(57)【要約】本開示は、免疫応答プライマーポリペプチド（例えば、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）ポリペプチドまたはインターロイキン３６γ（ＩＬ−３６ガンマ）ポリペプチド）と免疫応答共刺激シグナルポリペプチド（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチド）とをコードする免疫調節ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の組み合わせの調製、製造及び治療上の使用のための組成物及び方法に関する。本開示は、がんの治療のためのｍＲＮＡ治療薬を提供する。本開示のｍＲＮＡ治療薬は、この技術が免疫調節ポリペプチド（例えば、免疫応答刺激因子、共刺激因子、チェックポイント阻害剤などを含む、免疫腫瘍学的方法（「ＩＯ」）において有用な腫瘍学関連ポリペプチド）をコードするｍＲＮＡの細胞内送達後に、標的細胞内での、例えば、腫瘍における標的細胞内での機能的タンパク質の新規合成をもたらすので、がんの治療に特に十分適している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つのポリヌクレオチドを含む、腫瘍の大きさを減少させ、または腫瘍の成長を阻害するための組成物であって、前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、
（ｉｉ）第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）免疫応答共刺激シグナルペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び
（ｉｖ）これらの組み合わせ
からなる群より選択される、前記組成物。
【請求項２】
前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド
からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、
（ａ）樹状細胞を刺激すること、
（ｂ）樹状細胞の成熟を促進すること、
（ｃ）抗原提示細胞サイトカイン及び／またはケモカインの産生を促進すること、
（ｄ）Ｔｈ１７細胞を増殖させまたは維持すること、
（ｅ）Ｔｈ１及び／またはＴｈ９の分化を亢進すること、ならびに
（ｆ）（ａ）〜（ｆ）の何らかの組み合わせ
からなる群より選択される、１つ以上の活性を有する、請求項１または２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
前記第１または第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１２ファミリーのメンバーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ＩＬ−１２ファミリーのメンバーは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−２７、ＩＬ−３５、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−２３ポリペプチドである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＩＬ−２３ポリペプチドが、配列番号１、配列番号５または配列番号１４０のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＩＬ−２３ポリペプチドが、配列番号１４１または配列番号１４２に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１または第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１ファミリーのメンバーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＩＬ−１ファミリーのメンバーが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＩＬ−３６Ｒａ、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、ＩＬ−３６γ、ＩＬ−３７、ＩＬ−３８、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドが、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドが、配列番号１４３または配列番号１４４に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１８ポリペプチドである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
ＩＬ−１８ポリペプチドが、配列番号１４７、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ＩＬ−１８ポリペプチドが、配列番号１４８及び配列番号１５５〜１６２からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、第１の免疫応答プライマーポリペプチド及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、前記第１の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１２ファミリーのメンバーであり、かつ前記第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１ファミリーのメンバーである、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記第１の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−２３ポリペプチドであり、かつ前記第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第１の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−２３ポリペプチドであり、かつ前記第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１８ポリペプチドである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドが、
（ａ）Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の生存、Ｔ細胞の動員を活性化、刺激、促進、もしくは亢進すること、またはこれらの組み合わせ、及び
（ｂ）ＮＫ細胞の増殖、ＮＫ細胞の生存、ＮＫ細胞の動員を活性化、刺激、促進もしくは亢進すること、またはこれらの組み合わせ
からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドが、
（ｃ）Ｔ細胞の増殖及び／または機能を促進または亢進すること、
（ｄ）Ｔｈ１、Ｔｈ２及び／またはＴｈ９細胞発生を促進または亢進すること、
（ｅ）Ｔｒｅｇの発生及び／または活性を阻害または阻害すること、
（ｆ）記憶細胞の発生及び／または活性を促進または亢進すること、ならびに
（ｇ）（ｃ）〜（ｆ）の何らかの組み合わせ
からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドが、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＩＬ−１５、及びそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドが、ＯＸ４０Ｌ及びＩＬ−１５、ならびにそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドが、ＯＸ４０Ｌポリペプチドである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドが、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドが、配列番号１４５または配列番号１４６に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドがＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、またはこれらの組み合わせを阻害する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、抗体またはその抗原結合断片である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記抗体が、ＣＴＬＡ４を特異的に結合する抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ１を特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１を特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、及びこれらの組み合わせである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、トレメリムマブまたはイピリムマブである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗ＰＤ１抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
少なくとも第１及び第２のポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチドを含む、腫瘍の大きさを減少させまたは腫瘍の成長を阻害するための組成物であって、前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖｉ）抗ＣＴＬＡ４抗体をコードするポリヌクレオチド、及び
（ｖｉｉ）それらのいずれかの組合せ
からなる群より選択される、前記組成物。
【請求項３５】
前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｖ）それらのいずれかの組合せ
からなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖ）ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに
（ｖｉ）ＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むポリヌクレオチド
からなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
第３のポリペプチドをコードする少なくとも１つの第３のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
少なくとも第１、第２及び第３のポリヌクレオチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記少なくとも３つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチド
からなる群より選択される、前記組成物。
【請求項３９】
前記組成物が、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物が、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、（ｉ）ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｉｉ）ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドをコードするＯＲＦ、または（ｉｉｉ）ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含む、請求項３８〜４０のいずれかに記載の組成物。
【請求項４２】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドとＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドとをコードするＯＲＦ、及び前記ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドと前記ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドの間に操作可能に位置取られたリンカーを含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記リンカーが、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーが（ＧｎＳ）ｍであり、ｎが１、２  ３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０であり、かつｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーが（ＧｎＳ）ｍを含み、ｎが６であり、かつｍが１である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ＩＬ−２３ポリペプチドが、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４８】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、配列番号１４１に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４９】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのミクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍｉＲ−１２２結合部位である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記ｍｉＲ−１２２結合部位が、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲを含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位が、配列番号２６に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５５】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５６】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、配列番号１４２に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項５７】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦへ作動可能に連結された異種性シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３８〜５６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５８】
前記異種性シグナルペプチドが、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域、ｈＩＧＶＫ４に由来する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記ＩＬ−３６ガンマポリペプチドが、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６０】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１４３に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６１】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位を含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍｉＲ−１２２結合部位である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
前記ｍｉＲ−１２２結合部位が、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲを含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６５】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位が、配列番号２６に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６７】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１４４に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６９】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするＯＲＦへ作動可能に連結された異種性シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３８〜５６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７０】
前記異種性シグナルペプチドが、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域（ｈＩＧＶＫ４）に由来する、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記ＩＬ−１８ポリペプチドが、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１または配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７２】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１４８及び配列番号１５５〜１６２からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７３】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのミクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍｉＲ−１２２結合部位である、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記ｍｉＲ−１２２結合部位が、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７７】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位が、配列番号２６に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７９】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、配列番号１６１に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドが、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項３８〜８０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８２】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、配列番号１４５に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのミクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍｉＲ−１２２結合部位である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
前記ｍｉＲ−１２２結合部位が、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲを含む、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位が、配列番号２６に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８９】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９０】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記第３のポリヌクレオチドが、配列番号１４６に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項８１に記載の組成物。
【請求項９１】
チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項３８〜９０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９２】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、またはこれらの組み合わせを阻害する、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９３】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、抗体または前記抗体をコードするポリヌクレオチドである、請求項９２に記載の組成物。
【請求項９４】
前記抗体が、ＣＴＬＡ４を特異的に結合する抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ１を特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１を特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びそれらのいずれかの組合せである、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである、請求項９４に記載の組成物。
【請求項９６】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、トレメリムマブまたはイピリムマブである、請求項９４に記載の組成物。
【請求項９７】
前記抗ＰＤ１抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項９４に記載の組成物。
【請求項９８】
各ポリヌクレオチドが、修飾されたｍＲＮＡを含む、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９９】
各ｍＲＮＡが、少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１００】
前記化学修飾が、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群より選択される、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
前記化学修飾が、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０２】
前記化学修飾が、Ｎ１−メチルシュードウリジンである、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０３】
前記組成物中の各ｍＲＮＡが、完全に修飾されたＮ１−メチルシュードウリジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１０４】
腫瘍内送達のために製剤化された、請求項１〜１０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０５】
脂質ナノ粒子担体中に製剤化された、請求項１〜１０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０６】
前記脂質ナノ粒子担体が、約２０〜６０％のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
前記脂質ナノ粒子担体が、約５０％のイオン性アミノ脂質、約１０％のリン脂質、約３８．５％のコレステロール、及び約１１．５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０８】
前記脂質ナノ粒子担体が、約４９．８３％のイオン性アミノ脂質、約９．８３％のリン脂質、約３０．３３％のコレステロール、及び約２．０％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０９】
前記イオン性アミノ脂質が、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオアート（Ｌ３１９）からなる群より選択される、請求項１０６〜１０８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１０】
前記イオン性アミノ脂質が、化合物１８である、請求項１０９に記載の組成物。
【請求項１１１】
前記脂質ナノ粒子担体が、約２０〜６０％の化合物１８、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のコレステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記脂質ナノ粒子担体が、約５０％の化合物１８、約１０％のリン脂質、約３８．５％のコレステロール、及び約１．５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１１３】
前記脂質ナノ粒子担体が、約４９．８３％の化合物１８、約９．８３％のリン脂質、約３０．３３％のコレステロール、及び約２．０％のＰＥＧ修飾脂質のモル比を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１１４】
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ヒトＩＬ−２３ポリペプチドが、ヒトＩＬ−２３ｐ１９サブユニットへ作動可能に連結されたヒトＩＬ−１２ｐ４０サブユニットを含む、前記ポリヌクレオチド、及び
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドが異種性シグナルペプチドを含む、前記ポリヌクレオチド
を含む、脂質ナノ粒子であって、
前記ポリヌクレオチドが、修飾されたｍＲＮＡであり、及び
前記ｍＲＮＡが、１：１：２のＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ質量比で製剤化された、前記脂質ナノ粒子。
【請求項１１５】
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４５に示されるヌクレオチド配列を含み、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４１に示されるヌクレオチド配列を含み、及び
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４３に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１１６】
各ポリヌクレオチド（ｉ）〜（ｉｉｉ）が、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項１１５に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１１７】
各ポリヌクレオチド（ｉ）〜（ｉｉｉ）が、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む、請求項１１５または１１６に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１１８】
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４６に示されるヌクレオチド配列を含み、
（ｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４２に示されるヌクレオチド配列を含み、及び
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号１４４に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１１９】
各ｍＲＮＡが、少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項１１４〜１１８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２０】
前記化学修飾が、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群より選択される、請求項１１９に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２１】
前記化学修飾が、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１２０に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２２】
前記化学修飾が、Ｎ１−メチルシュードウリジンである、請求項１２１に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２３】
前記脂質ナノ粒子中の各ｍＲＮＡが、完全に修飾されたＮ１−メチルシュードウリジンを含む、請求項１１９に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２４】
腫瘍内送達のために製剤化された、請求項１１４〜１２３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２５】
前記脂質ナノ粒子が、約２０〜６０％の化合物１８、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のコレステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質のモル比を含む、請求項１１４〜１２４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２６】
前記脂質ナノ粒子が、約５０％の化合物１８、約１０％のリン脂質、約３８．５％のコレステロール、及び約１．５％のＰＥＧ修飾脂質のモル比を含む、請求項１１４〜１２４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２７】
前記脂質ナノ粒子が、約４９．８３％の化合物１８、約９．８３％のリン脂質、約３０．３３％のコレステロール、及び約２．０％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む、請求項１１４〜１２４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２８】
請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、及び医薬として許容され得る担体または賦形剤を含む、組成物。
【請求項１２９】
請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物、または個体におけるがんを治療するもしくはがんの進行を遅延させるうえでの使用のための請求項１２８に記載の組成物であって、前記治療が、第２の組成物との組み合わせにおける前記脂質ナノ粒子の投与を含み、前記第２の組成物が、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意の医薬として許容され得る担体を含む、前記組成物。
【請求項１３０】
個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させる薬剤の製造における、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子及び任意の医薬として許容され得る担体の使用であって、前記薬剤が、前記脂質ナノ粒子及び前記任意の医薬として許容され得る担体を含み、前記治療が、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせにおける前記薬剤の投与を含む、前記使用。
【請求項１３１】
請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子及び任意の医薬として許容され得る担体または請求項１２８に記載の組成物を含む容器、ならびに個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための前記脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
【請求項１３２】
前記添付文書が、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせでの前記医薬組成物の投与のための説明をさらに含む、請求項１３１に記載のキット。
【請求項１３３】
請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子及び任意の薬剤として許容され得る担体を含む薬剤または請求項１２８に記載の医薬組成物、ならびに前記薬剤単独のまたは個体におけるがんを治療するもしくはがんの進行を遅延させるためのチェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせにおける投与のための説明を含む添付文書を含む、キット。
【請求項１３４】
個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための、第１の薬剤及び第２の薬剤の投与のための説明を含む添付文書をさらに含む、請求項１３３に記載のキット。
【請求項１３５】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、またはこれらの組み合わせを阻害する、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３６】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、抗体である、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３７】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、ＣＴＬＡ４を特異的に結合する抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ１を特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−Ｌ１を特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、及びこれらの組み合わせから選択される抗体である、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３８】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブから選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３９】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、トレメリムマブまたはイピリムマブから選択される抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４０】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、ニボルマブまたはペンブロリズマブから選択される抗ＰＤ１抗体である、請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、請求項１２８もしくは１２９に記載の組成物、請求項１３０に記載の使用、または請求項１３１〜１３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４１】
腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害する必要のある対象へ、請求項１〜１１３及び１２８〜１２９のいずれか一項に記載の組成物、または請求項１１４〜１２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を投与することを含む、前記対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害する、方法。
【請求項１４２】
前記組成物が、腫瘍内投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記組成物が、部域的に投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４４】
前記組成物が、腹腔内投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４５】
前記腫瘍が、肝細胞癌である、請求項１４１〜１４４のいずれかに記載の方法。
【請求項１４６】
前記腫瘍が、卵巣腫瘍、結腸腫瘍または散在性胃腫瘍である、請求項１４１〜１４４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年５月１８日出願の米国仮特許出願番号第６２／３３８，４９６号、２０１６年５月１８日出願の米国仮特許出願番号第６２／３３８，５０６号、２０１６年５月１８日出願の米国仮特許出願番号第６２／３３８，４６７号、２０１６年５月１８日出願の米国仮特許出願番号第６２／３３８，４８３号、２０１６年１０月４日出願の米国仮特許出願番号第６２／４０４，１７３号、２０１６年１０月４日出願の米国仮特許出願番号第６２／４０４，１７５号、２０１６年１０月３１日出願の米国仮特許出願番号第６２／４１５，４２４号、２０１６年１２月２３日出願の米国仮特許出願番号第６２／４３８，９４５号、２０１６年１２月２３日出願の米国仮特許出願番号第６２／４３８，９４２号、２０１７年１月７日出願の米国仮特許出願番号第６２／４４３，６９３号、２０１７年３月１６日出願の米国仮特許出願番号第６２／４７２，５１３号及び２０１７年４月１日出願の米国仮特許出願番号第６２／４８０，４００号の利益を主張する。上述に参照した特許出願の全体の内容は、本参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
がんは、体内で制御されない細胞分裂及び増殖を特徴とする疾患である。米国においては、女性全体の約３分の１及び男性全体の半数が人生においてがんを経験することになる。今日使用されている化学療法及び放射線療法などの標準的な治療によって多くの望ましくない結果が生じており、疾患関連ペプチド及びこれらのペプチドの機能を操作するための遺伝的療法は、疾患の診断、治療及び管理をより標的としたアプローチを提供する。しかしながら、遺伝子療法は、ゲノム内の無作為な位置における遺伝子の組込みによる望ましくない免疫応答及び安全性の懸念を含む複数の課題も有している。それゆえ、腫瘍を治療するための改良された治療アプローチが必要性とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本開示は、がんの治療のためのｍＲＮＡ治療薬を提供する。本開示のｍＲＮＡ治療薬は、この技術が免疫調節ポリペプチド（例えば、免疫応答刺激因子、共刺激因子、チェックポイント阻害剤などを含む、免疫腫瘍学的方法（「ＩＯ」）において有用な腫瘍学関連ポリペプチド）をコードするｍＲＮＡの細胞内送達後に、標的細胞内での、例えば、腫瘍における標的細胞内での機能的タンパク質の新規合成をもたらすので、がんの治療に特に十分適している。本開示は、（１）望ましくない免疫活性化（例えば、外来核酸のｉｎ  ｖｉｖｏでの導入と関係した先天性免疫応答）を最小限にし、及び（２）ｍＲＮＡからタンパク質への翻訳効率を最適化するようヌクレオチドを修飾した治療用ｍＲＮＡを特徴とする。本開示の例示的な態様は、特にタンパク質発現を亢進するよう免疫調節ポリペプチドをコードする治療用ｍＲＮＡのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）内での生得的免疫応答及び配列の最適化を低下させるヌクレオチド修飾の組み合わせを有する治療用ｍＲＮＡを特徴とする。
【０００４】
他の態様において、本開示のｍＲＮＡ治療技術は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）送達系を介した、免疫調節（例えば、腫瘍学関連）ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）の送達を特徴とする。例示的な実施形態において、本開示のｍＲＮＡ治療技術は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）送達系を介した腫瘍への免疫調節ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）の送達を特徴とする。本開示は、免疫調節（例えば、腫瘍学関連）ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）と組み合わせて、またｉｎ  ｖｉｖｏで、投与される場合の、例えば、細胞内取り込み、細胞内輸送及び／またはエンドソームの放出もしくはエンドソーム・エスケープなどの特性が改良された新規のイオン性脂質系ＬＮＰも特徴とする。本開示のＬＮＰ製剤は、ＬＮＰのｉｎ  ｖｉｖｏでの投与と関係する免疫原性低下も実証する。
【０００５】
したがって、本開示は、がんを治療するための方法及び組成物、特に免疫治療用の方法及び組成物を特徴とする。いくつかの態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチド及び第２の異なる免疫応答プライマーポリペプチドをコードする２つ以上の免疫調節（例えば、腫瘍学関連）ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ならびに、任意選択で、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに、任意選択で、チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを特徴とする併用療法を用いてがんを治療するための方法及び組成物を特徴とする。いくつかの態様において、本開示は、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ−３６ガンマ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び、任意選択で、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、免疫調節組成物を提供する。他の態様において、本開示は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び、任意選択で、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む免疫調節組成物を提供する。
【０００６】
本開示の他の態様は、ＩＬ−３６ポリペプチドをコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。本開示の他の態様は、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。本開示のさらに他の態様は、チェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ−１抗体、抗−ＣＴＬＡ４、またはこれらの組み合わせ）などの追加の治療剤との組み合わせにおける免疫応答プライマーポリペプチドをコードするｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。例示的な態様は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されたｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。例示的な態様は、イオン性アミノ脂質系ＬＮＰ中のｍＲＮＡの腫瘍内投与を特徴とする。
【０００７】
いくつかの態様において、本開示は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する必要のある対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する方法であって、少なくとも２つのポリヌクレオチドが、第１の免疫応答プライマーポリペプチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド）をコードする第１のポリヌクレオチド及び（第１とは異なる）第２の免疫応答プライマーポリペプチド、例えば、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及び、任意選択で、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチド）をコードする第３のポリヌクレオチドから選択される、方法を提供する。
【０００８】
１つの実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み、第２のポリヌクレオチドは、第２のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み、及び／または第３のポリヌクレオチドは、第３のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。１つの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０００９】
１つの態様において、本開示は、少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、少なくとも２つのｍＲＮＡ）を含む組成物、例えば、免疫調節組成物であって、少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（第１の免疫応答プライマーポリペプチドとは異なる）第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（「二剤」）、
（ｉｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、（第１とは異なる）第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（「三剤」）
からなる群より選択される、組成物を提供する。
【００１０】
いくつかの態様において、組成物は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの態様において、組成物は、チェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤＬ−１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはこれらの組み合わせ）を含むポリペプチドなど、別のがん療法との組み合わせで、この組成物を必要とする対象へ投与される。
【００１１】
１つの態様において、本組成物は、第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）及び（第１の免疫応答プライマーポリペプチドとは異なる）第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、第１及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドは、
（ａ）樹状細胞を刺激すること、
（ｂ）樹状細胞の成熟を促進すること、
（ｃ）抗原提示細胞サイトカイン及び／またはケモカインの産生を促進すること、
（ｄ）Ｔｈ１７細胞を増殖させまたは維持すること、
（ｅ）Ｔｈ１及び／またはＴｈ９の分化を亢進すること、ならびに
（ｆ）（ａ）〜（ｆ）の何らかの組み合わせ
からなる群より選択される１つ以上の活性を有する。
【００１２】
１つの態様において、免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−１２ファミリーのメンバーである。１つの実施形態において、ＩＬ−１２ファミリーのメンバーは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−２７、ＩＬ−３５、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドである。１つの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−２３である。１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、配列番号１、配列番号５または配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、配列番号１４１または１４２に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１３】
他の態様において、免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−１ファミリーのメンバーである。１つの実施形態において、ＩＬ−１ファミリーのメンバーは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＩＬ−３６Ｒａ、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、ＩＬ−３６γ、ＩＬ−３７、ＩＬ−３８、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドである。１つの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドである。１つの実施形態において、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドは、配列番号１４３または１４４に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる。１つの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−１８である。１つの実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、配列番号１４７、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、配列番号１４８及び１５５〜１６２から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１４】
１つの態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチド及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、２つのｍＲＮＡ）を含む組成物（例えば、免疫調節組成物）であって、第１の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１２ファミリーのメンバーであり、及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドが、ＩＬ−１ファミリーのメンバーである、組成物を提供する。１つの実施形態において、第１の免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−２３ポリペプチドであり、第２の免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドである。１つの実施形態において、第１の免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−２３ポリペプチドであり、第２の免疫応答プライマーポリペプチドは、ＩＬ−１８ポリペプチドである。
【００１５】
別の態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、（第１とは異なる）第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、３つのｍＲＮＡ）を含む組成物（例えば、免疫調節組成物）を提供する。いくつかの態様において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、
（ａ）Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の生存、Ｔ細胞の動員を活性化、刺激、促進、もしくは亢進すること、またはこれらの組み合わせ、及び／または
（ｂ）ＮＫ細胞の増殖、ＮＫ細胞の生存、ＮＫ細胞の動員を活性化、刺激、促進もしくは亢進すること、またはこれらの組み合わせ
からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する。
【００１６】
いくつかの態様において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、
（ｃ）Ｔ細胞の増殖及び／または機能を促進または亢進すること、
（ｄ）Ｔｈ１、Ｔｈ２及び／またはＴｈ９細胞発生を促進または亢進すること、
（ｅ）Ｔｒｅｇの発生及び／または活性を阻害または阻害すること、
（ｆ）記憶細胞の発生及び／または活性を促進または亢進すること、ならびに
（ｇ）（ｃ）〜（ｆ）の何らかの組み合わせ
からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する。
【００１７】
１つの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＩＬ−１５、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。１つの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＩＬ−１５、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。１つの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌである。１つの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号１４５または１４６に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１８】
１つの態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチド、第２の免疫応答プライマーポリペプチド及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、３つのｍＲＮＡ）を含む組成物（例えば、免疫調節組成物）であって、第１の免疫応答プライマーポリペプチドがＩＬ−２３ポリペプチドであり、第２の免疫応答プライマーポリペプチドがＩＬ−１８ポリペプチドであり、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドがＯＸ−４０Ｌである、組成物を提供する。別の態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチド、第２の免疫応答プライマーポリペプチド及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、３つのｍＲＮＡ）を含む組成物（例えば、免疫調節組成物）であって、第１の免疫応答プライマーポリペプチドがＩＬ−２３ポリペプチドであり、第２の免疫応答プライマーポリペプチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドであり、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドがＯＸ−４０Ｌである、組成物を提供する。他の実施形態において、この組成物は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）をさらに含む。
【００１９】
他の実施形態において、本開示は、少なくとも第１及び第２のポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、２つの、ｍＲＮＡ）を含む、腫瘍の大きさを減少させまたは腫瘍の成長を阻害するための組成物であって、少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖｉ）抗ＣＴＬＡ４抗体をコードするポリヌクレオチド、及び
（ｖｉｉ）これらの組み合わせ
からなる群より選択される、組成物を提供する。
【００２０】
１つの実施形態において、この少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｖ）これらの組み合わせ
からなる群より選択される。
【００２１】
さらに別の実施形態において、この少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｉｖ）これらの組み合わせ
からなる群より選択される。
【００２２】
別の実施形態において、この少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｖ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｖ）ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに
（ｖｉ）ＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むポリヌクレオチド
からなる群より選択される。
【００２３】
別の実施形態において、本開示は、少なくとも第１、第２及び第３のポリペプチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、３つのｍＲＮＡ）を含む、胃腫瘍の大きさを減少させまたは腫瘍の成長を阻害するための組成物であって、この少なくとも３つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
からなる群より選択される、組成物を提供する。
【００２４】
いくつかの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、（ｉ）ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド、（ｉｉ）ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチド、または（ｉｉｉ）ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドの両方を含む。１つの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド、ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチド、及びＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドとＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドの間に操作可能に位置取られたリンカーを含む。１つの態様において、このリンカーは、配列番号１３６〜１３９のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するＧｌｙ／Ｓｅｒリンカー（例えば、Ｇ４Ｓ）である）。１つの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含む。他の態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４１に示されるヌクレオチド配列を含む。
【００２５】
いくつかの態様において、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、異種性シグナル配列を含む。１つの態様において、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４７、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む。１つの態様において、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４８及び１５５〜１６２から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【００２６】
いくつかの態様において、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、異種性シグナル配列を含む。１つの態様において、ＩＬ３６−ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。１つの態様において、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４３に示されるヌクレオチド配列を含む。
【００２７】
１つの態様において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む。１つの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４５に示されるヌクレオチド配列を含む。
【００２８】
１つの態様において、本開示は、少なくとも第１、第２及び第３のポリペプチドをコードする少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、３つのｍＲＮＡ）を含む、例えば、腫瘍の大きさを減少させまたは腫瘍の成長を阻害するための組成物であって、この少なくとも３つのポリヌクレオチドが、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６ガンマをコードする第３のポリヌクレオチドを含み、第１、第２及び第３のポリヌクレオチドがそれぞれ、およそ１：１：２の質量比で組成物中に存在する、組成物を提供する。１つの実施形態において、ＯＸ４０Ｌ及びＩＬ−２３をそれぞれコードする第１及び第２のポリヌクレオチドは、およそ等しい質量で組成物中に存在し、ＩＬ−３６ガンマをコードする第３のポリヌクレオチドは、第１及び第３のポリヌクレオチドよりも多量の質量で組成物中に存在する。組成物についての追加の質量比は、本明細書に開示されている。
【００２９】
本開示の他の態様は、上述のまたは関連する組成物のうちのいずれかを含む脂質ナノ粒子に関する。いくつかの態様において、脂質ナノ粒子は、医薬として許容され得る担体または賦形剤とともに製剤化される。いくつかの態様において、脂質ナノ粒子は、腫瘍内投与（ｉＴｕ）のために製剤化される。
【００３０】
１つの態様において、本開示は、以下を含む脂質ナノ粒子を提供する：
【００３１】
ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、ポリヌクレオチド；ヒトＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、ヒトＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドへ作動可能に連結されたヒトＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、ポリヌクレオチド；及びヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、ポリヌクレオチド。
【００３２】
いくつかの態様において、ヒトＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドは、ヒトＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドへ、ペプチドリンカーを介して作動可能に連結される。いくつかの態様において、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドは、ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドまたはリンカー（例えば、ペプチドリンカー）の５’末端に配置される。他の態様において、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドは、ＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドまたはリンカー（例えば、ペプチドリンカー）の５’末端に配置される。いくつかの態様において、リンカーは、ペプチドリンカー、例えば、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（例えば、Ｇ６Ｓ）である。いくつかの態様において、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーは、（ＧｎＳ）ｍを含み、式中ｎは、１、２  ３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０であり、かつｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０である。いくつかの態様において、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーは、（ＧｎＳ）ｍを含み、式中ｎは６であり、かつｍは１である（すなわち、Ｇ６Ｓ）。
【００３３】
関連態様において、ヒトＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド、またはヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドであり、例えば、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域（ｈＩＧＶＫ４）に由来するシグナルペプチドである。
【００３４】
いくつかの態様において、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒトＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒトＩＬ−２３ｐ１９ポリペプチドは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。
【００３５】
いくつかの態様において、本開示は、１つ以上のミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位をさらに含む、上述のまたは関連するポリヌクレオチドのうちのいずれかを提供する。いくつかの態様において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位またはその両方）である。いくつかの実施形態において、ｍｉＲ結合部位は、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲを含む。いくつかの態様において、ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は、配列番号１２６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。１つの態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号２７に示されるヌクレオチド配列を含む５’ＵＴＲを含む。
【００３６】
他の態様において、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための薬剤の製造における、上述または後述の組成物または本明細書に記載される脂質ナノ粒子のうちのいずれかの使用であって、薬剤が、組成物または脂質ナノ粒子及び任意の医薬として許容され得る担体を含み、ならびに、治療が、チェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ−１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはこれらの組み合わせ）及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせにおける薬剤の投与を含む、使用を提供する。
【００３７】
いくつかの態様において、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）組成物または（例えば、ｍＲＮＡ）としてポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子及び任意の医薬として許容され得る担体を含む容器、ならびに個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与の説明を含む添付文書を含む、キットを提供する。いくつかの態様において、添付文書は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるための、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせでの医薬組成物の投与のための説明をさらに含む。
【００３８】
さらに他の態様において、本開示は、本明細書に記載される上述もしくは後述の組成物のうちのいずれかまたは脂質ナノ粒子のうちのいずれか及び任意の医薬として許容され得る担体を含む薬剤、ならびに薬剤単独の、または個体におけるがんを治療するもしくはがんの進行を遅延させるための、チェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ−１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはこれらの組み合わせ）及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物との組み合わせでの投与のための説明を含む添付文書を含む、キットを提供する。いくつかの態様において、キットは、個体におけるがんを治療するもしくはがんの進行を遅延させるための、第１の薬剤及び第２の薬剤の投与のための説明を含む添付文書をさらに含む。
【００３９】
本開示の他の態様は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅延させるのに使用するための、本明細書に記載される上述もしくは後述の脂質ナノ粒子のいずれか及び任意の医薬として許容され得る担体を含む組成物であって、治療が、第２の組成物との組み合わせにおける脂質ナノ粒子の投与を含み、第２の組成物が、チェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ−１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはこれらの組み合わせ）及び任意の医薬として許容され得る担体を含む、組成物に関する。
【００４０】
いくつかの態様において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、またはこれらの組み合わせを阻害する。１つの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、抗体または抗体をコードするポリヌクレオチドである。１つの実施形態において、抗体は、ＣＴＬＡ４を特異的に結合する抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ１を特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−Ｌ１を特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、及びこれらの組み合わせである。１つの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。１つの実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブである。１つの実施形態において、抗ＰＤ１抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【００４１】
組成物の種々の実施形態において、組成物内のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学修飾を各々含むｍＲＮＡである。１つの実施形態において、化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群より選択される。いくつかの態様において、ｍＲＮＡは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドであって、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、Ｎ１−メチルシュードウリジンである。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、完全に修飾されたＮ１−メチルシュードウリジンｍＲＮＡである。追加の化学修飾は、本明細書に開示される。
【００４２】
組成物の種々の実施形態において、組成物は、脂質ナノ粒子担体中に製剤化される。例えば、本明細書に記載されるように、第１及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択で第３のポリヌクレオチドを含む組成物は、組成物内のポリヌクレオチドがすべて、同じ脂質ナノ粒子担体によって運搬されるように製剤化される。１つの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、約２０〜６０％のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質のモル比を含む。１つの実施形態において、イオン性アミノ脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオアート（Ｌ３１９）からなる群より選択される。１つの実施形態において、イオン性アミノ脂質は、化合物１８である。
【００４３】
他の態様において、脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質のモル比を含む。他の態様において、脂質ナノ粒子担体は、約２０〜６０％の化合物１８、５〜２５％のリン脂質、２５〜５５％のコレステロール、及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む。他の態様において、脂質ナノ粒子担体は、約５０％のイオン性アミノ脂質、約１０％のリン脂質、約３８．５％のコレステロール、及び約１．５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む。他の態様において、脂質ナノ粒子担体は、約５０％の化合物１８、約１０％のリン脂質、約３８．５％のコレステロール、及び約１．５％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む。他の態様において、脂質ナノ粒子担体は、約４９．８３％のイオン性アミノ脂質、約９．８３％のリン脂質、約３０．３３％のコレステロール、及び約２．０％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む。他の態様において、脂質ナノ粒子担体は、約４９．８３％の化合物１８、約９．８３％のリン脂質、約３０．３３％のコレステロール、及び約２．０％のＰＥＧ修飾された脂質のモル比を含む。
【００４４】
別の態様において、本発明は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象へ、本明細書に記載される組成物のいずれかを投与することを含む、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する方法に関する。１つの実施形態において、組成物は、腫瘍内に投与される。別の実施形態において、組成物は、部域的に（すなわち、腫瘍が成長している領域へと）投与され、例えば、組成物は、腹腔内の腫瘍に対して腹腔内投与することができる。１つの実施形態において、腫瘍は肝細胞癌である。別の実施形態において、腫瘍は卵巣腫瘍、結腸腫瘍または散在性胃腫瘍である。治療に適した他の腫瘍及びがんは、本明細書に記載される。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙された配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＩＬ−１２ｐ４０サブユニットであって、アミノ酸配列が、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットへ結合して、ＩＬ−２３活性を有するＩＬ−２３を形成することができる、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットを含む。他の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙された配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＩＬ−２３ｐ１９サブユニットであって、アミノ酸配列が、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットへ結合して、ＩＬ−２３活性を有するＩＬ−２３を形成することができる、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３Ｐ１９サブユニットは、単一のポリペプチド鎖または２つの異なる鎖の上にある。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に列挙された配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列であって、ＩＬ−３６−ガンマ活性を有するアミノ酸配列を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、第３のタンパク質または第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドを投与することをさらに含む。１つの実施形態において、第３のタンパク質は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む。別の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに列挙された配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列であって、ＯＸ４０Ｌ活性を有するアミノ酸配列を含む。
【００４８】
ある特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２を含む核酸配列、例えば、ａａｃｇｃｃａｕｕａ  ｕｃａｃａｃｕａａａ  ｕａ（配列番号２３）またはｕｇｇａｇｕｇｕｇａ  ｃａａｕｇｇｕｇｕｕ  ｕｇ（配列番号２５）をさらに含む。
【００４９】
第１のポリヌクレオチド及び／または第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、５’末端キャップ、及び／または３’ポリ−Ａ尾部をさらに含むことができる。他の実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、コドンが最適化され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写され、キメラであり、または環状である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、送達剤、例えば、脂質ナノ粒子を用いて製剤化される。他の実施形態において、送達剤は、式（Ｉ）：
【化１】
2019519517.tif 000002
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｒ１は、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され、
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択され、またはＲ２及びＲ３は、これらが結合する原子とまとまって、複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群より選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ６は独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
Ｒ８は、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され、
各Ｒは独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ’は独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ”は独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され、
各Ｒ＊は独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され、
各Ｙは独立して、Ｃ３〜６炭素環であり、
各Ｘは独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択され、かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
但し、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）ｎが１、２、３、４もしくは５であるとき、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２であるとき、Ｑは５、６、もしくは７員のヘテロシクロアルキルではないことを条件とする。
【００５１】
他の実施形態において、送達剤は、式（Ｉ）：
【化２】
2019519517.tif 000003
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され、
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択され、またはＲ２及びＲ３は、これらが結合する原子とまとまって、複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群より選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲからなる群より選択され、各ｎは独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ６は独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒは独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ’は独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され、
各Ｒ”は独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され、
各Ｒ＊は独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され、
各Ｙは独立して、Ｃ３〜６炭素環であり、
各Ｘは独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択され、かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
但し、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）ｎが１、２、３、４もしくは５であるとき、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２であるとき、Ｑは５、６、もしくは７員のヘテロシクロアルキルではないことを条件とする。
【００５２】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＡ）：
【化３】
2019519517.tif 000004
またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、ｎは１、２、３、４、または５であり、かつＱはＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ―、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ｍは５、７、または９である。
【００５４】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＡ）またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、ｎは、１、２、３、４、または５であり、かつＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、かつ
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ）：
【化４】
2019519517.tif 000005
またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中ｎは、２、３、または４であり、かつＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、かつ
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルから選択される。
【００５７】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ）、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中ｎは、２、３、または４であり、かつＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、かつ
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルから選択される。
【００５８】
いくつかの実施形態において、Ｍ１は、Ｍ’である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ｌは、１、３、または５である。
【００６１】
いくつかの実施形態において、化合物は、化合物１〜化合物２３２、その塩及び立体異性体、ならびにこれらの何らかの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、化合物は、化合物１〜化合物１４７、その塩及び立体異性体、ならびにそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される。
【００６２】
ある特定の実施形態において、送達剤は、式（ＩＩａ）
【化５】
2019519517.tif 000006
の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００６３】
ある特定の実施形態において、送達剤は、式（ＩＩｂ）
【化６】
2019519517.tif 000007
の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００６４】
ある特定の実施形態において、送達剤は、式（ＩＩｃ）もしくは（ＩＩｅ）
【化７】
2019519517.tif 000008
の化合物またはこれらの塩もしくは立体異性体を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
【００６６】
ある特定の実施形態において、送達剤は、式（ＩＩｄ）
【化８】
2019519517.tif 000009
の化合物またはその塩もしくは立体異性体を含み、
式中、ｎは、２、３、及び４から選択され、かつｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２〜Ｒ６は、本明細書に記載されるとおりである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は独立して、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群より選択され得る。
【００６７】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｄ）、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群より選択され、ｎは、２、３、及び４から選択され、かつＲ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍは、本明細書に記載されるとおりである。
【００６８】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。
【００６９】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。
【００７１】
いくつかの実施形態において、各Ｒ５はＨである。
【００７２】
いくつかの実施形態において、各Ｒ６はＨである。
【００７３】
他の実施形態において、送達剤は、リン脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、イオン性脂質、及び／または第４級アミン化合物をさらに含む。
【００７４】
本開示は、本明細書に開示される第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、本明細書に開示される第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、本明細書に含まれる第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、またはこれらの組み合わせを含む組成物であって、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドが、本明細書に開示される送達剤中で製剤化されている、組成物をさらに含む。
【００７５】
本開示は、本明細書に開示される第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、本明細書に開示される第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び本明細書に開示される第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む組成物であって、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドが、本明細書に開示される送達剤中で製剤化されている、組成物をさらに含む。
【００７６】
本開示は、本明細書に開示される組成物及び本明細書に開示される方法により使用するための説明を含む、キットも開示する。
【００７７】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、本開示の組成物、または本開示のキット、ポリヌクレオチドを必要とする対象へのポリヌクレオチドの投与は結果として、（ｉ）閾値レベルに対する、またはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中の顆粒球レベルの上昇、（ｉｉ）閾値レベルに対する、またはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中の交差提示樹状細胞レベルの上昇、（ｉｉｉ）閾値レベルに対する、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後の比に対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のエフェクター：サプレッサーＴ細胞比の上昇、（ｉｖ）閾値レベルに対する、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のエフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇、（ｖ）閾値レベルに対する、またはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のＰＤＬ１発現レベルの上昇、あるいは（ｖｉ）これらの組み合わせを生じる。
【００７８】
本開示は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがインターロイキン２３ポリペプチド（ＩＬ−２３）を含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがインターロイキン３６−ガンマポリペプチド（ＩＬ−３６−ガンマ）を含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質（ＯＸ４０Ｌ）をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する方法であって、対象への二剤または三剤の投与が結果として、（ｉ）閾値レベルに対するまたはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中の顆粒球レベルの上昇、（ｉｉ）閾値レベルに対するまたはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中の交差提示樹状細胞レベルの上昇、（ｉｉｉ）閾値レベルに対するまたはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後の比に対する二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のエフェクター：サプレッサーＴ細胞比の上昇、（ｉｖ）閾値レベルに対する、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のエフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇、（ｖ）閾値レベルに対するまたはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する、二剤または三剤の投与後の対象から得られた１つ以上の試料中のＰＤＬ１発現レベルの上昇、あるいは（ｖｉ）これらの組み合わせを生じる、方法も提供する。いくつかの態様において、顆粒球レベルの上昇は、（ｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての顆粒球、または（ｉｉ）腫瘍の１ｍｇ当たりの顆粒球として定量される。いくつかの態様において、交差提示樹状細胞はＣＤ１０３＋細胞である。いくつかの態様において、交差提示樹状細胞レベルの上昇は、（ｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの交差提示樹状細胞、（ｉｉ）腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）における交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、または（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞として定量される。いくつかの態様において、エフェクター：サプレッサーＴ細胞比は、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比として定量される。いくつかの態様において、エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋細胞である。いくつかの態様において、ＰＤＬ１発現レベルは、（ｉ）陽性ＣＤ１１ｂ＋細胞の数、または（ｉｉ）ＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＰＤＬ１発現として定量される。
【００７９】
本開示は、顆粒球レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象における顆粒球レベルを上昇させる方法であって、顆粒球レベルが対象から得られた１つ以上の試料中で測定される、方法も提供する。いくつかの態様において、顆粒球レベルの上昇は、（ｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての顆粒球、及び／または（ｉｉ）閾値レベルに対するまたはＩＬ−２３をコードする単一のポリヌクレオチドもしくはＩＬ−３６−ガンマをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する腫瘍１ｍｇ当たりの顆粒球として測定される。
【００８０】
本開示は、交差提示樹状細胞レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象における交差提示樹状細胞レベルを上昇させる方法であって、交差提示樹状細胞レベルが、対象から得られた１つ以上の試料中で測定される、方法も提供する。いくつかの態様において、交差提示樹状細胞は、ＣＤ１０３＋細胞である。いくつかの態様において、交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞レベルの上昇は、（ｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、（ｉｉ）ＴｄＬＮにおける交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、または（ｉｖ）これらの組み合わせとして、閾値レベルに対して、またはＩＬ−２３をコードする単一のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマをコードする単一のポリヌクレオチド、もしくはＯＸ４０Ｌをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して測定される。
【００８１】
本開示は、エフェクター：サプレッサーＴ細胞比を上昇させることを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるエフェクター：サプレッサーＴ細胞比を上昇させる方法であって、エフェクター：サプレッサーＴ細胞比が対象から得られた１つ以上の試料中で測定される、方法も提供する。いくつかの態様において、エフェクター：サプレッサーＴ細胞比は、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比として測定される。
【００８２】
本開示は、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるエフェクター記憶Ｔ細胞レベルを上昇させる方法であって、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルが、対象から得られた１つ以上の試料中で測定される、方法も提供する。いくつかの態様において、エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋細胞である。いくつかの態様において、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇は、閾値レベルに対するまたはＯＸ４０Ｌをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対する腫瘍内のエフェクター記憶Ｔ細胞として測定される。
【００８３】
本開示は、ＰＤＬ１陽性細胞レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるＰＤＬ１陽性細胞レベルを上昇させる方法であって、ＰＤＬ１陽性細胞レベルは、対象から得られた１つ以上の試料中で測定される、方法も提供する。いくつかの態様において、ＰＤＬ１陽性細胞は、ＣＤ１１ｂ＋細胞である。
【００８４】
本明細書に開示される方法のいくつかの態様において、対象から得られた試料は、例えば、腫瘍組織、腫瘍浸潤物、血液、血漿、またはこれらの組み合わせから選択される。当業者は、本明細書に開示される方法において測定される細胞（例えば、顆粒球、交差提示樹状細胞、エフェクターＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、ＰＤＬ１陽性細胞など）のいかなるものも、及びこれらの測定に対応するパラメータ（例えば、細胞の絶対レベルまたは相対レベル、他の細胞に対する比、具体的なサブタイプのレベル、活性化レベル、マーカーの存在／非存在など）は、これらの細胞が存在するいかなる組織試料においても、過度の実験なしで当該技術分野において既知である方法を用いて測定することができることが理解される。
【００８５】
本明細書に開示される方法のいくつかの態様において、１つ以上の対照試料は、健常対象または腫瘍を保有している対象から得られた１つのまたは複数の試料である。いくつかの態様において、閾値レベルは、所定の値または１つ以上の試料から得られた値である。
【００８６】
本開示は、（１）被投与者へ、初期用量の二剤または三剤を投与すること、及び（２）初期用量の二剤または三剤の投与後に対象が閾値に対して、（ａ）顆粒球のレベル、（ｂ）交差提示樹状細胞のレベル、（ｃ）エフェクター：サプレッサーＴ細胞比、（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、（ｅ）ＰＤＬ１陽性細胞のレベル、（ｆ）ＰＤＬ１の発現、または（ｇ）これらの組み合わせにおける上昇があると判断された場合に、対象を治療することを含む、腫瘍疾患を保有している対象を、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物で治療するかどうかを判断する方法も提供する。
【００８７】
本開示は、（１）対象へ、初期用量の二剤または三剤を投与すること、及び（２）初回用量の二剤または三剤の投与後に、対象が閾値レベルに関して、（ａ）顆粒球のレベル、（ｂ）交差提示樹状細胞のレベル、（ｃ）エフェクター：サプレッサーＴ細胞比、（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、（ｅ）ＰＤＬ１陽性細胞のレベル、（ｆ）ＰＤＬ１の発現、または（ｇ）これらの組み合わせにおける上昇があると判断された場合に、治療に対して対象を選択することを含む、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含む組成物を用いた治療のための候補として腫瘍と診断された対象を選択する方法も提供する。
【００８８】
本開示は、腫瘍を治療することを必要とする対象における腫瘍を治療するための組成物の効能を測定する方法であって、組成物が、（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせにおける２つのポリヌクレオチド（二剤）、または（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせにおける３つのポリヌクレオチド（三剤）を含み、該方法が、対象から採取した少なくとも１つの試料中で、（ａ）顆粒球のレベル、（ｂ）交差提示樹状細胞のレベル、（ｃ）エフェクター：サプレッサーＴ細胞比、（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、（ｅ）ＰＤＬ１陽性細胞のレベル、（ｆ）ＰＤＬ１の発現、または（ｇ）これらの組み合わせを測定することを含み、閾値レベルに関して測定の少なくとも１つにおける上昇が、二剤または三剤を用いた治療に対して対象が応答していることを示す、方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】Ａ及びＢは、Ａ２０リンパ腫動物モデルにおけるＩＬ−２３ｍＲＮＡ単独療法の効能を示す。ＡはＮＳＴ−ＦＩＸ対照（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１２例の対象のうちの１例において（８．３％）、完全応答が観察された。ＢはｍＩＬ−２３ｍｉＲｌｅｓｓ（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１２例の対象のうちの５例において（４１．６％）、完全応答が観察された。投薬条件：２．５μｇのｍＲＮＡ、腫瘍内（ｉＴｕ）投与、化合物１８系脂質ナノ粒子（ＳＭ６８  ＬＮＰ）。ＮＳＴ−ＦＩＸは、陰性対照ｍＲＮＡである。
【図２】Ａ及びＢは、ＭＣ３８−Ｃ結腸癌動物モデルにおけるＩＬ−２３ｍＲＮＡの単独療法の効能を示す。ＡはＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。Ｂは３’ＵＴＲにおいてｍｉＲ結合部位を欠失する、すなわち「ｍｉＲｌｅｓｓ」のｍＩＬ−２３ｍＲＮＡ（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの４例において（４０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの２例において（２０％）、部分的応答が観察された。投薬条件：２．５μｇのｍＲＮＡ、ｉＴｕ、化合物１８系ＬＮＰ。ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌは、陰性対照ｍＲＮＡである。
【図３−１】Ａ〜Ｆは、ＩＬ−２３ｍＲＮＡ療法へのＩＬ−３６−ガンマまたはＩＬ−１８のいずれかをコードするｍＲＮＡの添加がＭＣ３８−Ｃ結腸癌モデルにおける効能を高めることを示す。ＡはＩＬ−２３及びＮＳＴ−ＦＩＸをコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの３例において（３０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの６例において（６０％）、部分的応答が観察された。Ｂは、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの９例において（９０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの１例において（１０％）、部分的応答が観察された。Ｃは、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの６例において（６０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの３例において（３０％）、部分的応答が観察された。Ｄは、ＮＳＴ−ＦＩＸ対照（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。投薬条件：各ｍＲＮＡにつき２．５μｇのｍＲＮＡ（対照については５μｇ）、ｉＴｕ、化合物１８系ＬＮＰ。ＮＳＴ−ＦＩＸは、陰性対照ｍＲＮＡである。Ｅ、Ｆ及びＧは、それぞれＡ、Ｂ及びＤに呈されるのと同じ実験に対応するデータを示すが、９０日後まで実験の時間枠を延長している。
【図３−２】同上。
【図３−３】同上。
【図４−１】Ａ〜Ｃは、Ａ２０リンパ腫モデルにおけるＩＬ−２３とＩＬ−３６−ガンマまたはＩＬ−１８との組み合わせのｍＲＮＡ療法の効能を示す。ＡはＩＬ−２３ｍｉＲｌｅｓｓをコードするｍＲＮＡ及びＮＳＴ−ＦＩＸ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１２例の対象のうちの８例において（６６．６％）、完全応答が観察された。１２例の対象のうちの１例において（８．３％）、部分的応答が観察された。ＢはＩＬ−３６−ｍｉＲ−１２２をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３ｍｉＲｌｅｓｓをコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１２例の対象のうちの１０例において（８３．３％）完全応答が観察された。ＣはＩＬ−２３をコードする「ｍｉＲｌｅｓｓ」ｍＲＮＡ及びＩＬ−１８をコードする「ｍｉＲｌｅｓｓ」ｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１２例の対象のうちの６例において（５０％）完全応答が観察された。ＤはＮＳＴ−ＦＩＸ対照（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。投薬条件：各ＲＮＡにつき２．５μｇのｍＲＮＡ（対照については５μｇ）、ｉＴｕ、化合物１８系ＬＮＰ。ＮＳＴ−ＦＩＸは、陰性対照ｍＲＮＡである。
【図４−２】同上。
【図５−１】Ａ〜Ｃは、Ａ２０リンパ腫モデルにおける５μｇの固定用量のｍＲＮＡを用いたＩＬ−２３単独をコードするｍＲＮＡを上回る、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡの優れた効能の早期の徴候を示す。ＡはＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの１例において（１０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの４例において（４０％）、部分的応答が観察された。Ｂは、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの２例において（２０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの１例において（１０％）、部分的応答が観察された。ＣはＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。ＤはＮＳＴ−ＦＩＸｍＲＮＡ対照（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。投薬条件：各ｍＲＮＡにつき２．５μｇのｍＲＮＡ（対照については５μｇ）、ｉＴｕ、化合物１８系ＬＮＰ。ＮＳＴ−ＦＩＸは、陰性対照ｍＲＮＡである。ＩＬ−２３／ＩＬ−３６ガンマの組み合わせは、５μｇの固定用量のｍＲＮＡでの単独構成要素よりも優れている。
【図５−２】同上。
【図６】Ａ〜Ｃは、免疫浸潤物のＭＣ３８結腸癌モデル比較を示す。Ａは組織１ｍｇ当たりの細胞数におけるＭＣ３８モデル系におけるＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＣＤ１１ｂ＋細胞の浸潤物の定量を示す。結果は、ＭＣ３８−Ｍ（免疫原性はほとんどない）及びＭＣ３８−Ｃ（免疫原性は強い）について示されている。Ｂは免疫原性がほとんどないＭＣ３８−Ｍ試料の組織顕微鏡写真を示し、Ｃは免疫浸潤物のＭＣ３８結腸癌モデル比較を示す。免疫原性の強いＭＣ３８−Ｃ試料の組織顕微鏡写真を示す。
【図７−１】Ａ〜Ｄは、ＭＣ３８−Ｍ結腸癌モデルにおけるＩＬ−２３ｍＲＮＡ単独療法及びＩＬ−２３／ＩＬ−３６−ガンマまたはＩＬ−２３／ＩＬ−１８の組み合わせのｍＲＮＡ療法の効能を分析する。Ａは化合物１８系ＬＮＰにおけるＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。応答は観察されなかった。Ｂは化合物１８系ＬＮＰにおけるＩＬ−２３ｍＲＮＡ「ｍｉＲｌｅｓｓ」（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。たった１例の部分的応答が観察された（１０例のうちの１例、１０％）。ＭＣ３８−Ｍは、ＯＸ４０Ｌ、抗ＰＤ−１抗体、及びＩＬ−２３の単独療法が有効ではない比較的感受性のないモデルである。ＣはＩＬ−２３及びＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。１０例の対象のうちの２例において（２０％）、完全応答が観察された。１０例の対象のうちの５例において（５０％）、部分的応答が観察された。したがって、ＩＬ−２３／ＩＬ−３６−ガンマｍＲＮＡ併用療法は、免疫原性がほとんどないＭＣ３８−Ｍ結腸癌において効能がある。ＤはＮＳＴ−ＦＩＸ対照（５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。ＥはＩＬ−２３及びＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ（各２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。たった１例の部分的応答が観察された（１０例のうちの１例、１０％）。
【図７−２】同上。
【図７−３】同上。
【図８】Ａ２０腫瘍モデルにおけるＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡ単独療法の効能を分析する。ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ（２．５μｇのｍＲＮＡ）を化合物１８系ＬＮＰ中に製剤化した。２例の完全応答が観察された。
【図９】Ａ〜Ｃは、ＭＣ３８−Ｍ（免疫原性がほとんどない）結腸癌モデルにおけるＯＸ４０ＬｍＲＮＡ「ｍｉＲｌｅｓｓ」または抗ＰＤ−１単独療法の効能を示す。Ａは化合物１８系ＬＮＰ中のＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡ「ｍｉＲｌｅｓｓ」（２．５μｇのｍＲＮＡ）を用いた処置を示す。Ｂは抗ＰＤ−１抗体を用いた処置（５ｍｇ／ｋｇで２回／週の腹腔内投与）を示す。ＣはＭＣ３８−Ｍ結腸癌モデル組織の顕微鏡写真を示す。
【図１０−１】Ａ〜Ｈは、各ｍＲＮＡがｍｉＲ１２２結合部位を含む、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを用いた単独療法、二剤併用療法、及び三剤併用療法（種々の薬用量レベルでの単回用量及び複数回用量の投与を含む）の効果を示す。Ａは、ＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２を用いた単独療法処置を示す。完全応答は観察されなかったが、８例のエスケープがあった。ＢはＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２及びＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２を用いた併用処置を示す。３例の完全応答が観察された（２５％）。６例のエスケープがあった。ＣはＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２、ＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２及びＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２三剤併用療法を用いた処置を示す。３例の完全応答が観察された（２５％）。４例のエスケープが観察された。各試料について、５μｇの全ｍＲＮＡ／投与を腫瘍内に（ｉＴｕ）投与した。非翻訳対照ｍＲＮＡ及びＩＬ−３６ガンマ＿ｍｉＲ−１２２単独を投与した場合、マウスはすべて、２６日後までに進行した（データ非掲載）。Ｄ、Ｅ及びＦはそれぞれＡ、Ｂ及びＣに呈されるのと同じ実験に対応するデータを示すが、７０日後まで実験の時間枠を延長した。Ｇは偽対照に対するＭＣ３８ルシフェラーゼ細胞におけるＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２及びＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２二剤療法を単回用量（８μｇ）で、ならびにＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２、ＩＬ−３６ガンマ＿ｍｉＲ−１２２、及びＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２三剤療法を単回用量または複数回用量（１２μｇ）で用いた処置を示す。ＨはＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２及びＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２二剤療法の単回８μｇ用量、ＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２、ＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２、及びＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２三剤療法の単回１２μｇ用量、またはＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２、ＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２、及びＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２三剤療法の複数回１２μｇ用量を用いた処置後の４７日後までの生存を示す。処置と関連した死亡は、ＩＬ−２３＿ｍｉＲ−１２２、ＩＬ−３６−ガンマ＿ｍｉＲ−１２２、及びＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２三剤療法の複数回１２μｇ用量を用いて観察された。
【図１０−２】同上。
【図１０−３】同上。
【図１０−４】同上。
【図１０−５】同上。
【図１１】組換えＩＬ−２３タンパク質と比較したｍＲＮＡから生成されたＩＬ−２３タンパク質の生物活性（例えば、マウス一次脾細胞からのマウスインターロイキン１７（ｍＩＬ−１７）発現の誘導）を示す。実線の上側の線は、ｍＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡをトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞から得られたマウスＩＬ−２３（ｍＩＬ−２３）を添加した後の初代マウス脾細胞から分泌したｍＩＬ−１７（ｐｇ／ｍｌ）を示し、実線の下側の線は、ｈＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡをトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞から得られたヒトＩＬ−２３（ｈＩＬ−２３）を添加した後のｍＩＬ−１７（ｐｇ／ｍｌ）発現を示す。点線の黒色の線は、組換えｈＩＬ−２３を添加した後のマウス初代脾細胞から分泌したｍＩＬ−１７を示し、点線の灰色の線は、組換えｍＩＬ−２３を添加した後の脾細胞からのｍＩＬ−１７発現を示す。本実験において使用するＩＬ−２３タンパク質レベルは、０．１ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、３．３ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ及び１００ｎｇ／ｍｌとした。
【図１２Ａ】ＡはマウスＩＬ−３６ガンマ（ｍＩＬ−３６γ）タンパク質によって誘導されるような骨髄由来樹状細胞におけるマウスインターロイキン６（ｍＩＬ６）（ｎｇ／ｍｌ）を示す。第１のパネル（ＮＴ）は、陰性対照である。第２のパネルは、組換えｍＩＬ−３６γを添加した後のｍＩＬ６発現を示す。第３のパネルは、ｍＩＬ−３６γをコードするｍＲＮＡをトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞から得られたｍＩＬ−３６γを添加した後のｍＩＬ６発現を示す。第４のパネル（偽）は、偽対照を示す。Ｂは組換えヒトＩＬ−３６−ガンマ及び、ｈＩＬ−３６−ガンマをコードする３つのｍＲＮＡをトランスフェクトしたＢ１６Ｆ１０細胞からの上清による、Ａ４３１細胞におけるインターロイキン８（ＩＬ８）発現（ＯＤ４５０）を示す。
【図１２Ｂ】同上。
【図１３−１】Ａ〜Ｅは、ＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡを用いて処置した細胞の表面に発現するＯＸ４０Ｌの共刺激生物活性を示す。ＡはＴ細胞活性化アッセイの概略図を示す。ＯＸ４０Ｌを発現するＢ１６Ｆ１０細胞またはＨｅＬａ細胞を、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗マウスＣＤ３抗体（Ｂ１６Ｆ１０細胞）またはＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子（ＨｅＬａ細胞）と共培養した。ＩＬ−２産生は、Ｔ細胞活性化の相関としてＥＬＩＳＡを用いて測定したＢはマウスＩＬ−２によって測定されるようなＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。ＣはヒトＩＬ−２によって測定されるようなＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。ｙ軸は、ｍＩＬ−２発現をｎｇ／ｍｌで示す。ＤはナイーブのＴ細胞の活性化アッセイへのＯＸ４０Ｌ発現細胞の添加を示す概略図とともに、図１３Ｃからのデータを示す。ＥはＯＸ４０Ｌを発現するＨｅＬａ細胞の存在または非存在の下で、及び抗ヒトＣＤ３抗体の存在または非存在の下で培養した、あらかじめ刺激されたＴ細胞を用いたＴ細胞活性化アッセイを示す。
【図１３−２】同上。
【図１３−３】同上。
【図１４−１】Ａ〜Ｄは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの投与後のＡ２０腫瘍における腫瘍微小環境に浸潤する異なるタイプの免疫細胞を示す。ＡはＤＸ５マーカーによって検出されるような、処置２４時間後の腫瘍浸潤物中のＮＫ細胞の百分率を示す。ＢはＣＤ４マーカーによって検出されるような、処置１４日間後の腫瘍浸潤物中のＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率を示す。ＣはＣＤ８マーカーによって検出されるような、処置１４日後の腫瘍浸潤物中のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。ＤはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの第１及び第２の投与２４時間後及び７２時間後のＭＣ３８腫瘍の腫瘍浸潤物中のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。
【図１４−２】同上。
【図１５Ａ】Ａ及びＢは、腫瘍内送達されるｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効能を示す。Ａは対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ」）を用いて腫瘍内処置した動物における腫瘍の成長を示す（矢印は、注射日数を標識する）。ＢはｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２  ｍＲＮＡ（「ＯＸ４０Ｌ−ｍｉＲ−１２２」）を用いて腫瘍内処置した動物における腫瘍の成長を示す（矢印は、注射日数を標識する）。
【図１５Ｂ】同上。
【図１６−１】Ａ〜Ｆは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びｍｉＲ−１２２結合部位及び抗ＰＤ−１抗体を含む併用療法のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効能を示す。Ａは対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ＿ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２」）及び対照抗体（「ラットＩｇＧ２ａ」）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。ＢはｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２（「ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２」）及び対照抗体（「ラットＩｇＧ２ａ」）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｃは対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ＿ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２」）及び抗ＰＤ−１抗体（「抗ＰＤ−１」）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。ＤはｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２（「ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２」）及び抗ＰＤ−１抗体（「抗ＰＤ−１」）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｅは抗ＰＤ−１抗体及びＰＢＳの腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。ＦはＰＢＳ及び対照抗体（「ラットＩｇＧ２ａ」）を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。ＣＲ＝完全応答。
【図１６−２】同上。
【図１６−３】同上。
【図１７】対照ｍＲＮＡ及び対照抗体（「ＮＳＴ＿ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２＋ラットＩｇＧ２ａ」）、ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２及び対照抗体（「ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２＋ラットＩｇＧ２ａ」）、対照ｍＲＮＡ及び抗ＰＤ−１抗体（「ＮＳＴ＿ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２＋抗ＰＤ−１」）、ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２及び抗ＰＤ−１抗体（「ｍＯＸ４０Ｌ＿１２２＋抗ＰＤ−１」）、抗ＰＤ−１抗体及びＰＢＳ（「ＰＢＳ＋抗ＰＤ−１」）、ならびにＰＢＳ及び対照抗体（「ＰＢＳ＋ラットＩｇＧ２ａ」）を含む併用療法を用いて腫瘍内処置した動物についての生存曲線を示す。
【図１８】Ａ及びＢは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びｍｉＲ−１２２結合部位及び抗ＰＤ−１抗体を含む併用療法を用いて処置した動物における記憶免疫応答を示す。動物を図１６Ｄにおいて示したように、ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２及び抗ＰＤ−１抗体の腫瘍内注射を用いて最初に処置した。完全応答（ＣＲ）と特定した４匹の動物にＭＣ３８腫瘍細胞を再度抗原投与した。ＡはＭＣ３８腫瘍細胞を抗原投与したナイーブの動物における腫瘍の成長を示す。ＢはＭＣ３８腫瘍細胞を再度抗原投与した４匹のＣＲ動物における腫瘍の成長を示す。
【図１９−１】Ａ〜Ｇは、二重ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３及びＩＬ−３６をコードするｍＲＮＡの組み合わせ）及び三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３、ＩＬ−３６、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡの組み合わせ）を用いて一次処置した及び未処置の遠位腫瘍の両方におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍効能を示す。Ａは本実験において使用するＭＣ３８−Ｓ二重側腹モデルの概略図を示す。片側の側腹に植え込まれた腫瘍を処置し、一次処置した腫瘍及びもう片方の側腹における未処置の腫瘍の両方においてその効果を測定する。Ｂは一次処置した腫瘍に及ぼす陰性対照ｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌをコードする非翻訳ｍＲＮＡ）の効果を示す。Ｃは未処置の腫瘍に及ぼす陰性対照ｍＲＮＡの効果を示す。Ｄは一次処置した腫瘍に及ぼす二重ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）の効果を示す。Ｅは未処置の遠位腫瘍に及ぼす二重ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）の効果を示す。Ｆは一次処置した腫瘍に及ぼす三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）の効果を示す。Ｇは未処置の遠位腫瘍に及ぼす三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）の効果を示す。各場合において、腫瘍に注射したｍＲＮＡ（対照、二剤、または三剤）の総用量は、５マイクログラムとした。ｍＲＮＡは、単回用量で腫瘍内に投与した。
【図１９−２】同上。
【図２０−１】Ａ〜Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた三剤ｍＲＮＡ療法が、治療することの困難なＢ１６Ｆ１０−ＡＰ３腫瘍モデルにおいて改良された効能を有することを示す。Ａは陰性対照を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｂは抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｃは三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｄは三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）＋抗ＰＤ−１抗体を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。
【図２０−２】同上。
【図２１】Ａ及びＢは、二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）を用いて処置した動物における記憶免疫応答を示す。腫瘍内に毎日７日間投与した５ｕｇの全ｍＲＮＡ（ＩＬ−２３をコードする２．５ｕｇのｍＲＮＡ及びＩＬ−３６−ガンマをコードする２．５ｕｇのｍＲＮＡ）を用いて動物を最初に処置した。完全応答（ＣＲ）として特定された１０匹の動物にＭＣ３８−Ｓ腫瘍細胞を再度抗原投与した。ＡはＭＣ３８−Ｓ腫瘍細胞を抗原投与したナイーブの動物における腫瘍の成長を示す。ＢはＭＣ３８−Ｓ腫瘍細胞を再度抗原投与した１０匹のＣＲ動物における腫瘍の成長を示す。
【図２２Ａ】Ａ及びＢは、二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置に対して応答したＬｙ６Ｇ＋顆粒球の増加を示す。Ａは処置の２４時間後、７２時間後、７日間後、及び１４日間後のＣＤ４５＋細胞の百分率としての顆粒球のレベルを示す。Ｂは処置の２４時間後、７２時間後、７日間後、及び１４日間後の腫瘍１ｍｇ当たりの顆粒球としての顆粒球のレベルを示す。呈される測定結果は、対照（「ＮｏＲｘ」及び「ＮＳＴ」）を用いた処置、ＩＬ−２３及びＩＬ−３６−ガンマ単独療法（「ＩＬ２３」及び「ＩＬ３６」）、ならびに二剤ｍＲＮＡ併用療法（単回用量の併用療法を受けているマウスに対応する「Ｃｏｍｂｏ」、及び２回用量の併用療法を受けているマウスに対応する「Ｃｏｍｂｏ２回用量」）に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２２Ｂ】同上。
【図２３】三剤ｍＲＮＡ併用療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置の２４時間後、７２時間後及び７日間後のＣＤ４５＋細胞の百分率としてのＬｙ６Ｇ＋顆粒球の増加を示す。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２４】Ａ及びＢは、二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置に応答したＣＤ１０３＋樹状細胞（ＤＣ）の増加を示す。Ａは処置の７日間後のＣＤ４５＋細胞の百分率としてのＣＤ１０３＋樹状細胞のレベルを示す。Ｂは処置の７日間後の腫瘍１ｍｇ当たりのＣＤ１０３＋樹状細胞としてのＣＤ１０３＋樹状細胞のレベルを示す。呈される測定結果は、対照（「ＮｏＲｘ」及び「ＮＳＴ」）、ＩＬ−２３及びＩＬ−３６−ガンマ単独療法（「ＩＬ２３」及び「ＩＬ３６」）ならびに二剤ｍＲＮＡ併用療法（「Ｃｏｍｂｏ」）を用いた処置に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２５】Ａ及びＢは、二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）または三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置に応じたＣＤ１０３＋樹状細胞（ＤＣ）の増加を示す。Ａは処置の７日間後の腫瘍１ｍｇ当たりのＣＤ８＋細胞としてのＣＤ１０３＋樹状細胞のレベルを示す。Ｂは処置の７日間後の腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）におけるＣＤ８＋樹状細胞のレベルを示す。呈される測定結果は、対照を用いた処置（「ナイーブ」及び「ＮＳＴ」）、ＯＸ４０Ｌ単独療法（「ＯＸ４０Ｌ」）、ならびに二剤及び三剤ｍＲＮＡ併用療法（それぞれ、「二剤」及び「三剤」）に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２６−１】Ａ〜Ｄは、三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いた処置に応じたＭＣ３８腫瘍及び流入領域リンパ節におけるＣＤ１１ｂ＋樹状細胞の増加を示す。Ａは、処置の７日間後の腫瘍１ｍｇ当たりの細胞数としてのＣＤ１１＋ｃＤＣ２細胞のレベルを示す。Ｂは、処置の７日間後の腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）におけるＣＤ１１＋ｃＤＣ２樹状細胞のレベルを示す。Ｃは、ＣＤ２４  ｃＤＣ２細胞の百分率として測定される三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるＣＤ１１ｂ＋ｃＤＣ２に及ぼすＣＤ８６の活性化を示す。Ｄは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定される三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるＣＤ１１ｂ＋ｃＤＣ２のＣＤ８６活性化を示す。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２６−２】同上。
【図２７】Ａ及びＢは、ＣＤ８  ｃＤＣ１細胞の百分率（Ａ）として測定されるＭＣ３８腫瘍への三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるＣＤ８  ｃＤＣ１に及ぼすＣＤ８６の活性化を示し、または平均蛍光強度（ＭＦＩ）（Ｂ）として測定されるＭＣ３８腫瘍への三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるＣＤ８  ｃＤＣ１に及ぼすＣＤ８６の活性化を示す。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２８−１】Ａ〜Ｄは、三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いた処置に応じたＭＣ３８腫瘍及び流入領域リンパ節における炎症性樹状細胞（ｉＤＣ）の増加を示す。Ａは、処置７日間後の腫瘍１ｍｇ当たりの細胞数としての腫瘍におけるｉＤＣのレベルを示す。Ｂは、処置７日間後の腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）におけるｉＤＣのレベルを示す。Ｃは、ｉＤＣの百分率として測定される、三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるｉＤＣに及ぼすＣＤ８６の活性化を示す。Ｄは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定される三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内投与の２４時間後及び７２時間後の流入領域リンパ節におけるｉＤＣに及ぼすＣＤ８６の活性化を示す。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図２８−２】同上。
【図２９】二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）及び三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置に応じた、エフェクターＣＤ８（キラー）Ｔ細胞と調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）との比の増大を示す。測定結果は、処置７２時間後及び７日間後に得た。測定結果は、対照（「ＮＳＴ」）、ＯＸ４０Ｌ単独療法（「ＯＸ４０Ｌ」）、ならびに二剤及び三剤ｍＲＮＡ併用療法（それぞれ、「二剤」及び「三剤」）を用いた処置に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図３０】Ａ及びＢは、二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）または三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置に応じたセントラル及びエフェクターＣＤ４及びＣＤ８細胞の増加を示す。Ａは処置７日間後及び１０日間後の腫瘍１ｍｇ当たりのＣＤ４細胞としてのＣＤ４細胞のレベルを示すＢは処置７日間後及び１０日間後の腫瘍１ｍｇ当たりのＣＤ８細胞としてのＣＤ８細胞のレベルを示す。測定結果は、対照（「ＮＳＴ」）、ＯＸ４０Ｌ単独療法（「ＯＸ４０Ｌ」）、ならびに二剤及び三剤ｍＲＮＡ併用療法（それぞれ、「二剤」及び「三剤」）を用いた処置に対応する。バーは、ナイーブの、セントラル記憶の、及びエフェクター記憶のＣＤ４及びＣＤ８細胞のレベルを示す。
【図３１】三剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）を用いたＭＣ３８腫瘍の処置の効能に及ぼすＣＤ細胞枯渇の効果を示す生存曲線を表す。抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体をＭＣ３８腫瘍を保有しているマウスへ投与することによって、ＣＤ４及びＣＤ８細胞レベルを枯渇させた。矢印は、三剤療法の投与を示す。ＣＤ細胞を枯渇させる用量の抗体（円によって示す）を三剤療法の投与の前及び後に投与した。
【図３２】Ａ及びＢは、三剤ｍＲＮＡ療法の投与に応じたＭＣ３８腫瘍を保有しているマウスのがん細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現を示す。Ａは、三剤ｍＲＮＡ療法を用いた処置７日間後のＰＤ−Ｌ１に対して陽性のがん細胞（ＣＤ４５−、ＦＳｃｈｉ、ＭＨＣＩＩ−）百分率を示す。Ｂは、ＭＦＩ（平均蛍光強度）として測定されるがん細胞（ＣＤ４５−、ＦＳｃｈｉ、ＭＨＣＩＩ−）におけるＰＤ−Ｌ１発現のレベルを示す。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。
【図３３】Ａ及びＢは、ＩＬ−２３もしくはＩＬ−３６−ガンマの単独療法または二剤ｍＲＮＡ療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）の投与に応じたＭＣ３８腫瘍を保有しているマウスにおけるＰＤ−Ｌ１の発現を示す。ＡはＰＤ−Ｌ１に対して陽性であるＣＤ１１ｂ＋細胞の百分率を示す。ＢはＭＦＩ（平均蛍光強度）として測定されるＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現の強度を示す。測定結果は、対照（「ＮｏＲｘ」及び「ＮＳＴ」）、ＩＬ−２３及びＩＬ−３６−ガンマ単独療法（「ＩＬ２３」及び「ＩＬ３６」）ならびに二剤ｍＲＮＡ併用療法（「Ｃｏｍｂｏ」）を用いた処置に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。測定結果はすべて、腫瘍細胞を植え込んだ７日間後に実施した。
【図３４】Ａ及びＢは、ＯＸ４０Ｌ単独療法または二剤（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ）もしくは三剤（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）ｍＲＮＡ療法の投与に応じたＭＣ３８腫瘍を保有しているマウスにおけるＰＤ−Ｌ１の発現を示す。ＡはＰＤ−Ｌ１に対して陽性であるＣＤ１１ｂ＋細胞の百分率を示す。ＢはＭＦＩ（平均蛍光強度）として測定されるＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現の強度を示す。呈される測定結果は、対照（「ＮｏＲｘ」）、ＯＸ４０Ｌ単独療法（「ＯＸ４０Ｌ」）、ならびに二剤及び三剤ｍＲＮＡ併用療法（それぞれ、「二剤」及び「三剤」）を用いた処置に対応する。縦方向のバーは、平均及び標準偏差を表す。データの上にある横方向のバーは、統計的な有意性を表す。測定はすべて、腫瘍細胞インプラントが植え込まれた７日間後に実施した。
【図３５−１】Ａ〜Ｄは、免疫抑制性ＭＣ３８腫瘍における抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１０Ｆ．９Ｇ２）と組み合わせた三剤ｍＲＮＡ療法のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効能を示す。Ａは対照抗体の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｂは抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１０Ｆ．９Ｇ２）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｃは三剤ｍＲＮＡ療法の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｄは三剤ｍＲＮＡ療法＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１０Ｆ．９Ｇ２）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。縦方向の破線は、対照抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、三剤ｍＲＮＡ療法、または三剤ｍＲＮＡ療法＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与日を示す。
【図３５−２】同上。
【図３６】Ａ及びＢは、同系のＨ２２（肝細胞癌（ＨＣＣ））モデルにおける三剤ｍＲＮＡ併用療法（ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ＋ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ＋ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効能を示す。Ａは対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ−ＦＩＸ」）の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。Ｂは三剤ｍＲＮＡ併用療法の腫瘍内注射を用いて処置した動物における腫瘍の成長を示す。
【図３７】表１１に概略した設計により処置したマウスの各群についての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。破線は、第８群において投与したＯＸ４０Ｌの効能がないこと、及び第５群におけるＯＸ４０ＬとＩＬ−２３との組み合わせの相乗効果を示す。
【図３８Ａ】マウスＯＸ４０Ｌ、マウスＩＬ−２３、及びマウスＩＬ−３６−ガンマを含む三剤組み合わせを用いて処置したマウスの群についての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。マウスＩＬ−３６−ガンマをコードする異なる量のｍＲＮＡを、各三剤において使用した。各三剤用量におけるｍＲＮＡの総量を、適切な量のＮＳＴ対照ｍＲＮＡを添加することによって、一定に維持した。
【図３８Ｂ】マウスＯＸ４０Ｌ、マウスＩＬ−２３、及びヒトＩＬ−３６−ガンマを含む三剤組み合わせを用いて処置したマウスの群についての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。ヒトＩＬ−３６−ガンマをコードする異なる量のｍＲＮＡを、各三剤において使用した。各三剤用量におけるｍＲＮＡの総量を、適切な量のＮＳＴ対照ｍＲＮＡを添加することによって、一定に維持した。
【図３９−１】Ａ〜Ｏは、表１１に概略される研究設計により処置したマウスの各群についての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。ｍＲＮＡを投与した日を縦方向の破線によって示す。各図は、１群当たりの動物数（ｎ）、完全応答（ＣＲ）の数、及び本研究の終了時の体積において腫瘍が１００ｍｍ３未満である動物の数を示す。各図は、各動物へ投与した組成物及び組成物中の各ｍＲＮＡ間の比も示す。
【図３９−２】同上。
【図３９−３】同上。
【図３９−４】同上。
【図３９−５】同上。
【図４０】表１１に概略される研究設計により処置したマウスの各群についての体重の変化（％）を示す。図は、各群についての平均体重の値を示す。
【図４１−１】Ａ〜Ｏは、表１１に概略される研究設計により処置したマウスの各群についての体重の変化（％）を示す。図は、各群における各動物についての体重の値の個々の変化を示す。
【図４１−２】同上。
【図４１−３】同上。
【図４１−４】同上。
【図４１−５】同上。
【図４２】表１１に概略される設計によるＭＣ３８腫瘍の処置の効果を示す生存曲線を表す。破線の矢印は、（ｉ）第８群において投与したＯＸ４０Ｌの効能がないこと、（ｉｉ）第９群におけるＩＬ−２３の中程度の効能、（ｉｉｉ）第５群におけるＯＸ４０ＬとＩＬ−２３との組み合わせの相乗効果、及び（ｉｖ）第１群（ｍＯＸ４０Ｌ／ｍＩＬ−２３／ｍＩＬ−３６−ガンマが１：１：１）に対応した、観察された最高の効能を示す。
【図４３Ａ】ＭＣ３８−Ｓ腫瘍を保有し、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ及びＯＸ４０Ｌを含む三剤組み合わせを用いて処置したマウスについての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。
【図４３Ｂ】ＭＣ３８−Ｓ腫瘍を保有し、ＩＬ−２３及びＯＸ４０Ｌを含む二剤組み合わせを用いて処置したマウスについての平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。用量におけるｍＲＮＡの総量を、図４３Ａにあるように処置したマウスと比較して、適切な量のＮＳＴ対照ｍＲＮＡを添加することによって一定に維持した。
【図４４】がん治療についての遠達効果を示すダイアグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００９０】
がんを治療するための特に面白いアプローチは、免疫治療として公知の、免疫応答を刺激する物質を用いた疾患の予防または治療を包含する。当該技術分野において免疫腫瘍学的方法とも呼ばれる免疫治療は、腫瘍ではなく宿主免疫系を標的とする療法を導入することによって、がんの治療に革命を起こし始めた。これらの療法は、独特な薬理学的応答特性を有し、したがって、多くの異なるタイプのがんを治癒させ得る療法を表す。肺、腎臓、膀胱及び皮膚のがんは、とりわけ、生存または腫瘍応答の点で免疫腫瘍学的方法を用いた治療から実質的な効能を得、メラノーマは潜在的に、最も多大なる恩恵を示す。免疫療法はしばしば、チェックポイント阻害抗体として公知の面白い新たなクラスの生物製剤を用いたチェックポイント阻害剤治療を特徴とする。
【００９１】
本開示は、がんを治療するための方法及び組成物、特に免疫治療法及び免疫治療組成物を特徴とする。いくつかの態様において、本開示は、第１の免疫応答プライマーポリペプチド及び第２の異なる免疫応答プライマーポリペプチドをコードする２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び、任意選択で免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに、任意選択で、チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを特徴とする併用療法を用いてがんを治療するための方法ならびに組成物を特徴とする。いくつかの態様において、本開示は、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ−３６ガンマ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び、任意選択で、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む免疫調節組成物を提供する。他の態様において、本開示は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び、任意選択で、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む免疫調節組成物を提供する。
【００９２】
いくつかの態様において、本開示は、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６もしくはＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを特徴とする組み合わせアプローチを用いてがんを治療する方法に関する。理論において束縛されることなく、抗がん免疫応答の刺激は、ＩＬ−１２ファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−２３）及び／またはＩＬ−１ファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−３６またはＩＬ−１８）をコードするｍＲＮＡを、例えば、腫瘍内に投与することによって可能である。ＩＬ−２３は、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、及びまたは樹状細胞の刺激において重要である。ＩＬ−３６は、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、及び／または樹状細胞の刺激において重要である。ＩＬ−１８は、ＩＬ−１２とまとまって、細胞仲介性免疫を誘導し、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び／またはマクロファージの刺激において重要である。ＩＬ−３６をコードするｍＲＮＡ、またはＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡは、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおいて、例えば、腫瘍環境内での免疫系へ、例えば、これらのｍＲＮＡの腫瘍内注射を介して第１の刺激シグナルを提供すると考えられている。免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、例えば、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡの投与は、ＩＬ−２３及びＩＬ−３６をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおいて提供される場合、Ｔ細胞を刺激するＯＸ４０Ｌの能力に少なくとも一部起因して、第２の刺激シグナルを提供すると考えられている。
【００９３】
いくつかの態様において、本明細書に開示される免疫治療法は、（１）免疫原性を最適化するために腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を転換し、及び／または（２）遠達制御及び抗がんメモリーを引き出すようＴ細胞応答を高めることができる。遠達効果、すなわち、腫瘍を局所的に治療してなおも包括的に作用することは、図４４に示されている。
【００９４】
本開示のいくつかの態様は、ＩＬ−３６をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。本開示の他の態様は、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡとの組み合わせにおけるＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。例示的な態様は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されたｍＲＮＡを用いた治療を特徴とする。例示的な態様は、イオン性アミノ脂質系ＬＮＰにおけるｍＲＮＡの腫瘍内投与を特徴とする。
【００９５】
本開示の他の態様は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象へ、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマまたはＩＬ−１８、及びＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを含む有効量の組成物を投与することによって、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害する組成物及び方法を特徴とする。いくつかの態様において、ｍＲＮＡの組み合わせは、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドを含む。本開示の一態様は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む、医薬組成物に関する。
【００９６】
別の態様において、本組成物は、以下に開示される式（Ｉ）の化合物、例えば、化合物１８、２５、２６または４８など、イオン性アミノ脂質を含む脂質組成物である。本開示のいくつかの態様において、医薬組成物の脂質組成は、追加の脂質／成分を含む。例えば、脂質組成は、１つ以上のリン脂質、例えば、ＭＳＰＣまたはＤＳＰＣを含むことができる。脂質組成は、ＤＯＴＡＰなどの第４級アミン化合物も含むことができる。
【００９７】
別の態様において、本出願は、（１）式（Ｉ）を有する化合物、（２）任意選択でヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、（３）任意選択で、構造脂質（例えば、ステロール）、（４）任意選択で、脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）、及び（５）任意選択で、第４級アミン化合物を含む脂質組成物（例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ））を提供する。
【００９８】
本明細書に提供する見出しは、本開示の種々の態様または態様の制限とはならず、全体として明細書に対する参照によって定義することができる。したがって、直後に定義される用語は、その全体が明細書に対する参照によってより完全に定義される。本開示を詳細に説明する前に、本開示が、具体的な組成物またはプロセスステップが変わり得るので、これらに制限されるものではないことが理解される。
【００９９】
Ｉ．定義
本開示がより容易に理解されることができるために、ある特定の用語を最初に定義する。本出願において使用する場合、本明細書で別段の明確な提供がない限り、以下の用語の各々は、以下に明らかにする意味を有する。追加の定義は、本出願のいたるところで明らかにされている。
【０１００】
本開示は、群の実際に１つのメンバーが所与の生成物またはプロセスにおいて存在する、採用される、またはそうでなければ、これらと関連する、実施形態を含む。本開示は、群のメンバーの２つ以上またはすべてが、所与の生成物またはプロセスにおいて存在する、採用される、またはそうでなければこれらと関連する、実施形態を含む。
【０１０１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈で別段に明確に記載されていない限り、複数の指示物を含む。「ａ」（または「ａｎ」）という用語は、「１つ以上の」、及び「少なくとも１つの」という用語と同様に、本明細書で相互交換可能に使用することができる。ある特定の態様において、「ａ」または「ａｎ」という用語は、「単一の」を意味する。他の態様において、「ａ」または「ａｎ」という用語は、「２つ以上の」または「複数の」を含む。
【０１０２】
さらに、本明細書で使用する場合の「及び／または」は、２つの指定された特徴または成分の各々の具体的な開示として、他を含みまたは他を含まないとするものとする。したがって、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」などの語句において使用されるような「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ（単独）」、ならびに「Ｂ（単独）」を含むよう意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句において使用されるような「及び／または」という用語は、以下の態様、すなわち、Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含するよう意図される。
【０１０３】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はすべて、本開示が関連する技術分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示において使用される用語の多くの一般的な辞書とともに当業者に提供される。
【０１０４】
態様が、「を含む」という言語を用いて本明細書で記載される場合は常に、「からなる」及び／または「から本質的になる」という点において説明される別の類似の態様も提供される。
【０１０５】
単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）の認可した形態で示される。数値範囲は、この範囲を規定する数を含む。ある範囲の値が列挙される場合、その範囲の列挙された上限値と下限値の間にある介在する各整数値、及びこの各分数も、このような値の間の各部分範囲とともに具体的に開示されることが理解されるべきである。いかなる範囲の上限値及び下限値も独立して、この範囲に含まれることができ、またはこの範囲から除外することができ、いずれかの限界値が含まれ、いずれの限界値も含まれず、またはいずれの限界値も含まれる各範囲も、本開示内に包含される。値が、明白に列挙される場合、列挙された値とほぼ同じ数量または量も本開示の範囲内にあることは理解されるべきである。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の各部分的組み合わせも具体的に開示され、本開示の範囲内にある。逆に、異なる要素または要素の群が個々に開示される場合、その組み合わせも開示される。開示の何らかの要素が複数の代替物を有するものとして開示される場合、各代替物が単一で除外される、または他の代替物との何らかの組み合わせにおける、その開示の例も、本明細書により開示され、開示の２つ以上の要素は、このような除外を有することができ、このような除外を有する要素の組み合わせはすべて、参照により開示される。
【０１０６】
ヌクレオチドは、通常受け入れられている一文字コドンによって称される。別段の記載がない限り、核酸は、５’から３’の向きで左から右へと記載される。ヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される一般に公知の一文字記号によって本明細書で称される。したがって、Ａはアデニンを表し、Ｃはシトシンを表し、Ｇはグアニンを表し、Ｔはチミンを表し、及びＵはウラシルを表す。
【０１０７】
アミノ酸は、一般に公知の三文字記号か、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１文字記号のいずれかによって本明細書で称される。別段の記載がない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシへの向きで左から右へと記載される。
【０１０８】
約：明細書及び特許請求の範囲のいたるところで数値と関連して使用される「約」という用語は、当業者になじみのある及び許容され得る、正確性の間隔を示す。概して、このような正確性の間隔は、±１０％である。
【０１０９】
範囲が与えられる場合、終点は含まれる。さらに、別段の記載がない限り、または文脈及び当業者の理解から明白ではない限り、範囲として表される値は、文脈に別段の明確な記載がない限り、本開示の異なる実施形態において記載された範囲内の何らかの特定の値または部分範囲を、その範囲の下限値の単位の１０分の１まで保証することができる。
【０１１０】
組み合わせにおいて投与された：本明細書で使用する場合、「組み合わせにおいて投与された」、「組み合わされた投与」、または「併用療法」という用語は、２つ以上の薬剤が患者に及ぼす各薬剤の効果の重複であり得るように同時にまたは間隔内で対象へ投与されることを意味する。いくつかの実施形態において、この２つ以上の薬剤は、互いに約６０、３０、１５、１０、５、または１分以内に投与される。いくつかの実施形態において、薬剤の投与は、組み合わせ（例えば、相乗）効果に達するよう、互いに十分に短い間隔である。
【０１１１】
アミノ酸置換：「アミノ酸置換」という用語は、患者または参照配列（例えば、野生型配列）に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基と置き換えることを指す。アミノ酸は、患者または参照配列（例えば、野生型ポリペプチド配列）において、化学ペプチド合成を介してまたは当該技術分野において既知である組換え方法を通じて置換することができる。したがって、「位置Ｘにおける置換」に対する参照は、位置Ｘに存在するアミノ酸置換を代替的なアミノ酸残基と置換することを指す。いくつかの態様において、置換パターンは、スキームＡｎＹにより説明することができ、式中Ａは、位置ｎに天然にまたは元来存在するアミノ酸に対応する一文字コードであり、Ｙは、置換するアミノ酸残基である。他の態様において、置換パターンは、式Ａｎ（ＹＺ）により説明することができ、式中Ａは、位置Ｘに天然にまたは元来存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する一文字コードであり、Ｙ及びＺは、代替的な置換アミノ酸残基である。
【０１１２】
本開示の文脈において、置換（アミノ酸置換という場合は特に）は、核酸レベルで実施され、すなわち、アミノ酸残基を代替的アミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを、第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって実施される。
【０１１３】
動物：本明細書で使用する場合、「動物」という用語は、動物界のいかなるメンバーもいう。いくつかの実施形態において、「動物」は、何らかの発生期にあるヒトを指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、何らかの発生期にある非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物は、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び虫類を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、形質転換動物、遺伝子操作された動物、またはクローンである。
【０１１４】
およそ：本明細書で使用する場合、目的の１つ以上の値へ適用される場合の「およそ」という用語は、記載された参照値と類似の値を指す。ある特定の実施形態において、「およそ」という用語は、別段に記載されない限り、または文脈から明らかではない限り、記載された参照値のいずれかの方向（大または小）において２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはこれ未満の内に収まる値の範囲を指す（例外は、このような数が、可能な値の１００％を超えるであろう場合である）。
【０１１５】
と関係する：疾患に対して本明細書で使用する場合、「と関係する」という用語は、問題の症状、測定、特徴、または状態が、その疾患の診断、発症、存在、または進行に連関することを意味する。関係が疾患の原因として連関していることがあるかもしれないが、そうである必要はない。
【０１１６】
２つ以上の部分に対して使用する場合、「と関係した」、「コンジュゲートした」、「連関した」、「付着した」、及び「結びつけられた」という用語は、２つ以上の部分に関して使用する場合、その部分が互いに、直接的に、または連結剤として機能する１つ以上の追加の部分を介して、物理的に関係または接続して、構造が使用される条件、例えば、生理学的条件の下でその部分が物理的に関係したままであるように十分に安定である構造を形成することを意味する。「関係」は、厳密には、直接的な化学的共有結合を通じてである必要はない。この用語は、「関係した」実体が物理的に関係したままであるように十分に安定である、イオン結合もしくは水素結合またはハイブリッド形成に基づいた接続性も示唆し得る。
【０１１７】
生体適合性：本明細書で使用する場合、「生体適合性」という用語は、損傷、毒性または免疫系による拒絶の危険性がほとんどないかまったくない生きた細胞、組織、器官または系との適合性を意味する。
【０１１８】
生分解性：本明細書で使用する場合、「生分解性」という用語は、生きているものの作用によって無害な産物へと分解することができることを意味する。
【０１１９】
配列の最適化：「配列の最適化」という用語は、参照核酸配列における核酸塩基が代替的な核酸塩基と置き換えられ、結果的に、改良された特性、例えば、改良されたタンパク質発現または低下した免疫原性を備えた核酸配列を生じるプロセスまたは一連のプロセスを指す。
【０１２０】
概して、配列の最適化の目的とは、参照ヌクレオチド配列によってコードされる同じポリペプチド配列をコードするよりも同義のヌクレオチド配列を生じることである。したがって、参照ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドに関してコドン最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドにおける（コドン最適化の結果としての）アミノ酸置換はない。
【０１２１】
コドンの置換：配列の最適化の文脈における「コドンの置換」または「コドンの置き換え」という用語は、参照核酸配列中に存在するコドンを別のコドンと置き換えることを指す。コドンは、参照核酸配列において、例えば、化学ペプチド合成または当該技術分野において既知である組換え法を通じて置換することができる。したがって、核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）におけるある特定の位置での、または核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）のある特定の領域もしくはサブ配列内でのある特定の位置における「置換」または「置き換え」に対する参照は、このような位置または領域のコドンの、代替的なコドンとの置換を言う。
【０１２２】
本明細書で使用する場合、「コドン領域」及び「コードする領域」という用語ならびにこれらの文法上の変形は、発現の際にポリペプチドまたはタンパク質を生じるポリヌクレオチドにおけるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を指す。
【０１２３】
化合物：本明細書で使用する場合、「化合物」という用語は、示される構造の立体異性体及び同位体をすべて含むよう意味される。本明細書で使用する場合、「立体異性体」という用語は、化合物の何らかの幾何異性体（例えば、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体）、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示は、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオマー的に純粋）、並びに鏡像異性及び立体異性の混合物、例えば、ラセミ化合物を含む、本明細書に記載される化合物のいかなる及びすべての立体異性体も包含する。化合物の鏡像異性及び立体異性の混合物ならびにこれらをその構成要素である鏡像異性体または立体異性体へと分解する手段は周知である。「同位体」は、核における異なる数の中性子から結果的に生じる同じ原子番号だが異なる質量数を有する原子を指す。例えば、水素の同位体は、トリチウム及び重水素が含まれる。さらに、本開示の化合物、塩、または複合体は、常用法によって溶媒和物及び水和物を形成するために溶媒または水分子との組み合わせにおいて調製することができる。
【０１２４】
保存的アミノ酸置換：「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられることである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で規定されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、またはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、非帯電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、またはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン）、ベータ分枝状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン）を含む。したがって、ポリペプチドにおけるアミノ酸が同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸と置き換えられる場合、アミノ酸置換は、保存的であるとみなされる。別の態様において、アミノ酸鎖は、側鎖ファミリーのメンバーの桁及び／または組成が異なる構造上類似した鎖と保存的に置き換えることができる。
【０１２５】
非保存的アミノ酸置換には、（ｉ）正に帯電した側鎖（例えば、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＬｙｓ）を有する残基が、負に帯電した残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）と、またはこれによって置換されたもの、（ｉｉ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＰｈｅまたはＶａｌ）と、またはこれによって置換されたもの、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが何らかの他の残基と、またはこれによって置換されたもの、あるいは（ｉｖ）かさのある疎水性または芳香族側鎖（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＴｒｐ）がより小さな側鎖（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）を有するものまたは側鎖を有さないもの（例えば、Ｇｌｙ）と、またはこれらによって置換されたものが含まれる。
【０１２６】
他のアミノ酸置換は、当業者によって容易に特定することができる。例えば、アミノ酸アラニンについては、置換は、Ｄ型アラニン、グリシン、ベータ−アラニン、Ｌ型システイン及びＤ型システインのいずれか１つから採用することができる。リジンについては、置き換えは、Ｄ型リジン、アルギニン、Ｄ型アルギニン、ホモアルギニン、メチオニン、Ｄ型メチオニン、オルニチン、またはＤ型オルニチンのいずれか１つであり得る。概して、単離されたポリペプチドの特性の変化を誘導すると期待できる機能的に重要な領域における置換は、（ｉ）極性残基、例えば、セリンまたはトレオニンが疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、またはアラニンと（またはこれらによって）置換されたもの、（ｉｉ）システイン残基が何らかの他の残基と（またはこれによって）置換されたもの、（ｉｉｉ）正に帯電した側鎖、例えば、リジン、アルギニンまたはヒスチジンを有する残基が負に帯電した側鎖、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸と（またはこれらによって）置換されたもの、あるいは（ｉｖ）かさのある側鎖、例えば、フェニルアラニンを有する残基が、このような側鎖を有さないもの、例えば、グリシンと（またはこれによって）置換されたものである。上述の非保存的置換のうちの１つがタンパク質の機能的特性を変化させることができる見込みは、このタンパク質の機能的に重要な領域に対して置換の位置と相関し、つまり、いくつかの非保存的置換は、したがって、生物学的特性に及ぼす効果がほとんどまたは全くない可能性がある。
【０１２７】
保存された：本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較される２つ以上の配列の同じ位置において未変化のままのものである、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のそれぞれヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸残基とは、配列の他の箇所で現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連した配列において保存されたものである。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに１００％同一である場合、「完全に保存された」状態であるといわれる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存された」状態であるといわれる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」状態であるといわれる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存された」状態であるといわれる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存された」状態であるといわれる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの完全長に適用され得、あるいはその部分、領域または特徴に適用され得る。
【０１２９】
接触させること：本明細書で使用する場合、「接触させること」という用語は、２つ以上の実体間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、哺乳類細胞をナノ粒子組成物と接触させることは、哺乳類細胞及びナノ粒子が物理的接続を共有するようにすることを意味する。細胞を外部の実体とｉｎ  ｖｉｖｏ及びｅｘ  ｖｉｖｏの両方で接触させる方法は、生物学的分野において周知である。例えば、哺乳類内に配置されたナノ粒子組成物及び哺乳類細胞を接触させることは、さまざまな投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下）によって実施され得、さまざまな量のナノ粒子組成物を包含し得る。そのうえ、２つ以上の哺乳類細胞は、ナノ粒子組成物によって接触させられ得る。
【０１３０】
徐放性：本明細書で使用する場合、「徐放性」という用語は、治療結果をもたらすよう特定の放出パターンに従う医薬組成物または化合物の放出特性を指す。
【０１３１】
共有結合性誘導体：ポリペプチドを指す場合の「共有結合性誘導体」という用語は、有機タンパク質性または非タンパク質性誘導体化剤及び／または翻訳後修飾による天然のタンパク質または出発タンパク質の修飾を含む。共有結合性修飾は従来より、タンパク質の標的とされるアミノ酸残基を、選択された側鎖もしくは末端残基と反応することのできる有機誘導体化剤と反応させることによって、または選択された組換え宿主細胞において機能する翻訳後修飾のつなぐ機序によって導入される。結果として生じる共有結合性誘導体は、生物活性にとって、イムノアッセイにとって、または抗タンパク質抗体の調製にとって、組換え糖タンパク質の免疫親和性精製にとって重要な残基を特定することに方向づけられたプログラムにおいて有用である。このような修飾は、当該技術分野における通常の技術のうちであり、過度の実験なしで実施される。
【０１３２】
環状または環化：本明細書で使用される場合、「環状」という用語は、連続したループの存在を指す。環状分子は、環状である必要はなく、サブユニットの破壊されていない鎖を形成するよう接合されているに過ぎない。本開示の操作されたＲＮＡまたはｍＲＮＡなどの環状分子は、単一の単位または多量体であり得、あるいは複雑なまたはより高次の構造の１つ以上の構成要素を含むことができる。
【０１３３】
細胞障害性：本明細書で使用する場合、「細胞障害性」は、細胞（例えば、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生虫、プリオン、またはこれらの組み合わせに及ぼす殺傷効果または損傷性のある、毒性のある、もしくは致命的である効果を指す。
【０１３４】
送達すること：本明細書で使用する場合、「送達すること」という用語は、実体を目的地へ提供することを意味する。例えば、ポリヌクレオチドを対象へ送達することは、ポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物を対象へ（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路によって）投与することを包含し得る。哺乳類または哺乳類細胞へのナノ粒子組成物の投与は、１つ以上の細胞をナノ粒子組成物と接触させることを包含し得る。
【０１３５】
送達剤：本明細書で使用する場合、「送達剤」は、標的とされる細胞へのポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏでの送達を少なくとも一部容易にする何らかの物質を指す。
【０１３６】
脱安定化した：本明細書で使用する場合、「脱安定の」、「脱安定化させる」、または「脱安定化している領域」は、領域または分子の出発形態、野生型形態または天然の形態よりも安定していない同じ領域または分子を意味する。
【０１３７】
検出可能な標識：本明細書で使用する場合、「検出可能な標識」は、Ｘ線撮像、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光度などを含む当該技術分野において既知である方法によって容易に検出される別の実体と付着、組み込みまたは会合した１つ以上のマーカー、シグナル、または部分を指す。検出可能な標識には、放射性同位体、発蛍光団、発色団、酵素、色素、金属イオン、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン及びハプテンなどのリガンド、量子ドット、ならびにこれらに類するものが含まれる。検出可能な標識は、本明細書で開示されるペプチドまたはタンパク質における何らかの位置に位置することができる。検出可能な標識は、アミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の内部にあり得、あるいはＮ末端またはＣ末端に位置することができる。
【０１３８】
ジアステレオマー：本明細書で使用する場合、「ジアステレオマー」という用語は、互いに鏡像ではなく、互いに重ねることのできない立体異性体を意味する。
【０１３９】
消化する：本明細書で使用する場合、「消化する」という用語は、より小さな片または成分へと分解することを意味する。ポリペプチドまたはタンパク質を指す場合、消化は結果として、ペプチドの生成を生じる。
【０１４０】
遠位の：本明細書で使用する場合、「遠位の」という用語は、中心から離れてあるいは目的の点または領域から離れて位置することを意味する。
【０１４１】
ドメイン：本明細書で使用する場合、ポリペプチドを指す場合、「ドメイン」という用語は、１つ以上の特定可能な構造上のまたは機能的な特徴または特性（例えば、結合能、タンパク質間相互作用のための部位として役立つこと）を有するポリペプチドのモチーフを指す。
【０１４２】
投与計画：本明細書で使用する場合、「投与計画」または「投与計画」とは、治療、予防、または緩和ケアに関する投与のまたは医師により決定された計画のスケジュールである。
【０１４３】
有効量：本明細書で使用する場合、薬剤の「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、このようなものとして、「有効量」は、それが適用中である内容による。例えば、腫瘍を治療する薬剤を投与する内容において、薬剤の有効量は、例えば、薬剤の投与なしで得られる応答と比較して、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させるまたは腫瘍の成長を阻害するのに十分な量である。「有効量」という用語は、「有効用量」、「治療有効量」、または「治療有効用量」と相互交換可能に使用することができる。
【０１４４】
鏡像異性体：本明細書で使用する場合、「鏡像異性体」という用語は、少なくとも８０％（すなわち、ある鏡像異性体の少なくとも９０％及びその他の鏡像異性体の多くとも１０％）、少なくとも９０％、または少なくとも９８％の光学純度または鏡像異性体過剰率（当該技術分野で標準的な方法によって測定される）を有する、本開示の化合物の各個々の光学的に活性のある形態を意味する。
【０１４５】
封入する：本明細書で使用する場合、「封入する」という用語は、囲い込む、取り囲む、または包むことを意味する。
【０１４６】
封入効率：本明細書で使用する場合、「封入効率」は、ナノ粒子組成物の調製において使用されるポリヌクレオチドの初期合計量に対する、ナノ粒子組成物の一部となるポリヌクレオチドの量を指す。例えば、９７ｍｇのポリヌクレオチドが組成物へ初期的に提供される合計１００ｍｇのポリヌクレオチドからナノ粒子組成物中に封入される場合、封入効率は９７％として与えられ得る。本明細書で使用する場合、「封入」は、完全な、実質的な、または部分的な閉込め、囲い込み、取り囲み、または包み込みを指す場合がある。
【０１４７】
コード化タンパク質切断シグナル：本明細書で使用する場合、「コード化タンパク質切断シグナル」は、タンパク質切断シグナルをコードするヌクレオチド配列を指す。
【０１４８】
操作された：本明細書で使用する場合、本開示の実施形態は、構造的であろうと化学的であろうと、出発点の、野生型のまたは天然の分子から変化する特徴または特性を有するよう設計された場合に「操作された」ことである。
【０１４９】
送達の亢進：本明細書で使用する場合、「送達の亢進」という用語は、対照ナノ粒子による目的の標的組織（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）へのポリヌクレオチドの送達レベルと比較して、目的の標的組織（例えば、哺乳類肝臓）へのナノ粒子によるポリヌクレオチドのより多い（例えば、少なくとも１．５倍多い、少なくとも２倍多い、少なくとも３倍多い、少なくとも４倍多い、少なくとも５倍多い、少なくとも６倍多い、少なくとも７倍多い、少なくとも８倍多い、少なくとも９倍多い、少なくとも１０倍多い）送達を意味する。特定の組織へのナノ粒子の送達のレベルは、組織中で産生されるタンパク質の量をこの組織の重量と比較すること、組織中のポリヌクレオチドの量をこの組織の重量と比較すること、組織中で産生されるタンパク質の量をこの組織中の総タンパク質量と比較すること、または組織中のポリヌクレオチドの量をこの組織中の全ポリヌクレオチドの量と比較することによって測定され得る。標的組織へのナノ粒子の送達の亢進が、治療中の対象において測定される必要がないことは理解され、送達の亢進は、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代用物において測定され得る。
【０１５０】
エキソソーム：本明細書で使用する場合、「エキソソーム」とは、哺乳類細胞によって分泌される小胞、またはＲＮＡ分解に関与する複合体である。
【０１５１】
発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、次の事象の１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの生成（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシング）、（３）ＲＮＡからポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
【０１５２】
ｅｘ  ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合、「ｅｘ  ｖｉｖｏ」という用語は、生体（例えば、動物、植物、もしくはその微生物またはこれらの細胞もしくは組織）の外側で生じる事象を指す。ｅｘ  ｖｉｖｏ事象は、天然（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ）環境から最小限だけ変化した環境において起こり得る。
【０１５３】
特徴（Ｆｅａｔｕｒｅ）：本明細書で使用する場合、「特徴」は、特徴（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）、特性、または特有の要素を指す。ポリペプチドを指す場合、「特徴」は、分子の特有のアミノ酸配列に基づく構成要素として定義される。本開示のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの特徴は、表面顕在化、局所的な立体配座形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端またはそれらのいずれかの組合せが含まれる。
【０１５４】
製剤：本明細書で使用する場合、「製剤」には、少なくともポリヌクレオチド、ならびに担体、賦形剤、及び送達剤のうちの１つ以上が含まれる。
【０１５５】
断片：「断片」は、本明細書で使用する場合、部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された完全長のタンパク質を消化することによって得られたポリペプチドを含むことができる。いくつかの実施形態において、断片とは、Ｎ末端、及び／またはＣ末端、及び／または内部のサブ配列が欠失した完全長タンパク質のサブ配列（例えば、ＩＬ−２３のサブユニットの１つ）である。本開示のいくつかの好ましい態様において、本開示のタンパク質の断片は、機能的断片である。
【０１５６】
機能的：本明細書で使用する場合、「機能的」生体分子とは、特徴とする特性及び／または活性を呈する形態にある生体分子である。したがって、本開示のポリヌクレオチドの機能的断片とは、機能的なインターロイキン断片を発現することのできるポリヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、インターロイキンの機能的な断片は、野生型インターロイキンの断片（すなわち、インターロイキンの天然に存在する形態の断片）、またはその変異体もしくはバリアントを指し、この断片は、対応する完全長タンパク質の生物活性の最小約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％を保持する。
【０１５７】
ヘルパー脂質：本明細書で使用する場合、「ヘルパー脂質」という用語は、脂質性部分（脂質層、例えば、脂質二分子膜への挿入用）及び極性部分（脂質層の表面での生理学的溶液との相互作用用）を含む化合物または分子を指す。典型的には、ヘルパー脂質とは、リン脂質である。ヘルパー脂質の機能とは、アミノ脂質を「補完する」こと、及び二重層の膜融合性を増大させること、及び／または、例えば、細胞へ送達された核酸のエンドソーム・エスケープを容易にするのに役立つことである。ヘルパー脂質、ＬＮＰの表面に対する鍵となる構造的な構成要素であるとも考えられている。
【０１５８】
相同性：本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間の、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。概して、「相同性」という用語は、２つの分子間の進化上の関連性を含意する。したがって、相同的である２つの分子は、共通の進化上の祖先を有することになっている。本開示の文脈において、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、分子中のモノマーの少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が同一（実際に同じモノマー）である、または類似している（保存的置換）場合、互いに「相同的」であるとみなされる。「相同的」という用語は必ず、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。
【０１６０】
同一性：本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的なモノマー保存を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一性百分率の計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実施することができる（ギャップは、最適な整列のために第１及び第２の核酸配列のうちの１つまたは両方において導入することができ、非同一性の配列を比較目的のために無視することができる）。ある特定の実施形態において、比較目的のために整列した配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次に、対応するヌクレオチド位置にあるヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドによって占有される場合、この分子はこの位置において同一である。２つの配列間の同一性百分率とは、これらの配列によって共有される同一の位置の数の関数であり、ギャップの数、及び２つの配列の最適な整列のために導入されることが必要な各ギャップの長さを考慮に入れる。配列の比較、及び２つの配列間の同一性百分率の決定は、算術アルゴリズムを用いてなし得る。ＤＮＡ及びＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）は等価とみなすことができる。
【０１６１】
適切なソフトウェアプログラムは、種々の源から、タンパク質及びヌクレオチド両配列の整列のために入手可能である。配列同一性百分率を決定するための１つの適切なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴ一式の一部であるｂｌ２ｓｅｑである。ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰのいずれかのアルゴリズムを用いて２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用されるのに対し、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の適切なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳ一式の一部であるＮｅｅｄｌｅ，Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ，Ｗａｔｅｒ，ｏｒ  Ｍａｔｃｈｅｒであり、また、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａでＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）から入手可能である。
【０１６２】
配列の整列は、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ  ＸまたはＣｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどのような、当該技術分野において既知である方法を用いて実施することができる。
【０１６３】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの参照配列と整列させる単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの標的配列内にある異なる領域は各々、それ自体の配列同一性百分率を有し得る。配列同一性百分率の値が、最も近い１０分の１に丸められることは特筆される。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられるのに対し、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。長さが常に整数であることになっていることも特筆される。
【０１６４】
ある特定の態様において、第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の同一性百分率（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中Ｙは、第１及び第２の配列の整列（目視検査または特定の配列整列プログラムによって整列）において同一の一致として点数化されるアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列の同一性百分率は、第１の配列に対する第２の配列の同一性百分率よりも大きいことになる。
【０１６５】
当業者は、配列同一性百分率の計算のための配列整列の作成が一次配列データによって排他的に実施される２配列間比較に限定されないことを理解するだろう。配列整列が、配列データを、構造データ（例えば、タンパク質の結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統発生的データのような異種源に由来するデータと統合することによって作成することができることも理解されるだろう。複数の配列整列を作成するよう異種性データを統合する適切なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能なＴ−Ｃｏｆｆｅｅであり、例えば、ＥＢＩから代替的に入手可能である。配列同一性百分率を計算するために使用される最終的な整列が自動または手動のいずれかで精選することができることも理解されるだろう。
【０１６６】
免疫チェックポイント阻害剤：「免疫チェックポイント阻害剤」または単に「チェックポイント阻害剤」は、免疫細胞ががん細胞によってオフになることを防止する分子を指す。本明細書で使用する場合、チェックポイント阻害剤という用語は、細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、プログラム死細胞１受容体（ＰＤ−１）、またはＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）のような阻害性チェックポイント分子を中和または阻害するポリペプチド（例えば、抗体）、またはこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を指す。
【０１６７】
免疫応答：「免疫応答」という用語は、病原体が侵入している人体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合は正常なヒト細胞もしくは組織に対する、選択的損傷、破壊、または除去を結果として生じる、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、及びこれらの細胞または肝臓によって産生される可溶性の高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を指す。
【０１６８】
免疫応答共刺激シグナル：「免疫応答共刺激シグナル」という用語は、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の動員、増殖、活性化、生存、またはこれらの組み合わせを促進する免疫刺激分子をいう。いくつかの態様において、免疫応答共刺激シグナルは、Ｔ細胞の増殖、機能及び記憶形成を亢進するポリペプチドである（例えば、ＯＸ４０Ｌ）。いくつかの態様において、共刺激シグナルは、Ｔｈ１、Ｔｈ２及び／またはＴｈ９の発達を促進し、Ｔｒｅｇの発達もしくは活性を抑制し、ＣＤ４及び／またはＣＤ８  Ｔ細胞の増殖及び／または生存を亢進し、及び／または記憶細胞を促進する。具体的な態様において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、及びＩＬ−１５からなる群より選択される。いくつかの具体的な態様において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌ及びＣＤ８０からなる群より選択される。
【０１６９】
免疫応答プライマー：「免疫応答プライマー」という用語は、抗原提示及び／または認識を亢進する免疫刺激分子をいう。いくつかの態様において、免疫応答プライマーは、樹状細胞を刺激し、樹状細胞の成熟を促進し、抗原提示細胞のサイトカイン／ケモカインの産生を促進し、Ｔｈ１７細胞を増殖させ及び／または維持し、Ｔ細胞の増殖を亢進し、及び／またはＴｈ１及び／またはＴｈ９の分化を亢進するポリペプチドである。いくつかの態様において、免疫応答プライマーは、ＩＬ−１２ファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−２７、ＩＬ−３５）である。他の態様において、免疫応答プライマーは、ＩＬ−１ファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＩＬ−３６Ｒａ、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、ＩＬ−３６γ、ＩＬ−３７、ＩＬ−３８）である。いくつかの態様において、免疫応答プライマーは、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−１２、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＩＬ−１８からなる群より選択されるポリペプチドである。
【０１７０】
炎症性応答：「炎症性応答」は、特異的及び非特異的防御系を含む免疫応答をいう。特異的な防御系反応とは、抗原に特異的な免疫系応答である。特異的な防御系反応の例としては、抗体応答が挙げられる。非特異的防御系反応は、免疫学的記憶が概して不可能な白血球、例えば、マクロファージ、好酸球及び好中球によって媒介される炎症性応答である。いくつかの態様において、免疫応答は、炎症性サイトカインレベルの上昇を結果的に生じる炎症性サイトカインの分泌を含む。
【０１７１】
炎症性サイトカイン：「炎症性サイトカイン」という用語は、炎症性応答において上昇したサイトカインをいう。炎症性サイトカインの例としては、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＣＸＣＬ１（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１；ＧＲＯαとしても公知、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。炎症性サイトカインという用語は、当該技術分野において既知である炎症性応答と関係する他のサイトカイン、例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキンα（ＩＦＮ−α）なども含む。
【０１７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用する場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」という用語は、生体（例えば、動物、植物、または微生物）内よりもむしろ人工環境において、例えば、試験管または反応容器の中で、細胞培養において、ペトリ皿の中などで生じる事象をいう。
【０１７３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、生体（例えば、動物、植物、もしくは微生物またはこれらの細胞もしくは組織）内で生じる事象をいう。
【０１７４】
挿入バリアント及び欠失バリアント：「挿入バリアント」は、ポリペプチドをいう場合、天然の配列または出発配列における特定の位置のアミノ酸のすぐ近くに挿入された１つ以上のアミノ酸を有するものである。アミノ酸の「すぐ近くに」は、アミノ酸のアルファ−カルボキシ官能基またはアルファ−アミノ官能基のいずれかへ結合したことを意味する。「欠失バリアント」は、ポリペプチドをいう場合、除去されたナイーブのアミノ酸配列または出発アミノ酸配列において１つ以上のアミノ酸を有するものである。通常、欠失バリアントは、分子の特定の領域において１つ以上のアミノ酸が欠失することになっている。
【０１７５】
インタクト：本明細書で使用する場合、ポリペプチドにおいて、「インタクト」という用語は、野生型タンパク質に対応するアミノ酸を保有していること、例えば、野生型アミノ酸を変異させていないことまたは置換していないことを意味する。逆に、核酸において、「インタクト」という用語は、野生型核酸に対応する核酸塩基を保有していること、例えば、野生型核酸塩基を変異させていないことまたは置換していないことを意味する。
【０１７６】
イオン性アミノ脂質：「イオン化可能なアミノ脂質」という用語は、１、２、３、またはそれ以上の脂肪酸または脂肪アルキル鎖及びｐＨ滴定可能なアミノ頭部基（例えば、アルキルアミノ頭部基またはジアルキルアミノ頭部基）を有するアミノ脂質を含む。イオン化可能なアミノ脂質は、アミノ頭部基のｐＫａを下回るｐＨで典型的にプロトン化し（すなわち、正に帯電し）、ｐＫａを上回るｐＨで実質的に帯電されない。このようなイオン性アミノ脂質は、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ（ＭＣ３）及び（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）を含むが、これらに限定されない。
【０１７７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用する場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」という用語は、生体（例えば、動物、植物、または微生物）内よりもむしろ人工環境において、例えば、試験管または反応容器の中で、細胞培養において、ペトリ皿の中などで生じる事象をいう。
【０１７８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、生体（例えば、動物、植物、もしくは微生物またはこれらの細胞もしくは組織）内で生じる事象をいう。
【０１７９】
単離された：本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、物質または実体が（天然であろうと実験設定においてであろうと）会合していた複数の成分の少なくともいくつかから分離された物質または実体をいう。単離された物質（例えば、ヌクレオチド配列またはタンパク質配列）は、単離前に結合していた物質に関して純度レベルを変化させることができる。単離した物質及び／または実体は、初めは結合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上から分離することができる。いくつかの実施形態において、単離された作用剤は、約８０％超、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超純粋である。本明細書で使用する場合、物質は、他の成分が実質的に含まれていない場合、「純粋」である。「実質的に単離された」という用語は、化合物が形成または検出された環境から実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離は、例えば、本開示の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、本開示の化合物またはその塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％を含有する組成物を含むことができる。
【０１８０】
「単離され」ている本明細書に開示されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、細胞、または何らかの組成物とは、天然では認められない形態にあるポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、細胞、または組成物である。単離されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、または組成物は、天然で認められる形態ではもはやない程度まで精製されたものを含む。いくつかの態様において、単離されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、または組成物は、実質的に純粋である。
【０１８１】
異性体：本明細書で使用する場合、「異性体」という用語は、本開示の何らかの化合物の何らかの互変異性体、立体異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示の化合物が、１つ以上のキラル中心及び／または二重結合を有することができ、それゆえ、二重結合異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）またはジアステレオマー（例えば、鏡像異性体（すなわち、（＋）または（−））またはｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体）などの立体異性体として存在することができることは認識されている。本開示によると、本明細書で示されるキラル構造、及びそれゆえ、本開示の化合物は、対応する立体異性体をすべて、すなわち、立体異性体として純粋な形態（例えば、幾何異性体として純粋、鏡像異性体として純粋、またはジアステレオマーとして純粋）と鏡像異性混合物及び立体異性混合物、例えば、ラセミ化合物とをいずれも包含する。本開示の化合物の鏡像異性体混合物及び立体異性体混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、当該化合物をキラル塩複合体として結晶化すること、またはキラル溶媒中で当該化合物を結晶化することなどの周知の方法によって、当該混合物の成分の鏡像異性体または立体異性体へと典型的に分解することができる。鏡像異性体及び立体異性体は、周知の不斉合成法によって立体異性体としてまたは鏡像異性体として純粋な中間体、試薬、及び触媒から得ることもできる。
【０１８２】
リンカー：本明細書で使用する場合、「リンカー」は、原子、例えば、１０〜１，０００個の原子からなる基をいい、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどだがこれらに限定されない原子または基から構成することができる。リンカーは、第一の端部にある修飾された核酸塩基または糖部分の上にあるヌクレオシドまたはヌクレオチドへ、及び第２の端部にあるペイロード、例えば、検出可能な作用剤、または治療剤へ結合することができる。リンカーは、核酸配列への組込みに干渉しないのに十分な長さであり得る。リンカーは、本明細書で説明するように、ポリヌクレオチド多量体（例えば、２つ以上のキメラポリヌクレオチド分子またはＩＶＴポリヌクレオチドの結合を通じて）またはポリヌクレオチドコンジュゲートを形成する及びペイロードを投与するなどのために、何らかの有用な目的に使用することができる。リンカーへ組み込むことができる化学基の例としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリルが挙げられるが、これらに限定されず、これらの各々は、本明細書で説明されるように、任意選択で置換することができる。リンカーの例としては、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレンまたはプロピレングリコール単量体単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール）、ならびにデキストランポリマー及びこれらの誘導体が挙げられるが、それらに限定されない。他の例としては、還元剤または光分解を用いて開裂することができる、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）またはアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）など、リンカー内の開裂可能な部分が挙げられるが、これらに限定されない。選択的に開裂可能な結合の非限定的な例としては、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、もしくは他の還元剤及び／または光分解の使用によって開裂することができ、ならびにエステル結合は、例えば、酸性または塩基性の加水分解によって開裂することができる。
【０１８３】
投与方法：本明細書で使用する場合、「投与方法」は、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、または組成物を対象へ送達する他の方法を含み得る。投与方法は、身体の特定の領域または系への送達を標的とするために（例えば、特異的に送達するために）選択され得る。
【０１８４】
修飾された：本明細書で使用する場合、「修飾された」は、本開示の分子の変化した状態または構造をいう。分子は、化学的、構造的、および機能的方法を含む多くの方法で修飾することができる。いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡ分子は、例えば、天然のリボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関する場合、非天然のヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。キャップ構造などの非参照ヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるが、「修飾された」とみなされない。
【０１８５】
ナノ粒子組成物：本明細書で使用する場合、「ナノ粒子組成物」とは、１つ以上の脂質を含む組成物である。ナノ粒子組成物は典型的には、マイクロメートル以下の桁の大きさであり、脂質二分子膜を含み得る。ナノ粒子組成物は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム（例えば、脂質小胞）、及びリポプレックスを包含する。例えば、ナノ粒子組成物は、直径が５００ｎｍ以下の脂質二分子膜を有するリポソームであり得る。
【０１８６】
天然に存在する：本明細書で使用する場合、「天然に存在する」は、人工的な助剤を有することなく天然に存在することを意味する。
【０１８７】
非ヒト脊椎動物：本明細書で使用する場合、「非ヒト脊椎動物」は、野生型及び家畜種を含む、ホモ・サピエンス以外の脊椎動物をすべて含む。非ヒト脊椎動物の例としては、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、及びヤクなどの哺乳類が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８８】
核酸配列：「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」という用語は、相互交換可能に使用され、連続的な核酸配列を指す。この配列は、一本鎖または二本鎖のいずれかのＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡであり得る。
【０１８９】
「核酸」という用語は、その最も広範な意味において、ヌクレオチドのポリマーを含む何らかの化合物及び／または物質を含む。これらのポリマーはしばしば、ポリヌクレオチドと呼ばれる。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ；β−Ｄ−リボ立体配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ立体配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）またはこれらのハイブリッドもしくは組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９０】
「をコードするヌクレオチド配列」という語句は、ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子）を指す。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳類の細胞において発現を方向付けることができるプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントへ作動可能に連結された開始シグナル及び終止シグナルをさらに含むことができる。コード配列は、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含むことができる。
【０１９１】
オフターゲット：本明細書で使用する場合、「オフターゲット」は、何らかの１つ以上の標的、遺伝子、または細胞転写産物に及ぼす何らかの意図せぬ効果を指す。
【０１９２】
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」は、所与のリーディングフレームにおいて停止コドンを含有しない配列を指す。
【０１９３】
作用可能に連結された：本明細書で使用する場合、「作用可能に連結された」という句は、２つ以上の分子、コンストラクト、転写産物、実体、部分などの間の機能的な接続をいう。
【０１９４】
任意選択で置換された：本明細書では、「任意選択で置換されたＸ」（例えば、任意選択で置換されたアルキル）という形態の語句は、「Ｘであって、任意選択で置換されたＸ」（例えば、「アルキルであって、任意選択で置換されたアルキル」）と等価であることが意図されている。「Ｘ」（例えば、アルキル）の特徴はそれ自体、任意選択であることを意味するよう意図するものではない。
【０１９５】
部分：本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドの「部分」または「領域」は、ポリヌクレオチドの完全長よりも短いポリヌクレオチドの何らかの部分として定義される。
【０１９６】
患者：本明細書で使用する場合、「患者」は、特定の疾患または状態について治療を探索し得るまたは治療の必要性があり得る、治療を必要とする、治療を受けている、治療を受けようとしている、または訓練された専門家によるケアのもとにある対象を指す。
【０１９７】
医薬として許容され得る：「医薬として許容され得る」という語句は、正確な医学的判断の範囲内であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症と有さないヒト及び動物の組織との接触での使用に適した、妥当な利益／危険比と釣り合った、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で採用される。
【０１９８】
医薬として許容され得る賦形剤：「医薬として許容され得る賦形剤」という語句は、本明細書で使用する場合、本明細書に記載される化合物以外の、ならびに患者において実質的に非毒性及び非炎症性である特性を有する、何らかの成分（例えば、活性のある化合物を懸濁または溶解することができるビヒクル）を指す。賦形剤には、例えば、以下を含むことができる：付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング、圧縮助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、皮膚軟化薬、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤もしくはフィルムコーティング剤、着香料、香料、滑剤（流動亢進剤）、潤滑剤、保存剤、プリントインク、溶剤、懸濁剤もしくは分散剤、甘味料、及び水和の水。例示的な賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋型ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、α化デンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミタート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリコール酸デンプンナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９９】
医薬として許容され得る塩：本開示は、本明細書で記載される化合物の医薬として許容され得る塩も含む。本明細書で使用する場合、「医薬として許容され得る塩」は、親化合物が既存の酸または塩基の部分をその塩形態へ転換することによって（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって）修飾された、開示された化合物の誘導体を指す。医薬として許容され得る塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などが挙げられるが、それらに限定されない。代表的な酸付加塩は、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミスルファート、へプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などを含む。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがそれらに限定されない非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオンを含む。本開示の医薬として許容され得る塩は、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性塩を含む。本開示の医薬として許容され得る塩は、従来の化学法によって、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。概して、このような塩は、水中でまたは有機溶媒中で、またはこれら２つの混合物中で、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基の形態を化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができ、概して、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が使用される。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８，及びＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１−１９（１９７７）において見つかり、これらは各々、その全体が参照により本明細書で援用される。
【０２００】
医薬として許容され得る溶媒和物：「医薬として許容され得る溶媒和物」という用語は、本明細書で使用する場合、適切な溶媒の分子が結晶格子の中に組み込まれた、本開示の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与される用量で生理学的に耐容され得る。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、またはこれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶、または沈殿によって調製することができる。適切な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一水和物、二水和物、及び三水和物）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−ピロリドン、安息香酸ベンジルなどである。水が溶媒であるとき、この溶媒和物は、「水和物」と呼ばれる。
【０２０１】
薬物動態：本明細書で使用する場合、「薬物動態」は、生体へ投与した物質の運命の決定に関する場合の分子または化合物の何らかの１つ以上の特性をいう。薬物動態は、吸収、分配、代謝及び排泄の程度及び速度を含むいくつかの領域へと分けられる。このことは通常、ＡＤＭＥと呼ばれる。（Ａ）吸収は、血液循環に入る物質のプロセスであり、（Ｄ）分配は、身体の流体及び組織のいたるところでの物質の分散または内転移であり、（Ｍ）代謝（または生体形質転換）は、親化合物から娘代謝産物への不可逆的形質転換であり、ならびに（Ｅ）排泄（または除去）は、身体からの物質の除去を指す。まれな場合、いくつかの薬剤は、身体組織中に不可逆的に蓄積する。
【０２０２】
物理化学的：本明細書で使用する場合、物理的特性及び／または化学的特性の、または当該特性に関する、「物理化学的」手段である。
【０２０３】
ポリヌクレオチド：本明細書で使用する場合の「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、これらの類似体、またはそれらの混合物を含む何らかの長さのヌクレオチドのポリマーを指す。当該用語は、当該分子の一次構造を指す。したがって、当該用語は、三本鎖、二本鎖及び一本鎖のデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖及び一本鎖のリボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。当該用語は、例えば、ポリヌクレオチドのアルキル化によって、及び／またはキャッピングによって修飾された形態、ならびに未修飾形態も含む。より詳しくは、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有する）、スプライシングしていようとしていまいとにかかわらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含むポリリボヌクレオチド（Ｄ−リボースを含有する）、プリン塩基またはピリミジン塩基のＮ−グリコシドまたはＣ−グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、ならびにノルムクレオチド主鎖（ｎｏｒｍｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ  ｂａｃｋｂｏｎｅ）を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびに他の合成配列特異的核酸ポリマーを含み、ただし、ポリマーが、ＤＮＡ及びＲＮＡにおいて認められるような、塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする立体配置において核酸塩基を含有することを条件とする。特定の態様において、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。他の態様において、ｍＲＮＡは合成ｍＲＮＡである。いくつかの態様において、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様において、ある特定のクラスの核酸塩基はすべて、非天然核酸塩基と置き換えられている（例えば、本明細書で開示されるポリヌクレオチドにおけるウリジンはすべて、非天然核酸塩基、例えば、５−メトキシウリジンと置き換えることができる）。いくつかの態様において、ポリヌクレオチド（例えば、合成ＲＮＡまたは合成ＤＮＡ）は、天然核酸塩基のみを含み、すなわち、合成ＤＮＡの場合にはＡ、Ｃ、Ｔ及びＵ、または合成ＲＮＡの場合にはＡ、Ｃ、Ｔ、及びＵである。
【０２０４】
当業者は、本明細書で開示されたコドンマップにおけるＴ塩基がＤＮＡ中に存在するが、Ｔ塩基が対応するＲＮＡにおけるＵ塩基によって置き換えられるであろうことを理解するであろう。例えば、ＤＮＡ形態、例えば、ベクターまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで翻訳（ＩＶＴ）テンプレートにおけるコドン−ヌクレオチド配列は、対応する転写されたｍＲＮＡにおいて基づいたＵとして転写されたそのＴ塩基を有するであろう。この点において、コドン最適化されたＤＮＡ配列（Ｔを含んでいる）及びその対応するＲＮＡ配列（Ｕを含んでいる）はいずれも、本開示のコドン最適化されたヌクレオチド配列とみなされる。当業者は、等価のコドンマップが、非天然塩基と置き換えられた１つ以上の塩基によって生じ得ることも理解するであろう。したがって、ＴＴＣコドン（ＤＮＡマップ）は、ＵＵＣコドン（ＲＮＡマップ）に対応するであろうし、これが順に、ΨΨＣコドン（Ｕがシュードウリジンと置き換えられたＲＮＡマップ）に対応するであろう。
【０２０５】
標準的なＡ−Ｔ及びＧ−Ｃ塩基対は、チミジンのＮ３−Ｈ及びＣ４−オキシとアデノシンのそれぞれＮ１及びＣ６−ＮＨ２との間に、ならびにシチジンのＣ２−オキシ、Ｎ３及びＣ４−ＮＨ２とグアノシンのそれぞれＣ２−ＮＨ２、Ｎ’−Ｈ及びＣ６−オキシとの間に水素結合の形成を可能にする条件下で形成する。したがって、例えば、グアノシン（２−アミノ−６−オキシ−９−β−Ｄ−リボフラノシル−プリン）は、イソグアノシン（２−オキシ−６−アミノ−９−β−Ｄ−リボフラノシル−プリン）を形成するために修飾することができる。このような修飾は結果として、ヌクレオシド塩基を生じ、このヌクレオシド塩基はもはや、シトシンとの標準的な塩基対を有効に形成しないことになっている。しかしながら、イソシトシン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−２−アミノ−４−オキシ−ピリミジン−）を形成するためのシトシン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−２−オキシ−４−アミノ−ピリミジン）の修飾は結果として、修飾ヌクレオチドを生じ、このヌクレオチドは、グアノシンと有効に塩基対形成しないことになっているが、イソグアノシンとの塩基対形成を形成することになっている（Ｃｏｌｌｉｎｓらに対する米国特許第５，６８１，７０２号）。イソシトシンは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）から入手可能であり、イソシチジンは、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２：１０４８９−１０４９６及びそこで引用されている参考文献によって説明される方法によって調製することができ、２’−デオキシ−５−メチル−イソシチジンは、Ｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：４４６１−４４６７の方法及びそこで引用されている参考文献によって調製することができ、イソグアニンヌクレオチドは、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，上述、及びＭａｎｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５９３−５６０１によって説明される方法を用いて、またはＣｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第５，７８０，６１０号において説明される方法によって調製することができる。他の非天然塩基対は、２，６−ジアミノピリミジン及びその相補体（１−メチルピラゾロ−［４，３］ピリミジン−５，７−（４Ｈ，６Ｈ）−ジオンの合成については、Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４３：３３−３７において説明される方法によって合成することができる。独特な塩基対を形成する他のこのような修飾ヌクレオチド単位は、Ｌｅａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：３６７５−３６８３及びＳｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，上述において説明されているものなどが公知である。
【０２０６】
核酸配列：「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」という用語は、相互交換可能に使用され、連続的な核酸配列を指す。この配列は、一本鎖または二本鎖のいずれかのＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡであり得る。
【０２０７】
「をコードするヌクレオチド配列」という語句及びそのバリアントは、本明細書に記載されるポリペプチドまたはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、ｍＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子）コード配列をいう。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳類の細胞において発現を方向付けることができるプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントへ作動可能に連結された開始シグナル及び終止シグナルをさらに含むことができる。コード配列は、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含むことができる。
【０２０８】
ポリペプチド：「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、何らかの長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書で相互交換可能に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含むことができる。当該用語は、天然にまたは介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなど、その他の操作もしくは修飾によって修飾アミノ酸ポリマーも包含する。また、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ−アセチルフェニルアラニン、Ｄ−アミノ酸及びクレアチンなどの非天然アミノ酸を含む）ならびに当該技術分野において既知である他の修飾物を含むポリペプチドも本定義内に含まれる。
【０２０９】
当該用語は、本明細書で使用する場合、何らかの大きさ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドをいう。ポリペプチドは、遺伝子産物、天然に存在ポリペプチド、合成ポリペプチド、相同体、相同分子種、パラログ、断片、ならびにこれらの他の等価物、上記のバリアント、及び類似体を含む。ポリペプチドは、単一のポリペプチドであり得、または二量体、三量体もしくは四量体などの多分子複合体であり得る。ポリペプチドは、一本鎖または多重鎖のポリペプチドも含むことができる。最も一般的には、ジスルフィド結合は、多重鎖ポリペプチドにおいて認められる。ポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然のアミノ酸の人工化学類似体であるアミノ酸ポリマーへも適用することができる。いくつかの実施形態において、「ペプチド」は、５０個以下のアミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。
【０２１０】
ポリペプチドバリアント：本明細書で使用する場合、「ポリペプチドバリアント」という用語は、アミノ酸配列が天然の配列または参照配列とは異なる分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、天然の配列または参照配列と比較してアミノ酸配列内のある特定の位置に置換、欠失、及び／または挿入を有することができる。通常、バリアントは、天然の配列または参照配列に対して少なくとも約５０％の同一性、少なくとも約６０％の同一性、少なくとも約７０％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、少なくとも約９５％の同一性、少なくとも約９９％の同一性を有することになっている。いくつかの実施形態において、バリアントは、天然の配列または参照配列と少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％同一であることになっている。
【０２１１】
単位薬剤当たりのポリペプチド（ＰＵＤ）：本明細書で使用する場合、ＰＵＤまたは単位薬剤当たりの生成物は、合計日用量を細分した部分として定義され、体液または身体組織において測定されるような生成物（ポリペプチドなど）の通常１ｍｇ、ｐｇ、ｋｇなどであり、通常、体液中での基準によって除されたｐｍｏｌ／ｍＬ、ｍｍｏｌ／ｍＬなどの濃度において定義される。
【０２１２】
予防すること：本明細書で使用する場合、「予防すること」という用語は、感染、疾患、障害及び／または状態の発症を部分的にまたは完全に遅延させること、特定の感染、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床症状の発症を部分的にまたは完全に遅延させること、感染、特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的にまたは完全に遅延させること、及び／または感染、疾患、障害、及び／または状態と関係した病理学的性質を発症させる危険性を低下させることを指す。
【０２１３】
プロドラッグ：本開示は、本明細書に記載される化合物のプロドラッグも含む。本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」は、物質、分子または実体が化学的または物理的変化に応じて治療薬として作用すると断定する形態にある何らかの物質、分子または実体を指す。プロドラッグは、哺乳類対象へ投与される前、投与される際または投与された後に、活性薬部分を放出するまたは活性薬部分へと転換される何らかの方法で共有結合し得または隔離され得る。プロドラッグは、修飾が親化合物に対して通例の操作においてまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのいずれかで開裂するような方法で、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。プロドラッグは、哺乳類対象へ投与したときにヒドロキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基、またはカルボキシル基がそれぞれ遊離のヒドロキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基、またはカルボキシル基を形成するよう切断させる何らかの基へ結合した化合物を含む。プロドラッグの調製及び使用は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”  Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓにおいて、及びＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７において考察されており、これらはいずれも、それらの全体が参照により本明細書により援用される。
【０２１４】
増殖する：本明細書で使用する場合、「増殖する」という用語は、成長、増大もしくは増加すること、または迅速に成長、増大もしくは増加する原因となることを意味する。「増殖性」は、増殖する能力を有することを意味する。「抗増殖性」は、増殖特性に対抗するまたは不適切な特性を有することを意味する。
【０２１５】
予防的：本明細書で使用する場合、「予防的」は、疾患の拡散を予防するのに使用される治療薬または作用コースを指す。
【０２１６】
予防：本明細書で使用する場合、「予防」は、健康を維持し及び疾患の拡散を予防するために採られる手段を指す。「免疫予防」は、疾患の拡散を予防するために能動免疫または受動免疫を生じる手段を指す。
【０２１７】
タンパク質切断部位：本明細書で使用する場合、「タンパク質切断部位」は、アミノ酸鎖の制御された切断が、化学的手段、酵素による手段、または光化学的手段によって達成することができる部位を指す。
【０２１８】
タンパク質切断シグナル：本明細書で使用する場合、「タンパク質切断シグナル」は、切断のためにポリペプチドをフラッグ付けまたは標識する少なくとも１つのアミノ酸をいう。
【０２１９】
目的のタンパク質：本明細書で使用する場合、「目的のタンパク質」または「所望のタンパク質」という用語は、本明細書に提供されるもの、ならびにこれらの断片、変異体、バリアント、及び変化物を含む。
【０２２０】
近位の：本明細書で使用する場合、「近位の」という用語は、中心よりもまたは目的の地点もしくは領域よりもより近くに配置されていることを意味する。
【０２２１】
シュードウリジン：本明細書で使用する場合、シュードウリジンは、ヌクレオシドウリジンのＣ−グリコシド異性体を指す。「シュードウリジン類似体」とは、シュードウリジンの何らかの修飾物、バリアント、アイソフォームまたは誘導体である。例えば、シュードウリジン類似体には、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、１−メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３Ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３Ψ）、及び２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（Ψｍ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２２】
精製された：本明細書で使用する場合、「精製する」、「精製された」、「精製」は、望ましくない成分、材料汚染、混合材または不完全物から実質的に純粋または清澄にすることを意味する。
【０２２３】
参照核酸配列：「参照核酸配列」または「参照核酸」または「参照ヌクレオチド配列」または「参照配列」という用語は、配列が最適化されて得る出発核酸配列（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ配列）を指す。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、野生型核酸配列、その断片またはバリアントである。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、あらかじめ配列が最適化された核酸配列である。
【０２２４】
反復トランスフェクション：本明細書で使用する場合、「反復されたトランスフェクション」という用語は、同じ細胞培養物にポリヌクレオチドを複数回用いたトランスフェクションをいう。細胞培養物は、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、少なくとも１６回、少なくとも１７回、少なくとも１８回、少なくとも１９回、少なくとも２０回、少なくとも２５回、少なくとも３０回、少なくとも３５回、少なくとも４０回、少なくとも４５回、少なくとも５０回またはそれより多数回トランスフェクトすることができる。
【０２２５】
塩：いくつかの態様において、本明細書に開示される腫瘍内送達のための医薬組成物は、その脂質構成要素のいくつかの塩を含む。「塩」という用語は、何らかのアニオン性及びカチオン性の複合体を含む。アニオンの非限定的な例としては、無機及び有機アニオン、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、シュウ酸塩（例えば、ヘミシュウ酸塩）、リン酸塩、ホスホン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、酸化物塩、炭酸塩、重炭酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、窒化物、亜硝酸水素塩、硫化物、亜硫酸塩、重硫酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、アクリル酸塩、ポリアクリル酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、イタコン酸塩、グリコール酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、チグリン酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩、ポリメタクリル酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、臭素酸塩、次亜臭素酸塩、ヨウ素酸塩、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、ヒ酸塩、亜ヒ酸塩、クロム酸塩、二クロム酸塩、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩、水酸化物、過酸化物、過マンガン酸塩、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０２２６】
試料：本明細書で使用する場合、「試料」または「生物学的試料」という用語は、その組織、細胞または成分（例えば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、臍帯血、尿、膣液及び精液）の部分集合を指す。試料はさらに、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚、気管、腸管、及び尿生殖路の外面切片、涙、唾液、母乳、血球、腫瘍、器官を含むがこれらに限定されない生体全体またはその組織、細胞もしくは成分、あるいはこれらの画分または部分から調製されたホモジェネート、溶解物または抽出物を含むことができる。試料はさらに、タンパク質または核酸分子などの細胞成分を含有し得る栄養ブロスまたはゲルなどの培地を指す。
【０２２７】
シグナル配列：本明細書で使用する場合、「シグナル配列」、「シグナルペプチド」、及び「トランジットペプチド」という語句は、相互交換可能に使用され、ある特定の小器官、細胞区画、または細胞外輸送に対するタンパク質の輸送または局在を向かわせる配列を指す。この用語は、シグナル配列ポリペプチド及びシグナル配列をコードする核酸配列のいずれも包含する。したがって、核酸においてシグナル配列への参照は実際、シグナル配列ポリペプチドをコードする核酸配列を指す。
【０２２８】
シグナル伝達経路：「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達における役割を担っている種々のシグナル伝達分子間の生化学的関連性を指す。本明細書で使用する場合、「細胞表面受容体」という語句は、例えば、シグナル及び細胞の形質膜を横切るこのようなシグナルの伝達を受信することができる分子及び分子の複合体を含む。
【０２２９】
類似性：本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間の、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。互いに対する複数のポリマー分子の類似性百分率の計算は、同一性百分率の計算と同じ様式で実行することができるが、例外は、類似性百分率の計算が、当該技術分野において理解されているような保存的置換を考慮に入れることである。
【０２３０】
特異的送達：本明細書で使用する場合、「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、オフターゲット組織（例えば、哺乳類の脾臓）と比較して目的の標的組織（例えば、哺乳類の肝臓）への、ナノ粒子によるポリヌクレオチドのより多く（例えば、少なくとも１．５倍超、少なくとも２倍超、少なくとも３倍超、少なくとも４倍超、少なくとも５倍超、少なくとも６倍超、少なくとも７倍超、少なくとも８倍超、少なくとも９倍超、少なくとも１０倍超）の送達を意味する。特定の組織へのナノ粒子の送達レベルは、組織において生成されたタンパク質の量を当該組織の重量と比較すること、組織におけるポリヌクレオチドの量を当該組織の重量と比較すること、組織において産生されるタンパク質の量を当該組織の総ポリヌクレオチドの重量と比較すること、または組織におけるポリヌクレオチドの量を当該組織における全ポリヌクレオチドの重量と比較することによって測定され得る。例えば、腎血管性標的化のために、組織１ｇ当たり１．５、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍以上のポリヌクレオチドがこのポリヌクレオチドの全身投与後に哺乳類の肝臓または脾臓へ送達されるものと比較して腎臓へ送達される場合、ポリヌクレオチドは、肝臓及び脾臓と比較して腎臓へ特異的に提供される。標的組織へ特異的に送達するナノ粒子の能力が治療されている対象において測定される必要がなく、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代用物において測定され得ることは、理解されるだろう。
【０２３１】
安定した：本明細書で使用する場合、「安定した」は、反応混合物からの有用な純度まで単離物を存続させるのに十分に堅牢であり、いくつかの場合において、効能のある治療剤へと製剤化することができる化合物を指す。
【０２３２】
安定化した：本明細書で使用する場合、「安定化する」、「安定化した」、「安定化した領域」という用語は、安定にさせるまたは安定となることを意味する。
【０２３３】
立体異性体：本明細書で使用する場合、「立体異性体」という用語は、化合物（例えば、本明細書に記載する何らかの式の化合物）が特に基本的な分子構造に関して考えられ得る立体化学的に及び立体配座上異性体の形態全部、ジアステレオマー、鏡像異性体及び／または配座異性体全部を有し得る、考えられ得る異なる異性形態及び立体配座形態をすべていう。本開示のいくつかの化合物は、異なる互変異性形態で存在し得、後者はすべて、本開示の範囲内に含まれる。
【０２３４】
対象：「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳類」によって意味されるのは、診断、予後、または療法が所望である何らかの対象、特に哺乳類対象である。哺乳類対象は、ヒト、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛などの家畜、農場飼育動物、動物園展示動物、競技用動物、ペット動物；類人猿、サル、オランウータン、及びチンパンジーなどの霊長類；イヌ及びオオカミなどのイヌ科；ネコ、ライオン、及びトラなどのネコ科；ウマ、ロバ、及びシマウマなどのウマ科；クマ、乳牛、ブタ、及びヒツジなどの食品動物；シカ及びキリンなどの有蹄類；マウス、ラット、ハムスター及びモルモットなどの齧歯類；ならびにその他を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、哺乳類は、ヒト対象である。他の実施形態において、対象は、ヒト患者である。特定の実施形態において、対象は、がんの治療を必要とするヒト患者である。
【０２３５】
実質的に：本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴または特性の全部またはほぼ全部の程度または度合いを呈する定性的な条件を指す。生物分野の当業者は、生物学的及び化学的現象が、たとえあったとしても、完了へ向かっている及び／または完了へ進んでいるまたは絶対的な結果に達するもしくはこれを回避することがまれであることを理解するだろう。「実質的に」という用語はそれゆえ、多くの生物学的及び化学的現象において固有の完了性を欠く可能性を捕捉するために、本明細書において使用される。
【０２３６】
実質的に等しい：投薬間の時間差に関する場合に本明細書で使用する場合、この用語は、プラス／マイナス２％を意味する。
【０２３７】
実質的に同時の：本明細書で使用する場合及び複数の投与に関する場合、この用語は、２秒以内を意味する。
【０２３８】
に罹患している：疾患、障害、及び／または状態「に罹患している」個体は、その疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状で診断されまたはこれらの症状を示している。
【０２３９】
に感染しやすい：疾患、障害、及び／または状態「に感染しやすい」個体は、この疾患、障害、及び／または状態の症状で診断されていない及び／またはこれらの症状を呈し得ないが、疾患またはその症状を発症する傾向を有する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または状態（例えば、がん）に感染しやすい個体は、次の１つ以上を特徴とすることができる：（１）疾患、障害、及び／または状態の発症と関係する遺伝的変異、（２）疾患、障害、及び／または状態の発症と関係する遺伝的多形、（３）疾患、障害、及び／または状態の発症と関係するタンパク質及び／または核酸の発現及び／または活性の上昇及び／または低下、（４）疾患、障害、及び／または状態の発症と関係する習慣及び／または生活様式、（５）疾患、障害、及び／または状態の家族歴、ならびに（６）疾患、障害、及び／または状態の発症と関係する微生物への曝露及び／またはこの微生物による感染。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または状態に感染しやすい個体は、この疾患、障害、及び／または状態を発症するだろう。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または状態に感染しやすい個体は、この疾患、障害、及び／または状態を発症しないだろう。
【０２４０】
持続性放出：本明細書で使用する場合、「持続性放出」という用語は、特定の時間にわたる放出速度により挙動する医薬組成物または化合物の放出特性を指す。
【０２４１】
合成の：「合成の」という用語は、人為的に生成、調製、及び／または製造されていることを意味する。本開示のポリヌクレオチドまたは他の分子の合成は、化学的または酵素により得る。
【０２４２】
標的とされる細胞：本明細書で使用する場合、「標的とされる細胞」は、目的の何らかの１つ以上の細胞を指す。この細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕで、または生体の組織もしくは器官において認められ得る。この生体は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒト及び最も好ましくは患者であり得る。
【０２４３】
標的組織：本明細書で使用する場合、「標的組織」は、ポリヌクレオチドの送達が結果として所望の生物学的及び／または薬理学的効果を生じるであろう、目的の何らかの１つ以上の組織タイプを指す。目的の標的組織の例としては、特異的な組織、器官、及び系またはその群が挙げられる。特定の適用において、標的組織は、腎臓、肺、脾臓、血管における血管内皮（例えば、冠状内または大腿内）、または腫瘍組織（例えば、腫瘍内注射を介する）であり得る。「オフターゲット組織」は、コードされたタンパク質の発現が、所望の生物学的及び／または薬理学的効果を結果として生じない何らかの１つ以上の組織タイプを指す。特定の適用において、オフターゲット組織は、肝臓及び膵臓を含み得る。
【０２４４】
標的とされる配列：本明細書で使用する場合、「標的とされる配列」という語句は、タンパク質またはポリペプチドの輸送または局在を方向付けることができる配列を指す。
【０２４５】
末端：本明細書で使用する場合、「末端（複数可）」という用語は、ポリペプチドに関する場合、ペプチドまたはポリペプチドの端部を指す。このような端部は、ペプチドまたはポリペプチドの最初または最後の部位のみに限定されるわけではなく、末端の領域における追加のアミノ酸を含むことができる。本開示のポリペプチド系分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸によって終止）及びＣ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸によって終止）をともに有することを特徴とすることができる。本開示のタンパク質は、いくつかの場合、ジスルフィド結合によってまたは非共有結合力（多量体、オリゴマー）によって一緒に生じる多重ポリペプチド鎖でできている。これらの種類のタンパク質は、Ｎ末端及びＣ末端を複数有することになっている。あるいは、ポリペプチドの末端は、場合により、有機コンジュゲートなどの非ポリペプチド系部分で始まりまたは終止するように修飾することができる。
【０２４６】
治療剤：「治療剤」という用語は、対象へ投与したときに、治療効果、診断効果、及び／または予防効果を有する、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する作用剤をいう。例えば、いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、治療剤であり得る。
【０２４７】
治療有効量：本明細書で使用する場合、「治療有効量」は、感染、疾患、障害、及び／または状態に罹患しているまたは感染しやすい対象へ投与したときに、感染、疾患、障害、及び／または状態の症状を治療、改善し、感染、疾患、障害、及び／または状態の発症を予防及び／または遅延させるのに十分である、送達される作用剤（例えば、核酸、薬物、治療剤、診断薬、予防薬など）の量を意味する。
【０２４８】
治療有効結果：本明細書で使用する場合、「治療有効結果」という用語は、感染、疾患、障害、及び／または状態に罹患しているまたは感染しやすい対象において、感染、疾患、障害、及び／または状態の症状を治療、改善し、及び／または感染、疾患、障害、及び／または状態の発症を予防及び／または遅延させるのに十分である結果を意味する。
【０２４９】
合計日用量：本明細書で使用する場合、「合計日用量」とは、２４時間に所与または処方された量である。合計日用量は、単一単位用量または分割用量として投与することができる。
【０２５０】
転写因子：本明細書で使用する場合、「転写因子」という用語は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写を、例えば、転写の活性化または抑制によって調節するＤＮＡ結合タンパク質を指す。いくつかの転写因子は転写のみの調節をもたらすが、その他は他のタンパク質と一緒に作用する。いくつかの転写因子は、ある特定の条件下での転写を活性化することも抑制することもできる。概して、転写因子は、標的遺伝子の調節領域における特定のコンセンサス配列と非常に類似した特定の１つのまたは複数の標的配列を結合する。転写因子は、標的遺伝子の転写を単独でまたは他の分子との複合体において調節し得る。
【０２５１】
転写：本明細書で使用する場合、「転写」という用語は、外来性核酸を細胞へと導入する方法を指す。トランスフェクション方法は、化学的方法、物理的処置、及びカチオン性脂質または混合物を含むが、これらに限定されない。
【０２５２】
トランスフェクション：本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」は、細胞へのポリヌクレオチドの導入を指し、このポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは発現し（例えば、ｍＲＮＡ）、またはこのポリペプチドは細胞の機能を調節する（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）。本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、ポリペプチドもしくはタンパク質へのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡの翻訳）及び／またはポリペプチドもしくはたんぱく質の翻訳後修飾を指す。
【０２５３】
治療すること、治療、療法：本明細書で使用する場合、「治療すること」または「治療」または「療法」という用語は、過剰増殖性疾患、例えば、がんの１つ以上の症状または特徴の発症を部分的にまたは完全に軽減させ、改良し、改善し、緩和し、遅延させる、進行を抑制する、重症度を低減させる、及び／または発生率を低減させることを指す。例えば、がんを「治療すること」は、腫瘍の生存、成長、及び／または伝播を阻害することを指すことができる。治療は、疾患、障害、及び／または状態の徴候を呈していない対象へ、及び／または疾患、障害、及び／または状態の早期の徴候のみを呈する対象へ、疾患、障害、及び／または状態と関係する病理学的性質を発症する危険性を低下させる目的のために投与することができる。
【０２５４】
腫瘍微小環境：本明細書で使用する場合、「腫瘍微小環境」は、浸潤免疫細胞及び／または炎症細胞、ならびに腫瘍内でのこのような細胞のタイプ（複数可）の有無に対する、腫瘍内細胞の組成を指す。１つの態様において、腫瘍微小環境とは、「炎症を起こした腫瘍微小環境」であり、腫瘍へと浸潤した免疫細胞及び／または炎症細胞の存在を指し、主要な細胞タイプは顆粒球である。別の態様において、腫瘍微小環境とは、「免疫抑制腫瘍微小環境」であり、腫瘍へと浸潤した免疫細胞及び／または炎症細胞の存在を指し、主要な細胞タイプは単球細胞及びマクロファージである。別の態様において、腫瘍微小環境とは、「免疫学的に欠乏している腫瘍微小環境」であり、免疫細胞及び／または炎症細胞の腫瘍への顕著な浸潤の欠如をいう。
【０２５５】
非修飾の：本明細書で使用する場合、「未修飾の」は、何らかの方法で変化する前の何らかの物質、化合物または分子を指す。未修飾は、生体分子の野生型または天然形態を指すことができるが、必ずしもそうではない。分子は、一連の修飾を受けることができ、それにより各修飾された分子は、その後の修飾について「非修飾の」出発分子として役に立つことができる。
【０２５６】
ウラシル：ウラシルとは、ＲＮＡの核酸における４つの核酸塩基の１つであり、Ｕという文字によって表される。ウラシルはリボース環へ、またはより具体的には、β−Ｎ１−グリコシド結合を介してリボフラノースへ結合して、ヌクレオシドウリジンを生じることができる。ヌクレオシドウリジンはまた、その核酸塩基の一文字表記、すなわちＵにより通常略記される。したがって、本開示において、ポリヌクレオチド配列におけるモノマーがＵである場合、このようなＵは、「ウラシル」または「ウリジン」と相互交換可能に示される。
【０２５７】
ウリジン含有量：「ウリジン含有量」または「ウラシル含有量」という用語は、相互交換可能であり、ある特定の核酸配列において存在するウラシルまたはウリジンの量を指す。ウリジン含有量またはウラシル含有量は、絶対値（配列中のウリジンまたはウラシルの総数）または相対的なもの（核酸配列における核酸塩基の総数に関するウリジンまたはウラシルの百分率）として表すことができる。
【０２５８】
ウリジン修飾した配列：「ウリジン修飾した配列」という用語は、候補核酸配列のウリジン含有量及び／またはウリジンパターンに関して、異なる全体のもしくは局所的なウリジン含有量（より多量のまたはより少量のウリジン含有量）を用いて、または異なるウリジンパターン（例えば、勾配分布またはクラスター形成）を用いて配列を最適化した核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）を指す。本開示において、「ウリジン修飾した配列」及び「ウラシル修飾した配列」という用語は、等価及び相互交換可能とみなされる。
【０２５９】
「高ウリジンコドン」は、２つまたは３つのウリジンを含むコドンとして定義され、「低ウリジンコドン」は、１つのウリジンを含むコドンとして定義され、「無ウリジンコドン」とは、いかなるウリジンも有しないコドンである。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、高ウリジンコドンを低ウリジンコドンでの置換、高ウリジンコドンを無ウリジンコドンでの置換、低ウリジンコドンを高ウリジンコドンでの置換、低ウリジンコドンを無ウリジンコドンでの置換、無ウリジンコドンを低ウリジンコドンでの置換、無ウリジンコドンを高ウリジンコドンでの置換、及びこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、高ウリジンコドンは、別の高ウリジンコドンと置き換えることができる。いくつかの実施形態において、低ウリジンコドンは、別の低ウリジンコドンと置き換えることができる。いくつかの実施形態において、無ウリジンコドンは、別の無ウリジンコドンと置き換えることができる。ウリジン修飾した配列は、ウリジンが豊富であり得るかまたはウリジンが希少であり得る。
【０２６０】
ウリジンが豊富な：本明細書で使用する場合、「ウリジンが豊富な」という用語及び文法上の変形は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に関して、配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）におけるウリジン含有量（絶対値でまたは百分率値として表される）の増加を指す。ウリジンを豊富にすることは、候補核酸配列におけるコドンを、ウリジン核酸塩基をほとんど含有していない同義のコドンで置換することによって行うことができる。ウリジンを豊富にすることは、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対する）または局所的（すなわち、候補核酸配列のサブ配列または領域に対する）であり得る。
【０２６１】
ウリジンが希少な：本明細書で使用する場合、「ウリジンが希少な」という用語及び文法上の変形は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に関して、配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）におけるウリジン含有量（絶対値でまたは百分率値として表される）の減少を指す。ウリジンを希少にすることは、候補核酸配列におけるコドンを、ウリジン核酸塩基をほとんど含有していない同義のコドンで置換することによって行うことができる。ウリジンを希少にすることは、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対する）または局所的（すなわち、候補核酸配列の部分配列または領域に対する）であり得る。
【０２６２】
バリアント：本開示において使用するバリアントという用語は、天然のバリアント（例えば、多形、アイソフォームなど）、及びナイーブの配列または出発配列（例えば、野生型配列）における少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、異なるアミノ酸配列が同じ位置のその場所に挿入された人工バリアントの両方をいう。これらのバリアントは、「置換バリアント」と説明することができる。置換は単一であり得、この場合、分子中のたった１つのアミノ酸が置換されており、または置換は複数であり得、この場合、２つ以上のアミノ酸が同じ分子において置換されている。アミノ酸が挿入されまたは欠失した場合、結果として生じるバリアントはそれぞれ、「挿入バリアント」または「欠失バリアント」であろう。
【０２６３】
ＩＩ．免疫調節ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組み合わせ
本開示は、がんの治療のための組成物（「本開示の組成物」）を提供する。１つの実施形態において、この組成物は、単一の製剤において、少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）または少なくとも３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、組成物の各々は、ＩＬ−２３をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマ（または、それに代わるものとして、ＩＬ−１８）をコードする第２のポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０Ｌをコードする第３のポリヌクレオチドから選択される。したがって、本開示は、例えば、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド（またはＩＬ−１８ポリペプチド）を含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドは、種々の組み合わせで使用される。１つの態様において、この組成物は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドを含む。「本開示のポリヌクレオチド」という用語は、本明細書に開示する第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドを指す。
【０２６４】
本明細書で使用する場合、「本開示の組み合わせ」という用語は、例えば、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｖ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の、組み合わせを含む。「本開示の組み合わせ」と用語は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドからなる物理的な組み合わせに限定されず、これらのポリヌクレオチドのあらゆるものの個別投与、同時投与または連続投与も包含することが理解される。
【０２６５】
それゆえ、別の実施形態において、本開示の組成物は、単一のポリペプチドであるＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８、またはＯＸ４０Ｌをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含むが、組成物の各々（例えば、ＩＬ−２３をコードする第１のポリヌクレオチドを含む組成物、ＩＬ−３６−ガンマまたはＩＬ−１８をコードする第２のポリヌクレオチドを含む組成物、及びＯＸ４０Ｌをコードする第３のポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される方法において併用することができる。
【０２６６】
当業者は、本開示の代替的な実施形態が、ポリヌクレオチド及び／またはタンパク質としてのＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８、及び／またはＯＸ４０の併用療法を含むことも認識するであろう。例えば、本開示は、（ｉ）ＩＬ−２３をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）及びＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８を含む第２のタンパク質、ＩＬ−２３を含む第１のタンパク質、及びＩＬ−３６ガンマ  ＩＬ−１８を含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）または（ｉｉｉ）ＩＬ−２３を含む第１のタンパク質及びＩＬ−３６ガンマもしくはＩＬ−１８を含む第２のタンパク質の、併用療法を包含する。同様に、本開示は、ＩＬ−２３ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、またはＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質か、ＩＬ−３６−ガンマポリヌクレオチドもしくはＩＬ−１８ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、またはＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質か、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質か、あるいはこれらの組み合わせかの、併用療法を包含する。
【０２６７】
ＩＬ−２３をコードするポリヌクレオチド
ＩＬ−２３は、先天免疫及び適応免疫において重要な役割を担っている炎症性サイトカインである。Ｃｒｏｘｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：２２６３−２２７３。ＩＬ−２３は、はじめにジスルフィド結合のｐ１９及びｐ４０サブユニットからなる６０ｋＤａのヘテロ二量体タンパク質として機能する。ＩＬ−２３は、炎症性サイトカインＩＬ−１２と構造的に及び機能的に類似している。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２と同じｐ４０サブユニットを含有するが、ＩＬ−１２のｐ３５サブユニットよりもむしろｐ１９を含む。Ｏｐｐｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：７１５−７２５。ｐ１９サブユニットの前駆形態（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＰ＿０５７６６８；ＮＭ＿０１６５８４；Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｑ９ＮＰＦ７；ＩＬ−２３Ａ及びＩＬ−２３サブユニットアルファともいう）は、１８９アミノ酸長であるが、その成熟形態は、１７０アミノ酸長である。ｐ４０サブユニットの前駆形態（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＭ＿００２１８７；Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ２９４６０；ＩＬ−１２Ｂ、ナチュラルキラー細胞刺激因子２及び細胞障害性リンパ球成熟因子２ともいう）は、３２８アミノ酸長であるが、その成熟形態は、３０６アミノ酸長である。
【０２６８】
樹状細胞及びマクロファージを含む多くの異なる免疫細胞は、抗原刺激の際にＩＬ−２３を産生する。ＩＬ−１２とＩＬ−２３の間にある１つの違いは、ＩＬ−１２がＴＨ１  Ｔ細胞集団の発生及び活性と関係しているのに対し、ＩＬ−２３がＴｈ１７  Ｔ細胞集団の発生及び活性と関係していることである。Ｖｉｇｎａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：７２２−７２８を参照されたい。
【０２６９】
いくつかの初期の研究は、抗腫瘍療法についてＩＬ−２３を関係があるとした（Ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５４４８−５４５４）が、より近年の研究は、ＩＬ−２３についての潜在的な腫瘍形成化促進機能を示している。例えば、Ｃｒｏｘｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：２２６３−２２７３．Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：２０７−２１２；Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：４６１−４６５；Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０７：８３２８−８３３３；Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７２：３９８７−３９９６を参照されたい。Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ（２００６）は、ヒト腫瘍におけるＩＬ−２３の増加を観察した。Ｎｇｉｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：５４８−５５５；Ｗｉｌｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３２：６４３−６４９；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０も参照されたい。例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（Ｓｕｐｐｌ．９２）：Ｓ８７−Ｓ９０は、ＩＬ−２３の発現亢進ががんにおける病原性機能を有していると教示している。ＩＬ−２３は、腫瘍の発生及び進行において原因となる役割を有しており、有害な予後結果及び転移性疾患への急速な進行と連関しており、このことは、ＩＬ−２３発現の阻害が療法に有用であり得、がん、特に大腸癌の予防となり得ることを示唆してきた。Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２１：７１９−２９は、ＩＬ−２３が腫瘍化、成長、及び転移を間接的にまたは直接的に促進することを教示しており、ＩＬ−２３発現の阻害が、がんの療法及び予防に使用することができたことを示している。
【０２７０】
本開示において使用する場合、「ＩＬ−２３ポリペプチド」という用語は、例えば、ＩＬ−２３のＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３のＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、またはＩＬ−１２ｐ４０サブユニットポリペプチド及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットポリペプチドを含む融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へと以下を含む：
（ａ）ＩＬ−１２ｐ４０シグナルペプチドを含むＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ペプチドリンカー、及び成熟ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、または
（ｂ）ＩＬ−２３ｐ１９シグナルペプチドを含むＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ペプチドリンカー、及び成熟ＩＬ−１２ｐ４０。
【０２７１】
一つの特定の態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１のヒトまたはマウスＩＬ−２３ポリペプチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になり（例えば、ＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−２３ｐ１９の前駆体または成熟体）、あるいはそれらに関する組み合わせである。一つの特定の態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、表１のＩＬ−２３をコードするポリヌクレオチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−２３アミノ酸配列または表１に列挙するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このＩＬ−２３ポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ−２３ポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、配列番号１、配列番号５または配列番号１４０と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、対応する野生型ＩＬ−２３ポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。別の特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、配列番号１、配列番号５または配列番号１４０から本質的になり、対応する野生型ＩＬ−２３ポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。
【０２７３】
他の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙されるアミノ酸配列、または１つ以上の保存的置換を有する配列番号１、５もしくは１４０に示されるアミノ酸配列を含み、この保存的置換は、ＩＬ−２３ポリペプチドの受容体へのＩＬ−２３ポリペプチドの結合活性に大きく影響せず、すなわち、ＩＬ−２３ポリペプチドは、置換後にＩＬ−２３受容体へ結合する。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、表１に列挙する核酸配列をコードするＩＬ−２３ポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１９、配列番号７１、配列番号１４１または配列番号１４２と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。別の特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１９、配列番号７１、配列番号１４１または配列番号１４２から本質的になる。ＩＬ−２３ポリペプチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１９、配列番号７１または配列番号１４１）が、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または配列番号１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０２７５】
ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
いくつかの態様において、第１のポリヌクレオチドは、ＩＬ−１２ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする。本開示において使用する場合、「ＩＬ−１２ポリペプチド」という用語は、例えば、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（すなわち、ＩＬ１２Ｂ）、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（すなわち、ＩＬ１２Ａａ）、またはＩＬ−１２ｐ４０サブユニットポリペプチド及びＩＬ−１２ｐ３５サブユニットポリペプチドを含む融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この融合タンパク質は、以下から選択されるＩＬ１２Ｂポリペプチド：
（ｉ）完全長のＩＬ１２Ｂポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ１２Ｂと同じ長さまたは本質的に同じ長さを有する）、
（ｉｉ）完全長のＩＬ１２Ｂポリペプチド配列の機能的断片（ＩＬ１２Ｂ野生型よりも短い切断型（例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失）配列だが、ＩＬ１２Ｂ酵素活性をなおも保有している）、
（ｉｉｉ）ＩＬ１２Ｂポリペプチドのバリアント（例えば、全長の、または１つ以上のアミノ酸が置き換えられた切断型のＩＬ１２Ｂタンパク質、例えば、野生型ＩＬ１２Ｂポリペプチドに関してＩＬ１２Ｂポリペプチド活性の全部またはほとんどを保有しているバリアント（例えば、Ｖ３３Ｉ、Ｖ２９８Ｆ、または当該技術分野において既知である何らかの天然バリアントまたは人工バリアントなど）、または
（ｉｖ）（ｉ）全長のＩＬ１２Ｂ野生型、その機能的断片もしくはバリアントと、（ｉｉ）異種性タンパク質とを含む、融合タンパク質、
及び／あるいは、以下から選択されるＩＬ１２Ａポリペプチド：
（ｉ）全長のＩＬ１２Ａポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ１２Ａと同じ長さまたは本質的に同じ長さを有する）、
（ｉｉ）完全長のＩＬ１２Ａポリペプチドの機能的断片（例えば、ＩＬ１２Ａ野生型よりも短い切断型（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列だが、ＩＬ１２Ａ酵素活性をなおも保有している）、
（ｉｉｉ）ＩＬ１２Ａポリペプチドのバリアント（例えば、完全長の、または１つ以上のアミノ酸が置き換えられた切断型のＩＬ１２Ａタンパク質、例えば、野生型ＩＬ１２Ａポリペプチドに関してＩＬ１２Ａポリペプチド活性の全部またはほとんどを保有しているバリアント（当該技術分野において既知である天然バリアントまたは人工バリアントなど））、または
（ｉｖ）（ｉ）完全長のＩＬ１２Ａ野生型、その機能的断片もしくはバリアントと、（ｉｉ）異種性タンパク質とを含む、融合タンパク質
を含む。
【０２７６】
一つの特定の態様において、ＩＬ−１２ポリペプチドは、表１のヒトまたはマウスＩＬ−１２ポリペプチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になり（例えば、ＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−１２ｐ３５の前駆体または成熟体）、あるいはそれらに関する組み合わせである。一つの特定の態様において、ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、表１のＩＬ−２３をコードするポリヌクレオチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−１２アミノ酸配列または表１に列挙するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このＩＬ−１２ポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ−１２ポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−１２ポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。
【０２７８】
他の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるＩＬ−１２ポリペプチドは、１つ以上の保存的置換を有する、表１に列挙されるアミノ酸配列を含み、この保存的置換は、ＩＬ−１２ポリペプチドの受容体へのＩＬ−１２ポリペプチドの結合活性に大きく影響せず、すなわち、ＩＬ−１２ポリペプチドは、置換後にＩＬ−１２受容体へ結合する。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、表１に列挙される核酸配列をコードするＩＬ−１２ポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。特定の実施形態において、ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１８３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。ＩＬ−１２ポリペプチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）が、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または配列番号１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０２８０】
ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
いくつかの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、ＩＬ−３６ポリペプチドを含む第２をコードするポリヌクレオチドと組み合わせることができる。
【０２８１】
ＩＬ−３６−ガンマは、サイトカインのインターロイキン１ファミリーのメンバーである。サイトカインのインターロイキン１ファミリーの他のメンバーと同様に、ＩＬ−３６−ガンマは、完全な生物活性のためにＮ末端の開裂を必要とする。ＩＬ−３６−ガンマは、シグナル配列を有さず、それゆえ、小胞体のゴルジ経路を通じて分泌されることはない。Ｇｒｅｓｎｉｇｔ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｅｒｄｏｎｋ（２０１３）Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２５：４５８−４６５）を参照されたい。ＩＬ−３６−ガンマが例えば、免疫細胞、他の上皮細胞、及び線維芽細胞に対して作用するために、どのようにして細胞から放出されるのかについては不明である（Ｇａｂａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９７：６４５−６５２）。本発明の例示的な態様において、ＩＬ−３６、例えば、ＩＬ−３６−ガンマをコードするポリヌクレオチドは、異種性シグナルペプチドをコードする配列を含む。理論に縛られることなく、このような「操作された」シグナルペプチド−インターロイキンキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、インフラマソームの活性化の非存在下で発現した場合、活性のあるタンパク質の生成を準備すると考えられている。
【０２８２】
１つの実施形態において、異種性シグナルペプチドは、免疫グロブリン重鎖または軽鎖から誘導される。例示的な実施形態において、異種性シグナルペプチドは、免疫グロブリン軽鎖から、例えば、当該軽鎖の可変領域から誘導される。例示的な実施形態において、異種性シグナルペプチドは、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域ｈＩＧＶＫ４から誘導される。例示的な態様において、本発明のポリヌクレオチドは、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードする配列へ作動可能に連結された異種性シグナルペプチドをコードする。
【０２８３】
一つの特定の態様において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１のＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。一つの特定の態様において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、表１のＩＬ−３６−ガンマをコードするポリヌクレオチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−３６−ガンマアミノ酸配列または表１に列挙するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。特定の実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、対応する野生型ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。別の特定の実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、本質的に配列番号１６からなり、対応する野生型ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。
【０２８５】
他の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に列挙されるアミノ酸配列、または１つ以上の保存的置換を有する配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、この保存的置換は、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドの受容体へのＩＬ−３６−ガンマポリペプチドの結合活性に大きく影響せず、すなわち、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、置換後にＩＬ−３６−ガンマ受容体へ結合する。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、表１に列挙する核酸配列をコードするＩＬ−３６−ガンマポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。特定の実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１７、配列番号９４、配列番号１４３または配列番号１４４と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。別の特定の実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１７、配列番号９４、配列番号１４３または配列番号１４４から本質的になる。ＩＬ−２３ポリペプチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１７、配列番号９４、または配列番号１４３）が、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または配列番号１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０２８７】
ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
いくつかの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと組み合わせることができ、この第２のタンパク質は、ＩＬ−１８ポリペプチドを含む。
【０２８８】
インターフェロンガンマ誘導因子（ＩＧＩＦ）及びＩＦＮ−γ誘導因子としても公知のＩＬ−１８は、サイトカインのインターロイキン１ファミリーのメンバーである。ＩＬ−１８は、２つの公知のアイソフォーム、アイソフォーム１及びアイソフォーム２を有する。アイソフォーム２は、残基２７〜３０がない点でアイソフォーム１とは異なる。サイトカインのインターロイキン１ファミリーの他のメンバーと同様に、ＩＬ−１８は、完全な生物活性のためにＮ末端の開裂を必要とする（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４：２８９）。ＩＬ−１８は、シグナル配列を有さず、それゆえ、小胞体のゴルジ経路を通じて分泌されることはない。Ｇｒｅｓｎｉｇｔ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｅｒｄｏｎｋ（２０１３）Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２５：４５８−４６５）を参照されたい。
【０２８９】
ＩＬ−１８は、シグナル伝達カスケードを活性化させるＮＦκＢ及びＭＡＰＫを誘導するためにＩＬ−１８α及びＩＬ−１８β共受容体を通じてシグナル伝達する炎症性アゴニストである（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）。ＩＬ−２３の場合と同様に、抗がん療法のためのＩＬ−１８の有望な使用に関して矛盾した報告がある。Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２２：２９６９−２６８０は、ＩＬ−１８を用いた併用処置が、抗ＰＤ−Ｌ１及び／または抗ＣＴＬＡ−４によって誘発される抗腫瘍活性を亢進することを教示している。しかしながら、Ｆａｂｂｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．９７：６６５−６７５は、ＩＬ−１８ががんにおいて異なる役割を担っている可能性があり、いくつかの症例では抗がん活性を、他の症例では腫瘍促進活性を有することを教示している。Ｆａｂｂｉは、前臨床研究及びいくつかの臨床試験でＩＬ−１８が抗腫瘍活性を有することを示唆しているが、他の研究は、ＩＬ−１８が異なる腫瘍モデルにおいて浸潤促進性活性、血管新生促進性活性、及び免疫調節活性を発揮する可能性があることを示していると示している。例えば、Ｔｅｒｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７１：５３９３−９は、ＩＬ−１８ががんにおける免疫抑制サイトカインであり、腫瘍細胞によって産生されるＩＬ−１８がＰＤ−１依存的な様式でＮＫ制御型転移の発症を促進することを教示している。Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３０：１９８７−８６は、ＩＬ−１８が胃癌の転移及び免疫エスケープを増大させることを教示している。
【０２９０】
本発明の例示的な態様において、ＩＬ−１８をコードするポリヌクレオチドは、異種性シグナルペプチドをコードする配列を含む。理論に縛られることなく、このような「操作された」シグナルペプチド−インターロイキンキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、インフラマソームの活性化の非存在下で発現した場合、活性のあるタンパク質の生成を準備すると考えられている。
【０２９１】
１つの実施形態において、異種性シグナルペプチドは、免疫グロブリン重鎖または軽鎖から誘導される。例示的な実施形態において、異種性シグナルペプチドは、免疫グロブリン軽鎖から、例えば、当該軽鎖の可変領域から誘導される。
【０２９２】
例示的な実施形態において、異種性シグナルペプチドは、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域ｈＩＧＶＫ４から誘導される。例示的な態様において、本発明のポリヌクレオチドは、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする配列へ作動可能に連結された異種性シグナルペプチドをコードする。
【０２９３】
一つの特定の態様において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、表１のＩＬ−１８ポリペプチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。一つの特定の態様において、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、表１のＩＬ−１８をコードするポリヌクレオチドを含み、これからなり、またはこれから本質的になる。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−１８アミノ酸配列または表１に列挙するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このＩＬ−１８ポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ−１８ポリペプチドの活性（例えば、ＩＬ−１８ポリペプチド受容体への結合）の少なくとも１０％を有する。特定の実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１４８、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１または配列番号１６２と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。別の特定の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１４８、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１または配列番号１６２から本質的になる。ＩＬ−１８ポリペプチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４８、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１または配列番号１６２）が、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または配列番号１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０２９５】
ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
いくつかの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドと組み合わせることができ、この第３のタンパク質は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む。他の態様において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドと組み合わせることができ、この第３のタンパク質はＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む。ある特定の態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドと組み合わせることができ、この第３のタンパク質はＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む。
【０２９６】
ヒトＯＸ４０Ｌは、Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．によってヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）に感染したヒトリンパ球の表面上で最初に特定された（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（１９８５），３６（５）：５４９−５５）。ＯＸ４０Ｌとは、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）についてのリガンドである。ＯＸ４０Ｌは、ＣＤ２５２（分化クラスター２５２）、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーのメンバー４、ｔａｘ転写活性化型糖タンパク質１（ＴＸＧＰ１）、またはｇｐ３４とも呼ばれてきた。ヒトＯＸ４０Ｌは、１８３アミノ酸長であり、以下の３つのドメインを含有する：アミノ酸１〜２３の細胞質ドメイン、アミノ酸２４〜５０の膜貫通ドメイン、及びアミノ酸５１〜１８３の細胞外ドメイン。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、哺乳類ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、哺乳類ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、マウスＯＸ４０Ｌポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳類ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに示すアミノ酸配列を含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、本開示の各ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡ、すなわち、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、哺乳類ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、哺乳類ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、哺乳類ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、マウスＩＬ−２３ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、マウスＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、マウスＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−２３ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に示されるヒトアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に示されるヒトアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに示されるヒトアミノ酸配列を含む。
【０３００】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに列挙するアミノ酸配列または表１Ａに列挙するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このアミノ酸配列は、ＯＸ４０受容体へ結合することができる。特定の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号２１と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＯＸ４０受容体へ結合することができる。別の特定の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号２１から本質的になり、ＯＸ４０受容体へ結合することができる。
【０３０１】
ある特定の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに列挙するアミノ酸配列、または１つ以上の保存的置換を有する配列番号２１に示すアミノ酸配列を含み、この保存的置換は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの受容体へのＯＸ４０Ｌポリペプチドの結合活性に大きく影響せず、すなわち、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、置換後にＯＸ４０受容体へ結合する。
【０３０２】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、表１Ａに列挙する核酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１１６、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の配列を含む。別の特定の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、配列番号１１６、配列番号１４５または配列番号１４６から本質的になる。ＯＸ４０Ｌポリペプチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１１６または配列番号１４５）が、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または配列番号１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、本方法及び組成物に有用なポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。他の実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの膜貫通をコードするオープンリーディングフレームを含む。他の実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングを含む。さらに他の実施形態において、このポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＯＸ４０Ｌの膜貫通、及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングを含む。
【０３０４】
表１または表１Ａは、例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０Ｌについての前駆体配列及び成熟配列、ならびにＩＬ−２３またはＩＬ−３６−ガンマを含むコンストラクトを表す。本開示において、ＩＬ−２３ポリヌクレオチドまたはＩＬ−２３ポリペプチドは、「前駆体」形態及び「成熟」形態の両方を包含する。さらに、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０Ｌをコードするポリヌクレオチドを含み、成分、このような３’ＵＴＲ及び５’ＵＴＲをさらに含むコンストラクトは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０Ｌをコードするポリヌクレオチドとみなされるであろう。当業者は、表１または表１Ａに疑うことなく開示したナイーブのシグナル配列及びプロペプチド配列（成熟した対応する形態についての前駆体に存在する配列及び成熟した対応する形態に存在しない配列）ならびに表１または表１Ａに開示される非ナイーブのシグナルペプチド（ＩｇＫＶ４シグナルペプチド）に加えて、他のシグナル配列を使用することができることを理解するであろう。したがって、表１によるＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０Ｌのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する参照は、当該技術分野において既知である代替的なシグナルペプチド（またはコード配列）が、当該ＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、及びＯＸ４０Ｌのポリペプチド（またはポリヌクレオチド）に結合したバリアントを包含する。本出願を通じて表１に開示される配列に対する参照が、等価に適用可能であり、当該技術分野において既知である当該配列の相同分子種及び機能的バリアント（例えば、多形バリアント）ならびにアイソフォームを包含することも理解される。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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【表１−２２】
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【表１−２３】
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【表１−２４】
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【表１−２５】
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【表１−２６】
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【表１−２７】
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【表１−２８】
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【表１−２９】
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【表１Ａ−１】
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【表１Ａ−２】
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【表１Ａ−３】
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【表１Ａ−４】
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【表１Ａ−５】
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【表１Ａ−６】
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【表１Ａ−７】
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【表１Ａ−８】
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【表１Ａ−９】
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【表１Ａ−１０】
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【表１Ａ−１１】
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【表１Ａ−１２】
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【０３０５】
本明細書に提供するＲＮＡ配列に基づいて、ならびに特に表１及び表１Ａにおいて、当業者は、対応するＤＮＡ配列（例えば、ウラシルからチミンへの転換）を理解するであろう。同様に、提供されるＤＮＡ配列に基づいて、当業者は、対応するＲＮＡ配列（例えば、チミンからウラシルへの転換）を理解するであろう。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードする、コドン最適化配列を含む、ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１４１）を含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードする、コドン最適化配列を含む、ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１４３）を含む。他の実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、コドン最適化された配列を含む、ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１４５）を含む。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、全長であるＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、野生型ＩＬ−２３ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個のアミノ酸を欠失しているヒトＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、全長であるＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、野生型ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドのＮ末端またはＣ末端で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個のアミノ酸を欠失している、ヒトＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、全長であるＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、１８３アミノ酸長であるヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。ある特定の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、ＯＸ４０ＬポリペプチドのＮ末端またはＣ末端で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個のアミノ酸を欠失していることができる。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、「構造上修飾され」または「化学的に修飾され」ている。本明細書で使用する場合、「構造の」修飾は、２つ以上の結合したヌクレオシドが、ｍＲＮＡ自体の著しい化学修飾を有さないポリヌクレオチドにおいて、挿入、欠失、複製、逆位または無作為化しているものである。化学結合は、構造の修飾をもたらすために必ず破壊されて再形成されることになっているので、構造の修飾は、化学的性質についてのものであり、それゆえ、化学修飾である。しかしながら、構造の修飾は結果として、異なるヌクレオチド配列をもたらすことになっている。例えば、「ＡＵＣＧ」というｍＲＮＡは、「ＡＵ−５ｍｅＣ−Ｇ」へと化学的に修飾することができる。同じｍＲＮＡは、「ＡＵＣＧ」から「ＡＵＣＣＣＧ」へと構造上修飾することができる。ここで、「ＣＣ」というジヌクレオチドが挿入され、結果として、ポリヌクレオチドへと構造上修飾を生じる。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、同じヌクレオシドタイプのすべてもしくはいかなるものも均一な化学的修飾を有することができ、または同じヌクレオシドタイプのすべてもしくはいかなるものにおいても同じ出発修飾の単なる下向き滴定によって生じた修飾の集団を有することができ、または同じヌクレオシドタイプだが、ウリジンがすべてウリジン類似体、例えば、シュードウリジンもしくは５−メトキシウリジンによって置き換えられる場合などの無作為な組込みを有するいかなるものもすべて、化学的修飾の測定された百分率を有することができる。別の実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ）は、ポリヌクレオチド全体（例えば、ｍＲＮＡ）（ウリジンすべて及びシトシンすべてなどは、同じ方法で修飾される）のいたるところで同じヌクレオシドタイプのうちの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有することができる。本開示のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ）が、化学的に及び／または構造上修飾される場合、そのｍＲＮＡは、「修飾ｍＲＮＡ」ということができる。化学修飾の非限定的な例は、本明細書の他の箇所でする。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド及び／または第２のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、本明細書に開示される化学的に修飾されたヌクレオシドのいずれか及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドにおけるヌクレオシドは、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドにおける化学的に修飾されたヌクレオシドは、ウリジン、アデニン、シトシン、グアニン、及びそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドにおけるウリジンヌクレオシドは、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドにおけるアデノシンヌクレオシドは、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドにおけるシチジンヌクレオシドは、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドにおけるグアノシンヌクレオシドは、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡ、第２のタンパク質をコードするｍＲＮＡ、及び第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡは各々、オープンリーディングフレームを含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−２３ポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列を含むＩＬ−１２ｐ４０サブユニットを含み、このアミノ酸配列は、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットへ結合して、ＩＬ−２３活性を有するＩＬ−２３を形成することができる。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは、表１に列挙するＩＬ−２３ポリペプチドをコードする配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−２３ポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＩＬ−２３ｐ１９サブユニットを含み、このアミノ酸配列は、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットへ結合して、ＩＬ−２３活性を有するＩＬ−２３を形成することができる。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、表１に列挙するＩＬ−２３ポリペプチドコード配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３タンパク質のＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、一本鎖のポリプチド鎖または２つの異なる鎖上にある。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、リンカーによって融合している。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは、成熟型ＩＬ−１２ｐ４０である（すなわち、シグナルペプチドを含んでいない）。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、成熟型ＩＬ−２３ｐ１９である（すなわち、シグナルペプチドを含んでいない）。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは、非天然のシグナルペプチドを含む。いくつかの態様において、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニットは、非ナイーブのシグナルペプチドを含む。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３は、以下の代替式のいずれかによるＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットを含む融合ポリペプチドである：
［シグナルペプチド１］−［ＩＬ−１２ｐ４０］−［リンカー］−［ＩＬ−２３ｐ１９］
［シグナルペプチド２］−［ＩＬ−２３ｐ１９］−［リンカー］−［ＩＬ−１２ｐ４０］
式中、［シグナルペプチド１］は、ＩＬ−１２ｐ４０シグナルペプチドまたは非ナイーブのシグナルペプチドであり得、［シグナルぺプチド２］は、ＩＬ−２３ｐ１９シグナルペプチドまたは非ナイーブのシグナルペプチドであり得、［ＩＬ−１２ｐ４０］は成熟型ＩＬ−１２ｐ４０であり、［ＩＬ−２３ｐ１９］は成熟型ＩＬ−２３ｐ２９であり、かつ［リンカー］はペプチドリンカーである。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、（ＧＳ）リンカーを含む。いくつかの実施形態において、（ＧＳ）リンカーは、（ＧｎＳ）ｍ配列を含み、式中ｎは１〜２０であり、かつｍは１〜１００である。いくつかの実施形態において、（ＧＳ）リンカーは、配列ＧＧＳ、ＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ（配列番号１３６）、ＧＧＧＧＧＳ（配列番号１３７）、ＧＧＧＧＧＧＳ（配列番号１３８）、ＧＧＧＧＧＧＧＳ（配列番号１３９）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１８３）、ＧＧＳＧＧＧＧＧ（配列番号１８４）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１８５）を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）ｑ（配列番号１６３）を含むことができ、式中ｑは１〜５の整数である。１つの実施形態において、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）３、すなわち、ＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫ（配列番号１６４）を含むことができる。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｇｌｙ富化リンカーであり得、例えば、（Ｇｌｙ）ｐを含み、ｐは、１〜４０の整数である。いくつかの実施形態において、Ｇｌｙの豊富なリンカーは、ＧＧＧＧＧ（配列番号１６５）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号１６６）、ＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号１６７）またはＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号１６８）を含み得る。さらなる例示的なリンカーとしては、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６９）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号１７０）、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧ（配列番号１７１）、ＧＧＳＧＧＨＭＧＳＧＧ（配列番号１７２）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号１７３）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１７４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１７５）、ＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧ（配列番号１７６）、ＡＡＧＡＡＴＡＡ（配列番号１７７）、ＧＧＳＳＧ（配列番号１７８）、ＧＳＧＧＧＴＧＧＧＳＧ（配列番号１７９）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＧＳＧ（配列番号１８０）、ＧＳＧＧＳＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１８１）、及びＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１８２）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載されるリンカーは、本明細書に記載するポリヌクレオチドのいずれかにおいて使用することができる。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、上述の式によるＩＬ−２３ポリペプチド（すなわち、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットを含むＩＬ−２３ポリペプチド）は、表１に列挙するＩＬ−２３ポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このアミノ酸配列は、少なくとも１つのＩＬ−２３活性を有すること（例えば、ＩＬ−２３受容体へ結合すること）ができる。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、上述の式によるＩＬ−２３ポリペプチド（すなわち、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット及びＩＬ−２３ｐ１９サブユニットを含むＩＬ−２３ポリペプチド）は、表１に列挙する配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−３６−ガンマポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このポリペプチドは、ＩＬ−３６−ガンマ活性を有すること（例えば、ＩＬ−３６受容体へ結合すること）ができる。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−３６−ガンマポリペプチドコード配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−１８ポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このポリペプチドは、ＩＬ−１８活性を有すること（例えば、ＩＬ−１８受容体へ結合すること）ができる。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−１８ポリペプチドは、表１に列挙するＩＬ−１８ポリペプチドコード配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３３３】
他の実施形態において、本開示の組成物は、第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含む。１つの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに列挙するＯＸ４０Ｌポリペプチド配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、このポリペプチドは、ＯＸ４０Ｌ活性を有する（例えば、ＯＸ４０Ｌ受容体へ結合すること）ができる。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、表１Ａに列挙するＯＸ４０Ｌポリペプチドコード配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされる。
【０３３６】
ある特定の実施形態において、この組成物は、第４のタンパク質をコードする第４のポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、第４のポリヌクレオチドは、第４のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸配列をさらに含む。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２へ結合する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２−３ｐへまたはｍｉＲ−１２２−５ｐへ結合する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号２４に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２（ｍｉＲ−１２２−３ｐ、２２ｎｔ−ａａｃｇｃｃａｕｕａｕｃａｃａｃｕａａａｕａ）へ結合する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号２６に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２（ｍｉＲ−１２２−５ｐ、２２ｎｔ−ｕｇｇａｇｕｇｕｇａ  ｃａａｕｇｇｕｇｕｕｕｇ）へ結合する。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、２つの異なるｍｉＲＮＡ結合部位または同じｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、５’ＵＴＲをさらに含む。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、表３に列挙する５’ＵＴＲ配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、５’ＵＴＲは、配列番号２７または配列番号４４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、５’ＵＴＲは、配列番号２７または配列番号４４の核酸配列から本質的になる。５’ＵＴＲが、例えば、５’末端キャップ、ＯＦＲ（例えば、配列番号１７、１９、７１、９４、及び１１６）、３’ＵＴＲ（例えば、配列番号１１９または１２０）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。いくつかの実施形態において、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位は、１つ以上の起こり得る挿入部位で５’ＵＴＲ内に配置することができる。
【０３３９】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、３’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、表４Ａまたは表４Ｂに列挙する３’ＵＴＲ配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。特定の実施形態において、３’ＵＴＲは、配列番号１１９または配列番号１２０に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、３’ＵＴＲは、配列番号１１９または配列番号１２０の核酸配列から本質的になる。３’ＵＴＲが、例えば、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ（例えば、配列番号２７または配列番号４４）、ＯＦＲ（例えば、配列番号１７、１９、７１、９４、及び１１６）、及び／またはポリ−Ａ尾部をさらに含む、より大きなコンストラクト内の１つの要素であり得ることは理解されるべきである。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、３’ＵＴＲ内に挿入される。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、停止コドンとｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）の間に３’ＵＴＲ塩基がある場合の本発明のポリリボヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡの内部のコード領域の停止コドンの下流にある３’ＵＴＲ内に挿入される。いくつかの実施形態において、コンストラクトの中に停止コドンの複数のコピーがある場合、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、最終的な停止コドンの下流に挿入される。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、停止コドン（またはコンストラクトの中に複数の停止コドンがある場合は最終の停止コドン）の約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００塩基下流に挿入される。特定の実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、停止コドンとｍｉＲ結合部位（複数可）の間に７９個の３’ＵＴＲ塩基があるよう、停止コドン（またはコンストラクトの中に複数の停止コドンがある場合は最終の停止コドン）の下流に挿入される。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位へ融合したスペーサー配列をさらに含む。いくつかの実施形態において、スペーサー配列は、少なくとも約１０個のヌクレオチド、少なくとも約１５個のヌクレオチド、少なくとも約２０個のヌクレオチド、少なくとも約２５個のヌクレオチド、少なくとも約３０個のヌクレオチド、少なくとも約３５個のヌクレオチド、少なくとも約４０個のヌクレオチド、少なくとも約４５個のヌクレオチド、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約５５個のヌクレオチド、少なくとも約６０個のヌクレオチド、少なくとも約６５個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、少なくとも約７５個のヌクレオチド、少なくとも約８０個のヌクレオチド、少なくとも約８５個のヌクレオチド、少なくとも約９０個のヌクレオチド、少なくとも約９５個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドを含む。
【０３４２】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、５’末端キャップをさらに含む。いくつかの実施形態において、５’末端キャップは、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジドグアノシン、Ｃａｐ２、Ｃａｐ４、５’メチルＧキャップまたはこれらの類似体である。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、３’ポリ−Ａ尾部を含む。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、コドン最適化されている。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写（ＩＶＴ）される。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、キメラである。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、第３のポリヌクレオチド、及び／または第４のポリヌクレオチドは、環状である。
【０３４３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ポリペプチドＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドは、異種性ポリペプチドへ融合する。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、５’末端キャップ、５’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、３’ＵＴＲ、及びポリ−Ａ尾部を含み、これらから本質的になり、またはこれらからなる。１つの実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号２７または４４、配列番号１９、７１または１４１、及び配列番号１１９または１２０のうちの核酸配列を含み、これから本質的になり、またはこれからなる。別の実施形態において、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号２７または４４、配列番号１７、９４または１４３、及び配列番号１１９または１２０のうちの核酸配列を含み、これらから本質的になり、またはこれらからなる。さらに別の実施形態において、第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号２７または４４、配列番号１１６または１４５、及び配列番号１１９または１２０のうちの核酸配列を含み、これから本質的になり、またはこれからなる。
【０３４５】
特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、配列番号１４２に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、配列番号１４２の核酸配列から本質的になる。さらに別の特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、配列番号１４２の核酸配列からなる。
【０３４６】
特定の実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、配列番号１４４に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、配列番号１４４の核酸配列から本質的になる。さらに別の特定の実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、配列番号１４４の核酸配列をからなる。
【０３４７】
特定の実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、配列番号１４６に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。別の特定の実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、配列番号１４６の核酸配列から本質的になる。さらに別の特定の実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、配列番号１４６の核酸配列からなる。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチドは、表１に開示するＩＬ−２３コード配列のいずれかに対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０３４９】
いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、表１に開示するＩＬ−３６−ガンマコード配列のいずれかに対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ−１８をコードする配列に対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含み、当該配列は、表１に開示するＩＬ−１８コード配列を含む。
【０３５１】
いくつかの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、表１ＡのＯＸ４０Ｌコード配列またはＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ−１２２コンストラクトに対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０３５２】
他の実施形態において、本開示のための組成物は、第４のタンパク質または第４のタンパク質をコードする第４のポリヌクレオチドを含む。例えば、第４のポリヌクレオチドは、第４のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含むことができる。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を抑制することを必要とする対象において、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を抑制することにおける使用のためにある。いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を抑制することを必要とする対象において、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を抑制することにおける使用のためにある。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物をがんを治療するためにそれを必要とする対象に投与し、組成物の投与はがんの症状を治療し、または緩和する。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、咽頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底細胞・扁平上皮細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、癌治療起因性二次性癌、ならびにそれらのいずれかの組合せからなる群から選択される。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドは、ポンプ、パッチ、薬剤リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、急速注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、冷凍子、カニューレ、微小カニューレ、または熱、ＲＦエネルギー、電流を利用する装置、またはそれらのいずれかの組合せを備えた装置による送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物の有効量は、約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物は、ヒト対象への投与のために製剤化される。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物及び製剤は、がんの治療における使用のためである。いくつかの実施形態において、開示する組成物及び製剤は、がんの治療のための薬剤の製造に使用される。
【０３５８】
本明細書に開示するポリヌクレオチドの組み合わせ（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチド）を、開示する特定の形態に制限するようには全く意図していないことを理解すべきである。この点において、本節における特定のポリヌクレオチド及びその個々のコードしたポリペプチドに関連した本開示は、本明細書に開示するＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、ＩＬ−１８、及び／またはＯＸ４０Ｌコードポリヌクレオチドと組み合わせることになっている追加のポリヌクレオチド及びこれらの個々のコードしたポリペプチド、例えば、第３、第４、第５などのポリペプチドへ等価に適用可能である。したがって、「第１のポリヌクレオチド」または「第２のポリヌクレオチド」（または個々のコードしたポリペプチド）に関連した開示は、「第３のポリヌクレオチド」及び連続するポリヌクレオチド（またはこれらの個々のコードしたポリペプチド）へ等価に適用可能である。
【０３５９】
加えて、第１または第２のポリヌクレオチドによってコードされる特定のタンパク質と関連した具体的な開示、例えば、「第２のポリヌクレオチドが野生型ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドのＮ末端またはＣ末端で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個のアミノ酸を欠失するヒトＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む」という開示は、第３の連続したタンパク質へ等価に適用可能であろう。したがって、当業者は、第３のタンパク質が例えばＯＸ４０Ｌである場合、第３のポリヌクレオチドが、本開示の第１のまたは第２のポリペプチドに関して先に開示されたように、野生型ＯＸ４０ＬポリペプチドのＮ末端またはＣ末端で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個のアミノ酸を欠失しているヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むことができたことは理解されたであろう。
【０３６０】
ＩＩＩ．免疫調節ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの併用方法
免疫腫瘍学的方法としても公知の免疫療法は、腫瘍ではなく宿主免疫系を標的にする療法、独自の有害事象特性を有する療法、及び多くのタイプのがんを治癒し得る療法を導入することによって、がんの治療を刷新してきた。本明細書で使用する場合、「免疫療法」という用語は、免疫応答を誘導し、亢進し、または抑制することによる疾患の治療を指す。免疫応答を誘発または増幅するよう設計された免疫療法は、「活性化免疫療法」と呼ばれるのに対し、免疫応答を低減または抑制する免疫療法は、「抑制免疫療法」と呼ばれる。
【０３６１】
肺、腎臓、膀胱及び皮膚のがんは、とりわけ、生存または腫瘍応答の点で免疫腫瘍学的方法を用いた治療から実質的な効能を誘導し、最大の利点をおそらく示すのはメラノーマである。免疫療法はしばしば、チェックポイント阻害抗体として公知の生物製剤の刺激的な新たなクラスを用いたチェックポイント阻害剤治療を特徴とする。標的には、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及びＣＴＬＡ−４が含まれる。
【０３６２】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ４を標的とするモノクローナル抗体は、がん細胞に対する免疫応答をブーストすることができ、ある特定のがんを治療する上で大いに有望であることが示されてきた。例えば、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））及びニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））はＰＤ−１を標的とし、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））はＰＤ−Ｌ１を標的とし、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））はＣＴＬＡ−４へ結合してこれを阻害する。
【０３６３】
これらの薬物に関する１つの懸念は、これらの薬物が免疫系に体内のいくつかの正常な器官を攻撃させることができ、このことが人によっては重篤なまたは生命の危機に瀕することさえある副作用をもたらす可能性がある点である。このような副作用を低減する１つの方法は、これらのチェックポイント阻害抗体と組み合わせて他の作用剤を投与することであり、これによって、医師が抗体の治療用量を低下させることが理想的に可能である。
【０３６４】
それゆえ、本開示は、上述の第ＩＩ節において開示した組成物のいずれかの投与を含む、がんを治療する（例えば、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を抑制することを必要とする対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を抑制する）ための方法を提供する。特に、本開示は、がんを治療すること（腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を抑制すること）を必要とする対象へ以下を投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する：
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含むタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む少なくとも１つのポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含むタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び／または
（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、本開示は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ及び／または腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象へ、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含む、当該対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、及び／または腫瘍の成長を阻害する方法であって、この少なくとも２つのポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドから選択される方法を提供する。一つの特定の態様において、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、及び／または腫瘍の成長を阻害する必要のある対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ及び／または腫瘍の成長を阻害する方法は、この対象へ（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチド、及び／または（ｉｖ）これらの組み合わせを投与することを含む。別の特定の実施形態において、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、及び／または腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する方法は、この対象へ、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチド（例えば、配列番号１４１）を含む第１のタンパク質をコードする第１のポオリヌクレオチド、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチド（例えば、配列番号１４３）を含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド（例えば、配列番号１４５）を含む第３のタンパク質をコードする第３のポリぺプチドを好ましくは１：２：１ｗ／ｗの質量比で投与することを含む。いくつかの特定の態様において、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、及び／または腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、及び／または腫瘍の成長を阻害する方法は、この対象へ、有効量の追加のポリヌクレオチド、例えば、第４または第５のタンパク質をコードする第４または第５のポリヌクレオチドを投与することをさらに含む。
【０３６６】
他の実施形態において、本開示は、本明細書に開示する第１、第２、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を投与することによって、抗腫瘍効果を促進する（例えば、Ｔ細胞増殖を誘導する、腫瘍におけるＴ細胞浸潤を誘導する、記憶Ｔ細胞応答を誘導する、ＮＫ細胞数を増加させるなど）方法を提供する。
【０３６７】
１つの実施形態において、本開示は、Ｔ細胞を活性化させることを必要とする対象においてＴ細胞を活性化させ、Ｔ細胞の増殖を誘導することを必要とする対象においてＴ細胞の増殖を誘導し、腫瘍へのＴ細胞の浸潤を誘導することを必要とする対象において腫瘍へのＴ細胞の浸潤を誘導し、及び／または記憶Ｔ細胞応答を誘導することを必要とする対象において記憶Ｔ細胞応答を誘導する方法であって、この対象へ、ＩＬ−２３をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８をコードする第２のポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌをコードする第３のポリヌクレオチド、またはこれらの組み合わせを投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態において、Ｔ細胞を活性化させることを必要とする対象においてＴ細胞を活性化させ、Ｔ細胞の増殖を誘導することを必要とする対象においてＴ細胞の増殖を誘導し、腫瘍へのＴ細胞の浸潤を誘導することを必要とする対象において腫瘍へのＴ細胞の浸潤を誘導し、及び／または記憶Ｔ細胞応答を誘導することを必要とする対象において記憶Ｔ細胞応答を誘導する方法は、この対象へ、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４１）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４３）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（配列番号１４５）を、好ましくは１：２：１ｗ／ｗの質量比で投与することを含む。ある特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の腫瘍内投与は、他の投与経路と比較して抗腫瘍効果の効能（例えば、腫瘍へのＴ細胞の浸潤）を増大させることができる。
【０３６８】
１つの実施形態において、対象において活性化したＴ細胞は、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する。Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞の増殖を測定すること、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）もしくは酵素結合免疫スポット検定法（ＥＬＩＳＰＯＴ）を用いてサイトカインの産生を測定すること、またはフローサイトメトリーなどの技術を用いてのＴ細胞活性化と関係する細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ２５、ＣＤ７１、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１５４、及びＣＤ１３４）の検出など、当該技術分野における応用を用いて測定することができる。
【０３６９】
１つの実施形態において、対象におけるＴ細胞増殖は、対象における抗腫瘍免疫応答へ向けられる。別の態様において、対象におけるＴ細胞の増殖は、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する。Ｔ細胞の増殖は、細胞計数、生存度染色、光学密度アッセイ、またはフローサイトメトリーなどの技術を用いてのＴ細胞活性化と関係する細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ２５、ＣＤ７１、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１５４、及びＣＤ１３４）の検出など、当該技術分野における応用を用いて測定することができる。
【０３７０】
１つの実施形態において、対象の腫瘍へのＴ細胞の浸潤は、対象における抗腫瘍免疫応答に向けられる。別の態様において、対象の腫瘍へのＴ細胞の浸潤は、対象内の腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害する。腫瘍へのＴ細胞の浸潤は、組織切片の作製及び細胞マーカーに対する染色、腫瘍部位で局所サイトカイン産生を測定すること、またはフローサイトメトリーなどの技術を用いてのＴ細胞表面マーカーの検出など、当該技術分野における応用を用いて測定することができる。
【０３７１】
１つの実施形態において、対象における記憶Ｔ細胞応答は、対象における抗腫瘍免疫応答に向けられる。別の態様において、対象における記憶Ｔ細胞応答は、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させ、または腫瘍の成長を阻害する。記憶Ｔ細胞応答は、記憶Ｔ細胞と関係するＴ細胞マーカーを測定すること、記憶免疫応答と関連した局所サイトカイン産生を測定すること、またはフローサイトメトリーなどの技術を用いて記憶Ｔ細胞表面マーカーを検出することなど、当該技術分野における応用を用いて測定することができる。
【０３７２】
ある特定の実施形態において、本方法によって活性化したＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌ−セレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組合せである。いくつかの実施形態において、本方法によって活性化したＴ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本方法によって活性化したＴ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示によって活性化したＴ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、本方法によって浸潤するＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌ−セレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組合せである。いくつかの実施形態において、本方法によって浸潤するＴ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本方法によって浸潤するＴ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示によって浸潤するＴ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、本方法によって誘導される記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌ−セレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組合せである。いくつかの実施形態において、本方法による記憶Ｔ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本方法による記憶Ｔ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示による記憶Ｔ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０３７５】
本開示は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の数を増加させることを必要とする対象において、ナチュラルキラー細胞の数を増加させる方法であって、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを投与することを含む方法をさらに提供する。特定の実施形態において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の数を増加させることを必要とする対象において、ナチュラルキラー細胞の数を増加させる方法は、対象へ、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４１）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４３）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチド（例えば、配列番号１４５）を、好ましくは１：２：１ｗ／ｗの質量比で投与することを含む。１つの態様において、対象におけるＮＫ細胞の数の増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答に向けられる。別の態様において、対象におけるＮＫ細胞の数の増加は、対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する。対象におけるＮＫ細胞の数の増加は、ＮＫ細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３３５／ＮＫｐ４６、ＣＤ３３６／ＮＫｐ４４、ＣＤ３３７／ＮＰｐ３０）または細胞内ＮＫ細胞マーカー（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュリシン）の検出など、当該技術分野における応用を用いて測定することができる。
【０３７６】
ある特定の実施形態において、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡまたはＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡより選択される少なくとも２つのｍＲＮＡの投与は、この少なくとも２つのｍＲＮＡを投与されていない対象、またはＩＬ−２３単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマ単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、もしくはＯＸ４０Ｌ単独をコードするｍＲＮＡを投与された対象におけるＮＫ細胞の数と比較して、対象におけるＮＫ細胞の総数を増加させる。他の実施形態において、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡより選択される少なくとも２つのｍＲＮＡの投与は、ＯＸ４０Ｌポリペプチド単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−２３単独をコードするｍＲＮＡ、またはＩＬ−３６−ガンマ単独をコードするｍＲＮＡ、またはＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡを用いて形質転換した樹状細胞を投与した対象と比較して、対象におけるＮＫ細胞の総数を増加させる。他の実施形態において、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡより選択される少なくとも２つのｍＲＮＡの投与は、この少なくとも２つのｍＲＮＡを投与されていない対象、またはＩＬ−２３単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマ単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８単独をコードするｍＲＮＡ、もしくはＯＸ４０Ｌポリペプチド単独をコードするｍＲＮＡを投与された対象と比較して、腫瘍微小環境内の、対象におけるＮＫ細胞の総数を増加させる。他の実施形態において、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡより選択される少なくとも２つのｍＲＮＡの投与は、ＯＸ４０Ｌポリペプチド単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−２３単独をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８単独をコードするｍＲＮＡ、もしくはＩＬ−３６−ガンマ単独をコードするｍＲＮＡを投与された対象のものと比較して、腫瘍微小環境内の、対象におけるＮＫ細胞の数を増加させる。他の実施形態において、腫瘍微小環境内でのＮＫ細胞の濃度は上昇するのに対し、対象におけるＮＫ細胞の総数は同じままである。
【０３７７】
本開示のある特定の実施形態において、ＮＫ細胞の数は、対照（例えば、生理食塩水またはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、もしくはＯＸ４０Ｌの発現が生じないｍＲＮＡ）と比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍増加する。特定の実施形態において、ＮＫ細胞の数は、ＩＬ−２３をコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−３６−ガンマをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１８をコードするｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡより選択される少なくとも２つのｍＲＮＡによって、対照（例えば、生理食塩水またはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、ＩＬ−１８、もしくはＯＸ４０Ｌの発現が生じないｍＲＮＡ）と比較して少なくとも約２倍増加する。
【０３７８】
１つの態様において、本明細書に開示する組み合わせの投与は、（ｉ）第１のタンパク質単独をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド）の投与、（ｉｉ）第２のタンパク質単独をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド）の投与、または（ｉｉｉ）第３のタンパク質単独をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド）の投与よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、または少なくとも５倍、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する。腫瘍の大きさの減少もしくは低下または腫瘍の成長の阻害は、当該技術分野において既知である何らかの方法を用いて、過度の実験なしで測定することができる。
【０３７９】
いくつかの態様において、腫瘍の大きさの減少もしくは低下、または腫瘍の成長の阻害は、対照（例えば、ＰＢＳを用いた処置、対照タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いた処置、または対照タンパク質を用いた処置）よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、または少なくとも５倍である。
【０３８０】
いくつかの態様において、本明細書に開示する方法により投与される第１のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、第１のタンパク質（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドを含むタンパク質）をコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの態様において、本明細書に開示する方法により投与される第２のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、第２のタンパク質（例えば、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含むタンパク質）をコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの態様において、本明細書に開示する方法により投与される第３のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、第３のタンパク質（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むタンパク質）をコードするｍＲＮＡを含む。
【０３８１】
本明細書に開示する方法は、腫瘍内、腸内、胃腸内、硬膜外、経口、経皮、硬膜外硬膜周囲、脳内（大脳の中への）、脳室内（脳室の中への）、皮膚上（皮膚上への塗布）、皮内、（皮膚自体の中への）、皮下（皮膚の下への）、鼻腔内投与（鼻を経ての）、静脈内（静脈の中への）、腹腔内（腹腔の中への）、動脈内（動脈の中への）、筋肉内（筋肉の中への）、心内（心臓の中への）、経骨髄投与（骨髄の中への）、髄腔内（脊柱管の中への）、腹腔内、（腹腔の中への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内、（眼を通じて）、海綿体内注射、（陰茎の基部の中への）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布のためのインタクトな皮膚を通じての拡散）、経粘膜（粘膜を通じての拡散）、吸入（鼻呼吸）、舌下、口唇下、浣腸、点眼（結膜の上への）、または点耳液を含むがこれらに限定されない利用可能な何らかの経路によって本開示の組成物のいずれかを投与することを含む。
【０３８２】
いくつかの態様において、本明細書に開示する方法は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドを皮下に、静脈内に、筋肉内に、関節内に、滑液嚢内に、胸骨内に、くも膜下腔内に、肝臓内に、病変内に、頭蓋内に、脳室内に、経口に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸に、鼻腔内に、頬側に、膣にまたは植え込まれたリザーバーを介して投与することを含む。
【０３８３】
いくつかの態様において、本明細書に開示する方法は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドを筋肉内、皮下、腫瘍内、または皮内への送達のための製剤として投与することを含む。いくつかの実施形態において、筋肉内、皮下、腫瘍内、または皮内への送達のための製剤は、追加のポリヌクレオチド、例えば、第３、第４、または第５のポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドの腫瘍内投与は、他の投与経路と比較して、抗腫瘍効果の効能を高めることができる。いくつかの実施形態において、追加のポリヌクレオチド、例えば、第３、第４または第５のポリヌクレオチドは、腫瘍内に投与され、他の投与経路と比較して抗腫瘍効果の効能を高める。
【０３８４】
本明細書に開示する方法のいくつかの態様において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドは、種々の重量比で、例えば、同量（重量による）の各ポリヌクレオチドとともに、または他のポリヌクレオチドの量（重量による）の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０倍で存在するポリヌクレオチドのいずれか１つとともに同時製剤化することができる。１つの実施形態において、ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３及びＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドがほぼ同量であり、ＩＬ−３６ガンマポリヌクレオチドが１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５または５．０倍多量の重量（質量）などの高量の重量（質量）で存在するような重量（質量）比で同時製剤化される。一つの特定の実施形態において、ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドは、１：２：１の重量（質量）比で同封製剤化される。本明細書で使用する場合、質量比は、１：１：２の重量（質量）比で製剤化されるＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む組成物に対する参照によって参照することもできる。
【０３８５】
他の実施形態において、ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドは、１：１：１、２：１：１、１：２：１、１：１：２、３：１：１、１：３：１、１：１：３、４：１：１、１：４：１、１：１：４、５：１：１、１：５：１、１：１：５、６：１：１、１：６：１、１：１：６、７：１：１、１：７：１、１：１：８、９：１：１、１：９：１、１：１：９、１０：１：１、１：１０：１、１：１：１０、１１：１：１、１：１１：１、１：１：１１、１２：１：１、１：１２：１、１：１：１２、１３：１：１、１：１３：１、１：１：１３、１４：１：１、１：１４：１、１：１：１４、１５：１：１、１：１５：１、１：１：１５、１６：１：１、１：１６：１、１：１：１６、１７：１：１、１：１７：１、１：１：１７、１８：１：１、１：１８：１、１：１：１８、１９：１：１、１：１９：１、１：１：１９、２０：１：１、１：２０：１、１：１：２０、２５：１：１、１：２５：１、１：１：２５、３０：１：１、１：３０：１、１：１：３０、３５：１：１、１：３５：１、１：１：３５、４０：１：１、１：４０：１、１：１：４０、４５：１：１、１：４５：１、１：１：４５、５０：１：１、１：５０：１、または１：１：５０の重量（質量）比で同封製剤化される。他の実施形態において、これら３つのポリヌクレオチドの各々は、異なる重量で同封製剤物中に存在することができる。例に過ぎないが、ＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドは、１：２：３、１：３：２、２：１：３、２：３：１、３：１：２、または３：２：１の重量（質量）比で、あるいは１：３：５、１：５：３、３：５：１、３：１：５、５：１：３、または５：３：１の重量（質量）比で、あるいは１：５：１０、１：１０：５、５：１：１０、５：１０：１、１０：１：５、または１０：５：１の重量（質量）比で同封製剤化することができる。特定の実施形態において、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４０）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１６）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチド（例えば、配列番号２１）は、１：２：１の重量（質量）比で製剤化される。これは好ましい製剤であるが、当業者は、この比以外のこの３つの構成要素のいずれか１つの量が本明細書に開示する方法のいずれかにおける使用に適した製剤も提供し得ることを容易に認識するだろう。
【０３８６】
ポリヌクレオチド同封製剤化は、単回用量としてまたは複数回用量として投与することができる。種々の重量（質量）比の同封製剤、例えば、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドが１：２：１ｗ／ｗで存在する同封製剤＃１、ならびに第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリヌクレオチドが１：１：２ｗ／ｗで存在する同封製剤＃２は各々、単回または複数回で、連続して、逐次、または同時に投与することができる。
【０３８７】
１つの実施形態において、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４０）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１６）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチド（例えば、配列番号２１）の１：２：１の同封製剤は、単回用量としてまたは複数回用量として投与される。
【０３８８】
本明細書に開示する方法のいくつかの態様において、本明細書に開示される組成物の投与はがんを治療する。
【０３８９】
本明細書に開示する方法のある特定の態様において、本明細書に開示する組成物は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉種、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底細胞・扁平上皮細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、癌治療起因性二次性癌、ならびにそれらのいずれかの組合せからなる群より選択されるがんを治療するために投与される。
【０３９０】
本明細書に開示する方法のいくつかの態様において、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド、及び／または第３のポリヌクレオチドは、ポンプ、パッチ、薬剤リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、急速注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、冷凍子、カニューレ、微小カニューレ、または熱、ＲＦエネルギー、電流、もしくはそれらのいずれかの組合せを利用する装置を備えた装置によって送達される。本明細書に開示する方法の他の態様において、追加のポリヌクレオチド、例えば、第３、第４または第５のポリヌクレオチドも、ポンプ、パッチ、薬剤リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、急速注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、冷凍子、カニューレ、微小カニューレ、または熱、ＲＦエネルギー、電流、もしくはそれらのいずれかの組合せを利用する装置を備えた装置によって送達される。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、本開示の方法において使用する本明細書に開示する組成物の有効量は、約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【０３９２】
本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、同じ組成物の一部である（例えば、溶液は、第１、第２、及び第３のポリヌクレオチドをいずれも含有する）。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、異なる組成物の一部である（例えば、各ポリヌクレオチドは、異なる溶液であり得、または異なる溶液中で組み合わせることができる）。
【０３９３】
本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、同時に投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、逐次投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、連続して投与される（すなわち、第１のポリヌクレオチドを初めに投与することができ、次いで第２のポリヌクレオチドの投与となり、またはその逆もある）。
【０３９４】
本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、同時に投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、逐次投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドは連続して投与される（すなわち、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドを初めに投与することができ、次いでＩＬ−３６−ガンマポリヌクレオチドまたはＩＬ−１８ポリヌクレオチドの投与となり、またはその逆もある）。
【０３９５】
本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、同時に投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、逐次投与される。本明細書に開示する方法のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは連続して投与される（すなわち、第１、第２、及び第３のポリヌクレオチドは、何らかの投与順序によって投与することができる）。特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質（例えば、配列番号１４１によってコードされる配列１４０）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４３によってコードされる配列番号１６）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４５によってコードされる配列番号２１）は、投与順序にかかわらず、１：２：１の最終的な重量（質量）比で投与される。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、本開示は、治療する腫瘍（近位腫瘍）に関して遠位に存在する腫瘍を治療する（例えば、腫瘍の大きさを減少させる）方法を提供する。いくつかの実施形態において、近位腫瘍は、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、あるいはこれらの組み合わせを用いて治療される。本明細書に開示する方法は、例えば、療法の腫瘍内投与が安全ではなくまたは実用的ではないであろう場所にある腫瘍を、本明細書に開示する組成物（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（例えば、配列番号１４１）、ｍＲＮＡすなわちＩＬ−３６−ガンマポリペプチド（例えば、配列番号１４３）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ（配列番号１４５））を１つ以上の接近可能な腫瘍へ腫瘍内投与することによって治療するために使用することができる。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、本開示は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び／または抗ＰＤ−１抗体及び／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）と一緒の、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、あるいはこれらの組み合わせの投与を含むチェックポイント阻害剤（例えば抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１を標的とする分子）に対して応答性がまったくないまたはほとんどない腫瘍を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質（例えば、配列番号１４１によってコードされる配列番号１４０）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４３によってコードされる配列番号１６）、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４５によってコードされる配列番号２１）は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び／または抗ＰＤ−１抗体及び／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）と一緒に投与される。
【０３９８】
本明細書で使用する場合、「二剤」、「二剤療法」、「二剤併用療法」、「二剤ｍＲＮＡ療法」という用語、及びこれらの文法上の変形は、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドより選択される２つのタンパク質をコードする２つのｍＲＮＡが、これを必要とする患者へ投与される併用治療を指す。いくつかの実施形態において、二剤療法は、ＩＬ−２３ポリペプチド及びＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをそれぞれコードする２つのｍＲＮＡから本質的になるかまたはこれらのｍＲＮＡからなる。二剤療法は、（ｉ）両方のｍＲＮＡを含む単一の組成物として、または（ｉｉ）各１つが各ｍＲＮＡをふくむ別個の組成物として投与することができる。いくつかの実施形態において、二剤療法におけるｍＲＮＡは、同時に投与される。他の実施形態において、二剤療法におけるｍＲＮＡは連続して投与される。
【０３９９】
本明細書で使用する場合、「三剤」、「三剤療法」、「三剤併用療法」、「三剤ｍＲＮＡ療法」という用語、及びこれらの文法上の変形は、相互交換可能に使用され、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする３つのｍＲＮＡが、これらを必要とする患者へ投与される併用治療を指す。いくつかの実施形態において、三剤療法は、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをそれぞれコードする３つのｍＲＮＡから本質的になるかまたはこれらのｍＲＮＡからなる。三剤療法は、例えば、（ｉ）３つのｍＲＮＡを（例えば、１：２：１ｗ／ｗのＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌの最終的な重量（質量）比で）含む単一の組成物として、または（ｉｉ）１つもしくは２つのｍＲＮＡを（例えば、１：２：１ｗ／ｗのＩＬ−２３：ＩＬ−３６ガンマ：ＯＸ４０Ｌの最終的な重量（質量）比で）各々１つを含む別個の組成物として投与することができる。いくつかの実施形態において、三剤療法におけるｍＲＮＡは、同時に投与される。他の実施形態において、三剤療法における各ｍＲＮＡ、またはこれらの組み合わせは、連続して投与される。特定の実施形態において、三剤療法は、１：２：１の重量（質量）比で好ましく製剤化され、何らかの投与順序により投与される（例えば、連続的、逐次、または同時）、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４１によってコードされる配列番号１４０）、（ｉｉ）ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１４３によってコードされる配列番号１６）、及び（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチド（例えば、配列番号１４５によってコードされる配列番号１４５）を含み、またはこれらから本質的になる。
【０４００】
いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に開示のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせ（例えば、ｍＲＮＡ）を必要とする対象への本明細書に開示のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせの投与が結果的に以下を生じる、治療方法を提供する：
（ａ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中の顆粒球レベルの上昇、
（ｂ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中の交差提示樹状細胞レベルの上昇、
（ｃ）閾値レベルに対して、またはＯＸ４０Ｌポリぺプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後の比に対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のエフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞と比の上昇、
（ｄ）閾値レベルに対して、またはＯＸ４０Ｌポリぺプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のエフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇、
（ｅ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のＰＤＬ１発現レベルの上昇、あるいは
（ｆ）これらの組み合わせ。
【０４０１】
本開示は、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する必要のある対象における腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害する方法であって、対象へ、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがインターロイキン２３ポリペプチド（ＩＬ−２３）を含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがインターロイキン３６−ガンマポリペプチド（ＩＬ−３６−ガンマ）またはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）を含む組成物を投与することを含む方法を提供し、第１のポリヌクレオチドはＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチド（ＯＸ４０Ｌ）を含む第３のタンパク質をコードし、対象へのこの二剤または三剤の投与は結果として以下を生じる：
（ａ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中の顆粒球レベルの上昇、
（ｂ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中の交差提示樹状細胞レベルの上昇、
（ｃ）閾値レベルに対して、またはＯＸ４０Ｌポリぺプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後の比に対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のエフェクター細胞とサプレッサーＴ細胞と比の上昇、
（ｄ）閾値レベルに対して、またはＯＸ４０Ｌポリぺプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のエフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇、
（ｅ）閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３、ＩＬ−３６−ガンマ、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、二剤または三剤の投与後に対象から得た１つ以上の試料中のＰＤＬ１発現レベルの上昇、あるいは
（ｆ）これらの組み合わせ。
【０４０２】
顆粒球、交差提示樹状細胞（例えば、ＣＤ１０３＋細胞）、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞）、サプレッサーＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）、エフェクター記憶Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞）、ＣＤ１１ｂ＋細胞のレベル、ＰＤ−Ｌ１の発現などは、当該技術分野において既知である何らかの方法によって、対象から得た１つ以上の試料において測定することができる。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、顆粒球レベルの上昇は、（ｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての顆粒球、または（ｉｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの顆粒球として定量される。いくつかの実施形態において、交差提示樹状細胞は、ＣＤ１０３＋細胞である。いくつかの実施形態において、交差提示樹状細胞レベルの上昇は、（ｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの交差提示樹状細胞、（ｉｉ）腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）における交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、またはそれらのいずれかの組合せとして定量される。いくつかの実施形態において、エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比は、ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比として定量される。実施形態において、エフェクター記憶Ｔ細胞とはＣＤ４＋細胞及び／またはＣＤ８＋細胞である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１発現レベルは、（ｉ）陽性ＣＤ１１ｂ＋細胞の数、または（ｉｉ）ＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現として定量される。
【０４０４】
本開示は、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む組成物を投与することを含む、顆粒球レベルの上昇を必要とする対象における顆粒球レベルを上昇させる方法であって、顆粒球レベルが、対象から得た１つ以上の試料において測定される、方法も提供する。いくつかの実施形態において、顆粒球レベルの上昇は、閾値レベルに対して、あるいはＩＬ−２３をコードする単一のポリヌクレオチドまたはＩＬ−３６−ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、（ｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての顆粒球、及び／または（ｉｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの顆粒球として測定される。
【０４０５】
交差提示樹状細胞レベルの上昇を必要とする対象へ、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドが、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）を含む組成物を投与することを含む、対象における樹状細胞レベルを上昇させる方法であって、交差提示樹状細胞レベルが、対象から得た１つ以上の試料において測定される方法も提供される。いくつかの実施形態において、交差提示樹状細胞は、ＣＤ１０３＋細胞である。いくつかの実施形態において、交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞レベルの上昇は、閾値レベルに対して、またはＩＬ−２３をコードする単一のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする単一のポリヌクレオチド、またはＯＸ４０Ｌをコードする単一のポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、（ｉ）腫瘍１ｍｇ当たりの交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、（ｉｉ）ＴｄＬＮにおける交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋細胞の百分率としての交差提示ＣＤ１０３＋樹状細胞、または（ｉｖ）これらの組み合わせとして測定される。
【０４０６】
本開示は、エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比の上昇を必要とする対象へ、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば配列番号１４１、１４３及び１４５）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるエフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比を上昇させる方法であって、エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比が対象から得られた１つ以上の試料において測定される、方法も提供する。いくつかの実施形態において、エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比は、ＣＤ８＋細胞と調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）との比、すなわちＣＤ８：Ｔｒｅｇの比として測定される。
【０４０７】
本開示は、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるエフェクター記憶Ｔ細胞レベルを上昇させる方法であって、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルが、対象から得た１つ以上の試料において測定される方法も提供される。いくつかの実施形態において、エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４＋細胞及び／またはＣＤ８＋細胞である。いくつかの実施形態において、エフェクター記憶Ｔ細胞レベルの上昇は、閾値レベルに対して、またはＯＸ４０Ｌをコードする単一ポリヌクレオチドの投与後のレベルに対して、腫瘍内でのエフェクター記憶Ｔ細胞として測定される。
【０４０８】
本開示は、ＰＤ−Ｌ１陽性細胞レベルを上昇させることを必要とする対象へ、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）を含む組成物を投与することを含む、対象におけるＰＤ−Ｌ１陽性細胞レベルを上昇させる方法であって、ＰＤ−Ｌ１陽性細胞レベルが、対象から得た１つ以上の試料において測定される方法も提供される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１陽性細胞は、ＣＤ１１ｂ＋細胞である。
【０４０９】
本明細書に開示する方法のいくつかの態様において、対象から得た１つまたは複数の試料は、腫瘍組織、腫瘍浸潤物、血液、血漿、及びそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の対照試料は、健常対象または腫瘍に罹患している対象から得た１つまたは複数の試料である。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、閾値レベルは、所定の値、または１つ以上の試料から得た値であり、例えば、健常個体の集団または腫瘍に罹患している対象の集団からの試料のプールから得た値である。
【０４１１】
本開示は、（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）、または（ｉｉｉ）本明細書に開示する何らかの組成物、を含む組成物を用いて腫瘍疾患を有する対象を治療するかどうかを判断する方法であって、
（ｉ）二剤もしくは三剤の初期用量を被投与者へ投与すること、及び
（ｉｉ）二剤もしくは三剤の初期用量の投与後に対象が閾値レベルに関して以下の上昇を有すると判断された場合、対象を治療することを含む方法も提供する：
（ａ）顆粒球レベル、
（ｂ）交差提示樹状細胞のレベル、
（ｃ）エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比、
（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、
（ｅ）ＰＤ−Ｌ１陽性細胞のレベル、
（ｆ）ＰＤ−Ｌ１発現、または
（ｇ）これらの組み合わせ。
【０４１２】
（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドが、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）、または（ｉｉｉ）本明細書に開示する何らかの組成物、を含む組成物を用いた治療のための候補として腫瘍と診断された対象を選択する方法であって、
（ｉ）二剤または三剤の初期用量を被投与者へ投与すること、及び
（ｉｉ）二剤または三剤の初期用量の投与後に対象が閾値レベルに関して以下の上昇を有すると判断された場合、治療のための対象を選択すること、を含む方法も提供する：
（ａ）顆粒球レベル、
（ｂ）交差提示樹状細胞のレベル、
（ｃ）エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比、
（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、
（ｅ）ＰＤ−Ｌ１陽性細胞のレベル、
（ｆ）ＰＤ−Ｌ１発現、または
（ｇ）これらの組み合わせ。
【０４１３】
本開示は、腫瘍を治療するための組成物の効能を測定する必要のある対象における腫瘍を治療するための組成物の効能を測定する方法であって、組成物が（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする、組み合わせ（二剤）における２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードし、第３のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする、組み合わせ（三剤）における３つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１４１、１４３及び１４５）、または（ｉｉｉ）本明細書に開示する何らかの組成物、を含む組成物の効能を測定する方法であって、対象から採取した少なくとも１つの試料において、（ａ）顆粒球レベル、（ｂ）交差提示樹状細胞レベル、（ｃ）エフェクターＴ細胞とサプレッサーＴ細胞との比、（ｄ）エフェクター記憶Ｔ細胞のレベル、（ｅ）ＰＤ−Ｌ１陽性細胞のレベル、（ｆ）ＰＤ−Ｌ１発現、または（ｇ）これらの組み合わせを測定することを含み、閾値レベルに関してこれらの測定結果の少なくとも１つの上昇は、対象が二剤または三剤を用いた処置に応答していることを示す、方法も提供する。
【０４１４】
ＩＶ．疾患、障害及び／または状態
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドを使用して、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することができる。
【０４１５】
いくつかの実施形態において、追加のポリヌクレオチド（例えば、第４のポリヌクレオチド）は、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドとの組み合わせで、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害するために投与することができる。
【０４１６】
したがって、いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、すなわち、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドを使用して、腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することを必要とする対象において腫瘍の大きさを減少もしくは低下させまたは腫瘍の成長を阻害することができる。
【０４１７】
いくつかの実施形態において、腫瘍は、疾患、障害、及び／または状態と関係している。特定の実施形態において、疾患、障害、及び／または状態はがんである。したがって、１つの態様において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドの投与により、がんを治療する。
【０４１８】
別の態様において、ＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドとさらに組み合わせた、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチドの投与により、がんを治療する。
【０４１９】
「がん」とは、体内の異常な細胞の成長が制御されていないことを特徴とする幅広い、種々の疾患群をいう。調節されていない細胞の分裂及び成長は結果として、隣接組織に侵入し、リンパ系または血流を通じて身体の遠位の部分へ転移することもできる悪性腫瘍の形成を生じる。「がん」または「がん組織」は、種々の病期での腫瘍を含むことができる。ある特定の実施形態において、がんまたは腫瘍は第０期であり、このような場合、例えば、がんまたは腫瘍は、発生において非常に初期であり、転移していない。いくつかの実施形態において、がんまたは腫瘍は第Ｉ期であり、このような場合、例えば、がんまたは腫瘍は、大きさが比較的小さく、近隣の組織へ広がっておらず、転移していない。他の実施形態において、がんまたは腫瘍は、第ＩＩ期または第ＩＩＩ期であり、このような場合、例えば、がんまたは腫瘍は、第０期または第Ｉ期よりも大きく、近隣組織の中へと成長しているが、転移しておらず、例外は、リンパ節への転移の可能性である。他の実施形態において、がんまたは腫瘍は、第ＩＶ期であり、このような場合、例えば、がんまたは腫瘍は、転移している。第ＩＶ期は、進行癌または転移癌とも呼ぶことができる。
【０４２０】
いくつかの態様において、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉種、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底細胞・扁平上皮細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、がん治療により生じる二次がんを含むことができるが、これらに限定されない。
【０４２１】
いくつかの態様において、腫瘍は固形腫瘍である。「固形腫瘍」は、肉腫、メラノーマ、癌腫、または他の固形腫瘍癌を含むが、これらに限定されない。「肉腫」は、胚性結合組織のような物質でできた腫瘍を指し、概して、線維状物質または均質な物質において包埋された密に詰められた細胞から構成されている。肉腫には、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシー肉腫、脂肪肉腫、脂肪肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫（、絨毛癌、胎芽性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー肉腫、血管肉腫、白血肉腫症、悪性間葉細胞腫肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または末梢血管拡張性肉腫（ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｌｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０４２２】
「メラノーマ」という用語は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍をいう。メラノーマには、例えば、末端黒子型メラノーマ、無色素性メラノーマ、良性若年性メラノーマ、クラウドマンメラノーマ、Ｓ９１メラノーマ、ハーディング・パッセーメラノーマ、若年性メラノーマ、悪性黒子メラノーマ、悪性メラノーマ、転移性メラノーマ、結節性メラノーマ、爪下メラノーマ、または表在性拡大型メラノーマが含まれる。
【０４２３】
「癌腫」という用語は、周辺組織に浸潤して転移をもたらす傾向がある上皮細胞でできた悪性の新たな成長物をいう。例示的な癌腫としては、例えば、腺房癌、小葉癌、腺嚢癌腫、腺様嚢胞癌、腺腫様癌、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞上皮癌、基底細胞癌、基底細胞癌、類基底細胞癌、基底扁平細胞癌、気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、粘液癌、面皰癌、子宮体癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱癌、円柱細胞癌、腺管癌、硬膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｄｕｒｕｍ）、胎児性癌、脳様癌、類上皮癌、上皮アデノイド癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維性癌、膠様癌、コロイド腺癌、巨細胞癌、巨細胞癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血性癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子状癌、副腎様癌、乳児性胎生期癌、上皮内癌、表皮内癌、上皮内癌、クロンペシャー癌、カルチャスキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ状癌、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌、髄様癌、黒色癌、軟性癌、粘液癌、粘液分泌性癌、粘液細胞癌、粘膜類表皮癌、粘液癌、粘液性癌、粘液腫状癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、骨様癌、乳頭状癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、髄様癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫性癌、シュナイダー癌腫、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、回転楕円面細胞癌腫、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮癌、絞施型癌、血管拡張性癌、血管拡張様癌、移行上皮癌、結節癌、結節癌、いぼ状癌、または絨毛癌が挙げられる。
【０４２４】
治療することができる追加のがんには、例えば、白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺癌、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽腫、神経内分泌癌、食道癌、尿路生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミューラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌が含まれる。
【０４２５】
本発明の方法に従った治療に適しているがん及び／または腫瘍は、直接的な腫瘍内投与及び／または局所的投与、すなわち、標的腫瘍の領域における投与を介して接触可能なものを含む。例えば、単純なシリンジ注射を用いた投与へ接触可能な腫瘍は、治療に容易に適している。また、治療に適しているのは、注射に何らかの撮像及び／または誘導投与を必要とする腫瘍、及び／または注射が画像誘導穿刺注射を介して、または部位へと直接的にカテーテル／カニューレを介して、もしくは内視鏡を介して可能であるものである。
【０４２６】
治療に適した例示的ながん及び／または腫瘍は、メラノーマ、乳癌、例えば、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、肉腫、ＣＴＬＣ、ＮＨＬ、基底細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、神経膠腫、胃癌、及び膵癌を含む。治療に特に適しているのは、メラノーマ、乳癌、例えば、ＴＮＢＣ、及び頭頸部癌である。
【０４２７】
メラノーマ
メラノーマとは、皮膚癌の最も侵襲性の形態の１つである。さらに、発生率は増加の一途であり、利用可能な治療選択肢はほとんどない。メラノーマは、世界中で年間新たに１３２，０００例の発生率で検出され（米国では年間新たに７６，０００例）、米国における年間およそ１０，０００例の死亡を占める。約２５％が４０歳未満の患者である。ＰＤ−１阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ）は現行では、ケアの標準であり、３７％の効果の持続性を、２年間で３０％の進行のない生存を立証している。しかしながら、非レスポンダーについては迅速な進行も観察され（中央値４か月）、たったの４０％の全体的な生存が３年間で観察され、平衡状態の証拠はなく、すなわち、治療した患者は退行し続ける。
【０４２８】
したがって、この状況における新たな、より有効な治療についての明らかな必要性がある。メラノーマは、がんに対する免疫性を理解するためのモデル腫瘍としても役立っている。メラノーマ腫瘍関連抗原は、特定及び分類される最初のがん抗原であったが、さらなる研究は、これらの多くが他の腫瘍のタイプによっても発現することを示している。加えて、メラノーマ退行は白斑と関係しており、このタイプのがんにおける免疫系の活発な役割を視認でき、原発メラノーマの自然退行も、いくつかの症例で観察されてきた。これらの観察は、メラノーマにおける免疫系の活動度と関連して、この腫瘍が免疫療法に適していると立証すべきである強力な証拠を提供した。この背景に対し、メラノーマは、長く免疫腫瘍学的研究の最先端であり続け、免疫腫瘍学的方法に関する我々の理解を高めるためのモデル腫瘍として使用され続けるようであり、他のタイプの免疫療法応答がんにおける治療選択肢を知らせることになる。
【０４２９】
三重陰性乳癌
乳癌は、異なるタイプの治療を必要とする異なる特徴を示す。たいていの乳癌は、ホルモン受容体陽性であり、このことは、がん細胞が、女性ホルモンであるエストロゲン及び／またはプロゲステロンへの曝露から成長するよう刺激されることを意味する。他の乳癌は、ＨＥＲ２陽性といわれており、このことは、この乳癌が細胞の複製及び成長に関与する生物学的経路であるヒト表皮成長因子受容体２を過剰発現することを意味する。ＨＥＲ２陽性乳癌は、乳癌のおよそ２５％を占め、成長及び複製を遅延させるために受容体を標的とする作用剤を用いて治療される。エストロゲンまたはプロゲステロンへの曝露から成長するよう刺激されておらず、ＨＥＲ２陰性である乳癌は、三重陰性乳癌と呼ばれる。三重陰性乳癌は、他の乳癌よりも侵襲性が高い傾向にあり、他の乳癌と比較して治療選択肢は少数である。乳癌は歴史的に、免疫学的にサイレントであるとみなされてきたが、いくつかの前臨床試験及び臨床試験は、乳がん患者についての臨床成績を改善する可能性が免疫治療にあることを示唆している。全体として、免疫治療は、腫瘍自体に向けられる従来の化学療法処置及び標的化処置を上回るいくつかのカギとなる利点を持っている。第一に、免疫治療は概して結果的に副作用が低めとなり、より長期間及び／または毒性を追加されることなく他の作用剤と組み合わせて投与することができる。患者は、免疫治療に対する耐性を発展させる傾向もほとんどない場合があり、その理由は、複数のがん抗原を同時に標的として、同時にがん細胞を変化させるように適応させる免疫系の能力のためである。
【０４３０】
頭頸部癌
頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、種々の機序を介して免疫抑制状態を誘導する。ＨＮＳＣＣ患者は、健常対照と比較してリンパ球の恒常性が変化している（主として、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ４＋細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが低下）。この不均衡は、治癒を企図した治療の後、２年間そのままでさえある。一貫して、より多数の腫瘍浸潤ＣＤ４＋リンパ球及びＣＤ８＋リンパ球は、ＨＮＳＣＣ患者におけるより良好な全体的な生存と関係している。加えて、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）の機能は、ＨＮＳＣＣ患者において低下している。
【０４３１】
ＨＮＳＣＣ細胞は、免疫サーベイランス及びその後の除去をエスケープするためのある特定の戦略を適用する。例えば、ＨＮＳＣＣ細胞は、免疫系と間接的に相互作用して、免疫抑制性微小環境を維持する。本質的に、ＨＮＳＣＣは、生理学的状況下での自己免疫または免疫系の過剰活性化を回避するために、免疫系が免疫チェックポイントを通じて緊密に調節されているという事実を利用している。
【０４３２】
腫瘍指向性免疫治療
免疫腫瘍学的方法の分野にとって重要な目標とは、応答率を改善し、免疫治療に応答する腫瘍発生数を、有害な副作用を高めることなく増加させることである。これらの目標を達成する１つのアプローチは、腫瘍指向性免疫治療を用いること、すなわち、免疫系の最も関連性のある部分に対して免疫活性化の的を絞ることである。これにより抗腫瘍効能を改善し、免疫関連有害事象を低減させ得る。腫瘍指向性免疫活性化は、腫瘍へのまたは腫瘍領域への免疫調節因子の直接的な局所注射によって達成することができる。標的チェックポイント阻害剤及び共刺激受容体に的を絞った療法は、局所の免疫活性化を介して腫瘍特異的Ｔ細胞応答を生じることができる。
【０４３３】
腫瘍微小環境の調節
ある特定の実施形態において、本発明の組成物（例えば、二剤または三剤ｍＲＮＡ組成物）は、腫瘍微小環境を調節することができ、及び／または治療する対象における腫瘍微小環境に基づく治療のために選択でき得る。１つの実施形態において、本発明の組成物は、炎症性腫瘍微小環境を有する腫瘍の治療のために使用され得る。別の実施形態において、本発明の組成物は、免疫抑制性腫瘍微小環境を有する腫瘍の治療のために使用され得る。さらに別の実施形態において、本発明の組成物は、免疫学的に欠乏している腫瘍微小環境を有する腫瘍を治療するために使用される。腫瘍が炎症性腫瘍微小環境を有する状況、すなわち、腫瘍微小環境がすでに免疫及び／または炎症細胞の浸潤を示している状況において、三剤ｍＲＮＡ療法による治療ではなく二剤ｍＲＮＡ療法による治療が十分であり得る（実施例２３、図４３Ａ−Ｂを参照のこと）。例えば、炎症性腫瘍微小環境を伴う腫瘍の治療のために、１つの実施形態において、腫瘍は、ＩＬ−１２ファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−２３）をコードするポリヌクレオチド及び免疫応答共刺激シグナル（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするポリヌクレオチドで治療する。
【０４３４】
Ｖ．併用療法
ある特定の実施形態において、本明細書に開示する治療方法は、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドを投与すること、ならびに１つまたは複数の抗がん薬を対象へ投与することをさらに含む。ある特定の実施形態において、本明細書に開示する治療方法は、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを含み、かつ１つまたは複数の抗がん薬を対象へ投与することをさらに含む。
【０４３５】
いくつかの実施形態において、この１つまたは複数の抗がん薬はｍＲＮＡである。ある特定の実施形態において、この１つまたは複数の抗がん薬は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡである。他の実施形態において、この１つまたは複数の抗がん薬は、腫瘍抗原でも腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡでもない。いくつかの実施形態において、この１つまたは複数の抗がん薬は、米国食品医薬品局によって承認された作用薬である。他の実施形態において、この１つまたは複数の抗がん薬は、米国食品医薬品局によって承認される前の作用薬である。
【０４３６】
いくつかの態様において、本発明の方法または組成物についての対象は、ケア療法の１つまたは複数の標準物質を用いて治療されてきた。他の態様において、本発明の方法または組成物についての対象は、ケア療法または抗がん療法の１つまたは複数の標準物質に対して応答してきていない。
【０４３７】
近年、治療目的のための免疫チェックポイント阻害剤の導入ががん治療を変革してきた。目的のものは、チェックポイント阻害剤と他の共刺激分子または阻害分子との組み合わせを特徴とする療法である。
【０４３８】
Ｔ細胞の調節、すなわち、活性化または阻害は、共刺激シグナルまたは共阻害シグナルを介して仲介される。この相互作用はリガンド／受容体の相互作用を介して発揮される。Ｔ細胞は、ＯＸ４０などの活性化受容体及びプログラム細胞死受容体１（ＰＤ−１）または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）などの阻害受容体（すなわち、免疫チェックポイント）の両方を無数保有する（Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｎａｔｕｒｅ．；４８０：４８０−４８９）。この免疫チェックポイントの活性化は結果として、Ｔ細胞の失活を生じ、腫瘍細胞によるこれらの経路の動員は、免疫チェックポイントがうまく免疫をエスケープすることに寄与する。
【０４３９】
ペンブロリズマブまたはニボルマブなど、プログラム死受容体１／プログラム死リガンド１（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１）とＰＤ−Ｌ２の間の相互作用を標的とする免疫チェックポイント阻害剤は近年、種々の悪性腫瘍の治療に承認されてきており、メラノーマ、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含むがんの臨床試験で現在調査されている。これらの治験から入手可能なデータは、これらの患者集団における好ましい安全性及び毒性特性が付随する実質的な活性を示す。
【０４４０】
例えば、チェックポイント阻害剤は、メラノーマの治療についての臨床試験において試験されてきた。特に、第ＩＩＩ相臨床試験は、イピリムマブ及びペンブロリズマブなど、ＣＴＬＡ４及びＰＤ−１免疫チェックポイントをそれぞれ標的とする療法がメラノーマ患者の３年生存率を約７０％まで、及び全体の生存率（５年超）を約３０％まで上昇させることを明らかにした。
【０４４１】
同様に、チェックポイント阻害剤は、頭頸部癌の治療についての臨床試験において検査されてきた。前臨床試験において、ＨＮＳＣＣ腫瘍の４５〜８０％がプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を発現させることが示された（Ｚａｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．５０：６２７−６３２）。現に、単一療法としてのまたはＨＮＳＣＣの組み合わせレジメンにおける免疫チェックポイント阻害剤の効能及び安全性を評価する非常にたくさんの臨床試験がある。例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、及びＣＴＬＡ−４阻害剤を用いた臨床試験は、ＨＮＳＣＣにおいて試験中である。ＰＤ−１抗体ペンブロリズマブが転移性／再発性（Ｒ／Ｍ）ＨＮＳＣＣ患者において有効であろうというデータは、第１ｂ相キーノート−０１２第Ｉ／ＩＩ相試験において得られた（Ｃｈｅｎｇ．ＡＳＣＯ  ２０１５、口頭発表）。より近年、無作為化チェックメイト−１４１第ＩＩＩ相臨床試験のデータが発表された（Ｇｉｌｌｉｓｏｎ．ＡＡＣＲ  ２０１６、口頭発表）。この試験では、白金不応性Ｒ／Ｍ  ＨＮＳＣＣ患者において２週間ごとに投与されたモノクローナルＰＤ１抗体ニボルマブの効能を調査した。この試験は、この試験のニボルマブ群の優位性により、早期に終わった。
【０４４２】
１つの態様において、対象は、本開示のポリヌクレオチドに先立ってＰＤ−１アンタゴニストを用いてすでに治療されている。別の態様において、対象は、本開示のポリヌクレオチドに先立ってＰＤ−１へ結合するモノクローナル抗体を用いて治療されている。別の態様において、対象は、本発明の方法または組成物のポリヌクレオチドに先立って抗ＰＤ−１モノクローナル抗体療法を用いて治療されている。他の態様において、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体療法は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、またはそれらのいずれかの組合せを含む。別の態様において、対象は、本開示のポリヌクレオチドに先立ってＰＤ−Ｌ１へ結合するモノクローナル抗体を用いて治療されている。別の態様において、対象は、本発明の方法または組成物のポリヌクレオチドに先立って抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体療法を用いて治療されている。他の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体療法は、デュルバルマブ、アベルマブ、ＭＥＤＩ４７３、ＢＭＳ−９３６５５９、アエゾリズマブ、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０４４３】
いくつかの態様において、対象は、本開示の組成物を用いた治療に先立って、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを用いて治療されている。別の態様において、対象は、本開示の組成物に先立ってＣＴＬＡ−４へ結合するモノクローナル抗体を用いてすでに治療されている。別の態様において、対象は、本開示のポリヌクレオチドに先立って、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体を用いて治療されている。他の態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体療法は、イピリムマブまたはトレメリムマブを含む。
【０４４４】
いくつかの態様において、本開示は、がんを治療する方法及び／または免疫治療の方法を必要とする対象へ（例えば、腫瘍内に、腹腔内に、または静脈内に）ＩＬ−２３ポリペプチド、またはＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド．ＯＸ４０Ｌポリペプチドをそれぞれコードする第１、第２、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、ＰＤ−１アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−１へ特異的に結合する抗体、例えば抗ＰＤ−１モノクローナル抗体またはその抗原結合部分との組み合わせで投与することを含む、当該対象におけるこれらの方法に関する。
【０４４５】
一実施形態において、本開示に有用な抗ＰＤ−１抗体（またはその抗原結合部分）は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ランブロリズマブ、及びＭＫ−３４７５としても公知）は、ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１（プログラム死１またはプログラム細胞死１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，９００，５８７号において説明されており、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝６９５７８９（最新アクセス日：２０１４年１２月１４日）も参照されたい。ペンブロリズマブは、再発性または不応性メラノーマ及び進行性ＮＳＣＬＣの治療のためにＦＤＡによって承認されている。
【０４４６】
別の実施形態において、本開示に有用な抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。ニボルマブ（「ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）」、旧名５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、またはＯＮＯ−４５３８としても公知）は、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に防止して、それにより抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方調節を遮断する完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害抗体である（米国特許第８，００８，４４９号；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２（９）：８４６−５６）。ニボルマブは、腎細胞がん（腎腺癌、または副腎腫）、メラノーマ、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む種々の進行性固形腫瘍において活性を示してきた（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２ａ；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；ＷＯ  ２０１３／１７３２２３。
【０４４７】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１受容体に対するモノクローナル抗体であるＭＥＤＩ０６８０（旧名ＡＭＰ−５１４）である。ＭＥＤＩ０６８０は、例えば、米国特許第８，６０９，０８９Ｂ２号において、またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝７５６０４７（最新アクセス日２０１４年１２月１４日）において説明されている。
【０４４８】
ある特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であるＢＧＢ−Ａ３１７である。ＢＧＢ−Ａ３１７は、米国公開第２０１５／００７９１０９号において説明されている。
【０４４９】
ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、Ｂ７−ＤＣ  Ｆｃ融合タンパク質であるＡＭＰ−２２４である。ＡＭＰ−２２４は、米国公開第２０１３／００１７１９９号において、またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ／ｃａｎｃｅｒ−ｄｒｕｇ？ｃｄｒｉｄ＝７００５９５（最新アクセス日２０１５年７月８日）において考察されている。
【０４５０】
他の実施形態において、本開示は、がんを治療する方法及び／または免疫治療の方法を必要とする対象へ（例えば、腫瘍内に、腹腔内に、または静脈内に）、ＩＬ−２３ポリペプチド、またはＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをそれぞれコードする第１、第２、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、ＰＤ−１へ特異的に結合する抗体、例えば、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、もしくはそれらのいずれかの組合せを含む抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合部分と一緒に投与することを含む、当該対象におけるこれらの方法を含む。
【０４５１】
いくつかの態様において、本開示は、がんを治療する方法及び／または免疫治療の方法を必要とする対象へ（例えば、腫瘍内に、腹腔内に、または静脈内に）ＩＬ−２３ポリペプチド、またはＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをそれぞれコードする第１、第２、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−Ｌ１へ特異的に結合する抗体、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、例えば、デュルバルマブ、アベルマブ、ＭＥＤＩ４７３、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、もしくはそれらのいずれかの組合せを含む抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合部分との組み合わせで投与することを含む、当該対象におけるこれらの方法に関する。
【０４５２】
ある特定の実施形態において、本開示に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブとも呼び、ＵＳ２０１４／０３４１９１７を参照されたい）またはＢＭＳ−９３６５５９（旧１２Ａ４またはＭＤＸ−１１０５）である（例えば、米国特許第７，９４３，７４３号、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。他の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａである（ＲＧ７４４６としても公知）（例えば、Ｈｅｒｂｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３１（補遺）：３０００．Ａｂｓｔｒａｃｔ；米国特許第８，２１７，１４９号を参照されたい）、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブとも呼ばれており、Ｋｈｌｅｉｆ（２０１３）Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ２０１３；２０１３年９月２７日〜１０月１日、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓである。
【０４５３】
他の態様において、本開示は、がんを治療する方法及び／または免疫治療の方法を必要とする対象へ（例えば、腫瘍内に、腹腔内に、または静脈内に）ＩＬ−２３ポリペプチド、またはＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドをそれぞれコードする第１、第２、及び／または第３のポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、例えば、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体、例えば、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、例えば、イピリムマブもしくはトレメリムマブ、またはそれらのいずれかの組合せを含む抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、あるいはそれらの抗原結合部分との組み合わせで投与することを含む、当該対象におけるこれらの方法に関する。
【０４５４】
例示的な臨床用抗ＣＴＬＡ−４抗体は、米国特許第６，９８４，７２０号において開示されるようなヒトｍＡｂ１０Ｄ１（今ではイピリムマブとして公知であり、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）として市販）である。本発明の方法に有用な別の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６としても公知）である。トレメリムマブは、ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体である。トレメリムマブは、ＷＯ／２０１２／１２２４４４、米国公開第２０１２／２６３６７７号、または国際公開第２００７／１１３６４８  Ａ２号において説明されている。
【０４５５】
一実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチドは、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、ＰＤ−１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、ＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、それらをコードするポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せとの組み合わせで投与される。
【０４５６】
一実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチドは、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、またはこれらをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせで投与される。
【０４５７】
別の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチドは、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、またはこれらをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせで投与される。
【０４５８】
さらに別の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む第３のタンパク質をコードする第３のポリペプチドは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、及びＣＴＬＡ−４（またはそのポリヌクレオチド）へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分との組み合わせで投与される。
【０４５９】
ＶＩ．免疫調節ポリペプチドをコードする、配列最適化したポリヌクレオチド配列
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示するポリペプチド、例えば、ＩＬ−２３（ＩＬ−２３の少なくとも１つのサブユニットまたはＩＬ−２３の両サブユニットを含む融合タンパク質）、ＩＬ−３６−ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌをコードする配列最適化したヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、このＯＲＦは、配列最適化がされている（例えば、配列番号１４１）。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、このＯＲＦは、配列最適化がされている（例えば、配列番号１４３）。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、このＯＲＦは、配列最適化がされている（例えば、配列番号１４５）。
【０４６０】
いくつかの実施形態において、配列最適化したＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０Ｌの配列、これらの断片、ならびにバリアントは、本明細書に開示する方法を実施するために使用される。いくつかの実施形態において、配列最適化したＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０Ｌの断片ならびにこれらのバリアントは、それらの個々の野生型配列と組み合わせられまたは当該野生型配列に対する代替物である（表１及び表１Ａにおいて示す）。
【０４６１】
本明細書に開示する配列最適化したヌクレオチド配列は、対応する野生型ヌクレオチド酸配列とは及び他の公知の配列最適化したヌクレオチド配列とは異なっており、例えば、これらの配列最適化した核酸は、独自の組成特徴を有する。
【０４６２】
いくつかの実施形態において、配列最適化したヌクレオチド配列（例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマもしくはＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチド、これらの機能的断片またはそれらのバリアント）におけるウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率は、参照野生型ヌクレオチド配列におけるウラシルまたはチミンの核酸塩基の百分率に関して変更させられる（例えば、低下させられる）。このような配列は、ウラシル改変したまたはチミン改変した配列と呼ばれる。ヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミンの含有量の百分率は、配列中のウラシルまたはチミンの数をヌクレオチドの総数によって除して１００を乗じたものによって求めることができる。いくつかの実施形態において、配列最適化したヌクレオチド配列は、参照野生型配列におけるウラシルまたはチミンの含有量よりも少量のウラシルまたはチミンの含有量を有する。いくつかの実施形態において、本開示の配列最適化したヌクレオチド配列におけるウラシルまたはチミンの含有量は、参照野生型配列におけるウラシルまたはチミンの含有量よりも多く、有益な効果、例えば、参照野生型配列と比較した場合、高い発現及び／またはシグナル伝達の応答をなおも維持している。
【０４６３】
いくつかの実施形態において、本開示の最適化した配列は、その配列中にウラシルまたはチミン（ＤＮＡの場合）の独自の範囲を含有する。最適化した配列のウラシルまたはチミンの含有量は、種々の方法で、例えば、理論的最小値に対する（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）、野生型に対する（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）及び総ヌクレオチド含有量に対する（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）最適化した配列のウラシルまたはチミンの含有量で表すことができる。ＤＮＡについては、チミンは、ウラシルの代わりに存在すると認識されており、ＵのあるところではＴに置換されるであろう。したがって、例えば、ＲＮＡに関して％ＵＴＭ、％ＵＷＴ、または％ＵＴＬと関連した開示はすべて、ＤＮＡに関して％ＴＴＭ、％ＴＷＴ、または％ＴＴＬに等しく適用可能である。
【０４６４】
ウラシルまたはチミンの理論的最小値に対するウラシル含有量またはチミン含有量とは、配列最適化したヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミンの数を、仮説上の配列におけるコドン全部が最小の考えられ得るウラシルまたはチミンの含有量を有する同義のコドンと置き換えられた仮説上のヌクレオチド配列におけるウラシルまたはチミンの総数によって除して、１００を乗じることによって求めたパラメータを指す。このパラメータは、本明細書では％ＵＴＭまたは％ＴＴＭと略記される。
【０４６５】
本開示のＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変またはチミン改変した配列は、対応する野生型核酸配列（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）中のウラシルまたはチミンの含有量に対する当該就職した配列のウラシルまたはチミンの含有量により説明することもできる。「野生型核酸配列中のウラシルまたはチミンの含有量に対するウラシルまたはチミンの含有量」とは、配列最適化した核酸中のウラシルまたはチミンの数を、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミンの総数によって除して１００を乗じたものによって求めたパラメータを指す。このパラメータは、本明細書において％ＵＷＴまたは％ＴＷＴと略記される。
【０４６６】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は、対応する野生型核酸配列に関して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２つの連続したロイシンは、４つのウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。このようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去しているＣＵＧＣＵＣで置換することができる。フェニルアラニンはＵＵＣまたはＵＵＵによってコードすることができる。したがって、ＵＵＵによってコードされるフェニルアラニンがＵＵＣによって置き換えられた場合でさえ、同義のコドンはウラシルペア（ＵＵ）をなおも含有している。したがって、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変化させることなく、除去することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立している。
【０４６７】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に関してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の最小可能数に対応するウラシルペア（ＵＵ）の数を有する。
【０４６８】
「野生型核酸配列中のウラシル対（ＵＵ）に対するウラシルペア（ＵＵ）」という語句は、配列最適化したヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数を対応する野生型ヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の総数で除して１００を乗じることによって求めたパラメータを指す。このパラメータは、本明細書において％ＵＵＷＴと略記される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は１００％より少ない％ＵＵＷＴを有する。
【０４６９】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示するＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列は、少なくとも１つの化学的に改変した核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、改変した核酸塩基である。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするウラシル改変した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル改変した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２へ結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル改変した配列を含むポオリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）を有する化合物、例えば、化合物１〜１４７のいずれか、または化合物１〜２３２のいずれかを用いて製剤化される。
【０４７０】
ＶＩＩ．配列の最適化のための方法
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチド（例えば、野生型配列、その機能的断片、またはバリアントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド）は、配列最適化がなされている。
【０４７１】
配列最適化したヌクレオチド配列（ヌクレオチド配列は本明細書では「核酸」とも呼ばれる）は、参照配列（例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする野生型配列）に関して、少なくとも１つのコドンの改変を含む。したがって、配列最適化した核酸において、少なくとも１つのコドンは、参照配列（例えば、野生型配列）中の対応するコドンとは異なる。
【０４７２】
概して、配列最適化した核酸は、参照配列中のコドンを同義のコドン（すなわち、同じアミノ酸をコードするコドン）と置換することを含む少なくとも１つのステップによって生成される。このような置換は、例えば、コドン置換マップ（すなわち、コドン最適化された配列中の各アミノ酸をコードすることになっているコドンを提供する表）を適用することによって、または法則セット（例えば、グリシンが中性アミノ酸の隣にある場合、グリシンはある特定のコドンによってコードされるであろうが、極性アミノ酸の隣にある場合は、別のコドンによってコードされるであろう）を適用することによってもたらすことができる。コドンの置換（すなわち、「コドンの最適化」）に加えて、本明細書に開示する配列の最適化法は、有害なモチーフの除去（不安定性モチーフの置換）など、コドン最適化を厳密に取り扱ってはいない追加の最適化ステップを含む。これらの配列最適化した核酸（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含む組成物及び製剤は、機能的に活性のあるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏでの発現を容易にするために、当該核酸を必要とする対象へ投与することができる。
【０４７３】
細胞培養物中の大きな分子の組換え発現は、数多くの制限（例えば、不良なタンパク質発現レベル、切断型発現産物を結果として生じる失速した翻訳、タンパク質ミスフォールディングなど）をともなって、課題の残るものとなる可能性がある。これらの制限は、機能的に活性のあるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）、あるいはこれらを含む組成物または製剤をがんに罹患している患者へ投与することによって低減または回避することができ、それにより、がんを治療するためのＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの合成及び送達が内在的に生じる。
【０４７４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの発現系（例えば、細胞培養）からｉｎ  ｖｉｖｏでの発現への変更は、治療剤をコードする核酸配列の再設計を必要とする。コードされたアミノ酸配列を必ずしも変化させることなく異なるコドンを選択することによって天然に存在する遺伝子配列を再設計することはしばしば、タンパク質発現レベルの劇的な上昇をもたらすことができる（Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ／Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２２，３４６−５３）。コドン適応指標（ＣＡＩ）、ｍＲＮＡの二次構造、シス調節配列、ＧＣ含有量及び多くの他の類似の変数などの変数は、タンパク質発現レベルと幾分相関していることが示されてきた（Ｖｉｌｌａｌｏｂｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，”Ｊｏｕｒｎａｌ／ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ７，２８５）。しかしながら、遺伝暗号の縮重により、すべてが同じ治療剤をコードすることができる数多くの異なる核酸配列がある。各アミノ酸は、最多６個の同義のコドンによってコードされ、これらのコドン間の選択は、遺伝子発現に影響する。加えて、コドンの用法（すなわち、異なる生体がポリペプチド配列を発現するためのコドンを使用する頻度）は、生体間で異なる（例えば、ヒトまたはヒト化治療用抗体の組換え産生は、ハムスター細胞培養において頻繁に生じる）。
【０４７５】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、コドンマップを適用することによって最適化された配列であり得る。当業者は、以下に開示されるコドンマップにおけるＴ塩基がＤＮＡ中に存在するのに対し、このＴ塩基が、対応するＲＮＡ中のＵ塩基によって置き換えられるであろうことを認識することになっている。例えば、ＤＮＡ形態、例えば、ベクターまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳（ＩＶＴ）テンプレートにおける本明細書に開示する配列最適化した核酸は、その対応する転写されたｍＲＮＡに基づいたＵとして転写されたＴ塩基を有するであろう。この点において、配列最適化したＤＮＡ配列（Ｔを含む）及びこれらの対応するＲＮＡ配列（Ｕを含む）はいずれも、本開示の配列最適化した核酸とみなされる。当業者は、等価のコドンマップが非天然塩基と置き換えられた１つまたは複数の塩基によって生成されることができることも理解するであろう。したがって、例えば、ＴＴＣコドン（ＤＮＡマップ）は、ＵＵＣコドン（ＲＮＡマップ）に対応するであろうし、これは順にΨΨＣコドン（Ｕがシュードウリジンと置き換えられたＲＮＡマップ）に対応し得る。
【０４７６】
一実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照配列は、ある特定のアミノ酸をコードするコドン全部を、コドンマップにおいて提供される代替的なコドンのたった１つと置き換えることによって最適化することができる。例えば、最適化された配列中のバリンはすべて、ＧＴＧまたはＧＴＣまたはＧＴＴによってコードされるであろう。
【０４７７】
本開示の配列最適化したポリヌクレオチドは、１つまたは複数のコドン最適化法、またはその組み合わせを用いて生成することができる。核酸配列に配列最適化を行うために使用され得る配列の最適化法は、本明細書で詳細に説明されている。この方法リストは、包括的でも制限するものでもない。
【０４７８】
以下で考察する配列の最適化法の各１つについて説明される設計の原理及び法則が多くの異なる方法において組み合わせることができ、例えば、参照核酸配列のいくつかの領域についてはＧ／Ｃ含有量の高い配列の最適化、他の領域についてはウリジン含有量の高い配列の最適化、及び配列全体で二次構造を最小限にするまたは有害モチーフを除外するための標的されたヌクレオチドの変異であることは認識されるだろう。
【０４７９】
配列の最適化法の起こり得る組み合わせの選択は、例えば、合成ポリヌクレオチドを生成するために使用する具体的な化学的プロセスにより得る。このような選択は、配列最適化した核酸によってコードされるタンパク質、例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドなどを含む完全配列、機能的断片、または融合タンパク質の特徴にもより得る。いくつかの実施形態において、このような選択は、配列最適化された核酸（例えば、治療用合成ｍＲＮＡ）によって標的化される具体的な組織または細胞により得る。
【０４８０】
配列の最適化法または最適化法の適用及び解析から得られた設計の法則を組み合わせる機序は、単純であるかまたは複雑であるかのいずれかであり得る。例えば、組み合わせは、以下であり得る：
（ｉ）連続的：各配列の最適化法または設計の法則セットは、全体的な配列の異なる部分配列へ適用され、例えば、コドン位置１〜３０のウリジンを減少させ、次に、配列の残りについて高頻度のコドンを選択すること、
（ｉｉ）階層的：いくつかの配列の最適化法または設計の法則セットは、階層的な決定様式で組み合わされる。例えば、最も多いＧＣ富化コドンを使用して、これらのコドンのうちの最も頻度の高いものを選択することによって関係（通常である関係）を断ち切る。
（ｉｉｉ）多因子的／多パラメータ的：機械学習または他のモデル化技術を用いて、複数の重複する及びおそらく矛盾した必要条件を最善に満たす単一の配列を設計する。このアプローチは、数学に関する多くの技術、例えば遺伝アルゴリズムを適用するコンピュータの使用を必要とするであろう。
【０４８１】
最終的には、これらのアプローチの各１つは、多くの場合において単一コドン表に要約することができる具体的な法則セット、すなわち、標的タンパク質（すなわち、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチド）における各アミノ酸についてのコドンに関する選抜されたリストを結果として生じることができ、具体的な法則または法則セットは、各アミノ酸位置について具体的なコドンをどのように選ぶかを示している。
【０４８２】
ａ  ウリジン含有量最適化
核酸配列中に局所で高濃度のウリジンが存在すると、特に合成ｍＲＮＡの生成において修飾ウリジン類似体が使用される場合、翻訳、例えば、遅いかまたは早期に終結した翻訳に有害な影響を及ぼし得る。さらに、高いウリジン含有量はまた、ＴＬＲ活性化に起因して合成ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期も低下し得る。
【０４８３】
したがって、核酸配列は、少なくとも１つのウリジン含有量最適化ステップを含む方法を用いて配列最適化してもよい。そのようなステップは、例えば、参照核酸中の少なくとも１つのコドンを代替コドンで置換してウリジン修飾した配列を生成することを包含し、ここで、ウリジン修飾配列は、少なくとも１つの以下の特性を有する：
（ｉ）全体的なウリジン含有量の増減；
（ｉｉ）局所的ウリジン含有量の増減（すなわち、ウリジン含有量の変化は特定のサブ配列に限定される）；
（ｉｉｉ）全体的なウリジン含有量を変えないウリジン分布の変化；
（ｉｖ）ウリジンクラスタリングの変化（例えば、クラスターの数、クラスターの位置、またはクラスター間の距離）；または
（ｖ）それらの組合せ。
【０４８４】
いくつかの実施形態において、配列の最適化プロセスは、全体的なウリジン含有量を最適化すること、すなわち、参照核酸配列中のウリジン核酸塩基の百分率に対して配列最適化核酸中のウリジン核酸塩基の百分率を最適化することを包含する。例えば、核酸塩基のうち３０％が参照配列中のウリジンであってもよく、そして核酸塩基中の１０％が配列最適化核酸中のウリジンであってもよい。
【０４８５】
他の実施形態では、配列の最適化プロセスは、参照核酸配列の特定の領域における局所ウリジン含有量を低減すること、すなわち、参照核酸配列の対応するサブ配列中のウリジン核酸塩基の百分率に対する配列最適化核酸のサブ配列におけるウリジン核酸塩基の百分率を低減することを包含する。例えば、参照核酸配列は、３０％の局所ウリジン含有量を有する５’末端領域（例えば、３０コドン）を有してもよく、そしてその同じ領域におけるウリジン含有量は、配列最適化核酸において１０％に減少されてもよい。
【０４８６】
特定の実施形態において、例えば、タンパク質翻訳に有害な影響を及ぼし得るウリジンクラスターの数、サイズ、位置、または分布を、減少または改変するために、参照核酸配列中のコドンを置換してもよい。原則として、参照核酸配列のウリジン含有量を減らすことが望ましいが、ある特定の実施形態では、参照核酸配列のいくつかのサブ配列のウリジン含有量、特に局所的ウリジン含有量を増大してもよい。
【０４８７】
翻訳に対する悪影響を回避するためのウリジン含有量の低減は、他の設計目標を達成するために本明細書に開示される他の最適化方法と組み合わせて行ってもよい。例えば、ほとんどのアミノ酸に最も稀なコドンを使用すると、いくつかの例外を除いてＵ含有量が減少するので、ウリジン含有量の最適化を、傾斜の設計と組み合わせてもよい。
【０４８８】
いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列と比較したとき、より低いトール様受容体（ＴＬＲ）応答を誘導するように設計されている。いくつかのＴＬＲは、核酸を認識しそしてそれに応答する。頻繁なウイルス構成要素である二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡは、ＴＬＲ３を活性化することが示されている。Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ、４１３：７３２−７３８及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１０：１３６６−１３７３を参照のこと。一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡは、ＴＬＲ７を活性化する。Ｄｉｅｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：１５２９−１５３１を参照のこと。ＲＮＡオリゴヌクレオチド、例えばホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有するＲＮＡは、ヒトＴＬＲ８のリガンドである。Ｈｅｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：１５２６−１５２９を参照のこと。細菌性及びウイルス性ＤＮＡに特徴的な非メチル化ＣｐＧモチーフを含むＤＮＡは、ＴＬＲ９を活性化する。Ｈｅｍｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ、４０８：７４０−７４５を参照のこと。
【０４８９】
本明細書中で使用される場合、「ＴＬＲ応答」という用語は、ＴＬＲ７受容体による一本鎖ＲＮＡの認識として定義され、そしていくつかの実施形態において、受容体による一本鎖ＲＮＡの認識によって引き起こされるＲＮＡの分解及び／または生理学的応答を包含する。ＲＮＡのＴＬＲ７への結合を決定及び定量する方法は、当該技術分野において既知である。同様に、ＲＮＡがＴＬＲ７媒介生理学的応答（例えば、サイトカイン分泌）を誘発したか否かを決定するための方法は、当該技術分野において周知である。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ応答は、ＴＬＲ７の代わりにＴＬＲ３、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９によって媒介され得る。
【０４９０】
ＴＬＲ７媒介性応答の抑制は、ヌクレオシド修飾を介して達成され得る。ＲＮＡは、事実上、１００を超える異なるヌクレオシド修飾を受けている（ｍｏｄｓ．ｒｎａ．ａｌｂａｎｙ．ｅｄｕで入手可能なＲＮＡ修飾データベースを参照のこと）。例えば、ヒトｒＲＮＡは、細菌性ｒＲＮＡよりも１０倍多いシュードウリジン（Ψ）及び２５倍多い２’−Ｏ−メチル化ヌクレオシドを有する。細菌性ｍＲＮＡは、ヌクレオシド修飾を含まないが、哺乳動物ｍＲＮＡは、Ｎ７−メチルグアノシン（ｍ７Ｇ）に加えて、５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、Ｎ６−メチルアデノシン（ｍ６Ａ）、イノシン及び多くの２’−Ｏ−メチル化ヌクレオシドのような修飾ヌクレオシドを有する。
【０４９１】
ＲＮＡの２つの重要な特徴であるウラシル及びリボースは、ＴＬＲ７刺激に必要かつ十分であり、短い一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）は、それらが近接していくつかのウリジンを含む限り、配列非依存的様式でＴＬＲ７アゴニストとして作用する。Ｄｉｅｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｅｕｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：３２５６−３２６７（これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。したがって、本明細書に開示される１つ以上の最適化方法は、（局所的及び／または局所的に）ウリジン含有量を低減すること、及び／またはＴＬＲ７媒介応答を低減もしくは抑制するためにウリジンクラスタリングを低減もしくは修飾することを包含する。
【０４９２】
いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列によって引き起こされるＴＬＲ応答（例えば、ＴＬＲ７によって媒介される応答）は、参照核酸配列によって生じるＴＬＲ応答よりも、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％低い。
【０４９３】
いくつかの態様において、参照核酸配列によって引き起こされるＴＬＲ応答は、ウリジン修飾した配列によって引き起こされるＴＬＲ応答よりも、少なくとも約１倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．３倍、少なくとも約１．４倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．６倍、少なくとも約１．７倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約１．９倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍高い。
【０４９４】
いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列のウリジン含有量（平均の全体的なウリジン含有量）（絶対的または相対的）は、参照核酸配列のウリジン含有量（絶対的または相対的）より高い。したがって、いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％多いウリジンを含む。
【０４９５】
他の実施形態では、ウリジン修飾した配列のウリジン含有量（平均の全体的なウリジン含有量）（絶対的または相対的）は、参照核酸配列のウリジン含有量（絶対的または相対的）より低い。したがって、いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％ウリジンが少ない。
【０４９６】
いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列のウリジン含有量（平均の全体的なウリジン含有量）（絶対的または相対的）は、ウリジン修飾した配列中の全核酸塩基の５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％未満である。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列のウリジン含有量は、約１０％〜約２０％である。いくつかの特定の実施形態において、ウリジン修飾した配列のウリジン含有量は、約１２％〜約１６％である。
【０４９７】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列のウリジン含有量は、スライディングウィンドウを用いて測定され得る。いくつかの実施形態において、スライディングウィンドウの長さは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０核酸塩基である。いくつかの実施形態において、スライディングウィンドウは、長さが４０核酸塩基を超える。いくつかの実施形態において、スライディングウィンドウは、長さが２０核酸塩基である。スライディングウィンドウで測定されたウリジン含有量に基づいて、参照核酸配列及び配列最適化核酸の長さ全体にわたってウリジン含有量を表すヒストグラムを生成することが可能である。
【０４９８】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、ある特定の百分率値より上または下にあるヒストグラム中のピークを減少または排除するために修飾されてもよい。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、または３０％のウリジンを超えるスライディングウィンドウ提示においてピークを排除するように修飾されてもよい。別の実施形態では、２０の核酸塩基スライディングウィンドウを用いて測定したときに、ピークが配列最適化核酸中に３０％を超えるウリジンを含まないように、参照核酸配列を修飾してもよい。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、２０の核酸塩基スライディングウィンドウを使用して測定したときに、配列最適化核酸配列中のピークの所定数以下または以上がある特定の閾値を上回るかまたは下回るように修飾されてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、配列最適化核酸中のピークがないかまたは１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０を超えないピークが、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％超のウリジンであるように修飾されてもよい。別の実施形態では、配列最適化核酸は、３０％以上高いウリジン含有量を有する０個〜２個のピークを含む。
【０４９９】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、連続したウリジンの発生を減らすために配列最適化されてもよい。例えば、２つの連続したロイシンは、４つのウリジンクラスターを含むであろう配列ＣＵＵＵＵＧによってコード化され得る。そのようなサブ配列は、ウリジンクラスターを効果的に除去するであろうＣＵＧＣＵＣで置換されてもよい。したがって、参照核酸配列は、ウリジン対（ＵＵ）、ウリジントリプレット（ＵＵＵ）またはウリジンクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を減少または排除することによって配列最適化され得る。Ｕの高次の組合せは、低次の組合せの組合せとは見なされない。したがって、例えば、ＵＵＵＵは、厳密にクアドラプレットであり、２つの連続したＵの対ではないとみなされる；またはＵＵＵＵＵＵは、セクスタプレットであって、３つの連続したＵの対でもなく、または２つの連続したＵのトリプレットなどでもないと見なされる。
【０５００】
いくつかの実施形態において、全てのウリジン対（ＵＵ）及び／またはウリジントリプレット（ＵＵＵ）及び／またはウリジンクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を、参照核酸配列から除去してもよい。他の実施形態では、ウリジン対（ＵＵ）及び／またはウリジントリプレット（ＵＵＵ）及び／またはウリジンクアドラプレット（ＵＵＵＵ）は、ある特定の閾値を下回って、配列最適化核酸中に例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０回を超えない出現まで低減されてもよい。特定の実施形態では、配列最適化核酸は、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ未満のウリジン対を含む。別の特定の実施形態では、配列最適化核酸は、ウリジンの対及び／またはトリプレットを含まない。
【０５０１】
フェニルアラニンコドン、すなわちＵＵＣまたはＵＵＵは、ウリジンの対またはトリプレットを含み、したがって、ウリジン含有量を低減するための配列の最適化は、多くともフェニルアラニンＵのトリプレットをフェニルアラニンＵの対に低減し得る。いくつかの実施形態において、ウリジン対（ＵＵ）及び／またはウリジントリプレット（ＵＵＵ）の出現は、非フェニルアラニンＵの対またはトリプレットのみを指す。したがって、いくつかの実施形態において、非フェニルアラニンウリジンの対（ＵＵ）及び／またはウリジンのトリプレット（ＵＵＵ）は、配列最適化核酸中で、ある特定の閾値、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０回を超えない出現に減少されてもよい。特定の実施形態において、配列最適化核酸は、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１未満の非フェニルアラニンウリジンの対及び／またはトリプレットを含む。別の特定の実施形態では、配列最適化核酸は、非フェニルアラニンウリジン対及び／またはトリプレットを含まない。
【０５０２】
いくつかの実施形態において、配列最適化核酸におけるウリジンの組合せ（例えば、対、トリプレット、クアドラプレット）の減少は、参照核酸配列に存在するウリジンの組合せに対する減少率として表されてもよい。
【０５０３】
いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、参照核酸配列中に存在するウリジン対の総数の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６５％を含んでもよい。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、参照核酸配列中に存在するウリジンのトリプレットの総数の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６５％を含んでもよい。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、参照核酸配列中に存在するウリジンのクアドラプレットの総数の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６５％を含んでもよい。
【０５０４】
いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、参照核酸配列中に存在する非フェニルアラニンウリジンの対の総数の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６５％を含んでもよい。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、参照核酸配列中に存在する非フェニルアラニンウリジンのトリプレットの総数の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６５％を含んでもよい。
【０５０５】
いくつかの実施形態において、配列最適化配列中のウリジン含有量は、配列中の理論上の最小ウリジン含有量に関して表現されてもよい。「理論上の最小ウリジン含有量」という用語は、配列内の全てのコドンが最も低いウリジン含有量を持つ同義コドンに置き換えられた後の、核酸配列のウリジン含有量をその配列の長さの百分率として定義している。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸のウリジン含有量は、参照配列（例えば、野生型配列）の理論上の最小ウリジン含有量と同一である。いくつかの態様では、配列最適化核酸のウリジン含有量は、参照配列（例えば、野生型配列）の理論上の最小ウリジン含有量の約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％または約２００％である。
【０５０６】
いくつかの実施形態において、配列最適化核酸のウリジン含有量は、参照配列（例えば、野生型配列）の理論上の最小ウリジン含有量と同一である。
【０５０７】
参照核酸配列（例えば、野生型配列）は、それらの数、サイズ、位置、分布またはそれらの組合せに起因して翻訳に悪影響を及ぼすウリジンクラスターを含む場合がある。本明細書中で使用される場合、「ウリジンクラスター」という用語は、ある特定の閾値を超えるウリジン含有量（通常、百分率として記載される）を含む参照核酸配列または配列最適化核酸配列中のサブ配列を指す。したがって、ある特定の実施形態では、サブ配列が約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％または６５％を超えるウリジン含有量を含む場合、そのようなサブ配列は、ウリジンクラスターと見なされる。
【０５０８】
ウリジンクラスターの悪影響は、例えば、ＴＬＲ７反応を誘発することであり得る。したがって、本明細書に開示される核酸配列の最適化方法のいくつかの実施態様では、クラスターの数、クラスターのサイズ、クラスターの位置（例えば、核酸配列の５’及び／または３’末端近く）、クラスター間の距離、またはウリジンクラスターの分布（例えば、核酸配列に沿ったクラスターのある特定のパターン、発現産物中の二次構造要素に関するクラスターの分布、またはｍＲＮＡの二次構造に対するクラスターの分布）を減らすことが望ましい。
【０５０９】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列は少なくとも１つのウリジンクラスターを含み、ここで前記ウリジンクラスターは、参照核酸配列のサブ配列であり、前記サブ配列中の総ウリジン核酸塩基の百分率は、所定の閾値を超える。いくつかの実施形態において、サブ配列の長さは少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、または少なくとも約１００核酸塩基である。いくつかの実施形態において、このサブ配列は１００核酸塩基より長い。いくつかの実施形態において、閾値は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％または２５％のウリジン含有量である。いくつかの実施形態において、閾値は２５％を超える。
【０５１０】
例えば、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｓ及びＲを含むアミノ酸配列は、核酸配列ＧＣＵ、ＧＡＵ、ＧＧＵ、ＡＧＵ、ＣＧＵによってコードされ得る。そのような配列はウリジンの対、トリプレット、またはクアドラプレットを含まないが、核酸塩基の３分の１はウリジンであろう。そのようなウリジンクラスターは、代替のコドンを使用することによって、例えば、ウリジンを含まないであろう、ＧＣＣ、ＧＡＣ、ＧＧＣ、ＡＧＣ、及びＣＧＣを使用することによって除去されてもよい。
【０５１１】
他の実施形態では、参照核酸配列は、少なくとも１つのウリジンクラスターを含み、前記ウリジンクラスターは、参照核酸配列のサブ配列であり、前記サブ配列のウリジン核酸塩基の百分率は、所定の閾値を上回るスライディングウィンドウを用いて測定される。いくつかの実施形態において、スライディングウィンドウの長さは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０核酸塩基である。いくつかの実施形態において、スライディングウィンドウは、長さが４０核酸塩基を超える。いくつかの実施形態において、閾値は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％または２５％のウリジン含有量である。いくつかの実施形態において、閾値は２５％を超える。
【０５１２】
いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、少なくとも２つのウリジンクラスターを含む。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列よりも少ないウリジンに富むクラスターを含む。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列よりも多くのウリジン富化クラスターを含む。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列中の対応するウリジン富化クラスターよりも長さが短いウリジン富化クラスターを含む。他の実施形態では、ウリジン修飾した配列は、参照核酸配列中の対応するウリジン富化クラスターよりも長さが長いウリジン富化クラスターを含む。
【０５１３】
Ｋａｒｉｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２３：１６５−１７５；Ｋｏｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２９：１５４−１５７；またはＳａｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １  ＡＯＰ、オンライン公開２０１４年９月１９日ｍ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｄ４２７８（それらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０５１４】
ｂ．グアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量
参照核酸配列は、参照核酸配列のグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量（絶対的または相対的）を変えることを包含する方法を用いて配列最適化してもよい。そのような最適化は、参照核酸配列の全体的なＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）を変更する（例えば、増大または減少させる）こと；参照核酸配列中のＧ／Ｃ含有量の局所的変化を導入すること（例えば、参照核酸配列中の選択された領域またはサブ配列においてＧ／Ｃを増大または減少させる）；参照核酸配列中のＧ／Ｃクラスターの頻度、サイズ、及び分布を変化させること、またはそれらの組合せを包含し得る。
【０５１５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、参照核酸配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）と比較してＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）の全体的な増加を含む。いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量の全体的な増加（絶対的または相対的）は、参照核酸配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。
【０５１６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、参照核酸配列のＧ／Ｃ含有量に対するＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）の全体的な減少を含む。いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量の全体的な減少（絶対的または相対的）は、参照核酸配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。
【０５１７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、参照核酸配列中の対応するサブ配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対するサブ配列（すなわち、Ｇ／Ｃ修飾サブ配列）におけるグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量（絶対的または相対的）の局所的な増加を含む。いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量の局所的な増加（絶対的または相対的）は、参照核酸配列中の対応するサブ配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％までである。
【０５１８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、参照核酸配列中の対応するサブ配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対するサブ配列（すなわち、Ｇ／Ｃ修飾サブ配列）におけるグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量の（絶対的または相対的な）局所的な減少を含む。いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量の局所的な減少（絶対的または相対的）は、参照核酸配列中の対応するサブ配列のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。
【０５１９】
いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）は、サブ配列中で増加されるかまたは減少され、これは少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００核酸塩基の長さである。
【０５２０】
いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）は、サブ配列中で増加されるかまたは減少され、これは少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、または１０００の核酸塩基の長さである。
【０５２１】
いくつかの実施形態において、Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）は、サブ配列中で増加されるかまたは減少され、これは少なくとも約１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、４０００、４１００、４２００、４３００、４４００、４５００、４６００、４７００、４８００、４９００、５０００、５１００、５２００、５３００、５４００、５５００、５６００、５７００、５８００、５９００、６０００、６１００、６２００、６３００、６４００、６５００、６６００、６７００、６８００、６９００、７０００、７１００、７２００、７３００、７４００、７５００、７６００、７７００、７８００、７９００、８０００、８１００、８２００、８３００、８４００、８５００、８６００、８７００、８８００、８９００、９０００、９１００、９２００、９３００、９４００、９５００、９６００、９７００、９８００、９９００、または１００００の核酸塩基の長さである。
【０５２２】
本明細書に記載のＧ及びＣの含有量（絶対的または相対的）の増加または減少は、低いＧ／Ｃ含有量を有する同義コドンを、より高いＧ／Ｃ含有量を有する同義コドンで置換することによって、またはその逆によっても同様に行われ得る。例えば、Ｌは６つの同義コドンを持ち、そのうちの２つは２Ｇ／Ｃを有し（ＣＵＣ、ＣＵＧ）、３つは単一のＧ／Ｃを有し（ＵＵＧ、ＣＵＵ、ＣＵＡ）、１つはＧ／Ｃを有さない（ＵＵＡ）。したがって、参照核酸がある特定の位置にＣＵＣコドンを有する場合、その位置でのＧ／Ｃ含有量は、ＣＵＣを単一のＧ／Ｃを有するコドンまたはＧ／Ｃを有さないコドンのいずれかと置き換えることによって減少されてもよい。
【０５２３】
米国特許出願公開第２０１４０２２８５５８号、同第２００５００３２７３０  Ａ１号；Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ８３：３７−４６を参照のこと（それらの全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５２４】
ｃ．コドン頻度−コドン使用頻度バイアス
当該技術分野において既知である多数のコドン最適化方法は、参照核酸配列中のコドンをより高い頻度を有するコドンで置換することに基づく。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に開示されているＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸配列は、非コドン最適化配列での使用頻度に関して、配列最適化核酸中の他の同義コドンと比較して１個以上のコドンの使用頻度における修飾の使用を含む方法を用いて配列最適化され得る。
【０５２５】
本明細書中で使用される場合、「コドン頻度」という用語は、コドン使用頻度バイアス、すなわち、ＤＮＡ／ＲＮＡのコードにおける同義コドンの出現頻度の相違を指す。コドン選択は、突然変異のバイアスと翻訳の最適化のための自然な選択との間のバランスを反映することが一般に認められている。最適なコドンは、より速い翻訳速度と高い精度を達成することを助ける。これらの要因の結果として、翻訳選択は、高度に発現された遺伝子においてより強力であると予想される。バイオインフォマティクス及び計算生物学の分野では、コドン使用頻度バイアスを分析するために多くの統計的方法が提案され使用されてきた。例えば、Ｃｏｍｅｒｏｎ  ＆  Ａｇｕａｄｅ（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．４７：２６８−７４．‘ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｏｆ  ｏｐｔｉｍａｌ  ｃｏｄｏｎｓ’（Ｆｏｐ）（Ｉｋｅｍｕｒａ（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５１（３）：３８９−４０９）、ｔｈｅ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｃｏｄｏｎ  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ（ＲＣＡ）（Ｆｏｘ  ＆  Ｅｒｉｌ（２０１０）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．１７（３）：１８５−９６）または‘Ｃｏｄｏｎ  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ’（ＣＡＩ）（Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｌｉ（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５（３）：１２８１−９５）のような方法を用いて遺伝子発現レベルを予測するが、一方で、情報理論による「ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｃｏｄｏｎｓ」（Ｎｃ）及びＳｈａｎｎｏｎエントロピーなどの方法が、コドン使用頻度の均一性を測定するために使用される。対応分析及び主成分分析などの多変量統計法は、遺伝子間のコドン使用頻度の変動を分析するために広く使用されている（Ｓｕｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．１５（６）：３５７−６５；Ｓａｎｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｓｉｌｉｃｏ  Ｂｉｏｌ．２００８；８（２）：１８７−９２）。
【０５２６】
本明細書に開示されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、野生型核酸配列、変異型核酸配列、キメラ核酸配列など、これは例えば、ｍＲＮＡであってもよい）は、参照核酸配列中の少なくとも１つのコドンを、同義コドンセット中でより高いコドン頻度またはより低いコドン頻度を有する代替コドンで置換することを包含する方法を使用してコドン最適化され得る；ここで、得られた配列最適化核酸は、参照核酸配列に対して少なくとも１つの最適化特性を有する。
【０５２７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列中のコドンの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％は代替コドンで置換され、各代替コドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する。
【０５２８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する代替コドンで置換され、参照核酸配列中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より低いコドン頻度を有する代替コドンで置換されている。
【０５２９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列中のコドンのうち少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、代替コドンで置換され、各代替コドンは同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する。
【０５３０】
いくつかの実施形態において、より高いコドン頻度を有する少なくとも１つの代替コドンは、同義コドンセットにおいて最も高いコドン頻度を有する。他の実施形態では、より高いコドン頻度を有する全ての代替コドンは、同義コドンセットにおいて最も高いコドン頻度を有する。
【０５３１】
いくつかの実施形態において、より低いコドン頻度を有する少なくとも１つの代替コドンは、同義コドンセットの中で最も低いコドン頻度を有する。いくつかの実施形態において、より高いコドン頻度を有する全ての代替コドンは、同義コドンセットにおいて最も高いコドン頻度を有する。
【０５３２】
いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つの代替コドンは、同義コドンセットにおいて２番目に高いか、３番目に高いか、４番目に高いか、５番目に高いか、または６番目に高い頻度を有する。いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つの代替コドンは、同義コドンセットにおいて２番目に低いか、３番目に低いか、４番目に低いか、５番目に低いか、または６番目に低い頻度を有する。
【０５３３】
コドン頻度に基づく最適化は、上記のように、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列に対して全体的に、または局所的に適用することができる。いくつかの実施形態において、局所的に適用される場合、参照核酸配列の領域は、コドン頻度に基づいて改変され得、ある特定のサブ配列におけるコドンの全部またはある特定の百分率をそれぞれの同義コドンセットにおいてより高いまたはより低い頻度を有するコドンで置換する。したがって、いくつかの実施形態において、参照核酸配列のサブ配列中のコドンの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％が代替コドンで置換され、各代替コドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する。
【０５３４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列のサブ配列中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する代替コドンで置換されており、参照核酸配列のサブ配列中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度より低いコドン頻度を有する代替コドンで置換されている。
【０５３５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３及び／またはＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードする参照核酸配列のサブ配列中のコドンのうち、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は代替コドンで置換され、各代替コドンは、同義コドンのセット中の置換コドンのコドン頻度より高いコドン頻度を有する。
【０５３６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列のサブ配列において置換され、より高いコドン頻度を有する少なくとも１つの代替コドンが、同義コドンセットにおいて最も高いコドン頻度を有する。他の実施形態では、参照核酸配列のサブ配列において置換され、より低いコドン頻度を有する全ての代替コドンは、同義コドンセットにおいて最も低いコドン頻度を有する。
【０５３７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列のサブ配列において置換され、より低いコドン頻度を有する少なくとも１つの代替コドンは、同義コドンセットにおいて、最も低いコドン頻度を有する。いくつかの実施形態において、参照核酸配列のサブ配列において置換され、より高いコドン頻度を有する全ての代替コドンは、同義コドンセットにおいて最も高いコドン頻度を有する。
【０５３８】
特定の実施形態では、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、特定の位置、例えば配列最適化核酸の５’末端もしくは３’末端、またはそれらの領域から所定の距離内（例えば、配列最適化核酸の５’末端または３’末端から少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００コドン）で、参照核酸配列の対応するサブ配列中の全体コドン頻度より高いかまたは低い全体コドン頻度を有するサブ配列を含んでもよい。
【０５３９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸は、参照核酸配列の対応するサブ配列において、その全体のコドン頻度より高いかまたは低い全体のコドン頻度を有する２つ以上のサブ配列を含み得る。当業者は、全体のコドン頻度が高いか、または低いサブ配列が、その全体的なコドン頻度が、高いかまたは低いか、サブ配列の長さ、サブ配列間の距離、サブ配列の位置などに応じて、無数のパターンで組織化され得ることを理解する。
【０５４０】
米国特許第５０８２７６７号、同第８１２６６５３号、同第７５６１９７３号、同第８４０１７９８号、米国特許出願公開第２００８００４６１９２号、同第２００８００７６１６１号；国際公開番号ＷＯ２００００１８７７８；Ｗｅｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ４（９）：ｅ７００２；Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ８３：３７−４６；Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＢＭＣ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６：１３４（それらの全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０５４１】
ｄ．モチーフ置換の不安定化
配列の最適化に影響を与え得るモチーフは種々あるが、それらは、例えば、以下の種々の非排他的なカテゴリに収まる：
（ｉ）一次配列に基づくモチーフ：ヌクレオチドの単純な配置によって定義されるモチーフ。
（ｉｉ）構造モチーフ：ある特定の二次構造を形成する傾向があるヌクレオチドの配列によってコードされるモチーフ。
（ｉｉｉ）局所モチーフ：１つの連続したサブ配列においてコードされたモチーフ。
（ｉｖ）分散モチーフ：２つ以上のバラバラなサブ配列においてコードされたモチーフ。
（ｖ）有利なモチーフ：ヌクレオチドの構造または機能を改善するモチーフ。
（ｖｉ）不利なモチーフ：ヌクレオチドの構造または機能に悪影響を及ぼすモチーフ。
【０５４２】
不利なモチーフのカテゴリに収まる多くのモチーフがある。いくつかの例としては、例えば、比較的短い傾向がある制限酵素モチーフ、正確な配列、例えば、Ｘｂａ１（ＴＣＴＡＧＡ）、ＥｃｏＲＩ（ＧＡＡＴＴＣ）、ＥｃｏＲＩＩ（ＣＣＷＧＧ、Ｗは、ＩＵＰＡＣ多義性コードにそって、ＡまたはＴを意味する）またはＨｉｎｄＩＩＩ（ＡＡＧＣＴＴ）の制限部位モチーフ；酵素部位であって、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ（ＧｎｎｎｎＷｎＣＲｎＣＴＣｎＣｎｎＷｎＤ、ここでｎは任意のヌクレオチドを意味し、ＲはＡまたはＧを意味し、ＷはＡまたはＴを意味し、ＤはＡまたはＧまたはＴを意味するがＣではない）などにおける、より長い傾向であり、コンセンサスで正確でない配列に基づく酵素部位；ＧＧＧＧリピートのような構造モチーフ（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５１（６３２４）：３３１−２）；またはＣＵＧ−トリプレットリピートのような他のモチーフ（Ｑｕｅｒｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１２４：１７０３−１７１４）が挙げられる。
【０５４３】
したがって、本明細書に開示されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸配列は、参照核酸配列中の少なくとも１つの不安定化モチーフを置換すること、そのような不利なモチーフを除去すること、またはそれを有利なモチーフと置き換えることを包含する方法を用いて配列最適化されてもよい。
【０５４４】
いくつかの実施形態において、最適化プロセスは、参照核酸配列中の有利及び／または不利なモチーフを同定することを包含し、そのようなモチーフは、例えば、最適化プロセスの前または最中に参照核酸配列の安定性の喪失を引き起こし得る特定のサブ配列である。例えば、最適化の間の特定の塩基の置換は、制限酵素によって認識されるサブ配列（モチーフ）を生成し得る。従って、最適化プロセスの間、配列最適化配列を、不利であることが公知のモチーフのライブラリーと比較することによって、不利なモチーフの出現をモニターしてもよい。次いで、不利なモチーフの同定を、事後フィルタとして使用して、すなわち、参照核酸配列に潜在的に導入され得るある特定の修飾を実際に実施すべきか否かを決定してもよい。
【０５４５】
いくつかの実施形態において、不利なモチーフの同定は、本明細書に開示される配列の最適化方法の適用、すなわち、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列におけるモチーフの同定の前に使用されてもよく、それらの代替核酸配列との置換は、例えばウリジン減少の前の前処理ステップとして使用してもよい。
【０５４６】
他の実施形態では、不利なモチーフの同定及びそれらの除去は、本明細書に開示されている２つ以上の配列の最適化方法を含む多様性核酸最適化方法に統合された追加の配列最適化技術として用いられる。この様式で使用される場合、最適化プロセスの間に同定された不利なモチーフは、例えば、元の設計原理をできるだけ厳密に保存するために、可能な限り少ない数の核酸塩基を置換することによって除去される（例えば、低いＵ．高い頻度など）。
【０５４７】
例えば、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１４０２２８５５８号、同第２００５００３２７３０号、または同第２０１４０２２８５５８号を参照のこと。
【０５４８】
ｅ．制限されたコドンセット最適化
いくつかの特定の実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする参照核酸配列の配列の最適化は、制限コドンセット、例えば、あるコドンセット（ここで天然の数未満のコドンを使用して、２０個の天然アミノ酸、２０個の天然アミノ酸のサブセット、または例えば非天然アミノ酸を含むアミノ酸の拡張セットをコードする）を使用して実施できる。
【０５４９】
遺伝子コードは全ての生物体の間で極めて類似しており、タンパク質翻訳に含まれる２０の標準アミノ酸に加えて開始コドン及び停止コドンをコードする、６４の項目を含む単純な表で表され得る。遺伝子コードは縮重しており、すなわち、一般に、２つ以上のコドンが各アミノ酸を特定する。例えば、アミノ酸ロイシンは、ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵ、ＣＵＣ、ＣＵＡ、またはＣＵＧコドンで指定され、一方で、アミノ酸セリンは、ＵＣＡ、ＵＣＧ、ＵＣＣ、ＵＣＵ、ＡＧＵ、またはＡＧＣコドンで指定される（１番目、２番目、または３番目の位置における相違）。天然の遺伝子コードは、天然に存在するアミノ酸をコードする６２コドンを含む。したがって、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、２０個のアミノ酸をコードするために６２個未満のコドンを含む最適化コドンセット（遺伝子コード）は、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、または２０コドンを含んでもよい。
【０５５０】
いくつかの実施形態において、制限コドンセットは、２０未満のコドンを含む。例えば、あるタンパク質が２０種類未満のアミノ酸を含む場合、そのようなタンパク質は、２０未満のコドンを有するコドンセットによってコードされ得る。したがって、いくつかの実施形態において、最適化コドンセットは、参照核酸配列によってコードされるタンパク質中に異なる種類のアミノ酸が存在するのと同数のコドンを含む。いくつかの実施形態において、最適化コドンセットは、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、さらには１つのコドンを含む。
【０５５１】
いくつかの態様では、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸、すなわち、２つ以上のコドンによって天然にコードされているアミノ酸は、天然に存在する同義コドンの数より少ないコドンでコードされている。例えば、いくつかの実施形態において、Ａｌａは、３、２または１コドンによって配列最適化核酸中でコードされ得る；Ｃｙｓは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ａｓｐは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｇｌｕは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｐｈｅは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｇｌｙは、配列最適化核酸において３コドン、２コドンまたは１コドンでコードされ得る；Ｈｉｓは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｉｌｅは、配列最適化核酸において２コドンまたは１コドンでコードされ得る；Ｌｙｓは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｌｅｕは、配列最適化核酸において５コドン、４コドン、３コドン、２コドンまたは１コドンによってコードされ得る；Ａｓｎは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ｐｒｏは、配列最適化核酸において３コドン、２コドン、または１コドンによってコードされ得る；Ｇｌｎは、配列最適化核酸において１コドンでコードされ得る；Ａｒｇは、配列最適化核酸において５コドン、４コドン、３コドン、２コドン、または１コドンによってコードされ得る；Ｓｅｒは、配列最適化核酸において、５コドン、４コドン、３コドン、２コドン、または１コドンによってコードされ得る；Ｔｈｒは、配列最適化核酸において、３コドン、２コドン、または１コドンによってコードされ得る；Ｖａｌは、配列最適化核酸において、３コドン、２コドン、または１コドンによってコードされ得る；そして、Ｔｙｒは、配列最適化核酸において１コドンによってコードされ得る。
【０５５２】
いくつかの実施形態において、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸、すなわち、２つ以上のコドンによって天然にコードされるアミノ酸は、制限されたコドンセット中の単一のコドンによってコードされる。
【０５５３】
いくつかの特定の実施形態において、配列最適化核酸はＤＮＡであり、制限コドンセットは２０個のコドンからなり、ここで各コドンは、２０個のアミノ酸のうちの１個をコードする。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸は、ＤＮＡであり、制限コドンセットは、ＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＡ、及びＧＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＣＧＴ、ＣＧＣ、ＣＧＡ、ＣＧＧ、ＡＧＡ、及びＡＧＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＡＴまたはＡＣＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＡＴまたはＧＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＴＧＴまたはＴＧＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＣＡＡまたはＣＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＡＡまたはＧＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＧＴ、ＧＧＣ、ＧＧＡ、及びＧＧＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＣＡＴまたはＣＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＡＴＴ、ＡＴＣ、及びＡＴＡからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ、ＣＴＡ、及びＣＴＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＡＡまたはＡＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＡＴＧコドン；ＴＴＴまたはＴＴＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＣＣＴ、ＣＣＣ、ＣＣＡ、及びＣＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＡ、ＴＣＧ、ＡＧＴ、及びＡＧＣからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＣＴ、ＡＣＣ、ＡＣＡ、及びＡＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＴＧＧコドン；ＴＡＴまたはＴＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ならびにＧＴＴ、ＧＴＣ、ＧＴＡ及びＧＴＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドンを含む。
【０５５４】
他の実施形態では、配列最適化核酸は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、制限コドンセットは２０コドンからなり、ここで各コドンは２０アミノ酸のうちの１つをコードする。いくつかの実施形態において、配列最適化核酸はＲＮＡであり、制限コドンセットは、ＧＣＵ、ＧＣＣ、ＧＣＡ、及びＧＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＣＧＵ、ＣＧＣ、ＣＧＡ、ＣＧＧ、ＡＧＡ、及びＡＧＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＡＵまたはＡＣＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＡＵまたはＧＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＵＧＵまたはＵＧＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＣＡＡまたはＣＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＡＡまたはＧＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＧＧＵ、ＧＧＣ、ＧＧＡ、及びＧＧＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＣＡＵまたはＣＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＡＵＵ、ＡＵＣ、及びＡＵＡからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵ、ＣＵＣ、ＣＵＡ、及びＣＵＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＡＡまたはＡＡＧから選択される少なくとも１つのコドン；ＡＵＧコドン；ＵＵＵまたはＵＵＣから選択される少なくとも１つのコドン；ＣＣＵ、ＣＣＣ、ＣＣＡ、及びＣＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＵＣＵ、ＵＣＣ、ＵＣＡ、ＵＣＧ、ＡＧＵ、及びＡＧＣからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＡＣＵ、ＡＣＣ、ＡＣＡ、及びＡＣＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドン；ＵＧＧコドン；ＵＡＵまたはＵＡＣから選択される少なくとも１つのコドン；ならびにＧＵＵ、ＧＵＣ、ＧＵＡ及びＧＵＧからなる群より選択される少なくとも１つのコドンを含む。
【０５５５】
いくつかの特定の実施形態において、制限されたコドンセットは、ある特定の組織または細胞への投与後の配列最適化核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの発現について最適化されている。
【０５５６】
いくつかの実施形態において、最適化コドンセット（例えば、２０個のアミノ酸をコードする２０個のコドンセット）は、少なくとも以下の特性のうちの１つに適合する：
（ｉ）最適化されたコドンセットは、元のまたは天然コドンセットよりも高い平均Ｇ／Ｃ含有量を有するか；または、
（ｉｉ）最適化コドンセットは、元のもしくは天然コドンセットよりも低い平均Ｕ含有量を有するか；または、
（ｉｉｉ）最適化コドンセットは、最も高い頻度のコドンから構成されるか；または、
（ｉｖ）最適化コドンセットは、最も低い頻度のコドンから構成されるか；または、
（ｖ）それらの組合せ。
【０５５７】
いくつかの特定の実施形態において、最適化コドンセット中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中で２番目に高いか、３番目に高いか、４番目に高いか、５番目に高いか、または６番目に高い頻度を有する。いくつかの特定の実施形態において、最適化コドン中の少なくとも１つのコドンは、同義コドンセット中で２番目に低いか、３番目に低いか、４番目に低いか、５番目に低いか、または６番目に低い頻度を有する。
【０５５８】
本明細書中で使用される場合、「天然コドンセット」という用語は、参照核酸配列をコードするために起源の生物体によって天然に使用されるコドンセットを指す。本明細書中で使用される場合、「元のコドンセット」という用語は、配列の最適化の開始前に参照核酸配列をコードするために使用されるコドンセット、または配列の最適化が、反復的または再帰的に適用される、新しい最適化反復の開始の時点で、参照核酸配列の最適化バリアントをコードするために使用されるコドンセットを指す。
【０５５９】
いくつかの実施形態において、コドンセット中のコドンの５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が、最も高い頻度を有するコドンである。他の実施形態では、コドンセット中のコドンの５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が最も低い頻度を有するコドンである。
【０５６０】
いくつかの実施形態において、コドンセット中のコドンの５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が最も高いウリジン含有量を有するコドンである。いくつかの実施形態において、コドンセット中のコドンの５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が最も低いウリジン含有量を有するコドンである。
【０５６１】
いくつかの実施形態において、コドンセット中の平均Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）は、元のコドンセットの平均Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％高い。いくつかの実施形態において、コドンセットの平均Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）は、元のコドンセットの平均Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％低い。
【０５６２】
いくつかの実施形態において、コドンセットのウラシル含有量（絶対的または相対的）は、元のコドンセットの平均ウラシル含有量（絶対的または相対的）よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％高い。いくつかの実施形態において、コドンセットのウラシル含有量（絶対的または相対的）は、元のコドンセットの平均ウラシル含有量（絶対的または相対的）より、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％低い。
【０５６３】
また、米国特許出願公開第２０１１／００８２０５５号、及び国際公開番号ＷＯ２００００１８７７８号（その両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照のこと。
【０５６４】
ＶＩＩＩ．配列最適化核酸の特性決定
本開示のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、本明細書に開示の配列最適化核酸を含むポリヌクレオチド（例えばＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ）を、少なくとも１つの核酸配列特性（例えば、ヌクレアーゼに曝されたときの安定性）または発現特性が、配列最適化されていない核酸に対して改善されているか否か決定するために試験してもよい。
【０５６５】
本明細書中で使用される場合、「発現特性」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏで（例えば、それを必要とする対象への投与後の合成ｍＲＮＡの翻訳効率）またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのモデル系で試験された合成ｍＲＮＡの翻訳効率）のいずれかにおける核酸配列の特性を指す。発現特性としては、限定するものではないが、投与後にＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡによって産生されるタンパク質の量、ならびに産生される可溶性またはそうでなくとも機能的なタンパク質の量が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される配列最適化核酸は、本明細書に開示されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化核酸配列（例えばＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ）によってコードされるタンパク質を発現する細胞の生存率に従って評価され得る。
【０５６６】
特定の実施形態では、最適化されていない参照核酸配列に対するコドン置換を含む、本明細書に開示されている複数の配列最適化核酸（例えばＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ）を機能的に特徴付けて、目的の特性、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのモデル系またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、標的組織もしくは細胞における発現特性を測定してもよい。
【０５６７】
ａ．核酸配列の固有特性の最適化
本開示のいくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドの所望の特性は、核酸配列の固有の特性である。例えば、ヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの安定性について最適化された配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、特定の標的組織または細胞における発現に最適化された配列であってもよい。いくつかの実施形態において、核酸配列は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによるその分解を防ぐことによって、その血漿半分を増大させるように最適化された配列である。
【０５６８】
他の実施形態では、この核酸配列は、例えば、配列最適化核酸または配列最適化核酸を含む医薬組成物を水性条件下で、最小限の分解で保存できる時間を長くするために、溶液中での加水分解に対する耐性を高めるように最適化される配列である。
【０５６９】
他の実施形態では、この配列最適化核酸は、例えば、凍結乾燥後に最小の分解で配列最適化核酸を保存できる時間を長くするために、乾燥保存条件における加水分解に対するその耐性を高めるように最適化され得る。
【０５７０】
ｂ．タンパク質発現に最適化された核酸配列
本開示のいくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドの所望の特性は、本明細書に開示されている配列最適化配列によってコードされるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現レベルである。タンパク質発現レベルは、１つ以上の発現系を用いて測定してもよい。いくつかの実施形態において、発現は細胞培養系、例えば、ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞において測定され得る。いくつかの実施形態において、生細胞の抽出物、例えば、ウサギ網状赤血球溶解物から調製されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系、または精製された個々の成分のアセンブリによって調製されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系を用いて発現を測定してもよい。他の実施形態では、タンパク質発現は、ｉｎ  ｖｉｖｏ系、例えばマウス、ウサギ、サルなどで測定される。
【０５７１】
いくつかの実施形態において、溶液形態でのタンパク質発現が望ましい場合がある。したがって、いくつかの実施形態において、参照配列を配列最適化して、可溶性形態で最適化レベルの発現タンパク質を有する配列最適化核酸配列を得てもよい。タンパク質発現のレベルならびに他の特性、例えば、溶解度、凝集レベル、及び切断産物（すなわち、タンパク質分解、加水分解、または不完全な翻訳に起因する断片）の存在は、当該技術分野において既知である方法に従って、例えば、電気泳動（例えば、天然またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ）またはクロマトグラフィー法（例えば、ＨＰＬＣ、サイズ排除クロマトグラフィーなど）を用いて測定され得る。
【０５７２】
ｃ．標的組織または標的細胞の生存率の最適化
いくつかの実施形態において、核酸配列によってコードされる異種治療用タンパク質の発現は、標的組織または細胞において有害な影響を及ぼし得、タンパク質収率を低下させるか、または発現産物の品質を低下させるか（例えば、タンパク質断片の存在または封入体中の発現されたタンパク質の沈殿に起因して）、または毒性を引き起こす場合がある。
【０５７３】
したがって、本開示のいくつかの実施形態において、本明細書に開示されている核酸配列、例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸配列の配列の最適化を使用して、配列最適化核酸によってコードされるタンパク質を発現する標的細胞の生存率を増加させてもよい。
【０５７４】
異種タンパク質発現はまた、自己または異種移植のための核酸配列でトランスフェクトされた細胞にとって有害であり得る。したがって、本開示のいくつかの実施形態において、本明細書に開示される核酸配列の配列の最適化を使用して、配列最適化されている核酸配列によってコードされるタンパク質を発現する標的細胞の生存率を増加し得る。細胞または組織の生存率、毒性、及び他の生理学的反応の変化は、当該技術分野において既知である方法に従って測定され得る。
【０５７５】
ｄ．免疫応答及び／または炎症反応の減少
いくつかの場合において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドまたはその機能的フラグメントをコードする配列最適化核酸の投与は、免疫応答を引き起こし得、この免疫応答は、（ｉ）治療剤（例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ）、または（ｉｉ）そのような治療剤の発現産物（例えば、ｍＲＮＡによってコードされるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチド）、または（ｉｖ）それらの組合せによって生じる場合がある。したがって、本開示のいくつかの実施形態において、本明細書に開示される核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）の配列最適化を使用して、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸の投与によって、またはこのような核酸によってコードされるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現産物によって、引き起こされる免疫応答または炎症反応を減少させてもよい。
【０５７６】
いくつかの態様において、炎症反応は、当該技術分野において既知である方法、例えばＥＬＩＳＡを使用して、増大したレベルの１つ以上の炎症性サイトカインを検出することによって測定され得る。「炎症性サイトカイン」という用語は、炎症反応において上昇するサイトカインを指す。炎症性サイトカインの例としては、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＣＸＣＬ１（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１；ＧＲＯαとしても公知、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ誘発性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。炎症性サイトカインという用語にはまた、当該技術分野において既知である炎症反応に関連する他のサイトカイン、例えばインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）なども包含する。
【０５７７】
ＩＸ．マイクロＲＮＡ結合部位を含む免疫調節ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上のマイクロＲＮＡ結合部位をさらに含んでもよい。マイクロＲＮＡ（またはｍｉＲＮＡ）は、核酸分子の３’ＵＴＲに結合し、核酸分子の安定性を低下させることによって、または翻訳を阻害することによって、遺伝子発現を下方制御する、１９〜２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。
【０５７８】
本発明はまた、上記の任意のポリリボヌクレオチドを含む医薬組成物及び製剤を提供する。いくつかの実施形態において、組成物または製剤は、送達剤をさらに含む。
【０５７９】
いくつかの実施形態において、組成物または製剤は、ポリペプチドをコードする、本明細書に開示される配列最適化核酸配列を含むポリリボヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態において、組成物または製剤は、ポリペプチドをコードする、本明細書に開示される配列最適化核酸配列と顕著な配列同一性を有するポリリボヌクレオチド（例えば、ＯＲＦ）を含むポリリボヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチドはさらに、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０５８０】
マイクロＲＮＡ標的配列を本開示のポリヌクレオチド（例えば、３’ＵＴＲ様領域または他の領域）に操作することによって、問題のマイクロＲＮＡが利用可能であるならば、分解または翻訳の減少のために分子を標的にしてもよい。これは、ポリリボヌクレオチドの送達時のオフターゲット効果を減少し得る。例えば、本発明のポリリボヌクレオチドが組織または細胞に送達されることを意図していないが最終的には前記組織または細胞であるならば、この組織または細胞に豊富なｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡの複数の結合部位が、ポリリボヌクレオチドの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作されている場合に、目的の遺伝子の発現を阻害し得る。したがって、いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡへの１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位の組み込みによって、核酸分子送達に対するオフターゲット効果の危険性が低減され得、及び／またはｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドの発現の組織特異的調節が可能になり得る。なお他の実施形態では、本開示のｍＲＮＡへの１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位の組み込みは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの核酸送達の際の免疫応答を調節し得る。さらなる実施形態において、本開示のｍＲＮＡへの１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位の組み込みは、本明細書に記載の脂質含有化合物及び組成物の急速な血液クリアランス（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）（ＡＢＣ）を調節し得る。
【０５８１】
逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位をポリリボヌクレオチド配列（それらが天然に存在する）から除去して、特定の組織におけるタンパク質発現を増大させてもよい。例えば、特定のｍｉＲＮＡの結合部位を、ポリリボヌクレオチドから除去して、ｍｉＲＮＡを含む組織または細胞におけるタンパク質発現を改善してもよい。
【０５８２】
マイクロＲＮＡは、ＲＮＡ転写物（それら自身で折り返されてしばしばプレｍｉＲＮＡ（前駆体−ｍｉＲＮＡ）と呼ばれる短いヘアピン構造を形成する）の領域から酵素によって得られる。プレｍｉＲＮＡは、典型的には、その３’末端に２ヌクレオチドオーバーハングを有し、そして３’ヒドロキシル基及び５’リン酸基を有する。この前駆体ｍＲＮＡは、核内で処理され、続いて細胞質に輸送され、そこでＤＩＣＥＲ（ＲＮアーゼ  ＩＩＩ酵素）によってさらに処理されて、約２２ヌクレオチドの成熟マイクロＲＮＡが形成される。次いで成熟マイクロＲＮＡを、リボ核粒子に組み込み、遺伝子サイレンシングを媒介するＲＮＡ誘導サイレンシング複合体、ＲＩＳＣを形成する。成熟ｍｉＲＮＡについての当該分野で認識されている命名法は、典型的には、成熟ｍｉＲＮＡが由来するプレｍｉＲＮＡのアームを指す；「５ｐ」とは、マイクロＲＮＡがプレｍｉＲＮＡヘアピンの５プライムアームに由来することを意味し、「３ｐ」とはマイクロＲＮＡがプレｍｉＲＮＡヘアピンの３プライム末端に由来することを意味する。本明細書において番号で示されるｍｉＲは、同じプレｍｉＲＮＡの反対側のアームから生じる２つの成熟マイクロＲＮＡのいずれか（例えば、３ｐまたは５ｐマイクロＲＮＡのいずれか）を指す場合がある。本明細書で言及される全てのｍｉＲは、３ｐまたは５ｐの指定によって特に指定されない限り、３ｐ及び５ｐの両方のアーム／配列を含むことを意図している。
【０５８３】
１つの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、ダイサーを含む活性ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）の一部である、対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の態様において、ＲＩＳＣ中の対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡが翻訳されるのを妨ぐ。
【０５８４】
本明細書中で使用される場合、「マイクロＲＮＡ結合部位」という用語は、マイクロＲＮＡ標的部位もしくはマイクロＲＮＡ認識部位、またはマイクロＲＮＡが結合もしくは会合する任意のヌクレオチド配列を指す。「結合」は、伝統的なワトソン−クリックハイブリダイゼーション法則に従い得るか、またはマイクロＲＮＡと、マイクロＲＮＡ部位もしくはそれに隣接する標的配列との任意の安定した会合を反映し得ることを理解すべきである。
【０５８５】
いくつかのマイクロＲＮＡ、例えば、ｍｉＲ−１２２は、正常組織に豊富に存在するが、がんまたは腫瘍組織にははるかに低いレベルで存在する。したがって、マイクロＲＮＡ標的配列（すなわち、マイクロＲＮＡ結合部位）を、ＩＬ−２３及び／またはＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／または第３のタンパク質（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチド）をコードするポリヌクレオチド中に操作すること（例えば、３’ＵＴＲ様領域または他の領域）は、正常な組織（マイクロＲＮＡが豊富である場合）における分解または翻訳の減少のために分子を効果的に標的化し得、一方で、がんまたは腫瘍組織における高レベルの翻訳を提供する（マイクロＲＮＡがはるかに低いレベルで存在する場合）。これによって、本開示の方法及び組成物のための腫瘍標的化アプローチが提供される。
【０５８６】
いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）と完全に相補的であり、それによってｍｉＲＮＡ結合部位に融合したｍＲＮＡが分解される。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと完全に相補的ではない。ある特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、対応するｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）と同じ長さである。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、２２ｎｔを有するｍｉＲ−１２２）よりも１ヌクレオチド短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも２ヌクレオチド短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも３ヌクレオチド短い。いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも４ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも５ヌクレオチド短い。いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも６ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも７ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも８ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも９ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも１０ヌクレオチド短い。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）よりも１１ヌクレオチド短い。他の態様において、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、５’末端または３’末端における対応するマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）より１２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、やはり１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を組み込んでいるｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡの翻訳を妨げ得る。
【０５８７】
いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）を含むＲＩＳＣ複合体がマイクロＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドを切断するように、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）に対して十分な相補性を有する。他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えばｍｉＲ−１２２結合部位）は、ｍｉＲＮＡ（例えばｍｉＲ−１２２）を含むＲＩＳＣ複合体が、マイクロＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチド中の不安定性を誘発するように不完全な相補性を有する。別の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）を含むＲＩＳＣ複合体が、マイクロＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドの転写を抑制するように、不完全な相補性を有する。
【０５８８】
ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、ポリリボヌクレオチドのｍｉＲＮＡ媒介調節、例えば、ポリリボヌクレオチドのｍｉＲＮＡ媒介翻訳抑制または分解を促進するのに十分な程度の相補性を指す。本発明の例示的な態様において、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリリボヌクレオチドのｍｉＲＮＡ媒介分解、例えば、ｍＲＮＡの、ｍｉＲＮＡガイドのＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を促進するのに十分な程度の相補性を指す。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９〜２５ヌクレオチドの長さのｍｉＲＮＡ配列に対して、１９〜２３ヌクレオチドの長さのｍｉＲＮＡ配列に対して、または２２ヌクレオチドの長さのｍｉＲＮＡ配列に対して相補性を有し得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部のみに対して、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の全長の１、２、３、または４ヌクレオチド未満の部分に対して、または天然に存在するｍｉＲＮＡ配列より１、２、３、または４ヌクレオチド短い部分に対して相補的であり得る（そのようなｍｉＲＮＡ結合部位は「不完全な相補性」を有する）。所望の調節がｍＲＮＡ分解である場合、全もしくは完全相補性（例えば、全相補性、または天然に存在するｍｉＲＮＡの長さの全部もしくはかなりの部分にわたる完全相補性）が好ましい。
【０５８９】
１つの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、対応するｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）由来の１つのミスマッチを有する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の２つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の３つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の４つのミスマッチを有する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の５つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の６つのミスマッチを有する。ある特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の７つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の８つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の９つのミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の１０個のミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の１１個のミスマッチを有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡ由来の１２個のミスマッチを有する。
【０５９０】
ある特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、対応するｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）の少なくとも約１０の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１０の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１１の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１１の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１２の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１２の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１３の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１３の連続ヌクレオチド、または対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１４の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１４の連続ヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１５の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１５の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１６の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１６の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１７の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１７の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１８の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１８の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１９の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約１９の連続ヌクレオチド、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約２０の連続ヌクレオチドに相補的な少なくとも約２０の連続ヌクレオチド、または対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約２１の連続ヌクレオチドに相補的な２１の連続ヌクレオチドを有する。
【０５９１】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ならびに少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも２つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも３つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも４つのｍｉＲ−１２２結合部位、または少なくとも５つのｍｉＲ−１２２結合部位を含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合するか、またはｍｉＲ−１２２に相補的である。別の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐに結合する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号２４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含み、ここでこのｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。別の特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号２６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含み、ここでこのｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。これらの配列を下の表２に示す。
【表２】
2019519517.tif 000051
【０５９２】
いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位）は、ポリヌクレオチド（例えば、３’ＵＴＲ）の任意の位置で本開示のポリヌクレオチドに挿入される；ポリヌクレオチド中のｍｉＲＮＡ結合部位の挿入が、対応するｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）の非存在下で機能的ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの翻訳を妨害しない限り、ポリヌクレオチド中の挿入部位は、ポリヌクレオチド中のどこにあってもよい；そしてｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１２２）の存在下では、ポリヌクレオチド中のｍｉＲＮＡ結合部位の挿入及び対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合は、ポリヌクレオチドを分解するか、またはポリヌクレオチドの翻訳を妨げ得る。１つの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリヌクレオチドの３’ＵＴＲに挿入される。
【０５９３】
ある特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍＲＮＡをコードするＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの停止コドンから少なくとも約３０ヌクレオチド下流に挿入される。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリヌクレオチド、例えばＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドコードｍＲＮＡの停止コドンから、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約３５ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約４５ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約５５ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約６５ヌクレオチド、少なくとも約７０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流に挿入される。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリヌクレオチド、例えばＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドコードｍＲＮＡの停止コドンから、約１０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド〜約９０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド〜約８０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド〜約７０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド〜約６０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド〜約６５ヌクレオチド下流に挿入される。
【０５９４】
ＩＶＴポリヌクレオチド構造
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む本開示のポリヌクレオチドは、ＩＶＴポリヌクレオチドである。従来、ｍＲＮＡ分子の基本成分は、少なくともコード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、５’キャップ及びポリ−Ａ尾部を含む。本開示のＩＶＴポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡとして機能し得るが、それらの機能的及び／または構造的設計特徴において野生型ｍＲＮＡとは区別され、例えば、核酸ベースの治療法を用いた有効なポリペプチド産生の既存の問題を克服するのに役立つ。
【０５９５】
ＩＶＴポリヌクレオチドの一次コンストラクトは、第１の隣フランキング領域及び第２のフランキング領域に隣接する連結ヌクレオチドの第１の領域を含む。この第１の領域は、限定するものではないが、コードされたＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドを含んでもよい。第１のフランキング領域は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）として機能する連結ヌクレオシドの配列、例えば、ポリペプチドの天然の５’ＵＴＲをコードする任意の核酸の５’ＵＴＲ、または非天然の５’ＵＴＲ、例えば、限定するものではないが、異種性５’ＵＴＲまたは合成５’ＵＴＲを含んでもよい。ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＩＶＴは、その５末端に１つ以上のシグナル配列をコードするシグナル配列領域を含み得る。この隣接する領域は、１つ以上の完全または不完全５’ＵＴＲ配列を含む、連結ヌクレオチドの領域を含み得る。このフランキング領域はまた、５’末端キャップも含んでもよい。第２のフランキング領域は、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの天然の３’ＵＴＲ、または限定するものではないが、異種性３’ＵＴＲもしくは合成３’ＵＴＲなどの非天然３’ＵＴＲをコードし得る１つ以上の完全または不完全３’ＵＴＲを含む連結ヌクレオチドの領域を含み得る。この隣接する領域はまた、３’尾部付加配列を含んでもよい。３’尾部付加配列は、限定するものではないが、ポリ−Ａ尾部、ポリＡ−Ｇのカルテット及び／またはステムループ配列であってもよい。
【０５９６】
第１の領域の５’末端と第１のフランキング領域とを架橋することが第１の操作領域である。従来、この操作領域は開始コドンを含む。操作領域はあるいは、開始コドンを含む任意の翻訳開始配列またはシグナルを含んでもよい。
【０５９７】
第１の領域の３’末端と第２のフランキング領域とを架橋することは、第２の操作領域である。従来、この操作領域は停止コドンを含む。操作領域はあるいは、停止コドンを含む任意の翻訳開始配列またはシグナルを含んでもよい。複数の連続停止コドンもまた、ＩＶＴポリヌクレオチドに使用してもよい。いくつかの実施形態において、本開示の操作領域は、２つの停止コドンを含んでもよい。第１の停止コドンは、「ＴＧＡ」であっても、または「ＵＧＡ」であってもよく、そして第二の停止コドンは「ＴＡＡ」、「ＴＧＡ」、「ＴＡＧ」、「ＵＡＡ」、「ＵＧＡ」または「ＵＡＧ」からなる群より選択され得る。
【０５９８】
ＩＶＴポリヌクレオチド一次コンストラクトは、第１のフランキング領域及び第２のフランキング領域によって隣接される連結ヌクレオチドの第１の領域を含む。本明細書で使用される場合、「第１の領域」は、「コード領域」または「コードする領域」または単に「第１の領域」と呼ばれてもよい。この第１の領域は、限定するものではないが、目的のコードされたポリペプチドを含んでもよい。一態様では、第１の領域は、限定するものではないが、少なくとも１つの目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含んでもよい。オープンリーディングフレームは、全体的または部分的にコドン最適化されてもよい。隣接する領域は、完全にコドン最適化または部分的にコドン最適化され得る１つ以上の完全または不完全５’ＵＴＲ配列を含む、連結ヌクレオチドの領域を含んでもよい。隣接する領域は、限定するものではないが、ｍｉＲ配列、ＴＥＲＺＡＫ（商標）配列及び翻訳制御配列を含む、少なくとも１つの核酸配列を含んでもよい。隣接する領域はまた、５’末端キャップ１３８を含んでもよい。５’末端キャッピング領域は、天然に存在するキャップ、合成キャップ、または最適化されたキャップを含んでもよい。第２のフランキング領域は、１つ以上の完全または不完全３’ＵＴＲを含む連結ヌクレオチドの領域を含んでもよい。第２のフランキング領域は、完全にコドン最適化されてもよいし、または部分的にコドン最適化されていてもよい。フランキング領域は、限定するものではないが、ｍｉＲ配列及び翻訳制御配列を含む少なくとも１つの核酸配列を含んでもよい。第２のフランキング領域の後に、ポリヌクレオチド一次コンストラクトは３’尾部付加配列を含んでもよい。この３’尾部付加配列は、合成尾部付加領域を含んでも、及び／または連鎖終止ヌクレオシドを含んでもよい。合成尾部付加領域の非限定的な例としては、ポリＡ配列、ポリＣ配列、ポリＡ−Ｇカルテットが含まれる。連鎖終止ヌクレオシドの非限定的な例としては、２’−Ｏメチル、Ｆ及びロックされた核酸（ＬＮＡ）が挙げられる。
【０５９９】
第１の領域の５’末端と第１のフランキング領域とを架橋することが第１の操作領域である。従来、この操作領域は開始コドンを含む。操作領域はあるいは、任意の翻訳開始配列または開始コドンを含むシグナルを含んでもよい。
【０６００】
第１の領域の３’末端と第２のフランキング領域とを架橋することが、第２の操作領域である。従来、この操作領域は停止コドンを含む。操作領域はあるいは、任意の翻訳開始配列または停止コドンを含むシグナルを含んでもよい。本開示によれば、複数の連続停止コドンも使用してもよい。
【０６０１】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドの第１及び第２のフランキング領域は、独立して、長さが１５〜１，０００ヌクレオチドの範囲であってもよい（例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，５００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００，５，０００，５，５００ヌクレオチド超、または少なくとも３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，５００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、５，０００、５，５００ヌクレオチド）。
【０６０２】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドの尾部付加配列は、存在しないヌクレオチド長から５００ヌクレオチド長までの範囲であり得る（例えば、少なくとも６０、７０、８０、９０、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ヌクレオチド）。テール領域がポリ−Ａ尾部である場合、その長さはポリＡ結合タンパク質の単位で、またはその関数として決定され得る。この実施形態では、ポリ−Ａ尾部は、少なくとも４モノマーのポリＡ結合タンパク質に結合するのに十分な長さである。ポリＡ結合タンパク質モノマーは、約３８ヌクレオチドのストレッチに結合する。そのように、約８０ヌクレオチド及び１６０ヌクレオチドのポリ−Ａ尾部が機能的であることが観察されている。
【０６０３】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドのキャッピング領域は、単一のキャップまたはキャップを形成する一連のヌクレオチドを含んでもよい。この実施形態では、キャッピング領域は、１から１０、例えば、２〜９、３〜８、４〜７、１〜５、５〜１０、または少なくとも２、または１０以下のヌクレオチド長であってもよい。いくつかの実施形態において、キャップは存在しない。
【０６０４】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドの第１及び第２の操作領域は、３〜４０、例えば５〜３０、１０〜２０、１５、または少なくとも４、または３０以下の長さのヌクレオチドの範囲であってもよく、開始コドン及び／または停止コドンに加えて、１つ以上のシグナル及び／または制限配列を含んでもよい。
【０６０５】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドは構造的に修飾されても化学的に修飾されてもよい。ＩＶＴポリヌクレオチドが化学的及び／または構造的に修飾されている場合、このポリヌクレオチドは「修飾ＩＶＴポリヌクレオチド」と呼ばれてもよい。
【０６０６】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドが化学修飾されている場合、それらは全てもしくは任意の同じヌクレオシドタイプの均一な化学修飾、または全てもしくは任意の同じヌクレオシドタイプにおける同じ出発修飾の単なる下向き滴定によって生じる修飾の集団、または全てのウリジンがウリジン類似体、例えばシュードウリジンもしくは５−メトキシウリジンで置換されている場合のような、全ての任意の同一のヌクレオシドタイプであるがランダムな組み込みがある化学修飾の測定された百分率を有し得る。別の実施形態では、ＩＶＴポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド全体にわたって同じヌクレオシドタイプの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有してもよい（全てのウリジン及び全てのシトシンなどが同様に修飾される）。
【０６０７】
いくつかの実施形態において、ＩＶＴポリヌクレオチドは、限定するものではないが、２Ａペプチドなどの、本明細書に記載の自己切断ペプチドをコードする配列を含んでもよい。ＩＶＴポリヌクレオチド中の２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書中に記載される方法によって改変され得るかもしくはコドン最適化されてもよく、及び／または当該分野で公知である。いくつかの実施形態において、この配列を使用して、ＩＶＴポリヌクレオチド中の２つ以上の目的のポリペプチドのコード領域を分離してもよい。
【０６０８】
キメラポリヌクレオチド構造
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドである。本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドまたはＲＮＡコンストラクトは、ＩＶＴポリヌクレオチドと同様のモジュール構造を維持するが、このキメラポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに有用な特性を付与する１つ以上の構造的及び／または化学的な修飾または改変を含む。したがって、本開示の修飾ｍＲＮＡ分子であるキメラポリヌクレオチドは、「キメラ修飾ｍＲＮＡ」または「キメラｍＲＮＡ」と呼ばれる。
【０６０９】
キメラポリヌクレオチドは、サイズ及び／または化学修飾パターン、化学修飾位置、化学修飾百分率または化学修飾集団、ならびにそれらの組合せが異なる部分または領域を有する。
【０６１０】
キメラポリヌクレオチドがｍＲＮＡとして機能し、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする部分または領域の例は、限定するものではないが、非翻訳領域（ＵＴＲ、例えば、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲ）、コード領域、キャップ領域、ポリ−Ａ尾部領域、開始領域、停止領域、シグナル配列領域、及びそれらの組合せである。他の地域を結ぶか、またはその間にある地域または部分も、サブ領域を有するように設計されてもよい。
【０６１１】
いくつかの実施形態において、本開示のキメラポリヌクレオチドは、式Ｘを含む構造を有する。
５’［Ａｎ］ｘ−Ｌ１−［Ｂｏ］ｙ−Ｌ２−［Ｃｐ］ｚ−Ｌ３  ３’
式Ｘ
ここで：
Ａ及びＢの各々は独立して連結ヌクレオシドの領域を含み；
ＡまたはＢのいずれか、あるいはＡ及びＢの両方が、本明細書の他のいずれかに記載されているＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし；
Ｃは連結ヌクレオシドの任意の領域であり；
少なくとも１つの領域Ａ、Ｂ、またはＣが位置的に修飾されており、前記位置的に修飾された領域が、１つ以上の同じヌクレオシドタイプのアデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、またはウリジンの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、ここで同じ種類のヌクレオシドの少なくとも２つの化学修飾は異なる化学修飾であり；
ｎ、ｏ及びｐは独立して１５〜１０００の整数であり；
ｘ及びｙは独立して１〜２０であり；
ｚは０〜５であり；
Ｌ１及びＬ２は独立して任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースまたは非核酸ベースのいずれかであり；そして
Ｌ３は任意選択のコンジュゲートまたは任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は、核酸ベースまたは非核酸ベースのいずれかである。
【０６１２】
いくつかの実施形態において、Ａの連結ヌクレオシドの領域の少なくとも１つは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）として機能し得る一連の連結ヌクレオシドを含む。連結ヌクレオシドの配列は、天然の５’ＵＴＲであっても、または合成の５’ＵＴＲであってもよい。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし得、Ａの連結ヌクレオシドの配列は、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／または４０Ｌポリペプチド、または非異種性５’ＵＴＲ、例えば、限定するものではないが、合成ＵＴＲをコードし得る。
【０６１３】
別の実施形態では、Ａの連結ヌクレオシドの少なくとも１つの領域は、キャップ領域である。キャップ領域は、５’ＵＴＲとして機能するＡの連結ヌクレオシドの領域に対して５’に位置し得る。キャップ領域は、限定するものではないが、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジド−グアノシン、Ｃａｐ２及びＣａｐ４などの少なくとも１つのキャップを含んでもよい。
【０６１４】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、Ｃａｐ１の５’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするための５’ＵＴＲ配列、例えばＣａｐ１を含むポリヌクレオチドは、異なる５’ＵＴＲ（例えば、Ｃａｐ０、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジド−グアノシン、Ｃａｐ２またはＣａｐ４）を含むＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと比較してＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現を増大させる。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはＣａｐ１の５’ＵＴＲを含み、ここでポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、Ｃａｐ１の５’ＵＴＲを含むポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチド発現を増大させる。
【０６１５】
いくつかの実施形態において、Ｂの連結ヌクレオシドの領域の少なくとも１つは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含む。この核酸配列はコドン最適化されてもよく、及び／または少なくとも１つの修飾を含んでもよい。
【０６１６】
いくつかの実施形態において、Ｃの連結ヌクレオシドの領域の少なくとも１つは、３’ＵＴＲとして機能し得る一連の連結ヌクレオシドを含む。連結ヌクレオシドの配列は、天然３’ＵＴＲであっても、または合成３’ＵＴＲであってもよい。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし得、Ｃの連結ヌクレオシドの配列は、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの３’ＵＴＲまたは非異種性３’ＵＴＲ、例えば、限定するものではないが、合成ＵＴＲをコードし得る。
【０６１７】
いくつかの実施形態において、Ａの連結ヌクレオシドの領域の少なくとも１つは、５’ＵＴＲとして機能する連結ヌクレオシドの配列を含み、Ｃの連結ヌクレオシドの領域の少なくとも１つは、３’ＵＴＲとして機能する連結ヌクレオシドの配列を含む。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、同じ種に由来しても、または異なる種に由来してもよい。別の実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、同じ種または異なる種由来の異なるタンパク質由来の天然の非翻訳領域をコードし得る。
【０６１８】
本開示のキメラポリヌクレオチド（その部分または領域を含む）は、ヘミマー、ギャップマー、ウィングマー、またはブロックマーとして分類され得る。
【０６１９】
本明細書で使用される場合、「ヘミマー」とは、化学修飾（複数可）の１つのパターン、百分率、位置または集団の半分、及び化学修飾（複数可）の第２のパターン、百分率、位置、または集団の半分を含む領域または部分を含むキメラポリヌクレオチドである。本開示のキメラポリヌクレオチドはまた、ヘミマーサブ領域を含んでもよい。いくつかの実施形態において、部分または領域は、一方の５０％及び他方の５０％である。
【０６２０】
いくつかの実施形態において、全キメラポリヌクレオチドは、一方が５０％、他方が５０％である。本開示の任意のキメラポリヌクレオチドの任意の領域または部分は、ヘミマーであり得る。ヘミマーの種類としては、パターンヘミマー、集団ヘミマーまたは位置ヘミマーが挙げられる。定義により、ヘミマーは、５０：５０百分率ヘミマーである。
【０６２１】
本明細書中で使用される場合、「ギャップマー」は、部分または領域間にギャップを有する少なくとも３つの部分または領域を有するキメラポリヌクレオチドである。「ギャップ」は、結合したヌクレオシドの領域またはそれに隣接する２つの部分または領域のキメラ性とは異なる単一のヌクレオシドを含んでもよい。ギャップマーの２つの部分または領域は、互いに同じでも異なっていてもよい。
【０６２２】
本明細書中で使用される場合、「ウイングマー」とは、部分または領域の間にギャップを有する少なくとも３つの部分または領域を有するキメラポリヌクレオチドである。ギャップマーとは異なり、ウイングマーのギャップを囲む２つの隣接する部分または領域は、程度または種類が同じである。そのような類似性は、異なる修飾の単位数の長さまたは修飾の数にある場合がある。ウングマーのウイングはギャップより長くても短くてもよい。ウイング部分または領域は、ギャップを含む領域よりも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または９５％大きいかまたは短い長さであり得る。
【０６２３】
本明細書において用いる場合、「ブロックマー」とは、パターン化されたポリヌクレオチドであって、この部分または領域は、等価なサイズまたは数、および修飾の種類である。ブロックマー中の領域またはサブ領域は、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１  ６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０または５００ヌクレオチド長であってもよい。
【０６２４】
化学修飾パターンを有する本開示のキメラポリヌクレオチド（その部分または領域を含む）は、「パターンキメラ」と呼ばれる。パターンキメラはブロッカーとも呼ばれ得る。パターンキメラは、領域もしくは部分内、領域もしくは部分にまたがって、または領域もしくは領域間に、あるパターンの修飾を有するポリヌクレオチドである。
【０６２５】
部分または領域内の修飾パターンは、定義された領域内で開始及び停止するパターンである。部分または領域にわたる修飾のパターンは、部分または領域で始まり、別の隣接する部分または領域で終わるパターンである。部分または領域間の修飾のパターンは、１つの部分または領域で始まって終わるパターンであり、必ずしも第１の領域または部分に隣接していない異なる部分または領域で繰り返されるパターンである。
【０６２６】
パターンキメラまたはブロックマーの領域またはサブ領域は、各「Ａ」及び各「Ｂ」が異なる化学修飾（塩基、糖または主鎖リンカーの少なくとも１つ）を表し、異なる種類の化学修飾（例えば、天然に存在する及び非天然に存在する）、修飾の異なるパーセンテージまたは修飾の異なる集団に相当する、ＡＢＡＢ［ＡＢ］ｎのような単純な交互するパターンを有し得る。このパターンはｎ回繰り返してもよく、ここでｎ＝３〜３００である。さらに、各ＡまたはＢは、１〜２，５００単位（例えば、ヌクレオシド）のパターンである場合もある。パターンは、ＡＡＢＢＡＡＢＢ［ＡＡＢＢ］ｎ（交互の二重重複）またはＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ［ＡＡＡＢＢＢ］ｎ（交互の三重重複）パターンのような交互の重複であってもよい。パターンはｎ回繰り返してもよく、ｎ＝３〜３００である。
【０６２７】
異なるパターンをまた一緒に混合して２次パターンを形成してもよい。例えば、１つの交互パターンを三重の交互パターンと組み合わせて、２次の交互パターンＡ’Ｂ’を形成してもよい。１つの例は［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］であり、ここで［ＡＢＡＢＡＢ］はＡ’であり、かつ［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］はＢ’である。同様の方法で、これらのパターンはｎ回繰り返されてもよく、ここで、ｎ＝３〜３００である。
【０６２８】
パターンは、ＡＢＣＡＢＣ［ＡＢＣ］ｎパターンを形成するための３つ以上の異なる修飾を含んでもよい。これらの３つの成分パターンはまた、ＡＡＢＢＣＣＡＡＢＢＣＣ［ＡＡＢＢＣＣ］ｎのような重複であってもよく、ＡＢＣＡＢＣＡＡＢＢＣＣＡＢＣＡＢＣＡＡＢＢＣＣのような他のパターンとの組合せとして設計されてもよく、より高次のパターンであってもよい。
【０６２９】
位置、パーセント、及び集団修飾の領域またはサブ領域は、各種修飾からの等しい寄与を受ける必要はない。「１−２−３−４」、「１−２−４−８」などのシリーズを形成してもよく、ここで各整数は特定の修飾型の単位数を表す。あるいは、「１−３−３−１−３−１−５」のような奇数のみ、または「２−４−２−４−６−４−８」のような偶数のみ、または奇数及び偶数の両方の単位の混合物、例えば「１−３−４−２−５−７−３−３−４」であってもよい。
【０６３０】
パターンキメラは、その化学修飾の度合い（例えば、上記のような程度）または種類（例えば、異なる修飾）においてその化学修飾が変化し得る。
【０６３１】
同じヌクレオシド種（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、またはＵ）の２つ以上のヌクレオシドメンバーの２つ以上の異なる化学修飾を有する少なくとも１つの領域を有する本開示のキメラポリヌクレオチド（その部分または領域を含む）は、「位置的修飾」キメラと呼ばれる。位置的修飾キメラはまた、本明細書では「選択的配置」キメラまたは「選択的配置ポリヌクレオチド」とも呼ばれる。その名称が示すように、選択的配置とは、Ａ、Ｃ、Ｇ、ＴまたはＵのいずれかへの修飾が合成方法によって同じである、当該技術分野におけるポリヌクレオチドとは異なり、ポリヌクレオチドまたはその領域における個々のＡｓ、Ｃｓ、Ｇｓ、ＴｓまたはＵｓに対して異なる修飾を有し得る、ポリヌクレオチドの設計を指す。例えば、位置的に修飾されたキメラポリヌクレオチドにおいて、Ａｓ、Ｃｓ、Ｇｓ、ＴｓまたはＵｓのいずれかのヌクレオシドタイプに対して２つ以上の異なる化学修飾が存在し得る。同じヌクレオシドタイプの任意の２つ以上に対する２つ以上の組合せもあり得る。例えば、位置的に修飾された、または選択的に配置されたキメラポリヌクレオチドは、分子中のアデニンの集団に対して３つの異なる修飾を含んでもよく、またコンストラクト（この全てが固有のランダムでない位置を有する）中のシトシンの集団に対して３つの異なる修飾を有してもよい。
【０６３２】
化学修飾パーセントを有する本開示のキメラポリヌクレオチド（その部分または領域を含む）は、「パーセントキメラ」と呼ばれる。パーセントキメラは、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の修飾の位置、パターンまたは集団を含む、領域または部分を有し得る。あるいは、パーセントキメラは、修飾の位置、パターンまたは集団に関して完全に修飾されてもよい。パーセントキメラの修飾パーセントは、天然に存在する修飾と天然に存在しない修飾との間で分けられ得る。
【０６３３】
ある化学修飾集団を有する本開示のキメラポリヌクレオチド（その部分または領域を含む）は、「集団キメラ」と呼ばれる。集団キメラは、ヌクレオシド（それらの塩基、糖もしくは骨格結合、またはそれらの組合せ）が選択された修飾集団を有する領域または部分を含み得る。このような修飾は、表現型帰結を誘導、変更または調整する修飾などの機能的集団から選択されてもよい。例えば、機能的集団は、サイトカインのレベルを上昇させる化学修飾の集団であってもまたは選択であってもよい。他の機能的集団は、個々にまたは集合的に機能して、１つ以上のサイトカインのレベルを低下し得る。したがって、キメラポリヌクレオチドにおけるこれらの同様の機能の修飾の選択の使用は、「機能的集団キメラ」を構成するであろう。本明細書中で使用される場合、「機能的集団キメラ」は、その固有の機能的特徴が上記のような修飾の集団によって規定されるものであってもよいし、またはこの用語は、キメラポリヌクレオチド自体の全体的機能に適用されてもよい。例えば、全体として、キメラポリヌクレオチドは、未修飾または非キメラポリヌクレオチドと比較して異なるまたは優れた様式で機能し得る。
【０６３４】
全ての任意の同じヌクレオシドタイプの均一な化学修飾、もしくは全ての任意の同一のヌクレオシドタイプにおいて同一開始修飾の単なる下向き滴定によって生成された修飾の集団を有するポリヌクレオチド、または、全ての任意の同じヌクレオシドタイプでただしランダムな取り込みを伴う化学修飾の測定されたパーセントを有するポリヌクレオチド（全てのウリジンがウリジン類似体、例えばシュードウリジンもしくは５−メトキシウリジンで置き換えられている場合など）は、キメラポリヌクレオチドとはみなされないことに注意すべきである。同様に、ポリヌクレオチド全体（例えば、全てのウリジン及び全てのシトシンなども同様に修飾されている）にわたって同じヌクレオシドタイプの２つ、３つまたは４つの均一な化学修飾を有するポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドとはみなされない。キメラではないポリヌクレオチドの一例は、標準シュードウリジン／５−メチルシトシン修飾ポリヌクレオチドである。これらの均一ポリヌクレオチドは、完全にｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）酵素合成を介して得られ、合成酵素の制限のため、ポリヌクレオチドで見られる同一ヌクレオシド種のそれぞれ、すなわち、アデノシン（Ａ）、チミジン（Ｔ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、またはウリジン（Ｕ）の出現に対して１種の修飾のみを含む。そのようなポリヌクレオチドは、ＩＶＴポリヌクレオチドとして特性決定される。
【０６３５】
本開示のキメラポリヌクレオチドは、構造的に修飾されてもよいし、または化学修飾されてもよい。本開示のキメラポリヌクレオチドが化学的及び／または構造的に修飾される場合、このポリヌクレオチドは「修飾キメラポリヌクレオチド」と呼んでもよい。
【０６３６】
キメラポリヌクレオチドの領域または部分は、リンカーまたはスペーサー部分によって分離されてもよい。そのようなリンカーまたはスペーサーは、核酸ベースであっても、または非ヌクレオシドであってもよい。
【０６３７】
いくつかの実施形態において、キメラポリヌクレオチドは、限定されないが、２Ａペプチドのような本明細書に記載の自己切断ペプチドをコードする配列を含んでもよい。
キメラポリヌクレオチド中の２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載される方法及び／または当該技術分野において既知である方法により、修飾またはコドン最適化されてもよい。
【０６３８】
上記にかかわらず、本開示のキメラポリヌクレオチドは、本明細書で定義されるように位置的修飾されておらず、キメラでもない領域または部分を含んでもよい。例えば、１つ以上のＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、またはＵでキメラポリヌクレオチドの領域または一部を均一に修飾してもよいが、ポリヌクレオチドは全領域または部分を通して均一には修飾されていないことになる。
【０６３９】
本開示のキメラポリヌクレオチドは、完全に位置的修飾されていても部分的に位置的修飾されていてもよい。それらはまた、任意のパターンまたは設計であり得るサブ領域を有してもよい。
【０６４０】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドの領域またはサブ領域は、存在しないことから５００ヌクレオチド長まで（例えば、少なくとも６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ヌクレオチド）に及んでもよい。この領域がポリ−Ａ尾部である場合、長さは、ポリＡ結合タンパク質結合の単位または機能として決定され得る。この実施形態では、ポリ−Ａ尾部は、ポリＡ結合タンパク質の少なくとも４つのモノマーに結合するのに十分な長さである。ポリＡ結合タンパク質モノマーは、約３８ヌクレオチドのストレッチに結合する。このように、約８０ヌクレオチド〜約１６０ヌクレオチドのポリ−Ａ尾部が機能的であることが観察されている。ｍＲＮＡとして機能する本開示のキメラポリヌクレオチドは、ポリ−Ａ尾部を含む必要はない。
【０６４１】
本開示によれば、ｍＲＮＡとして機能するキメラポリヌクレオチドは、キャッピング領域を有し得る。キャッピング領域は、単一のキャップを含んでも、またはキャップを形成する一連のヌクレオチドを含んでもよい。この実施形態では、キャッピング領域は、１から１０、例えば、２〜９、３〜８、４〜７、１〜５、５〜１０、もしくは少なくとも２、または１０もしくはそれ以下の長さヌクレオチドであってもよい。いくつかの実施形態において、キャップは存在しない。
【０６４２】
本開示は、円形、すなわち環状のキメラポリヌクレオチドを企図する。この名前が示すように、環状ポリヌクレオチドは、性質として円形であり、これはライゲーション、共有結合、同じタンパク質もしくは他の分子もしくは複合体との共通会合、またはハイブリダイゼーションのいずれかによって、末端が何らかの形で結合されることを意味する。
【０６４３】
キメラポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチドを含む製剤及び組成物、ならびにキメラポリヌクレオチドを作製、使用及び投与する方法はまた、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／５３９０７号にも記載されている。
【０６４４】
いくつかの実施形態において、キメラポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、本開示のキメラポリヌクレオチドは、表１に列挙されるＩＬ−２３及び／またはＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８核酸配列、及び／または表１Ａに列挙されるＯＸ４０Ｌ核酸配列のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、本開示のキメラポリヌクレオチドは、表１に列挙されるＩＬ−２３及び／もしくはＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８ならびに／または表１Ａに列挙されるＯＸ４０Ｌポリペプチドのうちいずれか１つをコードする。
【０６４５】
環状ポリヌクレオチド
ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、環状であっても、または円形であってもよい。本明細書で使用する場合「環状ポリヌクレオチド」または「ｃｉｒｃＰ」とは、ＲＮＡと実質的に同様に作用し、ＲＮＡの特性を有する一本鎖環状ポリヌクレオチドを意味する。「環状」という用語はまた、ｃｉｒｃＰの任意の二次または三次配置を包含することを意味する。環状ポリヌクレオチドは、性質として環状であり、ライゲーション、共有結合、同じタンパク質または他の分子もしくは複合体との共通会合、またはハイブリダイゼーションによるなどに関わらず、末端が何らかの形で結合されることを意味する。
【０６４６】
環状ポリヌクレオチド、環状ポリヌクレオチドを含む製剤及び組成物、ならびに環状ポリヌクレオチドを作製、使用及び投与する方法はまた、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／５３９０４（ＷＯ２０１５０３４９２５として公開、また、米国特許出願公開第２０１６−０１９４３６８号も参照のこと）にも開示されている。
【０６４７】
いくつかの実施形態において、環状ポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、本開示の環状ポリヌクレオチドは、表１に列挙されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８核酸配列、または表１Ａに列挙されるＯＸ４０Ｌ核酸配列のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、本開示の環状ポリヌクレオチドは、表１に記載されるＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８ポリペプチド、または表１Ａに列挙されるＯＸ４０Ｌポリペプチドのうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態において、環状ポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現を増加させる。
【０６４８】
ポリヌクレオチドの多量体
いくつかの実施形態において、複数の異なるキメラポリヌクレオチド及び／またはＩＶＴポリヌクレオチドは、３’末端が修飾されているヌクレオチドを使用して、３’末端を介して一緒に結合され得る。化学結合を使用して、細胞への送達の化学量論を制御してもよい。これは、１つのポリヌクレオチド種上の３’−アジド末端ヌクレオチド及び反対側のポリヌクレオチド種上のＣ５−エチニルまたはアルキニル含有ヌクレオチドを使用して、キメラポリヌクレオチド及び／またはＩＶＴポリヌクレオチドを化学結合させることによって制御され得る。修飾ヌクレオチドは、製造元のプロトコルに従って、ターミナルトランスフェラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）を用いて転写後に付加される。３’−修飾ヌクレオチドの付加後、２つのポリヌクレオチド種を、銅の存在下または非存在下で水溶液中で組み合わせて、文献に記載されているようなクリック化学機構を介して新しい共有結合を形成してもよい。
【０６４９】
別の例では、２つを超えるキメラポリヌクレオチド及び／またはＩＶＴポリヌクレオチドを、官能基が導入されたリンカー分子を用いて一緒に結合してもよい。例えば、官能化糖分子は、３’官能基が導入ｍＲＮＡ分子上の同族部分（すなわち、３’−マレイミドエステル、３’−ＮＨＳ−エステル、アルキニル）と反応する複数の化学反応基（ＳＨ−、ＮＨ２−、Ｎ３など）を含むように化学修飾してもよい。修飾された糖の上の反応基の数を、化学量論的様式で制御して、コンジュゲートされたキメラポリヌクレオチド及び／またはＩＶＴポリヌクレオチドの化学量論比を直接制御してもよい。
【０６５０】
いくつかの実施形態において、キメラポリヌクレオチド及び／またはＩＶＴポリヌクレオチドを、あるパターンで一緒に結合してもよい。このパターンは、各「Ｃ」及び各「Ｄ」がキメラポリヌクレオチド、ＩＶＴポリヌクレオチド、異なるキメラポリヌクレオチドまたは異なるＩＶＴポリヌクレオチドを表す、ＣＤ［ＣＤ］ｘのような単純な交互パターンであってもよい。このパターンは、ｘ回繰り返されてもよく、ここでｘ＝１−３００である。パターンはまた、ＣＣＤＤ［ＣＣＤＤ］ｘ（交互の二重重複）またはＣＣＣＤＤＤ［ＣＣＣＤＤＤ］ｘ（交互の三重重複）パターンのような交互の重複であってもよい。この交互の二重重複または交互の三重重複は、ｘ回繰り返されてもよく、ｘ＝１−３００である。
【０６５１】
ポリヌクレオチドのコンジュゲート及び組合せ
本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、他のポリヌクレオチド、色素、挿入剤（例えばアクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン（ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎ）、サプフィリン（Ｓａｐｐｈｙｒｉｎ））、多環芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、アルキル化剤、リン酸塩、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射標識されたマーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチド、例えば、共リガンドに特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞、もしくは骨細胞など特定の細胞型に結合する抗体、ホルモン及びホルモン受容体、非ペプチド種、例えば脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、または薬物とコンジュゲートするように設計することができる。
【０６５２】
コンジュゲーションは、安定性を上昇及び／または半減期の延長をもたらし得、ポリヌクレオチドを細胞、組織または生物の特定の部位に標的化するのに特に有用であり得る。
【０６５３】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上の異種性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含んでもよい。一実施形態では、１つ以上の異種性ポリペプチドは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチドもしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドの薬物動態特性もしくは薬力学特性、またはＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチドもしくはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、少なくとも１つのｍＲＮＡ）の薬物動態学的特性または薬力学的特性を改善する。別の実施形態では、この１つ以上の異種性ポリペプチドは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの半減期を延長し得るポリペプチドを含む。
【０６５４】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、非翻訳領域として作用または機能する、１つ以上の領域または部分をさらに含んでもよい。定義上、遺伝子の野生型非翻訳領域（ＵＴＲ）は、転写されるが翻訳されない。ｍＲＮＡにおいて、５’ＵＴＲは、転写開始部位で開始し、開始コドンまで続くが、開始コドンは含まない。一方、３’ＵＴＲは、停止コドンのすぐ後に始まり、転写終止シグナルまで続く。核酸分子の安定性及び翻訳の点でＵＴＲが果たす規制の役割についての証拠がますます増えている。ＵＴＲの調節機能は、とりわけ、分子の安定性を高めるために、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれてもよい。特定の特徴を組み込んで、望ましくない臓器部位に誤って送付された場合に、転写物の制御された下方調節を確実にしてもよい。表３及び表４Ａ及び４Ｂは、本開示のポリヌクレオチドにおいて利用され得る例示的なＵＴＲのリストを提供する。
【０６５５】
５’ＵＴＲ及び翻訳開始
ある特定の実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、５’ＵＴＲ及び／または翻訳開始配列をさらに含む。天然の５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす特徴を有する。それらは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが一般的に知られているＫｏｚａｋ配列のような特徴を保持している。５’ＵＴＲはまた、伸長因子結合に関与する二次構造を形成することも公知である。
【０６５６】
特定の標的器官の豊富に発現された遺伝子に典型的に見出される特徴を操作することにより、本開示のポリヌクレオチドの安定性及びタンパク質産生を向上し得る。例えば、ｃ−ｍｙｃのようながんにおいて上方制御されることが公知のｍＲＮＡの５’ＵＴＲの導入は、がん細胞におけるポリヌクレオチドのような核酸分子の発現を向上するために使用され得る。ポリヌクレオチドの設計及び製造に有用な非翻訳領域としては、限定するものではないが、国際特許公開番号ＷＯ２０１４／１６４２５３（米国特許出願公開第２０１６００２２８４０号も参照のこと）に開示されるものが挙げられる。
【０６５７】
表３に、本開示の５’−非翻訳領域の列挙を示す。Ａ、Ｕ、ＣまたはＧを含む、１つ以上のヌクレオチドが末端に付加または除去される５’ＵＴＲのバリアントを利用してもよい。
【表３−１】
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【表３−２】
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【０６５８】
他の非ＵＴＲ配列も、ポリヌクレオチド内の領域またはサブ領域として使用してもよい。例えば、イントロンまたはイントロン配列の一部をポリヌクレオチドの領域に組み込んでもよい。イントロン配列の組み込みは、タンパク質産生ならびにポリヌクレオチドレベルを上昇させ得る。
【０６５９】
特徴の組合せは、フランキング領域に含まれてもよく、他の特徴内に含まれてもよい。例えば、ＯＲＦは、強力なＫｏｚａｋ翻訳開始シグナルを含み得る５’ＵＴＲ及び／またはポリ−Ａ尾部のテンプレート付加用オリゴ（ｄＴ）配列を含み得る３’ＵＴＲに隣接し得る。５’ＵＴＲは、米国特許出願公開第２０１０−０２９３６２５号に記載されている５’ＵＴＲなどの同じ及び／または異なる遺伝子に由来する、第１のポリヌクレオチド断片及び第２のポリヌクレオチド断片を含んでもよい。
【０６６０】
これらのＵＴＲまたはその一部は、それらが選択された転写物と同じ向きに配置されてもよく、または向きもしくは位置を変更されてもよい。したがって、５’または３’ＵＴＲは、１つ以上の他の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを用いて反転されても、短縮されても、延長されても、作製されてもよい。
【０６６１】
いくつかの実施形態において、ＵＴＲ配列は、参照配列に対して何らかの方法で変更されてもよい。例えば、３’または５’ＵＴＲは、上記で教示されたような向きもしくは位置の変化によって野生型もしくは天然のＵＴＲに対して改変されてもよいし、または追加のヌクレオチドの包含、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの交換もしくは転位によって改変されてもよい。「改変された」ＵＴＲ（３’または５’のいずれか）を産生する、任意のこれらの変化がバリアントＵＴＲを含む。
【０６６２】
いくつかの実施形態において、５’または３’ＵＴＲのような２倍、３倍または４倍のＵＴＲを使用してもよい。本明細書で使用する場合、「二重」ＵＴＲとは、同じＵＴＲの２つのコピーが直列または実質的に直列にコードされたＵＴＲである。例えば、米国特許出願公開第２０１０−０１２９８７７号に記載されているように、二重ベータグロビン３’ＵＴＲを使用してもよい。
【０６６３】
いくつかの実施形態において、フランキング領域は異種であってもよい。いくつかの実施形態において、５’非翻訳領域は、３’非翻訳領域とは異なる種に由来し得る。非翻訳領域はまた、翻訳エンハンサーエレメント（ＴＥＥ）も含んでもよい。非限定的な例として、ＴＥＥは、米国特許出願公開第２００９−０２２６４７０号に記載されているものが挙げられる。
【０６６４】
３’ＵＴＲ及びＡＵリッチエレメント
特定の実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、３’ＵＴＲをさらに含む。３’−ＵＴＲは、翻訳停止コドンのすぐ後に続くｍＲＮＡのセクションであり、遺伝子発現に転写後に影響する調節領域を含む場合が多い。３’−ＵＴＲ内の調節領域は、ｍＲＮＡのポリアデニル化、翻訳効率、局在化、及び安定性に影響し得る。一実施形態では、本開示に有用な３’−ＵＴＲは、調節プロテインまたはマイクロＲＮＡのための結合部位を含む。いくつかの実施形態において、３’−ＵＴＲは、リプレッサータンパク質に結合し、かつｍＲＮＡの発現を阻害するサイレンサー領域を有する。他の実施形態では、３’−ＵＴＲは、ＡＵリッチエレメントを含む。タンパク質は、ＡＲＥに結合して、局所的な様式で転写物の安定性または減衰率に影響を及ぼすか、または翻訳開始に影響を及ぼす。他の実施形態では、３’−ＵＴＲは、ｍＲＮＡ転写物の末端にポリ（Ａ）テールと呼ばれる数百のアデニン残基の付加を指示する配列ＡＡＵＡＡＡを含む。
【０６６５】
表４Ａは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡに有用な３’−非翻訳領域の列挙を示す。１つ以上のヌクレオチドがＡ、Ｕ、ＣまたはＧを含む末端に付加されるか、または除去されている３’ＵＴＲのバリアントを利用してもよい。
【表４Ａ−１】
2019519517.tif 000054
【表４Ａ−２】
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【表４Ａ−３】
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【表４Ａ−４】
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【表４Ａ−５】
2019519517.tif 000058
【表４Ａ−６】
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【表４Ａ−７】
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【表４Ａ−８】
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【表４Ａ−９】
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【表４Ａ−１０】
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【表４Ａ−１１】
2019519517.tif 000064
【０６６６】
ある特定の実施形態において、本開示に有用な３’ＵＴＲ配列は、配列番号４５〜６２およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態において、３’ＵＴＲ配列は、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えばｍｉＲ−１２２結合部位をさらに含む。他の実施形態では、本開示に有用な３’ＵＴＲ配列は、３’ＵＴＲ−０１８（配列番号６２）を含む。
【０６６７】
ある特定の実施形態において、３’ＵＴＲ配列は、３’ＵＴＲの機能を妨害することなく、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位、例えばｍｉＲ−１２２結合部位、またはその中の任意の他の異種ヌクレオチド配列を含む。ｍｉＲＮＡ結合部位を含む３’ＵＴＲ配列のいくつかの例を表４Ｂに列挙する。
【表４Ｂ−１】
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【表４Ｂ−２】
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【０６６８】
ある特定の実施形態において、本開示に有用な３’ＵＴＲ配列は、配列番号６３または６４に示される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０６６９】
５’キャップを有する領域
本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、５’キャップをさらに含み得る。ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドコードｍＲＮＡに有用な５’キャップは、ｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）に結合し得、それによってｍＲＮＡ安定性を上昇させ得る。キャップは、ｍＲＮＡスプライシングの間に５’近位イントロンの除去をさらに補助し得る。
【０６７０】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、脱キャップを防止し、ｍＲＮＡ半減期を延長する非加水分解性キャップ構造を含む。キャップ構造の加水分解は、５’−ｐｐｐ−５’ホスホロジエステル結合の切断を必要とするので、修飾ヌクレオチドを、キャッピング反応中に使用してもよい。例えば、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）のワクシニアキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）は、５’−ｐｐｐ−５’キャップ中にホスホロチオエート結合を作製するための製造者の説明に従って、α−チオ−グアノシンヌクレオチドとともに使用してもよい。α−メチル−ホスホネート及びセレノ−ホスフェートヌクレオチドのような、追加的な修飾グアノシンヌクレオチドを使用してもよい。
【０６７１】
ある特定の実施形態において、５’キャップは、５’末端及び／または５’末端前（ａｎｔｅｔｅｒｍｉｎａｌ）ヌクレオチドのリボース糖を、糖環の２’−ヒドロキシル基で２’−Ｏ−メチル化したものを含む。他の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドコードｍＲＮＡのキャップは、キャップ類似体を含み、本明細書ではまた、合成キャップ類似体、化学的キャップ、化学的キャップ類似体、または構造的もしくは機能的キャップ類似体とも呼ばれ、天然の（すなわち、内在性、野生型または生理学的）５’キャップとは、化学構造が異なり、一方では、キャップ機能を保持している。キャップ類似体は、本開示のポリヌクレオチドに化学的に（すなわち非酵素的に）または酵素的に合成及び／または結合されてもよい。
【０６７２】
例えば、アンチリバースキャップアナログ（Ａｎｔｉ−Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｃａｐ  Ａｎａｌｏｇ）（ＡＲＣＡ）キャップは、５’−５’−トリフォスフェート基によって結合された２つのグアニンを含み、ここで一方のグアニンは、Ｎ７メチル基ならびに３’−Ｏ−メチル基を含む（すなわち、Ｎ７，３’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−トリフォスフェート−５’−グアノシン（ｍ７Ｇ−３’ｍｐｐｐ−Ｇ；これは３’Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇで同等に指定され得る）。他の修飾されていないグアニンの３’−Ｏ原子は、キャップ化ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに連結される．Ｎ７及び３’Ｏメチル化グアニンは、キャップ化ポリヌクレオチドの末端部分を提供する。
【０６７３】
別の例示的なキャップは、ｍＣＡＰであり、これはＡＲＣＡに類似しているが、グアノシンに２’−Ｏ−メチル基を有する（すなわち、Ｎ７，２’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−トリホスフェート−５’−グアノシン、ｍ７Ｇｍ−ｐｐｐ−Ｇ）。
【０６７４】
いくつかの実施形態において、キャップはジヌクレオチドキャップ類似体である。非限定的な例として、ジヌクレオチドキャップ類似体は、ボラノホスフェート基またはホスホロセレノエート基、例えば、米国特許第８，５１９，１１０号に記載されているジヌクレオチドキャップ類似体によって異なるホスフェート位置で修飾されてもよい。
【０６７５】
別の実施形態では、キャップは、キャップ類似体は、当該技術分野において既知である及び／または本明細書に記載されるキャップ類似体のＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチド型である。キャップ類似体のＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチド形態の非限定的な例としては、Ｎ７−（４−クロロフェノキシエチル）−Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ及びＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）−ｍ３’−ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇキャップ類似体が挙げられる。例えば、Ｋｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１：４５７０−４５７４に記載されている様々なキャップ類似体及びキャップ類似体を合成する方法を参照のこと。別の実施形態において、本開示のキャップ類似体は、４−クロロ／ブロモフェノキシエチル類似体である。
【０６７６】
キャップ類似体は、ポリヌクレオチドまたはその領域の付随するキャッピングを可能にするが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応において、転写物の２０％までがキャップされないままであり得る。これは、内在性の細胞転写機構によって産生された核酸の内在性の５’キャップ構造からのキャップ類似体の構造的相違と同様に、翻訳能力の低下及び細胞安定性の低下につながり得る。
【０６７７】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドコードｍＲＮＡは、酵素を用いて、より真正な（ａｕｔｈｅｎｔｉｃ）５’キャップ構造を生成するために、製造後（ＩＶＴまたは化学合成のいずれであっても）にキャップしてもよい。本明細書中で使用される場合、「より真正な」という語句は、構造的または機能的に、内因性または野生型の特徴を密接に反映または模倣する特徴を指す。すなわち、「より真正な」特徴は、先行技術の合成特徴または類似体などと比較して、内在性の野生型、天然または生理学的な細胞機能及び／または構造をよりよく代表しているか、または対応する内因性、野生型、天然または生理学的特徴を１つ以上の観点においてしのいでいる。
【０６７８】
本開示のより真正な５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当該技術分野において既知である合成５’キャップ構造と（または野生型、天然または生理学的５’キャップ構造と）比較して、キャップ結合タンパク質の結合の向上、半減期の延長、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性の減少及び／または５’脱キャップの減少を有する５’キャップ構造である。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）及び組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチドとの間に標準の５’−５’−トリフォスフェート結合を生じ得、ここでこのキャップグアニンは、Ｎ７メチル化を含み、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルを含む。そのような構造は、Ｃａｐ１構造と呼ばれる。このキャップは、例えば、当技術分野で公知の他の５’キャップ類似体構造と比較して、より高い翻訳能力及び細胞安定性、ならびに細胞性炎症性サイトカインの活性化の低下をもたらし得る。キャップ構造としては、限定するものではないが、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ、ｐＮ２ｐ（ｃａｐ  ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、及び７ｍＧ（５’）−ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）が挙げられる。
【０６７９】
本開示によれば、５’末端キャップは、内在性キャップまたはキャップ類似体を含んでもよい。本開示によれば、５’末端キャップは、グアニン類似体を含んでもよい。有用なグアニン類似体としては、限定するものではないが、イノシン、Ｎ１−メチルグアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソグアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、及び２−アジド−グアノシンが挙げられる。
【０６８０】
ポリ−Ａ尾部
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、さらにポリ−Ａ尾部を含む。さらなる実施形態では、安定化のために、ポリ−Ａ尾部上の末端基を取り込んでもよい。他の実施形態では、ポリ−Ａ尾部は、ｄｅｓ−３’ヒドロキシルテールを含む。有用なポリ−Ａ尾部はまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５：１５０１−１５０７によって教示されるような構造的部分または２’−Ｏメチル修飾を含んでもよい。
【０６８１】
一実施形態では、存在する場合、ポリ−Ａ尾部の長さは、３０ヌクレオチド長を超える。別の実施形態では、ポリ−Ａ尾部は、３５ヌクレオチド長を超える（例えば、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００ヌクレオチドまたはそれより多い）。
【０６８２】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドまたはその領域は、約３０〜約３，０００ヌクレオチドを含む（例えば、３０〜５０、３０〜１００、３０〜２５０、３０〜５００、３０〜７５０、３０〜１，０００、３０〜１，５００、３０〜２，０００、３０〜２，５００、５０〜１００、５０〜２５０、５０〜５００、５０〜７５０、５０〜１，０００、５０〜１，５００、５０〜２，０００、５０〜２，５００、５０〜３，０００、１００〜５００、１００〜７５０、１００〜１，０００、１００〜１，５００、１００〜２，０００、１００〜２，５００、１００〜３，０００、５００〜７５０、５００〜１，０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜２，５００、５００〜３，０００、１，０００〜１，５００、１，０００〜２，０００、１，０００〜２，５００、１，０００〜３，０００、１，５００〜２，０００、１，５００〜２，５００、１，５００〜３，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜２，５００、及び２，５００〜３，０００）。
【０６８３】
いくつかの実施形態において、ポリ−Ａ尾部は、ポリヌクレオチド全体の長さまたはポリヌクレオチドの特定領域の長さに対して設計される。この設計は、コード領域の長さ、特定の特徴もしくは領域の長さに基づいても、またはポリヌクレオチドから発現される最終産物の長さに基づいてもよい。
【０６８４】
この文脈において、ポリ−Ａ尾部は、そのポリヌクレオチドまたはその特徴よりも、長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％長くてもよい。ポリ−Ａ尾部はまた、それが属するポリヌクレオチドの一部として設計されてもよい。この状況では、ポリ−Ａ尾部は、コンストラクトの全長、コンストラクト領域またはコンストラクトの全長マイナスポリ−Ａ尾部の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％またはそれ以上であってもよい。さらに、操作された結合部位及びポリＡ結合タンパク質のためのポリヌクレオチドのコンジュゲーションは発現を向上させ得る。
【０６８５】
さらに、複数の異なるポリヌクレオチドを、ポリ−Ａ尾部の３’末端で修飾ヌクレオチドを用いて、３’末端を通じてＰＡＢＰ（ポリＡ結合タンパク質）を介して一緒に連結してもよい。関連する細胞株においてトランスフェクション実験を行ってもよく、タンパク質産生は、トランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日目にＥＬＩＳＡによってアッセイしてもよい。
【０６８６】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ポリＡ−Ｇカルテット（Ｑｕａｒｔｅｔ）領域を含むように設計される。Ｇカルテット（Ｇ四重）は、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方においてＧリッチな配列によって形成され得る４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイである。この実施形態では、Ｇカルテットはポリ−Ａ尾部の末端に組み込まれる。得られたポリヌクレオチドは、様々な時点で、安定性、タンパク質産生及び半減期を含む他のパラメーターについてアッセイされる。ポリＡ−Ｇカルテットは、１２０ヌクレオチド単独のポリ−Ａ尾部を用いて見られるｍＲＮＡの少なくとも７５％に相当するｍＲＮＡからのタンパク質産生をもたらすことが発見されている。
【０６８７】
開始コドン領域
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、開始コドン領域に類似するかまたは同様に機能する領域をさらに含む。
【０６８８】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドの翻訳は、開始コドンＡＵＧではないコドンで開始する。ポリヌクレオチドの翻訳は、限定するものではないが、ＡＣＧ、ＡＧＧ、ＡＡＧ、ＣＴＧ／ＣＵＧ、ＧＴＧ／ＧＵＧ、ＡＴＡ／ＡＵＡ、ＡＴＴ／ＡＵＵ、ＴＴＧ／ＵＵＧなどの代替開始コドンで開始し得る。Ｔｏｕｒｉｏｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  ９５：１６９−１７８、ならびにＭａｔｓｕｄａおよびＭａｕｒｏ（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：１１を参照のこと。非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＡＣＧで始まる。別の非限定的な例として、ポリヌクレオチド翻訳は、代替の開始コドンＣＴＧまたはＣＵＧで開始する。さらに別の非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＧＴＧまたはＧＵＧで開始する。
【０６８９】
限定するものではないが、開始コドンまたは代替開始コドンなどの翻訳を開始するコドンに隣接するヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの翻訳効率、長さ及び／または構造に影響することが公知である。例えば、Ｍａｔｓｕｄａ及びＭａｕｒｏ（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：１１を参照のこと。翻訳を開始するコドンに隣接するヌクレオチドのいずれかのマスキングを使用することにより、ポリヌクレオチドの翻訳開始の位置、翻訳効率、長さ及び／または構造を変えてもよい。
【０６９０】
いくつかの実施形態において、開始コドンまたは代替開始コドンをマスクするまたは隠す目的で、コドンの近くでマスキング剤を使用することで、マスクされた開始コドンまたは代替開始コドンでの翻訳開始の確率を低下させる。マスキング剤の非限定的な例としては、アンチセンスロック核酸（ＬＮＡ）ポリヌクレオチド及びエキソン−ジャンクション複合体（ＥＪＣ）が挙げられる。例えば、マスキング剤ＬＮＡポリヌクレオチド及びＥＪＣを記載しているＭａｔｓｕｄａ及びＭａｕｒｏ（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：１１を参照のこと。
【０６９１】
別の実施形態では、マスキング剤を用いてポリヌクレオチドの開始コドンをマスクして、翻訳が別の開始コドンで開始する可能性を高める。いくつかの実施形態において、翻訳が、マスクされる開始コドンまたは代替開始コドンより下流にある開始コドンまたは代替開始コドンで開始される可能性を高める目的で、第１の開始コドンまたは代替開始コドンをマスクするためにマスキング剤を使用する。
【０６９２】
いくつかの実施形態において、開始コドンまたは代替開始コドンは、ｍｉＲ結合部位の完全な相補体内に位置する。ｍｉＲ結合部位の完全な相補体は、マスキング剤に類似したポリヌクレオチドの翻訳、長さ及び／または構造の制御を補助し得る。非限定的な例として、開始コドンまたは代替開始コドンは、ｍｉＲ−１２２結合部位の完璧な相補体の中央に位置する。開始コドンまたは別の開始コドンは、第１のヌクレオチド、第２のヌクレオチド、第３のヌクレオチド、第４のヌクレオチド、第５のヌクレオチド、第６のヌクレオチド、第７のヌクレオチド、第８のヌクレオチド、第９のヌクレオチド、第１０のヌクレオチド、第１１のヌクレオチド、第１２のヌクレオチド、第１３のヌクレオチド、第１４のヌクレオチド、第１５のヌクレオチド、第１６のヌクレオチド、第１７のヌクレオチド、第１８のヌクレオチド、第１９のヌクレオチド、第２０のヌクレオチドまたは第２１のヌクレオチド後に位置されてもよい。
【０６９３】
別の実施形態では、ポリヌクレオチドの開始コドンをポリヌクレオチド配列から除去して、開始コドンではないコドンからポリヌクレオチドの翻訳を開始させる。ポリヌクレオチドの翻訳は、除去された開始コドンに続くコドンまたは下流の開始コドンもしくは代替開始コドンで開始してもよい。非限定的な例において、開始コドンＡＴＧまたはＡＵＧを、ポリヌクレオチド配列の最初の３ヌクレオチドとして除去して、下流の開始コドンまたは代替開始コドンに対して翻訳開始させる。開始コドンが除去されたポリヌクレオチド配列は、翻訳の開始、ポリヌクレオチドの長さ及び／またはポリヌクレオチドの構造を制御するか、または制御することを試みるために、下流の開始コドン及び／または代替開始コドンのための少なくとも１つのマスキング剤をさらに含んでもよい。
【０６９４】
停止コドン領域
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、少なくとも１つの停止コドンまたは少なくとも２つの停止コドンを、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の前にさらに含んでもよい。停止コドンは、ＵＧＡ、ＵＡＡ、及びＵＡＧから選択されてもよい。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、停止コドンＵＧＡ及び１つのさらなる停止コドンを含む。さらなる実施形態において、付加停止コドンはＵＡＡであってもよい。別の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、３つの停止コドン、４つの停止コドン、またはそれ以上の停止コドンを含む。
【０６９５】
Ｘ．ポリヌクレオチドの作製方法
本開示はまた、本明細書に開示されるポリヌクレオチドまたはその補体を作製するための方法を提供する。いくつかの態様において、本明細書に開示されており、かつＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写を用いて構築されてもよい。
【０６９６】
他の態様では、本明細書に開示されており、かつＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、オリゴヌクレオチド合成機を用いた化学合成によって構築され得る。他の態様において、本明細書に開示され、かつＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、宿主細胞を用いて作製される。ある特定の態様では、本明細書に開示されており、かつＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＶＴ、化学合成、宿主細胞発現、または当該技術分野において既知である任意の他の方法の１つ以上の組合せによって作製される。
【０６９７】
天然に存在するヌクレオシド、非天然に存在するヌクレオシド、またはそれらの組合せは、候補ヌクレオチド配列中に存在する天然に存在するヌクレオシドを完全にまたは部分的に天然に置き換え得、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えばｍＲＮＡ）中に組み込まれてもよい。次いで、得られたｍＲＮＡを、タンパク質を産生するか、及び／または治療結果を産生する能力について調べてもよい。
【０６９８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写−酵素合成
本明細書中に開示されるポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）系を用いて転写され得る。この系は、典型的には、転写緩衝液、ヌクレオチドトリフォスフェート（ＮＴＰ）、ＲＮアーゼ阻害剤及びポリメラーゼを含む。ＮＴＰは、限定するものではないが、天然及び非天然（改変）ＮＴＰを含む本明細書に記載のものから選択されてもよい。ポリメラーゼは、限定されるものではないが、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼ、及び突然変異ポリメラーゼ、例えば、限定するものではないが、修飾された核酸を組み込み得るポリメラーゼから選択され得る。米国特許出願公開第２０１３−０２５９９２３号を参照のこと。
【０６９９】
ＩＶＴ系は、典型的には、転写緩衝液、ヌクレオチドトリフォスフェート（ＮＴＰ）、ＲＮアーゼ阻害剤及びポリメラーゼを含む。ＮＴＰは、限定するものではないが、天然及び非天然（改変）ＮＴＰを含む、本明細書に記載のものから選択されてもよい。ポリメラーゼは、限定するものではないが、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼ、及び変異体ポリメラーゼ、例えば、限定するものではないが、本明細書に開示されたポリヌクレオチドを組み込み得るポリメラーゼから選択され得る。
【０７００】
任意の数のＲＮＡポリメラーゼまたはバリアントが、本開示のポリヌクレオチドの合成に使用され得る。
【０７０１】
ＲＮＡポリメラーゼは、ＲＮＡポリメラーゼ配列のアミノ酸を挿入または欠失させることによって修飾され得る。非限定的な例として、ＲＮＡポリメラーゼは、修飾されていないＲＮＡポリメラーゼと比較して、２’−修飾ヌクレオチドトリフォスフェートを取り込む能力の増大を示すために改変される。国際公開第ＷＯ２００８０７８１８０号及び米国特許第８，１０１，３８５号を参照のこと。
【０７０２】
バリアントは、ＲＮＡポリメラーゼを進化させること、ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸及び／もしくは核酸配列を最適化することによって、及び／または当該技術分野において既知である他の方法を用いることによって得られ得る。非限定的な例として、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼバリアントは、Ｅｓｖｅｌｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  ４７２：４９９−５０３によって記載された連続的定向進化系を用いて進化され、ここでは、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼのクローンが、スレオニン（Ｋ９３Ｔ）、Ｉ４Ｍ、Ａ７Ｔ、Ｅ６３Ｖ、Ｖ６４Ｄ、Ａ６５Ｅ、Ｄ６６Ｙ、Ｔ７６Ｎ、Ｃ１２５Ｒ、Ｓ１２８Ｒ、Ａ１３６Ｔ、Ｎ１６５Ｓ、Ｇ１７５Ｒ、Ｈ１７６Ｌ、Ｙ１７８Ｈ、Ｆ１８２Ｌ、Ｌ１９６Ｆ、Ｇ１９８Ｖ、Ｄ２０８Ｙ、Ｅ２２２Ｋ、Ｓ２２８Ａ、Ｑ２３９Ｒ、Ｔ２４３Ｎ、Ｇ２５９Ｄ、Ｍ２６７Ｉ、Ｇ２８０Ｃ、Ｈ３００Ｒ、Ｄ３５１Ａ、Ａ３５４Ｓ、Ｅ３５６Ｄ、Ｌ３６０Ｐ、Ａ３８３Ｖ、Ｙ３８５Ｃ、Ｄ３８８Ｙ、Ｓ３９７Ｒ、Ｍ４０１Ｔ、Ｎ４１０Ｓ、Ｋ４５０Ｒ、Ｐ４５１Ｔ、Ｇ４５２Ｖ、Ｅ４８４Ａ、Ｈ５２３Ｌ、Ｈ５２４Ｎ、Ｇ５４２Ｖ、Ｅ５６５Ｋ、Ｋ５７７Ｅ、Ｋ５７７Ｍ、Ｎ６０１Ｓ、Ｓ６８４Ｙ、Ｌ６９９Ｉ、Ｋ７１３Ｅ、Ｎ７４８Ｄ、Ｑ７５４Ｒ、Ｅ７７５Ｋ、Ａ８２７Ｖ、Ｄ８５１ＮまたはＬ８６４Ｆに置換された９３位のリジンなどであるが、これに限定されない少なくとも１つの変異をコードし得る。別の非限定的な例として、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼバリアントは、米国特許出願公開第２０１００１２００２４号及び同第２００７０１１７１１２号に記載のような少なくとも１つの突然変異をコードし得る。ＲＮＡポリメラーゼのバリアントとしてはまた、限定するものではないが、置換バリアント、保存的アミノ酸置換、挿入バリアント、欠失バリアント及び／または共有結合性誘導体が挙げられ得る。
【０７０３】
１つの態様において、ポリヌクレオチドは、野生型またはバリアントのＲＮＡポリメラーゼによって認識されるように設計され得る。そうすることで、ポリヌクレオチドは、野生型または親キメラポリヌクレオチドからの配列変化の部位または領域を含むように改変されてもよい。
【０７０４】
ポリヌクレオチドまたは核酸合成反応は、ポリメラーゼを利用する酵素法によって行ってもよい。ポリメラーゼは、ポリヌクレオチドまたは核酸鎖中のヌクレオチド間のホスホジエステル結合の生成を触媒する。現在公知のＤＮＡポリメラーゼは、アミノ酸配列比較及び結晶構造解析に基づいて異なるファミリーに分けられ得る。ＤＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）またはＡポリメラーゼファミリー、例としては、Ｅ．ｃｏｌｉのクレノウ断片、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ＤＮＡポリメラーゼＩ、サーマス・アクアティカス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ａｑｕａｔｉｃｕｓ）（Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ、ならびにＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ及びＤＮＡポリメラーゼは、とりわけこれらのファミリーの中で最もよく研究されている。別の大きなファミリーは、ＤＮＡポリメラーゼα（ｐｏｌα）またはＢポリメラーゼファミリー、例としては、全ての真核生物複製ＤＮＡポリメラーゼ及びファージＴ４及びＲＢ６９由来のポリメラーゼである。それらは類似の触媒機構を用いるが、これらのファミリーのポリメラーゼは、基質特異性、基質類似体取り込み効率、プライマー伸長の程度及び率、ＤＮＡ合成様式、エキソヌクレアーゼ活性、ならびに阻害剤に対する感受性が異なる。
【０７０５】
ＤＮＡポリメラーゼはまた、それらが必要とする最適な反応条件、例えば反応温度、ｐＨ、ならびにテンプレート及びプライマー濃度に基づいて選択される。２つ以上のＤＮＡポリメラーゼの組合せを用いて、所望のＤＮＡ断片サイズ及び合成効率を達成することもある。例えば、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌは、ｐＨを増大させ、グリセロール及びジメチルスルホキシドを添加し、変性時間を短縮させ、伸長時間を増大させ、３’〜５’エキソヌクレアーゼ活性を有する二次熱安定性ＤＮＡポリメラーゼを利用して、クローン化インサート及びヒトゲノムＤＮＡからの長い標的を効果的に増幅する。Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：５６９５−５６９９。バクテリオファージＴ３、Ｔ７、及びＳＰ６由来のＲＮＡポリメラーゼは、生化学的及び生物物理学的研究のためのＲＮＡを調製するために広く使用されている。ＲＮＡポリメラーゼ、キャッピング酵素、及びポリＡポリメラーゼは、国際公開番号ＷＯ２０１４０２８４２９（米国特許出願公開第２０１５０２１１０３９号も参照のこと）に開示されている。
【０７０６】
１つの態様において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドの合成に用いることができるＲＮＡポリメラーゼは、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼである。Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８８：３５４５−３５５２を参照のこと。Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼは最近、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．による海洋性シアノファージＳｙｎ５から特徴付けられ、プロモーター配列も確認された。Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８８：３５４５−３５５２を参照のこと。Ｚｈｕらは、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼが、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼと比較して、より広い温度範囲及び塩度にわたってＲＮＡ合成を触媒することを見出した。さらに、プロモーターでヌクレオチドを開始する要件は、ＲＮＡ合成に有望なＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼを作製するＴ７  ＲＮＡポリメラーゼと比較して、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼについてはそれほどストリンジェントでないことが判明した。
【０７０７】
１つの態様において、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼを、本明細書に記載のポリヌクレオチドの合成に用いてもよい。非限定的な例として、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼは、正確な３’末端を必要とするポリヌクレオチドの合成に使用され得る。
【０７０８】
１つの態様において、ポリヌクレオチドの合成にＳｙｎ５プロモーターを使用してもよい。非限定的な例として、Ｓｙｎ５プロモーターは、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８８：３５４５−３５５２によって記載されているように５’−ＡＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＧＴＡＡＧＧＧ−３’であってもよい。
【０７０９】
１つの態様において、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼは、本明細書に記載されるか、及び／または当該技術分野において既知である少なくとも１つの化学修飾を含むポリヌクレオチドの合成に使用され得る。（例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８８：３５４５−３５５２に記載されているシュードＵＴＰ及び５Ｍｅ−ＣＴＰの組み込みを参照のこと）。
【０７１０】
１つの態様において、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドは、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８８：３５４５−３５５２によって記載された改変及び改良された精製手順を使用して精製されたＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼを用いて合成されてもよい。
【０７１１】
遺伝子工学における様々なツールは、テンプレートとして作用する標的遺伝子の酵素的増幅に基づいている。個々の遺伝子または特定の目的の領域及び他の研究ニーズの配列の研究のためには、ポリヌクレオチドまたは核酸の少量の試料から標的遺伝子の複数のコピーを生成することが必要である。そのような方法は、本開示のポリヌクレオチドの製造に適用されてもよい。
【０７１２】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、標的遺伝子の迅速な増幅、ならびにゲノムマッピング及び配列決定に広く適用されている。ＤＮＡを合成するための主要な成分は、テンプレートとしての標的ＤＮＡ分子、標的ＤＮＡ鎖の末端に相補的なプライマー、構成要素としてのデオキシヌクレオシドトリフォスフェート（ｄＮＴＰ）、及びＤＮＡポリメラーゼを含む。ＰＣＲが変性、アニーリング及び伸長ステップを経るにつれて、新たに産生されたＤＮＡ分子は、標的ＤＮＡの指数関数的増幅を達成する次の複製サークルのテンプレートとして作用し得る。ＰＣＲは、変性及びアニーリングのために加熱及び冷却のサイクルを必要とする。基本ＰＣＲのバリエーションとしては、非対称ＰＣＲ（Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：９４３６−９４４０）、インバースＰＣＲ（Ｏｃｈｍａｎら（１９８８）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １２０：６２１−６２３）逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２６：１１２−２２，１２４−５）が挙げられる。ＲＴ−ＰＣＲでは、一本鎖ＲＮＡが所望の標的であり、最初に逆転写酵素によって二本鎖ＤＮＡに変換される。
【０７１３】
種々の等温ｉｎ  ｖｉｔｒｏ核酸増幅技術が、ＰＣＲの代替物または補体として開発されている。例えば、鎖置換増幅（ＳＤＡ）は、ニックを形成する制限酵素の能力に基づいている。Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３９２−３９６は、その内容が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０７１４】
制限酵素認識配列を、アニーリングしたプライマー配列に挿入する。プライマーは、ＤＮＡポリメラーゼ及びｄＮＴＰによって伸長されて二本鎖が形成される。二本鎖の一方の鎖のみが制限酵素によって切断される。次いで、各一本鎖は、その後の合成のためのテンプレートとして利用可能である。ＳＤＡは、ＰＣＲの複雑な温度制御サイクルを必要としない。
【０７１５】
転写媒介増幅（ＴＭＡ）とも呼ばれる、核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）はまた、ＤＮＡポリメラーゼ、逆転写酵素、ＲＮアーゼＨ及びＴ７  ＲＮＡポリメラーゼの組合せを利用する等温増幅法でもある。Ｃｏｍｐｔｏｎ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５０：９１−９２。標的ＲＮＡは、テンプレートとして使用され、逆転写酵素はその相補的ＤＮＡ鎖を合成する。ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡテンプレートを加水分解し、ＤＮＡポリメラーゼがＲＮＡ標的に相補的な第１のＤＮＡ鎖に相補的なＤＮＡ鎖を合成し、ＤＮＡ二本鎖を形成するためのスペースを作る。Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼは、このＤＮＡ二本鎖の相補的ＲＮＡ鎖を連続的に生成する。これらのＲＮＡ鎖は、ＤＮＡ合成の新しいサイクルのためのテンプレートとして働き、標的遺伝子の増幅をもたらす。
【０７１６】
ローリングサークル増幅（ＲＣＡ）は、一本鎖環状ポリヌクレオチドを増幅し、Ф２９ＤＮＡポリメラーゼが、ポリヌクレオチドサークルの周りを連続的に進行してその配列を何度も繰り返し複製することによってプライマーを伸長させる、多数回の等温酵素合成を含む。したがって、環状テンプレートの直鎖状コピーが達成される。次いで、この直鎖状コピーにプライマーをアニーリングさせ、その相補鎖を合成してもよい。Ｌｉｚａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １９：２２５−２３２を参照のこと。一本鎖環状ＤＮＡはまた、ＲＮＡポリメラーゼの存在下でのＲＮＡ合成のテンプレートとしても機能し得る。Ｄａｕｂｅｎｄｉｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＪＡＣＳ  １１７：７８１８−７８１９を参照のこと。ｃＤＮＡ末端（ＲＡＣＥ）ＲＣＡの逆急速増幅は、Ｐｏｌｉｄｏｒｏｓ  ｅｔ  ａｌに記載されている。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）をｃＤＮＡに逆転写し、続いてＲＮアーゼＨ処理を行い、ｃＤＮＡを分離する。次いで、ｃＤＮＡをＣｉｒｃＬｉｇａｓｅにより環状ＤＮＡに環状化する。得られた環状ＤＮＡの増幅は、ＲＣＡにより達成される。Ｐｏｌｉｄｏｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４１：３５−４２。
【０７１７】
任意の前述の方法を、本開示のポリヌクレオチドの１つ以上の領域の製造に利用してもよい。
【０７１８】
リガーゼによるポリヌクレオチドまたは核酸のアセンブリも広く使用されている。ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼは、ホスホジエステル結合の形成によるポリヌクレオチド鎖の５’及び３’末端の分子間ライゲーションを促進する。リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）は、２つの隣接するポリヌクレオチドプローブが標的遺伝子の一方の鎖にハイブリダイズし、リガーゼによって互いにカップリングさせる原理に基づく有望な診断技術である。標的遺伝子が存在しない場合、または標的遺伝子に一塩基多型（ＳＮＰ）などのミスマッチがある場合、このプローブは連結し得ない。Ｗｉｅｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ３（４）：ｓ５１−ｓ６４。ＬＣＲは、検出の感度を増大させるために、またはポリヌクレオチド及び核酸の合成に使用される場合は、生成物の量を増大させるために、様々な増幅技術と組み合わせてもよい。
【０７１９】
現在、核酸用のいくつかのライブラリー調製キットが市販されている。それらには、少量の核酸試料を下流に適用するためのインデックス付きライブラリーに変換するための酵素及び緩衝液を備える。例えば、ＤＮＡ断片は、末端調製、ライゲーション、サイズ選択、クリーンアップ、ＰＣＲ増幅及び最終的なクリーンアップのためにＮＥＷＥＮＧＬＡＮＤ  ＢＩＯＬＡＢＳ（登録商標）によってＮＥＢＮＥＸＴ（登録商標）ＵＬＴＲＡＴＭ  ＤＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔに入れてもよい。
【０７２０】
増幅技術の改善のための開発が続けられている。例えば、Ａｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第８，３６７，３２８号は、反応エンハンサーを利用してＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成反応の効率を増大することを教示している。反応エンハンサーは、酸性物質または酸性物質のカチオン性複合体を含む。Ｋｉｔａｂａｙａｓｈｉ（キタバヤシ）ｅｔ  ａｌ．の米国特許第７．３８４，７３９号は、酵素ＤＮＡ合成を促進するカルボン酸イオン供給物質（このカルボン酸イオン供給物質はシュウ酸、マロン酸、シュウ酸のエステル、マロン酸のエステル、マロン酸の塩及びマレイン酸のエステルから選択される）を教示する。Ｓｏｂｅｋらの米国特許第７，３７８，２６２号は、ＤＮＡ増幅の忠実度を高めるための酵素組成物を開示している。この組成物は、３’エキソヌクレアーゼ活性を有するがポリメラーゼ活性を有さない１つの酵素と、ポリメラーゼである別の酵素とを含む。両方の酵素は熱安定性であり、低温で不活性になるように可逆的に改変されている。
【０７２１】
Ｇｅｔｔｓらの米国特許第７，５５０，２６４号によって、ｃＤＮＡ分子の３’末端にオリゴデオキシヌクレオチドテールを結合させ、ＲＮＡポリメラーゼを用いてＲＮＡ転写を開始することによって、センスＲＮＡ分子の複数回の合成を行うことが教示されている。Ｒｏｈａｙｅｍの公開番号米国特許出願公開第２０１３／０１８３７１８号は、一本鎖ＤＮＡテンプレートに対するＲＮＡポリメラーゼ活性を示すＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）によるＲＮＡ合成を教示している。鎖のないヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドは、Ｂｅｎｎｅｒの米国特許第６，６１７，１０６号に開示されるように、鎖のないヌクレオチドを含むテンプレートを、テンプレートのヌクレオチドに相補的なヌクレオチドの混合物と接触させる酵素重合によって合成され得る。
【０７２２】
化学合成
ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列を合成するために標準的な方法を適用してもよい。例えば、特定の単離ポリペプチドをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列を含む単一のＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーを合成してもよい。他の態様では、所望のポリペプチドの部分をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成し、次いでライゲードしてもよい。いくつかの態様では、個々のオリゴヌクレオチドは典型的には、相補的なアセンブリのために、５’または３’オーバーハングを含む。
【０７２３】
本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、当該技術分野において既知である化学合成方法及び可能性のある核酸塩基置換を用いて化学的に合成され得る。例えば、国際公開番号ＷＯ２０１４０９３９２４（米国特許出願公開第２０１５０３０７５４２号も参照のこと）、ＷＯ２０１３０５２５２３（米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照のこと）。ＷＯ２０１３０３９８５７、ＷＯ２０１２１３５８０５（米国特許出願公開第２０１２０２５１６１８号も参照のこと）、ＷＯ２０１３１５１６７１（米国特許出願公開第２０１５００４４２７７号も参照のこと）；米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号；または米国特許第８９９９３８０号、同第８７１０２００号を参照のこと。
【０７２４】
精製
本明細書に記載のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の精製には、限定するものではないが、ポリヌクレオチドのクリーンアップ、品質保証及び品質管理が挙げられる。クリーンアップは、当該技術分野において既知である方法、例えば、限定するものではないが、ＡＧＥＮＣＯＵＲＴ（登録商標）ビーズ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）、ポリ−Ｔビーズ、ＬＮＡ（商標）オリゴ−Ｔ捕捉プローブ（ＥＸＩＱＯＮ（登録商標）Ｉｎｃ、Ｖｅｄｂａｅｋ，Ｄｅｎｍａｒｋ）またはＨＰＬＣベースの精製方法、例えば、限定するものではないが、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）によって行われ得る。「精製された」という用語は、「精製されたポリヌクレオチド」などのポリヌクレオチドに関して使用される場合、少なくとも１つの汚染物質から分離されるものを指す。本明細書で使用される場合、「汚染物質」とは、別の物質を不適当、不純または劣悪にさせる任意の物質である。したがって、精製されたポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡ）とは、天然に存在するものとは異なる形態または設定で存在するか、またはそれを処置もしくは精製方法に供する前に存在したものとは異なる形態もしくは設定で存在する。
【０７２５】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の精製とは、望ましくない免疫応答、例えば、サイトカイン活性を低減もしくは除去し得る不純物を取り除く。
【０７２６】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、投与前に、カラムクロマトグラフィー（例えば、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）、または（ＬＣＭＳ））を用いて精製される。いくつかの実施形態において、カラムクロマトグラフィー（例えば、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）、または（ＬＣＭＳ））精製ポリヌクレオチド（本明細書に開示されるＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする）は、異なる精製方法によって精製されたＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと比較して、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現を増加する。
【０７２７】
いくつかの実施形態において、カラムクロマトグラフィー（例えば、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）、または（ＬＣＭＳ））精製ポリヌクレオチドは、哺乳動物ＩＬ−２３ポリペプチド、哺乳動物ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／または哺乳動物ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、この精製されたポリヌクレオチドは、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、この精製されたポリヌクレオチドは、ヒトＩＬ−２３ポリペプチド、ヒトＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする。
【０７２８】
いくつかの実施形態において、精製ポリヌクレオチドは、少なくとも約８０％純粋、少なくとも約８５％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、少なくとも約９６％純粋、少なくとも約９７％純粋、少なくとも約９８％純粋、少なくとも約９９％純粋、または約１００％純粋である。
【０７２９】
限定されるものではないが、ゲル電気泳動、ＵＶ吸光度、または分析用ＨＰＬＣなどの方法を使用して、品質保証及び／または品質管理チェックを行ってもよい。
【０７３０】
別の実施形態において、ポリヌクレオチドは、逆転写ＰＣＲを含むがこれに限定されない方法によって配列決定され得る。
【０７３１】
ＸＩ．化学修飾
本明細書において用いる場合、本開示による、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド  ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらの組合せにおいて、「化学修飾」または必要に応じて「化学的に修飾された」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドに対する修飾であって、それらの位置、パターン、パーセントまたは集団のうちの１つ以上における修飾を指す。一般に、本明細書において、これらの用語は、天然に存在する５’末端ｍＲＮＡキャップ部分におけるリボヌクレオチド修飾を指すものではない。
【０７３２】
ポリペプチドにおいて、「修飾」という用語は、２０アミノ酸の標準のセットと比較した修飾を指す。
【０７３３】
修飾は、様々な別個の変更であり得る。いくつかの実施形態において、その領域は、１，２、またはそれ以上の（場合により異なる）ヌクレオシドまたはヌクレオチド（核酸塩基）修飾を含んでもよい。いくつかの実施形態において、細胞に導入された修飾ポリヌクレオチドは、未修飾ポリヌクレオチドと比較して、細胞において分解の低下を示す場合がある。他の実施形態において、修飾は、核酸塩基及び／または糖構造中にある。さらに他の実施形態では、修飾は主鎖構造内にある。
【０７３４】
化学修飾
本開示のいくつかの実施形態は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、及びＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドを提供し、ここでこのｍＲＮＡが少なくとも１つの化学修飾を含む。
【０７３５】
本開示の他の実施形態は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、またはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドを提供し、ここでこのｍＲＮＡは、少なくとも１つの化学修飾を含む。
【０７３６】
いくつかの実施形態において、化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチルシュードウリジン、２−チオ−５−アザウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、）、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンから選択される。
【０７３７】
「ヌクレオシド」は、本明細書中で使用される場合、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書中では、「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせた糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含む化合物を指す。「ヌクレオチド」とは、本明細書において用いる場合、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾ヌクレオチドは、例えば、化学的に、酵素的に、または組換えなどにより、１つ以上の修飾または非天然ヌクレオシドを含むように任意の有用な方法によって合成され得る。ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域（複数可）を含んでもよい。そのような領域は、可変の主鎖結合を有し得る。結合は、標準的なホスホジエステル結合であってもよく、その場合、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドの領域を含む。
【０７３８】
修飾ヌクレオチド塩基対形成は、標準的なアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシル、またはグアノシン−シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド間に形成された塩基対及び／または非標準塩基もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチドも包含し、ここで水素結合供与体及び水素結合受容体の配置によって、非標準塩基と標準塩基との間、または２つの相補的非標準塩基構造間の水素結合が可能になる。そのような非標準塩基対形成の一例は、修飾ヌクレオチドイノシンとアデニン、シトシンまたはウラシルとの間の塩基対形成である。本開示のポリヌクレオチドに、塩基／糖またはリンカーの任意の組合せを組み込んでもよい。
【０７３９】
当業者であれば、特記しない限り、本出願に記載のポリヌクレオチド配列は代表的なＤＮＡ配列中に「Ｔ」を挙げるが、その配列がＲＮＡを表す場合には「Ｔ」を「Ｕ」で置き換えることを理解する。
【０７４０】
本開示のポリヌクレオチド、組成物、方法及び合成プロセスにおいて有用なポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドのようなＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾としては、限定するものではないが、以下のヌクレオチド、ヌクレオシド及び核酸塩基が挙げられる：２−メチルチオ−Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；２−メチルチオ−Ｎ６−メチルアデノシン；２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６−イソペンテニルアデノシン；Ｎ６−メチルアデノシン；Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン；１，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン；１−メチルアデノシン；２’−Ｏ−メチルアデノシン；２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸塩）；２−メチルアデノシン；２−メチルチオ−Ｎ６  イソペンテニルアデノシン；２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリル  カルバモイルアデノシン；２’−Ｏ−メチルアデノシン；２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸塩）；イソペンテニルアデノシン；Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン；Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン；Ｎ６−アセチルアデノシン；Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン；２−メチルアデノシン；２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン；７−デアザ−アデノシン；Ｎ１−メチル−アデノシン；Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン；Ｎ６−ｃｉｓ−ヒドロキシ−イソペンテニル−アデノシン；α−チオ−アデノシン；２（アミノ）アデニン；２（アミノプロピル）アデニン；２（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン；２−（アルキル）アデニン；２−（アミノアルキル）アデニン；２−（アミノプロピル）アデニン；２−（ハロ）アデニン；２−（ハロ）アデニン；２−（プロピル）アデニン；２’−アミノ−２’−デオキシ−ＡＴＰ；２’−アジド−２’−デオキシ−ＡＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アミノアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アジドアデノシン  ＴＰ；６（アルキル）アデニン；６（メチル）アデニン；６−（アルキル）アデニン；６−（メチル）アデニン；７（デアザ）アデニン；８（アルケニル）アデニン；８（アルキニル）アデニン；８（アミノ）アデニン；８（チオアルキル）アデニン；８−（アルケニル）アデニン；８−（アルキル）アデニン；８−（アルキニル）アデニン；８−（アミノ）アデニン；８−（ハロ）アデニン；８−（ヒドロキシル）アデニン；８−（チオアルキル）アデニン；８−（チオール）アデニン；８−アジド−アデノシン；アザ  アデニン；デアザ  アデニン；Ｎ６（メチル）アデニン；Ｎ６−（イソペンチル）アデニン；７−デアザ−８−アザ−アデノシン；７−メチルアデニン；１−デアザアデノシン  ＴＰ；２’フルオロ−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシン  ＴＰ；２’−ＯＭｅ−２−アミノ−ＡＴＰ；２’Ｏ−メチル−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシン  ＴＰ；２’−ａ−エチニルアデノシン  ＴＰ；２−アミノアデニン；２−��ミノアデノシン  ＴＰ；２−アミノ−ＡＴＰ；２’−ａ−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ；２−アジドアデノシン  ＴＰ；２’−ｂ−エチニルアデノシン  ＴＰ；２−ブロモアデノシン  ＴＰ；２’−ｂ−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ；２−クロロアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトアデノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシアデノシン  ＴＰ；２−フルオロアデノシン  ＴＰ；２−ヨードアデノシン  ＴＰ；２−メルカプトアデノシン  ＴＰ；２−メトキシ−アデニン；２−メチルチオ−アデニン；２−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ；３−デアザ−３−ブロモアデノシン  ＴＰ；３−デアザ−３−クロロアデノシン  ＴＰ；３−デアザ−３−フルオロアデノシン  ＴＰ；３−デアザ−３−ヨードアデノシン  ＴＰ；３−デアザアデノシン  ＴＰ；４’−アジドアデノシン  ＴＰ；４’−炭素環式アデノシン  ＴＰ；４’−エチニルアデノシン  ＴＰ；５’−ホモ−アデノシン  ＴＰ；８−Ａｚａ−ＡＴＰ；８−ブロモ−アデノシン  ＴＰ；８−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ；９−デアザアデノシン  ＴＰ；２−アミノプリン；７−デアザ−２，６−ジアミノプリン；７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン；７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン；２，６−ジアミノプリン；７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン；２−チオシチジン；３−メチルシチジン；５−ホルミルシチジン；５−ヒドロキシメチルシチジン；５−メチルシチジン；Ｎ４−アセチルシチジン；２’−Ｏ−メチルシチジン；２’−Ｏ−メチルシチジン；５，２’−Ｏ−ジメチルシチジン；５−ホルミル−２’−Ｏ−メチルシチジン；リシジン；Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン；Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチルシチジン；Ｎ４−メチルシチジン；Ｎ４，Ｎ４−ジメチル−２’−ＯＭｅ−シチジン  ＴＰ；４−メチルシチジン；５−アザ−シチジン；シュード−イソ−シチジン；ピロロ−シチジン；α−チオ−シチジン；２−（チオ）シトシン；２’−アミノ−２’−デオキシ−ＣＴＰ；２’−アジド−２’−デオキシ−ＣＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アミノシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アジドシチジン  ＴＰ；３（デアザ）５（アザ）シトシン；３（メチル）シトシン；３−（アルキル）シトシン；３−（デアザ）５（アザ）シトシン；３−（メチル）シチジン；４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン；５（ハロ）シトシン；５（メチル）シトシン；５（プロピニル）シトシン；５（トリフルオロメチル）シトシン；５−（アルキル）シトシン；５−（アルキニル）シトシン；５−（ハロ）シトシン；５−（プロピニル）シ���シン；５−（トリフルオロメチル）シトシン；５−ブロモ−シチジン；５−ヨード−シチジン；５−プロピニル  シトシン；６−（アゾ）シトシン；６−アザ−シチジン；アザ  シトシン；デアザ  シトシン；Ｎ４（アセチル）シトシン；１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン；１−メチル−シュードイソシチジン；２−メトキシ−５−メチル−シチジン；２−メトキシ−シチジン；２−チオ−５−メチル−シチジン；４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン；４−メトキシ−シュードイソシチジン；４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン；４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン；４−チオ−シュードイソシチジン；５−アザ−ゼブラリン；５−メチル−ゼブラリン；ピロロ−シュードイソシチジン；ゼブラリン；（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）シチジン  ＴＰ；２，２’−アンヒドロ−シチジン  ＴＰ塩酸塩；２’フルオロ−Ｎ４−Ｂｚ−シチジン  ＴＰ；２’フルオロ−Ｎ４−アセチル−シチジン  ＴＰ；２’−Ｏ−メチル−Ｎ４−アセチル−シチジン  ＴＰ；２’Ｏ−メチル−Ｎ４−Ｂｚ−シチジン  ＴＰ；２’−ａ−エチニルシチジン  ＴＰ；２’−ａ−トリフルオロメチルシチジン  ＴＰ；２’−ｂ−エチニルシチジン  ＴＰ；２’−ｂ−トリフルオロメチルシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトシチジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシシチジン  ＴＰ；２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）シチジン  ＴＰ；３’−エチニルシチジン  ＴＰ；４’−アジドシチジン  ＴＰ；４’−炭素環式シチジン  ＴＰ；４’−エチニルシチジン  ＴＰ；５−（１−プロピニル）アラ−シチジン  ＴＰ；５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオシチジン  ＴＰ；５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオシチジン  ＴＰ；５−アミノアリル−ＣＴＰ；５−シアノシチジン  ＴＰ；５−エチニルアラ−シチジン  ＴＰ；５−エチニルシチジン  ＴＰ；５’−ホモ−シチジン  ＴＰ；５−メトキシシチジン  ＴＰ；５−トリフルオロメチル−シチジン  ＴＰ；Ｎ４−アミノ−シチジン  ＴＰ；Ｎ４−ベンゾイル−シチジン  ＴＰ；シュードイソシチジン；７−メチルグアノシン；Ｎ２，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン；Ｎ２−メチルグアノシン；ワイオシン；１，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン；１−メチルグアノシン；２’−Ｏ−メチルグアノシン；２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸塩）；２’−Ｏ−メチルグアノシン；２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸塩）；７−アミノメチル−７−デアザグアノシン；７−シアノ−７−デアザグアノシン；アルカエオシン；メチルワイオシン；Ｎ２，７−ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，２’−Ｏ−トリ��チルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン；Ｎ２，７，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン；６−チオ−グアノシン；７−デアザ−グアノシン；８−オキソ−グアノシン；Ｎ１−メチル−グアノシン；α−チオ−グアノシン；２（プロピル）グアニン；２−（アルキル）グアニン；２’−アミノ−２’−デオキシ−ＧＴＰ；２’−アジド−２’−デオキシ−ＧＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アミノグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アジドグアノシン  ＴＰ；６（メチル）グアニン；６−（アルキル）グアニン；６−（メチル）グアニン；６−メチル−グアノシン；７（アルキル）グアニン；７（デアザ）グアニン；７（メチル）グアニン；７−（アルキル）グアニン；７−（デアザ）グアニン；７−（メチル）グアニン；８（アルキル）グアニン；８（アルキニル）グアニン；８（ハロ）グアニン；８（チオアルキル）グアニン；８−（アルケニル）グアニン；８−（アルキル）グアニン；８−（アルキニル）グアニン；８−（アミノ）グアニン；８−（ハロ）グアニン；８−（ヒドロキシル）グアニン；８−（チオアルキル）グアニン；８−（チオール）グアニン；アザ  グアニン；デアザ  グアニン；Ｎ（メチル）グアニン；Ｎ−（メチル）グアニン；１−メチル−６−チオ−グアノシン；６−メトキシ−グアノシン；６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン；６−チオ−７−デアザ−グアノシン；６−チオ−７−メチル−グアノシン；７−デアザ−８−アザ−グアノシン；７−メチル−８−オキソ−グアノシン；Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン；Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン；１−Ｍｅ−ＧＴＰ；２’フルオロ−Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ；２’Ｏ−メチル−Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ；２’−ａ−エチニルグアノシン  ＴＰ；２’−ａ−トリフルオロメチルグアノシン  ＴＰ；２’−ｂ−エチニルグアノシン  ＴＰ；２’−ｂ−トリフルオロメチルグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオログアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−
２’−ｂ−ブロモグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−クロログアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオログアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトグアノシン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシグアノシン  ＴＰ；４’−アジドグアノシン  ＴＰ；４’−炭素環式グアノシン  ＴＰ；４’−エチニルグアノシン  ＴＰ；５’−ホモ−グアノシン  ＴＰ；８−ブロモ−グアノシン  ＴＰ；９−デアザグアノシン  ＴＰ；Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ；１−メチルイノシン；イノシン；１，２’−Ｏ−ジメチルイノシン；２’−Ｏ−メチルイノシン；７−メチルイノシン；２’−Ｏ−メチルイノシン；エポキシキューオシン；ガラクトシル−キューオシン；マンノシルキューオシン；キューオシン；アリルアミノ−チミジン；アザ  チミジン；デアザ  チミジン；デオキシ−チミジン；２’−Ｏ−メチルウリジン；２−チオウリジン；３−メチルウリジン；５−カルボキシメチルウリジン；５−ヒドロキシウリジン；５−メチルウリジン；５−タウリノメチル−２−チオウリジン；５−タウリノメチルウリジン；ジヒドロウリジン；シュードウリジン；（３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン；１−メチル−３−（３−アミノ−５−カルボキシプロピル）シュードウリジン；１−メチルシュードウリジン；１−エチル−シュードウリジン；２’−Ｏ−メチルウリジン；２’−Ｏ−メチルシュードウリジン；２’−Ｏ−メチルウリジン；２−チオ−２’−Ｏ−メチルウリジン；３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン；３，２’−Ｏ−ジメチルウリジン；３−メチル−シュード−ウリジン  ＴＰ；４−チオウリジン；５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン；５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン  メチルエステル；５，２’−Ｏ−ジメチルウリジン；５，６−ジヒドロ−ウリジン；５−アミノメチル−２−チオウリジン；５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン；５−カルバモイルメチルウリジン；５−カルボキシヒドロキシメチルウリジン；５−カルボキシヒドロキシメチルウリジン  メチルエステル；５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン；５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン；５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン；５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５−カルバモイルメチルウリジン  ＴＰ；５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン；５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン；５−メトキシカルボニルメチルウリジン；５−メチルウリジン、）、５−メトキシウリジン；５−メチル−２−チオウリジン；５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン；５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン；５−メチルアミノメチルウリジン；５−メチルジヒドロウリジン；５−オキシ酢酸−ウリジン  ＴＰ；５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウリジン  ＴＰ；Ｎ１−メチル−シュード−ウラシル；Ｎ１−エチル−シュード−ウラシル；ウリジン  ５−オキシ酢酸；ウリジン  ５−オキシ酢酸  メチルエステル；３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウリジン  ＴＰ；５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオウリジン  ＴＰ；５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジン  ＴＰ；５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウリジン  ＴＰ；５−プロピニル  ウラシル；α−チオ−ウリジン；１（アミノアルキルアミノ−カルボニルエチレニル）−２（チオ）−シュードウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）シュードウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−４（チオ）シュードウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−シュードウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）−２（チオ）−シュードウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）シュードウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）−４（チオ）シュードウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）−シュードウラシル；１置換２（チオ）−シュードウラシル；１置換２，４−（ジチオ）シュードウラシル；１置換４（チオ）シュードウラシル；１置換シュードウラシル；１−（アミノアルキルアミノ−カルボニルエチレニル）−２−（チオ）−シュードウラシル；１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン  ＴＰ；１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュード−ＵＴＰ；１−メチル−シュード−ＵＴＰ；１−エチル−シュード−ＵＴＰ；２（チオ）シュードウラシル；２’デオキシ  ウリジン；２’フルオロウリジン；２−（チオ）ウラシル；２，４−（ジチオ）シュードウラシル；２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−グアノシン；２’−アミノ−２’−デオキシ−ＵＴＰ；２’−アジド−２’−デオキシ−ＵＴＰ；２’−アジド−デオキシウリジン  ＴＰ；２’−Ｏ−メチルシュードウリジン；２’デオキシ  ウリジン；２’フルオロウリジン；２’−デオキシ−２’−ａ−アミノウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−アジドウリジン  ＴＰ；２−メチルシュードウリジン；３（３  アミノ−３  カルボキシプロピル）ウラシル；４（チオ）シュードウラシル；４−（チオ）シュードウラシル；４−（チオ）ウラシル；４−チオウラシル；５（１，３−ジアゾール−１−アルキル）ウラシル；５（２−アミノプロピル）ウラシル；５（アミノアルキル）ウラシル；５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル；５（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル；５（メチル）２（チオ）ウラシル；５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチル）４（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）−４（チオ）ウラシル；５（プロピニル）ウラシル；５（トリフルオロメチル）ウラシル；５−（２−アミノプロピル）ウラシル；５−（アルキル）−２−（チオ）シュードウラシル；５−（アルキル）−２，４（ジチオ）シュードウラシル；５−（アルキル）−４（チオ）シュードウラシル；５−（アルキル）シュードウラシル；��−（アルキル）ウラシル；５−（アルキニル）ウラシル；５−（アリルアミノ）ウラシル；５−（シアノアルキル）ウラシル；５−（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル；５−（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５−（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５−（ハロ）ウラシル；５−（ｌ，３−ジアゾール−ｌ−アルキル）ウラシル；５−（メトキシ）ウラシル；５−（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル；５−（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル；５−（メチル）２（チオ）ウラシル；５−（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５−（メチル）４（チオ）ウラシル；５−（メチル）−２−（チオ）シュードウラシル；５−（メチル）−２，４（ジチオ）シュードウラシル；５−（メチル）−４（チオ）シュードウラシル；５−（メチル）シュードウラシル；５−（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル；５−（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル；５−（メチルアミノメチル）−４−（チオ）ウラシル；５−（プロピニル）ウラシル；５−（トリフルオロメチル）ウラシル；５−アミノアリル−ウリジン；５−ブロモ−ウリジン；５−ヨード−ウリジン；５−ウラシル；６（アゾ）ウラシル；６−（アゾ）ウラシル；６−アザ−ウリジン；アリルアミノ−ウラシル；アザ  ウラシル；デアザ  ウラシル；Ｎ３（メチル）ウラシル；シュード−ＵＴＰ−１−２−エタン酸；シュードウラシル；４−チオ−シュード−ＵＴＰ；１−カルボキシメチル−シュードウリジン；１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン；１−プロピニル−ウリジン；１−タウリノメチル−１−メチル−ウリジン；１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン；１−タウリノメチル−シュードウリジン；２−メトキシ−４−チオ−シュードウリジン；２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン；２−チオ−１−メチル−シュードウリジン；２−チオ−５−アザ−ウリジン；２−チオ−ジヒドロシュードウリジン；２−チオ−ジヒドロウリジン；２−チオ−シュードウリジン；４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン；４−メトキシ−シュードウリジン；４−チオ−１−メチル−シュードウリジン；４−チオ−シュードウリジン；５−アザ−ウリジン；ジヒドロシュードウリジン；（±）１−（２−ヒドロキシプロピル）シュードウリジン  ＴＰ；（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）シュードウリジン  ＴＰ；（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）シュードウリジン  ＴＰ；（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジン  ＴＰ；（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジン  ＴＰ；（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジン  ＴＰ；（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジン  ＴＰ；１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−シュード−ＵＴＰ；１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（２，２−ジエトキシエチル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（２，４，６−トリメチルベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）シュード−ＵＴＰ；１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）シュード−ＵＴＰ；１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）シュード−ＵＴＰ；１−（２−アミノ−エチル）シュード−ＵＴＰ；１−（２−ヒドロキシエチル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（２−メトキシエチル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（３，４−Ｂｉｓ−トリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（３，４−ジメトキシベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュード−ＵＴＰ；１−（３−アミノ−プロピル）シュード−ＵＴＰ；１−（３−シクロプロピル−プロパ−２−イニル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−アミノ−ベンジル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−アミノ−ブチル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−アミノ−フェニル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−アジドベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−ブロモベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−クロロベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−フルオロベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−ヨードベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−メタンスルホニルベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−メトキシベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−メトキシ−ベンジル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−メトキシ−フェニル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−メチルベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−メチル−ベンジル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−ニトロベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−ニトロ−ベンジル）シュード−ＵＴＰ；１（４−ニトロ−フェニル）シュード−ＵＴＰ；１−（４−チオメトキシベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（４−トリフルオロメチルベンジル）シュードウリジン  ＴＰ；１−（５−アミノ−ペンチル）シュード−ＵＴＰ；１−（６−アミノ−ヘキシル）シュード−ＵＴＰ；１，６−ジメチル−シュード−ＵＴＰ；１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］シュードウリジン  ＴＰ；１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル  ｝  シュードウリジン  ＴＰ；１−アセチルシュードウリジン  ＴＰ；１−アルキル−６−（１−プロピニル）−シュード−ＵＴＰ；１−アルキル−６−（２−プロピニル）−シュード−Ｕ
ＴＰ；１−アルキル−６−アリル−シュード−ＵＴＰ；１−アルキル−６−エチニル−シュード−ＵＴＰ；１−アルキル−６−ホモアリル−シュード−ＵＴＰ；１−アルキル−６−ビニル−シュード−ＵＴＰ；１−アリルシュードウリジン  ＴＰ；１−アミノメチル−シュード−ＵＴＰ；１−ベンゾイルシュードウリジン  ＴＰ；１−ベンジルオキシメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−ベンジル−シュード−ＵＴＰ；１−ビオチニル−ＰＥＧ２−シュードウリジン  ＴＰ；１−ビオチニルシュードウリジン  ＴＰ；１−ブチル−シュード−ＵＴＰ；１−シアノメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−シクロブチルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロブチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロヘプチルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロヘプチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロヘキシルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロヘキシル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロオクチルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロオクチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロペンチルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロペンチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロプロピルメチル−シュード−ＵＴＰ；１−シクロプロピル−シュード−ＵＴＰ；１−エチル−シュード−ＵＴＰ；１−ヘキシル−シュード−ＵＴＰ；１−ホモアリルシュードウリジン  ＴＰ；１−ヒドロキシメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−イソ−プロピル−シュード−ＵＴＰ；１−Ｍｅ−２−チオ−シュード−ＵＴＰ；１−Ｍｅ−４−チオ−シュード−ＵＴＰ；１−Ｍｅ−アルファ−チオ−シュード−ＵＴＰ；１−メタンスルホニルメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−メトキシメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−（４−モルホリノ）−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−（置換フェニル）シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−アミノ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−アジド−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ブロモ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ブチル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−クロロ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−シアノ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ジメチルアミノ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−エトキシ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−エチルカルボキシレート−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−エチル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−フルオロ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ホルミル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ヒドロキシ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ヨード−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−イソ−プロピル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−メトキシ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−メチルアミノ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−フェニル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−プロピル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−シュード−ＵＴＰ；１−メチル−６−トリフルオロメチル−シュード−ＵＴＰ；１−モルホリノメチルシュ���ドウリジン  ＴＰ；１−ペンチル−シュード−ＵＴＰ；１−フェニル−シュード−ＵＴＰ；１−ピバロイルシュードウリジン  ＴＰ；１−プロパルギルシュードウリジン  ＴＰ；１−プロピル−シュード−ＵＴＰ；１−プロピニル−シュードウリジン；１−ｐ−トリル−シュード−ＵＴＰ；１−ｔｅｒｔ−ブチル−シュード−ＵＴＰ；１−チオメトキシメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−チオモルホリノメチルシュードウリジン  ＴＰ；１−トリフルオロアセチルシュードウリジン  ＴＰ；１−トリフルオロメチル−シュード−ＵＴＰ；１−ビニルシュードウリジン  ＴＰ；２，２’−アンヒドロ−ウリジン  ＴＰ；２’−ブロモ−デオキシウリジン  ＴＰ；２’−Ｆ−５−メチル−２’−デオキシ−ＵＴＰ；２’−ＯＭｅ−５−Ｍｅ−ＵＴＰ；２’−ＯＭｅ−シュード−ＵＴＰ；２’−ａ−エチニルウリジン  ＴＰ；２’−ａ−トリフルオロメチルウリジン  ＴＰ；２’−ｂ−エチニルウリジン  ＴＰ；２’−ｂ−トリフルオロメチルウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトウリジン  ＴＰ；２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシウリジン  ＴＰ；２−メトキシ−４−チオ−ウリジン；２−メトキシウリジン；２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）ウリジン  ＴＰ；３−アルキル−シュード−ＵＴＰ；４’−アジドウリジン  ＴＰ；４’−炭素環式ウリジン  ＴＰ；４’−エチニルウリジン  ＴＰ；５−（１−プロピニル）アラ−ウリジン  ＴＰ；５−（２−フラニル）ウリジン  ＴＰ；５−シアノウリジン  ＴＰ；５−ジメチルアミノウリジン  ＴＰ；５’−ホモ−ウリジン  ＴＰ；５−ヨード−２’−フルオロ−デオキシウリジン  ＴＰ；５−フェニルエチニルウリジン  ＴＰ；５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロウリジン  ＴＰ；５−トリフルオロメチル−ウリジン  ＴＰ；５−ビニルアラウリジン  ＴＰ；６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−シュード−ＵＴＰ；６−（４−モルホリノ）−シュード−ＵＴＰ；６−（４−チオモルホリノ）−シュード−ＵＴＰ；６−（置換−フェニル）−シュード−ＵＴＰ；６−アミノ−シュード−ＵＴＰ；６−アジド−シュード−ＵＴＰ；６−ブロモ−シュード−ＵＴＰ；６−ブチル−シュード−ＵＴＰ；６−クロロ−シュード−ＵＴＰ；６−シアノ−シュード−ＵＴＰ；６−ジメチルアミノ−シュード−ＵＴＰ；６−エトキシ−シュード−ＵＴＰ；６−エチルカルボキシレート−シュード−ＵＴＰ；６−エチル−シュード−ＵＴＰ；６−フルオロ−シュード−ＵＴＰ；６−ホルミル−シュード−ＵＴＰ；６−ヒドロキシアミノ−シュード−ＵＴＰ；６−ヒドロキシ−シュード−ＵＴＰ；６−ヨード−シュード−ＵＴＰ；６−イソ−プロピル−シュード−ＵＴＰ；６−メトキシ−シュード−ＵＴＰ；６−メチルアミノ−シュード−ＵＴＰ；６−メチル−シュード−ＵＴＰ；６−フェニル−シュード−ＵＴＰ；６−フェニル−シュード−ＵＴＰ；６−プロピル−シュード−ＵＴＰ；６−ｔｅｒｔ−ブチル−シュード−ＵＴＰ；６−トリフルオロメトキシ−シュード−ＵＴＰ；６−トリフルオロメチル−シュード−ＵＴＰ；アルファ−チオ−シュード−ＵＴＰ；シュードウリジン  １−（４−メチルベンゼンスルホン酸）ＴＰ；シュードウリジン  １−（４−メチル安息香酸）ＴＰ；シュードウリジン  ＴＰ  １−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−メチルホスホン酸；シュードウリジン  ＴＰ  １−メチルホスホン酸  ジエチルエステル；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−３−プロピオン酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−４−ブタン酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−５−ペンタン酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−６−ヘキサン酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−７−ヘプタン酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸；シュード−ＵＴＰ−Ｎ１−ｐ−安息香酸；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；イソワイオシン；ペルオキシワイブトシン；不十分修飾ヒドロキシワイブトシン；４−デメチルワイオシン；２，６−（ジアミノ）プリン；１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル：１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−ｌ−イル；１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル；１，３，５−（トリアザ）−２，６−（ジオキサ）−ナフタレン；２（アミノ）プリン；２，４，５−（トリメチル）フェニル；２‘メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−シチジン；２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−アデニン；２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−ウリジン；２’−アミノ−２’−デオキシリボース；２−アミノ−６−クロロ−プリン；２−アザ−イノシニル；２’−アジド−２’−デオキシリボース；２’フルオロ−２’−デオキシリボース；２’−フルオロ−修飾塩基；２’−Ｏ−メチル−リボース；２−オキソ−７−アミノピリドピリミジン−３−イル；２−オキソ−ピリドピリミジン−３−イル；２−ピリジノン；３  ニトロピロロ；３−（メチル）−７−（プロピニル）イソカルボスチリリル；３−（メチル）イソカルボスチリリル；４−（フルオロ）−６−（メチル）ベンズイミダゾール；４−（メチル）ベンズイミダゾール；４−（メチル）インドリル；４，６−（ジメチル）インドリル；５  ニトロインドール；５置換ピリミジン；５−（メチル）イソカルボスチリリル；５−ニトロインドール；６−（アザ）ピリミジン；６−（アゾ）チミン；６−���メチル）−７−（アザ）インドリル；６−クロロ−プリン；６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−ｌ−イル；７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル；７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル；７−（アミノアルキルヒドロキシ）−ｌ，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−ｌ−イル；７−（アミノアルキルヒドロキシ）−ｌ，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−ｌ−イル；７−（アザ）インドリル；７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジニル−イル；７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−ｌ−イル；７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル；７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル；７−（グアニジニウムアルキル−ヒドロキシ）−ｌ，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−ｌ−イル；７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−ｌ，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−ｌ−イル；７−（プロピニル）イソカルボスチリリル；７−（プロピニル）イソカルボスチリリル，プロピニル−７−（アザ）インドリル；７−デアザ−イノシニル；７−置換１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル；７−置換１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル；９−（メチル）−イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ｂｉｓ−オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；ｂｉｓ−オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリル；イソグアニシン；Ｎ２−置換プリン；Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン；Ｎ６−置換プリン；Ｎ−アルキル化誘導体；ナフタレニル；
ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；Ｏ６−置換プリン；Ｏ−アルキル化誘導体；オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；オキソホルマイシン  ＴＰ；パラ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；パラ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル−７−（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン−３−イル；ピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−７−アミノ−ピリドピリミジン−３−イル；ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル；ピロロピリミジニル；ピロロピリジニル；スチルベンジル；置換１，２，４−トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キサンチン；キサントシン−５’−ＴＰ；２−チオ−ゼブラリン；５−アザ−２−チオ−ゼブラリン；７−デアザ−２−アミノ−プリン；ピリジン−４−オン  リボヌクレオシド；２−アミノ−リボシド−ＴＰ；ホルマイシン  Ａ  ＴＰ；ホルマイシン  Ｂ  ＴＰ；ピロロシン  ＴＰ；２’−ＯＨ−アラ−アデノシン  ＴＰ；２’−ＯＨ−アラ−シチジン  ＴＰ；２’−ＯＨ−アラ−ウリジン  ＴＰ；２’−ＯＨ−アラ−グアノシン  ＴＰ；５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン  ＴＰ；及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）アデノシン  ＴＰ。
【０７４１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、上述の修飾された核酸塩基のうち少なくとも２つ（例えば、２、３、４またはそれ以上）の組合せを含む。
【０７４２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せにおける修飾された核酸塩基は、シュードウリジン（Ψ）、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、）、５−メトキシウリジン、２’−Ｏ−メチル  ウリジン  １−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）、１−エチル−シュードウリジン（ｅ１Ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、α−チオ−グアノシン、α−チオ−アデノシン、５−シアノ  ウリジン、４’−チオ  ウリジン  ７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、及び２，６−ジアミノプリン、（Ｉ）、１−メチル−イノシニル（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、２，８−ジメチルアデノシン、２−ゲラニルチオウリジン、２−リシジン、２−セレノウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−５，６−ジヒドロウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン、３−メチルシュードウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジン  メチルエステル，５−アミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、５−アミノメチル−２−セレノウリジン、５−アミノメチルウリジン、５−カルバモイルヒドロキシメチルウリジン、５−カルバモイルメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−セレノウリジン、５−シアノメチルウリジン、５−ヒドロキシシチジン、５−メチルアミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、７−アミノカルボキシプロピル−デメチルワイオシン、７−アミノカルボキシプロピルワイオシン、７−アミノカルボキシプロピルワイオシン  メチルエステル，８−メチルアデノシン、Ｎ４，Ｎ４−ジメチルシチジン、Ｎ６−ホルミルアデノシン、Ｎ６−ヒドロキシメチルアデノシン、アグマチジン、環状Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、グルタミル−キューオシン、メチル化不十分修飾ヒドロキシワイブトシン、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチルシチジン、ゲラニル化  ５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン、ゲラニル化  ５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、Ｑｂａｓｅ、ｐｒｅＱ０ｂａｓｅ、ｐｒｅＱ１ｂａｓｅ、及びそれらの２つ以上の組合せからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、シュードウリジン、１−メチル−シュードウリジン、１−エチル−シュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びそれらの組合せからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、上述の修飾された核酸塩基のうち少なくとも２つ（例えば、２、３、４以上）の組合せを含む。
【０７４３】
塩基の修飾
ある特定の実施形態において、化学修飾は、ポリヌクレオチド中の核酸塩基（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）である。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド中の修飾核酸塩基（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドのようなＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）、１−エチルシュードウリジン（ｅ１Ψ）、５−メトキシウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（Ψ）、α−チオ−グアノシン及びα−チオ−アデノシンからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、少なくとも２つ（例えば、２、３、４またはそれ以上）の上述の修飾核酸塩基の組合せを含む。
【０７４４】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、シュードウリジン（Ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−エチル−シュードウリジン（ｅ１Ψ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）及び５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−エチル−シュードウリジン（ｅ１Ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）はメトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０７４５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、特定の修飾のために均一に修飾される（例えば、完全に修飾され、全配列を通して修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾されてもよく、このことは、ｍＲＮＡ配列中の全てのシトシン残基が５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で置換されていることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列中に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基について、上記の修飾残基のような修飾された残基で置換することによって、均一に修飾されてもよい。
【０７４６】
いくつかの実施形態において、オープンリーディングフレーム中の化学的に修飾されたヌクレオシドは、ウリジン、アデニン、シトシン、グアニン、及びそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される。
【０７４７】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。
【０７４８】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾ウリジンである。修飾ウリジンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、５−シアノウリジンまたは４’−チオウリジンが挙げられる。
【０７４９】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾されたアデニンである。修飾アデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデニン（ｍ６Ａ）及び２，６−ジアミノプリンが挙げられる。
【０７５０】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾されたグアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。
【０７５１】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド中の核酸塩基修飾ヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、５−メトキシウリジンである。
【０７５２】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４またはそれ以上）の修飾核酸塩基の組合せを含む。
【０７５３】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡポリヌクレオチド）中のある種の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡポリヌクレオチド）中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。
【０７５４】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、５−メトキシウリジン（５ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０７５５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、特定の修飾のために均一に修飾される（例えば、完全に修飾され、全配列を通して修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、５−メトキシウリジンで均一に修飾されてもよく、これはｍＲＮＡ配列中の実質的に全てのウリジン残基を５−メトキシウリジンで置換することを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列中に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基について、上記の任意の修飾残基のような修飾された残基で置換することによって、均一に修飾され得る。
【０７５６】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。
【０７５７】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、５−メトキシウラシルが挙げられる。
【０７５８】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。
【０７５９】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。
【０７６０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せをコードするオープンリーディングフレーム中の核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組合せは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０７６１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せをコードするオープンリーディングフレーム中のウリジンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０７６２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せをコードするオープンリーディングフレーム中のアデノシンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％化学的に修飾される。
【０７６３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せをコードするオープンリーディングフレーム中のシチジンヌクレオシドは、少なくとも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０７６４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチド、ＩＬ−１８ポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せをコードするオープンリーディングフレーム中のグアノシンヌクレオシドは、少なくとも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾される。
【０７６５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ヌクレオシド間の任意の有用なリンカーを含んでもよい。本開示の組成物において有用な主鎖修飾を含むそのようなリンカーとしては、限定されないが、以下の、３’−アルキレンホスホネート、３’−アミノホスホルアミダート、アルケン含有主鎖、アミノアルキルホスホルアミダート、アミノアルキルホスホトリエステル、ボラノホスフェート、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、キラルホスホネート、キラルホスホロチオエート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖、メチレン（メチルイミノ）、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ主鎖、モルホリノ結合、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−、ヘテロ原子ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド、ホスフィナート、ホスホルアミダート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ＰＮＡ、シロキサン主鎖、スルファメート主鎖、スルフィドスルホキシド及びスルホン主鎖、スルホネート及びスルホンアミド主鎖、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル及びチオノホスホルアミダートが挙げられる。
【０７６６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリヌクレオチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せの中の修飾核酸塩基は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（Ψ）、α−チオ−グアノシン及びα−チオ−アデノシンからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、少なくとも２つ（例えば、２、３、４またはそれ以上）の上述の修飾核酸塩基の組合せを含む。
【０７６７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、シュードウリジン（Ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０７６８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０７６９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドポリペプチド、またはそれらのいずれかの組合せは、メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せは、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。
【０７７０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０７７１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、特定の修飾のために、均一に修飾される（例えば、完全に修飾され、全配列にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾されてもよく、これはｍＲＮＡ配列中の全てのシトシン残基が５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で置換されていることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列中に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基について、上記の任意の修飾残基のような修飾された残基で置換することによって、均一に修飾されてもよい。
【０７７２】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾されたシトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。
【０７７３】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾ウリジンである。修飾されたウリジンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、５−シアノウリジンまたは４’−チオウリジンが挙げられる。
【０７７４】
いくつかの実施形態において、修飾された核酸塩基は、修飾されたアデニンである。修飾されたアデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び２，６−ジアミノプリンが挙げられる。
【０７７５】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾されたグアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシンまたは７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。
【０７７６】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド中で有用であり得る他の修飾を表５に列挙する。
【表５−１】
2019519517.tif 000067
【表５−２】
2019519517.tif 000068
【表５−３】
2019519517.tif 000069
【表５−４】
2019519517.tif 000070
【０７７７】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、ヌクレオシド間に任意の有用なリンカーを含み得る。主鎖修飾を含むそのようなリンカーを表６に示す。
【表６−１】
2019519517.tif 000071
【表６−２】
2019519517.tif 000072
【０７７８】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、任意の有用な修飾、例えば、糖、核酸塩基、またはヌクレオシド間結合（例えば、結合ホスフェート／ホスホジエステル結合／ホスホジエステル主鎖）を含んでもよい。ピリミジン核酸塩基の１つ以上の原子は、任意選択で置換されたアミノ、任意選択で置換されたチオール、任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチルまたはエチル）、またはハロ（例えば、クロロまたはフルオロ）で置き換えられても、または置換されてもよい。ある特定の実施形態において、糖及びヌクレオシド間結合のそれぞれに修飾（例えば、１つ以上の修飾）が存在する。本開示による修飾は、リボ核酸（ＲＮＡ）からデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ）ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、またはそれらのハイブリッドの修飾であってもよい。追加の修飾が本明細書に記載される。修飾された核酸及びそれらの合成は、国際特許公開番号ＷＯ２０１３０５２５２３（米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照のこと）に開示されている。
【０７７９】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、ｍＲＮＡが導入される細胞の先天性免疫応答を実質的に誘導しない。誘導された先天性免疫応答の特徴としては、１）炎症性サイトカインの発現増大、２）細胞内ＰＲＲの活性化（ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５など、及び／または３）タンパク質翻訳の終結もしくは減少が挙げられる。
【０７８０】
本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの任意の領域、またはそれらのいずれかの組合せは、本明細書に教示されるように、または国際特許公開番号ＷＯ２０１３０５２５２３号（米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照）に教示されるように化学的に修飾されてもよい。
【０７８１】
いくつかの実施形態において、本開示の、修飾されたポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８ポリペプチド及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドをコードする。いくつかの実施形態において、本開示の修飾されたポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ１８及び／またはＯＸ４０Ｌをコードする。
【０７８２】
いくつかの実施形態において、本開示の、修飾されたポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、表１に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、修飾されたポリヌクレオチド、例えば、本開示の、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、表１に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【０７８３】
いくつかの実施形態において、本開示の、修飾ポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、少なくとも１つのＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌの変異体、断片、またはそのバリアント、例えば、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０ＬのＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌの機能的な断片をコードする。
【０７８４】
いくつかの実施形態において、本開示の、修飾ポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡは、表１に列挙されるＩＬ−２３、ＩＬ−３６ガンマ、ＩＬ−１８及び／またはＯＸ４０Ｌ核酸配列から選択される。
【０７８５】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び本開示のＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドはまた、構成要素、例えば、ポリヌクレオチド分子の修飾リボヌクレオシド及び修飾リボヌクレオチドを含んでもよい。例えば、これらの構成要素は、本開示のポリヌクレオチドを調製するために有用であり得る。そのような構成要素は、国際特許出願番号ＷＯ２０１３０５２５２３（また、米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照のこと）及び国際出願公開番号ＷＯ２０１４０９３９２４（米国特許出願公開第２０１５０３０７５４２号も参照のこと）に教示されている。
【０７８６】
糖の修飾
本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡまたはｍＲＮＡ）、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡまたはｍＲＮＡ）、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡまたはｍＲＮＡ）に組み込まれる修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド（例えば、構成要素分子）を、リボ核酸の糖上で修飾してもよい。
【０７８７】
例えば、２’ヒドロキシル基（ＯＨ）を、多数の異なる置換基で修飾してもまたは置換してもよい。２’位の例示的な置換としては、限定するものではないが、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されていてもよいＣ１〜６アルキル；任意選択で置換されたＣ１〜６アルコキシ；任意選択で置換されたＣ６〜１０アリールオキシ；任意選択で置換されたＣ３〜８シクロアルキル；任意選択で置換されたＣ３−８シクロアルコキシ；任意選択で置換されたＣ６〜１０アリールオキシ；任意選択で置換されたＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、任意選択で置換されたＣ１〜１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（式中、ＲはＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、ｎは０〜２０の整数（例えば、０〜４、０〜８、０〜１０、０〜１６、１〜４、１〜８、１〜１０、１〜１６、１〜２０、２〜４、２〜８、２〜１０、２〜１６、２〜２０、４〜８、４〜１０、４〜１６、及び４〜２０）であり；２’−ヒドロキシルがＣ１〜６アルキレンまたはＣ１〜６ヘテロアルキレン架橋によって同じリボース糖の４’−炭素に連結されている、「ロックされた」核酸（ＬＮＡ）（例示的な架橋はメチレン、プロピレン、エーテル、またはアミノ架橋を含んだ）；本明細書で定義するアミノアルキル；本明細書で定義するアミノアルコキシ；本明細書で定義のアミノ；及び本明細書で定義されるようなアミノ酸が挙げられる。
【０７８８】
一般に、ＲＮＡは、酸素を有する５員環である糖基リボースを含む。例示的な、非限定的修飾ヌクレオチドは、リボースの酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、または、アルキレン、例えば、メチレンもしくはエチレンによる）置き換え；二重結合の付加（例えば、シクロペンテニルまたはシクロヘキセニルを用いたリボースを置き換えるため）；リボースの環縮小（例えば、シクロブタンまたはオキセタンの４員環を形成するため）；リボースの環拡大（例えば、追加の炭素またはヘテロ原子を有する６員環または７員環、例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル及びモルホリノであってホスホロアミダート主鎖も有するものを形成するため）；多環式の形態（例えば、三環式の形態；ならびに「アンロックされた（ｕｎｌｏｃｋｅｄ）」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、リボースがホスホジエステル結合に結合したグリコールユニットによって置き換えられている、Ｒ−ＧＮＡまたはＳ−ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ、リボースがα−Ｌ−トレオフラノシル−（３’→２’）で置き換えられている）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、２−アミノ−エチル−グリシン結合がリボース及びホスホジエステルの主鎖に置き換わっている）、を含む。糖基はまた、リボース中の対応する炭素とは反対の立体化学配置を有する１つ以上の炭素を含んでもよい。したがって、ポリヌクレオチド分子としては、糖として例えばアラビノースを含んでいるヌクレオチドが挙げられる。このような糖修飾は、国際出願公開番号ＷＯ２０１３０５２５２３（米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照のこと）及び国際出願公開番号ＷＯ２０１４０９３９２４（米国特許出願公開第２０１５０３０７５４２号も参照のこと）に教示される。
【０７８９】
修飾糖、核酸塩基及びヌクレオシド間結合の組合せ
本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せは、糖、核酸塩基及び／またはヌクレオシド間結合への修飾の組合せを含んでもよい。これらの組合せは、本明細書に記載される１つ以上の修飾を含む場合がある。
【０７９０】
修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオチドの組合せの例を、下の表７に示す。修飾ヌクレオチドのこれらの組合せを使用して、本開示のポリヌクレオチドを形成してもよい。特に明記しない限り、修飾ヌクレオチドで、本開示のポリヌクレオチドの天然ヌクレオチドを完全に置換してもよい。非限定的な例として、天然ヌクレオチドであるウリジンは、本明細書に記載される修飾ヌクレオシドで置換されてもよい。別の非限定的な例において、天然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に開示されている修飾ヌクレオシドの少なくとも１つと部分的に置換されていてもよい（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９．９％）。塩基／糖またはリンカーの任意の組合せを、本開示のポリヌクレオチドに組み込んでもよく、このような修飾は、国際特許公開番号ＷＯ２０１３０５２５２３（米国特許出願公開第２０１３０１１５２７２号も参照のこと）及び国際出願公開番号ＷＯ２０１４０９３９２４（米国特許出願公開第２０１５０３０７５４２号も参照）に教示されている。
【表７−１】
2019519517.tif 000073
【表７−２】
2019519517.tif 000074
【表７−３】
2019519517.tif 000075
【０７９１】
修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオチドの組合せのさらなる例を、以下の表８に示す。
【表８−１】
2019519517.tif 000076
【表８−２】
2019519517.tif 000077
【表８−３】
2019519517.tif 000078
【表８−４】
2019519517.tif 000079
【表８−５】
2019519517.tif 000080
【表８−６】
2019519517.tif 000081
【表８−７】
2019519517.tif 000082
【表８−８】
2019519517.tif 000083
【表８−９】
2019519517.tif 000084
【表８−１０】
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【表８−１１】
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【表８−１２】
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【０７９２】
ＸＩＩ．医薬組成物：製剤、投与、送達及び投与
本開示は、本明細書に開示される任意の組成物を含む医薬製剤、例えば、ＩＬ−２３ポリペプチドを含む第１のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第１のポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドを含む第２のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第２のポリヌクレオチド、またはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／または第３のタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む第３のポリヌクレオチドを提供し、ここでこの第３のタンパク質は、本明細書に他の箇所で記載のＯＸ４０Ｌポリペプチドを含む。
【０７９３】
本開示のいくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、１つ以上の医薬として許容され得る賦形剤と組み合わせて組成物及び複合体中に製剤化される。医薬組成物は、任意選択で１つ以上の追加の活性物質、例えば、治療上及び／または予防上活性な物質を含んでもよい。本開示の医薬組成物は、滅菌及び／または発熱物質フリーであり得る。医薬品の製剤及び／または製造における一般的な考察は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００５に見出すことができる。
【０７９４】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒト、ヒト患者または対象に投与される。本開示の目的のために、「活性成分」という語句は、一般に、本明細書に記載されるように送達されるポリヌクレオチドを指す。
【０７９５】
本明細書で提供される医薬組成物の記載は、主に、ヒトへの投与に適した医薬組成物に関するものであるが、当業者であれば、このような組成物が、任意の他の動物へ、例えば、非ヒト動物へ、例えば非ヒト哺乳動物への投与に一般的に適切であることを理解する。組成物を種々の動物への投与に適したものにするために、ヒトへの投与に適切な医薬組成物の改変はよく理解されており、通常の熟練した獣医学の薬理学者は、もしあれば単なる慣用的実験によってこのような改変をデザイン及び／または行い得る。医薬組成物の投与が企図される対象としては、限定するものではないが、ヒト及び／または他の霊長類；哺乳動物が挙げられる。
【０７９６】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、皮下、静脈内、腹腔内、腫瘍内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内、頭蓋内、脳室内、経口、吸入噴霧、局所、直腸、経鼻、口腔、膣内、腫瘍内に関して製剤化されるか、またはリザーバーを筋肉内、皮下、腫瘍内または皮内送達のために移植される。他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、腫瘍内、腹腔内、または静脈内送達のために処方される。特定の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、腫瘍内送達のために製剤化される。
【０７９７】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知であるか、または今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と会合させ、次いで、必要であるか、及び／または望ましい場合には、生成物を所望の単回または複数回投与単位に分割するか、成形するか、及び／またはパッケージングするステップを包含する。
【０７９８】
この開示による、医薬組成物中の活性成分、医薬として許容され得る賦形剤及び／または任意の追加の成分の相対量は、処置される対象の同一性、サイズ及び／または状態に応じて、さらに組成物が投与されるべき経路に応じて、変化する。例えば、この組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５％〜５０％、１％〜３０％、５％〜８０％、または少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでもよい。
【０７９９】
製剤
本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、１つ以上の賦形剤を使用して製剤化され得る。
【０８００】
１つ以上の賦形剤の機能は、例えば、（１）安定性を増大させること、（２）細胞トランスフェクションを増大させること；（３）（例えば、ポリヌクレオチドのデポ製剤からの）持続放出または遅延放出を可能にすること；（４）生体内分布を変更する（例えば、ポリヌクレオチドを特定の組織または細胞型に標的化する）；（５）コードされたタンパク質の翻訳をｉｎ  ｖｉｖｏで増大すること；及び／または（６）コードされたタンパク質の放出プロファイルをｉｎ  ｖｉｖｏで変更することである。伝統的な賦形剤、例えば、本開示のありとあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、賦形剤に加えて、限定するものではないが、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、（例えば、対象への移植のための）ポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣物、及びそれらの組合せが挙げられる。したがって、本開示の製剤は、一緒になってポリヌクレオチドの安定性を増大させるか、ポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増大させるか、ポリヌクレオチドコード化タンパク質の発現を増大させるか、及び／またはポリヌクレオチドコードタンパク質の放出プロファイルを変更する各々の量で、１つ以上の賦形剤を含んでもよい。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、自己組織化核酸ナノ粒子を使用して製剤化され得る。
【０８０１】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知であるかまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、このような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と会合させるステップを包含する。
【０８０２】
本開示による医薬組成物は、バルクで、単一の単位用量として、及び／または複数の単一の単位用量として調製しても、パッケージングしても及び／または販売してもよい。本明細書で使用する「単位用量」とは、所定量の活性成分を含む医薬組成物の別々の量を指す。活性成分の量は一般には、対象に投与されるであろう活性成分の用量及び／またはこのような用量の好都合な割合、例えば、そのような用量の二分の一または三分の一などの用量に等しい。
【０８０３】
本開示による医薬組成物中の活性成分、医薬として許容され得る賦形剤、及び／または任意の追加の成分の相対量は、処置されている対象の同一性、大きさ及び／または状態に応じて、さらに組成物が投与されるべき経路に応じて変化し得る。例えば、組成物は、０．１％〜９９％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでもよい。一例として、この組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでもよい。
【０８０４】
いくつかの実施形態においては、本明細書に記載される製剤は、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。非限定的な例として、製剤は、１、２、３、４または５個のポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、それを必要とする患者の腫瘍における腫瘍内送達のために製剤化される。
【０８０５】
医薬製剤は、本明細書中で使用される場合、限定するものではないが、任意の及び全ての溶媒、分散媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存剤などの、所望の特定の剤形に適したものを含む、医薬として許容され得る賦形剤をさらに含んでもよい。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物を調製するための技術は、当技術分野において既知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ、Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２００６を参照のこと）。任意の従来の賦形剤媒体が、任意の望ましくない生物学的効果を生じさせるか、そうでなければ有害な様式で医薬組成物の任意の他の成分（単数または複数）と相互作用することによって、物質またはその誘導体と不適合であり得る場合を除いて、従来の賦形剤媒体の使用が、本開示の範囲内で企図され得る。
【０８０６】
いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子の粒径は増大されるか、及び／または減少される。粒径の変化は、限定するものではないが、炎症などの生物学的反応に対抗することを補助し得るか、または哺乳動物に送達される修飾ｍＲＮＡの生物学的効果を増大し得る。
【０８０７】
医薬組成物の製造に使用される医薬として許容され得る賦形剤としては、限定するものではないが、不活性希釈剤、表面活性剤及び／または乳化剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤及び／または油が挙げられる。そのような賦形剤は、任意選択で、本開示の医薬製剤に含まれてもよい。
【０８０８】
いくつかの実施形態においては、ポリヌクレオチドは、コレステロールなどの分子を隔離し得るナノ構造中で投与されるか、それとともに投与されるか、それの中に製剤化されるか、それとともに送達される。これらのナノ構造の非限定的な例及びこれらのナノ構造の作製方法は、米国特許出願公開第２０１３０１９５７５９号に記載されている。これらのナノ構造の例示的な構造は、米国特許出願公開第２０１３０１９５７５９号に示されており、コア及びコアを取り囲むシェルを含んでもよい。
【０８０９】
リピドイド
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、リピドイドとともに処方されてもよい。リピドイドの合成は、広範に記載されており、これらの化合物を含有する製剤は、ポリヌクレオチドの送達に特に適している（Ｍａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ．２０１０  ２１：１４４８−１４５４；Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１０  ２６７：９−２１；Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８  ２６：５６１−５６９；Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１０  １０７：１８６４−１８６９；Ｓｉｅｇｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳ  Ａ  ２０１１  １０８：１２９９６−３００１を参照のこと）。
【０８１０】
これらのリピドイドは、げっ歯類及び非ヒト霊長類において二本鎖低分子干渉ＲＮＡを効果的に送達するために使用されてきたが（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８  ２６：５６１−５６９；Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００８  １０５：１１９１５−１１９２０；Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００９  １７：８７２−８７９；Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９；Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  ２９：１００５〜１０１０を参照のこと）、本開示は、ポリヌクレオチドを送達する際のそれらの製剤及び使用を記載する。
【０８１１】
これらのリピドイドを含む複合体、ミセル、リポソームまたは粒子を調製してもよく、従って、局所的及び／または全身的な投与経路を介したリピドイド製剤の注射後、コードされたタンパク質の産生によって判断されるように、ポリヌクレオチドの効果的な送達が生じ得る。ポリヌクレオチドのリピドイド複合体は、限定されるものではないが、静脈内、腹腔内、腫瘍内、筋肉内、または皮下経路を含む様々な手段によって投与され得る。
【０８１２】
核酸のｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、多くのパラメーター、限定されるものではないが、製剤組成、粒子ＰＥＧ化の性質、負荷の程度、ポリヌクレオチド対脂質比、及び限定されないが、粒径などの生物物理的パラメーターによって影響され得る（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００９  １７：８７２−８７９）。一例として、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）脂質のアンカー鎖長のわずかな変化が、ｉｎ  ｖｉｖｏの効能に重大な影響をもたらし得る。限定するものではないが、ペンタ［３−（１−ラウリルアミノプロピオニル）］−トリエチレンテトラミン塩酸塩（ＴＥＴＡ−５ＬＡＰ；別名９８Ｎ１２−５、Ｍｕｒｕｇａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４０１：６１（２０１０）を参照のこと））、Ｃ１２−２００（誘導体及びバリアントを含む）及びＭＤ１を含む異なるリピドイドによる製剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性について試験してもよい。
【０８１３】
本明細書で「９８Ｎ１２−５」と呼ばれるリピドイドは、Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．（２００９）１７：８７２−８７９に開示される。
【０８１４】
本明細書で「Ｃ１２−２００」と称するリピドイドは、Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１０）１０７：１８６４−１８６９及びＬｉｕ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ（２０１０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２０１０：６６９−６７０に開示される。リピドイド製剤は、ポリヌクレオチドに加えて３または４またはそれを超える成分を含む粒子を含んでもよい。
【０８１５】
リピドイド及びリピドイドを含むポリヌクレオチド製剤は、国際出願公開番号第ＷＯ２０１４０９３９２４号（米国特許出願公開第２０１５０３０７５４２も参照のこと）に記載されている。
【０８１６】
リポソーム、リポプレックス及び脂質ナノ粒子
本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上のリポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子を使用して製剤化してもよい。１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの医薬組成物は、リポソームを含む。リポソームは、人工的に調製された小胞であり、主として脂質二分子膜から構成され得、医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用されてもよい。リポソームは、種々のサイズ、例えば、限定するものではないが、直径が数百ナノメートルであってもよく、狭い水性区画によって分離された一連の同心二分子膜を含んでもよい、多重膜小胞（ＭＬＶ）、直径が５０ｎｍ未満であり得る、小さな単細胞小胞（ＳＵＶ）、及び直径が５０〜５００ｎｍであり得る大きな単層の小胞（ＬＵＶ）であってもよい。リポソームの設計は、リポソームの不健康な組織への付着を改善するため、または限定するものではないが、エンドサイトーシスなどの事象を活性化するために、限定するものではないが、オプソニンまたはリガンドを含んでもよい。リポソームは、医薬製剤の送達を改善するために、低ｐＨを含んでも、または高ｐＨを含んでもよい。
【０８１７】
リポソームの形成は、生理化学的特徴、例えば、限定するものではないが、封入された医薬製剤及びリポソーム成分、脂質小胞が分散される媒体の性質、封入された物質の有効濃度及びその潜在的毒性、小胞の適用及び／または送達中に関与する任意のさらなるプロセス、意図される用途のための小胞の最適化サイズ、多分散性及び貯蔵寿命、ならびにバッチ間の再現性及び安全かつ効率的なリポソーム生成物の大量生産の可能性などの物理化学的特性に依存し得る。
【０８１８】
非限定的な例として、合成膜小胞などのリポソームは、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３８号、同第２０１３０１７７６３７号、同第２０１３０１７７６３６号、同第２０１３０１７７６３５号、同第２０１３０１７７６３４号、同第２０１３０１７７６３３号、同第２０１３０１８３３７５号、同第２０１３０１８３３７３号、及び同第２０１３０１８３３７２号に記載された方法、装置及びデバイスによって調製される。
【０８１９】
１つの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物としては、限定するものではないが、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ、ＷＡ）のＤｉＬａ２リポソーム、１，２−ジリノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、及びＭＣ３（米国特許出願公開第２０１００３２４１２０号に記載されている）及び限定するものではないが、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．（Ｈｏｒｓｈａｍ、ＰＡ）のＤＯＸＩＬ（登録商標）などの低分子薬物を送達し得るリポソームから形成されるロポソームなどのリポソームが挙げられる。
【０８２０】
１つの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は限定するものではないが、これまでに記載され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチド送達のために適切であることが示された、安定化プラスミド−脂質粒子（ＳＰＬＰ）または安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるリポソームなどのリポソームを含んでもよい（Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９９  ６：２７１−２８１；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９９  ６：１４３８−１４４７；Ｊｅｆｆｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２００５  ２２：３６２−３７２；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５  ２：１００２−１００７；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ、２００６  ４４１：１１１−１１４；Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．２００５  １０７：２７６−２８７；Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０  ２８：１７２−１７６；Ｊｕｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００９  １１９：６６１−６７３；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００８  １９：１２５−１３２；米国特許出願公開第２０１３０１２２１０４号を参照のこと）。Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，のオリジナルの製造方法は、界面活性剤透析法であり、これは後にＪｅｆｆｓ    ｅｔ  ａｌ．，によって改良され、自発的小胞形成法と呼ばれる。リポソーム製剤は、ポリヌクレオチドに加えて３〜４個の脂質成分から構成される。一例として、リポソームとしては、限定するものではないが、Ｊｅｆｆｓ  ｅｔ  ａｌが記載するように、５５％コレステロール、２０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１０％ＰＥＧ−Ｓ−ＤＳＧ、及び１５％１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）が挙げられる。別の例として、特定のリポソーム製剤としては、限定するものではないが、４８％コレステロール、２０％ＤＳＰＣ、２％ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ、及び３０％のイオン性脂質を含み、このイオン性脂質は、Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．によって記載されているように、１，２−ジステアリルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、または１，２−ジリノレニルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）であってもよい。
【０８２１】
いくつかの実施形態において、リポソーム製剤は、約２５．０％のコレステロール〜約４０．０％のコレステロール、約３０．０％のコレステロール〜約４５．０％のコレステロール、約３５．０％のコレステロール〜約５０．０％のコレステロール及び／または約４８．５％のコレステロール〜約６０％のコレステロールを含む。他の実施形態では、製剤は、２８．５％、３１．５％、３３．５％、３６．５％、３７．０％、３８．５％、３９．０％及び４３．５％からなる群より選択される百分率のコレステロールを含む。いくつかの実施形態において、製剤は、約５．０％〜約１０．０％のＤＳＰＣ及び／または約７．０％〜約１５．０％のＤＳＰＣを含む。
【０８２２】
１つの実施形態において、医薬組成物は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを送達するために形成されるリポソームを含む。ポリヌクレオチドは、リポソームによって封入されてもよく、及び／またはリポソームによって後に封入され得る水性コアに含有されてもよい。国際公開番号ＷＯ２０１２０３１０４６（米国特許第２０１３０１８９３５１号も参照のこと）、ＷＯ２０１２０３１０４３（米国特許第２０１３０２０２６８４号も参照のこと）、国際公開番号ＷＯ２０１２０３０９０１（米国特許出願公開第２０１３０１９５９６９号も参照のこと）及びＷＯ２０１２００６３７８（米国特許出願公開第２０１３０１７１２４１号も参照のこと）及び米国特許出願公開第２０１３０１８９３５１号、同第２０１３０１９５９６９号及び同第２０１３０２０２６８４号を参照のこと）を参照のこと。
【０８２３】
別の実施形態では、標的化送達のためにリポソームを製剤化する。非限定的な例として、リポソームは、肝臓への標的化送達のために製剤化される。標的化送達のために使用されるリポソームとしては、限定するものではないが、米国特許出願公開第２０１３０１９５９６７号に記載されているリポソーム及び記載されているリポソームの作製方法を含んでもよい。
【０８２４】
別の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、カチオン性水中油型エマルジョン中に製剤化され、このエマルジョン粒子は、油性コア及びエマルジョン粒子に分子を固定するポリヌクレオチドと相互作用し得るカチオン性脂質を含む。国際出願番号ＷＯ２０１２００６３８０（ＵＳ２０１６０２５６５４１も参照のこと）を参照のこと。
【０８２５】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、親水性相が分散している連続的な疎水相を含む油中水型エマルジョン中に製剤化する。非限定的な例として、このエマルジョンは、国際公開番号ＷＯ２０１３０８７７９１（米国特許出願公開第２０１４０２９４９０４号も参照のこと）に記載されている方法によって製造してもよい。
【０８２６】
別の実施形態では、脂質製剤は、少なくともイオン性脂質、トランスフェクションを増強し得る脂質、及び脂質部分に結合した親水性頭部基を含む少なくとも１つの脂質を含む。国際公開番号ＷＯ２０１１０７６８０７及び米国特許出願公開第２０１１０２００５８２号を参照のこと。別の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、官能化脂質二分子膜の間に架橋を有し得る脂質小胞中に製剤化する（米国特許出願公開第２０１２０１７７７２４号を参照のこと）。
【０８２７】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチドは、国際特許公開番号ＷＯ２０１３０８６５２６（米国特許出願公開第２０１４０３５６４１６号も参照のこと）に記載されているように、リポソーム中に製剤化する。ポリヌクレオチドは、国際特許公開番号ＷＯ２０１３０８６５２６に記載されているような逆ｐＨ勾配及び／または最適化された内部緩衝液組成物を使用してリポソーム中に封入してもよい。
【０８２８】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチド医薬組成物は、リポソーム、例えば、限定するものではないが、ＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｏｔｈｅｌｌ、ＷＡ）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｏｔｈｅｌｌ、ＷＡ）、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００６  ５（１２）１７０８−１７１３））及びヒアルロナンコーティングリポソーム（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｓｒａｅｌ）中に製剤化される。
【０８２９】
１つの実施形態において、カチオン性脂質は、米国特許出願公開第２０１３００９０３７２号に記載されているものなどの低分子量カチオン性脂質である。別の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、官能化脂質二分子膜の間に架橋を有し得る脂質小胞中に製剤化される。
【０８３０】
他の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、カチオン性脂質を含むリポソーム中に処方される。リポソームは、国際公開番号ＷＯ２０１３００６８２５に記載されているように、ポリヌクレオチド中のリン酸塩に対するカチオン性脂質中の窒素原子のモル比（Ｎ：Ｐ比）が１：１〜２０：１であり得る。別の実施形態では、リポソームは、２０：１より大きいかまたは１：１より小さいＮ：Ｐ比を有し得る。
【０８３１】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、脂質−ポリカチオン複合体中に製剤化される。脂質−ポリカチオン複合体の形成は、当技術分野において既知である方法によって、及び／または米国特許出願公開大２０１２０１７８７０２号に記載されているような方法によって達成され得る。非限定的な例として、ポリカチオンは、限定するものではないが、ポリリジン、ポリオルニチン及び／またはポリアルギニンのようなカチオン性ペプチドまたはポリペプチド、ならびに国際公開番号ＷＯ２０１２０１３３２６号または米国特許出願公開第２０１３０１４２８１８号に記載のカチオン性ペプチドを含む。別の実施形態では、ポリヌクレオチドは、限定するものではないが、コレステロールまたはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）のような非カチオン性脂質をさらに含み得る、脂質−ポリカチオン複合体中に製剤化される。
【０８３２】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、アミノアルコールリピドイド中に製剤化する。本開示で用いられ得るアミノアルコールリピドイドは、米国特許第８，４５０，２９８号に記載された方法によって調製してもよい。
【０８３３】
リポソーム製剤は、限定するものではないが、イオン性脂質成分の選択、イオン性脂質飽和の程度、ＰＥＧ化の性質、全ての成分の比、及びサイズなどの生物物理学的パラメーターの影響を受ける場合がある。Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｓｅｍｐｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０  ２８：１７２−１７６）による一例では、リポソーム製剤は、５７．１％のイオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロール及び１．４％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡから構成されていた。別の例として、イオン性脂質の組成を変えることにより、ｓｉＲＮＡを様々な抗原提示細胞により効果的に送達することができた（Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １９：２１８６−２２００）。いくつかの実施形態において、リポソーム製剤は、約３５％〜約４５％のイオン性脂質、約４０％〜約５０％のイオン性脂質、約５０％〜約６０％のイオン性脂質及び／または約５５％〜約６５％脂質を含む。いくつかの実施形態においては、リポソーム中の脂質対ｍＲＮＡの比は、約５：１〜約２０：１、約１０：１〜約２５：１、約１５：１〜約３０：１及び／または少なくとも３０：１である。
【０８３４】
いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤中のＰＥＧの比は、増大もしくは減少するか、及び／またはＰＥＧ脂質の炭素鎖長がＣ１４からＣ１８に変更されて、ＬＮＰ製剤の薬物動態学及び／または生体内分布が変化する。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、約０．５％〜約３．０％、約１．０％〜約３．５％、約１．５％〜約４．０％、約２．０％〜約４．５％、約２．５％〜約５．０％及び／または約３．０％〜約６．０％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ（Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン）（本明細書ではＰＥＧ−ＤＯＭＧとも呼ばれる）を、イオン性脂質、ＤＳＰＣ及びコレステロールと比較して含む。別の実施形態において、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧは、ＰＥＧ脂質、例えば、限定するものではないが、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＭＧ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール）及び／またはＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）で置き換えられてもよい。イオン性脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００及びＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡのような当該分野で公知の任意の脂質から選択されてもよい。
【０８３５】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、国際公開番号ＷＯ２０１２１７０９３０（米国特許出願公開第２０１４０２９４９３８号も参照）に記載されているような脂質ナノ粒子中に製剤化される。
【０８３６】
別の実施形態では、ポリヌクレオチド（複数可）を含む製剤は、ポリヌクレオチド（複数可）を含む製剤は、少なくとも１つの脂質を含み得るナノ粒子である。この脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質及びアミノアルコール脂質から選択され得る。別の態様では、この脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ及びアミノアルコール脂質などのカチオン性脂質である。アミノアルコールカチオン性脂質は、米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号に記載されている脂質であってもよいし、及び／または記載されている方法によって作製されてもよい。非限定的な例として、カチオン性脂質は、２−アミノ−３−［（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ、２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５中の化合物１）；２−アミノ−３−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号の化合物２）；２−アミノ−３−［（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−［（オクチルオキシ）メチル］プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号の化合物３）；及び２−（ジメチルアミノ）−３−［（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号の化合物４）；またはその任意の医薬として許容される塩もしくは立体異性体であり得る。
【０８３７】
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。特に、本出願は、以下を含む医薬組成物を提供する：
（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド；または、
（ｉｉ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、もしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド；または、
（ｉｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド；または
（ｉｖ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド；または、
（ｖ）ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドもしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド；または
（ｖｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、もしくはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド；
ならびに、
（ｂ）送達剤。
【０８３８】
いくつかの実施形態においては、送達剤は、式（Ｉ）を有する化合物であって、
【化９】
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式中、
Ｒ１は、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１〜６アルキルからなる群より選択され、ここでＱは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、及び各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｒ８は、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物、
あるいはそれらの塩または立体異性体を含む。
【０８３９】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５−２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され；
Ｒ２及びＲ３が独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群より独立して選択され、ここでＱは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、
化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられ、ここでアルキル及びアルケニル基は、直鎖であっても、または分枝されていてもよい。
【０８４０】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）ｎが１、２、３、４もしくは５である場合、Ｑが−Ｎ（Ｒ）２ではないか、または（ｉｉ）ｎが１または２である場合、Ｑが、５員、６員もしくは７員のヘテロシクロアルキルではない、化合物のサブセットが挙げられる。  
【０８４１】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され；
Ｒ２及びＲ３が独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロシクロアルキルから選択され、これは、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１〜３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｒ８は、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４２】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロシクロアルキルから選択され、これは、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１〜３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されており、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４３】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１〜６アルキルからなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員の複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、かつ各々のｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され；かつＱが５員〜１４員の複素環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎが１もしくは２であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ｎが１であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２である場合、Ｑは、５員〜１４員のヘテロアリールまたは８〜１４員のヘテロシクロアルキルであり；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｒ８は、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４４】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択され、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群より選択され、ここでＱは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員の複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；かつＱが５員〜１４員の複素環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでｎが１もしくは２であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでｎが１であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２であるならば、Ｑは５員〜１４員のヘテロアリールまたは８〜１４員のヘテロシクロアルキルのいずれかであり；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より独立して選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４５】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１〜６アルキルからなる群より選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、かつ各々のｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｒ８は、Ｃ３〜６炭素環及び複素環からなる群より選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群より独立して選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４６】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４が、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１〜６アルキルからなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より独立して選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４７】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ２〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より独立して選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ１〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４８】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ２〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ１〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物の別のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８４９】
さらに他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜３０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択され、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及びＣＱ（Ｒ）２からなる群より選択され、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ１〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８５０】
さらに他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットとしては、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＲ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択され；
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し；
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及びＣＱ（Ｒ）２からなる群より選択され、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、１、２、３、４、及び５から選択され；
各々のＲ５は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；
Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲは、独立して、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ’は、独立して、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群より選択され；
各々のＲ”は、独立して、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択され；
各々のＲ＊は、独立して、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ１〜１２アルケニルからなる群より選択され；
各々のＹは、独立して、Ｃ３〜６炭素環であり；
各々のＸは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群より選択され；かつ
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、化合物のサブセット、
あるいはそれらの塩または立体異性体が挙げられる。
【０８５１】
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、
式（ＩＡ）：
【化１０】
2019519517.tif 000089
の化合物、またはその塩もしくは立体異性体が挙げられ、ここでｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され；Ｍ１は結合であるか、またはＭ’であり；Ｒ４は、非置換のＣ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり；Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；かつＲ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【０８５２】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、式（ＩＡ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体が挙げられ、
式中
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され；
Ｍ１は結合であるか、またはＭ’であり；
Ｒ４は、非置換のＣ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；かつ
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【０８５３】
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、式（ＩＩ）の化合物：
【化１１】
2019519517.tif 000090
またはその塩もしくは立体異性体が挙げられ、式中ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；Ｍ１は結合であるか、またはＭ’であり；Ｒ４は、非置換のＣ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでｎは、２、３、または４であり、かつＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり；Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；かつ
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【０８５４】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物のサブセットとしては、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体が挙げられ、式中
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；
Ｍ１は結合であるか、またはＭ’であり；
Ｒ４は、非置換のＣ１〜３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでｎは、２、３、または４であり、かつＱは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり；
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され；かつ
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、及びＣ２〜１４アルケニルからなる群より選択される。
【０８５５】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）の化合物、
【化１２】
2019519517.tif 000091
またはその塩であり、式中Ｒ４は、上記のとおりである。
【０８５６】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）の化合物、
【化１３】
2019519517.tif 000092
またはその塩であり、式中Ｒ４は上記のとおりである。
【０８５７】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）の化合物、
【化１４】
2019519517.tif 000093
またはその塩であり、式中Ｒ４は上記のとおりである。
【０８５８】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｅ）の化合物：
【化１５】
2019519517.tif 000094
またはその塩であり、式中Ｒ４は上記のとおりである。
【０８５９】
いくつかの実施形態においては、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、または（ＩＩｅ）の化合物は、Ｒ４を含み、これは、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、ここでＱ、Ｒ及びｎは上記で規定されるとおりである。
【０８６０】
いくつかの実施形態においては、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群より選択され、式中Ｒは上記で規定されるとおりである。いくつかの態様では、ｎは、１または２である。いくつかの実施形態においては、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
【０８６１】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｄ）の化合物、
【化１６】
2019519517.tif 000095
またはその塩であり、式中Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群より選択され、ｎは、２、３、及び４から選択され、かつＲ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍは、上記で規定されるとおりである。
【０８６２】
式（ＩＩｄ）の化合物のいくつかの態様では、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。式（ＩＩｄ）の化合物のいくつかの態様では、Ｒ３は、Ｃ５〜Ｃ９アルキルである。式（ＩＩｄ）の化合物のいくつかの態様では、ｍは、５、７、または９である。式（ＩＩｄ）の化合物のいくつかの態様では、各々のＲ５は、Ｈである。式（ＩＩｄ）の化合物のいくつかの態様では、各々のＲ６は、Ｈである。
【０８６３】
別の態様では、本出願は、脂質組成物（例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ））を提供し、これは：（１）式（Ｉ）を有する化合物；（２）任意選択でヘルパー脂質（例えば、リン脂質）；（３）任意選択で構造脂質（例えば、ステロール）；（４）任意選択で脂質コンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−脂質）；及び（５）任意選択で四級アミン化合物を含む。例示的な実施形態では、脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）はさらに、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらの組合せ、例えば、ポリヌクレオチドまたはその中に封入されたポリヌクレオチドを含む。
【０８６４】
１つの特定の実施形態では、この脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）は、さらにＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む。別の特定の実施形態では、この脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）は、さらにＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む。
【０８６５】
本明細書において用いる場合、「アルキル」または「アルキル基」という用語は、直鎖または分枝した、飽和された炭化水素であって、１つ以上の炭素原子（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上の炭素原子）を含む炭化水素を意味する。
【０８６６】
「Ｃ１〜１４アルキル」という表記は、直鎖または分枝した、飽和された炭化水素であって、１〜１４個の炭素原子を含む炭化水素を意味する。アルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。
【０８６７】
本明細書において用いる場合、「アルケニル」または「アルケニル基」という用語は、直鎖または分枝した炭化水素であって、２つ以上の炭素原子（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上の炭素原子）及び少なくとも１つの二重結合を含む炭化水素を意味する。
【０８６８】
「Ｃ２〜１４アルケニル」という表記は、直鎖または分枝した炭化水素であって、２〜１４個の炭素原子及び少なくとも１つの二重結合を含む炭化水素を意味する。アルケニル基は、１つ、２つ、３つ、４つ以上の二重結合を含んでもよい。例えば、Ｃ１８アルケニルは、１つ以上の二重結合を含んでもよい。２つの二重結合を含むＣ１８アルケニル基は、リノレイル基であってもよい。アルケニル基は任意選択で置換されていてもよい。
【０８６９】
本明細書において用いる場合、「炭素環」または「炭素環式基」（という用語は、炭素原子の１つ以上の環を含む単環式または多環式の系を意味する。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５員の環であってもよい。
【０８７０】
表記「Ｃ３〜６炭素環」とは、３〜６個の炭素原子を有する単一の環を含む炭素環を意味する。炭素環は、１つ以上の二重結合及びを含んでもよく、芳香族（例えば、アリール基）であってもよい。炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、ナフチル、及び１，２−ジヒドロナフチル基が挙げられる。炭素環は、任意選択で置換されていてもよい。
【０８７１】
本明細書において用いる場合、「複素環」または「複素環式基」という用語は、１つ以上の環を含む、単環式または多環式の系であって、少なくとも１つの環が、少なくとも１つのヘテロ原子を含む系を意味する。ヘテロ原子は、例えば、窒素、酸素、または硫黄原子であってもよい。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２員の環であってもよい。複素環は、１つ以上の二重結合を含んでもよく、かつ芳香族（例えば、ヘテロアリール基）であってもよい。複素環の例としては、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、チアゾリル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリジニル，イソチアゾリル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フリル、テトラヒドロフリル、チオフェニル、ピリジニル、ピペリジニル、キノリル、及びイソキノリル基が挙げられる。複素環は、任意選択で置換されていてもよい。
【０８７２】
本明細書において用いる場合、「生分解性の基」とは、対象における脂質のより速い代謝を促進し得る基である。生分解性の基とは、限定するものではないが、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基であってもよい。
【０８７３】
本明細書において用いる場合、「アリール基」とは、１つ以上の芳香族環を含むカルボサイクリック族である。アリール基の例としては、フェニル及びナフチル基が挙げられる。
【０８７４】
本明細書において用いる場合、「ヘテロアリール基」とは、１つ以上の芳香族環を有する複素環式基である。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、及びチアゾリルが挙げられる。アリール及びヘテロアリール基は両方とも、任意選択で置換されていてもよい。例えば、Ｍ及びＭ’は、任意選択で置換されているフェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる非限定的な基から選択され得る。本明細書における式では、Ｍ及びＭ’は、独立して、上記の生分解性の基の列挙から選択され得る。
【０８７５】
アルキル、アルケニル、及びシクリル（例えば、カルボシクリル及びヘテロシクリル）基は、別段特定しない限り、任意選択で置換されてもよい。任意の置換基は、限定するものではないが、ハロゲン原子（例えば、塩化物、臭化物、フッ化物、またはヨウ化物基）、カルボン酸（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、アルコール（例えば、ヒドロキシル、−ＯＨ）、エステル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＲまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アルデヒド（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｈ）、カルボニル（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、代わりにＣ＝Ｏと示される）、ハロゲン化アシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｘ、Ｘは、臭化物、フッ化物、塩化物、ヨウ化物から選択されるハロゲン化物である）、炭酸塩（例えば、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ）、アルコキシ（例えば、−ＯＲ）、アセタール（例えば、−Ｃ（ＯＲ）２Ｒ”、ここで各々のＯＲは、同じであってもまたは異なってもよいアルコキシ基であり、かつＲ”は、アルキルまたはアルケニル基である）、リン酸塩（例えば、Ｐ（Ｏ）４３−）、チオール（例えば、−ＳＨ）、スルホキシド（例えば、−Ｓ（Ｏ）Ｒ）、スルフィン酸（例えば、−Ｓ（Ｏ）ＯＨ）、スルホン酸（例えば、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ）、チアール（例えば、−Ｃ（Ｓ）Ｈ）、硫酸塩（例えば、Ｓ（Ｏ）４２−）、スルホニル（例えば、−Ｓ（Ｏ）２−）、アミド（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、または−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ）、アジド（例えば、−Ｎ３）、ニトロ（例えば、−ＮＯ２）、シアノ（例えば、−ＣＮ）、イソシアノ（例えば、−ＮＣ）、アシルオキシ（例えば、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アミノ（例えば、−ＮＲ２、−ＮＲＨ、または−ＮＨ２）、カルバモイル（例えば、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＨ、または−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２）、スルホンアミド（例えば、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＨ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ、または−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ）、アルキル基、アルケニル基、及びシクリル（例えば、カルボシクリルまたはヘテロシクリル）基からなる群より選択され得る。
【０８７６】
前述のいずれにおいても、Ｒは、本明細書において規定されたような、アルキルまたはアルケニル基である。いくつかの実施形態においては、置換基自体が、さらに、例えば、本明細書に規定されるような、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの置換基で置換されてもよい。例えば、Ｃ１〜６アルキル基はさらに、本明細書に記載されるような、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの置換基で置換されてもよい。
【０８７７】
式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、及び（ＩＩｅ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つ以上を含む。
【０８７８】
いくつかの実施形態においては、Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及びＣＱ（Ｒ）２からなる群より選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員の芳香族または非芳香族複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及びＣ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択される。
【０８７９】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−ＣＨ２）ｎＱ、−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群より選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロシクロアルキルから選択され、これは、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１〜３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されており、かつ、各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
【０８８０】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−ＣＨ２）ｎＱ、−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及びＣＱ（Ｒ）２からなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員の複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され；そしてＱが５員〜１４員の複素環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎが１または２であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が、−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでｎが１であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２であるならば、Ｑは、５員〜１４員のヘテロアリールまたは８〜１４員のヘテロシクロアルキルである。
【０８８１】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群より独立して選択され、ここでＱは、Ｃ３〜６炭素環、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、かつ各々のｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
【０８８２】
別の実施形態では、Ｒ４は、非置換のＣ１〜４アルキル、例えば、非置換のメチルである。
【０８８３】
特定の実施形態では、本開示によって、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、式中Ｒ４は、−ＣＨ２）ｎＱまたは−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、３、４、及び５から選択される。
【０８８４】
特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中Ｒ４は、−ＣＨ２）ｎＱ、−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及びＣＱ（Ｒ）２からなる群より独立して選択され、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２、及びｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。
【０８８５】
特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、かつＲ４は、−ＣＨ２）ｎＱまたは−ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここでＱは、−Ｎ（Ｒ）２であり、かつｎは、３、４、及び５から選択される。
【０８８６】
特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群より選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成する。
【０８８７】
いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルキル及びＣ５〜２０アルケニルからなる群より独立して選択される。
【０８８８】
他の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群より独立して選択される。
【０８８９】
特定の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ”及び−ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態においては、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態においては、Ｒ＊は、Ｃ８アルキルまたはＣ８アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３〜１２アルキルである。例えば、Ｒ”は、Ｃ３アルキルであってもよい。例えば、Ｒ”は、Ｃ４〜８アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、またはＣ８アルキル）であってもよい。
【０８９０】
いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ９アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルキルである。
【０８９１】
いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルケニルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ１は、リノレイルである。
【０８９２】
特定の実施形態では、Ｒ１は分枝されている（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）。特定の実施形態では、Ｒ１は、
【化１７】
2019519517.tif 000096
である。
【０８９３】
特定の実施形態では、Ｒ１は、非置換のＣ５〜２０アルキルまたはＣ５−２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されているＣ５〜２０アルキルまたはＣ５〜２０アルケニル（例えば、１−シクロプロピルノニルのようなＣ３〜６炭素環で置換されている）である。
【０８９４】
他の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ”Ｍ’Ｒ’である。
【０８９５】
いくつかの実施形態においては、Ｒ’は、−Ｒ＊ＹＲ”及び−ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態においては、Ｙは、Ｃ３〜８シクロアルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｙは、Ｃ６〜１０アリールである。いくつかの実施形態においては、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態においては、Ｙは、シクロヘキシル基である。特定の実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ１アルキルである。
【０８９６】
いくつかの実施形態においては、Ｒ”は、Ｃ３〜１２アルキル及びＣ３〜１２アルケニルからなる群より選択される。いくつかの実施形態においては、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ４〜９アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８またはＣ９アルキル）である。
【０８９７】
いくつかの実施形態においては、Ｒ’は、Ｃ４アルキル及びＣ４アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ５アルキル及びＣ５アルケニルから選択される。いくつかの実施形態においては、Ｒ’は、Ｃ６アルキル及びＣ６アルケニルから選択される。いくつかの実施形態においては、Ｒ’は、Ｃ７アルキル及びＣ７アルケニルから選択される。いくつかの実施形態においては、Ｒ’は、Ｃ９アルキル及びＣ９アルケニルから選択される。
【０８９８】
他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１１アルキル及びＣ１１アルケニルから選択される。他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’は分枝されている（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イルまたはヘプタデカ−９−イル）。特定の実施形態では、Ｒ’は、
【化１８】
2019519517.tif 000097
である。
【０８９９】
特定の実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ１〜１８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されているＣ１〜１８アルキル（例えば、１−シクロプロピルノニルのようなＣ３〜６炭素環で置換されているＣ１〜１５アルキル）。
【０９００】
いくつかの実施形態においては、Ｒ”は、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群より選択される。いくつかの実施形態においては、Ｒ”は、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ”は、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、またはＣ１４アルキルである。
【０９０１】
いくつかの実施形態においては、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態においては、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−である。
【０９０２】
他の実施形態では、Ｍ’は、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群より選択されてもよい。
【０９０３】
いくつかの実施形態においては、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態においては、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態においては、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−である。いくつかの実施形態においては、Ｍは、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−である。
【０９０４】
他の実施形態では、Ｍは、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群より選択され得る。
【０９０５】
いくつかの実施形態においては、Ｍは、Ｍ’と同じである。他の実施形態では、Ｍは、Ｍ’とは異なる。
【０９０６】
いくつかの実施形態においては、各々のＲ５は、Ｈである。特定のこのような実施形態では、各々のＲ６はまたＨでもある。
【０９０７】
いくつかの実施形態においては、Ｒ７は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはｉ−プロピル）である。
【０９０８】
いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５−１４アルキルまたはＣ５〜１４アルケニルである。
【０９０９】
いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は同じである。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ４アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ７アルキルである。
【０９１０】
他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、異なる。特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態においては、Ｒ３は、Ｃ１〜７（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、またはＣ７アルキル）またはＣ９アルキルである。
【０９１１】
いくつかの実施形態においては、Ｒ７及びＲ３は、Ｈである。
【０９１２】
特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
【０９１３】
いくつかの実施形態においては、ｍは、５、７、または９である。
【０９１４】
いくつかの実施形態においては、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ  及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
【０９１５】
いくつかの実施形態においては、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、炭素環、及び複素環からなる群より選択される。
【０９１６】
特定の実施形態では、Ｑは、−ＯＨである。
【０９１７】
特定の実施形態では、Ｑは、置換されるか、または非置換の５員〜１０員のヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２−アミノ−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン−９−イル（またはグアニン−９−イル）、アデニン−９−イル、シトシン−１−イル、またはウラシル−１−イルである。特定の実施形態では、Ｑは、置換された５員〜１４員のヘテロシクロアルキル、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１〜３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されている。例えば、Ｑは、４−メチルピペラジニル、４−（４−メトキシベンジル）ピペラジニル、またはイソインドリン−２−イル−１，３−ジオンである。
【０９１８】
特定の実施形態では、Ｑは、非置換のまたは非置換のＣ６〜１０アリール（例えば、フェニル）またはＣ３〜６シクロアルキルである。
【０９１９】
いくつかの実施形態においては、ｎは１である。他の実施形態では、ｎは２である。さらなる実施形態では、ｎは、３である。特定の他の実施形態では、ｎは、４である。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）２ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）３ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は−（ＣＨ２）４ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は、ベンジルであってもよい。例えば、Ｒ４は、４−メトキシベンジルであってもよい。
【０９２０】
いくつかの実施形態においては、Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環である。いくつかの実施形態においては、Ｒ４は、Ｃ３〜６シクロアルキルである。例えば、Ｒ４は、例えば、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、などで任意選択で置換されているシクロヘキシルであってもよい。例えば、Ｒ４は、２−ヒドロキシシクロヘキシルであってもよい。
【０９２１】
いくつかの実施形態においては、Ｒは、Ｈである。
【０９２２】
いくつかの実施形態においては、Ｒは、非置換のＣ１〜３アルキルまたは非置換のＣ２〜３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３であってもよい。
【０９２３】
いくつかの実施形態においては、Ｒは、非置換のＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ２ＯＨである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨであってもよい。
【０９２４】
いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員〜１４員の芳香族または非芳香族複素環を形成する。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、任意選択で置換されているＣ３〜２０炭素環（例えば、Ｃ３〜１８炭素環、Ｃ３〜１５炭素環、Ｃ３〜１２炭素環、またはＣ３〜１０炭素環）、芳香族または非芳香族のいずれかを形成する。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、Ｃ３〜６炭素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、Ｃ６炭素環、例えば、シクロヘキシルまたはフェニル基を形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ３〜６炭素環は、１つ以上のアルキル基で置換される（例えば、同じ環の原子で、または隣接するかまたは隣接していない環原子）である。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、１つ以上のＣ５アルキル置換基を保有するシクロヘキシルまたはフェニル基を形成し得る。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３によって形成された複素環またはＣ３〜６炭素環は、炭素環基で置換される。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはフェニル基（シクロヘキシルで置換されている）を形成し得る。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、Ｃ７〜１５炭素環、例えば、シクロヘプチル、シクロペンタデカニル、またはナフチル基を形成する。
【０９２５】
いくつかの実施形態においては、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。いくつかの実施形態においては、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群より選択される。他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群より選択される。
【０９２６】
いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、Ｃ３〜６炭素環、例えば、フェニル基を形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ３〜６炭素環は、１つ以上のアルキル基で置換されている（例えば、同じ還原子でまたは隣接もしくは隣接していない環原子で）。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、１つ以上のＣ５アルキル置換基を保有するフェニル基を形成し得る。
【０９２７】
いくつかの実施形態においては、本開示の医薬組成物である、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群より選択される：
【化１９】
2019519517.tif 000098
【化２０】
2019519517.tif 000099
【化２１】
2019519517.tif 000100
【化２２】
2019519517.tif 000101
【化２３】
2019519517.tif 000102
【化２４】
2019519517.tif 000103
【化２５】
2019519517.tif 000104
【化２６】
2019519517.tif 000105
【化２７】
2019519517.tif 000106
【化２８】
2019519517.tif 000107
【化２９】
2019519517.tif 000108
【化３０】
2019519517.tif 000109
【化３１】
2019519517.tif 000110
【化３２】
2019519517.tif 000111
【化３３】
2019519517.tif 000112
【化３４】
2019519517.tif 000113
【化３５】
2019519517.tif 000114
【化３６】
2019519517.tif 000115
【化３７】
2019519517.tif 000116
【化３８】
2019519517.tif 000117
【化３９】
2019519517.tif 000118
【化４０】
2019519517.tif 000119
【化４１】
2019519517.tif 000120
【化４２】
2019519517.tif 000121
【化４３】
2019519517.tif 000122
【化４４】
2019519517.tif 000123
【化４５】
2019519517.tif 000124
【化４６】
2019519517.tif 000125
【化４７】
2019519517.tif 000126
【化４８】
2019519517.tif 000127
【化４９】
2019519517.tif 000128
【化５０】
2019519517.tif 000129
及びその塩または立体異性体。
【０９２８】
他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、化合物１〜化合物１４７、またはその塩もしくは立体異性体からなる群より選択される。
【０９２９】
本明細書において開示される脂質化合物のアミン部分は、特定の条件下でプロトン化されてもよい。例えば、式（Ｉ）による脂質の中央のアミン部分は、通常は、アミノ部分のｐＫａより下のｐＨでプロトン化され（すなわち、正に荷電されている）、ｐＫａを超えるｐＨでは実質的に荷電されていない。このような脂質は、イオン性アミノ脂質と呼ばれる場合もある。いくつかの実施形態においては、イオン性脂質は、イオン性アミノ脂質であり、当該分野では、「イオン性カチオン性脂質」と呼ばれる場合もある。
【０９３０】
いくつかの実施形態においては、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物の量は、脂質組成物中で約１モル％〜９９モル％の範囲である。
【０９３１】
１つの実施形態において、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物の量は、脂質組成物中で、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９モル％である。
【０９３２】
１つの実施形態において、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物の量は、脂質組成物中で、約３０モル％〜約７０モル％、約３５モル％〜約６５モル％、約４０モル％〜約６０モル％、及び約４５モル％〜約５５モル％の範囲である。
【０９３３】
１つの特定の実施形態では、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物の量は、脂質組成物中で、約５０モル％である。
【０９３４】
イオン性アミノ脂質、例えば、式Ｉの化合物に加えて、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、追加の成分、例えば、リン脂質、構造脂質、四級アミン化合物、ＰＥＧ−脂質、及びそれらのいずれかの組合せを含んでもよい。
【０９３５】
脂質組成物の追加の成分
Ａ．リン脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上のリン脂質、例えば、１つ以上の飽和リン脂質もしくは（ポリ）不飽和リン脂質またはそれらの組合せを含んでもよい。一般的には、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。例えば、リン脂質は、式（ＶＩＩ）による脂質であってもよく：
【化５１】
2019519517.tif 000130
ここで、Ｒｐは、リン脂質部分であり、かつＲ１及びＲ２は、同じであってもまたは異なってもよい、不飽和を有する、または有さない脂肪酸部分である。
【０９３６】
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群より選択され得る。
【０９３７】
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
【０９３８】
特定のリン脂質は、膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜の１つ以上の負に荷電されたリン脂質と相互作用し得る（例えば、細胞膜、細胞内膜）。膜に対するリン脂質の融合によって、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１つ以上の要素（例えば、治療剤）が、膜を通過することを可能にし、例えば１つ以上の要素の標的組織（例えば、腫瘍組織）への送達が可能になり得る。
【０９３９】
分枝、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然種を含む非天然リン脂質種もまた意図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置換されているアルケニル基）で官能化されていてもよいし、または架橋されていてもよい。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドに暴露されると銅触媒付加環化を受ける場合がある。このような反応は、ナノ粒子組成物の脂質二分子膜を官能化して膜透過もしくは細胞認識を促進するか、またはナノ粒子組成物を標的化もしくは画像化部分（例えば、色素）などの有用成分に結合させるのに有用であり得る。
【０９４０】
リン脂質としては、限定するものではないが、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸が挙げられる。また、リン脂質としては、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される腫瘍内送達のための医薬組成物は、２つ以上のリン脂質を含んでもよい。２つ以上のリン脂質が使用される場合、そのようなリン脂質は、同じリン脂質クラス（例えば、ＭＳＰＣ及びＤＳＰＣ）または異なるクラス（例えば、ＭＳＰＣ及びＭＳＰＥ）に属する場合がある。
【０９４１】
リン脂質は、対称型であっても非対称型であってもよい。本明細書中で使用される場合、「対称リン脂質」という用語は、スフィンゴシン主鎖の可変脂肪酸部分及び炭化水素鎖が、匹敵する数の炭素原子を含む、適合する脂肪酸部分及びスフィンゴ脂質を有するグリセロリン脂質を包含する。本明細書中で使用される場合、「非対称リン脂質」という用語は、リゾ脂質、異なる脂肪酸部分（例えば、炭素原子数及び／または不飽和（例えば、二重結合）の数が異なる脂肪酸部分）を有するグリセロリン脂質、ならびに可変脂肪酸部分及びスフィンゴシン主鎖の炭化水素鎖は、異なる数の炭素原子を含む（例えば、可変脂肪酸部分は、炭化水素鎖よりも少なくとも２個多い炭素原子または炭化水素鎖より少なくとも２個少ない炭素原子を含む）スフィンゴ脂質を包含する。
【０９４２】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、少なくとも１つの対称リン脂質を含む。対称リン脂質は、以下からなる非限定的な群から選択され得る、
１，２−ジプロピオニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０３：０  ＰＣ）、
１，２−ジブチリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０４：０  ＰＣ）、
１，２−ジペンタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０５：０  ＰＣ）、
１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０６：０  ＰＣ）、
１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０７：０  ＰＣ）、
１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０８：０  ＰＣ）、
１，２−ジノナノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０９：０  ＰＣ）、
１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１０：０  ＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１１：０  ＰＣ，ＤＵＰＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１２：０  ＰＣ）、
１，２−ジトリデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１３：０  ＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０  ＰＣ，ＤＭＰＣ）、
１，２−ジペンタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１５：０  ＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０  ＰＣ，ＤＰＰＣ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（４ＭＥ  １６：０  ＰＣ）、
１，２−ジヘプタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１７：０  ＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ＰＣ，ＤＳＰＣ）、
１，２−ジノナデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１９：０  ＰＣ）、
１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２０：０  ＰＣ）、
１，２−ジヘナラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２１：０  ＰＣ）、
１，２−ジベヘノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：０  ＰＣ）、
１，２−ジトリコサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２３：０  ＰＣ）、
１，２−ジリグノセロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２４：０  ＰＣ）、
１，２−ジミリストオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：１（Δ９−Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジミリステライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：１（Δ９−Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、
１，２−ジパルミトオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：１（Δ９−Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジパルミテライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：１（Δ９−Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、
１，２−ジペントロセレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１（Δ６−Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１（Δ９−Ｃｉｓ）ＰＣ，ＤＯＰＣ）、
１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１（Δ９−Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、
１，２−ジリノオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：２（Ｃｉｓ）ＰＣ，ＤＬＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：３（Ｃｉｓ）ＰＣ，ＤＬｎＰＣ）、
１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２０：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２０：４（Ｃｉｓ）ＰＣ，ＤＡＰＣ）、
１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：６（Ｃｉｓ）ＰＣ，ＤＨＡＰＣ）、
１，２−ジネルボノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２４：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、
１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（０６：０  ＰＥ）、
１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（０８：０  ＰＥ）、
１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１０：０  ＰＥ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１２：０  ＰＥ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１４：０  ＰＥ）、
１，２−ジペンタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１５：０  ＰＥ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０  ＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（４ＭＥ  １６：０  ＰＥ）、
１，２−ジヘプタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１７：０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０  ＰＥ，ＤＳＰＥ）、
１，２−ジパルミトレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：１  ＰＥ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９−Ｃｉｓ）ＰＥ，ＤＯＰＥ）、
１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９−Ｔｒａｎｓ）ＰＥ）、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：２  ＰＥ，ＤＬＰＥ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：３  ＰＥ，ＤＬｎＰＥ）、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２０：４  ＰＥ，ＤＡＰＥ）、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２２：６  ＰＥ，ＤＨＡＰＥ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテル  ＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及び
それらのいずれかの組合せ。
【０９４３】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＵＰＣ、１８：０  Ｄｉｅｔｈｅｒ  ＰＣ、ＤＬｎＰＣ、ＤＡＰＣ、ＤＨＡＰＣ、ＤＯＰＥ、４ＭＥ  １６：０  ＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＬｎＰＥ、ＤＡＰＥ、ＤＨＡＰＥ、ＤＯＰＧ、及びそれらのいずれかの組合せからなる非限定的な群から選択される少なくとも１つの対称性リン脂質を含む。
【０９４４】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、少なくとも１つの非対称性のリン脂質を含む。非対称性のリン脂質は、以下からなる非限定的な群より選択され得る、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０−１６：０  ＰＣ，ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０−１８：０  ＰＣ，ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−０２：０  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−１４：０  ＰＣ，ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−１８：０  ＰＣ，ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−１８：１  ＰＣ，ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−１８：２  ＰＣ，ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０−２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０−２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−１４：０  ＰＣ，ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−１６：０  ＰＣ，ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−１８：１  ＰＣ，ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０−２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１−１４：０  ＰＣ，ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１−１６：０  ＰＣ，ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１−１８：０  ＰＣ，ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０−１８：１  ＰＥ，ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０−１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０−２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０−２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０−１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０−１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０−２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０−２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミサクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、及びそれらのいずれかの組合せ。
【０９４５】
脂質組成物中で有用な非対称性の脂質はまた、リゾ脂質であってもよい。リゾ脂質は、以下からなる非限定的な例から選択され得る、
１−ヘキサノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０６：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ヘプタノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０７：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−オクタノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０８：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ノナノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（０９：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−デカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１０：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ウンデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１１：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ラウロイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１２：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−トリデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１３：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ペンタデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１５：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ヘプタデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１７：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ノナデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１９：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−アラキドイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２０：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ベヘノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−リグノセロイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２４：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ヘキサコサノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２６：０  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１４：０  Ｌｙｓｏ  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０  Ｌｙｓｏ  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０  Ｌｙｓｏ  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：１  Ｌｙｓｏ  ＰＥ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、及びそれらのいずれかの組合せ。
【０９４６】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、ＭＰＰＣ、ＭＳＰＣ、ＰＭＰＣ、ＰＳＰＣ、ＳＭＰＣ、ＳＰＰＣ、及びそれらのいずれかの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの非対称性のリン脂質を含む。いくつかの実施形態においては、非対称性のリン脂質は、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）である。
【０９４７】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される脂質組成物は、１つ以上の対称性のリン脂質、１つ以上の非対称性のリン脂質、またはそれらの組合せを含んでもよい。多数のリン脂質が存在する場合、それらは、等モル比で存在しても、または非等モル比で存在してもよい。
【０９４８】
１つの実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、脂質組成物中で、約１モル％〜約２０モル％、約５モル％〜約２０モル％、約１０モル％〜約２０モル％、約１５モル％〜約２０モル％、約１モル％〜約１５モル％、約５モル％〜約１５モル％、約１０モル％〜約１５モル％、約５モル％〜約１０モル％の範囲であるリン脂質（例えば、ＭＳＰＣ）の総量を含む。１つの実施形態において、リン脂質の量は、脂質組成物中で約８モル％〜約１５モル％である。１つの実施形態において、リン脂質（例えば、ＭＳＰＣ）の量は、脂質組成物中で約１０モル％である。
【０９４９】
いくつかの態様では、特定のリン脂質（例えば、ＭＳＰＣ）の量は、脂質組成物中で、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０モル％である。
【０９５０】
Ｂ．四級アミン化合物
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）を含んでもよい。「四級アミン化合物」という用語は、１つ以上の四級アミン基（例えば、トリアルキルアミノ基）を有し、永続的に正電荷を有し、塩の形態で存在する化合物を含むために使用される。例えば、１つ以上の四級級アミン基は、脂質またはポリマー（例えば、ＰＥＧ）中に存在し得る。いくつかの実施形態においては、四級アミン化合物は、（１）四級アミン基、ならびに（２）（ｉ）直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和の炭化水素鎖、及び（ｉｉ）任意選択で四級アミン基と炭化水素鎖との間にエーテル、エステル、カルボニル、またはケタール結合を含む少なくとも１つの疎水性尾部基を含む。いくつかの実施形態においては、四級アミン基は、トリメチルアンモニウム基であってもよい。いくつかの実施形態においては、四級アミン化合物は、２つの同一の炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態においては、四級アミン化合物は、２つの異なる炭化水素鎖を含む。
【０９５１】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、少なくとも１つの四級アミン化合物を含む。四級アミン化合物は、以下からなる非限定的な群から選択され得る、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロライド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリストイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０−１８：１  ＥＰＣ）、
及びそれらのいずれかの組合せ。
【０９５２】
１つの実施形態において、四級アミン化合物は、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）である。
【０９５３】
四級アミン化合物、例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開番号第２０１３／０２４５１０７及び米国特許出願公開第２０１４／０３６３４９３号、米国特許番号第８，１５８，６０１号、及び国際公開番号ＷＯ２０１５／１２３２６４及びＷＯ２０１５／１４８２４７に記載される四級アミン化合物は、当該技術分野において既知である。
【０９５４】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、約０．０１モル％〜約２０モル％の範囲である。
【０９５５】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、約０．５モル％〜約２０モル％、約０．５モル％〜約１５モル％、約０．５モル％〜約１０モル％、約１モル％〜約２０モル％、約１モル％〜約１５モル％、約１モル％〜約１０モル％、約２モル％〜約２０モル％、約２モル％〜約１５モル％、約２モル％〜約１０モル％、約３モル％〜約２０モル％、約３モル％〜約１５モル％、約３モル％〜約１０モル％、約４モル％〜約２０モル％、約４モル％〜約１５モル％、約４モル％〜約１０モル％、約５モル％〜約２０モル％、約５モル％〜約１５モル％、約５モル％〜約１０モル％、約６モル％〜約２０モル％、約６モル％〜約１５モル％、約６モル％〜約１０モル％、約７モル％〜約２０モル％、約７モル％〜約１５モル％、約７モル％〜約１０モル％、約８モル％〜約２０モル％、約８モル％〜約１５モル％、約８モル％〜約１０モル％、約９モル％〜約２０モル％、約９モル％〜約１５モル％、約９モル％〜約１０モル％の範囲である。
【０９５６】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、約５モル％〜約１０モル％の範囲である。
【０９５７】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、約５モル％である。１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、約１０モル％である。
【０９５８】
いくつかの実施形態においては、四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）の量は、本明細書に開示される脂質組成物中で、少なくとも約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５または２０モル％である。
【０９５９】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、式（Ｉ）の化合物を含む。１つの実施形態において、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）対、四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡ）のモル比は、約１００：１〜約２．５：１である。１つの実施形態において、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）対、四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）のモル比は、約９０：１、約８０：１、約７０：１、約６０：１、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２０：１、約１５：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、または約２．５：１である。１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）対、四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）のモル比は、約１０：１である。
【０９６０】
いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、四級アミン化合物を含まない。いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、ＤＯＴＡＰを含まない。
【０９６１】
Ｃ、構造脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上の構造脂質を含んでもよい。本明細書において用いる場合、「構造脂質」とは、ステロールを指し、及びまた脂質含有ステロール部分を指す。いくつかの実施形態においては、構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール、及びそれらの混合物からなる群より独立して選択される。いくつかの実施形態においては、この構造脂質はコレステロールである。
【０９６２】
１つの実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物中の構造脂質（例えば、コレステロールのようなステロール）の量は、約２０モル％〜約６０モル％、約２５モル％〜約５５モル％、約３０モル％〜約５０モル％、または約３５モル％〜約４５モル％の範囲である。
【０９６３】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の構造脂質（例えば、コレステロールのようなステロール）の量は、約２５モル％〜約３０モル％、約３０モル％〜約３５モル％、または約３５モル％〜約４０モル％の範囲である。
【０９６４】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中の構造脂質（例えば、コレステロールのようなステロール）の量は、約２３．５モル％、約２８．５モル％、約３３．５モル％、または約３８．５モル％である。
【０９６５】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される脂質組成物中の構造脂質（例えば、コレステロールのようなステロール）の量は、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０モル％である。
【０９６６】
いくつかの態様では、開示される腫瘍内送達のための医薬組成物の脂質組成物の成分は、コレステロールを含まない。
【０９６７】
Ｄ．ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質を含んでもよい。
【０９６８】
本明細書において用いる場合、「ＰＥＧ−脂質」という用語は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質を指す。ＰＥＧ−脂質の非限定的な例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ−セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン及びＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミンが挙げられる。このような脂質はまた、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧであっても、ＰＥＧ−ＤＭＧであっても、ＰＥＧ−ＤＬＰＥであっても、ＰＥＧ−ＤＭＰＥであっても、ＰＥＧ−ＤＰＰＣであっても、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であってもよい。
【０９６９】
いくつかの実施形態においては、上記ＰＥＧ−脂質としては限定するものではないが、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、ＰＥＧ−ジパルメトレイル、ＰＥＧ−ジオレイル、ＰＥＧ−ジステアリル、ＰＥＧ−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ−ｌ，２−ジミリストイルオキシルプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ）が挙げられる。
【０９７０】
１つの実施形態において、上記ＰＥＧ−脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群より選択される。
【０９７１】
いくつかの実施形態においては、上記ＰＥＧ−脂質の脂質部分としては、約Ｃ１４〜約Ｃ２２、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ１６の長さを有するものが挙げられる。いくつかの実施形態においては、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ−ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００または２０，０００ダルトンというサイズを有する。１つの実施形態において、ＰＥＧ−脂質は、ＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧである。
【０９７２】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含んでもよい。非拡散性ＰＥＧ非限定的な例としては、ＰＥＧ−ＤＳＧ及びＰＥＧ−ＤＳＰＥが挙げられる。
【０９７３】
ＰＥＧ−脂質、例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開番号ＷＯ２０１５／１３０５８４に記載されるＰＥＧ−脂質は当該技術分野において既知である。
【０９７４】
１つの実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物中のＰＥＧ−脂質の量は、約０．１モル％〜約５モル％、約０．５モル％〜約５モル％、約１モル％〜約５モル％、約１．５モル％〜約５モル％、約２モル％〜約５モル％モル％、約０．１モル％〜約４モル％、約０．５モル％〜約４モル％、約１モル％〜約４モル％、約１．５モル％〜約４モル％、約２モル％〜約４モル％、約０．１モル％〜約３モル％、約０．５モル％〜約３モル％、約１モル％〜約３モル％、約１．５モル％〜約３モル％、約２モル％〜約３モル％、約０．１モル％〜約２モル％、約０．５モル％〜約２モル％、約１モル％〜約２モル％、約１．５モル％〜約２モル％、約０．１モル％〜約１．５モル％、約０．５モル％〜約１．５モル％、または約１モル％〜約１．５モル％の範囲である。
【０９７５】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中のＰＥＧ−脂質の量は、約１．５モル％である。
【０９７６】
１つの実施形態において、本明細書に開示される脂質組成物中のＰＥＧ−脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５モル％である。
【０９７７】
いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、ＰＥＧ−脂質を含まない。
【０９７８】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される脂質組成物は、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物、及び非対称性のリン脂質を含む。いくつかの実施形態においては、脂質組成物は、化合物１８及びＭＳＰＣを含む。
【０９７９】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される脂質組成物は、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物、及び四級アミン化合物を含む。いくつかの実施形態においては、この脂質組成物は、化合物１８及びＤＯＴＡＰを含む。
【０９８０】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される脂質組成物は、イオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）の化合物、非対称性のリン脂質、及び四級アミン化合物を含む。いくつかの実施形態においては、脂質組成物は、化合物１８、ＭＳＰＣ及びＤＯＴＡＰを含む。
【０９８１】
１つの実施形態において、上記脂質組成物は、約５０モル％の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、約１０モル％のＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ、約３３．５モル％のコレステロール、約１．５モル％のＰＥＧ−ＤＭＧ、及び約５モル％のＤＯＴＡＰを含む。１つの実施形態において、この脂質組成物は、約５０モル％の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、約１０モル％のＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ、約２８．５モル％のコレステロール、約１．５モル％のＰＥＧ−ＤＭＧ、及び約１０モル％のＤＯＴＡＰを含む。
【０９８２】
上記脂質ナノ粒子の成分は、望ましい転帰に基づいてポリヌクレオチドの最適な送達のために調整してもよい。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、４０〜６０モル％のイオン性アミノ脂質（例えば、式（Ｉ）の化合物）、８〜１６モル％のリン脂質、３０〜４５モル％のコレステロール、１〜５モル％のＰＥＧ脂質、及び任意選択で１〜１５モル％の四級アミン化合物を含んでもよい。
【０９８３】
いくつかの実施形態においては、上記脂質ナノ粒子は、４５〜６５モル％のイオン性アミノ脂質（例えば、式（Ｉ）の化合物）、５〜１０モル％リン脂質、２５〜４０モル％のコレステロール、０．５〜５モル％のＰＥＧ脂質、及び任意選択で１〜１５モル％の四級アミン化合物を含んでもよい。
【０９８４】
核酸脂質粒子の非限定的な例は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開番号第２０１４０１２１２６３号に開示される。
【０９８５】
Ｅ．他のイオン性アミノ酸脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、式（Ｉ）による脂質に加えて１つ以上のイオン性アミノ脂質を含んでもよい。
【０９８６】
イオン性脂質は、以下からなる非限定的な群から選択され得る、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル  ４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）、
２−（｛８−［（３β）−コレステ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレステ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレステ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））。これらに加えて、イオン性アミノ脂質はまた、環状アミン基を含む脂質であってもよい。
【０９８７】
イオン性脂質はまた、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、国際公開番号ＷＯ２０１５／１９９９５２（米国特許出願公開第２０１５０３７６１１５号も参照のこと）に開示される化合物も含んでもよい。例えば、イオン性アミノ脂質としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：
【化５２】
2019519517.tif 000131
【化５３】
2019519517.tif 000132
【化５４】
2019519517.tif 000133
及びそれらのいずれかの組合せ。
【０９８８】
Ｆ．他の脂質組成物成分
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、上記のものに加えて、１つ以上の成分を含んでもよい。例えば、脂質組成物は、１つ以上の透過性増強分子、炭化水素、ポリマー、表面改変剤（例えば、サーファクタント）、または他の成分を含んでもよい。例えば、透過性増強分子は、米国特許出願公開番号２００５／０２２２０６４に記載の分子であってもよい。炭水化物は、単糖（例えば、グルコース）及び多糖類（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）を含んでもよい。脂質組成物は、緩衝液、例えば、限定するものではないが、７のｐＨで、クエン酸またはリン酸の塩及び／または糖を含んでもよい。塩及び／または糖は、等張性のために本明細書に記載される製剤中に含まれてもよい。
【０９８９】
ポリマーは、本明細書に開示される医薬組成物を封入するかまたは部分的に封入するために含まれてもよいし、及び／または用いられてもよい（例えば、脂質ナノ粒子形態中の医薬組成物）。ポリマーは、生分解性であっても、及び／または生体適合性であってもよい。ポリマーは、限定するものではないが、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択され得る。
【０９９０】
脂質組成物とポリヌクレオチドとの間の比は、約１０：１〜約６０：１（ｗｔ／ｗｔ）の範囲である。
【０９９１】
いくつかの実施形態においては、脂質組成物とポリヌクレオチドとの間の比は、約１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２１：１、２２：１、２３：１、２４：１、２５：１、２６：１、２７：１、２８：１、２９：１、３０：１、３１：１、３２：１、３３：１、３４：１、３５：１、３６：１、３７：１、３８：１、３９：１、４０：１、４１：１、４２：１、４３：１、４４：１、４５：１、４６：１、４７：１、４８：１、４９：１、５０：１、５１：１、５２：１、５３：１、５４：１、５５：１、５６：１、５７：１、５８：１、５９：１または６０：１（ｗｔ／ｗｔ）であり得る。いくつかの実施形態においては、脂質組成物対、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドのｗｔ／ｗｔ比は、約２０：１または約１５：１である。
【０９９２】
いくつかの実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物は、２つ以上のポリペプチド、例えば、２つ、３つまたはそれ以上のポリペプチドを含んでもよい。例えば、本明細書に開示される医薬組成物は、２つ、３つまたはそれ以上のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含んでもよい。
【０９９３】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を、脂質：ポリヌクレオチドの重量比が５：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１もしくは７０：１で、またはある範囲、もしくは限定するものではないが、５：１〜約１０：１、約５：１〜約１５：１、約５：１〜約２０：１、約５：１〜約２５：１、約５：１〜約３０：１、約５：１〜約３５：１、約５：１〜約４０：１、約５：１〜約４５：１、約５：１〜約５０：１、約５：１〜約５５：１、約５：１〜約６０：１、約５：１〜約７０：１、約１０：１〜約１５：１、約１０：１〜約２０：１、約１０：１〜約２５：１、約１０：１〜約３０：１、約１０：１〜約３５：１、約１０：１〜約４０：１、約１０：１〜約４５：１、約１０：１〜約５０：１、約１０：１〜約５５：１、約１０：１〜約６０：１、約１０：１〜約７０：１、約１５：１〜約２０：１、約１５：１〜約２５：１，約１５：１〜約３０：１、約１５：１〜約３５：１、約１５：１〜約４０：１、約１５：１〜約４５：１、約１５：１〜約５０：１、約１５：１〜約５５：１、約１５：１〜約６０：１もしくは約１５：１〜約７０：１などの任意のこれらの範囲で含んでもよい。
【０９９４】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、およそ０．１ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌ、例えば、限定するものではないが、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌまたは２．０ｍｇ／ｍｌ超の濃度でポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０９９５】
１つの実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチド及び脂質ナノ粒子を含む製剤は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の０．１５ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌを含んでもよい。いくつかの実施形態においては、この製剤はさらに、１０ｍＭのクエン酸塩緩衝液を含んでもよく、この製剤はさらに、１０％（ｗ／ｗ）のスクロース（例えば、少なくとも１％（ｗ／ｗ）、少なくとも２％（ｗ／ｗ）／、少なくとも３％（ｗ／ｗ）、少なくとも４％（ｗ／ｗ）、少なくとも５％（ｗ／ｗ）、少なくとも６％（ｗ／ｗ）、少なくとも７％（ｗ／ｗ）、少なくとも８％（ｗ／ｗ）、少なくとも９％（ｗ／ｗ）または１０％（ｗ／ｗ））を含んでもよい。
【０９９６】
ナノ粒子組成物
いくつかの実施形態においては、本明細書に記載される医薬組成物は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化される。従って、本開示はまた、（ｉ）本明細書に記載されるような式（Ｉ）の化合物などの送達剤を含む脂質組成物、及び（ｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せを含むナノ粒子組成物も提供する。このようなナノ粒子組成物では、本明細書に開示される脂質組成物は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組合せを封入し得る。
【０９９７】
１つの特定の実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、別々に（すなわち、ナノ粒子の２つの集団中で）封入される。別の特定の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、別々に（すなわち、ナノ粒子の３つの集団中で）封入される。１つの特定の実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、または（ｉｉｉ）ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、一緒に（すなわち、単一集団のナノ粒子中で）封入される。別の特定の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド一緒に（すなわち、単一集団のナノ粒子中で）封入する。
【０９９８】
ナノ粒子組成物は典型的には、およそマイクロメートル以下のサイズにされ、脂質二分子膜を含んでもよい。ナノ粒子組成物は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム（例えば、脂質小胞）、及びリポプレックスを包含する。例えば、ナノ粒子組成物は、５００ｎｍ以下の直径を有する脂質二分子膜を有するリポソームであってもよい。
【０９９９】
ナノ粒子組成物としては、例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム、及びリポプレックスが挙げられる。いくつかの実施形態においては、ナノ粒子組成物は、１つ以上の脂質二分子膜を含む小胞である。特定の実施形態では、ナノ粒子組成物は、水性区画で分けられた２つ以上の同心二分子膜を含む。脂質二分子膜は、お互いに官能化されるか、及び／または架橋されてもよい。脂質二分子膜は、１つ以上のリガンド、タンパク質、またはチャネルを含んでもよい。
【１０００】
本開示のナノ粒子組成物は、式（Ｉ）による少なくとも１つの化合物を含む。例えば、ナノ粒子組成物は、１つ以上の化合物１−１４７、または１つ以上の化合物１−２３２を含んでもよい。ナノ粒子組成物はまた、様々な他の成分を含んでもよい。例えば、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩａ）−（ＩＩｄ）による脂質に加えて１つ以上の他の脂質、例えば、（ｉ）少なくとも１つのリン脂質、（ｉｉ）少なくとも１つの四級アミン化合物、（ｉｉｉ）少なくとも１つの構造脂質、（ｉｖ）少なくとも１つのＰＥＧ−脂質、または（ｖ）それらのいずれかの組合せを含んでもよい。
【１００１】
いくつかの実施形態においては、上記ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）を含む。いくつかの実施形態においては、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）及びリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ）を含む。いくつかの実施形態においては、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、リン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ）、及び四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）を含む。いくつかの実施形態においては、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、及び四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）を含む。
【１００２】
いくつかの実施形態においては、上記ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）からなるか、または本質的にそれらからなる、脂質組成物を含む。いくつかの実施形態においては、このナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）及びリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ）からなるか、または本質的にそれらからなる、脂質組成物を含む。いくつかの実施形態においては、このナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、リン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ）、及び四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）からなるか、または本質的にそれらからなる、脂質組成物を含む。いくつかの実施形態においては、このナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）、及び四級アミン化合物（例えば、ＤＯＴＡＰ）からなるか、または本質的にそれらからなる、脂質組成物を含む。
【１００３】
１つの実施形態において、上記ナノ粒子組成物は、（１）約５０モル％の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）；約１０モル％のＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ；約３３．５モル％のコレステロール；約１．５モル％のＰＥＧ−ＤＭＧ（例えば、ＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧ）；約５モル％のＤＯＴＡＰを含む、脂質組成物；及び（２）ポリヌクレオチドを含む。
【１００４】
１つの実施形態において、上記ナノ粒子組成物は、（１）約５０モル％の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）；約１０モル％のＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ；約２８．５モル％のコレステロール；約１．５モル％のＰＥＧ−ＤＭＧ（例えば、ＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧ）；約１０モル％のＤＯＴＡＰを含む、脂質組成物；及び（２）ポリヌクレオチドを含む。
【１００５】
１つの実施形態において、上記ナノ粒子組成物は、（１）約５０モル％の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）；約１０モル％のＤＳＰＣ、またはＭＳＰＣ；約２３．５モル％のコレステロール；約１．５モル％のＰＥＧ−ＤＭＧ（例えば、ＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧ）；約１５モル％のＤＯＴＡＰを含む、脂質組成物；及び（２）ポリヌクレオチドを含む。
【１００６】
本明細書に一般的に定義されているとおり、「脂質」という用語は、疎水性または両親媒性の特性を有する低分子を指す。脂質は、天然に存在してもよいし、または合成であってもよい。脂質のクラスの例としては、限定するものではないが、脂肪、ワックス、ステロール含有代謝物、ビタミン、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、及びポリケチド、及びプレノール脂質が挙げられる。いくつかの場合には、いくつかの脂質の両親媒性の特性によって、それらは、リポソーム、小胞、または膜を水性媒体中で形成するようになる。
【１００７】
いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、イオン性脂質を含んでもよい。本明細書において用いる場合、「イオン性脂質」という用語は、当該分野においてその通常の意味を有し、かつ１つ以上の荷電部分を含む脂質を指す場合がある。いくつかの実施形態においては、イオン性脂質は、正に荷電されてもよいし、または負に荷電されてもよい。イオン性脂質は、正に荷電されてもよく、この場合、この脂質は、「カチオン性脂質」と呼ばれてもよい。例えば、イオン性分子は、イオン性アミノ脂質と呼ばれるアミン基を含んでもよい。本明細書において用いる場合、「荷電部分」とは、正規の荷電、例えば、単価（＋１、または−１）、二価（＋２、または−２）、三価（＋３、または−３）などを保持する化学基である。この荷電された部分は、アニオン性（すなわち、負に荷電された）であっても、またはカチオン性（すなわち、正に荷電された）であってもよい。正に荷電された部分の例としては、アミン基（例えば、一級、二級、及び／または三級のアミン）、アンモニウム基、ピリジニウム基、グアニジン基、及びイミジゾリウム基が挙げられる。特定の実施形態では、荷電された部分は、アミン基を含む。負に荷電された基またはその前駆体の例としては、カルボキシレート基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基、ヒドロキシル基などが挙げられる。荷電された部分の電荷は、ある場合には、環境条件とともに変化し得、例えば、ｐＨの変化は、その部分の荷電を変化し得るか、及び／またはその部分を荷電させるか、非荷電し得る。一般には、その分子の電荷密度は、任意選択で選択され得る。
【１００８】
「荷電した」または「荷電した部分」という用語は、分子上の「部分的負電荷」または「部分的正電荷」を意味しないことが理解されるべきである。「部分的負電荷」及び「部分的正電荷」という用語は、当技術分野で通常の意味を有する。官能基が、電子密度が結合の１つの原子に向かって引っ張られるように極性化される結合を含み、その原子上に部分的負電荷を生成する場合、「部分負電荷」が生じる場合がある。当業者は、このように分極し得る結合を一般に認識する。
【１００９】
いくつかの実施形態においては、イオン性脂質は、イオン性アミノ脂質であり、当技術分野で「イオン性カチオン性脂質」と呼ばれることもある。１つの実施形態において、イオン性アミノ脂質は、リンカー構造体を介して連結される、正に荷電した親水性の頭部及び疎水性の尾部を有してもよい。
【１０１０】
ナノ粒子組成物は、様々な方法によって特徴付けられ得る。例えば、ナノ粒子組成物の形態及びサイズ分布を調べるために、顕微鏡法（例えば、透過型電子顕微鏡法または走査型電子顕微鏡法）を使用してもよい。動的光散乱法または電位差測定法（例えば、電位差滴定法）を使用して、ゼータ電位を測定してもよい。動的光散乱を利用して粒径を決定してもよい。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）のような装置を使用して、粒径、多分散性指数、及びゼータ電位などのナノ粒子組成物の複数の特性を測定してもよい。
【１０１１】
ナノ粒子のサイズは、限定されるものではないが、炎症などの生物学的反応に対抗することを補助する場合があり、またはポリヌクレオチドの生物学的効果を増大する場合もある。
【１０１２】
本明細書で使用する場合、ナノ粒子組成物の文脈における「サイズ」または「平均サイズ」とは、ナノ粒子組成物の平均直径を指す。
【１０１３】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子中で製剤化される。いくつかの態様では、脂質ナノ粒子は、約１０〜約１００ｎｍ、例えば、限定するものではないが、約１０〜約２０ｎｍ、約１０〜約３０ｎｍ、約１０〜約４０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約１０〜約６０ｎｍ、約１０〜約７０ｎｍ、約１０〜約８０ｎｍ、約１０〜約９０ｎｍ、約２０〜約３０ｎｍ、約２０〜約４０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約２０〜約１００ｎｍ、約３０〜約４０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約３０〜約１００ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約４０〜約１００ｎｍ、約５０〜約６０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ、約５０〜約８０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約５０〜約１００ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ、約６０〜約１００ｎｍ、約７０〜約８０ｎｍ、約７０〜約９０ｎｍ、約７０〜約１００ｎｍ、約８０〜約９０ｎｍ、約８０〜約１００ｎｍ及び／または約９０〜約１００ｎｍの直径を有する。
【１０１４】
１つの実施形態において、ナノ粒子は、約１０〜５００ｎｍの直径を有する。１つの実施形態において、ナノ粒子は、１００ｎｍ超、１５０ｎｍ超、２００ｎｍ超、２５０ｎｍ超、３００ｎｍ超、３５０ｎｍ超、４００ｎｍ超、４５０ｎｍ超、５００ｎｍ超、５５０ｎｍ超、６００ｎｍ超、６５０ｎｍ超、７００ｎｍ超、７５０ｎｍ超、８００ｎｍ超、８５０ｎｍ超、９００ｎｍ超、９５０ｎｍ超、または１０００ｎｍ超の直径を有する。
【１０１５】
いくつかの実施形態においては、ナノ粒子組成物の最大寸法は、１μｍ以下（例えば、１μｍ、９００ｎｍ、８００ｎｍ、７００ｎｍ、６００ｎｍ、５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２００ｎｍ、１７５ｎｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１００ｎｍ、７５ｎｍ、５０ｎｍ以下）である。
【１０１６】
ナノ粒子組成物は、相対的に均一であり得る。多分散性指数は、ナノ粒子組成物の均一性、例えば、ナノ粒子組成物の粒径分布を指すために使用され得る。小さい（例えば、０．３未満）多分散性指数は一般に、狭い粒径分布を指す。ナノ粒子組成物は、約０〜約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５の多分散性指数を有し得る。いくつかの実施形態においては、本明細書に開示されるナノ粒子組成物の多分散性指数は、約０．１０〜約０．２０であってもよい。
【１０１７】
ナノ粒子組成物のゼータ電位を使用して、組成物の界面動電位を示し得る。例えば、ゼータ電位は、ナノ粒子組成物の表面電荷を表し得る。比較的高電荷の種が細胞、組織、及び体内の他の要素と望ましくない相互作用をする可能性があるため、比較的低電荷の正または負のナノ粒子組成物が一般に望ましい。いくつかの実施形態においては、本明細書に開示されるナノ粒子組成物のゼータ電位は、約−１０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約１０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約−５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ〜約＋１０ｍＶであり得る。
【１０１８】
いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約０ｍＶ〜約１００ｍＶ、約０ｍＶ〜約９０ｍＶ、約０ｍＶ〜約８０ｍＶ、約０ｍＶ〜約７０ｍＶ、約０ｍＶ〜約６０ｍＶ、約０ｍＶ〜約５０ｍＶ、約０ｍＶ〜約４０ｍＶ、約０ｍＶ〜約３０ｍＶ、約０ｍＶ〜約２０ｍＶ、約０ｍＶ〜約１０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約１００ｍＶ、約１０ｍＶ〜約９０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約８０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約７０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約６０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約５０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約４０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約３０ｍＶ、約１０ｍＶ〜約２０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約１００ｍＶ、約２０ｍＶ〜約９０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約８０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約７０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約６０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約５０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約４０ｍＶ、約２０ｍＶ〜約３０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約１００ｍＶ、約３０ｍＶ〜約９０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約８０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約７０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約６０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約５０ｍＶ、約３０ｍＶ〜約４０ｍＶ、約４０ｍＶ〜約１００ｍＶ、約４０ｍＶ〜約９０ｍＶ、約４０ｍＶ〜約８０ｍＶ、約４０ｍＶ〜約７０ｍＶ、約４０ｍＶ〜約６０ｍＶ、及び約４０ｍＶ〜約５０ｍＶであってもよい。いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約１０ｍＶ〜約５０ｍＶ、約１５ｍＶ〜約４５ｍＶ、約２０ｍＶ〜約４０ｍＶ、及び約２５ｍＶ〜約３５ｍＶであってもよい。いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約１０ｍＶ、約２０ｍＶ、約３０ｍＶ、約４０ｍＶ、約５０ｍＶ、約６０ｍＶ、約７０ｍＶ、約８０ｍＶ、約９０ｍＶ、及び約１００ｍＶであってもよい。
【１０１９】
ポリヌクレオチドの「封入効率」という用語は、提供された初期量に対して、調製後のナノ粒子組成物によって封入されるか、そうでなければそれと会合されるポリヌクレオチドの量を表す。本明細書で使用される場合、「封入」とは、完全な、実質的な、または部分的な囲い込み、閉じ込め、包囲、または包装を指す場合もある。
【１０２０】
封入効率は望ましくは高い（例えば、１００％に近い）。封入効率は、例えば、１つ以上の有機溶媒または界面活性剤を使用してナノ粒子組成物を破壊する前後のナノ粒子組成物を含有する溶液中のポリヌクレオチドの量を比較することによって測定され得る。
【１０２１】
蛍光を使用して、溶液中の遊離のポリヌクレオチドの量を測定してもよい。本明細書に記載されるナノ粒子組成物に関しては、ポリヌクレオチドの封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であってもよい。いくつかの実施形態においては、封入効率は、少なくとも８０％であってもよい。特定の実施形態では、封入効率は、少なくとも９０％であってもよい。
【１０２２】
本明細書に開示される医薬組成物中に存在するポリヌクレオチドの量は、ポリヌクレオチドのサイズ、所望の標的及び／または用途、またはナノ粒子組成物の他の特性ならびにポリヌクレオチドの特性などの多数の要因に依存し得る。
【１０２３】
例えば、ナノ粒子組成物において有用なｍＲＮＡの量は、ｍＲＮＡのサイズ（長さまたは分子量として表される）、配列及び他の特徴に依存し得る。ナノ粒子組成物中のポリヌクレオチドの相対量も変化し得る。
【１０２４】
本開示の脂質ナノ粒子組成物中に存在する脂質組成物及びポリヌクレオチドの相対量は、効能及び忍容性の考慮に従って最適化され得る。ポリヌクレオチドとしてのｍＲＮＡを含む組成物では、Ｎ：Ｐ比は、有用な測定基準として有用であり得る。
【１０２５】
ナノ粒子組成物のＮ：Ｐ比は、発現と耐容性の両方を制御するので、低いＮ：Ｐ比及び強い発現を有するナノ粒子組成物が望ましい。Ｎ：Ｐ比は、ナノ粒子組成物中の脂質対ＲＮＡの比によって変化する。
【１０２６】
一般に、より低いＮ：Ｐ比が好ましい。１つ以上のＲＮＡ、脂質、及びその量は、約２：１〜約３０：１、例えば２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１のＮ：Ｐ比を提供するように選択され得る。特定の実施形態において、Ｎ：Ｐ比は、約２：１〜約８：１であり得る。他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１〜約８：１である。特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、５：１〜６：１である。１つの特定の態様において、Ｎ：Ｐ比は約５．６７：１である。
【１０２７】
ナノ粒子組成物を提供することに加えて、本開示はまた、ポリヌクレオチドを封入することを含む、脂質ナノ粒子を製造する方法を提供する。このような方法は、本明細書に開示される医薬組成物のいずれかを使用すること、及びページ  ：  ２９５
当該技術分野において既知である脂質ナノ粒子の製造方法に従って脂質ナノ粒子を製造することを包含する。例えば、Ｗａｎｇ（ｅｔ  ａｌ．２０１５）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．８７：６８−８０；Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９４０−９５４；Ｎａｓｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．５：３０５−１３；Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：２９１−３０２及びそこに引用されている参考文献を参照のこと。
【１０２８】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子中に製剤化され、ポリヌクレオチドは、表１に開示されるｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子中に処方され、このポリヌクレオチドは、表１に記載される配列を含む。
【１０２９】
脂質ナノ粒子製剤は典型的には、脂質、具体的には、イオン性アミノ脂質、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、またはジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）を含み、及びさらに天然の脂質、ステロール及び粒子の凝集を低減し得る分子、例えば、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。
【１０３０】
１つの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、（ｉ）２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群より選択される少なくとも１つの脂質；（ｉｉ）ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ及びＳＭから選択される天然の脂質；（ｉｉｉ）ステロール、例えば、コレステロール；及び（ｉｖ）ＰＥＧ−脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡから（約２０〜６０％イオン性アミノ脂質：５〜２５％の天然の脂質：２５〜５５％のステロール；０．５〜１５％のＰＥＧ−脂質というモル比で）本質的になる。
【１０３１】
１つの実施形態において、製剤としては、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択されるイオン性アミノ脂質をモル基準で約２５％〜約７５％、例えば、モル基準で約３５〜約６５％、約４５〜約６５％、約６０％、約５７．５％、約５０％または約４０％含む。
【１０３２】
１つの実施形態において、この製剤は、天然の脂質のモル基準で、約０．５％〜約１５％、例えば、モル基準で、約３〜約１２％、約５〜約１０％または約１５％、約１０％、または約７．５％を含む。例示的な天然の脂質としては、限定するものではないが、ＤＳＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ及びＳＭが挙げられる。１つの実施形態において、この製剤は、ステロールのモル基準で約５％〜約５０％（例えば、モル基準で約１５〜約４５％、約２０〜約４０％、約４０％、約３８．５％、約３５％、または約３１％）を含む。例示的なステロールは、コレステロールである。１つの実施形態において、この製剤は、モル基準で約０．５％〜約２０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質（例えば、モル基準で約０．５〜約１０％、約０．５〜約５％、約１．５％、約０．５％、約１．５％、約３．５％、または約５％）を含む。１つの実施形態において、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質は、２，０００Ｄａという平均分子量のＰＥＧ分子を含む。他の実施形態では、このＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質は、２，０００未満、例えば約１，５００Ｄａ、約１，０００Ｄａ、または約５００Ｄａの平均分子量のＰＥＧ分子を含む。例示的なＰＥＧ修飾脂質としては、限定するものではないが、ＰＥＧ−ジステアロイルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）（本明細書ではまたＰＥＧ−Ｃ１４またはＣ１４−ＰＥＧともいう）、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ（さらにＲｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １０７：２７６−２８７で考察される）が挙げられる。
【１０３３】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される２５〜７５％のイオン性アミノ脂質、０．５〜１５％の天然の脂質、５〜５０％のステロール、及び０．５〜２０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０３４】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される３５〜６５％のイオン性アミノ脂質、３〜１２％の天然の脂質、１５〜４５％のステロール、及び０．５〜１０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０３５】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される４５〜６５％のイオン性アミノ脂質、５〜１０％の天然の脂質、２５〜４０％のステロール、及び０．５〜１０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０３６】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される約６０％のイオン性アミノ脂質、約７．５％の天然の脂質、約３１％のステロール、及び約１．５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０３７】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される約５０％のイオン性アミノ脂質、約１０％の天然の脂質、約３８．５％のステロール、及び約１．５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０３８】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される約５０％のイオン性アミノ脂質、約１０％の天然の脂質、約３５％のステロール、約４．５％または約５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質、及び約０．５％の標的化脂質をモル基準で含む。
【１０３９】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される約４０％のイオン性アミノ脂質、約１５％の天然の脂質、約４０％のステロール、及び約５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０４０】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される約５７．２％のイオン性アミノ脂質、約７．１％の天然の脂質、約３４．３％のステロール、及び約１．４％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０４１】
１つの実施形態において、本開示の製剤は、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ（ＰＥＧ−ｃＤＭＡは、さらに、Ｒｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １０７：２７６−２８７において考察される）であるＰＥＧ脂質から選択される約５７．５％のイオン性アミノ脂質、約７．５％の天然の脂質、約３１．５％のステロール、及び約３．５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質をモル基準で含む。
【１０４２】
いくつかの実施形態においては、脂質ナノ粒子製剤は、本質的に、脂質混合物であって、モル比が約２０〜７０％のイオン性アミノ脂質：５〜４５％の天然の脂質：２０〜５５％のコレステロール：０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質；例えば、モル比が約２０〜６０％のイオン性アミノ脂質：５〜２５％の天然の脂質：２５〜５５％のコレステロール：０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質の脂質混合物からなる。
【１０４３】
特定の実施形態では、このモルの脂質比は、およそ５０／１０／３８．５／１．５（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＳＧまたはＰＥＧ−ＤＰＧ）、５７．２／７．１１３４．３／１．４（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ）、４０／１５／４０／５（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧ）、５０／１０／３５／４．５／０．５（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＳＧ）、５０／１０／３５／５（イオン性アミノ脂質／天然の脂質、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧ）、４０／１０／４０／１０（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ）、３５／１５／４０／１０（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ）または５２／１３／３０／５（イオン性アミノ脂質／天然脂質のモル％、例えば、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ）である。
【１０４４】
例示的な脂質ナノ粒子組成物、及びこれを作製する方法は、例えば、Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１７２−１７６；Ｊａｙａｒａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５１：８５２９−８５３３；及びＭａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２１：５７０−１５７８に記載される。
【１０４５】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子製剤は、イオン性アミノ脂質、ＰＥＧ脂質及び構造脂質を含み、及び任意選択で非カチオン性脂質を含む。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約４０〜６０％のイオン性アミノ脂質、約５〜１５％の非カチオン性脂質、約１−２％のＰＥＧ脂質及び約３０〜５０％の構造脂質を含む。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５０％のイオン性アミノ脂質、約１０％の非カチオン性脂質、約１．５％のＰＥＧ脂質及び約３８．５％の構造脂質を含む。さらに別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５５％のイオン性アミノ脂質、約１０％の非カチオン性脂質、約２．５％のＰＥＧ脂質及び約３２．５％構造脂質を含む。１つの実施形態において、このイオン性アミノ脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ及びＬ３１９のような、本明細書に記載される任意のイオン性アミノ脂質である。
【１０４６】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子製剤は、４成分の脂質ナノ粒子である。この脂質ナノ粒子は、イオン性アミノ脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質及び構造脂質を含んでもよい。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約４０〜６０％のイオン性アミノ脂質、約５〜１５％の非カチオン性脂質、約１〜２％のＰＥＧ脂質及び約３０〜５０％の構造脂質を含んでもよい。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５０％イオン性アミノ脂質、約１０％の非カチオン性脂質、約１．５％のＰＥＧ脂質及び約３８．５％の構造脂質を含んでもよい。さらに別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５５％のイオン性アミノ脂質、約１０％の非カチオン性脂質、約２．５％のＰＥＧ脂質及び約３２．５％の構造脂質を含んでもよい。１つの実施形態において、このイオン性アミノ脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ及びＬ３１９のような本明細書に記載される任意のイオン性アミノ脂質であってもよい。
【１０４７】
１つの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子製剤は、イオン性アミノ脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質及び構造脂質を含む。非限定的な例として、この脂質ナノ粒子は、約５０％のイオン性アミノ脂質ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、約１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣ、約１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＯＭＧ及び約３８．５％の構造脂質コレステロールを含む。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５０％のイオン性アミノ脂質ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、約１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣ、約１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＯＭＧ及び約３８．５％の構造脂質コレステロールを含む。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５０％のイオン性アミノ脂質ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、約１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣ、約１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＭＧ及び約３８．５％の構造脂質コレステロールを含む。さらに別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、約５５％のイオン性アミノ脂質Ｌ３１９、約１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣ、約２．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＭＧ及び約３２．５％の構造脂質コレステロールを含む。
【１０４８】
１つの実施形態において、脂質は、切断可能な脂質、例えば、国際公開番号ＷＯ２０１２１７０８８９に記載の脂質である。別の実施形態では、脂質は、例えば、限定するものではないが、米国特許出願公開第２０１３００６４８９４号の式（Ｉ）のようなカチオン性脂質である。
【１０４９】
１つの実施形態において、この脂質は、当該技術分野において既知であるか、及び／または国際公開番号ＷＯ２０１２０４０１８４、ＷＯ２０１１１５３１２０、ＷＯ２０１１１４９７３３、ＷＯ２０１１０９０９６５、ＷＯ２０１１０４３９１３、ＷＯ２０１１０２２４６０、ＷＯ２０１２０６１２５９、ＷＯ２０１２０５４３６５、ＷＯ２０１２０４４６３８、ＷＯ２０１００８０７２４、ＷＯ２０１０２１８６５、ＷＯ２０１３０８６３７３及びＷＯ２０１３０８６３５４に記載のような方法によって合成される。
【１０５０】
別の実施形態では、カチオン性脂質は、トリアルキルカチオン性脂質である。トリアルキルカチオン性脂質及びトリアルキルカチオン性脂質を作製及び使用する方法の非限定的な例は、国際特許出願番号ＷＯ２０１３１２６８０３に記載されている。
【１０５１】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチドのＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを３％の脂質モル比で含む。別の実施形態では、ポリヌクレオチドのＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを１．５％脂質モル比で含む。
【１０５２】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの医薬組成物は、国際公開番号ＷＯ２０１２０９９７５５に記載される少なくとも１つのＰＥＧ化脂質を含む。
【１０５３】
１つの実施形態において、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００）を含む。１つの実施形態において、ＬＮＰ製剤は、当該分野で公知のイオン性アミノ脂質であるＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００及び少なくとも１つの他の成分を含んでもよい。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤は、当該分野で公知のイオン性アミノ脂質であるＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００、ＤＳＰＣ及びコレステロールを含む。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣ及びコレステロールを含む。別の非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣ及びコレステロールを、２：４０：１０：４８のモル比で含む（例えば、Ｇｅａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０９：１４６０４−９を参照のこと）。
【１０５４】
１つの実施形態において、ＬＮＰ製剤は、国際公開番号ＷＯ２０１１１２７２５５またはＷＯ２００８１０３２７６に記載の方法によって製剤化される。非限定的な例として、本明細書に記載される、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、ＷＯ２０１１１２７２５５及び／またはＷＯ２００８１０３２７６に記載されるようなＬＮＰ製剤中に封入される；また、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３００３７９７７及び米国特許出願公開第２０１０００１５２１８号を参照のこと。
【１０５５】
１つの実施形態において、本明細書に記載される、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、米国特許出願公開番号第２０１２０２０７８４５号に記載されるような非経口経路で送達されるナノ粒子中に製剤化される。
【１０５６】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、米国特許出願公開番号第２０１３０１５６８４５号または国際公開番号ＷＯ２０１３０９３６４８またはＷＯ２０１２０２４５２６に記載される方法によって作製される脂質ナノ粒子中に製剤化される。
【１０５７】
本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、米国特許出願公開番号第２０１３０１６４４００号に記載されるシステム及び／または方法によって無菌的な環境で作成され得る。
【１０５８】
１つの実施形態において、ＬＮＰ製剤は、米国特許第８，４９２，３５９号に記載の核酸−脂質粒子のようなナノ粒子中に製剤化される。非限定的な例として、脂質粒子は、１つ以上の活性剤または治療剤；１つ以上のイオン性アミノ脂質（粒子中に存在する総脂質の約５０モル％〜約８５モル％を含む）；１つ以上の非カチオン性脂質（粒子中に存在する総脂質の約１３モル％〜約４９．５モル％を含む）；及び粒子の凝集を阻害する１つ以上のコンジュゲートされた脂質（粒子中に存在する総脂質の約０．５モル％〜約２モル％を含む）を含む。ナノ粒子中の核酸は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドであってもよく、及び／または当技術分野において既知であってもよい。
【１０５９】
１つの実施形態において、ＬＮＰ製剤は、国際公開番号ＷＯ２０１１１２７２５５またはＷＯ２００８１０３２７６に記載の方法によって製剤化される。非限定的な例として、本明細書に記載される修飾されたＲＮＡは、ＷＯ２０１１１２７２５５及び／またはＷＯ２００８１０３２７６に記載されるようなＬＮＰ製剤中に封入される。
【１０６０】
１つの実施形態において、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤は、ポリカチオン性の組成物を含む。非限定的な例として、このポリカチオン性の組成物は、米国特許出願公開番号第２００５０２２２０６４号の式１〜６０から選択される。別の実施形態では、ポリカチオン性の組成物を含んでいるＬＮＰ製剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで本明細書において記載される修飾ＲＮＡの送達のために用いられる。
【１０６１】
１つの実施形態において、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤は、さらに、透過性増強分子を含む。非限定的な透過性増強分子は、米国特許出願公開番号第２００５０２２２０６４号に記載される。
【１０６２】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチド医薬組成物は、リポソーム、例えば、限定するものではないが、ＤｉＬａ２  リポソーム（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）、天然のＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：１７０８−１７１３）及びヒアルロナンコーティングリポソーム（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｓｒａｅｌ）中に製剤化される。
【１０６３】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、米国特許出願公開番号第２０１２０６０２９３号に記載されるような凍結乾燥されたゲル相のリポソーム組成物中に製剤化される。
【１０６４】
ナノ粒子製剤は、リン酸塩コンジュゲートを含んでもよい。リン酸塩コンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間を延長するか、及び／またはナノ粒子の標的化送達を増大し得る。本開示での使用のためのリン酸塩コンジュゲートは、国際出願番号ＷＯ２０１３０３３４３８または米国特許出願公開番号第２０１３０１９６９４８号に記載の方法によって作製され得る。非限定的な例として、リン酸塩コンジュゲートは、国際出願番号ＷＯ２０１３０３３４３８に記載の式のいずれか１つの化合物を含んでもよい；また、米国特許出願公開第２０１３００６６０８６号を参照のこと。
【１０６５】
ナノ粒子製剤は、ポリマーコンジュゲートを含んでもよい。このポリマーコンジュゲートは、水溶性コンジュゲートであってもよい。このポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開番号第２０１３００５９３６０号に記載のような構造を有し得る。１つの実施形態において、本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドとのポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開番号第２０１３００７２７０９号に記載の方法、及び／またはセグメント化されたポリマー試薬を使用して作製され得る。別の実施形態では、ポリマーコンジュゲートは、限定するものではないが、米国特許出願公開番号第２０１３０１９６９４８号に記載のポリマーコンジュゲートのような環部分を含むペンダント側鎖を有し得る。
【１０６６】
ナノ粒子製剤は、対象における本開示のナノ粒子の送達を亢進するためのコンジュゲートを含んでもよい。さらに、このコンジュゲートは、対象におけるナノ粒子の食作用性のクリアランスを阻害し得る。１つの実施形態において、このコンジュゲートは、ヒト膜タンパク質ＣＤ４７、例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：９７１−９７５によって記載された「自己」粒子から設計された「自己」ペプチドである。Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌによって示されるように、自己ペプチドは、ナノ粒子の送達の亢進をしたナノ粒子のマクロファージ媒介クリアランスを遅延させた。別の実施形態では、このコンジュゲートは、膜タンパク質ＣＤ４７である。例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：９７１−９７５を参照のこと。Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．は、「自己」ペプチドと同様に、ＣＤ４７が、スクランブルされたペプチド及びＰＥＧでコーティングされたナノ粒子と比較して、対象における循環粒子比を増大し得ることを示した。
【１０６７】
１つの実施形態において、本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、対象における本開示のナノ粒子の送達を亢進するためのコンジュゲートを含むナノ粒子中に製剤化される。このコンジュゲートは、ＣＤ４７膜であってもよく、またはこのコンジュゲートは、以前に記載される「自己」ペプチドなどのＣＤ４７膜タンパク質から誘導されてもよい。別の態様では、このナノ粒子は、ＰＥＧ及びＣＤ４７のコンジュゲートまたはそれらの誘導体を含んでもよい。さらに別の態様では、このナノ粒子は、上記の「自己」ペプチド及び膜タンパク質ＣＤ４７の両方を含む。
【１０６８】
別の態様では、「自己」ペプチド及び／またはＣＤ４７タンパク質は、本開示のポリヌクレオチドの送達について本明細書に記載されるように、ウイルス様粒子または偽ウイルス粒子にコンジュゲートされる。
【１０６９】
別の実施形態では、本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む医薬組成物は、分解可能な結合を有するコンジュゲートを含んでもよい。コンジュゲートの非限定的な例としては、イオン性水素原子を含む芳香族部分、スペーサー部分、及び水溶性ポリマーが挙げられる。非限定的な例として、分解性結合を有するコンジュゲートを含む医薬組成物、及びこのような医薬組成物を送達するための方法は、米国特許出願公開番号第２０１３０１８４４４３号に記載される。
【１０７０】
ナノ粒子製剤は、炭水化物担体及びポリヌクレオチドを含む炭水化物ナノ粒子であってもよい。非限定的な例として、炭水化物担体としては、限定するものではないが、無水物修飾フィトグリコーゲンまたはグリコーゲン型物質、フィトグリコーゲンオクテニルスクシネート、フィトグリコーゲンベータデキストリン、無水物修飾フィトグリコーゲンベータデキストリンが挙げられる。例えば、国際公開番号ＷＯ２０１２１０９１２１号を参照のこと；また、米国特許出願公開第２０１４００６６３６３号も参照のこと。
【１０７１】
本開示のナノ粒子製剤は、粒子の送達を改善するために界面活性剤またはポリマーでコーティングしてもよい。１つの実施形態において、ナノ粒子は、限定するものではないが、ＰＥＧコーティング及び／または中性表面電荷を有するコーティングなどの親水性コーティングでコーティングされる。親水性コーティングは、限定するものではないが、中枢神経系内のポリヌクレオチドなどの、より大きなペイロードを有するナノ粒子を送達することを補助し得る。非限定的な例として、親水性コーティングを含むナノ粒子及びそのようなナノ粒子を作製する方法は、米国特許出願公開第２０１３０１８３２４４号に記載されている。
【１０７２】
１つの実施形態において、本開示の脂質ナノ粒子は、親水性ポリマー粒子である。親水性ポリマー粒子及び親水性ポリマー粒子を作製する方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１０９９１号に記載されている。
【１０７３】
別の実施形態において、本開示の脂質ナノ粒子は、疎水性ポリマー粒子である。脂質ナノ粒子製剤は、イオン性カチオン性脂質を、迅速に排出される脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）として公知の生分解性のイオン性カチオン性脂質で置換することによって改善され得る。限定するものではないが、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡなどのイオン性カチオン性脂質は、経時的に血漿及び組織に蓄積することが示されており、可能性としては毒性源であり得る。迅速に排出される脂質の迅速な代謝は、ラットにおける１ｍｇ／ｋｇ用量〜１０ｍｇ／ｋｇ用量までの幅で、脂質ナノ粒子の耐容性及び治療指数を改善し得る。酵素的に分解されたエステル結合を含めることにより、カチオン性成分の分解及び代謝プロファイルが改善され得、一方ではやはりｒｅＬＮＰ製剤の活性は維持される。エステル結合は、脂質鎖の内部に位置してもよいし、またはそれは、脂質鎖の末端に最終的に位置してもよい。内部エステル結合は、脂質鎖中の任意の炭素を置換し得る。
【１０７４】
１つの実施形態において、内部エステル結合は、飽和炭素のいずれかの側に位置する。
【１０７５】
１つの実施形態において、免疫応答は、ナノ種、ポリマー及び免疫原を含み得る脂質ナノ粒子を送達することによって誘発される。例えば、米国特許出願公開番号第２０１２０１８９７００号及び国際公開第ＷＯ２０１２０９９８０５号を参照のこと。このポリマーは、ナノ種を封入してもよいし、またはナノ種を部分的に封入してもよい。免疫原は、本明細書に記載される組み換えタンパク質、修飾されたＲＮＡ及び／または本明細書に記載されるＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む本明細書に記載されるポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／または本明細書に記載されるＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドであってもよい。
【１０７６】
脂質ナノ粒子は、粒子の表面特性を変化させて脂質ナノ粒子が粘膜障壁を浸透し得るように操作してもよい。粘液は、限定するものではないが、口腔（例えば、口腔及び食道の膜及び扁桃組織）、眼、胃腸（例えば、胃、小腸、大腸、結腸、直腸）、鼻、呼吸器（例えば、鼻、咽頭、気管及び気管支の膜）、生殖器（例えば、膣、頸部及び尿道の膜）などの粘膜組織に位置する。より高い薬物封入効率及び広い範囲の薬物の持続的送達を提供する能力のために好ましい、１０〜２００ｎｍより大きいナノ粒子は、粘膜障壁を通って急速に拡散するには大きすぎると考えられてきた。粘液は、連続的に分泌され、捨てられ、廃棄されるか、または消化されてリサイクルされるので、捕捉された粒子の大部分が、数秒または数時間以内に粘膜組織から除去され得る。低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で高密度にコーティングされた大きなポリマーナノ粒子（直径２００ｎｍ〜５００ｎｍ）は、水中で拡散する同じ粒子よりもわずか４〜６倍低く、粘液を介して拡散した（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０４：１４８２−４８７；Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．６１：１５８−１７１）。ナノ粒子の輸送は、限定するものではないが、透過率及び／または光漂白（ＦＲＡＰ）後の蛍光回復及び高分解能複数粒子追跡（ＭＰＴ）を含む、蛍光顕微鏡技術を用いて決定され得る。非限定的な例として、粘膜障壁を浸透し得る組成物は、米国特許第８，２４１，６７０号または国際特許公開第ＷＯ２０１３１１００２８号（米国特許出願公開第ＵＳ２０１５０２９７５３１号も参照のこと）に記載のように作製され得る。
【１０７７】
粘液に浸透するように操作された脂質ナノ粒子は、ポリマー材料（すなわち、ポリマーコア）及び／またはポリマー−ビタミンコンジュゲート及び／またはトリブロックコポリマーを含んでもよい。ポリマー材料としては、限定するものではないが、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリ（スチレン）、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートが挙げられる。ポリマー材料は、生分解性であっても、及び／または生体適合性であってもよい。生体適合性ポリマーの非限定的な例は、国際特許公開番号ＷＯ２０１３１１６８０４に記載されている；また、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３０２０３７１３号も参照のこと。ポリマー材料をさらに照射してもよい。非限定的な例として、ポリマー材料をガンマ線照射してもよい。例えば、国際出願番号ＷＯ２０１２０８２１６５を参照のこと；また、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３０１０１６０９号も参照のこと。
【１０７８】
特定のポリマーの非限定的な例としては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（酢酸ビニル）、ポリハロゲン化ビニル、例えば、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）ならびにこれらのコポリマー及び混合物、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ及びトリメチレンカーボネート、ポリビニルピロリドンが挙げられる。脂質ナノ粒子は、コポリマー、例えば、限定するものではないが、ブロックコポリマー（例えば、国際公開番号ＷＯ２０１３０１２４７６に記載の分枝したポリエーテル−ポリアミドブロックコポリマー）、及び（ポリ（エチレングリコール））−（ポリ（プロピレンオキシド））−（ポリ（エチレングリコール））トリブロックコポリマーでコーティングされてもよいし、またはそれと会合されてもよい。例えば、米国特許出願公開番号第２０１２０１２１７１８号及び同第２０１００００３３３７号、及び米国特許番号第８，２６３，６６５号を参照のこと。
【１０７９】
コポリマーは、一般に安全とみなされる（ＧＲＡＳ）ポリマーであってもよく、脂質ナノ粒子の形成は、新しい化学物質が生成されないような方法であり得る。例えば、脂質ナノ粒子は、ヒト粘液にやはり迅速に浸透し得る新しい化学物質を形成することなくＰＬＧＡナノ粒子をコーティングするポロキサマーを含んでもよい。Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５０：２５９７−２６００。ヒト粘液に浸透し得るナノ粒子を製造するための非限定的な拡張可能な方法は、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １７０：２７９−８６に記載される。
【１０８０】
ポリマー−ビタミンコンジュゲートのビタミンは、ビタミンＥであってもよい。このコンジュゲートのビタミン部分は、他の適切な成分、例えば、限定するものではないが、ビタミンＡ、ビタミンＥ、他のビタミン、コレステロール、疎水性部分、または他のサーファクタントの疎水性成分（例えば、ステロール鎖、脂肪酸、炭化水素鎖及びアルキレンオキシド鎖）で置換されてもよい。
【１０８１】
粘液に浸透するように操作された脂質ナノ粒子としては、表面変質剤、例えば、限定するものではないが、ポリヌクレオチド、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミドなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン、オオヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドルム（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ）、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルソリン、チモシンβ４ドーナーゼアルファ、ネルテキシン、エルドステイン）及びｒｈＤＮアーゼを含む種々のＤＮアーゼが挙げられる。表面改変剤は、粒子の表面に埋め込まれてもよいし、もしくは取り込まれてもよいし、または脂質ナノ粒子の表面に（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによって）配置されてもよい。例えば、米国特許出願公開第２０１００２１５５８０号、第２００８０１６６４１４号、及び第２０１３０１６４３４３号を参照のこと。
【１０８２】
１つの実施形態において、粘液浸透脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。このポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子中に封入されてもよく、及び／または粒子の表面上に配置されてもよい。ポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子に共有結合されてもよい。粘液浸透脂質ナノ粒子の製剤は、複数のナノ粒子を含んでもよい。さらに、製剤は、粘液と相互作用し得、周囲の粘液の構造的及び／または接着の特性を変化させて、粘膜浸透性脂質ナノ粒子の粘膜組織への送達を増大し得る粘膜付着を減少させ得る粒子を含んでもよい。
【１０８３】
別の実施形態において、粘液浸透脂質ナノ粒子は、粘膜浸透促進コーティングを含む低張性製剤である。製剤は、それが送達されている上皮に対して低張性であってもよい。低張性製剤の非限定的な例は、国際特許公開第ＷＯ２０１３１１００２８号に見出すことができる；また、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５０２９７５３１号も参照のこと。
【１０８４】
１つの実施形態において、粘膜障壁を介する送達を向上するために、ポリヌクレオチド製剤は、低張溶液を含むか、または低張溶液である。低張液は、限定するものではないが、粘液浸透性粒子などの粘液透過性粒子が膣上皮表面に到達できる速度を増大させることが見出された。例えば、Ｅｎｓｉｇｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３４：６９２２−９を参照のこと。
【１０８５】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチドは、限定するものではないが、ＡＴＵＰＬＥＸ（商標）システム、ＤＡＣＣシステム、ＤＢＴＣシステム及びＳｉｌｅｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）の他のｓｉＲＮＡ−リポプレックス技術、ＳＴＥＭＧＥＮＴ（登録商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）のＳＴＥＭＦＥＣＴ（商標）、及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）またはプロタミンベースの標的化及び非標的化送達の核酸などのリポプレックスとして製剤化される。Ａｌｅｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８：９７８８−９７９８；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．５０：７６−７８；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１３：１２２２−１２３４；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１３：１３６０−１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｐｕｌｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３：３３４−３４４；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．８０：２８６−２９３；Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３２：４９８−５０７；Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３１：１８０−１８８；Ｐａｓｃｏｌｏ（２００４）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１２８５−１２９４；Ｆｏｔｉｎ−Ｍｌｅｃｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１−１５；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：７０９−７１７；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６：１０４：４０９５−４１００；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ（２００８）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９：１２５−１３２）を参照のこと。
【１０８６】
１つの実施形態において、このような製剤はまた、限定するものではないが、肝細胞、免疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞、及び白血球を含む、ｉｎ  ｖｉｖｏで異なる細胞型に受動的または能動的に向けられるように、構築されるか、またはそのような組成物である（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：１３５７−１３６４；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：７０９−７１７；Ｊｕｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：６６１−６７３；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．８０：２８６−２９３；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１３：１２２２−１２３４；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１３：１３６０−１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｐｕｌｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３：３３４−３４４；Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９：２１８６−２２００；Ｆｅｎｓｋｅ及びＣｕｌｌｉｓ（２００８）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  ５：２５−４４；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１９：６２７−６３０；Ｐｅｅｒ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ（２０１１）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１８：１１２７−１１３３）。肝細胞への製剤の受動的標的化の一例としては、アポリポタンパク質Ｅに結合し、これらの製剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの肝細胞への結合及び取り込みを促進することが示されているＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡベースの脂質ナノ粒子製剤が挙げられる（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：１３５７−１３６４）。
【１０８７】
製剤はまた、限定するものではないが、葉酸、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、及び抗体標的アプローチによって例示されるように、それらの表面上に異なるリガンドを発現させることによって選択的に標的化され得る。例えば、Ｋｏｌｈａｔｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  ８：１９７−２０６；Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ及びＴｏｒｃｈｉｌｉｎ、Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．２０１１  １６：１３８８−１４１２；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．２０１０  ２７：２８６−２９８；Ｐａｔｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．２００８  ２５：１−６１；Ｂｅｎｏｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１  １２：２７０８−２７１４；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．２００８  ５：３０９−３１９；Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：１３５７−１３６４；Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１２  ８２０：１０５−１１６；Ｂｅｎ−Ａｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１２  ７５７：４９７−５０７；Ｐｅｅｒ  ２０１０  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．２０：６３−６８；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００７  １０４：４０９５−４１００；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１１  ７２１：３３９−３５３；Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：２０２８−２０３７；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５  ２３：７０９−７１７；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８  ３１９：６２７−６３０；ならびにＰｅｅｒ及びＬｉｅｂｅｒｍａｎ、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １８：１１２７−１１３３（これらの全ては、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【１０８８】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び本開示のＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、固体脂質ナノ粒子として製剤化される。
【１０８９】
固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、平均直径が１０〜１，０００ｎｍの球形であり得る。ＳＬＮは、親油性分子を可溶化し得、かつ界面活性剤及び／または乳化剤で安定化され得る固体脂質コアマトリックスを有する。さらなる実施形態において、脂質ナノ粒子は、自己組織化脂質−ポリマーナノ粒子であってもよい。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）ＡＣＳ  Ｎａｎｏ  ２：１６９６−１７０２を参照のこと。非限定的な例として、ＳＬＮは、国際特許公開番号ＷＯ２０１３１０５１０１に記載されているＳＬＮであってもよい。別の非限定的な例として、ＳＬＮは、国際特許公開番号ＷＯ２０１３１０５１０１に記載された方法またはプロセスによって作製され得る。
【１０９０】
ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６−ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及びそれらのいずれかの組合せの効能を改善するために、リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子を使用してもよい。なぜなら、これらの製剤は、ポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増大し得るか；及び／またはコードされたＩＬ−２３、ＩＬ−３６、ＩＬ−１８及びＯＸ４０Ｌの翻訳を増大し得るからである。そのような例の１つは、ポリプレックスプラスミドＤＮＡの効果的な全身送達を可能にする脂質封入の使用を包含する。Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５：７１３−７２０を参照のこと。リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子は、ポリヌクレオチドの安定性を増大するためにも使用してもよい。
【１０９１】
１つの実施形態において、本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、徐放性及び／または標的化送達のために製剤化する。
【１０９２】
本明細書で使用される「徐放性」とは、治療結果を達成するために放出の特定のパターンに適合する医薬組成物または化合物放出プロファイルを指す。１つの実施形態において、ポリヌクレオチドは、徐放性及び／または標的化送達のために、本明細書中に記載されるか、及び／または当該技術分野において既知である送達剤に封入される。本明細書で使用される場合、「封入する」という用語は、囲む、包囲するまたは包むことを意味する。これは、本開示の化合物の製剤に関連するので、封入は、実質的であっても、完全であってもまたは部分的であってもよい。「実質的に封入された」という用語は、本開示の医薬組成物または化合物の少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９または９９．９９９％超が、送達剤内に囲まれてもよいし、包囲されてもよいし、または封入されてもよいことを意味する。「部分的封入」とは、本開示の医薬組成物または化合物の１０、１０、２０、３０、４０、５０またはそれ未満が、送達剤内に囲まれてもよいいし、包囲されてもよいし、または封入されてもよいことを意味する。有利には、封入は、蛍光及び／または電子顕微鏡写真を用いて、本開示の医薬組成物または化合物の脱出または活性を測定することによって決定され得る。例えば、本開示の医薬組成物または化合物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％超が送達剤中に封入される。
【１０９３】
１つの実施形態において、徐放性製剤は、限定するものではないが、トリブロックコポリマーを含む。非限定的な例として、製剤は、２つの異なるタイプのトリブロックコポリマーを含む。国際公開番号ＷＯ２０１２１３１１０４及びＷＯ２０１２１３１１０６を参照のこと；また、米国特許出願公開第２０１４０２１９９２３号及び米国特許第２０１５０１６５０４２号（これらはそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる）も参照のこと。
【１０９４】
別の実施形態では、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子または迅速に除去された脂質ナノ粒子に封入され、次いで、脂質ナノ粒子または迅速に除去された脂質ナノ粒子は、本明細書に記載されるか及び／または当該技術分野において既知であるポリマー、ヒドロゲル及び／または外科用シーラントに封入されてもよい。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲルまたは外科用シーラントとは、ＰＬＧＡ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｉｎｃ．Ａｌａｃｈｕａ、ＦＬ）、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）、外科的シーラント、例えば、フィブリノーゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．Ｃｏｒｎｅｌｉａ、ＧＡ）、ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）、ＰＥＧベースのシーラント、またはＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）である。
【１０９５】
別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、対象に注入されたときにゲルを形成し得る当該技術分野において既知である任意のポリマーに封入される。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、生分解性であり得るポリマーマトリックスに封入される。
【１０９６】
１つの実施形態において、徐放性及び／または標的化送達のための製剤は、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含み、また、少なくとも１つの制御放出コーティングも含む。
【１０９７】
徐放性コーティングとしては、限定するものではないが、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ（登録商標）、及びセルロース誘導体、例えば、エチルセルロース水性分散ＡＱＵＡＣＯＡＴ（登録商標）及びＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（登録商標））が挙げられる。
【１０９８】
１つの実施形態において、ポリヌクレオチド徐放性及び／または標的化送達製剤は、ポリカチオン性側鎖を含み得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含む。分解性ポリエステルとしては、限定するものではないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、及びこれらの組合せが挙げられる。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ＰＥＧコンジュゲーションを含んで、ＰＥＧ化ポリマーを形成し得る。
【１０９９】
１つの実施形態において、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド徐放性及び／または標的化送達製剤は、米国特許第８，４０４，２２２号に記載されるような少なくとも１つのＰＥＧ及び／またはＰＥＧ関連ポリマー誘導体を含む。
【１１００】
別の実施形態では、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド徐放性送達製剤は、米国特許出願公開第２０１３０１３０３４８号に記載の徐放性ポリマーシステムである。
【１１０１】
１つの実施形態において、本開示の、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドまたはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、治療用ナノ粒子に封入する。
【１１０２】
治療用ナノ粒子は、本明細書に記載され、かつ限定するものではないが、国際公開番号ＷＯ２０１０００５７４０、ＷＯ２０１００３０７６３、ＷＯ２０１０００５７２１、ＷＯ２０１０００５７２３、ＷＯ２０１２０５４９２３、米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号、同第２０１０００６８２８５号、同第２０１１０２７４７５９号、同第２０１０００６８２８６号、同第２０１２０２８８５４１号、同第２０１３０１２３３５１号、及び同第２０１３０２３０５６７号、ならびに米国特許第８，２０６，７４７号、同第８，２９３，２７６号、同第８，３１８，２０８号、及び同第８，３１８，２１１号などの当該技術分野において既知である方法によって製剤化され得る。別の実施形態では、治療用ポリマーナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０１４０７９０号に記載の方法によって特定され得る。
【１１０３】
１つの実施形態において、ＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、ＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、及び／またはＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを、持続性放出のために製剤化する。
【１１０４】
本明細書で使用される場合「持続性放出」とは、特定の期間にわたる放出速度に適合する医薬組成物または化合物を指す。期間としては、限定するものではないが、時間、日、週、月及び年が挙げられる。非限定的な例として、持続性放出性ナノ粒子は、ポリマー及び治療剤、例えば、限定するものではないが、本開示のＩＬ−２３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド及びＩＬ−３６ガンマポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド、またはＩＬ−１８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む。国際公開番号ＷＯ２０１００７５０７２号、及び米国特許出願公開第２０１００２１６８０４号、同第２０１１０２１７３７７号、及び同第２０１２０２０１８５９号を参照のこと。別の非限定的な例において、持続性放出性製剤は、限定するものではないが、結晶、高分子ゲル及び／または微小粒子懸濁物などのバイオアベイラビリティを持続させる薬剤を含む。米国特許出願公開第２０１３０１５０２９５号を参照のこと。
【１１０５】
１臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣ꦼ볯銈볯鎼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢鎼볯겂菣麃菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣誏臣込臣龁臣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣骃菣膃菣꾁胣馨髧릉闧蒚臣芁苣袂臣ꮁꏨꒉ賥閁苣鞾苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣뎂菣膃苣릂菣궃苣覃苣ꮐ苣芀鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯醼볯颼볯閼볯颼苣芏藧꺁臣ꢁ胣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯颼볯銼볯馼볯馼胣랼볯銼볯醼볯邼볯閼볯銼볯膀볯꾼볯邼볯邼볯邼볯鞼볯閼胣랼볯銼볯醼볯邼볯钼볯銼볯膀迥뎁뇧붛觧놨蟥颡藥讖闧랏곧銼볯醼볯邼볯隼볯钼볯隼迥膀郥견볯邼볯銼볯邼볯钼볯馼볯랏胣誏臣貐곧銼볯醼볯邼볯邼볯隼볯閼迥ꮁ꣨覼臣貂臣蒁苣誃菣銲귥ꮁꏨꒉ賥閁苣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†볯ꒁ臣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀鳦讖ꓧ꺁菣躃닧邭臣膀菣ꪃ菣벃菣袃菣莃苣릂苣ꮐ苣芀鷩邙껥蒚臣设臣鞁臣膀菣躃닧邭臣膀볯ꒁ믤誸臣鶃菣麃菣膀뻤袁臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀菣ꪃ苣膃菣뎃胣鶃菣ꮂ菣鲃菣벃菣膀菣ꪃ蓧뒰觧膀菣ꪃ菣覃菣궂苣뢅胣鶃菣鞃菣钃菣閃菣것菣袃胣鶃菣ꮂ菣궃菣꾂菣뎃胣鶃菣ꊂ菣覃胣鶃菣ꊂ苣뾂菣ꮃ胣鶃菣ꢂ菣蚃菣膀菣ꪃ苣릂菣ꮃ胣鶃菣袼苣ꮃ菣ꢂ苣蚃菣覼胣鶃菣랂苣躃苣꾂菣것菣袃胣鶃菣鎃菣ꮃ苣ꮃ苣벃菣膀菣ꪃ苣것苣뎃胣鶃菣鮃苣閃苣벂菣膀菣ꪃ苣꾂菣것菣袃胣鶃菣ꆃ苣꾂菣것菣袃胣鶃菣랂苣躃苣꾂菣것菣袃胣鶃菣뾰듧膀菣ꪃ苣膃菣뎃胣鶃菣ꊂ菣뎃胣鶃菣ꪃ苣뎃胣鶃菣袼苣膃菣뎃苣龃菣覼胣鶃菣袼苣ꪃ菣ꢂ苣蚃菣覼胣鶃菣袼볯銈菣꾂菣覃裢莽뷯銈볯銈菣뢂菣覼胣鶃菣袼볯銈菣覃菣궂苣銈볯銈菣궃菣뎃苣릂菣ꮃ볯뺁臣꾁臣貂苣꺁뗧袐臣銂郥肂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†볯ꒁ臣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀닦芙铧誃菣銲귥꾁苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣芀룤龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀臣꺁苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀菣ꪃ苣膃菣뎃胣鶃菣ꮂ菣鲃菣벃菣膀菣ꪃ藩ꆄ냦ꦉ胣鶃菣銃菣궃苣랂藩膀菣ꪃ菣궃菣ꮃ菣麃菣벃菣膀菣ꪃ苣鞃菣ꦃ苣袃菣膀菣ꪃ苣龃菣膀菣ꪃ苣뮂苣벃菣膀菣ꪃ苣벃菣ꮃ胣鶃菣ꢂ苣蚃菣膀菣ꪃ볯ꪂ菣袃苣릂菣ꮃ볯膀菣ꪃ苣ꊂ菣ꊂ苣ꪃ菣벃菣膀菣ꪃ菣讃菣ꊂ菣뎂菣ꮃ胣鶃菣Ꚃ菣뾂菣膀菣ꪃ菣릂菣ꆂ苣뎃胣鶃菣ꊂ苣ꪃ菣벃菣膀菣ꪃ菣뾂苣ꪃ菣벃菣膀菣ꪃ苣ꊂ菣ꊂ苣ꪃ菣벃菣膀菣ꪃ냥ꂴ胣鶃菣릂菣것菣膀菣ꪃ苣龃菣膀菣ꪃ菣뢂菣膀菣ꪃ볯ꢂ菣것菣ꒂ菣뎃볯膀菣ꪃ볯뮂菣뎃苣릂菣ꮃ볯膀菣ꪃ볯겼裢ꦃ苣膃菣銈뷯辽裢겼裢ꪃ苣뎃볯膀菣ꪃ볯钼裢銃菣궃苣랂裢겼裢鞃菣ꪃ菣ꢂ苣蚃菣覼臣龁臣鶁苣覂臣蒵郥鮁臣ꦁ臣鶃菣麃菣ꢁ臣蒵郥鮁臣낼볯Ꞽ苣ꮐ苣芀臣覂臣ꖈ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃臣膀鯥鮚觧놨藥讖곧랼볯銼볯醼볯醼볯邼볯閼볯랏臣風볨閁苣ꚁ臣讂苣蚁臣颫볯뢂菣궃菣꾂苣鶃菣麃菣ꞁ臣讂볯뺁臣膀臣꺁藥鎽臣芏藧ꮁ苣誂鳦躘듧뢛臣蒵臣벾臣貂苣膀뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧銼볯醼볯邼볯鎼볯邼볯颼迥节迥ꞅ臣鎁臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀볯겼볯ꆼ裢낼볯Ꞽ菣궃菣꾂苣鶃菣麃菣銂郥肂胣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯銼볯邼볯钼볯馼볯랏迥뎁뇧붛觧놨곧颼볯銼볯隼볯鎼볯邼迥銂迥ꞅ臣鎁臣芀裥꺁鷩邙껥蒚臣设臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀볯ꖼ볯ꢁ볯겼볯뺁臣꾁볯ꖼ볯ꢁ볯겼볯ꆼ臣꺁苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣릂菣ꮃ苣誃菣銲귥ꞁ臣讂胣뎱鯥릉꣨견볯貼볯钼볯貼볯隼볯랏迥뎁鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯銼볯隼볯馼볯鎼迥銂迥ꞅ臣鎁臣芀臣覂臣ꖈ臣麝駩骮髧ꪁ뻤ꮁ臣蒁臣膀닦芙铧誃菣銲귥꾁胣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯鎼볯醼볯銼볯邼볯랏臣風볨閁苣讂苣蚁臣膀苣蚃菣릂菣躃닧邭臣龁臣馨髧릉闧蒚苣蚃菣릂菣躃닧邭臣芁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀菣ꮃ菣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣芀뻤袁臣膀뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧颼볯銼볯鎼볯隼볯閼迥誏臣貐곧颼볯銼볯鞼볯馼볯邼迥膀臣覂臣ꮁ뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧銼볯醼볯邼볯馼볯馼볯鞼迥銂迥ꞅ臣鎁臣芀臣覂臣ꖈ臣麝駩骮髧ꪁ뻤ꞁ臣膀蓨ꪳ菣躃닧邭臣膀菣궃菣꾂苣鶃菣麃菣낼볯Ꞽ裢낼볯Ꞽ볯銈볯ꖼ볯銂郥肂胣设臣낁胣겼뷯薽†뷯钽†뷯貽볯貼볯銼볯邼볯覼볯袽뷯銽뷯膽뷯薽뷯钽뷯莽뷯貽†볯薽뷯薽뷯銽뷯袽†볯邼볯醼볯馼볯銈볯邼볯邼볯겼뷯₉薽뷯ₔ膽뷯躼볯袼볯邼볯鎼볯낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯閽뷯覽뷯膽뷯₌늼뷯鎽뷯膽뷯莽뷯₈銼볯骼볯颼볯銈볯颼볯鮼迥뎁볯袽뷯躽뷯₇薽뷯ₔ膽뷯躼볯袼볯邼볯鞼볯ꪼ볯ꎼ뷯躽뷯銽뷯貽뷯薽뷯₄늼뷯貽뷯膽뷯薽볯醼볯颼볯銼볯閼裢銼볯鎼苣芏藧꺁臣ꢁ胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†鳦讖ꓧ꺁볯겼裢銼볯膀볯겼裢鎼볯겂菣麃迥뎁볯뺁臣꾁볯뢼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃臣膀볯ꖼ볯銈볯겼볯ꆼ裢낼볯Ꞽ菣궃菣꾂苣鶃菣麃菣銂郥肂蓨ꪳ菣躃닧邭룤ꮁꏨꒉ賥閁苣鞾苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀菣ꮃ菣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣芀뻤袁臣膀뇧붛觧놨곧랏볯貼볯隼볯貼볯隼볯랏迥뎁郥견볯貼볯颼볯貼볯醼볯랏胣ꪁ苣뎁臣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯鎼볯醼볯閼볯颼볯랏苣芏藧꺁臣ꢁ胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†볯ꒁ臣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀鳦躘듧뢛臣風볨閁苣讂菣궃菣꾂苣鶃菣麃菣꾁胣麝菣ꪃ菣벃菣뮂菣誏臣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣鶃菣ꒂ苣뎃ꓨ袐뷤ꮁ郥뺁苣讂胣设臣낁胣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯銼볯邼볯隼볯鎼볯랏苣芏藧꺁臣ꢁ胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†볯ꒁ臣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀닦芙铧誃菣銲귥꾁胣醰臣辁臣节볯꺨臣ꊂ苣ꪃ菣鶃菣麃菣銂郥肂胣ꊂ苣ꪃ菣鶃菣麃菣ꢁ臣ꚁ臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀苣꾂菣ꮃ藩膀菣뾂苣ꪃ菣뢅胣ꊂ苣ꪃ菣뢅迥뎁菣뾂苣ꪃ菣뢅苣鶃菣麃菣膀菣뾂苣ꪃ菣뢅菣膃菣뎂菣ꪃ菣벃胣ꢂ菣궂苣ꢂ菣ꮃ菣뾂苣ꪃ菣벃菣膀苣ꊂ菣ꢂ菣ꮃ菣뾂苣ꪃ菣벃菣膀苣龃菣ꊂ菣궂菣ꆃ苣꾂菣것菣袃苣鶃菣麃菣膀菣ꪃ볯ꊂ苣ꪃ菣뢅볯膀菣ꪃ볯ꆃ苣꾂菣ꮃ藩覼胣鶃菣랂苣躃苣꾂菣것菣袃迥뎁臣貂苣꺁뗧袐臣貁賦銁苣貂苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼臣꺁菣ꪃ볯鎃菣ꮃ苣릂菣ꮃ볯鶃菣麃菣銂郥肂胣鶃菣袼菣讃菣ꢂ苣蚃菣覼菣ꪃ菣벃臣膀菣뎃菣ꂃ苣鶃菣麃菣ꪁ臣꺁苣鶃菣麃菣ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣ꦃ菣肃菣뎂菣ꪃ菣벃臣膀鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯鎼볯鎼볯颼볯馼臣龁臣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯鎼볯醼볯醼볯閼볯랏臣風볨閁苣ꚁ臣讂苣蚁臣讧胩銂鳦馁苣芀볯ꒁ臣讅꟦ꮁ臣蒁臣膀菣ꪃ볯鎃菣ꮃ苣릂菣ꮃ볯鶃菣麃菣꾁胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣貂苣鶃菣貃苣것苣膃菣ꮁ苣뎃苣ꖃ苣벃菣閁苣鞾苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼臣꺁苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣芀臣꺁苣隃菣莃苣뎂菣ꪃ菣벃臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀菣ꪃ볯뎹藩覼裢鶃菣袼苣膃菣뎃볯낂菣뎂菣ꮃ苣鶃菣麃菣ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣设臣낁胣붛髩릉꣨겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯钼볯醼볯銂迥ꞅ臣鎁臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀駧銂닦芙臣讂臣膂臣뾽铧閁苣讂胣붛髩겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯钼볯醼볯랏苣芏藧꺁臣ꢁ볯뺁臣膀臣꺁藥鎽臣芏藧ꮁ苣誂鳦躘듧뢛臣蒵臣벾臣貂苣膀뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧銼볯醼볯邼볯醼볯銼볯閼迥节迥ꞅ臣鎁臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀鳦躘듧뢛臣風볨閁苣讂臣膀迥뎁볯뺁臣꾁뷥늩諦鎡裥躇臣誁臣ꚁ韦ꖟ臣芁苣醰臣辁臣节볯ꒁ臣ꮂ菣ꪂ菣Ꞁ菣ꪃ菣벃苣ꮐ苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 醼臣꺁껥붖뷥讅臣誁臣ꚁ胣뮲駧ꢔ菣躃닧邭臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀菣ꪃ菣뢂菣膀菣ꪃ苣膃菣뎃苣龃菣膀菣ꪃ볯ꊂ菣覃苣龃菣覼菣뎃菣ꪃ菣벃胣鶃菣袼菣벃苣銈苣龃菣ꢂ苣蚃菣覼迥뎁臣貂苣꺁뗧袐臣ꪁ臣꺁냥ꪁ臣ꢁ苣醼臣꺁苣龃菣ꮐ鳦鶃菣麃菣銂郥肂胣设臣낁胣뎱鯥릉꣨견볯貼볯颼볯貼볯钼볯랏苣芏藧꺁臣ꢁ胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†裥꺁껥붖뷥讅臣꾁胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣貂苣誃菣銲귥꾁胣붛髩릉꣨몇ꇩꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯馼볯馼볯ꮁ꣨覼臣貂臣蒁苣袂臣ꪁ苣龃菣ꮂ菣ꪂ菣Ꞁ蓨ꪳ苣ꮐ苣芀볯ꒁ臣讅꟦ꮁ臣蒁臣膀苣膃苣뎃胦芄돨꾁胣ꊂ菣躃裢ꊂ菣뎃臣龁臣ꊂ菣躃裢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袁臣膀鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯鞼볯銼볯鎼볯鎼迥ꞅ臣鎁臣覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†臣辁臣讁臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀菣躃닧邭臣膀鳦躘듧뢛臣讖ꓧ閁苣讂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃臣뎂苣誏臣鶃菣麃菣랂苣ꮃ苣ꮐ苣芀菣ꪃ菣벃苣Ꞃ菣꾁胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣貂臣鶃菣麃菣꺁臣骁苣ꞁ臣ꎁ臣节苣辁胣鎽ꧨ肊ꇨ蚈蟩ꮁ臣蒁臣ꊗ鿧ꞁ臣讂胣閁苣ꪁ苣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀菣ꪃ菣벃苣Ꞃ菣銂뷤ꢔ臣ꚁ胣뎂苣궸臣鶃菣貃苣것苣膃菣銂뿤랭臣ꚁ苣袂臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯颼볯醀⼼䥄㹖 蒁臣ꒁ臣꺁껥붖뷥讅臣꾁胣ꦼ볯銈볯鎼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢鎼볯겂菣麃菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀臣龁臣鶁苣覂臣蒁臣貂臣꺁뗧袐臣銂胣꺾냥銲귥궸臣붣觥隌臣讂胣鎁臣꺾냥銲귥꾁胣鶃菣貃苣것苣膃菣꺁苣ꊂ胣ꪁ苣뎁臣龔뷤ꦁ郥Ꞁ迥뎁볯뺁臣꾁铧蚈꟨Ꞁ菣ꪃ菣벃ꇨ꒱苣ꮐ苣ꞁ苣袂臣芀鷩邙껥蒚臣设臣鞁臣膀鳦讖ꓧꞁ뷤ꢔ臣貂뻥讂뻥辰닧邭臣膀뇧붛觧놨곧颼볯钼볯邼볯鞼볯馼迥膀뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧銼볯醼볯邼볯銼볯颼볯邼迥誏臣붛髩릉꣨겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯閼볯隼볯ꮁ꣨覼臣貂臣蒁苣꺾냥銲귥ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣ꖈ臣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣꺾냥銲귥꾁胣肉鳦꺁鳦鎖臣辂臣ꎁ臣겜雩몤臣鶃菣貃苣것苣膃菣꺁铦몇苣뚻闩馁苣袂臣ꮁ꣨袨臣貂뻥讂볯设臣낁胣뎱鯥릉꣨몇ꇩ겅雩견볯邼볯鎼볯醼볯馼볯鎼볯랏臣誁臣讂닦芙苣뎃菣꾂돨꺁賦骶铦몇苣芏藧꺁臣ꢁ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯颼볯醀⼼䥄㹖 誃菣뢂菣놂菣袃迥뎁菣躃菣鶃苣벃菣㲠牢ਾ†볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯颼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯뢼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣뺁臣꾁臣貂苣꺁臣骁苣讁臣蒵郥鮁臣膀볯薽뷯鎽뷯辽뷯薽†볯膽뷯辽볯뎼뷯膽뷯薽†볯辽뷯貽뷯螽뷯膀볯ꆼ볯ꮁ苣ꎁ臣膀볯膽뷯辽볯膽뷯讽뷯钽뷯袼菣躃苣ꎃ苣莃菣覼迥뎁볯膽뷯辽볯覽뷯辽뷯辽뷯薽뷯袼菣躃菣鶃苣벃菣覼룤ꮁꏨꒉ賥閁苣鞾苣芀볯膽뷯辽뷯膽뷯讽뷯钽뷯袼菣躃苣ꎃ苣莃菣覼臣膀苣ꮃ苣Ꚃ菣膀菣뎃藩ꦡ苣ꮐ苣膀뷤薆臣ꪇ蓧ꮁ귥ꢜ臣讂賥袐觧ꞁ臣趁臣誁苣膀냥辇臣놂苣뢅ꇥ銂郥鎂臣节苣蒁胣꺼뷯躽뷯ꪼ뷯莽뷯薽뷯鎽臣膀볯鲀볯邼뷯趽臣떂苣몂臣蒯鯥ꞁ臣ꎁ臣节苣辁胣邙껥馁苣节臣ꞁ臣ꪁ臣貁胣鶃菣貃苣것苣膃菣ꪁ臣꺁ꛨ뒰胦誏臣躖냦Ꞁ賥袐觧銂胩钁臣讂臣膂臣뾽铧閁苣鞾苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯颼볯醀⼼䥄㹖 꺼뷯躽뷯겼뷯邽뷯鎽뷯趽뷯鎽볯誃菣ꪃ菣붂菣ꂃ볯꾁胣邙껥馁苣节臣ꞁ臣ꪁ臣貁胣鎽蛥ꮁꓥ뚄臣颭鳥馁苣芄돨ꪁ臣꺁蓨ꪳ臣ꞁ臣ꚁ臣讂胣誃菣ꪃ菣붂菣ꂃ臣膀볯邼胣颼볯躽뷯꺁苣ꒂ苣꺁꿧늛臣芁臣ꚁ苣袂臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃臣ꦁ臣ꪦ냦Ꞁ迥뎁雧뒰胦隌郥ꦉ苣膀臩馁苣龁苣ꮁ뷤ꢔ臣ꚁ苣袂臣芀볯ꒁ臣讅꟦ꮁ臣蒁臣膀볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣誏臣込臣龁臣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣꾁胣邙껥馁苣节臣ꞁ臣ꪁ臣貁胣ꎼ뷯銽뷯趽뷯蒽뷯₅꺼뷯躽뷯겼뷯邽뷯鎽뷯趽뷯鎽臣ꦁ臣꺼뷯躽뷯겼뷯邽뷯鎽뷯趽뷯궸臣붣觥隌臣貂苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯颼볯醀⼼䥄㹖 龃菣내菨㲞牢ਾ†볯ꒁ臣讅꟦ꮁ臣蒁臣膀볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯颼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯뢼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣뺁臣꾁臣貂苣꺁臣骁苣讁臣蒵郥鮁苣膀듧貏菣讃듧麃룤ꮁꏨꒉ賥鞁臣节苣蒁胣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣내迨龃菣내菨꾁胣붛髩겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯颼볯閼볯뺁臣꾁뇧붛觧놨蟥颡藥讖곧銼볯醼볯邼볯鞼볯钼볯馼迥ꮁ꣨覼臣貂臣蒁苣节臣ꞁ臣讂胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣貂苣鶃菣貃苣것苣膃菣ꪁ臣꺁닦芙觥銂郥肂듧貏菣讃듧麃苣膀닦芙觥銂蓨ꮅ飧ꮁ胩钁臣讂臣膂臣뾽铧鞁臣节苣蒁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†跥몛뷤蒵裦ꦉ戼㹲 蒁臣ꒁ臣꺁껥붖뷥讅臣꾁胣ꦼ볯銈볯鎼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢鎼볯겂菣麃菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀臣龁臣鶁苣覂臣蒁臣貂臣꺁뗧袐臣銂胣躖냦Ꞁ菣袃菣莃苣릂臣붣觥隌臣ꚁ胣認鯥鎽뗧邈觧銂뷥邈臣讂胣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣認鯥鎽뗧邈觧뺁臣꾁菣벃苣袃꟦蒵裦ꦉ臣膀鯥鮚觧놨藥讖闧랏볯꾼볯邼볯鎼볯鞼볯邼볯ꮁ꣨覼臣貂臣릖돦ꮁ苣ꎁ臣붣胩閁苣讂胣認鯥鎽뗧邈觧꾁胣붛髩릉꣨겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯隼볯钼臣風볨閁苣ꚁ臣讂苣蚁臣膌뛧Ꞁ铦몇ꏨꒉ臣芁臣ꚁ苣袂臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 ꖈ臣龮雦ꊽ藦ꮁ臣蒁臣膀跥몛뷤蒵裦ꦉ臣閁苣ꮁ胣蒵裦ꦉ臣ꢑ鯥ꮁ뷥邈臣貂臣꺾냥钭胦鲆臣龁臣龔裥ꎧ胦鶃菣麃菣銂鳦馁苣袼뻤袁臣膀鯥鮚觧놨藥讖闧랏볯꾼볯邼볯鎼볯鞼볯邼볯銂迥ꞅ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 ꦼ볯銈볯鎼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢鎼볯겂菣麃菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀臣龁臣鶁苣覂臣蒁臣貂臣꺁뗧袐臣꾁胣붛髩릉꣨겅雩ꪕ迥랼볯銼볯醼볯邼볯隼볯钼臣風볨閁苣讂苣蚁臣認鯥鎽럦袐觧꺁觧Ꞁ苣覜臣鞾苣袼뻤袁臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯銈볯꺼菣趽뷯銈볯꺁볥Ꞁ軧膀迥뎁볯뺁臣꾁냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯邼뷯낼뷯뮃뷯꺁닧ꚺ볯ꞁ臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†苣궂苣붂菣ꂃ戼㹲 蒁臣ꒁ臣꺁껥붖뷥讅臣꾁胣ꦼ볯銈볯鎼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢鎼볯겂菣麃菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀臣龁臣鶁苣覂臣蒁臣貂臣꺁뗧袐臣銂胣ꢂ苣붂苣벃菣궸臣붣觥隌臣讂胣ꢂ苣붂苣벃菣꾁胣醰臣辁臣节볯ꒁ臣鶃菣貃苣것苣膃菣銂단랍臣貂胣내菨膀뗧钹迥뎁볯뺁臣꾁铧ꦉ臣膀臩閁苣鞾苣芀鷩邙껥蒚臣设臣鞁臣膀볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯颼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯뢼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣뺁臣꾁臣貂苣꺁臣骁苣讁臣蒵郥鮁苣膀鯥鮚藥讖闧랏볯꾼볯邼볯鎼볯颼볯邼볯邼臣風볨閁苣ꚁ臣讂苣궂苣붂菣ꂃ룤ꮁ菣벃菣鞁臣节苣蒁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†苣ꮃ苣馃菣릂臣膀臩㲔牢ਾ†臣辁臣讁臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯颼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀볯뢼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣뺁臣꾁臣貂苣꺁臣骁苣讁臣蒵郥鮁苣膀賦骶铦몇苣ꮃ苣馃菣릂臣膀臩랂苣蚃菣궸臣붣觥隌臣讂胣랂菣꾂菣ꎂ菣궃苣뎃뫦늶苣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀볯겼裢銼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣ꦼ볯銈볯隼苣뎃菣鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯銂郥肂菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃胣꾼볯钼볯겼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣ꮐ苣鶃菣貃苣것苣膃菣膀臣龁臣鶁苣覂臣蒁臣貂臣꺁뗧袐臣銂臣ꦁ臣뮲駧ꒉ臣ꖎ꟨閁臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ胣랂菣꾂菣벃苣꺁胩钁苣릂菣ꂃ苣ꊽ裦鞁臣节苣蒁胣麝駩骮髧ꪁ뻤ꢁ臣ꚁ胣겜雩몤臣뾽铧馁苣鎁臣貁臣趁苣膌뛧Ꞁ铦몇苣ꮃ苣馃菣릂臣膀臩랂苣蚃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