(57)【要約】本発明は、アッセイ装置および医学的分析におけるその使用、特に血液または血液細胞を評価するための方法に関する。
2019523123.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上部枠エレメント（１）と下部枠エレメント（２）とを備えたアッセイ装置であって、
前記上部枠エレメント（１）及び前記下部枠エレメント（２）は、機能層（５、６、７）の積層体を受けるのに適した試験コンパートメントが形成されるように組立てられ、
前記試験コンパートメントは、前記上部枠エレメント（１）の上部試験コンパートメントの内側表面（１ａ）と、前記下部枠エレメント（２）の下部試験コンパートメントの内側表面（２ａ）とを含み、
前記上部枠エレメント（１）は、前記下部枠エレメント（２）に対し移動可能となることで、前記アッセイ装置の第１の構造および第２の構造を規定し、
前記上部枠エレメント（１）は、第１開口部（３）および第２開口部（４）を有しており、前記第１開口部と第２開口部の双方が外部からの前記試験コンパートメントへのアクセスを提供し、
前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）は、前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第２開口部（４）の位置と略同じであるように配置されており、
前記アッセイ装置は、上部膜層（６）と下部吸収層（７）とを備えた機能層の積層体を備えており、
前記上部膜層と前記下部吸収層は、互いに重なり合って配置されると共に、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）および前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対し略平行に延出する、装置。
【請求項２】
前記上部枠エレメント（１）は、前記下部枠エレメント（２）に対して回転可能である、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項３】
少なくとも前記上部膜層（６）は、前記下部枠エレメント（２）に固定されている、請求項１又は２に記載のアッセイ装置。
【請求項４】
少なくとも１つのカットアウト（６ａ、６ｂ、７ａ、７ｂ）は、前記上部膜層（６）に形成されると共に、少なくとも１つの凸部（８ａ、９ａ）は、前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に形成され、
前記カットアウト（６ａ、５ｂ、７ａ、７ｂ）が前記凸部（８ａ、９ａ）と係合することで前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対する前記上部膜層（６）の位置を確保する、請求項３に記載のアッセイ装置。
【請求項５】
前記試験コンパートメントは、前記上部膜層（６）に略平行に配置されたフィルタ層（５）を備え、
前記フィルタ層（５）は、前記第１開口部（３）と前記上部膜層（６）との間に位置するように配置され、
前記フィルタ層（５）は、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）に取付けられる、請求項１から４のうちいずれか１項に記載のアッセイ装置。
【請求項６】
前記フィルタ層（５）は、グリッドを備える、請求項５に記載のアッセイ装置。
【請求項７】
前記上部膜層（６）は、前記上部試験コンパートメント内側表面（１ａ）から離間するように配置されている、請求項１から６のうちいずれか１項に記載のアッセイ装置。
【請求項８】
移動制限部（２１）が前記上部枠エレメント（１）に形成されると共に、別の移動制限部（２２）が前記下部枠エレメント（２）に形成され、
前記第１の構造に対応する第１の極限位置と前記第２の構造に対応する第２の極限位置との間で、前記上部枠エレメント（１）が前記下部枠エレメント（２）に対し可動性となるように、前記移動制限部（２１、２２）が設けられている、
請求項１から７のうちのいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項９】
前記上部枠エレメント（１）及び前記下部枠エレメント（２）は、互いに嵌合することで組立てられる、請求項１から８のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１０】
ラベル（１１）は、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）と反対側の前記上部枠エレメント（１）の表面上に配置されている、請求項１から９のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１１】
前記アッセイ装置は、ホール（１０ａ）を備えたカード（１０）をさらに備え、
前記上部枠エレメント（１）または前記下部枠エレメント（２）は、前記ホール（１１ａ）と係合する、請求項１から１０のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１２】
凹部（８ｂ、９ｂ）が前記下部枠エレメント（２）に形成され、
前記カード（１０）の前記ホール（１０ａ）には、ノッチが設けられ、
前記凹部（８ｂ、９ｂ）が前記ホールと係合することで、前記カード（１０）に対する前記下部枠エレメント（２）の位置が確保される、
請求項１１に記載のアッセイ装置。
【請求項１３】
前記上部枠エレメント（１）は、複数の第１開口部（３）と第２開口部（４）を有し、
前記第１開口部（３）の各々が前記第２開口部（４）の１つと関連付けられており、
前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する関連する前記第２開口部（４）の位置と略同一となるように、前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）が配置されている、
請求項１から１２のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１４】
血液または血液細胞を評価するための方法であって、請求項１から１３のうちいずれか一項で規定された装置を適用するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アッセイ装置およびその医学における、特に医学的分析または診断における分析道具としての使用、ならびに血液またはその構成成分、特に血液細胞を評価するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液細胞の表面上の受容体分子などの、特定の分析物の分析は、様々な疾患の診断において極めて重要であり、かつ医療専門家が最も有望な治療戦略を選ぶことを可能にする。垂直フローアッセイは、生物医学的サンプル、例えば全血のサンプルまたは全血に由来するサンプルの、診断および分析の分野において広く適用される。それらは特に、イムノアッセイフォーマットにおいて使用されるが、それに限定されない。医学的環境における日々の使用に向けて垂直フローアッセイを開発するための１つの重要な必要条件は、潜在的使用者の範囲が特別に訓練された医師に限定されず、彼らの助手および彼らの患者さえも含むような高度のユーザビリティである。
【０００３】
血液サンプルを用いて垂直フローアッセイを実施する上での１つの重要な工程は、さもなければ試験結果を偽造するかもしれない細胞性血液成分を血液サンプルから除去することである。これは通常、前処理工程により達成されるが、それには分析されるべきサンプルを前処理するための追加の装置が必要であり、その結果、アッセイを実施するためにさらなる時間が必要となり、そのことでまたアッセイ当たりの費用も増大するであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
それ故、本発明によって解決されるべき問題は、高度に効率的かつ迅速な分析試験を可能にする、血液細胞を評価するための医学的試験装置および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この目的は、特許請求の範囲によるアッセイ装置および分析法の提供により達成される。本発明によるアッセイ装置は、特に簡単かつ安全な方法で操作できる。アッセイは、医療の専門家によるばかりでなく、ヘルパーおよび患者によっても使用可能であるように設計できる。健康診断などの他のプロセスへの取込みが容易である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１Ａ】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態を示す図である。
【図１Ｂ】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態を示す図である。
【図２】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態の立体分解図を示す図である。
【図３】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態の横断面を示す図である。
【図４Ａ】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態の動作を示す図である。
【図４Ｂ】本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態の動作を示す図である。
【図５Ａ】本発明によるアッセイ装置の第２の実施形態の立体分解図を示す図である。
【図５Ｂ】本発明によるアッセイ装置の第２の実施形態を示す図である。
【図６】本発明によるアッセイ装置の第３の実施形態の立体分解図を示す図である。
【図７】図６によるアッセイ装置の第３の実施形態の上面図を示す図である。
【図８】本発明の一般的な実施形態によるアッセイ装置の断面図を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
（発明の詳細な説明）
ａ）一般的な定義
特記しない限り、用語「上部」は、分析されるべきサンプル（例えば、任意に前処理された血液サンプル）がそこで添加されて装置に侵入する装置の側を指す。
【０００８】
特記しない限り、用語「内部」は、周辺環境と直接接触していないかまたは実質的に直接接触していない、装置の部分を指す。
【０００９】
「第１の構造」はまた、「サンプル添加構造」とも呼び得る。
【００１０】
「第２の構造」はまた、「試薬添加構造」または「読み出し構造」または「読み取り構造」とも呼び得る。
【００１１】
「第１開口部」はまた、「サンプル添加開口部」または「サンプル供給開口部」とも呼び得る。前記開口部においては、任意に前処理された血液サンプルが添加され、かつ第１のフィルタ層へ洗い流されて、前記サンプル中に任意に形成された細胞凝集体が前記フィルタにより保持されるようにする。
【００１２】
「第２開口部」はまた、「試薬添加開口部」、「読み取り開口部」、または「読み出し開口部」とも呼び得る。分析物（例えば、評価されるべき細胞など）に特異的な試薬の添加に際し形成される検出可能なシグナルは、前記開口部から検出および読み出され得る。
【００１３】
「吸収層」は、分析されるべきサンプルの液相（その中に溶解または懸濁された構成成分も含めて）、アッセイ法の間に添加される洗浄液、および装置内に添加される液体試薬媒体（液相中の必要な試薬の溶液もしくは分散液）の液相、ならびに前記試薬媒体の未反応の構成成分を、物理的に吸収する能力を有する適当な天然または合成の材料を含む。前記吸収層のサイズ（容積）は、吸収されるべき液体の全体積と吸収性材料の吸収能力とに依存し、かつ好ましくは吸収されるべき液体の体積を超えるべきである。
【００１４】
本発明による「垂直フローアッセイ」または「垂直フローイムノアッセイ」は、アッセイ装置を通した流体の垂直流によって特徴づけられる。アッセイ装置は、互いに積み重ねられた同じかまたは好ましくは機能性の異なる、多重（少なくとも２つ以上、特に３つの）層を含む。かかる機能層は、グリッド、フィルタ膜、および吸着層から選択できる。
【００１５】
細胞の「表面上に存在する」とは、前記分子（細胞表面マーカーなど）が、細胞表面に結合するか、または細胞膜の不可欠な部分であって、細胞膜を超えて細胞外空間へ、また場合により細胞内空間（すなわち、細胞質）にも延在することを意味する。
【００１６】
標的（特に抗原、例えばＣＤ４またはＣＤ８など）に対する結合剤（抗体など）の結合を含む反応に関して「特異的」とは、前記特定の目的とする標的を特異的に認識および結合する一方、分析されるべきサンプル中に存在し得る別の標的（特に抗原）とは何ら交差反応性を示さない、結合剤の能力を定義する。
【００１７】
「抗体」は、任意のクラスの「免疫グロブリン分子」（ＩｇＡ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｍ、Ｗ、Ｙなど）および任意のアイソタイプに関係し、限定するものではないがＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。前記用語は特に、機能性抗体（すなわち、抗原に結合する能力を有する）モノクローナルおよびポリクローナル抗体（Ａｂ）、または特定の抗原に結合可能なフラグメント抗体（ｆＡｂ）を指す。前記ＡｂおよびｆＡｂは、化学的もしくは酵素的に産生された分子から選択されるか、または原核生物もしくは真核生物もしくは細胞株により、非組換え的もしくは組換え的に産生されてもよく、あるいは高等生物、例えば哺乳動物、特に非ヒト哺乳動物種、または非哺乳動物種、好ましくは鳥類、または植物により産生されてもよい。前記ｆＡｂは：一価抗体（１つの重鎖および１つの軽鎖からなる）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２（またはＦａｂ２）、Ｆａｂ３、ｓｃＦｖ、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンダブ；および単一抗体ドメイン、例えばＶＨおよびＶＬドメイン、およびそれらのフラグメントからなる群より選択されてもよく；これにおいて、それらの多価フラグメントは、異なるかまたは好ましくは同じ抗原の同じ抗原決定基、例えば特にＣＤ４もしくはＣＤ８に結合してもよい。
【００１８】
本明細書で用いるとき、用語「標識抗体」は、抗体（好ましくは個々の抗原に結合した後）の同定を提供する標識が取込まれた、上記に定義されたような抗体分子を指す。特に、標識とは「検出可能なマーカー」であり、例えば、放射能標識されたアミノ酸を取込むこと、または標識されたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的もしくは比色分析法によって測定可能な酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出可能なビオチン部分をポリペプチドに結合することである。抗体のための標識の例は、限定するものではないが以下を含む：
−放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）；
−蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）；
−酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；
−化学発光マーカー；
−ビオチニル基；
−二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；および
−ポリマー粒子（例えば、有色ナノ粒子）
−金属粒子（金ナノ粒子など）
−磁性物質、例えば、ガドリニウムキレート、および
−オリゴヌクレオチド。
【００１９】
本発明のアッセイ法において用いるとき、「全血」サンプルは、哺乳動物、特にヒトに由来するサンプルである。任意の「全血サンプル」が使用可能である。前記サンプルは「そのまま」すなわち、何ら前処理なしに、血液提供者から採取されたまま直接使用されてもよく、またはアッセイに先立ち前処理されてもよい。したがって、例えば本明細書における全血は、全血の未修飾サンプルか、または抗凝固剤がサンプルに添加されているサンプルか、または、例えば緩衝液もしくは別の液体を添加することにより全血から派生するサンプルを意味する。適当なサンプルの例は、天然の、未処理の全血、および前処理された全血血液、例えばＥＤＴＡ血、シトラート血、ヘパリン血である。最初に取得されたサンプルは、希釈によってさらに修飾され得る。アッセイを妨げるかもしれない構成成分を除去するための全血の分画は必要ではない。希釈は、例えば分析物のような、構成成分の濃度を調整する目的で、元のサンプルを適当なサンプル液、例えば適当な緩衝液と混合することにより実施可能である。サンプルはまた、例えば赤血球の選択的溶血などの、溶血によって前処理されてもよい。このように修飾されたサンプルは、哺乳動物の身体から収集または単離された元の血液サンプルに「由来する」サンプルの例となる。
【００２０】
本発明により測定されるべき「分析物」とは、細胞マーカー、例えば細胞表面マーカー、特にＣＤ４またはＣＤ８である。
【００２１】
「ＣＤ４」（分化抗原群４）は、Ｔヘルパー細胞、単球、マクロファージ、および樹状細胞などの免疫細胞の表面上に検出される糖タンパク質である。それは、１９７０年代後半に発見され、１９８４年にＣＤ４と命名される以前には、当初ｌｅｕ−３およびＴ４として知られていた。
【００２２】
「ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞」は、ヒト免疫系に必須の部分である白血球細胞である。それらはしばしば、ＣＤ４細胞、Ｔ−ヘルパー細胞、またはＴ４細胞と称される。それらがヘルパー細胞と称されるのは、それらの主な役割の１つが、ＣＤ８キラー細胞を含めた別のタイプの免疫細胞にシグナルを送ることであり、次いでそれらの免疫細胞が感染粒子を破壊するからである。ＣＤ４細胞が枯渇してくると、例えば未治療のＨＩＶ感染において、または移植に先立つ免疫抑制後では、その身体は、さもなければ戦うことができたであろう広範囲の感染症に対し無防備なままとなる。
【００２３】
「ＣＤ８」（分化抗原群８）は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のための共受容体として働く膜貫通糖タンパク質である。ＴＣＲと同様、ＣＤ８は主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合するが、しかしクラスＩ  ＭＨＣタンパク質に特異的である。このタンパク質には、それぞれ異なる遺伝子によってコードされた２つのアイソフォーム、アルファおよびベータがある。ＣＤ８共受容体は、主として細胞障害性Ｔ細胞の表面上に発現されるが、またナチュラルキラー細胞、皮質胸腺細胞、および樹状細胞上にも検出できる。
【００２４】
「ＣＤ１４」（分化抗原群１４）は、またＣＤ１４としても知られるヒト遺伝子である。この遺伝子によりコードされたタンパク質は、自然免疫系の構成要素である。ＣＤ１４は、２つの形態で存在しており、１つはグリコシルホスファチジルイノシトール尾部（ｍＣＤ１４）によって膜に固定され、他は可溶性の形態（ｓＣＤ１４）である。可溶性ＣＤ１４は、ｍＣＤ１４（４８ｋＤａ）の剥離後に出現するか、または細胞内小胞体（５６ｋＤａ）から直接分泌される。ＣＤ１４は、主としてマクロファージおよび好中球（１０倍少ない程度で）により発現される。それはまた、樹状細胞および単球によっても発現される。
【００２５】
本明細書で言及する場合、「興味の血液細胞」（ＢＣｏＩ）は、本発明により評価されるべき全血サンプル中に典型的に存在する細胞の、クラスもしくは集団、またはより特定的にはサブクラスもしくは亜集団に属する。かかる（サブ）クラスまたは（亜）集団は、試験環境（全血サンプル）において、特定の細胞表面マーカーまたはかかるマーカーのパターンに基づき互いに識別可能であって、前記マーカーまたはマーカーのパターンは、それらに特異的な対応する抗体分子によって分析され得る。
【００２６】
細胞の「サブクラス」、「サブセット」、または「亜集団」とは、機能的または抗原的に関連する血液細胞のグループを指す。それらの例は、（ＣＤ４＋）Ｔヘルパー細胞またはＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞である。
【００２７】
血液細胞の「クラス」または「集団」の例は、Ｔリンパ球およびＢリンパ球である。
【００２８】
本明細書における「識別可能」とは、特定のマーカーが前記特定のＢＣｏＩに「特異的」であること、すなわち身体の他のいかなる細胞においても検出されないこと、または「サブクラス特異的」であり、それ故分析されるべき血液サンプルの別の細胞集団には検出されないこと、或いは、全血サンプル中に存在する他の血液細胞でも同様に検出されるため「非特異的」ではあるが、しかしながらそれらの細胞が非常に低い割合で存在するか、またアッセイ結果に悪影響を及ぼしたり偽造したりすることがないか、またはＢＣｏＩの評価が実施される前に試料から除去されることを意味する。
【００２９】
それ故、本発明に関しては、細胞のクラス、集団、サブクラス、または亜集団に「特異的」とは、特記しない限り広義に理解されるべきである。
【００３０】
「評価する」または「評価」とは、サンプル中に存在する分析物の量または濃度について絶対値を得ること、かつまたサンプル中の分析物のレベルを示す指数、比率、パーセント、視覚的な値、または他の値も得るという意味において、量的および質的測定の双方を包含することを意図したものである。評価は、直接または間接的であってよく、また実際に検出される化学種は当然分析物自体である必要はないが、例えばそれらの誘導体であってもよい。
【００３１】
ｂ）特に好適な実施形態
本発明は、以下の実施形態に関する：
【００３２】
第１の一般的実施形態は、以下の装置に関する：
１．アッセイ装置であって、
上部試験コンパートメント内側表面（１ａ）と第１開口部（３）とを有する上部枠エレメント（１）と、
互いに重なり合って配置された、上部膜層（６）と下部吸収層（７）とを含む、機能層の積層体と、
上部枠エレメント（１）に取付けられており、かつ第１開口部（３）を横切って延在するフィルタ層（５）と、を含み、
前記フィルタ層（５）は、機能層の積層体に対して移動可能となることで、アッセイ装置の少なくとも第１の構造および第２の構造が規定され、
機能層の積層体が、上部試験コンパートメント内側表面（１ａ）に沿って延在し、
機能層の積層体の上部膜層（６）が、上部試験コンパートメント表面（１ａ）、フィルタ層（５）および上部枠エレメント（１）の第１開口部（３）に面している
ことにより第１の構成が特徴付けられ、
前記第２の構造は、前記フィルタ層（３）が上部枠エレメントから除去されることで第１の構造とは異なる、
アッセイ装置。
【００３３】
第２の、より特定的な実施形態は、上記の一般的実施形態のさらに開発された変形に関し、これもやはり前記一般的実施形態の基本原理を利用している。
２．上部枠エレメント（１）と下部枠エレメント（２）とを備えたアッセイ装置であって、
前記上部枠エレメント（１）及び前記下部枠エレメント（２）は、機能層（５、６、７）の積層体を受けるのに適した試験コンパートメントが形成されるように組立てられ、
前記試験コンパートメントは、前記上部枠エレメント（１）の上部試験コンパートメントの内側表面（１ａ）と、前記下部枠エレメント（２）の下部試験コンパートメントの内側表面（２ａ）とを含み、
前記上部枠エレメント（１）は、前記下部枠エレメント（２）に対し移動可能となることで、前記アッセイ装置の第１の構造および第２の構造を規定し、
前記上部枠エレメント（１）は、第１開口部（３）および第２開口部（４）を有しており、前記第１開口部と第２開口部の双方が外部からの試験コンパートメントへのアクセスを提供し、
前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）は、前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第２開口部（４）の位置と略同じであるように配置されている、
アッセイ装置。
【００３４】
３．実施形態２によるアッセイ装置であって、
上部枠エレメント（１）が下部枠エレメント（２）に対し回転可能である、該装置。
【００３５】
４．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
機能層の積層体は、上部膜層（６）および下部吸収層（７）を備え、
前記上部膜層と前記下部吸収層は、互いに重なり合って配置されると共に、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）および前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対し略平行に延出する、アッセイ装置。
【００３６】
５．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
少なくとも上部膜層（６）が下部枠エレメント（２）に固定されている、アッセイ装置。
【００３７】
６．実施形態５によるアッセイ装置であって、
少なくとも１つのカットアウト（６ａ、６ｂ、７ａ、７ｂ）が、上部膜層（６）において形成され、かつ
少なくとも１つの凸部（８ａ、９ａ）が、下部試験コンパートメント表面（２ａ）において形成され、
カットアウト（６ａ、５ｂ、７ａ、７ｂ）が凸部（８ａ、９ａ）と係合して、下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対する上部膜層（６）の位置を確保する、
アッセイ装置。
【００３８】
７．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
試験コンパートメントが、上部膜層（６）に略平行に配置されたフィルタ層（５）を備え、
フィルタ層（５）が、第１開口部（３）と上部膜層（６）との間に位置するように配置され、フィルタ層（５）が上部試験コンパートメント表面（１ａ）に取付けられている、アッセイ該装置。
【００３９】
８．実施形態７のアッセイ装置であって、
フィルタ層（５）がグリッドを備える、アッセイ装置。
【００４０】
９．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
上部膜層（６）が上部試験コンパートメント内側表面（１ａ）から離間するように配置されている、アッセイ装置。
【００４１】
１０．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
移動制限部（２１）が上部枠エレメント（１）に形成され、かつ別の移動制限部（２２）が下部枠エレメント（２）に形成され、
移動制限部（２１、２２）が、第１の構造に対応する第１の極限位置と第２の構造に対応する第２の極限位置との間で、上部枠エレメント（１）が下部枠エレメント（２）に対し可動性となるように設けられている、アッセイ装置。
【００４２】
１１．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
上部（１）および下部枠エレメント（２）が互いに嵌合により組立てられている、アッセイ装置。
【００４３】
１２．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
ラベル（１１）が、上部試験コンパートメント表面（１ａ）と反対側の上部枠エレメント（１）の表面上に配置されている、アッセイ装置。
【００４４】
１３．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
アッセイ装置がホール（１０ａ）を備えたカード（１０）をさらに備えており、上部枠エレメント（１）または下部枠エレメント（２）がホール（１１ａ）と係合する、アッセイ装置。
【００４５】
１４．実施形態１３によるアッセイ装置であって、
凹部（８ｂ、９ｂ）が下部枠エレメント（２）に形成され、
前記カード（１０）の前記ホール（１０ａ）には、ノッチが設けられ、
前記凹部（８ｂ、９ｂ）が前記ホールと係合することで、前記カード（１０）に対する前記下部枠エレメント（２）の位置が確保される、アッセイ装置。
【００４６】
１５．先行する実施形態のいずれか１つによるアッセイ装置であって、
前記上部枠エレメント（１）は、複数の第１開口部（３）と第２開口部（４）を有し、
前記第１開口部（３）の各々が前記第２開口部（４）の１つと関連付けられており、
前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する関連する前記第２開口部（４）の位置と略同一となるように、前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）が配置されている、アッセイ装置。
【００４７】
１６．血液または血液構成成分、特に血液細胞を評価するための方法、特に診断または分析法であって、先行する実施形態のいずれか１つに定義されるような装置を適用することを含む、該方法。
【００４８】
１７．実施形態１６の方法であって、液体全血サンプルまたはそれに由来するサンプル中の、１つ以上のサブクラスの興味の血液細胞（ＢＣｏＩ）を評価するための方法であり、
各サブクラスは、前記サブクラスの興味の血液細胞のための第１の識別可能な細胞表面マーカー（Ｍ１）を有しており、
前記サンプルはさらに妨害血液細胞（ＤＢＣ）を含んでいてもよく、これらは少なくとも１つの前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）を非特異的マーカーとして、および／または任意の前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）の少なくとも１つの遊離の非細胞表面結合型を有しており、
該方法は、
（１）装置の上部機能層（５、１０６）により、前記サンプルから任意の妨害血液細胞（ＤＢＣ）を除去すること、
（２）工程（１）で得られたような前記サンプルから、前記装置の機能層（６、１０４）により、前記第１細胞表面マーカー（Ｍ１）の各々の任意の遊離の非細胞表面結合型を除去すること、
（３）工程（２）で得られたようなサンプルにおいて、機能層（６、１０４）上に保持されている、前記第１細胞マーカー（Ｍ１）を有する、前記サブクラスのＢＣｏＩの各々を評価すること、を含む。
【００４９】
１８．垂直フローアッセイ法である、実施形態１７のアッセイ法。
【００５０】
１９．工程（１）において、前記ＤＢＣがフィルタ層（５、１０６）を通した濾過により除去される、実施形態１７および１８のいずれか１つのアッセイ法。
【００５１】
２０．前記ＤＢＣが凝集され、その凝集体が工程（１）において適用されたフィルタにより保持される、実施形態１９のアッセイ法。
【００５２】
２１．前記ＤＢＣが、前記ＢＣｏＩに結合しない免疫グロブリン分子によって凝集される、実施形態２０の方法。
【００５３】
２２．前記ＤＢＣが、前記ＢＣｏＩの表面上に存在しない第２の（識別可能な）細胞表面マーカー（Ｍ２）に結合する免疫グロブリンによって凝集され、前記第２の細胞表面マーカー（Ｍ２）が前記ＤＢＣに特異的であり得る、実施形態２１の方法。
【００５４】
２３．前記ＤＢＣ結合免疫グロブリンが、遊離抗体、ポリマー抗体、または固体粒子、特にポリマー粒子の表面に結合された抗体から選択される、実施形態２２または２３の方法。
【００５５】
２４．工程（２）において、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）の前記非細胞表面結合型が、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）の前記非細胞表面結合型に対し透過性であるが前記ＢＣｏＩは保持するフィルタ（６、１０４）の適用による濾過によって除去される、先行する実施形態１７から２３のいずれか１つの方法。
【００５６】
２５．工程（３）の前記評価が、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）と反応性の免疫グロブリン分子によって実施される、実施形態１７から２４のいずれか１つの方法。
【００５７】
２６．前記免疫グロブリン分子が標識されている、実施形態２５の方法。
【００５８】
２７．前記標識が、酵素、蛍光性もしくは着色された分子マーカー、または蛍光性もしくは着色された粒子から選択される、実施形態２６の方法。
【００５９】
２８．前記ＢＣｏＩがリンパ球のサブクラス、特にＴリンパ球から選択され、かつ前記ＤＢＣが単球である、先行する実施形態１７から２７のいずれか１つの方法。
【００６０】
２９．前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）がＴリンパ球マーカー（Ｍ１ａ）、特にＣＤ４細胞表面受容体分子である、先行する実施形態１７から２８のいずれか１つの方法。
【００６１】
３０．評価されるべき前記１つ以上のサブクラスの興味の血液細胞（ＢＣｏＩ）が、ＣＤ４＋細胞を含む、先行する実施形態１７から２９のいずれか１つの方法。
【００６２】
３１．前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１ａ）がＣＤ４であり、かつ前記第１のサブクラスの細胞がＴヘルパー細胞である、先行する実施形態１７から３０のいずれか１つの方法。
【００６３】
３２．前記方法がまた、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１ａ）とは異なる識別可能な細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）を有する第２のサブクラスのＢＣｏＩの評価も含む、先行する実施形態１７から３１のいずれか１つの方法。
【００６４】
３３．前記細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）が、Ｍ１ａとは異なるＴリンパ球マーカー、特に表面マーカーＣＤ８であり、かつ前記第２のサブクラスのＢＣｏＩがＣＤ８＋細胞を含む、実施形態３２の方法。
【００６５】
３４．前記表面マーカー（Ｍ１ｂ）がＣＤ８であり、かつ前記第２のサブクラスの細胞が細胞障害性Ｔ細胞である、実施形態３３の方法。
【００６６】
３５．前記第２の細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）を有する前記第２のサブクラスのＢＣｏＩの評価が、工程（３）で、第１の細胞表面マーカー（Ｍ１ａ）を有する前記第１のサブクラスのＢＣｏＩの評価と一緒に、特に同一サンプル中で実施される、実施形態３２から３４のいずれか１つの方法。
【００６７】
３６．前記細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）を有する前記第２のサブクラスのＢＣｏＩの評価が、別個に実施される、実施形態３２から３４のいずれか１つの方法。
【００６８】
３７．実施例３６の方法であって、該方法は、
（４）任意で、前記サンプルから、評価を妨害するかもしれない任意の妨害高分子不純物を、装置の上部機能層（５、１０６）によって除去すること、
（５）前記サンプル（任意で、工程（４）において得られるような）から、前記第２の細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）の任意の遊離の非細胞表面結合型を、装置の機能層（６、１０４）によって除去すること、
（６）工程（５）で得られるようなサンプルにおいて、機能層（６、１０４）上に保持されている、前記細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）を有する前記サブクラスのＢＣｏＩを評価すること、を含む。
【００６９】
３８．工程（５）において、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）の前記非細胞表面結合型が、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）の前記非細胞表面結合型に対し透過性であるが（Ｍ１ｂ）を有する前記サブクラスのＢＣｏＩは保持するフィルタ（６、１０４）の適用による濾過によって除去される、実施形態３７の方法。
【００７０】
３９．前記工程（６）の評価が、前記細胞表面マーカー（Ｍ１ｂ）と反応性の免疫グロブリン分子によって実施される、実施形態３８の方法。
【００７１】
４０．前記免疫グロブリン分子が標識されている、実施形態３９の方法。
【００７２】
４１．前記標識が、酵素、蛍光性もしくは着色された分子マーカー、または蛍光性もしくは着色された粒子から選択される、実施形態４０の方法。
【００７３】
４２．前記ＤＢＣがＣＤ１４＋単球である、先行する実施形態１７から４１のいずれか１つの方法。
【００７４】
４３．工程（１）におけるＤＢＣの凝集が、免疫グロブリンを含む第１の液体の添加により実施され、前記液体がサンプル中に含有される赤血球を溶解する、先行する実施形態１７から４２のいずれか１つの方法。
【００７５】
４４．先行する実施形態１７から４３のいずれか１つの方法であって、該方法は、
（１ａ）前記サンプルまたは前記サンプルのアリコートを、前記特定のサブグループの細胞とは異なるがしかしＣＤ４受容体をもつ別の細胞の、表面上の別の構造物に結合する抗体を含む第１の液体と混合して、前記特定のサブグループの細胞における細胞のサイズよりも有意に大きいサイズをもつ、粒子もしくは凝集体、または粒子もしくは細胞のクラスターを形成すること、
（１ｂ）前記形成された粒子もしくは凝集体、または粒子もしくは細胞のクラスターを、サイズ排除フィルタにより構成される第１のフィルタ（５、１０６）によって濾去すること、
（２）残留混合物を、前記サンプル中の前記特定のサブグループの細胞を保持するが、しかし溶液中のＣＤ４受容体分子は通過させる、第２のフィルタ（６、１０４）を通過させること、任意で、それに洗浄工程が続くこと、
（３ａ）続いて、前記第２のフィルタ（６、１０４）を、前記ＣＤ４受容体に特異的に反応する標識された抗体を含む液体に暴露することであって、これにおいて前記標識は、酵素または有色もしくは蛍光性の粒子により構成され、任意で、それに洗浄工程が続くこと、
（３ｂ）続いて任意に、前記酵素に基質を添加して、有色もしくは蛍光性の物質を生成すること、および
（３ｃ）前記第２のフィルタ（６、１０４）上の色または蛍光の強度を測定し、前記強度を、前記特定のサブグループの細胞の表面上の前記クラスのＣＤ４受容体の濃度と相関させること、を含む。
【００７６】
４５．評価に先立ち、すなわち、工程（１）、（１ａ）、および（４）の前に、前記血液サンプルに対し、赤血球の（選択的）低張溶解が実施される、先行する実施形態１７から４４のいずれか１つの方法。
【００７７】
４６．ＣＤ４＋細胞グループの細胞数が評価される、先行する実施形態１７から４５のいずれか１つの方法。
【００７８】
４７．細胞数が、ＣＤ４＋細胞グループについて、およびＣＤ４＋細胞とは異なる少なくとも１つのさらなる細胞グループ、特にＣＤ８＋細胞グループについて、とりわけＣＤ４／ＣＤ８比が評価される、実施形態４６の方法。
【００７９】
４８．全血のサンプルまたは血液由来のサンプル中で、ＣＤ４＋細胞の表面上に位置するＣＤ４受容体の量を評価するため、および任意でＣＤ８＋細胞の表面上に位置するＣＤ８受容体の量を評価するための方法であって、実施形態１７から４７のうちの１つの方法を実施すること、およびＣＤ４＋細胞のグループの評価について得られたシグナルを、細胞結合ＣＤ４＋受容体の量と相関させること、および任意で、ＣＤ８＋細胞のグループの評価について得られたシグナルを、細胞結合ＣＤ８＋受容体の量と相関させることを含む、該方法。
【００８０】
４９．前記方法において適用されるような前記免疫グロブリン分子が、抗体、例えばモノクローナルまたはポリクローナル非ヒト、特に非げっ歯類抗体、例えば鳥類抗体である、先行する実施形態１７から４８のいずれか１つの方法。
【００８１】
５０．（Ｍ１ａ）および／または（Ｍ１ｂ）（特にＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞）に結合するために適用された免疫グロブリンが、３０から５００ｎｍの範囲の平均粒径を有する有色ラテックス粒子に対し共有結合される、先行する実施形態１７から４９のいずれか１つの方法。
【００８２】
ｃ）さらなる実施形態
上記の実施形態のさらなる変形が、以下に記載される。
【００８３】
上述のように、アッセイ装置の一般的実施形態は、内側表面と開口部とを有する上部枠エレメントと、互いに重なり合って配置された、上部膜層および下部吸収層とを含む、機能層の積層体と、上部枠エレメントに取付けられ、かつ第１開口部（サンプル、洗浄液、および試薬液の添加のための）を横切って延在する、フィルタ層とを備えている。前記フィルタ層は、機能層の積層体に対し移動可能である。
【００８４】
特に、前記一般的実施形態は、垂直フローアッセイ装置であって、少なくとも１つの円形液体サンプル供給開口部（前記第１開口部）と、上部カバーシートに固定された下部吸収層とを備えた上部カバーシート（すなわち、前記上部枠エレメント）と、前記少なくとも１つの円形開口部内に脱着可能に挿入された、第１の円形フィルタ（すなわち、前記フィルタ層）と、前記上部カバーシートと前記下部吸収層との間に固定されており、かつ前記少なくとも１つの供給開口部とそこに挿入された円形フィルタとを前記下部吸収層から分離している、第２のフィルタ（すなわち、前記上部膜層）を備える、該装置に関する。
【００８５】
特に、正方形ディスクの形態にある前記上部層には、中央の円形開口部（サンプル、洗浄液、および試薬液の添加用）が備えられてもよい。前記正方形ディスクの下のその下面には、適当な細孔サイズを有するフィルタ（または膜層）の円形片を前記ディスク層の下側に、前記ディスクの中央開口部の中央をその中心にして固定する目的で、接着剤の薄層が備えられる。接着層はまた、前記正方形ディスクの下側に、上部ディスクとほぼ同じサイズの正方形の吸収パッドも固定する。前記正方形ディスクの中央ホールでは、下にあるフィルタの上に、キャリアリングに取付けられた適当なネットフィルタのディスクが、中央開口部に挿入され、かつ前記リングの上側に固定された粘着テープにより、前記正方形ディスクの上側に脱着可能に固定される。前記テープには、中央開口部が形成され、これにより分析されるべきサンプル、および洗浄用試薬の、ネットフィルタの上部での添加が可能となる。前記フィルタは、サンプル添加後に装置から除去することができ、洗浄はテープを引っ張ることにより完了する。次いで、洗浄緩衝液および追加の試薬を、残る「開放」された装置へ、前記開口部を通して第２フィルタ（または膜層）の上に直接添加し得る。試験結果（例えば、呈色反応）は、視覚的に検査され、前記装置（２）によってさらに分析され得る。吸収層の下側および任意でその外縁は、タイトニングまたはブロッキング層、例えばポリマー層でさらに覆われていてもよく、これにより、吸収層により吸収されたアッセイもしくはサンプル液体が前記吸収体内に保持されることが保証される。
【００８６】
上述のように、本発明によるさらに進歩したアッセイ装置は、上部枠エレメントと下部枠エレメントとにより形成されたツーパートケーシングを含む。ケーシングエレメントは、医療用の使い捨て装置の製造において通常用いられる異なる材料で製されていてもよく、特にポリマー材料、例としては、ホモ−またはコポリマーを主成分とする熱硬化性または熱可塑性の材料が使用されてもよい。非限定的例は、ポリエステル、ポリスチレン、ポリアクリラート、ポリアルキレン、およびポリアルカノアートであり、それらはアッセイを妨害することのないよう不活性であるべきである。上部および下部枠エレメントは、機能層の積層体を収容するのに適した試験コンパートメントが形成されるように組立てられる。試験コンパートメントは、上部枠エレメントの上部試験コンパートメント内側表面と、下部枠エレメントの下部試験コンパートメント内側表面とを含む。特に、試験コンパートメントは上部および下部枠エレメントによって内側の試験コンパートメントとして規定され、したがってそれは環境から保護され、かつ上部枠エレメントに形成された限られた数の開口部からのみアクセス可能である。
【００８７】
上部枠エレメントは、下部枠エレメントに対し移動可能、例えば回転可能であって、それによりアッセイ装置の少なくとも第１の構造および第２の構造が規定される。特に、上部枠エレメントは、それ故、機能層の積層体に対し移動可能、例えば回転可能である。
【００８８】
上部枠エレメントは、第１開口部および第２開口部を有しており、それらの双方が外部からの試験コンパートメントへのアクセスを提供する。特にこれにより、外部から機能層の積層体へのアクセスが可能となる。第１開口部および第２開口部は、第１の構造における下部枠エレメントに対する第１開口部の位置が、第２の構造における下部枠エレメントに対する第２開口部の位置と略同一となるように配置されている、それにより、試験コンパートメントの内側の１つの定められた位置、特に上部機能層（特に膜層）上の定められたセグメントまたはセクションが、第１および第２の構造において別々に、第１および第２の開口部を通して有利にアクセス可能となる。
【００８９】
下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの動きは、さらに、垂直フローアッセイの少なくとも２つのプロセス工程の実施を可能にする。これにおいて、１つの工程から別の工程への、例えばサンプル適用および分離工程から読み出し工程への移行が、ケーシングエレメントの動きと結合される。
【００９０】
特に、試験コンパートメントの内側表面は、互いに平行に配置されている。したがって、試験コンパートメントは、２つの平行な上部壁および下部壁を有する。
【００９１】
特に、第１の上部の、および第２の下部のケーシングエレメントの互いに対する動きは、１つの自由度、例えば、一方向への平行移動または軸の周りの回転に制限される。並進は、例えば上部枠エレメントを下部枠エレメント上に、これら２つが互いに滑り運動できるように支持することにより実施され得る。特に、上部および下部内側試験コンパートメント内側表面は、互いに平行に配置され、かつ第１および第２の構造の双方において平行なままである。
【００９２】
本発明の好ましい実施形態においては、上部枠エレメントは下部枠エレメントに対し回転可能である。好ましくは、回転運動は、試験コンパートメントの中央を通り抜けている軸の周りに行われる。したがって第１の構造は、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの第１の回転角度によって規定され、第２の構造は、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの第２の回転角度によって規定され得る。
【００９３】
このことは、本発明によるアッセイ装置の有利に容易な使用を可能にする。アッセイ装置の第１および第２の構造は、それ故下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの２つの回転角度によって規定され得る。特に、上部および下部枠エレメントは、１つの回転自由度に沿ってのみ、第１および第２の構造の間で移動可能である。有利には、上部および下部試験コンパートメント内側表面は互いに平行に配置され、かつ回転軸について回転下で平行なままである。
【００９４】
アッセイ装置の別の実施形態においては、機能層の積層体は、分析されるべきサンプル（特に、サンプル供給開口部の直下に備えられたいかなるフィルタ層によっても保持されないサンプルの分画）と接触する上部膜層と、下部吸収層（膜層によって保持されないサンプルの部分を吸収する）とを備え、これらの層は互いに重なり合って配置され、かつ上部試験コンパートメント内側表面および下部試験コンパートメント内側表面に対し実質的に平行に延在する。特に、上部膜層は、上部試験コンパートメント内側表面（およびそれ故上部枠エレメントに設けられた開口部）に面しており、かつ下部吸収層は、下部試験コンパートメント内側表面に面している。
【００９５】
その結果、垂直フローアッセイを実施するために必要な層材料を有利に提供できる。具体的には、上部膜層を、上部試験コンパートメント内側表面と下部吸収層との間に挿入してもよい。さらに、上部膜層および下部吸収層は、試験コンパートメント内で、上部枠エレメントの第１および第２の開口部がそれらに沿って位置するように配置してもよい。前記第１または第２の開口部への液体サンプルまたは液体試薬の添加時には、装置の上から下までの液体相の垂直の流れが観察される。
【００９６】
具体的には、上部膜層は好ましくは、非凝集血細胞（細胞表面マーカータンパク質により評価されるべき）を保持せず、かつまたそれに添加された液体相のタンパク質、ポリペプチド、および低分子構成成分に対し透過性である、（活性のある）半透過性膜を含む。適当なカットオフ値（例えば、１０、２０、５０ｋＤａ）をもつ膜が市販されている。カットオフは、前記フィルタ膜の細孔サイズによって決定される。平均細孔サイズ３、５、または８μｍに相当するカットオフは、それにより細胞性の物質が保持される一方、さもなければアッセイを妨害するかもしれない可溶性タンパク質フラグメント細胞表面マーカータンパク質が前記膜下の吸収層により吸収されることから、特に適している。例えば、ニトロセルロース膜は、特に適している。下部吸収層は、吸収性材料、例えば脱脂綿を含んでいてもよい。したがって、それを用いて、アッセイ装置に導入されたサンプルに吸引力を生じさせ、かつ過剰の液体を吸い上げ得る。
【００９７】
別の実施形態では、上部膜層は下部枠エレメントに固定されている。それ故、上部膜層は、下部枠エレメントに対するその位置が第１および第２の構造において等しくなるように設けられる。特に、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの動きは、上部膜層に対する動きに対応する。
【００９８】
また、下部吸収層が、下部枠エレメントに固定されていてもよい。それ故、試験コンパートメントの内側の材料のそれぞれの位置が、特に下部枠エレメントに対して容易に定義される。
【００９９】
好ましくは、上部膜層および吸収層は垂直投影図において、同じ形状およびサイズのものであり、それ故実質的に重ね合わせることが可能である。前記形状およびサイズは、試験コンパートメントの形状およびサイズに適合されており、これにおいて前記層は前記コンパートメント内にフォームロッキング（またはポジティブロッキング）式で挿入される。
【０１００】
或いはまた、単に吸収層の形状およびサイズのみが試験コンパートメントのサイズおよび形状に適合され、これにおいて前記層は前記コンパートメント内にフォームロッキング（またはポジティブロッキング）式で挿入される。この場合、吸収層に固く取り付けられるべきである上部膜層のサイズは、吸収層のサイズよりも小さく、その形状およびサイズにおいて前記第１（および第２）の開口部の形状およびサイズに略対応する。いかなる場合にも、上部膜層の形状は、分析されるべき細胞材料をその層上に定量的に保持するのに充分広い表面をもつ円形ディスクであるべきである。
【０１０１】
具体的には、上部膜層および下部吸収層の双方は、下部枠エレメントに対し固定した位置に配置される。上部枠エレメントは、下部枠エレメントおよび機能層の積層体、例えば上部膜層と下部吸収層との集合体に対し移動可能である。したがって、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの動きは、有利には、上部膜層および下部吸収層に対する上部枠エレメントの第１および第２の開口部の位置の変化に変換される。
【０１０２】
別の実施形態では、少なくとも１つのカットアウトが上部膜層に形成される。また、数個のカットアウトが形成されてもよい。少なくとも１つの凸部が、下部試験コンパートメント内側表面に対する上部膜層の位置を確保する目的で、カットアウトが凸部と係合するように下部試験コンパートメント内側表面上に形成される。
【０１０３】
好ましくは、少なくとも１つまたは数個のカットアウトが、下部吸収層においても形成される。また、下部吸収層の少なくとも１つのカットアウトが、凸部と係合できる。
【０１０４】
このことは、有利には、上部膜層および好ましくは下部吸収層の、下部枠エレメントに対する動きを非常に容易な方法で制限できるようにする。特に、下部試験コンパートメント内側表面に対して確保された位置は、アッセイ装置の第１および第２の構造について同じである。
【０１０５】
代わりにまたは付加的に、他の取付け手段を同じ目的のために使用してもよい。例えば、上部膜層および／または下部吸収層は、下部試験コンパートメント内側表面に、および／または互いに、接着されていてもよい。また、試験コンパートメントに、好ましくは下部試験コンパートメント内側表面に、スパイクが備えられてもよく、上部膜層および／または下部吸収層が、スパイクにより保持されてもよい。
【０１０６】
別の実施形態では、試験コンパートメントには、上部膜層に実質的に平行に配置された、フィルタ層が備えられる。これにおいてフィルタ層は、それが第１開口部と上部膜層との間に位置するように配置される。フィルタ層は、例えば、第１開口部内に挿入されてもよい。それは特に、それを第１開口部上に延在できるようにする任意の方法で設けてもよい。それにより、フィルタ層は、サンプル添加部位と膜層との間に半透過性のバリアを形成し、そしてこれが分析されるべきサンプル中に含有される細胞凝集体を定量的に保持する。前記フィルタ層は、異なる材料から製され得る。それは好ましくは、アッセイを妨害しない有機不活性ポリマー材料から製される。例えばフィルタは、１８から５０μｍ、好ましくは２２から４０μｍ、より好ましくは２５から３３μｍの範囲のグリッドサイズを有する、ナイロンネットフィルタでよい。
【０１０７】
特に、フィルタ層は上部膜層のセクション上に延在し、フィルタ層を通した上部膜層へのアクセスが、例えば一定のサイズを超える粒子について、制限されるようにする。したがって、第１開口部は、アッセイ装置により実施されるべきアッセイの濾過工程を実施するのに有利に使用できる。例えば、第１開口部は、サンプル供給開口部として提供され、これにおいてサンプルは、例えば一定のサイズを超える粒子を除去するために濾過されるフィルタ層を通して、試験コンパートメント内に供給される。
【０１０８】
さらに、フィルタ層は上部試験コンパートメント内側表面上に取付けられる。取付けは、種々の取付け手段により達成されてよく、例えばフィルタ層は上部試験コンパートメント内側表面に接着されてもよい。これに代えてまたは付加的に、上部試験コンパートメント内側表面は凹部を有することができ、フィルタ層は少なくとも一部が、好ましくは完全に、前記凹部内にあり、したがってそれが動くのを制限する。さらに、上部試験コンパートメント内側表面上にスパイクが備えられてもよく、フィルタ層はスパイクによって保持されてもよい。
【０１０９】
フィルタ層は、例えば接着剤により、上部試験コンパートメント内側表面上に取付けられ、その動きが上部枠エレメントに対し制限されるようにしてもよい。具体的には、上部枠エレメントに対するフィルタ層の位置は、アッセイ装置の第１および第２の構造において同じである。特に、試験コンパートメントにおける機能層の積層体に対するフィルタ層の位置は、上部枠エレメントを動かすことにより変更される。
【０１１０】
好ましくは、フィルタ層は第２の開口部上に延在したり重なったりすることはなく、すなわち、フィルタ層は上部膜層よりも小さい。したがって第２開口部は、外部からの試験コンパートメントの光学的検査のための読み取り開口部として設けられてよい。特に、第２開口部は、上部試験コンパートメント内側表面に面している上部膜層の側の光学的検査を可能にし得る。さらに、第１開口部を通した上部膜層の光学的検査は、フィルタ層および／またはサンプルの濾過材料によって妨害され得る。
【０１１１】
特に、第１の構造では、第１開口部およびフィルタ層は、外部から上部膜層へのアクセスがフィルタ層を介するよう、上部膜層の限られたセクションに延在する。第２の構造では、第２の開口部が前記セクションに延在する一方、フィルタ層（および第１の開口部）は上部膜の異なるセクションの上に位置される。したがって、上部膜層へのアクセスが、フィルタ層によって制限され得ず、例えば、外部から上部膜層への光学的な繋がりが可能となる。
【０１１２】
別の実施形態では、フィルタ層はグリッドを備える。グリッドは、例えば、ナイロングリッドを含み得る。したがってフィルタ工程は、有利には、所与の最小サイズの、抗体結合によりある種の血液細胞の架橋によって人工的に形成された、粒子もしくは細胞、または好ましくは細胞凝集体が、試験コンパートメントおよび特に上部膜層に到達することを防止する目的で実施される。特に、凝集した細胞性血液成分は、それ故濾去され、かつ垂直フローアッセイの下部膜材料に到達するのを妨げ得る。
【０１１３】
別の実施形態では、上部膜層は上部試験コンパートメント内側表面から離間した位置に配設される。間隔は、好ましくは０．１ｍｍから０．２５ｍｍの範囲内であってよい。したがって、上部枠エレメントが下部枠エレメントに対して動くとき、特に試験コンパートメントの機能層の積層体が下部枠エレメントに固定されている場合には、摩擦力および特にスミアリング効果を有利に回避できる。
【０１１４】
別の、より好ましくない実施形態では、上部膜層はまた上部試験コンパートメント内側表面上と、直接または別の層を介して間接的に接し得る。
【０１１５】
別の実施形態では、移動制限部が上部枠エレメントに形成され、かつ別の移動制限部が下部枠エレメントに形成される。移動制限部は、第１の構造に対応する第１の極限位置と第２の構造に対応する第２の極限位置との間で、上部枠エレメントが下部枠エレメントに対し移動可能となるように設けられている。したがって動きは、使用者が、アッセイ装置の第１から第２の構造へ容易に切り替えられ得るよう、有利に制限される。移動制限部は種々の方法で形成されてよい。
【０１１６】
上部および下部枠エレメントがある回転自由度をもって可動性である場合、第１および第２の限界回転角度が規定され得る。
【０１１７】
上部および下部枠エレメントがある平行移動自由度をもって可動性である場合、第１および第２の平行移動極限位置が規定され得る。
【０１１８】
回転移動の場合、第１および第２の限界回転角度は、移動制限部の位置によって規定され得る。したがって、上部枠エレメントは下部枠エレメントに対し、第１の極限角度における下部枠エレメントに対するサンプル供給開口部の位置が、第２の極限角度における下部枠エレメントに対する検査開口部の位置と実質的に同じになるように回転され得る。
【０１１９】
上部または下部枠エレメントには、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの動きを促進する目的で、グリップリッジが備えられてもよい。それ故、アッセイ装置の操作、特に第１の構造と第２の構造との間の切り替えが促進される。リッジは特に、使用者の手および／または指による操作に適合され得る。
【０１２０】
別の実施形態では、上部および下部枠エレメントは、互いに嵌合により組立てられる。嵌合アセンブリは、周知の方法で提供される。例えば、上部および下部枠エレメントのアセンブリを固定する目的で、ラッチが備えられてもよい。特に、下部枠エレメントに対する上部枠エレメントの動きは、適切な嵌合機構によってある自由度に制限され得る。
【０１２１】
別の実施形態では、ラベルが、上部試験コンパートメント内側表面と反対の表面上で、上部枠エレメント上に配置される。ラベルには、上部枠エレメントの第１および第２の開口部に対応するホールを備えてもよい。したがって、アッセイ装置の読み出しの評価が有利に促進される。
【０１２２】
具体的には、例えば、色および／または強度の指標を含む、説明用インプリントが、垂直フローアッセイの光学的読み出しに対し定量的な値を割り当てるために示されていてもよい。別法としてまたは付加的に、いかにアッセイを実施するかについてなどの、さらなる情報がラベルに示されていてもよい。ラベルは、上部枠エレメントに固定して方向づけおよび位置づけされてもよい。またラベルは、上部枠エレメントの第２開口部と一緒に使用者に見えるように方向づけられていてもよい。
【０１２３】
別の実施形態では、アッセイ装置はさらにカード、例えば銀行またはクレジットカードの標準化されたサイズのものを含んでおり、それにはホールが設けられ、これにおいて、上部または下部枠エレメントはホールと係合する。このことは、アッセイ装置を囲むより広い面積を有利に提供できるようにする。カードの面積は、使用者のための情報、例えば、アッセイ装置の使用、分析アッセイの実施、および／または結果の評価のための指示を含む説明用インプリントを印刷するために使用され得る。
【０１２４】
別の実施形態では、下部枠エレメントに凹部が形成され、かつカードのホールには、凹部がホールと係合しそれによりカードに対する下部枠エレメントの位置を確保するようにノッチが備えられる。特に、ノッチと係合している凹部は、下部枠エレメントに対しカードを固定し、かつそれが回転するのを防止する。これに代えて、上部枠エレメントの位置を、カードに対して規定してもよい。
【０１２５】
したがって、上部または下部枠エレメントは、カードに対し有利に固定される。このことは、分析ワークフローへのアッセイ装置の使用および統合を促進し得る。また、接着剤または溶接などの他の取付け手段を用いて、カードに対し規定された位置に枠エレメントを保持してもよい。
【０１２６】
別の実施形態では、上部枠エレメントはいくつかの、好ましくはペアになって配置された第１開口部および第２開口部、例としては４つ、３つ、または好ましくは２つのペアを有しており、第１開口部の１つ１つが第２開口部の１つと関連する。かくて第１および第２開口部のペアが提供される。ここで、第１の構造における第１開口部の下部枠エレメントに対する位置は、第２の構造における下部枠エレメントに対する関連する第２開口部の位置と実質的に同じであるように配置されている。したがって、第１および第２開口部の配置は、各ペアについて唯一の、第１および第２開口部の配置に対応する。
【０１２７】
したがって、同じかまたは異なる分析物（細胞表面マーカーなど、例えばＣＤ４およびＣＤ８細胞表面マーカー）の１つ超の分析を、１つの装置で一度に行い、それにより時間、コスト、および材料消費を低減することが有利に可能である。特に、異なる血液サンプルについて、同じタイプの測定を本発明の１つのアッセイ装置で行い得ること、或いは同じサンプルを、異なる試験、例えば、異なる受容体についての分析に供し得ることが可能である。特に、１つの分析膜上の異なる位置を用いて、いくつかのサンプルを試験してもよい。また、異なる分析機能を、１つのアッセイ装置において実施してもよい。
【０１２８】
血液細胞を評価するための本発明の方法は、一般的に言えば以下の通りである。
【０１２９】
液体全血サンプルまたはそれに由来するサンプル中の１つ以上のサブクラスの興味の血液細胞（ＢＣｏＩ）を評価するためのアッセイ法であって、各サブクラスは、前記サブクラスの興味の血液細胞のための第１の識別可能な細胞表面マーカー（または細胞表面受容体分子）（Ｍ１）を有する。これは、異なるサブクラスの細胞のマーカー（Ｍ１）が互いに異なる（すなわち、抗原的に異なりかつそれ故識別可能である）ことを意味している。前記サンプルはさらに、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）の少なくとも１つを非特異的マーカーとして有する妨害血液細胞（ＤＢＣ）を含んでいてもよく（または含む疑いがあり）、および／または、これにおいて前記サンプルはさらに、前記第１の細胞表面マーカー（Ｍ１）の少なくとも１つ、好ましくはそれぞれの、少なくとも１つの遊離の（溶解された）非細胞表面結合型、例えば（可溶性）細胞外フラグメントを含んでいてもよく（または含む疑いがあり）、
（１）前記サンプルから、少なくとも１つの前記第１細胞表面マーカー（Ｍ１）も有する、任意の妨害血液細胞（ＤＢＣ）を除去すること、
（２）工程（１）で得られたような前記サンプルから、前記第１細胞表面マーカー（Ｍ１）の各々の、任意の遊離の非細胞表面結合型を除去すること、
（３）工程（２）で得られたような前記サンプルにおいて、前記第１細胞表面マーカー（Ｍ１）を有する、前記サブクラスのＢＣｏＩの各々を評価すること、を含む。
【０１３０】
上記の工程（１）、（２）、および（３）において、本発明による装置は、上記のセクション「ｂ）特に好適な実施形態」においてより詳細に説明されるように適用される。
【０１３１】
特に、前記全血サンプルは、哺乳動物、好ましくはヒト、血液提供者などの個人、または、全血液細胞の集団、特に少なくとも１つの前記ＢＣｏＩの、細胞プロフィールもしくは組成に影響を及ぼす疾患に罹患しているか、または罹患する疑いのある患者からの血液である。それは例えば、針を介した静脈採取から、または鋭利な物体による指穿刺の後に収集された毛細血管血から入手可能である。
【０１３２】
第１の特定の変法において、本方法は、単一のサブクラスのＢＣｏＩの評価を含み、かつ工程（１）から（３）は１回行われる。好ましくは、前記単一のサブクラスはＣＤ４＋細胞を含み、かつ表面マーカーＭ１はＣＤ４である。ＤＢＣは、Ｍ１マーカーＣＤ４も有するＣＤ１４＋を含み、特に、前記ＤＢＣはＣＤ１４＋単球を含む。前記第１の細胞表面マーカーＭ１の前記非細胞表面結合型は、ＣＤ４に由来し、すなわち、その可溶性フラグメントを含む。
【０１３３】
第２の特定の変法において、本方法は、２つの異なるサブクラスのＢＣｏＩの評価を含み、かつ工程（１）から（３）は各サブクラスの細胞について別々に行われる。
【０１３４】
前記第２の特定の変法の変形において、本方法は、２つの異なるサブクラスのＢＣｏＩ（例えば、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞）の評価を含み、かつ工程（１）から（３）は第１のサブクラスのＢＣｏＩ（例えばＣＤ４＋細胞）について行なわれ、かつ、何ら他の血液細胞が前記第２のサブクラスの細胞の評価を妨害しない場合には、少なくとも工程（２）および（３）は、第２のサブクラスの細胞（例えばＣＤ８＋細胞）について別々に行われる。
【０１３５】
好ましくは、前記２つの異なるサブクラスは、ＣＤ４＋細胞（第１のサブクラス）およびＣＤ８＋細胞（第２のサブクラス）を含み、かつ評価されるべき表面マーカーＭ１は、ＣＤ４（すなわち、Ｍ１ａ）およびＣＤ８（すなわち、Ｍ１ｂ）である。ＤＢＣは、ＣＤ１４＋細胞、特に、前記ＣＤ４マーカー（すなわち、Ｍ１ａ）も有するＣＤ１４＋単球を含む。前記非細胞表面結合型の前記マーカーＭ１ａおよびＭ１ｂは、ＣＤ４および／またはＣＤ８に由来し、すなわち、ＣＤ４および／またはＣＤ８の可溶性の非細胞固定フラグメントを含む。
【０１３６】
第３の特定の変法において、本方法は、２つの異なるサブクラスのＢＣｏＩの評価を含み、かつ工程（１）から（３）は１回だけ行われる。
【０１３７】
第４の特定の変法において、本方法は、２つの異なるサブクラスのＢＣｏＩの評価を含み、かつ工程（１）および（２）は１回だけ行われるのに対し、工程（３）は前記サブクラスの各々について別々に行われる。
【０１３８】
好ましくは、上記の前記第２、第３、および第４の変法において、前記２つの異なるサブクラスは、ＣＤ４＋細胞（第１のサブクラス）およびＣＤ８＋細胞（第２のサブクラス）を含み、かつ評価されるべき表面マーカーＭ１は、ＣＤ４（すなわち、Ｍ１ａ）およびＣＤ８（すなわち、Ｍ１ｂ）である。ＤＢＣは、ＣＤ１４＋細胞、特に、前記ＣＤ４マーカー（Ｍ１ａ）も有するＣＤ１４＋単球を含む。前記非細胞表面結合型の前記マーカーＭ１ａおよびＭ１ｂは、ＣＤ４および／またはＣＤ８に由来し、すなわち、ＣＤ４および／またはＣＤ８の可溶性のフラグメントを含む。
【０１３９】
前記方法のさらなる変形は、上記に記載されている
【０１４０】
特に、前記読み出し開口部において検出可能なシグナルは、本発明により、例えば有色または蛍光性のマーカー、例としては有色ポリマー粒子、に結合された抗体を適用することにより発生される。装置の各読み出し開口部において本発明の方法で発生される色または蛍光と、分析されるべき特定のクラスの受容体分子（例えばＣＤ４および／またはＣＤ８受容体）の濃度との間の相関は、以下のように行うことができる。結合した有色粒子または蛍光性分子の量は、試験されるべきサンプル中に存在する前記特定の受容体分子の量に関連するため、前記特定の受容体分子の量と、測定されるべき色との間には直接的関係がある。この色は次に、事前評価、事前較正、および／または所定の色図表と比較して視覚的に、或いは市場で自由に利用できるかまたは本発明のために開発されたもののいずれかの、電子式色検出器による色量の測定によって検出可能である。用いる測定機器は、用いる有色物質または免疫粒子、それらのカラースキーム、および必要な検出範囲に対し、容易に較正されかつ調整される。検出機器の較正においては、バックグラウンド対シグナルの良好な比を考慮して、既知の量の分析物が使用され、正確な計算された読み出しを使用者に提供できる。有色または蛍光性物質の代わりに酵素−制限するものではないがペルオキシダーゼ酵素またはアルカリホスファターゼを含む−が使用される場合、前記酵素用の発色物質または蛍光発生物質が使用される。２つ以上の波長における反射率の測定による、フィルタ上に堆積された異なる色をもつ２つの成分の測定は、当業者に周知である。それは既に、Ｆｒａｎｋ  Ｆｒａｎｔｚｅｎらによる、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、１９９７年、第４３巻、第１２号、Ｐ．２３９０−２３９６の論文“Ｇｌｙｃｏｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ｆｉｌｔｅｒ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｄｏｃｔｏｒｓ’  ｏｆｆｉｃｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ（医院のためのボロン酸親和性原理に基づくグリコヘモグロビンフィルタアッセイ）”において、Ｅｒｌｉｎｇ  ＳｕｎｄｒｅｈａｇｅｎおよびＦｒａｎｋ  Ｆｒａｎｔｚｅｎによる、米国特許第５，７０２，９５２号明細書において、またＳｕｎｄｒｅｈａｇｅｎおよびＦｒａｎｔｚｅｎによる、米国特許第５，５０６，１４４号明細書において記載されている。Ｆｒａｎｔｚｅｎらは、６２０および４７０ｎｍにおける反射率（％Ｒ）を測定する専用の反射率計を使用した。これらの波長における測定を用いて、青色のボロン酸接合体および赤色のヘモグロビン（Ｈｂ）がそれぞれ定量された。この機器は、Ｋｕｂｅｌｋａ−Ｍｕｎｋ変換（Ｋｕｂｅｒｌｋａ  Ｐ．Ｎｅｗ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｏｐｔｉｃｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｎｓｅｌｙ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ（強光散乱性材料の光学への新たな貢献）、「Ｊ  Ｏｐｔ  Ｓｏｃ  Ａｍ」、１９４８年、第３８巻、Ｐ．４４８−５７）を自動的に行って、記録された反射率データを線形化した。“Ｐｏｒｔａｂｌｅ  ｒａｐｉｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｔｅｓｔ  ｒｅａｄｅｒ（携帯型迅速診断テストリーダー）”は、欧州特許第２８１２６７５号明細書に記��されており、また“Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｓｅｎｓｏｒ  ｏｎ  ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈｏｎｅ（携帯電話の分光器センサー）”は、米国特許出願公開第２００６／０２７９７３２号明細書に記載されている。今日では、携帯電話のカメラ機能が、診断医学におけるフィルターベースの試験装置の反射測定用に一般的に使用されている。
【０１４１】
かかるシステムはまた、ＳｕｎｄｅｒｈａｇｅｎおよびＢｒｅｍｎｅｓによる欧州特許第０９５３１４９号明細書にも記載されている。今日では多くの企業が、反射光の強度および波長からサンプルの濃度を電算するための較正のためのソフトウェアを備えた、診断装置の試験スポットからの反射光の強度および波長を測定するための、反射走査装置またはデジタルカメラ画像処理ソフトウェアを提供している。Ｓｋａｎｎｅｘ  ＡＳ（オスロ、ノルウェー）からのＳｃａｎｓｍａｒｔシステムは、このアプリケーション用の自動化された専用のシステムの一例である。また、デジタルカメラを備えた標準的な「スマートフォン」を用いて、得られた色シグナルのデジタル画像を取得できる。典型的には、デジタル画像はその後、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ電子プログラムにアップロードされる。この方法は、結果のグラフィック表示を可能にする。この方法はまた、バックグラウンドが最低である場合に対して、シグナルが最強である場合の測定を可能にする。シグナルの標準化および較正は、測定されるべき分析物の既知の強度および濃度をもつ参照スポットを用いることにより取得可能である。
【０１４２】
酵素的色システムの生成が使用される場合であれば、反応速度論的測定を用いてもよく、測定は「ビデオ」モードを用いて行い得る。
【０１４３】
ソフトウェアＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  １３（登録商標）と、プログラム「Ｅｙｅｄｒｏｐｐｅｒ  ｔｏｏｌ」とを用いて、ＨＳＬと、赤、緑、および青、ならびにその他のカラースキームとを測定して、アップロードされた画像の色を決定してもよい。ＨＳＬ（色相、彩度、および輝度）スキームは、色を記載するための、装置に依存しない方法を提供する。特に教示的であるのは、インターネット上のｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈａｎｄｐｒｉｎｔ．ｃｏｍ／ＬＳ／ＣＶＳ／ｃｏｌｏｒ．ｈｔｍｌ（２０１５年７月）である。
【０１４４】
本発明の特定の実施形態において、参照用の色スポットは、固定化された抗体または他の結合性分子またはそのフラグメントをもつ膜に近接して、好ましくはアッセイ膜のホルダー上に（例えば、上部枠エレメントの上側に、または適用で得きる場合には、上記にまたは以下のセクションにおいて記載されるような、アッセイ装置を保持するカード上に）配置または固定される。本発明のアッセイの測定の一部として、これらの参照スポットが同様に測定される。測定機器のソフトウェアによって、前記参照スポットの測定を使用して、装置対装置および他のハードウェアバリエーションを補正して、アッセイの全体的な精度を高めることができる。
【０１４５】
これらの参照スポットは、分析測定における各色の色スケールを規定してもよい。機器、例えば携帯電話のカメラは、測定されるべき表面の写真または一連の写真と、装置上の参照スポットも撮影する。種々のソフトウェアプログラムが、測定されたピクセルを数値に変換し、種々の数値システムでカラールームを規定できる。非常に一般的であるのは、ＲＧＢ（赤、緑、青）の色空間である。ＲＧＢ色モデルは、幅広い色のアレイを再現するために、赤、緑、および青が様々な方法で一緒に加えられる、加法混色のカラーモデルである。モデルの名称は、加法混色の三原色、赤、緑、および青の頭文字に由来する（ウィキペディア、２０１６年７月１６日）。
【０１４６】
ＨＳＬおよびＨＳＶは、ＲＧＢ色モデルにおけるポイントの２つの最も一般的な円柱座標表示である。２つの表示は、ＲＧＢのジオメトリを、直交（キューブ）表示よりもより直感的かつ知覚的に関連づけようとして再配置する。１９７０年代にコンピュータグラフィックアプリケーション用に開発されたＨＳＬおよびＨＳＶは、今日ではカラーピッカーにおいて、画像編集ソフトウェアにおいて、またそれほど一般的ではないが画像分析およびコンピュータビジョンにおいて使用されている。
【０１４７】
今日、色スポットを測定および分析し、かつカラールームにおいてそれらに数値を与えるために使用される、非常に近代的で無料のソフトウェアパッケージは、ＧＩＭＰである。ＧＩＭＰ／ｇＩｍｐ（ＧＮＵ  Ｉｍａｇｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ）は、画像の修正および編集、フリーフォーム描画、サイズ変更、クロッピング、写真モンタージュ、異なる画像フォーマット間の変換、およびより特化されたタスクのために使用される、無料かつオープンソースのラスターグラフィックエディタである。
【０１４８】
本発明は、ここで図面を参照して記載される。
【０１４９】
図１Ａおよび１Ｂを参照すれば、本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態が記載される。
【０１５０】
アッセイ装置は、上部枠エレメント１および下部枠エレメント２を備える。上部枠エレメント１は、図示されているケースではサンプル供給開口部である第１開口部３と、図示されているケースでは読み取り開口部４である第２開口部４とを有する。上部枠エレメント１および下部枠エレメント２は、互いに重なり合って組立てられている。上部枠エレメント１および下部枠エレメント２を含むアセンブリは、平らな円形ディスクの形状を有しており、すなわち、結果として得られるアセンブリの半径は、ディスクの厚さよりも大きい。
【０１５１】
この実施形態の任意の変形においては、カード１０には、組立てられたアッセイ装置を受けるのに適したホール１０ａが備えられている。特に、カード１０のホール１０ａの形状は、下部枠エレメント２の少なくとも一部と嵌合するのに適するように形成される。ホール１０ａはまた、下部枠エレメント２を適所に保持しかつカード１０に対する回転防止に適したノッチを備えてもよい。
【０１５２】
この実施形態の別の変形においては、カード１０上に、例えば、アッセイ装置の使用のための指示、または上記で説明したような参照色スポットなどの、アッセイ装置を用いた測定の定量化を促進するための情報が含まれていてもよい。
【０１５３】
図２および３を参照すれば、本発明におるアッセイ装置の第１の実施形態の立体分解図および断面図が記載される。
【０１５４】
上部１および下部枠エレメント２は、上部１ａおよび下部試験コンパートメント内側表面２ａを含み、それらは互いに向き合っており、かつ実質的に互いに平行に延在する。上部１および下部枠エレメント２はさらに、それらの間に試験コンパートメントが形成されるような方法で形成される。上部１ａおよび下部試験コンパートメント内側表面２ａは、円筒形の試験コンパートメントの上面および下面を形成する。
【０１５５】
試験コンパートメントには、上部膜層６および下部吸収層７が備えられ、それらは互いに重なり合って配置され、かつ上部１ａおよび下部試験コンパートメント内側表面２ａに対し実質的に平行に延在する。この実施形態では、試験コンパートメントは、上部膜層６および下部吸収層７、すなわちフォームロック式で挿入されるような前記層、によって実質的に満たされる。さらなる実施形態では、上部膜層６は上部試験コンパートメント内側表面１ａから離れているが、なおフォームロック式で下部試験コンパートメントに挿入される。
【０１５６】
第２の、下部試験チャンバ内側表面２ａには凸部２ｂが備えられ、これは、下部吸収層７を、特にアッセイ処置中のアッセイ装置の回転運動の間のいかなる動きも阻害することにより、とりわけ試験コンパートメント内での回転運動を完全に回避することにより、その移動を制限することによって適所に保持する。本発明の別の実施形態では、凸部２ｂはさらに試験コンパートメント内に延在し、かつ上部膜層６を適所に保持するためにも適している。別の実施形態では、下部吸収層および／または上部膜層は、代わりにまたは追加的に、他の取付け手段により、例えば接着剤により適所に保持される。
【０１５７】
アセンブリはさらに、フィルタ層５を備え、これは図示された実施形態では、第１開口部３の直下の、上部試験コンパートメント内側表面１ａの凹部５ａの内側に配置されている。フィルタ層５は、特に上部枠エレメント１に対するその動きを制限するべく、上部枠エレメント１に取付けられる。図示された場合では、フィルタ層５は、第１開口部３の試験コンパートメントに面する側が被覆されるように、上部枠エレメント１に接着される。
【０１５８】
この実施形態では、上部枠エレメント１の第２開口部４は、主として読み取り開口部４として役立ち、これにおいて第２開口部は、外部からの上部枠エレメント１を通した試験コンパートメントへの直接の光学的アクセスと、上部膜層６の見通しとを提供する。第２開口部４はまた、前記膜層６の表面上の保持された分析物（特定の血液細胞など）を有する前記膜層の上部へ、試薬溶液または洗浄溶液を添加するためにも使用される。
【０１５９】
この実施形態において、下部吸収層７は、上部膜層６によって保持されない低分子物質および液体を受けるための吸収性材料を含む。上部膜層６は、分析物、特にその細胞中にまたは好ましくは細胞表面上に、分析物を有することが疑われる血液細胞を保持する、半透性膜を備える。さらに、フィルタ層５は、非凝集血液細胞およびサンプルのより小さい成分を通す一方、上部膜表面上で分析検出反応が最終的に行われる前に除去されるべき血液細胞のより大きい凝集体は保持する、半透性膜を含む。
【０１６０】
上部１および下部枠エレメント２のアセンブリは、上部枠エレメント１が下部枠エレメント２の一部を受ける嵌合機構を含む。上部枠エレメント１および下部枠エレメント２の嵌合部分の丸い形状のため、上部１および下部枠エレメント２は互いに対し回転可能であり、ここで回転角度は、２つの枠エレメント１、２の互いに対する位置を規定する。下部枠エレメント２の嵌合部分にはラッチ１２が設けられ、これは、上部１および下部枠エレメント２のアセンブリを適所に堅く保持して、枠エレメント１、２の互いに対する動作の回転自由度のみを実質的に残すのに適している。
【０１６１】
さらに、ラッチ１３が、図１ｂに示したようなカード１０において、ホール１０ａと嵌合する下部枠エレメント２の一部に設けられている。
【０１６２】
ラッチ１２、１３は、当業者が理解するような種々の方法で形成されてよい。さらに、下部枠エレメントのラッチ１２に対応する上部枠エレメント１に、対応する溝が形成される。下部枠エレメント２との嵌合動作を促進する目的で、同様の構造がカード１０に形成されてもよい。
【０１６３】
図４ａおよび図４ｂについては、本発明によるアッセイ装置の第１の実施形態の操作が記載されている。
【０１６４】
アッセイ装置の単純化された上面図が示される。この視点からは、上部枠エレメント１の第１開口部３および第２開口部４を、上部枠エレメント１の縁に設けられた回転ストップ２１と共に見ることができる。さらに、回転ストップ２２が図示されており、これは下部枠エレメント２に対する上部枠エレメント１の回転運動を制限する目的で、下部枠エレメント２（示されず）に形成されている。図４Ａおよび４Ｂは、上部枠エレメント１の２つの回転角度によって規定される２つの極限位置を示す一方、下部枠エレメント２は、回転ストップ２２の静止位置によって示された、静止状態で示されている。矢印２３は、回転の方向を示す。ここで図示された２つの限界回転角度は、アッセイ装置の第１および第２の構造を規定する。回転ストップ２１は、当該技術分野において公知の種々の方法で形成されてよい。図示した実施形態では、それらは上部枠エレメント１の縁にリッジを備える。
【０１６５】
アッセイ装置の第１および第２の構造では、第１開口部３および第２開口部４がそれぞれ示されている。図４Ａにおける第１開口部３の位置は、下部枠エレメント２の回転ストップ２２に対して、図４Ｂにおける第２開口部４の位置と同じである。
【０１６６】
したがって、下部枠エレメント２に対する上部枠エレメント１の回転時には、上部枠エレメント１の第１開口部３および第２開口部４の位置は、下部枠エレメント２に対して変化する。それ故、下部枠エレメント２に対して固定されていると想定される上部膜層６および下部吸収層７は、第１および第２の構造において、それぞれ上部枠エレメント１の第１開口部３および第２開口部４を通して同じ位置にアクセスされ得る。図４Ａに図示された第１の構造においては、第１開口部３は回転ストップ２２に近接した規定の位置に示されている。図４Ｂに図示された第２の構造においては、第２開口部４が、先の第１開口部３のように回転ストップ２２に隣接する位置に示されている。したがって、上部枠エレメント１を回転した後、およびそれ故、第１から第２の構造への移行後は、読み取り開口部４は、第１の構造においてサンプル供給開口部３によって占められていたのと同じ位置に移動されている。フィルタ層５は、第１開口部３の周辺領域において上部枠エレメント１に取付けられており、かつ第２開口部４の領域には延在していないことから、フィルタ層５は、第１開口部３の下の部分の眺望をもはや妨げることなく、使用者には、この実施形態では読み取り開口部４である第２開口部４を通して視覚的なアクセスが得られる。同時に、フィルタグリッド５によって保持されるようなサンプル材料は、第１の構造における開口部３によって定義されるような位置から除去される。
【０１６７】
図３、４ａ、および４ｂを参照して、本発明による方法（ここではＣＤ４細胞の評価のための）が以下に記載され、かつ以下の工程を含む：
１．全血サンプルを、サンプル中に含有されるような赤血球の溶解には適するが白血球を溶解しない希釈緩衝液と混合した。希釈緩衝液はまたａｎｔｉ  ＣＤ１４抗体を、ＣＤ１４単球を凝集させるのに適した形態で含有する。
２．短いインキュベーション時間の後、前記混合物のアリコートを図４の装置の開口部３に移し、直ちに前記開口部３の下に位置する粗い（ナイロンメッシュ）フィルタ５中に吸引し、凝集したＣＤ１４細胞を保持する一方、次のフィルタ層６の表面上に保持されることとなるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は通過させる。
３．その後、洗浄溶液を濾過装置の開口部３に移し、ナイロンメッシュフィルタ５、およびフィルタ６中に吸引した。
４．その後、装置の上部枠エレメント１をねじって（９０度を超える回転の角度）ナイロンフィルタ５を除去し、今度は開口部４が、フィルタ５に対する先の開口部３の位置、すなわち前記ＣＤ４＋ヘルパー細胞がフィルタ上に吸収されたフィルタのセクションに正確に位置するようにした。
５．その後、検出可能なマーカー（酵素など）をもつ抗ヒトＣＤ４受容体抗体の溶液を、濾過装置の開口部４に移し、フィルタ６中に吸引した。溶液をフィルタ６中に吸引した後、抗体コンジュゲートを、フィルタ６上に保持された細胞に結合させた。
６．その後、洗浄溶液をろ過装置のホール４に移し、そしてフィルタ６中に吸引した。
７．その後、マーカーとして酵素を使用した場合、対応する基質を濾過装置のホール４に移し、フィルタ６中に吸引した。
８．規定の時間（例えば、５分間）の後、発色を例えば反射測定法により、Ｓｋａｎｎｅｘ  ＡＳ（ノルウェー）によって提供されたソフトウェアを備えたＳｋａｎＳｍａｒｔ  ＣＥリーダを用いて測定した。
９．読み取り値を、同等の実験において分析された、Ｔ細胞関連ＣＤ４受容体分子を既知の含量で有する較正用サンプルによって生成された、ソフトウェアに保存された較正曲線と比較し、Ｔ細胞関連ＣＤ４受容体分子の含量を計算した。
【０１６８】
検出可能なマーカーが例えば有色粒子である場合には、工程７、および工程８による発色は、当然ではなく必要ではない。
【０１６９】
図２、３、および４に図示されたようなさらに進歩した装置について、上記に記載したようなＣＤ４評価は、図６および７に図示された装置を用いても同様に実施することができ、この場合、２つの血液サンプルは同時に評価されてもよく、また前記２つのサンプルの分析物は同じか（例えば、ＣＤ４細胞表面マーカー）または異なっていてもよい（例えば、ＣＤ４およびＣＤ８細胞表面マーカー）。この場合、上部枠エレメント１の回転角度は約９０°の範囲である。
【０１７０】
図５Ａおよび５Ａについては、本発明によるアッセイ装置の第２の実施形態が記載されている。
【０１７１】
アッセイ装置の一般的な構造は、第１の実施形態について上記に記載されたものに相当する。図５Ａに示した立体分解図は、上部枠エレメント１（一部のみ）、フィルタ層５、上部膜層６、下部吸収層７、および下部枠エレメント２を図示している。下部枠エレメント２は、下部試験コンパートメント内側表面２ａを備える。図５Ａから、試験コンパートメントが実質的に円筒形の形状を持つように認識されてもよい。
【０１７２】
しかしながら、上記に記載したアッセイ装置とは対照的に、凸部８ａ、９ａが、下部試験コンパートメント内側表面２ａ上に、そして対応するカットアウト７ａ、７ｂ、６ａ、６ｂが、下部吸収層７および膜エレメント６に形成される。下部吸収層７および上部膜層６が、下部試験コンパートメント内側表面２ａ上の試験コンパートメント内に挿入された後、カットアウト７ａ、７ｂ、６ａ、６ｂが、凸部８ａ、９ａと嵌合し、それにより下部吸収層７および上部膜層６の回転運動が制限される。下部枠エレメント２の反対側では、凹部８ｂ、９ｂが形成される。この実施形態では、凹部８ｂ、９ｂは、カード１０に対する下部枠エレメント２の回転運動を防止する目的で、カード１０のホール１０ａに形成されたラッチと嵌合するために使用できる。さらに、下部枠エレメント２の不可欠部分として形成されている回転ストップ２２が、図５Ａおよび５Ｂに示されている。図５Ｂは、下部枠エレメント２の回転ストップ２２が、上部枠エレメント１の回転ストップ２１と接している場合を図示する。さらに、当業者は、上部枠エレメント１が下部枠エレメント２に対して回転する可能性を認識するであろうが、これにおいて回転は、上部枠エレメント１の回転ストップ２１の位置により、一定の回転角度に制限される。
【０１７３】
図６を参照すれば、対応する第１および第２の開口部の２つのペア（３、４および３’、４’）によって特徴づけられる、本発明によるアッセイ装置の第３の実施形態の、立体分解図が記載されている。
【０１７４】
アッセイ装置の一般的なセットアップは、第１および第２の実施形態に関して上記に記載された構造に類似している。
【０１７５】
アッセイ装置は、上部１および下部枠エレメント２を備え、それらは互いに嵌合により組立てられてもよく、それにより上部膜層６と下部吸収層７とを備えた試験コンパートメントを形成する。上部枠エレメント１は、上部試験コンパートメント内側表面１ａを含み、そして下部枠エレメント２は、下部試験コンパートメント内側表面２ａを含む。下部試験コンパートメントにおいては、内側表面２ａおよび凸部８ａおよび９ａ（示されず）が形成され、対応するカットアウト６ａ、６ｂ、７ａ、および７ｂが、上部膜層６および下部吸収層７に、上部膜層６および下部吸収層７の回転運動が禁止されるように形成される。
【０１７６】
さらに、フィルタ層５および５’が、上部枠エレメント１の第１開口部３および３’の領域において、上部枠エレメント１に取付けられる。上部枠エレメント１は、さらに第２の開口部４、４’を含む。第１開口部３および３’はさらに、試験コンパートメントに対し外側表面である上部枠エレメント１の、上部試験コンパートメント内側表面１ａの反対側で、その周囲にリッジ３ａおよび３ａ’を有する。さらに、ラベル１１が、試験コンパートメントに対して外側の上部枠エレメント１の上に備えられ、これにおいてラベル１１はホール１１ａを備え、それらは、上部枠エレメント１の第１開口部３、３’および第２開口部４、４’に相当する。開口部３，４の１つの外周を取り囲むリッジ３ａおよび３ａ’は、ラベル１１および上部枠エレメント１の明確に規定された配置を確保するために使用される。ラベル１１はさらに、アッセイの比色分析的読み出しを定量的な結果へ容易に変換するための情報を与える、図示されたケースでは色スケールである、説明用インプリント１１ｂを含んでもよい。
【０１７７】
図７を参照すれば、本発明のアッセイ装置の第３の実施形態の上面図が記載されている。アッセイ装置の構造は、第３の実施形態について図６を参照して上記に記載された構造に類似している。
【０１７８】
簡素化を目的として、下部枠エレメント２は、回転ストップ２２以外は図７に図示されていない。上部枠エレメント１には、２つの回転ストップ２１が備えられ、それらは第１および第２の構造において、それぞれ下部枠エレメント２の回転ストップ２２と係合する。ここでは、アッセイ装置の第１の構造が示されており、第２の構造は、上部枠エレメント１を、回転ストップ２１、２２により規定される第２の限界回転角度に向けて、下部枠エレメント２に対して反時計方向に回転させることにより達成できる。
【０１７９】
上部枠エレメント１には、第１開口部３、３’の、および第２開口部４、４’の、第１のペア３、４、および第２のペア３’、４’が形成され、ここで、第１開口部３、３’には、それら各々の周囲を取り囲むリッジ３ａ、３ａ’が設けられる。また、上部枠エレメント１の底側で第１開口部３、３’を横切って延在するフィルタ層５、５’が、第１開口部３，３’の内側に網掛けで示されている。開口部３、４、３’、４’のペアは、第２の構造（回転後）において、その回転ストップ２２によって表される下部枠エレメントに対する第２開口部４、４’の位置が、第１の構造における第１開口部３、３’の位置と実質的に同じとなるように配置されている。
【０１８０】
さらに、ラベル１１が、上部枠エレメント１の上面に配置され、説明用インプリント１１ｂが、アッセイ装置の使用者に見えている。また、第２開口部４、４’の周囲のラベル１１には、周辺のインプリント４ａ、４ａ’が設けられる。周辺のインプリント４ａ、４ａ’の異なる網掛けは、発色の差異を例示しており、例えば、使用者が個々の第２開口部４、４’を互いに容易に区別するのを助け、またはアッセイの比色分析の読み出しを解釈するために参照色を与えるものである。
【０１８１】
図８を参照すれば、本発明の一般的な実施形態によるアッセイ装置の断面図が示されている。
【０１８２】
かかる装置の前記垂直断面は、特に、アッセイを実施するのに必要な、フィルタおよび吸収性材料からなる一連の異なる層を例示する。上部の正方形ディスク層１０１には、中央の円形開口部１０２が設けられる。前記正方形ディスクの下の下面には、適当な細孔サイズを有するフィルタの円形片１０４を前記ディスク層１０１の下側に、前記ディスクの中央開口部１０２の中央をその中心にして固定する目的で、接着剤の薄層１０３が備えられる。接着層１０３はまた、前記ディスク１０１の下側に、ディスク１０１とほぼ同じサイズの正方形の吸収パッド１０５も固定する。前記ディスク１０１の中央ホール１０２では、下にあるフィルタ１０４の上に、リング１０８に取付けられた適当なネットフィルタのディスク１０６が、中央開口部１０２に挿入され、かつリング１０８の上側に固定された粘着テープ１０７により、ディスク１０１の上側に脱着可能に固定される。前記テープ１０７には、中央開口部が形成され、これにより分析されるべきサンプル、および洗浄用試薬を、ネットフィルタ１０６上で添加することが可能となる。フィルタ１０６は、サンプル添加後に装置から取外すことができ、洗浄はテープ１０７を引っ張ることにより完了する。次いで、洗浄緩衝液および追加の試薬を、残る「開放」された装置へ、開口部１０２を通してフィルタ１０４の上に直接添加し得る。試験結果（例えば、呈色反応）は、視覚的に検査され、かつ前記装置１０２によってさらに分析され得る。
【０１８３】
上記の明細書において引用された参考文献は、参照により本明細書に援用される。
【符号の説明】
【０１８４】
１：上部枠エレメント
１ａ：上部試験コンパートメント内側表面
２：下部枠エレメント
２ａ：下部試験コンパートメント内側表面
２ｂ：凸部
３、３’：第１開口部、サンプル供給開口部
３ａ、３ａ’：リッジ（第１開口部）
４、４’：第２開口部、読み取り開口部
４ａ、４ａ’：周辺のインプリント（第２開口部）
５：フィルタ層
５ａ：凹部（フィルタ層用）
６：膜エレメント
６ａ、６ｂ：カットアウト（膜エレメント）
７：下部吸収層
７ａ、７ｂ：カットアウト（下部吸収層）
８ａ、９ａ：凸部
８ｂ、９ｂ：凹部
１０：カード
１０ａ：ホール（カード）
１１：ラベル
１１ａ：ホール（ラベル）
１１ｂ：説明用インプリント
１２：ラッチ（ケーシング）
１３：ラッチ（カード）
２１：運動制限器、回転ストップ（上部枠エレメント）
２２：運動制限器、回転ストップ（下部枠エレメント）
２３：矢印（回転方向）
【図１Ａ】
2019523123.tif 000003
【図１Ｂ】
2019523123.tif 000004
【図２】
2019523123.tif 000005
【図３】
2019523123.tif 000006
【図４Ａ】
2019523123.tif 000007
【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
2019523123.tif 000009
【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2019523123.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月27日(2018.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上部枠エレメント（１）と下部枠エレメント（２）とを備えたアッセイ装置であって、
前記上部枠エレメント（１）及び前記下部枠エレメント（２）は、機能層（５、６、７）の積層体を受けるのに適した試験コンパートメントが形成されるように組立てられ、
前記試験コンパートメントは、前記上部枠エレメント（１）の上部試験コンパートメントの内側表面（１ａ）と、前記下部枠エレメント（２）の下部試験コンパートメントの内側表面（２ａ）とを含み、
前記上部枠エレメント（１）は、前記下部枠エレメント（２）に対し回転可能となることで、前記アッセイ装置の第１の構造および第２の構造を規定し、
前記上部枠エレメント（１）は、第１開口部（３）および第２開口部（４）を有しており、前記第１開口部と第２開口部の双方が外部からの前記試験コンパートメントへの別々のアクセスを提供し、
前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）は、前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第２開口部（４）の位置と略同じであるように配置されており、
前記アッセイ装置は、上部膜層（６）と下部吸収層（７）とを備えると共に、前記試験コンパートメントにより受けられる機能層の積層体を備えており、
前記上部膜層と前記下部吸収層は、互いに重なり合って配置されると共に、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）および前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対し略平行に延出し、
前記試験コンパートメントは、前記上部膜層（６）に略平行に配置されたフィルタ層（５）を備え、
前記フィルタ層（５）は、前記第１開口部（３）と前記上部膜層（６）との間に位置するように配置され、
前記フィルタ層（５）は、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）に取付けられる一方で、前記第２開口部（４）にまで延出しない、且つ前記第２開口部（４）に重ならない、装置。
【請求項２】
少なくとも前記上部膜層（６）は、前記下部枠エレメント（２）に固定されている、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項３】
少なくとも１つのカットアウト（６ａ、６ｂ、７ａ、７ｂ）は、前記上部膜層（６）に形成されると共に、少なくとも１つの凸部（８ａ、９ａ）は、前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に形成され、
前記カットアウト（６ａ、５ｂ、７ａ、７ｂ）が前記凸部（８ａ、９ａ）と係合することで前記下部試験コンパートメント表面（２ａ）に対する前記上部膜層（６）の位置を確保する、請求項３に記載のアッセイ装置。
【請求項４】
前記フィルタ層（５）は、グリッドを備える、請求項１から４のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項５】
前記上部膜層（６）は、前記上部試験コンパートメント内側表面（１ａ）から離間するように配置されている、請求項１から４のうちいずれか１項に記載のアッセイ装置。
【請求項６】
移動制限部（２１）が前記上部枠エレメント（１）に形成されると共に、別の移動制限部（２２）が前記下部枠エレメント（２）に形成され、
前記第１の構造に対応する第１の極限位置と前記第２の構造に対応する第２の極限位置との間で、前記上部枠エレメント（１）が前記下部枠エレメント（２）に対し可動性となるように、前記移動制限部（２１、２２）が設けられている、
請求項１から５のうちのいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項７】
前記上部枠エレメント（１）及び前記下部枠エレメント（２）は、互いに嵌合することで組立てられる、請求項１から６のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項８】
ラベル（１１）は、前記上部試験コンパートメント表面（１ａ）と反対側の前記上部枠エレメント（１）の表面上に配置されている、請求項１から７のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項９】
前記アッセイ装置は、ホール（１０ａ）を備えたカード（１０）をさらに備え、
前記上部枠エレメント（１）または前記下部枠エレメント（２）は、前記ホール（１１ａ）と係合する、請求項１から８のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１０】
凹部（８ｂ、９ｂ）が前記下部枠エレメント（２）に形成され、
前記カード（１０）の前記ホール（１０ａ）には、ノッチが設けられ、
前記凹部（８ｂ、９ｂ）が前記ホールと係合することで、前記カード（１０）に対する前記下部枠エレメント（２）の位置が確保される、
請求項１０に記載のアッセイ装置。
【請求項１１】
前記上部枠エレメント（１）は、複数の第１開口部（３）と第２開口部（４）を有し、
前記第１開口部（３）の各々が前記第２開口部（４）の１つと関連付けられており、
前記第１の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する前記第１開口部（３）の位置が、前記第２の構造における前記下部枠エレメント（２）に対する関連する前記第２開口部（４）の位置と略同一となるように、前記第１開口部（３）および前記第２開口部（４）が配置されている、
請求項１から１０のうちいずれか一項に記載のアッセイ装置。
【請求項１２】
血液または血液細胞を評価するための方法であって、請求項１から１１のうちいずれか一項で規定された装置を適用するステップを含む、方法。
【国際調査報告】
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