(57)【要約】  グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド、及び該オリゴヌクレオチドを使用する方法が本明細書に開示される。任意の目的のオリゴヌクレオチドが、核酸阻害剤分子等のｉｎ  ｖｉｖｏ送達に使用されるオリゴヌクレオチドを含むグルタチオン感受性部分により修飾され得る。典型的には、オリゴヌクレオチド中の１以上のヌクレオチドの糖部分の２’−炭素を可逆的に修飾するため、グルタチオン感受性部分が使用されるが、他の炭素位置もまたグルタチオン感受性部分で修飾され得る。また、例えば標準的なオリゴヌクレオチド合成法において使用可能なグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを含むグルタチオン感受性のヌクレオチド及びヌクレオシドのモノマーが開示される。さらに、ホスホロアミダイトを含まないグルタチオン感受性のヌクレオチド及びヌクレオシドのモノマーは、例えば抗ウイルス剤として治療的に使用され得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、グルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分の２’−炭素に共有結合される、酸素原子に共有結合されたグルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含み、前記グルタチオン感受性部分が式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記グルタチオン感受性部分が、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ（ｉ）、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、式ＩＶｅ、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記グルタチオン感受性部分が式ＩＩによって表される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記グルタチオン感受性部分が式ＩＩＩによって表される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記グルタチオン感受性部分が式ＩＶによって表される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドであって、前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、式Ｉ：
【化１】
2019526555.tif 000059
（式中、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここでＲ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の２つは共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は任意にヘテロ原子を含み、
ＪはＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｗは、水素、リン酸基、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｉは存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ１は存在しない、水素、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つは、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在せず、
ＩとＵ１は組み合わされて、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａは存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、又はホスホロアミデートであり、
Ｌは、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶ：
【化２】
2019526555.tif 000060
（式中、
ＹはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、
Ｚ１は、Ｎ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｖは、Ｃ又はＳＯであり、
Ｘ２及びＸ３は、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、アシル、置換若しくは非置換の脂肪族、ＯＲ１０、ＣＯＲ１０、ＣＯ２Ｒ１０、ＮＱ１Ｑ２から選択され、ここで、Ｒ１０は、独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換脂肪族、アリール脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換アリール、又はアルコキシ置換複素環であり、
Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しなくてもよく、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ、ＮＲ’から選択されてもよく、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、
ＰとＱは、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成し、
Ｐ１とＱ１は、共にジスルフィド架橋若しくはスルホニル基を形成し、又はＰ１とＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋若しくはスルホニル基であり、
Ｐ１とＱ１がジスルフィド架橋を形成する場合、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、前記環は、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のシクロアルキルであってもよく、ここで、前記芳香族又はシクロアルキル環は、任意にヘテロ原子を含んでもよく、
Ｔは、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドであり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくはスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択され、
Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキルから選択され、
Ｍ３及びＭ４は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、又はＣＯＯＲから選択され、ここで、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択され、又はＭ３とＭ４は共に４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、前記環は、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のシクロアルキルであってもよく、ここで、前記芳香族又はシクロアルキル環は、任意にヘテロ原子を含んでもよく、
Ｋは、Ｃ、ＣＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、
ｎは０〜５である）
から選択されるグルタチオン感受性部分である）
によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
Ｌが、式ＩＩ：
【化３】
2019526555.tif 000061
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’が共に複素環を形成し、
Ｖは、Ｃ又はＳＯであり、
Ｘ２及びＸ３は、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、アシル、置換又は非置換の脂肪族、ＯＲ１０、ＣＯＲ１０、ＣＯ２Ｒ１０、ＮＱ１Ｑ２から選択され、ここで、Ｒ１０は、独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換脂肪族、アリール脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換アリール、又はアルコキシ置換複素環であり、
ＰとＱは、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成し、
Ｔは、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである）によって表される、請求項６に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
Ｌが、式ＩＩＩ：
【化４】
2019526555.tif 000062
（式中、
ＹはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｖは、Ｃ又はＳＯであり、
Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキルから選択され、
Ｐ１とＱ１は、共にジスルフィド架橋若しくはスルホニル基を形成し、又はＰ１とＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋若しくはスルホニル基であり、
Ｐ１とＱ１がジスルフィド架橋を形成する場合、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、前記環は、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のシクロアルキルであってもよく、ここで、前記芳香族又はシクロアルキル環が、任意にヘテロ原子を含んでもよく、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくはスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択される）によって表される、請求項６に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
Ｌが、式ＩＶ：
【化５】
2019526555.tif 000063
（式中、
ＹはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、
ＶはＣ又はＳＯであり、
Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しなくてもよく、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ若しくはＮＲ’から選択されてもよく、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、
Ｍ３及びＭ４は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、又はＣＯＯＲから選択され、ここで、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択され、又はＭ３とＭ４は共に４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、前記環は、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のシクロアルキルであってもよく、ここで、前記芳香族又はシクロアルキル環は、任意にヘテロ原子を含んでもよく、
ＫはＣ、ＣＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、
ｎは０〜５であり、
ＰとＱは、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成し、
Ｔは、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換ヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである）によって表される、請求項６に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
ＹがＯであり、ＺがＮＲ’であり、ここで、Ｒ’が水素、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、ＶがＣである、請求項７に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
Ｘ２及びＸ３が、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、又はアミノから選択される、請求項１０に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
Ｌが、式ＩＩａ：
【化６】
2019526555.tif 000064
によって表される、請求項７に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
ＹがＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１がＮ又はＣＨであり、ＶがＣである、請求項８に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
Ｍ１及びＭ２が置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又はＰ１及びＱ１と共に５員環〜８員環を形成し、ここで、前記環が置換又は非置換のシクロアルキルである、請求項１３に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
Ｌが、式ＩＩＩａ：
【化７】
2019526555.tif 000065
（式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択される）によって表される、請求項８に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
Ｌが、式ＩＩＩａ（ｉ）：
【化８】
2019526555.tif 000066
によって表される、請求項１５に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
Ｌが、式ＩＩＩｂ：
【化９】
2019526555.tif 000067
（式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドから選択される）によって表される、請求項８に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
Ｌが、式ＩＩＩｂ（ｉ）：
【化１０】
2019526555.tif 000068
によって表される、請求項１７に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
ＹがＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＺがＮＨ又はＮ−ＣＨ３であり、ＶがＣであり、ＧがＣＨ２であって、かつＥが存在しない、又はＥがＣＨ２であって、かつＧが存在しない、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
Ｍ３及びＭ４が、独立して、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、前記環が置換又は非置換のシクロアルキルである、請求項１９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
Ｌが、式ＩＶａ：
【化１１】
2019526555.tif 000069
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、Ｏアシル、ＮＨＲ’、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換された脂肪族若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成してもよく、
Ｔは、分岐鎖若しくは非分岐鎖のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又はスペーサーを介して任意に硫黄原子に接続されたリガンドである）によって表される、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
Ｌが、式ＩＶａ（ｉ）：
【化１２】
2019526555.tif 000070
によって表される、請求項２１に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
Ｌが、式ＩＶｂ：
【化１３】
2019526555.tif 000071
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は水素であり、ＫはＣＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、ＥはＮＨ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は置換又は非置換の脂肪族であり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドである）によって表される、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
Ｌが、式ＩＶｂ（ｉ）又は式ＩＶｂ（ｉｉ）：
【化１４】
2019526555.tif 000072
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル若しくは複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される、請求項２３に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
Ｌが、式ＩＶｃ：
【化１５】
2019526555.tif 000073
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は、共に５員環〜８員環を形成し、ここで、前記環は、任意にヘテロ原子で置換された置換又は非置換のシクロアルキルであり、Ｋは、分岐鎖又は非分岐鎖の置換又は非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
Ｌが、式ＩＶｃ（ｉ）：
【化１６】
2019526555.tif 000074
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される、請求項２５に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
Ｌが、式ＩＶｄ：
【化１７】
2019526555.tif 000075
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮＣＨ３から選択され、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルから選択される）によって表される、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
Ｌが、式ＩＶｄ（ｉ）：
【化１８】
2019526555.tif 000076
によって表される、請求項２７に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
Ｌが、式ＩＶｅ：
【化１９】
2019526555.tif 000077
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣ又はＳＯであり、Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しなくてもよく、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ、ＮＲ’から選択されてもよく、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、ＫはＣ又はＣＨであり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される、請求項９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
ＺがＮＨ又はＮ−ＣＨ３であり、Ｇ及びＥの１つ又は両方が存在しない、ＣＨ２、又はＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、独立して、水素、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択される、請求項２９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
Ｌが、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）：
【化２０】
2019526555.tif 000078
2019526555.tif 000079
2019526555.tif 000080
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される、請求項２９に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
前記ヌクレオチド間の結合基がリン原子を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
前記オリゴヌクレオチドが、第１の鎖及び第２の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドが二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、第１の鎖がセンス鎖を含み、第２の鎖がアンチセンス鎖を含む、請求項３３に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
前記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子が、約１５個〜４５個のヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖との間の相補性領域を含む、請求項３４に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
前記センス鎖とアンチセンス鎖との間の相補性領域が、２０個〜３０個、２１個〜２６個、１９個〜２４個又は１９個〜２１個のヌクレオチドである、請求項３５に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
前記式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドが前記アンチセンス鎖に位置する、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
前記式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドが前記センス鎖に位置する、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
前記式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドが、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１にある、請求項３８に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
前記式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドが、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１４にある、請求項３８に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
前記式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドが、前記センス鎖のＡｇｏ２切断部位の又はそれに近接するヌクレオチド位置にある、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
前記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子がテトラループを含む、請求項３４〜４１のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
前記オリゴヌクレオチドが一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
前記一本鎖オリゴヌクレオチドが一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、請求項４３に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
前記一本鎖オリゴヌクレオチドが、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、マイクロＲＮＡ、アンタゴｍｉｒ、又はアプタマーである、請求項４３に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
前記一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子が、約１４個〜５０個、１６個〜３０個、１８個〜２２個、又は２０個〜２２個のヌクレオチド長である、請求項４４又は４５に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、式Ｉによって表される１個〜５個のヌクレオチドを含む、請求項１〜４６のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが修飾され、前記グルタチオン感受性部分により修飾されていない全てのヌクレオチドが不可逆的修飾によって修飾される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
送達物質を更に含み、前記送達物質が、細胞の外膜を越えて前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの輸送を促進する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５０】
前記送達物質が、炭水化物、ペプチド、脂質、ビタミン及び抗体からなる群から選択される、請求項１〜４９のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
前記送達物質が、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、マンノース−６−リン酸、ガラクトース、オリゴ糖、多糖、コレステロール、ポリエチレングリコール、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、リトコール酸、及びカチオン性脂質から選択される、請求項１〜５０のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５２】
前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、ネイキッドグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドである、請求項１〜５１のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５３】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドであって、該グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、ヌクレオチドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合されたグルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含み、前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、グルタチオン感受性部分を有するヌクレオシドホスホロアミダイトを使用して、ホスホロアミダイト系オリゴヌクレオチド合成法によって作製される、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５４】
前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、細胞における標的配列にハイブリダイズすることができる第１の部分を有するｃｒＲＮＡ配列及び／又は該ｃｒＲＮＡ配列の第２の部分とハイブリダイズしてガイド配列を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有する、「クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）」核酸配列である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５５】
前記ガイド配列がキメラガイド配列であり、前記ｃｒＲＮＡ配列がｔｒａｃｒＲＮＡ配列に融合される、請求項５４に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項５６】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項５７】
請求項３３〜５２のいずれか一項に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項５８】
被験体において標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、それを必要とする被験体に、前記標的遺伝子の発現を減少させるのに十分な量の請求項５７に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５９】
前記投与が全身投与を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
医薬組成物であって、該医薬組成物が、薬学的に許容可能な賦形剤と、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドを含む、治療的有効量のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドとを含み、前記少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドが、リボース又はその類縁体の２’−炭素のヒドロキシル基のグルタチオン感受性部分による置換を含む、医薬組成物。
【請求項６１】
前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、第１のオリゴヌクレオチドセンス鎖及び第２のオリゴヌクレオチドアンチセンス鎖を含む、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、
前記第１のオリゴヌクレオチドセンス鎖及び前記第２のオリゴヌクレオチドアンチセンス鎖が、それぞれ、１８個〜６６個のヌクレオチドを含み、
前記第１のオリゴヌクレオチドセンス鎖及び前記第２のオリゴヌクレオチドアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記二重鎖領域が少なくとも１８個のヌクレオチド塩基対を含み、
前記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子が細胞に導入される場合に、前記第２のオリゴヌクレオチドアンチセンス鎖が、標的遺伝子発現を減少させるために標的ＲＮＡに対して十分に相補的である、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
被験体において標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、それを必要とする被験体に対して、前記標的遺伝子の発現を減少させるのに十分な量の請求項６０又は６１に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６３】
ホスホロアミダイトオリゴヌクレオチド合成法と適合する、ホスホロアミダイトとグルタチオン感受性部分とを含むヌクレオシド。
【請求項６４】
前記ホスホロアミダイトが前記ヌクレオシドの糖部分の５’−炭素又は３’−炭素に結合され、前記グルタチオン感受性部分が、前記ヌクレオシドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合される、請求項６３に記載のヌクレオシド。
【請求項６５】
前記グルタチオン感受性部分が、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される、請求項６３又は６４に記載のヌクレオシド。
【請求項６６】
式ＩＩが式ＩＩａであり、式ＩＩＩが、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ若しくは式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択され、又は式ＩＶが、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ若しくは式ＩＶｅから選択される、請求項６５に記載のヌクレオシド。
【請求項６７】
前記式ＩＶが、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される、請求項６５に記載のヌクレオシド。
【請求項６８】
ヌクレオシドホスホロアミダイトであって、該ヌクレオシドホスホロアミダイトが式ＶＩＩＩ：
【化２１】
2019526555.tif 000081
（式中、
Ｌ１はグルタチオン感受性部分であり、
Ａ１は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、ホスホロアミダイト、保護基、又は固体支持体であり、
Ｗ１は、ホスホロアミダイト、保護基、固体支持体、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｕ３は、水素であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
少なくともＡ１はホスホロアミダイトであって、かつＵ３はＯであり、又は少なくともＷ１はホスホロアミダイトであって、かつＵ２はＯであり、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の２つは、共に５員環〜８員環を形成し、ここで、前記環は任意にヘテロ原子を含み、
ＪはＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基、又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
ＩとＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよい）によって表される、ヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項６９】
ヌクレオシドホスホロアミダイトであって、該ヌクレオシドホスホロアミダイトが式ＩＸ：
【化２２】
2019526555.tif 000082
（式中、
Ｌ１はグルタチオン感受性部分であり、
Ｒ９はホスホロアミダイトであり、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルであり、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の２つは、共に５員環〜８員環を形成し、ここで、前記環は任意にヘテロ原子を含み、
ＪはＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基、又はユニバーサル核酸塩基であり、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、及び置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ３は、水素であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
ＩとＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａ３は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、保護基、又は固体支持体である）によって表される、ヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７０】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）がジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む、請求項６８又は６９に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７１】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される、請求項６８〜７０のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７２】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が式ＩＩａによって表される、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７３】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ、又は式ＩＩＩｂ（ｉ）によって表される、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７４】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、又は式ＩＶｅによって表される、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７５】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、又は式ＩＶｄ（ｉ）によって表される、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７６】
前記グルタチオン感受性部分（Ｌ１）が、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｆ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表される、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７７】
ＪがＯであり、Ｂが天然核酸塩基であり、Ｕ２がＯであり、ＩがＣＨ２であり、Ｗ１がホスホロアミダイトであり、Ａ１が保護基、水素又は固体支持体であり、Ｕ３がＯである、請求項６８に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７８】
ＸがＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素である、請求項７７に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項７９】
ＪがＯであり、Ｂが天然核酸塩基であり、Ｕ２がＯであり、ＩがＣＨ２であり、Ｗ１が保護基、水素又は固体支持体であり、Ａ１がホスホロアミダイトであり、Ｕ３がＯである、請求項６８に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項８０】
ＸがＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素である、請求項７９に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項８１】
前記ホスホロアミダイトが、式−Ｐ（ＯＲｘ）−Ｎ（Ｒｙ）２（式中、Ｒｘは、任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙは、それぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される）を有する、請求項６３〜８０のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項８２】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを作製する方法であって、
（ａ）共有結合を介してヌクレオシドを固体支持体に付着させることと、
（ｂ）請求項６３〜８１のいずれか一項に記載のヌクレオシドホスホロアミダイトを、工程（ａ）のヌクレオシド上のヒドロキシル基にカップリングして、その間にリンヌクレオシド結合を形成することであって、前記固体支持体上の任意のカップリングされていないヌクレオシドがキャッピング試薬によってキャップされることと、
（ｃ）酸化剤で前記リンヌクレオシド結合を酸化することと、
（ｄ）請求項６８〜８１のいずれか一項に記載の１以上の後のヌクレオシドホスホロアミダイト又はグルタチオン感受性部分を含まない１以上の後のヌクレオシドホスホロアミダイトを用いて、反復して工程（ｂ）〜工程（ｄ）を繰り返して前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを形成することと、
（ｆ）任意に、前記固体支持体から前記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを取り除くことと、
を含む、方法。
【請求項８３】
前記グルタチオン感受性部分が、ジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
請求項８２又は８３に記載の方法によって作製されたグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項８５】
グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドであって、
前記グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドがグルタチオン感受性部分を含み、
前記グルタチオン感受性部分が、前記ヌクレオチド又はヌクレオシドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合され、
前記グルタチオン感受性部分が式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項８６】
前記グルタチオン感受性部分が、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ若しくは式ＩＩＩｂ（ｉ）、又は式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ若しくは式ＩＶｅによって表される、請求項８５に記載のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項８７】
式ＩＶが、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される、請求項８５に記載のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項８８】
グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドであって、前記グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドが式ＸＩ：
【化２３】
2019526555.tif 000083
（式中、
Ｌ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分であり、又はＡ２若しくはＷ２の１つが式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分である場合、存在せず、
Ｌ２がグルタチオン感受性部分である場合、ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＬ２が存在しない場合、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ハロゲン、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルアミノ若しくはジアルキルアミノであり、ここで、前記アルキル、アルケニル及びアルキニル中の１以上のメチレンは、１以上のＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ’）、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換された複素環、若しくは任意に置換されたシクロアルキル、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＨＲ’で中断されてもよく、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうち２つは、共に５員環〜８員環を形成し、ここで前記環は任意にヘテロ原子を含み、
Ｊは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｗ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ３は水素であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｉ及びＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａ２は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、又は式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分である）
によって表される、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項８９】
ＪがＯであり、ＸがＯであり、Ｌ２が、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分であり、Ｗ２が、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、Ａ２は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、又はホスホロアミデートである、請求項８８に記載のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項９０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素であり、Ｕ２が酸素であり、Ｗ２が水素であり、ＩがＣＨ２であり、Ｕ３がＯであり、Ａ２が水素又はリン酸基である、請求項８９に記載のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド。
【請求項９１】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドであって、該グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドが、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）：
【化２４】
2019526555.tif 000084
（式中、
Ａは、存在しない、水素、リン酸基、又はホスフェート模倣物であり、
Ｕ１は、Ｏ、又は式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、
Ｂが天然核酸塩基であり、
Ｕ２がＯであり、
Ｗが、水素、又は式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、
Ｕ１又はＷの少なくとも１つが、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在しない）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、
センス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項９２】
Ａが水素であり、Ｗが式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドが、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１にある、請求項９１に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項９３】
Ａが存在せず、Ｗが、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを第１のオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１が、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを第２のオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドが、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１４にある、請求項９１に記載のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項９４】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドであって、該グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式ＶＩＩｅ（ｘｉ）：
【化２５】
2019526555.tif 000085
（式中、
Ａは、存在しない、水素、リン酸基、又はホスフェート模倣物であり、
Ｕ１は、Ｏ、又は式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、
Ｂは、天然核酸塩基であり、
Ｕ２は、Ｏであり、
Ｗは、水素又は、式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つは、式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在しない）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、
センス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド。
【請求項９５】
ヌクレオシドホスホロアミダイトであって、該ヌクレオシドホスホロアミダイトが式Ｘ：
【化２６】
2019526555.tif 000086
（式中、Ｒ８はＨ又は保護基であり、Ｒ７はホスホロアミダイトであり、Ｂは天然核酸塩基であり、ＸはＯであり、
Ｌ１は式ＩＶｅ（ｉｘ）：
【化２７】
2019526555.tif 000087
によって表される）によって表される、ヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項９６】
ヌクレオシドホスホロアミダイトであって、該ヌクレオシドホスホロアミダイトが式Ｘ：
【化２８】
2019526555.tif 000088
（式中、Ｒ８はＨ又は保護基であり、Ｒ７はホスホロアミダイトであり、Ｂは天然核酸塩基であり、ＸはＯであり、
Ｌ１は式ＩＶｅ（ｘｉ）：
【化２９】
2019526555.tif 000089
によって表される）によって表される、ヌクレオシドホスホロアミダイト。
【請求項９７】
前記ホスホロアミダイトが、式−Ｐ（ＯＲｘ）−Ｎ（Ｒｙ）２（式中、Ｒｘは、任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙは、それぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される）を有する、請求項９５又は９６に記載のヌクレオシドホスホロアミダイト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１６年８月２３日付で出願された米国仮特許出願第６２／３７８，６３５号の利益を主張し、その出願日に依拠し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【背景技術】
【０００２】
オリゴヌクレオチドは、分子生物学において、例えばプローブ、プライマー又はリンカーとしての使用を含む様々な用途を有する。また、オリゴヌクレオチドを、例えばゲノムＤＮＡ配列（例えば、「クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）」）を編集するため、遺伝子療法技術を使用して欠損遺伝子又は失われた遺伝子を回復するため、又は様々な機構を通して細胞内ＲＮＡレベルを調節するための核酸阻害剤分子として治療的に使用することができる。低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、マイクロＲＮＡ、アンタゴｍｉｒ（antagomir）及びアプタマーはいずれも、癌、ウイルス感染症及び遺伝性障害の治療の初期の期待を実証した核酸分子の例である。ヌクレオシド及びヌクレオチド類縁体もまた、治療的に、特に抗ウイルス剤又は抗癌剤として一般的に使用される。
【０００３】
他の薬物のように、治療的オリゴヌクレオチドは、とりわけ生体システムにおける安定性及び意図された作用部位における十分な効力を必要とする。身体を通過して標的細胞の細胞基質へと進むにつれてこれらの分子が経験する状況から、ｉｎ  ｖｉｖｏ環境には、治療的オリゴヌクレオチドの安定性に対する課題がある。例えば、オリゴヌクレオチドは、血清中での３’−エキソヌクレアーゼを含むヌクレアーゼによる分解に弱い。非特許文献１を参照されたい。特定のカノニカルな（canonical）２１−ｍｅｒのｓｉＲＮＡ、及び当該技術分野で知られ、本明細書に記載される他のｓｉＲＮＡデザイン等の一本鎖３’−オーバーハングを有する核酸阻害剤分子は、結果的に、かかる３’−エキソヌクレアーゼによる分解に特に弱い可能性がある（非特許文献１）。さらに、リボヌクレアーゼＡ（RNase A）様活性は、血清中のｓｉＲＮＡの分解と関連付けられた。
【０００４】
さらに、オリゴヌクレオチドが血清の環境を通って目的の標的細胞に入れたとしても、オリゴヌクレオチドの安定性を損なう酵素又は条件（例えばｐＨ）に更に曝され得る。例えば、ｐＨ依存性のリボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼは、細胞の小胞、例えばリソソーム、エンドソーム、及び融合エンドソーム／リソソームの小胞に存在する。
【０００５】
この数年に亘り、いろいろなアプローチが、これらの環境条件から治療的オリゴヌクレオチドを保護しようとする試みを追い求めてきた。核酸阻害剤分子のｉｎ  ｖｉｖｏ投与に関連する課題に取り組むことへの主なアプローチは、核酸分子中の１以上のヌクレオチドに特定の不可逆的な共有結合による化学修飾を導入することであった。多くの種類の不可逆的なヌクレオチド化学修飾がこの数年に亘り報告されている。例えば、非特許文献２を参照されたい。かかる不可逆的化学修飾は、しばしばヌクレオチドの糖部分に対する変化を含む。
【０００６】
通常、２’−ヒドロキシル（２’−ＯＨ）基がリボヌクレオチドを特定のリボヌクレアーゼに対してより感受性とすることから、ヌクレオチドの糖部分の２’−炭素（Ｃ２’）が不可逆的に修飾された。例えば、多くのグループが、糖部分の２’位をヒドロキシル基から２’−フルオロ（２’−Ｆ）又は２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）に修飾し、かかる変化は、ＲＮＡオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ抵抗性を効果的に高めた。非特許文献１を参照されたい。
【０００７】
オリゴヌクレオチドの５’−末端は、一般的には、不可逆的な方法で修飾されたもう一つの位置である。核酸阻害剤分子の５’−末端の典型的な不可逆的な修飾として、ホスホロアミデート又はリン酸基の静電気的及び立体的な特性を模倣する化学部分（「ホスフェート模倣物」）が挙げられる。非特許文献３を参照されたい。典型的には、これらの５’−ホスフェート模倣物はホスファターゼ抵抗性結合を含む。
【０００８】
また、オリゴヌクレオチドの骨格を不可逆的に修飾することも可能である。例えば、ホスホロチオエート（ＰＳ）骨格の修飾は、非架橋酸素原子を硫黄原子で置き換えて、血漿中のオリゴヌクレオチドの半減期を数分から数日に延ばすことがある。非特許文献４、非特許文献５を参照されたい。
【０００９】
多くの場合、同じ核酸阻害剤分子中の１以上のヌクレオチド位置を２以上の種類の不可逆的修飾により不可逆的に修飾することが望ましい。例えば、ｓｉＲＮＡ分子を複数の２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ及びホスホロチオエートの修飾によって修飾することが一般的である。非特許文献６を参照されたい。
【００１０】
これらの不可逆的な修飾は、修飾ヌクレオチドの位置及び／又は修飾の数に応じて、核酸の安定性を改善する及び／又は血清若しくは細胞中の酵素から核酸を保護するのを支援し得る一方で、これらの不可逆修飾は、一旦細胞の細胞質基質に達すると、核酸阻害剤分子の効力又は活性を減少させることもある。非特許文献１を参照されたい。さらに、これらの修飾が細胞内条件下で不可逆であることから、それらの修飾は、細胞の細胞質基質においてその生物学的活性を発揮する前には核酸阻害剤分子から取り除かれない。不可逆的修飾が効力又は活性の減少をもたらす場合、不可逆的修飾は、それらを含む核酸阻害剤分子の治療有効性を制限することがある。
【００１１】
研究及び薬物開発の努力が核酸阻害剤分子を保護するために不可逆的な修飾に注目する一方で、より小さい規模の、可逆的であって、オリゴヌクレオチドが細胞に入った後に除去され得る化学修飾を含むオリゴヌクレオチドの報告もある。可逆的な修飾は、例えば、細胞内酵素の作用により、又は細胞の内部の化学的状況によって（例えば細胞内グルタチオンによる還元を通して）除去され得る。典型的には、ヌクレオチド間のジホスフェート結合によって生じる負電荷をマスクし、細胞取り込み及びヌクレアーゼ抵抗性を改善するため、環状ジスルフィド部分により核酸分子を化学修飾した。当初はTraversa Therapeutics, Inc.（「Traversa」）に譲渡された特許文献１、Solstice Biologics, Ltd.（「Solstice」）に対する特許文献２、非特許文献７（「Meade」）、Merck Sharp & Dohme Corpに対する特許文献３を参照されたい。ヌクレオチド間のジホスフェート結合のこの可逆的な修飾は、細胞質基質の還元環境（例えばグルタチオン）によって細胞内で切断されるように設計される。先の例は、細胞内部で切断可能であると報告されたリン酸トリエステル修飾を中和することを含む（非特許文献８）。
【００１２】
２’−炭素（Ｃ２’とも称される）等のヌクレオチドの糖部分の他の位置を可逆的に修飾する努力は、当該技術分野ではほとんどなされていなかった。Ｃ２’は、酵素的切断（非特許文献９）及び光刺激切断（非特許文献１０）に感受性である修飾を使用して可逆的に修飾された。特に最近では、可逆的なジスルフィド修飾は、２’炭素においてＲＮＡ分子に適用された。より詳しくは、特異的な２’−Ｏ−メチルジチオメチル（２’−Ｏ−ＭＤＴＭ）ＲＮＡは、グルタチオンによって細胞内で切断可能なジスルフィド架橋を伴って設計され、単離されたＡ５４９細胞において外因的に添加されたルシフェラーゼ遺伝子の発現を阻害し得ることがｉｎ  ｖｉｔｒｏで示された。非特許文献１１を参照されたい。しかしながら、非特許文献１１の著者らは、２’−Ｏ−ＭＤＴＭ基を含むヌクレオシドホスホロアミダイトは、標準的なオリゴヌクレオチド固相合成と適合性しないことを見出した。非特許文献１１と同様に非特許文献１２も参照されたい。したがって、Ochiは、彼らの２’−Ｏ−ＭＤＴＭ修飾ＲＮＡ分子を合成するため、合成後アプローチを使用しなければならなかった。非特許文献１１と同様に、２’−Ｏ−ＭＤＴＭ修飾ＲＮＡ分子を作製するためのOchiの合成後アプローチを２’−Ｏ−ＭＤＴＭ基を含むヌクレオシドホスホロアミダイトにおけるジスルフィド結合の不安定を回避する方法として認識し、様々な２’−アルキルジチオメチル基を含むＲＮＡを作製する代替的な合成後アプローチを提案する非特許文献１３も参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号
【特許文献２】国際公開第２０１５／１８８１９７号
【特許文献３】国際公開第２０１４／０８８９２０号
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Behlke, M.A., Oligonucleotides, 2008,18:305-320
【非特許文献２】Bramsen et al., Nucleic Acids Res., 2009, 37:2867-2881
【非特許文献３】Prakash et al., 2015, 43(6):2993-3011
【非特許文献４】Shen et al. Nucleic Acids Res., 2015, 43:4569-4578
【非特許文献５】Eckstein, F. Nucleic Acid Thera., 2014, 24(6):374-387
【非特許文献６】Podbevsek et al., Nucleic Acid Res., 2010,38(20):7298-7307
【非特許文献７】Meade et al., Nature Biotechnology, 2014,32:1256-1263
【非特許文献８】Dellinger et al., J. Am. Chem. Soc. 2003, 125:940-950
【非特許文献９】Lavergne et al., J. Org. Chem., 2011, 76:5719-5731
【非特許文献１０】Johnsson et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters, 2011, 21:3721-25
【非特許文献１１】Ochi et al., Bioorganic Medicinal Chemistry Letters, 2016,26:845-848
【非特許文献１２】Ochi et al., Curr. Protoc. Nucleic Acid Chem., 2015, (62):4.63.1-4.63.20
【非特許文献１３】Biscans et al., Org. Biomol. Chem., 2016, 14:7010-17
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
オリゴヌクレオチドの安定性を改善するため及び／又は血清中若しくは細胞中の酵素からオリゴヌクレオチドを保護するために当該技術分野でなされた進歩にもかかわらず、核酸分子の可逆的な修飾、特に、標準的なホスホロアミダイトオリゴヌクレオチド合成と適合する可逆的な修飾に対する改善された方略が当該技術分野において引き続き必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本出願は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ、リボザイム、アンタゴｍｉｒ及びアプタマー等の核酸阻害剤分子を含む任意の目的のオリゴヌクレオチドに組み込まれ得る、様々な新しいグルタチオン感受性で可逆的に修飾されたヌクレオチド及びヌクレオシドを開示する。また、上記ヌクレオチド及びヌクレオシドは、クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチド等の他のオリゴヌクレオチドにも組み込まれ得る。
【００１７】
また、本発明のグルタチオン感受性で可逆的な修飾は、例えば標準的なオリゴヌクレオチド合成法で使用され得るグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを含む、ヌクレオチド及びヌクレオシドのモノマーを可逆的に修飾するために使用され得る。さらに、ホスホロアミダイトを含まないグルタチオン感受性のヌクレオチド及びヌクレオシドのモノマーは、例えば抗ウイルス剤として治療的に使用され得る。
【００１８】
典型的には、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチド中の糖部分の２’−炭素を可逆的に修飾するために使用されるが、他の炭素位置もまたグルタチオン感受性部分で修飾され得る。オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えばｐＨ）に曝露されるｉｎ  ｖｉｖｏ投与（例えば、血液、及び／又は細胞のリソソーム／エンドソームのコンパートメントを通る輸送）の間、オリゴヌクレオチドを保護することを支援するため、１以上のグルタチオン感受性のヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに組み込むことができる。可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチドが細胞質基質に放出される場合、高レベルのグルタチオンを含む細胞内の状況は、オリゴヌクレオチドからグルタチオン感受性部分を除去させる。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性部分の除去は、ヒドロキシル基を２’−炭素位置に生じ、この基は、その位置でのリボヌクレオチドに対する天然の置換基である（例えば、実施例３のスキーム７を参照されたい）。
【００１９】
本出願の教示に従って可逆的なグルタチオン感受性部分を使用することにより、不可逆的な化学修飾を使用する利用可能な選択肢と比較して、立体的により大きな化学基を目的のオリゴヌクレオチドへ導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基が細胞質基質で除去されるため、細胞の細胞質基質内部のオリゴヌクレオチドの生物学的活性を妨げないからである。その結果、これらのより大きな化学基は、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに対して、ヌクレアーゼ抵抗性、親油性、電荷、熱安定性、特異性及び免疫原性の減少等の様々な利点を与えるために操作され得る。幾つかの実施の形態において、グルタチオン感受性部分の構造は、その放出の動態を変更するために操作され得る。
【００２０】
さらに、本発明の可逆的に修飾されたグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、従来の固相合成を使用して合成され得る。したがって、これらの可逆的に修飾されたグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、容易に作製され、治療適用における使用に適している。さらに、従来の固相合成を使用して上記核酸を合成することができることから、グルタチオン感受性ヌクレオチドは、所望の効果に応じてオリゴヌクレオチド中の選択された位置で核酸分子に組み込まれ得る。核酸阻害剤分子等のオリゴヌクレオチドの特定位置でのグルタチオン感受性部分の組み込みは、オリゴヌクレオチドの特性に影響する場合がある。例えば、グルタチオン感受性部分は、核酸阻害剤分子のヌクレオチド位置１（すなわち、５’−末端ヌクレオチド）に組み込まれ得て、それがヌクレオチド位置１に２’−Ｆを有する分子と比較して分子の安定性を増加させる。
【００２１】
この技術によって、今般、１以上の目的のヌクレオチド位置に組み込まれたグルタチオン感受性部分を有する治療的に有用なグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを容易に合成することができる。したがって、或る１つの態様では、本明細書に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、医薬品として使用され得て、薬学的に許容可能な賦形剤と共に医薬組成物として製剤化され得て、例えば、ゲノムＤＮＡを編集する又は標的遺伝子の発現を調節し、それを必要とする患者を治療するため使用され得る。
【００２２】
或る特定の態様では、本開示は、１以上の可逆的に修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに関し、ここで、可逆的に修飾されたヌクレオチドは、糖環（又はその類縁体）の２’−炭素に付着されたグルタチオン感受性部分を含む。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性部分は、本明細書に記載される、式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶ、又は例えば、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ及び式ＩＩＩｂ（ｉ）；式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ若しくは式ＩＶｅ；式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）若しくは式ＩＶｄ（ｉ）；又は式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）又は式ＩＶｅ（ｘｉ）を含むそれらの亜属のいずれかによって表される。オリゴヌクレオチドが２以上の可逆的に修飾されたヌクレオチドを含む実施の形態において、可逆的に修飾されたヌクレオチドはそれぞれ、同じグルタチオン感受性部分を含んでもよく、又は可逆的に修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つは、オリゴヌクレオチドの他の可逆的に修飾されたヌクレオチド中の少なくとも１つのグルタチオン感受性部分とは異なるグルタチオン感受性部分を含んでもよい。或る特定の実施の形態において、オリゴヌクレオチドの可逆的に修飾されたヌクレオチドはそれぞれ、異なるグルタチオン感受性部分を含む。
【００２３】
或る特定の態様において、本開示は、薬学的に許容可能な担体と、糖部分（又はその類縁体）の２’−炭素に付着されたグルタチオン感受性部分を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含む治療的有効量のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドとを含む医薬組成物に関する。
【００２４】
或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶ、又は例えば式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ及び式ＩＩＩｂ（ｉ）；式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ若しくは式ＩＶｅ；式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）若しくは式ＩＶｄ（ｉ）；又は式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）若しくは式ＩＶｅ（ｘｉ）を含む本明細書に記載されるそれらの亜属のいずれかから選択されるグルタチオン感受性部分である。
【００２５】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩによって表され、式中、ＹはＯであり、ＺはＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、ＶはＣであり、任意に、Ｘ２及びＸ３は独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、又はアミノから選択される。
【００２６】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩａによって表される。
【００２７】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＨであり、ＶはＣであり、任意にＭ１及びＭ２は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又はＰ１及びＱ１と共に５員環〜８員環を形成し、ここで、上記環は置換又は非置換のシクロアルキルである。
【００２８】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩＩａによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択される。或る一つの実施の形態において、ＹはＯであり、Ｚ１はＮである（式ＩＩＩａ（ｉ）を参照されたい）。
【００２９】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩＩｂによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドから選択される。１つの実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＩＩｂ（ｉ）によって表される。
【００３０】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３であり、ＶはＣであり、ＧはＣＨ２であり、かつＥは存在しない、又はＧは存在せず、かつＥはＣＨ２であり、任意に、Ｍ３及びＭ４は、独立して、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、上記環は置換又は非置換のシクロアルキルである。
【００３１】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶａによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、Ｏアシル、ＮＨＲ’、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＣＨ２、ＣＨ、置換された脂肪族若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成することができ、Ｔは、分岐鎖若しくは非分岐鎖のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又はスペーサーを介して任意に硫黄原子に接続されたリガンドである。１つの実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶａ（ｉ）によって表される。
【００３２】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、式ＩＶｂによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は水素であり、ＫはＣＨであり、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、ＥはＮＨ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は置換又は非置換の脂肪族であり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドである。或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｂ（ｉ）又は式ＩＶｂ（ｉｉ）によって表され、式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル若しくは複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである。
【００３３】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｃによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は、共に５員環〜８員環を形成し、ここで、上記環は、任意にヘテロ原子で置換された置換又は非置換のシクロアルキルであり、Ｋは、分岐鎖又は非分岐鎖の置換又は非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである。１つの実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｃ（ｉ）によって表され、式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである。
【００３４】
或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｄによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮＣＨ３から選択され、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルから選択される。１つの実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｄ（ｉ）によって表される。
【００３５】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｅによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣ又はＳＯであり、Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しなくてもよく、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ、ＮＲ’から選択されてもよく、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、ＫはＣ又はＣＨであり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである。或る特定の実施の形態において、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３であり、Ｇ及びＥの１つ又は両方が存在しない、ＣＨ２、又はＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ、ＮＲ’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択される。或る特定の実施の形態において、Ｌは、本明細書に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表され、式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲはスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである。
【００３６】
或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、式中、Ａは存在しない、水素、リン酸基又はホスフェート模倣物であり、Ｕ１は、Ｏ、又は式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、Ｗが、水素、又は式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つが、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在せず、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。
【００３７】
或る特定の実施の形態において、Ａは水素であり、Ｗは、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１にある。
【００３８】
或る特定の実施の形態において、Ａは存在せず、Ｗは、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを第１のオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１は、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを第２のオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、式ＶＩＩｅ（ｉｘ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１４にある。
【００３９】
或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、式中、Ａは、存在しない、水素、リン酸基又はホスフェート模倣物であり、Ｕ１はＯであり、又は式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、Ｗは水素であり、又は式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つは、式ＶＩＩｅ（ｘｉ）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在せず、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。
【００４０】
或る特定の実施の形態において、上記ヌクレオチド間の結合基はリン原子を含む。
【００４１】
或る特定の実施の形態において、上記オリゴヌクレオチドは、第１の鎖及び第２の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドである。
【００４２】
或る特定の実施の形態において、上記二本鎖オリゴヌクレオチドは二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、第１の鎖はセンス鎖を含み、第２の鎖はアンチセンス鎖を含む。或る特定の実施の形態において、上記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、約１５個〜４５個、２０個〜３０個、２１個〜２６個、１９個〜２４個又は１９個〜２１個のヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖との間の相補性領域を含む。
【００４３】
或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドはアンチセンス鎖に位置する。或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドはセンス鎖に位置する。
【００４４】
或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１にある。或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置１４にある。或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、センス鎖のＡｇｏ２切断部位の又はそれに近接する１つ以上のヌクレオチド位置にある。或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、Ａｇｏ２切断部位のすぐ５’又は３’の１個、２個又は３個のヌクレオチドにある。或る特定の実施の形態において、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドは、Ａｇｏ２切断部位の両側に、例えば、Ａｇｏ２切断部位のすぐ５’の１個以上のヌクレオチド、及びＡｇｏ２切断部位のすぐ３’の１個以上のヌクレオチドにある。
【００４５】
或る特定の実施の形態において、上記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子はテトラループを含む。
【００４６】
或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは一本鎖オリゴヌクレオチドである。或る特定の実施の形態において、上記一本鎖オリゴヌクレオチドは一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。或る特定の実施の形態において、上記一本鎖オリゴヌクレオチドは、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、マイクロＲＮＡ、アンタゴｍｉｒ、又はアプタマーである。或る特定の実施の形態において、上記一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、約１４個〜５０個、１６個〜３０個、１８個〜２２個、又は２０個〜２２個のヌクレオチド長である。
【００４７】
或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式Ｉによって表される１個〜５個のヌクレオチドを含む。或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが修飾され、上記グルタチオン感受性部分により修飾されていない全てのヌクレオチドが不可逆的修飾によって修飾される。
【００４８】
或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、送達物質を更に含み、上記送達物質は、細胞の外膜を越えて上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの輸送を促進する。或る特定の実施の形態において、上記送達物質は、炭水化物、ペプチド、脂質、ビタミン及び抗体からなる群から選択される。或る特定の実施の形態において、上記送達物質は、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、マンノース−６−リン酸、ガラクトース、オリゴ糖、多糖、コレステロール、ポリエチレングリコール、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、リトコール酸、及びカチオン性脂質から選択される。
【００４９】
或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは脂質ナノ粒子に含まれる。或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、ネイキッドグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドである。
【００５０】
或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合されたグルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含み、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を有するヌクレオシドホスホロアミダイトを使用して、ホスホロアミダイト系オリゴヌクレオチド合成法によって作製される。
【００５１】
或る特定の実施の形態において、上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、細胞における標的配列にハイブリダイズすることができる第１の部分を有するｃｒＲＮＡ配列及び／又はｃｒＲＮＡ配列の第２の部分とハイブリダイズしてガイド配列を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有する、「クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）」核酸配列である。或る特定の実施の形態において、上記ガイド配列はキメラガイド配列であり、上記ｃｒＲＮＡ配列はｔｒａｃｒＲＮＡ配列に融合される。
【００５２】
或る特定の態様では、本開示は、本明細書に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物、及び該医薬組成物を使用する方法に関する。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドを含み、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドは、リボース又はその類縁体の２’−炭素のヒドロキシル基のグルタチオン感受性部分による置換を含む。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。或る特定の態様では、本開示は、被験体において標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、それを必要とする被験体に、標的遺伝子の発現を減少させるのに十分な量でグルタチオン感受性二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施の形態において、投与は全身投与を含む。
【００５３】
或る特定の態様において、本開示は、ホスホロアミダイト系オリゴヌクレオチド合成法と適合する、ホスホロアミダイトとグルタチオン感受性部分とを含むヌクレオシドに関する。或る特定の実施の形態において、上記ホスホロアミダイトは、上記ヌクレオシドの糖部分の５’−炭素又は３’−炭素に結合され、上記グルタチオン感受性部分は、上記ヌクレオシドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合される。ヌクレオシドホスホロアミダイトの或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性部分は、本明細書に記載される、式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶ、又は式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ（ｉ）、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、式ＩＶｅ、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）若しくは式ＩＶｅ（ｘｉ）を含むそれらの任意の亜属によって表される。
【００５４】
或る特定の態様では、本開示はグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトに関し、ここで、ヌクレオシドホスホロアミダイトは、本明細書に記載される式ＶＩＩＩによって表される。或る特定の実施の形態において、ヌクレオシドホスホロアミダイトは式ＩＸによって表される。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）はジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む。
【００５５】
或る特定の実施の形態において、ヌクレオシドホスホロアミダイトは、式ＶＩＩＩによって表され、式中、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、ＩはＣＨ２であり、Ｗ１はホスホロアミダイトであり、Ａ１は保護基、水素又は固体支持体であり、Ｕ３はＯであり、任意に、ここでＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【００５６】
或る特定の実施の形態において、ヌクレオシドホスホロアミダイトは、式ＶＩＩＩによって表され、式中、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、ＩはＣＨ２であり、Ｗ１は保護基、水素又は固体支持体であり、Ａ１はホスホロアミダイトであり、Ｕ３はＯであり、任意に、ここでＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【００５７】
或る特定の実施の形態において、ヌクレオシドホスホロアミダイトは、式Ｘによって表され、式中、Ｒ８はＨ又は保護基であり、Ｒ７はホスホロアミダイトであり、Ｂは天然核酸塩基であり、ＸはＯであり、ここで、Ｌ１は式ＩＶｅ（ｉｘ）によって表される。
【００５８】
或る特定の実施の形態において、ヌクレオシドホスホロアミダイトは、式Ｘによって表され、式中、Ｒ８はＨ又は保護基であり、Ｒ７はホスホロアミダイトであり、Ｂは天然核酸塩基であり、ＸはＯであり、ここで、Ｌ１は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表される。
【００５９】
或る特定の実施の形態において、上記ホスホロアミダイトが、式−Ｐ（ＯＲｘ）−Ｎ（Ｒｙ）２を有し、式中、Ｒｘは、任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙは、それぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される。
【００６０】
或る特定の態様では、本開示は、（ａ）共有結合を介して固体支持体にヌクレオシドを付着させることと、（ｂ）本明細書に記載されるグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを、工程（ａ）のヌクレオシドのヒドロキシル基にカップリングしてそれらの間にリンヌクレオシド結合を形成することであって、固体支持体上の任意のカップリングされていないヌクレオシドをキャッピング試薬によりキャップすることと、（ｃ）酸化試薬で上記リンヌクレオシド結合を酸化することと、（ｄ）本明細書に記載される１以上の後のグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイト、又はグルタチオン感受性部分を含まない１以上の後のヌクレオシドホスホロアミダイトを用いて、反復して工程（ｂ）〜工程（ｄ）を繰り返してグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを形成することと、（ｆ）任意に、上記固体支持体から上記グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを取り除くこととを含む、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを作製する方法に関する。別の態様では、本開示は、上記方法によって作製されたオリゴヌクレオチドに関する。或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性部分は、例えば、本明細書に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分、又は本明細書に記載される式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ（ｉ）、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、式ＩＶｅ、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）若しくは式ＩＶｅ（ｘｉ）を含むそれらの亜属のいずれかを含む、ジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む。或る特定の態様では、本開示は、ホスホロアミダイトを含まないグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドに関し、ここで、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドは、ヌクレオチド又はヌクレオシドの糖部分の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合されるグルタチオン感受性部分を含み、グルタチオン感受性部分が、本明細書に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ、若しくは式ＩＶ、又はそれらの任意の亜属によって表される。
【００６１】
或る特定の実施の形態において、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドは、本明細書に記載される式ＸＩによって表される。或る特定の実施の形態において、ＪはＯであり、ＸはＯであり、Ｌ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分であり、Ｗ２は、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、Ａ２は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、又はホスホロアミデートであり、また任意に、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、Ｕ２は酸素であり、Ｗ２は水素であり、ＩはＣＨ２であり、Ｕ３はＯであり、Ａ２は水素又はリン酸基である。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】図１Ａ及び図１Ｂは、実施例に記載される、４つの代表的な二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子：対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂ（図１Ａ）、並びに試験化合物１及び試験化合物２（図１Ｂ）の例を表す図である。試験化合物１及び試験化合物２は、それぞれ、本開示に従って、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖のヌクレオチド位置１（「ガイド位置１」）及びヌクレオチド位置１４（「ガイド位置１４」）において２’−炭素に指定のグルタチオン感受性部分を含む。試験化合物１及び試験化合物２のそれぞれのガイド鎖のヌクレオチド位置１及びヌクレオチド位置１４のグルタチオン感受性ヌクレオチド以外に、試験化合物１及び試験化合物２における残りのヌクレオチドを、２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅのいずれかで不可逆的に修飾した。対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂは、ガイド鎖の位置１及び位置１４のヌクレオチドを除いて試験化合物１及び試験化合物２と同じである。対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂは、ガイド鎖のヌクレオチド位置１（「ガイド位置１」）に２’−Ｆを含む。対照化合物Ａはガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドの５’−炭素に天然リン酸塩（５’−ＰＯ４２−）を含むのに対し、対照化合物Ｂはガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドの５’−炭素に遊離ヒドロキシル基（５’−ＯＨ）を含むことから、対照化合物Ａは対照化合物Ｂとは異なる。対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂのガイド鎖は同じヌクレオチド配列を含むことから、試験化合物１及び試験化合物２と同じ標的ｍＲＮＡ配列を認識する。
【図２】実施例３に記載されるように、グルタチオンとのインキュベーションの後の、本開示による２’−炭素にグルタチオン感受性部分を有する可逆的に修飾されたウリジンからのウリジンの放出速度を表す図である。
【図３】実施例３に記載されるように、グルタチオンとのインキュベーションの後の試験化合物２の消失の速度を表す図である。
【図４】実施例４に記載されるように、マウス肝細胞への化合物のトランスフェクションから４８時間後に標的ｍＲＮＡのノックダウンによって測定される、対照化合物（化合物Ａ及び化合物Ｂ）と比較した試験化合物１の効力（ＩＣ５０を含む）を表す図である。
【図５】実施例４に記載されるように、トランスフェクションから２４時間後に標的ｍＲＮＡのノックダウンによって測定されるサル肝細胞中の試験化合物１の効力（ＩＣ５０を含む）を表す図である。
【図６】実施例５に記載されるように、標的ｍＲＮＡのノックダウンによって測定されるマウスにおける効力、及び対照ＰＢＳ注射と比較した試験化合物１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与に続く効果の持続期間を表す図である。
【図７】実施例５に記載されるように、標的ｍＲＮＡのノックダウンによって測定されるマウスにおける効力、及び対照ＰＢＳ注射と比較した試験化合物２のｉｎ  ｖｉｖｏ投与に続く効果の持続期間を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
定義
本開示のより容易な理解のために、幾つかの用語を初めに下記に規定する。以下の用語及び他の用語の付加的な定義は本明細書を通して示され得る。以下に示される用語の定義が、引用することにより本出願の一部をなす出願又は特許における定義と一致していない場合には、本出願に示される定義を使用して、その用語の意味を理解するべきである。
【００６４】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合に、文脈上他に明らかに指示されない限り、数量を特定していない単数形（the singular forms "a," "an," and "the"）は複数の指示対象を含む。このため、例えば「方法（a method）」への言及には１つ以上の方法、及び／又は本明細書に記載される及び／又は本開示を読むことで当業者に明らかとなるタイプの工程等が含まれる。
【００６５】
アシル：本明細書で使用される「アシル」の用語は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル及びアリールカルボニルの部分を指す。
【００６６】
脂肪族基：本明細書で使用される「脂肪族基」の用語は、１以上の官能基で任意に置換される飽和及び不飽和、直鎖（すなわち、非分岐鎖）又は分岐鎖の両方の炭化水素を指す。「置換（された）脂肪族」の用語は、置換基を持つ脂肪族の部分を指す。
【００６７】
アルコキシ：本明細書で使用される「アルコキシ」の用語は、酸素原子によって分子部分に付着されたアルキル基を指す。
【００６８】
アルケニル：本明細書で使用される「アルケニル」の用語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し、約２個〜約２０個の範囲の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のヒドロカルビル基を指す。「置換（された）アルケニル」は、１以上の置換基を更に持つアルケニル基を指す。本明細書で使用される「低級アルケニル」は、２個〜約６個の炭素原子を有するアルケニル部分を指す。
【００６９】
アルキル：本明細書で使用される「アルキル」の用語は、１個から最大約２０個の炭素原子を有する、直線又は分岐鎖のヒドロカルビル基を指す。本明細書に「アルキル」の用語が使用される場合は常に、「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」等の数値範囲は、アルキル基が、最大で６個の炭素原子を含み、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子のみを含み得ること等を意味するが、「アルキル」の用語は、炭素原子の数値範囲が明確に示されていない場合も含む。例えば、「アルキル」の用語は、Ｃ１〜Ｃ１０（例えば、Ｃ１〜Ｃ６）の部分範囲を指す場合がある。「置換（された）アルキル」は、置換基を持つアルキル部分を指す。本明細書で使用される「低級アルキル」は、１個〜約６個の炭素原子を有するアルキル部分を指す。
【００７０】
アルキルアミノ：本明細書で使用される「アルキルアミノ」の用語は、アミン官能基を持つアルキルラジカルを指す。アルキルアミノは、置換であってもよく、又は非置換であってもよい。
【００７１】
アルキニル：本明細書で使用される「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有し、約２個〜約２０個の範囲の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のヒドロカルビル基を指す。「置換（された）アルキニル」は、１以上の置換基を更に持つアルキニル基を指す。本明細書で使用される「低級アルキル」は、約２個〜約６個の炭素原子を有するアルキニル部分を指す。
【００７２】
およそ：本明細書で使用される、１以上の目的の値に適用される「およそ」又は「約」の用語は、規定の基準値に類似する値を指す。或る特定の実施形態では、「およそ」又は「約」の用語は、（かかる数が可能性のある値の１００％を超える場合を除いて）別段の指定がない限り又は文脈から明らかでない限り、規定の基準値のいずれかの方向の（より大きい又はより少ない）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下に含まれる値の範囲を指す。
【００７３】
アプタマー：本明細書で使用される「アプタマー」の用語は、核酸、タンパク質、特定の細胞全体、又は特定の組織を含む特定の標的に対して結合親和性を有するオリゴヌクレオチドを指す。アプタマーは、当該技術分野で知られている方法、例えば核酸の大きなランダム配列プールからのｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択法によって使用して得られてもよい。Lee et al., Nucleic Acid Res., 2004, 32:D95-D100。
【００７４】
アンタゴｍｉｒ：本明細書で使用される「アンタゴｍｉｒ」の用語は、外因性のＲＮＡｉ阻害剤分子又は天然ｍｉＲＮＡのガイド鎖を含む特定の標的に対して結合親和性を有するオリゴヌクレオチドを指す（Krutzfeldt et al. Nature 2005,438(7068):685-689）。
【００７５】
アンチセンス鎖：二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、アンチセンス鎖及びセンス鎖の２つのオリゴヌクレオチド鎖を含む。アンチセンス鎖又はその領域は、標的核酸の対応する領域に対して、部分的に、実質的に又は完全に相補性である。さらに、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖又はその領域は、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のセンス鎖又はその領域に対して、部分的に、実質的に又は完全に相補性である。また、或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、標的核酸配列に対して非相補性のヌクレオチドを含んでいてもよい。非相補性ヌクレオチドは、相補性配列の片側又は相補性配列の両側のいずれにあってもよい。アンチセンス鎖又はその領域がセンス鎖又はその領域に対して部分的に又は実質的に相補性である或る特定の実施形態では、非相補性ヌクレオチドは、相補性の１以上の領域間に位置してもよい（例えば１以上のミスマッチ）。二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖はガイド鎖とも呼ばれる。
【００７６】
芳香族基：本明細書で使用される「芳香族基」の用語は、４ｎ＋２π電子を含み、ｎが整数である、非局在化されたπ電子系を有する平面環を指す。芳香環は、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個以上の原子から形成されてもよい。「芳香族」の用語は、炭素環式アリール（例えばフェニル）基と、複素環式アリール（すなわち「ヘテロアリール」又は「ヘテロ芳香族」）基（例えばピリジン）の両方を包含することが意図される。上記用語は、単環式又は縮合環の多環式の環、すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環を含む。「置換（された）芳香族」は、１以上の置換基を更に持つ芳香族基を指す。
【００７７】
芳香脂肪族（Araliphatic）：本明細書で使用される「芳香脂肪族」、「アリール脂肪族」、又は「芳香族脂肪族（aromatic aliphatic）」の用語は同じ意味で使用され、１以上の芳香族部分及び１以上の脂肪族部分を含む化合物を指す。
【００７８】
アリール：本明細書で使用される「アリール」の用語は、５個から最大１９個の範囲の炭素原子を有する芳香族の単環式又は多環式の基を指す。「置換（された）アリール」は、１以上の置換基を更に持つアリール基を指す。
【００７９】
カルボキシルの（Carboxylic）：本明細書で使用される「カルボキシルの」、「カルボキシ」、又は「カルボキシル」は、一般的にはラジカルＣ（Ｏ）ＯＨを指す。
【００８０】
カノニカルＲＮＡ阻害剤分子：本明細書で使用される「カノニカルＲＮＡ阻害剤分子」の用語は、それぞれ２１ヌクレオチド長で、二本鎖核酸の形成のための１９塩基対の長さの相補性の中心領域と、それぞれの３’−末端に２つのヌクレオチドオーバーハング（overhands）とを有する核酸の２本鎖を指す。
【００８１】
相補性（の）：本明細書で使用される「相補性（の）」の用語は、２つのヌクレオチドが互いに塩基対を形成することを可能とする、（例えば、２つの対向する核酸に対する、又は１本の核酸鎖の対向する領域に対する）２つのヌクレオチド間の構造上の関係を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的な１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することによって共に塩基対合され得る。幾つかの実施形態では、相補性ヌクレオチドは、ワトソン−クリック方式で又は安定な二重鎖の形成を可能とする任意の他の方法で塩基対合し得る。「完全に相補性」又は１００％相補性は、第１のオリゴヌクレオチド鎖又は第１のオリゴヌクレオチドのセグメントの各ヌクレオチドモノマーが、第２のオリゴヌクレオチド鎖又は第２のオリゴヌクレオチド鎖のセグメントの各ヌクレオチドモノマーと塩基対を形成し得る状況を指す。１００％未満の相補性は、２つのオリゴヌクレオチド鎖（又は２つのオリゴヌクレオチド鎖の２つのセグメント）のヌクレオチドモノマーの全部ではなく幾つかが互いに塩基対形成し得る状況を指す。「実質的に相補性」は、互いに９０％以上の相補性を示す２つのオリゴヌクレオチド鎖（又は２つのオリゴヌクレオチド鎖のセグメント）を指す。「十分に相補性の」は、標的ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質量が減少するような、標的ｍＲＮＡと核酸阻害剤分子間との相補性を指す。
【００８２】
相補鎖：本明細書で使用される「相補鎖」の用語は、他の鎖に対して部分的に、実質的に又は完全に相補性の二本鎖核酸阻害剤分子の鎖を指す。
【００８３】
従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド：本明細書で使用される「従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド」の用語は、以下の機構の１つによって標的とされる遺伝子の発現を阻害する一本鎖オリゴヌクレオチドを指す：（１）立体障害、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば遺伝子の転写、ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング及びｍＲＮＡの翻訳を直接妨げることによって、遺伝子発現及び／又はコードされるタンパク質の産生に関与する一連の事象における幾つかの段階を妨げる；（２）標的とされる遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮａｓｅ  Ｈによる酵素消化の誘導；（３）標的とされる遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮａｓｅ  Ｌによる酵素消化の誘導；（４）標的とされる遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮａｓｅ  Ｐによる酵素消化の誘導；（５）標的とされる遺伝子のＲＮＡ転写物の二本鎖ＲＮａｓｅによる酵素消化の誘導；並びに（６）立体障害と同じアンチセンスオリゴにおける酵素消化活性の誘導との組み合わせ。従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ阻害剤分子のようなＲＮＡｉ作用機構を有しない。意図される標的（複数の場合もある）に、またＡｇｏ２が標的のサイレンシングに必要とされる所にＲＮＡｉアンチセンス鎖がＡｇｏ２タンパク質を導くように該アンチセンス鎖と結合するＡｇｏ２に対する要件を含む幾つかの方法で、ＲＮＡｉ阻害剤分子を従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドと区別することができる。
【００８４】
クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ）ＲＮＡ：「クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）」は、侵入するファージ及びプラスミドに対する防御に関与する微生物ヌクレアーゼ系である。Wright et al., Cell, 2016, 164:29-44。この原核生物のシステムは、真核細胞のゲノム中の目的の標的核酸配列の編集における使用に適合されている。Cong et al., Science, 2013,339:819-23、Mali et al., Science, 2013,339:823-26、Woo Cho et al., Nat. Biotechnology, 2013,31(3):230-232。本明細書で使用される「クリスパーＲＮＡ」の用語は、「クリスパー」ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）部分及び／又はｃｒＲＮＡを活性化するトランス（ｔｒａｃｒＲＮＡ）部分を含む核酸を指し、ここで、クリスパー部分は、トレーサーメイト（tracer mate）配列とｔｒａｃｒＲＮＡ部分がハイブリダイズしてガイドＲＮＡを形成するように、標的核酸に部分的に、実質的に又は完全に相補性である第１の配列と、ｔｒａｃｒＲＮＡ部分に十分に相補性である第２の配列（トレーサーメイト配列とも称される）とを有する。ガイドＲＮＡは、Ｃａｓエンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ９）等のエンドヌクレアーゼと複合体を形成し、ヌクレアーゼを標的核酸の切断を媒介するように指示する。或る特定の実施形態では、ｃｒＲＮＡ部分は、ｔｒａｃｒＲＮＡ部分に融合されてキメラガイドＲＮＡを形成する。Jinek et al., Science, 2012, 337:816-21。或る特定の実施形態では、ｃｒＲＮＡ部分の第１の配列は、標的核酸にハイブリダイズする、約１６個〜約２４個のヌクレオチド、好ましくは約２０個ヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、ガイドＲＮＡは約１０個〜５００個のヌクレオチドである。他の実施形態では、ガイドＲＮＡは約２０個〜１００個のヌクレオチドである。
【００８５】
シクロアルキル：本明細書で使用される「シクロアルキル」の用語は、３個〜１２個の炭素、例えば３個〜８個の炭素、例えば３個〜６個の炭素を含む環状（すなわち、環含有）炭化水素基を指す。「置換（された）シクロアルキル」は、１以上の置換基を更に持つシクロアルキル基を指す。
【００８６】
送達物質：本明細書で使用される「送達物質」の用語は、オリゴヌクレオチドと複合体化されて又はそれに結合されて細胞への進入を媒介する、トランスフェクション物質又はリガンドを指す。上記用語は、例えば、オリゴヌクレオチドの負電荷に結合する正味の正電荷を有する、カチオン性リポソームを包含する。この用語は、或る特定の組織への送達を指示するためオリゴヌクレオチドに共有結合的に付着され得る、ＧａｌＮＡｃ及びコレステロール等の本明細書に記載される接合体も包含する。また、更なる特定の好適な送達物質が本明細書に記載される。
【００８７】
デオキシリボヌクレオチド：本明細書で使用される「デオキシリボヌクレオチド」の用語は、糖部分の２’−位に水素基を有する、天然又は修飾されたヌクレオチドを指す。
【００８８】
ジスルフィド：本明細書で使用される「ジスルフィド」の用語は、基：
【化１】
2019526555.tif 000002
を含む化合物を指す。典型的には、硫黄原子はそれぞれ、炭化水素基に共有結合される。或る特定の実施形態では、少なくとも１つの硫黄原子が、炭化水素以外の基に共有結合される。またこの結合は、ＳＳ結合又はジスルフィド架橋と称される。
【００８９】
二重鎖：本明細書で使用される、核酸（例えばオリゴヌクレオチド）に関する「二重鎖」の用語は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対合によって形成される二重螺旋構造を指す。
【００９０】
賦形剤：本明細書で使用される「賦形剤」の用語は、例えば、所望の粘度又は安定化効果を提供する又はそれに寄与するように組成物に含まれ得る非治療剤を指す。
【００９１】
グルタチオン：本明細書で使用される「グルタチオン」（ＧＳＨ）の用語は、下記式ＸＩＩＩの構造を有するトリペプチドを指す。ＧＳＨは、およそ１ｍＭ〜１０ｍＭの濃度で細胞中に存在する。ＧＳＨは、ジスルフィド結合を含むグルタチオン感受性結合を還元する。その過程で、グルタチオンは、その酸化体であるグルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）に変換される。一旦酸化すると、グルタチオンは、電子供与体としてＮＡＤＰＨを使用して、グルタチオンレダクターゼによって還元されて元に戻り得る。
【化２】
2019526555.tif 000003
【００９２】
グルタチオン感受性化合物又はグルタチオン感受性部分：本明細書で使用される「グルタチオン感受性化合物」又は「グルタチオン感受性部分」の用語は同じ意味で使用され、任意の化合物（例えばオリゴヌクレオチド、ヌクレオチド又はヌクレオシド）、又はジスルフィド架橋若しくはスルホニル基等の少なくとも１つのグルタチオン感受性結合を含む部分を指す。本明細書で使用される「グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド」は、グルタチオン感受性結合を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドである。
【００９３】
半減期：本明細書で使用される「血清半減期」、「血漿半減期」及び「小胞半減期」の用語は、可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチド等の分子の半量が特定の条件下、例えば、血清、血漿の存在下で、又はエンドソーム若しくはリソソームの小胞中で分解又は除去される時間を指す。
【００９４】
ハロ：本明細書で使用される「ハロ」及び「ハロゲン」の用語は同じ意味であり、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される原子を指す。
【００９５】
ハロアルキル：本明細書で使用される「ハロアルキル」の用語は、１以上のハロゲン原子が付着されたアルキル基を指し、例としてはクロロメチル、ブロモメチル、トリフルオロメチル等の基が挙げられる。
【００９６】
ヘテロアリール：本明細書で使用される「ヘテロアリール」の用語は、窒素、酸素及び硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族環系を指す。ヘテロアリール環は縮合されてもよく、そうでなければ、１以上のヘテロアリール環、芳香族若しくは非芳香族炭化水素環、又はヘテロシクロアルキル環に付着されてもよい。
【００９７】
複素環：本明細書で使用される「複素環」又は「複素環式」の用語は、環構造の一部として１以上のヘテロ原子（例えばＮ、Ｏ、Ｓ等）を含み、３個から最大１４個の範囲の炭素原子を有する非芳香族環状（すなわち、環含有）基を指す。「置換（された）複素環式」又は「置換（された）複素環」は、１以上の置換基を更に持つ複素環基を指す。
【００９８】
ＩＣ５０：本明細書で使用される「ＩＣ５０」の用語はどのくらいの特定の薬物又は他の物質（阻害剤）が、所与の生物学的プロセス（例えばｍＲＮＡの発現）を半分に阻害するのに必要であるかを示す定量的な尺度を指す。
【００９９】
ヌクレオチド間の結合基：本明細書で使用される「ヌクレオチド間の結合基」又は「ヌクレオチド間の結合」の用語は、２つのヌクレオシド部分を共有結合することができる化学基を指す。典型的には、化学基は、リン酸基又は亜リン酸基を含むリン含有結合基である。リン酸結合基は、ホスホジエステル結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオノアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホネート結合、及び／又はボラノホスフェート結合を含むことを意味する。例えば、米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，４６９，８６３号、同第４，４７６，３０１号、同第５，０２３，２４３号、同第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，１９４，５９９号、同第５，５６５，５５５号、同第５，５２７，８９９号、同第５，７２１，２１８号、同第５，６７２，６９７号、及び同第５，６２５，０５０号に開示されるように、多くのリン含有結合が当該技術分野において良く知られている。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン原子を含まない１以上のヌクレオチド間の結合基、かかる短鎖アルキル若しくはシクロアルキルのヌクレオチド間の結合、混合ヘテロ原子及びアルキル若しくはシクロアルキルのヌクレオチド間の結合、又は１以上の短鎖ヘテロ原子の若しくは複素環式のヌクレオチド間の結合を含み、限定されないが、シロキサン骨格；スルフィド骨格、スルホキシド骨格及びスルホン骨格；ホルムアセチル（formacetyl）骨格及びチオホルムアセチル（thioformacetyl）骨格；メチレンホルムアセチル骨格及びメチレンチオホルムアセチル骨格；リボアセチル（riboacetyl）骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノ骨格及びメチレンヒドラジノ骨格；スルホネート骨格及びスルホンアミド骨格；並びにアミド骨格を有するものを含む。リンを含有しない結合は、例えば、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０��、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、同第５，７９２，６０８号、同第５，６４６，２６９号、及び同第５，６７７，４３９号に開示されるように、当該技術分野でよく知られている。
【０１００】
ループ：本明細書で使用される「ループ」の用語は、核酸の一本鎖によって形成された構造を指し、ここで、相補性領域間の一本鎖ヌクレオチド領域が二重鎖形成又はワトソン−クリック型塩基対合から除外されるように、特定の一本鎖ヌクレオチド領域に隣接する相補性領域がハイブリダイズする。ループは任意の長さの一本鎖ヌクレオチド領域である。ループの例として、ヘアピン及びテトラループ等の構造中に存在する不対ヌクレオチドが挙げられる。
【０１０１】
マイクロＲＮＡ：本明細書で使用される「マイクロＲＮＡ」、「成熟マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」及び「ｍｉＲ」の用語は同じ意味であり、植物及び動物のゲノム中にコードされる非コーディングＲＮＡ分子を指す。典型的には、成熟マイクロＲＮＡは約１８ヌクレオチド長〜２５ヌクレオチド長である。或る特定の例では、高度に保存された内因性に発現されるマイクロＲＮＡが、特定のｍＲＮＡの３’−非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）に結合することによって遺伝子の発現を調節する。或る特定の成熟マイクロＲＮＡは、しばしば数百ヌクレオチド長の長い内因性のマイクロＲＮＡ一次転写産物（ｐｒｅ−マイクロＲＮＡ、ｐｒｉ−マイクロＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｒ、ｐｒｉ−ｍｉＲ又はｐｒｉ−ｐｒｅ−マイクロＲＮＡとしても知られる）に起因するようである（Lee, et al., EMBO J., 2002, 21(17), 4663-4670）。
【０１０２】
修飾ヌクレオシド：本明細書で使用される「修飾ヌクレオシド」の用語は、１以上の修飾核酸塩基若しくはユニバーサル核酸塩基、又は修飾糖を含むヌクレオシドを指す。修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基（本明細書では塩基類縁体とも称される）は、一般的にはヌクレオシド糖部分の１’−位にあり、１’−位のアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。或る特定の実施形態では、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基は窒素塩基である。或る特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８０２７４４６２号を参照されたい。或る特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含まない（脱塩基）。修飾糖（本明細書では糖類縁体とも称される）は、例えば、糖の２’−、３’−、４’−、又は５’−の炭素位置で修飾が生じる、修飾されたデオキシリボース又はリボースの部分を含む。また、修飾糖は、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Koshkin et al. (1998), Tetrahedron, 54,3607-3630を参照されたい）、架橋型核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号、及びMitsuoka et al. (2009), Nucleic Acids Res., 37(4):1225-38を参照されたい）、及びアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Snead et al. (2013), Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2, e103 (doi: 10.1038/mtna.2013.36)を参照されたい）に存在するもの等の非天然の代替的な炭素構造を含んでもよい。本開示に関して、好適な修飾核酸塩基若しくはユニバーサル核酸塩基、又は修飾糖が本明細書に記載される。
【０１０３】
修飾ヌクレオチド：本明細書で使用される「修飾ヌクレオチド」の用語は、１以上の修飾核酸塩基若しくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖、又は修飾リン酸基を含むヌクレオチドを指す。修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基（本明細書では塩基類縁体とも称される）は、一般的にはヌクレオシド糖部分の１’−位にあり、１’−位のアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。或る特定の実施形態では、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基は窒素塩基である。或る特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８０２７４４６２号を参照されたい。或る特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含まない（脱塩基）。修飾糖（本明細書では糖類縁体とも称される）は、例えば、糖の２’−、３’−、４’−又は５’−の炭素位置で修飾が生じる、修飾されたデオキシリボース又はリボース部分を含む。また、修飾糖は、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Koshkin et al. (1998), Tetrahedron, 54,3607-3630を参照されたい）、架橋型核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号、及びMitsuoka et al. (2009), Nucleic Acids Res., 37(4):1225-38を参照されたい）、及びアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Snead et al. (2013), Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2, e103 (doi: 10.1038/mtna.2013.36）を参照されたい）に存在するもの等の非天然の代替的な炭素構造を含んでもよい。修飾リン酸基は、天然ヌクレオチドには生じないリン酸基の修飾を指し、リン原子及びホスフェート（例えばアセテート）を含まない陰イオンホスフェート模倣物を含むホスフェート模倣物を含む、本明細書に記載されるような非天然起原のホスフェート模倣物を含む。また、修飾リン酸基は、本明細書に記載されるように、リンを含有するヌクレオチド間の結合基と、リンを含有しない結合基の両方を含む、非天然起原のヌクレオチド間の結合基を含む。本開示に関して好適な修飾核酸塩基若しくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖又は修飾ホスフェートが本明細書に記載される。
【０１０４】
ネイキッドグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド：本明細書で使用される「ネイキッドグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド」の用語は、保護脂質ナノ粒子又は他の保護製剤に製剤化されないため、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与された場合に血液及びエンドソーム／リソソームのコンパートメントに曝される、本明細書に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを指す。
【０１０５】
天然ヌクレオシド：本明細書で使用される「天然ヌクレオシド」の用語は、糖（例えば、デオキシリボース若しくはリボース、又はそれらの類縁体）とのＮ−グリコシド結合中の複素環式窒素塩基を指す。天然複素環式窒素塩基として、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル及びチミンが挙げられる。
【０１０６】
天然ヌクレオチド：本明細書で使用される「天然ヌクレオチド」の用語は、リン酸基に連結される糖（例えば、リボース若しくはデオキシリボース、又はそれらの類縁体）とのＮ−グリコシド結合中の複素環式窒素塩基を指す。天然複素環式窒素塩基として、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル及びチミンが挙げられる。
【０１０７】
核酸阻害剤分子：本明細書で使用される「核酸阻害剤分子」の用語は、標的遺伝子の発現を減少させる又は排除するオリゴヌクレオチド分子を指し、ここで、オリゴヌクレオチド分子は標的遺伝子ｍＲＮＡ中の配列を特異的に標的とする領域を含む。典型的には、核酸阻害剤分子のターゲッティング領域は、指定の標的遺伝子に対して核酸阻害剤分子の効果を導くため標的遺伝子ｍＲＮＡの配列に十分に相補的な配列を含む。核酸阻害剤分子は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含んでもよい。
【０１０８】
ヌクレオシド：本明細書で使用される「ヌクレオシド」の用語は、天然ヌクレオチド又は修飾ヌクレオシドを指す。
【０１０９】
ヌクレオチド：本明細書で使用される「ヌクレオチド」の用語は、天然ヌクレオチド又は修飾ヌクレオチドを指す。
【０１１０】
ヌクレオチド位置：本明細書で使用される「ヌクレオチド位置」の用語は、５’−末端のヌクレオチドから数えたオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの位置を指す。
【０１１１】
オリゴヌクレオチド：本明細書で使用されるように、本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」用語は、２個〜２５００個のヌクレオチドの範囲のヌクレオチドの重合形態を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖であってもよく又は二本鎖であってもよい。或る特定の実施形態では、例えば、オリゴヌクレオチドが遺伝子療法で使用される場合、オリゴヌクレオチドは典型的には５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖であり、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、典型的には、例えば、オリゴヌクレオチドが核酸阻害剤分子である場合、オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、典型的には例えば、オリゴヌクレオチドが二本鎖核酸阻害剤分子であり、少なくとも１８塩基対〜２６塩基対の二重鎖を形成する場合、オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり、１９個〜４０個又は１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。他の実施形態では、典型的には例えば、オリゴヌクレオチドヌクレオチドが一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である場合、オリゴヌクレオチドは一本鎖であり、１５個〜２５個のヌクレオチドを有する。典型的には、本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチドはリンを含有するヌクレオチド間の結合基を１以上含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるように、ヌクレオチド間の結合基はリンを含有しない結合である。
【０１１２】
オーバーハング：本明細書で使用される「オーバーハング」の用語は、二本鎖核酸阻害剤分子のいずれかの鎖のいずれかの末端にある末端非塩基対ヌクレオチド（複数の場合もある）を指す。或る特定の実施形態では、オーバーハングは、それに対して第１の鎖又は領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を越えて伸びる１本の鎖又は領域から生じる。塩基対の水素結合によって二重鎖を形成することができる２つのオリゴヌクレオチド領域の一方又は両方が、２つのポリヌクレオチド又は領域によって共有される３’−及び／又は５’−末端の相補性を越えて伸びる５’−及び／又は３’−末端を有してもよい。二重鎖の３’−及び／又は５’−末端を越えて伸びる一本鎖領域をオーバーハングと呼ぶ。
【０１１３】
医薬組成物：本明細書で使用される「医薬組成物」の用語は、薬理学的に有効量の本発明の可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチド又は他の生理活性剤と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む。本明細書で使用される「薬理学的有効量」、「治療的有効量」又は「有効量」は、本開示の可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチド又は意図される薬理学的、治療的、若しくは予防的な結果を生むのに有効な他の活性剤の量を指す。
【０１１４】
薬学的に許容可能な賦形剤：本明細書で使用される「薬学的に許容可能な賦形剤」の用語は、その賦形剤が、合理的なベネフィット／リスク比に釣り合うように、過度の有害な副作用（毒性、刺激及びアレルギー反応等）を伴わず、ヒト及び／又は動物による使用に適しているものであることを意味する。
【０１１５】
ホスフェート模倣物：本明細書で使用される「ホスフェート模倣物」の用語は、リン酸基の静電気及び立体的な特性を模倣する化学部分を指す。典型的には、ホスフェート類縁体は、酵素による除去に弱いことが多い５’−ホスフェートに代わりオリゴヌクレオチドの５’末端のヌクレオチドに位置する。幾つかの実施形態では、これらの５’−ホスフェート模倣物はホスファターゼ抵抗性の結合を含む。好適なホスフェート模倣物として、その全体が引用することすることにより本明細書の一部をなす米国仮特許出願第６２／３９３，４０１号に記載される、５’−メチレンホスホネート（５’−ＭＰ）及び５’−（Ｅ）−ビニルホスホネート（５’−ＶＰ）等の５’−ホスホネート、並びに４’−オキシメチルホスホネート、４’−チオメチルホスホネート、又は４’−アミノメチルホスホネート等のオリゴヌクレオチドの５’−末端ヌクレオチドの糖部分（例えばリボース若しくはデオキシリボース、又はその類縁体）の４’−炭素に結合されている４’−ホスフェート類縁体が挙げられる。他の修飾がオリゴヌクレオチドの５’−末端に対して開発されている（例えば、米国特許第８，９２７，５１３号、非特許文献３、国際公開第２０１１／１３３８７１号を参照されたい）。
【０１１６】
ホスホロアミダイト：本明細書で使用される「ホスホロアミダイト」の用語は、三価リン誘導体を含む窒素を指す。好適なホスホロアミダイトの例が本明細書に記載される。
【０１１７】
効力：本明細書で使用される「効力」は、細胞中の意図される標的に対して特定の活性水準を得るためにｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで投与されなければならないオリゴヌクレオチド又は他の薬物の量を指す。例えば、１ｍｇ／ｋｇの投与量で被験体においてその標的の発現を９０％抑えるオリゴヌクレオチドは、１００ｍｇ／ｋｇの投与量で被験体においてその標的の発現を９０％抑えるオリゴヌクレオチドよりも大きな効力を有する。
【０１１８】
保護基：本明細書で使用される「保護基」の用語は、従来の化学的な意味で、所望の反応の或る特定の条件下で官能基を可逆的に非反応性にする基として使用される。所望の反応の後、保護された官能基を脱保護するために保護基を除去してもよい。全ての保護基は、合成されている分子の実質的な割合を低下しない条件下で除去可能でなくてはならない。
【０１１９】
リボヌクレオチド：本明細書で使用される「リボヌクレオチド」の用語は、糖部分の２’−位置にヒドロキシル基を有する天然又は修飾ヌクレオチドを指す。
【０１２０】
リボザイム：本明細書で使用される「リボザイム」の用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡのいずれであってもよい別々の標的核酸配列を特異的に認識し切断する触媒核酸分子を指す。リボザイムはそれぞれ、触媒コンポーネント（「触媒ドメイン」とも称される）と、１つが触媒ドメインのいずれかの側にある２つの結合ドメインからなる標的配列結合コンポーネントとを有する。
【０１２１】
ＲＮＡｉ阻害剤分子：本明細書で使用される「ＲＮＡｉ阻害剤分子」の用語は、（ａ）アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部が標的ｍＲＮＡの切断においてＡｒｇｏｎａｕｔｅ  ２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用される場合の、センス鎖（パッセンジャー）及びアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖核酸阻害剤分子（「ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）、又は（ｂ）アンチセンス鎖（又はそのアンチセンス鎖の一部）が標的ｍＲＮＡの切断においてＡｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用される場合の、単一のアンチセンス鎖を有する１本鎖核酸阻害剤分子（「ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）のいずれかを指す。
【０１２２】
センス鎖：二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、アンチセンス鎖とセンス鎖の２本のオリゴヌクレオチド鎖を含む。センス鎖又はその領域は、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖又はその領域に部分的に、実質的に又は完全に相補性である。或る特定の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖に非相補性のヌクレオチドも含み得る。非相補性ヌクレオチドは、相補性配列の片側にあってもよく、又は相補性配列の両側にあってもよい。センス鎖又はその領域がアンチセンス鎖又はその領域に部分的に又は実質的に相補性である或る特定の実施形態では、非相補性ヌクレオチドは、１以上の相補性の領域間に位置してもよい（例えば１以上のミスマッチ）。センス鎖はパッセンジャー鎖とも称される。
【０１２３】
固体支持体：本明細書で使用される「固体支持体」は、オリゴヌクレオチド等の化合物が付着し得る非液体及び非気体の物質を指す。「固体支持体」の用語は、限定されないが、ゲル、樹脂、ビーズ、プラスチック、ガラス、シリコン、金属及びセルロースを含む様々な材料を包含する。
【０１２４】
スペーサー：本明細書で使用される「スペーサー」の用語は、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド又はヌクレオシドにリガンドをカップリングする分子を指す。スペーサーとして、限定されないが、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮ−、−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（例えばｎ＝３又は６）、炭水化物、ペプチド、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオウレア、スルホンアミド、モルホリノ又はビオチンが挙げられる。
【０１２５】
置換基又は置換された：本明細書で使用される「置換基」又は「置換（された）」の用語は、所与の構造中の水素ラジカルの置換基のラジカルによる置き換えを指す。任意の所与の構造中の２以上の位置が２以上の置換基で置換され得る場合、置換基は、別段の指定がない限り、全ての位置で同じであってもよく、又は異なってもよい。本明細書で使用される「置換（された）」の用語は、有機化合物と適合する全ての許容可能な置換基を含むことが意図される。許容可能な置換基として、非環式及び環式、分岐鎖及び非分岐鎖、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族の有機化合物の置換基が挙げられる。本開示は、有機化合物の許容可能な置換基によって何ら制限されることを意図しない。
【０１２６】
スルホニル基：本明細書で使用される「スルホニル基」の用語は、二価の基−ＳＯ２−を含む化合物を指す。或る特定の実施形態では、硫黄原子は２個の炭素原子及び２個の酸素原子に共有結合される。他の実施形態では、硫黄原子は、炭素原子、窒素原子及び２個の酸素原子に共有結合される。
【０１２７】
全身投与：本明細書で使用される「全身投与」の用語は、血流中の薬物のｉｎ  ｖｉｖｏでの体内吸収又は蓄積に続く、全身に亘る分布を指す。
【０１２８】
標的部位：本明細書で使用される「標的部位」、「標的配列」、「標的核酸」、「標的領域」、「標的遺伝子」の用語は同じ意味で使用され、例えば、そのガイド／アンチセンス領域内に、その標的配列に対して部分的に、実質的に、又は完全に若しくは十分に相補性の配列を含むＲＮＡｉ分子によって媒介される切断に対して「標的化された」ＲＮＡ又はＤＮＡの配列を指す。
【０１２９】
テトラループ：本明細書で使用される「テトラループ」の用語は、近接するワトソン−クリックハイブリダイズしたヌクレオチドの安定性に寄与する安定な二次構造を形成する、ループ（一本鎖領域）を指す。理論に限定されるものではないが、テトラループは、スタッキング相互作用によって近接するワトソン−クリック塩基対を安定化し得る。さらに、テトラループにおけるヌクレオチド間の相互作用として、限定されないが、非ワトソン−クリック塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられる（Cheong et al., Nature, 1990,346(6285):680-2、Heus and Pardi, Science, 1991,253(5016):191-4）。テトラループは、無作為の塩基からなる単純なモデルループ配列から予想されるよりも高い、近接する二重鎖の融解温度（Ｔｍ）の上昇を与える。例えば、テトラループは、少なくとも２塩基対の長さの二重鎖を含むヘアピンに対して１０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４中で少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃又は少なくとも７５℃の融解温度を与えることができる。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びそれらの組み合わせを含んでもよい。或る特定の実施形態では、テトラループは、４個のヌクレオチドからなる。或る特定の実施形態では、テトラループは５個のヌクレオチドからなる。
【０１３０】
ＲＮＡテトラループの例として、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例えばＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例えばＧＡＡＡ）及びＣＵＵＧテトラループが挙げられる（Woese et al., PNAS, 1990,87(21):8467-71、Antao et al., Nucleic Acids Res., 1991, 19(21):5901-5）。ＤＮＡテトラループの例として、ｄ（ＧＮＮＡ）ファミリーのテトラループ（例えばｄ（ＧＴＴＡ））、ｄ（ＧＮＲＡ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＧＮＡＢ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＣＮＮＧ）ファミリーのテトラループ、及びｄ（ＴＮＣＧ）ファミリーのテトラループ（例えばｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる（Nakano et al. Biochemistry, 2002,41(48):14281-14292、Shinji et al., Nippon Kagakkai Koen Yokoshu, 2000,78(2):731）。
【０１３１】
Ｉ．序論
本出願は、限定されないが、ｄｓＲＮＡｉ、アンチセンス、ｍｉＲＮＡ及びｓｓＲＮＡｉの薬剤等の核酸阻害剤分子を含む、目的の任意のオリゴヌクレオチドに組み込まれ得る様々な新たなグルタチオン感受性のヌクレオチド及びヌクレオシドと並んで、標的遺伝子の発現を調節し、それを必要とする患者を治療するためにグルタチオン感受性核酸阻害剤分子を使用する方法を提供する。本出願の開示に従って１以上のグルタチオン感受性部分で可逆的に修飾され得る他のオリゴヌクレオチドとして、限定されないが、クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ；Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸及びプローブが挙げられる。
【０１３２】
可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチドは、典型的には糖部分の２’−炭素にグルタチオン感受性部分を有する１以上のヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチド中の１以上のグルタチオン感受性ヌクレオチドは、血液及び細胞のリソソーム／エンドソームのコンパートメントを通る移動の間オリゴヌクレオチドを安定化し、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与の間に遭遇するヌクレアーゼ及び他の環境条件（例えばｐＨ）からオリゴヌクレオチドを保護することを支援する。治療用オリゴヌクレオチドを保護するために使用される不可逆的なアプローチとは異なり、本明細書に開示される可逆的なグルタチオン感受性の修飾は、細胞の細胞質基質の還元環境に達するとオリゴヌクレオチドから取り除かれる。或る特定の実施形態では、２’−炭素のグルタチオン感受性部分を除去することで、２’−炭素に、その位置でリボヌクレオチドに対する天然の置換基であるヒドロキシル基が脱離する。その結果、上記オリゴヌクレオチドが細胞の細胞質基質に達すると、可逆的に修飾されたグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、細胞質基質で取り除かれる可逆的なグルタチオン感受性部分からのいかなる干渉も受けることなく、それらの意図される生物学的活性を実行することができる。本出願に開示される可逆的なグルタチオン感受性の修飾は、不可逆的な修飾に代えて又はそれと組み合わせて、細胞の細胞質基質内で増強された生物学的活性を有する安定なオリゴヌクレオチドを生成するために使用され得る合成オリゴヌクレオチドに対する強力で新たな手段となる。
【０１３３】
さらに、本明細書に開示されるグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトは、従来の固相合成に適合している。したがって、本発明の可逆的に修飾されたグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、従来のホスホロアミダイトに基づく合成法を使用して合成され得る。この合成アプローチを使用して、グルタチオン感受性ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドに組み込まれるヌクレオチドの位置を選択することができる。オリゴヌクレオチド中の特定のヌクレオチド位置を修飾することが好ましい場合があることから、この発見は、目的の特定のヌクレオチド位置に可逆的な修飾を有するオリゴヌクレオチドの合理的な設計を容易にする。
【０１３４】
また、本出願は、治療剤（例えば、抗ウイルス剤又は抗癌剤）として使用され得るグルタチオン感受性のヌクレオチド及びヌクレオシドを提供する。
【０１３５】
ＩＩ．グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド
本開示の１つの態様は、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分を含むオリゴヌクレオチドに関する。典型的には、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖部分、例えばデオキシリボース又はリボース（又はそれらの類縁体）に付着される。典型的には、グルタチオン感受性部分は、デオキシリボース又はリボース（又はそれらの類縁体）の２’−炭素に位置する。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’−末端ヌクレオチドである場合、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の５’−炭素に位置する。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’−末端ヌクレオチドである場合、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の３’−炭素に位置する。
【０１３６】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分はジスルフィド架橋を含む。
【０１３７】
或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドの糖部分（例えば、リボース）の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に共有結合されたグルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ（ｉ）、式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、式ＩＶｅ、式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、式ＩＶｄ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表される。
【０１３８】
１．式Ｉ
１つの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式Ｉ：
【化３】
2019526555.tif 000004
（式中、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここでＲ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の２つは共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は任意にヘテロ原子を含み、
ＪはＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｗは、水素、リン酸基、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｉは存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ１は存在しない、水素、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つは、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在せず、
ＩとＵ１は組み合わされて、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａは存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、又はホスホロアミデートであり、
Ｌは、下記式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶから選択されるグルタチオン感受性の部分である）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０１３９】
或る特定の実施形態では、ＸはＯである。
【０１４０】
或る特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【０１４１】
或る特定の実施形態では、ＪはＯである。
【０１４２】
或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０１４３】
或る特定の実施形態では、Ｕ２は、存在しない又はＯである。
【０１４４】
或る特定の実施形態では、Ｗは水素、リン酸基、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である。典型的には、Ｗは、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である。
【０１４５】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。
【０１４６】
或る特定の実施形態では、Ｕ１は水素、又は式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である。典型的には、Ｕ１は、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、又はＡは存在しない。
【０１４７】
或る特定の実施形態では、Ａは存在しない、リン酸基、又はホスフェート模倣物である。幾つかの実施形態では、リン酸基は、モノホスフェート、ジホスフェート又はトリホスフェートである。幾つかの実施形態では、ホスフェート模倣物は、ビニルホスホネート、５’−メチレンホスホネート又は４’−オキシメチルホスホネートである。
【０１４８】
或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１はＯである。
【０１４９】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯである。或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２は存在しない又はＯであり、Ａは存在せず、ＩはＣＨ２であり、Ｗは、水素、リン酸基又は、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１は、水素、又は式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、ここで、Ｕ１又はＷの少なくとも１つは、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である。
【０１５０】
或る特定の実施形態では、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式Ｉのオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０１５１】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式Ｉの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０１５２】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子中の少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分の環状構造は修飾され、先に検討されるように、例えば、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）構造、架橋型核酸（「ＢＮＡ」）構造、及びアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）構造を包含する。
【０１５３】
ａ．グルタチオン感受性部分−式ＩＩ
上で検討されるように、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含み、ここで、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶから選択される。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、以下の通り式ＩＩ：
【化４】
2019526555.tif 000005
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環が選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’が共に複素環を形成し、
Ｖは、Ｃ又はＳＯであり、
Ｘ２及びＸ３は、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、アシル、置換又は非置換の脂肪族、ＯＲ１０、ＣＯＲ１０、ＣＯ２Ｒ１０、ＮＱ１Ｑ２から選択され、ここで、Ｒ１０は、独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換脂肪族、アリール脂肪族、ヒドロキシル若しくはアルコキシ置換アリール、又はアルコキシ置換複素環であり、
ＰとＱは、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成し、
Ｔは、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴはスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである）によって表される。
【０１５４】
或る特定の実施形態では、上記ジスルフィド架橋又は上記スルホニル基は、少なくとも約７．５のｐＨでグルタチオンによって細胞質基質において切断可能である。
【０１５５】
幾つかの実施形態では、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨである。典型的には、ＹはＯである。
【０１５６】
幾つかの実施形態では、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’である。典型的には、ＺはＮＨである。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、ＶはＳＯである。典型的には、ＶはＣである。
【０１５８】
幾つかの実施形態では、Ｘ２及びＸ３は、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ若しくはアシル、又はＣ３〜Ｃ６の分岐鎖若しくは非分岐鎖のアルキルから選択される。典型的には、Ｘ２及びＸ３は、独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、又はアミノから選択される。
【０１５９】
典型的には、Ｐ及びＱは共にジスルフィド結合を形成する。
【０１６０】
幾つかの実施形態では、ＴはＣ３〜Ｃ６の分岐鎖若しくは非分岐鎖のアルキルであり、又はＴは任意にスペーサーを介してＰ若しくはＱに接続されたリガンドである。典型的には、ＴはＣ４分岐鎖アルキルである。
【０１６１】
或る特定の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０１６２】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０１６３】
ｉ．式ＩＩａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化５】
2019526555.tif 000006
によって表される。
【０１６４】
ｂ．グルタチオン感受性部分−式ＩＩＩ
式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含むグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの別の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、以下の通り式ＩＩＩ：
【化６】
2019526555.tif 000007
（式中、
ＹはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｖは、Ｃ又はＳＯであり、
Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキルから選択され、
Ｐ１とＱ１は、共にジスルフィド架橋若しくはスルホニル基を形成し、又はＰ１とＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋若しくはスルホニル基であり、
Ｐ１とＱ１がジスルフィド架橋を形成する場合、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、環は、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のシクロアルキルであってもよく、ここで、芳香族又はシクロアルキル環が、任意にヘテロ原子を含んでもよく、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくは任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択される）によって表される。
【０１６５】
幾つかの実施形態では、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は共に、アルコキシ置換アリール脂肪族、アルコキシ置換ヘテロアリール、又はアルコキシ置換複素環を含む５員環〜８員環を形成する。
【０１６６】
幾つかの実施形態では、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨである。典型的には、ＹはＯである。
【０１６７】
幾つかの実施形態では、Ｚ１はＮ又はＣＨである。典型的には、Ｚ１はＮである。
【０１６８】
幾つかの実施形態では、ＶはＳＯである。典型的には、ＶはＣである。
【０１６９】
幾つかの実施形態では、Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換の脂肪族から選択され、又はＭ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は、共に４員環〜９員環を形成し、ここで、環は、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環である。典型的には、Ｍ１及びＭ２は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであるか、又はＰ１及びＱ１と共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は置換又は非置換のシクロアルキルである。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、Ｐ１及びＱ１は、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成する。典型的には、Ｐ１及びＱ１は共にジスルフィド架橋を形成する。幾つかの実施形態では、ジスルフィド架橋又はスルホニル基は、少なくとも約７．５のｐＨでグルタチオンによって細胞質基質において切断可能である。
【０１７１】
幾つかの実施形態では、Ｔａ及びＴｂは存在しない、又はそれぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、分岐鎖若しくは直鎖のＣ３〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくは任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択される。典型的には、Ｔａ及びＴｂは、存在しない、分岐鎖Ｃ３〜Ｃ６アルキル、又は任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に接続されたリガンドである。
【０１７２】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され、又はＭ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は共に４員環〜９員環を形成し、ここで、環は、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のシクロアルキル、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、Ｐ１及びＱ１は共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔａ及びＴｂは、存在しない、又は任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドである。
【０１７３】
典型的には、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は、置換若しくは非置換の芳香環又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、ここで、任意に芳香環又はシクロアルキルは任意のヘテロ原子も含んでもよく、Ｐ１及びＱ１は共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔａ及びＴｂは、存在しない、又は任意にＰ１若しくはＱ１に任意のスペーサーを介して接続されたリガンドである。
【０１７４】
より典型的には、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１及びＱ１は共に７員環を形成し、ここで、環は置換又は非置換のシクロアルキルであり、Ｐ１及びＱ１は共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔａ及びＴｂは存在しない。
【０１７５】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１及びＭ２は、それぞれ独立して、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のヘテロアリールから選択され、Ｐ１及びＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋であり、Ｔａ及びＴｂは、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択される。
【０１７６】
より典型的には、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１及びＭ２は置換又は非置換の脂肪族であり、Ｐ１及びＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋であり、Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドである。
【０１７７】
更に典型的には、グルタチオン感受性部分は、式ＩＩＩによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮであり、ＶはＣであり、Ｍ１及びＭ２は置換若しくは非置換の脂肪族であり、Ｐ１及びＱ１は、それぞれ独立して、ジスルフィド架橋であり、Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、分岐鎖若しくは非分岐鎖のＣ３〜Ｃ６アルキル、若しくは任意のスペーサーを介してＰ１若しくはＱ１に任意に接続されたリガンドから選択される。
【０１７８】
或る特定の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０１７９】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０１８０】
ｉ．式ＩＩＩａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化７】
2019526555.tif 000008
（式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択される）によって表される。
【０１８１】
より典型的には、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化８】
2019526555.tif 000009
によって表される。
【０１８２】
ｉｉ．式ＩＩＩｂ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化９】
2019526555.tif 000010
（式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｚ１はＮ又はＣＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、若しくはスペーサーを介して硫黄原子に任意に接続されたリガンドから選択される）によって表される。
【０１８３】
より典型的には、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１０】
2019526555.tif 000011
によって表される。
【０１８４】
ｃ．グルタチオン感受性部分−式ＩＶ
式Ｉによって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含むグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの更に他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、以下の通り式ＩＶ：
【化１１】
2019526555.tif 000012
（式中、ＹはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’及びＲ’’は共に複素環を形成し、
ＶはＣ又はＳＯであり、
Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しない、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ若しくはＮＲ’から選択することができ、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’及びＲ’’は共に複素環を形成し、
Ｍ３及びＭ４は、共に４員環〜９員環を形成してもよく、ここで、環は、置換又は非置換の芳香族、置換又は非置換のシクロアルキルであってもよく、芳香族若しくはシクロアルキル環は、任意にヘテロ原子を含んでもよく、又はＭ３及びＭ４は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換の芳香族、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、又はＣＯＯＲから選択され、ここで、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択され、
Ｋは、Ｃ、ＣＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、
ｎは０〜５であり、
Ｐ及びＱは、共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成し、
Ｔは、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドであってもよい）によって表される。
【０１８５】
幾つかの実施形態では、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨである。典型的には、ＹはＯである。
【０１８６】
幾つかの実施形態では、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＮＲ’又はＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択される。或る特定の実施形態では、ＺはＮＨ又はＮ−ＣＨ３である。
【０１８７】
幾つかの実施形態では、ＶはＳＯである。典型的には、ＶはＣである。
【０１８８】
幾つかの実施形態では、Ｍ３及びＭ４は、それぞれ独立して、水素、若しくはＣ２〜Ｃ６アルキル等の置換若しくは非置換の脂肪族から選択され、又はＭ３及びＭ４は、共に４員環〜９員環を形成し、ここで、環は、置換若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換若しくは非置換の複素環である。典型的には、Ｍ３及びＭ４は、独立して、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルあり、又は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は置換又は非置換のシクロアルキルである。
【０１８９】
幾つかの実施形態では、Ｇは、存在しない、ＣＨ２、又はＣＨＲ’であり、ここで、Ｒ’は置換又は非置換の脂肪族である。典型的には、Ｇは、存在しない又はＣＨ２である。
【０１９０】
幾つかの実施形態では、Ｅは、存在しない、ＮＨ、ＮＲ’、ＣＨ２又はＣＨＲ’であり、ここで、Ｒ’は置換又は非置換の脂肪族である。典型的には、Ｅは存在しない、ＮＨ、又はＣＨ２である。
【０１９１】
幾つかの実施形態では、Ｇ及びＥは存在しない。
【０１９２】
幾つかの実施形態では、ＫはＣ又はＣＨである。典型的には、ＫはＣＨである。
【０１９３】
幾つかの実施形態では、ｎは０である。
【０１９４】
幾つかの実施形態では、Ｐ及びＱは共にジスルフィド架橋又はスルホニル基を形成する。典型的には、Ｐ及びＱは共にジスルフィド架橋を形成する。幾つかの実施形態では、ジスルフィド架橋又はスルホニル基は、少なくとも約７．５のｐＨでグルタチオンによって細胞質基質において切断可能である。
【０１９５】
幾つかの実施形態では、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである。典型的には、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、又は任意のスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである。
【０１９６】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶで表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮＣＨ３であり、ＶはＣであり、ＧはＣＨ２であり、かつＥは存在せず、又はＧは存在せず、かつＥはＣＨ２であり、Ｍ３及びＭ４は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環はヘテロ原子によって置換されたシクロアルキル若しくは非置換のシクロアルキルであり、又はＭ３及びＭ４は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、ＫはＣＨであり、ｎは０であり、Ｐ及びＱは共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔは、ＣＨ３、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである。
【０１９７】
或る特定の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０１９８】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０１９９】
ｉ．式ＩＶａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１２】
2019526555.tif 000013
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、Ｏアシル、ＮＨＲ’、ＮＲ’、又はＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換された脂肪族若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｔは、分岐鎖若しくは非分岐鎖のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、又は任意のスペーサーを介して任意に硫黄原子に接続されたリガンドである）によって表すことができる。
【０２００】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１３】
2019526555.tif 000014
によって表すことができる。
【０２０１】
ｉｉ．式ＩＶｂ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１４】
2019526555.tif 000015
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は水素であり、ＫはＣＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族であり、ＥはＮＨ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は置換又は非置換の脂肪族であり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドである）によって表すことができる。
【０２０２】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶｂによって表され、式中、ＹはＯであり、ＺはＮＨであり、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は水素であり、ＫはＣＨであり、ＥはＮＨであり、ｎは１であり、Ｐ及びＱは共にスルホニル基を形成し、Ｔは置換アリールである。
【０２０３】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１５】
2019526555.tif 000016
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、ＮＯ２、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル若しくは複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表すことができる。
【０２０４】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶｂによって表され、式中、ＹはＯであり、ＺはＮＨであり、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は水素であり、ＫはＣＨであり、ＥはＮＨであり、ｎは０であり、Ｐ及びＱは共にスルホニル基を形成し、Ｔは置換アリールである。
【０２０５】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１６】
2019526555.tif 000017
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、ＮＯ２、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル若しくは複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表すことができる。或る特定の実施形態では、Ｒは水素である。
【０２０６】
ｉｉｉ．式ＩＶｃ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、Ｚは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、Ｇ及びＥは存在せず、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は、任意にヘテロ原子で置換された置換又は非置換のシクロアルキルであり、ＫはＣＨであり、ｎは０〜５であり、Ｐ及びＱは共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドである。典型的には、ＹはＯであり、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３である。
【０２０７】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１７】
2019526555.tif 000018
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣであり、Ｍ３及びＭ４は、共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は、任意にヘテロ原子で置換された置換又は非置換のシクロアルキルであり、Ｋは、分岐鎖又は直鎖の置換又は非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、ｎは０又は１であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される。典型的には、ＹはＯであり、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３である。
【０２０８】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１８】
2019526555.tif 000019
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表すことができる。
【０２０９】
ｉｖ．式ＩＶｄ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶで表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣであり、Ｇ及びＥは存在せず、Ｍ３はＣＯＯＲであり、ここで、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルから選択され、Ｍ４は水素であり、ＫはＣＨであり、ｎは０であり、Ｐ及びＱは共にジスルフィド架橋を形成し、Ｔは、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介してＰ若しくはＱに任意に接続されたリガンドである。典型的には、ＹはＯであり、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３である。
【０２１０】
１つの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化１９】
2019526555.tif 000020
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮＣＨ３であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルから選択される）によって表される。
【０２１１】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化２０】
2019526555.tif 000021
によって表すことができる。
【０２１２】
ｖ．式ＩＶｅ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、式ＩＶによって表され、式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣ又はＳＯであり、ｎは０であり、Ｍ３及びＭ４は共に４員環〜９員環を形成し、ここで、環は置換又は非置換のアリールであり、Ｋは、Ｃ、ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、又は分岐鎖若しくは非分岐鎖の置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキルであり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドである。典型的には、ＹはＯであり、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３である。
【０２１３】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化２１】
2019526555.tif 000022
（式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨであり、ＺはＯ、Ｓ又はＮＲ’から選択され、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、ＣＨ３、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され、ＶはＣ又はＳＯであり、Ｇ及びＥは、それぞれ独立して、存在しなくてもよく、又はＣＨ２、ＣＨＲ’、ＣＲ’Ｒ’’、ＮＨ、ＮＲ’から選択されてもよく、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲ’とＲ’’は共に複素環を形成し、ＫはＣ又はＣＨであり、ｎは０〜５であり、Ｔは、置換若しくは非置換のＣ２〜Ｃ６アルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリールであり、又はＴは任意のスペーサーを介して任意に接続されたリガンドであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）によって表される。
【０２１４】
或る特定の実施形態では、ＺはＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換の脂肪族である。典型的には、ＺはＮＨ又はＮＣＨ３である。或る特定の実施形態では、ＺはＳである。
【０２１５】
或る特定の実施形態では、ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＶはＣである。或る一つの実施形態では、ＶはＳＯであり、ＹはＯである。
【０２１６】
或る特定の実施形態では、Ｇ及びＥの一方又は両方は、存在しない、ＣＨ２、又はＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、独立して、水素、又は置換若しくは非置換の脂肪族から選択される。或る特定の実施形態では、Ｇ及びＥはいずれも存在しない、又はＧはＣＨ２であり、かつＥは存在しない、又はＧは存在せず、かつＥはＣＨ２若しくは分岐鎖アルキルである。
【０２１７】
例えば、グルタチオン感受性部分は下記式：
【化２２】
2019526555.tif 000023
2019526555.tif 000024
2019526555.tif 000025
2019526555.tif 000026
（式中、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換のシクロアルキル、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）の１つによって表すことができる。
【０２１８】
２．式Ｖ（式ＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチド）
他の実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式Ｖ：
【化２３】
2019526555.tif 000027
（式中、
Ａ、Ｕ１、Ｉ、Ｂ、Ｗ及びＵ２は式Ｉに記載される通りであり、
Ｙ、Ｖ、Ｚ、Ｘ２、Ｘ３、Ｐ、Ｑ及びＴは、式ＩＩに記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２１９】
或る特定の実施形態では、Ｕ１は、存在しない、酸素、又は式Ｖによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基、又は水素であり、Ｕ２は、存在しない又はＯであり、Ｗは、水素、リン酸基、又は式Ｖによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１又はＷの少なくとも１つが、式Ｖによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である限り、またＵ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在しない。
【０２２０】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２であり、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２２１】
或る特定の実施形態では、Ａは水素、リン酸基又はホスフェート模倣物である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素であり、ＩはＣＨ２である。
【０２２２】
ａ．式Ｖａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化２４】
2019526555.tif 000028
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｉ、Ｗ及びＢは上記で式Ｖに記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２２３】
或る特定の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０２２４】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式Ｖの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０２２５】
３．式ＶＩ（式ＩＩＩのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチド）
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式ＶＩ：
【化２５】
2019526555.tif 000029
（式中、
Ａ、Ｕ１、Ｉ、Ｂ、Ｗ及びＵ２は式Ｉに記載される通りであり、
Ｙ、Ｖ、Ｚ１、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１、Ｑ１、Ｔａ及びＴｂは、式ＩＩＩに記載される通りである）によって以下の通り表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２２６】
或る特定の実施形態では、Ｕ１は、存在しない、酸素、又は式ＶＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基、又は水素であり、Ｕ２は、存在しない又はＯであり、Ｗは、水素、リン酸基、又は式ＶＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１又はＷの少なくとも１つが、式ＶＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である限り、またＵ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在しない。
【０２２７】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２であり、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２２８】
或る特定の実施形態では、Ａは水素、リン酸基又はホスフェート模倣物である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素であり、ＩはＣＨ２である。
【０２２９】
或る特定の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０２３０】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式ＶＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０２３１】
ａ．式ＶＩａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化２６】
2019526555.tif 000030
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは式ＶＩについて上に記載される通りであり、Ｙ及びＺ１は式ＩＩＩａについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２３２】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化２７】
2019526555.tif 000031
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２３３】
ｂ．式ＶＩｂ
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化２８】
2019526555.tif 000032
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは式ＶＩについて上に記載される通りであり、Ｙ、Ｚ１及びＴａ及びＴｂは式ＩＩＩｂについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２３４】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化２９】
2019526555.tif 000033
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２３５】
４．式ＶＩＩ（式ＩＶのグルタチオン感受性部分を有するオリゴヌクレオチド）
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式ＶＩＩ：
【化３０】
2019526555.tif 000034
（式中、
Ａ、Ｕ１、Ｉ、Ｂ、Ｗ及びＵ２は式Ｉに記載される通りであり、
Ｙ、Ｚ、Ｖ、Ｋ、Ｇ、Ｅ、ｎ、Ｍ３、Ｍ４、Ｐ、Ｑ、及びＴは、上記で式ＩＶに記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２３６】
或る特定の実施形態では、Ｕ１は、存在しない、酸素、又は式ＶＩＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基、又は水素であり、Ｕ２は、存在しない又はＯであり、Ｗは、水素、リン酸基、又は式ＶＩＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基であり、Ｕ１又はＷの少なくとも１つが、式ＶＩＩによって表される少なくとも１つのヌクレオチドをヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに付着するヌクレオチド間の結合基である限り、またＵ１がヌクレオチド間の結合基である限り、Ａは存在しない。
【０２３７】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２であり、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２３８】
或る特定の実施形態では、Ａは水素、リン酸基又はホスフェート模倣物である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素である。或る特定の実施形態では、Ａは水素であり、Ｕ１は酸素であり、ＩはＣＨ２である。
【０２３９】
或る特定の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、２個〜２５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、５００個〜１５００個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、７個〜１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１５個〜５０個のヌクレオチドを有する。更に別の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、１９個〜２５個のヌクレオチドを有する。
【０２４０】
或る特定の実施形態では、本出願を通して更に詳細に検討されるように、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは核酸阻害剤分子である。他の実施形態では、式ＶＩＩの少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、クリスパー核酸、遺伝子療法用核酸、ＤＮＡエディティング用核酸、プローブ、又はｉｎ  ｖｉｖｏで投与される他のオリゴヌクレオチドを含む、ヌクレアーゼによる分解及び／又は過酷な環境条件（例えばｐＨ）に弱い任意の他のオリゴヌクレオチドである。
【０２４１】
ａ．式ＶＩＩａ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性修飾オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３１】
2019526555.tif 000035
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｙ、Ｚ、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７、及びＴは、式ＩＶａにおいて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２４２】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３２】
2019526555.tif 000036
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２４３】
ｂ．式ＶＩＩｂ
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３３】
2019526555.tif 000037
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｙ、Ｖ、Ｚ、Ｋ、Ｅ、Ｍ３、Ｍ４、ｎ、及びＴは、式ＩＶｂについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２４４】
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３４】
2019526555.tif 000038
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｒは式ＩＶｂ（ｉ）に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２４５】
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３５】
2019526555.tif 000039
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｒは、式ＩＶｂ（ｉｉ）に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２４６】
ｃ．式ＶＩＩｃ
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３６】
2019526555.tif 000040
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｙ、Ｚ、Ｖ、Ｋ、ｎ、Ｔ、及びＲは、式ＩＶｃについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２４７】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３７】
2019526555.tif 000041
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｒは式ＩＶｃ（ｉ）に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２４８】
ｄ．式ＶＩＩｄ
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３８】
2019526555.tif 000042
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｙ、Ｚ、Ｒ、及びＴは、式ＩＶｄについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２４９】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化３９】
2019526555.tif 000043
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２５０】
ｅ．式ＶＩＩｅ
幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化４０】
2019526555.tif 000044
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、Ｉ及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｖ、Ｙ、Ｚ、Ｇ、Ｅ、Ｔ、Ｋ、ｎ、Ｒ、及びＴは、式ＩＶｅについて上に記載される通りである）によって表される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０２５１】
より典型的には、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、下記式：
【化４１】
2019526555.tif 000045
2019526555.tif 000046
2019526555.tif 000047
2019526555.tif 000048
（式中、Ａ、Ｕ１、Ｕ２、Ｗ、及びＢは、式ＶＩＩについて上に記載される通りであり、Ｒは、水素、ＣＨ３、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、若しくは複素環から選択され、又はＲは任意のスペーサーを介して任意に接続された標的リガンドである）の１つから選択される少なくとも１つのヌクレオチドを含む。
【０２５２】
Ａ．グルタチオン感受性核酸阻害剤分子
或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は核酸阻害剤分子に組み込まれる。一本鎖及び二本鎖のオリゴヌクレオチドを含む核酸阻害剤分子として様々なオリゴヌクレオチド構造が使用されており、これらの様々なオリゴヌクレオチドのいずれかは本明細書に記載される１以上のグルタチオン感受性ヌクレオチドを含めるように修飾され得る。
【０２５３】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、センス（すなわちパッセンジャー）鎖及びアンチセンス（すなわちガイド鎖）を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。様々な二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子の構造が当該技術分野で知られている。例えば、ＲＮＡｉ阻害剤分子の初期の研究は、各鎖が少なくとも１つの１個〜５個のヌクレオチドの３’−オーバーハングを含む１９個〜２５個のヌクレオチドのサイズを有する二本鎖核酸分子に注目した（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。後に、Ｄｉｃｅｒ酵素によってｉｎ  ｖｉｖｏで処理されてＲＮＡｉ阻害剤分子を活性化する、より長い二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子が開発された（例えば、米国特許第８，８８３，９９６号を参照されたい）。後の研究は、少なくとも１つの鎖の少なくとも１つの末端が分子の二本鎖標的領域を越えて伸長されている伸長された二本鎖核酸阻害剤分子であって、鎖の一本が熱力学的に安定化するテトラループ構造を含む構造を含む二本鎖核酸阻害剤分子を開発した（例えば、これらの二本鎖核酸阻害剤分子のそれらの開示を引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許第８，５１３，２０７号、米国特許第８，９２７，７０５号、国際公開第２０１０／０３３２２５号及び国際公開第２０１６／１００４０１号を参照されたい）。それらの構造は、一本鎖伸長（分子の片側又は両側）及び二本鎖伸長を含む。
【０２５４】
ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子の幾つかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は１５個〜６６個、２５個〜４０個又は１９個〜２５個のヌクレオチドの範囲である。幾つかの実施形態では、センス鎖は１８ヌクレオチド長〜６６ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、センス鎖は１８ヌクレオチド長〜２５ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、センス鎖は、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個又は２４個のヌクレオチド長である。それらの実施形態の幾つかでは、センス鎖は２５ヌクレオチド長〜４５ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、センス鎖は３０ヌクレオチド長〜４０ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、センス鎖は、３６個、３７個、３８個、３９個又は４０個のヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、センス鎖は２５ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長である。それらの実施形態の幾つかでは、センス鎖は２５個、２６個又は２７個のヌクレオチド長である。
【０２５５】
ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子の幾つかの実施形態では、アンチセンス鎖は１８ヌクレオチド長〜６６ヌクレオチド長である。典型的には、アンチセンス鎖は、標的遺伝子に対して核酸阻害剤分子の効果を導くように、標的遺伝子ｍＲＮＡ中の配列に十分に相補的な配列を含む。或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、標的遺伝子ｍＲＮＡに含まれる配列と完全に相補性の配列を含み、ここで完全に相補性の配列は１８ヌクレオチド長〜４０ヌクレオチド長である。それらの実施形態の幾つかでは、アンチセンス鎖は２０ヌクレオチド長〜５０ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は２０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個又は２８個のヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、３５ヌクレオチド長〜４０ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、３６個、３７個、３８個又は３９個のヌクレオチド長である。
【０２５６】
ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子の幾つかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は１５塩基対〜５０塩基対の二重鎖構造を形成する。或る特定の実施形態では、二重鎖領域は、１５塩基対〜３０塩基対の長さ、例えば１９塩基対〜３０塩基対、より典型的には１８塩基対〜２６塩基対、例えば１９塩基対〜２３塩基対の長さであり、或る特定の例では１９塩基対〜２１塩基対の長さである。或る特定の実施形態では、二本鎖領域は、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個又は２６個の長さの塩基対である。
【０２５７】
幾つかの実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、１以上の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを更に含み得る。典型的には、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、１個〜１０個、１個〜４個又は１個〜２個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有する。一本鎖オーバーハングは、典型的には、センス鎖の３’−末端及び／又はアンチセンス鎖の３’−末端に位置する。或る特定の実施形態では、１個〜１０個、１個〜４個又は１個〜２個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、アンチセンス鎖の５’−末端に位置する。或る特定の実施形態では、１個〜１０個、１個〜４個又は１個〜２個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、センス鎖の５’−末端に位置する。或る特定の実施形態では、１個〜２個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、アンチセンス鎖の３’−末端に位置する。或る特定の実施形態では、１０個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、アンチセンス鎖の５’−末端に位置する。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ阻害剤分子は、典型的にはアンチセンス鎖の５’−末端に平滑末端を有する。
【０２５８】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子はセンス鎖及びアンチセンス鎖、並びに１９ヌクレオチド〜２１ヌクレオチドの二重鎖領域を含み、ここで、センス鎖は１９ヌクレオチド長〜２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長〜２３ヌクレオチド長であり、その３’末端に１ヌクレオチド〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【０２５９】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２１ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び２１ヌクレオチド長のセンス鎖を有し、ここで、分子の右側（センス鎖の３’−末端／アンチセンス鎖の５’−末端）に２つのヌクレオチド３’−パッセンジャー鎖オーバーハング、及び分子の左側（センス鎖の５’−末端／アンチセンス鎖の３’−末端）に２つのヌクレオチド３’−ガイド鎖オーバーハングが存在する。かかる分子には、１９塩基対の二重鎖領域がある。
【０２６０】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２３ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び２１ヌクレオチド長のセンス鎖を有し、ここで、分子の右側（センス鎖の３’−末端／アンチセンス鎖の５’−末端）に平滑末端、及び分子の左側（センス鎖の５’−末端／アンチセンス鎖の３’−末端）に２つのヌクレオチド３’−ガイド鎖オーバーハングが存在する。かかる分子には、２１塩基対の二重鎖領域がある。
【０２６１】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖、並びに１８ヌクレオチド〜３４ヌクレオチドの二重鎖領域を含み、ここで、センス鎖は２５ヌクレオチド長〜３４ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は２６ヌクレオチド長〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１個〜５個の一本鎖ヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、センス鎖は２６ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖は３８ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、その５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は２６ヌクレオチドの二重鎖領域を形成する。或る特定の実施形態では、センス鎖は２５ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖は２７ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は２５ヌクレオチドの二重鎖領域を形成する。
【０２６２】
幾つかの実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子はステム及びループを含む。典型的には、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖の３’−末端領域又は５’−末端領域は、一本鎖のステム及びループの構造を形成する。
【０２６３】
幾つかの実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子はステム及びテトラループを含む。ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子がステム及びテトラループを含む実施形態では、パッセンジャー鎖は、ステム及びテトラループを含み、２０ヌクレオチド長〜６６ヌクレオチド長の範囲である。典型的には、ガイド鎖及びパッセンジャー鎖は別々の鎖であり、それぞれ連続するオリゴヌクレオチドを形成しない５’末端及び３’末端を有する（「ニックド（nicked）」構造と称される時がある）。
【０２６４】
それらの実施形態の幾つかでは、ガイド鎖は１５ヌクレオチド長〜４０ヌクレオチド長である。或る特定の実施形態では、ステム及びテトラループを含むパッセンジャー鎖の伸長部分は、鎖の３’−末端にある。或る特定の他の実施形態では、ステム及びテトラループを含むパッセンジャー鎖の伸長部分は、鎖の５’−末端にある。
【０２６５】
或る特定の実施形態では、ステム及びテトラループを含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖は、３４ヌクレオチド長〜４０ヌクレオチド長であり、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖は２０ヌクレオチド〜２４ヌクレオチドを含み、ここで、パッセンジャー鎖及びガイド鎖は１８ヌクレオチド〜２４ヌクレオチドの二重鎖領域を形成する。
【０２６６】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、（ａ）ステム及びテトラループを含み、３６ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖であって、ここで、５’−末端から最初の２０個のヌクレオチドはガイド鎖に相補的であり、続く１６個のヌクレオチドはステム及びテトラループを形成する、パッセンジャー鎖と、（ｂ）２２ヌクレオチド長であり、その３’−末端に２つのヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有するガイド鎖とを含み、ここで、ガイド鎖及びパッセンジャー鎖は、連続するオリゴヌクレオチドを形成しない別々の鎖である（例えば、図１Ａ及び図１Ｂを参照されたい）。
【０２６７】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は１個以上のデオキシリボヌクレオチドを含む。典型的には、核酸阻害剤分子は５個より少ないデオキシリボヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は１個以上のリボヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子のヌクレオチドはいずれもリボヌクレオチドである。
【０２６８】
幾つかの実施形態では、二本鎖核酸阻害剤分子、例えばｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子の少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドは、パッセンジャー鎖上にある。別の実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドはガイド鎖上にある。幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドは二重鎖領域にある。幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドは、オーバーハング領域にある。
【０２６９】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、本明細書に記載されるように、グルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含む一本鎖核酸阻害剤分子である。一本鎖核酸阻害剤分子は、当該技術分野で知られている。例えば、最近の努力の成果は、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子の活性を実証した（例えば、Matsui et al., Molecular Therapy, 2016,24(5):946-55を参照されたい）。さらに、特定の標的遺伝子の発現を減少させるため、アンチセンス分子が数十年に亘って使用されている。Pelechano and Steinmetz, Nature Review Genetics, 2013,14:880-93。これらの構造に共通するテーマに関する多くの変種が、一定範囲の標的に対して開発されている。一本鎖核酸阻害剤分子として、例えば、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ、リボザイム、アプタマー、アンタゴｍｉｒ及びｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子が挙げられ、いずれも当該技術分野で知られている。
【０２７０】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、１４個〜５０個、１６個〜３０個又は１５個〜２５個のヌクレオチドを有するｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子である。他の実施形態では、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は１８個〜２２個又は２０個〜２２個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は２０個のヌクレオチドを有する。他の実施形態では、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は２２個のヌクレオチドを有する。或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、外因性ＲＮＡｉ阻害剤分子又は天然ｍｉＲＮＡを阻害する一本鎖オリゴヌクレオチドである。
【０２７１】
或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、８個〜８０個、１４個〜５０個、１６個〜３０個、１２個〜２５個、１２個〜２２個、１４個〜２０個、１８個〜２２個又は２０個〜２２個のヌクレオチドを有する一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドである。或る特定の実施形態では、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは１８個〜２２個、例えば１８個〜２０個のヌクレオチドを有する。
【０２７２】
或る特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその部分は、標的核酸又はその特定の部分に完全に相補的である。或る特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその部分は、標的核酸の少なくとも１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個以上の連続するヌクレオチドに相補的である。或る特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸又はその部分に関して、５個、４個、３個、２個又は１個以下の非相補性ヌクレオチドを含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドの長さを減少させること及び／又は活性を除外することなくミスマッチ塩基を導入することができる。
【０２７３】
本明細書に記載されるように、１以上のヌクレオチドの糖部分が、典型的には糖部分の２’−炭素でグルタチオン感受性部分によって修飾され得る。典型的には、核酸阻害剤分子の１個又は２個のヌクレオチドが、グルタチオン感受性部分によって可逆的に修飾される。或る特定の実施形態では、核酸阻害剤分子の２個よりも多いヌクレオチド、例えば３個、４個、５個以上のヌクレオチドがグルタチオン感受性部分によって可逆的に修飾される。或る特定の実施形態では、ほとんどのヌクレオチドが、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの全て又は実質的に全てのヌクレオチドがグルタチオン感受性部分を含む。
【０２７４】
或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖は、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾されている１以上のヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖は、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾されている１以上のヌクレオチドを含む。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖及びパッセンジャー鎖は、それぞれ、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾されている１以上のヌクレオチドを含む。
【０２７５】
幾つかの実施形態では、核酸阻害剤分子中の少なくとも１つのグルタチオン感受性部分の存在は、例えば血清中のヌクレアーゼ及び／又は細胞内、例えばエンドソーム小胞、リソソーム小胞及び／又は融合エンドソーム／リソソーム小胞等の小胞内のヌクレアーゼに起因するオリゴヌクレオチドの分解を減少する。例えば、核酸阻害剤分子の５’−末端又は３’−末端のいずれかのヌクレオチドにグルタチオン感受性部分を置くことで、ヌクレアーゼによる分解から保護することができる。さらに、或る特定の二本鎖核酸阻害剤分子は、ヌクレアーゼ分解により弱い、パッセンジャー鎖若しくはガイド鎖のいずれか、又はそれらの両方の一本鎖オーバーハング領域を含む。この一本鎖オーバーハング領域を修飾することにより、ヌクレアーゼによる分解からかかる二本鎖核酸阻害剤分子を保護することができる。
【０２７６】
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、一本鎖核酸阻害剤分子の５’−末端ヌクレオチド、又は二本鎖核酸阻害剤分子のパッセンジャー鎖若しくはガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドに位置する。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、５’−末端ヌクレオチドの５’−炭素に位置する。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、５’−末端ヌクレオチドの２’−炭素に位置する。二本鎖核酸阻害剤分子の或る特定の実施形態では、パッセンジャー鎖又はガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドに位置するグルタチオン感受性部分は、オーバーハング領域内にある。
【０２７７】
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、一本鎖核酸阻害剤分子の３’−末端ヌクレオチド、又は二本鎖核酸阻害剤分子のパッセンジャー鎖若しくはガイド鎖の３’−末端ヌクレオチドに位置する。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、３’−末端ヌクレオチドの３’−炭素に位置する。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、３’−末端ヌクレオチドの２’−炭素に位置する。二本鎖核酸阻害剤分子の或る特定の実施形態では、パッセンジャー鎖又はガイド鎖の３’−末端ヌクレオチドに位置するグルタチオン感受性部分は、オーバーハング領域内にある。
【０２７８】
糖の２’−炭素における修飾等のＲＮＡｉ阻害剤分子のヌクレオチド位置２及び位置１４における不可逆的な化学修飾は、一般的には、十分に許容されない。いかなる理論にも拘束されることを意図するものではないが、これらのヌクレオチド位置は立体的な嵩に対して感受性である可能性がある。幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は一本鎖核酸阻害剤分子のヌクレオチド位置２、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖のヌクレオチド位置２にある。幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、一本鎖核酸阻害剤分子のヌクレオチド位置１４、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖のヌクレオチド位置１４にある。
【０２７９】
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖のＡｇｏ２切断部位に位置する又はそれに隣接する１以上のヌクレオチド上にある。典型的には、Ａｇｏ２は、ガイド鎖の５’−末端から計測してガイド鎖のヌクレオチド位置１０及びヌクレオチド位置１１に対向する２つのヌクレオチド間のホスホジエステル結合においてパッセンジャー鎖を切断する。したがって、例えば、ガイド鎖は２２個のヌクレオチド及び二塩基対オーバーハングを有する（又は２０個のヌクレオチド及びオーバーハングなし）場合、Ａｇｏ２はパッセンジャー鎖のヌクレオチド位置１０とヌクレオチド位置１１との間を切断するはずである。ガイド鎖が２１個のヌクレオチド及び二塩基対オーバーハングを有する（又は１９個のヌクレオチド及びオーバーハングなし）場合、Ａｇｏ２はパッセンジャー鎖のヌクレオチド位置９とヌクレオチド位置１０との間を切断するはずである。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、Ａｇｏ２切断部位のすぐ５’にある１個、２個又は３個のヌクレオチド上にグルタチオン感受性部分を含む。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、Ａｇｏ２切断部位のすぐ３’にある１個、２個又は３個のヌクレオチド上にグルタチオン感受性部分を含む。或る特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、例えば、Ａｇｏ２切断部位のすぐ５’にある１個、２個又は３個のヌクレオチド上、及びＡｇｏ２切断部位のすぐ３’にある１個、２個又は３個のヌクレオチド上を含む、Ａｇｏ２切断部位の両側にグルタチオン感受性部分を含む。
【０２８０】
Ｂ．グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの他の修飾
本明細書に記載される可逆的なグルタチオン感受性部分で修飾されているオリゴヌクレオチドは、例えば、本明細書に記載される不可逆的な修飾を含む当該技術分野で知られている他のヌクレオチド修飾を使用して、１以上のヌクレオチドに対して更に修飾され得る。典型的には、ヌクレアーゼに対する抵抗性又は免疫原性の低下等の分子の様々な特徴を改善するため、目的のオリゴヌクレオチドの複数のヌクレオチドサブユニットが修飾される。例えば、非特許文献２を参照されたい。オリゴヌクレオチドの分野において、特に核酸阻害剤分子に対して多くのヌクレオチドの修飾が使用されてきた。かかる不可逆的な修飾は、糖部分、ホスホジエステル結合及び核酸塩基を含む、ヌクレオチドの任意の部分に対して行われ得る。ヌクレオチド修飾の典型例として、限定されないが、２’−Ｆ、２−Ｏ−メチル（「２’−ＯＭｅ」又は「２’−ＯＣＨ３」）、２’−Ｏ−メトキシエチル（「２’−ＭＯＥ」又は「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」）、及び５’−メチルシトシンが挙げられる。不可逆的な修飾は、本明細書に記載されるように、５’−炭素等のヌクレオチドの他の部分で生じてもよい。
【０２８１】
或る特定の実施形態では、先に検討されるように、糖部分の環構造は、限定されないが、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）構造、架橋型核酸（「ＢＮＡ」）構造及びアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）構造を含めて、修飾される。
【０２８２】
修飾核酸塩基は、当該技術分野で知られ、また本明細書に記載されるように、１’−位にアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を含む。修飾核酸塩基の典型例は５’−メチルシトシンである。
【０２８３】
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然起源のヌクレオチド間の結合は、３’から５’のホスホジエステル結合である。修飾ホスホジエステル結合として、当該技術分野で知られ、また本明細書に記載されるように、リン原子を含むヌクレオチド間の結合及びリン原子を含まないヌクレオチド間の結合を含む、非天然起原のヌクレオチド間の結合基が挙げられる。典型的には、本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチドはリンを含有する１以上のヌクレオチド間の結合基を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるように、核酸阻害剤分子の１以上のヌクレオチド間の結合基は、リンを含有しない結合である。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リンを含有する１以上のヌクレオチド間の結合基、及びリンを含有しない１以上のヌクレオチド間の結合基を含む。
【０２８４】
グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端は、ヒドロキシル基又はリン酸基等の天然置換基を含んでもよい。或る特定の実施形態では、ヒドロキシル基は、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端に付着される。或る特定の実施形態では、リン酸基は、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端に付着される。典型的には、ホスフェートは、オリゴヌクレオチドの合成に先立ってモノマーに付加される。他の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドが、例えば細胞質基質Ｃｌｐ１キナーゼによって、細胞質基質に導入された後、５’−リン酸化が自然に達成される。幾つかの実施形態では、５’−末端のホスフェートは、５’−モノホスフェート［（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’］、５’−ジホスフェート［（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’］又は５’−トリホスフェート［（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’］等のリン酸基である。
【０２８５】
また、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端も修飾され得る。例えば、幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端は、ホスホロアミデート［（ΗΟ）２（Ｏ）Ρ−ΝΗ−５’，（ΗΟ）（ＮΗ２）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’］に付着される。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの５’−末端はホスフェート模倣物に付着される。好適なホスフェート模倣物として、５’−メチレンホスホネート（５’−ＭＰ）及び５’−（Ｅ）−ビニルホスホネート（５’−ＶＰ）等の５’−ホスホネートが挙げられる。Lima et al., Cell, 2012, 150-883-94、国際公開第２０１４／１３０６０７号。他の好適なホスフェート模倣物として、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす米国特許仮出願第６２／３９３，４０１号に記載される、オリゴヌクレオチドの５’−末端ヌクレオチドの糖部分（例えば、リボース若しくはデオキシリボース、又はそれらの類縁体）の４’−炭素に結合される４’−ホスフェート類縁体が挙げられる。例えば、幾つかの実施形態では、核酸阻害剤分子の５’−末端は、オキシメチルホスホネートに付着され、ここで、オキシメチル基の酸素原子は、糖部分又はその類縁体の４’−炭素に結合される。或る特定の実施形態では、４’−オキシメチルホスホネートは、式−Ｏ−ＣＨ２−ＰＯ（ＯＨ）２又は−Ｏ−ＣＨ２−ＰＯ（ＯＲ）２（式中、Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、アルキル基、又は保護基から選択される）によって表される。或る特定の実施形態では、アルキル基はＣＨ２ＣＨ３である。より典型的には、Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ３から選択される。他の実施形態では、ホスフェート類縁体は、チオメチルホスホネート又はアミノメチルホスホネートであり、ここで、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子は、糖部分又はその類縁体の４’−炭素に結合される。
【０２８６】
或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは完全に修飾され、ここで、完全に修飾されたオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、不可逆的修飾又は可逆的なグルタチオン感受性部分のいずれかで修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが修飾され、ここで、グルタチオン感受性部分で修飾されていない全てのヌクレオチドは不可逆的修飾によって修飾される。或る特定の実施形態では、本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチドはリボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドを含み、オリゴヌクレオチド中の全てのリボヌクレオチドは、不可逆的修飾又は可逆的なグルタチオン感受性部分のいずれかによって修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの実質的に全てのヌクレオチドが修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの半分より多くが修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの半分より多くが不可逆的修飾を含む。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの半分未満が修飾される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの半分未満が不可逆的修飾を含む。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１以上のグルタチオン感受性ヌクレオチド以外のいかなる修飾も含まない。修飾がオリゴヌクレオチド鎖上の基に生じてもよく、又は異なる修飾ヌクレオチドが点在してもよい。
【０２８７】
幾つかの実施形態では、不可逆化学修飾は、グルタチオン感受性部分を含むものと同じヌクレオチドに位置する。他の実施形態では、不可逆化学修飾は、グルタチオン感受性部分を含まない１以上のヌクレオチドに位置する。
【０２８８】
幾つかの実施形態では、一本鎖核酸阻害剤分子、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖若しくはパッセンジャー鎖の全てのヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、グルタチオン感受性部分によって可逆的に修飾される１個のヌクレオチドを除いて、不可逆的な化学修飾によって修飾される。他の実施形態では、一本鎖核酸阻害剤分子、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖若しくはパッセンジャー鎖の少なくとも１個、例えば少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾され、一本鎖核酸阻害剤分子、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖若しくはパッセンジャー鎖の少なくとも１個、例えば少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のヌクレオチドは、不可逆的な化学修飾によって化学修飾される。幾つかの実施形態では、一本鎖核酸阻害剤分子、又は二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖若しくはパッセンジャー鎖の全てのヌクレオチドは、本明細書に記載される少なくとも１つのグルタチオン感受性部分、又は少なくとも１つの不可逆的修飾を含む。
【０２８９】
核酸阻害剤分子の或る特定の実施形態では、全てのヌクレオチドは２’−炭素で修飾される。核酸阻害剤分子（又はそのセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖）の或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分で修飾されていない全てのヌクレオチドが、２’−Ｆ、２’−Ｏ−Ｍｅ及び／又は２’−ＭＯＥで修飾される。核酸阻害剤分子の或る特定の実施形態では、１個から全てのリン原子が修飾され、１個から全てのリボヌクレオチドが２’−炭素で修飾される。
【０２９０】
ＩＩＩ．グルタチオン感受性モノマー（ヌクレオシド及びヌクレオチド）
本開示の一態様は、標準的なオリゴヌクレオチド合成法に使用され得るグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイト、及び例えば抗ウイルス剤として治療的有用性を有し、ホスホロアミダイト基を伴わないグルタチオン感受性ヌクレオシド又はヌクレオチドを含む、グルタチオン感受性部分を含む可逆的に修飾されたヌクレオシド又はヌクレオチドに関する。典型的には、可逆的修飾は、ヌクレオシド又はヌクレオチドの糖部分、例えば、デオキシリボース又はリボース（又はそれらの類縁体）にグルタチオン感受性部分を含む。典型的には、ヌクレオシド又はヌクレオチド中のグルタチオン感受性部分は、デオキシリボース又はリボース（又はその類縁体）の２’−炭素に位置する。他の実施形態では、ヌクレオシド又はヌクレオチド中のグルタチオン感受性部分は、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の５’−炭素に位置する。更に他の実施形態では、ヌクレオシド又はヌクレオチド中のグルタチオン感受性部分は、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の３’−炭素に位置する。
【０２９１】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分はジスルフィド架橋を含む。
【０２９２】
Ａ．グルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイト
本出願は、グルタチオン感受性部分によって可逆的に修飾され、ホスホロアミダイトオリゴヌクレオチド合成法と適合するヌクレオシドを開示する。したがって、別の態様では、本開示は、グルタチオン感受性部分を含む可逆的に修飾されたヌクレオシドホスホロアミダイト、及びこれらのグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを使用してオリゴヌクレオチドを合成する方法に関する。
【０２９３】
或る特定の実施形態では、ヌクレオシドは、ホスホロアミダイト及びグルタチオン感受性部分を含み、ここで、ヌクレオシドはホスホロアミダイトオリゴヌクレオチド合成法に適合する。典型的には、ホスホロアミダイトは、ヌクレオシドの糖部分の５’−炭素又は３’−炭素に結合され、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオシドの糖部分（例えばリボース）の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合される。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩによって表される。或る特定の実施形態では、本明細書に記載されるように、式ＩＩは式ＩＩａである。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ又は式ＩＩＩｂから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ（ｉ）又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。更に他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される。
【０２９４】
１．式ＶＩＩＩ
幾つかの実施形態では、ヌクレオシドホスホロアミダイトは下記式：
【化４２】
2019526555.tif 000049
（式中、
Ｌ１はグルタチオン感受性部分であり、
Ａ１は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、ホスホロアミダイト、保護基又は固体支持体であり、
Ｗ１は、ホスホロアミダイト、保護基、固体支持体、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｕ３は、水素であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
少なくともＡ１はホスホロアミダイトであり、かつＵ３はＯであり、又は少なくともＷ１はホスホロアミダイトであり、かつＵ２はＯであり、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうち２つは共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は任意にヘテロ原子を含み、
Ｊは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｉ及びＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成し、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成する）によって表される。
【０２９５】
典型的には、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、ジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分はジスルフィド架橋を含む。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。
【０２９６】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表される。
【０２９７】
或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＩａによって表される。
【０２９８】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＩＩａ又は式ＩＩＩｂによって表される。
【０２９９】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＩＩａ（ｉ）又は式ＩＩＩｂ（ｉ）によって表される。
【０３００】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、又は式ＩＶｅによって表される。
【０３０１】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、又は式ＩＶｄ（ｉ）によって表される。
【０３０２】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分（Ｌ１）は、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）によって表される。
【０３０３】
或る特定の実施形態では、ＸはＯである。
【０３０４】
或る特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【０３０５】
或る特定の実施形態では、ＪはＯである。
【０３０６】
或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０３０７】
或る特定の実施形態では、Ｕ２はＯである。
【０３０８】
或る特定の実施形態では、Ｗ１はホスホロアミダイト、保護基又は水素である。
【０３０９】
或る特定の実施形態では、Ａ１はホスホロアミダイト、保護基又は水素である。
【０３１０】
或る特定の実施形態では、Ｗ１はホスホロアミダイトであり、Ａ１は保護基である。
【０３１１】
或る特定の実施形態では、Ｗ１は保護基であり、Ａ１はホスホロアミダイトである。
【０３１２】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。
【０３１３】
或る特定の実施形態では、Ｕ３はＯである。
【０３１４】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯである。
【０３１５】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、ＩはＣＨ２であり、Ｗ１はホスホロアミダイトであり、Ａ１は保護基であり、Ｕ３はＯである。
【０３１６】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、ＩはＣＨ２であり、Ｗ１は保護基であり、Ａ１はホスホロアミダイトであり、Ｕ３はＯである。
【０３１７】
或る特定の実施形態では、ホスホロアミダイトは、式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２（式中、ＲＸは任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙはそれぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される）を有する。或る特定の実施形態では、ＲＸは２−シアノエチルであり、Ｒｙはイソプロピルである。
【０３１８】
２．式ＩＸ
或る特定の実施形態では、ヌクレオシドホスホロアミダイトは下記式：
【化４３】
2019526555.tif 000050
（式中、
Ｌ１はグルタチオン感受性部分であり、
Ｒ９はホスホロアミダイトであり、
ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうち２つは共に５員環〜８員環を形成し、ここで、環は任意にヘテロ原子を含み、
Ｊは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基であり、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ３は、水素、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｉ及びＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成し、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａ３は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、保護基、又は固体支持体である）によって表される。
【０３１９】
典型的には、Ｌ１はジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む。或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分はジスルフィド架橋を含む。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。
【０３２０】
幾つかの実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩａによって表される。
【０３２１】
他の実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。
【０３２２】
更に他の実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される。
【０３２３】
或る特定の実施形態では、ＸはＯである。
【０３２４】
或る特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【０３２５】
或る特定の実施形態では、ＪはＯである。
【０３２６】
或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０３２７】
或る特定の実施形態では、Ａ３は保護基又は水素である。
【０３２８】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。
【０３２９】
或る特定の実施形態では、Ｕ３はＯである。
【０３３０】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯである。
【０３３１】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、ＩはＣＨ２であり、Ａ３は保護基であり、Ｕ３はＯである。
【０３３２】
或る特定の実施形態では、ホスホロアミダイトは、式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２（式中、ＲＸは任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙはそれぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される）を有する。或る特定の実施形態では、ＲＸは２−シアノエチルであり、Ｒｙはイソプロピルである。
【０３３３】
３．式Ｘ
或る特定の実施形態では、ヌクレオシドホスホロアミダイトは下記式：
【化４４】
2019526555.tif 000051
（Ｌ１はグルタチオン感受性部分であり、
Ｒ８は、Ｈ、保護基、固体支持体又はホスホロアミダイトであり、
Ｒ７は、Ｈ、保護基、固体支持体又はホスホロアミダイトであり、
Ｒ８がホスホロアミダイトである場合、Ｒ７はＨ、固体支持体若しくは保護基であり、又はＲ８がＨ、固体支持体若しくは保護基である場合、Ｒ７はホスホロアミダイトであり、
Ｂは、天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、脂肪族又は置換された脂肪族、アリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環から選択され得る）によって表される。
【０３３４】
典型的には、Ｌ１はジスルフィド架橋又はスルホニル基を含む。或る特定の実施形態では、Ｌ１はジスルフィド架橋を含む。他の実施形態では、Ｌ１はスルホニル基を含む。
【０３３５】
幾つかの実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩａによって表される。
【０３３６】
他の実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。
【０３３７】
更に他の実施形態では、Ｌ１は、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される。
【０３３８】
或る特定の実施形態では、ＸはＯである。
【０３３９】
或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０３４０】
或る特定の実施形態では、ホスホロアミダイトは、式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２（式中、ＲＸは、任意に置換されたメチル、２−シアノエチル及びベンジルからなる群から選択され、Ｒｙはそれぞれ、任意に置換されたエチル及びイソプロピルからなる群から選択される）を有する。或る特定の実施形態では、ＲＸは２−シアノエチルであり、Ｒｙはイソプロピルである。
【０３４１】
或る特定の実施形態では、Ｒ８は式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２を有するホスホロアミダイトであり、Ｒ９はＨ又は保護基である。
【０３４２】
或る特定の実施形態では、Ｒ９は式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２を有するホスホロアミダイトであり、Ｒ８はＨ又は保護基である。
【０３４３】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｒ８は保護基であり、Ｒ９は式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２を有するホスホロアミダイトである。
【０３４４】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｒ８は式−Ｐ（ＯＲＸ）−Ｎ（Ｒｙ）２を有するホスホロアミダイトであり、Ｒ９は保護基である。或る特定の実施形態では、ＲＸは２−シアノエチルであり、Ｒｙはイソプロピルである。
【０３４５】
Ｂ．ホスホロアミダイトを有しないグルタチオン感受性のヌクレオシド及びヌクレオチド
幾つかの実施形態では、可逆的に修飾されたグルタチオン感受性モノマー（ヌクレオシド若しくはヌクレオチド、又はそれらの類縁体）は、糖部分の３’−炭素又は５’−炭素にホスホロアミダイト基を含まない。かかるグルタチオン感受性モノマーは、治療薬として、例えば、抗ウイルス活性を有するヌクレオシド又はヌクレオチドの類縁体として使用され得る。典型的には、可逆的修飾は、ヌクレオチド又はヌクレオシド（又はそれらの類縁体）の糖部分、例えばデオキシリボース又はリボース（又はそれらの類縁体）にグルタチオン感受性部分を含む。典型的には、グルタチオン感受性部分は、デオキシリボース又はリボース（又はそれらの類縁体）の２’−炭素に位置する。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の５’−炭素に位置する。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の３’−炭素に位置する。
【０３４６】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分はジスルフィド架橋を含む。
【０３４７】
或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性モノマーは、モノマーの糖部分（例えば、リボース）の２’−炭素に共有結合されている酸素原子に結合されたグルタチオン感受性部分を含む。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩによって表される。或る特定の実施形態では、式ＩＩは、本明細書に記載される式ＩＩａである。他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。更に他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される。
【０３４８】
或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性モノマー（ヌクレオシド若しくはヌクレオチド、又はそれらの類縁体）は、以下に更に詳述される、治療的有効量のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチド（又はそれらの類縁体）と薬学的担体とを含む医薬組成物に製剤化される。
【０３４９】
１．式ＸＩ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドは下記式：
【化４５】
2019526555.tif 000052
（式中、
Ｌ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分であり、又はＡ２若しくはＷ２の１つがグルタチオン感受性部分である場合、存在せず、
Ｌ２がグルタチオン感受性部分である場合、ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、若しくは置換若しくは非置換の複素環から選択され、又はＬ２が存在しない場合、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ハロゲン、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルアミノ若しくはジアルキルアミノであり、ここで、アルキル、アルケニル及びアルキニル中の１以上のメチレンは、１以上のＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ’）、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換された複素環、若しくは任意に置換されたシクロアルキル、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＨＲ’で中断されてもよく、ここで、Ｒ’は、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール又は置換若しくは非置換の複素環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルから選択され、又はＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうち２つは、共に５員環〜８員環を形成し、ここで環は任意にヘテロ原子を含み、
Ｊは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ、独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾された核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基から選択され、
Ｕ２は、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の脂肪族、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の複素環、又は置換若しくは非置換のシクロアルキルであり、
Ｗ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分、水素、ハロゲン、ＯＲ’、ＳＲ’、ＮＲ’Ｒ’’、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換の複素環であり、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環から選択され、又は共に複素環を形成し、
Ｉは、存在しない、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｕ３は水素であり、又はＯ、Ｓ、ＮＲ’若しくはＣＲ’Ｒ’’から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して水素、置換又は非置換の脂肪族、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換の複素環、及び置換又は非置換のシクロアルキルであり、
Ｉ及びＵ３は、組み合わされてＣＲ’−ＣＲ’’アルキル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルケニル、ＣＲ’−ＣＲ’’アルキニル、置換若しくは非置換の脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環を形成してもよく、又は共にシクロアルキル若しくは複素環を形成してもよく、
Ａ２は、存在しない、水素、リン酸基、ホスフェート模倣物、ホスホロアミデート、又は式ＩＩ、式ＩＩＩ若しくは式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分である）によって表される。
【０３５０】
幾つかの実施形態では、Ａ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分である。幾つかの実施形態では、Ｗ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分である。幾つかの実施形態では、Ｌ２は、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分であり、かつＡ２とＷ２のいずれも式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分ではない。
【０３５１】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩａによって表される。
【０３５２】
他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。更に他の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）又は式ＩＶ（ｘｉ）から選択される。
【０３５３】
或る特定の実施形態では、ＸはＯである。
【０３５４】
或る特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素である。
【０３５５】
或る特定の実施形態では、ＪはＯである。
【０３５６】
或る特定の実施形態では、Ｂは天然核酸塩基である。
【０３５７】
或る特定の実施形態では、Ｕ２はＯである。
【０３５８】
或る特定の実施形態では、Ｗ２は水素である。
【０３５９】
或る特定の実施形態では、Ｕ３はＯである。
【０３６０】
或る特定の実施形態では、ＩはＣＨ２である。
【０３６１】
或る特定の実施形態では、Ａ２は水素又はリン酸基である。
【０３６２】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯである。
【０３６３】
或る特定の実施形態では、ＸはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素であり、ＪはＯであり、Ｂは天然核酸塩基であり、Ｕ２はＯであり、ＩはＣＨ２であり、Ｗ２は水素であり、Ｕ３はＯであり、Ａ２は水素又はリン酸基である。
【０３６４】
２．式ＸＩＩ
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドのモノマーは下記式：
【化４６】
2019526555.tif 000053
（式中、
Ｒ１０はヒドロキシル、ホスフェート模倣物又はリン酸基であり、
Ｌは、上に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶから選択され、
Ｂは、水素、天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基である）によって表される。
【０３６５】
幾つかの実施形態では、Ｌは、先に記載される式ＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、Ｌは、先に記載される式ＩＩａによって表される。
【０３６６】
他の実施形態では、Ｌは、先に記載される式ＩＩＩによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＩＩは、先に記載される式ＩＩＩａ、式ＩＩＩａ（ｉ）、式ＩＩＩｂ又は式ＩＩＩｂ（ｉ）から選択される。
【０３６７】
更に他の実施形態では、Ｌは、先に記載される式ＩＶによって表される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ、式ＩＶｂ、式ＩＶｃ、式ＩＶｄ、又は式ＩＶｅから選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶは、先に記載される式ＩＶａ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉ）、式ＩＶｂ（ｉｉ）、式ＩＶｃ（ｉ）、又は式ＩＶｄ（ｉ）から選択される。幾つかの実施形態では、式ＩＶｅは、先に記載される式ＩＶｅ（ｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｖ）、式ＩＶｅ（ｖ）、式ＩＶｅ（ｖｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉ）、式ＩＶｅ（ｖｉｉｉ）、式ＩＶｅ（ｉｘ）、式ＩＶｅ（ｘ）、又は式ＩＶｅ（ｘｉ）から選択される。
【０３６８】
Ｃ．保護基
グルタチオン感受性のヌクレオチド又はヌクレオシドの幾つかの実施形態では、保護基は、Ｂ、すなわち天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基に付着される。Ｂに対する好適な保護基として、アセチル、ジフルオロアセチル、トリフルオロアセチル、イソブチリル、ベンゾイル、９−フルオレニルメチトキシカルボニル、フェノキシアセチル、ジメチルホルムアミジン、ジブチルホルムアミジン及びＮ，Ｎジフェニルカルバメートが挙げられる。
【０３６９】
幾つかの実施形態では、保護基は、特にヌクレオシドホスホロアミダイトに対して、上に記載されるヌクレオシド中のヒドロキシル基に付着される。上に記載されるヌクレオシドのヒドロキシル基に対する好適な保護基として、限定されないが、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基及び／又はトリチル基を含む固相オリゴヌクレオチド合成に適合する任意の保護基が挙げられる。典型例は、酸性条件下（例えば、ジクロロ酢酸（ＤＣＡ）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は酢酸の存在下）で容易に切断され得る４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）基である。
【０３７０】
他の典型的なヒドロキシル保護基として、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）等のトリアルキルシリル基が挙げられる。ＴＢＤＭＳ基は、合成サイクル中にＤＭＴ基を除去するために使用される酸性条件下で安定であるが、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のテトラブチルアンモニウムフッ化物（ＴＢＡＦ）の溶液による又はトリエチルアミンヒドロフルオリドによる、ＲＮＡオリゴマーの切断及び脱保護の後に様々な方法によって除去され得る。他の典型的なヒドロキシル保護基として、例えばフッ化アンモニウムで除去され得るｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルエーテル（ＴＢＤＰＳ）が挙げられる。
【０３７１】
ＩＶ．核酸塩基
上に記載されるグルタチオン感受性のオリゴヌクレオチド、ヌクレオチド及びヌクレオシドでは、Ｂは天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基を表す。
【０３７２】
好適な天然核酸塩基として、プリン塩基及びピリミジン塩基、例えばアデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、又はウラシル（Ｕ）が挙げられる。
【０３７３】
好適な修飾核酸塩基として、ジアミノプリン及びその誘導体、アルキル化されたプリン又はピリミジン、アシル化されたプリン又はピリミジン、チオール化されたプリン又はピリミジン等が挙げられる。
【０３７４】
他の好適な修飾された核酸塩基として、プリン及びピリミジンの類縁体が挙げられる。好適な類縁体として、限定されないが、１−メチルアデニン、２−メチルアデニン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンチルアデニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアデニン、８−ブロモアデニン、２−チオシトシン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、５−エチルシトシン、４−アセチルシトシン、１−メチルグアニン、２−メチルグアニン、７−メチルグアニン、２，２−ジメチルグアニン、８−ブロモグアニン、８−クロログアニン、８−アミノグアニン、８−メチルグアニン、８−チオグアニン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、５−エチルウラシル、５−プロピルウラシル、５−メトキシウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）ウラシル、５−（カルボキシメチルアミノメチル）−ウラシル、２−チオウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−（２−ブロモビニル）ウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、偽ウラシル（pseudouracil）、１−メチル偽ウラシル、クエオシン（queosine）、ヒポキサンチン、キサンチン、２−アミノプリン、６−ヒドロキシアミノプリン、ニトロピロリル、ニトロインドリル及びジフルオロトリル、６−チオプリン、並びに２，６−ジアミノプリンニトロピロリル、ニトロインドリル及びジフルオロトリルが挙げられる。
【０３７５】
典型的には、核酸塩基は窒素塩基を含む。或る特定の実施形態では、核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８０２７４４６２号を参照されたい。
【０３７６】
ユニバーサル核酸塩基は、天然起原の核酸に典型的に見られる２個以上の塩基と対合することができる塩基を指し、したがって、二重鎖中のかかる天然起源の塩基を置換することができる。塩基は、それぞれの天然起源の塩基と必ずしも対合可能でなくてもよい。例えば、或る特定の塩基は、プリンのみ若しくはそれと選択的に対合する、又はピリミジンのみ若しくはそれと選択的に対合する。ユニバーサル核酸塩基は、ワトソン−クリック又は非ワトソン−クリックの相互作用（例えばフーグスティーン相互作用）を介して水素結合を形成することによって塩基対合し得る。代表的なユニバーサル核酸塩基として、イノシン及びその誘導体が挙げられる。
【０３７７】
Ｖ．式Ｉ〜式ＸＩＩにおける他の置換基
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適な脂肪族基は、典型的には、約２個〜約１０個の炭素原子、より典型的には約２個〜約６個の炭素原子、例えば約２個〜約５個の炭素原子を含む。
【０３７８】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なアルキル基は、典型的には、約１個〜約１０個の炭素原子、より典型的には約２個〜約６個の炭素原子、例えば約２個〜約５個の炭素原子を含む。
【０３７９】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なアルコキシ基として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ネオペントキシ及びｎ−ヘキソキシ等が挙げられる。
【０３８０】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なシクロアルキルとして、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等が挙げられる。
【０３８１】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なヘテロ原子として、酸素、硫黄及び窒素が挙げられる。代表的な複素環として、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル及びテトラヒドロフリルが挙げられる。代表的なヘテロアリールとして、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロロ、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルが挙げられる。
【０３８２】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なアルケニル基として、ビニル、アリル、及び２−メチル−３−ヘプテンが挙げられ、好適なアルキニル基としてプロピン及び３−ヘキシンが挙げられる。
【０３８３】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なアリール基として、フェニル、ナフチル等が挙げられるのに対し、好適なヘテロアリール基として、ピリジル、フラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニル又はチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリル等が挙げられる。
【０３８４】
式Ｉ〜式ＸＩＩでは、適切な場合、好適なアルキルアミノとして、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−又はＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−が挙げられる。
【０３８５】
ＶＩ．オリゴヌクレオチドを合成する方法
上で検討されるように、本出願は、標準的なホスホロアミダイトに基づくオリゴヌクレオチド合成法に適合するグルタチオン感受性部分を含むヌクレオシドを開示する。
【０３８６】
本出願に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドは、標準的なホスホロアミダイト法を含む、当該技術分野で知られている様々な合成法を使用して作製され得る。任意のホスホロアミダイト合成法を使用して、本発明のグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを合成することができる。或る特定の実施形態では、ホスホロアミダイトを固相合成法において使用し、反応性中間体であるホスファイト化合物を得て、該中間体をその後既知の方法を使用して酸化し、典型的にはホスホジエステル又はホスホロチオエートのヌクレオチド間の結合を有するグルタチオン感受性オリゴヌクレオチドを産生する。本開示のオリゴヌクレオチド合成は、当該技術分野で知られている方法を使用して、いずれの方向でも、すなわち、５’から３’、又は３’から５’で行われ得る。
【０３８７】
したがって、別の態様では、本開示は、上で検討され、例えば式ＶＩＩＩ、式ＩＸ又は式Ｘによって表されるもの等のグルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを使用してオリゴヌクレオチドを合成する方法に関する。典型的には、グルタチオン感受性部分は、リボース又はデオキシリボース（又はそれらの類縁体）の２’−炭素に位置し、スルホニル基又はジスルフィド架橋を含み、このグルタチオン感受性部分としては、例えば、式ＩＩ、式ＩＩＩ及び式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分が挙げられる。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドを合成する方法は、（ａ）共有結合を介してヌクレオシドを固体支持体に付着させることと、（ｂ）ヌクレオシドホスホロアミダイトを、工程（ａ）のヌクレオシド上の反応性ヒドロキシル基にカップリングして、その間にヌクレオチド間の結合を形成することであって、上記固体支持体上の任意のカップリングされていないヌクレオシドがキャッピング試薬によってキャップされることと、（ｃ）酸化剤で上記ヌクレオチド間の結合を酸化することと、（ｄ）後のヌクレオシドホスホロアミダイトを用いて、反復して工程（ｂ）〜工程（ｃ）を繰り返してオリゴヌクレオチドを形成することとを含み、ここで、少なくとも工程（ａ）のヌクレオシド、工程（ｂ）のヌクレオシドホスホロアミダイト、又は少なくとも１つの工程（ｄ）の後のヌクレオシドホスホロアミダイトが、本明細書に記載されるグルタチオン感受性部分を含む。典型的にはカップリング、キャッピング／酸化の工程、及び任意に脱保護工程は、オリゴヌクレオチドが所望の長さ及び／又は配列に達するまで繰り返され、その後、該オリゴヌクレオチドを固体支持体から切断する。
【０３８８】
或る特定の態様では、オリゴヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含み、少なくとも１つのグルタチオン感受性部分を含むヌクレオシドホスホロアミダイトを使用してホスホロアミダイトに基づくオリゴヌクレオチド合成法によって作製される。或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、（ａ）共有結合を介してヌクレオシドを固体支持体に付着させることと、（ｂ）ヌクレオシドホスホロアミダイトを、工程（ａ）のヌクレオシド上の反応性ヒドロキシル基にカップリングして、その間にヌクレオチド間の結合を形成することであって、上記固体支持体上の任意のカップリングされていないヌクレオシドがキャッピング試薬によってキャップされることと、（ｃ）酸化剤で上記ヌクレオチド間の結合を酸化することと、（ｄ）後のヌクレオシドホスホロアミダイトを用いて、反復して工程（ｂ）〜工程（ｃ）を繰り返してオリゴヌクレオチドを形成することと、（ｅ）任意に、固体支持体からオリゴヌクレオチドを切断することとを含み、ここで、少なくとも工程（ａ）のヌクレオシド、工程（ｂ）のヌクレオシドホスホロアミダイト、又は少なくとも１つの工程（ｄ）の後のヌクレオシドホスホロアミダイトが、グルタチオン感受性部分を含む、方法によって作製される。
【０３８９】
ＶＩＩ．医薬組成物
本開示は、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド、又はグルタチオン感受性のヌクレオシド若しくはヌクレオチドと、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【０３９０】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤と、治療的有効量の核酸阻害剤分子とを含み、ここで、本明細書に記載されるように、核酸阻害剤分子はグルタチオン感受性部分を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含む。別記されるように、グルタチオン感受性部分は、典型的には、ヌクレオチドの糖部分の２’−炭素に位置し、典型的には、先に記載される式ＩＩ、式ＩＩＩ又は式ＩＶによって表されるグルタチオン感受性部分等を含む、スルホニル基又はジスルフィド架橋を含む。
【０３９１】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤と、治療的有効量の核酸阻害剤分子とを含み、ここで、核酸阻害剤分子は、先に記載される式Ｉ、式Ｖ、式ＶＩ又は式ＶＩＩによって表される少なくとも１つのグルタチオン感受性ヌクレオチドを含む。
【０３９２】
他の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤と、先に記載されるように、例えば式ＸＩ及び式ＸＩＩによって表される、治療的有効量のグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドとを含む。
【０３９３】
Ａ．薬学的に許容可能な賦形剤
本開示において有用な薬学的に許容可能な賦形剤は、従来の賦形剤である。Remington’s Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)は、１以上の治療用組成物の薬学的送達に適した組成物及び製剤を記載する。薬学的に許容可能な賦形剤としてはたらくことができる材料の幾つかの例として、ラクトース、グルコース及びスクロース等の糖；コーンスターチ及びジャガイモデンプン等のデンプン；カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース等のセルロース及びその誘導体；麦芽；ゼラチン；カカオバター及び坐剤ワックス等の賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油等の油；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤；（等張生理食塩水；リンガー溶液）；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の多価アルコール；並びに医薬製剤で利用される他の無毒な適合性の物質が挙げられる。
【０３９４】
Ｂ．剤形
医薬組成物は、通常の慣行に従って選択され得る、任意の意図される投与経路に対する従来の賦形剤と共に製剤化され得る。
【０３９５】
一実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド、又はグルタチオン感受性のヌクレオチド若しくはヌクレオシドを含み、非経口投与に適している。典型的には、オリゴヌクレオチドを含む本開示の医薬組成物は、例えば、皮下、筋肉内、静脈内又は硬膜外の注射による非経口投与用の液状形態に製剤化される。非経口投与に適した剤形として、典型的には、例として、無菌水溶液、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の低分子量アルコール、植物油、ゼラチン、オレイン酸エチル等の脂肪酸エステル等を含む、非経口投与に適した１以上のビヒクルが挙げられる。非経口的製剤は、糖、アルコール、抗酸化剤、バッファー、静菌剤、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁剤若しくは増粘剤を含んでもよい。適切な流動性は、例えば界面活性剤の使用によって維持され得る。液体製剤を凍結乾燥し、無菌注射用溶液を用いた再構成による後の使用に対して保存することができる。
【０３９６】
別の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載されるグルタチオン感受性オリゴヌクレオチド、又はグルタチオン感受性のヌクレオチド若しくはヌクレオシドを含み、経口投与に適している。典型的には、ヌクレオチド又はヌクレオシドを含む本開示の医薬組成物は、経口投与に対して製剤化される。経口投与に適した医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、口内錠、カシェ剤、糖衣錠、粉体、顆粒等の形態であってもよい。
【０３９７】
また、医薬組成物は、良く知られている技術を使用して、局所若しくは経皮の投与、直腸若しくは経腟の投与、点眼投与、点鼻投与、頬側投与又は舌下投与を含む他の投与経路に対して製剤化されてもよい。
【０３９８】
Ｃ．送達物質
上記グルタチオン感受性核酸阻害剤分子、ヌクレオチド又はヌクレオシドは、例えばリポソーム及び脂質、例えば米国特許第６，８１５，４３２号、同第６，５８６，４１０号、同第６，８５８，２２５号、同第７，８１１，６０２号、同第７，２４４，４４８号、及び同第８，１５８，６０１号に開示されるもの、ポリマー材料、例えば米国特許第６，８３５，３９３号、同第７，３７４，７７８号、同第７，７３７，１０８号、同第７，７１８，１９３号、同第８，１３７，６９５号、及び米国特許出願公開第２０１１／０１４３４３４号、同第２０１１／０１２９９２１号、同第２０１１／０１２３６３６号、同第２０１１／０１４３４３５号、同第２０１１／０１４２９５１号、同第２０１２／００２１５１４号、同第２０１１／０２８１９３４号、同第２０１１／０２８６９５７号、及び同第２００８／０１５２６６１号に開示されるもの、カプシド、カプソイド、又は摂取、分配若しくは吸収を補助するための受容体を標的とする分子を含む、その他の分子、分子構造物、又は化合物の混合物と混合され、それらでカプセル化され、それらと接合され、さもなければそれらと会合され得る。
【０３９９】
或る特定の実施形態においては、上記グルタチオン感受性核酸阻害剤分子、ヌクレオチド又はヌクレオシドは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化される。脂質−核酸ナノ粒子は一般的に、脂質と核酸とを混合して複合体が形成されることで自然形成する。所望の粒径分布に依存して、得られたナノ粒子混合物は、任意にポリカーボネート膜（例えば、１００ｎｍのカットオフ）を通じて、例えばサーモバレル押出機、例えばＬＩＰＥＸ（商標）押出機（Northern Lipids, Inc社）を使用して押し出され得る。治療用途の脂質ナノ粒子を調製するためには、ナノ粒子の形成に使用される溶剤（例えば、エタノール）及び／又は交換バッファーを除去することが望ましい場合があり、それは、例えば透析若しくはタンジェンシャルフロー濾過により達成することができる。核酸干渉分子を含む脂質ナノ粒子の製造方法は、例えば米国特許出願公開第２０１５／０３７４８４２号及び同第２０１４／０１０７１７８号に開示されているように、当該技術分野で知られている。
【０４００】
或る特定の実施形態においては、ＬＮＰは、カチオン性脂質及びペグ化脂質を含む脂質コアを含む。ＬＮＰは、１種以上のエンベロープ脂質、例えばカチオン性脂質、構造脂質若しくは中性脂質、ステロール、ペグ化脂質、又はそれらの混合物を更に含み得る。
【０４０１】
或る特定の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、目的の組織へのオリゴヌクレオチドの送達を指示するリガンドに共有結合によって接合される。多くのかかるリガンドが探索されてきた。例えば、Winkler, Ther. Deliv., 4(7): 791-809 (2013)を参照されたい。例えば、本発明のオリゴヌクレオチドは、肝臓へのオリゴヌクレオチドの取り込みを指示するように、複数の糖リガンド部分（例えば、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ））に接合され得る。例えば、国際公開第２０１６／１００４０１号を参照されたい。使用可能な他のリガンドとして、限定されないが、マンノース−６−リン酸、コレステロール、葉酸塩、トランスフェリン及びガラクトースが挙げられる（その他のリガンドの具体例は、例えば国際公開第２０１２／０８９３５２号を参照されたい）。典型的には、オリゴヌクレオチドがリガンドに接合される場合、オリゴヌクレオチドはネイキッドオリゴヌクレオチドとして投与され、オリゴヌクレオチドはＬＮＰ又は他の保護コーティングのいずれにも製剤化されていない。或る特定の実施形態では、ネイキッドオリゴヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含み、ネイキッドオリゴヌクレオチドの残りのヌクレオチドの糖部分の２’−位は、典型的には２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅによって修飾される。
【０４０２】
これらの医薬組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されてもよく、又は濾過滅菌されてもよい。得られる水溶液は、そのままの使用に対して又は凍結乾燥して包装され得て、凍結乾燥調製物は、投与に先立って無菌の水性担体と合わせられる。調製物のｐＨは、典型的には３〜１１、より好ましくは５〜９、又は６〜８、最も好ましくは７〜８、例えば７〜７．５となる。固形の医薬組成物は、それぞれ、一定量の上に言及される薬剤（複数の場合もある）を含む、錠剤又はカプセル剤の密閉包装等に複数の単回単位用量で包装され得る。また、固形の医薬組成物は、局所塗布用のクリーム又は軟膏用に設計された絞り出しチューブ等のフレキシブルな量に対する容器に包装され得る。
【０４０３】
本開示の医薬組成物は、治療用途に適用される。したがって、本開示の一態様は、限定されないが、被験体に有効量の本開示の医薬組成物を投与することによって、疾患又は病状に苦しむヒトを含む上記被験体を治療するために使用され得る、医薬組成物を提供する。
【０４０４】
或る特定の実施形態では、本開示は、治療を必要とする患者の治療のための医薬の製造への、本明細書に記載される治療的有効量の医薬組成物の使用を特徴とする。
【０４０５】
ＶＩＩＩ．投与／治療の方法
本明細書に記載される医薬組成物は、典型的には経口的に又は非経口的に投与される。本発明のグルタチオン感受性核酸阻害剤分子を含む医薬組成物は、典型的には、静脈内又は皮下で投与される。本発明のグルタチオン感受性のヌクレオチド又はヌクレオシドを含む医薬組成物は、典型的には経口投与される。しかしながら、本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、頬側、舌下、直腸、膣、尿道内、局所、眼内、鼻腔内及び／又は耳介内を含む当該技術分野で知られている任意の方法によって投与され得て、該投与は、錠剤、カプセル剤、顆粒、水性懸濁液、ゲル、スプレー、坐剤、膏薬、軟膏等を含み得る。
【０４０６】
或る特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、それを必要とする患者において、ウイルス感染症に関連する症状の治療又は予防に有用となり得る。一実施形態は、本明細書に記載される、治療的有効量のグルタチオン感受性の核酸阻害剤分子、ヌクレオチド又はヌクレオシドを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、ウイルス感染症を治療する方法に関する。或る特定の実施形態では、医薬組成物は、先に記載されるように、例えば式ＸＩ及び式ＸＩＩによって表されるグルタチオン感受性のヌクレオシド又はヌクレオチドを含む。かかるウイルス感染症の非限定的な例として、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ又はＨＩＶの感染症が挙げられる。
【０４０７】
或る特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、それを必要とする患者において、癌に関連する症状の治療又は予防に有用となり得る。一実施形態は、本明細書に記載される、治療的有効量のグルタチオン感受性核酸阻害剤分子を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、癌を治療する方法に関する。かかる癌の非限定的な例として、胆道癌、膀胱癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、脳腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、乳癌、化生性癌、子宮頸癌、子宮頸部扁平上皮癌、直腸癌、結腸直腸癌、結腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、結腸直腸腺癌、胃腸間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮内膜癌、子宮内膜間質肉腫、食道癌、食道扁平上皮癌、食道腺癌、眼内黒色腫、ブドウ膜黒色腫、胆嚢癌、胆嚢腺癌、腎細胞癌、腎明細胞癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、ウィルムス腫瘍、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、肝臓癌（liver cancer）、肝癌（liver carcinoma）、ヘパトーマ（hepatoma）、肝細胞癌、胆管細胞癌、肝芽腫、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌（ＮＰＣ）、神経芽細胞腫、中咽頭癌、口腔扁平上皮癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵管腺癌、偽乳頭状腫瘍（pseudopapillary neoplasms）、膵腺房細胞癌、前立腺癌、前立腺腺癌、皮膚癌、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、小腸癌、胃癌（stomach cancer）、胃癌（gastric carcinoma）、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮癌、又は子宮肉腫が挙げられる。典型的には、本開示は、本明細書に記載される、治療的有効量の医薬組成物を投与することによって、肝臓癌、肝癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管細胞癌及び肝芽腫を治療する方法を特徴とする。
【０４０８】
或る特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、増殖性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、眼疾患、呼吸器疾患、代謝性疾患、皮膚疾患、聴覚疾患、肝疾患、腎疾患又は感染性疾患に関連する症状の治療又は予防に有用となり得る。一実施形態は、本明細書に記載される、治療的有効量のグルタチオン感受性核酸阻害剤分子を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、増殖性疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾患、神経疾患、眼疾患、呼吸器疾患、代謝性疾患、皮膚疾患、聴覚疾患、肝疾患、腎疾患又は感染性疾患を治療する方法に関する。典型的には、疾患又は病状は肝臓の疾患である。
【０４０９】
幾つかの実施形態では、本開示は、標的遺伝子の発現を減少するのに十分な量で医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ここで、医薬組成物が本明細書に記載されるグルタチオン感受性核酸阻害剤分子と、これもまた本明細書に記載される薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、被験体において標的遺伝子の発現を減少する方法を提供する。
【０４１０】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性核酸阻害剤分子は、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子又はｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子を含む、本明細書に記載されるＲＮＡｉ阻害剤分子である。
【０４１１】
標的遺伝子は、ヒト標的遺伝子等の任意の哺乳動物に由来する標的遺伝子であってもよい。任意の遺伝子が、本方法によってサイレンシングされ得る。例示的な標的遺伝子として、限定されないが、第ＶＩＩ因子、Ｅｇ５、ＰＣＳＫ９、ＴＰＸ２、ａｐｏＢ、ＳＡＡ、ＴＴＲ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＲＳＶ、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータ−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼＩＩアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、カベオリンＩ遺伝子、ＭＩＢＩ遺伝子、ＭＴＡＩ遺伝子、Ｍ６８遺伝子、腫瘍抑制遺伝子中の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子、ＬＤＨＡ、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０４１２】
幾つかの実施形態では、グルタチオン感受性核酸阻害剤分子は標的遺伝子をサイレンシングするため、標的遺伝子の望ましくない発現を特徴とする障害を有する又はそのリスクがある被験体を治療するために使用され得る。例えば、幾つかの実施形態では、本発明のグルタチオン感受性核酸阻害剤分子は、ベータ−カテニン遺伝子をサイレンシングするため、望ましくないベータ−カテニン発現を特徴とする障害、例えば腺癌又は肝細胞癌を有する又はそのリスクがある被験体を治療するために使用され得る。
【０４１３】
或る特定の実施形態では、医薬組成物は、全身投与（静脈内又は皮下の投与等）によって、肝臓等の被験体又は生体の関連する組織又は細胞へと送達される。他の実施形態では、医薬組成物は、局所投与又は全身投与によって送達される。或る特定の実施形態では、医薬組成物は、肺送達等の肺の細胞及び組織等の関連する組織又は細胞への局所投与によって送達される。
【０４１４】
本明細書に開示される化合物の治療的有効量は、投与経路、並びに被験体の大きさ及び体重、疾患の進行又は浸潤の程度、被験体の年齢、健康状態及び性別等の患者の身体的特徴に依存し得る。本明細書で使用される治療的有効量は、治療されている被験体の疾患又は病状の症状を予防、緩和又は改善するのに有効な化合物（複数の場合もある）の量を意味する。
【０４１５】
或る特定の実施形態では、グルタチオン感受性のオリゴヌクレオチド、ヌクレオチド又はヌクレオシドは、１日当たりレシピエントの体重１キログラム当たり２０マイクログラム〜１０ミリグラム、体重１キログラム当たり１００マイクログラム〜５ミリグラム、体重１キログラム当たり０．２５ミリグラム〜２．０ミリグラム、又は体重１キログラム当たり０．５ミリグラム〜２．０ミリグラムの投薬量で投与される。
【０４１６】
本開示の医薬組成物は、毎日又は間欠的に投与されてもよい。例えば、本開示の化合物の間欠投与は、１週間当たり１日〜６日、１カ月当たり１日〜６日、１週間に１回、１週間おきに１回、１カ月に１回、１カ月おきに１回、又は１年に１回若しくは２回投与されてもよく、又は複数の毎年、毎月、毎週若しくは毎日の投薬に分けられてもよい。幾つかの実施形態では、間欠投薬は、周期的な投与を意味する場合があり（例えば、１日間、１週間、又は連続して２週間〜８週間に亘る毎日の投与の後、残りの期間は最長１週間、最長１カ月、最長２カ月、最長３カ月又は最長６カ月以上に亘って投与を行わない）、又は間欠投薬は隔日、隔週、隔月若しくは隔年の投与を意味する場合がある。
【０４１７】
本発明の治療方法のいずれかにおいて、上記化合物は、単剤療法として単独で、又は当該技術分野で知られている追加の治療法と組み合わせて被験体に投与され得る。
【実施例】
【０４１８】
実施例１．グルタチオン感受性化合物の合成
別段の指示がない限り、非加水分解の反応はいずれも、Sigma-Aldrich Corporation（ミズーリ州セントルイス）から購入したドライソルベント（dry solvents）で行われた。アミダイトを除き、同一の条件下で、改質剤としてギ酸アンモニウム（３ミリモル）を用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＺＯＲＢＡＸ（商標）Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ（カリフォルニア州サンタクララのAgilent Technologies Company）Ｃ１８、２１×５０ミリメートル（ｍｍ）、１．８ミクロンのカラム、１００×４．６ｍｍ、２．７ミクロンのカラムを使用し、６０℃で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。ＵＶトレースを２２０ナノメートル（ｎｍ）で記録し、陽イオンと陰イオンの両方のモードでＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６１４０  Ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ  ＬＣ／ＭＳ質量分析計を使用して質量スペクトルを得た。プレ充填カラム（ネブラスカ州リンカーンのTeledyne Isco, Inc.）を使用して、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（商標）Ｒｆで勾配クロマトグラフィーにより予備精製を行った。Varian, Inc.（カリフォルニア州パロアルト）のＶａｒｉａｎ  ＵＮＩＴＹ（商標）６００、５００又は４００のスペクトロメータでＮＭＲスペクトルを記録した。
【０４１９】
化合物８ｂ
下記スキーム１は、ジスルフィド架橋を含むグルタチオン感受性化合物：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２シアノエチル）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）フェニル）カルバメート（化合物８ｂ）の合成を表す。化合物８ｂのグルタチオン感受性部分は、式ＩＶｅによって包含され、より具体的には式ＩＶｅ（ｉｘ）によって表される。この化合物の作製の実施可能性を実証するため、８個のヌクレオチドを含む単純なモデルオリゴマーを合成した。下記スキームに示される手順に従って、重要中間体であるホスホロアミダイト８ｂを合成した。要約すると、商業的に入手可能なｔｅｒｔブチルチオールを活性化チオスルホネート２ｂに変換し、その後２−アミノチオフェノールと反応させてジスルフィド化合物４ｂを得た。次に、４ｂ化合物をトリホスゲンで処理して、イソシアネート中間体５ｂを生成した。予め単離せずに、イソシアネート５ｂ化合物を「ｉｎ−ｓｉｔｕ」で５’−ジメトキシトリチル（ＤＭｔｒ）保護ウリジンと反応させて、２’，３’−保護カルバメートの混合物を得た。本発明者らは、クロマトグラフィー精製の間、２’−位から３’−位へのカルバメートの移動を観察した。この望ましくない移動を回避するため、シリカゲル精製中に１％ピリジン溶液を使用した。望ましくない異性体の分離の後、化合物７ｂを、合成されたホスホロアミダイトによって典型的に使用されるホスフィチル化条件に供した。次いで、標準的なシアノエチル基含有ホスホロアミダイトの精製中に通常使用されるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって化合物８ｂを精製した。化合物８ｂは、安定性を含めて、標準的なホスホロアミダイト化合物に類似する生理化学的な挙動を示した。
【化４７】
2019526555.tif 000054
【０４２０】
Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルメタンスルホノチオエート（２ｂ）の合成
乾燥ピリジン（１００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中のｔｅｒｔ−ブチルチオール（１ｂ）（２０グラム（ｇ）、０．２２モル（ｍｏｌ）、１当量のアルデヒド（Ａｌｄ．））の溶液に、メタンスルホニルクロリド（１７．１ミリリットル（ｍＬ）、０．２２ｍｏｌ、Ａｌｄ．）を滴加した。反応物を室温で撹拌し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１；リンモリブデン酸（ＰＭＡ）で可視化、遅延係数（Ｒｆ）＝０．４４）によってモニターした。一晩の後、上記反応は完了し、反応物をＥｔ２Ｏで希釈し、次いで、４Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。水相をＥｔ２Ｏで抽出し、分離して、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロータリーエバポレータ（ロタバップ）で濃縮した後、粗生成物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）（Teledyne Isco, Inc）、３３０ｇ）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて２ｂ（２０ｇ、５３％）の無色の油を得た。陽子核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）（３００メガヘルツ（ＭＨｚ）、クロロホルム−ｄ（ＣＤＣｌ３）スペクトルは次の通りである：３．３３（ｓ，３Ｈ）、１．５８（ｓ、９Ｈ）。
【０４２１】
２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）アニリン（４ｂ）の合成
ＭｅＯＨ（２００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中のオルト−アミノベンゼンチオール（３）（１２．８ｍＬ、０．１２モル、１当量、Acros）の溶液にＳ−ｔｅｒｔ−ブチルメタンスルホノチオエート２ｂ（２０ｇ、０．１２ｍｏｌ、１当量）を添加し、反応物をＮ２のもと室温で撹拌した。反応物をＴＬＣ及び質量分析（ＭＳ）（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１；ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．６８；ＭＳ大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）［Ｍ＋１］：２１４．０（１００％））によってモニターした。２時間後、反応は完了し、ロタバップによって濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、３３０ｇ）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて４ｂ（２５ｇ、９８％）の無色の油を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）スペクトルは次の通りである：７．５０（ｄｄ，Ｊ＝７．６８，１．３８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９（ｔｄ，Ｊ＝７．４１，１．３８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６７（ｍ，２Ｈ）、１．３４（ｓ，９Ｈ）。ＭＳ：（ＡＰＣＩ＋）Ｍ＋１＝２１４．０。
【０４２２】
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２−（２−イソシアナトフェニル）ジスルファン（５ｂ）の合成
０℃の氷水浴のもと、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）アニリン（４ｂ）（１０ｇ、４６．８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にトリホスゲン（１３．９ｇ、４６．８ｍｍｏｌ、１当量、Acros）を添加し、続いてＥｔ３Ｎ（６５．３ｍＬ、０．４６ｍｏｌ、１０当量、Ａｌｄ．無水）を添加して、その反応物を０℃で１時間撹拌した。反応物をロタバップ（水浴：室温）によって濃縮し、得られた粗製固体を、次の工程で直接使用した。
【０４２３】
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル（２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）フェニル）カルバメート（７ｂ）の合成
０℃の氷水浴のもと、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の粗製１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２−（２−イソシアナトフェニル）ジスルファン（５ｂ）（粗製、２当量）の溶液に１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン６（１３ｇ、２３．７８ｍｍｏｌ、１当量、carbosynth）を添加し、反応物を１．５時間撹拌して０℃から室温にした。反応物をＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：２；ＰＭＡで可視化）によってモニターした。ＴＬＣは、生成物７ｂ（Ｒｆ＝０．３８）と並んで、７ｂ’（位置異性体、Ｒｆ＝０．１９）及び７ｂ’’（ジカルバメート、Ｒｆ＝０．６１）を示した。１．５時間後、反応物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と混合して不溶性の塩を濾過した。濾液をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物を予め平衡化したシリカゲルカラムに充填し、ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、１２０ｇ、０．５％ピリジン／ヘキサンで予め平衡化した）１によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて９４％（ＨＰＬＣ）の純度の無色で泡状の２．６ｇの７ｂ（１４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：１１．４２（ｓ，１Ｈ）、９．３８（ｓ，１Ｈ）、７．７２（ｍ，２Ｈ）、７．２４〜７．３８（ｍ，１３Ｈ）、６．８８〜６．９１（ｍ，４Ｈ）、６．０１（ｄ，Ｊ＝４．９５Ｈｚ，１Ｈ）、５．７０（ｄ，Ｊ＝５．７９Ｈｚ，１Ｈ）、５．３７（ｄｄ，Ｊ＝７．９５，２．１９Ｈｚ，１Ｈ）、５．３０（ｔ，Ｊ＝３．０９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１１．０１，５．４９Ｈｚ，１Ｈ）、３．７３（ｓ，６Ｈ）、３．２１〜３．３０（ｍ，２Ｈ）、１．２１（ｓ，９Ｈ）。ＭＳ：（ＡＰＣＩ−）Ｍ−１＝７８４．２。
【０４２４】
（工程５）：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２−シアノエチル）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）フェニル）カルバメート（８ｂ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル（２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）フェニル）カルバメート（７ｂ）（１．６ｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｎ２のもと室温で、ピリジン（０．１６ｍＬ、２．０３ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｄ．無水）及び５−（エチルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（２６５ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｄ．）を添加した。次いで、Ｏ−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（６７４．９ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１．１当量、マサチューセッツ州ウィルミントンのChemGenes Corporation）を添加した。反応物を室温で撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：２；ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．５１）でモニターした。２時間後、反応は完了し、反応物をＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物を予め平衡化したシリカゲルカラムに充填し、ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、４０ｇ、ヘキサン中１．０％Ｅｔ３Ｎで予め平衡化した）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃ（１％Ｅｔ３Ｎ）で溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせて、蒸発させて９７％（ＨＰＬＣ）の純度の無色で泡状の１．６ｇの８ｂ（７７％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：１１．４７（ｓ，１Ｈ）、９．４５（ｍ，１Ｈ）、７．７４（ｍ，２Ｈ）、７．２５〜７．３８（ｍ，１３Ｈ）、６．８７〜６．９０（ｍ，４Ｈ）、６．０２（ｍ，１Ｈ）、５．４０〜５．４９（ｍ，２Ｈ）、４．６２（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、３．７３（ｓ，６Ｈ）、３．４８〜３．６５（ｍ，４Ｈ）、３．３２（ｍ，１Ｈ）、２．７３（ｍ，１Ｈ）、２．６２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．１９（ｓ，９Ｈ）、０．９４〜１．１２（ｍ，１２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）１５０．４４，１５０．０８。ＭＳ：（ＡＰＣＩ−）Ｍ−１＝９８４．４。
【０４２５】
化合物８ｄ
下記スキーム３は、ジスルフィド架橋を含むグルタチオン感受性化合物：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）フェニル）カルバメート（化合物８ｄ）の合成を表す。化合物８ｄのグルタチオン感受性部分は式ＩＶｅによって包含され、より具体的には式ＩＶｅ（ｉｉ）によって表される。８ｂの合成について記載されるのと同様の手順に従って、ヌクレオシドホスホロアミダイト８ｄを合成した。簡潔には、商業的に入手可能な２−アミノベンジルアルコールをＢｏｃ基で一過性に保護して１ｄ−２を得た。チオ酢酸の存在下での１ｄ−２の光延反応により、チオエステル中間体１ｄ−２を生じた。ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨによるチオエステルの選択的な加水分解に続いて、Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルメタンスルホノチオエートで処理し、化合物３ｄを得た。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によるＢｏｃ脱保護の後、４ｄをイソシアネート中間体５ｄに変換し、５’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）−保護ウリジンと「ｉｎ−ｓｉｔｕ」で反応させて、２’−及び３’−保護カルバメート７ｄ及び７ｄ’の混合物を得た。カラムクロマトグラフイー分離の後、７ｄのホスフィチル化は５０％の収率で無色の泡として、求められるホスホロアミダイト８ｄを生じた。
【化４８】
2019526555.tif 000055
【０４２６】
（工程１）：ｔｅｒｔ−ブチル（２−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバメート（１ｄ−１）の合成
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の（２−アミノフェニル）メタノール（１ｄ）（１０ｇ、８１．２ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｄ．）の溶液にＢｏｃ２Ｏ（１８．６ｇ、８５．２ｍｍｏｌ、１．１当量、AK scientific）を添加した。反応物を室温で撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１、ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．２）によってモニターした。一晩の後、反応は完了し、反応物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、２２０ｇ）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて１ｄ−１の無色の泡１５ｇ（８２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）スペクトルは次の通りである：７．９０（ｄ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．３０（ｔ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｄ，Ｊ＝７．４１Ｈｚ，１Ｈ）、７．００（ｔ，Ｊ＝７．４１Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８（ｓ，２Ｈ）、１．５１（ｓ，９Ｈ）。
【０４２７】
（工程２）：Ｓ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ベンジルエタンチオエート（１ｄ−２）の合成
ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のＰｈ３Ｐ（２３．６ｇ、９０．３ｍｍｏｌ、２．１当量、Ａｌｄ．）の溶液に、０℃でジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）（１７．７ｍＬ、９０．３ｍｍｏｌ、２．１当量、Ａｌｄ．）を添加し、混合物を３０分間撹拌した。ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（２−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバメート（１ｄ−１）（９．６ｇ、４３ｍｍｏｌ、１当量）及びチオ酢酸（６．３ｍＬ、９０．３ｍｍｏｌ、２．１当量、Ａｌｄ．）の混合物を、上の反応混合物に滴加した。反応物を撹拌して室温まで温め、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１、ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．４７）によってモニターした。一晩の後、混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈して、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、２２０ｇ）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて１ｄ−２の無色の泡１０ｇ（８８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：８．６４（ｓ，１Ｈ）、７．１９〜７．３０（ｍ，３Ｈ）、７．０５（ｔ，Ｊ＝７．４１Ｈｚ，１Ｈ）、４．１０（ｓ，２Ｈ）、２．２８（ｓ，３Ｈ）、１．４１（ｓ，９Ｈ）。
【０４２８】
（工程３）：ｔｅｒｔ−ブチル（２−（メルカプトメチル）フェニル）カルバメート（１ｄ−３）の合成
ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中のＳ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ベンジルエタンチオエート（１ｄ−２）（１１．８ｇ、４１．９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にＮａＯＭｅ（２．２ｇ、４１．９ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｄ．）を添加し、反応物を室温で撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１、ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．５）によってモニターした。２時間後、反応は完了し、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨを約６に酸性化し、次いで、ロタバップによって濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濃縮後、粗生成物１ｄ−３を次の工程で直接使用した。
【０４２９】
（工程４）：２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）アニリン（３ｄ）の合成
ＭｅＯＨ（２００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中のｔｅｒｔ−ブチル（２−（メルカプトメチル）フェニル）カルバメート（１ｄ−３）（１０ｇ、４１．９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にＳ−ｔｅｒｔ−ブチルメタンスルホノチオエート２ｂ（９．２ｇ、５４．５ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加し、続いてＥｔ３Ｎ（１７．５ｍＬ、１２５．８ｍｍｏｌ、３当量、Ａｌｄ．無水）を添加した。反応物をＮ２のもと室温で撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１、ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．６）によってモニターした。２時間後、反応は完了し、ロタバップによって濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、８０ｇ）によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて３ｄの白色固体（５．８ｇ、４２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：８．６２（ｓ，１Ｈ）、７．１９〜７．３０（ｍ，３Ｈ）、７．０５（ｔ，Ｊ＝７．４１Ｈｚ，１Ｈ）、４．０２（ｓ，２Ｈ）、１．４１（ｓ，９Ｈ）、１．２１（ｓ，９Ｈ）。
【０４３０】
（工程５）：２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）アニリン（４ｄ）の合成
２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）アニリン（３ｄ）（３ｇ、９．１６ｍｍｏｌ、１当量）をＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ／４５ｍＬ）の混合溶液に添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物をロタバップ（水浴：室温）によって濃縮し、得られた粗生成物４ｄを次の工程で直接使用した。
【０４３１】
（工程６）：１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２−（２−イソシアナトベンジル）ジスルファン（５ｄ）の合成
０℃の氷水浴のもと、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）アニリン（４ｄ）（粗製物、２ｇ、８．８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にトリホスゲン（２．６ｇ、８．８ｍｍｏｌ、１当量、Acros）を添加し、続いてＥｔ３Ｎ（１２．３ｍＬ、０．０９ｍｏｌ、１０当量、Ａｌｄ．無水）を添加し、反応物を０℃で１時間撹拌した。反応物をロタバップ（水浴：室温）によって濃縮し、得られた粗製の固体５ｄを次の工程で直接使用した。
【０４３２】
（工程７）：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）フェニル）カルバメート（７ｄ）の合成
０℃の氷水浴のもと、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の粗製１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２−（２−イソシアナトベンジル）ジスルファン（５ｄ）（粗製物、２当量）の溶液に１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン６（２．４ｇ、４．３９ｍｍｏｌ、１当量、carbosynth）を添加し、反応物を撹拌して０℃から室温にした。反応物をＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：４、ＰＭＡで可視化）によってモニターした。ＴＬＣは７ｄ’（位置異性体、Ｒｆ＝０．１８）及び７ｄ’’（ジカルバメート、Ｒｆ＝０．７１）と並んで、生成物７ｄ（Ｒｆ＝０．３５）を示した。一晩の後、反応物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と混合して、不溶性塩を濾過した。濾液をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物を予め平衡化したシリカゲルカラムに充填し、ＩＳＣＯクロマトグラフィー（０．５％ピリジン／ヘキサンで予め平衡化したＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、８０ｇ）１によって精製し、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃで溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて７９．３％（ＨＰＬＣ）２、３の純度で７ｄの無色の泡３３９ｍｇ（１０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：１１．４５（ｓ，１Ｈ）、９．２７（ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｄ，Ｊ＝８．２５Ｈｚ，１Ｈ）、７．２３〜７．４０（ｍ，１３Ｈ）、６．８８〜６．９６（ｍ，４Ｈ）、６．０４（ｄ，Ｊ＝４．６５Ｈｚ，１Ｈ）、５．７２（ｄ，Ｊ＝５．４９Ｈｚ，１Ｈ）、５．３８（ｄ，Ｊ＝７．９８Ｈｚ，１Ｈ）、５．２６（ｔ，Ｊ＝５．２２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４５（ｄｄ，Ｊ＝１０．４４，５．２２Ｈｚ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，１Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、３．３２（ｍ，１Ｈ）、３．２６（ｍ，１Ｈ）、１．２１（ｓ，９Ｈ）。
【０４３３】
（工程８）：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）フェニル）カルバメート（８ｄ）の合成
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ、Ａｌｄ．無水）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）メチル）フェニル）カルバメート（７ｄ）の溶液（２３９ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１当量）に、Ｎ２１のもと室温でピリジン（０．０２ｍＬ、０．３０ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｄ．無水）及び５−（エチルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（３８．９ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１当量、Combi-Blocks）を添加した。次いで、Ｏ−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（９９．１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．１当量、ChemGenes Corporation）を添加した。反応物を室温で撹拌し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：４、ＰＭＡで可視化、Ｒｆ＝０．６９）によってモニターした。６時間後、反応物は目立ったスポットとして予想された生成物を示し、反応物をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ロタバップによる濃縮の後、粗生成物を予め平衡化したシリカゲルカラムに充填し、ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）、２４ｇ、ヘキサン中１．０％Ｅｔ３Ｎで予め平衡化した）によって精製して、ヘキサン中０％→１００％のＥｔＯＡｃ（１％Ｅｔ３Ｎ）で溶出した（ＵＶ：２５４ｎｍ、２８０ｎｍによってモニターした）。所望の画分を合わせ、蒸発させて９４．４％（ＨＰＬＣ）２の純度で８ｄの無色の泡１５１ｍｇ（５０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）スペクトルは次の通りである：１１．４９（ｓ，１Ｈ）、９．４１（ｍ，１Ｈ）、７．７１（ｍ，１Ｈ）、７．１３〜７．４０（ｍ，１４Ｈ）、６．８７〜６．９０（ｍ，４Ｈ）、６．０５（ｍ，１Ｈ）、５．４１〜５．４５（ｍ，２Ｈ）、４．６８（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｍ，１Ｈ）、４．０８（ｍ，１Ｈ）、３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、３．５２〜３．６５（ｍ，４Ｈ）、３．３４（ｍ，１Ｈ）、２．６３（ｍ，１Ｈ）、２．５３（ｍ，１Ｈ）、１．２１（ｓ，９Ｈ）、０．９６〜１．１２（ｍ，１２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）１５０．４５，１５０．３４。ＭＳ：（ＡＰＣＩ−）Ｍ−１＝９９９．４。
【０４３４】
化合物８ｈ
下記スキーム４は、ジスルフィドを含むグルタチオン感受性化合物（化合物８ｈ）：エチルＮ−（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）カルボニル）−Ｓ−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−Ｌ−システイネートの合成を表す。化合物８ｈのグルタチオン感受性部分は式ＩＶｄによって包含され、より具体的には式ＩＶｄ（ｉ）によって表される。
【化４９】
2019526555.tif 000056
【０４３５】
下記スキーム５は、スルホンを含むグルタチオン感受性化合物（化合物８ｉ）：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）−２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−（フェニルスルホンアミド）エチル）カルバメートの合成を表す。化合物８ｉのグルタチオン感受性部分は、式ＩＶｂによって包含され、より具体的には、式ＩＶｂ（ｉｉ）によって表され、式中、Ｒは水素である。
【化５０】
2019526555.tif 000057
【０４３６】
実施例２．グルタチオン感受性オリゴヌクレオチドの合成
オリゴヌクレオチドを市販のオリゴ合成装置で合成した。２’−修飾ヌクレオシドホスホロアミダイト、すなわち、２’−Ｆ及び２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドホスホロアミダイト及び２’−グルタチオン感受性ヌクレオシドホスホロアミダイトを使用して、試験化合物１及び試験化合物２（図１Ｂ）を合成した。試験化合物１及び試験化合物２は、２’−炭素に可逆的なグルタチオン感受性修飾を有する１個のヌクレオチドを含むのに対し、残りのヌクレオチドは不可逆２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅ修飾を含んだ。
【０４３７】
オリゴヌクレオチド合成を、３’から５’の方向に固体支持体上で行った。標準的なオリゴヌクレオチド合成プロトコルを利用した。カップリング時間は、活性化因子として５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ）を用いて３００秒であった。ヨウ素溶液を、亜リン酸トリエステル酸化に使用した。合成されたオリゴヌクレオチドを５５℃で１０時間に亘り、濃縮した水性アンモニウムで処理した。懸濁液中のアンモニアの除去の後、ＣＰＧを濾過によって除去した。酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＡ）の添加後に、粗製オリゴヌクレオチドを分析し、強アニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＳＡＸ−ＨＰＬＣ）によって精製した。得られたオリゴヌクレオチド溶液をプールし、濃縮して、水で脱塩した。最後に、オリゴヌクレオチドを凍結乾燥して粉末にした。
【０４３８】
２つの試験化合物の各々に対してオリゴヌクレオチドガイド鎖を合成した。一方のガイド鎖は、ヌクレオチド位置１（すなわち、５’−末端のヌクレオチド）に単一の２’−グルタチオン感受性ヌクレオシドを有した。他方のガイド鎖は、ヌクレオチド位置１４に単一の２’−グルタチオン感受性ヌクレオシドを有した。２つのガイド鎖は、標的ｍＲＮＡ配列に相補的であった同じヌクレオチド配列を含んだ。したがって、試験化合物１及び試験化合物２に対する２本のオリゴヌクレオチドガイド鎖は、２’−グルタチオン感受性ヌクレオシド部分のヌクレオチド位置を除いて同一であった。
【０４３９】
次いで、上記プロセスを繰り返して、グルタチオン感受性部分を含まない相補的なオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖を作製した。パッセンジャー鎖は、スペーサーを介してポリエチレングリコール−ＧａｌＮＡｃリガンドにホスホロアミダイトを接合することによって更に修飾された。ＧａｌＮＡｃ末端ポリエチレングリコールは、当該技術分野で知られている方法を使用して、クリック化学を介してパッセンジャー鎖中のテトラループ構造の４個のヌクレオチドの２’−炭素に接合された（例えば、国際公開第２０１６／１００４０１号を参照されたい）。
【０４４０】
２つのｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子である試験化合物１及び試験化合物２を得るため、１：１のモル比で２本の相補鎖（ガイド及びパッセンジャー）の各々を混合することにより、二重鎖を形成した。図１Ｂを参照されたい。試験化合物１は、ヌクレオチド位置１に２’−グルタチオン感受性部分を有する２２塩基対のガイド鎖及びグルタチオン感受性部分を全く含まない３６塩基対のパッセンジャー鎖を含み、ここで、パッセンジャー鎖は、ポリエチレングリコール−ＧａｌＮＡｃリガンドにそれぞれ接合される、テトラループの４個のヌクレオチドを含む（図１Ｂを参照されたい）。また、試験化合物１は、ガイド鎖の５’−末端の５’−炭素の遊離ヒドロキシル基（５’−ＯＨ）を有した。ガイド鎖のヌクレオチド位置１のグルタチオン感受性ヌクレオチドを除いて、試験化合物１の残りのヌクレオチドを２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅのいずれかによって不可逆的に修飾した。
【０４４１】
試験化合物２は、ヌクレオチド位置１４に２’−グルタチオン感受性部分を有する２２塩基対のガイド鎖、及びグルタチオン感受性部分を全く有しない３６塩基対のパッセンジャー鎖を含み、ここで、パッセンジャー鎖は、ポリエチレングリコール−ＧａｌＮＡｃリガンドにそれぞれ接合される、テトラループの４個のヌクレオチドを含む（図１Ｂを参照されたい）。ガイド鎖のヌクレオチド位置１４のグルタチオン感受性ヌクレオチドを除いて、試験化合物２中の残りのヌクレオチドを２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅのいずれかで不可逆的に修飾した。
【０４４２】
大きな２’−修飾ヌクレオシドは、一般的には、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のヌクレオチド位置１４において十分耐容性ではなく（Zheng et al., FASEB Journal, 2013, 27(2):1-10）、２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅ等の小さな機能的部分は位置１４のヌクレオシドを修飾するために好ましく使用されると報告されている。試験化合物２では、位置１４の大きな２’−グルタチオン感受性部分は細胞質基質においてグルタチオンによって切断されて、２’−炭素にはるかに小さなヒドロキシル基を生じ、これはその炭素位置のリボヌクレオチドに対する天然の置換基にもなる。したがって、グルタチオン感受性部分が試験化合物２から放出されない限り、試験化合物２にはＲＮＡ阻害活性がほとんどない又は全くないと予想された。そのため、試験化合物２はグルタチオン感受性部分のｉｎ  ｖｉｖｏ除去に対する試験を提供する。
【０４４３】
また、対照化合物中のどのヌクレオチドもグルタチオン感受性部分を含まないことを除いては、上に記載される通り、２つの対照二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子（対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂ）を作製した。図１Ａを参照されたい。対照化合物中のヌクレオチドをいずれも、（グルタチオン感受性部分で修飾された位置以外は）試験化合物と同じパターンで２’−Ｆ又は２’−ＯＭｅで不可逆的に修飾した。対照化合物Ａは、ガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドの５’−炭素の天然ホスフェート（５’−ＰＯ４２−）で合成されたのに対し、対照化合物Ｂは、ガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドの５’−炭素の遊離ヒドロキシル基（５’−ＯＨ）を含んだ。対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂのガイド鎖は、同じヌクレオチド配列を含み、したがって、試験化合物１及び試験化合物２と同じ標的ｍＲＮＡ配列を認識した。
【０４４４】
実施例３．２’−可逆的修飾ヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドの放出動態
下記のスキーム７で示されるように、２’−炭素の可逆的に修飾されたヌクレオシド（ウリジン）を含むグルタチオン感受性部分を作製した。ｐＨ７．５で５００倍過剰なグルタチオン（５ｍＭグルタチオン）を含むＰＢＳバッファー中に修飾ヌクレオシドを溶解することにより、２’−グルタチオン感受性ウリジンに関する放出研究を行った。ジスルフィド放出研究の進行をＲＰ−ＨＰＬＣによってモニターした。ＲＰ−ＨＰＬＣは、下記スキーム７に表される、中間体種である「中間体Ａ」及び「中間体Ｂ」に対応する２つの新たなピークを示した。下記スキーム７に示されるように、上記中間体種を、所望のウリジン及びベンゾチアゾロン放出生成物へと徐々に変換した。
【０４４５】
下記スキーム７に示されるように、２’−グルタチオン感受性ウリジンに関する放出機構は２段階反応によって進行する。第１段階は、グルタチオンに対する曝露後のジスルフィド交換反応であり、その反応は急速であり、３０分以内〜６０分以内のグルタチオン付加物への完全な変換をもたらす。初期のジスルフィド切断は、２つの中間体である「中間体Ａ」及び「中間体Ｂ」をもたらす。第２の工程は、ヌクレオシドからベンゾチアゾロンを放出してヌクレオシドの２’−位にヒドロキシル基を脱離する、Ｏ→Ｓアシル転位反応による急速な分子内環化である。ベンゾチアゾロンの形成に対する反応動態データは、ウリジン形成の二相性プロファイルを支持した。ベンゾチアゾロンの環化及び放出（遊離ウリジンをもたらす）に対する半減期（ｔ１／２）は、およそ４時間であった。図２を参照されたい。
【化５１】
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【０４４６】
また、放出速度は、図３に示されるように、グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド（すなわち、試験化合物２）に対して決定され、残存する試験化合物２のパーセンテージの経時変化を示す。５００当量のグルタチオン（２１ｍｇ）を、１０ｍＭリン酸バッファー（体積１０ｍＬ）中ｐＨ７．５で試験化合物２（１ｍｇ）に添加した。試験化合物２の消失速度をＲＰ−ＨＰＬＣによってモニターした。図３より明らかなように、反応は二相性である。グルタチオン感受性部分の環化及び試験化合物２からの放出に対する半減期（ｔ１／２）は、およそ６．５時間（約４００分）であった。図３を参照されたい。
【０４４７】
実施例４．試験化合物１のｉｎ  ｖｉｔｒｏの効力
マウス肝細胞
試験化合物１の標的ｍＲＮＡの発現をノックダウンする能力をｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した。上に示されるように、試験オリゴヌクレオチド及び対照オリゴヌクレオチドは同じ標的配列を認識する。製造業者のプロトコルの通り９６ウェルプレートにおいてＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）  ＲＮＡｉＭａｘ（メリーランド州ロックビルのThermo Fisher Scientific Inc.）を使用して、試験化合物１、並びに対照化合物Ａ及び対照化合物Ｂをマウス肝細胞にリバーストランスフェクトした。試験及び対照のオリゴヌクレオチドの最終濃度は１０００ｐＭ〜０．０６ｐＭの範囲であった。１２０００個の細胞／ウェルをプレートに添加した。プレートを３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間の終了時、細胞を１ウェル当たり３０μｌのＩＳＣＲＩＰＴ（商標）溶解バッファーを添加することにより溶解した。２２μｌの溶解物を新たなプレートに移し、これを使用して、製造業者のプロトコルの通りｃＤＮＡを作製した。定量的ＰＣＲは、５５℃でヒトＳＦＲ６９遺伝子（ｈＳＦＲＳ９−Ｆ５６９（ＨＥＸ））に正規化された標的配列を用いて行った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（カリフォルニア州ラホヤのGraphPad Software Inc.）を使用してグラフをプロットし、ＩＣ５０値を計算した。
【０４４８】
図４は、４８時間後の脂質トランスフェクションアッセイにおける種々の濃度の試験化合物１の効力を表す。対照化合物Ａ（ガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドに５’−天然ホスフェートを有する）は約８．７ｐＭのＩＣ５０を有したのに対し、対照化合物Ｂ（ガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドに５’−ヒドロキシルを有する）は、標的ｍＲＮＡの発現減少にほとんど効果がなく、約２４．５ｐＭのＩＣ５０を有した。試験化合物１について、ＩＣ５０は約１３．５ｐＭであった。試験化合物１のこのＩＣ５０値は、より対照化合物Ａに匹敵して、試験化合物１のガイド鎖の５’−末端ヌクレオチドの５’−ヒドロキシルが、細胞質基質中のキナーゼによってリン酸化されたことを示唆する。細胞質基質中の試験化合物１のガイド鎖のヌクレオシド位置１における２’−炭素のグルタチオン感受性部分の放出が、５’−ヒドロキシルをキナーゼリン酸化により適用可能とし、そして標的ｍＲＮＡのノックダウンに対するガイド鎖のＡｇｏ２媒介ＲＩＳＣローディングを促進するはずであることが予想される。
【０４４９】
サル肝細胞
初代サル肝細胞をLife Technologies Corporation（カリフォルニア州カールスバード）から得て、解凍し、製造業者のプロトコルの通り、ＣＯＲＮＩＮＧ（商標）  ＢＩＯＣＯＡＴ（商標）９６ウェルプレートに蒔いた。蒔いてから４時間後〜６時間後、１ウェル当たり９０μｌのウィリアムスＥインキュベーション培地で培地を置き換えた。試験化合物を１μＭの濃度で開始して１２．８ｐＭ（５倍の減少）まで段階希釈した。１０μｌの試験化合物１をＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）（Thermo Fisher Scientfic, Inc.）の不在下で各ウェルに添加した。プレートを３７℃でインキュベートし、ＲＮＡ標的のノックダウンを２４時間に試験した。２４時間の終わりに、標的ＲＮＡを抽出し、製造業者のプロトコルの通りＳＶ９６  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ウィスコンシン州マディソンのPromega）を使用して精製した。高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems Corporation）を使用してｃＤＮＡを作製した。ヒトペプチジルプロリルイソメラーゼＢ  ＰＰＩＢに正規化された標的配列を用いて６０℃で定量的ＰＣＲを行った。ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェア（GraphPad Software Inc.）を使用してグラフをプロットし、ＩＣ５０値を計算した。図５は、脂質トランスフェクション剤が全く存在しない場合の初代サル肝細胞に送達された種々の濃度の試験化合物１の２４時間における効力を示す。試験化合物１は、２４時間に１．６ｎＭのＩＣ５０を有した。
【０４５０】
実施例５．試験化合物１及び試験化合物２に関するｉｎ  ｖｉｖｏ効力及び効果の持続期間
試験化合物１及び試験化合物２を、ＰＢＳで１ｍｇ／ｋｇの希釈標準溶液に希釈した。ＰＢＳ希釈と同じ日に、ＣＤ−１雌性マウスに１ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物１、試験化合物２、又は対照ＰＢＳ溶液を単回で皮下注射した。投薬後（３日目、１０日目、２１日目及び２８日目）の動物をＣＯ２で安楽死させた後、心臓穿刺によって放血させた。肝臓の左中葉を摘除して１ｍｍ〜４ｍｍのパンチを摘除し、ドライアイス上の９６ウェルプレートに入れた。全ての試料を収集した後、ＲＮＡ及びｃＤＮＡを定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）のために作製した。全ての試料を３通り作製し、ＣＦＸ３８４  ＴＯＵＣＨ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（カリフォルニア州ヘラクレスのBioRad Laboratories, Inc.）を使用してｑＰＣＲを行った。次いで、全ての試料をＰＢＳで処理した対照動物に対して正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェアを使用してブロットした。
【０４５１】
図６は、試験化合物１のｉｎ  ｖｉｖｏ持続期間の研究を表す。１ｍｇ／ｋｇの試験化合物１の皮下注射は、３日目に標的ＲＮＡの５０％を超えるノックダウンをもたらした。１０日目に標的ＲＮＡノックダウンのレベルの増加が観察され、キナーゼリン酸化及び標的遺伝子ノックダウンのための後のＡｇｏ−２媒介ＲＩＳＣローディングにより適用可能であるオリゴヌクレオチド基質を生成する、グルタチオン感受性部分の持続放出を示唆した。これらの結果は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖のヌクレオシド位置１の２’−炭素に対してグルタチオン感受性部分を接合させることにより、細胞の細胞質基質への移動の間ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子を安定化するとともに、細胞質基質中の標的ＲＮＡの有効なノックダウンを促進することができることを示し、細胞質基質ではオリゴヌクレオチドのグルタチオン感受性部分がグルタチオンの存在下で除去される。
【０４５２】
図７は、試験化合物２のｉｎ  ｖｉｖｏ持続期間の研究を表す。上に示されるように、試験化合物２は、２’−炭素の大きな修飾を通常許容しないヌクレオチド位置である、ガイド鎖のヌクレオチド位置１４の２’−炭素においてグルタチオン感受性部分で修飾される（図１Ｂを参照）。したがって、大きなグルタチオン感受性部分が試験化合物２から放出されない限り、試験化合物２はＲＮＡノックダウン効果がほとんどない又は全くないと予想された。図７に示されるように、１ｍｇ／ｋｇの試験化合物２の皮下注射は、１０日目までの標的ＲＮＡの約５０％のノックダウンをもたらし、細胞質基質におけるグルタチオン感受性部分のｉｎ  ｖｉｖｏ持続放出が、ガイド鎖のヌクレオチド位置１４での可逆的なグルタチオン感受性部分に代えて天然２’−ＯＨを生成することを示唆した。
【図１Ａ−１】
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【図１Ａ−２】
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【図１Ｂ−１】
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【図１Ｂ−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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