(57)【要約】  本明細書は、後発酵茶から分離した新規な化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を含む認知機能低下改善用組成物に関するものであり、認知機能及び神経細胞保護関連分野において広く活用され得る。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物。
【化１】
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前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６であり、Ｒ２はＣ６Ｈ１１Ｏ５であり、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２である。
【請求項２】
前記Ｒ１は下記の化学式２で表される化合物である、請求項１に記載の組成物。
【化２】
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【請求項３】
前記Ｒ２は下記の化学式３で表される化合物である、請求項１に記載の組成物。
【化３】
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【請求項４】
前記Ｒ３は下記の化学式４で表される化合物である、請求項１に記載の組成物。
【化４】
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【請求項５】
前記化合物は、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ３−Ｏ−［２−Ｏ’’-（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−ａｌｐｈａ−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記抽出は、熱水、Ｃ１〜Ｃ６の低級アルコール、及びこれらの混合溶媒から選ばれた一つ以上の溶媒による抽出である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記低級アルコールはエタノールである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記抽出物は、抽出後にケトンで分画した分画物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ケトンはアセトンである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物中の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．００００１質量％〜１０質量％の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物中の後発酵茶抽出物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．１質量％〜９０質量％の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抽出物は、前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物が、抽出物の総質量を基準に、０．０００１質量％〜２０質量％の範囲で含まれたものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物の投与による前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記認知機能低下は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）発現低下、及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）発現増加からなる群より選ばれた一つ以上に起因したものである、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記認知機能低下は、記憶力減退、認知減退、識別力減退、鬱病、及び健忘症からなる群より選ばれる一つ以上を含むものである、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記改善は、ベータ−アミロイドの凝集抑制、凝集したベータ−アミロイドの分解、ＢＤＮＦの発現増進及びＤＮＭＴ１の発現減少からなる群より選ばれた一つ以上によってなされる、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
当該組成物は神経細胞保護用組成物である、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記神経細胞保護は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）の発現低下、及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）の発現増加からなる群より選ばれた一つ以上による影響から神経細胞を保護することである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物は食品又は薬学組成物である、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、新規なケンペロール系化合物を含む認知機能改善用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生活水準の向上や医療産業の発展により癌をはじめとした難治性疾患の治療が可能になるにつれて人間の寿命も延びてきたが、それによる人口の老令化に伴い認知機能低下や慢性退行性神経疾患に病む患者が増加しており、これはむしろ暮らしの質を相対的に落としている。神経細胞機能障害や損傷は凝集しやすい特定のタンパク質によって誘発するとされており、多くの神経系疾患はかかる容態を特徴とする。このような神経系疾患はアルツハイマー病のような疾患を含む。
【０００３】
老人人口の増加に伴い、老化、認知機能低下、退行性神経疾患及び脳疾患に対する治療及び防止についての必要性が高まっている。そのため、このような老化や疾患の予防、治療、緩和、及び改善などについての研究が絶え間なく続いてきているが、既存の物質はその効果が不明確であったり副作用を誘発したりするなどの問題があり、このような問題を解決する天然物由来の治療剤の開発が必要な実情であった。
【０００４】
緑茶は、葉状の葉茶形態、又はより深い香りを感じるために醗酵状態の茶で飲用する。醗酵緑茶は、緑茶葉に酸化処理を施したものを意味し、茶葉に存在する酸化酵素によって酸化させた醗酵茶、茶葉に存在する酵素ではない他の微生物によって醗酵させた後発酵茶を含む。醗酵の度合に応じて、弱発酵茶、半発酵茶、全醗酵茶などに分けられる。例えば、醗酵緑茶は、醗酵の形態や度合に応じて、緑茶、ウーロン茶、紅茶、プーアル茶などといった多様な名称で呼ばれる。
【０００５】
醗酵状態の茶は、葉茶と比べて、香りにおいて違いを示すだけでなく、具体的醗酵工程や微生物の種類などに応じて、有効成分の種類や含量において大きな違いを示すことがある。このように多様な化合物が生成、分離され得るという点のため、緑茶を用いた未知の新規化合物の分離及び同定のための多様な努力が続けられてきている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−０９７５１９９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一側面において、後発酵茶由来の新規な化合物を見出し、これを認知機能改善及び神経細胞保護に用いることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供する。
【０００９】
【化１】
2019531306.tif 000003
【００１０】
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６であってよく、Ｒ２はＣ６Ｈ１１Ｏ５であってよく、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２であってよい。
【００１１】
また、本発明は、他の側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を有効成分として含む神経細胞保護用又は神経疾患治療用組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、一側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを含む認知機能低下改善方法、認知機能低下治療方法、神経細胞保護方法、又は神経疾患治療方法を提供する。
【００１３】
また、本発明は、他の側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を認知機能低下改善用、認知機能低下治療用、神経細胞保護用、又は神経疾患治療用組成物の製造に用いる用途を提供する。
【００１４】
また、本発明は、他の側面において、認知機能低下改善、認知機能低下治療、神経細胞保護、神経疾患治療用途に用いるための有効成分として、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を提供する。
【００１５】
さらに、本発明は、また他の側面において、認知機能低下改善、神経細胞保護のための有効成分として、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物の非治療的用途を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明は、一側面において、後発酵茶から分離した新規化合物を認知機能改善分野及び神経細胞保護分野において利用できるようにすることで、後発酵茶関連産業、認知機能分野、及び神経科学分野などで広く活用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一側面に係る化合物のＭＳスペクトルを示した図である。
【図２】本発明の一側面に係る化合物の１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴）スペクトルを示した図である。
【図３】本発明の一側面に係る化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図４】本発明の一側面に係る化合物の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図５】本発明の一側面に係る化合物の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図６】本発明の一側面に係る化合物がベータアミロイドの凝集に及ぼす影響を確認した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書において「後発酵」は、茶葉に存在する酵素ではない他の微生物又は物質によって醗酵させることを含む。後発酵茶は、前記方式によって緑茶を醗酵させたものを含む。
【００１９】
本明細書において「抽出物」とは、天然物からその中の成分を取り出すことで得られた物質であれば、取り出し方法や成分の種類を問わずいずれも含む。例えば、水や有機溶媒を用いて天然物から溶媒に溶解される成分を取り出して得たもの、天然物の特定の成分、例えば、オイルのような特定の成分のみを抽出して得られたもの、そのようにして得られたものを再び特定の溶媒などを用いて分画して得た分画物などをいずれも含む広義の概念である。
【００２０】
本明細書において「分画物」は、ある溶媒を用いて特定の物質や抽出物を分画して得たもの又は分画して残ったもの、そして、これらを特定の溶媒で再び抽出して得たものを含む。分画方法や抽出方法は当業界における通常の技術者に知られたものであればいずれも用いてよい。
【００２１】
本明細書において「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋なエナンチオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）又はそれらの混合物）だけでなく、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（すなわち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００２２】
本明細書において「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーと関連して用いた場合、エナンチオマー又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、好ましくは約９５％以上、より好ましくは約９７％以上、又は約９８％以上、さらに好ましくは約９９％以上、最も好ましくは約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００２３】
本明細書において「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｄｏｓａｇｅ）で利用する際に相当な毒性を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに使用することができるという政府又はこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は一般的な薬局方に列挙され、又はその他一般的な薬局方に記載されたものと認定されることを意味する。
【００２４】
本明細書において「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸から形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１-カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換されるときに形成される塩を含んでよい。
【００２５】
本明細書において「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは、水が結合している化合物を意味し、水と混合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００２６】
本明細書において「溶媒和物」とは、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００２７】
本発明は、一側面において、下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供する。
【００２８】
【化２】
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【００２９】
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６であってよく、Ｒ２はＣ６Ｈ１１Ｏ５であってよく、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２であってよい。
【００３０】
一具現例によると、前記Ｒ１は、下記の化学式２で表される化合物であってよい。
【００３１】
【化３】
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【００３２】
他の具現例によると、前記Ｒ２は、下記の化学式３で表される化合物であってよい。
【００３３】
【化４】
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【００３４】
前記Ｒ３は、下記の化学式４で表される化合物であってよい。
【００３５】
【化５】
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【００３６】
他の具現例によると、前記化合物は、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−ａｌｐｈａ−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）であってよい。前記化合物は、下記の化学式５のように表し得る。
【００３７】
【化６】
2019531306.tif 000008
【００３８】
本発明の一側面によると、前記化合物、その異性体、これらの薬学的に許容可能な塩、これらの水和物又はこれらの溶媒和物を製造する方法は、合成、天然物からの分離などを含んでいてよい。
【００３９】
他の具現例によると、前記後発酵は菌株接種によるものであってよく、前記菌株は、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）及びロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）から選ばれる菌株であってよく、好ましくは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｌｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｕｓ）及びロイコノストック・メッセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）から選ばれるものであってよい。また他の具現例によると、前記後発酵茶は緑茶を後発酵させたものであってよい。
【００４０】
本発明は、一側面において、前記化合物は、本発明者らが後発酵茶に対する持続的な研究の末に見出した化合物であって、当該化合物を用いてベータ−アミロイド凝集評価（ｂｅｔａ−Ａｍｙｌｏｉｄ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）を実施した結果、これまで知られていた抑制剤であるモリン、フェノールレッドよりも優れたベータアミルロイド凝集抑制及びプラーク（ｐｌａｑｕｅ）形成抑制効能があることを確認した。したがって、本発明の一側面に係る前記化合物を用いてベータ−アミロイドに関係した認知機能低下を予防、治療、及び改善することができることを究明し、さらに、ベータ−アミロイド凝集に起因する損傷及び死滅から神経細胞を保護する用途として前記化合物を用いることができることを立証した（図６参照）。
【００４１】
また、本発明の一側面において、前記化合物は、神経細胞においてＢＤＮＦの発現を増進させ且つＤＮＭＴ１の発現を低下させた。すなわち、ＢＤＮＦの発現減少又はＤＮＭＴ１の発現増進に関係した認知機能低下、痴ほう、アルツハイマー病などの神経退化性疾患の予防及び治療に本願発明を有効に活用することができることを究明した。
【００４２】
また、本発明は、一側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを含む認知機能低下改善方法、認知機能低下治療方法、神経細胞保護方法、又は神経疾患治療方法であってよい。
【００４３】
また、本発明は、他の側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を認知機能低下改善用、認知機能低下治療用、神経細胞保護用、又は神経疾患治療用組成物の製造に用いる用途に関するものであってよい。
【００４４】
また、本発明は、他の側面において、認知機能低下改善、認知機能低下治療、神経細胞保護、神経疾患治療用途に用いるための有効成分として、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物であってよい。
【００４５】
さらに、本発明はまた他の側面において、認知機能低下改善、神経細胞保護のための有効成分として、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物の非治療的用途に関するものであってよい。
【００４６】
一具現例において、前記抽出は、水、熱水、Ｃ１〜Ｃ６の低級アルコール、及びこれらの混合溶媒から選ばれた一つ以上の溶媒による抽出であってよく、他の具現例によると、前記低級アルコールは、当業界において一般的に用いられ得るアルコール単独又は混合物であってよく、好ましくは、エタノールであってよい。
【００４７】
本発明の他の側面によると、前記抽出物は、抽出後にケトンで分画した分画物であってよい。
【００４８】
他の具現例によると、前記ケトンは、アセトン、カルボン（ｃａｒｖｏｎ）、プレゴン（ｐｕｌｅｇｏｎｅ）、イソロンギホラノン（ｉｓｏｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ）、２−ヘプタノン、２−ペンタノン、３−ヘキサノン、３−ヘプタノン、４−ヘプタノン、２−オクタノン、３−オクタノン、２−ノナノン、３−ノナノン、２−ウンデカノン、２−トリデカノン、メチルイソプロピルケトン、エチルイソアミルケトン、ブチリデンアセトン、メチルヘプテノン、ジメチルオクテノン、ゲラニルアセトン、ファルネシルアセトン、２,３−ペンタジオン、２,３−ヘキサジオン、３,４−ヘキサジオン、２,３−ヘプタジオン、アミルシクロペンタノン、アミルシクロペンテノン、２−シクロペンチルシクロペンタノン、ヘキシルシクロペンタノン、２−ｎ−ヘプチルシクロペンタノン、ｃｉｓ−ジャスモン、ジヒドロジャスモン、メチルコリロン、２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、２−ｓｅｃ−ブチルシクロヘキサノン、セロリーケトン、クリプトン、ｐ−ｔｅｒｔ−ペンチルシクロヘキサノン、メチルシクロシトロン、ネロン、４−シクロヘキシル−４−メチル−２−ペンタノン、オキサイドケトン、エモキシフロン、メチルナフチルケトン、α−メチルアニサルアセトン、アニシルアセトン、ｐ−メトキシフェニルアセトン、ベンジリデンアセトン、ｐ−メトキシアセトンフェノン、ｐ−メチルアセトフェノン、プロピオフェノン、アセトフェノン、α−ダイナスコン（Ｄｙｎａｓｃｏｎｅ）、イリトーン（ｌｒｉｔｏｎｅ）、イオノン（ｉｏｎｏｎｅ）、プソイドイオノン（Ｐｓｅｕｄｏｉｏｎｏｎｅ）、メチルイオノン、メチルイリトーン、２,４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、アリルイオノン、２−アセチル−３,３−ジメチルノルボルナン、ベルベノン、フェンコン（ｆｅｎｃｈｏｎ）、シクロペンタデカノン、シクロヘキサデセノンなどを含んでいてよく、当業界において一般的に用いられ得る溶媒としてのケトン類及びこれらの混合物をいずれも含んでいてよく、好ましくは、アセトンであってよい。
【００４９】
本発明の一側面によると、前記組成物中の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．００００１質量％〜１０質量％の範囲であってよい。前記含量は、前記組成物の総質量に対し、０．００００１質量％以上、０．００００５質量％以上、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、２質量％以上、３質量％以上、４質量％以上、５質量％以上、６質量％以上、７質量％以上、８質量％以上、又は９質量％以上であってよい。また、１０質量％以下、９質量％以下、８質量％以下、７質量％以下、６質量％以下、５質量％以下、４質量％以下、３質量％以下、２質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、０．０００５質量％以下、０．０００１質量％以下、０．００００５質量％以下、又は０．００００３質量％以下であってよい。
【００５０】
本発明の他の側面によると、前記組成物中の後発酵茶抽出物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．１質量％〜９０質量％の範囲であってよい。前記含量は、前記組成物の総質量に対し、０．１質量％以上、１質量％以上、５質量％以上、１０質量％以上、１５質量％以上、２０質量％以上、２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上、４５質量％以上、５０質量％以上、５５質量％以上、６０質量％以上、６５質量％以上、７０質量％以上、７５質量％以上、８０質量％以上、又は８５質量％以上であってよい。また、９０質量％以下、８５質量％以下、８０質量％以下、７５質量％以下、７０質量％以下、６５質量％以下、６０質量％以下、５５質量％以下、５０質量％以下、４５質量％以下、４０質量％以下、３５質量％以下、３０質量％以下、２５質量％以下、２０質量％以下、１５質量％以下、１０質量％以下、５質量％以下、１質量％以下、又は０．５質量％以下であってよい。
【００５１】
本発明のまた他の側面によると、前記抽出物は、前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物が、抽出物の総質量を基準に、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、３質量％以上、５質量％以上、７質量％以上、１０質量％以上、１２質量％以上、１５質量％以上、又は１８質量％以上含まれたものであってよい。また、２０質量％以下、１５質量％以下、１２質量％以下、１０質量％以下、７質量％以下、５質量％以下、３質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、０．０００５質量％以下、又は０．０００３質量％以下含まれたものであってよい。好ましくは、前記抽出物は、前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物が、抽出物の総質量を基準に、０．０００１質量％〜２０質量％の範囲で含まれたものであってよい。
【００５２】
本発明のまた他の側面によると、前記組成物の投与による前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってよい。前記投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以上、１ｍｇ／ｋｇ／日以上、５ｍｇ／ｋｇ／日以上、１０ｍｇ／ｋｇ／日以上、１５ｍｇ／ｋｇ／日以上、２０ｍｇ／ｋｇ／日以上、２５ｍｇ／ｋｇ／日以上、３０ｍｇ／ｋｇ／日以上、３５ｍｇ／ｋｇ／日以上、４０ｍｇ／ｋｇ／日以上、４５ｍｇ／ｋｇ／日以上、５０ｍｇ／ｋｇ／日以上、５５ｍｇ／ｋｇ／日以上、６０ｍｇ／ｋｇ／日以上、６５ｍｇ／ｋｇ／日以上、７ｍｇ／ｋｇ／日以上、７５ｍｇ／ｋｇ／日以上、８０ｍｇ／ｋｇ／日以上、８５ｍｇ／ｋｇ／日以上、９０ｍｇ／ｋｇ／日以上、又は９５ｍｇ／ｋｇ／日以上であってよい。また、前記投与量は、１００ｍｇ／ｋｇ／日以下、９５ｍｇ／ｋｇ／日以下、９０ｍｇ／ｋｇ／日以下、８５ｍｇ／ｋｇ／日以下、８０ｍｇ／ｋｇ／日以下、７５ｍｇ／ｋｇ／日以下、７０ｍｇ／ｋｇ／日以下、６５ｍｇ／ｋｇ／日以下、６０ｍｇ／ｋｇ／日以下、５５ｍｇ／ｋｇ／日以下、５０ｍｇ／ｋｇ／日以下、４５ｍｇ／ｋｇ／日以下、４０ｍｇ／ｋｇ／日以下、３５ｍｇ／ｋｇ／日以下、３０ｍｇ／ｋｇ／日以下、２５ｍｇ／ｋｇ／日以下、２０ｍｇ／ｋｇ／日以下、１５ｍｇ／ｋｇ／日以下、１０ｍｇ／ｋｇ／日以下、５ｍｇ／ｋｇ／日以下、１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以下、又は０．００３ｍｇ／ｋｇ／日以下であってよい。
【００５３】
一具現例によると、前記認知機能低下は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、ベータアミロイドプラーク（ｐｌａｑｕｅ）の形成、又は脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）の発現低下及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ-５）-ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）の発現増加からなる群より選ばれたいずれか一つ以上に起因するものであってよい。
【００５４】
他の具現例によると、前記認知機能低下は、記憶力減退、認知減退、識別力減退、鬱病、及び健忘症からなる群より選ばれる一つ以上を含むものであってよい。
【００５５】
また他の具現例によると、前記改善は、ベータ−アミロイドの凝集抑制、ベータ−アミロイドのプラーク（ｐｌａｑｕｅ）形成抑制、ベータ−アミロイドプラーク又は凝集したベータ−アミロイドの分解、ＢＤＮＦの発現増進及びＤＮＭＴ１の発現減少からなる群より選ばれた一つ以上によってなされるものであってよい。
【００５６】
本発明の一実施態様によると、前記組成物は、神経細胞保護用組成物であってよい。
【００５７】
他の実施態様によると、前記神経細胞保護は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）又はプラーク（ｐｌａｑｕｅ）、ＢＤＮＦの発現減少又はＤＮＭＴ１の発現増進による影響から神経細胞を保護することであってよい。凝集したベータアミロイドは、神経細胞を損傷及び死滅させるものと知られていることから、本発明の一側面に従い、ベータアミロイドの凝集又はプラークの形成を抑制させると、神経細胞を保護することができる。また、ＤＮＭＴ１は、ＤＮＡメチル化を生じさせて遺伝子発現を抑制し、これにより、ＢＤＮＦの発現などに問題が生じて認知能力低下も誘発される。本発明は、一側面において、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ１（ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １、ＤＮＭＴ１）活性を阻害してＤＮＡメチル化を抑制するため、神経細胞保護による認知能力の改善及び神経退化性疾患の改善に役立つ。
【００５８】
本発明の他の側面によると、前記組成物は薬学組成物又は食品組成物であってよい。一側面において、前記組成物は神経退化性疾病を予防又は治療するための薬学組成物であってよい。他の側面において、前記神経退化性疾病は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、ＢＤＮＦの発現低下、及びＤＮＭＴ１の発現増加からなる群より選ばれた一つ以上に起因するものであってよい。他の側面において、前記神経退化性疾患は、痴呆、アルツハイマー病、健忘症などを含む。
【００５９】
本発明の一側面に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与されてよい。経口投与のための剤形は、錠剤、丸剤、軟質及び硬質カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、液剤、乳濁剤又はペレット剤であってよいが、これらに制限されるものではない。非経口投与のための剤形は、溶液剤、懸濁剤、乳液剤、ゲル、注射剤、点滴剤、坐剤、パッチ又は噴霧剤であってよいが、これらに制限されるものではない。前記剤形は、当該分野の通常的な方法に従い容易に製造することができ、界面活性剤、賦形剤、水和剤、乳化促進剤、懸濁剤、浸透圧調節のための塩又は緩衝剤、着色剤、香辛料、安定化剤、防腐剤、保存剤又はその他常用する補助剤をさらに含んでいてよい。
【００６０】
本発明の一側面による前記薬学組成物の適用量又は投与量は、投与を受ける対象の年齢、性別、体重、病理状態及びその深刻度、投与経路又は処方者の判断によって異なり得る。このような因子に基づく適用量の決定は当業者の水準内にある。
【００６１】
前記食品組成物の剤形は特に限定されないが、例えば、錠剤、顆粒剤、丸剤、粉末剤、ドリンク剤といった液剤、キャラメル、ゲル、バー、ティーバッグなどに剤形化されていてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分の他、当該分野において通常的に用いられる成分を剤形又は使用目的に応じて当業者が難なく適宜選定して配合してよく、他の原料と併せて適用した場合、相乗効果が生じることがある。
【００６２】
前記組成物は、単純摂取、飲用、注射投与、スプレー投与又はスクイーズ投与などの様々な方法で投与されてよい。
【００６３】
本発明の一側面に係る食品組成物において、前記有効成分の投与量の決定は、当業者の水準内にあり、投与しようとする対象の年齢、健康状態、合併症などといった様々な要因に応じて異なり得る。本発明の一側面に係る食品組成物は、例えば、チューイングガム、キャラメル製品、キャンデー類、氷果子類、お菓子類などの各種の食品類、清凉飲料、ミネラルウォーター、アルコール飲料などの飲料製品、ビタミンやミネラルなどを含む健康機能性食品類であってよい。
【００６４】
前記の他、本発明の一側面に係る食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド粘増剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含んでいてよい。その他、本発明の一側面に係る食品組成物は、天然果物ジュース並びに果物ジュース飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含んでいてよい。このような成分は、独立で、或いは組み合わせて用いていてよい。このような添加剤の割合はそれほど重要ではないが、本発明の一側面に係る組成物１００質量部当たり０〜約５０質量部の範囲で含まれるのが一般的である。
【００６５】
以下、下記実験例及び剤形例を挙げて本明細書の構成及び効果についてより具体的に説明する。なお、これらの例は、本明細書についての理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本明細書の範疇及び範囲が下記例に限定されるものではない。
【００６６】
［実施例１］後発酵茶試料の製造
緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ. Ｙａｂｕｋｉｔａ）葉で作った緑茶に水を添加して水分含量を４０質量％に調整した。これにバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）５×１０６ｃｆｕ／ｇを接種し、５０℃で３日間醗酵させた後に８０℃で４日間醗酵させた。
【００６７】
前記熟成された茶の試料を１５秒間粉砕し、メッシュサイズ１ｍｍのステンレス篩で篩いわけした。次いで、粉砕された５０ｍｇを１．５ｍｌのエッペンドルフ・チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅ）に入れ、１ｍｌの脱イオン水を添加し、６０℃の恒温槽で３０分間一定の速度で撹拌した後、２５℃、１３,０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。乾燥させた醗酵緑茶抽出物から水に溶けない部分だけを分離した。
【００６８】
［実施例２］分画物の収得及び化合物の分離
前記後発酵茶試料１５０ｇをアセトンで分画してカテキン誘導体及びカフェインを除去し、他の化合物が濃縮された可溶物を収得した。前記アセトン可溶物４０ｇに対し一次的にシリカゲルコラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルム：メタノールの５：１（ｖ／ｖ）混合物を溶媒として分画物を得た。
【００６９】
カフェインが除去されたクロロホルム：メタノール５：１（ｖ／ｖ）分画物８．９ｇを大容量の高性能向流クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＣＣＣ、Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、ＵＫ）を利用して分画した。このときに用いた溶媒はｎ−ｈｅｘａｎｅ−ＴＢＭＥ（Ｍｅｔｈｙｌ  ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｅｔｈｅｒ）−ＢｕＯＨ−ＭｅＣＮ−Ｗａｔｅｒ（０．２５：３：１：１：５、ｖ／ｖ）とし、流速は２５ｍｌ／ｍｉｎとした。前記条件を用いて計１０個の下位分画を分け、各分画に対し、再び小容量のＨＰＣＣＣ（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、ＵＫ）、ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、セファデックス（ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０コラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｗｅｄｅｎ）などを使用して、各分画に含有された成分を分離した。
【００７０】
その結果、前記分画物からこれまで知られていない化合物である、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−ａｌｐｈａ−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）を分離することができ、１Ｈ、１３Ｃ−ＮＭＲ（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｃｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、ＵＶ（ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｅｌｅｃｔｒｏ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｒｏｓｃｏｐｙ）を用いて構造を同定して、各化合物の構造を究明した。１Ｈ及び１３Ｃ核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＮＭＲ）の場合、溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔ）としてｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ３を用い、機器はＢｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ＤＰＸ−５００（ＢＲＵＫＥＲ社、ＵＳＡ）を使用した。各化合物のＭＳスペクトルは、６２００  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｃｃｕｒａｔｅ−Ｍａｓｓ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ）ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳ）を用いて分析した。
【００７１】
分析の結果、前記各化合物は、これまで知られていない新規な化合物であって、Ｃ４２Ｈ４６Ｏ２２の分子量９０２．２４８１であるケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］であると確認された。
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の化学式及びＮＭＲデータは以下のとおりである。
【００７２】
【化７】
2019531306.tif 000009
【００７３】
【表１Ａ】
2019531306.tif 000010
【００７４】
【表１Ｂ】
2019531306.tif 000011
【００７５】
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のＭＳスペクトルは図１のように示され、１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはそれぞれ図２及び図３のように示され、ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図４のように示され、ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図５のように示された。
【００７６】
［実験例１］ベータアミロイド凝集効能の実験
前記ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のベータ−アミロイド凝集阻害効果を蛍光分析法（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｔ  ａｓｓａｙ）で確認した。
【００７７】
具体的に、ベータ−アミロイド（Ａβ１−４２、ＡｎａＳｐｅｃ  Ｉｎｃ、ＵＳＡ）を入手して０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用し、使用の前に−８０℃で保管した。ＤＭＳＯにモリン（Ｍｏｒｉｎ、２０μＭ）、フェノールレッド（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ、２０μＭ）、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（１ｍｇ／ｍｌ）のそれぞれを希釈して前記濃度に調節した。
【００７８】
Ａβ１−４２凝集抑制度合いを特定するために、０．０１Ｍリン酸ソーダ緩衝溶液５０μｌに前記濃度で用意したそれぞれの化合物を１０μＭになるように希釈した後、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ１−４２を４０μｌ加えた後、２ｍＭチオフラビンＴ（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｔ）１０μｌを加え、３７℃・５分間隔で１５０分間分光蛍光光度計（ＲＦ−５３００ＰＣ、ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ、Ｊａｐａｎ）で蛍光を測定した。
【００７９】
その結果は、下の表２及び図６のように示された。
【００８０】
【表２】
2019531306.tif 000012
【００８１】
前記表中のＲＦＵは、ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｕｎｉｔであり、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＲＦＵ」は凝集したベータアミルロイドの量を表し、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＲＦＵ（％  ｏｆ  Ｐｏｓ.Ｃｏｎｔ.）」は凝集したベータアミルロイドの量の陽性対照群に対する百分率の値を表す。「新規物質３３」はケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を表す。
【００８２】
すなわち、陽性対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ、「Ｐｏｓ.Ｃｏｎｔ.」と表し、化合物の処理なしにベータアミルロイドだけを凝集させたもの）の凝集を１００％としたとき、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］は陽性対照群に比べ２３．０％程度凝集を抑制する効果を示した。この結果は、これまで知られた抑制剤であるモリン(Ｍｏｒｉｎ)（２１．４％）、フェノールレッド（６．４％）よりも優れたベータアミルロイド凝集抑制及びプラーク形成抑制効能があることを示す。したがって、前記二種の化合物は、前記のような効能を持っているところ、ベータアミロイド凝集に関連した認知機能低下の予防、治療、及び改善に用いられ得る。また、ベータアミロイド凝集などによる神経細胞損傷又は死滅を予防、防止、及び抑制することができ、これにより神経細胞を保護することができる。
【００８３】
［実験例２］皮膚累積刺激の実験
前記ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の皮膚累積刺激性の有無を確認し、皮膚に使用できる濃度範囲を算出するために、ＨＲＩＰＴ（Ｈｕｍａｎ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｔ  ｐａｔｃｈ  ｔｅｓｔｓ）を実施した。
【００８４】
具体的に、健康な成人被験者１５人を無作為に選定し、前記化合物が０．５質量％、１質量％、３質量％ずつ含まれた試験用組成物（前記化合物の他、乳化剤、安定化剤、精製水などを含む皮膚用組成物）をチャンバ（ＩＱ  ｃｈａｍｂｅｒ、Ｅｐｉｔｅｓｔ  Ｌｔｄ、フィンランド）当り２０μｌずつ滴下し、被験者の背中の右上側部位に貼布してから２４時間経過したときに新しい貼布に取り替えた。このような方法で、１週間に３回ずつ計３週間９回の貼布を行いながら毎回貼布の前後の皮膚反応を検査し、最終の貼布を除去してから４８時間までの間の皮膚反応を確認し、その平均反応度を求めた。
【００８５】
その結果は、下の表３のとおりである。
【００８６】
【表３】
2019531306.tif 000013
【００８７】
前記皮膚反応は、国際接触皮膚炎研究班（ＩＣＤＲＧ；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ  Ｇｒｏｕｐ）の基準に従って判定した。前記表において「新規物質３３」は、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を示す。すなわち、前記物質は、前記含量範囲でいずれも（−）反応度を示し（±、＋、＋＋、又は＋＋＋反応度を示した被験者なし）、これより、前記物質は皮膚累積刺激がなく、皮膚に安全に使用できることが分かった。
【００８８】
［実験例３］細胞内ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子、ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）の発現量の確認
前記新規物質３３が細胞内でも効能を奏するかを確認した。
【００８９】
具体的に、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ（神経母細胞種、韓国細胞株銀行）細胞株を６ウェルプレート（ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ、ＦＡＬＣＯＮ）にウェル当たり２×１０６ずつシードし（ｓｅｅｄｉｎｇ）、３７℃で２４時間、５％ＣＯ２インキュベーターで培養後、ＧＣＧ  １０μＭ、ＥＧＣＧ  １０μＭ、既存の緑茶抽出物（ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｅｘｔｒａｃｔ、ＧＴＥ）１０μｇ／ｍｌ、前記「新規物質３３」１０μｇ／ｍｌ、陽性対照群として５−Ａｚａ−２’ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（５−Ａｚａ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）１μＭで処理して、２４時間さらに培養した。しかる後、培地をすべて除去し、ＲＮＡ抽出キット（ＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ、Ｑｕｉａｇｅｎ社）を利用してＲＮＡを抽出した。抽出したｍＲＮＡを、紫外線検出器（ＴＥＣＡＮ社）を利用して定量後、１μｇのｍＲＮＡをキット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を利用して相補的なＤＮＡに合成した。約１μｇの相補的なＤＮＡを取り、Ｔａｑｍａｎ  ｐｒｏｂｅ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）とＱｕａｎｔｉｔｅｃｔ  Ｐｒｏｂｅ  ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ社）を利用してリアルタイム定量連鎖重合反応を行った。これにより、ＢＤＮＦ及びＤＮＭＴ１の発現量を確認した。このとき、補正基準ｍＲＮＡとしては、ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ  ｇｅｎｅであるＧＡＰＤＨを用いた。
【００９０】
ＢＤＮＦ及びＤＮＭＴ１の発現量を、それぞれ表５及び表６に表した。
【００９１】
【表４】
2019531306.tif 000014
【００９２】
【表５】
2019531306.tif 000015
【００９３】
新規物質３３はＤＮＭＴ１の発現を低減させ、且つＢＤＮＦの発現を増加させるため、前記化合物は神経細胞損傷又は死滅を予防、防止、及び抑制することができ、これにより、神経細胞保護及び神経退化性疾患の予防及び改善を図ることができる。
【００９４】
以下、本発明の一側面に係る組成物の剤形例について説明するが、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。
【００９５】
［剤形例１］軟質カプセル剤
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］２０ｍｇ、Ｌ−カルニチン８０〜１４０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、植物性硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇ及びレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法に従い１カプセルに充填して軟質カプセル剤を製造した。
【００９６】
［剤形例２］錠剤
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］３０ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２００ｍｇ、乳糖６０ｍｇ及び麦芽糖１４０ｍｇを混合して流動層乾燥機を利用して顆粒した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ  ｅｓｔｅｒ）を６ｍｇ添加して、打錠機で打錠して錠剤を製造した。
【００９７】
［剤形例３］顆粒剤
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］５０ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を使用して顆粒に成形した後、包に充填して顆粒剤を製造した。
【００９８】
［剤形例４］ドリンク剤
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］２０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて各瓶に２００ｍｌずつ充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【００９９】
［剤形例５］注射剤
ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］５０ｍｇ、適量の注射用滅菌蒸留水、適量のｐＨ調節剤を用いて通常的な方法に従い注射剤を製造した。
【０１００】
［剤形例６］健康食品
下記の表６に記載された組成にて通常の方法に従い健康食品を製造した。
【０１０１】
【表６】
2019531306.tif 000016
【０１０２】
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法に従い前記成分を混合した後、通常の方法に従い健康食品の組成物の製造に用いてもよい。
【０１０３】
［剤形例７］健康飲料
【０１０４】
【表７】
2019531306.tif 000017
【０１０５】
前記表７のように総体積９００ｍｌになるように残量の精製水を添加して通常の健康飲料の製造方法に従い前記成分を混合してから約１時間８５℃で撹拌加熱し、これにより調製された溶液をろ過して得られたろ液を滅菌された２リットルの容器に入れて密封滅菌した後に冷蔵保管して健康飲料を製造した。
【０１０６】
以上、本明細書の特定の実施例などを詳しく記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこのような具体的な記述は単に好適な具現例であるに過ぎず、これによって本明細書の範囲が制限されるものではないことは明白であろう。したがって、本明細書の実質的な範囲は添付の請求項とその等価物によって定義されるといえよう。
【図１】
2019531306.tif 000022
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年4月19日(2019.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、その溶媒和物、又はこれを含む後発酵茶抽出物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物。
【化１】
2019531306.tif 000028
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６であり、Ｒ２はＣ６Ｈ１１Ｏ５であり、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２である。
【請求項２】
前記Ｒ１は下記の化学式２で表される化合物である、請求項１に記載の組成物。
【化２】
2019531306.tif 000029
【請求項３】
前記Ｒ２は下記の化学式３で表される化合物である、請求項１又は２に記載の組成物。
【化３】
2019531306.tif 000030
【請求項４】
前記Ｒ３は下記の化学式４で表される化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【化４】
2019531306.tif 000031
【請求項５】
前記化合物は、ケンペロール３−Ｏ−［２−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ３−Ｏ−［２−Ｏ’’-（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−ａｌｐｈａ−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記抽出は、熱水、Ｃ１〜Ｃ６の低級アルコール、及びこれらの混合溶媒から選ばれた一つ以上の溶媒による抽出である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記低級アルコールはエタノールである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記抽出物は、抽出後にケトンで分画した分画物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ケトンはアセトンである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物中の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．００００１質量％〜１０質量％の範囲である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物中の後発酵茶抽出物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．１質量％〜９０質量％の範囲である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抽出物は、前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物が、抽出物の総質量を基準に、０．０００１質量％〜２０質量％の範囲で含まれたものである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物の投与による前記化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記認知機能低下は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）発現低下、及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）発現増加からなる群より選ばれた一つ以上に起因したものである、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記認知機能低下は、記憶力減退、認知減退、識別力減退、鬱病、及び健忘症からなる群より選ばれる一つ以上を含むものである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記改善は、ベータ−アミロイドの凝集抑制、凝集したベータ−アミロイドの分解、ＢＤＮＦの発現増進及びＤＮＭＴ１の発現減少からなる群より選ばれた一つ以上によってなされる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
当該組成物は神経細胞保護用組成物である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記神経細胞保護は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）の発現低下、及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）の発現増加からなる群より選ばれた一つ以上による影響から神経細胞を保護することである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物は食品又は薬学組成物である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【国際調査報告】
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