(57)【要約】  本発明は、免疫反応を病原体と関連付ける機能を有する新規化合物、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害における該化合物の使用、該化合物を含む組成物、その調製方法、並びに該方法において使用される新規中間体に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩：
【化１】
2019526614.tif 000086
（式中：
Lは、アミンによってX1と結合しているカチオン性抗微生物ペプチドから選択される結合部分であり；
S1は、結合、又は-CH2-基のうちの1〜5個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)a-若しくは-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-基から選択されるスペーサーであり；
aは、1〜40から選択される整数であり；
bは、0〜25から選択される整数であり；
cは、1〜20から選択される整数であり；
dは、1〜15から選択される整数であり；
S2は、-CH2-基のうちの1〜3個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)e-又は-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-基から選択されるスペーサーであり；
eは、1〜20から選択される整数であり；
fは、1〜10から選択される整数であり；
gは、1〜15から選択される整数であり；
hは、1〜5から選択される整数であり；
X1は、結合、又は-C(O)-であり；
Y1及びY2は独立に、結合、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、又は-C(O)NH-基であり；
Fは、ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することができる糖質分子であり；
mは、1〜5から選択される整数であり；かつ
Cyは、フェニル、ビフェニル、又はトリフェニルであり、Cyがビフェニル又はトリフェニルである場合、該-Y1-S1-X1-L基はいずれの該フェニル環上に存在してもよく、かつ該[F-S2-Y2]m-基（1又は複数）は、いずれの該フェニル環上に存在してもよい。）。
【請求項２】
S1が、結合、又は：
-CH2-基のうちの1若しくは5個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば-(CH2)5-CONH-(CH2)5若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5- CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-)；若しくは
-CH2-基のうちの2個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-、若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）、
から選択されるスペーサーであり；あるいは
S1が：
-CH2-基のうちの1個が-C(O)NH-基で置換されている、-(CH2)a-（例えば-(CH2)5-CONH-(CH2)5）；若しくは
-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）、
から選択されるスペーサーであり；あるいは
S1が、-CH2-基のうちの1個が-C(O)NH-基で置換されている、-(CH2)a-（例えば-(CH2)5-CONH-(CH2)5）、
から選択されるスペーサーである、請求項1記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項３】
aが：1〜35；又は10〜35；又は11若しくは35；又は11から選択される整数である、請求項1若しくは2記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項４】
bが、0〜24；又は0若しくは24；又は0から選択される整数である、請求項1〜3のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項５】
cが、1〜15；又は1〜10；又は8から選択される整数である、請求項1〜4のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項６】
dが、1〜3；又は1若しくは2；又は2から選択される整数である、請求項1〜5のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項７】
Y1が、-C(O)NH-若しくは-C(O)-；又は-C(O)NH-である、請求項1〜6のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項８】
S2が：
-CH2-基のうちの1若しくは3個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-若しくは-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-）；又は
-CH2-基のうちの2個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-（例えば-(CH2)3-NHCO-(CH2CH2O)4-(CH2)2-NHCO-CH2-）、
から選択されるスペーサーであり；あるいは
S2が、-CH2-基のうちの3つが-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-）から選択されるスペーサーである、請求項1〜7のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項９】
eが、1〜17；又は5〜17；又は5若しくは17；又は17から選択される整数である、請求項1〜8のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１０】
fが、1〜8；又は2〜6；又は4から選択される整数である、請求項1〜9のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１１】
gが、1〜5；又は1〜4；又は4から選択される整数である、請求項1〜10のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１２】
hが、1〜4；又は4から選択される整数である、請求項1〜11のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１３】
X1が、-C(O)-である、請求項1〜12のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１４】
Y2が、-O-である、請求項1〜13のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１５】
mが、1〜4；又は1、2、若しくは3；又は1若しくは2；又は1から選択される整数である、請求項1〜14のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１６】
Cyが、フェニル若しくはビフェニル；又はビフェニルである、請求項1〜15のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１７】
Fが、ガラクトシル-α-1,3-ガラクトシル-β-1,4-N-アセチルグルコサミン、α1-3ガラクトビオース、α1-3-β1-4-ガラクトトリオース、又はガリリペンタサッカリドから選択される、請求項1〜16のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１８】
Fが、以下の式に示される構造：
【化２】
2019526614.tif 000087
（式中、S2は、S2基との結合点を指す）を有する、請求項1〜17のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１９】
Lが、リポペプチド、例えばポリミキシンB、ポリミキシンB2、ポリミキシンノナペプチド、コリスチンA、コリスチンB、CB-182,204（Cubist Pharmaceuticals）、5a（Pfizer）、5x（Pfizer）、CA 14（Cantab Anti-Infectives）、CA824（Cantab Anti-Infectives）、NAB739（Northern Antibiotics）、NAB741（Northern Antibiotics）、NAB7061（Northern Antibiotics）、38（University of Queensland）、FADDI-002（Monash University）、FADDI-100（Monash University）、又はそれらの誘導体から選択されるポリミキシンである、請求項1〜18のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項２０】
Lが、リポペプチド；又はポリミキシンB誘導体；又は以下の構造：
【化３】
2019526614.tif 000088
2019526614.tif 000089
2019526614.tif 000090
（式中、X1は、X1基との結合点を指す）のうちの1つから選択されるポリミキシンB誘導体である、請求項1〜18のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項２１】
実施例1〜25のうちのいずれか1つから選択される、請求項1記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項２２】
請求項1〜21のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩、を含む医薬組成物。
【請求項２３】
治療における使用のための、請求項1〜21のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項２４】
感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患若しくは障害の治療における使用のための、請求項1〜21のいずれか1項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項２５】
感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患若しくは障害の治療における使用のための医薬の製造における、請求項1〜21のいずれか1項記載の式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩の使用。
【請求項２６】
感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患若しくは障害の治療方法であって、それを必要とする個体に請求項1〜21のいずれか1項記載の式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項２７】
請求項1記載の式(I)の化合物の製造方法であって：
(a) 式(II)の化合物を式(III)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-である（すなわち、式（IA）の化合物））を製造すること：
【化４】
2019526614.tif 000091
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、X1、L、及びFは請求項1記載の通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(b) 式(IV)の化合物を式(V)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-であり、かつX1は-C(O)-である（すなわち、式(IB)の化合物)）を製造すること：
【化５】
2019526614.tif 000092
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、L、及びFは請求項1記載の通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(c) 式(VI)の化合物を式(VII)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物を製造すること：
【化６】
2019526614.tif 000093
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、X1、L、及びFは請求項1記載の通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(d) 式(XII)の化合物を式(XIII)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-基である）を製造すること：
【化７】
2019526614.tif 000094
（ここで、S2、Y2、m、Cy、X1、L、及びFは先に記載の通りであり、S1A及びS1Bは一緒になってS1基を形成し、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(e) 式(I)の化合物又はその保護誘導体の、さらなる式(I)の化合物又はその保護誘導体への相互変換、
を含む、前記製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、免疫反応を病原体と関連付ける機能を有する新規化合物、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害における該化合物の使用、該化合物を含む組成物、その調製方法、並びに該方法において使用される新規中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
疾患と戦う個体の免疫系を動員するための新規方法を見出すことが要望されている。ヒト免疫系は外来シグナルを求めて継続的に身体を調査しており、潜在的に有害な病原体又は変異ヒト細胞（癌性成長の原因となり得る）を特定し、それらを標的化して排除する。前記病原体又は変異ヒト細胞へと動員され、免疫系を駆動して脅威を排除することの可能な自然抗体が存在する。本発明では、潜在的な副作用を最小限に抑えながら、免疫を動員する効力を最大化することの可能な様式でこれらの自然抗体を誘引するように設計された新規リンカー分子のセットの使用について詳述する。
【０００３】
細菌、ウイルス、及び真菌感染症の新規治療方法を特定することが喫緊に要望されている。薬物耐性は重大な全世界的健康脅威となりつつある。例えば、米国では200万人超が少なくとも1つのクラスの抗生物質に対し耐性を示す細菌に感染した（米国疾病管理予防センター（Centers for Disease Control and Prevention）、2013年）。総じて、グラム陰性生物の耐性株を標的化する新規抗生物質の同定は特に困難であったが、それは部分的にこれらの細菌の天然の非透過性細胞膜により細胞内へと透過して鍵となる標的を阻害する薬物を同定することを困難となっていることに合わせて、これらの細菌が抗生物質の作用を妨害するために使用する戦略が複雑でありかつ発展を遂げること（例えば、抗生物質を不活性化する酵素の生産、株間で耐性を伝達する能力、細胞内作用を妨害する流出ポンプ）に起因する。さらに、多くの株が複数の耐性機構を利用しており、単一の抗生物質によって克服することを困難にしている。
【０００４】
感染性疾患を治療するための革新的なアプローチがWO 01/45734で開示されており、該公報には新規免疫リンカーのセットが記載されている。前記リンカー部分の例には、前記個体の免疫系によって異物として認識され、従って免疫反応の誘因となる化合物又は薬剤がある。そのような例の1つは、ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することができる糖質分子（すなわち、ガラクトシル-α-1,3-ガラクトシル-β-1,4-N-アセチルグルコサミン）であり、該糖質分子はヒト血清自然抗体である抗α-ガラクトシルの再方向づけをもたらす。結果として得られる前記免疫リンカー分子の効果は、個体の免疫反応が前記個体の既存の免疫反応から標的、すなわち病原体へと転換されることである。
【０００５】
従って、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害の治療のための代替免疫リンカー分子が要望されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の第一の態様に従って、式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩：
【化１】
2019526614.tif 000002
（式中：
Lは、アミンによってX1と結合しているカチオン性抗微生物ペプチドから選択される結合部分であり；
S1は、結合、又は-CH2-基のうちの1〜5個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)a-若しくは-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-基から選択されるスペーサーであり；
aは、1〜40から選択される整数であり；
bは、0〜25から選択される整数であり；
cは、1〜20から選択される整数であり；
dは、1〜15から選択される整数であり；
S2は、-CH2-基のうちの1〜3個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)e-又は-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-基から選択されるスペーサーであり；
eは、1〜20から選択される整数であり；
fは、1〜10から選択される整数であり；
gは、1〜15から選択される整数であり；
hは、1〜5から選択される整数であり；
X1は、結合、又は-C(O)-であり；
Y1及びY2は独立に、結合、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、又は-C(O)NH-基であり；
Fは、ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することができる糖質分子であり；
mは、1〜5から選択される整数であり；かつ
Cyは、フェニル、ビフェニル、又はトリフェニルであり、Cyがビフェニル又はトリフェニルである場合、該-Y1-S1-X1-L基はいずれの該フェニル環上に存在してもよく、かつ該[F-S2-Y2]m-基（1又は複数）は、いずれの該フェニル環上に存在してもよい。）を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
（図面の簡単な説明）
【図１】「PMB_std」、「PMB_nona」、及び実施例1についての大腸菌（E. coli）LPSと結合したDPMBの置換率。蛍光強度の百分率を試験化合物濃度の関数としてプロットした。100％の蛍光強度は陽性対照であるDPMB＋LPSによって定義した。0％の蛍光強度は陰性対照であるDPMB＋水によって定義した。試料は「PMB_std」については三連で実行した。試料は「PMB_nona」及び実施例1については二連で実行した。エラーバーはSDを表す。
【図２】大腸菌LPS又は緑膿菌（P. aeruginosa）LPSと結合したDPMBの置換率。蛍光強度の百分率を試験化合物濃度の関数としてプロットした。100％の蛍光強度は陽性対照であるDPMB＋LPSによって定義した。0％の蛍光強度は陰性対照であるDPMB＋水によって定義した。試料は「PMB_std」及び「PMB_int」については三連で実行した。試料は「PMB_nona」及び実施例1については二連で実行した。エラーバーはSDを表す。
【図３】実施例4、5、6、7、及び9についてのヒト血清から大腸菌表面へのC3bの動員のフローサイトメトリー結果。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
言及され得る本発明の特定の一態様に従って、式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩：
【化２】
2019526614.tif 000003
（式中：
Lは、アミンによってX1と結合しているカチオン性抗微生物ペプチドから選択される結合部分であり；
S1は、結合、又は-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)a-若しくは-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-基から選択されるスペーサーであり；
aは、1〜15から選択される整数であり；
bは、0〜5から選択される整数であり；
cは、1〜20から選択される整数であり；
dは、1〜5から選択される整数であり；
S2は、-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されていてもよい、-(CH2)e-又は-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-基から選択されるスペーサーであり；
eは、1〜15から選択される整数であり；
fは、1〜10から選択される整数であり；
gは、1〜15から選択される整数であり；
hは、1〜5から選択される整数であり；
X1は、結合、又は-C(O)-であり；
Y1及びY2は独立に、結合、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、又は-C(O)NH-基であり；
Fは、ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することができる糖質分子であり；
mは、1〜5から選択される整数であり；かつ
Cyはフェニル、ビフェニル、又はトリフェニルであり、Cyがビフェニル又はトリフェニルである場合、該-Y1-S1-X1-L基はいずれの該フェニル環上に存在してもよく、かつ該[F-S2-Y2]m-基（1又は複数）は、いずれの該フェニル環上に存在してもよい。）を提供する。
【０００９】
本発明は、カチオン性ペプチド（細菌に特異的に結合する）と、1以上のヒト抗α-ガラクトシル抗体（すなわち、α-Gal三糖類）に結合することができる糖質分子単位とのリンカーを介して連結されたコンジュゲートを含む。カチオン性ペプチドの例は、ポリミキシンB（又はポリミキシンノナペプチド、コリスチン、又はそれらの誘導体）である。このカチオン性ペプチドのファミリーは細菌細胞表面上のリピドAと結合し、α-Galリンカーとコンジュゲートされた場合、α-Galを提示して、その結果抗Gal抗体を動員し、細胞を殺傷する。リピドAはグラム陰性細菌の生存に重要であるため、耐性率は低くなることが見込まれる。実際、ポリミキシン耐性株さえもカチオン性ペプチドのための結合部位を保持し、従ってペプチド-α-Galコンジュゲートのための結合部位を保持する。このように、本発明はこれらの株に対してさえも、効力を保持する。
【００１０】
明らかに、新規の機構を通じて機能し、かつ抗生物質耐性機構による影響を受けない新たな革新的治療法は、特に魅力的である。本発明によって提供される解決策、すなわちカチオン性ペプチドの広いスペクトルの細菌結合能と、自然に発生する抗Gal抗体を特異的に細菌表面に動員し、これらの抗体を補体活性化、貪食及び殺傷を促進するように再方向づけする特有の機能との組み合わせは、非常に魅力的である。本発明は細菌感染症のための広いスペクトルの活性を有する新規治療法を提供する可能性がある。抗生物質耐性機構とは独立した効力は、多剤耐性株に対して有効となる可能性がある。本発明は単剤として、並びに用量及び治療の持続期間を低下させるための標準治療とともに機能し得る。
【００１１】
一実施態様において、S1は：結合、又は：
-CH2-基のうちの1〜5個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5、-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5- CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-、-(CH2)2-、-CH2-CONH-(CH2)2-、-CH2-NHCO-(CH2)4-CONH-(CH2)2-、若しくは-(CH2)6-）；又は
-CH2-基のうちの1〜5個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-、若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2CH2O)8-(CH2)2-)
から選択されるスペーサーである。
【００１２】
さらなる実施態様において、S1は、結合、又は
-CH2-基のうちの1若しくは2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5, -(CH2)2-, -CH2-CONH-(CH2)2-, -CH2-NHCO-(CH2)4-CONH-(CH2)2-、若しくは-(CH2)6-）又は
-CH2-基のうちの1若しくは2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）
から選択されるスペーサーである。
【００１３】
さらなる実施態様において、S1は、結合、又は
-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5）又は
-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）
から選択されるスペーサーである。
【００１４】
なおさらなる実施態様において、S1は：結合、又は：
-CH2-基のうちの1若しくは5個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-）；又は
-CH2-基のうちの2個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-, -(CH2CH2O)8-(CH2)2-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-、若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH- (CH2CH2O)8-(CH2)2-）
から選択されるスペーサーである。
【００１５】
一実施態様において、S1は結合である。代替の実施態様において、S1は、-CH2-基のうちの1又は5個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-）である。代替の実施態様において、S1は、-CH2-基のうちの2個が-C(O)NH-基によって任意に置換されている、-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-、若しくは-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2)5-CONH-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）である。
【００１６】
さらなる実施態様において、S1は：
-CH2-基のうちの1個が-C(O)NH-基によって置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5）；又は
-(CH2)b-(CH2-CH2-O)c-(CH2)d-（例えば、-(CH2CH2O)8-(CH2)2-）
から選択されるスペーサーである。
【００１７】
なおさらなる実施態様において、S1は：
-CH2-基のうちの1個が-C(O)NH-基によって置換されている、-(CH2)a-（例えば、-(CH2)5-CONH-(CH2)5）
から選択されるスペーサーである。
【００１８】
a、b、c、d、e、f、g、及びhは基F及びLの間の好適なリンカー長を維持するように選択されることが認識されよう。F及びLの間の好適なリンカー長の例は、約5 Å〜約50 Å又はそれ以上の長さ、約6 Å〜約45 Å、約7 Å〜約40 Å、約8 Å〜約35 Å、約9 Å〜約30 Å、約10 Å〜約25 Å、約11 Å〜約20 Å、約12 Å〜約15 Åの範囲にわたる。従って、一実施態様において、a、b、c、d、e、f、g、及びhは合計で30以下の整数、例えば5〜30、例えば7〜29である。
【００１９】
さらなる実施態様において、aは1〜35から選択される整数である。さらなる実施態様において、aは1〜10から選択される整数である。さらなる実施態様において、aは2〜13から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、aは2、4、6、9、又は11から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、aは10〜35から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、aは11又は35から選択される整数である。実になおさらなる実施態様において、aは11から選択される整数である。
【００２０】
一実施態様において、bは0〜24から選択される整数である。さらなる実施態様において、bは0〜3から選択される整数である。さらなる実施態様において、bは0、2、又は3から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、bは0又は24から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、bは0から選択される整数である。
【００２１】
一実施態様において、cは1〜15から選択される整数である。さらなる実施態様において、cは1〜12から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、cは1〜10から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、cは8から選択される整数である。
【００２２】
一実施態様において、dは1〜3から選択される整数である。さらなる実施態様において、dは1又は2から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、dは2から選択される整数である。
【００２３】
一実施態様において、Y1は-C(O)NH-又は-C(O)-である。さらなる実施態様において、Y1は-C(O)NH-である。
【００２４】
一実施態様において、S2は：
-CH2-基のうちの1〜3個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-、-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-、-(CH2)3-NHCO-、-(CH2)3-、-(CH2)3-NHCO-(CH2)4-CONH-CH2-、若しくは-(CH2)3-NH-CH2-）；又は
-CH2-基のうちの1〜3個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-（例えば、-(CH2)3-NHCO-(CH2CH2O)4-(CH2)2-NHCO-CH2-、-(CH2)3-NHCO-(CH2)2-(CH2CH2O)4-NHCO-CH2-、若しくは-(CH2)4-NHCO-(CH2)2-(CH2CH2O)4-NHCO-CH2-）
から選択されるスペーサーである。
【００２５】
さらなる実施態様において、S2は：
-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-、-(CH2)3-NHCO-、-(CH2)3-、-(CH2)3-NHCO-(CH2)4-CONH-CH2-、若しくは-(CH2)3-NH-CH2-）；又は
-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-若しくは-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-（例えば、-(CH2)3-NHCO-(CH2)2-(CH2CH2O)4-NHCO-CH2-若しくは-(CH2)4-NHCO-(CH2)2-(CH2CH2O)4-NHCO-CH2-）
から選択されるスペーサーである。
【００２６】
さらなる実施態様において、S2は、-CH2-基のうちの1又は2個が-C(O)NH-又は-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-）から選択されるスペーサーである。
【００２７】
さらなる実施態様において、S2は：
-CH2-基のうちの1又は3個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-若しくは-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-）；又は
-CH2-基のうちの2つが-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-（例えば、-(CH2)3-NHCO-(CH2CH2O)4-(CH2)2-NHCO-CH2-）
から選択されるスペーサーである。
【００２８】
一実施態様において、S2は、-CH2-基のうちの1又は3個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-CH2-又は-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-）から選択されるスペーサーである。代替の実施態様において、S2は、-CH2-基のうちの2個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)f-(CH2-CH2-O)g-(CH2)h-（例えば、-(CH2)3-NHCO-(CH2CH2O)4-(CH2)2-NHCO-CH2-）から選択されるスペーサーである。
【００２９】
一実施態様において、S2は、-CH2-基のうちの3個が-NHC(O)-基によって任意に置換されている、-(CH2)e-（例えば、-(CH2)3-NHCO-(CH2)5-NHCO-(CH2)5-NHCO-CH2-）から選択されるスペーサーである。
【００３０】
一実施態様において、eは1〜17から選択される整数である。さらなる実施態様において、eは1〜10から選択される整数である。さらなる実施態様において、eは4〜10から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、eは4、5、又は10から選択される整数である。実になおさらなる実施態様において、eは5又は17から選択される整数である。実になおさらなる実施態様において、eは5から選択される整数である。実になおさらなる実施態様において、eは17から選択される整数である。
【００３１】
一実施態様において、fは1〜8から選択される整数である。さらなる実施態様において、fは2〜6から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、fは6から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、fは4から選択される整数である。
【００３２】
一実施態様において、gは1〜5から選択される整数である。さらなる実施態様において、gは1〜4から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、gは4から選択される整数である。
【００３３】
一実施態様において、hは1〜4から選択される整数である。さらなる実施態様において、hは1〜3から選択される整数である。さらなる実施態様において、hは1又は2から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、hは2から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、hは4から選択される整数である。
【００３４】
一実施態様において、X1は-C(O)-である。
【００３５】
一実施態様において、Y2は-O-である。
【００３６】
一実施態様において、mは1〜4から選択される整数である。さらなる実施態様において、mは1〜3から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、mは1、2、又は3から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、mは1又は3から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、mは1又は2から選択される整数である。なおさらなる実施態様において、mは1から選択される整数である。
【００３７】
一実施態様において、Cyはフェニル又はビフェニルである。さらなる実施態様において、Cyはビフェニルである。
【００３８】
本明細書における用語「ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することができる糖質分子」への言及には、前記ヒトの免疫反応構成要素（すなわち、抗α-ガラクトシル抗体）と結合することができ、その結果ヒトにおける免疫反応を誘発する糖（すなわち、糖質）部分を含む。そのような糖質分子の例には、α-ガラクトシル化合物及びその改変誘導体がある。好適な糖質分子のさらなる例には、腫瘍細胞の選択的標的化及び殺傷における使用に好適であるとしてUS 2012/0003251に列記されているα-Galエピトープがあり、そのエピトープは参照により本明細書に組み込まれている。一実施態様において、Fはガラクトシル-α-1,3-ガラクトシル-β-1,4-N-アセチルグルコサミン、α1-3 ガラクトビオース、α1-3-β1-4-ガラクトトリオース、又はガリリペンタサッカリド（galilipentasaccharide）から選択される。
【００３９】
特定の一実施態様において、Fは以下の式：
【化３】
2019526614.tif 000004
（式中、S2はS2基との結合点を指す）のうちの1つにおいて示されている構造を有する。
【００４０】
特定の一実施態様において、Fは以下の式：
【化４】
2019526614.tif 000005
（式中、S2はS2基との結合点を指す）において示されている構造を有する。
【００４１】
本明細書における用語「結合部分」への言及には、さらなる構成要素と結合することができる任意の好適な部分を指す。本発明にはアミンによってX1と結合されるカチオン性抗微生物ペプチドである結合部分が必要である。
【００４２】
一実施態様において、Lはリポペプチドである。さらなる実施態様において、リポペプチドはポリミキシン又はその誘導体を含む。好適なポリミキシン及びその誘導体の例は、Velkovらの文献(2016) Future Med Chem 8(10), 1017-1025に記載されており、ポリミキシン及びその誘導体は、参照により本明細書に組み込まれている。一実施態様において、ポリミキシン又はその誘導体は、ポリミキシンB、ポリミキシンB2、ポリミキシンノナペプチド、コリスチンA、コリスチンB、CB-182,204（Cubist Pharmaceuticals）、5a（Pfizer）、5x（Pfizer）、CA 14（Cantab Anti-Infectives）CA824（Cantab Anti-Infectives）、NAB739（Northern Antibiotics）、NAB741（Northern Antibiotics）、NAB7061（Northern Antibiotics）、38（University of Queensland）、FADDI-002（Monash University）、FADDI-100（Monash University）、又はそれらの誘導体から選択される。さらなる実施態様において、ポリミキシンは以下の構造：
【化５】
2019526614.tif 000006
を有するポリミキシンB又は誘導体である。
【００４３】
なおさらなる実施態様において、ポリミキシンB誘導体は、以下の構造を含む（式中、X1との結合点が示されている）：
【化６】
2019526614.tif 000007
2019526614.tif 000008
。
【００４４】
本発明のカチオン性抗微生物ペプチドは、特定の病原体又は感染性病原体と結合するよう構成されていることを認識されよう。
【００４５】
一実施態様において、本発明では実施例1〜25の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。さらなる実施態様において、本発明では実施例1〜14の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。なおさらなる実施態様において、本発明では実施例1〜10の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。実になおさらなる実施態様において、本発明では実施例4、6、9、17、若しくは22の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。実になおさらなる実施態様において、本発明では実施例17の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。
【００４６】
一実施態様において、本発明では実施例1〜25の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、式(I)の化合物を提供する。さらなる実施態様において、本発明では実施例1〜14の化合物の遊離塩基又はトリフルオロ酢酸塩である、式(I)の化合物を提供する。なおさらなる実施態様において、本発明では実施例1〜10の化合物の遊離塩基又はトリフルオロ酢酸塩である、式(I)の化合物を提供する。実になおさらなる実施態様において、本発明では実施例4、6、9、17、又は22の化合物の遊離塩基又はトリフルオロ酢酸塩である、式(I)の化合物を提供する。実になおさらなる実施態様において、本発明では実施例17の化合物の遊離塩基又はトリフルオロ酢酸塩である、式(I)の化合物を提供する。
【００４７】
また、式(I)の化合物及びその亜群への言及には、そのイオン形態、塩、溶媒和物、異性体（幾何及び立体化学異性体を含む）、互変異性体、N-オキシド、エステル、同位体、及び保護形態、例えば以下に論じるように；好ましくはその塩又は互変異性体又は異性体又はN-オキシド又は溶媒和物；及びより好ましくはその塩又は互変異性体又はN-オキシド又は溶媒和物、なおより好ましくはその塩又は互変異性体又は溶媒和物を含む。以後本発明の任意の態様において定義された化合物及びそれらのイオン形態、それらの塩、溶媒和物、異性体（幾何及び立体化学異性体を含む）、互変異性体、N-オキシド、エステル、同位体、及び保護形態（化学的プロセスにおける中間体化合物を除く）を、「本発明の化合物」と呼ぶ。
【００４８】
式(I)の化合物は塩、例えば酸付加塩、又はある事例ではカルボン酸塩、スルホン酸塩、及びリン酸塩等の有機及び無機塩基の塩の形態で存在し得る。そのような全ての塩は本発明の範囲内にあり、式(I)の化合物への言及には化合物の塩形態が含まれる。
【００４９】
本発明の塩は従来の化学的方法、例えば「薬学的塩：特性、選択、及び使用（Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use）」, P. Heinrich Stahl (編), Camille G. Wermuth (編), ISBN: 3-90639-026-8, ハードカバー, 388ページ, August 2002に記載の方法によって塩基部分を含む親化合物から合成することができる。一般にそのような塩はこれらの化合物の塩基形態を水中又は有機溶媒中又はこれら2つの混合物中で（一般に、非水性媒体、例えばエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルを使用する）適当な塩基又は酸と反応させることにより調製することができる
【００５０】
酸付加塩（単又は二塩）は、無機及び有機のどちらであってもよい多種多様の酸を用いて形成させることができる。酸付加塩の例には、酢酸、2,2-ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸（例えば、L-アスコルビン酸）、L-アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、4-アセトアミド安息香酸、ブタン酸、(+) ショウノウ酸、カンファースルホン酸、(+)-(1S)-カンファー-10-スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン-1,2-ジスルホン酸、エタンスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、D-グルコン酸、グルクロン酸（例えば、D-グルクロン酸）、グルタミン酸（例えば、L-グルタミン酸）、α-オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、ハロゲン化水素酸（例えば、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸）、イセチオン酸、乳酸（例えば、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸）、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、(-)-L-リンゴ酸、マロン酸、(±)-DL-マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ナフタレン-1,5-ジスルホン酸、1-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、L-ピログルタミン酸、サリチル酸、4-アミノ-サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、(+)-L-酒石酸、チオシアン酸、p-トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸、及び吉草酸、並びにアシル化アミノ酸及び陽イオン交換樹脂からなる群から選択される酸を用いて形成されるモノ又はジ塩がある。
【００５１】
塩の特定の一群は、酢酸、塩酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、リンゴ酸、イセチオン酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸（メシラート）、エタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、吉草酸、酢酸、プロパン酸、ブタン酸、マロン酸、グルクロン酸、及びラクトビオン酸から形成される塩からなる。1つの特定の塩は、塩酸塩である。別の特定の塩はヘミ硫酸塩としても知られる硫酸水素塩である。
【００５２】
式(I)の化合物がアミン官能基を含む場合、これらは例えば当業者に周知の方法によってアルキル化剤と反応させることにより、4級アンモニウム塩を形成させ得る。そのような4級アンモニウム化合物は式(I)の範囲内にある。
【００５３】
本発明の化合物は塩がそれから形成される酸のpKaに依存して、単又は二塩として存在し得る。
【００５４】
本発明の化合物の塩形態は典型的に医薬として許容し得る塩であり、医薬として許容し得る塩の例は、Bergeらの文献、1977, 「医薬として許容し得る塩（Pharmaceutically Acceptable Salts）」 J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19で論じられている。しかしながら、医薬として許容し得ない塩も中間体形態として調製することができ、該中間体はその後医薬として許容し得る塩へと変換することができる。そのような医薬として許容し得ない塩形態は、例えば本発明の化合物の精製又は分離において有用となる場合があり、該塩形態もまた本発明の一部を形成する。
【００５５】
有機化学の当業者であれば、多くの有機化合物が溶媒と複合体を形成することができ、該複合体においてそれらが反応したり、該複合体からそれらが析出し、又は結晶化されることを認識されよう。これらの複合体は「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は「水和物」として知られている。本発明の化合物の医薬として許容し得る溶媒和物は、本発明の範囲内にある。
【００５６】
また、アミン官能基を含む式(I)の化合物はN-オキシドを形成し得る。本明細書におけるアミン官能基を含む式(I)の化合物への言及も、N-オキシドを含む。
【００５７】
化合物がいくつかのアミン官能基を含む場合、1又は複数の窒素原子が酸化されてN-オキシドを形成し得る。N-オキシドの特定の例は3級アミン又は窒素含有複素環の窒素原子のN-オキシドである。
【００５８】
N-オキシドは対応するアミンを過酸化水素又は過酸（例えば、ペルオキシカルボン酸）などの酸化剤とともに処理することによって形成させることができる。例えば「最新有機化学（Advanced Organic Chemistry）」, Jerry March, 4版, Wiley Interscience, pagesを参照されたい。より詳細には、N-オキシドはアミン化合物をm-クロロペルオキシ安息香酸（mCPBA）と、例えばジクロロメタンのような不活性溶媒中で反応させるL. W. Deadyの手順（Syn. Comm. 1977, 7, 509-514）によって作製することができる。
【００５９】
当業者であれば、式(I)の化合物の特定の保護誘導体を最終脱保護段階の前に作製することができ、該保護誘導体はそれ自体では薬学的活性を有していなくてもよいが、特定の例において経口的又は非経口的に投与され、その後体内で代謝されて薬学的に活性である本発明の化合物を形成することを認識されよう。従ってそのような誘導体を「プロドラッグ」と記載し得る。本発明の化合物のそのようなプロドラッグの全てを本発明の範囲内に含める。本発明の化合物に好適なプロドラッグの官能性の例は、Drugs of Today, Volume 19, Number 9, 1983, pp. 499 - 538及び「化学のトピックス（Topics in Chemistry）」, Chapter 31, pp. 306 - 316及び「プロドラッグの設計（Design of Prodrugs）」、H. Bundgaard, Elsevier, 1985, Chapter 1（当該文書中の開示は参照により本明細書に組み込まれている）に記載されている。当業者であれば、例えばH. Bundgaardが「プロドラッグの設計」（当該文書中の開示は参照により本明細書に組み込まれている）において記載している「プロ部分（pro-moieties）」として当業者に知られる特定の部分を、適切な官能基が本発明の化合物内に存在する場合、そのような官能基上に配置してもよいことを、さらに認識されよう。
【００６０】
本発明の化合物及び様々な塩の多形体も、本発明の化合物及び様々な塩の範囲内に含まれる。
【００６１】
式(I)の化合物はいくつかの異なる幾何異性及び互変異性形態中に存在し得、式(I)の化合物への言及はそのような全ての形態を含む。不確かさを避けるために説明すると、化合物がいくつかの幾何異性又は互変異性形態のうちの1つにあり得、かつ1つだけが具体的に記載され、又は示される場合、それにもかかわらず他の全てが式(I)に包含される。
【００６２】
本発明は全ての医薬として許容し得る同位体標識された本発明の化合物、すなわち式(I)の化合物を含み、ここで1以上の原子は同じ原子番号を有するが、通常天然に見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子で置換されている。
【００６３】
本発明の化合物に含めるのに好適な同位体の例には、水素、例えば2H（D）及び3H（T）、炭素、例えば11C、13C、及び14C、フッ素、例えば18F、窒素、例えば13N及び15N、酸素、例えば15O、17O、及び18Oの同位体を含む。
【００６４】
特定の同位体標識された式(I)の化合物、例えば放射性同位元素を取り込んだ式(I)の化合物は、薬物及び/又は基質の組織分布研究に有用である。また、式(I)の化合物は、それを標識された化合物及び他の分子、ペプチド、タンパク質、酵素、又は受容体の間の複合体形成を検出又は識別するのに使用できる点で、有益な診断特性を有し得る。検出又は識別の方法では、標識剤、例えば放射性同位体、酵素、蛍光物質、発光物質（例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、エクオリン、及びルシフェラーゼ）等により標識された化合物を使用することができる。放射性同位体トリチウム、すなわち3H（T）及び炭素14、すなわち14Cは、それらの取り込みの容易さ及び検出手段が既に用意されていることに鑑みると、この目的に特に有用である。
【００６５】
重水素、すなわち2H（D）等のより重い同位体による置換は、代謝安定性の増大、例えばインビボ半減期の増加又は投薬必要量（dosage requirements）の低下に起因する一定の治療上の利点をもたらし得、そのために一部の状況で好ましいものとなる可能性がある。
【００６６】
陽電子放出同位体、例えば11C、18F、15O、及び13Nによる置換は、標的の占有度を調べるための陽電子放出断層撮影（PET）による研究において有用となり得る。
【００６７】
同位体標識された式(I)の化合物は一般に、当業者に公知の従来の技術又は過去に利用された非標識試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を用いる、添付の実施例及び調製に記載の方法と類似の方法によって調製できる。
【００６８】
（式(I)の化合物の調製方法）
この節では、文脈によってそうでないことが示されない限り、本願の他の全ての節と同様に、式(I)への言及はまた、本明細書で定義されたその全ての他の亜群及び例を含む。
【００６９】
本明細書に記載の本発明に関する化合物は、以下のスキームに示された段階的な合成シーケンスで調製することができる。合成は様々な中心構成体（Cy）の調製を含み、それにより分子内のFの結合価の選択及びLのペプチドの選択が可能となる。式(I)の化合物は当業者に周知されている合成方法に従って調製することができる。例えば、当業者であれば、化学工程及び保護基の選択が合成の成功を可能とするために任意の順序で達成し得ることを認識されよう。
【００７０】
本発明のさらなる態様に従って、本明細書中先に定義した式(I)の化合物を製造するための方法であって：
(a) 式(II)の化合物を式(III)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-である（すなわち、式(IA)の化合物））を製造すること：
【化７】
2019526614.tif 000009
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、X1、L、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(b) 式(IV)の化合物を式(V)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-であり、かつX1は-C(O)-である（すなわち、式(IB)の化合物)）を製造すること：
【化８】
2019526614.tif 000010
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、L、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(c) 式(VI)の化合物を式(VII)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物を製造すること：
【化９】
2019526614.tif 000011
（ここで、S2、Y2、m、Cy、S1、X1、L、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(d) 式(XII)の化合物を式(XIII)の化合物と反応させ、続いて好適な脱保護工程を行うことにより、式(I)の化合物（式中、Y1は-CONH-基である）を製造すること：
【化１０】
2019526614.tif 000012
（ここで、S2、Y2、m、Cy、X1、L、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、S1A及びS1Bは一緒になってS1基を形成し、PGは好適なペプチド保護基、例えばDdeである）；又は
(e) 式(I)の化合物又はその保護誘導体の、さらなる式(I)の化合物又はその保護誘導体への相互変換、を含む、前記方法を提供する。
【００７１】
方法(a)〜(d)の工程(i)は典型的にアミド結合形成反応を含み、該反応は典型的に有機溶媒中有機塩基の存在下でのカルボン酸のリン酸含有試薬、トリアジンベースの試薬、又はカルボジイミド含有試薬のいずれかによる活性化を含む。好ましい条件は、DMF中でジイスプロピルエチルアミン（diispropylethylamine）を伴うHATU（1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスフェート）を含む。
【００７２】
方法(a)〜(d)の工程(ii)は典型的に任意の好適な脱保護反応を含み、その条件は保護基の性質に応じて決まる。保護基がDdeを含む場合、そのような脱保護は典型的にDMF中でのヒドラジンの使用を含む。保護基がCbz又はベンジルを含む場合、そのような脱保護は典型的に好適な触媒、例えばパラジウム炭素上での水素化を含む。保護基がtertブトキシカルボニル又はtert-ブチルを含む場合、そのような脱保護は酸によって仲介され、典型的にDCM中のTFAを含む。
【００７３】
方法(e)は典型的に当業者に公知の相互変換手順を含む。例えば、式(I)の化合物において第1の置換基は当業者に公知の方法によって第2の代替置換基へと変換することができる。前駆化合物を式(I)の化合物へと変換するための多種多様な周知の官能基相互変換が当業者に知られており、「最新有機化学（Advanced Organic Chemistry）」, Jerry March, 4版, John Wiley & Sons, 1992に記載されている。例えば、例として有機スズ試薬（スティル反応）、グリニャール試薬を使用する実行可能な金属触媒官能化及び窒素求核試薬を用いる反応が、「パラジウム試薬と触媒（Palladium Reagents and Catalysts）」 [Jiro Tsuji, Wiley, ISBN 0-470-85032-9]及び「有機合成のための有機パラジウム化学の手引き（Handbook of OrganoPalladium Chemistry for Organic Synthesis）」 [Volume 1, Ei-ichi Negishi編, Wiley, ISBN 0-471-31506-0]に記載されている。
【００７４】
適切ならば、方法(a)、(b)、(c)、(d)、及び(e)における先に記載の反応に続けて、又はこれらに先立って当業者に公知の1以上の反応を行い、該反応を他の式(I)の化合物を得るために先に定義したS2、Y2、m、Cy、S1、X1、Y1、L、及びFへの必要な置換を達成するために適切な順序で実施する。その条件を文献中に見出すことができるそのような反応の非限定的な例には：
反応性官能基の保護
反応性官能基の脱保護
ハロゲン化
脱ハロゲン化
脱アルキル化
アミン、アニリン、アルコール、及びフェノールのアルキル化及びアリール化
ヒドロキシル基への光延反応
適切な基への環状付加反応
ニトロ、エステル、シアノ、アルデヒドの還元
遷移金属触媒によるカップリング反応
アシル化
スルホン化/スルホニル基の導入
エステル基の鹸化/加水分解
エステル基のアミド化（amidification）又はエステル交換
カルボキシル基のエステル化又はアミド化
ハロゲン交換
アミン、チオール、又はアルコールの求核置換
還元的アミノ化
カルボニル及びヒドロキシルアミン基でのオキシム形成
S-酸化
N-酸化
塩化
がある。
【００７５】
式(II)の化合物は、本明細書中先に記載の方法工程(i)及び(ii)に従って式(VIII)及び(VI)の化合物からスキーム1に記載の方法に従って製造できる：
【化１１】
2019526614.tif 000013
（式中、m、Cy、Y2、S2、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、PG1はベンジルを含む保護基である）。
【００７６】
さらに、式(V)の化合物は、市販の又は当業者が文献において記載の通り製造した、好適な保護基、例えばベンジルを含む好適に選択されたリンカー（S1）を利用して、本明細書中先に記載の方法工程(i)及び(ii)に従って式(II)の化合物から製造することができる。
【００７７】
式(VII)の化合物は本明細書中先に記載の通り方法工程(i)及び(ii)に従って式(III)及び(IX)の化合物からスキーム2に記載の方法に従って製造することができる：
【化１２】
2019526614.tif 000014
（ここで、m、Cy、Y2、S1、S2、X1、及びFは本明細書中先に定義した通りであり、Y1は-CONH-であり、PG2はtert-ブチルを含む保護基であり、かつPGはDdeなどの好適なペプチド保護基である）。
【００７８】
式(VIII)の化合物は、それぞれ本明細書中先に記載の通りのアルキル化反応とそれに続く脱保護反応である方法工程(iii)及び(ii)に従う式(X)及び(XI)の化合物からスキーム3に記載の方法に従って製造することができる：
【化１３】
2019526614.tif 000015
（ここで、m及びCyは本明細書中先に定義した通りであり、PG2はtert-ブチルを含む保護基であり、PG1はベンジルを含む保護基であり、かつHalはCl、Br、又はIなどのハロゲン化物である）。
【００７９】
工程(iii)は典型的に室温で極性有機溶媒中の無機塩基中の式(XI)の化合物を用いるアルキル化条件を含む。好ましい条件はDMF中の炭酸カリウムを含む。
【００８０】
同様に、式(IX)の化合物もスキーム3に従って製造することができ、ここで代替の脱保護条件を利用することができる。PG1をベンジルとするアルキル化工程の後、PG1は本明細書中先に既に記載した通り水素化条件下で優先的に脱保護することができる。
【００８１】
Cyがビフェニルである場合、式(X)の化合物は、ビフェニル単位を構築する鈴木反応の利用によって製造することができる。好ましい条件は100℃のジオキサン及び水中の炭酸ナトリウムを含むテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(0)を含む。好適な要求される保護基、例えばTBSを利用する場合、そのような保護基はフッ化物仲介性の脱保護を用いて脱保護することができる。好ましい条件は、室温でのTHF中のTBAFを含む。
【００８２】
式(XII)及び(XIII)の化合物は、S1がS1A又はS1Bを含む場合、本明細書に記載の方法に従ってスキーム1により製造し、又は文献に従って製造することができる。
【００８３】
式(III)、(IV)、(VI)、及び(XI)の化合物は市販されているか、本明細書に記載の方法に従って製造されるか、又は文献に従って製造される。
【００８４】
（医薬組成物）
式(I)の化合物を単独で投与することは可能であるが、該化合物は医薬組成物（例えば、製剤）として提示することが好ましい。
【００８５】
よって、さらなる態様に従って、本発明は本明細書に記載の通り、医薬組成物並びにLがカチオン性抗微生物ペプチドである少なくとも1つの本発明の化合物を1以上の医薬として許容し得る賦形剤及び任意に他の治療用又は予防用薬剤と一緒に含む（例えば、混合する）医薬組成物を作製する方法を提供する。
【００８６】
この医薬として許容し得る賦形剤（複数可）は、例えば、担体（例えば、固形、液体又は半固形の担体）、補助剤、希釈剤、充填剤又は増量剤、造粒剤、コーティング剤、放出制御剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、保存剤、酸化防止剤、緩衝剤、懸濁化剤、増粘剤、香味剤、甘味料、味覚マスキング剤、安定化剤又は医薬組成物において常用される任意の他の賦形剤から選択することができる。様々な型の医薬組成物のための賦形剤の例は、以下により詳細に示される。
【００８７】
本明細書において使用される用語「医薬として許容し得る」は、信頼に足る医学的判断の範囲内で、妥当なベネフィット/リスク比に釣り合って、過度の毒性を伴わず（すなわち、一般に安全と認められる（GRAS））、また刺激、アレルギー反応、又は他の問題点もしくは合併症を伴わずに、対象（例えばヒト）の組織と接触させて使用するのに適している、化合物、物質、組成物、及び/又は剤形に関する。各担体、賦形剤などはまた、製剤の他の構成成分と適合性があるという意味で「許容され得」なければならない。
【００８８】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、公知の技術に従い製剤化することができ、例えば、「レミントン薬科学（Remington’s Pharmaceutical Sciences）」、Mack Publishing Company、Easton、PA、USAを参照されたい。
【００８９】
本医薬組成物は、非経口、鼻腔内、気管支内、舌下、眼内、耳内、経直腸、膣内、又は経皮投与に適した任意の形態とし得る。本組成物が非経口的投与のために意図される場合、これらは、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下投与のため、又は注射、輸液もしくは他の送達手段による標的臓器若しくは組織への直接送達のために、製剤化することができる。この送達は、ボーラス注射、短期間の輸液若しくは長期間の輸液によることができ、並びに受動送達を介して又は好適な輸液ポンプ若しくは注射器ドライバーの利用を通じたものとすることができる。
【００９０】
非経口的投与に適応された医薬製剤は、とりわけ、可溶性形態の活性成分を安定化し、かつこの製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にするために、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、共溶媒、界面活性剤、有機溶媒混合物、シクロデキストリン錯体形成剤、乳化剤（乳剤製剤の形成及び安定化のために）、リポソームの形成のためのリポソーム成分、高分子ゲル形成のためのゲル化ポリマー、凍結乾燥保護剤及び薬剤の組合せを含んでよい、水性及び非水性の滅菌注射溶液を含む。非経口的投与のための医薬製剤はまた、懸濁化剤及び増粘剤を含み得る、水性及び非水性の滅菌懸濁液の形態をとることができる（R. G. Stricklyの文献、「経口及び注射用製剤を可溶化する賦形剤（Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations）」、Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, p 201-230）。
【００９１】
本製剤は、単位-投与量又は反復-投与量の容器、例えば密封したアンプル、バイアル及び予め充填された注射器中で提示することができ、かつ使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とする、フリーズドライされた（凍結乾燥された）状態で貯蔵することができる。
【００９２】
本医薬製剤は、本発明の化合物を凍結乾燥することにより調製することができる。凍結乾燥は、組成物をフリーズドライする手順をいう。従ってフリーズドライ及び凍結乾燥は、本明細書において同義的に使用する。
【００９３】
即時用の注射溶液及び懸濁液は、滅菌した散剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【００９４】
非経口注射用の本発明の医薬組成物はまた、医薬として許容し得る滅菌した水性又は非水性の溶液、分散液、懸濁液又は乳液、並びに使用直前に滅菌注射用溶液若しくは分散液へ再構成するための滅菌散剤を含むことができる。
【００９５】
好適な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど)、カルボキシメチルセルロース及びそれらの好適な混合物、植物油(例えば、ヒマワリ油、ベニバナ油、トウモロコシ油又はオリーブ油)、並びにオレイン酸エチルのような注射用有機エステルを含む。例えば、レシチンのような増粘剤又はコーティング物質の使用により、分散剤の場合必要とされる粒子サイズを維持することにより、及び界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。
【００９６】
本発明の組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のような補助剤を含んでもよい。微生物の活動の防止は、様々な抗菌薬及び抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの含有により確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの、浸透圧（tonicity）を調節するため薬剤を含有することもまた、望ましい。注射用医薬形態の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンのような吸収を遅延する薬剤を含めることによりもたらされ得る。
【００９７】
本発明の好ましい一実施態様において、本医薬組成物は、例えば注射又は輸液による、静脈内投与に適した形態である。静脈内又は皮下投与のために、溶液は、そのままで投与することができるか、又は投与前に、輸液バッグ（0.9％生理食塩水又は5％ブドウ糖のような医薬として許容し得る賦形剤を含む）へと注入することができる。
【００９８】
別の好ましい実施態様において、本医薬組成物は、皮下(s.c.)投与に適した形態である。
【００９９】
本発明の化合物は、担体と共に製剤化し、且つナノ粒子の形態で投与することができ、ナノ粒子の増大した表面積はそれらの吸収を補助する。加えて、ナノ粒子は、細胞へ直接浸透する可能性をもたらす。ナノ粒子薬物送達システムは、「薬物送達のためのナノ粒子技術(Nanoparticle Technology for Drug Delivery)」、Ram B Gupta及びUday B. Kompella編、Informa Healthcare, ISBN 9781574448573、第13版、2006年3月刊行に説明されている。薬物送達のためのナノ粒子はまた、J. Control. Release, 2003, 91 (1-2), 167-172、及びSinhaらの文献、Mol. Cancer Ther. August 1, (2006) 5, 1909に説明されている。
【０１００】
本医薬組成物は典型的には、およそ1％（w/w）〜およそ95％（w/w）の活性成分及び99％（w/w）〜5％（w/w）の医薬として許容し得る賦形剤又は賦形剤の組合せを含む。好ましくは、本組成物は、およそ20％（w/w）〜およそ90％（w/w）の活性成分及び80％（w/w）〜10％の医薬として許容し得る賦形剤又は賦形剤の組合せを含む。本医薬組成物は、およそ1％〜およそ95％、好ましくはおよそ20％〜およそ90％の活性成分を含む。本発明に従う医薬組成物は、例えば、アンプル、バイアル、坐薬、予め充填した注射器、ドラギー、錠剤又はカプセル剤の形態のような、単位剤形であってよい。
【０１０１】
この医薬として許容し得る賦形剤(複数可)は、この製剤の望ましい物理的形態に従い選択することができ、かつ例えば、希釈剤(例えば、充填剤又は増量剤のような固形希釈剤；並びに、溶媒及び共溶媒のような液体希釈剤)、崩壊剤、緩衝剤、滑沢剤、流動助剤、放出制御剤(例えば、放出を抑制又は遅延するポリマー又はワックス)、結合剤、造粒剤、顔料、可塑剤、酸化防止剤、保存剤、香味剤、味覚マスキング剤、浸透圧調節剤及びコーティング剤から選択することができる。
【０１０２】
当業者は、製剤において使用するための構成成分の適切な量を選択する専門知識を有するであろう。例えば、錠剤及びカプセル剤は典型的には、（薬物投与量に応じて）0〜20％の崩壊剤、0〜5％の滑沢剤、0〜5％の流動助剤及び／又は0〜99％（w/w）の充填剤/若しくは増量剤を含む。これらはまた、0〜10％（w/w）のポリマー結合剤、0〜5％（w/w）の酸化防止剤、0〜5％（w/w）の顔料も含み得る。徐放錠剤は、加えて、0〜99％（w/w）の放出制御（例えば遅延）ポリマー（投与量に応じて）を含むであろう。錠剤又はカプセル剤のフィルムコートは、典型的には、0〜10％（w/w）のポリマー、0〜3％（w/w）の顔料、及び/又は0〜2％（w/w）の可塑剤を含む。
【０１０３】
非経口又は皮下製剤は典型的には、0〜20％(w/w)の緩衝液、0〜50％(w/w)の共溶媒、及び/又は0〜99％(w/w)の注射用水(WFI)(投与量に応じ及びフリーズドライされる場合)を含む。筋肉内デポ剤のための製剤はまた、0〜99％(w/w)の油分も含み得る。
【０１０４】
本発明の化合物はまた、固形分散剤として製剤化され得る。固形分散剤は、2種以上の固形物の均質な極めて細かい分散相である。固形分散剤の一つの型である、固溶体（分子の分散系）は、医薬技術における使用に関して周知であり（（Chiou及びRiegelmanの文献、J. Pharm. Sci., 60, 1281-1300（1971）参照）、かつ水に溶けにくい薬物の溶解速度の増加及び生物学的利用能の増加に有用である。
【０１０５】
本医薬製剤は、通常ブリスターパックである、単独の包装内に治療過程全てを含む「患者用パック」において、患者へ提供することができる。患者用パックは、従来の処方に勝る利点を有し、ここでは薬剤師は、バルク供給品から医薬品の患者用の供給を分割し、その場合患者は、通常患者の処方箋には記載されない、患者用パックに含まれた添付文書に常にアクセスする。添付文書の封入は、医師の指示を患者が順守することを改善することが示されている。患者用パックの一例は、予め充填された注射器を含む。かかる予め充填された注射器は、既に薬物物質を含む。針が装着されている予め充填された注射器の先端部分は、ノズルキャップにより封止されている。注射前に、ノズルキャップを、先端部分から取り外し、針がそこに装着される。次にガスケットは、プランジャーロッドを、先端部分へと押し込むことによりスライドし、その結果薬物が放出される。
【０１０６】
鼻腔送達のための組成物は、軟膏、クリーム、スプレー、貼付剤、ゲル剤、液滴及び挿入物(例えば、眼内挿入物)を含む。かかる組成物は、公知の方法に従い製剤化することができる。
【０１０７】
経直腸又は膣内投与のための製剤の例は、ペッサリー及び坐薬を含み、これらは例えば、活性化合物を含む、造形された成形可能な物質又はワックス状物質から形成され得る。活性化合物の溶液はまた、経直腸投与のために使用することができる。
【０１０８】
吸入による投与のための組成物は、吸入可能な粉末組成物又は液体若しくは粉末スプレーの形態をとることができ、かつ粉末吸入装置又はエアロゾル計量分配装置を用い、標準の形態で投与されることができる。かかる装置は、周知である。吸入による投与のために、粉末化された製剤は典型的には、活性化合物を、乳糖のような不活性の固形の粉末化された希釈剤と一緒に含む。
【０１０９】
本発明の化合物は、一般に単位剤形で提示され、従って典型的には、所望のレベルの生物活性を提供するのに十分な化合物を含む。例えば、製剤は、1 ng〜2 gの活性成分を、例えば1 ng〜2 mgの活性成分を含み得る。これらの範囲内で、化合物の特定の部分範囲は、0.1 mg〜2 gの活性成分（より一般的には、10 mg〜1 g、例えば50 mg〜500 mg）、又は1 μg〜20 mg（例えば、1 μg〜10 mg、例えば0.1 mg〜2 mgの活性成分）である。
【０１１０】
この活性化合物は、所望の治療効果を達成するのに十分な量で、それらを必要とする患者（例えば、ヒト又は動物患者）へ、投与されるであろう。
【０１１１】
（治療上の使用）
本発明のさらなる態様に従って、治療において使用するための、本明細書で定義される式(I)の化合物を提供する。
【０１１２】
本発明のさらなる態様に従って、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害の治療における使用のための、本明細書で定義される式(I)の化合物を提供する。
【０１１３】
本発明のさらなる態様に従って、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害の治療における使用のための医薬の製造における、本明細書で定義される式(I)の化合物の使用を提供する。
【０１１４】
本発明のさらなる態様に従って、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害を治療する方法であって、それを必要とする個体に本明細書で定義される式(I)の化合物を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０１１５】
感染性病原体の例には、あらゆる病原体、例えば細菌、真菌、寄生虫、又はウイルスがある。このように一実施態様において、感染性病原体によって媒介され、かつ/又は引き起こされる疾患又は障害は、細菌性感染症である。
【０１１６】
例えば細菌性感染症の例には、以下の細菌：
黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus）（MRSA）を含む）などの、スタフィロコッカス種；クロストリジウム種（例えば、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、破傷風菌（Clostridium tetani）及びボツリヌス菌（Clostridium botulinum））；エンテロバクター種、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）；赤痢菌（Shigella dysenteriae）などの、シゲラ種；カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）などの、カンピロバクター種；エンテロコッカス・フェーカリス（Enterococcus faecalis）などの、エンテロコッカス種；炭疽菌（Bacillus anthracis）；ペスト菌（Yersinia pestis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、連鎖球菌種（Streptococcal species）；サルモネラ・ティフィムリウム（Salmonella thyphimurim）、サルモネラ菌（Salmonella enterica）；クラミジア種、梅毒トレポネーマ（Treponemapallidum）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）；アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、クレブシエラ肺炎菌（Klebsiella pneumoniae）、及び大腸菌（Escherichia coli）などの、グラム陰性病原体（並びに、抗生物質の1以上のクラスに対し耐性がある菌株、特に多剤耐性(MDR)菌株を含む）による感染症がある。
【０１１７】
本発明の化合物は一般に、例えばヒト又は動物患者、好ましくはヒトである、そのような投与を必要とする対象へ、投与される。
【０１１８】
本発明の化合物は典型的には、治療上又は予防上有用であり、かつ一般に無毒である量で投与する。しかし特定の状況において（例えば生命を脅かす疾患の症例において）、本発明の化合物を投与する恩恵は、あらゆる毒性作用又は副作用の不利益を上回り得るものであり、そのような症例において、毒性の程度に関連している量で、本発明の化合物を投与することは望ましいと考えられる。
【０１１９】
本発明の化合物は、有益な治療効果を維持するために、長期間にわたり投与しても（すなわち、長期的投与）、又は短期間のみ投与してもよい（すなわち、短期的投与）。あるいは、これらは、連続様式で又は間欠的投薬を提供する様式（例えば、パルス様式）で、投与することができる。
【０１２０】
本発明の化合物の典型的一日量は、100 pg〜100 mg/kg体重、より典型的には5 ng〜25 mg/kg体重、及びより一般には体重1 kgにつき10 ng〜15 mg/kg（例えば、10 ng〜10 mg、及びより典型的には1 μg/kg〜20 mg/kg、例えば1 μg〜10 mg/kg）/体重の範囲とすることができるが、必要ならば、より高い又はより低い投与量を投与してよい。本発明の化合物は、毎日ベースで、或いは例えば2日毎、又は3日毎、又は4日毎、又は5日毎、又は6日毎、又は7日毎、又は10日毎、又は14日毎、又は21日毎、又は28日毎の反復ベースのいずれかで投与することができる。あるいは、本発明の化合物は、輸液により、1日に複数回投与することができる。
【０１２１】
本発明の化合物は、例えば、1〜1500mg、2〜800mg、又は5〜500mg、例えば2〜200mg又は10〜1000mgの投与量の範囲で、投与されてよく、投与量の特定の例は、10、20、50及び80mgを含む。本発明の化合物は、各日1回又は2回以上投与することができる。本発明の化合物は、連続して投与することができる(すなわち、治療レジメンの期間にわたり休みなく毎日服用)。あるいは、本発明の化合物は、間欠的に投与することができる(すなわち、1週間のように所定の期間連続して服用し、その後1週間のような期間中断し、その後1週間のような別の期間連続して服用し、かつ治療レジメンの期間を通じてそのようにする)。間欠投与に関する治療レジメンの例は、投与が、1以上のサイクルについて、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9又は10又はそれよりも多いサイクルについて、1週間オン、1週間オフ；又は、2週間オン、1週間オフ；又は、3週間オン、1週間オフ；又は、2週間オン、2週間オフ；又は、4週間オン、2週間オフ；又は、1週間オン、3週間オフのサイクルであるレジメンを含む。
【０１２２】
1つの特定の投薬スケジュールにおいて、患者には、最長10日間、特に1週間に最大5日間にわたり毎日1時間の期間、本発明の化合物の輸液を行い、並びにこの治療は、2〜4週間のように望ましい間隔で、特に3週間毎で、繰り返されるであろう。
【０１２３】
より詳細には、患者は、5日間にわたり毎日1時間の期間、本発明の化合物の輸液を受け、並びにこの治療は、3週間毎に繰り返されてよい。
【０１２４】
別の特定の投薬スケジュールにおいて、患者には、30分〜1時間に及ぶ輸液、それに続けて、例として1〜5時間の可変期間の、例えば3時間の、維持輸液が行われる。
【０１２５】
さらなる特定の投薬スケジュールにおいて、患者には、12時間〜5日間の期間の持続輸液が、特に24時間〜72時間の持続輸液が行われる。
【０１２６】
しかし最終的には、投与される本発明の化合物の量、及び使用される組成物の型は、治療される疾患の性質又は生理的状態と釣り合っており、並びに医師の判断に委ねられる。
【０１２７】
本発明の化合物は、単剤として使用することができ、又は他の治療薬と併用することができることを認識されよう。併用実験は、例えば、Chou TC、Talalay P.の文献、「投与量-効果関係の定量分析：多剤又は酵素阻害剤の併用効果(Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or Enzyme inhibitors)」、Adv Enzyme Regulat, 1984;22: 27-55に記載の通り実施することができる。
【０１２８】
本発明の化合物が、1、2、3、4種又はそれよりも多い他の治療薬(好ましくは1又は2種、より好ましくは1種)との併用療法において投与される場合、これらの薬剤は、同時に又は連続して投与され得る。後者の場合、2種以上の薬剤は、ある期間内に、確実に有利な又は相乗効果が達成されるのに十分である量及び様式で、投与されるであろう。連続投与される場合、これらは、密に間をあけた間隔で(例えば、5〜10分の期間にわたり)又はより長い間隔で(例えば、1、2、3、4時間もしくはそれ以上間をあけて、又は必要ならばさらにより長い期間間をあけて)投与されることができ、その正確な投薬レジメンは、治療薬(複数可)の特性に見合ったものである。これらの用量は、例えば7、14、21又は28日毎に繰り返され得る、治療の1クールにつき、例えば、1回、2回又はそれ以上投与されてよい。
【０１２９】
投与の好ましい方法及び順番並びに組合わせの各成分のそれぞれの投薬量及びレジメンは、投与される特定の他の医学的薬剤及び本発明の化合物、それらの投与経路、治療される特定の腫瘍及び治療される特定の宿主によって左右されることは、認識されよう。投与の最適な方法及び順番並びに投薬量及びレジメンは、慣習的方法を用い、本明細書に記載した情報を考慮し、当業者により容易に決定され得る。
【０１３０】
組合わせとして与えられる場合の本発明の化合物と1種以上の他の治療薬(複数可)の重量比は、当業者により決定されてよい。該比及び正確な用量及び投与頻度は、当業者に周知であるように、特定の本発明の化合物及び使用される他の治療薬(複数可)、治療される特定の状態、治療される状態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、食事、投与時間及び全身の状態、投与の様式、並びに個体が服用中の他の医薬によって決まる。さらに、有効一日量は、治療される対象の反応に応じ及び/又は本発明の化合物を処方する医師の評価に応じ、減少又は増加されてよいことは、明白である。本発明の化合物と別の治療薬の特定の重量比は、1/10〜10/1、より詳細には1/5〜5/1、さらにより詳細には1/3〜3/1の範囲であってよい。
【実施例】
【０１３１】
（実施例）
ここで本発明を、これらに限定するものではないが、以下の実施例に記載の具体的実施態様を参照することによって説明する。化合物は自動命名パッケージ（ChemDraw）を使用して命名するか、又は化学物質供給業者の命名する通りとする。
【０１３２】
以下の合成手順は使用する方法の例示のために提供する；所与の調製又は工程に対し、使用する前駆物質は必ずしも、与えられた記載における工程に従って合成された個別のバッチに由来するものでなくともよい。
【０１３３】
（分析方法）
ここで実施例及び調製では分析データを引用するが、別途明示されない限り以下の分析法を使用した：
（LCMS）
システム：LCMS Agilent 1100（クォータナリ・ポンプ）；質量分析計：Waters Micromass ZQ
カラム：XBridge C18 4.6×50 mm, 5 μm。
溶媒：A＝水；B＝アセトニトリル、C＝水中10 mMギ酸アンモニウム；D＝アセトニトリル中0.05％ギ酸
カラム温度：25℃、注入体積：5 μL
【０１３４】
（LCMS方法A：4.5分酸性ラン）
【表１】
2019526614.tif 000016
【０１３５】
（LCMS方法B：4.5分緩衝ラン）
【表２】
2019526614.tif 000017
【０１３６】
（NMR）
NMRの詳細はOxford Instruments AS400上で記録した。
【０１３７】
（MS）
ここでMSデータを報告するが、分子量の大きな化合物については、通常質量対電荷比（m/z）を観察する。
【０１３８】
（略語）
ここで以下の略語を使用したが、以下の意味を適用する：
Ahxはアミノへキシルであり；
Allocはアリルオキシカルボニルであり；
aq.は水性であり；
Bocはtert-ブチルオキシカルボニルであり；
br sはブロードな一重線であり；
CDCl3は重水素化クロロホルムであり；
CTC樹脂は塩化クロロトリチル樹脂であり；
dは二重線であり；
Dabは2,4-ジアミノ酪酸であり；
DCMはジクロロメタンであり；
Ddeは(1,(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキサ-1-イリデン)-3-エチル)であり；
DIPEAはジイソプロピルエチルアミンであり；
DMFはジメチルホルムアミドであり；
DMSOはジメチルスルホキシドであり；
d6-DMSOは重水素化DMSOであり；
ESはエレクトロスプレーイオン化技術であり；
EtOAcは酢酸エチルであり；
Fmocは9-フルオレニルメトキシカルボニルであり；
gはグラムであり；
Glyはグリシンであり；
HATUはO-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり；
HBTUはO-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり；
HClは塩酸であり；
HOBtはヒドロキシベンゾトリアゾールであり；
HPLCは高速液体クロマトグラフィーであり；
KHCO3は炭酸水素カリウムであり；
Lはリットルであり；
LCMSは液体クロマトグラフィー質量分析であり；
Leuはロイシンであり；
mは多重線であり；
mgはミリグラムであり；
Mはモルであり；
MeCNはアセトニトリルであり；
MeOHはメタノールであり； 
MgSO4は硫酸マグネシウムであり；
MHzはメガヘルツであり、
mLはミリリットルであり；
mmolはミリモルであり；
MSは質量分析であり；
NaHCO3は炭酸水素ナトリウムであり；
NaOHは水酸化ナトリウムであり；
NH3はアンモニアであり；
NMRは核磁気共鳴であり；
Pd/Cはパラジウム炭素であり；
Pd(PPh3)4はテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)であり；
Pd(PPh3)2Cl2はパラジウム(II)ビス(トリフェニルホスフィン)ジクロリドであり
Pheはフェニルアラニンであり；
PhSiH3はフェニルシランであり；
Psiはポンド毎平方インチであり；
Rtは保持時間であり；
sは一重線であり；
tは三重線であり；
TBTUはO-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラートであり；
TEAはトリエチルアミンであり；
Thrはスレオニンであり；
TISはトリイソプロピルシランであり；
TFAはトリフルオロ酢酸であり；
μLはマイクロリットルであり、かつ
vは体積である。
【０１３９】
ここでα-Galに言及するが、以下の中間体：
3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミンに適用される。
【化１４】
2019526614.tif 000018
この中間体はBovinらの文献、(Mendeleev Communications (2002), (4), 143-145)に記載の方法に従って調製することができる。
【０１４０】
（ペプチド中間体の合成）
PMBスキャフォールドを適切に保護されたアミノ酸及びCTC樹脂を使用した標準的な固相ペプチド合成（SPPS）によって構築した。Fmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂、Fmoc-Thr(OtBu)-CTC樹脂、又はFmoc-Leu-CTC樹脂のいずれかを好適な出発点として選択し、スキャフォールドを合成の適切な場所で環化した。全ての保護されたアミノ酸及びリンカー出発物質は市販されているか、本明細書で引用する参考文献に従って調製する。
【０１４１】
SPPSを使用して、3つの代替のポリミキシンスキャフォールド戦略を利用した：
方法1：ここでは、ポリミキシンスキャフォールドをリンカーなしで合成する、
方法2：ここでは、ポリミキシンスキャフォールドを樹脂からの切断後の溶液相中のリンカーの追加によって合成する、
方法3：ここでは、ポリミキシンスキャフォールドを割増しの樹脂上工程としてのリンカーの追加によって合成する。
保護されたアミノ酸は：Fmoc-Leu-OH、Fmoc-[D-Phe]-OH、Fmoc-Dab(Dde)-OH、Fmoc-Dab(Alloc)-OH、Fmoc-Thr-(OtBu)-OH、Fmoc-[D-Ser(OtBu)]-OH、及びBoc-Dab(Dde)-OHから選択した。
リンカー出発物質は、Boc-PEG8-OH、Boc-Ahx-Ahx-OH（WO2008123844）、Boc-[L-オクチルGly]-OH、Fmoc-[L-オクチルGly]-OH、又はそれらの組合わせから選択した。
さらに、一部のペプチドスキャフォールドはノナン酸で末端修飾した（terminated）。
ペプチドスキャフォールドはHPLC: Agilent 1260 LCMS: Agilent 1200＋6410 MSを使用して分析した。
【０１４２】
（調製物1）
（H2N-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化１５】
2019526614.tif 000019
（方法1）
Fmoc-Leu-OHから出発して、ペプチド鎖をCTC樹脂上で伸長させた[DCM（10.00 mL）中のCTC樹脂（1 mmol、1 g、1.0 mmol/g）及びFmoc-Leu-OH（0.353 g、1.0 mmol、1.0当量）にDIPEA（4.0当量）を加え、反応物を2時間混合した。MeOH（1.0 mL）を追加し、反応系に蓋をして30分間混合した。]。DMF中の20％ピペリジンを脱保護に使用し、Fmoc-Dab(Alloc)-OHを除く全ての残基（Fmoc-Dab(Alloc)-OHはDMF中のHATU及びDIPEAを使用してカップリングさせた）についてDMF中のHBTU及びDIPEAを使用して、所望のアミノ酸配列を構築し、Boc-Dab(Dde)-Thr(OtBu)-Dab(Dde)-Dab(Alloc)-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-O-CTC-樹脂を得た。この時点で樹脂をDCM中のPd(PPh3)2Cl2（0.1当量）及びPhSiH3（10当量）で処理し、続いてDMF及びMeOHで樹脂を洗浄してallocの脱保護を達成した。続いてペプチドを上述の通り要求される残存アミノ酸によりさらに伸長させた。2分間のDCM中の1％ TFAによりペプチドを樹脂から切り出し、DCM中のDIPEAでpH＝7に調整した。続いてTBTU（2当量）及びHOBt（2当量）を加え、反応物を1時間撹拌して環化を達成した。反応物を5％水性HClで洗浄し、真空中で濃縮してBoc-Dab(Dde)-Thr(OtBu)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OtBu)*を得た。粗製ペプチドをTFA/水（95％ TFA、5％水、20 mL）で処理し、室温で2時間撹拌した。反応物を冷イソプロピルエーテルで処理し、3回遠心分離した。残渣を真空下で乾燥させ、逆相カラムクロマトグラフィー（HPLC:移動相: A: H2O中の0.1％TFA、B: MeCN中の0.1％ TFA； 流量: 1.0 mL/分 T=50℃； カラム: YMC-Pack ODS-A 150×4.6mm, 5 μm； 機器: Agilent 1200 HPLC (5-521)）を使用して精製し、続いて凍結乾燥させて標題化合物（80 mg）を得た。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１４３】
（調製物2）
（H2N-Dab-Thr(OH)-Dab-Dab*-Dab-[D-Phe]-Leu-Dab-Dab-Thr(OH)*）
【化１６】
2019526614.tif 000020
調製物1（3％ヒドラジン/MeOH）からのDde保護基の全体的脱保護の後、以下のデータを得た：
Rt＝14.23分、ES+ MS m/z 1063.4 [M+1]、及び532.2 [M+2]/2；理論質量: 1062.6。
【０１４４】
（調製物3）
（H2N-L-オクチルGly-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化１７】
2019526614.tif 000021
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂又はFmoc-Leu-CTC樹脂をBoc-[L-オクチルGly]-OHと合わせて使用して、方法1に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１４５】
（調製物4）
（ノナンアミド-Dab(NH2)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化１８】
2019526614.tif 000022
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂又はFmoc-Leu-CTC樹脂をノナン酸と合わせて使用して、方法1に従って調製した。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１４６】
（調製物5）
（ノナンアミド-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(PEG8NH2)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化１９】
2019526614.tif 000023
（方法2）
Fmoc-Thr(OtBu)-OHから出発して、ペプチド鎖をCTC樹脂上で伸長させた[DCM（5.0 mL）中のCTC樹脂（0.5 mmol、0.5 g、1.0 mmol/g）及びFmoc-Thr(OtBu)-OH（200 mg、0.5 mmol、1.0当量）にDIPEA（4.0当量）を加え、反応物を2時間混合した。MeOH（0.5 mL）を追加し、反応系に蓋をして30分間混合した。]。DMF中の20％ピペリジンを脱保護に使用し、DMF（2.0 mL）中のHATU（2.85当量）及びDIPEA（6.0当量）を使用して所望のアミノ酸配列を構築し、ノナンアミド-Dab(Dde)-Thr(OtBu)-Dab(Boc)-Dab(Alloc)-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-O-CTC-樹脂を得た。この時点で樹脂をDCM中のPd(PPh3)2Cl2（0.1当量）及びPhSiH3（10当量）で処理し、続いてDMF及びMeOHで樹脂を洗浄してallocの脱保護を達成し、窒素下で一晩乾燥させた。ペプチドを上述の通り要求される残存アミノ酸によりさらに伸長させた。2分間の1％ TFA/DCM（2×5 mL）によりペプチドを樹脂から切り出し、DCM中のDIPEAでpH＝7に調整した。TBTU（2当量）及びHOBt（2当量）を加え、その次にDIPEA（2当量）を加え、混合物を1時間撹拌して環化を達成した。反応物を5％水性HClで洗浄し、真空中で濃縮してノナンアミド-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Boc)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*を得た。粗製ペプチドを室温にて95％ TFA/2.5％ H2O/2.5％ TIS（5 mL）で処理し、30分間撹拌した。反応物を冷イソプロピルエーテル（50 mL）で沈殿させ、遠心分離した（3000 rpmで3分間）。粗製ペプチドをイソプロピルエーテル（2×50 mL）で洗浄し、遠心分離し、分取HPLC（移動相A: H2O中の0.1％ TFA、B: H2O）を使用して精製し、続いて凍結乾燥させてリンカーを含まないスキャフォールドを得た。
【０１４７】
DCM中のペプチド溶液にBoc-PEG8-OH（1.2当量）及びHBTU（1.2当量）を加え、続いてDIPEA（2当量）を加え、反応物を室温で30分間撹拌した。反応物を5％ HCl（水性）で2回洗浄し、真空中で濃縮した。残渣を20％ TFA/DCMで20分間処理し、真空中で濃縮させた。残渣を分取HPLC（移動相A: H2O中の0.1％ TFA、B: H2O）を使用して精製し、凍結乾燥させて標題化合物を得た。
ES+ MS m/z 1142.6 [M+2]/2及び762.1 [M+3]/3； 理論質量: 2283.8
【０１４８】
（調製物6）
（H2N-PEG8-[L-オクチルGly]-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２０】
2019526614.tif 000024
（方法3）
Fmoc-Dab(Dde)-OHから出発して、ペプチド鎖をCTC樹脂上で伸長させた[DCM（30 mL）中のCTC樹脂（2 mmol、2 g、1.0 mmol/g）及びFmoc-Dab(Dde)-OH（1.08 g、2 mmol、1.0当量）にDIPEA（4.0当量）を加え、反応物を2時間混合した。MeOH（2 mL）を追加し、反応系に蓋をして30分間混合した。]。DMF中の20％ピペリジンを脱保護に使用し、DMF（10 mL）中のHATU（2.85当量）及びDIPEA（6.0当量）を使用して、所望のアミノ酸配列を構築し、Boc(PEG8)-[L-オクチルGly]-Dab(Dde)-Thr(OtBu)-Dab(Dde)-Dab(Alloc)-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-O-CTC-樹脂を得た。この時点で樹脂をDCM中のPd(PPh3)2Cl2（0.1当量）及びPhSiH3（10当量）で処理し、続いてDMF及びMeOHで樹脂を洗浄してallocの脱保護を達成し、窒素下で一晩乾燥させた。ペプチドを上述の通り要求される残存アミノ酸によりさらに伸長させた。2分間の1％ TFA/DCM（2×20 mL）でペプチドを処理し、DIPEAでpH＝7に調整し、DCMで希釈した。TBTU（2当量）及びHOBt（2当量）を加え、その次にDIPEA（2当量）を加え、混合物を1時間撹拌して環化を達成した。反応物を5％水性HClで洗浄し、真空中で濃縮してBoc(PEG8)-[L-オクチルGly]-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*を得た。
【０１４９】
粗製ペプチドを室温にて95％ TFA/2.5％ H2O/2.5％ TIS（5 mL）で処理し、30分間撹拌した。反応物を冷イソプロピルエーテル（300 mL）で沈殿させ、遠心分離した（3000 rpmで3分間）。粗製ペプチドをイソプロピルエーテル（2×100 mL）で洗浄し、遠心分離し、分取HPLC（移動相A: H2O中の0.1％ TFA、B: H2O）を使用して精製し、続いて凍結乾燥させて標題化合物を得た。
Rt＝10.6〜11.9分、ES+ MS m/z 1239.2 [M+2]/2及び826.4 [M+3]/3； 理論質量: 2477.0
【０１５０】
（調製物7）
（ノナンアミド-Dab(Ahx-Ahx-NH2)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２１】
2019526614.tif 000025
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をノナン酸及びBoc-Ahx-Ahx-OHと合わせて使用して、方法2に従って調製することができる。
Rt＝8.2〜9.3分、ES+ MS m/z 1043.7 [M+2]/2及び696.3 [M+3]/3； 理論質量: 2086.6
【０１５１】
（調製物8）
（H2N-Ahx-Ahx-[L-オクチルGly]-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２２】
2019526614.tif 000026
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をBoc-Ahx-Ahx-OH及びFmoc-[L-オクチルGly]-OHと合わせて使用して、方法3に従って調製することができる。
Rt＝11.9〜12.9分、ES+ MS m/z 1140.2 [M+2]/2及び760.7 [M+3]/3； 理論質量: 2279.9
【０１５２】
（調製物9）
（Fmoc-[L-オクチルGly]-Dab(Dde)-Thr(OH)-Dab(PEG8NH2)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２３】
2019526614.tif 000027
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Thr(OtBu)-CTC樹脂をBoc-PEG8-OH及びFmoc-[L-オクチルGly]-OHと合わせて使用して、方法2に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１５３】
（調製物10）
（H2N-PEG8-Ahx-Ahx-Thr(OH)-[D-Ser(OH)]-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２４】
2019526614.tif 000028
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をBoc-PEG8-OH及びBoc-Ahx-Ahx-OHと合わせて使用して、方法2に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１５４】
（調製物11）
（H2N-PEG8-Ahx-Ahx-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２５】
2019526614.tif 000029
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をBoc-PEG8-OH及びBoc-Ahx-Ahx-OHと合わせて使用して、方法2に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１５５】
（調製物12）
（H2N-Ahx-Ahx-Thr(OH)-[D-Ser(OH)]-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２６】
2019526614.tif 000030
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をBoc-Ahx-Ahx-OHと合わせて使用して、方法3に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１５６】
（調製物13）
（H2N-Ahx-Ahx-Thr(OH)-Dab(Dde)-Dab*-Dab(Dde)-[D-Phe]-Leu-Dab(Dde)-Dab(Dde)-Thr(OH)*）
【化２７】
2019526614.tif 000031
標題化合物を、出発点としてのFmoc-Dab(Dde)-CTC樹脂をBoc-Ahx-Ahx-OHと合わせて使用して、方法3に従って調製することができる。
中間体を直接次の工程に持ち込んだ。
【０１５７】
（α-Gal中間体の合成）
（調製物14）
（6-(6-(4'-(2-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-イルカルボキサミド)ヘキサンアミド)ヘキサン酸）
【化２８】
2019526614.tif 000032
DMF（600 μL）中の調製物15（30 mg、0.035 mmol）及びベンジル6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサノアート（JACS 136 (52) 18034-18043 (2014)、14.1 mg、0.042 mmol）の溶液に、トリエチルアミン（17 μL、0.123 mmol）を加え、続いてHATU（16 mg、0.042 mmol）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、DMSOに溶解させ、0.1％アンモニアを含む7〜60％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製し、所望のベンジル保護された中間体（19.8 mg、48％）を得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.45分； ES+ MS m/z 1173.9  [M+H]+
【０１５８】
単離した中間体をMeOH/水（1:1 v/v、10 mL）に溶解させ、Pd/C（10％、10 mg）を加えた。反応物を水素雰囲気（50 psi（344.7 kPa））中におき、室温で3時間撹拌した。触媒をシリンジフィルターを通した濾過によって除き、溶媒を減圧下で除去して標題化合物を無色の固形物（20.4 mg、＞99％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝1.70分； ES- MS m/z 1081.8 [M-H]-
【０１５９】
（調製物15）
（4'-(2-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸）
【化２９】
2019526614.tif 000033
DMF（7.5 mL）中の2-((3'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)オキシ)酢酸（調製物16、55 mg、152 μmol）にTEA（63.4 μL、455 μmol）を加え、続いてDMSO（500 μL）中のα-Gal（119 mg、197 μmol）溶液を加えた。DMF（500 μL）溶液としてHATU（86.6 mg、228 μmol）を加え、反応物を室温で窒素下16時間撹拌させておいた。溶媒を真空中で除き、残渣を0.1％ NH3を含む7〜60％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製し、所望のベンジル保護された中間体を無色の固形物（93.5 mg、65％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.54分, ES+ MS m/z 947.6 [M+H]+
【０１６０】
単離した中間体をMeOH/水（1:1 v/v、5 mL）に溶解させ、この溶液にPd/C（10％、10 mg）を加えた。反応物を水素雰囲気（50 psi（344.7 kPa））中におき、室温で3時間撹拌した。触媒をシリンジフィルターを通した濾過によって除き、溶媒を真空中で除去した。残渣を0.1％ NH3を含む5〜40％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製し、標題化合物を無色の固形物（71.6 mg、84％）として得た。
LCMS (方法A) Rt＝1.83分, ES+ MS m/z 857.6 [M+H]+
【０１６１】
（調製物16）
（2-((3'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)オキシ)酢酸）
【化３０】
2019526614.tif 000034
DCM/TFA/水（10:10:1 v/v/v、80 mL）中のベンジル 4'-(2-(tert-ブトキシ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート（調製物17、7.80 g、18.6 mmol）の溶液を室温で2時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、ジオキサン/トルエン（1:1、v/v、80 mL）を含む共沸混合物とし、トルエンを用いてトリチュレートし、濾過し、真空オーブン中で乾燥させて、標題化合物を無色の固形物（6.11 g、90％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.43分, ES+ MS m/z 363.2 [M+H]+
【化３１】
2019526614.tif 000035
【０１６２】
（調製物17）
（ベンジル4'-(2-(tert-ブトキシ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート）
【化３２】
2019526614.tif 000036
DMF（150 mL）に溶解させたベンジル4'-ヒドロキシ-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート（調製物18、15 g、49.3 mmol）にtert-ブチルブロモアセタート（10.9 mL、73.9 mmol）及び炭酸カリウム（20.4 g、148 mmol）を加えた。結果として得た懸濁液を窒素下室温で16時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、残渣を水（150 mL）に溶解し、EtOAc（2×150 mL）で抽出した。合わせた有機層を塩水（150 mL）、NaOH（2M 水性、150 mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣を5〜40％ EtOAc/ヘプタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して精製し、標題化合物を無色の油状物（17.8 g、86％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝4.14分、質量イオンは観察されなかった。
【化３３】
2019526614.tif 000037
【０１６３】
（調製物18）
（ベンジル 4'-ヒドロキシ-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート）
【化３４】
2019526614.tif 000038
ジオキサン/水（5:1 v/v、450 mL）中に溶解させたベンジル3-ブロモベンゾアート（調製物19、15 g、51.5 mmol)、炭酸ナトリウム（19.1 g、180 mmol）、及び(4-ヒドロキシフェニル)ボロン酸（8.53 g、61.8 mmol）の混合物を窒素下で30分間脱酸素処理した。Pd(PPh3)4（5.95 g、5.15 mmol）を加え、反応物を窒素下90分間、100℃に加熱した。室温に冷ました後、EtOAc（450 mL）及び水（450 mL）を加え、層を分離した。水層をEtOAc（2×450 mL）で抽出し、合わせた有機層を塩水（450 mL）で洗浄した。有機層をMgSO4で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して黒い残渣を得た。残渣をEtOAc/ヘプタン（1:1 v/v、2 L）で洗浄しながらシリカのパッドを通して濾過し、真空中で濃縮した。残渣をトルエン（75 mL）を用いてトリチュレートし、濾過した。結果として得た固形物をさらなるトルエン（25 mL）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、標題化合物を黄褐色の固形物（12.7 g、81％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝3.39分, ES- MS m/z 303.3 [M-H]-
【化３５】
2019526614.tif 000039
【０１６４】
（調製19）
（ベンジル 3-ブロモベンゾアート）
【化３６】
2019526614.tif 000040
DMF（100 mL）に溶解させた3-ブロモ安息香酸（20 g、99.5 mmol）の溶液に、KHCO3（9.96 g、99.5 mmol）を加えた。臭化ベンジル（11.8 mL、99.5 mmol）を滴加し、反応物を窒素下室温で一晩撹拌した。反応物を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc（200 mL）及び水（200 mL）の間で分配した。層を分離し、有機層をクエン酸（1M、200 mL）、NaHCO3（飽和、水性、200 mL）、及び塩水（200 mL）で洗浄した。有機層をMgSO4で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して標題化合物を淡黄色の油状物（28.3 g、97％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝3.80分、イオン化は観察されなかった。
【化３７】
2019526614.tif 000041
【０１６５】
（調製物20）
（6-(6-(3',5,5'-トリス(2-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキサミド)ヘキサンアミド)ヘキサン酸）
【化３８】
2019526614.tif 000042
標題化合物を調製物14に従って調製物21及びベンジル6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサノアート（JACS 136 (52) 18034-18043 (2014)）を使用して調製した。
LCMS (方法B) Rt＝1.47分, ES+ MS m/z 1201.3 [M+2H]+/2； 理論質量: 2400.0
【０１６６】
（調製物21）
（3',5,5'-トリス(2-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸）
【化３９】
2019526614.tif 000043
標題化合物を、調製物14に従ってα-Gal及び2,2',2''-((5'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1’-ビフェニル]-3,3',5-トリイル)トリス(オキシ))三酢酸（WO2017060729）を使用して調製した。
LCMS (方法B) Rt＝1.27分, ES+ MS m/z 1088.4 [M+2H]+/2, 理論質量: 2174.0.
【０１６７】
（調製物22）
（4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸）
【化４０】
2019526614.tif 000044
ベンジル 4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート（調製物23、215 mg）をTEA及び水（1:1 v/v、10 mL）の溶液に溶解させ、一晩撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、残渣を0.1％ NH3を含む1〜30％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。結果として得た出発物質を含む残渣をさらにTEA及び水（1:1 v/v、10 mL）の溶液で処理し、5日間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、残渣を0.1％ NH3を含む1〜30％ MeCN/水、続いて0.1％ NH3を含む1〜20％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製し、標題化合物を無色の固形物（総量＝172 mg、87％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝1.65分, ES+ MS m/z 1083.9 [M+H]+
【０１６８】
（調製物23）
（ベンジル 4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート）
【化４１】
2019526614.tif 000045
DMF（2.2 mL）中に溶解させた6-(6-(2-((3'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)オキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)ヘキサン酸（調製物24、110 mg、187 μmol）の溶液にHATU（106 mg、280 μmol）及びTEA（80 μL、560 μmol）を加えた。DMSO（1 mL）中のα-Gal（146 mg、243 μmol）溶液を加え、反応物を1時間撹拌した。反応物を0.1％ NH3を含む水中の10〜70％ MeCNで溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して直接精製し、標題化合物を無色の固形物（215 mg、98％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.62分, ES+ MS m/z 1173.7 [M+H]+
【０１６９】
（調製物24）
（6-(6-(2-((3'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)オキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)ヘキサン酸）
【化４２】
2019526614.tif 000046
ベンジル 4'-(2-((6-((6-(tert-ブトキシ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート（調製物25、320 mg、496 μmol）をDCM、TFA、及び水（10:10:1 v/v/v、10 mL）の溶液中に溶解させ、3時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、残渣をジオキサン/トルエン（1:1 v/v、3×24 mL）を含む共沸混合物とした。粗製物質を0.1％ギ酸を含む10〜80％ MeCN/水で溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製し、標題化合物を無色の固形物（168 mg、66％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.81分, ES- MS m/z 589.2 [M]-
【化４３】
2019526614.tif 000047
【０１７０】
（調製物25）
（ベンジル4'-(2-((6-((6-(tert-ブトキシ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボキシラート）
【化４４】
2019526614.tif 000048
DMF（3 mL）中に溶解させた2-((3'-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)オキシ)酢酸（調製物16、150 mg、414 μmol、1当量）の溶液に、TEA（173 μL、1.2 mmol）及びDMF（2 mL）中のtert-ブチル6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサノアート（調製物31、162 mg、538 μmol）の溶液を加えた。続いてHATU（236 mg、621 μmol）を加え、反応物を室温で1時間撹拌した。反応物をヘプタン中の0〜100％ EtOAcで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して直接精製し、標題化合物を無色の油状物（320 mg、＞100％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝3.70分, ES- MS m/z 645.3 [M]-
【化４５】
2019526614.tif 000049
【０１７１】
（調製物26）
（1-(4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-1,8,15,22-テトラオキソ-2,9,16,23-テトラアザノナコサン-29-酸）
【化４６】
2019526614.tif 000050
MeOH（5 mL）及び水（5 mL）中のベンジル 1-(4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-1,8,15,22-テトラオキソ-2,9,16,23-テトラアザノナコサン-29-オアート (調製物27、50 mg、30 μmol)の溶液に5％ Pd/C（5 mg）を加えた。反応物を脱気し、水素雰囲気（バルーン）中一晩撹拌した。反応物をシリンジフィルターに通して濾過し、溶液を真空中で濃縮して標題化合物を淡灰色固形物として得た（26 mg、60％）。
LCMS (方法B) Rt＝1.88分, ES- MS m/z 1537.4 [M]-
【０１７２】
（調製物27）
（ベンジル1-(4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-1,8,15,22-テトラオキソ-2,9,16,23-テトラアザノナコサン-29-オアート）
【化４７】
2019526614.tif 000051
DMF（2 mL）中の4'-(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸（調製物22、50 mg、46 μmol）の溶液にHATU（26 mg、69 μmol）及びTEA（19 μL、138 μmol）を加えた。DMF（2 mL）及びTEA（13 μL、92 μmol）中のベンジル6-(6-(6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)ヘキサノアート塩酸塩（WO2017060729、36 mg、60 μmol）の溶液を加えて黄色の溶液を得、反応物を室温で1時間撹拌した。反応物を0.1％ NH3を含む水中の2〜70％ MeCNで溶出する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して直接精製し、標題化合物を無色の固形物（50 mg、66％）として得た。
LCMS (方法B) Rt＝2.41分, ES+ MS m/z 1627.5 [M+H]+
【０１７３】
（調製物28）
（1-(4',5-ビス(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-1,8,15,22-テトラオキソ-2,9,16,23-テトラアザノナコサン-29-酸）
【化４８】
2019526614.tif 000052
標題化合物を調製物27及び26について記載の方法に従い、4',5-ビス(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸（調製物29）及びベンジル 6-(6-(6-(6-アミノヘキサンアミド)-ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)ヘキサノアート（WO2017060729）を使用して調製した。
LCMS (方法B) Rt＝1.72分, ES+ MS m/z 1211.7 [M+2H]+/2； 理論質量: 2420.7
【０１７４】
（調製物29）
（4',5-ビス(2-((6-((6-((3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)プロピル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-6-オキソへキシル)アミノ)-2-オキソエトキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸）
【化４９】
2019526614.tif 000053
標題化合物を調製物22及び23について記載の方法に従い、6,6'-((6,6'-((2,2'-((5-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-3,4'-ジイル)ビス(オキシ))ビス(アセチル))ビス(アザンジイル))ビス(ヘキサノイル))ビス(アザンジイル))二ヘキサン酸（調製物30）及びα-Galを使用して調製した。
LCMS (方法B) Rt＝1.55分, ES- MS m/z 1967.3 [M-H]-
【０１７５】
（調製物30）
（6,6'-((6,6'-((2,2'-((5-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1'-ビフェニル]-3,4'-ジイル)ビス(オキシ))ビス(アセチル))ビス(アザンジイル))ビス(ヘキサノイル))ビス(アザンジイル))二ヘキサン酸）
【化５０】
2019526614.tif 000054
標題化合物を調製物25及び24について記載の方法に従い、tert-ブチル6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサノアート（調製物31）及び2,2’-((5-((ベンジルオキシ)カルボニル)-[1,1’-ビフェニル]-3,4-ジイル)ビス(オキシ))二酢酸（WO2017060729）を使用して調製した。
LCMS (方法B) Rt＝2.67分, ES- MS m/z 889.5 [M-H]-
【０１７６】
（調製物31）
（tert-ブチル6-(6-アミノヘキサンアミド)ヘキサノアート）
【化５１】
2019526614.tif 000055
標題化合物を調製物27及び26について記載の方法に従い、tert-ブチル6-アミノヘキサノアート及び6-{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}ヘキサン酸を使用して調製した。
【化５２】
2019526614.tif 000056
【０１７７】
（実施例の合成）
（実施例1）
【化５３】
2019526614.tif 000057
DMF（0.5 mL）中の調製物14（1.2 mg、0.0011 mmol）の溶液に、DIPEA（4.0当量）及びDMF（200 μL）中の調製物1（2.5 mg、0.0024 mmol）の溶液を加えた。続いてHATU（1.2当量）を加え、反応物を室温で1時間撹拌した。反応物を逆相カラムクロマトグラフィー（C-18、4 g、0〜70％ MeCN/水）によって精製し、真空下で乾燥させた。残渣を3％ヒドラジン/MeOH（0.5 mL）に溶解させ、反応物を30分間振盪した。物質を分取HPLCカラムクロマトグラフィー（カラム: Gemini-NX 5u C18 110A 150×4.6mm； 流量: 1.0 ml/分 T=30℃； 移動相A: H2O中の0.1％TFA B: MeCN中の0.1％TFA； 機器: Agilent 1260 HPLC-(5-521)）を使用して精製し、凍結乾燥させて標題化合物をトリフルオロ酢酸塩（0.1 mg）として得た。
HPLC (方法1) Rt＝15.11〜15.76分； 
MS m/z 1064.0 [M+2H]+/2及び710 [M+3H]+/3 , 理論質量: 2127.0。
【０１７８】
以下の実施例2〜25は本明細書の適切な調製物を使用し、かつ実施例1（アミド結合形成とそれに続くヒドラジン分解）に従って調製した。実施例はTFA塩として単離し、HPLCによって以下に記載の通りに分析した：
方法1: Gemini-NX 5um, C18, 110A, 150×4.6mm； 流量: 1.0 mL/分。移動相A: H2O中の0.1％TFA B: MeCN中の0.1％TFA； 機器: Agilent 1200 HPLC-BE (1-614)。勾配: 0分 (85％ A), 20分 (55％ A), 20.1分 (10％ A), 23分 (10％ A)。
方法2: XBridge C18, 3.5 um, 2.1×30 mm。 流量: 1.0 mL/分。移動相A: 水中の0.1％ TFA； 移動相B: MeCN。勾配: 0分 (5％ B), 6分 (95％ B), 7分 (95％ B), 8分 (5％ B)。温度: 40℃。
【０１７９】
（実施例2）
【化５４】
2019526614.tif 000058
実施例2の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物20及び調製物1を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝6.31〜7.31分
MS m/z 1149.0 [M+3H]+/3, 理論質量: 3445.6
【０１８０】
（実施例3）
【化５５】
2019526614.tif 000059
実施例3の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物21及び調製物3を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝9.66〜10.84分
MS m/z 1130 [M+3H]+/3, 理論質量: 3388.6
【０１８１】
（実施例4）
【化５６】
2019526614.tif 000060
実施例4の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物14及び調製物3を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝9.82〜10.24分
MS m/z 1149.0 [M+2H]+/2, 理論質量: 2297.7
【０１８２】
（実施例5）
【化５７】
2019526614.tif 000061
実施例5の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物20及び調製物3を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝10.23〜10.81分
MS m/z 904.0 [M+4H]+/4, 理論質量: 3614.9
【０１８３】
（実施例6）
【化５８】
2019526614.tif 000062
実施例6の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物6を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝9.71〜10.55分
HPLC (方法2) Rt＝2.953分
MS m/z 832 [M+3H]+/3, 理論質量: 2493.0
【０１８４】
（実施例7）
【化５９】
2019526614.tif 000063
実施例7の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物21及び調製物6を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝10.06〜10.98分
HPLC (方法2) Rt＝2.640分
MS m/z 1271 [M+3H]+/3, 理論質量: 3809.0
【０１８５】
（実施例8）
【化６０】
2019526614.tif 000064
実施例8の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物20及び調製物4を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝14.43〜15.24分
MS m/z 897 [M+4H]+/4, 理論質量: 3585.8
【０１８６】
（実施例9）
【化６１】
2019526614.tif 000065
実施例9の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物14及び調製物4を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝17.57〜17.84分
MS m/z 1134 [M+2H]+/2, 理論質量: 2268.6
【０１８７】
（実施例10）
【化６２】
2019526614.tif 000066
実施例10の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物21及び調製物4を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝13.70〜14.50分
MS m/z 1120 [M+3H]+/3 , 理論質量: 3359.5
【０１８８】
（実施例11）
【化６３】
2019526614.tif 000067
実施例11の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物11を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝9.75〜10.79分
MS m/z 817.9 [M+3H]+/3, 理論質量: 2450.3
【０１８９】
（実施例12）
【化６４】
2019526614.tif 000068
実施例12の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物10を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝10.77〜11.23分
HPLC (方法2) Rt＝3.065分
MS m/z 1219.8 [M+2H]+/2, 理論質量: 2437.3
【０１９０】
（実施例13）
【化６５】
2019526614.tif 000069
実施例13の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物13を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝8.77〜11.14分
MS m/z 1014.0 [M+2H]+/2, 理論質量: 2026.0
【０１９１】
（実施例14）
【化６６】
2019526614.tif 000070
実施例14の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物12を使用して調製した。
HPLC (方法1) Rt＝10.71〜11.64分
MS m/z 1007.8 [M+2H]+/2, 理論質量: 2013.6
【０１９２】
（実施例15）
【化６７】
2019526614.tif 000071
実施例15の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物9を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝8.390分
MS m/z 1248.3 [M+2H]+/2, 832.3 [M+3H]+/3 理論質量: 2493.3
【０１９３】
（実施例16）
【化６８】
2019526614.tif 000072
実施例16の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、4'-((22-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2,18-ジオキソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,19-ジアザドコシル)オキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸（WO2017060729）及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.944分
MS m/z 1273.0 [M+2H]+/2, 849.1 [M+3H]+/3； 理論質量: 2543.4
【０１９４】
（実施例17）
【化６９】
2019526614.tif 000073
実施例17の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物22及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.964分
MS m/z 1262.5 [M+2H]+/2, 841.9 [M+3H]+/3； 理論質量: 2522.41
【０１９５】
（実施例18）
【化７０】
2019526614.tif 000074
実施例18の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、4'-((22-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2,18-ジオキソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,19-ジアザドコシル)オキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸（WO2017060729）及び調製物6を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.963分
MS m/z 914.9 [M+3H]+/3, 686.3 [M+4H]+/4； 理論質量: 2740.5
【０１９６】
（実施例19）
【化７１】
2019526614.tif 000075
実施例19の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物22及び調製物6を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.998分
MS m/z 1361.6 [M+2H]+/2, 907.9 [M+3H]+/3； 理論質量: 2719.49
【０１９７】
（実施例20）
【化７２】
2019526614.tif 000076
実施例20の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物26及び調製物6を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝3.033分
MS m/z 1058.7 [M+3H]+/3, 794.1 [M+4H]+/4； 理論質量: 3173.82
【０１９８】
（実施例21）
【化７３】
2019526614.tif 000077
実施例21の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、4',5-ビス((22-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-アセトアミド-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)-4-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4-ヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2,18-ジオキソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,19-ジアザドコシル)オキシ)-[1,1'-ビフェニル]-3-カルボン酸（WO2017060729）及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.761分
MS m/z 1151.3 [M+3H]+/3, 863.6 [M+4H]+/4； 理論質量: 3448.8
【０１９９】
（実施例22）
【化７４】
2019526614.tif 000078
実施例22の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物29及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.791分
MS m/z 1137.1 [M+3H]+/3, 853.2 [M+4H]+/4； 理論質量: 3406.8
【０２００】
（実施例23）
【化７５】
2019526614.tif 000079
実施例23の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物15及び調製物5を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.983分
MS m/z 1233.7 [M+2H]+/2, 822.7 [M+3H]+/3； 理論質量: 2464.30
【０２０１】
（実施例24）
【化７６】
2019526614.tif 000080
実施例24の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物28及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.852分
MS m/z 1287.6 [M+3H]+/3, 966.3 [M+4H]+/4； 理論質量: 3861.5
【０２０２】
（実施例25）
【化７７】
2019526614.tif 000081
実施例25の化合物は、実施例1に記載の手順と同様の様式で、調製物26及び調製物8を使用して調製した。
HPLC (方法2) Rt＝2.990分
MS m/z 993.0 [M+3H]+/3, 745.1 [M+4H]+/4； 理論質量: 2976.6
【０２０３】
（生物学的アッセイ）
（化合物の精製LPSとの結合）
化合物のグラム陰性細菌由来のLPSとの結合を確立されたアッセイ（J. Pharm. Sci. (2016), 105(2), 1006-10； Antimicrob Agents Chemother. (1986), 29(3), 495-550； Anal. Biochem (2011), 409 (2), 273-283）においてポリミキシンBのダンシル化誘導体のLPSからの置換を測定することにより評価する。ダンシル化ポリミキシンBをLPS溶液中に滴定し、蛍光強度を測定した（exc 485nm、em 535nm）。漸増濃度のリードコンジュゲート又はポリミキシンBを95％のプローブ占有度に相当するLPS及びダンシル化ポリミキシンBを含む溶液中に滴定すると、ダンシル化ポリミキシンBの候補物質への置換によって蛍光放出量が低下した。
【０２０４】
合成ポリミキシン誘導体ペプチド及び本明細書の実施例のリポ多糖（LPS）結合活性を、大腸菌LPS及び緑膿菌LPSと結合したダンシル-ポリミキシンB（DPMB）の置換を測定することにより評価する。
【０２０５】
（材料）
大腸菌LPSはSigma Aldrichからcat#L3024を購入した。緑膿菌LPSはSigma Aldrichからcat#L9143を購入した。硫酸ポリミキシンB（PMB_std）はAlfa Aesarからcat#J63074を購入した。ポリミキシンBノナペプチド塩酸塩（PMB_nona）はSigma Aldrichからcat#P2076を購入した。ヌクレアーゼフリー水はQiagenからcat#129114を購入した。
【０２０６】
（アッセイプロトコル）
細菌LPSはヌクレアーゼフリー水中で20 μg/mlとなるように調製した。DPMBはヌクレアーゼフリー水中で4 μMとなるように作製した。20 μg/mlの細菌LPS（40 μl）又は陰性対照である水（40 μl）を単一黒色96ウェルプレート（solid black 96 well plate）中で振盪（450 rpm）しながら室温で5分間保つことにより4 μMのDPMB（20 μl）で平衡化した。4×最終アッセイ濃度の試験化合物の滴定（20 μl）をLPS及びDPMBに加え、アッセイプレートを振盪（450 rpm）しながら室温で10分間保った。蛍光強度をEnvision 2102マルチラベルプレートリーダーで記録した（Em340, Ex485）。実施例1の化合物を先に言及した結合アッセイで試験した。結果を図1及び2に示す。
【０２０７】
（抗α-ガラクトシルIgM抗体を使用したフローサイトメトリーによる抗体動員アッセイ）
フローサイトメトリーを使用してL（カチオン性抗微生物ペプチドである）の大腸菌及びF（ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することが可能な糖質分子である）との結合を実証した。FITC標識抗ヒトIgM二次抗体を使用して抗α-ガラクトシルの化合物への結合を検出した。
【０２０８】
（方法1）
ポリスチレン96ウェルU底プレート（Costar）中でアッセイを実施した。96ウェルプレートをカゼインブロッキング緩衝液（Thermo Fisher 37528）で事前ブロッキングし、続いてアッセイ前に（HBSS+/+）（Life Technologies 14025-050）で3回洗浄した。大腸菌K12（Public Health England, NCTC 10538）をLB培地（Fisher BP1426-500）中で対数増殖期後期まで増殖させた。次に、細菌を10000 rpmで5分間遠心分離し、HBSS+/+中に再懸濁させて2×109 CFU/mLの細菌密度とした。Baclight red細菌染色液（ThermoFisher B35001）を最終濃度を1 μMにして細菌に加え、室温で10分間インキュベートした。細菌を遠心分離し（10000 rpm、5分間）、HBSS+/+中に再懸濁させて2×109 CFU/mLの濃度とした。続いて1×108 CFUを20 μMの実施例2〜14（表1を参照されたい）又は緩衝液単独とともに室温、450 rpmで振盪しながら1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+中で25 μg/mLにした50 μLの抗α-ガラクトシルヒトIgM M86抗体（Absolute Antibody Ab00532）を加えた。プレートを450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+で1:10に希釈した100 μLの抗ヒトIgM-FITC 抗体（Biolegend 314506）を加え、450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。3×200 μL HBSS+/+のうちの最後の洗浄後、細菌を200 μL HBSS+/+中に再懸濁させてFC500（Beckman Coulter）で評価した。細菌をFL-4チャネルで生細胞によるゲーティングにかけ、蛍光シフトの中央値をFL-1チャネルで記録した。全試料からのデータをKaluzaソフトウェアパッケージ（Beckman Coulter）で分析した。実験は2回繰り返した。
【０２０９】
表1は、先に記載のフローサイトメトリーアッセイを使用した細菌表面への抗α-ガラクトシルIgM抗体の捕捉を示している。バックグラウンドに対する倍数シフトを20 μM実施例の存在下で得られた蛍光強度中央値を実施例の非存在下で得られた蛍光強度中央値で除することにより算出した。蛍光強度のシフト（FITC）は分子の各末端での結合事象によって起こる。
【０２１０】
表1
【表３】
2019526614.tif 000082
【０２１１】
（方法2）
ポリスチレン96ウェルU底プレート（Costar）中でアッセイを実施した。大腸菌K12（Public Health England, NCTC 10538）をLB培地（Fisher BP1426-500）中で対数増殖期後期まで増殖させた。次に、細菌を10000 rpmで5分間遠心分離することによりHBSS+/+で1回洗浄し、HBSS+/+中で再懸濁させた。細菌を10000 rpmで5分間遠心分離し、HBSS+/+中に再懸濁させて2×109 CFU/mLの細菌密度とした。続いて1×108 CFUを20 μMの実施例15〜25（表2を参照されたい）又は緩衝液単独とともに室温、450 rpmで振盪しながら1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+中で25 μg/mLにした50 μLの抗α-ガラクトシルヒトIgM M86抗体（Absolute Antibody Ab00532）を加えた。プレートを450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+で1:10に希釈した100 μLの抗ヒトIgM-FITC 抗体（Biolegend 314506）を加え、450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。3×200 μL HBSS+/+のうちの最後の洗浄後、細菌を200 μL HBSS+/+中に再懸濁させてCytoflex（Beckman Coulter）で評価した。50000個の細菌を回収し、蛍光シフトの中央値をFITC-Aチャネルで記録した。全試料からのデータをKaluzaソフトウェアパッケージ（Beckman Coulter）で分析した。実験は2回繰り返した。
【０２１２】
表2は、先に記載のフローサイトメトリーアッセイを使用した細菌表面への抗α-ガラクトシルIgM抗体の捕捉を示している。バックグラウンドに対する倍数シフトを20 μM実施例の存在下で得られた蛍光強度中央値を実施例の非存在下で得られた蛍光強度中央値で除することにより算出した。蛍光強度のシフト（FITC）は分子の各末端での結合事象によって起こる。
【０２１３】
表2
【表４】
2019526614.tif 000083
【０２１４】
（抗α-ガラクトシルIgG抗体を使用したフローサイトメトリーによる抗体動員アッセイ）
フローサイトメトリーを使用してL（カチオン性抗微生物ペプチドである）の大腸菌及びF（ヒト抗α-ガラクトシル抗体と結合することが可能な糖質分子である）との結合を実証した。FITC標識抗ヒトIgG二次抗体を使用してα-ガラクトシルの化合物への結合を検出した。
【０２１５】
ポリスチレン96ウェルU底プレート（Costar）中でアッセイを実施した。96ウェルプレートをカゼインブロッキング緩衝液（Thermo Fisher 37528）で事前ブロッキングし、続いてアッセイ前に（HBSS+/+）（Life Technologies 14025-050）で3回洗浄した。大腸菌K12（Public Health England, NCTC 10538）をLB培地（Fisher BP1426-500）中で対数増殖期後期まで増殖させた。次に、細菌を10000 rpmで5分間遠心分離し、HBSS+/+中に再懸濁させて2×109 CFU/mLの細菌密度とした。Baclight red細菌染色液（ThermoFisher B35001）を最終濃度を1 μMにして細菌に加え、室温で10分間インキュベートした。細菌を遠心分離し（10000 rpm、5分間）、HBSS+/+中に再懸濁させて2×109 CFU/mLの濃度とした。続いて1×108 CFUを20 μMの実施例1〜10（表3を参照されたい）又は緩衝液単独とともに室温、450 rpmで振盪しながら1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+中で42 μg/mLにした50 μLの抗α-ガラクトシルIgG抗体を加えた（抗α-ガラクトシル抗体はRockland Immunochemicals社製のα-ガラクトシル-HAS（ヒト血清アルブミン）セファロースカラムを使用したアフィニティー精製によりヒトIVIG（Gammagard）から精製した。）。プレートを450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。細菌を3×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後HBSS+/+で1:20に希釈した100 μLの抗ヒトIgG-FITC 抗体（Biolegend 409310）を加え、450 rpmで振盪しながら室温で1時間インキュベートした。3×200 μL HBSS+/+のうちの最後の洗浄後、細菌を200 μL HBSS+/+中に再懸濁させてFC500（Beckman Coulter）で評価した。細菌をFL-4チャネルで生細胞によるゲーティングにかけ、蛍光シフトの中央値をFL-1チャネルで記録した。全試料からのデータをKaluzaソフトウェアパッケージ（Beckman Coulter）で分析した。実験は2回繰り返した。
【０２１６】
表3は、先に記載のフローサイトメトリーアッセイを使用した細菌表面への抗α-ガラクトシルIgG抗体の捕捉を示している。バックグラウンドに対する倍数シフトを20 μM実施例の存在下で得られた蛍光強度中央値を実施例の非存在下で得られた蛍光強度中央値で除することにより算出した。蛍光強度のシフト（FITC）は分子の各末端での結合事象によって起こる。
【０２１７】
表3
【表５】
2019526614.tif 000084
【０２１８】
（補体沈着アッセイ（Complement deposition assay）フローサイトメトリー）
ポリスチレン96ウェルU底プレート（Costar）中でアッセイを実施した。大腸菌K1:O18ac:H7（ATCC 700973）をLB培地（Fisher BP1426-500）中で対数増殖期後期まで増殖させた。次に、細菌を10000 rpmで5分間遠心分離し、PBS（Sigma D8537-500mL）に再懸濁させた。細菌を遠心分離（10000 rpm、5分間）して、1％ BSA（Sigma A2153-50G）を含むPBSに再懸濁させて2×109 CFU/mLの濃度とした。続いて1×108 CFUを20 μM及び/又は10 μMの実施例4〜7、9、及び15〜25（表4及び図3を参照されたい）又は緩衝液単独とともに4℃で45分間インキュベートした。細菌を1×200 μL HBSS+/+で洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後PBS＋1％ BSA中で最終血清濃度を25％にした100 μLのヒト血清プール（Innovate Research IPLA-CSER）を加えた。細菌を37℃で20分間インキュベートした。100 μL氷冷PBSを各ウェルに加えた。プレートを4℃、4000 rpmで5分間遠心分離し、上清を捨てた。細菌を200 μL HBSS+/+でさらに2回洗浄し（4000 rpmで5分間遠心分離した）、その後PBS＋1％ BSA中1:50に希釈した100 μLの抗ヒトC3b/C3bi-PE抗体（Biolegend 846104）を加え、4℃で45分間インキュベートした。3×200 μL HBSS+/+のうちの最後の洗浄後、細菌を200 μL HBSS+/+中に再懸濁させてCytoflex（Beckman Coulter）で評価した。蛍光強度の中央値をPEチャネルに記録した。全試料からのデータをKaluzaソフトウェアパッケージ（Beckman Coulter）で分析した。
【０２１９】
表4は、先に記載のフローサイトメトリーアッセイを使用したヒト血清から細菌表面へのC3bの沈着を示している。バックグラウンドに対する倍数シフトを20 μM実施例の存在下で得られた蛍光強度中央値を実施例の非存在下で得られた蛍光強度中央値で除することにより算出した。蛍光強度のシフト（PE）は細菌表面へのC3bの動員によって起こる。
【０２２０】
表4
【表６】
2019526614.tif 000085
【０２２１】
図3は、20 μMの実施例4（図3A）、実施例5（図3B）、実施例6（図3C）、実施例7（図3D）、及び実施例9（図3E）の存在下のヒト血清から大腸菌表面へのC3bの動員を示している。蛍光強度のシフト（PE）は血清から細菌表面へのC3bの動員によって起こる。
【図１】
2019526614.tif 000095
【図２】
2019526614.tif 000096
【図３Ａ−Ｂ】
2019526614.tif 000097
【図３Ｃ−Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【国際調査報告】
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