(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物、およびこれらの医薬用途に関する。本発明の特定の態様は、これらの化合物を合成する方法、および微生物感染症の治療、改善、または予防におけるこれらの化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2019527724.tif 000114
の化合物であって、
式中、Ｒ１は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ３は、任意のアミノ酸側鎖であり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであるか、またはＲ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、
Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された６員環であり、
前記置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ１または各Ｘ１は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｘ２または各Ｘ２は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｒ６または各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化２】
2019527724.tif 000115
からなる群から選択され、
Ｒ７または各Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化３】
2019527724.tif 000116
からなる群から選択され、
かつ／あるいはＲ６およびＲ７は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換された３〜７員環を形成し、ここで、前記置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＳＲ１０、ＳＯ２Ｒ１０、ＯＲ１０またはＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ１０または各Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化４】
2019527724.tif 000117
からなる群から選択され、
Ｒ１１または各Ｒ１１は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化５】
2019527724.tif 000118
からなる群から選択され、
ｐは、１、２、３、４または５であり、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成する、
化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｍが０であり、かつｎが０である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３が、システイン側鎖ではない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、水素、メチル、イソプロピルまたはベンジルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５が、以下からなる群から選択され、
【化６】
2019527724.tif 000119
式中、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
ｒは、０、１、２または３であり、
ｓは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ３は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５が、以下からなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【化７】
2019527724.tif 000120
【請求項８】
Ｒ５が、フェニル基である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、式（Ｉｊ）：
【化８】
2019527724.tif 000121
を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
少なくとも１つのＸ３基がハロゲンであり、かつ前記ハロゲンまたは各ハロゲンが好ましくはフッ素である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
３つのＸ３基がフッ素であり、１つのＸ３基が、フッ素、ＯＥｔ、ＳＯ２ＭｅおよびＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ６およびＲ７が、それぞれエチルであるか、またはＲ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、前記置換基または各置換基が、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＳＲ１０、ＳＯ２Ｒ１０、ＯＲ１０またはＮＲ１０Ｒ１１である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物が、式（Ｉｌｈ）：
【化９】
2019527724.tif 000122
を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘ３が、ハロゲンまたはＳＯ２Ｒ６である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が、式（Ｉｍ）：
【化１０】
2019527724.tif 000123
を有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
以下：
【化１１−１】
2019527724.tif 000124
【化１１−２】
2019527724.tif 000125
【化１１−３】
2019527724.tif 000126
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
治療に使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形。
【請求項１７】
微生物感染症の治療、改善、または予防に使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形。
【請求項１８】
前記微生物感染症が、ウイルス感染症を含む、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項１９】
前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、請求項１８に記載の使用のための化合物。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形と、薬学的に許容されるビヒクルと、を含む、薬学的組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組成物を作製するためのプロセスであって、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形と、薬学的に許容されるビヒクルと、を接触させることを含む、プロセス。
【請求項２２】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を調製する方法であって、式（ＩＩ）：
【化１２】
2019527724.tif 000127
の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を、式（ＩＩＩ）：
【化１３】
2019527724.tif 000128
の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物と接触させることを含み、式中、Ｒ１は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ３は、任意のアミノ酸側鎖であり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであるか、あるいはＲ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、
Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された６員環であり、
前記置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ１または各Ｘ１は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｘ２または各Ｘ２は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｒ６または各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化１４】
2019527724.tif 000129
からなる群から選択され、
Ｒ７または各Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化１５】
2019527724.tif 000130
からなる群から選択され、
かつ／あるいはＲ６およびＲ７は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、
ｐは、１、２、３、４または５であり、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、
Ｒ１２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルである、方法。
【請求項２３】
Ｒ１２が、水素である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
式（ＩＶ）：
【化１６】
2019527724.tif 000131
の化合物であって、
式中、Ｒ３は、任意のアミノ酸側鎖であり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであるか、あるいはＲ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、
Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された６員環であり、
ここで、前記置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ１３は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルである、
化合物を調製する方法であって、式（Ｖ）：
【化１７】
2019527724.tif 000132
の化合物を、
脱離基で置換され、かつ１つ以上のさらなる置換基で任意に置換されたベンゼン、ピリジンまたはピリミジンと接触させることを含み、
前記さらなる置換基または各さらなる置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ６または各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化１８】
2019527724.tif 000133
からなる群から選択され、
Ｒ７または各Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化１９】
2019527724.tif 000134
からなる群から選択され、
かつ／あるいはＲ６およびＲ７は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、
ｐは、１、２、３、４または５であり、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、
前記反応が密閉容器中で行われることを特徴とする、方法。
【請求項２５】
Ｒ１３が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、前記方法が、式（ＩＩＩ）：
【化２０】
2019527724.tif 000135
の化合物であって、
式中、Ｒ１２は水素である、化合物を得るために、続いて、得られた化合物を金属水酸化物と接触させることを含む、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物感染症の治療に使用するための抗微生物化合物に関する。本発明は、化合物自体、薬学的組成物、化合物の作製方法および微生物感染症の治療方法にまで及ぶ。
【背景技術】
【０００２】
この４０年間にわたって、フッ素含有化合物は、新規の医薬品、作物保護剤および殺虫剤の開発に重要な役割を果たしてきており２，３、これらの製品のかなりの数が、１つ以上のフッ素原子を含有する１。医薬品化学における設計成分としてのフッ素の使用への関心は、主として、フッ素が組み込まれた化合物の物理化学的および生物学的特性に影響を及ぼすその能力によるものであった。フッ素の高電気陰性度に加えて小さいファンデルワールス比の低立体構造衝突、水素結合に関与する能力、および代謝変換に対する固有の炭素−フッ素結合安定性は、周知の特徴である。さらに、親油性に関しては、フッ素原子の組み込みおよびこの置換基の効果範囲の例が多く存在する４。しかしながら、これにもかかわらず、フッ化ピリジンおよびピリミジン核は、比較的研究中のままであり、薬物特性に対するこれらの効果は、比較的文書化されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、フッ素を組み込んだ新規の抗微生物化合物を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、フッ化ピリジンおよびピリミジン核を新規のスクリーニング収集の開発の基礎として作用する強力な起源を有する薬物構造に組み込むための方法の開発に対する本発明者の関心によって生まれた。本発明者らは、特定した化合物群それ自体が新規であると考えている。
【０００５】
したがって、本発明の第１の態様では、式（Ｉ）：
【化１】
2019527724.tif 000002
の化合物であって、
式中、Ｒ１は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ３は、任意のアミノ酸側鎖であり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであるか、あるいはＲ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、
Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された６員環であり、
ここで、置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ１または各Ｘ１は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｘ２または各Ｘ２は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｒ６または各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化２】
2019527724.tif 000003
からなる群から選択され、
Ｒ７または各Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化３】
2019527724.tif 000004
からなる群から選択され、
かつ／あるいはＲ６およびＲ７は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換された３〜７員環を形成し、ここで、置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＳＲ１０、ＳＯ２Ｒ１０、ＯＲ１０またはＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ１０または各Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化４】
2019527724.tif 000005
からなる群から選択され、
Ｒ１１または各Ｒ１１は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化５】
2019527724.tif 000006
からなる群から選択され、
ｐは、１、２、３、４または５であり、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成する、
化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形が提供される。
【０００６】
本発明者らは、式（Ｉ）の化合物が、治療において、または薬物として有用であり得ることを見出した。
【０００７】
したがって、第２の態様では、治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形が提供される。
【０００８】
また、本発明者らは、式（Ｉ）の化合物が、微生物感染症の治療に有用であることを見出した。
【０００９】
したがって、第３の態様では、微生物感染症の治療、改善、または予防に使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形が提供される。
【００１０】
第４の態様では、微生物感染症を治療、改善または予防する方法であって、そのような治療を必要とする対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形を投与することを含む、方法が提供される。
【００１１】
「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的特性を保持し、毒性ではない、または医薬用途に望ましくないものではない、本明細書で提供される化合物の任意の塩を指すと理解され得る。そのような塩は、当技術分野において既知の様々な有機および無機対イオンから誘導してもよい。そのような塩には、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール、グルタル酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、ソルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ピクリン酸、桂皮酸、マンデル酸、フタル酸、ラウリン酸、メタン硫酸、エタンスルホン酸、１、２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、樟脳酸、樟脳スルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、安息香酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、キナ酸、ムコン酸および同様の酸などの有機酸もしくは無機酸で形成される酸付加塩、または（２）親化合物に存在する酸性プロトンが、（ａ）金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオン、または水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化亜鉛、および水酸化バリウムなどのアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニアで置換される場合か、あるいは（ｂ）アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレン−ジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、Ｎ−メチルグルカミンピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、水酸化テトラメチルアンモニウムなどの脂肪族、脂環式、もしくは芳香族の有機アミンなどの有機塩基と配位結合する場合に形成される塩基付加塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００１２】
薬学的に許容される塩には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどが含まれ得、化合物が塩基性官能基を含有する場合は、ハロゲン化水素酸塩、例えば塩酸塩および臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、プロピオン酸塩、ヘキサン酸塩、シクロペンチルプロピオン酸塩、グリコール酸塩、グルタル酸塩、ピルビン酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、ソルビン酸塩、アスコルビン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸塩、ピクリン酸塩、桂皮酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、ラウリン酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、エタンスルホン酸塩、１、２−エタン−ジスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、４−クロロベンゼンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、４−トルエンスルホン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸塩、グルコヘプトン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、トリメチル酢酸塩、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸塩、ラウリル硫酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、キナ酸塩、ムコン酸塩などの、非毒性の有機酸または無機酸の塩が含まれ得る。
【００１３】
「溶媒和物」という用語は、非共有結合性分子間力によって結合した化学量論量または非化学量論量の溶媒をさらに含む、本明細書で提供される化合物またはその塩を指すと理解され得る。溶媒が水の場合、溶媒和物は水和物である。
【００１４】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって治療され得る微生物感染症は、真菌感染症を含んでもよい。
【００１５】
あるいは、好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって治療され得る微生物感染症は、細菌感染症を含んでもよい。細菌感染症は、グラム陽性細菌感染症を含んでもよい。あるいは、細菌感染症は、グラム陰性細菌感染症を含んでもよい。
【００１６】
しかしながら、好ましくは、治療され得る微生物感染症は、好ましくはウイルス感染症を含む。本発明の化合物で治療され得るウイルス感染症の例には、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、デングウイルス、エボラウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびインフルエンザウイルスが含まれる。好ましい実施形態では、化合物は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）によって引き起こされる感染症の治療、改善、または予防に使用するためのものである。
【００１７】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であり得ることが理解されるであろう。好ましい一実施形態では、Ｒ１が、メチル基である。しかしながら、より好ましい実施形態では、Ｒ１が、水素であり、化合物は式（Ｉａ）：
【化６】
2019527724.tif 000007
を有する。
【００１８】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であり得ることが理解されるであろう。同様に、Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であり得ることが理解されるであろう。
【００１９】
好ましい一実施形態では、Ｒ２が、メチル基である。好ましい一実施形態では、Ｒ４が、メチル基である。
【００２０】
しかしながら、より好ましい実施形態では、Ｒ２が、水素である。より好ましい実施形態では、Ｒ４が、水素である。
【００２１】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ２とＲ４の両方が水素であり、化合物が式（Ｉｂ）：
【化７】
2019527724.tif 000008
を有する。
【００２２】
好ましい実施形態では、ｍが０であり、化合物が式（Ｉｃ）：
【化８】
2019527724.tif 000009
を有する。
【００２３】
別の実施形態では、ｍが４である。したがって、Ｘ１基は、ベンゾジアゼピン環構造の６、７、８および９位の炭素のそれぞれに存在することになる。
【００２４】
ｍが１である実施形態では、Ｘ１基は、ベンゾジアゼピン環構造の６、７、８および９位の炭素のうちの１つに結合してもよく、水素は残りの３つの炭素のそれぞれに結合することになる。ｍが２である実施形態では、Ｘ１基は、ベンゾジアゼピン環構造の６、７、８および９位の炭素のうちの２つに結合してもよく、水素は残りの２つの炭素のそれぞれに結合することになる。ｍが３である実施形態では、Ｘ１基は、ベンゾジアゼピン環構造の６、７、８および９位の炭素のうちの３つに結合してもよく、水素は残りの炭素に結合することになる。
【００２５】
別の好ましい実施形態では、ｍが１であり、Ｘ１基が７位の炭素に結合し、化合物が式（Ｉｄ）：
【化９】
2019527724.tif 000010
を有する。
Ｘ１は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などの任意のハロゲンであってもよい。好ましくは、Ｘ１は塩素またはフッ素である。好ましい実施形態では、ｍが１であり、Ｘ１が７位の炭素に結合した塩素である。
【００２６】
好ましい実施形態では、ｎが０であり、化合物が式（Ｉｅ）：
【化１０】
2019527724.tif 000011
を有する。
【００２７】
ｎが５である実施形態では、Ｘ２基は、フェニル環構造の２、３、４、５および６位の炭素のそれぞれに存在することになる。
【００２８】
ｎが１である実施形態では、Ｘ２基は、フェニル環構造の２、３、４、５および６位の炭素のうちの１つに結合してもよく、水素は残りの４つの炭素のそれぞれに結合することになる。ｎが２である実施形態では、Ｘ２基は、フェニル環構造の２、３、４、５および６位の炭素のうちの２つに結合してもよく、水素は残りの３つの炭素のそれぞれに結合することになる。ｎが３である実施形態では、Ｘ２基は、フェニル環構造の２、３、４、５および６位の炭素のうちの３つに結合してもよく、水素は残りの２つの炭素に結合することになる。ｎが４である実施形態では、Ｘ２基は、フェニル環構造の２、３、４、５および６位の炭素のうちの４つに結合してもよく、水素は残りの炭素に結合することになる。
【００２９】
別の好ましい実施形態では、ｎが１であり、Ｘ２基が４位の炭素に結合している。
【００３０】
Ｘ２は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などの任意のハロゲンであってもよい。好ましくは、Ｘ２は、塩素である。あるいは、Ｘ２は、好ましくはフッ素である。あるいは、Ｘ２は、好ましくは臭素である。
【００３１】
Ｒ３は任意のアミノ酸の側鎖であることが理解されるであろう。好ましくは、Ｒ３は、任意の天然に存在するアミノ酸の側鎖である。Ｒ３は、アルギニン側鎖、ヒスチジン側鎖、リジン側鎖、アスパラギン酸側鎖、グルタミン酸側鎖、セリン側鎖、トレオニン側鎖、アスパラギン側鎖、グルタミン側鎖、システイン側鎖、システイン側鎖、セレノシステイン側鎖、グリシン側鎖、プロリン側鎖、アラニン側鎖、バリン側鎖、イソロイシン側鎖、ロイシン側鎖、メチオニン側鎖、フェニルアラニン側鎖、チロシン側鎖またはトリプトファン側鎖であってもよい。
【００３２】
例として、グリシン側鎖は水素であり、アラニンはメチルであり、バリンはイソプロピルであり、フェニルアラニンはベンジルであることが理解されるであろう。あるいは、Ｒ３がプロリン側鎖である場合は、Ｒ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成する。
【００３３】
一実施形態では、Ｒ３は、セリン、トレオニンおよびシステインから選択され得る求核性アミノ酸側鎖であってもよい。しかしながら、好ましくは、Ｒ３は、システイン側鎖ではない。別の実施形態では、Ｒ３は、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニンおよびプロリンから選択され得る疎水性アミノ酸側鎖であってもよい。さらに別の実施形態では、Ｒ３は、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸およびグルタミン酸から選択され得る芳香族アミノ酸側鎖であってもよい。さらに別の実施形態では、Ｒ３は、アスパラギンおよびグルタミンから選択され得るアミドアミノ酸側鎖であってもよい。さらに別の実施形態では、Ｒ３は、ヒスチジン、リジンおよびアルギニンから選択される塩基性アミノ酸側鎖であってもよい。さらに別の実施形態では、Ｒ３は、グリシンまたはアラニンのいずれかであり得る小さなアミノ酸の側鎖であってもよい。
【００３４】
好ましい実施形態では、Ｒ３がグリシン側鎖であり、すなわち、Ｒ３が水素であり、化合物が式（Ｉｆａ）：
【化１１】
2019527724.tif 000012
を有する。
【００３５】
別の好ましい実施形態では、Ｒ３がアラニン側鎖であり、すなわち、Ｒ３がメチルであり、化合物が式（Ｉｆｂ）：
【化１２】
2019527724.tif 000013
を有する。
【００３６】
さらに別の好ましい実施形態では、Ｒ３がバリン側鎖であり、すなわち、Ｒ３がイソプロピルであり、化合物が式（Ｉｆｃ）：
【化１３】
2019527724.tif 000014
を有する。
【００３７】
またさらに別の好ましい実施形態では、Ｒ３がフェニルアラニン側鎖であり、すなわち、Ｒ３がフェニルであり、化合物が式（Ｉｆｄ）：
【化１４】
2019527724.tif 000015
を有する。
【００３８】
またさらに別の好ましい実施形態では、Ｒ３がプロリン側鎖であり、すなわち、Ｒ３およびＲ４が、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、化合物が式（Ｉｆｅ）：
【化１５】
2019527724.tif 000016
を有する。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物は、アミノ酸リンカー、すなわち以下：
【化１６】
2019527724.tif 000017
を含むことが理解されるであろう。
【００４０】
アミノ酸リンカーが、Ｄアミノ酸リンカー、すなわち以下：であってもよい。
【化１７】
2019527724.tif 000018
【００４１】
しかしながら、好ましい実施形態では、アミノ酸リンカーが、Ｌアミノ酸リンカー、すなわち以下：である。
【化１８】
2019527724.tif 000019
【００４２】
好ましくは、Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された芳香環である。したがって、Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された、フェニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニルまたはピリミジニル基であってもよい。より好ましくは、Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された、フェニル、ピリジンまたはピリミジンである。したがって、Ｒ５は、以下：からなる群から選択されてもよく、
【化１９】
2019527724.tif 000020
式中、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
ｒは、０、１、２または３であり、
ｓは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ３は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７である。
【００４３】
好ましくは、Ｒ５は、以下：からなる群から選択される。
【化２０】
2019527724.tif 000021
【００４４】
好ましくは、フェニル、ピリジニルまたはピリミジニル基が、１つ以上のＸ３基で置換されている。
【００４５】
Ｘ３が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルである場合は、Ｘ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよいことが理解されるであろう。
【００４６】
Ｘ３がハロゲンである場合は、Ｘ３は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であってもよいことが理解されるであろう。
【００４７】
Ｒ６および／またはＲ７が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルである場合は、Ｒ６および／またはＲ７は、独立して、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよいことが理解されるであろう。
【００４８】
Ｒ６および／またはＲ７が、Ｃ３−６シクロアルキルまたはシクロアルケニルである場合は、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニルまたは各Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニルは、独立して、シクロヘキシルまたはフェニルであってもよい。
【００４９】
Ｒ６および／またはＲ７が、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはヘテロアリールである場合は、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリールまたは各Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリールは、独立して、ピリジル、ピリミジル、フラニル、イミダゾリル、ピペリジニル、モルホリニル、ピロリジニル、チオモルホリニルまたはチオモルホリニル−Ｓ，Ｓ−ジオキシドであってもよい。
【００５０】
好ましくは、Ｘ３が、ＳＲ６である場合は、Ｒ６が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルであり、より好ましくはＲ６が、メチル基である。
【００５１】
好ましくは、Ｘ３が、ＳＯ２Ｒ６である場合は、Ｒ６が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルであり、より好ましくはＲ６が、メチル基である。
【００５２】
好ましくは、Ｘ３が、ＯＲ６である場合は、Ｒ６が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルであり、より好ましくはＲ６が、エチル基である。
【００５３】
一実施形態では、Ｘ３が、ＮＲ６Ｒ７である場合は、Ｒ６が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルであり、Ｒ７が、水素である。好ましくは、Ｒ６が、メチル基、エチル基またはプロピル基である。
【００５４】
別の実施形態では、Ｘ３が、ＮＲ６Ｒ７である場合は、Ｒ６が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルであり、Ｒ７が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルである。好ましくは、Ｒ６およびＲ７が、それぞれ独立して、メチル基、エチル基またはプロピル基である。一実施形態では、Ｒ６とＲ７の両方が、エチル基である。
【００５５】
別の実施態様では、Ｘ３が、ＮＲ６Ｒ７である場合は、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換された３〜７員環を形成する。３〜７員環または各３〜７員環が、１つ以上の置換基で任意に置換された、４員環、５員環または６員環であってもよい。４員環が、１つ以上の置換基で任意に置換されたアゼチジンであってもよい。５員環が、１つ以上の置換基で任意に置換されたピロリジンであってもよい。６員環が、１つ以上の置換基で任意に置換された、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリンまたはチオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシドであってもよい。
【００５６】
３〜７員環が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルで置換されていてもよい。Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルが、独立して、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよい。
【００５７】
３〜７員環が、ハロゲンで置換されていてもよい。ハロゲンが、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であってもよい。好ましくは、ハロゲンが、フッ素または塩素である。いくつかの実施形態では、３〜７員環が、以下：であってもよい。
【化２１】
2019527724.tif 000022
【００５８】
３〜７員環が、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０で置換されていてもよい。Ｒ１０が、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよい。好ましくは、Ｒ１０が、メチル基である。いくつかの実施形態では、３〜７員環が、以下：であってもよい。
【化２２】
2019527724.tif 000023
【００５９】
３〜７員環が、ＳＲ１０またはＳＯ２Ｒ１０で置換されていてもよい。Ｒ１０が、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよい。好ましくは、Ｒ１０が、メチル基である。いくつかの実施形態では、３〜７員環が、以下：であってもよい。
【化２３】
2019527724.tif 000024
【００６０】
３〜７員環が、ＯＲ１０で置換されていてもよい。Ｒ１０が、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよい。
【００６１】
３〜７員環が、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。Ｒ１０およびＲ１１が、それぞれ独立して、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であってもよい。
【００６２】
Ｒ６および／またはＲ７が、
【化２４】
2019527724.tif 000025
である場合は、Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成する。３〜７員環または各３〜７員環が、４員環、５員環または６員環であってもよい。４員環が、アゼチジンであってもよい。５員環が、ピロリジンであってもよい。６員環が、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリンまたはチオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシドであってもよい。好ましくは、Ｒ８およびＲ９が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になってモルホリンを形成する。
【００６３】
好ましい一実施形態では、Ｒ５が、１つ以上のＸ３基で任意に置換されたフェニル基であり、化合物が式（Ｉｇ）：
【化２５】
2019527724.tif 000026
を有する。
【００６４】
一実施形態では、ｓが５である。好ましくは、少なくとも１つのＸ３基が、ハロゲンである。より好ましくは、少なくとも２つのＸ３基がハロゲンであるか、少なくとも３つのＸ３基がハロゲンであるか、または少なくとも４つのＸ３基がハロゲンである。最も好ましくは、全てのＸ３基が、ハロゲンである。好ましくは、ハロゲンまたは各ハロゲンが、フッ素である。
【００６５】
しかしながら、より好ましい実施形態では、Ｒ５が、フェニル基であり、ｓが０であり、化合物が式（Ｉｈ）：
【化２６】
2019527724.tif 000027
を有する。
【００６６】
好ましい一実施形態では、Ｒ５が、１つ以上のＸ３基で任意に置換されたピリジニル基である。化合物が、式（Ｉｉ）：
【化２７】
2019527724.tif 000028
を有してもよい。
【００６７】
あるいは、化合物が、式（Ｉｉａ）：
【化２８】
2019527724.tif 000029
を有してもよい。
【００６８】
より好ましい実施形態では、Ｒ５が、ピリジニル基であり、ｑが４である。化合物が、式（Ｉｊ）または式（Ｉｊａ）：
【化２９】
2019527724.tif 000030
を有してもよい。
【００６９】
好ましくは、少なくとも１つのＸ３基が、ハロゲンである。より好ましくは、少なくとも２つのＸ３基が、ハロゲンである。さらにより好ましくは、少なくとも３つのＸ３基が、ハロゲンである。好ましくは、ハロゲンまたは各ハロゲンが、フッ素である。
【００７０】
好ましい一実施形態では、Ｒ５が、ピリジニル基であり、ｑが４であり、３つのＸ３基が、ハロゲンであり、１つのＸ３基が、ＯＲ６を含む。好ましくは、各ハロゲンが、フッ素である。好ましくは、Ｒ６が、エチル基である。好ましくは、化合物が、式（Ｉｋ）：
【化３０】
2019527724.tif 000031
を有する。
【００７１】
より好ましい実施形態では、Ｒ５が、ピリジニル基であり、ｑが４であり、４つのＸ３基のそれぞれがハロゲンである。好ましくは、各ハロゲンが、フッ素である。化合物が、式（Ｉｌ）：
【化３１】
2019527724.tif 000032
を有してもよい。
【００７２】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ５が、ピリジニル基であり、ｑが４であり、３つのＸ３基が、ハロゲンであり、１つのＸ３基が、ＳＯ２Ｒ６を含む。好ましくは、各ハロゲンが、フッ素である。好ましくは、Ｒ６が、メチル基である。好ましくは、各ハロゲンが、フッ素である。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌａ）：
【化３２】
2019527724.tif 000033
を有する。
【００７３】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ５が、ピリジニル基であり、ｑが４であり、３つのＸ３基が、ハロゲンであり、１つのＸ３基が、ＮＲ６Ｒ７を含む。好ましくは、各ハロゲンが、フッ素である。Ｒ６およびＲ７が、それぞれ独立して、水素またはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであってもよい。好ましくは、Ｒ６およびＲ７が、それぞれ独立して、メチル、エチル、プロピル、ブチルまたはペンチルであってもよい。より好ましくは、Ｒ６およびＲ７が、それぞれエチルである。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌｂ）：
【化３３】
2019527724.tif 000034
を有する。
【００７４】
あるいは、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換された３〜７員環を形成する。好ましくは、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換されたピペラジン環を形成する。好ましくは、ピペラジン環が、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０で置換され、より好ましくはＲ１０が、メチルである。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌｃ）：
【化３４】
2019527724.tif 000035
を有する。
【００７５】
あるいは、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換されたチオモルホリニル−Ｓ，Ｓ−ジオキシド環を形成する。好ましくは、チオモルホリニル−Ｓ，Ｓ−ジオキシド環が非置換である。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌｄ）：
【化３５】
2019527724.tif 000036
を有する。
【００７６】
あるいは、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換されたモルホリン環を形成する。好ましくは、モルホリン環が、非置換である。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌｅ）：
【化３６】
2019527724.tif 000037
を有する。
【００７７】
あるいは、Ｒ６およびＲ７が、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基で任意に置換されたピペリジン環を形成する。好ましくは、ピペリジン環が、少なくとも１つのハロゲンで置換されている。好ましくは、ピペリジン環が、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のハロゲンで置換されている。好ましくは、ハロゲンまたは各ハロゲンが、フッ素である。好ましくは、化合物が、式（Ｉｌｆ）：
【化３７】
2019527724.tif 000038
を有する。
【００７８】
別の好ましい実施形態では、Ｒ５が、１つ以上のＸ３基で任意に置換されたピリミジニル基である。化合物が、式（Ｉｌｇ）：
【化３８】
2019527724.tif 000039
を有してもよい。
【００７９】
ｒは１、２または３であり得ることが理解されるであろう。好ましい実施形態では、Ｒ５が、ピリミジニル基であり、ｒが１である。化合物が、式（Ｉｌｈ）：
【化３９】
2019527724.tif 000040
を有してもよい。
【００８０】
好ましくは、Ｘ３が、ハロゲンまたはＳＯ２Ｒ６である。より好ましくは、Ｘ３が、塩素またはＳＯ２Ｍｅである。
【００８１】
本明細書に記載の化合物は、ベンゾジアゼピン環構造の３位の炭素にキラル中心を有することが理解されるであろう。したがって、好ましい一実施形態では、化合物が、Ｓキラル中心を有してもよく、式（Ｉｍ）：
【化４０】
2019527724.tif 000041
を有してもよい。
【００８２】
好ましい実施形態では、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素であり、Ｌが存在せず、Ｒ５がフェニル基であり、ｍが０であり、ｎが０であり、ｓが０であり、化合物がＳキラル中心を有する。したがって、化合物が、式（Ｉｎ）：
【化４１】
2019527724.tif 000042
を有してもよい。
【００８３】
別の好ましい実施形態では、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素であり、Ｌが存在せず、Ｒ５がピリジニル基であり、ｍが０であり、ｎが０であり、ｑが４であり、３つのＸ３基がフッ素であり、１つのＸ３基がＯＲ８であり、Ｒ８がエチルであり、化合物がＳキラル中心を有する。したがって、化合物が、式（Ｉｏ）：
【化４２】
2019527724.tif 000043
を有してもよい。
【００８４】
さらに別の好ましい実施形態では、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素であり、Ｌが存在せず、Ｒ５がピリジニル基であり、ｍが０であり、ｎが０であり、ｑが４であり、全てのＸ３基がフッ素である。したがって、化合物が、式（Ｉｐ）：
【化４３】
2019527724.tif 000044
を有してもよい。
【００８５】
最も好ましい実施形態では、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素であり、Ｌが存在せず、Ｒ５がピリジニル基であり、ｍが０であり、ｎが０であり、ｑが４であり、全てのＸ３基がフッ素であり、化合物がＳキラル中心を有する。したがって、化合物が、式（Ｉｑ）：
【化４４】
2019527724.tif 000045
を有してもよい。
【００８６】
あるいは、化合物が、以下：
【化４５−１】
2019527724.tif 000046
【化４５−２】
2019527724.tif 000047
【化４５−３】
2019527724.tif 000048
から選択されてもよい。
【００８７】
本明細書に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形は、微生物感染症を治療、改善、または予防するための単独療法（すなわち、化合物単独の使用）において使用されてもよい薬剤に使用されてもよいことが理解されるであろう。あるいは、化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形は、微生物感染症を治療、改善、もしくは予防するために既知の療法に補助として、または既知の療法と組み合わせて使用されてもよい。例えば、式Ｉの化合物と共に投与されてもよい、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）を治療するための既知の抗ウイルス薬は、リバビリンまたは気管支拡張薬を含む。
【００８８】
特に組成物が使用される方法に応じて、化合物を多くの異なる形態を有する組成物と組み合わせてもよい。したがって、例えば、組成物は、粉末、錠剤、カプセル、液剤、軟膏、クリーム、ゲル、ヒドロゲル、エアロゾル、スプレー、ミセル溶液、経皮パッチ、リポソーム懸濁液、または治療を必要とするヒトまたは動物に投与できる他の任意の適切な形態であり得る。本発明による薬剤のビヒクルは、それが与えられる対象によって良好な忍容性が示されるものでなければならないことが理解されるであろう。
【００８９】
本明細書に記載の化合物を含む薬剤は、多くの方法で使用されてもよい。例えば、経口投与が必要とされる場合があり、その場合、化合物は、例えば錠剤、カプセル剤または液剤の形態で経口摂取され得る組成物内に含まれ得る。本発明の化合物を含む組成物は、吸入（例えば、鼻腔内）によって投与されてもよい。組成物はまた、局所使用のためにも製剤化され得る。例えば、クリームまたは軟膏は、皮膚に塗布されてもよい。
【００９０】
本発明による化合物はまた、徐放型または遅延型放出デバイスに組み込まれてもよい。そのようなデバイスは、例えば、皮膚の上または下に挿入されてもよく、薬剤は数週間または数ヶ月にわたって放出されてもよい。デバイスは、少なくとも治療部位に隣接して配置されてもよい。そのようなデバイスは、本発明に従って使用される化合物による長期治療が必要で、通常頻繁な投与を必要とする（例えば、少なくとも毎日の注射）場合に、特に有利であり得る。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明による化合物および組成物は、血流にまたは直接治療が必要な部位に注射することによって対象に投与されてもよい。注射は、静脈内（ボーラスまたは注入）、または皮下（ボーラスまたは注入）、または皮内（ボーラスまたは注入）であり得る。
【００９２】
必要とされる化合物の量は、その生物学的活性および生物学的利用能によって決定され、次に投与方法、化合物の生理化学的特性、およびそれが単独療法として、または併用療法に使用されるかどうかによって決定されることが理解されるであろう。投与頻度はまた、治療される対象内の化合物の半減期によっても影響されるだろう。投与される最適用量は、当業者によって決定されてもよく、使用時の特定の化合物、薬学的組成物の強さ、投与方法、および微生物感染症の進行によって変動するであろう。対象の年齢、体重、性別、食事、および投与時間を含む、治療される特定の対象によるさらなる要因は、投与量を調整する必要性をもたらすであろう。
【００９３】
一般に、どの化合物または類似物を使用するかに応じて、０．０１μｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重という本発明による化合物の１日量が、生物感染症を治療、改善、または予防するために使用されてもよい。より好ましくは、１日量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜４００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００９４】
化合物は、治療される微生物感染症の発症前、発症中または発症後に投与されてもよい。１日量は、単回投与（例えば、１日１回の注射）として与えられてもよい。あるいは、微生物感染症は、１日に２回以上の投与を必要とし得る。一例として、本発明による化合物は、２５ｍｇ〜７０００ｍｇ（すなわち、７０ｋｇの体重と仮定）の１日量を２回（または治療される微生物感染症の重症度によってはそれ以上）投与されてもよい。治療を受けている患者は、起床時に最初の用量を服用し、次に夕方に（２回投与計画の場合）またはその後３〜４時間間隔に２回目の用量を服用することができる。あるいは、徐放デバイスを使用して、反復投与を行う必要なく、本発明による化合物の最適用量を患者に提供してもよい。
【００９５】
製薬業界によって従来用いられるもの（例えば、インビボ実験、臨床試験等）などの既知の手順は、本発明による化合物を含む特定の配合物および（化合物の１日量および投与回数などの）厳密な治療計画を形成するために使用されてもよい。本発明者らは、本発明の化合物の使用に基づいて、微生物感染症を治療するための薬学的組成物について説明する最初の者であると考えている。
【００９６】
したがって、本発明の第５の態様では、第１の態様による化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形、および薬学的に許容されるビヒクルを含む薬学的組成物が提供される。
【００９７】
薬学的組成物は、微生物感染症の対象における治療的改善、予防または治療に使用することができる。したがって、組成物は、好ましくは抗微生物薬学的組成物であり、最も好ましくは抗ウイルス薬学的組成物である。最も好ましい実施形態では、第５の態様の組成物は、抗ＲＳＶ薬学的組成物である。好ましくは、化合物は、式Ｉ、Ｉａ〜Ｉｑとして示される式のいずれかを有する。
【００９８】
本発明は、第６の態様において、第５の態様による組成物を作製するためのプロセスであって、治療有効量の第１の態様の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形と、薬学的に許容されるビヒクルとを接触させることを含む、プロセスも提供する。
【００９９】
好ましくは、化合物は、式Ｉ、Ｉａ〜Ｉｑとして示される式のいずれかを有する。
【０１００】
「対象」は、脊椎動物、哺乳動物、または家畜であり得る。したがって、本発明による化合物、組成物および薬剤は、例えば家畜（例えば、ウマ）、ペット等の任意の哺乳動物を治療するために使用されてもよいし、他の獣医学的用途に使用されてもよい。しかしながら、最も好ましくは、対象はヒトである。
【０１０１】
化合物の「治療有効量」は、対象に投与される際の任意の量であり、標的疾患を治療するために、または所望の効果を生む、すなわち微生物感染症、好ましくはＲＳＶ感染症を抑制するために必要とされる薬物の量である。
【０１０２】
例えば、使用される化合物の治療有効量は、約０．０１ｍｇ〜約８００ｍｇであってもよく、好ましくは約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇであってもよい。化合物の量は、約０．１ｍｇ〜約２５０ｍｇの量であることが好ましく、最も好ましくは約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【０１０３】
本明細書で言及される「薬学的に許容されるビヒクル」は、薬学的組成物を製剤するのに有用であることが当業者に知られている任意の既知の化合物または既知の化合物の組み合わせである。
【０１０４】
一実施形態では、薬学的に許容されるビヒクルは固体であってよく、組成物は粉末または錠剤の形態であってよい。固体の薬学的に許容されるビヒクルは、香味剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁剤、染料、充填剤、流動促進剤、圧縮助剤、不活性結合剤、甘味剤、防腐剤、染料、コーティング剤、または錠剤崩壊剤としても作用し得る１つ以上の物質を含んでもよい。ビヒクルは封入材料でもあり得る。粉末の場合、ビヒクルは、本発明による微粉化した活性物質（すなわち、第１、第２および第３の態様による化合物）との混合物中の微粉化した固体である。錠剤の場合、活性化合物は、適切な割合で必要な圧縮特性を有するビヒクルと混合され、所望の形およびサイズに固められてもよい。粉末および錠剤は、好ましくは最大で９９％の活性化合物を含有する。適切な固体ビヒクルとしては、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、およびイオン交換樹脂が挙げられる。別の実施形態では、薬学的ビヒクルはゲルであってよく、組成物はクリームなどの形態であってもよい。
【０１０５】
しかしながら、薬学的ビヒクルは液体であってもよく、薬学的組成物は溶液の形態である。液体ビヒクルは、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、および加圧組成物を調製するのに使用される。本発明による化合物は、水、有機溶媒、両方の混合物、または薬学的に許容される油もしくは脂肪などの薬学的に許容される液体ビヒクルに溶解または懸濁させてもよい。液体ビヒクルは、可溶化剤、乳化剤、緩衝剤、防腐剤、甘味剤、香味剤、懸濁剤、増粘剤、着色剤、粘度調整剤、安定剤、または浸透圧調整剤などの他の適切な薬学的添加剤を含有することができる。経口および非経口投与のための液体ビヒクルの適切な例には、水（上記の添加剤、例えばセルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液を部分的に含有する）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えばグリコールを含む）、およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば分別ヤシ油および落花生油）が含まれる。非経口投与の場合、ビヒクルは、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油性エステルでもあり得る。滅菌液体ビヒクルは、非経口投与用の滅菌液体形態の組成物において有用である。加圧組成物用の液体ビヒクルは、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に許容される噴射剤であり得る。
【０１０６】
滅菌溶液または懸濁剤である液体薬学的組成物は、例えば、筋肉内、髄腔内、硬膜外、腹腔内、静脈内、および特に皮下注射によって利用することができる。化合物は、滅菌水、食塩水、または他の適切な滅菌注射用媒体を使用して投与時に溶解または懸濁することができる滅菌固体組成物として調製することができる。
【０１０７】
本発明の化合物および組成物は、他の溶質または懸濁剤（例えば、等張液を作製するのに十分な生理食塩水またはグルコース）、胆汁塩、アカシア、ゼラチン、モンオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８０（エチレンオキシドで共重合したソルビトールおよびその無水物のオレイン酸エステル）等を含有する滅菌した溶液または懸濁液の形態で投与されてもよい。本発明により使用される化合物は、液体か固体いずれかの組成物の形態で経口投与もされ得る。経口投与に適した組成物には、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、錠剤、および散剤などの固体形態、ならびに液剤、シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤などの液体形態が含まれる。非経口投与に有用な形態としては、滅菌溶液、乳剤、および懸濁剤が挙げられる。
【０１０８】
本発明者らは、第１の態様の化合物を調製する方法もまた新規であると考えている。
【０１０９】
第７の態様によれば、第１の態様の化合物を調製する方法であって、式（ＩＩ）：
【化４６】
2019527724.tif 000049
の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を、式（ＩＩＩ）：
【化４７】
2019527724.tif 000050
の化合物であって、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ１、Ｘ２、ｍおよびｎは、上記で定義した通りであり、
Ｒ１２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルである、化合物、またはその塩もしくは溶媒和物と接触させることを含む、方法が提供される。
【０１１０】
Ｒ１２は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であり得ることが理解されるであろう。好ましい一実施形態では、Ｒ１２が、メチル基である。しかしながら、より好ましい実施形態では、Ｒ１２が、水素である。
【０１１１】
好ましくは、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩａ）：
【化４８】
2019527724.tif 000051
の化合物である。
【０１１２】
より好ましくは、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩｂ）：
【化４９】
2019527724.tif 000052
の化合物である。
【０１１３】
最も好ましくは、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩｃ）：
【化５０】
2019527724.tif 000053
の化合物である。
【０１１４】
好ましくは、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の化合物を、塩基の存在下で接触させる。好ましくは、塩基は、トリメチルアミンである。
【０１１５】
好ましくは、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の化合物を、カップリング剤の存在下で接触させる。好ましくは、カップリング剤は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１１６】
反応は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および／またはアセトニトリルを含む溶液中で実施されてもよい。好ましくは、反応は、ジメチルホルムアミドを含む溶液中で実施される。
【０１１７】
好ましくは、溶液を少なくとも１時間撹拌する。より好ましくは、溶液を少なくとも２、３、４または５時間撹拌する。最も好ましくは、溶液を少なくとも１０または１５時間撹拌する。
【０１１８】
好ましくは、溶液を０℃〜５０℃の温度で撹拌する。より好ましくは、溶液を５℃〜４０℃または１０℃〜３０℃の温度で撹拌する。最も好ましくは、溶液をほぼ室温で撹拌する。
【０１１９】
方法は、得られた化合物を、続いて求核剤と接触させることを含んでもよい。求核剤は、アルコール、チオール、チオレート、アミンまたはこれらの塩を含んでもよい。アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールを含んでもよい。チオールは、メタンチオール、エタンチオール、プロパンチオール、ブタンチオールまたはペンタンチオールを含んでもよい。チオレートは、メタンチオレート、エタンチオレート、プロパンチオレート、ブタンチオレートまたはペンタンチオレートを含んでもよい。アミンは、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、またはチオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシドを含んでもよい。
【０１２０】
好ましい化合物を調製することを可能にするために、本発明者らは、最初に中間化合物を調製してもよい。本発明者らは、中間化合物を調製するこれらの方法もまた新規であると考えている。
【０１２１】
第８の態様によれば、式（ＩＶ）：
【化５１】
2019527724.tif 000054
の化合物であって、
式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、上記で定義した通りであり、
Ｒ１３は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルである、化合物を調製する方法であって、式（Ｖ）：
【化５２】
2019527724.tif 000055
の化合物を、
脱離基で置換され、かつ１つ以上のさらなる置換基で任意に置換されたベンゼン、ピリジンまたはピリミジンと接触させることを含み、
ここで、さらなる置換基または各さらなる置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６およびＲ７は、上記で定義した通りであり、
反応が密閉容器中で行われることを特徴とする、方法が提供される。
【０１２２】
有利には、密閉容器はベンゼン、ピリジンまたはピリミジンが大気中に逃げるのを防止する。
【０１２３】
好ましくは、Ｒ１３が、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアルケニルである。Ｒ１３が、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基またはペンチル基であり得ることが理解されるであろう。好ましい一実施形態では、Ｒ１３が、メチル基である。
【０１２４】
脱離基は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などの任意のハロゲンであってもよい。好ましくは、Ｘ４は、フッ素である。
【０１２５】
好ましくは、ベンゼン、ピリジンまたはピリミジンが、以下：からなる群から選択され、
【化５３】
2019527724.tif 000056
式中、Ｘ３、ｒ、ｑおよびｓは、上記で定義した通りであり、Ｘ４は脱離基である。
【０１２６】
好ましくは、方法が、式（Ｖ）の化合物を、ピリジンまたはピリミジンと接触させることを含む。より好ましくは、方法が、式（Ｖ）の化合物を、ピリジンと接触させることを含む。
【０１２７】
好ましくは、ピリジンが、以下：
【化５４】
2019527724.tif 000057
を含む。
【０１２８】
最も好ましくは、ピリジンが、ペンタフルオロピリジンである。
【０１２９】
好ましくは、式（Ｖ）の化合物とベンゼン、ピリジンまたはピリミジンとを塩基の存在下で接触させる。好ましくは、塩基は、トリメチルアミンである。
【０１３０】
反応は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および／またはアセトニトリルを含む溶液中で実施されてもよい。好ましくは、反応は、ジメチルホルムアミドを含む溶液中で実施される。
【０１３１】
好ましくは、溶液を、１分〜１８０分間撹拌する。より好ましくは、溶液を、５分〜１２０分間、または１０分〜６０分間撹拌する。最も好ましくは、溶液を、２０分〜４０分間撹拌する。
【０１３２】
好ましくは、溶液を、０℃〜５０℃の温度で撹拌する。より好ましくは、溶液を、５℃〜４０℃または１０℃〜３０℃の温度で撹拌する。最も好ましくは、溶液を、ほぼ室温で撹拌する。
【０１３３】
方法は、得られた化合物を、続いて金属水酸化物と接触させることを含んでもよい。
【０１３４】
有利には、方法は、式（ＩＩＩｂ）または式（ＩＩＩｃ）の化合物を調製してもよい。
【０１３５】
金属水酸化物は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物を含んでもよい。好ましくは、金属水酸化物が、水酸化リチウムを含む。
【０１３６】
得られた化合物を、続いて金属水酸化物と接触させる工程は、水溶液中で実施されてもよい。
【０１３７】
好ましくは、水溶液を、少なくとも１時間撹拌する。より好ましくは、水溶液を、少なくとも２、３、４または５時間撹拌する。最も好ましくは、水溶液を、少なくとも１０または１５時間撹拌する。
【０１３８】
好ましくは、水溶液を、０℃〜５０℃の温度で撹拌する。より好ましくは、水溶液を、５℃〜４０℃または１０℃〜３０℃の温度で撹拌する。最も好ましくは、水溶液を、ほぼ室温で撹拌する。
【０１３９】
水溶液を、酸でクエンチしてもよい。酸は、好ましくは塩化水素である。
【０１４０】
さらなる態様では、式（Ｉ）：
【化５５】
2019527724.tif 000058
の化合物であって、
式中、Ｒ１は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであり、
Ｒ３は、任意のアミノ酸側鎖であり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニルであるか、あるいはＲ３およびＲ４は、これらが結合している原子と一緒になって、結合して５員複素環を形成し、
Ｒ５は、１つ以上の置換基で任意に置換された６員環であり、
ここで、置換基または各置換基は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６、またはＮＲ６Ｒ７であり、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘ１または各Ｘ１は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｘ２または各Ｘ２は、独立して、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、ハロゲン、ＳＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＯＲ６またはＮＲ６Ｒ７から選択され、
Ｒ６または各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化５６】
2019527724.tif 000059
からなる群から選択され、
Ｒ７または各Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ１−５の直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはシクロアルケニル、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはヘテロアリール、Ｃ２−４メタンスルホニルアルキル、Ｃ２−４ジアルキルアミノアルキルおよび
【化５７】
2019527724.tif 000060
からなる群から選択され、
かつ／あるいはＲ６およびＲ７は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成し、
ｐは、１、２、３、４または５であり、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員環を形成する、
化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体もしくは結晶多形が提供される。
【０１４１】
本明細書に記載される全ての特徴（添付されているあらゆる図面、特許請求の範囲、および要約を含む）、および／またはそのように開示されるいずれかの方法またはプロセスの工程の全ては、そのような特徴および／または工程の少なくともいくつかの互いに排他的な組み合わせを除き、任意の組み合わせで、上記の態様のいずれかと組み合わせてもよい。
【図面の簡単な説明】
【０１４２】
【図１】図１は、Ｎ−｛（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］（テトラフルオロピリジン−４−イルアミノ）アセトアミドの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４３】
実施例
実施例１：化合物の合成
融点は、解放毛細管において、Ｓｔｕａｒｔ  ＳＭＰ３０デジタル融点装置を使用して決定され、補正されていない。周囲プローブ温度（公称２９５Ｋ）で、溶媒として重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）かあるいはヘキサ重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）を使用し、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ−ＩＩＩ−４００（１Ｈ＝４００．０６ＭＨｚ；１９Ｆ＝３７６．４ＭＨｚ；１３Ｃ＝１００．６ＭＨｚ）にＮＭＲスペクトルが記録された。化学シフト（δ）は、内部基準としてｐｐｍ対ＴＭＳ（１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲ）で示される。結合定数は、ヘルツ（Ｈｚ）で示される。ＬＣ  ＥＳ  ＭＳ（陽イオン）は、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）を装備したＱＴｏＦ  Ｐｒｅｍｉｅｒ質量分析計で実施された。ＬＣ分離は、０．６ｍＬ／分で、１００％水性（水中０．１％ギ酸）〜１００％有機（アセトニトリル中０．１％ギ酸）の逆相勾配を使用して、Ｃ１８  ＢＥＨクロマトグラフィーカラム（２．１ｍｍ×１００ｍｍおよび１．７ｕｍ粒度）で達成された。Ｓｕｐｅｌｃｏ．Ｓ−Ａ（２５４ｎＭでの蛍光指示薬）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ  Ｒｉｅｄｓｔｒ．２Ｄ−８９５５Ｔ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ  ４９７３２９−９７０，Ｇｅｒｍａｎｙ）のシリカゲルプレートを、ＴＬＣ試験に使用した。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｔｈｅ  Ｏｌｄ  Ｂｒｉｃｋｙａｒｄ，Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，ＳＰ８  ４ＪＬ．ＵＫ）のシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を使用して、カラムクロマトグラフィーを実施した。試薬もＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手し、さらに精製することなく使用した。
【０１４４】
中間体１：２−［（テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸メチル
【化５８】
2019527724.tif 000061
ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶かしたペンタフルオロピリジン（０．４ｍｌ）を、密封容器中、室温で、トリエチルアミン（０．５ｍｌ）およびグリシンメチルエステル塩酸塩（２５０ｍｇ）で処理し、そこで３０分間撹拌した。混合物を水とＥｔＯＡｃに分配した。層を分離し、ＥｔＯＡｃ層を、水（５回）、ブラインの一部で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、デカントし、真空中で濃縮した。得られた固体をヘキサンで粉砕して、白色の固体として表題化合物を得た。収率：０．２２１ｇ（８７％）；融点６７〜６９℃；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．２２（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．３２（ｂｔ、２Ｈ、ＣＨ２）、３．９０（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）；１９Ｆ（３７６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）−９３．６１（ｍ、２Ｆ）、−１６３．９７（ｍ、２Ｆ）。
【０１４５】
中間体２：２−［（テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸
【化５９】
2019527724.tif 000062
ＴＨＦ（９ｍｌ）に溶かした２−［（テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸メチル（中間体１）（１１９ｍｇ）を、室温で、水（９ｍｌ）に溶かした水酸化リチウム（１６４ｍｇ）で処理した。１８時間後、９ｍｌの３Ｍ  ＨＣｌを加え、続いて飽和するまで塩を加えた。この混合物を酢酸エチルで抽出し（３回）、合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、デカントし、真空中で濃縮した。
【０１４６】
化合物１：Ｎ−｛（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］（フェニルアミノ）アセトアミド
【化６０】
2019527724.tif 000063
（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イルアミン（１２６ｍｇ）を、ＤＭＦ（２．５ｍｌ）に溶かしたトリエチルアミン（１９０μｌ）、ＨＢＴＵ（１９０ｍｇ）、Ｎ−フェニルグリシン（７６ｍｇ）と混合し、室温で１８時間撹拌した。水（５ｍｌ）を添加し、得られた固体をろ過した。シリカ上のクロマトグラフィー（２００：８：１、ＤＣＭ、エタノール、アンモニア）により、所望の化合物を淡クリーム色の固体として得た。収率：０．０４５ｇ（２３％）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．９２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．９４（ｄ，１Ｈ，Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ），７．６６（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５４−７．４３（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），７．１０（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．６０（ｄ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．５０（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．０６（ｔ，１Ｈ，ＣＨ２ＮＨＡｒ），５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｃ＝ＮＣＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｎ），３．８４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｃ＝Ｏ）；）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１７１．２，１６８．１，１６７．３，１４８．８，１３９．１，１３８．５，１３２．６，１３１．１，１３０．９，１２９．９，１２９．３，１２８．８，１２６．６，１２３．８，１２２．０，１１７．１，１１３．０，５６．５，４７．３）。
【０１４７】
化合物２：Ｎ−｛（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］（テトラフルオロピリジン−４−イルアミノ）アセトアミド
【化６１】
2019527724.tif 000064
上記化合物を、化合物１と同様の方法で、Ｎ−フェニルグリシンを２−［（テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸（中間体２）と置き換えて、調製した。収率：０．１１ｇ（４８％）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝９．４３（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），８．２５（ｄ，１Ｈ，ＣＨＮＨＣ＝Ｏ）７．５１（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），７．４４（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．３６（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），７．２２（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｃ＝ＮＣＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｎ），５．５５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＮＨＡｒ），４．３８（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ２Ｃ＝Ｏ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１６８．９，１６８．７，１６８．５，１４５．２，１４２．８，１３８．２，１３７．３，１３７．０，１３２．５，１３２．４７，１３１．５，１３０．９，１３０．０，１２９．８，１２８．３，１２７．５，１２４．４，１２１．６，６７．６：１９Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）−９４．０７（ｍ，１Ｆ），−１６３．７７（ｍ，１Ｆ）。
【０１４８】
化合物３：Ｎ−｛２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］（フェニルアミノ）アセトアミド
【化６２】
2019527724.tif 000065
上記化合物を、化合物１と同様の方法で、Ｎ−フェニルグリシンを２−［（テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸（中間体２）と置き換えて、かつ（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イルアミンをそのラセミ体と置き換えて、調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．９０（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），９．３４（ｄ，１Ｈ，ＣＨＮＨＣ＝Ｏ）７．６５（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），７．４８（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ）），５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｃ＝ＮＣＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｎ），４．２５（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ２Ｃ＝Ｏ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１６８．９，１６８．７，１６８．５，１４５．２，１４２．８，１３８．２，１３７．３，１３７．０，１３２．５，１３２．４７，１３１．５，１３０．９，１３０．０，１２９．８，１２８．３，１２７．５，１２４．４，１２１．６，６７．６：１９Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）−９７．０（ｍ，１Ｆ），−１６３．５４（ｍ，１Ｆ）。
【０１４９】
化合物４：２−［（２−エトキシ−３，５，６−トリフルオロピリジン−４−イル）アミノ］−Ｎ−｛（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化６３】
2019527724.tif 000066
Ｎ−｛（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］（テトラフルオロピリジン−４−イルアミノ）アセトアミド（化合物２）（１００ｍｇ）を、室温で、エタノール（２ｍｌ）に溶解させ、ナトリウムエトキシド（１３５μｌ）で処理した。混合物を７６℃に加熱した。この温度で１２時間後、混合物を室温に冷却し、さらにナトリウムエトキシド（１３５μｌ）を加えた。混合物を、さらに１８時間７６℃に加熱した。希ＨＣｌ（２Ｎ、３ｍｌ）を加え、混合物を酢酸エチルと水に分配した。水相を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、デカントし、真空中で濃縮した。シリカ上のクロマトグラフィー（１５０：８：１；ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）により、所望の化合物を淡褐色の固体として単離した。収率：０．０４ｇ（３９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．９０（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），９．３４（ｄ，１Ｈ，ＣＨＮＨＣ＝Ｏ）７．６５（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），７．４８（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ）），５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｃ＝ＮＣＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｎ），４．２５（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ２Ｃ＝Ｏ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１６８．９，１６８．７，１６８．５，１４５．２，１４２．８，１３８．２，１３７．３，１３７．０，１３２．５，１３２．４７，１３１．５，１３０．９，１３０．０，１２９．８，１２８．３，１２７．５，１２４．４，１２１．６，６７．６：１９Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）−９７．０（ｍ，１Ｆ），−１６３．５４（ｍ，１Ｆ）。
【０１５０】
実施例２：抗ウイルスおよび細胞毒性アッセイ
細胞をＡＴＣＣから入手し、ウイルス調製物を４０％（Ｖ／Ｖ）グリセロールを通して１回遠心分離して、感染細胞から産生されたインターフェロンを除去した。増殖培地は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）であり、ウイルス維持培地はＤＭＥＭ＋２％（ｖ／ｖ）ＦＣＳであった。
【０１５１】
細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ−ＩＣ５０：
Ａ５４９細胞およびＨｅＬａ細胞を使用して、５０％コンフルエントになるまで増殖させて一連の９６ウェルプレートに播種し、化合物の２倍連続希釈を、１００μＭの化合物で開始して対照としてＤＭＳＯ（のみ）を用いて各細胞株に対して行った。使用した培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＣＳ（ウイルス増殖用の通常の培地）であった。
【０１５２】
細胞を６〜８日間増殖させてＴＣＩＤ５０アッセイを模倣した後、細胞生存率を、Ａｌｍａｒ  ｂｌｕｒ（ＸＴＴと同様）を加え、６００ｎｍ（励起５４０ｎｍ）で読み取ることによって決定した。得られた結果を表１に示す。
【表１】
2019527724.tif 000067
【０１５３】
結果は、３つの化合物全てが、ＲＳＶの治療に有効であることを示している。低いＩＣ５０値のために、化合物２は、ＲＳＶの治療において最も効果的な化合物である。化合物２が、化合物４（ラセミ体）よりもＲＳＶの治療において十分より効果的であるという事実は、キラル選択があり、したがって化合物がウイルス内のタンパク質部位に直接結合することを示している。
【０１５４】
細胞毒性−ＣＣ５０（５０％の細胞毒性が観察される濃度）：
Ａ５４９細胞およびＨｅＬａ細胞を使用して、５０％コンフルエントになるまで増殖させて一連の９６ウェルプレートに播種し、化合物の２倍連続希釈を、１００μＭの化合物で開始して対照としてＤＭＳＯ（のみ）を用いて各細胞株に対して行った。使用した培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＣＳ（ウイルス増殖用の通常の培地）であった。
【０１５５】
細胞を６〜８日間増殖させてＴＣＩＤ５０アッセイを模倣した後、細胞生存率を、Ａｌｍａｒ  ｂｌｕｒ（ＸＴＴと同様）を加え、６００ｎｍ（励起５４０ｎｍ）で読み取ることによって決定した。
【０１５６】
得られた結果を表２に示す。
【表２】
2019527724.tif 000068
【０１５７】
３つの化合物全てについてＣＣ５０は、ＣＰＥ  ＩＣ５０値よりも有意に高かった。これは、化合物が、ＲＳＶを治療するために使用され得る濃度で毒性がないことを示唆している。
【０１５８】
プラーク減少アッセイ
ベロ細胞を、１ウェル当たり４×１０４細胞の濃度で、３％ＦＣＳを加えたオプティメム（Ｏｐｔｉｍｅｍ）を１００μＬ容量用い、９６ウェルプレートに播種した。３７℃で、加湿した５％ＣＯ２の雰囲気下で一晩培養した後に、細胞の単層は、ほぼ９０％融合しているはずである。化合物２を、Ｕ型底の９６ウェルプレートに入れ、予め加温した、血清を含まない（ＳＦ）オプティメム中で、滴定した。ＤＭＳＯ溶液中の化合物につき、最初に１００％ＤＭＳＯでの滴定を行い、それぞれ、ＳＦ培地中における４％ＤＭＳＯでの最終濃度ｘ２まで各濃度量加え、その後、最終のウイルスを含むＤＭＳＯ濃度として２％となるように、ウイルスと混合した。次いで、培地を細胞から取り除き、ＰＢＳ（１００μｌ／ウェル）で置き換えた。保存したＲＳＶを、自然に解かし、ＳＦオプティメム培地に、４０００ＰＦＵ／ｍＬになるように希釈した。等量のウイルスを滴定プレート上の化合物に加えた。細胞から、ＰＢＳを取り除いた後、ウイルス／化合物の溶液（５０μＬ／ウェル）で、接種した。細胞を、３７℃で、加湿した５％ＣＯ２の培養器で、２時間培養して、感染させた。接種材料を取り除き、培地（オプティメム＋１％ＦＣＳ）を、細胞に加えた（１００μｌ／ウェル）。細胞は、その後４８時間、３７℃で、５％ＣＯ２を入れた加湿培養器で培養した。
【０１５９】
免疫染色手順
培地を細胞から取り除き、単層をＰＢＳで洗浄した。細胞を、２０分間、−２０℃で、氷冷したＰＢＳ（１００μｌ／ウェル）中の８０％アセトンを用いて、定着処理した。定着剤を取り除き、細胞を反転したプレートで、３０分間乾燥させた。細胞（１５０μＬ／ウェル）に、ブロッキング溶液（ＰＢＳ−Ｔ中に５％スキムミルク粉末含有）を加え、プレートを、室温で、３０分間培養した。ブロッキング溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ−Ｔで一回洗浄した。ブロッキング溶液中の一次抗体を、プレート（５０μｌ／ウェル）に加え、３７℃で、１時間培養した。その後プレートを、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ブロッキング溶液中の二次抗体をプレート（５０μＬ／ウェル）に加え、暗がりで、３７℃で１時間培養した。このプレートを洗浄し、１０分間乾燥させた。プレートを、オディッセイイメージャー（Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｅｒ）（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用い、８００ｎＭチャンネルで、中適度の品質の４２μＭの解像度、レベル５の強度でスキャンした。
【０１６０】
データ分析
得られた画像を保存し、コンピュータイメージングソフトウェアを用いてプラーク数をカウントした。化合物のＩＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して得られた用量反応曲線［３変数ｌｏｇ（阻害剤）対反応］から誘導した。
【０１６１】
結果を表３に示す。
【表３】
2019527724.tif 000069
【０１６２】
プラーク減少アッセイは、化合物がＲＳＶを治療するために使用され得ることを示すデータを支持する。この標準的なプラーク減少アッセイに加えて、化合物を２つのさらなるフォーマットでＲＳＶに対して試験した：第１の化合物は、感染時のみ添加し、複製段階時に除去し、第２のフォーマットでは、化合物を複製段階時にのみ添加し、第２のプラーク減少のＩＣ５０値は標準プラーク減少アッセイよりもはるかに高いので、これは、化合物が感染の最初の２時間では有効ではないことを示唆している。同様に、標準および第２のフォーマットのプラーク減少アッセイのＩＣ５０値は類似しているので、それは化合物がウイルス生活環の比較的遅い時期に作用することを強く示唆している。言い換えると、これは、化合物がウイルス複製阻害剤であることを示唆している。いかなる仮説によっても束縛されることを望まないが、本発明者らは、本発明の化合物が、ＲＳＶのＮ−タンパク質に結合し、故にウイルスの複製を阻害し、化合物がウイルスの生活環のより早い段階で作用した場合にはそうであったかもしれない、ウイルス−宿主細胞融合阻害剤である可能性は低いと考えている。
【０１６３】
細胞毒性
ＭＴＴ細胞毒性アッセイ
ベロ細胞を、１ウェル当たり１×１０４細胞の濃度で、１％ＦＢＳを加えた１００μＬ容量のオプティメム（Ｏｐｔｉｍｅｍ）培地中、９６ウェルプレートに播種した。３７℃で、加湿した５％ＣＯ２の雰囲気下で一晩培養した後に、細胞の単層は、ほぼ９０％融合しているはずである。化合物２を、Ｕ型底の９６ウェルプレートに入れ、予め加温した、血清を含まない（ＳＦ）オプティメム中で、滴定した。ＤＭＳＯ溶液中の化合物につき、最初に１００％ＤＭＳＯでの滴定を行い、それぞれ、４％ＤＭＳＯでの最終濃度ｘ２まで各濃度量加えた。次いで、培地を細胞から取り除き、滴定した化合物（１００μｌ／ウェル）で置き換えた。細胞を、加湿した５％ＣＯ２雰囲気で、３７℃で４８時間インキュベートした。
【０１６４】
オプティメム上のＭＴＴ溶液（４ｍｇ／ｍｌ）を調製し、２μｌを各ウェルに添加した後、それを加湿した５％ＣＯ２雰囲気で、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、培地を細胞から除去し、ＤＭＳＯを加えた（５０μｌ／ウェル）。Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘにおいて５７０ｎｍで読み取る前に、プレートをシェーカーに置いた。未処理の対照（１％ＤＭＳＯのみ）と比較してデータを正規化し、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた非線形回帰分析を使用してＣＣ５０値を決定した。
【０１６５】
この方法を使用して、化合物２は、６３μＭのＣＣ５０値を有することが分かった。化合物２について観察された細胞毒性値の差は、生物学的変動性と結び付いた細胞株の差（ＶｅｒｏとＡ５４９）に起因し得る。また、異なる実験が異なるラボで異なる時間に行われたことにも注意する必要があり、それもまたある程度の変動性をもたらし得る。
【０１６６】
しかしながら、６３μＭのＣＣ５０値は、依然としてＣＰＥ  ＩＣ５０値よりも有意に高い。これは、化合物２がＲＳＶを治療するために使用され得る濃度で毒性がないという結論をさらに支持する。
【０１６７】
結果および考察
結果は、化合物１、２および４がＲＳＶを治療するために使用され得ることを示す。さらに、化合物は、非毒性濃度でも有効である。化合物が、タンパク質部位に直接結合し、ウイルスの複製を阻害すると考えられる。
【０１６８】
実施例３：透過性アッセイ
ＮＩＨ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）から入手したＭＤＲ１−ＭＤＣＫ細胞を、継代数６〜３０の間で使用する。細胞を３．４ｘ１０５細胞／ｃｍ２でＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレートに播種する。細胞をＤＭＥＭで培養し、培地を３日目に交換する。４日目に透過性試験を行う。細胞培養およびアッセイインキュベーションを、相対湿度９５％、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で行う。アッセイの日に、３７℃に昇温した所望のｐＨのハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で側底面および先端面を２回すすぐことにより単層を調製する。次いで、細胞を先端区画および側底区画両方で所望のｐＨのＨＢＳＳと４０分間インキュベートし、生理学的パラメーターを安定させる。
【０１６９】
投与液を、アッセイバッファーで化合物２を希釈して１０μＭの最終化合物２濃度（１％ｖ／ｖの最終ＤＭＳＯ濃度）を得ることにより調製する。蛍光インテグリティマーカーのルシファーイエローも投与液に含める。分析標準を試験化合物のＤＭＳＯ希釈液から調製し、バッファーに移し、１％ｖ／ｖ  ＤＭＳＯ濃度に維持する。
【０１７０】
Ａ−Ｂ透過性の評価のために、ＨＢＳＳを先端区画から除去して、化合物２の投与液に置き換える。次いで、先端区画のインサートを、新しいバッファーを含むコンパニオンプレート（１％ｖ／ｖ  ＤＭＳＯ含有）に入れる。Ｂ−Ａ透過性の評価のために、ＨＢＳＳをコンパニオンプレートから除去して、化合物２の投与液に置き換える。新しいバッファー（１％ｖ／ｖ  ＤＭＳＯ含有）を先端区画のインサートに加え、次いで、コンパニオンプレートに入れる。
【０１７１】
６０分で、先端区画のインサートおよびコンパニオンプレートを分離し、先端および側底の試料を、分析のために希釈する。
【０１７２】
化合物２の透過性を２回評価する。透過特性が知られた化合物を、各アッセイプレート上で対照として用いる。
【０１７３】
化合物２および対照化合物を、試料の適切な希釈を伴う８点較正を用いるＬＣ−ＭＳ／ＭＳカセット分析により定量する。開始濃度（Ｃ０）を投与液から決定し、実験的回復を、Ｃ０ならびに先端区画および側底区画両方の濃度から計算する。
【０１７４】
蛍光分析を用いてルシファーイエローの透過率をモニタリングすることにより、実験を通して単層のインテグリティをチェックする。単分子層がダメージを受けた場合、ルシファーイエローの透過率は高くなる。
【０１７５】
透過性データを表４に示す。
【表４】
2019527724.tif 000070
【０１７６】
このデータは、化合物２が、透過性化合物であるが、おそらくＰＧＰなどの輸送体を介した排出機構に対する感受性を有することを示している。
【０１７７】
実施例４：クリアランスアッセイ
プールされたヒト肝ミクロソーム（プールされた男性および女性のもの）、プールされたラット肝ミクロソーム（オスのＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット）およびプールされたイヌ肝ミクロソーム（オスのビーグル犬）を、信頼できる商業的供給業者から購入し、使用前に−８０℃で保存する。
【０１７８】
ミクロソーム（最終タンパク質濃度０．５ｍｇ／ｍＬ）、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．４）および化合物２（最終基質濃度３μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度０．２５％）を３７℃で予めインキュベートし、その後、ＮＡＤＰＨ（最終濃度１ｍＭ）を加えて、反応を開始する。最終のインキュベーション容量は５０μＬである。対照インキュベーションは、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．４）をＮＡＤＰＨ（マイナスＮＡＤＰＨ）の代わりに加える場合の試験された各化合物のために含まれる。２つの対照化合物は、それぞれの種に含まれる。全てのインキュベーションを各試験化合物について単独で行う。
【０１７９】
化合物を、０、５、１５、３０および４５分間インキュベートする。対照（マイナスＮＡＤＰＨ）は、４５分間のみインキュベートする。適切な時点で、２５μＬのインキュベートを、５０μＬメタノールに移すことにより反応を停止させる。終結プレートを、２，５００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離し、タンパク質を沈殿させる。タンパク質を沈殿させた後、試料の上清を、最大４つの化合物のカセットにまとめ、内部標準を加え、試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。時間に対してｌｎピーク面積比（化合物ピーク面積／内部標準ピーク面積）をプロットすることにより、線の傾きを決定する。続いて、半減期および固有クリアランスを計算し、これを表５に示す。
【表５】
2019527724.tif 000071
【０１８０】
このデータは、実施例が第１相代謝を受ける可能性を示している。例えば、ラットおよびイヌのミクロソーム調製物では中程度および低いクリアランスが観察され、ヒトのミクロソーム調製物ではより高いクリアランスが観察される。
【０１８１】
実施例５：マウスのインビボ薬物動態アッセイ
化合物２の薬物動態評価を、雄のＣＤ−１マウスにおいて静脈内（ＩＶ）および経口（ＰＯ）投与後に行った。静脈内投与のために、化合物を、４０：６０のＤＭＡ：生理食塩水に溶かした溶液に処方し、尾静脈を介して１ｍｇ／ｋｇで投与した。経口投与のために、化合物を、１％メチルセルロースおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する水に溶かした懸濁液に処方し、経口胃管栄養法により１０ｍｇ／ｋｇで投与した。ＩＶ投与後１分〜２４時間の間の１０の時点、およびＰＯ投与後５分〜２４時間の間の９の時点で、血液試料を末梢麻酔（イソフルラン）下の心臓穿刺により採取した（各時点につきｎ＝３）。遠心分離によって血漿を直ちに得て、得られた試料を分析まで凍結した。試料を、化合物を対照血漿にスパイクすることによって調製した検量線と共に、続いてアセトニトリルを用いた血漿タンパク質の沈殿による定量分析のために調製した。分析は、エレクトロスプレーイオン化（Ａｇｉｌｅｎｔ  ６５５０システム）を使用して、飛行時間型質量分析と組み合わせた超高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ  １２９０システム）によって行われた。薬物動態パラメーターは、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．４を使用して、平均濃度データの非コンパートメント分析によって決定した。得られたデータを表６に示す。
【表６】
2019527724.tif 000072
【０１８２】
このデータは、実施例２が、中程度のクリアランスで経口的に生物学的に利用可能であることを示している。
【０１８３】
実施例６：さらなる化合物の合成
試薬を、商業的供給源から入手し、さらに精製することなく使用した。無水反応は、オーブン乾燥ガラス器具中、窒素雰囲気下で実施した。ＴＬＣは、２５４ｎＭの蛍光指示薬を用いたアルミニウム裏打ちシリカゲルプレート（平均細孔径６０Å）で実施した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、ＫＰ−Ｓｉｌ、ＵｌｔｒａまたはＫＰ−ＮＨカラムを使用してＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｏｎｅシステムを用いて行った。ＮＭＲスペクトルは、周囲プローブ温度（公称２９５Ｋ）で、４００ＭＨｚ分光計で記録した。化学シフト（δ）は、ｐｐｍで与えられ、溶媒の残留ピークを内部標準として使用することによって較正される（ＣＤＣｌ３，δＨ＝７．２６ｐｐｍ，δＣ＝７７．１６ｐｐｍ；ＤＭＳＯ−ｄ６，δＨ＝２．５０ｐｐｍ，δＣ＝３９．５２ｐｐｍ）。結合定数は、ヘルツ（Ｈｚ）で示される。ＬＲＭＳは、ＡＰＣＩまたはＥＳＩイオン源のいずれかを備えたＡｄｖｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＬコンパクト質量分析計を使用して記録した。
【０１８４】
調製例
中間体：
３Ａ：２−［（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化６４】
2019527724.tif 000073
グリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩（２．５１４ｇ、１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．３９ｍＬ、３１．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４５ｍＬ）に溶かした冷却（０℃）溶液に、ペンタフルオロピリジン（３．２９３ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で６時間撹拌した。反応物を室温にし、１８時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン中０〜４５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、白色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．１６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．２０−４．１５（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ−）ｍ／ｚ２７８．６［Ｍ−Ｈ］−。
【０１８５】
以下の中間体化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表７−１】
2019527724.tif 000074
【表７−２】
2019527724.tif 000075
【表７−３】
2019527724.tif 000076
【０１８６】
４Ａ：２−｛［３，５，６−トリフルオロ−４−（チオモルホリン−４−イル）ピリジン−２−イル］アミノ｝酢酸エチル
【化６５】
2019527724.tif 000077
４−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）チオモルホリン（中間体３Ｋ）（８５６ｍｇ、３．３９ｍｍｏｌ）、グリシンエチルエステル塩酸塩（９４７ｍｇ、６．７９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．６４１ｇ、１１．８８ｍｍｏｌ）をＮ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ、１０ｍＬ）に溶かした溶液を、密封管において、１００℃で１７時間加熱した。室温に冷却した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、次いでブライン（それぞれ２０ｍＬ）で連続的に洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン中０〜３０％ＥｔＯＡｃ）による精製により、白色の固体（５４１ｍｇ、４８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．１１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５４−３．４８（ｍ，４Ｈ），２．７２−２．６７（ｍ，４Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３６．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８７】
以下の中間体化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表８】
2019527724.tif 000078
【０１８８】
５Ａ：２−｛［２，３，５−トリフルオロ−６−（モルホリン−４−イル）ピリジン−４−イル］アミノ｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化６６】
2019527724.tif 000079
２−［（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体３Ａ）（２００ｍｇ、０．７１０ｍｍｏｌ）およびモルホリン（７１．８μＬ、０．８２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶かした溶液を、８０℃で７時間加熱した。追加のモルホリン（１５．６μＬ、０．１７８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８５℃でさらに１８時間加熱した。室温に冷却した後、反応物を水（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（３×２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン中３〜５０％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物を白色の固体（１２０ｍｇ、４８％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．８４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．１３−４．１０（ｍ，２Ｈ），３．８１−３．７７（ｍ，４Ｈ），３．３５−３．３０（ｍ，４Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３４７．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８９】
６Ａ：２−｛［２，３，５−トリフルオロ−６−（メチルスルファニル）ピリジン−４−イル］アミノ｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化６７】
2019527724.tif 000080
２−［（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体３Ａ）（２００ｍｇ、０．７１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶かした溶液に、ナトリウムメタンチオレート（５８ｍｇ、０．８２０ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で７時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（４×３０ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物を黄色の油状物（１８２ｍｇ、８３％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．８９（ｓ，１Ｈ），４．１５−４．１１（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３０８．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９０】
７Ａ：２−［（２，３，５−トリフルオロ−６−メタンスルホニルピリジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化６８】
2019527724.tif 000081
２−［（２，３，５−トリフルオロ−６−メチルスルファニルピリジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体３Ａ）（１７６ｍｇ、０．５７０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶かした冷却（０℃）溶液に、メタクロロ過安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）（約７７％の純度、３８４ｍｇ、１．７１０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、ＮａＯＨ（０．５Ｍ水溶液）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２回）およびブライン（それぞれ２０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン中０〜７０％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物を白色の固体（１４９ｍｇ、７６％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．３１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．２２−４．１８（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ−）ｍ／ｚ３３８．７［Ｍ−Ｈ］−。
【０１９１】
８Ａ：２−｛［３，５，６−トリフルオロ−４−（モルホリン−４−イル）ピリジン−２−イル］アミノ｝酢酸エチル
【化６９】
2019527724.tif 000082
４−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）モルホリン（中間体３Ｊ）（１８０ｍｇ、０．７６０ｍｍｏｌ）、２−アミノ酢酸エチル塩酸塩（１２８ｍｇ、０．９１０ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２５３ｍｇ、１．８３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に溶かした溶液を、６０℃で４時間、次いで１００℃で４４時間加熱した。反応混合物を、室温に冷却し、水（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（４×１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物を白色の固体（８４ｍｇ、３４％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ４．８８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８２−３．７７（ｍ，４Ｈ），３．４１−３．３６（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３１９．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９２】
９Ａ：（２Ｓ）−２−［（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］プロパン酸
【化７０】
2019527724.tif 000083
（２Ｓ）−２−［（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）アミノ］プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体３Ｂ）（２１２ｍｇ、０．７２０ｍｍｏｌ）の溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２／トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１：１、２ｍＬ）中で、室温で４時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去して、粗生成物を白色の固体（１７１ｍｇ、９９．５％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．９８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７４−４．６５（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ−）ｍ／ｚ２３６．９［Ｍ−Ｈ］−。
【０１９３】
以下の中間体化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表９−１】
2019527724.tif 000084
【表９−２】
2019527724.tif 000085
【０１９４】
１０Ａ：２−［（２，３，５−トリフルオロ−６−メタンスルホニルピリジン−４−イル）アミノ］酢酸
【化７１】
2019527724.tif 000086
中間体７Ａから中間体９Ａで記載した一般的な手順により調製した。Ｒｆ＝０．１７（ＥｔＯＡｃ）。
【０１９５】
１１Ａ：２−｛［２，３，５−トリフルオロ−６−（モルホリン−４−イル）ピリジン−４−イル］アミノ｝酢酸塩酸塩
【化７２】
2019527724.tif 000087
２−｛［２，３，５−トリフルオロ−６−（モルホリン−４−イル）ピリジン−４−イル］アミノ｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体５Ａ）（１１９ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液）およびＥｔ２Ｏの混合物（１：１、６ｍＬ）に懸濁させ、室温で２４時間撹拌した。さらにＨＣｌ（Ｅｔ２Ｏ中２Ｍ、３ｍＬ）を加え、反応物を２４時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去して、粗生成物を薄茶色の固体（９７ｍｇ、８６％）として得た。Ｒｆ＝０．６６（ＥｔＯＡｃ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２９２．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９６】
１２Ａ：２−｛［３，５，６−トリフルオロ−４−（モルホリン−４−イル）ピリジン−２−イル］アミノ｝酢酸リチウム
【化７３】
2019527724.tif 000088
２−［（３，５，６−トリフルオロ−４−モルホリン−４−イルピリジン−２−イル）アミノ］酢酸エチル（中間体８Ａ）（６３ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．５ｍＬ）に溶かした溶液に、ＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液、３９２μＬ、０．３９２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、残渣をＥｔ２Ｏで粉砕した。次いで、残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２：ｉＰｒＯＨ：ＥｔＯＨ（約４：１：１）に溶解し、ろ過し、ＥｔＯＨで洗浄し、溶媒を減圧下で除去して、粗リチウム塩を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．７０−３．６５（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．２６（ｍ，８Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２９１．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９７】
１３Ａ：２−｛［４−（４−アセチルピペラジン−１−イル）−３，５，６−トリフルオロピリジン−２−イル］アミノ｝酢酸
【化７４】
2019527724.tif 000089
２−［［４−（４−アセチルピペラジン−１−イル）−３，５，６−トリフルオロピリジン−２−イル］アミノ］酢酸エチル（中間体４Ｂ）（２６９ｍｇ、０．７５０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした溶液に、ＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液、１．４９ｍＬ、１．４９０ｍｍｏｌ）を室温で加え、１７時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）でｐＨ約６〜７に酸性化してＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出し、次いでＨＣｌ水溶液（１Ｍ）でｐＨ約４〜５に酸性化してＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水およびブライン（それぞれ１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。残渣をヘプタン（３回）で粉砕し、減圧下で乾燥させて、白色の固体（１８９ｍｇ、７６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．４８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．００（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５８−３．５０（ｍ，４Ｈ），３．２８−３．２２（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９８】
以下の中間体化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表１０】
2019527724.tif 000090
【０１９９】
１４Ａ：（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−１−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド
【化７５】
2019527724.tif 000091
ＷＯ２００５／０９０３１９に記載の手順に従って、（３Ｓ）−３−アミノ−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を調製した。（３Ｓ）−３−アミノ−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−１−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）ピロリジン−２−カルボン酸（中間体９Ｅ）（６４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（０．０７ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を加え、続いて１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１７時間撹拌した。水（１５ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、水（３×１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中３５〜６０％ＥｔＯＡｃ）により、所望の化合物を白色固体として得た（７９ｍｇ、７９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１−７．５６（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３３−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），６．９５−６．８４（ｍ，２Ｈ），６．６７−６．５５（ｍ，２Ｈ），５．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９１−４．８０（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．１０（ｍ，１Ｈ），３．９３−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．４８−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．３７−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．０９−１．９９（ｍ，１Ｈ）；ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋６１８．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２００】
以下の中間体化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表１１−１】
2019527724.tif 000092
【表１１−２】
2019527724.tif 000093
【表１１−３】
2019527724.tif 000094
【表１１−４】
2019527724.tif 000095
【表１１−５】
2019527724.tif 000096
【表１１−６】
2019527724.tif 000097
【表１１−７】
2019527724.tif 000098
【０２０１】
脱保護の手順
化合物５：（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−１−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド
【化７６】
2019527724.tif 000099
（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−１−（２，３，５，６−テトラフルオロピリジン−４−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド（中間体１４Ｃ）（７６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を無水アニソール（１．５ｍＬ）に溶かした溶液に、ＡｌＣｌ３（２０１ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４０時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、水（１０ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（４×１０ｍＬ）で抽出した。有機物をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中３０〜４５％ＥｔＯＡｃ）により、所望の化合物を白色固体（２４ｍｇ、３９％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５９（ｓ，１Ｈ），７．６７−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．４５−７．３４（ｍ，３Ｈ），７．２６−７．１８（ｍ，２Ｈ），５．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９１−４．７９（ｍ，１Ｈ），４．１３−４．０５（ｍ，１Ｈ），３．９４−３．７８（ｍ，１Ｈ），２．３９（ｄｔ，Ｊ＝１４．９，７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１３（ｄｔ，Ｊ＝１３．１，６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．０３−１．９５（ｍ，１Ｈ）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋４９８．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０２】
以下の化合物を同じ一般的な手順により調製した。
【表１２−１】
2019527724.tif 000100
【表１２−２】
2019527724.tif 000101
【表１２−３】
2019527724.tif 000102
【表１２−４】
2019527724.tif 000103
【０２０３】
化合物１７：２−｛［４−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３，５，６−トリフルオロピリジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化７７】
2019527724.tif 000104
（３Ｓ）−３−アミノ−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン（９０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）および２−［［４−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３，５，６−トリフルオロピリジン−２−イル］アミノ］酢酸（中間体１３Ｃ）（１２８ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１．１当量）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ、２当量）を加え、続いてＨＡＴＵ（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１７時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機物を、水（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中５０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により、所望の化合物を白色固体（１４４ｍｇ、７２％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９０（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，７．１，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５９−７．３９（ｍ，４Ｈ），７．３６−７．２３（ｍ，３Ｈ），６．９４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．５０−３．３８（ｍ，４Ｈ），２．１８−２．０４（ｍ，４Ｈ）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋５５９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０４】
化合物１８：２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化７８】
2019527724.tif 000105
４，６−ジクロロピリミジン（４．００ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）およびグリシンｔｅｒｔブチルエステル塩酸塩（５．５０ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（９．３５ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を７０℃で１８時間加熱した。混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィー［２０〜５０％（５０：８：１ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２中のＮＨ４ＯＨ）］により、所望の化合物を白色固体（４．８５ｇ、７４％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），５．５３（ｓ，１Ｈ），４．０４（ｓ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋２４３．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０５】
２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］酢酸塩酸塩
【化７９】
2019527724.tif 000106
２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）に、ＨＣｌ（Ｅｔ２Ｏ中２Ｍ、２ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）を加え、続いて１，４−ジオキサン（５ｍＬ）を加えた。水（３ｍＬ）を添加して、溶液を得た。混合物を室温で４８時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、所望の化合物の粗製物を白色固体として得た（１１０ｍｇ、１２０％）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋５４１．９［Ｍ＋Ｈ］＋。Ｒｆ＝０．０１（ＥｔＯＡｃ）。
【０２０６】
２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化８０】
2019527724.tif 000107
中間体１４Ａで記載したものと同様の手順によって、２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］酢酸塩酸塩から調製した。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋５４１．９［Ｍ＋Ｈ］＋。Ｒｆ＝０．３５（２００：８：１ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）。
【０２０７】
２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化８１】
2019527724.tif 000108
化合物５で記載されたものと同様の手順によって、２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミドから調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．９０（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，７．２，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５８−７．３５（ｍ，５Ｈ），７．３５−７．１５（ｍ，３Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２５−４．０８（ｍ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋４２２．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０８】
化合物１９：２−｛［６−（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
２−｛［６−（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化８２】
2019527724.tif 000109
１−（メチルスルホニル）ピペラジン（１７２．４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）および２−［（６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１２２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を１−ブタノール（２ｍＬ）に溶かした溶液を、ＡＣＥ圧力管において、１５０℃で２２時間加熱した。混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィー［１０〜２５％（５０：８：１  ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２中のＮＨ４ＯＨ）］により、所望の化合物をオフホワイトの固体（１２３ｍｇ、６６％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．４８（ｓ，１Ｈ），５．１２（ｓ，１Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７６−３．６４（ｍ，４Ｈ），３．３３−３．１８（ｍ，４Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，７Ｈ）。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋３７１．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０９】
２−｛［６−（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝酢酸塩酸塩
【化８３】
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２−｛［６−（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１２６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）に、ＨＣｌ（Ｅｔ２Ｏ中２Ｍ；３．３８ｍＬ、６．７６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。水（３ｍＬ）を加えて溶液を得、混合物をさらに１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、精製せずに直接使用した。ＬＲＭＳ  ＡＰＣＩ＋３７１．７［Ｍ＋Ｈ］＋．Ｒｆ＝０．０１（ＥｔＯＡｃ）
【０２１０】
２−｛［６−（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化８４】
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中間体１４Ａで記載したものと同様の手順によって、２−｛［６−（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝酢酸塩酸塩から調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．５，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．２３（ｍ，４Ｈ），７．２３−７．１２（ｍ，３Ｈ），６．９１−６．８７（ｍ，２Ｈ），６．６４−６．６０（ｍ，２Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），５．５７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２２−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８７−３．６７（ｍ，４Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．３５−３．１６（ｍ，４Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ）。Ｒｆ＝０．０９（２００：８：１ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）
【０２１１】
２−｛［６−（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝−Ｎ−［（３Ｓ）−２−オキソ−５−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセトアミド
【化８５】
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化合物５で記載したものと同様の手順によって、Ｎ−［（３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−オキソ−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−２−｛［６−（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］アミノ｝アセトアミドから調製した。Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９１（ｓ，１Ｈ），９．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．７０−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．５０−７．４３（ｍ，４Ｈ），７．３８−７．２１（ｍ，４Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２９−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．４６（ｍ，４Ｈ），３．３９−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．２６−３．１３（ｍ，４Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ）。Ｒｆ＝０．０３（２００：８：１ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）。
【０２１２】
実施例７：抗ウイルスおよび細胞毒性アッセイ
細胞をＡＴＣＣから入手し、ウイルス調製物を４０％（Ｖ／Ｖ）グリセロールを通して１回遠心分離して、感染細胞から産生されたインターフェロンを除去した。増殖培地は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）であり、ウイルス維持培地はＤＭＥＭ＋２％（ｖ／ｖ）ＦＣＳであった。
【０２１３】
第２のプラーク減少アッセイ
ＲＳＶプラーク減少アッセイは、ＲＳＶ感染の異なる病巣における感染単位の数の定量化を可能にする感染性アッセイである。これは、他の点では健康な組織培養細胞の単層内の特異的抗体染色によって検出されるウイルス抗原のゾーンによって示される。各プラークは単一の感染性ウイルス粒子に由来するので、抗ウイルス効果の正確な計算は、抗ウイルス化合物の存在下および非存在下でプラークを計測することによって得られ得る。ＨＥｐ−２細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ２３）をフラスコで継代し、抗生物質を含有し、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中、９６ウェルプレートに播種した。接種中およびその後のインキュベーション中に、３％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中で細胞を培養した。１００プラーク形成単位（ＰＦＵ）／ウェルのＲＳＶ（ＲＳＶ  Ａ２  ＶＲ−１５４０）を、１０段階希釈の化合物と混合した。続いて、１００μＬのウイルス／化合物混合物を、コンフルエントなＨＥｐ−２細胞単層に添加した。細胞およびウイルス／化合物混合物を、加湿した５％ＣＯ２インキュベーターにおいて、３５℃で１日間インキュベートした。
【０２１４】
細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、５０％ｖ／ｖのＥｔＯＨ／ＭｅＯＨを添加し、次いで−２０℃で保存した。染色の日に、最初に固定剤をプレートから除去した。プレートをＰＢＳで３回洗浄した。６０μＬのＰＢＳ／２％粉乳中の予め滴定した量の一次抗体を加え、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、６０μＬのＰＢＳ／２％粉乳中のヤギ抗マウス西洋ワサビペルオキシダーゼを添加し、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を用いた３回の洗浄ステップの後、６０μＬのすぐ使用できるＴｒｕｅＢｌｕｅを添加し、プレートを室温で１０〜１５分間インキュベートした後、ＭｉｌｌｉＱ水を添加した。プレートを水で１回洗浄し、３０〜６０分間インキュベートし、水を除去した後、暗所で風乾した。
【０２１５】
免疫染色プラーク（ｖｉｒｏｓｐｏｔ）を計測するためのＢｉｏＳｐｏｔ分析ソフトウェアを備えたＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔ  Ｓ６  ＵＶ分析器を使用して、プレートをスキャンし、分析した。プラークカウントを使用して、ＲＳＶについてのウイルス対照ウェル中のスポットカウント（ＳＣ）の平均に対する感染％を計算した。ＩＣ５０／ＩＣ９０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ５．０（Ｐｒｉｓｍ）における可変勾配を有する４パラメーター非線形回帰を当てはめた阻害曲線の内挿により、それぞれシグナルの５０％または９０％減少として計算された。
【０２１６】
細胞毒性−ＣＣ５０（５０％の細胞毒性が観察される濃度）：
１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充した培地中のＨｅｐＧ２細胞を、４×１０５細胞／ウェルで、白色壁９６ウェルプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。播種後２４時間で培地を除去し、２％ＦＢＳを補充した、並行のウイルスプラークアッセイで試験したものと等しい最終化合物濃度を含有する培地と交換した。さらに４８時間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｏｘ（商標）Ｇｒｅｅｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）キットを使用して細胞毒性を測定し、ＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の適切なプロトコルを使用して発光を読み取った。分析中、ＤＭＳＯ含有ウェルを陰性対照として使用し、溶解した細胞を陽性対照として使用した。
【表１３】
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【０２１７】
複数の値を複数の試験機会を実施した表１２に示す。
【０２１８】
結果および考察
結果は、上記試験化合物がＲＳＶを治療するために使用され得ることを示す。さらに、化合物は、非毒性濃度でも有効である。
【０２１９】
結論
本明細書に記載の化合物は、ＲＳＶの阻害剤であることが示された。さらに、化合物は、非毒性濃度でも有効である。これらの化合物の１つ（化合物２）は、マウスにおいて経口で生物学的に利用可能である。
【図１】
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【国際調査報告】
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