(57)【要約】本発明は、PHY906またはスクテラリア・バイカレンシスの薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質の治療的有効量と、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤とを、それを必要とする対象に投与する段階を含む、対象の黒色腫および他のがんを処置する方法を提供する。特定の態様において、この方法は、グリシリザ・ウラレンシス、ペオニア・ラクチフロラ、およびジジファス・ジュジュバからなる群より選択される少なくとも1種の薬草に由来する少なくとも1種の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を投与する段階をさらに含む。本発明のこれらの方法は、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞がん、肝臓がん、結腸がん、尿路上皮膀胱がん、および膵がんなどのがんを処置するために有用である。特定の態様において、本発明の薬草抽出物の投与は、免疫チェックポイント阻害剤の1種もしくは複数種の胃腸副作用を抑制し、かつ/またはがんに対するそれらの治療指数を高める。2019519525.tif 000003
2019519525.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤と、
(a)スクテラリア・バイカレンシス(Scutellaria baicalensis)(S)の薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;
(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(Glycyrrhiza uralensis)(G)、ペオニア・ラクチフロラ(Paeonia lactiflora)(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Ziziphus jujuba)(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;
(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに
(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質
からなる群より選択される少なくとも1種の薬草組成物と
を含む、キット。
【請求項２】
(a)または(c)が、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)からなる群より選択される少なくとも1種の薬草に由来する薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質をさらに含む、請求項1に記載のキット。
【請求項３】
免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される、請求項1に記載のキット。
【請求項４】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブからなる群より選択される、請求項3に記載のキット。
【請求項５】
1種または複数種の薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項1に記載のキット。
【請求項６】
(a)スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;
(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;
(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに
(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質
からなる群より選択される少なくとも1種の薬草組成物の治療的有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、対象のがんを処置する方法であって、
該対象に、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤がさらに投与され、
がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞がん、肝臓がん、結腸がん、尿路上皮膀胱がん、および膵がんからなる群より選択される少なくとも1つである、
方法。
【請求項７】
(a)または(c)が、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)からなる群より選択される少なくとも1種の薬草に由来する、薬草抽出物、その画分、または該薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質をさらに含む、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される、請求項6に記載の方法。
【請求項９】
免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブからなる群より選択される、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
治療的有効量の薬草組成物が、悪心、嘔吐、疲労、結腸炎、および下痢からなる群より選択される免疫チェックポイント阻害剤の胃腸副作用のうちの1種または複数種を、最小限にするか、またはなくす、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１１】
がんが黒色腫である、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１２】
薬草組成物が対象に経口投与される、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１３】
薬草組成物が、丸剤、錠剤、カプセル剤、スープ、茶、濃縮物、糖衣錠、液剤、ドロップ、およびゼラチンカプセルからなる群より選択される形態で対象に経口投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
薬草組成物の治療的有効量が約20mg/日〜約2g/日である、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１５】
薬草組成物の治療的有効量が約1,600mg/日である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
薬草組成物が1日に2回投与される、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１７】
薬草組成物が、約1〜約2週間、1日に2回投与され、その後少なくとも1週間、処置が中止される、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与する前、投与と同時、および投与後より選択される時点に、薬草組成物が投与される、請求項6または7に記載の方法。
【請求項１９】
対象が哺乳動物である、請求項6に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物がヒトである、請求項19に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、2016年5月23日に出願された米国仮特許出願第62/340,164号の優先権を米国特許法119条(e)項に基づいて主張する。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、国立衛生研究所(NIH)によって授与された第CA154295-01A1号のもとで、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
多くの腫瘍は、免疫チェックポイントとしても公知の共抑制経路を上方調節することによって免疫系応答を回避することができる。PDL-PD1経路は、このような免疫チェックポイントの1つである。細胞傷害性T細胞(CD8陽性)は、腫瘍細胞に接近すると、腫瘍細胞表面でのPD-L1タンパク質発現を上方調節するインターフェロン-γ(IFNγ)を分泌する。腫瘍細胞膜上のPD-L1タンパク質とT細胞膜上のPD1タンパク質が相互作用することにより、T細胞の殺細胞作用が不活性化され、腫瘍はT細胞によって排除されることから逃れることができる。PDL-PD1経路を阻害することは、例えば、非小細胞肺がん、黒色腫、および腎細胞がんにおける腫瘍細胞増殖を阻害するのに有効であることが示されている。残念ながら、U.S.FDAに認可されたPD1阻害剤およびPD-L1阻害剤(例えば、非限定的に、ペンブロリズマブ(KEYTRUDA(登録商標))、ニボルマブ(OPDIVO(登録商標))、デュルバルマブ(MEDI4736)、アテゾリズマブ(TECENTRIQ(登録商標))、およびイピリムマブ(YERVOY(登録商標)))はまた、特に抗CTLA4との組合せで、悪心、下痢、疲労、結腸炎、および嘔吐を引き起こすことが知られている(例えば、図4を参照されたい)。
【０００４】
PHY906は、1,800年前に中国の書籍で最初に説明され、消化器症状を処置するのに使用されているオウゴントウ(Huang Qin Tang)薬草混合物をベースとする薬草混合物抽出物である。PHY906は、4種の薬草、すなわちスクテラリア・バイカレンシス(Scutellaria baicalensis)(S)、グリシリザ・ウラレンシス(Glycyrrhiza uralensis) (G)、ペオニア・ラクチフロラ(Paeonia lactiflora)(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Ziziphus jujuba)(Z)から構成されている。現在、PHY906は、cGMP(current Good Manufacturing Practice)に従って製造されている。臨床試験において、PHY906は、がんに対する化学療法の治療指数を向上させることが示されている。
【０００５】
このように、PDL-PD1経路を阻害することによって腫瘍を処置するための新規の組成物および方法についての当技術分野のニーズは、まだ満たされていない。特定の態様において、このような方法は、PDL-PD1経路阻害剤の治療指数を向上させ、かつ抗免疫チェックポイント療法の抗がん活性を損なわないべきである。本発明は、この未達成のニーズを満たす。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤、ならびに(a)スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質からなる群より選択される少なくとも1種の薬草組成物を含むキットを含む。
【０００７】
本発明のキットの特定の態様において、(a)または(c)は、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)からなる群より選択される少なくとも1種の薬草に由来する薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質をさらに含む。
【０００８】
特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される。他の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブからなる群より選択される。
【０００９】
特定の態様において、キットは、1種または複数種の薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００１０】
本発明は、対象のがんを処置する方法であって、それを必要とする対象に治療的有効量の少なくとも1種の本発明の薬草組成物および1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤を投与する段階を含み、がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞がん、肝臓がん、結腸がん、尿路上皮膀胱がん、および膵がんからなる群より選択される少なくとも1つである、方法もさらに提供する。特定の態様において、がんは黒色腫である。
【００１１】
特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される。他の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブからなる群より選択される。
【００１２】
特定の態様において、治療的有効量の薬草組成物は、悪心、嘔吐、疲労、結腸炎、および下痢からなる群より選択される免疫チェックポイント阻害剤の胃腸副作用のうちの1種または複数種を、最小限にするか、またはなくす。
【００１３】
特定の態様において、薬草組成物は、対象に経口投与される。他の態様において、薬草組成物は、丸剤、錠剤、カプセル剤、スープ、茶、濃縮物、糖衣錠、液剤、ドロップ、およびゼラチンカプセルからなる群より選択される形態で対象に経口投与される。
【００１４】
特定の態様において、薬草組成物の治療的有効量は、約20mg/日〜約2g/日である。他の態様において、薬草組成物の治療的有効量は、約1,600mg/日である。さらに別の態様において、薬草組成物は、1日に2回投与される。
【００１５】
特定の態様において、薬草組成物は、約1〜約2週間、1日に2回投与され、その後、少なくとも1週間、処置が中止される。
【００１６】
特定の態様において、薬草組成物は、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与する前、投与と同時、および投与後より選択される時点に投与される。
【００１７】
特定の態様において、対象は哺乳動物である。他の態様において、哺乳動物はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本発明の具体的な態様についての以下の詳細な説明は、添付図面と共に読むと、さらに良く理解されるであろう。本発明を例示するために、具体的な態様が図面に示される。しかし、本発明は、図面で示される態様と寸分違わない配置および手段には限定されないことを理解すべきである。
【図１Ａ】図1A〜1Gは、B6マウスの皮下に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906および抗PD-L1の効果を報告するグラフおよび表を示す。投与は次のとおりであった:PHY906(500mg/kg、1日2回、0日目〜5日目)および/または抗PD-L1(動物1匹につき150μg、IP、0日目および4日目)。図1A〜1Eは、様々な処置レジメン後の相対的腫瘍サイズを示す。図1Aは、4つの可能な処置レジメンの概略を示す。
【図１Ｂ】対照実験を示す。
【図１Ｃ】PHY906のみを用いる処置を示す。
【図１Ｄ】抗PD-L1のみを用いる処置を示す。
【図１Ｅ】PHY906と抗PD-L1の両方を用いる処置を示す。
【図１Ｆ】図1A〜1Eで報告されたデータの有意性を示す表であり、表中のP<0.05は有意な結果を示した。
【図１Ｇ】図1B〜1Fで報告された各処置レジメンにおける相対的体重変化を示すグラフである。
【図２Ａ】図2A〜2Fは、B6マウスの脳に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906および抗PD-L1の効果を報告するグラフを表す。図2Aは、対照、PHY906(500mg/kg、1日2回、0日目および5日目)、抗PD-L1(動物1匹につき150μg、IP、0日目および4日目)、またはPHY906と抗PD-L1の両方を用いる処置後の、B16脳腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフを表す。
【図２Ｂ】対照による処置後の(ルシフェラーゼイメージングを用いて測定される)腫瘍のルシフェラーゼ強度を示すグラフである。
【図２Ｃ】PHY906による処置後の(ルシフェラーゼイメージングを用いて測定される)腫瘍のルシフェラーゼ強度を示すグラフである。
【図２Ｄ】抗PD-L1による処置後の(ルシフェラーゼイメージングを用いて測定される)腫瘍のルシフェラーゼ強度を示すグラフである。
【図２Ｅ】PHY906および抗PD-L1による処置後の(ルシフェラーゼイメージングを用いて測定される)腫瘍のルシフェラーゼ強度を示すグラフである。
【図２Ｆ】図2B〜2Eで報告された各処置レジメンにおける体重(g)変化を示すグラフを表す。
【図３】B6マウスの皮下に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906(500mg/kg、1日2回、0日目、1日目、2日目、および3日目)、抗PD-L1(動物1匹につき150μg、IP、0日目)、PHY906+抗PD-L1、およびスクテラリア・バイカレンシス(S、500mg/kg、1日2回、0日目、1日目、2日目、および3日目)+抗PD-L1の効果を示すグラフを表す。
【図４】認可されている自己免疫チェックポイント治療物質の胃腸副作用を示す表である(Larkin, et al., 2005, N.Engl.Med. 373:23-34を目的に合うように変更した)。
【図５】進行した結腸直腸がんの患者におけるイリノテカンに基づくIFL化学療法の非血液学的毒性を示す表である(Kummar, et al., 2011, Clin.Colorectal Cancer 10(2):85-96を目的に合うように変更した)。
【図６Ａ】図6A〜6Dは、インビボでのB16黒色腫に対するPHY906の単独での、ならびに抗PD-L1抗体、抗PD1抗体、および抗CTLA4抗体と組み合わせての、効果を報告するグラフである。図6A〜6Cにおいて、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回投与され、必要に応じて、抗PD-L1(図6A、150μg/動物)、抗PD1(図6B、150μg/動物)、および抗CTLA4(図6C、300μg/動物)が3日毎に1回投与された。
【図６Ｂ】図6A〜6Cにおいて、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回投与され、必要に応じて、抗PD-L1(図6A、150μg/動物)、抗PD1(図6B、150μg/動物)、および抗CTLA4(図6C、300μg/動物)が3日毎に1回投与された。
【図６Ｃ】図6A〜6Cにおいて、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回投与され、必要に応じて、抗PD-L1(図6A、150μg/動物)、抗PD1(図6B、150μg/動物)、および抗CTLA4(図6C、300μg/動物)が3日毎に1回投与された。
【図６Ｄ】PHY906は、上述したように500mg/kgまたは1g/kgの投与量で1日2回投与され、抗PD1(150μg/動物)および抗CTLA4(300μg/動物)が3日毎に1回投与された。
【図７Ａ】図7A〜7Eは、Hepa1-6マウス肝臓腺がん腫瘍のサイズに対するPHY906の単独での、および抗PD1抗体と組み合わせての、効果を報告するグラフである。図7Aにおいて、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回、7日間投与された。抗PD1抗体は、実験開始時に1回、200μg/マウスの投与量で投与された。
【図７Ｂ】図7Aの各処置レジメンについて複数回の試験の平均をとった腫瘍サイズの変化を示す。
【図７Ｃ】図7Aと同様の実験を報告するグラフであり、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回、7日間投与され、抗PD1抗体は、実験開始時に1回、70μg/マウスまたは200μg/マウスの投与量で投与された。
【図７Ｄ】図7Aと同様の実験を報告するグラフであり、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回、7日間投与され、抗PD1抗体は、実験開始時に1回、70μg/マウスまたは200μg/マウスの投与量で投与された。
【図７Ｅ】図7C〜7Dの各処置レジメンについて複数回の試験の平均をとった腫瘍サイズの変化を示す。
【図８Ａ】図8Aおよび8Bは、CMT-167非小細胞肺がん腫瘍のサイズに対するPHY906の単独での、および抗PD1抗体と組み合わせての、効果を報告するグラフである。図8Aにおいて、PHY906は、500mg/kgの投与量で1日2回、7日間投与され、抗PD1抗体は、実験開始時に1回、200μg/マウスの投与量で投与された。
【図８Ｂ】図8Aの各処置レジメンについて複数回の試験の平均をとった腫瘍サイズの変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
発明の詳細な説明
1つの局面において、本発明は、下記の組成物のいずれかまたはそれらの任意の組合せを1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて用いて、黒色腫および他のがんを処置することができるという予想外の発見に関する:(a)スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質。特定の態様において、これらの薬草抽出物、またはその単離された画分もしくはその中に存在する活性化学物質を、免疫チェックポイント阻害剤と同時にまたは組み合わせて、がんに罹患している対象に投与することができる。特定の態様において、薬草抽出物は、水抽出物、アルコール抽出物、酸抽出物、塩基抽出物、またはそれらの任意の組合せを含む。
【００２０】
本発明はまた、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤および下記の組成物のいずれかまたはそれらの任意の組合せを含む薬学的組成物を含むキットにも関する:(a)スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質。
【００２１】
定義
本明細書において使用される場合、下記の各用語は、このセクションでそれに関連付けられている意味を有する。
【００２２】
他に規定されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において説明されるものと同様または等価な任意の方法および材料を、本発明の実践または試験において使用することができるが、例示的な方法および材料を説明する。
【００２３】
一般に、本明細書において使用する学名ならびに薬理学、天然物化学、および有機化学における実験手順は、当技術分野において周知の、一般に使用されるものである。
【００２４】
本明細書において使用される場合、冠詞「1つの(a)」および「1つの(an)」は、冠詞の文法的対象の1つまたは複数(すなわち、少なくとも1つ)を指す。例えば、「要素(an element)」とは、1つの要素または複数の要素を意味する。
【００２５】
本明細書において使用される場合、用語「がん」は、異常細胞の急速かつ制御不能な増殖を特徴とする疾患と定義される。がん細胞は、局部的にまたは血流およびリンパ系を介して他の身体部分に広がることができる。様々ながんの例には、骨がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、および肺がんなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２６】
1つの局面において、対象に関する用語「同時投与される」および「同時投与」は、本発明の化合物および/または組成物を、本明細書において企図される疾患または障害を同じく処置または予防し得る化合物および/または組成物と共に対象に投与することを意味する。特定の態様において、同時投与される化合物および/または組成物は、別々に、または単一の治療アプローチの一環として任意の種類の組合せで、投与される。同時投与される化合物および/または組成物は、様々な固形製剤、ゲル製剤、および液体製剤の形をとる固形物および液体の混合物として、ならびに液剤として、任意の種類の組合せで製剤化されてよい。
【００２７】
本明細書において使用される場合、用語「抽出物」は、薬草または他の植物材料などの天然に存在する供給源に由来する化合物または薬物の、濃縮された調製物または溶液を意味する。抽出物は、薬草を溶液に浸す段階、または薬草を乾燥および粉砕して粉末にし、その粉末を溶液中に溶かす段階を含む、いくつかの工程によって調製され得る。抽出物は、ある量の所望の化合物を溶液中に溶かした後に溶媒の一部分を除去することによって、さらに濃縮してもよい。また、抽出物をこすか、または遠心分離して、任意の固形材料を溶液から除去してもよい。
【００２８】
本明細書において使用される場合、語句「阻害する」は、分子、反応、相互作用、遺伝子および/もしくはタンパク質の発現、安定性、機能、もしくは活性を測定可能な量で減少させるか、または完全に妨げることを意味する。阻害剤とは、例えば、タンパク質および/または遺伝子の安定性、発現、機能、および活性に関して、結合するか、部分的もしくは全面的に刺激を妨害するか、減らすか、妨げるか、活性化を遅らせるか、不活性化するか、感度を低めるか、または下方調節する化合物、例えばアンタゴニストである。
【００２９】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的組成物」または「組成物」は、本発明の範囲内で有用な少なくとも1種の化合物と薬学的に許容される担体との混合物を意味する。薬学的組成物は、対象への化合物の投与を容易にする。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される」は、本発明の範囲内で有用な化合物の生物活性または特性を抑制せず、比較的に非毒性の、担体または希釈剤などの物質を意味する。すなわち、この物質は、望ましくない生物学的作用を引き起こすことも、それが含まれる組成物の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することもなく、対象に投与され得る。
【００３１】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、本発明の範囲内で有用な化合物を、意図された機能をそれが果たし得るように、対象の体内または対象に運搬または輸送するのに関与する、薬学的に許容される物質、組成物、または担体、例えば、液状もしくは固形の増量剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、希釈剤、賦形剤、増粘剤、溶剤、またはカプセル化材を意味する。典型的には、このような構築物は、身体の1つの器官または部分から、身体の別の器官または部分へと運搬または輸送される。各担体は、本発明の範囲内で有用な化合物を含めた、製剤の他の成分と適合性で、対象に害を与えないという意味で、「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体としての機能を果たし得る物質のいくつかの例には、糖、例えば、ラクトース、グルコース、およびスクロース;デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン;セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース;トラガント末;麦芽;ゼラチン;タルク;賦形剤、例えば、ココアバターおよび坐剤用ワックス;油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油;グリコール、例えばプロピレングリコール;多価アルコール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール;エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル;寒天;緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム;界面活性剤;アルギン酸;パイロジェンフリー水;等張生理食塩水;リンガー溶液;エチルアルコール;リン酸緩衝液;ならびに薬学的製剤中で使用される他の非毒性の適合可能な物質が含まれる。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される担体」はまた、本発明の範囲内で有用な化合物の活性と適合性であり、かつ対象に生理学的に許容される、任意およびすべてのコーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、ならびに吸収遅延剤なども含む。補助的な活性化合物もまた、組成物中に混合されてよい。「薬学的に許容される担体」は、本発明の範囲内で有用な化合物の薬学的に許容される塩をさらに含んでよい。本発明の実践に際して使用される薬学的組成物に含まれてよい他の付加的な成分は、当技術分野において公知であり、例えば、参照により本明細書に組み入れられるRemington’s Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)で説明されている。
【００３２】
本明細書において使用される場合、専門用語「薬学的に許容される塩」は、無機酸、無機塩基、有機酸、有機塩基を含む薬学的に許容される非毒性の酸および塩基、その溶媒和物、水和物、およびクラスレートから調製される、投与される化合物の塩を意味する。薬学的に許容される適切な酸付加塩は、無機酸または有機酸から調製され得る。無機酸の例には、スルファート、ヒドロゲンスルファート、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、およびリン酸(リン酸水素塩およびリン酸二水素塩を含む)が含まれる。適切な有機酸は、脂肪族酸、シクロ脂肪族酸、芳香族酸、芳香脂肪族酸、複素環酸、カルボン酸、およびスルホン酸類の有機酸より選択されてよく、これらの例には、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、4-ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸(パモ酸)、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β-ヒドロキシ酪酸、サリチル酸、ガラクタル酸、およびガラクツロン酸が含まれる。本発明の化合物の薬学的に許容される適切な塩基付加塩には、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、および遷移金属塩を含む金属塩、例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、および亜鉛塩などが含まれる。薬学的に許容される塩基付加塩にはまた、例えば、N,N’-ジベンジルエチレン-ジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン(Nメチルグルカミン)、およびプロカインなどの塩基性アミンから生じる有機塩も含まれる。これらの塩のすべてが、例えば、適切な酸または塩基を化合物と反応させることによって、対応する化合物から調製することができる。
【００３３】
用語「薬学的に有効な量」および「有効量」は、所望の生物学的結果を実現するための作用物質の非毒性であるが十分な量を意味する。この結果は、疾患もしくは障害の徴候、症状、もしくは原因の減少および/もしくは軽減、または生物系の他の任意の所望の変更であることができる。任意の個々の事例における適切な有効量は、ごく普通の実験を用いて、当業者が決定することができる。「薬学的製剤」とは、担体、溶剤、賦形剤、および/または塩が、製剤の有効成分(例えば、本発明の化合物)と適合性でなければならないことを、さらに意味する。本分野の当業者は、用語「薬学的製剤」および「薬学的組成物」が通常は相互交換可能であり、本出願の目的のためにそのように使用されることを理解する。
【００３４】
本明細書において使用される場合、用語「PHY906」は、グリシリザ・ウラレンシス・フィッシュ(Fisch)(G)、ペオニア・ラクチフロラ・パール(Pall)(P)、スクテラリア・バイカレンシス・ジョージ(Georgi)(S)、およびジジファス・ジュジュバ・ミル(Mill)(Z)を含む薬草組成物を意味する。PHY906は、例えば、標準的な操作手順のもとで調製された、3:2:2:2の比率でS、G、P、およびZを含む特定の組成物を意味することができる。
【００３５】
本明細書において使用される場合、用語「予防する」、「予防」、または「予防すること」は、疾患、障害、および/または病態、例えばがんの、1種または複数種の症状または特徴の発現を部分的または完全に予防するか、または遅延させるための任意の方法を意味する。予防とは、疾患状態の臨床症状を発達させないこと、すなわち、疾患状態にさらされているか、またはなりやすい可能性があるが、疾患状態の症状をまだ経験もしておらず示しもしていない対象において、疾患の発症を抑制することである。予防は、疾患、障害、および/または病態の徴候を示していない対象に施されてもよい。
【００３６】
本明細書において使用される場合、それに対して投与が企図される、用語「対象」、「患者」、または「個体」には、ヒト(すなわち、任意の年齢群の男性もしくは女性、例えば小児対象(例えば、幼児、子供、青年)もしくは成人対象(例えば、若年成人、中年成人、もしくは高齢成人))、ならびに/または他の霊長類(例えば、カニクイザル、アカゲザル);ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、および/もしくはイヌなどの商業的に有意義な哺乳動物を含む、哺乳動物;ならびに/またはニワトリ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、および/もしくはシチメンチョウなどの商業的に有意義な鳥類を含む、鳥類が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３７】
本明細書において使用される場合、用語「治療的有効量」とは、患者に投与された場合に、疾患または障害の症状を処置、最小化、および/または緩和する、本発明の化合物の量である。「治療的有効量」に相当する本発明の化合物の量は、化合物、疾患状態およびその重症度、ならびに処置される患者の年齢などに応じて変動するであろう。治療的有効量は、当業者が自身の知識および本開示を考慮して、ごく普通に決定することができる。
【００３８】
本明細書において使用される場合、用語「処置」または「処置する」は、治療物質、すなわち、(単独もしくは別の薬学的物質と組み合わせた)本発明の範囲内で有用な化合物を、対象に適用もしくは投与すること、または、がん、がんの症状、もしくはがんを発症する可能性を有する対象から(例えば、診断用途もしくはエクスビボ用途のために)単離された組織もしくは細胞株に、がん、がんの症状、もしくはがんを発症する可能性に関して、治癒するか、治すか、軽減するか、軽くするか、変更するか、治療するか、緩和するか、改善するか、もしくは影響を及ぼす目的で、治療物質を適用もしくは投与すること、と定義される。このような処置は、薬理ゲノム学の分野から得られる知識に基づいて個別化または改変してよい。
【００３９】
範囲:本開示の全体を通して、本発明の様々な局面は、範囲形式で示すことができる。範囲形式での説明は、便宜および簡略のためにすぎず、本発明の範囲に対する融通のきかない制限と解釈されるべきではないことを理解すべきである。したがって、範囲の説明は、存在し得る部分範囲すべてならびにその範囲内の個々の数値を具体的に開示したとみなされるべきである。例えば、1〜6のような範囲の説明は、1〜3、1〜4、1〜5、2〜4、2〜6、3〜6などの部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数および部分的な数、例えば、1、2、2.7、3、4、5、5.3、および6を具体的に開示したとみなされるべきである。このことは、範囲の広さに関わらず適用される。
【００４０】
以下の略語が、本明細書において使用される。
cGMP  現行の医薬品の製造および品質管理に関する基準
G  中国カンゾウとしても公知のグリシリザ・ウラレンシス・フィッシュ
IFNγ  インターフェロンγ
P  中国シャクヤクとしても公知のペオニア・ラクチフロラ・パール
S  コガネバナまたはオウゴンとしても公知のスクテラリア・バイカレンシス・ジョージ
Z  赤ナツメまたは中国ナツメとしても公知のジジファス・ジュジュバ・ミル
【００４１】
組成物
本発明は、がんを処置するための化合物および組成物に関する。特定の態様において、本発明の組成物は、黒色腫および他のがんを処置するために、抗PD-L1、抗PD1、または抗CTLA4に起因する胃腸への毒性を、それらの抗腫瘍活性に影響を及ぼさずに低下させるために、有用である。
【００４２】
特定の態様において、組成物は、スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。
【００４３】
特定の態様において、組成物は、スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。
【００４４】
特定の態様において、組成物は、Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。
【００４５】
特定の態様において、組成物は、S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。他の非限定的な態様において、組成物は、薬草S、G、P、およびZが約3:2:2:2の比で存在する、S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。別の非限定的な態様において、薬草抽出物はPHY906である。
【００４６】
特定の態様において、組成物は、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質を含む。
【００４７】
特定の態様において、組成物は、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤を含む。
【００４８】
特定の態様において、組成物は、1種または複数種の薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００４９】
特定の態様において、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される。他の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、CTLA4を標的とするイピリムマブ(YERVOY(登録商標))、PD1を標的とするペンブロリズマブ(KEYTRUDA(登録商標))およびニボルマブ(OPDIVO(登録商標))、ならびにPD-L1を標的とするデュルバルマブおよびアテゾリズマブ(TECENTRIQ(登録商標))からなる群より選択される。
【００５０】
処置方法
本発明は、それを必要とする対象に治療的有効量の本発明の組成物を投与する段階を含む、対象のがんを処置する方法を含む。特定の態様において、この方法は、(a)スクテラリア・バイカレンシス(S)の薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(b)スクテラリア・バイカレンシス(S)、グリシリザ・ウラレンシス(G)、ペオニア・ラクチフロラ(P)、およびジジファス・ジュジュバ(Z)の薬草抽出物を含む薬草抽出物PHY906、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;(c)Sの抽出物を含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質;ならびに(d)S、G、P、およびZの組合せを含む薬草抽出物、その画分、またはこの薬草抽出物もしくはその画分中に存在する任意の活性化学物質からなる群より選択される少なくとも1つを、対象に投与する段階を含む。他の態様において、この方法は、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤を対象に同時投与する段階を含む。
【００５１】
特定の態様において、1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD1、抗PD-L1、および抗CTLA4からなる群より選択される。他の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、CTLA4を標的とするイピリムマブ(YERVOY(登録商標))、PD1を標的とするペンブロリズマブ(KEYTRUDA(登録商標))およびニボルマブ(OPDIVO(登録商標))、ならびにPD-L1を標的とするデュルバルマブおよびアテゾリズマブ(TECENTRIQ(登録商標))からなる群より選択されるが、それらに限定されるわけではない。
【００５２】
特定の態様において、1種または複数種の薬草抽出物は、対象に経口投与される。他の態様において、1種または複数種の薬草抽出物は、丸剤、錠剤、カプセル剤、スープ、茶、濃縮物、糖衣錠、液剤、ドロップ、およびゼラチンカプセルからなる群より選択される1種または複数種の形態で投与される。
【００５３】
特定の態様において、1種または複数種の薬草抽出物の治療的有効量は、約20mg/日〜約2g/日、特定の態様において約100mg/日〜約2g/日、および他の態様において約1.6g/日である。
【００５４】
特定の態様において、本発明の薬草抽出物は、約800mgの用量で1日2回投与されてよい(すなわち、800mgを1日2回または1,600mg/日)。特定の態様において、薬草抽出物は、約1〜約2週間、1日1回または2回投与される。特定の態様において、薬草抽出物は、約1〜約2週間投与され、その後、1週間以上、処置が中止される。
【００５５】
特定の態様において、治療的有効量の薬草抽出物は、免疫チェックポイント阻害剤の1種または複数種の胃腸副作用を抑制する。特定の非限定的な態様において、副作用は、悪心、嘔吐、疲労、結腸炎、および下痢からなる群より選択される少なくとも1種である。
【００５６】
特定の態様において、がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞がん、肝臓がん、結腸がん、尿路上皮膀胱がん、および膵がんからなる群より選択される少なくとも1つであるが、それらに限定されるわけではない。
【００５７】
特定の態様において、薬草抽出物および1種または複数種の免疫チェックポイント阻害剤は、相乗効果を示す。特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤の治療的有効量は、単独で投与される場合と比べて、本発明の方法の一環として投与される場合の方が少ない。他の態様において、免疫チェックポイント阻害剤を用いる処置の治療的有効期間は、単独で投与される場合と比べて、本発明の方法の一環として投与される場合の方が短い。さらに別の態様において、免疫チェックポイント阻害剤の腫瘍縮小および/または腫瘍抑制効果は、単独で投与される場合と比べて、本発明の方法の一環として投与される場合の方が大きい。
【００５８】
特定の態様において、対象は哺乳動物である。他の態様において、対象はヒトである。
【００５９】
投与/投与量/製剤
投与レジメンは、有効量を構成するものに影響を及ぼし得る。治療的製剤は、本発明において企図される疾患または障害の発症の前または後のいずれかに対象に投与されてよい。さらに、いくつかの分割された投与量、ならびに時間をずらされた投与量が、各日もしくは逐次的に投与されてもよく、または用量は、継続的に注入されてもよく、もしくはボーラス注入であってもよい。さらに、治療的製剤の投与量は、治療状況または予防状況の緊急性によって必要とされるのに応じて、比例的に増加または減少させてもよい。
【００６０】
患者、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトへの本発明の組成物の投与は、本発明において企図される疾患または障害を処置するのに有効な投与量および期間で、公知の手順を用いて実施されてよい。治療的効果を実現するのに必要な治療的化合物の有効量は、患者の疾患または障害の程度;患者の年齢、性別、および体重;ならびに本発明において企図される疾患または障害を処置する治療的化合物の能力などの因子によって変動し得る。最適な治療応答を実現するために、投薬レジメンを調整することもできる。例えば、いくつかに分割した用量を各日投与してもよく、または治療状況の緊急性によって必要とされるのに応じて用量を比例的に減少させてもよい。本発明の治療的化合物の有効用量範囲の限定的な例は、約1mg/kg体重/日〜約1,000mg/kg体重/日である。本発明を実践するのに有用な薬学的組成物は、1ng/kg/日〜100mg/kg/日の用量を送達するように投与されてよい。当業者は、関連する因子を調査し、過度に実験をすることなく治療的化合物の有効量について決定できるであろう。
【００６１】
本発明の薬学的組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、個々の患者、組成物、および投与様式に対して、患者に有毒とならずに所望の治療応答を実現するのに有効である有効成分の量を得るために、変更してよい。
【００６２】
具体的には、選択される投与量レベルは、使用される個々の化合物の活性、投与時間、化合物の排出速度、処置期間;化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、または物質;処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的健康状態、および以前の病歴;ならびに医薬分野において周知である同様の因子を含む、様々な因子に依存する。
【００６３】
当技術分野において通常の技能を有する医師、例えば内科医または獣医は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、内科医または獣医は、薬学的組成物中で使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療的効果を実現するために必要とされるよりも低いレベルで開始し、所望の効果が実現されるまで投与量を徐々に増加させることができる。
【００６４】
特定の態様において、投与を容易にし投与量を均一にするために化合物を単位剤形で製剤化することが有利である。本明細書において使用される単位剤形とは、処置される患者に対する単位投与量として適した物理的に個別の単位を意味し、各単位は、必要な薬学的ビヒクルとの関連で所望の治療的効果を生じるように算出された所定の量の治療的化合物を含む。本発明の単位剤形は、(a)治療的化合物の独特の特徴および実現すべき個々の治療的効果、ならびに(b)本発明において企図される疾患または障害を処置するためにこのような治療的化合物を調合/製剤化する技術につきものの制約によって定まり、かつこれらに直接的に依存する。
【００６５】
特定の態様において、本発明の組成物は、1種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または担体を用いて製剤化される。他の態様において、本発明の薬学的組成物は、治療的有効量の本発明の化合物および薬学的に許容される担体を含む。さらに別の態様において、本発明の化合物は、組成物中の唯一の生物学的に活性な作用物質(すなわち、がんを処置することができる)である。さらに別の態様において、本発明の化合物は、組成物中の治療的有効量の唯一の生物学的に活性な作用物質(すなわち、がんを処置することができる)である。
【００６６】
担体は、例えば、水、エタノール、多価アルコール(例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコールなど)、それらの適切な混合物、ならびに植物油を含む、溶媒または分散媒であってよい。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用によって、分散系の場合は必要とされる粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の活動の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなどによって実現することができる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、塩化ナトリウム、またはマンニトールおよびソルビトールなどの多価アルコールを組成物中に含むことが好ましい。注射用組成物の持続吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物中に含めることによって実現することができる。
【００６７】
特定の態様において、本発明の組成物は、1日に1〜5回またはそれより多くに及ぶ投与量で患者に投与される。他の態様において、本発明の組成物は、限定されるわけではないが、毎日、2日毎、3日毎に1回〜1週間に1回、および2週毎に1回を含む投与量範囲で患者に投与される。本発明の様々な組合せ組成物の投与頻度は、限定されるわけではないが、年齢、処置される疾患または障害、性別、全般的健康、および他の因子を含む多くの因子に応じて個体毎に異なることが、当業者には容易に明らかである。したがって、本発明は、任意の特定の投与レジメンに限定されると解釈されるべきではなく、任意の患者に投与される的確な投与量および組成物は、患者に関する他の全ての因子を考慮に入れて、主治医によって決定される。
【００６８】
投与用の本発明の化合物および/または組成物は、約1mg〜約10,000mg、約20mg〜約9,500mg、約40mg〜約9,000mg、約75mg〜約8,500mg、約150mg〜約7,500mg、約200mg〜約7,000mg、約400mg〜約6,000mg、約500mg〜約5,000mg、約750mg〜約4,000mg、約1,000mg〜約3,000mg、約1,000mg〜約2,500mg、約20mg〜約2,000mg、ならびにそれらの間の任意およびすべての整数単位または整数より小さい単位で増加した値の範囲で存在してよい。特定の態様において、本発明の化合物および/または組成物の用量は、約800mgである。
【００６９】
特定の態様において、本発明は、治療的有効量の本発明の化合物を単独で、または第2の薬学的物質と組み合わせて含む容器;および本発明で企図される疾患または障害の1種または複数種の症状を処置、予防、または軽減するために化合物を使用するための取扱い説明書を含む、容器入りの薬学的組成物に向けられている。
【００７０】
製剤は、慣習的な賦形剤、すなわち、経口、非経口、鼻腔、静脈内、皮下、腸内、または当技術分野で公知である他の任意の適切な投与様式に適している薬学的に許容される有機または無機の担体物質と混合して使用されてよい。薬学的製剤は、滅菌してよく、所望の場合は、補助剤、例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色剤、矯味剤、および/または芳香物質などと混合してよい。これらはまた、所望の場合、他の活性物質と混合してもよい。
【００７１】
本発明の組成物のいずれかの投与経路には、経口、鼻腔、直腸、腟内、非経口、口腔内、舌下、または局所が含まれる。本発明において使用するための化合物は、任意の適切な経路による投与向けに、例えば、経口または非経口、例えば、経皮、経粘膜(例えば、舌下、舌、(経)口腔内、(経)尿道、膣(例えば、経膣および膣周囲)、鼻腔(内)および(経)直腸)、膀胱内、肺内、十二指腸内、胃内、くも膜下腔内、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、動脈内、静脈内、気管支内、吸入、および局所投与向けに製剤化されてよい。
【００７２】
適切な組成物および剤形には、例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸剤、ゼラチンカプセル剤、トローチ剤、分散剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、顆粒剤、ビーズ、経皮吸収型貼付剤、ゲル剤、散剤、ペレット剤、マグマ剤、ロゼンジ剤、クリーム剤、パスタ剤、硬膏剤、ローション剤、ディスク剤、坐剤、鼻腔投与または経口投与用の液状噴霧剤、吸入用の乾燥粉末製剤またはエアロゾル化製剤、ならびに膀胱内投与用の組成物および製剤が含まれる。本発明において有用であろう製剤および組成物は、本明細書において説明される特定の製剤および組成物に限定されないことを理解すべきである。
【００７３】
経口投与
経口適用の場合、スープ、茶、濃縮物、錠剤、糖衣錠、液剤、ドロップ、坐剤、またはカプセル剤、カプレット剤、およびゼラチンカプセル剤が特に適している。経口使用向けの組成物は、当技術分野で公知の任意の方法に従って調製してよく、このような組成物は、錠剤を製造するのに適している不活性で毒性のない薬学的な賦形剤からなる群より選択される1種または複数種の作用物質を含んでよい。このような賦形剤には、例えば、ラクトースのような不活性な希釈剤;コーンスターチのような造粒および崩壊剤;デンプンのような結合剤;ならびにステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤が含まれる。錠剤はコーティングされなくてもよく、または見た目を良くするためもしくは有効成分の放出を遅らせるために公知の技術によってコーティングされてもよい。経口使用向けの製剤はまた、有効成分が不活性希釈剤と混合されている硬ゼラチンカプセル剤として提供されてもよい。
【００７４】
経口投与の場合、本発明の化合物は、結合剤(例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース);増量剤(例えば、コーンスターチ、ラクトース、微結晶性セルロース、もしくはリン酸カルシウム);滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、もしくはシリカ);崩壊剤(例えばグリコール酸デンプンナトリウム);または湿潤剤(例えばラウリル硫酸ナトリウム)などの薬学的に許容される賦形剤を用いて従来手段によって調製された、錠剤またはカプセル剤の形態であってよい。所望の場合は、錠剤は、適切な方法およびコーティング材料、例えばColorcon(West Point, Pa.)から入手可能なOPADRY(商標)フィルムコーティングシステム(例えば、OPADRY(商標)OY型、OYC型、有機腸溶性OY-P型、水性腸溶性OY-A型、OY-PM型、およびOPADRY(商標)白、32K18400)を用いてコーティングされてよい。経口投与向けの液体製剤は、液剤、シロップ剤、または懸濁剤の形態であってよい。これらの液体製剤は、薬学的に許容される添加剤、例えば、懸濁化剤(例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、または硬化食用脂);乳化剤(例えば、レシチンまたはアラビアゴム);非水系ビヒクル(例えば、アーモンド油、油状エステル、またはエチルアルコール);および保存剤(例えば、メチルp-ヒドロキシベンゾアートもしくはプロピルp-ヒドロキシベンゾアートまたはソルビン酸)を用いて従来手段によって調製されてよい。
【００７５】
造粒技術は、有効成分の出発粉末または他の粒子状物質を改変するために、製薬分野において周知である。典型的には、これらの粉末は、結合剤材料と混合されて、より大きく長持ちのするさらさらした塊または顆粒にされ、「造粒」と呼ばれる。例えば、溶媒を用いる「湿式」造粒方法は、通常、粉末を結合剤材料と混合し、湿式造粒された塊の形成をもたらす条件下で水または有機溶媒で湿らせる(その後、この溶媒は塊から蒸発させなければならない)ことを特徴としている。
【００７６】
通常、溶融造粒は、添加される水または他の液状溶媒が本質的にない状況で粉末化材料または他の材料の造粒を促進するために、室温で固体または半固体である(すなわち、比較的低い軟化点または融点の範囲を有する)材料を使用することに本質がある。低融点の固体は、融点範囲の温度まで加熱されると液化して、結合剤または造粒媒体の役割を果たす。液化した固体は、接触した粉末化材料の表面に広がり、冷却すると、固形の造粒された塊を形成し、この塊の中で最初の材料が互いに結び付けられている。次いで、結果として生じる溶融造粒は、打錠機に供給されるか、または経口剤形を調製するためにカプセル化されてよい。溶融造粒は、固体分散体または固溶体を形成させることによって有効物質(すなわち薬物)の溶解速度および生物学的利用能を向上させる。
【００７７】
米国特許第5,169,645号は、流動性が改善された直接的に圧縮可能なロウ含有顆粒を開示している。これらの顆粒は、ワックスをある種の流動改善添加剤と溶融物中で混合し、続いてその混合物を冷却し造粒すると、得られる。特定の態様においては、ワックスおよび添加剤の溶融した組合せ中でワックスそれ自体のみが溶融し、他の場合においては、ワックスおよび添加剤の両方が溶融する。
【００７８】
本発明はまた、本発明の1種または複数種の化合物の遅延放出を実現するための層および本発明で企図される疾患または障害を処置するための薬物の即時放出を実現するための別の層を含む多層錠剤も含む。ワックス/pH感受性ポリマー混合物を用いることにより、有効成分が閉じ込められて、その遅延放出が保証されている胃不溶性の組成物を得ることができる。
【００７９】
非経口投与
本明細書において使用される場合、薬学的組成物の「非経口投与」とは、対象の組織に物理的に侵入することを特徴とする任意の経路の投与および組織中の開口を介した薬学的組成物の投与を含む。したがって、非経口投与には、組成物の注射、外科的切開部を介した組成物の適用、および組織を貫通する非外科的創傷を介した組成物の適用などによる薬学的組成物の投与が含まれるが、それらに限定されるわけではない。特に、非経口投与は、限定されるわけではないが、皮下注射、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、および腎臓透析の注入技術を含むと企図される。
【００８０】
非経口投与に適した薬学的組成物の製剤は、滅菌水または滅菌等張生理食塩水などの薬学的に許容される担体と組み合わせられた有効成分を含む。このような製剤は、ボーラス投与または持続投与に適した形態で調製、包装、または販売され得る。注射剤は、単位剤形で、例えば、アンプルに入れて、または保存剤を含む多回投与用容器に入れて、調製、包装、または販売され得る。非経口投与用の製剤には、懸濁剤、液剤、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中の乳剤、パスタ剤、および埋め込み可能な持続放出性または生分解性の製剤が含まれるが、それらに限定されるわけではない。このような製剤は、懸濁化剤、安定化剤、または分散剤を非限定的に含む1種または複数種の付加的な成分をさらに含んでもよい。非経口投与用の製剤の1つの態様において、有効成分は乾燥(すなわち粉末状または顆粒状の)形態で提供され、適切なビヒクル(例えば滅菌済みパイロジェンフリー水)で再構成し、再構成された組成物を非経口投与する。
【００８１】
これらの薬学的組成物は、無菌注射用の水性または油性の懸濁剤または液剤の形態で調製、包装、または販売され得る。この懸濁剤または液剤は、公知の技術に従って製剤化されてよく、かつ有効成分に加えて、本明細書において説明される分散剤、湿潤剤、または懸濁化剤などの付加的成分を含んでよい。このような無菌注射剤は、例えば水または1,3-ブタンジオールなど非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶剤を用いて調製され得る。他の許容される希釈剤および溶剤には、リンガー溶液、等張塩化ナトリウム溶液、および合成のモノグリセリドまたはジグリセリドなどの不揮発性油が含まれるが、それらに限定されるわけではない。有用である他の非経口的に投与可能な製剤には、微結晶型で、リポソーム調製物中に、または生分解性ポリマー系の成分として、有効成分を含むものが含まれる。持続放出または埋め込み用の組成物は、乳濁液、イオン交換樹脂、難溶性ポリマー、または難溶性塩などの薬学的に許容されるポリマー材料または疎水性材料を含んでよい。
【００８２】
制御放出製剤および薬物送達系
特定の態様において、本発明の製剤は、短期の、迅速なオフセットの、および制御された、例えば、持続放出性、遅延放出性、およびパルス放出性の製剤であってよいが、それらに限定されるわけではない。
【００８３】
持続放出という用語は、従来の意味で使用され、長期間にわたる薬物の段階的放出を実現し、また、必ずしもそうではないが、長期間にわたって実質的に一定の薬物血中レベルをもたらし得る、薬物製剤を意味する。期間は、1ヶ月またはそれより長くてよく、ボーラス形態で投与される同量の作用物質より長い放出であるべきである。
【００８４】
持続放出の場合、化合物は、持続放出特性を化合物に与える適切なポリマー材料または疎水性材料と共に製剤化され得る。従って、本発明の方法において有用な化合物は、例えば注射によって微粒子の形態で、または埋め込みによってウェーハ剤もしくはディスク剤の形態で、投与され得る。
【００８５】
本発明の1つの態様において、本発明の化合物は、徐放性製剤を用いて、単独でまたは別の薬学的物質と組み合わせて患者に投与される。
【００８６】
遅延放出という用語は、従来の意味で本明細書において使用され、薬物投与後いくらか遅延した後に初めて薬物を放出することを実現し、また、必ずしもそうではないが、約10分から最長で約12時間の遅延期間を含み得る、薬物製剤を意味する。
【００８７】
パルス放出という用語は、従来の意味で本明細書において使用され、薬物投与後に薬物のパルス状の血漿プロファイルをもたらすような方法で薬物を放出することを実現する薬物製剤を意味する。
【００８８】
即時放出という用語は、従来の意味で使用され、薬物投与後ただちに薬物を放出することを実現する薬物製剤を意味する。
【００８９】
本明細書において使用される場合、短期間とは、薬物投与後の薬物投与後の、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約40分、約20分、約10分、または約1分、およびそれらの任意またはすべての整数単位または整数より小さい単位で増加した値までの、およびそれらを含む、任意の期間を意味する。
【００９０】
本明細書において使用される場合、迅速なオフセットとは、薬物投与後の、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約40分、約20分、約10分、または約1分、ならびにそれらの任意およびすべての整数単位または整数より小さい単位で増加した値までの、およびそれらを含む、任意の期間を意味する。
【００９１】
投薬
本発明の化合物の治療的有効量または治療的有効用量は、患者の年齢および体重、患者の現在の医学的状態、ならびに本発明において企図される疾患または障害の進行に応じて変わる。当業者は、これらおよび他の因子に応じて適切な投与量を決定することができる。
【００９２】
本発明の化合物の適切な用量は、約0.01mg/日〜約5,000mg/日、例えば約0.1mg/日〜約1,000mg/日、例えば約1mg/日〜約500mg/日、例えば約5mg/日〜約250mg/日の範囲であってよい。用量は、1回の投与または複数回の投与で、例えば、1日に1〜5回またはそれより多い回数、投与されてよい。複数回の投与が使用される場合、各投与量の量は同じでも異なってもよい。例えば、1mg/日の用量は、用量0.5mgを2回、約12時間の投与間隔を空けて投与されてよい。
【００９３】
1日に投与される化合物の量は、非限定的な例において、毎日、1日おき、2日毎、3日毎、4日毎、または5日毎に投与されてよいことが、理解される。例えば、1日おきの投与の場合、用量5mg/日を月曜日に開始して、1回目の次の用量5mg/日を水曜日に投与し、2回目の次の用量5mg/日を金曜日に投与してよく、以下同様である。
【００９４】
患者の状態が改善する場合には、医師の裁量に基づいて、本発明の阻害剤の投与は、任意で継続的に行われる;あるいは、投与される薬物の用量が一時的に減らされるか、または一定の長さの期間、一時的に中止される(すなわち「休薬期間」)。休薬期間の長さは、ほんの一例として2日、3日、4日、5日、6日、7日、10日、12日、15日、20日、28日、35日、50日、70日、100日、120日、150日、180日、200日、250日、280日、300日、320日、350日、または365日を含む、2日〜1年の間で任意に変動する。休薬期間中の用量減少は、ほんの一例として10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、または100％を含む、10％〜100％を含む。
【００９５】
患者の病態が改善したら、必要に応じて、維持用量が投与される。続いて、投与量もしくは投与頻度または両方が、改善された疾患が保持されるレベルまで、疾患または障害の関数として減らされる。特定の態様において、患者は、症状および/または感染が再発することがあれば、長期に渡って間欠的な処置を必要とする。
【００９６】
本発明の方法で使用するための化合物は、単位剤形で製剤化されてよい。用語「単位剤形」は、処置を受ける患者に対する単位投与量として適した物理的に個別の単位を意味し、各単位は、任意で適切な薬学的担体との関連で所望の治療的効果をもたらすように算出された所定の量の活性物質を含む。単位剤形は、1日1回の投与のため、または1日複数回の投与(例えば、1日当たり約1〜5回もしくはそれより多い)のうちの1回のためのものであってよい。1日複数回の投与が使用される場合、単位剤形は、各投与について同じでも異なっていてもよい。
【００９７】
このような治療レジメンの毒性および治療的有効性は、実験動物において任意で測定され、限定されるわけではないが、LD50(集団の50％に対して致死的な用量)およびED50(集団の50％において治療的に有効な用量)の測定が含まれる。毒性作用と治療的効果の用量比が治療指数であり、LD50とED50の比として表される。ヒトにおいて使用するための投与量範囲を公式化する際に、動物試験から得られたデータが任意で使用される。このような化合物の投与量は、ED50を含み毒性が最小限である循環濃度の範囲内であることが好ましい。投与量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で任意に変動する。
【００９８】
当業者なら、慣用の域を出ない実験法を用いて、本明細書において説明される特定の手順、態様、特許請求の範囲、および実施例の多数の等価物を認識するか、または確認することができるであろう。このような等価物は、本発明の範囲内にあるとみなされ、本明細書に添付の特許請求の範囲に包含された。例えば、限定されるわけではないが、反応時間、反応規模/体積、および実験試薬を含む反応条件を当技術分野において認識されている代替物および慣用の域を出ない実験法を用いて改変することは、本出願の範囲に収まることを理解すべきである。
【００９９】
値および範囲が本明細書において提供される場合はいつでも、範囲形式での説明は、便宜および簡略のためにすぎず、本発明の範囲に対する融通のきかない制限と解釈されるべきではないことを理解すべきである。したがって、これらの値および範囲に包含される値および範囲はすべて、本発明の範囲内に包含されることを意図している。さらに、これらの範囲に収まるすべての値、ならびに値の範囲の上限値または下限値もまた、本出願によって企図される。範囲の説明は、存在し得るすべての部分範囲およびその範囲内の個々の数値、ならびに適切な場合には、範囲内の数値の整数未満の数を具体的に開示したとみなされるべきである。例えば、1〜6のような範囲の説明は、1〜3、1〜4、1〜5、2〜4、2〜6、3〜6などの部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数、例えば、1、2、2.7、3、4、5、5.3、および6を具体的に開示したとみなされるべきである。このことは、範囲の広さに関わらず、当てはまる。
【０１００】
以下の実施例は、本発明の局面をさらに例示する。しかし、これらは、本明細書におい説明される本発明の教示または開示を限定するものでは決してない。
【実施例】
【０１０１】
以下の実施例を参照して、本発明を以下に説明する。これらの実施例は、例証のために提供されるにすぎず、本発明は、これらの実施例に限定されると解釈されるべきでは決してなく、正しくは、本明細書において提供される教示の結果として明らかになる任意およびすべての変形例を包含すると解釈されるべきである。
【０１０２】
材料および方法
B16 B10ルシフェラーゼマウス黒色腫細胞を、C57BL6マウスへの腫瘍実施(皮下実施または脳実施)のために使用した。マウスモノクローナル抗PD-L1(クローン10B5)(150μg/マウス)を、すべての実験で使用した。PHY906(500mg/kg、1日2回)水抽出物を、これらの実験で使用した。
【０１０３】
B16 B10ルシフェラーゼマウス黒色腫細胞を、C57BL6マウスの皮下(マウス1匹につき細胞106個)または脳(マウス1匹につき細胞103個)に移植した。腫瘍移植から6日後に処置を開始した。マウスモノクローナル抗PD-L1(クローン10B5)(150μg/マウス、3日毎)を、すべての実験で使用した。500mg/kgのPHY906水抽出物を1日2回、マウスに経口的に与えた:皮下移植されたB16腫瘍の場合は毎日、脳B16腫瘍の場合は6〜9日目および13〜16日目。腫瘍の大きさが150〜300mm3であるマウスを選択した。腫瘍体積は、式(長さ×幅2)/2を用いて概算した。ルシフェラーゼイメージングのために、25mg/kgのルシフェリンを各マウスに注射し、IVISイメージングシステムを用いてルシフェラーゼイメージングを記録した。
【０１０４】
実施例1：薬草抽出物の調製
PHY906は、4種の薬草、すなわちスクテラリア・バイカレンシス・ジョージ(S)、ペオニア・ラクチフロラ・パール(P)、グリシリザ・ウラレンシス・フィッシュ(G)、およびジジファス・ジュジュバ・ミル(Z)の、それぞれ3:2:2:2の比率の従来の熱水抽出物から構成され、標準的な操作手順で調製される。この抽出物は、多数の生物学的特性および薬理学的特性を有する多数の植物化学物質の複雑な混合物を含む。現時点では、混合物全体から、関連性のある生物学的に活性な植物化学物質の部分集団を同定することは不可能である。このため、本発明者らは、高度な化学的および生物学的測定基準を利用してPHY906製品の特徴を明らかにする。
【０１０５】
PHY906の未加工成分を、台湾の薬草製造業者であるSun Ten Pharmaceuticalsによって受け入れられるように、PhytoCeuticaによって設定された厳密な仕様に合うように予め選択する。PHY906抽出物は、75％を超える1000amu未満の低分子量植物化学化合物、タンパク質、核酸、複合糖質を含む10％の高分子成分、および5％の水から構成される。さらに、10重量％の賦形剤としての不溶性セルロースが、製造時の噴霧乾燥段階の間に添加される。原子吸光測定によって検出した場合、重金属(Pb、Hg、Cd、As)はすべて0.5ppm未満であり、水銀およびカドミウムは0.03ppm未満である。農薬レベル(BHC、DDT、PCNB)は、LC-MSまたはGC-MSによって0.2ppm未満である。細菌総数は260cfu/gであるが、大腸菌(E. coli)およびサルモネラ菌(Salmonella)の種は検出されていない。含有水分(5％)および不溶性デンプン賦形剤(10％)を除いて、90重量％を超えるPHY906を再抽出することができる。最終的なPHY906液体抽出物(100mg/ml)は、室温で18時間安定であり、適切に保管された大量の乾燥抽出物(真空包装、遮光、4℃)は、3年を超えて安定なようである。PHY906に関するより詳細な情報は、Lam W, Bussom S, Guan F, Jiang Z, Zhang W, Gullen EA, Liu SH, Cheng YC, 2010, “The Four-Herb Chinese Medicine PHY906 Reduces Chemotherapy-Induced Gastrointestinal Toxicity”, Sci. Transl. Med. 2(45):45ra59中に見出すことができる。
【０１０６】
実施例2：PHY906薬草抽出物の、皮下黒色腫腫瘍成長に対する阻害活性
B6マウスの皮下に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906および抗PD-L1の効果を調査した。
【０１０７】
B6マウスの皮下または脳に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906およびPD-L1の組合せ効果を評価した。
【０１０８】
PHY906(500mg/kg、1日2回、0日目〜5日目;図1C)と抗PD-L1(動物1匹につき150μg、IP、0日目および4日目;図1D)の両方とも、B6マウスの皮下移植物であるB16黒色腫腫瘍の成長に対して有意な(P<0.005)阻害を示した。抗PD-L1に加えてPHY906を用いる処置は、抗PD-L1単独よりもB16腫瘍成長に対して強い阻害を示した(図1Aおよび1D)。
【０１０９】
すべての動物が抗PD-L1処置に応答したわけではなかった(図1D)。しかし、抗PD-L1とPHY906の併用処置は、すべての動物においてB16腫瘍の成長に対して阻害効果を示した(図1Aおよび1E)。動物への毒性の点では、体重減少ならびに顕著な血球数(白血球、赤血球、および血小板)は、いずれの処置群でも認められなかった(図1G)。
【０１１０】
結論として、PHY906は単独で、インビボで抗黒色腫効果を示した。さらに、抗PD-L1とPHY906の併用処置は、抗PD-L1単独よりも大きな抗黒色腫活性を示した。
【０１１１】
実施例3：PHY906薬草抽出物の、脳移植黒色腫腫瘍成長に対する阻害活性
B6マウスの脳に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906および抗PD-L1の効果を調査した。
【０１１２】
一般に、黒色腫では脳転移が見出される。したがって、B6マウスの脳に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対するPHY906およびPD-L1の組合せ効果を調査した。結果から、PHY906単独では、B16腫瘍を脳移植された動物の生存期間は長くならないことが示された。さらに、抗PD-L1単独では、B16腫瘍を脳移植された動物の生存期間は延びた。ルシフェラーゼ測定により、抗PD-L1が脳におけるB16腫瘍成長を減少させることが示された(図2A〜2E)。抗PD-L1とPHY906を組み合わせた場合、抗PD-L1単独と比べて、脳にB16腫瘍を有する動物の生存期間中央値は変わらなかった(図2A)。動物への毒性に関して、いずれの処置群でも体重減少は認められなかった(図2F)。結論として、PHY906は、脳における抗PD-L1の抗B16黒色腫活性を弱めなかった。
【０１１３】
実施例4：PHY906薬草抽出物およびS薬草抽出物の、皮下黒色腫腫瘍成長に対する阻害活性
B6マウスの皮下に移植されたB16黒色腫腫瘍の成長に対する、単離されたS、PHY906、および抗PD-L1の効果を調査した。
【０１１４】
B6マウスの皮下移植物であるB16黒色腫腫瘍の成長に対する、PHY906と抗PD-L1およびSと抗PD-L1の併用療法の効果を試験した。図3に示したように、単独のSは、抗PD-L1の抗腫瘍活性の強化および抗PD-L1の治療活性の強化という点で、PHY906と同程度の効果を有していた。
【０１１５】
実施例5：抽出物の分画手順
本発明の特定の態様において、本発明の抽出物(水抽出物および他の溶媒抽出物を含む)をさらに加工処理して、本発明の処置方法で使用できる単離された画分にすることができる。非限定的な例は、以下のとおりである。
【０１１６】
固相抽出方法
薬草の水抽出物または他の溶媒抽出物(1ml、100mg/ml)に、Discovery(登録商標)DSC-18 SPEチューブベッド重量1gを通過させる。1ml水、10％エタノール、30％エタノール、50％エタノール、70％エタノール、および100％エタノールを用いて、結合された化学物質を逐次的に溶出させる。様々な画分を減圧下で乾燥させて、ペレットを形成させる。乾燥させたペレットを、水を用いて再溶解して1mlにする。再溶解した溶液は、その後の実験において、元の薬草水抽出物投入量の「100mg/ml相当物」とみなされる。
【０１１７】
液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)
クロマトグラフィー分離は、ZORBAX-SBC18カラム(100mm×2.1mm内径、3.5μm、Agilent, Palo Alto, CA)を用いて実行する。移動相Aは、0.05％(v/v)ギ酸を含む水であり、移動相Bはアセトニトリルである。液体の流速は0.3mL/分に設定し、カラム温度は30℃で維持する。移動相は、0.05％(v/v)ギ酸(A)およびアセトニトリル(B)の直線勾配からなる。使用されるクロマトグラフィーシステムは、バイナリポンプ(モデルG1312B)、真空脱気装置(モデルG1379B)、オートサンプラー(モデルG1367C)、およびカラムオーブン(モデルG1316B)を含むAgilent 1200 HPLCシリーズからなる。化学物質の質量は、Applied Biosystems Sciex 4000 Q-trap(登録商標)質量分析計(Applied Biosystems Sciex; Foster, CA)によって検出される。データ取得は、DELLコンピューターにおいてAnalyst 1.4.2(登録商標)ソフトウェアを用いて実施する。
【０１１８】
実施例6：抗PD-L1抗体、抗PD1抗体、および抗CTLA4抗体を伴うPHY906の、B16黒色腫成長に対する阻害活性
インビボでの、B16黒色腫に対するPHY906の単独での、ならびに抗PD-L1抗体、抗PD1抗体、および抗CTLA4抗体と組み合わせての効果を、投与量500mg/kgのPHY906を1日に2回(図6A〜6D)、抗PD-L1(図6A、150μg/動物、3日毎に1回)、抗PD1(図6B/6D、150μg/動物、3日毎に1回)、抗CTLA4(図6C/6D、300μg/動物、3日毎に1回)、またはこれらの投与量の2つもしくはそれより多くの組合せを投与することによって試験した。
【０１１９】
抗PD-L1およびPHY906の組合せは、マウスモデルにおいて腫瘍の成長を遅らせるのに大きな効果を有していた(図6A)。抗PD1およびPHY906の組合せも同様に、いずれかを個別に使う場合よりも、強い効果を有していた。抗CTLA4およびPHY906の組合せは、腫瘍成長を阻害する際に強い効果は有していないようであった。しかし、抗PD1、抗CTLA4、およびPHY906の組合せは、非常に強い効果を示し、数名の対象において腫瘍の成長を完全に阻害した。
【０１２０】
実施例7：抗PD1抗体を伴うPHY906の、Hepa1-6マウス肝臓腺がん腫瘍に対する阻害活性
インビボでの、Hepa1-6マウス肝臓腺がん腫瘍に対するPHY906の単独の、および抗PD1抗体と組み合わせての効果を、投与量500mg/kgのPHY906を1日に2回、マウス1匹につき70μgもしくは200μgの投与量の抗PD1抗体を実験開始時に1回、または両方の処置の組合せを投与することによって試験した。PHY906または抗PD1のいずれかを用いて個別に処置すると、プラセボで処置されたマウスと比べて腫瘍成長が遅れることが判明した。さらに、PHY906と抗PD1の両方の組合せを用いる処置は、ずっと強力な腫瘍阻害効果をもたらした。これらの実験を繰り返したところ、併用処置の有効性は再現性があった。
【０１２１】
実施例8：抗PD1抗体を伴うPHY906の、CMT-167非小細胞肺がん腫瘍に対する阻害活性
インビボでの、CMT-167非小細胞肺がん腫瘍に対するPHY906の単独での、および抗PD1抗体と組み合わせての効果を、投与量500mg/kgのPHY906を1日に2回、マウス1匹につき200μgの投与量の抗PD1抗体を実験開始時に1回、または両方の処置の組合せを施すことによって試験した。どちらの処置も個別に腫瘍成長を妨げるが、PHY906と抗PD1の組合せの方が非小細胞肺がん腫瘍の成長に対してはるかに大きな阻害効果を示すことが判明した。
【０１２２】
本明細書に引用される、それぞれおよびすべての特許、特許出願、および刊行物の開示内容は、これによって、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。特定の態様に関して本発明を開示したが、本発明の他の態様および変形が、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、このような態様および等価な変形すべてを含むと解釈されるものとする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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