(57)【要約】  本発明は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて、本明細書に記載の前記抗原に結合するＣＡＲを含む組換えＴ細胞を投与することにより、抗原、例えば固形腫瘍抗原又はＴＡＭ及び／若しくはＭＤＳＣに関連する腫瘍上に発現される抗原の発現に関連する疾患を処置するための組成物及び方法を提供する。本発明は、本明細書に記載のキット及び組成物も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象の処置においてプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて使用するための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、前記ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ治療。
【請求項２】
腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、前記ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ治療、及び
（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤
を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項３】
前記ＣＡＲ治療及びプロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、逐次的に投与される、請求項１又は２に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、前記ＣＡＲ治療前に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤及び前記ＣＡＲ治療は、同時に又は一緒に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項６】
前記ＣＡＲ治療は、（ａ）単回注入、又は（ｂ）複数回注入（例えば、複数回注入に分割された単回用量）として投与され、プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、（ａ）単回用量、又は（ｂ）複数回用量（例えば、第１及び第２の用量並びに任意選択により１用量以上のその後の用量）として投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項７】
前記ＣＡＲ治療の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤の第１の用量の投与後（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）であるが、例えば前記阻害剤の前記第２の用量の投与前に投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項８】
前記ＣＡＲ治療の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤の第１の用量の前記投与と一緒に（例えば、その２日以内（例えば、２日以内、１日以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、４時間以内、２時間以内又はそれ未満）に）投与される、請求項１又は５に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項９】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤の１用量以上のその後の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤の第２の用量後に投与される、請求項６〜８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１０】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、１用量を超えて投与され、及び前記用量は、１日２回（ＢＩＤ）、１日１回、１週間に１回、１４日毎に１回又は毎月１回投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１１】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤の前記投与は、少なくとも７日、例えば少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月又はそれを超える期間を含む複数回用量を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１２】
前記ＣＡＲ治療は、少なくとも約５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９個の細胞、例えばＣＡＲ陽性細胞を含む用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１３】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−１３Ｒα１阻害剤、ＩＬ−４Ｒα阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、ＣＳＦ−１阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、細胞表面分子、酸化鉄、小分子阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、解糖系の阻害剤、ミトコンドリア標的化抗酸化剤又はそれらの組み合わせである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１４】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、小分子、抗体若しくはその抗原結合断片、タンパク質（例えば、融合タンパク質）、核酸（例えば、ｓｈＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ）又は遺伝子編集系である、請求項１３に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１５】
プロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、抗体又はその抗原結合断片である、請求項１３に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１６】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３に結合する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項１７】
腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象の処置において腫瘍標的治療と組み合わせて使用するための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、
（ｉ）前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する腫瘍抗原結合ドメイン（ＣＤ１２３  ＣＡＲ）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、及び
（ｉｉ）前記腫瘍標的治療は、ＣＤ１２３以外の腫瘍抗原に結合する腫瘍抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３以外の固形腫瘍抗原又は血液腫瘍抗原に結合するＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む第２のＣＡＲ治療を含み、
前記ＣＤ１２３  ＣＡＲは、Ｍ２マクロファージ活性の阻害をもたらすのに十分な量及び／又は時間で投与される、ＣＡＲ治療。
【請求項１８】
腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する腫瘍抗原結合ドメイン（ＣＤ１２３  ＣＡＲ）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ治療、及び
（ｉｉ）腫瘍標的治療であって、ＣＤ１２３以外の腫瘍抗原に結合する腫瘍抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３以外の固形腫瘍抗原又は血液腫瘍抗原に結合するＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む第２のＣＡＲ治療を含む腫瘍標的治療
を前記対象に投与することを含み、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲは、Ｍ２マクロファージ活性の阻害をもたらすのに十分な量及び／又は時間で投与される、方法。
【請求項１９】
前記Ｍ２マクロファージ活性の前記阻害は、Ｍ２表現型へのマクロファージの偏向の阻害及び／又はＭ２マクロファージの表現型の逆転を含む、請求項１７又は１８に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２０】
前記第２のＣＡＲ治療の前記腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、メソテリン又はＥＧＦＲｖｉｉｉに結合する、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療。
【請求項２１】
ＣＤ１２３に結合する前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、表１６、表１８、表２０、表２２、表２４、表２５、表２６、表２７又は表２８に列挙される任意のＣＤ１２３重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び
表１７、表１９、表２１、表２３、表２４、表２５、表２６、表２７又は表２８に列挙される任意のＣＤ１２３軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）
を含む、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２２】
前記ＣＤ１２３結合ドメインは、表２６、表２７又は表２８に列挙されるＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む、請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２３】
前記ＣＡＲは、表２６又は表２７に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２４】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、メソテリンに結合する、請求項１〜１５、１７又は１８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２５】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、表２、表３又は表１１に列挙される任意のメソテリン重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び
表２、表４又は表１１に列挙される任意のメソテリン軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）
を含む、請求項２４に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２６】
前記メソテリン結合ドメインは、表２又は表１１に列挙されるメソテリン結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む、請求項２４又は２５に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２７】
前記ＣＡＲは、表１１に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２８】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する、請求項１〜１５、１７又は１８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項２９】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、表５に列挙される任意のＥＧＦＲｖＩＩＩ重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び
表５に列挙される任意のＥＧＦＲｖＩＩＩ軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）
を含む、請求項２８に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３０】
前記ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、表５に列挙されるＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む、請求項２８又は２９に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３１】
前記ＣＡＲは、表３０に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３２】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する、請求項１〜１５、１７又は１８に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３３】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、表６、表７又は表９に列挙される任意のＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び
表６、表８又は表９に列挙される任意のＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）
を含む、請求項３２に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３４】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、表６又は表９に列挙されるＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む、請求項３２又は３３に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３５】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５及び配列番号１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３６】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、固形腫瘍に結合する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３７】
前記ＣＡＲの前記腫瘍抗原結合ドメインは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に関連する腫瘍上に発現された抗原に結合する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３８】
前記固形腫瘍抗原又は腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び／若しくは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に関連する腫瘍上に発現された前記抗原は、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−糖ペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−β、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６若しくはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣ上に提示された前記抗原のいずれかのペプチドである、請求項３６又は３７に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項３９】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ζ刺激ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される共刺激性タンパク質の細胞内ドメインである共刺激ドメインを含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４１】
前記共刺激ドメインは、４−１ＢＢの細胞内ドメインを含む、請求項４０に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４２】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメインを含む、請求項４０に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４３】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激ドメイン、例えば４−１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４４】
腫瘍抗原の発現に関連する前記疾患は、癌である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４５】
前記癌は、ホジキンリンパ腫である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌は、固形癌である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
ＣＡＲを含む前記細胞は、前記ＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４８】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルスベクターである、請求項４７に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項４９】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルス形質導入によって前記細胞に導入される、請求項４７又は４８に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５０】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡである、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５１】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、電気穿孔によって前記細胞に導入される、請求項４７〜５０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５２】
前記細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５３】
前記Ｔ細胞は、自己又は同種のＴ細胞である、請求項５２に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５４】
前記対象は、哺乳動物、例えばヒトである、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５５】
前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療及び前記腫瘍標的治療は、逐次的に、同時に又は一緒に投与される、請求項１７〜５４に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５６】
前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療は、前記腫瘍標的治療前に投与される、請求項１７〜５５に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５７】
前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療は、前記腫瘍標的治療の投与の少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１０日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月又は少なくとも１０ヶ月前に投与される、請求項５６に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５８】
前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療は、（ａ）単回注入、又は（ｂ）複数回注入（例えば、複数回注入に分割された単回用量）として投与され、前記腫瘍標的治療は、（ａ）単回用量、又は（ｂ）複数回用量（例えば、第１及び第２の用量並びに任意選択により１用量以上のその後の用量）として投与される、請求項１７〜５７に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項５９】
前記ＣＡＲ治療又は前記腫瘍標的治療は、少なくとも約５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９個の細胞、例えばＣＡＲ陽性細胞を含む用量で投与される、請求項１７〜５８に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項６０】
前記ＣＡＲ治療及び前記腫瘍標的治療は、薬学的組成物において製剤される、請求項１７〜６０に記載の使用のためのＣＡＲ治療又は方法。
【請求項６１】
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、前記ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団、及び（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項６２】
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、前記ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団、及び（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤を含む、疾患又は障害の処置における使用のための医薬組成物。
【請求項６３】
哺乳動物において固形腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、有効量の請求項６１に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項６４】
哺乳動物において抗固形腫瘍免疫を提供する方法であって、有効量の請求項６１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項６５】
固形腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する哺乳動物を処置する方法であって、有効量の請求項６１に記載の組成物を投与することを含む方法。
【請求項６６】
前記細胞、例えば免疫エフェクター細胞の前記集団及びプロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、（例えば、２つの個別の組成物中における）個別の投与のために提供される、請求項６３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞、例えば免疫エフェクター細胞の前記集団及びプロＭ２マクロファージ分子の前記阻害剤は、（例えば、１つの組成物中における）同時投与のために提供される、請求項６３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年８月１日に出願された米国特許出願第６２／３６９５８９号に対する優先権を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１７年７月３１日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｎ２０６７−７１１３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、且つサイズが１，５４９，３０４バイトである。
【０００３】
本発明は、一般に、癌抗原、例えば固形腫瘍抗原又は腫瘍関連マクロファージに関連する癌細胞上の抗原の発現に関連する疾患を処置するための、例えばプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えばＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−１０又はＣＳＦ−１の阻害剤などの別の薬剤と組み合わせた、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
悪性腫瘍を有する多くの患者は、標準治療では治癒できない。更に、従来の処置の選択肢には、多くの場合、重篤な副作用がある。癌免疫治療において複数の試みがなされてきたが、いくつかの障害により、これは、臨床的有効性を達成する非常に困難な目標となっている。何百ものいわゆる腫瘍抗原が同定されているが、これらは、一般的に自己由来であり、従って免疫原性が低い。更に、腫瘍は、免疫攻撃の開始及び伝播に対して自らを好ましくないものとするためにいくつかのメカニズムを使用する。これらの機構のいくつかは、免疫応答に対して阻害性である表現型、例えばＭ２表現型を有し得る腫瘍細胞、例えば腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）に関連し得る非腫瘍細胞に関与する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変自己Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）療法を用いた最近の展開は、Ｔ細胞をＢ細胞悪性腫瘍などの癌細胞上の好適な細胞表面分子に仕向け直すことに依存するものであり、免疫系の力を利用したＢ細胞悪性腫瘍及び他の癌の治療において有望な結果を示している（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ３：３８８−３９８（２０１３）を参照されたい）。マウス由来ＣＡＲＴ１９（即ち「ＣＴＬ０１９」）の臨床結果は、ＣＬＬ並びに小児ＡＬＬに罹患している患者において完全寛解が得られる見込みを示している（例えば、Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ３：９５ｒａ７３（２０１１）、Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ３６５：７２５−７３３（２０１１）、Ｇｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ３６８：１５０９−１５１８（２０１３）を参照されたい）。遺伝的に修飾されたＴ細胞上のキメラ抗原受容体が標的細胞を認識し、破壊する能力以外に、治療的Ｔ細胞治療の成功は、経時的に増殖し、持続し、それらの機能を阻害する環境において有効であり続け、悪性細胞の漏出を更に監視する能力を有することを必要とする。Ｔ細胞の質の変動及びインビボでのアネルギー、抑制又は消耗は、ＣＡＲ変換Ｔ細胞のパフォーマンスに影響を与え、現時点では、これは、熟練した医師による制御が制限されている。特定のＣＡＲ形質転換Ｔ細胞産物が有効であることが証明されているが、強化された有効性、例えば固形腫瘍及びその関連する免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に対する強化された有効性を伴うＣＡＲ形質転換Ｔ細胞治療が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子、例えば腫瘍抗原（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍の表面に発現される抗原）に結合するＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を使用して癌などの障害（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍）を処置する組成物及び方法を少なくとも部分的に特徴とする。組成物は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）又はＩＬ−１３若しくはＩＬ−４（例えば、ＩＬ−１３Ｒα１若しくはＩＬ−４Ｒα）についてマクロファージ細胞の表面に存在する受容体の阻害剤）と組み合わせて、ＣＡＲを標的とする腫瘍を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を含み、方法は、これを投与することを含む。いくつかの実施形態において、この組み合わせは、いずれかの治療単独と比較して、例えば固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍に対してより優れた臨床効果を維持するか又は有する。理論に縛られることなく、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書に記載のもの）の使用は、マクロファージ、例えば腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のＭ２表現型への偏向を阻害し、又はＭ２マクロファージ、例えば腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の表現型を逆転させ、それによりＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ発現Ｔ細胞の機能、例えばＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍活性又は増殖活性の阻害源を除去することが本明細書に示される。本発明は、腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍細胞上の抗原に結合するＣＡＲ分子を発現する操作された細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書に記載のプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤）と組み合わせた、腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍（例えば、癌）上の抗原の発現に関連する障害を処置するための使用に更に関する。
【０００７】
第１の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象（例えば、癌を有する対象（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍））を処置する方法であって、（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、本明細書に記載のもの）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療を対象に投与することを含む方法を提供する。ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン（例えば、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインはＣＤ１９又はＣＤ１２３に結合する）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン、及び（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書に記載のもの）を含む。
【０００８】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象（例えば、癌を有する対象（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍））の処置においてプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて使用するための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療を提供する。ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン（例えば、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９又はＣＤ１２３に結合する）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０００９】
実施形態において、ＣＡＲ治療及びプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、逐次的に投与される。
【００１０】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＣＡＲ治療前に投与される。前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤及びＣＡＲ治療は、同時に又は一緒に投与される。
【００１１】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲ治療は、（ａ）単回注入、又は（ｂ）複数回注入（例えば、複数回注入に分割された単回用量を）として投与され、及びプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、（ａ）単回用量、又は（ｂ）複数回用量（例えば、第１及び第２の用量並びに任意選択により１用量以上のその後の用量）として投与される。
【００１２】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲ治療の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の第１の用量の投与後（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）且つ例えば阻害剤の第２の用量の投与前に投与される。
【００１３】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲ治療の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の第１の用量の投与と一緒に（例えば、その２日以内（例えば、２日以内、１日以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、４時間以内、２時間以内又はそれ未満）に）投与される。
【００１４】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の１用量以上のその後の用量は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の第２の用量後に投与される。
【００１５】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、１用量を超えて投与され、及び用量は、１日２回（ＢＩＤ）、１日１回、１週間に１回、１４日毎に１回又は毎月１回投与される。
【００１６】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の投与は、少なくとも７日、例えば少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月又はそれを超える期間を含む複数回用量を含む。
【００１７】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲ治療は、少なくとも約５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９個の細胞、例えばＣＡＲ陽性細胞を含む用量で投与される。
【００１８】
別の態様において、本発明は、（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、本明細書に記載のもの）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団、及び（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、本明細書に記載のもの）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、ＣＡＲは、腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団、及び（ｉｉ）プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む、本明細書に記載の疾患又は障害の処置における使用のための医薬組成物を提供する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、哺乳動物において固形腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を刺激する方法を提供であって、有効量の先の態様の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、哺乳動物において抗腫瘍免疫、例えば抗固形腫瘍免疫を提供する方法であって、有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する哺乳動物を処置する方法であって、有効量の先の態様の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２３】
上記方法の実施形態のいずれかを含む実施形態において、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団及びプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、（例えば、２つの個別の組成物中における）個別の投与のために提供される。上記方法の実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団及びプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、（例えば、１つの組成物中における）同時投与のために提供される。
【００２４】
プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の以下の態様は、上記の態様及び実施形態のいずれかと共に利用され得る。
【００２５】
実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−１３Ｒα１阻害剤、ＩＬ−４Ｒα阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、ＣＳＦ−１阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤又はそれらの組み合わせ、例えば本明細書に記載のものである。実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−１３Ｒα１阻害剤、ＩＬ−４Ｒα阻害剤又はそれらの組み合わせ、例えば本明細書に記載のものである。いくつかの実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、小分子、抗体若しくはその抗原結合断片、タンパク質（例えば、融合タンパク質）、核酸（例えば、ｓｈＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ）又は遺伝子編集系である。いくつかの実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、抗体又はその抗原結合断片である。
【００２６】
いくつかの実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−１３Ｒα１阻害剤、ＩＬ−４Ｒα阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、ＣＳＦ−１阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、細胞表面分子、酸化鉄、小分子阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、解糖系の阻害剤、ミトコンドリア標的化抗酸化剤又はそれらの組み合わせ、例えば本明細書に記載のものである。
【００２７】
一実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−１３阻害剤（例えば、フェンレチニド（４−ＨＰＲ））である。
【００２８】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−４阻害剤（例えば、４−ＨＰＲ）である。
【００２９】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−１３Ｒα１阻害剤である。
【００３０】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＩＬ−４Ｒα阻害剤である。
【００３１】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＣＳＦ−１阻害剤（例えば、ニンテダニブ）である。
【００３２】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である。
【００３３】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＪＡＫ２阻害剤（例えば、ルキソリチニブ）である。
【００３４】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、細胞表面分子（例えば、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）又はＣＤ２６）である。
【００３５】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、酸化鉄（例えば、フェルモキシトール）である。
【００３６】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、小分子阻害剤（例えば、プテロスチルベン）である。
【００３７】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、テナリシブ（ＲＰ６５３０））である。
【００３８】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＳＡＨＡ）である。
【００３９】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、解糖系の阻害剤（例えば、２−デオキシ−ｄ−グルコース（２−ＤＧ））である。
【００４０】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ミトコンドリア標的抗酸化剤（例えば、ＭｉｔｏＱ）である。
【００４１】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象（例えば、癌を有する対象（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍））を処置する方法を提供する。方法は、（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ治療、及び（ｉｉ）腫瘍標的治療を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、Ｍ２マクロファージ活性の阻害をもたらすのに十分な量及び／又は時間で投与される。実施形態において、Ｍ２マクロファージ活性の阻害は、Ｍ２表現型へのマクロファージの偏向の阻害及び／又はＭ２マクロファージの表現型の逆転を含む。
【００４２】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象（例えば、癌を有する対象（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍））の処置において腫瘍標的治療と組み合わせて使用するための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療を提供する。ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、Ｍ２マクロファージ活性の阻害をもたらすのに十分な量及び／又は時間で投与される。実施形態において、Ｍ２マクロファージ活性の阻害は、Ｍ２表現型へのマクロファージの偏向の阻害及び／又はＭ２マクロファージの表現型の逆転を含む。
【００４３】
本明細書に開示される使用のための方法及びＣＡＲ治療のいくつかの実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＤ１２３以外の腫瘍抗原に結合する腫瘍抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３以外の固形腫瘍抗原又は血液腫瘍抗原に結合するＣＡＲ）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む第２のＣＡＲ治療である。一実施形態において、腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、メソテリン又はＥＧＦＲｖｉｉｉに結合する。
【００４４】
本明細書に開示される使用のための方法及びＣＡＲ治療のいくつかの実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療、例えばＣＤ１９阻害剤を含む治療であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞若しくは抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単若しくは二特異性抗体）又はその断片若しくはコンジュゲートを含む。一実施形態において、ＣＤ１９阻害剤は、ＣＤ１９抗体、例えばＣＤ１９二特異性抗体（例えば、ＣＤ１９を標的とする二特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、例えばブリナツモマブ）である。
【００４５】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、ＣＡＲ治療及び腫瘍標的治療は、逐次的に投与される。
【００４６】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＡＲ治療前に投与される。
【００４７】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療は、腫瘍標的治療前に投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ治療は、腫瘍標的治療の投与の少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１０日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月又は少なくとも１０ヶ月前に投与される。
【００４８】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、腫瘍標的治療及びＣＡＲ治療は、同時に又は一緒に投与される。
【００４９】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、ＣＡＲ治療は、（ａ）単回注入、又は（ｂ）複数回注入（例えば、複数回注入に分割された単回用量）として投与され、及び腫瘍標的治療は、（ａ）単回用量、又は（ｂ）複数回用量（例えば、第１及び第２の用量並びに任意選択により１用量以上のその後の用量）として投与される。
【００５０】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む他の実施形態において、ＣＡＲ治療の用量は、腫瘍標的治療の第１の用量の投与後（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）であるが、例えば腫瘍標的治療の第２の用量の投与前に投与される。
【００５１】
他の実施形態において、ＣＡＲ治療の用量は、腫瘍標的治療の第１の用量の投与と一緒に（例えば、その２日以内（例えば、２日以内、１日以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、４時間以内、２時間以内又はそれ未満）に）投与される。
【００５２】
他の実施形態において、腫瘍標的治療の１用量以上のその後の用量は、第２の用量の腫瘍標的治療後に投与される。
【００５３】
他の実施形態において、腫瘍標的治療は、１用量を超えて投与され、及び用量は、１日２回（ＢＩＤ）、１日１回、１週間に１回、１４日毎に１回又は毎月１回投与される。
【００５４】
他の実施形態において、腫瘍標的治療の投与は、少なくとも７日、例えば少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月又はそれを超える期間を含む複数回用量を含む。
【００５５】
他の実施形態において、ＣＡＲ治療又は腫瘍標的治療は、少なくとも約５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９個の細胞、例えばＣＡＲ陽性細胞を含む用量で投与される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ治療及び腫瘍標的治療は、薬学的組成物（例えば、薬学的賦形剤を含む）において製剤される。
【００５７】
ＣＡＲ及びＣＡＲ発現細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団の以下の態様は、前述の態様及び実施形態のいずれかと共に利用され得る。
【００５８】
一態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３に結合する。
【００５９】
実施形態において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、表１６、表１８、表２０、表２２、表２４、表２５、表２６、表２７又は表２８に列挙される任意のＣＤ１２３重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び表１７、表１９、表２１、表２３、表２４、表２５、表２６、表２７又は表２８に列挙される任意のＣＤ１２３軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表２６、表２７又は表２８に記載のＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む。実施形態において、ＣＡＲは、表２６又は表２７に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【００６０】
別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、メソテリンに結合する。実施形態において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、表２、表３又は表１１に列挙される任意のメソテリン重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び表２、表４又は表１１に列挙される任意のメソテリン軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。実施形態において、メソテリン結合ドメインは、表２又は表１１に記載のメソテリン結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む。実施形態において、ＣＡＲは、表１１に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【００６１】
別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。実施形態において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、表５に列挙される任意のＥＧＦＲｖＩＩＩ重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び表５に列挙される任意のＥＧＦＲｖＩＩＩ軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、表５に列挙されるＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む。実施形態において、ＣＡＲは、表３０に列挙されるＣＡＲアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【００６２】
別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、表６、表７又は表９に列挙される任意のＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び表６、表８又は表９に列挙される任意のＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表６又は表９に記載のＣＤ１９結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）アミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５及び配列番号１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６３】
別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、固形腫瘍抗原に結合する。別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に関連する腫瘍上に発現された抗原に結合する。実施形態において、固形腫瘍抗原又は腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び／若しくは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に関連する腫瘍上に発現された抗原は、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−糖ペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−β、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６若しくはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣ上に提示されたこれらの抗原のいずれかのペプチドである。
【００６４】
別の態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、例えば、本明細書に記載の通り、血液癌に結合する。いくつかの態様において、ＣＡＲの腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９に結合する前述のＣＡＲのいずれも、ＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載のＣＤ１９発現Ｂ細胞悪性腫瘍を処置するために使用することができる。
【００６５】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ζ刺激ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む。
【００６６】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される共刺激性タンパク質の細胞内ドメインである共刺激ドメインを含む。前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、共刺激ドメインは、４−１ＢＢの細胞内ドメインを含む。前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、共刺激ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメインを含む。前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激ドメイン、例えば４−１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む。
【００６７】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、腫瘍抗原の発現に関連する疾患は、癌である。前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、癌は、ホジキンリンパ腫である。癌がホジキンリンパ腫である実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１９又はＣＤ１２３に結合し、例えばＣＤ１２３に結合する。
【００６８】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、癌は、固形癌である。
【００６９】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲを含む細胞は、ＣＡＲをコードする核酸を含む。実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、レンチウイルスベクターである。実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、レンチウイルス形質導入によって細胞に導入される。
【００７０】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡである。実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、電気穿孔によって細胞に導入される。
【００７１】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。実施形態において、Ｔ細胞は、自己又は同種のＴ細胞である。
【００７２】
前述の態様及び実施形態のいずれかを含む実施形態において、対象は、哺乳動物、例えばヒトである。
【００７３】
見出し、副見出し、又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、ステップ若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はなく、又はステップ若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。
【００７４】
本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７５】
本開示は、前述の態様及び／又は実施形態の任意の１つ以上の組み合わせ並びに詳細な説明及び実施例に記載されている実施形態の任意の１つ以上の実施形態との組み合わせを含む。
【００７６】
本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態についての以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとより良く理解されるであろう。本発明を例示する目的から、現在好ましい実施形態が図面に示される。しかしながら、本発明は、図面に示される実施形態の正確な構成及び手段に限定されないことが理解されなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１Ａ−１Ｃ】図１Ａは、ＣＤ３０及びＣＤ１２３について免疫組織化学により染色されたホジキンリンパ腫の一次サンプルを示す。ＣＤ１２３の発現は、ＨＬリードシュテルンベルク細胞で見られたが、ＨＲＳでのみ陽性であったＣＤ３０とは対照的に腫瘍微小環境でも見られた。図１Ｂは、４つの標準ＨＬ細胞株（ＭＯＬＭ−１４及びＡ３５７を陽性及び陰性対照として使用）におけるＣＤ１２３のＲＮＡ発現を示す。図１Ｃは、ＣＤ１２３がＨＬ細胞株の表面にも発現されることが見出されたことを示す（ＣＤ３０は、ＨＬの標準マーカーとして使用される）。
【図２Ａ−２Ｇ】図２Ａは、末梢血単球から分化したヒト正常ドナーマクロファージをＨＤＬＭ−２細胞又はＩＬ−４（Ｍ２陽性対照）又は対照急性リンパ芽球性白血病細胞株（ＮＡＬＭ−６）と共培養したことを示す。ＨＬリンパ腫細胞（ＨＤＬＭ−２）は、２４時間培養後にマクロファージをＭ２表現型（ＣＤ１６３＋ＣＤ２０６＋）に偏向させることができる。図２Ｂは、フローサイトメトリーによりＭ２偏向マクロファージ（ＩＬ−４）がＣＤ１２３＋であることを示す。図２Ｃは、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより示されるように、Ｍ２偏光マクロファージ（ＩＬ−４）が抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体増殖を阻害し得ることを示す。図２Ｄは、ＣＦＳＥ希釈アッセイ及び５日目の絶対Ｔ細胞数によって示されるように、ＨＬ偏光マクロファージがＣＡＲＴ１９増殖を強く阻害することを示す（図２Ｅ）。図２Ｆは、マクロファージとのＨＬ細胞（ＨＤＬＭ−２）の共培養物の上清中に存在するサイトカインのＬｕｍｉｎｅｘ分析が対照と比較して高レベルのＩＬ−１３を明らかにすることを示す。図２Ｇは、減少したＰＤ−Ｌ１発現によって示されるように、抗ＩＬ−１３抗体によるＩＬ−１３の遮断がＨＬ駆動Ｍ２偏向を回復させたことを示す。
【図３Ａ−３Ｆ】図３Ａは、ＨＬ細胞（ＨＤＬＭ−２）をＣＡＲＴ１２３と４〜６時間共培養したことを示す。ＣＡＲ＋細胞は、高レベルの脱顆粒マーカーＣＤ１０７Ａを発現し、ＩＦＮγ、ＩＬ−２及びＴＮＦαのような細胞内サイトカインを産生したが、ＣＡＲ−Ｔ細胞をしなかった。図３Ｂは、ＣＡＲＴ１２３がＨＬ細胞に対して用量依存的に強力な細胞毒性を発揮することを示す。図３Ｃは、ＨＬ細胞（ＨＤＬＭ−２）がＣＡＲＴ１２３又は対照ＵＴＤと長期間共培養されたことを示す。２０日目に、ＵＴＤではなくＣＡＲＴ１２３がＨＬ細胞を殺傷して増殖した。図３Ｄは、ＣＡＲＴ１２３又はＵＴＤをＨＬ細胞株（又は陽性及び陰性対照）と５日間共培養したことを示す。ＣＡＲＴ１２３は、絶対数及びＣＦＳＥ希釈として有意な増殖を示したが（図３Ｅ）、ＵＴＤ対照を示さなかった。図３Ｆは、ＨＬ細胞がＣＡＲＴ１２３を刺激したが、ＵＴＤ細胞を刺激せず、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＭＩＰ１β及びＴＮＦαを含む複数のサイトカインを放出したことを示す。これらの図において、Ｅ：Ｔ＝エフェクター：標的細胞比である。
【図４Ａ−４Ｄ】図４Ａは、ＨＬに対してＣＤ１２３  ＣＡＲＴを試験するマウス実験の実験概要を示す。２×１０６個のルシフェラーゼ陽性ＨＤＬＭ−２細胞をＮＳＧマウスに静脈内注射し、腫瘍生着を生物発光造影により監視した。４２日目に、無処置、２×１０６個の対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）、又は２×１０６個のＣＡＲＴ１２３を受けるようにマウスを無作為に分けた。図４Ｂは、ＣＡＲＴ１２３を投与されたマウス（対照では投与されなかった）が長期の疾患寛解（＞２５０日）で完全応答を経験したことを示す。図４Ｃは、ＣＡＲＴ１２３処置マウスが対照と比較して有意に長い全生存を有することを示す。図４Ｄは、ＣＡＲ１２３  Ｔ細胞が生着し、増殖し、腫瘍を除去した後に末梢血から消失することを示す。ＣＡＲＴ１２３処置マウスのＰＢ中のＴ細胞は、ＣＡＲの高発現を伴うＣＤ８及びＣＤ４の両方であった。
【図５Ａ−５Ｄ】図５Ａは、ＨＬを有するマウスにおける長期免疫記憶の確立についての実験概要を示す。先にＣＡＲＴ１２３で処置され、且つ長期寛解を経験しているマウスをＨＬ細胞（ＨＤＬＭ−２）で２５０日目に再負荷した。対照として、腫瘍ナイーブ群のマウスにも腫瘍を注射した。図５Ｂは、腫瘍ナイーブマウスではＨＬ細胞のみが生着及び増殖し、長期生存マウスが疾患の増殖を抑制できたことを示す図である。図５Ｃは、以前にＣＡＲＴ１２３で処置したマウスにおいて観察されたＣＡＲＴ１２３細胞の再増殖を示す。図５Ｄは、ＣＡＲＴ１２３への先の曝露でマウスにおいて全生存の改善が観察されたことを示す。
【図６Ａ−６Ｃ】図６Ａは、５日間のＣＦＳＥ増殖において、ＣＡＲＴ１２３がＨＬ偏向マクロファージに対して完全に耐性であることを示す。図６Ｂは、位相差顕微鏡（２０Ｘ）及びフローサイトメトリーによってそれぞれ示されるように、ＣＡＲＴ１２３細胞が急速に（１日目）Ｍ２マクロファージを認識し、それらの周囲でクラスター形成し、５日目までにそれらを除去することを示す。図６Ｃは、対照ＣＡＲＴ１９細胞とは対照的に、ＣＡＲＴ１２３もＨＬ偏向Ｍ２マクロファージの存在下でサイトカインを分泌できたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【００８０】
用語「プロＭ２マクロファージ分子」は、単独で又は他の分子と組み合わせてマクロファージのＭ２表現型への偏向に寄与する分子を指す。プロＭ２マクロファージ分子の非限定的な例には、サイトカインＩＬ−１３（ＯＭＩＭ  Ａｃｃ．Ｎｏ．１４７６８３；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｏ．３５９６；Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ．Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ３５２２５）、ＩＬ−４（ＯＭＩＭ  Ａｃｃ．Ｎｏ．１４７７８０；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｏ．３５６５；Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ．Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ０５１１２）、ＣＳＦ−１（Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｏ．１４３５；Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ．Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ０９６０３）及び／又はＩＬ−１０（ＯＭＩＭ  Ａｃｃ．Ｎｏ．１２４０９２；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｏ．３５８６；Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ．Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ２２３０１）が含まれる。
【００８１】
用語「プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤」は、プロＭ２マクロファージ分子の発現又は機能、例えば受容体結合機能を阻害する分子を指す。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤には、小分子、抗体分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ又は遺伝子編集系、例えばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の例には、ＩＬ−１３の阻害剤が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の別の例には、ＩＬ−４の阻害剤が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の別の例には、ＩＬ−１３Ｒα１の阻害剤（Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｏ．３５９７；Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ．Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ７８５５２）が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の別の例には、ＩＬ−１０の阻害剤が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の別の例には、ＣＳＦ−１の阻害剤が含まれる。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤に関する更なる詳細は、以下に提供される。実施形態において、プロＭ２マクロファージの阻害剤は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の機能、例えば阻害機能を阻害する。
【００８２】
用語「腫瘍関連マクロファージ」又は「ＴＡＭ」は、典型的には単球又は内在性組織マクロファージに由来するマクロファージ系統の細胞を指し、これは、ごく近接して又は腫瘍塊内、例えば腫瘍間質内に見出される。
【００８３】
用語「骨髄由来抑制細胞」又は「ＭＤＳＣ」は、ごく近接して又は腫瘍塊内に、例えば腫瘍間質内に見出される骨髄由来細胞を指す。
【００８４】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
【００８５】
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
【００８６】
用語「キメラ抗原受容体」又は代わりに「ＣＡＲ」は、一連のポリペプチド、典型的には最も単純な実施形態で２ポリペプチドを指し、免疫エフェクター細胞にあるとき、細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び細胞内シグナル産生を与える。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、下に定義されるような、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激性分子由来の機能的シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激性分子を含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称する）を含む。いくつかの態様において、一連のポリペプチドは、互いに隣接しており、例えば同じポリペプチド鎖中にある（例えば、キメラ融合タンパク質を含む）。いくつかの実施形態において、一連のポリペプチドは、互いに隣接しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖にある。いくつかの実施形態において、一連のポリペプチドは、二量体化分子存在下において、互いにポリペプチドを結合できる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。一態様において、刺激性分子は、Ｔ細胞受容体複合体と関係するζ鎖である。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、下に定義するような少なくとも１つの共刺激性分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激性分子は、本明細書に記載の共刺激性分子、例えば４−１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択により、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
【００８７】
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。
【００８８】
本明細書で使用されるとき、用語「ＩＬ−３受容体のαサブユニット」、「ＩＬ３Ｒα」、「ＣＤ１２３」、「ＩＬ３Ｒα鎖」及び「ＩＬ３Ｒαサブユニット」は、同義的に、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＩＬ３Ｒαのアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ  ００２１７４で見付けることができ、ヒトＩＬ３Ｒαをコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ  ００５１９１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ１２３タンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一態様において、ＣＤ１２３タンパク質は、癌細胞上に発現する。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１２３」には、完全長野生型ＣＤ１２３の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質が含まれる。
【００８９】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ１９」は、白血病前駆細胞上に検出可能な抗原決定基である分化クラスター１９タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として見付けることができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８で見付けることができる。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１９」には、完全長野生型ＣＤ１９の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質が含まれる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病及び非ホジキンリンパ腫を含むほとんどのＢ細胞系列癌に発現する。ＣＤ１９を発現する他の細胞は、以下の「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」の定義に提供する。これは、Ｂ細胞前駆細胞の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）を参照されたい。一態様において、ＣＡＲＴの抗原結合部分は、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ１９タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ２０」は、Ｂ細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒトＣＤ２０は、膜貫通４−ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１（ＭＳ４Ａ１）とも称される。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ＿６９０６０５．１及びＮＰ＿０６８７６９．２で見付けることができ、ヒトＣＤ２０の転写変異体１及び３をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ受託番号ＮＭ＿１５２８６６．２及びＮＭ＿０２１９５０．３で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ２０タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ２０タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ２２」は、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、アイソフォーム１〜５ヒトＣＤ２２のアミノ酸配列は、それぞれ受託番号ＮＰ  ００１７６２．２、ＮＰ  ００１１７２０２８．１、ＮＰ  ００１１７２０２９．１、ＮＰ  ００１１７２０３０．１、及びＮＰ  ００１２６５３４６．１で見付けることができ、ヒトＣＤ２２の変異体１〜５をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ受託番号ＮＭ  ００１７７１．３、ＮＭ  ００１１８５０９９．１、ＮＭ  ００１１８５１００．１、ＮＭ  ００１１８５１０１．１、及びＮＭ  ００１２７８４１７．１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部  分は、ＣＤ２２タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ２２タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、用語「ＲＯＲ１」は、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＲＯＲ１のアイソフォーム１及び２前駆体のアミノ酸配列は、それぞれ受託番号ＮＰ＿００５００３．２及びＮＰ＿００１０７７０６１．１で見付けることができ、それらをコードするｍＲＮＡ配列は、それぞれ受託番号ＮＭ＿００５０１２．３及びＮＭ＿００１０８３５９２．１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＲＯＲ１タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＲＯＲ１タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【００９３】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ３３」は、白血病細胞上並びに骨髄細胞系列の正常前駆細胞上に検出可能な抗原決定基である分化クラスター３３タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０１３８として見付けることができ、ヒトＣＤ３３をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１７７２．３で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ３３タンパク質又はその断片の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一態様において、ＣＤ３３タンパク質は、癌細胞上に発現する。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ３３」は、完全長野生型ＣＤ３３の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質を含む。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、用語「ＢＣＭＡ」は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９としても知られる）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、主に最終分化したＢ細胞、例えば記憶Ｂ細胞、及び形質細胞上に発現する。そのリガンドは、ＴＮＦファミリーのＢ細胞アクティベータ（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる。ＢＣＭＡは、長期体液性免疫を維持するため形質細胞の生存を媒介することに関与する。ＢＣＭＡの遺伝子は、１６番染色体にコードされ、１８４アミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１１８３．２）をコードする９９４ヌクレオチド長の一次ｍＲＮＡ転写物（ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１９２．２）を産生する。ＢＣＭＡ遺伝子座に由来する第２のアンチセンス転写物について記載されており、これは、ＢＣＭＡ発現の調節において役割を果たし得るものである。（Ｌａａｂｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９４，２２：１１４７−１１５４）。更なる転写変異体が記載されているが、有意性は不明である（Ｓｍｉｒｎｏｖａ  ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，４５（４）：１１７９−１１８３。ＴＶ４としても知られる第２のアイソフォームが同定されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別名Ｑ０２２２３−２）。本明細書で使用されるとき、「ＢＣＭＡ」は、完全長野生型ＢＣＭＡの突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質を含む。
【００９５】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＬＬ−１」は、白血病前駆細胞上及び正常免疫細胞上に検出可能な抗原決定基であるＣ型レクチン様分子−１を指す。Ｃ型レクチン様１（ＣＬＬ−１）は、ＭＩＣＬ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＥＣ−１、樹状細胞関連レクチン１、及びＤＣＡＬ−２としても知られている。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＬＬ−１のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ５ＱＧＺ９として見付けることができ、ヒトＣＬＬ−１をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ  ００１２０７０１０．１、ＮＭ  １３８３３７．５、ＮＭ  ２０１６２３．３、及びＮＭ  ２０１６２５．１で見付けることができる。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＬＬ−１タンパク質又はその断片の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一実施形態において、ＣＬＬ−１タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【００９６】
用語「ＥＧＦＲ」は、ヒト及び非ヒト形態を含め、任意の哺乳類成熟完全長上皮成長因子受容体を指す。１１８６アミノ酸のヒトＥＧＦＲは、Ｕｌｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３０９：４１８−４２５（１９８４））並びにＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ１２５２５３及びＳｗｉｓｓＰｒｏｔ受託番号Ｐ００５３３−２に記載されている。
【００９７】
用語「ＥＧＦＲｖＩＩＩ」は、上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩを指す。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ヒト腫瘍に観察されるが、正常組織にほとんど観察されないＥＧＦＲの最も一般的な変異体である。このタンパク質は、ＥＧＦＲの細胞外ドメイン内のエクソン２〜７のインフレーム欠失及びエクソン１及び８のジャンクションにおける新規グリシン残基の生成に起因して、それにより腫瘍特異的エピトープが作り出されることによって生じる。ＥＧＦＲｖＩＩＩはＧＢＭの２４％〜６７％に発現するが、正常組織に発現しない。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ＩＩＩ型突然変異体、Δ−ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｄｅ２−７、及びΔＥＧＦＲとしても知られ、米国特許第６，４５５，４９８号明細書、同第６，１２７，１２６号明細書、同第５，９８１，７２５号明細書、同第５，８１４，３１７号明細書、同第５，７１０，０１０号明細書、同第５，４０１，８２８号明細書、及び同第５，２１２，２９０号明細書に記載される。ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現は、染色体欠失によって生じることもあり、また異常な選択的スプライシングによって生じることもある。Ｓｕｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：８６０２−８６０６を参照されたい。
【００９８】
本明細書で使用されるとき、用語「メソテリン」は、巨核球増強因子（ＭＰＦ）と称される、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合及びアミノ末端３１ｋＤａシェディング断片によって細胞膜にアンカリングされる４０ｋＤａタンパク質、メソテリンを指す。両方の断片ともＮ−グリコシル化部位を含む。この用語は、「可溶性メソテリン／ＭＰＦ関連」とも称される４０ｋＤａカルボキシル末端断片の可溶性スプライス変異体も指す。好ましくは、この用語は、例えば、細胞膜上、例えば癌細胞膜上に発現する通りのＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０３５１２．１のヒトメソテリン及びその天然で切断された一部分を指す。
【００９９】
用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質、又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであり得、及び天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
【０１００】
用語「抗体断片」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布による）能力を保持する抗体の少なくとも一部分を指す。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線形抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２個のＦａｂ断片及び単離ＣＤＲを含む二価断片などの抗体断片から形成される多特異性抗体又は抗体の他のエピトープ結合断片を含むが、これらに限定されない。抗原結合断片は、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
【０１０１】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、合成リンカー、例えば短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得るか又はＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【０１０２】
抗体又はその抗体断片を含む本発明のＣＡＲの一部分は、種々の形態で存在し得、抗原結合ドメインは、例えば、シングルドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体又は二重特異性抗体を含め、連続したポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。ある所与のＣＤＲの厳密なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）により記載のもの又はその組み合わせを含む多くの周知のスキームのいずれかを使用して決定できる。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体断片を包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数個のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数個のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
【０１０４】
本発明のＣＡＲの抗体又は抗体その断片を含む部分は、例えば、単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体又は二機能性抗体を含む、抗原結合ドメインが連続的ポリペプチド鎖の一部として発現される多様な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
【０１０５】
用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
【０１０６】
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【０１０７】
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
【０１０８】
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生、又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用される通りの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること、及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得、又は生体試料から得られ得、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少、又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。用語「抗腫瘍効果」は、例えば、腫瘍体積減少、腫瘍細胞数減少、腫瘍細胞増殖減少又は腫瘍細胞生存減少を含むが、これらに限定されない種々の手段により顕在化され得る生物学的効果を指す。
【０１０９】
用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
【０１１０】
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
【０１１１】
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
【０１１２】
用語「癌」は、異常細胞の無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【０１１３】
語句「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」は、例えば、癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患、又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌状態を含む、ＣＤ１９の発現に関連する疾患、又はＣＤ１９を発現するか若しくは任意の時点で発現していた細胞に関連する状態、又はＣＤ１９を発現する細胞に関連する非癌関連の適応症を含むが、これらに限定されるものではない。疑義を回避するために、ＣＤ１９の発現に関連する疾患は、例えば、ＣＤ１９を標的とする分子（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）であるが、かつてはＣＤ１９を発現していた分子を用いた処置により、ＣＤ１９発現が下方制御されているため、現在ＣＤ１９を発現していない細胞に関連する状態を含み得る。一態様において、ＣＤ１９の発現と関係する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＣＤ１９の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。更に、ＣＤ１９発現の発現に関連する疾患には、限定されないが、例えばＣＤ１９の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１１４】
語句「Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患」は、例えば、癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患、又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌状態を含む、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２若しくはＲＯＲ１の１つ以上の発現に関連する疾患、又はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２若しくはＲＯＲ１の１つ以上を発現するか若しくは任意の時点で発現していた細胞に関連する状態、又はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２若しくはＲＯＲ１の１つ以上を発現する細胞に関連する非癌関連の適応症を含むが、これらに限定されるものではない。疑義を回避するために、Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患は、例えば、Ｂ細胞抗原を標的とする分子（例えば、Ｂ細胞標的ＣＡＲ）であるが、かつてはＢ細胞抗原を発現していた分子を用いた処置により、抗原発現が下方制御されているため、現在Ｂ細胞抗原を発現していない細胞に関連する状態を含み得る。語句「Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患」は、本明細書に記載のように、ＣＤ１９の発現に関連する疾患を含む。
【０１１５】
本明細書で使用される通りの語句「ＣＤ１２３の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＤ１２３の発現に関連する疾患又はＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）を発現する細胞に関連する病態、又はＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。一態様において、ＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、疾患には、ＡＭＬ、ＡＬＬ、ヘアリー細胞白血病、前リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（Ｂ細胞急性リンパ性白血病、ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、組織球性障害（例えば、肥満細胞障害又は芽球性形質細胞様樹状細胞新生物）、肥満細胞障害、例えば全身性肥満細胞症又は肥満細胞性白血病などが含まれる。ＣＤ１２３発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＤ１２３の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ１２３の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。
【０１１６】
本明細書で使用される通りの語句「ＣＤ３３の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する疾患又はＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する病態、又はＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＤ３３の発現に関連する疾患には、例えばＣＤ３３を標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＣＤ３３阻害薬による治療によって例えばＣＤ３３発現が下方制御されているため、現在ではＣＤ３３を発現しないが、かつてはＣＤ３３を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌には、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、骨髄線維症及び骨髄増殖性新生物、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、前リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物などが含まれる。ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。実施形態において、ＣＤ３３の発現に伴う非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１１７】
語句「ＢＣＭＡの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する疾患又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する病態、又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、例えばＢＣＭＡを標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡ阻害薬による治療によってＢＣＭＡ発現が下方制御されているため、現在ではＢＣＭＡを発現しないが、かつてはＢＣＭＡを発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、分化型形質細胞Ｂ細胞の悪性腫瘍である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＢＭＣＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。一部の実施形態において、癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、又は膠芽腫である。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）が含まれる。ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患、例えば本明細書に記載される癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは療法抵抗性前立腺癌、又は転移性前立腺癌）、膵癌、又は肺癌が含まれる。
【０１１８】
ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）に関連する非癌関連病態には、ウイルス感染症、例えばＨＩＶ、真菌感染症、例えばＣ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ又はループス）、尋常性天疱瘡、及びシェーグレン症候群、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、粘膜免疫に関連する移植関連アロ特異的免疫障害、及び体液性免疫が重要な場合の生物製剤（例えば、第ＶＩＩＩ因子）に対する望ましくない免疫応答が含まれる。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に伴う非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１１９】
語句「ＣＬＬ−１の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＬＬ−１を発現する細胞に関連する疾患又はＣＬＬ−１を発現する細胞に関連する病態、又はＣＬＬ−１（例えば、野生型又は突然変異体ＣＬＬ−１）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＬＬ−１の発現に関連する疾患には、例えばＣＬＬ−１を標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＣＬＬ−１阻害薬による治療によって例えばＣＬＬ−１発現が下方制御されているため、現在ではＣＬＬ−１を発現しないが、かつてはＣＬＬ−１を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＬＬ−１の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌には、限定されないが、白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病及び骨髄異形成症候群など）及びリンパ腫（多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び小細胞型及び大細胞型濾胞性リンパ腫など）を含めた悪性リンパ球増殖性病態が含まれる。ＣＬＬ−１発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＬＬ−１の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＬＬ−１の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１２０】
本明細書で使用される通りの用語「ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば膠芽腫（膠芽腫幹細胞を含む）、乳癌、卵巣癌、及び非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、髄芽腫、結腸直腸癌、前立腺癌、及び膀胱癌などの様々な癌の腫瘍細胞を含めた、ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患又はＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する細胞に関連する病態が含まれる。特定の理論又は機構に拘束されるものではないが、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに対する抗原特異的応答を誘発することにより、以下：ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現腫瘍細胞の標的化及び破壊、腫瘍の減少又は消失、腫瘍部位への免疫細胞の浸潤促進、及び抗腫瘍応答の亢進／延長の１つ以上を提供すると考えられる。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、正常な（即ち非癌性の）組織において検出可能なレベルで発現しないため、本発明のＣＡＲは、有利には、正常組織及び細胞の標的化／破壊を実質的に回避することが企図される。
【０１２１】
本明細書で使用される通りの語句「メソテリンの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は中皮過形成などの前癌状態を含めた、メソテリンの発現に関連する疾患又はメソテリンを発現する細胞に関連する病態、又はメソテリンを発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。メソテリンを発現する様々な癌の例には、限定されないが、中皮腫、卵巣癌、膵癌などが含まれる。
【０１２２】
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
【０１２３】
用語「刺激」は、刺激性分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体又はＣＡＲ）とその同族のリガンド（又はＣＡＲの場合には腫瘍抗原）との結合によって誘導される一次応答を指し、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達、又は適切なＮＫ受容体若しくはＣＡＲのシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達などのシグナル伝達事象を媒介する。刺激は、特定の分子の発現変化を媒介することができる。
【０１２４】
用語「刺激性分子」は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現され、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について、免疫細胞の活性化を刺激的に調節する細胞質シグナル伝達配列を提供する分子を指す。一態様において、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドを載せたＭＨＣ分子との結合により開始される一次シグナルであり、これは、増殖、活性化、分化などを含むが、これらに限定されないＴ細胞応答の媒介をもたらす。刺激性方向に作用する初代細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例には、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２由来のものが含まれるが、これらに限定されない。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号１７として提供される配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号４３に提供される通りの配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１２５】
用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
【０１２６】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。
【０１２７】
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激、又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル、又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
【０１２８】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
【０１２９】
用語「ζ」若しくは代わりに「ζ鎖」、「ＣＤ３−ζ」又は「ＴＣＲ−ζ」は、ＧｅｎＢａｎ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義され、「ζ刺激ドメイン」若しくは代わりに「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ−ζ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なζ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基又はその機能性誘導体として定義される。一態様において、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４又はその機能性オルソログである非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を含む。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号１７として提供される配列である。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号４３として提供される配列である。
【０１３０】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定されないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激性分子には、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体並びにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような共刺激性分子の更なる例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と選択的に結合するリガンドを含む。
【０１３１】
共刺激性細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内部分であり得る。共刺激性分子は、以下のタンパク質ファミリーに代表され得る：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）及び活性化ＮＫ細胞受容体。そのような分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが含まれる。
【０１３２】
細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はその機能性断片、又はその誘導体を含み得る。
【０１３３】
用語「４−１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、及び「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義される。一態様において、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号１６として提供される配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１３４】
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β  Ｔ細胞及びγ／δ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞、及び骨髄由来食細胞が挙げられる。免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、対象に直接由来し得るか、又は対象由来の細胞から分化し得る（例えば、幹細胞、例えば胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から分化し得る）。
【０１３５】
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
【０１３６】
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖、及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
【０１３７】
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
【０１３８】
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載される通りの化合物、製剤、材料、又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。非限定的な一実施形態において、用語「治療有効量」は、対象に投与した場合、（１）（ｉ）ＢＴＫによって媒介される、又は（ｉｉ）ＢＴＫ活性に関連した、又は（ｉｉｉ）ＢＴＫの活性（正常又は異常）を特徴とする状態又は障害若しくは疾患の少なくとも部分的な軽減、阻害、予防及び／又は改善、或いは（２）ＢＴＫの活性の低下又は阻害、或いは（３）ＢＴＫの発現の低下又は阻害に有効である、本明細書に記載の化合物の量を指す。別の非限定的な一実施形態において、用語「治療有効量」は、細胞、組織又は非細胞性生物学的物質若しくは培地に投与した場合、少なくとも部分的なＢＴＫの活性の低下若しくは阻害又は部分的若しくは完全なＢＴＫの発現の低下若しくは阻害に有効である、本明細書に記載の化合物の量を指す。
【０１３９】
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の、又はその内部で産生される任意の材料を指す。
【０１４０】
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
【０１４１】
用語「発現」は、プロモーターによってドライブされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。
【０１４２】
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１４３】
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
【０１４４】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１４５】
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供される通りの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
【０１４６】
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
【０１４７】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体断片の性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、及びＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
【０１４８】
「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体断片などの免疫グロブリンを指す。
【０１４９】
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができ、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
【０１５０】
本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。
【０１５１】
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
【０１５２】
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
【０１５３】
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、ある詳細な核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択の（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作成することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０１５４】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【０１５５】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０１５６】
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
【０１５７】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１５８】
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１５９】
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１６０】
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整（配列番号３１）数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である（配列番号２８））を含む。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）４（配列番号２９）又は（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）３（配列番号３０）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号３１）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
【０１６１】
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
【０１６２】
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
【０１６３】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現用のコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０〜５０００（配列番号３０）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
【０１６４】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分、又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行、及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
【０１６５】
本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１６６】
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
【０１６７】
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。
【０１６８】
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
【０１６９】
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解、又は根絶によって達成される。
【０１７０】
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の予防又はそれに対する予防的治療を意味する。
【０１７１】
本発明との関連において、「腫瘍抗原」、又は「過剰増殖性障害抗原」、又は「過剰増殖性障害に関連する抗原」は、特異的な過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害抗原は、限定されないが、原発性又は転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌及び腺癌、例えば乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵癌などを含めた癌に由来する。
【０１７２】
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
【０１７３】
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在するコグネイト結合パートナー（例えば、刺激腫瘍抗原）タンパク質を認識し、結合する抗体、又はリガンドであって、しかし、試料中の他の分子は、実質的に認識又は結合しない、抗体又はリガンドを指す。
【０１７４】
「制御可能キメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、本明細書で使用される場合、一連のポリペプチド、典型的には最も単純な実施形態で２ポリペプチドを指し、ＲＣＡＲＸ細胞にある場合、ＲＣＡＲＸ細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び制御可能細胞内シグナル産生又は増殖を与え、これは、ＲＣＡＲＸ細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。ＲＣＡＲ細胞は、少なくとも一部には、抗原結合ドメインにより結合される抗原を含む標的細胞に対する特性を提供することを抗原結合ドメインに依存する。一実施形態において、ＲＣＡＲは、二量体化分子存在下、細胞内シグナル伝達ドメインを抗原結合ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。
【０１７５】
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
【０１７６】
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、その断片、又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。
【０１７７】
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
【０１７８】
「不応性」は、本明細書で使用されるとき、治療に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、不応性癌は、治療の開始前又は開始時点で治療に抵抗性であり得る。他の実施形態において、不応性癌は、治療中に不応性になり得る。不応性癌は、抵抗性癌とも称される。
【０１７９】
本明細書で使用される「完全レスポンダー」は、処置に対する完全応答、例えば完全寛解を示す、疾患、例えば癌を有する対象を指す。完全応答は、例えば、本明細書に記載されているようなＣｈｅｓｏｎ基準を使用して同定され得る。
【０１８０】
本明細書で使用される「部分的レスポンダー」は、処置に対する部分的応答、例えば部分的寛解を示す、疾患、例えば癌を有する対象を指す。部分的応答は、例えば、Ｃｈｅｓｏｎ基準を使用して同定され得る。
【０１８１】
本明細書で使用される「非レスポンダー」は、処置に応答を示さない、疾患、例えば癌を有する対象、例えば安定した疾患又は進行した疾患を有する患者を指す。非レスポンダーは、例えば、本明細書に記載されているようなＣｈｅｓｏｎ基準を使用して同定され得る。
【０１８２】
本明細書で使用される用語「再発」は、初期の応答性期間（例えば、完全応答又は部分応答）後の疾患（例えば、癌）の再出現を指す。応答性の最初の期間は、癌細胞のレベルの、ある閾値未満、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満への低下を含み得る。再出現は、癌細胞のレベルの、ある閾値を越える、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を超える増加を含み得る。再発は、例えば、本明細書に記載のＣｈｅｓｏｎ基準を用いて同定され得る。
【０１８３】
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、及び９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％及び９８〜９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０１８４】
説明
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、固形腫瘍上の抗原又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍上の抗原を標的とするＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を使用して癌などの疾患（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍）を処置するための組成物及び使用の方法が本明細書に提供される。方法は、とりわけ、本明細書に記載のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）をプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば抗ＩＬ−１３抗体、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−１３Ｒα１抗体などの別の薬剤と組み合わせて投与することを含む。
【０１８５】
本発明は、少なくとも部分的には、ＣＡＲ治療（例えば、固形腫瘍上の抗原又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍上の抗原を標的とするＣＡＲ）の組み合わせ、及びプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の高い有効性を裏付ける実験を提供する。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤とＣＡＲ治療との組み合わせは、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の単剤療法若しくはＣＡＲ発現細胞の用量又はその両方と比較して併用療法の有効性を高め得る。これらの有益な効果は、例えば、有効性を維持しながら、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤若しくはＣＡＲ発現細胞又はその両方の用量低下を可能にし得る。本明細書における結果は、広範囲の癌、例えば固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍に適用可能である。例えば、ホジキンリンパ腫などのリンパ腫は、ＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連することが知られており、これは、前記リンパ腫、例えばＣＤ１２３  ＣＡＲに対するＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の機能を阻害し得る。ＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるものを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＤ１２３表面発現を伴う癌（ホジキンリンパ腫など）を標的とする。代わりに又はＣＤ１２３  ＣＡＲと組み合わせて、他の任意のリンパ腫標的ＣＡＲを本明細書に記載の併用療法に使用することができる。従って、ＣＡＲ治療（例えば、ＣＤ１２３  ＣＡＲ又はリンパ腫抗原を標的とする他のＣＡＲの１つ以上）とプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書中に記載されるもの）との組み合わせは、広範囲のリンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）の処置に適当である。同様に、固形腫瘍上の抗原を標的とするＣＡＲ、例えば本明細書に記載のもの、例えばメソテリン又はＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、抗原の表面発現を有する癌を標的とする。従って、ＣＡＲ治療（例えば、１つ以上の固形腫瘍標的ＣＡＲ、例えばＣＡＲ標的メソテリン又はＥＧＦＲｖＩＩＩ、例えば本明細書に記載のもの）と、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤（例えば、本明細書中に記載されるもの）との組み合わせは、広範囲の固形腫瘍、例えばメソテリン上での発現に関連する疾患又はＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患の処置に適している。
【０１８６】
本発明によると、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ発現腫瘍エフェクター細胞、例えば本明細書に記載されるものの、癌、例えば固形腫瘍又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍に対する阻害、例えばマクロファージ媒介性阻害を低減し得る。理論に拘束されることを望まないが、ホジキンリンパ腫などの特定のリンパ腫及び固形腫瘍は、ＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する癌性細胞の塊を特徴とする。ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、これらの密集した塊を貫通することが困難である場合があり、それらの抗癌機能は、阻害性腫瘍微小環境により損なわれ得、例えばＭＤＳＣ又はＴＡＭにより阻害され得る。従って、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＣＡＲ発現細胞療法と組み合わせて投与され得、これにより、癌細胞は、ＣＡＲ発現細胞に対してより脆弱になる。
【０１８７】
一態様において、本発明は、固形腫瘍又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原（例えば、ホジキンリンパ腫の場合、抗原は、例えば、ＣＤ１２３である）への特異的結合のために操作された抗体又は抗体断片を含む多数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。一態様において、本発明は、ＣＡＲを発現するように操作された細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、ここで、ＣＡＲ  Ｔ細胞（「ＣＡＲＴ」）は、抗癌特性を示す。一態様において、細胞は、ＣＡＲで形質転換され、ＣＡＲは、細胞表面に発現される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクターで形質導入される。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかのこのような実施形態において、細胞は、ＣＡＲを安定に発現し得る。別の実施形態において、細胞（例えば、Ｔ細胞）に、ＣＡＲをコードする核酸、例えばｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡをトランスフェクトする。いくつかのこのような実施形態において、細胞は、ＣＡＲを一過性に発現し得る。
【０１８８】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ｓｃＦｖ抗体断片である。一態様において、そのような抗体断片は、それらが同等の結合親和性を保持し、例えば、それらが、由来するＩｇＧ抗体と同程度の親和性で同じ抗原に結合するという点で機能的である。一態様において、このような抗体断片は、当業者に理解されるように、免疫応答活性化、その標的抗原からのシグナル伝達開始阻害を含むが、これらに限定されない生物学的応答を提供するという点で機能的である。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、それが由来するｓｃＦｖのマウス配列と比較してヒト化されたｓｃＦｖ抗体断片である。いくつかの態様において、本発明の抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に取り込まれる。
【０１８９】
一態様において、ＣＡＲ又は本発明のＣＡＲの結合ドメイン、例えばヒト化ｓｃＦｖ部分は、配列が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されているトランス遺伝子によってコードされる。一態様において、本発明のＣＡＲコンストラクト全体は、配列全体が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されているトランス遺伝子によってコードされる。コドン最適化とは、コードＤＮＡにおける同義コドン（即ち同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種で偏っているという発見を指す。かかるコドン縮重により、同一のポリペプチドが種々のヌクレオチド配列によってコードされることが可能になる。種々のコドン最適化方法が当技術分野において公知であり、例えば少なくとも米国特許第５，７８６，４６４号明細書及び同第６，１１４，１４８号明細書に開示される方法が挙げられる。
【０１９０】
一態様において、本発明のＣＡＲは、特異的抗体の抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達分子と組み合わせる。例えば、いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達分子は、ＣＤ３−ζ鎖、４−１ＢＢ及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール並びにそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０１９１】
更に、本発明は、ＣＡＲ組成物及び数ある疾患の中で、癌又はＣＡＲによって認識される標的抗原を発現する細胞若しくは組織が関与するあらゆる悪性腫瘍若しくは自己免疫性疾患を処置するための医薬又は方法におけるそれらの使用を提供する。
【０１９２】
一態様において、本発明のＣＡＲを標的抗原発現正常細胞の根絶に使用でき、それにより細胞移植前の細胞コンディショニング治療としての使用が適用可能である。一態様において、標的抗原発現正常細胞はＣＤ１９発現正常幹細胞であり、細胞移植は幹細胞移植である。
【０１９３】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、ここで、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞（「ＣＡＲＴ」）は、抗癌特性を示す。例えば、ホジキンリンパ腫に対する抗癌性に関して、好ましい抗原は、ＣＤ１２３である。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、複数の抗原結合断片を含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む複数の抗体断片を含む。
【０１９４】
一態様において、ＣＡＲは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナルドメイン及び任意のこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。一態様において、ＣＡＲは、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）又はＣＤ２８以外の１つ以上の共刺激性分子である。
【０１９５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明は、ＣＡＲをコードする配列を含む組換えＤＮＡ構築物を包含し、ここで、ＣＡＲは、抗原（例えば、固形腫瘍又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）に特異的に結合する抗体又は抗体断片を含み、抗体断片の配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と連続し、且つ同じリーディングフレーム内にある。細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激性シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインの少なくとも一部を含むＣＡＲの部分を指す。一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載のマウス抗体又は抗体断片である。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片である。
【０１９６】
一態様において、例示的なＣＡＲ構築物、例えば本明細書に記載のものは、任意のリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン及び細胞内刺激ドメインを含む。一態様においてＣＡＲ構築物の例は、任意のリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン及び細胞内刺激ドメインを含む。本発明のマウス、完全ヒト及び／又はヒト化ｓｃＦｖドメインを含有する特定のＣＡＲ構築物を以下に提供する。
【０１９７】
例示的なリーダー配列は、配列番号２として提供される。ヒンジ／スペーサー配列の例は、配列番号４、又は配列番号６、又は配列番号８、又は配列番号１０として提供される。例示的な膜貫通ドメイン配列は、配列番号１２として提供される。例示的な４−１ＢＢタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの配列は、配列番号１４として提供される。例示的なＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号１６として提供される。例示的なＣＤ３ζドメイン配列は、配列番号１８又は配列番号２０として提供される。
【０１９８】
一態様において、本発明は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む組換え核酸コンストラクトを包含し、核酸分子は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある、例えば本明細書に記載される抗原結合ドメインをコードする核酸配列を含む。一態様において、本発明は、ＣＡＲをコードする導入遺伝子を含む組換え核酸コンストラクトを包含し、核酸分子は、本明細書に記載の抗原結合ドメインをコードする核酸配列を含む。ＣＡＲに使用し得る例示的細胞内シグナル伝達ドメインには、限定されないが、例えばＣＤ３−ζ、ＣＤ２８、４−１ＢＢなどの１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。一部の例では、ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ２８、４−１ＢＢなどの任意の組み合わせを含み得る。
【０１９９】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準的な技法を用いて、例えばその遺伝子を発現する細胞からのライブラリをスクリーニングすることによるか、それを含むことが知られるベクターから遺伝子を誘導することによるか、又はそれを含む細胞及び組織から直接単離することによるなど、当技術分野において公知の組換え方法を用いて得ることができる。代わりに、目的の核酸はクローニングでなく、むしろ合成的に作製することができる。
【０２００】
本発明は、細胞に直接形質導入することのできるＣＡＲを発現するレトロウイルス及びレンチウイルスベクターコンストラクトを含む。
【０２０１】
本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることのできるＲＮＡコンストラクトも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法には、特別に設計したプライマーによる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリＡ付加が含まれ、それにより、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させようとする核酸、及びポリＡテールを含むコンストラクト、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３２）（例えば、配列番号３２〜３４又は配列番号３７〜３８）が提供される。このように作製されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一実施形態において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。ある実施形態において、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターは、電気穿孔によってＴ細胞に形質導入される。
【０２０２】
本明細書に記載のＣＡＲ分子の一部となり得る様々な成分の非限定的な例の配列を表１に列挙する。表中、「ａａ」は、アミノ酸を表し、「ｎａ」は、対応するペプチドをコードする核酸を表す。
【０２０３】
【表１】
2019527696.tif 000002
【０２０４】
【表２】
2019527696.tif 000003
【０２０５】
【表３】
2019527696.tif 000004
【０２０６】
【表４】
2019527696.tif 000005
【０２０７】
【表５】
2019527696.tif 000006
【０２０８】
【表６】
2019527696.tif 000007
【０２０９】
抗原結合ドメイン及びＣＡＲ
一態様において、本発明のＣＡＲは、他の場合には抗原結合ドメインと称される標的特異的結合エレメントを含む。部分の選択は、標的細胞の表面を定義するリガンドの種類及び数に依存する。例えば、抗原結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとしての役割を果たすリガンドを認識するように選択され得る。従って、本発明のＣＡＲにおける抗原結合ドメインのリガンドとしての役割を果たし得る細胞表面マーカーの例には、ウイルス、細菌及び寄生虫感染症、自己免疫疾患及び癌細胞に関連するものが含まれる。
【０２１０】
一態様において、所望の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインをＣＡＲに操作することにより、ＣＡＲ媒介性Ｔ細胞応答を目的の抗原に仕向けることができる。
【０２１１】
一態様において、ＣＡＲは、固形腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。一態様において、ＣＡＲは、ＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍、例えばホジキンリンパ腫に発現する腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。
【０２１２】
抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びその機能性断片、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体、及び組換えフィブロネクチンドメインなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のドメインであり得る。
【０２１３】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合する。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合するマウスｓｃＦｖドメイン、例えばＳＳ１又は配列番号４６である。一実施形態では、抗原結合ドメインは、マウスＳＳ１  ｓｃＦｖ由来のヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合するヒト抗体又は抗体断片である。メソテリンに結合する例示的なヒトｓｃＦｖドメイン（及びそれらの配列）及びマウスＳＳ１  ｓｃＦｖを表２に提供する。ＣＤＲ配列には下線が付されている。表２に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ＶＬ及びＶＨは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）（例えば、ＳＳ１  ｓｃＦｖドメインに示されるもの）又はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２９）（例えば、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１０、Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ１３、Ｍ１４、Ｍ１５、Ｍ１６、Ｍ１７、Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１、Ｍ２２、Ｍ２３、又はＭ２４  ｓｃＦｖドメインに示されるもの）を含むリンカーによって結合される。表２に列挙されるｓｃＦｖドメインは、次の配向にある：ＶＬ−リンカー−ＶＨ。
【０２１４】
【表７】
2019527696.tif 000008
【０２１５】
【表８】
2019527696.tif 000009
【０２１６】
【表９】
2019527696.tif 000010
【０２１７】
表２に提供されるメソテリン抗原結合ドメインのｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表３及び軽鎖可変ドメインについて表４に示す。
【０２１８】
【表１０】
2019527696.tif 000011
【０２１９】
【表１１】
2019527696.tif 000012
【０２２０】
例えば、公知の抗体、二特異性分子又はＣＡＲ由来の、任意の公知の抗メソテリン結合ドメインが本発明のＣＡＲにおける使用に適当であり得る。例えば、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載されている抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬであるか又はそれに由来し得る。実施形態において、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第１９９７／０２５０６８号パンフレット、国際公開第１９９９／０２８４７１号パンフレット、国際公開第２００５／０１４６５２号パンフレット、国際公開第２００６／０９９１４１号パンフレット、国際公開第２００９／０４５９５７号パンフレット、国際公開第２００９／０６８２０４号パンフレット、国際公開第２０１３／１４２０３４号パンフレット、国際公開第２０１３／０４０５５７号パンフレット又は国際公開第２０１３／０６３４１９号パンフレットに記載されている抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬであるか又はそれに由来する。
【０２２１】
一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、本明細書に記載の、例えば表２又は４に提供されるメソテリン結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、及び／又は本明細書に記載の、例えば表２又は３に提供されるメソテリン結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、表４に提供されるような任意のアミノ酸配列の１つ、２つ又は全てのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３、及び表３に提供されるような任意のアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３の全てのうちの１つ、２つ、３つを含む。
【０２２２】
一実施形態において、メソテリン抗原結合ドメインは、
（ｉ）（ａ）配列番号１８４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１５９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｉ）（ａ）配列番号１９０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号２０４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２５４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１３２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｖ）（ａ）配列番号１８０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１５５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖ）（ａ）配列番号１８１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１５６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉ）（ａ）配列番号１８２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１５７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号１８３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１５８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号１８６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｘ）（ａ）配列番号１８６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘ）（ａ）配列番号１８７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉ）（ａ）配列番号１８８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１１９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号１８９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２３９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号１９１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号１９２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖ）（ａ）配列番号１９３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉ）（ａ）配列番号１９４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉｉ）（ａ）配列番号１９５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号１９６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｘ）（ａ）配列番号１９７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘ）（ａ）配列番号１９８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉ）（ａ）配列番号１９９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２４９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｉ）（ａ）配列番号２００のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２５０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｉｉ）（ａ）配列番号２０１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２５１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１２９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｖ）（ａ）配列番号２０２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２５２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１３０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、又は
（ｘｘｖ）（ａ）配列番号２０３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２５３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号１３１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１７８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０２２３】
一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、本明細書に（例えば、表２に）記載の軽鎖可変領域及び／又は本明細書に（例えば、表２に）記載の重鎖可変領域を含む。一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、表２に記載するアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、メソテリン結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表２に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表２に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表２に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表２に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２２４】
一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９及び配列番号７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかに少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書、例えば表２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書、例えば表２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーにより結合している。一実施形態において、メソテリン結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号８０）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２２５】
メソテリンに結合するそのような抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載のものは、例えば、メソテリンの発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載のものが処置される本発明の実施形態において有用である。
【０２２６】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。一実施形態において、抗原結合ドメインは、例えば、ｍｕ３１０ＣなどのヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合するマウスｓｃＦｖドメインである。一実施形態では、抗原結合ドメインは、マウスｍｕ３１０Ｃ  ｓｃＦｖ由来のヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する例示的なヒト化ｓｃＦｖドメイン（及びそれらの配列）を表５に提供する。
【０２２７】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、ヒトクローディン６（ＣＬＤＮ６）に結合する。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＬＤＮ６に結合するマウスｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片である。ＣＬＤＮ６に結合する例示的なｓｃＦｖドメイン（及びそれらの配列）を表５に提供する。表５に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ＶＬ及びＶＨは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２９）を含むリンカーにより、例えば次の配向：ＶＬ−リンカー−ＶＨで結合される。
【０２２８】
【表１２】
2019527696.tif 000013
【０２２９】
【表１３】
2019527696.tif 000014
【０２３０】
一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、本明細書に記載の、例えば表５に提供されるＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、及び／又は本明細書に記載の、例えば表５に提供されるＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。
【０２３１】
一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、本明細書に（例えば、表５に）記載の軽鎖可変領域及び／又は本明細書に（例えば、表５に）記載の重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、表５に記載するアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表５に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表５に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表５に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表５に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２３２】
一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８及び配列番号７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかに少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書、例えば表５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書、例えば表５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーにより結合している。一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号８０）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２３３】
一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、本明細書に記載の、例えば表５に提供されるＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、及び／又は本明細書に記載の、例えば表５に提供されるクローディン６結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。
【０２３４】
一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、本明細書に（例えば、表５に）記載の軽鎖可変領域及び／又は本明細書に（例えば、表５に）記載の重鎖可変領域を含む。一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、表５に記載するアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、クローディン６結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表５に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表５に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表５に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表５に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２３５】
ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合するそのような抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載のものは、例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載のものが処置される本発明の実施形態において有用である。
【０２３６】
一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、配列番号９８、配列番号９９及び配列番号１００からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかに少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書、例えば表５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書、例えば表５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーにより結合している。一実施形態において、クローディン６結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号８０）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２３７】
一実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｕｊｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７（４）：１０９８−１１０４（１９８７）；Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４５（６）：２６４２−２６４９（１９８５）、Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ５（９）：１４３０−１４４０（１９８７）、Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １６（９）：３０５３−３０６０（１９９８）、．Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３５（３）：１９９−２０４（１９９２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。いくつかの実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、ｍＡｂ  １４．１８、１４Ｇ２ａ、ｃｈ１４．１８、ｈｕ１４．１８、３Ｆ８、ｈｕ３Ｆ８、３Ｇ６、８Ｂ６、６０Ｃ３、１０Ｂ８、ＭＥ３６．１及び８Ｈ９（例えば、国際公開第２０１２０３３８８５号パンフレット、国際公開第２０１３０４０３７１号パンフレット、国際公開第２０１３１９２２９４号パンフレット、国際公開第２０１３０６１２７３号パンフレット、国際公開第２０１３１２３０６１号パンフレット、国際公開第２０１３０７４９１６号パンフレット及び国際公開第２０１３８５５５２号パンフレットを参照されたい）から選択される抗体の抗原結合部分である。いくつかの実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１００１５０９１０号明細書又は国際公開第２０１１１６０１１９号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分である。
【０２３８】
一実施形態において、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−グリコペプチド抗原又はｓＴｎ−Ｏ−グリコペプチド抗原に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０１７８３６５号明細書、米国特許第８，４４０，７９８号明細書、欧州特許第２０８３８６８Ａ２号明細書、Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０７（２２）：１００５６−１００６１（２０１０）及びＳｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（６）：８６３−８７３（２０１２）に記載される抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２３９】
一実施形態において、ＰＳＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ８９（２）：１３６−１４５（２０１３）、米国特許出願公開第２０１１０２６８６５６号明細書（Ｊ５９１  ＳｃＦｖ）；Ｆｒｉｇｅｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４９（９）：２２２３−２２３２（２０１３）（ｓｃＦｖＤ２Ｂ）；国際公開第２００６１２５４８１号パンフレット（ｍＡｂｓ  ３／Ａ１２、３／Ｅ７及び３／Ｆ１１）に記載されている抗体及び単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ  Ａ５及びＤ７）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４０】
一実施形態において、ＣＤ９７に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第６，８４６，９１１号明細書；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８３（６）：４１２７−４１３４（２００９）に記載されている抗体；又はＲ＆Ｄ：ＭＡＢ３７３４からの抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４１】
一実施形態において、ＴＡＧ７２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１３（４）：１１６３−１１７０（１９９７）に記載されている抗体；及びＡｂｃａｍ  ａｂ６９１の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４２】
一実施形態において、ＣＤ４４ｖ６に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃａｓｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２０）：３４６１−３４７２（２０１３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４３】
一実施形態において、ＣＥＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４３（４）：１０９５−１１０７（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４４】
一実施形態において、ＥＰＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、ＭＴ１１０、ＥｐＣＡＭ−ＣＤ３二特異性Ａｂ（例えば、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００６３５５９６を参照されたい）；エドレコロマブ；３６２２Ｗ９４；ＩＮＧ−１；及びアデカツムマブ（ＭＴ２０１）から選択される抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４５】
一実施形態において、ＫＩＴに対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７９１５３９１号明細書、米国特許出願公開第２０１２０２８８５０６号明細書に記載されている抗体及びいくつかの市販のカタログ抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４６】
一実施形態において、ＩＬ−１３Ｒａ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２００８／１４６９１１号パンフレット、国際公開第２００４０８７７５８号パンフレット、いくつかの市販カタログ抗体及び国際公開第２００４０８７７５８号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４７】
一実施形態において、ＣＤ１７１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３７（２）：９３−１０４（２０１４）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４８】
一実施形態において、ＰＳＣＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｏｒｇｅｎｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ６７（１０）：１１２１−１１３１（２００７）（ｓｃＦｖ  ７Ｆ５）；Ｎｅｊａｔｏｌｌａｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１３（２０１３），ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ８３９８３１（ｓｃＦｖ  Ｃ５−ＩＩ）；及び米国特許出願公開第２００９０３１１１８１号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２４９】
一実施形態において、ＭＡＤ−ＣＴ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＭＩＤ：２４５０９５２；米国特許第７６３５７５３号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５０】
一実施形態において、葉酸受容体αに対する抗原結合ドメインは、抗体ＩＭＧＮ８５３、又は米国特許出願公開第２０１２０００９１８１号明細書；米国特許第４８５１３３２号明細書、ＬＫ２６：米国特許第５９５２４８４号明細書に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５１】
一実施形態において、ＥＲＢＢ２に対する抗原結合ドメイン（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）は、抗体トラスツズマブ又はペルツズマブの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５２】
一実施形態において、ＭＵＣ１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＳＡＲ５６６６５８の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５３】
一実施形態において、ＥＧＦＲに対する抗原結合ドメインは、抗体セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ又はマツズマブの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５４】
一実施形態において、ＮＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン２−２Ｂ：ＭＡＢ５３２４（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５５】
一実施形態において、ＣＡＩＸに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン３０３１２３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５６】
一実施形態において、Ｆｏｓ関連抗原１に対する抗原結合ドメインは、抗体１２Ｆ９（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５７】
一実施形態において、ＳＳＥＡ−４に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＣ８１３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）又は他の市販の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５８】
一実施形態において、ＰＤＧＦＲβに対する抗原結合ドメインは、抗体Ａｂｃａｍ  ａｂ３２５７０の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２５９】
一実施形態において、ＡＬＫに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｉｎｏ−Ｋｅｎｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６（５）：１５６１−１５７１（２０１０）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６０】
一実施形態において、プリシアル酸（ｐｌｙｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ）に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｎａｇａｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８８（４７）：３３７８４−３３７９６（２０１３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６１】
一実施形態において、ＰＬＡＣ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｇｈｏｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０１３  ｄｏｉ：１０．１００２／ｂａｂ．１１７７に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６２】
一実施形態において、ＧｌｏｂｏＨに対する抗原結合ドメインは、抗体ＶＫ９；又は例えばＫｕｄｒｙａｓｈｏｖ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ  Ｊ．１５（３）：２４３−９（  １９９８）、Ｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１１（７）：２４８２−２４８７（２０１４）；ＭＢｒ１：Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ−Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７（１９８４）に記載されている抗体の抗原結合部分である。
【０２６３】
一実施形態において、ＮＹ−ＢＲ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｊａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｍｏｒｐｈｏｌ  １５（１）：７７−８３（２００７）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６４】
一実施形態において、精子タンパク質１７に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｒｇｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１３  Ａｕｇ  １４（ＰＭＩＤ：２３９４３３１３）；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ２９（４）：２９２３−２９３１（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６５】
一実施形態において、ＴＲＰ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８４（６）：２２０７−１６（１９９６）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６６】
一実施形態において、ＣＹＰ１Ｂ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍａｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  １０２（９）：３２８７−３２９４（２００３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６７】
一実施形態において、ＲＡＧＥ−１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＡＢ５３２８（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６８】
一実施形態において、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素に対する抗原結合ドメインは、抗体カタログ番号：ＬＳ−Ｂ９５−１００（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２６９】
一実施形態において、腸管カルボキシルエステラーゼに対する抗原結合ドメインは、抗体４Ｆ１２：カタログ番号：ＬＳ−Ｂ６１９０−５０（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２７０】
一実施形態において、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２に対する抗原結合ドメインは、抗体Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ：モノクローナル：カタログ番号：ＬＳ−Ｃ１３３２６１−１００（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２７１】
一実施形態において、ＭＡＤ−ＣＴ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＭＩＤ：２４５０９５２；米国特許第７６３５７５３号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０２７２】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３並びに／又は上に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
【０２７３】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、骨髄性腫瘍集団が標的となるように選択することができる。代わりに、２種類以上の骨髄性腫瘍を標的とすることが望ましい場合、標的とされるべき骨髄性腫瘍の２種類以上（例えば、全て）によって発現される骨髄性腫瘍を標的とする抗原結合ドメインを選択することができる。
【０２７４】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞により発現されるＣＡＲはＣＤ１２３、例えば、ヒトＣＤ１２３に結合する。本発明において、任意の公知のＣＤ１２３結合ドメインが使用され得る。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに記載の抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬである。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに記載の抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬである。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第１９９７／０２４３７３号パンフレット、国際公開第２００８／１２７７３５号パンフレット（例えば２６２９２、３２７０１、３７７１６又は３２７０３のＣＤ１２３結合ドメイン）、国際公開第２０１４／１３８８０５号パンフレット（例えばＣＳＬ３６２のＣＤ１２３結合ドメイン）、国際公開第２０１４／１３８８１９号パンフレット、国際公開第２０１３／１７３８２０号パンフレット、国際公開第２０１４／１４４６２２号パンフレット、国際公開第２００１／６６１３９号パンフレット、国際公開第２０１０／１２６０６６号パンフレット（例えば、Ｏｌｄ４、Ｏｌｄ５、Ｏｌｄ１７、Ｏｌｄ１９、Ｎｅｗ１０２、又はＯｌｄ６のいずれかのＣＤ１２３結合ドメイン）、国際公開第２０１４／１４４６２２号パンフレット、又は米国特許国際公開第２００９／０２５２７４２号明細書に記載の抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。実施形態において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＤ１２３結合ドメインであるか又はそれに由来する。実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１２３に結合するヒト抗体又は抗体断片である。実施形態において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬ及びＶＨは、例えば、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）を含む本明細書に記載のリンカーによって結合され得、任意の配向、例えばＶＬ−リンカー−ＶＨ、又はＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０２７５】
一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）並びに／又は本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、例えばＬＣ  ＣＤＲの１つ以上、例えば３つ全て及びＨＣ  ＣＤＲの１つ以上、例えば３つ全てを含むヒトＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含み、例えば、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、２個の可変重鎖領域を含み、本明細書に記載のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に（例えば、表２６又は２８に）記載するヒト軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表２６又は２８に）記載するヒト重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に（例えば、表２６又は２８に）ヒト重鎖可変領域、例えば本明細書に（例えば、表２６又は２８に）記載する少なくとも２つのヒト重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表２６又は２８のアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表２６若しくは２８に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表２６若しくは２８に提供する重鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２６又は２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号２１５７〜２１６０、２４７８、２４８０、２４８３及び２４８５からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書において、例えば表２６又は２８に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書において、例えば表２６に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって結合されている。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−��ｅｒ）ｎリンカー（配列番号８０）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは３又は４である）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向きのいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２７６】
いくつかの態様において、非ヒト抗体は、ヒト化され、抗体の特定の配列又は領域は、ヒトにおいて天然に産生される抗体又はその断片に対する類似性を高めるために改変される。そのため、一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、並びに／又は本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、例えば３つ全て及びＬＣ  ＣＤＲの１つ以上、並びに例えば３つ全て及びＨＣ  ＣＤＲの１つ以上を含むヒト化ＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含み、例えば、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、２つの可変重鎖領域を有し、本明細書に記載のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書（例えば、表２７）に記載するヒト化軽鎖可変領域、及び／又は本明細書（例えば、表２７）に記載するヒト化重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書（例えば、表２７）に記載するヒト化重鎖可変領域、例えば本明細書（例えば、表２７）に記載する少なくとも２つのヒト化重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表２７のアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表２７に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表２７に提供する重鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号２１８４〜２２１５及び２３０２〜２３３３からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書において、例えば表２７に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書において、例えば表２７��記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって結合されている。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号８０）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは３又は４である）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向きのいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２７７】
本明細書に開示する例示的なＣＤ１２３  ＣＡＲ構築物は、ｓｃＦｖ（例えば、本明細書の表２６、２７及び２８に開示するようなヒトｓｃＦｖ、任意選択により、任意選択のリーダー配列（例えば、それぞれ例示的なリーダーアミノ酸及びヌクレオチド配列として配列番号２及び配列番号３）が前に存在する）を含む。ヒトｓｃＦｖ断片の配列（配列番号２１５７〜２１６０のアミノ酸配列）を本明細書で表２６に提供する。リーダー配列を伴わないヒトｓｃＦｖ断片の配列を本明細書で表２８に提供する（ヌクレオチド配列について配列番号２４７９、２４８１、２４８２及び２４８４、並びにアミノ酸配列について配列番号２４７８、２４８０、２４８３及び２４８５）。ＣＤ１２３  ＣＡＲ構築物は、任意選択によるヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン（例えば、配列番号４又は配列番号５の核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１２又は配列番号１３のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；細胞内ドメイン、例えば４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号１４又は配列番号１５のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含み、及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメイン（例えば、配列番号１８若しくは２０又は配列番号１９若しくは２１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）を更に含む。一実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するか又はその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のようなＲＣＡＲ分子におけるような個別のポリペプチドにある。
【０２７８】
一実施形態において、全長ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子は、表２６、２７若しくは２８に提供されるか、又はそれと実質的に同一である（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有する）配列である、ＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１又はｈｚＣＤ１２３−３２のアミノ酸配列を含むか、又はヌクレオチド配列によりコード化される。
【０２７９】
一実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表２６、２７又は２８に提供するＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１又はｈｚＣＤ１２３−３２のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１若しくはｈｚＣＤ１２３−３２又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有し、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸変化を有する）である配列のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はヌクレオチド配列によりコード化される。
【０２８０】
一実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表２６又は２７に提供されるＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１若しくはｈｚＣＤ１２３−３２の重鎖可変領域、及び／又は軽鎖可変領域若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５〜９９％の同一性を有し、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸変化を有する）である配列を含む。
【０２８１】
一実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表１６若しくは１８に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表１７若しくは１９に提供するＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１若しくはｈｚＣＤ１２３−３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５〜９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
【０２８２】
一実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表２０に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表２１に提供するＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１又はｈｚＣＤ１２３−３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５〜９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
【０２８３】
一実施形態において、ＣＤ１２３分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表２２に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表２３に提供するＣＤ１２３−１、ＣＤ１２３−２、ＣＤ１２３−３、ＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−１、ｈｚＣＤ１２３−２、ｈｚＣＤ１２３−３、ｈｚＣＤ１２３−４、ｈｚＣＤ１２３−５、ｈｚＣＤ１２３−６、ｈｚＣＤ１２３−７、ｈｚＣＤ１２３−８、ｈｚＣＤ１２３−９、ｈｚＣＤ１２３−１０、ｈｚＣＤ１２３−１１、ｈｚＣＤ１２３−１２、ｈｚＣＤ１２３−１３、ｈｚＣＤ１２３−１４、ｈｚＣＤ１２３−１５、ｈｚＣＤ１２３−１６、ｈｚＣＤ１２３−１７、ｈｚＣＤ１２３−１８、ｈｚＣＤ１２３−１９、ｈｚＣＤ１２３−２０、ｈｚＣＤ１２３−２１、ｈｚＣＤ１２３−２２、ｈｚＣＤ１２３−２３、ｈｚＣＤ１２３−２４、ｈｚＣＤ１２３−２５、ｈｚＣＤ１２３−２６、ｈｚＣＤ１２３−２７、ｈｚＣＤ１２３−２８、ｈｚＣＤ１２３−２９、ｈｚＣＤ１２３−３０、ｈｚＣＤ１２３−３１又はｈｚＣＤ１２３−３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５〜９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
【０２８４】
ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１６、１８、２０及び２２、並びに軽鎖可変ドメインについて表１７、１９、２１及び２３に示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
【０２８５】
表１６、１７、１８及び１９に提供するＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームの組み合わせに従う。
【０２８６】
【表１４】
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【０２８７】
【表１５】
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【０２８８】
【表１６】
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【０２８９】
【表１７】
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【０２９０】
【表１８】
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【０２９１】
【表１９】
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【０２９２】
【表２０】
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【０２９３】
【表２１】
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【０２９４】
【表２２】
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【０２９５】
【表２３】
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【０２９６】
【表２４】
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【０２９７】
【表２５】
2019527696.tif 000026
【０２９８】
実施形態において、ＣＤ１２３単鎖可変断片を産生し、細胞内ＣＤ３ζドメイン及び４−１ＢＢの細胞内共刺激ドメインを有するレンチウイルスＣＡＲ発現ベクターにクローン化する。例示的な完全ヒトＣＤ１２３  ｓｃＦｖの名称を表２４に示す。例示的なヒト化ＣＤ１２３  ｓｃＦｖの名称を表２５に示す。
【０２９９】
【表２６】
2019527696.tif 000027
【０３００】
【表２７】
2019527696.tif 000028
【０３０１】
実施形態において、ＶＬ及びＶＨドメインがｓｃＦｖにおいて現れる順番は、変わり（即ちＶＬ−ＶＨ又はＶＨ−ＶＬ方向）、各サブユニットが配列ＧＧＧＧＳ（配列番号２２）（例えば、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号３０）又は（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２９））を含む３つ（配列番号３０）又は４つ（配列番号２９）のコピーの「Ｇ４Ｓ」（配列番号２２）サブユニットは、表２６、表２７及び表２８に示すように、可変ドメインに結合してｓｃＦｖドメイン全体を作る。
【０３０２】
ＣＤ１２３  ｓｃＦｖドメイン及びＣＤ１２３  ＣＡＲ分子のアミノ酸及び核酸配列を表２６、表２７及び表２８に提供する。各ｓｃＦｖの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列も表２６及び表２７に提供する。リーダー配列（例えば、配列番号２のアミノ酸配列又は配列番号３のヌクレオチド配列）を伴うｓｃＦｖ断片（配列番号２１５７〜２１６０及び２１８４〜２２１５）及びリーダー配列を伴わないｓｃＦｖ断片（配列番号２４７８、２４８０、２４８３、２４８５及び２５５６〜２５８７）も本発明に包含されることに留意されたい。
【０３０３】
実施形態において、表２６及び２７におけるこれらのクローンは、全てＣＤ３ζ鎖由来の共刺激ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含む。
【０３０４】
【表２８】
2019527696.tif 000029
【０３０５】
【表２９】
2019527696.tif 000030
【０３０６】
【表３０】
2019527696.tif 000031
【０３０７】
【表３１】
2019527696.tif 000032
【０３０８】
【表３２】
2019527696.tif 000033
【０３０９】
【表３３】
2019527696.tif 000034
【０３１０】
【表３４】
2019527696.tif 000035
【０３１１】
【表３５】
2019527696.tif 000036
【０３１２】
【表３６】
2019527696.tif 000037
【０３１３】
【表３７】
2019527696.tif 000038
【０３１４】
【表３８】
2019527696.tif 000039
【０３１５】
【表３９】
2019527696.tif 000040
【０３１６】
【表４０】
2019527696.tif 000041
【０３１７】
【表４１】
2019527696.tif 000042
【０３１８】
【表４２】
2019527696.tif 000043
【０３１９】
【表４３】
2019527696.tif 000044
【０３２０】
【表４４】
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【０３２１】
【表４５】
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【０３２２】
【表４６】
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【０３２３】
【表４７】
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【０３２４】
【表４８】
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【０３２５】
【表４９】
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【０３２６】
【表５０】
2019527696.tif 000051
【０３２７】
【表５１】
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【０３２８】
【表５２】
2019527696.tif 000053
【０３２９】
【表５３】
2019527696.tif 000054
【０３３０】
【表５４】
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【０３３１】
【表５５】
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【０３３２】
【表５６】
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【０３３３】
【表５７】
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【０３３４】
【表５８】
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【０３３５】
【表５９】
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【０３３６】
【表６０】
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【０３３７】
【表６１】
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【０３３８】
【表６２】
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【０３３９】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ＣＤ１２３に特異的に結合し、リーダー配列、例えばアミノ酸配列番号２を含まないｓｃＦｖを含む。下記表２８は、リーダー配列番号２を含まないＣＤ１２３  ｓｃＦｖ配列のアミノ酸及びヌクレオチド配列を提供する。
【０３４０】
【表６３】
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【０３４１】
【表６４】
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【０３４２】
【表６５】
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【０３４３】
【表６６】
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【０３４４】
【表６７】
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【０３４５】
【表６８】
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【０３４６】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞により発現されるＣＡＲは、ＣＤ３３、例えばヒトＣＤ３３に結合する。本発明において、任意の公知のＣＤ３３結合ドメインが使用され得る。一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット（その内容は、全体として本明細書に組み込まれる）に記載の抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬである。一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（例えば、重鎖可変ドメインの１つ以上、例えば１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、及び／又は軽鎖可変ドメインの１つ以上、例えば１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、又はゲムツズマブ・オゾガマイシンのｓｃＦｖ配列のＶＨ若しくはＶＬ、又はｓｃＦｖ配列を含む抗原結合ドメインを含む）（以前はＭｙｌｏｔａｒｇとして市販）、例えばＢｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７（６）：１４９０−１４９６（２００１）（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ，ｈＰ６７．６）の抗原結合部分であるか又はそれに由来する。一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号ＡＭ４０２９７４．１（参照により本明細書に組み込まれるＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，ｖｏｌ．２３：１，ｐｐ．１８４−１９１（２０１５）を参照されたい）によってコードされるｓｃＦｖ配列の抗原結合部分であるか又はそれに由来する（例えば、重鎖可変ドメインの１つ以上、例えば１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、及び／又は軽鎖可変ドメインの１つ以上、例えば１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、又はＶＨ若しくはＶＬ、又はｓｃＦｖ配列を含む抗原結合ドメインを含む）。一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２（２４）：６７６１−６７６７（１９９２）（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ，ＨｕＭ１９５）、Ｌａｐｕｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ３０（３）：１１２１−１１３１（２０１２）（ＡＶＥ９６３３）、Ａｉｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２７（５）：１１０７−１１１５（２０１３）（ＡＭＧ３３０，ＣＤ３３  ＢｉＴＥ）、Ｄｕｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１２：６８３０６５（２０１２）、及び  Ｐｉｚｚｉｔｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｄｏｉ：１０．１０３８／Ｌｕｅ．２０１４．６２（２０１４）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。実施形態において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＤ３３結合ドメインであるか又はそれに由来する。実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ３３に結合するヒト抗体又は抗体断片である。実施形態において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬ及びＶＨは、例えば、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）を含む本明細書に記��のリンカーによって結合され得、任意の配向、例えばＶＬ−リンカー−ＶＨ又はＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０３４７】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、ＣＬＬ−１、例えばヒトＣＬＬ−１に結合する。本発明において、任意の公知のＣＬＬ−１結合ドメインが使用され得る。一実施形態において、ＣＬＬ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット（その内容は、全体として本明細書に組み込まれる）に記載の抗体、抗原結合断片又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬである。一実施形態において、ＣＬＬ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｒ＆Ｄ、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｂｃａｍから入手可能な抗体、例えば、ＰＥ−ＣＬＬ１−ｈｕ  Ｃａｔ＃３５３６０４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）；及びＰＥ−ＣＬＬ１（ＣＬＥＣ１２Ａ）Ｃａｔ＃５６２５６６（ＢＤ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。実施形態において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＬＬ−１結合ドメインであるか又はそれに由来する。実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＬＬ−１に結合するヒト抗体又は抗体断片である。実施形態において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬ及びＶＨは、例えば、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）を含む本明細書に記載のリンカーによって結合され得、任意の配向、例えばＶＬ−リンカー−ＶＨ又はＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０３４８】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、Ｂ細胞抗原、例えばヒトＢ細胞抗原に結合する。本発明において、任意の公知のＢ細胞抗原結合ドメインが使用され得る。
【０３４９】
一実施形態において、Ｂ細胞抗原は、Ｂ細胞の表面に優先的又は特異的に発現される抗原である。抗原は、以下のタイプのＢ細胞のいずれか１つの表面上に発現させることができる：前駆Ｂ細胞（例えば、プレＢ細胞又はプロＢ細胞）、初期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型プレＢ細胞、未成熟Ｂ細胞、例えばナイーブＢ細胞、成熟Ｂ細胞、プラズマＢ細胞、形質芽細胞、記憶Ｂ細胞、Ｂ−１細胞、Ｂ−２細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、又は制御性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇｓ）。
【０３５０】
本開示は、以下のＢ細胞抗原を標的とし得るＣＡＲを提供する：ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＲＯＲ１、ＢＣＭＡ、ＣＤ８６、及びＣＤ１７９ｂ。本明細書中に記載されるＣＡＲによって標的化され得る他のＢ細胞抗原は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３５、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５０、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ６０ａ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６３、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ８５Ｅ、ＣＤ８５Ｉ、ＣＤ８５Ｊ、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０２、ＣＤ１０８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＣＤ１３２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ１６２、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１８０、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９２、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ２００、ＣＤ２０５、ＣＤ２１０ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１５、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２１８ｂ、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７７、ＣＤ２７９、ＣＤ２８３、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３００ａ、ＣＤ３００ｃ、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７ａ、ＣＤ３０７ｂ、ＣＤ３０７ｃ、ＣＤ３０７ｄ、ＣＤ３０７ｅ、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１９、ＣＤ３２１、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３８、ＣＤ３５１、ＣＤ３５２、ＣＤ３５３、ＣＤ３５４、ＣＤ３５５、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０、ＣＤ３６１、ＣＤ３６２、及びＣＤ３６３を含む。
【０３５１】
別の実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ−１及びＣＤ１３８から選択される。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ１９である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ２０である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ２２である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＢＣＭＡである。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＦｃＲｎ５である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＦｃＲｎ２である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＳ−１である。一実施形態において、ＣＡＲによって標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ１３８である。
【０３５２】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲは、好ましいＢ細胞集団が標的となるように選択することができる。例えば、制御性Ｂ細胞の標的化が望まれる実施形態において、制御性Ｂ細胞上に発現され、他のＢ細胞集団、例えば形質Ｂ細胞及び記憶Ｂ細胞上に発現されないＢ細胞抗原を標的とする抗原結合ドメインが選択される。制御性Ｂ細胞上に発現される細胞表面マーカーには、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３８、又はＣＤ８６、又はＨｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２１５４７１に記載のマーカーが含まれる。２種類以上のＢ細胞を標的とすることが望ましい場合、標的とされるべき全てのＢ細胞によって発現されるＢ細胞抗原を標的とする抗原結合ドメインを選択することができる。
【０３５３】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９は、プロ／プレＢ細胞段階から最終分化形質細胞段階までの系統の分化を通してＢ細胞上に見られる。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９に結合するマウスｓｃＦｖドメイン、例えばＣＴＬ０１９（例えば、配列番号９５）である。一実施形態では、抗原結合ドメインは、マウスＣＴＬ０１９  ｓｃＦｖ由来のヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９に結合するヒト抗体又は抗体断片である。ＣＤ１９に結合する例示的なｓｃＦｖドメイン（及びそれらの配列、例えばＣＤＲ、ＶＬ及びＶＨ配列）を表６に提供する。表６に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ＶＬ及びＶＨは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）を含むリンカーにより、例えば次の配向：ＶＬ−リンカー−ＶＨで結合される。
【０３５４】
【表６９】
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【０３５５】
【表７０】
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【０３５６】
表６に提供されるＣＤ１９抗原結合ドメインのｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表７及び軽鎖可変ドメインについて表８に示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
【０３５７】
【表７１】
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【０３５８】
【表７２】
2019527696.tif 000073
【０３５９】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体又はその断片、例えばｓｃＦｖを含む。例えば、抗原結合ドメインは、表９に列挙される可変重鎖及び可変軽鎖を含む。可変重鎖及び可変軽鎖を連結するリンカー配列は、本明細書中に記載される任意のリンカー配列であり得るか、又は代わりにＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号８１）であり得る。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０３６０】
【表７３】
2019527696.tif 000074
【０３６１】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載の、例えば表６又は７に提供されるＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、及び／又は本明細書に記載の、例えば表６又は８に提供されるＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表８（参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような任意のアミノ酸配列の１つ、２つ、又は全てのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３、及び表７に提供されるような任意のアミノ酸配列の１つ、２つ、又は全てのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０３６２】
一実施形態において、ＣＤ１９抗原結合ドメインは、
（ｉ）（ａ）配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｉ）（ａ）配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｖ）（ａ）配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０３６３】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に（例えば、表６又は９に）記載の軽鎖可変領域及び／又は本明細書に（例えば、表６又は９に）記載の重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表６又は９に記載するアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表６又は９に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表６又は９に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表６又は９に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表６又は９に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０３６４】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５及び配列番号１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかに少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書、例えば表６又は９に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーを介して、本明細書、例えば表６又は９に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に結合する。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号８０）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０３６５】
当技術分野における任意の公知のＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば任意の公知のＣＤ１９  ＣＡＲのＣＤ１９抗原結合ドメインを本発明に従って使用してＣＡＲを構築することができる。例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲは、米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１３  ５４（２）：２５５−２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（１７）：２９６５−２９７３（２０１３）；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７−４８２８（２０１１）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１６（２０）：４０９９−１０２（２０１０）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２５）：４１２９−３９（２０１３）；及び１６ｔｈ  Ａｎｎｕ  Ｍｅｅｔ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｇｅｎ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ  １５−１８，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ  １０に記載され、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態において、ＣＤ１９に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット；国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３２（７），６８９−７０２（２００９）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１６（２０），４０９９−４１０２（２０１０）；国際公開第２０１４／０３１６８７号パンフレット；Ｂｅｊｃｅｋ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５，２３４６−２３５１，１９９５；又は米国特許第７，４４６，１９０号明細書（それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＡＲ、抗体又はその抗原結合断片の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３６６】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本発明の細胞によって発現されるＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。ＢＣＭＡは、成熟Ｂリンパ球において優先的に発現されることが見出される。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するマウスｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するヒト化抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖドメインである。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するヒト抗体又は抗体断片である。ＢＣＭＡに結合する例示的なｓｃＦｖドメイン（及びそれらの配列、例えばＣＤＲ、ＶＬ及びＶＨ配列）を表１２、表１３、表１４及び表１５に提供する。表１２及び表１３に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ＶＬ及びＶＨは、例えば、次の配向：ＶＨ−リンカー−ＶＬでリンカーによって結合される。
【０３６７】
【表７４】
2019527696.tif 000075
【０３６８】
【表７５】
2019527696.tif 000076
【０３６９】
【表７６】
2019527696.tif 000077
【０３７０】
【表７７】
2019527696.tif 000078
【０３７１】
【表７８】
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【０３７２】
【表７９】
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【０３７３】
【表８０】
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【０３７４】
【表８１】
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【０３７５】
【表８２】
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【０３７６】
【表８３】
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【０３７７】
【表８４】
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【０３７８】
【表８５】
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【０３７９】
【表８６】
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【０３８０】
【表８７】
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【０３８１】
【表８８】
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【０３８２】
【表８９】
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【０３８３】
【表９０】
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【０３８４】
【表９１】
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【０３８５】
【表９２】
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【０３８６】
【表９３】
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【０３８７】
【表９４】
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【０３８８】
実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１２／０１６３８０５号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１４／１２２１４４号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１６／０１４７８９号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＣＡＲ分子、及び／又はＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１４／０８９３３５号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＣＡＲ分子、及び／又はＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１４／１４０２４８号パンフレット（その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる）からのＣＡＲ分子、及び／又はＶＨ及びＶＬ配列を用いて産生される。
【０３８９】
実施形態において、更なる例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、表１３に見られるＶＨ及びＶＬ配列を使用しても産生され得る。ＶＨ及びＶＬドメイン並びにリンカー配列を含む例示的なｓｃＦｖドメイン、及び全長ＣＡＲのアミノ酸配列も表１３に見出される。
【０３９０】
【表９５】
2019527696.tif 000096
【０３９１】
ｓｃＦｖドメインのヒトＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１４及び軽鎖可変ドメインについて表１５に示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。ＣＤＲはＫａｂａｔの定義に従って示されるが、他の規定、例えばＣｈｏｔｈｉａ又は組み合わされたＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの定義の下のＣＤＲは、上記のＶＨ及びＶＬ配列に基づいて容易に推定され得る。
【０３９２】
【表９６】
2019527696.tif 000097
【０３９３】
【表９７】
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【０３９４】
【表９８】
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【０３９５】
【表９９】
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【０３９６】
一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載の、例えば表１２、１３又は１５に提供されるＢＣＭＡ結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、及び／又は本明細書に記載の、例えば表１２、１３又は１４に提供されるＢＣＭＡ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、表１２（参照により本明細書に組み込まれる）に提供されるような任意のアミノ酸配列の１つ、２つ、又は全てのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３、及び表１２に提供されるような任意のアミノ酸配列の１つ、２つ、又は全てのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０３９７】
一実施形態において、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、
（ｖ）（ａ）配列番号８１４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉ）（ａ）配列番号８０４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号８０５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８０６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｉｘ）（ａ）配列番号８０７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘ）（ａ）配列番号８０８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉ）（ａ）配列番号８０９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８８９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６８９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７６９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号８１０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号８１１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号８１２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖ）（ａ）配列番号８１３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉ）（ａ）配列番号８１５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉｉ）（ａ）配列番号８１６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８１７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｉｘ）（ａ）配列番号８１８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘ）（ａ）配列番号８１９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８９９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号６９９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７７９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉ）（ａ）配列番号８２０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９００のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７００のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｉ）（ａ）配列番号８２１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｉｉ）（ａ）配列番号８２２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｉｖ）（ａ）配列番号８２３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｖ）（ａ）配列番号８２４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、
（ｘｘｖｉ）（ａ）配列番号８２５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、又は
（ｘｘｖｉｉ）（ａ）配列番号８２６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９０６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
（ｂ）配列番号７０６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号７８６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０３９８】
一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１２又は１３に）記載の軽鎖可変領域及び／又は本明細書に（例えば、表１２又は１３に）記載の重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、表１２又は１３に記載するアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１２又は１３に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表１２又は１３に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１２又は１３に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列又は表１２又は１３に提供するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０３９９】
一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号３４９、配列番号３３９、配列番号３４０、配列番号３４１、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５及び配列番号５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかに少なくとも１、２又は３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書、例えば表１２又は１３に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーを介して、本明細書、例えば表１２又は１３に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に結合する。一実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号８０）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０４００】
当技術分野における任意の公知のＢＣＭＡ  ＣＡＲ、例えば任意の公知のＢＣＭＡ  ＣＡＲのＢＭＣＡ抗原結合ドメインを本発明に従って使用してＣＡＲを構築することができる。例えば、本明細書に記載のものである。
【０４０１】
一実施形態において、ＲＯＲ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｕｄｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９（１２）：３１５３−３１６４（２０１３）；国際公開第２０１１１５９８４７号パンフレット；及び米国特許出願公開第２０１３０１０１６０７号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０２】
一実施形態において、ＣＤ２２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈａｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２１（７）：１１６５−１１７４（２０１３）；Ｗａｙｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６（６）：１８９４−１９０３（２０１０）；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ３７（１）：８３−８８（２０１３）；Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＢｉｏＭａｒｔ（ｃｒｅａｔｉｖｅｂｉｏｍａｒｔ．ｎｅｔ）：ＭＯＭ−１８０４７−Ｓ（Ｐ）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０３】
一実施形態において、ＣＤ２０に対する抗原結合ドメインは、抗体リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ若しくはＧＡ１０１又はそれらの誘導体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０４】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した、腫瘍抗原又はＢ細胞抗原に結合する抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３並びに／又は上に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した腫瘍抗原又はＢ細胞抗原に結合する抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
【０４０５】
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書及び同第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）、ベニアリング又はリサーフェシング（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第５９２，１０６号明細書及び欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３を参照されたい）、鎖シャッフリング（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）、及び例えばそれぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９−２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３−６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−７９（２０００）、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５−９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ  Ｊ  Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）に記載の技術を含むが、これらに限定されない、当技術分野で公知の多様な方法を使用して産生できる。多くの場合、フレームワーク領域におけるフレームワーク残基を、抗原結合を変える、例えば改善するためにＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換する。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリング及び特定の位置の異常フレームワーク残基を同定するための配列比較により同定される。（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたい）。
【０４０６】
固形腫瘍関連抗原（即ち固形腫瘍抗原）の例には、限定されるものではないが、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−糖ペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−β、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６又はＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４及びＭＨＣ上に提示されたこれらの抗原のいずれかのペプチドが含まれる。
【０４０７】
一態様において、ＣＡＲは、Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ１９抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９に特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
【０４０８】
本明細書に記載の例示的なＣＡＲ分子を表１０に提供する。表１０のＣＡＲ分子はＣＤ１９抗原結合ドメイン、例えば表６に提供される任意のＣＤ１９抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。
【０４０９】
【表１００】
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【０４１０】
【表１０１】
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【０４１１】
【表１０２】
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【０４１２】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、表１０又は２０１４年３月１５日に出願された国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）の表３に提供されるようなアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０若しくは配列番号２８１のアミノ酸配列、又は配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０若しくは配列番号２８１に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくは３０修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が６０、５０若しくは４０を超えないアミノ酸配列、又は配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０若しくは配列番号２８１のアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、これらからなる）。
【０４１３】
一態様において、ＣＡＲは、Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン（例えば、ＢＣＭＡ、例えばヒトＢＣＭＡに特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
【０４１４】
本明細書に記載の例示的なＣＡＲ分子は、表２９又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットの表１に記載され、又は他に本明細書に記載される通りである。表２９のＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン、例えば表１２又は１３に提供されるいずれかのＢＣＭＡ抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。
【０４１５】
【表１０３】
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【０４１６】
【表１０４】
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【０４１７】
【表１０５】
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【０４１８】
【表１０６】
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【０４１９】
【表１０７】
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【０４２０】
【表１０８】
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【０４２１】
【表１０９】
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【０４２２】
【表１１０】
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【０４２３】
【表１１１】
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【０４２４】
【表１１２】
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【０４２５】
【表１１３】
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【０４２６】
【表１１４】
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【０４２７】
【表１１５】
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【０４２８】
【表１１６】
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【０４２９】
【表１１７】
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【０４３０】
【表１１８】
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【０４３１】
【表１１９】
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【０４３２】
【表１２０】
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【０４３３】
【表１２１】
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【０４３４】
【表１２２】
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【０４３５】
【表１２３】
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【０４３６】
【表１２４】
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【０４３７】
【表１２５】
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【０４３８】
【表１２６】
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【０４３９】
【表１２７】
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【０４４０】
【表１２８】
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【０４４１】
【表１２９】
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【０４４２】
【表１３０】
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【０４４３】
【表１３１】
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【０４４４】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、表２９若しくは国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットの表１に提供され、又は他に本明細書に記載されるアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８若しくは配列番号９９９のアミノ酸配列、又は配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８若しくは配列番号９９９に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくは３０修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が６０、５０若しくは４０を超えないアミノ酸配列、又は配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８若しくは配列番号９９９のアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、これらからなる）。
【０４４５】
メソテリンを標的とする例示的なＣＡＲ分子は、本明細書に記載されており、表１１に提供されている。表１１のＣＡＲ分子は、メソテリン抗原結合ドメイン、例えば表２に提供される任意のメソテリン抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。リーダー配列は、太字で下線が付され、ＣＤＲは、下線が付され、抗原結合領域の重鎖と軽鎖との間のリンカー配列は、灰色で網掛けされている。
【０４４６】
【表１３２】
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【０４４７】
【表１３３】
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【０４４８】
【表１３４】
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【０４４９】
【表１３５】
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【０４５０】
【表１３６】
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【０４５１】
一実施形態において、本発明の細胞は、メソテリンに結合するＣＡＲ分子を含み、表１１及び２０１４年１２月１９日に出願された国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）の表２に提供されるようなアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５若しくは配列番号３０６のアミノ酸配列、又は配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５若しくは配列番号３０６に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくは３０修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が６０、５０若しくは４０を超えないアミノ酸配列、又は配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５若しくは配列番号３０６のアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、これらからなる）。
【０４５２】
一態様において、本発明の細胞は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原結合ドメイン（例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
【０４５３】
ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする例示的なＣＡＲ分子は、本明細書に記載されており、表３０若しくは国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットの表２に提供され、又は国際公開第２０１６／０１４７８９号パンフレットに記載されている。
【０４５４】
【表１３７】
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【０４５５】
【表１３８】
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【０４５６】
【表１３９】
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【０４５７】
【表１４０】
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【０４５８】
【表１４１】
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【０４５９】
【表１４２】
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【０４６０】
【表１４３】
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【０４６１】
【表１４４】
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【０４６２】
【表１４５】
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【０４６３】
【表１４６】
2019527696.tif 000147
【０４６４】
一実施形態において、本発明の細胞は、表３０に提供されるようなアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合するＣＡＲ分子を含む。一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合するＣＡＲは、配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０若しくは配列番号１０９６のアミノ酸配列、又は配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０若しくは配列番号１０９６に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくは３０修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が６０、５０若しくは４０を超えないアミノ酸配列、又は配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０若しくは配列番号１０９６のアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、これらからなる）。
【０４６５】
一態様において、本発明の細胞は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ１２３抗原結合ドメイン（例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む、ＣＡＲ分子を含む。
【０４６６】
ＣＤ１２３を標的とする例示的なＣＡＲ分子は、本明細書に記載されており（例えば、表２６又は表２７）、及び国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットの表２、６及び９に提供されている。ＣＤ１２３を標的とする他の例示的なＣＡＲ分子は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットの表１）に記載されている。ＣＤ１２３を標的とする他の例示的なＣＡＲ分子は、国際公開第２０１４／１４４６２２号パンフレットに記載されている。
【０４６７】
一態様において、本発明の細胞は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ３３抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ３３に特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。ＣＤ３３を標的とする例示的なＣＡＲ分子は、本明細書に記載されており、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット、例えば国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットの表２に提供されている。
【０４６８】
一態様において、本発明の細胞は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＬＬ−１抗原結合ドメイン（例えば、ＣＬＬ−１に特異的に結合するマウス、ヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。ＣＬＬ−１を標的とする例示的なＣＡＲ分子は、本明細書に記載されており、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット、例えば、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットの表２に提供されている。
【０４６９】
一実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片である。一態様において、そのような抗体断片は、それらが同等の結合親和性を保持するという点で機能的であり、例えば、それらは、由来するＩｇＧ抗体と同程度の有効性で同じ抗原に結合する。他の実施形態において、抗体断片は、より低い結合親和性を有し、例えば、それは、由来する抗体よりも低い結合親和性で同じ抗原に結合するが、本明細書に記載の生物学的応答を提供するという点で機能的である。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、標的抗原について、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば１０−６Ｍ又は１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗体断片を含む。一実施形態において、抗体断片は、参照抗体、例えば本明細書に記載の抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍又は１，０００倍小さい結合親和性を有する。
【０４７０】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、非ヒト抗体又は抗体断片、例えばマウス抗体又は抗体断片を含む。
【０４７１】
別の実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片を含む。いくつかの態様において、非ヒト抗体は、ヒト化され、ここで、抗体の特定の配列又は領域が修飾されて、ヒトにおいて天然に産生される抗体又はその断片に対する類似性が上昇する。一態様において、抗原結合ドメインは、それが由来する抗体又は抗体断片、例えばｓｃＦｖのマウス配列と比較してヒト化されている。
【０４７２】
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号及び第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）、ベニアリング又はリサーフェシング（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第５９２，１０６号明細書及び欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３を参照されたい）、鎖シャッフリング（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）及び例えばそれぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９−２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３−６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−７９（２０００）、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５−９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ  Ｊ  Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）に記載の技術を含むが、これらに限定されない、当技術分野で公知の多様な方法を使用して産生できる。多くの場合、フレームワーク領域におけるフレームワーク残基を、抗原結合を変える、例えば改善するためにＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換する。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリング及び特定の位置の異常フレームワーク残基を同定するための配列比較により同定される。（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたい）。
【０４７３】
ヒト化抗体又は抗体断片は、非ヒトである供給源から残留している１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、典型的には「インポート」可変ドメインからとられる「インポート」残基という。本明細書に提供されるように、ヒト化抗体又は抗体断片は、フレームワークが完全に又は大部分ヒト生殖細胞系に由来する、非ヒト免疫グロブリン分子及びフレームワーク領域からの１つ以上のＣＤＲを含む。抗体又は抗体断片のヒト化のための多数の技術が当技術分野で周知であり、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従い、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより、即ちＣＤＲ移植（欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第４，８１６，５６７号；第６，３３１，４１５号；第５，２２５，５３９号；第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第６，５４８，６４０号明細書、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）により実施できる。このようなヒト化抗体及び抗体断片において、実質的に１つより少ない無傷のヒト可変ドメインは、非ヒト種からの対応する配列により置換されている。ヒト化抗体は、多くの場合、あるＣＤＲ残基及びおそらくあるフレームワーク（ＦＲ）残基が齧歯類抗体における類似部位からの残基により置換される、ヒト抗体である。抗体及び抗体断片のヒト化は、ベニアリング又はリサーフェシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３（１９９４））又は鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）によっても達成でき、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４７４】
ヒト化抗体を製造するために使用する軽及び重両者のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少するためである。いわゆる「ベストフィット」法により、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を既知ヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングする。齧歯類に最も近いヒト配列を、その後、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）、これらの内容は、その全体が参照によりその全体を本明細書に組み込まれる）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖又は重鎖の全抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、数種の異なるヒト化抗体のために使用し得る（例えば、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれるＮｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば４つ全てのフレームワーク領域は、ＶＨ４＿４−５９生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。一実施形態において、軽鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＫ３＿１．２５生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。
【０４７５】
いくつかの態様において、本発明のＣＡＲの抗体断片を含む部分は、標的抗原に対する高親和性及び他の有利な生物学的特性を維持しながらヒト化される。本発明の一態様によると、ヒト化抗体及び抗体断片は、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物の分析の過程により製造される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者に熟知されている。選択した候補免疫グロブリン配列の可能性のある三次元立体構造的構造を説明及び提示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、例えば候補免疫グロブリンの標的抗原への結合能に影響する残基の分析を可能にする。この方法で、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性増加などの所望の抗体又は抗体断片時調が達成されるように、レシピエント及びインポート配列から選択及び組み合わせできる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合の直接的且つ最も実質的な影響に関与する。
【０４７６】
ヒト化抗体又は抗体断片は、例えば、本開示における元の抗体と同様の抗原特異性、本明細書に記載されるようなヒト腫瘍抗原に結合する能力を保持し得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体又は抗体断片は、本明細書に記載の腫瘍抗原又は本明細書に記載のＢ細胞抗原に結合する、改善された親和性及び／又は特異性を有し得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体又は抗体断片は、本明細書に記載の腫瘍抗原又は本明細書に記載のＢ細胞抗原についてより低い親和性及び／又は特異性を有し得る。
【０４７７】
一態様において、本発明の抗原結合ドメインは、抗体又は抗体断片の特定の機能的特徴又は特性によって特徴付けられる。例えば、一態様において、抗原結合ドメインを含む本発明のＣＡＲの部分は、本明細書に記載の腫瘍抗原に特異的に結合する。
【０４７８】
一態様において、抗原結合ドメインは、断片、例えば単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。一態様において、本明細書に記載の抗腫瘍抗原結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、又は二機能性（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））である。一態様において、本発明の抗体及びその断片は、野生型又は増強した親和性で本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する。
【０４７９】
ある例において、ｓｃＦｖｓは、当技術分野で公知の方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域とを一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合、（例えば、５〜１０アミノ酸）、鎖内折りたたみは阻止される。鎖内折りたたみは、２可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号、第２００５／０１７５６０６号、第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。
【０４８０】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。別の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは、１以上の正の整数である）などの一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２２）。一実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２９）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３０）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。
【０４８１】
別の態様において、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、操作されたＴＣＲ、又はその断片、例えば単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。そのようなＴＣＲを作製する方法は、当技術分野で公知である。例えば、ｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７：１３６９−１３７７（２０００）；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １１：４８７−４９６（２００４）；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９（４）：３６５−７４（２０１２）（参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、リンカー（例えば、柔軟なペプチド）によって連結されたＴ細胞クローン由来のＶα及びＶβ遺伝子を含むｓｃＴＣＲを操作することができる。このアプローチは、それ自体が細胞内にある癌関連標的にとって非常に有用であるが、そのような抗原（ペプチド）の断片は、ＭＨＣによって癌細胞の表面に提示される。
【０４８２】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメインアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメインの所望の機能的特性を保持する。
【０４８３】
特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体断片を含む。更なる態様において、抗体断片は、ｓｃＦｖを含む。更なる態様において、抗体断片は、可変重鎖（ＶＨ）のみを含む。
【０４８４】
種々の態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、一方又は両方の可変領域（例えば、ＶＨ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域の、１つ以上のアミノ酸の改変により操作される。特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体断片を含む。更なる態様において、抗体断片は、ｓｃＦｖを含む。
【０４８５】
本発明の抗体又は抗体断片が、アミノ酸配列が（例えば、野生型から）異なるように更に改変され得るが、所望の活性は改変されないことが当業者に理解される。例えば、「非必須」アミノ酸残基でのアミノ酸置換を生じる更なるヌクレオチド置換をタンパク質に行い得る。例えば、分子における非必須アミノ酸残基を同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換え得る。別の実施形態において、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーメンバーの順番及び／又は組成が異なる構造的に類似する一連のもので置き換えることができ、例えばアミノ酸残基が類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられた保存的置換をなし得る。
【０４８６】
塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。
【０４８７】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関連して、同一性パーセントは、同じである、２つ以上の配列を指す。２配列は、次の配列比較アルゴリズムの１つを使用して又は手動アラインメント及び目視により、比較窓又は指定領域にわたり、最大対応を比較及びアラインしたとき、同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドを特定パーセント有する場合、「実質的に同一」である（特定領域又は、特定されていないとき、配列全体にわたり、例えば６０％の同一性、任意選択により７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）。任意選択により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長の領域又はより好ましくは１００〜５００又は１０００又はそれを超えるヌクレオチド（又は２０、５０、２００又はそれを超えるアミノ酸）長の領域にわたり、同一性が存在する。
【０４８８】
配列比較のために、典型的には１配列が対照配列としての役割を果たし、それに対して試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験及び対照配列をコンピューターに入力し、必要であれば、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用でき又は代替パラメータを指定できる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、対照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。比較のために配列をアラインメントする方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４のサーチのための類似法、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）又は手動アラインメント及び目視（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）により実施できる。
【０４８９】
配列同一性及び配列類似性パーセントの決定に適するアルゴリズムの２つの例はＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから公的に入手可能である。
【０４９０】
２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれている、Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）アルゴリズムを使用しても決定できる。加えて、２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス及びギャップ荷重１６、１４、１２、１０、８、６又は４及び長さ荷重１、２、３、４、５又は６を使用する、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムに取り込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して決定できる。
【０４９１】
一態様において、本開示は、機能的に均等な分子を産生する、出発抗体又は断片（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列の改変を企図する。例えば、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖのＶＨ又はＶＬを、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの出発ＶＨ又はＶＬフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変できる。本開示は、機能的に均等な分子を産生するための、ＣＡＲ構築物全体の改変、例えばＣＡＲ構築物における種々のドメインの１つ以上のアミノ酸配列における改変を企図する。ＣＡＲ構築物は、出発ＣＡＲ構築物の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変され得る。
【０４９２】
二特異性ＣＡＲ
一実施形態において、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２つ以下の抗原に特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）である。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、重複する。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、重複しない。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）にある。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列並びに第２のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体及び第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体又はその断片及び第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体又はその断片を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片及び第２のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片を含む。
【０４９３】
一実施形態において、抗体分子は、多特異性（例えば、二特異性又は三特異性）抗体分子である。二特異性又はヘテロ二量体抗体分子を産生するためのプロトコルは、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第５７３１１６８号明細書に記載の「ノブインアホール」アプローチ；例えば、国際公開第０９／０８９００４号パンフレット、国際公開第０６／１０６９０５号パンフレット及び国際公開第２０１０／１２９３０４号パンフレットに記載のような静電的ステアリングＦｃ対形成；例えば、国際公開第０７／１１０２０５号パンフレットに記載のような鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、国際公開第０８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットに記載のようなＦａｂアーム交換；例えば、米国特許第４４３３０５９号明細書に記載のような、例えば、アミン反応性基とスルフヒドリル反応性基とを有するヘテロ二官能性試薬を使用して二特異性構造を製造するための、抗体架橋結合による二重抗体コンジュゲート；例えば、米国特許第４４４４８７８号明細書に記載のような、２重鎖間のジスルフィド結合の還元及び酸化のサイクルを経る異なる抗体からの半抗体（重−軽鎖対又はＦａｂ）の組み換えにより産生する二特異性抗体決定基；例えば、米国特許第５２７３７４３号明細書に記載のような、三機能性抗体、スルフヒドリル反応性基により架橋された３Ｆａｂ’断片；例えば、米国特許第５５３４２５４号明細書に記載のような、生合成結合タンパク質、例えばＣ末端テール、好ましくはジスルフィド又はアミン反応性化学架橋結合により架橋されたｓｃＦｖの対；例えば、米国特許第５５８２９９６号明細書に記載のような、二機能性抗体、例えば置換された定常ドメインを有する、ロイシンジッパー（例えば、ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｊｕｎ）により二量体化された異なる結合特性を有するＦａｂ断片；例えば、米国特許第５５９１８２８号明細書に記載のような、二特異性及びオリゴ特異性一価及びオリゴ価受容体、例えば一方の抗体のＣＨ１領域と他方の典型的には軽鎖を伴う抗体のＶＨ領域との間のポリペプチドスペーサーを介して連結した２つの抗体（２Ｆａｂ断片）のＶＨ−ＣＨ１領域；例えば、米国特許第５６３５６０２号明細書に記載のような、二特異性ＤＮＡ−抗体コンジュゲート、例えば二本鎖切片のＤＮＡを経た抗体又はＦａｂ断片の架橋；例えば、米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のような、二特異性融合タンパク質、例えば親水性らせん状ペプチドリンカーを間に有し、完全定常領域を有する２つのｓｃＦｖを含む発現構築物；例えば、米国特許第５８３７２４２号明細書に記載のような、多価及び多特異性結合タンパク質、例えばＩｇ重鎖可変領域の結合領域を有する第１のドメイン及びＩｇ軽鎖可変領域の結合領域を有する第２のドメインを有し、一般に、二特異性、三特異性、四特異性の分子を作るための高次構造を包含する二特異性抗体と呼ばれるポリペプチドの二量体；例えば、米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のような、二特異性／多価分子を形成するように二量体できる、ペプチドスペーサーで更に抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域に結合した、連結ＶＬ鎖及びＶＨ鎖を有するミニボディ構築物；二特異性二特異性抗体を形成するように二量体を形成できる、いずれかの方向で短ペプチドリンカー（例えば、５又は１０アミノ酸）により又はリンカーなしで連結されたＶＨ及びＶＬドメイン；例えば、米国特許第５８４４０９４号明細書に記載のような三量体及び四量体；例えば、米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のような、一連のＦＶ（又はｓｃＦｖ）を形成するように更にＶＬドメインと結合した、Ｃ末端で架橋可能基とのペプチド結合により連結した一連のＶＨドメイン（又はファミリーメンバーにおけるＶＬドメイン）；及び例えば米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のような、ｓｃＦＶ又は二特異性抗体形態の両者を使用して、例えばホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成するように、非共有又は化学架橋により多価構造に合わさっている、ペプチドリンカーにより連結してＶＨドメイン及びＶＬドメインの両者を有する単鎖結合ポリペプチドを例えば含むが、これらに限定されない。多特異性及び二特異性分子及びそれを製造するための更なる例は、例えば、米国特許第５９１０５７３号明細書、米国特許第５９３２４４８号明細書、米国特許第５９５９０８３号明細書、米国特許第５９８９８３０号明細書、米国特許第６００５０７９号明細書、米国特許第６２３９２５９号明細書、米国特許第６２９４３５３号明細書、米国特許第６３３３３９６号明細書、米国特許第６４７６１９８号明細書、米国特許第６５１１６６３号明細書、米国特許第６６７０４５３号明細書、米国特許第６７４３８９６号明細書、米国特許第６８０９１８５号明細書、米国特許第６８３３４４１号明細書、米国特許第７１２９３３０号明細書、米国特許第７１８３０７６号明細書、米国特許第７５２１０５６号明細書、米国特許第７５２７７８７号明細書、米国特許第７５３４８６６号明細書、米国特許第７６１２１８１号明細書、米国特許出願公開第２００２００４５８７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２０７６４０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２１０３３４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２０７３４６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２１１０７８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２１９６４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２２０３８８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２４２８４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００３４０３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００４３５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０６９５５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０７９１７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１００５４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１６３７８２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５２６６４２５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６０８３７４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６１２０９６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２６３３６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７００４９０９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７０８７３８１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１２８１５０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１４１０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１５４９０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７２７４９８５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０５０３７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０６９８２０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１５２６４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１７１８５５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２４１８８４Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２５４５１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２６０７３８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１３０１０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１４８９０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１５５２７５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３５９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３２８１１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３４１０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２６３３９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２７４６４９Ａ１号明細書、欧州特許第３４６０８７Ａ２号明細書、国際公開第０００６６０５Ａ２号パンフレット、国際公開第０２０７２６３５Ａ２号パンフレット、国際公開第０４０８１０５１Ａ１号パンフレット、国際公開第０６０２０２５８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０４４８８７Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０９５３３８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７１３７７６０Ａ２号パンフレット、国際公開第２００８１１９３５３Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０２１７５４Ａ２号パンフレット、国際公開第２００９０６８６３０Ａ１号パンフレット、国際公開第９１０３４９３Ａ１号パンフレット、国際公開第９３２３５３７Ａ１号パンフレット、国際公開第９４０９１３１Ａ１号パンフレット、国際公開第９４１２６２５Ａ２号パンフレット、国際公開第９５０９９１７Ａ１号パンフレット、国際公開第９６３７６２１Ａ２号パンフレット、国際公開第９９６４４６０Ａ１号パンフレットに見ることができる。上に参照した出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４９４】
二特異性抗体分子の各抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流であり得る。いくつかの実施形態において、上流抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）の上流のそのＶＨ（ＶＨ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）の上流のそのＶＨ（ＶＨ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有する。他の実施形態において、上流抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）の上流のそのＶＬ（ＶＬ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）の上流のそのＶＬ（ＶＬ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有する。任意選択により、リンカーは、２つの抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２として配列される場合、ＶＬ１とＶＬ２との間、又は構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２として配置される場合、ＶＨ１とＶＨ２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）であり得る（配列番号８０）。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。任意選択により、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。任意選択により、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数リンカーを有する構築物において、リンカーの任意の２つ以上は、同一又は異なり得る。従って、いくつかの実施形態において、二特異性ＣＡＲは、本明細書に記載のような配置でＶＬ、ＶＨ及び任意選択により１つ以上のリンカーを含む。
【０４９５】
一態様において、本発明は、二特異性抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載のもの）及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のもの）を含むキメラ抗原受容体を提供する。別の態様において、本発明は、細胞（例えば細胞集団）、例えば免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞、例えば本明細書に記載されるものを提供し、これは、本明細書に記載の二特異性ＣＡＲを発現する（例えば、含む）ように操作されている。いかなる理論にも縛られるものではないが、そのような二特異性ＣＡＲを発現する細胞は、本明細書に記載の方法及び組成物において有用であると考えられる。
【０４９６】
キメラＴＣＲ
一態様において、本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えば抗体及び抗体断片、例えば本明細書の表に提供されるものは、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載の固形腫瘍抗原又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原に特異的に結合するキメラＴＣＲを生成するため、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）鎖、例えばＴＣＲα鎖又はＴＣＲβ鎖の１つ以上の定常ドメインに移植され得る。理論に縛られないが、キメラＴＣＲは、抗原結合によりＴＣＲ複合体を経てシグナル伝達すると考えられる。例えば、本明細書に記載するようなメソテリン又はＣＤ１９  ｓｃＦｖ又はその断片、例えばＶＬドメイン又はＶＨドメインをＴＣＲ鎖、例えばＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の定常ドメイン、例えば少なくとも細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの部分に移植できる。別の例として、抗体又は抗体断片のＣＤＲ、例えば本明細書中に提供される表に記載されるような任意の抗体又は抗体断片のＣＤＲは、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載の固形腫瘍抗原又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原に特異的に結合するキメラＴＣＲを生成するため、ＴＣＲα鎖及び／又はβ鎖に移植され得る。例えば、本明細書に記載のＬＣＤＲをＴＣＲα鎖の可変ドメインに移植し得、本明細書に記載のＨＣＤＲをＴＣＲβ鎖の可変ドメインに移植し得るか又はその逆も可能である。このようなキメラＴＣＲは、当技術分野で公知の方法により産生し得る（例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０００；７：１３６９−１３７７；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００４；１１：４８７−４９６；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ａｐｒ；１９（４）：３６５−７４）。
【０４９７】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、例えば抗原結合ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大で１５のアミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大で１５のアミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つに関連するものであり、例えば、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば共刺激ドメインと同じタンパク質に由来する。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択され又はアミノ酸置換による改変ができる。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。
【０４９８】
膜貫通ドメインは、天然由来又は組み換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０４９９】
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、一実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号４のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号１２の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
【０５００】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号６のアミノ酸配列のヒンジを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号７のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号８のアミノ酸配列のヒンジを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号９のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０５０１】
一態様において、膜貫通ドメインは組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
【０５０２】
任意選択により、２〜１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域の間に結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む（配列番号１０）。一実施形態において、リンカーは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣのヌクレオチド配列によりコードされる（配列番号１１）。
【０５０３】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
【０５０４】
細胞質ドメイン
本ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般的に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。従って、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを形質導入し、細胞に特殊な機能を果たすよう指示するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達の切断された一部を使用する範囲内において、このような切断された一部を、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、完全鎖の代わりに使用し得る。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、そのため、エフェクター機能シグナルの伝達に十分な細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆる切断された一部を含むことを意図する。
【０５０５】
本発明のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又はバリアント及び同じ機能的能力を有するあらゆる組み換え配列を含む。
【０５０６】
ＴＣＲ単独により産生されたシグナルはＴ細胞の完全活性化には不十分であり、二次及び／又は共刺激性シグナルも必要であることが知られている。そのため、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激性シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。
【０５０７】
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０５０８】
本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものを含む。一実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζ、例えば本明細書に記載のＣＤ３ζ配列の一次シグナル伝達ドメインを含む。
【０５０９】
一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
【０５１０】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをそれ自体で含むことができ又は本発明のＣＡＲに関連して、有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激性分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。そのような分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンド等が含まれる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、インビボでヒトＴ細胞残留性及び抗腫瘍活性を増強することが示されている（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６−７０６）。更なるこのような共刺激性分子の例は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。
【０５１１】
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択により、例えば、２〜１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列間に結合を形成し得る。一実施形態において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。一実施形態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
【０５１２】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、リンカー分子はグリシン残基である。一実施形態において、リンカー分子はアラニン残基である。
【０５１３】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１４のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号１８のシグナル伝達ドメインである。
【０５１４】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１７の核酸配列によりコードされる。
【０５１５】
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５の核酸配列によりコードされる。
【０５１６】
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４３の核酸配列によりコードされる。
【０５１７】
一態様において、本発明の細胞、例えば本明細書に記載のもの、例えば本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞は、本明細書に記載の標的腫瘍抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）、膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメイン、及び１つ以上（例えば、１つ）の共刺激性シグナル伝達ドメインに結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを含む。
【０５１８】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は阻害性ＣＡＲを更に含み得る。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばまたＣＡＲによって標的化される腫瘍抗原を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン又はＴＧＦβの細胞内ドメインであり得る。
【０５１９】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものであり得る。例えば、第１及び第２のＣＡＲを発現する細胞は、第２のＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えばＶＨＨである第２のＣＡＲの抗原結合ドメインと結合を形成しない、例えば断片、例えばｓｃＦｖとしての第１のＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。
【０５２０】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子を含み、相補的決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４鎖抗体由来の単一ドメイン、操作されたドメイン及び抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドを含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の又は将来的な単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
【０５２１】
一態様において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であるような、魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域由来の単一ドメイン分子を製造する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。
【０５２２】
別の態様によると、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８に記載されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインは、ここでは、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するためにＶＨＨ又はナノボディとして知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコ由来であり得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
【０５２３】
ＳＤＡＢ分子は、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロ産生され得る（例えば、ファージディスプレイにより選択）。
【０５２４】
受容体の抗原結合ドメイン間を相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１つ以上がその同族抗原に結合することを阻止するため、望ましくない可能性があることも判明した。従って、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する、抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。また、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸並びにこのような細胞及び核酸を製造及び使用する方法である。一実施形態において、前記第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の抗原結合ドメインの一方は、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。
【０５２５】
一実施形態において、本発明は、第１及び第２のＣＡＲを含み、ここで、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０５２６】
一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一実施形態において、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０５２７】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの存在により実質的に低減されない。一実施形態において、第２のＣＡＲの存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの非存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。
【０５２８】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なく互いに結合する。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく互いに結合する。
【０５２９】
別の態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を更に発現できる。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ１は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβを含む。
【０５３０】
一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ、又はこれらのいずれかの断片（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はその断片（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド並びに本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７６５−７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。
【０５３１】
一実施形態において、薬剤は、膜貫通ドメイン及び４１ＢＢ及びＣＤ３ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合する阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）（本明細書ではＰＤ１  ＣＡＲと称する）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、本明細書に記載のＸＣＡＲと組み合わせで使用したとき、Ｔ細胞の残留性を改善する。一実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２６において下線で示すＰＤ１の細胞外ドメインを含むＰＤ１  ＣＡＲである。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む。
【０５３２】
一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＰＤ１  ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲの核酸配列は、表１の配列番号２７として示され、ＰＤ１  ＥＣＤの配列に下線が付されている。
【０５３３】
別の態様において、本開示は、ＣＡＲ発現細胞の集団を提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態では、ＣＡＲＴ細胞の集団は、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞、及び異なる抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の異なる腫瘍抗原に対する抗原結合ドメイン、例えば第１の細胞によって発現されるＣＡＲの抗原結合ドメインによって結合された腫瘍抗原と異なる、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞、及び本明細書に記載の腫瘍抗原以外の標的に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含む。
【０５３４】
他の態様において、本開示は、細胞の集団を提供し、ここで、集団内の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞は、他の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ−１は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβを含む。一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ、又はこれらのいずれかの断片などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−１又はその断片の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインの第２のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を含む。
【０５３５】
一態様において、本開示は、別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて、ＣＡＲ発現細胞、例えば種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を投与することを含む方法を提供する。別の態様において、本開示は、集団内の少なくとも１つの細胞が本明細書に記載の腫瘍抗原の抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞が別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する細胞集団を別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【０５３６】
ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子、例えば腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原を標的とするＣＡＲ分子は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の１つ以上の成分を含み、それによりＮＫＲ−ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、次のナチュラルキラー細胞受容体のいずれか由来の膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン又は細胞質ドメインであり得る：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、例えば、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１及びＫＩＲ３ＤＰ１；天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）、例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー、例えばＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ−Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ及びＣＤ２Ｆ−１０；Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＣＤ１６及びＣＤ６４；及びＬｙ４９受容体、例えばＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃ。本明細書に記載のＮＫＲ−ＣＡＲ分子は、アダプター分子又は細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ要素を含むＣＡＲ分子の例示的な配置及び配列は、国際公開第２０１４／１４５２５２号パンフレットに記載され、その内容が参照により本明細書に援用される。
【０５３７】
スプリットＣＡＲ
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び国際公開第２０１４／０５５６５７号パンフレットにより詳細に記載されている。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は、第１の抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢ）を有する第１のＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞は、第２の抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を有する第２のＣＡＲも発現する。細胞が第１の抗原に遭遇したとき、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２の抗原に遭遇したとき、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、殺細胞活性が開始される。そのため、ＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下でのみ完全活性化される。実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の腫瘍抗原又はＢ細胞抗原を認識し、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインは、第２の抗原、例えば本明細書に記載の第２の腫瘍抗原又は第２のＢ細胞抗原を認識する。
【０５３８】
キメラ抗原受容体を制御するための戦略
ＣＡＲ活性が制御され得る多くの方法がある。一実施形態において、ＣＡＲ活性が制御できる制御可能ＣＡＲ（ＲＣＡＲ）は、ＣＡＲ治療の安全性及び有効性を最適化するために望ましい。例えば、例として二量体化ドメインに融合した、カスパーゼを使用するアポトーシスの誘導（例えば、Ｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１  Ｎｏｖ．３；３６５（１８）：１６７３−１６８３を参照されたい）を本発明のＣＡＲ治療における安全スイッチとして使用できる。別の例において、ＣＡＲ発現細胞は、誘導性カスパーゼ−９（ｉＣａｓｐａｓｅ−９）分子も発現でき、これは、二量体化因子薬物（例えば、ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ（ＡＰ１９０３（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＰ２０１８７（Ａｒｉａｄ）とも呼ばれる）の投与により、細胞のカスパーゼ−９活性化及びアポトーシスに至る。ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、二量体化（ＣＩＤ）結合ドメインの化学誘導因子を含み、これは、ＣＩＤの存在下で二量体化に介在する。これは、ＣＡＲ発現細胞の誘導的及び選択的枯渇に至る。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと別の核酸分子によりコードされる。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によりコードされる。ｉＣａｓｐａｓｅ−９は、ＣＡＲ発現細胞の何らかの毒性を避けるための安全スイッチを提供できる。例えば、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００８；１５（１０）：６６７−７５；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄ．Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０７９６３；及びＤｉ  Ｓｔａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１；３６５：１６７３−８３を参照されたい。
【０５３９】
本発明のＣＡＲ治療を制御するための代替的戦略は、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘発により、例えばＣＡＲ発現細胞を消失させることにより、ＣＡＲ活性の脱活性化又は遮断する小分子又は抗体の利用を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えばＡＤＣＣ又は補体誘導性細胞死を誘発できる分子により認識される抗原も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体又は抗体断片により標的化され得る受容体も発現し得る。このような受容体の例は、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ−７２、ＩＬ−６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ−１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７、及びＥＧＦＲ、並びにその切断バージョン（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠くバージョン）を含む。
【０５４０】
例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘発できる分子、例えばセツキシマブ（アービタックス（登録商標））により認識されるエピトープを保持する切断型上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）も発現し、その結果、セツキシマブの投与がＡＤＣＣ及び続くＣＡＲ発現細胞の枯渇を誘発する（例えば、国際公開第２０１１／０５６８９４号パンフレット及びＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１３；２０（８）８５３−８６０を参照されたい）。別の戦略は、例えば、ＡＤＣＣによりＣＡＲ発現細胞の選択的枯渇をもたらす、リツキシマブに結合する、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞におけるＣＤ３２及びＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープをあわせる、高度に小型のマーカー／自殺遺伝子の発現を含む（例えば、Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４（８）１２７７−１２８７を参照されたい）。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を枯渇させる他の方法は、例えば、ＡＤＣＣ誘発により、破壊するために成熟リンパ球、例えばＣＡＲ発現細胞に選択的に結合し、標的とするモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）の投与を含む。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体を使用して選択的に標的化され得る。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を引き起こし、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。他の実施形態において、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体は、細胞致死を誘発する薬剤、例えばトキシンに結合させ、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。代わりに、ＣＡＲ分子自体、下記のように、活性が制御され得る、例えば活性化又は遮断され得るように配置できる。
【０５４１】
他の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、Ｔ細胞除去剤により認識される標的タンパク質も発現し得る。一実施形態において、標的タンパク質は、ＣＤ２０であり、Ｔ細胞除去剤は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブである。このような実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を減少又は除去する、例えばＣＡＲ誘発毒性を軽減することが望まれるときにＴ細胞除去剤を投与する。他の実施形態において、Ｔ細胞除去剤は、抗ＣＤ５２抗体、例えばアレムツズマブである。
【０５４２】
他の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の標準的ＣＡＲの要素、例えば抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが個別のポリペプチド又はメンバーに配置された、一連の典型的には最も単純な実施形態において２つのポリペプチドを含む。一部の実施形態において、一連のポリペプチドは、二量体化分子の存在下で互いにポリペプチドを結合できる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。このような制御可能ＣＡＲの更なる記載及び例示的な配置は、本明細書、及び参照により本明細書にその全体が援用される国際公開第２０１５／０９０２２９号パンフレットに提供される。
【０５４３】
ＣＡＲ及びケモカイン受容体の共発現
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ケモカイン受容体分子を更に含む。Ｔ細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂ又はＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、黒色腫及び神経芽腫を含むＣＣＬ２−又はＣＸＣＬ１分泌固形腫瘍への輸送を促進する（Ｃｒａｄｄｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０  Ｏｃｔ；３３（８）：７８０−８及びＫｅｒｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００２  Ｎｏｖ  １；１３（１６）：１９７１−８０）。そのため、理論に拘束されることを望まないが、腫瘍、例えば固形腫瘍により分泌されるケモカインを認識するＣＡＲ発現細胞で発現されるケモカイン受容体は、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への帰巣を改善し、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への浸潤を促進し、ＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍効果を増強すると考えられる。ケモカイン受容体分子は、天然に存在する又は組み換えケモカイン受容体又はそのケモカイン結合断片を含む。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞における発現に適するケモカイン受容体分子は、ＣＸＣケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６又はＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０又はＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例えば、ＣＸ３ＣＲ１）、ＸＣケモカイン受容体（例えば、ＸＣＲ１）又はそのケモカイン結合断片を含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲと共に発現するケモカイン受容体分子は、腫瘍により発現されるケモカインに基づいて選択する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＣＲ２ｂ受容体又はＣＸＣＲ２受容体を更に含み、例えば発現する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、同じベクターにあるか又は２つの異なるベクターにある。本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子が同じベクターにある実施形態において、ＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、それぞれ２つの異なるプロモーターの制御下にあるか又は同じプロモーターの制御下にある。
【０５４４】
ＣＡＲをコードする核酸構築物
本開示は、本明細書に記載の腫瘍抗原及び／又はＢ細胞抗原を標的とする１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする核酸分子も提供する。一態様において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。一態様において、核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
【０５４５】
従って、一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸分子に関し、ＣＡＲは、腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）、及び刺激ドメイン、例えば共刺激性シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の共刺激性シグナル伝達ドメイン）、及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載のζ鎖）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４からなる群から選択される、タンパク質の膜貫通ドメインである。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ及びＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０５４６】
一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号１２の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域、例えば本明細書に記載のヒンジにより接続される。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号４又は配列番号６又は配列番号８又は配列番号１０又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、単離核酸分子は、共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインである。そのような共刺激性分子の更なる例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ及びＮＫＧ２Ｃを含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号１６の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインを含む。ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１４の配列又は配列番号１６，４２若しくは４４又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列及び配列番号１８又は配列番号２０の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームに及び単一ポリペプチド鎖として発現される。
【０５４７】
他の態様において、本発明は、配列番号２のリーダー配列、本明細書に記載されるようなｓｃＦｖドメイン、配列番号４又は配列番号６又は配列番号８又は配列番号１０（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）のヒンジ領域、配列番号１２の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有する膜貫通ドメイン、配列番号１４の配列を有する４−１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１６の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ２７共刺激ドメイン、配列番号４２の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有するＩＣＯＳ共刺激ドメイン、又は配列番号４４の配列を有するＣＤ２８共刺激ドメイン、及び配列番号１８又は配列番号２０の配列を有するＣＤ３ζ刺激ドメイン（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を含む、ＣＡＲ構築物をコードする単離核酸分子に関する。
【０５４８】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技術を使用して、例えば遺伝子を発現する細胞からのライブラリのスクリーニングにより、それを含むことが知られるベクターからの遺伝子を誘導化することにより又はそれを含むことが知られる細胞及び組織から直接単離することによるような、組み換え当技術分野で知られる方法を使用して得ることができる。代わりに、目的の遺伝子をクローン化ではなく合成により産生できる。
【０５４９】
本開示は、本開示の核酸が挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。更に低免疫原性であるという付加的利点も有する。
【０５５０】
別の実施形態において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ、ｃｒｉｓｐｅｒ、ＣＡＳ９及び亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。参照により本明細書に包含される下記のＪｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６を参照されたい。
【０５５１】
概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
【０５５２】
本開示の構築物の発現は、標準遺伝子送達プロトコルを使用する核酸免疫化及び遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子送達のための方法が当技術分野で知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第５，３９９，３４６号明細書、同第５，５８０，８５９号明細書、同第５，５８９，４６６号明細書を参照されたい。別の実施形態において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０５５３】
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシークエンシングベクターを含む。
【０５５４】
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １  −４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
【０５５５】
多数のウイルスベースの系が哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組み換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当技術分野で知られている。一実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。一実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。
【０５５６】
更なるプロモーター要素、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０〜１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間は、多くの場合、可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。代表的プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。
【０５５７】
哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲコード核酸分子の発現ができるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子−１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された核酸分子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。一態様において、ＥＦ１ａプロモーターは、配列番号１として提供される配列を含む。
【０５５８】
プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子−１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに活性化し、発現が望まれないときに遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０５５９】
プロモーターの別の例は、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、切断ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき、１つ以上、例えば１つ、２つ、５つ、１０、１００、２００、３００又は４００のヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいことがある。ＰＧＫプロモーター例のヌクレオチド配列を下に提供する。
ＷＴ  ＰＧＫプロモーター
【化１】
2019527696.tif 000148
【０５６０】
例示的な切断型ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：
【化２】
2019527696.tif 000149
ＰＧＫ２００：
【化３】
2019527696.tif 000150
ＰＧＫ３００：
【化４】
2019527696.tif 000151
ＰＧＫ４００：
【化５】
2019527696.tif 000152
【０５６１】
ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野で知られる他のもの）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。
【０５６２】
ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両方を含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用される。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【０５６３】
レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２）。適当な発現系は、周知であり、既知技術により製造できるか又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用され得る。
【０５６４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸配列を含むベクターは、ポリペプチド、例えばＣＡＲ分子の活性を増大させる薬剤をコードする第２の核酸配列を更に含み得る。他の実施形態において、２つ以上の核酸配列は、同じフレームにおいて単一核分子により且つ単一ポリペプチド鎖としてコード化される。この態様において、２つ以上のＣＡＲは、例えば、１つ以上のペプチド開裂部位により分けられ得る（例えば、自己開裂部位又は細胞内プロテアーゼのための基質）。ペプチド開裂部位の例は、次のものを含み、ここで、ＧＳＧ残基は、任意選択である。
Ｔ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｅ  Ｇ  Ｒ  Ｇ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｔ  Ｃ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１０６）
Ｐ２Ａ：（ＧＳＧ）Ａ  Ｔ  Ｎ  Ｆ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｑ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１０７）
Ｅ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｑ  Ｃ  Ｔ  Ｎ  Ｙ  Ａ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１０８）
Ｆ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｖ  Ｋ  Ｑ  Ｔ  Ｌ  Ｎ  Ｆ  Ｄ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１０９）
【０５６５】
細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野の任意の方法により、宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段により、宿主細胞に移入され得る。
【０５６６】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、電気穿孔などを含む。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照されたい）。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入に好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクション又は電気穿孔である。
【０５６７】
宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞への遺伝子挿入に最も広く使用される方法となってきている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書及び同第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。
【０５６８】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段は、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散体系を含む。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための代表的コロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。標的化ナノ粒子又は他の適当なサブミクロンサイズの送達系を用いるポリヌクレオチドの送達など、最新式の核酸の標的化送達の他の方法が利用可能である。
【０５６９】
非ウイルス送達系を利用する場合、代表的送達媒体は、リポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入のために意図される（インビトロ、エクスビボ又はインビボ）。別の態様において、核酸は、脂質と結合され得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの水性内部への被包、リポソームの脂質二重層内への分散、リポソームとオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介するリポソームへの結合、リポソームへの封入、リポソームとの複合体化、脂質含有溶液への分散、脂質との混合、脂質との組み合わせ、脂質中の懸濁液としての包含、ミセル内への包含又は複合体化又は他の方法で脂質と結合する。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造において、ミセルとして又は「崩壊」構造を有して存在し得る。それらはまた、単に溶液に分散され、恐らくサイズ又は形状が均一ではない凝集体を形成し得る。脂質は、天然に存在する又は合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素を含む化合物群及びその誘導体を含む。
【０５７０】
使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から得ることができる。クロロホルム又はクロロホルム／メタノール中の脂質の原液を約−２０℃で保存できる。クロロホルムを、メタノールよりも容易に揮発するために唯一の溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層又は凝集体の産生により形成される多様な単及び多層状脂質媒体を包含する一般的用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜及び内部水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられ得る。多層状リポソームは、水性媒体により分離された、複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自然に形成される。脂質要素は、閉構造形成前に自己凝集し、水及び溶解した溶質を脂質二重層の間に封入する（Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５：５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造と異なる構造を溶液で有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であるか又は単に脂質分子の不均一凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン−核酸複合体も考慮される。
【０５７１】
外来性核酸を宿主細胞に導入するか又はそうでなければ細胞を本開示の阻害剤に曝す方法に関係なく、宿主細胞における組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために多様なアッセイを行い得る。このようなアッセイは、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、薬剤の同定に使用するための、例えば免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）により、特定のペプチドの存在又は不在を検出するような「生化学的」アッセイ又は本発明の範囲内に入る本明細書に記載のアッセイを含む。
【０５７２】
本開示は、ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを更に提供する。一実施形態において、ベクターは、例えば、本明細書に記載されているように、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む。一態様において、１つ以上のＣＡＲベクターを細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入することができる。一態様において、ベクターは、クローニング又は発現ベクター、例えば１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳動物免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）においてＣＡＲ構築物の発現ができる。
【０５７３】
一実施形態において、ＣＡＲの安定した発現が望ましい場合、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターが免疫エフェクター細胞に形質導入される。例えば、ＣＡＲの安定した発現を有する免疫エフェクター細胞は、レンチウイルスベクターを用いて産生することができる。ＣＡＲの安定した発現を示す細胞は、形質導入後、少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月又は１２ヶ月間ＣＡＲを発現する。
【０５７４】
一実施形態において、ＣＡＲの一過性発現が望ましい場合、ＣＡＲをコードする核酸分子が免疫エフェクター細胞にトランスフェクトされる。ＣＡＲをコードする核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクター又はＣＡＲをコードするインビトロで転写されたＲＮＡであり得る。インビトロで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲ及び免疫エフェクター細胞へのトランスフェクションのための方法は、以下に更に記載される。ＣＡＲの一過性発現を示す細胞は、トランスフェクション後４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間ＣＡＲを発現する。
【０５７５】
ＲＮＡトランスフェクション
インビトロで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲ、例えばインビトロで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲの製造方法が本明細書に開示される。本開示は、細胞に直接遺伝子導入できるＲＮＡ構築物をコードするＣＡＲも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを産生する方法は、特異的に設計したプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続くポリＡ付加を含み、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させる核酸及びポリＡテールを含む構築物、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３２）を産生し得る。このように産生されたＲＮＡは、異なる種の細胞において効率的に翻訳され得る。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
【０５７６】
一態様において、本開示のＣＡＲは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされている。一態様において、本明細書に記載のＣＡＲをコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲを発現する細胞の産生のためにＴ細胞又はＮＫ細胞に導入される。
【０５７７】
一実施形態において、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲを一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入できる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）産生鋳型を使用するインビトロ転写により産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマー及びＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型にＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列又はＤＮＡのあらゆる他の適切な供給源であり得る。インビトロ転写のための所望の鋳型は本明細書中に記載されるＣＡＲである。例えば、ＲＮＡ  ＣＡＲの鋳型は、腫瘍抗原、例えば固形腫瘍抗原、又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原に対する抗体の単鎖可変ドメインを含む細胞外領域、ヒンジ領域（例えば、本明細書に記載のヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８ａの膜貫通ドメインなどの本明細書に記載の膜貫通ドメイン）；及び細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むものを含む細胞質領域を含む。
【０５７８】
一実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。一実施形態において、核酸は、５’及び／又は３’非翻訳領域（ＵＴＲ）のいくらか又は全てを含み得る。核酸は、エクソン及びイントロンを含み得る。一実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、ヒト核酸配列である。別の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。ＤＮＡは、代わりに、天然に存在する生物で通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するようにライゲートされた遺伝子の部分を含むものである。ライゲートされたＤＮＡの部分は、単一生物由来又は１つを超える生物由来であり得る。
【０５７９】
ＰＣＲを使用して、トランスフェクションに使用するｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を産生する。ＰＣＲを実施する方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲにおいて使用するプライマーは、ＰＣＲのための鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計する。本明細書で使用する「実質的に相補的」は、プライマー配列の残基の大部分又は全てが相補的であるか又は１つ以上の塩基が非相補的又はミスマッチである、ヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用するアニーリング条件下においてＤＮＡ標的とアニール又はハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的であるように設計できる。例えば、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲを含む、細胞において通常転写される（オープンリーディングフレーム）核酸の部分を増幅するように設計できる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するようにも設計できる。一実施形態において、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲの全て又は一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコーディング領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成法により産生できる。「順方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上にヌクレオチドに対して実質的に相補的であるヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する５位を指すために本明細書で使用する。「逆方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の下流である、二本鎖ＤＮＡ鋳型に対して実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する３’位を指すために本明細書で使用する。
【０５８０】
ＰＣＲに有用なあらゆるＤＮＡポリメラーゼを本明細書に開示する方法で使用できる。試薬及びポリメラーゼは、多数の供給元から市販されている。
【０５８１】
安定性及び／又は翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用し得る。ＲＮＡは、好ましくは、５’及び３’ＵＴＲを有する。一実施形態において、５’ＵＴＲは、１〜３０００ヌクレオチド長である。コーディング領域に付加する５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの異なる領域をアニールするＰＣＲのためのプライマーの設計を含むが、これに限定されない異なる方法により変わり得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後、最適翻訳効率を達成するのに必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾できる。
【０５８２】
５’及び３’ＵＴＲは、目的の核酸のための天然に存在する内在性５’及び３’ＵＴＲであり得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列を順方向及び逆方向プライマーへのＵＴＲ配列の取り込みにより又は鋳型の任意の他の修飾により付加できる。目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／又は翻訳効率の修飾のために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵリッチ要素は、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られる。従って、３’ＵＴＲを、当技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づき、転写されたＲＮＡの安定性を増加するように選択及び設計できる。
【０５８３】
一実施形態において、５’ＵＴＲは、内在性核酸のＫｏｚａｋ配列を含み得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではない５’ＵＴＲを上記のようにＰＣＲにより付加するとき、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を５’ＵＴＲ配列の付加により再設計できる。Ｋｏｚａｋ配列は、あるＲＮＡ転写物の翻訳効率を上げることができるが、効率的翻訳を可能とするために全ＲＮＡで必要であるように見えない。多くのｍＲＮＡについてのＫｏｚａｋ配列に対する必要性は、当技術分野で公知である。他の実施形態において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲであり得る。他の実施形態において、種々のヌクレオチドアナログを、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために３’又は５’ＵＴＲにおいて使用できる。
【０５８４】
遺伝子クローニングの必要性なしにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするために、転写のプロモーターは、転写する配列の上流のＤＮＡ鋳型に結合すべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列が順方向プライマーの５’末端に追加されるとき、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。好ましい一実施形態において、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載するような、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターは、Ｔ３及びＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３及びＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列が当技術分野で公知である。
【０５８５】
好ましい一実施形態において、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳開始及び細胞におけるｍＲＮＡの安定性を決定する、５’末端及び３’ポリ（Ａ）テールの両者にキャップを有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡ上において、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞における発現に適しない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後ポリアデニル化されても、真核トランスフェクションに有効ではない正常サイズのｍＲＮＡを生じる。
【０５８６】
直鎖状ＤＮＡ鋳型で、ファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長できる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ  ａｎｄ  Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：６２２３−３６（１９８５）；Ｎａｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５−６５（２００３））。
【０５８７】
ＤＮＡ鋳型に伸びるポリＡ／Ｔの組込みの慣用法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミド不安定性を生じ得、これは、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型が多くの場合に欠失及び他の異常で高度に汚染されている理由である。これにより、クローニング工程は、困難で時間がかかるだけでなく、多くの場合に信頼できないものとなる。これが、クローニングを伴わないポリＡ／Ｔ  ３’ストレッチを有するＤＮＡ鋳型の産生を可能にする方法が非常に望ましい理由である。
【０５８８】
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００ＴテールなどのポリＴテールを含む逆方向プライマーを使用するＰＣＲ中（配列番号３５）（サイズは、５０〜５０００Ｔであり得る（配列番号２５８８））又はＤＮＡライゲーション若しくはインビトロ組み換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法によりＰＣＲ後に産生できる。ポリ（Ａ）テールはまた、ＲＮＡに安定性を提供し、その分解を減らす。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールは、１００〜５０００アデノシンである（例えば、配列番号３４）。
【０５８９】
ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリＡポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）のなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼの使用により、インビトロ転写後更に伸長できる。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールの１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチドへの長さの延長（配列番号３８）は、ＲＮＡの翻訳効率の約２倍増加を生じる。更に、３’末端への異なる化学基の付加は、ｍＲＮＡ安定性を増加させ得る。このような結合は、修飾／人工ヌクレオチド、アプタマー及び他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰアナログは、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに取り込まれ得る。ＡＴＰアナログは、ＲＮＡの安定性を更に高め得る。
【０５９０】
５’キャップもＲＮＡ分子に安定性を提供する。好ましい一実施形態において、本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり、本明細書に記載の技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２９：４３６−４４４（２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＲＮＡ，７：１４６８−９５（２００１）；Ｅｌａｎｇｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３３０：９５８−９６６（２００５））。
【０５９１】
本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列も含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始し、翻訳開始を促進するあらゆるイルス、染色体又は人工設計配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤及び界面活性剤などの細胞透過性及び生存能を促進する因子を含有し得る、細胞電気穿孔に適した任意の溶質が含まれ得る。
【０５９２】
ＲＮＡを、多数の異なる方法、例えば商業的に利用可能な方法のいずれかを使用して標的細胞に導入でき、これは、電気穿孔（Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ  ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）又はＧｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ  ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ  Ｇｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム介在トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド介在トランスフェクション又は「遺伝子銃」などの微粒子銃粒子送達系（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１２（８）：８６１−７０（２００１）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０５９３】
非ウイルス送達方法
いくつかの態様において、非ウイルス方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を細胞又は組織又は対象に送達できる。
【０５９４】
いくつかの実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転位因子とも呼ばれる）の使用を含む。いくつかの実施形態において、トランスポゾンは、ゲノムの位置にそれ自体挿入できるＤＮＡの断片、例えば自己複製性であり、そのコピーをゲノムに挿入することができるＤＮＡの断片又は長い核酸の外にスプライシングされ、ゲノムの別の場所に挿入されることができるＤＮＡの断片である。例えば、トランスポゾンは、転位のための逆位反復フランキング遺伝子からなるＤＮＡ配列を含む。
【０５９５】
例示的なトランスポゾンを使用する核酸送達法は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系（ＳＢＴＳ）及びｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポゾン系を含む。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０．Ｒ１（２０１１）：Ｒ１４−２０；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（２００８）：２９６１−２９７１；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（２００８）：５８０−５８９；Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（２０１０）：１２００−１２０９；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２２．２１（２０１３）：１６６；Ｗｉｌｌｉａｍｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６．９（２００８）：１５１５−１６；Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２．１２（２００７）：３１５３−６５；及びＤｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．１２２．３（２００５）：４７３−８３（これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０５９６】
ＳＢＴＳは２つの成分：１）導入遺伝子を含むトランスポゾン、及び２）トランスポサーゼ酵素の供給源を含む。トランスポサーゼは、担体プラスミド（又は他のドナーＤＮＡ）から、宿主細胞染色体／ゲノムなどの標的ＤＮＡにトランスポゾンを転位できる。例えば、トランスポサーゼは、担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン（導入遺伝子含有）をプラスミドの外に切り出し、宿主細胞のゲノムに入れる。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．上掲を参照されたい。
【０５９７】
例示的なトランスポゾンは、ｐＴ２ベースのトランスポゾンを含む。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１．３（２０１３）：１８２９−４７；及びＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８．８（２００８）：２９６１−２９７１を参照されたい。例示的なトランスポサーゼは、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型トランスポサーゼ、例えばＳＢ１０トランスポサーゼ又はＳＢ１１トランスポサーゼを含む（例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現できる機能亢進トランスポサーゼ）。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＡｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．；及びＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０５９８】
ＳＢＴＳの使用は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸の効率的組込み及び発現を可能にする。例えば、ＳＢＴＳなどのトランスポゾン系を使用する、本明細書に記載のＣＡＲを安定に発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を産生する方法が本明細書に提供される。
【０５９９】
本明細書に記載の方法により、いくつかの実施形態において、ＳＢＴＳ成分を含む１つ以上の核酸、例えばプラスミドが細胞に送達される（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）。例えば、核酸は、核酸（例えば、プラスミドＤＮＡ）送達の標準法、例えば本明細書に記載の方法、例えば電気穿孔、トランスフェクション又はリポフェクションにより送達される。いくつかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸）を含むトランスポゾン並びにトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施形態において、例えば、デュアルプラスミド系、例えば第１のプラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第２のプラスミドがトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む、２核酸の系が提供される。例えば、第１及び第２の核酸は、宿主細胞に共送達される。
【０６００】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系又は操作されたメガヌクレアーゼ再操作ホーミングエンドヌクレアーゼ）を使用するＳＢＴＳ及び遺伝子編集の遺伝子挿入の組み合わせを使用して産生される。
【０６０１】
いくつかの実施形態において、非ウイルス送達方法の使用は、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の再プログラミング及び対照への細胞の直接注入を可能にする。非ウイルスベクターの利点は、患者集団に見合うために必要な十分量の産生が容易且つ比較的安価であること、保存中の安定性及び免疫原性の欠如を含むが、これらに限定されない。
【０６０２】
細胞の供給源
例えば、本明細書に記載のＣＡＲを発現するための増殖及び遺伝的改変前に細胞、例えばＴ細胞の供給源を対象から得ることができる。用語「対象」は、免疫応答が惹起できる生存生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。本開示の一態様において、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞系を使用し得る。本開示の一態様において、Ｔ細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に知られるあらゆる技術を使用して、対象から採取した血液の単位から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れる。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
【０６０３】
本出願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。
【０６０４】
一態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離又は向流遠心溶出法により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的下位集団を陽性又は陰性選択技術により更に単離し得る。例えば、一態様において、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズとインキュベーションすることにより単離する。一態様において、時間は、約３０分である。更なる態様において、時間は、３０分〜３６時間又はそれより長い範囲及びその間の任意の整数値である。更なる態様において、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。別の好ましい態様において、時間は、１０〜２４時間である。一態様において、インキュベーション時間は、２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。更に、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短くするか若しくは長くし、及び／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加若しくは減少させる（更に本明細書に記載の通り）ことにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。複数回の選択も本発明で使用できることを当業者は認識する。一態様において、選択過程を実施し、「未選択」細胞を活性化及び増殖過程で使用することが望ましいことがある。「未選択」細胞も更なる選択に付され得る。
【０６０５】
陰性選択によるＴ細胞集団富化は、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。一態様において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞について富化又は陽性選択することが望ましいことがある。代わりに、一態様において、Ｔ制御性細胞を抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似選択法により枯渇させる。
【０６０６】
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０６０７】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去する。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はその断片を本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
【０６０８】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
【０６０９】
一実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９〜１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
【０６１０】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２−０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
【０６１１】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０６１２】
一実施形態において、製造法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。
【０６１３】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。
【０６１４】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。
【０６１５】
一実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
【０６１６】
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。
【０６１７】
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗腫瘍抗原抗体又はその断片を同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗腫瘍抗原抗体又はその断片を別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。
【０６１８】
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＰＤ１、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ及びＬＡＩＲ１を含む。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はその断片を同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はその断片を別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序の順番でも生じ得る。
【０６１９】
一実施形態において、Ｔ細胞ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
【０６２０】
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０６２１】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ〜１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
【０６２２】
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２〜１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
【０６２３】
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後に凍結され得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接−２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
【０６２４】
一態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本開示の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
【０６２５】
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、Ｔ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどのＴ細胞治療からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、Ｔ細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、Ｔ細胞をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
【０６２６】
本開示の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本開示に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
【０６２７】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
【０６２８】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
【０６２９】
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現せず、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
【０６３０】
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０６３１】
同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞
本明細書に記載の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
【０６３２】
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され、又はその表面に微少の機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異した又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」は、このＴＣＲが宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。
【０６３３】
本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。
【０６３４】
一実施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。
【０６３５】
機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用したＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０６３６】
一実施形態において、同種細胞は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにより、阻害性分子を発現しないか又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下できる、阻害分子を発現しないか又は阻害分子を低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載の阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用できる。
【０６３７】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、細胞、例えばＴ細胞におけるＴＣＲ、及び／又はＨＬＡ、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。
【０６３８】
ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの発現系、及び例示的なｓｈＲＮＡは、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６４９及び６５０に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３９】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
本明細書で使用する「ＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、一連の群生性等間隔短回文反復配列又はこのような一連の反復を含む系を指す。本明細書で使用する「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。
【０６４０】
「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、細胞、例えばＴ細胞におけるＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の発現抑制又は変異に使用できる、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ由来の系を指す。
【０６４１】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６５１〜６５８に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４２】
ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ
「ＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、細胞、例えばＴ細胞におけるＨＬＡ、及び／又はＴＣＲ遺伝子、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼを指す。
【０６４３】
ＴＡＬＥＮ及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６５９〜６６５に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４４】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するための亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
「ＺＦＮ」、又は「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＺＦＮ」は、細胞、例えばＴ細胞におけるＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである亜鉛フィンガーヌクレアーゼを指す。
【０６４５】
ＺＦＮ及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６６６〜６７１に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４６】
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、治療的Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアのために患者における残留性が短く、従って、テロメラーゼ遺伝子を用いるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅ，“Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６−１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、異所性にテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。いくつかの態様において、本開示は、細胞をテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前に、同時に又は後に核酸と接触させ得る。
【０６４７】
一態様において、本開示は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を製造する方法に関する。一実施形態において、本方法は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、免疫エフェクター細胞集団を、ＣＡＲをコードする核酸と接触させ、免疫エフェクター細胞集団をテロメラーゼサブユニット、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と、ＣＡＲ及びテロメラーゼ発現を可能とする条件下で接触させることを含む。
【０６４８】
一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡである。一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、テロメラーゼサブユニットの発現を駆動できるプロモーターを含む。
【０６４９】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、以下のようにＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＩＤ  ＡＡＣ５１７２４．１のアミノ酸配列を有する（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ，Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  ９０，Ｉｓｓｕｅ  ４，２２  Ａｕｇｕｓｔ  １９９７，Ｐａｇｅｓ  ７８５−７９５）。
【化６】
2019527696.tif 000153
【０６５０】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６＾、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１０の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方に欠失（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方にトランスジェニックアミノ酸配列（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。
【０６５１】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、以下のようにＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＦ０１８１６７の核酸配列によりコードされる（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ，Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  ９０，Ｉｓｓｕｅ  ４，２２  Ａｕｇｕｓｔ  １９９７，Ｐａｇｅｓ  ７８５−７９５）。
【化７】
2019527696.tif 000154
【化８】
2019527696.tif 000155
【化９】
2019527696.tif 000156
【０６５２】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１１の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６、９７％、９８％又は９９％同一である配列を有する核酸によりコードされる。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１１の核酸によりコードされる。
【０６５３】
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び増殖
Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載する方法を使用して、一般的に活性化及び増殖できる。
【０６５４】
一般に、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面と、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合断片又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドである。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０６５５】
一態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本開示におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０６５６】
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片であり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片であり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本開示の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１〜約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１〜１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。本発明の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。本開示の一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
【０６５７】
１：５００〜５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００〜１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９〜９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１〜１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１〜１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本開示における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
【０６５８】
本開示の更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
【０６５９】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４〜１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本開示に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、及び特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０６６０】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）〜約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一実施形態において、細胞は、４〜９日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
【０６６１】
本開示の一態様において、混合物を数時間（約３時間）〜約１４日又はその間の任意の時間的整数値だけ培養し得る。一態様において、混合物を２１日培養し得る。本発明の一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に約８日培養する。一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に２〜３日培養する。Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ−α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ−アセチル−システイン、及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５及びＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
【０６６２】
一実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一実施形態において、細胞は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７（例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の存在下で増殖させる。
【０６６３】
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、その断片又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、その断片又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７の存在下で増殖させる。
【０６６４】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。
【０６６５】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
【０６６６】
一実施形態において、細胞は、血清を含む培地中で培養（例えば、増殖、シミュレート、及び／又は形質導入）される。血清は、例えば、ヒトＡＢ血清（ｈＡＢ）であり得る。いくつかの実施形態において、ｈＡＢ血清は、約２％、約５％、約２〜３％、約３〜４％、約４〜５％又は約２〜５％で存在する。２％及び５％の血清は、それぞれＴ細胞の何倍もの増殖を可能にするのに適当なレベルである。更に、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に示されるように、２％ヒトＡＢ血清を含有する培地がＴ細胞のエクスビボ増殖に適当である。
【０６６７】
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８〜９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
【０６６８】
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
【０６６９】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸で形質導入された細胞は、例えば、ＣＣＬ２０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＴＮＦαの１つ以上及び／又はそれらの組み合わせのタンパク質発現レベルに基づいて投与のために選択され得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸で形質導入された細胞は、例えば、ＣＣＬ２０、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−６及びそれらの組み合わせのタンパク質発現レベルに基づいて投与のために選択され得る。
【０６７０】
ＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。ＣＡＲ又はＣＡＲを発現する細胞（例えば、本発明の細胞）の効果を評価するためのアッセイは、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６９５〜７０３に更に詳細に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６７１】
ＣＡＲ又はＣＡＲ発現細胞（例えば、本発明の細胞）の効果を評価するためのアッセイは、以下に更に詳細に記載される。
【０６７２】
例えば、上記の細胞毒性アッセイは、インビトロでＣＡＲ発現細胞の細胞毒性活性を評価するために改変され得る。本発明の細胞は、標的細胞、例えばＣＡＲによって標的化された抗原を発現する細胞と、標的に対するエフェクターの様々な比率（Ｅ：Ｔ）で混合することができる。細胞媒介性細胞溶解を可能にするのに十分なインキュベーション後、各比率のサンプルからの上清を採取し、次いで放出された５１Ｃｒについて測定する。細胞媒介性の存続又は増殖をモニターするために、本発明の細胞は、例えば、フローサイトメトリーによって監視され得る。
【０６７３】
更に、上記のものと同様の動物モデルに本発明の細胞を投与して細胞の能力を評価することができる。
【０６７４】
本明細書の実施例の項に記載のもの並びに当技術分野で公知のものを含む他のアッセイも本発明のＣＡＲ構築物及び方法の評価に使用できる。
【０６７５】
治療適用
本明細書に記載の任意の方法に従って、実施形態において、対象は、癌、例えば固形腫瘍、又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍を有する。実施形態において、本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載の癌を処置するために使用され得る。実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のもの、例えば抗ＩＬ−１３抗体、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−１３Ｒα１抗体は、癌、例えばホジキンリンパ腫を処置するためにＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３  ＣＡＲ発現細胞）と組み合わせて使用される。
【０６７６】
本発明は、とりわけ、例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態、又は抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）を発現する細胞が関係する非癌関連徴候を含む、抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現と関係する疾患又は抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）を発現する細胞と関係する状態を処置するための組成物及び方法を提供する。一態様において、抗原の発現と関係する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、ＡＭＬ、骨髄異形成症候群、ＡＬＬ、慢性骨髄白血病、芽細胞性形質細胞様樹状細胞新生物、骨髄増殖性新生物、ホジキンリンパ腫などを含むが、これらに限定されない。実施形態において、ＣＤ１２３と関係する疾患は、例えば、非定型及び／又は非古典的癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性ＣＤ１２３の発現と関係する疾患を含むが、これらに限定されない。抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する非癌関連徴候も包含され得る。いくつかの態様において、障害は、ＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載のＣＤ１９発現Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０６７７】
一態様において、本発明は、抗原（例えば、固形腫瘍抗原、又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現に関連する疾患を処置するための方法を提供する。一態様において、本発明は、腫瘍の一部が抗原（例えば、固形腫瘍抗原、又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）に対して陰性であり、腫瘍の一部が抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）に対して陽性である疾患を処置する方法を提供する。例えば、本明細書に記載のＣＡＲは、抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現上昇に関連する疾患の処置を受けた対象を処置するのに有用であり、ここで、上昇したレベルの抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）について処置を受けた対象は、上昇したレベルの抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）に関連する疾患を示す。実施形態において、ＣＡＲは、抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現に関連する疾患の処置を受けた対象を処置するのに有用であり、ここで、抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現に関する処置を受けた対象は、抗原（例えば、固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ又はＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原）の発現に関連する疾患を示す。
【０６７８】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞が、抗原に応答して活性化し、癌細胞を標的とし、ここで、腫瘍の増殖が阻害されるように、腫瘍細胞とＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載のもの）とを接触させることを含む、抗原発現腫瘍細胞（例えば、固形腫瘍又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍）の増殖を阻害する方法が本明細書で提供される。方法は、例えば、本明細書に記載のプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の投与を含み得る。
【０６７９】
一態様において、本発明は、対象における癌を処置する方法に関する。この方法は、癌が対象において処置されるように、対象に本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を投与することを含む。細胞療法は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて提供される。
【０６８０】
本開示は、ある種の細胞治療を含み、ここで、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に修飾され、ＣＡＲ発現細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントにおいて腫瘍細胞を殺傷することができる。細胞療法は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて提供される。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ修飾Ｔ細胞又はＣＡＲ修飾ＮＫ細胞は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞又はその子孫は、患者において、患者に免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
【０６８１】
本発明は、ある種の細胞治療も含み、ここで、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように例えばインビトロ転写ＲＮＡにより改変され、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ  ＮＫ細胞）は、それを必要とするレシピエントに注入される。細胞治療は、プロＭ２マクロファージ分子、例えば本明細書に記載のものの阻害剤と組み合わせて提供される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与した免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、患者に免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満持続する。
【０６８２】
何らかの特定の理論に拘束されないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞により惹起される抗腫瘍免疫応答は、能動的又は受動的免疫応答であり得るか又は代わりに直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、標的抗原を発現するヒト癌細胞に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解性活性を示し、可溶性標的抗原阻害に抵抗し、バイスタンダー細胞死に介在し、確立されたヒト腫瘍の退縮に介在する。例えば、抗原発現腫瘍の不均一な場における抗原低腫瘍細胞は、近辺の抗原陽性癌細胞に対して先に反応している癌関連抗原の抗原再指向免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）による間接的破壊を受け得る。
【０６８３】
一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化及び／又はインビボ治療のための１種のワクチンである。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
【０６８４】
エクスビボ免疫化に関して、次の少なくとも１つは、哺乳動物に細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を投与する前にインビトロで起こる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）細胞へのＣＡＲをコードする核酸の導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。
【０６８５】
エクスビボ過程は、当技術分野で周知であり、下により詳細に記載する。簡潔には、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に記載するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的に改変（即ちインビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を提供できる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに対して同種、同系又は異種であり得る。
【０６８６】
参照により本明細書に援用される米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載する造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖のための方法を本発明の細胞に適用できる。他の適当な方法は、当技術分野で知られ、従って、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、（１）哺乳動物からの採取した末梢血又は髄外植体からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞回収、及び（２）エクスビボでのこのような細胞の増殖を含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載される細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用できる。
【０６８７】
エクスビボ免疫化の点で細胞ベースのワクチンを使用するのに加えて、本発明は、患者における抗原に対する免疫応答を惹起するための、インビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。
【０６８８】
一般に、本明細書に記載のような細胞活性化及び増殖は、免疫不全状態である個体で惹起する疾患の処置及び予防に利用し得る。特に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、本明細書に記載の疾患、障害及び症状、例えば本明細書に記載の抗原、例えば固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原の発現に関連する障害又は症状の処置に使用される。特定の態様において、本発明の細胞は、本明細書に記載の疾患、障害及び症状、例えば本明細書に記載の抗原、例えば、例えば固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原の発現に関連する障害又は症状を発症するリスクがある患者の処置に使用される。そのため、本発明は、処置を必要とする対象に、本明細書に記載のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の治療有効量を、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて投与することを含む、本明細書に記載の障害及び状態、例えば本明細書に記載の抗原、例えば、例えば固形腫瘍抗原又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍上に発現される抗原の発現と関係する疾患、障害及び状態の処置又は予防のための方法を提供する。
【０６８９】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態の処置に使用し得る。一態様において、癌は、血液癌、前白血病状態、過増殖性障害、過形成又は細胞の異常増殖により特徴付けられる異形成である。
【０６９０】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を癌の処置に使用し、ここで、癌は、血液癌である。血液癌状態は、白血病及び血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌である。
【０６９１】
一態様において、本発明の組成物及びＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、例えば、膵臓、肝臓、肺、乳房、卵巣、リンパ系、消化管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば腎細胞、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭に影響を及ぼすものなどの様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば肉腫、腺癌、及び癌腫などの固形腫瘍を処置するのに特に有用である。一態様において、本発明の組成物及びＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、ホジキンリンパ腫を処置するのに特に有用である。
【０６９２】
抗原発現細胞集団（例えば、固形腫瘍細胞集団、又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭ細胞集団に関連する腫瘍）の増殖を阻害するか又は減少させるための方法も本明細書に提供され、方法は、抗原発現細胞を含む細胞の集団を、抗原発現細胞に結合するＣＡＲ発現細胞と接触させることを含む。特定の態様において、本発明は、抗原を発現する癌細胞の集団の増殖を阻害するか又は減少させるための方法を提供し、方法は、抗原発現癌細胞集団を、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて、抗原発現細胞に結合するＣＡＲ発現細胞と接触させることを含む。一態様において、本発明は、抗原を発現する癌細胞の集団の増殖を阻害するか又は減少させるための方法を提供し、方法は、抗原発現癌細胞集団を、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて、抗原発現細胞に結合するＣＡＲ発現細胞と接触させることを含む。一態様において、ＣＡＲ発現細胞は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて投与した場合、細胞及び／又は癌細胞の含量、数、量又はパーセンテージを、陰性対照と比較して、又はいずれかの単剤療法と比較して、ホジキンリンパ腫又は抗原発現細胞と関係する別の癌を有する対象又は動物モデルで少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％減少させる。一態様において、対象は、ヒトである。
【０６９３】
本発明は、抗原発現細胞に関連する疾患（例えば、固形腫瘍、又はＭＤＳＣ若しくはＴＡＭに関連する腫瘍、例えば、ホジキンリンパ腫）を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合するＣＡＲ発現細胞をプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０６９４】
本発明は、抗原発現細胞に関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合するＣＡＲ発現細胞をプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０６９５】
本発明は、抗原発現細胞に関連する癌の再発を予防する方法を提供し、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合する本発明のＣＡＲ発現細胞をプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて投与することを含む。一態様において、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合する有効量の本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を有効量の別の治療（例えば、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤、例えば本明細書に記載のもの）と組み合わせて投与することを含む。
【０６９６】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象（例えば、癌を有する対象（例えば、固形腫瘍又は腫瘍関連マクロファージに関連する腫瘍））を処置する方法を提供する。方法は、（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む（例えば、発現する）細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ治療であって、ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する腫瘍抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ治療、及び（ｉｉ）腫瘍標的治療を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、Ｍ２マクロファージ活性の阻害をもたらすのに十分な量及び／又は時間で投与される。実施形態において、Ｍ２マクロファージ活性の阻害は、Ｍ２表現型へのマクロファージの偏向の阻害及び／又はＭ２マクロファージの表現型の逆転を含む。
【０６９７】
他の実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療、例えばＣＤ１９阻害剤を含む治療であるか又はそれを含む。実施形態において、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療は、ＣＲＳに関連する。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９阻害剤は、ＣＤ１９抗体、例えばＣＤ１９二特異性抗体（例えば、ＣＤ１９を標的とする二特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、例えばブリナツモマブ）である。いくつかの実施形態において、二特異性Ｔ細胞エンゲイジャー抗体分子は、Ｂａｒｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｂｙ  ｖｅｒｙ  ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｅｎｇａｇｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．”Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８  Ａｕｇ  １５；３２１（５８９１）：９７４−７．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１５８５４５に記載される抗体分子である。
【０６９８】
いくつかの実施形態において、腫瘍標的治療は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞若しくは抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単又は二特異性抗体）又はその断片若しくはコンジュゲートを含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３）に記載のヒト化抗原結合ドメイン又はそのコンジュゲートである。他の例示的な抗ＣＤ１９抗体又はその断片若しくはコンジュゲートは、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＥＤＩ−５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ  ＬＬＣ）、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（Ｍａｓｏｎｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、ＭＯＲ−２０８（別名ＸｍＡｂ−５５７４；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＸｍＡｂ−５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ−１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｈａｍｍｅｒ．ＭＡｂｓ．４．５（２０１２）：５７１−７７を参照されたい。ブリナツモマブは、２つのｓｃＦｖを含む二特異性抗体、ＣＤ１９に結合するもの及びＣＤ３に結合するものである。ブリナツモマブは、Ｔ細胞を指向し、癌細胞を攻撃する。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００２７４７４２及びＮＣＴ０１２０９２８６を参照されたい。ＭＥＤＩ−５５１は、増強した抗体依存性細胞介在細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有するように操作されたＦｃを有するヒト化抗ＣＤ１９抗体ｗである。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０１９５７５７９を参照されたい。Ｃｏｍｂｏｔｏｘは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する免疫毒素の混合物である。免疫毒素は、脱グリコシル化リシンＡ鎖に融合したｓｃＦｖ抗体断片からなる。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及びＨｅｒｒｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３１．１２（２００９）：９３６−４１；Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５４．４（２０１１）：４７１−６を参照されたい。ＤＴ２２１９ＡＲＬは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的化し、２つのｓｃＦｖ及び切断型ジフテリア毒素を含む二特異性免疫毒素である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００８８９４０８を参照されたい。ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａは、合成細胞毒性細胞致死剤、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と連結した抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体からなる抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１７８６０９６及びＮＣＴ０１７８６１３５を参照されたい。ＳＡＲ３４１９は、開裂可能リンカーによりメイタンシン誘導体にコンジュゲートした抗ＣＤ１９ヒ���化モノクローナル抗体を含む抗ＣＤ１９抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０．２（２０１２）：２７７６−８２；Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００５４９１８５；及びＢｌａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１１；１７：６４４８−５８を参照されたい。ＸｍＡｂ−５８７１は、Ｆｃ操作、ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。ＭＤＸ−１３４２は、ＡＤＣＣが増強されたヒトＦｃ操作抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。実施形態において、抗体分子は、二特異性抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ３分子である。例えば、ＡＦＭ１１は、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的とする二特異性抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０６０９１を参照されたい。一実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体を治療剤、例えば化学療法剤、ペプチドワクチン（例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載のもの）、免疫抑制剤又は免疫除去剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、ＦＫ５０６、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、ｃｙｔｏｘｉｎ、フルダラビン、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８又はサイトカインとコンジュゲート又は他の方法で結合させる。
【０６９９】
血液癌
血液癌状態は、白血病、リンパ腫並びに血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌の種類である。
【０７００】
一実施形態において、血液癌は、白血病である。一実施形態において、癌は、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を包含する、１種又は複数の急性白血病；これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を包含する、１種又は複数の慢性白血病；これらに限定されないが、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せ持つ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」を包含する追加の血液癌又は血液学的状態からなる群から選択される。
【０７０１】
一実施形態において、癌は、ホジキンリンパ腫である。実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のものである。
【０７０２】
白血病は、急性白血病及び慢性白血病に分類できる。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として更に分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連する状態は、骨髄球性血液細胞の産生不良（又は異形成）によりまとめられる血液学的状態の多様なコレクションであり、ＡＭＬに癌化するリスクがある骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病状態」として知られる）を含む。
【０７０３】
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。代表的リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む。一実施形態において、癌は、ホジキンリンパ腫である。実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のものである。
【０７０４】
一態様において、本発明は、血液癌を有する哺乳動物を処置する方法であって、ＣＡＲ分子を発現する細胞及び本明細書に記載のプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤の有効量を哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
【０７０５】
固形癌
本発明の方法及び組成物が固形癌及び固形腫瘍を処置するために使用されることが特に好ましい。例示的な固形癌には、子宮癌、大腸癌、卵巣癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、肺癌、肺の非小細胞癌、乳癌、小腸癌、精巣癌、肛門部癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、食道癌、黒色腫、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、脳腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、副腎癌、骨癌、膵癌、頭頸部癌、類表皮癌、子宮内膜癌、膣癌、子宮頸癌、肉腫、子宮癌、胃癌、食道癌、大腸癌、肝癌、前立腺癌、子宮頸部扁平上皮癌、卵管癌、軟部肉腫、尿道癌、外陰癌、腎臓又は尿管癌、腎盂癌、脊髄軸腫瘍、陰茎癌、膀胱癌、中枢神経系新生物（ＣＮＳ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、前記癌の転移性病変、及び／又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０７０６】
一実施形態において、本開示は、本発明の細胞又は組成物が固形腫瘍を処置するために、例えば固形腫瘍の増殖を阻害するために投与される、本明細書に記載の治療を提供する。実施形態において、細胞は、固形腫瘍中の細胞又は細胞集団上に存在する腫瘍抗原を標的とする、例えばそれに結合するＣＡＲ分子を含む。本明細書に開示する方法で治療され得る固形腫瘍の例には、膵臓、肝臓、肺、乳房、卵巣、リンパ系、消化管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎細胞、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭に影響を及ぼすものなどの様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば肉腫、腺癌、及び癌腫が含まれる。腺癌には、大部分の結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌などの悪性腫瘍が含まれる。一実施形態において、固形腫瘍は、中皮腫である。前述の癌の転移性病変も本発明の方法及び組成物を使用して処置又は予防することができる。
【０７０７】
一実施形態において、本明細書に記載の併用療法は、ＣＤ１９陰性癌を処置するために投与される。ＣＤ１９陰性癌は、ＣＤ１９喪失（例えば、抗原喪失変異）又はＣＤ１９レベルを低減させる他のＣＤ１９改変（例えば、ＣＤ１９陰性クローンのクローン選択による）を特徴とし得る。ＣＤ１９陰性癌は、１００％のＣＤ１９喪失を有する必要はなく、いくらかの部分的ＣＤ１９発現を保持し得る（例えば、ＣＤ１９を発現するいくつかの癌細胞を保持する）と解されるものとする。
【０７０８】
一態様において、本開示は、ＣＤ１２３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１２３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ホジキンリンパ腫である。
【０７０９】
一態様において、本開示は、ＥＧＦＲｖＩＩＩＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫である。
【０７１０】
一態様において、本開示は、メソテリンＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、メソテリンを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、又は大細胞肺癌、膵臓癌、膵管腺癌、膵転移性、食道腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌及び膀胱癌又はそれらの任意の組み合わせである。
【０７１１】
一態様において、本開示は、ＧＤ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＤ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫である。
【０７１２】
一態様において、本開示は、ＴｎＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｔｎ抗原を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌、又は膵臓癌である。
【０７１３】
一態様において、本開示は、ｓＴｎＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｓＴｎ抗原を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌、又は膵臓癌である。
【０７１４】
一態様において、本開示は、ＰＳＭＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＳＭＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０７１５】
一態様において、本開示は、ＴＡＧ７２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＡＧ７２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７１６】
一態様において、本開示は、ＣＤ４４ｖ６ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ４４ｖ６を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、子宮頸癌、ＡＭＬ、又はＭＭである。
【０７１７】
一態様において、本開示は、ＥＰＣＡＭＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＰＣＡＭを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７１８】
一態様において、本開示は、ＫＩＴＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＫＩＴを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７１９】
一態様において、本開示は、ＩＬ−１３Ｒａ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＩＬ−１３Ｒａ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫である。
【０７２０】
一態様において、本開示は、ＣＤ１７１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１７１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫、卵巣癌、黒色腫、乳癌、膵臓癌、結腸癌、又はＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）である。
【０７２１】
一態様において、本開示は、ＰＳＣＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＳＣＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０７２２】
一態様において、本開示は、ルイスＹＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ルイスＹを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌又はＡＭＬである。
【０７２３】
一態様において、本開示は、ＰＤＧＦＲ−βＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＤＧＦＲ−βを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、前立腺癌、ＧＩＳＴ（胃腸間質腫瘍）、ＣＭＬ、ＤＦＳＰ（隆起性皮膚線維肉腫）、又は神経膠腫である。
【０７２４】
一態様において、本開示は、ＳＳＥＡ−４ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＳＳＥＡ−４を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、膠芽腫、乳癌、肺癌、又は幹細胞癌である。
【０７２５】
一態様において、本開示は、葉酸受容体αＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、葉酸受容体αを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、子宮内膜癌、腎臓癌、又は他の固形腫瘍である。
【０７２６】
一態様において、本開示は、ＥＲＢＢ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、胃癌、結腸直腸癌、肺癌、又は他の固形腫瘍である。
【０７２７】
一態様において、本開示は、ＭＵＣ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＵＣ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、肺癌、又は他の固形腫瘍である。
【０７２８】
一態様において、本開示は、ＥＧＦＲＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＧＦＲを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫、ＳＣＬＣ（小細胞肺癌）、ＳＣＣＨＮ（頭頸部の扁平上皮癌）、ＮＳＣＬＣ、又は他の固形腫瘍である。
【０７２９】
一態様において、本開示は、ＮＣＡＭＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＣＡＭを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫又は他の固形腫瘍である。
【０７３０】
一態様において、本開示は、ＣＡＩＸＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＡＩＸを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、腎臓癌、ＣＲＣ、子宮頸癌、又は他の固形腫瘍である。
【０７３１】
一態様において、本開示は、ＨＭＷＭＡＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＨＭＷＭＡＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫、神経膠芽腫、又は乳癌である。
【０７３２】
一態様において、本開示は、ｏ−アセチル−ＧＤ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｏ−アセチル−ＧＤ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫又は黒色腫である。
【０７３３】
一態様において、本開示は、ＣＬＤＮ６ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＬＤＮ６を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、肺癌、又は乳癌である。
【０７３４】
一態様において、本開示は、ＴＳＨＲＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＳＨＲを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、甲状腺癌又は多発性骨髄腫である。
【０７３５】
一態様において、本開示は、ＣＤ９７ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ９７を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、胃癌、膵臓癌、膵臓癌、食道癌、神経膠芽腫、乳癌、又は結腸直腸癌である。
【０７３６】
一態様において、本開示は、ポリシアル酸ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ポリシアル酸を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、小細胞肺癌である。
【０７３７】
一態様において、本開示は、ＰＬＡＣ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＬＡＣ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＨＣＣ（肝細胞癌）である。
【０７３８】
一態様において、本開示は、ＧｌｏｂｏＨＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧｌｏｂｏＨを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、胃癌、前立腺癌、肺癌、乳癌、又は膵臓癌である。
【０７３９】
一態様において、本開示は、ＮＹ−ＢＲ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＹ−ＢＲ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌である。
【０７４０】
一態様において、本開示は、ＭＡＤ−ＣＴ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＤ−ＣＴ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌又は黒色腫である。
【０７４１】
一態様において、本開示は、ＭＡＤ−ＣＴ−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＤ−ＣＴ−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌、黒色腫である。
【０７４２】
一態様において、本開示は、Ｆｏｓ関連抗原１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｆｏｓ関連抗原１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠腫、扁平上皮癌、又は膵臓癌である。
【０７４３】
一態様において、本開示は、ＭＬ−ＩＡＰ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＬ−ＩＡＰを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７４４】
一態様において、本開示は、ＮＡ１７ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＡ１７を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７４５】
一態様において、本開示は、ＴＲＰ−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＲＰ−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７４６】
一態様において、本開示は、ＣＹＰ１Ｂ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＹＰ１Ｂ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、結腸癌、肺癌、食道癌、皮膚癌、リンパ節癌、脳腫瘍、又は精巣癌である。
【０７４７】
一態様において、本開示は、ＲＡＧＥ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲＡＧＥ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＲＣＣ（腎細胞癌）又は他の固形腫瘍である。
【０７４８】
一態様において、本開示は、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０７４９】
一態様において、本開示は、腸カルボキシルエステラーゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、腸カルボキシルエステラーゼを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、甲状腺癌、ＲＣＣ、ＣＲＣ（結腸直腸癌）、乳癌、又は他の固形腫瘍である。
【０７５０】
一態様において、本開示は、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７５１】
併用療法
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、プロＭ２マクロファージ分子、例えば本明細書に記載のものの阻害剤と組み合わせて使用され得る。ＣＡＲ発現細胞とプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤との組み合わせは、他の公知の薬剤及び治療（更なる治療薬）と更に組み合わせて使用することができる。本明細書で使用する「組み合わせて」投与するとは、２つ（又はそれを超える）の異なる処置を、対象が障害を患っている過程中に対象に送達することを意味し、例えば、２つ以上の処置を、対象が障害と診断された後に且つ障害が治癒又は撲滅される前に、又は処置が他の理由で中止される前に送達される。一実施形態において、投与期間の重複があるように、一方の処置の送達は、第２の処置の送達開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」又は「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）送達」ということがある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの場合の一実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。例えば、第２の処置剤は、より有効である、例えば等しい効果が少ない第２の処置剤で見られるか、又は第２の処置剤は、第２の処置剤を第１の処置剤の非存在下で投与したときに見られるよりも大きい程度で症状を軽減するか又は第１の処置剤で同様の状況が見られる。一実施形態において、送達、障害と関係する症状又は他のパラメータの減少は、他方の処置剤の非存在下において一方の処置剤の送達で観察されるより大きい。２つの処置の効果は、一部相加的、完全相加的又は相加的より大きいものであり得る。送達は、送達した第１の処置の効果が第２の薬剤の送達時になお検出可能であるようなものであり得る。
【０７５２】
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び少なくとも１つの更なる治療剤を同時に、同じ又は別の組成物で又は逐次的に投与できる。逐次投与について、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をまず投与し得、更なる薬剤を次に投与し得、又は投与の順番が逆であり得る。プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＣＡＲ発現細胞又は更なる薬剤の前に、それと同時に、又はその後に投与され得る。
【０７５３】
ＣＡＲ治療及び／又は他の治療剤、方法又はモダリティを活動性障害の期間又は寛解又は低活動性疾患の期間に投与できる。ＣＡＲ治療を他の処置の処置前、処置と同時に、処置後に、又は障害の寛解中に投与できる。
【０７５４】
組み合わせて投与するとき、ＣＡＲ治療及び更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全てを、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は投与より高い、低い又は同じ量又は用量で投与できる。一実施形態において、ＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％）。他の実施形態において、所望の効果（例えば、癌の処置）を生じるＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、同じ治療効果を達成するのに必要である、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％低い）。
【０７５５】
プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤
Ｍ２表現型を有するマクロファージは、細胞毒性機能を含むＴ細胞機能の阻害において役割を果たすことが知られている。ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＣＳＦ−１、ＴＧＦ−β及びＧＭ−ＣＳＦなどの特定のサイトカインは、例えば（ＩＬ−１３及び／又はＩＬ−４の場合）、マクロファージ上で発現されるＩＬ−１３Ｒα１鎖及び／又はＩＬ−４Ｒα鎖との相互作用により、マクロファージをＭ２表現型に偏向させることが知られている。そのような分子を遮断する分子は、本明細書に記載の方法及び組成物において有用である。プロＭ２マクロファージ分子の好ましい阻害剤には、ＩＬ−１３の阻害剤、ＩＬ−４の阻害剤、ＩＬ−１３Ｒα１の阻害剤、及び／又はＩＬ−４Ｒαの阻害剤、例えば本明細書に記載のものが含まれる。
【０７５６】
プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤には、例えば、小分子が含まれる。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができる小分子阻害剤の例は、プテロスチルベン（例えば、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６  Ｊｕｎ  ２８；７（２６）：３９３６３−３９３７５を参照されたい）であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０７５７】
プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤には、例えば、抗体分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ、又はＭＤＳＣ又はＴＡＭ上の１つ以上の表面抗原に結合するＣＡＲ発現細胞が含まれる。
【０７５８】
一態様において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、抗ＩＬ−１３抗体である。そのような抗体の産生は、当技術分野において公知の方法によって行われ得る。抗ＩＬ−１３抗体の例には、例えば、レブリキズマブ（ＣＡＳ番号９５３４００−６８−５を参照されたい）が含まれる。抗ＩＬ−１３抗体の別の例は、例えば、トラロキヌマブ（ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）である。抗ＩＬ−１３抗体の別の例は、ＧＳＫ２４３４７３５の抗ＩＬ−１３結合ドメインであるか又はそれを含む。抗ＩＬ−１３抗体の別の例は、ＱＡＸ５７６である（例えば、Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，１３５（２），ｐｐ．５００−５０７を参照されたい）。
【０７５９】
別の態様において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−４Ｒα抗体である。そのような抗体の産生は、当技術分野において公知の方法によって行われ得る。抗ＩＬ−４抗体の例には、例えば、ＧＳＫ２４３４７３５の抗ＩＬ−４結合ドメインが含まれる。抗ＩＬ−４抗体の別の例は、例えば、デュピルマブである（ＣＡＳ番号１１９０２６４−６０−８を参照されたい）。
【０７６０】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージの阻害剤は、ＩＬ−１３及び／又はＩＬ−４の阻害剤である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができるＩＬ−１３及びＩＬ−４の阻害剤の例は、ビタミンＡ誘導体フェンレチニド（（例えば、４−ＨＰＲ）例えばその全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．２０１７年３月１日、第３８８巻、４３−５３ページ）である。
【０７６１】
別の態様において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、抗ＣＳＦ−１抗体又はＣＳＦ−１の小分子阻害剤である。そのような抗体の産生は、当技術分野において公知の方法によって行われ得る。抗ＣＳＦ−１抗体の一例は、エマクツズマブである。ＣＳＦ−１阻害剤の別の例は、ＢＬＺ９４５である（例えば、Ｓｔｒａｃｈａｎ，ＤＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３年１２月１日、２（１２）：ｅ２６９６８を参照されたい）。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができるＣＳＦ−１の阻害剤の別の例は、ニンテダニブである（例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられるＴａｎｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１７；１９５：Ａ２３９７を参照されたい）。
【０７６２】
別の態様において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＭＤＳＣ又はＴＡＭの表面に発現される抗原（即ちＴＡＭ抗原）、例えば他のマクロファージと比較して、ＭＤＳＣ又はＴＡＭの表面において上方制御された抗原と結合するＣＡＲ発現細胞である。実施形態において、ＭＤＳＣ又はＴＡＭ抗原に結合するＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に結合する（例えば、本明細書に記載のＣＤ１２３  ＣＡＲである）。実施形態において、ＭＤＳＣ又はＴＡＭ抗原に結合するＣＡＲ発現細胞は、ＣＳＦ１Ｒに結合する。実施形態において、ＭＤＳＣ又はＴＡＭ抗原に結合するＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ６８に結合する。実施形態において、ＭＤＳＣ又はＴＡＭ抗原に結合するＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ２０６に結合する。
【０７６３】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージの阻害剤は、ＪＡＫ２阻害剤である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができるＪＡＫ２阻害剤の例は、ルキソリチニブである（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｍｙｅｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ，Ｖｏｌｕｍｅ  １７  ，Ｉｓｓｕｅ  １  ，ｅ９３，２０１７を参照されたい）。
【０７６４】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、細胞表面分子である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができる細胞表面分子の例は、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ−４）又はＣＤ２６である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺｈｕｇｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０１６  Ｏｃｔ；６５（１０）：２９６６−２９７９を参照されたい）。
【０７６５】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害剤である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができるＨＤＡＣ阻害剤の例は、スベラニロヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）である。
【０７６６】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、解糖系の阻害剤である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができる解糖系の阻害剤の例は、２−デオキシ−ｄ−グルコース（（２−ＤＧ）例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺａｎｇａｎｅｈ，Ｎａｔ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６  Ｎｏｖ；１１（１１）：９８６−９９４を参照されたい）である。
【０７６７】
別の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、ミトコンドリア標的抗酸化剤である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができるミトコンドリア標的抗酸化剤の例は、ＭｉｔｏＱである（Ｆｏｒｍｅｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  １９，Ｉｓｓｕｅ  ６，２０１７年５月９日、１２０２−１２１３ページ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０７６８】
他の実施形態において、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤は、酸化鉄である。ＣＡＲ発現細胞と共に投与することができる酸化鉄の例は、フェルモキシトールである（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺａｎｇａｎｅｈ，Ｎａｔ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６  Ｎｏｖ；１１（１１）：９８６−９９４を参照されたい）。
【０７６９】
実施形態において、本発明は、プロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と薬学的に許容される担体とを含む組成物を含む。
【０７７０】
更なる併用療法
更なる態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、手術、サイトカイン、放射線若しくはシトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、デメチル化剤、又はＩｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載ものなどのペプチドワクチンなどの化学療法剤と組み合わせて治療レジメンにおいて使用し得る。
【０７７１】
ある例において、本発明の化合物を他の抗癌剤、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤及びこれらの組み合わせなどの他の治療剤と組み合わせる。
【０７７２】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はプロＭ２マクロファージ分子、例えば本明細書に記載のものの阻害剤を化学療法剤と更に組み合わせて使用できる。例示的な化学療法剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、サリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤を含む。
【０７７３】
併用療法における使用が企図される一般的化学療法剤は、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標））、ブスルファン注（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメサゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５−フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６−メルカプトプリン（ピュリネソール（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０とカルムスチンインプラント（グリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【０７７４】
本明細書に記載の組み合わせのための特に興味深い抗癌剤は、アントラサイクリン；アルキル化剤；代謝拮抗剤；カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン又はｐ７０Ｓ６キナーゼＦＫ５０６）を阻害する又はｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬剤；ｍＴＯＲ阻害剤；免疫調節剤；アントラサイクリン；ビンカアルカロイド；プロテアソーム阻害剤；ＧＩＴＲアゴニストタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；ＣＤＫ４キナーゼ阻害剤；ＢＴＫ阻害剤；ＭＫＮキナーゼ阻害剤；ＤＧＫキナーゼ阻害剤；又は腫瘍溶解性ウイルスを含む。
【０７７５】
例示的な代謝拮抗剤は、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤）：メトトレキサート（リウマトレックス（登録商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、エフデックス（登録商標）、フルオロプレクス（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＦ（登録商標））、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、Ｔａｒａｂｉｎｅ  ＰＦＳ）、６−メルカプトプリン（プリントール（登録商標）））、６−チオグアニン（チオグアニンＴａｂｌｏｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））、ペメトレキセド（アリムタ（登録商標））、ラルチトレキセド（トムデックス（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、クロファラビン（Ｃｌｏｆａｒｅｘ（登録商標）、クロラール（登録商標））、アザシチジン（ビダーザ（登録商標））、デシタビン及びゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））を含むが、これらに限定されない。好ましい代謝拮抗剤は、シタラビン、クロファラビン及びフルダラビンを含む。
【０７７６】
例示的なアルキル化剤は、窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類及びトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、ウラムスチン（登録商標）、ウラムスチン（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（ヘメル（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホロアミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、マイレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））及びダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。アルキル化剤の更なる例は、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（登録商標）及びテモダール（登録商標））；ダクチノマイシン（別名アクチノマイシン−Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（別名Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェクス（登録商標）及びマイレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（別名ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（別名ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（別名ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（別名窒素マスタード、ムスチン及び塩酸メクロロエタミン、Ｍｕｓｔ��ｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（別名チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。
【０７７７】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、ＢＴＫ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。ＢＴＫの阻害剤には、小分子、抗体分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡが含まれる。
【０７７８】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【０７７９】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５とも称される）と組み合わせて対象に投与する。イブルチニブの化学名は、１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロプ−２−エン−１−オン）である。
【０７８０】
いくつかの実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第／２０１５／０７９４１７号パンフレットに記載のＢＴＫ阻害剤である。
【０７８１】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、イデラリシブ又はドゥベリシブ）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイデラリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をドゥベリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。イデラリシブ（ＧＳ−１１０１又はＣＡＬ−１０１とも呼ばれる；Ｇｉｌｅａｄ）は、ＰＩ３Ｋのδアイソフォームを遮断する小分子である。イデラリシブの化学名は、５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノンである。デュベリシブは、ＰＩ３Ｋ−δ、γを遮断する小分子である。デュベリシブの化学名は、８−クロロ−２−フェニル−３−［（１Ｓ）−１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）エチル］−１（２Ｈ）−イソキノリノン）である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤と組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、テナリシブ（ＲＰ６５３０）である。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＬｏｃａｔｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．Ｊｕｌｙ  ０７，２０１６；１２８（１）を参照されたい）。
【０７８２】
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に抗ＣＤ２０抗体を投与されているか又は先にイブルチニブを投与されている）。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、対象は、染色体１１の長腕に欠失を有する（ｄｅｌ（１１ｑ））。他の実施形態において、対象は、ｄｅｌ（１１ｑ）を有しない。実施形態において、イデラリシブを約１００〜４００ｍｇ（例えば、１００〜１２５ｍｇ、１２５〜１５０ｍｇ、１５０〜１７５ｍｇ、１７５〜２００ｍｇ、２００〜２２５ｍｇ、２２５〜２５０ｍｇ、２５０〜２７５ｍｇ、２７５〜３００ｍｇ、３２５〜３５０ｍｇ、３５０〜３７５ｍｇ又は３７５〜４００ｍｇ）で例えばＢＩＤ投与する。実施形態において、ドゥベリシブを約１５〜１００ｍｇ（例えば、約１５〜２５、２５〜５０、５０〜７５又は７５〜１００ｍｇ）で例えば１日２回投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内投与する。
【０７８３】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）と組み合わせて対象に投与される。例示的なＡＬＫキナーゼ阻害剤は、クリゾチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、セリチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、アレクチニブ（中外）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３とも呼ばれる；Ａｒｉａｄ）、エントレクチニブ（Ｉｇｎｙｔａ）、ＰＦ−０６４６３９２２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＴＳＲ−０１１（Ｔｅｓａｒｏ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０２０４８４８８を参照されたい）、ＣＥＰ−３７４４０（Ｔｅｖａ）及びＸ−３９６（Ｘｃｏｖｅｒｙ）を含む。一実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌、例えば肺癌を有する。
【０７８４】
クリゾチニブの化学名は、３−［（１Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ］−５−（１−ピペリジン−４−イルピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミンである。セリチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−［２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（４−ピペリジニル）フェニル］−Ｎ４−［２−（イソプロピルスルホニル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。アレクチニブの化学名は、９−エチル−６，６−ジメチル−８−（４−モルホリノピペリジン−１−イル）−１１−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］カルバゾール−３−カルボニトリルである。ブリガチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−｛４−［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］−２−メトキシフェニル｝−Ｎ４−［２−（ジメチルホスホリル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。エントレクチニブの化学名は、Ｎ−（５−（３，５−ジフルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）ベンズアミドである。ＰＦ−０６４６３９２２の化学名は、（１０Ｒ）−７−アミノ−１２−フルオロ−２，１０，１６−トリメチル−１５−オキソ−１０，１５，１６，１７−テトラヒドロ−２Ｈ−８，４−（メテノ）ピラゾロ［４，３−ｈ］［２，５，１１］−ベンズオキサジアザシクロテトラデシン−３−カルボニトリルである。ＣＥＰ−３７４４０の化学名は、（Ｓ）−２−（（５−クロロ−２−（（６−（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミドである。Ｘ−３９６の化学名は、（Ｒ）−６−アミノ−５−（１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）ピリダジン−３−カルボキサミドである。
【０７８５】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与される。ＩＤＯは、アミノ酸、Ｌ−トリプトファンのキヌレニンへの分解を触媒する酵素である。多くの癌、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌及び肺癌がＩＤＯを過発現する。ｐＤＣ、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）がＩＤＯを発現できる。理論に拘束されないが、Ｌ−トリプトファンの減少（例えば、ＩＤＯによる触媒）は、Ｔ細胞アネルギー及びアポトーシスの誘発による免疫抑制性環境をもたらすと考えられる。そのため、理論に拘束されないが、ＩＤＯ阻害剤は、例えば、ＣＡＲ発現免疫細胞の抑制又は死を減少させることにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強できると考えられる。実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌又は肺癌を有する。例示的なＩＤＯ阻害剤は、１−メチル−トリプトファン、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１１９１２１６；ＮＣＴ０１７９２０５０を参照されたい）及びＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１６０４８８９；ＮＣＴ０１６８５２５５を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０７８６】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、骨髄由来サプレッサー細胞のモジュレーター（ＭＤＳＣ）と組み合わせて対象に投与される。ＭＤＳＣは、末梢及び多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞は、Ｔ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の効果を障害する。理論に拘束されないが、ＭＤＳＣモジュレーター投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強すると考えられる。一実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば神経膠芽腫を有する。例示的なＭＤＳＣのモジュレーターは、ＭＣＳ１１０及びＢＬＺ９４５を含むが、これらに限定されない。ＭＣＳ１１０は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００７５７７５７及び国際公開第２００５／０６８５０３号パンフレットを参照されたい。ＢＬＺ９４５は、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）の小分子阻害剤である。例えば、Ｐｙｏｎｔｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９（２０１３）：１２６４−７２を参照されたい。実施形態において、ＣＡＲは、メソテリンを標的とし、例えば本明細書に記載のメソテリン結合ドメインを含み、例えば表１１のＣＡＲであり、例えばＭ５である。実施形態において、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とし、例えば本明細書に記載のＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインを含み、例えば表３０のＣＡＲである。ＢＬＺ９４５の構造を下に示す。
【化１０】
2019527696.tif 000157
【０７８７】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド、又はＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５（Ａｄｍｕｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）と組み合わせて対象に投与する。ｈｅｔＩＬ−１５は、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体非共有複合体である。ｈｅｔＩＬ−１５は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，１２４，０８４号明細書、米国特許第２０１２／０１７７５９８号明細書、米国特許第２００９／００８２２９９号明細書、米国特許第２０１２／０１４１４１３号明細書及び米国特許第２０１１／００８１３１１号明細書に記載されている。実施形態において、ｈｅｔ−ＩＬ−１５を皮下投与する。実施形態において、対象は、癌、例えば固形癌、例えば黒色腫又は結腸癌を有する。実施形態において、対象は、転移癌を有する。
【０７８８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて対象に投与される。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）である。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、１つ以上のサイトカインを分泌するように操作され、例えば、実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ａｄ５−ＣＭＶ−ＴＮＦａであり、実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ａｄ５−ＣＭＶ−ＩＬ２であり、実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ａｄ５−ＣＭＶ−ＩＦＮｇであり、実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ａｄ５−ＣＭＶ−ＩＦＮｂであり、又はそれらの組み合わせである。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、国際公開第２０１４／１７０３８９号パンフレットに記載される通りであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えばメソＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載されるものと組み合わせて使用される。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載されている。一実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のような、免疫又は炎症性応答の阻害剤をコードする核酸配列（例えば、異種核酸配列）を含む。実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ＮＤＶは、アポトーシス促進性タンパク質（例えば、アポプチン）、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子−α）、免疫グロブリン（例えば、ＥＤ−Ｂフィブロネクチンに対する抗体）、腫瘍関連抗原、二特異性アダプタータンパク質（例えば、ＮＤＶ  ＨＮタンパク質及びＣＤ３又はＣＤ２８などのＴ細胞共刺激性受容体に対する二特異性抗体又は抗体断片；又はヒトＩＬ−２及びＮＤＶ  ＨＮタンパク質に対する単鎖抗体の融合タンパク質）を含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺａｍａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７．３（２０１２）：３４７−６７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８５９１８８１Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１２２１８５Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６７７Ａ１号明細書に記載のキメラ腫瘍溶解性ＮＤＶである。一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、排他的に癌細胞において複製するよう設計された条件的複製アデノウイルス（ＣＲＡｄ）である。例えば、Ａｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（２０００）：７２３−２７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性アデノウイルスは、その全体が参照により本明細書��組み込まれるＡｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．の７２５頁の表１に記載のものを含む。
【０７８９】
例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、次のものを含むが、これらに限定されない。
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス（ＣｏｌｏＡｄ１）（ＰｓｉＯｘｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２０５３２２０を参照されたい）；
顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ−１０２（以前はＣＧＴＧ−１０２と呼ばれた）（Ｏｎｃｏｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１５９８１２９を参照されたい）；
ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的に修飾された腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ−０１（ＶＣＮ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓ．Ｌ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０２０４５６０２及びＮＣＴ０２０４５５８９を参照されたい）；
網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路の脱制御を伴い癌細胞で選択的に複製するように修飾されている野生型ヒトアデノウイルス血清型５（Ｈａｄ５）由来のウイルスである条件的複製アデノウイルスＩＣＯＶＩＲ−５（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃａｔａｌａ  ｄ’Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８６４７５９を参照されたい）；
ＩＣＯＶＩＲ５、腫瘍溶解性アデノウイルスで感染させた骨髄由来自己間葉性幹細胞（ＭＳＣ）を含むＣｅｌｙｖｉｒ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｉｎｆａｎｔｉｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉｏ  Ｎｉｎｏ  Ｊｅｓｕｓ，Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ／Ｒａｍｏｎ  Ａｌｅｍａｎｙ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８４４６６１を参照されたい）；
ヒトＥ２Ｆ−１プロモーターが必須Ｅ１ａウイルス遺伝子の発現を駆動し、それによりＲｂ経路欠損腫瘍細胞複製及び細胞毒性を制限する、条件複製腫瘍溶解性血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）であるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２１４３８０４を参照されたい）；又は
路網膜芽細胞腫（Ｒｂ）経路欠損細胞で選択的に複製し、ある種のＲＧＤ結合インテグリンをより効率的に発現する細胞に感染するように操作されているアデノウイルスであるＤＮＸ−２４０１（以前はδ−２４−ＲＧＤと称された）（Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ／ＤＮＡｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１９５６７３４を参照されたい）。
腫瘍溶解性ウイルスを組み込んだ任意の実施形態において、一態様において、ＣＡＲは、メソテリンを標的とし、例えば本明細書に記載のメソテリン結合ドメインを含み、例えば表１１のＣＡＲであり、例えばＭ５である。腫瘍溶解性ウイルスを組み込んだ任意の実施形態において、一態様において、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とし、例えば本明細書に記載のＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインを含み、例えば表３０のＣＡＲである。
【０７９０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、任意選択によりプロＭ２マクロファージ分子の阻害剤と組み合わせて、ヒトヒアルロニダーゼ、例えば組換えヒトヒアルロニダーゼ、例えばＰＥＧＰＨ２０と組み合わせて対象に投与される。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄ．ＮＣＴ０２７１５８０４を参照されたい。実施形態において、ＣＡＲは、メソテリンを標的とし、例えば本明細書に記載のメソテリン結合ドメインを含み、例えば表１１のＣＡＲであり、例えばＭ５である。実施形態において、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とし、例えば本明細書に記載のＥＧＦＲｖＩＩＩ結合ドメインを含み、例えば表３０のＣＡＲである。
【０７９１】
医薬組成物及び処置
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与用に製剤される。
【０７９２】
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
【０７９３】
一実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【０７９４】
「免疫学的に有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物を、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの例において１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。
【０７９５】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約１０４〜約１０９細胞／ｋｇ、例えば約１０４〜約１０５細胞／ｋｇ、約１０５〜約１０６細胞／ｋｇ、約１０６〜約１０７細胞／ｋｇ、約１０７〜約１０８細胞／ｋｇ、又は約１０８〜約１０９細胞／ｋｇを含む。実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約０．６×１０６細胞／ｋｇ〜約２×１０７細胞／ｋｇを含む。特定の実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約２×１０５、１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、少なくとも約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。
【０７９６】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、少なくとも約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、最大約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約１．１×１０６〜１．８×１０７細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、少なくとも約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ細胞の用量は、最大約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９個の細胞を含む。
【０７９７】
細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０７９８】
一態様において、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、続いて血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからのＴ細胞を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させたＴ細胞を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一態様において、Ｔ細胞を、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、Ｔ細胞を、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
【０７９９】
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に投与し得る。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
【０８００】
特定の例示的態様において、対象は、白血球を採取し、エクスビボで富化又は枯渇させて、目的の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を選択及び／又は単離する白血球除去を受け得る。これらの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）単離体を当技術分野で知られる方法により増殖させ、１つ以上の本発明のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が創製されるように処理し得る。処置を必要とする対象を、その後、高用量の化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付し得る。一態様において、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖させた本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の注入を受ける。更なる態様において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【０８０１】
患者に投与すべき上記処置の用量は、処置する状態の正確な性質及び処置のレシピエントにより変わる。ヒト投与のためのスケーリングは、当技術分野で認識されている習慣に従って実施できる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者に１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、連日で１〜３０日の期間にわたって投与する。好ましい１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例において最大４０ｍｇ／日までの高用量を使用し得る（米国特許６，１２０，７６６号明細書に記載）。
【０８０２】
一実施形態において、ＣＡＲを、例えばインビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入し、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の初期投与及びその後の本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回以上の投与を受け、ここで、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日未満で行う。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間当たりに行い、例えば本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の２、３又は４投与を１週間当たりに投与する。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１週間当たり１回を超える投与を受け（例えば、１週間当たり２回、３回又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、続いて１週間、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を投与されず、その後、更にＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりでＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超える投与）を対象に投与する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超えるサイクルの投与を受け、各サイクル間の期間は、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日又は３日より短い。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を隔日で１週間３回投与する。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超えて投与する。
【０８０３】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）（例えば、ＣＤ１２３  ＣＡＲ発現細胞）を、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して産生する。この方法で産生したＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、安定なＣＡＲ発現を有する。
【０８０４】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞を、γレトロウイルスベクター、例えば本明細書に記載のγレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用して産生する。これらのベクターを使用して産生されたＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、安定なＣＡＲ発現を有し得る。
【０８０５】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、形質導入４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日後、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ  ＣＡＲベクター送達により行われ得る。一態様において、ＣＡＲ  ＲＮＡを電気穿孔法により細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に形質導入する。
【０８０６】
一過性に発現されるＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖ担持ＣＡＲを伴う）を使用して処置される患者で生じ得る可能性のある問題は、複数処置後のアナフィラキシーである。
【０８０７】
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０〜１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
【０８０８】
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）注入中断は、１０〜１４日を超えて継続してはならない。
【実施例】
【０８０９】
本発明を、次の実験的実施例を参照して更に詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。
【０８１０】
更に記載しなくとも、当業者は、前の記載及び次の説明的実施例を使用して、本発明の化合物を製造及び利用し、特許請求される方法を実施できると考える。次の作業実施例は、本発明の多様な態様を特に示すものであり、本開示を限定するものと解釈されるべきでない。
【０８１１】
実施例１：キメラ抗原受容体Ｔ細胞を用いたホジキンリンパ腫の免疫抑制性腫瘍微小環境の克服
現代の処置レジメンにも関わらず、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する患者のサブセットは、この疾患のために死亡している。特に、最初に限局性疾患を有する患者の１０〜１５％及び最初に進行期疾患を有する患者の２０〜４０％が最終的に再発する。Ｊｏｓｔｉｎｇ  Ａ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｊ，Ｍａｙ  Ｍ，Ｋｏｃｈ  Ｐ，Ｂｅｙｋｉｒｃｈ  ＭＫ，Ｈｅｉｎｚ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｃｏｒｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｒｍａｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｓｔｕｄｙ  ｇｒｏｕｐ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００２；２０：２２１−３０。更に、患者の１０〜１５％が第１選択治療に抵抗性の疾患を有する。Ｓａｎｔｏｒｏ  Ａ，Ｂｏｎａｄｏｎｎａ  Ｇ，Ｖａｌａｇｕｓｓａ  Ｐ，Ｚｕｃａｌｉ  Ｒ，Ｖｉｖｉａｎｉ  Ｓ，Ｖｉｌｌａｎｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ  ｏｆ  ＡＢＶＤ  ｐｌｕｓ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｖｅｒｓｕｓ  ＭＯＰＰ  ｐｌｕｓ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．１９８７；５：２７−３７。第１選択治療（ｒ／ｒ  ＨＬ）後に再発しているか又はこれに難治性である患者の約半数は、化学療法とそれに続く自己幹細胞移植（ＳＣＴ）とで救済に成功し得る。しかしながら、救済化学療法後にＰＥＴ陰性状態を達成できない患者は、特に予後不良であり、原発性難治性疾患を有する患者は全生存が５０％未満となることが予想され得る。Ｊｏｓｔｉｎｇ  Ａ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｊ，Ｍａｙ  Ｍ，Ｋｏｃｈ  Ｐ，Ｂｅｙｋｉｒｃｈ  ＭＫ，Ｈｅｉｎｚ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｃｏｒｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｒｍａｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｓｔｕｄｙ  ｇｒｏｕｐ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００２；２０：２２１−３０；Ｊｏｓｔｉｎｇ  Ａ，Ｒｕｅｆｆｅｒ  Ｕ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｊ，Ｓｉｅｂｅｒ  Ｍ，Ｄｉｅｈｌ  Ｖ，Ｅｎｇｅｒｔ  Ａ．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｇｅｒｍａｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｂｌｏｏｄ．２０００；９６：１２８０−６。ｒ／ｒ  ＨＬに対する生物学的療法における最近の開発は、抗ＣＤ３０抗体−薬物コンジュゲートブレンツキシマブベドチン（ＢＶ）を含む。自己ＳＣＴ後のＲＲ−ＨＬを有する患者の７５％にＢＶが客観的応答を誘発するが、応答は、持続せず、無増悪生存の中央値は、５．６ヶ月である。Ｙｏｕｎｅｓ  Ａ，Ｇｏｐａｌ  ＡＫ，Ｓｍｉｔｈ  ＳＥ，Ａｎｓｅｌｌ  ＳＭ，Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ  ＪＤ，Ｓａｖａｇｅ  ＫＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｉｖｏｔａｌ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２；３０：２１８３−９。これらの患者は、若い場合が多く、代替となる積極的治療が緊急に必要である。
【０８１２】
ＨＬは、ＨＬ患者のサブセットにおける同種移植の活性により、且つより最近では、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の注入の有望な臨床結果によって示されるように、免疫応答性疾患である。Ｂｏｌｌａｒｄ  ＣＭ，Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ  Ｓ，Ｔｏｒｒａｎｏ  Ｖ，Ｄｉｏｕｆ  Ｏ，Ｋｕ  Ｓ，Ｈａｚｒａｔ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｌａｔｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１４；３２：７９８−８０８。しかしながら、同種移植は、処置に関連した死亡率が高く、ＨＬの約３０〜４０％のみＥＢＶ抗原を発現する。Ｓｔａａｌ  ＳＰ，Ａｍｂｉｎｄｅｒ  Ｒ，Ｂｅｓｃｈｏｒｎｅｒ  ＷＥ，Ｈａｙｗａｒｄ  ＧＳ，Ｍａｎｎ  Ｒ．Ａ  ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ＤＮＡ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ．Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．１９８９；９１：１−５；Ｗｅｉｓｓ  ＬＭ，Ｍｏｖａｈｅｄ  ＬＡ，Ｗａｒｎｋｅ  ＲＡ，Ｓｋｌａｒ  Ｊ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１９８９；３２０：５０２−６。最近の臨床試験では、ｒ／ＨＬにおいてＰＤ１−ＰＤＬ１軸を抑制した際の応答率が高いことが示されており、この適応症に対するニボルマブのＦＤＡ承認につながっている。Ａｎｓｅｌｌ  ＳＭ，Ｌｅｓｏｋｈｉｎ  ＡＭ，Ｂｏｒｒｅｌｌｏ  Ｉ，Ｈａｌｗａｎｉ  Ａ，Ｓｃｏｔｔ  ＥＣ，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．ＰＤ−１  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｗｉｔｈ  ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５；３７２：３１１−９；Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ  ＣＨ，Ｒｉｂｒａｇ  Ｖ，Ｍｉｃｈｏｔ  Ｊ−Ｍ，Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ  Ｇ，Ｚｉｎｚａｎｉ  ＰＬ，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．ＰＤ−１  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（ＭＫ−３４７５）ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｆｔｅｒ  Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  Ｖｅｄｏｔｉｎ  Ｆａｉｌｕｒｅ：Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｐｈａｓｅ  １ｂ  Ｓｔｕｄｙ（ＫＥＹＮＯＴＥ−０１３）．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４：２９０。従って、Ｔ細胞ベースの治療薬は、ＨＬにおいて重要且つ増大する役割を担っている。キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）は、癌免疫療法における最近の目覚ましい発展を提示するものである。Ｒｕ���ｌｌａ  Ｍ，Ｋａｌｏｓ  Ｍ．Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ．２０１４；２５７：１４−３８。本発明者らのグループ及び他のグループは、難治性Ｂ細胞悪性腫瘍に対する抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体再指向Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１９、ＣＴＬ０１９）の臨床効果を実証した。Ｋａｌｏｓ  Ｍ，Ｌｅｖｉｎｅ  ＢＬ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，Ｋａｔｚ  Ｓ，Ｇｒｕｐｐ  ＳＡ，Ｂａｇｇ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｈａｖｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｃａｎ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１１；３：９５ｒａ７３；Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，Ｆｒｅｙ  Ｎ，Ｓｈａｗ  ＰＡ，Ａｐｌｅｎｃ  Ｒ，Ｂａｒｒｅｔｔ  ＤＭ，Ｂｕｎｉｎ  ＮＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１４；３７１：１５０７−１７；Ｄａｖｉｌａ  ＭＬ，Ｒｉｖｉｅｒｅ  Ｉ，Ｗａｎｇ  Ｘ，Ｂａｒｔｉｄｏ  Ｓ，Ｐａｒｋ  Ｊ，Ｃｕｒｒａｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  １９−２８ｚ  ＣＡＲ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｕｔｅ  Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１４；６：２２４ｒａ２５；Ｔｕｒｔｌｅ  ＣＪ，Ｈａｎａｆｉ  ＬＡ，Ｂｅｒｇｅｒ  Ｃ，Ｇｏｏｌｅｙ  ＴＡ，Ｃｈｅｒｉａｎ  Ｓ，Ｈｕｄｅｃｅｋ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ＣＤ４＋：ＣＤ８＋  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ＡＬＬ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２０１６；Ｌｅｅ  ＤＷ，Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ＪＮ，Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  Ｍ，Ｃｕｉ  ＹＫ，Ｄｅｌｂｒｏｏｋ  Ｃ，Ｆｅｌｄｍａｎ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＤ１９  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ａｎｄ  ｙｏｕｎｇ  ａｄｕｌｔｓ：ａ  ｐｈａｓｅ  １  ｄｏｓｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２０１５；３８５：５１７−２８。しかしながら、ホジキン・リード−シュテルンベルク（ＨＲＳ）細胞のＢ細胞起源にも関わらず、ＣＤ１９を含むＢ細胞抗原は、ＨＬにおいてめったに発現されない。Ｈｅｒｂｓｔ  Ｈ，Ｔｉｐｐｅｌｍａｎｎ  Ｇ，Ａｎａｇｎｏｓｔｏｐｏｕｌｏｓ  Ｉ，Ｇｅｒｄｅｓ  Ｊ，Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇ  Ｒ，Ｂｏｅｈｍ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ��ｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｋｉ−１−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  ｌａｒｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９８９；１３：１０３−１６。ＣＤ３０抗原は、ＨＲＳ細胞上で一般的に発現されることが知られているが、抗ＣＤ３０  ＣＡＲＴで処置された患者の結果は、期待に反するものであり、ｒ／ｒ  ＨＬ患者において１／８の完全応答（ＣＲ）及び４／８の安定疾患（ＳＤ）及び３／８の進行性疾患（ＰＤ）を有した。Ｓａｖｏｌｄｏ  Ｂ，Ｒｏｏｎｅｙ  ＣＭ，Ｄｉ  Ｓｔａｓｉ  Ａ，Ａｂｋｅｎ  Ｈ，Ｈｏｍｂａｃｈ  Ａ，Ｆｏｓｔｅｒ  ＡＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０ｚｅｔａ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ．２００７；１１０：２６２０−３０；Ｄｉ  Ｓｔａｓｉ  Ａ，Ｄｅ  Ａｎｇｅｌｉｓ  Ｂ，Ｒｏｏｎｅｙ  ＣＭ，Ｚｈａｎｇ  Ｌ，Ｍａｈｅｎｄｒａｖａｄａ  Ａ，Ｆｏｓｔｅｒ  ＡＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＣＲ４  ａｎｄ  ａ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＤ３０  ｈａｖｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｈｏｍｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｍｏｄｅｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１３：６３９２−４０２；Ｒａｍｏｓ  ＣＡ，Ｂａｌｌａｒｄ  Ｂ，Ｌｉｕ  Ｅ，Ｄａｋｈｏｖａ  Ｏ，Ｍｅｉ  Ｚ，Ｌｉｕ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ＣＤ３０＋  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ａｎｄ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１５；１２６：１８５−。ＨＬでは、悪性細胞は、細胞質のおよそ１〜２％のみに相当し、大部分は、浸潤性免疫細胞（マクロファージ及び骨髄由来抑制細胞、好塩基球、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球及びＴリンパ球、間質細胞及び線維芽細胞）からなる。ＴＭＥ、特に腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、腫瘍増殖を促進するのに重要な役割を果たし、抗腫瘍免疫応答を阻害もする。Ｓｔｅｉｄｌ  Ｃ，Ｃｏｎｎｏｒｓ  ＪＭ，Ｇａｓｃｏｙｎｅ  ＲＤ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１１；２９：１８１２−２６；Ｓｔｅｉｄｌ  Ｃ，Ｌｅｅ  Ｔ，Ｓｈａｈ  ＳＰ，Ｆａｒｉｎｈａ  Ｐ，Ｈａｎ  Ｇ，Ｎａｙａｒ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  ��ｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１０；３６２：８７５−８５；Ｓａｎｃｈｅｚ−Ａｇｕｉｌｅｒａ  Ａ，Ｍｏｎｔａｌｂａｎ  Ｃ，ｄｅ  ｌａ  Ｃｕｅｖａ  Ｐ，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｖｅｒｄｅ  Ｌ，Ｍｏｒｅｎｔｅ  ＭＭ，Ｇａｒｃｉａ−Ｃｏｓｉｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ａｒｅ  ｋｅｙ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８：６６２−８；Ｄｅｖｉｌａｒｄ  Ｅ，Ｂｅｒｔｕｃｃｉ  Ｆ，Ｔｒｅｍｐａｔ  Ｐ，Ｂｏｕａｂｄａｌｌａｈ  Ｒ，Ｌｏｒｉｏｄ  Ｂ，Ｇｉａｃｏｎｉａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ｏｆ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００２；２１：３０９５−１０２；Ｍｉｚｕｎｏ  Ｈ，Ｎａｋａｙａｍａ  Ｔ，Ｍｉｙａｔａ  Ｙ，Ｓａｉｔｏ  Ｓ，Ｎｉｓｈｉｗａｋｉ  Ｓ，Ｎａｋａｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒ  ｂｙ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｔｈａｔ  ｃａｎ  ｂｅ  ｐｅｒｔｕｒｂｅｄ  ｂｙ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１２；２６：２２６９−７６；Ｈｕｂｅｒ  Ｓ，Ｈｏｆｆｍａｎｎ  Ｒ，Ｍｕｓｋｅｎｓ  Ｆ，Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｄ．Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｓｔａｔ６−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ２．Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１６：３３１１−２０。従って、ＨＬは、免疫療法に対するＴＭＥの影響を研究するための特有の機会を提示するものである。悪性細胞及び支持的Ｔ
ＭＥを標的とし得るアプローチの開発は、Ｔ細胞阻害を回避しながらＣＡＲ  Ｔ細胞の頑強な刺激を提供することにより、ＣＡＲＴ免疫療法の分野において重要な進歩を表す可能性が高いと考えられる。これに関連して、本発明者らは、その発現が以前にホジキン・リード・シュテルンベルク（ＨＲＳ）細胞について説明されている、ＣＤ１２３、インターロイキン−３（ＩＬ−３）に対する受容体のα鎖を研究した。Ｆｒｏｍｍ  ＪＲ．Ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤ１２３  ｉｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｂ  Ｃｌｉｎ  Ｃｙｔｏｍ．２０１１；８０：９１−９；Ｌｉｕ  Ｋ，Ｚｈｕ  Ｍ，Ｈｕａｎｇ  Ｙ，Ｗｅｉ  Ｓ，Ｘｉｅ  Ｊ，Ｘｉａｏ  Ｙ．ＣＤ１２３  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ．Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０１５；１２２：５９−６４；Ｈａｓｓａｎｅｉｎ  ＮＭ，Ａｌｃａｎｃｉａ  Ｆ，Ｐｅｒｋｉｎｓｏｎ  ＫＲ，Ｂｕｃｋｌｅｙ  ＰＪ，Ｌａｇｏｏ  ＡＳ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ＣＤ１２３  ａｎｄ  ＣＤ３４  ｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ（“ｈｅｍａｔｏｇｏｎｅｓ”）ａｎｄ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｌａｓｔｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．２００９；１３２：５７３−８０；Ｄｊｏｋｉｃ  Ｍ，Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ｅ，Ｂｌｅｎｎｏｗ  Ｅ，Ｍａｚｕｒ  Ｊ，Ｓｏｄｅｒｈａｌｌ  Ｓ，Ｐｏｒｗｉｔ  Ａ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ１２３  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｄｉｐｌｏｉｄ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．２００９；９４：１０１６−９；Ａｌｄｉｎｕｃｃｉ  Ｄ，Ｐｏｌｅｔｔｏ  Ｄ，Ｇｌｏｇｈｉｎｉ  Ａ，Ｎａｎｎｉ  Ｐ，Ｄｅｇａｎ  Ｍ，Ｐｅｒｉｎ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．２００２；１６０：５８５−９６。更に、インビトロのデータは、ＩＬ−３がＨＬ細胞をアポトーシスから救済し、ＨＬ細胞株の増殖を促進することを示している。Ａｌｄｉｎｕｃｃｉ  Ｄ，Ｏｌｉｖｏ  Ｋ，Ｌｏｒｅｎｚｏｎ  Ｄ，Ｐｏｌｅｔｔｏ  Ｄ，Ｇｌｏｇｈｉｎｉ  Ａ，Ｃａｒｂｏｎｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ＆ｌｙｍｐｈｏｍａ．２００５；４６：３０３−１１。更に、ＣＤ１２３がマクロファージ、好酸球、好塩基球及び肥満細胞を含む骨髄性細胞に発現していることから、本発明者らは、ＣＤ１２３が悪性細胞及び支持的ＴＭＥの両方のＨＬ腫瘍塊内で広範に発現されると仮定��た。Ｐｏｌｌａｒｄ  ＪＷ．Ｔｒｏｐｈｉｃ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；９：２５９−７０。
【０８１３】
従って、この実施例の目的は、ＨＬ微小環境の免疫抑制を克服することもできると考えられる抗ＨＬ  ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法を開発することであった。本発明者らは、ＨＲＳ細胞上のＣＤ１２３の存在を確認し、ＨＬ  ＴＭＥ中の多くの免疫細胞、特に免疫抑制性Ｍ２型腫瘍関連マクロファージがＣＤ１２３を発現することを見出した。本発明者らは、以前にＡＭＬの処置のための抗ＣＤ１２３  ＣＡＲ  Ｔ細胞を開発し（Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４）、本発明者らは、現在、ＣＡＲＴ１２３細胞が播種性ＨＬ腫瘍異種移植を排除することを見出し、これは、永続性のある寛解及び免疫記憶の形成をもたらす。更に、免疫抑制性ＣＤ１２３発現腫瘍関連マクロファージの共標的化を通じて、ＣＡＲＴ１２３は（ＣＡＲＴ１９と異なり）微小環境の免疫抑制に対して耐性である。
【０８１４】
材料及び方法
細胞株及び初代サンプル。細胞株は、元々ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）（Ｋ−５６２）又はＤＳＭＺ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）（ＭＯＬＭ−１４及びＮＡＬＭ−６）から得た。全細胞株をマイコプラズマ汚染について試験した（ＭｙｃｏＡｌｅｒｔ（商標）Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ，ＬＴ０７−３１８，Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。いくつかの実験では、細胞株をルシフェラーゼ（コメツキムシ緑色）又はｅＧＦＰで形質導入し、次いで選別して＞９９％の陽性集団を得た。ＭＯＬＭ−１４及びＫ５６２を、関連する図面に示すように対照として使用した。細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｅｍｉｎｉ，１００−１０６，Ｗｅｓｔ  Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）及び５０ＵＩ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１５０７０−０６３）添加ＲＰＭＩ培地１６４０（Ｇｉｂｃｏ，１１８７５−０８５，ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での培養により維持した。全機能的試験のために、初代細胞を実験の少なくとも１２時間前に融解し、３７℃で静置した。非特定化されたホルマリン固定初代ヒトＨＬ標本は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）プロトコルの下、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ／Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｏｆ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａの臨床現場から入手した。
【０８１５】
免疫組織化学及び免疫蛍光。ホルマリン固定パラフィン包埋組織について、Ｂｏｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｒｅｆｉｎｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ−ＩＩＩ装置（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）で免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色を行った。ＣＤ３０、ＣＤ１２３に対する抗体を希釈せずに使用した。熱誘導エピトープ検索は、ＥＲ２溶液（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＡＲ９６４０）を用いて２０分間行った。画像は、Ａｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ（商標）（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてデジタル的に取得した。
【０８１６】
ＲＴ−ＰＣＲ。ＨＬ及び対照細胞系をＣＤ１２３（ＡＢ、Ｈｓ００６０８１４）ｍＲＮＡ発現についてＲＴ−ＰＣＲ分析によってスクリーニングした。ＲＮＡをＲＮＡｑｕｅｏｓ−４ＰＣＲキット（Ａｍｂｉｏｎ、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＡＭ−１９１４）で抽出し、ｃＤＮＡをＲＴ−ｑＰＣＲ用ｉＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ、１７０−８８４１）で合成した。相対標的ｃＤＮＡコピーを、ＡＢＩ  ＴａｑＭａｎ特異的プライマー及びプローブセットを用いた相対ｑＰＣＲ（ｑＰＣＲ）により定量した。ＴａｑＭａｎ  ＧＵＳＢプライマー（ＡＢ、Ｈｓ００９３９６２７）及びプローブセットを正規化に使用した。
【０８１７】
多変数フローサイトメトリー。フローサイトメトリーは、先に記載のように実施した。Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ  ＳＳ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ  Ｍ，Ａｉｋａｗａ  Ｖ，Ｍｏｒｒｉｓｓｅｔｔｅ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤ３３  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｅｘｈｉｂｉｔ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｕｍａｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５。抗ヒト抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ又はＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎから購入した。細胞数定量のために、Ｃｏｕｎｔｂｒｉｇｈｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ビーズを製造業者の指示に従い使用した。全検体において、目的の集団を前方対側方散乱光特徴に基づき、続いて一重項ゲーティングによりゲーティングし、生存細胞をＬｉｖｅ  Ｄｅａｄ  Ｆｉｘａｂｌｅ  Ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してゲーティングした。時間ゲーティングを品質管理のために含ませた。ヤギ抗マウス抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、又はＣＤ１２３−Ｆｃ／Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、及び抗Ｈｉｓ−ＡＰＣ（Ｒ＆Ｄ）、又はＰＥ（ＡｂＣａｍ）、又は直接ＰＥコンジュゲートＣＤ１２３タンパク質を用いてＣＡＲ１２３の検出を行った。フローサイトメトリーを４レーザーＦｏｒｔｅｓｓａ−ＬＳＲ  ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で実施し、ＦｌｏｗＪｏ×１０．０．７ｒ２（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。
【０８１８】
ヒトマクロファージ分化。５％ＧｅｍＣｅｌｌヒト血清ＡＢ（Ｇｅｍｉｎｉ  ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、及びペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ）を添加したＸ−ＶＩＶＯ  １０（Ｌｏｎｚａ）中において７日間にわたり、陽性選択されたＣＤ１４＋正常ドナー単球（Ｈｕｍａｎ  ＣＤ１４  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を分化させることによってヒトマクロファージ（Ｍ０）を産生した。更に２４時間、２０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＦＮγ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）及び１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（ＬＰＳ−ＥＫ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を分化培地に添加することにより、マクロファージをＭ１に偏向させた。更に２４時間、２０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−４、ＩＬ−１０、又はＩＬ−１３（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）のいずれかを分化培地に添加することにより、マクロファージをＭ２に偏向させた。マクロファージ表現型に対するホジキンリンパ腫細胞の効果は、Ｍ０ヒトマクロファージを、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｅｍｉｎｉ、１００−１０６、Ｗｅｓｔ  Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）及び５０ＵＩ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１５０７０−０６３）を添加したＲＰＭＩ培地１６４０（Ｇｉｂｃｏ、１１８７５−０８５、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）中においてＨＤＬＭ−２細胞と１：１のエフェクター対標的比で５日間共培養することによって評価した。
【０８１９】
ＣＡＲ構築物及びＣＡＲ  Ｔ細胞の産生。第２世代抗ＣＤ１２３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ１２３）は、抗ＣＤ１２３  ｓｃＦｖ（クローン３２７１６）、ＣＤ８ヒンジ、４−１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインを特徴とする。Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４。この構築物は、現在、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａの急性骨髄性白血病の臨床試験（ＮＣＴ０２６２３５８２）で使用されている。マウス抗ＣＤ１９キメラ−抗原受容体（ＣＤ８ヒンジ、４−１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を先に記載されたように産生した。Ｍｉｌｏｎｅ  ＭＣ，Ｆｉｓｈ  ＪＤ，Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ  Ｃ，Ｃａｒｒｏｌｌ  ＲＧ，Ｂｉｎｄｅｒ  ＧＫ，Ｔｅａｃｈｅｙ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＣＤ１３７  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２００９；１７：１４５３−６４；Ｉｍａｉ  Ｃ，Ｍｉｈａｒａ  Ｋ，Ａｎｄｒｅａｎｓｋｙ  Ｍ，Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ＩＣ，Ｐｕｉ  ＣＨ，Ｇｅｉｇｅｒ  ＴＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ４−１ＢＢ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｐｒｏｖｏｋｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００４；１８：６７６−８４。これは、現在、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａでのＣＴＬ０１９臨床試験で使用されるものと同じ構築物である。ＣＡＲ発現Ｔ細胞の産生を先に記載のように実施した。Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４。正常ドナーＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞又はＰＢ単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａから得た。全実験前にＴ細胞を解凍し、３７℃で一晩静置した。
【０８２０】
インビトロＴ細胞エフェクター機能アッセイ。脱顆粒、ＣＦＳＥ増殖、細胞毒性アッセイ及びサイトカイン測定を先に記載のように実施した。Ｋａｌｏｓ  Ｍ，Ｌｅｖｉｎｅ  ＢＬ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，Ｋａｔｚ  Ｓ，Ｇｒｕｐｐ  ＳＡ，Ｂａｇｇ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｈａｖｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｃａｎ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１１；３：９５ｒａ７３；Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４；Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ  ＳＳ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｆｒａｉｅｔｔａ  ＪＡ，Ｑａｙｙｕｍ  Ｓ，Ｚｈａｎｇ  Ｑ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＢＴＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ  ｔｏ  Ａｎｔｉ−ＣＤ１９  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ（ＣＡＲＴ１９）Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｍａｎｔｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ：ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１６。Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｔｉ−Ｓ顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ．）で２０倍レンズを用いて、ヒトマクロファージとＴ細胞との共培養（２４時間）の位相差画像を作成した。
【０８２１】
動物実験。インビボ実験を先に記載のように実施した。Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ  ＳＳ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ  Ｍ，Ａｉｋａｗａ  Ｖ，Ｍｏｒｒｉｓｓｅｔｔｅ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤ３３  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｅｘｈｉｂｉｔ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｕｍａｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５。利用した異種移植モデルのスキームは、関連する図面に詳述する。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから元々得たＮＯＤ−ＳＣＩＤγ鎖欠損（ＮＳＧ）マウスをＳｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａから購入した。細胞（ＨＬ細胞株又はＴ細胞）を、１００〜２００μｌのＰＢＳ中、記載する濃度でマウスの尾静脈に注射した。生物発光造影を、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ−２００  Ｓｐｅｃｔｒｕｍカメラを使用して行い、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅソフトウェアｖ．４．３．１（Ｃａｌｉｐｅｒ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｉｅｓ）で分析した。動物を実験の最後に又はＩＡＣＵＣプロトコルの予め特定されたエンドポイントを充足したときに屠殺した。研究の承認。動物実験は、ＮＩＨ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに取り組むＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）により承認されたプロトコル（＃８０３２３０）に従って実施した。
【０８２２】
統計分析。全統計学を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ、ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０５（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して、示す通りに実施した。スチューデントｔ検定を２群の比較に使用した。複数群を比較する分析において、一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）を複数比較のためのＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ補正と共に実施した。複数時点での複数群／比を比較するとき、各時点／比のスチューデントｔ検定又はＡＮＯＶＡを使用した。生存曲線を、ｌｏｇ−ｒａｎｋ検定を使用して比較した。図において、アスタリスクを、ｐ値を表すために使用し（＊＝＜０．０５、＊＊＝＜０．０１、＊＊＊＝＜０．００１、＊＊＊＊＝＜０．０００１）、「ｎｓ」は、「非有意」（ｐ＞０．０５）を示す。
【０８２３】
結果
ＩＬ−３受容体α、ＣＤ１２３は、ホジキンリンパ腫細胞及び腫瘍関連マクロファージに発現する
本発明者らは、ＨＲＳだけでなく微小環境でも発現する腫瘍関連抗原を定義することを試みた。この目的のために、本発明者らは、ＨＬを有する患者からの組織学的標本上のＣＤ１２３、ＩＬ−３受容体αの発現を評価した。予想されたように、１０／１０の患者において、ＨＲＳ細胞はＨＬの特徴、即ちＣＤ３０について陽性であり、５／１０の患者において、本発明者らはまた、ＨＲＳ細胞上にＣＤ１２３を見出した。ＣＤ３０は、浸潤性免疫細胞上に低密度で分布していた一方、ＣＤ１２３は、ＴＭＥ上で高度に発現され、特に二色免疫蛍光法によって示されるように、本発明者らは、ＴＡＭがＣＤ１２３を発現することを見出した（図１Ａ）。更なる研究のために適切なヒト腫瘍モデルを定義するために、本発明者らは、４つのＨＬ細胞株（ＨＤＬＭ−２、ＫＭ−Ｈ２、ＳＵＰ−ＨＤ１、及びＬ−４２８）を評価し、ｍＲＮＡ及びタンパク質レベルで高レベル発現を見出した（図１Ｂ及びＣ）。
【０８２４】
ＨＬ細胞は、正常マクロファージをＭ２様表現型に偏向させ、ＩＬ‐１３を介して機能する
ＴＡＭは、ＨＬの病因及び予後において関連する役割を有するため（Ｓｔｅｉｄｌ  Ｃ，Ｌｅｅ  Ｔ，Ｓｈａｈ  ＳＰ，Ｆａｒｉｎｈａ  Ｐ，Ｈａｎ  Ｇ，Ｎａｙａｒ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１０；３６２：８７５−８５）、本発明者らは、ＨＬ細胞が単球から免疫抑制表現型への変換を直接媒介できるかを明らかにすることを試みた。末梢血単球から分化したヒト正常ドナーマクロファージをＨＤＬＭ−２細胞、又はＩＬ−４（Ｍ２陽性対照）、又は対照急性リンパ芽球性白血病細胞株（ＮＡＬＭ−６）と共培養した。２４時間共培養した後、マクロファージ表現型をフローサイトメトリーによって分析した。図２Ａに示すように、ＨＤＬＭ−２プライム化マクロファージは、Ｍ２様表現型を示し、ＣＤ２０６及びＣＤ１６３の発現は、ＩＬ４プライム化マクロファージの発現と同様であった。Ｇｏｒｄｏｎ  Ｓ．Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；３：２３−３５；Ｍｕｒｒａｙ  ＰＪ，Ａｌｌｅｎ  ＪＥ，Ｂｉｓｗａｓ  ＳＫ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＥＡ，Ｇｉｌｒｏｙ  ＤＷ，Ｇｏｅｒｄｔ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１４；４１：１４−２０；Ｑｉａｎ  ＢＺ，Ｐｏｌｌａｒｄ  ＪＷ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃｅｌｌ．２０１０；１４１：３９−５１；Ｒｏｓｚｅｒ  Ｔ．Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｙｓｔｅｒｉｏｕｓ  Ｍ２  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２０１５；２０１５：８１６４６０；Ｇｅｏｒｇｏｕｄａｋｉ  ＡＭ，Ｐｒｏｋｏｐｅｃ  ＫＥ，Ｂｏｕｒａ  ＶＦ，Ｈｅｌｌｑｖｉｓｔ  Ｅ，Ｓｏｈｎ  Ｓ，Ｏｓｔｌｉｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｂｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１６；１５：２０００−１１。対照として、非ＨＬ細胞株、ＮＡＬＭ−６と共培養したマクロファージは、非Ｍ２様表現型を示した。重要なことに、ＣＤ１２３発現は、Ｍ２及びＨＬ偏向マクロファージの両方において高かった（図２Ｂ）。
【０８２５】
表現型的に定義された免疫抑制性マクロファージの機能を試験するために、本発明者らは、ヒトＣＡＲ  Ｔ細胞をＭ０（ヒト血清、ＧＭ又はＭ−ＣＳＦ）、Ｍ１（ＩＦＮγ／ＬＰＳ）又はＭ２（ＩＬ−４）偏向条件下で共培養したモデルを用い、又は腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のモデルとしてのＨＬ偏向マクロファージを用いた。この実験では、本発明者らは、「レスポンダー」細胞として至適基準の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、「スティミュレーター」細胞としてＣＤ１９＋Ｂ白血病細胞系ＮＡＬＭ−６を使用した。Ｍｉｌｏｎｅ  ＭＣ，Ｆｉｓｈ  ＪＤ，Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ  Ｃ，Ｃａｒｒｏｌｌ  ＲＧ，Ｂｉｎｄｅｒ  ＧＫ，Ｔｅａｃｈｅｙ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＣＤ１３７  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ：ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２００９；１７：１４５３−６４。予想されたように、ＣＡＲＴ１９は、標的細胞株の存在下で強力に増殖したが、この増殖は、Ｍ２マクロファージ又はＨＬ偏向マクロファージの存在下で阻害された（図２Ｃ〜Ｅ）。ＨＬ細胞によるマクロファージ偏向の機構を調べるため、本発明者らは、ヒトマクロファージと共培養したＨＤＬＭ−２（又は対照非ＨＬ細胞株、Ｋ５６２）の上清を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによって３０の異なるサイトカインの存在を分析した。ＩＬ−１３は、最も過剰発現されたサイトカインであった（図２Ｆ）。特異的抗体を用いてＩＬ−１３シグナル伝達を遮断することにより、本発明者らは、ＨＬプライム化マクロファージの免疫抑制機能の部分的逆転（図２Ｇ）及び阻害性受容体リガンドＰＤＬ−１の発現の減少を見出した。（図２Ｈ）。
【０８２６】
抗ＣＤ１２３キメラ抗原受容体Ｔ細胞は、インビトロ及びインビボでＨＬ細胞を殺傷する
ＨＲＳ細胞におけるＣＤ１２３の存在を実証したため、本発明者らは、抗原依存性ＣＡＲＴ増殖、サイトカイン産生及び特異的腫瘍溶解によって測定して、抗ＣＤ１２３  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１２３）がＨＬ細胞を認識できる程度を実証することを試みた。培養物中で初代ＨＬを増殖させることは不可能であることを考慮して、また信頼性のある初代ＨＬ異種移植片モデルがないことから、本発明者らは、モデルとしてＨＤＬＭ２細胞系を使用した。ＣＤ１２３発現ＡＭＬは、本発明者らが以前にＣＡＲＴ１２３に対するその感受性を実証したため、これらの実験において陽性対照として使用した。インビトロで、ＣＡＲＴ１２３は、４〜６時間ＨＬ細胞と共培養した場合、特異的ＣＤ１０７ａ脱顆粒及び細胞内サイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＴＮＦα）の産生を示した（図３Ａ）。２４時間で、ＨＬ細胞に対する強力な細胞毒性がＣＡＲＴ１２３によって発揮されるが、対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）では発揮されず（図３Ｂ）、４日目までのＨＬ細胞の完全根絶は、大量のＴ細胞増殖（２０日目）に関連する（図３Ｃ）。５日後の絶対Ｔ細胞数（図３Ｄ）及びＣＦＳＥ希釈（図３Ｅ）によって実証されるように、ＨＬ細胞（ＨＤＬＭ−２又はＫＭ−Ｈ２）と共培養した場合、ＣＡＲＴ１２３は増殖する。重要なことに、ＣＡＲＴ１２３細胞は、ＨＬ細胞の存在下でＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮｇ、ＭＩＰ１ｂ及びＴＮＦａのようなエフェクターサイトカインを分泌する（図３Ｆ）。要約すると、ＨＲＳ及びＴＡＭの両方がＰＤＬ１を発現し、ＨＲＳによって免疫抑制性サイトカインを産生するという事実にも関わらず、ＣＡＲＴ１２３細胞は、悪性ＨＲＳ細胞に対してインビトロで非常に応答性であった。
【０８２７】
次に、本発明者らは、ＮＳＧマウスに０日目に１×１０６個のルシフェラーゼ＋ＨＤＬＭ−２細胞を静脈内注射することにより、全身的に進行したＨＬモデルの新規の厳密な異種移植モデルを開発した（図４Ａ）。連続生物発光造影（ＢＬＩ）は、７日目までに腫瘍生着を示し、その後、およそ６週間にわたって腫瘍負荷が徐々に増加し、ヒト疾患の緩慢な性質を再現した。腫瘍負荷がベースラインより２０倍高かった４２日目にマウスを１．５×１０６ＣＡＲＴ１２３細胞又は対照Ｔ細胞で処置した。ＣＡＲＴ１２３は、１４日以内に播種性腫瘍の完全且つ持続性の根絶を誘発し、６ヶ月での１００％無再発及び１００％全生存に至った（図４Ｂ及びＣ）。マウスをほぼ１年間経過観察し、ＣＡＲＴ１２３処置マウスで再発は観察されなかったが、対照Ｔ細胞で処置されたマウスの生存中央値は、１２８日であった（ｐ＝０．００９）。腫瘍除去は、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞の臨床試験で見られるように、一連の末梢血分析においてフローサイトメトリーによって検出されるＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞の両方を含む末梢血中の広範なＣＡＲ  Ｔ細胞増殖に関連した（図４Ｄ）。
【０８２８】
ＣＡＲＴ１２３は、ＨＬを有するマウスにおける長期免疫記憶を確立する
長期持続性及びＴ細胞記憶は、免疫監視及び再発予防において重要な役割を果たす。免疫記憶の形成を実証するために、長い経過観察期間（２５０日目）でＣＡＲＴ１２３処置マウスにＨＤＬＭ−２ＨＬ細胞で再負荷を与えた（実験概要図５Ａを参照されたい）。興味深いことに、先で検出できなかったＣＡＲＴ１２３細胞の末梢血中での再増殖（Ｔ細胞注入後約１０ヶ月）（図５Ｃ）に関連して、先のＣＡＲＴ１２３処理マウスにおいて腫瘍は拒絶された（図５Ｂ）。対照的に、対照マウスでは、ＨＬ細胞が生着してこれらのマウスの死をもたらした（図５Ｄ）。
【０８２９】
ＣＡＲＴ１２３は、Ｍ２マクロファージの阻害に耐性を有する
最後に、本発明者らがＣＡＲ  Ｔ細胞がＭ２及びＨＬ偏向マクロファージによって阻害されること、及びこれらのマクロファージがＣＤ１２３陽性であることを実証したように、本発明者らは、ＣＡＲＴ１２３もマクロファージ阻害に感受性であるか、又は逆にＨＬマクロファージにおけるＣＤ１２３の発現により更なる刺激を受けるかを理解しようと試みた。
【０８３０】
ＩＬ−４又はＨＤＬＭ−２細胞への曝露のいずれかを用いて免疫抑制性Ｍ２マクロファージを産生した。Ｂ急性リンパ芽球性白血病におけるＣＡＲＴ１９モデルの既に確立されたモデルを使用して、本発明者らは、Ｍ２  ＴＡＭが５日目のＣＡＲ刺激後のＣＡＲＴ１９増殖を強力に阻害できるが、全く対照的にＣＡＲＴ１２３が影響を受けなかったことを示した（図６Ａ）。重要なことに、ＣＡＲＴ１２３は、早い時点（２４時間）でＭ２マクロファージを活発に認識し、それらの周囲に凝集体を形成し、５日目までにＴＡＭに対して有意な細胞毒性を発揮し、それによりＴＡＭ媒介阻害を克服する（図６Ｂ）。ＨＬマクロファージは、ＣＡＲＴ１９によってサイトカイン産生を阻害できたが、ＣＡＲＴ１２３によって阻害されなかった（図６Ｃ）。
【０８３１】
考察
本発明者らは、以前にヒト急性骨髄性白血病におけるＣＡＲＴ１２３の活性を説明した。Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４。ここで、本発明者らは、ＨＲＳ細胞及びＨＬ細胞株がＣＤ１２３を発現するという以前の発見を確認し（Ｆｒｏｍｍ  ＪＲ．Ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤ１２３  ｉｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｂ  Ｃｌｉｎ  Ｃｙｔｏｍ．２０１１；８０：９１−９；Ａｌｄｉｎｕｃｃｉ  Ｄ，Ｐｏｌｅｔｔｏ  Ｄ，Ｇｌｏｇｈｉｎｉ  Ａ，Ｎａｎｎｉ  Ｐ，Ｄｅｇａｎ  Ｍ，Ｐｅｒｉｎ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．２００２；１６０：５８５−９６）、ＣＡＲＴ１２３がインビトロで特異的に脱顆粒し、増殖し、サイトカインを産生し、ＨＬ細胞を殺傷することを示す。インビボにおいて、本発明者らは、ヒトＣＤ１２３再指向Ｔ細胞が播種性ＨＬに対して強力な治療活性を示し、疾患の根絶後も長期間持続し、腫瘍負荷に対する頑強な再生応答を備えることができることを示す。本発明者らの知る限り、これは、播種性ホジキンリンパ腫の最初の異種移植モデルであり、リンパ節局在及び緩徐進行は臨床疾患のいくつかの態様を再現する。しかしながら、異種移植片システムは、マウスＮＳＧレシピエントがリンパ球を欠き、ヒト免疫細胞がＨＬ細胞株と共に移入されないため、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の役割の評価を可能とするものではない。従って、ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する耐性におけるＴＭＥの役割を調べるために、本発明者らは、インビトロ系に着目した。
【０８３２】
本発明者らは、ＨＬ細胞株がいくつかの免疫抑制性サイトカインを産生し、最も高い上昇は、インターロイキン１３であることを示した。ＩＬ−１３は、ＨＲＳ細胞の自己分泌増殖刺激において役割を果たすことが以前に報告されており（Ｔｒｉｅｕ  Ｙ，Ｗｅｎ  ＸＹ，Ｓｋｉｎｎｉｄｅｒ  ＢＦ，Ｂｒａｙ  ＭＲ，Ｌｉ  Ｚ，Ｃｌａｕｄｉｏ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｏｌｕｂｌｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３Ｒａｌｐｈａ２  ｄｅｃｏｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００４；６４：３２７１−５；Ｓｋｉｎｎｉｄｅｒ  ＢＦ，Ｋａｐｐ  Ｕ，Ｍａｋ  ＴＷ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １３  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ＆ｌｙｍｐｈｏｍａ．２００２；４３：１２０３−１０）、免疫細胞のＨＬ  ＴＭＥへの動員を媒介すると仮定されてきた。本発明者らは、ＨＬへの曝露が、ＰＤ−Ｌ１の上方制御及びその結果としてのＴ細胞、特にＣＡＲ  Ｔ細胞に対する免疫抑制効果を伴う、代替的に活性化された「Ｍ２」表現型に向かってマクロファージを偏向させることを示した。この効果は、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生の減少として現れた。「至適基準」として、ＡＬＬ細胞株ＮＡＬＭ−６によって刺激された抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１９）を使用した。Ｍｉｌｏｎｅ  ＭＣ，Ｆｉｓｈ  ＪＤ，Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ  Ｃ，Ｃａｒｒｏｌｌ  ＲＧ，Ｂｉｎｄｅｒ  ＧＫ，Ｔｅａｃｈｅｙ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＣＤ１３７  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ：ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２００９；１７：１４５３−６４；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ＲＪ，Ｌａｔｏｕｃｈｅ  ＪＢ，Ｓａｎｔｏｓ  Ｅ，Ｍａｒｔｉ  Ｆ，Ｇｏｎｇ  ＭＣ，Ｌｙｄｄａｎｅ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒｓ  ｂｙ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＣＤ８０  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５．Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３；９：２７９−８６。本発明者らは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のモデルとしてのＨＬ曝露マクロファージがＣＡＲＴ１９を阻害することができることを見出した。ＣＤ１９はＨＬに発現せず、ＣＡＲＴ１９治療はＨＬにおいて活性を有することが期待されていないが、ＨＬにおけるクローン型ＣＤ１９＋Ｂ細胞に関する文献があり、本発明者らのグループを含むいくつかのグループがＨＬのための治療としてのＢ細胞指向薬剤に取り組んでおり（Ｙｏｕｎｅｓ  Ａ，Ｏｋｉ  Ｙ，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  Ｐ，Ｃｏｐｅｌａｎｄ  ＡＲ，Ｇｏｙ  Ａ，��ｒｏ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｐｌｕｓ  ＡＢＶＤ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９：４１２３−８；Ｋａｓａｍｏｎ  ＹＬ，Ｊａｃｅｎｅ  ＨＡ，Ｇｏｃｋｅ  ＣＤ，Ｓｗｉｎｎｅｎ  ＬＪ，Ｇｌａｄｓｔｏｎｅ  ＤＥ，Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ−ＡＢＶＤ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９：４１２９−３２）、本発明者らの施設では、ＣＤ１９に対するＣＡＲ  Ｔ細胞をＨＬ（ＮＣＴ０２２７７５２２）について評価する試験に取り組んだ。更に重要なことに、本発明者らの知見が他の悪性腫瘍におけるＴＡＭに一般化することができる場合、ＴＡＭは、真正のＣＤ１９発現Ｂ細胞悪性腫瘍においてＣＡＲＴ１９に対して同様の効果を有し得る。
【０８３３】
これに関連して、本発明者らは、ＨＬについて関連するＣＡＲＴ細胞モダリティを開発することを試みた。最も広く発現されているＨＬ抗原であるＣＤ３０は、ＴＭＥ内の他のほとんどの細胞に発現されておらず、特にＴＡＭに発現されていない。ＣＤ１２３がＨＲＳ細胞上で発現されるという報告に続いて、本発明者らは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａの病理学部門からの一連の臨床標本を分析し、ＣＤ１２３がおよそ５０％の患者においてＨＲＳ細胞上に存在することを観察した。同様に重要なことに、本発明者らは、ＣＤ１２３がＴＡＭ上に存在することを認めた。ＨＬを有する患者の診断標本中のＣＤ６８＋マクロファージ数の増加が予後不良を生じるため、本発明者らは、ＨＬについて成長している医療装備においてＴＡＭ細胞及びＨＲＳ細胞の両方を除去できるモダリティが有意な進歩を表すと仮定した。Ｓｔｅｉｄｌ  Ｃ，Ｌｅｅ  Ｔ，Ｓｈａｈ  ＳＰ，Ｆａｒｉｎｈａ  Ｐ，Ｈａｎ  Ｇ，Ｎａｙａｒ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１０；３６２：８７５−８５。特に、ＨＬ治療における最近の進歩にはＰＤ１アンタゴニストのニボルマブが含まれ、推定される作用機序は、ＨＲＳ細胞上に発現されるＰＤ−Ｌ１からの阻害性シグナル伝達の逆転であるが、ニボルマブに対する応答におけるＴＡＭ上のＰＤ−Ｌ１発現の重要性は、本発明者らの知る限り依然として調査されていない。ＴＡＭがＣＤ１２３を発現し、ＣＡＲＴ１２３によって標的化され得るという発見は、ＣＳＦ１Ｒに対するモノクローナル抗体を用いたＴＡＭの枯渇についてのますます多くの文献に追加される。Ｐｙｏｎｔｅｃｋ  ＳＭ，Ａｋｋａｒｉ  Ｌ，Ｓｃｈｕｈｍａｃｈｅｒ  ＡＪ，Ｂｏｗｍａｎ  ＲＬ，Ｓｅｖｅｎｉｃｈ  Ｌ，Ｑｕａｉｌ  ＤＦ，ｅｔ  ａｌ．ＣＳＦ−１Ｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｌｔｅｒｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｌｏｃｋｓ  ｇｌｉｏｍａ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１３；１９：１２６４−７２。
【０８３４】
従って、この研究では、抗ＣＤ１２３  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対して特に脆弱であり得るリンパ腫−マクロファージ−Ｔ細胞軸を強調している。抗ＣＤ１２３  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１２３）の抗白血病有効性に関する本発明者らの以前の刊行物は、正常造血前駆体上のＣＤ１２３を標的とすることから生じる骨髄破壊の可能性も強調した。従って、本発明者らの現在の臨床試験では、恒久的に修飾されたレンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞ではなく、短時間作用型のｍＲＮＡを電気穿孔したＣＡＲ  Ｔ細胞を利用する。（ＮＣＴ０２６２３５８２）。特に、現在、ＣＡＲ  Ｔ細胞、二特異性抗体、モノクローナル抗体又は抗体−薬物コンジュゲートを使用して、血液癌の標的としてのＣＤ１２３を調査している１３の試験がある。Ｅ．ｇ．，Ｌｉｕ  Ｋ，Ｚｈｕ  Ｍ，Ｈｕａｎｇ  Ｙ，Ｗｅｉ  Ｓ，Ｘｉｅ  Ｊ，Ｘｉａｏ  Ｙ．ＣＤ１２３  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ．Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０１５；１２２：５９−６４；Ｇｉｌｌ  Ｓ，Ｔａｓｉａｎ  ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ  Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ  Ｏ，Ｌｉ  Ｙ，Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３−５４；Ａｎｇｅｌｏｔ−Ｄｅｌｅｔｔｒｅ  Ｆ，Ｒｏｇｇｙ  Ａ，Ｆｒａｎｋｅｌ  ＡＥ，Ｌａｍａｒｔｈｅｅ  Ｂ，Ｓｅｉｌｌｅｓ  Ｅ，Ｂｉｉｃｈｌｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｂｌａｓｔｉｃ  ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｍ  ｔｏ  ＳＬ−４０１，ａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ａｇｅｎｔ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．２０１５；１００：２２３−３０；Ｃｏｈｅｎ  ＫＡ，Ｌｉｕ  ＴＦ，Ｃｌｉｎｅ  ＪＭ，Ｗａｇｎｅｒ  ＪＤ，Ｈａｌｌ  ＰＤ，Ｆｒａｎｋｅｌ  ＡＥ．Ｓａｆｅｔｙ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＴ３８８ＩＬ３，ａ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  ｔｏｘｉｎ／ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ３  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ：ＣＩＩ．２００５；５４：７９９−８０６；Ｈｅ  ＳＺ，Ｂｕｓｆｉｅｌｄ  Ｓ，Ｒｉｔｃｈｉｅ  ＤＳ，Ｈｅｒｔｚｂｅｒｇ  ＭＳ，Ｄｕｒｒａｎｔ  Ｓ，Ｌｅｗｉｓ  ＩＤ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  Ｐｈａｓｅ  １  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＣＤ１２３  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＳＬ３６０  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ，ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｏｒ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ＆ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１４：１−１０；Ｚｅｒｅｓｈ���ｉａｎ  Ａ，Ｌｅｙｔｏｎ  ＪＶ，Ｃａｉ  Ｚ，Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ  Ｄ，Ｗｅｉｎｆｅｌｄ  Ｍ，Ｒｅｉｌｌｙ  ＲＭ．Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｋｉｎａｓｅ／ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ｈＰＮＫＰ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ａ１２Ｂ４Ｃ３  ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  Ａｕｇｅｒ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ−ｅｍｉｔｔｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＣＤ１２３（１）（１）（１）Ｉｎ−ＮＬＳ−７Ｇ３  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１４；４１：３７７−８３；Ｋｕｏ  ＳＲ，Ｗｏｎｇ  Ｌ，Ｌｉｕ  ＪＳ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａ  ＣＤ１２３ｘＣＤ３  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｃＦｖ  ｉｍｍｕｎｏｆｕｓｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｄｅｓｉｇｎ＆ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ：ＰＥＤＳ．２０１２；２５：５６１−９；Ｃｈｉｃｈｉｌｉ  ＧＲ，Ｈｕａｎｇ  Ｌ，Ｌｉ  Ｈ，Ｂｕｒｋｅ  Ｓ，Ｈｅ  Ｌ，Ｔａｎｇ  Ｑ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ＣＤ３ｘＣＤ１２３  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＤＡＲＴ  ｆｏｒ  ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ  ｈｏｓｔ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５；７：２８９ｒａ８２；Ｆａｎ  Ｄ，Ｌｉ  Ｚ，Ｚｈａｎｇ  Ｘ，Ｙａｎｇ  Ｙ，Ｙｕａｎ  Ｘ，Ｚｈａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．ＡｎｔｉＣＤ３Ｆｖ  ｆｕｓｅｄ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｎｔ  ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１５；８：１８；Ｍａｒｄｉｒｏｓ  Ａ，Ｄｏｓ  Ｓａｎｔｏｓ  Ｃ，ＭｃＤｏｎａｌｄ  Ｔ，Ｂｒｏｗｎ  ＣＥ，Ｗａｎｇ  Ｘ，Ｂｕｄｄｅ  ＬＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＤ１２３−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｅｘｈｉｂｉｔ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２：３１３８−４８；Ｔｅｔｔａｍａｎｔｉ  Ｓ，Ｍａｇｎａｎｉ  ＣＦ，Ｂｉｏｎｄｉ  Ａ，Ｂｉａｇｉ  Ｅ．Ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ：ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｇｅｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｌｅｔｔｅｒｓ．２０１３；１５５：４３−６。最近の症例報告では、レンチウイルスで形質導入された��ＡＲＴ１２３で処置された１人の患者がこのアプローチの実現可能性を示しており、これは、他のＣＤ１２３標的薬からの予備的結果によって裏付けられている。Ｌｕｏ  Ｙ，Ｃｈａｎｇ  Ｌ−Ｊ，Ｈｕ  Ｙ，Ｄｏｎｇ  Ｌ，Ｗｅｉ  Ｇ，Ｈｕａｎｇ  Ｈ．Ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−Ｍａｎ  ＣＤ１２３−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１５；１２６：３７７８−；Ｆｒａｎｋｅｌ  ＡＥ，Ｗｏｏ  ＪＨ，Ａｈｎ  Ｃ，Ｐｅｍｍａｒａｊｕ  Ｎ，Ｍｅｄｅｉｒｏｓ  ＢＣ，Ｃａｒｒａｗａｙ  ＨＥ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＳＬ−４０１，ａ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｉｎ  ｂｌａｓｔｉｃ  ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４：３８５−９２；Ｈｅ  ＳＺ，Ｂｕｓｆｉｅｌｄ  Ｓ，Ｒｉｔｃｈｉｅ  ＤＳ，Ｈｅｒｔｚｂｅｒｇ  ＭＳ，Ｄｕｒｒａｎｔ  Ｓ，Ｌｅｗｉｓ  ＩＤ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  Ｐｈａｓｅ  １  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＣＤ１２３  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＳＬ３６０  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ，ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｏｒ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ＆ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１５；５６：１４０６−１５。
【０８３５】
要約すると、本発明者らは、ヒトＣＤ１２３再指向Ｔ細胞が播種性ＨＬに対して強力な治療活性を示すことを示した。重要なことに、ＣＡＲＴ１２３は、ＨＲＳ及びＴＡＭの両方を標的とし得る。前臨床モデルにおいてＣＡＲＴ１２３が骨髄抑制をもたらすという観察は、本発明者らの知見が、難治性ＨＬを有する患者を、組み合わせた「短時間作用型」ＲＮＡ−ＣＡＲ１２３又は枯渇可能なＣＡＲＴ１２３  Ｔ細胞とそれに続く自己骨髄移植で処置すると解釈され得ることを示唆する。同様に、この実施例は、ＣＡＲＴ細胞治療、例えば固形腫瘍を標的とするＣＡＲＴ細胞治療と一緒のＩＬ−１３阻害剤の併用療法が固形腫瘍の処置のための実行可能な戦略であることを実証する。
【０８３６】
均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的態様を参照して開示しているが、本発明の他の態様及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような態様及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。
【図１−１】
2019527696.tif 000158
【図１−２】
2019527696.tif 000159
【図２−１】
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【図２−２】
2019527696.tif 000161
【図２−３】
2019527696.tif 000162
【図２−４】
2019527696.tif 000163
【図２−５】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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