(57)【要約】  本発明は抗ＯＸ４０抗体およびその抗原結合部分を提供する。ある実施態様において、抗体またはそのフラグメントは、癌の処置に使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４９、５０および５１；配列番号５５、５６および５７；配列番号６１、６２および６３；配列番号６７、６８および６９；配列番号７３、７４および７５；配列番号７９、８０および８１；配列番号８５、８６および８７；配列番号９１、９２および９３；配列番号１０３、１０４および１０５；配列番号１０９、１１０および１１１；配列番号１１８、１１９および１２０；配列番号１３３、１３４および１３５；配列番号１３９、１４０および１４１；配列番号１４８、１４９および１５０；配列番号１５７、１５８および１５９；配列番号１６３、１６４および１６５；配列番号１７２、１７３および１７４；配列番号１７８、１７９および１８０；配列番号１８４、１８５および１８６；配列番号１９５、１９６および１９７；および配列番号２０３、２０４および２０５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む重鎖可変ドメイン；および
配列番号５２、５３および５４；配列番号５８、５９および６０；配列番号６４、６５および６６；配列番号７０、７１および７２；配列番号７６、７７および７８；配列番号８２、８３および８４；配列番号８８、８９および９０；配列番号９４、９５および９６；配列番号９７、９８および９９；配列番号１００、１０１および１０２；配列番号１０６、１０７および１０８；配列番号１１２、１１３および１１４；配列番号１１５、１１６および１１７；配列番号１２１、１２２および１２３；配列番号１２４、１２５および１２６；配列番号１２７、１２８および１２９；配列番号１３０、１３１および１３２；配列番号１３６、１３７および１３８；配列番号１４２、１４３および１４４；配列番号１４５、１４６および１４７；配列番号１５１、１５２および１５３；配列番号１５４、１５５および１５６；配列番号１６０、１６１および１６２；配列番号１６６、１６７および１６８；配列番号１６９、１７０および１７１；配列番号１７５、１７６および１７７；配列番号１８１、１８２および１８３；配列番号１８７、１８８および１８９；配列番号１９０、１９１および１９２；配列番号１９８、１９９および２００；配列番号２０６、２０７および２０８；配列番号２１０、２１１および２１２；および配列番号２１４、２１５および２１６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、単離抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインが配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み；そして配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み；そして配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み；そして配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み；そして配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
重鎖可変ドメインが配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；そして配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
配列番号４９、５０および５１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号５２、５３および５４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号５８、５９および６０の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６１、６２および６３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号６４、６５および６６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号７０、７１および７２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号７３、７４および７５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号７６、７７および７８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号７９、８０および８１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号８２、８３および８４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号８５、８６および８７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号８８、８９および９０の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号９１、９２および９３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号９４、９５および９６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号９７、９８および９９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１００、１０１および１０２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１０３、１０４および１０５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１０６、１０７および１０８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１０９、１１０および１１１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１１２、１１３および１１４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１１５、１１６および１１７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１１８、１１９および１２０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２１、１２２および１２３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２４、１２５および１２６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２７、１２８および１２９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１３０、１３１および１３２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１３３、１３４および１３５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１３６、１３７および１３８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１３９、１４０および１４１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１４２、１４３および１４４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１４５、１４６および１４７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１４８、１４９および１５０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１５１、１５２および１５３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１５４、１５５および１５６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１５７、１５８および１５９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６０、１６１および１６２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１６３、１６４および１６５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６６、１６７および１６８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６９、１７０および１７１の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１７２、１７３および１７４の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１７５、１７６および１７７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１７８、１７９および１８０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１８１、１８２および１８３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１８４、１８５および１８６の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１８７、１８８および１８９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１９０、１９１および１９２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号１９５、１９６および１９７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１９８、１９９および２００の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号２０３、２０４および２０５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２０６、２０７および２０８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；
配列番号６１、６２および６３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２１０、２１１および２１２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；および
配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２１４、２１５および２１６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット
からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット／軽鎖ＣＤＲセットを含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項１〜９の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
ヒト抗体である、請求項１〜１０の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
ＩｇＧである、請求項１〜１１の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体。
【請求項１３】
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１２に記載の抗ＯＸ４０抗体。
【請求項１４】
抗原結合フラグメントがＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖである、請求項１〜１１の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
癌を有する対象を処置する方法であって、有効量の請求項１〜１４の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項１７】
癌が前立腺癌、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、食道癌、肝癌、腎癌、胃癌、結腸癌、子宮頸癌、子宮癌、肝癌および血液癌からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
癌がＢ慢性リンパ性白血病(Ｂ−ＣＬＬ)、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、有毛細胞白血病(ＨＣＬ)、骨髄増殖性障害／新生物(ＭＰＤＳ)、骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫(ＢＬ)を含む非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、Ｔ細胞リンパ腫(ＴＣＬ)、多発性骨髄腫(ＭＭ)、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
炎症性疾患を有する対象を処置する方法であって、有効量の請求項１〜１３の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
炎症性疾患がアレルギー、ＣＯＰＤ、自己免疫性疾患、リウマチ性関節炎、喘息、移植片対宿主病、クローン病、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、重症筋無力症、グレーブス病、移植片拒絶、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、全身性硬化症およびウイルス誘発肺炎症からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
感染を有する対象を処置する方法であって、有効量の請求項１〜１４の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
免疫応答の刺激または抑制を必要とする疾患を処置する方法であって、有効量の請求項１〜１４の何れかに記載の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
疾患が癌、炎症性疾患およびウイルス感染からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年８月８日出願の米国仮出願６２／３７１,９９３に基づく優先権を主張し、その内容全体を、引用により全体として本明細書に包含させる。
【背景技術】
【０００２】
背景
ＯＸ４０(ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５またはＴＸＧＰ１Ｌとしても知られる)は、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ３０およびＣＤ４０を含む、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＯＸ４０の細胞外リガンド結合ドメインは、３個の完全システインリッチドメイン(ＣＲＤ)および部分的、第四のＣ末端ＣＲＤからなる(Bodmer et al, 2002, Trends Biochem. Sci., 27, 19-26)。ＯＸ４０のリガンドであるＯＸ４０ＬはＴＮＦファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞、マクロファージ、内皮細胞および樹状細胞(ＤＣ)を含む活性化抗原提示細胞(ＡＰＣ)に発現される。ＯＸ４０は膜結合受容体であるが、可溶性アイソフォームも検出されている(Taylor and Schwarz, 2001, J. Immunol. Methods, 255, 67-72)。ＯＸ４０は休止Ｔ細胞では発現されないが、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)のライゲーション後、活性化Ｔ細胞で一過性に発現される。
【０００３】
ＯＸ４０は、主要共刺激受容体であり、ＣＤ２８およびＯＸ４０の逐次的結合が最適Ｔ細胞増殖および生存をもたらす。活性化Ｔ細胞上のＯＸ４０のライゲーションは、サイトカイン産生増強およびＣＤ４＋およびＣＤ８＋両方のＴ細胞の増殖に至り(Gramaglia et al., 2000, J. Immunol, 165, 3043-3050, Bansal-Pakala et al., 2004, J. Immunol., 172, 4821-425)、進行中のＴｈｌおよびＴｈ２両方の応答に寄与し得る(Gramaglia et al., 1998, J. Immunol., 161, 6510-6517, Arestides et al, 2002, Eur. J. Immunol. 32, 2874-2880)。ＯＸ４０共刺激は、エフェクターＴ細胞死の阻害を介して、免疫応答の初期エフェクター相を超えてＴ細胞生存を延長し、記憶Ｔ細胞の数を増加させる。
【０００４】
免疫活性化が過剰または無制御であるならば、病的アレルギー、喘息、炎症、自己免疫性および他の関連疾患が生じ得る。
【０００５】
腫瘍細胞は、一般に、制御性Ｔリンパ球(Ｔｒｅｇ)が大きく介在する能動的免疫耐容性の誘発により、免疫系を‘回避する’(Quezada SA et al. Immunol Rev. 2011; 241:104-118)。それ故に、エフェクター(すなわち、腫瘍細胞の直接的または間接的根絶)Ｔリンパ球(Ｔｅｆｆ)と免疫寛容原性(すなわち、Ｔｅｆｆエフェクター機能および生存の抑制)Ｔｒｅｇのバランスが、効果的抗腫瘍免疫療法に重要であると考えられる。換言すると、効果的抗腫瘍免疫応答は、腫瘍特異的Ｔｅｆｆのエフェクター機能増強および／または腫瘍特異的Ｔｒｅｇの抑制性機能の減弱により得られ得る。これらの応答に介在することが示されている重要な受容体は、ＯＸ４０(ＣＤ１３４)である(Sugamura et al., Nature Rev. Imm. 2004; 4: 420-431)。
【０００６】
腫瘍担持マウスにおけるマウスＣＤ１３４受容体のインビボライゲーション(可溶性マウスＯＸ４０リガンド(ＯＸ４０Ｌ)−免疫グロブリン融合タンパク質またはマウスＯＸ４０Ｌ模倣物、例えば抗マウスＣＤ１３４特異的抗体による)は、種々のマウス悪性腫瘍細胞株、例えば、リンパ腫、黒色腫、肉腫、結腸癌、乳癌および神経膠腫のマウスモデルにおいて抗腫瘍免疫を増強し、無腫瘍生存に至る(Sugamura et al. Nature Rev. Imm. 2004; 4:420631)。Al-Shamkhani et al. (Eur. J. Chem. 1996; 26: 1695-1699)は、活性化マウスＴ細胞のＯＸ４０の示差的発現を探索するためにＯＸ４０Ｌ結合を阻害しなかったＯＸ８６と称される抗ＯＸ４０抗体を使用し、Hirschhorn-Cymerman et al. (J. Exp. Med. 2009; 206: 1103-1116)は、可能な化学免疫療法としてマウスモデルにおいてＯＸ８６をシクロホスファミドと共に使用した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
それ故に、ＯＸ４０、特に抗ＯＸ４０抗体に基づく効果的処置剤が当分野で必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要約
本発明は、ヒトＯＸ４０を含むＯＸ４０に特異的に結合する抗体を提供する。
【０００９】
第一の態様において、本発明は、配列番号４９、５０および５１；配列番号５５、５６および５７；配列番号６１、６２および６３；配列番号６７、６８および６９；配列番号７３、７４および７５；配列番号７９、８０および８１；配列番号８５、８６および８７；配列番号９１、９２および９３；配列番号１０３、１０４および１０５；配列番号１０９、１１０および１１１；配列番号１１８、１１９および１２０；配列番号１３３、１３４および１３５；配列番号１３９、１４０および１４１；配列番号１４８、１４９および１５０；配列番号１５７、１５８および１５９；配列番号１６３、１６４および１６５；配列番号１７２、１７３および１７４；配列番号１７８、１７９および１８０；配列番号１８４、１８５および１８６；配列番号１９５、１９６および１９７；および配列番号２０３、２０４および２０５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号５２、５３および５４；配列番号５８、５９および６０；配列番号６４、６５および６６；配列番号７０、７１および７２；配列番号７６、７７および７８；配列番号８２、８３および８４；配列番号８８、８９および９０；配列番号９４、９５および９６；配列番号９７、９８および９９；配列番号１００、１０１および１０２；配列番号１０６、１０７および１０８；配列番号１１２、１１３および１１４；配列番号１１５、１１６および１１７；配列番号１２１、１２２および１２３；配列番号１２４、１２５および１２６；配列番号１２７、１２８および１２９；配列番号１３０、１３１および１３２；配列番号１３６、１３７および１３８；配列番号１４２、１４３および１４４；配列番号１４５、１４６および１４７；配列番号１５１、１５２および１５３；配列番号１５４、１５５および１５６；配列番号１６０、１６１および１６２；配列番号１６６、１６７および１６８；配列番号１６９、１７０および１７１；配列番号１７５、１７６および１７７；配列番号１８１、１８２および１８３；配列番号１８７、１８８および１８９；配列番号１９０、１９１および１９２；配列番号１９８、１９９および２００；配列番号２０６、２０７および２０８；配列番号２１０、２１１および２１２；および配列番号２１４、２１５および２１６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号��０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群��ら選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；そして軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
さらなる実施態様において、本発明は、配列番号４９、５０および５１／配列番号５２、５３および５４；配列番号５５、５６および５７／配列番号５８、５９および６０；配列番号６１、６２および６３／配列番号６４、６５および６６；配列番号６７、６８および６９／配列番号７０、７１および７２；配列番号７３、７４および７５／配列番号７６、７７および７８；配列番号７９、８０および８１／配列番号８２、８３および８４；配列番号８５、８６および８７／配列番号８８、８９および９０；配列番号９１、９２および９３／配列番号配列番号９４、９５および９６；配列番号６７、６８および６９／配列番号９７、９８および９９；配列番号５５、５６および５７／配列番号１００、１０１および１０２；配列番号１０３、１０４および１０５／配列番号１０６、１０７および１０８；配列番号１０９、１１０および１１１／配列番号１１２、１１３および１１４；配列番号６７、６８および６９／配列番号１１５、１１６および１１７；配列番号１１８、１１９および１２０／配列番号１２１、１２２および１２３；配列番号６７、６８および６９／配列番号１２４、１２５および１２６；配列番号６７、６８および６９／配列番号１２７、１２８および１２９；配列番号６７、６８および６９／配列番号１３０、１３１および１３２；配列番号１３３、１３４および１３５／配列番号１３６、１３７および１３８；配列番号１３９、１４０および１４１／配列番号１４２、１４３および１４４；配列番号５５、５６および５７／配列番号１４５、１４６および１４７；配列番号１４８、１４９および１５０／配列番号１５１、１５２および１５３；配列番号６７、６８および６９／配列番号１５４、１５５および１５６；配列番号１５７、１５８および１５９／配列番号１６０、１６１および１６２；配列番号１６３、１６４および１６５／配列番号１６６、１６７および１６８；配列番号６７、６８および６９／配列番号１６９、１７０および１７１；配列番号１７２、１７３および１７４／配列番号１７５、１７６および１７７；配列番号１７８、１７９および１８０／配列番号１８１、１８２および１８３；配列番号１８４、１８５および１８６／配列番号１８７、１８８および１８９；配列番号６７、６８および６９／配列番号１９０、１９１および１９２；配列番号１９５、１９６および１９７／配列番号１９８、１９９および２００；配列番号２０３、２０４および２０５／配列番号２０６、２０７および２０８；配列番号６１、６２および６３／配列番号２１０、２１１および２１２；配列番号６７、６８および６９／配列番号２１４、２１５および２１６からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット／軽鎖ＣＤＲセットを含む、単離抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００１１】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１２】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１３】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１４】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１５】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１６】
他の態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含み；かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００１７】
上記態様または実施態様の何れかのある実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する。
【００１８】
上記態様または実施態様の何れかの他の実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは単離ヒト抗体である。
【００１９】
上記態様または実施態様の何れかのある実施態様において、抗ＯＸ４０抗体はＩｇＧである。さらなる実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプである。
【００２０】
上記態様または実施態様の何れかのある実施態様において、抗原結合フラグメントはＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖである。
【００２１】
他の実施態様において、本発明は、上記態様または実施態様の何れかの抗ＯＸ４０抗体またはその抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００２２】
ある実施態様において、本発明は、癌を有する対象を処置する方法に関し、該方法は、対象に有効量の上記態様または実施態様の何れかの抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。ある実施態様において、癌は、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、食道癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌、結腸癌、子宮頸癌、子宮癌、肝臓癌および血液癌からなる群から選択される。さらに他の実施態様において、癌は、Ｂ慢性リンパ性白血病(Ｂ−ＣＬＬ)、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、有毛細胞白血病(ＨＣＬ)、骨髄増殖性障害／新生物(ＭＰＤＳ)、骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫(ＢＬ)を含む非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、Ｔ細胞リンパ腫(ＴＣＬ)、多発性骨髄腫(ＭＭ)、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫からなる群から選択される。
【００２３】
ある実施態様において、本発明は、炎症性疾患を有する対象を処置する方法に関し、該方法は、対象に有効量の上記態様または実施態様の何れかの抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。
【００２４】
さらなる実施態様において、炎症性疾患は、アレルギー、ＣＯＰＤ、自己免疫性疾患、リウマチ性関節炎、喘息、移植片対宿主病、クローン病、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、重症筋無力症、グレーブス病、移植片拒絶、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、全身性硬化症およびウイルス誘発炎症性肺疾患からなる群から選択される。
【００２５】
ある実施態様において、本発明は、感染を有する対象を処置する方法に関し、該方法は、対象に有効量の上記態様または実施態様の何れかの抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。
【００２６】
ある実施態様において、本発明は、免疫応答の刺激または抑制を必要とする疾患を処置する方法に関し、該方法は、対象に有効量の上記態様または実施態様の何れかの抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。さらなる実施態様において、疾患は、癌、炎症性疾患およびウイルス感染からなる群から選択される。
【００２７】
また本発明に含まれるのは、ここに開示するアミノ酸配列をコードする核酸、ならびに本発明の抗体およびフラグメントを製造する方法である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、パーセントＣＤ３＋ＯＸ４０＋Ｔ細胞により測定した活性化ヒトＴ細胞への抗ＯＸ４０抗体クローンの結合を示すグラフである。試験した抗ＯＸ４０クローンをｘ軸に示す。二次抗体のみを陰性対照として使用した。市販ＡＰＣ標識抗ヒトＯＸ４０(クローンＢｅｒ−ＡＣＴ３５)を陽性対照として使用した。
【００２９】
【図２Ａ】図２Ａは、制御実験条件で６時間刺激後の相対発光量(ＲＬＵ)により測定したルシフェラーゼ活性を示すグラフである。図２Ａに示すとおり、非刺激細胞、アイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)およびポリクローナル抗ＯＸ４０抗体はＲＬＵの増加を示さず、ＮＦｋＢ経路が活性化されなかったことを示した。陽性対照である可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)および可溶性ＴＮＦαは高いＲＬＵを示し、ＮＦｋＢ活性の増加を示した。
【００３０】
【図２Ｂ】図２Ｂは、６時間刺激後に試験した抗ＯＸ４０抗体クローンについてＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示すグラフである。非刺激細胞およびアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)は、陰性対照として示す。可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)は、陽性対照として示す。グラフを二分する線は、参照として陰性対照ＲＬＵレベルを示す。図２Ｂに示すとおり、ＯＸ４０クローンの全ては、陰性対照値を超えるＲＬＵの増加を示した。クローン１Ｃ４、４Ｄ７  １Ｄ９および１Ｂ２は最強ＮＦｋＢ活性化を示した(精製ｒｈＯＸ４０Ｌ＋抗Ｈｉｓで＞５０％のシグナルが観察された)。
【００３１】
【図３Ａ】図３Ａは、制御実験条件で約１５時間刺激後の相対発光量(ＲＬＵ)により測定したルシフェラーゼ活性を示すグラフである。図３Ａに示すとおり、非刺激細胞、アイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)はＲＬＵの増加を示さず、ＮＦｋＢ経路が活性化されなかったことを示した。陽性対照、可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)および可溶性ＴＮＦαは高いＲＬＵを示し、ＮＦｋＢ活性の増加を示した。
【００３２】
【図３Ｂ】図３Ｂは、約１５時間刺激後に試験した抗ＯＸ４０抗体クローンについてＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示すグラフである。非刺激細胞およびアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)は、陰性対照として示す。可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)は、陽性対照として示す。グラフを二分する線は、参照として陰性対照ＲＬＵレベルを示す。図３Ｂに示すとおり、ＯＸ４０クローンの大部分は、陰性対照値を超えるＲＬＵの増加を示した。特にクローン１Ａ１１、１Ｃ４、４Ｄ７、１Ｄ９、５Ｃ１１、２Ｂ４、４Ｄ９、３Ｃ１０および１Ｂ２は、この中で最も活性であった。
【００３３】
【図４Ａ】図４Ａは、フローサイトメトリーにより測定したＣＤ３＋ＣＤ２５＋活性化Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフである。抗ＣＤ３単独およびアイソタイプ対照抗体であるＦｅＤ２を陰性対照として使用した。抗ＣＤ２８を陽性対照として使用した。グラフを二分する線は、参照としてＣＤ３＋ＣＤ２５＋活性化Ｔ細胞のパーセンテージの陰性対照レベルを示す。
【００３４】
【図４Ｂ】図４Ｂは、フローサイトメトリーにより測定したＣＤ３＋ＣＤ２５＋活性化Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフである。抗ＣＤ３単独およびアイソタイプ対照抗体であるＦｅＤ２を陰性対照として使用した。抗ＣＤ２８を陽性対照として使用した。グラフを二分する線は、参照としてＣＤ３＋ＣＤ２５＋活性化Ｔ細胞のパーセンテージの陰性対照レベルを示す。
【００３５】
図４Ａおよび図４Ｂに示すとおり、多数の抗ＯＸ４０クローンは、有意なＴ細胞共刺激を示した。Ｔ細胞共刺激を示すこれらクローンの中で、クローン２Ｂ４、４Ｄ７、２Ｂ３、４Ｇ９および１Ｂ１は最も強固なアゴニスト活性を示した。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
詳細な記載
定義
“抗原結合タンパク質”は、抗原に結合する部分、および、所望により、抗原結合部分が抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する構造を採ることを可能にする足場またはフレームワーク部分を含む、タンパク質である。抗原結合タンパク質の例は、抗体、抗体フラグメント(例えば、抗体の抗原結合フラグメント)、抗体誘導体および抗体アナログを含む。抗原結合タンパク質は、例えば、移植ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を有する代替的タンパク質足場または人工足場を含み得る。このような足場は、例えば、抗原結合タンパク質の三次元構造安定化のために導入された変異を含む抗体由来足場ならびに、例えば、生体適合性ポリマーを含む、完全合成足場を含むが、これらに限定されない。例えば、Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654参照。さらに、ペプチド抗体模倣物(“ＰＡＭ”)ならびに足場としてフィブロネクチン成分を利用する抗体模倣物に基づく足場を使用できる。
【００３７】
用語“抗体”は、免疫グロブリンと同義であり、当分野で一般に知られるものとして解釈されるべきである。基本的抗体構造単位は、四量体である。各四量体は二つの同一ポリペプチド鎖対からなり、各対は、１つの“軽”鎖(約２５kDa)および１つの“重”鎖(約５０〜７０kDa)を有する。一般に、各抗体鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主として担う可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、例えば、エフェクター機能を担う、定常領域を規定する。ヒト軽鎖はカッパまたはラムダ軽鎖に分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンに分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は約１２以上のアミノ酸の“Ｊ”領域により連結され、重鎖はまた約３以上のアミノ酸の“Ｄ”領域を含む。
【００３８】
各重／軽鎖対の可変領域(ＶＨ／ＶＬ)は、それぞれ、抗原結合部位を形成する。抗体重鎖および軽鎖の可変領域(ＶＨ／ＶＬ)は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される、３つの超可変領域により連結された、比較的保存されるフレームワーク領域(ＦＲ)の同じ一般構造を示す。Ｎ末端からＣ末端方向で、軽鎖および重鎖の両方はドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては当分野で知られ、例えば、Kabat et al. in Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991(ここでは“Kabat番号付け”と称す)に記載の定義を含む。例えば、抗体のＣＤＲ領域は、Kabat番号付けにより決定され得る。
【００３９】
用語“インタクト抗体”または“完全長抗体”は、各々Ｆｃ領域を含む２つの同一抗体軽鎖および２つの同一抗体重鎖からなる、抗体をいう。
【００４０】
“抗原結合ドメイン”、“抗原結合領域”または“抗原結合部位”は、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質の抗原に対する特異性および親和性に寄与する、アミノ酸残基(または他の部分)を含む抗原結合タンパク質の部分をいう。その抗原に特異的に結合する抗体について、これは、そのＣＤＲドメインの少なくとも一つの少なくとも一部を含む。
【００４１】
“エピトープ”は、抗原結合タンパク質(例えば、抗体)により結合される、分子の部分である。エピトープは、分子の非隣接部分を含み得る(例えば、ポリペプチドにおいて、該ポリペプチドの一次配列では隣接していないが、該ポリペプチドの三次および四次構造の場合は、抗原結合タンパク質により結合されるのに互いに十分に近いアミノ酸残基)。一般に抗体の可変領域、特にＣＤＲはエピトープと相互作用する。
【００４２】
用語“Ｆｃポリペプチド”は、抗体のＦｃ領域由来の天然およびムテイン形態のポリペプチドを含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含むこのようなポリペプチドの切断型も包含される。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質(およびそれから形成されるオリゴマー)は、プロテインＡまたはプロテインＧカラムでの親和性クロマトグラフィーによる容易な精製の利点をもたらす。
【００４３】
用語“抗ＯＸ４０抗体”および“ＯＸ４０に結合する抗体”は、該抗体が、ヒトＯＸ４０を含むＯＸ４０のターゲティングにおいて診断および／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＯＸ４０と結合できる抗体をいう。
【００４４】
ここで使用する用語“単特異的”は、一つの特定のエピトープに対して親和性を示す抗体またはその抗原結合フラグメントをいう。対照的に、二特異的抗体またはその抗原結合フラグメントは、２つの異なるエピトープに対して親和性を示す。ある実施態様において、ここに記載する方法および組成物は、単特異的抗体またはその抗原結合フラグメントの細胞内送達に有用である。ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは単特異的である。
【００４５】
“多特異的抗体”は、１以上の抗原の一つを超えるエピトープを認識する抗体をいう。このタイプの抗体のサブクラスは、同一または異なる抗原上の２つの別のエピトープを認識する“二特異的抗体”である。
【００４６】
抗体の文脈においてここで使用する用語“特異的結合”、“特異的に結合する”または“特異的結合性”は、他の分子または部分に比して、抗体の抗原への非共有または共有の優先的結合をいう(例えば、抗体は、他の利用可能な抗原に比して、特定の抗原に特異的に結合する)。ある実施態様において、抗体は、１０−５Ｍ以下(例えば、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下または１０−１０Ｍ以下)の解離定数ＫＤで抗原(例えば、ＯＸ４０)と結合するならば、該抗原に特異的に結合する。
【００４７】
ここで使用する用語“ヒト抗体”は、ヒト免疫グロブリン配列由来重鎖および軽鎖を含む、抗体または抗体の抗原結合フラグメントをいう。ヒト抗体は、多様な方法で同定可能であり、その例は下に記載され、ヒト重鎖および／または軽鎖コード化遺伝子由来の抗体を発現するように遺伝子修飾されたマウスの目的の抗原での免疫化を介するものを含む。ある実施態様において、ヒト抗体は、抗体のグリコシル化パターンが、同じ配列を有する抗体が天然に存在すると仮定した場合と異なるように組み換え方法を使用して製造される。
【００４８】
用語“キメラ抗体”は、ある特定の源または種由来の１以上の領域および異なる源または種由来の１以上の領域を含む、抗体をいう。
【００４９】
用語“ヒト化抗体”は、非ヒト種(例えば、マウス)由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部がより“ヒト様”であるように、すなわち、よりヒト生殖系列可変配列に類似するように、改変されている、抗体をいう。“ヒト化抗体”は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク(ＦＲ)領域および実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む、抗体またはそのバリアント、誘導体、アナログもしくはフラグメントをいう。
【００５０】
“ヒト化抗体”は、１以上のアミノ酸置換、欠失および／または付加により、非ヒト種に由来する抗体の配列と異なる配列を有する抗体をいう。一般に、ヒト化抗体は、それをヒト対象に投与したとき、非ヒト種抗体、例えば、マウスまたはキメラ抗体と比較して、免疫応答を有する可能性が低くおよび／または重篤度が低い免疫応答を誘発する。ある実施態様において、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークおよび定常ドメインにおけるあるアミノ酸を変異させて、ヒト化抗体を産生する。ヒト化抗体の製造法の例は、米国特許６,０５４,２９７、５,８８６,１５２および５,８７７,２９３に見ることができる。
【００５１】
“抗体フラグメント”、“抗体部分”、“抗体の抗原結合フラグメント”または“抗体の抗原結合部分”は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子をいう。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ(ａｂ’)２；Ｆｄ；およびＦｖフラグメントならびにｄＡｂ；二特異性抗体；直線状抗体；一本鎖抗体分子(例えばｓｃＦｖ)；少なくともポリペプチドへの特異的抗原結合を与えるのに十分な抗体の一部を含む、ポリペプチドを含むが、これらに限定されない。抗体の抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技法またはインタクト抗体の酵素もしくは化学切断により産生され得る。抗原結合部分は、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｖ、ドメイン抗体(ｄＡｂ)および相補性決定領域(ＣＤＲ)フラグメント、キメラ抗体、二特異性抗体、トリアボディ、テトラボディを含む。
【００５２】
ある実施態様において、抗体フラグメントはｓｃＦｖである。一本鎖抗体(ｓｃＦｖ)は、ＶＬおよびＶＨ領域がリンカー(例えば、複数アミノ酸残基の合成配列)により繋がれて、連続的タンパク質鎖を形成する、抗体である(例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883参照)。
【００５３】
Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価フラグメントであり；Ｆ(ａｂ’)２フラグメントはヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントを有する二価フラグメントであり；ＦｄフラグメントはＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し；Ｆｖフラグメントは抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有し；そしてｄＡｂフラグメントは、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合フラグメントを有する(米国特許６,８４６,６３４；６,６９６,２４５、米国出願公開２０／０２０２５１２；２００４／０２０２９９５；２００４／００３８２９１；２００４／０００９５０７；２００３／００３９９５８およびWard et al., Nature 341:544-546, 1989)。
【００５４】
二特異性抗体は、２ポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、ここで、各ポリペプチド鎖は、同一鎖上の２つのドメインを対形成させるには短すぎ、それ故に、各ドメインを他のポリペプチド鎖の相補性ドメインと対形成させるリンカーにより繋がれた、ＶＨおよびＶＬドメインを有する(例えば、Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, and Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23参照)。二特異性抗体の２ポリペプチド鎖が同一ならば、それらの対形成によりもたらされた二特異性抗体は、２個の同一抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリペプチド鎖を使用して、２つの異なる抗原結合部位を有する二特異性抗体を製造できる。同様に、トリアボディおよびテトラボディは、それぞれ３個および４個のポリペプチド鎖を含み、それぞれ、同一でも異なってもよい３個および４個の抗原結合部位を形成する、抗体である。
【００５５】
２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の“同一性パーセント”または“相同性パーセント”は、ＧＡＰコンピュータープログラム(GCG Wisconsin Package, version 10.3 (Accelrys, San Diego, Calif.)の一部)を使用して、そのデフォルトパラメーターを使用して配列を比較することにより決定される。
【００５６】
用語“ポリヌクレオチド”、“オリゴヌクレオチド”および“核酸”は、くまなく相互交換可能に使用され、ＤＮＡ分子(例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ)、ＲＮＡ分子(例えば、ｍＲＮＡ)、ヌクレオチドアナログ(例えば、ペプチド核酸および天然に存在しないヌクレオチドアナログ)を使用して産生したＤＮＡまたはＲＮＡのアナログおよびそれらのハイブリッドを含む。核酸分子は、一本鎖でも二本鎖でもよい。ある実施態様において、本発明の核酸分子は、ここに記載する抗体またはそのフラグメントをコードする、隣接オープンリーディングフレームを含む。
【００５７】
２つの一本鎖ポリヌクレオチドは、それらの配列が、一方のポリヌクレオチドにおける全ヌクレオチドが、ギャップの挿入なく、かつ何れかの配列の５’または３’末端に不対ヌクレオチドなく、他方のポリヌクレオチドにおけるその相補性ヌクレオチドと逆向きであるならば、互いに“相補体”である。あるポリヌクレオチドは、他のポリヌクレオチドと、これら２つのポリヌクレオチドが、中程度にストリンジェントな条件下互いにハイブリダイズし得るならば、“相補性”である。それ故に、ポリヌクレオチドは、他のポリヌクレオチドと、その相補体となることなく、相補性であり得る。
【００５８】
“ベクター”は、それに連結した他の核酸を細胞に導入するのに使用できる核酸である。ベクターの１タイプは、直線状または環状二本鎖ＤＮＡ分子をいう“プラスミド”であり、この中に、付加的核酸セグメントがライゲートされ得る。ベクターの他のタイプはウイルスベクター(例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス)であり、付加的ＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に導入できる。あるベクターは、それが導入される宿主細胞で自律増殖可能である(例えば、細菌複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター)。他のベクター(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター)は、宿主細胞への導入により宿主細胞のゲノムに統合され、それにより宿主ゲノムと共に複製される。“発現ベクター”は、選択ポリヌクレオチドの発現を指示できるベクターのタイプである。
【００５９】
ヌクレオチド配列は、制御性配列がヌクレオチド配列の発現(例えば、発現のレベル、タイミングまたは位置)に影響するならば、該制御性配列に“操作可能に結合”する。“制御性配列”は、それが操作可能に結合している核酸の発現(例えば、発現のレベル、タイミングまたは位置)に影響する核酸である。制御性配列は、例えば、その効果を、制御された核酸に直接または１以上の他の分子(例えば、制御性配列および／または核酸に結合するポリペプチド)の作用を介して、発揮する。制御性配列の例は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御要素(例えば、ポリアデニル化シグナル)を含む。制御性配列のさらなる例は、例えば、Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-06に記載される。
【００６０】
“宿主細胞”は、核酸、例えば、本発明の核酸の発現に使用できる細胞である。宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌であってよくまたは真核生物、例えば、単細胞真核生物(例えば、酵母または他の真菌)、植物細胞(例えば、タバコまたはトマト植物細胞)、動物細胞(例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞)またはハイブリドーマであり得る。宿主細胞の例は、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７系統(ATCC CRL 1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23:175参照)、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞(ATCC CCL 163)、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞またはＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯおよび無血清培地で増殖する関連細胞株(Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31)もしくはＤＨＦＲを欠損するＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１(Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20参照)などのその誘導体、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ(ATCC CRL 10)細胞株、アフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１由来ＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株(ATCC CCL 70)(McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821参照)、２９３、２９３  ＥＢＮＡもしくはＭＳＲ  ２９３などのヒト胚性腎臓細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常２倍体細胞、一次組織のインビトロ培養由来の細胞株、一次外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはジャーカット細胞を含む。ある実施態様において、宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であるが、ヒト宿主細胞ではない。一般に、宿主細胞は、ポリペプチドコード化核酸で形質転換または形質移入でき、その後それらが宿主細胞で発現され得る、培養細胞である。用語“組み換え宿主細胞”は、発現されるべき核酸で形質転換または形質移入されている、宿主細胞をいう。宿主細胞はまた、核酸を含むが、制御性配列が、該核酸と操作可能に結合するように宿主細胞に導入されない限り、所望のレベルで発現しない、細胞を含む。用語宿主細胞は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫または潜在的子孫もいうことは理解されるべきである。例えば、変異または環境的影響により、ある種の修飾が後代で生じ得るため、このような子孫は、実際、親細胞と同一ではないかもしれないが、なお、ここで使用するこの用語の範囲内に含まれる。
【００６１】
用語“組み換え抗体”は、抗体のコード配列またはその一部(例えば、ここに記載する重鎖または軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列)を含む、発現ベクター(またはあるいは１個を超える発現ベクター)で形質移入した細胞(または細胞株)から発現される、抗体をいう。ある実施態様において、該コード配列は、該細胞と天然で関係しない。ある実施態様において、組み換え抗体は、同じ配列を有する抗体が天然に存在すると仮定した場合のグリコシル化パターンと異なるグリコシル化パターンを有する。ある実施態様において、組み換え抗体は、ヒト宿主細胞ではない哺乳動物宿主細胞で発現される。特に、個々の哺乳動物宿主細胞は、特有のグリコシル化パターンを有する。
【００６２】
ここで使用する用語“有効量”は、対象に投与したとき、ここに記載する、ＯＸ４０シグナル伝達と関連する疾患の処置を行うのに十分である、ＯＸ４０に結合する抗体またはその抗原結合部分の量をいう。ここに提供する抗体の治療有効量は、単独でまたは組み合わせて使用するとき、抗体および組み合わせの(例えば、細胞増殖阻害における)相対的活性によりおよび処置する対象および疾患、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与方式などにより変わり、これは、当業者により容易に決定され得る。
【００６３】
用語“単離”は、他の細胞物質が実質的にない、タンパク質(例えば、抗体)をいう。ある実施態様において、単離抗体は、同種からの他のタンパク質が実質的にない。ある実施態様において、単離抗体は、異なる種からの細胞から発現され、該異なる種からの他のタンパク質が実質的にない。当分野で周知のタンパク質精製技法を使用して、単離により、タンパク質から天然に関連する成分(または抗体産生に使用した細胞発現系と関係する成分)が実質的になくすことができる。ある実施態様において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは単離されている。
【００６４】
ここで使用する用語“ＯＸ４０活性化”は、ＯＸ４０受容体の活性化をいう。一般に、ＯＸ４０活性化は、シグナル伝達をもたらす。
【００６５】
ここで使用する用語“ＯＸ４０”は、特に断らない限り、霊長類(例えば、ヒト)および齧歯類(例えば、マウスおよびラット)などの哺乳動物を含む、あらゆる脊椎動物源からのあらゆる天然ＯＸ４０をいう。本用語は、“完全長”、未加工ＯＸ４０ならびに細胞におけるプロセシング由来のあらゆる形態のＯＸ４０を含む。本用語はまた天然に存在するＯＸ４０のバリアント、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントも包含する。シグナルペプチドを欠くヒトＯＸ４０のアミノ酸配列例は配列番号２１７に示す(LHCVGDTYPSNDRCCHECRPGNGMVSRCSRSQNTVCRPCGPGFYNDVVSSKPCKPCTWCNLRSGSERKQLCTATQDTVCRCRAGTQPLDSYKPGVDCAPCPPGHFSPGDNQACKPWTNCTLAGKHTLQPASNSSDAICEDRDPPATQPQETQGPPARPITVQPTEAWPRTSQGPSTRPVEVPGGRAVAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI)。ある実施態様において、本発明の抗体またはフラグメントは、配列番号２１７に示すＯＸ４０に結合する。
【００６６】
ＯＸ４０抗原結合タンパク質
本発明は、ＯＸ４０結合タンパク質、特に抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分およびその使用に関する。本発明の種々の態様は、抗体および抗体フラグメント、医薬組成物、核酸、組み換え発現ベクターならびにそのような抗体およびフラグメントを製造するための宿主細胞に関する。インビトロまたはインビボで、ヒトＯＸ４０の検出に、ＯＸ４０活性刺激にならびに癌などの障害の予防または処置に本発明の抗体を使用する方法も本発明に包含される。
【００６７】
下記表１のとおり、本発明に包含されるのは、ヒトＯＸ４０に特異的な新規ヒト抗体重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲである。
【００６８】
ある実施態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示すアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示すアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示すアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖；および配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示すアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００６９】
ある実施態様において、本発明は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性でヒトＯＸ４０エピトープと結合するＩｇＧクラスのヒト抗体を提供し、ここで、該抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一または同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一または同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００７０】
ある実施態様において、本発明は、配列番号１／配列番号２(ここでＯｘ１Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号４(ここでＯｘ１Ｂ１と称する)、配列番号５／配列番号６(ここでＯｘ１Ｂ２と称する)、配列番号７／配列番号８(ここでＯｘ１Ｂ３と称する)、配列番号９／配列番号１０(ここでＯｘ１Ｃ４と称する)、配列番号１１／配列番号１２(ここでＯｘ１Ｃ５と称する)、配列番号１３／配列番号１４(ここでＯｘ１Ｄ９と称する)、配列番号１５／配列番号１６(ここでＯｘ１Ｅ１０と称する)、配列番号７／配列番号１７(ここでＯｘ１Ｅ７と称する)、配列番号３／配列番号１８(ここでＯｘ１Ｆ２と称する)、配列番号１９／配列番号２０(Ｏｘ１Ｇ９と称する)、配列番号２１／配列番号２２(ここでＯｘ２Ｂ１２と称する)、配列番号７／配列番号２３(ここでＯｘ２Ｂ３と称する)、配列番号２４／配列番号２５(ここでＯｘ２Ｂ４と称する)、配列番号７／配列番号２６(ここでＯｘ２Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号２７(ここでＯｘ２Ｆ２と称する)、配列番号７／配列番号２８(ここでＯｘ２Ｇ２と称する)、配列番号２９／配列番号３０(ここでＯｘ３Ｃ１０と称する)、配列番号３１／配列番号３２(ここでＯｘ４Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号３３(ここでＯｘ４Ａ１２と称する)、配列番号３４／配列番号３５(ここでＯｘ４Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号３６(ここでＯｘ４Ｄ４と称する)、配列番号３７／配列番号３８(ここでＯｘ４Ｄ７と称する)、配列番号３９／配列番号４０(ここでＯｘ４Ｄ９と称する)、配列番号７／配列番号４１(ここでＯｘ４Ｇ９と称する)、配列番号４２／配列番号４３(ここでＯｘ４Ｈ４と称する)、配列番号４４／配列番号４５(ここでＯｘ５Ｂ９と称する)、配列番号４６／配列番号４７(ここでＯｘ５Ｃ１と称する)、配列番号７／配列番号４８(ここでＯｘ５Ｄ７と称する)、配列番号１９３／配列番号１９４(ここでＯｘ４Ｂ５と称する)、配列番号２０１／配列番号２０２(ここでＯｘ２Ｅ５と称する)、配列番号５／配列番号２０９(ここでＯｘ２Ｂ５と称する)および配列番号７／配列番号２１３(ここでＯｘ５Ｃ１１と称する)からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む単離抗ｈＯＸ４０ヒト抗体に関する。
【００７１】
相補性決定領域(ＣＤＲ)は、抗体の軽鎖および重鎖両方の可変ドメインにおける超可変領域として知られる。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク(ＦＲ)と称される。ある抗体の相補性決定領域(ＣＤＲ)およびフレームワーク領域(ＦＲ)は、Kabat et al. supra; Lefranc et al., supraおよび/またはHoneggerおよびPluckthun, supraに記載のもののような当分野で知られるシステムを使用して特定され得る。例えば、Kabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, VA.)に記載されているナンバリングシステムは当業者に周知である。Kabat et al. は、あらゆる抗体に適用可能な可変ドメイン配列のナンバリングシステムを規定する。当業者は、配列自体を超える何らかの実験データに頼ることなく、あらゆる可変ドメインアミノ酸配列にこのシステムの“Kabat番号”を明確に割り当て得る。
【００７２】
ある実施態様において、本発明は、表１に記載する重鎖および軽鎖可変ドメインのＣＤＲ(配列番号１〜２１２)を含む、抗ＯＸ４０抗体を提供する。例えば、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示すアミノ酸配列に記載したＣＤＲを有する重鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示すアミノ酸配列に記載したＣＤＲを有する軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示すアミノ酸配列に記載したＣＤＲを有する軽鎖可変領域；および配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示すアミノ酸配列に記載したＣＤＲを有する重鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００７３】
ある実施態様において、本発明は、配列番号４９、５０および５１；配列番号５５、５６および５７；配列番号６１、６２および６３；配列番号６７、６８および６９；配列番号７３、７４および７５；配列番号７９、８０および８１；配列番号８５、８６および８７；配列番号９１、９２および９３；配列番号１０３、１０４および１０５；配列番号１０９、１１０および１１１；配列番号１１８、１１９および１２０；配列番号１３３、１３４および１３５；配列番号１３９、１４０、１４１；配列番号１４８、１４９および１５０；配列番号１５７、１５８および１５９；配列番号１６３、１６４および１６５；配列番号１７２、１７３および１７４；配列番号１７８、１７９および１８０；配列番号１８４、１８５および１８６；配列番号１９５、１９６および１９７；および配列番号２０３、２０４および２０５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号５２、５３および５４；配列番号５８、５９および６０；配列番号６４、６５および６６；配列番号７０、７１および７２；配列番号７６、７７および７８；配列番号８２、８３および８４；配列番号８８、８９および９０；配列番号９４、９５および９６；配列番号９７、９８および９９；配列番号１００、１０１および１０２；配列番号１０６、１０７および１０８；配列番号１１２、１１３および１１４；配列番号１１５、１１６および１１７；配列番号１２１、１２２および１２３；配列番号１２４、１２５および１２６；配列番号１２７、１２８および１２９；配列番号１３０、１３１および１３２；配列番号１３６、１３７および１３８；配列番号１４２、１４３および１４４；配列番号１４５、１４６および１４７；配列番号１５１、１５２および１５３；配列番号１５４、１５５および１５６；配列番号１６０、１６１および１６２；配列番号１６６、１６７および１６８；配列番号１６９、１７０および１７１；配列番号１７５、１７６および１７７；配列番号１８１、１８２および１８３；配列番号１８７、１８８および１８９；配列番号１９０、１９１および１９２；配列番号１９８、１９９および２００；配列番号２０６、２０７および２０８；配列番号２１０、２１１および２１２；および配列番号２１４、２１５および２１６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲセット(ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３)を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離ヒト抗ヒトＯＸ４０(ｈＯＸ４０)抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００７４】
ある実施態様において、本発明の抗体は、配列番号４９、５０および５１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号５２、５３および５４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号５８、５９および６０の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６１、６２および６３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号６４、６５および６６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号７０、７１および７２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号７３、７４および７５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号７６、７７および７８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号７９、８０および８１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号８２、８３および８４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号８５、８６および８７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号８８、８９および９０の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号９１、９２および９３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号９４、９５および９６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号９７、９８および９９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１００、１０１および１０２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１０３、１０４および１０５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１０６、１０７および１０８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１０９、１１０および１１１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１１２、１１３および１１４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１１５、１１６および１１７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１１８、１１９および１２０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２１、１２２および１２３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２４、１２５および１２６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１２７、１２８および１２９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１３０、１３１および１３２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１３３、１３４および１３５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１３６、１３７および１３８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１３９、１４０および１４１の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１４２、１４３および１４４の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号５５、５６および５７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１４５、１４６および１４７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１４８、１４９および１５０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１５１、１５２および１５３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１５４、１５５および１５６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１５７、１５８および１５９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６０、１６１および１６２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１６３、１６４および１６５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６６、１６７および１６８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１６９、１７０、１７１の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１７２、１７３および１７４の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１７５、１７６および１７７の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１７８、１７９および１８０の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１８１、１８２および１８３の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１８４、１８５および１８６の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１８７、１８８および１８９の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１９０、１９１および１９２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号１９５、１９６および１９７の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号１９８、１９９および２００の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号２０３、２０４および２０５の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２０６、２０７および２０８の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；配列番号６１、６２および６３の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２１０、２１１および２１２の軽鎖可変ドメインＣＤＲセット；および配列番号６７、６８および６９の重鎖可変ドメインＣＤＲセット／配列番号２１４、２１５および２１６の軽鎖可変ドメインＣＤＲセットからなる群から選択される、重鎖ＣＤＲセット／軽鎖ＣＤＲセットを含む。
【００７５】
ある実施態様において、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示すＣＤＲ３ドメインを含む重鎖を含み、かつ配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１の何れかに示す配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示すＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖を含み、かつ、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３の何れかに示す配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。それ故に、ある実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＯＸ４０に結合する能力を維持し、そして親の機能特性、例えば、結合親和性および／またはＴ細胞を活性化する能力を維持しながら、ＣＤＲ３ドメインは、一定を維持し、一方可変性を、重鎖および／または軽鎖の残りのＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に導入できる。
【００７６】
１以上のＣＤＲを共有結合性にまたは非共有結合性に分子に取り込み、抗原結合タンパク質とし得る。
【００７７】
抗原結合タンパク質は、ＣＤＲを大型ポリペプチド鎖の一部として取り込み得て、ＣＤＲを他のポリペプチド鎖に共有結合的に結合させ得てまたはＣＤＲを非共有結合的に取り込み得る。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が特定の目的の抗原に特異的に結合することを可能とする。
【００７８】
ある実施態様において、少なくとも９５％同一(または少なくとも９６％同一または少なくとも９７％同一または少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一)である重鎖または軽鎖内に行った置換は、保存的アミノ酸置換である。“保存的アミノ酸置換”は、アミノ酸残基が、類似する化学性質(例えば、荷電または疎水性)の側鎖(Ｒ基)を有する他のアミノ酸残基で置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的性質を実質的に変えない。２以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似度を、置換の保存的性質を補正するために上方修正し得る。この修飾の手段は、当業者に周知である。例えば、引用により本明細書に包含させるPearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331参照。類似する化学性質の側鎖を有するアミノ酸のグループの例は、(１)脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；(２)脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；(３)アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；(４)芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；(５)塩基性側鎖：リシン、アルギニンおよびヒスチジン；(６)酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸および(７)硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンを含む。
【００７９】
ある実施態様において、本発明は、表１に記載する抗体の何れかの抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００８０】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ１Ａ１１の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号５１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号４９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号５４に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号５２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８１】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ２Ｅ５の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２０１に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２０２に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２０１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２０２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２０１に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２０２に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２０５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２０４に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号２０３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号２０８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２０７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号２０６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８２】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ２Ｂ１２の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２１に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２２に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２１に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２２に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１０９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８３】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ１Ｂ１の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号４に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号４に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号５７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号５５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号６０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号５８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８４】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ５Ｃ１の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４６に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号４７に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４６のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４７のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４６に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号４７に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１８４に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１８９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８５】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ４Ｄ７の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３７に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号３８に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３８のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号３７に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号３８に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８６】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ５Ｂ９の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４４に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号４５に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４４のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４５のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号４４に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号４５に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１７８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１８３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８７】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ１Ｃ４の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号９に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号１０に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号９のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１０のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号９に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１０に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号７５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７４に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号７３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号７８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号７６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００８８】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ４Ｂ５の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１９３に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号１９４に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１９３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１９４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１９３に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１９４に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１９７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１９５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号２００に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１９８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００８９】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ２Ｂ５の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号５に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２０９に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号５のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２０９のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号５に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２０９に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号６３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号２１２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２１１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号２１０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００９０】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ２Ｂ４の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２４に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２５に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２４のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２５のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号２４に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２５に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号１２０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１２１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００９１】
ある実施態様において、本発明は、抗体Ｏｘ２Ｂ３の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号７に示す重鎖可変ドメイン配列および配列番号２３に示す軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施態様において、本発明は、配列番号７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２３のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号７に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２３に示す配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。ある実施態様において、本発明は、配列番号６９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６８に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み；かつ配列番号１１７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分に関する。
【００９２】
本発明の抗体は、さらに、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。
【００９３】
表１に記載するとおり、抗体Ｏｘ１Ｂ３、Ｏｘ１Ｅ７、Ｏｘ２Ｂ３、Ｏｘ２Ｂ６、Ｏｘ２Ｆ２、Ｏｘ２Ｇ２、Ｏｘ４Ｄ４、Ｏｘ４Ｇ９、Ｏｘ５Ｄ７およびＯｘ５Ｃ１１は、配列番号７に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する。また表１に記載するとおり、抗体Ｏｘ１Ｂ１、Ｏｘ１Ｆ２およびＯｘ４Ａ１２は、配列番号３に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する。
【００９４】
本発明の抗原結合タンパク質の抗原結合フラグメントは、慣用の技法により産生し得る。このようなフラグメントの例は、ＦａｂおよびＦ(ａｂ’)２フラグメントを含むが、これらに限定されない。
【００９５】
一本鎖抗体は、単一ポリペプチド鎖をもたらす、アミノ酸架橋(短ペプチドリンカー)を介する重鎖および軽鎖可変ドメイン(Ｆｖ領域)フラグメントの連結により形成し得る。このような一本鎖Ｆｖ(ｓｃＦｖ)は、２つの可変ドメインポリペプチド(ＶＬおよびＶＨ)をコードするＤＮＡ間に、ペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合することにより製造されている。得られたポリペプチドは、２つの可変ドメイン間の可動性リンカーの長さによって、抗原結合単量体を形成するようにそれ自体折り返され得るかまたは多量体(例えば、二量体、三量体または四量体)を形成し得る(Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108)。異なるＶＬおよびＶＨ含有ポリペプチドを組み合わせることにより、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖを形成できる(Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40)。一本鎖抗体産生のために開発された技法は、米国特許４,９４６,７７８; Bird, 1988, Science 242:423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879; Ward et al., 1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:379-87に記載のものを含むが、これらに限定されない。
【００９６】
ある実施態様において、本発明は、重鎖からの可変ドメイン領域および軽鎖からの可変ドメイン領域を有するＦａｂフラグメントを提供し、ここで、重鎖可変ドメイン配列は配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％または１００％同一であり、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％または１００％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する。好ましくは、ヒト抗体Ｆａｂフラグメントは重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、該抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号７／配列番号１７、配列番号３／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号７／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２５、配列番号７／配列番号２６、配列番号７／配列番号２７、配列番号７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３／配列番号３３、配列番号３４／配列番号３５、配列番号７／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号７／配列番号４１、配列番号４２／配列番号４３)、配列番号４４／配列番号４５、配列番号４６／配列番号４７および配列番号７／配列番号４８、配列番号１９３／配列番号１９４、配列番号２０１／配列番号２０２、配列番号５／配列番号２０９および配列番号７／配列番号２１３からなる群から選択される、重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００９７】
ある実施態様において、本発明は、重鎖からの可変ドメイン領域および軽鎖からの可変ドメイン領域および重鎖と軽鎖の可変ドメイン領域を繋ぐペプチドリンカーを有する一本鎖ヒト抗体を提供し、ここで、重鎖可変ドメイン配列は配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一または１００％同一であり、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％または１００％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する。好ましくは、ヒト一本鎖抗体は、重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、該一本鎖ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号７／配列番号１７、配列番号３／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号７／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２５、配列番号７／配列番号２６、配列番号７／配列番号２７、配列番号７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３／配列番号３３、配列番号３４／配列番号３５、配列番号７／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号７／配列番号４１、配列番号４２／配列番号４３)、配列番号４４／配列番号４５、配列番号４６／配列番号４７および配列番号７／配列番号４８、配列番号１９３／配列番号１９４、配列番号２０１／配列番号２０２、配列番号５／配列番号２０９および配列番号７／配列番号２１３からなる群から選択される、重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００９８】
目的の抗体から異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を誘導する技法、すなわち、サブクラススイッチングは知られる。それ故に、例えば、ＩｇＧ抗体はＩｇＭ抗体から誘導でき、逆もそうである。このような技法は、ある抗体(親抗体)の抗原結合性質を有するが、また親抗体と異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスに関連する生物学的性質も示す、新規抗体の製造を可能とする。組み換えＤＮＡ技法を用い得る。特定の抗体ポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡは、このような方法に用いられ得る(Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:303-16)。さらに、ＩｇＧ４が所望であるならば、ＩｇＧ４抗体の不均一性をもたらし得るＨ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を減らすために、ヒンジ領域(Bloom et al., 1997, Protein Science 6:407)における点変異(ＣＰＳＣＰ→ＣＰＰＣＰ)を導入することも望ましいことがある。それ故に、ある実施態様において、本発明の抗体はヒトＩｇＧ１抗体である。それ故に、ある実施態様において、本発明の抗体はヒトＩｇＧ４抗体である。
【００９９】
本発明は、可変ドメイン領域のアミノ酸配列により構造的に特徴付けられる多数の抗体を提供する。しかしながら、アミノ酸配列は、特異的標的への高い結合度を保持しながら、ある程度変化を受け得る。より具体的に、可変ドメイン領域内の多数のアミノ酸を保存的置換により保存でき、得られた抗体の結合特性は、野生型抗体配列の結合特性と変わらないであろうことが予測される。抗原と直接相互作用しないまたは抗原結合に影響せず、かつ抗体構造決定に重要ではない、多数のアミノ酸が抗体可変ドメイン内にある。例えば、開示する抗体の何れかの予測非必須アミノ酸残基は、好ましくは同じクラスからの他のアミノ酸残基で置き換える。抗原結合を消失させないアミノ酸保存的置換を特定する方法は、当分野で周知である(例えば、Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999);およびBurks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)参照)。Near et al. Mol. Immunol. 30:369-377, 1993は、部位特異的変異導入により結合に影響を与えるまたは影響を与えない方法を説明する。Near et al. は、彼らが抗原結合を変える可能性が高いと考えた残基のみを変異させた。大部分は、結合親和性にわずかな影響を有するかまたは負の影響を有し(Near et al. 表３)、異なる形態のジゴキシンに結合した(Near et al. 表２)。
【０１００】
ある実施態様において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０−６Ｍ以下、５×１０−７Ｍ以下、１×１０−７Ｍ以下、５×１０−８Ｍ以下、１×１０−８Ｍ以下、５×１０−９Ｍ以下または１×１０−９Ｍ以下の解離定数(ＫＤ)を有する。ある実施態様において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０−７Ｍ〜１×１０−１０ＭのＫＤを有する。ある実施態様において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０−８Ｍ〜１×１０−１０ＭのＫＤを有する。
【０１０１】
当業者は、抗体またはそのフラグメントのＫＤを決定するための標準法を認識している。例えば、ある実施態様において、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ(ＲＩＡ)により測定する。ある実施態様において、ＲＩＡを、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実施する。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を、力価測定用の一連の非標識抗原の存在下、Ｆａｂを最小濃度の(１２５Ｉ)標識抗原で平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体被覆プレートで結合抗原を捕捉することにより測定する(例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)参照)。
【０１０２】
他の実施態様によると、ＫＤは、BIACORE表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定する。ここで使用する用語“表面プラズモン共鳴”は、例えばBIACORE系を使用する、バイオセンサーマトリクス内のタンパク質濃度の変化の検出による、実時間相互作用の解析を可能にする光学現象をいう(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)。表面プラズモン共鳴をＫｏｆｆおよびＫａ値の決定にも使用できる。
【０１０３】
具体的実施態様において、本発明の抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０に対して少なくとも１０３Ｍ−１Ｓ−１の結合親和性(Ｋａ)を有する。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０３Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも１０４Ｍ−１Ｓ−１、少なくとも１０５Ｍ−１Ｓ−１または少なくとも１０６Ｍ−１Ｓ−１のＫａを示す。他のさらなる実施態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０７Ｍ−１Ｓ−１のＫａを示す。他のさらなる実施態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０７Ｍ−１Ｓ−１または少なくとも１０８Ｍ−１Ｓ−１のＫａを示す。ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体またはそのフラグメントは、少なくとも１０３〜１０７Ｍ−１Ｓ−１のＫａを示す。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、実施例においてここに記載する抗体と実質的に同じＫａを示す。Ｋａは、例えばBiacore 3000またはT200を用いる、Biacore試験で決定できる。
【０１０４】
他の実施態様において、本発明は、ＯＸ４０からの低解離速度を有する抗原結合タンパク質に関する。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、１×１０−４〜１０−１秒−１以下のＫｏｆｆを有する。他の実施態様において、Ｋｏｆｆは、５×１０−５〜１０−１秒−１以下である。他の実施態様において、Ｋｏｆｆは、５×１０−６〜１０−１秒−１以下である。他の実施態様において、Ｋｏｆｆは、ここに記載する抗体と実質的に同じである。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０に、ここに記載する抗体と実質的に同じＫｏｆｆで結合する。
【０１０５】
他の態様において、本発明は、ＯＸ４０の活性を阻害する抗原結合タンパク質を提供する。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、１０００nM以下のＩＣ５０を有する。他の実施態様において、ＩＣ５０は１００nM以下である；他の実施態様において、ＩＣ５０は１０nM以下。他の実施態様において、ＩＣ５０は、実施例においてここに記載する抗体と実質的に同じである。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、ここに記載する抗体と実質的に同じＩＣ５０でＯＸ４０の活性を阻害する。
【０１０６】
他の態様において、本発明は、細胞表面に発現されるＯＸ４０に結合し、そにように結合したとき、細胞表面のＯＸ４０の量を有意に減少させることなく、細胞におけるＯＸ４０シグナル伝達活性を阻害する、抗原結合タンパク質を提供する。細胞表面および／または内部のＯＸ４０量を決定または推定するあらゆる方法が使用され得る。他の実施態様において、抗原結合タンパク質のＯＸ４０発現細胞への結合は、細胞表面ＯＸ４０の約７５％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、１％または０.１％未満を内部移行させる。
【０１０７】
他の態様において、本発明は、インビトロまたはインビボ(例えば、ヒト対象に投与したとき)で少なくとも１日の半減期を有する抗原結合タンパク質を提供する。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも３日の半減期を有する。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、４日以上の半減期を有する。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、８日以上の半減期を有する。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、非誘導体化または非修飾抗原結合タンパク質と比較して長い半減期を有するように、誘導体化または修飾される。他の実施態様において、抗原結合タンパク質は、引用により本明細書に包含させるＷＯ００／０９５６０に記載のような、血清半減期を延長する１以上の点変異を含む。
【０１０８】
本発明は、さらに、多特異的抗原結合タンパク質、例えば、二特異的抗原結合タンパク質、例えば、２つの異なる抗原結合部位または領域により、ＯＸ４０の２つの異なるエピトープまたはＯＸ４０の１エピトープと他の分子の１エピトープに結合する抗原結合タンパク質を提供する。さらに、ここに開示する二特異的抗原結合タンパク質は、他の刊行物の引用によりここに記載されているとされるものを含む、ここに記載する抗体の一つからの一つのＯＸ４０結合部位およびここに記載する他の抗体からの第二のＯＸ４０結合領域を含み得る。あるいは、二特異的抗原結合タンパク質は、ここに記載する抗体の一つからの１つの抗原結合部位および当分野で知られる他のＯＸ４０抗体または既知の方法もしくはここに記載する方法により製造される抗体からの第二の抗原結合部位を含み得る。
【０１０９】
二特異的抗体を製造する多数の方法が当分野で知られる。このような方法は、Milstein et al., 1983, Nature 305:537に記載されるハイブリッド−ハイブリドーマの使用および抗体フラグメントの化学カップリングを含む(Brennan et al., 1985, Science 229:81; Glennie et al., 1987, J. Immunol. 139:2367; 米国特許６,０１０,９０２)。さらに、二特異的抗体は、組み換え手段により、例えばロイシンジッパー部分(すなわち、ヘテロ二量体を優先的に形成するＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質から；Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547)または米国特許５,５８２,９９６に記載の他の鍵と鍵穴相互作用ドメイン構造の使用により産生され得る。さらなる有用な技法は米国特許５,９５９,０８３；および５,８０７,７０６に記載のものを含む。
【０１１０】
他の態様において、抗原結合タンパク質は、抗体の誘導体を含む。誘導体化抗体は、特定の使用においては半減期延長のような、抗体に所望の性質を与えるあらゆる分子または物質を含み得る。誘導体化抗体は、例えば、検出可能(または標識)部分(例えば、放射性、発色性、抗原性または酵素分子、検出可能ビーズ(例えば磁気または高電子密度(例えば、金)ビーズ)または他の分子に結合する分子(例えば、ビオチンまたはストレプトアビジン)、治療的または診断的部分(例えば、放射性、細胞毒性または薬学的活性部分)または特定の使用(例えば、ヒト対象などの対象への投与または他のインビボまたはインビトロ使用)への抗体の適合性を増加させる分子を含み得る。抗体の誘導体化に使用し得る分子の例は、アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン)およびポリエチレングリコール(ＰＥＧ)を含む。抗体のアルブミン結合およびペグ化誘導体は、当分野で周知の技法を使用して製造し得る。ある実施態様において、抗体を、トランスサイレチン(ＴＴＲ)またはＴＴＲバリアントとコンジュゲートするかまたは他の方法で結合させ得る。ＴＴＲまたはＴＴＲバリアントは、例えば、デキストラン、ポリ(N−ビニルピロリドン)、ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリビニルアルコールからなる群から選択される化学基で、化学的に修飾され得る。
【０１１１】
１以上の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーを、ＯＸ４０アンタゴニストとして用い得る。オリゴマーは、共有結合的に結合または非共有結合的に結合した二量体、三量体またはそれより高次のオリゴマーの形態であり得る。２以上の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーが、ホモ二量体を一例として、使用のために企図される。他のオリゴマーは、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ四量体、ヘテロ四量体などを含む。
【０１１２】
ある実施態様は、抗原結合タンパク質に融合したペプチド部分の間の共有または非共有相互作用により連結された、複数抗原結合タンパク質を含むオリゴマーに関する。このようなペプチドは、ペプチドリンカー(スペーサー)またはオリゴマー化を促進する性質を有するペプチドであり得る。ロイシンジッパーおよび抗体由来のあるポリペプチドは、特に、下により詳細に記載する、それに結合した抗原結合タンパク質のオリゴマー化を促進できるペプチドである。
【０１１３】
具体的実施態様において、オリゴマーは、２〜４個の抗原結合タンパク質を含む。オリゴマーの抗原結合タンパク質は、任意の形態、例えば、上記の形態の何れか、例えば、バリアントまたはフラグメントであり得る。好ましくは、オリゴマーは、ＯＸ４０結合活性を有する抗原結合タンパク質を含む。
【０１１４】
ある実施態様において、オリゴマーは、免疫グロブリン由来のポリペプチドを使用して製造する。抗体由来ポリペプチドの種々の部分(Ｆｃドメインを含む)に融合したある異種ポリペプチドを含む融合タンパク質の製造は、例えば、Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535; Byrn et al., 1990, Nature 344:677; and Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19.1-10.19.11により記載される。
【０１１５】
オリゴマー抗原結合タンパク質を製造する他の方法は、ロイシンジッパーの使用を含む。ロイシンジッパードメインは、それが見られるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、元々数個のＤＮＡ結合タンパク質で特定されており(Landschulz et al., 1988, Science 240:1759)、それ以来、多種多様なタンパク質で発見されている。特に知られるロイシンジッパーは、二量体化または三量体化する天然に存在するペプチドおよびその誘導体である。可溶性オリゴマータンパク質の製造に適するロイシンジッパードメインの例は、ＷＯ９４／１０３０８に記載されるものおよびHoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191に記載される肺サーファクタントタンパク質Ｄ(ＳＰＤ)由来ロイシンジッパーである。融合した異種タンパク質の安定な三量体化を可能にする修飾ロイシンジッパーの使用は、Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78に記載される。一つの試みにおいて、ロイシンジッパーペプチドに融合した抗ＯＸ４０抗体フラグメントまたは誘導体を含む組み換え融合タンパク質を適当な宿主細胞で発現させ、形成した可溶性オリゴマー抗ＯＸ４０抗体フラグメントまたは誘導体を培養上清から回収する。
【０１１６】
ＯＸ４０に対する抗原結合タンパク質を、インビトロまたはインビボで、例えば、ＯＸ４０ポリペプチドの存在を検出するためのアッセイにおいて使用し得る。抗原結合タンパク質はまた免疫親和性クロマトグラフィーによるＯＸ４０タンパク質精製にも使用し得る。抗原結合タンパク質遮断を、ここに開示する方法において使用し得る。ＯＸ４０アンタゴニストとして機能するこのような抗原結合タンパク質を、種々の癌を含むが、これらに限定されない何らかのＯＸ４０誘発状態の処置に用い得る。
【０１１７】
抗原結合タンパク質を、インビトロ手順で用いまたはインビボで投与してＯＸ４０誘発生物学的活性を阻止し得る。ＯＸ４０のタンパク分解が原因のまたはそれにより増悪する(直接的または間接的)障害(その例はここに提供される)は、それゆえに
、処置され得る。ある実施態様において、本発明は、ＯＸ４０遮断抗原結合タンパク質を、それを必要とする哺乳動物にＯＸ４０誘発生物学的活性の減少に有効な量でインビボ投与することを含む、治療方法を提供する。
【０１１８】
本発明のある実施態様において、抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０の生物学的活性を阻害するヒトモノクローナル抗体を提供する。
【０１１９】
ここに記載する抗体および抗体フラグメントを含む抗原結合タンパク質は、多数の慣用技法の何れかにより製造され得る。例えば、それらは、当分野で知られる任意の技法を使用して、自然にそれを発現する細胞から精製でき(例えば、抗体を、それを産生するハイブリドーマから精製できる)または組み換え発現系において産生され得る。例えば、Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.), Plenum Press, New York (1980); and Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988)参照。
【０１２０】
当分野で知られる任意の発現系を、本発明の、ここに記載する抗体および抗体フラグメントを含む、組み換えポリペプチドの産生に使用できる。一般に、宿主細胞を、所望のポリペプチドをコードするＤＮＡを含む組み換え発現ベクターで形質転換する。特に使用し得る宿主細胞は、原核生物、酵母または高等真核生物細胞である。原核生物は、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば大腸菌または桿菌を含む。高等真核生物細胞は、昆虫細胞および哺乳動物起源の確立された細胞株を含む。適当な哺乳動物宿主細胞株の例は、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７系列(ATCC CRL 1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23:175)、Ｌ細胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞(ATCC CCL 163)、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ(ATCC CRL 10)細胞株およびMcMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821に記載のアフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１からのＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株(ATCC CCL 70)を含む。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞宿主と使用するのに適切なクローニングおよび発現ベクターは、Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985)により記載される。
【０１２１】
形質転換細胞は、ポリペプチドの発現を促進する条件下で培養し、該ポリペプチドを慣用のタンパク質精製手順により取得し得る。あるこのような精製手順は、例えば、ＯＸ４０の全てまたは一部(例えば、細胞外ドメイン)が結合したマトリクスでの、親和性クロマトグラフィーの使用である。ここでの使用のために企図されるポリペプチドは、実質的に内在性物質で汚染されていない、実質的に均一な組み換え哺乳動物抗ＯＸ４０抗体ポリペプチドを含む。
【０１２２】
抗原結合タンパク質は、多数の既知技法の何れかにより製造し、所望の性質についてスクリーニングし得る。該技法の一部は、目的の抗原結合タンパク質(例えば、抗ＯＸ４０抗体)のポリペプチド鎖(またはその一部)をコードする核酸を単離し、該核酸を組み換えＤＮＡテクノロジーにより操作することを含む。核酸を目的の他の核酸と融合しまたは、例えば１以上のアミノ酸残基が付加、欠失または置換されるように改変(例えば、変異誘発または他の慣用の技法により)し得る。
【０１２３】
本発明の抗体およびそのフラグメントは、当分野で知られる任意の標準法を使用して製造され得る。一例として、ポリペプチドは、該ポリペプチドをコードする核酸配列(ｃＤＮＡ)を組み換え発現ベクターに挿入し、該ＤＮＡ配列を発現を促進する条件下で発現させる、組み換えＤＮＡ方法により産生する。本発明は、配列番号１〜２１６に記載するポリペプチド配列の何れかをコードする核酸および該核酸配列を含むベクターを含む。
【０１２４】
ここに開示する種々のポリペプチドの何れかをコードする核酸は、化学合成され得る。コドン使用頻度を、細胞における発現が改善するように選択し得る。このようなコドン使用頻度は、選択した細胞型による。特定化コドン使用頻度パターンが大腸菌および他の細菌、ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞に関して開発されている。
【０１２５】
核酸操作の一般技法は、例えばSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989またはF. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987)および定期的改訂版に記載され、隠喩おにより本明細書に包含させる。ポリペプチドをコードするＤＮＡは、哺乳動物、ウイルスまたは昆虫遺伝子由来の適当な転写または翻訳調節エレメントに操作可能に結合される。このような調節エレメントは、転写プロモーター、転写を制御するための任意のオペレーター配列、適当なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列ならびに転写および翻訳の停止を制御する配列を含む。通常複製起点により付与される宿主内で複製する能力および形質転換体の認識を促進する遺伝子がさらに取り込まれる。
【０１２６】
組み換えＤＮＡはまたタンパク質に有用であり得る任意のタイプのタンパク質タグ配列も含み得る。タンパク質タグの例は、ヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグまたはＧＳＴタグを含むが、これらに限定されない。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞宿主と共に使用する適切なクローニングおよび発現ベクターは、Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985)に見ることができる。
【０１２７】
発現構築物を、適切な方法を使用して、宿主細胞に導入する。核酸を宿主細胞に導入するための多様な方法は当分野で知られ、エレクトロポレーション；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストランまたは他の物質を用いるトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染(ベクターが感染性因子であるとき)を含むが、これらに限定されない。適当な宿主細胞は、原核生物、酵母、哺乳動物細胞または細菌細胞を含む。
【０１２８】
適当な細菌は、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌またはバシラス属を含む。酵母、好ましくはサッカロミセス・セレビシアなどのサッカロミセス属もポリペプチドの産生に使用し得る。種々の哺乳動物または昆虫細胞培養系も組み換えタンパク質の発現に使用し得る。昆虫細胞における異種タンパク質の産生のためのバキュロウイルス系は、Luckow and Summers (Bio/Technology, 6:47, 1988)に総説されている。適当な哺乳動物宿主細胞株の例は、内皮細胞、ＣＯＳ−７サル腎臓細胞、ＣＶ−１、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)、ヒト胚性腎臓細胞、ＨｅＬａ、２９３、２９３ＴおよびＢＨＫ細胞株を含む。精製ポリペプチドは、組み換えタンパク質を発現するように適当な宿主／ベクター系を培養することにより製造される。多くの適用について、ここに開示するポリペプチドの多くのサイズの小ささにより、大腸菌による発現が好ましい発現方法である。次いで、タンパク質を培養培地または細胞抽出物から精製する。
【０１２９】
タンパク質をまた細胞−翻訳系を使用しても産生し得る。このような目的のために、該ポリペプチドをコードする核酸を修飾して、ｍＲＮＡを産生するためのインビトロ転写を可能とし、かつ利用する特定の無細胞系(真核生物、例えば哺乳動物または酵母無細胞翻訳系または原核生物、例えば細菌無細胞翻訳系)におけるｍＲＮＡの無細胞翻訳を可能としなければならない。
【０１３０】
ＯＸ４０結合ポリペプチドはまた化学合成により産生され得る(例えばSolid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載の方法により)。タンパク質への修飾も化学合成によりなし得る。
【０１３１】
本発明のポリペプチドを、タンパク質化学分野で一般に知られるタンパク質の単離／精製方法により精製し得る。非限定的例は、抽出、再結晶、塩析(例えば、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムで)、遠心分離、透析、限外濾過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過、ゲル浸透クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、電気泳動、向流分配またはこれらの任意の組み合わせを含む。精製後、ポリペプチドを、濾過および透析を含むが、これらに限定されない当分野で知られる多様な方法の何れかにより、異なる緩衝液に交換するおよび／または濃縮することができる。
【０１３２】
精製ポリペプチドは、好ましくは少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、最も好ましくは少なくとも９８％純粋である。純度の正確な数値と関係なく、ポリペプチドは、医薬品としての使用のために十分に純粋である。
【０１３３】
ある実施態様において、本発明は、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体を提供する。モノクローナル抗体は、当分野で知られる任意の技法を使用して、例えば、免疫化スケジュールの完了後、トランスジェニック動物から収集した脾臓細胞の不死化により、産生できる。脾臓細胞を、当分野で知られる任意の技法を使用して、例えば、それらを骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマにより、不死化し得る。ハイブリドーマ産生融合手順に使用するための骨髄腫細胞は好ましくは非抗体産生であり、高融合効率を有し、かつ所望の融合細胞(ハイブリドーマ)のみの増殖を指示するある選択的培地で増殖を不可能とする酵素欠損を有する。マウス融合において使用するのに適当な細胞株の例は、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８.６５３、ＮＳ１／１.Ａｇ４１、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ１.７およびＳ１９４／５ＸＸ０  Ｂｕｌを含む；ラット融合において使用する細胞株の例はＲ２１０.ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ  １.２.３、ＩＲ９８３Ｆおよび４８２１０を含む。細胞融合に有用な他の細胞株はＵ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２およびＵＣ７２９−６である。
【０１３４】
ポリペプチドの翻訳後修飾
ある実施態様において、本発明の結合ポリペプチドは、さらに翻訳後修飾を含み得る。翻訳後タンパク質修飾の例は、リン酸化、アセチル化、メチル化、ＡＤＰ−リボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、ＳＵＭＯ化、ビオチニル化またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加を含む。その結果、修飾可溶性ポリペプチは、脂質、多糖もしくは単糖およびリン酸などの非アミノ酸要素を含み得る。グリコシル化の好ましい形態はシアル酸付加であり、これは１以上のシアル酸部分をポリペプチドにコンジュゲートする。シアル酸部分は、溶解度および血清半減期を改善し、同時にタンパク質の免疫原性の可能性も減らす。Raju et al. Biochemistry. 2001 31; 40(30):8868-76参照。
【０１３５】
ある実施態様において、修飾形態の該対象可溶性ポリペプチドは、対象可溶性ポリペプチドの非タンパク質性ポリマーへの連結部を含む。ある実施態様において、ポリマーは、米国特許４,６４０,８３５；４,４９６,６８９；４,３０１,１４４；４,６７０,４１７；４,７９１,１９２または４,１７９,３３７に示す方法で、ポリエチレングリコール(“ＰＥＧ”)、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンである。
【０１３６】
ＰＥＧは、市販されているまたは当分野で周知の方法によるエチレングリコールの開環重合により生存できる水可溶性ポリマーである(Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161)。用語“ＰＥＧ”は、サイズまたはＰＥＧ末端の修飾と関係なく、あらゆるポリエチレングリコール分子を包含するように広義に使用され、式：Ｘ−−Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ  (１)により表され、ここで、ｎは２０〜２３００であり、ＸはＨまたは末端修飾、例えば、Ｃ１−４アルキルである。ある実施態様において、本発明のＰＥＧは、一端をヒドロキシまたはメトキシで終わり、すなわち、ＸはＨまたはＣＨ３(“メトキシＰＥＧ”)である。ＰＥＧは、結合反応に必要である；分子の化学合成由来である；または分子の複数部分の最適距離のためのスペーサーであるさらなる化学基を含み得る。さらに、このようなＰＥＧは、互いに結合された１以上のＰＥＧ側鎖からなり得る。１を超えるＰＥＧ鎖のＰＥＧは、多腕または分枝ＰＥＧと称される。分枝ＰＥＧは、例えば、ポリエチレンオキシドの、グリセロール、ペンタエリトリトールおよびソルビトールを含む種々のポリオールへの付加により産生される。例えば、四腕分枝ＰＥＧはペンタエリトリトールおよびエチレンオキシドから産生され得る。分枝ＰＥＧは、例えば、ＥＰ−Ａ０４７３０８４および米国特許５,９３２,４６２に記載される。ＰＥＧのある形態は、リシンの一次アミノ基を介して結合する２つのＰＥＧ側鎖(ＰＥＧ２)を含む(Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69)。
【０１３７】
ＰＥＧ修飾ポリペプチドの血清クリアランス速度は、非修飾結合ポリペプチドのクリアランス速度に比して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％減少し得る。ＰＥＧ修飾ポリペプチドは、非修飾タンパク質の半減期に比して延長された半減期(ｔ１／２)を有する。ＰＥＧ結合ポリペプチドの半減期は、非修飾結合ポリペプチドの半減期に比して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％または５００％または１０００％延長され得る。ある実施態様において、タンパク質半減期を、緩衝化食塩水溶液または血清などのインビトロで決定する。他の実施態様において、タンパク質半減期は、血清または動物の他の体液におけるタンパク質の半減期などのインビボ半減期である。
【０１３８】
治療方法、製剤および投与方式
ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメントの何れも、このような治療方法に使用し得る。本発明の治療方法および組成物に使用し得る抗ＯＸ４０抗体および抗原結合フラグメントの例は、上述の通りである。
【０１３９】
ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、免疫応答の刺激または抑制を必要とする疾患の処置に使用する。ＯＸ４０刺激(アゴニストで)は、免疫応答(優先的にＴ細胞)が増強される必要がある疾患の処置に有用である。例えば、癌の処置の場合である。逆に、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ遮断は、炎症を押さえる必要がある疾患、例えば自己免疫またはアレルギー中の処置に有用である。ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ遮断は、通常ＯＸ４０Ｌ遮断抗体の使用により行う。
【０１４０】
ある実施態様において、疾患は、癌、自己免疫性疾患および感染からなる群から選択される。
【０１４１】
ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、癌の処置に使用され得る。
【０１４２】
他の実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、感染(例えば、細菌またはウイルスまたは他の病原体による感染)の処置に使用し得る。ある実施態様において、感染はウイルスおよび／または細菌による。ある実施態様において、感染は病原体による。
【０１４３】
他の実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、例えば、癌を有する個体において、免疫機能(例えば、細胞介在免疫応答の上方制御により)の増強に使用し得る。
【０１４４】
本発明は、さらに、ここに開示する抗体および抗体フラグメントを使用して、抗ＯＸ４０ポリペプチドを投与することを含む、哺乳動物の広範な癌、感染症または自己免疫性反応を処置する方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、処置を必要とする対象に抗ヒトＯＸ４０抗体を投与することによる、癌を処置する方法を提供する。ここに開示する治療方法で使用し得る抗体およびそのフラグメントの例は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性を有するＩｇＧクラスの抗ヒトＯＸ４０ヒト抗体または配列番号１〜４８、１９３、１９４、２０１、２０２、２０９および２１３に記載の抗体配列からの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むまたは配列番号１〜４８、１９３、１９４、２０１、２０２、２０９および２１３の抗体配列の何れかに記載のＣＤＲを含む抗ヒトＯＸ４０  Ｆａｂ抗体フラグメントを含む。ある実施態様において、ここに開示する方法は、重鎖からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列および軽鎖からの可変ドメイン領域を含む単離ヒト抗体を投与することを含み、ここで、重鎖可変ドメイン配列は配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％または１００％同一であり、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する。ある実施態様において、ここに開示する方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含み、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列���号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を有する、ＩｇＧヒト抗ｈＯＸ４０抗体の投与を含む。
【０１４５】
ある実施態様において、ここに記載する方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列を含み、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含む、Ｆａｂフラグメントの使用をふくむ。ある実施態様において、ここに記載する方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含み、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む、ヒトＦａｂ抗体フラグメントの使用をふくむ。
【０１４６】
ある実施態様において、ここに記載する方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列を含み、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含む、一本鎖ヒト抗体、例えば、ｓｃＦｖの使用をふくむ。ある実施態様において、ここに記載する方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号１９３および配列番号２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含み、かつ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号１９４、配列番号２０２、配列番号２０９および配列番号２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む、一本鎖ヒト抗体の使用を含む。
【０１４７】
ある実施態様において、本発明の方法において使用される単離抗ＯＸ４０ヒト抗体は重鎖および軽鎖を含み、ここで、該抗体は、配列番号１／配列番号２(ここでＯｘ１Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号４(ここでＯｘ１Ｂ１と称する)、配列番号５／配列番号６(ここでＯｘ１Ｂ２と称する)、配列番号７／配列番号８(ここでＯｘ１Ｂ３と称する)、配列番号９／配列番号１０(ここでＯｘ１Ｃ４と称する)、配列番号１１／配列番号１２(ここでＯｘ１Ｃ５と称する)、配列番号１３／配列番号１４(ここでＯｘ１Ｄ９と称する)、配列番号１５／配列番号１６(ここでＯｘ１Ｅ１０と称する)、配列番号７／配列番号１７(ここでＯｘ１Ｅ７と称する)、配列番号３／配列番号１８(ここでＯｘ１Ｆ２と称する)、配列番号１９／配列番号２０(Ｏｘ１Ｇ９と称する)、配列番号２１／配列番号２２(ここでＯｘ２Ｂ１２と称する)、配列番号７／配列番号２３(ここでＯｘ２Ｂ３と称する)、配列番号２４／配列番号２５(ここでＯｘ２Ｂ４と称する)、配列番号７／配列番号２６(ここでＯｘ２Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号２７(ここでＯｘ２Ｆ２と称する)、配列番号７／配列番号２８(ここでＯｘ２Ｇ２と称する)、配列番号２９／配列番号３０(ここでＯｘ３Ｃ１０と称する)、配列番号３１／配列番号３２(ここでＯｘ４Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号３３(ここでＯｘ４Ａ１２と称する)、配列番号３４／配列番号３５(ここでＯｘ４Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号３６(ここでＯｘ４Ｄ４と称する)、配列番号３７／配列番号３８(ここでＯｘ４Ｄ７と称する)、配列番号３９／配列番号４０(ここでＯｘ４Ｄ９と称する)、配列番号７／配列番号４１(ここでＯｘ４Ｇ９と称する)、配列番号４２／配列番号４３(ここでＯｘ４Ｈ４と称する)、配列番号４４／配列番号４５(ここでＯｘ５Ｂ９と称する)、配列番号４６／配列番号４７(ここでＯｘ５Ｃ１と称する)、配列番号７／配列番号４８(ここでＯｘ５Ｄ７と称する)、配列番号１９３／配列番号１９４(ここでＯｘ４Ｂ５と称する)、配列番号２０１／配列番号２０２(ここでＯｘ２Ｅ５と称する)、配列番号５／配列番号２０９(ここでＯｘ２Ｂ５と称する)および配列番号７／配列番号２１３(ここでＯｘ５Ｃ１１と称する)からなる群から選択される、重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１４８】
ある実施態様において、本発明の方法において使用するＦａｂフラグメントは重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、該抗体は、配列番号１／配列番号２(ここでＯｘ１Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号４(ここでＯｘ１Ｂ１と称する)、配列番号５／配列番号６(ここでＯｘ１Ｂ２と称する)、配列番号７／配列番号８(ここでＯｘ１Ｂ３と称する)、配列番号９／配列番号１０(ここでＯｘ１Ｃ４と称する)、配列番号１１／配列番号１２(ここでＯｘ１Ｃ５と称する)、配列番号１３／配列番号１４(ここでＯｘ１Ｄ９と称する)、配列番号１５／配列番号１６(ここでＯｘ１Ｅ１０と称する)、配列番号７／配列番号１７(ここでＯｘ１Ｅ７と称する)、配列番号３／配列番号１８(ここでＯｘ１Ｆ２と称する)、配列番号１９／配列番号２０(Ｏｘ１Ｇ９と称する)、配列番号２１／配列番号２２(ここでＯｘ２Ｂ１２と称する)、配列番号７／配列番号２３(ここでＯｘ２Ｂ３と称する)、配列番号２４／配列番号２５(ここでＯｘ２Ｂ４と称する)、配列番号７／配列番号２６(ここでＯｘ２Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号２７(ここでＯｘ２Ｆ２と称する)、配列番号７／配列番号２８(ここでＯｘ２Ｇ２と称する)、配列番号２９／配列番号３０(ここでＯｘ３Ｃ１０と称する)、配列番号３１／配列番号３２(ここでＯｘ４Ａ１１と称する)、配列番号３／配列番号３３(ここでＯｘ４Ａ１２と称する)、配列番号３４／配列番号３５(ここでＯｘ４Ｂ６と称する)、配列番号７／配列番号３６(ここでＯｘ４Ｄ４と称する)、配列番号３７／配列番号３８(ここでＯｘ４Ｄ７と称する)、配列番号３９／配列番号４０(ここでＯｘ４Ｄ９と称する)、配列番号７／配列番号４１(ここでＯｘ４Ｇ９と称する)、配列番号４２／配列番号４３(ここでＯｘ４Ｈ４と称する)、配列番号４４／配列番号４５(ここでＯｘ５Ｂ９と称する)、配列番号４６／配列番号４７(ここでＯｘ５Ｃ１と称する)、配列番号７／配列番号４８(ここでＯｘ５Ｄ７と称する)、配列番号１９３／配列番号１９４(ここでＯｘ４Ｂ５と称する)、配列番号２０１／配列番号２０２(ここでＯｘ２Ｅ５と称する)、配列番号５／配列番号２０９(ここでＯｘ２Ｂ５と称する)および配列番号７／配列番号２１３(ここでＯｘ５Ｃ１１と称する)からなる群から選択される、重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１４９】
ある実施態様において、ヒト一本鎖抗体は、重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、該一本鎖ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号７／配列番号１７、配列番号３／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号７／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２５、配列番号７／配列番号２６、配列番号７／配列番号２７、配列番号７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３／配列番号３３、配列番号３４／配列番号３５、配列番号７／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号７／配列番号４１、配列番号４２／配列番号４３)、配列番号４４／配列番号４５、配列番号４６／配列番号４７および配列番号７／配列番号４８、配列番号１９３／配列番号１９４、配列番号２０１／配列番号２０２、配列番号５／配列番号２０９および配列番号７／配列番号２１３からなる群から選択される、重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１５０】
癌適応症
本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、例えば、細胞表面にＯＸ４０を発現する固形腫瘍または白血病細胞を含む、癌を有する対象の処置に使用し得る。
【０１５１】
ある実施態様において、ここに記載するＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、処置を必要とする対象における癌または他の新生物状態の処置、進行遅延、再発予防または症状軽減に有用である。
【０１５２】
ある実施態様において、本発明の抗体およびフラグメントを使用して処置し得る癌は、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、食道癌、肝癌、腎癌、胃癌、結腸癌、子宮頸癌、子宮癌、肝癌および血液癌を含むが、これらに限定されない。
【０１５３】
ここで使用する“血液癌”は、血液の癌をいい、数ある中で、白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む。“白血病”は、感染との戦いに無力である白血球が過剰に産生され、それ故に、血小板および赤血球などの血液を構成する他の部分を押し出す、血液の癌である。白血病の症例は急性または慢性に分類されることが理解される。“リンパ腫”は、リンパ系で生じる一群の血液癌をいう。“骨髄腫”は、形質細胞と称されるタイプの白血球で形成される癌をいう。
【０１５４】
本発明の抗体およびフラグメントを使用して処置し得る特定の形態の白血病は、Ｂ慢性リンパ性白血病(Ｂ−ＣＬＬ)、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)；急性骨髄白血病(ＡＭＬ)；慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)；慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)；有毛細胞白血病(ＨＣＬ)；骨髄増殖性障害／新生物(ＭＰＤＳ)；および骨髄異形成症候群を含む。
【０１５５】
本発明の抗体およびフラグメントを使用して処置し得るある特定の形態のリンパ腫は、数ある中で、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)を含むＢ細胞リンパ腫；小リンパ球性(ＳＬ)ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度汎発性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；再発性高悪性度ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、Ｔ細胞リンパ腫(ＴＣＬ)およびホジキンリンパ腫(ＨＬ)を含む。
【０１５６】
本発明の抗体およびフラグメントを使用して処置し得るある特定の形態の骨髄腫は、多発性骨髄腫(ＭＭ)、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫を含む。
【０１５７】
抗体によるＯＸ４０の遮断は、患者における癌細胞に対する免疫応答を増強できる。ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、癌性腫瘍の増殖阻害に単独で使用し得る。
【０１５８】
あるいは、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、他の免疫原性薬剤、標準癌処置剤または他の抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、本発明は、対象に治療有効量の抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供する。好ましくは、抗体または抗体フラグメントは、ヒト抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメント(例えばここに記載するヒト抗ＯＸ４０抗体の何れか)である。
【０１５９】
ある実施態様において、増殖が阻害され得る好ましい癌は、免疫療法に一般に応答性である癌を含む。
【０１６０】
所望によりここに記載するＯＸ４０に対する抗体および抗体フラグメントを、癌細胞、精製腫瘍抗原(組み換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む)、細胞および免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子で形質移入された細胞などの免疫原性薬剤と組み合わせ得る(He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28)。使用し得る腫瘍ワクチンの非限定的例は、黒色腫抗原のペプチド、例えばｇｐ１００のペプチド、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼまたはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するように形質移入された腫瘍細胞(さらに下に記載する)を含む。
【０１６１】
ヒトにおいて、黒色腫などの一部腫瘍は、免疫原性であることが示されている。
【０１６２】
ある実施態様において、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、ワクチン接種プロトコールと組み合わせ得る。腫瘍に対するワクチン接種の多くの実験的戦略が考案されている。これらの戦略の一つにおいて、ワクチンを自己または同種腫瘍細胞を使用して調製する。これらの細胞性ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するように形質導入されているとき、最も効果的であることが示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種に対する抗原提示の強力なアクティベーターであることが示されている(Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43)。
【０１６３】
種々の腫瘍における遺伝子発現および大規模遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義を導いている(Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7)。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍および腫瘍が生じた細胞で発現される分化抗原、例えばメラニン形成細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原およびＴｒｐ−２である。これらの抗原の多くは、宿主に見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であることが示されている。ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを腫瘍で発現される組み換えタンパク質および／またはペプチドのコレクションと組み合わせて使用し、これらのタンパク質に対する免疫応答を産生し得る。これらのタンパク質は、通常自己抗原として免疫系に見られ、それ故にそれらに寛容である。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成に必要であり、ヒト癌の８５％超で発現され、限られた数の体性組織でしか発現されない、タンパク質テロメラーゼを含み得る(Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013)。(これらの体性組織は、種々の手段により免疫攻撃から保護され得る)。腫瘍抗原はまたタンパク質配列を改変するまたは二つの無関係配列間の融合タンパク質を作る(すなわち、フィラデルフィア染色体におけるｂｃｒ−ａｂｌ)体性変異またはＢ細胞腫瘍からのイディオタイプのために癌細胞で発現される“ネオ抗原”であり得る。
【０１６４】
他の腫瘍ワクチンは、ヒト乳頭腫ウイルス(ＨＰＶ)、肝炎ウイルス(ＨＢＶおよびＨＣＶ)およびカポジのヘルペス肉腫ウイルス(ＫＨＳＶ)などのヒト癌に関与するウイルスからのタンパク質を含み得る。ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントと組み合わせて使用し得る他の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織自体から単離された精製熱ショックタンパク質(ＨＳＰ)である。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞からのタンパク質のフラグメントを含み、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫誘発のために抗原提示細胞に非常に効率的に送達される(Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120)。
【０１６５】
樹状細胞(ＤＣ)は、抗原特異的応答の刺激に使用し得る強力な抗原提示細胞である。ＤＣはエクスビボで、および種々のタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物を充填して産生され得る(Nestle et al. (1998) NatureMedicine 4: 328-332)。ＤＣはまた遺伝学的手段により形質導入もでき、同様にこれらの腫瘍抗原を発現する。ＤＣはまた免疫化の目的で腫瘍細胞に直接融合され得る(Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336)。ワクチン接種の一方法として、ＤＣ免疫化をＯＸ４０遮断と効率的に組み合わせて、より強力な抗腫瘍応答を活性化し得る。
【０１６６】
ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、他の癌処置剤とも組み合わせ得る。ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、化学療法レジメと効率的に組み合わせ得る。これらの場合、投与される化学療法剤の用量を減らすことが可能であり得る(Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304)。このような組み合わせの例は、黒色腫の処置のためにダカルバジンと組み合わせた抗ＯＸ４０抗体である。このような組み合わせの他の例は、黒色腫の処置のためにインターロイキン−２(ＩＬ−２)と組み合わせた抗ＯＸ４０抗体である。ＯＸ４０遮断と化学療法の組み合わせ使用を支える科学的説明は、殆どの化学療法化合物の細胞毒性作用の結果である細胞死が、抗原提示経路における腫瘍抗原のレベルを増加させると言うものである。細胞死を介してここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントと相乗作用をもたらし得る他の組み合わせ治療は、放射線、手術およびホルモン枯渇である。これらのプロトコールの各々は、宿主において腫瘍抗原の源を作る。血管形成阻害剤も、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントと組み合わせ得る。血管形成の阻害は、しばしば腫瘍細胞死をもたらし、これは腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に供給し得る。
【０１６７】
二特異的抗体を使用して２つの別々の抗原を標的とし得る。例えば抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原(例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ)二特異的抗体は、マクロファージを腫瘍の部位に標的化させるために使用されている。このターゲティングは、より効率的に腫瘍特異的応答を活性化し得る。これらの応答のＴ細胞アームは、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントの使用により増強される。あるいは、抗原を腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二特異的抗体の使用により、ＤＣに直接送達し得る。
【０１６８】
二特異的抗体を使用して、２つの別々の腫瘍抗原を標的とし得る。例えば、Ｈｅｒ２、ｃＭｅｔ、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲ発現腫瘍を含む、多様な腫瘍標的が考慮され得る。すなわち、ある実施態様において、本発明は、ここに記載する重鎖および軽鎖可変領域配列またはここに記載する一連のＣＤＲ配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＯＸ４０抗体(または抗原結合フラグメント)および抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＶＥＧＦＲ(例えば、引用により本明細書に包含させる米国特許９,０２９,５１０に記載の抗体参照)または抗ｃＭｅｔ抗体(または抗原結合その一部)を含む、二特異的抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ＯＸ４０およびＥＧＦＲに特異的な二特異的抗体を含み、ここで、該抗体は、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体またはフラグメントおよび国際公開ＷＯ２０１３／１７３２５５または国際公開ＷＯ２０１４／０６６５３０(両者とも引用によりその全体を本明細書に包含させる)に記載の抗ＥＧＦＲ抗体またはフラグメントを含む。ある実施態様において、本発明は、ＯＸ４０およびＶＥＧＦＲに特異的な二特異的抗体に関し、ここで、該抗体は、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体またはフラグメントおよび米国特許９,０２９,５１０(その全体を本明細書に包含させる)に記載の抗ＶＥＧＦＲ抗体またはフラグメントを含む。ある実施態様において、本発明は、ＯＸ４０およびｃＭｅｔに特異的な二特異的抗体に関し、ここで、該抗体は、ここに開示する抗ＯＸ４０抗体またはフラグメントおよび国際公開ＷＯ２０１６／０９４４５５(その全体を本明細書に包含させる)に記載の抗ｃＭｅｔ抗体またはフラグメントを含む。
【０１６９】
ここに開示する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントをまた、例えば、ＦｃαまたはＦｃγ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化させる、二特異的抗体と組み合わせて使用し得る(米国特許５,９２２,８４５および５,８３７,２４３)。
【０１７０】
腫瘍は、極めて多様な機構により宿主免疫監視を逃れる。これらの機構の多くが、腫瘍により発現され、免疫抑制性であるタンパク質の不活性化により克服され得る。これらは、数ある中で、ＴＧＦ−β(Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050)、ＩＬ−１０(Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200)およびＦａｓリガンド(Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365)を含む。これらの各々に対する抗体を、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントと組み合わせで使用して、免疫抑制性因子の作用に対抗し、宿主による腫瘍免疫応答を支援し得る。
【０１７１】
宿主免疫応答性を活性化する他の抗体を、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントと組み合わせて使用し得る。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する、樹状細胞の表面上の分子を含む。抗ＣＤ４０抗体は、効率的にＴ細胞ヘルパー活性の変わりとなり得て(Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478)、ＯＸ４０抗体と組み合わせて使用し得る(Ito et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40)。ＣＴＬＡ−４、ＯＸ−４０、４−１ＢＢおよびＩＣＯＳなどのＴ細胞共刺激分子に対する活性化抗体を、Ｔ細胞活性化レベル増加のためにまた提供し得る。ＯＸ４０遮断を腫瘍特異的Ｔ細胞を移植されたドナーの有効性増加のために使用し得る。
【０１７２】
抗原特異的Ｔ細胞のエクスビボ活性化および増大および腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を刺激するためのこれらの細胞のレシピエントへの養子移入を含む、いくつかの実験的処置プロトコールもある(Greenberg & Riddell (1999) Science 285: 546-51)。これらの方法をＣＭＶなどの感染因子に対するＴ細胞応答の活性化にも使用し得る。抗ＯＸ４０抗体存在下のエクスビボ活性化は、養子移入されたＴ細胞の数および活性を増加させ得る。
【０１７３】
本発明の抗ＯＸ４０抗体およびフラグメントを使用する癌の処置のさらなる方法を、後段に、例えば、組み合わせ治療セクションに開示する。
【０１７４】
感染
本発明は、さらに、対象が感染性疾患について処置されるように、対象に抗ＯＸ４０抗体または抗原結合部分を投与することを含む、対象における感染性疾患を処置する方法を提供する。好ましくは、抗体は、ヒト抗ヒトＯＸ４０抗体または抗体フラグメント(例えばここに記載するヒト抗ＯＸ４０抗体の何れか)である。
【０１７５】
他の実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、感染(例えば、細菌またはウイルスまたは他の病原体による感染)の処置に使用し得る。ある実施態様において、感染は、ウイルスおよび／または細菌による。ある実施態様において、感染は病原体による。
【０１７６】
開示する抗体で処置可能な感染を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例は、ＨＩＶ、肝炎(Ａ型、Ｂ型またはＣ型)、ヘルペスウイルス(例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−IIおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス)、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器多核体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスを含む。
【０１７７】
開示する抗体で処置可能な感染を引き起こす病原性細菌のいくつかの例は、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、テタヌス、ボツリヌス中毒症、炭疽、ペスト、レプトスピラ症およびライム病細菌を含む。
【０１７８】
組み合わせ治療
ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、単独でまたは１以上のさらなる治療と組み合わせて投与し得る。長期治療は、上記のとおり、他の処置戦略の状況におけるアジュバント治療のときと同様、可能である。
【０１７９】
ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、化学療法または化学療法剤と組み合わせて投与し得る。ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、放射線治療または放射線治療剤と組み合わせて投与し得る。ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、標的化治療または標的化治療剤と組み合わせて投与し得る。ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントは、免疫療法または免疫療法剤、例えばモノクローナル抗体と組み合わせて投与し得る。
【０１８０】
このような方法のある実施態様において、１以上の本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを一緒に(同時に)または異なる時点で(逐次的に)投与し得る。さらに、本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントを、癌を処置するまたは血管形成を阻害する他のタイプの化合物と投与し得る。
【０１８１】
開示されるヒト抗ＯＸ４０抗体を、１以上の他の治療剤、例えば、細胞毒性剤、放射性毒性剤または免疫抑制剤と共投与し得る。抗体をこれら薬剤と連結でき(免疫複合体として)またはこれら薬剤と別に投与できる。後者の場合(別の投与)、抗体をこれら薬剤の前、後または同時に投与できまたは他の既知治療、例えば、抗癌治療、例えば、放射線と共投与し得る。このような治療剤は、数ある中で、ドキソルビシン(アドリアマイシン)、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、ダカルバジンおよびシクロホスファミドヒドロキシ尿素などの抗新生物剤を含み、これらはそれら単独では、患者に毒性または準毒性であるレベルでしか効果的ではない。シスプラチンは、１日１回、４週間、１００mg／ml用量として静脈内投与され、アドリアマイシンは、２１日毎に６０〜７５mg／ml用量として静脈内投与される。本発明の抗ＯＸ４０抗体および抗体フラグメントの化学療法剤との共投与は、ヒト腫瘍細胞に細胞毒性作用を生じる異なる機構で作用する２つの抗癌剤を提供する。このような共投与は薬物に対する耐性獲得または腫瘍細胞が抗体に対して非反応性となる抗原性の変化の問題を解決できる。
【０１８２】
ＯＸ４０は未処置Ｔ細胞では構成的に発現されないが、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)の結合後に誘発される。ＯＸ４０に対するリガンドであるＯＸ４０Ｌは、抗原提示細胞に優勢に発現される。ＯＸ４０は活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞および制御性Ｔ細胞により高度に発現される。ＯＸ４０シグナル伝達はＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞に共刺激シグナルを提供し、細胞増殖、生存、エフェクター機能および遊走を増強させ得る。ＯＸ４０シグナル伝達はまた記憶Ｔ細胞発達および機能も増強する。
【０１８３】
従って、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを、免疫応答の刺激に効果的であり、それにより対象における免疫応答をさらに増強、刺激または上方制御する、１以上のさらなる抗体と共投与し得る。例えば、本発明は、例えば、腫瘍増殖を阻害するまたは抗ウイルス応答を刺激するために、対象における免疫応答が刺激されるように、対象に抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび１以上のさらなる免疫刺激性抗体、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することを含む、対象における免疫応答を刺激する方法を提供する。
【０１８４】
免疫系の重要な部分は、体内の正常細胞と、それが“外来”と見なすものとを区別する能力である。これにより、免疫系は正常細胞をそのままにして、外来細胞を攻撃できる。そうするために、免疫応答の開始前に活性化(または不活性化)されることを要する免疫細胞上の分子である“チェックポイント”を使用する。癌細胞は、免疫系からの攻撃を回避するために、このチェックポイントを利用する方法を発見することがある。従って、免疫チェックポイント阻害剤は、薬物または薬剤、例えば、抗体を含み、これは、少なくとも一部、Ｔ細胞を不活性状態に維持できる癌細胞からのシグナル伝達のため、該薬物または薬剤非存在下では不活性である、Ｔ細胞を活性化できる。
【０１８５】
それ故に、ある実施態様において、本発明の抗ＯＸ４０抗体または抗原結合抗体フラグメントを、癌の処置のために免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用する。例えば、ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメントを、抗細胞毒性Ｔ−リンパ球抗原４(ＣＴＬＡ−４)抗体、抗プログラム死１(ＰＤ−１)抗体または抗プログラム死リガンド１(ＰＤ−Ｌ１)抗体を含むが、これらに限定されない免疫チェックポイント阻害剤である抗体と組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメントを、トラスツズマブ(ハーセプチン)と組み合わせて投与する。
【０１８６】
ある実施態様において、対象は、抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＰＤ−１抗体を投与される。ある実施態様において、対象は、１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５から選択される抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＰＤ−１抗体を投与される。
【０１８７】
他の実施態様において、対象は、抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与される。ある実施態様において、対象は、１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５から選択される抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与される。
【０１８８】
さらに他の実施態様において、対象はＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与される。ある実施態様において、対象は１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５から選択される抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与される。
【０１８９】
ある実施態様において、本発明は、対象にＯＸ４０抗体およびＣＴＬＡ−４抗体を投与することを含む、過増殖性疾患(例えば、癌)を処置する方法を提供する。さらなる実施態様において、抗ＯＸ４０抗体を治療量以下の用量で投与する、抗ＣＴＬＡ−４抗体を治療量以下の用量で投与するまたは両者を治療量以下の用量で投与する。あるいは、免疫刺激剤での過増殖性疾患の処置に付随する有害事象を変える方法は、対象に抗ＯＸ４０抗体および治療量以下の用量の抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することを含むものである。
【０１９０】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、抗細胞毒性Ｔ−リンパ球抗原４(ＣＴＬＡ−４)抗体、例えばイピリムマブ(ヤーボイ)またはトレメリムマブ(ＣＰ−６７５,２０６；MedImmune)と組み合わせて投与する。
【０１９１】
他の組み合わせは、対象へのＯＸ４０抗体または抗体フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)およびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体の投与を含む。ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメントを、抗プログラム死１(ＰＤ−１)抗体、例えばペンブロリズマブ(キイトルーダ)またはニボルマブ(オプジーボ)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、抗プログラム死リガンド１(ＰＤ−Ｌ１)抗体、例えばアベルマブ(ＭＳＢ００１０７１８Ｃ)、アテゾリズマブ(テセントリク)またはデュルバルマブ(ＭＥＤＩ４７３６)と組み合わせて投与する。さらなる実施態様において、抗ＯＸ４０抗体を治療量以下の用量で投与する、抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体を治療量以下の用量で投与するまたは両者を治療量以下の用量で投与する。
【０１９２】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、ＰＡＲＰ阻害剤(例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、セジラニブ、ＢＭＮ６７３、ベリパリブ)、トラベクテジン、ｎａｂ−パクリタキセル(アルブミン結合パクリタキセル、アブラキサン)、トレバナニブ、パゾパニブ、セジラニブ、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、エベロリムス、フルオロピリミジン(例えば、フォルフォックス、フォルフィリ)、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、レオライシン、アリムタ、ジカディア、スーテント、トーリセル(テムシロリムス)、インライタ(アクシチニブ、Pfizer)、アフィニトール(エベロリムス、Novartis)、ネクサバール(ソラフェニブ、Onyx/Bayer)、ヴォトリエント、パゾパニブ、アクシチニブ、ＩＭＡ−９０１、ＡＧＳ−００３、カボザンチニブ、ビンフルニン、Ｈｓｐ９０阻害剤(例えば、アパトルセン)、Ａｄ−ＧＭ−ＣＳＦ(ＣＴ−００７０)、テモゾロミド、ＩＬ−２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、サロミド、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドマイド、アザシチジン、レナリドマイド、ボルテゾミブ(ベルケイド)、アムルビシン、カルフィルゾミブ、プララトレキサートおよび／またはエンザスタウリンと組み合わせて投与する。
【０１９３】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、活性化共刺激分子に対するアゴニストと組み合わせて投与する。ある実施態様において、活性化共刺激分子は、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭまたはＣＤ１２７を含み得る。ある実施態様において、活性化共刺激分子に対するアゴニストは、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭまたはＣＤ１２７に結合するアゴニスト抗体である。ある実施態様において、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、阻害性共刺激分子に対するアンタゴニストと組み合わせて投与し得る。ある実施態様において、阻害性共刺激分子は、ＣＴＬＡ−４(ＣＤ１５２としても知られる)、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂまたはアルギナーゼを含み得る。ある実施態様において、阻害性共刺激分子に対するアンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３(例えば、ＬＡＧ−３−ＩｇＧ融合タンパク質(ＩＭＰ３２１))、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂまたはアルギナーゼに結合するアンタゴニスト抗体である。
【０１９４】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、ＣＤ１９に対するアンタゴニストと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)をＭＯＲ００２０８と組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)をＣＤ３８に対するアンタゴニストと組み合わせて投与する。
【０１９５】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合フラグメント(例えば１Ａ１１、２Ｅ５、２Ｂ１２、１Ｂ１、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、４Ｂ５)を、血管形成阻害剤(例えばベバシズマブ、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ)およびエベロリムスと組み合わせて投与する。
【０１９６】
本発明の抗体を使用して増殖が阻害され得る癌は、免疫療法に一般に応答性である癌を含む。本発明の組み合わせ治療で処置される癌の代表例は、上の抗ＯＸ４０抗体での単剤療法に関する記載で特に挙げた癌を含む。
【０１９７】
治療方法および組成物
ここに記載する抗体組成物(例えば、ヒトモノクローナル抗体、多特異的および二特異的分子および免疫複合体)を投与する適当な経路は、インビボおよびインビトロであり、当分野で周知であり、当業者により選択され得る。例えば、抗体組成物を注射(例えば、静脈内または皮下)により投与し得る。使用する分子の適当な投与量は、対象の年齢および体重ならびに抗体組成物の濃度および／または製剤による。
【０１９８】
投与のための技法および投与量は、特定の結合タンパク質のタイプおよび処置される特定の状態により変わるが、当業者により容易に決定される。一般に、規制当局は、治療で使用するタンパク質医薬を、発熱物質が許容可能な低レベルであるように製剤することを要求する。従って、治療製剤は、一般に実質的に無発熱物質であるかまたは少なくとも適切な規制当局(例えば、ＦＤＡ)により決定される許容されるレベルを超える発熱物質を含まない点で、非治療製剤と区別される。
【０１９９】
本発明の抗原結合タンパク質を含む治療組成物は、単位投与量形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体または添加物と共に投与され得る。投与は、非限定的例として、非経腸(例えば、静脈内、皮下)、経口または局所であり得る。さらに、ネイキッドＤＮＡ送達、組み換え遺伝子およびベクター、患者細胞のエクスビボ操作を含む細胞ベースの送達などなどのような、本発明のポリペプチドをコードする核酸を使用するあらゆる遺伝子治療技法を用い得る。
【０２００】
それ故に、本発明の抗ＯＸ４０抗体または抗原結合その一部を、非経腸投与に適する医薬組成物に取り込み得る。好ましくは、抗ＯＸ４０抗体または抗原結合その一部を、０.１〜２５０mg／ml抗体を含む注射可能溶液として調製する。注射可能溶液は、フリントもしくはアンバーバイアル、アンプルまたはプレフィルドシリンジ中の液体または凍結乾燥投与形態からなり得る。緩衝液は、ｐＨ５.０〜７.０(所望によりｐＨ６.０)のＬ−ヒスチジン(１〜５０mM)、所望により５〜１０mMであり得る。他の適当な緩衝液は、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムを含むが、これらに限定されない。塩化ナトリウムを溶液の毒性を修飾するために、０〜３００mM(液体投与形態について所望により１５０mM)の濃度で使用し得る。凍結保護物質を凍結乾燥投与形態に含めてよく、主に０〜１０％スクロース(所望により０.５〜１.０％)である。他の適当な凍結保護物質はトレハロースおよびラクトースを含む。充填剤を凍結乾燥投与形態に含めてよく、主に１〜１０％マンニトール(所望により２〜４％)である。安定化剤を液体および凍結乾燥両方の投与形態に使用でき、主に１〜５０mM  Ｌ−メチオニン(所望により５〜１０mM)である。他の適当な充填剤は、グリシン、アルギニンであり、０〜０.０５％ポリソルベート−８０(所望により０.００５〜０.０１％)として包含され得る。さらなる界面活性剤は、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
【０２０１】
本発明の組成物は多様な形態であり得る。これらは、例えば、液体、半固体および固体投与形態、例えば液体溶液(例えば、注射可能および点滴可能溶液)、分散体または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐薬を含む。好ましい形態は意図する投与方式および治療適用による。典型的な好ましい組成物は、他の抗体でのヒトの受動免疫化に使用するものに類似する組成物のような、注射可能または点滴可能溶液の形態である。好ましい投与方式は非経腸(例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内)である。好ましい実施態様において、ここに記載する抗ＯＸ４０抗体または抗原結合その一部を静脈内点滴または注射により投与する。他の好ましい実施態様において、抗ＯＸ４０抗体または抗原結合その一部を筋肉内または皮下注射により投与する。
【０２０２】
治療組成物は、一般に無菌であり、製造および貯蔵条件下安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散体、リポソームまたは高薬物濃度に適する他の規則正しい構造として製剤され得る。無菌注射可能溶液を、必要量の活性化合物(すなわち、抗体または抗体部分)を、必要に応じて、上に挙げた成分の一つまたは組み合わせと共に適切な溶媒に取り込み、続いて滅菌濾過することにより調製し得る。一般に、分散体は、活性化合物を塩基性分散体媒体および上に挙げたものからの必要な他の成分を含む無菌媒体に取り込むことにより調製し得る。無菌注射可能溶液の調製のための無菌、凍結乾燥散剤の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液からの活性成分と何らかの付加的な所望の成分の粉末を得る真空乾燥および噴霧乾燥である。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散体の場合必要な粒子径の維持によりおよび界面活性剤の使用により維持され得る。注射可能組成物の長期吸収は、該組成物に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを包含させることによりもたらされ得る。
【０２０３】
本発明の抗ＯＸ４０抗体または抗原結合その一部を、当分野で知られる多様な方法で投与できるが、多くの治療適用について、好ましい投与経路／方式は皮下注射、静脈内注射または点滴である。当業者には認識されるとおり、投与経路および／または方式は所望の結果により変わる。ある実施態様において、活性化合物を、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの、化合物を急速な放出から保護する担体と調製し得る。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような製剤を調製する多くの方法が特許されており、または当業者に一般に知られる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., (Marcel Dekker, Inc., New York, 1978)参照。
【０２０４】
治療有効用量は、投与されたものに治療効果を生じる用量をいう。正確な用量は処置する障害により、当業者は既知技法を使用して確定し得る。一般に、ポリペプチドは、１日あたり約０.０１μg／kg〜約５０mg／kg、好ましくは１日あたり０.０１mg／kg〜約３０mg／kg、最も好ましくは１日あたり０.１mg／kg〜約２０mg／kgで投与される。ポリペプチドを連日(例えば、１日１回、２回、３回または４回)または好ましくは低頻度で(例えば、毎週、隔週、３週毎、毎月または四半期毎)与え得る。さらに、当分野で知られるとおり、年齢および体重、一般的健康、性別、食習慣、投与時間、薬物相互作用および疾患の重症度による調節が必要となり得る。
【０２０５】
ある実施態様において、本発明の抗体を吸入により投与するが、完全ＩｇＧ抗体のエアロゾル化は、その分子サイズ(約１５０kDa)により制限され得る。市販エアロゾル化デバイスを最大限利用可能とするために、小さいＦａｂフラグメントが必要であり得る。
【０２０６】
ある実施態様において、主題の本発明の抗ＯＸ４０抗体または抗体フラグメントを単独で使用し得る。
【０２０７】
診断およびキット
ある実施態様において、抗ＯＸ４０ここに提供する抗体の何れも、生物学的サンプルにおけるＯＸ４０存在の検出のために有用である。ある実施態様において、生物学的サンプルは、腫瘍サンプル(例えば、ＮＳＣＬＣまたは乳房腫瘍)などの細胞または組織を含む。
【０２０８】
ある実施態様において、診断または検出の方法において使用するための抗ＯＸ４０抗体が提供される。さらなる態様において、生物学的サンプルにおいてＯＸ４０の存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、該方法は、生物学的サンプルとここに記載する抗ＯＸ４０抗体を、抗ＯＸ４０抗体のＯＸ４０への結合を許容する条件下で接触させ、抗ＯＸ４０抗体とＯＸ４０の間で複合体が形成されたか否かを検出することを含む。このような方法はインビトロまたはインビボ方法であり得る。ある実施態様において、抗ＯＸ４０抗体を使用して、例えばＯＸ４０が患者選択のバイオマーカーであるとき、抗ＯＸ４０抗体での治療に適格である対象を選択する。
【０２０９】
本発明の抗体で診断され得る障害の例は、癌を含む。
【０２１０】
ある実施態様において、結合ポリペプチドまたはそのフラグメントは診断目的で標識されても標識されていなくてもよい。一般に、診断アッセイは、結合ポリペプチドのＯＸ４０への結合に起因する、複合体の形成の検出を伴う。結合ポリペプチドまたはフラグメントは抗体に準じて、直接標識できる。放射性核種、蛍光体、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤およびリガンド(例えば、ビオチン、ハプテン)を含むが、これらに限定されない多様な標識が用いられ得る。多数の適切な免疫アッセイは当業者に知られる(例えば、米国特許３,８１７,８２７；３,８５０,７５２；３,９０１,６５４；および４,０９８,８７６参照)。非標識であるとき、結合ポリペプチドを凝集アッセイなどのアッセイに使用し得る。非標識結合ポリペプチドはまた、該結合ポリペプチドまたは他の適当な試薬(例えば、標識プロテインＡ)と反応性である標識抗体のような該結合ポリペプチドの検出に使用できる他の(１以上の)適当な試薬と組み合わせも使用し得る。
【０２１１】
ある実施態様において、本発明の結合ポリペプチドを、対象ポリペプチドを酵素にコンジュゲートさせる、酵素免疫アッセイに利用し得る。ＯＸ４０タンパク質を含む生物学的サンプルを対象結合ポリペプチドと組み合わせるとき、結合ポリペプチドとＯＸ４０タンパク質の間に結合が生じる。ある実施態様において、ＯＸ４０タンパク質を発現する細胞(例えば、内皮細胞)を含むサンプルを対象抗体と組み合わせ、該結合ポリペプチドと、該結合ポリペプチドにより認識されるＯＸ４０タンパク質を担持する細胞で結合が生じる。これら結合細胞を未結合試薬と分離でき、該細胞に特異的に結合する結合ポリペプチド−酵素コンジュゲートを、例えば、該サンプルと、該酵素と反応したとき色または他の検出可能な変化を生じる酵素の基質と接触させることにより、決定し得る。他の実施態様において、対象結合ポリペプチドは非標識であり、対象結合ポリペプチドを認識する第二標識ポリペプチド(例えば、抗体)を加え得る。
【０２１２】
ある態様において、本発明の抗体またはそのフラグメントを使用する生物学的サンプルにおけるＯＸ４０タンパク質の存在の検出に使用するためのキットも性ズオされる。このようなキットは、ＯＸ４０タンパク質または該受容体の一部に結合するＯＸ４０結合ポリペプチド、例えば、抗体またはそのフラグメントならびに結合ポリペプチドと該受容体タンパク質またはその一部の間の複合体の存在の検出に適する１以上の補助的試薬を含む。本発明のポリペプチド組成物は、単独でまたは他のエピトープに特異的なさらなる抗体と組み合わせで、凍結乾燥形態で提供され得る。標識または非標識であり得る結合ポリペプチドおよび／または抗体は、補助成分(例えば、緩衝液、例えばＴｒｉｓ、リン酸および炭酸、安定化剤、添加物、殺生物剤および／または不活性タンパク質、例えば、ウシ血清アルブミン)と共にキットに入れられ得る。例えば、結合ポリペプチドおよび／または抗体を、補助成分との凍結乾燥混合物で包含できまたは補助成分を、使用者が組み合わせるように別々に提供し得る。一般にこれらの補助物質は、活性結合ポリペプチドまたは抗体の量に基づき約５重量％未満で存在し、通常ポリペプチドまたは抗体濃度に基づき少なくとも約０.００１重量％の総量で存在する。該結合ポリペプチドに結合できる第二抗体を用いるとき、このような抗体をキットに、例えば別のバイアルまたは容器に提供し得る。第二抗体は、存在するならば、一般に標識され、上記抗体製剤と同様の方法で製剤化され得る。
【０２１３】
他の実施態様を、次の非限定的実施例に記載する。
【実施例】
【０２１４】
実施例１
種々の抗ＯＸ４０抗体の結合能を決定するために実験を行った。抗ＯＸ４０抗体ライブラリーからのクローンを、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８前活性化ヒト末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)への結合について３日間試験した。各クローンを５μg／mlで３×１０５前活性化ヒトＰＢＭＣとインキュベートした。抗ＯＸ４０抗体の活性化ヒトＴ細胞への結合を、ＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ二次抗体を使用するフローサイトメトリーで明らかにした。フィコエリトリン(ＰＥ)標識抗ｈＣＤ３抗体も、その蛍光がＴ細胞で検出されることを示すために使用した。二次抗体のみを陰性対照として使用した。市販ＡＰＣ標識抗ヒトＯＸ４０(クローンＢｅｒ−ＡＣＴ３５)を陽性対照として使用した。結果を図１に示す。図１は、パーセントＣＤ３＋ＯＸ４０＋Ｔ細胞で測定した、活性化ヒトＴ細胞上の抗ＯＸ４０抗体クローンの結合を示す。試験した抗ＯＸ４０クローンをｘ軸に示す。図１は、試験した抗ＯＸ４０クローンの大部分がＴ細胞に結合することを示す。
【０２１５】
実施例２
ＯＸ４０抗体クローンがＮＦｋＢシグナル伝達経路を活性化する能力を有することを特定するために実験を行った。ＯＸ４０＋ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼレポーター安定細胞を計数し、ＲＰＭＩ−１６４０＋５％ＦＣＳ(完全培地)に懸濁した。６.７×１０４細胞／ウェル(６０μl中)を白色平底９６ウェルマイクロプレートに播種した。細胞をトリプリケートで播種した。次の試薬の一つを６０μl加えることにより、細胞を刺激した：(１)陽性対照として可溶性ＴＮＦα(Biolegend; Ref.570102; Lot. B204173)；(２)陽性対照として５μg／ml可溶性抗ヒスチジン(Biolegend; Ref. 652502)＋１μg／ml精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(Biolegend; Ref.555704またはR&D Systems; Ref. 1054-OX-010)；(３)同族抗原の種々のエピトープを認識する抗体の混合物がモノクローナル抗体より良好なアゴニストであるかを決定するために使用したポリクローナル抗ＯＸ４０抗体；(４)２０μg／mlアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体；(５)２０μg／ml抗ＯＸ４０抗体クローン。その後、細胞を３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートした。
【０２１６】
約６時間刺激後、ルシフェラーゼ活性をPromegaからのBIO-GLO Luciferase Assay system(Cat. No. G7941; Lot. 0000168497)を１００μl／ウェルで加えて明らかにした。次いでプレートを室温で、暗所で５分、ゆっくりした震盪条件下でインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Molecular DevicesからのFlexStation3での読み取りにより得た(発光読み取り、５００ms)。結果を相対発光量(ＲＬＵ)として示す。
【０２１７】
図２Ａは、６時間刺激後の制御実験条件でのＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示す。図２Ａに示すとおり、非刺激細胞、アイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)およびポリクローナル抗ＯＸ４０抗体はＲＬＵの増加を示さず、ＮＦｋＢ経路が活性化されなかったことを示した。陽性対照、可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)および可溶性ＴＮＦαは高いＲＬＵを示し、予想どおり、ＮＦｋＢ活性の増加を示した。図２Ｂは、６時間刺激後に試験した抗ＯＸ４０抗体クローンについてＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示す。非刺激細胞およびアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)は、陰性対照として示す。可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)は、陽性対照として示す。図２Ｂに示すとおり、ＯＸ４０クローンの全て陰性対照値を超えるＲＦＵの増加を示した。これらの結果は、ＯＸ４０／ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ−Ｌｕｃレポーターアッセイが内部対照に基づき適切に働いたことを示した。クローン１Ｃ４、４Ｄ７  １Ｄ９および１Ｂ２は最強ＮＦｋＢ活性化を示した(精製ｒｈＯＸ４０Ｌ＋抗Ｈｉｓで＞５０％のシグナルが観察された)。
【０２１８】
種々の試薬での細胞刺激時間を６時間から１５時間に延長した類似する一連の実験を実施した。最初の一連の実験に類似して、ＯＸ４０＋ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼレポーター安定細胞を計数し、ＲＰＭＩ−１６４０＋５％ＦＣＳ(完全培地)に懸濁させた。５×１０４細胞／ウェル(６０μl中)を白色平底９６ウェルプレートに分配した。細胞をトリプリケートで播種した。細胞を、次の試薬の何れか一つを６０μl加えて刺激した(１)陽性対照としての可溶性ＴＮＦα(Biolegend; Ref.570102; Lot. B204173)；(２)陽性対照として５μg／ml可溶性抗ヒスチジン(Biolegend; Ref. 652502)＋１μg／ml精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(Biolegend; Ref.555704)；(３)２０μg／mlアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体；(４)２０μg／ml抗ＯＸ４０抗体クローン。その後、細胞を３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートした。
【０２１９】
約１５時間後、刺激ルシフェラーゼ活性PromegaからのBIO-GLO Luciferase Assay system(Cat. No. G7941; Lot. 0000168497)を１００μl／ウェルで加えて明らかにした。プレートを室温で、暗所で５分、ゆっくりした震盪条件下でインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Molecular DevicesからのFlexStation3での読み取りにより得た(発光読み取り、５００ms)。結果を相対発光量(ＲＬＵ)として示す。
【０２２０】
図３Ａは、約１５時間刺激の制御実験条件でのＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示す。図３Ａに示すとおり、非刺激細胞、アイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)およびポリクローナル抗ＯＸ４０抗体はＲＬＵの増加を示さず、ＮＦｋＢ経路が活性化されなかったことを示した。陽性対照、可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)および可溶性ＴＮＦαは高いＲＬＵを示し、予想どおり、ＮＦｋＢ活性の増加を示した。図３Ｂは、約１５時間刺激後に試験した抗ＯＸ４０抗体クローンについてＲＬＵにより測定したルシフェラーゼ活性を示す。非刺激細胞およびアイソタイプ対照ＦｅＨ３抗体(Ｃｔｒｌ  ＦｅＨ３)は、陰性対照として示す。可溶性抗ヒスチジン＋精製ｒｈＯＸ４０Ｌ(ｒｈＯＸ４０Ｌ＋αＨｉｓ)は、陽性対照として示す。図３Ｂに示すとおり、ＯＸ４０クローンの全て陰性対照値を超えるＲＦＵの増加を示した。これらの結果は、ＯＸ４０／ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ−Ｌｕｃレポーターアッセイが内部対照に基づき適切に働いたことを示した。長いインキュベーション時間(６時間の代わりに１５時間)は、より強いＮＦｋＢ活性を誘発し、一部クローンがＮＦｋＢ活性を刺激するのに６時間より長くかかることを示唆する。特にクローン１Ａ１１、１Ｃ４、４Ｄ７、１Ｄ９、５Ｃ１１、２Ｂ４、４Ｄ９、３Ｃ１０および１Ｂ２は、この中で最も活性であった。
【０２２１】
実施例３
ヒトＴ細胞活性化アッセイを、ＯＸ４０クローンアゴニスト活性の特定に使用した。平底９６ウェルプレートを、ＰＢＳ１×中、一夜、４℃で１.５μg／ml抗ＣＤ３(クローンＯＫＴ３)＋１０μg／ml(抗ＣＤ２８または抗ＯＸ４０または抗ＣＤ１３７クローン)(最終１００μl／ウェル)で被覆した。抗ＣＤ３単独およびアイソタイプ対照抗体であるＦｅＤ２を陰性対照として使用した。抗ＣＤ２８を陽性対照として使用した。翌日、プレートをウェルあたり１５０μlの無菌完全培地(ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ)で、無菌フード下３回洗浄した。精製ヒトＴ細胞を、完全培地中４×１０５細胞／ウェルで播種した。プレートを３７℃で３日、加湿組織培養インキュベーターでインキュベートした。
【０２２２】
３日後、細胞をＶ底９６ウェルプレートに移し、冷ＦＡＣＳ緩衝液(ＰＢＳ１Ｘ＋２％ＦＣＳ)で２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中７０μlの５μl／ウェルＰＥ標識抗ヒトＣＤ２５(クローンＭ−Ａ２５１)で２０分、４℃で染色した。細胞を１,５００rpmで２分回転させ、上清をプレートを迅速に軽打することにより除去した。次に、細胞を１７０μl／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。細胞を１,５００rpmで２分回転させ、上清をプレートを迅速に軽打することにより除去した。洗浄工程を２回繰り返した。ＣＤ３＋ＣＤ２５＋活性化Ｔ細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーにより測定した。図４Ａおよび図４Ｂに示すとおり、抗ＯＸ４０クローンの数は、有意なＴ細胞共刺激を示した。Ｔ細胞共刺激を示すこれらクローンの中で、クローン２Ｂ４、４Ｄ７、２Ｂ３、４Ｇ９および１Ｂ１は最も強固なアゴニスト活性を示した。
【０２２３】
合わせて、これらの実験からの結果は、１Ａ１１、２Ｅ５、１Ｂ１、４Ｇ９、５Ｃ１、４Ｄ７、５Ｂ９、１Ｃ４、２Ｂ４および２Ｂ３を含む特定の候補アゴニストクローンを同定している。
【０２２４】
【表１】
2019526623.tif 000002
【表２】
2019526623.tif 000003
【０２２５】
【表３】
2019526623.tif 000004
【表４】
2019526623.tif 000005
【０２２６】
【表５】
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【表６】
2019526623.tif 000007
【０２２７】
【表７】
2019526623.tif 000008
【表８】
2019526623.tif 000009
【０２２８】
【表９】
2019526623.tif 000010
【表１０】
2019526623.tif 000011
【０２２９】
【表１１】
2019526623.tif 000012
【図１】
2019526623.tif 000013
【図２Ａ】
2019526623.tif 000014
【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
2019526623.tif 000016
【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【配列表】
2019526623000001.app
【国際調査報告】
2019526623.tif 000020
2019526623.tif 000021
2019526623.tif 000022