(57)【要約】  本明細書は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．肝細胞期に輸送されるタンパク質の配列及びかかる配列を発現する発現構成体を提供する。また、本明細書は、本明細書で提供される発現構成体を使用してマラリアに対する免疫応答を生じさせる方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．肝細胞期（ＬＳ）免疫原をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つの核酸分子を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
少なくとも１つのＬＳ免疫原は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２からなる群から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
ＥＸＰ１及びＥＸＰ２をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１、配列番号１７、及び配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号１７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３２の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号１７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３２に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号２、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号３３及び配列番号３４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ＥＸＰ２３をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号４、配列番号２０、及び配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３５の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３５に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５、配列番号６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３６及び配列番号３７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３７に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項５に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
ＩＣＰをコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号７、配列番号２３及び配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３８の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３８に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号８、配列番号９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号３９及び配列番号４０からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項７に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
ＴＭＰ２１をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１０、配列番号２６及び配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２６の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号４１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２６に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号４１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号２７、配列番号２８、配列番号４２及び配列番号４３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号１１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号４２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号１１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２７に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号４２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ＵＩＳ３をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１３、配列番号２９及び配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２９の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号４４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２９に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号４４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号１４、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４５及び配列番号４６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号１４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号４５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号１４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号４５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項１１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
ＵＩＳ１０をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号４７をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号４７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号４８及び配列番号４９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号４８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号４９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号４８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号４９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項１３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号５０をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号５０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び
ｃ）配列番号５０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５１及び配列番号５２からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号５２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号５２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
ＲＯＮ２をコードする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号５３をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号５３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び
ｃ）配列番号５３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５４及び配列番号５５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号５５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号５５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記核酸配列は、配列番号１６のＩｇＥリーダー配列をコードする、請求項１〜１８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記核酸配列は、ＨＡタグをコードする、請求項１〜１８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１からなる群から選択される１つ以上のマラリア抗原をコードする１つ以上のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
配列番号５６、配列番号５９、配列番号６２、及び配列番号６５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６６及び配列番号６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１〜２１のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＬ−３３またはＲＡＮＴＥＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記ヌクレオチド配列は、１つ以上のプラスミドに組み込まれる、請求項１〜２３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれかに記載の免疫原性組成物を哺乳類の組織に投与するステップを含む、マラリアに対し前記哺乳類を免疫する方法。
【請求項２６】
ａ）前記免疫原性組成物を前記哺乳類の前記組織に投与し、ｂ）前記核酸分子を前記組織の細胞へ侵入させるのに有効な定電流のパルスエネルギーで前記細胞に電気穿孔するというステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫原性組成物を筋肉内注射または皮内注射により投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２からなる群から選択される１つ以上のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．ＬＳ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む、核酸分子。
【請求項２９】
ＥＸＰ１及びＥＸＰ２をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３０】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１、配列番号１７、及び配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号１７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３２の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号１７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３２に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号２、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号３３及び配列番号３４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項２９に記載の核酸分子。
【請求項３１】
ＥＸＰ２３をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３２】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号４、配列番号２０、及び配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３５の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３５に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５、配列番号６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３６及び配列番号３７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号３７に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３１に記載の核酸分子。
【請求項３３】
ＩＣＰをコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３４】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号７、配列番号２３及び配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号３８の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号３８に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号８、配列番号９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号３９及び配列番号４０からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３３に記載の核酸分子。
【請求項３５】
ＴＭＰ２１をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３６】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１０、配列番号２６及び配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２６の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号４１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２６に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号４１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号２７、配列番号２８、配列番号４２及び配列番号４３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号１１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号２８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号４２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号１１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２７に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号２８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号４２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３５に記載の核酸分子。
【請求項３７】
ＵＩＳ３をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項３８】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号１３、配列番号２９及び配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、配列番号２９の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列、及び配列番号４４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号１３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、配列番号２９に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列、及び配列番号４４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号１４、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４５及び配列番号４６からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号１４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号１５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号３１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、配列番号４５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号１４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号１５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号３１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、配列番号４５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列、及び配列番号４６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３７に記載の核酸分子。
【請求項３９】
ＵＩＳ１０をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項４０】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号４７をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｃ）配列番号４７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号４８及び配列番号４９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号４８の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号４９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号４８に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号４９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項３９に記載の核酸分子。
【請求項４１】
ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項４２】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号５０をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号５０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び
ｃ）配列番号５０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５１及び配列番号５２からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５１の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号５２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５１に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号５２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項４１に記載の核酸分子。
【請求項４３】
ＲＯＮ２をコードする、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項４４】
前記核酸配列は、
ａ）配列番号５３をコードするヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号５３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、及び
ｃ）配列番号５３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、
ｄ）配列番号５４及び配列番号５５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
ｅ）配列番号５４の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列及び配列番号５５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに
ｆ）配列番号５４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列及び配列番号５５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項４３に記載の核酸分子。
【請求項４５】
前記核酸配列は、配列番号１６のＩｇＥリーダー配列をコードする、請求項２８〜４４のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項４６】
前記核酸分子はプラスミドである、請求項２８に記載の核酸分子。
【請求項４７】
ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１からなる群から選択される１つ以上のマラリア抗原をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項４８】
前記ヌクレオチド配列は、配列番号５６、配列番号５９、配列番号６２、及び配列番号６５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸配列、ならびに配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６６及び配列番号６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列
からなる群から選択される、請求項４７に記載の核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年５月１９日に提出された米国仮特許出願第６２／３３８，８４１号に対する優先権を主張するものであり、本明細書での参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、抗原性マラリアタンパク質及びそれをコードする核酸分子；そのようなタンパク質及び／または核酸分子を含む改善されたマラリアワクチン；ならびにかかるワクチンをマラリア抗原に対する免疫応答誘導のために使用する方法、ならびにマラリア感染症の予防及び／またはマラリアに感染した個人の治療を行う方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
マラリアは蚊を媒介とする感染症であり、真核原生生物Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属によって引き起こされる。マラリアは、南北アメリカの一部（２２か国）、アジア、及びアフリカなど熱帯及び亜熱帯地域の広範囲に及んでいる。毎年、マラリアの症例は２億５０００万以上あり、１００万〜３００万人が死亡し、その大部分はサハラ砂漠以南のアフリカの若年小児である。伝播を減少させ、治療を増大させる取り組みにもかかわらず、１９９２年以降、この疾患のリスクがある地域でほとんど変化が見られていない。事実、マラリア有病率が現在のまま上昇をたどれば、今後２０年で死亡率は２倍になる可能性が考えられる。多くの症例は、人々が病院での治療を利用できないかまたは医療を受けられる手段がない農村地域で発生するため、正確な統計は不明である。その結果、症例の大部分が報告されていない。
【０００４】
Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍの５種が寄生虫としてヒトに感染し得、疾患の最も重篤な型はＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（本明細書ではＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｆ．及びＰＦとも呼ばれる）によって引き起こされる。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍは寄生原虫であり、ヒトにマラリアを引き起こすＰｌａｓｍｏｄｉｕｍの種の一つである。これは雌のハマダラカにより伝播される。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（または悪性）マラリアは合併症発生率及び死亡率が最も高いため、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍは上記の感染のうち最も危険である。２００６年には、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによる感染はヒトの全マラリア感染２億４７００万のうち９１％（９８％はアフリカ）を占め、また死亡例の９０％を占めた。
【０００５】
マラリア治療用に多種多様な抗マラリア薬が利用可能である。過去５年、流行している国々でのＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによる感染症治療は、アルテミシニン誘導体を含有する薬物の併用により変わってきている。重症マラリアは、キニーネまたは使用が増えつつあるアルテミシニン誘導体アルテスナートの静脈内または筋肉内投与で治療される。いくつかの薬物はまた、マラリアが流行している国々への旅行者のマラリア予防にも利用可能である（予防）。いくつかの抗マラリア薬、中でも特にクロロキンに対する耐性が発現している。
【０００６】
マラリア用ワクチンは開発中であるが、利用可能な完全に有効なワクチンはまだない。１９６７年、生の放射線照射弱毒化スポロゾイトでマウスを免疫することにより、マラリアワクチンの可能性を実証する最初の有望な試験が実施され、その後の正常な生存スポロゾイト注射時には約６０％のマウスに防御を与えた。１９７０年以来、ヒト体内での同様のワクチン接種戦略を開発すべく多大な努力が払われてきた。しかしながら、現在最も進んでいるとされるマラリアワクチン候補は、臨床疾患に対する部分的な防御を付与するにすぎない。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ前赤内期に対するサブユニットワクチン及びＤＮＡワクチンはＣＳＰのような表面のスポロゾイト抗原への指向に実質的に依存していたが、それほど成功してはいない。
【０００７】
したがって、マラリア感染に対する防御及び／または感染した対象の治療を行う新規な免疫原性組成物がかかる分野で求められている。
【発明の概要】
【０００８】
一実施形態では、本発明は、少なくとも１つのコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．肝細胞期（ＬＳ）免疫原をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つの核酸分子を含む免疫原性組成物に関する。
【０００９】
一実施形態では、少なくとも１つのＬＳ免疫原は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２からなる群から選択される。
【００１０】
一実施形態では、免疫原性組成物はＥＸＰ１及びＥＸＰ２をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１、配列番号１７、または配列番号３２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１の少なくとも９０％、配列番号１７の少なくとも９０％、または配列番号３２の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１７に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３２に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号３３または配列番号３４のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２の少なくとも９０％、配列番号３の少なくとも９０％、配列番号１８の少なくとも９０％、配列番号１９の少なくとも９０％、配列番号３３の少なくとも９０％、または配列番号３４の少なくとも９０％を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１９に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３３に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３４に対する少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００１１】
一実施形態では、免疫原性組成物はＥＸＰ２３をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４、配列番号２０または配列番号３５をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４の少なくとも９０％、配列番号２０の少なくとも９０％、または配列番号３５の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２０に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号３５に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５、配列番号６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３６または配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５の少なくとも９０％、配列番号６の少なくとも９０％、配列番号２１の少なくとも９０％、配列番号２２の少なくとも９０％、配列番号３６の少なくとも９０％または配列番号３７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号６に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３６に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号３７に対する少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００１２】
一実施形態では、免疫原性組成物はＩＣＰをコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号７、配列番号２３または配列番号３８のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号７の少なくとも９０％、配列番号２３の少なくとも９０％または配列番号３８の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号７に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２３に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３８に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号８、配列番号９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号３９または配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号８の少なくとも９０％、配列番号９の少なくとも９０％、配列番号２４の少なくとも９０％、配列番号２５の少なくとも９０％、配列番号３９の少なくとも９０％、または配列番号４０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号９に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３９に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１３】
一実施形態では、免疫原性組成物はＴＭＰ２１をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１０、配列番号２６または配列番号４１をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１０の少なくとも９０％、配列番号２６の少なくとも９０％または配列番号４１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１０に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２６に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号２７、配列番号２８、配列番号４２または配列番号４３のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１１の少なくとも９０％、配列番号１２の少なくとも９０％、配列番号２７の少なくとも９０％、配列番号２８の少なくとも９０％、配列番号４２の少なくとも９０％または配列番号４３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２７に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号４２に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１４】
一実施形態では、免疫原性組成物はＵＩＳ３をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１３、配列番号２９または配列番号４４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１３の少なくとも９０％、配列番号２９の少なくとも９０％、または配列番号４４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１３に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２９に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１４、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４５または配列番号４６のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１４の少なくとも９０％、配列番号１５の少なくとも９０％、配列番号３０の少なくとも９０％、配列番号３１の少なくとも９０％、配列番号４５の少なくとも９０％、または配列番号４６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３０に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号４５に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号４６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１５】
一実施形態では、免疫原性組成物はＵＩＳ１０をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４７をコードするヌクレオチド配列、配列番号４７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号４７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４８または配列番号４９のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４８の少なくとも９０％または配列番号４９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号４８に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１６】
一実施形態では、免疫原性組成物は、ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５０をコードするヌクレオチド配列、配列番号５０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号５０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５１または配列番号５２のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５１の少なくとも９０％または配列番号５２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５１に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号５２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１７】
一実施形態では、免疫原性組成物はＲＯＮ２をコードする。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５３をコードするヌクレオチド配列、配列番号５３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号５３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５４または配列番号５５のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５４の少なくとも９０％または配列番号５５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列または配列番号５５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００１８】
一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＩｇＥリーダー配列をコードする核酸配列を含む。
【００１９】
一実施形態では、免疫原性組成物は、ＨＡタグをコードする核酸配列を含む。
【００２０】
一実施形態では、免疫原性組成物は、ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１の１つ以上をコードする１つ以上のヌクレオチド配列をさらに含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号５６、配列番号５９、配列番号６２または配列番号６５のアミノ酸配列をコードする核酸配列をさらに含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６６または配列番号６７の核酸配列をさらに含む。
【００２１】
一実施形態では、免疫原性組成物は、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＬ−３３またはＲＡＮＴＥＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む。
【００２２】
一実施形態では、１つ以上のヌクレオチド配列は、１つ以上のプラスミドに組み込まれる。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、少なくとも１つのコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．肝細胞期（ＬＳ）免疫原をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つの核酸分子を含む免疫原性組成物を、哺乳類の組織に投与するステップを含む、哺乳類をマラリアに対して免疫する方法に関する。一実施形態では、方法は、ａ）免疫原性組成物を哺乳類の組織に投与し、ｂ）核酸分子を細胞へ侵入させるのに有効な定電流のパルスエネルギーで組織の細胞に電気穿孔するというステップを含む。一実施形態では、免疫原性組成物を筋肉内注射または皮内注射により投与する。
【００２４】
一実施形態では、本発明は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２からなる群から選択される１つ以上のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．ＬＳ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む核酸分子に関する。
【００２５】
一実施形態では、核酸分子はＥＸＰ１及びＥＸＰ２をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１、配列番号１７、または配列番号３２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１の少なくとも９０％、配列番号１７の少なくとも９０％、または配列番号３２の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１７に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３２に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号２、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号３３または配列番号３４のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号２の少なくとも９０％、配列番号３の少なくとも９０％、配列番号１８の少なくとも９０％、配列番号１９の少なくとも９０％、配列番号３３の少なくとも９０％、または配列番号３４の少なくとも９０％を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１９に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３３に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３４に対する少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００２６】
一実施形態では、核酸分子はＥＸＰ２３をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４、配列番号２０または配列番号３５をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４の少なくとも９０％、配列番号２０の少なくとも９０％、または配列番号３５の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２０に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号３５に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３６または配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５の少なくとも９０％、配列番号６の少なくとも９０％、配列番号２１の少なくとも９０％、配列番号２２の少なくとも９０％、配列番号３６の少なくとも９０％または配列番号３７の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号６に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３６に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号３７に対する少なくとも９０％の相同性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００２７】
一実施形態では、核酸分子はＩＣＰをコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号７、配列番号２３または配列番号３８のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号７の少なくとも９０％、配列番号２３の少なくとも９０％または配列番号３８の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号７に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２３に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号３８に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号８、配列番号９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号３９または配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号８の少なくとも９０％、配列番号９の少なくとも９０％、配列番号２４の少なくとも９０％、配列番号２５の少なくとも９０％、配列番号３９の少なくとも９０％、または配列番号４０の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号９に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３９に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４０に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００２８】
一実施形態では、核酸分子はＴＭＰ２１をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１０、配列番号２６または配列番号４１をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１０の少なくとも９０％、配列番号２６の少なくとも９０％または配列番号４１の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１０に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２６に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４１に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号２７、配列番号２８、配列番号４２または配列番号４３のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１１の少なくとも９０％、配列番号１２の少なくとも９０％、配列番号２７の少なくとも９０％、配列番号２８の少なくとも９０％、配列番号４２の少なくとも９０％または配列番号４３の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１２に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２７に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２８に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号４２に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４３に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００２９】
一実施形態では、核酸分子はＵＩＳ３をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１３、配列番号２９または配列番号４４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１３の少なくとも９０％、配列番号２９の少なくとも９０％、または配列番号４４の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１３に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号２９に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４４に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１４、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４５または配列番号４６のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１４の少なくとも９０％、配列番号１５の少なくとも９０％、配列番号３０の少なくとも９０％、配列番号３１の少なくとも９０％、配列番号４５の少なくとも９０％、または配列番号４６の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１４に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号１５に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３０に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号３１に対する少なくとも９０％の相同性、配列番号４５に対する少なくとも９０％の相同性、または配列番号４６に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００３０】
一実施形態では、核酸分子はＵＩＳ１０をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４７をコードするヌクレオチド配列；配列番号４７の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列；または配列番号４７に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４８または配列番号４９のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４８の少なくとも９０％または配列番号４９の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４８に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号４９に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００３１】
一実施形態では、核酸分子は、ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５０をコードするヌクレオチド配列、配列番号５０の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号５０に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５１または配列番号５２のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５１の少なくとも９０％または配列番号５２の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５１に対する少なくとも９０％の相同性または配列番号５２に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００３２】
一実施形態では、核酸分子はＲＯＮ２をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５３をコードするヌクレオチド配列、配列番号５３の少なくとも９０％を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列、または配列番号５３に対する少なくとも９０％の相同性を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５４または配列番号５５のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５４の少なくとも９０％または配列番号５５の少なくとも９０％を含むヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５４に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列または配列番号５５に対する少なくとも９０％の相同性を含むヌクレオチド配列を含む。
【００３３】
一実施形態では、核酸分子は、配列番号１６のＩｇＥリーダー配列をコードする配列を含む。
【００３４】
一実施形態では、前記核酸分子はプラスミドである。
【００３５】
一実施形態では、本発明は、ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１の１つ以上をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。一実施形態では、核酸分子は、配列番号５６、配列番号５９、配列番号６２または配列番号６５のアミノ酸配列をコードする核酸配列をさらに含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６６または配列番号６７の核酸配列をさらに含む。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１６のＩｇＥリーダー配列をコードする配列を含む。一実施形態では、前記核酸分子はプラスミドである。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ感染のスポロゾイト期及び肝細胞期を示す。肝細胞期（ＬＳ）に輸送されるタンパク質は寄生胞膜（ＰＶＭ）を横切る。
【図２】ＬＳに輸送されるタンパク質の一覧を示し、そのタンパク質をコードする核酸配列の長さ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．におけるその保存、及びそれらのタンパク質が同定されたステージ（複数可）（肝細胞期（ＬＳ）、血内期（ＢＳ）またはスポロゾイト期）を示す。
【図３】図３Ａから図３Ｄを含め、ＥＸＰ１及びＥＸＰ２で免疫したマウスでは対照マウスより生存率が高いことを示す。Ａは、免疫、攻撃、及び観察時の経時変化を表す線図を示す。Ｂは、実験結果を示す表の記載である。ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２で免疫したマウスは、血内期疾患の発症遅延を示した。Ｃは、攻撃後８日にわたり前顕性を示すマウスの割合を示す。Ｄは、攻撃後８日にわたり顕性を示すマウスの割合を示す。
【図４】図４Ａから図４Ｄを含め、ＥＸＰ１及びＥＸＰ２で免疫したマウスでは対照マウスより生存率及び血内期疾患防御が高いことを示す。Ａは、免疫、攻撃、及び観察時の経時変化を表す線図を示す。Ｂは、実験結果を示す表の記載である。ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２で免疫したマウスは、ＩＬ−１２またはＩＬ３３のアジュバントの有無を問わず、血内期疾患の発症に対する防御を示した。Ｃは、攻撃後１０日にわたり前顕性を示すマウスの割合を示す。Ｄは、攻撃後１０日にわたり顕性を示すマウスの割合を示す。
【図５】ＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示し、初回免疫から１４週間後、ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２で免疫したマウスは、ＩＬ−１２またはＩＬ−３３を用いた補助療法の有無を問わず、対照ベクター（ｐＶａｘ）で処置したマウスと比べて免疫応答増強を示したことを示す。
【図６】図５のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果の平均を示し、ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２で免疫したマウスは、ＩＬ−１２またはＩＬ−３３を用いた補助療法の有無を問わず、対照ベクター（ｐＶａｘ）で処置したマウスと比べて免疫応答増強を示したことを示す。
【図７】図７Ａから図７Ｂを含め、ＬＳ免疫原をさまざまに組み合わせて免疫したマウスでは対照マウスより生存率及びＢＳ疾患防御が高いことを示す。Ａは、免疫、攻撃、及び観察時の経時変化を表す線図を示す。Ｂは、実験結果を示す表の記載である。ＬＳ免疫原の組み合わせを含む構成体で免疫したマウスは、ＩＬ−１２またはＩＬ３３のアジュバントの有無を問わず、ＢＳ疾患の発症に対する防御を示した。
【図８】ＥＸＰ＿１及びＥＸＰ２抗原、ＥＸＰ２３及びＩＣＰ抗原またはｐＶＡＸを単独またはアジュバント（ＩＬ−１２またはＩＬ−３３）との組み合わせで免疫したマウスの血液の代表的画像を示す。赤い矢印はＢＳ疾患の発症を示す。
【図９】ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３抗原、またはＥＸＰ１＿ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３抗原を含む免疫原性混合組成物（ｃｏｍｂｏ）またはｐＶＡＸを単独またはアジュバント（ＩＬ−１２またはＩＬ−３３）との組み合わせで免疫したマウスの血液の代表的画像を示す。赤い矢印はＢＳ疾患の発症を示す。
【図１０】補助療法（ＩＬ−１２またはＩＬ−３３）を追加して、または追加しないでＥＸＰ１＿ＥＸＰ２（上のパネル）またはＥＸＰ２３＋ＩＣＰ（下のパネル）で免疫した場合に攻撃後１０日にわたり前顕性及び顕性であるマウスの割合を示す。
【図１１】ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３抗原（上のパネル）、またはＥＸＰ１＿ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３の抗原を含む免疫原性混合組成物（ｃｏｍｂｏ）（下のパネル）に補助療法（ＩＬ−１２またはＩＬ−３３）を追加して、または追加しないで免疫した場合に攻撃後１０日にわたり前顕性及び顕性であるマウスの割合を示す。
【図１２】ＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示し、初回免疫から１８週間後、ＬＳ免疫原の組み合わせに、ＩＬ−１２またはＩＬ−３３を用いた補助療法を追加して、または追加しないで免疫したマウスは、対照ベクター（ｐＶａｘ）で処置したマウスと比べて免疫応答増強を示したことを示す。
【図１３】図１２のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果の平均を示し、ＬＳ免疫原の組み合わせに、ＩＬ−１２またはＩＬ−３３を用いた補助療法を追加して、または追加しないで免疫したマウスは、対照ベクター（ｐＶａｘ）で処置したマウスと比べて免疫応答増強を示したことを示す。
【図１４】ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２単独またはさらなるマラリア免疫原ＣｅｌＴＯＳ＿ＴＲＡＰとの組み合わせに、ＩＬ−１２またはＩＬ−３３を用いた補助療法を追加して、または追加しないで免疫したマウスでは、生存率及びＢＳ疾患防御が高いことを実証する実験結果を示す。
【図１５】ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２、ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２とＣｅｌＴＯＳ＿ＴＲＡＰとの組み合わせ、ＣｅｌＴＯＳ＿ＴＲＡＰ、ＵＩＳ１０＿ＰＬ、またはＳＰＥＣＴ１／ＳＰＥＣＴ２で免疫した場合に、攻撃から数日にわたり前顕性及び顕性であるマウスの割合を示す例示的な実験結果を示す。
【図１６】ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２、ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２とＣｅｌＴＯＳ＿ＴＲＡＰとの組み合わせ、ＣｅｌＴＯＳ＿ＴＲＡＰ、ＵＩＳ１０＿ＰＬ、またはＳＰＥＣＴ１／ＳＰＥＣＴ２で免疫した後にスポロゾイトで攻撃したマウスの前顕性日数を示す例示的な実験結果を示す。
【図１７】ＵＩＳ１０＿ＰＬ１０抗原で免疫したマウスの血清においてＵＩＳ１０＿ＰＬ１０が検出されることを実証する例示的な実験結果を示す。
【図１８】図１６及び図１７に提示した例示的な実験データの結果をまとめた表を示す。
【図１９】Ｐｖｉｖａｘ構成体及びＰｃｙｎｏｍｏｌｇｉ構成体の発現を示す例示的な実験結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
一態様では、本発明は、肝細胞期（ＬＳ）に輸送されるタンパク質の核酸及びアミノ酸配列を含む組成物ならびにそれらをＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．免疫原性組成物として使用する方法を提供する。一実施形態では、組成物は、ＬＳに輸送されるタンパク質１つ以上をコードする核酸配列である。一実施形態では、組成物には、ＬＳに輸送される複数のタンパク質をコードする複数の核酸が含まれる。一実施形態では、組成物は、ＬＳに輸送されるタンパク質１つ以上をコードするプラスミドである。一実施形態では、組成物は、ＬＳに輸送されるタンパク質１つ以上をコードする複数のプラスミドを含む。
【００３８】
一実施形態では、本発明は、ヒト細胞での発現用に最適化された配列を提供する。ヒト対象の治療では最適化ＤＮＡ配列が好ましい。
【００３９】
定義
特別に定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、当該技術分野の当業者に共通して理解される意味と同一の意味を有する。矛盾がある場合は、定義も含め、本明細書が優先することになる。本発明の実施または試験においては本明細書に記載の方法及び材料と類似または同等のものを使用できるが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示する材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定的ではないことが意図される。本明細書で使用する用語は、あくまで具体的な実施形態の記載を目的とするものであり、限定的ではないことが意図される。
【００４０】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「することができる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」、及びその変形は、本明細書で使用する場合、さらなる行為または構造の可能性を除外しない非限定的な移行句、用語、または語句であることが意図される。単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、文脈で特に明確に指示されない限り、複数の指示対象が含まれる。本開示はまた、明示的な記載の有無を問わず、本明細書で提示する実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」他の実施形態も意図する。
【００４１】
本明細書で数値範囲を詳述する場合、それらの間に介在する同程度に正確な数値各々が明示的に意図される。例えば、６〜９の範囲では、６及び９に加えて数字の７及び８が意図され、範囲６．０〜７．０では、数字の６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が明示的に意図される。
【００４２】
本明細書で使用する「アジュバント」は、本明細書で後述するＤＮＡプラスミド及びコード核酸配列によってコードされる抗原の免疫原性を高めるために、本明細書に記載するＤＮＡプラスミドワクチンに加えられる任意の分子を意味する。
【００４３】
本明細書で使用する「抗体」は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ各クラスの抗体、または断片、またはその誘導体を意味し、それらにはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ならびに一本鎖抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、二機能性抗体及びそれらの誘導体が含まれる。抗体は、所望のエピトープまたはそれ由来の配列に対する十分な結合特異性を示す、哺乳類血清試料から単離された抗体、ポリクローナル抗体、親和性精製抗体、またはそれらの混合物であり得る。
【００４４】
本明細書で使用する「コード配列」または「コード核酸」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子）を意味する。コード配列にはさらに、プロモーターなど調節エレメントに機能的に連結される開始シグナル及び終結シグナル、ならびに核酸を投与される個体または哺乳類の細胞で発現を誘導できるポリアデニル化シグナルが含まれ得る。
【００４５】
本明細書で使用する「相補体」または「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド間またはヌクレオチド類似体間でワトソン−クリック型（例えば、Ａ−Ｔ／Ｕ及びＣ−Ｇ）またはフーグスティーン型の塩基対合を指し得る核酸を意味する。
【００４６】
本明細書で使用する「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、異なる生物に由来する同一遺伝子の複数配列のアラインメント分析に基づくポリペプチド配列を意味する。コンセンサスポリペプチド配列をコードする核酸配列は調製可能である。コンセンサス配列を含むタンパク質及び／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子を含むワクチンを使用して、ある抗原に対する広い免疫を誘導することができる。
【００４７】
本明細書で互換的に使用される「電気穿孔法」、「電気透過（ｅｌｅｃｔｒｏ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」、または「電気運動強化（ｅｌｅｃｔｒｏ−ｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」（「ＥＰ」）とは、生体膜に微細通路（孔）を誘導するために膜貫通電場パルスを使用することを意味し、それらの通路があることにより、プラスミド、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬物、イオン、及び水等の生体分子が細胞膜の片側から反対側に通過することができる。
【００４８】
本明細書で核酸配列に関して使用する「断片」とは、本明細書に開示される抗原と交差反応し哺乳類において免疫応答を誘発することができるポリペプチドをコードする、核酸配列またはその一部を意味する。断片は、以下に記載のタンパク質断片をコードするさまざまなヌクレオチド配列のうち少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であり得る。断片は、以下に記載の核酸配列１つ以上の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を含むことができる。いくつかの実施形態では、断片は、本明細書に開示する核酸配列のうち少なくとも１つの少なくとも２０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも３０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも４０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも６０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも７０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも８０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも９０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも１００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも１５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも２００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも２５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも３００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも３５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも４００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも４５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも５００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも５５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも６００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも６５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも７００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも７５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも８００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも８５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも９００のヌクレオチドもしくはそれ以上、少なくとも９５０のヌクレオチドもしくはそれ以上、または少なくとも１０００のヌクレオチドもしくはそれ以上を含むことができる。
【００４９】
ポリペプチド配列に関して「断片」または「免疫原性断片」とは、本明細書に開示される抗原と交差反応し、哺乳類において免疫応答を誘発することができるポリペプチドを意味する。断片は、下記のさまざまなアミノ酸配列のうち少なくとも１つから選択されるポリペプチド断片であり得る。コンセンサスタンパク質の断片は、コンセンサスタンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％を含むことができる。いくつかの実施形態では、コンセンサスタンパク質の断片は、本明細書に開示するタンパク質配列のうち少なくとも２０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも３０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも４０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも５０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも６０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも７０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも８０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも９０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１００のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１１０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１２０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１３０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１４０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１５０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１６０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１７０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも１８０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも２１０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも２４０のアミノ酸もしくはそれ以上、少なくとも２７０のアミノ酸もしくはそれ以上、または少なくとも３００のアミノ酸もしくはそれ以上を含むことができる。
【００５０】
本明細書で使用する場合、用語「遺伝子構成体」とは、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡの分子を指す。コード配列には、プロモーターなど調節エレメントに機能的に連結される開始シグナル及び終結シグナル、ならびに核酸分子が投与される個体の細胞において発現を導くことができるポリアデニル化シグナルが含まれる。本明細書で使用する場合、用語「発現可能な形態」とは、個体の細胞内に存在している場合にタンパク質をコードするコード配列が発現するよう、かかるコード配列に機能的に連結された必須調節エレメントを含有する遺伝子構成体を指す。
【００５１】
用語「相同性」は、本明細書で使用する場合、相補性の程度を指す。部分的相同性または完全相同性（すなわち、同一性）があり得る。完全相補配列が標的核酸とハイブリダイズしないよう少なくとも部分的に阻害する部分的相補配列は、「実質的に相同な」という機能用語を使用して言及される。本明細書においてｃＤＮＡまたはゲノムクローンなどの二本鎖核酸配列に関して使用する場合、用語「実質的に相同な」とは、低ストリンジェンシー条件下で二本鎖核酸配列の鎖とハイブリダイズすることができるプローブを指す。本明細書において、一本鎖核酸配列に関して使用する場合、用語「実質的に相同な」とは、低ストリンジェンシー条件下で一本鎖核酸鋳型配列とハイブリダイズすることができる（すなわち、相補体である）プローブを指す。
【００５２】
本明細書で２つ以上の核酸またはポリペプチド配列において「同一な」または「同一性」という場合、それらの配列が、ある特定領域にわたり同一である特定割合の残基を有することを意味する。割合は、２つの配列を至適に整列させ、かかる２配列を特定領域にわたり比較し、両配列において残基が同一となる位置番号を決定して一致する位置数を求め、一致する位置数を特定領域中の総位置数で割り、その結果に１００を乗じて配列同一性の割合を求めることによって計算することができる。２配列が異なる長さであるかまたはアラインメントにより１つ以上の突出末端が生成され、比較する特定領域に単一配列しか含まれない場合、単一配列の残基はその計算の分子ではなく分母に含まれる。ＤＮＡとＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）とウラシル（Ｕ）は同等と考えることができる。同一性評価は、手作業またはＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ  ２．０などのコンピュータによる配列アルゴリズムの使用により実施することができる。
【００５３】
本明細書で使用する「免疫応答」は、宿主の免疫系、例えば、哺乳類の免疫系が抗原導入に応答して活性化されることを意味する。免疫応答は、細胞性または液性の応答、またはその両方の形態であり得る。
【００５４】
本明細書で使用する「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、互いに共有結合で連結されている少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。一本鎖の記載により、相補鎖の配列もまた定義される。したがって、核酸は、描写されている一本鎖の相補鎖をも包含する。核酸の多くの変異型は、所与の核酸の目的と同一の目的に使用することができる。したがって、核酸は、実質的に同一な核酸及びその相補体をも包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列とハイブリダイズすることができるプローブを提供する。したがって、核酸は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブをも包含する。
【００５５】
核酸は、一本鎖もしくは二本鎖であっても、または二本鎖配列の部分及び一本鎖配列の部分の両方を含有してもよい。核酸は、ゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、その場合、核酸は、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン及びイソグアニンが含まれる塩基の組み合わせを含有することができる。核酸は、化学的合成法または組換え法のいずれによっても得ることができる。
【００５６】
本発明において「機能的に連結された」とは、遺伝子の発現が、その遺伝子と空間的に連結されるプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下の遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に位置し得る。プロモーターと遺伝子間の距離は、そのプロモーターと、そのプロモーターが由来する遺伝子における同プロモーターが制御する遺伝子との距離とほぼ同じであり得る。当該技術分野で公知のように、この距離の変更は、プロモーター機能を損失させることなく適応可能である。
【００５７】
本発明において「ペプチド」、「タンパク質」、または「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結配列を意味し得、天然配列、合成配列、または天然及び合成の配列の修飾型もしくは組み合わせであり得る。
【００５８】
本明細書で使用する「プロモーター」は、細胞内で核酸の発現を付与する、活性化する、または高めることができる合成分子または天然由来分子を意味する。プロモーターは、核酸の発現をさらに高める、及び／または空間的発現を改変する、及び／または時間的発現を改変する、１つ以上の特定の転写調節配列を含むことができる。プロモーターは、遠位のエンハンサーエレメントまたはリプレッサーエレメントも含むことができ、これらは転写開始部位から数千塩基対も離れて位置することができる。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物などの材料に由来し得る。プロモーターは、遺伝子成分の発現を、恒常的に調節する、または発現が生じる細胞、組織、もしくは器官について差次的に調節する、または発現が生じる発達段階について差次的に調節する、または生理的ストレス、病原体、金属イオン、もしくは誘発物質などの外部刺激に応答して調節することができる。プロモーターの代表例には、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレーター−プロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ  ＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターまたはＳＶ４０後期プロモーター及びＣＭＶ  ＩＥプロモーターが含まれる。
【００５９】
「シグナルペプチド」及び「リーダー配列」は本明細書では同じ意味で使用され、本明細書に記載されるタンパク質のアミノ末端で連結され得るアミノ酸配列を指す。シグナルペプチド／リーダー配列は典型的に、タンパク質の局在化を導く。本明細書で使用するシグナルペプチド／リーダー配列は、好ましくは、かかるタンパク質を産生する細胞からの当該タンパク質の分泌を促進する。シグナルペプチド／リーダー配列はしばしば、細胞から分泌されると同時に、成熟タンパク質と呼ばれる残りのタンパク質部分から切断される。シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）で連結されている。
【００６０】
本明細書で使用する「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、核酸の複合混合物中などで、第１の核酸配列（例えば、プローブ）が第２の核酸配列（例えば、標的）とハイブリダイズする条件を意味する。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、状況が異なれば条件は異なってくる。ストリンジェントな条件は、定義されたイオン強度、ｐＨにおいて特定の配列の熱融点（Ｔｍ）よりも約５〜１０℃低くなるよう選択され得る。Ｔｍは、平衡状態において、標的に相補的なプローブの５０％が標的配列とハイブリダイズする温度（定義されたイオン強度、ｐＨ、及び核酸濃度下で）であり得る（標的配列が過剰に存在する場合、Ｔｍにて平衡状態でプローブの５０％が占有されている）。ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３において塩濃度は約１．０Ｍのナトリウムイオン、例えば、約０．０１〜１．０Ｍのナトリウムイオン濃度（または他の塩）などであり、温度は、短いプローブ（例えば、約１０〜５０ヌクレオチド）では少なくとも約３０℃、また長いプローブ（例えば、約５０ヌクレオチド超）では少なくとも約６０℃という条件であり得る。ストリンジェントな条件は、ホルムアミドのような不安定化剤を添加して達成することもできる。選択的または特異的ハイブリダイゼーションの場合、陽性シグナルは、バックグランドハイブリダイゼーションの少なくとも２〜１０倍であり得る。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件には、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、及び１％ＳＤＳで４２℃にてインキュベートするか、または５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで６５℃にてインキュベートし、０．２×ＳＳＣ、及び０．１％ＳＤＳで６５℃にて洗浄することが含まれる。
【００６１】
本発明で使用する「対象」は、本明細書に記載のワクチンで免疫することを望んでいるかまたは必要としている哺乳類を意味し得る。哺乳類は、ヒト、チンパンジー、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、またはラットであり得る。
【００６２】
本発明において「実質的に相補的」とは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０、もしくはそれ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸の領域にわたり、第１の配列が、第２の配列の相補体と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であること、または２つの配列がストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることを意味する。
【００６３】
本発明で使用する「実質的に同一な」とは、第１の配列が第２の配列の相補体に対し実質的に相補的である場合、第１の配列と第２の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０またはそれ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸の領域にわたって、または核酸に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であることを意味する。
【００６４】
本発明で使用する「治療」または「治療する」とは、疾患を予防する、抑制する（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ）、抑制する（ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ）、または完全に消失させる手段を介して動物を疾患から保護することを意味し得る。疾患の予防では、動物に対する本発明のワクチンの投与を疾患発症前に行う。疾患の抑制（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ）では、動物に対する本発明のワクチンの投与を、疾患が誘導された後ではあるがその疾患が臨床的に出現する前に行う。疾患の抑制（ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ）では、動物に対する本発明のワクチンの投与を疾患が臨床的に出現した後に行う。
【００６５】
本明細書で使用する核酸に関して「変異型」とは、（ｉ）参照ヌクレオチド配列の一部または断片、（ｉｉ）参照ヌクレオチド配列の相補体またはその部分、（ｉｉｉ）参照核酸と実質的に同一な核酸またはその相補体、または（ｉｖ）参照核酸、その相補体、またはそれと実質的に同一な配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を意味する。
【００６６】
ペプチドまたはポリペプチドに関しての「変異型」は、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によりアミノ酸配列は異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持している。また、変異型は、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一なアミノ酸配列を有するタンパク質をも意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわち、あるアミノ酸を特性（例えば、親水性、荷電領域の程度と分布）が類似する異なるアミノ酸で置き換えることは、当該技術分野では典型的に軽微な変更を行うものとして認識されている。これらの軽微な変更は、当該技術分野で理解されているように、一部は、アミノ酸のハイドロパシー指標を考慮して確認することができる。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸のハイドロパシー指標はその疎水性と電荷についての考察に基づく。ハイドロパシー指標が同様のアミノ酸は置換が可能であり、なおもタンパク質機能が保持され得ることは当該技術分野で公知である。一態様では、ハイドロパシー指標が±２のアミノ酸が置換される。生物学的機能を保持するタンパク質がもたらされるであろう置換を明らかにするためにアミノ酸の親水性を使用することもできる。ペプチドにおいてアミノ酸の親水性を考慮することにより、そのペプチドの局所的な最大平均親水性を計算することができ、これは抗原性及び免疫原性と良好に相関することが報告されている有用な尺度である。参照により本明細書に完全に組み込まれる米国特許第４，５５４，１０１号。当該技術分野で理解されているように、親水性値が同様であるアミノ酸の置換により、生物学的活性、例えば、免疫原性を保持するペプチドがもたらされ得る。置換は、互いの親水性値が±２以内のアミノ酸を用いて実施可能である。アミノ酸の疎水性指標及び親水性値は、そのアミノ酸の特定の側鎖による影響を受ける。その所見と一致して、疎水性、親水性、電荷、大きさ、及び他の特性によって明らかになるように、生物学的機能と適合性のあるアミノ酸置換は、アミノ酸の相対的類似性、特にそれらのアミノ酸の側鎖に依存すると理解される。
【００６７】
変異型は、完全長遺伝子配列の全長にわたり実質的に同一な核酸配列またはその断片であってよい。核酸配列は、遺伝子配列の全長またはその断片に対して８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一あってよい。変異型は、アミノ酸配列の全長にわたり実質的に同一なアミノ酸配列またはその断片であってよい。アミノ酸配列は、アミノ酸配列の全長またはその断片に対して８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であってよい。
【００６８】
本明細書で使用する「ベクター」は、複製起点を含有する核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌の人工染色体または酵母の人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製染色体外ベクターであり得、好ましくは、ＤＮＡプラスミドである。ベクターは、１つ以上の異種核酸配列を含有するかまたは含むことができる。
【００６９】
１．免疫原性組成物
本発明は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．に対する免疫応答の誘発に使用するための免疫原性組成物を対象とする。一実施形態では、免疫原性組成物は、少なくとも１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．の肝細胞期（ＬＳ）抗原を含む。一実施形態では、ＬＳ抗原は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐの複数のＬＳ抗原配列から作製したコンセンサスＬＳ抗原である。一実施形態では、コンセンサスＬＳ抗原は、複数のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．に対する広い免疫応答を誘発することができる。
【００７０】
一実施形態では、免疫原性組成物は、前顕性期の長さを、免疫されていない対象での前顕性期の長さに対して少なくとも１％、５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、または４５％以上延長することができる。一実施形態では、免疫原性組成物は、顕性期を、免疫されていない対象の場合より少なくとも１％、５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％または６０％以上、免疫後に短縮することができる。
【００７１】
一実施形態では、免疫原性組成物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐに対する防御を、免疫されていない集団の防御よりも少なくとも１％、５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、または４５％以上高めることができる。
【００７２】
免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与された対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ攻撃に応答した細胞性免疫応答を、免疫原性組成物非投与の対象の細胞性免疫応答よりも約２倍〜約６０００倍、約３倍〜約６０００倍、約４倍〜約６０００倍、約５倍〜約６０００倍、約６倍〜約６０００倍、約７倍〜約６０００倍、約８倍〜約６０００倍、約９倍〜約６０００倍、約１０倍〜約６０００倍、約１５倍〜約６０００倍、約１０倍〜約６０００倍、約２５倍〜約６０００倍、約３０倍〜約６０００倍、約３５倍〜約６０００倍、約４０倍〜約６０００倍、約４５倍〜約６０００倍、約５０倍〜約６０００倍、約２倍〜約５５００倍、約２倍〜約５０００倍、約２倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍高めることができる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与された対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ攻撃に応答した細胞性免疫応答を、免疫原性組成物非投与の対象の細胞性免疫応答よりも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍高めることができる。
【００７３】
免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与された対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ攻撃に応答したインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）レベルを、免疫原性組成物非投与の対象のＩＦＮ−γレベルよりも約２倍〜約６０００倍、約３倍〜約６０００倍、約４倍〜約６０００倍、約５倍〜約６０００倍、約６倍〜約６０００倍、約７倍〜約６０００倍、約８倍〜約６０００倍、約９倍〜約６０００倍、約１０倍〜約６０００倍、約１５倍〜約６０００倍、約１０倍〜約６０００倍、約２５倍〜約６０００倍、約３０倍〜約６０００倍、約３５倍〜約６０００倍、約４０倍〜約６０００倍、約４５倍〜約６０００倍、５０倍〜約６０００倍、約２倍〜約５５００倍、約２倍〜約５０００倍、約２倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍高めることができる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与された対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ攻撃に応答したＩＦＮ−γレベルを、免疫原性組成物非投与の対象のＩＦＮ−γレベルよりも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍高めることができる。
【００７５】
免疫原性組成物は、ＤＮＡワクチンであり得る。ＤＮＡワクチンは、米国特許第５，５９３，９７２号、第５，７３９，１１８号、第５，８１７，６３７号、第５，８３０，８７６号、第５，９６２，４２８号、第５，９８１，５０５号、第５，５８０，８５９号、第５，７０３，０５５号、及び第５，６７６，５９４号に開示されており、それらは参照により全体が本明細書に組み込まれる。ＤＮＡワクチンはさらに、ワクチンの染色体内への取り込みを阻害する要素または試薬を含むことができる。
【００７６】
免疫原性組成物は、少なくとも１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原のＲＮＡであり得る。ＲＮＡワクチンは、細胞への導入が可能である。
【００７７】
免疫原性組成物は、弱毒生ワクチン、抗原を送達する組換えベクターを使用するワクチン、サブユニットワクチン、及び糖タンパク質ワクチン、例えば、限定するわけではないが、参照により各々が本明細書に組み込まれる米国特許第４，５１０，２４５号；第４，７９７，３６８号；第４，７２２，８４８号；第４，７９０，９８７号；第４，９２０，２０９号；第５，０１７，４８７号；第５，０７７，０４４号；第５，１１０，５８７号；第５，１１２，７４９号；第５，１７４，９９３号；第５，２２３，４２４号；第５，２２５，３３６号；第５，２４０，７０３号；第５，２４２，８２９号；第５，２９４，４４１号；第５，２９４，５４８号；第５，３１０，６６８号；第５，３８７，７４４号；第５，３８９，３６８号；第５，４２４，０６５号；第５，４５１，４９９号；第５，４５３，３６４号；第５，４６２，７３４号；第５，４７０，７３４号；第５，４７４，９３５号；第５，４８２，７１３号；第５，５９１，４３９号；第５，６４３，５７９号；第５，６５０，３０９号；第５，６９８，２０２号；第５，９５５，０８８号；第６，０３４，２９８号；第６，０４２，８３６号；第６，１５６，３１９号及び第６，５８９，５２９号に記載のワクチンであり得ある。
【００７８】
本発明の免疫原性組成物は、ワクチンそのものが疾患または死亡の原因とならないよう安全であること、疾患に対する防御となること、中和抗体を誘導すること、Ｔ細胞の防御応答を誘導すること、ならびに投与の簡便性、少ない副作用、生物学的安定性、及び用量あたりのコスト低減を提供することといった、有効なワクチンに要求される特徴を有し得る。ワクチンは、これらの特徴の一部またはすべてを、以下に考察するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原の少なくとも１つを含有させることにより達成できる。
【００７９】
２．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原
合成のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、核酸配列、アミノ酸配列、またはその組み合わせであり得る。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、その変異型、その断片、またはその組み合わせであり得る。また、核酸配列には、抗原にペプチド結合で連結されたリンカー配列またはタグ配列をコードするさらなる配列も含まれ得る。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、その変異型、その断片、またはその組み合わせであり得る。コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は組換え抗原であり得る。コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳのタンパク質またはペプチド２つ以上に対する配列を含む融合抗原であり得る。
【００８０】
一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２といったタンパク質の少なくとも１つに由来する。一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、対応する天然ＬＳ抗原に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８５％かつ最高９９％であり、配列同一性が少なくとも９０％かつ最高９９％、配列同一性が少なくとも９３％かつ最高９８％、または配列同一性が少なくとも９５％かつ最高９９％である。いくつかの例では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、対応する天然コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原に対するアミノ酸配列同一性が最高で９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％である。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原に応じ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原のコンセンサス配列は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ間またはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．内の複数の株または血清型同士のコンセンサス配列であり得る。
【００８１】
コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原の完全長アミノ酸配列、その断片、その相同な変異アミノ酸配列、または相同な変異アミノ酸配列の断片を含んでよい。コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、免疫グロブリンのシグナルペプチド（例えば、ＩｇＥまたはＩｇＧのシグナルペプチド）などのシグナルペプチドに機能的に連結されてよい。一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原配列のＮ末端メチオニンを除去し、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原のアミノ酸配列にシグナルペプチドをＮ末端結合させる。いくつかの実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、ＨＡタグなどの別のアミノ酸配列に機能的に連結される。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本発明のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原を発現増加について最適化する。一実施形態では、本発明のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原には、標的とする種での発現増加について最適化されたコドン及びＲＮＡの１つ以上が含まれる。一実施形態では、標的とする種はヒト、非ヒト霊長類、またはマウスである。
【００８３】
一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５３、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、及び配列番号８２に記載のアミノ酸配列の全長にわたり同一性が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一実施形態では、コード核酸配列はリボ核酸（ＲＮＡ）配列である。
【００８４】
一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、及び配列番号８３に記載のような核酸配列の全長にわたり同一性が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である核酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、及び配列番号８３に記載のような核酸配列の転写産物に対する同一性が、リボ核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるリボ核酸配列を含む。
【００８５】
一実施形態では、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５３、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、及び配列番号８２に記載のアミノ酸配列の全長にわたり同一性が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態は、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原の免疫原性断片、及び相同タンパク質の免疫原性断片に相同なタンパク質をコードする核酸配列に関する。本明細書に開示されるある配列に対する相同性が少なくとも９５％である、ある配列に対する相同性が少なくとも９６％である、ある配列に対する相同性が少なくとも９７％である、ある配列に対する相同性が少なくとも９８％である、及びある配列に対する相同性が少なくとも９９％であるような免疫原性タンパク質をコードする核酸分子が提供され得る。同様に、本明細書に記載の免疫原性断片及び本明細書に記載のタンパク質に相同なタンパク質の免疫原性断片をコードする核酸配列も提供される。
【００８７】
いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列に対する相同性が少なくとも９５％である免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列に対する相同性が少なくとも９６％である免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列に対する相同性が少なくとも９７％である免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列に対する相同性が少なくとも９８％である免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列に対する相同性が少なくとも９９％である免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するコンセンサスタンパク質のコード配列に相同な本明細書に開示するコード配列を有する核酸分子には、本明細書に開示する相同タンパク質配列をコードするコード配列の５’末端に連結されたＩｇＥリーダー配列をコードする配列が含まれる。
【００８８】
いくつかの実施形態は、完全長コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原の免疫原性断片、及びコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原に対する同一性を有するタンパク質の免疫原性断片に対して特定の割合で同一性を有するタンパク質をコードする核酸配列に関する。完全長コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原に対する同一性が少なくとも８０％である、本明細書に開示する完全長配列に対する同一性が少なくとも８５％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９０％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９１％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９２％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９３％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９４％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９５％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９６％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９７％である、完全長配列に対する同一性が少なくとも９８％である、及び完全長配列に対する同一性が少なくとも９９％であるような免疫原性タンパク質をコードする核酸分子が提供され得る。同様に、本明細書に記載の免疫原性断片、及び本明細書に記載のコンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原に対する同一性が上記で示した割合と同様であるタンパク質の免疫原性断片をコードする核酸配列も提供される。
【００８９】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、核酸配列は、ＩｇＥリーダーをコードするコード配列を含まない。
【００９０】
いくつかの実施形態は、コンセンサスＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｓｐ．ＬＳ抗原の断片に関する。断片は、本明細書に開示する完全長配列のうち少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％であり得る。断片は、本明細書に開示する完全長配列の断片に少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％相同であり得る。断片は、本明細書に開示する完全長配列の断片と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。いくつかの実施形態では、断片には、リーダー配列をコードする配列、例えば、ＩｇＥリーダーのような免疫グロブリンリーダーなどが含まれる。いくつかの実施形態では、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、断片は、リーダー配列をコードするコード配列、例えば、ＩｇＥリーダーなどを含まない。
【００９１】
１．ＥＸＰ１抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＥＸＰ１抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号６８に記載のヌクレオチド配列は、ＥＸＰ１抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号６８に記載のＥＸＰ１抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号６９に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９２】
一実施形態では、ＥＸＰ１抗原は非ヒト霊長類での発現用に設計される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７２に記載のＥＸＰ１抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７３に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９３】
一実施形態では、ＥＸＰ１抗原はマウスでの発現用に設計される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７６に記載のＥＸＰ１抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７７に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９４】
一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＥＸＰ１抗原をコードする。
【００９５】
２．ＥＸＰ２抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＥＸＰ２抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＥＸＰ２抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号７０に記載のヌクレオチド配列は、ＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号７０に記載のＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７１に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９６】
一実施形態では、ＥＸＰ２抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７４に記載のＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７５に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９７】
一実施形態では、ＥＸＰ２抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７８に記載のＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７９に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダーをコードする配列に機能的に連結される。
【００９８】
一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ２抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＥＸＰ２抗原をコードする。
【００９９】
３．ＥＸＰ２３抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＥＸＰ２３抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号４に記載のヌクレオチド配列は、ＥＸＰ２３抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号４に記載のＥＸＰ２３抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号６に記載されている。
【０１００】
一実施形態では、ＥＸＰ２３抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２０に記載のＥＸＰ２３抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２１に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結された非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２２に記載されている。
【０１０１】
一実施形態では、ＥＸＰ２３抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３５に記載のＥＸＰ２３抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３６に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結されたマウスで発現させるコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３７に記載されている。
【０１０２】
一実施形態では、コンセンサスＥＸＰ２３抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＥＸＰ２３抗原をコードする。
【０１０３】
４．ＩＣＰ抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＩＣＰ抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＩＣＰ抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号７に記載のヌクレオチド配列は、ＩＣＰ抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号７に記載のＩＣＰ抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号９に記載されている。
【０１０４】
一実施形態では、ＩＣＰ抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２３に記載のＩＣＰ抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２４に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結された非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２５に記載されている。
【０１０５】
一実施形態では、ＩＣＰ抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３８に記載のＩＣＰ抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３９に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結されたマウスで発現させるコンセンサスＩＣＰ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４０に記載されている。
【０１０６】
一実施形態では、コンセンサスＩＣＰ抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＩＣＰ抗原をコードする。
【０１０７】
５．ＴＭＰ２１抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＴＭＰ２１抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号１０に記載のヌクレオチド配列は、ＴＭＰ２１抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号１０に記載のＴＭＰ２１抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１１に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２に記載されている。
【０１０８】
一実施形態では、ＴＭＰ２１抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２６に記載のＴＭＰ２１抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２７に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結された非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２８に記載されている。
【０１０９】
一実施形態では、ＴＭＰ２１抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４１に記載のＴＭＰ２１抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４２に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結されたマウスで発現させるコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４３に記載されている。
【０１１０】
一実施形態では、コンセンサスＴＭＰ２１抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＴＭＰ２１抗原をコードする。
【０１１１】
６．ＵＩＳ３抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＵＩＳ３抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサスＵＩＳ３抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号１３に記載のヌクレオチド配列は、ＵＩＳ３抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号１３に記載のＵＩＳ３抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１４に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１５に記載されている。
【０１１２】
一実施形態では、ＵＩＳ３抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２９に記載のＵＩＳ３抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３０に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結された非ヒト霊長類で発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載されている。
【０１１３】
一実施形態では、ＵＩＳ３抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４４に記載のＵＩＳ３抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４５に記載されている。一実施形態では、リーダー配列に機能的に連結されたマウスで発現させるコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４６に記載されている。
【０１１４】
一実施形態では、コンセンサスＵＩＳ３抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＵＩＳ３抗原をコードする。
【０１１５】
７．ＵＩＳ１０抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＵＩＳ１０抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。さまざまな実施形態では、コンセンサスＵＩＳ１０抗原をコードする核酸は、ヒト、非ヒト霊長類またはマウスでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号４７に記載のヌクレオチド配列は、ＵＩＳ１０抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号４７に記載のＵＩＳ１０抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＵＩＳ１０抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４８に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＵＩＳ１０抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４９に記載されている。
【０１１６】
一実施形態では、コンセンサスＵＩＳ１０抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＵＩＳ１０抗原をコードする。
【０１１７】
８．ＳＰＥＣＴ１抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＳＰＥＣＴ１抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。さまざまな実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１抗原をコードする核酸は、ヒト、非ヒト霊長類またはマウスでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号８０に記載のヌクレオチド配列は、ＳＰＥＣＴ１抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号８０に記載のＳＰＥＣＴ１抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８１に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結される。
【０１１８】
一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＳＰＥＣＴ１抗原をコードする。
【０１１９】
９．ＳＰＥＣＴ２抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＳＰＥＣＴ２抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。さまざまな実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ２抗原をコードする核酸は、ヒト、非ヒト霊長類またはマウスでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号８２に記載のヌクレオチド配列は、ＳＰＥＣＴ２抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号８２に記載のＳＰＥＣＴ２抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８３に記載されている。一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結される。
【０１２０】
一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ２抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＳＰＥＣＴ２抗原をコードする。
【０１２１】
１０．ＲＯＮ２抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＲＯＮ２抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。さまざまな実施形態では、コンセンサスＲＯＮ２抗原をコードする核酸は、ヒト、非ヒト霊長類またはマウスでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号５３に記載のヌクレオチド配列は、ＲＯＮ２抗原をコードする。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された配列番号５３に記載のＲＯＮ２抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＲＯＮ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５４に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＲＯＮ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５５に記載されている。
【０１２２】
一実施形態では、コンセンサスＲＯＮ２抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＲＯＮ２抗原をコードする。
【０１２３】
１１．融合抗原
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＬＳタンパク質の少なくとも１つと他のアミノ酸配列のうち少なくとも１つとの組み合わせを含む融合タンパク質を提供する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２の１つを別のアミノ酸配列に直接隣接して連結させて含んでよい。一実施形態では、融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２の２つ以上を、互いに直接隣接して連結させるか、またはスペーサーもしくはもう１つのアミノ酸を間に挟んで連結させて含んでよい。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のＬＳ免疫原を含む。２つのＬＳ免疫原を有する非限定的な例示的融合タンパク質は、ＥＸＰ１及びＥＸＰ２；ＥＸＰ１及びＥＸＰ２３；ＥＸＰ１及びＩＣＰ；ＥＸＰ１及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ１及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２及びＥＸＰ２３；ＥＸＰ２及びＩＣＰ；ＥＸＰ２及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ２及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２３及びＩＣＰ；ＥＸＰ２３及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ２３及びＵＩＳ３；ＩＣＰ及びＴＭＰ２１；ＩＣＰ及びＵＩＳ３；またはＴＭＰ２１及びＵＩＳ３を含んでよい。３つのＬＳ免疫原を有する非限定的な例示的融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２及びＥＸＰ２３；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２及びＩＣＰ；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２及びＵＩＳ３；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２３及びＩＣＰ；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２３及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ１、ＥＸＰ２３及びＵＩＳ３；ＥＸＰ１、ＩＣＰ及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ１、ＩＣＰ及びＵＩＳ３；ＥＸＰ１、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３及びＩＣＰ；ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２、ＩＣＰ及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ２、ＩＣＰ及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２３、ＩＣＰ及びＴＭＰ２１；ＥＸＰ２３、ＩＣＰ及びＵＩＳ３；ＥＸＰ２３、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３；またはＩＣＰ、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３を含んでよい。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５３、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２またはその相同体もしくはその断片から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含んでよい。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５３、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２またはその相同体もしくはその断片から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上の配列を含む。
【０１２６】
一実施形態では、融合タンパク質は、別のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．抗原と融合させた、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２から選択される１つ以上のＬＳ免疫原をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含んでよい。本発明のマラリアＬＳ免疫原との融合に適切なＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．抗原は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／５３５４１及び対応する米国出願第１３／８７６，１４８号に提供されており、その記載内容は全体が参照により組み込まれる。したがって、一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２から選択される１つ以上のＬＳ免疫原をコードする１つ以上のアミノ酸配列、ならびにＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１から選択される１つ以上のＰ．ｆ．免疫原をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含んでよい。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２から選択される１つ以上のＬＳ免疫原の断片をコードする１つ以上のアミノ酸配列、ならびにＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１から選択される１つ以上のＰ．ｆ．免疫原の断片をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含んでよい。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２から選択される１つ以上のＬＳ免疫原に９８％超または９９％超相同なタンパク質をコードする１つ以上のアミノ酸配列、ならびにＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１から選択される１つ以上のＰ．ｆ．免疫原に９８％超または９９％超相同なタンパク質をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含んでよい。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ｎ末端に連結されたシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、各ＬＳ免疫原のＮ末端に連結されたシグナルペプチドを複数含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、融合タンパク質のＬＳ免疫原間に含まれてよい。いくつかの実施形態では、融合タンパク質のＬＳ免疫原間のスペーサーは、タンパク質分解性の切断部位であってよい。いくつかの実施形態では、スペーサーは、免疫原性組成物の投与及び／または取り込みが意図される細胞内に見出されるプロテアーゼによって認識される、タンパク質分解性の切断部位であってよい。いくつかの実施形態では、スペーサーは、融合タンパク質のＬＳ免疫原間に含まれてよく、ここで、スペーサーは、免疫原性組成物の投与及び／または取り込みが意図される細胞内に見出されるプロテアーゼによって認識される、タンパク質分解性の切断部位であり、融合タンパク質は、各ＬＳ免疫原のＮ末端に連結されたシグナルペプチドを複数含み、切断された際に、各ＬＳ免疫原のシグナルペプチドが免疫原を細胞外へと移行させるようにする。
【０１２８】
ａ．ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２融合抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。コンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする核酸は、ヒトでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号１に記載のヌクレオチド配列は、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、配列番号１に記載のヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結された融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３に記載されている。
【０１２９】
一実施形態では、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原を非ヒト霊長類での発現用に設計する。一実施形態では、配列番号１７に記載の、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１８に記載されている。一実施形態では、非ヒト霊長類で発現させるための、リーダー配列に機能的に連結されたコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１９に記載されている。
【０１３０】
一実施形態では、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をマウスでの発現用に設計する。一実施形態では、配列番号３２に記載の、マウスで発現させるコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする。一実施形態では、マウスで発現させる配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するリーダー配列に機能的に連結される。一実施形態では、マウスで発現させるコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３３に記載されている。一実施形態では、マウスで発現させるための、リーダー配列に機能的に連結されたコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３４に記載されている。
【０１３１】
一実施形態では、コンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサス融合ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２抗原をコードする。
【０１３２】
ｂ．ＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原、その断片、その変異型、またはその組み合わせを含むことができる。さまざまな実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードする核酸は、ヒト、非ヒト霊長類またはマウスでの発現について最適化されたコドン及びＲＮＡであり得る。一実施形態では、配列番号５０に記載のヌクレオチド配列は、ＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードする。一実施形態では、配列番号５０に記載のヌクレオチド配列は、ＩｇＥリーダー配列に機能的に連結されたＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードする。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５１に記載されている。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列をコードする配列に機能的に連結されたコンセンサスＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５２に記載されている。
【０１３３】
一実施形態では、コンセンサスＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原のアミノ酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結される。一実施形態では、核酸配列は、ＨＡタグに機能的に連結されたコンセンサスＳＰＥＣＴ１＿ＳＰＥＣＴ２融合抗原をコードする。
【０１３４】
３．タンパク質コード配列
本明細書は、ＬＳ免疫原をコードする核酸配列を提供する。かかる核酸配列を含む核酸分子の投与は、細胞により取り込まれ発現すると、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．に対する広い免疫応答をもたらす。ＬＳタンパク質のコード配列は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２、本明細書に記載するその融合体、その断片、もしくはその相同体、本明細書に記載する相同な変異アミノ酸配列、または相同な変異アミノ酸配列の断片をコードし得る。いくつかの実施形態では、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２をコードするコード配列は、ＤＮＡ配列であってよい。いくつかの実施形態では、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２をコードするコード配列は、ＲＮＡ配列であってよい。一実施形態では、コード配列は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５３、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２またはその相同体もしくはその断片から選択される１つ以上のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子であってよい。一実施形態では、コード配列はさらに、配列番号１６に記載のＩｇＥリーダー配列をコードする。一実施形態では、コード配列はさらにＨＡタグをコードする。
【０１３５】
４．プラスミド
本明細書では、ＬＳ免疫原またはその断片を、哺乳類に免疫応答誘発するのに有効な量で哺乳類細胞に発現させることができるベクターを提供する。ベクターは、ＬＳ免疫原またはその断片をコードする異種核酸を含んでよい。ベクターは、プラスミドであってよい。プラスミドは、細胞にＬＳ免疫原またはその断片をコードする核酸をトランスフェクトするのに有用であり得、その場合、形質転換された宿主細胞を培養し、ＬＳ免疫原またはその断片の発現が生じる条件下で維持する。
【０１３６】
プラスミドは、本明細書に開示するＬＳ免疫原をコードする１つ以上のコード配列を含むＤＮＡ構成体を含んでよい。本明細書に開示するＬＳ免疫原をコードするコード配列は、調節エレメントに機能的に連結されることが好ましい。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、プラスミドは、少なくとも１つのＬＳ免疫原、すなわち、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２の１つについてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、プラスミドは、複数のＬＳ免疫原についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。いくつかの実施形態では、複数のＬＳ免疫原についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有するプラスミドの場合、かかる構成体は、各ＬＳ免疫原が別々のセットの調節エレメントを含む別々の発現カセットであってよく、または複数のコード配列をＩＲＥＳ配列により分離する単一発現カセット内に２つ以上のコード配列を組み込んでもよい。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、プラスミドは、２つのＬＳ免疫原についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。そのようなプラスミドは、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２のうち少なくとも２つについてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を含んでよい。いくつかの実施形態では、プラスミドは、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２のうち少なくとも３つについてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。いくつかの実施形態では、プラスミドは、３つ以上のＬＳ免疫原についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。いくつかの実施形態では、プラスミドは、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のＬＳ免疫原についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。いくつかの実施形態では、プラスミドは、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２のうち４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたは１０についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有する。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のＬＳ免疫原、すなわち、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２の１つ以上についてのコード配列が含まれるＤＮＡ構成体を有するプラスミドはさらに、１つ以上のさらなるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．抗原についてのコード配列を含む。本発明のプラスミドでコードされ得る例示的なＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．抗原には、ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１、またはその断片またはその相同体でＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／５３５４１及び対応する米国出願第１３／８７６，１４８号に開示のようなものが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１４１】
プラスミドは、Ｉｇのシグナルペプチド配列にそのＮ末端で連結されているＬＳ免疫原またはその断片を含むタンパク質をコードする核酸を含んでよい。プラスミドはさらに、コード配列の上流であり得る開始コドン、及びコード配列の下流であり得る終止コドンを含んでよい。開始コドン及び終止コドンは、コード配列を有するフレーム内にあってよい。
【０１４２】
プラスミドは、コード配列に機能的に連結されたプロモーターも含んでよい。コード配列に機能的に連結されるプロモーターは、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、例えば、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）の長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターなど、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例えばＣＭＶ前初期プロモーターなど、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、またはラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであってよい。プロモーターは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、またはヒトメタロチオネインなどのヒト遺伝子に由来するプロモーターであってもよい。プロモーターは、天然または合成の組織特異的プロモーター、例えば、筋特異的または皮膚特異的なプロモーターなどであってもよい。そのようなプロモーターの例は米国特許出願公開ＵＳ２００４０１７５７２７に記載されており、その記載内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
プラスミドはポリアデニル化シグナルも含んでよく、コード配列の下流であってよい。ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、またはヒトβ−グロビンポリアデニル化シグナルであってよい。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）由来のポリアデニル化シグナルであってよい。
【０１４４】
プラスミドは、コード配列の上流のエンハンサーも含んでよい。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンであっても、またはウイルスのエンハンサー、例えば、ＣＭＶ、ＦＭＤＶ、ＲＳＶまたはＥＢＶに由来するものなどであってもよい。ポリヌクレオチド機能エンハンサーは、米国特許第５，５９３，９７２号、第５，９６２，４２８号、及びＷＯ９４／０１６７３７に記載されており、その各々の記載内容は全体が参照により組み込まれる。
【０１４５】
プラスミドを染色体外に維持して、プラスミドの複数のコピーを細胞内に作らせるため、プラスミドは哺乳類の複製起点も含んでよい。プラスミドは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製のｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４またはｐＲＥＰ４であってよく、エプスタイン・バー・ウイルスの複製起点及び核抗原ＥＢＮＡ−１をコードする領域を含んでよく、多数のエピソームの複製コピーを組み込みなしで作製し得る。プラスミドの骨格はｐＡＶ０２４２であってよい。プラスミドは、複製欠損アデノウイルス５型（Ａｄ５）プラスミドであってよい。
【０１４６】
プラスミドは、プラスミドを投与される細胞での遺伝子発現に十分に適した調節配列も含んでよい。コード配列は、宿主細胞でのコード配列のより効率的な転写を可能にし得るコドンを含んでよい。
【０１４７】
コード配列は、Ｉｇのシグナルペプチド配列も含んでよい。シグナルペプチド配列のコード配列は、コード配列の５’であってよい。この配列によりコードされる抗原は、Ｎ末端Ｉｇシグナルペプチド、それに続く抗原タンパク質を含んでよい。Ｎ末端Ｉｇシグナルペプチドは、ＩｇＥまたはＩｇＧであってよい。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，７３３，９９４号には、最適化されたＲＮＡ配列及びＩｇＥシグナルペプチド配列を含む構成体が開示されている。いずれも参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０４／１８９６２及び対応する米国出願第１０／５６０，６５０号には、ＩｇＥシグナルペプチド配列を含む構成体も開示されている。
【０１４８】
プラスミドは、ｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であってよく、これはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）でのタンパク質産生に使用され得る。プラスミドは、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であってもよく、これは酵母のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株でのタンパク質産生に使用され得る。プラスミドは、ＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）のプラスミドであってもよく、これは昆虫細胞でのタンパク質産生に使用され得る。プラスミドは、ｐｃＤＮＡ  ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であってもよく、これはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞など哺乳類細胞でのタンパク質産生に使用され得る。
【０１４９】
プラスミドを含む組成物を提供する。組成物は、単一プラスミドなどの単一核酸分子の複数のコピー、２つ以上の異なるプラスミドなど２つ以上の異なる核酸分子の複数のコピーを含んでよい。例えば、組成物は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つもしくは１０またはそれ以上の複数の異なる核酸分子を含んでよい。そのような組成物は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つもしくは１０またはそれ以上の複数の異なるプラスミドを含んでよい。組成物は、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１、ＵＩＳ３、ＵＩＳ１０、ＳＰＥＣＴ１、ＳＰＥＣＴ２及びＲＯＮ２の１つ以上についてのコード配列を含んでよい。組成物は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のＬＳ免疫原についてのコード配列、２つのＬＳ免疫原についてのコード配列を集合的に含有するプラスミドなどの核酸分子を含んでよい。少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のＬＳ免疫原についてのコード配列を含む組成物は、単一プラスミドなどの単一核酸分子上にあってよく、または組成物が２つ以上の異なる核酸分子を含んでもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のプラスミドなど複数の異なる核酸分子を含み、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上の異なるＬＳ免疫原についてのコード配列を集合的に含む。
【０１５０】
一実施形態では、１つ以上の核酸分子はＤＮＡ分子である。一実施形態では、１つ以上の核酸分子はＲＮＡ分子である。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、組成物はさらに、１つ以上のさらなるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．抗原についてのコード配列を含む１つ以上のプラスミドを含む。一実施形態では、単一プラスミドは、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０または１０以上のＬＳ免疫原をコードし、さらに、１つ以上のさらなる抗原をコードする。一実施形態では、１つ以上のさらなる抗原は、ＣＳＰ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１、またはその断片、またはその相同体から選択される。
【０１５２】
一実施形態では、ＴＲＡＰをコードするヌクレオチド配列は、配列番号５６、配列番号５９または配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣＳＰをコードするヌクレオチド配列は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣｅｌＴＯＳをコードするヌクレオチド配列は、配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
一実施形態では、ＴＲＡＰをコードするヌクレオチド配列は、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６６または配列番号６７に記載されている。一実施形態では、ＣＳＰをコードするヌクレオチド配列は、配列番号６３または配列番号６４を含む。一実施形態では、ＣｅｌＴＯＳをコードするヌクレオチド配列は、配列番号５７または配列番号５８を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、組成物はさらに、１つ以上のアジュバントについてのコード配列を含む。アジュバントには、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＬ−３３及びＲＡＮＴＥＳが挙げられるが、これに限定されるものではない。ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＬ−３３及び／またはＲＡＮＴＥＳについてのコード配列は、１つ以上のＬＳ免疫原についてのコード配列を含む１つ以上の核酸分子上に含まれてよい。ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＬ−３３及び／またはＲＡＮＴＥＳについてのコード配列は、別々のプラスミドのような別々の核酸分子上に含まれてよい。
【０１５５】
５．免疫原性組成物製剤
本明細書は、哺乳類にＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．に対する免疫応答、好ましくはマラリアに対する免疫応答を生じさせることができる免疫原性組成物を提供する。免疫原性組成物は、上述のような１つ以上のプラスミドを含んでよい。免疫原性組成物は、複数のプラスミド、またはその組み合わせを含んでよい。免疫原性組成物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．に対する治療的または予防的免疫応答を誘導するよう提供され得る。
【０１５６】
免疫原性組成物はさらに、薬理学的に許容される添加剤を含んでよい。薬理学的に許容される添加剤は、ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤としての機能性分子であってよい。薬理学的に許容される添加剤は、トランスフェクション促進剤であってよく、それには、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）のような界面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリルリピドＡなどのＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、スクアレン及びスクアレンのような小胞体、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、またはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤が含まれ得る。
【０１５７】
トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含めたポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマートであり、より好ましくは、ポリ−Ｌ−グルタマートは免疫原性組成物中に濃度６ｍｇ／ｍｌ未満で存在する。トランスフェクション促進剤には、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリルリピドＡなどのＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体ならびにスクアレン及びスクアレンのような小胞体といった界面活性剤も含まれてよく、ヒアルロン酸を遺伝子構成体と併用投与してもよい。いくつかの実施形態では、ＤＮＡプラスミド免疫原性組成物には、脂質のようなトランスフェクション促進剤、レシチンリポソームまたはＤＮＡ−リポソーム混合物（例えば、Ｗ０９３２４６４０を参照のこと）のような当該技術分野で公知の他のリポソームを含むリポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、またはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤も含まれ得る。好ましくは、トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含めたポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。免疫原性組成物中のトランスフェクション剤の濃度は４ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．７５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．５００ｍｇ／ｍｌ未満、０．２５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．１００ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５０ｍｇ／ｍｌ未満、または０．０１０ｍｇ／ｍｌ未満である。
【０１５８】
薬理学的に許容される添加剤は１つ以上のアジュバントであってよい。アジュバントは、同一または代替的プラスミドから発現させる他の遺伝子であってよく、または免疫原性組成物中で上記プラスミドと組み合わせたタンパク質として送達される。１つ以上のアジュバントは、α−インターフェロン（ＩＦＮ−α）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５（シグナル配列または欠失させたシグナル配列をコードするコード配列を有し、かつ任意選択でＩｇＥ由来シグナルペプチドなどの異なるシグナルペプチドまたはＩｇＥ由来シグナルペプチドなどの異なるシグナルペプチドをコードするコード配列が含まれているＩＬ−１５を含む）、ＩＬ−２８、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−ｌα、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−８、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８の変異型、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経成長因子、血管内皮細胞増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２及びそれらの機能的断片またはその組み合わせからなる群から選択されるタンパク質をコードするタンパク質及び／または核酸分子であってよい。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＩＬ−３３、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、ＭＥＣまたはＲＡＮＴＥＳからなる群から選択されるタンパク質をコードする１つ以上のタンパク質及び／または核酸分子であってよい。ＩＬ−１２構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１９９７／０１９５０２及び対応する米国出願第０８／９５６，８６５号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−１５構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０４／１８９６２及び対応する米国出願第１０／５６０，６５０号、ならびにＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／Ｕ���０７／００８８６及び対応する米国出願第１２／１６０，７６６号、ならびにＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１０／０４８８２７に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２８構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３９６４８及び対応する米国出願第１２／９３６，１９２号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−３３構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１４／５８７２７及び対応する米国出願第１５／０２６，１６２号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ及び他の構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１９９９／００４３３２及び対応する米国出願第０９／６２２４５２号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ構成体及び配列の他の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１１／０２４０９８に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ及び他の構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１９９９／００４３３２及び対応する米国出願第０９／６２２４５２号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ構成体及び配列の他の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１１／０２４０９８に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。ケモカインＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ及びＭＥＣの構成体及び配列の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４２２３１及び対応する米国出願第１１／７１９，６４６号に開示されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。ＯＸ４０及び他の免疫調節薬の例は、米国出願第１０／５６０，６５３号に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。ＤＲ５及び他の免疫調節薬の例は、米国出願第０９／６２２４５２号に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５９】
免疫原性組成物はさらに、全体が参照により組み込まれる、１９９４年４月１日に提出されたＵ．Ｓ．第０２１，５７９号に記載のような遺伝子免疫原性組成物促進剤を含んでよい。
【０１６０】
免疫原性組成物は、抗原及びプラスミドを約１ナノグラム〜１００ミリグラム、約１マイクログラム〜約１０ミリグラム、または好ましくは約０．１マイクログラム〜約１０ミリグラム、またはより好ましくは約１ミリグラム〜約２ミリグラムの量で含んでよい。いくつかの好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物は、約５ナノグラム〜約１０００マイクログラムのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、約１０ナノグラム〜約８００マイクログラムのＤＮＡを含有する。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、約０．１〜約５００マイクログラムのＤＮＡを含有する。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、約１〜約３５０マイクログラムのＤＮＡを含有する。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラム、約１ナノグラム〜１００ミリグラム、約１マイクログラム〜約１０ミリグラム、約０．１マイクログラム〜約１０ミリグラム、約１ミリグラム〜約２ミリグラム、約５ナノグラム〜約１０００マイクログラム、約１０ナノグラム〜約８００マイクログラム、約０．１〜約５００マイクログラム、約１〜約３５０マイクログラム、約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラムの抗原またはそのプラスミドを含有する。
【０１６１】
免疫原性組成物は、使用する投与方法に従って製剤化されてよい。注射用免疫原性組成物の医薬組成物は、無菌、パイロジェンフリー及び微粒子不含であってよい。等張性の製剤または溶液を使用してよい。等張性のための添加物には、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及び乳糖が含まれ得る。免疫原性組成物は、血管収縮剤を含んでよい。等張液には、リン酸緩衝食塩水が含まれ得る。免疫原性組成物はさらに、ゼラチン及びアルブミンなど安定化剤を含んでよい。安定化剤は、製剤を室温または雰囲気温度で長期間安定にすることができ、例えば、免疫原性組成物製剤へのＬＧＳまたはポリカチオンまたはポリアニオンなどである。
【０１６２】
免疫原性ＤＮＡ組成物などの遺伝子免疫原性組成物の使用に加え、コード配列及び／またはタンパク質を、弱毒化させた生の免疫原性組成物、組換えベクターまたはサブユニット免疫原性組成物に組み込んでよい。弱毒生免疫原性組成物及び異物抗原を送達する組換えベクターを使用するものの例は、米国特許第４，７２２，８４８号、第５，０１７，４８７号、第５，０７７，０４４号、第５，１１０，５８７号、第５，１１２，７４９号、第５，１７４，９９３号、第５，２２３，４２４号、第５，２２５，３３６号、第５，２４０，７０３号、第５，２４２，８２９号、第５，２９４，４４１号、第５，２９４，５４８号、第５，３１０，６６８号、第５，３８７，７４４号、第５，３８９，３６８号、第５，４２４，０６５号、第５，４５１，４９９号、第５，４５３，３６４号、第５，４６２，７３４号、第５，４７０，７３４号、及び第５，４８２，７１３号に記載されており、それらは各々が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６３】
６．免疫原性組成物の送達方法
本明細書では、誘導可能な免疫応答の対象であるマラリア免疫原に対して特に有効となるエピトープを含む、抗原の遺伝子構成体及びタンパク質を提供するための免疫原性組成物を送達する方法を提供する。免疫原性組成物の送達方法またはワクチン接種の方法は、治療及び予防的な免疫応答を誘導するよう提供され得る。ワクチン接種方法により、マラリアに対する免疫応答が哺乳類に生じ得る。哺乳類の免疫系の活性を調節して免疫応答を高めるため、個体に免疫原性組成物を送達してよい。免疫原性組成物の送達は、核酸分子として抗原をトランスフェクトすることであってよく、かかる分子は、細胞内で発現し、細胞表面に送達され、送達された際に免疫系により認識され、細胞性応答、液性応答、または細胞性と液性の応答を誘導する。上述の免疫原性組成物を哺乳類に投与することによって、免疫原性組成物の送達を使用してマラリアに対する免疫応答を哺乳類に誘導または誘発してよい。
【０１６４】
哺乳類の細胞内に免疫原性組成物及びプラスミドが送達された際、トランスフェクトされた細胞は、免疫原性組成物から注入されたプラスミドの各々についての抗原を発現し、分泌することになる。これらのタンパク質は免疫系により異物として認識されることになり、それらに対する抗体が作られることになる。これらの抗体は免疫系により維持され、その後のマラリア感染に対して効果的に応答できるであろう。
【０１６５】
哺乳類に免疫応答を誘発するため、哺乳類に免疫原性組成物を投与してよい。哺乳類は、ヒト、霊長類、非ヒト霊長類、雌ウシ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、レイヨウ、バイソン、水牛、バイソン、ウシ科、シカ、ハリネズミ、ゾウ、ラマ、アルパカ、マウス、ラット、及びニワトリであってよい。
【０１６６】
ａ．併用治療
免疫原性組成物は、インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５（欠失させたシグナル配列を有し、かつ任意選択でＩｇＥシグナルペプチドなどの異なるシグナルペプチドが含まれているＩＬ−１５を含む）、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−２８、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐ１５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８の変異型、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経成長因子、血管内皮細胞増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２及びそれらの機能的断片またはその組み合わせをコードする他のタンパク質及び／または遺伝子と組み合わせて投与してよい。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物を、以下の核酸分子及び／またはタンパク質、すなわち、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＩＬ−３３、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、ＭＥＣ及びＲＡＮＴＥＳまたはそれらの機能的断片の１つ以上をコードするコード配列を含む核酸分子からなる群から選択される核酸分子、ならびにＩＬ−１２タンパク質、ＩＬ−１５タンパク質、ＩＬ−２８タンパク質、ＩＬ−３３タンパク質、ＣＴＡＣＫタンパク質、ＴＥＣＫタンパク質、ＭＥＣタンパク質もしくはＲＡＮＴＥＳタンパク質またはそれらの機能的断片からなる群から選択されるタンパク質のうち１つ以上と組み合わせて投与する。
【０１６７】
免疫原性組成物を異なる経路で投与してよく、それらには、経口、非経口、舌下、経皮吸収、直腸内、経粘膜、局所、経吸入、経頬側投与、胸膜腔内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、髄腔内、及び関節内、またはその組み合わせが含まれる。動物に使用する場合、通常の獣医学的処置に従って好適に許容される製剤として組成物を投与してよい。獣医は、特定の動物に最適な投与レジメン及び投与経路を容易に決定できる。免疫原性組成物は、従来のシリンジ、無針注射デバイス、「微粒子遺伝子銃）」、または他の物理的方法、例えば、電気穿孔法（「ＥＰ」）、「ハイドロダイナミック法」、または超音波などによって投与してよい。
【０１６８】
免疫原性組成物のプラスミドは、いくつかの周知の技術によって哺乳類に送達されてよく、それらには、生体内電気穿孔法、リポソーム介在性、ナノ粒子促進性、組換え型のベクター、例えば、組換えアデノウイルス、組換えアデノウイルス関連ウイルス及び組換えワクシニアなどを用いる、及び用いないＤＮＡ注射（ＤＮＡワクチン接種とも呼ばれる）が含まれる。抗原は、生体内電気穿孔法と併せてＤＮＡ注射により送達されてよい。
【０１６９】
ｂ．電気穿孔法
免疫原性組成物のプラスミドの電気穿孔を介した免疫原性組成物投与は、細胞膜に可逆性の細孔を形成させる有効なパルスエネルギーが哺乳類の所望組織に送達されるよう構成可能な電気穿孔装置を使用して達成することができ、好ましくは、パルスエネルギーは、使用者が入力した設定電流と同様の定電流である。電気穿孔装置は、電気穿孔用構成部品及び電極アセンブリまたはハンドルアセンブリを含んでよい。電気穿孔用構成部品には、電気穿孔装置のさまざまな要素の１つ以上が含まれ、かつ組み込まれてよく、これには、コントローラー、電流波形発生器、インピーダンステスター、波形ロガー、入力要素、ステータスレポート要素、通信ポート、メモリ構成部品、電源、及び電源スイッチが含まれる。電気穿孔法は、プラスミドによる細胞のトランスフェクション促進のため、生体内電気穿孔装置、例えば、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ  ＥＰシステム（ＶＧＸ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ，Ｐａ．）またはＥｌｇｅｎ電気穿孔装置（Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して達成され得る。
【０１７０】
電気穿孔用構成部品は、電気穿孔装置の一要素として機能し得、他の要素は電気穿孔用構成部品と通信する別々の要素（または構成部品）である。電気穿孔用構成部品は、電気穿孔装置の２つ以上の要素として機能し得、電気穿孔用構成部品から分離した、電気穿孔装置のさらに他の要素と通信していてよい。電気機械装置または機械装置の一部として存在する電気穿孔装置の要素は、かかる要素が１つの装置として機能できるもの、または互いに通信し合う別々の要素として機能できるものと限定しなくてよい。電気穿孔用構成部品は、所望の組織で定電流を発生させるパルスエネルギーを送達することができてよく、かつフィードバック機構が含まれる。電極アセンブリには、空間的に配置された複数の電極を有する電極アレイを含んでよく、ここで、かかる電極アセンブリは、電気穿孔用構成部品からパルスエネルギーを受け取り、それを所望の組織へ電極を介して送達する。複数の電極の少なくとも１つは、パルスエネルギー送達中は中性であり、所望組織のインピーダンスを測定し、そのインピーダンスを電気穿孔用構成部品に通信する。フィードバック機構は、測定インピーダンスを受け取ってよく、電気穿孔用構成部品により送達されたパルスエネルギーを調整して定電流を維持することができる。
【０１７１】
複数の電極は、パルスエネルギーを分散パターンで送達してよい。複数の電極は、プログラムされた順序での電極制御によりパルスエネルギーを分散パターンで送達してよく、プログラムされた順序は使用者により電気穿孔用構成部品に入力される。プログラムされた順序は、順次送達される複数のパルスを含んでよく、ここで、複数のパルスのそれぞれのパルスは、インピーダンスを測定する１つの中性電極を備える少なくとも２つの活性電極により送達され、複数のパルスの以降のパルスは、インピーダンスを測定する１つの中性電極を備える少なくとも２つの活性電極とは異なる電極により送達される。
【０１７２】
フィードバック機構は、ハードウェアまたはソフトウェアのいずれで実施されてもよい。フィードバック機構は、アナログ閉ループ回路により実施されてよい。フィードバックは、５０μｓごと、２０μｓごと、１０μｓごとまたは１μｓごとに発生するが、リアルタイムフィードバックまたは瞬時フィードバック（すなわち、応答時間測定に利用可能な技術で測定した場合に実質的に瞬時である）が好ましい。中性電極は、所望組織のインピーダンスを測定し、そのインピーダンスをフィードバック機構に通信してよく、フィードバック機構は、そのインピーダンスに応答し、パルスエネルギーを調整して、設定電流と同様の値で定電流を維持する。フィードバック機構は、パルスエネルギーの送達時、継続的かつ瞬時に定電流を維持してよい。
【０１７３】
本発明の免疫原性ＤＮＡ組成物の送達を促進し得る電気穿孔装置及び電気穿孔方法の例には、その記載内容が参照により全体が本明細書により組み込まれる米国特許第７，２４５，９６３号（Ｄｒａｇｈｉａ−Ａｋｌｉ，ｅｔ  ａｌ．）、米国特許公開第２００５／００５２６３０号（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．による提出）に記載のものが含まれる。免疫原性ＤＮＡ組成物の送達を促進するために使用してよい他の電気穿孔装置及び電気穿孔方法には、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づいて米国仮出願第６０／８５２，１４９号（２００６年１０月１７日提出）、及び第６０／９７８，９８２号（２００７年１０月１０日提出）に対する利益を主張する同時係属中の共有米国特許出願第１１／８７４，０７２号（２００７年１０月１７日提出）で提供されているものが含まれ、それらはいずれも本明細書によりその全体が組み込まれる。
【０１７４】
Ｄｒａｇｈｉａ−Ａｋｌｉ，ｅｔ  ａｌ．による米国特許第７，２４５，９６３号には、モジュラー電極系、及びそれらを、体内または植物内の選択組織細胞内への生体分子導入促進のために使用することが記載されている。モジュラー電極系は、複数の針電極、皮下注射針、プログラム可能定電流パルスコントローラーから複数の針電極まで伝導的に連結する電気コネクター、及び電源を含んでよい。操作者は、支持構造上に取り付けられた複数の針電極を握り、それらを体内または植物内の選択組織内へしっかりと挿入することができる。その後、生体分子は、皮下注射針を介して選択組織内へ送達される。プログラム可能定電流パルスコントローラーは活性化され、定電流電気パルスが複数の針電極に印加される。印加された定電流電気パルスにより、複数の電極の間にある細胞内への生体分子導入が促進される。米国特許第７，２４５，９６３号の記載内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７５】
Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．により提出された米国特許公開第２００５／００５２６３０号には、体内または植物内の選択組織細胞への生体分子の導入を有効に促進するために使用され得る電気穿孔装置が記載されている。電気穿孔装置は、その操作がソフトウェアまたはファームウェアによって指定される動電装置（「ＥＫＤ装置」）を含む。ＥＫＤ装置は、ユーザーコントロール及びパルスパラメータ入力に基づいてアレイの電極間に一連のプログラム可能定電流パルスパターンを生成し、電流波形データの保存及び取得を可能にする。電気穿孔装置は、針電極アレイを有する交換式電極ディスク、注射針用の中央注入チャネル、及び着脱式ガイドディスクも含む。米国特許公開第２００５／００５２６３０号の記載内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７６】
米国特許第７，２４５，９６３号及び米国特許公開第２００５／００５２６３０号に記載の電極アレイ及び方法を、筋肉などの組織内だけではなく、他の組織または器官内にも深く浸透させるために適合させてよい。電極アレイの構成上、予め電極により描かれている領域内で、注射針（選択生体分子を送達するため）もまた標的器官内に完全に挿入し、注射液を標的組織に対して垂直に投与する。米国特許第７，２４５，９６３号及び米国特許公開第２００５／００５２６３号に記載の電極は長さ２０ｍｍ、ゲージ２１であることが好ましい。
【０１７７】
さらに、電気穿孔装置とその使用が組み込まれたいくつかの実施形態では、以下の特許：１９９３年１２月２８日発行の米国特許第５，２７３，５２５号、２０００年８月２９日発行の米国特許第６，１１０，１６１号、２００１年７月１７日発行の第６，２６１，２８１号、及び２００５年１０月２５日発行の大６，９５８，０６０号、及び２００５年９月６日発行の米国特許第６，９３９，８６２号に記載のものである電気穿孔装置があることが意図される。さらに、多種多様な装置の任意の装置を使用するＤＮＡ送達に関する２００４年２月２４日発行の米国特許第６，６９７，６６９号、及びＤＮＡを注射する方法に関する２００８年２月５日発行の米国特許第７，３２８，０６４号において提供されている主題を含む特許は本明細書で意図される。上記特許は参照によりその全体が組み込まれる。
【０１７８】
ｃ．タンパク質ブースト
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物プロトコルの一部に含まれるタンパク質として１つ以上のＬＳ免疫原を送達してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するプラスミドＤＮＡ組成物を投与する初回免疫付与ワクチン接種の後、タンパク質免疫原をブーストとして送達する。いくつかの実施形態では、ブーストは免疫原性プラスミドＤＮＡ組成物とタンパク質の組み合わせである。いくつかの実施形態では、複数のブーストを投与する。いくつかの実施形態では、複数のブーストを投与し、ここで、１つ以上のブーストはタンパク質投与であり、１つ以上のブーストは免疫原性ＤＮＡ組成物投与である。ウイルスベクター及び／または死菌もしくは弱毒化病原体を用いるブーストを用いてもよい。１つ以上のワクチン接種を、初回または直近以外のすべての投与から独立して、１日以内、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１２週間、６か月、１年の間隔を置いて投与してよい。
【０１７９】
タンパク質ブーストに使用するタンパク質は、本明細書に開示する情報及び周知の方法を使用する常套的方法により作製してよい。例えば、タンパク質のコード配列が含まれる組換えベクターを作製し、それを使用して大量のタンパク質を作製してよい。本発明のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターは、日常的に作製可能である。本明細書で使用する場合、用語「組換え発現ベクター」は、プラスミド、ファージ、ウイルス粒子、または適切な宿主に導入した場合に、コード配列の発現を導く必須遺伝要素を含有する他のベクターを指すものとする。当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸分子を単離または合成して、それを標準技術及び容易に利用可能な出発物質を使用して発現ベクターに挿入することができる。コード配列は、必須調節配列に機能的に連結される。発現ベクターは周知であり、容易に利用可能である。発現ベクターの例には、プラスミド、ファージ、ウイルスベクター、及び宿主細胞の形質転換に有用なビヒクルを含有し、コード配列の発現を促進する他の核酸分子もしくは核酸分子が含まれる。本発明の組換え発現ベクターは、宿主の形質転換に有用である。
【０１８０】
組換え発現ベクターを含む宿主細胞を使用してタンパク質を産生させることができる。タンパク質を産生させるための周知の組換え発現系で使用する宿主細胞は周知であり、容易に利用可能である。宿主細胞の例には、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの酵母細胞、Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａなどの昆虫細胞、非ヒト哺乳類の組織培養細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＨｅｌａ細胞などのヒト組織培養細胞が含まれる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、例えば、当業者は、周知の技術を使用して、周知の発現系で使用するための市販の発現ベクターにＤＮＡ分子を挿入することができる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉでのタンパク質産生には市販のプラスミドｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用してよい。例えば、酵母のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株での産生には市販のプラスミドｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用してよい。例えば、昆虫細胞での産生には、市販のＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用してよい。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞などの哺乳類細胞での産生には、市販のプラスミドｐｃＤＮＡ  ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用してよい。当業者はこれらの商用発現ベクター及び発現系または他の市販品を使用して、常套的技術及び容易に利用可能な出発物質を用い本発明のタンパク質を作製することができる。（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照のこと）。したがって、所望のタンパク質は、原核細胞系及び真核細胞系のいずれでも調製可能であり、広範囲のプロセシングを受けた形態のタンパク質をもたらすことができる。
【０１８２】
当業者は、他の市販の発現ベクター及び発現系を使用しても、または周知の方法及び容易に利用可能な出発物質を用いてベクターを作製してもよい。必要な制御配列、例えば、プロモーター及びポリアデニル化シグナル、好ましくはエンハンサーなどを含有する発現系は容易に利用可能であり、多種多様な宿主が当該技術分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照のこと。
【０１８３】
タンパク質をコードするＤＮＡが含まれる発現ベクターを使用して、適合性のある宿主を形質転換し、その後、これを培養し、外来ＤＮＡの発現が生じる条件下で維持する。このようにして作製された本発明のタンパク質を、適宜、当業者に公知の方法で細胞溶解により得るか、または培地から得ることにより培養物から回収する。当業者は、そのような発現系を用いて作製された本発明のタンパク質を周知の技術を使用して単離することができる。そのようなタンパク質に特異的に結合する抗体を使用して天然の材料から本発明のタンパク質を精製する方法は、そのような抗体を作製する方法（参照により本明細書に組み込まれるＨａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｅ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９８８、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと）と同様に常套的である。そのような抗体を使用して、組換えＤＮＡ法により作製されたタンパク質または天然材料により産生されたタンパク質を精製してよい。
【０１８４】
遺伝子構成体の例には、本発明のタンパク質をコードし、かつ構成体をトランスフェクトする細胞株において機能性であるプロモーターに機能的に連結されるコード配列が含まれる。構成的プロモーターの例には、サイトメガロウイルスまたはＳＶ４０由来のプロモーターが含まれる。誘導性プロモーターの例には、マウス乳腺白血病ウイルスまたはメタロチオネインのプロモーターが含まれる。当業者は、本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを有する細胞を用いたトランスフェクションに有用な遺伝子構成体を、容易に利用可能な出発物質から容易に作製することができる。そのような遺伝子構成体は、本発明のタンパク質の作製に有用である。
【０１８５】
本発明のタンパク質を組換え技術によって作製することに加え、自動ペプチド合成装置を用いて本発明のタンパク質を作製してもよい。そのような技術は当業者に周知であり、ＤＮＡによりコードされるタンパク質産生に提供されない置換を有する誘導体の場合に有用である。例えば、本発明のタンパク質は、以下の公知技術のうちいずれで調製してもよい。好都合なことに、本発明のタンパク質は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１５：２１４９−２１５４（１９６３）でＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより最初に記載された固相合成法を使用して調製され得る。他のタンパク質合成の技術は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＭ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７６）Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，２ｄ  Ｅｄ．、参照により本明細書に組み込まれるＫｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｐ．２９５−３５８，ｅｄｓ．Ａｌｉｔａｌｏ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５）、及び当業者に公知の他の参考文献に見出され得る。合成技術の概要は、参照により本明細書に組み込まれるＪ．Ｓｔｕａｒｔ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｌｉａ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）に見出され得る。参照により本明細書に組み込まれるＴｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．ＩＩ，３ｄ  Ｅｄ．，ｐ．１０５−２３７，Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９７６）に記載のように、溶液法による合成を使用してもよい。そのような合成で使用する適切な保護基は、上記のテキストならびに参照により本明細書に組み込まれるＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９７３）に見出されるであろう。一般に、これらの合成方法では、伸長ペプチド鎖に、１つ以上のアミノ酸残基または保護された適切なアミノ酸残基を順次付加していく。通常、第１のアミノ酸残基のアミノ基またはカルボキシル基いずれかを、選択的に除去可能な適切な保護基により保護する。リシンのように、反応性側基が含有されるアミノ酸には、選択的に除去可能な異なる保護基を使用する。
【０１８６】
容易に利用可能な材料を使用し周知の方法によってタンパク質を哺乳類への投与用に製剤化してよい。当業者であれば、多数の薬理学的に許容される培地を本発明で使用してよいことを容易に理解するであろう。適切な医薬担体は、この分野では標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。局所投与用製剤には、経皮吸収パッチ剤、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、点滴薬、坐剤、スプレー剤、液剤及び粉末が含まれ得る。従来の医薬担体、水性、粉末または油性の基剤、粘稠剤等を必要とするかまたは望ましい場合がある。経口投与用組成物には、粉末もしくは顆粒、水もしくは非水性媒体に溶解させた懸濁液もしくは溶液、カプセル、小袋または錠剤が含まれる。粘稠剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合がある。非経口投与、静脈内投与、髄腔内投与または脳室内投与のための組成物には、緩衝剤、希釈剤及び他の適切な添加物も含有され得る滅菌水溶液が含まれてよく、無菌かつパイロジェンフリーであることが好ましい。本発明に従った静脈内投与に好適な医薬組成物は無菌かつパイロジェンフリーである。非経口投与の場合、本発明のペプチドは、例えば、薬理学的に許容される非経口ビヒクルと関連して溶液、懸濁液、エマルジョンまたは凍結乾燥粉末として製剤化することができる。そのようなビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンである。リポソーム及び不揮発性油のような非水性ビヒクルを使用してもよい。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性を維持する添加物（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）及び化学的安定性（例えば、緩衝剤及び保存剤）を維持する添加物を含有してよい。一般に使用される技術で製剤を滅菌する。例えば、注射投与に好適な非経口組成物は、０．９％塩化ナトリウム溶液に１．５重量％の有効成分を溶解させて調製する。
【０１８７】
本発明によるタンパク質を含む医薬組成物を単回用量または複数用量で投与してよい。用量は、既知因子、例えば、特定の薬剤の薬力学的特性、及びその投与方法と投与経路；被投与者の年齢、健康、及び体重；症状の性質と程度、併用治療の種類、治療頻度、及び所望の効果などに応じて異なる。治療用組成物の製剤化及びそれに続くかかる組成物の投与は、当業者の技能の範囲内と考えられる。通常、ペプチドの用量は、約１マイクログラム〜１０００ミリグラムまたはそれ以上、１０マイクログラム〜１０００ミリグラム、好ましくは５０マイクログラム〜５００ミリグラム、より好ましくは１００マイクログラム〜４００ミリグラムであり得る。いくつかの実施形態では、用量は１０〜２５０マイクログラムの範囲である。いくつかの実施形態では、用量はより高く、例えば、２５０マイクログラム〜１ミリグラム、または１〜５０ミリグラムのようにより高い用量である。いくつかの実施形態では、用量はより一層高く、例えば５０〜５００ミリグラムである。
【０１８８】
ｄ．ＤＮＡプラスミドの調製方法
本明細書では、本明細書で論じる免疫原性ＤＮＡ組成物を含むＤＮＡプラスミドを調製する方法を提供する。哺乳類の発現プラスミド内への最終サブクローニングステップの後、当該技術分野で公知の方法を使用し、ＤＮＡプラスミドを用いて細胞培養を大規模発酵タンクに接種することができる。
【０１８９】
ＥＰ装置と共に使用するための本発明のＤＮＡプラスミドは、公知の装置と技術の組み合わせを用いて製剤化または製造が可能であるが、好ましくは、実施権許諾を受けた同時係属中の米国仮出願第Ｕ．Ｓ．６０／９３９，７９２号（２００７年５月２３日提出）に記載されている最適プラスミド製造技術を使用してそれらを製造する。いくつかの例では、これらの研究に使用するＤＮＡプラスミドを１０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で製剤化することができる。製造技術には、実施権許諾を受けた特許である米国特許第７，２３８，５２２号（２００７年７月３日発行）に記載のものを含む、米国第６０／９３９，７９２号に記載のものに加え、一般に当業者に公知のさまざまな装置及びプロトコルも含まれるかまたは組み込まれる。上記で参照した出願及び特許である米国第６０／９３９，７９２号及び米国特許第７，２３８，５２２号はそれぞれ、本明細書によりその全体が組み込まれる。
【実施例】
【０１９０】
以下の実施例で本発明を詳細に説明する。これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、それらはあくまで例示として記載されていることを理解されるべきである。上記の考察及びこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を確認することができ、またその趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明をさまざまに変更及び修正をして多種多様な用途及び条件に適合させることができる。したがって、当業者には、上述の説明から、本明細書に示され、記載されている修正の他にも本発明のさまざまな修正が明らかとなるであろう。そのような修正もまた、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０１９１】
実施例１：有望な新規マラリア免疫原性ＤＮＡ組成物としての肝細胞期に輸送される低分子タンパク質
現在のところ、ヒト及び動物モデルで無菌防御を誘発したマラリアワクチンは弱毒生スポロゾイトである。この無菌防御は主にＣＤ８＋ＣＴＬにより誘発され、増殖停止した肝細胞期（ＬＳ）に感染した肝細胞に対し誘導される。本発明は、寄生虫−宿主界面で寄生胞膜に、またはそれを超えて輸送されたタンパク質は、感染した肝細胞表面でＭＨＣ  Ｉ分子上に提示され得るであろうという発見に基づいている（図１）。
【０１９２】
ここで材料及び方法を記載する。
【０１９３】
最適化ＬＳ免疫原の構築及び設計
ｐＶＡＸ１骨格（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ）を使用してＥＸＰ１及びＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３を発現している各プラスミドの一群を構築した。いずれの配列もＧｅｎＢａｎｋから入手した。インサートは、発現が増加するよう最適化され、ＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩまたはＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩいずれかを使用してｐＶＡＸ１にクローニングされたＲＮＡ及びコドンであった。
【０１９４】
ワクチン接種マウスにおける免疫応答
細胞免疫原性試験では、Ｂａｌｂ／ｃマウスの前脛骨筋に抗原をコードするプラスミド各々を３０μｇずつ筋肉内注射で送達し、その後、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（商標）適応定電流電気穿孔装置（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ  Ｐａ．）を使用して電気穿孔を行った。アジュバントとしてＩＬ−１２が提供された試験ではすべて、ＩＬ−１２をコードするプラスミド１１μｇを共送達した。アジュバントとしてＩＬ−３３が提供された試験ではすべて、ＩＬ−３３をコードするプラスミド２５μｇを共送達した。初回試験では、マウスは第０週、第４週及び第８週の３回免疫を受けた。最終免疫後６週間目（第１４週）に細胞及び応答を評価した（図３Ａ）。第２試験では、マウスは第０週、第３週、第６週及び第９週の４回免疫を受けた。最終免疫後６週間目（第１４週）にＥＬＩＳｐｏｔで細胞及び応答を評価し、第１８週にマウスをスポロゾイトで攻撃し、その後、毎日、１０日間ＢＳ疾患の徴候について監視した（図４Ａ）。第３試験では、マウスは第０週、第３週、第６週及び第９週の４回免疫を受けた。最終免疫後９週間目（第１８週）にＥＬＩＳｐｏｔによりマウスの１つの群で細胞及び応答を評価し、並行群にはスポロゾイトで攻撃し、さらに１０日間ＢＳ疾患の徴候について監視した（図７Ａ）。９６ウェルプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用し、製造者（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の指示書に従いＥＬＩＳｐｏｔを実施した。免疫したマウスそれぞれの脾細胞２×１０５をプレートの各ウェルに加え、Ｒ１０（陰性対照）、コンカナバリンＡ（陽性対照）、またはそれぞれの抗原に特異的なペプチドプールの存在下、３７℃、５％ＣＯ２で一晩刺激した。ペプチドプールは、タンパク質全体に及び、１１のアミノ酸が重複する１５−ｍｅｒペプチドで構成される。
【０１９５】
生体内電気穿孔法により送達される多価抗原ｐＤＮＡ免疫原性組成物候補を使用したマウスでの試験
多価抗原免疫原性組成物による方法を介した改善されたマラリア用免疫原性ＤＮＡ組成物が試験の対象である。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．の肝細胞期を標的とする多価抗原免疫原性ＤＮＡ組成物候補を筋肉内注射（ｉ．ｍ．）及び電気穿孔法（ＥＰ）により送達し、初期マウス試験で感染を評価した。この免疫原性組成物候補には、重要なマラリアＬＳ抗原６つ、すなわち、ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＩＣＰ、ＴＭＰ２１及びＵＩＳ３が組み込まれた。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉｉ配列を基本とし、コドン及びＲＮＡの最適化など発現を改善するいくつかの修飾及び高効率ＩｇＥリーダー配列の付加を行って免疫原性組成物抗原を設計した。
【０１９６】
Ｂａｌｂ／ｃマウスでの免疫原性試験に先立ち、インビトロ翻訳、ウエスタンブロット法及び免疫組織化学により抗原発現を確認した。マウスでは、免疫原性組成物は、他のベクター系により誘導される場合と同様であるかまたはそれを上回る抗原特異的な強い細胞性及び液性の応答を誘発した。具体的には、脾細胞１０６あたりのインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）スポット形成細胞（ＳＦＵ）をＥＬＩＳｐｏｔで定量した。
【０１９７】
現エビデンスは、複数の肝細胞期抗原に対し強い液性及び細胞性の両応答を誘発するマラリア免疫原性組成物候補は、マラリアに対する防御を付与でき得ることを裏付けている。したがって、この免疫原性組成物による方法の最終目標は、複数の肝細胞期の抗原に対し同時に細胞性及び液性の応答を誘導することである。免疫原性組成物の設計及び送達をさらに最適化し、免疫原性組成物により誘導される免疫応答をさらに特徴づけるため、マウスモデルでいくつかの試験を行った。
【０１９８】
その結果をここに記載する。
【０１９９】
すべてのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種において保存されている、ＬＳに輸送される低分子タンパク質を選択し（図２）、さまざまに組み合わせて免疫原性ＤＮＡ組成物として使用した（図３Ｂ、４Ｂ及び７Ｂ）。最初に、ＢＡＬＢ／ｃマウスの各群を、ＬＳに輸送される６つの異なる低分子タンパク質（ＥＸＰ１、ＥＸＰ２、ＥＸＰ２３、ＵＩＳ３、ＴＬＰ２１及びＩＣＰ）をコードする合成免疫原性ＤＮＡ組成物構成体の筋肉内注射で免疫した。アジュバントとして異なるサイトカインを用いて、または用いないで、電気穿孔法により核酸分子を導入した。ＬＳに輸送される異なる抗原と、免疫応答をＴｈ１に向けて偏らせるサイトカインとを組み合わせた大半の免疫群で、スポロゾイト攻撃に対する無菌防御が観察された。まとめると、我々のデータは、ＬＳに輸送される低分子タンパク質の各種組み合わせを、マラリア寄生虫感染に対する免疫原性ＤＮＡ組成物中に使用するという可能性を示している。
【０２００】
細胞免疫原性分析ＩＮＦ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔにより抗原の細胞免疫原性を測定した。ＬＳ抗原の細胞免疫原性を図３から図１１に示す。免疫原性組成物はすべて、ＥＬＩＳｐｏｔで測定した強いＩＦＮ−γ応答を誘導した（図５、６、１２及び１３）。抗原、アジュバントまたはその組み合わせの各々を尾静脈からのハイドロダイナミック注入法により注入し、肝臓で過剰発現するようにした。血内期感染発症の徴候についてマウスの血液を分析した（図８及び９）。
【０２０１】
ＥＸＰ１＿ＥＸＰ２を、コンセンサスＰ．ｆ．免疫原であるＴＲＡＰ及びＣｅｌＴＯＳと同時投与した場合、血内期疾患に対してＥＸＰ１＿ＥＸＰ２と同様レベルの防御を示したことから（図１４）、免疫原性組成物と他のＰ．ｆ．免疫原の同時投与による有意な交差反応性はもたらされなかったことを示している。
【０２０２】
実施例２：ＬＳコンセンサス抗原で免疫した非ヒト霊長類では強力な細胞性及び液性の応答が誘導される
アカゲザルのＴ細胞免疫はヒトのＴ細胞免疫に非常に近く、免疫療法用ワクチン開発のための高度な関連モデルとして利用される。したがって、ＬＳ抗原ワクチンがヒト免疫応答に及ぼす可能性のある効果を評価するためにアカゲザルをモデルとして用いることができる。
【０２０３】
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）モデルにおけるコンセンサスＬＳ抗原の免疫原性を示すため、アカゲザル（ＲｈＭ）を、ｐＧＸ７０３９、ｐＧＸ７０４０、ｐＧＸ７０４１、ｐＧＸ７０４２、及びｐＧＸ７０４３の１つ以上で免疫する。コンセンサスＬＳ抗原でのワクチン接種は、強いＬＳ抗原特異的ＣＴＬをアカゲザルに発生させることができる。非ヒト霊長類（ＮＨＰ）に、ＬＳ抗原を単独またはアジュバントと共に製剤化してＩＤ送達した後、電気穿孔を行って与えた。
【表１】
2019516741.tif 000003
【０２０４】
手短に言えば、アカゲザルにＬＳ抗原を接種し、その際、免疫１回につきＤＮＡ２ｍｇの筋肉内注入に続き、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）適応定電流ＥＰ装置を使用したＥＰ（定電流０．５Ａｍｐ、パルス３、パルス幅５２ミリ秒、パルス間隔０．２秒）を６週間隔で４回行う。各免疫の２週間後に血液を採取し、標準的なＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心によりＰＢＭＣを単離する。各免疫の２週間後にサルＩＦＮγプレコート済ＥＬＩＳｐｏｔキット（Ｍａｂｔｅｃｈ）を使用してＬＳ抗原特異的細胞応答を評価する。手短に言えば、プレートをＰＢＳで洗浄し、Ｒ１０（１０％ＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ  １６４０）を用いて室温にて２時間ブロッキングした。サルＰＢＭＣを３連で、１ウェルあたり投入細胞数２×１０５細胞を加え、Ｒ１０に再懸濁させる。ＬＳ抗原全体を表すペプチドのセット（例えば、それぞれが、８つのアミノ酸が重複する１５のアミノ酸残基を含有）をＧｅｎＳｃｒｉｐｔから合成した。このセットのペプチドを複数のペプチドプール内にプールする。陽性対照としてコンカナバリンＡを２．５μｇ／ｍｌで使用し、陰性対照としてＲ１０培地をそれぞれ使用する。プレートを５％ＣＯ２雰囲気インキュベーター内で３７℃にて２４時間インキュベートする。その後、ビオチン化ＩＦＮ−γ検出抗体を加え、プレートを室温で２時間インキュベートする。プレートを洗浄し、製造者の指示書に従って発色を追跡した。自動ＥＬＩＳＰＯＴリーダー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｋｅｒ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＯＨ）を使用してプレート上のスポットを計数する。ペプチド含有ウェルのスポット数から陰性対照ウェルのスポット数を減算して抗原特異的応答を決定する。陰性対照スポット数を減算した後は、ワクチン接種後に採取したＰＢＭＣを含むウェルの平均値は５０ＳＦＵ／１０６ＰＢＭＣを超え、かつ陽性反応とみなされるワクチン接種前の反応性より少なくとも４倍高くなければならない。予め抜いた血液試料を試験して、本試験における個々の被験動物それぞれの免疫応答のバックグラウンドレベルを設定する。
【０２０５】
特定の理論に拘束されるわけではないが、結果は、ＬＳ抗原の免疫を受けたサルでは、免疫応答のバックグラウンドレベルが非常に低く、各免疫後にワクチンにより誘導された応答は劇的に高まり、ＩＦＮ−γを産生する平均細胞数は初回、２回目、３回目及び４回目の免疫後に増加を示したことが示されると予測される。これらの結果は、ＬＳ抗原を１種または組み合わせて免疫することにより強いＬＳ抗原特異的細胞応答が誘発され得ることを実証するであろう。エピトープマッピングを実施して、アカゲザルにおける観察された免疫応答の多様性を調べてもよい。
【０２０６】
ＣＴＬ介在性の宿主毒性の有無を調べるため、免疫を受けたサルで多数の生理的パラメータを評価する。手短に言えば、麻酔下にある動物の体重を測定する。ワクチン接種動物で血液化学検査及びＣＢＣのパネルを最終免疫から２週間後に実施を開始し、ＩＤＥＸＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによるワクチン接種プロトコル完了から３か月後まで実施する。
【０２０７】
特定の理論に拘束されるわけではないが、忍容性が高いワクチンは、有意な体重減少が観察されず、白血球数が正常範囲内に留まるワクチンであると考えられる。アルカリホスファターゼ（ＡＬＫ  Ｐ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及び総ビリルビン（ＴＢＩＬ）の上昇がなかったことから、ＬＳ抗原特異的免疫応答の誘導による肝臓への有意な損傷は生じなかったことが示される。特定の理論に拘束されるわけではないが、忍容性が高いワクチンは、腎機能障害の証拠が見られず、クレアチニン及び血中尿素窒素（ＢＵＮ）が正常範囲内に留まるワクチンであると考えられる。特定の理論に拘束されるわけではないが、忍容性が高いワクチンは、ワクチン接種手順後、ＣＰＫに有意な変化が検出されないワクチンであると考えられる。
【０２０８】
実施例３：ヒト細胞におけるコンセンサスＬＳ抗原の発現
ヒト及び非ヒト霊長類で使用するための最適化コンセンサスＬＳ抗原を作製した。図１９は、最適化コンセンサスＬＳ抗原はヒト細胞株で発現できることが確認された実験結果を示す。表示されている構成体を２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲルで細胞溶解物の泳動を実施し、ニトロセルロース膜に転写した。抗ＨＡ１次抗体及びＩＲＤｙｅ  ６８０ＲＤ二次抗体で膜をプローブし、Ｏｄｙｓｓｅｙリーダーで画像化した。
実施例４：配列情報：
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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