(57)【要約】  本明細書で提供されるのは、多くの卵巣癌サブタイプにおいて豊富な卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）タンパク質に対する合成コンセンサス抗原を含む免疫原性組成物である。また、本明細書で開示されるのは、免疫原性組成物を対象に投与することによって、腫瘍関連病理の治療を必要とする対象において、それを行う方法である。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸分子を含む、免疫原性組成物であって、
前記核酸分子は、
ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、前記免疫原性組成物。
【請求項２】
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子からなる群から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｂ）前記配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、
ｃ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、及び
ｄ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記ペプチドをコードするヌクレオチド配列が、開始コドン、ＩｇＥリーダー配列及び停止コドンからなる群から選択される少なくとも１つの調節配列と機能的に連結している、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、請求項４に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｂ）前記配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、
ｃ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、及び
ｄ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項５に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記核酸分子が、発現ベクターを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記核酸分子が、ウイルス粒子に組み込まれる、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
アジュバントをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項１２】
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子からなる群から選択される、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｂ）前記配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、
ｃ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、及び
ｄ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１４】
前記コード化ペプチドが、開始コドン、ＩｇＥリーダー配列及び停止コドンからなる群から選択される少なくとも１つの調節配列と機能的に連結している、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１５】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、請求項１４に記載の核酸分子。
【請求項１６】
前記核酸分子が、
ａ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｂ）前記配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、
ｃ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、及び
ｄ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１５に記載の核酸分子。
【請求項１７】
前記核酸分子が、発現ベクターを含む、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１８】
前記核酸分子が、ウイルス粒子を含む、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１９】
ペプチドを含む、免疫原性組成物であって、
前記ペプチドは、
ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記免疫原性組成物。
【請求項２０】
ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
ｂ）前記配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、
ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列、及び
ｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド。
【請求項２１】
卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）に対する免疫応答の誘導を必要とする対象において、それを行う方法であって、
請求項１に記載の免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
投与することが、電気穿孔及び注入のうちの少なくとも１つを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍関連病理の治療または予防を必要とする対象において、それを行う方法であって、
請求項１に記載の免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２４】
投与することが、電気穿孔及び注入のうちの少なくとも１つを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記腫瘍関連病理が、腫瘍増殖、腫瘍転移、及び血管新生のうちの少なくとも１つである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象が、がんと診断されている、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記がんが、卵巣癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１つ以上の卵巣癌抗原を含む免疫原性組成物を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が、がんを発症するリスクが高い、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記がんが、卵巣癌である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
１つ以上の卵巣癌抗原を含む免疫原性組成物を前記対象に投与することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年８月２９日に出願された米国仮出願第６２／３８０，７６６号の優先権を受ける権利があり、その全体が参照することによって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）を標的にする免疫原性組成物、及び免疫原性組成物を投与する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
上皮卵巣癌は、米国において１４，０００人を超える女性を毎年死に至らしめる最悪の腫瘍のうちの１つである。外科的手法や化学療法の進歩にもかかわらず、５年生存率は、過去４０年においてほとんど変わっていない。卵巣癌は、免疫原性腫瘍であり、Ｔ細胞浸潤は、良好な予後と繰り返し関連づけられている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００３，３４８：２０３−２１３）。しかしながら、腫瘍の約５０％のみが、Ｔ細胞の浸潤を示す（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００３，３４８：２０３−２１３）。したがって、卵巣癌のＴ細胞浸潤の強化を目的とした免疫療法は、この予後不良の逆転に大きな影響を有し得る。
【０００４】
卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）は、卵巣顆粒細胞中（Ｓｉｍｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｖ．１９９７，１８：７３９−７７３）で、及び卵巣内皮中（Ｖａｎｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，３５：１３５８−１３６６）で低レベルにて、女性で選択的に発現される抗原である。より重要なことは、この表面抗原は、卵巣癌の５０〜７０％で発現され（Ｐｅｒａｌｅｓ−Ｐｕｃｈａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００９，６９：６５０６−６５１４、Ａｌ−Ｔｉｍｉｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１９８６，５３：３２１−３２９、Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０００，６：２７６４−２７７０、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０００，７６：８０−８８）、及び非性腺の健康組織、例えば、ネガティブフィードバックがエストロゲンに依存している脳において発現されない。卵巣摘出術が卵巣癌の治療における標準手順であることを考えると、ＦＳＨＲに対する免疫系をリダイレクトすることは、健康組織に損傷を引き起こすことはないはずである。以前の研究により、キメラ受容体を有するＴ細胞をＦＳＨＲに対してリダイレクトすることに目立った毒性はなかった。したがって、ＦＳＨＲは、Ｔ細胞を卵巣癌に対してリダイレクトする合成コンセンサスＤＮＡワクチンを生成するための理想的な治療標的であり得る。
【０００５】
歴史的に見て、ペプチドワクチン接種は、特に、ネズミモデルにおいて良好な細胞性応答を示してきた（Ｐａｒｍｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．２００２、９４：８０５−８１８）。しかしながら、プラスミド設計及び送達での最近の改善は、ヒトにおいて新しい合成ＤＮＡ手法からの素晴らしいＣＤ８及びＣＤ４  Ｔ細胞応答をもたらした（Ｂａｇａｒａｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１２，４：１５５ｒａ３８、Ｋａｌａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２０１３，２０８：８１８−８２９、Ｍｏｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１５，２３：５９１−６０１）。合成ＤＮＡワクチンは、ペプチドワクチンとは異なり、ＨＬＡ制限されておらず、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩ上に強固に存在し、クラスＩＩ応答を駆動することによって耐性を破壊するように設計することができる（Ｆｌｉｎｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３，４：３５４、Ｓａｒｄｅｓａｉ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１，２３：４２１−４２９）。
【０００６】
ＦＳＨＲに対する免疫耐性を破壊することは、がん治療を改善する可能性を有する。したがって、当該技術分野において、耐性を破壊することが可能なＦＳＨＲに向けたワクチンを開発することが必要とされている。本発明は、この未解決のニーズを満足させる。
【発明の概要】
【０００７】
一実施形態では、本発明は、核酸分子を含む免疫原性組成物であって、核酸分子が、ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、免疫原性組成物に関する。
【０００８】
一実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子である。
【０００９】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、ｂ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、ｃ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはｄ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片のヌクレオチド配列を含む。
【００１０】
一実施形態では、コード化ヌクレオチド配列は、開始コドン、ＩｇＥリーダー配列をコードするヌクレオチド配列、及び停止コドンからなる群から選択される少なくとも１つの調節配列と機能的に連結している。
【００１１】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。
【００１２】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、ｂ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、ｃ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはｄ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片のヌクレオチド配列を含む。
【００１３】
一実施形態では、核酸分子は、発現ベクターである。
【００１４】
一実施形態では、核酸分子は、ウイルス粒子である。
【００１５】
一実施形態では、免疫原性組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００１６】
一実施形態では、免疫原性組成物は、アジュバントを含む。
【００１７】
一実施形態では、本発明は、ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする核酸分子に関する。
【００１８】
一実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子からなる群から選択される。
【００１９】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、ｂ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、ｃ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはｄ）配列番号１、配列番号５、及び配列番号９からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片のヌクレオチド配列を含む。
【００２０】
一実施形態では、ヌクレオチド配列は、開始コドン、ＩｇＥリーダー配列をコードするヌクレオチド配列、及び停止コドンのうちの少なくとも１つと機能的に連結している。
【００２１】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号４、配列番号８、及び配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。
【００２２】
一実施形態では、核酸分子は、ａ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、ｂ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列の免疫原性断片、ｃ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはｄ）配列番号３、配列番号７、及び配列番号１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列の免疫原性断片のヌクレオチド配列を含む。
【００２３】
一実施形態では、核酸分子は、発現ベクターである。
【００２４】
一実施形態では、核酸分子は、ウイルス粒子である。
【００２５】
一実施形態では、本発明は、ペプチドを含む免疫原性組成物であって、ペプチドが、ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含む、免疫原性組成物に関する。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含む、ペプチドに関する。
【００２７】
一実施形態では、本発明は、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）に対する免疫応答の誘導を必要とする対象において、それを行う方法であって、核酸分子を含む免疫原性組成物を対象に投与することを含み、核酸分子が、ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、方法に関する。一実施形態では、投与方法は、電気穿孔及び注入のうちの少なくとも１つを含む。
【００２８】
一実施形態では、本発明は、腫瘍関連病理の治療または予防を必要とする対象において、それを行う方法であって、核酸分子を含む免疫原性組成物を対象に投与することを含み、核酸分子が、ａ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ｂ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％にわたって、少なくとも約９０％の同一性を含む免疫原性断片、ｃ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはｄ）配列番号２、配列番号６、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも６０％を含む免疫原性断片のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする、方法に関する。一実施形態では、投与方法は、電気穿孔及び注入のうちの少なくとも１つを含む。
【００２９】
一実施形態では、腫瘍関連病理は、腫瘍増殖、腫瘍転移、及び血管新生のうちの少なくとも１つである。
【００３０】
一実施形態では、対象は、がんと診断されている。
【００３１】
一実施形態では、がんは、卵巣癌である。
【００３２】
一実施形態では、方法は、１つ以上の卵巣癌抗原を含む免疫原性組成物を対象に投与することをさらに含む。
【００３３】
一実施形態では、対象は、がんを発症するリスクが高い。
【００３４】
一実施形態では、がんは、卵巣癌である。
【００３５】
一実施形態では、方法は、１つ以上の卵巣癌抗原を含む免疫原性組成物を対象に投与することをさらに含む。
【００３６】
本発明の好適な実施形態についての以下の詳細な説明は、添付図面と合わせて読むとより理解できよう。本発明を説明する目的のため、現在好ましい実施形態を図面に示す。しかしながら、本発明は、図面に示す実施形態の正確な配置構成及び手段に限定されるものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１Ａ〜図１Ｃを含み、ＦＳＨＲが、卵巣癌のおおよそ５０％で発現されるが、非性腺の健康な成人組織で発現されないことを実証する結果を示す。図１Ａは、がんゲノム・アトラス（ＴＣＧＡ）データセットから卵巣癌の４０４個のケースのＦＳＨＲ発現を示す。図１Ｂは、ＦＳＨＲのために染色した粘液卵巣癌の代表的な免疫組織化学画像を示す。図１Ｃは、ヒト健康組織中のＦＳＨＲ発現の正規化リアルタイム定量ＰＣＲを示す（Ｐｅｒａｌｅｓ−Ｐｕｃｈａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６）。
【図２】コンセンサスＦＳＨＲワクチンがインビトロで発現することを実証する例示の実験結果を示す。
【図３】図３Ａ〜図３Ｃを含み、ＦＳＨＲワクチンが、強いＩＦＮｇ応答を生成することを実証する例示の実験結果を示す。図３Ａは、実験設計の図を示す。５匹のマウスを各群でワクチン接種した。図３Ｂは、Ｓｙｎｃｏｎ  ＦＳＨＲによる免疫化が、天然のＦＳＨＲによる免疫化よりもコンセンサスＦＳＨＲペプチドに対して大きなＩＦＮγ応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。図３Ｃは、Ｓｙｎｃｏｎ  ＦＳＨＲによる免疫化が、天然のＦＳＨＲによる免疫化よりも天然のＦＳＨＲペプチドに対して大きなＩＦＮγ応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。
【図４】Ｓｙｎｃｏｎ  ＦＳＨＲによって誘導されたＩＦＮγ応答が主に、ペプチドプール２（ＦＳＨ結合ドメインと膜貫通ドメインの一部の重複部分）及びペプチドプール３（膜貫通ドメインと細胞内ドメインの重複部分）に対してであることを実証する例示の実験結果を示す。
【図５】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、ＦＳＨＲに対する耐性を破壊し、強力なＩＦＮγ応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。
【図６】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、強いＣＤ８及びＣＤ４  Ｔ細胞応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。
【図７】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、天然のＦＳＨＲによる免疫化よりも強いＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。
【図８】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、著しいＣＤ８応答、例えば、天然のＦＳＨＲ配列による免疫化よりも高いパーセンテージのＴＮＦα  ＣＤ８  Ｔ細胞を誘発することを実証する例示の実験結果を示す。
【図９】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、天然のＦＳＨＲによる免疫化よりも強いＣＤ４  Ｔｈ１応答を誘導することを実証する例示の実験結果を示す。
【図１０】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化が、天然のＦＳＨＲ配列による免疫化よりも著しいＣＤ４  Ｔｈ１応答、例えば、より高いパーセンテージのＩＦＮγ／ＴＮＦα／ＩＬ２  ＣＤ４  Ｔ細胞を誘発することを実証する例示の実験結果を示す。
【図１１】ＦＳＨＲワクチンが抗体応答を生成することを実証する例示の実験結果を示す。
【図１２】図１２Ａ〜図１２Ｃを含み、ＦＳＨＲワクチンが、予防的な方法で腫瘍進行を遅らせることができることを実証する例示の実験結果を示す。図１２Ａは、実験設計の図を示す。図１２Ｂは、腫瘍移植後の免疫化マウスの全腫瘍関連蛍光を評価する例示の実験の結果を示す。図１２Ｃは、腫瘍移植後の免疫化マウスにおける腫瘍増殖の画像を示す。
【図１３】コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンによる免疫化によりマウスの生存率を増加させることが可能であることを実証する例示の実験結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
一態様では、本発明は、ＦＳＨＲ抗原を標的にする免疫原性組成物を提供する。本発明のさらなる態様は、開示の免疫原性組成物を単独でまたは追加のがんワクチンまたは治療と組み合わせて用いたがん増殖または転移の治療及び／または予防である。
【００３９】
本発明のＦＳＨＲ抗原をコードする配列は、天然のＦＳＨＲタンパク質をコードする配列とは遺伝的に異なるため、本発明の抗原は、独自である。本発明の免疫原性組成物は、コード化抗原のユニーク配列のため、天然抗原に対する耐性の破壊、及び腫瘍増殖または転移の減少または予防に広く適用可能であり得る。これらのユニーク配列により、免疫原性組成物は、複数のタイプのがんに対して防御することができる。
【００４０】
免疫原性組成物を使用して、任意の数のがんを防御し、治療することができる。免疫原性組成物は、抗原を標的にする体液性及び細胞性免疫応答の両方を誘発することができる。免疫原性組成物は、抗原と反応性がある中和抗体及び免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体を誘発することができる。また、免疫原性組成物は、抗原と反応性があるＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発し、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）のうちの１つ以上を産生することができる。一実施形態では、免疫原性組成物は、抗原と反応性があるＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発し、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αのうちの１つ以上を産生することもできる。
【００４１】
定義
特に定義していない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。矛盾が生じる場合には、定義を含めて本明細書が優先となる。本発明の実施または試験において、本明細書中に記載されたものと同様または同等の方法及び材料を用いることはできるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の引用文献は、引用によりそれらの全体が組み入れられる。尚、本明細書で開示した材料、方法、及び実施例は単なる例示であり、限定することを意図していない。
【００４２】
本明細書で使用する「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「を有する（ｈａｓ）」、「できる」、「を含む（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」という用語、及びその変形は、付加的な行為あるいは構造の可能性を妨げない、制限しない移行句、用語、または単語であることを意図している。単数形である「ａ」、「及び」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上例外が明記されていない限り、複数形の意味を含む。本開示は、明示的に記載されているかどうかに関わらず、本明細書に示される実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる」、及び「から実質的になる」他の実施形態も企図する。
【００４３】
本明細書で使用する場合、「アジュバント」は、抗原の免疫原性を高めるために本明細書に記載の免疫原性組成物に添加される任意の分子を意味する。
【００４４】
本明細書で使用する場合、「抗体」は、クラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＥの抗体、またはそれらの断片もしくは誘導体（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄを含む）、並びにその一本鎖抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、二機能性抗体、及び誘導体を意味する。抗体は、哺乳動物の血清試料から単離された抗体、ポリクローナル抗体、親和性精製抗体、またはこれらの混合物のうち、所望のエピトープまたはそれに由来する配列に対する十分な結合特異性を示すものであり得る。
【００４５】
本明細書で使用する場合、「コード配列」または「コード化核酸」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ分子）を意味する。コード配列は、核酸の投与先である個体または哺乳動物の細胞内の発現を誘導できるプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントと機能的に連結した、開始及び終止シグナルをさらに含むことができる。
【００４６】
本明細書で使用する場合、「相補体」または「相補的」は、ヌクレオチド間または核酸分子のヌクレオチド類似体間のワトソン・クリック（例えば、Ａ−Ｔ／Ｕ及びＣ−Ｇ）またはフーグスティーン塩基対を意味する。
【００４７】
本明細書で使用する場合、「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、特定の抗原の複数のサブタイプのアライメント分析に基づいて構築された合成核酸配列またはそれに対応するポリペプチド配列を意味し得る。配列を用いて、特定の抗原の複数のサブタイプ、血清型、または株に対する幅広い免疫を誘導することができる。融合タンパク質などの合成抗原を、コンセンサス配列（またはコンセンサス抗原）に操作することができる。
【００４８】
本明細書で互換的に使用する、「電気穿孔」、「電気透過処理」、「界面動電増強」（「ＥＰ」）は、生体膜に微細経路（細孔）を生じさせるための膜貫通電場パルスの使用を意味する。こうした微細経路の存在により、プラスミド、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬剤、イオン、及び水などの生体分子が、細胞膜の片側から他方の側に通過することが可能になる。
【００４９】
本明細書で使用する場合、「発現可能形態」という用語は、個体の細胞に存在する場合にコード配列が発現されるように、標的タンパク質または免疫調節タンパク質をコードするコード配列に機能的に連結される必要な調節エレメントを含有する遺伝子構築物を指す。
【００５０】
本明細書で使用する場合、「断片」は、哺乳動物において免疫反応を誘発することのできるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはその部分を意味する。断片は、以下に記載のタンパク質断片をコードする種々のヌクレオチド配列の少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であり得る。
【００５１】
ポリペプチド配列に関する「断片」または「免疫原性断片」は、全長内因性抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発することができるポリペプチドを意味する。コンセンサスタンパク質の断片は、コンセンサスタンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％を含むことができる。いくつかの実施形態では、コンセンサスタンパク質の断片は、コンセンサスタンパク質の少なくとも２０以上のアミノ酸、少なくとも３０以上のアミノ酸、少なくとも４０以上のアミノ酸、少なくとも５０以上のアミノ酸、少なくとも６０以上のアミノ酸、少なくとも７０以上のアミノ酸、少なくとも８０以上のアミノ酸、少なくとも９０以上のアミノ酸、少なくとも１００以上のアミノ酸、少なくとも１１０以上のアミノ酸、少なくとも１２０以上のアミノ酸、少なくとも１３０以上のアミノ酸、少なくとも１４０以上のアミノ酸、少なくとも１５０以上のアミノ酸、少なくとも１６０以上のアミノ酸、少なくとも１７０以上のアミノ酸、少なくとも１８０以上のアミノ酸、少なくとも１９０以上のアミノ酸、少なくとも２００以上のアミノ酸、少なくとも２１０以上のアミノ酸、少なくとも２２０以上のアミノ酸、少なくとも２３０以上のアミノ酸、または少なくとも２４０以上のアミノ酸を含むことができる。
【００５２】
本明細書で使用する場合、「遺伝子構築物」という用語は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を指す。コード配列は、核酸の投与先である個体の細胞内の発現を誘導できるプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントと機能的に連結した、開始及び終止シグナルを含む。本明細書で使用する場合、「発現可能形態」という用語は、個体の細胞内に存在している場合にコード配列が発現するように、タンパク質をコードするコード配列に機能的に連結している必要な調節エレメントを含んでいる遺伝子構築物を指す。
【００５３】
本明細書で使用する場合、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈で使用する「同一」または「同一性」は、当該配列が指定領域にわたって指定の割合の同一残基を有することを意味する。この割合を計算するには、２つの配列を最適に整列させ、指定領域にわたって２つの配列を比較し、両配列の同一残基が発生する位置の数を確定して一致位置の数を得て、一致位置の数を指定領域の総位置数で割り、計算結果に１００を掛けることにより、配列同一性のパーセント値が得られる。２つの配列の長さが異なるか、アライメントにより１つ以上の付着末端が生じ、指定の比較領域に単一配列のみが含まれる場合には、単一配列の残基を計算の分母に含めるが、分子には含めない。ＤＮＡとＲＮＡを比較する場合には、チミン（Ｔ）とウラシル（Ｕ）を同等とみなすことができる。同一性の計算は、手動で行っても、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ  ２．０などのコンピューター配列アルゴリズムを使用して行ってもよい。
【００５４】
本明細書で使用する場合、「免疫応答」は、抗原の導入に応答して、宿主の免疫系、例えば、哺乳動物の免疫系が活性化することを意味する。この免疫応答は、細胞性もしくは体液性応答の形態、またはその両方であり得る。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、互いに共有結合している少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。一本鎖を表現することにより、相補鎖の配列も定義される。したがって、核酸は、表現される一本鎖の相補鎖も包含する。核酸の多くの変異体を、所与の核酸として同一目的で使用できる。したがって、核酸は、実質的に同一の核酸及びその相補体も包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列とハイブリダイズできるプローブを提供する。したがって、核酸は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブも包含する。
【００５６】
核酸は、一本鎖または二本鎖であってもよく、二本鎖と一本鎖の両方の配列の一部分を含むこともできる。核酸は、ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡの両方、ＲＮＡ、またはハイブリッドであってもよく、核酸は、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの組み合わせを含むことができ、ウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン、及びイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含むことができる。核酸は、化学合成法または組み換え法により得ることができる。
【００５７】
本明細書で使用する場合、「機能的に連結」は、遺伝子と空間的に接続しているプロモーターの制御下で遺伝子が発現することを意味する。プロモーターは、その制御下にある遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に位置できる。プロモーターと遺伝子の間の距離は、プロモーターの派生元遺伝子において当該プロモーターが制御する遺伝子とプロモーターの間の距離とほぼ同一であってもよい。当該技術分野で知られているように、プロモーター機能を失うことなく、この距離の変化に適応することができる。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「ペプチド」、「タンパク質」、または「ポリペプチド」は、アミノ酸の結合配列を意味することができ、天然、合成、または、天然及び合成の修飾あるいはそれらの組み合わせであってもよい。
【００５９】
本明細書で使用する場合、「プロモーター」は、核酸の細胞中発現を授与、活性化、または増強することのできる合成分子または天然由来分子を意味する。プロモーターは、発現をさらに増強し、及び／または空間的発現及び／またはその時間的発現を改変する目的で、１つ以上の特定の転写調節配列を含むことができる。プロモーターは、遠位のエンハンサーエレメントまたは抑制エレメントを含むこともでき、このエンハンサーエレメントまたは抑制エレメントは、転写開始部位から数千塩基対も離れた場所に位置できる。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物を含む源に由来してよい。プロモーターは、発現が発生する細胞、組織、もしくは臓器に関して、もしくは発現が生じる発生段階に関して、恒常的もしくは差次的に遺伝子成分の発現を調節でき、または、例えば、生理的ストレス、病原体、金属イオン、または誘発剤などの外部刺激に応答して遺伝子成分の発現を調節できる。プロモーターの代表例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレータープロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、またはＳＶ４０後期プロモーター、及びＣＭＶ  ＩＥプロモーターが挙げられる。
【００６０】
「シグナルペプチド」及び「リーダー配列」は、本明細書で互換的に使用され、本明細書に記載の腫瘍微小環境タンパク質のアミノ末端に結合することができるアミノ酸配列を指す。一般に、シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質の局在化を指示する。本明細書で使用するシグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質を産生する細胞からタンパク質を分泌し易くすることが好ましい。シグナルペプチド／リーダー配列は、細胞からの分泌時に、タンパク質（しばしば成熟タンパク質と呼ばれる）の残余から切断されることが多い。シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質のＮ末端に結合する。
【００６１】
本明細書で使用する場合、「対象」は、本明細書に記載の免疫原性組成物を投与することができる哺乳動物を意味する。哺乳動物は、例えば、ヒト、チンパンジー、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、またはネズミであり得る。
【００６２】
本明細書で使用する場合、「実質的に同一」は、第１及び第２のアミノ酸配列が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００以上のアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味し得る。実質的に同一は、第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００以上のヌクレオチドの領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることも意味し得る。
【００６３】
本明細書で使用する場合、「治療」または「治療すること」は、疾患を予防するか、抑制するか、抑圧するかまたは完全に除去することで対象を疾患から防御することを意味することができる。一実施形態では、疾患を予防することは、その疾患の発症前に対象に本発明の免疫原性組成物を投与することを含む。一実施形態では、疾患を予防することは、疾患の再発またはさらなる進行を予防するように、治療後に対象に本発明の免疫原性組成物を投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘導後でその疾患の臨床的出現前に、対象に本発明の免疫原性組成物を投与することを含む。疾患を抑圧することは、その疾患の臨床的出現後に、対象に本発明の免疫原性組成物を投与することを含む。
【００６４】
核酸に関して本明細書で使用する「変異体」は、（ｉ）言及されるヌクレオチド配列の一部分もしくは断片、（ｉｉ）言及されるヌクレオチド配列もしくはその一部分の相補体、（ｉｉｉ）言及される核酸もしくはその相補体と実質的に同一の核酸、または（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で、言及される核酸、その相補体、もしくはその実質的に同一の配列とハイブリダイズする核酸を意味する。
【００６５】
変異体は、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によりアミノ酸配列が異なっているが、少なくとも１つの生物活性を保持しているペプチドまたはポリペプチドとしてさらに定義することができる。「生物活性」の代表例としては、特定の抗体によって結合される能力または免疫応答を促進する能力が挙げられる。また、変異体は、言及されるタンパク質と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、少なくとも１つの生物活性を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質も意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわち、あるアミノ酸を類似特性（例えば、荷電領域の親水性、程度、及び分布）の別のアミノ酸に置換することは、当該技術分野では、通常は軽微な変化を伴うものと認識されている。こうした軽微な変化は、当該技術分野で理解されているように、アミノ酸の疎水性指標を検討することにより部分的に特定できる。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性指標は、その疎水性と電荷の考察に基づく。類似の疎水性指標を有するアミノ酸は置換可能であり、その後もタンパク質機能を維持することが当該技術分野において公知である。一態様では、±２の疎水性指標を有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性を用いて、生物機能を保持したタンパク質となる置換を明らかにすることもできる。ペプチドに関連してアミノ酸の親水性を検討することにより、そのペプチドの局所的な最大平均親水性を計算でき、抗原性及び免疫原性と良く相関すると報告されている有用な尺度となる。当該技術分野で理解されているように、類似の親水性値を有するアミノ酸を置換すると、例えば、免疫原性などの生物活性を保持したペプチドが得られる。親水性値が互いに±２以内のアミノ酸を用いて、置換を実施できる。アミノ酸の疎水性指標と親水性値の両方とも、そのアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。こうした知見と一致して、生物機能に適合するアミノ酸置換とは、アミノ酸の相対的類似性、特に、当該アミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存するものと理解されており、この相対的類似性は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、その他の特性により明らかになる。
【００６６】
変異体は、完全遺伝子配列またはそれらの断片の全長にわたって実質的に同一なヌクレオチド配列であってもよい。ヌクレオチド配列は、遺伝子配列またはそれらの断片の全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。変異体は、アミノ酸配列またはそれらの断片の全長にわたって実質的に同一なアミノ酸配列であってもよい。アミノ酸配列は、アミノ酸配列またはそれらの断片の全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。
【００６７】
本明細書で使用する場合、「ベクター」は、複製起点を含む核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であってもよい。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであってもよい。ベクターは、自己複製過剰染色体ベクターであってもよく、好ましくは、ＤＮＡプラスミドである。
【００６８】
本明細書中の数値範囲の記述について、同程度の精度でその間に入る各数が明示的に企図される。例えば、６〜９という範囲の場合、６及び９に加えて７及び８という数が企図され、６．０〜７．０という範囲の場合、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０という数が明示的に企図される。
【００６９】
説明
本発明は、ＦＳＨＲ抗原をコードする最適化コンセンサス配列を提供する。一実施形態では、最適化コンセンサス配列によってコードされるＦＳＨＲ抗原は、哺乳動物において免疫応答を誘発することができる。一実施形態では、最適化コンセンサス配列によってコードされるＦＳＨＲ抗原は、それを、免疫応答を誘導させることができる免疫原として特に効果的にさせるエピトープ（複数可）を含むことができる。
【００７０】
最適化コンセンサス配列は、２つ以上の天然のＦＳＨＲタンパク質由来のコンセンサス配列であり得る。最適化コンセンサス配列は、コンセンサス配列及び／または修飾（複数可）を含んで、発現を改善することができる。修飾には、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、翻訳開始を増加させるコザック配列の付加、及び／または免疫原性を増加させるための免疫グロブリンリーダー配列の付加が含まれ得る。最適化コンセンサス配列によってコードされるＦＳＨＲ抗原は、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、限定されないが、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）または免疫グロブリン（ＩｇＧ）シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含むことができる。いくつかの実施形態では、最適化コンセンサス配列によってコードされる抗原は、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含むことができる。最適化コンセンサス配列によってコードされる抗原は、対応する天然抗原よりも強い細胞性及び／または体液性免疫応答を誘発するように設計することができる。最適化コンセンサス配列によってコードされる抗原は、抗がん免疫療法に対する耐性を破壊し、抗がん免疫療法と相乗作用するように設計することができる。
【００７１】
一実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲは、天然のヒトＦＳＨＲに対する耐性を破壊するために設計されている。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＦＳＨＲをコードする配列は、配列番号１または配列番号３に記載される。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＦＳＨＲコード化抗原は、配列番号２または配列番号４に記載されるアミノ酸配列を有する。
【００７２】
一実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲは、天然のマウスＦＳＨＲに対する耐性を破壊するために設計されている。一実施形態では、マウス最適化コンセンサスＦＳＨＲをコードする配列は、配列番号５または配列番号７に記載される。一実施形態では、マウス最適化コンセンサスＦＳＨＲコード化抗原は、配列番号６または配列番号８に記載されるアミノ酸配列を有する。
【００７３】
一実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲは、天然のイヌＦＳＨＲに対する耐性を破壊するために設計されている。一実施形態では、イヌ最適化コンセンサスＦＳＨＲをコードする配列は、配列番号９、または配列番号１１に記載される。一実施形態では、イヌ最適化コンセンサスＦＳＨＲコード化抗原は、配列番号１０または配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を有する。
【００７４】
一実施形態では、最適化コンセンサスコード化ＦＳＨＲ抗原は、１つ以上の調節エレメントと機能的に連結している。一実施形態では、調節エレメントは、リーダー配列である。一実施形態では、ＩｇＥリーダーをコードする配列と機能的に連結した最適化コンセンサスＤＮＡ配列は、配列番号３、配列番号７、または配列番号１１に記載される。一実施形態では、ＩｇＥリーダー配列と機能的に連結した最適化コンセンサスコード化ＦＳＨＲ抗原は、配列番号４、配列番号８、または配列番号１２に記載される。
【００７５】
一実施形態では、調節エレメントは、開始コドンである。したがって、一実施形態では、本発明は、配列番号１、配列番号５、または配列番号９に記載される核酸配列、または５’末端で開始コドンを含むヌクレオチド配列と機能的に連結したそれらの断片もしくはホモログに関する。一実施形態では、本発明は、配列番号２、配列番号６、または配列番号１０に記載されるアミノ酸配列、またはＮ末端で開始コドン（例えば、メチオニン）によってコードされるアミノ酸と機能的に連結したそれらの断片もしくはホモログに関する。
【００７６】
一実施形態では、調節エレメントは、少なくとも１つの停止コドンである。したがって、一実施形態では、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１に記載される核酸配列、または３’末端で少なくとも１つの停止コドンを含むヌクレオチド配列と機能的に連結したそれらの断片もしくはホモログに関する。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、２つの停止コドンと機能的に連結して、翻訳終止の効率を増加させる。
【００７７】
一実施形態では、ＦＳＨＲ抗原をコードする最適化コンセンサス配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するペプチドをコードすることができる。一実施形態では、最適化コンセンサス配列は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を有することができる。いくつかの実施形態では、配列は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１に記載のヌクレオチド配列の全長にわたって、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列であり得る。他の実施形態では、配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であり得る。いくつかの実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲ抗原は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１に記載の核酸配列の全長にわたって、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するＤＮＡ配列からの転写産物であるＲＮＡによってコードすることができる。いくつかの実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲ抗原は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするＲＮＡによってコードすることができる。
【００７８】
最適化コンセンサスコード化ＦＳＨＲ抗原は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、抗原は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有することができる。
【００７９】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２の免疫原性断片を提供することができる。免疫原性断片は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２の全長の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を含むことができる。いくつかの実施形態では、免疫原性断片は、リーダー配列（例えば、ＩｇＥリーダーなどの免疫グロブリンリーダー）を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性断片は、リーダー配列を含まない。
【００８０】
一実施形態では、核酸配列は、本明細書に記載のコンセンサスＦＳＨＲ免疫原配列をコードするＲＮＡ配列を含む。例えば、核酸は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２のうちの１つ以上をコードするＲＮＡ配列、それらの変異体、それらの断片またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【００８１】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２の免疫原性断片に相同のアミノ酸配列を有するタンパク質の免疫原性断片を提供することができる。そのような免疫原性断片は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２に９５％相同のタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を含むことができる。いくつかの実施形態は、本明細書のコンセンサスタンパク質配列の免疫原性断片に９０％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のコンセンサスタンパク質配列の免疫原性断片に９７％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のコンセンサスタンパク質配列の免疫原性断片に９８％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のコンセンサスタンパク質配列の免疫原性断片に９９％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態では、免疫原性断片は、リーダー配列（例えば、ＩｇＥリーダーなどの免疫グロブリンリーダー）を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性断片は、リーダー配列を含まない。
【００８２】
いくつかの実施形態は、配列番号１の免疫原性断片に関する。免疫原性断片は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１の全長の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であり得る。免疫原性断片は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、または配列番号１１の断片に少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％相同であり得る。いくつかの実施形態では、免疫原性断片は、リーダー配列（例えば、ＩｇＥリーダーなどの免疫グロブリンリーダー）をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。
【００８３】
免疫原性組成物
本明細書で提供されるのは、最適化コンセンサス配列、最適化コンセンサスコード化抗原、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせを含む、ワクチンなどの免疫原性組成物である。免疫原性組成物を使用して、腫瘍増殖または転移を減少させるかまたは腫瘍の発達に対して防御することによって、がんベースの病理を治療、予防、及び／または防御することができる。免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与した対象の免疫応答を著しく誘導することができる。
【００８４】
一実施形態では、免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与した対象の免疫応答を大幅に誘導することによって、対象におけるがんベースの病理を防御及び治療することができる。
【００８５】
免疫原性組成物は、ＤＮＡワクチン、ＲＮＡワクチン、ペプチドワクチン、または混合ワクチンであり得る。ワクチンは、抗原をコードする最適化コンセンサスヌクレオチド配列を含むことができる。ヌクレオチド配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせであり得る。ヌクレオチド配列は、ペプチド結合によって抗原に連結されるリンカー、リーダー、またはタグ配列をコードする付加配列も含み得る。ペプチドワクチンは、抗原、その変異体、その断片、またはその組み合わせを含むことができる。組み合わせＤＮＡ及びペプチドワクチンは、上述の最適化コンセンサスヌクレオチド配列及びコード化抗原を含むことができる。
【００８６】
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物を使用して、例えば、ＦＳＨ受容体を持つ腫瘍細胞によって特徴付けられる卵巣癌または他のがん、例えば、前立腺癌細胞及び転移性腫瘍性病変に対する保護抗腫瘍免疫を誘発し、それらの発生または再発を予防することができる。
【００８７】
ワクチンは、弱毒化生ワクチン、抗原を送達するための組み換えベクターを用いたワクチン、サブユニットワクチン、及び糖タンパク質ワクチン、例えば、限定されないが、米国特許第４，５１０，２４５号、同第４，７９７，３６８号、同第４，７２２，８４８号、同第４，７９０，９８７号、同第４，９２０，２０９号、同第５，０１７，４８７号、同第５，０７７，０４４号、同第５，１１０，５８７号、同第５，１１２，７４９号、同第５，１７４，９９３号、同第５，２２３，４２４号、同第５，２２５，３３６号、同第５，２４０，７０３号、同第５，２４２，８２９号、同第５，２９４，４４１号、同第５，２９４，５４８号、同第５，３１０，６６８号、同第５，３８７，７４４号、同第５，３８９，３６８号、同第５，４２４，０６５号、同第５，４５１，４９９号、同第５，４５３，３６４号、同第５，４６２，７３４号、同第５，４７０，７３４号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４８２，７１３号、同第５，５９１，４３９号、同第５，６４３，５７９号、同第５，６５０，３０９号、同第５，６９８，２０２号、同第５，９５５，０８８号、同第６，０３４，２９８号、同第６，０４２，８３６号、同第６，１５６，３１９及び同第６，５８９，５２９号に記載されるワクチンであり得、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【００８８】
本発明のワクチンは、安全であることなど、有効なワクチンに必要な特徴を有することができるため、ワクチン自体は、病気または死を引き起こさず、病気に対して防御し、中和抗体を誘導し、防御Ｔ細胞を誘導し、投与し易く、副作用もほとんどなく、生物学的安定性や投与量当たりの低コスト化をもたらすことができる。
【００８９】
一実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、治療すべき細胞がＦＳＨＲを発現する限り、がん及び腫瘍細胞、すなわち、悪性及び良性腫瘍の両方の治療に有用である。したがって、本明細書に記載の方法及び組成物の種々の実施形態では、がんは、乳癌、肺癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、胃癌、膀胱癌、膵癌、腎臓癌、子宮頸癌、肝臓癌、甲状腺癌、卵巣癌、及び精巣癌を含むことができるが、これらに限定されない。
【００９０】
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＦＳＨＲ抗原及び１つ以上の追加のがん抗原を含む。
【００９１】
特定のがんを治療するための組み合わせ免疫原性組成物
免疫原性組成物は、上述の抗原と１つ以上のがん抗原との種々の組み合わせの形態で、特定のがんまたは腫瘍を治療することができる。１つ以上のがん抗原の組み合わせに応じて、種々のがんまたは他の腫瘍型を免疫原性組成物で標的とすることができる。これらのがんは、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、及び精巣癌を含むことができるが、これらに限定されない。
【００９２】
がん抗原
免疫原性組成物は、ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ  Ｅ６  Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、イディオタイプ、ＭＡＧＥ  Ａ３、ｐ５３（非変異体）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＳＭＡ、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、ｐ５３変異体、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、Ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ−ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＴＲＰ−２、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ  Ａ１、ｓＬｅ（ａ）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３ガングリオシド、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精液タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、精子線維鞘タンパク質、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ  ２、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１（プロタミン２）、ＭＡＤ−ＣＴ−２、及びＦＯＳ−関連抗原１などの１つ以上のがん抗原を含み、腫瘍関連病理を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ  Ｅ６  Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、イディオタイプ、ＭＡＧＥ  Ａ３、ｐ５３（非変異体）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＳＭＡ、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、ｐ５３  変異体、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、Ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ−ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＴＲＰ−２、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ  Ａ１、ｓＬｅ（ａ）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３ガングリオシド、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精液タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、精子線維鞘タンパク質、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ  １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ  ２、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１（プロタミン２）、ＭＡＤ−ＣＴ−２、及びＦＯＳ−関連抗原を最適化コンセンサスコード化ＦＳＨＲ抗原と組み合わせて、腫瘍関連病理を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、腫瘍関連病理を治療または予防することもできる。
【００９３】
卵巣癌抗原
免疫原性組成物は、ＣＡ−１２５、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン（ベータ−ｈＣＧ）、尿ゴナドトロピン断片、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、インヒビン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）抗原、ミュラー管抑制物質（ＭＩＳ）、トポイソメラーゼＩＩ、炭水化物抗原１９−９、がん抗原２７−２９、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）及びフェリチンなどの１つ以上のがん抗原を含み、卵巣癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＣＡ−１２５、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン（ベータ−ｈＣＧ）、尿ゴナドトロピン断片、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、インヒビン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）抗原、ミュラー管抑制物質（ＭＩＳ）、トポイソメラーゼＩＩ、炭水化物抗原１９−９、がん抗原２７−２９、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）及びフェリチンをＦＳＨＲ抗原と組み合わせて、卵巣癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、卵巣癌を治療または予防することもできる。
【００９４】
前立腺癌抗原
免疫原性組成物は、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、またはＳＴＥＡＰなどの１つ以上のがん抗原を含み、前立腺癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、またはＳＴＥＡＰをＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、前立腺癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、前立腺癌を治療または予防することもできる。ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、及びＳＴＥＰ抗原、並びにそのような抗原をコードする核酸分子の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１１／６０５９２号及び対応する米国特許第８，９２７，６９２号に開示され、それらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００９５】
乳癌抗原
免疫原性組成物は、ＨＥＲ２、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＭＡＧＥ−３及びＮＹ−ＥＳＯ−１などの１つ以上のがん抗原を含み、乳癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＨＥＲ２、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＭＡＧＥ−３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１をＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、乳癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、乳癌を治療または予防することもできる。
【００９６】
膵癌抗原
免疫原性組成物は、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＨＥＲ２、メソテリン、サバイビン、及びＶＥＧＦＲ２などの１つ以上のがん抗原を含み、膵癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＨＥＲ２、メソテリン、サバイビン、及びＶＥＧＦＲ２をＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、膵癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、膵癌を治療または予防することもできる。
【００９７】
肺癌抗原
免疫原性組成物は、ＴＥＲＴ、ＣＤ２２、ＭＡＧＥ−３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１などの１つ以上のがん抗原を含み、肺癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＴＥＲＴ、ＣＤ２２、ＭＡＧＥ−３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１をＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、肺癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、肺癌を治療または予防することもできる。
【００９８】
黒色腫抗原
免疫原性組成物は、チロシナーゼ、ＰＲＡＭＥ、またはＧＰ１００−Ｔｒｐ２などの１つ以上のがん抗原を含み、黒色腫を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原チロシナーゼ、ＰＲＡＭＥ、またはＧＰ１００−Ｔｒｐ２をＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、黒色腫を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、黒色腫を治療または予防することもできる。
【００９９】
肝臓癌抗原
免疫原性組成物は、ＨＢＶコア抗原、ＨＢＶ表面抗原、ＨＣＶＮＳ３４Ａ、ＨＣＶＮＳ５Ａ、ＨＣＶＮＳ５Ｂ、またはＨＣＶＮＳ４Ｂなどの１つ以上のがん抗原を含み、肝臓癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＨＢＶコア抗原、ＨＢＶ表面抗原、ＨＣＶＮＳ３４Ａ、ＨＣＶＮＳ５Ａ、ＨＣＶＮＳ５Ｂ、またはＨＣＶＮＳ４ＢをＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、肝臓癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、肝臓癌を治療または予防することもできる。
【０１００】
膠芽腫抗原
免疫原性組成物は、ＣＭＶを含み、膠芽腫を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、ＣＭＶをＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、膠芽腫を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、膠芽腫を治療または予防することもできる。
【０１０１】
血液癌抗原（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）
免疫原性組成物は、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ−１、ｈＴＥＲＴなどの１つ以上のがん抗原を含み、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの血液癌を治療または予防することができる。免疫原性組成物はさらに、１つ以上のがん抗原ＰＲＡＭＥ、ＷＴ−１、ｈＴＥＲＴをＦＳＨＡ抗原と組み合わせて、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの血液癌を治療または予防することができる。がん抗原の他の組み合わせを適用して、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの血液癌を治療または予防することもできる。
【０１０２】
免疫応答
免疫原性組成物は、組成物を投与した対象において免疫応答を誘導することができる。誘導された免疫応答は、天然抗原に特異的であり得る。誘導された免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原と反応することができる。種々の実施形態では、関連抗原は、最適化コンセンサスコード化抗原のアミノ酸配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の相同性を有するアミノ酸配列を有する抗原を含む。種々の実施形態では、関連抗原は、本明細書に開示の最適化コンセンサスヌクレオチド配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされる抗原を含む。
【０１０３】
免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与した対象において体液性免疫応答を誘導することができる。誘導された体液性免疫応答は、天然抗原に特異的であり得る。誘導された体液性免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原と反応することができる。体液性免疫応答は、免疫原性組成物を投与した対象において、約１．５倍〜約１６倍、約２倍〜約１２倍、または約３倍〜約１０倍に誘導することができる。体液性免疫応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、免疫原性組成物を投与した対象において、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、または少なくとも約１６．０倍に誘導することができる。
【０１０４】
免疫原性組成物によって誘導された体液性免疫応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象と比較して、免疫原性組成物を投与した対象と関連する中和抗体のレベルの増加を含むことができる。中和抗体は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原に特異的であり得る。中和抗体は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。中和抗体は、免疫原性組成物を投与した対象において腫瘍増殖、転移、または腫瘍関連病理の防御及び／または治療をもたらすことができる。
【０１０５】
免疫原性組成物によって誘導された体液性免疫応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象と比較して、免疫原性組成物を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルの増加を含むことができる。これらのＩｇＧ抗体は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原に特異的であり得る。これらのＩｇＧ抗体は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルは、免疫原性組成物を投与しなかった対象と比較して、約１．５倍〜約１６倍、約２倍〜約１２倍、または約３倍〜約１０倍に増加させることができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルは、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、または少なくとも約１６．０倍に増加させることができる。
【０１０６】
免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与した対象において細胞性免疫応答を誘導することができる。誘導された細胞性免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原に特異的であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原に反応することができる。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができる。誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、多官能性であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができ、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、またはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの組み合わせを産生する。
【０１０７】
誘導された細胞性免疫応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象と比較して、免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象と比較して、約２倍〜約３０倍、約３倍〜約２５倍、または約４倍〜約２０倍に増加させることができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１６．０倍、少なくとも約１７．０倍、少なくとも約１８．０倍、少なくとも約１９．０倍、少なくとも約２０．０倍、少なくとも約２１．０倍、少なくとも約２２．０倍、少なくとも約２３．０倍、少なくとも約２４．０倍、少なくとも約２５．０倍、少なくとも約２６．０倍、少なくとも約２７．０倍、少なくとも約２８．０倍、少なくとも約２９．０倍、または少なくとも約３０．０倍に増加させることができる。
【０１０８】
誘導された細胞性免疫応答は、天然抗原と反応性があるＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ／Ｔ−ｂｅｔ三重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ／Ｔ−ｂｅｔ三重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍に増加させることができる。
【０１０９】
誘導された細胞性免疫応答は、天然抗原と反応性があるＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ二重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ二重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、または１４倍に増加させることができる。
【０１１０】
免疫原性組成物によって誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができる。誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、多官能性であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができ、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、またはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの組み合わせを産生する。
【０１１１】
誘導された細胞性免疫応答は、ＩＦＮ−γを産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞の頻度は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍に増加させることができる。
【０１１２】
誘導された細胞性免疫応答は、ＴＮＦ−αを産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＴＮＦ−α＋Ｔ細胞の頻度は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２１倍、または２２倍に増加させることができる。
【０１１３】
誘導された細胞性免疫応答は、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの両方を産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性組成物を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ−α＋の頻度は、免疫原性組成物を投与しなかった対象または非最適化ＦＳＨＲ抗原を投与した対象と比較して、少なくとも約２倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４．０倍、４．５倍、５．０倍、５．５倍、６．０倍、６．５倍、７．０倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍、９．０倍、９．５倍、１０．０倍、１０．５倍、１１．０倍、１１．５倍、１２．０倍、１２．５倍、１３．０倍、１３．５倍、１４．０倍、１４．５倍、１５．０倍、１５．５倍、１６．０倍、１６．５倍、１７．０倍、１７．５倍、１８．０倍、１８．５倍、１９．０倍、１９．５倍、２０．０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、３０倍、３１倍、３２倍、３３倍、３４倍、または３５倍に増加させることができる。
【０１１４】
本発明の免疫原性組成物は、安全であることなど、有効なワクチンに必要な特徴を有することができるため、ワクチン自体は、病気または死を引き起こさず、ウイルスまたはバクテリアなどの生きた病原体への暴露から生じる病気に対して防御し、中和抗体を誘導して、細胞の創出を防止し、細胞内病原体に対して防御Ｔ細胞を誘導し、投与し易く、副作用もほとんどなく、生物学的安定性や投与量当たりの低コスト化をもたらすことができる。
【０１１５】
免疫原性組成物は、筋肉または皮膚などの異なる組織に投与した場合に免疫応答をさらに誘導することができる。免疫原性組成物は、電気穿孔または注入を介した投与、または皮下投与、または筋肉内投与した場合に免疫応答をさらに誘導することができる。
【０１１６】
断片
一実施形態では、免疫原性断片は、本発明の全長抗原の免疫原性断片である。本明細書で使用する場合、免疫原性断片は、全長配列のものと大幅に類似している免疫応答を誘導することができる全長核酸またはアミノ酸配列の断片である。一実施形態では、免疫原性断片は、全長配列の免疫原性エピトープを含む。一実施形態では、免疫原性断片は、全長配列と比較して、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、少なくとも約１．０倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．３倍、少なくとも約１．４倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、または２．０倍を超える免疫応答を誘導する。
【０１１７】
免疫原性断片は、免疫原性断片を投与した対象において体液性免疫応答を誘導することができる。体液性免疫応答は、免疫原性断片を投与した対象において、約１．５倍〜約１６倍、約２倍〜約１２倍、または約３倍〜約１０倍に誘導することができる。体液性免疫応答は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、免疫原性断片を投与した対象において、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、または少なくとも約１６．０倍に誘導することができる。
【０１１８】
免疫原性断片によって誘導された体液性免疫応答は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、免疫原性断片を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルの増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルは、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、約１．５倍〜約１６倍、約２倍〜約１２倍、または約３倍〜約１０倍に増加させることができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＩｇＧ抗体のレベルは、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、または少なくとも約１６．０倍に増加させることができる。
【０１１９】
免疫原性断片は、免疫原性断片を投与した対象において細胞性免疫応答を誘導することができる。誘導された細胞性免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原に特異的であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、最適化コンセンサスコード化抗原に関連する天然抗原に反応することができる。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができる。誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、多官能性であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができ、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、またはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの組み合わせを産生する。
【０１２０】
誘導された細胞性免疫応答は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、約２倍〜約３０倍、約３倍〜約２５倍、または約４倍〜約２０倍に増加させることができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１６．０倍、少なくとも約１７．０倍、少なくとも約１８．０倍、少なくとも約１９．０倍、少なくとも約２０．０倍、少なくとも約２１．０倍、少なくとも約２２．０倍、少なくとも約２３．０倍、少なくとも約２４．０倍、少なくとも約２５．０倍、少なくとも約２６．０倍、少なくとも約２７．０倍、少なくとも約２８．０倍、少なくとも約２９．０倍、または少なくとも約３０．０倍に増加させることができる。
【０１２１】
誘導された細胞性免疫応答は、天然抗原と反応性があるＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ／Ｔ−ｂｅｔ三重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ／Ｔ−ｂｅｔ三重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍に増加させることができる。
【０１２２】
誘導された細胞性免疫応答は、天然抗原と反応性があるＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ二重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ１０７ａ／ＩＦＮγ二重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、免疫原性を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、または１４倍に増加させることができる。
【０１２３】
免疫原性断片によって誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができる。誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、最適化コンセンサス抗原に遺伝的に関連する天然抗原と反応することができる。誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、多官能性であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することを含むことができ、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、またはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの組み合わせを産生する。
【０１２４】
誘導された細胞性免疫応答は、ＩＦＮ−γを産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞の頻度は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍に増加させることができる。
【０１２５】
誘導された細胞性免疫応答は、ＴＮＦ−αを産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＴＮＦ−α＋Ｔ細胞の頻度は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２１倍、または２２倍に増加させることができる。
【０１２６】
誘導された細胞性免疫応答は、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの両方を産生するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の増加を含むことができる。免疫原性断片を投与した対象と関連するＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ−α＋の頻度は、免疫原性断片を投与しなかった対象と比較して、少なくとも約２倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４．０倍、４．５倍、５．０倍、５．５倍、６．０倍、６．５倍、７．０倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍、９．０倍、９．５倍、１０．０倍、１０．５倍、１１．０倍、１１．５倍、１２．０倍、１２．５倍、１３．０倍、１３．５倍、１４．０倍、１４．５倍、１５．０倍、１５．５倍、１６．０倍、１６．５倍、１７．０倍、１７．５倍、１８．０倍、１８．５倍、１９．０倍、１９．５倍、２０．０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、３０倍、３１倍、３２倍、３３倍、３４倍、または３５倍に増加させることができる。
【０１２７】
本発明の免疫原性断片は、安全であることなど、有効なワクチンに必要な特徴を有することができるため、ワクチン自体は、病気または死を引き起こさず、ウイルスまたはバクテリアなどの生きた病原体への暴露から生じる病気に対して防御し、中和抗体を誘導して、細胞の創出を防止し、細胞内病原体に対して防御Ｔ細胞を誘導し、投与し易く、副作用もほとんどなく、生物学的安定性や投与量当たりの低コスト化をもたらすことができる。
【０１２８】
免疫原性断片は、筋肉または皮膚などの異なる組織に投与した場合に免疫応答をさらに誘導することができる。免疫原性断片は、電気穿孔または注入を介した投与、または皮下投与、または筋肉内投与した場合に免疫応答をさらに誘導することができる。
【０１２９】
ベクター
ベクターには、プラスミド、発現ベクター、組み換えウイルス、任意の形態の組み換え「裸ＤＮＡ」ベクターなどが含まれるが、これらに限定されない。「ベクター」には、細胞に感染、トランスフェクト、一過性または恒久的に形質導入することができる核酸が含まれる。ベクターは、裸の核酸でも、またはタンパク質もしくは脂質と複合体を形成する核酸でもよいことは認識されるだろう。ベクターは、場合により、ウイルスまたは細菌の核酸及び／またはタンパク質、及び／または膜（例えば、細胞膜、ウイルス脂質エンベロープなど）を含む。ベクターには、ＤＮＡの断片を連結し、複製することができるレプリコン（例えば、ＲＮＡレプリコン、バクテリオファージ）が含まれるが、これらに限定されない。したがって、ベクターには、限定されないが、ＲＮＡ、自律的な自己複製環状または直鎖状ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、プラスミド、ウイルスなど、例えば、米国特許第５，２１７，８７９号を参照）が含まれ、発現または非発現プラスミドの両方が含まれる。組み換え微生物または細胞の培養物を、「発現ベクター」を有するとして記載する場合には、これは、染色体外の環状及び直鎖状ＤＮＡ、並びに宿主染色体（複数可）に組み込まれたＤＮＡの両方を含むものである。ベクターが宿主細胞により保持される場合には、ベクターは、有糸分裂の間に細胞により自律的構造として安定して複製されるか、または宿主のゲノム内に組み込まれる。
【０１３０】
１つ以上のベクターは、発現構築物であり得、これは、一般に、特定の遺伝子を標的細胞に導入するのに用いられるプラスミドである。発現ベクターが細胞の中に入ると、遺伝子によってコードされるタンパク質は、細胞性転写及び翻訳機構リボソーム複合体によって産生される。プラスミドは、エンハンサー及びプロモーター領域として作用する調節配列を含み、かつ、発現ベクター上に運搬された遺伝子の効率的な転写をもたらすように操作されることが多い。本発明のベクターは、多量の安定したメッセンジャーＲＮＡを発現するため、多量の安定したタンパク質を発現する。
【０１３１】
ベクターは、強力なプロモーター、強力な終止コドン、プロモーターとクローン化遺伝子の間の距離の調節、転写終止配列及びＰＴＩＳ（ポータブルな翻訳開始配列）の挿入などの発現シグナルを有し得る。
【０１３２】
（１）発現ベクター
ベクターは、環状プラスミドまたは線状核酸であり得る。環状プラスミド及び線状核酸は、適切な対象細胞内において特定のヌクレオチド配列の発現をもたらすことができる。ベクターは、抗原コード化ヌクレオチド配列に機能的に連結しているプロモーターを有してもよく、これは、終止シグナルに機能的に連結し得る。ベクターは、ヌクレオチド配列の適切な翻訳に必要な配列も含み得る。対象のヌクレオチド配列を含むベクターは、キメラであってもよく、これは、その成分の少なくとも１つが、その他の成分の少なくとも１つに対して異種であることを意味する。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下であってもよく、宿主細胞がいくつかの特定の外部刺激に晒された場合にのみ転写を開始する。多細胞生物の場合、プロモーターは、特定の組織または臓器もしくは発生の段階に特異的であり得る。
【０１３３】
（２）ＲＮＡベクター
一実施形態では、核酸は、ＲＮＡ分子である。したがって、一実施形態では、本発明は、１つ以上のＭＡＹＶ抗原をコードするＲＮＡ分子を提供する。ＲＮＡは、プラス鎖であってもよい。したがって、いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、逆転写などのいかなる介在複製ステップも必要とすることなく細胞によって翻訳することができる。本発明で有用なＲＮＡ分子は、５’キャップ（例えば、７−メチルグアノシン）を有し得る。このキャップは、ＲＮＡのインビボ翻訳を増強し得る。本発明で有用なＲＮＡ分子の５’ヌクレオチドは、５’トリホスフェート基を有し得る。キャップをしたＲＮＡでは、これは、５’から５’への架橋を介して、７−メチルグアノシンに連結され得る。ＲＮＡ分子は、３’ポリ−Ａ尾部を有し得る。それはまた、その３’末端付近にポリ−Ａポリメラーゼ認識配列（例えば、ＡＡＵＡＡＡ）を含み得る。本発明で有用なＲＮＡ分子は、一本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、裸のＲＮＡ分子である。一実施形態では、ＲＮＡ分子は、ベクター内に含まれる。
【０１３４】
一実施形態では、ＲＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを有する。一実施形態では、５’ＵＴＲは、０〜３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加する５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの種々の領域とアニールするＰＣＲ用プライマーの設計を含むが、これらに限定されない、種々の方法により改変され得る。この試みを使用して、当業者は、転写ＲＮＡの遺伝子導入後の最適翻訳効率の達成に必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾することができる。
【０１３５】
５’及び３’ＵＴＲは、対象の遺伝子のための、天然に存在する内因性５’及び３’ＵＴＲであり得る。あるいは、対象の遺伝子に内因性ではないＵＴＲ配列を、ＵＴＲ配列を順方向及び逆方向プライマーに取り込ませることによりまたは鋳型の何らかの他の修飾により添加することができる。対象の遺伝子に内因性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／または翻訳効率の修飾に有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列におけるＡＵに富むエレメントが、ＲＮＡの安定性を低減し得ることが知られる。したがって、３’ＵＴＲを、当該技術分野で周知である、ＵＴＲの性質に基づき、転写ＲＮＡの安定性を増加するように選択または設計できる。
【０１３６】
一実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含み得る。あるいは、対象の遺伝子に内因性ではない５’ＵＴＲを上記のようにＰＣＲで付加する場合、コンセンサスコザック配列を、５’ＵＴＲ配列の付加により再設計できる。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写産物の翻訳効率を高め得るが、効率的翻訳を可能にするために全ＲＮＡで必要であるようには見えない。多くのＲＮＡについてのコザック配列の必要性は、当該技術分野で知られる。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルス由来であり得る。他の実施形態では、種々のヌクレオチド類似体を、ＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げるために３’または５’ＵＴＲにおいて使用できる。
【０１３７】
一実施形態では、ＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳の開始、及び細胞におけるＲＮＡ安定性を決定する、５’末端及び３’ポリ（Ａ）尾部の両者上にキャップを有する。
【０１３８】
一実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオシド修飾ＲＮＡである。ヌクレオシド修飾ＲＮＡは、非修飾ＲＮＡを上回る特定の利点を有し、例えば、安定性の増加、先天性免疫原性が低いかまたは存在しない、及び翻訳の強化が挙げられる。
【０１３９】
（３）環状及び線状ベクター
ベクターは、環状プラスミドであってもよく、これは、標的細胞を統合によって細胞性ゲノムに形質転換してもよく、あるいは、染色体外に存在してもよい（例えば、複製起点を持つ自律複製プラスミド）。
【０１４０】
ベクターは、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、ｐｒｏｖａｘ、または、抗原をコードするＤＮＡを発現することができ、かつ、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳できるようにすることが可能な発現可能な任意の他の発現ベクターであってもよい。
【０１４１】
また、本明細書で提供されるのは、線状核酸免疫原性組成物または線状発現カセット（「ＬＥＣ」）であり、これは、電気穿孔を介して対象に効率よく送達され、かつ、１つ以上の所望の抗原を発現することができる。ＬＥＣは、任意のリン酸バックボーンを欠いた任意の線状ＤＮＡであってもよい。ＤＮＡは、１つ以上の抗原をコードしてもよい。ＬＥＣは、プロモーター、イントロン、停止コドン、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。抗原の発現は、プロモーターにより制御されてもよい。ＬＥＣは、任意の抗生物質抵抗性遺伝子及び／またはリン酸バックボーンを含んでいなくてもよい。ＬＥＣは、所望の抗原遺伝子発現に関連しない他の核酸配列を含んでいなくてもよい。
【０１４２】
ＬＥＣは、線状にすることが可能な任意のプラスミド由来であってもよい。プラスミドは、抗原発現可能であってもよい。プラスミドは、ｐＮＰ（プエルトリコ／３４）またはｐＭ２（ニューカレドニア／９９）であってもよい。プラスミドは、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、ｐｒｏｖａｘ、または、抗原をコードするＤＮＡを発現することができ、かつ、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳できるようにすることが可能な任意の他の発現ベクターであってもよい。
【０１４３】
ＬＥＣは、ｐｃｒＭ２であってもよい。ＬＥＣは、ｐｃｒＮＰであってもよい。ｐｃｒＮＰ及びｐｃｒＭＲは、それぞれ、ｐＮＰ（プエルトリコ／３４）及びｐＭ２（ニューカレドニア／９９）由来であってもよい。
【０１４４】
（４）プロモーター、イントロン、停止コドン、及びポリアデニル化シグナル
ベクターは、プロモーターを有し得る。プロモーターは、遺伝子発現を駆動し、単離核酸の発現を調節することができる任意のプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは、ＤＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼ経由の転写に要するシス作用配列エレメントであり、本明細書に記載の抗原配列を転写する。異種核酸の発現の指示に用いられるプロモーターは、特定の用途に依って選択される。プロモーターは、ベクターの転写開始部位から、これがその天然の設定における転写開始部位からの距離であるのとほぼ同じ距離に配置され得る。しかしながら、この距離の変動には、プロモーター機能の喪失を伴うことなく対応し得る。
【０１４５】
プロモーターは、抗原をコードするヌクレオチド配列と、転写産物の効率的なポリアデニル化、リボソーム結合部位、及び翻訳終止に必要なシグナルとに機能的に連結し得る。プロモーターは、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞内で効率的な発現を示す別のプロモーターであってもよい。
【０１４６】
ベクターは、機能的スプライスドナー及びアクセプター部位を持つエンハンサー及びイントロンを含み得る。ベクターは、効率よい終止を提供するために、構造遺伝子の下流に転写終止領域を含み得る。終止領域は、プロモーター配列と同じ遺伝子から得てもよいし、あるいは、異なる遺伝子から得てもよい。
【０１４７】
多重ベクター
免疫原性組成物は、単一プラスミドなどの単一核酸分子の複数のコピー、または２つ以上の異なるプラスミドなどの２つ以上の異なる核酸分子の複数のコピーを含み得る。例えば、免疫原性組成物は、複数の２、３、４、５、６、７、８、９、または１０、またはそれ以上の異なる核酸分子を含み得る。そのような組成物は、複数の２、３、４、５、６、またはそれ以上の異なるプラスミドを含み得る。
【０１４８】
免疫原性組成物は、ＦＳＨＲ抗原のコード配列を集合的に含む、プラスミドなどの核酸分子を含み得る。免疫原性組成物は、多重抗原のコード配列を集合的に含む、プラスミドなどの核酸分子を含み得る。一実施形態では、抗原は、ＦＳＨＲ抗原及び１つ以上の追加のがん抗原である。免疫原性組成物は、１つ以上の抗原及び１つ以上のがん抗原のコード配列を集合的に含む、プラスミドなどの核酸分子を含み得る。
【０１４９】
免疫原性組成物の賦形剤及び他の成分
免疫原性組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでいてもよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤としての機能的分子であり得る。薬学的に許容可能な賦形剤は、界面活性剤、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、スクアレン及びスクアレンなどの小胞、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子を含み得るトランスフェクション促進剤、または他の公知のトランスフェクション促進剤であり得る。
【０１５０】
トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマートであり、より好ましくは、ポリ−Ｌ−グルタマートは、６ｍｇ／ｍｌ未満の濃度で免疫原性組成物中に存在する。トランスフェクション促進剤は、界面活性剤、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、並びにスクアレン及びスクアレンなどの小胞を含んでいてもよく、ヒアルロン酸を用いて、遺伝的構築物と一体化させて投与してもよい。いくつかの実施形態では、ＤＮＡプラスミドベースの免疫原性組成物は、トランスフェクション促進剤、例えば、脂質、レシチンリポソームまたはＤＮＡリポソーム混合物（例えば、ＷＯ０９３２４６４０を参照）などの当該技術分野で公知の他のリポソームを含むリポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤を含んでいてもよい。好ましくは、トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。免疫原性組成物中のトランスフェクション剤の濃度は、４ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．７５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．５００ｍｇ／ｍｌ未満、０．２５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．１００ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５０ｍｇ／ｍｌ未満、または０．０１０ｍｇ／ｍｌ未満である。
【０１５１】
薬学的に許容可能な賦形剤は、１つ以上のアジュバントであり得る。アジュバントは、同じまたは別のプラスミドから発現される他の遺伝子であってもよく、または、免疫原性組成物中に上記プラスミドと組み合わせてタンパク質として送達される。１つ以上のアジュバントは、ＣＣＬ２０、α−インターフェロン（ＩＦＮ−α）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘因性ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２８、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−８、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、変異体型ＩＬ−１８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経成長因子、血管内皮細胞増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰＩ、ＴＡＰ２、及びその機能的断片、またはそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質をコードするタンパク質及び／または核酸分子であってもよい。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、ＩＬ−２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、ＭＥＣ、ＯＸ４０、及びＤＲ５からなる群から選択されるタンパク質をコードする１つ以上のタンパク質及び／または核酸分子であってもよい。ＩＬ−１２構築物及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１２／６９０１７号及び対応する米国特許第９，２７２，０２４号に開示され、それらは参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−１５構築物及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／１８９６２号及び対応する米国特許第８，１７３，７８６号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２３構築物及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１４／２５３４８号及び対応する米国出願シリアル番号第１４／７７５，０８７号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２８構築物及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３９６４８号及び対応する米国出願シリアル番号第１２／９３６，１９２号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２８構築物及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０９／０３９６４８号及び対応する米国出願シリアル番号第１２／９３６，１９２号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ、他の構築物、及び配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９９９／００４３３２号及び対応する米国特許第８，１１９，３９５号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳ構築物及び配列の他の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１１／０２４０９８号及び対応する米国特許第９．０３４，３１３号に開示され、それは参照により本明細書に組み込まれる。ケモカインＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ及びＭＥＣ構築物、並びに配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４２２３１号及び対応する米国出願シリアル番号第１１／７１９，６４６号に開示され、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＯＸ４０及び他の免疫調節因子の例は、米国出願シリアル番号第１０／５６０，６５３号に開示され、それは参照により本明細書に組み込まれる。ＤＲ５及び他の免疫調節因子の例は、米国出願シリアル番号第０９／６２２，４５２号に開示され、それは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５２】
免疫原性組成物は、コンセンサス抗原及びプラスミドを約１ナノグラム〜約１００ミリグラム、約１マイクログラム〜約１０ミリグラム、または好ましくは約０．１マイクログラム〜約１０ミリグラム、またはさらに好ましくは約１ミリグラム〜約２ミリグラムの量で含んでいてもよい。いくつかの好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物は、ＤＮＡを約５ナノグラム〜約１０００マイクログラム含む。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＤＮＡを約１０ナノグラム〜約８００マイクログラム含む。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＤＮＡを約０．１〜約５００マイクログラム含む。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＤＮＡを約１〜約３５０マイクログラム含む。いくつかの好ましい実施形態では、医薬組成物は、コンセンサス抗原またはそのプラスミドを約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラム、約１ナノグラム〜１００ミリグラム、約１マイクログラム〜約１０ミリグラム、約０．１マイクログラム〜約１０ミリグラム、約１ミリグラム〜約２ミリグラム、約５ナノグラム〜約１０００マイクログラム、約１０ナノグラム〜約８００マイクログラム、約０．１〜約５００マイクログラム、約１〜約３５０マイクログラム、約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラム含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ナノグラム含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５，１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５。９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、または１０００マイクログラム含むことができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０ｍｇ以上含むことができる。
【０１５４】
他の実施形態では、医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ナノグラムまで含むことができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５，１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５。９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、または１０００マイクログラムまで含むことができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ワクチンのＤＮＡを１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０ｍｇまで含むことができる。
【０１５５】
免疫原性組成物は、用いられる投与様式に従って配合してもよい。注入可能なワクチン医薬組成物は、滅菌されたパイロジェンフリー及び微粒子フリーであってもよい。等張性配合剤または溶液が用いられてもよい。等張性のための添加剤として、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール及びラクトースを挙げることができる。ワクチンは、血管収縮剤を含んでいてもよい。等張性溶液は、リン酸緩衝生理食塩水を含んでいてもよい。免疫原性組成物は、ゼラチン及びアルブミンを含む安定化剤をさらに含んでいてもよい。ワクチン配合剤へのＬＧＳまたはポリカチオンまたはポリアニオンなど、安定化により、配合剤を室温または周囲温度で長時間安定にさせることができる。
【０１５６】
免疫原性組成物は、室温（２５℃）で１週間超、いくつかの実施形態では、２週間超、いくつかの実施形態では、３週間超、いくつかの実施形態では、４週間超、いくつかの実施形態では、５週間超、及びいくつかの実施形態では、６週間超安定である。いくつかの実施形態では、ワクチンは、１ヵ月超、２ヵ月超、３ヵ月超、４ヵ月超、５ヵ月超、６ヵ月超、７ヵ月超、８ヵ月超、９ヵ月超、１０ヵ月超、１１ヵ月超、または１２ヵ月超安定である。いくつかの実施形態では、ワクチンは、１年超、２年超、年超、または５年超安定である。一実施形態では、免疫原性組成物は、冷蔵下（２〜８℃）で安定である。したがって、一実施形態では、免疫原性組成物は、凍結されたコールドチェーンを必要としない。免疫原性組成物は、その使用目的（例えば、対象において免疫応答を生成すること）を可能にする十分な期間にわたってその生物活性を保持する場合に安定である。例えば、保存される、出荷されるなどの免疫原性組成物の場合、免疫原性組成物は、数ヵ月から数年安定した状態を保つことが望ましいこともある。
【０１５７】
ワクチン接種方法
また、本明細書で提供されるのは、免疫原性組成物を、それを必要とする対象に投与することによって、対象における疾患を治療、防御、及び／または予防する方法である。対象への免疫原性組成物の投与は、対象における免疫応答を誘導または誘発することができる。誘導された免疫応答を使用して、疾患、例えば、１つ以上の腫瘍関連病理を治療、予防、及び／または防御することができる。
【０１５８】
誘導された免疫応答は、誘導された体液性免疫応答及び／または誘導された細胞性免疫応答を含むことができる。体液性免疫応答は、約１．５倍〜約１６倍、約２倍〜約１２倍、または約３倍〜約１０倍に誘導することができる。誘導された体液性免疫応答は、抗原に反応性があるＩｇＧ抗体及び／または中和抗体を含むことができる。誘導された細胞性免疫応答は、約２倍〜約３０倍、約３倍〜約２５倍、または約４倍〜約２０倍に誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含むことができる。
【０１５９】
免疫原性組成物用量は、１μｇ〜１０ｍｇ活性成分／ｋｇ体重／時間であり得、２０μｇ〜１０ｍｇ成分／ｋｇ体重／時間であり得る。免疫原性組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに投与することができる。効果的な治療のための免疫原性組成物用量の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり得る。
【０１６０】
免疫原性組成物は、製薬技術の当業者に周知の標準的技術に従って製剤化することができる。そのような組成物は、特定の対象の年齢、性別、体重、及び状態、並びに投与経路などの要因を考慮に入れて、医療技術の当業者に周知の投与量で、当業者に周知の技術によって投与することができる。
【０１６１】
免疫原性組成物を、予防的または治療的に投与することができる。予防的投与では、免疫原性組成物は、免疫反応を誘導するのに十分な量で投与することができる。治療的適用の場合、免疫原性組成物は、治療的作用を誘発する十分な量で、それを必要とする対象に投与される。これを達成するために十分な量を、「治療的有効用量」として定義する。この用途のための有効量は、例えば、投与される免疫原性組成物レジメンの特定の組成物、投与様式、疾患の段階及び重症度、患者の全身健康状態、及び処方する医師の判断に依存するであろう。
【０１６２】
免疫原性組成物は、Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６１７−６４８（１９９７）、Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６年１２月３日に交付された米国特許第５，５８０，８５９号）、Ｆｅｌｇｎｅｒ（１９９７年１２月３０日に交付された米国特許第５，７０３，０５５号）、及びＣａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７年１０月２１日に交付された米国特許第５，６７９，６４７号）に記載されているように当該技術分野で周知の方法によって投与することができ、これらの内容は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。免疫原性組成物のＤＮＡは、例えば、ワクチン銃を用いて個体に投与することができる粒子またはビーズと複合体を形成することができる。当業者は、生理学的に許容される化合物を含む薬学的に許容可能な担体の選択が、例えば、発現ベクターの投与経路に依存することを承知している。
【０１６３】
免疫原性組成物を、多様な経路によって送達することができる。典型的な送達経路には、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、または皮下送達が含まれる。他の経路には、経口投与、鼻腔内、及び膣内経路が含まれる。特に免疫原性組成物のＤＮＡに関して、免疫原性組成物を、個体の組織の間質空間に送達することができる（Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８０，８５９号及び同第５，７０３，０５５号、これらの内容は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる）。免疫原性組成物は、筋肉に投与してもよいし、または、皮内または皮下注入を通して、あるいは、イオン導入法による経皮投与を通して投与してもよい。免疫原性組成物の表皮投与も用いることができる。表皮投与は、刺激物質に対する免疫反応を刺激するために、表皮の最も外側の層を機械的または化学的に刺激することを含むことができる（Ｃａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，６７９，６４７号、この内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６４】
また、免疫原性組成物を、鼻腔内経路を通して投与するために調製することができる。担体が固体であって鼻腔投与に適した製剤には、粒径、例えば、約１０ミクロン〜約５００ミクロンの範囲の粒径を有する目の粗い粉末を含むことができ、鼻から吸うように投与される、すなわち、鼻に近づけて保持した粉末容器から鼻腔を通して急速に吸入することによって投与される。製剤は、点鼻スプレー、点鼻薬、またはネブライザーによるエアロゾル投与であってもよい。製剤は、免疫原性組成物の水溶液または油性溶液を含み得る。
【０１６５】
免疫原性組成物は、懸濁剤、シロップ、またはエリキシル剤などの液体調製物であり得る。また、免疫原性組成物は、非経口、皮下、皮内、筋肉内または静脈内投与（例えば、注入投与）用の製剤、例えば、滅菌懸濁液またはエマルションであり得る。
【０１６６】
免疫原性組成物は、リポソーム、ミクロスフェア、または他のポリマーマトリクスに組み込むことができる（Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，７０３，０５５号、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ  ｔｏ  ＩＩＩ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９３）、これらの内容は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる）。リポソームは、リン脂質または他の脂質からなることができ、作製及び投与が比較的単純な、非毒性の、生理学的に許容される、代謝可能な担体であり得る。
【０１６７】
免疫原性組成物は、米国特許第７，６６４，５４５号に記載の方法により電気穿孔を介して投与することができ、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。電気穿孔は、米国特許第６，３０２，８７４、同第５，６７６，６４６号、同第６，２４１，７０１号、同第６，２３３，４８２号、同第６，２１６，０３４号、同第６，２０８，８９３号、同第６，１９２，２７０号、同第６，１８１，９６４号、同第６，１５０，１４８号、同第６，１２０，４９３号、同第６，０９６，０２０号、同第６，０６８，６５０号、及び同第５，７０２，３５９号に記載の方法及び／または装置によってであってもよく、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。電気穿孔は、最小侵襲装置を介して行ってもよい。
【０１６８】
最小侵襲性電気穿孔装置（「ＭＩＤ」）は、上述の免疫原性組成物及び関連流体を体組織に注入する装置であり得る。装置は、中空針、ＤＮＡカセット、及び流体送込み手段を含んでもよく、装置は、針の当該体組織への挿入中にＤＮＡを体組織に同時に（例えば、自動的に）注入するように、使用時に流体送込み手段を作動するようになっている。これは、針が挿入されている間にＤＮＡ及び関連流体を徐々に注入する能力が体組織中の流体のより一様な分布をもたらすという利点を有する。注入されるＤＮＡのより大きい面積にわたる分布により、注入中に体感される痛みが低減され得る。
【０１６９】
ＭＩＤは、針を使用せずに免疫原性組成物を組織に注入することができる。ＭＩＤは、免疫原性組成物が組織表面を貫通し、下層の組織及び／または筋肉に入るような力で、免疫原性組成物を小さなストリームまたはジェットとして注入することができる。小さなストリームまたはジェットの背後にある力は、マイクロオリフィスを通じた二酸化炭素などの圧縮ガスを瞬時に膨張させることで提供することができる。最小侵襲性電気穿孔装置及びそれらの使用方法の例については、米国公開特許出願第２００８０２３４６５５号、米国特許第６，５２０，９５０号、米国特許第７，１７１，２６４号、米国特許第６，２０８，８９３号、米国特許第６，００９，３４７号、米国特許第６，１２０，４９３号、米国特許第７，２４５，９６３号、米国特許第７，３２８，０６４号、及び米国特許第６，７６３，２６４号に記載されており、それぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
ＭＩＤは、痛みを伴わずに組織を貫通する液体の高速ジェットを生成する注入器を含み得る。そのような針なし注入器は市販されている。本明細書で利用することができる針なし注入器の例としては、米国特許第３，８０５，７８３号、同第４，４４７，２２３号、同第５，５０５，６９７号、及び同第４，３４２，３１０号に記載のものが挙げられ、それぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７１】
直接的または間接的な電気輸送に適した形態の所望の免疫原性組成物を、針なし注入器を用いて、治療対象組織に導入する（例えば、注入する）ことができる。これは、通常、組織表面に注入器を接触させ、免疫原性組成物を組織に貫通させるのに十分な力で薬剤をジェット送達させて行う。例えば、治療対象組織が粘膜、皮膚、または筋肉の場合、薬剤を、角質層を通じて皮層へ、または下層組織及び筋肉それぞれへと貫通させるのに十分な力で、粘膜または皮膚表面に向けて薬剤を発射する。
【０１７２】
針なし注入器は、全タイプの組織、特に、皮膚及び粘膜に免疫原性組成物を送達するのに適している。いくつかの実施形態では、針なし注入器は、免疫原性組成物を含む液体を表面及び対象の皮膚または粘膜に進ませるのに用いることができる。本発明の方法を用いて治療することができる様々なタイプの組織の代表的な例としては、膵臓、喉頭、鼻咽頭、下咽頭、中咽頭、唇、喉、肺、心臓、腎臓、筋肉、乳房、結腸、前立腺、胸腺、睾丸、皮膚、粘膜組織、卵巣、血管、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１７３】
ＭＩＤは、組織を電気穿孔する針状電極を有し得る。例えば、長方形または正方形パターンにセットされた複数の電極アレイにおける複数対の電極間にパルスを発生させることで、一対の電極間にパルスを発生させるよりも優れた結果がもたらされる。「Ｎｅｅｄｌｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｓ」と題された米国特許第５，７０２，３５９号に開示されているものは、針アレイであり、治療的処置中に複数対の針にパルス発生させ得るものである。あたかも完全に記載されるかのように参照によりその内容全体が完全に本明細書に組み込まれる該出願において、針は、円形配列で設置されているが、対向する対の針状電極間にパルスを発生させることが可能な接続器及び切替装置を有する。一対の針状電極を用いて、組み換え発現ベクターを細胞に送達することができる。そのような装置及びシステムは、米国特許第６，７６３，２６４号に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、ＤＮＡの注入、及び、通常の注入針に似た単一針による電気穿孔が可能な単一針装置を用いて、現在使用されている装置によって送達する場合よりも低い電圧パルスを印加することで、患者が受ける電気が走ったような感覚を減らすことができる。
【０１７４】
ＭＩＤは、１つ以上の電極アレイを含み得る。アレイは、同一直径または異なる直径の２つ以上の針を含み得る。針は等間隔または不等間隔に配置されていてもよい。針は、０．００５インチ〜０．０３インチ、０．０１インチ〜０．０２５インチ、または０．０１５インチ〜０．０２０インチであり得る。針は、直径０．０１７５インチであり得る。針は、０．５ｍｍ、１．０ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、３．０ｍｍ、３．５ｍｍ、４．０ｍｍ、またはそれ以上の間隔で配置されていてもよい。
【０１７５】
ＭＩＤは、１つのパルス発生器と、シングルステップで免疫原性組成物を送達して電気穿孔パルスを与える２つ以上の針免疫原性組成物注入器とからなり得る。パルス発生器により、フラッシュカードで操作されるパーソナルコンピューター経由でパルスや注入パラメーターをフレキシブルにプログラミングできるだけでなく、電気穿孔及び患者データを包括的に記録、保存することができる。パルス発生器は、様々な電圧パルスを短時間で送達することができる。例えば、パルス発生器は、長さ１００ミリ秒（ｍｓ）の１５ボルトのパルスを３回送達することができる。そのようなＭＩＤの例としては、米国特許第７，３２８，０６４号に記載されているＩｎｏｖｉｏ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＥｌｇｅｎ１０００システムであり、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７６】
ＭＩＤは、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ  ＰＡ）装置及びシステムであってもよく、これは、生体または植物の選択された組織の細胞へＤＮＡなどの高分子の導入を円滑にするためのモジュール式の電極システムである。モジュール式の電極システムは、複数の針状電極、皮下注入針、プログラム可能な定電流パルス制御器から複数の針状電極への導電性連結を提供する電気接続器、及び電源を含み得る。操作者は、支持構造に搭載される複数の針状電極を握り、生体または植物の選択された組織の中へそれをしっかりと挿入することができる。次いで皮下注入針を介して選択された組織の中に高分子を送達する。プログラム可能な定電流パルス制御器が駆動され、複数の針状電極に定電流の電気パルスが印加される。印加された定電流の電気パルスは複数の電極間で細胞への高分子の導入を促進する。細胞の過熱による細胞死は、定電流パルスにより組織内の電力消費を制限することで最小化される。Ｃｅｌｌｅｃｔｒａ装置及びシステムは、米国特許第７，２４５，９６３号に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７７】
ＭＩＤは、Ｅｌｇｅｎ１０００システム（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）であり得る。Ｅｌｇｅｎ１０００システムは、中空針と流体送込み手段とを備える装置を含んでもよく、該装置は、針の当該体組織への挿入中に本明細書に記載の免疫原性組成物である流体を体組織に同時に（例えば、自動的に）注入するように、使用時に流体送込み手段を作動するようになっている。これは、針が挿入されている間に流体を徐々に注入する能力が体組織中の流体のより一様な分布をもたらすという利点を有する。また、注入される流体量のより大きい面積にわたる分布により、注入中に体感される痛みが低減されると考えられる。
【０１７８】
加えて、流体の自動注入は、注入される流体の実際の投与量の自動的な監視及び登録を容易にする。このデータは所望なら、証拠資料用に制御ユニットにより記憶できる。
【０１７９】
注入速度は直線的であっても、非直線的であってもよく、注入は、針が治療対象の皮膚を通って挿入された後でかつそれらがさらに体組織に挿入される間に実行されることが理解されるであろう。
【０１８０】
本発明の装置によって流体を注入するのに適した組織は、腫瘍組織、皮膚、または肝組織を含むが、筋肉組織であってもよい。
【０１８１】
装置は、体組織への針の挿入をガイドする針挿入手段をさらに含む。流体の注入速度は、針の挿入速度により制御される。これは、注入速度に対し挿入速度を所望通りに整合できるように、針の挿入と流体の注入の両方を制御できるという利点を有する。それはまたユーザーにとって装置をより操作し易くする。所望なら、針を体組織に自動的に挿入する手段を設けることもできる。
【０１８２】
ユーザーは、流体の注入を開始すべき時点を選ぶことができる。しかしながら、理想的には、注入は針の先端が筋肉組織に到達したときに開始され、装置は針が流体の注入が始まる十分な深さまで挿入された時点を感知する手段を含む。これは、針が所望の深さ（これは通常は筋肉組織が始まる深さであろう）に到達したときに流体の注入が自動的に始まるようにできることを意味する。筋肉組織が始まる深さは、例えば、４ｍｍ（この値は針が皮膚層を通り抜けるのに十分であると思われる）の値等の予め設定された針の挿入深さとなるように取ることもできる。
【０１８３】
感知手段は、超音波プローブを含み得る。感知手段は、インピーダンスまたは抵抗の変化を感知する手段を含み得る。この場合、この手段はそれ自体、体組織内の針の深さを記録しなくてもよいが、むしろ針が種々のタイプの体組織から筋肉に移動しながらインピーダンスまたは抵抗の変化を感知するようになっている。これらの代案のいずれも、比較的正確で操作が簡単な注入開始感知手段を提供する。所望なら針の挿入深さがさらに記録でき、それは流体の注入を制御するために使用でき、それにより針の挿入深さが記録されながら注入すべき流体の量が決定される。
【０１８４】
装置は、針を支持する基体と、中に基体を受容するハウジングとをさらに含み、基体がハウジングに対して第１の後方位置にあるときに針がハウジング内に引っ込められ、基体がハウジング内の第２の前方位置にあるときに針がハウジングから出ているように、基体はハウジングに対して移動可能である。これは、ハウジングが患者の皮膚の上に並べられ、次に基体に対してハウジングを移動することにより針を患者の皮膚に挿入できるので、ユーザーにとって好都合である。
【０１８５】
上に述べたように、針が皮膚に挿入されながら、針の長さにわたり流体が一様に分布するように制御された流体注入速度を達成することが望ましい。流体送込み手段は、制御された速度で流体を注入するようになっているピストン駆動手段を含み得る。ピストン駆動手段は、例えば、サーボモーターにより駆動することもできる。しかしながら、ピストン駆動手段は、基体がハウジングに対して軸方向に移動されることにより作動され得る。流体送達の代わりの手段を設けてもよいことが理解されるであろう。したがって、例えば、制御された、あるいは制御されない速度で流体を送達するために搾り出しができる閉じられた容器を注入器及びピストンシステムの代わりに設けることもできる。
【０１８６】
上記の装置は、どのようなタイプの注入にも使用できる。しかしながら、電気穿孔の分野において特に有用であると考えられ、したがって、それは、針に電圧を印加する手段をさらに含み得る。これは針が注入に使用されるだけでなく、電気穿孔中の電極としても使用されることを可能にする。これは、電界が注入される流体と同じ領域に印加されることを意味するので特に好都合である。電気穿孔には、前に注入された流体に電極を正確に合わせることが非常に難しいという問題が伝統的にあり、したがって、注入された物質と電界の間の重なりを保証しようとして、ユーザーはより大きい領域にわたり必要以上に大量の流体を注入し、またより大面積にわたり電界を印加する傾向にあった。本発明を使用すれば、電界と流体の良好な適合を達成しつつ、流体の注入量と電界の印加サイズの両方を減少できる。
【０１８７】
インビトロ及びエクスビボでの抗原の生成
一実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲ抗原は、インビトロまたはエクスビボで生成される。例えば、一実施形態では、最適化コンセンサスＦＳＨＲ抗原をコードする核酸を細胞に導入して、インビトロまたはエクスビボ細胞で発現することができる。
【０１８８】
遺伝子を細胞に導入して発現させる方法は、当該技術分野で公知である。発現ベクターとの関連において、ベクターは、当該技術分野における任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって、宿主細胞に移入することができる。
【０１８９】
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、電気穿孔などが含まれる。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞を生成するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
【０１９０】
対象のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞に挿入するための、最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルスなどから導出することができる。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号及び同第５，５８５，３６２号を参照されたい。
【０１９１】
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段には、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型乳剤、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散系が含まれる。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０１９２】
非ウイルス性送達系が使用される場合、例示的な送達媒体は、リポソームである。宿主細胞内への核酸の導入（インビトロ、エクスビボ、またはインビボ）に、脂質製剤の使用が企図される。別の態様では、核酸を脂質と会合させることができる。脂質と会合される核酸は、リポソームの水性内部に封入すること、リポソームの脂質二重層内に散在させること、リポソームとオリゴヌクレオチドの両方と会合する連結分子を介してリポソームに付着させること、リポソーム内に捕捉すること、リポソームと複合体形成させること、脂質を含む溶液中に分散させること、脂質と混合すること、脂質と組み合わせること、脂質中に懸濁液として含めること、ミセルと共に含めるかもしくはミセルと複合体形成させること、または別の方法で脂質と会合させることができる。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクターと関連した組成物は、溶液中での任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造で、ミセルとして、または「崩壊」構造を有して存在し得る。それらはまた、溶液中に単に散在されてもよく、サイズまたは形状が均一でない凝集物を形成する可能性がある。脂質とは、天然脂質または合成脂質であってよい脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質内で天然に生じる脂肪滴、並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、及びアルデヒドなどの、長鎖脂肪族炭化水素及びそれらの誘導体を含む化合物のクラスが含まれる。
【０１９３】
ＤＮＡプラスミドを調製する方法
本明細書で提供されるのは、本明細書に開示されているＤＮＡベース免疫原性組成物を含むＤＮＡプラスミドを調製する方法である。ＤＮＡプラスミドを、哺乳類発現プラスミドへの最終的なサブクローニングステップの後、当該技術分野で公知の方法を用いて、大規模発酵タンクで細胞培養物に接種するのに用いることができる。
【０１９４】
本発明のＥＰ装置で用いられるＤＮＡプラスミドは、公知の装置及び技術の組み合わせを用いて配合または製造することができる。いくつかの例では、これらの研究で用いたＤＮＡプラスミドは、１０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で配合させることができる。その製造技術は、米国特許出願第６０／９３９７９２号に記載されたものに加えて、２００７年７月３日発行の許諾対象特許である米国特許第７，２３８，５２２号に記載されたものをはじめとする、当業者に概ね公知の様々な装置及びプロトコルも含み、または組み入れている。先に参照された出願及び特許である、米国特許出願第６０／９３９，７９２号及び米国特許第７，２３８，５２２号は、それぞれ全体が本明細書に組み入れられる。
【０１９５】
治療方法
免疫原性組成物を使用して、それを必要とする対象のＦＳＨＲに反応性があるかまたは向けられる哺乳動物において免疫応答を生成または誘発することができる。一実施形態では、免疫原性組成物を使用して、対象におけるがんを予防または治療することができる。一実施形態では、がんは、ＦＳＨＲを発現する。したがって、免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与した対象において、がんを発現するＦＳＨＲを治療する及び／または予防する方法で使用することができる。一実施形態では、免疫原性組成物を使用して、対象において、がんを発現するＦＳＨＲの原発または最初の発生を予防することができる。一実施形態では、免疫原性組成物を使用して、対象において、ＦＳＨＲを発現するがんの再発を予防することができる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、免疫応答は、免疫原性組成物を投与した対象において種々の組織または系（例えば、脳または神経系など）に損傷または炎症を引き起こさない体液性免疫応答及び／または抗原特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を生成することができる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、投与された免疫原性組成物は、対象において、がんの生存率を増加させる、腫瘍サイズを減少させる、またはそれらの組み合わせをもたらすことができる。投与された免疫原性組成物は、対象におけるがんの生存率を５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、及び６０％、またはそれ以上増加させることができる。投与された免疫原性組成物は、免疫化後の対象における腫瘍サイズを５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、及び７０％、またはそれ以上減少させることができる。
【０１９８】
投与された免疫原性組成物は、対象における細胞性免疫応答を約５倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍に増加させることができる。いくつかの実施形態では、投与された免疫原性組成物は、対象における細胞性免疫応答を約５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍に増加させることができる。
【０１９９】
投与されたワクチンは、対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）レベルを約５倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍に増加させることができる。いくつかの実施形態では、投与されたワクチンは、対象におけるＩＦＮ−γレベルを約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍に増加させることができる。
【０２００】
ワクチンの用量は、１μｇ〜１０ｍｇ有効成分／ｋｇ体重／時間であってもよく、２０μｇ〜１０ｍｇ成分／ｋｇ体重／時間であってもよい。ワクチンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに投与することができる。効果的な治療のためのワクチンの投与回数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であってもよい。
【０２０１】
投与経路
免疫原性または医薬組成物は、経口、非経口、舌下、経皮、経直腸、経粘膜、局所、吸入、口腔投与、胸腔内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻内、髄腔内、及び関節内、またはそれらの組み合わせをはじめとする異なる経路で投与してもよい。獣医学的使用では、通常の獣医学的実践に従い、組成物を適切に許容しうる配合剤として投与してもよい。獣医は、特定の動物に最も適した投与レジメン及び投与経路を、容易に決定することができる。ワクチンを、伝統的なシリンジ、針なし注射装置、「微粒子衝撃遺伝子銃」、または他の物理的方法、例えば、電気穿孔法（ＥＰ）、「水力学的方法」、または超音波により投与してもよい。
【０２０２】
ワクチンのベクターは、インビボ電気穿孔、組み換えアデノウイルス、組み換えアデノウイルス随伴ウイルス、及び組み換えワクシニアのようなリポソーム仲介、ナノ粒子促進組み換えベクターを用いる及び用いないＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種とも呼ばれる）を含むいくつかの周知の技術により哺乳動物に投与することができる。本発明の最適化コンセンサスＦＳＨＲ抗原は、インビボ電気穿孔と共にＤＮＡ注入を介して投与することができる。
【０２０３】
キット
本明細書で提供されるのは、上述のワクチン接種の方法を用いて対象の治療に使用することができるキットである。キットは、免疫原性組成物を含むことができる。
【０２０４】
キットは、上述のワクチン接種方法を実施する及び／またはキットをどのように使用するかの説明書も含み得る。キットに含められる説明書は、包装材料に貼付され得、またはパッケージ挿入物として含まれ得る。説明書は、一般に、文書による、または印刷された材料であるが、こうした物に限定されない。このような説明書を貯え、エンドユーザーに説明書を伝達できる任意の媒体が、本開示により企画される。こうした媒体は、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ）、光学媒体（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、「説明書」という用語は、説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含むことができる。
【０２０５】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって示される複数の態様を有する。
【実施例】
【０２０６】
本発明を、以下の実験例を参照しながらさらに説明する。これらの例は、例示のみを目的として提供されるものであり、特に指定されない限り、限定を意図するものではない。したがって、本発明は、以下の例に限定されるとは全くみなされるべきではなく、本明細書で提供される教示の結果として明らかになる任意かつ全ての変更も範囲に含むとみなされるべきである。
【０２０７】
さらなる説明がなくても、当業者は、前記の説明及び以下の例示的な例を用いて、本発明を作成して利用し、請求される方法を実施することができると考えられる。以下の実施例は、このため、本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘しており、本開示の残りを限定するものとは全くみなされるべきでない。
【０２０８】
実施例１：最適化コンセンサスＦＳＨＲ免疫原性組成物
ＤＮＡワクチンは、ヒトにおいて強力な抗腫瘍活性を有する。合成コンセンサスＤＮＡワクチンは、耐性を破壊し、ＦＳＨＲタンパク質に向けて免疫系をリダイレクトするように設計されている。コンセンサス配列に基づくＤＮＡワクチンは、臨床において有望であり、子宮頸上皮内腫瘍性病変のクリアランスを達成することを示している。ペプチドワクチンを上回るこの手法の利点は、タンパク質の内因性の天然切断由来の複数のペプチドに対する免疫応答を誘発し、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩの全ての異なる変異体で提示することができることである。
【０２０９】
ＤＮＡがんワクチンは、ウイルス抗原による腫瘍に対して奏効性があることが証明されている、しかしながら、この奏効性は、卵巣癌などの侵襲性が強くかつ頻度が高いがんに対する効果的応答にはまだ変換されていない。制限の１つは、腫瘍細胞によって選択的に発現されるが、健康組織によって発現されない標的可能な抗原が不足しており、これは、致命的な悪影響をもたらし得る。本明細書に記載の最適化コンセンサス配列は、ＦＳＨＲ（卵巣癌の５０〜７０％において存在する標的可能な抗原）に対する免疫応答を誘発するように設計されている（図１）。
【０２１０】
最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンを介したプライミングは、ＦＳＨＲ＋腫瘍細胞を標的にするＴ細胞の数を増強し、腫瘍浸潤Ｔ細胞の量を増加させる。加えて、卵巣癌微小環境において作動している抑制ネットワークのコンビナトリアルターゲッティングは、腫瘍浸潤リンパ球を、それらの防御活性を弱め得る寛容原性経路から解放することで、固形腫瘍におけるＴ細胞の活性の公知の制限に対処する。
【０２１１】
本方法をここで説明する。
【０２１２】
最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチン
ＦＳＨＲを標的にする最適化コンセンサスＤＮＡワクチンが開発されている。コンセンサスＦＳＨＲは、ＧｅｎＢａｎｋから収集した５５個のＦＳＨＲ配列を用いて生成した。ホルモン活性及びＧタンパク質活性化に必須の突然変異を導入した。最適化されたＦＳＨＲ  ＤＮＡは、以下の特徴を含むように設計されている：リボソームローディングを改善するためのＲＮＡ変化、ｍＲＮＡ安定性、ＧＣ含有量の増加、翻訳改善のためにリフォーカスされたコドン使用、非常に高く、非常に低いＧＣ領域の最小化、シス作用モチーフ、反復配列、不安定性配列、及びＲＮＡ構造モチーフの除去、効率的なコザック配列の導入、ＩｇＥリーダー配列の追加、及び受容体活性を不活性化し、耐性を破壊するように組み込まれた突然変異。最適化コンセンサスＦＳＨＲの発現を図２に示す。
【０２１３】
５匹のマウス／群は、マン・ホイットニーまたはウィルコクソン検定を用いて、２０％以上の差を検出するために、５％の有意レベルと９５％の検出力を提供する。特に明記しない限り、実験は、少なくとも５匹のマウス／群（＋反復）を使用し、これらの統計パラメーターに従って分析する。
【０２１４】
マウスのワクチン接種は、おおよそ２０ｕｇのＤＮＡを前脛骨筋に注入した後、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ装置による電気穿孔によって実施する。ナイーブマウスには、マウス最適化コンセンサスＦＳＨＲを２週間隔で３回ワクチン接種する。対照マウスは、天然のマウスＦＳＨＲまたは空のｐＶａｘベクターを受ける。体液性及び細胞性免疫応答を調べるために、最後のワクチン接種の１週間後にマウスを屠殺する（図３Ａ）。体液性応答を判断するため、組み換えＦＨＳＲタンパク質に対する酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、マウス血清中の抗ＦＳＨＲ抗体の力価を測定する。細胞性応答を判断するため、単離された脾細胞をネズミＦＳＨＲタンパク質で刺激し、マウスＩＦＮγ及びグランザイムＢ酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイは、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ６９及びＣＤ６２Ｌの染色で実施する。エフェクターメモリー（ＣＤ４４＋／ＣＤ６２Ｌ−）及びセントラルメモリー（ＣＤ４４ｉｎｔ−ｈｉ／ＣＤ６２Ｌｈｉ）ＣＤ８Ｔ細胞の周波数を検査する。最終的に、抑制調節Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇｓ）の周波数を検査する。細胞溶解ＣＤ８＋応答は、インビボ細胞毒性アッセイを用いて評価する。簡潔に言えば、脾細胞をコンジェニック（ＣＤ４５．１＋）ナイーブマウスから単離し、高用量または低用量のいずれかのカルボキシフルオセイン二酢酸サクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、関連ペプチド（ＦＳＨＲ）または無関連ペプチドをロードする。その後、これらの細胞をナイーブマウスまたは免疫化マウスのいずれかに４８時間注入し、再び単離し、フローサイトメトリーによって周波数を測定した。死滅率は、ＣＦＳＥｈｉ及びＣＦＳＥｌｏ集団の残りの周波数に基づいて算出することができる。
【０２１５】
結果をここで説明する。
【０２１６】
コンセンサスＦＳＨＲ免疫化は、強力なＩＦＮγ応答を誘導する
マウスコンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンが天然のＦＳＨＲに対する耐性を破壊できるかどうか判断するため、ナイーブマウスを、２週間隔で３用量のＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンで免疫化し、最後の免疫化の１週間後に屠殺した。インターフェロン−γ  ＥＬＩＳＰＯＴは、ネズミＦＳＨＲ由来のペプチドでパルスした免疫化マウス由来の脾細胞で行った。ｐＶａｘ処理マウスと比較した場合、ワクチンタンパク質由来のペプチドに対して強い細胞性応答が観察された（図３〜図５）。
【０２１７】
コンセンサスＦＳＨＲ免疫化は、強いＣＤ８及びＣＤ４  Ｔ細胞応答を誘導する
どのような特定の細胞型がＩＦＮｇ誘導の原因であったかを判断するため、細胞内フローサイトメトリーをＦＳＨＲペプチドパルス脾細胞で行った。ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞の両方をマウスコンセンサスＦＳＨＲワクチンによって刺激した（図６〜図１０）。ＩＦＮγ産生が増加しただけでなく、ＴＮＦα産生も増加した（図７及び図８）。
【０２１８】
ワクチンアジュバントは、ＦＳＨＲに対するコンセンサスＦＳＨＲワクチンの免疫応答を増加させる。
ワクチン接種の部位に存在する樹状細胞の数は、ワクチンが効果的な免疫応答を誘発する能力における制限因子であることが示されている（Ｋｕｔｚｌｅｒ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００４，１１４：１２４１−１２４４）。ＤＮＡワクチンと同時に注入した異なるアジュバントは、その免疫原性を増加させることができ（Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１５，２３：１６５３−１６６２、Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，２０１５，３３：４３１３−４３２０、Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４，７４：１７８９−１８００）、特定のニーズに従ってＴｈ１またはＴｈ２応答の方に免疫応答を歪ませる。最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンと一緒に共形質移入した異なるアジュバント（ＩＬ−１２４、１１、１５、ＧＭ−ＣＳＦ１５、２１、及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ１０、１３、１４）は、細胞性免疫応答の増加、及びその臨床応用においてより効果的な抗腫瘍効果を示す。
【０２１９】
免疫適格宿主における卵巣癌に対する最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンの有効性
卵巣癌における最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンの抗腫瘍活性は、卵巣癌細胞株ＩＤ８−Ｄｅｆｂ２９／Ｖｅｇｆ−ａ１を用いて定義される（Ｒｕｔｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，２０１５：２７：２７−４０、Ｃｕｂｉｌｌｏｓ−Ｒｕｉｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１５，１６１：１５２７−１５３８、Ｓｔｅｐｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１４，４１：４２７−４３９）。最適化コンセンサスＦＳＨＲワクチンが卵巣癌進行を遅らせることができたかどうかを判断するため、コンセンサスＦＳＨＲワクチンまたはｐＶａｘ空ベクターでマウスを２週間隔で３回免疫化した。３回目の免疫化の１週間後、マウスを、２百万個のＩＤ８−Ｄｅｆｂ２９／Ｖｅｇｆ−ａ−Ｆｓｈｒ卵巣癌細胞で腹腔内にチャレンジした。マウスの生存を追跡し、卵巣癌進行の遅延が、コンセンサスＦＳＨＲワクチンで処置したマウスで観察された（図１１〜図１３）。生存を有効性の読み出しとして比較し、Ｔ細胞の抗腫瘍活性を判断する。Ｔ細胞をリンパコンパートメントから選別し、同じＦＳＨＲ＋卵巣腫瘍細胞株でパルスした樹状細胞と共インキュベートし、ＩＦＮγ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを行う。最適化コンセンサスＦＳＨＲは、抗原拡散を介して、ポリクローナル免疫応答（現在進行中の抗腫瘍免疫応答）に影響を及ぼす。これは、腫瘍細胞がＦＳＨＲを失っていても腫瘍再発を予防する決定的な重要性であり得る。担がんマウスを、処置後１４日目に、最適化コンセンサスＦＳＨＲ対疑似、及び腫瘍並びにリンパ部位からのＦＡＣＳ選別Ｔ細胞で処置し、ＥＬＩＳｐｏｔをＦＳＨＲ腫瘍パルス樹状細胞で行う（Ｐｅｒａｌｅｓ−Ｐｕｃｈａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６）。
【０２２０】
免疫チェックポイント阻害剤であるペムブロリズマブ（αＰＤ−１）、ニボルマブ（αＰＤ−１）、及びイピリムマブ（αＣＴＬＡ−４）を卵巣癌で試験し、有望な結果をもたらした（Ｈａｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１５，３３：４０１５−４０２２、Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０１２，３６６：２４５５−２４６５）。イピリムマブは、照射された卵巣癌パルス樹状細胞ワクチンと組み合わせて試験され、相乗効果を示した（Ｈｏｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．２００３，１００：４７１２−４７１７）。αＣＴＬＡ−４（クローン９Ｄ９）またはαＰＤ−１（クローンＲＭＰ１−１４）と組み合わせた最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンは、マウスにおける腫瘍増殖に相乗効果を示す。
【０２２１】
腫瘍微小環境におけるＦＳＨＲワクチンの効果
確立されたＦＳＨＲ＋を有するマウス腫瘍微小環境の組成物を、腫瘍チャレンジ後の２０日目及び３４日目に卵巣腫瘍で評価し、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＴｒｅｇの割合及び数を決定する（Ｐｅｒａｌｅｓ−Ｐｕｃｈａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６）。脾臓、排出（縦隔）リンパ節、骨髄、及び腫瘍床（腹膜洗浄液）からの試料も含まれる。活性化（例えば、ＣＤ４４、ＣＤ６９、ＣＤ２７、ＣＤ２５）対枯渇（例えば、ＰＤ−１、Ｌａｇ３）の徹底的分析は、腫瘍特異的活性化パターンを示す。加えて、ＢＭ及びリンパ節におけるＴ細胞のセントラルメモリー分化を分析する。樹状細胞（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ７０）骨髄コンパートメントの数及び活性化ステータス、例えば、マクロファージ及び骨髄由来抑制細胞による浸潤についても分析する。
【０２２２】
最適化コンセンサスＦＨＳＲ  ＤＮＡ抗腫瘍応答に対する異なる免疫コンパートメントの相対的寄与を決定する。
最適化コンセンサスＦＨＳＲ  ＤＮＡ抗腫瘍応答に対する細胞性免疫コンパートメントの相対的寄与は、担ＦＳＨＲ＋腫瘍マウスを抗ＣＤ８または抗ＣＤ４枯渇抗体で処置することを介して試験する。抗体応答の寄与は、腫瘍チャレンジ後に抗ＣＤ２０枯渇抗体を添加することで試験する。共に、これにより、最適化コンセンサスＤＮＡワクチンが自己抗原に対する耐性を破壊し、その治療実装におけるその後の改善を促進するメカニズムが確立される。
【０２２３】
最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンで処置した担卵巣癌マウスは、対照と比較して生存の大幅な増加（場合によっては、腫瘍拒絶さえをも）を示し、チェックポイント阻害剤の存在下でさらに増強される。加えて、腫瘍溶解物ＥＬＩＳｐｏｔによって測定された特定の抗腫瘍活性の増加を同定する。キメラ抗原受容体リダイレクトＴ細胞を用いて実証されたことと同様に拡散する抗原によりポリクローナル免疫応答における測定可能な増加がある（Ｐｅｒａｌｅｓ−Ｐｕｃｈａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６）。共に、これらの結果は、ＦＳＨＲを標的にする最適化コンセンサスＤＮＡワクチンの治療可能性のためのエビデンスを提供し、その後の臨床試験への道を開く。ポリクローナル応答の構築は、患者における長期治癒を誘発するために特に重要である可能性がある。
【０２２４】
最適化コンセンサスＦＳＨＲによるマウスの免疫化は、腫瘍微小環境に浸潤するＣＤ８及びＣＤ４  Ｔ細胞の増加、より高いＣＤ８＋／Ｔｒｅｇの比率、活性化樹状細胞（ＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣＩＩ＋）の数の増加、及び腫瘍微小環境及び排出リンパ節における共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０）の発現をもたらす。抗腫瘍応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の不在下で無効になり、ＣＤ４＋Ｔ細胞の不在下で低減する。共に、これらのデータは、最適化コンセンサスＦＳＨＲ  ＤＮＡワクチンの活性のメカニズムを実証し、卵巣癌患者の治療において期待される効果を特徴付ける。
【０２２５】
卵巣癌の予後不良は、卵巣癌と診断されるステージの進行によるところが大きい。（ＣＡ１２５及び／または超音波を用いた）卵巣癌のスクリーニングを開発するための複数の試みは、非常に悪い陽性的中率、及び非常に高い救命年数当たりのコストを示しており、これは、卵巣癌の早期発見に対して適用不能にさせる。同様に、卵巣癌のリスクが増した患者（ＢＲＣＡ突然変異、リンチ症候群を有するもの）は、早期発見を達成するための厳しいフォローアップから恩恵を受けず、これらの患者は、卵巣癌を予防するための卵巣摘出術のみに頼ることにさせてしまう。
【０２２６】
診断年齢の中央値は、６３歳であり、ほとんどのがんは、閉経後に診断される。効果的なスクリーニングに欠けるため、ＦＳＨＲに対する予防的ワクチン接種は、ＦＳＨＲを発現する卵巣癌の５０〜７０％を予防するための実行可能な手法であろう。この年齢で、ＦＳＨＲの生殖活動はもはや機能しないため、この用途から潜在的な悪影響は考え難い。図１３に示すように、予防的にワクチン接種したマウスは、ＦＳＨＲ卵巣腫瘍で後にチャレンジした場合に、生存率の非常に重要な増加を示す。注目すべきは、これらの実験で悪影響は見られなかったことである。したがって、合成コンセンサスＦＳＨＲワクチンは、卵巣癌の標準治療を上回る複数の利点を有する。加えて、ＦＳＨＲワクチンの予防的投与は、そのため、卵巣癌を発症するリスクがある女性、例えば、閉経後の女性、及び高リスク症候群を有する女性を防御するための潜在的用途を有する。
【０２２７】
前述の詳細な説明及び添付の実施例は単に例証であり、添付された特許請求の範囲及びそれらの等価物によってのみ定義される本発明の範囲の限定としてみなすべきではないことが理解される。
【０２２８】
開示された実施形態に対する、種々の変更及び修正は、当業者に明白であろう。そのような変更及び修正は、本発明の化学構造、代替物、派生物、中間体、合成物、組成物、製剤、または使用の方法に関するものを限定することなく含み、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく行うことができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
2019529383000001.app
【国際調査報告】
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