(57)【要約】  本発明は、ＦＧＦＲ阻害剤として作用するアルキニル置換複素環化合物、そのための調製方法およびその医学的用途に関する。特に、本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物およびその薬学的に許容される塩と、該化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物と、該化合物またはその薬学的に許容される塩を使用することにより、ＦＧＦＲ関連疾患、特に腫瘍を治療および／または予防する方法と、該化合物またはその薬学的に許容される塩の調製方法と、に関する。本発明はまた、ＦＧＦＲ関連疾患、特に腫瘍を治療および／または予防するための薬物の調製における、化合物もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらの化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の使用にも関し、一般式（Ｉ）中の各置換基の定義は、明細書中の定義と同じである。【化１】2019529444.tif 000063
2019529444.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で示される化合物であって、
【化１】
2019529444.tif 000056
式中、
Ａが、ＮまたはＣＲ２であり、
環Ｂが、ベンゼン環または５〜６員ヘテロアリール環であり、前記ベンゼン環および前記ヘテロアリール環が、１つ以上のＧ１で任意に置換され、
Ｒ１が、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキルまたは−ＮＨＲ３から独立して選択され、
Ｒ２が、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキルから独立して選択され、アルキルが、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシまたは−ＯＣ１−６アルキルで任意に置換され、
Ｒ３が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルが、ハロゲン、シアン化物、−ＯＲ４、−ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルで任意に置換され、
Ｘが、存在しないか、またはＣ１−６アルキレンであり、
Ｙが、存在しないか、またはＣ３−８シクロアルキレン、３〜８員ヘテロシクリレン、アリーレンもしくはヘテロアリーレンから選択され、シクロアルキレン、ヘテロシクリレン、前記アリーレンおよび前記ヘテロアリーレンが、１つ以上のＧ２で任意に置換され、
Ｚが、シアノ、−ＮＲ７ＣＮ、
【化２】
2019529444.tif 000057
から独立して選択され、
結合ａが、二重結合または三重結合であり、
前記結合ａが二重結合である場合、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、それぞれ独立して、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルは、１つ以上のＧ３で任意に置換され、
ＲａおよびＲｂまたはＲｂおよびＲｃが、それらが結合している炭素原子と任意に一緒になって、ヘテロ原子を含有する任意の３〜６員環を形成し、
前記結合ａが三重結合である場合、ＲａおよびＲｃは存在せず、Ｒｂは、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルは、１つ以上のＧ４で任意に置換され、
Ｒ７が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルが、１つ以上のＧ５で任意に置換され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４およびＧ５が、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、−ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８および−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ９からなる群からそれぞれ独立して選択され、前記アルキル、前記アルケニル、前記アルキニル、前記シクロアルキル、前記ヘテロシクリル、前記アリールおよび前記ヘテロアリールが、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１１および−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）ｍＲ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリールおよびフェニルからなる群からそれぞれ独立して選択される、及び
ｍが、１または２である、
またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物である、化合物。
【請求項２】
ＡがＮまたはＣＨ、好ましくはＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
環Ｂがベンゼン環である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
下記一般式（ＩＩ）で示される化合物であって、
【化３】
2019529444.tif 000058
式中、
Ｇａ、Ｇｂ、Ｇｃ、およびＧｄが、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群からそれぞれ独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルが、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１および−ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、Ｇａ、Ｇｂ、Ｇｃ、およびＧｄが、それぞれ独立して、好ましくは−ＯＣ１−２アルキルまたはハロゲンであり、
Ａ、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ、Ｙ、Ｚが、請求項１に定義される通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
下記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物であって、
【化４】
2019529444.tif 000059
式中、
ＧａおよびＧｂが、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群からそれぞれ独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルが、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１および−ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、ＧａおよびＧｂが、それぞれ独立して、好ましくは−ＯＣ１−２アルキルであり、
Ａ、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ、Ｙ、Ｚが、請求項１に定義される通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、Ｈ、−ＮＨ２および−ＮＨＲ３から独立して選択され、
Ｒ３が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルが、ハロゲン、シアノ、−ＯＲ４、−ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルで置換される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、Ｈ、−ＮＨ２および−ＮＨＣ１−６アルキルから独立して選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、存在しないか、またはＣ１−６アルキレンであり、
Ｙが、存在しないか、またはＣ３−８シクロアルキレンもしくは３〜８員ヘテロシクリレンであり、
Ｚが、シアノ、−ＮＲ７ＣＮ、
【化５】
2019529444.tif 000060
から独立して選択され、
結合ａが、二重結合または三重結合であり、
前記結合ａが二重結合である場合、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルからそれぞれ独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、３〜６員ヘテロシクリル、−ＯＲ８および−ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
前記結合ａが三重結合である場合、ＲａおよびＲｃは存在せず、Ｒｂは、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、前記シクロアルキルおよび前記ヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、３〜６員ヘテロシクリル、−ＯＲ８および−ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
Ｒ４、Ｒ８およびＲ９が、ＨおよびＣ１−６アルキルからそれぞれ独立して選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、以下、
【化６−１】
2019529444.tif 000061
【化６−２】
2019529444.tif 000062
またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物、および薬学的に許容される担体および賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
ＦＧＦＲ関連疾患、好ましくは腫瘍（例えば、非小細胞肺癌、食道癌、黒色腫、横紋筋肉腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、前立腺癌および肝臓癌、より好ましくは肝臓癌、胃癌、非小細胞肺癌および膀胱癌）の治療および／または予防のための薬物の調製における、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物、あるいは請求項１０に記載の医薬組成物の、使用。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物、あるいは請求項１０に記載の医薬組成物の、薬物としての使用。
【請求項１３】
ＦＧＦＲ関連疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦＧＦＲ阻害剤として作用する新規アルキニル置換複素環化合物またはその薬学的に許容される塩と、該化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物と、アルキニル置換複素環化合物またはその薬学的に許容される塩の調製方法と、ＦＧＦＲ関連疾患、特に腫瘍を治療および／または予防するための薬物の調製における、アルキニル置換複素環式化合物もしくはその薬学的に許容される塩、またはアルキニル置換複素環式化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の使用と、該化合物または組成物を使用することにより、ＦＧＦＲ関連疾患、特に腫瘍を治療および／または予防するための方法と、に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）は、構造的に膜外リガンド結合ドメイン、単一の膜貫通ドメイン、および膜内チロシンキナーゼから構成される一種の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。それは主に４つのサブタイプ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３およびＦＧＦＲ４を含む。それとそのリガンドである線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、細胞シグナル伝達において重要な調節的役割を果たす。細胞外刺激シグナルとして、ＦＧＦはＦＧＦＲの細胞外ドメインに結合し、その膜内チロシンキナーゼのリン酸化を引き起こし、それによって細胞増殖、分化および転移を調節する一連の下流シグナル伝達経路を活性化する。
【０００３】
非小細胞肺癌、乳癌、胃癌、肝臓癌、膀胱癌、子宮内膜癌、前立腺癌、子宮頸癌、結腸癌、食道癌、骨髄腫および黒色腫等の様々な腫瘍がＦＧＦ／ＦＧＦＲの発現および活性化と密接に関連している（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１２、１８、１８５５）。研究により、ＦＧＦＲ１の増幅が非小細胞肺癌の２０％を占め、ＦＧＦＲ２の増幅が胃癌の約５％を占め、ＦＧＦＲ３の突然変異が非浸潤性膀胱癌の約７０％を占め、ＦＧＦＲ４が肝臓癌で増幅されることが示されている（ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２、７、ｅ３６７１３）。したがって、ＦＧＦＲを標的とする阻害剤の開発は、抗腫瘍薬の研究において注目の話題となっている（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ  ２０１４、１９、５１）。
【０００４】
現在、Ｐｆｉｚｅｒのスニチニブ、Ｅｉｓａｉのレンバチニブ、およびＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍのニンテダニブ等の、ＦＧＦＲ特異的ではない薬物がいくつか市販されているが、現在利用可能なＦＧＦＲ特異的阻害剤は存在しない。臨床段階に入る具体的なＦＧＦＲ阻害剤は、ＨＭＰＬ−４５３、ＢＧＪ−３９８、ＬＹ−２８７４４５５、ＡＺ−４５４７、ＪＮＪ−４２７５６４９３、ＴＡＳ−１２０、ＡＲＱ−０８７、およびＢＬＵ−５５４を含む。
【０００５】
ＦＧＦＲ阻害剤の開発は、多くのバイオ医薬品会社の注目を集めているが、それらは種々の悪性腫瘍の治療において有望であるため、なおも新しい化合物を開発する必要がある。本発明者らの継続的な努力により、本発明は、一般式（Ｉ）によって表される構造を有する化合物を設計し、そのような構造を有する化合物が優れた機能および効果を示すことが見出された。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、ＦＧＦＲ阻害剤、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物として一般式（Ｉ）によって表される化合物を提供し、
【化１】
2019529444.tif 000003
式中、
Ａは、ＮまたはＣＲ２であり、
環Ｂは、ベンゼン環または５〜６員ヘテロアリール環であり、ベンゼン環およびヘテロアリール環は、１つ以上のＧ１で任意に置換され、
Ｒ１は、独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキルまたは−ＮＨＲ３から選択され、
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキルから選択され、アルキルは、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシまたは−ＯＣ１−６アルキルで任意に置換され、
Ｒ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアン化物、−ＯＲ４、−ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルで任意に置換され、
Ｘは、存在しないか、またはＣ１−６アルキレンであり、
Ｙは、存在しないか、またはＣ３−８シクロアルキレン、３〜８員ヘテロシクリレン、アリーレンもしくはヘテロアリーレンから選択され、シクロアルキレン、ヘテロシクリレン、アリーレンおよびヘテロアリーレンは、１つ以上のＧ２で任意に置換され、
Ｚは、独立して、シアノ、−ＮＲ７ＣＮ、
【化２】
2019529444.tif 000004
から選択され、
結合ａは、二重結合または三重結合であり、
結合ａが二重結合である場合、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、それぞれ独立して、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、１つ以上のＧ３で任意に置換され、
ＲａおよびＲｂまたはＲｂおよびＲｃは、任意に、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ヘテロ原子を含有する任意の３〜６員環を形成し、
結合ａが三重結合である場合、ＲａおよびＲｃは存在せず、Ｒｂは、独立して、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、１つ以上のＧ４で任意に置換され、
Ｒ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、１つ以上のＧ５で任意に置換され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４およびＧ５は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、−ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８および−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ９からなる群から選択され、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１１および−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）ｍＲ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリールおよびフェニルからなる群から選択され、
ｍは、１または２である。
【０００７】
本発明の一実施形態は、上記一般式（Ｉ）によって表される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物に関し、式中、Ａは、ＮまたはＣＨ、好ましくはＮである。
【０００８】
本発明の別の実施形態は、上記一般式（Ｉ）によって表される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物に関し、式中、環Ｂはベンゼン環である。
【０００９】
一態様において、本発明は、一般式（ＩＩ）によって表される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物を提供し、
【化３】
2019529444.tif 000005
式中、
Ｇａ、Ｇｂ、Ｇｃ、およびＧｄは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１および−ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、Ａ、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ、Ｙ、Ｚは、上で定義した通りである。
【００１０】
本発明の別の実施形態は、上記一般式（Ｉ）によって表される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物に関し、それは、下記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物であり、
【化４】
2019529444.tif 000006
式中、
ＧａおよびＧｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、３〜８員ヘテロシクリル、−ＯＲ１１および−ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、Ａ、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ、Ｙ、Ｚは、上で定義した通りである。
【００１１】
本発明の別の実施態様は、上記一般式（Ｉ）によって表される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物に関し、式中、Ｒ１は、独立して、Ｈ、−ＮＨ２および−ＮＨＣ１−６アルキルから選択される。
【００１２】
本発明の一実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、または−ＮＨ２であり得る。
【００１３】
本発明の一実施形態において、Ｇａ、Ｇｂ、Ｇｃ、およびＧｄは、それぞれ独立して、−ＯＣ１−２アルキルおよびハロゲンから選択される。
【００１４】
本発明の一実施形態において、Ｒ１は、独立して、Ｈ、−ＮＨ２および−ＮＨＲ３から選択され、Ｒ３は、独立して、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、−ＯＲ４、−ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたは３〜６員ヘテロシクリルで置換される。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）で示される化合物、そのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、またはそれらの混合物に関し、式中、
Ｘは、存在しないか、またはＣ１−６アルキレンであり、
Ｙは、存在しないか、またはＣ３−８シクロアルキレンもしくは３〜８員ヘテロシクリレンであり、
Ｚは、独立して、シアノ、−ＮＲ７ＣＮ、
【化５】
2019529444.tif 000007
から選択され、
結合ａは二重結合または三重結合であり、
結合ａが二重結合である場合、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、それぞれ独立して、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、３〜６員ヘテロシクリル、−ＯＲ８および−ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
結合ａが三重結合である場合、ＲａおよびＲｃは存在せず、Ｒｂは、独立して、Ｈ、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、３〜６員ヘテロシクリル、−ＯＲ８および−ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意に置換され、
Ｒ４、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、ＨおよびＣ１−６アルキルから選択される。
【００１６】
本発明の別の実施形態は、上記一般式（Ｉ）によって表される化合物に関し、該化合物は、
【化６−１】
2019529444.tif 000008
【化６−２】
2019529444.tif 000009
【化６−３】
2019529444.tif 000010
【化６−４】
2019529444.tif 000011
【化６−５】
2019529444.tif 000012
【化６−６】
2019529444.tif 000013
【化６−７】
2019529444.tif 000014
またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物から選択される。
【００１７】
本発明の化合物は、ＦＧＦＲの活性に対して有意な阻害効果を有する。本発明の化合物は、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ４の活性を阻害するのに有効であり、好ましくはＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ４を阻害するために１００〜１０００ｎｍのＩＣ５０、より好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０、最も好ましくは１０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。特に、本発明の化合物は、腫瘍細胞（例えば、Ｈｅｐ３Ｂ、ＲＴ４、およびＳＮＵ−１６腫瘍細胞）の細胞増殖に対して有意な阻害効果を有し、好ましくは１００〜１０００ｎＭのＩＣ５０を有し、より好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有し、最も好ましくは１０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００１８】
したがって、本発明の化合物は、限定されないが、腫瘍および変形性関節症等の炎症性疾患を含む、ＦＧＦＲ関連疾患の治療または予防に有用である。本発明の化合物は、ＦＧＦＲ関連腫瘍、例えば、非小細胞肺癌、食道癌、黒色腫、横紋筋肉腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、前立腺癌および肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、より具体的には、肝臓癌、胃癌、非小細胞肺癌および膀胱癌を治療または予防するのに有用である。したがって、さらに別の態様において、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物、あるいは該化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、腫瘍等のＦＧＦＲ媒介性疾患を治療または予防する方法を提供する。
【００１９】
本発明の別の態様は、限定されないが、非小細胞肺癌、食道癌、黒色腫、横紋筋肉腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、前立腺癌および肝臓癌を含む腫瘍または炎症性疾患等のＦＧＦＲ関連疾患の治療または予防のための薬物の調製における、一般式（Ｉ）の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物の使用に関する。
【００２０】
本発明はさらに、本発明の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物にも関する。
【００２１】
本発明の別の態様は、一般式（Ｉ）の化合物、またはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、もしくはそれらの混合物、または薬物の調製のための医薬組成物の使用に関し、薬物は、腫瘍および炎症性疾患等のＦＧＦＲ媒介性疾患を治療または予防するために使用される。
【００２２】
本発明によれば、薬物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、液剤、凍結乾燥製剤、および注射剤を含む任意の医薬剤形であり得る。
【００２３】
本発明の医薬製剤は、投与単位当たりの所定量の活性成分を含有する投与単位の形態で投与することができる。そのような単位は、治療される疾患、投与方法、ならびに患者の年齢、体重および状態に応じて、例えば、０．５ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１ｍｇ〜７００ｍｇ、特に好ましくは５ｍｇ〜３００ｍｇの本発明の化合物を含んでもよく、または医薬製剤は、投与単位当たりの所定量の活性成分を含有する投与単位の形態で投与することができる。好ましい投与単位の製剤は、上に示した１日用量もしくは分割用量またはそれらの対応する割合の活性成分を含有するものである。さらに、この種の医薬製剤は、製薬分野で周知の方法を用いて調製することができる。
【００２４】
本発明の医薬製剤は、所望される任意の適切な方法による、例えば経口（頬側または舌下を含む）、直腸、経鼻、局所（頬側、舌下または経皮を含む）、膣内または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）投与方法による投与に適応させることができる。製剤は、例えば、製薬分野で既知の方法のいずれか１つを用いて、活性成分を１つ以上の賦形剤または１つ以上のアジュバントと組み合わせることによって、調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
別段の記載のない限り、本明細書および本出願の特許請求の範囲において使用される以下の用語は、以下の意味を有するものとする。
【００２６】
本明細書で使用される「Ｃｘ−ｙ」という表現は、炭素原子数の範囲を示し、ｘおよびｙは両方とも整数であり、例えば、Ｃ３−８シクロアルキル基は、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル基、すなわち、３、４、５、６、７または８個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味する。「Ｃ３−８」は、それに含まれる任意の部分範囲、例えば、Ｃ３−７、Ｃ３−６、Ｃ４−７、Ｃ４−６、Ｃ５−６等も包含することを理解されたい。
【００２７】
「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子、例えば、１〜１８個の炭素原子、１〜１２個の炭素原子、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を含有する、飽和直鎖または分岐ヒドロカルビル基を指す。アルキル基の非限定的な例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、および２−エチルブチルが挙げられる。アルキル基は、置換または非置換であり得る。
【００２８】
「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合と、通常、２〜２０個の炭素原子、例えば、２〜８個の炭素原子、２〜６個の炭素原子、または２〜４個の炭素原子と、を含有する直鎖または分岐ヒドロカルビル基を指す。アルケニル基の非限定的な例として、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−メチル−２−プロペニル、１，４−ペンタジエニル、および１，４−ブタジエニルが挙げられる。アルケニル基は、置換または非置換であり得る。
【００２９】
「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合と、典型的には、２〜２０個の炭素原子、例えば、２〜８個の炭素原子、２〜６個の炭素原子、または２〜４個の炭素原子と、を含有する直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。アルキニル基の非限定的な例として、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、および３−ブチニルが挙げられる。アルキニル基は、置換または非置換であり得る。
【００３０】
「シクロアルキル」は、３〜１４個の環式炭素原子を含有する飽和環式ヒドロカルビル置換基を指す。シクロアルキル基は、単一の炭素環であり得、通常、３〜７個の炭素環原子を含有する。単環式シクロアルキル基の非限定的な例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられる。シクロアルキル基は、代替として、デカヒドロナフチル等の、一緒に縮合した２つまたは３つの環構造であってもよい。シクロアルキル基は、置換または非置換であり得る。
【００３１】
「複素環または複素環基」は、３〜２０個の環原子、例えば、３〜１６個、３〜１４個、３〜１２個、３〜１０個、３〜８個、３〜６個、または５〜６個の環原子を含有する、飽和または部分不飽和の単環式または多環式の環式基を指し、環原子の１つ以上は、窒素、酸素またはＳ（Ｏ）ｍ（式中、ｍは０〜２の整数である）からなる群から選択されるが、−Ｏ−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ−または−Ｓ−Ｓ−の環部分を含まず、残りの環原子は炭素である。好ましくは、それは３〜１２個の環原子、より好ましくは３〜１０個の環原子、最も好ましくは５〜６個の環原子を含み、１〜４個がヘテロ原子であり、より好ましくは１〜３個がヘテロ原子であり、最も好ましくは１〜２個がヘテロ原子である。単環式複素環基の非限定的な例として、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニル、オキセアリール（ｏｘｅａｒｙｌ）およびアゼチジニルが挙げられる。多環式複素環基は、縮合、架橋またはスピロ多環式の複素環基を含む。複素環または複素環基は、置換または非置換であってもよい。
【００３２】
「アリール」は、フェニルおよびナフチル、最も好ましくはフェニル等の、６〜１４個の炭素原子、好ましくは６〜１０個の構成要素を含有する芳香族単環式基または縮合多環式基を指す。アリール環は、ヘテロアリール環、ヘテロシクリル環またはシクロアルキル環に縮合していてもよく、親構造が結合している環がアリール環であり、その非限定的な例として、
【化７】
2019529444.tif 000015
が挙げられ、
アリール基は、置換または非置換であってもよい。
【００３３】
「ヘテロアリールまたはヘテロアリール環」は、５〜１４個の環原子を含有するヘテロ芳香族系を指し、１〜４個の環原子が、酸素、硫黄および窒素を含むヘテロ原子から選択される。ヘテロアリール基は、好ましくは５〜１０員である。より好ましくは、ヘテロアリール基は、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル等の５員または６員である。ヘテロアリール環は、アリール環、複素環またはシクロアルキル環に縮合していてもよく、親構造が結合している環がヘテロアリール環であり、その非限定的な例として、
【化８】
2019529444.tif 000016
が挙げられ、
ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。
【００３４】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。
【００３５】
「シアノ」は、−ＣＮを指す。
【００３６】
「任意の」または「任意に」は、事象または環境が発生するまたは発生しない場合を含めて、後に記載される事象または環境が発生する可能性があるが必ずしも発生する必要はないことを指す。例えば、「アルキル基で任意に置換された複素環基」は、アルキル基が存在してもよいが必ずしも存在しなくてもよいことを指し、この記載は、複素環基がアルキル基で置換されている場合、および複素環基がアルキル基で置換されていない場合を含む。
【００３７】
「置換された」は、基中の１つ以上の水素原子、好ましくは５個、より好ましくは１〜３個の水素原子が、互いに独立して、対応する数の置換基で置換されていることを指す。言うまでもなく、置換基は、それらの可能な化学的位置にのみ存在しており、当業者は、過度の努力なしに、可能であり得るかまたは不可能であり得る置換を（実験または理論により）決定することができるであろう。例えば、遊離水素を有するアミノ基またはヒドロキシル基は、不飽和結合を有する炭素原子（例えば、オレフィン）と会合すると不安定になる可能性がある。そのような置換基は、限定されないが、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル等を含む。
【００３８】
「医薬組成物」は、本明細書に記載の１つ以上の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ、ならびに薬学的に許容される担体および賦形剤等の他の成分を含む組成物を指す。医薬組成物の目的は、生物への投与を容易にし、活性成分の吸収を促し、それによって所望の生物学的活性を発揮することである。
【００３９】
「異性体」は、同じ分子式を有するが、その原子結合の性質もしくは配列において、またはその原子の空間配置において異なる化合物を指し、これは「異性体」と称される。原子空間が異なって配置された異性体は「立体異性体」と称される。立体異性体は、光学異性体、幾何異性体、および立体配座異性体を含む。
【００４０】
本発明の化合物は、光学異性体の形態で存在してもよい。これらの光学異性体は、キラル炭素原子の周囲の置換基の立体配置に応じて「Ｒ」または「Ｓ」配置にある。光学異性体は、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む。光学異性体を調製および単離する方法は、当該技術分野において既知である。
【００４１】
本発明の化合物は、幾何異性体の形でも存在し得る。本発明は、炭素−炭素二重結合、炭素−窒素二重結合、シクロアルキル基または複素環基の周囲の置換基の分布から生じる種々の幾何異性体およびそれらの混合物を有する。炭素−炭素二重結合または炭素−窒素結合の周囲の置換基は、Ｚ配置またはＥ配置と呼ばれ、シクロアルキルまたは複素環の周りの置換基はシス配置またはトランス配置と呼ばれる。
【００４２】
本発明の化合物はまた、ケト−エノール互変異性化等の互変異性も示し得る。
【００４３】
本発明は、任意の互変異性体または立体異性体およびそれらの混合物を含み、化合物の命名または化学構造式で使用される互変異性体形態または立体異性体形態のいずれか１つに限定されないことを理解されたい。
【００４４】
「同位体」は、本発明の化合物中に生じる原子の全ての同位体である。同位体は、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有する原子を含む。本発明の化合物への組み込みに適した同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素、例えば、限定されないが、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌが挙げられる。本発明の同位体標識化合物は、一般に、非同位体標識の代わりに適切な同位体標識試薬を用いて、当業者に既知の従来の技術手段によって、または添付の実施例に記載のものと類似の方法によって調製することができる。そのような化合物は、例えば、生物学的活性の測定における標準物質および試薬として、様々な潜在的用途を有する。安定同位体の場合、そのような化合物は、生物学的、薬理学的または薬物動態学的な特性を有利に変更する可能性を有する。
【００４５】
「プロドラッグ」は、本発明の化合物がプロドラッグの形態で投与され得ることを指す。プロドラッグは、インビボの生理学的条件下で、例えば、酸化、還元、加水分解等によって、本発明の生物学的に活性な化合物に変換することができる誘導体であり、それらの各々は酵素を使用してまたは酵素の関与なしに実行される。プロドラッグの例は、本発明の化合物中のアミノ基がアシル化、アルキル化もしくはリン酸化されている化合物、例えば、エイコシルアミノ、アラニルアミノ、ピバロイルオキシメチルアミノ等、またはヒドロキシ基がアシル化、アルキル化、リン酸化されているかもしくはボラートに変換されている化合物、例えば、アセトキシ、パルミトイルオキシ、ピバロイルオキシ、スクシニルオキシ、フマリルオキシ、アラニルオキシ等、あるいはカルボキシル基がエステル化もしくはアミド化されているか、またはチオール基が細胞の標的および／もしくはサイトゾルに選択的に薬剤を送達する基とジスルフィド架橋を形成する担体分子、例えばペプチドである。これらの化合物は、ある特定の既知の方法に従って本発明の化合物から調製することができる。
【００４６】
「薬学的塩」または「薬学的に許容される塩」は、無機塩基または酸および有機塩基または酸を含む薬学的に許容される塩基または酸から作られる塩を指し、本発明の化合物が１つ以上の酸性基または塩基性基を含有する場合、本発明はそれらの対応する薬学的に許容される塩も含む。したがって、酸性基を含有する本発明の化合物は、塩の形態で存在してもよく、本発明に従って、例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはアンモニウム塩として使用され得る。そのような塩のより具体的な例として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、またアンモニアもしくは有機アミン、例えば、エチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミンもしくはアミノ酸との塩が挙げられる。塩基性基を含有する本発明の化合物は、塩の形態で存在してもよく、本発明に従って、無機酸または有機酸とのそれらの付加塩の形態で使用され得る。適切な酸の例として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ギ酸、プロピオン酸、ピバリン酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、スルファミン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、クエン酸、アジピン酸、および当業者に既知の他の酸が挙げられる。本発明の化合物が分子中に酸性基および塩基性基の両方を含む場合、本発明は、上記塩形態に加えて、内部塩または内部アンモニウム塩を含む。各塩は、当業者に既知の従来の方法によって、例えば、それらを溶媒または分散剤中で有機酸もしくは無機酸または塩基と接触させることによって、あるいは他の塩とのアニオン交換またはカチオン交換によって得ることができる。
【００４７】
したがって、本出願において「化合物」、「本発明の化合物（単数）」または「本発明の化合物（複数）」に言及する場合、それはそのプロドラッグ、その安定同位体誘導体、その薬学的に許容される塩、その異性体、そのメソマー、そのラセミ、そのエナンチオマー、そのジアステレオマー、およびそれらの混合物等の全てのそのような化合物形態を含む。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「腫瘍」は、良性腫瘍および悪性腫瘍（例えば癌）を含む。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「癌」は、限定されないが、非小細胞肺癌、食道癌、黒色腫、横紋筋肉腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、前立腺癌および肝臓癌（肝細胞癌等）、より具体的には肝臓癌、胃癌、非小細胞肺癌および膀胱癌を含む、ＦＧＦＲが関与する種々の悪性腫瘍を含む。
【００５０】
本明細書中で使用される場合、用語「炎症性疾患」は、変形性関節症等の、ＦＧＦＲが炎症の発症に関与する任意の炎症性疾患を指す。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「治療有効量」は、ＦＧＦＲの機能を阻害するためにおよび／または疾患を治療もしくは予防するために有効である本発明の化合物を含む量を指す。
【００５２】
合成プロセス
本発明はまた、化合物を作製する方法も提供する。本発明の一般式（Ｉ）の化合物の調製は、以下の例示的な方法および実施形態によって実施することができるが、これらの方法および実施形態は、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本発明の化合物はまた、当業者に既知の他の合成技術によって合成されてもよいか、または当該技術分野で既知の方法と本発明の方法との組み合わせが使用されてもよい。反応の各ステップで得られる生成物は、限定されないが、抽出、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィー分離等を含む、当該技術分野で既知の分離技術によって得られる。合成に必要な出発物質および化学試薬は、慣用的に合成することができるか、または文献に従って購入することができる（ＳｃｉＦｉｎｄｅｒから検索することにより入手可能）。
【００５３】
本発明の一般式（Ｉ）のピラゾール化合物は、プロセスＡに記載の経路に従って合成することができる：１）出発物質Ａ１をザンドマイヤー反応に供してＡ２を得るか、または臭素化してＡ３を得ることができ、式中、Ｒ１は−ＣＮまたはエステル（−ＣＯＯＲ、Ｒはアルキル基）であり得る。２）Ａ２またはＡ３および前駆体Ｘ−Ｌ〜Ｎ−Ｐ（式中、Ｘは脱離基であり、Ｘ−Ｌ〜Ｎ−Ｐは保護アミノ基を含有する官能基であり、Ｐはアミノ基のための保護基である）は、Ａ４を形成するための塩基触媒下で起こる置換反応を有するか、代替として、それとヒドロキシル基を有する前駆体（ＨＯ−Ｌ〜Ｎ−Ｐ）を光遅延反応（光延反応）に供してＡ４を得ることができる。３）Ａ４のＲ１が−ＣＮである場合、それをＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ２条件下でアミドＡ５に加水分解し、Ａ４のＲ１がエステル（−ＣＯＯＲ、式中、Ｒはアルキル基である）である場合、それを最初に塩基性条件下（例えばＬｉＯＨ）でカルボン酸に加水分解し、次いでアミド化に供してＡ５を得る。４）Ａ５とアルキンとを薗頭反応によりカップリングさせてＡ６を得る。５）Ａ６中のアミノ基を脱保護してＡ７を得る。６）Ａ７中のアミノ基を、キナーゼリガンド結合ドメイン中のシステイン残基と反応する官能基を含有する化学試薬（例えば、ＢｒＣＮ、塩化アクリロイル等）で誘導体化して標的化合物Ａ８を得る。
【化９】
2019529444.tif 000017
【００５４】
代替として、アプローチＢに記載の経路に従って合成することができる。第２のステップでピラゾールＮＨ保護基Ｑを導入し、第５のステップで共通の中間体Ｂ７を脱保護から得、次にＢ７のピラゾールＮＨを、置換反応において保護アミノ基を有する異なる前駆体と反応させ、それを次に脱保護および誘導体化に供して標的生成物Ａ８を得る。
【化１０】
2019529444.tif 000018
【００５５】
本発明の一般式（Ｉ）のピラゾール化合物は、アプローチＣに記載の経路に従って合成することもできる。１）Ａ４を薗頭反応により最初にアルキンとカップリングさせてＣ１を得る。２）Ｃ１中の−ＮＨ２を塩基触媒反応において置換するか、または還元的アミノ化に供してＣ２を形成する。３）Ｃ２中のＣＮを、ＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ２条件下でアミドＣ３に加水分解し、場合によっては、最初にＢｏｃ−ＮＨ−で保護し、次いで加水分解し、最後に脱保護および誘導体化して標的生成物Ｃ５を得る。Ｃ５はＡ８の直接置換によっても得ることができる。
【化１１】
2019529444.tif 000019
【実施例】
【００５６】
化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）または質量分析（ＭＳ）によって決定される。ＮＭＲはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ−４００またはＶａｒｉａｎ  Ｏｘｆｏｒｄ−３００  ＮＭＲによって測定し、溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）であり、化学シフトは１０−６（ｐｐｍ）の単位で提供される。
【００５７】
ＭＳは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＳＱＤ（ＥＳＩ）質量分析計（製造元：Ａｇｉｌｅｎｔ、モデル：６１２０）を用いて測定した。
【００５８】
ＨＰＬＣ測定は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＤＡＤ高圧液体クロマトグラフ（Ｓｕｎｆｉｒｃ  Ｃ１８、１５０×４．６ｍｍ、５μｍカラム）およびＷａｔｅｒｓ  ２６９５−２９９６高圧液体クロマトグラフ（Ｇｉｍｉｎｉ  Ｃ１８  １５０×４．６ｍｍ、５μｍカラム）を用いて行った。
【００５９】
薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートは、Ｑｉｎｇｄａｏ  Ｏｃｅａｎ  ＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用する。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されるシリカゲルプレートの仕様は、０．１５ｍｍ〜０．２ｍｍである。薄層クロマトグラフィーによる分離および精製の仕様は、０．４ｍｍ〜０．５ｍｍのシリコーンボードである。
【００６０】
カラムクロマトグラフィーは、一般に、担体としてＱｉｎｇｄａｏ  Ｏｃｅａｎ  ２００〜３００メッシュシリカゲルを使用する。
【００６１】
本発明の既知の出発物質は、当該技術分野で既知の方法に従って合成されてもよいか、またはＡＢＣＲ  ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ａｃｃｅｌａ  ＣｈｅｍＢｉｏ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｃｈｅｍｉｃａｌ、および他の企業から購入されてもよい。
【００６２】
本発明の実施例において、別段の規定のない限り、反応は全てアルゴン雰囲気下または窒素雰囲気下で行った。
【００６３】
アルゴン雰囲気または窒素雰囲気は、反応フラスコが約１Ｌの容積を有するアルゴンまたは窒素バルーンに接続されていることを指す。
【００６４】
水素雰囲気は、反応フラスコが約１Ｌの容積の水素バルーンに接続されていることを指す。
【００６５】
加圧水素化反応は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｊｉａｗｅｉ  Ｋｅｃｈｕａｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．製のＧＣＤ−５００Ｇ高純度水素発生器およびＢＬＴ−２０００中圧水添水素化装置を用いて行った。
【００６６】
水素化反応は、通常、排気し、水素を充填し、３回繰り返して操作する。
【００６７】
マイクロ波反応はＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ−ＳＰ型マイクロ波反応器を使用した。
【００６８】
本発明の実施例において、別段の規定のない限り、反応温度は室温であり、温度範囲は２０℃〜３０℃であった。
【００６９】
実施例における反応の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターし、反応に使用した系は、Ａ：ジクロロメタンおよびメタノール系、Ｂ：石油エーテルおよび酢酸エチル系であり、化合物の極性に基づいて溶媒の体積比を調整した。
【００７０】
化合物を精製するプロセスで使用されるカラムクロマトグラフィー溶離液の系および薄層クロマトグラフィーで現像するために使用される現像主薬系は、Ａ：ジクロロメタンおよびメタノール系、Ｂ：石油エーテルおよび酢酸エチル系であり、化合物の極性に応じて溶媒の体積比を調整し、微量のトリエチルアミンおよび酸性または塩基性の試薬が調整のために加えられてもよい。
【００７１】
実施例１
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１２】
2019529444.tif 000020
ステップ１
（Ｒ）−３−（トルエンスルホニルオキシ）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
化合物（Ｒ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ａ（３．５ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．２５ｍＬ、３７．９ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．３５ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、次いで、塩化ｐ−トルエンスルホニル（５．４ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１２時間撹拌し、次に希釈のために水（５０ｍＬ）を加え、次に抽出のために酢酸エチル（１００ｍＬ×３）を使用し、得られた有機相を合わせ、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次に乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製して、標題生成物（Ｒ）−３−（トルエンスルホニルオキシ）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｂ（６．０ｇ、黄色油状物質）を得、収率は９４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３６４［Ｍ＋２３］
【００７２】
ステップ２
（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）トリメチルシラン
混合物１−ブロモ−３，５−ジメトキシベンゼン１ｃ（６．５１ｇ、３０ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（８．８ｇ、９０ｍｍｏｌ）、塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．０５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（０．５６ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）を８０℃に加熱し、窒素下で１２時間撹拌し、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル）により精製して、標題生成物（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）トリメチルシラン１ｄ（６．２ｇ、褐色固体）を得、収率は８８％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２３５［Ｍ＋１］
【００７３】
ステップ３
１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン
（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）トリメチルシラン１ｄ（３．０ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（３．５ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌し、濾過し、得られた濾液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル）により精製して、標題生成物１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン１ｅ（２ｇ、黄色固体）を得、収率は９６％であった。
【００７４】
ステップ４
３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル
３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル１ｆ（４．７ｇ、３０．３ｍｍｏｌ）を濃塩酸（１２Ｍ、４０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、亜硝酸ナトリウムの溶液（４．２５ｇ、６０ｍｍｏｌ）（７．５ｍＬ）を加え、次いで５分間撹拌し、次いでヨウ化カリウムの溶液（１２．５ｇ、７５ｍｍｏｌ）（１７．５ｍＬ）を徐々に加えて３０分間撹拌し続け、反応混合物をチオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（４００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムにより乾燥させ、次いで乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製して、標題生成物３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル１ｇ（６．４ｇ、淡黄色固体）を得、収率は８０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２６７［Ｍ＋１］
【００７５】
ステップ５
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル
１−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル１ｇ（４．５ｇ、１７ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−３−（トルエンスルホニルオキシ）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｂ（６．１ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．５ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）の混合物を８０℃に加熱して３時間撹拌し、反応混合物を室温に冷却し、次いで飽和重炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、次いでそれを酢酸エチル（３００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次に濾過して乾燥剤を除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１〜２／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル１Ｈ（３．１ｇ、淡黄色固体）を得、収率は４２％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４５８［Ｍ＋２３］
【００７６】
ステップ６
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル１ｈ（１ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）、１−アセチレン−３，５−ジメトキシベンゼン１ｅ（０．７５ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムクロリド（１７５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１２．５ｍｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２．５ｍＬ）の混合物を８０℃に加熱して１２時間撹拌し、反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−エチルホルメート（０．９５ｇ、黄色油状物質）を得、収率は９０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１４［Ｍ＋１−５６］
【００７７】
ステップ７
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル１ｉ（０．３０ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解し、水酸化ナトリウム溶液（４Ｍ、２ｍＬ）を加えて室温で１時間撹拌し、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を塩酸（６Ｍ、１ｍＬ）で酸性化し、次いで酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ホルメート１ｊ（２００ｍｇ、淡黄色油状物質）を得、収率は７１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８６［Ｍ＋１−５６］
【００７８】
ステップ８
（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ホルメート１ｊ（２２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（２７０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（２２８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）の混合物を室温で一晩撹拌し、次いで水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルの薄層上の分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｋ（１４０ｍｇ、白色固体）を得、収率は６４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８５［Ｍ＋１−５６］
【００７９】
ステップ９
（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｋ（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、塩酸（６Ｍ、５ｍＬ）およびジオキサン（５ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌し、次いで溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド１ｌ（４２ｍｇ、塩酸塩、粗生成物）を得、収率は１００％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３４１［Ｍ＋１］
【００８０】
ステップ１０
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩１Ｌ（３０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）の混合物を、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の塩化アクリロイルの溶液（１１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に滴下で加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで水（３０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次いで濾過して乾燥剤を除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルの薄層上の分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド１（１５ｍｇ、白色固体）を得、収率は５０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９５［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１０（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．５４−６．５２（ｍ，１Ｈ）、６．４６−６．３９（ｍ，２Ｈ）、５．８０（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．７６−５．７２（ｍ，１Ｈ）、５．０１−４．９２（ｍ，１Ｈ）、４．１３−４．００（ｍ，２Ｈ）、３．９０−３．７５（ｍ，８Ｈ）、２．６２−２．４４（ｍ，２Ｈ）。
【００８１】
実施例２
１−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１３】
2019529444.tif 000021
ステップ１
３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル
化合物３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル１ｇ（２．０１ｇ、７．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、水素化ナトリウム（６０％鉱油分散液、０．４２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌し、反応混合物を２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（１．７６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）に加え、１５時間撹拌し続け、次いで飽和塩水（１００ｍＬ）を反応混合物に加え、それを酢酸エチル（１５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１〜１／２）により精製して、標題生成物３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル（２．６ｇ、無色油状物質）を得、収率は８７％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９７［Ｍ＋１］
【００８２】
ステップ２
３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
化合物３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ギ酸エチル２ａ（２．６ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウムの水溶液（１Ｍ、１３ｍＬ）を加えて室温で１５時間撹拌し、次いでそれを水（２０ｍＬ）で希釈し、塩酸（１Ｍ）でｐＨ＝４〜５に酸性化し、次いでそれを酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で除去し、次いで乾燥させて、標題生成物３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸２ｂ（２．０３ｇ、白色固体）を得、収率は８５％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９１［Ｍ＋２３］
【００８３】
ステップ３
３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸２ｂ（２．０３ｇ、５．５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２．１３ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を混合し、次いでそれをＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（２．５ｇ、６．６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８９０ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ）に順次加え、室温で１時間撹拌した後、固体塩化アンモニウム（１．４７ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）を加え、１５時間撹拌し続け、次いで飽和塩水（３０ｍＬ）を反応混合物に加え、それを酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｃ（２．３ｇ、黄色油状物質）を得、収率は１００％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３６８［Ｍ＋１］
【００８４】
ステップ４
３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｃ（２．７ｇ、７．３ｍｍｏｌ）、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン（１．７８ｇ、１１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．２ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）、塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５１２ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、および無水テトラヒドロフラン（７０ｍＬ）の化合物を混合し、次いで脱酸素化に供し、アルゴン雰囲気下で１５時間室温で撹拌し、次いで溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１０／１〜２／１）により精製して、標題生成物３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｄ（１．５ｇ、黄色固体）を得、収率は５１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０２［Ｍ＋１］
【００８５】
ステップ５
３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｄ（１．４ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、エチレンジアミン（５２５ｍｇ、８．７５ｍｍｏｌ））およびテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）を一緒に混合し、次いでテトラヒドロフラン中のテトラブチルアンモニウムフルオリドの溶液（１Ｍ、１７．５ｍＬ、１７．５ｍｍｏｌ）を加え、１５時間加熱還流した後、室温に冷却し、飽和塩水（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、得られた有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次いで乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｅ（６００ｍｇ、白色固体）を得、収率は６３％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７２［Ｍ＋１］
【００８６】
ステップ６
４−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
化合物３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｅ（１８０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、４−ブロモピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２６４ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１８２ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）の化合物を一緒に混合し、次いで７５℃に加熱して１５時間撹拌し、次に水を加え、得られた溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物４−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２ｆ（１２０ｍｇ、黄色固体、位置異性体を含有）を得、収率は４０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７７［Ｍ＋２３］
【００８７】
ステップ７
３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物４−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２ｆ（１２０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、混合物）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解し、次いでエタノール中の塩化水素（４Ｍ、１ｍＬ、４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で溶液をｐＨ＝８〜９に調整し、次に溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）により精製して、標題生成物３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｇ（２５ｍｇ、白色固体）を得、収率は２７％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３５５［Ｍ＋１］
【００８８】
ステップ８
１−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２ｇ（２５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、塩化アルケンプロピオニル（１０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、固体炭酸水素ナトリウム（１８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、水（２ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を０℃で混合し、この温度で１０時間撹拌し、次いでそれを酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次いで乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、次に残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）により精製して、標題生成物１−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２（１７ｍｇ、白色固体）を得、収率は６０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０９［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．０１（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．６２（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１０．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．５５（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．８０（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．８１（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．４０（ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、３．２６（ｂｒｓ，１Ｈ）、２．８９（ｂｒｓ，１Ｈ）、２．４２−２．２５（ｍ，２Ｈ）、２．０８−２．００（ｍ，２Ｈ）。
【００８９】
実施例３〜６は、実施例２に提供される手順に従って実行した。
実施例３
１−（１−アクリロイルアゼチジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１４】
2019529444.tif 000022
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８１［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．４３（ｓ，１Ｈ）、７．３０（ｓ，２Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．６０（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１０．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．１６（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．４１−５．２８（ｍ，１Ｈ）、４．７１（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５０（ｄｄ，Ｊ＝９．２，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４６−４．３６（ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．７８（ｓ，６Ｈ）。
【００９０】
実施例４
１−（（１−アノイルピペリジン−４−イル）メチル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１５】
2019529444.tif 000023
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２３［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．００（ｓ，１Ｈ）、６．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７２（ｓ，２Ｈ）、６．６１−６．５４（ｍ，２Ｈ）、６．２８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．８７（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．７０（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０４（ｂｒｓ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、３．０５（ｂｒｓ，１Ｈ）、２．６４（ｂｒｓ，１Ｈ）、２．２７（ｂｒｓ，１Ｈ）、１．６９（ｂｒｓ，２Ｈ）、１．２４（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【００９１】
実施例５
１−（４−アクリロイルアミノシクロヘキシル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１６】
2019529444.tif 000024
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２３［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．２５（ｓ，１Ｈ）、６．７７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．５８（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１７．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．６８（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．３８−４．３３（ｍ，１Ｈ）、４．１３−４．１１（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、２．２８−２．１８（ｍ，２Ｈ）、２．０７−２．０２（ｍ，２Ｈ）、１．９６−１．８０（ｍ，４Ｈ）。
【００９２】
実施例６
３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（２−（Ｎ−メチルアクリロイルアミノ）エチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１７】
2019529444.tif 000025
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８３［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．２４（ｓ，１Ｈ）、７．１０−６．９０（ｍ，２Ｈ）、６．７６（ｓ，２Ｈ）、６．６９−６．５４（ｍ，２Ｈ）、６．０７（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．６４（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．３７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）、３．８９−３．８０（ｍ，８Ｈ）、２．９４（ｓ，３Ｈ）。
【００９３】
実施例７
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１８】
2019529444.tif 000026
ステップ１
５−アミノ−３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル
化合物５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル７ａ（２０ｇ、１８５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次にＮ−ブロモスクシンイミド（３４ｇ、１９０ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、温度を室温まで上昇させて２時間撹拌し、次いで反応溶液を亜硫酸ナトリウム溶液に注ぎ入れ、酢酸エチル（２００ｍＬ×３）で抽出し、次いで相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物５−アミノ−３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル７ｂ（３２ｇ、黄色固体）を得、収率は９３％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１８７／１８９［Ｍ＋１］
【００９４】
ステップ２
（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
５−アミノ−３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル７ｂ（１０ｇ、５３．８ｍｍｏｌ）、３−（トルエンスルホニルオキシ）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５８ｇ、１０７．６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２５０ｍＬ）の混合物を９０℃に加熱し、４時間反応させ、次いで室温に冷却し、濾過し、得られた濾過ケーキをジクロロメタンで洗浄し、濾液を合わせて減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４）−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｃ（５ｇ、黄色油）を得、収率は２６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３００／３０２［Ｍ＋１−５６］
【００９５】
ステップ３
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｃ（５ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（０．６ｇ、２．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９ｍＬ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）の混合物をアルゴン下で８０℃に加熱し、次いで１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン（１４ｇ、８４．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、次に２時間撹拌し、次いで室温に冷却し、反応溶液を水に注ぎ入れ、酢酸エチル（２００ｍＬ×３）で抽出し、次に有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（５ｇ、褐色油）を得、収率は８１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８２［Ｍ＋１−５６］
【００９６】
ステップ４
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（１．５ｇ、３７．５ｍｍｏｌ、２ｍＬの水に溶解）、エタノール（５０ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）の混合物を０℃に冷却し、過酸化水素（２０ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌し、次に反応溶液を亜硫酸ナトリウム溶液に注ぎ入れ、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５）−アミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得、収率は９６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４００［Ｍ＋１−５６］
【００９７】
ステップ５
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｅ（５ｇ、１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、次にトリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）を加え、次いで室温で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（７．１ｇ、褐色油状物質、トリフルオロ酢酸塩、粗製）を得、収率は＞１００％であり、
その生成物を精製することなく次の反応に使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３５６［Ｍ＋１］
【００９８】
ステップ６
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（７．１ｇ、１１ｍｍｏｌ、トリフルオロ酢酸塩、粗製）をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）および塩化アクリロイル（９００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）を順次加え、３０分間撹拌し、次いで反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／２）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７（１．９ｇ、白色固体）を得、収率は４２％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１０［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．６９−６．５５（ｍ，３Ｈ）、６．２０−６．１４（ｍ，１Ｈ）、５．７２−５．６７（ｍ，１Ｈ）、５．０３−４．９１（ｍ，１Ｈ）、４．０１−３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．８４−３．７０（ｍ，７Ｈ）、３．６６−３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．５５−３．４８（ｍ，１Ｈ）、２．３６−２．２１（ｍ，２Ｈ）。
【００９９】
実施例８
（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化１９】
2019529444.tif 000027
ステップ１
（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
（Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エン酸（２３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（６４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌し、反応溶液を水に注ぎ入れ、ジクロロメタン（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣を高速液体クロマトグラフィーにより精製して、標題生成物（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド８（２．４ｍｇ、白色固体、ギ酸塩）を得、収率は４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４６７［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．２７（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２０（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．７０−６．６１（ｍ，３Ｈ）、６．４４−６．３５（ｍ，１Ｈ）、５．０１−４．９３（ｍ，１Ｈ）、４．０１−３．９３（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．７４−３．６４（ｍ，３Ｈ）、３．０６−３．０３（ｍ，２Ｈ）、２．３８−２．２４（ｍ，２Ｈ）、２．１７−２．１５（ｍ，６Ｈ）。
【０１００】
実施例９
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（２−フルオロアクリロイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２０】
2019529444.tif 000028
ステップ１
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（２−フルオロアクリロイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および２−フルオロアクリル酸（１５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（６９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌し、次いで反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣を薄層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（２−フルオロアクリロイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド９（３．６ｍｇ、白色固体）を得、収率は６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２８［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．６２（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ）、６．４７（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．３９（ｄｄ，Ｊ＝４７．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．６，５．７，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６−４．８１（ｍ，１Ｈ）、４．０２−３．９１（ｍ，２Ｈ）、３．８７−３．７２（ｍ，２Ｈ）、３．７１（ｓ，６Ｈ）、２．３４−２．２３（ｍ，２Ｈ）。
【０１０１】
実施例１０
（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−（ブタ−２−イニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２１】
2019529444.tif 000029
ステップ１
（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−（ブタ−２−イニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および２−ブチン酸酸（１４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（６９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌し、次いで反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣を薄層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−（ブタ−２−イニル）ピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド１０（５．１ｍｇ、淡黄色固体）を得、収率は９％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２２［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．６２（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ）、６．４７（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．８５−４．８１（ｍ，１Ｈ）、４．０１−３．８６（ｍ，２Ｈ）、３．７７−３．６２（ｍ，７．５Ｈ）、３．５４−３．４６（ｍ，０．５Ｈ）、２．３２−２．２７（ｍ，２Ｈ）、１．９５−１．９３（ｍ，３Ｈ）。
【０１０２】
実施例１１
（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−メトキシブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２２】
2019529444.tif 000030
ステップ１
（Ｅ）−４−ブロモブタ−２−エン酸
メチル（Ｅ）−４−ブロモブタ−２−エノエート１１ａ（３ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム一水和物（１．１ｇ、２５．３ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を０℃で混合してさらに２時間撹拌し、反応の完了後、テトラヒドロフランを石油エーテルで洗い流し、水相を２Ｍ塩酸でｐＨ＝１に調整し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせた後、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題生成物（Ｅ）４−ブロモブタ−２−エン酸１１ｂ（２．３ｇ、黄色油状物質）を得、収率は８３％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６３［Ｍ−１］
【０１０３】
ステップ２
（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸
化合物（Ｅ）−４−ブロモブタ−２−エン酸１１ｂ（１００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、メタノール中のナトリウムメトキシド（３０％、０．５５ｍＬ、３．０５ｍｍｏｌ）を加え、次いで１５時間撹拌し、反応混合物を減圧下溶媒で除去し、次いで水に溶解し、次に希塩酸でｐＨ＝１に調整し、次いでジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸１１ｃ（５０ｍｇ、黄色油状物質）を得、収率は７１％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１３−７．０３（ｍ，１Ｈ）、６．１５−６．０７（ｍ，１Ｈ）、４．１８−４．１１（ｍ，２Ｈ）、３．４８−３．３８（ｓ，３Ｈ）。
【０１０４】
ステップ３
（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−メトキシブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸１１ｃ（２２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（６７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、２−（７−オキソベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）を混合して２時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、次いで水および飽和塩水で順次洗浄し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ，Ｅ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（１−（４−メトキシブタ−２−エノイル）ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（３０ｍｇ、白色固体）を得、収率は５１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４５４［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．９８（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．８６（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ）、６．５４（ｓ，１Ｈ）、６．３９（ｄｄ，Ｊ＝２７．７，１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．５４（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．７３−４．７０（ｍ，１Ｈ）、４．１４−４．１２（ｍ，２Ｈ）、４．０５−４．００（ｍ，２Ｈ）、３．９５−３．９３（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、３．７７−３．６８（ｍ，１Ｈ）、３．４３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．７２（ｂｒｓ，０．５Ｈ）、２．５４（ｂｒｓ，０．５Ｈ）、２．４３−２．３５（ｍ，１Ｈ）。
【０１０５】
実施例１２
（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−シアノピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２３】
2019529444.tif 000031
ステップ１
（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−シアノピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７ｆ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解し、次いでトリエチルアミン（１ｍＬ）を加え、０℃に冷却し、臭化シアン（１７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌し、次に反応温度を室温まで上昇させて２時間撹拌し続け、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を薄層シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１５／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−１−（１−シアノピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド１２（１８ｍｇ、白色固体）を得、収率は３４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８１［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．７７（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．６８（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．５０（ｓ，１Ｈ）、５．７５（ｓ，２Ｈ）、５．６７（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．７９−４．７３（ｍ，１Ｈ）、３．８４−３．７３（ｍ，９Ｈ）、３．６１−３．５３（ｍ，１Ｈ）、２．５３−２．４３（ｍ，１Ｈ）、２．３７−２．２６（ｍ，１Ｈ）。
【０１０６】
実施例１３〜１６は、実施例７の操作ステップを参照して合成した。
実施例１３
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２４】
2019529444.tif 000032
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１０［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．７３（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．７１−６．６０（ｍ，１Ｈ）、６．５８（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４−５．７４（ｍ，１Ｈ）、５．０４−４．９１（ｍ，１Ｈ）、４．０９（ｍ，０．５Ｈ）、３．９８（ｔｄ，Ｊ＝１１．１，４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｄｄ，Ｊ＝７．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．８６（ｄｄ，Ｊ＝９．９，４．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、３．７３−３．６３（ｍ，０．５Ｈ）、２．４７（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，６．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．３８（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，７．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０７】
実施例１４
１−（１−アクリロイルアゼチジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２５】
2019529444.tif 000033
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９６［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．７５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．６０（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４５−６．２８（ｍ，２Ｈ）、５．８０（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．２９−５．２１（ｍ，１Ｈ）、４．７９−４．６４（ｍ，２Ｈ）、４．５４−４．４７（ｍ，１Ｈ）、４．４６−４．３９（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）。
【０１０８】
実施例１５
１−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２６】
2019529444.tif 000034
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２４［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．８８−６．７８（ｍ，１Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．５８（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２４（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．７３（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４７−４．３６（ｍ，１Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、３．３２−３．２４（ｍ，１Ｈ）、２．９１（ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．０２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ）。
【０１０９】
実施例１６
１−（（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）メチル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２７】
2019529444.tif 000035
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２４［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．７３（ｓ，２Ｈ）、６．６６−６．５５（ｍ，２Ｈ）、６．２８（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．７５（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．１３−３．９９（ｍ，２Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、３．７８−３．６１（ｍ，２Ｈ）、３．４８（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．３９−３．３４（ｍ，１Ｈ）、２．９４−２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．２０−２．０２（ｍ，１Ｈ）、１．９４−１．７１（ｍ，１Ｈ）。
【０１１０】
実施例１７
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（２−フルオロ−３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２８】
2019529444.tif 000036
ステップ１
１−エチニル−２−フルオロ−３，５−ジメトキシベンゼン
混合物１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン１ｅ（２ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニウムジシクロ２．２．２オクタンビスの塩（テトラフルオロボレート）（６．６ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、次いで室温で一晩撹拌し、反応溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、次に系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３０／１）により精製して、標題生成物１−エチニル−２−フルオロ−３，５−ジメトキシベンゼン１７ａ（８００ｍｇ、黄色固体）を得、収率は３６％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．４６（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．４１（ｄｄ，Ｊ＝４．５，３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．７８（ｓ，３Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、３．２２（ｓ，１Ｈ）。
【０１１１】
次いで、上に提供された実施例７の第１〜第６のステップの手順を参照して実施例１７を合成したが、第３のステップにおいて、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼンの代わりに１−エチニル−２−フルオロ−３，５−ジメトキシベンゼンを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２８［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．００（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．５９−６．５７（ｍ，２Ｈ）、６．４９−６．３９（ｍ，２Ｈ）、５．７４−５．７０（ｍ，１Ｈ）、５．５２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）、５．３５（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．７３−４．６４（ｍ，１Ｈ）、４．０７−３．９０（ｍ，３Ｈ）、３．８８（ｓ，３Ｈ）、３．７８（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，３Ｈ）、３．７５−３．６７（ｍ，１Ｈ）、２．７２−２．６７（ｍ，０．５Ｈ）、２．５４−２．３１（ｍ，１．５Ｈ）。
【０１１２】
実施例１８
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（５−クロロ−２−フルオロフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化２９】
2019529444.tif 000037
ステップ１
（（２‐フルオロ‐５‐クロロフェニル）エチニル）トリメチルシラン
２−フルオロ−５−クロロブロモベンゼン１８ａ（１１．０ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）、エチニルトリメチルシラン（７．７ｇ、７９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６０ｍＬ）を一緒に混合し、次いでヨウ化第一銅（１００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）および塩化ジトリフェニルホスフィンパラジウム（１．８６ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を窒素雰囲気下で８０℃に加熱して撹拌を４時間続け、反応が完了した後、溶媒を減圧下で溶液から除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１００／１）により精製し、標題生成物（（２−フルオロ−５−クロロフェニル）エチニル）トリメチルシラン１８ｂ（１１．０ｇ、黄色油状物質）を得、収率は９０％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．４５（ｄｄ，Ｊ＝６．０，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８−７．２２（ｍ，１Ｈ）、７．０２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、０．２９（ｓ，９Ｈ）。
【０１１３】
ステップ２
４−クロロ−２−エチニル−１−フルオロベンゼン
（（２−フルオロ−５−クロロフェニル）エチニル）トリメチルシラン１８ｂ（１１．０ｇ、４８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（８．１ｇ、５８ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（８０ｍＬ）およびメタノール（４０ｍＬ）を一緒に混合し、室温で１８時間撹拌し、反応が終了した後、溶媒を減圧下で溶液から除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１００／１）により精製し、標題生成物４−クロロ−２−エチニル−１−フルオロベンゼン１８ｃ（５．５ｇ、黄色固体）を得、収率は７４％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．４５（ｄｄ，Ｊ＝６．０，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１−７．２７（ｍ，１Ｈ）、７．０４（ｔ，Ｊ＝８．０，１Ｈ）、３．３５（ｓ，１Ｈ）。
【０１１４】
次いで、上に提供された実施例７の第１〜第６のステップの手順を参照して実施例１８を合成したが、第３のステップにおいて、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼンの代わりに４−クロロ−２−エチニル−１−フルオロベンゼンを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０２［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．６２−７．６１（ｍ，１Ｈ）、７．４７−７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．６９−６．５６（ｍ，１Ｈ）、６．３０（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．７７（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０２−１．９１（ｍ，１Ｈ）、４．０９−３．９５（ｍ，２Ｈ）、３．８４−３．７８（ｍ，２Ｈ）、２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，６．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．３７（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，６．９Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１１５】
実施例１９
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３０】
2019529444.tif 000038
ステップ１
４−クロロ−３−ブロモ安息香酸メチル
４−クロロ−３−ブロモ安息香酸１９ａ（２ｇ、８．５ｍｍｏｌ）をメタノール（４００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次に塩化アセチル（２．３ｇ、３０ｍｍｏｌ）を滴下して加えて撹拌を１８時間続け、反応が終了した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）により精製して、標題生成物４−クロロ−３−ブロモ安息香酸メチル１９ｂ（１．２ｇ、黄色固体）を得、収率は５７％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．３１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）。
【０１１６】
ステップ２
４−クロロ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）安息香酸メチル
化合物４−クロロ−３−ブロモ安息香酸メチル１９ｂ（１．２ｇ、４．８ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（０．９５ｇ、９．７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１０８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（２５４ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（１８５ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５ｍＬ）を封管中で混合し、１００℃で１５時間加熱および撹拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）により精製して、標題生成物４−クロロ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）安息香酸メチル１９ｃ（１ｇ、黄色固体）を得、収率は７８％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、０．３０（ｓ，９Ｈ）。
【０１１７】
ステップ３
４−クロロ−３−エチニル安息香酸メチル
４−クロロ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）安息香酸メチル１９ｃ（１ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、次いで炭酸カリウム（１．０４ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水で洗浄し、次いで濾過して、標題生成物４−クロロ−３−エチニル安息香酸メチル１９ｄ（３８０ｍｇ、黄色固体）を得、収率は５２％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．２３（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、３．４４（ｓ，１Ｈ）。
【０１１８】
ステップ４
（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
化合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｃ（２．２０ｇ、６．２ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウムの水溶液（０．５Ｍ、１２．４ｍＬ、６．２ｍｍｏｌ）、過酸化水素の水溶液（３０％、１５ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（３０ｍＬ）を一緒に混合し、室温で２時間撹拌した後、反応物を飽和塩水（５０ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、次いで有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１００／１〜２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｅ（１．９２ｇ、淡黄色固体）を得、収率は８３％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３７４［Ｍ＋１］
【０１１９】
ステップ５
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（カルボメトキシ＜メトキシカルボニル＞）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｅ（７７０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６ｍＬ）、１，１’−ビスジフェニルホスフィノフェロセンパラジウムジクロリド（３０７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を混合し、脱酸素化し、次いでアルゴン雰囲気下９０℃に加熱し、次にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の４−クロロ−３−エチニル安息香酸メチル１９ｄの溶液（３．２０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を滴下して加え、１２時間撹拌し続け、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製し、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（カルボメトキシ＜メトキシカルボニル＞）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｆ（４２０ｍｇ、黄色固体）を得、収率は４１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４８８［Ｍ＋１］
【０１２０】
ステップ６
（Ｓ）−３−（（５−アミノ−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチニル）−４−クロロ安息香酸
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（カルボメトキシ＜メトキシカルボニル＞）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｆ（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をメタノール（４ｍＬ）と水（４ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、次いで水酸化ナトリウム（２５ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を加えて撹拌を２時間続け、反応が完了した後、有機溶媒を減圧下で除去し、残渣を塩酸（１Ｍ）でｐＨ＝４〜５に調整し、次いで酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、得られた有機相を合わせて飽和塩水で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下溶媒で除去して、標題生成物（Ｓ）−３−（（５−アミノ−１（−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチニル）−４−クロロ安息香酸１９ｇ（８０ｍｇ、褐色固体）を得、収率は８４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８［Ｍ＋Ｈ−５６］
【０１２１】
ステップ７
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（（５−アミノ−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチニル）−４−クロロ安息香酸１９ｇ（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解し、次いでメチルアミン塩酸塩（３４ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および２−（７−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（６４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を順次加え、反応物を室温で２時間撹拌し、次いで水でクエンチし、次に酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１００／１〜０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｈ（４１ｍｇ、褐色固体）を得、収率は５０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８７［Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ］
【０１２２】
ステップ８
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ホルムアミド塩酸塩
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｈ（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解し、次いでエタノール中の塩化水素の溶液（３３％、３ｍＬ）を加えて室温で１時間撹拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ホルムアミド塩酸塩１９ｉ（４０ｍｇ、粗製、褐色固体）を得、その生成物をさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８７［Ｍ＋Ｈ］
【０１２３】
ステップ９
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−ホルムアミド塩酸塩１９ｉ（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、粗製）、塩化アクリロイル（７．５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウムの水溶液（０．４Ｍ、１．０ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（５ｍＬ）を０℃で混合し、この温度で０．５時間撹拌し、次に酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１００／１〜１０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（２−クロロ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド１９（１８ｍｇ、白色固体）を得、収率は２つのステップで５１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４４１［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６５（ｓ，１Ｈ）、８．１８（ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ）、６．７０−６．６２（ｍ，４Ｈ）、６．１９−６．１５（ｍ，１Ｈ）、５．７０（ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０３−４．９４（ｍ，１Ｈ）、３．８０−３．５４（ｍ，４Ｈ）、２．７８（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，３Ｈ）、２．３６−２．２５（ｍ，２Ｈ）。
【０１２４】
実施例２０
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３１】
2019529444.tif 000039
ステップ１
３−ブロモ−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド
３−ブロモ−５−メトキシ安息香酸２０ａ（５００ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解し、次いでメチルアミン塩酸塩（２９１ｍｇ、４．３５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．１２ｇ、８．６８ｍｍｏｌ）および２−（７−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（１．２４ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）を順次加え、反応系を室温で２時間撹拌し、次いで水でクエンチし、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、標題生成物３−ブロモ−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド２０ｂ（５００ｍｇ、白色固体）を得、収率は９５％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２４４［Ｍ＋Ｈ］
【０１２５】
ステップ２
３−メトキシ−Ｎ−メチル−５−（（トリメチルシリル）エチニル）ベンズアミド
化合物３−ブロモ−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド２０ｂ（５００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（３０２ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（４７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１１０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０ｍＬ）を封管中で混合し、次いで１００℃に加熱して１５時間撹拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、標題生成物３−メトキシ−Ｎ−メチル−５−（（トリメチルシリル）エチニル）ベンズアミド、２０ｃ（２２０ｍｇ、黄色固体）を得、収率は４１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２６２［Ｍ＋Ｈ］
【０１２６】
ステップ３
３−エチニル−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド
３−メトキシ−Ｎ−メチル−５−（（トリメチルシリル）エチニル）ベンズアミド２０ｃ（２２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）をメタノール（８ｍＬ）に溶解し、次いで炭酸カリウム（２３３ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、標題生成物３−エチニル−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド２０ｄ（１４０ｍｇ、淡黄色固体）を得、収率は８８％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１９０［Ｍ＋Ｈ］
【０１２７】
ステップ４
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−カルバモイル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１９ｅ（３２９ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２ｍＬ）、１，１’−ビスジフェニルホスフィノフェロセンパラジウムジクロリド（１２９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（３４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）を混合し、次いで脱酸素化し、アルゴン雰囲気下で９０℃に加熱し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の３−エチニル−５−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド２０ｄの溶液（１．００ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を滴下して加え、１２時間撹拌し続け、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２０ｅ（４００ｍｇ、粗製、褐色固体）を得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８３［Ｍ＋Ｈ−１００］
【０１２８】
ステップ５
（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−カルバモイル−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２０ｅ（４００ｍｇ、粗製）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、次いでエタノール中の塩化水素の溶液（３０％、３ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩２０ｆ（３００ｍｇ、粗製、褐色固体）を得た。その生成物を精製することなく次の反応に直接使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８３［Ｍ＋Ｈ］
【０１２９】
ステップ６
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩２０ｆ（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、粗製）、塩化アクリロイル（４２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、重炭酸ナトリウム（１３１ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）、水（４ｍＬ）、およびテトラヒドロフラン（８ｍＬ）を０℃で混合し、この温度で０．５時間撹拌し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３−メトキシ−５−（メチルカルバモイル）フェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２０（６０ｍｇ、白色固体）を得、収率は２つのステップで３５％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３７［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．５９（ｓ，１Ｈ）、７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．２８（ｓ，１Ｈ）、６．７３−６．５８（ｍ，１Ｈ）、６．３６−６．２８（ｍ，１Ｈ）、５．８３−５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．０４−４．９３（ｍ，１Ｈ）、４．１２−３．９１（ｍ，２Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ）、３．８６−３．６６（ｍ，２Ｈ）、２．９３（ｓ，３Ｈ）、２．５１−２．４４（ｍ，１Ｈ）、２．４２−２．３４（ｍ，１Ｈ）。
【０１３０】
実施例２１
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３２】
2019529444.tif 000040
ステップ１
（Ｓ）−３−（３−ブロモ−４−シアノ−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
化合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−３−ブロモ−４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｃ（１７８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、およびベンゼンスルホン酸一水和物（１２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をオルトギ酸トリエチル（４ｍＬ）に溶解し、２時間加熱還流し、反応が終了した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水に分散させ、次に酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、濾液を減圧下溶媒で除去し、残渣をエタノール（１０ｍＬ）に溶解して０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（８９ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）を加え、次いで室温で２時間撹拌し、反応が完了した後、飽和塩水でクエンチし、次いで酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１００／１〜１／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（３−ブロモ−４−シアノ−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ａ（１７８ｍｇ、白色固体）を得、収率は１００％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３１４［Ｍ＋Ｈ−５６］
【０１３１】
ステップ２
（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（３−ブロモ−４−シアノ−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ａ（１．８５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２０ｍＬ）、１，１’−ビスジフェニルホスフィノフェロセンパラジウムジクロリド（８１６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（１９０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルメチル（２０ｍＬ）を一緒に混合し、脱酸素化し、アルゴン雰囲気下で９０℃に加熱し、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼンの溶液（４．８６ｇ、３０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、１２時間撹拌し続け、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１〜０／１）により精製し、標題生成物（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｂ（２．１ｇ、褐色固体）を得、収率は８０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４９６［Ｍ＋Ｈ−５６］
【０１３２】
ステップ３
（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピリジルジリデン−１−イル）ピロリジン−１）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｂ（２２５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、次いでトリエチルアミン（１５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ無水物（２１８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間撹拌した後、飽和塩水（１０ｍＬ）を加え、次いで酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１〜１／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピリジルジリデン−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｃ（２００ｍｇ、淡黄色固体）を得、収率は７２％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４４０［Ｍ＋Ｈ−１１２］
【０１３３】
ステップ４
（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピリジルジリデン−１−イル）ピロリジン−１）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｃ（５５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウムの水溶液（０．５Ｍ、０．１ｍＬ、０．０５ｍｍｏｌ）、過酸化水素の水溶液（３０％、０．５ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（１ｍＬ）を混合し、室温で２時間撹拌し、反応物を飽和塩水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１００／１〜１／１００）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｄ（３０ｍｇ、褐色固体）を得、収率は５０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１４［Ｍ＋Ｈ−１５６］
【０１３４】
ステップ５
（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩
（Ｓ）−３−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２１ｄ（５７０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、次いでエタノール中の塩化水素の溶液（３３％、５ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧下で除去して、標題生成物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩２１ｅ（４００ｍｇ、粗製、褐色固体）を得た。この生成物をさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３７０［Ｍ＋Ｈ］
【０１３５】
ステップ６
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩２１ｅ、塩化アクリロイル（２５４ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウムの水溶液（２．５Ｍ、４．７ｍＬ、１１．７８ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を混合し、この温度で０．５時間撹拌し、次に酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１００／１〜１０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２１（７２０ｍｇ、白色固体）を得、収率は７６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２４［Ｍ＋Ｈ］
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．８８（ｓ，１Ｈ）、６．６９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ）、６．５１（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４６−６．４０（ｍ，２Ｈ）、５．７４−５．７２（ｍ，１Ｈ）、５．５２−５．４８（ｍ，１Ｈ）、５．０６−５．０１（ｍ，１Ｈ）、４．０９−３．９４（ｍ，３Ｈ）、３．８０（ｓ，６Ｈ）、３．７２−３．７０（ｍ，１Ｈ）、３．００（ｓ，３Ｈ）、２．７１−２．５６（ｍ，１Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ，１Ｈ）。
【０１３６】
実施例２２
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（２−フルオロ−３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３３】
2019529444.tif 000041
実施例２２は、実施例２１の手順に従って合成したが、第２のステップにおいて、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼンの代わりに１−エチニル−２−フルオロ−３，５−ジメトキシベンゼンを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４４２［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．０８（ｓ，１Ｈ）、６．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．６０−６．５７（ｍ，２Ｈ）、６．５１−６．４０（ｍ，２Ｈ）、５．７４−５．６９（ｍ，１Ｈ）、５．３５（ｓ，１Ｈ）、５．０８−４．９９（ｍ，１Ｈ）、４．１１−４．０８（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９４（ｍ，２Ｈ）、３．８８（ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．７５−３．６５（ｍ，１Ｈ）、３．００（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）、２．７２−２．５８（ｍ，１Ｈ）、２．４４−２．３３（ｍ，１Ｈ）。
【０１３７】
実施例２３
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（５−クロロ−２−フルオロフェニル）エチニル）−５−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３４】
2019529444.tif 000042
実施例２３は、実施例２１の手順に従って合成したが、第２のステップにおいて、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼンの代わりに４−クロロ−２−エチニル−１−フルオロベンゼンを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１６［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．５６−７．５２（ｍ，１Ｈ）、７．３５−７．３３（ｍ，１Ｈ）、７．０８（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０２−６．９２（ｍ，１Ｈ）、６．５１−６．３９（ｍ，２Ｈ）、５．７４（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５−５．４４（ｍ，１Ｈ）、５．０９−４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．１４−３．９０（ｍ，３Ｈ）、３．８０−３．６５（ｍ，１Ｈ）、３．０１（ｓ，３Ｈ）、２．７４−２．５５（ｍ，１Ｈ）、２．４９−２．３４（ｍ，１Ｈ）。
【０１３８】
実施例２４
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３５】
2019529444.tif 000043
ステップ１
（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
混合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（５００ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（９１ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、６０％）をＮ，Ｎ−ジエチルアセトアミド（５ｍＬ）に加え、１０分間撹拌し、次いでヨードエタン（１０６ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を加えて０．５時間撹拌し、反応溶液を水に注ぎ入れ、次いで減圧下で濃縮し、残渣を逆相高速液体分取クロマトグラフィー［アセトニトリル／水（０．１％ギ酸を含有）：５０％〜９０％］により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２４ａ（７０ｍｇ、白色固体）を得、収率は２２％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１０［Ｍ＋１−５６］
【０１３９】
ステップ２
（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２４ａ（５５ｍｇ）、０．１２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（３ｍＬ）に溶解し、次に過酸化水素（２ｍＬ）および水酸化ナトリウム（３００ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した後、４０℃まで加温し、反応が完了した後、冷却後にそれを水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出し、水（２０ｍＬ×３）で洗浄し、有機相を減圧下で濃縮し、残渣を逆相高速液体分取クロマトグラフィー［アセトニトリル／水（０．１％ギ酸を含有）：５０％〜９０％］により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２４ｂ（１５ｍｇ）を得、収率は２６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４８４［Ｍ＋１］
【０１４０】
ステップ３
（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
（Ｓ）−３−（５−エチルアミノ−４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２４ｂ（１５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、次いでトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、３０分間撹拌し、反応が完了した後、反応系を減圧下で濃縮して、標題生成物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２４ｃ（２０ｍｇ、粗製、褐色油）を得、収率は＞１００％であった。その生成物を精製することなく次の反応に使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８４［Ｍ＋１］
【０１４１】
ステップ４
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２４ｃ（２０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、粗製）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解し、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｍＬ）を加え、次にテトラヒドロフラン中の塩化アクリロイルの溶液（２．７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間撹拌し、反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、次いで水（２０ｍＬ×３）で洗浄し、次いで有機相を減圧下で濃縮し、残渣を逆相高速液体分取クロマトグラフィー［アセトニトリル／水（０．１％ギ酸を含有）：２０％〜７０％］により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−（ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（エチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２４（４．７ｍｇ、白色固体）を得、収率は２４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３８［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．８７（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７４（ｓ，２Ｈ）、６．５４（ｓ，１Ｈ）、６．５２（ｓ，１Ｈ）、６．４８−６．４０（ｍ，２Ｈ）、５．７４−５．６９（ｍ，１Ｈ）、５．０６−４．９７（ｍ，２Ｈ）、４．１３−３．９３（ｍ，３Ｈ）、３．８４（ｓ，６Ｈ）、３．８０−３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．４２（ｂｒｓ，２Ｈ）、２．７５−２．３５（ｍ，２Ｈ）、１．３１−１．２５（ｍ，３Ｈ）。
【０１４２】
実施例２５
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（イソプロピルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３６】
2019529444.tif 000044
ステップ１
（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（イソプロピルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
混合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（６００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（８９３ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２５ｍＬ）を１０分間撹拌し、次いで２−ブロモプロパン（１８６ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を速やかに加え、７２℃に加熱し、６時間撹拌し、次いで室温に冷却し、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（イソプロピルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２５ａ（６００ｍｇ、淡黄色固体）を得、収率は９１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２４［Ｍ＋１−５６］
【０１４３】
実施例２５は、実施例２４で行われた第２〜第４のステップの操作を参照して合成した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４５２［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．８８（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７０（ｓ，２Ｈ）、６．５４（ｓ，１Ｈ）、６．５１−６．３９（ｍ，２Ｈ）、６．０３（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．７４−５．６９（ｍ，１Ｈ）、５．４９（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．９６−４．８７（ｍ，１Ｈ）、４．０９−３．８６（ｍ，３Ｈ）、３．８０−３．６６（ｍ，７Ｈ）、３．４５−３．４３（ｍ，１Ｈ）、２．６９−２．３２（ｍ，２Ｈ）、１．２７−１．１５（ｍ，６Ｈ）。
【０１４４】
実施例２６
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−（（シクロプロピルメチル）アミノ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３７】
2019529444.tif 000045
ステップ１
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−（（シクロプロピルメチル）アミノ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍＬ）に溶解し、次いで炭酸セシウム（８０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および（ブロモメチル）シクロプロパン（１９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加え、７０℃に加温し、４時間撹拌し、次に反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、残渣をシリカゲルの薄層上のクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１２／１）により調製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−（（シクロプロピルメチル）アミノ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２６（１４ｍｇ、白色固体）を得、収率は２８％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４６４［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．８９（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７１（ｓ，２Ｈ）、６．５４（ｓ，１Ｈ）、６．５１−６．３７（ｍ，２Ｈ）、５．７６−５．７１（ｍ，１Ｈ）、５．４０（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．０３−４．９５（ｍ，１Ｈ）、４．０６−３．８９（ｍ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、３．７８−３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．０６−３．０２（ｍ，２Ｈ）、２．６９−２．５２（ｍ，１Ｈ）、２．４６−２．３５（ｍ，１Ｈ）、１．１５−０．９８（ｍ，１Ｈ）、０．６３−０．６０（ｍ，２Ｈ）、０．２９−０．２７（ｍ，２Ｈ）。
【０１４５】
実施例２７
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３８】
2019529444.tif 000046
ステップ１
（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（４３０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、トリフルオロアセトアルデヒド（７５％）の水溶液（３０４ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）およびテトラエチルチタネート（４４８ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に加え、２時間撹拌し、反応が完了した後、水素化ホウ素ナトリウム（７５ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温で１時間撹拌を続け、反応混合物を水に注ぎ入れ、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をカラムにより速やかに精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２７ａ（１２０ｍｇ、黄色油状物質）を得、収率は２６％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４６４［Ｍ＋１−５６］
【０１４６】
実施例２７は、実施例２４で行われた第２〜第４のステップの操作を参照して合成した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４９２［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．９２（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７０（ｓ，２Ｈ）、６．５２（ｓ，１Ｈ）、６．４７−６．３９（ｍ，２Ｈ）、６．３１−６．２５（ｍ，１Ｈ）、５．７５−５．６５（ｍ，１Ｈ）、５．６５（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．０５−４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．１０−３．８８（ｍ，３Ｈ）、３．８０（ｓ，６Ｈ）、３．７５−３．６１（ｍ，３Ｈ）、２．６３−２．３４（ｍ，２Ｈ）。
【０１４７】
実施例２８
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−メトキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化３９】
2019529444.tif 000047
実施例２８は、実施例２５の手順に従って合成したが、第１のステップにおいて、２−ブロモプロパンの代わりに１−ブロモ−２−メトキシエタンを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４６８［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．３２（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．６４（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６０（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．１６（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．６８（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．１５−５．０５（ｍ，１Ｈ）、４．０５−４．０１（ｍ，０．５Ｈ）、３．８６−３．８１（ｍ，１．５Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．７０−３．６１（ｍ，１Ｈ）、３．５９−３．５０（ｍ，１Ｈ）、３．４６（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．３９−３．３４（ｍ，２Ｈ）、３．２６（ｓ，３Ｈ）、２．４２−２．２３（ｍ，２Ｈ）。
【０１４８】
実施例２９
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４０】
2019529444.tif 000048
ステップ１
（Ｓ）−３−（５−（（２−アセトキシエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（３００ｍｇ、０．６８５ｍｍｏｌ）、２−ブロモ酢酸エチル（１２６ｍｇ、０．７５３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４４７ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（４ｍＬ）の混合物を９０℃に加熱し、２時間撹拌し、反応溶液を室温に冷却し、水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１５／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−（（２−アセトキシエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ａ（１４８ｍｇ、黄色固体）を得、収率は４１％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４６８［Ｍ＋１−５６］
【０１４９】
ステップ２
（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−（（２−アセトキシエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ａ（６８ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（１ｍＬ）の混合物に飽和水酸化ナトリウム溶液（３ｍＬ）および過酸化水素（４ｍＬ）を加え、３０℃で１時間撹拌し、反応が完了した後、反応溶液を飽和亜硫酸ナトリウム溶液（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮して、標題生成物（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５）−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ｂ（１１０ｍｇ、粗製、黄色油状物質）を得、収率は＞１００％であった。その生成物を精製することなく次の反応に使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４４４［Ｍ＋１−５６］
【０１５０】
ステップ３
（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−３−（４−カルバモイル−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ｂ（１１０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ、粗製）をメタノール中の塩酸の溶液（５ｍＬ）に溶解し、４０℃に加熱して１時間撹拌し、反応が完了した後、反応系を減圧下で濃縮して、標題生成物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２９ｃ（１６０ｍｇ、粗製、白色固体）を得、収率は＞１００％であった。その生成物を精製することなく次の反応に使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４００［Ｍ＋１］
【０１５１】
ステップ４
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２９ｃ（１６０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ、粗製）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解し、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加え、次いで塩化アクリロイル（１２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した。反応が完了した後、反応溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣を逆相高速分取クロマトグラフィー［アセトニトリル／水（０．２％ギ酸を含有）：２０％〜６０％］により精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド２９（６ｍｇ、白色固体）を得、収率は９％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４５４［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．３６（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．７４（ｓ，２Ｈ）、６．７０−６．６０（ｍ，２Ｈ）、６．５５−６．５２（ｍ，１Ｈ）、６．１７（ｄ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．６９（ｔ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６−５．１０（ｍ，１Ｈ）、４．８７（ｓ，１Ｈ）、４．０６−４．０（ｍ，０．５Ｈ）、３．８３−３．８１（ｍ，１．５Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．６８−３．６３（ｍ，２Ｈ）、３．５５−３．５３（ｍ，２Ｈ）、３．２８−３．２６（ｍ，２Ｈ）、２．３８−２．２７（ｍ，２Ｈ）。
【０１５２】
実施例３０
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（３−モルホリノプロピル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４１】
2019529444.tif 000049
ステップ１
３−モルホリノプロピル４−メチルベンゼンスルホネート
化合物３−モルホリノプロパン−１−オール３０ａ（５００ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解し、次いで４−ジメチルアミノピリジン（４２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．０４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）および塩化ｐ−トルエンスルホニル（９８８ｍｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌し、反応が完了した後、反応溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製して、標題生成物３−モルホリノプロピル４−メチルベンゼンスルホネート３０ｂ（６６０ｍｇ、黄色油状物質）を得、収率は６４％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３００［Ｍ＋１］
【０１５３】
実施例３０は、実施例２５の手順を参照して合成したが、第１のステップにおいて、２−ブロモプロパンの代わりに３−モルホリノプロピル−４−メチルベンゼンスルホネートを用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５３７［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．２３（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．１２（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．９４（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．６９（ｓ，２Ｈ）、６．５２（ｓ，１Ｈ）、６．４９−６．４０（ｍ，２Ｈ）、５．９２（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．７４−５．７０（ｍ，１Ｈ）、５．０３−４．９６（ｍ，１Ｈ）、４．０９−３．９０（ｍ，３Ｈ）、３．８０−３．６８（ｍ，１１Ｈ）、３．２８（ｂｒｓ，２Ｈ）、２．８９（ｂｒｓ，６Ｈ）、２．６９−２．３３（ｍ，２Ｈ）、１．９３（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【０１５４】
実施例３１
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−モルホリノエチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４２】
2019529444.tif 000050
実施例３１は、実施例２５の手順を参照して合成したが、第１のステップにおいて、２−ブロモプロパンを４−（２−クロロエチル）モルホリンに置き換えた。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５２３［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１４（ｓ，１Ｈ）、６．９５（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．６９（ｓ，２Ｈ）、６．６３（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．５２（ｓ，１Ｈ）、６．４９−６．３９（ｍ，２Ｈ）、６．１４（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．７５−５．７０（ｍ，１Ｈ）、５．０６−４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．１１−３．８５（ｍ，３Ｈ）、３．８０−３．７２（ｍ，１１Ｈ）、３．３７−３．３３（ｍ，２Ｈ）、２．８０−２．７３（ｍ，２Ｈ）、２．６５（ｂｒｓ，４Ｈ）、２．４５−２．３２（ｍ，２Ｈ）。
【０１５５】
実施例３２
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４３】
2019529444.tif 000051
ステップ１
２−ブロモエチル４−メチルベンゼンスルホネート
化合物２−ブロモエタノール３２ａ（５００ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２４６ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．２２ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次に塩化ｐ−トルエンスルホニル（１．１５ｇ、６．０５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、添加が終了した後、室温で一晩撹拌し、反応が完了した後、反応物を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１）により精製し、標題生成物２−ブロモエチル４−メチルベンゼンスルホネート３２ｂ（６００ｍｇ、黄色油状物質）を得、収率は５３％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７７［Ｍ＋１］
【０１５６】
ステップ２
（Ｓ）−３−（５−（（２−ブロモエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
混合物（Ｓ）−３−（５−アミノ−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７ｄ（４００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、２−ブロモエチル４−メチルベンゼンスルホネート（３８０ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６００ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１０ｍＬ）を７０℃に加熱し、２時間撹拌し、反応溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣を精製用クイックカラムにより精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（５−（（２−ブロモエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３２ｃ（２４０ｍｇ、褐色油状物質）を得、収率は４８％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０８［Ｍ＋１−５６−８０］
【０１５７】
ステップ３
（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−３−（５−（（２−ブロモエチル）アミノ）−４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３２ｃ（２４０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、ピロリジン（４７ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２８８ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）の混合物を７０℃に加熱し、１．５時間撹拌し、反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）により精製して、標題生成物（Ｓ）−３−（４−シアノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３２ｄ（２００ｍｇ、黄色油状物質）を得、収率は８５％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７９［Ｍ＋１−５６］
【０１５８】
実施例３２は、実施例２４で行われた第２〜第４のステップの操作ステップを参照して合成した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５０７［Ｍ＋１］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．３８（ｓ，１Ｈ）、６．９９（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．６９（ｓ，２Ｈ）、６．５１（ｓ，１Ｈ）、６．４７−６．３６（ｍ，２Ｈ）、５．７２−５．６７  ｍ，２Ｈ）、５．１６−５．０８（ｍ，１Ｈ）、４．１２−３．８６（ｍ，３Ｈ）、３．８０−３．６２（ｍ，９Ｈ）、３．３３−３．２９（ｍ，６Ｈ）、２．６２−２．３４（ｍ，２Ｈ）、２．０７（ｂｒｓ，４Ｈ）。
【０１５９】
実施例３３
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４４】
2019529444.tif 000052
ステップ１
４−ヨードテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン３３ａ（２．０４ｇ、２０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（６．８１ｇ、２６）およびイミダゾール（２．０４ｇ、３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いでヨウ素（６．０９ｇ、２４ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で１４時間撹拌し、反応を水でクエンチし、次いで酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、標題生成物４−ヨードテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン３３ｂ（２．１２ｇ、白色固体）を得、収率は５０％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ４．６２（ｄｔ，Ｊ＝１３．９，４．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８−３．６４（ｍ，２Ｈ）、３．４７−３．４２（ｍ，２Ｈ）、２．１３−１．９７（ｍ，４Ｈ）。
【０１６０】
実施例３３は、実施例２４の手順に従って合成したが、第１のステップにおいて、ヨウ化エチルの代わりに４−ヨードテトラヒドロ−２Ｈ−ピランを使用した。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４９４［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．７４（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．７１−６．６２（ｍ，１Ｈ）、６．６０−６．５８（ｍ，１Ｈ）、６．３６−６．３０（ｍ，１Ｈ）、５．８２−５．７７（ｍ，１Ｈ）、５．１８−５．１２（ｍ，１Ｈ）、４．０４−３．９４（ｍ，６Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、３．５２−３．４６（ｍ，３Ｈ）、２．５５−２．３９（ｍ，２Ｈ）、１．９４−１．９２（ｍ，２Ｈ）、１．６０−１．５５（ｍ，２Ｈ）。
【０１６１】
実施例３４
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（１−メチルピペリジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
【化４５】
2019529444.tif 000053
ステップ１
４−ヨード−１−メチルピペリジン
４−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン３４ａ（２．３ｇ、２０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（６．８１ｇ、２６ｍｍｏｌ）、イミダゾール（２．０４ｇ、３０ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）を混合し、０℃に冷却し、次いでヨウ素（６．０９ｇ、２４ｍｍｏｌ）を加え、１８時間撹拌し続け、反応が終了した後、水でクエンチし、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、反応系を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）により精製して、標題生成物４−ヨード−１−メチルピペリジン３４ｂ（２．２５ｇ、白色固体）を得、収率は５０％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２２６［Ｍ＋Ｈ］
【０１６２】
ステップ２
（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（１−メチルピペリジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド
化合物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−５−アミノ−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド７（２１０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、４−ヨード−１−メチルピペリジン３４ｂ（４５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２０７ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１０ｍＬ）を混合し、９０℃で１３時間加熱および撹拌し、減圧下で反応混合物から溶媒を除去し、次いで反応混合物を水に溶解し、次いで酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣を逆相分取液体クロマトグラフィーにより精製して、標題生成物（Ｓ）−１−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−３−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−５−（（１−メチルピペリジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド３４（８．１ｍｇ、白色固体）を得、収率は３．２％であった。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５０７［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．７７（ｓ，２Ｈ）、６．６８−６．６５（ｍ，１Ｈ）、６．５９（ｓ，１Ｈ）、６．３４−６．３０（ｍ，１Ｈ）、５．８１−５．７８（ｍ，１Ｈ）、５．６９−５．６７（ｍ，１Ｈ）、５．０３−５．００（ｍ，１Ｈ）、４．９８−５．９５（ｍ，１Ｈ）、４．９２−４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．３６（ｓ，２Ｈ）、４．１２−４．０７（ｍ，１Ｈ）、４．００−３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．９３−３．９０（ｍ，１Ｈ）、３．８６−３．８４（ｍ，１Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、３．７２−３．６８（ｍ，１Ｈ）、２．５３−２．４７（ｍ，３Ｈ）、２．４０−２．３８（ｍ，１Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）、２．２７−２．２１（ｍ，１Ｈ）。
【０１６３】
生物学的実験
ＦＧＦＲ活性阻害試験
ＦＧＦＲのインビトロ活性に対する本発明の化合物の効果を、ＨＴＲＦキナーゼアッセイキットを用いてキナーゼ反応における基質のリン酸化レベルを測定することによって評価した（表１）。
【０１６４】
ＦＧＦＲ１活性阻害試験
実験方法は以下のように要約される。
反応緩衝液は以下の成分を含有する：５倍希釈酵素緩衝液／キナーゼ５×（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（その主成分は５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０である）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＤＴＴ；同社により精製されたヒト組換えＦＧＦＲ１触媒ドメインタンパク質（アミノ酸３０８〜７３１）、反応緩衝液により希釈した０．６ｎｇ／μＬのキナーゼ溶液；反応緩衝液により希釈した４００ｎＭビオチン化チロシンキナーゼ基質を含有する基質反応溶液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）および４０μＭ  ＡＴＰ；試験緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）により希釈した０．１２５ｎｇ／μＬのＥｕ３＋標識ケージ抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）、および２５ｎＭストレプトアビジン標識ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）。
【０１６５】
化合物をＤＭＳＯ中で１ｍＭに希釈し、次いでＤＭＳＯで４倍段階希釈して最小濃度０．０６１μＭとし、各濃度を反応緩衝液でさらに４０倍希釈した。化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１６６】
４μＬの化合物溶液および２μＬのＦＧＦＲ１キナーゼ溶液を３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートし、次いで、４μＬの基質反応溶液を加え、反応混合物を室温で６０分間インキュベートし、次いで等量の試験溶液１０μＬを加えることによって反応を停止させ、混合物を均一に混合して室温で放置した。６０分後、リン酸化生成物がＥｕ３＋標識ケージ抗体（ドナー）およびストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体（レセプター）によって同時に認識され、レーザー励起後、互いに近いドナーとアクセプターとの間でエネルギー共鳴移動が起こり、エネルギーがドナー（６２０ｎｍ）からアクセプター（６６５ｎｍ）に移動し、それをマイクロプレートリーダーＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって検出することができた。６６５／６２０の比は基質のリン酸化度と正相関しており、そのためＦＧＦＲ１キナーゼの活性が検出された。
【０１６７】
この実験では、酵素を含まない群は１００％阻害群であり、酵素を含むが化合物を含まない群は０％阻害群であった。このようにして、化合物によるＦＧＦＲ１活性に対する阻害の割合を以下の式を用いて計算した：
阻害の割合＝１００−１００＊（比化合物−比１００％阻害）／（比０％阻害−比１００％阻害）
化合物のＩＣ５０値は、ＥｘｃｅｌのＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して以下の式により１０の濃度点から計算した：
Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊勾配係数））
式中、Ｙは阻害の割合、最小値はＳ字曲線の下平坦部の値、最大値はＳ字曲線の上平坦部の値、Ｘは試験される化合物の濃度の対数、勾配係数は曲線の勾配係数である。
【０１６８】
ＦＧＦＲ２活性阻害試験
実験方法は以下のように要約される。
反応緩衝液は以下の成分を含む：５倍希釈酵素緩衝液／キナーゼ５×（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（その主成分は５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０である）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＤＴＴ；Ｙｉｑｉａｏ  Ｓｈｅｎｚｈｏｕ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入したヒト組換えＦＧＦＲ２触媒ドメインタンパク質（アミノ酸４００〜８２１）、反応緩衝液により希釈した０．４５ｎｇ／μＬのキナーゼ溶液；反応緩衝液により希釈した８００ｎＭビオチン化チロシンキナーゼ基質を含有する基質反応溶液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）および５０μＭ  ＡＴＰ；試験緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）により希釈した０．１２５ｎｇ／μＬのＥｕ３＋標識ケージ抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）、および５０ｎＭストレプトアビジン標識ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）。
【０１６９】
化合物をＤＭＳＯ中で１ｍＭに希釈し、次いでＤＭＳＯで４倍段階希釈して最小濃度０．０６１μＭとし、各濃度を反応緩衝液でさらに４０倍希釈した。化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１７０】
４μＬの化合物溶液および２μＬのＦＧＦＲ２キナーゼ溶液を３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートし、次いで、４μＬの基質反応溶液を加え、反応混合物を室温で６０分間インキュベートし、次いで等量の試験溶液１０μＬを加えることによって反応を停止させ、混合物を均一に混合して室温で放置した。６０分後、リン酸化生成物がＥｕ３＋標識ケージ抗体（ドナー）およびストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体（レセプター）によって同時に認識され、レーザー励起後、互いに近いドナーとアクセプターとの間でエネルギー共鳴移動が起こり、エネルギーがドナー（６２０ｎｍ）からアクセプター（６６５ｎｍ）に移動し、それをマイクロプレートリーダーＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって検出することができた。６６５／６２０の比は基質のリン酸化度と正相関しており、そのためＦＧＦＲ２キナーゼの活性が検出された。
【０１７１】
この実験では、酵素を含まない群は１００％阻害群であり、酵素を含むが化合物を含まない群は０％阻害群であった。このようにして、化合物によるＦＧＦＲ２活性に対する阻害の割合を以下の式を用いて計算した：
阻害の割合＝１００−１００＊（比化合物−比１００％阻害）／（比０％阻害−比１００％阻害）
化合物のＩＣ５０値は、ＥｘｃｅｌのＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して以下の式により１０の濃度点から計算した：
Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊勾配係数））
式中、Ｙは阻害の割合、最小値はＳ字曲線の下平坦部の値、最大値はＳ字曲線の上平坦部の値、Ｘは試験される化合物の濃度の対数、勾配係数は曲線の勾配係数である。
【０１７２】
ＦＧＦＲ３活性阻害試験
実験方法は以下のように要約される。
反応緩衝液は以下の成分を含む：５倍希釈酵素緩衝液／キナーゼ５×（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（その主成分は５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０である）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＤＴＴ；Ｙｉｑｉａｏ  Ｓｈｅｎｚｈｏｕ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入したヒト組換えＦＧＦＲ３触媒ドメインタンパク質（アミノ酸３９９〜８０６）、反応緩衝液により希釈した０．３ｎｇ／μＬのキナーゼ溶液、反応緩衝液により希釈した１０００ｎＭビオチン化チロシンキナーゼ基質を含有する基質反応溶液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）および９０μＭ  ＡＴＰ；試験緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）により希釈した０．１２５ｎｇ／μＬのＥｕ３＋標識ケージ抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）、および６２．５ｎＭストレプトアビジン標識ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）。
【０１７３】
化合物をＤＭＳＯ中で１ｍＭに希釈し、次いでＤＭＳＯで４倍段階希釈して最小濃度０．０６１μＭとし、各濃度を反応緩衝液でさらに４０倍希釈した。化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１７４】
４μＬの化合物溶液および２μＬのＦＧＦＲ３キナーゼ溶液を３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートし、次いで、４μＬの基質反応溶液を加え、反応混合物を室温で６０分間インキュベートし、次いで等量の試験溶液１０μＬを加えることによって反応を停止させ、混合物を均一に混合して室温で放置した。６０分後、リン酸化生成物がＥｕ３＋標識ケージ抗体（ドナー）およびストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体（レセプター）によって同時に認識され、レーザー励起後、互いに近いドナーとアクセプターとの間でエネルギー共鳴移動が起こり、エネルギーがドナー（６２０ｎｍ）からアクセプター（６６５ｎｍ）に移動し、それをマイクロプレートリーダーＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって検出することができた。６６５／６２０の比は基質のリン酸化度と正相関しており、そのためＦＧＦＲ３キナーゼの活性が検出された。
【０１７５】
この実験では、酵素を含まない群は１００％阻害群であり、酵素を含むが化合物を含まない群は０％阻害群であった。このようにして、化合物によるＦＧＦＲ３活性に対する阻害の割合を以下の式を用いて計算した：
阻害の割合＝１００−１００＊（比化合物−比１００％阻害）／（比０％阻害−比１００％阻害）
化合物のＩＣ５０値は、ＥｘｃｅｌのＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して以下の式により１０の濃度点から計算した：
Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊勾配係数））
式中、Ｙは阻害の割合、最小値はＳ字曲線の下平坦部の値、最大値はＳ字曲線の上平坦部の値、Ｘは試験される化合物の濃度の対数、勾配係数は曲線の勾配係数である。
【０１７６】
ＦＧＦＲ４活性阻害試験
実験方法は以下のように要約される。
反応緩衝液は以下の成分を含む：５倍希釈酵素緩衝液／キナーゼ５×（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（その主成分は５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０である）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＤＴＴ。Ｔｓｉｎｇｈｕａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒから購入したヒト組換えＦＧＦＲ４触媒ドメインタンパク質（アミノ酸４６０〜８０２）、反応緩衝液により希釈した０．５ｎｇ／μＬのキナーゼ溶液、反応緩衝液により希釈した５００ｎＭビオチン化チロシンキナーゼ基質を含有する基質反応溶液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）および９０μＭ  ＡＴＰ；試験緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）により希釈した０．１２５ｎｇ／μＬのＥｕ３＋標識ケージ抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）、および３１．２５ｎＭストレプトアビジン標識ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）。
【０１７７】
化合物をＤＭＳＯ中で１ｍＭに希釈し、次いでＤＭＳＯで４倍段階希釈して最小濃度０．０６１μＭとし、各濃度を反応緩衝液でさらに４０倍希釈した。化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１７８】
４μＬの化合物溶液および２μＬのＦＧＦＲ４キナーゼ溶液を３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートし、次いで、４μＬの基質反応溶液を加え、反応混合物を室温で６０分間インキュベートし、次いで等量の試験溶液１０μＬを加えることによって反応を停止させ、混合物を均一に混合して室温で放置した。６０分後、リン酸化生成物がＥｕ３＋標識ケージ抗体（ドナー）およびストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体（レセプター）によって同時に認識され、レーザー励起後、互いに近いドナーとアクセプターとの間でエネルギー共鳴移動が起こり、エネルギーがドナー（６２０ｎｍ）からアクセプター（６６５ｎｍ）に移動し、それをマイクロプレートリーダーＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって検出することができた。６６５／６２０の比は基質のリン酸化度と正相関しており、そのためＦＧＦＲ４キナーゼの活性が検出された。
【０１７９】
この実験では、酵素を含まない群は１００％阻害群であり、酵素を含むが化合物を含まない群は０％阻害群であった。このようにして、化合物によるＦＧＦＲ４活性に対する阻害の割合を以下の式を用いて計算した：
阻害の割合＝１００−１００＊（比化合物−比１００％阻害）／（比０％阻害−比１００％阻害）
化合物のＩＣ５０値は、ＥｘｃｅｌのＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して以下の式により１０の濃度点から計算した：
Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊勾配係数））
式中、Ｙは阻害の割合、最小値はＳ字曲線の下平坦部の値、最大値はＳ字曲線の上平坦部の値、Ｘは試験される化合物の濃度の対数、勾配係数は曲線の勾配係数である。
【表１】
2019529444.tif 000054
【０１８０】
本発明の実施例における化合物は、ＦＧＦＲの活性に対して有意な阻害効果を有し、好ましくは１００〜１０００ｎＭのＩＣ５０、より好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０、最も好ましくは１０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【０１８１】
Ｈｅｐ３Ｂ細胞の増殖に対する阻害の決定
Ｈｅｐ３Ｂ肝細胞癌細胞系の細胞増殖に対する本発明の化合物の効果を、発光細胞生存率アッセイを用いて評価した（表２）。
【０１８２】
実験方法は以下のように要約される。
ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７２）は、ＣＴＧ凍結乾燥粉末およびＣＴＧ緩衝液からなる。使用前に、凍結乾燥粉末を緩衝液に溶解する必要がある。
【０１８３】
化合物をＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ５８７９）で５ｍＭに希釈し、次いでＤＭＳＯで４回段階希釈して最小濃度０．３１μＭとし、各濃度点をＦＢＳを含まないＤＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１１９９５０７３）で５０回さらに希釈した。化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を下げることができた。
【０１８４】
Ｈｅｐ３Ｂ細胞（Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手）を、１０％ＦＢＳ（ＧＢＩＣＯ、カタログ番号１００９９−１４１）および１００Ｕ／ｍＬストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５１４０１２２）の混合溶液を含有するＤＭＥＭ完全培地で培養した。細胞が培養容器内で８０〜９０％の密集度に達したとき、細胞を０．２５％トリプシン（ＥＤＴＡ含有）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２５２０００５６）で消化し、分散させ、次いで白色の３８４ウェル培養プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１６４６１０）に播種し（各ウェルは約１０００個の細胞（２７μＬのＤＭＥＭ完全培地）を含む）、次いで３８４ウェルプレートを３７℃の５％ＣＯ２インキュベータ内で一晩（１８〜２０時間）インキュベートした。
【０１８５】
一晩インキュベートした後、３μＬのＤＭＥＭ希釈化合物を各ウェルに加え、次いでそれを穏やかに遠心分離して十分に混合し、次いで３８４ウェルプレートを３７℃の５％ＣＯ２インキュベータに入れて培養を続け、７２時間後、プレートを取り出して室温で３０分間放置し、次に１ウェルあたり１５μＬのＣＴＧ試薬を加え、それを室温まで加温し、プレートをシェーカー上で３分間穏やかに振盪して十分な細胞溶解を確実にし、１０分間放置して発光シグナルを安定化させ、次いでＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で発光シグナルを読み取った。
【０１８６】
１０μＭを用いるＢＬＵ９９３１（Ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ社製）群の発光シグナル（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２０１５、５、４２４）をシグナル１００％阻害として使用し、０．２％ＤＭＳＯ群の発光シグナルシグナルをシグナル０％阻害として使用した。
【０１８７】
化合物によるＨｅｐ３Ｂ細胞増殖に対する阻害の割合は、以下の式によって計算することができた。
阻害の割合＝１００−１００＊（シグナル化合物−シグナル１００％阻害）／（シグナル０％阻害−シグナル１００％阻害）
ＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、ＵＫ）ソフトウェアを使用して、８つの濃度点から以下の式により化合物ＩＣ５０値を計算した。
Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊勾配係数））
式中、Ｙは阻害の割合、最小値はＳ字曲線の下平坦部の値、最大値はＳ字曲線の上平坦部の値、Ｘは試験される化合物の濃度の対数、勾配係数は曲線の勾配係数である。
【０１８８】
ＲＴ４細胞の増殖に対する阻害の決定
ＲＴ４膀胱癌細胞株の細胞増殖に対する本発明の化合物の効果を、発光細胞生存率アッセイを用いて評価した（表２）。
【０１８９】
実験方法については、Ｈｅｐ３Ｂ細胞の増殖に対する阻害を決定するための方法を参照されたい。ＲＴ４細胞は、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手し、陽性対照は、Ｔａｉｈｏの特許出願第ＷＯ２０１５／００８８４４Ａ１号の実施例１に開示されている（（Ｓ）−１−（３−（４−アミノ−３−（（３，５）−ジメトキシフェニル）エチニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピロリジン−１−イル）プロプ−２−エン−１−オン）であった。
【０１９０】
ＳＮＵ−１６細胞の増殖に対する阻害の決定
ＳＮＵ−１６胃癌細胞株の細胞増殖に対する本発明の化合物の効果を、発光細胞生存率アッセイを用いて評価した（表２）。
【０１９１】
実験方法については、Ｈｅｐ３Ｂ細胞の増殖に対する阻害を決定するための方法を参照されたい。ＳＮＵ−１６細胞はＡＴＣＣからのＨＢ−８０６４であり、陽性対照はＮｏｖａｒｔｉｓからのＢＪＧ３９８であった。
【表２】
2019529444.tif 000055
【０１９２】
本発明の実施例における化合物は、Ｈｅｐ３Ｂ、ＲＴ４およびＳＮＵ−１６のそれぞれの細胞増殖に対して有意な阻害効果を有し、好ましくは１００〜１０００ｎｍのＩＣ５０、より好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【国際調査報告】
2019529444.tif 000064
2019529444.tif 000065
2019529444.tif 000066
2019529444.tif 000067
2019529444.tif 000068
2019529444.tif 000069