(57)【要約】本明細書に提供するのは、キメラ受容体を含む修飾Ｔリンパ球及びその方法である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる前記セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む第二のポリペプチド含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドは、前記セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２】
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記膜貫通ドメイン、及び前記セレブロンまたはその機能部分を含み、前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記膜貫通ドメイン、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記セレブロンまたはその機能部分、及び前記膜貫通ドメインを含み、前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、前記膜貫通ドメイン、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記第一のポリペプチドが、さらに共刺激ドメインを含む、請求項１〜３のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記第二のポリペプチドが、さらに共刺激ドメインを含む、請求項１〜４のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、共刺激ドメインを含む、請求項１〜５のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項７】
（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる前記セレブロンまたはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含み、共刺激ドメインを含まない前記第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチド含むＣＡＲであって、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドは、前記セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する、前記ＣＡＲ。
【請求項８】
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記膜貫通ドメイン、前記セレブロンまたはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドを含み、前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記膜貫通ドメイン、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、及び前記共刺激ドメインを含む、請求項７に記載のＣＡＲ。
【請求項９】
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記セレブロンまたはその機能部分、前記膜貫通ドメイン、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドを含み、前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、前記膜貫通ドメイン、及び前記共刺激ドメインを含む、請求項７に記載のＣＡＲ。
【請求項１０】
一次細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドが、ＣＤ３ζである、請求項１〜９のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１１】
一次細胞シグナル伝達ドメインを含む前記ポリペプチドが、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）であるか、またはこれを含む、請求項１〜９のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１２】
ＩＴＡＭを含む前記ポリペプチドが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃＥＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及び／またはＤＡＰ１２のうちの１つ以上に由来するシグナル伝達ドメインである、請求項１１に記載のＣＡＲ。
【請求項１３】
請求項４〜１２のいずれかに記載のＣＡＲであって、前記共刺激ドメインが、１つ以上の共刺激ドメインであり、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−Ｌ  ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ８３のリガンド、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、及び／またはシグナル伝達リンパ球活性化分子のうちの１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを含む、前記ＣＡＲ。
【請求項１４】
前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４由来の膜貫通ドメインである、請求項１〜１３のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１５】
前記抗原結合ドメインが、前記抗原の受容体である、請求項１〜１４のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１６】
前記抗原結合ドメインが、前記抗原と結合する抗体またはその結合フラグメントである、請求項１〜１４のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１７】
前記抗体が、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１７に記載のＣＡＲ。
【請求項１８】
前記抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である、請求項１〜１７のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項１９】
前記ＴＡＡまたはＴＳＡが、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンのうちの１つ以上である、請求項１８に記載のＣＡＲ。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかに記載のＣＡＲであって、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で発現され、ヘテロ二量体化されると、前記ＣＡＲが一次活性化シグナル、または一次活性化シグナル及び共刺激シグナルを伝達し、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化することができる、前記ＣＡＲ。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載のＣＡＲを構成する前記第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの一方または両方をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２２】
ポリヌクレオチドベクター内に含まれる、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】
前記ベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記核酸配列が、ＮＫ細胞特異的プロモーターのＴ細胞特異的プロモーターに作動可能に連結される、請求項２０〜２３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記核酸配列が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーターに作動可能に連結される、請求項２０〜２３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記核酸配列が、構成的プロモーターに作動可能に連結される、請求項２０〜２３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
請求項２１〜２７のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項２９】
細菌細胞である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
哺乳類細胞である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３１】
前記細胞がＴ細胞である、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３２】
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３４】
前記Ｔ細胞がＴエフェクター細胞である、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３５】
前記Ｔ細胞がＴ記憶細胞である、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３６】
前記細胞がナチュラルキラー細胞である、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３７】
Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、（ａ）抗原結合ドメインが特異的である抗原、及び（ｂ）セレブロン結合化合物と接触させることを含む、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化する方法であって、前記Ｔ細胞は、請求項１〜２０のいずれかに記載のＣＡＲの前記第一及び第二のポリペプチドを発現するように修飾されており、前記セレブロン結合化合物は、前記第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドに二量体化を引き起こし、これらに前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化させる、前記方法。
【請求項３８】
前記抗原結合ドメインが、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンのうちの１つ以上に対して特異的である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、請求項３７または請求項３８に記載の活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞と接触させることを含む、前記方法。
【請求項４０】
前記標的細胞が、がん細胞である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記がん細胞が血液がん細胞である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記がん細胞が固形腫瘍細胞である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記標的細胞が、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンのうちの１つ以上を発現する、請求項３９〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
（ａ）アポトーシス誘導ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる前記セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン、及びＡｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含む、二量体化可能な人工細胞死受容体であって、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドは、前記セレブロン結合化合物の存在下で二量体を形成し、アポトーシス誘導シグナルを生じる、前記二量体化可能な人工細胞死受容体。
【請求項４５】
前記第一のポリペプチドが、膜貫通ドメインならびに前記アポトーシス誘導ドメイン及び前記セレブロンを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項４６】
前記第一のポリペプチドが、前記セレブロンまたはその機能部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び前記アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項４７】
前記第二のポリペプチドが、膜貫通ドメインならびに前記アポトーシス誘導ドメイン及び前記ＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項４８】
前記第二のポリペプチドが、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び前記アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項４９】
前記第一のポリペプチドが、膜貫通ドメインならびに前記アポトーシス誘導ドメイン及び前記セレブロンを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質であり、前記第二のポリペプチドが、膜貫通ドメインならびに前記アポトーシス誘導ドメイン及び前記ＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項５０】
前記第一のポリペプチドが、前記セレブロンまたはその機能部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び前記アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質であり、前記第二のポリペプチドが、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び前記アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質である、請求項４４に記載の細胞死受容体。
【請求項５１】
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの前記アポトーシス誘導ドメインが、カスパーゼである、請求項４４〜５０のいずれかに記載の細胞死受容体。
【請求項５２】
前記カスパーゼが、カスパーゼ９である、請求項５１に記載の細胞死受容体。
【請求項５３】
前記カスパーゼが、カスパーゼ８である、請求項５１に記載の細胞死受容体。
【請求項５４】
前記カスパーゼが、カスパーゼ３である、請求項５１に記載の細胞死受容体。
【請求項５５】
請求項４４〜５４のいずれかに記載の細胞死受容体の前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの一方または両方をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項５６】
ポリヌクレオチドベクター内に含まれる、請求項５５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５７】
前記ベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項５６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５８】
前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項５６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５９】
前記核酸配列が、ＮＫ細胞特異的プロモーターのＴ細胞特異的プロモーターに作動可能に連結される、請求項５５〜５８のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項６０】
前記核酸配列が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーターに作動可能に連結される、請求項５５〜５８のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項６１】
前記核酸配列が、構成的プロモーターに作動可能に連結される、請求項５５〜５８のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項６２】
請求項５５〜６１のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項６３】
細菌細胞である、請求項６２に記載の細胞。
【請求項６４】
哺乳類細胞である、請求項６２に記載の細胞
【請求項６５】
前記哺乳類細胞がＴ細胞である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項６５に記載の細胞。
【請求項６７】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項６５に記載の細胞。
【請求項６８】
前記Ｔ細胞がＴエフェクター細胞である、請求項６５に記載の細胞。
【請求項６９】
前記Ｔ細胞がＴ記憶細胞である、請求項６５に記載の細胞。
【請求項７０】
前記哺乳類細胞がナチュラルキラー細胞である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項７１】
前記細胞が、さらにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項６２〜７０のいずれかに記載の細胞。
【請求項７２】
前記ＣＡＲが、請求項１〜２０のいずれかに記載のＣＡＲである、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７３】
前記ＣＡＲが、第一世代のＣＡＲである、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７４】
前記ＣＡＲが、第二世代のＣＡＲである、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７５】
前記ＣＡＲが、第三世代のＣＡＲである、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７６】
前記ＣＡＲが、２つ以上の細胞外抗原標的ドメインを含むＣＡＲである、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７７】
前記ＣＡＲが、Ｔ細胞活性の負の調節因子であるインターロイキンに結合する細胞外ドメイン、及びＴ細胞活性の正の調節因子であるインターロイキン受容体由来の細胞内ドメインを含む、請求項７１に記載の細胞。
【請求項７８】
アポトーシス誘導ドメイン及び二量体化ドメインを含む人工細胞死ポリペプチドを含む請求項２８〜３６のいずれかに記載の細胞であって、前記ポリペプチドは、二量体化剤を用いて二量体化可能であり、前記ポリペプチドが二量体化されると、前記ポリペプチドは、前記細胞にてアポトーシス誘導シグナルを生じる、前記細胞。
【請求項７９】
前記二量体化剤が、セレブロン結合化合物ではない、請求項７８に記載の細胞。
【請求項８０】
前記二量体化剤が、ラパマイシンまたはラパマイシンの類似体（ラパログ）である、請求項７９に記載の細胞。
【請求項８１】
前記二量体化剤が、ＡＰ１９０３（ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）である、請求項８０に記載の細胞。
【請求項８２】
前記二量体化ドメインが、ＦＫ結合ドメインまたはその類似体である、請求項８０または請求項８１に記載の細胞。
【請求項８３】
前記二量体化剤が、前記二量体化ドメインに結合する抗体である、請求項８０に記載の細胞。
【請求項８４】
細胞を死滅させる方法であって、前記細胞は、請求項４４〜５４のいずれかに記載の人工細胞死受容体を発現するものであり、前記細胞をセレブロン結合化合物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項８５】
前記細胞が、請求項６２〜７７のいずれかに記載の細胞である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
細胞を死滅させる方法であって、前記細胞は、請求項７８〜８３のいずれかに記載の細胞であり、前記細胞を二量体化剤と接触させることを含む、前記方法。
【請求項８７】
前記二量体化剤が、ラパマイシンまたはラパマイシンの類似体（ラパログ）である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記二量体化剤が、ＡＰ１９０３（ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８９】
前記二量体化ドメインが、ＦＫ結合ドメインまたはその類似体である、請求項８０または請求項８１に記載の細胞。
【請求項９０】
前記二量体化剤が、前記二量体化ドメインに結合する抗体である、請求項８０に記載の細胞。
【請求項９１】
前記セレブロン結合化合物が、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである、請求項１〜２０のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項９２】
前記セレブロン結合化合物が、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである、請求項３７〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項９３】
前記セレブロン結合化合物が、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）、ポマリドミド（４−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン）、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである、請求項４４〜５４のいずれかに記載の細胞死受容体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において、本開示は、免疫学の分野に関し、より具体的には、Ｔリンパ球または他の免疫細胞の修飾に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞とも呼ばれる）等の免疫系の細胞は、受容体または受容体複合体を介して特定の抗原を認識しかつこれらと相互作用し、かかる抗原を認識またはこれらと相互作用すると、これら受容体または受容体複合体は当該細胞の活性化を引き起こす。かかる受容体の一例は、８つのタンパク質の複合体である抗原特異的Ｔリンパ球受容体複合体（ＴＣＲ／ＣＤ３）である。該Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔリンパ球の表面で発現する。不変構造を有する一成分であるＣＤ３は、リガンドによるＴＣＲの占有後の細胞内シグナル伝達に関与する。抗原−ＣＤ３複合体（ＴＣＲ／ＣＤ３）に対するＴリンパ球受容体は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）のタンパク質によってそれに提示される抗原性ペプチドを認識する。ＭＨＣとペプチドの複合体は、抗原提示細胞及び他のＴリンパ球標的の表面で発現する。ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の刺激は、Ｔリンパ球の活性化及びその結果として抗原特異的免疫反応をもたらす。該ＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、エフェクター機能及び免疫系の調節において中心的な役割を果たす。
【０００３】
Ｔリンパ球は、完全に活性化するために第二の、すなわち、共刺激シグナルを必要とする。かかるシグナルなしでは、Ｔリンパ球は、ＴＣＲへの抗原結合に反応しないか、またはアネルギー性になる。かかる共刺激シグナルは、例えば、抗原産生細胞上のＣＤ８０及びＣＤ８６と相互作用するＴリンパ球タンパク質であるＣＤ２８によって提供される。別のＴリンパ球タンパク質であるＩＣＯＳ（誘導性共刺激分子）は、ＩＣＯＳリガンドに結合した時に共刺激シグナルを提供する。
【０００４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、ＴＣＲ複合体の必須の抗原結合、シグナル伝達、及び刺激性機能を含むように遺伝子操作されたポリペプチドである。かかるＣＡＲを有するＴリンパ球は、一般にＣＡＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲ−Ｔリンパ球と呼ばれる。しかしながら、ＣＡＲはＴリンパ球を特定の腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原に効果的に標的化することができるが、かかる抗原を同様に発現する正常な健康細胞もまた標的化され得る。本明細書に記載するのは、現在のＣＡＲ設計のこの欠点を克服する修飾キメラ受容体である。
【発明の概要】
【０００５】
１つの態様において、本明細書に提供するのは、（ａ）セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド及び（ｂ）セレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、該第一のポリペプチドもしくは第二のポリペプチド、または両方のポリペプチドは、ＣＡＲのさらなる成分、例えば、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞シグナル伝達ドメイン、及び／または共刺激ドメインを含む。該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドは、セレブロン結合化合物（例えば、本明細書に記載される）の存在下、免疫細胞中（例えば、Ｔリンパ球中）で一緒に発現されると、該第一のポリペプチドの該セレブロン（または、例えば、本明細書に記載される通り、その機能部分）及び該第二のポリペプチドのセレブロン関連タンパク質（または、例えば、本明細書に記載される通り、その機能部分）は、該セレブロン結合化合物と結合し、ＣＡＲ機能を有するヘテロ二量体の形成をもたらす。従って、本明細書に記載のＣＡＲの活性（例えば、インビボ活性）は、該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドを発現する細胞（例えば、当該ＣＡＲを発現するように操作されたＴリンパ球）をセレブロン結合化合物と接触させることによって選択的に制御することができる。免疫細胞で発現された該ＣＡＲがセレブロン結合化合物と接触され、該ＣＡＲが抗原、例えば、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原に結合すると、該ＣＡＲは、一次シグナル及び共刺激シグナルの両方を伝達し、これにより該免疫細胞を活性化する。
【０００６】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる、該セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる、該セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲであり、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオンである。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０００７】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０００８】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び膜貫通ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０００９】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロン関連タンパク質またはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる、該セレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる、該セレブロンまたはその機能部分は、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲであり、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオンである。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１０】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１１】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び膜貫通ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１２】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１３】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１４】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１５】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００１６】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一または第二のポリペプチドが一次細胞シグナル伝達ドメインを含む場合、該ポリペプチドはＣＤ３ζである。特定の実施形態において、該細胞シグナル伝達ドメインはヒトである。
【００１７】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一または第二のポリペプチドが一次細胞シグナル伝達ドメインを含む場合、該一次細胞シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の一次細胞シグナル伝達ドメインであるか、またはこれを含む。特定の実施形態において、該ＩＴＡＭは、以下のうちの１つ以上に由来する：ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及び／またはＤＡＰ１２。特定の実施形態において、該細胞シグナル伝達ドメインはヒトである。
【００１８】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドが共刺激ドメインを含む場合、該共刺激ドメインは、以下のうちの１つ以上に由来する：ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−Ｌ  ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ８３のリガンド、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、及び／またはシグナル伝達リンパ球活性化分子。特定の実施形態において、該共刺激ドメインはヒトである。
【００１９】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲの該第一のポリペプチド及び／または第二のポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４由来の膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、該膜貫通ドメインはヒトである。
【００２０】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、受容体を含む。
【００２１】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体またはその結合フラグメントを含む。特定の実施形態において、該抗体の結合フラグメントは、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。
【００２２】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する抗原は、腫瘍細胞上の抗原である。特定の実施形態において、該抗原は、固形腫瘍細胞の抗原である。別の特定の実施形態において、該抗原は、血液がん細胞の抗原である。
【００２３】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合さする抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。特定の実施形態において、該ＴＡＡまたはＴＳＡは、以下のうちの１つ以上、またはそのフラグメントである：４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチン。
【００２４】
別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸、すなわち、本明細書に記載のＣＡＲの第一のポリペプチドをコードする核酸及び第二のポリペプチドをコードする核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの第一のポリペプチドは、第一の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされ、本明細書に記載のＣＡＲの第二のポリペプチドは、第二の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲの該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの両方をコードする核酸（ポリヌクレオチド）である。
【００２５】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲのポリペプチドをコードする核酸は、核酸ベクター内に含まれる。特定の実施形態において、該ベクターはレトロウイルスベクターである。別の特定の実施形態において、該ベクターはレンチウイルスベクターである。
【００２６】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲのポリペプチドをコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。特定の実施形態において、該プロモーターは、Ｔ細胞特異的プロモーター、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーター、または構成的プロモーターである。
【００２７】
別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸及び／またはベクターを含む細胞（本明細書では「ＣＡＲ細胞」と呼ばれる）である。該細胞としては、原核（例えば、細菌）細胞及び真核（例えば、哺乳類）細胞が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲを含むＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ＋Ｔ細胞、Ｔエフェクター細胞、またはＴ記憶細胞である。別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲを含むナチュラルキラー細胞である。
【００２８】
本明細書に提供するＣＡＲ細胞、例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸（複数可）を含むＴ細胞、または本明細書に記載のＣＡＲを発現する（すなわち、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドを発現する）Ｔ細胞は、（ｉ）該ＣＡＲが特異的である抗原（すなわち、該ＣＡＲの抗原結合ドメインによって認識される抗原）及び（ｉｉ）セレブロン結合化合物に接触された場合に活性化され得る。従って、別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲを含む、及び／またはこれを発現する細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を活性化する方法であり、該方法は、ＣＡＲの抗原結合ドメインと結合する抗原に該細胞を接触させること、及び該細胞をさらにセレブロン結合化合物と接触させることを含む。特定の実施形態において、該細胞は、該抗原及び該セレブロン結合化合物とインビボで接触される。すなわち、接触は、該細胞を対象に投与した後に生じる。別の特定の実施形態において、該細胞は、対象に投与され、当該ＣＡＲが特異的である抗原を見つけて接触するための特定の時間が与えられ、続いてセレブロン結合化合物が該対象に投与される。
【００２９】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲ細胞は、さらに、アポトーシス誘導ドメイン及び二量体化ドメインを含む人工細胞死ポリペプチドを含み、該人工細胞死ポリペプチドは、二量体化剤を用いて二量体化可能であり、該人工細胞死ポリペプチドが二量体化されると、該ポリペプチドは、当該細胞にてアポトーシス誘導シグナルを生じる。特定の実施形態において、該二量体化剤は、ラパマイシンまたはラパマイシンの類似体（ラパログ）である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤はＡＰ１９０３（ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤は、セレブロン結合化合物ではない。特定の実施形態において、該二量体化ドメインは、ＦＫ結合ドメインまたはその類似体である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤は、該ＦＫ結合ドメインに結合する抗体である。
【００３０】
別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する抗原を発現する標的細胞を死滅させる方法であり、該方法は、（ｉ）本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）に該標的細胞を接触させること、及び（ｉｉ）該ＣＡＲを発現する細胞をセレブロン結合化合物に接触させることを含み、該抗原及び該セレブロン結合化合物の存在下で該ＣＡＲを発現する細胞が活性化する。特定の実施形態において、該標的細胞は、がん細胞、例えば、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である。別の特定の実施形態において、該標的細胞は、以下の抗原のうちの１つ以上、またはその抗原フラグメントを発現する：４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチン。
【００３１】
別の態様において、本明細書に提供するのは、がんを治療する方法であり、該方法は、（ｉ）本明細書に記載のＣＡＲであって、当該ＣＡＲが、がん抗原（例えば、ＴＳＡまたはＴＡＡ）に対して特異的な抗原結合ドメインを含む、当該ＣＡＲを含む／発現する（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸（複数可）を含む、または本明細書に記載のＣＡＲを発現する）本明細書に記載のＣＡＲ細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の集団を対象（例えば、ヒト対象）に投与すること、及び（ｉｉ）セレブロン結合化合物を含む組成物を該対象に投与することを含む。特定の実施形態において、該細胞の集団が最初に該対象に投与され、その後、該細胞集団の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、セレブロン結合化合物を含む該組成物が投与される。特定の実施形態において、該ＣＡＲが結合する該抗原は、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンである。
【００３２】
特定の実施形態において、本明細書に記載のがんを治療する方法に従って対象に投与されるセレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００３３】
本明細書に記載の治療方法に従って治療することができるがんの限定されないリストには、リンパ腫、白血病、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、上咽頭癌、メラノーマ、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢性原始神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経膠腫、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、及び脂肪腫が含まれる。例示的なリンパ腫及び白血病としては、慢性リンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒リンパ球性白血病、悪性ＮＫ細胞性白血病、成人Ｔリンパ球性白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔリンパ球性リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢性Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３４】
別の態様において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む第一のポリペプチドならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びＡｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体であり、該セレブロン（またはその機能部分）及び該Ａｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）の両方が、セレブロン結合化合物と結合することができ、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下で二量体を形成し、アポトーシス誘導シグナルを生じる。特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００３５】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【００３６】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）セレブロン（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【００３７】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【００３８】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【００３９】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供する二量体化可能な人工細胞死受容体のアポトーシス誘導ドメインは、カスパーゼである。特定の実施形態において、該カスパーゼは、カスパーゼ９、カスパーゼ８、またはカスパーゼ３である。
【００４０】
別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸、すなわち、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチドをコードする核酸及び第二のポリペプチドをコードする核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチドは、第一の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされ、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第二のポリペプチドは、第二の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの両方をコードする核酸（ポリヌクレオチド）である。
【００４１】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸は、核酸ベクター内に含まれる。特定の実施形態において、該ベクターはレトロウイルスベクターである。別の特定の実施形態において、該ベクターはレンチウイルスベクターである。
【００４２】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。特定の実施形態において、該プロモーターは、Ｔ細胞特異的プロモーター、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーター、または構成的プロモーターである。
【００４３】
別の態様において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸及び／または本明細書に記載のベクターを含む細胞（本明細書では「細胞死受容体細胞」と呼ばれる）である。該細胞としては、原核（例えば、細菌）細胞及び真核（例えば、哺乳類）細胞が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体を含むＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔエフェクター細胞、またはＴ記憶細胞である。別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体を含むナチュラルキラー細胞である。
【００４４】
本明細書に提供する細胞死受容体細胞、例えば、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸（複数可）を含むまたは本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体を発現する（すなわち、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一及び第二のポリペプチドを発現する）Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、セレブロン結合化合物と接触された場合に、例えば、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンと接触された場合に、誘導されてアポトーシスを受け得る。
【００４５】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供する細胞死受容体細胞はさらに、ＣＡＲ、例えば、第一世代のＣＡＲ、第二世代のＣＡＲ、または第三世代のＣＡＲを含む。特定の実施形態において、該ＣＡＲは、２つ以上の細胞外抗原標的ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該ＣＡＲは、Ｔ細胞活性の負の調節因子であるインターロイキンに結合する細胞外ドメイン、及びＴ細胞活性の正の調節因子であるインターロイキン受容体由来の細胞内ドメインを含む。別の特定の実施形態において、アポトーシスは、人工細胞死受容体及びＣＡＲを含む細胞において、該細胞をセレブロン結合化合物、例えば、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンに接触させることによって誘導される。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を調節するためのセレブロン結合化合物（例えば、ポマリドミド）の使用。ポマリドミド及び腫瘍抗原への曝露後に活性化されるＴ細胞上の分割ＣＡＲの概略図を示す（腫瘍抗原結合ドメイン、ＣＤ２８等の共刺激ドメイン、及びセレブロンを含む第一のポリペプチド、ならびにＣＤ３ζ等のＩＴＡＭ及びＡｉｏｌｏｓ等のセレブロン関連タンパク質を含む第二のポリペプチドを備える）。ここで、ポマリドミドは、分割ＣＡＲの二量体化を誘導することによってＣＡＲ活性を調節する。ＣＲＢＮ：セレブロン、ＰＯＭ：ポマリドミド、Ｃｏｓｔｉｍ．Ｄｏｍａｉｎ：共刺激ドメイン。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
潜在的に毒性をもたらすＣＡＲを発現する治療的免疫細胞によって媒介される標的上であるが腫瘍外の効果は、活性化のために一次及び共刺激シグナルの両方を必要とする調節可能なＣＡＲをかかる細胞において発現させることによって低減または除去することができる。本明細書に開示するこの分離は、２つの人工ポリペプチドを含むＣＡＲの使用によって達成される。ここで、（ｉ）第一のポリペプチドは、セレブロン（またはその機能部分）を含み、第二のポリペプチドは、セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含み、（ｉｉ）活性化に必要とされる該ＣＡＲの成分は、２つのポリペプチドに分けられ、（ｉｉｉ）該ＣＡＲは、セレブロン及び該セレブロン関連タンパク質と結合するセレブロン結合化合物の存在下で活性化される。
【００４８】
ＣＡＲが媒介する標的上、腫瘍外効果は、二量体化可能な人工細胞死受容体の使用によっても低減または除去することができる。これは、かかる受容体を発現する細胞を要求に応じて死滅させる。本明細書に記載のかかる二量体化可能な人工細胞死受容体は、アポトーシス誘導ドメイン及び二量体化ドメイン、例えば、セレブロン（またはその機能部分）を含む第一のポリペプチド、ならびにアポトーシス誘導ドメイン及び相補的二量体化ドメイン、例えば、セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む。かかる二量体化可能な人工細胞死受容体を発現する細胞は、該第一及び第二のポリペプチドを二量体化することができるセレブロン結合化合物とそれらを接触させることによって、従って、該アポトーシス誘導ドメインを活性化することによってアポトーシスを受けさせることができる。
【００４９】
４．１．キメラ抗原受容体及びそれらの使用
４．１．１．キメラ抗原受容体構築物
本明細書に提供するのは、（ａ）セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド及び（ｂ）セレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、ここで、該第一のポリペプチドもしくは第二のポリペプチド、または両方のポリペプチドは、ＣＡＲの残りの成分、例えば、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞シグナル伝達ドメイン、及び／または共刺激ドメインを含む。該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドは、セレブロン結合化合物の存在下、免疫細胞中（例えば、Ｔリンパ球またはナチュラルキラー細胞中）で一緒に発現されると、該第一のポリペプチドのセレブロン（またはその機能部分）及び該第二のポリペプチドの該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、該セレブロン結合化合物に結合し、ＣＡＲ機能を有するヘテロ二量体の形成をもたらす。従って、本明細書に記載のＣＡＲの活性（例えば、インビボ活性）は、該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドを発現する細胞（例えば、当該ＣＡＲを発現するように操作されたＴリンパ球）をセレブロン結合化合物と接触させることによって選択的に制御することができる。本明細書で使用される、「膜貫通ドメイン」としては、該膜貫通ドメインを含むタンパク質が細胞内及び細胞外ドメインの両方を含むパススルー膜貫通ドメイン、ならびに該膜貫通ドメインを含むタンパク質が細胞内ドメインを含むが細胞外ドメインは含まない膜アンカードメインが挙げられる。
【００５０】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる、該セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる、該セレブロン関連タンパク質またはその機能部分）、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲであり、ここで、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【００５１】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５２】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び膜貫通ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５３】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロン関連タンパク質またはその機能部分であり、セレブロン結合化合物に結合することができる、該セレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分であり、セレブロン結合化合物と結合することができる、該セレブロンまたはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲであり、ここで、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）である。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオンである。別の特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５４】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５５】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び膜貫通ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。別の特定の実施形態において、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含み、該第一のポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５６】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５７】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５８】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、膜貫通ドメイン、セレブロンまたはその機能部分、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００５９】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、抗原結合ドメイン、セレブロン関連タンパク質またはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び一次細胞シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、セレブロンまたはその機能部分、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインを含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲである。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。別の実施形態において、該セレブロン（またはその機能部分）及び該セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）は、両方ともセレブロン結合化合物と結合することができ、ここで、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【００６０】
セレブロン及びセレブロン関連タンパク質
本明細書に提供するＣＡＲは、セレブロンもしくはその機能部分またはセレブロン関連タンパク質（例えば、ＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓ）もしくはそのいずれかの機能部分を含むポリペプチドを含む。本明細書で使用される、セレブロンまたはセレブロン関連タンパク質の「機能部分」という用語は、セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロンまたはセレブロン関連タンパク質の一部と定義される。いくつかの実施形態において、セレブロンまたはセレブロン関連タンパク質の機能部分は、該セレブロンまたは該セレブロン関連タンパク質の全ポリペプチドコード配列を含む。他の実施形態において、セレブロンまたはセレブロン関連タンパク質の機能部分は、それぞれ、該セレブロンまたは該セレブロン関連タンパク質の切断短縮されたものを含む。当業者には、機能を維持するために必要な、及び／またはセレブロン結合化合物への各タンパク質の結合を確保するために必要な各タンパク質の成分が認識されよう。他の実施形態において、セレブロンまたはセレブロン関連タンパク質の機能部分は、それぞれ、該セレブロンまたは該セレブロン関連タンパク質由来のペプチド配列を含む。当業者には、機能を維持するために必要な、及び／またはセレブロン結合化合物への各タンパク質の結合を確保するために必要な各タンパク質の成分が認識されよう。
【００６１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲは、セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロンまたはその機能部分を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲは、セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロン関連タンパク質（例えば、ＡｉｏｌｏｓもしくはＩｋａｒｏｓ）またはその機能部分を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲは、セレブロン結合化合物と結合することができるＡｉｏｌｏｓまたはその機能部分を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲは、（ｉ）セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、及び（ｉｉ）セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロン関連タンパク質（例えば、ＡｉｏｌｏｓもしくはＩｋａｒｏｓ）またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含む。
【００６２】
セレブロンは、タンパク質「精神遅滞、非症候性、常染色体劣性、２Ａ」、ＣＲＢＮ、ＭＲＴ２、ＭＲＴ２Ａ、及びＡＤ−００６としても知られる。セレブロンをコードする例示的な核酸は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ遺伝子ＩＤ５１１８５として提供されている。例示的なセレブロンのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉｐｒｏｔのＩＤ  Ｑ９６ＳＷ２−１として提供されている。当業者には、組み換え操作を用いたセレブロン含有ポリペプチドの作製及び使用方法が容易に理解されよう。
【００６３】
本明細書で使用される、「セレブロン」という用語は、天然に存在するセレブロンタンパク質またはその部分、及び天然に存在するセレブロンタンパク質またはその部分に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の相同性または配列同一性を含むポリペプチドを指し、ここで、該配列は、例えば、本明細書に記載のセレブロン結合化合物の存在下で、セレブロン関連タンパク質と結合することができる。
【００６４】
本明細書で使用される、「セレブロン関連タンパク質」は、セレブロンの基質としての機能を果たす、例えば、セレブロン結合化合物の存在下で、例えば、セレブロンに結合することができる及び／またはセレブロンと会合することができるタンパク質（またはその部分）を指す。例えば、Ｇａｎｄｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１６４（６）：８１１−８２１を参照されたい。
【００６５】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲで使用される該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓである。Ａｉｏｌｏｓは、「ＩＫＡＲＯＳファミリージンクフィンガー３」、「ジンクフィンガータンパク質、サブファミリー１Ａ、３」、及びＺＮＦＮ１Ａ３としても知られる。Ａｉｏｌｏｓをコードする例示的な核酸は、Ｇｅｎｂａｎｋ遺伝子ＩＤ２２８０６として提供されている。例示的なＡｉｏｌｏｓのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉｐｒｏｔのＩＤ  Ｑ９ＵＫＴ９−１として提供されている。当業者には、組み換え操作を用いたＡｉｏｌｏｓ含有ポリペプチドの作製及び使用方法が容易に理解されよう。本明細書で使用される、「Ａｉｏｌｏｓ」という用語は、天然に存在するＡｉｏｌｏｓタンパク質またはその部分、及び天然に存在するＡｉｏｌｏｓタンパク質またはその部分に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の相同性または配列同一性を含むポリペプチドを指す。
【００６６】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲで使用される該セレブロン関連タンパク質はＩｋａｒｏｓである。Ｉｋａｒｏｓは、「ＩＫＡＲＯＳファミリージンクフィンガー１」、ＩＫＺＦ１、ＩＫ１、ＬＹＦ１、ＬｙＦ−１、ＣＶＩＤ１３、ＰＰＰ１Ｒ９２、ＰＲＯ０７５８、ＺＮＦＮ１Ａ１、及びＨｓ．５４４５２としても知られる。Ｉｋａｒｏｓをコードする例示的な核酸は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ遺伝子ＩＤ１０３２０として提供されている。例示的なＩｋａｒｏｓのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉｐｒｏｔのＩＤ  Ｑ０３２６７−１として提供されている。当業者には、組み換え操作を用いたＩｋａｒｏｓ含有ポリペプチドの作製及び使用方法が容易に理解されよう。本明細書で使用される、「Ｉｋａｒｏｓ」という用語は、天然に存在するＩｋａｒｏｓタンパク質またはその部分、及び天然に存在するＩｋａｒｏｓタンパク質またはその部分に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の相同性または配列同一性を含むポリペプチドを指す。
【００６７】
抗原結合ドメイン
本明細書に提供するＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原に結合する任意のポリペプチドドメイン、モチーフ、または配列であり得る。
【００６８】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、受容体の抗原結合部分である。特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、腫瘍細胞によって産生されるリガンドに対する受容体である。
【００６９】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体の抗原結合部分である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体、抗体鎖、一本鎖抗体、もしくはその抗原結合部分、Ｆｃドメイン、グリコホスファチジルイノシトールアンカードメイン、またはｓｃＦｖ抗体フラグメントである。
【００７０】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、ペプチド系の高分子抗原結合剤、例えば、ファージ提示タンパク質である。
【００７１】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインによる抗原結合は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に関連した抗原提示に限定される。ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインによる抗原結合は、ＭＨＣに限定されない。
【００７２】
本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、任意の目的の抗原であり得る。特定の実施形態において、該抗原は、細胞（例えば、固形腫瘍細胞または血液がんの腫瘍細胞等の腫瘍細胞）の表面で発現される抗原である。
【００７３】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、腫瘍細胞上の抗原であり、例えば、該抗原は、ＴＳＡまたはＴＡＡである。本明細書に記載のＣＡＲが認識し得る（すなわち、ＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する）例示的な腫瘍細胞抗原としては、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及びビメンチンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７４】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、リンパ腫／白血病、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、上咽頭癌、メラノーマ、例えば、悪性メラノーマ、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢性原始神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、脂肪腫等の腫瘍細胞で発現されるまたはこれと関連する抗原である。
【００７５】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、慢性リンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒リンパ球性白血病、悪性ＮＫ細胞性白血病、成人Ｔリンパ球性白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔリンパ球性リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢性Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫の腫瘍細胞で発現されるまたはこれと関連する抗原である。
【００７６】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、非腫瘍関連抗原または非腫瘍特異的抗原である。ある特定の実施形態において、該抗原は、腫瘍の状況、例えば、腫瘍環境に関連する。例えば、腫瘍は、当該腫瘍を囲む組織において炎症状態を誘導することができ、また、当該腫瘍の中及び当該腫瘍の周辺で血管新生を促進する血管新生成長因子、インターロイキン、及び／またはサイトカインを放出し得る。従って、ある特定の実施形態において、該抗原は、成長因子、サイトカイン、またはインターロイキン（例えば、血管新生もしくは血管形成に関連する成長因子、サイトカイン、またはインターロイキン）である。かかる成長因子、サイトカイン、及びインターロイキンとしては、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、及びインターロイキン−８（ＩＬ−８）を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７７】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する／認識する抗原は、腫瘍が引き起こす傷害の局在に反応して、正常組織によって放出される傷害関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ、アラーミンとしても知られる）である。本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合することができる例示的なＤＡＭＰとしては、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度群ボックス１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、デオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、及びヘパリン硫酸を挙げることができるがこれらに限定されない。
【００７８】
膜貫通ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインとして機能することが当技術分野で知られる、例えば、ＣＡＲとの関連で機能することが当業者に知られる任意の分子を含むことができる。本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、任意の膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインから得られ得、またはそれに由来し得、かかる膜貫通ドメインのすべて、または一部を含み得る。
【００７９】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体から得られるか、またはこれに由来し、例えば、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖から得られるか、またはこれに由来する。
【００８０】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７もしくはＣＤ１５４、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、または成長因子受容体から得られるか、またはこれに由来する。
【００８１】
シグナル伝達ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲの一次細胞シグナル伝達ドメインは、細胞シグナル伝達ドメインとして機能することが当技術分野で知られる、例えば、ＣＡＲとの関連で機能することが当業者に知られる任意の分子を含むことができる。特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞シグナル伝達ドメインは、一次Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。
【００８２】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの一次細胞シグナル伝達ドメインは、ＺＡＰ−７０もしくはそのシグナル伝達変異体であるか、それを含む。
【００８３】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの一次細胞シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭであるか、それを含む。特定の実施形態において、該ＩＴＡＭは、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、２０  ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃＥＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、またはＤＡＰ１２のＩＴＡＭである。
【００８４】
共刺激ドメイン
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。本明細書に記載のＣＡＲの共刺激ドメイン（複数可）は、共刺激ドメインとして機能することが当技術分野で知られる、例えば、ＣＡＲとの関連で機能することが当業者に知られる任意の分子を含むことができる。
【００８５】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、共刺激ＣＤ２７ポリペプチド配列、共刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列、共刺激ＯＸ４０（ＣＤ１３４）ポリペプチド配列、共刺激４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列、または共刺激誘導性Ｔ細胞共刺激性（ＩＣＯＳ）ポリペプチド配列から得られるか、またはこれに由来する。
【００８６】
別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−Ｌ  ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ８３のリガンド、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、またはシグナル伝達リンパ球活性化分子であるか、これを含む。
【００８７】
他の修飾
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドはさらに、調節剤（すなわち、セレブロン結合化合物以外の薬剤）に反応する二量体化ドメインを含む。
【００８８】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドはさらに、Ｔ細胞生存モチーフを含む。該Ｔ細胞生存モチーフは、抗原による刺激後のＴリンパ球の生存を促進する任意のポリペプチド配列またはモチーフであり得る。ある特定の実施形態において、該Ｔ細胞生存モチーフは、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＩＬ−７受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＬ−７Ｒ）、ＩＬ−１２受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１５受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−２１受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、または形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、またはそれに由来する。
【００８９】
４．１．２．ＣＡＲのポリペプチド修飾
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドは、例えば、アシル化、アミド化、グリコシル化、メチル化、リン酸化、硫酸化、ＳＵＭＯ化、及び／またはユビキチン化（または他のタンパク質修飾）によって修飾される。
【００９０】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドは、検出可能なシグナルを提供することができる標識、例えば、放射性同位体または蛍光化合物で標識される。
【００９１】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドの１つ以上の側鎖は誘導体化されており、例えば、リシニル及びアミノ末端残基のコハク酸もしくは他のカルボン酸無水物による誘導体化、または例えば、イミドエステル、例えば、メチルピコリンイミデート、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４ペンタンジオン、及びグリオキシル酸とのトランスアミナーゼ触媒反応による誘導体化である。ある特定の実施形態において、カルボキシル側鎖、アスパルチルまたはグルタミルは、カルボジイミド（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）、例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−（４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドとの反応によって選択的に修飾され得る。
【００９２】
４．１．３．核酸
本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸、すなわち、本明細書に記載のＣＡＲの該第一のポリペプチドをコードする核酸及び該第二のポリペプチドをコードする核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの第一のポリペプチドは、第一の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされ、本明細書に記載のＣＡＲの第二のポリペプチドは、第二の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲの該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの両方をコードする核酸（ポリヌクレオチド）である。
【００９３】
本明細書に記載のＣＡＲの製造に有用な核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び核酸類似体が含まれる。核酸類似体は、その塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾され得、デオキシチミジンに対するデオキシウリジン置換、デオキシシチジンに対する５−メチル−２’−デオキシシチジンまたは５−ブロモ−２’−デオキシシチジン置換を挙げることができる。糖部分の修飾としては、リボース糖の２’ヒドロキシルの２’−Ｏ−メチルまたは２’−Ｏ−アリル糖を形成する修飾を挙げることができる。デオキシリボースリン酸骨格は、各塩基部分が６員のモルホリノ環に結合するモルホリノ核酸を製造するように、または該デオキシリン酸骨格がプソイドペプチド骨格で置換され、４つの塩基が保持されるペプチド核酸を製造するように修飾され得る。例えば、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｅｒ（１９９７）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．７：１８７−１９５、及びＨｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．  Ｃｈａｉｎ．４：５−２３を参照されたい。さらに、該デオキシリン酸骨格は、例えば、ホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート骨格、ホスホロアミダイト、またはアルキルホスホトリエステル骨格で置換され得る。
【００９４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲのポリペプチドをコードする核酸は、核酸ベクター内に含まれる。例えば、目的の細胞、例えば、Ｔリンパ球は、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドをコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含む合成ベクター、レンチウイルスもしくはレトロウイルスベクター、自律複製プラスミド、ウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）等を用いて形質転換することができる。特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドを含むベクターは、レトロウイルスベクターである。別の特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該第一及び／または第二のポリペプチドを含むベクターは、レンチウイルスベクターである。細胞、例えば、Ｔリンパ球の形質転換に適するレンチウイルスベクターとしては、米国特許第５，９９４，１３６号、第６，１６５，７８２号、第６，４２８，９５３号、第７，０８３，９８１号、及び第７，２５０，２９９号に記載のレンチウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。細胞、例えば、Ｔリンパ球の形質転換に適するＨＩＶベクターとしては、米国特許第５，６６５，５７７号に記載のベクターが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９５】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲのポリペプチドをコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。特定の実施形態において、該プロモーターは、Ｔ細胞特異的プロモーター、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーター、または構成的プロモーターである。
【００９６】
４．１．４．細胞
本明細書に提供するＣＡＲは、ＣＡＲの発現が有用な細胞において発現させることができ、すなわち、細胞は、該細胞において当該核酸が発現すると、該細胞が本明細書に記載のＣＡＲを発現するように、本明細書に提供するＣＡＲをコードする核酸を含むように操作される。例えば、本明細書に記載のＣＡＲは、Ｔリンパ球またはナチュラルキラー細胞において発現され得る。本明細書に記載のＣＡＲを発現する本明細書に提供する細胞は、「ＣＡＲ細胞」と呼ばれる。
【００９７】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ｉ）セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、及び（ｉｉ）セレブロン結合化合物と結合することができるセレブロン関連タンパク質（例えば、ＡｉｏｌｏｓもしくはＩｋａｒｏｓ）またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含むＣＡＲを発現するように修飾された細胞（例えば、Ｔリンパ球またはナチュラルキラー細胞）である。特定の実施形態において、該第一のポリペプチドはさらに、抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメイン（ならびに、任意に、共刺激ドメイン）を含む。特定の実施形態において、該第二のポリペプチドはさらに、膜貫通ドメイン及び一次細胞シグナル伝達ドメイン（ならびに、任意に、共刺激ドメイン）を含む。
【００９８】
特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲは、Ｔリンパ球において発現される。該Ｔリンパ球は、ナイーブＴリンパ球またはＭＨＣ拘束性Ｔリンパ球であり得る。ある特定の実施形態では、該Ｔリンパ球は、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）である。ある特定の実施形態において、該Ｔリンパ球は、腫瘍生検から単離されたものであるか、または腫瘍生検から単離されたＴリンパ球から拡大されたものである。ある特定の他の実施形態において、該Ｔリンパ球は、末梢血、臍帯血、もしくはリンパから拡大されたＴリンパ球から単離されたものであるか、または末梢血、臍帯血、もしくはリンパから拡大されたＴリンパ球から拡大される。
【００９９】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現するように操作された細胞（例えば、Ｔリンパ球）は、該細胞（例えば、Ｔリンパ球）が本明細書に記載の治療方法の一部として投与される個体にとって自己である。他の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現するように操作された細胞（例えば、Ｔリンパ球）は、該細胞（例えば、Ｔリンパ球）が投与される個体にとって同種である。同種異系細胞（例えば、Ｔリンパ球）がＣＡＲ細胞を調製するために使用される場合、当該個体における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の可能性を低減する細胞（例えば、Ｔリンパ球）を選択することが好ましい。例えば、ある特定の実施形態において、ウイルス特異的Ｔリンパ球がＣＡＲ  Ｔリンパ球の調製のために選択され、かかるリンパ球は、任意のレシピエント抗原に結合し、したがってそれらによって活性化される著しく低減された天然能力を有することが予想される。ある特定の実施形態において、同種異系細胞（例えば、Ｔリンパ球）のレシピエント媒介性拒絶は、１つ以上の免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス、シクロホスファミド等の宿主への共投与により減少され得る。
【０１００】
１つの実施形態において、Ｔリンパ球は、個体から得られ、任意にその後拡大され、次いで本明細書に記載のＣＡＲの該第一のポリペプチドをコードする第一のベクター及び本明細書に記載のＣＡＲの該第二のポリペプチドをコードする第二のベクターで形質転換され、任意にその後拡大される。二重形質転換体は、例えば、当該ベクターの各々に固有の選択マーカーを用いて選択され得る。
【０１０１】
別の実施形態において、Ｔリンパ球は、個体から得られ、任意にその後拡大され、次いで本明細書に記載のＣＡＲの該第一のポリペプチド及び本明細書に記載のＣＡＲの該第二のポリペプチドをコードするベクターで形質転換され、任意にその後拡大される。該ベクターを含む細胞は、選択マーカーを用いて得ることができる。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲ細胞を生成するために使用されるＴリンパ球は、人工共刺激ポリペプチド（共刺激ポリペプチドが使用される実施形態において）に加えて、または該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチド（ＣＡＲ細胞が該抗原結合シグナル伝達及び共刺激シグナル伝達を分離しているポリペプチドを含む実施形態において）に加えて、天然のＴＣＲタンパク質、例えば、天然のＴＣＲ複合体を形成することができるＴＣＲ−α及びＴＣＲ−βを含む。ある特定の他の実施形態において、該Ｔリンパ球でＴＣＲ−α及びＴＣＲ−βをコードする天然遺伝子のいずれかまたは両方は、機能しないように修飾され、例えば、一部またはすべてが欠失しているか、または突然変異が挿入されている。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの該シグナル伝達ドメイン（複数可）は、該ＣＡＲを含む／発現する細胞（例えば、Ｔリンパ球）の増殖及び拡大を促進するために使用され得る。例えば、未修飾のＴリンパ球、ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含むポリペプチドを含むＴリンパ球は、ＣＤ３及びＣＤ２８に対する抗体、例えば、ビーズに結合した抗体を使用して拡張することができる。例えば、米国特許第５，９４８，８９３号、第６，５３４，０５５号、第６，３５２，６９４号、第６，６９２，９６４号、第６，８８７，４６６号、及び第６，９０５，６８１号を参照されたい。同様に、シグナル伝達モチーフに対する抗体を、本明細書に記載のＣＡＲを含む細胞（例えば、Ｔリンパ球）の増殖を刺激するために使用することができる。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ細胞は、必要に応じて実質的にすべてのＣＡＲ細胞を死滅させるようにする「自殺遺伝子」または「安全スイッチ」を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ細胞は、ある特定の実施形態において、ガンシクロビルと接触した際に細胞死をもたらす、ＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ−ＴＫ）を含む。別の実施形態において、該ＣＡＲ細胞は、誘導性カスパーゼ、例えば、誘導性カスパーゼ９（ｉｃａｓｐａｓｅ９）、例えば、カスパーゼ９と特定の小分子医薬を使用した二量体化を可能にするヒトＦＫ５０６結合タンパク質との融合タンパク質を含む。Ｓｔｒａａｔｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０５（１１）：４２４７−４２５４（２００５）を参照されたい。
【０１０５】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供するＣＡＲ細胞は、さらに、アポトーシス誘導ドメイン及び二量体化ドメインを含む人工細胞死ポリペプチドを含み、該人工細胞死ポリペプチドは、二量体化剤を用いて二量体化可能であり、該人工細胞死ポリペプチドが二量体化されると、該ポリペプチドは、当該細胞にてアポトーシス誘導シグナルを生じる。特定の実施形態において、該二量体化剤は、ラパマイシンまたはラパマイシンの類似体（ラパログ）である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤はＡＰ１９０３（ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤は、セレブロン結合化合物ではない。特定の実施形態において、該二量体化ドメインは、ＦＫ結合ドメインまたはその類似体である。別の特定の実施形態において、該二量体化剤は、該ＦＫ結合ドメインに結合する抗体である。
【０１０６】
４．１．５．使用方法
本明細書に記載のＣＡＲ細胞、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現するように修飾されたＴリンパ球細胞は、該細胞によって標的化される（例えば、死滅させる）ことが望ましい１つ以上の細胞型を有する個体を治療するために使用することができる。
【０１０７】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインが結合する抗原を発現する標的細胞を死滅させる方法であり、該方法は、（ｉ）本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）に該標的細胞を接触させること、及び（ｉｉ）該ＣＡＲを発現する細胞をセレブロン結合化合物に接触させることを含み、該抗原及び該セレブロン結合化合物の存在下で該ＣＡＲを発現する細胞が活性化する。特定の実施形態において、該標的細胞は、がん細胞、例えば、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である。別の特定の実施形態において、該標的細胞は、以下の抗原のうちの１つ以上、またはそのフラグメント発現する：４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチン。
【０１０８】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、がんを治療する方法であり、該方法は、（ｉ）本明細書に記載のＣＡＲであって、当該ＣＡＲが、がん抗原（例えば、ＴＳＡまたはＴＡＡ）に対して特異的な抗原結合ドメインを含む、当該ＣＡＲを含む／発現する（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸（複数可）を含む、または本明細書に記載のＣＡＲを発現する）本明細書に記載のＣＡＲ細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の集団を対象（例えば、ヒト対象）に投与すること、及び（ｉｉ）セレブロン結合化合物を含む組成物を該対象に投与することを含む。特定の実施形態において、該細胞の集団が最初に該対象に投与され、その後、該細胞集団の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、セレブロン結合化合物を含む該組成物が投与される。特定の実施形態において、該ＣＡＲが結合する該抗原は、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンである。
【０１０９】
特定の実施形態において、本明細書に記載のがんを治療する方法に従って対象に投与されるセレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０１１０】
本明細書に記載の治療方法に従って治療することができるがんの限定されないリストには、リンパ腫、白血病、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、上咽頭癌、メラノーマ、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢性原始神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経膠腫、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、及び脂肪腫が含まれる。例示的なリンパ腫及び白血病としては、慢性リンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒リンパ球性白血病、悪性ＮＫ細胞性白血病、成人Ｔリンパ球性白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔリンパ球性リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢性Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１１】
疾患または障害の治療における、例えば、がんを有する個体の治療における本明細書に記載のＣＡＲ細胞の有効性は、当業者に知られる、特定の疾患または障害に特異的な、該疾患または障害の進行を示す１つ以上の基準で評価することができる。一般に、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔリンパ球）の疾患／障害（例えば、がん）を有する個体への投与は、１つ以上の該基準が検出可能に、例えば、有意に、疾患状態の値もしくは範囲から、正常値もしくは範囲に、またはそれに向かって動いた場合に有効である。
【０１１２】
本明細書に記載のＣＡＲ細胞は、任意の医薬的に許容される溶液、好ましくは、生細胞の送達に適した溶液、例えば、生理食塩水（リンゲル液等）、ゼラチン、炭水化物（例えば、ラクトース、アミロース、デンプン等）、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等に製剤化され得る。かかる製剤は、好ましくは、ＣＡＲ細胞の添加の前に滅菌され、滑沢剤、保存剤、安定剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝剤、及び着色剤等の補助剤と混合されてもよい。本明細書に記載のＣＡＲ細胞の製剤化に使用するのに適した医薬担体は、当技術分野で知られており、例えば、ＷＯ  ９６／０５３０９に記載されている。
【０１１３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔリンパ球）は、個々の用量に製剤化される。該個々の用量は、少なくとも、多くとも、または約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、もしくは１×１０１１のＣＡＲ細胞を含む。
【０１１４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔリンパ球）は、静脈内、動脈内、非経口、筋肉内、皮下、髄腔内、もしくは眼内投与、または特定の器官もしくは組織内投与用に製剤化される。
【０１１５】
セレブロン結合化合物
本明細書で使用される、「セレブロン結合化合物」という用語は、セレブロン（またはその機能部分）と結合することができ、かつセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）、例えば、Ａｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）またはＩｋａｒｏｓ（またはその機能部分）と結合することができる分子（例えば、小分子またはタンパク質／ポリペプチド（例えば、抗体））を指す。特定の実施形態において、セレブロン結合化合物は、セレブロン（またはその機能部分）及びＡｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）の両方と結合することができ、セレブロン（またはその機能部分）及びＡｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）の間に関連、例えば、ヘテロ二量体の形成をもたらす。別の特定の実施形態において、セレブロン結合化合物は、セレブロン（またはその機能部分）及びＩｋａｒｏｓ（またはその機能部分）の両方と結合することができ、セレブロン（またはその機能部分）及びＩｋａｒｏｓ（またはその機能部分）の間に関連、例えば、ヘテロ二量体の形成をもたらす。
【０１１６】
特定の実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用される該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用される該セレブロン結合化合物は、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）である。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用される該セレブロン結合化合物は、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）である。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用される該セレブロン結合化合物は、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオンである。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用される該セレブロン結合化合物は、３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。これらの化合物に関連する開示に関しては、例えば、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０１６２２８２号を参照されたい。
【０１１７】
本明細書に記載の方法に従って使用されるセレブロン結合化合物、またはそのエナンチオマーもしくはそのエナンチオマーの混合物、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、包接化合物、もしくは多形体は、単回投与、例えば、単回ボーラス注入、または経口錠剤もしくは丸剤等として、または徐々に、例えば、時間をかけた持続注入もしくは時間をかけた分割ボーラス投与等として送達することができる。
【０１１８】
本明細書に記載の方法に従って使用されるセレブロン結合化合物は、静脈内、動脈内、非経口、筋肉内、皮下、髄腔内、もしくは眼内投与、または特定の器官もしくは組織内投与用に製剤化することができる。
【０１１９】
４．２．人工細胞死ポリペプチド
４．２．１．細胞死ポリペプチド構築物
また、本明細書に提供するのは、セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド、及びセレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体であり、これは、細胞、例えば、Ｔリンパ球またはＮＫ細胞にて発現された場合、セレブロン結合化合物の存在下で該細胞の死をもたらし得る。セレブロン、セレブロン関連タンパク質、及びセレブロン結合化合物は、上記第４．１節に詳述されている。
【０１２０】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む第一のポリペプチドならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びＡｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体であり、該セレブロン（またはその機能部分）及び該Ａｉｏｌｏｓ（またはその機能部分）の両方が、セレブロン結合化合物と結合することができ、該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドは、該セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成し、アポトーシス誘導シグナルを生じる。特定の実施形態において、該セレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０１２１】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【０１２２】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）セレブロン（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。別の特定の実施形態において、該第二のポリペプチドは、セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【０１２３】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）膜貫通ドメインならびにアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【０１２４】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、（ａ）アポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）及びセレブロン（またはその機能部分）を含む膜貫通タンパク質を含む第一のポリペプチド、ならびに（ｂ）セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びアポトーシス誘導ドメイン（またはその機能部分）を含む細胞内ドメインを含む膜貫通タンパク質を含む第二のポリペプチドを含む二量体化可能な人工細胞死受容体である。特定の実施形態において、該セレブロン関連タンパク質はＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓである。
【０１２５】
該細胞死ポリペプチドのアポトーシス誘導ドメインは、例えば、二量体化された場合にアポトーシス誘導シグナルを当該細胞にて開始する任意のタンパク質またはその部分であり得る。ある特定の実施形態において、該アポトーシス誘導ドメインは、ホモ二量体化する任意のカスパーゼである。特定の実施形態において、該アポトーシス誘導ドメインは、カスパーゼ、例えば、カスパーゼ９、カスパーゼ８、またはカスパーゼ３（例えば、ヒトカスパーゼ９、カスパーゼ８、またはカスパーゼ３）であるか、これを含む。ヒトカスパーゼ９、ヒトカスパーゼ８、及びヒトカスパーゼ３を含めたヒトカスパーゼのアミノ酸配列は、当技術分野で周知である。例えば、ヒトカスパーゼ３は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ８３６を割り当てられ、ヒトカスパーゼ８は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ８４１を割り当てられ、ヒトカスパーゼ９は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ８４２を割り当てられている。ある特定の実施形態において、カスパーゼドメインであるか、またはそれを含む該細胞内ドメイン及び該細胞外ドメインは、ＣＤ８αストークまたはＣＤ８βストークによって結合され、その少なくとも一部は、膜貫通ドメインとして機能することができる。
【０１２６】
４．２．２．核酸
本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸、すなわち、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチドをコードする核酸及び第二のポリペプチドをコードする核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチドは、第一の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされ、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第二のポリペプチドは、第二の核酸（ポリヌクレオチド）によってコードされる。特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの両方をコードする核酸（ポリヌクレオチド）である。
【０１２７】
本明細書に記載の人工細胞死受容体の製造に有用な核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び核酸類似体が含まれる。核酸類似体は、その塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾され得、デオキシチミジンに対するデオキシウリジン置換、デオキシシチジンに対する５−メチル−２’−デオキシシチジンまたは５−ブロモ−２’−デオキシシチジン置換を挙げることができる。糖部分の修飾としては、リボース糖の２’ヒドロキシルの２’−Ｏ−メチルまたは２’−Ｏ−アリル糖を形成する修飾を挙げることができる。デオキシリボースリン酸骨格は、各塩基部分が６員のモルホリノ環に結合するモルホリノ核酸を製造するように、または該デオキシリン酸骨格がプソイドペプチド骨格で置換され、４つの塩基が保持されるペプチド核酸を製造するように修飾され得る。例えば、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｅｒ（１９９７）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．  ７：１８７−１９５、及びＨｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｈａｉｎ．４：５−２３を参照されたい。さらに、該デオキシリン酸骨格は、例えば、ホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート骨格、ホスホロアミダイト、またはアルキルホスホトリエステル骨格で置換され得る。
【０１２８】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の人工細胞死受容体をコードする核酸は、核酸ベクター内に含まれる。例えば、目的の細胞、例えば、Ｔリンパ球は、本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第一及び／または第二のポリペプチドをコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含む合成ベクター、レンチウイルスもしくはレトロウイルスベクター、自律複製プラスミド、ウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）等を用いて形質転換することができる。特定の実施形態において、本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第一及び／または第二のポリペプチドを含むベクターは、レトロウイルスベクターである。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第一及び／または第二のポリペプチドを含むベクターは、レンチウイルスベクターである。細胞、例えば、Ｔリンパ球の形質転換に適するレンチウイルスベクターとしては、米国特許第５，９９４，１３６号、第６，１６５，７８２号、第６，４２８，９５３号、第７，０８３，９８１号、及び第７，２５０，２９９号に記載のレンチウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。細胞、例えば、Ｔリンパ球の形質転換に適するＨＩＶベクターとしては、米国特許第５，６６５，５７７号に記載のベクターが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２９】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の人工細胞死受容体をコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。特定の実施形態において、該プロモーターは、Ｔ細胞特異的プロモーター、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞特異的プロモーター、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で機能する誘導性プロモーター、または構成的プロモーターである。
【０１３０】
４．２．３．細胞
本明細書に提供する人工細胞死受容体は、発現が有用な細胞において発現され得、すなわち、細胞は、該細胞において当該核酸が発現すると、該細胞が本明細書に記載の人工細胞死受容体を発現するように、本明細書に提供する人工細胞死受容体をコードする核酸を含むように操作される。例えば、本明細書に記載の人工細胞死受容体は、Ｔリンパ球またはナチュラルキラー細胞において発現され得る。本明細書に記載の人工細胞死受容体を発現する本明細書に提供する細胞は、「細胞死受容体細胞」と呼ばれる。
【０１３１】
特定の実施形態において、本明細書に提供する人工細胞死受容体は、Ｔリンパ球において発現される。該Ｔリンパ球は、ナイーブＴリンパ球またはＭＨＣ拘束性Ｔリンパ球であり得る。ある特定の実施形態では、該Ｔリンパ球は、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）である。ある特定の実施形態において、該Ｔリンパ球は、腫瘍生検から単離されたものであるか、または腫瘍生検から単離されたＴリンパ球から拡大されたものである。ある特定の他の実施形態において、該Ｔリンパ球は、末梢血、臍帯血、もしくはリンパから拡大されたＴリンパ球から単離されたものであるか、または末梢血、臍帯血、もしくはリンパから拡大されたＴリンパ球から拡大される。
【０１３２】
特定の実施形態において、本明細書に記載の細胞死受容体細胞は、該細胞（例えば、Ｔリンパ球）が本明細書に記載の治療方法の一部として投与される個体にとって自己である。他の実施形態において、本明細書に記載の細胞死受容体細胞は、該細胞（例えば、Ｔリンパ球）が投与される個体にとって同種である。同種異系細胞（例えば、Ｔリンパ球）が人工細胞死受容体を含む／発現する細胞を調製するために使用される場合、当該個体における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の可能性を低減する細胞（例えば、Ｔリンパ球）を選択することが好ましい。第４．１節を参照されたい。
【０１３３】
１つの実施形態において、Ｔリンパ球は、個体から得られ、任意にその後拡大され、次いで本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第一のポリペプチドをコードする第一のベクター及び本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第二のポリペプチドをコードする第二のベクターで形質転換され、任意にその後拡大される。二重形質転換体は、例えば、当該ベクターの各々に固有の選択マーカーを用いて選択され得る。
【０１３４】
別の実施形態において、Ｔリンパ球は、個体から得られ、任意にその後拡大され、次いで本明細書に記載の人工細胞死受容体の該第一のポリペプチド及び該第二のポリペプチドをコードするベクターで形質転換され、任意にその後拡大される。該ベクターを含む細胞は、選択マーカーを用いて得ることができる。
【０１３５】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供する細胞死受容体細胞を生成するために使用されるＴリンパ球は、人工共刺激ポリペプチド（共刺激ポリペプチドが使用される実施形態において）に加えて、または該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチド（該細胞が該抗原結合シグナル伝達及び共刺激シグナル伝達を分離しているポリペプチドを含む実施形態において）に加えて、天然のＴＣＲタンパク質、例えば、天然のＴＣＲ複合体を形成することができるＴＣＲ−α及びＴＣＲ−βを含む。ある特定の他の実施形態において、該Ｔリンパ球でＴＣＲ−α及びＴＣＲ−βをコードする天然遺伝子のいずれかまたは両方は、機能しないように修飾され、例えば、一部またはすべてが欠失しているか、または突然変異が挿入されている。
【０１３６】
本明細書に提供する細胞死受容体細胞、例えば、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体をコードする核酸（複数可）を含むまたは本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体を発現する（すなわち、本明細書に記載の二量体化可能な人工細胞死受容体の第一及び第二のポリペプチドを発現する）Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、セレブロン結合化合物と接触された場合に、例えば、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンと接触された場合に、誘導されてアポトーシスを受け得る。
【０１３７】
本明細書に提供する細胞死受容体細胞はさらに、ＣＡＲ、例えば、腫瘍特異的抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現するように操作され得る。該ＣＡＲは、例えば、第一世代のＣＡＲ（唯一のシグナル伝達ドメインがＣＤ３ζである）、第二世代のＣＡＲ（ＣＤ３ζからのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８からの共刺激ドメインを含む）、ならびに第三世代のＣＡＲ（ＣＤ３ζからのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８からの共刺激ドメインならびに４−１ＢＢ等の別のタンパク質を含む）から選択され得る。特定の実施形態において、本明細書に提供する細胞死受容体細胞のＣＡＲは、２つ以上の細胞外抗原標的ドメインを含む。別の特定の実施形態において、本明細書に提供する細胞死受容体細胞の該ＣＡＲは、Ｔ細胞活性の負の調節因子であるインターロイキンに結合する細胞外ドメイン、及びＴ細胞活性の正の調節因子であるインターロイキン受容体由来の細胞内ドメインを含む。別の特定の実施形態において、アポトーシスは、人工細胞死受容体及びＣＡＲを含む細胞において、該細胞をセレブロン結合化合物、例えば、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンに接触させることによって誘導される。
【０１３８】
４．２．４．使用方法
本明細書に提供する人工細胞死受容体及びＣＡＲを含む本明細書に提供する細胞、例えば、Ｔリンパ球、は、本明細書に記載の細胞によって標的化されることが望まれる１つ以上の細胞型、例えば、死滅させる１つ以上の細胞型を有する個体を治療するために使用することができ、該細胞死受容体細胞の活性は、セレブロン結合化合物の投与によって制御され得る。特に、該細胞死受容体細胞は、それらのＣＡＲ成分の効果としての治療に使用することができ、それらの細胞死受容体成分の効果として、必要に応じて死滅させられ、該細胞死は、該細胞死受容体細胞をセレブロン結合化合物と接触させることによって達成される。
【０１３９】
特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、標的細胞の制御された死滅方法であり、該方法は、（ｉ）当該標的細胞を、本明細書に提供する人工細胞死受容体及びＣＡＲを含む細胞死受容体細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）と接触させること、及び、正当な場合、（ｉｉ）該細胞死受容体細胞を、セレブロン結合化合物と接触させることを含み、ここで、該セレブロン結合化合物の存在下、該細胞死受容体細胞を死滅させ、例えば、該細胞死受容体細胞はアポトーシスを受ける。特定の実施形態において、該標的細胞は、がん細胞、例えば、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である。別の特定の実施形態において、該標的細胞は、以下の抗原のうちの１つ以上、またはそのフラグメントを発現する：４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチン。
【０１４０】
別の特定の実施形態において、本明細書に提供するのは、がんを治療する方法であり、該方法は、（ｉ）本明細書に提供する人工細胞死受容体及びＣＡＲであって、当該ＣＡＲが、がん抗原（例えば、ＴＳＡまたはＴＡＡ）に対して特異的な抗原結合ドメインを含む、当該ＣＡＲを含む細胞死受容体細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団をがんと診断された対象（例えば、ヒト対象）に投与すること、及び正当な場合、（ｉｉ）該細胞死受容体細胞を、セレブロン結合化合物と接触させることを含み、ここで、該セレブロン結合化合物の存在下、該細胞死受容体細胞はアポトーシスを受ける。特定の実施形態において、該細胞の集団が最初に該対象に投与され、その後、該細胞集団の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、セレブロン結合化合物を含む該組成物が投与される。別の特定の実施形態において、セレブロン結合化合物を含む該組成物は、最初に該対象に投与され、その後、セレブロン結合化合物を含む該組成物の投与後の特定の時点で、例えば、セレブロン結合化合物を含む該組成物の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、該細胞集団が投与される。
【０１４１】
特定の実施形態において、該ＣＡＲが結合する該抗原は、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ  β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及び／またはビメンチンである。
【０１４２】
特定の実施形態において、本明細書に記載のがんを治療する方法に従って対象に投与されるセレブロン結合化合物は、ポマリドミド、サリドマイド、レナリドミド、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである。
【０１４３】
本明細書に記載の治療方法に従って治療することができるがんの限定されないリストには、リンパ腫、白血病、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、上咽頭癌、メラノーマ、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢性原始神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経膠腫、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、及び脂肪腫が含まれる。例示的なリンパ腫及び白血病としては、慢性リンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒リンパ球性白血病、悪性ＮＫ細胞性白血病、成人Ｔリンパ球性白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔリンパ球性リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢性Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫が挙げられるがこれらに限定されない。
【実施例】
【０１４４】
本実施例は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む修飾Ｔリンパ球の生成及び使用を記載する。該ＣＡＲは、腫瘍特異的抗原に特異的な抗原結合ドメイン、共刺激ドメイン、及びセレブロンを含む第一のポリペプチド、ならびにセレブロン関連タンパク質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ）、及びＣＤ３ζ免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。
【０１４５】
ＣＡＲ構築物
図１に示すＣＡＲを標準的な方法を用いて調製する。
【０１４６】
第一のポリペプチド、腫瘍抗原結合タンパク質（例えば、抗ＨＥＲ２  ｓｃＦｖ、抗ＰＳＣＡ  ｓｖＦｖ、または抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ）セレブロン（ＣＲＢＮ）系のＣＡＲ、すなわち、抗腫瘍抗原抗体のｓｃＦｖ、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＲＢＮを含む「第一のポリペプチド」をコードする第一のポリヌクレオチドを構築する。該第一のポリヌクレオチドをレンチウイルスベクターにクローニングする。
【０１４７】
第二のポリペプチド、Ａｉｏｌｏｓ系のＩＴＡＭ  ＣＡＲ、すなわち、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）ドメイン、Ａｉｏｌｏｓ、及びＣＤ３ζ  ＩＴＡＭドメインを含む「第二のポリペプチド」をコードする第二のポリヌクレオチドを構築する。該第二のポリヌクレオチドをレンチウイルスベクターにクローニングする。
【０１４８】
Ｔ細胞におけるＣＡＲ構築物の発現
上記ＣＡＲ構築物のＴ細胞による発現を調べる。Ｔ細胞を単離するため、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健常ドナー血から分離する（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（商標）密度勾配遠心法（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いて全血から得たバフィーコートからＰＭＢＣを分離する）。汎Ｔ細胞は、ＰＭＢＣから陰性選択する（例えば、製造業者の指示に従って汎Ｔ単離キットＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を用いて）。
【０１４９】
該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドのＣＡＲをコードする構築物を含むプラスミドを（例えば、エレクトロポレーションにより）一次Ｔ細胞に導入し、このエレクトロポレートされたＴ細胞を次に培地（例えば、ＲＰＭＩ−１０）中で一夜培養する。該ＣＡＲの抗原結合ドメインの発現を検出し、該第一のポリペプチドをコードする構築物によるＴ細胞の安定なトランスフェクションを確認する。例えば、Ｔ細胞をエレクトロポレーションの２４時間後に採取し、染色して、該第一のポリペプチドの抗原結合ドメインを検出する（例えば、抗ＨＥＲ２の検出のためには、ＨＥＲ２−ヒトＩｇＧ−Ｆｃキメラタンパク質で染色し、その後、ＡＰＣと結合した抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ抗体で染色する）。染色した細胞をフローサイトメトリーで分析する。該第二のポリペプチドをコードする構築物によるＴ細胞の安定なトランスフェクションを確認する。例えば、該Ｔ細胞を、ポマリドミドまたはレナリドミドを追加した培地（例えば、ＲＰＭＩ−１０）中で一夜培養する。Ｔ細胞をエレクトロポレーションの２４時間後に採取し、溶解し、その後、該第一のポリペプチドの抗原結合ドメインと結合することができる薬剤で免疫沈降させる（例えば、抗ＨＥＲ２の検出のためには、ＨＥＲ２−ヒトＩｇＧ−Ｆｃキメラタンパク質）。免疫沈降物を、該第二のポリペプチドのＡｉｏｌｏｓまたはＣＤ３ζドメインを検出及び標識することができる薬剤（例えば、抗ヒトＡｉｏｌｏｓ抗体または抗ヒトＣＤ３ζ抗体）で処理する。標識された免疫沈降物をＥＬＩＳＡで分析し、該第二のポリペプチドを検出し、該第二のポリペプチドをコードする構築物によるＴ細胞の安定なトランスフェクションを確認する。
【０１５０】
ＣＡＲ  Ｔ細胞活性をがん患者において制御するためのポマリドミドまたはレナリドミドの使用
Ｔ細胞上の該第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドのＣＡＲは、ポマリドミドまたはレナリドミド及び腫瘍抗原への曝露で活性化される。ポマリドミドまたはレナリドミドは、ヒトにおいて良好な耐容性を示す。
【０１５１】
第一及び第二のポリペプチドのＣＡＲの機能評価
Ｔ細胞における該第一及び第二のポリペプチドの機能評価を行う（例えば、ＨＥＲ２−ＣＡＲの機能評価、以下参照）。Ｔ細胞を該第一及び第二のポリペプチドで安定にトランスフェクトし、ポマリドミドまたはレナリドミドの非存在下もしくは存在下、固定化した腫瘍抗原Ｆｃキメラタンパク質で刺激する。ＣＤ２８共刺激の陽性対照として、ＣＤ３ζ  ＩＴＡＭ細胞内ドメインの包含及びセレブロンの除外を除いて該第一のポリペプチドとして設計されたＣＡＲ構築物と同一である別の構築物を生成する。陰性対照として、第一のポリペプチドのモックトランスフェクション（すなわち、第二のポリペプチドのみトランスフェクトする）、第二のポリペプチドのモックトランスフェクション（すなわち、第一のポリペプチドのみトランスフェクトする）、及び第一及び第二の両ポリペプチドのモックトランスフェクション（すなわち、第一及び第二のポリペプチドのいずれもトランスフェクトしない）を行う。
【０１５２】
Ｔ細胞の刺激を評価するため、Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９及びＣＤ７１の発現を、刺激の４８時間後、フローサイトメトリー及び／またはＥＬＩＳＡによって調べる。ＣＤ６９及びＣＤ７１の発現の上方制御は、Ｔ細胞の刺激を示す。該第一及び第二のポリペプチドをコードする構築物ならびに陽性及び陰性対照のポリペプチドをコードする構築物でトランスフェクトされたＴ細胞をＣＤ６９及びＣＤ７１の発現に関して試験する。該第一及び第二のポリペプチドをコードする構築物でトランスフェクトされたＴ細胞におけるＣＤ６９及びＣＤ７１発現の、陰性対照細胞で観察されたＣＤ６９及びＣＤ７１発現に対する上方制御は、該第一及び第二のポリペプチドをコードする構築物でトランスフェクトされたＴ細胞の刺激を示す。
【０１５３】
乳癌の治療
ある個体は、少なくとも１つの所属リンパ節に広がっているステージ３の乳癌を呈している。がん組織の切除手術後、この個体に、第一及び第二のキメラ受容体（上記の第一及び第二のポリペプチド等）を含む、１０９〜１０１０個の修飾Ｔリンパ球の２００ｍＬ生理食塩水溶液を３０分間静注により投与する。該第一のキメラ受容体は、ＨＥＲ２に結合する細胞外抗原結合領域、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の細胞内共刺激ドメイン、及びセレブロンドメインを含む。該第二のキメラ受容体は、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ）、及びＣＤ３ζ由来のシグナルトランスフェクションドメインを含む。
【０１５４】
この個体に、該第一及び第二のキメラ受容体を含む修飾Ｔリンパ球の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、ポマリドミドまたはレナリドミドを投与する。
【０１５５】
別の方法として、この個体に、ポマリドミドまたはレナリドミドを最初に投与し、その後、第一及び第二のキメラ受容体を含む該修飾Ｔリンパ球を、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後の特定の時点で、例えば、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で投与する。
【０１５６】
この個体を、投与後３０、６０、９０、及び１８０日で、残りの乳房組織の、及び他のリンパ節に広がった乳癌に関して評価する。
【０１５７】
前立腺癌の治療
ある個体は、所属リンパ節にも他のリンパ節にも広がっていないステージＴ２の前立腺癌を呈している（Ｎ０、Ｍ０）。組織学的グレードはＧ２と確定されている。全体的に見て、この個体はステージＩＩの前立腺癌を有すると確定されている。この個体に、該第一及び第二のキメラ受容体（上記の第一及び第二のポリペプチド等）を含む、１０９〜１０１０個の修飾Ｔリンパ球の２００ｍＬ生理食塩水溶液を３０分間静注により投与する。該第一のキメラ受容体は、ＰＳＣＡに結合する細胞外抗原結合領域、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメインＣＤ２８、及びセレブロンドメインを含む。該第二のキメラ受容体は、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ）、及びＣＤ３ζ由来のシグナルトランスフェクションドメインを含む。
【０１５８】
この個体に、該第一及び第二のキメラ受容体を含む修飾Ｔリンパ球の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、ポマリドミドまたはレナリドミドを投与する。
【０１５９】
別の方法として、この個体に、ポマリドミドまたはレナリドミドを最初に投与し、その後、第一及び第二のキメラ受容体を含む該修飾Ｔリンパ球を、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後の特定の時点で、例えば、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で投与する。
【０１６０】
投与後３０、６０、及び９０日で、この個体を前立腺癌のステージ及びリンパ節に広がった前立腺癌について再評価し、生検前立腺組織の組織学検査を行う。
【０１６１】
多発性骨髄腫の治療
ある個体は、ステージＩＩＩの多発性骨髄腫（国際分類システムまたはＤｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎシステムによる）を呈しており、少なくとも１回の治療過程、例えば、レナリドミドまたはポマリドミドで以前に治療されている。この個体に、該第一及び第二のキメラ受容体（上記の第一及び第二のポリペプチド等）を含む、１０８〜１０１０個の修飾Ｔリンパ球の２００ｍＬ生理食塩水溶液を３０分間静注により投与する。該第一のキメラ受容体は、ＢＣＭＡに結合する細胞外抗原結合領域、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメインＣＤ２８、及びセレブロンドメインを含む。該第二のキメラ受容体は、膜貫通ドメイン、セレブロン関連タンパク質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ）、及びＣＤ３ζ由来のシグナル伝達ドメインを含む。
【０１６２】
この個体に、該第一及び第二のキメラ受容体を含む修飾Ｔリンパ球の投与後の特定の時点で、例えば、該細胞集団の投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で、ポマリドミドまたはレナリドミドを投与する。
【０１６３】
別の方法として、この個体に、ポマリドミドまたはレナリドミドを最初に投与し、その後、第一及び第二のキメラ受容体を含む該修飾Ｔリンパ球を、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後の特定の時点で、例えば、ポマリドミドまたはレナリドミドの投与後３０分、１時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間で投与する。
【０１６４】
投与後３０、６０、及び９０日で、この個体を多発性骨髄腫のステージについて再評価する。
【０１６５】
均等物
本開示は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際には、本明細書に説明されるものに加えて、本明細書に提供する主題の様々な修正は、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０１６６】
様々な刊行物、特許、及び特許出願が本明細書に引用されており、これらの開示は、参照することによりそれらの全体が組み込まれる。
【図１】
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【国際調査報告】
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