(57)【要約】  記述されるのは、Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子発現を阻害するための組成物及び方法である。Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）薬が記述される。本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、例えば、コンジュゲートされた標的化リガンドを使用することによって、肝細胞などの細胞に対して標的化され得る。所望により１つ又は複数の追加の治療薬を備えた、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む医薬組成物が、更に記述される。記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を、感染した肝臓にインビボで送達することにより、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害と、ＨＢＶ感染に関係する疾患及び状態の治療とが提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンチセンス鎖及びセンス鎖を含むＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ薬であって、前記アンチセンス鎖は、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス鎖配列に対して少なくとも約８５％の同一性を有する配列を含む、ＲＮＡｉ薬。
【請求項２】
前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス配列の少なくとも１６個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項３】
前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス鎖配列の位置２〜１８（５’→３’）のヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＲＮＡｉ薬の前記センス鎖の少なくとも１つのヌクレオチド、及び／又は、前記アンチセンス鎖の少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、及び／又は修飾ヌクレオシド間連結を有する、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、それぞれ１７〜３０ヌクレオチド長である、請求項１〜４のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６】
前記センス鎖が、表２又は表４に提供されるいずれかのセンス鎖配列の少なくとも１６個の連続ヌクレオチドを含み、かつ前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して前記１６個の連続ヌクレオチドにわたって少なくとも約８５％の相補性の領域を有する、請求項１〜５のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項７】
前記ＲＮＡｉ薬の前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖の両方における全て又は実質的に全てのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、請求項１〜６のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖が、表３に提供されるいずれかの修飾配列のヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項９】
前記センス鎖が、表４に提供されるいずれかの修飾センス配列のヌクレオチド配列を含む、請求項１又は８に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬を含む、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、前記ＲＮＡｉ薬が標的化リガンドにコンジュゲートされている、組成物。
【請求項１１】
前記標的化リガンドがＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記標的化リガンドが（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、又は（ＮＡＧ３９）ｓである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記標的化リガンドが、前記ＲＮＡｉ薬の前記センス鎖にコンジュゲートされている、請求項１０〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、製薬的に許容される賦形剤を更に含む、請求項１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；ＡＤ０５１６４；又はＡＤ０５１６５のデュプレックス構造を有する、請求項１０〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８２；又はＡＤ０５０７０のデュプレックス構造を有する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するためのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む第２のＲＮＡｉ薬を更に含む、請求項１０〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記第２のＲＮＡｉ薬が、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス鎖配列に対して少なくとも約８５％の同一性を有するアンチセンス配列を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第２のＲＮＡｉ薬の前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス配列の少なくとも１６個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第２のＲＮＡｉ薬の前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供されるいずれかのアンチセンス鎖配列の位置２〜１８（５’→３’）のヌクレオチドを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第１のＲＮＡｉ薬が、ＨＢＶ遺伝子のＳオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を標的とし、かつ、前記第２のＲＮＡｉ薬が、ＨＢＶ遺伝子のＸオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を標的とする、請求項１７〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記第１のＲＮＡｉ薬がＨＢＶ遺伝子のＸ  ＯＲＦを標的とし、かつ、前記第２のＲＮＡｉ薬が、ＨＢＶ遺伝子のＳ  ＯＲＦを標的とする、請求項１７〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記第１のＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４９６２；及びＡＤ０５１６４からなる群から選択され、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；及びＡＤ０５１６５からなる群から選択される、請求項１７〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記第１のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４８７２であり、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬がＡＤ０５０７０である、請求項１７〜２１又は２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
前記第１のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４８７２であり、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４９８２である、請求項１７〜２１又は２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前記第１のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４８７２であり、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４７７６である、請求項１７〜２１又は２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
前記第１のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４５８５であり、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬がＡＤ０４５８０である、請求項１７〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
１つ又は複数の追加の治療を更に含む、請求項１０〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記追加の治療が、ラミブジン、テノホビル、テノホビルアラフェナミド、テノホビルジソプロキシル、又はエンテカビルである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記追加の治療がインターフェロンである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
対象におけるＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するための方法であって、請求項１〜９のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
対象におけるＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するための方法であって、請求項１０〜３０のいずれかに記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記対象が、ＨＢＶ感染を有するか又は有するリスクがある、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
対象におけるＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ感染に関連する疾患、障害、又は状態を治療するための方法であって、請求項１〜９のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬の有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
対象におけるＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ感染に関連する疾患、障害、又は状態を治療するための方法であって、請求項１０〜３０のいずれかに記載の組成物の有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記組成物が、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の前記発現を阻害するための２つのＲＮＡｉ薬の有効量を含む、請求項３２、３３、又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物の前記有効量が、対象におけるＨＢｓＡｇのレベルを、前記組成物の投与前の前記対象のＨＢｓＡｇ発現レベルに比べて、少なくとも約４０％低下させるのに十分である、請求項３２、３３、３５、又は３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物の前記有効量が、対象におけるＨＢｅＡｇのレベルを、前記組成物の投与前の前記対象のＨＢｅＡｇ発現レベルに比べて、少なくとも約４０％低下させるのに十分である、請求項３２、３３、３５、又は３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記組成物の前記有効量が、対象における血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、前記組成物の投与前の前記対象の血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルに比べて、少なくとも約４０％低下させるのに十分である、請求項３２、３３、３５、又は３６のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
ＨＢＶ感染に関連する前記疾患、障害、又は状態が、慢性肝疾患若しくは障害、肝臓炎症、線維化状態、増殖性疾患、肝細胞癌、Ｄ型肝炎ウイルス感染、又は急性ＨＢＶ感染である、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記第１のＲＮＡｉ薬と前記第２のＲＮＡｉ薬とが約１：１の比で投与される、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記第１のＲＮＡｉ薬と前記第２のＲＮＡｉ薬とが約２：１の比で投与される、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記第１のＲＮＡｉ薬と前記第２のＲＮＡｉ薬とが約３：１の比で投与される、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記第１のＲＮＡｉ薬と前記第２のＲＮＡｉ薬とが約４：１の比で投与される、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記第１のＲＮＡｉ薬と前記第２のＲＮＡｉ薬とが約５：１の比で投与される、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記第１のＲＮＡｉ薬の前記有効量が約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの間であり、かつ前記第２のＲＮＡｉ薬の前記有効量が約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの間である、請求項３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記ＲＮＡｉ薬の前記有効量が、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの間である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４８】
ＨＢＶ感染の治療のための、請求項１〜９のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬の使用。
【請求項４９】
ＨＢＶ感染の治療のための、請求項１０〜３０のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５０】
ＨＢＶ感染の治療のために医薬品を製造するための、請求項１０〜３０のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５１】
アンチセンス鎖及びセンス鎖を含むＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ薬であって、前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；ＡＤ０５１６４；又はＡＤ０５１６５からなる群からのデュプレックス構造におけるそれぞれのセンス鎖又はアンチセンス鎖に同一又は実質的に同一なセンス鎖又はアンチセンス鎖を含むデュプレックス構造を有する、ＲＮＡｉ薬。
【請求項５２】
前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；ＡＤ０５１６４；又はＡＤ０５１６５からなる群からのデュプレックス構造におけるそれぞれのセンスに同一又は実質的に同一なセンス鎖を含むデュプレックス構造を有する、請求項５１に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５３】
前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；ＡＤ０５１６４；又はＡＤ０５１６５からなる群からのデュプレックス構造におけるそれぞれのアンチセンス鎖に同一又は実質的に同一なアンチセンス鎖を含むデュプレックス構造を有する、請求項５２に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５４】
前記ＲＮＡｉ薬が、ＡＤ０３４９８；ＡＤ０３４９９；ＡＤ０３５００；ＡＤ０３５０１；ＡＤ０３７３８；ＡＤ０３７３９；ＡＤ０３９６７；ＡＤ０３９６８；ＡＤ０３９６９；ＡＤ０３９７０；ＡＤ０３９７１；ＡＤ０３９７２；ＡＤ０３９７３；ＡＤ０３９７４；ＡＤ０３９７５；ＡＤ０３９７６；ＡＤ０３９７７；ＡＤ０３９７８；ＡＤ０４００１；ＡＤ０４００２；ＡＤ０４００３；ＡＤ０４００４；ＡＤ０４００５；ＡＤ０４００６；ＡＤ０４００７；ＡＤ０４００８；ＡＤ０４００９；ＡＤ０４０１０；ＡＤ０４１７６；ＡＤ０４１７７；ＡＤ０４１７８；ＡＤ０４４１２；ＡＤ０４４１３；ＡＤ０４４１４；ＡＤ０４４１５；ＡＤ０４４１６；ＡＤ０４４１７；ＡＤ０４４１８；ＡＤ０４４１９；ＡＤ０４４２０；ＡＤ０４４２１；ＡＤ０４４２２；ＡＤ０４４２３；ＡＤ０４４２５；ＡＤ０４４２６；ＡＤ０４４２７；ＡＤ０４４２８；ＡＤ０４４２９；ＡＤ０４４３０；ＡＤ０４４３１；ＡＤ０４４３２；ＡＤ０４４３３；ＡＤ０４４３４；ＡＤ０４４３５；ＡＤ０４４３６；ＡＤ０４４３７；ＡＤ０４４３８；ＡＤ０４４３９；ＡＤ０４４４０；ＡＤ０４４４１；ＡＤ０４４４２；ＡＤ０４５１１；ＡＤ０４５７０；ＡＤ０４５７１；ＡＤ０４５７２；ＡＤ０４５７３；ＡＤ０４５７４；ＡＤ０４５７５；ＡＤ０４５７６；ＡＤ０４５７７；ＡＤ０４５７８；ＡＤ０４５７９；ＡＤ０４５８０；ＡＤ０４５８１；ＡＤ０４５８３；ＡＤ０４５８４；ＡＤ０４５８５；ＡＤ０４５８６；ＡＤ０４５８７；ＡＤ０４５８８；ＡＤ０４５９０；ＡＤ０４５９１；ＡＤ０４５９２；ＡＤ０４５９３；ＡＤ０４５９４；ＡＤ０４５９５；ＡＤ０４５９６；ＡＤ０４５９７；ＡＤ０４５９８；ＡＤ０４５９９；ＡＤ０４７３４；ＡＤ０４７７１；ＡＤ０４７７２；ＡＤ０４７７３；ＡＤ０４７７４；ＡＤ０４７７５；ＡＤ０４７７６；ＡＤ０４７７７；ＡＤ０４７７８；ＡＤ０４８２２；ＡＤ０４８２３；ＡＤ０４８７１；ＡＤ０４８７２；ＡＤ０４８７３；ＡＤ０４８７４；ＡＤ０４８７５；ＡＤ０４８７６；ＡＤ０４８８１；ＡＤ０４８８２；ＡＤ０４８８３；ＡＤ０４８８４；ＡＤ０４８８５；ＡＤ０４９６２；ＡＤ０４９６３；ＡＤ０４９８１；ＡＤ０４９８２；ＡＤ０４９８３；ＡＤ０５０６９；ＡＤ０５０７０；ＡＤ０５０７１；ＡＤ０５０７２；ＡＤ０５０７３；ＡＤ０５０７４；ＡＤ０５０７５；ＡＤ０５０７６；ＡＤ０５０７７；ＡＤ０５０７８；ＡＤ０５１４７；ＡＤ０５１４８；ＡＤ０５１４９；ＡＤ０５１６４；又はＡＤ０５１６５からなる群からのデュプレックス構造におけるそれぞれのセンス鎖及びアンチセンス鎖に両方とも同一又は実質的に同一なセンス鎖及びアンチセンス鎖を含むデュプレックス構造を有する、請求項５３に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５５】
前記実質的に同一であることが、正確に同一であるか、少なくとも、又は約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である、請求項５１〜５４に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５６】
前記実質的に同一であることが、少なくとも、又は約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である、請求項５１〜５４のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５７】
前記実質的に同一であることが、約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である、請求項５１〜５４のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５８】
前記実質的に同一であることが、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である、請求項５１〜５４のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項５９】
請求項５１〜５８のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬を含む組成物。
【請求項６０】
請求項５１〜５８のいずれかに記載の、少なくとも２つのＲＮＡｉ薬を含む組成物。
【請求項６１】
前記ＲＮＡｉ薬が少なくとも１つのオーバーハングを含む、請求項１〜９又は５１〜５８のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６２】
前記ＲＮＡｉ薬が前記アンチセンス鎖の３’末端にオーバーハングを含む、請求項６１に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６３】
前記ＲＮＡｉ薬が、前記アンチセンス鎖の３’末端及び前記センス鎖の３’末端にオーバーハングを含む、請求項６２に記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６４】
前記ＲＮＡｉ薬が１つ又は２つの平滑末端を含む、請求項１〜９又は５１〜５８のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６５】
前記ＲＮＡｉ薬が１つ又は２つのフレイド末端を含む、請求項１〜９又は５１〜５８のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【請求項６６】
前記センス鎖が少なくとも１つの逆向き塩基脱落ヌクレオシドを含む、請求項１〜９、５１〜５８、又は６１〜６５のいずれかに記載のＲＮＡｉ薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国仮特許出願第６２／５４０，６３９号（２０１７年８月３日）、同第６２／５３４，７３３号（２０１７年７月２０日）、及び同第６２／３７０，７５４号（２０１６年８月４日）に対して優先権を主張し、これらそれぞれの内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本明細書で開示されるのは、Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子発現を阻害するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）薬、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物、及びその使用方法である。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、厳密な肝臓指向性の二本鎖ＤＮＡを含むウイルスである。ＤＮＡは遺伝物質であるが、その複製周期には、プレゲノムＲＮＡをＤＮＡにコピーする逆転写工程が含まれる。Ｂ型肝炎ウイルスは、ヘパドナウイルスの１つのメンバーとして分類され、ヘパドナウイルス科のファミリーに属する。Ｂ型肝炎ウイルスを有する成人の一次感染は、臓器炎症症状、発熱、黄疸、及び血液中の肝臓トランスアミナーゼの増加を伴う急性肝炎を引き起こす。ウイルス感染を克服することができない患者は、長年にわたって慢性疾患が進行し、肝硬変や肝臓癌に至るリスクが高まる。Ｂ型肝炎ウイルス感染した母親から新生児への周産期感染も、慢性肝炎につながる。
【０００４】
肝細胞により取り込まれると、そのヌクレオカプシドが核に移動し、ＤＮＡが放出される。ここでＤＮＡ鎖合成が完了し、隙間が補修されて、３．２ｋｂの共有結合閉環状（ｃｃｃ）スーパーコイルＤＮＡを生じる。このｃｃｃＤＮＡは、５つの主要なウイルスｍＲＮＡ（これらは長さ３．５、３．５、２．４、２．１、及び０．７ｋｂである）の転写のテンプレートとして作用する。全てのｍＲＮＡは５’末端がキャップされ、３’末端がポリアデニル化されている。５つのｍＲＮＡ全ての間には、３’末端に配列重複がある。
【０００５】
１つの３．５ｋｂのｍＲＮＡは、コアタンパク質及びポリメラーゼ生成のテンプレートとして作用する。また、同じ転写物がプレゲノム複製中間体として作用し、これによりウイルスのポリメラーゼがＤＮＡへの逆転写を開始することができる。コアタンパク質は、ヌクレオカプシド形成のために必要となる。他の３．５ｋｂのｍＲＮＡは、分泌可能なｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のプレコアをコードする。複製阻害剤が存在しない場合、血液中のｅ抗原の存在量は、肝臓におけるＢ型肝炎ウイルス複製と相関関係があり、疾患進行をモニターする重要な診断マーカーとなる。
【０００６】
２．４ｋｂ及び２．１ｋｂのｍＲＮＡは、ウイルスの大型、中型、及び小型の表面抗原の発現のための、オープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）のプレＳ１、プレＳ２及びＳを擁している。Ｓ抗原は、感染性の、完全粒子と関連している。また、感染した患者の血液は、ゲノムＤＮＡ又はポリメラーゼを含まない、Ｓ抗原単独に由来する非感染性粒子も含む。これらの粒子の機能は完全には解明されていない。血液中の検出可能なＳ抗原の完全かつ持続的な枯渇は、Ｂ型肝炎ウイルスのクリアランスに対する信頼性のある指標と考えられる。
【０００７】
０．７ｋｂのｍＲＮＡは、Ｘタンパク質をコードする。この遺伝子産物は、ウイルス遺伝子の効率的な転写のために重要であり、宿主遺伝子発現に対する転写活性化因子としても作用する。後者の活性は、肝臓癌の発達中の肝細胞形質転換に関して重要であると見られる。
【０００８】
６か月以上にわたって血液中に検出可能なＳ抗原、ｅ抗原、及び／又はウイルスＤＮＡがある患者は、慢性的に感染していると見なされる。逆転写酵素活性の阻害剤としてのヌクレオシド類似体は典型的に、多くの患者に対して第１の治療オプションである。ラミブジン、テノホビル、及び／又はエンテカビルの投与は、肝機能の改善と、典型的に最も重要な利点と考えられる肝臓炎症の低減を伴って、時には検出不能なレベルまでＢ型肝炎ウイルス複製を抑制することが示されている。しかし、治療終了後に完全かつ持続的な寛解を達成する患者はわずかである。更に、Ｂ型肝炎ウイルスは、治療の持続期間が長くなるにつれて、薬剤耐性を生じる。これは特に、Ｂ型肝炎及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に重感染した患者にとっては困難である。両方のウイルスがヌクレオシドアナログ薬（nucleoside analogue drug）に感受性であり、耐性を同時に生じる可能性がある。
【０００９】
第２の治療オプションは、インターフェロンαの投与である。ここで、患者は、６か月間にわたって高用量のインターフェロンαが投与される。アジア遺伝子型Ｂは、奏功率が非常に低い。Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）又はヒト免疫不全ウイルスとの重感染は、インターフェロンα療法を完全に無効化することが示されている。激しい肝障害及び重い線維化状態がある患者は、インターフェロンα療法には不適格となる。
【００１０】
特定のＢ型肝炎ウイルス特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）薬は、ＨＢＶ遺伝子発現の発現を阻害することがこれまでに示されている。例えば、米国特許出願公開第２０１３／０００５７９３号（Ｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．）（この全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を阻害するための、特定の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子を開示している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）遺伝子の発現を選択的かつ効率的に阻害することができる、新しいＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）薬（本明細書においてのＲＮＡｉ薬、ＲＮＡｉトリガ、又はトリガとも記載される）が必要とされている。また、ＨＢＶ感染の治療及びＨＢＶに関連する疾患の予防のために、新しいＨＢＶ特異的ＲＮＡｉ薬を組み合わせることが必要とされている。
【００１２】
本明細書に記載されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができるＨＢＶ遺伝子特異的ＲＮＡｉ薬である。記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ感染の症状及び関連疾患の治療処置及び／又は予防のための方法に使用することができ、これには、慢性肝疾患／障害、炎症、線維化状態、増殖性疾患（肝細胞癌などの癌を含む）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）感染、及び急性ＨＢＶ感染が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、慢性ＨＢＶ感染及び／又はＨＤＶ感染に関連する症状及び疾患の治療処置及び／又は予防のための方法に使用することができる。このような方法は、本明細書に記載の１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を、対象（例えばヒト又は動物の対象）に投与することを含む。
【００１３】
また、本明細書中に記載されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができる、１つ又は複数の開示されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物である。この１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物は、ＨＢＶ感染に関連する症状及び疾患の治療及び／又は予防のために、対象（例えばヒト又は動物の対象）に投与することができる。
【００１４】
本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、少なくとも１つのセンス鎖及び１つのアンチセンス鎖を含む。センス鎖とアンチセンス鎖とは、部分的に、実質的に、又は完全に、互いに対して相補的であり得る。本明細書に記載のＲＮＡｉ薬のセンス鎖とアンチセンス鎖の長さは、それぞれ１６〜３０ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立に１７〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立に１９〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立に２１〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立に２１〜２４ヌクレオチド長である。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さ又は異なる長さのいずれでもあり得る。本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、既知のＨＢＶ血清型の大部分にわたって保存されている、ＨＢＶゲノム中の配列に少なくとも部分的に相補的であるような、アンチセンス鎖配列を含むように設計されている。本明細書に記載のＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶを発現する細胞に送達されると、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、１つ又は複数のＨＢＶ遺伝子の発現を阻害する。
【００１５】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、第１の配列を含むセンス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）と、第２の配列を含むアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）とを含む。本明細書に記載されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡにおける少なくとも１６個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列に対して少なくとも約８５％の同一性を有する、コアストレッチを含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ｍＲＮＡにおける配列に対して少なくとも約８５％の同一性を有する、センス鎖コアヌクレオチドストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチド長である。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡ及び対応するセンス鎖における配列に対して、少なくとも１６個の連続ヌクレオチドのコアストレッチにわたって、少なくとも約８５％の相補性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ｍＲＮＡ又は対応するセンス鎖の配列に対して少なくとも約８５％の相補性を有するアンチセンス鎖コアヌクレオチド配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチド長である。
【００１６】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬に用いることができるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖の例が、表３及び４に提供される。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬デュプレックスの例が、表５に提供される。本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖からなる、又はこれらに含まれる、１９ヌクレオチドのコアストレッチ配列の例が、表２に提供される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、当該技術分野で周知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、標的細胞又は組織に送達される。核酸送達方法には、リポソーム内カプセル封入によるもの、イオントフォレシスによるもの、又は、他のビヒクル（例えばヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、及び生体接着性微小球）、タンパク質性ベクター、若しくはＤｙｎａｍｉｃ  Ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅ（ＤＰＣ）に組み込むことによるものが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、国際公開第２０００／０５３７２２号、同第２００８／００２２３０９号、同第２０１１／１０４１６９号、及び同第２０１２／０８３１８５号を参照、これらそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＲＮＡｉ薬を標的化基に共有結合させることにより標的細胞又は組織に送達される。いくつかの実施形態において、この標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）リガンドなどの細胞受容体リガンドを含み得る。いくつかの実施形態において、ＡＳＧＰｒリガンドは、ガラクトース誘導体クラスターを含むか又はこれからなる。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体又はＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体を含む。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体又はＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体である。
【００１８】
標的化基は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖又はアンチセンス鎖の３’又は５’末端に連結し得る。いくつかの実施形態において、標的化基はセンス鎖の３’又は５’末端に連結される。いくつかの実施形態において、標的化基はセンス鎖の５’末端に連結される。いくつかの実施形態において、標的化基はリンカーを介してＲＮＡｉ薬に連結される。
【００１９】
標的化基は、リンカーあり又はなしで、表２、３、及び４に開示されるいずれかのセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖の５’又は３’末端に連結され得る。リンカーは、標的化基あり又はなしで、表２、３、及び４に開示されるいずれかのセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖の５’又は３’末端に取り付けられ得る。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、表５に開示されるデュプレックス配列を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、異なるヌクレオチド配列を有する少なくとも２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の組み合わせ又はカクテルを含む組成物である。いくつかの実施形態において、２つ以上の異なるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が、それぞれ別個かつ独立に標的化基に連結されている。いくつかの実施形態において、２つ以上の異なるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が、それぞれ、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンからなる標的化基に連結されている。いくつかの実施形態において、２つ以上のＲＮＡｉ薬が組成物に含まれる場合、このＲＮＡｉ薬のそれぞれが同じ標的化基に連結されている。いくつかの実施形態において、２つ以上のＲＮＡｉ薬が組成物に含まれる場合、このＲＮＡｉ薬のそれぞれが、異なる標的化基（例えば異なる化学構造を有する標的化基）に連結されている。
【００２２】
いくつかの実施形態において、標的化基は、追加のリンカーを使用することなしに、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬に連結されている。いくつかの実施形態において、標的化基は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬への連結を促進するために予め存在するリンカーを有するよう設計される。いくつかの実施形態において、２つ以上のＲＮＡｉ薬が組成物に含まれる場合、この２つ以上のＲＮＡｉ薬は、同じリンカーを用いて標的化基に連結され得る。いくつかの実施形態において、２つ以上のＲＮＡｉ薬が組成物に含まれる場合、この２つ以上のＲＮＡｉ薬は、異なるリンカーを用いて標的化基に連結される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、異なる配列を有する少なくとも２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の組み合わせを含む組成物であり、この各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ遺伝子の異なる位置又は異なる領域を標的とする。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、少なくとも２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の組み合わせを含む組成物であり、この各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、異なるＨＢＶ転写物を標的とするよう設計される（例えば、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物で、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ遺伝子のＳ  ＯＲＦに位置するあるヌクレオチド配列に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含み、一方、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ遺伝子のＸ  ＯＲＦに位置するあるヌクレオチド配列に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含む）。本明細書で使用されるとき、Ｓ  ＯＲＦに位置するヌクレオチド配列に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ薬は、配列番号１のＨＢＶゲノムの位置１〜１３０７及び３１８５〜３２２１の一部を標的とする。本明細書で使用されるとき、Ｘ  ＯＲＦに位置するヌクレオチド配列に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ薬は、配列番号１のＨＢＶゲノムの位置１３０８〜１９３０の一部を標的とする。
【００２４】
ＨＢＶ  ｍＲＮＡは多シストロン性であることが知られており、これにより、複数のポリペプチドが翻訳され、それぞれのｍＲＮＡがＲＮＡ配列内で重複する。よって、ＨＢＶ遺伝子を標的とする単一のＲＮＡｉ薬で、大半の又は全てのＨＢＶ転写物の阻害をもたらすことが可能になる。ただし、理論に拘束されるものではないが、ＨＢＶ遺伝子の異なる位置又は領域を標的とする２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物は（特に、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬で、一方のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬がＳ  ＯＲＦを標的とし、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬がＸ  ＯＲＦを標的とする場合）、単一のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のみを含む組成物に比べて付加的な利点を提供する可能性があることが仮定され、この利点には例えば、（ａ）全てのＨＢＶウイルス転写物が確実に標的となるようにすること（すなわち、３．５ｋｂプレゲノムＲＮＡ、３．５ｋｂプレコアｍＲＮＡ、２．４ｋｂプレＳ１  ｍＲＮＡ、２．１ｋｂプレＳ２／Ｓ  ｍＲＮＡ、０．７ｋｂ  Ｘ  ｍＲＮＡ、並びに、組み込まれたＨＢＶ  ＤＮＡから生成されるｍＲＮＡを発現する任意のＳ抗原）、（ｂ）より大きな患者集団に潜在的に対処できるようにするため、遺伝子型の包括範囲を拡大するよう作用すること、及び／又は、（ｃ）ｓｉＲＮＡ結合部位における突然変異によるウイルス耐性を潜在的に低減すること、が挙げられる。
【００２５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、ＨＢＶ  ＲＮＡのＳ  ＯＲＦを標的とする１つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（すなわち、Ｓ転写物（Ｓ、プレＳ１、及びプレＳ２）、プレゲノムＲＮＡ（コア及びポリメラーゼ）、並びにＨＢＶゲノムのプレコア転写物（ＨＢｅＡｇ）を標的とするアンチセンス鎖を有するもの）と、ＨＢＶ  ＲＮＡのＸ  ＯＲＦを標的とする１つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（すなわち、ＨＢＶゲノムのＸ転写物、Ｓ転写物（Ｓ、プレＳ１、及びプレＳ２）、プレゲノムＲＮＡ（コア及びポリメラーゼ）、並びにＨＢＶゲノムのプレコア転写物（ＨＢｅＡｇ）を標的とするアンチセンス鎖を有するもの）との組み合わせを含む組成物である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、ＨＢＶ遺伝子のＳ  ＯＲＦを標的とする配列を含む少なくとも１つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬と、ＨＢＶ遺伝子のＸ  ＯＲＦを標的とする配列を含む第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬とを含む。
【００２６】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列を含むアンチセンス鎖を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００２７】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、表４のいずれかの配列の配列を含むセンス鎖を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００２８】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列を含むアンチセンス鎖と、そのアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表４のいずれかの配列の配列を含むセンス鎖とを有する、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００２９】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列からなるアンチセンス鎖と、そのアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表４のいずれかの配列の配列からなるセンス鎖とを有する、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３０】
本明細書に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、表５のデュプレックス構造を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３１】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列を含むアンチセンス鎖を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３２】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、表４のいずれかの配列の配列を含むセンス鎖を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３３】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列を含むアンチセンス鎖と、そのアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表４のいずれかの配列の配列を含むセンス鎖とを有する、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３４】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、表３のいずれかの配列の配列からなるアンチセンス鎖と、そのアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表４のいずれかの配列の配列からなるセンス鎖とを有する、１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３５】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、表５のデュプレックス構造を有する１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。
【００３６】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、（ｉ）表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖を有するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬と、（ｉｉ）表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖を有する第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬とを、投与することを含む。
【００３７】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、（ｉ）表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖を有するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬と、（ｉｉ）表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖を有する第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬とを、投与することを含む。
【００３８】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための方法であり、この方法は、（ｉ）第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬であって、表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖と、その第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表２又は表４のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるセンス鎖とを有する、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬と、（ｉｉ）第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬であって、表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖と、その第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表２又は表４のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるセンス鎖とを有する、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬とを、投与することを含む。
【００３９】
本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、（ｉ）第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬であって、表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖と、その第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表２又は表４のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるセンス鎖とを有する、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬と、（ｉｉ）第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬であって、表２又は表３のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるアンチセンス鎖と、その第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的な表２又は表４のいずれかの配列の配列を含むか又はこれらからなるセンス鎖とを有する、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬とを、投与することを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のものを含む：
ａ．配列（５’→３’）ＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ（配列番号７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵ（配列番号３４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｂ．配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ（配列番号８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＡ（配列番号３５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｃ．配列（５’→３’）ＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号３９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｄ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡ（配列番号４０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｅ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号４４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｆ．配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号４５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｇ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣ（配列番号２２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号４９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｈ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣ（配列番号２３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号５０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉ．配列（５’→３’）ＧＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＣ（配列番号５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｊ．配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号５５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｋ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号５６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖。
【００４１】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号３９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡ（配列番号４０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含み、
第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＧＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＣ（配列番号５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号５５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉｉ）配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号５６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号４４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号４５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含み、
第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＧＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＣ（配列番号５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号５５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉｉ）配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号５６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号３９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡ（配列番号１３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡ（配列番号４０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含み、
第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡのＸ  ＯＲＦの一部に少なくとも部分的に相補的な配列を有するアンチセンス鎖を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号４４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣ（配列番号１８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号４５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含み、
第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡのＸ  ＯＲＦの一部に少なくとも部分的に相補的な配列を有するアンチセンス鎖を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つ以上のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡのＳ  ＯＲＦの一部に少なくとも部分的に相補的な配列を有するアンチセンス鎖を含み、また第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は：
ｉ）配列（５’→３’）ＧＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＣ（配列番号５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉ）配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号５５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉｉｉ）配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧ（配列番号２９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号５６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
のいずれかを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ａ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣＣＵＵＡＵ（配列番号１４９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｂ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣＣＵ（配列番号１５０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｃ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣ（配列番号１５１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｄ．配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＵＵ（配列番号１５２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｅ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｆ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＧ（配列番号１６０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｇ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｈ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１６３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｉ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＧＡ（配列番号１７０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｊ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｋ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１７２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｌ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１７３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｍ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＵＵ（配列番号１７４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｎ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｏ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＵＵ（配列番号１７８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｐ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｑ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣ（配列番号１８０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｒ．配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１８１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｓ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１８２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｔ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１８３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｕ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＣ（配列番号１８４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１８５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｗ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１８６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵ（配列番号１８７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｙ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｚ．配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１８９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ａａ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１９０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｂｂ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１９１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｃｃ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＧ（配列番号１９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｄｄ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＧ（配列番号１９３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｅｅ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＧ（配列番号１９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、
を含み、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なセンス鎖を更に含む。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ａ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣＣＵＵＡＵ（配列番号１４９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｂ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣＣＵ（配列番号１５０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｃ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＣ（配列番号１５１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｄ．配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＵＵ（配列番号１５２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｅ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｆ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＧ（配列番号１６０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｇ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｈ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１６３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｉ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＧＡ（配列番号１７０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｊ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｋ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１７２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｌ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１７３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｍ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＵＵ（配列番号１７４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｎ．配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｏ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＵＵ（配列番号１７８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｐ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｑ．配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣ（配列番号１８０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｒ．配列（５’→３’）ＵＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１８１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｓ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１８２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｔ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１８３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｕ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＣ（配列番号１８４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵＵ（配列番号１８５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｗ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵＵ（配列番号１８６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｘ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＵ（配列番号１８７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｙ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｚ．配列（５’→３’）ＡＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１８９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ａａ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１９０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｂｂ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＵ（配列番号１９１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｃｃ．配列（５’→３’）ＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＧ（配列番号１９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、又は
ｄｄ．配列（５’→３’）ＵＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣＧ（配列番号１９３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｅｅ．配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＧＧ（配列番号１９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖、
を含み、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なセンス鎖を更に含む。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｃｓｕｓｕＡｕ（配列番号６１）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｓｃｓｕ（配列番号６２）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｃｓｕ（配列番号６３）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号６４）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号６８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓｃａａｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕａｃａｇｃｓｃ（配列番号８５）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓｕｇａｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｃａｃｓｇ（配列番号９４）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａＣｆｇｓａ（配列番号９８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１０２）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｕｓｕ（配列番号１０３）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｃｓｕ（配列番号１０４）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｃｕｓｕ（配列番号１０５）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号１０７）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｉｖ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａＣｆｓｇ（配列番号１０８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｕｓｕ（配列番号１０９）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｇ（配列番号１１０）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｕｓｕ（配列番号１１１）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｇｓａ（配列番号１１２）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｕｓｕ（配列番号１２０）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃｕｓｕ（配列番号１２５）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、
ｘｘｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｓｃ（配列番号１２６）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｕｓｕ（配列番号１２７）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｓｃ（配列番号１２８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃｕｓｕ（配列番号１２９）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｓｃ（配列番号１３０）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｕｓｕ（配列番号１３１）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｕ（配列番号１３２）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｃ（配列番号１３３）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｕｓｕ（配列番号１３４）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｕ（配列番号１３５）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１３６）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｓｃｓｃ（配列番号１３７）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｓｃｓｃ（配列番号１３８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｕ（配列番号１３９）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｇ（配列番号１４０）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉ．配列（５’→３’）ａｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１４１）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆＵｆＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号１４２）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＣｆｓｃ（配列番号１４３）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｘ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃＣｆｓｕ（配列番号１４４）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｌ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃＣｆｓｕ（配列番号１４５）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｓｇ（配列番号１４６）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｓｇ（配列番号１４７）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｇｓｇ（配列番号１４８）から０個、１個、２個又は３個のヌクレオチドが異なる配列を含むアンチセンス鎖、
を含み、式中、ａ、ｇ、ｃ及びｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）修飾ヌクレオチド、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間連結であり、残りのヌクレオチドモノマーはホスホジエステル結合により連結され、ｃＰｒｐｕは５’−シクロプロピルホスホネート−２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なセンス鎖を更に含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｃｓｕｓｕＡｕ（配列番号６１）からなるアンチセンス鎖、又は
ｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｓｃｓｕ（配列番号６２）からなるアンチセンス鎖、又は
ｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｃｃｓｕ（配列番号６３）からなるアンチセンス鎖、又は
ｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号６４）からなるアンチセンス鎖、又は
ｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号６８）からなるアンチセンス鎖、又は
ｖｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓｃａａｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕａｃａｇｃｓｃ（配列番号８５）からなるアンチセンス鎖、又は
ｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓｕｇａｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｃａｃｓｇ（配列番号９４）からなるアンチセンス鎖、又は
ｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａＣｆｇｓａ（配列番号９８）からなるアンチセンス鎖、又は
ｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１０２）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｕｓｕ（配列番号１０３）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｃｓｕ（配列番号１０４）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕｕｕａｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｃｕｓｕ（配列番号１０５）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号１０７）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｉｖ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａＣｆｓｇ（配列番号１０８）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｕｓｕ（配列番号１０９）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｇ（配列番号１１０）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｕｓｕ（配列番号１１１）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｓｇｓａ（配列番号１１２）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｕｓＵｆｇＡｆｇａｇａａＧｆｕＣｆｃＡｆｃＣｆａｃｕｓｕ（配列番号１２０）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃｕｓｕ（配列番号１２５）からなるアンチセンス鎖、
ｘｘｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｓｃ（配列番号１２６）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｕｓｕ（配列番号１２７）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｃｓｃ（配列番号１２８）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃｕｓｕ（配列番号１２９）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＡｆａＡｆｕＵｆｇＡｆｇＡｆｇＡｆａＧｆｕＣｆｃａｓｃ（配列番号１３０）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｕｓｕ（配列番号１３１）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｕ（配列番号１３２）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｃ（配列番号１３３）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｉｘ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｕｓｕ（配列番号１３４）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃｓＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｕｓｕ（配列番号１３５）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１３６）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｓｃｓｃ（配列番号１３７）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｉｉ．配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｓｃｓｃ（配列番号１３８）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｕ（配列番号１３９）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｇ（配列番号１４０）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉ．配列（５’→３’）ａｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｃｓｃ（配列番号１４１）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆＵｆＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｕｓｕ（配列番号１４２）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｖｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇＣｆｓｃ（配列番号１４３）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｘｘｉｘ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃＣｆｓｕ（配列番号１４４）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｌ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃＣｆｓｕ（配列番号１４５）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉ．配列（５’→３’）ａｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｓｇ（配列番号１４６）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓｃＡｆａＵｆｕＵｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＣｆａＧｆｃｃｓｇ（配列番号１４７）からなるアンチセンス鎖、又は
ｘｌｉｉｉ．配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＣｆａＡｆｕＵｆｕＡｆｕＧｆｃＣｆｕＡｆｃＡｆｇｇｓｇ（配列番号１４８）からなるアンチセンス鎖、
を含み、式中、ａ、ｇ、ｃ及びｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）修飾ヌクレオチド、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間連結であり、残りのヌクレオチドモノマーはホスホジエステル結合により連結され、ｃＰｒｐｕは５’−シクロプロピルホスホネート−２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なセンス鎖を更に含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ａ．配列（５’→３’）ＵＵＧＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＴ（配列番号２７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｂ．配列（５’→３’）ＵＡＵＡＵＧＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２７６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｃ．配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号２７８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｄ．配列（５’→３’）ＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号２８５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｅ．配列（５’→３’）ＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡ（配列番号２８９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｆ．配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｇ．配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｈ．配列（５’→３’）ＵＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号３００）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｉ．配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｊ．配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号３０３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｋ．配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号３０４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｌ．配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｍ．配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｎ．配列（５’→３’）ＡＡＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｏ．配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３１８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｐ．配列（５’→３’）ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３１９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｑ．配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号３２０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｒ．配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号３２１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｓ．配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｔ．配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｕ．配列（５’→３’）ＧＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｖ．配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３２５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｗ．配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３２６）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｘ．配列（５’→３’）ＡＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｙ．配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｚ．配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号３２９）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ａａ．配列（５’→３’）ＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３３０）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、又は
ｂｂ．配列（５’→３’）ＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３３１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｃｃ．配列（５’→３’）ＣＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３３２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｄｄ．配列（５’→３’）ＣＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３３３）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、又は
ｅｅ．配列（５’→３’）ＣＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３３４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖、
を含み、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を更に含む。
【００５２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は以下のもの：
ａ．核酸塩基配列（５’→３’）ＵＵＧＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＴ（配列番号２７５）からなるセンス鎖、又は
ｂ．核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＵＡＵＧＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２７６）からなるセンス鎖、又は
ｃ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号２７８）からなるセンス鎖、又は
ｄ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号２８５）からなるセンス鎖、又は
ｅ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡ（配列番号２８９）からなるセンス鎖、又は
ｆ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）からなるセンス鎖、又は
ｇ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）からなるセンス鎖、又は
ｈ．核酸塩基配列（５’→３’）ＵＣＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵ（配列番号３００）からなるセンス鎖、又は
ｉ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）からなるセンス鎖、又は
ｊ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号３０３）からなるセンス鎖、又は
ｋ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡＵＵ（配列番号３０４）からなるセンス鎖、又は
ｌ．核酸塩基配列（５’→３’）ＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０６）からなるセンス鎖、又は
ｍ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）からなるセンス鎖、又は
ｎ．核酸塩基配列（５’→３’）ＡＡＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０８）からなるセンス鎖、又は
ｏ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３１８）からなるセンス鎖、又は
ｐ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３１９）からなるセンス鎖、又は
ｑ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号３２０）からなるセンス鎖、又は
ｒ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＡ（配列番号３２１）からなるセンス鎖、又は
ｓ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２２）からなるセンス鎖、又は
ｔ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２３）からなるセンス鎖、又は
ｕ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３２４）からなるセンス鎖、又は
ｖ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３２５）からなるセンス鎖、又は
ｗ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３２６）からなるセンス鎖、又は
ｘ．核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２７）からなるセンス鎖、又は
ｙ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）からなるセンス鎖、又は
ｚ．核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＵ（配列番号３２９）からなるセンス鎖、又は
ａａ．核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３３０）を含むセンス鎖、又は
ｂｂ．核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３３１）からなるセンス鎖、又は
ｃｃ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵ（配列番号３３２）からなるセンス鎖、又は
ｄｄ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＡ（配列番号３３３）からなるセンス鎖、又は
ｅｅ．核酸塩基配列（５’→３’）ＣＣＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３３４）からなるセンス鎖、
を含み、このＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、各アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を更に含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）からなるセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）からなるセンス鎖を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）からなるセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）からなるセンス鎖を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）からなるセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）からなるセンス鎖を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）からなるセンス鎖を含み、第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、核酸塩基配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）からなるアンチセンス鎖、及び、核酸塩基配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）からなるセンス鎖を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＵＵ（配列番号１７５）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＵＵ（配列番号１５４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬及び第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされる。
【００６６】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＧ（配列番号１８８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＣＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号３２８）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬及び第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＧＣＵＧＵＡＧＧＣＡＵＡＡＡＵＵＧＧＵＡ（配列番号２９４）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬及び第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされる。
【００６８】
いくつかの実施形態において、本発明に開示されるのは、細胞におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための組成物であり、この組成物は、２つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含み、センス鎖内のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾されているか、並びに／あるいは、第１及び／又は第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の、アンチセンス鎖のヌクレオチド全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドであり、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＡＧＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣ（配列番号１７１）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＣＵ（配列番号３０２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、配列（５’→３’）ＵＡＣＣＡＡＵＵＵＡＵＧＣＣＵＡＣＡＧＣＣ（配列番号１６２）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖、及び、配列（５’→３’）ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＵＵ（配列番号３０７）から０個、１個、２個又は３個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むセンス鎖を含み、この第１のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬及び第２のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、これらを必要としている対象に、有効量のＡＤ０４８７２及び有効量のＡＤ０５０７０を投与することを含む。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約２：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約３：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約１：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約４：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約５：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０５０７０の比は、約１：２である。
【００７０】
いくつかの実施形態において、約１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＤ０４８７２と約１ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．２ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約０．８ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約４．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５０７０が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約ＡＤ０４８７２と約ＡＤ０５０７０とが、別々に投与される（例えば、別の注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２の各用量と、ＡＤ０５０７０の各用量が、一緒に投与される（例えば、同じ注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２の各用量と、ＡＤ０５０７０の各用量が、単一の医薬組成物に調製される。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、これらを必要としている対象に、有効量のＡＤ０４８７２及び有効量のＡＤ０４７７６を投与することを含む。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約２：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約３：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約４：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約１：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約５：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４７７６の比は、約１：２である。
【００７２】
いくつかの実施形態において、約１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＤ０４８７２と約１ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．２ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約０．８ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約４．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４７７６が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４７７６の各用量が、別々に投与される（例えば、別の注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４７７６の各用量が、一緒に投与される（例えば、同じ注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４７７６の各用量が、単一の医薬組成物に調製される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、これらを必要としている対象に、有効量のＡＤ０４８７２及び有効量のＡＤ０４９８２を投与することを含む。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約２：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約３：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約４：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約１：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約５：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４８７２対ＡＤ０４９８２の比は、約１：２である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、約１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＤ０４８７２と約１ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．２ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約０．８ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約２．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約４．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約３．３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と約１．７ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８７２と、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４９８２が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４９８２の各用量が、別々に投与される（例えば、別の注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４９８２の各用量が、一緒に投与される（例えば、同じ注射内）。いくつかの実施形態において、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４９８２の各用量が、単一の医薬組成物に調製される。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ感染の治療、又はＨＢＶ感染によって生じる疾患若しくは症状の予防の方法であり、この方法は、これらを必要としている対象に、有効量のＡＤ０４５８０及び有効量のＡＤ０４５８５を投与することを含む。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約２：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約３：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約４：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約５：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約１：１である。いくつかの実施形態において、これらを必要としている対象に投与されるＡＤ０４５８０対ＡＤ０４５８５の比は、約１：２である。いくつかの実施形態において、約１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＤ０４５８０と約１ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４５８５が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４５８０と約１．５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４５８５が、これらを必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態において、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４５８０と、約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４５８５が、これらを必要としている対象に投与される。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ３７）ｓに連結したＡＤ０５０７０からなるか又はこれを含む：
【００７７】
【化１】
2019527694.tif 000002
【００７８】
【化２】
2019527694.tif 000003
【００７９】
【化３】
2019527694.tif 000004
【００８０】
【化４】
2019527694.tif 000005
【００８１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ２５）ｓに連結したＡＤ０５０７０からなるか又はこれを含む：
【００８２】
【化５】
2019527694.tif 000006
【００８３】
【化６】
2019527694.tif 000007
【００８４】
【化７】
2019527694.tif 000008
【００８５】
【化８】
2019527694.tif 000009
【００８６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有する遊離酸として示される（ＮＡＧ３７）ｓに連結したＡＤ０５０７０からなるか又はこれを含む：
【００８７】
【化９】
2019527694.tif 000010
【００８８】
【化１０】
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【００８９】
【化１１】
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【００９０】
【化１２】
2019527694.tif 000013
【００９１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ３１）ｓに連結したＡＤ０４５８０からなるか又はこれを含む：
【００９２】
【化１３】
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【００９３】
【化１４】
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【００９４】
【化１５】
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【００９５】
【化１６】
2019527694.tif 000017
【００９６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ２５）ｓに連結したＡＤ０４５８５からなるか又はこれを含む：
【００９７】
【化１７】
2019527694.tif 000018
【００９８】
【化１８】
2019527694.tif 000019
【００９９】
【化１９】
2019527694.tif 000020
【０１００】
【化２０】
2019527694.tif 000021
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ３７）ｓに連結したＡＤ０４８７２からなるか又はこれを含む：
【０１０２】
【化２１】
2019527694.tif 000022
【０１０３】
【化２２】
2019527694.tif 000023
【０１０４】
【化２３】
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【０１０５】
【化２４】
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【０１０６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有するナトリウム塩として示される（ＮＡＧ２５）ｓに連結したＡＤ０４８７２からなるか又はこれを含む：
【０１０７】
【化２５】
2019527694.tif 000026
【０１０８】
【化２６】
2019527694.tif 000027
【０１０９】
【化２７】
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【０１１０】
【化２８】
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【０１１１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下に示す構造を有する遊離酸として示される（ＮＡＧ３７）ｓに連結したＡＤ０４８７２からなるか又はこれを含む：
【０１１２】
【化２９】
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【０１１３】
【化３０】
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【０１１４】
【化３１】
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【０１１５】
【化３２】
2019527694.tif 000033
【０１１６】
いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の（すなわち、第２、第３などの）治療と組み合わせられる。第２の治療は、別のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬であり得る（例えば、ＨＢＶゲノムの別の配列を標的とするＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬）。追加の治療は更に、小分子薬、抗体、抗体フラグメント、及び／又はワクチンであり得る。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１つ又は複数の追加の治療を伴っても伴わなくても、１つ又は複数の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を形成することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の治療と組み合わせられ、この追加の治療はヌクレオシド阻害剤又はヌクレオチド阻害剤である。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の治療と組み合わせられ、この追加の治療はエンテカビル、テノホビル、テノホビルアラフェナミド、テノホビルジソプロキシル、ラミブジン、又はその他の抗ウイルス治療である。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の治療と組み合わせられ、この追加の治療はインターフェロンである。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の治療と組み合わせられ、この追加の治療はインターフェロンαである。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加のＨＢＶ治療と組み合わせられ、この追加の治療はＨＢＶワクチンである。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は所望により、１つ又は複数の追加の治療と、単一の用量形態に組み合わせられる（すなわち、単回注射に含まれるカクテル）。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は、１つ又は複数の所望による追加の治療とは別個に投与され得る。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は、皮下注射経由で、これらを必要としている対象に投与され、かつ、１つ又は複数の所望による追加の治療は経口投与され、これらは合わせて、ＨＢＶ感染に関連する疾患及び状態のための治療レジメンを提供する。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）は、皮下注射経由で、これらを必要としている対象に投与され、かつ、１つ又は複数の所望による追加の治療は、別の皮下注射経由で投与される。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるのは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬をｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞に送達するための組成物であって、この組成物は、標的化基にコンジュゲート又は連結されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む。いくつかの実施形態において、この標的化基はアシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬をｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞に送達するための組成物が記述され、この組成物は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドに連結されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の１つ又は複数が、製薬的に許容される担体又は希釈剤中で哺乳類に投与される。いくつかの実施形態において、この哺乳類はヒトである。
【０１２１】
Ｂ型肝炎ウイルスＲＮＡｉ薬（複数可）の使用は、ＨＢＶ感染に関連する疾患／障害の治療的処置及び／又は予防的処置のための方法を提供する。記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＲＮＡ干渉を媒介して、Ｂ型肝炎ウイルスの複製及び／又は病原に必要な１つ又は複数の遺伝子の発現を阻害する。特に、例えば、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、細胞、組織、又は哺乳類における、ウイルスポリメラーゼ、コアタンパク質、表面抗原、ｅ抗原、及び／又はＸタンパク質を阻害し得る。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ感染の治療に使用することができる。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は更に、ＨＢＶ感染に関連する慢性肝疾患／障害、炎症、線維化状態、及び増殖性疾患（癌など）の治療又は予防に使用することができる。いくつかの実施形態において、この方法は更に、対象におけるＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）の治療を含む。そのような方法は、ＨＢＶに感染しているヒト又は動物に対して、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することを含む。更に、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を肝細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで送達するための組成物が記述される。
【０１２２】
１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む医薬組成物は、局所的又は全身的治療が望ましいかどうかに応じて、数多くの方法で投与することができる。投与は、静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、真皮下投与（例えば、インプラントされたデバイスを介して）、及び実質内投与であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射によって投与される。
【０１２３】
記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬及び／又は組成物は、ＨＢＶ感染の治療処置、又は、ＨＢＶ感染に起因する疾患若しくは状態の治療処置のための方法に使用することができる。このような方法には、本明細書に記載のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を、対象（例えばヒト又は動物の対象）に投与することが挙げられる。
【０１２４】
本明細書で使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味し、このそれぞれが独立に修飾又は非修飾であり得る。
【０１２５】
本明細書で使用されるとき、「ＲＮＡｉ薬」又は「ＲＮＡｉトリガ」は、配列特異的な方法で標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のｍＲＮＡ転写物の翻訳を遅延又は阻害することができる、ＲＮＡ又はＲＮＡ様（例えば、化学修飾ＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。本明細書で使用されるとき、ＲＮＡｉ薬は、ＲＮＡ干渉メカニズム（すなわち、哺乳類細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体、ＲＩＳＣ）との相互作用によりＲＮＡ干渉を引き起こす）を介して、あるいは任意の代替的なメカニズム（複数可）又は経路（複数可）によって、作用し得る。ＲＮＡｉ薬という語は、本明細書で使用されるとき、主にＲＮＡ干渉メカニズムを介して作用すると考えられるが、本開示のＲＮＡｉ薬は、いかなる特定の経路又は作用メカニズムにも拘束されるものではなく、またこれらに制限されるものではない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ薬はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、これには、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びダイサー基質が挙げられるがこれらに制限されない。本明細書に記載のＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、標的となるｍＲＮＡに少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ薬は、修飾ヌクレオチド及び／又は１つ若しくは複数の非ホスホジエステル結合を含み得る。
【０１２６】
本明細書で使用されるとき、所与の遺伝子の発現に関する用語「サイレンス」、「低減」、「阻害」、「ダウンレギュレーション」又は「ノックダウン」とは、その遺伝子の発現が、遺伝子から転写されたＲＮＡのレベル、あるいは、その遺伝子が転写される細胞、細胞群、組織、臓器、又は対象において、ｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチド、タンパク質又はタンパク質サブユニットのレベルによって測定される際、その細胞、細胞群、組織、臓器、又は対象が、本明細書に記載されるＲＮＡｉ薬などのオリゴマー化合物で治療されたときに、そのように治療されていない第２の細胞、細胞群、組織、臓器、又は対象に比べて、低減されていることを意味する。
【０１２７】
本明細書で使用されるとき、用語「配列」又は「ヌクレオチド配列」は、核酸塩基又はヌクレオチドの連続又は順序を意味し、標準命名法を用いて文字の連続で記述される。
【０１２８】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオチド塩基」又は「核酸塩基」は、複素環式ピリミジン又はプリン化合物であり、これは全ての核酸の標準構成要素であり、ヌクレオチド（アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ））を形成する塩基を含む。核酸塩基は更に修飾されてよく、これには、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基（promiscuous base）、サイズ拡大塩基、及びフッ素化塩基が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２９】
本明細書で使用されるとき、別途記載のない限り、用語「相補的」とは、第１のヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖又は標的ｍＲＮＡ）について第２のヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖又は単鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）との関連で記述するのに使用されるとき、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドと、特定の条件下において、ハイブリダイズ（哺乳類生理学的条件下（又は類似のｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下）において塩基対水素結合を形成）して、デュプレックス又は二重らせん構造を形成できることを意味する。相補的配列には、ワトソンクリック塩基対又は非ワトソンクリック塩基対が含まれ、また、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が充足される限りにおいて、天然ヌクレオチド若しくは修飾ヌクレオチド又はヌクレオチド模倣体が含まれる。配列同一性又は相補性は、修飾に依存しない。例えば、ａ及びＡｆはＵ（又はＴ）に対して相補的であり、同一性又は相補性を判定する目的ではＡと同一である。
【０１３０】
本明細書で使用されるとき、「完璧に相補的」又は「完全に相補的」とは、第１のポリヌクレオチドの連続配列中の塩基の全て（１００％）が、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同じ数の塩基にハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第１又は第２のヌクレオチド配列の全部又は一部を含み得る。
【０１３１】
本明細書で使用されるとき、「部分的に相補的」とは、ハイブリダイズした核酸塩基配列の対において、第１のポリヌクレオチドの連続配列中の塩基の、全てではないが少なくとも７０％が、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同じ数の塩基にハイブリダイズすることを意味する。
【０１３２】
本明細書で使用されるとき、「実質的に相補的」とは、ハイブリダイズした核酸塩基配列の対において、第１のポリヌクレオチドの連続配列中の塩基の、全てではないが少なくとも約８５％が、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同じ数の塩基にハイブリダイズすることを意味する。用語「相補的」、「完全に相補的」、及び「実質的に相補的」は、本明細書において、二本鎖ＲＮＡｉ薬のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖と標的ｍＲＮＡの配列との間、又は、単鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的ｍＲＮＡの配列との間でマッチする塩基に関して使用され得る。
【０１３３】
本明細書で使用されるとき、用語「実質的に同一」又は「実質的に同一性」は、核酸配列に適用される際、核酸配列が、参照配列と比較して、少なくとも約８５％以上、好ましくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むことを意味する。配列同一性の百分率は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に揃えられた配列を比較することによって決定される。この百分率は、同じ核酸塩基が両方の配列に生じる位置の数を求めることにより、一致した位置の数を得て、一致した位置の数をウィンドウ内の位置の総数で割り、その結果に１００を掛けて配列同一性の割合（％）を得ることによって計算される。本明細書に開示される発明は、例えば表２、３、及び４において本明細書に開示されるヌクレオチド配列と実質的に同一なヌクレオチド配列を包含する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される配列は、例えば表１、２、３及び４において本明細書に開示される配列と、正確に同一であるか、又は少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である。
【０１３４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」、及び同様の語は、対象における疾患又は状態の１つ又は複数の症状の回数、重篤度、及び／又は頻度の軽減又は緩和を提供するために行われる方法又は工程を意味する。
【０１３５】
本明細書で使用されるとき、オリゴマー化合物に関して「細胞に導入する」という語句は、このオリゴマー化合物を細胞内に機能的に送達することを意味する。「機能的に送達」という語句は、オリゴマー化合物が期待される生物学的活性（遺伝子発現の配列特異的阻害）を有することを可能にする手段で、細胞内にそのオリゴマー化合物を送達することを意味する。
【０１３６】
別途記載のない限り、記号
【０１３７】
【化３３】
2019527694.tif 000034
の使用は、本明細書で使用されるとき、本明細書に記載される本発明の範囲に従ってそこに連結され得る任意の基（複数可）を意味する。
【０１３８】
本明細書で使用されるとき、用語「異性体」は、同一の分子式を有するが、それらの原子の結合の性質又は配列が異なるか、又は空間における原子の配置が異なる、化合物を意味する。空間におけるその原子の配置において異なる異性体を、「立体異性体」と呼ぶ。互いの鏡像ではない立体異性体を、「ジアステレオマー」と呼び、重ね合わせられない鏡像である立体異性体を、「エナンチオマー」又は時に光学異性体と呼ぶ。４つの非同一置換基に結合した炭素原子は、「キラル中心」と呼ばれる。
【０１３９】
本明細書で使用されるとき、特定のコンフォメーションを有するものとして構造中で特定されている場合を除き、非対称中心が存在し、よってエナンチオマー、ジアステレオマー、又はその他の立体異性配置が生じるような各構造について、本明細書に開示される各構造は、そのような可能な異性体全てを表わすことが意図され、これにはその光学的に純粋な形態及びラセミ体が含まれる。例えば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物、並びに単独の立体異性体を包含することが意図される。
【０１４０】
本出願の請求項に使用されるとき、「からなる」という語句は、請求項に特定されていない要素、工程、又は成分を除外する。本出願の請求項に使用されるとき、「から本質的になる」という語句は、特定される材料又は工程、並びに、請求される特許の基本的かつ新しい特徴（複数可）に実質的に影響しないものに、特許請求の範囲を制限する。
【０１４１】
本明細書に開示される化合物及び組成物は、その化合物又は組成物が置かれている環境に応じて、特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、又はＳ原子）をプロトン化状態又は脱プロトン化状態で有し得ることが、当業者には容易に理解され評価されるであろう。したがって、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示される構造は、特定の官能基（例えば、ＯＨ、ＳＨ、又はＮＨ）がプロトン化又は脱プロトン化し得ることが想定される。本明細書の開示は、当業者には容易に理解され得るように、環境（例えばｐＨ）に基づくプロトン化の状態にかかわらず、開示された化合物及び組成物を包含することが意図される。
【０１４２】
特に定義されない限り、本明細書で用いる技術的及び科学的な用語は全て、当業者によって共通に解釈されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様又は同等の方法及び材料を本発明を実施又は試験するために使用することが可能であるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書において言及される出版物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は全て、その全体が参照により組み込まれるものとする。矛盾がある場合には、定義を含め、本明細書が適用される。加えて、材料、方法、及び実施例は、単に例示的なものであり、限定することを意図するものではない。
【０１４３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の「発明を実施するための形態」、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
本明細書に記述されるのは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ薬である（本明細書においてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬又はＨＢＶ  ＲＮＡｉトリガと呼ばれる）。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖とアンチセンス鎖はそれぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、１７〜２６ヌクレオチド長であり得る。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さ又は異なる長さのいずれでもあり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立に１７〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立に１７〜２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、それぞれ２１〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は約１９ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は約２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は約２１ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は約２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、それぞれ２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立に１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ薬は、約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４ヌクレオチドのデュプレックス長を有する。センス鎖とアンチセンス鎖との間の、完全又は実質的に相補性の領域は、典型的に１５〜２５（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５）ヌクレオチド長であり、これは、アンチセンス鎖の５’末端位置又はその近くに生じる（例えば、この領域は、アンチセンス鎖の５’末端から、完全又は実質的に相補的でない０、１、２、３、又は４個のヌクレオチドによって隔てられていてよい）。
【０１４５】
センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、核酸塩基１６〜２３個の長さであるコアストレッチ配列を含む。アンチセンス鎖コアストレッチ配列は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡ標的に存在するヌクレオチド配列（時に例えば、標的配列と呼ばれる）に対して、１００％（完全に）相補的又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列に対して１００％（完全に）相補的又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、よって、センス鎖コアストレッチ配列は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡ標的に存在するヌクレオチド配列（標的配列）に対して、完全に同一又は少なくとも約８５％同一である。センス鎖コアストレッチ配列は、対応するアンチセンスコア配列と同じ長さであってよく、又は異なる長さであってもよい。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチド長である。
【０１４６】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を形成するのに使用されるセンス鎖及びアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の実施例が、表３及び４に提供される。表３及び４のヌクレオチド配列を含むＲＮＡｉ薬デュプレックスの実施例が、表５に提供される。
【０１４７】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖がアニーリングしてデュプレックスを形成する。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖とアンチセンス鎖とは、部分的に、実質的に、又は完全に、互いに対して相補的であり得る。相補的デュプレックス領域において、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンスコアストレッチ配列に対して、少なくとも約８５％相補的、又は１００％相補的である。いくつかの実施形態において、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、又は２１個のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約８５％又は１００％相補的な、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、又は少なくとも２１個のヌクレオチドの配列を含む（すなわち、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンスコアストレッチ配列は、少なくとも８５％の塩基が対になった、又は１００％の塩基が対になった、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、又は少なくとも２１個のヌクレオチド領域を有する）。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表２又は表３のいずれかのアンチセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表２又は表４のいずれかのセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。
【０１４９】
本明細書に記載されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖の長さは、独立に１６〜３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立に１７〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は１９〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、記載されるＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖は独立に１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６ヌクレオチド長である。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さ又は異なる長さのいずれでもあり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は２３ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は２２ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は２１ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖は１９ヌクレオチド長、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。
【０１５０】
センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、任意にかつ独立に、コア配列の３’末端、５’末端、又は３’末端と５’末端の両方に、追加の１、２、３、４、５、又は６個のヌクレオチド（延長部）を含み得る。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドがある場合は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡの対応する配列に対して相補的であってもよく、また相補的でなくてもよい。センス鎖の追加のヌクレオチドがある場合は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡの対応する配列に対して同一であってもよく、また同一でなくてもよい。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドがある場合は、対応するセンス鎖の追加のヌクレオチドがある場合、これに対して相補的であってもよく、また相補的でなくてもよい。
【０１５１】
本明細書で使用されるとき、延長部は、センス鎖コアストレッチ配列及び／又はアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５’及び／又は３’末端に、１、２、３、４、５、又は６個のヌクレオチドを含む。センス鎖の延長部ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖のヌクレオチド（コアストレッチ配列ヌクレオチド、又は延長部ヌクレオチドのいずれか）に対して、相補的であってもよく、また相補的でなくてもよい。逆に、アンチセンス鎖の延長部ヌクレオチドは、対応するセンス鎖のヌクレオチド（コアストレッチ配列ヌクレオチド、又は延長部ヌクレオチドのいずれか）に対して、相補的であってもよく、また相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、３’及び５’延長部を含む。いくつかの実施形態において、一方の鎖の１つ又は複数の３’延長部ヌクレオチドは、他方の鎖の１つ又は複数の５’延長部ヌクレオチドと、塩基対となる。他の実施形態において、一方の鎖の１つ又は複数の３’延長部ヌクレオチドは、他方の鎖の１つ又は複数の５’延長部ヌクレオチドと、塩基対とはならない。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、３’延長部を有するアンチセンス鎖と、５’延長部を有するセンス鎖とを有する。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１、２、３、４、５、又は６ヌクレオチド長の３’延長部を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１、２、又は３ヌクレオチド長の３’延長部を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のアンチセンス鎖延長部ヌクレオチドは、ウラシル又はチミジンヌクレオチド、又は、対応するＨＢＶ  ｍＲＮＡ配列に対して相補的なヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、３’アンチセンス鎖延長部は、ＡＵＡ、ＵＧＣＵＵ、ＣＵＧ、ＵＧ、ＵＧＣＣ、ＣＵＧＣＣ、ＣＧＵ、ＣＵＵ、ＵＧＣＣＵＡ、ＣＵＧＣＣＵ、ＵＧＣＣＵ、ＵＧＡＵＵ、ＧＣＣＵＡＵ、Ｔ、ＴＴ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５’→３’で記載）を含むか又はこれらからなるが、これらに限定されない。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端は、追加の塩基脱落ヌクレオシド（Ａｂ）を含み得る。いくつかの実施形態において、Ａｂ又はＡｂＡｂが、アンチセンス鎖の３’末端に追加され得る。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１、２、３、４、又は５ヌクレオチド長の５’延長部を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１又は２ヌクレオチド長の５’延長部を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のアンチセンス鎖延長部ヌクレオチドは、対応するＨＢＶ  ｍＲＮＡ配列に対して相補的なウラシル又はチミジンヌクレオチド又はヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、５’アンチセンス鎖延長部は、ＵＡ、ＴＵ、Ｕ、Ｔ、ＵＵ、ＴＴ、ＣＵＣ（それぞれ５’→３’で記載）を含むか又はこれらからなるが、これらに限定されない。アンチセンス鎖は、記述される５’アンチセンス鎖延長部（存在する場合）と組み合わせて、上述の３’延長部のいずれかの者を有し得る。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１、２、３、４、又は５ヌクレオチド長の３’延長部を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のセンス鎖延長部ヌクレオチドは、アデノシン、ウラシル、又はチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、又はＨＢＶ  ｍＲＮＡ配列のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、３’センス鎖延長部は、Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、又はＴＴＴＴ（それぞれ５’→３’で記載）を含むか又はこれらからなるが、これらに限定されない。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、センス鎖の３’末端は、追加の塩基脱落ヌクレオシドを含み得る。いくつかの実施形態において、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、又はＡｂが、センス鎖の３’末端に追加され得る。いくつかの実施形態において、センス鎖の３’末端に追加された１つ又は複数の塩基脱落ヌクレオシドが、逆向きになり得る（ｉｎｖＡｂ）。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の逆向き塩基脱落ヌクレオシドが、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の逆向き塩基脱落ヌクレオシドを、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の末端（複数可）位置又はその近くに含めることによって、ＲＮＡｉ薬の活性強化又は他の望ましい特性が可能になり得る。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１、２、３、４、５，又は６ヌクレオチド長の５’延長部を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のセンス鎖延長部ヌクレオチドは、ウラシル又はアデノシンヌクレオチド、又はＨＢＶ  ｍＲＮＡ配列のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、センス鎖５’延長部は、ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５’→３’で記載）であり得るが、これらに限定されない。センス鎖は、３’延長部及び／又は５’延長部を有し得る。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、センス鎖の５’末端は、追加の塩基脱落ヌクレオシド（Ａｂ）又は複数の塩基脱落ヌクレオシド（ＡｂＡｂ）を含み得る。いくつかの実施形態において、センス鎖の５’末端に追加された１つ又は複数の塩基脱落ヌクレオシドが、逆向きになり得る（ｉｎｖＡｂ）。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の逆向き塩基脱落ヌクレオシドが、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の逆向き塩基脱落ヌクレオシドを、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の末端（複数可）位置又はその近くに含めることによって、ＲＮＡｉ薬の活性強化又は他の望ましい特性が可能になり得る。
【０１５９】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を形成するのに使用されるヌクレオチド配列の実施例が、表３及び４に提供される。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３の配列のいずれかの１−１７、２−１５、２−１７、１−１８、２−１８、１−１９、２−１９、１−２０、２−２０、１−２１、２−２１、１−２２、２−２２、１−２３、２−２３、１−２４、２−２４、１−２５、２−２５、１−２６、又は２−２６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表４の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表４の配列のいずれかの１−１８、１−１９、１−２０、１−２１、１−２２、１−２３、１−２４、１−２５、１−２６、２−１９、２−２０、２−２１、２−２２、２−２３、２−２４、２−２５、２−２６、３−２０、３−２１、３−２２、３−２３、３−２４、３−２５、３−２６、４−２１、４−２２、４−２３、４−２４、４−２５、４−２６、５−２２、５−２３、５−２４、５−２５、５−２６、６−２３、６−２４、６−２５、６−２６、７−２４、７−２５、７−２５、８−２５、８−２６のヌクレオチド配列を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、同じヌクレオチド数を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、異なるヌクレオチド数を含む。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の５’末端及びアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬の両端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のいずれの末端も平滑末端ではない。本明細書で使用されるとき、平滑末端とは、ＲＮＡｉ薬の二本鎖の端で、２本のアニーリングされた鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補的塩基対を形成している）ことを意味する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の５’末端及びアンチセンス鎖の３’末端は、フレイド末端（frayed end）を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の５’末端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬の両端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬のいずれの端も、フレイド末端ではない。本明細書で使用されるとき、フレイド末端とは、ＲＮＡｉ薬の二本鎖の端で、２本のアニーリングされた鎖の末端ヌクレオチドが対を形成する（すなわちオーバーハングを形成しない）が、相補的ではない（すなわち、非相補的対を形成する）ことを意味する。本明細書で使用されるとき、オーバーハングとは、二本鎖ＲＮＡｉ薬の一方の鎖の末端にある、１つ又は複数の非対ヌクレオチドのストレッチである。非対ヌクレオチドは、センス鎖上又はアンチセンス鎖上にあってよく、３’又は５’オーバーハングのいずれかを形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬は、平滑末端及びフレイド末端、平滑末端及び５’オーバーハング末端、平滑末端及び３’オーバーハング末端、フレイド末端及び５’オーバーハング末端、フレイド末端及びａ３’オーバーハング末端、２つの５’オーバーハング末端、２つの３’オーバーハング末端、５’オーバーハング末端及び３’オーバーハング末端、２つのフレイド末端、又は２つの平滑末端を含む。
【０１６１】
ヌクレオチド塩基（核酸塩基）は、複素環式ピリミジン又はプリン化合物であり、これは全ての核酸の構成要素であり、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ）を含む。本明細書で使用されるとき、用語「ヌクレオチド」は、修飾ヌクレオチド（例えば、ヌクレオチド模倣体、塩基脱落部位（Ａｂ）、又は代理置換部分）を含み得る。修飾ヌクレオチドは、様々なポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド構造体に使用されるとき、化合物の血清安定性を高めると同時に、細胞中でその化合物の活性を維持することができ、更に、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド構造体の投与時に、ヒト体内でのインターフェロン活性を活性化する可能性を最小限に抑えることができる。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、塩、混合塩、又は遊離酸として調製又は提供される。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬はナトリウム塩として調製される。このような形態は、本明細書で開示される本発明の範囲内である。
【０１６３】
修飾ヌクレオチド
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）のヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用されるとき、修飾ヌクレオチドには、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、塩基脱落ヌクレオチド（本明細書においてＡｂと表わされる）、２’−修飾ヌクレオチド、３’−３’連結（逆向き）ヌクレオチド（本明細書においてｉｎｖｄＮ、ｉｎｖＮ、ｉｎｖｎ、ｉｎｖＡｂと表わされる）、非天然塩基含有ヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックト核酸塩基類似体、本明細書においてＮＵＮＡ又はＮＵＮＡと表わされる）、ロックトヌクレオチド（本明細書においてＮＬＮＡ又はＮＬＮＡと表わされる）、３’−Ｏ−メトキシ（２’ヌクレオシド間連結）ヌクレオチド（本明細書において３’−ＯＭｅｎと表わされる）、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド（本明細書においてＮｆＡＮＡ又はＮｆＡＮＡと表わされる）、５’−Ｍｅ、２’−フルオロヌクレオチド（本明細書において５Ｍｅ−Ｎｆと表わされる）、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド（本明細書においてｖｐｄＮと表わされる）、ビニルホスホネート含有ヌクレオチド、及びシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）が挙げられるがこれらに限定されない。２’−修飾ヌクレオチド（すなわち、糖五員環の２’位置にヒドロキシル基以外の基があるヌクレオチド）には、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド（本明細書においてヌクレオチド配列中で小文字の「ｎ」と表わされる）、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド（本明細書においてＮｆ、また２’−フルオロヌクレオチドと表わされる）、２’−デオキシヌクレオチド（本明細書においてｄＮと表わされる）、２’−メトキシエチル（２’−Ｏ−２−メトキシルエチル）ヌクレオチド（本明細書においてＮＭ又は２’−ＭＯＥと表わされる）、２’−アミノヌクレオチド、及び２’−アルキルヌクレオチドが挙げられるがこれらに限定されない。所与の化合物中の全ての位置を均一に修飾する必要はない。逆に、複数の修飾を、単一のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は更にはその単一のヌクレオチド中に組み込むことができる。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、当該技術分野で周知の方法により、合成及び／又は修飾することができる。あるヌクレオチドでの修飾は、別のヌクレオチドでの修飾とは無関係である。
【０１６４】
修飾核酸塩基には、合成及び天然のヌクレオ塩基が含まれ、これには、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン、（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、又は５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−アルキル（例えば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、又は６−ｎ−ブチル）誘導体、アデニン及びグアニンの２−アルキル（例えば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、又は２−ｎ−ブチル）及びその他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ（例えば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、及び他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、及び３−デアザアデニンが挙げられる。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用されるとき、実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるＲＮＡｉ薬は、リボヌクレオチドとなるセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方において、４個以下の（すなわち、０、１、２、３、又は４個の）ヌクレオチドを有するＲＮＡｉ薬である。本明細書で使用されるとき、実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるセンス鎖は、リボヌクレオチドとなるセンス鎖において、２つ以下の（すなわち、０、１、又は２個の）修飾ヌクレオチドを有するセンス鎖である。本明細書で使用されるとき、実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖は、リボヌクレオチドとなるセンス鎖において、２つ以下の（すなわち、０、１、又は２個の）修飾ヌクレオチドを有するアンチセンス鎖である。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬の１つ又は複数のヌクレオチドがリボヌクレオチドである。
【０１６６】
修飾ヌクレオシド間連結
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の１つ又は複数のヌクレオチドは、非標準的な連結又は骨格鎖により連結している（すなわち、修飾ヌクレオシド間連結又は修飾骨格鎖）。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間連結は、リン酸塩非含有の共有結合ヌクレオシド間連結である。修飾ヌクレオシド間連結又は骨格鎖には、５’−ホスホロチオエート基（本明細書において小文字の「ｓ」と表わされる）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、アルキルホスホネート（例えば、メチルホスホネート又は３’−アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホロアミダート（例えば、３’−アミノホスホロアミダート、アミノアルキルホスホロアミダート、又はチオノホスホロアミダート）、チオノアルキル−ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ連結、通常の３’−５’連結を有するボラノホスフェート、ボラノホスフェートの２’−５’連結類似体、又は逆向きの極性を有するボラノホスフェート（隣接するヌクレオシド対単位が、３’−５’対５’−３’、又は２’−５’対５’−２’）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間連結又は骨格鎖は、リン原子を有さない。リン原子を有さない修飾ヌクレオシド間連結には、短鎖アルキル又はシクロアルキル糖間連結、混合ヘテロ原子及びアルキル又はシクロアルキル糖間連結、あるいは、１つ又は複数の短鎖ヘテロ原子又は複素環式糖間連結が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間骨格鎖には、シロキサン骨格鎖、スルフィド骨格鎖、スルホキシド骨格鎖、スルホン骨格鎖、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格鎖、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格鎖、アルケン含有骨格鎖、スルファメート骨格鎖、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格鎖、スルホネート及びスルホンアミド骨格鎖、アミド骨格鎖、及びＮ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２成分を有するその他の骨格鎖が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエート連結を含み得、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエート連結を含み得、又は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が独立に１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエート連結を含み得る。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、１、２、３、又は４個のホスホロチオエート連結を含み得、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は１、２、３、又は４個のホスホロチオエート連結を含み得、又は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が独立に１、２、３、又は４個のホスホロチオエート連結を含み得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の３’末端から位置１〜３のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態において少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の５’末端から位置１〜３、２〜４、３〜５、４〜６、４〜５、又は６〜８のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態において、この４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の５’末端から位置１〜３のヌクレオチド間、及び、５’末端から位置１９〜２１、２０〜２２、２１〜２３、２２〜２４、２３〜２５、又は２４〜２６のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、センス鎖に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結と、アンチセンス鎖に３つ又は４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結とを含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１つ又は複数の修飾ヌクレオチド、及び１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、修飾ヌクレオシド間連結と組み合わせられる。
【０１７０】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、下記の表１に示すＨＢＶゲノムの位置にある又はその近くにあるＨＢＶ遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＨＢＶ  １９−ｍｅｒ配列に対して完全に、実質的に、又は少なくとも部分的に相補的なコアストレッチ配列を含む。
【０１７１】
【表１】
2019527694.tif 000035
【０１７２】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、アンチセンス鎖（５’→３’）の位置１９が、表１に開示される１９−ｍｅｒ標的配列の位置１と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、アンチセンス鎖（５’→３’）の位置１が、表１に開示される１９−ｍｅｒ標的配列の位置１９と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、アンチセンス鎖（５’→３’）の位置２が、表１に開示される１９−ｍｅｒ標的配列の位置１８と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、アンチセンス鎖（５’→３’）の位置２〜１８が、表１に開示される１９−ｍｅｒ標的配列の位置１８〜２に位置する各相補的塩基それぞれと塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、以下の表２に示すコア１９−ｍｅｒヌクレオチド配列を含む。
【０１７５】
【表２】
2019527694.tif 000036
【０１７６】
表２のヌクレオチド配列を含むか又はこれらからなるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、修飾ヌクレオチド又は非修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態において、表２のヌクレオチド配列を含むか又はこれらからなるセンス鎖配列及びアンチセンス鎖配列を有するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、全て又は実質的に全て修飾ヌクレオチドである。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表２のいずれかのアンチセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表２のいずれかのセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。
【０１７８】
修飾ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬アンチセンス鎖配列、並びにその基盤となる非修飾配列が、表３に提供される。修飾ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖、並びにその基盤となる非修飾配列が、表４に提供される。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の形成において、表３及び４に列記されている非修飾配列のそれぞれにおける各ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドであり得る。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき（表３及び４を含む）、修飾ヌクレオチド、標的化基、及び連結基を示すのに、下記の命名法が使用される。当業者には容易に理解され得るように、配列により別途記載のない限り、オリゴヌクレオチド中に存在するとき、モノマーは５’−３’−ホスホジエステル結合により相互に連結される。
Ａ＝アデノシン−３’−ホスフェート
Ｃ＝シチジン−３’−ホスフェート
Ｇ＝グアノシン−３’−ホスフェート
Ｕ＝ウリジン−３’−ホスフェート
ｎ＝任意の２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオチド
ａ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスフェート
ａｓ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｃ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスフェート
ｃｓ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｇ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスフェート
ｇｓ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｔ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−ホスフェート
ｔｓ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｕ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスフェート
ｕｓ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
Ｎｆ＝任意の２’−フルオロ修飾ヌクレオチド
Ａｆ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスフェート
Ａｆｓ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｃｆ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスフェート
Ｃｆｓ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスホロチオエート
Ｇｆ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスフェート
Ｇｆｓ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｔｆ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスフェート
Ｔｆｓ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
Ｕｆ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスフェート
Ｕｆｓ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＮ＝任意の２’−デオキシリボヌクレオチド
ｄＴ＝２’−デオキシチミジン−３’−ホスフェート
ＮＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックト核酸塩基類似体）
ＮＬＮＡ＝ロックトヌクレオチド
ＮｆＡＮＡ＝２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド
ＮＭ＝２’−メトキシエチルヌクレオチド
ＡＭ＝２’−メトキシエチルアデノシン−３’−ホスフェート
ＡＭｓ＝２’−メトキシエチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ＴＭ＝２’−メトキシエチルチミジン−３’−ホスフェート
ＴＭｓ＝２’−メトキシエチルチミジン−３’−ホスホロチオエート
Ｒ＝リビトール
（ｉｎｖｄＮ）＝任意の逆向きデオキシリボヌクレオチド（３’−３’連結ヌクレオチド）
（ｉｎｖＡｂ）＝逆向き（３’−３’連結）塩基脱落デオキシリボヌクレオチド、表６参照
（ｉｎｖＡｂ）ｓ＝逆向き（３’−３’連結）塩基脱落デオキシリボヌクレオチド−５’−ホスホロチオエート、表６参照
（ｉｎｖｎ）＝任意の逆向き２’−ＯＭｅヌクレオチド（３’−３’連結ヌクレオチド）
ｓ＝ホスホロチオエート連結
ｖｐｄＮ＝ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド
（５Ｍｅ−Ｎｆ）＝５’−Ｍｅ、２’−フルオロヌクレオチド
ｃＰｒｐ＝シクロプロピルホスホネート、表６参照
ｅｐＴｃＰｒ＝表６参照
ｅｐＴＭ＝表６参照
【０１８０】
当業者には、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端にある末端ヌクレオチドは典型的に、ｅｘ  ｖｉｖｏでホスフェート部分の代わりに、所与のモノマーのそれぞれの３’位置に、ヒドロキシル（−ＯＨ）基を有することが容易に理解されよう。よって例えば、上記ＡＤ０５０７０の構造表示に示されているように、ＡＭ０６６０６−ＡＳのアンチセンス鎖の３’末端にある「ｇ」修飾ヌクレオチドは、３’位置にあるヒドロキシル基を有する。本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、及びＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の組成物の記述には、本明細書で別途記載のない限り、当業者によるそのような理解が使用される。
【０１８１】
標的化基及び連結基には、（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓが挙げられ、これらの化学構造は表６に提供される。各センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、上記の任意の標的化基又は連結基、並びに他の標的化基又は連結基を有し得、これらは配列の５’及び／又は３’末端にコンジュゲートされる。
【０１８２】
【表３−１】
2019527694.tif 000037
【０１８３】
【表３−２】
2019527694.tif 000038
【０１８４】
【表３−３】
2019527694.tif 000039
【０１８５】
【表４−１】
2019527694.tif 000040
【０１８６】
【表４−２】
2019527694.tif 000041
【０１８７】
【表４−３】
2019527694.tif 000042
【０１８８】
本明細書に記載のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、センス鎖でアンチセンス鎖をアニーリングすることによって形成される。表４に記載される配列を含むセンス鎖は、表３に記載される配列を含む任意のアンチセンス鎖に対し、この２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、又は２１個のヌクレオチド配列にわたって少なくとも約８５％の相補性の領域を有する限りにおいて、ハイブリダイズさせることができる。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３のいずれかのアンチセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表４のいずれかのセンス鎖配列から、０、１、２、又は３個のヌクレオチドが異なる。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３の配列のいずれかの１−１７、２−１７、１−１８、２−１８、１−１９、２−１９、１−２０、２−２０、１−２１、２−２１、１−２２、２−２２、１−２３、２−２３、１−２４、２−２４、１−２５、２−２５、１−２６、又は２−２６（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表４の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖は、表４の配列のいずれかの１−１７、２−１７、３−１７、４−１７、１−１８、２−１８、３−１８、４−１８、１−１９、２−１９、３−１９、４−１９、１−２０、２−２０、３−２０、４−２０、１−２１、２−２１、３−２１、４−２１、１−２２、２−２２、３−２２、４−２２、１−２３、２−２３、３−２３、４−２３、１−２４、２−２４、３−２４、４−２４、１−２５、２−２５、３−２５、４−２５、１−２６、２−２６、３−２６、又は４−２６（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含む。
【０１９２】
本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬について、アンチセンス鎖の位置１（５’末端→３’末端）のヌクレオチドは、ＨＢＶ遺伝子に対して完全に相補的であってもよいし、ＨＢＶ遺伝子に対して非相補的であってもよい。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の位置１（５’末端→３’末端）のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、又はｄＴである。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の位置１（５’末端→３’末端）のヌクレオチドは、センス鎖と、Ａ：Ｕ又はＵ：Ａ塩基対を形成する。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のアンチセンス鎖は、表３のいずれかのアンチセンス鎖配列の、２−１８又は２−１９（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉのセンス鎖は、表４のセンス鎖配列のいずれかの、１−１７又は１−１８（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、（ｉ）表３のいずれかのアンチセンス鎖配列の、２−１８又は２−１９（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、（ｉｉ）表４のセンス鎖配列のいずれかの、１−１７又は１−１８（５’末端→３’末端）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖とを含む。
【０１９５】
表４に記載される配列を含むセンス鎖は、表３に記載される配列を含む任意のアンチセンス鎖に対し、この２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、又は２１個のヌクレオチド配列にわたって少なくとも約８５％の相補性の領域を有する限りにおいて、ハイブリダイズさせることができる。代表的な配列対が、表５に示すデュプレックスＩＤ番号に例示されている。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すデュプレックスＩＤ番号の任意のものを含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すいずれかのデュプレックスＩＤ番号からなる。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すいずれかのデュプレックスＩＤ番号のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すいずれかのデュプレックスＩＤ番号のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖ヌクレオチド配列と、標的化基及び／又は連結基（この標的化基及び／又は連結基は、センス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合連結（すなわちコンジュゲート）している）とを含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すいずれかのデュプレックスＩＤ番号のセンス鎖及びアンチセンス鎖の修飾ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、本明細書に示すいずれかのデュプレックスＩＤ番号のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖の修飾ヌクレオチド配列と、標的化基及び／又は連結基（この標的化基及び／又は連結基は、センス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合連結している）とを含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのアンチセンス鎖／センス鎖デュプレックスのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、更に、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基を含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのデュプレックスのいずれかのアンチセンス鎖及び／又はセンス鎖ヌクレオチド配列のヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、更に、（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓからなる群から選択される標的化基を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのデュプレックスのアンチセンス鎖及びセンス鎖ヌクレオチド配列の修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのデュプレックスのいずれかのアンチセンス鎖及び／又はセンス鎖ヌクレオチド配列の修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、更に、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのデュプレックスを含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表５のいずれかのデュプレックスからなる。
【０２０３】
【表５−１】
2019527694.tif 000043
【０２０４】
【表５−２】
2019527694.tif 000044
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、塩、混合塩、又は遊離酸として調製又は提供される。本明細書に記載のＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ遺伝子を発現する細胞に送達されると、ｉｎ  ｖｉｖｏで、１つ又は複数のＨＢＶ遺伝子の発現を阻害又はノックダウンする。
【０２０６】
標的化基、連結基、及び送達ビヒクル
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、１つ又は複数の非ヌクレオチド基にコンジュゲートされており、これには標的化基、連結基、送達ポリマー、又は送達ビヒクルが挙げられるがこれらに限定されない。この非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ薬の標的化、送達又は接合を増強することができる。表６には、標的化基及び連結基の例が提供されている。非ヌクレオチド基は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの３’及び／又は５’末端に共有結合連結され得る。いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、センス鎖の３’及び／又は５’末端に連結された非ヌクレオチド基を含む。いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の５’末端に連結される。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基を介して、直接又は間接的にＲＮＡｉ薬に連結され得る。いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、動揺性、分割化能、又は反転可能な結合又はリンカーを介して、ＲＮＡｉ薬に連結される。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ薬又はコンジュゲート（これに非ヌクレオチド基が取り付けられて、細胞特異的若しくは組織特異的な分布と、コンジュゲートの細胞特異的取り込みとを改善する）の薬物動態又は体内分布特性を向上させる。いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ薬のエンドサイトーシスを向上させる。
【０２０８】
標的化基又は標的化部分は、それが取り付けられたコンジュゲートの細胞特異的分布及び細胞特異的取り込みを改善して、コンジュゲートの薬物動態又は体内分布特性を向上させる。標的化基は、一価、二価、三価、四価、又はそれ以上の価数を有し得る。代表的な標的化基には、細胞表面分子に親和性を有する化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、及び細胞表面分子に親和性を有する抗体模倣体が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、標的化基は、リンカー（例えば、ＰＥＧリンカー、又は１つ、２つ、若しくは３つの塩基脱落及び／又はリビトール（塩基脱落リボース）基）を用いて、ＲＮＡｉ薬に連結される。いくつかの実施形態において、標的化基はガラクトース誘導体クラスターを含む。
【０２０９】
本明細書に記載されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、５’末端に反応性基（例えばアミン基）を有するよう合成され得る。この反応性基は、その後、当該技術分野で典型的な方法を使用して、標的化部分を取り付けるのに使用することができる。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、標的化基はアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。いくつかの実施形態において、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つ又は複数のガラクトース誘導体を含むか又はこれらからなる。本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体という用語は、ガラクトースと、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性がガラクトース以上である親和性を有するガラクトース誘導体との、両方を含む。ガラクトース誘導体には、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイル−ガラクトサミン、及びＮ−イソ−ブタノイルガラクトス−アミン（例えば、Ｉｏｂｓｔ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｂ．Ｃ．１９９６、２７１、６６８６を参照）が挙げられるがこれらに限定されない。肝臓に対するオリゴヌクレオチド及び他の分子のｉｎ  ｖｉｖｏ標的化に有用な、ガラクトース誘導体、及びガラクトース誘導体のクラスターは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｔｅ，１９８０，Ｃｅｌｌ，２２，６１１〜６２０；Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７，９３９〜９４５を参照）。ガラクトース誘導体は、肝細胞の表面上に発現されているアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）に対する結合を介して、ｉｎ  ｖｉｖｏで、肝細胞に対し分子を標的化するのに使用されている。ＡＳＧＰｒリガンドがＡＳＧＰｒ（複数可）に結合することによって、肝細胞に対する細胞特異的標的化と、分子の肝細胞へのエンドサイトーシスとが促進される。ＡＳＧＰｒリガンドは、単量体（例えば、単一のガラクトース誘導体を有する）、又は多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）であり得る。ガラクトース誘導体又はガラクトース誘導体クラスターは、当該技術分野で周知の方法を使用して、ＲＮＡｉポリヌクレオチドの３’又は５’末端に取り付けることができる。標的化基（例えばガラクトース誘導体クラスター）の調製は、例えば、米国特許出願第１５／４５２，３２４号及び同第１５／４５２，４２３号に記述されており、これらの両方の内容全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１１】
本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体クラスターは、２〜４つの末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素を介して分子に取り付けられる。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体である（三分枝型ガラクトース誘導体、又は三価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体である（四分枝型ガラクトース誘導体、又は四価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは４つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【０２１２】
本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体三量体は、それぞれ中心分岐点に連結された３つのガラクトース誘導体を含む。本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体四量体は、それぞれ中心分岐点に連結された４つのガラクトース誘導体を含む。ガラクトース誘導体は、糖のＣ−１炭素を介して中心分岐点に取り付けられ得る。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体は、リンカー又はスペーサーを介して分岐点に連結される。いくつかの実施形態において、リンカー又はスペーサーは、例えばＰＥＧ基などの、可撓性の親水性スペーサーである（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号；Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９５  Ｖｏｌ．３９  ｐ．１５３８〜１５４６を参照）。いくつかの実施形態において、ＰＥＧスペーサーはＰＥＧ３スペーサーである。この分岐点は、３つのガラクトース誘導体の取り付けが可能であり、更に、ＲＮＡｉ薬に分岐点を取り付けることが可能であるような、任意の小分子であり得る。分岐点基の例は、ジリジン又はジグルタミン酸塩である。分岐点のＲＮＡｉ薬への取り付けは、リンカー又はスペーサーを介して行うことができる。いくつかの実施形態において、リンカー又はスペーサーは、可撓性の親水性スペーサー（例えばＰＥＧスペーサーが挙げられるがこれらに限定されない）を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、剛性のリンカー（例えば環状基）を含む。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含むか又はこれからなる。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体からなり、これは例えば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得る。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬をｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞に送達するための医薬組成物が記述される。このような医薬組成物には、例えば、ガラクトース誘導体クラスターにコンジュゲートされたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が含まれ得る。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体（これは例えば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体であり得る）、又はガラクトース誘導体四量体（これは例えば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得る）からなる。
【０２１４】
標的化基には、（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７），（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８），（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９），（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０），（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、及び（ＮＡＧ３９）ｓが挙げられるがこれらに限定されない。他の標的化基（ガラクトースクラスター標的化リガンドを含む）は当該技術分野で周知である。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、連結基がＲＮＡｉ薬にコンジュゲートされる。この連結基は、標的化基又は送達ポリマー又は送達ビヒクルに対する薬物の共有結合連結を促進する。連結基は、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖又はアンチセンス鎖の３’又は５’末端に連結することができる。いくつかの実施形態において、連結基はＲＮＡｉ薬のセンス鎖に連結する。いくつかの実施形態において、連結基は、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の５’又は３’末端にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、連結基は、ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされる。連結基の例としては、反応性基（例えば一次アミン及びアルキン）、アルキル基、塩基脱落ヌクレオシド、リビトール（塩基脱落リボース）、及び／又はＰＥＧ基が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２１６】
リンカー又は連結基は、１つ又は複数の共有結合によって、対象の１つの化学基（ＲＮＡｉ薬など）又はセグメントを、対象の別の化学基（例えば標的化基又は送達ポリマー）又はセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。動揺性連結は、動揺性結合を含む。連結は、２つの結合原子間の距離を増大させるスペーサーを任意に含むことができる。スペーサーは、この連結に可撓性及び／又は長さを更に付加することができる。スペーサーには、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、及びアラルキニル基が挙げられ得るがこれらに限定されない。このそれぞれが１つ又は複数のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、及び糖類を含み得る。スペーサー基は当該技術分野で周知であり、上述のリストは本明細書の範囲を制限することを意味するものではない。
【０２１７】
表３及び４に記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のヌクレオチド配列は、修飾か非修飾かを問わず、３’又は５’標的化基及び／又は連結基を含み得る。３’又は５’標的化基及び／又は連結基を含む表３及び４に記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬いずれかの配列のものが、代替的に、３’又は５’標的化基及び／又は連結基を含まなくてもよく、あるいは、表３に示されるものを含むがこれらに限定されない別の３’又は５’標的化基及び／又は連結基を含んでもよい。表５に記載されているいずれかのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬デュプレックスが、修飾か非修飾かを問わず、標的化基及び／又は連結基を更に含んでよく、これには、表３に示されているものが含まれるがこれらに限定されず、更に、この標的化基又は連結基は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬デュプレックスのセンス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの３’又は５’末端に取り付けられ得る。
【０２１８】
表６には、標的化基及び連結基の例が提供されている。表４は、５’又は３’末端に連結される標的化基又は連結基を有するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖の、いくつかの実施形態を提供する。
【０２１９】
【表６−１】
2019527694.tif 000045
【０２２０】
【表６−２】
2019527694.tif 000046
【０２２１】
【表６−３】
2019527694.tif 000047
【０２２２】
【表６−４】
2019527694.tif 000048
【０２２３】
【表６−５】
2019527694.tif 000049
【０２２４】
【表６−６】
2019527694.tif 000050
【０２２５】
【表６−７】
2019527694.tif 000051
【０２２６】
【表６−８】
2019527694.tif 000052
【０２２７】
【表６−９】
2019527694.tif 000053
【０２２８】
【表６−１０】
2019527694.tif 000054
【０２２９】
【表６−１１】
2019527694.tif 000055
【０２３０】
【表６−１２】
2019527694.tif 000056
【０２３１】
【表６−１３】
2019527694.tif 000057
【０２３２】
表６における上記構造の各々において、上記構造及び本明細書に提供される記述の観点で、当業者には理解されるように、ＮＡＧは、取り付けられるＮ−アセチル−ガラクトサミン又は他のＡＳＧＰｒリガンドを含む。例えば、いくつかの実施形態において、表６に提供される構造のＮＡＧは、次の構造で表される：
【０２３３】
【化３４】
2019527694.tif 000058
【０２３４】
各（ＮＡＧｘ）は、ホスフェート基を介して（例えば（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、及び（ＮＡＧ３１）のように）、又はホスホロチオエート基を介して（例えば（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、又は（ＮＡＧ３７）ｓのように）、又は別の連結基を介して、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬に取り付けることができる。
【０２３５】
【化３５】
2019527694.tif 000059
【０２３６】
当該技術分野で周知の他の連結基を用いてもよい。
【０２３７】
送達ビヒクル
いくつかの実施形態において、細胞又は組織にＲＮＡｉ薬を送達するために、送達ビヒクルを使用することができる。送達ビヒクルは、細胞又は組織へのＲＮＡｉ薬の送達を改善する化合物である。送達ビヒクルには、ポリマー（例えば、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー）、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆性修飾ポリマー又はペプチド、又は可逆性修飾膜活性ポリアミンを挙げることができ、又はこれらからなるが、これらに限定されない。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ薬は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ、又は当該技術分野で利用可能な他の送達システムと組み合わせることができる。ＲＮＡｉ薬は更に、標的化基、脂質（コレステロール及びコレステリル誘導体を含むがこれらに限定されない）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例えば国際公開第２０００／０５３７２２号、同第２００８／００２２３０９号、同第２０１１／１０４１６９号、及び同第２０１２／０８３１８５号、同第２０１３／０３２８２９号、同第２０１３／１５８１４１号を参照；これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）、又は当該技術分野で利用可能な他の送達システムに化学的にコンジュゲートされ得る。
【０２３９】
医薬組成物及び製剤
本明細書で開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、医薬組成物又は製剤として調製され得る。いくつかの実施形態において、医薬組成物には、少なくとも１つのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が含まれる。これらの医薬組成物は、標的細胞内、細胞群、組織、又は生体内の標的ｍＲＮＡの発現を阻害するのに特に有用である。この医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルを低下又は標的遺伝子の発現を阻害することにより助けが得られるであろう疾患又は障害を有する対象を治療するために使用することができる。この医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルを低下又は標的遺伝子の発現を阻害することにより助けが得られるであろう疾患又は障害の発症リスクがある対象を治療するために使用することができる。一実施形態において、本方法は、本明細書に記載される、標的化リガンドに連結されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を、治療対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の製薬的に許容される賦形剤（ビヒクル、担体、希釈剤、及び／又は送達ポリマーを含む）が、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む医薬組成物に添加されて、ヒトへのｉｎ  ｖｉｖｏ送達に適した医薬製剤が形成される。
【０２４０】
本明細書で開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む医薬組成物及び方法は、本明細書に記載されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の治療有効量を対象に投与することを含み、細胞、細胞群、細胞群、組織又は対象における標的ｍＲＮＡのレベルを減少させることができ、これにより対象の標的ｍＲＮＡの発現を阻害することができる。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む記載されている医薬組成物は、ＨＢＶ感染に関係する臨床症状を治療又は管理するために使用される。いくつかの実施形態において、治療的又は予防的に有効な量の１つ又は複数の医薬組成物が、このような治療、予防又は管理を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態において、開示されているいずれかのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の投与を使用して、対象における疾患の症状の数、重篤度、及び／又は頻度を減少させることができる。
【０２４２】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む、記載された医薬組成物は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡの発現を減少又は阻害することにより助けが得られるであろう疾患又は障害を有する対象における少なくとも１つの症状を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、対象には、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む１つ又は複数の医薬組成物の治療有効量が投与され、これにより症状を治療する。他の実施形態において、対象に、予防的有効量の１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与することによって、少なくとも１つの症状を予防する。
【０２４３】
投与経路は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を身体に接触させる経路である。一般に、哺乳類の治療のための薬物及び核酸の投与方法は、当該技術分野で周知であり、本明細書に記載される組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、特定の経路に適切に合わせた、調製の任意の好適な経路を介して投与することができる。これにより、本明細書に記載される医薬組成物は、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、又は腹腔内などの注射により投与することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。
【０２４４】
本明細書に記載のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む医薬組成物は、当該技術分野で周知のオリゴヌクレオチド送達技術を用いて、細胞、細胞群、腫瘍、組織、又は対象に送達することができる。一般に、核酸分子を送達するための当該技術分野で知られる任意の好適な方法（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ）が、本明細書に記載の組成物と共に使用するために適合され得る。例えば、送達は、局所的投与（例えば直接注射、植え込み、局所投与）、全身投与、皮下投与、静脈内、腹腔内、又は非経口的経路によるものであってよく、これには、頭蓋内（例えば、心室内、実質内、及び髄腔内）、筋肉内、経皮的、気道（エアロゾル）、鼻、口腔、直腸、又は局所（頬側及び舌下を含む）投与が挙げられる。特定の実施形態において、この組成物は皮下又は静脈内の注入又は注射によって投与される。
【０２４５】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、１つ又は複数の製薬的に許容される賦形剤を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、対象に投与するために製剤することができる。
【０２４６】
本明細書で使用されるとき、医薬組成物又は医薬品には、薬理学的有効量の少なくとも１つの記載される治療用化合物と、１つ又は複数の製薬的に許容される賦形剤とが含まれる。製薬的に許容される賦形剤（賦形剤）とは、薬物送達システムに意図的に含まれる原薬（ＡＰＩ、治療用製品、例えばＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬）以外の物質である。賦形剤は、意図された用量で治療効果を発揮しないか、発揮することが意図されていないものである。賦形剤は、ａ）製造中に薬物送達システムの処理を助けるよう、ｂ）ＡＰＩの安定性、生物学的利用能、又は患者の受容性を保護、支援、又は強化するよう、ｃ）製品識別を補助する、及び／又は、ｄ）保管時又は使用時の、全体的な安全性、有効性、ＡＰＩの送達の他の属性を強化するよう、作用し得る。製薬的に許容される賦形剤は、不活性物質であってよく、また不活性物質でなくてもよい。
【０２４７】
賦形剤としては、吸収促進剤、抗付着剤、抗泡剤、抗酸化剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料剤、滑剤、保湿剤、潤滑剤、油類、ポリマー、防腐剤、生理食塩水、塩、溶媒、糖、懸濁剤、持続的放出マトリックス、甘味料、増粘剤、張性剤、ビヒクル、撥水剤、及び湿潤剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４８】
注射による使用に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。静脈内投与用では、適当な担体として、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ社、ニュージャージー州パーシッパニー）、又はリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。組成物は製造及び保存条件下で安定であるべきであり、細菌及び真菌類などの微生物の汚染作用に対抗して保存されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適当な混合物を含んだ溶媒又は分散媒であってよい。例えばレシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要な粒径の維持により、また、界面活性剤の使用により、適正な流動性を保つことができる。多くの場合、組成物中に、例えば糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、及び塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましい。組成物中に、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる物質を含有させることによって、注射用組成物の長期的な吸収をもたらすことができる。
【０２４９】
滅菌注入用溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせと共に適切な溶媒に添加した後、濾過による滅菌を行うことにより調製することができる。一般に分散液は、活性化合物を基本の分散媒及び上記に挙げた必要な他の成分を含有する滅菌賦形剤に組み込むことにより調製される。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の方法には、予め滅菌濾過されたその溶液から有効成分及び任意の更なる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥及び凍結乾燥が挙げられる。
【０２５０】
関節内投与に適した製剤は、例えば水性微結晶懸濁液の形態などの、微結晶形態であり得る薬物の滅菌水性調製物の形態であり得る。リポソーム製剤又は生分解性ポリマー系も、関節内及び眼内投与の両方のための薬剤を投与するのに使用することができる。
【０２５１】
活性化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、化合物が身体から速やかに排出されるのを防ぐ担体と共に、調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製方法は当業者には明らかであろう。リポソーム懸濁液も、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような当業者には周知の方法に従って調製することができる。
【０２５２】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、投与を容易とし、用量を均一とするために投与単位形態として製剤化することができる。投与単位形態とは、治療対象のための単位投与量として適した物理的に異なる単位を指し、各単位には、要求される医薬担体と関連して所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定量が含まれる。本開示の投与単位形態に対する仕様は、活性化合物の固有の特性と、達成されるべき治療効果と、個々における治療のためにそのような活性化合物を配合する当分野で固有の制限、によって決定され、直接依存する。
【０２５３】
医薬組成物は、医薬組成物において一般に見られる他の付加的成分を含むことができる。このような付加的成分には、かゆみ止め、皮膚収斂剤、局所麻酔薬、又は抗炎症剤（例えば、抗ヒスタミン薬、ジフェンヒドラミンなど）が挙げられるがこれらに限定されない。また、本明細書で定義されるＲＮＡｉ薬を発現する又は含む細胞、組織又は単離された器官を、「医薬組成物」として使用され得ることも想到される。本明細書で使用されるとき、「薬理学的有効量」、「治療有効量」又は単に「有効量」とは、薬理学的、治療的、又は予防的結果を生じるＲＮＡｉ薬の量である。
【０２５４】
一般に、活性化合物の有効量は、約０．１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、例えば、約１．０〜約５０ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲にある。いくつかの実施形態において、活性化合物の有効量は、１回の投与当たり約０．２５〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲にある。いくつかの実施形態において、活性成分の有効量は、１回の投与当たり約０．５〜約３ｍｇ／体重ｋｇの範囲にある。投与量は、患者の全体的な健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的効力、薬物の製剤形態、製剤における賦形剤の存在及び種類、並びに投与経路などの不確定要素に依存する可能性が高い。また、投与される初期投与量は、望ましい血液レベル又は組織レベルを急速に達成するために上記の上限レベルを超えて増加させることができ、又は、初期投与量は最適量よりも少なくすることができることが、理解されよう。
【０２５５】
疾患の治療のため、又は疾患の治療のための医薬品又は組成物の形成のために、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む本明細書に記述される医薬組成物は、賦形剤又は第２の治療薬若しくは治療（第２の又は他のＲＮＡｉ薬、小分子薬、抗体、抗体フラグメント、及び／又はワクチンが挙げられるがこれらに限定されない）と組み合わせることができる。
【０２５６】
記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、製薬的に許容される賦形剤又はアジュバントに添加された場合、キット、容器、パック、又はディスペンサにパッケージ化することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、予め充填されたシリンジ又はバイアルにパッケージ化されていてもよい。
【０２５７】
治療と発現阻害の方法
本明細書に開示されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、化合物を投与することにより助けが得られるであろう疾患又は障害を有する対象（例えば、ヒト又は哺乳類）を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ  ｍＲＮＡの発現を低減又は阻害することにより助けが得られるであろう疾患又は障害を有する対象（例えば、ヒト）を治療するために使用することができる。対象には、任意の１つ又は複数のＲＮＡｉ薬の治療有効量が投与される。対象は、ヒト、患者、又はヒト患者であり得る。対象は、成人、青年、小児、乳児であり得る。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む記述される医薬組成物は、疾患の治療処置のための方法を提供するのに使用することができる。このような方法は、本明細書に記載される医薬組成物をヒト又は動物に投与することを含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶに感染した対象を治療するのに使用される。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ感染を有する対象における少なくとも１つの症状を治療するのに使用される。対象には、任意の１つ又は複数の記述されるＲＮＡｉ薬の治療有効量が投与される。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、対象は、ＨＢＶ感染及びＨＤＶ感染の両方を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶとＨＤＶの両方に感染した対象を治療するのに使用される。いくつかの実施形態において、記載されているＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、ＨＢＶ又はＨＤＶ感染を有する対象における少なくとも１つの症状を治療するのに使用される。対象には、任意の１つ又は複数の記述されるＲＮＡｉ薬の治療有効量が投与される。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、対象がＨＢＶに感染している臨床症状を治療又は管理するために使用される。対象には、本明細書に記載の１つ又は複数のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬含有組成物の治療的量又は有効量が投与される。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含む組成物を、治療対象に投与することを含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が投与される対象におけるＨＢＶ遺伝子の遺伝子発現レベル及び／又はｍＲＮＡレベルは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与される前の対象、又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与されていない対象に比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超、低減される。対象における遺伝子発現レベル及び／又はｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞群、及び／又は組織において低減され得る。いくつかの実施形態において、記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が投与される対象におけるＨＢＶ遺伝子の発現タンパク質レベルは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与される前の対象、又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与されていない対象に比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超、低減される。対象内のタンパク質レベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、及び／又はその他の体液において低減され得る。例えば、いくつかの実施形態において、記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が投与される対象におけるＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の量又はレベルは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与される前の対象、又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与されていない対象に比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超、低減される。いくつかの実施形態において、記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が投与される対象におけるＢ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）の量又はレベルは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与される前の対象、又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与されていない対象に比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超、低減される。いくつかの実施形態において、記述されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が投与される対象における血清ＨＢＶ  ＤＮＡの量又はレベルは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与される前の対象、又はＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を投与されていない対象に比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超、低減される。血清ＨＢＶ  ＤＮＡの存在、ＨＢＶ遺伝子発現、ＨＢＶ  ｍＲＮＡ、又はＨＢＶタンパク質の量若しくはレベルの低減は、当該技術分野で周知の方法により評価され得る。ＨＢＶ  ｍＲＮＡの量若しくはレベル、発現タンパク質の量若しくはレベル、及び／又は血清ＨＢＶ  ＤＮＡの量若しくはレベルにおける低減若しくは減少は、本明細書において総称的に��ＨＢＶの低減若しくは減少、又は、ＨＢＶ発現の阻害若しくは低減と呼ばれる。
【０２６２】
細胞及び組織と非ヒト生物
本明細書に記載のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の少なくとも１つを含む細胞、組織、及び非ヒト生物が想到される。この細胞、組織、又は非ヒト生物は、細胞、組織、又は非ヒト生物に対してＲＮＡｉ薬を送達することにより生成される。
【０２６３】
ここで、上述の実施形態及び項目が、以下の非限定的な実施例で例示される。
【実施例】
【０２６４】
実施例１．ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の合成
以下の手順に従って、表５に示すＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬デュプレックスを合成した。
Ａ．合成。オリゴヌクレオチド合成に使用される固相上のホスホロアミダイト技術に基づいて、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のセンス鎖及びアンチセンス鎖を合成した。規模に応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ａ  ＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、又はＯＰ  Ｐｉｌｏｔ  １００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が使用された。制御された多孔質ガラス（ＣＰＧ、５００Å又は６００Å、Ｐｒｉｍｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡから入手）でできた固体支持体上で、合成を実施した。全てのＲＮＡ及び２’修飾ホスホロアミダイトは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ、ＵＳＡ）から購入した。具体的には、以下の２’−Ｏ−メチルホスホロアミダイトが使用された：（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２’−Ｏ−メチル−アデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２’−Ｏ−メチル−シチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノ）ホスホロアミダイト、（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２’−Ｏ−メチル−グアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、及び５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト。２’−デオキシ−２’−フルオロ−ホスホロアミダイトは、２’−Ｏ−メチルアミダイトと同じ保護基を有していた。塩基脱落（３’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボース−５’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。ホスホロアミダイトを含む標的化リガンドを、無水ジクロロメタン又は無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶かし、一方、他の全てのアミダイトは無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶かし、分子ふるい（３Å）を加えた。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）又は５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）を、活性化剤溶液として使用した。結合時間は１２分間（ＲＮＡ）、１５分間（標的化リガンド）、９０秒間（２’ＯＭｅ）、及び６０秒間（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート連結を導入するために、３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡから入手）の無水アセトニトリル中１００ｍＭ溶液を用いた。
Ｂ．支持体結合オリゴマーの切断及び脱保護。固相合成を完了させた後、乾燥させた固体支持体を、水中４０重量％メチルアミンと、２８％水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）との体積１：１の溶液で、１．５時間３０℃で処理した。この溶液を蒸発させ、固体残留物を水中で再構成した（下記参照）。
Ｃ．精製。ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＱ−５ＰＷ  １３μｍカラム及びＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８システムを用いて、アニオン交換ＨＰＬＣにより粗オリゴマーを精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０であり、２０％アセトニトリルを含有していた。緩衝液Ｂは、緩衝液Ａと同じものに、１．５Ｍ塩化ナトリウムを加えたものであった。２６０ｎｍでＵＶトレースが記録された。適切な分画をプールしてから、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ｆｉｎｅを詰めたＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＸＫ  ２６／４０カラムを用いて、サイズ排除ＨＰＬＣに通し、濾過ＤＩ水又は１００ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ  ６．７）及び２０％アセトニトリルをランニング緩衝液として用いた。
Ｄ．アニーリング。相補的鎖を、１×リン酸塩緩衝生理食塩水（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中の等モル量のＲＮＡ溶液（センス及びアンチセンス）を合わせて混合し、ＲＮＡｉ薬を形成した。一部のＲＮＡｉ薬を凍結乾燥し、−１５〜−２５℃で保管した。１×リン酸塩緩衝生理食塩水中でＵＶ−Ｖｉｓスペクトロメーターを用いて溶液吸光度を測定することによりデュプレックス濃度を求めた。次に、２６０ｎｍでの溶液吸光度に換算係数及び希釈係数を掛けて、デュプレックス濃度を求めた。特に明記しない限り、換算係数は全て０．０３７ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であった。いくつかの実験において、実験的に求められた吸光係数から換算係数を計算した。
【０２６５】
実施例２．ｐＨＢＶモデルマウス。
【０２６６】
６〜８週齢の雌のＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ／ＮｃｒＣｒｌ（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ）マウスを一時的にｉｎ  ｖｉｖｏでＭＣ−ＨＢＶ１．３によりトランスフェクトした。これは、流体力学的尾静脈注射（Ｙａｎｇ  ＰＬ  ｅｔ  ａｌ．”Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ＤＮＡ：ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ２００２  Ｖｏｌ．９９：ｐ．１３８２５〜１３８３０）により、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬又は対照の投与の３０〜４５日前に投与された。ＭＣ−ＨＢＶ１．３は、プラスミド誘導ミニサークルであり、これは、プラスミドｐＨＢＶ１．３及びＨＢＶ１．３．３２トランスジェニックマウス（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｖ０１４６０）におけるものと同じ末端重複ヒトＢ型肝炎ウイルス配列ＨＢＶ１．３を含む（Ｇｕｉｄｏｔｔｉ  ＬＧ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，」Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  １９９５  Ｖｏｌ．６９，ｐ６１５８〜６１６９）。５又は１０μｇのＭＣ−ＨＢＶ１．３のリンゲル溶液を、動物の体重の１０％の合計体積、マウスの尾静脈に注射して、慢性ＨＢＶ感染のｐＨＢＶモデルを形成した。前述のように、２７ゲージ針で５〜７秒間かけて溶液を注射した（Ｚｈａｎｇ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｆｏｒｅｉｇｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｔａｉｌ  ｖｅｉｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｋｅｄ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ．」Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９  Ｖｏｌ．１０，ｐ１７３５〜１７３７）。投与前（投与前１日目、−１日目、又は−２日目のいずれか）に、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の血清中ＨＢｓＡｇ発現レベルをＥＬＩＳＡにより測定し、マウスを平均ＨＢｓＡｇ発現レベルに従ってグループ分けした。
【０２６７】
分析：ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬投与前後の様々な時点で、血清ＨＢｓＡｇ、血清ＨＢｅＡｇ、血清ＨＢＶ  ＤＮＡ、又は肝臓ＨＢＶ  ＲＮＡを測定することができる。ＨＢＶ発現レベルは、投与前発現レベルと、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）を注射された対照マウスとに対して正規化された。
【０２６８】
ｉ）血清採取：マウスを２〜３％イソフルランで麻酔し、顎下領域から血清分離管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ＡＧ  ＆  Ｃｏ．、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に血液試料を採取した。血液を周囲温度に２０分間置いて凝固させた。この管を８，０００×ｇで３分間遠心分離し、血清を分離して、４℃で保管した。
【０２６９】
ｉｉ）血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベル：血清を採取し、脱脂粉乳５％を含むＰＢＳで１０〜８０００倍に希釈した。１０μｇ  ＨＢｓＡｇ発現プラスミドｐＲｃ／ＣＭＶ−ＨＢｓ（Ａｌｄｅｖｒｏｎ，Ｆａｒｇｏ，ＮＤ）でトランスフェクトしたＩＣＲマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）の血清から、脱脂乳溶液で希釈した二次ＨＢｓＡｇ標準を調製した。ＨＢｓＡｇレベルを、ＧＳ  ＨＢｓＡｇ  ＥＩＡ  ３．０キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を用いて、メーカーによる記述に従って測定した。遺伝子組換えＨＢｓＡｇタンパク質（ａｙｗサブタイプ、これもＰＢＳ中脱脂乳で希釈）を、一次標準として使用した（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）。
【０２７０】
ＭＣ−ＨＢＶ１．３における処置に関連しない低下を説明するために、各動物のＨＢｓＡｇ発現は、ＰＢＳが注射されたマウス対照群に対して正規化された。最初に、ある時点における各動物のＨＢｓＡｇレベルを、その動物の処置前発現レベルで割って、「処置前に対して正規化された」発現の比率を求めた。次いで、個々の動物の「処置前に対して正規化された」比を、正常なＰＢＳ対照群における全マウスの平均の「処置前に対して正規化された」比で割ることにより、特定の時点での発現を対照群に対して正規化した。
【０２７１】
ｉｉｉ）血清Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）レベル：５％脱脂粉乳で４〜２０倍に希釈した血清を使用し、メーカー（ＤｉａＳｏｒｉｎ）の記述されているようにＨＢｅＡｇ酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）でＨＢｅＡｇ分析を実施した。抗原の量を、アッセイの直線範囲で測定し、ＨＢｅＡｇタンパク質標準（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ｃａｔａｌｏｇ  ＃  ３０−ＡＨ１８，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）に対して定量した。
【０２７２】
ＭＣ−ＨＢＶ１．３における処置に関連しない低下を説明するために、各動物のＨＢｅＡｇ発現は、ＰＢＳが注射されたマウス対照群に対して正規化された。血清中のＨＢｅＡｇを評価するために、ＨＢｅＡｇを、プールされた群又はサブ群の血清試料から分析する。最初に、各プールされた群又はサブ群のＨＢｅＡｇレベルを、同じ群又はサブ群の処置前発現レベルで割って、「処置前に対して正規化された」発現比を求めた。特定の時点での発現が、対照群に対して正規化された。これは、群又はサブ群の「処置前に対して正規化された」比を、正常なＰＢＳ対照群の全試料の平均の「処置前に対して正規化された」比で割ることにより得られた。
【０２７３】
ｉｖ）血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベル：群又はサブ群のマウスから得た等体積の血清を最終体積１００μＬまでプールした。ＱＩＡａｍｐ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  Ｖｉｒｕｓ  Ｓｐｉｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用い、メーカーの説明に従って、ＤＮＡを血清試料から分離した。各試料に０．９％滅菌生理食塩水を添加して、最終体積２００μＬとした。血清試料を、緩衝液及びプロテアーゼの入った管に加えた。少量のＤＮＡの単離を補助するため、担体ＲＮＡを添加した。１ｎｇのｐＨＣＲ／ＵｂＣ−ＳＥＡＰプラスミドＤＮＡ（Ｗｏｏｄｄｅｌｌ  ＣＩ，ｅｔ  ａｌ．「Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｆｒｏｍ  ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ｓｉＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ．」Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ（２００５）３３４，１１７〜１２７）を、回収対照として加えた。１５分間５６℃でインキュベートした後、エタノールで核酸を溶解液から沈殿させ、溶液全体をカラムに通した。洗浄後、試料を５０μＬの緩衝液ＡＶＥに溶出させた。
【０２７４】
ｐＨＢＶマウスモデル血清から分離されたＤＮＡのＨＢＶゲノムのコピー数をｑＰＣＲにより測定した。Ｓ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｖ０１４６０の塩基３５３−７７７）内のＨＢＶゲノムの短いセグメントをコードするプラスミドｐＳＥＡＰ−ＨＢＶ３５３−７７７を使用して、６つの対数標準曲線を作成した。ｐＨＣＲ／ＵｂＣ−ＳＥＡＰの検出に基づき、平均から２標準偏差下のＤＮＡの回収率を有する試料は省いた。ＴａｑＭａｎ化学系プライマー及びｆｌｕｏｒ／ＺＥＮ／ＩＢＦＱ付きプローブを利用する。
【０２７５】
７５００  Ｆａｓｔ又はＳｔｅｐＯｎｅ  Ｐｌｕｓ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲシステム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でｑＰＣＲアッセイを実施した。血清中のＨＢＶ  ＤＮＡを評価するために、プールされた群の血清試料から、一重又は二重精製工程でＤＮＡを単離した。ＨＢＶ  ＤＮＡ及び回収対照プラスミドの定量を、３回実施されたｑＰＣＲ反応により測定した。ＨＢＶ及びｐＨＣＲ／ＵｂＣ−ＳＥＡＰを定量するプローブを、各反応に含めた。
【０２７６】
実施例３．ｐＨＢＶモデルマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。１日目、各マウスに、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）中に配合されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬２ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）を含有する２００μＬの単回皮下注射、又は、対照として使用されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まないリン酸緩衝生理食塩水２００μＬの単回皮下注射を投与した。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。試験されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬には、以下の表７に示すデュプレックス数を有するものが含まれた。注射を、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）で行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０２７７】
８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０２７８】
【表７】
2019527694.tif 000060
【０２７９】
ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４１７８、ＡＤ０４５７９、ＡＤ０４５８０、ＡＤ０４５７０、ＡＤ０４５７２、ＡＤ０４５７３、ＡＤ０４５７４、ＡＤ０４５７５、ＡＤ０４４１９、及びＡＤ０４５７８をそれぞれ、上述の表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７８９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬はそれぞれ、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの実質的な減少を示した。例えば、ＡＤ０４５８０は、処置前及びＰＢＳ対照に対して正規化されたとき、８日目でＳ抗原レベルが９５％超の減少を示した（０．０４８±０．００７  ＨＢｓＡｇレベル）。
【０２８０】
加えて、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１５、２２、２９、３６、４３及び５０日目に採取された血清試料のＰＢＳ、ＡＤ０４５７９、及びＡＤ０４５８０群について測定した。各群からの血清をプールし、重複分離で血清からＤＮＡを単離した。データを以下の表に示す：
【０２８１】
【表８】
2019527694.tif 000061
【０２８２】
表８のデータは、調べたＲＮＡｉ薬の両方とも、ＰＢＳ群に比べてＨＢＶ  ＤＮＡレベルを実質的に低下させ、ＡＤ０４５８０は最下値で１ログのノックダウンよりもわずかに上回る達成を示した（例えば、１５日目で０．０８６９±０．０１１７平均血清ＤＮＡレベル）。
【０２８３】
実施例４．ｐＨＢＶモデルマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。１日目、各マウスに、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）中に配合されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬２ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）を含有する２００μＬの単回皮下投与、又は、対照として使用されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まないリン酸緩衝生理食塩水２００μＬの単回皮下投与を行った。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。投与されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬には、以下の表９に示されるものが含まれた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０２８４】
８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０２８５】
【表９】
2019527694.tif 000062
【０２８６】
ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４０１０、ＡＤ０４５８１、ＡＤ０４５９１、ＡＤ０４４３４、ＡＤ０４５８３、ＡＤ０４５８４、ＡＤ０４５８５、ＡＤ０４５８６、ＡＤ０４５８８、及びＡＤ０４４３８を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２５７〜２７５のＳオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。上記の表９に示すＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬はそれぞれ、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照と比較して、ＨＢｓＡｇの実質的な減少を示した。例えば、ＡＤ０４５８５は８日目で約９０％のＨＢｓＡｇ減少、１５日目、で９５％の減少、２２日目で９７％の減少、及び２９日目で９５％の減少を示した。
【０２８７】
加えて、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１５、２２、２９、３６、４３及び５０日目に採取された血清試料のＰＢＳ及びＡＤ０４５８５群について測定した。各群からの血清をプールし、重複分離で血清からＤＮＡを単離した。データを以下の表に示す：
【０２８８】
【表１０】
2019527694.tif 000063
【０２８９】
表１０に示すデータは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４５８５が、ＰＢＳ群に比べて、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの減少をもたらしたことを示している。
【０２９０】
実施例５．ｐＨＢＶモデルマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の用量応答及び組み合わせ。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表１１に示すものを含む様々な群に分けられ、マウスには表１１に示す投与レジメンに従って２００μＬ皮下注射が行われた。
【０２９１】
【表１１】
2019527694.tif 000064
【０２９２】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表１１に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０２９３】
８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、及び５７日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０２９４】
【表１２】
2019527694.tif 000065
【０２９５】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４５８０及びＡＤ０４５８５はそれぞれ、測定された全時点にわたって、ＨＢｓＡｇ  ＰＢＳ対照と比較して、個々にＨＢｓＡｇの低下を示した。更に、ＡＤ０４５８５及びＡＤ０４５８０の併用処置も、ＨＢＶゲノムの異なる領域を標的とした上述の実施例に示されているように、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照と比較して、ＨＢｓＡｇの低下を示した。
【０２９６】
加えて、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１５、２２、２９及び３６日目に採取された血清試料の表１１の群のそれぞれについて測定した。各群からの血清をプールし、重複反応で血清からＤＮＡを単離した。データを以下の表に示す：
【０２９７】
【表１３】
2019527694.tif 000066
【０２９８】
表１３のデータは、試験されたＲＮＡｉ薬が、個別及び組み合わせの両方とも、ＰＢＳ群に比べて、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの減少をもたらしたことを示している。再投与又は投与量の増加は、更なるＨＢＶ  ＤＮＡの減少をもたらした。
【０２９９】
実施例６．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：用量応答及び併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表１４に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表１４に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３００】
【表１４】
2019527694.tif 000067
【０３０１】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表１４に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３０２】
投与前の−１日目、及び次いで８日目、１５日目、２２日目、２９日目、及び３６日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清ＨＢｓＡｇレベルを測定した。実験のデータを以下の表１５に示す。平均ＨＢｓＡｇは、ＨＢｓＡｇの正規化された平均値を反映している：
【０３０３】
【表１５】
2019527694.tif 000068
【０３０４】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。更に、ＡＤ０４８７２（表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳ  ＯＲＦに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含む）と、ＡＤ０４９８１又はＡＤ０４９６３のいずれか（この両方とも、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸ  ＯＲＦに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含む）との併用処置は、実施例６の群Ｈ、Ｉ、及びＪに示されており、これらは、２つのＲＮＡｉ薬（一方はＨＢＶゲノムのＳ  ＯＲＦを標的とし、他方はＨＢＶゲノムのＸ  ＯＲＦを標的とするもの）の併用処置が、同様に、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。
【０３０５】
加えて、血清Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）レベルもまた評価した。それぞれの群のマウスから得た試料を最初にプールし、結果として得られた血清試料を一重項状態でアッセイを行った。実験のデータを以下の表に示す：
【０３０６】
【表１６】
2019527694.tif 000069
【０３０７】
表１６に示すように、ＡＤ０４８７２（ＨＢＶゲノムのＳ  ＯＲＦを標的とする）と、ＡＤ０４９８１又はＡＤ０４９６３（両方ともＨＢＶゲノムのＸ  ＯＲＦを標的とする）のいずれかとの組み合わせは、ＡＤ０４８７２単独投与に比べて、ＨＢｅＡｇレベルの更なる減少を示した。
【０３０８】
実施例７．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：追加用量応答及び併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表１７に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表１７に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３０９】
【表１７】
2019527694.tif 000070
【０３１０】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表１７に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。−１日目及び８日目に、各群で４匹のマウスを試験し（ｎ＝４）、次いで、各群で１匹のマウスを安楽死させ、組織学的評価を行った。２２日目及び２９日目に、各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３１１】
投与前の−１日目、及び次いで８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表１８に示す：
【０３１２】
【表１８】
2019527694.tif 000071
【０３１３】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。
【０３１４】
加えて、血清Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）レベルもまた評価した。それぞれの群のマウスから得た試料を最初にプールし、結果として得られた血清試料を一重項状態でアッセイを行った。実験のデータを以下の表に示す：
【０３１５】
【表１９】
2019527694.tif 000072
【０３１６】
【表２０】
2019527694.tif 000073
【０３１７】
表１９−１は、ＨＢｅＡｇと対照とを比較したノックダウン倍率を反映する。これは、対照（ＰＢＳ）群の正規化ＨＢｅＡｇレベル／それぞれのＲＮＡｉ薬（複数可）群の正規化ＨＢｅＡｇレベル（すなわち、１．０００／ＨＢｅＡｇレベル）として計算される。表１９−１に示すデータは、ＡＤ０４８７２（上述のように、ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳ  ＯＲＦに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含む）と、ＡＤ０４９８２（ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸ  ＯＲＦに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含む）との組み合わせは、個々のＲＮＡｉ薬単独投与に比べて、ＨＢｅＡｇレベルの更なる減少を示した（例えば、表１９及び１９−１の群Ｈ及びＩを参照）。更に、この実施例からのデータは、ＡＤ０４８７２とＡＤ０４９８２との組み合わせが、ＡＤ０４８７２及びＡＤ０４９８２を個別に投与した場合のＨＢｅＡｇの減少倍率（fold decrease）の合計よりも、更に大きなＨＢｅＡｇ減少倍率をもたらしたことを示している。例えば、群Ｉ（３．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７２＋２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４９８２の投与）は１５日目にＨＢｅＡｇの減少倍率が１７．０であり、これは、群Ｇ（３．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７２）の減少倍率４．６と、群Ｄ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４９８２）の減少倍率３．２との和よりも大きい。
【０３１８】
更に、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、−１、８、１５、２２、２９、及び３６日目に採取された血清試料の表１７の群のそれぞれについて測定した。血清ＨＢＶ  ＤＮＡが、各時点で各動物から単離された。データを以下の表に示す：
【０３１９】
【表２１】
2019527694.tif 000074
【０３２０】
表２０のデータは、試験されたＲＮＡｉ薬が、個別及び組み合わせの両方とも、ＰＢＳ群に比べて、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの減少をもたらしたことを示しており、ＡＤ０４８７２（Ｓ  ＯＲＦを標的とする）とＡＤ０４９８２（Ｘ  ＯＲＦを標的とする）との組み合わせが、同量のＡＤ０４８７２単独と同程度に、血清ＨＢＶ  ＤＮＡを低下させたことを更に示している。
【０３２１】
実施例８．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：更なる用量応答及び併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表２１に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表２１に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３２２】
【表２２】
2019527694.tif 000075
【０３２３】
加えて、マウスは下記のスケジュールに従って安楽死させる予定である：
・１１日目：群２Ａ、３Ａ、４Ａ、５Ａ、６Ａ、７Ａ及び８Ａのマウス２匹、及び群９のマウス１匹を安楽死。
・１４日目：群２Ａ、３Ａ、４Ａ、５Ａ、６Ａ、７Ａ、及び８Ａのマウス２匹を安楽死。
・２１日目：群２Ｂ、３Ｂ、４Ｂ、５Ｂ、６Ｂ、７Ｂ、及び８Ｂのマウス２匹を安楽死。
・２８日目：群１、２Ｂ、３Ｂ、４Ｂ、５Ｂ、６Ｂ、７Ｂ、及び８Ｂのマウス２匹、及び群１０及び１２の全てのマウス（４匹）を安楽死。
【０３２４】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表２１に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。上記の表１４に示すように、各群の４匹のマウスを試験し（ｎ＝４）、ただし群１０、１１、１２及び１３については３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３２５】
投与前の−１日目、及び次いで８日目、１４日目、２１日目、及び２８日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０３２６】
【表２３】
2019527694.tif 000076
【０３２７】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、単独と組み合わせの両方において、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの実質的な減少を示した。
【０３２８】
実施例９．ＲＮＡｉ薬の送達。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。１日目、各マウスに、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）中に配合されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）を含有する２００μＬの単回皮下注射、又は、対照として使用されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まないリン酸緩衝生理食塩水２００μＬの単回皮下注射を投与した。試験されるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬には、以下の表２３に示すデュプレックス数を有するものが含まれた。これらはそれぞれ、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３２９】
投与前、及び次いで８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０３３０】
【表２４】
2019527694.tif 000077
【０３３１】
上記の表２３に示すＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬はそれぞれ、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９でＸ  ＯＲＦに少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含んでいた。各ＲＮＡｉ薬が、ＰＢＳ対照に比べて有意なノックダウンを示した。
【０３３２】
実施例１０．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：更なる併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表２４に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表２４に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３３３】
【表２５】
2019527694.tif 000078
【０３３４】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表２４に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３３５】
血清を、投与の前、及び−１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、５７日目、及び６４日目に採取した。血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、測定した。実験のデータを以下に示す：
【０３３６】
【表２６】
2019527694.tif 000079
【０３３７】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４５８５及びＡＤ０４７７１を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２５７〜２７５のＳオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４５８０及びＡＤ０４７７６を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、単独と組み合わせの両方において、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。それぞれの後続の用量が、ＨＢｓＡｇ低減の最下値を更に低下させた。
【０３３８】
加えて、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、−１、８、１５、２２、２９、及び３６、４３及び５０日目に採取された血清試料の、表２４の群Ｃ（３．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４５８５）、群Ｅ（３．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４５８０）、及び群Ｇ（１．５ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４５８５＋１．５ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４５８０）について測定した。血清ＨＢＶ  ＤＮＡが、これらの時点のそれぞれで各動物から単離された。データを以下の表に示す：
【０３３９】
【表２７】
2019527694.tif 000080
【０３４０】
表２６のデータは、試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬が、個別及び組み合わせの両方とも、ＰＢＳ群に比べて、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの減少をもたらしたことを示している。
【０３４１】
実施例１１．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表２７に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表２７に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３４２】
【表２８】
2019527694.tif 000081
【０３４３】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表２４に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３４４】
投与前の−１日目、及び次いで８日目、１５日目、２２日目、２９日目、及び３６日目に血清を採取し（ただし群Ｌ（ＡＤ０４８８２）及び群Ｍ（ＡＤ０４８８５）を除く）、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０３４５】
【表２９】
2019527694.tif 000082
【０３４６】
ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４９６２を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２５７〜２７５のＳオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８７２を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４９６３を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８８２及びＡＤ０４８８５を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８０〜１７９８のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。上記の表９に示すＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬はそれぞれ、測定された全時点にわたって、個別と組み合わせの両方で、ＰＢＳ対照と比較して、ＨＢｓＡｇの減少を示した。再投与により、ＨＢｓＡｇの更なる低下が得られた。
【０３４７】
加えて、群Ｌ及びＭを除く全ての群について、血清Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）レベルもまた評価した。それぞれの群のマウスから得た試料を最初にプールし、結果として得られた血清試料を一重項状態でアッセイを行った。実験のデータを以下の表に示す：
【０３４８】
【表３０】
2019527694.tif 000083
【０３４９】
更に、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１５、２２、及び２９日目に採取された血清試料の表２７の群のそれぞれについて測定した。血清ＨＢＶ  ＤＮＡが、各時点で各動物から単離された。データを以下の表に示す：
【０３５０】
【表３１】
2019527694.tif 000084
【０３５１】
表３０のデータは、試験されたＲＮＡｉ薬が、個別及び組み合わせの両方とも、ＰＢＳ群に比べて、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの減少をもたらしたことを示している。再投与により、ＨＢＶ  ＤＮＡの更なる低下が得られた。
【０３５２】
実施例１２．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表３１に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表３１に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３５３】
【表３２】
2019527694.tif 000085
【０３５４】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表２４に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３５５】
血清を、投与前、次いで８日目、１５日目、及び２２日目に採取した。群Ａ（ＰＢＳ）、群Ｂ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７１）、群Ｃ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７２）、群Ｄ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７４）、群Ｅ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７５）、及び群Ｆ（２．０ｍｇ／ｋｇ  ＡＤ０４８７６）は更に、２９日目、３６日目、４３日目、及び５０日目に血清を採取した。血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０３５６】
【表３３】
2019527694.tif 000086
【０３５７】
ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８７１、ＡＤ０４８７２、ＡＤ０４８７４、ＡＤ０４８７５、及びＡＤ０４８７６を、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するようにそれぞれ設計した。これらのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬のそれぞれが、ＰＢＳ対照に比べて実質的なＨＢｓＡｇ低下を示した。例えば、ＡＤ０４８７１（群Ｂ）、ＡＤ０４８７２（群Ｃ）及びＡＤ０４８７４（群Ｄ）、及びＡＤ０４８７６（群Ｆ）ぞれぞれの単回投与量２ｍｇ／ｋｇでは、対照に比べて、１５日目〜４３日目に測定された各時点において、ＨＢｓＡｇが９０％超の低下を示した。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８８１、ＡＤ０４８８３、ＡＤ０４８８４をそれぞれ、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８０〜１７９８のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。
【０３５８】
実施例１３．Ｘ領域ノックアウトモデルマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の用量応答及び組み合わせ。
ＨＢＶ  ｍＲＮＡのＳ  ＯＲＦに位置する領域に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含むＲＮＡｉ薬と、ＨＢＶ  ｍＲＮＡのＸ  ＯＲＦに位置する領域に少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を含む第２のＲＮＡｉ薬との組み合わせの影響を評価する別の手段として、表１及び２に示すように位置１７８０及び１７８１を標的とするＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬に対して、結合部位をノックアウトしたＨＢＶゲノムを含むプラスミドを生成した（以下、Ｘ領域ノックアウトマウスと呼ぶ）。このモデルは、これらのＲＮＡｉ薬の結合部位内で、ｐＨＢＶ１．３プラスミドの１０個の塩基を突然変異させることによって生成された。ＨＢＶ  ｍＲＮＡの残りの部分（Ｓ領域を含む）は機能的なままであった。よって、このＨＢＶマウスモデルにおいて、本明細書に開示されるＨＢＶゲノムの位置１７８０及び１７８１を標的とするアンチセンス鎖を有するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含めると、発現のサイレンシングに関して無効となることが期待される。
【０３５９】
マウスは、以下の表３３に示すものを含む様々な群に分けられ、マウスには以下の表に示す投与レジメンに従って２００μＬ皮下注射が行われた。
【０３６０】
【表３４】
2019527694.tif 000087
【０３６１】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表３３に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３６２】
５日目、８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。更に３６日目及び４３日目に、群１〜５について血清を採取した。実験のデータを以下の表３４に示す：
【０３６３】
【表３５】
2019527694.tif 000088
【０３６４】
予想されたように、群６（３．０ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４９６３の単回投与量であり、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含む）は、ＨＢｓＡｇのノックダウンをもたらすことができなかった。加えて、群２〜５のそれぞれが、ＰＢＳ対照に比べて実質的なＨＢｓＡｇのノックダウンをもたらし、群３及び群５の両方は、最下値（２２日目）でＨＢｓＡｇの２ログ超の低下を示した。
【０３６５】
実施例１４．Ｘ領域ノックアウトモデルマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬の用量応答及び組み合わせ。
上述の実施例１３に記載のＸ領域ノックアウトマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表３１に示すものを含む様々な群に分けられ、各マウスには、表３５に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３６６】
【表３６】
2019527694.tif 000089
【０３６７】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表３５に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。表３５に示す各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３６８】
１日目（投与前）、８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０３６９】
【表３７】
2019527694.tif 000090
【０３７０】
表３６は、単独で投与されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８７２、並びに、ＡＤ０４８７２（ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳオープンリーディングに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含む）とＡＤ０５０７０（ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含む）との組み合わせが、測定された各時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの有意なノックダウンをもたらしたことを示している。このＸ領域ノックアウトモデルにおける突然変異した標的部位に対するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０５０７０を０．７ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ追加した場合、２ｍｇ／ｋｇ  ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８７２の活性を低下させなかった。
【０３７１】
加えて、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１５、及び２２日目に採取された血清試料で血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを測定した。各群からの血清をプールし、一重項状態で血清からＤＮＡを単離した。データを以下の表に示す：
【０３７２】
【表３８】
2019527694.tif 000091
【０３７３】
このＸ領域ノックアウトモデルにおける突然変異した標的部位に対するＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０５０７０を０．７ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ追加した場合、２ｍｇ／ｋｇ  ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４８７２の活性を低下させなかった。
【０３７４】
実施例１５．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表３８に示すものを含む様々な群に分けられ、各マウスには、表３８に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３７５】
【表３９】
2019527694.tif 000092
【０３７６】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表３８に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３７７】
血清を、投与前の−１日目、次いで８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、及び５０日目に採取した。血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、測定した。実験のデータを以下の表３９に示す。平均ＨＢｓＡｇは、ＨＢｓＡｇの正規化された平均値を反映している：
【０３７８】
【表４０】
2019527694.tif 000093
【０３７９】
ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４７７６、ＡＤ０５０６９、ＡＤ０５０７０、ＡＤ０５０７１、ＡＤ０５０７３、及びＡＤ０５０７４をそれぞれ、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８１〜１７９９のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。ＲＮＡｉ薬ＡＤ０５０７５、ＡＤ０５０７６、ＡＤ０５０７７、及びＡＤ０５０７８をそれぞれ、表１及び２に示すように、ＨＢＶゲノムの位置１７８０〜１７９８のＸオープンリーディングフレームに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖配列を有するように設計した。
【０３８０】
表３９は、単独で投与されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬ＡＤ０４７７６、ＡＤ０５０６９、ＡＤ０５０７０、ＡＤ０５０７１、ＡＤ０５０７３、及びＡＤ０５０７４、又はそれらのＡＤ０４８７２（ＨＢＶゲノムの位置２６１〜２７９のＳオープンリーディングに対して少なくとも部分的に相補的なアンチセンス鎖を含む）との組み合わせが、測定された各時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの有意なノックダウンをもたらしたことを示している。
【０３８１】
実施例１６．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬：用量応答及び併用試験。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表４０に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表４０に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３８２】
【表４１】
2019527694.tif 000094
【０３８３】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表４０に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で６匹のマウスを試験した（ｎ＝６）。
【０３８４】
投与前、及び次いで８日目、１５日目、２２日目、及び２９日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表４１に示す：
【０３８５】
【表４２】
2019527694.tif 000095
【０３８６】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、個別と組み合わせの両方において、測定された全時点にわたって、ＰＢＳ対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。ＨＢｓＡｇ発現は、２２日目に再投与された全ての群で更に低下した。
【０３８７】
加えて、血清Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）レベルもまた評価した。８日目の測定については、各群の全６匹のマウスの血清試料がプールされ、結果として得られた試料を一重項状態でアッセイを行った。−１日目、１５日目、２２日目、及び２９日目の測定については、各群の６匹のマウスが各群内で対にされ、それぞれの血清試料がプールされ、各群につき３つのサブ群を形成した。各群の３つのサブ群それぞれの血清試料について、アッセイが行われた。実験のデータを以下の表４２に示す：
【０３８８】
【表４３】
2019527694.tif 000096
【０３８９】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、個別と組み合わせの両方において、測定された全時点にわたって、生理食塩水対照に比べてＨＢｅＡｇの減少を示した。ＨＢｅＡｇ発現は、２２日目に再投与された全ての群で更に低下した。
【０３９０】
更に、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを、上述の実施例２に示す手順に従って、−１、８、１５、及び２２日目に採取された血清試料の表４０の群のそれぞれについて測定した。各対のマウスの血清をプールし、単一分離で各血清プールからＤＮＡを単離した。データを以下の表に示す：
【０３９１】
【表４４】
2019527694.tif 000097
【０３９２】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、個別と組み合わせの両方において、測定された全時点にわたって、生理食塩水対照に比べて血清ＨＢＶ  ＤＮＡを低下させているが、ただし、群１１及び１２では、８日目で血清ＨＢＶ  ＤＮＡの低下がなかったことが示された。
【０３９３】
実施例１７．ｐＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬。
上述の実施例２に記載のｐＨＢＶマウスモデルを使用した。マウスは、以下の表４４に示すように様々な群に分けられ、各マウスには、表４４に示す投与レジメンに従って、単回２００μＬ皮下注射を投与した。
【０３９４】
【表４５】
2019527694.tif 000098
【０３９５】
各マウスに２００μＬの単回皮下投与が行われた。これには、表４４に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に配合された所定量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬、又は対照としてＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水が含まれた。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。各群で３匹のマウスを試験した（ｎ＝３）。
【０３９６】
投与前、及び次いで８日目、１４日目、２１日目、及び２９日目及び３６日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表４５に示す：
【０３９７】
【表４６】
2019527694.tif 000099
【０３９８】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬組み合わせは、測定された全時点にわたって、生理食塩水対照に比べてＨＢｓＡｇの減少を示した。ＡＤ０４８７２を含む組み合わせは、ＡＤ０４８７２の代わりにＡＤ０４５８５を用いた同等の組み合わせよりも、大きな低下を示した。
【０３９９】
加えて、上述の実施例２に示す手順に従って、８、１４、２１、及び２９日目に採取された血清試料で血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを測定した。血清ＨＢＶ  ＤＮＡが、各時点で各動物から単離された。データを以下の表４６に示す：
【０４００】
【表４７】
2019527694.tif 000100
【０４０１】
試験されたＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬組み合わせは、測定された全時点にわたって、生理食塩水対照に比べて血清ＨＢＶ  ＤＮＡの減少を示した。ＡＤ０４８７２を含む組み合わせは、ＡＤ０４８７２の代わりにＡＤ０４５８５を用いた同等の組み合わせよりも、大きな低下を示した。これらの大きな低下は、２２日目及び２９日目に観察された。
【０４０２】
実施例１８．ＨＢＶ感染ヒト化マウスモデルにおけるＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬。
この試験では、雄のＦＲＧ（登録商標）（Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド（Ｙｅｃｕｒｉｓ）の遺伝子型Ｆａｈ−／−／Ｒａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−三重ノックアウトマウス）が１〜２箇月齢のときに、ヒト肝細胞を移植した。ヒト肝細胞は、マウス肝細胞の増殖を抑制するために、定期的なＮＴＢＣ処理を用いて約６箇月間肝臓に再増殖させた。９箇月齢で、マウスに、４×１０８個のゲノム／ｋｇ  ＨＢＶ遺伝子型Ｃの静脈内接種を行った。これがヒト肝細胞を感染させた。２〜３箇月後、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルがプラトーに達し、ヒト肝細胞が最大限に感染したことが示された（マウス肝細胞はＨＢＶに感染できない）。ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬による処置の開始時にマウスは１歳であり、よって寿命の終わりに近かった。
【０４０３】
処置前の血清試料を−１０日目及び−３日目に採取した。１日目に、各マウスに、１日１回、水中に溶解させた０．０１ｍｇ／ｋｇのエンテカビルで、１日１回強制経口投与を行い、ＨＢＶの複製を阻害した。マウスの安楽死の日まで、エンテカビルの１日１回の投与を継続した。エンテカビル投与により、慢性的に感染したヒト患者の血清ＨＢＶ  ＤＮＡは低減するが、ＨＢｓＡｇは低減しないことが予想された。
【０４０４】
マウスを、下記の表４７に示すものを含む様々な群に分けた：
【０４０５】
【表４８】
2019527694.tif 000101
【０４０６】
各マウスには更に、リン酸緩衝生理食塩水に調剤された量のＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬（複数可）を含む体重２０グラム当たり１００μＬの皮下投与、あるいは、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬を含まない同量のリン酸緩衝生理食塩水を含む体重２０グラム当たり１００μＬの皮下投与を、上記の表４７に示すスケジュールに従って、１日目及び２９日目（２９日目にまだ生存している場合）に行った。各ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬は、表４及び５に示す、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首及び肩領域にわたる緩んだ皮膚の、皮膚と筋肉の間（すなわち皮下注射）に行った。
【０４０７】
８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４０日目に血清を採取し、上述の実施例２に示す手順に従って、血清Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）レベルを測定した。実験のデータを以下の表に示す：
【０４０８】
【表４９】
2019527694.tif 000102
【０４０９】
加えて、上述の実施例２に示す手順に従って、−１０、−３、８、１５、２２、２９、３６、及び４０日目に採取された血清試料で血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを測定した。データを以下の表４９に示す：
【０４１０】
【表５０】
2019527694.tif 000103
【０４１１】
予想されたように、エンテカビルの投与は、ＨＢＶ  ＲＮＡｉ薬がない場合とある場合の両方において、ウイルス複製を低減させた。
【０４１２】
他の実施形態
本発明はこの詳細な説明と関連して記載されてきたが、前述の説明は本発明の範囲を例示したものであって、発明の範囲を限定することを意図したものではなく、発明の範囲は添付の特許請求の範囲により定義されると理解される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。
【配列表】
2019527694000001.app
【国際調査報告】
2019527694.tif 000104
2019527694.tif 000105
2019527694.tif 000106
2019527694.tif 000107