(57)【要約】【課題】本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶、及びその製造方法を提供する。【解決手段】本発明の製造方法は、有機溶媒を用いてポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の飽和溶液から固体を沈殿させる工程、並びに該固体を真空乾燥してポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を得る工程を含む。【選択図】図２Ａ
2019531338.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１であって、
ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、前記無水結晶１は２θ＝３．３９６°、４．８９５°、及び６．９０３°の位置に回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示し、好ましくは図２Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示し、
好ましくは、ＫＢｒ錠剤法による赤外吸収測定において、前記無水結晶１は１０７１．９３ｃｍ−１、１２４２．９１ｃｍ−１、１３８４．２５ｃｍ−１、１４５７．６９ｃｍ−１、１５２４．２９ｃｍ−１、１６３９．３８ｃｍ−１、２９５７．６９ｃｍ−１、３０６４．５５ｃｍ−１、及び３２７０．５３ｃｍ−１の位置に特性吸収帯を有する赤外吸収スペクトルを示し、より好ましくは図３Ａの赤外吸収スペクトルを示し、
より好ましくは、前記無水結晶１は２２６．９７℃の融点を有し、図４の示差走査熱量測定パターンを示すことを特徴とするポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１。
【請求項２】
ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａであって、
ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、前記無水結晶Ａは２θ＝３．４０１°の位置に回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示し、好ましくは図８Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示し、
好ましくは、ＫＢｒ錠剤法による赤外吸収測定において、前記無水結晶Ａは１０７１．９３ｃｍ−１、１２４２．９１ｃｍ−１、１３８４．２５ｃｍ−１、１４５７．６９ｃｍ−１、１５２４．２９ｃｍ−１、１６３９．３８ｃｍ−１、２９５７．６９ｃｍ−１、３０６４．５５ｃｍ−１、及び３２７０．５３ｃｍ−１の位置に特性吸収帯を有する赤外吸収スペクトルを示し、より好ましくは図９Ａの赤外吸収スペクトルを示し、
より好ましくは、前記無水結晶Ａは２２５．００℃の融点を有し、図１０の示差走査熱量測定パターンを示すことを特徴とするポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａ。
【請求項３】
ポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶であって、
ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、前記無水結晶は図１７Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示すことを特徴とするポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶。
【請求項４】
ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を製造する方法であって、
ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；
温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、前記飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは前記有機溶媒に前記飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、前記有機溶媒がＣ１〜Ｃ４アルコール、Ｃ３〜Ｃ４ケトン、酢酸エチル、及び酢酸ブチルから選択される１種以上であり、好ましくは、前記Ｃ１〜Ｃ４アルコールがメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、及びブタノールから選択される１種以上であり、更に好ましくは、前記Ｃ３〜Ｃ４ケトンがアセトン及び２−ブタノンから選択される１種以上である工程（２）；並びに
前記固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、前記ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を得る工程（３）
を含むことを特徴とする製造方法。
【請求項５】
請求項１に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１を製造する方法であって、
ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；
温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、前記飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは前記有機溶媒に前記飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、前記有機溶媒がｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、及び２−ブタノールから選択される工程（２）；並びに
前記固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、前記ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１を得る工程（３）
を含むことを特徴とする製造方法。
【請求項６】
請求項２に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａを製造する方法であって、
ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；
温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、前記飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは前記有機溶媒に前記飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、前記有機溶媒がエタノール、エタノール／ｎ−ブタノール、ｎ−ブタノール／イソプロパノール、メタノール、アセトン、ブタノン、及びエタノール／酢酸エチルから選択される工程（２）；並びに
前記固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、前記ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａを得る工程（３）
を含むことを特徴とする製造方法。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか一項に記載の製造方法において、
前記工程（１）では、前記ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物に前記水を添加した後、６０℃以下の温度に加熱して前記固体を完全に溶解させ、
工程（２）では、好ましくは、前記飽和溶液の０．５〜２０倍の体積の前記有機溶媒を使用し、
工程（２）では、より好ましくは、前記固体を沈殿させた後、０〜８時間撹拌することを特徴とする製造方法。
【請求項８】
請求項１に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１、請求項２に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａ、請求項３に記載のポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶、或いは請求項４〜７のいずれか一項に記載の製造方法によって製造したポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の医薬組成物において、更に薬学的に許容される担体又は賦形剤を含有し、任意に前記ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶以外の抗菌活性成分をを含有する医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１、請求項２に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａ、請求項３に記載のポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶、或いは請求項４〜７のいずれか一項に記載の製造方法によって製造したポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶の使用であって、
前記無水結晶を、細菌（特にグラム陰性菌）が引き起こす疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製に使用することを特徴とする使用。
【請求項１１】
請求項１０に記載の使用において、前記疾患がグラム陰性菌（特に緑膿菌及び大腸菌）が引き起こす様々な感染症から選択され、好ましくは呼吸器感染症、腹膜炎、胆道感染症、尿路感染症、熱傷後感染症、角膜感染症、又は敗血症であることを特徴とする使用。
【請求項１２】
細菌（特にグラム陰性菌）が引き起こす疾患を予防及び／又は治療するする方法であって、請求項１に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１、請求項２に記載のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａ、請求項３に記載のポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶、或いは請求項４〜７のいずれか一項に記載の製造方法によって製造したポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を、予防有効量且つ／或いは治療有効量だけ、対象に投与することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬学分野に属し、特にポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の結晶、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリミキシンＢはバチルス・ポリミキサによって産生されるアルカリ性環状ポリペプチド抗生物質であり、様々なアミノ酸及び脂肪酸を含有する。ポリミキシンＢ製品はポリミキシンＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１−Ｉを含む多成分混合物であり（ヨーロッパ薬局方では、これら４成分の合計質量が８０．０％以上であることが必要とされる）、通常はその硫酸塩が用いられる。ポリミキシンＢ硫酸塩は白色又はオフホワイト色の吸湿性粉末である。ポリミキシンＢ硫酸塩はグラム陰性菌に対して強い殺菌効果を示し、特にＮＤＭ−１細菌（スーパーバクテリア）に対してインビトロで高い感受性を示し、そのため注目を集めている。ポリミキシンＢ３及びＢ１−Ｉの２成分は腎毒性であるため、臨床的には上記４成分混合物は主に外用剤に用いられる。ポリミキシンＢ１及びＢ２の２成分は副作用が少ないため注射に使用できる。ポリミキシンＢ１及びＢ２の結晶を高濃度で含む製品は品質が高く、注射に使用できる。
【０００３】
ポリミキシンＢ硫酸塩は結晶化が困難であるため、通常、噴霧乾燥法（特許出願第ＣＮ２０１２１０５１９３３１．７号）又は凍結乾燥法（特許出願第ＣＮ２０１５１０７７５５８０．６号）を用いてポリミキシンＢ硫酸塩製品を精製する。ポリミキシンＢ結晶に関する最新の特許として、ポリミキシンＢ１二水和物結晶を開示している特許出願第ＣＮ２０１２１０３７９２３１．９号が挙げられる。この特許出願は分子式Ｃ５６Ｈ９８Ｎ１６Ｏ１３・２Ｈ２Ｏの化合物を明確に特許請求しており硫酸塩ではない。この特許出願のポリミキシンＢ１二水和物結晶はアセトン及びジエチルエーテルの混合物を用いて沈殿させることによって得られる。ジエチルエーテルは揮発性が極めて高く、空気中で容易に酸化され爆発を起こすため、工業生産には適していない。加えて、市販品は全てポリミキシンＢ硫酸塩との混合物である。本願出願人によるポリミキシンＢ１硫酸塩モノマーの調製に関する特許出願が既に特許登録されており（特許第ＺＬ２０１１１０３９０６２４．５号）、このポリミキシンＢ１硫酸塩は９９．５％純度を有し、その固体は噴霧乾燥法によって得られる。しかしながら、現在噴霧乾燥法で製造されているポリミキシンＢ硫酸塩は、結晶形を形成することが難しく、製品は非常に凝集しやすいため、製造及び研究には不都合であり、薬品の品質及び効能に悪影響がある。
【発明の概要】
【０００４】
従来技術の問題を鑑み、本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の結晶とその製造方法とを提供する。ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物はＺＬ２０１１１０３９０６２４．５に記載の方法で調製したものであってよい。
【０００５】
本発明はポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１を提供する。この無水結晶１は、ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、２θ＝３．３９６°、４．８９５°、及び６．９０３°の位置に回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示し、好ましくは図２Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【０００６】
無水結晶１は、ＫＢｒ錠剤法による赤外吸収測定において、好ましくは１０７１．９３ｃｍ−１、１２４２．９１ｃｍ−１、１３８４．２５ｃｍ−１、１４５７．６９ｃｍ−１、１５２４．２９ｃｍ−１、１６３９．３８ｃｍ−１、２９５７．６９ｃｍ−１、３０６４．５５ｃｍ−１、及び３２７０．５３ｃｍ−１の位置に特性吸収帯を有する赤外吸収スペクトルを示し、より好ましくは図３Ａの赤外吸収スペクトルを示す。
【０００７】
無水結晶１は、より好ましくは２２６．９７℃の融点を有し、図４の示差走査熱量測定パターンを示す。
【０００８】
本発明者がより詳細に無水結晶１を分析したところ、無水結晶１は、図５の動的吸湿分析スペクトル、図６の熱重量分析スペクトル、及び図７の等温線図を示した。
【０００９】
本発明はポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａも提供する。この無水結晶Ａは、ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、２θ＝３．４０１°の位置に回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示し、好ましくは図８Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【００１０】
無水結晶Ａは、ＫＢｒ錠剤法による赤外吸収測定において、好ましくは１０７１．９３ｃｍ−１、１２４２．９１ｃｍ−１、１３８４．２５ｃｍ−１、１４５７．６９ｃｍ−１、１５２４．２９ｃｍ−１、１６３９．３８ｃｍ−１、２９５７．６９ｃｍ−１、３０６４．５５ｃｍ−１、及び３２７０．５３ｃｍ−１の位置に特性吸収帯を有する赤外吸収スペクトルを示し、より好ましくは図９Ａの赤外吸収スペクトルを示す。
【００１１】
無水結晶Ａは、より好ましくは２２５．００℃の融点を有し、図１０の示差走査熱量測定パターンを示す。
【００１２】
本発明者がより詳細に無水結晶Ａを分析したところ、無水結晶Ａは、図１１の動的吸湿分析スペクトル、図１２の熱重量分析スペクトル、及び図１３の等温線図を示した。
【００１３】
本発明はポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶も提供する。この無水結晶は、ＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折測定において、図１７Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【００１４】
本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を製造する方法も提供する。この製造方法は、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは有機溶媒に飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、該有機溶媒がＣ１〜Ｃ４アルコール、Ｃ３〜Ｃ４ケトン、酢酸エチル、及び酢酸ブチルから選択される１種以上であり、好ましくはＣ１〜Ｃ４アルコールがメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、及びブタノールから選択される１種以上であり、更に好ましくはＣ３〜Ｃ４ケトンがアセトン及び２−ブタノンから選択される１種以上である工程（２）；並びに固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を得る工程（３）を含む。
【００１５】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶の製造方法の一実施形態では、工程（１）において、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物に水を添加した後、６０℃以下の温度に加熱して固体を完全に溶解させる。
【００１６】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶の製造方法の他の実施形態では、工程（２）において、飽和溶液の０．５〜２０倍の体積の有機溶媒を使用する。この有機溶媒は上記固体を沈殿させ、且つ不純物を溶解させることができるため、沈殿した固体は粘度が低く非粘着性である。
【００１７】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶の製造方法の他の実施形態では、工程（２）において、固体を沈殿させた後、撹拌を０〜８時間続ける。
【００１８】
本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩の上記無水結晶１を製造する方法も提供する。この製造方法は、ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは有機溶媒に飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、該有機溶媒がｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、及び２−ブタノールから選択される工程（２）；並びに固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１を得る工程（３）を含む。
【００１９】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１の製造方法の一実施形態では、工程（１）において、ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加した後、６０℃以下の温度に加熱して固体を完全に溶解させる。
【００２０】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１の製造方法の一実施形態では、工程（２）において、飽和溶液の０．５〜２０倍の体積の有機溶媒を使用する。
【００２１】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１の製造方法の一実施形態では、工程（２）において、固体を沈殿させた後、撹拌を０〜８時間続ける。
【００２２】
本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩の上記無水結晶Ａを製造する方法も提供する。この製造方法は、ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加して固体を完全に溶解させ、飽和溶液を得る工程（１）；温度を０〜６０℃の範囲内に制御しながら、飽和溶液に有機溶媒をゆっくり滴下するか、或いは有機溶媒に飽和溶液をゆっくり滴下して固体を沈殿させる工程であって、該有機溶媒がエタノール、エタノール／ｎ−ブタノール、ｎ−ブタノール／イソプロパノール、メタノール、アセトン、ブタノン、及びエタノール／酢酸エチルから選択される工程（２）；並びに固体をろ過により分離し、真空下で乾燥して、ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａを得る工程（３）を含む。
【００２３】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａの製造方法の一実施形態では、工程（１）において、ポリミキシンＢ１硫酸塩に水を添加した後、６０℃以下の温度に加熱して固体を完全に溶解させる。
【００２４】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａの製造方法の一実施形態では、工程（２）において、飽和溶液の０．５〜２０倍の体積の有機溶媒を使用する。
【００２５】
本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａの製造方法の一実施形態では、工程（２）において、固体を沈殿させた後、撹拌を０〜８時間続ける。
【００２６】
従来の方法と比較して、本発明の製造方法では、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を得ることができ、得られた無水結晶の粒子は粘度が低く非粘着性であり、特に薬剤の工業生産に有利である。加えて、本発明の製造方法では、薬物原料中の不純物を効果的に除去することが可能であり、薬物の品質を大幅に改善することができる。製剤加工や効能評価を行う当業者にとって、本発明の製造方法で得られたポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶は非常に有用である。
【００２７】
本発明は、本発明によるポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を含有する医薬組成物も提供する。本発明の医薬組成物は、更に薬学的に許容される担体又は賦形剤を含有してもよく、任意にポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶以外の抗菌活性成分をを含有していてもよい。
【００２８】
本発明は、ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶（特にポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１、ポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａ、又はポリミキシンＢ２硫酸塩の上記無水結晶）を、細菌（特にグラム陰性菌）が引き起こす疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製に使用する方法も提供する。好ましくは、この疾患はグラム陰性菌（特に緑膿菌及び大腸菌）が引き起こす様々な感染症、例えば呼吸器感染症、腹膜炎、胆道感染症、尿路感染症、熱傷後感染症、角膜感染症、及び敗血症等から選択される。
【００２９】
本発明は、細菌（特にグラム陰性菌）が引き起こす疾患を予防及び／又は治療する方法も提供する。この方法では、上記ポリミキシンＢ１硫酸塩、ポリミキシンＢ２硫酸塩、又はこれらの混合物の無水結晶を、予防有効量且つ／或いは治療有効量だけ、対象に投与する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】エタノール／ｎ−ブタノール水溶液中のポリミキシンＢ１硫酸塩結晶を示す図である。
【図１Ｂ】乾燥後のポリミキシンＢ１硫酸塩結晶試料を示す図である。
【図２Ａ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＸＲＤパターンである。
【図２Ｂ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＸＲＤパターンの、ピークリストである。
【図２Ｃ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１の高温ＸＲＤパターンである。
【図３Ａ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＩＲスペクトルである。
【図３Ｂ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＩＲスペクトルの、ピークリストである。
【図４】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＤＳＣパターンである。
【図５】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＤＶＳパターンである。
【図６】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１のＴＧＡスペクトルである。
【図７】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１の等温線図である。
【図８Ａ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＸＲＤパターンである。
【図８Ｂ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＸＲＤパターンの、ピークリストである。
【図８Ｃ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａの高温ＸＲＤパターンである。
【図９Ａ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＩＲスペクトルである。
【図９Ｂ】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＩＲスペクトルの、ピークリストである。
【図１０】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＤＳＣパターンである。
【図１１】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＤＶＳパターンである。
【図１２】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶ＡのＴＧＡスペクトルである。
【図１３】本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶Ａの等温線図である。
【図１４】結晶形競争実験における、本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１と無水結晶Ａの初期混合試料のＸＲＤパターンである。
【図１５】競争実験における、エタノール中の本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１と無水結晶ＡのＸＲＤパターンである。
【図１６】競争実験における、エタノール／水混合溶媒（ｖ／ｖ＝５／１）中の本発明のポリミキシンＢ１硫酸塩の無水結晶１と無水結晶ＡのＸＲＤパターンである。
【図１７Ａ】本発明のポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶のＸＲＤパターンである。
【図１７Ｂ】本発明のポリミキシンＢ２硫酸塩の無水結晶のＸＲＤパターンの、ピークリストである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明をより適切に解説し、本発明の技術的解決法の理解を容易にするために、以下、添付図面及び実施形態との関連で、本発明を更に説明する。なお、下記具体例は本発明の説明を意図したものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３２】
実施例１
エタノール／水系：１００ｍｌのポリミキシンＢ１硫酸塩水溶液（濃度５０ｇ／Ｌ）を採取し、室温で撹拌した。これに３倍の体積の９５ｖ／ｖ％のエタノール水溶液を添加し、ポリミキシンＢ１硫酸塩結晶を沈殿させた。０〜５℃の温度で３〜５時間撹拌した後、得られた混合物をろ過し、真空下で８時間乾燥して、結晶形Ａを有するポリミキシンＢ１硫酸塩結晶を得た。
【００３３】
実施例２
イソプロパノール／水：２６ｍｌのポリミキシンＢ１硫酸塩とポリミキシンＢ２硫酸塩の水溶液（濃度５０ｇ／Ｌ）を採取し、撹拌しながら２６０ｍｌ（１０倍体積）のイソプロパノールにゆっくり滴下した。イソプロパノールの温度は常に５〜１０℃の範囲内に制御した。滴下中、ポリミキシンＢ１硫酸塩結晶及びポリミキシンＢ２硫酸塩結晶の沈殿が徐々に増加したが、付着の無い均一な分散状態であった。撹拌を１時間続け、得られた混合物をろ過して固体を得た。この固体を真空下で１０時間乾燥して、ポリミキシンＢ１硫酸塩とポリミキシンＢ２硫酸塩の結晶粉末（１．２３g）を得た（結晶収率９４．６％）。得られたポリミキシンＢ１硫酸塩結晶は結晶形１を有していた。
【００３４】
実施例３
ｎ−ブタノール／水：１３．５ｇのポリミキシンＢ２硫酸塩を１５０ｍｌの純水に溶解させ、撹拌しながら１５００ｍｌ（１０倍体積）のｎ−ブタノールにゆっくり滴下した。温度は常に２５〜３０℃の範囲内に制御した。滴下中、ポリミキシンＢ２硫酸塩結晶の沈殿が徐々に増加したが、付着の無い均一な分散状態であり、良好な粒度を有していた。ポリミキシンＢ２硫酸塩水溶液の滴下が完了した後、撹拌を３０分間続け、得られた混合物をろ過し、ろ取した固体を真空下で２０時間乾燥して、ポリミキシンＢ２硫酸塩の結晶粉末（１３．２ｇ）を得た（結晶収率９７．８％）。
【００３５】
ポリミキシンＢ２硫酸塩及びポリミキシンＢ１硫酸塩のＸＲＤパターンから、ポリミキシンＢ２硫酸塩のＸＲＤパターンでは２θ＝３１．８°に弱く小さいピークが現れていることが分かる。
【００３６】
実施例４
エタノール／ｎ−ブタノール／水：１００ｍｌのポリミキシンＢ１硫酸塩水溶液（濃度５０ｇ／Ｌ）を採取し、撹拌しながら１０００ｍｌ（１０倍体積）のエタノール＋ｎ−ブタノール（各５００ｍｌ）にゆっくり滴下した。滴下中、温度は常に０〜５℃の範囲内に制御した。滴下中、ポリミキシンＢ１硫酸塩結晶の沈殿が徐々に増加したが、均一な分散状態であり、良好な粒度を有していた。ポリミキシンＢ１硫酸塩水溶液の滴下が完了した後、撹拌を２時間続け、固体をろ取し、真空下で５時間乾燥して、結晶形Ａを有するポリミキシンＢ１硫酸塩の結晶粉末（４．６ｇ）を得た（結晶収率９２．０％）。
【００３７】
実施例５
エタノール／イソプロパノール／水：１０ｍｌのポリミキシンＢ１硫酸塩とポリミキシンＢ２硫酸塩の水溶液（濃度５０ｇ／Ｌ）を採取し、撹拌しながら１００ｍｌ（１０倍体積）のエタノール＋イソプロパノール（各５０ｍｌ）にゆっくり滴下した。滴下中、温度は常に１５〜２０℃の範囲内に制御した。滴下中、ポリミキシンＢ１硫酸塩結晶及びポリミキシンＢ２硫酸塩結晶の沈殿が徐々に増加したが、均一な分散状態であり、良好な粒度を有していた。これを３０分間放置してから迅速に固液分離する。ポリミキシンＢ１硫酸塩及びポリミキシンＢ２硫酸塩の水溶液の滴下が完了した後、撹拌を３０分間続け、固体をろ取し、真空下で１５時間乾燥して、結晶形Ａを有するポリミキシンＢ１硫酸塩及びポリミキシンＢ２硫酸塩の結晶粉末（０．４３ｇ）を得た（結晶収率８６．０％）。
【００３８】
実施例６
ｎ−ブタノール／イソプロパノール／水：５０ｍｌのポリミキシンＢ１硫酸塩水溶液（濃度５０ｇ／Ｌ）を採取し、撹拌しながら２５０ｍｌ（５倍体積）のｎ−ブタノール＋イソプロパノール（各１２５ｍｌ）にゆっくり滴下した。滴下中、温度は２５〜３０℃の範囲内に制御した。結晶が沈殿した後、残余の溶液を全て添加して結晶を得た。結晶は均一な分散状態であり、良好な粒度を有していた。これを３０分間放置してから迅速に固液分離する。ポリミキシンＢ１硫酸塩水溶液の滴下が完了した後、撹拌を６０分間続け、固体をろ取し、真空下で８時間乾燥して、結晶形１を有するポリミキシンＢ１硫酸塩結晶粉末（２．３ｇ）を得た（結晶収率９２．０％）。
【００３９】
実施例７
ポリミキシンＢ１硫酸塩の結晶形１及び結晶形Ａの特性評価及び分析
【００４０】
【表１】
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【００４１】
【表２】
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【００４２】
実施例８
後の調製操作（造粒等）の指標を得るために、水及びエタノール中でのポリミキシン硫酸塩の２つの結晶形（結晶形１及び結晶形Ａ）の安定性を調べ、これら２つの結晶形の変化を評価する競争実験を行った。水及びエタノールはこれら結晶形の調製に広く使用されている溶媒である。本競争実験では、エタノールとエタノール／水の混合溶媒（体積比５／１）を使用し、室温での結晶粥状化試験との組み合わせで、該溶媒中で室温で最も安定な結晶形を確認した。
【００４３】
結晶形競争実験
１．結晶形１及び結晶形Ａの試料を同量採取し、均一に混合して、初期混合試料を得た。この初期混合試料をＸＲＤ検出（図１４）に使用した。
【００４４】
２．均一に混合した試料を２つに分け、一方には２００μＬのエタノールを添加し、他方には３００μＬの混合溶媒（体積比エタノール／水＝５／１）を添加して、懸濁液を調製した。懸濁液を室温で撹拌し、遠心分離し、ＸＲＤ検出のために試料を異なる回数採取した。その結果、エタノール中で室温で１日結晶粥状化した後、結晶形は結晶形Ａへと変化した（図１５）。また、エタノール／水中で室温で６日結晶粥状化した後、結晶形は結晶形Ａへと変化した（図１６）。
【００４５】
この競争実験の結果から、ポリミキシンＢ１硫酸塩の２つの結晶形のうち、エタノール及びエタノール／水混合溶媒中、室温で安定な結晶形は結晶形Ａであることを確認した。
【００４６】
室温での結晶粥状化実験の結果から、エタノール及びエタノール／水混合溶媒中、室温で安定なポリミキシンＢ１硫酸塩結晶形は結晶形Ａであることを確認した。
【００４７】
これらの結果より、ポリミキシンＢ１硫酸塩を室温で扱う場合、エタノール又はエタノール／水混合溶媒を用いると、ポリミキシンＢ１硫酸塩の結晶形Ａが安定に存在し得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【国際調査報告】
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