(57)【要約】本発明は、ポリア抽出物、デヒドロパキミ酸(DPA)、パキム酸(ＰＡ)、デヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)、ツムロース酸(ＴＡ)、ポリポレン酸C(ＰＡＣ)、3-エピ-デヒドロツムロース酸(EDTA)、デヒドロトラメチノール酸(ＤＴＴＡ)、トラメチノール酸(ＴＴＡ)、デヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)、エブリコ酸(ＥＡ)、ポリコ酸A(ＰＡＡ)および/またはポリコ酸B(ＰＡＢ)を製剤調製に使用し、該製剤が皮膚ケアまたは創傷ケアに使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の保護および/または創傷治癒の促進のために使用される製剤の製造における松塊抽出物の使用。
【請求項２】
前記松塊抽出物が、デヒドロパキミ酸(DPA)、パキム酸(ＰＡ)、デヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)、ツムロース酸(ＴＡ)、ポリポレン酸C(ＰＡＣ)、3-エピ-デヒドロツムロース酸(EDTA)、デヒドロトラメチノール酸(ＤＴＴＡ)、トラメチノール酸(ＴＴＡ)、デヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)、エブリコ酸(ＥＡ)、ポリコ酸A(ＰＡＡ)及びポリコ酸B(ＰＡＢ)の少なくとも一つを含む、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
前記松塊抽出物が松塊表皮抽出物である、請求項1に記載の使用。
【請求項４】
前記松塊表皮抽出物において、松塊表皮抽出物の総重量を基準として、ポリコ酸A及びポリコ酸Bの総量が少なくとも40重量%である、請求項3に記載の使用。
【請求項５】
前記調製物が化粧品、ケア製品または食品として提供され、前記化粧品、ケア製品および食品がコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって皮膚を保護することができる、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記化粧品、ケア製品及び食品は、肌に栄養を与えること、肌を引き締めること、肌を補修すること、保湿すること、しわを滑らかにすること、肌の老化を遅らせること、及び肌の老化を防ぐことのうちの少なくとも1つに使用されることを特徴とする請求項5に記載の使用。
【請求項７】
前記製剤が薬剤として提供され、該薬剤がコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって創傷治癒を促進する、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
皮膚保護及び/又は創傷治癒促進のために用いられる製剤であって、有効成分がデヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメチノール酸、トラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸B、ポリコ酸A及びポリコ酸の少なくとも1つである製剤の製造における有効成分の使用。
【請求項９】
前記有効成分が、ポリコ酸A及び/又はポリコ酸Bであることを特徴とする請求項8に記載の使用方法。
【請求項１０】
活性成分が抽出物の形態で提供される、請求項8に記載の使用。
【請求項１１】
活性成分が、真菌エキスまたは植物エキスの形態で提供される、請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
前記調製物が化粧品、ケア製品または食品として提供され、前記化粧品、ケア製品および食品がコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって皮膚を保護することができる、請求項8ないし11のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
化粧品、ケア製品および食品が、栄養のある皮膚、皮膚の引き締め、皮膚の修復、保湿、しわの平滑化、皮膚老化の遅延、および皮膚老化の予防のうちの少なくとも一つに使用される、請求項12に記載の使用。
【請求項１４】
前記製剤が薬剤として提供され、該薬剤がコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって創傷治癒を促進する、請求項8ないし11のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、松塊（マツホド）（シノニム：poria cocos）抽出物および/またはその有効成分の使用に関し、特に、皮膚の保護および/または創傷治癒の促進における松塊抽出物および/またはその有効成分の使用に関する。松塊抽出物および/またはその有効成分は、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強するのに有効であるため、それらは皮膚を保護し、および/または創傷治癒を促進することができる。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の水分量が減少すると、正常に脱げない角質細胞が皮膚の表面に蓄積し、皮膚の光沢や弾力を失い、乾燥して荒れたように見える。しわなどの老化が始まることもあります。したがって、皮膚の水分を効果的に高めることができれば、上記のような事態の発生を抑制することができる。
【０００３】
コラーゲンやヒアルロン酸が肌の水分量を高めることが確認されています。従って、現在市販されている多くのケア製品およびコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸を外から添加した健康食品は、皮膚を栄養すること、皮膚を引き締めること、皮膚を修復すること、保湿すること、しわを滑らかにすること、皮膚老化を遅らせること、および皮膚老化を防止することの効果を宣伝する。また、コラーゲンは生体適合性が高く免疫力が低く、体内で吸収・分解されるため、コラーゲンを外から加えて創傷治癒効果を訴える健康食品もある。
【０００４】
しかしながら、近年、世界中での人畜共通伝染病(口蹄疫、鳥インフルエンザ、狂牛病など)の発生は、動物のコラーゲンとヒアルロン酸、外因性のコラーゲンやヒアルロン酸は、経口投与、経皮投与、注射などの投与方法にかかわらず、吸収率が低く、免疫応答が誘導される。上記の問題のため、外因性コラーゲンおよびヒアルロン酸の使用は、業界において議論の余地がある。そのため、内因性コラーゲンやヒアルロン酸の発現を増強する効果のある製剤や方法が積極的に開発されている。内因性コラーゲン及び/又はヒアルロン酸の発現を増強することによって、皮膚を保護する及び/又は創傷治癒を促進する効果を達成することができ、外因性コラーゲン及び/又はヒアルロン酸を補充することによって生じる安全性及び利用可能性の問題を回避することができる。
【０００５】
本発明者らは、松塊抽出物および/またはその活性成分が、細胞内コラーゲン、細胞外コラーゲンおよび/または細胞外ヒアルロン酸の含量を効果的に高めることができることを見出した。すなわち、松塊抽出物および/またはその活性成分は、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含量を効果的に高めることができ、したがって、松塊抽出物および/またはその活性成分は、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進する少なくとも1つのために使用することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明の1つの目的は、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進するための製剤の製造における松塊抽出物の使用を提供することである。好ましくは、松塊抽出物は、デヒドロパキミ酸(DPA)、パキム酸(ＰＡ)、デヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)、ツムロース酸(ＴＡ)、ポリポレン酸C(ＰＡＣ)、3-エピ-デヒドロツムロース酸(EDTA)、デヒドロトラメテノール酸(ＤＴＡ)、トラメノール酸(ＴＴＡ)、デヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)、エブリコ酸(ＥＡ)、ポリコ酸A(ＰＡＡ)及びポリコ酸B(ＰＡＢ)の少なくとも一つを含む。より好ましくは、松塊抽出物は、松塊表皮抽出物であり、松塊表皮抽出物において、松塊表皮抽出物の総重量を基準として、ポリコ酸Aおよびポリコ酸Bの総量が少なくとも40重量%である。
【０００７】
該調製物は、化粧品、ケア製品または食品として提供され、化粧品、ケア製品および食品は、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって皮膚を保護することができる。
【０００８】
化粧品、ケア製品及び食品は、肌に栄養を与える、肌を引き締める、肌を修復する、保湿する、しわを滑らかにする、肌の老化を遅らせる、及び肌の老化を防ぐ、のうちの少なくとも1つに使用される。
【０００９】
この製剤は、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強し、それによって創傷治癒を促進することができる薬剤として提供される。
【００１０】
本発明の別の目的は、皮膚保護および/または創傷治癒促進のための製剤の製造における活性成分の使用を提供することであり、活性成分は、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、エブリコ酸の少なくとも1つから選択される。
【００１１】
好ましくは、上記製剤は化粧品、ケア製品、食品または薬剤として提供される。この薬剤は、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強するのに有効であるため、創傷治癒を促進することができる。化粧品、ケア製品および食品は、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を高めるのに有効であるため、皮膚を保護することができ、したがって、栄養のある皮膚、皮膚の引き締め、皮膚の修復、保湿、しわの平滑化、皮膚老化の遅延、および皮膚老化の予防のうちの少なくとも1つに使用することができる。
【００１２】
本発明のさらに別の目的は、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進する方法であって、有効量の上記活性成分または松塊抽出物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供することである。
【００１３】
本発明のさらに別の目的は、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進するための組成物を提供することであり、この組成物は、化粧品、ケア製品、有効量の上記有効成分又は松塊エキスを含有する食品又は医薬品を提供する。
【００１４】
請求項に係る発明の特徴を当業者が十分に理解できるように、本発明のために実施される詳細な技術およびいくつかの実施形態を以下の段落に記載する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
以下、本発明の実施形態の一部について説明する。しかしながら、本発明の精神から逸脱することなく、本発明は様々な実施形態で実施することができ、本明細書に記載の実施形態に限定されるものではない。また、本明細書に別段の記載がない限り、本発明の明細書に記載された「個数指定なし」、「この」、(特に請求項において)等の表現は、単数形及び複数形の両方を含むものとする。本明細書において使用される用語「有効量」は、被験体に投与された場合に、被験体におけるコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を効果的に増強し得る化合物の量を指す。本明細書において使用される用語「主語」は、ヒトおよびヒト以外の動物を含む哺乳動物を指す。なお、本明細書で使用する単位「mg/kg体重」とは、体重kgあたりの投与量をいう。
【００１６】
上述のように、皮膚の水分含量の減少は、皮膚老化の重要な因子である。コラーゲンは、ヒトの結合組織および細胞外マトリックスの両方において重要な糖タンパク質であり、ヒトの体における全タンパク質の20%以上を占めることが知られている。コラーゲンの基本構造は三重らせんで、3本のポリペプチド鎖が互いに巻き合ってできている。三重らせん構造は皮膚の線維芽細胞で合成され、細胞外マトリックスに分泌されて固く成熟したコラーゲン線維を形成する。こういった構造により、コラーゲンは皮膚の弾力性を維持し、皮膚の水分含有量を増加させ、創傷治癒を促進する。
ヒアルロン酸は真皮に豊富に存在する。ヒアルロン酸はムコ多糖類であり、効果的な保湿剤であるため、肌の弾力性や水分量を維持し、しわを減らし、肌の老化を防ぐことができる。
【００１７】
ハーブFU-LINGは松塊（Poria cocos (Schw.) Wolf）の乾燥菌核を指す。ツガサルノコシカケ科の菌類である松塊(Poria cocos (FU-LING))真菌はしばしばマツの根に寄生する。松塊(Poria cocos (FU-LING))の外層は淡褐色(松塊表皮部)であり、松塊(Poria cocos (FU-LING))の内層は桃色又は白色(松塊肉部)である。伝統的漢方薬古典によれば,松塊は鎮静,利尿,栄養補給,免疫増強,老化遅延などに使用される。現代の医学研究はまた、松塊が抗炎症、抗腫瘍、免疫系調節、血糖降下、栄養分吸収促進などの機能を有することを確認している。本発明者らは、松塊抽出物が、細胞におけるコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸(すなわち、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含有量の増大)の発現を効果的に促進し得ることを見出した。したがって、松塊抽出物は、皮膚を保護し、創傷治癒を促進するために使用することができる。
【００１８】
したがって、本発明は、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進するための調製物の製造における松塊抽出物の使用を含む、皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進する松塊抽出物の使用を提供する。;皮膚を保護するおよび/または創傷治癒を促進するための方法であって、松塊抽出物を必要とする対象に投与することを含む方法;および松塊抽出物を含む組成物である。
【００１９】
本発明によれば、松塊抽出物は、粗抽出物であってもよいし、 (a) 松塊(原料等)を第一極性溶媒で抽出して粗抽出物を得る工程を含む抽出物であってもよい。;(b) 粗抽出物を乾燥して粗抽出物粉末を得る工程;(c) 粗抽出粉末を第2極性溶媒で抽出し、松塊抽出物を得る。第1の極性溶媒と第2の極性溶媒とは、同一または異なるものであり、それぞれ、水、エタノールおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される。本発明のいくつかの態様において、同じまたは異なるエタノール濃度を有する水性エタノール溶液を、第1の極性溶媒および第2の極性溶媒として使用した。
【００２０】
工程 (a) において、原料は「松塊表皮」および/または松塊肉であり得る。第1の極性溶媒と原料との量の比は、任意に調整することができる。一般的に、第1の極性溶媒に材料を均一に分散させることができれば、第1の極性溶媒の使用量に特に制限はない。例えば、工程 (a) において、第一の極性溶媒および原料は、約8:1〜約16:1(第一極性溶媒:原料)の範囲の体積比で使用することができる。本発明の一実施形態では、工程 (a) の抽出は、松塊表皮(原料として)およびエタノール水溶液(第一極性溶媒として)を用いて、原料に対するエタノール水溶液の体積比が8:1で行われた。本発明の別の態様において、工程 (a) の抽出は、松塊表皮及び肉(原料として)およびエタノール水溶液(第一極性溶媒として)を用いて、原料に対するエタノール水溶液の体積比が8:1であるようにして行った。
【００２１】
工程 (a) では、第1の極性溶媒の採用に応じて、適当な時間抽出を行うことができる。第1の極性溶媒としてエタノール水溶液を用い、エタノール水溶液:松塊の体積比が8:1の場合、抽出時間は通常1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは3時間以上である。工程 (a) は、必要に応じて、煎じ込み、冷却、濾過、真空濃縮、および樹脂カラムクロマトグラフィーなどの他の操作を伴うことができる。任意に、松塊は、工程 (a) を実施する前に、第1の極性溶媒に一定時間予め浸漬することができる。例えば、松塊は、エタノール水溶液が第一極性溶媒として供される場合、約12時間、第一極性溶媒に予め浸漬され得る。
【００２２】
工程 (c) では、工程 (b) で得られた第2の極性溶媒と粗抽出粉の量の比率を任意に調整することができる。一般に、粗抽出粉末を第2の極性溶媒中に均一に分散させることができれば、第2の極性溶媒の使用量に特に制限はない。例えば、工程 (c) において、第二極性溶媒および松塊の粗抽出粉末は、約8:1〜約16:1(第一極性溶媒:松塊の粗エキス粉末)の範囲の体積比で用いることができる。本発明の1つの態様において、工程 (c) の抽出は、第2の極性溶媒として水性エタノール溶液を使用し、かつ、水性エタノール溶液の、粗抽出粉末に対する体積比で行われた。
8:1の松塊。
【００２３】
本発明に用いられる松塊抽出物は、工程 (c) で得られた液体抽出物を乾燥することにより得られる乾燥物である。可能な限り高い抽出効率を達成するために、松塊の抽出は、任意に、工程 (b) の前に同一または異なる第一極性溶媒で反復することができ、こうして得られた液体抽出物を組み合わせて、工程 (b) で使用するための粗抽出物を提供することができる。また、ステップ (b)、ステップ (c)、および上述した他の任意の動作のサイクルを繰り返すことができる。
【００２４】
以下の実施例に示すように、本発明によれば、松塊抽出物から、デヒドロパキミ酸、パキム酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3―エピーデヒドロツムロース酸、デヒドロトラメノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸A、ポリコ酸Bなどの成分を精製して単離することができる。
【００２５】
本発明者らはさらに、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメテノール酸、トラメノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Aおよびポリコ酸Bの全てが、細胞を効果的に促進してコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸(すなわち、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含有量の増大)を発現させ、従ってそれらを保護することができることを見出した。従って、本発明は、皮膚の保護および/または創傷治癒の促進における活性成分の使用にも関し、ここで、活性成分は、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ホリコ酸Aおよびポリカ酸の製造の少なくとも1つから選択される。;皮膚を保護しかつ/または創傷治癒を促進するための方法であって、必要な対象に活性成分を投与することを含む方法;および活性成分を含む組成物。好ましくは、本発明に従って採用される活性成分抽出物の形で提供されます。より好ましくは、有効成分は、真菌エキスまたは植物エキスの形態で提供される。
【００２６】
本発明によれば、調製物または組成物は、化粧品、ケア製品、食品または薬剤として提供される。調製物または組成物が化粧品またはケア製品として提供される場合、所望の目的に応じて、化粧品またはケア製品は、特に限定されない任意の適切な形態で提供され得る。例えば、化粧品又はケア製品は、乳剤、クリーム、ゲル(例えば、ヒドロゲル)、ペースト(例えば、分散ペースト、軟膏)、スプレー又は外用溶液(例えば、洗浄液、懸濁液)の形態で提供することができるが、これに限定されるものではない。あるいは、本発明の調製物または組成物は、健康食品、美容飲料などの嚥下または飲用の食品に製造することができる。さらに、本発明の調製物または組成物は、皮下投与のための注射の形態で提供することもできる。
【００２７】
同様に、製剤または組成物が薬剤として提供される場合、所望の目的に応じて、薬剤は、特に限定されない任意の適切な形態で提供され得る。例えば、薬剤は、皮膚を保護しかつ/または創傷治癒を促進するために、経口または非経口(例えば、経皮、皮下または静脈内)経路によって必要な対象に投与することができるが、投与はそれによって制限されるものではない。形態および目的に応じて、適切な担体が選択され、薬剤を提供するために使用され得、ここで、担体は、賦形剤、希釈剤、助剤、安定剤、吸収遅延剤、崩壊剤、ハイドロトロープ剤、乳化剤、酸化防止剤、接着剤、結合剤、粘着付与剤、分散剤、懸濁剤、潤滑剤、および/または吸湿剤などを含む。
【００２８】
経口投与用の剤形として、医薬は、活性成分の所望の効果に悪影響を及ぼさない任意の薬学的に許容される担体を含むことができる(すなわち、松塊抽出物、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリオ酸Aおよびポリオ酸Bの少なくとも1つ)。例えば、薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールまたはそのアナログ、セルロース、デンプン、糖ベントナイト、およびそれらの組み合わせであり得る。薬剤は、錠剤(例:アラザン)、丸薬、カプセル、顆粒、パルビス、流体抽出物、溶液、シロップ、懸濁液、チンキ剤などの形態のような、経口投与に適した任意の形態で提供することができる。
【００２９】
皮下又は静脈内投与に適した注射剤又は点滴剤の形態に関しては、薬剤は、等張溶液、塩緩衝生理食塩水(例えば、リン酸緩衝生理食塩水またはクエン酸緩衝生理食塩水)、ハイドロトロープ剤、乳化剤、5%糖溶液、及び静脈内投与、乳化静脈内注入、注射用粉末、注射用懸濁液、又は注射用粉末懸濁液等として薬剤を提供するための他の担体のような一つ以上の成分を含むことができる。あるいは、薬剤は、注射前固体として調製され得る。注射前固体は、他の溶液または懸濁液に可溶な形態で、または乳化可能な形態で提供することができる。所望の注射は、必要な対象に投与される前に、前注射固体を他の溶液または懸濁液に溶解するか、またはそれを乳化することによって提供される。
【００３０】
必要に応じて、本発明に従って提供される調製物または組成物は、調製物または組成物の嗜好性および視覚認識を高めるための香味剤、トナー、または着色剤、および/または調製物または組成物の安定性および保存性を改善するための緩衝剤、保存剤、保存剤、抗菌剤、または抗真菌剤などの適切な量の添加剤をさらに含むことができる。さらに、製剤または組成物は、任意に、一つ以上の他の活性成分(例えば、コラーゲン、ヒアルロン酸、エラスチン、マンデル酸、アルブチンなど。)をさらに含むか、または一つ以上の他の活性成分を含む化粧品または薬剤と組み合わせて使用して、製剤または組成物の効果をさらに高めるか、または他の活性成分が本発明の製剤または組成物の所望の効果に悪影響を及ぼさない限り、このようにして提供される製剤または組成物の適用の柔軟性および適応性を高めることができる。
【００３１】
被験者の必要性、年齢、体重、健康状態に応じて、製剤、または本発明に従って提供される組成物は、1日に1回、1日に複数回、または数日に1回など、様々な投与頻度で投与することができる。
【００３２】
本発明はまた、有効量の活性成分(すなわち、松塊抽出物、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリオ酸Aおよびポリオ酸Bの少なくとも1つ)を必要とする被験体に投与することを含む、皮膚を保護する方法および創傷治癒を促進する方法の少なくとも一方を提供する。本発明の皮膚保護及び創傷治癒促進の少なくとも1つの方法において、関連する治療における活性成分の種類、投与経路、投与形態、適切な投与量及び使用は全て上記の説明と一致する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、本発明を具体例を用いて詳細に説明する。ただし、以下の実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲に示される。
【００３４】
例
[作成例]
A.          松塊抽出物の調製
【００３５】
A-1.       松塊(ハーブFU-LINGとも呼ばれる;生息地:中国雲南省)を洗浄し、
皮を剥いて(以下「松塊表皮」という)、残りは肉(以下 「松塊 meat」 という)。
【００３６】
A-2.       A―1から得たPoria cocos表皮を75%エタノール水溶液(Poria cocos epidermis:75%エタノール水溶液=1:8容量)に室温で12時間浸漬した後、3時間浸漬して液体抽出物を得た。上記の抽出手順を3回繰り返した。3つの抽出物から得た液体抽出物を合わせ、濾過して不溶性を除去し、粗抽出物を得た。粗抽出液に含まれる溶媒を真空濃縮により除去し、濃縮溶液を得た。濃縮液をスプレードライヤーで乾燥し、粗抽出粉末を得た。
【００３７】
A-3.       A―2から得られた粗抽出物粉末を95%エタノール水溶液(粗エキス粉末:95%エタノール水溶液=1:8容量)で3時間抽出し、得られた抽出液をシリカゲルの固定相カラムで溶離して松塊表皮抽出物を得た。
【００３８】
A-4.       A‐3から得た松塊表皮抽出物の成分を,ダイオードアレイUV検出と質量分析計(LC/UV/MS)を組み合わせた液体クロマトグラフィーにより,それぞれ243nmと210nmの波長で測定し,抽出物に含まれる各成分の含有量を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により定量した。その結果を表1に示す。
【００３９】
【表１】
2019529533.tif 000002
【００４０】
A-5.       A―1から得られた松塊表皮および肉を組み合わせた。
A―2およびA―3の抽出を繰り返し、松塊抽出物を得た。その後、得られた抽出物の成分をA―4の分析法により測定した。その結果,松塊抽出物はデヒドロパキミ酸,パキミ酸,デヒドロツムロース酸,ツムロース酸,ポリポレン酸C,3‐エピ‐デヒドロツムロース酸,デヒドロトラメテノール酸,トラメノール酸,デヒドロエブリコ酸,エブリコ酸,ポリコ酸A,ポリコ酸Bなどを含むことが分かった。
【００４１】
B.松塊エキス中の活性成分の調製
B-1.       A―5から得られた松塊抽出物をメタノール(松塊エキス:メタノール=1:500容量)に均一に分散させて混合物を得た。その後、ろ過して不溶物を除去した。残りの濾液を、それぞれ、243nmおよび210nmの波長の分取高速液体クロマトグラフィー(メタノール/水混液の移動相)によって精製し、デヒドロパキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメテノール酸、トラメノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Aおよびポリコ酸Bの一部を回収した。回収した部分を真空濃縮してメタノールを除去し、それぞれデヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3―エピーデヒドロツムロース酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Aおよびポリコ酸Bを得た。
【００４２】
B-2.       B―1から得たデヒドロパキミ酸,パキミ酸,デヒドロツムロース酸,ツムロース酸,ポリポレン酸C,3‐エピ‐デヒドロツムロース酸,デヒドロトラメチノール酸,デヒドロエブリコ酸,エブリコ酸,ポリコ酸A及びポリカ酸Bは,それぞれ243nm及び210nmの波長でダイオードアレイUV検出及び質量分析計(LC/UV/MS)と組み合わせた液体クロマトグラフィーにより98%の純度で検出された。
【００４３】
C.細胞培養
正常初代ヒト皮膚線維芽細胞(ATCCから購入)を線維芽細胞増殖培地で培養した。このようにして得られた細胞を以下の実験に用いた。
【００４４】
実施例1:細胞のコラーゲンおよびヒアルロン酸発現能力に対する松塊抽出物の効果
[調製例C]から提供された正常ヒト初代皮膚線維芽細胞を4グループに分け、それぞれ以下の培地で48時間培養した。
1.           グループI:線維芽細胞増殖培地;
2.           グループII:[調製例A―3]から得た松塊表皮抽出物0.005μg/mlを含む線維芽細胞増殖培地。;
3.           グループIII:[調製例A―3]から得た松塊表皮抽出物0.05μg/mlを含む線維芽細胞増殖培地。;
4.           グループIV:[調製例A―3]から得た松塊表皮抽出物0.5μg/mlを含む線維芽細胞増殖培地。
【００４５】
その後、各群の細胞培地を回収し、濃縮した。次いで,コラーゲンの細胞内含量,細胞培地中のコラーゲン含量(すなわち、コラーゲンの細胞外含量)および細胞培地中のヒアルロン酸含量を測定し,ウェスタンブロットおよび酵素結合免疫吸着検定法(ELISA法)により分析した。最後に,対照群(すなわち、グループIの培地で培養されている細胞)の結果を100%として,他の群のコラーゲンとヒアルロン酸の相対含量(パーセントで表示)を計算するための基礎として用いた。その結果を表2に示す。
【００４６】
【表２】
2019529533.tif 000003
【００４７】
表2に示されるように、対照群と比較して、本発明の松塊抽出物(すなわち、グループII、IIIまたはIVの培地で培養されている細胞)で処理される細胞は、コラーゲンの細胞内含有量、細胞培地中のコラーゲンの含有量 (すなわち、コラーゲンの細胞外含有量) および細胞培地中のヒアルロン酸の含有量。上記の結果は、本発明の松塊抽出物が、線維芽細胞(すなわち、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含有量の増大)におけるコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を効果的に増強することができ、従って、皮膚を保護し、創傷治癒を促進する少なくとも一つのために用いることができることを示す。
【００４８】
実施例2:松塊抽出物の有効成分が細胞のコラーゲンおよびヒアルロン酸発現能に及ぼす影響
(2-1)コラーゲンの細胞内発現
[調製例C]から提供された正常ヒト初代皮膚線維芽細胞を37群に分け、それぞれ以下の培地で48時間培養した。
1.           グループ1:線維芽細胞増殖培地
2.           グループ2―1〜グループ2―3:[調製例B]から得られるパキム酸(ＰＡ)をそれぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地;
3.           グループ3―1〜グループ3―3:[調製例B]から得られるデヒドロパキミ酸(DPA)を、それぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地;
4.           グループ4―1〜グループ4―3:[調製例B]から得られるツムロース酸(ＴＡ)を、それぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含有する線維芽細胞増殖培地;
5.           グループ5―1〜グループ5―3:[調製例B]から得られるデヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)をそれぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地;
6.           グループ6―1〜グループ6―3:それぞれ0.01、0.1および1μMの濃度で[調製例B]によって提供されるポリポレン酸C(ＰＡＣ)を含有する線維芽細胞増殖培地;
7.           グループ7―1〜グループ7―3:3―エピーデヒドロツムロース酸(EDTA)を含有する線維芽細胞増殖培地であって、[調製例B]により、それぞれ0.01、0.1および1μMの濃度で提供されるもの;
8.           グループ8―1〜グループ8―3:それぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度の[調製例B]によって提供されるデヒドロトラメテノール酸(ＤＴＡ)を含有する線維芽細胞増殖培地;
9.           グループ9―1〜グループ9―3:それぞれ0.01、0.1および1μMの濃度で[調製例B]によって提供されるトラメノール酸(ＴＴＡ)を含有する線維芽細胞増殖培地;
10.           グループ10―1〜グループ10―3:[調製例B]から得たポリコ酸A(ＰＡＡ)をそれぞれ0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地;
11.           グループ11―1〜11―3:[調製例B]により提供されるデヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)をそれぞれ0.01、0.1および1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地;
12.           グループ12―1〜グループ12―3:それぞれ0.01、0.1および1μMの濃度で[調製例B]によって提供されたポリ酸B(パブ)を含有する線維芽細胞増殖培地;
13.           グループ13―1〜13グループ:[調製例B]から得たエブリコ酸(ＥＡ)を、それぞれ
0.01μM、0.1μMおよび1μMの濃度で含む線維芽細胞増殖培地。
【００４９】
その後、各群の細胞培地を回収し、濃縮した。次いで,コラーゲンの細胞内含量を測定し,ウェスタンブロット法および酵素結合免疫吸着検定法(ELISA法)により分析した。最後に,対照群(すなわち、グループ1の培地で培養されている細胞)の結果を100%とし,他の群のコラーゲンの相対含量(パーセントで表示)を計算する基礎として用いた。その結果を表3に示す。
【００５０】
【表３】
2019529533.tif 000004
【００５１】
表3に示されるように、対照群と比較して、パキミン酸、デヒドロパキミン酸、ツムロース酸、デヒドロツムロース酸、ポリポレン酸C、デヒドロトラメテノール酸またはポリコ酸Aで処理された細胞は、コラーゲンの細胞内含量を有意に高めた。上記の結果は、パキミン酸、デヒドロパキミ酸、ツムロース酸、デヒドロツムロース酸、ポリポレン酸C、デヒドロトラメテノール酸、およびポリコ酸Aが、線維芽細胞(すなわち、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含有量の増大)におけるコラーゲンの発現を効果的に増強することができ、したがって、皮膚保護および創傷治癒の促進の少なくとも一つのために用いることができることを示す。
【００５２】
(2-2)コラーゲンの細胞外発現
コラーゲンの細胞外発現に対する本発明の活性成分の効果を理解するために、実施例(2-1)によって提供された各群の濃縮細胞培地を測定し、ウェスタンブロットおよび酵素結合免疫吸着検定法(ELISA法)によって分析した。各群の培地中のコラーゲン含量(すなわち、コラーゲンの細胞外含量)を測定した。最後に,対照群(すなわち、グループ1の培地で培養されている細胞)の結果を100%とし,他の群のコラーゲンの相対含量(パーセントで表示)を計算する基礎として用いた。その結果を表4に示す。
【００５３】
【表４】
2019529533.tif 000005
【００５４】
表4に示すように、対照群と比較して、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、デヒドロトラメテノール酸、トラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Aおよびポリコ酸Bで処理した細胞は、コラーゲンの細胞外含量が有意に増加した。上記の結果は、本発明の活性成分が、線維芽細胞におけるコラーゲンの発現を効果的に増強することができ、従って、皮膚を保護すること及び創傷治癒を促進することの少なくとも1つのために使用することができることを示す。
【００５５】
(2-3)ヒアルロン酸の細胞外発現
ヒアルロン酸の細胞外発現に対する本発明の活性成分の効果を理解するために、実施例(21)によって提供された各群の濃縮細胞培地を、ウェスタンブロットおよび酵素結合免疫吸着検定法(ELISA法)によって測定し、分析した。各群の培地中のヒアルロン酸含量(すなわちヒアルロン酸の細胞外含量)を測定した。最後に,対照群(すなわち、グループ1の培地で培養されている細胞)の結果を100%として,他の群のヒアルロン酸の相対含量(パーセントで表示)を計算するための基礎として用いた。その結果を表5に示す。
【００５６】
【表５】
2019529533.tif 000006
【００５７】
表5に示すように、対照群と比較して、デヒドロパキミ酸、パキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレン酸C、3-エピ-デヒドロツムロース酸、トラメノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリオ酸Aまたはポリオ酸Bで処理した細胞は、ヒアルロン酸の細胞内含量が有意に増加していた。パキム酸、デヒドロパキミ酸、ツムロン酸、デヒドロツムロン酸または3-エピ-デヒドロツムロン酸で処理した細胞中のヒアルロン酸含量は,より有意に増加した。上記の結果は、本発明の活性成分が、線維芽細胞におけるヒアルロン酸の発現を効果的に増強することができ、従って、皮膚を保護するために使用することができることを示す。
【００５８】
上記の例に示されるように、本発明の松塊抽出物および/またはその活性成分は、実際に、細胞におけるコラーゲンおよびヒアルロン酸の発現を増強することができ(すなわち、内因性コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の含有量を増強する能力を有すること)、したがって、皮膚の保護(肌に栄養を与える、肌を引き締める、肌を修復する、潤いを保つ、しわを滑らかにする、肌の老化を遅らせる、肌の老化を防ぐなど)と創傷治癒の促進の少なくとも一つに用いられる。
【手続補正書】
【提出日】平成30年2月6日(2018.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
パキム酸(ＰＡ)を含まず、コラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強するために使用される製剤の製造における松塊抽出物の使用。
【請求項２】
松塊抽出物が、デヒドロパキミ酸(DPA)、デヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)、ツムロース酸(ＴＡ)、ポリポレン酸C(ＰＡＣ)、3-エピ-デヒドロツムロース酸(EDTA)、デヒドロトラメチノール酸(ＤＴＴＡ)、トラメチノール酸(ＴＴＡ)、デヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)、エブリコ酸(ＥＡ)、ポリコ酸A(ＰＡＡ)及びポリコ酸B(ＰＡＢ)の少なくとも一つを含む、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
前記松塊抽出物が松塊表皮抽出物である、請求項1に記載の使用。
【請求項４】
前記松塊表皮抽出物において、松塊表皮抽出物の総重量を基準として、ポリコ酸A及びポリコ酸Bの総量が少なくとも40重量%である、請求項3に記載の使用。
【請求項５】
前記調製物が化粧品、ケア製品または食品として提供される、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記化粧品、ケア製品及び食品は、肌に栄養を与えること、肌を引き締めること、肌を補修すること、保湿すること、しわを滑らかにすること、肌の老化を遅らせること、及び肌の老化を防ぐことのうちの少なくとも1つに使用されることを特徴とする請求項5に記載の使用。
【請求項７】
前記製剤が薬剤として提供され、創傷治癒を促進するために使用される、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
コラーゲン及び/又はヒアルロン酸の発現を増強するために用いられる製剤であって、有効成分がデヒドロパキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレニン酸C、3-エピ-デヒドロツマチノール酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Ａ及びポリコ酸Ｂの少なくとも1つである製剤の製造における有効成分の使用。
【請求項９】
前記有効成分が、ポリ酸A及び/又はポリ酸Bであることを特徴とする請求項8に記載の使用。
【請求項１０】
活性成分が抽出物の形態で提供される、請求項8に記載の使用。
【請求項１１】
活性成分が、真菌エキスまたは植物エキスの形態で提供される、請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
前記調製物が化粧品、ケア製品または食品として提供される、請求項8ないし11のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
化粧品、ケア製品および食品が、栄養のある皮膚、皮膚の引き締め、皮膚の修復、保湿、しわの平滑化、皮膚老化の遅延、および皮膚老化の予防のうちの少なくとも一つに使用される、請求項12に記載の使用。
【請求項１４】
前記製剤が薬剤として提供され、創傷治癒を促進するために使用される、請求項8ないし11のいずれか一項に記載の使用。
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月6日(2019.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
松塊抽出物がパキム酸(ＰＡ)を含まず、
有効量の前記松塊抽出物を有するコラーゲンおよび/またはヒアルロン酸の発現を増強するための製剤。
【請求項２】
松塊抽出物が、デヒドロパキミ酸(DPA)、デヒドロツムロース酸(ＤＴＡ)、ツムロース酸(ＴＡ)、ポリポレン酸C(ＰＡＣ)、３-エピ-デヒドロツムロース酸(ＥＤＴＡ)、デヒドロトラメチノール酸(ＤＴＴＡ)、トラメチノール酸(ＴＴＡ)、デヒドロエブリコ酸(ＤＥＡ)、エブリコ酸(ＥＡ)、ポリコ酸Ａ(ＰＡＡ)及びポリコ酸Ｂ(ＰＡＢ)の少なくとも一つを含む、請求項1に記載の製剤。
【請求項３】
前記松塊抽出物が松塊表皮抽出物である請求項1に記載の製剤。
【請求項４】
前記松塊表皮抽出物において、松塊表皮抽出物の総重量を基準として、ポリコ酸Ａ及びポリコ酸Ｂの総量が少なくとも４０重量％である、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
化粧品、ケア製品または食品として提供される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
前記化粧品、ケア製品及び食品は、肌に栄養を与えること、肌を引き締めること、肌を補修すること、保湿すること、しわを滑らかにすること、肌の老化を遅らせること、及び肌の老化を防ぐことのうちの少なくとも１つに使用されることを特徴とする請求項5に記載の製剤。
【請求項７】
前記製剤が薬剤として提供され、創傷治癒を促進するために使用される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
コラーゲン及び/又はヒアルロン酸の発現を増強するために用いられる製剤であって、有効成分がデヒドロパキミ酸、デヒドロツムロース酸、ツムロース酸、ポリポレニン酸Ｃ、３-エピ-デヒドロツマチノール酸、デヒドロトラメチノール酸、デヒドロエブリコ酸、エブリコ酸、ポリコ酸Ａ及びポリコ酸Ｂの少なくとも1つである製剤の製造における有効成分を含む製剤。
【請求項９】
前記有効成分が、ポリ酸Ａ及び/又はポリ酸Ｂであることを特徴とする請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
活性成分が抽出物の形態で提供される請求項８及び９に記載の製剤。
【請求項１１】
活性成分が、真菌エキスまたは植物エキスの形態で提供される請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
前記製剤が化粧品、ケア製品または食品として提供される請求項８ないし１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１３】
化粧品、ケア製品および食品が、栄養のある皮膚、皮膚の引き締め、皮膚の修復、保湿、しわの平滑化、皮膚老化の遅延、および皮膚老化の予防のうちの少なくとも一つに使用される請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記製剤が薬剤として提供され、創傷治癒を促進するために使用される請求項８ないし１１のいずれか一項に記載の製剤。
【国際調査報告】
2019529533.tif 000007
2019529533.tif 000008
2019529533.tif 000009
2019529533.tif 000010
2019529533.tif 000011
2019529533.tif 000012
2019529533.tif 000013