(57)【要約】本明細書で提供するのは、例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドと組み合わせて、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニストを抗腫瘍薬として使用する方法である。また、そのＣＤＲにより特徴づけられた特異的抗体がアゴニスとして記載されている。
2019519536.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の少なくとも１つのグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニストを投与するステップと；
有効量の少なくとも１つのＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を腫瘍内に投与するステップを含み、それにより対象の腫瘍を処置する、哺乳動物の腫瘍を処置する方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは腫瘍内に投与される、請求項１の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは全身投与される、請求項１の方法。
【請求項４】
有効量の１つまたは複数の追加の治療薬を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項１〜３の何れかの方法であって、前記１つまたは複数の追加の治療薬は、１つもしくは複数の化学療法薬、１つもしくは複数の生物学的薬剤、１つもしくは複数の抗血管新生薬、１つもしくは複数の増殖阻害薬、１つもしくは複数の抗新生物形成組成物、手術、またはそれらの組み合わせを含む、方法。
【請求項５】
前記哺乳動物はヒトである、請求項１〜４の何れかの方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲ抗体またはＧＩＴＲ抗体断片を含む、請求項１〜５の何れか一項の方法。
【請求項７】
前記ＧＩＴＲ抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、請求項６の方法。
【請求項８】
前記ＧＩＴＲ抗体は、二重特異性抗体または単鎖抗体である、請求項６または７の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、および（Ｆａｂ’）２から選択されるＧＩＴＲ抗体断片である、請求項６の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは：
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含むＧＩＴＲ結合ドメイン（ＧＩＴＲ−ＢＤ）を含む抗体；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の配列を含むＧＩＴＲ−ＢＤを含む抗体；
ｃ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；
ｄ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；および
ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の配列を含むポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子から選択されるＧＩＴＲ抗体である、請求項６の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲペプチドまたはＧＩＴＲをコードする核酸分子を含む、請求項１〜５の何れか一項の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは大分子を含む、請求項１〜５の何れか一項の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍はリンパ腫、メラノーマ、肉腫、または腺がんである、請求項１〜１２の何れか一項の方法。
【請求項１４】
前記腫瘍は、乳房、肝臓、脾臓、腎臓、大腸、前立腺、肺、中枢神経系、頭頸部、胃、膵臓、卵巣、子宮頸部、精巣、膀胱、または胆のうのがんである、請求項１〜１２の何れか一項の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮにはクラスＢのＯＤＮが含まれる、請求項１〜１４の何れか一項の方法。
【請求項１６】
前記クラスＢのＯＤＮは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３´）およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３´）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３（５´−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５の方法。
【請求項１７】
前記注射腫瘍のサイズまたは体積を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる、請求項１〜１６の何れか一項の方法。
【請求項１８】
非注射転移性腫瘍のサイズまたは体積を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる、請求項１〜１７の何れか一項の方法。
【請求項１９】
非注射転移性腫瘍の数を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる、請求項１〜１８の何れか一項の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストと前記少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮは同時にまたは同時期に投与される、請求項１〜１９の何れか一項の方法。
【請求項２１】
有効量の少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの少なくとも２回の別個の腫瘍内投与と、有効量の少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの少なくとも２回の別個の腫瘍内投与を含む、請求項１、２、および４〜２０の何れか一項の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの有効量は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｋｇであり、前記少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの有効量は、少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇである、請求項１、２、および４〜２０の何れか一項の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの有効量は、０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇであり、前記少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの有効量は、０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇである、請求項１、および３〜２０の何れか一項の方法。
【請求項２４】
１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストと；
１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮとを含む、組成物。
【請求項２５】
薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項２４の組成物。
【請求項２６】
請求項２４または２５の組成物と、任意選択的に、１つもしくは複数の化学療法薬、１つもしくは複数の生物学的薬剤、１つもしくは複数の抗血管新生薬、１つもしくは複数の増殖阻害薬、１つもしくは複数の抗新生物形成組成物、またはそれらの組み合わせとを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１６年７月１日出願の米国仮特許出願第６２／３５７７５０号の利益を主張し、前記文献はその全体が参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【技術分野】
【０００２】
本出願は、例えばＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）との組み合わせた、抗腫瘍薬としてのグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニストの使用に関する。また、斯かる方法で使用され得るキットおよび組成物も提供する。
【背景技術】
【０００３】
がんは、身体の他の部分に浸潤または広がる可能性のある異常な細胞増殖を伴う疾患群である。２０１２年には、約１４１０万件の新規のがん症例が世界的に生じている（メラノーマ以外の皮膚がんは含まない）。それは約８２０万件の死亡、つまりヒトの死の１４．６％の原因であった。男性において最も一般的ながんタイプは、肺がん、前立腺がん、大腸がん、および胃がんである。女性では、最も一般的なタイプは乳がん、大腸がん、肺がん、および子宮頸がんである。がんおよびその転移に対する有効な処置に対しては、継続的なニーズがある。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書で提供するのは、ヒト、家畜動物、または実験動物などの哺乳動物における腫瘍を処置する方法である。本方法は、有効量の少なくとも１つのグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニストの投与（例えば、腫瘍内投与または全身投与）と、有効量の少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの腫瘍内投与とを含み、それにより哺乳動物の腫瘍を処置する。いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮは同時にまたは同時期に投与される。いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも２回で、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回などで、少なくとも２回の異なる機会に投与される。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮの両方が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１４日、または少なくとも３０日空けて、多数回で投与される。いくつかの例では、本方法は、さらに、有効量の１つまたは複数の追加の治療薬、例えば１つまたは複数の化学療法薬、１つまたは複数の生物学的薬剤、１つまたは複数の抗血管新生薬、１つまたは複数の増殖阻害薬、１つまたは複数の抗新生物形成組成物、手術、またはそれらの組み合わせなどを投与するステップを含む。
【０００５】
例示的なＧＩＴＲアゴニストとしては、ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲ抗体断片（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、もしくは（Ｆａｂ’）２など）、大分子、小分子、または核酸分子をコードするＧＩＴＲが挙げられる。特異的な例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、および（Ｆａｂ’）２から選択されるＧＩＴＲ抗体断片である。特異的な例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストは、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含むＧＩＴＲ結合ドメイン（ＧＩＴＲ−ＢＤ）を含む抗体；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の配列を含むＧＩＴＲ−ＢＤを含む抗体；ｃ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；ｄ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；およびｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の配列を含むポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子から選択されるＧＩＴＲ抗体である。
【０００６】
例示的なＣｐＧ  ＯＤＮとしては、クラスＢのＯＤＮ、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示されるヒトＣｐＧ配列（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３´）およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に示されるマウスＣｐＧ配列（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３´）などが挙げられる。一例では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列５´−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３´ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３を有する（ＤｙｎａｖａｘからのＩＳＳ  １０１８）。他の例は、Rachmilewitz et al. (Inflammatory Bowel Diseases 12(5):339-45, 2006)で提供される。当業者であれば、他のＴＬＲ９アゴニストがＣｐＧ  ＯＤＮの代替として（またはそれに加えて）使用可能であることを理解しよう。
【０００７】
いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの有効量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．０３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの有効量は、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．３ｍｇ／ｋｇ以下、０．２５ｍｇ／ｋｇ以下、０．０３ｍｇ／ｋｇ以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ以下、または０．０１ｍｇ／ｋｇ以下、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例では、少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの有効量は、少なくとも０．０５ｍｇ、少なくとも０．３ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも３ｍｇ、少なくとも６ｍｇ、少なくとも１８ｍｇ、または少なくとも２０ｍｇである。いくつかの例では、少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの有効量は、２０ｍｇ以下、１０ｍｇ以下、１ｍｇ以下、０．３ｍｇ以下、または０．０５ｍｇ以下、例えば００５ｍｇ〜２０ｍｇなどである。いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの有効量は０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇであり、少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの有効量は０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇである。
【０００８】
本開示の方法で処置され得る例示的な腫瘍としては、限定するわけではないが、リンパ腫、メラノーマ、肉腫、または腺がんが挙げられる。一部の実施形態では、腫瘍はメラノーマである。いくつかの例では、腫瘍は乳房、肝臓、脾臓、腎臓、大腸、前立腺、肺、中枢神経系、頭頸部、胃、膵臓、卵巣、子宮頸部、精巣、膀胱、または胆のうのがんである。一部の実施形態では、腫瘍は乳がんおよび大腸がんから選択される。他の例も本明細書において提供する。いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、注射腫瘍のサイズまたは体積を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、非注射転移性腫瘍のサイズまたは体積を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、非注射転移性腫瘍の数を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。
【０００９】
本開示の前述のおよび他の目的および特徴は、添付の図を参照にしながら進む、以下の詳細な記載から、より明らかになろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１で使用する方法の概要を提供する図である。
【図２】注射腫瘍または遠位の非注射腫瘍の腫瘍退縮に対する、（Ａ，Ｂ）ＣｐＧ、（Ｂ，Ｃ）抗ＧＩＴＲ、または（Ｄ，Ｆ）ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの両方の、直接腫瘍注射の結果を示すグラフである。（Ａ）ＣｐＧのみは注射腫瘍の退縮を引き起こしたが、（Ｂ）遠位の非注射腫瘍の退縮は引き起こさなかった。（Ｃ）抗ＧＩＴＲは、注射腫瘍の退縮を引き起こしたが、（Ｄ）いくつかのマウスにおいて、遠位腫瘍の退縮を引き起こさなかった。（Ｅ）ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの組み合わせは、注射腫瘍の退縮と、（Ｆ）遠位腫瘍の退縮を引き起こした。
【図３】注射腫瘍または遠位の非注射腫瘍の腫瘍退縮に対する、ＣｐＧの直接腫瘍注射、または抗ＧＩＴＲのｉ．ｐ．注射、またはＣｐＧの直接腫瘍注射と抗ＧＩＴＲのｉ．ｐ．注射の両方の結果を示すグラフである。（Ａ）ＣｐＧのみは注射腫瘍の退縮を引き起こしたが、（Ｂ）遠位非注射腫瘍の退縮は引き起こさなかった。（Ｃ，Ｄ）ｉ．ｐ．投与した抗ＧＩＴＲは、いくつかのマウスにおいて、腫瘍の退縮を引き起こした。（Ｅ）腫瘍内に投与したＣｐＧと、ｉ．ｐ．投与した抗ＧＩＴＲ（例えば、全身性抗ＧＩＴＲ）の組み合わせは、注射腫瘍の退縮を引き起こし、（Ｆ）全マウスではないが、いくつかのマウスにおいて、遠位腫瘍の退縮を引き起こした。
【図４】ある多価抗ＧＩＴＲ抗体構造の略図を提供する図である。
【００１１】
配列表
３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２２に定義されているように、ヌクレオチド塩基の標準的な文字略語とアミノ酸の３文字略語を使用し、核酸配列を示す。各核酸配列の一本の鎖のみを示すが、表示の鎖を参照することにより、含まれる相補鎖が理解される。
【００１２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−３は、例示的なＣｐＧ  ＯＤＮ配列を示す。
【００１３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４は、例示的なＧＩＴＲ結合ポリペプチドである。
【００１４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５は、例示的なＧＩＴＲ結合ドメインである。
【００１５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６は、例示的なＣＤＲ１ポリペプチドである。
【００１６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７は例示的なＣＤＲ２ポリペプチドである。
【００１７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８は例示的なＣＤＲ４ポリペプチドである。
【００１８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９〜１４は、例示的なタンパク質Ｆｃ配列を示す。
【００１９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５〜１７は、例示的なタンパク質ヒンジ配列を示す。
【００２０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８〜２４は、例示的なタンパク質リンカー配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下の用語および方法についての説明は、本開示をより良く開示し、本開示の実践にあたり当業者を誘導するために提供する。「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」の単数形は、文脈が明らかに他を意味する場合を除き、１つまたは２つ以上を指す。例えば、用語「細胞を含む」は、単一のまたは複数の細胞を含み、句「少なくとも１つの細胞を含み」と同等であると考えられる。用語「または」は、文脈上他のことが明確に示されている場合を除き、記載された複数の代替要素の１つの要素または２つ以上の要素の組合せを指す。本明細書で使用する場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。したがって、「ＡまたはＢを含む」は、「Ａ、Ｂ、またはＡおよびＢを含む」を意味し、追加の要素を除外しない。本明細書で言及するＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）のアクセッション番号の日付は、少なくとも早ければ２０１６年７月１日に利用可能な配列である。全ての参考文献（雑誌論文、特許、および特許出願を含む）ならびに本明細書で引用または言及するＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号は、参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００２２】
別途説明がない限り、本明細書で使用する全ての専門用語および科学技術用語は本開示が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと同様または同等の方法および材料を本開示の実践またはテストに使用することが可能だが、適切な方法および材料について以下に記載する。これらの材料、方法、および例は単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
【００２３】
本開示の種々の実施形態の総説を容易にするため、以下の特定の用語の説明を提供する：
【００２４】
投与：ＧＩＴＲ活性を高まるまたは増加させる１つもしくは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲの核酸分子もしくはタンパク質もしくはその下流生成物に対し特異的なアゴニスト）および／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、ＴＬＲ９アゴニスト）などの薬剤を、任意の効果的な経路で対象に提供するかまたは与えること。例示的な投与経路としては、限定するわけではないが、経口経路、注射経路（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、静脈内、腫瘍周辺、および腫瘍内など）、舌下経路、直腸経路、経皮経路、鼻腔経路、膣経路、ならびに吸入経路が挙げられる。一例では、投与経路は腫瘍内である。
【００２５】
薬剤：目的または結果を達成するのに有用である任意の物質または物質の任意の組み合わせ；例えば、腫瘍、例えばがんなどを処置するのに有用な物質または物質の組み合わせ。薬剤としては、限定するわけではないが、タンパク質、核酸分子、化合物、小分子、大分子、有機化合物、無機化合物、または他の関心分子が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリペプチド剤（例えば、抗体など）、核酸分子（例えば、ＧＩＴＲもしくはＣｐＧ  ＯＤＮをコードする核酸分子など）、または医薬化合物である。当業者は、特定の薬剤が２つ以上の結果を達成するのに有用である場合があることを理解しよう。
【００２６】
アゴニスト：タンパク質、例えばＧＩＴＲもしくはＴＬＲ９などの生物学的活性を高めるもしくは増加させる、または、該タンパク質をコードする核酸の転写もしくは翻訳を高めるもしくは増加させる任意の分子。例示的なアゴニスト分子としては、限定するわけではないが、アゴニスト抗体、アゴニストペプチド、オリゴペプチド、有機分子（大分子および小分子を含む）、ならびに核酸分子（例えば、ＧＩＴＲをコードする核酸分子またはＣｐＧ  ＯＤＮ）が挙げられる。用語「ＧＩＴＲアゴニスト」は、ＧＩＴＲの発現およびまたは活性を、例えば、エフェクターＴ細胞を刺激する、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる、制御性Ｔ細胞を欠乏させる、またはそれらの組み合わせにより、直接的または間接的に増加させるかまたは高める分子または分子の組み合わせを指す。用語「ＴＬＲ９アゴニスト」は、ＴＬＲ９の発現および／または活性を、例えば、Ｂ細胞の増殖および分化、ならびにまたは、形質細胞様（ｐＤＣ）活性化およびＩＦＮ−α分泌を誘発することにより、直接的または間接的に増加させるかまたは刺激する分子または分子の組み合わせを指す。
【００２７】
抗体：ＧＩＴＲなどの抗原またはその断片のエピトープを特異的に認識し結合する、少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチド。抗体は重鎖および軽鎖からなり、重鎖および軽鎖はそれぞれ可変領域を有し、可変重（ＶＨ）領域および可変軽（ＶＬ）領域という。一緒になって、ＶＨ領域とＶＬ領域は、抗体により認識される抗原への結合を担う。本開示の抗体には、ＧＩＴＲに対し特異的であるものが含まれ、いくつかの例では、該抗体は、タンパク質の生物学的活性を高めるまたは増加させもする（例えば、エフェクターＴ細胞を刺激する、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる、制御性Ｔ細胞を欠乏させる、または両方など）。
【００２８】
用語抗体には、無傷の免疫グロブリンと、その変異体およびその一部、例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）が含まれる。ｓｃＦｖタンパク質は融合タンパク質であり、ここでは免疫グロブリンの軽鎖可変領域および免疫グロブリンの重鎖可変領域はリンカーにより結合されているが、ｄｓＦｖでは、鎖は、鎖の会合を安定化するために、ジスルフィド結合を導入するように突然変異誘発している。該用語にはまた、遺伝子組み換え形態、例えばキメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、単鎖抗体（例えば、ラクダ科抗体）、およびヘテロ複合体抗体（例えば、二重特異的抗体など）も含まれる。また、Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照されたい。
【００２９】
典型的には、天然に存在する免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により相互結合される重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。２種のタイプの軽鎖、つまりラムダ（λ）およびカッパ（κ）がある。抗体分子の機能的活性を決定する次の５つの主要重鎖クラス（またはイソタイプ）が存在する：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＬｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ。
【００３０】
各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域（領域は「ドメイン」としても知られる）を含有する。組み合わさって、重鎖と軽鎖の可変領域は抗原に特異的に結合する。軽鎖および重鎖の可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる、３つの超可変領域により中断される「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991参照）。Ｋａｂａｔデータベースは現在、オンラインで維持されている。別の軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は構成要素である軽鎖および重鎖の組み合わせフレームワーク領域であり、三次元空間においてＣＤＲを位置付け、整列させるように機能する。
【００３１】
ＣＤＲは、主に、抗原のエピトープに対する結合を担う。各鎖のＣＤＲは、典型的には、Ｎ末端から始まって順に番号をつけられ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３といわれ、また典型的には、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても特定される。したがって、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それが見つけられる抗体の重鎖の可変ドメインに位置する一方、ＶＬ  ＣＤＲ１は、それが見つけられる抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ１である。標的タンパク質に結合する抗体は、特異的なＶＨ領域配列とＶＬ領域配列を有し、したがって、特異的なＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（例えば、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体ごとに異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置のみ、抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。
【００３２】
「ＶH」又は「ＶＨ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、またはＦａｂの可変領域を含む、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶL」または「ＶＬ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、またはＦａｂの可変領域を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
【００３３】
「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンにより、または単一抗体の軽鎖および重鎖の遺伝子が遺伝子導入された細胞により生成される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に既知の方法、例えば骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞との融合体からハイブリッド抗体形成細胞を作成することにより生成される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれる。
【００３４】
「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞株に由来する抗体である。ポリクローナル抗体は、特異的な抗原に対し分泌される免疫グロブリン分子の混合物であり、それぞれが別のエピトープを認識する。これらの抗体は、当業者に既知の方法、例えば、Ｂリンパ球を誘発する適切な哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、またはヤギなど）に抗原を注射して、該抗原に対し特異的なＩｇＧ免疫グロブリンを生成し、これを次に前記哺乳動物の血清より精製することにより生成される。
【００３５】
「キメラ抗体」は、１種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）由来のフレームワーク残基と、別の種（例えば、ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）由来のＣＤＲを有する。いくつかの例では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの例では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体の可変領域の全てが第１種に由来し、キメラ抗体の定常領域の全てが第２種に由来する。
【００３６】
「ヒト化」免疫グロブリンは、ヒトフレームワーク領域と、非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲとを含む、免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一例では、全ＣＤＲが、ヒト化免疫グロブリンにおけるドナー免疫グロブリンに由来する。定常領域は存在する必要はないが、定常領域が存在する場合、それらはヒト免疫グロブリン定常領域に対して実質的に同一、例えば少なくとも約８５−９０％、例えば約９５％またはそれ以上に同一である。つまり、おそらくＣＤＲを除くヒト化免疫グロブリンのすべての部分が、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に対し実質的に同一である。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子組み換えにより構築され得る（例えば、米国特許第５５８５０８９号明細書参照）。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体はＦａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
【００３７】
「ＣＤＲ移植抗体」は、第１（非ヒト）種の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）が、第２（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたヒト化抗体を指す。
【００３８】
結合：２つの基質または分子間の会合、例えば、ある核酸分子の別の核酸分子（またはそれ自体）へのハイブリダイゼーション、抗体または小有機分子とタンパク質との会合、または、あるタンパク質と別のタンパク質または核酸分子との会合など。結合は、限定するわけではないが以下を含む、当業者に既知の任意の手順によって検出され得る：ウェスタンブロット、イムノブロット、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降法、表面プラズモン共鳴、ケミルネサンス、蛍光偏光、りん光、免疫組織学的分析、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法、飛行時間型質量分析法、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびフローサイトメトリー。
【００３９】
特定の薬剤（「特異的結合薬」）が、特定の標的と特異的に反応し得るが無関係の分子とは反応しない、例えば、標的に特異的に免疫反応する、標的に特異的にハイブリダイズする、または標的に特異的に結合する場合、ある分子は別の分子に「特異的に結合する」という。例えば、ＧＩＴＲ特異的結合薬は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでＧＩＴＲタンパク質にのみ実質的に結合する。結合は、例えば、特異的結合薬（例えば、抗体もしくはその機能的断片、タンパク質、または核酸分子など）と標的（例えば、細胞、タンパク質、ＤＮＡ、またはＲＮＡなど）の間の、非ランダム結合反応である。結合特異性は、特異的結合薬が標的と無関係の分子では異なって結合し、それゆえ２つの異なる分子を区別する機能という基準点から決定され得る。例えば、オリゴヌクレオチド分子は、十分な量のオリゴヌクレオチド分子が塩基対を形成するか、または、その標的の核酸分子にハイブリダイズする場合に、標的核酸分子に結合するかまたは安定的に結合して、その結合検出を可能にする。
【００４０】
いくつかの例では、分子（例えば、抗体など）は、サンプルまたは対象の他の分子の結合定数よりも少なくとも１０３Ｍ−１、１０４Ｍ−１、または１０５Ｍ−１大きい結合定数で、標的（例えば、タンパク質など）に特異的に結合する。特定の例では、成分間の複合体形成の結合定数が少なくとも１０４Ｌ／ｍｏｌ、例えば少なくとも１０６Ｌ／ｍｏｌ、少なくとも１０８Ｌ／ｍｏｌ、または少なくとも１０１０Ｌ／ｍｏｌである場合に、２つの化合物は特異的に結合すると言う。２つの成分の結合定数は、当技術分野において既知の方法を使用して決定することが可能である。
【００４１】
特定の例では、２つの化合物は、結合親和性が少なくとも約０．１ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約０．３ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約０．５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約０．７５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約１．０ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約１．３ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約１．５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約２．０ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約２．５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約３．０ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約３．５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約４．０ｘ１０−８Ｍ、少なくとも約４．５ｘ１０−８Ｍ、または少なくとも約５．０ｘ１０−８Ｍである場合に、特異的に結合すると言う。
【００４２】
ある実施形態では、標的に結合する特異的結合薬の解離定数（Ｋｄ）は、≦１０４ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０―１３Ｍ、例えば１０―９Ｍ〜１０―１３Ｍ）である。一実施形態では、Ｋｄは、関心の抗体のＦａｂバージョンとその抗原を用いて実行される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される（例えば、Chen et al., J. Med. Biol. 293:865-881, 1999を参照）。別の例では、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥＳ−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥＳ−３０００（BIAcore, Inc.，ニュージャージー州ピスカタウェイ）を２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）の固定化抗原ＣＭ５チップと共に使用する、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。
【００４３】
がん：異常または制御不可な細胞増殖により特徴付けられる悪性腫瘍。がんにしばしば関連する他の特徴には、転移、つまり、近隣細胞の正常な機能への干渉、サイトカインまたは他の分泌生成物の異常なレベルでの放出、および、炎症または免疫学的反応の抑制または増悪、周囲または遠位の組織または臓器、例えばリンパ節などへの浸潤などが含まれる。「転移性疾患」は、元の腫瘍部位を離れ、例えば血流またはリンパ系を介して身体の他の部分に移動したがん細胞を指す。
【００４４】
接触：直接的な物理的会合下での配置；固体形態および液体形態の両方を含み、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの何れかで起き得る。接触には、ある分子と別の分子の間の接触、例えば、タンパク質と抗体の間の接触が含まれる。接触には、また、例えば、テスト薬剤を、細胞または組織（例えば、腫瘍サンプルなど）と直接物理的に会合させて置くことにより、または薬剤を対象に投与することにより、細胞または組織を接触させることも含まれ得る。
【００４５】
対照：参照基準。一部の実施形態は、対照は、治療薬の不在下で（例えば、ＧＩＴＲ活性、ＴＬＲ９活性、またはその両方の、例えば腫瘍細胞に対する実質的な免疫効果なしなど）予想される結果である。一部の実施形態では、対照は、例えば、腫瘍細胞に対する、免疫媒介性のＧＩＴＲの活性および／または発現を増加させる薬剤の存在下で予想される結果である。一部の実施形態では、対照は、例えば、腫瘍細胞に対する、免疫媒介性のＴＬＲ９の活性および／または発現を増加させる薬剤の存在下で予想される結果である。一部の実施形態では、対照は、例えば、腫瘍細胞に対する、免疫媒介性のＧＩＴＲの活性および／または発現を増加させる薬剤の不在下で予想される結果である。一部の実施形態では、対照は、例えば、腫瘍細胞に対する、免疫媒介性のＴＬＲ９の活性および／または発現を増加させる薬剤の不在下で予想される結果である。さらに他の実施形態では、対照は、ヒストリカル対照または標準的基準値または標準的基準値範囲である（例えば、既知の予後もしくは結果を有する患者群またはベースラインもしくは正常値を示すサンプル群などの、事前にテストした対照サンプル）。いくつかの例では、対照サンプルまたは対照値は、本明細書で提供する方法または組成物を使用して同定される疾患または病気に罹患していないことが分かっているかまたはそう考えられている供給源から得たサンプル、細胞、または組織を指す。一実施形態では、参照サンプル、参照細胞、または参照組織は、本明細書で提供する組成物または方法を使用して疾患または病気が同定された同一の対象または患者の身体の健康な部分から得る。一実施形態では、参照サンプル、参照細胞、または参照組織は、本明細書で提供する組成物または方法を使用して疾患または病気が同定された対象または患者ではない、少なくとも１つの個体の身体の健康な部分から得る。一部の実施形態は、参照サンプル、参照細胞、または参照組織は、疾患もしくは病気を発症する前の、または、初期段階の疾患もしくは病気の患者より事前に得た。
【００４６】
テストサンプルと対照の差は、増加である場合も逆に減少である場合もある。差は、定性的差または定量的差、例えば統計的に有意な差であり得る。適切な統計分析が当技術分野で周知であり、該統計分析としては、限定するわけではないがスチューデントＴ検定およびＡＮＯＶＡアッセイが挙げられる。いくつかの例では、差は、対照に対し、少なくとも約５％、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、または５００％超の増加または減少である。
【００４７】
ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）：特定の配列関係において、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する短合成一本鎖ＤＮＡ分子（ＣｐＧモチーフ）。ＣｐＧ  ＯＤＮは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）により認識され強い免疫賦活性効果を導き、したがって、ＴＬＲ９アゴニストである。ＣｐＧ  ＯＤＮは、ゲノム細菌ＤＮＡで見つけられる天然のホスホジエステル（ＰＯ）骨格とは反対に、部分的または完全にホスホロチオエート化された（ＰＳ）骨格を有する。刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮの３つの主なクラスは、構造特徴と、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、特にＢ細胞および形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）に対する活性とに基づいて特定されている。これらの３つのクラスは、クラスＡ（タイプＤ）、クラスＢ（タイプＫ）、およびクラスＣである。
【００４８】
クラスＢ（タイプＫ）のＣｐＧ  ＯＤＮ（ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮ）は、１８−２８ｍｅｒの線形オリゴデオキシヌクレオチドである。それは、１つまたは複数の６ｍｅｒのＣｐＧモチーフを有する完全にホスホロチオエート化された骨格を含有する。一例では、最適なモチーフはヒトではＧＴＣＧＴＴであり、マウスではＧＡＣＧＴＴである。ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の強力な活性化を刺激するが、ＩＦＮ−α分泌の弱い誘導因子である。ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは抗腫瘍活性を示し、強力なＴｈ１アジュバントである。例示的なクラスＢのＣｐＧ  ＯＤＮとしては、ヒトＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６（ホスホロチオエートＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１である塩基を有する５´−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３´）、マウスＯＤＮ  １８２６（ホスホロチオエートＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２である塩基を有する５´−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３´）、および５´−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３´（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）が挙げられる。
【００４９】
いくつかの例では、クラスＡまたはクラスＣのＣｐＧ  ＯＤＮが、本明細書で提供する方法で使用される。
【００５０】
減少：対照値に対し、あるものの質、量、または強度を統計的に有意な量で減少させること。一例では、ある療法は、腫瘍のサイズもしくは体積、腫瘍もしくは転移の数、またはそれらの組み合わせを、例えば、該療法の不在下での反応と比較し、減少させる。いくつかの例では、減少は、対照値と比較して、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％の減少である。
【００５１】
発現：核酸分子、例えばＧＩＴＲ核酸分子など（例えば、ＧＩＴＲ遺伝子）のコードされた情報が、タンパク質（例えば、ＧＩＴＲタンパク質）の合成などの細胞の作動的部分、非作動的部分、または構造的部分へ転換されるプロセス。遺伝子の発現は、ＤＮＡ→ＲＮＡ→タンパク質の経路の何れかにおいて調節され得る。調節には、転写、翻訳、ＲＮＡの輸送およびプロセシング、ｍＲＮＡなどの中間分子の分解の制御、または特異的なタンパク質分子が生成された後の該特異的タンパク質分子の活性化、不活化、局在化、もしくは分解を介した制御が含まれ得る。
【００５２】
核酸分子またはタンパク質（例えば、ＧＩＴＲなど）の発現は、通常の臨床病理学（例えば、正常な非がん性細胞における）と比べ、または、異常な臨床病理学（例えば、腫瘍細胞における）と比べ、変わる可能性がある。差次的発現などの遺伝子発現の変化には、限定するわけではないが、以下のものが含まれる：（１）過剰発現（例えば、上方制御）；（２）過小発現（例えば、下方制御）；または（３）発現抑制。核酸分子の発現変化は、対応するタンパク質の発現の変化と関連し、実際に該変化を引き起こし得る。
【００５３】
タンパク質の発現は、また、正常な状況でのタンパク質の発現とは異なるようないくつかの方法で変わり得る。これには、必ずしも限定されるわけではないが、以下のものが含まれる：対照または標準とそれぞれ比較して、（１）１つまたは複数のアミノ酸残基が異なるようなタンパク質における突然変異；（２）１つもしくはわずかな（例えば、１０−２０以下の）アミノ酸残基の短い欠失またはタンパク質配列への付加；（３）全タンパク質ドメインまたはサブドメインが除去または付加されるような、アミノ酸残基（例えば、少なくとも２０残基など）のより長い欠失または付加；（４）対照または標準量と比較した、タンパク質発現量の増加（例えば、上方制御）；（５）対照または標準量と比較した、タンパク質発現量の減少（下方制御）；（６）タンパク質の細胞内局在化または標的化の変化；（７）一時的に制御されるタンパク質発現の変化（タンパク質が通常なら発現しない場合に発現する、または、通常なら発現する場合に発現しないなど）；（８）タンパク質が細胞内に局在化し続ける時間の長さの増大によるタンパク質の安定性の変化；および（９）タンパク質の発現の局在化（例えば、臓器もしくは組織に特異的な局在化または細胞内局在化など）の変化（タンパク質が通常なら発現する場所で発現しない、または通常なら発現しない場所で発現するなど）。
【００５４】
差次的発現を決定するための、サンプルとの比較用の対照または標準には、正常であると考えられる（所望の特徴が変わらないという点において。例えば、健康な対象からの細胞）サンプル、異常であると考えられる（所望の特徴が変わるという点において。例えば、腫瘍細胞）サンプル、および、恣意的に設定された可能性があるものの、実験値（斯かる値は、実験室ごとに変わる可能性があることを留意すること）が含まれる。実験室標準および実験室値は既知のまたは規定の母集団値に基づいて設定される場合があり、測定された実験的に決められた値の比較を可能にするグラフまたは表の型式で与えられ得る。
【００５５】
グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）：腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）および活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体（ＡＩＴＲ）としても知られる。ＧＩＴＲ核酸分子およびタンパク質（例えば、ＯＭＩＭ６０３９０５）が含まれる。ＧＩＴＲは、Ｔｒｅｇ細胞上に恒常的に発現する、細胞表面受容体膜貫通タンパク質であり、Ｔ細胞が活性化されると上方制御される。ＧＩＴＲは、制御性Ｔ細胞の抑制作用を阻害し、Ｔエフェクター細胞の生存時間を延ばすことに関与することが示されている。ヒトＧＩＴＲは３つのアイソフォームを有し、マウスＧＩＴＲは２つのアイソフォームを有する。ＧＩＴＲはＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）により活性化される。
【００５６】
ＧＩＴＲ配列は、例えばＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公的に利用可能である（例えば、アクセッション番号ＮＰ＿６８３７００．１（アイソフォーム３前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２３４である）、ＮＰ＿６８３６９９．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２５５である）、ＮＰ＿００４１８６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２４１である）、ＮＰ＿０３３４２６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２０−２２８である）、およびＮＰ＿０６８８２０．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２２−１３２である）が、例示的なＧＩＴＲタンパク質配列を提供する一方、アクセッション番号ＮＭ＿１４８９０２．１、ＮＭ＿１４８９０１．１、ＮＭ＿００４１９５．２、ＮＭ＿００９４００．２、およびＮＭ＿０２１９８５．２は、例示的なＧＩＴＲ核酸配列を提供する）。当業者は、ＧＩＴＲに結合する機能、エフェクターＴ細胞を刺激する機能、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる機能、制御性Ｔ細胞を欠乏させる機能、またはそれらの組み合わせを保持するＧＩＴＲ抗体およびＧＩＴＲＬ変異体を含む、追加のＧＩＴＲまたはＧＩＴＲＬの核酸およびタンパク質配列を特定することが可能である。
【００５７】
宿主細胞：ベクターまたは単離ポリヌクレオチドのレシピエントであり得る、またはレシピエントであった細胞。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。例示的な真核細胞としては、腫瘍細胞などの哺乳動物細胞が挙げられる。
【００５８】
阻害するまたは減少させる：任意の表現型特徴の減少もしくは停止、または、その特徴の発生率、程度、もしくは可能性の減少もしくは停止。一部の実施形態では、「減少させる」または「阻害する」により、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の減少を引き起こす能力が意味される。
【００５９】
単離された：「単離された」生物学的成分（例えば、ＧＩＴＲのタンパク質、抗体、もしくは核酸分子、またはＣｐＧ  ＯＤＮなど）は、成分が中に存在する他の生物学的成分、例えば他の染色体および染色体外のＤＮＡおよびＲＮＡならびにタンパク質などから実質的に分離されているか、それとは別に生成されているか、またはそれから精製されている。したがって、「単離された」核酸分子およびタンパク質には、標準的な精製法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。該用語は、また、宿主細胞における組換え発現によって調製された核酸分子およびタンパク質ならびに化学合成された核酸も包含する。精製または単離された細胞、抗体、タンパク質または核酸分子は、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％純粋であり得る。
【００６０】
哺乳動物：この用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、用語「対象」には、ヒトおよび獣医学的対象（例えば、ネコ、イヌ、ウシ、およびブタなど）ならびに齧歯類（例えば、マウスおよびラットなど）の両方が含まれる。
【００６１】
平均および標準偏差：算術平均が「標準的な」平均であり、しばしば単に「平均」と呼ばれる。
【００６２】
【数１】
2019519536.tif 000003
【００６３】
平均は、一組の値の算術平均である。
【００６４】
標準偏差（記号シグマ、σで表される）は、平均からどの程度の差異または「分散」が存在するかを示す。ランダム変数、統計的母集団、データセット、または確率分布の標準偏差は、その分散の平方根である。標準偏差は、一般的に、統計的結論における信頼度を測定するために使用される。概して、標準偏差の２倍が、９５パーセント信頼区間のおよその範囲である。標準偏差の範囲のはるか外側にある効果は、概して、統計的に有意であると考えられる。当業者は、値の母集団から、平均および標準偏差を容易に計算可能である。
【００６５】
核酸分子：天然および／または非天然のヌクレオチドを含有し得る、ヌクレオチドポリマー。例としては、限定するわけではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡが挙げられる。
【００６６】
薬学的に許容可能な担体：本発明において有用である薬学的に許容可能な担体は、慣習的である。Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)が、本明細書で提供する薬剤、例えば、ＧＩＴＲ活性を高めるもしくは増加させる１つもしくは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト）および／またはＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、ＴＬＲ９アゴニスト）の薬学的送達に適切な組成物および製剤について記載する。
【００６７】
概して、担体の性質は、利用される特定の投与方法に左右されよう。例えば、非経口製剤は、通常、薬学的および生理学的に許容可能な流体、例えば、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロール、またはビヒクルである同種のものなどを含む、注射可能な流体を含む。固形組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤、またはカプセル形態）向けには、慣習的な非毒性固体担体として、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムが挙げられ得る。生物学的に中立な担体に加え、投与される薬学的組成物は、少量の非毒性補助剤、例えば、湿潤剤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤、および同種のもの、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートなどを含有し得る。
【００６８】
精製された：用語精製されたは、完全に純粋であることを必要とせず；むしろ、該用語は相対的な用語であることを意図する。したがって、例えば、精製されたペプチドまたは抗体の調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、細胞内の天然環境にあるペプチドまたはタンパク質よりも豊富である調製物である。一実施形態では、調製物は、タンパク質または抗体が、調製物の抗体またはタンパク質の総含有量の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるように精製される。
【００６９】
サンプル：例えば、物理的、生化学的、化学的、および／または生理学的な特徴に基づいて特徴づけおよび／または同定される、細胞実体および／または他の分子実体を含有する、関心の対象より得られるかまたは該対象に由来する物質。いくつかの例では、サンプルは、組織または細胞サンプル、例えば、新鮮な、冷凍された、および／または保存された、臓器もしくは組織のサンプルまたは生検もしくは吸引物など（例えば、腫瘍の生検もしくは吸引物など）；血液または任意の血液成分；体液、例えば、痰、脳脊髄液、羊水、腹膜液、または間質液など；対象の妊娠期間または成長時の任意の時期の細胞である。組織サンプルは、また、初代のまたは培養した、細胞または細胞株であり得る。任意選択的に、組織または細胞のサンプルは、疾患組織／臓器から得られる。組織サンプルは、天然では組織と自然に混在しない化合物、例えば、防腐剤、抗凝血剤、緩衝剤、定着剤、栄養剤、抗生物質、または同種のものを含有してよい。一例では、サンプルは腫瘍またはがんのサンプルである。
【００７０】
アミノ酸または核酸の配列の配列同一性：アミノ酸（または核酸）配列間の類似性は、配列同一性ともいう配列間の類似性に換算して表現される。配列同一性は、しばしば、同一性（または類似性もしくは相同性）パーセンテージに換算して測定され；パーセンテージが高いほど、２つの配列はより類似している。
【００７１】
比較のために配列を整列させる方法は、当技術分野で周知である。種々のプログラムおよび整列化アルゴリズムが、以下の：Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970；Pearson and Lipman, Proc.  Natl. Acad. Sci. U.S.A.  85:2444, 1988；Higgins and Sharp, Gene 73:237, 1988；Higgins and Sharp, CABIOS 5:151, 1989；Corpet et al., Nucleic Acids Research 16:10881, 1988；およびPearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.  85:2444, 1988に記載されている。Altschul et al., Nature Genet.6:119, 1994は、配列整列化方法および相同性計算についての詳細な考察を提示する。
【００７２】
ＮＣＢＩ  Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Altschul et al., J. Med. Biol. 215:403, 1990）が、配列分析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ、およびｔｂｌａｓｔｘに関連して使用するために、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ、メリーランド州ベセスダ）を含むいくつかのソースより、インターネット上で利用可能である。本プログラムを使用して配列同一性を如何に決定するかについての説明は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイト上で利用可能である。
【００７３】
天然のＧＩＴＲタンパク質の変異体は、典型的には、デフォルトパラメーターに設定されたＮＣＢＩ  Ｂｌａｓｔ  ２．０、ギャップ入りｂｌａｓｔｐを使用して、アミノ酸配列との完全長アライメントについて計算し、少なくとも約８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有することにより特徴付けられる。約３０アミノ酸超のアミノ酸配列の比較には、デフォルトパラメーターに設定されたデフォルトＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（ギャップ存在コスト１１および残基毎のギャップコスト１）を使用するＢｌａｓｔ  ２配列機能が利用される。短ペプチド（約３０より少ないアミノ酸）を整列化させる場合、アライメントは、デフォルトパラメーターに設定されたＰＡＭ３０マトリックスを利用するＢｌａｓｔ  ２配列機能を使用して実行されるべきである（ギャップ開始ペナルティ９、ギャップ伸長ペナルティ１）。参照配列に対しさらに高い類似性を有するタンパク質は、この方法により評価された場合には、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性など、同一性パーセンテージの増加を示すだろう。全配列より少ない配列を配列同一性について比較する場合には、相同体および変異体は、典型的には、１０−２０アミノ酸の短いウィンドウで少なくとも８０％の配列同一性を有し、参照配列に対する類似性次第では、少なくとも８５％または少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列同一性を有し得る。斯かる短ウィンドウで配列同一性を決定する方法は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトで利用可能である。当業者であれば、これらの配列同一性の範囲は、単に指針として提供されているに過ぎないことを理解しよう；提供される範囲に該当しない、強く有意な相同体が得られることも十分に可能性がある。
【００７４】
したがって、変異体ＧＩＴＲタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＮＰ＿６８３７００．１（アイソフォーム３前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２３４である）、ＮＰ＿６８３６９９．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２５５である）、ＮＰ＿００４１８６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２４１である）、ＮＰ＿０３３４２６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２０−２２８である）、およびＮＰ＿０６８８２０．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２２−１３２である）に示されるタンパク質配列の何れかに対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有し得、ここで該変異体は、エフェクターＴ細胞を刺激する機能、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる機能、制御性Ｔ細胞を欠乏させる機能、またはそれらの組み合わせを有する。
【００７５】
「選択的にハイブリダイズする」または「選択的に結合する」核酸は、非関連ヌクレオチド配列を排除する、中程度にまたは高度にストリンジェントな条件下でそれを行う。核酸ハイブリダイゼーション反応において、特定のレベルのストリンジェンシーを達成するために使用される条件は、ハイブリダイズする核酸の性質に応じて変わるだろう。例えば、核酸のハイブリダイズ領域の長さ、相補性の程度、ヌクレオチド配列の組成（例えば、ＧＣ対ＡＴの含有量）、および核酸タイプ（例えば、ＲＮＡ対ＤＮＡ）が、ハイブリダイゼーション条件を選択する際に考慮され得る。考慮すべき追加事項は、核酸の一方が、例えばフィルターに固定されているか否かである。
【００７６】
累進的に高くなるストリンジェンシー条件の特異的な例は、以下の通りである：ほぼ室温で２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（ハイブリダイゼーション条件）；ほぼ室温で０．２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（低ストリンジェンシー条件）；約４２℃で０．２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（中程度のストリンジェンシー条件）；および約６８℃で０．１ｘＳＳＣ（高ストリンジェンシー条件）。当業者は、これらの条件での変化を容易に求めることが可能である（例えば、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., vol. 1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989）。これらの条件のうち１つのみ、例えば、高ストリンジェンシー条件を使用して洗浄を実行する場合も、または、各条件を、それぞれ１０−１５分間、上記で挙げた順で、上記のステップの何れかまたは全てを繰り返して使用する場合もある。しかしながら、上記のように、最適な条件は関係する特定のハイブリダイゼーション反応に応じて変わり、経験的に決定され得る。
【００７７】
従って、いくつかの例における例示的なＧＩＴＲ核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＮＭ＿１４８９０２．１、ＮＭ＿１４８９０１．１、ＮＭ＿００４１９５．２、ＮＭ＿００９４００．２、およびＮＭ＿０２１９８５．２に示される核酸配列の何れかに対し、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、該例示的ＧＩＴＲ核酸配列には、ＧＩＴＲＬに結合する機能、エフェクターＴ細胞を刺激する機能、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる機能、制御性Ｔ細胞を欠乏させる機能、またはそれらの組み合わせを維持するＧＩＴＲ変異体が含まれる。
【００７８】
小分子：典型的には約１０００ダルトン未満の分子量を有するか、または一部の実施形態では約５００ダルトン未満の分子量を有する分子であって、標的分子、例えばＧＩＴＲなどの活性を測定可能なある程度まで調節（例えば増加）することが可能な、分子。
【００７９】
対象：任意の哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、齧歯類、ならびに特定の処置、例えば、ＧＩＴＲの発現および／または活性を高めるかまたは増加させる１つまたは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲに対し特異的なアゴニスト）およびＣｐＧ  ＯＤＮを用いた処置などのレシピエントである同種のもの。２つの非限定例では、対象はヒト対象またはマウス対象である。いくつかの例では、対象には、腫瘍、例えばがんなどを有する。いくつかの例では、対象には転移を有する。
【００８０】
治療的有効量：単独で、または追加の治療薬（例えば、ＣｐＧ  ＯＤＮまたは他のＴＬＲ９アゴニスト）と共に、疾患を処置する、または、障害もしくは疾患の何れかの症状および／もしくは根底にある原因を減少させるおよび／もしくは寛解させるのに十分である、ＧＩＴＲ活性を高めるかまたは増加させる１つまたは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト）の量。一実施形態では、「有効量」は、疾患、例えばがんなどの症状を、例えば、腫瘍サイズ、腫瘍体積、移転サイズ、移転体積、腫瘍負荷、移転数、またはそれらの組み合わせを減少させることにより、減少または除去するのに十分である。
【００８１】
治療的有効量の、ＧＩＴＲの発現および／または活性を高めるかまたは増加させる１つまたは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト）ならびに１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮは、一連の処置の間、単回でまたはいくつかの回数で、例えば毎日、投与され得る。しかしながら、治療的有効量は、処置する対象、処置する病気の重症度およびタイプ、投与方法、ならびに投与する治療薬のタイプに左右され得る。
【００８２】
組織：機能的に関連する複数の細胞。組織は、懸濁液、半固体、または固体であり得る。組織には、対象から収集された細胞、例えば腫瘍などが含む。
【００８３】
疾患の処置：「処置」は、疾患または病態が発現し始めた後の疾患または病態の兆候または症状、例えば、がんの兆候または症状を寛解させる、治療介入を指す。疾患もしくは疾患の進行を阻害すること、疾患またはその進行を阻害もしくは遅くすること、その発現を止めること、疾患を部分的にもしくは完全に緩和すること、疾患の１つもしくは複数の症状を部分的にもしくは完全に緩和すること、または、失われた、欠損した、もしくは欠陥のある機能を回復もしくは修復すること；または、非効率的なプロセスを刺激することを含む。処置は、また、病気、例えばがんなどの軽快または治癒を誘発する可能性がある。処置は、疾患が完全に消えることを必要としない。例えば、少なくとも２０％または少なくとも５０％の減少で十分であり得る。有益な効果は、例えば、対象における疾患の臨床症状の発症の遅れ、疾患のいくつかもしくは全ての臨床症状の重症度の低下、疾患の進行が遅くなること、対象の全身の健康もしくは幸福の改善、または、特定の疾患に対し特異的な当技術分野で既知の他のパラメータにより、証明され得る。
【００８４】
腫瘍、新生組織形成、悪性腫瘍、またはがん：新生物は、過剰な細胞分裂より生じる組織または細胞の異常な増殖である。新生物形成増殖は、腫瘍を生成し得る。個体の腫瘍量が「腫瘍負荷」であり、これは、腫瘍の数、体積、サイズ、または重量として測定され得る。「非がん性組織」は、悪性新生物が形成されているが、新生物の特徴的病変は有さない、同じ臓器からの組織である。概して、非がん性組織は、組織学的に正常な外見を呈する。「正常組織」は、臓器に由来する組織であって、該臓器がその臓器のがんまたは別の疾患もしくは障害に冒されていない、組織である。「がんを有さない」対象は、その臓器のがんを有すると診断されておらず、検出可能ながんを有さない。
【００８５】
〜に十分な条件下で：所望の活性を可能とする任意の環境について記載するのに使用される句。一例では、所望の活性を可能にするのに十分な治療薬を細胞または対象に投与することを含む。特定の例では、所望の活性は、ＧＩＴＲ活性を増加させることである（例えば、エフェクターＴ細胞を刺激する、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる、制御性Ｔ細胞を欠乏させる、または両方など）。
【００８６】
単位用量：個々でまたはまとまって所望の効果、例えば治療効果などを生成するように計算された、所定量の活性物質を含有する物理的に別個の単位。単一の単位用量または複数の単位用量を使用して、腫瘍または転移の処置などの所望の効果を提供することが可能である。一例では、単位用量は、所望の量の、ＧＩＴＲの発現および／または活性を高めるかまたは増加させる１つまたは複数の薬剤（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト）と、１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮとを含む。
【００８７】
上方制御された：分子（例えば、ＧＩＴＲ）の遺伝子またはタンパク質の発現に関連して使用される場合、遺伝子産物の生成の増加をもたらす任意のプロセスを指す。遺伝子産物は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、および構造ＲＮＡ）またはタンパク質であり得る。そのため、上方制御には、遺伝子の転写またはｍＲＮＡの翻訳を増加させ、それにより、ＧＩＴＲタンパク質または核酸分子などのタンパク質または核酸の存在量を増加させるプロセスが含まれる。
【００８８】
転写を増加させることが可能なプロセスの例としては、転写開始複合体の下方制御の減少を促進するプロセス、転写開始速度を速めるプロセス、転写伸長速度を速めるプロセス、転写の処理能力を高めるプロセス、および転写抑制を減少させるプロセスが挙げられる。遺伝子の上方制御には、既存のレベルを超えて発現を増加させることが含まれ得る。翻訳を増加させるプロセスの例としては、翻訳開始を増加させるプロセス、翻訳伸長を増加させるプロセス、ｍＲＮＡの安定性を増大させるプロセスが挙げられる。いくつかの例では、遺伝子発現法、抗体、または他の特異的な結合剤を使用して、ＧＩＴＲの発現および／または活性を増加させる。
【００８９】
上方制御には、ＧＩＴＲタンパク質などの遺伝子産物の生成の、任意の検出可能な統計的に有意な増加が含まれる。ある例では、細胞（例えば、腫瘍細胞など）における検出可能な標的タンパク質または核酸の発現は、対照（対応する対照細胞またはサンプル、例えば、非処置腫瘍細胞などにおいて検出される、タンパク質または核酸の発現量など）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、または５００％超増加する。
【００９０】
ベクター：宿主細胞に導入され、それにより形質転換された宿主細胞を生成する、核酸分子。ベクターは、該ベクターが宿主細胞中で複製されることを可能にする核酸配列、例えば、複製源などを含み得る。ベクターは、また、１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子および当技術分野で既知の他の遺伝要素を含み得る。いくつかの例では、ベクターには、プロモーターおよびＧＩＴＲをコードする核酸分子が含まれる。
【００９１】
腫瘍を処置する方法
本明細書で提供するのは、対象、例えば、哺乳動物対象（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、実験哺乳動物、または獣医学的対象など、例えば、マウス、ラット、チンパンジー、猿人類、ウマ、およびペット、例えばイヌおよびネコなど）の腫瘍を処置する方法である。対象は、子どもの場合も成人の場合もある。本方法は、有効量の少なくとも１つのグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニストの腫瘍内投与と、有効量の少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮまたは他のＴＬＲ９アゴニストの腫瘍内投与とを含み、それにより、対象の腫瘍を処置する。
【００９２】
いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮは同時にまたは同時期に投与される。いくつかの例では、少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストと少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも２回、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回などの、少なくとも２回の異なる機会に投与される。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮの両方が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１４日、または少なくとも３０日間離して、多数回で投与される。いくつかの例では、本方法は、さらに、有効量の１つもしくは複数の追加の治療薬、例えば１つもしくは複数の化学療法薬、１つもしくは複数の生物学的薬剤、１つもしくは複数の抗血管新生薬、１つもしくは複数の増殖阻害薬、１つもしくは複数の抗新生物形成組成物、またはそれらの組み合わせなどを投与するステップを含む。いくつかの例では、本方法は、さらに、例えば腫瘍の少なくとも一部を除去するために対象において手術を行うことを含む。
【００９３】
ＧＩＴＲアゴニスト
いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストは、核酸配列（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはｍＲＮＡなど）および／またはタンパク質の発現を増加させ得る。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲの生物学的活性を高めるかまたは増加させる。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストの組み合わせが使用される。例えば、ＧＩＴＲアゴニストを使用して、例えば、エフェクターＴ細胞を刺激する、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させる、制御性Ｔ細胞を欠乏させる、ＧＩＴＲＬのＧＩＴＲへの結合を高める、またはそれらの組み合わせにより、ＧＩＴＲの活性を高めるかまたは増加させることが可能である。斯かる増加は、ＧＩＴＲの下方制御（またはＧＩＴＲ活性の低下）が、疾患を引き起こす、もたらす、もしくは悪化させる、または疾患が不所望である場合には、望ましい（例えば、腫瘍のある対象における、ＧＩＴＲの生物学的活性の増加）。
【００９４】
いくつかの例では、抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ラクダ抗体、もしくはヒト化抗体など）、抗体断片、抗体複合体、小有機分子、小無機分子、大分子、ＧＩＴＲをコードする核酸分子、ＧＩＴＲタンパク質、ＧＩＴＲリガンド、またはそれらの組み合わせが使用される。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１４８９０２．１、ＮＭ＿１４８９０１．１、ＮＭ＿００４１９５．２、ＮＭ＿００９４００．２、もしくはＮＭ＿０２１９８５．２に示されるＧＩＴＲ核酸配列（もしくは、斯かる配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列）またはＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号  ＮＰ＿６８３７００．１（アイソフォーム３前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２３４である）、ＮＰ＿６８３６９９．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２５５である）、ＮＰ＿００４１８６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２４１である）、ＮＰ＿０３３４２６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２０−２２８である）、もしくはＮＰ＿０６８８２０．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２２−１３２である）に示されるＧＩＴＲタンパク質配列（もしくは、斯かる配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列）を標的にする。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲの発現および／または活性を、対照（例えば、処置前の量またはアゴニスト不在下での量など）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％増加させる。
【００９５】
いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲの活性を、対照（例えば、ＧＩＴＲアゴニストを用いた処置なしでの、または、ＧＩＴＲアゴニストを用いた処置前のＧＩＴＲ活性量など）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％増加させる（例えば、４０％〜９０％、４０％〜８０％、または５０％〜９５％の減少など）。一部の実施形態では、本開示の方法は、ＧＩＴＲ活性を測定するステップを含む。
【００９６】
いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲの核酸またはタンパク質の発現（例えば、腫瘍細胞における）を、対照（例えば、ＧＩＴＲアゴニストを用いた処置なしでの、または、ＧＩＴＲアゴニストを用いた処置前のＧＩＴＲ活性量など）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％増加させる（例えば、４０％〜９０％、４０％〜８０％、または５０％〜９５％の増加など）。一部の実施形態では、本開示の方法は、ＧＩＴＲの核酸またはタンパク質の発現を測定するステップを含む。
【００９７】
ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲの遺伝子配列、コード配列、および／またはタンパク質配列に対し特異的であり得る。本開示の方法および組成物で標的にすることが可能な例示的な配列は既知である（例示的な核酸およびタンパク質の配列を提供する、上記の例示的なＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号を参照）。さらに、当業者であれば、ＧＩＴＲ活性を維持している変異体配列も標的にされ得ることを理解しよう。例えば、斯かる変異体は、１つまたは複数の欠失、置換、または付加（またはそれらの組み合わせ）、例えば、１−５０の斯かる変化（例えば、１−４０、１−３０、１−２０、または１−１０の斯かる変化など）を有するタンパク質をコードし得る。ある例では、本開示の方法または組成物により標的にされるＧＩＴＲの核酸配列またはタンパク質配列は、本明細書で提供するＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００９８】
１．抗体を用いた、ＧＩＴＲの生物学的活性および／または発現の増加
一例では、腫瘍を処置するために１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮと組み合わせて使用されるＧＩＴＲアゴニストは、抗体である。ある実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、またはヒト化抗体である。ある例では、アゴニスト抗体または抗体断片は、哺乳動物のＧＩＴＲ、例えばヒトＧＩＴＲに特異的に結合する。斯かる抗体の例としては、ＧＩＴＲに高特異性で結合する抗体が挙げられる。ある例では、アゴニスト抗体は、１ｎＭ未満のＫＤでヒトＧＩＴＲに結合する。一例では、アゴニストは抗体断片（例えば、単鎖抗体、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、または（Ｆａｂ’）２など）である。斯かる抗体断片の例としては、ＧＩＴＲに高特異性で結合する抗体断片が挙げられる。ある例では、アゴニスト抗体断片は、ヒトＧＩＴＲに結合する。ある例では、アゴニスト抗体断片は、１ｎＭ未満のＫＤでヒトＧＩＴＲに結合する。
【００９９】
使用可能であるＧＩＴＲアゴニストおよび抗体の例としては、限定するわけではないが、ＴＲＸ５１８（ＧＩＴＲ，Ｉｎｃ．製のＧＩＴＲヒト化抗体）、ＭＫ−４１６６（Ｍｅｒｃｋ製のＧＩＴＲアゴニスト抗体）、ＭＫ−１２４８（Ｍｅｒｃｋ製）、ＭＥＤＩ１８７３（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ製のＧＩＴＲＬ−Ｆｃ融合タンパク質）、ＢＭＳ（未知の実体）、ＡＭＧ２２８（Ａｍｇｅｎ製）、およびＩＮＣＡＧＮ０１８７６（Ａｇｅｎｕｓ／Ｉｎｃｙｔｅ製）が挙げられる。さらなるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、米国特許第９４９３５７２号明細書、同第９４６４１３９号明細書、同第９３０９３２１号明細書、同第９２２８０１６号明細書、同第９２４１９９２号明細書、同第８７０９４２４号明細書、米国特許出願公開第２０１７／０１４５１０４号明細書、同第２０１６／０１９９４８７号明細書、同第２０１５／０３６８３４９号明細書、米国特許第９００５６１９号明細書、国際公開第２０１７／０８７６７８号、および同第２０１７／０６８１８６号に記載されている。
【０１００】
一部の実施形態では、ＧＩＴＲ活性を刺激する抗体は、エフェクターＴ細胞を刺激するか、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させるか、制御性Ｔ細胞を欠乏させるか、またはそれらの組み合わせを行う。一部の実施形態では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、例えばＮＦ−κＢ反応の活性化により、ＧＩＴＲシグナル伝達機能を活性化する。この活性化は、国際公開第２０１７／０１５６２３号の実施例５に記載されているように、ＮＦ−κＢに駆動される、レポーター、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の生成を監視するシステムを使用して評価することが可能である。そこに記載されているように、ＮＦ−κＢに駆動されるＳＥＡＰレポーター遺伝子を含有するＨＥＫ２９３細胞株（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴより入手）に、ＧＩＴＲを安定的に遺伝子導入し、次にその細胞株を、３７℃で一晩、抗ＧＩＴＲ抗体の用量を滴定しながらインキュベートした。次に、発色基質の加水分解により、６５０ナノメートルで光学濃度の変化を監視することで、細胞培養上清における各用量でのＳＥＡＰレポーターの遺伝子発現を定量化した。このアッセイにおける、抗体の付加を原因とする背景でのＳＥＡＰ生成の増加は、抗体がＧＩＴＲシグナル伝達機能を活性化することを示す。
【０１０１】
一部の実施形態では、アゴニストＧＩＴＲ抗体は、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）でＧＩＴＲに結合する。一部の実施形態では、アゴニストＧＩＴＲ抗体が、無関係の非ＧＩＴＲタンパク質に結合する程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定されるように、該抗体がＧＩＴＲに結合する約１０％未満である。一部の実施形態では、アゴニストＧＩＴＲ抗体は、別の種に由来するＧＩＴＲのうち、保存されているＧＩＴＲのエピトープに結合する。いくつかの例では、アゴニストＧＩＴＲ抗体は、ヒトＧＩＴＲに結合するヒトまたはヒト化ＧＩＴＲ抗体として、同じエピトープに結合する。
【０１０２】
一部の実施形態では、アゴニストＧＩＴＲ抗体の解離定数（Ｋｄ）は、ＧＩＴＲに対し、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０―１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０―１３Ｍ）である。
【０１０３】
一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、多数の種に由来するＧＩＴＲに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体はヒトＧＩＴＲに結合し、また、マウス、ラット、イヌ、モルモット、およびサルから選択される少なくとも１つの哺乳動物に由来するＧＩＴＲにも結合する。いくつかの例では、抗体は、ホモサピエンスのみなど１種のみに由来するＧＩＴＲに結合する。
【０１０４】
一部の実施形態では、本明細書のアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、以下の特徴の１つまたは複数を有し得る：（ａ）ＧＩＴＲに対するＫＤが１０ｎＭ未満であるＧＩＴＲ結合ドメインを含み；（ｂ）ヒトおよびカニクイザルのＧＩＴＲの両方に結合し；（ｃ）ＧＩＴＲとそのリガンドＧＩＴＲＬの間の結合をブロックし；ならびに（ｄ）抗腫瘍反応を同時刺激する一方、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の抑制効果も阻害する。
【０１０５】
一例では、ＧＩＴＲに結合するアゴニスト抗体は、二重特異性抗体または二重可変ドメイン抗体など、多特異性抗体である。非限定的な例示的二重特異性抗体としては、第１抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせを含む第１アームと、第２抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせを含む第２アームとを含む抗体が挙げられる。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＧＩＴＲに結合する第１アームと、免疫細胞成熟を刺激する第２アームとを含む。
【０１０６】
一例では、ＧＩＴＲに結合するアゴニスト抗体は、ラクダ抗体などの単鎖抗体であるか、または、斯かる抗体に由来するＧＩＴＲ結合ドメインを含む。例えば、一部の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＧＩＴＲに特異的に結合する少なくとも１つのポリペプチドを含み得、該ポリペプチドは、例えば、単一ドメイン抗体に由来する、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、少なくとも１つのＧＩＴＲ結合ドメインを含む。一部の実施形態では、前記少なくとも１つのＧＩＴＲ結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態では、抗体は多価（polyvalent）（または多価（multivalent））であり、上記のＣＤＲセットを有する斯かるＧＩＴＲ結合ドメインを２つ以上含む。
【０１０７】
一部の実施形態では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、少なくとも１つのＧＩＴＲ結合ドメインを含む少なくとも１つのポリペプチドを含み得、前記ＧＩＴＲ結合ドメインは、次に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列を含む、２つ、３つ、または４つのＧＩＴＲ結合ドメインを含む。
【０１０８】
一部の実施形態では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃなどのヒト定常領域に融合した２つ以上のＧＩＴＲ結合ドメインを含む、多価融合タンパク質を含む。一部の斯かる実施形態では、２つ以上のＧＩＴＲ結合ドメインは前後に並んでいる（「前後に並んで」には、ＧＩＴＲ結合ドメインが連続的に生じるが、任意選択的にその間に非Ｆｃ配列が入る構成が含まれる）。一部の実施形態では、ＧＩＴＲ結合ドメインは単一ドメイン抗体に由来し、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一部の実施形態では、ＧＩＴＲ結合ドメインの少なくとも１つまたは全てが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ）１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む。一部の斯かる実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。一部の実施形態では、多価融合タンパク質は、前後に並んだ２つ、３つ、または４つのＧＩＴＲ結合ドメインを含み、それぞれは上記のＣＤＲセットを有し、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４  Ｆｃから選択されるヒトＩｇＧ  Ｆｃに融合している。
【０１０９】
一部の実施形態では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃなどのヒト定常領域に融合した、２つ以上のＧＩＴＲ結合ドメインを含む、多価融合タンパク質を含む。一部の斯かる実施形態では、２つ以上のＧＩＴＲ結合ドメインは前後に並んでいる。一部の斯かる実施形態では、ＧＩＴＲ結合ドメインの少なくとも１つまたは全てが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列を含む。一部の斯かる実施形態では、ヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  ＦｃなどのヒトＩｇＧ  Ｆｃである。一部の実施形態では、多価融合タンパク質は、前後に並んだ２つ、３つ、または４つのＧＩＴＲ結合ドメインを含み、それぞれはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９のアミノ酸配列を含み、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧ  Ｆｃに融合している。
【０１１０】
四価分子
一部の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、構造：（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有する融合タンパク質の２つのコピーを含む四価分子であって、（ａ）ＧＩＴＲ−ＢＤは、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含むか；または、（ｉｉ）ＳＥＱ    ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列か、もしくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列を含む、ＧＩＴＲ結合ドメインであり、（ｂ）リンカーは、リンカーポリペプチドであり；（ｃ）ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり；（ｄ）Ｆｃは、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドである、四価分子を含む。
【０１１１】
四価分子の融合タンパク質がヒンジを含む一部の実施形態では、ヒンジは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、１６、または１７のアミノ酸配列を含む、例えば、ヒンジは、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）のアミノ酸配列を含む修飾ＩｇＧ１ヒンジを含み得、ここにおいて軽鎖のＣ末端システインとジスルフィド結合を形成するＣｙｓ２２０は、セリン、例えばＣｙｓ２２０Ｓｅｒ（Ｃ２２０Ｓ）に変異している。他の実施形態では、融合タンパク質は、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含むヒンジを含み得る。一部の実施形態では、ヒンジは、例えば鎖交換を予防または低減させるように修飾されたＩｇＧ４に由来する、例えば、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）を含むヒンジを含み、ここで、Ｓｅｒ２２８はＰｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）に変異している。
【０１１２】
四価分子の融合タンパク質がリンカーを含む一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧ、ＧＧＧ、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８〜２４の何れかから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８または２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、四価分子の融合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６を含むヒンジと、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８または２２を含むリンカーとを有する。
【０１１３】
四価分子の融合タンパク質がＦｃを含む一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  ＦｃなどのヒトＦｃである。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９−１４か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９−１４の１つと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列から選択されるアミノ酸を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９などのヒトＩｇＧ１アミノ酸配列を含む。
【０１１４】
例示的な四価分子を、図４Ａと４Ｂに示す。図４Ａは、例えば、二量体の形の例示的な四価分子を図示し、各サブユニット（ポリペプチド）は、（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃ構造を有し、各サブユニットは、ヒンジによりもう一方と関連し、Ｆｃ分子は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。図４Ｂは、例えば、代わりの（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−ヒンジ−Ｆｃ−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）構造を図示する。図４Ｃおよび４Ｄは、これらの２つの四価分子に関連した構造を有する六価分子を示し、つまり、図４Ｃでは、（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃであり、図４Ｄでは、（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃ−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）である。
【０１１５】
ある実施形態では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４のアミノ酸配列か、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列を含むポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子である。
【０１１６】
Ｆｃ領域
前記実施形態の何れにおいても、Ｆｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９−１４か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９−１４と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列から選択されるアミノ酸を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９などのヒトＩｇＧ１アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むが、位置Ａｓｎ２９７（配列表に示す配列における四角囲み）が、フコシル化を阻害するように修飾される。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１  Ｆｃであるが、位置Ｌｅｕ２３５、Ｌｅｕ２３６、およびＧｌｙ２３７の１つまたは複数が、他のアミノ酸へ修飾されている（配列表に示す配列における四角囲み）。一部の実施形態では、ＦｃはＬｙｓ４４７を欠くヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で提供されるように、Ｇｌｕ２３３、Ｌｅｕ２３４、またはＬｅｕ２３５の１つまたは複数においてアミノ酸を欠くヒトＩｇＧ１  Ｆｃである。一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、修飾されている、例えばＡｓｎ２９７で変異しているか（配列表における四角囲み）、または、Ｌｙｓ４４７を欠くヒトＩｇＧ２  Ｆｃを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、修飾されている、例えばＡｓｎ２９７で変異しているか、位置４３５でＡｒｇからＨｉｓへの置換を含有しているか（配列表における四角囲み）、またはＬｙｓ４４７を欠くヒトＩｇＧ３  Ｆｃを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３または１４を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、修飾されている、例えば、位置Ｌｅｕ２３５またはＡｓｎ２９７で修飾されているか（配列表における四角囲み）、またはＬｙｓ４４７を欠く、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃを含む。
【０１１７】
一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ＦｃＲｎ結合を高めるよう修飾される。ＦｃＲｎへの結合を高め得るＦｃ変異の例は、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ（それぞれ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ）（Ｋａｂａｔナンバリング、Dall'Acqua et al 2006, J. Biol Chem, 281(33) 23514-24）、Ｍｅｔ４２８ＬｅｕおよびＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（Zalevsky et al 2010 Nature Biotech, 28(2) 157-9）、またはＭｅｔ２５２Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２５６Ａｓｐ、Ｍｅｔ４２８Ｌｅｕ（それぞれ、Ｍ２５２Ｉ、Ｔ２５６Ｄ、Ｍ４２８Ｌ）（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのＥＵインデックス）である。
【０１１８】
一部の実施形態では、変異Ｆｃは、また、以下の置換を含み得る：Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、Ｍｅｔ２５２ＴｙｒおよびＭｅｔ４２８Ｌｅｕ（Ｍ２５２Ｙ、Ｍ４２８Ｌ）。
【０１１９】
一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または相補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を変更するように修飾され得、例えば、Natsume et al., 2008 Cancer Res, 68(10): 3863-72; Idusogie et al., 2001 J Immunol, 166(4): 2571-5；Moore et al., 2010 mAbs, 2(2): 181-189; Lazar et al., 2006 PNAS, 103(11): 4005-4010, Shields et al., 2001 JBC, 276(9): 6591-6604; Stavenhagen et al., 2007 Cancer Res, 67(18): 8882-8890；Stavenhagen et al., 2008 Advan. Enzyme Regul., 48: 152-164；Alegre et al, 1992 J Immunol, 148: 3461-3468; Reviewed in Kaneko and Niwa, 2011 Biodrugs,25(1):1-11に記載されているアミノ酸修飾である。ＡＤＣＣを高め得る変異の例としては、Ｓｅｒ２３９およびＩｌｅ３３２での修飾、例えば、Ｓｅｒ２３９ＡｓｐおよびＩｌｅ３３２Ｇｌｕ（Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ）が挙げられる。ＣＤＣを高め得る変異の例としては、Ｌｙｓ３２６およびＧｌｕ３３３での変異が挙げられる。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、これらの位置の一方または両方で修飾され、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、Ｌｙｓ３２６Ａｌａおよび／またはＧｌｕ３３３Ａｌａ（Ｋ３２６ＡおよびＥ３３３Ａ）である。
【０１２０】
一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヘテロ二量体化を誘発するように修飾され得る。例えば、ＣＨ３ドメイン内でＴｈｒ３６６においてアミノ酸修飾を有し、これがより大きいアミノ酸、例えばＴｙｐ（Ｔ３６６Ｗ）で置き換えられている場合、位置Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、およびＴｙｒ４０７でより小さいアミノ酸、例えばそれぞれＳｅｒ、Ａｌａ、およびＶａｌ（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）へのアミノ酸修飾を有する第２ＣＨ３ドメインと優先的に対合することが可能である。さらなるＣＨ３ドメイン修飾には、例えば、反対側のＣＨ３ドメインにおいて、Ｓｅｒ３５４をＣｙｓ（Ｓ３５４Ｃ）へ、および、Ｙ３４９をＣｙｓ（Ｙ３４９Ｃ）へ変更することが含まれる（Carter, 2001 Journal of Immunological Methods, 248: 7-15で概説されている）。
【０１２１】
一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、Ｆｃドメインの二量体形成を防ぐまたは低減させるように修飾される。例えば、残基Ｔｈｒ３６６は荷電残基と置換され、例えば、Ｔｈｒ３６６Ｌｙｓ、Ｔｈｒ３６６Ａｒｇ、Ｔｈｒ３６６Ａｓｐ、またはＴｈｒ３６６Ｇｌｕ（それぞれ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｄ、またはＴ３６６Ｅ）であり得、これは、いくつかの場合では、ＣＨ３−ＣＨ３二量体化を防ぎ得る。
【０１２２】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、以下の位置の１つまたは複数で変更されて、Ｆｃ受容体結合を低減させることができる：Ｌｅｕ２３４（Ｌ２３４）、Ｌｅｕ２３５（Ｌ２３５）、Ａｓｐ２６５（Ｄ２６５）、Ａｓｐ２７０（Ｄ２７０）、Ｓｅｒ２９８（Ｓ２９８）、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）、Ａｓｎ３２５（Ｎ３２５）、またはＡｌａ３２７（Ａ３２７）。例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）、Ｌｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）、Ａｓｐ２６５Ａｓｎ（Ｄ２６５Ｎ）、Ａｓｐ２７０Ａｓｎ（Ｄ２７０Ｎ）、Ｓｅｒ２９８Ａｓｎ（Ｓ２９８Ｎ）、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）、Ａｓｎ３２５Ｇｌｕ（Ｎ３２５Ｅ）、またはＡｌａ３２７Ｓｅｒ（Ａ３２７Ｓ）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域内の修飾は、Ｆｃ−受容体−ガンマ受容体への結合を低減させる一方で、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合への影響を最小にすることができる。
【０１２３】
〔配列表〕
2019519536.tif 000004
2019519536.tif 000005
【０１２４】
ａ．ヒト化抗体
一例では、ＧＩＴＲに結合するアゴニスト抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、治療用抗体に対する免疫反応を生じさせ、治療薬の効果を低下させ得る、非ヒト抗体に対するヒト免疫反応（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応）を減らすまたは排除することから、ヒト化抗体は治療用分子として有用である。抗体は、任意の方法によりヒト化され得る。ヒト化の非限定的な例示的方法としては、米国特許第５３５０１０１号明細書；同第５５８５０８９号明細書；同第５６９３７６１号明細書；同第５６９３７６２号明細書；同第６１８０３７０号明細書；Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988)；Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988)；および米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号明細書に記載されている方法が挙げられる。
【０１２５】
ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域の対応する位置に由来するアミノ酸と置き換えられている抗体である。一部の実施形態では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域の少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸が、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域の、１つまたは複数の対応する位置に由来するアミノ酸と置き換えられている。
【０１２６】
一部の実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。つまり、一部の斯かる実施形態では、１つまたは複数の非ヒトアミノ酸が、第１ヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または第１ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされた対応するアミノ酸と置き換えられ得、１つまたは複数の非ヒトアミノ酸が、第２ヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または、第２ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされた対応するアミノ酸で置き換えられ得、１つまたは複数の非ヒトアミノ酸が、第３ヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または、第３ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされた対応するアミノ酸と置き換えられ得る、などである。さらに、一部の実施形態では、単一フレームワーク領域、例えばＦＲ２にて置換に使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワークに由来する必要はない。しかしながら、一部の実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒト抗体に由来するか、同じヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされる。
【０１２７】
一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数の全フレームワーク領域を、対応するヒトフレームワーク領域と置き換えることによりヒト化される。一部の実施形態では、置き換えられる非ヒトフレームワーク領域に対し最も高い相同性レベルを有するヒトフレームワーク領域が、選択される。一部の実施形態では、斯かるヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。
【０１２８】
一部の実施形態では、ＣＤＲ移植に続き、１つまたは複数のフレームワークアミノ酸がマウスフレームワーク領域における対応するアミノ酸に戻される。斯かる「復帰変異」は、一部の実施形態では、１つもしくは複数のＣＤＲの構造に寄与するとみられる、および／または、抗原接触に関与し得る、および／または、抗体の構造全体の整合性に関与するとみられる、１つもしくは複数のマウスフレームワークアミノ酸を維持するために行われる。一部の実施形態では、ＣＤＲ移植に続いて抗体のフレームワーク領域に対し、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１、または０の復帰変異が行われる。
【０１２９】
一部の実施形態では、ヒト化抗体は、また、ヒト重鎖定常領域および／またはヒト軽鎖定常領域を含む。
【０１３０】
ｂ．キメラ抗体
一例では、ＧＩＴＲ特異的アゴニスト抗体は、キメラ抗体である。一部の実施形態では、ＧＩＴＲ特異的アゴニスト抗体は、少なくとも１つの非ヒト可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の斯かる実施形態では、ＧＩＴＲ特異的アゴニスト抗体の可変領域の全てが非ヒト可変領域であり、ＧＩＴＲ特異的アゴニスト抗体の定常領域の全てがヒト定常領域である。一部の実施形態では、キメラ抗体の１つまたは複数の可変領域が、マウス可変領域である。キメラ抗体のヒト定常領域は、それが置換する非ヒト定常領域が存在するとしても、その非ヒト定常領域と同じアイソタイプである必要はない。キメラ抗体は、米国特許第４８１６５６７号明細書；およびMorrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984)で述べられている。
【０１３１】
ｃ．ヒト抗体
一例では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の適切な方法により作成され得る。非限定的な例示的方法としては、ヒト免疫グロブリン座を含む遺伝子導入マウスにおいてヒト抗体を作成することが挙げられる。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al., Nature362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994)；ならびに米国特許第５５４５８０７号明細書；同第６７１３６１０号明細書；同第６６７３９８６号明細書；同第６１６２９６３号明細書；同第５５４５８０７号明細書；同第６３００１２９号明細書；同第６２５５４５８号明細書；同第５８７７３９７号明細書；同第５８７４２９９号明細書；および同第５５４５８０６号明細書を参照されたい。非限定的な例示的方法としては、また、ファージディスプレイライブラリを使用して、ヒト抗体を作成することも挙げられる。例えば、Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991)；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１０４９４号を参照されたい。
【０１３２】
ｄ．ヒト抗体定常領域
一部の実施形態では、本明細書に記載するヒト化、キメラ、またはヒトＧＩＴＲアゴニスト抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤより選択されるアイソタイプである。一部の実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλより選択されるアイソタイプである。一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態では、抗体またはＦｃ融合パートナーは、ＩｇＧ１定常領域において、例えば、Ｃ２３７Ｓ変異を含む。一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。一部の斯かる実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６９００２９２号明細書に記載されているように、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部の斯かる実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域において、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Angal et al. Mol. Immunol. 30(1): 105-108 (1993)を参照されたい。一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域と、ヒトκ軽鎖を含む。
【０１３３】
重鎖定常領域の選択は、抗体がｉｎ  ｖｉｖｏでエフェクター機能を有するか否かを決定し得る。斯かるエフェクター機能には、一部の実施形態では、抗体依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または相補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）が含まれ、これは、抗体が結合する細胞の死滅を引き起こし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３の重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。
【０１３４】
一部の実施形態では、エフェクター機能は望ましくない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター機能は、腫瘍の処置において望ましくない場合がある。一部の斯かる実施形態では、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２の重鎖定常領域は選択されか、または操作される。一部の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。
【０１３５】
ｅ．抗体複合体
一部の実施形態では、アゴニストＧＩＴＲ抗体は、標識にコンジュゲートする。標識は、抗体の検出を容易にする、および／または、抗体が結合する分子の検出を容易にする分子である。非限定的な例示的標識としては、限定するわけではないが、放射性同位体、蛍光群、酵素群、化学発光群、ビオチン、エピトープタグ、金属結合タグなどが挙げられる。一部の実施形態では、化学方法を使用して、標識をｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗体にコンジュゲートする。非限定的で例示的なコンジュゲートの化学的方法は当技術分野で既知であり、該方法には、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（以前のＰｉｅｒｃｅ；イリノイ州ロックフォード）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（カリフォルニア州ヘイワード）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（カナダ、カルガリー）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（ノースカロライナ州ローリー）などから商業的に入手可能である、サービス、方法、および／または試薬が含まれる。一部の実施形態では、標識がポリペプチドである場合、その標識は、少なくとも１つの抗体鎖と同じ発現ベクターから発現して、抗体鎖に融合した標識を含むポリペプチドを生成することが可能である。
【０１３６】
一部の実施形態では、制御性Ｔ細胞には特異的に結合し、それを死滅させるが、Ｔエフェクター細胞に特異的に結合し、それを死滅させることはないアゴニストＧＩＴＲ抗体が、毒素または薬物などの化合物に、例えばリンカーを介してコンジュゲートしている。斯かる化合物は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）という場合がある。リンカーは、除去可能の場合も除去不能の場合もある。例示的な毒素としては、限定するわけではないが、化学療法薬、ＤＮＡを傷つける薬剤、チューブリン重合を妨害する薬剤、または放射性核種などの細胞毒が挙げられる（斯かる細胞毒の例は、本開示の他のところで提供する）。一例では、毒素は、植物由来のタンパク質毒素（例えば、ゲロニン、リシン、アブリン、もしくはヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質など）または細菌毒性（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素およびＤｉｐｈｔｈｅｒｉａ毒素など）である。
【０１３７】
ｆ．抗体の生成
いくつかの例では、ＧＩＴＲ抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を生成する通例の方法を使用して生成される。
【０１３８】
一部の実施形態では、本明細書に記載するＧＩＴＲ抗体は、セルフリーシステムにおいて生成される。非限定的で例示的なセルフリーシステムは、例えば、Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)に記載されている。
【０１３９】
一部の例では、本明細書に記載するＧＩＴＲ抗体は、核酸分子より生成され、前記核酸分子は、本明細書に記載する抗体の１つまたは複数の鎖をコードする。いくつかの例では、核酸分子は、本明細書に記載のＧＩＴＲ抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの例では、核酸分子は、本明細書に記載するＧＩＴＲ抗体の、重鎖をコードするポリヌクレオチドと、軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。一部の実施形態では、第１核酸分子は、重鎖をコードする第１ポリヌクレオチドを含み、第２核酸分子は、軽鎖をコードする第２ポリヌクレオチドを含む。一部の斯かる例では、重鎖および軽鎖は、１つの核酸分子から、または、２つの別個の核酸分子から、２つの別個のポリペプチドとして発現する。抗体がｓｃＦｖである場合のような一部の実施形態では、単一ポリヌクレオチドは、連結し合った重鎖と軽鎖の両方を含む、単一ポリペプチドをコードする。
【０１４０】
いくつかの例では、ＧＩＴＲ抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドはリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、これは、翻訳されると、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置する。上記で論じたように、リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖のリーダー配列である場合もあるし、別の非相同的リーダー配列である場合もある。
【０１４１】
核酸分子は、組換えＤＮＡ技法を使用して、構築され得る。一部の実施形態では、核酸分子は、選択した宿主細胞における発現に適切な発現ベクターである（例えば、以下に記載するベクターなど）。ＧＩＴＲ抗体の重鎖および／または軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞；または真菌細胞（例えば、イーストなど）、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞などの真核細胞において発現し得る。いくつかの例では、１つまたは複数のポリペプチドは、任意の適する方法によって、ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸分子を用いて操作または遺伝子導入した動物において、ｉｎ  ｖｉｖｏで生成され得る。
【０１４２】
ＧＩＴＲ抗体は、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用することなどによる、任意の適切な方法により精製され得る。適切な親和性リガンドには、抗体が結合する抗原および／またはエピトープと、抗体定常領域に結合するリガンドが含まれる。例えば、タンパク質Ａ，タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、または抗体親和性カラムを使用して、定常領域に結合し、抗体を精製することができる。一部の実施形態では、疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えばブチルまたはフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するのに使用される。
【０１４３】
２．核酸を用いた、ＧＩＴＲの生物学的活性および／または発現の増加
一例では、ＧＩＴＲの生物学的活性は、ＧＩＴＲをコードする核酸分子の使用により高められるか、または増加する。例えば、ＧＩＴＲをコードする核酸分子を使用して、例えば、上方制御が望ましい場合に、ＧＩＴＲの遺伝子発現を増加させることが可能である（例えば、腫瘍においてまたは腫瘍領域においてＧＩＴＲの発現を増加させる）。
【０１４４】
いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸分子は、ＧＩＴＲの発現を、例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増加させる。いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸分子は、ＧＩＴＲの生物学的活性を、例えば、該ＧＩＴＲをコードする核酸分子の不在下での斯かる活性と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増加させる。例示的なＧＩＴＲをコードする核酸分子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１４８９０２．１、ＮＭ＿１４８９０１．１、ＮＭ＿００４１９５．２、ＮＭ＿００９４００．２、およびＮＭ＿０２１９８５．２（または、斯かる配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列）で提供される。
【０１４５】
ＧＩＴＲをコードする核酸分子は、組換えベクター（例えば、適切なプロモーターの制御下で、ＧＩＴＲをコードする核酸分子を配置することなどによるプラスミドもしくはウイルスベクター）を使用すること、または、ネイキッド核酸もしくは核酸複合体（リポソームカプセル化ＲＮＡなどの非ウイルス性方法）を使用することなどによる通例の方法を使用して、対象の細胞（例えば、腫瘍細胞など）に導入することが可能である。例示的なベクターとしては、限定するわけではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターが挙げられる。使用することが可能な例示的なウイルスベクターとしては、限定するわけではないが、ポックスウイルス、組換えワクシニアウイルス、レトロウイルス（例えば、レンチウイルスなど）、複製欠損性アデノウイルス株、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウイルス、またはポリオウイルスが挙げられる。例示的なプロモーターには、構成プロモーターまたは誘導性プロモーター、例えば、組織特異性プロモーターなどが含まれる。
【０１４６】
所望の宿主細胞への１つまたは複数の核酸の導入は、限定するわけではないが、リン酸カルシウム遺伝子導入、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性遺伝子導入、カチオン性脂質媒介性遺伝子導入、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含む、任意の方法によって達成され得る。非限定的で例示的な方法は、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rded. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、任意の適切な方法により、所望の宿主細胞に過渡的にまたは安定的に遺伝子導入され得る。
【０１４７】
いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸分子は、ある細胞または組織に導入されているだけである。例えば、ＧＩＴＲをコードする核酸分子を腫瘍のみへ導入することが十分な場合がある。しかしながら、いくつかの例では、対象の細胞全てを処置すること、または、ＧＩＴＲをコードする核酸分子を、例えば血管内投与によりより広く散在させることが、より治療的に効率的で単純である場合がある。いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸分子は、例えば、注射（皮内、筋肉内、ｉｖ、腫瘍内、もしくは皮下）、局所投与、経口投与、吸入、注入、沈着、または移植により、対象に直接投与される。
【０１４８】
３．ＧＩＴＲタンパク質を用いたＧＩＴＲの生物学的活性の増加
一例では、ＧＩＴＲの生物学的活性は、ＧＩＴＲタンパク質の使用により高められるか、または増加する。例えば、ＧＩＴＲタンパク質を使用して、例えば、上方制御が望ましい場合に、ＧＩＴＲの活性を増加させることが可能である（例えば、腫瘍領域においてＧＩＴＲの活性を増加させる）。
【０１４９】
ＧＩＴＲの活性を増加させるために使用可能である例示的なＧＩＴＲタンパク質には、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＮＰ＿６８３７００．１（アイソフォーム３前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２３４である）、ＮＰ＿６８３６９９．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２５５である）、ＮＰ＿００４１８６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２６−２４１である）、ＮＰ＿０３３４２６．１（アイソフォーム１前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２０−２２８である）、もしくはＮＰ＿０６８８２０．１（アイソフォーム２前駆体、成熟ペプチドはａａ  ２２−１３２である）に示されるＧＩＴＲタンパク質配列、または、斯かる配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＧＩＴＲ配列を有するものが含まれる。
【０１５０】
いくつかの例では、ＧＩＴＲタンパク質の投与は、ＧＩＴＲの活性を、対照（例えば、処置前の量またはタンパク質不在下での量など）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％増加させる。
【０１５１】
ＣｐＧ  ＯＤＮ
例示的なＣｐＧ  ＯＤＮとしては、クラスＢのＯＤＮ、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１で示されるヒトＣｐＧ配列（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３´）およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２で示されるマウスＣｐＧ  ＯＤＮ配列（ホスホロチオエートである塩基を有する５´−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３´）などが挙げられる。一例では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列５´−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３´ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３を有する（ＤｙｎａｖａｘからのＩＳＳ  １０１８）。
【０１５２】
投与および投薬量
本開示の方法は、治療的に有効な量の１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストと、１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮまたは他のＴＬＲ９アゴニストとを、例えば、治療的に有効な量の他の治療薬と組み合わせて、腫瘍のある対象に提供するステップを含む。１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、例えば、同時にまたは同時期に、腫瘍内に投与される。本明細書では、腫瘍内投与が、全身投与を超える予想外の優れた結果を提供することを示す。必要な投与量は、対象の種、年齢、体重、および全身状態、使用する特定の治療薬ならびにその投与方法に応じて、対象毎に異なり得る。いくつかの例では、本開示の方法は、さらに、手術および／または他の療法を、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）と組み合わせて、例えば、連続して、実質的に同時に、または同時に、対象に提供するステップを含む。
【０１５３】
投与は、単回投与または多回投与により達成され得る。いくつかの例では、処置は、数日から数か月、またはさらには数年の期間にわたる、本明細書で提供する１つまたは複数の治療薬の１日１回または１日複数回、または１日１回未満（例えば、週に１回もしくは月に１回など）の投与を含み得る。例えば、治療的に有効な量の１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストは、単回投与、１日２回、週１回、もしくは複数回投与、例えば１日１回で、または、処置過程の間中、投与され得る。例えば、治療的に有効な量の１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、単回投与、１日２回、週１回、もしくは複数回投与、例えば１日１回で、または処置過程の間中、投与され得る。特定の非限定的例では、処置は、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）の１日１回投与または１日２回投与を含む。いくつかの例では、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、月１回、月１回未満、例えば、２か月ごと、３か月ごと、または６か月ごとなどに対象に投与される。他の例では、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、月１回超、例えば、２週間ごと、毎週、週２回、週３回、毎日、または１日に多数回投与される。したがって、いくつかの例では、本開示の方法は、有効量の少なくとも１つのＧＩＴＲアゴニストの少なくとも２回の別個の腫瘍内投与と、有効量の少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの少なくとも２回の別個の腫瘍内投与を含む。
【０１５４】
１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、固体、溶液、エマルジョン、分散液、ミセル、リポソーム、および同類のものの形態で、例えば、腫瘍内適用に適切な有機または無機の担体または賦形剤との混合物において、使用され得る。１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、例えば、非毒性の、薬学的に許容可能な、ペレット、溶液、エマルジョン、懸濁液、および使用に適した任意の他のもの用の担体と共に配合され得る。本開示において有用である薬学的に許容可能な担体（ビヒクル）は、慣習的である。Remington’s Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, MackPublishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)が、１つまたは複数の治療薬の薬学的送達に適した組成物および製剤について記載している。例示的な担体としては、グルコース、ラクトース、アカシアゴム、ゼラチン、マンニトール、でんぷんのり、ケイ酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイドシリカ、ジャガイモでんぷん、尿素、中鎖長トリグリセリド、デキストラン、および、製剤を製造する際に使用するのに適した、固体、半固体、または液体状の他の担体が挙げられる。さらに、補助剤、安定剤、増粘剤、着色剤、および香料を使用してよい。
【０１５５】
腫瘍内投与は、概して、注射により達成される。注射可能剤は、溶液もしくは懸濁液、注射前の液体中での懸濁液の溶解に適した固体形態、またはエマルジョンの何れかとして、慣習的な形態で調製され得る。注射溶液および懸濁液は、無菌の粉末、顆粒、および錠剤より調製され得る。腫瘍内投与用調製物（例えば、無菌の注射可能懸濁液）には、無菌の水性または非水性の溶液、懸濁液、およびエマルジョンが含まれる。懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、既知の方法により製剤化され得る。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、水、アルコール／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれ、生理食塩水および緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。例示的なビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、Ｒｉｎｇｅｒデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または固定油が挙げられる。防腐剤および他の添加剤、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、緩衝剤、および不活性ガスなども存在してよい。一例では、１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）を含む滅菌注射可能調製物は、非毒性の経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液である。溶媒又は懸濁媒体としては、無菌の固定油が利用され得る。この目的のためには、合成のモノもしくはジグリセリド、脂肪酸、ごま油、ヤシ油、ピーナッツ油、綿実油などのような天然に生じる野菜油、またはオレイン酸エチル等のような合成脂肪ビヒクルを含む任意の無刺激性固定油が利用され得る。
【０１５６】
一例では、１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）を含む組成物は、それらを、水性もしくは非水性の溶媒、例えば、野菜もしくは他の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪族酸エステル、または、プロピレングリコールに；所望であれば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、および防腐剤などの慣習的な添加剤と共に溶解、懸濁、または乳化させることにより、腫瘍内投与を含む注射用に製剤化される。組成物は、また、種々の実施形態において、生分解性または非生分解性のポリマーなどと共に、徐放性マイクロカプセルにも製剤化され得る。非限定的で例示的な生分解性製剤としては、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが挙げられる。非限定的で例示的な非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。斯かる製剤を作成するある方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載されている。
【０１５７】
１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）は、単独で、または他の治療薬と組み合わせて、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸などの有機酸との反応により、または、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムなどの無機塩基、モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、アリールアミン、および置換エタノールアミンなどの有機塩基との反応により形成される、薬学的に許容可能な酸付加塩または塩基付加塩として投与され得る。
【０１５８】
一部の実施形態では、核酸分子（例えば、ＧＩＴＲをコードする核酸分子またはＣｐＧ  ＯＤＮなど）は、遺伝子療法を使用して送達される。非限定的例としては、核酸分子は金微小粒子にコーティングされ、粒子照射装置か、または、例えば、文献（例えば、Tang et al., Nature 356: 152-154 (1992)参照）に記載されているような「遺伝子銃」により送達され得る。
【０１５９】
１つもしくは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび／または１つもしくは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）の治療投薬量は、熟練の臨床医により決定され得る。他の治療薬、例えば、腫瘍を処置する薬剤も、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストおよび１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（もしくは他のＴＬＲ９アゴニスト）と組み合わせて投与するのに適している。
【０１６０】
一部の実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体、抗体断片、または抗体複合体の投与量は、全身投与での使用量の少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも７５分の１、または少なくとも１００分の１など、全身投与での使用量未満である。いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体の投与量は、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．３ｍｇ／ｋｇ以下、０．２５ｍｇ／ｋｇ以下、０．０３ｍｇ／ｋｇ以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ以下である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体の投与量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．０３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、または約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例では、抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇである。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＧＩＴＲタンパク質の投与量は、少なくとも０．２μｇ、少なくとも０．５μｇ、少なくとも１μｇ、少なくとも２μｇ、少なくとも５μｇ、または少なくとも１０μｇである。いくつかの例では、有効量の少なくとも１つのＧＩＴＲタンパク質は、１００μｇ以下、５０μｇ以下、２５μｇ以下、１０μｇ以下、または２μｇ以下、例えば、１μｇ〜１００μｇである。
【０１６２】
いくつかの例では、少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの投与量は、少なくとも０．０５ｍｇ、少なくとも０．３ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも３ｍｇ、少なくとも６ｍｇ、少なくとも１８ｍｇ、または少なくとも２０ｍｇ、例えば、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、１４ｍｇ、または１８ｍｇなどである。いくつかの例では、少なくとも１つのＣｐＧ  ＯＤＮの投与量は、２０ｍｇ、１０ｍｇ以下、１ｍｇ以下、０．３ｍｇ以下、または０．０５ｍｇ以下、例えば００５ｍｇ〜２０ｍｇなどである。
【０１６３】
一部の実施形態では、アゴニスト小分子の投与量は、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５００ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１０００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例では、アゴニスト小分子の投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、または約２５ｍｇ／ｋｇである。他の実施形態では、アゴニスト小分子の投与量は、少なくとも１ｍｇ／ｍ２、少なくとも１０ｍｇ／ｍ２、少なくとも５０ｍｇ／ｍ２、少なくとも１００ｍｇ／ｍ２、または少なくとも５００ｍｇ／ｍ２、例えば、約５０ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２など、例えば、約５０ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２、または約２５０ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２などである。いくつかの例では、投与量は、約５０ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約４００ｍｇ／ｍ２、または約５００ｍｇ／ｍ２である。
【０１６４】
いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸（単独で、またはプラスミドもしくはベクターの一部として）の投与量は、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約１００ｍｇである。いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸の投与量は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、または約１０００ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲをコードする核酸の投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約２５〜約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸の投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１２．５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇである。これらの投薬量は単なる例であり、適切な投薬量は当業者により決定され得ることが理解されよう。
【０１６５】
いくつかの例では、ＧＩＴＲをコードする核酸を含有するウイルス粒子は、少なくとも１ｘ１０５ｐｆｕ／ｍｌ、少なくとも１ｘ１０６ｐｆｕ／ｍｌ、少なくとも１ｘ１０７ｐｆｕ／ｍｌ、少なくとも１ｘ１０８ｐｆｕ／ｍｌ、少なくとも１ｘ１０９ｐｆｕ／ｍｌ、または少なくとも１ｘ１０１０ｐｆｕ／ｍｌ、およびいくつかの例では、２ｘ１０１１ｐｆｕ／ｍｌを超えないウイルス粒子力価を有する調製物の一部として投与される。ＧＩＴＲをコードする核酸分子を含有するウイルス粒子は、例えば体積が最大１０ｍｌの薬学的に許容可能な担体と組み合わせて投与され得る。薬学的に許容可能な担体は、例えば、液体担体、例えば、生理食塩水、硫酸プロタミン、またはポリブレンなどであり得る。
【０１６６】
追加治療薬の投与
組み合わせ療法も本出願に包含される。ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮは、他の生物学的に活性な物質または腫瘍処置用の他の処置手順と組み合わせて、対象に投与され得る。例えば、ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮは、単独でまたは他の処置方法と共に投与され得る。それらは、手術、放射線療法、化学療法、および／または生物学的療法などの他の処置方法の前に、該処置方法と実質的に同時期に、または該処置方法の後で提供され得る。例えば、ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮは、１つまたは複数の抗ガン剤、例えば、化学療法薬、増殖阻害剤、抗血管新生剤、抗新生物形成組成物、生物学的薬剤（例えば、治療用ｍＡｂ）、またはそれらの組み合わせなどと共に投与され得る。
【０１６７】
いくつかの例では、ＧＩＴＲアゴニストとＣｐＧ  ＯＤＮは、がんの処置に有用な１つまたは複数の他の薬剤、例えば、化学療法薬、生物学的薬剤（例えば、治療用モノクローナル抗体）、抗血管新生剤、増殖阻害剤、放射線療法、手術、またはそれらの組み合わせと組み合わせて使用される。使用可能な化学療法薬の例としては、限定するわけではないが、アルキル化剤、例えばチオテパおよびＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート類、例えばブスルファン、イムプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン類、例えばベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールオメラミンを含むエチレンイミン類およびメチラメラミン類；アセトゲニン類（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（アドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１、およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９、およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；窒素マスタード類、例えばクロランブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロソ尿素類、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムヌスチンなど；抗生物質、例えばエネジン抗生物質など（例えばカリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマＩＩおよびカリケアマイシンオメガＩＩ（例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)参照）；ジネマイシンＡを含むジネマイシン；クロドロン酸などのビスホスホネート；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチン発色団および関連の色素蛋白エネジン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、オーソラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン類、例えばマイトマイシンＣ、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５��ＦＵ）など；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートなど；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、デキシフルリジン、エノシタビン、フロクスリジンなど；アンドロゲン類、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；抗アドレナル類、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど；葉酸補給剤、例えばフロリン酸など；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノェブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド類、例えばマイタンシンおよびアンサミトシン類など；マイトグアゾン；マイトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメト；ピアルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，オレゴン州ユージーン）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；マイトブロニトール；マイトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド類、例えばＴａｘｏｌ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ニュージャージー州プリンストン）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）クレモフォールフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，イリノイ州シャンバーグ）、およびＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，フランス国アントニー）；クロランブシル；Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチンなど；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ，ＣＰＴ−１１）（５−ＦＵおよびロイコボリンと併せたイリノテカンの処置レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド類、例えばレチノイン酸など；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；細胞増殖を減少させる、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））およびＶＥＧＦ−Ａの阻害剤、ならびに上記何れかの薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【０１６８】
さらなる非限定的で例示的な化学療法薬としては、がんへのホルモン作用を制御または阻害するように働く抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）が挙げられ、例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）トレミフェン；副腎でのエストロゲン産生を制御する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）酢酸メゲストロール、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）レトロゾール、およびＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）アナストロゾール；および抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、およびゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に関わるシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、およびＨ−Ｒａｓなど；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばＡｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子治療ワクチン、例えばＡｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、およびＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ−２；Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記何れかの薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【０１６９】
「抗血管新生剤」は、直接的または間接的に血管新生、脈管形成、または不所望の血管透過を阻害する、小分子量の化合物、ポリヌクレオチド（例えば、阻害ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質である。抗血管新生剤には、結合して血管新生因子またはその受容体の血管新生活性を遮断する薬剤が含まれる。一例では、抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）））またはＶＥＧＦ−Ａ受容体に対する抗体（例えば、ＫＤＲ受容体もしくはＦｌｔ−１受容体）、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えばＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、または、例えば国際特許出願ＷＯ２００４／１１３３０４号に記載されるもの）である。抗血管新生剤には、また、天然の血管新生阻害剤、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、Klagsbrun and D’Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179（例えば、悪性メラノーマにおける抗血管新生療法を一覧表示する表３）；Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene22:6549-6556（例えば、既知の抗血管新生因子を一覧表示する表２）；および、Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206（例えば、臨床試験で使用される抗血管新生剤を一覧表示する表１）を参照のこと。
【０１７０】
増殖阻害剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの何れかで細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞など）の増殖を阻害する化合物または組成物である。したがって、増殖阻害剤は、Ｓ期の細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞など）のパーセンテージを著しく減少させるものであり得る。増殖阻害剤の例としては、限定するわけではないが、（Ｓ期以外の時点で）細胞周期進行を遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘発する薬剤などが挙げられる。伝統的なＭ期遮断剤には、ビンカス（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなどが含まれる。Ｇ１停止させるこれらの薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニソン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、およびａｒａ−Ｃなどは、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, Murakamiらによる標題"Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" (W. B. Saunders, Philadelphia, 1995)、例えばp. 13に見つけられる。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、両方ともイチイに由来する抗がん剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ―Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の構築を促進し、脱重合を防ぐことにより微小管を安定化させ、細胞の有糸分裂の阻害をもたらす。
【０１７１】
抗新生物形成組成物にはがんの処置に有用なものが含まれ、少なくとも１つの活性治療薬が含まれる。治療薬の例としては、限定するわけではないが、例えば、化学療法薬、増殖阻害剤、細胞障害剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法薬、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、およびがんを処置するための他の生物学的薬剤、例えば、抗ＨＥＲ−2抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害薬）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害薬（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来の増殖因子阻害薬（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）、ＣＯＸ−２阻害薬（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害薬（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、ＰＤ−１阻害薬（例えば、抗ＰＤ１抗体、ＢＭＳ−９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害薬（例えば、抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害薬（例えば、抗ＰＤＬ２抗体）、ＴＩＭ３阻害薬（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、またはＶＥＧＦ受容体のうち１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、および他の生体活性有機化学薬剤などが含まれる。それらの組み合わせも使用可能である。
【０１７２】
ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮと共に使用可能である、がんを処置するための生物学的薬剤の他の例としては、限定するわけではないが、セツキシマブ、ブレンツキシマブベドチン、ダラツムマブ、イブリツモマブチウキセタン、イピリムマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、ペンブロリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびトラスツズマブが挙げられる。
【０１７３】
治療反応
本開示の方法で処置され得る例示的な腫瘍、例えばがんなどには、固形腫瘍、例えば細胞腫、芽細胞腫、または肉腫が含まれる。本開示の方法で処置され得る特異的な腫瘍例としては、限定するわけではないが、乳がん（例えば、小葉がん、腺管がん、例えば三種陰性乳がんなど、および浸潤がん）、肺がん（例えば、非小細胞がん、小細胞肺がん、大細胞がん、扁平上皮がん、および腺がん）、肺中皮腫、大腸腺がん（例えば、大腸がんなど）、胃がん、前立腺腺がん、卵巣がん（例えば、漿液性嚢胞腺がんおよび粘液性嚢胞腺がんなど）、卵巣胚細胞腫瘍、精巣がんおよび胚細胞腫瘍、膵臓腺がん、胆管腺がん、肝細胞がん、腹膜がん、膀胱がん（例えば、移行上皮がん、腺がん、および扁平上皮がん、および膀胱尿路上皮がんを含む）、甲状腺がん、胆管細胞がん、胆嚢がん、腎細胞腺がん、腎明細胞がん、子宮内膜または子宮のがん（例えば、腺がんおよびミュラー管混合腫瘍（がん肉腫）を含む）、子宮頸部、子宮頸管内膜、子宮頸膣部、外陰部、および膣の細胞腫（例えば、それぞれの腺がんおよび扁平上皮がんなど）、前立腺がん、肝細胞がん、胆管細胞がん、皮膚腫瘍（例えば、扁平上皮がん、基底細胞がん、悪性メラノーマ、皮膚付属器腫瘍、カポジ肉腫、皮膚リンパ腫、皮膚付属器腫瘍、種々のタイプの肉腫、およびメルケル細胞がん）、食道がん、上咽頭および中咽頭の細胞腫（その扁平上皮がんおよび腺がんを含む）唾液腺がん、脳および中枢神経系の腫瘍（例えば、グリア、ニューロン、および髄膜起源の腫瘍、下垂体がん、神経膠芽腫、および星状細胞腫を含む）、末梢神経腫瘍、軟組織肉腫、骨および軟骨の肉腫、頭頸部扁平上皮がん、ならびにリンパ腫（Ｂ細胞およびＴ細胞の悪性リンパ腫を含む）が挙げられる。一例では、腫瘍は腺がんである。一例では、腫瘍はリンパ腫である。
【０１７４】
いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、注射腫瘍のサイズまたは体積を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらには１００％（例えば、検出可能な腫瘍細胞なし）、減少させる。いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、非注射転移性腫瘍のサイズまたは体積を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらには１００％（例えば、検出可能な腫瘍細胞なし）、減少させる。いくつかの例では、本開示の方法は、例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＤＮの投与なしと比較して、非注射転移性腫瘍の数を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらには１００％（例えば、検出可能な腫瘍細胞なし）、減少させる。
【０１７５】
一例では、本明細書で提供する方法および組成物は、その進行速度などの腫瘍の進行を低減させる（例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよびＣｐＧ  ＯＮＤの投与無しまたは投与前と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも５０％の低減）。
【０１７６】
一例では、治療反応は、治療を投与される対象の制御性Ｔ細胞の数を減少させることである。例えば、組成物は、治療用組成物の非存在下での（または処置前の）制御性Ｔ細胞の数と比較して、制御性Ｔ細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または１００％減少させ得る。
【０１７７】
一例では、治療反応は、治療を投与される対象のエフェクターＴ細胞の活性を増加させることである。例えば、治療用組成物は、治療用組成物の非存在下での（または処置前の）エフェクターＴ細胞の活性と比較して、エフェクターＴ細胞の活性を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍増加させ得る。
【０１７８】
一例では、治療反応は、治療を投与される対象の制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を低下させることである。例えば、治療用組成物は、治療用組成物の非存在下での（または処置前の）制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性と比較して、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または１００％低下させ得る。
【０１７９】
当業者なら、これらの治療反応の組み合わせが本開示の方法および組成物で達成され得ることを理解しよう。
【０１８０】
したがって、いくつかの例において、本開示の方法は、注射腫瘍のサイズもしくは体積、非注射転移性腫瘍のサイズもしくは体積、非注射転移性腫瘍の数、腫瘍の進行、制御性Ｔ細胞の数、制御性Ｔ細胞の抑制作用および系譜安定性、エフェクターＴ細胞の活性、またはそれらの組み合わせを、ある期間にわたって（例えば、治療薬の投与前後などで）測定するステップを含む。
【０１８１】
組成物およびキット
腫瘍の処置で使用するための医薬組成物およびキットも提供する。組成物は、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニスト（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト抗体など）と、１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、２、３、またはそれらの組み合わせ）とを、例えば少なくとも１つの薬学的担体、希釈剤、または賦形剤と共に含み得る。斯かる組成物は、さらに、他の治療薬、例えば、化学療法薬、生物学的薬剤、または同種のものを含み得る。いくつかの例では、組成物は、適切な液体、例えば無菌水の添加時に再構成される凍結乾燥粉末として提供される。いくつかの例では、組成物は、スクロースおよびアルギニンなどの、タンパク質凝集を阻害する１つまたは複数の物質を含む。いくつかの例では、組成物は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。
【０１８２】
１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストと、１つまたは複数のＣｐＧ  ＯＤＮ（これらは、単一組成物の場合も、例えば別個の容器またはバイアルに入った別個の組成物の場合もある）を含むキットも提供する。斯かるキットは、さらに、１つもしくは複数の化学療法薬、１つもしくは複数の生物学的薬剤、１つもしくは複数の抗血管新生薬、１つもしくは複数の増殖阻害薬、１つもしくは複数の抗新生物形成組成物、またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの例では、キットは、さらに、薬学的に許容される緩衝液、例えば静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液を含む。キットは、さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的見地およびユーザー見地から望ましい他の物質を含み得る。斯かる追加試薬は、別個の容器内に存在してよい。
【０１８３】
適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器はガラスまたはプラスチックなどの種々の物質で形成されてよい。いくつかの例では、容器は、組成物自体か、または、腫瘍を処置するために有効な別の組成物と組み合わさった組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針で穿刺可能な、ストッパ付きバイアルであってよい）。
【０１８４】
キットは、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用シリンジ、およびカスタマイズされた腫瘍内送達系などの、患者への治療薬の投与を助ける任意選択的な構成要素を含み得る。キットは、一患者用の単回使用単位投与量として、特定の患者用の多数回の使用として（一定投与量であるか、もしくは治療が進むにつれ個々の化合物の力価が変化する）、製造される場合もあるし；キットは多数の患者への投与に適した多数の投与量を含有する場合もある（「バルク包装」）。キットの構成要素は、カートン、ブリスター包装、ボトル、チューブ、および同類のものの中で組み立てられ得る。
【０１８５】
それぞれが１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストと１つまたは複数のＣＰＧ  ＯＤＮの１つまたは複数の投与量を含有する、１つまたは複数の容器を含む医薬投薬量パックも提供する。いくつかの例では、１つまたは複数の追加薬剤ありでまたはなしで、１つまたは複数のＧＩＴＲアゴニストと１つまたは複数のＣＰＧ  ＯＤＮとを含む、所定量の組成物を含有する単位投薬量を提供する。一部の実施形態では、斯かる単位投薬量は、注射用の単回使用プレフィルドシリンジで供給される。種々の実施形態において、単位投薬量に含有される組成物は、生理食塩水、スクロース、もしくは同類のもの；ホスフェートもしくは同類のものなどの緩衝剤を含み得；および／または安定的で有効なｐＨ範囲で製剤化され得る。
【０１８６】
〔実施例１〕
Ａ２０モデルにおける腫瘍および転移の退縮に対するＧＩＴＲ抗体の効果
この例は、腫瘍におけるＧＩＴＲのＴ細胞調節が、全身の抗腫瘍反応を誘発することを実証するために使用される方法について記載する。
【０１８７】
メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢、〜２０ｇ）は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、アメリカ合衆国メイン州）から得た。腫瘍細胞を移植する前にマウスを剪毛した。
【０１８８】
Ａ２０  Ｂ細胞のリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  Ｍａｎａｓｓａｓ、アメリカ合衆国バージニア州：カタログ番号ＴＩＢ−２０８）を、１０％ＦＢＳ、１％Ｐｅｎｎ／Ｓｔｒｅｐ、および０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノールを有するＲＰＭＩ−１６４０（ＡＴＣＣ）における、３７℃での培養で増殖させた。
【０１８９】
各マウスを、マウスの頭より、左右の第４乳頭（乳首）近くに、１００μＬのＰＢＳ中の５ｘ１０６Ａ２０細胞を２回皮下に注射することで接種した。各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ＾３）＝（長さｘ幅＾２）／２に従って計算した。
【０１９０】
１０日目、１２日目、および１４日目に、マウスを、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６（ＣｐＧ、５０μｇ、〜２．５ｍｇ／ｋｇ；Ａｄｉｐｏｇｅｎ，アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ：カタログ番号ＩＡＸ−２００−００２）およびまたは抗ＧＩＴＲ（５μｇ，〜０．２５ｍｇ／ｋｇ；ＷｕＸｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，中国上海）を用いて、図１に示すように処置した。腫瘍内注射剤を組み合わせ、２５μＬのＰＢＳ中で得た。抗ＧＩＴＲの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射剤を、１００μＬのＰＢＳ中で得た。
【０１９１】
図２Ｅ−２Ｆに示すように、ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの直接腫瘍注射は、注射腫瘍と、遠位の非注射腫瘍の両方の腫瘍退縮をもたらした。しかしながら、ＣｐＧのみは、注射腫瘍のみの退縮を引き起こし（図２Ａ）、遠位腫瘍では退縮を引き起こさず（図２Ｂ）、抗ＧＩＴＲのみは注射腫瘍（図２Ｃ）と遠位腫瘍（図２Ｄ）の両方の退縮をいくつかのマウスにおいて引き起こした。
【０１９２】
ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの直接腫瘍注射（図２Ｅ、２Ｆ）は、いくつかのマウスでは腫瘍退縮を引き起こしたが、全てのマウスでは腫瘍退縮を引き起こさなかった、ＣｐＧと全身性抗ＧＩＴＲ（図３Ｅ、３Ｆ）よりも、抗腫瘍効果がより高かった。
【０１９３】
〔実施例２〕
ＣＴ２６モデルにおける腫瘍および転移の退縮に対するＧＩＴＲ抗体の効果
上記の例は、ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの両方の腫瘍内注射が腫瘍の退縮を引き起こすことだけでなく、ＣｐＧの腫瘍内注射と抗ＧＩＴＲの全身性投与（図３Ｅ、３Ｆ）も、いくつかのマウスでは腫瘍の退縮を引き起こすことも実証する。そのため、ＣｐＧの腫瘍への直接的な注射が、遠位の非注射腫瘍において、全身投与のＧＩＴＲアゴニストに対する反応を増加させることを示すために、さらなる実験を実行する。
【０１９４】
一例では、ＣＴ２６モデルを使用して、ＣｐＧの腫瘍内注射と抗ＧＩＴＲの全身性投与の効果を求めた。メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢）の左右の腹側の側腹部（第４乳房脂肪体の近く）に、１００μＬのＤＰＢＳに懸濁した約１ｘ１０６のＣＴ２６マウス大腸がん細胞（ＡＴＣＣ  Ｍａｎａｓｓａｓ，アメリカ合衆国バージニア州；カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を接種する。腫瘍が約１００ｍｍ３に達した際（および／または移植の約５−７日後）に、腫瘍の１つに、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６（ＣｐＧ，１０−２０μｇ，〜０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ；Ａｄｉｐｏｇｅｎ，アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ：カタログ番号ＩＡＸ―２００−００２）を注射する。アゴニスト抗ＧＩＴＲを、腹腔内（つまり、全身に）、０．０１−０．１ｍｇ／ｋｇで投与する。注射腫瘍および非注射腫瘍の腫瘍体積を測定することにより、ＣｐＧの腫瘍への直接的な注射が、遠位の非注射腫瘍において、全身投与された抗ＧＩＴＲに対する反応を増加させることが実証する。上記プロトコル（ＣＴ２６接種と腫瘍の誘発、処置のタイミングおよび期間、ならびにＣｐＧまたは抗ＧＩＴＲの投薬量を含む）は、モデル最適化のために適合させることができる。ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの両方の腫瘍内注射も実行する場合がある。
【０１９５】
上記プロトコルにおいて使用されるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含むＧＩＴＲ結合ドメイン（ＧＩＴＲ−ＢＤ）を含む抗体；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の配列を含むＧＩＴＲ−ＢＤを含む抗体；ｃ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；ｄ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；またはｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の配列を含むポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子を含む、本明細書に記載する抗ＧＩＴＲ抗体の何れかを含む。
【０１９６】
〔実施例３〕
４Ｔ１モデルにおける腫瘍および転移の退縮に対するＧＩＴＲ抗体の効果
さらなる例において、４Ｔ１モデルを使用して、ＣｐＧの腫瘍内注射と抗ＧＩＴＲの全身性投与の効果を求めた。メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢）の左右の腹側の側腹部（第４乳房脂肪体の近く）に、１００μＬのＤＰＢＳに懸濁した約５ｘ１０４の４Ｔ１マウス乳がん細胞（ＡＴＣＣ  Ｍａｎａｓｓａｓ，アメリカ合衆国バージニア州；カタログ番号ＣＲＬ−２５３９）を接種する。腫瘍が約５０ｍｍ３に達した際（および／または移植の約１０−１４日後）に、腫瘍の１つにＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６（ＣｐＧ，１０−２０μｇ，〜０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ；Ａｄｉｐｏｇｅｎ，アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ：カタログ番号ＩＡＸ―２００−００２）を注射する。アゴニスト抗ＧＩＴＲを、腹腔内（つまり、全身に）、０．０１−０．１ｍｇ／ｋｇで投与する。注射腫瘍および非注射腫瘍の腫瘍体積を測定することにより、ＣｐＧの腫瘍への直接的な注射が、遠位の非注射腫瘍において、全身投与の抗ＧＩＴＲに対する反応を増加させることを実証する。上記プロトコル（４Ｔ１接種と腫瘍の誘発、処置のタイミングおよび期間、ならびにＣｐＧまたは抗ＧＩＴＲの投薬量を含む）は、モデル最適化のために適合させることができる。ＣｐＧと抗ＧＩＴＲの両方の腫瘍内注射も実行する場合がある。
【０１９７】
上記プロトコルにおいて使用されるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含むＧＩＴＲ結合ドメイン（ＧＩＴＲ−ＢＤ）を含む抗体；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の配列を含むＧＩＴＲ−ＢＤを含む抗体；ｃ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の配列を含むＣＤＲ１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列を含むＣＤＲ２と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の配列を含むＣＤＲ３とを含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；ｄ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子であって、（ｉ）前記ＧＩＴＲ−ＢＤは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）前記ヒンジは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドであり、（ｉｖ）前記Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである、四価分子；またはｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の配列を含むポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子を含む、本明細書に記載する抗ＧＩＴＲ抗体の何れかを含む。
【０１９８】
他のモデルを使用して、ＣｐＧの腫瘍への直接的な注射が、遠位の非注射腫瘍において、全身投与のＧＩＴＲアゴニストに対する反応を増加させることを実証することもできる。斯かるモデルはＧＩＴＲアゴニストに対し反応性であり、斯かるモデルには、Ｂ１６−Ｆ１０マウスメラノーマ細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）；ＭＣ３８マウス大腸腺がん細胞株；およびＥＭＴ６マウス乳がん細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２７５５）を使用するモデルが含まれる。
【０１９９】
本開示の原理が適用される多くの実行可能な実施形態を鑑み、例示の実施形態は単なる開示例であると理解されるべきであり、本発明の範囲を限定するものととらえるべきではない。むしろ、開示の範囲は以下の請求項により定義される。当社は、そのため、当社の発明として、これらの特許請求の範囲の範囲および趣旨に当てはまるもの全てを特許請求する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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