(57)【要約】嚢胞性線維症を有する患者の肺内での、例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染およびコロニー形成を含む医学的状態の診断および／または処置のための化合物、組成物、および方法が記載される。本発明の化合物は、ＰＡ−ＩＬおよび／またはＰＡ−ＩＩＬレクチンへの結合に対して高親和性を有し、ＣＦを含む、ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬの阻害が有用である疾患、障害、または状態に対して有益な治療効果を有し得る。さらに、これらの化合物は、第２の治療剤と組み合わせて投与されてもよいし、またはコンジュゲートされていてもよい（すなわち直接またはリンカーを介して結合する）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬの阻害が有用である少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態の処置および／または予防のための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、以下：
【化４】
2019502727.tif 000008
そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染および／またはコロニー形成を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌が、前記被験体の肺内に存在する、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態が、嚢胞性線維症、人工呼吸器関連肺炎、気管支拡張症、および慢性閉塞性肺疾患から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態が嚢胞性線維症である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染および／またはコロニー形成を阻害するための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、糖模倣体化合物（Ｉ）、そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項８】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による前記感染および／またはコロニー形成が、前記被験体の肺内におけるものである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
嚢胞性線維症の処置のための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、糖模倣体化合物（Ｉ）、そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの化合物が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２の治療剤が抗菌剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療剤がトブラマイシンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの化合物が、治療剤または診断剤にコンジュゲートしている、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの化合物が治療剤にコンジュゲートしている、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療剤が抗菌剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療剤がトブラマイシンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を検出する方法であって、試料を、糖模倣体化合物（Ｉ）、そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物にコンジュゲートした診断剤と、前記細菌またはそのレクチン産生物が試料内に存在する場合、これらに前記少なくとも１つの化合物が結合するのに十分な条件下で、接触させるステップと、前記試料中に存在する前記剤を検出するステップとを含み、前記試料中の剤の存在がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の存在を示す、方法。
【請求項１９】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固形支持体上に固定化する方法であって、結合に十分な条件下で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を含有する試料を、糖模倣体化合物（Ｉ）、そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物に接触させるステップであって、前記少なくとも１つの化合物が固形支持体に固定化される、ステップと、前記固形支持体から前記試料を分離させるステップとを含む、方法。
【請求項２０】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの化合物が、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせて投与される、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの化合物が、
【化５】
2019502727.tif 000009
である、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
嚢胞性線維症を有する患者の肺内での、例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染およびコロニー形成を含む疾患の診断および／または処置のための化合物、組成物、および方法が本明細書で開示されている。例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌のＰＡ−ＩＬおよび／またはＰＡ−ＩＩＬレクチンの結合に対して選択的な糖模倣体化合物（glycomimetic  compound）および少なくとも１種のこのような薬剤を含む組成物が記載されている。
【背景技術】
【０００２】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは、免疫系に障害がある患者、例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）を有する患者における感染症の原因である日和見細菌である。呼吸器系、消化器系および生殖器系に影響を与える慢性肺疾患である嚢胞性線維症は、クロライドチャネルとして作用する嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）をコードしている遺伝子の突然変異により引き起こされる。
【０００３】
イオン移動を変化させるＣＦＴＲの遺伝子変異はまた、ＣＦＴＲならびに他の細胞表面分子のＮ−グリコシル化に影響を与える。患者の外分泌腺のすべてが影響を受けるが、肺は病的状態および死亡の原発部位である。グリコシル化における一般的な変化はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる感染性の増加と関連する。ＣＦ患者から得た唾液および呼吸器のムチンはまた変化したグリコシル化パターンを含有する。
【０００４】
ＣＦ患者における病的状態および死亡の主要な原因は、細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる肺への慢性のコロニー形成であり、これは堅固な好中球の炎症性応答と共に顕著な肺感染症をもたらし、肺の破壊および死亡へとつながる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによるコロニー形成は、病毒性因子が協調して分泌される細菌の固着段階の間に開始する。炭水化物を結合する２つの病毒性因子はレクチンである。ＰＡ−ＩＬおよびＰＡ−ＩＩＬとして公知のこれらのレクチンは高親和性でこれらのオリゴ糖構造に結合し、細菌のコロニー形成を遮断するための潜在的な分子標的を意味する。
細菌により決して完全にコロニー形成されているわけではない患者は長期にわたる優れた予後を維持する。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌のコロニー形成を制限する化合物は公知である。例えば、米国特許第７，５１７，９８０号および第８，２５８，２９０号を参照されたい。しかし、より良い処置を提供するより有効な化合物に対する必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第７，５１７，９８０号明細書
【特許文献２】米国特許第８，２５８，２９０号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の化合物は、ＰＡ−ＩＬおよび／またはＰＡ−ＩＩＬレクチンへの結合に対して高親和性を有し、ＣＦを含む、ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬの阻害が有用である疾患、障害、または状態に対して有益な治療効果を有し得る。さらに、これらの化合物は、第２の治療剤と組み合わせて投与されてもよいし、またはコンジュゲートされていてもよい（すなわち直接またはリンカーを介して結合する）。
【０００７】
一部の実施形態では、少なくとも１つの化合物は、
【化１】
2019502727.tif 000002
そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【０００８】
本明細書で使用される場合、「式（Ｉ）の化合物」は、糖模倣体化合物（Ｉ）、糖模倣体化合物（Ｉ）の薬学的に許容される塩、糖模倣体化合物（Ｉ）のプロドラッグ、および糖模倣体化合物（Ｉ）のプロドラッグの薬学的に許容される塩を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物が開示される。
【００１０】
一部の実施形態では、被験体において、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌感染症を阻害する方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物または少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物を投与することを含む方法が開示される。
【００１１】
一部の実施形態では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を検出する方法であって、試料を、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物にコンジュゲートした診断剤と、細菌またはそのレクチン産生物が試料内に存在する場合、これらに式（Ｉ）の化合物が結合するのに十分な条件下で、接触させるステップと、試料中に存在する剤を検出するステップとを含み、試料中の剤の存在がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の存在を示す、方法が開示される。
【００１２】
一部の実施形態では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固形支持体上に固定化する方法であって、結合に十分な条件下で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を含有する試料を、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物に接触させるステップであって、少なくとも１つの化合物が固形支持体に固定化される、ステップと、固形支持体から試料を分離させるステップとを含む、方法が開示される。
【００１３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための医薬の調製に使用することができる。
【００１４】
本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明および付随する図を参照して明らかとなる。本明細書で開示されているすべての参考文献は、それぞれが個々に組み込まれているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、糖模倣体化合物（Ｉ）の合成を例示する図である。
【００１６】
【図２】図２は、本明細書に記載のアッセイのうちの１つまたは複数において使用されている化合物（化合物Ａおよび糖模倣体化合物（Ｉ））のうちの２つの構造を表している。
【００１７】
【図３】図３は、急性肺損傷モデルにおける、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａを、２×１０６ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと同時投与した後の生存パーセントを表している。
【００１８】
【図４】図４は、急性肺損傷モデルにおける、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａを、２×１０６ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと同時投与した後の臨床的疾患スコアを表している。
【００１９】
【図５】図５は、急性肺損傷モデルにおける、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａを、１×１０７ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと同時投与した後の生存パーセントを表している。
【００２０】
【図６】図６は、急性肺損傷モデルにおける、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａを、１×１０７ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと同時投与した後の臨床的疾患スコアを表している。
【００２１】
【図７】図７は、急性肺損傷モデルにおける、トブラマイシンと組み合わせて、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａを、１×１０７ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと同時投与した後の生存パーセントを表している。
【００２２】
【図８】図８は、急性肺損傷モデルにおける、処置プロトコール（Ａ）および生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａのいずれかの異なる接種時間において評価した、１×１０７ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの投与後の群の分布（Ｂ）を表している。
【００２３】
【図９】図９は、生存分析を、すべての群（Ａ）、糖模倣体化合物（Ｉ）の異なる注入時間（Ｂ）、Ｈ４  ｐ．ｉで注入された２つの化合物の比較（Ｃ）により表している。対照感染群に対する、各群の統計分析。
【００２４】
【図１０】図１０は、Ｈ２４（Ａ）、Ｈ４８（Ｂ）における、および時間をわたっての（Ｃ）体重減少分析を表している。
【００２５】
【図１１】図１１は、Ｈ２４（Ａ）、Ｈ４８（Ｂ）における、および時間をわたっての（Ｃ）疾患スコア分析を表している。
【００２６】
【図１２】図１２は、急性肺損傷モデルにおける、処置プロトコール（Ａ）および、生理食塩水、糖模倣体化合物（Ｉ）、または化合物Ａ（単独でまたはトブラマイシンと組み合わせる）のいずれかの異なる接種時間で評価した、１×１０７ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの投与後の群の分布（Ｂ）を表している。
【００２７】
【図１３】図１３は、生存分析を、すべての群（Ａ）、Ｈ４  ｐ．ｉで注入された糖模倣体化合物（Ｉ）および化合物Ａの比較（Ｂ）、糖模倣体化合物（Ｉ）の異なる注入時間（Ｃ）により表している。統計分析は、対照感染群と共に、各群に対して実施した。
【００２８】
【図１４】図１４は、時間をわたっての（Ａ）、Ｈ２４における（Ｂ）体重減少分析を表している。
【００２９】
【図１５】図１５は、時間をわたっての（Ａ）、Ｈ２４における（Ｂ）疾患スコア分析を表している。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬの阻害が有用である少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態を処置および／または予防するための化合物および組成物が本明細書で開示されている。化合物はｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの様々な使用を有し得る。
【００３１】
一部の実施形態では、ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬの阻害が有用である少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態の処置および／または予防のための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、以下：
【化２】
2019502727.tif 000003
そのプロドラッグ、および前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物を投与するステップを含む、方法が開示される。
【００３２】
一部の実施形態では、少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染および／またはコロニー形成を含む。一部の実施形態では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである。一部の実施形態では、少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態は、嚢胞性線維症、人工呼吸器関連肺炎、気管支拡張症、および慢性閉塞性肺疾患から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの疾患、障害、および／または状態は嚢胞性線維症である。
【００３３】
一部の実施形態では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染および／またはコロニー形成を阻害するための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物、および／または式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を投与するステップを含む、方法が開示される。一部の実施形態では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである。
【００３４】
一部の実施形態では、嚢胞性線維症を処置するための方法が開示され、方法は、それを必要とする被験体に、有効量の、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物、ならびに／または少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を投与することを含む。
【００３５】
一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物は、第２の治療剤と組み合わせて（すなわち、同時にまたは逐次的に）投与されてもよい。一部の実施形態では、第２の治療剤は抗菌性化合物である。一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物は、トブラマイシンと組み合わせて投与されてもよい。
【００３６】
一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物はまた、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対して物質を標的化するために使用することもできる。このような物質として、治療剤および診断剤が挙げられる。治療剤は、分子、ウイルス、ウイルス構成成分、細胞、細胞構成成分、あるいは疾患、障害、および／もしくは状態を処置もしくは予防するまたは患者の生理学を調節するための利益が得られるように標的細胞の特性を改変することが実証され得る任意の他の物質であってよい。治療剤はまた、薬物、またはｉｎ  ｖｉｖｏで生物学的活性を有する薬剤を生成するプロドラッグであってもよい。治療剤であり得る分子は、例えば、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ステロイド、多糖または無機化合物であってよい。このような分子は、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、受容体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、触媒ポリヌクレオチド、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗菌剤、免疫調節剤および細胞毒性剤（例えば、放射性核種、例えば、ヨウ素、臭素、鉛、レニウム、ホルミウム（homium）、パラジウムまたは銅）を含む、様々な方式のいずれかで機能してもよい。診断剤として、画像化剤、例えば、金属および放射性薬剤（例えば、ガリウム、テクネチウム、インジウム、ストロンチウム、ヨウ素、バリウム、臭素およびリン含有化合物）、造影剤、色素（例えば、蛍光色素および発色団）および比色分析または蛍光定量的反応を触媒する酵素が挙げられる。一部の実施形態では、治療剤および診断剤は式（Ｉ）の化合物に結合していてもよい。一部の実施形態では、前記治療剤および診断剤は、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により連結している。
【００３７】
一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物は、培養物におけるスクリーニング、アッセイおよび増殖のために、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌またはそれらの産生物を固定化することにおいて使用するために、固形支持体上に固定化されていてもよい（例えば、組織培養プレートまたは他の細胞培養支持体の内部表面に連結している）。このような連結は、任意の適切な技術により実施し得る。一部の実施形態では、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞識別およびソーティングを促進させて、このような細菌細胞の選択を可能にすることもできる。一部の実施形態では、このような方法での使用のための少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物は、検出可能なマーカーである診断剤に連結している。適切なマーカーは当技術分野で周知であり、放射性核種、発光性基、蛍光性基、酵素、色素、一定の免疫グロブリンドメインおよびビオチンが挙げられる。一部の実施形態では、フルオレセインなどの蛍光マーカーに連結した少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を細胞と接触させ、次いで蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）により分析する。
【００３８】
このようなｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法は、試料（例えば、生物学的調製物）を少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物と接触させるステップと、試料中の前記式（Ｉ）の化合物を検出するステップとを一般的に含む。所望する場合、１つまたは複数の洗浄ステップを方法に加えてもよい。例えば、試料を少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物と接触させた後、ただし、前記式（Ｉ）の化合物の検出前に、試料を洗浄することができる（すなわち、流体と接触させ、次いで流体を除去して、未結合の式（Ｉ）の化合物を除去する）。代わりに、または加えて、検出プロセス中に洗浄ステップを加えてもよい。例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物が検出可能な物質と結合することができるマーカー（診断剤）を保有する場合、試料を検出可能な物質と接触させた後で、ただし、検出前に、試料を洗浄するのが望ましいことがある。本明細書で使用される場合、「試料中の前記式（Ｉ）の化合物を検出する」という句は、これが試料に結合している間に前記式（Ｉ）の化合物（または薬剤）を検出すること、または試料に結合させたが、これが試料から分離された後に、前記式（Ｉ）の化合物（または薬剤）を検出することを含む。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物を特徴付けるための方法
本明細書に記載の化合物の生物学的活性は、例えば、当技術分野で規定通りに実施されるおよび本明細書または当技術分野で記載される少なくとも１つのｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏの試験を実施することにより決定することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイとして、限定ではないものの、結合アッセイ、イムノアッセイ、競合的結合アッセイおよび細胞ベースの活性アッセイが挙げられる。
【００４０】
ある特定のアッセイに対する条件は、温度、緩衝剤（塩、カチオン、媒体を含む）、およびアッセイに使用される任意の細胞および化合物の統合性を維持する他の成分を含み、当業者であれば、これらに精通しており、そして／または容易にそれらを決定することができる。当業者はまた、本明細書に記載されているインビトロの方法およびインビボの方法を実施する場合、適当な対照をデザインすることができ、これを含めることができることを容易に理解する。
【００４１】
本明細書に記載されており、そして当技術分野における少なくとも一つのアッセイおよび技法により特徴づけられる化合物の供給源は、その化合物で処置された被験体から得た生物学的試料であってよい。アッセイにおいて使用することができる細胞はまた、生物学的試料において提供されてもよい。「生物学的試料」は被験体からの試料を含んでもよく、血液試料（この血液試料から血清または血漿を調製できる）、生検検体、１種または複数種の体液（例えば、肺洗浄、腹水、粘膜洗浄液、滑液、尿）、骨髄、リンパ節、組織外植片、器官培養物、あるいは被験体もしくは生物学的供給源に由来する任意の他の組織または細胞調製物であり得る。生物学的試料は、形態学的完全性または物理的な状態が、例えば、解剖、解離、可溶化、分画化、均質化、生化学的もしくは化学的抽出、微粉粉砕、凍結乾燥、超音波処理、または被験体もしくは生物学的供給源に由来する試料を処理するための任意の他の手段により破砕されている、組織または細胞調製物をさらに含む。
【００４２】
当業者であれば理解しているように、「処置する」および「処置」という用語は、被験体（すなわち、患者、個体）の疾患、障害、または状態の医学的な管理を含む（例えば、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙを参照されたい）。一般的に、適当な用量および処置レジメンは、本明細書に記載されている少なくとも１種の本開示の化合物を、治療上および／または予防上の利点を得るのに十分な量で提供する。治療的処置と予防的または防止的手段の両方に対して、治療上および／または予防上の利点として、例えば、臨床での転帰の改善が挙げられ、この目的は、所望されない生理学的変化もしくは障害を予防もしくは減速もしくは遅らせる（低下させる）こと、このような障害の拡大または重症化を予防もしくは減速もしくは遅らせる（低下させる）こと、または障害の少なくとも１つの症状を回復することである。本明細書中で論じたように、被験体を処置することによる有利なまたは所望の臨床的結果として、これらに限定されないが、処置すべき疾患、状態、または障害から生じるかまたはこれらに伴う症状の寛解、低下、または軽減；症状の発症の低減；生活の質の改善；疾患を患っていない状態の延長（すなわち、疾患の診断がなされるときの基礎である症状を被験体が提示する可能性または傾向を低減させること）：疾患の程度の減退；疾患の安定化した（すなわち、悪化していない）状態；疾患の進行を遅延または減速させること；疾患状態の回復または緩和；および検出可能または検出不能に関わらず、緩解（部分的または全体的）、および／または全生存期間（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）が挙げられる。「処置」は、被験体が処置を受けていなかった場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を長引かせることを含み得る。
【００４３】
治療結果は、例えば、肺感染症の予防に関連し得る。一部の状態では、治療結果は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）またはその産生物の阻害に関連し得る（阻害することは、例えば、細菌の増殖を止めるもしくは細菌を死滅させる、または細菌によるコロニー形成を予防することを含む）。
【００４４】
本明細書に記載されている方法の一部の実施形態では、被験体はヒトである。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態では、被験体は非ヒト動物である。処置され得る非ヒト動物として、哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー、ゴリラなど）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、アレチネズミ、ハムスター、ケナガイタチ、ウサギ）、ウサギ目の動物、ブタ（ｓｗｉｎｅ）（例えば、ブタ（ｐｉｇ）、小型ブタ（ｐｉｇ））、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ属、および他の飼い慣らした動物、農場動物、および動物園の動物が挙げられる。
【００４５】
本開示の化合物の、ＰＡＩＬおよび／またはＰＡＩＩＬによって処置可能な疾患、障害または状態の処置および／または予防における有効性は、関連技術分野の当業者により容易に決定することができる。適当な投与計画の決定および調整（例えば、１用量当たりの化合物の量ならびに／または投与回数および投与頻度を調整すること）はまた、関連技術分野の当業者により容易に実施され得る。健康診断、評価および臨床症状のモニタリング、ならびに本明細書に記載されている分析試験および方法の性能を含めた診断法の一つまたは任意の組合せを被験体の健康状態のモニタリングに使用することができる。
【００４６】
医薬組成物および医薬組成物を使用する方法
少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物もまた本明細書に提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は少なくとも１つの追加の薬学的に許容される成分をさらに含む。
【００４７】
薬学的剤形において、本開示の化合物の任意の１種または複数種は、薬学的に許容される誘導体、例えば、塩などの形態で投与される、および／あるいは、これらは、単独で、および／または他の薬学的活性のある化合物を適切に伴って、ならびに他の薬学的活性のある化合物と組み合わせて使用することもできる。
【００４８】
有効量または治療有効量とは、単一用量としてまたは一連の用量の一部として被験体に投与した場合に少なくとも１つの治療上の効果および／または結果をもたらすのに有効である、少なくとも１つの本開示の化合物、あるいは、少なくとも１種のそのような化合物を含む医薬組成物の量を指す。最適な用量は一般的に、実験モデルおよび／または治験を使用して決定することができる。本明細書に記載されている治療剤のそれぞれ（予防的利点のために投与した場合を含む）に対する前臨床および臨床研究のデザインおよび実施は、十分に関連技術分野の当業者の範囲内である。治療剤に最適な用量は、被験体の体質量、体重、および／または血液量に依存し得る。一部の実施形態では、ある用量で存在する、式（Ｉ）の少なくとも１種の化合物の量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であり得る。有効な治療を提供するのに十分な最小用量が一部の実施形態において使用され得る。被験体は一般的に、処置されているかまたは予防されている疾患または状態に対して適切なアッセイを使用して治療上の有効性についてモニターすることができ、このアッセイは当業者にはよく知られており、本明細書に記載されている。被験体に投与する化合物のレベルは、被験体由来の生物学的流体中、例えば、血液、血液画分（例えば、血清）中、および／または尿中、および／または他の生物学的試料中の化合物（または化合物の代謝物）のレベルを測定することによってモニターすることができる。化合物、またはその代謝物を検出するために当技術分野で実施されているいずれの方法も、治療的レジメンの経過中に化合物のレベルを測定するために使用することができる。
【００４９】
本明細書に記載されている化合物の用量は、被験体の状態、すなわち、疾患の段階、疾患により引き起こされた症状の重症度、全般的な健康状態、ならびに年齢、性別、および体重、ならびに医学的技術分野の当業者には明らかな他の要素に依存し得る。同様に、疾患または障害を処置するための治療剤の用量は、医学的技術分野の当業者により理解されているパラメーターに従い決定することができる。
【００５０】
医薬組成物は、処置すべき疾患または障害に対して任意の適当な方式で、医学的技術分野の当業者により決定された通りに投与され得る。適当な用量ならびに投与の適切な継続時間および頻度は、患者の状態，患者の疾患の種類および重症度、活性成分の特定の形態、および投与方法を含めた、本明細書中で論じられたような要素により決定される。一般的に、適当な用量（または有効用量）および処置レジメンは、本明細書に記載されている組成物を、治療上および／または予防上の利点（例えば、改善された臨床での転帰、例えば、より頻繁な、完全もしくは部分的な緩解、または疾患を患っていないおよび／もしくは全生存期間の延長、または症状の重症度を低下させること、または上に詳細に記載されている他の利点）を提供するのに十分な量で提供される。
【００５１】
本明細書に記載されている医薬組成物は、有効量の化合物を効果的に送達するいくつかの経路のうちのいずれか一つにより、それを必要とする被験体に投与され得る。適切な投与経路の非限定的な例として、局所的、経口、鼻、髄腔内、経腸、口腔、舌下、経皮的、直腸、経膣、眼内、結膜下、舌下、および非経口投与（これらは、皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、空洞内、道内（ｉｎｔｒａｍｅａｔａｌ）、および尿道内への注射および／または点滴を含む）などが挙げられる。
【００５２】
本明細書に記載されている医薬組成物は、例えば、無菌の水性溶液であっても、水性懸濁液であっても、水性乳濁液であっても、無菌の非水性溶液であっても、非水性懸濁液であっても、非水性乳濁液であってもよく、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤（すなわち、活性成分の活性を妨げない無毒性材料）をさらに含んでもよい。このような組成物は、例えば、固体、液体、またはガス（エアゾール）の形態であってよい。あるいは、本明細書に記載されている組成物は、例えば、凍結乾燥物として製剤化してもよいか、または本明細書に記載されている化合物は、当技術分野で公知の技術を使用してリポソーム内に封入されてもよい。医薬組成物は、少なくとも１種の追加の薬学的に許容される成分をさらに含んでもよく、これは生物学的に活性であっても不活性であってもよい。このような成分の非限定的な例として、緩衝液（例えば、中性緩衝化食塩水またはリン酸緩衝食塩水）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡおよびグルタチオン）、安定剤、色素、香味剤、懸濁化剤および保存剤が挙げられる。
【００５３】
組成物における使用のための、当業者に公知の任意の適切な賦形剤または担体を、本明細書に記載されている組成物において利用することができる。治療的使用のための賦形剤は周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ、２１版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（２００５年））に記載されている。一般的に、賦形剤の種類は、投与形式、ならびに活性成分の化学組成に基づいて選択され得る。組成物は、特定の投与形式用に製剤化することができる。非経口投与に対して、医薬組成物は、水、生理食塩水、アルコール、脂肪、ワックス、および緩衝剤をさらに含んでもよい。経口投与に対して、医薬組成物は、例えば、前記の成分、賦形剤および担体の任意のものから選択される少なくとも１種の構成成分、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、カオリン、グリセリン、デンプンデキストリン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、グルコース、スクロースおよび炭酸マグネシウムなどをさらに含んでもよい。
【００５４】
医薬組成物（例えば、経口投与または注射による送達に対して）は液体の形態であってよい。液体組成物は、例えば、少なくとも１種の以下のものを含み得る：無菌の希釈剤、例えば、注射用水、食塩水溶液、生理食塩水、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ  ｍｅｄｉｕｍ）としての役目を果たすことができる不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤；抗酸化剤；キレート剤；緩衝液および張度調整のための剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースなど。非経口の調製物は、ガラスまたはプラスチックで作製されたアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与用バイアルの中に封入することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、生理食塩水を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は注射用組成物、一部の実施形態では、注射用組成物は無菌である。
【００５５】
経口製剤に対して、本開示の化合物のうちの少なくとも１種を、単独で、あるいは、錠剤、散剤、顆粒剤および／またはカプセル剤を作製するのに適当な少なくとも１種の添加物、例えば、任意の１種もしくは複数種の従来の添加物、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、着色剤、および香味剤と組み合わせて使用することができる。医薬組成物は、胃の環境の低いｐＨからの活性成分の保護および／または腸溶コーティングを提供し得る少なくとも１種の緩衝剤を含むように製剤化され得る。医薬組成物は、経口送達用に、少なくとも１種の香味剤を用いて、例えば、液体、固体もしくは半固体製剤で、かつ／または腸溶コーティングを用いて、製剤化することができる。
【００５６】
経口用製剤は、ゼラチンカプセル剤として提供され得、このゼラチンカプセル剤は、粉末状担体と共に活性化合物または生物学的化合物を含有することができる。同様の担体および希釈剤を使用して、圧縮錠を作製することができる。錠剤およびカプセル剤は、ある期間にわたる活性成分の連続放出を得るための持続放出製品として製造され得る。圧縮錠は、いずれの不快な味覚も遮蔽し、錠剤を大気から保護するために糖コーティングもしくはフィルムコーティングされ得るか、または、消化管内で選択的に崩壊するように腸溶コーティングされ得る。
【００５７】
医薬組成物は、持続放出または緩徐放出するように製剤化され得る。このような組成物は一般的に周知の技術を使用して調製され得、例えば、口腔、直腸または皮下への埋込み、または所望のターゲット部位での埋込みにより投与され得る。持続放出製剤は、担体マトリックス中に分散した活性のある治療剤を含有することができ、そして／または速度制御膜に取り囲まれたリザーバー内に含有され得る。このような製剤内で使用するための賦形剤は生体適合性であり、それは、生分解性であってよい。一部の実施形態では、製剤は、比較的一定のレベルの活性成分の放出を提供する。持続放出製剤内に含有される活性のある治療剤の量は、埋込みの部位、放出の速度および予想される継続時間、ならびに処置または予防する状態の性質に依存する。
【００５８】
本明細書に記載されている医薬組成物は、様々な基剤、例えば、乳化基剤または水溶性基剤などと混合することによって坐剤として製剤化され得る。医薬組成物は、吸入によって投与されるエアゾール製剤として調製されてもよい。医薬組成物は、加圧した、許容される噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などへと製剤化されてもよい。
【００５９】
本開示の化合物およびこれらの化合物を含む医薬組成物を、局所的に（例えば、経皮的投与により）投与してもよい。局所的製剤は、経皮的パッチ剤、軟膏剤、ペースト剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤などの形態であってよい。局所的製剤は、浸透剤もしくは強化剤（透過促進剤とも呼ばれる）、増粘剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤のうちの１種または複数種を含み得る。物理的浸透促進剤は、例えば、イオントホレーシスなどの電気泳動技法、超音波（または「音波泳動法」）の使用などを含む。化学的浸透促進剤は、治療剤の投与前、投与と同時、または投与直後のいずれかに投与される剤であり、皮膚、特に角質層の透過性を増加させて、皮膚を通しての薬物の浸透の向上を提供する。追加的な化学的および物理的浸透促進剤は、例えば、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ、Ａ．Ｆ．  Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ（編）１９８７年、ＣＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ、Ｓｍｉｔｈら編（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９５年）；Ｌｅｎｎｅｒａｓら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、５４巻：４９９〜５０８頁（２００２年）；Ｋａｒａｎｄｅら、Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．、１９巻：６５５〜６０頁（２００２年）；Ｖａｄｄｉら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．、９１巻：１６３９〜５１頁（２００２年）；Ｖｅｎｔｕｒａら、Ｊ．  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ、９巻：３７９〜９３頁（２００１年）；Ｓｈｏｋｒｉら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．、２２８巻（１−２号）：９９〜１０７頁（２００１年）；Ｓｕｚｕｋｉら、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ、２４巻：６９８〜７００頁（２００１年）；Ａｌｂｅｒｔｉら、Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ、７１巻：３１９〜２７頁（２００１年）；Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、Ｕｒｏｌｏｇｙ、５７巻：３０１〜５頁（２００１年）；Ｋｉｉｊａｖａｉｎｅｎら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、１０巻：９７〜１０２頁（２０００年）；およびＴｅｎｊａｒｌａら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．、１９２巻：１４７〜５８頁（１９９９年）において記載されている。
【００６０】
本開示の化合物のうちの少なくとも１種の単位用量（例えば、経口または注射用の用量）を含むキットが提供される。このようなキットは、単位用量を含む容器、対象となる病的状態の処置における治療剤の使用および付随して生じる利点を説明する情報提供のためのパッケージ挿入物、ならびに／または任意選択で少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物および／またはこれを含む医薬組成物の送達のための器具または装置を含み得る。
【実施例】
【００６１】
（実施例１）
糖模倣体化合物（Ｉ）の合成
【化３】
2019502727.tif 000004
化合物３の合成：化合物２（ＷＯ２００８／０６０３７８（２００８年５月２２日公開））（８．１２ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２００ｍＬ）に溶解した。火炎乾燥した４Åモレキュラーシーブ（１８ｇ）を加え、混合物を−４０℃に冷却した。トリメチルシリルトリフレート（０．４ｍＬ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間撹拌後、塩化メチレン（９５ｍＬ）に溶解した化合物１（９．５１３ｇ、１９．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、シリンジポンプを介して５時間にわたり滴下添加した。添加が完了したら、トリメチルアミン（４．１４ｍＬ、２９．７ｍｍｏｌ）の添加により、反応混合物を−４０℃でクエンチした。１０分間撹拌後、セライトを介して反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。２２０ｇのシリカカートリッジを使用し、０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶出するコンビフラッシュを介して反応混合物を分離することによって、無色の泡状物質として化合物３を生成した（１０．０９ｇ）。ＨＰＬＣ（Ｚ５０ＮＰ）ｔＲ＝５．４４分（８９％）。
ＨＰＬＣ（Ｚ５０ＮＰ）条件：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣ．Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ  １．８ミクロンカラム。溶媒Ａ水（０．１％ＴＦＡ）；溶媒Ｂアセトニトリル（０．０７％ＴＦＡ）、勾配  ９５％Ａ〜９５％Ｂを５分間；９５％Ｂで１分間保持する；９５％Ａに１分間リサイクルさせる；３０秒間保持する。基準なし、２１０および２５４ｎｍでのＵＶ検出。
【００６２】
化合物４の合成：化合物３（１０．０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、氷浴上で冷却した。ナトリウムメトキシド（３．５当量）を加え、反応混合物を終夜撹拌して、これを室温に温めた。Ｄｏｗｅｘ酸性イオン交換樹脂の添加により、反応混合物を中和した。樹脂を濾過で除去した。溶媒を除去し、粗材料をさらに精製せずに使用した。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.48  −  7.19  (m,  15H),  5.18  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.98  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.80  (d,  J  =  1.3  Hz,  2H),  4.75  (d,  J  =  11.5  Hz,  1H),  4.66  (q,  J  =  6.0  Hz,  1H),  4.62  (d,  J  =  11.3  Hz,  1H),  4.34  −  4.27  (m,  1H),  4.11  (dd,  J  =  10.3,  3.3  Hz,  1H),  4.05  (dd,  J  =  10.2,  2.4  Hz,  1H),  3.90  (broad  s,  1H),  3.87  (dd,  J  =  6.2,  2.6  Hz,  1H),  3.80  −  3.66  (m,  3H),  3.58  −  3.53  (m,  2H),  3.45  −  3.38  (m,  1H),  3.30  (t,  J  =  9.3  Hz,  1H),  3.16  (d,  J  =  1.4  Hz,  1H),  3.09  (dd,  J  =  8.5,  4.2  Hz,  1H),  3.01  (d,  J  =  2.7  Hz,  1H),  2.90  (d,  J  =  2.1  Hz,  1H),  2.16  −  2.05  (m,  1H),  1.71  −  1.57  (m,  4H),  1.41  −  1.18  (m,  2H),  1.14  (d,  J  =  6.5  Hz,  3H),  1.11  (d,  J  =  6.3  Hz,  3H),  1.02  (m,1H).
【００６３】
化合物５の合成：ジブチルオキソスタンナン（０．７３０５ｇ、２．９３４ｍｍｏｌ）を化合物４（１．６０ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）のメタノール（１２．０ｍＬ）中溶液に加え、スラリーを４時間還流させながら撹拌した。反応混合物は約１時間後均質になった。反応混合物を室温に冷却し、次いで濃縮し、トルエン（２×）と共沸混合した。粗材料をトルエン（１２．０ｍＬ）に溶解した。臭化アリル（０．３９０６ｍＬ、４．５１４ｍｍｏｌ）を加え、これに続いて、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムヨージド（０．５４１９ｇ、１．４６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７０℃で１時間撹拌した。追加のテトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムヨージド（０．２９１８ｇ、０．７９００ｍｍｏｌ）および臭化アリル（０．４０ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を７０℃で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いで残渣をシリカゲル上に吸着した。ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するコンビフラッシュ（４０ｇカラム）で反応混合物を分離することによって、赤色の油状物質として化合物５を生成した。ＨＰＬＣ（Ｚ５０ＮＰ）ｔＲ＝４．６７５分（１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.45  −  7.22  (m,  15H),  5.95  (ddt,  J  =  17.3,  10.3,  5.7  Hz,  1H),  5.33  (dq,  J  =  17.2,  1.6  Hz,  1H),  5.23  (dq,  J  =  10.3,  1.3  Hz,  1H),  5.14  (d,  J  =  3.1  Hz,  1H),  4.97  (d,  J  =  11.5  Hz,  1H),  4.86  (d,  J  =  11.6  Hz,  1H),  4.81  (s,  2H),  4.77  (d,  J  =  11.6  Hz,  1H),  4.71  (q,  J  =  6.4  Hz,  1H),  4.62  (d,  J  =  11.5  Hz,  1H),  4.30  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  4.21  (dt,  J  =  5.8,  1.4  Hz,  2H),  4.09  (dd,  J  =  4.3,  2.8  Hz,  2H),  4.00  (dd,  J  =  3.4,  1.2  Hz,  1H),  3.89  (dd,  J  =  11.5,  6.4  Hz,  1H),  3.80  −  3.67  (m,  3H),  3.66  (t,  J  =  6.0  Hz,  1H),  3.42  (dd,  J  =  6.4,  5.0  Hz,  1H),  3.38  −  3.25  (m,  3H),  2.78  (s,  1H),  2.63  (s,  1H),  2.16  −  2.07  (m,  1H),  1.81  −  1.46  (m,  2H),  1.42  −  1.19  (m,  2H),  1.15  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H),  1.14  −  1.07  (m,  4H),  1.07  −  0.96  (m,  1H).
【００６４】
化合物６の合成：水素化ナトリウム（鉱油中６０％、０．９２１ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０．０ｍＬ）に加え、生成したスラリーを氷浴上で冷却した。化合物５（３．４５ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５．０ｍＬ）中溶液を１０分間にわたり滴下添加した。氷浴上で３０分間撹拌した後、臭化ベンジル（２．４６ｍＬ、２０．７ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を継続した。２時間後、メタノール（２ｍＬ）の添加により反応混合物をクエンチした。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（５０ｍＬ）および水（２５ｍＬ）で希釈し、分液ロートに移した。混合物をジクロロメタン（３×）で抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ３飽和溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させ、次いで濃縮した。残渣をシリカゲル上に吸着させ、４０ｇのシリカカートリッジを使用し、ヘキサン中０〜３０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するコンビフラッシュで精製することによって、白色の泡状物質として化合物６を生成した。ＨＰＬＣ（Ｚ５０ＮＰ）ｔＲ＝６．８２４分（１００％）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.47  −  7.12  (m,  30H),  5.98  (dtt,  J  =  17.3,  10.3,  5.7  Hz,  1H),  5.36  (dq,  J  =  17.1,  1.7  Hz,  1H),  5.20  (dq,  J  =  9.0,  1.3,  1H),  5.02  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.95  (dd,  J  =  10.7,  4.6  Hz,  2H),  4.86  (q,  J  =  6.4  Hz,  1H),  4.81  (d,  J  =  11.7  Hz,  1H),  4.72  (d,  J  =  11.3  Hz,  2H),  4.68  −  4.55  (m,  3H),  4.52  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.44  (m,  4H),  4.27  −  4.23  (m,  2H),  4.06  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.01  −  3.94  (m,  3H),  3.73  (t,  J  =  8.8  Hz,  1H),  3.68  −  3.57  (m,  3H),  3.52  (dd,  J  =  8.7,  4.7  Hz,  1H),  3.44  (dd,  J  =  9.7,  2.9  Hz,  1H),  3.30  (s,  1H),  3.25  (t,  J  =  9.4  Hz,  1H),  2.12  (broad  d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  1.69  −  1.60  (m,  4H),  1.43  −  1.17  (m,  2H),  1.10  (d,  J  =  6.5  Hz,  3H),  1.06  −  0.94  (m,  1H).
【００６５】
化合物７の合成：塩化パラジウム（ＩＩ）（４３．５ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）を、化合物６（１．００ｇ、０．９８１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）および塩化メチレン（５ｍＬ）中撹拌溶液に室温で加えた。混合物を２時間撹拌した。セライトを介して混合物を濾過し、濃縮前にトリエチルアミン（１ｍＬ）を加えた。緑色の残渣をシリカゲル上に吸着させ（１０％トリエチルアミンで緩衝）、１２ｇのシリカカートリッジを使用して、ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するコンビフラッシュで精製することによって、白色の泡状物質として化合物７を生成した。ＨＰＬＣ（Ｚ５０ＮＰ）ｔＲ＝６．２７３分（１００％）。ＭＳデータ：Ｃ６１Ｈ７０Ｏ１１に対する計算値：１００２．３（Ｍ＋Ｎａ、ポジティブモード）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.48  −  7.13  (m,  30H),  5.09  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  5.04  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.84  (q,  J  =  6.0  Hz,  1H),  4.82  (d,  J  =  11.9  Hz,  1H),  4.73  (d,  J  =  11.7  Hz,  1H),  4.70  −  4.64  (m,  2H),  4.64  −  4.58  (m,  2H),  4.56  (d,  J  =  10.6  Hz,  1H),  4.49  (d,  J  =  10.6  Hz,  1H),  4.49  −  4.38  (m,  2H),  4.16  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.06  −  3.93  (m,  3H),  3.77  −  3.52  (m,  5H),  3.39  −  3.35  (m,  1H),  3.26  (t,  J  =  9.4  Hz,  1H),  2.39  (d,  J  =  3.7  Hz,  1H),  2.14  (broad  d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  1.71  −  1.64  (m,  2H),  1.42  −  1.16  (m,  2H),  1.12  (d,  J  =  9.0  Hz,  3H),  1.11  (d,  J  =  6.0  Hz,  3H),  1.08  −  0.95  (m,  1H).
【００６６】
化合物１０の合成：臭素（０．０８１ｍＬ、１．５８３ｍｍｏｌ）を、エチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−１−チオヘキソピラノシド（化合物８；Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  ｃａｔ＃ＭＥ０５４２９）（０．８９５８ｇ、１．５３２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２．０３ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、０℃で４５分間滴下添加した。シクロヘキセン（０．１８１０ｍＬ、１．７８７ｍｍｏｌ）を加え、撹拌をもう１５分間継続して、化合物９の溶液を生成した。
【００６７】
別個のフラスコ内に、臭化テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウム（０．６５８４ｇ、２．０４２ｍｍｏｌ）、４ＡＭＳ（１．４ｇ）、および２，６−ルチジン（０．２３６６ｍＬ、２．０４２ｍｍｏｌ）を、化合物７（０．５００ｇ、０．５１１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３．７ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．７ｍＬ）中溶液に室温で加え、１時間撹拌した。化合物９の溶液を一度に加え、生成した反応混合物を室温で２日間撹拌した。セライトを介して混合物を濾過した。濾液を濃縮し、トリエチルアミン（１０％）で処理したシリカゲル上に残渣を吸着させた。１２ｇのシリカカートリッジを使用し、ヘキサン中０〜３０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するコンビフラッシュで粗生成物を精製することによって、白色の泡状物質として化合物１０を生成した。ＨＰＬＣ（Ｚ５０Ｐ）ｔＲ＝６．７５０分（９３％）。ＭＳデータ：Ｃ６１Ｈ７０Ｏ１１に対する計算値：１５２４．４（Ｍ＋Ｎａ、ポジティブモード）。1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.54  −  7.09  (m,  50H),  5.31  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  5.11  (d,  J  =  7.0  Hz,  1H),  5.09  −  5.03  (m,  2H),  4.97  (d,  J  =  11.5  Hz,  1H),  4.94  −  4.83  (m,  3H),  4.80  (s,  1H),  4.79  (d,  J  =  2.2  Hz,  1H),  4.77  −  4.69  (m,  1H),  4.69  −  4.55  (m,  5H),  4.51  (d,  J  =  7.6  Hz,  2H),  4.43  −  4.33  (m,  3H),  4.30  (d,  J  =  3.3  Hz,  2H),  4.21  (dd,  J  =  10.2,  3.3  Hz,  1H),  4.09  (d,  J  =  2.7  Hz,  1H),  4.06  (d,  J  =  1.9  Hz,  2H),  4.04  −  3.93  (m,  3H),  3.86  (dd,  J  =  10.0,  2.5  Hz,  1H),  3.82  −  3.70  (m,  3H),  3.65  (dt,  J  =  8.5,  4.2  Hz,  1H),  3.61  −  3.48  (m,  2H),  3.36  −  3.22  (m,  3H),  2.09  (broad  d,  J  =  13.4  Hz,  1H),  1.83  (s,  1H),  1.73  −  1.58  (m,  3H),  1.40  −  1.20  (m,  3H),  1.17  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H),  1.15  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H),  1.11  −  1.01  (m,  1H).
ＨＰＬＣ（Ｚ５０Ｐ）条件：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ．  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ  １．８ミクロンカラム。溶媒Ａ水（０．１％ＴＦＡ）；溶媒Ｂアセトニトリル（０．０７％ＴＦＡ）、勾配、３分間、９５％Ａ〜１００％Ｂ；１００％Ｂで４分間保持する；９５％Ａに１分間リサイクルさせる；３０秒保持する。基準なし、２１０および２５４ｎｍでＵＶ検出。
【００６８】
糖模倣体化合物（Ｉ）の合成：水酸化パラジウム（５０％の湿ったＣ上の２０％Ｐｄ（ＯＨ）２、０．２１６ｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）を、化合物１０（０．４２５ｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）のメタノール（２３ｍＬ）および１，４−ジオキサン（２．３２ｍＬ）中の脱気した溶液に、水１滴と共に加えた。反応混合物を水素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。セライトを介して混合物を濾過し、ケーキをメタノールで洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、次いで、ＤＭＦ（１ｍＬ、いくらかの加熱が必要）に溶解した。ＤＭＦをコンビフラッシュゴールドカラム（４ｇ）に充填し、それに対して真空を引いてＤＭＦを除去することによって、残渣を精製した。次いで、これを別の４ｇのコンビフラッシュカラムに付け、ＤＣＭ中０〜５０％ＭｅＯＨの勾配を用いてコンビフラッシュユニットで溶出することによって、白色の固体として糖模倣体化合物（Ｉ）を生成した。ＭＳデータ：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ１６に対する計算値：６２３．４（Ｍ＋Ｎａ、ポジティブモード）；５９９．３（Ｍ−Ｈ、ネガティブモード）。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  5.03  (s,  1H),  4.98  (s,  1H),  4.77  (q,  J  =  6.8  Hz,  1H),  4.41  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.09  (t,  J  =  6.6  Hz,  1H),  4.05  (s,  2H),  3.89  (s,  1H),  3.84  (d,  J  =  10.7  Hz,  1H),  3.78  (d,  J  =  10.7  Hz,  1H),  3.75  −  3.68  (m,  2H),  3.68  −  3.56  (m,  9H),  3.51  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  3.49  −  3.44  (m,  1H),  3.11  (t,  J  =  9.6  Hz,  1H),  2.04  −  1.97  (m,  1H),  1.61  −  1.41  (m,  3H),  1.16  (q,  J  =  11.9  Hz,  2H),  1.06  (d,  J  =  6.2  Hz,  3H),  0.97  (d,  J  =  6.3  Hz,  3H).
（実施例ＩＩ）
ＰＡ−ＩＬアンタゴニスト活性に対するアッセイ
【００６９】
３７℃で２時間インキュベートすることによって、マイクロタイタープレート（プレート１）のウェルをＰＡ−ＩＬ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）でコーティングした。次いで、Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ、Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ、ＭＮ）と１：１ｖ／ｖ混合した、ＴＢＳ−Ｃａ（５０ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２  ｐＨ７．４）中で希釈した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の添加により、ウェルを２時間ブロックする。第２の低結合丸底マイクロタイタープレート（プレート２）内に、試験アンタゴニストを、ＴＢＳ−Ｃａ／Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（６０μｌ／ウェル）中の１％ＢＳＡ中で段階希釈する。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した、α−ガラクトース−ＰＡＡ−ビオチン（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の予め形成されたコンジュゲートをプレート２の各ウェルに加える（２μｇ／ｍｌの６０μｌ／ウェル）。次いで、プレート１をＴＢＳ−Ｃａで洗浄し、１００μｌ／ウェルをプレート２からプレート１に移す。室温で２時間インキュベーション後、プレート１を洗浄し、１００μｌのＴＭＢ試薬（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を各ウェルに加える。室温で５分間のインキュベーション後、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を添加することによって反応を停止し、マイクロタイタープレートリーダーにより４５０ｎｍでの光の吸光度を決定する。アンタゴニスト濃度の関数として吸光度をプロットし、最大吸光度の５０％（ＩＣ５０）が得られる濃度をプロットから決定する。
【表Ａ】
2019502727.tif 000005
（実施例ＩＩＩ）
ＰＡ−ＩＩＬアンタゴニスト活性に対するアッセイ
【００７０】
３７℃で２時間インキュベートすることによって、マイクロタイタープレート（プレート１）のウェルをＰＡ−ＩＩＬ（Ｄｒ．Ｗｉｍｍｅｒｏｖａ、Ｍａｓａｒｙｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｂｒｎｏ、Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）でコーティングする。次いで、Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ、Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ、ＭＮ）と１：１ｖ／ｖ混合したＴＢＳ−Ｃａ（５０ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２  ｐＨ７．４）中で希釈した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の添加により、ウェルを２時間ブロックする。第２の低結合丸底のマイクロタイタープレート（プレート２）内に、試験アンタゴニストを、ＴＢＳ−Ｃａ／Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（６０μｌ／ウェル）中の１％ＢＳＡ中で段階希釈する。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と混合した、フコース−ＰＡＡ−ビオチン（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の予め形成されたコンジュゲートをプレート２の各ウェルに加える（２μｇ／ｍｌの６０μｌ／ウェル）。次いで、プレート１をＴＢＳ−Ｃａで洗浄し、１００μｌ／ウェルをプレート２からプレート１に移す。室温で２時間インキュベーション後、プレート１を洗浄し、１００μｌのＴＭＢ試薬（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を各ウェルに加える。室温で５分間のインキュベーション後、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を添加することによって反応を停止し、マイクロタイタープレートリーダーにより４５０ｎｍでの光の吸光度を決定する。アンタゴニスト濃度の関数として吸光度をプロットし、最大吸光度の５０％（ＩＣ５０）が得られる濃度をプロットから決定する。
【表Ｂ】
2019502727.tif 000006
（実施例ＩＶ）
急性肺損傷モデル
【００７１】
雄のＢａｌＢ／ｃマウスのコホート（ｎ＝５／群）は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰａＯの低（１〜２×１０６ＣＦＵ）または高（１〜２×１０７ＣＦＵ）接種材料を、生理食塩水、または複数回用量レベル（それぞれ１０、２５および５０ｍｇ／ｋｇに対応する、８ｎＭ、２０ｎＭおよび４０ｎＭ）の糖模倣体化合物（Ｉ）もしくは化合物Ａと組み合わせて鼻腔内感染させた。細菌は、糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａと共に、２４ゲージ供給ニードル（総体積０．０５ｍＬ）を使用して、中咽頭を介した気管内（ｉ．ｔ．）注射により、各マウスの肺に直接同時投与した。
【００７２】
臨床スコア。動物は、感染から２４時間後から開始して毎日観察し、累積的な臨床（疾患）スコアを各マウスに対して決定した（図４および６）。評価したパラメーターは、（ａ）外観について（滑らか→ごわごわした）；（ｂ）体温（正常→冷たい）；（ｃ）運動（動いている→衰弱した）；および（ｄ）体重減少であった。臨床採点法は、０（正常、未感染の外観）〜１０（重度の障害が起きている）の範囲にわたった。
【００７３】
生存。病的状態／死亡について動物を毎日観察し、死亡の日を記録した。カプラン−マイヤー分析を使用して、生存期間データから生存関数を推定し、ログランク検定から統計値を誘導した。
【００７４】
低接種材料での結果。２×１０６ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと、４０ｍＭ糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａとの同時投与は、生理食塩水を同時投与された動物と比較して、生存利益をもたらした（図３）。糖模倣体化合物（Ｉ）および化合物Ａ群の比較は、糖模倣体化合物（Ｉ）の投与が、化合物Ａで処置した群の６７％生存（生理食塩水に対してｐ＜０．０５）と比較して１００％生存（生理食塩水に対してｐ＜０．００５）をもたらしたことを示した。糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａで処置したマウスの生存期間には統計的差異は観察されなかった（ｐ＝０．１３）。
【００７５】
高接種材料での結果。急性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ肺感染症のより攻撃的なモデルにおいて、２０または４０ｍＭ糖模倣体化合物（Ｉ）の同時投与は、９６時間において、６０％（生理食塩水に対してｐ＜０．０５）および１００％（生理食塩水に対してｐ＜０．０１）の生存をそれぞれもたらした（図５）。同一の実験条件下で、等しい用量の化合物Ａの同時投与は生存に影響を与えなかった。４０ｍＭ糖模倣体化合物（Ｉ）で処置した未感染のマウスにおいて病的状態も死亡も観察されなかったことから、高接種材料モデルにおける、糖模倣体化合物（Ｉ）の改善された効力は非特異的毒性作用の結果ではなかった。
（実施例Ｖ）
急性肺損傷モデル−トブラマイシンでの処置
【００７６】
マウスに、化合物Ａまたは糖模倣体化合物（Ｉ）と共に、またはこれらなしで、２×１０７のＣＦＵ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを１２ｍｇ／ｋｇトブラマイシンと組み合わせて同時投与した。細菌チャレンジの６時間後、トブラマイシンを腹腔内投与した。研究した用量範囲にわたり（８、２０および４０ｍＭ）、トブラマイシンとの化合物Ａの投与は、生存上の利益をもたらさなかった（図７）。対照的に、８、２０または４０ｍＭ糖模倣体化合物（Ｉ）と組み合わせたトブラマイシンの投与後、生存は有意に増加した（図７）。最も低い用量群、８ｍＭの糖模倣体化合物（Ｉ）は、４０％の生存（生理食塩水と比較して、ｐ＝０．０６７４）をもたらしたのに対して、２０および４０ｍＭの用量レベルは、このモデルにおいて１００％生存をもたらした（生理食塩水に対してｐ＜０．０１）。
（実施例ＶＩ）
マウスにおけるＰ．Ａｅｒｕｇｉｎｏｓ誘発性感染症の急性モデルの処置としての糖模倣体化合物（Ｉ）および化合物Ａの作用の評価：異なる接種時間におけるトブラマイシンと関連した化合物活性の評価
材料および方法
【００７７】
菌種。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１株は、基準株として使用される、配列が決定された、よく特徴付けられた株である。細菌は、凍結ストックから、Ｌｙｓｏｇｅｎｙ  Ｂｒｏｔｈ  Ｌｅｎｎｏｘ（ＬＢ）（ＢＤ  Ｅｕｒｏｐｅ、Ｌｅ  ｐｏｎｔ  ｄｅ  Ｃｌａｉｘ、Ｆｒａｎｃｅ）内、軌道振盪（３００ｒｐｍ）下、３７℃で終夜増殖させた。二次培養は、２時間の間実施し、その後遠心分離（２０００ｇ、５分）で細菌を収集し、滅菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。次いで、Ａ６００（Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ  １０  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｍｅｔｅｒ、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ、Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ、ＣＴ）で光学密度を測定することにより濁度を概算し、段階希釈およびＬＢ寒天プレート上での平板培養により検証した。
【００７８】
試験および対照品。ビヒクルはリン酸緩衝生理食塩水であった。試験溶液はＰＢＳ中の糖模倣体化合物（Ｉ）４０ｍＭ、およびＰＢＳ中の化合物Ａ、４０ｍＭである。試験品は、ＧｌｙｃｏＭｉｍｅｔｉｃｓにより提供され、−２０℃で貯蔵した。トブラマイシン（１ｇ）は、Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ  ＥＲＥＭＰＨＡＲＭＡ（２５  ｒｕｅ  Ｇｒｅｆｆｕｌｈｅ−９２３００  Ｌｅｖａｌｌｏｉｓ）により提供され、（＋４℃）で貯蔵した。
【００７９】
マウス感染性肺炎。Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ（Ｒｏｕｔｅ  ｄｕ  Ｇｅｎｅｓｔ、５３９４０  Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓａｉｎｔ−Ｉｓｌｅ）から購入した雄のＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス（８週齢）は、Ｌｉｌｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙの病原体を含まないユニット内で飼育し、食物および水を自由に与えた。
【００８０】
マウスは、セボフルラン（Ｓｅｖｏｒａｎｅ（商標）Ａｂｂｏｔｔ、Ｑｕｅｅｎｓｂｏｒｏｕｇｈ、ＵＫ）の吸入により軽く麻酔し、自発呼吸を維持させ、その後、合計１×１０６ＣＦＵ／マウス（致死接種物（lethal  inoculate）である２×１０６ＣＦＵ／マウスを用いて行ったトブラマイシン実験を除く）に相当する５０μＬの細菌溶液を鼻腔内投与した。対照マウスには５０μＬのＰＢＳを与える。すべてのマウスを２４時間の時点で屠殺した（生存実験を除いて、マウスは、細菌感染の９６時間後、体重および臨床スコアについてモニターした）。糖模倣体化合物（Ｉ）もしくは化合物Ａを、接種材料と共に、または感染後、ＩＮ投与した（図８および図１２を参照されたい）。適当な群において、感染の２４時間後、腹腔内投与された１２ｍｇ／ｋｇトブラマイシンによりマウスを処置した。
【００８１】
処置効果。各群に対して、チャレンジ後の疾患スコアおよび毎日の死亡率を用いて、処置効果を測定した。動物の臨床的外観を評価する疾患スコアの進展を０〜１０でスコア付けした４項目について評価し、表１に要約した（体温、剛毛の外観、挙動および体重減少；０：健康なマウス、１０：瀕死のマウス）。すべての疾患スコアの評価は、実験全体にわたり２名の実験者により実施した。
【表１】
2019502727.tif 000007
（臨床スコア＝［（毛皮スコア＋温度スコア＋運動スコア）＋（％体重減少／（−５））］）
【００８２】
統計分析。プリズム５ソフトウエア（Ｇｒａｐｈ−Ｐａｄソフトウエア、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）を使用して、統計分析を実施した。値は平均値±ＳＥＭとして表現されている。ノンパラメトリックマン−ホイットニー検定で比較群を分析した。ログ−ランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定を使用して、生存曲線を分析した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１  結果は平均値＋／−標準誤差である。
結果：単剤治療実験
【００８３】
図８に記載されているように、１×１０７ＣＦＵのＰａＯ１および糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａを、異なる時間点において、８週齢のＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雄のマウスに鼻腔内投与した。
【００８４】
本発明者らは、体重減少、臨床的疾患スコアおよび死亡を分析した。それぞれ５匹のマウスの１４の独立したコホートを試験した。各コホートは試験条件の等しい表示を含んだ。すべての段階１のコホートを４日間にわたり試験した。段階１の終わりには、上記７つの処置群のそれぞれに対して合計１０匹のマウスが存在した。
【００８５】
実験の間生存した非感染マウスと比較して、糖模倣体化合物（Ｉ）処置または化合物Ａ処置のいずれも受けなかった感染マウスはすべてＨ６６において死亡した。本発明者らの結果は、細菌と共に投与した糖模倣体化合物（Ｉ）の生存に対して有意な効果を示し、ＰＡ０１投与後のこのモデルにおいて９０％の生存が観察される（図９）。
【００８６】
異なる化合物で処置したすべての群は、有意な生存の増加を示し、化合物が感染の過程において早期に注射された場合、効力がより良い。感染の１時間後の糖模倣体化合物（Ｉ）の投与は、５４．５％の生存をもたらし、これは４時間後に４０％、および６時間後に２５％へと落ちる。比較すると、感染の４時間後の化合物Ａは２０％の生存と関連する。糖模倣体化合物（Ｉ）で処置したマウスについて生存は、化合物Ａと比較して、４時間の時点で２倍である。
【００８７】
体重減少および疾患スコアの両方で観察されたデータは生存実験と一致する。図１０および１１を参照されたい。本発明者らは、体重および疾患スコアに対して２つの化合物の肯定的な効果を観察している。糖模倣体化合物（Ｉ）は化合物Ａよりも優れており、効力もまた投与のタイミングと関連し、早いほど良い。
結果：トブラマイシンとの関連
【００８８】
８週齢のＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雄のマウスに、２×１０７ＣＦＵのＰＡＯ１および糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａを、トブラマイシン１２ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射と共に、またはなしで、異なる時点で鼻腔内投与した（図１２）。
【００８９】
トブラマイシンの関連は、糖模倣体化合物（Ｉ）とトブラマイシンとの間の相乗作用により非常に有望な結果を示している。例えば、図１３を参照されたい。実際に、Ｈ４の投与に注目すると、糖模倣体化合物（Ｉ）単独は３０％の生存と関連し、トブラマイシン単独は７０％まで上がるが、関連は９０％の生存に到達する。図１３。興味深いことに、トブラマイシンが１０％に下がる６時間の時点では、糖模倣体化合物（Ｉ）が２０％に下がり（図９より）、関連は５０％に到達する。これらのデータは、糖模倣体化合物（Ｉ）を抗生物質のアジュバントとして使用して、生存への相乗効果が得られることを支持している。
【００９０】
時間をわたっての体重減少の分析は興味深く、感染プロセスに対するいくつかの新規の洞察をもたらす（図１４を参照されたい）。体重減少はより高い生存を有する動物に対して増加しており、エネルギーを動員し、基礎代謝を増加させる能力がより良い宿主応答に関連しているようにみえる。疾患スコアで観察された結果もまた生存データと一致する。図１５。トブラマイシンおよび糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａのいずれかを投与した２つの群は、４時間においてより低いスコアと関連する。
考察
【００９１】
本発明者らは、第１のセットの実験を用いて、糖模倣体化合物（Ｉ）と化合物Ａの両方の生存に対する肯定的な効果を確認している。本発明者らは、応答が明確に時間依存性であり、化合物が早期に投与されるほど、生存がより良くなることを示す。この設定では、糖模倣体化合物（Ｉ）は化合物Ａより良い。
【００９２】
第２のセットの実験では、本発明者らは、６時間の時点でのトブラマイシン単独が生存予後を変えない場合、糖模倣体化合物（Ｉ）とトブラマイシンとの間に潜在的な相乗効果、さらには効果の持続までをも観察している。体重減少の分析に対して得たデータから、推定される機序は宿主応答と代謝の増加との相互作用であり得る。
【００９３】
全体的に、これらすべてのデータは、嚢胞性線維症（ＣＦ）環境、特に、以下に記載されているＣＦの３つの古典的段階において特に探究すべき潜在的経路を示唆している。
【００９４】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓによる最初の感染：理論に拘束されることなく、効力を説明することに潜在的に関連する機序に基づき、糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａの先制投与は、最初に付着およびコロニー形成を減少させ得、第２に病毒性またはコロニー形成に対する宿主応答またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの基礎代謝まで潜在的に影響を与え得ると主張することができる。この態様を測定するための潜在的な方式は、慢性モデルを使用し、コロニー形成能力ならびにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの代謝（時間をわたってのＬａｓ／Ｒｈｌ／アルギネートの発現）を評価することであり得る。マウスの７日間モデルがこれらの回答を提供し得る。
【００９５】
時間をわたってのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの確立：本発明者らが開発したモデルは７日を越えて生存できず、糖模倣体化合物（Ｉ）または化合物Ａ（またはこれらの化合物を抗生物質と組み合わせる）が時間をわたってのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓによるコロニー形成を改変できるかどうか確かめるためには、少なくとも３週間生存するモデルが必要となり得る。以前のデータから（特に、関連データ）、ある役割を仮定することができる。
【００９６】
増悪：結果は、糖模倣体化合物（Ｉ）および化合物Ａは単独で効率的であり、トブラマイシンとの関連もまた非常に効率的であることを支持し、吸入された糖模倣体化合物（Ｉ）および化合物Ａに対する可能性のある臨床的意義を示唆している。ＣＦにおいてトブラマイシンがエアゾール剤で使用されていることを知れば、この組合せの臨床評価が支持される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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