(57)【要約】  本発明は、対象の細胞外液量状態を決定する方法に関する。本方法は、対象から得られた試料においてマーカー、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含む。更に、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片のレベルに基づき、体液バランスが決定され、前記体液バランスが細胞外液量状態を決定する。更に、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片のレベルに基づき、塩分バランスが決定され、前記塩分バランスが細胞外液量状態及び塩分貯留を決定する。更に、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、前記対象の前記細胞外液量状態及び塩分貯留は、本明細書で提供される方法によって決定される。更に、本発明は、本明細書で提供される方法を実施するためのキット及び／又は診断装置に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の細胞外液量状態、体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定する方法であって、前記対象から得られた試料においてプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片のレベルを決定することを含み、好ましくは、前記断片がＭＲ−ｐｒｏＡＤＭである、方法。
【請求項２】
（ａ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、少なくとも１つの参照対象又は参照対象集団のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較するステップ；又は
（ａ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較するステップ；及び
（ｂ）それぞれステップ（ａ１）又は（ａ２）における比較に基づき、前記対象の前記細胞外液量状態、前記血球量状態、前記体液バランス及び／又は前記塩分バランスを同定するステップ
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記参照対象が健常対象である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（ｉ）前記参照レベルと比較したときに上昇したレベルの前記対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、前記対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示し；
（ｉｉ）前記参照レベルと比較したときに同一又は同様のレベルの前記対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、前記対象が同一若しくは同様の体液バランス、及び／又は同一若しくは同様の塩分バランスを有することを示し；前記同一の体液バランス及び／又は塩分バランスが、前記対象が正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有することを示し；及び／又は
（ｉｉｉ）前記参照レベルと比較したときに低下したレベルの前記対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、前記対象が負の体液バランス及び／又は負の塩分バランスを有することを示す、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記参照対象が、動脈瘤、多発外傷、脳傷害、及び／又は頭部傷害など、重篤な細胞外液量状態に関連することが公知の疾患又は障害に罹患している対象であり、又は前記参照対象が、ショックを伴う腹膜炎に罹患している術後対象である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）前記参照レベルと比較したときに同様のレベル、同一のレベル又は上昇したレベルの前記対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、前記対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示し；及び／又は
（ｉｉ）前記参照レベルと比較したときに低下したレベルの前記対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、前記対象が正常な体液バランス、正常な塩分バランス、正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有することを示す、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記試料中におけるｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの１ｎｍｏｌ／Ｌ以上のレベルが、重篤な細胞外液量状態、重篤な血球量状態、正の塩分バランス及び／又は正の塩分バランスの指標である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）ヘモグロビンレベル及び／又は血清総タンパクレベルを決定するステップ；
（ｉｉ）ボディマスインデックス、体重、年齢及び性別からなる群から選択される前記対象の少なくとも１つのパラメータを決定するステップ；及び／又は
（ｉｉｉ）前記試料中のｐｒｏＡＮＰレベル、全血量レベル、前記試料中のヘマトクリットレベル、赤血球量レベル、血漿量レベル、全尿量レベル、前記試料中のアンジオテンシンＩＩレベル、前記対象の患者群、前記試料中のコルチゾールレベル、血中の内皮幹細胞数、前記試料中のカテコールアミンレベル、前記対象の全血イオノグラム、前記対象の尿イオノグラム、前記対象の血液浸透圧、前記対象の尿浸透圧、血糖、前記試料中のプロエンドセリン−１（ｐｒｏ−ＥＴ−１）レベル、前記試料中のＣＴ−ｐｒｏＡＶＰレベル、前記試料中のアルドステロンレベル、前記試料中の乳酸塩レベル、前記対象の急性生理学及び慢性健康評価ＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）、前記対象の世界脳神経外科連盟（ＷＦＮＳ）グレード分類、及び前記対象のグラスゴーコーマスケール（ＧＣＳ）からなる群から選択される前記対象の少なくとも１つのマーカー及び／又はパラメータを決定するステップが決定されること；又は
（ｉｖ）前記対象のボディマスインデックス、前記対象の体重、前記対象の年齢、前記対象の性別、前記試料中のヘモグロビンレベル及び前記試料中の血清総タンパクレベルを決定するステップ
を更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が脳傷害、動脈瘤、頭部傷害、多発外傷性傷害に罹患しており、及び／又は前記対象が手術後である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記試料が血液、血漿、血清又は尿である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルがイムノアッセイによって決定され、前記アッセイが均一相又は不均一相で実施される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法であって、前記対象の細胞外液量状態が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法によって決定され、
任意選択的に、前記障害又は医学的状態が、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、頭部傷害、神経学的障害、多発外傷性傷害、手術後、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、乱れた体液バランスに関連する疾患からなる群から選択される、方法。
【請求項１３】
対象の細胞外液量状態、体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定するためのキットの使用であって、前記キットが、前記対象の試料中におけるｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するための１つ以上の検出試薬を含み、任意選択的に、前記検出試薬が抗体を含み、前記抗体の１つが標識されており、及び他方の抗体が固相に結合されているか又は固相に選択的に結合され得る、使用。
【請求項１４】
第１及び第２の抗体が液体反応混合物中に分散して存在し、蛍光又は化学発光の消光又は増幅に基づく標識系の一部である第１の標識成分が前記第１の抗体に結合され、及び前記標識系の第２の標識成分が前記第２の抗体に結合され、それにより、両方の抗体のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭへの結合後、前記測定溶液中の得られたサンドイッチ複合体の検出を可能にする測定可能なシグナルが生成され、任意選択的に、前記標識系が、希土類クリプテート又はキレートを、詳細にはシアニン型の蛍光又は化学発光色素と組み合わせて含む、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記ｐｒｏＡＤＭの断片が、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ＰＡＭＰ、アドレノテンシン及び成熟アドレノメデュリンからなる群から選択され、好ましくは、前記断片がＭＲ−ｐｒｏＡＤＭである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象、特にヘルスケア下、最も詳細には集中治療下にある患者の細胞外液量状態の決定に関する。本方法は、対象から得られた試料においてプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルを決定することを含む。更に、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、体液バランス及び／又は塩分バランスが決定され得、従って、これが前記対象の細胞外液量状態の指標となる。
【背景技術】
【０００２】
正確な血液量は評価が困難である。血球量は、ヘモグロビン濃度（本明細書では「Ｈｂ」とも称される）レベルを決定することにより推定し得る（Ｊａｃｏｂ，２０１２）。細胞外液量は、対象の体重に基づいて推定することができ、例えば、身体は６０％が水分からなり、即ち７０Ｋｇの患者について４２Ｌであり、細胞外液量は体内水分の４０％と見なすため、即ち７０Ｋｇの患者について１７Ｌである。図１を参照されたい。実際の臨床では、多くの急性の及び急性度の低い集中治療状況において、患者への処方の指針付け及び管理のため、血管内圧及び／又は心拍出量測定値の変化に関する動的情報の収集に基づく「有効」血液量が１日数回推定される。この推定は、血液増量剤の分量及びカテコールアミン又は輸血使用に関する基本的治療判断の基礎として一貫して用いられている。毎日、集中治療下の患者の推定４０％が評価に従って血液増量剤の投与を受けている（Ｆｉｎｆｅｒ，２０１１）。正の体液バランスを回避しながら適切な血液量を達成することは、急性炎症患者、例えば外傷性ストレス又は敗血症の日々のケアにおけるジレンマである。これは、まさに集中治療及び麻酔学文献中に存在する課題である（Ｒｉｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｓａｋｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｂａｇｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｐａｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｋｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；及びＡｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。治療法の提言は、臓器への十分な酸素供給を確保するためのより高い心拍出量の急性管理の必要性に向けられている。主として塩分及び水分で構成される輸液負荷が、提案されている主な血液増量手段である（Ｃｅｃｃｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０００３】
血液量を、水を伴う塩で増加させると、特にショックによる利尿の低下時に細胞外液量の増加が起こる。加えて、急性炎症状況では毛細血管透過性が極端に増加し、体液貯留リスクが悪化し得る（Ｃｈａｐｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｊａｃｏｂ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；及びＯｓｔｒｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。血液増量の過負荷は、急性肺傷害、腹部コンパートメント症候群又は腎機能障害などの臓器機能障害を引き起こし得ることが認識されている（Ｓａｋｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｂａｇｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｓａｋｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；及びＢｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。更に、諸研究により、水−ナトリウム過負荷に起因する死亡率の上昇が報告されている（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｋｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；及びＡｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。３〜４ｋｇの重量増加の累積的正の体液バランス、又は３〜４リットルの水分増加によって生じる２７〜３６ｇの塩分が、死亡率及び罹患率が上昇する閾値と考えられている（Ｌｏｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｂｒａｎｄｓｔｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；及び  Ｂｊｅｒｒｅｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。従って、この評価の精度は極めて重要である。これらの現象の防止又は修正に用いられている分析的方法は、血管内圧及び／又は心拍出量測定値の変化に関する動的情報の収集に基づく「有効」血液量に重点を置くものである。この戦略は、ショックから最初の数時間では有効であることが分かっているが、過剰な血漿増量を防ぐことはできない（Ｈｉｌｔｏｎ，２０１１）。
【０００４】
輸血処方も血管内液量によって決定される。輸血閾値は、通常、ヘモグロビン（Ｈｂ）値又はヘマトクリット（これは、定義上、全血量に対する赤血球量の比率である）を踏まえて考慮される。様々な集中治療セッティングで行われた多くの臨床試験が、７〜１１ｇ／ｄＬの濃度のＨｂについて、循環赤血球量の正確な評価が困難となるような不正確さを認めている（Ｔａｋａｎｉｓｈｉ，２００８；Ｄｏｒｂｏｕｔ  Ｍｅｅｓ，２０１１，Ｊａｃｏｂ，２０１２）。実際、広範な集中治療患者集団の臨床試験は、輸血が無効であり、７〜８ｇ／ｄＬの閾値で処方を制限する方策が有益であることを示している一方、対象を絞った集団で実施された他の臨床試験は、低Ｈｂが予後予測に有利でないことを示している（Ｎａｉｄｅｃｈ，２００７、Ｋｅｌｌｅｒｔ，２０１１）。更に、これらの任意閾値は臨床上の個別の状況を考慮せず、十分に正確でないとして異議が唱えられている（Ｋｌｅｉｎ，２０１５）。
【０００５】
全血量を直接正確に測定し、それから血球量及び血漿量を推定することが可能である。しかしながら、この検査はコストが高く、時間がかかり、且つ労力を要するため、稀にのみ実施される。従って、この方法は、特異な疾患（例えば、真性赤血球増加症）に適用されるに過ぎない。最も信頼性の高い測定は、患者の赤血球をクロム５１で標識することにより実施される（Ｇｏｒｅ，２００５）。この検査は血管内液量を測定する黄金律として認められているが、これを毎日繰り返すことは不可能である（Ｇｏｒｅ，２００５）。アルブミンをヨウ素１２５で標識してアルブミン分布容積を測定することにより、体内のアルブミン分布を決定することが可能である。このタンパク質は、赤血球と比べて毛細血管透過性障害に対する感受性がはるかに高い。クロム５１法に見られるように、ヨウ素１２５法を毎日繰り返すことはできず、従って、これは特異な疾患に適用されるのみである。更に、この種の測定は、集中治療室患者の場合のように、患者の体液量状態に関する即時情報が必要な場合に好適でない。
【０００６】
多くの集中治療室では、看護師が毎日の体重又は毎日の体液の出入りの計算によって体液バランスを体系的に測定する。しかしながら、日々の実務では、看護師は、要求される情報の収集に必要な時間を割くことができない。加えて、この方法は正確でなく、更に、細胞外液量の変化を示すパラメータである塩分バランス評価が全く考慮されない。
【０００７】
ヘルスケア、特に集中治療では、組織への酸素供給のモニタリングを改善し、且つより近似的でない方法で治療の均衡をとるため、対象の細胞外液量状態の評価方法を改良することが根本的に必要とされている。更に、正の一日体液及び塩分バランスは浮腫を引き起こし得ると共に、正の一日体液バランスの長期にわたる持続は、急性腎傷害（Ｐａｙｅｎ，２００８）、急性呼吸窮迫症候群（Ｊｏｚｗｉａｋ，２０１３）、外傷（Ｅｌｏｆｓｏｎ，２０１５）、くも膜下出血（Ｋｉｓｓｏｏｎ，２０１５）又は敗血症（Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ，２０１５）を有する重篤疾患患者のより高い死亡率に関連付けられているため、細胞外液量状態の評価方法の改良は決定的に重要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の根底にある技術的問題は、対象の細胞外液量状態を評価する迅速且つ信頼性の高い方法を提供する手段及び方法の提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この技術的問題は、添付の特許請求の範囲において特徴付けられるとおりの、本明細書において以下に提供する実施形態の提供によって解決される。
【００１０】
本発明は、対象の細胞外液量状態を決定する方法に関し、この方法は、前記対象から得られた試料においてプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片、好ましくは中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルを決定することを含む。
【００１１】
更に、本発明は、対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定する方法に関し、この方法は、前記対象から得られた試料においてプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片、好ましくは中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルを決定することを含む。
【００１２】
本明細書において以下及び添付の実施例に報告するとおり、意外にも、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片、好ましくは中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルと対象の細胞外液量状態との間に強い統計的関係があることが予想外にも見出されたことから、本発明は、上記に特定した技術的問題を解決するものである。
【００１３】
添付の実施例では、臨床試験の結果を報告する。この臨床試験は、コルチゾール、カテコールアミン、レニン、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン系（ＲＡＡＳ）、ＣＴ−ｐｒｏ−ＡＶＰ（本明細書では「コペプチン」とも称される）に反映されるバソプレシン、プロエンドセリンに反映されるエンドセリン及びプロ心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＭＲ−ＰｒｏＡＮＰ）に反映されるナトリウム利尿ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、及び例えばＭＲ−ｐｒｏ−ＡＤＭに反映されるプロアドレノメデュリンを含めた、試験したあらゆるバイオマーカーの中で、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが予想外にも対象の細胞外液量状態と強い統計的関係を有することを実証している（例えば、図２、表６を参照されたい）。この関係は、入院後２日目、５日目及び７日目の患者の臨床状況のタイプ、例えば、動脈瘤（例えば、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ））、多発外傷（例えば、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ））、脳傷害又は頭部傷害（例えば、重度脳外傷（ＳＢＴ））に罹患している患者、又はショックを伴う術後腹膜炎などの術後患者（Ｐ）とは無関係であることが報告される。例えば、図３を参照されたい。
【００１４】
従って、本明細書では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが対象の細胞外液量状態の良好なサロゲートであることが示される。
【００１５】
添付の実施例は、高い又は上昇したＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが重篤疾患患者の入院後最初の１週間における細胞外液量中の塩分及び／又は水分上昇と強く相関すること（例えば、図２及び実施例１を参照されたい）、及びほぼ全ての対象に正の体液バランス及び／又は塩分バランス、即ち細胞外液量の上昇があることを示している。細胞外液量の増加は、対象の塩分バランスの変化及び水分バランスの変化として報告される。更に、添付の実施例では、正の体液バランス及び／又は塩分バランスが、例えば全血量又は血漿量と相関しないことが示される。例えば、実施例１を参照されたい。
【００１６】
血漿量を増加させるため、医師は、輸液（例えば、晶質）を患者に投与し得る。無差別的な輸液処置（例えば、積極的輸液療法による）は、細胞外液量に向かう、例えば間質腔内への体液移動が増加し、従って、例えば間質浮腫が引き起こされ得る。添付の実施例は、有効輸液量が組織灌流動脈血液量であることを実証している。
【００１７】
本明細書に示されるとおり、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、体液バランス及び／又は塩分バランスと有意な関係を有する（実施例１〜４、例えば、図２）。詳細には、高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが体液量過負荷の指標であることが実証される。例えば、高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、例えば少なくとも１〜少なくとも１．５ｎｍｏｌ／ｌのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは体液過負荷を示す。更に、高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、並びに例えば少なくとも２７ｇ〜少なくとも３６ｇのＮａ＋及び／又は少なくとも３Ｌ〜少なくとも４Ｌの水分の増加は、医師が直ちに適切な処置を行うべき危険信号である。過剰な塩分及び／又は体液バランスは、重篤疾患患者の罹患及び死亡のリスク要因と考えられる（Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。従って、本発明の方法は、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル（又はｐｒｏＡＤＭ又はｐｒｏＡＤＭの別の断片のレベル）の測定を含め、対象の体液バランス、塩分バランス、血球量状態及び細胞外液量を迅速に、好都合に且つ高い信頼性で決定すること、及び対象が重篤な健康状態を有するかどうかを決定することへの高い医療的潜在能力を有する。
【００１８】
更に、添付の実施例では、追加的なマーカー及びパラメータなどの更なる共変量の評価が単一のマーカーｐｒｏＡＤＭ（又はその断片）、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの判別力を向上させることが報告される。例えば、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ単独は、体液バランスについて３５％の分散でＡＵＣ（「曲線下面積」）０．８２の良好な判別力及び塩分バランスについて４２％の分散でＡＵＣ０．７９の判別力を有する。例えば、実施例２を参照されたい。性別、年齢、血清総タンパク、ＢＭＩ、体重及びＨｂなど、更なるマーカー及び更なるパラメータをＭＲ−ｐｒｏＡＤＭに含めると、体液バランス及びナトリウムバランスの予測が更に改善され、例えば９２％のＲＯＣ曲線となる（表１３及び表１４並びに実施例４を参照されたい）。
【００１９】
多くの集中治療室では、看護師が毎日の体重又は毎日の体液の出入りの計算によって体液バランスを体系的に測定する。これらの方法は正確でない。例えば、添付の実施例では、体重と体液バランスとの間の関係が弱いことが分かった（ｒ２＝０．３３、添付の実施例１を参照されたい）。血漿タンパク又はヘモグロビンなどの先行技術に記載される従来の細胞外液量マーカーは、本明細書において以下に示すとおり塩分及び体液バランスとの関係が弱い（例えば、血漿タンパクとΔＮａ＋についてｒ２＝０．４４又は血漿タンパクとΔＨ２Ｏについてｒ２＝０．３５；ＨｂとΔＮａ＋についてｒ２＝０．１５又はＨｂとΔＨ２Ｏについてｒ２＝０．２４；添付の実施例１を参照されたい）。添付の実施例において、塩分及び体液バランスの測定には生体試料が多く必要となり、且つこの分析は常に２人の医師によって実施及び管理されたため、この手順は非常に多大な時間及び労力を要するものとなった。本明細書では、本発明の方法で用いられるｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが塩分バランス及び／又は体液バランス、従って細胞外液量状態のより速く且つより正確な尺度を提供することが報告される。従って、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを緊急用サロゲートとして用いることができる。様々な急性状況において、例えばショック後の最初の数日は、タイミングが決定的に重要である。急性肺傷害、腹部コンパートメント症候群、及び腎不全などの臓器損傷後に過負荷の発見が遅れると、重度の潜在的に致死的な結果に至り得る。添付の実施例では、また意外にも、多臓器不全スコア（ＳＯＦＡスコア）（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）と塩分及び体液バランスとの間に有意な関係があることも示された。この予測モデルはまた、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが有利なサロゲート及びベッドサイドツールであることも報告する。
【００２０】
従って、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、治療マネジメント／管理及び／又は手術管理の方法に関し、前記対象の前記細胞外液量状態は、全血、血漿、血清又は尿中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを測定することによって決定される。前記対象の細胞外液量状態はまた、前記対象のナトリウム貯留も反映し得る。
【００２１】
本発明は、従来の方法と比べてとりわけ以下の利点を有する。本発明の方法は、対象の細胞外液量状態の決定に関して迅速で実施し易く、且つ正確であり、対象の細胞外液量状態並びに正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスについて信頼性の高い予測を提供する。
【００２２】
本発明の方法の１つの更なる利点は、体液バランス及び塩分バランスがＳＯＦＡスコアと相関することである。従って、本明細書で提供される方法は、正の体液及び／又は塩分バランスによって引き起こされる浮腫に起因する臓器機能障害又は臓器不全に罹患するリスクのある重篤な対象を同定する信頼性の高い且つ簡便な方法を提供する。更に、本発明の方法は、血球量状態の決定が可能である。実施例３及び特に表９は、Ｈｂ単独に基づく血球量の予測値と比較した本発明の方法の改善された予測値を報告する。
【００２３】
更に、本明細書で提供される本発明の方法は、正の塩分バランスの患者を層別化することができ、従って、高血圧、腎不全又は心不全及び肺水腫のリスク要因であるナトリウム貯留を有する患者を層別化することができる。かかる患者は、塩の間質から血管内系への動員を標的とする別の治療が必要であり得る。
【００２４】
意外にも、添付の実施例では、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが対象の細胞外液量状態と有意な統計的関係を有することが示された。従って、本発明は、対象の細胞外液量状態を決定する方法に関し、この方法は、前記対象から得られた試料においてマーカーｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含む。
【００２５】
特定の態様において、本発明は、対象の細胞外液量状態の決定へのマーカー中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の使用に関する。ペプチドのアドレノメデュリン（ＡＤＭ）は、５２アミノ酸を含む血圧降下ペプチドとして発見されたものであり、ヒト褐色細胞腫から単離された（Ｋｉｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。アドレノメデュリン（ＡＤＭ）は、本明細書では配列番号１に示される、１８５アミノ酸を含む前駆体ペプチドとしてコードされる（「プレプロアドレノメデュリン」又は「ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭ」）。ＡＤＭはｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭアミノ酸配列の９５〜１４６位を含み、そのスプライス産物である。
【００２６】
「プロアドレノメデュリン」（「Ｐｒｏ−ＡＤＭ」）は、シグナル配列（アミノ酸１〜２１）を有しないｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭ、即ちｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸残基２２〜２８５を指す。「中央領域プロアドレノメデュリン」（「ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」）はｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸４２〜９５を指す。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸配列は配列番号２に提供される。また、本明細書では、対象の細胞外液量状態の予測など、本明細書に記載される方法にｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭ又はＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのペプチド及びその断片を使用し得ることも想定される。例えば、ペプチド及びその断片は、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸２２〜４１（ＰＡＭＰペプチド）又はｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸９５〜１４６（成熟アドレノメデュリン）を含み得る。ｐｒｏＡＤＭのＣ末端断片（ｐｒｅｐｒｏＡＤＭのアミノ酸１５３〜１８５）はアドレノテンシンと呼ばれる。ｐｒｏＡＤＭペプチドの断片又はＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、例えば５アミノ酸以上を含む。従って、ｐｒｏＡＤＭの断片は、例えば、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ＰＡＭＰ、アドレノテンシン及び成熟アドレノメデュリンからなる群から選択されてもよく、好ましくは、本明細書では、断片はＭＲ−ｐｒｏＡＤＭである。
【００２７】
また、本明細書では、配列番号２に示されるとおり少なくとも７５％の配列同一性、例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭポリペプチドのレベルが決定されることも想定され、ここで、配列同一性の値は高いほど好ましい。本発明において、２つ以上のアミノ酸配列との関連における用語「配列同一性」、「相同性」又は「パーセント相同性」又は「同一」又は「パーセント同一性」又は「パーセンテージ同一性」は、当該技術分野において公知のとおりの配列比較アルゴリズムを用いるか又は手動のアラインメント及び目視検査によって測定されるとおり、比較ウィンドウにわたって（好ましくは完全長にわたって）又は指定された領域にわたって一致が最大となるように比較及びアラインメントしたときに同じであるか、又は同じであるアミノ酸を指定の割合だけ有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。例えば、７０％〜９０％又はそれを超える配列同一性を有する配列は、実質的に同一と見なされ得る。かかる定義はまた、試験配列の相補体にも適用される。好ましくは、記載される同一性は、少なくとも約１５〜約２０アミノ酸長の領域にわたって、より好ましくは少なくとも約２５〜約４５アミノ酸長の領域にわたって、最も好ましくは完全長にわたって存在する。当業者は、例えば、当該技術分野において公知のとおり、ＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータプログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２（１９９４），４６７３−４６８０）又はＦＡＳＴＤＢ（Ｂｒｕｔｌａｇ  Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６（１９９０），２３７−２４５）に基づくものなどのアルゴリズムを用いて配列間／配列中のパーセント同一性をどのように決定し得るかが分かるであろう。
【００２８】
本明細書で使用されるとき、用語「マーカープロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）又はその断片のレベル」は、対象から得られた試料中にあるマーカープロアドレノメデュリン又はその断片の分子実体の分量を指す。換言すれば、このマーカーの濃度は試料において決定される。従って、用語「マーカー中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベル」は、対象から得られた試料中にあるマーカー中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の分子実体の分量を指す。換言すれば、このマーカーの濃度は試料において決定される。上記に記載したとおり、本明細書ではまた、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）の断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを検出及び定量化し得ることも想定される。また、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの断片を検出及び定量化することもできる。ｐｒｏＡＤＭ又はその断片（好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルを決定する好適な方法について、本明細書で以下に詳細に記載する。様々なフォーマットのイムノアッセイ、例えば、サンドイッチ、酵素結合免疫吸着アッセイ、発光イムノアッセイ、迅速検査フォーマット、ポイントオブケア検査に好適なアッセイ及び均一系アッセイ、例えばＫｒｙｐｔｏｒシステム（ＢＲＡＨＭＳ／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）などを利用することができる。更に、質量分析手法を用いてｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片を検出及び定量化することができる。当業者は、本明細書に記載されるマーカーの決定／定量化に好適なアッセイを認識している。
【００２９】
本発明は、対象の細胞外液量状態を決定する方法に関する。本明細書で使用されるとき、細胞外液量は対象の体内水分の一部である。対象の体内水分は体重の約５５〜７５％程を占める。対象の体内水分は、対象の「細胞外液量」と「細胞内液量」とから本質的になる。図１を参照されたい。本明細書で使用されるとき、「細胞内液量」は、サイトゾル又は細胞内液（ＩＣＦ）又は細胞質マトリックスを指し、細胞の内部に見られる液体である。通常、細胞内液量は体内水分の約６０％である。Ｇｕｙｔｏｎ（Ｇｕｙｔｏｎ  Ａｒｔｈｕｒ  Ｃ．，（１９９１），ｐ．２７５）によれば、４０Ｌの体液を含む身体を有する対象は２５Ｌの細胞内液量を有する。本明細書で使用されるとき、「細胞外液量」は、「全血量」と「間質液量」とから本質的になる。通常、細胞外液量は体内水分の約４０％である。従って、約４０Ｌの体液を含む対象は約１５Ｌの細胞外液量を有する（Ｇｕｙｔｏｎ  Ａｒｔｈｕｒ  Ｃ．，（１９９１），ｐ．２７５）。本明細書で使用されるとき、「間質液量」、「間質液」又は「組織液」は、多細胞動物の組織細胞を浸して取り囲んでいる溶液である。通常、間質液量は体内水分の約２８％又は細胞外液量の約７０％である。本明細書で使用されるとき、「全血量」又は「血管内液量」は、「血漿量」と「赤血球量」とから本質的になる。通常、全血量は体内水分の約１２％であり、約５０％を血漿（細胞外液量の約１５％又は体内水分の６％）が占め、及び約５０％を血球量（細胞外液量の約１５％）が占める。本明細書で使用されるとき、「赤血球量」はまた「血球量」とも称される。本明細書で使用されるとき、「血漿量」は、「血漿（ｂｌｏｏｄ  ｐｌａｓｍａ）」又は「血漿（ｐｌａｓｍａ）」の容積を指し、通常、全血中に血球細胞を懸濁状態で保持している淡黄色の液状血液成分である。これにより、血漿は血球細胞の細胞外マトリックスとなる。血漿は身体の全血量の約５５％を占める。血漿は細胞外液（細胞外にある全ての体液）の血管内液部分である。血漿は、ほとんどが水であり（最大９５体積％）、溶解タンパク質（６〜８％）（即ち血清アルブミン、グロブリン、及びフィブリノゲン）、グルコース、凝固因子、電解質（Ｎａ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ＨＣＯ３−、Ｃｌ−等）、ホルモン、及び二酸化炭素（血漿が排泄物輸送の主要な媒体である）を含有する。血漿はまた、人体のタンパク質貯蔵体としての役割も果たす。血漿は、電解質を平衡した形態に保ち且つ身体を感染及び他の血液障害から防御する血管内浸透圧効果において重要な役割を果たす。本明細書で使用されるとき、「赤血球量」はまた、平均血球体積、又は平均細胞体積（ＭＣＶ）（これは赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｏｒｐｕｓｃｌｅ）（又は赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ））の平均容積の尺度である）とも称される。
【００３０】
添付の実施例では、毎日塩分バランス及び／又は体液バランスを計算して細胞外液量の変化を推定することが報告される。添付の実施例１を参照されたい。添付の実施例において実証されるとおり、対象の体液バランス及び塩分バランスを決定するため、塩分及び水分（含有量）に関して前日の全流入−流出評価が毎日行われる。そこでは、必要に応じて例えば利尿、回腸造瘻術及び脳室ドレナージを決定することにより、対象のナトリウム及び／又は水分の喪失を測定できることが示される。ナトリウム（Ｎａ＋）の喪失は、液類から測定することができ、及び塩分寄与から推測することができる。しかしながら、塩分バランスの測定は特に難しい。流入水分（例えば、経腸栄養又は１日の晶質又はコロイド輸液の合計）と水分喪失との差も計算される。不感烝泄は体温の関数として推定される。添付の実施例では、「ナトリウム」又は「Ｎａ＋」の増加又は減少（本明細書では「ΔＮａ＋」、「Δナトリウム」又は「ナトリウムバランス」とも称される）及び水分又はＨ２Ｏの増加又は減少（本明細書では「ΔＨ２Ｏ」又は「体液バランス」とも称される）を毎日計算し、それぞれ累積「体液バランス」又は「塩分バランス」として前日の結果と合計した。
【００３１】
添付の実施例では、意外にも、対象の試料、例えば血漿試料中のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが体液バランス及び／又は塩分バランスと統計的関係を有することが実証された（図２）。従って、本発明は、対象の体液バランス、塩分バランス及び細胞外液量状態を決定する方法に関し、この方法は、前記対象から得られた試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、体液バランス及び／又は塩分バランスが決定され、前記体液バランス及び／又は塩分バランスが対象の細胞外液量状態を決定／同定／反映する。高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは高い体液バランス（有意な体液増加）又は高い塩分バランス（有意な塩分増加）と相関することが分かった。例えば、図２を参照されたい。従って、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを利用して、対象の塩分バランス及び体液バランスを予測することができる。換言すれば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを体液バランス及び／又は塩分バランスの直接的なサロゲートとして使用することができる。従って、用語「（ＭＲ−）ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づく」とは、（ＭＲ−）ｐｒｏＡＤＭのレベルによって対象の体液バランス及び／又は塩分バランスが同定／予測／決定されることを意味する。
【００３２】
添付の実施例では、塩分バランス及び／又は体液バランスを計算して細胞外液量の変化又は変動を推定する。体液バランス及び／又は塩分バランスは細胞外液量と相関することが知られている（Ｃｈａｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。従って、体液バランス及び／又は塩分バランスが細胞外液量状態の変化を決定する。細胞外液量状態とは、細胞外液量中にある体液を指す（図１）。対象の細胞外液量は対象の体内水分の約４０％である。対象の細胞外液量状態は対象の体液バランス及び／又は塩分バランスと相関する。従って、体液バランス又は塩分バランスの変動が細胞外液量の変動を表す。従って、対象の体液バランス及び／又は塩分バランスの変動から対象の細胞外液量状態を推定／決定することが可能である。換言すれば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは対象の体液バランス及び／又は塩分バランスの直接的なサロゲートであり、従って、それは対象の細胞外液量状態の指標である。本明細書で使用されるとき、「体液バランス」は、対象の「水分変動」、「水分変化」、「デルタ水分」又は「ΔＨ２Ｏ」を指す。換言すれば、「体液バランス」は、対象の「体液」又は「水分」の流入と流出との差である。本発明の好ましい態様において、体液バランスは対象の体液／水分の流入と流出との差である。更に一層好ましい態様において、体液バランスは、対象の入院中における体液／水分の流入と流出との差を反映する累積体液バランスである。本明細書で使用されるとき、用語「入院中」又は「入院１回当たり」は、患者が重篤な健康状況にある期間を意味する。従って、本明細書で使用されるとき、対象の入院は、対象が重篤状況及び／又は症状が軽減されるまでＩＣＵに入っている期間を意味し得る。或いは、この用語は、患者において例えば４Ｌの正の体液バランス、又は例えば３６ｇの正の塩分バランスが蓄積した期間に関する。換言すれば、期間とは、この態様では、対象において例えば４Ｌの体液又は３６ｇの塩の増加が蓄積した期間が意味される。添付の実施例では、体液バランス及び塩分バランスを毎日計算した。従って、体液バランスは、最初の１日以内（１日当たり）における対象の体液／水分の流入と流出との差である。好ましい態様において、体液バランスは累積体液バランスであり、これは、最初の２日間、更により好ましくは最初の５日間、最も好ましくは最初の１週間以内における対象の体液／水分の流入と流出との差、即ち７日後の対象の体液／水分の流入と流出との差である。本明細書では、対象の水分の増加／上昇とは、体液／水分の流出が水分の増加よりも少ないことに伴い、それ以前の時点（例えば、前日）と比較して多い水分を有する対象を指すことが理解される。本明細書では、対象の水分の減少／低下とは、それ以前の時点（例えば、前日）と比較して少ない水分を有する対象を指すことが理解される。本明細書では、対象の水分の変化がない又は有意な変化がないとは、それ以前の水分含有量（例えば、前日）と比較して同一又は同様の水分含有量を有する対象を指すことが理解される。好ましい態様において、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは幾つかの時点で、例えば、治療施設、特に集中治療室への入院後０日目（「Ｄ０」）、２日目（「Ｄ２」）、５日目（「Ｄ５」）及び／又は７日目（「Ｄ７」）に決定される。本明細書では、マーカー及び／又はパラメータのレベルはいつでも及びどのような間隔でも、例えば毎時又は毎日（例えば、入院時Ｄ０、次に対象のＩＣＵへの入院後１日目（Ｄ１）、２日目（Ｄ２）、３日目（Ｄ３）、４日目（Ｄ４）、５日目（Ｄ５）、６日目（Ｄ６）及び／又は７日目（Ｄ７）など）又はこれらの組み合わせで決定し得ることが理解される。
【００３３】
添付の実施例では、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが対象の体液バランスと相関することが示される。図２を参照されたい。本明細書では、高レベルのｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが対象の体液の増加／上昇の指標であることが理解される。本明細書で使用されるとき、「正の体液バランス」を有する対象とは、体液の増加が体液の減少よりも多い対象を指す。従って、対象は体液／水分の流入と流出とが不均衡である。従って、正の体液バランスの対象は体内に水分／体液が蓄積する。従って、この対象は体重が増加する。換言すれば、水分含有量の上昇又は水分の増加がある対象は正の体液バランスを有する。例えば、輸液で治療される対象は、体液／水分が血管系から出る体液移動を有し得る。この体液は対象の細胞外液量、例えば間質液量に向かって移動し得る。例えば、蘇生３日後の患者の１０Ｌを超える細胞外液量の過負荷は体内に封じ込められ、排泄されるのに３週間必要であることが示されている（Ｃｈａｐｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．；Ａ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ；２００８，１０９：７２３−４０）。解剖学的喪失は、病的量での生理現象、即ち間質腔内への病的体液蓄積と見なされる（Ｃｈａｐｐｅｌｌ、前掲）。血管から間質腔に向かうインタクトな血管関門の生理的体液移動に含まれるタンパク質及び主小分子はごく少量のみであると見なすことができる。この移動がリンパ系によって定量的に管理されるとき、生理的移動は間質浮腫などの浮腫を生じない。しかしながら、リンパ系が例えば晶質などの輸液の過剰適用によって圧倒されると、浮腫が生じ得る。間質液量と機能的及び解剖学的に分かれている体液コンパートメントに相当する非解剖学的な第３の空間喪失もある。この第３の空間への喪失は、通常、体液を全く又はほとんど含まない空間に例えば外科手技又は外傷によって引き起こされる体液蓄積であり得る。例えば、第３の空間喪失は腹膜腔、腸、及び外傷組織に向かうものであり得る。
【００３４】
本発明の特定の態様において、３〜４ｋｇの重量増加の正の体液バランス（入院中、例えば、最初の１日間、好ましくは最初の２日間、更により好ましくは最初の５日間、最も好ましくは最初の１週間の）は、死亡率及び罹患率が上昇する閾値と見なされる。従って、本発明の特定の態様において、少なくとも３Ｌ、好ましくは少なくとも４Ｌの体液増加は重篤と見なされる。細胞外液量の体液の少なくとも３Ｌ、好ましくは少なくとも４Ｌの増加は重篤と見なされる。重篤と見なされる体液増加はまた、対象の性別、年齢又は体重などの患者特性にも依存する。例えば、成人女性の体内水分は成人男性の体内水分よりも５〜１０％少ない。従って、本明細書では、体重が軽い患者ほど（例えば、女性）、体液及び／又は塩分の増加に一層敏感に反応し得ることが理解される。更に、体液コンパートメントにおける体液の分布は対象の年齢に依存し、例えば、それは新生児の７５％から成人の５５％まで低下する。従って、少ない体液増加、例えば３Ｌ以下の体液の増加が女性又は老齢対象では既に重症転帰となり得る。他方で、体重が重い対象は（例えば、男性）、体液及び／又は塩分増加に対して前記軽い対象ほど敏感でない可能性がある。従って、かかる対象では死亡リスクは低下し得る。
【００３５】
別の態様において、少なくとも４Ｌの正の体液バランスが重篤と見なされる。換言すれば、少なくとも４Ｌの正の体液バランスは、対象が重篤と見なされる細胞外液量状態を有することを示す。詳細には、添付の実施例において、水分、例えば少なくとも４Ｌの水分の高い増加が危険信号であり、重篤な細胞外液量状態、従って重篤な対象の指標であることが報告される。内皮損傷及び／又は塩分貯留は体液バランスの増加に関与し得る。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、「負の体液バランス」を有する対象とは、体液喪失が体液増加よりも多い対象を指す。従って、この対象は水分又は体液を失い、従って体重が減少する。換言すれば、水分含有量の低下又は水分喪失を有する対象は負の体液バランスを有する。本明細書で使用されるとき、同一又は同様の水分含有量を有する対象とは、「同一又は同様の体液バランス」を有する対象を指す。かかる対象は体液マネジメントの均衡がとれており、従って体液バランスは釣り合っているか又は正常である。換言すれば、体液／水分の流入が体液／水分の流出と同一又は同様である。換言すれば、対象は正常な体液バランスを有する。
【００３７】
本発明との関連において、対象の体液／水分バランスは、例えば血液増量剤を含め、経静脈療法によって例えば増加させることができる。特に好ましい態様において、対象の水分増加とは、それ以前の時点において決定された水分／体液と比較してより多くの水分／体液を有する対象を指し、ここで、より多くの水分／体液を有する前記対象とは、正の体液バランスを有する対象を指す。添付の実施例では、高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、例えば少なくとも１ｎｍｏｌ／ｌが水分増加、即ち正の体液バランス、従って上昇した細胞外液量状態の指標であることが示され、ここで、前記細胞外液量状態は重篤と見なされる。換言すれば、少なくとも４Ｌの正の体液バランスは、対象が重篤と見なされる細胞外液量状態にあることを示す。
【００３８】
本発明は、本明細書で提供される方法に関し、ここで、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、塩分バランスが決定され、前記塩分バランスが細胞外液量状態を決定／同定する。本明細書で使用されるとき、「塩分バランス」又は「ナトリウムバランス」は、「ナトリウムの変動」、「ナトリウムの変化」、「デルタナトリウム」又は「ΔＮａ＋」を指す。「塩分バランス」は対象の「塩分」又は「ナトリウム」の流入と流出との差である。本発明の好ましい態様において、塩分バランスは対象の体液／水分の流入と流出との差である。更に一層好ましい態様において、塩分バランスは、対象の入院中の塩分／ナトリウムの流入と流出との差を反映する累積塩分バランスである。特定の態様において、塩分バランスは、最初の１日以内における１日当たりの対象の塩分／ナトリウムの流入と流出との差である。好ましい態様において、塩分バランスは、最初の２日間、更により好ましくは最初の５日間、最も好ましくは最初の１週間以内の対象の塩分／ナトリウムの流入と流出との差、即ち７日後の差である。添付の実施例では、意外にも、塩分バランスが対象の試料、例えば血漿試料中のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと統計的関係を有することが実証された（図２Ｂ）。更に、添付の実施例では、対象の体液バランスが塩分バランスと統計的に関連していることが示される。実施例１を参照されたい。本明細書では、対象の塩、例えばナトリウムの増加／上昇とは、より高量／高含有量の塩、例えばナトリウムを有する対象を指すことが理解される。本明細書で使用されるとき、より高量／高含有量の塩を有する対象とは、正の塩分バランスを有する対象を指す。従って、「正の塩分バランス」を有する対象とは、本明細書では、対象の塩の喪失よりも多い塩の増加を有する対象を意味する。従って、この対象は、塩分／ナトリウムの流入と流出とが不均衡である。従って、正の塩分バランスを有する対象は体内に塩分／ナトリウムが蓄積する（例えば、塩分貯留）。換言すれば、塩分／ナトリウム量／含有量の上昇又はナトリウム／塩分の増加を有する対象は正のナトリウムバランスを有する。本明細書で使用されるとき、「ナトリウム貯留」又は「塩分貯留」は腎不全又は心不全の兆候であり得る。塩分貯留は体液／水分貯留及び血液量増加、血圧上昇及び炎症を引き起こし得る。理論によって拘束されるものではないが、炎症は塩分貯留を引き起こし得る。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは塩分及び／又は体液バランスと強い統計的関係を有するため、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（又はｐｒｏＡＤＭ又はその別の断片）は、炎症（又は炎症によって誘発される血管損傷及び透過性）の予後予測マーカーとして利用することができる。
【００３９】
本明細書で使用されるとき、「負の塩分バランス」を有する対象とは、塩分、例えばナトリウムの喪失が塩分増加よりも多い対象を指す。従って、対象は塩分又は体液を喪失し、従って体重が減少する。換言すれば、塩分含有量の低下又は塩分の喪失を有する対象は負の塩分バランスを有する。本明細書で使用されるとき、同一又は同様の塩分含有量を有する対象は、「同一又は同様の塩分バランス」を有する対象を指す。かかる対象は塩分マネジメントの均衡がとれており、従って塩分バランスは釣り合っているか又は正常である。換言すれば、塩分／ナトリウム流入が塩分／ナトリウム流出と同一又は同様である。換言すれば、対象は正常な塩分バランスを有する。
【００４０】
一態様において、正の塩分バランスとは、対象がそれ以前の時点と比較してより高い塩分含有量を有し、従って細胞外液量状態が上昇していることを意味する。添付の実施例では、高レベルの、例えば１ｎｍｏｌ／ｌより高いＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが、塩分増加、正の塩分バランス、従って上昇した細胞外液量状態の指標であることが示され、ここで、前記上昇した細胞外液量状態は重篤と見なされる。詳細には、添付の実施例では、高い塩分増加、例えば少なくとも２７ｇ、好ましくは少なくとも３６ｇのナトリウムの増加が危険信号であり、重篤な患者の指標であることが報告される。従って、本発明の特定の態様では、少なくとも約２７〜少なくとも約３６ｇの塩分増加が重篤と見なされる。本発明の好ましい態様では、少なくとも３６ｇの正の塩分バランスが重篤と見なされる。換言すれば、少なくとも２７ｇ、又は好ましくは少なくとも３６ｇの正の塩分バランスは、対象が重篤と見なされる細胞外液量状態を有することを示す。
【００４１】
本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、対象の血球量状態を決定する。詳細には、本明細書で提供される方法は、対象の血球量が２０ｍｌ／ｋｇ未満であるかどうかの決定を可能にする。２０ｍｌ／ｋｇ未満の血球量、又は好ましくは１５ｍｌ／ｋｇ未満の血球量は、重篤な血球量状態の指標である。特定の態様において、２０ｍｌ／ｋｇ未満の対象の血球量は、重篤な細胞外液量状態にある対象の予測性があり、前記重篤な細胞外液量状態は対象の重篤な健康状態の指標である。従って、２０ｍｌ／ｋｇを下回る血球量は、対象が正の体液バランスを有することを示し、ここで、前記正の体液バランスは重篤な細胞外液量状態の指標である。
【００４２】
本明細書で提供される方法は、対象の血球量状態を決定し、この方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、試料中のヘモグロビンレベル、対象のボディマスインデックス、対象の性別、対象の年齢、試料中の血清総タンパクレベル及び任意選択的に対象の体重を決定することを含む。
【００４３】
添付の実施例では、統計分析に更なるマーカー又はパラメータを含めると、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの予測力が向上することが報告される。例えば、実施例１〜４を参照されたい。統計分析により、意外にも、対象の細胞外液量状態と有意な関係を有するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを含むコンセンサスモデルが見出された。本明細書で使用されるとき、コンセンサスモデルは２つ以上のマーカー及びパラメータを含み、前記コンセンサスモデルに基づき、対象の体液バランス及び／又は塩分バランス及び／又は細胞外液量状態を決定することができる。換言すれば、特定の態様において、本発明は、マーカー及びパラメータのパネル（又はマルチパネル）が決定される方法に関する。従って、本発明との関連において、更なるパラメータ及び／又はマーカーが決定され得る。換言すれば、本発明に係る方法は、他のマーカー、パラメータ及び／又は方法と組み合わせて行うことができる。これは、本発明に係る測定方法が特に有利には多重パラメータ診断として行われ得ることを意味する。これにより、好ましくは血管拡張因子の群から選択される少なくとも１つの更なるマーカーが追加で決定される。
【００４４】
本発明の特定の態様において、本明細書で提供される方法は、ヘモグロビン、血清総タンパク、レニン、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド（ｐｒｏＡＮＰ）、Ｃ末端プロ−アルギニン−バソプレシン（ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰ）タンパク質、エリスロポエチン、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン、コルチゾール、アドレナリン、エピネフリン、カテコールアミン類及びプロエンドセリン−１（ｐｒｏ−ＥＴ−１）からなる群から選択される少なくとも１つの更なるマーカーのレベルを決定することを含む。
【００４５】
特定の態様において、本発明は、ヘモグロビン、血清総タンパク、レニン、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド（ｐｒｏＡＮＰ）、Ｃ末端プロ−アルギニン−バソプレシン（ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰ）タンパク質、エリスロポエチン、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン、コルチゾール、アドレナリン、エピネフリン、カテコールアミン類及びプロエンドセリン−１（ｐｒｏ−ＥＴ−１）からなる群から選択される１つの更なるマーカーの使用に関する。
【００４６】
特定の好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、マーカー「ヘモグロビン（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ）」（本明細書では「ヘモグロビン（ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ）とも称される」）のレベルを決定することを更に含む。「ヘモグロビン」又は「Ｈｂ」は、脊椎動物の赤血球中にある鉄含有酸素運搬金属タンパク質である。Ｈｂ濃度は、従来の血液検査に関連して、通常、全血球計算の一部として測定され得る。正常Ｈｂ濃度は、男性について１３．８〜１８．０ｇ／ｄＬ（１３８〜１８０ｇ／Ｌ、又は８．５６〜１１．１７ｍｍｏｌ／Ｌ）；女性について１２．１〜１５．１ｇ／ｄＬ（１２１〜１５１ｇ／Ｌ、又は７．５１〜９．３７ｍｍｏｌ／Ｌ）；小児について１１〜１６ｇ／ｄＬ（１１１〜１６０ｇ／Ｌ、又は６．８３〜９．９３ｍｍｏｌ／Ｌ）；又は妊婦について１１〜１４ｇ／ｄＬ、９．５〜１５（妊娠中の通常値）（１１０〜１４０ｇ／Ｌ、又は６．８３〜８．６９ｍｍｏｌ／Ｌ）である。本発明との関連において、低ヘモグロビンとは、ある人のヘモグロビンレベルが、その年齢及び性別についての正常限界の下限（上記の正常値範囲を参照されたい）を下回ることを意味する。例えば、１９歳男性は、検出された血液値が１３．６ｇ／ｄｌを下回る場合に低ヘモグロビンレベルを有する。本発明との関連において、高ヘモグロビンレベルとは、測定されたヘモグロビンレベルがその人の年齢及び性別についての正常限界の上限（上記の正常値を参照されたい）を上回ることを意味する。例えば、検出されたヘモグロビンレベルが１８．２ｇ／ｄｌを上回る１９歳男性は高ヘモグロビンレベルを有する。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、「血清総タンパク」は、血中にあるタンパク質の総量を指す。好ましい態様において、血清総タンパクは、血清又は血漿中にあるタンパク質の総量を指す。「血清総タンパク」はルーチンの検査で測定され、ＩＣＵ及び他の医療サービスで使用される。血清又は血漿中における２つの主要なタンパク質成分は、アルブミン及びグロブリンである。グロブリンは、α、β、及びγ型と呼ばれる種々のタンパク質で構成される。血清総タンパクの検査では、総タンパク量、アルブミン、及びグロブリンについて別個の値が報告される。血清総タンパクは、例えば、ビウレット試薬によるか、又は屈折率測定法によって決定することができる。低タンパク血症は、肝不全、栄養不良に起因する合成欠損、又は腎性喪失によって起こる。血清タンパク質濃度の上昇には主な原因が２つあり、体内の水分が減っている脱水及び血液量低下である。最も一般的には、過剰産生されるタンパク質は免疫グロブリンであり、感染及び血液新生物ではそのレベルが上昇し得る。血清総タンパクの正常範囲は約６０〜約８０ｇ／ｌである。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、「レニン」又は「アンジオテンシノゲナーゼ」は、細胞外液量（即ち、血漿、リンパ液及び間質液の量）を媒介する体内のレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）、及び動脈血管収縮に関与する酵素である。従って、これは生体の平均動脈圧を調節する。レニンレベルは、好ましくは対象の血漿又は血清中で測定される。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド」又は「ｐｒｏＡＮＰ」は、１２８アミノ酸を含むプロホルモンを指す。本明細書で使用されるとき、１２８アミノ酸を含むプロホルモン（ｐｒｏＡＮＰ）のＣ末端部の２８アミノ酸（９９〜１２６）を含むペプチドが実際のホルモンＡＮＰと称される。そのプロホルモンｐｒｏＡＮＰからＡＮＰが放出されると、ｐｒｏＡＮＰの残りのより大きい部分ペプチドである、９８アミノ酸からなるＮ末端ｐｒｏＡＮＰ（ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ；ｐｒｏＡＮＰ（１〜９８））の等モル量が循環中に放出される。ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰは大幅に向上した半減期及び安定性を有するため、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰは、診断、経過観察及び療法管理の検査パラメータとして使用することができる。例えば、Ｌｏｔｈａｒ  Ｔｈｏｍａｓ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｌａｂｏｒ  ｕｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｅ，５ｔｈ  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ｅｄ．，ｓｕｂ−ｃｈａｐｔｅｒ  ２．１４  ｏｆ  ｃｈａｐｔｅｒ  ２，Ｋａｒｄｉａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ，ｐａｇｅｓ  １１６−１１８、及び国際公開第２００８／１３５５７１号パンフレットを参照されたい。ｐｒｏＡＮＰのレベルは、好ましくは対象の血漿又は血清中で測定される。
【００５０】
本明細書で使用されるとき、エンドセリン−１は、プロエンドセリン−１と呼ばれる大型の前駆体分子に由来する。プロエンドセリン−１はタンパク質分解プロセシングを受けて記載されるとおりの様々な断片になる（欧州特許出願公開第２  １０８  ９５８  Ａ１号明細書；Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．２００５  Ｄｅｃ；２６（１２）：２４８２−６）。これらの断片は血液循環中でタンパク質分解に供され、これは断片のタイプ並びに循環中に存在するプロテアーゼのタイプ及び濃度／活性に応じて急速に起こることも又は緩慢に起こることもある。従って、本発明によれば、少なくとも１２アミノ酸のこれらの断片、好ましくは少なくとも２０アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０アミノ酸の断片のいずれかのレベルが測定され得る。好ましくは、Ｃ末端ｐｒｏ−ＥＴ−１（ＣＴ−ｐｒｏＥＴ−１）又はその断片が測定され得る。エンドセリン−１のレベルは、好ましくは対象の血漿又は血清中で測定される。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、「バソプレシン」は「ＡＶＰ」を指す。バソプレシンは強力な血管収縮剤である。そのプロホルモンのアッセイが尿崩症の症例に関する予後予測及び診断因子として調べられている。バソプレシン又は抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）は、体内水分及び水分バランスの調節における鍵の１つである。その分泌（これは一部にはストレスに関連している）は動脈圧の上昇及び水分の吸収を引き起こし、低ナトリウム血症の発症リスクをもたらす。しかしながら、ＡＤＨは不安定である。更に、その濃度はその血小板への結合に依存し、従って変動し易い。プロホルモンのＣ末端部分「ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰ」は、より安定性の高いＡＤＨ前駆体であり、その血漿濃度はＡＤＨ分泌を反映する（Ｓｔｒｕｃｋ，２００５、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ，２００７）。本明細書で使用されるとき、このプロホルモンのＣ末端部分は「ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰ」又は「コペプチン」と称される。敗血症性ショック又は出血後の血漿レベルの上昇は血液浸透圧及び死亡率と相関する（Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ，２００７）。ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰのレベルは、好ましくは対象の血漿又は血清中で測定される。
【００５２】
アンジオテンシンＩは、酵素アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）により、主に肺内のＡＣＥ（内皮細胞及び腎臓上皮細胞にも存在するが）を介して２つのＣ末端残基が除去されるとアンジオテンシンＩＩに変換される。アンジオテンシンＩＩは、エンドクリン、オートクリン／パラクリン、及びイントラクリンホルモンとして作用する。アンジオテンシンＩＩのレベルは、好ましくは対象の血漿又は血清中で測定される。
【００５３】
特定の態様において、本明細書で提供される方法は、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ＩＧＳ  ＩＩ、乳酸塩、ナトリウム摂取量、液体摂取量及び患者群からなる群から選択される対象の少なくとも１つのパラメータを決定することを更に含む。特定の好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、ボディマスインデックス、体重、年齢及び性別からなる群から選択される対象の少なくとも１つのパラメータを決定することを更に含む。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、ボディマスインデックス（ＢＭＩ）は、対象の質量（体重）及び身長から求められる値である。ＢＭＩは、対象のボディマス、即ち対象の体重を身長の二乗で除したものとして定義され、体重がキログラム単位及び身長がメートル単位である結果としてｋｇ／ｍ２単位で普遍的に表される。ＢＭＩはまた、表又はグラフ（参照値）を用いて決定されてもよく、これは、ＢＭＩを異なるＢＭＩカテゴリに関する等高線又は色を用いて質量及び身長の関数として表示するものであり、２つの異なる測定単位を使用し得る。ＢＭＩは、個人の組織塊（筋肉、脂肪、及び骨）の量を定量化し、次にその人をその値に基づいて低体重、普通体重、過体重、又は肥満に分類しようとする試みである。一般に認められているＢＭＩ範囲は、低体重：１８．５未満、普通体重：１８．５〜２５、過体重：２５〜３０、肥満：３０超である。本発明の特定の態様では、ＢＭＩは０日目、例えば患者入院時に決定される。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「体重」はｋｇ単位の対象の質量を指す（ＢＭＩを参照されたい）。本発明の特定の態様では、体重は０日目、例えば患者入院時に決定される。本発明との関連において、普通体重はデビン（Ｄｅｖｉｎ）の式又はハムウィ（Ｈａｍｗｉ）法に従って理論的に計算することができる。ハムウィ（Ｈａｍｗｉ）法によれば、男性の理想体重は４８ｋｇ＋１．５ｍを超える分について２．５４ｃｍ毎に２．７ｋｇである。女性について、理想体重は４５ｋｇ＋１．５ｍを超える分について２．５４ｃｍ毎に２．３ｋｇである。これらの正常値を下回る又は上回る値は、重篤な対象であるリスクが上昇する。
【００５６】
本明細書で使用されるとき、「年齢」は、年単位での個人が生きている時間の長さを指す。好ましい態様では、このパラメータは、本方法において、年齢の二乗及び三乗、即ち年齢２及び年齢３を加えることにより重み付けされる。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「ＩＧＳ  ＩＩ」（「簡易重症度指標」の略称である）又は「ＳＡＰＳ  ＩＩ」（「簡易急性生理学的スコアＩＩ」の略称である）は、疾患又は障害の重症度の分類体系を指す（Ｌｅ  Ｇａｌｌ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ａｃｕｔｅ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｓｃｏｒｅ（ＳＡＰＳ  ＩＩ）ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ／Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｓｔｕｄｙ．ＪＡＭＡ．１９９３；２７０（２４）：２９５７−６３を参照されたい）。「ＩＧＳ  ＩＩスコア」は１２個の生理学的変数及び３個の疾患関連変数で構成される。ポイントスコアは、１２個のルーチンの生理学的測定値、過去の健康状態に関する情報及びＩＣＵへの入院時に得られる何らかの情報から計算される。ＩＧＳ  ＩＩは、任意の時点、好ましくは２日目に決定することができる。「最悪の」測定値は、最も高いポイント数に関係する尺度として定義される。ＳＡＰＳ  ＩＩスコアは０〜１６３ポイントの範囲である。この分類体系は、以下のパラメータ：年齢、心拍数、収縮期血圧、体温、グラスゴーコーマスケール、機械的換気又はＣＰＡＰ、ＰａＯ２、ＦｉＯ２、尿排出量、血中尿素窒素、ナトリウム、カリウム、重炭酸塩、ビリルビン、白血球、慢性疾患及び入院タイプを含む。死亡率とＳＡＰＳ  ＩＩ総スコアとの間にはシグモイド関係がある。対象の死亡率は２９ポイントのＳＡＰＳＩＩスコアで１０％であり、死亡率は４０ポイントのＳＡＰＳＩＩスコアで２５％であり、死亡率は５２ポイントのＳＡＰＳＩＩスコアで５０％であり、死亡率は６４ポイントのＳＡＰＳＩＩスコアで７５％であり、死亡率は７７ポイントのＳＡＰＳＩＩスコアで９０％である（Ｌｅ  Ｇａｌｌ、前掲）。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、「液体摂取量」は、所与の時間内、例えば２４時間以内における対象の体液摂取量を指す。例えば、患者又は対象の体液摂取量は輸液又は補液蘇生であり得る。好ましくは、液体摂取量は０日目、換言すれば患者入院時又はその後に決定される。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、対象の「性別」は対象の生物学的性を指し、ここで、対象は男性又は女性のいずれかである。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、「ナトリウム摂取量」は、生物が栄養（食物及び液体）又は輸液などの外部供給源から受け取る塩分、又は好ましくはナトリウム、例えば塩化ナトリウムの総量を指す。好ましくは、ナトリウム摂取量は０日目、換言すれば患者入院時又はその後に決定される。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、「乳酸塩」又は「最高乳酸塩」は、血中で測定される最高乳酸濃度を指す。通常、乳酸濃度は毎日又は更にはそれより高い頻度で評価される。血中の乳酸濃度は乳酸オキシダーゼ分光光度法によって決定することができる。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、「全血量」、「ＴＢＶ」又は「ＴＶ」は、クロム５１（Ｃｒ５１）で標識した赤血球を用いて測定することができる。全血量は、任意の時点、特に１日目〜３日目、例えば３日目、及び／又は６日目〜１０日目、例えば１０日目に測定することができる。本明細書では、患者自身の血液をクロム５１（Ｃｒ５１）で放射標識し、放射活性標識された赤血球を選択することが想定される。次に既知量の放射活性標識赤血球を全血循環中に再注入する。例えば、２時点、例えば１０分及び３０分で動脈ラインにおいて２つの試料を実施することができる。ｍＬ又はｍＬ／ｋｇ単位の全血量（ＴＢＶ）を推定するため、これらの２つの試料の放射活性を測定し、患者の体重を決定する（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ヘマトクリット数及び測定された全血量が、（ｍＬ又はｍＬ／ｋｇ）単位の赤血球量（ＲＢＣＶ）及びｍＬ又はｍＬ／ｋｇ単位の血漿量（ＰＶ）を定義する。正常値（±２０％）は、ＴＢＶについて約７２±１４ｍＬ／ｋｇ、ＲＢＣＶについて約３２±６ｍＬ／ｋｇ、及びＰＶについて約４０±８ｍＬ／ｋｇである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【００６３】
「血漿量」又は「ＰＶ」はヨウ素１２５を用いて測定し得る（ＰＶＩ１２５）。血漿量は、任意の時点、例えば７日目に測定し得る。添付の実施例では、ＰＶＩ１２５は７日目に測定する。ヨウ素１２５（Ｉ１２５）による放射標識アルブミンの規定量を患者に注入し、注入後の幾つかの時点、例えば、１０分、３０分及び２時間に試料を採取する（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。Ｉ１２５によって測定したＰＶの正常値は約４５±１０ｍＬ／ｋｇである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。一般に、Ｉ１２５−アルブミンによって測定した血漿量は、Ｃｒ５１−赤血球によって測定した血漿量よりもやや多く、これはアルブミンの分布容積が赤血球より大きいためである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「患者群」又は「群」は、対象がその疾患パターン又は医学的像に従って分類されることを意味する。添付の実施例で使用されるとき、対象は４群、即ち、重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）及びショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）に分類される。
【００６５】
特定の態様において、本方法は、対象の細胞外液量状態を決定し、この方法は、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、性別、ヘモグロビン、血清総タンパク、ＩＧＳ  ＩＩスコア、体液摂取量及びナトリウム摂取量からなる群から選択される少なくとも１つのマーカー及び／又はパラメータを決定することを含む。添付の実施例では、ランダムフォレスト分析を用いて、生じる誤差が最も小さいマーカー及びパラメータの組み合わせを選択し得ることが実証される。本明細書では、意外にも、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを対象のボディマスインデックス、体重、年齢（年齢２及び年齢３）及び性別、ヘモグロビン及び血清総タンパクと組み合わせて用いることにより、対象の細胞外液量状態の予測に関する最良のモデルが実現することが示される。従って、本発明の最も好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定することを含む。添付の実施例４に実証されるとおり、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、血清総タンパク及びヘモグロビンなどのマーカーは、例えば体液バランスについて０．９４のＡＵＣの良好な予測力を有する。例えば、表１３及び表１４を参照されたい。対象のボディマスインデックス、体重、年齢及び性別などのパラメータをマーカーに追加すると、ＡＵＣが、例えば体液バランスについて０．９５に改善される。対象のボディマスインデックス、体重、年齢及び性別などのパラメータ単独は、例えば体液バランスについて０．８８のＡＵＣを有する。従って、本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別を決定することを含む。本発明の好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定することを含む。本発明の最も好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定することを含む。
【００６６】
添付の実施例、詳細には実施例３及び４に報告されるとおり、マーカー及びパラメータの種々の組み合わせを用いて対象の細胞外液量状態を決定し得る。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、対象の体液バランスを決定し、この方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別、試料中のヘモグロビンレベル、試料中の血清総タンパクレベル、対象のＩＧＳ  ＩＩスコア及び体液摂取量を決定することを含む。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、対象の塩分バランスを決定し、この方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別、試料中のヘモグロビンレベル、試料中の血清総タンパクレベル、試料中のナトリウム摂取量レベル、対象のＩＧＳ  ＩＩスコア及び体液摂取量を決定することを含む。添付の実施例３に示されるとおり、パラメータＩＧＳ  ＩＩ及び液体摂取量がなくても統計分析への効果は軽微であり、ｒ２が僅か２〜３％低下するに過ぎず、ＡＵＣに対する効果はない。例えば、表６を参照されたい。従って、本発明の特定の他の態様において、本明細書で提供される方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、体重、年齢、性別、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定することを含む。
【００６７】
本発明の特定の態様において、本方法は、試料中のｐｒｏＡＮＰレベル、全血量レベル、試料中のヘマトクリットレベル、赤血球量レベル、血漿量レベル、全尿量レベル、試料中のアンジオテンシンＩＩレベル、対象の患者群、試料中のコルチゾールレベル、血中の内皮幹細胞数、試料中のカテコールアミンレベル、対象の全血イオノグラム、対象の尿イオノグラム、対象の血液浸透圧、対象の尿浸透圧、対象の血糖、試料中のプロエンドセリン−１（ｐｒｏ−ＥＴ−１）レベル、試料中のＣＴ−ｐｒｏＡＶＰレベル、試料中のアルドステロンレベル、試料中の乳酸塩レベル、対象の急性生理学及び慢性健康評価ＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）、対象の世界脳神経外科連盟（ＷＦＮＳ）グレード分類、及び対象のグラスゴーコーマスケール（ＧＣＳ）からなる群から選択される対象の少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータを決定することを含む。
【００６８】
添付の実施例では、対象の多臓器不全スコア（ＳＯＦＡスコア）と体液バランス及び／又は塩分バランスとの間に有意な統計的関係があることが報告される。実施例１及び３及び図４を参照されたい。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは体液バランス及び／又は塩分バランスと相関する。従って、特定の態様では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、多臓器不全スコア（ＳＯＦＡスコア）が決定される。換言すれば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭがＳＯＦＡスコアのサロゲートマーカーとして用いられる。
【００６９】
本発明の特定の他の態様では、体液バランス及び／又は塩分バランスに基づき、多臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡスコア）が決定される。添付の実施例では、年齢、ＢＭＩ及び性別などの更なるパラメータを含めることにより、ＳＯＦＡスコアを決定する予測力が改善されることが示される。図５を参照されたい。従って、特定の態様において、本明細書で提供される方法は、体液バランス及び／又は塩分バランスに基づいてＳＯＦＡスコアを決定し、この方法は、年齢、ボディマスインデックス及び性別からなる少なくとも１つのパラメータを決定することを含む。
【００７０】
更に、本発明は、方法であって、
（ａ）対象の試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するステップ、及び
（ｂ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに対応する参照データと比較するステップ；又は
（ｂ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、以前の分析から得られた同じ対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに対応するデータと比較するステップ；
（ｃ）比較ステップ（ｂ）に基づき、前記対象の体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ；及び
（ｃ）ステップ（ｃ）に基づき、血球量状態及び／又は細胞外液量状態を同定するステップ
を含む方法に関する。
【００７１】
換言すれば、本発明は、本明細書で提供される方法に関し、前記方法は、
（ａ）対象の試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するステップ、及び
（ｂ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、少なくとも１つの参照対象又は参照対象集団のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較するステップ；又は
（ｂ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較するステップ；
（ｃ）比較ステップ（ｂ）に基づき、前記対象の体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ；及び
（ｃ）血球量状態及び／又は細胞外液量状態を同定するステップ
を含む。
【００７２】
更に、本発明は、インビトロ方法に関し、前記方法は、
（ａ）試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル及び対象の少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータのレベルを決定するステップ、及び
（ｂ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、並びに少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、及び前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルに対応する参照データと比較するステップ；又は
（ｂ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、並びに少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルを、以前の分析から得られた同じ対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、及び前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルに対応するデータと比較するステップ；及び
（ｃ）比較ステップ（ｂ１）又は（ｂ２）に基づき、前記対象の体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ；及び
（ｄ）ステップ（ｃ）に基づき、血球量状態及び／又は細胞外液量状態を同定するステップ
を含む。
【００７３】
本発明はまた、インビトロ方法にも関し、前記方法は、
（ａ）対象の試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、対象の体重、対象の年齢、対象の性別、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定するステップ；及び
（ｂ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記マーカーの前記レベル及び前記パラメータに対応する参照データと比較するステップ；又は
（ｂ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、ボディマスインデックス、体重、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルを、以前の分析から得られた同じ対象の前記マーカーの前記レベル及び前記パラメータに対応するデータと比較するステップ；
（ｃ）比較ステップ（ｂ１）又は（ｂ２）に基づき、前記対象の体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ；及び
（ｄ）ステップ（ｃ）に基づき、血球量状態及び／又は細胞外液量状態を同定するステップ
を含む。
【００７４】
本発明の特定の態様では、用語「前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片レベルを参照データと比較する」又は「前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片レベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベルに対応する参照データと比較する」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベルが本明細書に記載されるとおり決定され、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベルが、少なくとも１つの参照対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベルと比較されることを意味する。従って、用語「前記ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを参照データと比較する」又は「前記ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルに対応する参照データと比較する」は、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが本明細書において言及するとおり決定され、そのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、少なくとも１つの参照対象で決定されたＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較されることを意味する。これらの態様において、参照データは、これらの参照対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに対応する。換言すれば、前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルが、少なくとも１つの参照対象又は参照対象集団のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較される。参照レベルは、本明細書において、一般に参照データと称される。参照データは、例えば更なるマーカー及び／又はパラメータに対応するより多くのレベル／値を含み得る。本発明の好ましい態様において、用語「前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、並びに少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、並びに前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルに対応する参照データと比較するステップ」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが決定され、少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータの少なくとも１つのレベルが決定されることと、そのｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、少なくとも１つの参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの対応するレベルと比較されることと、少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータのレベルが、少なくとも１つの参照対象の少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータの対応するレベルと比較されることとを意味する。特定の態様において、参照データは、参照対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、並びに少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルに対応する。被験対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、並びに少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルは、かかる参照対象の参照データと比較される。
【００７５】
本発明の別の態様において、参照データは、参照対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルに対応する。被験対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルは、かかる参照対象の参照データと比較される。
【００７６】
本発明の特定の態様では、参照対象は健常対象、例えば正常な細胞外液量状態を有する対象であってもよい。本発明の更なる態様において、参照対象は、疾患又は障害に罹患している対象であってもよい。健常な又は疾患／障害を有する参照対象の集団は、それぞれ健常対象又は疾患若しくは障害に罹患している対象から本質的になる。参照対象集団は、１〜２００又はそれを超える参照対象を含む対象集団である。
【００７７】
詳細には、健常対象は、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、頭部傷害、神経学的障害、多発外傷性傷害、手術後、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、及び／又は乱れた体液バランスに関連する疾患に罹患していない。詳細には、健常対象は、動脈瘤、多発外傷、脳傷害及び／又は頭部傷害に罹患しておらず、及び術後患者でない。
【００７８】
詳細には、疾患又は障害に罹患している参照対象又は参照対象集団は、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、頭部傷害、神経学的障害、多発外傷性傷害、手術後、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、及び／又は乱れた体液バランスに関連する疾患など、重篤な細胞外液量状態及び／又は重篤な血球量状態に関連することが公知の疾患又は障害に罹患している。詳細には、疾患又は障害に罹患している参照対象又は参照対象集団は、動脈瘤、多発外傷、脳傷害、及び／又は頭部傷害に罹患しており、又は参照対象は、例えばショックを伴う腹膜炎に罹患している術後対象である。
【００７９】
参照対象からのマーカー及び／又はパラメータプロファイルが少なくとも１つの参照対象のマーカー及び／又はパラメータプロファイルの特有の特徴を含む場合、被験対象は、それぞれ健常である、例えば均衡した体液及び／若しくは塩分バランスを有するか、又は正の体液バランス及び／若しくは塩分バランスを発症するリスクがあるか若しくはそれを有し、且つ／又は重篤な細胞外液量状態及び／若しくは重篤な血球量状態のリスクがあるか若しくはそれを有すると診断され得る。
【００８０】
本発明の特定の態様では、本方法は、対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定することに関し、この方法は、
前記対象の試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するステップ、及び
前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、少なくとも１つの参照対象であって、各々が健常である参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較するステップ；
比較ステップに基づき、前記対象の細胞外液量状態、血球量状態、体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ
を含み、
前記参照レベルと比較したときに上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示し；
前記参照レベルと比較したときに同一又は同様のレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が同一若しくは同様の体液バランス、及び／又は同一若しくは同様の塩分バランスを有することを示し、前記同一の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有することを示し；及び／又は
前記参照レベルと比較したときに低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が負の体液バランス及び／又は負の塩分バランスを有することを示す。
【００８１】
本発明のこれらの態様において、参照対象は健常対象（上記参照）、例えば正常な細胞外液量状態を有する対象である。健常対象は正常な体液バランス及び／又は塩分バランスを有する。健常対象は、通常、約０．４〜１ｎｍｏｌ／ＬのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する（Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  ａｎｄ  ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｔｅｓｔ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｍａｙ；５１（５）：１０５９−６７；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ａｎ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２００５；９（６）：Ｒ８１６−２４；又はＳｕｚｕｋｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｄｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ．Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ．２０１３  Ｊａｎ；１９（１）：５９−６３）。一実施形態において、少なくとも１つの健常参照対象は、約０．５ｎｍｏｌ／ＬのｐｒｏＡＤＭ又はその断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。別の実施形態において、少なくとも１つの健常参照対象は、約０．７５ｎｍｏｌ／ＬのｐｒｏＡＤＭ又はその断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。更なる実施形態において、少なくとも１つの健常参照対象は、約１．０ｎｍｏｌ／ＬのｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。添付の実施例で実証されるとおり、例えば、動脈瘤、多発外傷又は術後障害に罹患している対象は、１．０ｎｍｏｌ／Ｌ以上のレベルを示した。換言すれば、疾患又は障害に罹患している対象は、高いｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを示した。この閾値はまた、ＲＯＣなどの統計分析によっても明らかになった。図４及び以下を参照されたい。本発明の特定の態様では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが健常対象の前記参照レベルと比較して上昇しているとき、被験対象は、正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有すると見なされる。本明細書で使用されるとき、「前記参照レベルと比較したときに上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」又は「より高い」レベルとは、前記健常参照対象又は前記健常参照対象の前記集団のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルと比べて対象のレベルが少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、又は更により好ましくは少なくとも３０％高いことを意味する。特定の態様において、「上昇した」又は「より高い」レベルとは、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベ��が少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、例えば、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．０ｎｍｏｌ／Ｌであることを意味する。
【００８２】
特定の態様において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは健常対象の前記参照レベルと比較され、ここで、細胞外液量状態、血球量状態、体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを前記参照レベルと比較することにより同定され、ここで、例えば少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌのレベル上昇は、対象が正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスを有することを示し、及び／又は前記正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスは、対象が重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示す。
【００８３】
本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、前記ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを健常対象の前記参照レベルと比較することを含み、健常対象の参照データと比較したときに同一又は同様のレベルの対象のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が同一若しくは同様の体液バランス及び／又は同一若しくは同様の塩分バランスを有することを示し、前記同一又は同様の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有することを示す。本明細書で使用されるとき、「前記参照レベルと比較したときに同様のレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、健常参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較して±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±２％、又は最も好ましくは同じ又は同一であることを意味する。例示的実施形態において、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの前記参照レベルは約０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜１．０ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記レベルが約０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜約１．０ｎｍｏｌ／Ｌである場合、対象は同一又は同様のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。正常な細胞外液量は、例えば、約４０Ｌの体液を含有する対象の約１５Ｌである（Ｇｕｙｔｏｎ  Ａｒｔｈｕｒ  Ｃ．，（１９９１），ｐ．２７５）。本明細書に定義するとおり、正常な細胞外液量状態の対象は同一又は同様の体液及び／又は塩分バランスを有し、従って、対象の体液及び／又は塩分の流入と流出とは釣り合っている、即ち同一又は同様である。正常な血球量状態は、例えば２０ｍｌ／ｋｇを上回る血球量状態であり得る。
【００８４】
本明細書で使用されるとき、「参照レベルと比較したときに低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、健常参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比べて対象のレベルが１５％、好ましくは２０％、より好ましくは２５％、又は更により好ましくは３０％低いことを意味する。好ましい態様において、「低下した」又は「より低い」レベルは、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、例えば、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ未満、又は０．５ｎｍｏｌ／Ｌ未満であることを意味する。換言すれば、対象は、前記レベルが１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、例えば０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ未満、又は約０．５ｎｍｏｌ／Ｌ未満である場合、低下したｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。これらの態様において、参照データと比較したときに低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が負の体液バランス及び／又は負の塩分バランスを有することを示す。
【００８５】
かかる方法の感度及び特異度は、単に検査の分析品質に依存するばかりでなく、それはまた、異常又は正常結果をなすものの定義にも依存する。疾患／病態を有する及び有しない対象について、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルの分布は重複し得る。かかる条件下では、試験は正常を疾患と１００％の精度で絶対的に区別するわけではない。当業者は、対象の状態自体又は対象の少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータがデータの解釈に役立ち得ること、及びこの更なる情報によって重複範囲におけるより信頼性の高い予測が可能になることを認識している。従って、少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルが少なくとも１つの健常対象の参照データと比較され、ここで、前記参照データの前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータの対応するレベルと比較して同様又は同一の前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータの値／レベルは、対象が正の体液及び／又は塩分バランスを有するリスクが低下していることを示し、及び／又は前記参照データの前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータの対応するレベルと比較して高い又は低い前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベル／値は、正の体液及び／又は塩分バランスを有するリスクが上昇していることを示し、及び正の体液及び／又は塩分バランスは重篤な細胞外液量の指標である。参照対象が少なくとも１つの健常対象である場合、前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータの前記同様又は同一の値／レベルは正常値／レベルであり、即ち、前記マーカー及びパラメータの値又はレベルは正常範囲にある。マーカー及びパラメータの正常値／レベルは当業者に一般に公知である。ある種のマーカー及びパラメータの正常値／レベルは本明細書において上記に記載される。本発明の最も好ましい態様において、参照データは、参照対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルに対応するか又はそれを含む。被験対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルは、かかる参照対象の参照データと比較される。
【００８６】
本明細書で使用されるとき、「同様又は同一」のレベル／値とは、レベル／値が対応するレベル／値と比較して±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±２％又は最も好ましくは同じ又は同一であることを意味する。本明細書で使用されるとき、「より低い」又は「低下した」又は「より高い」又は「上昇した」レベル／値とは、レベル／値が対応するレベル／値と比較して１５％、好ましくは２０％、より好ましくは２５％、又は最も好ましくは３０％だけそれぞれ高い又は低いことを意味する。
【００８７】
本発明の例示的実施形態において、本方法は、対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定することに関し、この方法は、
前記対象の試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するステップ、及び
前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、少なくとも１つの参照対象又は参照対象集団のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの参照レベルと比較するステップであって、参照対象が、重篤な細胞外液量状態及び／又は重篤な血球量状態に関連することが公知の疾患又は障害に罹患している対象であるか、又は参照対象が、ショックを伴う腹膜炎に罹患している術後対象である、ステップ；及び
比較ステップに基づき、前記対象の細胞外液量状態、血球量状態、体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ
を含み、
前記参照レベルと比較したときに同様のレベル、同一のレベル又は上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示し；及び／又は
前記参照データと比較したときに低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が正常な体液バランス、正常な塩分バランス、正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有することを示す。
【００８８】
本発明の特定の好ましい態様において、参照対象は、重篤な細胞外液量状態及び／又は重篤な血球量状態に関連することが公知の疾患又は障害に罹患している対象である。かかる疾患又は障害としては、例えば、動脈瘤、多発外傷、脳傷害、及び／又は頭部傷害、又は参照対象がショックを伴う腹膜炎に罹患している術後対象である場合が挙げられる。従って、疾患又は障害は、体液バランス、塩分バランス、体液、細胞外液量及び／又は細胞内液量が重篤である状態を伴うものであることが想定される。従って、例示的実施形態において、参照対象は、動脈瘤、多発外傷、脳傷害及び／又は頭部傷害に罹患しており、及び／又はショックを伴う腹膜炎などの疾患又は障害に罹患している術後対象である。別の実施形態において、参照対象は、動脈瘤（ＡＮＥ）、外傷性脳傷害（ＴＣ）、多発外傷（ポリ）、消化器外科手術（ＣＤ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）及びショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）から選択される疾患又は障害に罹患している対象である。被験対象のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは、かかる参照対象の参照データと比較される。添付の実施例では、体液バランス及び塩分バランスを予測するための疾患又は障害を有する対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ  ＲＯＣ曲線をプロットすることにより、重篤な細胞外液量状態を予測するｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの閾値が同定されたことが示される。実施例１及び図４を参照されたい。そこでは、高レベルのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、例えば少なくとも約１．０〜少なくとも約１．５ｎｍｏｌ／Ｌが、水分／体液及び／又はナトリウム／塩分の増加の指標であることが示される。従って、好ましい態様において、決定された前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルは、動脈瘤、多発外傷、脳傷害、及び／又は頭部傷害など、重篤な細胞外液量状態に関連することが公知の疾患又は障害に罹患しているか、又は参照対象がショックを伴う腹膜炎に罹患している術後対象である参照対象の参照レベルと比較され、ここで、高い又は上昇したレベル、例えば少なくとも１ｎｍｏｌ／ｌは、その対象が正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有することを決定する。換言すれば、前記疾患又は障害に罹患している参照対象の参照レベルと比較して同様又は同一のレベル又は更には増加したレベルの決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、前記対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示す。本明細書で使用されるとき、「前記参照レベルと比較したときに同様のレベル又は同一のレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、前記疾患及び／又は障害に罹患している少なくとも１つの参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較して±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±２％又は更により好ましくは同じ又は同一であることを意���する。本明細書で使用されるとき、「前記参照レベルと比較したときに上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、対象のレベルが、前記疾患又は障害に罹患している前記参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比べて少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、又は更により好ましくは少なくとも３０％高いことを意味する。換言すれば、「前記参照レベルと比較したときに同様のレベル又は同一のレベル又は上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、少なくとも前記疾患及び／又は障害に罹患している参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較して±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±２％又は更により好ましくは同じ又は同一であるか、又は前記疾患又は障害に罹患している前記参照対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比べて少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、又は更により好ましくは少なくとも３０％高いことを意味する。一態様において、参照対象が前記疾患又は障害に罹患している対象である場合、「同様のレベル又は同一のレベル又は上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが約０．５ｎｍｏｌ／Ｌ又は少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌであることを意味する。別の態様において、「同様又は同一のレベル又は上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが約０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ又は少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌであることを意味する。更なる態様において、「同様又は同一のレベル又は上昇したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが約１ｎｍｏｌ／Ｌ又は少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌ又は更には約１．５ｎｍｏｌ／Ｌ又は少なくとも１．５ｎｍｏｌ／Ｌであることを意味する。換言すれば、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの前記参照レベルは０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜１．５ｎｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は１．０ｎｍｏｌ／Ｌであり、ここで、前記レベルが約又は少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜約又は少なくとも１．５ｎｍｏｌ／Ｌである場合、対象は同様又は同一のレベル又は上昇したレベルのｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを有する。
【００８９】
対象において決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、前記疾患及び／又は障害を有する対象と比較して低下しているか又は低いとき、被験対象は正の体液及び／又は塩分バランスを有さず、むしろ正常な体液及び／又は塩分バランス、即ち同一又は同様の体液バランス及び／又は塩分バランスを有する。従って、体液及び／又は塩分バランスは釣り合っている。従って、この対象は正常な体液バランス、正常な塩分バランス、正常な細胞外液量状態及び／又は正常な血球量状態を有する。この低下した又はより低いレベルはまた、対象が負の塩分バランス及び／又は体液バランスを有することも示し得る。本明細書で使用されるとき、用語「低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」は、被験対象で決定されたｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、前記疾患又は障害に罹患している参照対象のレベルと比較して少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、又は更により好ましくは少なくとも３０％低いｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有することを意味する。好ましい態様において、「低下したレベルの対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ」又は「より低い」レベルは、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、例えば、１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ未満、又は０．５ｎｍｏｌ／Ｌ未満であることを意味する。換言すれば、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの前記参照レベルは０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜１．０ｎｍｏｌ／Ｌの範囲であり、ここで、対象は、前記レベルが１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、例えば、１．０ｎｍｏｌ／Ｌ未満、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ未満、又は０．５ｎｍｏｌ／Ｌ未満である場合、低下したｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを有する。
【００９０】
重複範囲では、対象の更なる条件を決定することが予後予測に役立ち得る。従って、少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルが、疾患又は障害に罹患している少なくとも１つの対象の参照データと比較され、ここで、前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータ値／レベルが同様又は同一であると、正の体液及び／又は塩分バランスを有するリスクが上昇し、及び前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベル／値がより高い又はより低いと、対象が正の体液及び／又は塩分バランスを有するリスクが低下し、及び正の体液及び／又は塩分バランスは重篤な細胞外液量の指標である。
【００９１】
添付の実施例に示されるとおり、マーカー及びパラメータの組み合わせは、生じる誤差が最も小さくなるように選択される。この選択又は重要度分析は、標準的な統計分析、例えばランダムフォレスト分析で行われる。添付の実施例に示したとおり、マーカー及びパラメータである対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビン及び血清総タンパクは、正の体液及び／又は塩分バランスに罹患している重篤な患者についての極めて信頼性の高い予測をもたらす。従って、本発明の好ましい態様では、患者転帰、即ち対象の体液バランス及び／又は塩分バランスの予測は、ランダムフォレストなどの標準的な統計分析で実施される。これらの態様において、マーカー及びパラメータは式に実装され、これはソフトウェアプログラムに組み込むことができる。従って、特定の実施形態において、本発明は、本明細書で提供される方法を用いた対象の体液バランス、塩分バランス、細胞外液量及び／又は血球量の決定に好適なソフトウェアに関する。従って、対象の試料でｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが決定され、ソフトウェアに入力される。他の実施形態では、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルが決定され、ソフトウェアに入力される。更なる実施形態において、ソフトウェアは、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル及び／又は更なるパラメータ及びマーカーに基づき、ｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌを自動的に計算／決定し、対象が重篤な体液バランス、重篤な塩分バランス、重篤な細胞外液量及び／又は重篤な血球量を有するかどうかを決定する。換言すれば、このソフトウェアは対象が重篤な対象であるか否かの予後予測を提供する。かかるソフトウェアはグラフィカルユーザインターフェースによって利用することができる。インターフェースの背後にある式は、統計オープンソフトウェアＲに実装された標準的な統計学的方法、例えばランダムフォレストを用いて患者データに基づいて自動的に生成される。従って統計分析によりマーカー及びパラメータのレベルが参照データと比較され、対象の体液バランス及び／又は塩分バランス、従って細胞外液量状態が予測される。ＩＣＵでは、医師がインターフェースを使用してマーカー及び／又はパラメータを入力することにより体液バランス及び塩分バランスの推定を得ることができ、これを用いて正の体液バランス及び／又は塩分バランスの対象を同定し得る。体液バランス又は塩分バランスが、体液バランスについて４ｌより多い、及び塩分バランスについて３６ｇより多い場合、患者は重篤段階にある（ｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌ＞６０％）。予測結果はグラフィカルユーザインターフェースに、例えば交通信号方式で表示され得る。例えば、それぞれ４Ｌ又は３６ｇより多い体液バランス及び塩分バランスの値は、それらが重篤な患者の指標であることに伴い赤色で強調表示される。患者がそれぞれ４Ｌ又は３６ｇ未満の体液バランス又は塩分バランスを有する場合、患者又は値が緑色で強調表示される（患者は３０％未満のｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌを有する）。これらの態様において、本明細書で提供される方法は、治療の指針付け（例えば、ｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌが６０％を超える場合、体液マネジメントが再検討される）；正の体液及び塩分バランスの診断（この患者が、静脈内輸液蘇生を受けていない患者であっても、体液過負荷を有することを臨床医に知らせる）；又は患者予後予測（患者がｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌ＞９０％を有する場合、その患者は高いＳＯＦＡスコア、低いＲＢＣＶ、従って更に不良の予後を有する）（図６）に用いることができる。３０％〜４０％では、患者は中間的なｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌを有し、これは黄色で強調表示される。
【００９２】
本発明の特定の態様では、本方法は、対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を決定することに関し、この方法は、
前記対象から得られた試料においてマーカーｐｒｏＡＤＭ又はその断片のレベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定するステップ；
前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較するステップ；及び
比較ステップに基づき、前記対象の細胞外液量状態、血球量状態、体液バランス及び／又は塩分バランスを同定するステップ
を含み、
少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌのレベルは、対象が正の体液バランス、正の塩分バランス、重篤な血球量状態及び／又は重篤な細胞外液量状態を有することを示す。
【００９３】
本発明の特定の態様では、用語「前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを、以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルと比較する」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片レベル、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが本明細書において言及するとおり決定されること、及びこのｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、以前の分析で得られた同じ対象からｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの１つのレベル、又はｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの複数のレベルと比較されることを意味する。好ましくは、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは幾つかの時点で決定され、即ち、以前の分析から得られた２つ以上のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが利用可能である。種々の時点で決定されたこれらのレベルによって系列を計算することができる。この系列は傾向を示し、これを用いて例えば対象の細胞外液量状態及び／又は血球量状態を決定することができる。換言すれば、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルの傾向は細胞外液量状態を予測する。例えば、幾つかの過去の時点で例えばＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル／値の計測値の系列が決定されている場合、当業者は、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ及び／又は更なるマーカー及び／又はパラメータの展開の解釈に用い得る傾向を計算することができる。例えば、正の傾向からは、即ち以前測定されたレベルと比べて値が上昇しているか又はそれより高いと、対象が正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有することが予測され得る。特定の態様において、以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが正の傾向を有し、且つ以前の分析から得られた同じ対象の少なくとも１つのｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ〜少なくとも１．５ｎｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌ又は少なくとも１．５ｎｍｏｌ／Ｌである場合、対象は正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスを有することが示され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、その対象が重篤な細胞外液量状態及び／又は重篤な血球量状態を有することを示し、ここで、対象の健康状態は悪化する。同様に、特定の態様において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、以前の分析から得られた同じ対象のレベルが負の傾向を示し、且つ以前の分析から得られた同じ対象のｐｒｏＡＤＭ、又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの少なくとも１つのレベルが、例えば、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌである場合、対象は正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスを有することが示され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、その対象が重篤な細胞外液量状態又は重篤な血球量状態を有するか又は有したことを示し、ここで、健康状態は改善する。添付の実施例では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは治療時間と共に低下する。理論によって拘束されるものではないが、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ濃度の低下は、内皮損傷の改善に起因する可能性がある。
【００９４】
特定の態様では、ある種の固定閾値を用いて対象の細胞外液量状態が決定される。一実施形態において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが０．５ｎｍｏｌ／ｌより高い場合、患者は正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有すると決定され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が重篤な細胞外液量を有することを示す。別の実施形態において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが０．７５ｎｍｏｌ／ｌより高い場合、患者は正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有すると決定され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が重篤な細胞外液量を有することを示す。別の実施形態において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが１．０ｎｍｏｌ／ｌより高い場合、患者は正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有すると決定され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が重篤な細胞外液量を有することを示す。別の実施形態において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが１．５ｎｍｏｌ／ｌより高い場合、患者は正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有すると決定され、ここで、正の体液バランス及び／又は塩分バランスは、対象が重篤な細胞外液量を有することを示す。
【００９５】
本発明の特定の態様では、用語「前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、及び前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータレベルを、以前の分析から得られた同じ対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベル、及び前記少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータレベルに対応するデータと比較する」は、ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが決定され、且つ少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータの少なくとも１つの更なるレベルが決定されること、及びそのｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが、以前の分析で決定された同じ対象のｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの対応するレベルと比較されること、及び少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータのレベルが、以前の分析で決定された同じ対象の少なくとも１つの更なるマーカー及び／又は少なくとも１つの更なるパラメータの対応するレベルと比較されることを意味する。以前の分析から得られた少なくとも１つの更なるマーカー及び／又はパラメータのレベルは、多変量に基づいて傾向を予測するためにそれ自体と比較することができる。或いは、更なるマーカー及び／又はパラメータは、正常データ、例えば健常参照対象のデータと比較することができる。更なるマーカー及び／又はパラメータが正常レベルよりも高い又は低い場合、正の体液バランス及び／又は塩分バランスのリスクが上昇し、即ち対象は重篤な細胞外液量状態になり易い。
【００９６】
本発明の特定の態様では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ボディマスインデックス、体重、ヘモグロビンレベル及び血清総タンパクレベルが、以前の分析で決定された同じ対象の対応するレベルと比較される。換言すれば、マーカー及びパラメータのレベルが種々の時点で決定され、レベルの傾向が細胞外液量状態の予測となる。
【００９７】
本明細書で使用されるとき、「以前の分析」は、マーカーのレベルが入院中に幾つかの時点で、例えば、０日目、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目等に決定されることを意味する。マーカー及び／又はパラメータの決定はまた、毎時実施することもでき、例えば、１回目の測定が患者の入院時に実施されてもよく、次に例えば１時間毎、２時間毎又は５時間毎に測定が繰り返されてもよい。マーカー、例えば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、及び任意選択的に、決定されたパラメータのレベルは、それ以前の時点において決定されたマーカー又はパラメータの１つのレベル／値、又はそれ以前の２つ以上の時点から計算したレベル／値の平均のいずれかと比較される。マーカーレベルの変化が対象の細胞外液量状態の指標である。
【００９８】
添付の実施例１及び図４に示されるとおり、重篤な患者を予測するためのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの閾値が、集中治療患者、例えば、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）に罹患している患者又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）の体液バランス及び塩分バランスを予測するためのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ  ＲＯＣ曲線をプロットすることにより、例えば少なくとも１ｎｍｏｌ／ｌと同定された。本明細書では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの高い又は上昇したレベル、例えば１ｎｍｏｌ／ｌを上回るレベルは、対象が体液過負荷、即ち正の体液バランスを有することを示すことが実証される。従って、本発明の好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、ここで、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇したレベルは、前記対象が正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスを有することを示す。
【００９９】
添付の実施例では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの高いレベル、例えば少なくとも約１．０〜少なくとも約１．５ｎｍｏｌ／Ｌが、対象の水分／体液及び／又はナトリウムの増加、即ち、例えば少なくともそれぞれ約３Ｌ〜４Ｌ又は約２７ｇ〜３６ｇのナトリウム／塩分の、正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスの指標であることが示される。従って、本発明の実施形態において、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇した又は高いレベルは、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも０．６ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも０．７ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも０．８ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも０．９ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．１ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．２ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．３ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．４ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１．０ｎｍｏｌ／Ｌである。
【０１００】
添付の実施例では、種々の患者群、即ち、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）に罹患している患者又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）は、全て上昇した又は高いＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを示した。詳細には、ショックを伴う術後腹膜炎に罹患している患者である患者（Ｐ）は、０日目、２日目及び７日目に特に高いＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ値を実証した。図３を参照されたい。従って、本明細書では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが患者群に応じて変わり得ると共に、手術後など、ある種の障害が、重篤な体液量状態、正の体液及び／又は塩分バランスを同定するのに好適な更に高いレベルのｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭをもたらし得ることが想定される。従って、本明細書では、特定の疾患に罹患している患者の体液バランス及び塩分バランスを予測するためにｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルをＲＯＣ（下記参照）にプロットすると、閾値が１ｎｍｏｌ／Ｌよりも高くなり得るか又は低くなり得ることが想定される。例えば、術後対象における少なくとも１．５ｎｍｏｌ／ＬのｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは、正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスの指標である。一般に、少なくとも１．０ｎｍｏｌ／Ｌの上昇した値が、正の体液及び／又は塩分バランスを有する対象の指標である。本発明の好ましい態様において、対象において決定されたｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの濃度が少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌ（濃度［ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ］≧１．０ｎｍｏｌ／Ｌ）である場合に上昇していると見なされる。換言すれば、対象における１ｎｍｏｌ／Ｌより高いｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの濃度は、正の体液バランス（例えば、少なくとも４Ｌの）又は水分増加の指標である。或いは、対象における１．０ｎｍｏｌ／Ｌより高いｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの濃度は、正の塩分バランス（例えば、少なくとも３６ｇの）若しくは塩分増加又は重篤な細胞外液量状態の指標である。
【０１０１】
本発明の好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、対象の細胞外液量を決定し、ここで、本方法は、前記対象から得られた試料においてマーカーｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、このｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づいて体液バランスが決定され、前記体液バランスが細胞外液量状態を決定し、ここで、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇したレベルは、前記対象が正の体液バランスを有することを示し、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇したレベルは少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記レベルは前記正の体液バランスが少なくとも約４Ｌであることを示し、及び前記正の体液バランスは、前記対象が重篤と見なされる細胞外液量状態を有することを示す。
【０１０２】
好ましい態様において、本明細書で提供される方法は、対象の細胞外液量を決定し、ここで、本方法は、前記対象から得られた試料においてマーカーｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、このｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、塩分バランスが決定され、前記塩分バランスが細胞外液量状態を決定し、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇したレベルは、前記対象が正の塩分バランスを有することを示し、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの上昇したレベルは少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記レベルは、前記正の塩分バランスが少なくとも約３６ｇであることを示し、及び前記正の塩分バランスは、前記対象が重篤と見なされる細胞外液量状態を有することを示す。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、本発明の意味における「試料」は、血漿、リンパ液、尿、脳脊髄液、血液、唾液、血清、又は糞便など、対象の任意の体液及び対象の任意の生物学的組織であり得る。
【０１０４】
好ましくは、本発明との関連において試料は血液試料、より好ましくは血清試料、又は最も好ましくは血漿試料である。
【０１０５】
本発明の好ましい態様において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは試料において決定され、前記試料は血液又は血漿試料である。最も好ましい態様において、マーカーは血漿試料において決定される。
【０１０６】
本明細書では、試料は、組織、例えば、肺組織、腹水、皮膚、心臓、腎臓、消化管、又は下肢浮腫、上皮組織、骨又は血液などの結合組織、内臓筋又は平滑筋及び骨格筋などの筋組織、神経組織、骨髄、軟骨、皮膚、粘膜又は毛髪であり得ることが想定される。試料は患者から採取／入手され、又は本発明に係る診断に供される。例えば、固体試料の場合のように、適宜試料を本発明における使用前に可溶化し、ホモジナイズし、又は溶媒で抽出して液体試料を入手する必要があり得る。好ましい態様において、試料は液体試料、例えば溶液又は懸濁液である。液体試料は本発明における使用前に１つ以上の前処理に供され得る。かかる前処理としては、限定はされないが、希釈、ろ過、遠心、濃縮、沈降、沈殿、又は透析が挙げられる。前処理としてはまた、酸、塩基、緩衝液、塩、溶媒、反応染料、界面活性剤、乳化剤、又はキレーターなど、溶液への化学的又は生化学的物質の添加も挙げることができる。好ましい態様において、前記試料は血液、血漿、血清又は尿である。最も好ましい態様において、試料は血漿である。
【０１０７】
「血漿」は、本発明との関連において、遠心後に得られた抗凝固薬を含有する血液の事実上無細胞の上清である。例示的抗凝固薬としては、ＥＤＴＡ又はクエン酸塩などのカルシウムイオン結合化合物及びヘパリン塩又はヒルジンなどのトロンビン阻害薬が挙げられる。無細胞血漿は、抗凝固処理血液（例えば、クエン酸塩加、ＥＤＴＡ又はヘパリン添加血液）を例えば２０００〜３０００ｇで少なくとも１５分間遠心することによって入手し得る。
【０１０８】
「血清」は、本発明との関連において、血液を凝固させた後に収集される全血の液体画分である。凝固血液（凝血）を遠心すると、上清として血清を得ることができる。
【０１０９】
ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル及び／又は更なるマーカーのレベルはイムノアッセイによって決定することができる。本明細書で使用されるとき、「アッセイ」又は診断アッセイは、診断学分野で適用される任意のタイプのものであってよい。好ましい検出方法には、様々なフォーマットのイムノアッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、化学発光及び蛍光イムノアッセイ、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、Ｌｕｍｉｎｅｘベースのビーズアレイ、タンパク質マイクロアレイアッセイ、例えば免疫クロマトグラフィーストリップ検査などのポイントオブケア検査及び迅速検査フォーマットに好適なアッセイが含まれる。かかるアッセイは、検出しようとする分析物が特定の親和性で１つ以上の捕捉プローブに結合することに基づき得る。本明細書で使用されるとき、イムノアッセイは、抗体又は免疫グロブリンを用いて溶液中の巨大分子／ポリペプチドの存在又は濃度を測定する生化学検査である。本発明によれば、抗体はモノクローナル抗体並びにポリクローナル抗体であってもよい。従って、少なくとも１つの抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である。本発明に係る方法が特に好ましく、ここで、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸４２〜９５にわたる中央領域部分ペプチド又は配列番号２として提供されるアミノ酸が、試料中のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその部分ペプチドの決定に用いられる。特定の態様において、マーカーのレベルは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される。特定の態様において、ＨＰＬＣはイムノアッセイと組み合わせることができる。
【０１１０】
本発明の特定の態様において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片及び／又は更なるマーカー又はその断片はサンドイッチイムノアッセイで決定される。このサンドイッチイムノアッセイでは、例えば試料中にあるｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭなどの１つのマーカーについて２つの抗体が適用される。詳細には、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片が、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片の別の部分配列に特異的に結合する２つの抗体の使用によって決定される場合、これが好ましい。
【０１１１】
本発明に係るインビトロ方法の好ましい態様では、抗体の１つが標識され、及び第２の抗体が固相に結合されているか又はそれに選択的に結合され得る。
【０１１２】
アッセイの特に好ましい態様では、抗体の１つが標識される一方、他方が固相に結合されているか又はそれに選択的に結合され得るかのいずれかである。好ましい実施形態において、本方法は、異種サンドイッチイムノアッセイとして実施され、ここで、抗体の１つが任意に選ばれた固相上、例えば、コーティングした試験管の壁（例えば、ポリスチロール試験管；コーティングチューブ；ＣＴ）又はマイクロタイタープレート（例えば、ポリスチロールでできている）に、又は例えば磁性粒子などの粒子に固定化され、ここで、他方の抗体が、検出可能標識に類似した又は標識への選択的付加を可能にする基を有し、これが形成されたサンドイッチ構造の検出に役立つ。好適な固相を用いた一時的に遅延させるか又は後の固定化も可能である。
【０１１３】
本発明に係る方法は、均一方法として更に具体化することができ、ここで、１つ又は複数の抗体と、検出しようとするマーカー、例えば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片とによって形成されるサンドイッチ複合体が液相中に懸濁されたままである。この場合、２つの抗体を用いるときは両方の抗体を検出系の一部で標識することが好ましく、これにより両方の抗体が単一のサンドイッチに組み込まれた場合にシグナルの生成又はシグナルの惹起につながる。かかる技法は、詳細には蛍光増強又は蛍光消光検出法として具体化されるべきである。特に好ましい態様は、例えば米国特許第４  ８８２  ７３３  Ａ号明細書、欧州特許第Ｂ１  ０  １８０  ４９２号明細書又は欧州特許第Ｂ１  ０  ５３９  ４７７号明細書に記載されているもの及びこれらの明細書に引用される先行技術など、対で使用すべき検出試薬の使用に関する。このようにして、単一の免疫複合体に両方の標識成分を含む反応産物のみが直接反応混合物において検出される測定が可能となる。例えば、かかる技術は商標ＴＲＡＣＥ（登録商標）（時間分解型増幅クリプテート発光（Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｃｒｙｐｔａｔｅ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ））又はＫＲＹＰＴＯＲ（登録商標）として提供され、上記に引用した出願の教示を実現する。従って、特に好ましい態様では、診断装置を用いて本明細書で提供される方法が実行される。例えば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル及び／又は本明細書で提供される方法の任意の更なるマーカーのレベルが決定される。特に好ましい態様において、診断装置はＫＲＹＰＴＯＲ（登録商標）である。
【０１１４】
本発明は、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ヘモグロビン、血清総タンパク、レニン、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド（ｐｒｏＡＮＰ）、Ｃ末端プロ−アルギニン−バソプレシン（ＣＴ−ｐｒｏＡＶＰ）、タンパク質、エリスロポエチン、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン、コルチゾール、アドレナリン、エピネフリン、カテコールアミン類及びプロエンドセリン−１（ｐｒｏ−ＥＴ−１）又はその断片からなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを決定するための検出試薬を含み、且つ本明細書で提供される方法を実施するための補助物質を含む、被験対象から入手した試料において細胞外液量状態を決定するためのキットの使用に更に関する。特定の態様において、本発明は、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片のレベルを決定するための検出試薬を含み、且つ本明細書で提供される方法を実施するための補助物質を含む、被験対象から入手した試料において細胞外液量状態を決定するためのキットの使用に関する。好ましい態様において、本発明は、マーカーｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ヘモグロビン及び血清総タンパクを決定するための検出試薬を含み、且つ本明細書で提供される方法を実施するための補助物質を含む、被験対象から入手した試料において細胞外液量状態を決定するためのキットの使用に関する。
【０１１５】
特定の態様において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ又はその断片のレベルを決定するための前記検出試薬は抗体を含み、これらの抗体の１つは標識されており、及び他方の抗体は固相に結合されているか又は固相に選択的に結合され得る。
【０１１６】
特定の態様において、少なくとも１つのマーカーのレベルを決定するための前記検出試薬は抗体を含み、これらの抗体の１つは標識されており、及び他方の抗体は固相に結合されているか又は固相に選択的に結合され得る。
【０１１７】
原則的に、放射性同位元素、酵素、蛍光標識、化学発光標識又は生物発光標識及び直接光学的に検出可能な色標識、例えば金原子及び色素粒子（これらは詳細にはポイントオブケア（ＰＯＣ）又は迅速検査で使用される）で標識するなど、前記タイプのアッセイに適用し得るあらゆる標識技法を用いることができる。不均一系サンドイッチイムノアッセイの場合、両方の抗体が、均一系アッセイのコンテクストにおける本明細書に記載されるタイプに従う検出系の一部を呈し得る。
【０１１８】
好ましい態様では、液体反応培地に第１及び第２の抗体の両方が分散され、それにより、蛍光又は化学発光消光又は増強に基づく標識系の一部である第１の標識成分が第１の抗体に結合され、及びこの標識系の第２の標識成分が第２の抗体に結合され、それにより、両方の抗体の、検出しようとするマーカー、例えば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ若しくはその断片又は更なるマーカー若しくはその断片への結合後、測定溶液中で形成されたサンドイッチ複合体の検出を可能にする検出可能なシグナルが生成される。この代替例の一態様は、希土類クリプテート又はキレートなどの標識系を蛍光色素又は化学発光色素との組み合わせで含む。特に好ましい態様において、標識系は、希土類クリプテートを、詳細にはシアニン型の蛍光色素又は化学発光色素との組み合わせで含む。更に好ましい態様において、検出は競合イムノアッセイで行われる。好ましい態様において、ラジオイムノアッセイが用いられる。また、本明細書では、イムノアッセイ、又は質量分析ベースの手法と併用することのできる質量分光分析法によるか又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法によってマーカーのレベルを例えば決定し得ることも想定される。当業者は、マーカーのレベルを高い信頼性で決定することができる限り任意の利用可能なアッセイを用い得ることを理解する。
【０１１９】
本発明の目的は、対象及び／又は患者の障害又は医学的状態の診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理のためのインビトロ方法であって、特に救急診療部（ＥＤ）又は集中治療室（ＩＣＵ）の医師に信頼性の高い情報を提供する方法を提供することである。
【０１２０】
従って、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、本明細書で提供される方法によって前記対象の細胞外液量状態、血球量状態、体液バランス及び／又は塩分バランスが決定される。
【０１２１】
一実施形態において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態が決定される。
【０１２２】
他の実施形態において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、体液バランス及び／又は塩分バランスが決定され、前記体液バランス及び／又は塩分バランスが細胞外液量状態を決定する。
【０１２３】
更なる実施形態において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、ヘモグロビンレベル、血清総タンパクレベル、対象の体重、対象の年齢及び対象の性別に基づき、体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態が決定される。
【０１２４】
本明細書で使用されるとき、「診断」は、本発明との関連において、対象の疾患又は臨床病態の認識及び（早期）発見に関し、鑑別診断も含み得る。また疾患又は臨床病態の重症度の評価も、特定の実施形態では用語「診断」に包含され得る。
【０１２５】
本明細書で使用されるとき、「予後予測」は、特定の疾患又は臨床病態に罹患している対象の転帰又は特定のリスクの予測に関する。これには前記対象についての回復の可能性又は有害転帰の可能性の推定が含まれ得る。
【０１２６】
用語「療法管理」は、本発明との関連において、前記患者の治療処置をモニタ及び／又は調整することに関する。「モニタする」は、既に診断された疾患、障害、合併症又はリスクの経過を追うこと、例えば疾患の進行又は特定の治療が疾患又は障害の進行に及ぼす影響を分析することに関する。
【０１２７】
本発明において、用語「リスク評価」及び「リスク層別化」は、対象をその更なる予後予測に従って異なるリスク群に分類することに関する。リスク評価はまた、予防及び／又は治療手段の適用について層別化することにも関する。本明細書で使用されるとき、用語「手術管理」は、対象の術前管理、術中管理及び／又は術後管理に関する。詳細には、それは、本明細書では、体液バランス、塩分バランス、血球量状態及び／又は細胞外液量状態が管理されていることを意味する。従って、かかる対象の体液及び／又は塩分はモニタ及び管理される。
【０１２８】
特定の態様において、障害又は医学的状態は、水分過負荷、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、重度頭部傷害、神経学的障害、重度多発外傷性傷害、手術後、心リスク、腎傷害、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、乱れた体液バランスに関連する疾患であり得る。
【０１２９】
添付の実施例に示されるとおり、対象のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭと体液及び／又は塩分バランスとの間の有意な統計的関係が見出された。体液及び／又は塩分バランスは対象及び／又は患者の細胞外液量の指標である。添付の実施例において実証されたとおり、この強い関係は、重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）及びショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）の患者など、患者の幾つかの臨床状況で見出された（例えば、実施例１）。従って、特定の態様において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、前記対象は脳又は頭部傷害、多発外傷性傷害、又は動脈瘤を有するか、又は手術後である。更なる態様において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、前記対象は重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）及びショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）を有する。更なる態様において、本発明は、対象の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理の方法に関し、ここで、前記対象は動脈瘤破裂後又は重度頭部傷害を有する。特定の態様において、前記対象は神経学的障害を有しない。特定の態様において、前記対象は重度多発外傷性傷害を有するか、又は手術後である。
【０１３０】
本明細書で提供される方法は、対象又は患者の体液マネジメントにおいて用いることができる。本明細書で使用されるとき、用語「体液マネジメント」は、対象又は患者の体液状態のモニタリング及び管理並びに例えば静脈内輸液投与による輸液の投与を意味する。従って、特定の態様において、本発明は、対象の体液マネジメントにおける使用方法に関し、本明細書で提供される方法によって前記対象の前記細胞外液量状態が決定される。特定の態様において、本発明は、対象の体液マネジメントにおける使用方法に関し、本明細書で提供される方法によってｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき対象の細胞外液量状態が決定される。
【０１３１】
特定の態様において、本発明は、対象の体液マネジメントに用いられる本明細書で提供される方法に関し、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき、及び／又は対象の体液及び／又は塩分バランスに基づき対象の障害又は医学的状態の療法が管理される。
【０１３２】
特定の態様において、本発明は、対象の死亡リスク及び患者転帰を予測するための本明細書で提供される方法に関し、本明細書で提供される方法によって前記対象の細胞外液量状態が決定される。特定の態様において、本発明は、医師及び臨床医が直ちに適切な治療行動をとるための警告システムとして用いられる方法に関し、本明細書で提供される方法によって前記対象の前記細胞外液量状態が決定される。
【０１３３】
特定の態様において、本発明は、対象の臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、機能低下又は心機能不全リスクを予測するための本明細書で提供される方法に関し、本明細書で提供される方法によって前記対象の前記細胞外液量状態が決定される。
【０１３４】
特定の態様において、本発明は、水分過負荷、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、重度頭部傷害、神経学的障害、重度多発外傷性傷害、手術後、心リスク、腎傷害、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、乱れた体液バランスに関連する疾患を含む群から選択される障害又は医学的状態に罹患している対象の治療に用いられる本明細書で提供される方法に関する。用語「治療」、「療法」などは、本明細書では、概して所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を達成することを意味して使用される。その効果は、疾患／医学的状態／障害又はその症状を完全に又は部分的に防ぐ点で予防的であってもよく、及び／又は疾患／医学的状態／障害及び／又は疾患／医学的状態／障害に起因する有害作用を部分的に又は完全に治癒する点で治療的であってもよい。用語「治療」は、本明細書で使用されるとき、対象の疾患／医学的状態／障害の任意の治療を包含し、（ａ）疾患／医学的状態／障害の素因があり得る対象の疾患／医学的状態／障害を予防及び／又は改善すること；（ｂ）疾患／医学的状態／障害を阻害する、即ちその発生を止めること；又は（ｃ）疾患／医学的状態／障害を軽減する、即ち疾患／医学的状態／障害の退縮を生じさせることを含む。例えば、本明細書で提供される方法を用いて蘇生患者の療法／治療を管理することができる。従って、例えば、本明細書で提供される方法を用いて対象の体液マネジメントを管理することができる。本明細書で提供される方法はまた、死亡率の上昇に関連する正の体液バランスが回避されるように対象の体液バランス及び／又は塩分バランスを均衡させるための静脈内輸液の管理にも用いることができる（Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。特定の態様において、本明細書で提供される方法はまた、間質腔への病的な量の体液移動及び／又は血液増量における過負荷を回避するための対象の体液マネジメントの評価及び管理にも用いることができる。重篤と見なされる血液増量における過負荷は、例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内及び／又は好ましくは７日以内７で４Ｌ超である。
【０１３５】
本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、
（ａ１）前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、少なくとも１つの参照対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルに対応する参照データと比較するステップ；又は
（ａ２）前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルを、以前の分析から得られた同じ対象の前記ｐｒｏＡＤＭ又は前記その断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルに対応するデータと比較するステップ；
（ｂ）比較ステップ（ａ）に基づき、前記対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態を同定するステップ
を含み、前記対象の体液バランス、塩分バランス及び／又は血球量状態は、対象の死亡リスク及び患者転帰の予測に用いられ、及び／又は対象の体液マネジメントの評価及び管理に用いられる。
【０１３６】
対象及び／又は患者の障害又は医学的状態のインビトロ診断、予後予測、リスク評価、リスク層別化、療法管理及び／又は手術管理との関連において、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、例えば、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、且つ対象が少なくとも４．０Ｌの体液バランスの上昇（１回の入院当たり４Ｌの水分の増加）を有する場合、その対象は重篤と見なされる正の体液バランス（上昇した体液バランス、即ち水分含有量の増加）を有する。換言すれば、重篤な対象では、正の体液バランスが少なくとも４Ｌであり、即ち重篤な健康状態の対象では水分増加が少なくとも４Ｌである。
【０１３７】
好ましい態様において、本方法は、試料においてｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、例えば、少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルは、前記対象が正の体液バランスを有することを示し、前記正の体液バランスは少なくとも４Ｌであり、及び前記正の体液バランスは、その対象が重篤な健康状態を有することを示す。換言すれば、前記正の体液バランスは、前記対象が重篤な細胞外液量状態を有することを示す。
【０１３８】
特定の態様では、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルが少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、例えば少なくとも０．５ｎｍｏｌ／Ｌ、少なくとも０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ、又は少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、且つ対象が少なくとも３６ｇの塩分バランスの上昇（ナトリウム又は塩分の３６ｇの増加）を有する場合、その対象は、重篤と見なされる正の塩分バランスを有する。最も好ましい態様において、ナトリウムの上昇は少なくとも３６．０ｇであり、及び前記変化は、その対象が重篤と見なされる正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有することを示す。換言すれば、前記正の塩分バランス及び／又は体液バランスは、前記対象が重篤と見なされる細胞外液量状態を有することを示す。換言すれば、重篤な対象では、正の塩分バランス（上昇した塩分バランス、即ち塩分量の増加）が少なくとも３６ｇであり、即ち重篤な対象では塩分増加が少なくとも３６ｇである。
【０１３９】
他の態様において、本方法は、試料においてｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルは、前記対象が正の塩分バランスを有することを示し、前記正の塩分バランスは少なくとも３６ｇであり、及び前記正の塩分バランスは、対象が重篤な健康状態を有することを示す。
【０１４０】
本明細書では、更なるマーカー及び／又はパラメータが、即ち、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭに加えて、体液及び／又は塩分バランスの予測を改善することが理解される。従って、特定の態様において、本方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベル、対象のボディマスインデックス、対象の体重、対象の年齢、対象の性別、試料中のヘモグロビンレベル及び試料中の血清総タンパクレベルを決定することを含み、前記マーカー及び前記パラメータに基づき体液バランス及び／又は塩分バランスが決定され、少なくとも３６ｇの塩分バランス及び／又は４Ｌの体液バランスが、その対象が重篤な健康状態を有することを示す。好ましい態様では、少なくとも３６ｇの塩分バランス及び４Ｌの体液バランスが、その対象が重篤な健康状態を有することを示す。
【０１４１】
本明細書で使用されるとき、「重篤な状態」、「重篤な健康状態」、「重篤疾患患者」又は「重篤な対象」は、細胞外液量状態が重篤と見なされることに伴い対象又は患者が生死に関わる状況にあることを意味する。上記に記載したとおり、正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有する対象では死亡率が上昇する。例えば、対象は、それが例えば過剰な静脈内注入によって引き起こされた体液又は塩分の過負荷を有する場合に重篤な健康状態を有すると見なすことができる。従って、重篤な対象は、重篤な正の体液バランス（例えば、少なくとも４Ｌ）、重篤な正の塩分バランス（例えば、少なくとも３６ｇ）及び／又は重篤な血球量状態（２０ｍｌ／ｋｇ未満）を有する。特定の態様において、対象は、それが低い血球量状態、例えば、約２０ｍｌ／ｋｇ未満又は好ましくは約１５ｍｌ／ｋｇ未満である場合に重篤な健康状態を有すると見なすことができる。特定の態様において、重篤な血球量状態は約１５ｍｌ／ｋｇ未満の血球量である。
【０１４２】
本明細書で決定されるマーカー及び／又はパラメータのレベルは、医師が直ちに適切な処置を行うべき危険信号である。本明細書で使用されるとき、「重篤な細胞外液量状態」は、上昇した又は高い細胞外液量を指す。本発明の好ましい態様において、上昇した細胞外液量は少なくとも３Ｌ、好ましくは少なくとも４Ｌであり、前記上昇した細胞外液量によって重篤な健康状態を有する対象が同定される。本明細書では、対象の死亡率を上昇させる体液増加又は塩分増加はまた、対象の特性、例えば、体重、年齢又は性別等にも依存することが想定される。例えば、重い男性対象で決定される４Ｌの正の体液バランスは、小さい子供における正の体液バランスと比較して異なる影響を有する。従って、本明細書では、重篤な対象の指標である体液増加及び／又は塩分増加、即ちそれぞれ４Ｌ又は３６ｇが対象の特性に依存し、対象の特性に依存してそれぞれ４Ｌ又は３６ｇよりも高いことも又は低いこともあり得ることが想定される。
【０１４３】
添付の実施例では、結合予測因子、即ち体液バランス及び塩分バランスの組み合わせと、重篤疾患患者の決定との間に強い統計的関係があることが報告される。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は重篤疾患患者を決定し、ここで、水分の上昇が少なくとも４Ｌであり、且つ塩分の上昇が少なくとも３６ｇである。従って、好ましい態様において、本方法は、試料においてｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定することを含み、ここで、対象のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルは少なくとも１ｎｍｏｌ／Ｌであり、前記ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルは、前記対象が正の塩分バランス及び正の体液バランスを有することを示し、前記正の塩分バランスは少なくとも３６ｇであり、及び前記正の体液バランスは少なくとも４Ｌであり、及び前記正の塩分バランス及び前記正の体液バランスは、対象が重篤な細胞外液量状態を有することを示す。
【０１４４】
添付の実施例は、多臓器不全スコア（ＳＯＦＡスコア）と塩分バランス及び／又は体液バランスとの間に強い関係があることを実証している。実施例１及び３を参照されたい。従って、好ましい態様では、多臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡスコア）が体液バランス及び／又は塩分バランスに基づき決定される。更なる好ましい態様では、多臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡスコア）が体液バランス及び／又は塩分バランスに基づき決定され、体液バランス及び／又は塩分バランスがｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき決定される。従って、提供される本明細書の方法は、試料中のｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルを決定し、このｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づきＳＯＦＡスコアが決定される。
【０１４５】
特定の態様において、１４を上回るＳＯＦＡスコアは極めて重症度の高い健康状態の指標であり、対象の重篤な健康状態の指標である。０〜６のＳＯＦＡスコアは重症度の低い健康状態の指標であり、及び７〜１４のＳＯＦＡスコアは重症度の高い健康状態の指標である。特定の態様において、上昇したｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭレベルは対象のＳＯＦＡスコアの指標であり、１４を上回るＳＯＦＡスコアは、対象が重篤な健康状態を有することを示す。
【０１４６】
添付の実施例では、年齢、ＢＭＩ及び性別などの更なるパラメータを含めることにより、ＳＯＦＡスコアを決定する予測力が改善されることが示される。図５を参照されたい。従って、特定の態様において、本明細書で提供される方法は、年齢、ボディマスインデックス及び性別からなる少なくとも１つのパラメータを決定することを更に含む。
【０１４７】
本明細書では、多臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡスコア）が少なくとも１５であることが想定され、及び前記スコアは、対象が重篤と見なされる正の体液バランス及び／又は塩分バランスを有することを示す。
【０１４８】
本明細書で使用されるとき、「多臓器不全評価スコア」又は「ＳＯＦＡスコア」は、集中治療室（ＩＣＵ）に在室している間の患者の状態を追跡するのに用いられる１つのスコアである。ＳＯＦＡスコアは、人の臓器機能の程度又は不全率を決定するための点数化方式である。このスコアは、呼吸器系、心血管系、肝臓系、凝固系、腎臓系及び神経系について各１つの６つの異なるスコアに基づく。平均及び最高の両方のＳＯＦＡスコアが転帰の予測因子である。ＩＣＵにおける最初の２４〜４８時間中のＳＯＦＡスコアの上昇は、５０％以上９５％以下の死亡率を予測する。９未満のスコアは３３％の予測死亡率を与え、一方、１４を上回るスコアは９５％に近いか又はそれを上回り得る。以下のスコア表は、点数付けの条件のみを記載する（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＳＯＦＡ（Ｓｅｐｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｏｒｇａｎ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）ｓｃｏｒｅ  ｔｏ  ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｏｒｇａｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ／  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９６；２２：７０７−７１０）。生理学的パラメータがいずれの列にも該当しない場合、０点とする。生理学的パラメータが２つ以上の列に該当する場合、最も高い点数の列を選ぶ。これは医師、看護師、及び患者の医療チームの他のメンバーが敗血症に起因する罹患及び死亡リスクを推定することを促進する。
【０１４９】
【表１】
2019502104.tif 000002
【０１５０】
【表２】
2019502104.tif 000003
【０１５１】
添付の実施例１及び４において、体液バランス及び塩分バランスの組み合わせが、対象は重篤な状態に直面することになるか、例えば正の体液バランス及び／又は正の塩分バランスを有することになるかどうかを効率的に予測し得る（ＡＵＣ＞０．９２）ことが示される。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、対象の体液バランス及びナトリウムバランスに基づき重篤な健康状態を有する対象を同定する。
【０１５２】
添付の実施例はまた、体液バランス及び塩分バランスの組み合わせが対象の浮腫リスクを効率的に予測することができ、即ち、体液及び塩分バランスの組み合わせ検出は、浮腫の発生リスクがある重篤疾患患者を同定できることも実証する。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、体液バランス及びナトリウムバランスに基づき重篤な浮腫リスクを有する対象を同定する。従って、本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法を用いて重篤な浮腫リスクを有する対象の療法が管理され、ここで、浮腫リスクは体液バランス及びナトリウムバランスに基づき決定される。本発明の特定の態様では、本明細書で提供される方法を用いて重篤な浮腫リスクを有する対象の療法が管理され、ここで、浮腫リスクは体液バランス及びナトリウムバランスに基づき同定され、この体液バランス及び／又は塩分バランスはｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのレベルに基づき決定される。
【０１５３】
本明細書においてタンパク質又はペプチドとの関連で言及するとき、用語「断片」は、大きいタンパク質又はペプチドから誘導可能な、従ってその大きいタンパク質又はペプチドの部分配列を含む小さいタンパク質又はペプチドを指す。前記断片は大きいタンパク質又はペプチドからアミノ酸の１つ以上を欠失させることにより大きいタンパク質又はペプチドから誘導可能である。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、「マーカー」、「サロゲート」、「予後マーカー」、「因子」又は「バイオマーカー」又は「生物学的マーカー」などの用語は同義的に使用され、疾患／障害／臨床病態リスクなど、健康関連及び生理学関連評価の指標としての役割を果たす測定可能且つ定量化可能な生物学的マーカー（例えば、特定の酵素若しくはその断片の濃度、特定のホルモン若しくはその断片の濃度、又は生物学的物質若しくはその断片の存在）に関する。更に、バイオマーカーは、正常な生物学的過程、発病過程、又は治療介入に対する薬理反応の指標として客観的に測定及び判定される特性として定義される。バイオマーカーはバイオ試料で（血液、血漿、尿、又は組織検査として）測定されてもよい。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、パラメータとは、特定の体系を定義するのに役立ち得る特性、特徴、又は測定可能因子である。パラメータは、疾患／障害／臨床病態リスクなど、健康関連及び生理関連評価に重要な要素である。更に、パラメータは、正常な生物学的過程、発病過程、又は治療介入に対する薬理反応の指標として客観的に測定及び判定される特性として定義される。例示的パラメータは、ボディマスインデックス、体重、年齢、性別、ＩＧＳ  ＩＩ、液体摂取量、急性生理学及び慢性健康評価ＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）、世界脳神経外科連盟（ＷＦＮＳ）グレード分類、グラスゴーコーマスケール（ＧＣＳ）及び多臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡスコア）からなる群から選択することができる。
【０１５６】
本発明の目的上、「対象」（又は「患者」）は脊椎動物であり得る。本発明との関連において、用語「対象」には、ヒト及び動物の両方、特に哺乳類、及び他の生物が含まれる。従って、本明細書で提供される方法はヒト対象及び動物対象の両方に適用可能である。従って、前記対象は、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、モルモット、フェレット、ネコ、イヌ、ニワトリ、ヒツジ、ウシ種、ウマ、ラクダ、又は霊長類などの動物であり得る。好ましくは、対象は哺乳類である。最も好ましくは、対象はヒトである。本発明の意味において、細胞、組織、器官、生物などから採取される任意の試料が、診断される患者の試料であり得る。添付の実施例に示されるとおり、種々の障害又は疾患に罹患している対象の細胞外液量状態を予測することができる。従って、本明細書で提供される方法は、健常対象である任意の対象又は任意の疾患若しくは障害に罹患している対象に用いることができる。好ましい態様において、対象は疾患又は障害に罹患しており、ここで、疾患又は障害は、浮腫、脳損傷、動脈瘤破裂後、頭部傷害、神経学的障害、多発外傷性傷害、手術後、臓器不全、無制御のリンパ液流活性、腎機能不全、心機能不全、乱れた体液バランスに関連する疾患からなる群から選択される。本発明のより好ましい態様において、対象は、脳傷害、動脈瘤、頭部傷害及び／又は多発外傷性傷害に罹患しており、及び／又は前記対象は手術後である。最も好ましい態様において、対象は、重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、ショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）に罹患しており、及び／又は消化管腹膜炎手術後である。
【０１５７】
本明細書で使用されるとき、用語「多発外傷性傷害」、「多発外傷」、「多発性外傷」又は「多外傷」は、本発明との関連において、身体の少なくとも２つの範囲に２つ以上の重度の傷害を含む病態又は１つの身体領域に複数の傷害、即ち２つ以上の重度の傷害を含む病態を包含する。多発性外傷は、外傷性ショック及び／又は出血性低血圧及び１つ以上の生体機能が重大な危険に曝されることを伴い得る。２つ以上の傷害の少なくとも１つ又は全ての傷害がまとまって、傷害を負った多発性外傷対象の生命を危険に曝す。外傷は、外因からの物理的危害によって生物学上の生物に引き起こされる傷害又は損傷である。大外傷は、慢性痛などの重症度の高い長期転帰につながる可能性のある傷害である。
【０１５８】
本明細書で使用されるとき、脳傷害は脳の傷害、例えば外傷性脳傷害である。脳傷害は、外力が脳に外傷性傷害を与えると起こる。頭部傷害は、通常、脳傷害を指すが、これは頭皮及び頭蓋など、脳以外の構造への損傷を含み得るため、より広いカテゴリである。動脈瘤（ａｎｅｕｒｙｓｍ）又は動脈瘤（ａｎｅｕｒｉｓｍ）は、血管の壁にある限局性の血液が充満したバルーン様の膨らみである。動脈瘤はいかなる血管にも生じ得るもので、例としては、脳ウィリス動脈輪の動脈瘤、胸部大動脈に発症する大動脈瘤、及び腹部大動脈瘤が挙げられる。動脈瘤はまた、心臓自体の範囲内にも生じ得る。
【０１５９】
本明細書で使用されるとき、術後対象は、手術を受けた対象である。より好ましくは、術後対象は、大手術を受けた対象である。大手術は、腹腔、骨盤腔、頭蓋腔又は胸腔の内容物の内部又はその上における任意の手術であり得、又はそれは、局所性、患者の状態、実施の難しさ又は時間的長さのレベルを所与として、生命又は器官若しくは組織の機能にとって危害となる。大手術は、通常、全身麻酔、様々な長さ（多くの場合に１週間）の入院期間が必要であり、二次診療病院の一般−有資格−外科医によるか、又は三次診療病院の手術専門分科医によって実施され得る。より好ましくは、術後対象は、消化器手術後の対象である。より好ましくは、術後対象は、大手術を受けた、且つ生命を脅かす疾患又は障害に罹患している対象である。この疾患又は障害は外科手術自体によって引き起こされ得る。最も好ましくは、術後対象は、ショックを伴う腹膜炎に罹患している対象である。
【０１６０】
本明細書で使用されるとき、複数のマーカー、例えば、ｐｒｏＡＤＭ又はその断片、好ましくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、及び／又はパラメータと、対象の細胞外液量状態、例えば、細胞外液量、血液量、又は障害／疾患／臨床病態との間の統計的関係は、本明細書の添付の実施例に示されるとおり統計的方法を用いて評価した。添付の実施例で実証されるとおり、ランダムフォレスト分析（Ｂｒｅｉｍａｎ，２００１  ａｎｄ  ２００２；及びＢｏｕｌｅｓｔｅｉｘ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）；重要度分析；前進選択法；線形回帰；一個抜き法；「Ｒ２」又は「ｒ２」（決定係数）；ＡＵＣ（曲線下面積）；及び生存分析を用いた。先行技術で利用可能な任意の対応する好適なアルゴリズム及びソフトウェアパッケージを使用してパラメータ／値間の統計的関係を計算及び分析することができる。
【０１６１】
本明細書で使用されるとき、用語「含む」及び「包含する」又はこれらの文法的変化形は、挙げられる特徴、整数、ステップ又は構成要素を指定するが、１つ以上の追加的な特性、整数、ステップ、構成要素又はそれらの群を除外しないものと解釈されなければならない。この用語には、用語「からなる」及び「から本質的になる」が含まれる。
【０１６２】
従って、用語「含む」／「包含する」／「有する」は、任意の更なる構成要素（又は同様に特徴、整数、ステップなど）が存在できる／存在してもよいことを意味する。
【０１６３】
用語「からなる」は、更なる構成要素（又は同様に特徴、整数、ステップなど）が存在しないことを意味する。
【０１６４】
用語「から本質的になる」又はこれらの文法的変化形は、本明細書で使用されるとき、挙げられる特徴、整数、ステップ又は構成要素を指定するが、１つ以上の追加的な特徴、整数、ステップ、構成要素又はそれらの群の追加を除外せず、但し、その追加的な特徴、整数、ステップ、構成要素又はそれらの群が特許請求される組成物、装置又は方法の基本的な且つ新規の特性を実質的に変化させない場合に限るものと解釈されなければならない。
【０１６５】
従って、用語「から本質的になる」は、それらの具体的な更なる構成要素（又は同様に特徴、整数、ステップなど）が存在することができ、即ちその組成物、装置又は方法の本質的な特徴に実質的に影響を及ぼさないものを意味する。換言すれば、用語「から本質的になる」（これは本明細書では、用語「実質的に含む」と同義的に使用することができる）は、指定される構成要素（又は同様に特徴、整数、ステップなど）に加え、組成物、装置又は方法に他の構成要素が存在することを許容し、但し、装置又は方法の必須の特性が他の構成要素の存在によって実質的に影響を受けないものとする。
【０１６６】
用語「方法」は、限定はされないが、化学、生物学及び生物物理学の技術分野の実務者に公知であるか、又はその実務者によって公知の方法、手段、技法及び手順から容易に開発されるかのいずれかである方法、手段、技法及び手順を含めた、所与の課題を達成するための方法、手段、技法及び手順を指す。
【０１６７】
用語「約」は、好ましくは、指示される数値の±１０％、より好ましくは指示される数値の±５％、及び詳細には指示される数値自体を指す。
【０１６８】
本明細書で使用されるとき、用語「約」は、指示される数値の±１０％、及び詳細には指示される数値の±５％を指す。用語「約」が用いられるときには常に、指示される数値自体への具体的な参照も含まれる。所与の核酸のヌクレオチド数など、整数で表されるパラメータとの関連で用語「約」が用いられる場合、指示される数値の±１０％又は±５％に対応する数は最も近い整数に丸めるものとする。例えば、表現「約２５アミノ酸」は、２３〜２８アミノ酸の範囲、詳細には２４〜２６アミノ酸の範囲を指し、及び好ましくは２５アミノ酸という具体的な値を指す。
【０１６９】
特に指示しない限り、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｒｕｓｓｅｌｌ“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎ．Ｙ．（２００１））（全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるとおりの、組換え遺伝子技術の確立された方法を用いた。
【０１７０】
診断及び／又は予後予測検査の感度及び特異度は、単に検査の分析「品質」に依存するばかりでなく、それはまた、異常結果をなすものの定義にも依存する。実際には、ある変数の値を「正常」（即ち、出生前障害又は病態を有しない見掛け上健康な個体）及び「疾患」集団におけるその相対頻度に対してプロットすることにより、受診者動作特性曲線（ＲＯＣ曲線）が典型的に計算される。任意の特定のマーカー（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭなど）について、疾患／病態を有する及び有しない対象のマーカーレベルの分布は重複する可能性がある。かかる条件下では、検査は正常を疾患と１００％の精度で絶対的に区別するわけではなく、検査が正常を疾患と区別できないところが重複範囲によって指示され得る。閾値が選択され、それ未満では検査は異常であると見なされ、それを上回ると検査は正常と見なされ、又はそれを下回る若しくは上回るとき、検査は特定の状態の指標である。ＲＯＣ曲線下面積は、見出された測定がある条件の正しい同定を可能にする確率の尺度である。ＲＯＣ曲線は、検査結果が必ずしも正確な数を提供しない場合であっても用いることができる。結果を順位付けすることができる限り、ＲＯＣ曲線を作成し得る。例えば、「疾患」試料に関する検査結果が程度に従って順位付けされてもよい（例えば、１＝低い、２＝正常、及び３＝高い）。この順位付けは「正常」集団の結果と相関付けることができ、及びＲＯＣ曲線を作成し得る。これらの方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｈａｎｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．１９８２．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  １４３：２９−３６を参照されたい。好ましくは、閾値は、約０．５より大きい、より好ましくは約０．７より大きい、更により好ましくは約０．８より大きい、更により好ましくは約０．８５より大きい、及び最も好ましくは約０．９より大きいＲＯＣ曲線面積を提供するように選択される。これに関連して用語「約」は、所与の測定値の±５％を指す。
【０１７１】
ＲＯＣ曲線の横軸は（１−特異度）を表し、これは偽陽性率と共に上昇する。曲線の縦軸は感度を表し、これは真陽性率と共に上昇する。従って、選択された特定のカットオフについて、（１−特異度）の値が決定されてもよく、及び対応する感度が求まり得る。ＲＯＣ曲線下面積は、測定されたマーカーレベルが疾患又は病態の正しい同定を可能にする確率の尺度である。従って、ＲＯＣ曲線下面積を用いて検査の有効性を決定することができる。
【０１７２】
他の実施形態では、陽性尤度比、陰性尤度比、オッズ比、又はハザード比が、ある検査のリスク予測能力又は障害若しくは病態診断能力（「疾患群」）の尺度として用いられる。陽性尤度比の場合、１の値は、陽性結果が「疾患」群及び「対照」群の両方の対象間で同様に確からしいことを示し；１より大きい値は、陽性結果が疾患群でより高い可能性で起こり得ることを示し；及び１より小さい値は、陽性結果が対照群でより高い可能性で起こり得ることを示す。陰性尤度比の場合、１の値は、陰性結果が「疾患」群及び「対照」群の両方の対象間で同様に確からしいことを示し；１より大きい値は、陰性結果が被験群でより高い可能性で起こり得ることを示し；及び１より小さい値は、陰性結果が対照群でより高い可能性で起こり得ることを示す。
【０１７３】
オッズ比の場合、１の値は、陽性結果が「疾患」群及び「対照」群の両方の対象間で同様に確からしいことを示し；１より大きい値は、陽性結果が疾患群でより高い可能性で起こり得ることを示し；及び１より小さい値は、陽性結果が対照群でより高い可能性で起こり得ることを示す。
【０１７４】
ハザード比の場合、１の値は、エンドポイント（例えば、死亡）の相対危険度が「疾患」群及び「対照」群の両方で等しいことを示し；１より大きい値は、危険度が疾患群でより高いことを示し；及び１より小さい値は、危険度が対照群でより高いことを示す。
【０１７５】
当業者は、診断指標又は予後予測指標と診断又は将来の臨床転帰の予後リスクとの関連付けが統計分析であることを理解するであろう。例えば、Ｘより低いマーカーレベルは、統計的有意性のレベルによって決定するとき、患者が有害転帰を被る可能性がＸ以上のレベルの患者よりも高いことを示すものであり得る。加えて、ベースラインレベルからのマーカー濃度の変化は患者予後の反映であり得ると共に、マーカーレベルの変化の程度は有害事象の重症度に関係し得る。統計的有意性は、多くの場合、２つ以上の集団を比較し、且つ信頼区間及び／又はｐ値を決定することにより決定される。例えば、Ｄｏｗｄｙ  ａｎｄ  Ｗｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８３を参照されたい。本発明の好ましい信頼区間は、９０％、９５％、９７．５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％及び９９．９９％であり、一方、好ましいｐ値は、０．１、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１、０．００５、０．００１、及び０．０００１である。
【０１７６】
以下の非限定的な図及び例を参照することにより本発明を更に説明する。
【図面の簡単な説明】
【０１７７】
【図１】体内水分の分布であり、体内水分は細胞外液量（楕円で囲んだ部分）と細胞内液量（約５７％相当）とに分けることができる。細胞外液量は、それ自体、血液量、即ち血球量（約６％相当）及び血漿（約６％相当）と、間質液量（約２７％相当）とに更に細分することができる。
【図２Ａ】ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（対数目盛）と体液バランス（ΔＨ２Ｏ）（Ａ）及び塩分バランス（ΔＮａ）（Ｂ）とのデミング回帰である。
【図２Ｂ】ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（対数目盛）と体液バランス（ΔＨ２Ｏ）（Ａ）及び塩分バランス（ΔＮａ）（Ｂ）とのデミング回帰である。
【図３Ａ】動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）に罹患している集中治療室患者の２日目（Ａ）、５日目（Ｂ）及び７日目（Ｃ）におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）の箱ひげ図である。２日目、５日目及び７日目のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの平均濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）を示す（Ｄ）。
【図３Ｂ】動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）に罹患している集中治療室患者の２日目（Ａ）、５日目（Ｂ）及び７日目（Ｃ）におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）の箱ひげ図である。２日目、５日目及び７日目のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの平均濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）を示す（Ｄ）。
【図３Ｃ】動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）に罹患している集中治療室患者の２日目（Ａ）、５日目（Ｂ）及び７日目（Ｃ）におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）の箱ひげ図である。２日目、５日目及び７日目のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの平均濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）を示す（Ｄ）。
【図３Ｄ】動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）、重度脳外傷（ＳＢＴ）又はショックを伴う術後腹膜炎患者（Ｐ）に罹患している集中治療室患者の２日目（Ａ）、５日目（Ｂ）及び７日目（Ｃ）におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）の箱ひげ図である。２日目、５日目及び７日目のＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの平均濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ単位）を示す（Ｄ）。
【図４Ａ】動脈瘤性くも膜下出血、頭部外傷を伴わない重度外傷、重度脳外傷又はショックを伴う術後腹膜炎に罹患している集中治療室患者の体液バランス（ΔＨ２Ｏ）（Ａ）及び塩分バランス（ΔＮａ）（Ｂ）の予測に関するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのＲＯＣプロットである。
【図４Ｂ】動脈瘤性くも膜下出血、頭部外傷を伴わない重度外傷、重度脳外傷又はショックを伴う術後腹膜炎に罹患している集中治療室患者の体液バランス（ΔＨ２Ｏ）（Ａ）及び塩分バランス（ΔＮａ）（Ｂ）の予測に関するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭのＲＯＣプロットである。
【図５】予測ＳＯＦＡ（一個抜き法）である。患者をＳＯＦＡの昇順にソートする。黒色の実線が真のＳＯＦＡ値を示す。ｘ軸は患者インデックス（患者はＳＯＦＡ値の昇順にソートしている）、ｙ軸は予測ＳＯＦＡ。黒色の実線は、全ての患者についての（昇順の）真のＳＯＦＡ値を示す。青色の丸は予測ＳＯＦＡを示す。
【図６】２０１人の患者の予測ΔＨ２Ｏ、ΔＮａ及びＰ−ｃｒｉｔｉｃａｌである。１２６人の「普通の」患者（浮腫を有しない患者）を白抜きの丸で表し、７５人の「重篤な」患者（浮腫を有する患者）を塗り潰した丸で表す。
【図７】血球量参照モデルのランダムフォレスト変数重度度である。
【発明を実施するための形態】
【０１７８】
配列
配列番号１：  ｐｒｅ−ｐｒｏ−ＡＤＭのアミノ酸配列：
１      ＭＫＬＶＳＶＡＬＭＹ  ＬＧＳＬＡＦＬＧＡＤ  ＴＡＲＬＤＶＡＳＥＦ  ＲＫＫＷＮＫＷＡＬＳ  ＲＧＫＲＥＬＲＭＳＳ
５１    ＳＹＰＴＧＬＡＤＶＫ  ＡＧＰＡＱＴＬＩＲＰ  ＱＤＭＫＧＡＳＲＳＰ  ＥＤＳＳＰＤＡＡＲＩ  ＲＶＫＲＹＲＱＳＭＮ
１０１  ＮＦＱＧＬＲＳＦＧＣ  ＲＦＧＴＣＴＶＱＫＬ  ＡＨＱＩＹＱＦＴＤＫ  ＤＫＤＮＶＡＰＲＳＫ  ＩＳＰＱＧＹＧＲＲＲ
１５１  ＲＲＳＬＰＥＡＧＰＧ  ＲＴＬＶＳＳＫＰＱＡ  ＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳ  ＡＰＨＦＬ
配列番号２：  ＭＲ−ｐｒｏ−ＡＤＭ  （ｐｒｅ−ｐｒｏ−ＡＤＭのＡＳ  ４５〜９２）のアミノ酸配列：
ＥＬＲＭＳＳＳＹＰＴ  ＧＬＡＤＶＫＡＧＰＡ  ＱＴＬＩＲＰＱＤＭＫ  ＧＡＳＲＳＰＥＤＳＳ  ＰＤＡＡＲＩＲＶ
【０１７９】
本実施例は、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを検出することにより実施した。しかしながら、以上に概説したとおり、本発明はまた、ｐｒｏＡＤＭ又はその別のペプチド断片を検出することにより実施してもよい。
【０１８０】
以下の非限定的な実施例により本発明を例示する。
【実施例】
【０１８１】
実施例１：重篤疾患患者における正の体液バランス、血液量及びＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭ
方法
患者及び手順
この前向き７日間観察研究は、２０１２年３月〜２０１４年９月に仏国ビセートル大学病院（Ｂｉｃｅｔｒｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）の３０床の麻酔及び集中治療科で実施した。ビセートル病院（Ｂｉｃｅｔｒｅ  ｈｏｓｐｉｔａｌ）の施設内治験審査委員会が２０１１年１２月に本研究を承認し、全ての患者又はその血縁者がインフォームドコンセントに署名した。
【０１８２】
４種類の患者：重度脳外傷（ＳＢＴ）、動脈瘤性くも膜下出血（ＳＡＨ）、頭部外傷を伴わない重度外傷（ＰＴ）及びショックを伴う術後腹膜炎（Ｐ）の患者を調べた。患者はＤ２（Ｄ２）に持続的に機械換気する必要があった場合に組み入れた。ＳＢＴは、９未満のグラスゴーコーマスコア（ＧＣＳ＜９）の脳外傷として定義した。ＳＡＨは、ＷＦＮＳスケールのスコアが４又は５であったとき組み入れた（Ｂｒｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）］。ＰＴは、ＩＳＳスコアが２５以上であったとき組み入れた。Ｐは、腹部手術後に血行動態上の合併症（低血圧、低心拍出量）を伴うショックの徴候を伴うもの又は集中治療室入院時における乳酸塩＞４ｍｍｏｌ／Ｌ及びカテコールアミンの処方を組み入れた。
【０１８３】
除外基準は、年齢＜１８歳、妊娠及び慢性心不全（ＮＹＨＡ  ＩＩ又はＩＶ）であった。
【０１８４】
一般的及び人口統計学的データ：年齢、性別、ＢＭＩ用の体重及び身長、ＩＧＳ  ＩＩ、ＩＳＳ、入院日、集中治療を出る前のグラスゴーアウトカムスコア（ＧＯＳ）を収集した。到着時（Ｄ０）、Ｄ２、Ｄ５及びＤ７に多臓器不全評価（ＳＯＦＡ）スコアを測定した（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【０１８５】
毎日、各患者について平均動脈圧（ＭＡＰ）及び使用する場合にはノルエピネフリンの用量を記録した。生化学パラメータ：ヘモグロビン濃度［Ｈｂ］及び血漿タンパク、血漿中及び尿中Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、尿素、クレアチニン及びオスモル濃度を測定した。全２４時間利尿から朝に得られた生化学的尿結果を用いて前日の尿中Ｎａ＋、Ｋ＋、尿素排泄量の合計及びクレアチニンのクリアランスを計算した。２日目（Ｄ２）、５日目（Ｄ５）及び７日目（Ｄ７）に体重及び体温を測定した。
【０１８６】
超音波検査徴候と人工呼吸患者の体液応答性の徴候と心充満の反復測定との組み合わせを毎日の輸液投与の指針とした（Ｆｅｉｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｆｅｉｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｍｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；及びＧｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。更に、静脈内輸液の投与量はまた、心拍数、動脈圧、血中乳酸塩レベル及び心拍出量を含めた幾つもの変数によっても決定した。
【０１８７】
細胞外液量の判定
毎日塩分及び体液バランスを計算して細胞外空間の変化を推定した。毎朝塩分及び水分に関して前日の全流入−流出評価を行った。正確な塩分及び水分の寄与を記録した。全ての喪失：必要に応じて利尿、回腸造瘻術及び脳室ドレナージを測定した。ナトリウム（Ｎａ＋）喪失を液類から測定し、塩分寄与から推定した。流入水分（経腸栄養及び晶質又はコロイド輸液の当日の合計）と水分喪失との差も計算した。不感烝泄は体温の関数として推定した。Ｎａ＋（ΔＮａ＋）及び水分（ΔＨ２Ｏ）の増加又は減少を毎日計算し、累積体液バランスとして前日の結果と合計した。クレアチニンのクリアランスも毎日計算した。各患者の計算は全て一医師が行い、第２の医師が確認した（ＢＶ、ＰＥＬ及びＨＦ）。
【０１８８】
血液量測定
Ｄ２及びＤ７に、クロム５１（Ｃｒ５１）で標識した赤血球による全血量を測定した。実際上の理由で、Ｄ２は必ずしも患者の入院後正確に２日目というわけではなく、１日目〜３日目における何れかの時点である。７日目は６日目〜１０日目である。
【０１８９】
検査室で１０ｍＬの患者自身の血液をクロム５１（Ｃｒ５１）で放射標識し、全ての血漿放射活性を慎重に取り除くことにより放射活性標識された赤血球を慎重に選択した。次に、既知量の放射性赤血球を全血液循環に注入し戻し、１０分及び３０分時に動脈ラインで２つの試料を実施した。これらの２つの試料の放射活性の測定により、全血量（ＴＢＶ）（ｍＬ又は患者の体重を用いる場合にはｍＬ／Ｋｇ単位）の推定が可能であった（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。次に、ヘマトクリット値及び測定した全血量によって赤血球量（ＲＢＣＶ）（ｍＬ又はｍＬ／Ｋｇ）及び血漿量（ＰＶ）（ｍＬ又はｍＬ／Ｋｇ単位）が確定した。正常値（±２０％）はＴＢＶについて７２±１４ｍＬ／Ｋｇ、ＲＢＣＶについて３２±６ｍＬ／Ｋｇ及びＰＶについて４０±８ｍＬ／Ｋｇである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。Ｄ７に、既知量の少量のヨウ素１２５（Ｉ１２５）放射標識アルブミンを患者に注射し、１０、３０分及び２時間で試料を採取して血漿量（ＰＶＩ１２５）を直接測定した（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。Ｉ１２５で測定したＰＶの正常値は４５±１０ｍＬ／Ｋｇである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。通常、Ｉ１２５−アルブミンで得られる血漿量は、Ｃｒ５１赤血球による測定から得られる血漿量よりもやや多く、これはアルブミンの分布容積が赤血球より大きいためである（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【０１９０】
Ｄ２及びＤ７における血液量測定の実施時、経胸壁心エコー測定を用いることにより２つの指標：下大静脈変動（ΔＩＶＣ）及びＥ／Ｅ’でストレス負荷量を判定した（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６及びＦｅｉｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【０１９１】
バイオマーカー分析
各患者について、Ｄ２、Ｄ５及びＤ７に血漿バイオマーカーを調べた。Ｄ２及びＤ７は血液量測定日であった。Ｄ５試料は常にＤ７の正確に２日前に行った。プロアドレノメデュリン（ＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭ）、Ｐｒｏ−ＡＮＰ、レニン、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン、コルチゾール、アドレナリン及びエピネフリン、ＣＴ−プロアルギニンバソプレシン（コペプチン）及びプロエンドセリンをバイオマーカーとして測定した。これらは潜在的に細胞外液量又は血漿量に干渉し、動脈圧を低下（ＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭ及びＰｒｏ−ＡＮＰ）又は上昇させる。エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、ＲＢＣＶと共に変化するその能力に関して測定した。用いられる標準及び技法を表３に示す。
【０１９２】
【表３】
2019502104.tif 000004
【０１９３】
統計分析
検定力分析：同様の患者における脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）及びエリスロポエチン（ＥＰＯ）濃度値の既発表の範囲を用いて必要な患者数を計算した（Ｄｏｒｈｏｕｔ  Ｍｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。８０％の検定力、５０％の期待群間差を考慮した。
【０１９４】
分位点−分位点（ｑｑ）プロット及びシャピロ検定を用いてデータ分布の正規性を調べた。データが対数正規分布している場合、統計比較は変換したデータで実施した。データは平均値±標準偏差（ＳＤ）又は中央値（２５〜７５パーセンタイル）又はカウント及び度数（パーセント）として報告される。
【０１９５】
データの正規性に応じて線形回帰又はスピアマンの回帰を用いて相関を調べた。加えて、ほとんどのデータが誤差を伴う測定であったため、等しい分散のデミング回帰を用いて回帰曲線の傾きを計算した。群内及び群間比較はＡＮＯＶＡ（反復測定の因子）又はノンパラメトリック（クラスカル・ワリス又はフリードマン）検定と、続くチューキー又はマン・ホイットニー／ウィルコクソン検定を用い、後者はボンフェローニ補正で多重比較補正した。
【０１９６】
受診者動作曲線（ＲＯＣ）を作成して、体液及びナトリウムバランスの予測に関するバイオマーカーの性能を計算した。重み付けのないヨーデン指標を用いて最良の感度／特異度カットオフを計算した。
【０１９７】
最後に、１５％の「グレーゾーン」除外有り及び無しの四象限プロットを使用したコンコーダンス分析を用いてマーカー並びに体液及びナトリウムバランスの変動を比較した（Ｐｅｒｒｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０１９８】
分析はＲ（Ｔｈｅ  Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ、ウィーン工科大学（Ｖｉｅｎｎａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、オーストリア国ウィーン、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／、２０１５年６月２０日アクセス）を用いて実施した。統計的有意性はＰ＜０．０５に設定した。
【０１９９】
体液バランス及び血液量とバイオマーカーとの間に独立した関連性が見出された。選択された一部の「妥当な」共変量を用いた重篤疾患患者の体液状態の臨床的に利用可能な予測因子を決定するため、バイオマーカー及び他の有意なパラメータを用いて数学的予測ツールを構築した。患者の状態に関する重症度スコア、ＳＯＦＡスコア（マルチレベルの順序変数である）を追加の応答変数として考慮した。
【０２００】
体液バランス（ΔＮａ＋及びΔＨ２Ｏ）について、ΔＮａ＋＞３６ｇ及びΔＨ２Ｏ＞４Ｌの両方を有する重篤疾患患者を同定する結合予測因子を構築した。そのために、本発明者らは、初めに、（ΔＮａ＋及びΔＨ２Ｏ）に関する一個抜き法の残差を合わせて考慮し、その分布が共分散行列のガウス型（中心がある）であることが見出された。従って、（ΔＮａ＋及びΔＨ２Ｏ）の予測値の各組み合わせについて、ｍｖｔｎｏｒｍパッケージを用いて容易に計算される重篤確率（Ｐｃｒｉｔｉｃａｌ）を求めることが可能である（Ｇｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；及びＧｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２０１】
結果
ＩＣＵ入院後の最初の７日間に、ＳＢＴ（ｎ＝２１）、ＨＳＡ（ｎ＝２０）、ＰＴ（ｎ＝２０）及びＰ（ｎ＝６）に分布した６７人の患者を調べた。一般的人口統計学的データ及び各臨床状況で試験した患者数を表４に示す。Ｄ０、Ｄ２、Ｄ５及びＤ７におけるＳＯＦＡスコアを表５に提示する。
【０２０２】
【表４】
2019502104.tif 000005
【０２０３】
【表５】
2019502104.tif 000006
【０２０４】
全ての患者を調べた。細胞外液量の増加は、各臨床状況についてＤ２及びＤ７における塩分の変化（ΔＮａ＋）及び水分の変化（ΔＨ２Ｏ）として報告される。Ｄ２においてほぼ全ての患者（ΔＮａ＋について６４／６７又はΔＨ２Ｏについて６３／６７）、及びＤ７において大部分（ΔＮａ＋について４２／６７又はΔＨ２Ｏについて４１／６７）が、正の体液バランス、即ち細胞外液量の上昇を示した。Ｄ２及びＤ７において含水ソーダの正のバランスが全ての病変に観察され、ＰＴ及びＰについての塩分の上昇がＳＨＴ及びＳＡＨよりも高い。例えば、Ｄ２では、ＰＴ及びＰは７０±３２ｇ及び７７±２８ｇの塩分の累積的上昇を示し、このとき、ＳＴＢと、一方でＳＡＨとは、４３±２４ｇ及び２８±２４ｇを示す。ΔＮａ＋はΔＨ２Ｏと関連があり、貯留水分が貯留塩分と密接に結び付いていることが示される（ｒ２＝０．６７；ｐ＜０．０００１）。細胞外空間の既知の指標として、タンパク質の血漿濃度及び体重の変動がΔＮａ＋及びΔＨ２Ｏに関係するものの、それらの関係性は弱い（血漿タンパクとΔＮａ＋についてｒ２＝０．４４、血漿タンパクとΔＨ２Ｏについてｒ２＝０．３５、及び体重とΔＨ２Ｏについてｒ２＝０．３３）。血漿タンパクと同じく、［Ｈｂ］がΔＮａ＋（ｒ２＝０．１５）及びΔＨ２Ｏ（ｒ２＝０．２４）と弱い関係を有する。
【０２０５】
Ｃｒ５１によって測定した容積（全血量（ＴＢＶ）、赤血球量（ＲＢＣＶ）及び血漿量（ＰＶ））をＤ２に６２患者及びＤ７に６３患者で調べた。ほとんどの患者でＴＢＶの低下が観察された。Ｄ２において２１患者及びＤ７において２５患者のみが正常な２０％範囲内である。ＴＢＶが正常値の２０％未満である血液量減少が、Ｄ２において４６患者（７４％）及びＤ７において４２患者（６６％）に存在した。Ｄ２の１患者及びＤ７の２患者を除き、全ての患者に低ＲＢＣＶが見出された。正常なＲＢＣＶを有するこれらの患者は全て輸液した。非出血病態であっても（ＳＢＴ又はＳＡＨ）、ＲＢＣＶの低下が有意となることができ、Ｄ２において２５患者（４０％）及びＤ７において２１患者（３３％）が正常ＲＢＣＶの５０％以下の不足であった。ＴＢＶ又はＲＢＣＶと体液バランス、即ちΔＮａ又はΔＨ２Ｏとの間に統計的関係はない。
【０２０６】
ＰＶの分布は正常範囲である。ＰＶと体液バランス、即ちΔＮａ又はΔＨ２Ｏとの間に関係はなく、本発明者らはまた、Ｄ２又はＤ７間におけるＰＶの変化とΔＨ２Ｏの変化との間の関係も認めなかった。ＰＶの変化は血漿タンパク質濃度の変化に関係しない。ヘモグロビン濃度はＲＢＣＶと弱い関係があり（ｒ２＝０．３３）、及びＶＰとは関係がない（ｒ２＝０．０２６）。
【０２０７】
Ｄ７に、５８患者のＶＰをＩ１２５によって測定した（ＰＶＩ１２５）。両方のＰＶ（ＰＶ  Ｃｒ５１及びＰＶＩ１２５）間には統計的に有意な関係がある。デミング回帰により、０．８５２の傾き（ＣＩ  ９５％  ０．６１０〜１．０８）及び７８０ｍＬの切片（ＣＩ  ９５％  １０３〜１４８５ｍＬ）（信頼区間は本明細書ではＣＩと称される）が見出され、ｒ２＝０．７５２でＰＶＩ１２５に有利であった。
【０２０８】
血液量と下大静脈の変動（ΔＩＶＣ）又はＥ／Ｅ’との間に関係は見出されなかった。
【０２０９】
バイオマーカー
全てのバイオマーカーの詳細な動態を付録Ｉに示す。これらの多くはＤ２に上昇し、次に、Ｄ５及びＤ７に統計的に低下する（コペプチン、アンジオテンシンＩＩ、レニン）；一部はＤ７にのみ統計的に低下する（ＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭ、ＥＰＯ）。他のバイオマーカーは３日間の考察中に変化しない（コルチゾール、アルドステロン、Ｐｒｏ−ＡＮＰ、プロエンドセリン）。血漿ノルエピネフリンは、患者の治療として用いられた外部注入に起因して偏りがあるため本試験に適切でない。
【０２１０】
試験した全てのバイオマーカーの中で、本発明者らは、２つのバイオマーカー、レニン及びＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭのみがΔＮａ＋及び／又はΔＨ２Ｏと統計的関係を有することを見出した（表６）。ＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭとΔＮａ＋及び／又はΔＨ２Ｏとの間の関係は極めて強く、且つ臨床状況のタイプと完全に独立しているように見える。
【０２１１】
【表６】
2019502104.tif 000007
【０２１２】
次に、ΔＨ２Ｏについて４Ｌ及び／又はΔＮａ＋について３６ｇ（４リットルの９‰は３６ｇの塩となる）を正の体液バランスの閾値と見なした（Ｂｊｅｒｒｅｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＲＯＣ曲線により、不均衡なヨーデン指標の感度／特異度の最良の妥協を示唆するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの最良の閾値を見出すことが可能となった（図４）。
【０２１３】
ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが塩分バランス及び体液バランス（ΔＮａ＋及びΔＨ２Ｏ）を予測できる許容可能な確率が分かったため、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ及び他の単純共変量でΔＮａ＋及び／又はΔＨ２Ｏの予測スコアを構築した。ΔＮａ＋及び／又はΔＨ２Ｏについて、最良の予測モデルには、強い方のパラメータから最も弱いパラメータへの順に、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、Ｄ０におけるＢＭＩ、Ｄ０における体重、年齢、性別、［Ｈｂ］、ＩＧＳ及びＤ０における体液摂取量が必要である。このモデルからＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを取り除くと予測力が低下する。これらの２つのモデルは独立に分散の約７０％を説明することができ、ΔＮａ＋について８８％及びΔＨ２Ｏについて９２％のＡＵＣの良好な判別力を有する。更に、ＩＧＳ及びＤ０における体液摂取量がないことの影響はこの２つのモデルにおいて極めて限定的であり、ｒ２の２〜３％の損失に過ぎず、及びＡＵＣに対する効果はない。
【０２１４】
ΔＮａ＋＞３６ｇ及びΔＨ２Ｏ＞４Ｌの両方を有する重篤疾患患者を決定する結合予測因子を、統計に関する段落に先述したとおり構築した場合、性能が有意に改善された。この結合予測因子の判別力は高く、ＡＵＣ＝０．９９８７（９５％ＣＩ［０．９９６４−１］）である。例えば、Ｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌを０．４の閾値とすると、０．９８８の感度及び０．９４９の特異度が得られた。更に、この体液バランス予測因子は患者のＳＯＦＡスコアに有意に結び付けられる。
【０２１５】
更に、バイオマーカーを試験して血液量を測定した。興味深いことに、全てのバイオマーカーの中で体液バランスに関しては同じ２つのバイオマーカー、レニン及びＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭが血液量と統計的関係を有する。しかしながら、血液量をバイオマーカー値の対数で混合目的の回帰によって再び分析した場合、マーカーの予測特性は弱く、ＲＯＣ曲線のＡＵＣは低かった（レニンについて：ＡＵＣ  ＴＢＶ＝０．５７９８及びＡＵＣ  ＰＶ＝０．６１５９及びＭＲ  ｐｒｏ−ＡＤＭについて：ＡＵＣ  ＴＢＶ＝０．５９６７及びＡＵＣ  ＰＶ＝０．６２７７）。更に、及び高い確率にも関わらず（ｐ＝０．０００２）、値にあまりに特徴がなく且つ低値であったため、ＲＢＣＶについてＲＯＣ曲線を構築してＡＵＣを測定することは不可能であった。このような状況では、閾値及び予測モデルは試験しなかった。
【０２１６】
考察
この研究は、内皮透過性の指標として知られる単純なバイオマーカー、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが（Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２００５及びＫｏｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、重篤疾患患者の入院後最初の１週間における細胞外液量中の塩分及び水分の上昇に関する良好なサロゲートであることを示している。加えて、Ｄ２及びＤ７における塩分バランス又は体液バランスの上昇と直接的な血液量測定値との間に関係は見出されなかった。
【０２１７】
ここで、過剰な塩分又は体液バランスは重篤疾患患者における罹患及び死亡のリスク要因と見なし得ることは明らかである（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｋｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；及びＭａｌａｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。心拍出効率を得るという目標から血液増量の実施による有効性の達成が提案されるため、この状況は高頻度で起こる（Ｃｅｃｃｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１及びＶｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。侵害後第１日目の高炎症状態（敗血症、外傷又は脳動脈瘤における）において高頻度で、毛細血管透過性が過剰となり、体液が上昇し、利尿が低下し、及び血漿量中に塩を維持することが困難となることに起因して、多くの患者は細胞外液量中に水と共に塩が蓄積するリスクが高い。患者の輸液蘇生に対する応答は様々である。従って、治療を個別化する：より多くの液体を灌流させるか、又はカテコールアミン若しくは利尿薬で調整するため患者をより良く層別化し、及び間質中に正の塩分バランスを有する患者を同定する明確且つ迅速なサロゲートマーカーが必要とされている。このマーカーはまた、集中治療における入院理由の種類とは無関係でなければならない。
【０２１８】
ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが塩分及び体液バランスの特に良好な指標と思われる場合、それは単に毛細血管透過性の指標というだけではない。Ｎａ＋平衡は腎臓によって調節されるだけではない（Ｔｉｔｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。Ｎａ＋の間質クリアランスは、間質の毛細リンパ管系を通じたＮａ＋排除を調節する免疫細胞、特にマクロファージによって媒介されるものと思われる（Ｔｉｔｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。炎症状態では、そのＮａ＋除去能力の不全に伴うマクロファージによる恒常性維持免疫細胞調節の喪失により、間質におけるＮａ＋蓄積が明らかとなり得る（Ｊａｎｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。興味深いことに、アドレノメデュリンペプチドは特に器官形成におけるリンパ管の組織化において役割を果たすことが知られている（Ｋａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０２１９】
間質中の過剰総量は炎症及びＮａ＋クリアランスの低下に起因するだけではない。それは、高い平均動脈圧（ＭＡＰ）若しくは速い注入速度（Ｂａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）によって誘発される静水圧の亢進又は過剰心拍出量によって強制される血管拡張の亢進など、生理学的原因によって悪化し得る。高いＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（１ｎｍｏｌ／ｌ超）はソーダ過負荷の指標であり、例えば３６ｇのＮａ＋及び４Ｌの水を上回る増加は、医師が直ちに適切な処置を行うべき危険信号であり得る。
【０２２０】
多くの集中治療室では、看護師が毎日の体重又は毎日の体液の出入りの計算によって体液バランスを体系的に測定する。これらの方法は正確でない。例えば、本発明者らの観察研究では、体重と体液バランスとの間の関係は弱いことが見出された（ｒ２＝０．３３）。血漿タンパク又は［Ｈｂ］などの通常の細胞外液量マーカーは、塩分及び体液バランスと弱い関係を有する（ｒ２＝０．３５、及びｒ２＝０．２４）。この研究では、塩分及び体液バランスの測定は多量の生体試料を要したと共に、常に２人の医師によって実施及び管理された。日々の実務では、看護師は要求される情報の収集に必要な時間を割くことはできない。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは塩分バランス及び細胞外液状態のより正確な測定をもたらすものと思われ、また、状況の緊急化に伴う緊急用サロゲートとして使用することもできる。一部の急性状況では、ショック後最初の数日はタイミングが決定的に重要であり得る。現実には、過負荷の存在の発見は遅過ぎ、臓器損傷（急性肺傷害、腹部コンパートメント症候群、腎不全）後であることが多い。ＳＯＦＡスコアと塩分及び体液バランス予測モデルとの間の関係は、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが興味深い臨床ツールであり得るという考えを裏付ける。
【０２２１】
全血量（ＴＢＶ）、血漿量（ＰＶ）又は赤血球量（ＲＢＣＶ）を推定するマーカーは見出されなかった。レニン及びＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは有意であることが分かったが、有効な予測モデルの構築には不十分であった。更に、ΔＮａ＋又はΔＨ２Ｏは血液量の予測因子でない。
【０２２２】
この研究の別の興味深い結果は、ＰＶと体液バランスとの間に関係がないことの実証である。血液増量が体液灌流の主な理由であるため、これは特に予想外であった。それにも関わらず、ＰＶは、患者の多くがＤ２及びＤ７に正常範囲にある唯一の液量である。体液バランスとＰＶとの間に相関がないことから、Ｎａ及び水分は間質液量に捕捉されるという仮説が裏付けられる。日々の実務では、この血漿量をより良好に管理することが有用であり得るが、しかし、本発明者らは、バイオマーカーのタンパク質又は［Ｈｂ］とも、超音波検査で測定されるストレス負荷量に関係する徴候とも関連しないことを発見した。この問題を研究するには、バイオマーカー又は他の要素の組み合わせによる他の研究を行わなければならない。
【０２２３】
Ｄ７においてＰＶの２つの測定方式（Ｃｒ５１及びＩ１２５）間に見出された相関から、本明細書において同定された結果が裏付けられた。アルブミンは、特に病的状況で毛細血管透過性が上昇した場合、赤血球よりも大きい分布容積を有し得る。Ｄ７では、この差はむしろ強く（７８０ｍＬ）、毛細血管透過性が完全には修復されないことが示唆される。この比較をＤ２でも考察することは興味深いものであり得る。残念ながら、Ｄ２におけるＩ１２５を用いた測定は、バイオマーカーの一部の測定方法との相互作用が原因で実施することができなかった（表１）。
【０２２４】
低ＲＢＣＶ、貧血はかなり一般的であり、低いＴＢＶ結果を説明する。ＲＢＣＶは評価が難しく、ＣＲ５１法及び放射活性ユニットの管理が必要である。その評価は、バケー病などの稀な症例において行われるのみである。日々の実務では、［Ｈｂ］閾値検査（＜７〜８ｇ／ｄｌ）を用いて輸血の必要性が決定される。［Ｈｂ］はＰＶとＲＢＣＶとの比であるため、［Ｈｂ］はＲＢＣＶの不十分なサロゲートである（Ｔａｋａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。患者は１１ｇ／ｄＬの［Ｈｂ］で正常ＲＢＣＶの僅か５０％であり得る。正常赤血球の５０％が欠けると、患者の健康に重大な影響があり得る。ＲＢＣの総量が認知回復に関する予後マーカーとなり得ることを示唆している研究もある（Ｎａｉｄｅｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。それにも関わらず、ＲＢＣ輸血は欠損細胞の補充のみにとどまらない。本研究では、ＥＰＯがＲＢＣＶのレベルに依存しないことから、ＥＰＯはＲＢＣＶの良好なサロゲートでないこと、及びＥＰＯ刺激がＲＢＣの量のみならず、ＲＢＣの質によっても説明されることが示唆される。
【０２２５】
本研究に記載される臨床状況は、我々のサービスの日々の実務を反映する。重度外傷、脳傷害及び神経学的状況は頻度が高く、敗血症性ショックはそれほど存在しない。それにも関わらず、共変量としてのこの群が体液バランス又は血液量の予測に介入しないことから、体液量障害がむしろ病理と無関係であることが示唆される。この結果を確認するには他の研究が必要であろう。
【０２２６】
ショック後の過負荷は重要であり、過小評価されている生存因子である。正の塩分バランスは、実際、重要な予後予測マーカーとして報告されている。血液量は血液増量に自動的に結び付くものではない。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、重篤疾患患者において急性炎症状況後の最初の１週間の塩分及び体液バランスを評価するための興味深いサロゲートである。高頻度の過剰な血液増量の抑制が提案される。
【０２２７】
実施例２：ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭによる体液バランス及び／又は塩分バランスの予測
１．序論
本研究の目的は、以下の疑問に答えることである：
・バイオマーカー及び／又は他の共変量を用いてＮａ及びＨ２Ｏの変動を予測することは可能であるか？
・バイオマーカー及び／又は他の共変量を用いて血液量応答を予測することは可能であるか？
そのため、データマイニング技法及びモデル選択を用いた提供のバイオマーカー及び共変量の予測性能を評価した。
【０２２８】
２  材料及び方法
以下の材料及び方法の節は、あくまでも例示的実施形態として提供される実施例２〜４で使用した材料及び方法について記載していることに留意されたい。
【０２２９】
２  材料及び方法
２．１  データ
ここで、本報告で使用する変数及びデータセットを説明する。３．５％の欠測データ率（ｍａｘ．乳酸塩について５４％）が観察されたが、この値は低い。従って、欠測データは本研究においてそれほど大きい問題ではなかった。このため、本発明者らは全ての欠側値を、対応する各列の平均値を用いて割り当てることにした。
【０２３０】
応答変数
合計２つの目的の応答変数を考慮した：
・ΔＨ２Ｏ（Ｄ２、Ｄ５、Ｄ７）：水分（Ｈ２Ｏ）の変動、リットル（Ｌ）で表される。変動≧４．０Ｌを重篤と見なす。
・ΔＮａ（Ｄ２、Ｄ５、Ｄ７）：ナトリウム（Ｎａ）の変動、グラム（ｇ）で表される。変動≧３６．０ｇを重篤と見なす。
・ＶＴ（Ｄ２、Ｄ７）：全血量、ｍＬ／ｋｇで表される。全血量≦６０ｍＬ／ｋｇを重篤と見なす（７２の古典的閾値を下げて対照の数を増やした）。
・ＶＰ（Ｄ２、Ｄ７）：血漿量、ｍＬ／ｋｇで表される。血漿量≦４０ｍＬ／ｋｇを重篤と見なす。
・ＶＧ（Ｄ２、Ｄ７）：血球量、ｍＬ／ｋｇで表される。血球量≦１５ｍＬ／ｋｇを重篤と見なす（３２の古典的閾値を下げて対照の数を増やした）。
・ＳＯＦＡ（Ｄ２、Ｄ５、Ｄ７）：多臓器不全評価スコア。マルチレベルの順序応答：患者の病態の重症度と共にスコアが増える。１つのみ観察されるＳＯＦＡスコアを避けるため、１５を上回る４つのＳＯＦＡスコアは１５に設定したことに留意されたい。
注：Ｄ７について、ＣＲ５１の代わりにヨウ素を使用した２番目の容積測定は破棄した。
【０２３１】
共変量
・患者共変量（８）：年齢、性別、体重．Ｄ０、ｂｍｉ．Ｄ０（ボディマスインデックス）、ＩＧＳ．ＩＩ（ＩＧＳ  ＩＩスコア）、ＧＯＳ（グラスゴーアウトカムスケール）、体液．Ｄ０（Ｄ０における液体摂取量）、Ｎａ．Ｄ０（Ｄ０におけるナトリウム摂取量）
・１日共変量（５）：ｍａｘ．ｔｅｍｐ（最高体温）、ｍａｘ．乳酸塩（乳酸塩）、ｍｉｎ．ＰＡＭ（中間動脈圧の最小値）、ＦＣ（心拍数）、ｍａｘ．ｃａｔｈｅ（カテコールアミン）。
・バイオマーカー共変量（１１）：Ｈｂ、Ｐｒｏｔ．Ｄ０（０日目における血清総タンパク）、Ｐｒｏｔ（血清総タンパク）、Ａｎｇｉｏ（アンジオテンシンＩＩ）、レニン、Ａｌｄｏ（アルドステロン）、Ｐｒｏ．ＡＮＰ、Ａｄｒｅ（アドレナリン）、Ｐｒｏ．Ｅｎｄｏ（プロエンドセリン−１）、ＣＴ．ｐｒｏＡＶＰ、ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ、コルチゾール、Ｎｏｒ（ノルアドレナリン）、ＥＰＯ（全て対数スケール、ｌｏｇ１ｐ変換）。
注：ｂｍｉは身長及び体重から式：ｂｍｉ．Ｊ０＝体重．Ｊ０／（身長．Ｊ０／１００）２を用いて計算した。共変量の身長．Ｄ０は体重．Ｄ０及びｂｍｉ．Ｄ０との重複を避けるため破棄した。
【０２３２】
２．２  統計的方法
全ての統計計算は、Ｒソフトウェア（Ｒｍａｎｕａｌ）、バージョン３．０．２を用いて行った。
【０２３３】
ランダムフォレスト
ランダムフォレスト（Ｂｒｅｉｍａｎ，２００１；Ｂｒｅｉｍａｎ，２００２）を用いることにより共変量を使用して応答変数を予測した。この手法は、ブートストラップデータから決定木を繰り返し構築することにある。各ランにつき合計５０，０００本の木（一個抜き法手順では５００本）が構築される。これは、非線形効果であっても捕捉可能であることが知られる強力な決定手法である。生物医学的コンテクストにおけるランダムフォレストの優れた入門書については、Ｂｏｕｌｅｓｔｅｉｘ，２０１２を参照されたい。
【０２３４】
重要度
共変量を重要度の降順で順位付けするため、感度分析を実施した。各共変量について、調べる共変量有り又は無しでランダムフォレスト予測を実施したと共に、予測品質の点でそれが存在しない場合の影響を測定する。
【０２３５】
前進選択法及び後退選択法
共変量間の高い相関構造に起因して、単純にｋ個の最も重要な変数を用いることによる最良モデルの選択は、必ずしも最も精度の高い予測につながらない。この問題を解消するための古典的手法（Ｄｉａｚ  ２００６；Ｎｇｕｙｅｎ，２０１３）は、ランダムフォレストを用いた後退選択手順の実施である。
【０２３６】
前進選択法の場合、その考え方は、空のモデルで開始し、感度分析を実施して（変数毎に１ＲＦ）、目的の基準（ここではＲ２を使用し、下記の説明を参照されたい）の最も低い改善をもたらす変数を追加し、その拡大したモデルで再び開始するというものである。ランダムフォレストの高度に確率論的な性質に起因して、前進選択手順の結果は反復試験毎に異なり得る。従って、合計５回の反復試験を多数の木で体系的に実施し（木＝５０，０００）、全反復試験にわたって安定しているように見えるコンセンサスモデルを選択した。
【０２３７】
後退選択法の場合、その考え方は、完全なモデルで開始し、感度分析を実施して（変数毎に１ＲＦ）、目的の基準（ここではＲ２（ｒ２とも称される）を使用し、下記の説明を参照されたい）の最も低い改善をもたらす変数を除去し、その縮小したモデルで再び開始するというものである。ランダムフォレストの高度に確率論的な性質に起因して、後退選択手順の結果は反復試験毎に異なり得る。従って、合計５回の反復試験を多数の木で体系的に実施し（木＝５０，０００）、全反復試験にわたって安定しているように見えるコンセンサスモデルを選択した。
【０２３８】
線形回帰
選択されたモデルに対して古典的線形回帰も実施する。線形係数を調べることも、応答変数に対する共変量の個々の効果を理解する単純な方法をもたらす。
【０２３９】
一個抜き法
データを訓練データセットと試験データセットとに分割すべきでないことに伴い、オーバーフィッティングを回避するため「一個抜き法」と呼ばれる古典的交差検証技法を用いた。本発明者らはこの手法を用いて、データから１つのエントリを抜き、縮小したデータセットで本発明者らのモデルを訓練し（線形回帰又はランダムフォレスト）、次に得られたモデルを用いて除外したエントリの値を予測することを繰り返した。
【０２４０】
Ｒ２
応答変数と予測応答との間の相関は相関の二乗Ｒ２（又はｒ２）で測定される。線形モデルのコンテクストでは、これはまさに説明される分散の割合に相当する。Ｒ２は、常に０〜１００％であり、高いほど良い。
【０２４１】
ＡＵＣ
分類性能はＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）で測定される。この古典的基準は、可能な全ての閾値を同時に考慮し、且つＨ０誤り率を調節する必要さえないため、多くの場合に検出力より好ましい。ＡＵＣは常に０〜１００％である。約５０％のＡＵＣは純粋なノイズに相当し、７０％未満のＡＵＣは弱いと見なされ、７０％〜８０％のＡＵＣは正しい、８０％〜９０％は良好、及び９０％超は優良と見なされる。ＡＵＣ推定は、ここではｐＲＯＣ  Ｒパッケージ（ｒｏｂｉｎ２０１１ｐｒｏｃ）を用いて実施される。
【０２４２】
生存分析
標準的な生存分析を用いた：Ｃｏｘモデル（Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｌ，１９８２；Ｔｈｅｒｎｅａｕ，２０００）、カプラン・マイヤーノンパラメトリックハザード推定値（Ｋａｐｌａｎ  ａｎｄ  Ｍｅｉｅｒ，１９５８）、及び生存曲線間の有意性に関する差のログ・ランク検定（Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｆｌｅｍｉｎｇ，１９８２）。ランダムフォレストについては、パッケージｒａｎｄｏｍＦｏｒｅｓｔＳＲＣを使用した（Ｉｓｈｗａｒａｎ  ａｎｄ  Ｋｏｇａｌｕｒ，２００７；Ｉｓｈｗａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｉｓｈｗａｒａｎ  ａｎｄ  Ｋｏｇａｌｕｒ，２０１５）。
【０２４３】
３  結果及び考察
３．１  体液バランス
ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭはΔＨ２Ｏの予測に関して良好な性能を示す。ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ自体は良好な分類力を実現し（ＡＵＣ≒０．８２）（図２Ａ）、応答変数は３５％の分散である。
【０２４４】
ΔＨ２Ｏの選択手順を実施した。重要度分析から、以下の患者及び１日共変量の重要度が指摘された：ｂｍｉ．Ｄ０、体重．Ｄ０、年齢、性別、ＢＭＩ、総タンパク、Ｈｂ、液体摂取量．Ｄ０（体液．Ｄ０）、患者群（群）。バイオマーカーのＭＲ．ｐｒｏＡＤＭは、最も高い重要度を実現した。更なるバイオマーカーが役割を果たすように見える：Ｐｒｏ．Ｅｎｄｏ、ＣＴ．ｐｒｏＡＶＰ、ＥＰＯ、血清総タンパク及びＨｂ。
【０２４５】
３．２  塩分バランス
ΔＨ２Ｏについて観察されたとおり、ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭが良好な分類力を有し（ＡＵＣ≒０．７９）、ｒ２は０．４２である（図２Ｂ）。
【０２４６】
実施した重要度分析から、ΔＨ２Ｏについての観察と同じマーカー／パラメータが指摘され、違いはＤ０におけるナトリウム摂取量（Ｎａ．Ｄ０）がＤ０における液体摂取量（体液．Ｄ０）に代わったことであった。
【０２４７】
４．結論
ΔＨ２Ｏ及びΔＮａの予測に関するＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの鍵となる役割が明確に確認された。それにも関わらず、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを更なるマーカー及び／又はパラメータと組み合わせた場合、体液及び／又は塩分バランスの予測が改善され得る。
【０２４８】
実施例３：更なるパラメータを含めることによる予測の改善
本研究の目的は、選択された一連の共変量（更なるマーカー又はパラメータ）を用いて（表７を参照されたい）、臨床的に利用可能な予測因子を構築することである。
【０２４９】
【表７】
2019502104.tif 000008
【０２５０】
１．１  体液バランス及びナトリウムバランス
ΔＨ２Ｏ予測の参照モデル：
ΔＨ２Ｏ〜ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＋ｂｍｉ．Ｄ０＋体重．Ｄ０＋年齢＋性別＋Ｈｂ＋Ｐｒｏｔ＋ＩＧＳ．ＩＩ＋体液．Ｄ０
ここで、ＩＧＳ．ＩＩ及び体液．Ｄ０は、両方ともに実際上臨床のコンテクストでは入手が困難であるために任意選択である。
【０２５１】
【表８】
2019502104.tif 000009
【０２５２】
表８を見ると分かるとおり（応答「Ｈ２Ｏ」）、このモデルは分散の約７０％を説明し、９２％のＡＵＣの極めて良好な判別力を有した（９５％ＣＩの下限は約８９％である）。ＩＧＳ．ＩＩ及び／又は体液．Ｄ０がないことの影響は非常に限定的であり、ｒ２の低下は２〜３％に過ぎず、ＡＵＣに対しては何ら効果がなかった。
【０２５３】
このモデルはまた、患者体重及びＰｒｏｔから構築した予測因子とも比較した。Ｄ５の体重は利用できなかったため、この時間点は完全に除き、従ってより小さいデータセットとなった。結果は表８に提供した（応答「Ｈ２Ｏ（−Ｄ５）」）。体重及びＰｒｏｔから構築した予測因子は８０％のＡＵＣを達成したに過ぎなかった。この降下は本発明者らの参照モデルからは有意であった（９０％のＡＵＣ）ことに留意されたい。更に、この低下は、体重（ＡＵＣ＝７１％）又はＰｒｏｔ（ＡＵＣ＝６３％）のみを考慮したとき更に劇的であったことから、これらの２つの共変量の有益性が限られていることが更に判明した。また、これらのモデルでは、特に線形回帰のみを用いるとき、ｒ２が極めて限られていることにも留意すべきである。
【０２５４】
ナトリウムバランス
ΔＮａ予測の参照モデル：
ΔＮａ〜ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＋ｂｍｉ．Ｄ０＋体重．Ｄ０＋年齢＋性別＋Ｈｂ＋Ｐｒｏｔ＋Ｎａ．Ｄ０＋ＩＧＳ．ＩＩ＋体液．Ｄ０
ΔＨ２Ｏについて観察されたとおり、ＩＧＳ．ＩＩ及び体液．Ｄ０は両方ともに任意選択である。
【０２５５】
表８を見ると（応答「Ｎａ」）、このモデルが分散の約７０％を説明し、８８％のＡＵＣの良好な判別力を有した（９５％ＣＩの下限は約８４％である）ことが分かる。ΔＨ２Ｏについて観察されたとおり、ＩＧＳ．ＩＩ及び／又は体液．Ｄ０がないことの影響は非常に限定的であった。この場合にも、ΔＨ２Ｏについて観察されたとおり、体重及びＰｒｏｔは応答変数の予測に関する有益性が明らかに限られており、Ｒ２（約２０％）及びＡＵＣ（約６３〜７５％）は両方とも低かった。
【０２５６】
結合予測因子の構築
この節では、「重篤な」患者、即ち、ΔＨ２Ｏ＞４Ｌ及びΔＮａ＞３６ｇの両方を有する患者の予測因子を開発する。そのため、（ΔＨ２Ｏ、ΔＮａ）に関する一個抜き法の残差を合わせて考慮し、その分布は以下の共分散行列のガウス型（中心がある）であることが見出された。
【数１】
2019502104.tif 000010
【０２５７】
従って、予測値（ΔＨ２Ｏ、ΔＮａ）の各組み合わせ（ｘ，ｙ）について、重篤である確率を以下のとおり計算することが可能である：
【数２】
2019502104.tif 000011
この確率はｍｖｔｎｏｒｍ  Ｒパッケージで容易に計算される（Ｇｅｎｚ  ａｎｄ  Ｂｒｅｔｚ，２００９；Ｇｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２５８】
二次元Ｐｃｒｉｔｉｃａｌ（ｐ−ｃｒｉｔｉｃａｌ）関数を図式表示すれば、ΔＨ２Ｏ及びΔＮａ予測値のみを用いて非重篤患者と重篤患者との間を区別することが可能になり得る。この結合予測因子の判別力はＡＵＣ＝０．９２と高いことに留意されたい（実施例４も参照されたい）。
【０２５９】
２．２  血液量応答
全血量及び血漿量
ΔＨ２Ｏ及びΔＮａは、意外にも、ＶＴ及びＶＰについて最適以下の予測因子であることが見出された（表９）。実際、これらが説明したのは分散のせいぜい７％であり、判別力の点でランダム分類器（最良のＡＵＣ＝６４％）よりも優れていることはほとんどなかった。このことから、塩水を「患者に充填する」という臨床的考え方は期待される血漿応答を惹起しないことが明確に実証された。
【０２６０】
【表９】
2019502104.tif 000012
【０２６１】
血球量
血球量（ＶＧ）について、ΔＨ２Ｏ及びΔＮａとの相関が観察された。予測（参照）モデルを構築することが可能であった。
ＶＧ〜ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＋Ｈｂ＋ｂｍｉ．Ｄ０＋性別＋年齢＋Ｐｒｏｔ
【０２６２】
表９を見ると分かるとおり、このモデルは分散の４５％を説明し（これは低い）、しかし、それにも関わらず、８２％のＡＵＣをもたらした（９５％ＣＩ下限は７５％である）。これは明らかに、僅か３０％のｒ２（ランダムフォレストでなく線形モデル）及び７０％のＡＵＣ（９５％下限は６０％）を達成したＨｂのみを用いた単純モデルの改善であった。この結果は、現行の臨床標準である、血球量応答に関する単一のバイオマーカーとしてのＨｂの限界を強調したため興味深いものであった。
【０２６３】
表９を見ると、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを含まない「参照」モデルが４８％のｒ２及び８４％のＡＵＣで同様の性能を実現したことが分かる。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭを含む参照モデルは、低い（＜２０又は１５）ＶＧ又はＲＢＣＶの患者を同定する。
【０２６４】
最良ＶＧモデルの一個抜き法の残差を考慮したとき、本発明者らは、明らかに、これらの残差が３．２〜３．３の標準偏差でガウス型の中心のある分布に従って分布することを観察した。観察された分散の大部分はこのモデルによっては説明されなかったという事実にも関わらず、それらは既に重篤な患者：ＶＧ＜２０ｍＬ／ｋｇの患者の検出に用いることができる。実際、ｘが予測ＶＧである場合、以下となる。
【数３】
2019502104.tif 000013
【０２６５】
図７はＰｃｒｉｔｉｃａｌ関数を示す。この決定関数は、信頼性の高い方法で重篤な患者を検出するためのＨｂに代わる妥当な方法を提供し得る。
【０２６６】
２．３  ＳＯＦＡ
図５には、専門家及び一個抜き手順によって選択されたモデルを用いた予測ＳＯＦＡ値を示す。予測精度はとてつもないものではなかったにしても、相関は極めて高かった。実際、表１０には、正確な予測（差＝０）は僅か１９％の精度であったが、予測ＳＯＦＡと正確なＳＯＦＡとの間のより大きい差を許容した場合、この数値が劇的に上昇した。４の差では、８２％のＳＯＦＡが求められた。
ＳＯＦＡ〜ΔＨ２Ｏ＋ΔＮａ＋年齢＋ｂｍｉ．Ｄ０＋性別
【０２６７】
【表１０】
2019502104.tif 000014
【０２６８】
本発明者らはまた、ＳＯＦＡを３クラスに再編成しようと試みたが、有意な改善はなかった（３３％誤り率）ことに留意されたい。
【０２６９】
２．４  浮腫持続期間
利用可能なデータについては、表１１を参照し得る。
【０２７０】
【表１１】
2019502104.tif 000015
【０２７１】
【表１２】
2019502104.tif 000016
【０２７２】
Ｃｏｘモデル
分析は、これらのデータに比例ハザードモデルを当てはめることから開始した（表１２）。試験した共変量のうち、年齢及びＳＯＦＡのみが有意であった。詳細には、ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭは重要な役割を果たさないものと見られた。本発明者らは、年齢について４１．５歳（中央値）及びＳＯＦＡについて９（中央値）を参照として、年齢及びＳＯＦＡのみを含むＣｏｘモデルを当てはめることにより、調整した浮腫持続期間を構築した。
【０２７３】
カプラン・マイヤー推定値
Ｄ２における低い値（ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＜１．５）及び高い値（ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＞１．５）に基づき層別化して、生存曲線のカプラン・マイヤー推定値を分析した。これらの２つの曲線の差は明らかに有意でなかったことから、表１２の結果が確認された。未調整の浮腫持続期間を用いると、２つの曲線間に有意な差（ｐ＝０．０１）が観察されたが（データは示さず）、年齢及びＳＯＦＡで調整すると、この結果はなくなったことに留意されたい。
【０２７４】
ランダムフォレスト
同じ（未調整の）データに関してランダムフォレストを実施した。この手順では４１％の全誤り率に達し、これは高い（この誤り率の正確な性質については不明であった）。変数重要度の点で、年齢の重要な役割が確認されたが、ＳＯＦＡ及びＭＲ．ｐｒｏＡＤＭは、両方ともこの非線形フレームワークの結果に対する影響は弱いように思われた。一個抜き法を用いて、各患者について共変量（年齢、ＳＯＦＡ及びＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ）に基づきランダムフォレストを用いて生存曲線を予測した。２つのデータセット間の差は、主に、Ｄ２におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが高い患者の大部分が試験終了時に治癒しなかったことに起因した。しかしながら、Ｄ２におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭがより低い患者は、年齢及びＳＯＦＡの効果を含めると、治癒に向かう明らかな傾向がなくなった。
【０２７５】
３．結論
血球量について、ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭは妥当な関連性を有した。更に、本発明者らの研究によれば、現行のバイオマーカー（Ｈｂ）の限界が指摘され、臨床医が今後重篤なＶＧの患者をモニタリングするのに有用となり得る新規モデルが提案される。
【０２７６】
本研究の更に興味深い成果は、明らかに、入手が容易な臨床共変量（ｂｍｉ．Ｄ０、体重．Ｄ０、年齢、性別及び任意選択的にＩＧＳ．ＩＩ及び体液．Ｄ０）のみを３つのバイオマーカー：ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ、Ｈｂ、及びＰｒｏｔと共に用いて重篤な浮腫リスクのある患者を極めて効率的に（ＡＵＣ＞０．９９）検出するΔＨ２Ｏ及びΔＮａ予測を組み合わせた浮腫の予測手段である。
【０２７７】
実施例４：予測の更なる改善
モデル
本明細書で提供されるモデルを単純化するため、元のモデルからＩＧＳ．ＩＩ、体液．Ｊ０及びＮａ．Ｊ０を取り除くことにより、ΔＨ２Ｏ及びΔＮａの両方を予測する単一の単純モデルを得た（以下で「モデル２」と称する）。このモデルに年齢２＝年齢２及び年齢３＝年齢３を含めると、予測力が更に改善された。これが唯一の変換した共変量の追加であり、有意な効果があると見られた。体液バランス及び塩分バランスを予測する実施例３に提示したモデル、即ちパラメータＩＧＳ．ＩＩ、体液．Ｊ０及びＮａ．Ｊ０を含むモデルは「モデル１」と称する。
・「モデル２」：〜ｂｍｉ．Ｊ０＋体重．Ｊ０＋年齢＋年齢２＋年齢３＋性別＋ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＋Ｈｂ＋Ｐｒｏｔ
・「バイオマーカーなし」：〜ｂｍｉ．Ｊ０＋体重．Ｊ０＋年齢＋年齢２＋年齢３＋性別
・「バイオマーカーのみ」〜ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ＋Ｈｂ＋Ｐｒｏｔ
注：ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ、Ｈｂ及びＰｒｏｔは元の計測値のｌｏｇ１ｐ変換を指すことに留意されたい。
【０２７８】
これらのモデルの各々について、一個抜き手法を用いるか、又は完全なデータセットを用いるかのいずれかで予測を実施することができる。当然ながら、性能は常に前者よりも後者で高くなり得る。ロバストな且つ可能な再現性のある結果を得るには一個抜き推定を選好すべきであり、より楽観的な観点について並びに非常に粗雑な方法（ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭを直接使用して普通の患者と重篤な患者とを判別するなど）との比較については、完全なデータセットの推定を用いるべきである。
【０２７９】
ＡＵＣ結果
【０２８０】
【表１３】
2019502104.tif 000017
【０２８１】
【表１４】
2019502104.tif 000018
【０２８２】
単純な共変量及び選択されたバイオマーカーのみを用いる本明細書で提供されるモデル２は、実施例３に提示したモデル１と比べて同様の又は更にはより良好な性能を実現した。いずれの状況でも、ＰｃｒｉｔｉｃａｌはΔＨ２Ｏ及びΔＮａ予測を効率的に組み合わせるように見え、これらの２つの方法の最良のものと比べて僅かな改善があった。いかなるバイオマーカーも含まないモデルを考察すると、性能の有意な低下があった。しかしながら、このモデルはそれにも関わらず高い浮腫リスクの患者を指摘することに留意すべきである。バイオマーカーのみを考察すると、最良モデルと比較して性能は同様であったが、それはなおも劣っていた。
【０２８３】
比較のため、ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ単独を実施して普通の患者と重篤な患者とを区別するとＡＵＣ＝０．８４５［０．７９１〜０．８９８］が実現し、これが一貫しているためには表１４のＡＵＣ（最良モデルについて０．９９０）と比較しなければならない。従って、更なるマーカー及び／又はパラメータを組み合わせると、予測力のなお一層の改善がもたらされた。
【０２８４】
最良モデルの詳細
３つの異なる方法、即ち、１）予測ΔＨ２Ｏのみを使用する方法；２）予測ΔＮａのみを使用する方法；３）両方の予測をＰｃｒｉｔｉｃａｌに組み合わせる方法で得たＲＯＣを比較した。ΔＨ２Ｏの効率が他の２つと比べてはるかに低い場合（これは表１３及び表１４と一致する）、ΔＮａ及びＰｃｒｉｔｉｃａｌのＲＯＣは極めて類似する。しかしながら、Ｐｃｒｉｔｉｃａｌは高い特異度の点で（例えば、Ｓｐｅ＞０．９５）ΔＮａよりも優れている。このことは、Ｓｐｅ∈［１．００，０．９５］の（調整済みの）部分的ＡＵＣを考えることにより明らかになり得る。ΔＨ２Ｏについて０．７８１の値、ΔＮａについて０．８８２の値、及びＰについて０．９４８の値が得られた。これらの結果から、高い特異度が要求されるとき、Ｐｃｒｉｔｉｃａｌの信頼性がΔＮａ（及びΔＨ２Ｏ）よりも更に一層高かったことが示唆された。
【０２８５】
【表１５】
2019502104.tif 000019
【０２８６】
表１５には、様々な閾値でＰｃｒｉｔｉｃａｌを用いた予測の性能を要約した。偽陽性及び偽陰性のコストに応じて、これは、２つが同時に起こるリスク間の最良の妥協を達成する閾値の選択を可能にすべきである。
【０２８７】
本研究に組み入れた２０１人の患者の予測ΔＨ２Ｏ対予測ΔＮａを分析した（図６）。両予測は高度に相関し（ｃｏｒ≒０．９）、これは観察されたΔＨ２Ｏ及びΔＮａ（ｃｏｒ≒０．８）と一致している。このＰｃｒｉｔｉｃａｌの表現から、高リスク領域がほぼ「重篤な」患者によってのみ表され、及び低リスク領域が「普通の」患者によってのみ表されることが実証された。
【０２８８】
Ｐｃｒｉｔｉｃａｌ、ＳＯＦＡ及びＶＧ間の相関
本節では、本発明者らは新規ＰｃｒｉｔｉｃａｌスコアとＳＯＦＡ及びＶＧ（血球量）との比較を行う。表１６及び表１７を見ると、ＳＯＦＡとＰｃｒｉｔｉｃａｌとの間に良好な相関があることが分かる。
【０２８９】
これ以降、本発明者らは、目的とする２つの特定の群：合計８６人のＰｃｒｉｔｉｃａｌ＜０：１の患者（２０１人中）が集まる「低リスク」群、及び５５人のＰｃｒｉｔｉｃａｌ＞０：９の患者が集まる「高リスク」群に焦点を合わせた。
【０２９０】
【表１６】
2019502104.tif 000020
【０２９１】
【表１７】
2019502104.tif 000021
【０２９２】
ＳＯＦＡは「低リスク」群よりも「高リスク」群で有意に高かったことが確認される。対照的に、ＶＧは「高リスク」群で有意に低かった。
【０２９３】
最後に、Ｐｃｒｉｔｉｃａｌを使用してＶＧ＜１５の患者（９１症例）とＶＧ≧１５の患者（４３対照）とを判別した。０：７６のＡＵＲＯＣ（９５％ＣＩは［０．６７〜０．８５］である）が得られた。データセット中にＶＧの測定が１３４例のみであることに起因してＣＩがかなり大きいことに留意されたい。
【０２９４】
結論
バイオマーカー（ＭＲ．ｐｒｏＡＤＭ、Ｈｂ、Ｐｒｏｔ）及び単純な共変量（ｂｍｉ、体重、年齢、性別）のみを用いる本明細書で提供されるモデルは、一個抜きフレームワークで０．９２６の最も高いＡＵＣ、及び全てのデータを使用したとき０．９９０のＡＵＣを達成した。この性能は優れている。臨床応用の点で、図６に提供されるとおりの図が臨床医に有用な情報を提供し得るであろう。
【０２９５】
本明細書に引用する全ての参考文献は、全体が参照によって援用される。ここで、本発明を詳細に説明したことにより、当業者は、本発明の趣旨若しくは範囲又はその任意の実施形態に影響を及ぼすことなく、広い均等な範囲内にある種々の条件、パラメータなどで本発明が実施され得ることを理解するであろう。
【０２９６】
Ｒｉｖｅｒｓ  Ｅ，Ｎｇｕｙｅｎ  Ｂ，Ｈａｖｓｔａｄ  Ｓ，Ｒｅｓｓｌｅｒ  Ｊ，Ｍｕｚｚｉｎ  Ａ，Ｋｎｏｂｌｉｃｈ  Ｂ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  Ｅ，Ｔｏｍｌａｎｏｖｉｃｈ  Ｍ．Ｅａｒｌｙ  Ｇｏａｌ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ：Ｅａｒｌｙ  ｇｏａｌ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００１，３４５：１３６８−１３７７．
Ｃｈａｐｐｅｌｌ  Ｄ，Ｊａｃｏｂ  Ｍ，Ｋｌａｕｓ  Ｈｏｆｍａｎｎ−Ｋｉｅｆｅｒ  Ｋ，Ｃｏｎｚｅ  Ｐ，Ｒｅｈｍ  Ｍ．Ａ  Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｆｌｕｉｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ２００８；１０９：７２３−４０
Ｓａｋｒ  Ｙ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ，Ｒｅｉｎｈａｒｔ  Ｋ，Ｇｒｏｅｎｅｖｅｌｄ  Ｊ，Ｍｉｃｈａｌｏｐｏｕｌｏｓ  Ａ，Ｓｐｒｕｎｇ  ＣＬ，Ａｒｔｉｇａｓ  Ａ，Ｒａｎｉｅｒｉ  ＶＭ；Ｓｅｐｓｉｓ  Ｏｃｃｕｒｅｎｃｅ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅｌｙ  Ｉｌｌ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ．Ｈｉｇｈ  ｔｉｄａｌ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｎｄ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｗｏｒｓｅ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｈｅｓｔ．２００５；１２８（５）：３０９８−１０８
Ｂａｇｓｈａｗ  ＳＭ，Ｂｒｏｐｈｙ  ＰＤ，Ｃｒｕｚ  Ｄ，Ｒｏｎｃｏ  Ｃ．Ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ａｓ  ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ：ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｆｌｕｉｄ  ｏｖｅｒｌｏａｄ  ｏｎ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２００８；１２（４）：１６９．
Ｐａｙｅｎ  Ｄ，ｄｅ  Ｐｏｎｔ  ＡＣ，Ｓａｋｒ  Ｙ，Ｓｐｉｅｓ  Ｃ，Ｒｅｉｎｈａｒｔ  Ｋ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ；Ｓｅｐｓｉｓ  Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅｌｙ  Ｉｌｌ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ（ＳＯＡＰ）ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓＡ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｗｏｒｓｅ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２００８；１２（３）：Ｒ７４．
Ｍｕｒｐｈｙ  ＣＶ，Ｓｃｈｒａｍｍ  ＧＥ，Ｄｏｈｅｒｔｙ  ＪＡ，Ｒｅｉｃｈｌｅｙ  ＲＭ，Ｇａｊｉｃ  Ｏ，Ａｆｅｓｓａ  Ｂ，Ｍｉｃｅｋ  ＳＴ，Ｋｏｌｌｅｆ  ＭＨ．Ｔｈｅ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｆｌｕｉｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｏ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｃｈｅｓｔ．２００９；１３６（１）：１０２−９．
Ｂｏｙｄ  ＪＨ，Ｆｏｒｂｅｓ  Ｊ，Ｎａｋａｄａ  ＴＡ，Ｗａｌｌｅｙ  ＫＲ，Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＪＡ．Ｆｌｕｉｄ  ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ：ａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ａｎｄ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｖｅｎｏｕｓ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１１；３９（２）：２５９−６５．
Ｋｅｌｍ  ＤＪ，Ｐｅｒｒｉｎ  ＪＴ，Ｃａｒｔｉｎ−Ｃｅｂａ  Ｒ，Ｇａｊｉｃ  Ｏ，Ｓｃｈｅｎｃｋ  Ｌ，Ｋｅｎｎｅｄｙ  ＣＣ．Ｆｌｕｉｄ  ｏｖｅｒｌｏａｄ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｇｏａｌ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｆｌｕｉｄ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｄｅａｔｈ．Ｓｈｏｃｋ．２０１５；４３（１）：６８−７３．
Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  Ａ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ．Ａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１５；１９（１）：２５１．
Ｃｅｃｃｏｎｉ  Ｍ，Ｐａｒｓｏｎｓ  ＡＫ，Ｒｈｏｄｅｓ  Ａ．Ｗｈａｔ  ｉｓ  ａ  ｆｌｕｉｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ？Ｃｕｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２０１１  １７：２９０−２９５
Ｃｈａｐｐｅｌｌ  Ｄ，Ｗｅｓｔｐｈａｌ  Ｍ，Ｊａｃｏｂ  Ｍ．Ｔｈｅ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｙｃｏｃａｌｙｘ  ｏｎ  ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  ｏｘｙｇｅｎ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｉｌｌｎｅｓｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ．２００９；２２（２）：１５５−６２．レビュー
Ｊａｃｏｂ  Ｍ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ  Ｄ，Ｈｏｌｌｍａｎｎ  ＭＷ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｈａｎｄｌｉｎｇ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ．２００９；２２（１）：１００−８．レビュー．
Ｏｓｔｒｏｗｓｋｉ  ＳＲ，Ｈａａｓｅ  Ｎ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＲＢ，Ｍｏｅｌｌｅｒ  ＭＨ，Ｐｏｔｔ  ＦＣ，Ｐｅｒｎｅｒ  Ａ，Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ＰＩ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｃｏａｇｕｌａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１５  Ａｐｒ  ２４；１９：１９１．
Ｓａｋｒ  Ｙ，Ｌｏｂｏ  ＳＭ，Ｍｏｒｅｎｏ  ＲＰ，Ｇｅｒｌａｃｈ  Ｈ，Ｒａｎｉｅｒｉ  ＶＭ，Ｍｉｃｈａｌｏｐｏｕｌｏｓ  Ａ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ；ＳＯＡＰ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ．Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｇａｎ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｕｎｉｔ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１２；１６（６）：Ｒ２２２．
Ｂｅｓｅｎ  ＢＡ，Ｇｏｂａｔｔｏ  ＡＬ，Ｍｅｌｒｏ  ＬＭ，Ｍａｃｉｅｌ  ＡＴ，Ｐａｒｋ  Ｍ．Ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  ｏｖｅｒｌｏａｄ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１５；４（２）：１１６−２９．
Ｌｏｂｏ  ＤＮ，Ｂｏｓｔｏｃｋ  ＫＡ，Ｎｅａｌ  ＫＲ，Ｐｅｒｋｉｎｓ  ＡＣ，Ｒｏｗｌａｎｄｓ  ＢＪ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＳＰ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓａｌｔ  ａｎｄ  ｗａｔｅｒ  ｂａｌａｎｃｅ  ｏｎ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２００２；３５９（９３２０）：１８１２−８．
Ｂｒａｎｄｓｔｒｕｐ  Ｂ，Ｔｏｅｎｎｅｓｅｎ  Ｈ，Ｂｅｉｅｒ−Ｈｏｌｇｅｒｓｅｎ  Ｒ，Ｈｊｏｒｔｓｏｅ  Ｅ，ｅｒ  ａｌ．Ｄａｎｉｓｈ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｎ  Ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｆｌｕｉｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｉｄ  ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐｅｒｉ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｆｌｕｉｄ  ｒｅｇｉｍｅｎｓ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ａｓｓｅｓｓｏｒ−ｂｌｉｎｄｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｔｒｉａｌ．Ａｎｎ  Ｓｕｒｇ  ２００３，２３８：６４１−６４８．
Ｂｊｅｒｒｅｇａａｒｄ  ＬＳ，Ｍｏｅｌｌｅｒ−Ｓｏｅｒｅｎｓｅｎ  Ｈ，Ｈａｎｓｅｎ  ＫＬ，Ｒａｖｎ  Ｊ，Ｎｉｌｓｓｏｎ  ＪＣ．Ｕｓｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｔｏ  ｇｕｉｄｅ  ｆｌｕｉｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ．Ａ  ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ，ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｗａｌｓｈ  ＳＲ，Ｗａｌｓｈ  ＣＪ．Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｉｄ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ  ｉｎ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｎｎ  Ｒ  Ｃｏｌｌ  Ｓｕｒｇ  Ｅｎｇｌ．２００５；８７（２）：１２６−３０．
ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ＭＤ，Ｌｅｍａｉｒｅ  ＬＣ，Ｇｉｅｂｅｌｅｎ  ＩＡ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｐａｐａｓｓｏｔｉｒｉｏｕ  Ｊ，Ｅｌｌｉｏｔｔ  ＰＪ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｏｌｌ  Ｔ．Ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２００８；３４（３）：５１８−２２．
Ｓｃｈｗｅｄａ  Ｆ．Ｓａｌｔ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｐｆｌｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ．２０１５；４６７（３）：５６５−７６．
Ｆａｒａｇ  Ｅ；Ｍａｈｅｓｈｗａｒｉ  Ｋ，Ｍｏｒｇａｎ  Ｊ，Ｓａｋｒ  Ｅ，Ｗａｅｌ  Ａ，Ｄｏｙｌｅ  ＤＪ．Ａｎ  Ｕｐｄａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｒｅｎｉｎ  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ．２０１５；１２０（２）：２７５−２９２
Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ａ．Ｃｏｐｅｐｔｉｎ，ａ  ｓｔａｂｌｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ，ｉｓ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２６（２００５）２５００−２５０４
Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｂ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ａ，Ｒｅｄｌ  Ｈ  Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  Ｍ．Ｃｏｐｅｐｔｉｎ，ａ  ｓｔａｂｌｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｉｓ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．２００７．２８：２１９−２２６
Ｚｗｅｉｆｅｌ  Ｃ，Ｋａｔａｎ  Ｍ，Ｓｃｈｕｅｔｚ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｐｅｐｔｉｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｒｅ  ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ．ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０１０；１０：３４．
Ｕｒｗｙｌｅｒ  ＳＡ，Ｓｃｈｕｅｔｚ  Ｐ，Ｆｌｕｒｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｎｏｓｔｉｃ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｃｏｐｅｐｔｉｎ．Ｏｎｅ−ｙｅａｒ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｐａｔｉｅｎｔｙ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｓｔｒｏｋｅ．Ｓｔｒｏｋｅ  ４１：１５６４−１５６７，２０１０．
Ｋｏｈａｎ  ＤＥ，Ｒｏｓｓｉ  ＮＦ，Ｉｎｓｃｈｏ  Ｅ，Ｐｏｌｌｏｃｋ  ＤＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ａｎｄ  ｓａｌｔ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ９１：１−７７，２０１１
Ｂｒｅｙｍａｎｎ  Ｃ，Ｒｏｈｌｉｎｇ  Ｒ，Ｈｕｃｈ  Ａ，Ｈｕｃｈ  Ｒ．Ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｏｌｕｍｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｈｕｍａｎｓ．Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０００；７９：１８３−１８６
Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  Ｍ．，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｈａｒｂａｒｔｈ  Ｓ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ａ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｂ．Ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ａｎ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２００５；９：Ｒ８１６−Ｒ８２４．
Ｋｏｙａｍａ  Ｔ，Ｏｃｈｏａ−Ｃａｌｌｅｊｅｒｏ  Ｌ，Ｓａｋｕｒａｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ−ＲＡＭＰ２  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３  １２７（７）：８４２−５３．
Ｂｒｉｓｍａｎ  ＪＬ，Ｓｏｎｇ  ＪＫ，Ｎｅｗｅｌｌ  ＤＷ．Ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００６；３５５（９）：９２８−３９．
Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ，Ｍｏｒｅｎｏ  Ｒ，Ｔａｋａｌａ  Ｊ，Ｗｉｌｌａｔｔｓ  Ｓ，Ｄｅ  Ｍｅｎｄｏｎｃａ  Ａ，Ｂｒｕｉｎｉｎｇ  Ｈ，Ｒｅｉｎｈａｒｔ  ＣＫ，Ｓｕｔｅｒ  ＰＭ，Ｔｈｉｊｓ  ＬＧ：Ｔｈｅ  ＳＯＦＡ  Ｓｅｐｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｏｒｇａｎ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．ｓｃｏｒｅ  ｔｏ  ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｏｒｇａｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ／ｆａｉｌｕｒｅ．Ｏｎ  ｂｅｈａｌｆ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｎ  Ｓｅｐｓｉｓ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １９９６，２２：７０７−７１０．
Ｆｅｉｓｓｅｌ  Ｍ，Ｍｉｃｈａｒｄ  Ｆ，Ｆａｌｌｅｒ  ＪＰ，Ｔｅｂｏｕｌ  ＪＬ．Ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆｅｒｉｏｒ  ｖｅｎａ  ｃａｖａ  ｄｉａｍｅｔｅｒ  ａｓ  ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｆｌｕｉｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２００４；３０（９）：１８３４−７．
Ｆｅｉｓｓｅｌ  Ｍ，Ｍｉｃｈａｒｄ  Ｆ，Ｍａｎｇｉｎ  Ｉ，Ｒｕｙｅｒ  Ｏ，Ｆａｌｌｅｒ  ＪＰ，Ｔｅｂｏｕｌ  ＪＬ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａｏｒｔｉｃ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｌｏｃｉｔｙ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｏｆ  ｆｌｕｉｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ｉｎ  ｖｅｎｔｉｌａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｃｈｅｓｔ．２００１；１１９（３）：８６７−７３．
Ｍｏｎｎｅｔ  Ｘ，Ｔｅｂｏｕｌ  ＪＬ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｖｏｌｕｍｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｖｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ：ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１３；１７（２）：２１７．
Ｇｏｒｅ  ＣＪ，Ｈｏｐｋｉｎｓ  ＷＧ，Ｂｕｒｇｅ  ＣＭ．Ｅｒｒｏｒｓ  ｏｆ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｏｌｕｍｅ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００５；９９：１７４５−１７５８．
Ｆａｉｒｂａｎｋｓ  ＶＦ，Ｋｌｅｅ  ＧＧ，Ｗｉｓｅｍａｎ  ＧＡ，Ｈｏｙｅｒ  ＪＤ，Ｔｅｆｆｅｒｉ  Ａ，Ｐｅｔｉｔｔ  ＲＭ，Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ  ＭＮ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｎｄ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌ  ｍａｓｓ：ｒｅ−ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ５１Ｃｒ  ａｎｄ  １２５Ｉ  ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ｍｏｌ  Ｄｉｓ．１９９６；２２（２）：１６９−８６．
Ｄｏｒｈｏｕｔ  Ｍｅｅｓ  ＳＭ，Ｈｏｆｆ  ＲＧ，Ｒｉｎｋｅｌ  ＧＪＥ，Ａｌｇｒａ  Ａ，ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈ  ＷＭ．Ｂｒａｉｎ  ｎａｔｕｉｒｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ａｆｔｅｒ  ａｎｅｕｖｒｉｓｍａｌ  ｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｏｖｏｌｅｍｉａ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｎａｔｒｅｍｉａ．Ｎｅｕｒｏｃｒｉｔ  ｃａｒｅ，２０１１
Ｐｅｒｒｉｎｏ  ＡＣ  Ｊｒ，Ｈａｒｒｉｓ  ＳＮ，Ｌｕｔｈｅｒ  ＭＡ．Ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｏｕｔｐｕｔ  ｕｓｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌａｎｅ  ｔｒａｎｓｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ：ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅｒｍｏｄｉｌｕｔｉｏｎ．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  １９９８；８９：３５０−７
Ｇｅｎｚ  Ａ，Ｂｒｅｔｚ  Ｆ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  Ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｔ  Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ．Ｌｅｃｔｕｒｅ  Ｎｏｔｅｓ  ｉｎ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，２００９．ＩＳＢＮ  ９７８−３−６４２−０１６８８−２．
Ｇｅｎｚ  Ａ，Ｂｒｅｔｚ  Ｆ，Ｍｉｗａ  Ｔ，Ｍｉ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．ｍｖｔｎｏｒｍ：Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  Ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｔ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ，２０１４．ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ＣＲＡＮ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｐａｃｋａｇｅ＝ｍｖｔｎｏｒｍ．Ｒパッケージ．バージョン１．０−２．
Ｍａｌｂｒａｉｎ  ＭＬ，Ｍａｒｉｋ  ＰＥ，Ｗｉｔｔｅｒｓ  Ｉ，Ｃｏｒｄｅｍａｎｓ  Ｃ，Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ  ＡＷ，Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＤＪ，Ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ  Ｎ．Ｆｌｕｉｄ  ｏｖｅｒｌｏａｄ，ｄｅ−ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｏｒ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ｗｉｔｈ  ｓｕｇｇｅｓｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ．Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｔｈｅｒ．２０１４；４６（５）：３６１−８０．
Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ，Ｒｈｏｄｅｓ  Ａ，Ｐｅｒｅｌ  Ａ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｇ，Ｒｏｃｃａ  Ｇ，Ｖａｌｌｅｔ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ  Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ：ａ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｏｆ  １６．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ２０１１，１５：２２９（１８  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１１）
Ｔｉｔｚｅ  Ｊ．Ｓｏｄｉｕｍ  ｂａｌａｎｃｅ  ｉｓ  ｎｏｔ  ｊｕｓｔ  ａ  ｒｅｎａｌ  ａｆｆａｉｒ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．２０１４；２３（２）：１０１−５．
Ｊａｎｔｓｃｈ  Ｊ，Ｂｉｎｇｅｒ  ＫＪ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＤＮ，Ｔｉｔｚｅ  Ｊ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０１４  Ｍａｙ  ５；５：１４６．
Ｋａｈｎ  ＭＬ．Ｂｌｏｏｄ  ｉｓ  ｔｈｉｃｋｅｒ  ｔｈａｎ  ｌｙｍｐｈ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００８；１１８（１）：２３−６．
Ｂａｒｋ  ＢＰ，Ｐｅｒｓｓｏｎ  Ｊ，Ｇｒａｅｎｄｅ  ＰＯ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ５％  ａｌｂｕｍｉｎ，６％  ＨＥＳ  １３０／０．４，４％  ｇｅｌａｔｉｎ，ａｎｄ  ０．９％  ＮａＣｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｐｔｉｃ  ｒａｔ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１３；４１（３）：８５７−６６．
Ｔａｋａｎｉｓｈｉ  ＤＭ，Ｙｕ  Ｍ，Ｌｕｒｉｅ  Ｆ，Ｂｉｕｋ−Ａｇｈａｉ  Ｅ，Ｙａｍａｕｃｈｉ  Ｈ，Ｈｏ  ＨＣ，Ｃｈａｐｉｔａｌ  ＡＤ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｈｅｍａｔｏｃｒｉｔ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａｎ  ｉｍｐｒｅｃｉｓｅ  ｓｕｒｒｏｇａｔｅ  ｏｆ  ｔｒｕｅ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｖｏｌｕｍｅ．Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ．２００８；１０６（６）：１８０８−１２
Ｎａｉｄｅｃｈ  ＡＭ，Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ  Ｂ，Ｗａｒｔｅｎｂｅｒｇ  ＫＥ，Ｐａｒｒａ  Ａ，Ｏｓｔａｐｋｏｖｉｃｈ  Ｎ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ＥＳ，Ｍａｙｅｒ  ＳＡ，Ｃｏｍｍｉｃｈａｕ  Ｃ．Ｈｉｇｈｅｒ  ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ａｆｔｅｒ  ｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２００７；３５（１０）：２３８３−９
Ｋ．Ｋｉｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．：Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９４：７２０−７２５（１９９３）
Ｐｅｒ  Ｋｒａｇｈ  Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｄ  Ｇｉｌｌ．Ｃｏｘ’ｓ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ：ａ  ｌａｒｇｅ  ｓａｍｐｌｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ  ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，ｐａｇｅｓ  １１００−１１２０，１９８２．
Ａｎｎｅ−Ｌａｕｒｅ  Ｂｏｕｌｅｓｔｅｉｘ，Ｓｉｌｋｅ  Ｊａｎｉｔｚａ，Ｊｏｃｈｅｎ  Ｋｒｕｐｐａ，ａｎｄ  Ｉｎｋｅ  Ｒ  Ｋｏｅｎｉｇ．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍ  ｆｏｒｅｓｔ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｅｍｐｈａｓｉｓ  ｏｎ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｄａｔａ  Ｍｉｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２（６）：４９３−５０７，２０１２．
Ｌｅｏ  Ｂｒｅｉｍａｎ．Ｒａｎｄｏｍ  ｆｏｒｅｓｔｓ．Ｍａｃｈｉｎｅ  ｌｅａｒｎｉｎｇ，４５（１）：５−３２，２００１．
Ｌｅｏ  Ｂｒｅｉｍａｎ．Ｍａｎｕａｌ  ｏｎ  ｓｅｔｔｉｎｇ  ｕｐ，ｕｓｉｎｇ，ａｎｄ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｒａｎｄｏｍ  ｆｏｒｅｓｔｓ  ｖ３．１．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ，ＵＳＡ，２００２．
Ｒａｍｏｎ  Ｄｉａｚ−Ｕｒｉａｒｔｅ  ａｎｄ  Ｓａｒａ  Ａｌｖａｒｅｚ  Ｄｅ  Ａｎｄｒｅｓ．Ｇｅｎｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｄａｔａ  ｕｓｉｎｇ  ｒａｎｄｏｍ  ｆｏｒｅｓｔ．ＢＭＣ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，７（１）：３，２００６．
Ｄａｖｉｄ  Ｐ  Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍａｓ  Ｒ  Ｆｌｅｍｉｎｇ．Ａ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｒａｎｋ  ｔｅｓｔ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｃｅｎｓｏｒｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｄａｔａ．Ｂｉｏｍｅｔｒｉｋａ，６９（３）：５５３−５６６，１９８２．
Ｈ．Ｉｓｈｗａｒａｎ  ａｎｄ  Ｕ．Ｂ．Ｋｏｇａｌｕｒ．Ｒａｎｄｏｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｏｒｅｓｔｓ  ｆｏｒ  ｒ．Ｒ  Ｎｅｗｓ，７（２）：２５−３１，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００７．ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ＣＲＡＮ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｄｏｃ／Ｒｎｅｗｓ／．
Ｈ．Ｉｓｈｗａｒａｎ  ａｎｄ  Ｕ．Ｂ．Ｋｏｇａｌｕｒ．Ｒａｎｄｏｍ  Ｆｏｒｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＦ−ＳＲＣ），２０１５．ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ｃｒａｎ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／ｐａｃｋａｇｅｓ／ｒａｎｄｏｍＦｏｒｅｓｔＳＲＣ／．Ｒ  ｐａｃｋａｇｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ  １．６．１．
Ｈ．Ｉｓｈｗａｒａｎ，Ｕ．Ｂ．Ｋｏｇａｌｕｒ，Ｅ．Ｈ．Ｂｌａｃｋｓｔｏｎｅ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｌａｕｅｒ．Ｒａｎｄｏｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｏｒｅｓｔｓ．Ａｎｎ．Ａｐｐｌ．Ｓｔａｔｉｓｔ．，２（３）：８４１−８６０，２００８．ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ａｒＸｉｖ．ｏｒｇ／ａｂｓ／０８１１．１６４５ｖ１．
Ｅｄｗａｒｄ  Ｌ  Ｋａｐｌａｎ  ａｎｄ  Ｐａｕｌ  Ｍｅｉｅｒ．Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，５３（２８２）：４５７−４８１，１９５８．
Ｃｕｏｎｇ  Ｎｇｕｙｅｎ，Ｙｏｎｇ  Ｗａｎｇ，ａｎｄ  Ｈａ  Ｎａｍ  Ｎｇｕｙｅｎ．Ｒａｎｄｏｍ  ｆｏｒｅｓｔ  ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｆｅａｔｕｒｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，６（５）：３１８８７，２０１３．
Ｒコアチーム（Ｒ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ）．Ｒ：Ａ  Ｌａｎｇｕａｇｅ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，２０１３．ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／．
Ｘａｖｉｅｒ  Ｒｏｂｉｎ，Ｎａｔａｃｈａ  Ｔｕｒｃｋ，Ａｌｅｘａｎｄｒｅ  Ｈａｉｎａｒｄ，Ｎａｔａｌｉａ  Ｔｉｂｅｒｔｉ，Ｆｒｅｄｅｒｉｑｕｅ  Ｌｉｓａｃｅｋ，Ｊｅａｎ−Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｓａｎｃｈｅｚ，ａｎｄ  Ｍａｒｋｕｓ  Ｍｕｅｌｌｅｒ．ｐＲＯＣ：ａｎ  ｏｐｅｎ−ｓｏｕｒｃｅ  ｐａｃｋａｇｅ  ｆｏｒ  Ｒ  ａｎｄ  Ｓ＋  ｔｏ  ａｎａｌｙｚｅ  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒｅ  ＲＯＣ  ｃｕｒｖｅｓ．ＢＭＣ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１２（１）：７７，２０１１．
Ｔｅｒｒｙ  Ｍ  Ｔｈｅｒｎｅａｕ．Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｄａｔａ：ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｏｘ  ｍｏｄｅｌ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０００．
Ｊａｃｏｂ  Ｍ，Ａｎｎａｈｅｉｍ  Ｓ，Ｂｏｕｔｅｌｌｉｅｒ  Ｕ，Ｈｉｎｓｋｅ  Ｃ，Ｒｅｈｍ  Ｍ，Ｂｒｅｙｍａｎｎ  Ｃ，Ｋｒａｆｆｔ  Ａ．Ｈａｅｍａｔｏｃｒｉｔ  ｉｓ  ｉｎｖａｌｉｄ  ｆｏｒ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌ  ｖｏｌｕｍｅ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｂｌｏｏｄ  Ｔｒａｎｓｆｕｓ．２０１２  Ｏｃｔ；１０（４）：４７１−９．ｄｏｉ：１０．２４５０／２０１２．０１１１−１１．Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｍａｙ  ４．
ＳＡＦＥ  Ｓｔｕｄｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ，Ｆｉｎｆｅｒ  Ｓ，ＭｃＥｖｏｙ  Ｓ，Ｂｅｌｌｏｍｏ  Ｒ，ＭｃＡｒｔｈｕｒ  Ｃ，Ｍｙｂｕｒｇｈ  Ｊ，Ｎｏｒｔｏｎ  Ｒ．Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｓａｌｉｎｅ  ｏｎ  ｏｒｇａｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１１  Ｊａｎ；３７（１）：８６−９６．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００１３４−０１０−２０３９−６．Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ｏｃｔ  ６．
Ｊｏｚｗｉａｋ  Ｍ，Ｓｉｌｖａ  Ｓ，Ｐｅｒｓｉｃｈｉｎｉ  Ｒ，Ａｎｇｕｅｌ  Ｎ，Ｏｓｍａｎ  Ｄ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ，Ｔｅｂｏｕｌ  ＪＬ，Ｍｏｎｎｅｔ  Ｘ．Ｅｘｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  ｌｕｎｇ  ｗａｔｅｒ  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｄｉｓｔｒｅｓｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｆｅｂ；４１（２）：４７２−８０．ｄｏｉ：１０．１０９７／ＣＣＭ．０ｂ０１３ｅ３１８２６ａｂ３７７．
Ｅｌｏｆｓｏｎ  ＫＡ，Ｅｉｆｅｒｍａｎ  ＤＡ，Ｐｏｒｔｅｒ  Ｋ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＣＶ．Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｌａｔｅ  ｆｌｕｉｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｔｒａｕｍａ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１５  Ｊｕｌ  １６．ｐｉｉ：Ｓ０８８３−９４４１（１５）００３７６−７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｃｒｃ．２０１５．０７．００９．［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］  ＰＭＩＤ：２６３４１４５７
Ｋｉｓｓｏｏｎ  ＮＲ，Ｍａｎｄｒｅｋａｒ  ＪＮ，Ｆｕｇａｔｅ  ＪＥ，Ｌａｎｚｉｎｏ  Ｇ，Ｗｉｊｄｉｃｋｓ  ＥＦ，Ｒａｂｉｎｓｔｅｉｎ  ＡＡ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｆｌｕｉｄ  Ｂａｌａｎｃｅ  Ｉｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｗｉｔｈ  Ｐｏｏｒ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄ  Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ．Ｊ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ  Ｄｉｓ．２０１５  Ｏｃｔ；２４（１０）：２２４５−５１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｓｔｒｏｋｅｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｄｉｓ．２０１５．０５．０２７．Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ａｕｇ  １３．
Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ，Ｍｏｒｅｎｏ  Ｒ，Ｔａｋａｌａ  Ｊ，Ｗｉｌｌａｔｔｓ  Ｓ，Ｄｅ  Ｍｅｎｄｏｎｃａ  Ａ，Ｂｒｕｉｎｉｎｇ  Ｈ，Ｒｅｉｎｈａｒｔ  ＣＫ，Ｓｕｔｅｒ  ＰＭ，Ｔｈｉｊｓ  ＬＧ．Ｔｈｅ  ＳＯＦＡ（Ｓｅｐｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｏｒｇａｎ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）ｓｃｏｒｅ  ｔｏ  ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｏｒｇａｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ／ｆａｉｌｕｒｅ．Ｏｎ  ｂｅｈａｌｆ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｎ  Ｓｅｐｓｉｓ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９６  Ｊｕｌ；２２（７）：７０７−１０．
Ｋｌｅｉｎ  ＨＧ，Ｆｌｅｇｅｌ  ＷＡ，Ｎａｔａｎｓｏｎ  Ｃ．Ｒｅｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ：Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｖｓ  Ｉｍｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．ＪＡＭＡ．２０１５  Ｏｃｔ  ２０；３１４（１５）：１５５７−８．ｄｏｉ：１０．１００１／ｊａｍａ．２０１５．１０８９０．
【図１】
2019502104.tif 000022
【図２Ａ】
2019502104.tif 000023
【図２Ｂ】
2019502104.tif 000024
【図３Ａ】
2019502104.tif 000025
【図３Ｂ】
2019502104.tif 000026
【図３Ｃ】
2019502104.tif 000027
【図３Ｄ】
2019502104.tif 000028
【図４Ａ】
2019502104.tif 000029
【図４Ｂ】
2019502104.tif 000030
【図５】
2019502104.tif 000031
【図６】
2019502104.tif 000032
【図７】
2019502104.tif 000033
【配列表】
2019502104000001.app
【国際調査報告】
2019502104.tif 000034
2019502104.tif 000035
2019502104.tif 000036