(57)【要約】本発明は、抗グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）抗体およびその抗原結合性断片、ならびに肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置するためのそのような抗体またはその抗原結合性断片の使用の方法を提供する。肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置する方法であって、対象に、治療有効量の抗グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、対象への抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与の治療的効果が、対象における肺動脈の肥厚を阻害すること、対象における一回拍出量を増加させること、対象における右心室の心拍出量を増加させること、および対象の生存期間を延長し、それによって、ＰＡＨを有する対象を処置することからなる群から選択される、方法が、開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置する方法であって、
前記対象に、治療有効量の抗グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、
前記対象への前記抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与の治療的効果が、
前記対象における肺動脈の肥厚を阻害すること、
前記対象における一回拍出量を増加させること、
前記対象における右心室の心拍出量を増加させること、および
前記対象の生存期間を延長し、それによって、前記ＰＡＨを有する対象を処置すること
からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
前記対象が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象に、少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記治療剤が、抗凝血剤、利尿剤、強心性配糖体、カルシウムチャネル遮断剤、血管拡張剤、プロスタサイクリン類似体、内皮アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドペプチダーゼ阻害剤、脂質降下剤、およびトロンボキサン阻害剤からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＧＲＥＭ１の、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ２）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、またはヘパリンのうちの１つへの結合を遮断する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、３７℃において、約２７５ｎＭよりも低い結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、３７℃において、約３分を上回る解離半減期（ｔ１／２）で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｃ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、２５℃において、約２８０ｎＭよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｄ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、２５℃において、約２分を上回るｔ１／２で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｅ）２５℃での競合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される場合、約１．９ｎＭよりも低いＩＣ５０で、ＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ４への結合を遮断すること、
（ｆ）ＧＲＥＭ１によって媒介されるＢＭＰシグナル伝達の阻害を遮断し、細胞分化を促進すること、および
（ｇ）ＧＲＥＭ１のヘパリンへの結合を遮断すること
からなる群から選択される１つまたは複数の特性を呈する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＧＲＥＭ１への特異的結合に関して、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合性断片と競合し、前記ＨＣＶＲが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＧＲＥＭ１への特異的結合に関して、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片と競合し、前記ＬＣＶＲが、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択される前記重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択される前記軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、ならびに／または
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／４５８、４６６／４７４、４８２／４９０、４９８／５０６、５１４／５２２、５３０／５３８、５４６／５５４、５６２／５７０、および５７８／５８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同じ、ＧＲＥＭ１上のエピトープに結合し、前記ＨＣＶＲが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＶＲが、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年８月２９日に出願された米国仮特許出願番号第６２／３８０，５６２号に基づく優先権の利益を主張しており、その全体の内容は、参考として本明細書中に本明細書によって援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１７年８月１０日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、１１８００３＿２８８２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが１９５，９２７バイトである。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）は、肺動脈圧の持続的な増加により肺大動脈および肺小動脈の両方が損傷されることによって特徴付けられる進行性障害である。ＰＡＨは、血行動態的には、収縮期肺動脈圧が３０ｍｍ  Ｈｇよりも高いか、または平均肺動脈圧の評価が２５ｍｍ  Ｈｇよりも高く、肺毛細血管または左心房圧が、１５ｍｍ  Ｈｇまたはそれよりも低いとして、定義される。たとえば、Zaimanら、Am.  J.  Respir.  Cell  MoI.  Biol.、３３巻：４２５〜３１頁（２００５年）を参照されたい。ＰＡＨにおける持続的な血管狭窄は、構造リモデリングをもたらし、その際に、肺血管の平滑筋細胞および内皮細胞が、正常な収縮する表現型から、細胞成長およびマトリックス堆積をもたらす合成表現型への表現型転換を受ける。最も小さな血管の壁部が肥厚すると、血液と肺との間で酸素および二酸化炭素を正常に運ぶ能力が低下し、やがて、肺高血圧により、肺動脈の肥厚および血液が流れる経路の狭窄が生じる。最終的に、血管平滑筋細胞および内皮細胞の増殖により、肺脈管構造の内腔の消滅を伴う血管のリモデリングが生じる。肺高血圧を有する患者から得られた組織サンプルの組織検査では、特に、直径が１００μｍに満たない血管について、内膜肥厚、ならびに平滑筋細胞の肥大が、示される。これにより、血液が減少した内腔領域を通って押し出されるため、肺動脈圧における進行的な上昇が引き起こされる。結果として、心臓の右側は、これを補うためにより激しく働き、その負担の増加により、右心室が大きくなり、肥厚することになる。大きくなった右心室により、肺塞栓の危険性が生じるが、これは、血液が、心室および脚部にとどまりやすくなるためである。たまった血液に凝塊がプールされると、最終的にはそれが移動し、肺に留まり得る。最終的には、右心室にさらなる負荷がかかることにより、心不全が生じ、これらの患者に早期死亡が引き起こされる。
【０００４】
ＰＡＨを有する対象の処置のための標準的な治療薬は、主として、血行動態学的で、血管の調子に影響を及ぼすものであり、たとえば、プロスタサイクリン類似体、エンドセリン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、および可溶性グアニル酸シクラーゼ活性化剤／刺激剤が挙げられ、これらは、症状の緩和をもたらし、予後を改善する。しかしながら、これらの治療薬は、十分ではなく、ＰＡＨを有する患者に障害のない長期生存をもたらすような、肺脈管構造の構造的かつ機能的な完全性を再構築するものではない。
【０００５】
たとえば、形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）経路および／または骨形成タンパク質（ＢＭＰ）経路など、ＰＡＨの発症およびＰＡＨにおける構造的リモデリングをもたらし得る細胞経路が多数存在する。ＴＧＦ−β受容体スーパーファミリータンパク質ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲＬ１、もしくはＥＮＧ、またはシグナル伝達因子ＳＭＡＤ９をコードする遺伝子における変異が、遺伝的形態のＰＡＨに対する易罹患性を増加させるという発見によって、ＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーのＰＡＨにおける病原的な役割が、示唆されている。また、ＰＡＨ患者が、ＢＭＰＲ２の発現／シグナル伝達が低減されていること（Atkinsonら、Circulation.、１０５巻（１４号）：１６７２〜１６７８頁、２００２年；Alastaloら、J.  Clin.  Invest.、１２１巻：３７３５〜３７４６頁、２０１１年）、ＢＭＰＲ２の喪失がある場合、肺動脈平滑筋細胞のＴＧＦ−βの活性化が成長阻害に対して感受性でないこと（Morrellら、Circulation.、１０４巻（７号）：７９０〜７９５頁、２００１年；Yangら、Circ.  Res.、１０２巻、１２１２〜１２２１頁、２００８年）、およびＢＭＰＲ２のＢＭＰ９活性化が、前臨床ＰＡＨを好転させること（Longら、Nat  Med.、２１巻：７７７〜７８５頁、２０１５年）も示されている。ＢＭＰに対する生物学的応答は、ＢＭＰと直接的に会合し、受容体結合を阻害することができるＢＭＰアンタゴニストによって負に制御される。
【０００６】
ＢＭＰと直接的に会合し、受容体結合およびＢＭＰシグナル伝達を阻害することができる、１つのそのようなアンタゴニストは、システインノットスーパーファミリーのメンバーであるヒトグレムリン−１（ＧＲＥＭ１）であり（Hsu,  D.R.ら、１９９８年、Mol.  Cell、１巻：６７３〜６８３頁）、これは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、およびＢＭＰ７に高い親和性で結合する（Yanagitaら、（２００５年）、Cytokine  Growth  Factor  Rev、１６巻：３０９〜３１７頁）。ＧＲＥＭ１は、低酸素状態の際、マウスの肺内の小血管の壁部において、上昇していることが見出されている。グレムリン１のハプロ不全は、ＢＭＰシグナル伝達を増大させ、血管リモデリングを阻害することによる血管抵抗の低減と関連付けられている（Cahillら、（２０１２年）、Circulation、１２５巻（７号）：９２０〜３０頁）。加えて、ＧＲＥＭ１の発現は、低酸素状態下において、ヒト肺内皮細胞で増加し（Costelloら、（２００８年）、Am  J  Physiol  Lung  Cell  Mol  Physiol、２９５巻（２号）：Ｌ２７２〜８４頁）、ＧＲＥＭ１は、特発性および遺伝性のＰＡＨ患者の肺のリモデリングされた血管に発現される（Cahillら、（２０１２年）、Circulation、１２５巻（７号）：９２０〜３０頁）。
しかしながら、ＰＡＨの治療法におけるいかなる進歩があったにせよ、現在のところ、この死に至る疾患の治癒の見込みはなく、患者の大半で、右心室不全の進行が継続される。したがって、ＧＲＥＭ１を阻害することによって、ＴＧＦβのシグナル伝達を減少させ、ＢＭＰシグナル伝達を増加させるために、ＴＧＦβおよびＢＭＰ経路によって制御される血管リモデリングを標的とする、臨床上有益な方法および組成物が、当該技術分野において必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Zaimanら、Am.  J.  Respir.  Cell  MoI.  Biol.、３３巻：４２５〜３１頁（２００５年）
【非特許文献２】Atkinsonら、Circulation.、１０５巻（１４号）：１６７２〜１６７８頁、２００２年
【非特許文献３】Alastaloら、J.  Clin.  Invest.、１２１巻：３７３５〜３７４６頁、２０１１年
【非特許文献４】Morrellら、Circulation.、１０４巻（７号）：７９０〜７９５頁、２００１年
【非特許文献５】Yangら、Circ.  Res.、１０２巻、１２１２〜１２２１頁、２００８年
【非特許文献６】Longら、Nat  Med.、２１巻：７７７〜７８５頁、２０１５年
【非特許文献７】Hsu,  D.R.ら、１９９８年、Mol.  Cell、１巻：６７３〜６８３頁
【非特許文献８】Yanagitaら、（２００５年）、Cytokine  Growth  Factor  Rev、１６巻：３０９〜３１７頁
【非特許文献９】Cahillら、（２０１２年）、Circulation、１２５巻（７号）：９２０〜３０頁
【非特許文献１０】Costelloら、（２００８年）、Am  J  Physiol  Lung  Cell  Mol  Physiol、２９５巻（２号）：Ｌ２７２〜８４頁
【非特許文献１１】Cahillら、（２０１２年）、Circulation、１２５巻（７号）：９２０〜３０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、少なくとも部分的に、抗グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）抗体またはその抗原結合性断片が、肺動脈性肺高血圧の動物モデルにおいて、血管リモデリングの作用を緩和するのに有効であるという発見に基づく。
【０００９】
したがって、一態様では、本発明は、肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置するための方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、ここで、対象への抗ＧＲＥＭ１１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、対象における肺動脈の肥厚を阻害し、それによって、ＰＡＨを有する対象を処置する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置する方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、ここで、対象への抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、対象における一回拍出量を増加させ、それによって、ＰＡＨを有する対象を処置する。
【００１１】
さらに別の態様では、本発明は、肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置する方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、ここで、対象への抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、対象における右心室の心拍出量を増加させ、それによって、ＰＡＨを有する対象を処置する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置する方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、ここで、対象への抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、対象の生存期間を延長させ、それによって、ＰＡＨを有する対象を処置する。
【００１３】
一実施形態では、対象は、ヒトである。
【００１４】
一実施形態では、対象は、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有する。
【００１５】
本発明の方法は、対象に、少なくとも１つの追加の治療剤、たとえば、抗凝血剤、利尿剤、強心性配糖体、カルシウムチャネル遮断剤、血管拡張剤、プロスタサイクリン類似体、内皮アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドペプチダーゼ阻害剤、脂質降下剤、および／またはトロンボキサン阻害剤を投与することをさらに含み得る。
【００１６】
本発明において使用するための抗体またはその抗原結合性断片は、ＧＲＥＭ１の、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ２）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、またはヘパリンのうちの１つへの結合を遮断し得る。
【００１７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、３７℃において、約２７５ｎＭよりも低い結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、３７℃において、約３分を上回る解離半減期（ｔ１／２）で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｃ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、２５℃において、約２８０ｎＭよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｄ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、２５℃において、約２分を上回るｔ１／２で、ＧＲＥＭ１に結合すること、
（ｅ）２５℃での競合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される場合、約１．９ｎＭよりも低いＩＣ５０で、ＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ４への結合を遮断すること、
（ｆ）ＧＲＥＭ１によって媒介されるＢＭＰシグナル伝達の阻害を遮断し、細胞分化を促進すること、および
（ｇ）ＧＲＥＭ１のヘパリンへの結合を遮断すること
からなる群から選択される１つまたは複数の特性を呈する。
【００１８】
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＧＲＥＭ１への特異的結合に関して、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合性断片と競合し、ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１９】
さらに別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＧＲＥＭ１への特異的結合に関して、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片と競合し、ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００２０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、たとえば、抗体もしくはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、かつ／または抗体もしくはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、かつ／または抗体もしくはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【００２１】
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、ならびに／または
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【００２２】
さらに別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／４５８、４６６／４７４、４８２／４９０、４９８／５０６、５１４／５２２、５３０／５３８、５４６／５５４、５６２／５７０、および５７８／５８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００２３】
さらに別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同じ、ＧＲＥＭ１上のエピトープに結合し、ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００２４】
他の実施形態では、本発明において使用するのに好適な抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＧＲＥＭ１に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、ここで、抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと、（ｖ）１０−７またはそれよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること、（ｖｉ）ＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、またはＢＭＰ７のうちの１つへの結合を遮断すること、（ｖｉｉ）ＧＲＥＭ１によるＢＭＰシグナル伝達の阻害を遮断し、細胞分化を促進すること、ならびに（ｖｉｉｉ）ＧＲＥＭ１の、ヘパリンへの結合を遮断すること。
【００２５】
一実施形態では、本発明の方法において使用するのに好適な単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、表面プラズモン共鳴によって測定される場合、１０−７Ｍまたはそれよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合する。
【００２６】
一実施形態では、本発明の方法において使用するための、ＧＲＥＭ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つ内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む。
【００２７】
一実施形態では、本発明の方法は、ＧＲＥＭ１に結合し、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／４５８、４６６／４７４、４８２／４９０、４９８／５０６、５１４／５２、５３０／５３８、５４６／５５４、５６２／５７０、および５７８／５８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の使用を含む。
【００２８】
別の実施形態では、本発明の方法は、ＧＲＥＭ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の使用を含み、ここで、この抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと、（ｖ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、１０−７Ｍまたはそれよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること。
【００２９】
さらに別の実施形態では、本発明の方法は、ＧＲＥＭ１に結合し、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の使用を含み、ここで、ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００３０】
一実施形態では、本発明は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のＣＤＲおよび軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同じ、ヒトＧＲＥＭ１上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片の使用を含む方法であって、ＨＣＶＲが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＶＲが、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【００３１】
一実施形態では、本発明の方法は、ヒトＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、またはヘパリンのうちのいずれか１つへの結合を遮断し、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の使用を含み、ここで、ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００３２】
別の実施形態では、本発明は、ＧＲＥＭ１に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の使用を含み、ここで、この抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと、（ｖ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合、１０−７Ｍまたはそれよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること、（ｖｉ）ＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、またはＢＭＰ７のうちの１つへの結合を遮断すること、（ｖｉｉ）ＧＲＥＭ１によるＢＭＰシグナル伝達の阻害を遮断し、細胞分化を促進すること、ならびに（ｖｉｉｉ）ＧＲＥＭ１のヘパリンへの結合を遮断すること。
【００３３】
別の実施形態では、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、および５７７からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によってコードされるＨＣＶＲを含む抗体またはその断片の使用を含む方法を提供する。
【００３４】
一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、および５８５からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によってコードされるＬＣＶＲをさらに含む。
【００３５】
一実施形態では、本発明の方法は、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、３２７、３４３、３５９、３７５、３９１、４０７、４２３、４３９、４５５、４７１、４８７、５０３、５１９、５３５、５５１、５６７、および５８３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３３５、３５１、３６７、３８３、３９９、４１５、４３１、４４７、４６３、４７９、４９５、５１１、５２７、５４３、５５９、５７５、および５９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む抗体または抗体の抗原結合性断片の使用を含む。
【００３６】
別の実施形態では、本発明の方法は、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、および５７９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、３４１、３５７、３７３、３８９、４０５、４２１、４３７、４５３、４６９、４８５、５０１、５１７、５３３、５４９、５６５、および５８１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、および５８７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１、３９７、４１３、４２９、４４５、４６１、４７７、４９３、５０９、５２５、５４１、５５７、５７３、および５８９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む抗体またはその断片の使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、肺動脈性肺高血圧の慢性低酸素マウスモデルにおいて、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐの投与により、肺動脈のサイズ（断面積）および右心室の一回拍出量が、正常酸素状態のレベルの付近まで回復することを示す、グラフである。図１Ａは、肺動脈性肺高血圧の慢性低酸素マウスモデルにおける、肺動脈（ＰＡ）断面積（ＣＳＡ）に対する、ＲＥＧＮ２４７７の投与の効果を示す、グラフである。図１Ｂは、肺動脈性肺高血圧の慢性低酸素マウスモデルにおける、右心室の一回拍出量に対する、ＲＥＧＮ２４７７の投与の効果を示す、グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
発明の詳細な説明
本発明は、少なくとも部分的に、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片が、肺動脈性肺高血圧の動物モデルにおいて、血管リモデリングの作用を緩和するのに有効であるという発見に基づく。以下に詳述される説明により、ＧＲＥＭ１の活性を選択的に阻害するための抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物をどのように作製し、使用するか、ならびに肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）を有する対象を処置するための組成物、使用、および方法について開示している。
【００３９】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解することができるように、ある特定の用語を、最初に定義する。加えて、あるパラメーターの値または値の範囲に言及される場合は常に、言及された値の近傍の値および範囲もまた、本発明の一部であることを意図すると意図されることに、留意されたい。
【００４０】
「１つの（a）」および「１つの（an）」という冠詞は、１つまたは１つを上回る（すなわち、少なくとも１つの）その冠詞の文法上の目的物を指して本明細書に使用される。例として、「１つの要素」とは、１つの要素または１つを上回る要素、たとえば、複数の要素を意味する。
【００４１】
「含む」という用語は、「含むが、限定されない」という語句を意味して本明細書に使用され、また、それと互換可能に使用される。
【００４２】
「または」という用語は、文脈により別途明確に示されない限り、「および／または」という用語を意味して本明細書に使用され、また、それと互換可能に使用される。
【００４３】
数または一連の数の前にある「少なくとも」という用語は、文脈から明らかなように、「少なくとも」という用語に隣接する数、および論理的に含まれ得るすべての後続の数または整数を含むことが理解される。少なくともが、一連の数または範囲の前に存在する場合、「少なくとも」が、その一連の数または範囲内の数のそれぞれを修飾し得ることが、理解される。
【００４４】
本明細書において使用されるとき、範囲は、上限および下限の両方を含む。
【００４５】
「骨形成タンパク質」または「ＢＭＰ」という用語は、身体全体の組織構造を統合する、中枢的な形態形成シグナルとしての機能を果たす、増殖因子の群を指す。ＢＭＰは、もともとは、骨および軟骨の形成を誘導するそれらの能力によって発見されたが、現在では、胚発生の際に様々な異なる機能を有すること、身体のパターン形成および形態形成カスケードに関与すること、および器官の恒常性に必須であることが、公知である。現在までに、２０種類のＢＭＰが発見されており、そのうち、ＢＭＰ２〜ＢＭＰ７は、形質転換増殖因子ベータスーパーファミリーに属する。
【００４６】
「ＧＲＥＭ１」という用語は、システインノットスーパーファミリーのメンバーであるヒトグレムリン−１を指す。ヒトＧＲＥＭ１のアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ＿０３７５０４としてＧｅｎＢａｎｋに提供されており、本明細書においては配列番号５９４としても参照される。ＧＲＥＭ１は、本明細書において配列番号５９３として提供される核酸によってコードされ、受託番号ＮＭ＿０１３３７２としてＧｅｎＢａｎｋにおいても見出される。ＧＲＥＭ１は、染色体１５ｑ１３〜ｑ１５にマッピングされている、高度に保存された１８４個のアミノ酸のタンパク質である。このタンパク質は、シグナルペプチド（アミノ酸１〜２４）、予測グリコシル化部位（アミノ酸４２における）、システインリッチ領域、およびシステインノットモチーフ（アミノ酸９４〜１８４）を含み、その構造は、形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーのメンバーによって共有されている。ＧＲＥＭ１は、分泌型および細胞結合型（たとえば、膜結合型）の両方の形態で存在する。ＧＲＥＭ１はまた、グレムリン１、システインノットスーパーファミリー１−ＢＭＰアンタゴニスト１（ＣＫＴＳＦ１  Ｂ１）、ＤＡＮドメインファミリーメンバー２（ＤＡＮＤ２）、Ｍｏｓ形質転換細胞において下方制御されるタンパク質（ＤＲＭ）、グレムリン、ＧＲＥＭＬＩＮ、グレムリン−１前駆体、高グルコースにおいて増加しているタンパク質２（ＩＨＧ−２）、ＭＧＣ１２６６６０、増殖誘導遺伝子２タンパク質（ＰＩＧ２）、またはグレムリン１様タンパク質としても公知である。ＧＲＥＭ１は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）のアンタゴニストである。これは、ＢＭＰに結合し、ＢＭＰがそれらの受容体に結合するのを阻害する。ＧＲＥＭ１とＢＭＰとの間の相互作用は、利用可能なＢＭＰのレベルを微調整し、発生および疾患のプロセスに影響を及ぼす。ＧＲＥＭ１は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、およびＢＭＰ−７に結合し、それらを阻害し得る。
【００４７】
「肺高血圧」（「ＰＨ」）という用語は、任意の原因による肺における高い血圧を表して使用される用語である。一方で、「高血圧」または「高い血圧」という用語は、身体全体の動脈における高い血圧を指す。
【００４８】
「肺動脈性肺高血圧」（「ＰＡＨ」）という用語は、肺動脈圧の持続的な上昇によって特徴付けられる、進行性肺障害を指す。ＰＡＨを有する患者は、典型的に、２５ｍｍ  Ｈｇまたはそれよりも高い肺動脈圧を有し、肺毛細血管または左心房圧が、１５ｍｍ  Ｈｇまたはそれよりも低い。これらの血圧は、典型的に、対象において、右心カテーテル法を使用して、安静時に測定される。ＰＡＨは、処置されない場合、診断されてから２．８年以内に（平均して）死に至る。
【００４９】
世界保健機構（ＷＨＯ）は、５つのグループのＰＡＨの臨床上の分類を提供している（Simonneauら、J  Am  Coll  Cardiol.、２０１３年；６２巻（２５＿Ｓ）、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５０】
１．肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）
１．１．特発性
１．２．遺伝性
１．２．１．ＢＭＰＲ２
１．２．２．ＡＬＫ１、ＥＮＧ、ＳＭＡＤ９、ＣＡＶ１、ＫＣＮＫ３
１．２．３．未知
１．３．薬物および毒素誘導性
１．４．以下に関連するもの：
１．４．１．結合組織疾患
１．４．２．ＨＩＶ感染
１．４．３．門脈圧亢進
１．４．４．先天性心疾患
１．４．５．住血吸虫症
１’．肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）および／または肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）
１’’．新生児遷延性肺高血圧（ＰＰＨＮ）
【００５１】
２．左心疾患に起因する肺高血圧
２．１．左心室収縮不全
２．２．左心室拡張障害
２．３．弁膜疾患
２．４．先天性／後天性左心流入管／流出管閉塞および先天性心筋症
【００５２】
３．肺疾患および／または低酸素に起因する肺高血圧
３．１．慢性閉塞性肺疾患
３．２．間質性肺疾患
３．３．制限型および閉塞型のパターンが混合した他の肺疾患
３．４．睡眠時呼吸障害
３．５．肺胞性低換気障害
３．６．高所への慢性的な曝露
３．７．発生異常
【００５３】
４．慢性血栓塞栓性肺高血圧（ＣＴＥＰＨ）
【００５４】
５．不明瞭な多因子機序の肺高血圧
５．１．血液障害：慢性溶血性貧血、骨髄増殖性障害、脾臓摘出
５．２．全身性障害：サルコイドーシス、肺組織球増加症、リンパ管筋腫症
５．３．代謝障害：グリコーゲン貯蔵疾患、ゴーシェ病、甲状腺障害
５．４．その他：腫瘍による閉塞、線維性縦隔炎、透析中の慢性腎不全、部分的ＰＨ。
【００５５】
一実施形態では、本発明の方法により利益を得るであろう対象は、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有する対象である。
【００５６】
ベースライン（たとえば、診断されたとき）のＰＡＨは、たとえば、ＰＡＨを有する患者の疾患重症度の尺度であるＷＨＯ機能的クラスによって測定される場合、軽度、中等度、または重度であり得る。ＷＨＯ機能的分類は、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）のシステムの適合であり、たとえば、疾患の進行および処置に対する応答をモニタリングする際に、活動の耐容性を定性的に評価するために日常的に使用されている（Rubin、（２００４年）、Chest、１２６巻：７〜１０頁）。ＷＨＯのシステムでは、認識される機能的クラスは４つ存在する。
【００５７】
クラスＩ：身体活動の制限をもたらすことがない肺高血圧；通常の身体活動により、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸部疼痛、または失神寸前が生じない。
【００５８】
クラスＩＩ：身体活動のわずかな制限をもたらす肺高血圧；患者は、安静時には快適であり、通常の身体活動により、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸部疼痛、または失神寸前が生じる。
【００５９】
クラスＩＩＩ：著しい身体活動の制限をもたらす肺高血圧；患者は、安静時には快適であり、通常よりも少ない活動により、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸部疼痛、または失神寸前が生じる。
【００６０】
クラスＩＶ：症状を伴わずにはいかなる身体活動を行うことも不可能になる肺高血圧；患者は、右心不全の兆候を示し、呼吸困難および／または疲労が、安静時ですら存在し得、任意の身体活動によって、不快が増加される。
【００６１】
一実施形態では、本発明の方法により利益を得るであろう対象は、ベースラインにおいて、ＷＨＯのクラスＩのＰＡＨ、（たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨ）を有する対象である。別の実施形態では、本発明の方法により利益を得るであろう対象は、ベースラインにおいて、ＷＨＯのクラスＩＩのＰＡＨ（たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨ）を有する対象である。別の実施形態では、本発明の方法により利益を得るであろう対象は、ベースラインにおいて、ＷＨＯのクラスＩＩＩのＰＡＨ（たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨ）を有する対象である。
【００６２】
本明細書において使用されるとき、「対象」とは、動物、たとえば、哺乳動物、例として、霊長類（たとえば、ヒト、非ヒト霊長類、たとえば、サルおよびチンパンジー）、非霊長類（たとえば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、ウマ、およびクジラ）、または鳥類（たとえば、カモまたはガチョウ）である。
【００６３】
一実施形態では、対象は、ヒト、たとえば、本明細書において記載されるように、ＰＡＨ、たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨに関して処置もしくは評価を受けているヒト、ＰＡＨ、たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有する危険性にあるヒト、ＰＡＨ、たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有するヒト、および／またはＰＡＨ、（たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡ）に関して処置を受けているヒトである。
【００６４】
本明細書において使用されるとき、「処置すること」または「処置」という用語は、ＰＡＨ、（たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨ）に関連する１つまたは複数の症状の軽減または緩和を含むがこれらに限定されない、有益または所望される結果を指す。「処置」はまた、疾患の過程を遅延することもしくは疾患の症状の発生を低減すること、後期発症疾患の重症度を低減すること、または処置の非存在下において予測される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味し得る。たとえば、そのような疾患、障害、または状態と関連する症状の発生の低減（たとえば、その疾患もしくは障害に関して臨床上許容される規模で、少なくとも約１０％）、または症状の遅延を呈すること（たとえば、数日、数週間、数ヶ月、もしくは数年）は、有効な処置と考えられる。
【００６５】
「治療有効量」とは、本明細書において使用されるとき、ＰＡＨ、たとえば、グループＩ（ＷＨＯ）のＰＡＨを有する対象に投与した場合に、疾患の処置を達成する（たとえば、既存の疾患または疾患の１つもしくは複数の症状を減少、緩和、もしくは維持することによって）か、または疾患を管理するのに十分である、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の量を含むことが意図される。「治療有効量」は、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片がどのように投与されるか、疾患およびその重症度ならびに病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝的体質、ＰＡＨのステージ、存在する場合の先行するまたは同時の処置の種類、ならびに処置を受ける患者の他の個別の特徴に応じて、変動し得る。
【００６６】
「治療有効量」はまた、対象に投与した場合に、疾患または疾患の１つもしくは複数の症状を緩和するのに十分である、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の量を含むことが意図される。疾患を緩和することは、疾患の過程を遅延すること、または後期発症疾患の重症度を低減することを含む。
【００６７】
「治療有効量」はまた、任意の処置に該当する妥当な利益／危険性比で、なんらかの所望される局所的または全身的作用をもたらす、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の量を含む。本発明の方法において利用される抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、そのような処置に該当する妥当な利益／危険性比をもたらすのに十分な量で、投与され得る。
【００６８】
ＩＩ．本発明の方法
本発明は、肺動脈性肺高血圧を有する対象を処置するための方法を提供する。本方法は、一般に、対象に、治療有効量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。
【００６９】
本発明の一部の態様では、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与により、対象における肺動脈の肥厚が阻害される、たとえば、対象における肺動脈の、ベースライン、たとえば、診断時からのさらなる肥厚が阻害される。肺動脈の肥厚は、たとえば、胸部ＣＴ（たとえば、非強調（unenhanced）の軸方向１０ｍｍのＣＴ切片）によって判定し、これを使用して、主肺動脈の直径（ｍＰＡ）を計算することができる。正常な対象の主肺動脈の直径は、約２．４ｃｍ〜約３．０ｃｍである。肺動脈性肺高血圧を有する対象の主肺動脈の直径は、約３．１ｃｍ〜約３．８ｃｍであるか、またはそれを上回る。たとえば、Edwardsら、（１９９８年）、Br  J  Radiol、７１巻（８５０号）：１０１８〜２０頁を参照されたい。
【００７０】
本発明の他の態様では、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与により、対象における一回拍出量および／または一回拍出量対収縮終期量の比（「ＳＶ／ＥＳＶ」）が増加する。「一回拍出量」（「ＳＶ」）は、単回の収縮で、右心室または左心室から送り出される血液の量である。一回拍出量は、心エコー図による心室容積の測定値を使用して計算することができ、脈拍の終了時における心室内の血液の量（「収縮終期量」、「ＥＤＶ」と称される）を、脈拍の直前の血液の量（「拡張終期量」、「ＥＳＶ」と称される）から差し引くことによって、計算することができる。一回拍出量はまた、たとえば、右心カテーテル法中に熱希釈法によって測定される心拍出量を、心拍数で除したもの、またはＥＤＶからＥＳＶを差し引き、体表面積に関して指数化したものとして、計算することもできる。一回拍出量という用語は、心臓の２つの心室のそれぞれに適用することができる。それぞれの心室の一回拍出量は、一般に等しく、いずれも、健常な対象ではおよそ７０ｍＬである。健常な対象のＳＶ／ＥＳＶは、約０．９〜約２．２であり、ＰＡＨを有する対象のＳＶ／ＥＳＶは、約０．２〜約０．９である。たとえば、Brewisら、（２０１６年）、Int  J  Cardiol、２１８巻：２０６〜２１１頁を参照されたい。
【００７１】
本発明のさらに他の態様では、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与により、対象における右心室の心拍出量および／または心指数（ＣＩ）が増加する。「心拍出量」（「ＣＯ」）は、単位時間で心室によって送り出される血液の量として定義される。「心指数」（「ＣＩ」）は、１分間における左心室の心拍出量（ＣＯ）を、「体表面積」（「ＢＳＡ」）と関連付け、それによって、心臓の性能を個体のサイズと関連付ける、血行動態パラメーターである。心エコー技法および放射性核種撮像技法を使用して、心室サイズのリアルタイムでの変化を推測することができ、したがって、一回拍出量をコンピュータ計算することができ、これに、心拍数を乗じると、心拍出量が得られ、ＢＳＡは、たとえば、デュボイスの式（Verbraecken,  Jら、（２００６年）、Metabolism  -  Clin  Exper、５５巻（４号）：５１５〜２４頁）またはモステラーの式（Mosteller、（１９８７年）、N  Engl  J  Med、３１７巻：１０９８頁）を含む、当業者に公知の式のうちのいずれか１つを使用して計算することができる。ＰＡＨを有さない対象は、１平方メートル当たり、約４．０〜８．０Ｌ／分の範囲の心拍出量、および約２．６〜約４．２Ｌ／分の心指数を有する。ＰＡＨを有する対象は、１平方メートル当たり、約１．９〜約２．３Ｌ／分の心指数を有する（RyanおよびArcher、（２０１６年）、Circ  Res、１１５巻：１７６〜１８８頁）。
【００７２】
本発明の方法において、ＰＡＨを有する対象に、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を投与することにより、ＰＡＨを有する対象における他の血行動態測定値、たとえば、例として、右心房圧、肺動脈圧、呼気終末圧の存在下における肺毛細血管楔入圧、全身動脈圧、心拍数、肺血管抵抗、および／または全身血管抵抗を改善することができる。右心房圧、肺動脈圧、呼気終末圧の存在下における肺毛細血管楔入圧、全身動脈圧、心拍数、肺血管抵抗、および／または全身血管抵抗を測定するための方法およびデバイスは、当業者に公知である。
【００７３】
ＰＡＨを有さない対象は、約１ｍｍ  Ｈｇ〜約５ｍｍ  Ｈｇの右心房圧を有し、ＰＡＨを有する対象は、約１１ｍｍ  Ｈｇ〜約１３ｍｍ  Ｈｇの右心房圧を有する。
【００７４】
ＰＡＨを有さない対象は、約９ｍｍ  Ｈｇ〜約２０ｍｍ  Ｈｇの肺動脈圧を有し、ＰＡＨを有する対象は、約５７ｍｍ  Ｈｇ〜約６１ｍｍ  Ｈｇの肺動脈圧を有する。
【００７５】
ＰＡＨを有さない対象は、約４ｍｍ  Ｈｇ〜約１２ｍｍ  Ｈｇの呼気終末圧の存在下における肺毛細血管楔入圧を有し、ＰＡＨを有する対象は、約９ｍｍ  Ｈｇ〜約１１ｍｍ  Ｈｇの呼気終末圧の存在下における肺毛細血管楔入圧を有する。
【００７６】
ＰＡＨを有さない対象は、約９０ｍｍ  Ｈｇ〜約９６ｍｍ  Ｈｇの全身動脈圧を有し、ＰＡＨを有する対象は、約８７ｍｍ  Ｈｇ〜約９１ｍｍ  Ｈｇの全身動脈圧を有する。
【００７７】
ＰＡＨを有さない対象は、１分間当たり約６０回（ｂｐｍ）〜約９０ｂｐｍの心拍数を有し、ＰＡＨを有する対象は、約８４ｂｐｍ  ８８ｂｐｍの全身動脈圧を有する。
【００７８】
ＰＡＨを有さない対象は、約２０ダインｓ／ｃｍ５〜約１３０ダインｓ／ｃｍ５（または約０．２５〜約１．６２５ウッド単位）の肺血管抵抗を有し、ＰＡＨを有する対象は、約１２００ダインｓ／ｃｍ５〜約１３６０ダインｓ／ｃｍ５（または約１５〜約１７ウッド単位）の肺血管抵抗を有する。
【００７９】
ＰＡＨを有さない対象は、約７００ダインｓ／ｃｍ５〜約１６００ダインｓ／ｃｍ５（または約９〜約２０ウッド単位）の全身血管抵抗を有し、ＰＡＨを有する対象は、約１８４０ダインｓ／ｃｍ５〜約２０００ダインｓ／ｃｍ５（または約２３〜約２５ウッド単位）の全身血管抵抗を有する。
【００８０】
本発明の方法はまた、処置を受けている対象において、他の臨床上のパラメーター、たとえば、肺機能を改善することができる。たとえば、処置期間の最中または後に、対象は、たとえば、６分間の歩行距離（６  ＭＷＤ）もしくは活動の尺度の試験、またはＢｏｒｇ呼吸困難指標（ＢＤＩ）の低下によって測定される、運動能力または活動の増加を有し得る。
【００８１】
本発明の方法はまた、１つまたは複数の生活の質のパラメーターを、ベースラインと比べて、改善し得る。たとえば、ＳＦ−３６（登録商標）健康状態調査の機能的スケールのうちの少なくとも１つのスコアの増加、たとえば、より低いＷＨＯの機能的クラスへの移動による状態の重症度におけるベースラインと比べた改善、および／または寿命の増加がある。
【００８２】
運動能力に関する任意の好適な尺度を使用して、対象が、運動能力または活動の増加を有するかどうかを判定することができる。１つの好適な尺度は、６分間の歩行試験（６ＭＷＴ）であり、これは、対象が、６分間で、どれだけ長い距離を歩行することができるか、すなわち、６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）を測定する。別の好適な尺度は、Ｂｏｒｇ呼吸困難指標（ＢＤＩ）であり、これは、認められる呼吸困難（呼吸の難しさ）を評価するための数値スケールである。これは、６分間の歩行試験（６ＭＷＴ）の完了後の息切れの程度を測定し、０のＢＤＩは、息切れがないことを示し、１０は、最大限の息切れを示す。一実施形態では、本発明の方法は、対象に、６ＭＷＤにおけるベースラインからの、少なくとも約１０分間、たとえば、約１０分間、１５分間、２０分間、または約３０分間の増加をもたらす。別の実施形態では、６ＭＷＴの後に、本発明の方法は、対象に、ベースラインＢＤＩから、少なくとも約０．５〜約１．０指標ポイントの低下をもたらす。
【００８３】
生活の質に関する任意の好適な尺度を、使用することができる。たとえば、ＳＦ−３６（登録商標）の健康状態調査は、自己報告により次の８つの健康パラメーターを測定する複数項目のスケールを提供する：身体機能、物理的な健康上の問題に起因する機能の制限、身体の疼痛、全般的な健康状態、活力（エネルギーおよび疲労）、社会的機能、感情上の問題に起因する機能の制限、ならびに精神的な健康状態（精神的苦痛および精神的ウェルビーイング）。この調査は、身体上の構成要素の概要および精神的な構成要素の概要も提供する。一実施形態では、本発明の方法は、対象に、ＳＦ−３６の身体的な健康状態に関するパラメーター（身体的な健康状態、身体−機能、身体の疼痛、および／もしくは全般的な健康状態）のうちの少なくとも１つ、ならびに／またはＳＦ−３６の精神的な健康状態に関するパラメーター（活力、社会的機能、感情−機能、および／もしくは精神的な健康状態）のうちの少なくとも１つにおける、ベースラインと比べた改善を提供する。そのような改善は、任意の１つまたは複数のパラメーターのスケールにおける、少なくとも１ポイント、たとえば、少なくとも２ポイントまたは少なくとも３ポイントの増加の形態をとり得る。
【００８４】
本発明の方法はまた、処置を受けている対象の予後を改善することができる。たとえば、本発明の方法は、対象に、処置期間中の臨床悪化事象の可能性の低減、および／または血清中の脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）もしくはＮＴ  ｐｒｏ−ＢＮＰもしくはそのＮ末端ホルモン前駆体であるＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰの濃度のベースラインからの低減をもたらすことができ、ここで、ベースラインにおいて、対象における状態の最初の診断からの時間は、約２年を上回らない。
【００８５】
最初の診断からの時間は、様々な態様では、たとえば、約１．５年を上回らないか、約１年を上回らないか、約０．７５年を上回らないか、または約０．５年を上回らない場合がある。臨床悪化事象（ＣＷＥ）には、死亡、肺移植、ＰＡＨによる入院、心房中隔欠損作製術、さらなる肺高血圧治療の開始、またはこれらの組合せが含まれる。ＰＡＨの臨床悪化までの時間は、処置の開始からＣＷＥの最初の発生までの時間として定義される。
【００８６】
一実施形態では、本発明の方法は、ＢＮＰまたはＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰの濃度に、ベースラインから、少なくとも約１５％、たとえば、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％の低減をもたらす。
【００８７】
一実施形態では、本発明の方法は、処置期間中の、死亡、肺移植、肺動脈性肺高血圧による入院、心房中隔欠損作製術、および／またはさらなる肺高血圧治療の開始の可能性に、少なくとも約２５％、たとえば、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％＞、または少なくとも約８０％の低減をもたらす。
【００８８】
本発明の方法はまた、処置の開始時点から、たとえば、少なくとも約３０日間、ＰＡＨを有する対象の寿命を延長することができる（生存期間を延長することができる）。
【００８９】
本発明の方法において使用するための、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量は、約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ、たとえば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６９０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７９０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８９０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９９０ｍｇ、または約１０００ｍｇのそれぞれの抗体であり得る。
【００９０】
個々の用量に含まれる抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の量は、患者の体重１キログラム当たりの抗体のミリグラムという単位（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）で表すことができる。たとえば、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、約０．０００１〜約５０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ（たとえば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１２．０ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１３．０ｍｇ／ｋｇ、１３．５ｍｇ／ｋｇ、１４．０ｍｇ／ｋｇ、１４．５ｍｇ／ｋｇ、１５．０ｍｇ／ｋｇ、１５．５ｍｇ／ｋｇ、１６．０ｍｇ／ｋｇ、１６．５ｍｇ／ｋｇ、１７．０ｍｇ／ｋｇ、１７．５ｍｇ／ｋｇ、１８．０ｍｇ／ｋｇ、１８．５ｍｇ／ｋｇ、１９．０ｍｇ／ｋｇ、１９．５ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／ｋｇなど）の用量で、患者に投与され得る。
【００９１】
複数回の用量の抗ＧＲＥＭ１抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗ＧＲＥＭ１抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物は、既定の時間過程にわたって、対象に投与され得る。本発明のこの態様による方法は、対象に、複数回の用量の本発明の活性成分を、逐次的に投与することを含む。本明細書において使用されるとき、「逐次的に投与すること」とは、それぞれの用量の活性成分が、異なる時点で、たとえば、所定の間隔（たとえば、数時間、数日間、数週間、または数ヶ月間）で離間した異なる日に、対象に投与されることを意味する。本発明は、患者に、単一の初回用量の活性成分、その後に１回または複数回の二次用量の活性成分、その後に任意選択で１回または複数回の三次用量の活性成分を逐次的に投与することを含む方法を含む。
【００９２】
「初回用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本発明の抗ＧＲＥＭ１抗体もしくはその抗原結合性断片または組合せ療法の投与の時間的な順序を指す。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも称される）であり、「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり、「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回用量、二次用量、および三次用量は、すべて、同じ量の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を含んでもよいが、投与の頻度に関して、互いに異なってもよい。ある特定の実施形態では、しかしながら、初回用量、二次用量、および／または三次用量に含まれる抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の量は、処置の過程中、互いに変動する（たとえば、適宜、上方または下方調節される）。ある特定の実施形態では、２回またはそれよりも多い（たとえば、２回、３回、４回、または５回）用量が、「負荷用量」として、処置レジメンの開始時に投与され、続いて、より低い頻度基準で投与される後続用量（たとえば、「維持用量」）が投与される。
【００９３】
本発明のある特定の例示的な実施形態では、それぞれの二次用量および／または三次用量は、直前の用量の１〜２６（たとえば、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３、２３．５、２４、２４．５、２５、２５．５、２６、２６．５、またはそれよりも長い）週間後に投与される。「直前の用量」という語句は、本明細書において使用されるとき、複数回投与の順序において、他の用量を挟むことなく、順序における直後の用量の投与の前に患者に投与される、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の用量を意味する。
【００９４】
本発明のこの態様による方法は、患者に、任意の回数の二次用量および／または三次用量を投与することを含み得る。たとえば、ある特定の実施形態では、単回の二次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２回またはそれよりも多い（たとえば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはそれよりも多い）二次用量が、患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単回の三次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２回またはそれよりも多い（たとえば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはそれよりも多い）三次用量が、患者に投与される。
【００９５】
複数回の二次用量を含む実施形態では、それぞれの二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与され得る。たとえば、それぞれの二次用量は、直前の用量の１〜２週間後、または１〜２ヶ月後に患者に投与され得る。同様に、複数回の三次用量を含む実施形態では、それぞれの三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与され得る。たとえば、それぞれの三次用量は、直前の用量の２〜１２週間後に患者に投与され得る。本発明のある特定の実施形態では、二次用量および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与の頻度はまた、処置の過程中に、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師によって調節され得る。
【００９６】
本発明の一部の実施形態では、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）投与され得る。本発明の他の実施形態では、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与されてもよい。
【００９７】
対象に、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片、および少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含む、本発明の組合せ方法では、抗体および追加の治療剤は、たとえば、単一の治療的剤形（dosage）で、または同時もしくは互いに約５分未満以内に投与される２つの別個の剤形で、同時または実質的に同時に対象に投与されてもよい。あるいは、抗体および追加の治療剤は、たとえば、約５分を上回って、互いに時間的に離間した別個の治療的剤形で、逐次的に対象に投与されてもよい。
【００９８】
したがって、一実施形態では、本発明の方法は、抗凝血剤、利尿剤、強心性配糖体、カルシウムチャネル遮断剤、血管拡張剤、プロスタサイクリン類似体、内皮アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドペプチダーゼ阻害剤、脂質降下剤、およびトロンボキサン阻害剤からなる群から選択される、治療有効量の少なくとも１つの治療剤を投与することをさらに含む。一実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の、少なくとも１つまたは複数の追加の治療抗体（単数または複数）またはその抗原結合性断片（単数または複数）を投与することをさらに含む。一実施形態では、１つまたは複数の追加の抗体（単数または複数）は、抗Ｇｒｅｍ  １抗体（単数または複数）、抗ＰＤＧＦＲβ抗体（単数または複数）、抗ＴＬＲ４抗体（単数または複数）、抗ＴＬＲ２抗体（単数または複数）、抗ＥＤＮ１抗体（単数または複数）、および抗ＡＳＩＣ１抗体（単数または複数）からなる群から選択される。
【００９９】
好適な抗凝血剤の例としては、たとえば、増加した血栓症および血栓塞栓症の危険性を有する肺高血圧を有する患者の処置において有用なワルファリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
好適なカルシウムチャネル遮断剤の例としては、ジルチアゼム、フェロジピン、アムロジピン、およびニフェジピンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
好適な血管拡張剤としては、たとえば、プロスタサイクリン、エポプロステノール、トレプロスチニル、および一酸化窒素（ＮＯ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
好適な例示的なホスホジエステラーゼ阻害剤としては、特に、ホスホ−ジエステラーゼＶ阻害剤、たとえば、例として、タダラフィル、シルデナフィル、およびバルデナフィルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
好適なエンドセリンアンタゴニストの例としては、たとえば、ボセンタンおよびシタキセンタンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
好適なプロスタサイクリン類似体としては、たとえば、イロメジン、トレプロスチニル、およびエポプロステノールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
好適な脂質降下剤としては、たとえば、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、たとえば、シンバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、イタバスタチン、フルバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、ＺＤ−４５２２、およびセリバスタチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
本発明の組合せ療法において使用するのに好適な利尿剤としては、たとえば、クロルサリドン、インダパミド、ベンドロフルメチアジド、メトラゾン、シクロペンチアジド、ポリチアジド、メフルシド、キシマピド（ximapid）、クロロチアジド、およびヒドロクロロチアジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
他の治療剤の例としては、たとえば、ＡＣＥ阻害剤、たとえば、エナラプリル、ラミプリル、カプトプリル、シラザプリル、トランドラプリル、フォシノプリル、キナプリル、モエキシプリル、リシノプリル、およびペリンドプリル、またはＡＴＩＩ阻害剤、たとえば、ロサルタン、カンデサルタン、イルベサルタン、エンブサルタン（embusartan）、バルサルタン、およびテルミサルタン、またはイロプロスト、ベタプロスト（betaprost）、Ｌ−アルギニン、オマパトリラト、酸素、ならびに／またはジゴキシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
本発明の方法はまた、キナーゼ阻害剤（たとえば、ＢＭＳ−３５４８２５、カネルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ロナファーニブ、ペガプタニブ、ペリチニブ、セマキサニブ、タンデュチニブ、チピファルニブ、バタラニブ、ロニダミン、ファスジル、レフルノミド、ボルテゾミブ、イマチニブ、エルロチニブ、およびグリベック）、ならびに／またはエラスターゼ阻害剤の組合せ使用を含み得る。
【０１０９】
追加の治療上活性な成分は、本発明の抗ＧＲＥＭ１抗体の投与の前に、対象に投与され得る。たとえば、第１の成分が、第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与される場合、第１の成分は、第２の成分の「前に」投与されると考えることができる。他の実施形態では、追加の治療上活性な成分は、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与の後に、対象に投与され得る。たとえば、第１の成分が、第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与される場合、第１の成分は、第２の成分の「後に」投与されると考えることができる。
【０１１０】
さらに他の実施形態では、追加の治療上活性な成分は、本発明の抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与と同時に、対象に投与され得る。本発明の目的で、「同時の」投与には、たとえば、単一剤形または互いに約３０分以内もしくはそれよりも短い時間で対象に投与される別個の剤形での、対象への抗ＧＲＥＭ１抗体および追加の治療上活性な成分の投与が含まれる。別個の剤形で投与される場合、それぞれの剤形は、同じ経路を介して投与されてもよく（たとえば、抗ＧＲＥＭ１抗体および追加の治療上活性な成分の両方が、静脈内、皮下、硝子体内などに投与され得る）、あるいは、それぞれの剤形が、異なる経路を介して投与されてもよい（たとえば、抗ＧＲＥＭ１抗体は、局所的に（たとえば、硝子体内に）投与され得、追加の治療上活性な成分は、全身的に投与され得る）。いずれの事象においても、単一の剤形、同じ経路による別個の剤形、または異なる経路による別個の剤形で成分を投与することは、すべてが、本開示の目的で、「同時投与」と考えられる。本開示の目的で、追加の治療上活性な成分の投与の「前」、「それと同時」、または「その後」（これらの用語は本明細書において上記に定義されている）の抗ＧＲＥＭ１抗体の投与は、追加の治療上活性な成分「と組み合わせた」抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片の投与と考えられる）。
【０１１１】
ＩＩＩ．本発明の方法において使用するのに好適な結合性タンパク質
本発明の方法において使用するのに好適な抗グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）結合性タンパク質は、たとえば、米国特許公開第２０１６／００２４１９５号に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１２】
一実施形態では、本発明において使用するのに好適なＧＲＥＭ１結合性タンパク質は、抗原特異的結合性タンパク質である。
【０１１３】
本明細書において使用されるとき、「抗原特異的結合性タンパク質」という表現は、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つのドメインを含むタンパク質を意味する。抗原特異的結合性タンパク質の例示的なカテゴリーとしては、抗体、抗体の抗原結合性部分、特定の抗原と特異的に相互作用するペプチド（たとえば、ペプチボディ）、特定の抗原と特異的に相互作用する受容体分子、および特定の抗原に特異的に結合する受容体のリガンド結合性部分を含むタンパク質が挙げられる。
【０１１４】
したがって、本発明は、ＧＲＥＭ１に特異的に結合する抗原特異的結合性タンパク質、すなわち、「ＧＲＥＭ１特異的結合性タンパク質」の使用を含む。
【０１１５】
一実施形態では、本発明の方法において使用するための抗原特異的結合性タンパク質は、抗体または抗体の抗原結合性断片を含み得るかまたはそれからなり得る。
【０１１６】
一実施形態では、本発明において使用するためのＧＲＥＭ１特異的結合性タンパク質は、配列番号５９４または配列番号５９５のＧＲＥＭ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体である。
【０１１７】
「抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、４つのポリペプチド鎖、すなわち、２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）がジスルフィド結合によって相互接続されたものから構成される免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその多量体（たとえば、ＩｇＭ）、またはその抗原結合性断片を指すことが意図される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）ならびに重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインから構成される）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに分割することができ、そこには、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される保存性の高い領域が点在している。ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端に、次の順序で配置される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明のある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合性断片）のＦＲは、ヒト生殖細胞系列配列と同一であってもよく、または天然もしくは人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸のコンセンサス配列は、２つまたはそれよりも多くのＣＤＲを並べた分析に基づいて定義され得る。
【０１１８】
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定する方法および技法は、当該技術分野において周知であり、本明細書において開示される指定された重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および／または軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列内のＣＤＲを特定するために使用することができる。ＣＤＲの境界部を特定するために使用することができる例示的な従来方法としては、たとえば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、およびＡｂＭの定義が挙げられる。一般的に述べると、Ｋａｂａｔの定義は、配列の変動性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭの定義は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのアプローチの間の折衷案である。たとえば、Kabat、「Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest」、National  Institutes  of  Health,  Bethesda,  Md.、（１９９１年）、Al-Lazikaniら（１９９７年）、J.  Mol.  Biol.、２７３巻：９２７〜９４８頁；およびMartinら（１９８９年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８６巻：９２６８〜９２７２頁を参照されたい。公的データベースもまた、抗体内のＣＤＲ配列を特定するために利用可能である。
【０１１９】
１つもしくは複数のＣＤＲの残基の置換または１つもしくは複数のＣＤＲの省略もまた、可能である。結合のために１つまたは２つのＣＤＲを省略することができる抗体が、科学文献に記載されている。Padlanら（FASEB  J.、１９９５年、９巻：１３３〜１３９頁）では、公開されている結晶構造に基づいて抗体とそれらの抗原との間の接触領域を分析しており、ＣＤＲ残基のうちの約５分の１から３分の１のみが、実際に抗原と接触すると結論付けている。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を有さなかった抗体を多数発見している（Vajdosら、２００２年、J  Mol  Biol、３２０巻：４１５〜４２８頁もまた参照されたい）。
【０１２０】
抗原と接触しないＣＤＲ残基は、これまでの研究に基づいて、分子モデリングによって、および／または経験的に、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲには含まれないＫａｂａｔのＣＤＲの領域から、特定され得る（たとえば、ＣＤＲＨ２の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、必要でないことが多い）。ＣＤＲまたはその残基が省略される場合、それは、通常、別のヒト抗体配列またはそのような配列のコンセンサスにおいて対応する位置を占有しているアミノ酸と置換される。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。経験的な置換は、保存的置換であっても非保存的置換であってもよい。
【０１２１】
本明細書において開示される方法において使用するための完全ヒト抗ＧＲＥＭ１モノクローナル抗体は、対応する生殖細胞系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に、１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含み得る。そのような変異は、本明細書において開示されるアミノ酸配列を、たとえば、公的な抗体配列のデータベースから入手可能な生殖細胞系列配列と比較することによって、容易に確認することができる。本発明は、本明細書において開示されるアミノ酸配列のうちのいずれかに由来する、抗体およびその抗原結合性断片を含み、ここで、１つまたは複数のフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸が、抗体が由来する生殖細胞系列配列の対応する残基、または別のヒト生殖細胞系列配列の対応する残基、または対応する生殖細胞系列の残基の保存的アミノ酸置換に、変異されている（そのような配列の変化は、本明細書において集合的に「生殖細胞系列変異」と称される）。当業者であれば、本明細書において開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つまたは複数の個々の生殖細胞系列変異またはその組合せを含む多数の抗体および抗原結合性断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基は、すべてが、抗体が由来するもともとの生殖細胞系列配列において見出される残基に逆変異されている。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、もともとの生殖細胞系列配列に逆変異され、たとえば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内には、変異した残基しか見出されないか、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内には、変異した残基しか見出されない。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲの残基のうちの１つまたは複数は、異なる生殖細胞系列配列（すなわち、抗体がもともと由来する生殖細胞系列配列とは異なる生殖細胞系列配列）の対応する残基に変異されている。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つまたはそれよりも多い生殖細胞系列変異の任意の組合せを含み得、ここで、たとえば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖細胞系列配列の対応する残基に変異されているが、もともとの生殖細胞系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖細胞系列配列の対応する残基に変異されている。１つまたは複数の生殖細胞系列変異を含む抗体および抗原結合性断片は、得られた後、１つまたは複数の所望される特性、たとえば、結合特異性の改善、結合親和性の増加、アンタゴニスト性またはアゴニスト性の生物学的特性の改善または強化（事例に応じて）、免疫原性の低減などに関して、容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合性断片は、本発明に包含される。
【０１２２】
本発明はまた、１つまたは複数の保存的置換を有する本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかのバリアントを含む、完全ヒト抗ＧＲＥＭ１モノクローナル抗体の使用も含む。たとえば、本発明は、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、たとえば、１０個またはそれよりも少ない、８個またはそれよりも少ない、６個またはそれよりも少ない、４個またはそれよりも少ないなどの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＧＲＥＭ１抗体を含む。
【０１２３】
「ヒト抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のｍＡｂは、たとえば、ＣＤＲおよび具体的にはＣＤＲ３に、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的変異生成によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異によって、変異が導入されている）。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、別の哺乳動物種（たとえば、マウス）の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列にグラフトされているｍＡｂを含むことは意図されない。
【０１２４】
「特異的に結合する」または「に特異的に結合する」などの用語は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理学的条件下において比較的安定である、抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍまたはそれよりも低い平衡解離定数によって特徴付けることができる（たとえば、より低いＫＤは、より強固な結合を表す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを判定するための方法は、当該技術分野において周知であり、たとえば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが含まれる。本明細書において使用するのに好適なヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合する抗体は、表面プラズモン共鳴、たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって特定されている。さらに、ＧＲＥＭ１における１つのドメインおよび１つもしくは複数の追加の抗原に結合する多重特異性抗体、またはＧＲＥＭ１の２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体もなお、本明細書において使用されるとき、「特異的に結合する」抗体と考えられる。
【０１２５】
「高親和性抗体」という用語は、表面プラズモン共鳴、たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定される場合、ＧＲＥＭ１に対して、少なくとも１０−７Ｍ、好ましくは１０−８Ｍ、より好ましくは１０−９Ｍ、さらにより好ましくは１０−１０Ｍ、さらにより好ましくは１０”１１ＭのＫＤとして表される結合親和性を有するｍＡｂを指す。
【０１２６】
「遅い解離速度」、「Ｋｏｆｆ」、または「ｋｄ」という用語は、表面プラズモン共鳴、たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって判定される場合、１×１０−３  ｓ−１またはそれよりも低い、好ましくは１×１０−４  ｓ−１またはそれよりも低い速度定数で、ＧＲＥＭ１から解離する抗体を意味する。
【０１２７】
抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、本明細書において使用されるとき、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素反応により得ることができる、合成または遺伝子工学的操作を加えたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書において使用されるとき、ＧＲＥＭ１に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。
【０１２８】
本発明の方法の特定の実施形態では、抗体または抗体断片は、治療的部分にコンジュゲートされ得（「イムノコンジュゲート」）、たとえば、抗生物質、第２の抗ＧＲＥＭ１抗体、またはサイトカイン、たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、もしくはＴＧＦ−βに対する抗体、またはＰＡＨを処置するための任意の他の治療的部分に、コンジュゲートされ得る。
【０１２９】
「単離された抗体」とは、本明細書において使用されるとき、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことが意図され、たとえば、ヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合する単離された抗体またはその断片は、ＧＲＥＭ１以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。
【０１３０】
本明細書において使用されるとき、「遮断抗体」または「中和抗体」（または「ＧＲＥＭ１活性を中和する抗体」）は、ＧＲＥＭ１への結合により、ＧＲＥＭ１の少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす、抗体を指すことが意図される。ＧＲＥＭ１の生物学的活性のこの阻害は、当該技術分野において公知の複数の標準的なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ（たとえば、本明細書において記載される中和アッセイ）またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（たとえば、本明細書において記載される抗体のうちの１つもしくは複数を投与した後のＧＲＥＭ１活性からの保護を考察する動物モデル）の１つまたは複数により、ＧＲＥＭ１の生物学的活性の１つまたは複数の指標を測定することによって評価することができる。
【０１３１】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書において使用されるとき、たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、リアルタイムでの生体分子の相互作用の分析を可能にする、光学的現象を指す。
【０１３２】
「ＫＤ」という用語は、本明細書において使用されるとき、特定の抗体−抗原の相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
【０１３３】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域内の特定の抗原結合部位と相互作用する、抗原性決定基を指す。単一の抗原は、１つを上回るエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体が、抗原上の異なる領域に結合し得、異なる生物学的作用を有し得る。「エピトープ」という用語はまた、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。これは、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義され得る。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体構造的であってもよく、すなわち、非線形のアミノ酸から構成されてもよい。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基など、分子の化学的に活性な表面分類（surface  grouping）である決定基を含んでもよく、ある特定の実施形態では、特定の三次元構造特徴および／または特定の電荷特徴を有し得る。
【０１３４】
核酸またはその断片に言及する場合の「実質的な同一性」または「実質的に同一」という用語は、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を用いて、別の核酸（またはその相補鎖）と最適にアライメントしたときに、配列同一性に関する任意の周知のアルゴリズム、たとえば、以下に考察されるＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰによって測定される場合、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％に、ヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対して実質的な同一性を有する核酸分子は、ある特定の事例では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じかまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
【０１３５】
ポリペプチドに適用されるとき、「実質的な類似性」または「実質的に類似」という用語は、２つのペプチド配列が、たとえば、デフォルトのギャップ加重を使用してＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによって最適にアライメントした場合に、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換により異なっている。
【０１３６】
「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が、化学的特性（たとえば、電荷または疎水性）が類似の側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つまたはそれよりも多くのアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なっている場合には、類似性のパーセントまたは程度は、置換の保存的性質に関して補正するように、上方調節され得る。この調節を行うための手段は、当業者に周知である。たとえば、Pearson、（１９９４年）、Methods  Mol.  Biol.、２４巻：３０７〜３３１頁を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換の群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換は、参照により本明細書に組み込まれるGonnetら、（１９９２年）、Science、２５６巻：１４４３〜４５頁に開示されている、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中等度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負ではない値を有する任意の変化である。
【０１３７】
ポリペプチドの配列類似性は、典型的に、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含め、様々な置換、欠失、および他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して、類似の配列を対応させる。たとえば、ＧＣＧソフトウェアは、ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含み、これらのプログラムをデフォルトのパラメーターで使用して、緊密に関連するポリペプチド、たとえば、異なる生物種に由来する同種ポリペプチド間または野生型タンパク質とその変異型タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を判定することができる。たとえば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムであるＦＡＳＴＡを、デフォルトまたは推奨されるパラメーターで使用して、比較することができる。ＦＡＳＴＡ（たとえば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）により、問い合わせ配列と検索配列との間で最も良好にオーバーラップする領域のアライメントおよび配列同一性パーセントが得られる（Pearson、（２０００年）、上記）。本発明の配列を、異なる生物に由来する多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮをデフォルトパラメーターで使用することである。たとえば、Altschulら、（１９９０年）、J.  Mol.  Biol.、２１５巻：４０３〜４１０頁および（１９９７年）、Nucleic  Acids  Res.、２５巻：３３８９〜３４０２頁を参照されたく、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３８】
特定の実施形態では、本発明の方法において使用するための抗体または抗体断片は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよく、または１つを上回る標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含んでもよい。本発明の状況において使用することができる例示的な二重特異性抗体の形式は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用を伴い、ここで、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の相違により、この二重特異性抗体の、プロテインＡへの結合は、アミノ酸の相違が欠如している二重特異性抗体と比較して、低減される。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡへの結合を低減または無効にする変異、たとえば、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付けによるものであり、ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）を含む。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。第２のＣＨ３内に見出され得るさらなる修飾としては、ｌｇＧ１  ｍＡｂの事例ではＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ｌｇＧ２  ｍＡｂの事例ではＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにｌｇＧ４  ｍＡｂの事例ではＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上述の二重特異性抗体の形式における変化形は、本発明の範囲内であることが企図される。
【０１３９】
別途具体的に示されない限り、「抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその抗原結合性断片を包含することを理解されたい。抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、本明細書において使用されるとき、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素反応により得ることができる、合成または遺伝子工学的操作を加えたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書において使用されるとき、ヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含む断片、または単離されたＣＤＲを挙げることができる。抗体の抗原結合性断片は、任意の好適な標準的技法、たとえば、タンパク質分解消化または抗体の可変ドメインおよび（任意選択で）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子工学的操作技法を使用して、たとえば、完全抗体分子から導出され得る。そのようなＤＮＡは、公知であり、かつ／またはたとえば商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（たとえば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手することができるか、もしくは合成することができる。ＤＮＡを、シークエンシングし、化学的にかまたは分子生物学的技法を使用して操作して、たとえば、１つまたは複数の可変ドメインおよび／または定常ドメインを、好適な構成に配置するか、またはコドンを導入し、システイン残基を作成し、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失するなどしてもよい。
【０１４０】
抗原結合性断片の非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小限の認識単位（たとえば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、たとえば、ＣＤＲ３ペプチド）または構造制限（constrained）ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の工学的操作を加えた分子、たとえば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（たとえば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインもまた、本明細書において使用されるとき、「抗原結合性断片」という表現に包含される。
【０１４１】
抗体の抗原結合性断片は、典型的に、少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってよく、一般に、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接するかまたはそれとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、互いに対して、任意の好適な配置に位置され得る。たとえば、可変領域は、二量体であり得、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬ、またはＶＬ−ＶＬの二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを含んでもよい。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合性断片内に見出され得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的で例示的な構成としては、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−Ｃｈ２、（Ｖ）ＶＨ−Ｃｈ１−Ｃｈ２−Ｃｈ３、（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上記に列挙された例示的な構成のうちのいずれかを含め、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれの構成においても、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接的に連結され得るか、または完全もしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって連結され得る。ヒンジ領域は、少なくとも２個（たとえば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個、またはそれよりも多い）アミノ酸からなり得、これにより、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間に可動性または半可動性の連結がもたらされる。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いにおよび／または１つもしくは複数の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと非共有結合により会合した（たとえば、ジスルフィド結合による）、上記に列挙された可変ドメインおよび定常ドメインの構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
【０１４３】
完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異性または多重特異性（たとえば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合性断片は、典型的に、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含むことになり、ここで、それぞれの可変ドメインは、別個の抗原、または同じ抗原上の異なるエピトープに、特異的に結合することができる。本明細書において開示される例示的な二重特異性抗体形式を含め、いずれの多重特異性抗体形式も、当該技術分野において利用可能な日常的な技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合性断片の状況において使用するために適合され得る。
【０１４４】
本発明において使用するための抗ヒトＧＲＥＭ１抗体および抗体断片は、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるが、ヒトＧＲＥＭ１に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較した場合に、１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体のものと本質的に同等な生物学的活性を呈する。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示される配列と比較した場合に、１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と本質的に生物学的に同等である抗体または抗体断片をコードする、配列を包含する。
【０１４５】
２つの抗原結合性タンパク質または抗体は、たとえば、単回用量または複数回用量のいずれかで、類似の実験条件下において、同じモル用量で投与された場合に、吸収の速度および程度に有意差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物であれば、生物学的に同等であると考えられる。一部の抗体は、吸収の程度は同等であるが吸収の速度は同等ではなく、それでも、吸収の速度におけるそのような差が意図したものであり、表示に反映されており、たとえば、慢性的な使用時に、有効な体内薬物濃度の達成にとって必須ではなく、研究される特定の薬物製品にとって医薬上重要でないと考えられるために、依然として生物学的に同等であると考えることができる場合に、同等物または薬学的代替物と考えられるであろう。
【０１４６】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらの安全性、純度、および効力に臨床的に意味のある差がない場合に、生物学的に同等である。
【０１４７】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、参照製品と生物学的製品との間で１回または複数回の切り替えを行わずに継続される治療法と比較して、免疫原性における臨床上有意な変化を含め、悪影響の危険性の増加または有効性の減少が予測されることなく、患者にそのような切り替えを行うことができる場合、生物学的に同等である。
【０１４８】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、両方が、使用の条件（単数または複数）に対して、共通の作用機序（単数または複数）によって、そのような作用機序が公知である程度で作用する場合、生物学的に同等である。
【０１４９】
生物学的同等性は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法によって実証され得る。生物学的同等性の尺度としては、たとえば、（ａ）血液、血漿、血清、または他の体液中の抗体またはその代謝産物の濃度を時間の関数として測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験、（ｂ）ヒトｉｎ  ｖｉｖｏバイオアベイラビリティデータと相関付けられており、それを妥当に予測する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的作用を時間の関数として測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験ならびに（ｄ）抗体の安全性、有効性、またはバイオアベイラビリティもしくは生物学的同等性を構築する、十分に管理された臨床試験が挙げられる。
【０１５０】
本発明の抗体の生物学的に同等なバリアントは、たとえば、残基もしくは配列の様々な置換を行うこと、または生物学的活性に必要でない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失させることによって、構築することができる。たとえば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を、欠失させるか、または他のアミノ酸と置き換えて、再生時の不必要または不正な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。別の状況では、生物学的に同等な抗体には、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、たとえば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体バリアントが含まれ得る。
【０１５１】
本発明のある特定の実施形態によると、本発明の方法において使用するための抗ＧＲＥＭ１抗体は、たとえば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、抗体のＦｃＲｎ受容体への結合を強化または減少させる、１つまたは複数の変異を含むＦｃドメインを含む。たとえば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に変異を含む抗ＧＲＥＭ１抗体を含み、ここで、この変異は、酸性環境において（たとえば、ｐＨが、約５．５〜約６．０の範囲であるエンドソームにおいて）、ＦｃドメインのＦｃＲｎに対する親和性を増加させる。そのような変異は、動物に投与される場合、抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。そのようなＦｃ修飾の非限定的な例としては、たとえば、２５０位（たとえば、ＥもしくはＱ）における修飾；２５０位および４２８位（たとえば、ＬもしくはＦ）；２５２位（たとえば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷもしくはＴ）、２５４位（たとえば、ＳもしくはＴ）、および２５６位（たとえば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤもしくはＴ）；または４２８位および／もしくは４３３位（たとえば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱもしくはＫ）および／もしくは４３４位（たとえば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、もしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、もしくはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０位および／もしくは４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（たとえば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾が挙げられる。一実施形態では、修飾は、４２８Ｌ（たとえば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（たとえば、Ｎ４３４Ｓ）修飾；４２８Ｌ、２５９１（たとえば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（たとえば、Ｖ３０８Ｆ）修飾；４３３Ｋ（たとえば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（たとえば、４３４Ｙ）修飾；２５２、２５４、および２５６（たとえば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾；２５０Ｑおよび４２８Ｌ修飾（たとえば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８修飾（たとえば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、修飾は、２６５Ａ（たとえば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（たとえば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
【０１５２】
たとえば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（たとえば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ（たとえば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（たとえば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１  １１（たとえば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１  １１）；２５７１および４３４Ｈ（たとえば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（たとえば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ、および４３４Ａ（たとえば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（たとえば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される変異の１つまたは複数のペアまたは群を含むＦｃドメインを含む、抗ＧＲＥＭ１抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異のすべての可能性のある組合せおよび本明細書において開示される抗体可変ドメイン内の他の変異は、本発明の範囲内に含まれることが企図される。
【０１５３】
本発明はまた、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＧＲＥＭ１抗体を含み、ここで、キメラＣＨ領域は、１つを上回る免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。たとえば、本発明の抗体は、ヒトｌｇＧ１、ヒトｌｇＧ２、またはヒトｌｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部またはすべてを、ヒトｌｇＧ１、ヒトｌｇＧ２、またはヒトｌｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部またはすべてと組み合わせたものを含む、キメラＣＨ領域を含み得る。ある特定の実施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。たとえば、キメラヒンジは、ヒトｌｇＧ１、ヒトｌｇＧ２、またはヒトｌｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けによる２１６位〜２２７位のアミノ酸残基）が、ヒトｌｇＧ１、ヒトｌｇＧ２、またはヒトｌｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けによる２２８位〜２３６位のアミノ酸残基）と組み合わされたものを含み得る。
【０１５４】
ある特定の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトｌｇＧ１またはヒトｌｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基、ならびにヒトｌｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書において記載されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある特定の実施形態では、抗体の治療的特性または薬物動態特性に悪影響を及ぼすことなく、修飾されたＦｃエフェクター機能を呈し得る。（たとえば、２０１３年２月１日に出願された米国仮出願第６１／７５９，５７８号を参照されたく、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５５】
一般に、本発明の方法において使用するための抗体は、ヒトＧＲＥＭ１に結合することによって機能し得る。一部の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＧＲＥＭ１の触媒ドメインまたはその断片に結合し得る。一部の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＧＲＥＭ１の分泌形態またはヒトＧＲＥＭ１の膜結合形態に結合し得る。一部の実施形態では、本発明の抗体は、１つを上回るドメインに結合し得る（交差反応性抗体）。
【０１５６】
本発明のある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５９４または配列番号５９５のアミノ酸残基２５〜１８４の間の領域に位置するエピトープに結合し得る。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、本発明の方法において使用するための抗体は、全長天然タンパク質の任意の他の領域または断片に結合することによりＢＭＰシグナル伝達を遮断または阻害することによって機能し得、このタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号５９４に示されており、これは、配列番号５９３に示される核酸配列によってコードされる。一実施形態では、本発明の抗体は、全長ＧＲＥＭ１またはその断片に結合することによりＢＭＰ２、ＢＭＰ４、またはＢＭＰ７の阻害を好転させることによって、機能し得る。一部の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＭＰシグナル伝達を促進することによって機能し得るか、またはＧＲＥＭ１と、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、もしくはＢＭＰ７を含むＢＭＰとの間の結合を遮断し得る。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、本発明の方法において使用するための抗体は、ＧＲＥＭ１のヘパリンへの結合を遮断することによって、および／またはヘパリンにより媒介されるＶＥＧＦＲ−２の活性化を阻害することによって、機能し得る。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、本発明の方法において使用するための抗体は、二重特異性抗体であり得る。本発明の二重特異性抗体は、１つのドメイン内の１つのエピトープに結合し得、ヒトＧＲＥＭ１の第２のドメイン内の１つのエピトープにも結合し得る。ある特定の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、同じドメイン内の２つの異なるエピトープに結合し得る。
【０１６０】
一実施形態では、ヒトＧＲＥＭ１に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、本発明の方法において使用することができ、ここで、この抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、および５７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、および５８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、５０４、５２０、５３６、５５２、５６８、および５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、５７６、および５９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、および５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、および５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、および５８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、および５９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと、（ｖ）１０−７またはそれよりも低いＫＤで、ＧＲＥＭ１に結合すること、（ｖｉ）ＧＲＥＭ１の、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、またはＢＭＰ７のうちの１つへの結合を遮断すること、（ｖｉｉ）ＧＲＥＭ１によるＢＭＰシグナル伝達の阻害を遮断し、細胞分化を促進すること、ならびに（ｖｉｉｉ）ＧＲＥＭ１のヘパリンへの結合を遮断すること。
【０１６１】
本発明の方法において使用するためのある特定の抗ＧＲＥＭ１抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイによって判定される場合、ＧＲＥＭ１に結合し、その活性を中和することができる。本発明の抗体がＧＲＥＭ１に結合し、その活性を中和する能力は、本明細書において記載される結合アッセイまたは活性アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準的な方法を使用して、測定することができる。
【０１６２】
結合活性を測定するための非限定的で例示的なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイとしては、たとえば、Ｔ２００  Ｂｉａｃｏｒｅ機器において実行される表面プラズモン共鳴が挙げられる。遮断アッセイは、抗ＧＲＥＭ１抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＲＥＭ１のＢＭＰ４結合能力を遮断する能力を判定するために使用することができる。ＢＭＰ４シグナル伝達およびＢＭＰ４シグナル伝達に応答した骨芽細胞前駆細胞の細胞分化を促進することにおける抗ＧＲＥＭ１抗体の活性は、本明細書において記載される抗ＧＲＥＭ１抗体を使用して、ＧＲＥＭ１−ヘパリンの結合相互作用の阻害として評価することができる。
【０１６３】
本発明はまた、本発明の方法において使用するための、以下のタンパク質またはペプチドのうちのいずれかの少なくとも１つの生物学的に活性な断片に結合する、抗ＧＲＥＭ１抗体およびその抗原結合性断片を含む：配列番号５９４（全長天然ヒトＧＲＥＭ１）または配列番号５９５（ヒトＧＲＥＭ１の組換え形態）。本明細書において記載されるＧＲＥＭ１ペプチドまたはそれらの断片のいずれも、抗ＧＲＥＭ１抗体を生成するために使用することができる。
【０１６４】
ペプチドは、担体分子、たとえば、ＫＬＨのタグ付けまたはそれらへのコンジュゲーションの目的で、ある特定の残基の付加または置換を含むように修飾され得る。たとえば、システインが、ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに付加され得るか、またはたとえば、免疫処置のためにＫＬＨにコンジュゲーションするように、ペプチドを調製するために、リンカー配列が付加され得る。
【０１６５】
ＧＲＥＭ１に特異的な抗体は、追加の標識もしくは部分を含まなくてもよく、またはＮ末端もしくはＣ末端の標識もしくは部分を含んでもよい。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイでは、標識の位置により（存在する場合）、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの配向が決定され得る。たとえば、表面がアビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端のビオチンを含むペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面に対して遠位となるように配向されるであろう。一実施形態では、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩで検出可能な標識であり得る。ある特定の実施形態では、そのような標識化された抗体は、イメージングアッセイを含む、診断アッセイにおいて使用され得る。
【０１６６】
本発明は、ＧＲＥＭ１の１つまたは複数の領域内に見出される１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する、抗ＧＲＥＭ１抗体の使用を含む。抗体が結合するエピトープは、ＧＲＥＭ１分子の前述の領域のうちのいずれか内に位置する３個またはそれよりも多い（たとえば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれよりも多い）アミノ酸の単一の連続した配列からなり得る（たとえば、あるドメイン内の線形エピトープ）。あるいは、エピトープは、ＧＲＥＭ１分子の前述の領域のうちのいずれかまたは両方内に位置する複数の非連続的なアミノ酸（またはアミノ酸配列）からなってもよい（たとえば、立体構造エピトープ）。
【０１６７】
当業者に公知の様々な技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することができる。例示的な技法としては、たとえば、日常的な交差遮断アッセイ、たとえば、Antibodies、HarlowおよびLane（Cold  Spring  Harbor  Press、Cold  Spring  Harbor、NY）に記載されているものが挙げられる。他の方法としては、アラニンスキャニング変異分析、ペプチドブロット分析（Reineke、（２００４年）、Methods  Mol  Biol、２４８巻：４４３〜６３頁）、ペプチド切断分析、結晶学的研究、およびＮＭＲ分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学修飾といった方法を、用いることができる（Tomer、（２０００年）、Protein  Science、９巻：４８７〜４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を特定するために使用することができる別の方法は、質量分析法によって検出される水素／重水素交換である。一般的に述べると、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素で標識した後、抗体を、重水素標識したタンパク質に結合させることを伴う。次いで、タンパク質／抗体の複合体を、水中に移し、抗体複合体によって保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンが、接合部の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で、重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体の接合部の一部を形成しているアミノ酸は、重水素を保持することができ、したがって、接合部に含まれないアミノ酸と比べると、比較的高い質量を呈する。抗体の解離後に、標的タンパク質を、プロテアーゼ切断および質量分析法に供し、それによって、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識した残基が判明する。たとえば、Ehring、（１９９９年）、Analytical  Biochemistry、２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁、EngenおよびSmith、（２００１年）、Anal.  Chem.、７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。
【０１６８】
「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、連続的なアミノ酸またはタンパク質の三次元フォールディングによって並置される非連続的なアミノ酸の両方から形成され得る。連続的なアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒に曝露された際に保持されるが、三次元フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒での処置の際に失われる。エピトープは、固有の空間立体構造において、典型的には少なくとも３個のアミノ酸を含み、より通例的には少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を含む。
【０１６９】
抗原構造に基づく抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても公知の、修飾支援型プロファイリング（ＭＡＰ）は、同じ抗原を対象とする多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、化学的または酵素的に修飾した抗原表面に対するそれぞれの抗体の結合プロファイルの類似性によって類別する方法である（たとえば、米国特許公開第２００４／０１０１９２０号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる）。それぞれのカテゴリーは、別のカテゴリーによって示されるエピトープとははっきりと異なるかまたはそれと部分的にオーバーラップするかのいずれかである固有のエピトープを反映し得る。この技術は、特徴付けの焦点を遺伝子的に異なる抗体に当てることができるように、遺伝子的に同一な抗体を迅速にフィルタリングすることが可能である。ハイブリドーマのスクリーニングに適用する場合、ＭＡＰは、所望される特徴を有するｍＡｂを産生する希少なハイブリドーマクローンの特定を容易にすることができる。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を、異なるエピトープに結合する複数の抗体群に分類することができる。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、本発明の方法において使用するための抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５９４において例証される天然の形態、または配列番号５９５において例証される組換え産生されたもののいずれかであるＧＲＥＭ１において例証される領域のうちのいずれか１つまたは複数内のエピトープまたはその断片に結合する。ある特定の実施形態では、表１に示されるような、本発明の方法において使用するための抗体は、配列番号５９４の約１位〜約２４位の範囲のアミノ酸残基、または配列番号５９４の約２５位〜約１８４位の範囲のアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号５９５にさらに例証されている。
【０１７１】
本発明は、本明細書において表１に記載されている特定の例示的な抗体のうちのいずれか、または表１に記載されている例示的な抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と、同じエピトープまたはエピトープの一部分に結合する、抗ヒトＧＲＥＭ１抗体の使用を含む。同様に、本発明はまた、ＧＲＥＭ１またはＧＲＥＭ１断片への結合に関して、本明細書において表１に記載される特定の例示的な抗体のうちのいずれか、または表１に記載される例示的な抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と競合する、抗ヒトＧＲＥＭ１抗体を含む。
【０１７２】
当該技術分野において公知の日常的な方法を使用することによって、ある抗体が、参照抗ＧＲＥＭ１抗体と同じエピトープに結合するかどうか、または結合に関してそれと競合するかどうかを、容易に判定することができる。たとえば、試験抗体が、本発明の参照抗ＧＲＥＭ１抗体と同じエピトープに結合するかどうかを判定するために、参照抗体を、飽和条件下において、ＧＲＥＭ１タンパク質またはペプチドに結合させる。次いで、試験抗体が、ＧＲＥＭ１分子に結合する能力を、評価する。試験抗体が、参照抗ＧＲＥＭ１抗体による結合が飽和した後にＧＲＥＭ１に結合することができる場合、それは、試験抗体が、参照抗ＧＲＥＭ１抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方で、試験抗体が、参照抗ＧＲＥＭ１抗体による結合が飽和した後にＧＲＥＭ１タンパク質に結合できない場合、試験抗体は、本発明の参照抗ＧＲＥＭ１抗体が結合したエピトープと同じエピトープに結合し得る。
【０１７３】
ある抗体が、結合に関して、参照抗ＧＲＥＭ１抗体と競合するかどうかを判定するために、上述の結合手法を、２つの方向で行う。第１の方向では、参照抗体を、飽和条件下においてＧＲＥＭ１タンパク質に結合させた後、試験抗体のＧＲＥＭ１分子への結合の評価を行う。第２の方向では、試験抗体を、飽和条件下においてＧＲＥＭ１分子に結合させた後、参照抗体のＧＲＥＭ１分子への結合の評価を行う。いずれの方向においても、第１の（飽和している）抗体のみが、ＧＲＥＭ１分子に結合することができる場合は、試験抗体および参照抗体が、ＧＲＥＭ１への結合に関して競合すると結論付けられる。当業者には理解されるように、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープに結合し得るわけではないが、オーバーラップするかまたは隣接するエピトープに結合することによって、参照抗体の結合を空間的に遮断する場合がある。
【０１７４】
２つの抗体は、それぞれが、他方が抗原に結合するのを競合的に阻害（遮断）する場合、同じかまたはオーバーラップするエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰量の一方の抗体は、競合的結合アッセイにおいて測定される場合、他方の結合を、少なくとも５０％阻害するが、好ましくは、７５％、９０％、またはさらには９９％阻害する（たとえば、Junghansら、Cancer  Res.、１９９０年、５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照されたい）。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原における本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合に、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する一部のアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合に、オーバーラップするエピトープを有する。
【０１７５】
次いで、追加の日常的な実験（たとえば、ペプチド変異および結合分析）を行って、観察された試験抗体の結合の欠如が、実際に、参照抗体と同じエピトープへの結合に起因するかどうか、または立体的遮断（もしくは別の現象）が、観察された結合の欠如の原因であるかどうかを確認することができる。この種類の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して、行うことができる。
【０１７６】
本発明は、治療的部分にコンジュゲートしたヒト抗ＧＲＥＭ１モノクローナル抗体（「イムノコンジュゲート」）の使用を包含する。本明細書において使用されるとき、「イムノコンジュゲート」という用語は、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、または治療剤に化学的または生物学的に連結された抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子上の任意の位置において、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、または治療剤に連結され得る。イムノコンジュゲートの例は、抗体薬物コンジュゲートである。一部の実施形態では、薬剤は、ヒトＧＲＥＭ１、またはサイトカイン、たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、またはケモカイン、たとえば、ＴＧＦ−βに対する第２の別の抗体であってもよい。抗ＧＲＥＭ１抗体にコンジュゲートされ得る治療的部分の種類は、処置しようとする状態および達成しようとする所望される治療的効果を考慮したものであろう。イムノコンジュゲートを形成するのに好適な薬剤の例は、当該技術分野において公知であり、たとえば、国際公開第０５／１０３０８１号を参照されたい。イムノコンジュゲートおよびイムノトキシンの調製は、概して、当該技術分野において周知である（たとえば、米国特許第４，３４０，５３５号を参照されたい）。イムノコンジュゲートは、たとえば、米国特許第７，２５０，４９２号、同第７，４２０，０４０号、および同第７，４１１，０４６号に詳細に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７７】
本発明の方法において使用するための抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であり得る。多重特異的抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよく、または１つを上回る標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含んでもよい。たとえば、Tuttら、１９９１年、J.  Immunol.、１４７巻：６０〜６９頁、Kuferら、２００４年、Trends  Biotechnol.、２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。本発明の抗体は、別の機能的分子、たとえば、別のペプチドまたはタンパク質に連結され得るか、またはそれと共発現され得る。たとえば、抗体またはその断片は、１つまたは複数の他の分子実体、たとえば、別の抗体または抗体断片に機能的に連結されて（たとえば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合による会合、またはその他の方法によって）、第２の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性抗体が産生され得る。たとえば、本発明は、免疫グロブリンの一方のアームが、ＧＲＥＭ１のＮ末端領域またはその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他方のアームが、ＧＲＥＭ１のＣ末端領域もしくは第２の治療標的に特異的であるか、または治療的部分にコンジュゲートされている、二重特異性抗体を含む。本発明の状況において使用することができる例示的な二重特異性抗体の形式は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用を伴い、ここで、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の相違により、この二重特異性抗体の、プロテインＡへの結合は、アミノ酸の相違が欠如している二重特異性抗体と比較して、低減される。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡへの結合を低減または無効にする変異、たとえば、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付けによるものであり、ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）を含む。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。第２のＣＨ３内に見出され得るさらなる修飾としては、ｌｇＧ１抗体の事例ではＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ｌｇＧ２抗体の事例ではＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴのものであり、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにｌｇＧ４抗体の事例ではＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上述の二重特異性抗体の形式における変化形は、本発明の範囲内であることが企図される。
【０１７８】
本発明の状況において使用することができる他の例示的な二重特異性の形式としては、限定することなく、たとえば、ｓｃＦｖに基づくものもしくはダイアボディ二重特異性形式、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−ｌｇ、クアドローマ、ノブ・イントゥ−・ホール（knobs-into-holes）、共通軽鎖（たとえば、ノブ・イントゥ−・ホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（シード）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ、ｌｇＧ１／ｌｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ｌｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性形式が挙げられる（上述の形式の考察については、たとえば、Kleinら、２０１２年、mAbs、４巻：６号、１〜１１頁、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい）。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもでき、たとえば、直交的化学反応性を有する非天然のアミノ酸を使用して、部位特異的抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、これを、次いで、自己アセンブリして、既定の組成、価数、および幾何を有する多量体複合体にする。（たとえば、Kazaneら、J.  Am.  Chem.  Soc.、［電子出版：２０１２年１２月４日］を参照されたい）。
【０１７９】
本発明の方法において使用するのに好適な完全ヒトモノクローナル抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を含め、モノクローナル抗体を生成するための方法は、当該技術分野において公知である。任意のそのような公知の方法を、本発明の状況において使用して、ヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、本発明において使用するための抗体またはその抗原結合性断片は、一次免疫原、たとえば、天然の全長ヒトＧＲＥＭ１（たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３７５０４（配列番号５９４）を参照されたい）またはＧＲＥＭ１の組換え形態（配列番号５９５）もしくはＧＲＥＭ１断片で免疫処置し、続いて、二次免疫原またはＧＲＥＭ１の免疫原的に活性な断片で免疫処置したマウスから得られる。
【０１８１】
免疫原は、ヒトＧＲＥＭ１の免疫原性断片またはその断片をコードするＤＮＡであり得る。免疫原は、ヒスチジンタグおよび／または抗体のＦｃ領域の断片にカップリングされたＧＲＥＭ１であってもよい。
【０１８２】
全長ヒトＧＲＥＭ１のアミノ酸配列（Ｇｅｎ  ｂａｎｋ受託番号ＮＰ−０３７５０４としても公知）は、配列番号５９４として示されている。組換えＧＲＥＭ１の全長アミノ酸配列（ＧＲＥＭ１のアミノ酸残基２５〜１８４が、Ｆｃ領域およびヒスチジンタグにカップリングされたもの）は、配列番号５９５として示されている。
【０１８３】
ＧＲＥＭ１の全長ＤＮＡ配列は、配列番号５９３として示されている。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、ヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合する抗体は、上述の領域の断片、または指定された領域を本明細書において記載される領域のＮ末端もしくはＣ末端のいずれかもしくは両方から約５〜約２０個のアミノ酸残基分超えて伸長したペプチドを使用して、調製することができる。ある特定の実施形態では、上述の領域またはその断片の任意の組合せを、ヒトＧＲＥＭ１特異的抗体の調製に使用することができる。ある特定の実施形態では、ヒトＧＲＥＭ１の上述の領域またはその断片のうちの任意の１つまたは複数を、単一特異性、二重特異性、または多重特異性抗体を調製するために使用することができる。
【０１８５】
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法もまた、当該技術分野において公知である。任意のそのような公知の方法を、本発明の状況において使用して、ヒトＧＲＥＭ１に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【０１８６】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（たとえば、米国特許第６，５９６，５４１号、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照されたい）またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、ヒトＧＲＥＭ１に対する高い親和性の、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有するキメラ抗体を、まず、単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが、抗原刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、ヒト重鎖および軽鎖可変領域が内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結されたものを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを、単離し、ヒト重鎖および軽鎖の定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結させる。ＤＮＡを、次いで、完全ヒト抗体を発現することができる細胞において発現させる。
【０１８７】
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスを、目的の抗原でチャレンジし、リンパ系細胞（たとえば、Ｂ細胞）を、抗体を発現するマウスから回収する。リンパ系細胞を、骨髄腫細胞株と融合させて、不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し、このようなハイブリドーマ細胞株を、スクリーニングおよび選択して目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を特定することができる。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、所望されるアイソタイプの重鎖および軽鎖の定常領域に連結させることができる。そのような抗体タンパク質を、細胞、たとえば、ＣＨＯ細胞において産生させることができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを、抗原特異的リンパ球から直接的に単離してもよい。
【０１８８】
まず、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高い親和性のキメラ抗体を単離する。下記の実験の節にあるように、抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む、所望される特徴に関して特徴付け、選択する。マウス定常領域を、所望されるヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト抗体、たとえば、野生型または修飾されたＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は、具体的な使用に応じて変動し得るが、高い親和性の抗原結合性および標的特異性の特徴は、可変領域に存在する。
【０１８９】
一般に、本発明の方法において使用するための抗ＧＲＥＭ１抗体は、非常に高い親和性を有し、典型的に、固相または液相のいずれかに固定化された抗原への結合によって測定される場合、約１０−１２から約１０−７ＭのＫＤを有する。抗体の定常領域は、具体的な使用に応じて変動し得るが、高い親和性の抗原結合性および標的特異性の特徴は、可変領域に存在する。
【０１９０】
本発明の方法において使用するための抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片は、医薬組成物において存在してもよい。そのような医薬組成物は、好適な担体、賦形剤、および改善された輸送、送達、耐容性などを提供する他の薬剤とともに製剤化される。多数の適切な製剤を、すべての薬剤師に公知の処方書において見出すことができる：Remington's  Pharmaceutical  Sciences、Mack  Publishing  Company、Easton、PA。これらの製剤としては、たとえば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー剤、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（たとえば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Powellら、「Compendium  of  excipients  for  parenteral  formulations」、PDA,  J  Pharm  Sci  Technol、５２巻：２３８〜３１１頁（１９９８年）も参照されたい。
【０１９１】
様々な送達システム、たとえば、リポソームへのカプセル封入、マイクロ粒子、マイクロカプセル、抗体を発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが公知であり、抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するために使用することができる（たとえば、Wuら、J  Biol  Chem、２６２巻：４４２９〜４４３２頁（１９８７年）を参照されたい）。抗体はまた、遺伝子療法技法によって送達することもできる。導入の方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口の経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、任意の便宜的な経路によって、たとえば、注入またはボーラス注射によって、上皮内層もしくは皮膚粘膜の内側（たとえば、口腔粘膜、直腸、および腸管粘膜など）からの吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与されてもよい。投与は、全身的であっても局所的であってもよい。
【０１９２】
抗ＧＲＥＭ１抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物は、標準的なニードルおよびシリンジを用いて、皮下または静脈内に送達され得る。加えて、皮下送達に関しては、ペン型送達デバイスが、容易に、本発明の医薬組成物の送達において適用性を有する。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能であっても使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスは、一般に、医薬組成物を格納した交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物のすべてが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジを、容易に破棄し、医薬組成物を格納した新しいカートリッジと交換することができる。そうすると、ペン型送達デバイスは、再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスの場合、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバに保持される医薬組成物が事前充填された状態になっている。リザーバの医薬組成物が空になると、デバイス全体が破棄される。
【０１９３】
多数の再使用可能なペン型送達デバイスおよび自動注入型送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達において、適用性を有する。例としては、いくつか列挙すると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達において適用性を有する使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、いくつか列挙すると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入装置（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、ならびにＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９４】
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出システムにおいて送達され得る。一実施形態では、ポンプが使用され得る（Langer、上記；Sefton、CRC  Crit.  Ref.  Biomed.  Eng.、１４巻：２０１頁（１９８７年）を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料が使用され得る。Medical  Applications  of  Controlled  Release、LangerおよびWise  (編)、１９７４年、CRC  Pres.、Boca  Raton、Floridaを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出システムは、組成物の標的の近くに設置することができ、したがって、必要とされるのは全身用量の一部のみである（たとえば、Goodson、１９８４年、Medical  Applications  of  Controlled  Release、上記、２巻、１１５〜１３８頁を参照されたい）。他の制御放出システムは、Langer、Science、２４９巻：１５２７〜１５３３頁（１９９０年）による考察に記載されている。
【０１９５】
注射用調製物としては、静脈内、皮下、皮内、および筋肉内への注射、点滴注射などのための剤形を挙げることができる。これらの注射用調製物は、公的に公知の方法によって調製することができる。たとえば、注射用調製物は、たとえば、上述の抗体またはその塩を、注射に従来的に使用されている滅菌水性媒体または油性媒体中に溶解、懸濁、または乳化させることによって、調製することができる。注射用の水性媒体としては、たとえば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張溶液などがあり、これらは、適切な可溶化剤、たとえば、アルコール（たとえば、エタノール）、多価アルコール（たとえば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［たとえば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などと組み合わせて使用することができる。用いられる油性媒体としては、たとえば、ゴマ油、ダイズ油などがあり、これらは、可溶化剤、たとえば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと組み合わせて使用することができる。このようにして調製された注射剤は、好ましくは、適切なアンプルに充填される。
【０１９６】
有利なことに、上述の経口または非経口での使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に合うように調整された単位用量の剤形に調製される。そのような単位用量の剤形としては、たとえば、錠剤、丸剤、カプセル、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含まれる前述の抗体の量は、一般に、単位用量の剤形当たり約５〜約５００ｍｇ、特に、注射の形態では、前述の抗体が、約５〜約１００ｍｇで含まれ、他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含まれることが好ましい。
【０１９７】
本発明は、以下の実施例によってさらに例証されるが、これは、制限と解釈されるものではない。本出願全体を通じて引用されたすべての参考文献、特許、および特許出願公開のすべての内容、ならびに図面および配列表は、ここに参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１９８】
（実施例１）
グレムリン１結合性タンパク質
参照によりその全内容が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１６／００２４１９５号は、本発明において使用するのに好適なキメラ抗ＧＲＥＭ１抗体ならびに完全ヒト抗ＧＲＥＭ１抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体）の生成および特徴付けについて記載している。たとえば、交差反応性抗体ならびにキメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を含む、いくつかの抗ＧＲＥＭ１抗体が得られており、それには、Ｈ１Ｍ２９０７Ｎ、Ｈ２Ｍ２７８０Ｎ、Ｈ２Ｍ２７８２Ｎ、Ｈ２Ｍ２７８３Ｎ、Ｈ４Ｈ２７８３Ｎ２、Ｈ２Ｍ２７８４Ｎ、Ｈ２Ｍ２７８５Ｎ、Ｈ２Ｍ２７８６Ｎ、Ｈ２Ｍ２８８９Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９０Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９１Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９２Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９５Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９７Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９８Ｎ、Ｈ２Ｍ２８９９Ｎ、Ｈ２Ｍ２９０１Ｎ、Ｈ２Ｍ２９０６Ｎ、Ｈ２Ｍ２９２６Ｎ、Ｈ３Ｍ２７８８Ｎ、およびＨ３Ｍ２９２９Ｎとして表される抗体が含まれる。
【０１９９】
さらなる完全ヒト抗ＧＲＥＭ１抗体も得られており、それには、次のように、Ｈ４Ｈ６２３２Ｐ、Ｈ４Ｈ６２３３Ｐ、Ｈ４Ｈ６２３６Ｐ、Ｈ４Ｈ６２３８Ｐ、Ｈ４Ｈ６２４０Ｐ、Ｈ４Ｈ６２４３Ｐ、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ、Ｈ４Ｈ６２４６Ｐ、Ｈ４Ｈ６２４８Ｐ、Ｈ４Ｈ６２５０Ｐ、Ｈ４Ｈ６２５１Ｐ、Ｈ４Ｈ６２５２Ｓ、Ｈ４Ｈ６２５６Ｐ、Ｈ４Ｈ６２６０Ｐ、Ｈ４Ｈ６２６９Ｐ、およびＨ４Ｈ６２７０Ｐとして表される抗体が含まれる。
【０２００】
表１は、本発明の方法において使用するのに好適な、選択されたヒトＧＲＥＭ１に特異的な抗体の重鎖および軽鎖の可変領域アミノ酸配列ペア、ならびにそれらの対応する抗体識別子について記載している。抗体は、典型的に、本明細書では以下の命名法に従って参照される：Ｆｃ接頭辞（たとえば、「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」）に続いて、数字の識別子（たとえば、表１に示される「２９０７」）に続いて、「Ｐ」または「Ｎ」の接尾辞。したがって、この命名法に従って、抗体は、たとえば、「Ｈ１Ｈ２９０７」と称され得る。本明細書において使用される抗体表記のＨ４Ｈ、Ｈ１Ｍ、およびＨ２Ｍの接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域を示す。たとえば、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２  Ｆｃを有し、一方で「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する。当業者には理解されるように、Ｈ１ＭまたはＨ２Ｍ抗体は、Ｈ４Ｈ抗体に変換することができ、逆もまた同様であるが、いずれの事象においても、表１に示される数字の識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、同じままである。同じ数字の抗体表記を有するが、接尾辞の文字Ｎ、Ｂ、またはＰが異なる抗体は、同一のＣＤＲ配列を有するが、ＣＤＲ配列以外の領域（すなわち、フレームワーク領域）に配列の変動がある重鎖および軽鎖を有する抗体を指す。したがって、特定の抗体のＮ、Ｂ、およびＰバリアントは、それらの重鎖および軽鎖可変領域内では同一のＣＤＲ配列を有するが、それらのフレームワーク領域内では互いに異なる。
【表１−１】
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【表１−２】
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【０２０１】
（実施例２）
抗グレムリン−１抗体での処置は、慢性低酸素マウスモデルにおいて、肺動脈の直径を回復させ、右心室心機能を回復させる
肺動脈性肺高血圧における抗グレムリン−１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２の作用を評価するために、慢性低酸素状態によって誘導される肺動脈性肺高血圧のマウスモデルを使用して、２つの別個の研究を行った。
【０２０２】
以下の材料および方法を、これらの研究に使用した。
【０２０３】
材料および方法
マウス
両方の研究に関して、１１〜１３週齢のＴａｃｏｎｉｃのＣ５７ＢＬ／６マウスを使用した。マウスを、開始時の体重が、異なる群間で類似となるように、体重を基準に処置群に分けた。ケージは、約２１％  Ｏ２（常圧正常酸素状態）のままか、または室内の空気の安定な取込みに対してＮ２流を調節することにより低いＯ２レベルを維持した１０％  Ｏ２（常圧低酸素状態）チャンバ（改変型３’半硬質アイソレーター装置、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）に入れるかのいずれかを選択した。
【０２０４】
第１の研究（研究１）については、マウスは、１４日目に、薬物または生理食塩水の投与を開始した。常圧正常酸素状態のケージに収容したマウスの群（ｎ＝１０匹）には、１週間に２回、２週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水を皮下投与し、一方で、常圧低酸素状態のケージに収容したマウスは、１週間に２回、２週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、２週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体を皮下投与するマウスの群（ｎ＝１０匹）、および１週間に２回、２週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）を含む、３つの処置群に分けた。
【０２０５】
第２の研究（研究２）については、マウスは、１４日目に、薬物または生理食塩水の投与を開始した。常圧正常酸素状態のケージに収容したマウスの群（ｎ＝１０匹）には、１週間に２回、４週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水を皮下投与し、一方で、常圧低酸素状態のケージに収容したマウスは、１週間に２回、４週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、４週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体を皮下投与するマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、４週間にわたって１０ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、４週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝９匹）、および１週間に２回、４週間にわたって４０ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）を含む、５つの処置群に分けた。
【０２０６】
研究１および研究２の投薬スケジュールを、表２に提供する。
【表２】
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【０２０７】
超音波検査による評価および分析
それぞれの研究の最終日に、肺動脈のサイズならびに右心室の機能およびサイズを、高周波数超音波システム（Ｖｅｖｏ  ２１００、ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ）を使用して、それぞれのマウスにおいて評価した。評価のために、マウスに麻酔を行い（１．５％イソフルランを、１．０ｃｃ／医薬品グレードの空気ｍＬの速度で用いて）、マウスの体温を、直腸温度プローブを用いてモニタリングし、加熱プラットフォーム（ＭｏｕｓｅＭｏｎｉｔｏｒＳ、Ｉｎｄｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）および加温ランプを用いておよそ３７℃に保った。明るさモード（Ｂ−モード）および動きモード（Ｍ−モード）の両方のイメージングを使用した。Ｂ−モードでのマウスの心臓断面のイメージングを使用して、肺動脈の断面積（ＰＡ  ＣＳＡ）を、肺動脈弁のレベルで判定した。Ｍ−モードでのイメージングを使用して、パルス波の速度時間積分（ＶＴＩ）を判定したが、これは、肺動脈を流れる血流の代表的なドプラートレーシングの曲線下面積から導出される。右心室の一回拍出量（ＲＶ  ＳＶ）を、ＰＡ  ＣＳＡおよびＶＴＩの積から計算した。右心室の心拍出量（ＲＶ  ＣＯ）を、ＳＶおよび心拍数（ＨＲ）の積から計算した。Ｍ−モードでのイメージングを使用して、拡張期および収縮期の間の右心室自由壁（ＲＶＦＷ）の厚さを判定した。動物は、右心室圧の評価の前に、ホームケージに戻した。
【０２０８】
右心室圧の評価
続いて、右心室圧を、すべての処置群に関して、評価した。マウスを、イソフルランで麻酔し、加熱プラットフォーム（Ｈｅａｔｅｄ  Ｈａｒｄ  Ｐａｄ  １、Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および循環加熱ウォーターポンプ（Ｔ／Ｐｕｍｐ  Ｃｌａｓｓｉｃ、Ｇａｙｍａｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）を使用して、およそ３７℃に保った。それぞれのマウスの首の領域を、右総頸動脈および右頸静脈の上を脱毛することによって、外科手術のために準備した。切開部を作製し、右頸静脈を、頸動脈および／または迷走神経を損傷しないように注意しながら単離した。一本の５−０絹縫合糸を、単離した頸静脈の下に入れて、頭蓋的な血管の取り出しを可能にし、次いで、３０ゲージのニードルを使用して、頸静脈に穴を作製した。加圧カテーテル（マイクロチップカテーテルトランスデューサーＳＰＲ−１０００、Ｍｉｌｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）を、頸静脈の開口部に挿入し、右心房を越えて右心室へと進めた。カテーテルを、圧力／容積機器（ＭＰＶＳ−３００、Ｍｉｌｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）に接続し、心拍数、ならびに拡張期および収縮期の両方の右心室圧を測定した。これらのパラメーターは、データ取得システム（ＰｏｗｅｒＬａｂ  ４／３５、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、デジタルで取得した。ＬａｂＣｈａｒｔ  Ｐｒｏ  ７．０ソフトウェア（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、右心室圧を分析した。読み取り値を、６０秒間隔の圧力トレースから定量化した（圧力の安定化を可能にするため、２分間の記録期間の後に）。分析したパラメーターは、右心室の収縮期圧（ＲＶＳＰ）、心拍数（ＨＲ）、および右心室圧の上昇速度（ｄＰ／ｄｔ  ｍａｘ）であった。
【０２０９】
血清／組織の採取および右心室肥大に関する評価
右心室圧の測定の完了後に、カテーテルを取り出し、それぞれの動物を殺処分した。腹部を開き、ヘマトクリットの評価および血清の採取のために、血液を大静脈から採取した。次いで、胸腔を開き、右肺の中葉を、５−０絹縫合糸で結紮し、切除し、ＲＮＡ  ｌａｔｅｒ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｒ０９０１）に入れ、２４時間後に−８０℃で凍結させた。心臓を、それぞれの動物から切除し、右心室（ＲＶ）を、左心室および中隔（ＬＶ＋Ｓ）から注意深く切り離した。心臓組織の両片を、微量てんびん（ＡＪ０００、Ｍｅｔｔｌｅｒ）で別個に計量して、ＲＶ肥大指数［ＲＶ／（ＬＶ＋Ｓ）、Ｆｕｌｔｏｎ指数］を計算した。
【０２１０】
それぞれの処置群の半数の動物には、肺に、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を用いて２０〜２５ｍｍＨｇで灌流を受けさせ、次いで、１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）で固定した。肺を、２４時間、１０％  ＮＢＦ中に置いた後、７０％エタノールに少なくとも４８時間入れ、その後に、組織の処理およびパラフィン包埋を行った。肺の灌流−固定を受けなかった動物については、右肺の下葉を、５−０絹縫合糸で結紮した後に切除し、計量し、液体Ｎ２中で凍結させた。
【０２１１】
結果
グレムリン−１阻害により、慢性低酸素状態における肺動脈の直径が回復した
研究１において、Ｂ−モードでのマウス心臓の断面の超音波イメージングによって、低酸素状態への４週間の曝露により、生理食塩水で処置したマウスでは、ＰＡ  ＣＳＡが、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスと比較して、約２８％低減されたことが判明した（表３）。アイソタイプ対照抗体での処置により、ＰＡ  ＣＳＡ値が、低酸素状態において生理食塩水で処置したマウスで観察されたマウスのものから、有意に影響を受けることはなかった。抗グレムリン−１抗体での処置により、ＰＡ  ＣＳＡのサイズが、低酸素状態においてアイソタイプ対照抗体で処置したマウスで測定されたものよりも約４６％大きなサイズとなり、低酸素状態において抗グレムリン−１で処置した群からのこの計算ＰＡ  ＣＳＡは、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスの群のものと類似していた。したがって、抗グレムリン−１抗体は、低酸素状態において、肺動脈の直径を回復させることができた。
【０２１２】
研究２において、Ｂ−モードでのマウス心臓の断面の超音波イメージングによって、低酸素状態への６週間の曝露により、生理食塩水で処置したマウスでは、ＰＡ  ＣＳＡが、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスと比べて、約３２％低減されたことが判明した（表３）。アイソタイプ対照抗体で処置した動物のＰＡ  ＣＳＡ値は、低酸素状態において生理食塩水で処置したものと類似していた。１０ｍｇ／ｋｇの低い濃度の抗グレムリン−１抗体での処置は、アイソタイプ対照抗体での処置の計算値よりも、２１％高い（有意な）計算ＰＡ  ＣＳＡ値をもたらした。より高い濃度、すなわち、２５および４０ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１は、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスで測定されたものと類似のＰＡ  ＣＳＡ値をもたらし、アイソタイプ対照抗体での処置よりも有意に高かった。これらの結果は、慢性低酸素状態によって誘導される肺動脈の直径の変化を解決することに対する、抗グレムリン−１抗体の用量依存性作用を示す。
【０２１３】
グレムリン−１の阻害は、右心室の心機能を回復させた
研究１において、Ｍ−モードでのパルス波ＶＴＩの超音波イメージングにより、慢性低酸素状態に曝露された動物において、肺動脈を通る血流の速度には、有意ではない差（最大で５％の増加）が示された（データは示されない）。表３に示されるように、生理食塩水で処置したマウスおよびアイソタイプ対照で処置したマウスの両方について、計算された右心室の一回拍出量（ＶＴＩおよびＰＡ  ＣＳＡの積）は、低酸素状態への曝露により、２３〜３０％、有意に低減された。抗グレムリン−１抗体での処置により、右心室の一回拍出量の低減の、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスのものに類似の値への好転がもたらされた。これは、グレムリン−１の阻害が、低酸素状態において、一回拍出量を回復させ得ることを意味するであろう。測定したところ群間で有意差がないことが見出された心拍数を、右心室の心拍出量を判定するために使用した。右心室の心拍出量は、慢性低酸素状態に曝露した動物では、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスと比べて、２１％、有意に低いことが見出された。低酸素状態におけるアイソタイプ対照抗体での処置と比較して、低酸素状態において抗グレムリン−１で処置したマウスからの測定された心拍出量は、約４８％高く、この値は、正常酸素状態において生理食塩水で処置した群において測定された値よりも７％高く、グレムリン−１の阻害が、低酸素状態において心拍出量を回復させたことを示す。まとめると、これらの超音波検査の結果は、慢性低酸素状態における抗グレムリン−１抗体での処置が、心臓の一回拍出量および心拍出量を改善し、心拍数に対する変化は最小限であることを示す。
【０２１４】
研究２において、Ｍ−モードでのパルス波ＶＴＩの超音波イメージングにより、正常酸素状態と低酸素状態の条件を対比して、生理食塩水で処置した動物の肺動脈を通る血流の速度には、有意差がない（最大で１１％の増加）ことが判明した。表３に示されるように、生理食塩水で処置した動物では、低酸素状態により、正常酸素状態のマウスと比較した場合に、一回拍出量が３２％低減された。低酸素状態において生理食塩水で処置した群と比較して、アイソタイプ対照で処置した群の計算一回拍出量は、１６％高かった（有意ではなかった）ため、１０または４０ｍｇ／ｋｇのいずれかの抗グレムリン−１抗体で処置した動物から得られた値の比較は、値が、低酸素状態において生理食塩水で処置した群の値よりも２６〜４１％高く、正常酸素状態において生理食塩水で処置した群の値に匹敵していたとはいえ、統計学的に有意性はなかった。２５ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体での処置は、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスの計算値に類似する平均一回拍出量をもたらし、これらの値は、アイソタイプ対照抗体での処置の計算値よりも、３８％、有意に高かった（表３）。心拍数を測定すると、異なる条件間で同等であることが見出された。６週間の慢性的な低酸素状態により、右心室の心拍出量が、生理食塩水で処置した群では３５％下降し、アイソタイプ対照抗体の使用は、心拍出量の回復に対する作用を有さなかった（正常酸素状態における生理食塩水と比較して２７％の低減）。１０ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体の使用により、低酸素状態における心拍出量が増加した（アイソタイプ対照抗体での処置で測定された値よりも１５％高い）が、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスで見出された値よりも１６％低かった。２５または４０ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体の使用は、心拍出量をアイソタイプ対照抗体での処置よりも３０〜３５％増加させることによる利益を示し、正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスで見出された値と同等であった。まとめると、これらのデータは、慢性低酸素状態における高用量（２５または４０ｍｇ／ｋｇ）での抗グレムリン−１抗体の使用により、慢性低酸素状態において心機能が改善されることを示す。
【表３】
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Sidakの多重比較検定を用いた一方向ANOVA:*、**、***、****は、常圧正常酸素状態において生理食塩水で処置したものと対比してP<0.05、0.01、0.001、0.0001であり、#、##、###、####は、常圧低酸素状態においてアイソタイプ対照抗体で処置したものと対比してP<0.01、0.001、0.0001である。
【０２１５】
（実施例３）
抗グレムリン−１抗体での処置は、肺高血圧のＳｕｇｅｎ  ５４１６／慢性低酸素マウスモデルにおいて、肺動脈の直径を回復させる
肺動脈性肺高血圧の処置における抗ＧＲＥＭ１抗体、Ｈ４Ｈ６２４５Ｐ２の有効性をさらに評価するために、血管内皮増殖因子受容体アンタゴニストＳｕｇｅｎ  ５４１６／慢性低酸素マウスモデルを使用した。
【０２１６】
以下の材料および方法を、この研究に使用した。
【０２１７】
材料および方法
マウス
１１〜１３週齢のＴａｃｏｎｉｃのＣ５７ＢＬ／６マウスを使用した。マウスを、開始時の体重が、異なる群間で類似となるように、体重を基準に処置群に分けた。ケージは、約２１％  Ｏ２（常圧正常酸素状態）のままか、または室内の空気の安定な取込みに対してＮ２流を調節することにより低いＯ２レベルを維持した１０％  Ｏ２（常圧低酸素状態）チャンバ（改変型３’半硬質アイソレーター装置、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）に入れるかのいずれかを選択した。マウスは、２１日目に、Ｓｕｇｅｎ５４１６（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｓ８４４２、ＶＥＧＦＲ阻害剤、皮下、１週間に１回で６週間、２０ｍｇ／ｋｇ）および薬物または生理食塩水の投与を開始した。常圧正常酸素状態のケージに収容したマウスの群（ｎ＝１０匹）には、１週間に２回、３週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水を皮下投与し、一方で、常圧低酸素状態のケージに収容したマウスは、１週間に２回、３週間にわたって５ｍＬ／ｋｇの生理食塩水で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）、３週間にわたって毎日、３００ｍｇ／ｋｇのボセンタン（Ｓｅｑｕｏｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログＳＲＰ０２３２５ｂ）を経口投与するマウスの群（ｎ＝９匹）、１週間に２回、３週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体を皮下投与するマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、３週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体で皮下処置を受けるマウスの群（ｎ＝１０匹）、１週間に２回、３週間にわたって２５ｍｇ／ｋｇの抗グレムリン−１抗体で皮下処置を受け、３週間にわたって毎日、３００ｍｇ／ｋｇのボセンタンを経口投与するマウスの群（ｎ＝９匹）を含む、５つの処置群に分けた。マウスの群の実験的投薬および処置プロトコールは、表４に示される。
【表４】
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【０２１８】
超音波検査による評価および分析
研究の最終日に、肺動脈のサイズならびに右心室の機能およびサイズを、高周波数超音波システム（Ｖｅｖｏ  ２１００、ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ）を使用して、それぞれのマウスにおいて評価した。評価のために、マウスに麻酔を行い（１．５％イソフルランを、１．０ｃｃ／医薬品グレードの空気ｍＬの速度で用いて）、マウスの体温を、直腸温度プローブを用いてモニタリングし、加熱プラットフォーム（ＭｏｕｓｅＭｏｎｉｔｏｒＳ、Ｉｎｄｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）および加温ランプを用いておよそ３７℃に保った。明るさモード（Ｂ−モード）および動きモード（Ｍ−モード）の両方のイメージングを使用した。Ｂ−モードでのマウスの心臓断面のイメージングを使用して、肺動脈の断面積（ＰＡ  ＣＳＡ）を、肺動脈弁のレベルで判定した。Ｍ−モードでのイメージングを使用して、パルス波の速度時間積分（ＶＴＩ）を判定したが、これは、肺動脈を流れる血流の代表的なドプラートレーシングの曲線下面積から導出される。右心室の一回拍出量（ＲＶ  ＳＶ）を、ＰＡ  ＣＳＡおよびＶＴＩの積から計算した。右心室の心拍出量（ＲＶ  ＣＯ）を、ＳＶおよび心拍数（ＨＲ）の積から計算した。Ｍ−モードでのイメージングを使用して、拡張期および収縮期の間の右心室自由壁（ＲＶＦＷ）の厚さを判定した。動物は、右心室圧の評価の前に、ホームケージに戻した。
【０２１９】
右心室圧の評価
続いて、右心室圧を、すべての処置群に関して、評価した。マウスに、イソフルランで麻酔を行い、加熱プラットフォーム（Ｈｅａｔｅｄ  Ｈａｒｄ  Ｐａｄ  １、Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および循環加熱ウォーターポンプ（Ｔ／Ｐｕｍｐ  Ｃｌａｓｓｉｃ、Ｇａｙｍａｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）を使用して、およそ３７℃に保った。それぞれのマウスの首の部分に、右総頸動脈および右頸静脈の上を脱毛することによって、外科手術の準備をした。切開部を作製し、右頸静脈を、頸動脈および／または迷走神経を損傷しないように注意しながら単離した。一本の５−０絹縫合糸を、単離した頸静脈の下に入れて、頭蓋的な血管の取り出しを可能にし、次いで、３０ゲージのニードルを使用して、頸静脈に穴を作製した。加圧カテーテル（マイクロチップカテーテルトランスデューサーＳＰＲ−１０００、Ｍｉｌｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）を、頸静脈の開口部に挿入し、右心房を越えて右心室へと進めた。カテーテルを、圧力／容積機器（ＭＰＶＳ−３００、Ｍｉｌｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）に接続し、心拍数、ならびに拡張期および収縮期の両方の右心室圧を測定した。これらのパラメーターは、データ取得システム（ＰｏｗｅｒＬａｂ  ４／３５、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、デジタルで取得した。ＬａｂＣｈａｒｔ  Ｐｒｏ  ７．０ソフトウェア（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、右心室圧を分析した。読み取り値を、６０秒間隔の圧力トレースから定量化した（圧力の安定化を可能にするため、２分間の記録期間の後に）。分析したパラメーターは、右心室の収縮期圧（ＲＶＳＰ）、心拍数（ＨＲ）、および右心室圧の上昇速度（ｄＰ／ｄｔ  ｍａｘ）であった。
【０２２０】
血清／組織の採取および右心室肥大に関する評価
右心室圧の測定の完了後に、カテーテルを取り出し、それぞれの動物を殺処分した。腹部を開き、ヘマトクリットの評価および血清の採取のために、血液を大静脈から採取した。次いで、胸腔を開き、右肺の中葉を、５−０絹縫合糸で結紮し、切除し、ＲＮＡ  ｌａｔｅｒ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｒ０９０１）に入れ、２４時間後に−８０℃で凍結させた。心臓を、それぞれの動物から切除し、右心室（ＲＶ）を、左心室および中隔（ＬＶ＋Ｓ）から注意深く切り離した。心臓組織の両片を、微量てんびん（ＡＪ０００、Ｍｅｔｔｌｅｒ）で別個に計量して、ＲＶ肥大指数［ＲＶ／（ＬＶ＋Ｓ）、Ｆｕｌｔｏｎ指数］を計算した。
【０２２１】
それぞれの処置群の半数の動物には、肺に、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を用いて２０〜２５ｍｍＨｇで灌流を受けさせ、次いで、１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）で固定した。肺を、２４時間、１０％  ＮＢＦ中に置いた後、７０％エタノールに少なくとも４８時間入れ、その後に、組織の処理およびパラフィン包埋を行った。肺の灌流−固定を受けなかった動物については、右肺の下葉を、５−０絹縫合糸で結紮した後に切除し、計量し、液体Ｎ２中で凍結させた。
【０２２２】
結果
グレムリン−１阻害により、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素状態における肺動脈の直径が回復した。
表５に示されるように、Ｂ−モードでのマウス心臓の断面の超音波イメージングによって、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素状態への６週間の曝露により、生理食塩水で処置したマウスでは、ＰＡ  ＣＳＡが２９％低減された（正常酸素状態のマウスと比べて）ことが判明した。低酸素状態では、アイソタイプ対照抗体で処置した動物のＰＡ  ＣＳＡ値は、生理食塩水で処置したものと類似していた。エンドセリン受容体アンタゴニストであるボセンタンの使用により、低酸素状態において生理食塩水で処置した群よりも約４３％高く（有意である）、それでいて正常酸素状態において測定されたものに類似するＰＡ  ＣＳＡ値が得られた。同様に、抗グレムリン−１抗体の使用により、アイソタイプ対照抗体で処置した群で測定された値よりも有意に高く（２８％）、それでいて正常酸素状態において生理食塩水で処置したマウスで観察されたものと類似するＰＡ  ＣＳＡ値が得られた。しかしながら、ボセンタンおよび抗グレムリン−１抗体の使用は、ＰＡ  ＣＳＡにはわずかな作用しか有さず、低酸素状態において生理食塩水またはアイソタイプ対照抗体での処置で見出される値に類似していた。
【表５】
2019529371.tif 000007
Sidakの多重比較検定を用いた一方向ANOVA:**は、常圧正常酸素状態において生理食塩水で処置したものと対比してP<0.01であり、%%、%%%は、常圧低酸素状態において生理食塩水で処置したものと対比してP<0.01、0.001であり、#は、常圧低酸素状態においてアイソタイプ対照抗体で処置したものと対比してP<0.05である。
【０２２３】
均等物
当業者であれば、本明細書において記載される具体的な実施形態および方法に対する多数の均等物を認識するであろうし、または単に日常的な実験を使用すれば確かめることができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲の範囲によって包含されるものとする。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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