(57)【要約】  本発明は、錯体形成された227Thおよび（錯体形成されているかまたは溶液中の）223Raを含む混合物から錯体形成された227Thを精製するための方法を提供し、該方法は、  i）錯体形成された227Thイオンと223Raイオンの混合物を第1の水性緩衝剤中に含む第1の溶液を調製する工程；  ii）前記第1の溶液を分離材にロードする工程；  iii）錯体形成された227Thを前記分離材から溶離させ、それにより錯体形成された227Thを含む第2の溶液を生成する工程；  iv）場合により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐ工程；を含む。  本発明は、精製された227Th溶液、医薬製剤および癌などの疾患の治療におけるその使用、ならびにそのような製品を生成するためのキットをさらに提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
錯体形成された227Thおよび（錯体形成されているかまたは溶液中の）223Raを含む混合物から錯体形成された227Thを精製するための方法であって、
i）錯体形成された227Thイオンと223Raイオンとの混合物を第1の水性緩衝剤中に含む第1の溶液を調製する工程と、
ii）前記第1の溶液を分離材にロードする工程と、
iii）錯体形成された227Thを前記分離材から溶離させ、それにより錯体形成された227Thを含む第2の溶液を生成する工程と、
iv）場合により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐ工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
工程i）の前に、以下の工程X）
X）227Thイオンを少なくとも1つの錯化剤と溶液中で接触させ、それにより錯体形成された227Thの少なくとも1つの水溶液を形成する工程
をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記錯化剤が、標的化部分とコンジュゲートされたキレート部分である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
以下の任意選択の工程：
v）前記第2の溶液の227Th含有量を分析する工程；
vi）液体を前記第2の溶液から蒸発させる工程；
vii）前記第2の溶液に含まれる錯体形成された227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品の製剤を形成する工程；
viii）前記放射性医薬品を滅菌濾過する工程
の少なくとも1つをさらに含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第1の水性緩衝剤溶液が、3〜6.5の間のpHである、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記第1の水性緩衝剤溶液が、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、およびその混合物から選択される少なくとも1つの有機酸緩衝剤を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第1の水性緩衝剤溶液が、少なくとも1つのラジカルスカベンジャーおよび／または少なくとも1つのキレート剤をさらに含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記分離材が、シリカ系陽イオン交換樹脂である、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記陽イオン交換樹脂が少なくとも1つのスルホン酸部分を含む、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
前記溶離が、好ましくは重力もしくは遠心力下、または上からのガス圧力および／もしくは下からの真空下での、「ドライ」手段による、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
溶離が、重力の少なくとも5000倍の「相対遠心力」（RCF）の遠心力による、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
溶離が、10秒間から10分間の間の遠心力による、請求項10または11に記載の方法。
【請求項１３】
さらなる洗浄工程を含まない、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記分離材を水性洗浄媒体で洗浄する工程を含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ガンマ検出またはガンマ分光法によって、例えばゲルマニウム半導体検出器の使用によって、前記第2の溶液の前記227Th含有量を分析する工程をさらに含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
227Thを含む前記第2の溶液に含まれる227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成することをさらに含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記部分が0.1MBq〜20MBq 227Thの間である、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
前記錯体形成された227Thが、前記227Thイオンおよび少なくとも1つの8配位錯化剤から形成される、請求項2から17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記8配位錯化剤が、抗体、抗体構築物、抗体フラグメントまたは抗体フラグメントの構築物から選択される標的化部分にコンジュゲートされている、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
前記8配位錯化剤が、「表面抗原分類」（CD）細胞表面マーカーから選択される少なくとも1つの標的に対して特異性を有する標的化部分とコンジュゲートされている、請求項18に記載の方法。
【請求項２１】
前記工程X）の接触が、前記227Thイオンを、標的化部分に連結された錯化剤を含む標的化コンジュゲートとともにインキュベートする工程を含み、かかるインキュベーションが50℃よりも低い温度で実行される、請求項2から20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記インキュベーションが2時間未満の間実行される、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
前記インキュベーションが前記第1の水性緩衝剤中で実行される、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
1MBqの227Thあたり50KBq未満の223Raを含む錯体形成された227Thの溶液。
【請求項２５】
請求項1から23のいずれか一項に記載の方法によって形成されているかまたは形成可能である、請求項24に記載の錯体形成された227Thの溶液。
【請求項２６】
請求項24または25に記載の錯体形成された227Thの溶液および場合により少なくとも1つの医薬的に許容される希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項２７】
227Thと223Raとの混合物、錯化剤、第1の水性緩衝剤溶液、および強陽イオン交換樹脂を含むキット。
【請求項２８】
以下の任意選択の物品：
少なくとも1つの滅菌フィルタ；
少なくとも1つの耐熱容器；
少なくとも1つの加熱装置；
少なくとも1つの医薬品賦形剤または希釈剤；
の少なくとも1つをさらに含む、請求項27に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性医薬品の成分の精製に関する。特に、本発明は、体内放射性核種治療のための錯体形成されたトリウム−227の精製、特にその精製がヒト対象への医薬品の投与の直前に行われる精製のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特定の細胞を死滅させることは、哺乳動物対象の多様な疾患の治療の成功に不可欠でありうる。この典型的な例は、肉腫および癌腫などの悪性疾患の治療での死滅である。しかし、特定の細胞種を選択的に排除することも、多くのその他の疾患、特に免疫疾患、過形成性疾患および／またはその他の腫瘍性疾患の治療において重要な役割を果たしうる。
【０００３】
現在、選択的治療の最も一般的な方法は、外科手術、化学療法および外部ビーム照射療法である。しかし、標的化された体内放射性核種治療は、細胞毒性の高い放射線を望まない細胞型に送達する可能性をもつ、有望な発展途上の領域である。現在ヒトでの使用が認可されている放射性医薬品の最も一般的な形態は、β放出および／またはγ放出放射性核種を用いる。しかし、その特異性の高い細胞死滅の可能性のために、α放出放射性核種を治療で使用することへの関心が最近急速に高まってきている。特にα放出核種の1つであるラジウム−223（223Ra）は、特に骨および骨表面に関連する疾患の治療に著しく効果的であることが分かった。さらなるα放射体も活発に研究されていて、特に注目される1つの同位体が、α放射体トリウム−227である。
【０００４】
生理学的環境での典型的なα放射体の放射範囲は、通常100マイクロメートル未満であり、細胞直径のほんの数倍に相当する。このことにより、これらの核は微小転移を含む腫瘍の治療に非常に適したものになる。なぜなら放射されるエネルギーのほとんどが標的細胞を越えないので、周囲の健康な組織への損傷が最小限に抑えられるためである（Feinendegenら、Radiat Res 148：195−201（1997）参照）。対照的に、β粒子の範囲は水中で1mm以上である（Wilbur、Antibody Immunocon Radiopharm 4：85−96（1991）参照）。
【０００５】
α粒子線のエネルギーは、β粒子、γ線およびX線と比較して高く、一般に5〜8MeV、すなわちβ粒子のエネルギーの5〜10倍であり、γ線のエネルギーの20倍以上である。従って、この非常に短い距離での大量のエネルギーの蓄積により、γおよびβ線と比較して非常に高い線エネルギー付与（LET）、高い相対生物学的効力（RBE）および低い酸素効果比（OER）がα線に与えられる（Hall、「Radiobiology for the radiologist」、第5版、Lippincott Williams＆Wilkins、Philadelphia PA、USA、2000参照）。これらの特性は、α放出放射性核種の例外的な細胞毒性を説明し、また、同位体が体内に投与される場合に必要とされる純度のレベルに厳しい要求を課す。汚染物質は体内に保持されて重大な損傷を引き起こす可能性があるので、これは汚染物質がα放射体でもある場合に特にあてはまる。放射化学純度は適度に実現可能な程度に高くあるべきであり、特に汚染物質がα放射体である場合には、標的化されていない放射性核種による汚染は最小減に抑えられるべきである。
【０００６】
227Acからの放射性崩壊系列は、227Thを生じ、その後223Raおよびさらなる放射性同位元素を導く。この系列の最初の3つの同位体を下に示す。表は、元素、227Thおよびそれに先行する同位体と後に続く同位体の分子量（Mw）、崩壊モード（モード）および半減期（年数（y）または日数（d）で表す）を示す。227Thの調製は227Acから始めることができる。227Ac自体はウラン鉱にごく微量に見出され、235Uに起源をもつ天然の崩壊系列の一部である。1トンのウラン鉱は約10分の1グラムのアクチニウムを含み、そのため、227Acは天然に見出されるものであるが、原子炉で226Raの中性子照射によって作られることがより一般的である。
【０００７】
【表１】
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【０００８】
この説明から、20年以上の半減期をもつ227Acは、医薬品用に上記崩壊系列から227Thを調製することに関して、非常に危険な潜在的汚染物質であることが分かる。しかし、たとえ一度227Acが安全なレベルで除去または減少されたとしても、227Thは19日未満の半減期をもつ223Raまで崩壊し続ける。223Raは、アルカリ土類金属であるので、トリウムまたはその他のアクチニドのために設計されたリガンドにはあまり簡単に配位されない。次に、この223Raは、安定した207Pbに至る前に4つのα崩壊と2つのβ崩壊を含む、制御されない可能性のある（非標的化）崩壊系列の始まりを形成する。これらは下の表に説明される：
【０００９】
【表２】
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【００１０】
上の2つの崩壊表から、223Raが227Thのどんな調製物からも完全に除去されることができないことは明白である。それは、227Thは常に崩壊し、223Raを生成しているためである。しかし、25MeVを超える放射エネルギーが、患者に投与された各々の223Ra核の崩壊から放出され、その後に核が安定な同位体に達することは明らかである。また、2つの元素の異なる化学的性質に起因して、そのような223Raが、キレート化の系および227Thをその作用部位に輸送するように設計された特異的結合によって結合されず、標的化されないこともありうる。そのため、標的化細胞を死滅させ、治療効果を最大化し、副作用を最小にするために、投与の前に227Th調製物中の223Raのレベルを制御することが重要である。たとえ生成物が投与前に一定期間（例えば12〜96時間、例えば48時間までなど）貯蔵または輸送されなければならないとしても、娘同位体による汚染をなお最小減に抑えるために、非常に純粋な同位体で始めることがなお重要である。
【００１１】
227Thの223Raからの分離は、放射線学の実験室、例えば227Acの崩壊が起こる現場などで素早く簡便に実行することができた。しかし、結果として得られる精製された227Thは、次に投与部位に運ばれなければならないので、これは所望の結果を常に効果的に達成できるものではなく、効果的に達成できないことがある。この使用場所が227Thの発生場所から離れている場合、貯蔵および輸送中に223Raのさらなる増加が起こることになる。
【００１２】
さらに、227Thは、227Thの錯化の前か後に223Raから精製して、医薬品（例えば標的化された放射性医薬品錯体など）を形成することができる。大きいコンジュゲートは取り扱いが難しいことがあるので、この方法を錯化の前に実行するほうが、特にリガンドが抗体などの標的化分子とコンジュゲートされている場合には、精製は簡単になる。しかし、治療現場でまたは治療現場の近くで使用することができ、望ましくない223Raを医薬品227Th錯体（例えば、標的化された錯体）から分離するために使用することのできる精製方法を考案することができれば、精製と投与の間の遅れが錯体の生成に必要ないので、それはかなりの利点を提供すると思われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第2004／091668号
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Feinendegenら、Radiat Res 148：195−201（1997）
【非特許文献２】Wilbur、Antibody Immunocon Radiopharm 4：85−96（1991）
【非特許文献３】Hall、「Radiobiology for the radiologist」、第5版、Lippincott Williams＆Wilkins、Philadelphia PA、USA、2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
上記を考えると、精製された227Thが同位体の半減期よりも著しく迅速に投与部位に到達することのできる集中化された場所などで実行されうる、汚染物質223Raから227Thを精製する方法を提供することはかなりの利点であると思われる。精製された同位体がしばらく（例えば、12〜96時間）貯蔵される場合、避けられない内部増加に起因するラジウムだけが対象に投与されるように、この方法は、非常に高度の223Raの除去を提供するべきである。あるいは、精製は、実行するために幅広い訓練および経験を必要としない簡単な方法を用いて、投与時または投与直前に治療現場でまたは治療現場の近くで行われてもよい。いずれの実施形態でも、結果として得られる精製された227Th（227Th錯体）は医薬品に直接使用されることがあるので、この方法は頑強で、信頼でき、効果的でなければならない。
【００１６】
この方法が、好ましくは標的化部分にコンジュゲートされた、錯体形成された227Thで実行されることができれば、それはさらなる利点になると思われる。強無機酸および／または強塩基の使用を回避すること（ならびに、標的化錯体の標的化部分などの感受性の高い成分の起こりうる分解を回避すること）ができるのであれば、安全および取り扱いの観点から有利であると思われ、さらに、これらの材料を最終生成物から分離する必要性を回避することができるので、有利であると思われる。これは、使用する試薬が最終製剤での直接使用に適している場合に、それによって速度が最大化されるので、特にあてはまる。また、少量を使用して、取り扱いを容易にし、汚染廃棄物の量を減らすことができる場合も有利であると思われる。この方法が、所望によりキットの形態でそのような同時調製のために供給することのできる、簡単な試薬の群および装置の項目とともに実行できるのであれば、さらに有利であると思われる。
【００１７】
これまでに公知の227Thの調製は、一般に実験室用であり、かつ／または医薬品の基準に対して純度を試験されたことがなかった。例えば、国際公開第2004／091668号では、227Thは、単一カラムからの陰イオン交換によって調製され、純度の検証を行わずに実験目的で使用された。227Thのほとんどの調製方法において、分離の主目的は、長寿命の227Ac親同位体の除去であった。この方法は、227Acから予め精製した227Th試料中で内部成長した223Raの除去のために、これまで考案または最適化されてこなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者らは、今回、迅速かつ簡単な精製手順を用いて223Raを227Thの調製物から除去することができることを確立した。この方法は、227Thを錯化形態で存在することを可能にし、さらに錯体形成されて抗体などの標的化部分とコンジュゲートされることさえ可能にする。この方法は1回の精製工程を使用することができる。このように、この方法でいくつかの望ましい利点、特に精製と投与の間の遅れが減少したことおよび投与部位での生成物の取り扱いが少ないことに関する利点を提供する一方で、放射化学的純度の非常に高い227Th溶液を製造することができる。
【００１９】
そのため、第1の態様では、本発明は、錯体形成された227Thおよび（錯体形成されたかまたは溶液中の）223Raを含む混合物から錯体形成された227Thを精製するための方法を提供し、該方法は、
i）錯体形成された227Thイオンと223Raイオンとの混合物を第1の水性緩衝剤中に含む第1の溶液を調製する工程と、
ii）前記第1の溶液を強陽イオン交換樹脂などの分離材にロードする（載せる）工程と、
iii）錯体形成された227Thを前記分離材から溶離させ、それにより錯体形成された227Thを含む第2の溶液を生成する工程と、
iv）場合により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐ工程と、
を含む。
一般に、工程i）〜iv）は、上記の順序で実行されるが、その他の工程およびプロセスが記載される工程中にまたは工程間に実行されてもよいことは明らかである。
【００２０】
このプロセスは、場合によりかつ好ましくは、上記工程i）の前に、以下の工程X）：
X）227Thイオンを少なくとも1つの錯化剤と溶液中で接触させ、それにより錯体形成された227Thの少なくとも1つの水溶液を形成する工程
も含む。好ましくは、錯化剤は、標的化部分、例えば本明細書に記載されるものなどにコンジュゲートした（例えば、共有結合的にコンジュゲートした）キレート部分となる。
【００２１】
このプロセスには、場合により、以下のさらなる工程の少なくとも1つも含まれ、各々は通常上記工程i）〜iv）の後に実行される：
v）前記第2の溶液の227Th含有量を分析する工程；
vi）前記第2の溶液から液体を蒸発させる工程；
vii）前記第2の溶液に含まれる錯体形成された227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品の製剤を形成する工程；
viii）前記放射性医薬品を滅菌濾過する工程。
【００２２】
工程vii）は、特に好ましくは追加の工程を形成する。
【００２３】
さらなる態様では、本発明は、1MBqの227Thあたり50KBq未満の223Ra、好ましくは1MBqの227Thあたり10KBq未満の223Raを含む、227Thの溶液またはその他の試料を提供する。そのような溶液は、本明細書に記載される方法のいずれかによって場合により形成されるかまたは形成可能であり、好ましくは本明細書に記載される好ましい方法によって形成されるかまたは形成可能である。同様に、本発明の方法は、好ましくは1MBqの227Thあたり50KBq未満の223Ra、好ましくは1MBqの227Thあたり10KBq未満の223Raを含む、227Thの溶液の形成のためのものである。対応する医薬品も提供され、それは無菌であってよく、少なくとも1つの（特に227Thに対する）錯化剤、少なくとも1つの（例えば前記錯化剤とコンジュゲートした）標的化剤、および場合により少なくとも1つの医薬的に許容される担体または希釈液を含みうる。
【００２４】
なおさらなる態様では、本発明は、227Thと223Raとの混合物、第1の水性緩衝剤、キレート剤（好ましくは標的化部分とコンジュゲートしているかまたはコンジュゲート可能（congatable））および分離材（例えば陽イオン交換樹脂）を含むキット（一般に本発明の方法を実行するためのキット）も提供する。227Thと223Raとの混合物は（本発明のその他の態様の第1の溶液と同様に）、さらなる223Ra娘生成物も含む。そのような混合物は、貯蔵および輸送の間の（場合により錯体形成されているかまたは溶液中の）精製されているかまたは部分的に精製された227Thの放射性崩壊の結果でありうる。
【００２５】
本発明は、これから以下の限定されない例および添付の図面を参照することによってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】28日にわたる227Thの経時的な崩壊ならびに223Raおよび娘同位体の対応する内部増加を示す図である。
【図２】227Thの223Raを介して安定した207Pbまでの放射性崩壊系列を示す図である。
【図３】227Thが223Raに部分的に崩壊している、マイクロスピンカラムで錯体形成された227Thの試料の精製の実験工程の概略図を示す図である。
【図４】クエン酸で緩衝化された製剤中の227Th錯体（y軸）の放射化学的純度のpH（x軸）の効果を示す図である。図a）は、NAP5純度データを含む。図b）は、iTLC純度データの図である。pABA＋EDTAを含まないデータ系列（三角形のデータ系列）およびpABA＋EDTAを含むデータ系列（四角形のデータ系列）が各図に示される。
【図５】SDS−PAGEクロマトグラムを示す図である。試料1〜4は、TTC（結合した227Th）による適用点および前線（遊離227Th）を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
あらゆる種類の医薬品は、非常に高い純度基準まで、かつ、基準（例えば純度および無菌性の基準）を満たしているという非常に高い確信が得られるように、常に製造されなければならない。α放出放射性核種を対象の身体に投与するには、これらを全て考慮することが必要とされ、高い放射化学純度の必要性がさらに加わる。長寿命の前駆体同位体からの精製は、放射化学純度の1つの重要な側面であるが、これは典型的には複雑な方法および取り扱い手順を利用することのできる専門的な放射化学研究室または工場で達成することができる。
【００２８】
しかし、目的の放射性核種がその他の放射性同位元素に崩壊する場合には、さらなるレベルの放射化学的精製が必要となろう。放射性娘同位体の生成は、体内放射性核種治療の毒性の一因であることが大いにあり、用量制限性でありうる。227Thの場合では、娘同位体はラジウム、アルカリ土類金属であるが、親はアクチニド系列の遷移金属である。このことは、これまでトリウムを結合するのに適していたどんなキレート化または錯化も、おそらく娘ラジウムを保持するには化学的に適していないことを意味する。α崩壊は、非常に高速でα粒子を放出した後の運動量の保存の結果として、非常に重要な「反跳」エネルギーを娘核にさらに与える。この反跳は、共有結合または配位相互作用よりも何倍も大きいエネルギーを有し、必然的に娘核を最初の親同位体の周囲環境の外に追いやることになる。
【００２９】
227Th崩壊により体内で生成された223Raおよびその娘の存在は用量制限性である可能性があるので、227Thの許容される治療用量をさらに制限するか、または副作用を悪化させる、さらなる不要な223Raが対象に投与されないことが重要である。
【００３０】
本発明は、223Raの227Th試料への避けられない内部増加および対象に送達される223Raを合理的な程度まで最小化したいという要望を考慮して開発された。223Raは、最初に1時間当たりの全放射能のおよそ0.2％の割合で増加するので、この方法は、不要な用量を最小化するために、投与前数時間以内（例えば、72時間以内または48時間以内）に実行されなければならない。同様に、227Thを調製の2〜4時間以内に使用することができるならば、この方法は、好ましくは（調製時の）223Raに関しておよそ99％（例えば95％〜99.9％）の放射化学純度で227Thをもたらすはずである。使用前の内部増加はより厳密な精製方法のどんな利益も台無しにするので、より高い純度は、非効率的および／または無意味となりうるが、より低い純度（90％未満または95％未満の放射化学純度とする）は、現実的な投与時間を可能にするとしても223Raの用量（従って毒性）は、当然、さらに制限されうるので望ましくない。
【００３１】
一実施形態では、本発明で用いる227Thと223Raとの混合物は、227Thで始まる崩壊系列にない放射性同位元素をあまり含まない。特に、本発明の態様のいずれかで用いる227Thと223Raとの混合物は、好ましくは100MBqの227Thあたり20Bq未満の227Ac、好ましくは100MBqの227Thあたり5Bq未満の227Acを含む。
【００３２】
本発明は、体内放射性核種治療での使用に適した純度レベルの227Thの製造方法を提供する。本方法のさらなる利益は、それが既にキレート剤（好ましくは標的化部分とコンジュゲートされているキレート剤）と錯体形成された227Thで実行されてよいことである。分離を予め錯体形成させた試料で実行することにより、この方法は医薬製剤の生成に必要なさらなる工程の数を減らし、従って精製後のより迅速な同位体の投与を可能にする。放射性同位元素は全ての貯蔵条件下で崩壊し続けているので、投与直前の精製は、同位体純度のより高い医薬品を可能にする。本発明において、一般に標的化部分とコンジュゲートされたリガンドと錯体形成されたイオンの形の（「標的化トリウムコンジュゲート」−TTCとして公知）、錯体形成された227Thは、好ましくは投与の直前に、直接精製される。
【００３３】
この系のいくつかの好ましい特徴が下に示され、その各々は、別に明示されない限り、技術的に実行可能な任意のその他の特徴と組み合わせて使用されてよい。
【００３４】
本発明の方法および全ての対応する実施形態は、好ましくは患者への投与に適した規模で実行される。この規模は、1回の治療用量の場合であってもよいし、各々が用量を受ける多数の対象に適した規模であってもよい。一般に、この方法は、1〜5時間以内の投与、例えばおよそ1〜10の一般的な用量の227Thなどに適した規模で使用される。単一用量の精製は、好ましい一実施形態を形成する。明らかに、典型的な用量は適用に依存する、しかし、典型的な用量は0.5〜200MBq、好ましくは1〜25MBq、最も好ましくはおよそ1.2〜10MBqでありうることが予想される。プールした投薬量の精製は、可能であれば、20までの、好ましくは10までの、または5までの典型的な用量を用いて実行される。従って精製は200MBqまで、好ましくは100MBqまでで実行され、必要に応じて精製後に個別の用量に分割されてよい。
【００３５】
本発明の方法の工程i）は、227Thおよび223Raを含む溶液（そして一般に223Ra娘同位体も含む−上表に記載の娘同位体を参照）に関する。そのような混合物は、227Thの試料が徐々に崩壊することによって本質的に生じるが、本発明で使用するためには、以下の特徴の１以上を、個別に、または任意の実行可能な組合せで有することも好ましい：
a）227Th放射能が、少なくとも0.5MBq（例えば、0.5MBq〜100MBq）、好ましくは少なくとも0.5MBq、より好ましくは少なくとも1.4MBqでありうる；
b）溶液が、第1の水性緩衝剤溶液中で形成されうる；
c）溶液の体積が、50ml未満（例えば、0.1〜20mlまたは0.1〜10ml）、好ましくは10mlまたは5ml未満、より好ましくは3〜7mlの間でありうる。
d）第1の水性緩衝剤溶液が、3〜6.5の間のpH、好ましくは3.5〜6の間、特に、4〜6の間でありうる。
e）第1の水性緩衝剤溶液が、0.01〜0.5M、例えば0.03〜0.05Mまたは0.1〜0.2Mの濃度で使用されうる。
f）第1の水性緩衝剤溶液が、少なくとも1つの有機酸緩衝剤を含みうるか、それから本質的になりうるか、またはそれからなりうる。
g）第1の水性緩衝剤溶液が、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤およびその混合物から選択される少なくとも1つの有機酸緩衝剤を含みうるか、それから本質的になりうるか、またはそれからなりうる。
h）第1の水性緩衝剤溶液が、場合により少なくとも1つのフリーラジカルスカベンジャーおよび／または少なくとも1つのキレート剤（特に非緩衝化キレート剤）をさらに含む。それぞれの多くが当技術分野で公知であり、それには、pABA（スカベンジャー）およびEDTA（キレート剤）が挙げられる。
i）第1の水性緩衝剤溶液が、場合により塩をはじめとするその他の添加剤、例えばNaClなどをさらに含みうる。
【００３６】
本発明の方法の工程ii）は、分離材（例えば、陽イオン交換樹脂など）への第1の溶液のロードに関する。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある：
a）分離材が、陽イオン交換樹脂またはヒドロキシアパタイト、好ましくは強陽イオン交換樹脂でありうる。
b）樹脂（例えば、陽イオン交換樹脂）が、シリカ系樹脂でありうる；
c）陽イオン交換樹脂が、1以上の酸性官能基を含みうる；
d）陽イオン交換樹脂が、少なくとも1つの酸性部分と好ましくは少なくとも1つのカルボン酸またはスルホン酸部分、例えばプロピルスルホン酸（PSA）樹脂などのアルキルスルホン酸樹脂を含みうる；
e）樹脂（例えば強陽イオン交換樹脂）が、5〜500μm、好ましくは10〜200μmの平均粒度を有しうる。
f）分離材（例えば、陽イオン交換樹脂）が、カラムの形態で使用されうる。
g）使用する分離材（例えば樹脂）の量（例えばカラム充填時）が、100mg以下、（例えば2〜50mg）、好ましくは10〜50mgでありうる。
h）分離材（例えば樹脂）が、第1の溶液をロードする前に1以上のボリュームの水性媒体で洗浄することによってプレコンディショニングされうる。通常、緩衝剤溶液、より好ましくは第1の水性緩衝剤をプレコンディショニングに使用する。
【００３７】
本発明の方法の工程iii）は、錯体形成された227Thを分離材（例えば強陽イオン交換樹脂）から溶離し、それにより錯体形成された227Thを含む第2の溶液を生成することに関する。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある：
a）溶離が、溶離剤溶液を用いて、または「ドライ（乾燥）」溶離によって、例えば重力下、遠心力下または上からのガス圧力および／または下からの真空下での溶離によるものでありうる；
b）溶離が溶離剤溶液を用いる場合、これが水性緩衝剤溶液、例えば、有機酸緩衝剤溶液を含む、本明細書に記載される任意のものなどでありうる；
c）溶離が、「ドライ」手段、好ましくは重力または遠心力下、例えば遠心機でのスピニングなどによるものでありうる。
d）遠心力による溶離が、重力の少なくとも1000倍、好ましくは少なくとも2000倍または少なくとも5000倍の「相対遠心力」（RCF）（例えば1000〜50000gのrcf）で10秒間から10分間の間、好ましくは20秒間から5分間の間の溶離でありうる；
【００３８】
本発明の方法の工程iv）は、第1の水性洗浄媒体を使用して前記分離材（例えば強陽イオン交換樹脂）をすすぐ任意選択の工程に関する。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有することがある：
a）第1の水性洗浄媒体が、水、例えば蒸留水、脱イオン水または注射水などでありうる、または本明細書に記載されるような有機酸緩衝剤などの緩衝剤でありうる；
b）第1の水性洗浄媒体が、第1の緩衝剤溶液と同じ緩衝剤を含みうる；
c）任意選択の洗浄工程が省略されうる；
d）任意選択の洗浄工程が、本明細書に記載される「ドライ」溶離の後に第1の洗浄媒体を樹脂に添加すること、そしてその後洗浄媒体を、例えば重力または遠心分離；または上からのガス圧力および／または下からの真空下での溶離などによって「ドライ」溶離することを含みうる；
e）洗浄工程で溶離した溶液は、227Thを含む第2の溶液と合わせられることがある。
【００３９】
本発明の方法の工程iv）の後、分離材（例えば樹脂）は、一般に放射性廃棄物として処分される。必要とされる樹脂の量は一般に極めて少ないので（例えば50mg未満）、これは大きな処分問題とならない。しかし、樹脂を再使用するかまたは分析もしくは任意のその他の理由のために223Raを回復することを望む場合、任意の適した媒体を用いて223Raを溶離してもよい。そのような回復に適した媒体としては、緩衝剤溶液、例えば本明細書に記載されるもの、および水性無機酸、例えばHClおよびH2SO4が挙げられる。樹脂を再使用する場合、それは再使用の前に一般に数ボリュームの第1の緩衝剤溶液で再生される。
【００４０】
本発明の方法は、いくつかの任意選択の工程を含んでよく、その各々は、技術的に可能な限り独立して存在していてもよいし存在しなくてもよい。
【００４１】
分離工程i）〜iv）の前に、任意選択の調製工程X）を含めることが好ましい。工程X）は、227Thイオンおよびキレート剤からの錯体形成された227Thの調製を含む。好ましくは、錯化剤は、標的化部分と（例えば、共有結合によって）コンジュゲートしたキレート剤を含む。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある。さらに、本明細書に示される放射性医薬品の特徴の全ては、特にその医薬品が本発明の方法によって形成されるかまたは形成可能な場合に、本発明の医薬品の態様の好ましい特徴を形成する：
a）キレート剤と接触する227Thの量が、1MBq〜100MBq、好ましくは1〜10MBqでありうる。
b）錯化剤が8配位リガンドを含みうる。
c）錯化剤が、ヒドロキシピリジノン（HOPO）リガンド、好ましくは8配位3,2−ヒドロキシピリジノン（3,2−HOPO）などのヒドロキシピリジノンを含みうる。
d）錯化剤が、標的化部分、好ましくはHOPOリガンド（例えば、3,2−HOPO）などの8配位リガンドとコンジュゲートしたものを含みうる。
e）標的化部分が、抗体、抗体構築物、抗体フラグメント（例えば、FABまたはF(AB)’2フラグメント、もしくは少なくとも1つの抗原結合領域を含む任意のフラグメント）、またはかかるフラグメントの構築物でありうる。
f）標的化部分が、受容体または受容体結合剤（例えば、ホルモン、ビタミン、葉酸または葉酸類似体）ビスホスホネートまたはナノ粒子でありうる。
g）標的化部分が、「表面抗原分類（分化のクラスター）」（CD）細胞表面分子（例えば、CD22、CD33、CD34、CD44、CD45、CD166など）などの少なくとも1つの疾病関連抗原に対して特異性を有しうる。
h）標的化部分が、共有結合リンカーによってリガンドに連結され、それによって錯化剤が標的化コンジュゲートの形態で形成されうる。
j）接触が、溶液中の227Thイオンを錯化剤（特に標的化コンジュゲート）とともにインキュベートすることを含みうる。かかるインキュベーションは、50℃よりも低い温度、好ましくは10〜40℃、例えば20〜30℃でのものでありうる。かかるインキュベーションは、2時間未満、例えば1分から60分など（例えば、1〜15分）、好ましくは15〜45分の期間のものでありうる。
k）接触が、緩衝剤溶液中、好ましくは第1の緩衝剤溶液中でのものでありうる。
【００４２】
本発明の方法の工程v）は、場合により第2の溶液の227Th含有量を分析することに関する。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある：
a）227Thは、ガンマ検出／分光法によって、例えばゲルマニウム半導体検出器（高純度ゲルマニウム検出器−HPGe）を使用することなどによって分析されてよい；
b）227Th含有量は、望ましい医薬品用量と比較され、基準濃度、または投与のために引き出された適切な用量に希釈される。
【００４３】
発明の方法の工程vi）は、液体を前記第2の溶液から蒸発させる任意選択の工程に関する。この工程は、最終医薬組成物が少量である場合に望ましいことがある。一般に、第1の水性緩衝剤は、（本明細書に記載される）標識化反応に適合し、生理学的に容認できる（すなわち、使用する濃度および量での注射に適している）ように選択される。このように、複数の操作および溶媒の変更、例えば濃縮工程vi）に関するものなどは、好ましくは回避される。必要であれば、この工程を含めてよく、その中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある：
a）蒸発は、減圧下で実施されうる（例えば1〜500mbar）。
b）蒸発は、高温下で実施されうる（例えば50〜200℃、好ましくは80〜110℃）；
【００４４】
本発明の方法の工程vii）は、工程i）〜iv）を用いて精製された227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成する任意選択の工程に関する。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある。さらに、本明細書において示される放射性医薬品の特徴の全ては、特にその医薬品が本発明の方法によって形成されるかまたは形成可能である場合に、本発明の医薬品の態様の好ましい特徴をなす：
a）前記第2の溶液（工程i）〜iv）によって精製）から得た錯体形成された227Thの部分が、1MBq〜100MBq、好ましくは1〜10MBqでありうる。
b）医薬品担体、希釈剤、緩衝剤、塩、防腐剤などが添加され、それによって注射可能な放射性医薬品が形成されうる。
c）前記第2の溶液から得た錯体形成された227Thが、工程v）で得られた放射能測定に基づく基準放射能に希釈され、場合により調製（または測定）から投与までの時間を補正しうる。
d）放射性医薬品が、治療現場でまたは治療現場の近くで調製され、かつ／または短い時間内（例えば、精製から注射まで96時間以内、好ましくは精製から48時間以内または36時間以内）での使用用となりうる。
【００４５】
本発明の様々な態様で形成されるかまたは形成可能である放射性医薬品は、任意の適した疾患、例えば腫瘍性または過形成性疾患（例えば、癌腫、肉腫、黒色腫、リンパ腫、または白血病）の治療で使用されてよい。そのような医薬製剤とそのような医薬製剤の使用の両方、ならびに対応する対象の治療方法は、本発明のさらなる態様を形成する。そのような対象は、一般にそれを必要とする対象、例えば腫瘍性または過形成性疾患（例えば本明細書に記載される疾患）に罹患している対象などである。本発明は、放射性医薬品を工程i）〜iv）、vii）ならびに場合により工程v）、vi）および／またはviii）のいずれかによって形成し、前記放射性医薬品を（例えば、静脈注射によるかまたは特定の組織または部位に直接に）対象に投与することを含む、前記対象（例えばそれを必要とする対象）への前記放射性医薬品の投与方法をさらに提供する。
【００４６】
本発明の方法の工程viii）は、溶液または医薬品（特に工程vii）で形成されたもの）を殺菌することを含む、任意選択の工程である。この工程およびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、場合により本明細書に記載されるその他の工程の特徴のいずれかとの任意の実行可能な組合せで有することがある：
a）殺菌が、加熱によるか、照射によるかまたは濾過によるものでありうる。
b）濾過が、適した膜、例えば0.22μm（またはそれ以下）の膜によるものでありうる。
c）濾過が、適したシリンジフィルタを通るシリンジによるものでありうる。
【００４７】
上記の工程に加えて、本発明の方法および全ての対応する態様は、追加の工程を、例えば医薬品目的の227Thの純度を検証するため、対イオンを交換するため、溶液を濃縮または希釈するため、またはpHおよびイオン強度などの要素を制御するために含んでよい。これらの工程の各々は、従って、本発明の様々な態様の任意選択であるが好ましい追加の工程を形成する。
【００４８】
本発明の方法は、高収率の錯体形成された（comlexed）227Th生成物を提供することが好ましい。これは、消耗または有用な生成物を避けたいという要望のためだけでなく、全ての失われた放射性物質が、安全に処分されなければならない放射性廃棄物を形成するためである。従って、一実施形態では、工程ii）でロードされた227Thの少なくとも50％（例えば、50〜90％または50％〜98％）が、工程iv）で溶離される。これは、好ましくは少なくとも70％、より好ましくは少なくとも80％、最も好ましくは少なくとも85％の収率となる。関連する態様では、工程iv）で溶離された227Thの少なくとも50％が227Th錯体の形態で溶離される（残りは、溶液中の非錯化イオンとして溶離される）。これは、好ましくは少なくとも70％、好ましくは少なくとも80％、最も好ましくは少なくとも90％となる。1つの好ましい実施形態では、工程iv）で溶離された227Thの実質的に100％（例えば、少なくとも95％）が227Th錯体の形態で溶離される。
【００４９】
本発明の対応する態様では、錯体形成された227Th（特に本明細書に記載されるように精製されたもの）および場合により少なくとも1つの医薬的に許容される希釈剤を含む医薬組成物がさらに提供される。そのような医薬組成物は、場合により本発明の方法により形成されるかまたは形成可能である、本明細書に示される純度の227Thを含むことができる。注射水、pH調整剤、および緩衝剤、塩（例えばNaCl）およびその他の適した材料をはじめとする適した担体および希釈剤は、当業者に周知である。
【００５０】
医薬組成物は、本明細書に記載されるような錯体形成された227Thを一般にイオンの錯体、例えばTh4＋イオンなどとして含む。かかる組成物は、本発明の227Thの錯体を少なくとも1つのリガンド、例えば8配位3,2−ヒドロキシピリジノン（2,3−HOPO）リガンドとともに含む。適したリガンドは、参照により本明細書に援用される国際公開第2011／098611号に、特にその中に開示される典型的な適したHOPOリガンドを表す式I〜IXに関して開示されている。かかるリガンドは、それら自体で使用されてもよいし、少なくとも1つの標的化部分、例えば抗体などとコンジュゲートされていてもよい。最も一般的に、リガンドは本明細書に記載されるようにi）〜iv）の前に標的化部分とコンジュゲートされる。抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント（例えば、FABまたはF(AB)’2フラグメントまたは少なくとも1つの抗原結合領域を含む任意のフラグメント）、フラグメントの構築物（例えば、一本鎖抗体）またはその混合物が特に好ましい標的化部分である。このように、本発明の医薬組成物は、3,2−ヒドロキシピリジノン（3,2−HOPO）リガンドと、本明細書に記載されるように精製された少なくとも1つの抗体、抗体フラグメントまたは抗体構築物とのコンジュゲートと錯体形成されたTh4＋イオンを場合により医薬的に許容される担体および／または希釈剤とともに含んでよい。医薬組成物に関して本明細書に記載される実施形態は、実行可能な対応する方法の実施形態も形成し、逆もまた同じである。
【００５１】
本明細書において、用語「含む」は、さらなる成分が場合により存在していてもよいオープンの意味で記載される（このため「オープン」と「クローズド」の両方の形態を開示する）。その一方、用語「からなる」は、クローズドの意味だけに与えられるので、（効果的な、測定可能な、かつ／または絶対的な程度まで）、示される物質（必要に応じて任意選択の物質を含む）だけが存在する。相応して、「から本質的になる」と記載される混合物または物質は、どんな追加の成分も基本的な挙動に重要な程度まで影響を及ぼさないように、述べられた成分から本質的になる。かかる混合物は、例えば、5％未満（例えば、0〜5％）のその他の成分、好ましくは1％未満、より好ましくは0.25％未満のその他の成分を含む。同様に、用語が「実質的に」、「およそ」、「約」または「ほぼ」として所与の値に与えられる場合、これは与えられる正確な値を考慮に入れ、特に記載される特性の実体に影響を及ぼさない場合に、小さな変動を独立に考慮に入れる。かかる変動は、例えば±5％（例えば、±0.001％〜5％）、好ましくは±1％、より好ましくは±0.25％でありうる。
【実施例】
【００５２】
材料
酢酸ナトリウム三水和物（≧99.0％）、クエン酸三ナトリウム二水和物、（≧99.0％）、4−アミノ安息香酸ナトリウム塩（pABA、≧99％）、エデト酸二ナトリウム（EDTA、USP試験規格に合致）、および水酸化ナトリウム（98.0〜100.5％）は、シグマ−アルドリッチ（ノルウェー、オスロ）より購入した。金属フリー水（TraceSELECT（商標））はFLUKA（スイス、ブフス）より購入した。塩化ナトリウム（分析用）および塩酸（発煙、37％、分析用）はメルクミリポア（ドイツ、ダルムシュタット）より購入した。クエン酸一水和物（分析用試薬）はVWR（米国、ウエストチェスター）より購入した。酢酸（氷、分析用100％無水物）はメルク（ドイツ、ダルムシュタット）より購入した。
【００５３】
シリカ系PSA（プロピルスルホン酸）陽イオン交換樹脂は、Macherey Nagel（ドイツ、デューレン）より購入した。NAP5カラムは、GEヘルスケア・バイオサイエンスAB（スウェーデン、ウプサラ）より購入した。ピアス・マイクロスピンカラムは、サーモサイエンティフィックピアス（製品番号89879（米国ロックフォード）より購入した。
【００５４】
ハーセプチン（登録商標）由来のトラスツズマブ（注入溶液用濃縮物の粉末150mg）を使用した。これは、Roche Registration Limited（英国、Welwyn Garden City）の商標である。このコンジュゲートを自社製キレート剤にするためにこれを抗体と結合させた。得られるコンジュゲートコロイド懸濁液は、クエン酸ナトリウム緩衝剤0.10M  pH5.1および0.90％（w／w）塩化ナトリウム中の5.0mg／mlコンジュゲートであった。
【００５５】
0.05M塩酸および金属フリー水中の227Th（トリウム（IV）として）（自社製品）を放射能源として使用した。ほぼ1：1比の227Thと223Ra（ラジウム（II）として）を構築するために、227Thをほぼ1半減期の19日の間貯蔵して崩壊させた。
【００５６】
アジレントテクノロジー製の、シリカゲルを含浸させたiTLC−SGクロマトグラフィー用紙をインスタント薄層クロマトグラフィー（iTLC）分析に使用した（カリフォルニア州サンタクララ）。
【００５７】
以下の材料をドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）に使用した；LDS（4x）試料緩衝剤およびNovex（カリフォルニア州カールスバッド）製NuPage（登録商標）10％トリス−ビスゲル。NuPage（登録商標）のMES（20x）緩衝剤（カリフォルニア州カールスバッド）。Expedeon（ケンブリッジシャー、英国）製インスタントブルー、およびバイオラッド（カリフォルニア州ハーキュリーズ）製プレシジョンplusプロテイン2色スタンダード。
【００５８】
実施例1−緩衝化製剤の調製
ストッククエン酸緩衝剤（0.10M  pH4.0、0.05M  pH5.0、および0.07M  pH4.8）およびストック酢酸緩衝剤（0.10M  pH4.0、0.10M  pH6.0、および0.10M  pH5.0）を、金属フリー水中で調製し、（必要であれば）金属フリー水で希釈してDOEの範囲内で使用するそれぞれの緩衝剤濃度とした。その後、pABA（2.0 mg／ml）＋EDTA（2.0 mM）および塩化ナトリウムをこれらの賦形剤を含有するそれぞれの緩衝化製剤に添加した。
【００５９】
ストックおよび最終製剤のpHは、メトラー・トレド（ノルウェー、オスロ）製の目盛り付きsevenMulti（商標）pH計によって周囲温度で完全に制御された。
【００６０】
メトラー・トレド（ノルウェー、オスロ）製の目盛り付きsevenMulti（商標）pH計を使用してストックおよび最終製剤のpHを周囲温度で測定した。
【００６１】
実施例2  PSA陽イオン交換樹脂を用いるマイクロスピンカラムの調製
PSA樹脂の100.0mg／ml懸濁液を金属フリー水中で調製した。懸濁液の均質性を確保するために、ボルテックスミキサーを使用し、15.0、30.0、および22.5mg樹脂に必要な量をマイクロスピンカラムに添加した。
【００６２】
充填した樹脂のコンディショニングのために、300μlのそれぞれの緩衝化製剤をカラムに添加した後、さらなる使用の前にエッペンドルフ・サーモミキサー・コンフォート（ドイツ、ハンブルク（DOE試料に対してn＝1、2または3、中心点に対してn＝2））で10000rcfで1分間スピニングし、乾燥した樹脂床を得た。
【００６３】
カラムを、それぞれの緩衝化製剤300μlでコンディショニングした。過剰量は、サーモミキサーでの10000rcfで1分間のスピニングによって除去し、乾燥したカラムを得た（DOE試料と中心点に対してn＝2）。
【００６４】
実施例3−錯化および精製
各試料に添加した放射能の量は、ほぼ250kBq  227Th（TTCとして）および250kBq  223Raであった。使用前に、凍結したトラスツズマブ−キレートコンジュゲートコロイド懸濁液を周囲温度に平衡化させた。50μlのコンジュゲートを、0.05M塩酸中500kBq 227Thおよび500kBq  223Ra（放射能濃度に応じて1−5μl）を含むエッペンドルフチューブに添加し、それぞれの緩衝化製剤50μlと混合した。次に、コンジュゲートを崩壊した227Thで標識してTTCを形成するために、試料をエッペンドルフ・サーモミキサー・コンフォートで30分間振盪した（22℃、750rpm、10sサイクル）。その後、緩衝化製剤250μlを添加し、標識コンジュゲート（TTC）と混合した後、この試料170μlを各マイクロスピンカラムに添加した（試験試料に対してn＝1、2または3、中心点に対してn＝2）。1または3個の平行物（parallels）をもつ試料に関して、本明細書に記載される2つの平行物（parallels）に関して同じ条件を維持するために必要に応じて放射能および量を調節した。カラムをサーモミキサーで10000rcfで1分間回転させてカラムを溶離し、精製された材料をエッペンドルフチューブに回収した。
【００６５】
実施例4−放射線測定
実施例3の分離法の後の陽イオン交換カラムと溶離液中の223Raおよび227Thの量を測定した後、カラムと溶離液との間の放射性核種の分布を計算した。Ortec（テネシー州オークリッジ）製の高純度ゲルマニウム（HPGe）−検出器（GEM（15））から得たHPGeスペクトルを使用した。この検出器は、ほぼ30〜1400keVの範囲のγエネルギーをもつ放射性核種を識別し、数値化する。HPGe検出器で分析した全ての試料は、同じ場所に置いて1分間計数した。回転後のカラムおよび溶離液中の227Thおよび223Raの量を測定し、HPGe−検出器スペクトルの助けを借りてカラムと溶離液との間の放射性核種の分布を計算した。標準的な放射能を確保し、放射化学（放射性同位元素）純度を検証するために、放射性医薬品を調製する前に、この方法を用いて溶離液中の放射性同位元素濃度を分析することができた。
【００６６】
実施例5−安定性調査：TTCの放射化学的純度
放射性医薬品の放射化学的純度（RCP）は、この例では、結合した形態で（すなわちTTCとして）存在する227Thと遊離227Thとの間の関係である。放射性核種227Thおよび223Raだけが高純度ゲルマニウム（HPGe）−検出器GEM（15）で測定されるので、TTCデータは、遊離227Thを除外することができない。そのため、カラムおよび溶離液中でTTCおよび223Raの分離について分析した試料の一部を、放射性核種の分離の測定後に（同日中に）、周囲温度で同じ検出器によってRCP（ゲル濾過、iTLC、SDS−PAGE）についても分析した。
【００６７】
5.1  NAP5カラムでのゲル濾過
TTCの放射化学的純度を分析するために、NAP5カラムを使用した（サイズ排除を伴うゲル濾過）。製造業者から得た標準的な手順に従い、200μlの試料体積をカラムに添加した。NAP5カラム（n＝2）でのTTCの量を分析するためにHPGe−検出器スペクトルを記録した。図4a）を参照されたい。
【００６８】
5.2  インスタント薄層クロマトグラフィー
iTLC−SGクロマトグラフィー用紙を切断し、活性化させるために110〜120℃のインキュベーターの中で20〜30分間加熱することにより乾燥させた。ビーカーに、ほぼ0.5cmの0.10Mクエン酸緩衝剤pH 5.5と0.90％（w／w）塩化ナトリウム（移動相）を充填した。1〜8μlの試料（マイクロスピンカラムで精製されたTTC）を、用紙片の起線（origin line）に適用した（n＝2）。用紙片を、表面への損傷を慎重に避けてビーカーの中に垂直に入れた。溶媒が溶媒の前線に到達すると、用紙片をビーカーから取り出し、乾燥させた。この用紙片を半分に切断することによって用紙片を上部と下部に分割し、用紙片の各部分を計数管に入れた。各半分の活性を別々に5分間測定し、前線および適用点の227Thの百分率を、Auto HPGe、HPGe−検出器を備えたOrtec製ガンマ線スペクトロメーター（テネシー州オークリッジ）の助けを借りて計算した。分析の時間中に構築された、前線で崩壊した227Thからの223Raの存在について結果を補正した。図4b）を参照されたい。
【００６９】
5.3  ゲル電気泳動（SDS−PAGE）
表1（下記）のクエン酸で緩衝化した試料をSDS−PAGEで分析した（n＝2）。
【００７０】
NuPAGE（登録商標）ビス−トリスミニゲルの製造業者の標準的な手順に従った。MESランニングバッファーを、ミリQ水950mlとMES緩衝剤50mlを混合することによって調製した。試料は、希釈によって調製して、LDS試料緩衝剤、ミリQ水およびMES緩衝剤を用いて1.0mg／ml（0.03Mクエン酸緩衝剤pH5.5および0.90％w／w塩化ナトリウム中）のコンジュゲート濃度を達成した。次に、試料を混合し、使用するまで氷上で貯蔵した。5μgのコンジュゲートを各ウェルにロードした（n＝2）。ゲル電気泳動は、Power Pac Adaptor、4mmおよびPower Pac Basic（バイオラッド、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を備えたXCell SureLock Mini−Cell（インビトロジェン、カリフォルニア州カールスバッド）で、200Vの定電圧で手動で実行した。ゲルをInstant Blueで染色し、周囲温度で60分間インキュベートした。ゲルを水で洗浄することによって染色反応を停止させた。次に、ゲルを透明なフィルムに移し、写真を撮った。図5）を参照されたい。
【００７１】
【表３】
2019509328.tif 000005
【００７２】
実施例6−分離最適化
実験計画（DOE）は、シリカ／PSAマイクロスピンカラム上の227Thから223Raを分離するための条件を調査し、最適化するように考案した。各緩衝剤（クエン酸塩および酢酸塩）について、以下の変数を調査した：
【００７３】
【表４】
2019509328.tif 000006
【００７４】
実施例1〜5に示される分離および分析方法論を用いて、DoE変数の各々を調査した。結果は表3に示される。この表はPSA樹脂での放射性同位元素吸収への様々なパラメータの影響を示す。
【００７５】
【表５】
2019509328.tif 000007
【００７６】
非常に効果的な分離条件のいくつかの例が、以下の通りであることが見出された：
【００７７】
【表６】
2019509328.tif 000008
【００７８】
予測されるTTC％は、樹脂でのTTCの予測される吸収であり、予測される223Ra％は、樹脂での223Raの予測される吸収である。高い分離効率は、低いTTC吸収と、高い223Ra吸収を組み合わせるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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