(57)【要約】  本発明は、医化学の分野におけるものである。詳しくは、本発明は、がん細胞（例えば膵臓癌細胞）内で活性酸素種（ＲＯＳ）誘導剤として及びミトコンドリア活性の阻害剤として機能する、キナゾリンジオン構造を有する新しい部類の小分子ならびに、がん（例えば膵臓癌）及びその他の疾患の処置のための治療薬としてのそれらの用途に関する。
2019510084.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、または式ＩＩ
【化１】
2019510084.tif 000061
〔ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、がん細胞内でＲＯＳを誘導すること及びミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む〕
を有する化合物、ならびに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及び／またはプロドラッグ。
【請求項２】
前記がん細胞がＰＤＡＣ細胞及び／または膵臓癌細胞である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、がん細胞内でＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化によって（例えば、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって）ミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、ミトコンドリア活性の阻害を例えばｍｔＤＮＡ転写産物の合成の阻害及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素の下方制御によって起こすことが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、
【化２】
2019510084.tif 000062
2019510084.tif 000063
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、
【化３】
2019510084.tif 000064
からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、
【化４】
2019510084.tif 000065
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４が、
【化５】
2019510084.tif 000066
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、
【化６】
2019510084.tif 000067
2019510084.tif 000068
2019510084.tif 000069
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2019510084.tif 000076
または薬学的に許容できるその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物を含んでいる医薬組成物。
【請求項１１】
患者の過剰増殖性疾患を処置、改善または防止する方法であって、請求項１０に記載の医薬組成物を前記患者に治療的有効量投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
前記過剰増殖性疾患ががんである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが膵臓癌及び／またはＰＤＡＣである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者がヒト患者である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者に１つ以上の抗がん剤を投与することをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗がん剤が化学療法剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗がん剤が放射線療法である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物と、過剰増殖性疾患を有する患者に前記化合物を投与するための説明書とを含んでいるキット。
【請求項１９】
前記過剰増殖性疾患ががんである、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
前記がんが膵臓癌及び／またはＰＤＡＣである、請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
１つ以上の抗がん剤をさらに含んでいる、請求項１８に記載のキット。
【請求項２２】
前記化合物が１つ以上の抗がん剤と一緒に投与されることになる、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記がん細胞が、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、グリア腫、グリア芽腫、肝臓癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌腫、精巣癌腫、膀胱癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌腫、甲状腺癌腫、食道癌腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌腫、腎細胞癌腫、子宮内膜癌腫、副腎皮質癌腫、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌腫、絨毛癌腫、菌状息肉症、悪性高カルシウム血症、子宮頸肥大、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性多血症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、原発性マクログロブリン血症、及び網膜芽細胞腫から選択される１つ以上の種類のがんに関係している、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記がんが、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、グリア腫、グリア芽腫、肝臓癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌腫、精巣癌腫、膀胱癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌腫、甲状腺癌腫、食道癌腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌腫、腎細胞癌腫、子宮内膜癌腫、副腎皮質癌腫、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌腫、絨毛癌腫、菌状息肉症、悪性高カルシウム血症、子宮頸肥大、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性多血症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、原発性マクログロブリン血症、及び網膜芽細胞腫から選択される、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
〔連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する記載〕
本発明は、米国国立衛生研究所により授与されたＣＡ１８８２５２の下、政府の支援を受けてなされた発明である。
【０００２】
〔発明の分野〕
本発明は、医化学の分野におけるものである。詳しくは、本発明は、がん細胞（例えば膵臓癌細胞）内で活性酸素種（ＲＯＳ）誘導剤として及びミトコンドリア活性の阻害剤として機能する、キナゾリンジオン構造を有する新しい部類の小分子ならびに、がん（例えば膵臓癌）及びその他の疾患の処置のための治療薬としてのそれらの用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
〔序論〕
膵臓癌は、米国内の男女どちらにおいてもがん関連死の４番目に多い原因であり、２０１４年だけでも３９５９０名の命を奪っている（Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。その無症候性及び転移性の性質ゆえに、膵臓癌の症例の５０％超は、腫瘍が転移し切除不可能となった末期に診断されている。それゆえ、膵臓癌の処置は主に全身的化学療法に依存している。ゲムシタビンに基づく治療計画は、１９９６年にＦＤＡによって認可されて以来、膵臓癌の標準的医療となっている（Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。しかしながら、膵臓癌の全体的な５年生存率は、末期診断及び現在の化学療法に対する生得的／後天的な耐性による制限を受けるためにわずか６．７％であり、これはあらゆる種類のがんのなかでも最も低いものの１つである。近年、若干の臨床有効性を有する２つの併用治療計画が選択肢に加わった。ゲムシタビンにｎａｂ−パクリタキセル（アルブミン結合パクリタキセル）を追加することによって平均の全体的生存期間が６．７ヶ月から８．５ヶ月に延びた（Ｖｏｎ  Ｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。合剤ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（オキサリプラチン、イリノテカン、フルオロウラシル及びロイコボリン）は、全体生存期間中央値をゲムシタビン群における６．８ヶ月からＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ群における１１．１ヶ月に延ばす（Ｃｏｎｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）ことにより、転移性膵臓癌の処置のために認可されたが、増加した毒性はこれらの新しい処置選択肢において重大な懸念事項である。
【０００４】
したがって、この破壊的疾患を有する患者の生存期間を増大させるために新規な療法が早急に必要である。
【発明の概要】
【０００５】
がん細胞における改変されたレドックス恒常性は、腫瘍介入のための新しい機会を提供する。活性酸素種（ＲＯＳ）は、ミトコンドリア呼吸からの天然の副産物であるが、細胞シグナル伝達における第２のメッセンジャーとしての重要な役割を果たす（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。しかしながら、ＲＯＳは、高濃度で存在する場合には細胞プロセスにとって有害となり得、酸化によってＤＮＡ、脂質及びタンパク質に対する損傷を引き起こし得る。このため、健常なレドックス状態を確保するために、過剰な細胞内ＲＯＳは、ＲＯＳ解毒機構によって調節される抗酸化物質によって定常的に除去される。腫瘍細胞では、内因性ＲＯＳのレベル上昇の結果として抗酸化酵素が活発であることが多い（Ｆｒｕｅｈａｕｆ  ａｎｄ  Ｍｅｙｓｋｅｎｓ，２００７）。膵臓腺癌（ＰＤＡＣ）に一般的に存在するＫｒａｓＧ１２Ｄのような発癌性突然変異は、基底状態にある主たる抗酸化スイッチＮｒｆ２を活性化する（ＤｅＮｉｃｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。腫瘍における改変されたレドックス恒常性は、腫瘍の適応性抗酸化能を制圧する誘導性酸化ストレスに対する腫瘍の感受性をより高くし、ＲＯＳ媒介性細胞死を誘発する（Ｐｅｌｉｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４、Ｓａｂｈａｒｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｍａｃｋｅｒ，２０１４）。
【０００６】
以前に、キナゾリンジオンＱＤ２３２が膵臓癌モデルにおいてＲＯＳ依存性細胞傷害を及ぼすことが示された（Ｐａｔｈａｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５、Ｐａｔｈａｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。本発明の実施形態を開発する過程で行った実験は、先導的な最適化作業を成し遂げ、綿密な前臨床機序研究のための先導化合物としてＱＤ３２５
【０００７】
【化１】
2019510084.tif 000003
【０００８】
を同定した。そのような実験は、ミトコンドリアのＤループの選択的阻害が、有効なものであり得、ミトコンドリア機能に依るところが大きいがんを標的とする革新的な治療手法としてさらに探究され得る、ということを実証する。
【０００９】
かくして、本発明は、ＲＯＳ誘導剤として及びミトコンドリア機能の阻害剤として機能し、がん（例えば膵臓癌）（例えば任意の種類のがん）及びその他の疾患の処置のための治療薬として機能する、キナゾリンジオン構造を有する新しい部類の小分子を提供する。
【００１０】
したがって、本発明は、ＲＯＳを誘導しかつミトコンドリア活性を阻害するキナゾリンジオン構造を有する治療的有効量の薬物（複数可）（例えばキナゾリンジオン構造を有する小分子）に、がん（例えば膵臓癌）（例えばＰＤＡＣ）（例えば、それ及び／またはがん関連障害）（例えば任意の種類のがん）を患う動物（例えばヒト）を曝露することが、がん細胞（例えばＰＤＡＣ細胞）（例えば任意の種類のがん）及び／もしくは支持細胞の成長を完全に阻害することになり、かつ／またはそのような細胞を、がん治療薬もしくは放射線療法の細胞死誘導作用に対する感受性がより高い集団にすることになる、と企図する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ミトコンドリア活性の阻害は、例えば、Ｎｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答を活性化することによって起こる。例えば、いくつかの実施形態では、そのようなＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化は、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって起こる。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ミトコンドリア活性の阻害は、例えば、ｍｔＤＮＡ転写産物の合成を阻害すること及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素を下方制御することによって起こる。
【００１３】
本発明は、ＰＤＡＣ細胞でのミトコンドリア活性の阻害剤が、そのようながん細胞での細胞成長阻害、アポトーシス及び／または細胞周期停止を誘導する単剤療法として投与される場合、あるいは、がん細胞または支持細胞のアポトーシスプログラム実行への感受性を有する割合をがん治療薬単独または放射線療法単独で処置された動物の細胞の対応する割合に比べてより高くすべく、他の細胞死誘導性もしくは細胞周期撹乱性のがん治療薬などの付加的薬剤（複数可）または放射線療法との一時的関係性（併用療法）において投与される場合に、ＰＤＡＣの処置において未だ満たされていない要求を満足する、と企図する。
【００１４】
本発明のある特定の実施形態では、治療的有効量の本発明の化合物と、一連の抗がん剤との併用による動物の処置は、単独での当該化合物または抗がん薬／放射線で処置した場合に比べてより大きい腫瘍応答及び臨床上の恩恵をそのような動物にもたらす。認可済みの全ての抗がん薬及び放射線処置の用量は既知であるため、本発明は、それらと本発明の化合物との様々な組み合わせを企図する。
【００１５】
本出願人らは、ある特定のキナゾリンジオン化合物が、ＲＯＳ誘導剤及びミトコンドリア活性の阻害剤として機能し、がん（例えばＰＤＡＣ）及びその他の疾患の処置のための治療薬としての役割を果たす、ということを発見した。かくして、本発明は、ＲＯＳの誘導、ミトコンドリア活性の阻害（例えば、それによる細胞アポトーシスの促進）、ならびにアポトーシス及び／または細胞周期停止の誘導剤に対する細胞の感受性の向上にとって有用である、キナゾリンジオン化合物に関する。本発明のある特定のキナゾリンジオン化合物は、光学異性体を含めた立体異性体として存在していてもよい。本発明は、あらゆる立体異性体を純粋な個々の立体異性体調製物としても各々の濃縮調製物としても含み、そのような立体異性体のラセミ混合物も、当業者によく知られている方法に倣って分離され得る個々のジアステレオマー及びエナンチオマーも含む。
【００１６】
特定の実施形態では、式Ｉ：
【００１７】
【化２】
2019510084.tif 000004
【００１８】
に包含されるキナゾリンジオン化合物が提供され、薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及び／またはプロドラッグも含めて提供される。
【００１９】
式ＩはＲ１、Ｒ２及びＲ３に関して特定の化学部分に限定されない。式ＩＩはＲ４に関して特定の化学部分に限定されない。
【００２０】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、がん細胞内でＲＯＳを誘導すること及びミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、がん細胞内でＲＯＳを誘導すること及びミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、がん細胞内でＲＯＳを誘導することならびにＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化によって（例えば、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって）ミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、がん細胞内でＲＯＳを誘導することならびにＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化によって（例えば、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって）ミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、ＲＯＳを誘導することならびにミトコンドリア活性の阻害を例えばｍｔＤＮＡ転写産物の合成の阻害及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素の下方制御によって起こすことが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、ＲＯＳを誘導することならびにミトコンドリア活性の阻害を例えばｍｔＤＮＡ転写産物の合成の阻害及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素の下方制御によって起こすことが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、
【００２４】
【化３】
2019510084.tif 000005
2019510084.tif 000006
【００２５】
から選択される、化学部分である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、
【００２７】
【化４】
2019510084.tif 000007
【００２８】
から選択される化学部分である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、
【００３０】
【化５】
2019510084.tif 000008
【００３１】
から選択される化学部分である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、
【００３３】
【化６】
2019510084.tif 000009
【００３４】
から選択される化学部分である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩとして以下の化合物：
【００３６】
【化７】
2019510084.tif 000010
2019510084.tif 000011
2019510084.tif 000012
2019510084.tif 000013
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2019510084.tif 000020
【００３７】
または薬学的に許容できるその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが企図される。
【００３８】
表１（実施例を参照のこと）は、ＭＴＴアッセイによるＭｉａＰａＣａ２、Ｐａｎｃ−１及びＢｘＰＣ−３細胞におけるそのようなＱＤ化合物の構造及び細胞毒性を示す。
【００３９】
本発明はさらに、実施例に列挙する技術の少なくとも一部に倣うことによって本発明のいずれかの化合物を調製するプロセスを提供する。
【００４０】
本発明はまた、アポトーシス及び／または細胞周期停止の誘導剤などの付加的薬剤（複数可）に対する感受性を細胞にもたせるため、ならびに化学療法剤による処置の前に細胞周期停止を誘導することによる正常細胞の化学防御のための、化合物の用途に関する。本発明の化合物は、障害、例えば、アポトーシス細胞死の誘導に応答する障害、例えば、がん（例えばＰＤＡＣ）などの過剰増殖性疾患を含めたアポトーシスの調節不全によって特徴付けられる障害を処置、改善または防止するのに有用である。ある特定の実施形態では、化合物は、がん療法に対する耐性によって特徴付けられるがん（例えば、化学耐性、放射線耐性、ホルモン耐性などであるがん細胞）を処置、改善または防止するために使用することができる。いくつかの実施形態では、がんは膵臓癌及び／またはＰＤＡＣである。いくつかの実施形態では、がんは、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、グリア腫、グリア芽腫、肝臓癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌腫、精巣癌腫、膀胱癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌腫、甲状腺癌腫、食道癌腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌腫、腎細胞癌腫、子宮内膜癌腫、副腎皮質癌腫、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌腫、絨毛癌、菌状息肉症、悪性高カルシウム血症、子宮頸肥大、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性多血症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、原発性マクログロブリン血症、及び網膜芽細胞腫から選択される。
【００４１】
本発明はさらに、薬学的に許容できる担体中に本発明の化合物を含んでいる医薬組成物を提供する。
【００４２】
本発明はさらに、本発明の化合物と、動物に当該化合物を投与するための説明書とを含んでいるキットを提供する。キットは場合によってその他の治療剤、例えば抗がん剤またはアポトーシス調節剤を含んでいてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１Ａ〜Ｃは、ＱＤ化合物の細胞毒性がＲＯＳ誘導と相関していることを示す。Ａ）細胞に基づくＲＯＳ検出アッセイの説明図である。細胞透過性のＨ２ＤＣＦＤＡプローブがＭｉａＰａＣａ−２細胞に添加され、ＲＯＳの存在下で高蛍光性のＤＣＦに変換された。ＲＯＳレベルの指標として蛍光信号をＢｉｏＴｅｋ  Ｈ１プレートリーダーによって検出した。Ｂ）ＲＯＳの一形態であるＨ２Ｏ２は用量依存的及び時間依存的にＨ２ＤＣＦＤＡからＤＣＦへの変換を誘導する。Ｃ）構造グループ別に整理されているが、新しいＱＤ類縁体は、１０μＭで処理から２４時間後に異なるＲＯＳ誘導活性を示す。完全な活性化を表す陽性対照として、３００μＭで２４時間にわたるＨ２Ｏ２処理を用いている。ＱＤ化合物のＲＯＳ誘導活性は、陽性対照に対して正規化した。グラフのデータは、３つの独立した実験からの平均±標準偏差として表されている。
【図２】ＱＤ化合物の細胞毒性がＲＯＳ誘導と相関していることを示す。ＱＤ化合物の細胞毒性を、３．３μｍまたは１０μｍでのＭｉａＰａＣａ−２細胞における処理から７２時間後の細胞増殖阻害（％）によって表している。ＲＯＳ誘導は、３．３μｍまたは１０μｍのＱＤ化合物についてＭｉａＰａＣａ−２細胞における２４時間の処理の後に決定した。データ点は、３つの独立した実験の平均値を表す。線形相関をＰｒｉｓｍによって解析した。
【図３】図３Ａ〜Ｃは、ＭｉａＰａＣａ−２細胞においてＱＤ化合物の細胞毒性がＮＡＣによって低減されることを示す。Ａ）親化合物ＱＤ２３２は用量依存的及び時間依存的にＲＯＳ蓄積を誘導する。新しい類縁体ＱＤ３２５及びＱＤ３２６は、ＭｉａＰａＣａ−２細胞においてより強くより迅速なＲＯＳ蓄積を誘導する。化合物は１０μＭ、３．３μＭまたは１．１μＭで試験した。ＤＭＳＯを陰性対照として使用してアッセイの基礎信号（ＤＭＳＯ）を決定した。Ｈ２ＤＣＦＤＡによる前負荷のなされていない細胞を同条件で１０μＭの化合物で処理して、化合物の内因性蛍光（染色剤なし）を決定した。データ点は、２回繰り返した試行からの平均±標準偏差を表す。グラフは、３つの独立した実験の代表である。Ｂ）ＱＤ２３２、ＱＤ３２５及びＱＤ３２６によるＲＯＳ誘導は、ＮＡＣによる前処理（５ｍＭで３０分間）によって阻害される。データ点は、２回繰り返した試行からの平均±標準偏差を表す。グラフは、３つの独立した実験の代表である。Ｃ）５ｍＭのＮＡＣの存在は、ＱＤ２３２、ＱＤ３２５及びＱＤ３２６の細胞毒性を低下させる。細胞毒性は、７２時間の処理の後にＭＴＴアッセイによって決定した。データ点は、３つの独立した実験からの平均±標準偏差を表す。
【図４】ＩＰＡ（ｚスコア）で示された、ＱＤ化合物処理によって影響を受ける上位３０位までのカノニカル経路を示す。一覧表は、特定経路の活性化／阻害を指し示すものである活性化ｚスコアに基づいてＩＰＡによって生成した。
【図５】ＩＰＡ（ｐ値）で示された、ＱＤ化合物処理によって影響を受ける上位３０位までのカノニカル経路を示す。一覧表は、ｐ値に基づいてＩＰＡ比較解析によって生成した。一覧表は、階層クラスターによって分類した。
【図６】ＧＳＥＡで示された、ＱＤ化合物処理によって上方制御される上位５０位までの遺伝子セットを示す。各ＱＤ処理によって影響を受けた上位３０位までの遺伝子セット（ＦＤＲ  ｑ値＜０．１）を選抜及び集計した。全ての処理にわたって集計した一覧表は、正規化富化スコア（ＮＥＳ）の合計に応じて分類した。分類された一覧表からの上位５０位までの遺伝子セットを示す。灰色のセルは空白を示し、それは、特定の遺伝子セットが、示された処理による影響を受けた上位３０位までの遺伝子セットに含まれていなかったということを意味する。ヒートマップは、ＮＥＳに基づいて生成した。
【図７】ＧＳＥＡで示される、ＱＤ化合物処理によって下方制御される上位５０位までの遺伝子セットを示す。各ＱＤ処理によって影響を受けた上位３０位までの遺伝子セット（ＦＤＲ  ｑ値＜０．１）を選抜及び集計した。全ての処理にわたって集計した一覧表は、正規化富化スコア（ＮＥＳ）の合計に応じて分類した。分類された一覧表からの上位５０位までの遺伝子セットを示す。灰色のセルは空白を示し、それは、特定の遺伝子セットが、示された処理による影響を受けた上位３０位までの遺伝子セットに含まれていなかったということを意味する。ヒートマップは、ＮＥＳに基づいて生成した。
【図８−１】図８Ａ〜Ｃは、ＱＤ化合物が酸化ストレス及び異常タンパク質応答に対する細胞応答を誘導することを示す。Ａ）Ｂｒｕ−ｓｅｑデータのＩＰＡ解析によって明らかとなった、ＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理によって制御される上位１５位までのカノニカル経路である。ＭｉａＰａＣａ−２細胞を、（ＩＣ５０の１倍、２倍または３倍の）ＱＤ２３２または、（ＩＣ５０の１倍、２倍または５倍の）ＱＤ３２５で４時間処理した。新生ＲＮＡは、処理が残り３０分となった時にブロモウリジンで標識し、単離し、次世代シーケンシングに供した。
【図８−２】Ｂ）酸化ストレス応答遺伝子ＮＱＯ１及びＨＭＯＸ１の転写は、ＭｉａＰａＣａ−２細胞においてＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理によって用量依存的に上方制御された。Ｃ）異常タンパク質応答標的遺伝子ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の転写は、ＭｉａＰａＣａ−２細胞においてＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理によって上方制御された。
【図９】図９Ａ〜Ｃは、ＱＤ化合物が酸化ストレス及び異常タンパク質応答の標的遺伝子のタンパク質発現を誘導することを示す。酸化ストレス応答タンパク質ＮＱＯ１、ＨＯ−１ならびに異常タンパク質応答標的タンパク質ＣＨＯＰ及びＧＦＰ７８の発現レベルは、Ａ）ＭｉａＰａＣａ−２細胞、Ｂ）Ｐａｎｃ−１細胞及びＣ）ＢｘＰＣ−３細胞において、ＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理によって様々な程度に時間依存的に制御された。タンパク質レベルは、ＩｍａｇｅＪによって定量し、各々の負荷対照に対して正規化した。定量グラフ上のデータは、３つの独立した実験からの平均±標準偏差を表す。Ｐ値は、スチューデントのｔ検定を用いて算出した。＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊はｐ＜０．００１である。
【図１０】図１０Ａ〜Ｂは、ＱＤ化合物がミトコンドリアゲノムの転写を阻害することを示す。Ａ）ＭｉａＰａＣａ−２細胞の新生ＲＮＡ合成は、（６．９μＭの）ＱＤ２３２または（５．０μＭの）ＱＤ３２５による４時間の処理によって阻害された。上側の順方向矢印は、重鎖からの転写産物を表す。短い方の矢印は、Ｈ１プロモーターによって調節される、より短い転写産物を表すが、長い方の矢印は、ミトコンドリアゲノムの完全長を対象とするＨ２プロモーターによって調節される転写産物を表す。下側の逆方向矢印は、Ｌプロモーターによって調節される軽鎖転写産物を表す。対照からの信号を黄色で示し、ＱＤ２３２で処理した試料からの信号を青で表し、ＱＤ３２５で処理した試料からの信号を赤で示す。重軽鎖両方からの完全長転写産物はさらにプロセシングされて機能的なｔＲＮＡ分子、ｒＲＮＡ分子及びｍＲＮＡ分子となるが、それらに対応する遺伝子がパネルの下側に示されている。Ｂ）ミトコンドリア遺伝子ＣＯＩＩＩのタンパク質（ＣＯＸＩＩＩ）発現レベルは、ＭｉａＰａＣａ−２でのＱＤ化合物の処理によって低下する。タンパク質レベルは、ＩｍａｇｅＪによって定量し、各々の負荷対照に対して正規化した。定量グラフ上のデータは、３つの独立した実験からの平均±標準偏差を表す。Ｐ値は、スチューデントのｔ検定を用いて算出した。＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１である。
【図１１】図１１Ａ〜Ｃは、ＱＤ２３２またはＱＤ３２３５による処理がｍｔＤＮＡ転写産物の合成を選択的に阻害することを示す。Ａ）ＭｉａＰａＣａ−２細胞の新生ＲＮＡ合成は、（６．９μＭの）ＱＤ２３２または（５．０μＭの）ＱＤ３２５による４時間の処理によって阻害された。上側の曲線は、ＨＳＰ２プロモーターによって調節される重鎖転写産物に対してマッピングされた読み値を表し、下側の曲線は、ＬＳＰプロモーターによって調節される軽鎖転写産物に対してマッピングされた読み値を表す。対照からの信号を黄色で示し、ＱＤ２３２で処理した試料からの信号を青で表し、ＱＤ３２５で処理した試料からの信号を赤で示す。重軽鎖両方からの完全長転写産物はさらにプロセシングされて機能的なｔＲＮＡ分子、ｒＲＮＡ分子及びｍＲＮＡ分子となるが、それらに対応する遺伝子がパネルの下側に示されている。Ｂ）ｍｔＤＮＡの相対レベルはＭｉａＰａＣａ−２において活性ＱＤ化合物による６時間の処理によって低下する。ｍｔＤＮＡ含有量は、ｍｔＤＮＡ  １２Ｓ  ｒＲＮＡをゲノム１８Ｓ  ｒＲＮＡと比較することによって算出し、データは対照に対して正規化する。データは、３つの独立した実験からの平均±標準偏差として示している。Ｃ）ｍｔＤＮＡの相対レベルは、ＭｉａＰａＣａ−２においてＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理の後に時間依存的に低下する。
【図１２】図１２Ａ〜Ｅは、ＱＤ３２５が全身毒性を伴わずにＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の腫瘍成長を阻害することを示す。Ａ）５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５による処理は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の成長を阻害する。ＭｉａＰａＣａ−２移植マウスは、腫瘍の大きさが６５ｍｍ３に達したときに無作為にビヒクル対照群（ｎ＝５）またはＱＤ３２５処置群（ｎ＝５）に割り当てた。ＱＤ３２５は、４４日目まで週に５回、５ｍｇ／ｋｇを与えた。Ｂ）移植マウスの体重は５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５処置によって影響を受けなかった。データ点は平均±標準誤差を表す。Ｃ）ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色された臓器切片の代表的な顕微鏡写真である。画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ８３倒立顕微鏡を使用して倍率２０Ｘで撮影した。組織病理試験では、ＱＤ３２５処置後に主要な組織において大きな顕微鏡的変化は検出されなかった。Ｄ）ＭｉａＰａＣａ−２異種移植切片のＫｉ６７染色の代表的な免疫組織化学画像である。ＱＤ３２５は、処置された腫瘍のＫｉ６７指数（視野内のＫｉ６７陽性細胞の百分率）を低下させた。データは平均±標準偏差（ｎ＝９、各群から３つずつの腫瘍、各腫瘍切片の３つの画像）を表す。Ｐ値は、スチューデントのｔ検定を用いて算出した。Ｅ）ビヒクルまたはＱＤ３２５で処置されたＭｉａＰａＣａ−２異種移植片のＮＱＯ１、ＨＯ−１、ＧＨＯＰ、ＧＲＰ７８タンパク質レベルである。
【図１３】図１３Ａ〜Ｆは、ＱＤ３２５がＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の腫瘍成長を阻害することを示す。Ａ）５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５による処置は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の成長を阻害する。ＭｉａＰａＣａ−２移植マウスは、腫瘍の大きさが６５ｍｍ３に達したときに無作為にビヒクル対照群（ｎ＝５）またはＱＤ３２５処置群（ｎ＝５）に割り当てた。ＱＤ３２５は、４４日目まで週に５回、５ｍｇ／ｋｇを与えた。各群から３匹ずつのマウスを組織分析のために安楽死させた。４４日目の後は各群に２匹ずつマウスが残り、６７日目までＱＤ３２５用量を５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇに増やした。Ｂ）移植マウスの体重は５〜２０ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５処置によって影響を受けなかった。エラーバーは平均±標準誤差を示す。Ｃ）１５ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンによる処置は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の成長を阻害する。ＭｉａＰａＣａ−２移植マウスは、腫瘍の大きさが７５ｍｍ３に達したときに無作為にビヒクル対照群（ｎ＝４）、ゲムシタビン処置１群（ｎ＝３）、ゲムシタビン処置２群（ｎ＝４）に割り当てた。処置１では、ゲムシタビンは、４８日間にわたって週に１回、１５ｍｇ／ｋｇを与え、処置２では、ゲムシタビンは、１５日間にわたって週に２回、１５ｍｇ／ｋｇを与えた。データ点は平均±標準誤差を表す。Ｄ）移植マウスの体重は、どちらの投薬頻度であってもゲムシタビン処置によって影響を受けなかった。Ｅ）５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５による処置は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＭｉａＰａＣａ−２異種移植片の成長を阻害する。ＭｉａＰａＣａ−２移植マウスは、腫瘍の大きさが７５ｍｍ３に達したときに無作為にビヒクル対照群（ｎ＝４）、ゲムシタビン処置群（ｎ＝３）、ＱＤ３２５処置群（ｎ＝３）、及び併用処置群（ｎ＝３）に割り当てた。ＱＤ３２５は、週に５回、５ｍｇ／ｋｇを与え、ゲムシタビンは、週に１回、１５ｍｇ／ｋｇを与えた。データ点は平均±標準誤差を表す。Ｆ）移植マウスの体重は、ゲムシタビン処置によってもＱＤ３２５処置によっても影響を受けなかった。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
〔定義〕
本明細書中で使用する「抗がん剤」という用語は、（例えば哺乳動物、例えばヒトの）がんなどの過剰増殖性疾患の処置において使用される、任意の治療剤（例えば、化学療法化合物及び／または分子療法化合物）、アンチセンス療法、放射線療法、または外科的介入を指す。
【００４５】
本明細書中で使用する「プロドラッグ」という用語は、活性薬を放出するかまたはプロドラッグを活性薬へと（例えば酵素的、生理学的、力学的、電磁学的に）変換するのに標的とする生理系中での（例えば自発的または酵素的な）生体内変換を必要とする、親「薬物」分子の薬理学的に不活性な誘導体を指す。プロドラッグは、安定性、水溶性、毒性、特異性の欠如、または限定された生物学的利用能に関連する問題を克服するように設計される。典型的なプロドラッグは、活性薬分子自体と化学マスキング基（例えば、薬物の活性を可逆的に抑制する基）とを含む。いくつかのプロドラッグは、代謝条件下で開裂可能である基を有する化合物の変異型または誘導体である。プロドラッグは、当該技術分野において知られている方法、例えば、Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ（ｅｄｓ．），Ｇｏｒｄｏｎ  ＆Ｂｒｅａｃｈ，１９９１、特にＣｈａｐｔｅｒ５：“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ（ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５；Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｋ．Ｂ．Ｓｌｏａｎ（ｅｄ．），Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，１９９８、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｖｏｌ．４２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８５、特にｐｐ．３０９−３９６、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍ．Ｗｏｌｆｆ（ｅｄ．），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，１９９５、特にＶｏｌ．１及びｐｐ．１７２−１７８及びｐｐ．９４９−９８２、Ｐｒｏ−Ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ（ｅｄｓ．），Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７５、ならびにＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ（ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８７に記載されている方法を用いて親化合物から容易に調製することができる。
【００４６】
典型的なプロドラッグは、それらが生理学的条件下で加溶媒分解を受けるかまたは、酵素的分解もしくはその他の生化学変換（例えば、リン酸化、水素化、脱水素、グリコシル化）を受ける場合に、生体内または試験管内で薬学的に活性となる。プロドラッグは、水溶性、組織適合性、または哺乳動物臓器における遅延型放出の利点を提供することが多い（例えば、Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７−９，２１−２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ（１９８５）、及びＳｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ，ｐｐ．３５２−４０１，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９２）を参照されたい）。一般的なプロドラッグとしては、例えば、親酸と適切なアルコール（例えば低級アルカノール）との反応によって調製されたエステルもしくは親アルコールと適切なカルボン酸との反応によって調製されたエステルなどの酸誘導体（例えばアミノ酸）、親酸化合物とアミンとの反応によって調製されたアミド、塩基性基が反応してアシル化塩基誘導体（例えば低級アルキルアミド）を形成したもの、またはリン含有誘導体、例えば、ホスフェート、ホスホナート及びホスホロアミダイト（環状のホスフェート、ホスホナート及びホスホロアミダイトを含む）が挙げられる（例えば、米国特許出願公開ＵＳ２００７／０２４９５６４Ａ１（参照によりその全体を本明細書に援用する）を参照のこと）。
【００４７】
本明細書中で使用する「薬学的に許容できる塩」という用語は、標的動物（例えば哺乳動物）において生理学的に忍容される、本発明の化合物の任意の塩（例えば、酸または塩基との反応によって得られた塩）を指す。本発明の化合物の塩は、無機または有機の酸及び塩基から誘導され得る。酸の例としては、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、こはく酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。その他のシュウ酸などの酸は、それら自体薬学的に許容できるものではないが、本発明の化合物を得る際の中間体として有用な塩、及びそれらの薬学的に許容できる酸付加塩を調製する際に採用され得る。
【００４８】
塩基の例としては、限定されないが、アルカリ金属（例えばナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）水酸化物、アンモニア、及び式ＮＷ４＋（ここで、ＷはＣ１−４アルキルである）の化合物などが挙げられる。
【００４９】
塩の例としては、限定されないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、こはく酸塩、酒石酸塩、チオシアナート、トシラート、ウンデカン酸塩などが挙げられる。塩のその他の例としては、Ｎａ＋、ＮＨ４＋及びＮＷ４＋（ここで、ＷはＣ１−４アルキル基である）などの適切なカチオンと化合した本発明の化合物のアニオンなどが挙げられる。治療上の使用のためには、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容できることが企図される。しかしながら、薬学的に許容できない酸及び塩基の塩を、例えば薬学的に許容できる化合物の調製または精製において使用してもよい。
【００５０】
本明細書中で使用する「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、有機か無機かにかかわらない１つ以上の溶媒分子との物理的会合体を指す。この物理的会合体は、水素結合を含んでいることが多い。ある場合には、溶媒和物は、例えば１つ以上の溶媒和物分子が結晶固体の結晶格子内に組み込まれる場合に単離されることができる。「溶媒和物」は、液相の溶媒和物も、単離可能な溶媒和物も包含する。典型的な溶媒和物としては、例えば、水和物、エタノール和物及びメタノール和物が挙げられる。
【００５１】
本明細書中で使用する「治療的有効量」という用語は、障害の１つ以上の症候の改善をもたらすかまたは障害の進行を防止するかまたは障害の退行をもたらすのに十分な治療剤の量を指す。例えば、がんの処置に関して一実施形態において、治療的有効量は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％だけ、腫瘍成長の速度を下げるか、腫瘍量を減らすか、転移の数を減らすか、腫瘍進行の時間を延ばすかまたは生存時間を延ばす、治療剤の量を指すであろう。
【００５２】
本明細書中で使用する「感受性をもたせる」及び「感受性をもたせること」という用語は、第１薬剤（例えば、本発明の安息香酸化合物）の投与によって動物または動物内の細胞を第２薬剤の生体作用（例えば、限定されないが、細胞分裂、細胞成長、増殖、浸潤、血管新生、壊死またはアポトーシスを含めた細胞機能の促進または遅延）に対してより感受性またはより応答性にすることを指す。標的細胞に感受性をもたせる第１薬剤の効果は、第２薬剤の投与時に認められる意図された生体作用（例えば、限定されないが、細胞成長、増殖、浸潤、血管新生またはアポトーシスを含めた細胞機能の促進または遅延）の、第１薬剤の投与の有無による差によって、測ることができる。感受性をもたせた細胞の応答は、第１薬剤の非存在下での応答よりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、少なくとも４００％、少なくとも４５０％、少なくとも５００％だけ増加し得る。
【００５３】
本明細書中で使用する「アポトーシスの調節不全」という用語は、アポトーシスによって細胞死を受ける細胞の能力（例えば素因）の、任意の異常を指す。アポトーシスの調節不全は、種々の症状に関連しているかまたはそれらによって誘導され、それらの非限定的な例としては、自己免疫疾患（例えば、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症またはシェーグレン症候群）、慢性炎症症状（例えば、乾癬、喘息またはクローン病）、過剰増殖性障害（例えば、腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫またはＴ細胞リンパ腫）、ウイルス感染症（例えば、ヘルペス、パピローマまたはＨＩＶ）ならびに、その他の骨関節炎及びアテローム性動脈硬化などの症状が挙げられる。
【００５４】
本明細書中で使用する「過剰増殖性疾患」という用語は、動物内で局在化した増殖細胞集団が正常な成長の通常の制限によって統制されない任意の症状を指す。過剰増殖性障害の例としては、腫瘍、新生物、リンパ腫などが挙げられる。新生物は、浸潤または転移を経ないのであれば良性であると言われ、これらのうちのどちらかを行うのであれば悪性であると言われる。「転移」細胞とは、当該細胞が近隣の本体構造に浸潤し、それを破壊できることを意味する。過形成は、構造または機能の顕著な変化がなく組織または臓器の細胞数の増加を伴う、細胞増殖の一形態である。化生は、完全に分化したある種類の細胞が別の種類の分化細胞に取って代わる、制御された細胞成長の一形態である。
【００５５】
本明細書中で使用する「新生物疾患」という用語は、良性（非がん性）または悪性（がん性）のどちらかである、細胞の任意の異常成長を指す。
【００５６】
本明細書中で使用する「正常細胞」という用語は、異常な成長または分裂を経ていない細胞を指す。正常細胞は非がん性であり、また、いかなる過剰増殖性の疾患または障害の部分でもない。
【００５７】
本明細書中で使用する「抗新生物剤」という用語は、標的としての（例えば悪性の）新生物の増殖、成長または拡散を遅延させる任意の化合物を指す。
【００５８】
本明細書中で使用する「防止する」、「防止すること」及び「防止」という用語は、動物における病的細胞（例えば、過剰増殖細胞または新生物細胞）の発生の減少を指す。防止は、対象における病的細胞の完全、例えば全面的な非存在であってもよい。防止はまた、対象における病的細胞の発生が、本発明を用いない場合に起こるそれより少なくなるような、部分的なものであってもよい。
【００５９】
「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できるビヒクル」という用語は、医薬品用の標準的な担体、溶媒、界面活性剤またはビヒクルのいずれかを包含する。薬学的に許容できる適切なビヒクルとしては、例えば、水性ビヒクル及び非水性ビヒクルが挙げられる。標準的な医薬品用担体及びそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５に記載されている。
【００６０】
〔発明の詳細な説明〕
改変されたレドックス恒常性は、膵臓癌の処置のための独特の治療機会を提供する。本明細書に記載の新規キナゾリンジオン（ＱＤ）は、膵臓腺癌（ＰＤＡＣ）細胞系統における強力な成長阻害につながるレドックス調節剤である。本発明の実施形態を開発する過程で行った実験において、先導的な最適化作業は、大幅なＲＯＳ誘導を有する最も有力な候補としてのＱＤ３２５をもたらした。次世代シーケンシングを用いる機序研究は、核、小胞体及びミトコンドリアにおけるＱＤ化合物による全体的なストレス応答を明らかにした。ＱＤは、Ｎｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答を活性化させたことが、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の用量依存的増加によって実証された。ＱＤは、より高い濃度では、ｍｔＤＮＡ転写産物の合成を阻害すること及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素を下方制御することによってミトコンドリア機能を遮断することができた。より重要なことに、ＱＤ３２５による処置は生体内で良好に忍容され、マウスにおける腫瘍成長を著しく遅延させた。そのような結果は、ＰＤＡＣの処置における新しい治療方策としてのＱＤ３２５の使用を支持している。
【００６１】
したがって、本発明は、ＲＯＳ誘導剤として及びミトコンドリア活性の阻害剤として機能する、キナゾリンジオン構造を有する新しい部類の小分子ならびに、がん及びその他の疾患の処置のための治療薬としてのそれらの用途に関する。
【００６２】
特定の実施形態では、式Ｉ：
【００６３】
【化８】
2019510084.tif 000021
【００６４】
に包含されるキナゾリンジオン化合物が提供され、薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及び／またはプロドラッグも含めて提供される。
【００６５】
式ＩはＲ１、Ｒ２及びＲ３に関して特定の化学部分に限定されない。式ＩＩはＲ４に関して特定の化学部分に限定されない。
【００６６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、がん細胞内でＲＯＳを誘導すること及びミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、がん細胞内でＲＯＳを誘導すること及びミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、がん細胞内でＲＯＳを誘導することならびにＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化によって（例えば、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって）ミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、がん細胞内でＲＯＳを誘導することならびにＮｒｆ２媒介性酸化ストレス及び異常タンパク質応答の活性化によって（例えば、代表的な遺伝子ＮＱＯ１、ＨＭＯＸ１、ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の新生ＲＮＡ合成の増加によって）ミトコンドリア活性を阻害することが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のための特定の化学部分は、独立して、ＲＯＳを誘導することならびにミトコンドリア活性の阻害を例えばｍｔＤＮＡ転写産物の合成の阻害及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素の下方制御によって起こすことが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ４のための特定の化学部分は、ＲＯＳを誘導することならびにミトコンドリア活性の阻害を例えばｍｔＤＮＡ転写産物の合成の阻害及びｍｔＤＮＡによってコードされるＯＸＰＨＯＳ酵素の下方制御によって起こすことが結果としての化合物によってもたらされるのを可能にする任意の化学部分を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、
【００７０】
【化９】
2019510084.tif 000022
2019510084.tif 000023
【００７１】
から選択される、化学部分である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、
【００７３】
【化１０】
2019510084.tif 000024
【００７４】
から選択される化学部分である。
【００７５】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、
【００７６】
【化１１】
2019510084.tif 000025
【００７７】
から選択される化学部分である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、
【００７９】
【化１２】
2019510084.tif 000026
【００８０】
から選択される化学部分である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩとして以下の化合物：
【００８２】
【化１３】
2019510084.tif 000027
2019510084.tif 000028
2019510084.tif 000029
2019510084.tif 000030
2019510084.tif 000031
2019510084.tif 000032
2019510084.tif 000033
2019510084.tif 000034
2019510084.tif 000035
2019510084.tif 000036
【００８３】
または薬学的に許容できるその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが企図される。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物及び方法は、動物（例えば、限定されないがヒト及び獣医学的動物を含めた哺乳動物患者）の罹患細胞、罹患組織、罹患臓器、または病状及び／もしくは疾患状態を処置するために用いる。これに関して、本発明の方法及び組成物を使用する処置または予防で様々な疾患及び病態に対処することができる。これらの疾患及び症状の非制限的かつ典型的な一覧には、限定されないが例えば、膵臓癌、ＰＤＡＣ、及びその他の種類のがん（例えば、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、グリア腫、グリア芽腫、肝臓癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌腫、精巣癌腫、膀胱癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌腫、甲状腺癌腫、食道癌腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌腫、腎細胞癌腫、子宮内膜癌腫、副腎皮質癌腫、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌腫、絨毛癌腫、菌状息肉症、悪性高カルシウム血症、子宮頸肥大、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性多血症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、原発性マクログロブリン血症、及び網膜芽細胞腫）が含まれる。いくつかの実施形態では、処置されるがん細胞は転移性である。他の実施形態では、処置されるがん細胞は抗がん剤に対して耐性である。
【００８５】
本発明のいくつかの実施形態は、有効量の本発明の化合物と、少なくとも１つの付加的治療剤（限定されないが、化学療法用抗新生物剤、アポトーシス調節剤、抗微生物剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤及び抗炎症剤を含む）及び／または治療技術（例えば外科的介入及び／または放射線療法）とを施す方法を提供する。特定の実施形態では、付加的治療剤（複数可）は抗がん剤である。
【００８６】
数多くの適切な抗がん剤が本発明の方法における使用のために企図される。実際、本発明は、限定されないが、アポトーシスを誘導する薬剤；ポリヌクレオチド（例えば、アンチセンス、リボザイム、ｓｉＲＮＡ）；ポリペプチド（例えば酵素及び抗体）；生物学的模倣薬；アルカロイド；アルキル化剤；抗腫瘍抗生物質；代謝拮抗薬；ホルモン；白金化合物；モノクローナルまたはポリクローナル抗体（例えば、抗癌薬、毒素、ディフェンシンと結合させた抗体）、毒素；放射性核種；生体応答調節剤（例えば、インターフェロン（例えばＩＦＮ−α）及びインターロイキン（例えばＩＬ−２））；養子免疫療法剤；造血性成長因子；腫瘍細胞分化を誘導する薬剤（例えば全トランス型レチノイン酸）；遺伝子療法試薬（例えばアンチセンス療法試薬及びヌクレオチド）；腫瘍ワクチン；血管新生阻害剤；プロテオソーム阻害剤；ＮＦ−κＢ調節剤抗ＣＤＫ化合物；ＨＤＡＣ阻害剤；などの数々の抗がん剤の投与を企図する。本開示の化合物と共に同時投与するのに適した化学療法用化合物及び抗癌療法のその他多くの例は当業者に知られている。
【００８７】
ある特定の実施形態では、抗がん剤は、アポトーシスを誘導または刺激する薬剤を含む。アポトーシスを誘導する薬剤としては、限定されないが例えば、放射線（例えばＸ線、ガンマ線、ＵＶ）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連因子（例えばＴＮＦファミリーの受容体タンパク質、ＴＮＦファミリーのリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１またはＴＲＡＩＬ−Ｒ２に対する抗体）；キナーゼ阻害剤（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、血管成長因子受容体（ＶＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、及びＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤（例えばＧＬＥＥＶＥＣ））；アンチセンス分子；抗体（例えば、ハーセプチン、リツキサン、ゼバリン及びアバスチン）；抗エストロゲン剤（例えばラロキシフェン及びタモキシフェン）；抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテサミド、ケトコナゾール及びコルチコステロイド）；シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）阻害剤（例えば、セレコキシブ、メロキシカム、ＮＳ−３９８及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））；抗炎症薬（例えば、ブタゾリジン、デカドロン、デルタゾン、デキサメタゾン、デキサメタゾンインテンソール、デクソン、ヘキサドロール、ヒドロキシクロロキン、メチコルテン、オラデクソン、オラゾン、オキシフェンブタゾン、ペディアプレド、フェニルブタゾン、プラケニル、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン及びタンデアリル）；及びがん化学療法薬（例えば、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、ＣＰＴ−１１、フルダラビン（フルダラ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、デキサメタゾン、ミトキサントロン、マイロターグ、ＶＰ−１６、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、５−ＦＵ、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ボルテゾミブ、ゲフィチニブ、ベバシズマブ、タキソテールまたはタキソール）；細胞シグナル伝達分子；セラミド及びサイトカイン；スタウロスポリンなどが挙げられる。
【００８８】
さらに他の実施形態では、本発明の組成物及び方法は、本発明の化合物と、アルキル化剤、代謝拮抗薬及び天然産物（例えば、ハーブ及びその他の植物ならびに／または動物由来化合物）とから選択される少なくとも１つの抗過剰増殖剤または抗新生物剤とを提供する。
【００８９】
本発明の組成物及び方法において使用するのに適したアルキル化剤としては、限定されないが例えば、１）ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）；及びクロラムブシル）；２）エチレンイミン及びメチルメラミン（例えばヘキサメチルメラミン及びチオテパ）；３）アルキルスルホネート（例えばブスルファン）；４）ニトロソ尿素（例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）；ロムスチン（ＣＣＮＵ）；セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；及びストレプトゾシン（ストレプトゾトシン））；及び５）トリアゼン（例えばダカルバジン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド））が挙げられる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物及び方法において使用するのに適した代謝拮抗薬として、限定されないが例えば、１）葉酸類縁体（例えばメトトレキサート（アメトプテリン））；２）ピリミジン類縁体（例えば、フルオロウラシル（５−フルオロウラシル；５−ＦＵ）、フロキシウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦｕｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド））；３）及びプリン類縁体（例えば、メルカプトプリン（６−メルカプトプリン；６−ＭＰ）、チオグアニン（６−チオグアニン；ＴＧ）、及びペントスタチン（２’−デオキシコホルマイシン））が挙げられる。
【００９１】
他のさらなる実施形態では、本発明の組成物及び方法において使用するのに適した化学療法剤として、限定されないが例えば、１）ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン）；２）エピポドフィロトキシン（例えばエトポシド及びテニポシド）；３）抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＣ））；４）酵素（例えばＬ−アスパラギナーゼ）；５）生体応答調節剤（例えばインターフェロンα）；６）白金配位錯体（例えばシスプラチン（ｃｉｓ−ＤＤＰ）及びカルボプラチン）；７）アントラセンジオン（例えばミトキサントロン）；８）置換型尿素（例えばヒドロキシ尿素）；９）メチルヒドラジン誘導体（例えばプロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン；ＭＩＨ））；１０）副腎皮質抑制剤（例えばミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）及びアミノグルテチミド）；１１）副腎皮質ステロイド（例えばプレドニゾン）；１２）プロゲスチン（例えばカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン及び酢酸メゲストロール）；１３）エストロゲン（例えばジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール）；１４）抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン）；１５）アンドロゲン（例えばプロピオン酸テストステロン、及びフルオキシメステロン）；１６）抗アンドロゲン剤（例えばフルタミド）；及び１７）ゴナドトロピン放出ホルモン類縁体（例えばロイプロリド）が挙げられる。
【００９２】
がん療法との関連において慣例的に使用される腫瘍溶解剤には、本発明の組成物及び方法における用途がある。例えば、米国食品医薬品局は、米国内での使用が認可された腫瘍溶解剤の処方集を維持している。米国食品医薬品局と同等の国際機関は同様の処方集を維持している。表３は、米国での使用が認可された典型的な抗新生物剤の一覧を提供する。当業者であれば、全ての米国認可済み化学療法剤に対して要求される「製品ラベル」には当該典型的な薬剤について承認されている適応症、投薬情報、毒性データなどが記載されることを理解するであろう。
【００９３】
【表１】
2019510084.tif 000037
2019510084.tif 000038
2019510084.tif 000039
2019510084.tif 000040
2019510084.tif 000041
2019510084.tif 000042
2019510084.tif 000043
2019510084.tif 000044
2019510084.tif 000045
2019510084.tif 000046
2019510084.tif 000047
2019510084.tif 000048
2019510084.tif 000049
【００９４】
抗がん剤はさらに、抗がん活性を有すると同定された化合物を含む。例としては、限定されないが、３−ＡＰ、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート、１７ＡＡＧ、８５２Ａ、ＡＢＩ−００７、ＡＢＲ−２１７６２０、ＡＢＴ−７５１、ＡＤＩ−ＰＥＧ２０、ＡＥ−９４１、ＡＧ−０１３７３６、ＡＧＲＯ１００、アラノシン、ＡＭＧ７０６、抗体Ｇ２５０、抗新生物薬、ＡＰ２３５７３、アパジコン、ＡＰＣ８０１５、アチプリモード、ＡＴＮ−１６１、アトラセンタン、アザシチジン、ＢＢ−１０９０１、ＢＣＸ−１７７７、ベバシズマブ、ＢＧ００００１、ビカルタミド、ＢＭＳ２４７５５０、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブセレリン、カルシトリオール、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＢ−２９１４、セフィキシム、セツキシマブ、ＣＧ００７０、シレンジチド、クロファラビン、コンブレタスタチンＡ４ホスフェート、ＣＰ−６７５，２０６、ＣＰ−７２４，７１４、ＣｐＧ７９０９、クルクミン、デシタビン、ＤＥＮＳＰＭ、ドキセルカルシフェロール、Ｅ７０７０、Ｅ７３８９、エクテナサイジン７４３、エファプロキシラール、エフロルニチン、ＥＫＢ−５６９、アンザスタウリン、エルロチニブ、エクシスリンド、フェンレチニド、フラボピリドール、フルダラビン、フルタミド、ホテムスチン、ＦＲ９０１２２８、Ｇ１７ＤＴ、ガリキシマブ、ゲフィチニブ、ゲニステイン、グルホスファミド、ＧＴＩ−２０４０、ヒストレリン、ＨＫＩ−２７２、ホモハリントニン、ＨＳＰＰＣ−９６、ｈｕ１４．１８−インターロイキン−２融合タンパク質、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４、イロプロスト、イミキモド、インフリキシマブ、インターロイキン−１２、ＩＰＩ−５０４、イロフルベン、イキサベピロン、ラパチニブ、レナミドマイド、レスタウルチニブ、ロイプロリド、ＬＭＢ−９免疫毒、ロナファルニブ、ルニリキシマブ、マフォスファミド、ＭＢ０７１３３、ＭＤＸ−０１０、ＭＬＮ２７０４、モノクローナル抗体３Ｆ８、モノクローナル抗体Ｊ５９１、モテキサフィン、ＭＳ−２７５、ＭＶＡ−ＭＵＣ１−ＩＬ２、ニルタミド、ニトロカンプトテシン、ノラトレキセド二塩酸塩、ノルバデックス、ＮＳ−９、Ｏ６−ベンジルグアニン、オブリメルセンナトリウム、ＯＮＹＸ−０１５、オレゴボマブ、ＯＳＩ−７７４、パニツムマブ、パラプラチン、ＰＤ−０３２５９０１、ペメトレキセド、ＰＨＹ９０６、ピオグリタゾン、ピルフェニドン、ピキサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、ＰＳ−３４１、ＰＳＣ８３３、ＰＸＤ１０１、ピラゾロアクリジン、Ｒ１１５７７７、ＲＡＤ００１、ランピルナーゼ、レベッカマイシン類縁体、ｒｈｕアンジオスタチンタンパク質、ｒｈｕＭａｂ  ２Ｃ４、ロシグリタゾン、ルビテカン、Ｓ−１、Ｓ−８１８４、サトラプラチン、ＳＢ−，１５９９２、ＳＧＮ−００１０、ＳＧＮ−４０、ソラフェニブ、ＳＲ３１７４７Ａ、ＳＴ１５７１、ＳＵ０１１２４８、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、スラミン、タラボスタット、タランパネル、タリキダル、テムシロリムス、ＴＧＦａ−ＰＥ３８免疫毒、サリドマイド、チマルファシン、チピファルニブ、チラパザミン、ＴＬＫ２８６、トラベクテジン、グルコン酸トリメトレキサート、ＴｒｏＶａｘ、ＵＣ���−１、バルプロ酸、ビンフルニン、ＶＮＰ４０１０１Ｍ、ボロシキシマブ、ボリノスタット、ＶＸ−６８０、ＺＤ１８３９、ＺＤ６４７４、ジロイトン及びゾスキダル三塩酸塩が挙げられる。
【００９５】
抗がん剤及びその他の治療剤のより詳細な記載については、当業者は、限定されないがＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ及びＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”ｔｅｎｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄｓ．Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を含めた任意の数の指示マニュアルを参照されたい。
【００９６】
本発明は、放射線療法と共に本発明の化合物を投与する方法を提供する。本発明は、動物へ治療線量の放射線を送達するために用いるタイプ、量または、送達及び投与の方式によって限定されない。例えば、動物は、光子放射線療法、粒子線照射療法、その他の類の放射線療法、及びそれらの組み合わせを受け得る。いくつかの態様では、放射線は、直線加速器を使用して動物へ送達される。さらに他の実施形態では、放射線は、ガンマナイフを使用して送達される。
【００９７】
放射線源は、動物の外部にあっても内部にあってもよい。外部照射療法が最も一般的であり、高エネルギー放射線ビームを、例えば直線加速器を使用して、皮膚を介して腫瘍部位へ向けることを伴う。放射線ビームは腫瘍部位に局在化されるが、正常な健常組織の曝露を回避することはほぼ不可能である。しかしながら、外部放射線は通常、動物によって十分に忍容される。内部照射療法は、放射線放出源、例えば、ビーズ、ワイヤ、ペレット、カプセル、粒子などを体内の腫瘍部位またはその付近に埋植することを伴い、特異的にがん細胞を標的とする送達システムを使用すること（例えば、癌細胞結合性リガンドに結合させた粒子を使用すること）を含む。そのような埋植物質は、治療後に除去してもよいし、または不活性なままで体内に残してもよい。内部照射療法の種類としては、限定されないが例えば、近接照射療法、組織内照射、腔内照射、放射線免疫療法などが挙げられる。
【００９８】
動物は、場合により、放射線増感剤（例えば、メトロニダゾール、ミソニダゾール、動脈内Ｂｕｄｒ、静脈内ヨードデオキシウリジン（ＩｕｄＲ）、ニトロイミダゾール、５−置換−４−ニトロイミダゾール、２Ｈ−イソインドールジオン、［［（２−ブロモエチル）−アミノ］メチル］−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−エタノール、ニトロアニリン誘導体、ＤＮＡ親和性低酸素選択的細胞毒、ハロゲン化ＤＮＡリガンド、１，２，４ベンゾトリアジンオキサイド、２−ニトロイミダゾール誘導体、フッ素含有ニトロアゾール誘導体、ベンズアミド、ニコチンアミド、アクリジン−インターカレーター、５−チオトレトラゾール誘導体、３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール、４，５−ジニトロイミダゾール誘導体、ヒドロキシル化テキサフリン、シスプラチン、マイトマイシン、チリパザミン、ニトロソ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ブレオマイシン、ビンクリスチン、カルボプラチン、エピルビシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンデシン、エトポシド、パクリタキセル、熱（温熱療法）など）、放射線防護剤（例えば、システアミン、アミノアルキル二水素ホスホロチオエート、アミフォスチン（ＷＲ２７２１）、ＩＬ−１、ＩＬ−６など）を受け得る。放射線増感剤は、腫瘍細胞殺傷性を増強する。放射線防護剤は、放射線の有害作用から健常組織を防護する。
【００９９】
放射線の線量が、許容できない悪い副作用を伴わずして動物によって忍容される限り、いかなる類の放射線を動物に施してもよい。放射線療法の適切な種類としては、例えば、電離（電磁）放射線療法（例えばＸ線またはγ線）または粒子線照射療法（例えば高線形エネルギー放射線）が挙げられる。電離放射線は、イオン化、すなわち電子の獲得または喪失をもたらすのに十分なエネルギーを有する粒子または光子を含んでいる放射線として定義される（例えばＵ．Ｓ．５，７７０，５８１に記載されているとおり。これを参照によりその全体を本明細書に援用する）。放射線の作用は、少なくとも部分的に臨床医によって制御され得る。一実施形態では、放射線の線量は、最大の標的細胞曝露、及び毒性低減のために、分割される。
【０１００】
一実施形態では、動物に施す放射線の総線量は、約０．０１グレイ（Ｇｙ）〜約１００Ｇｙである。別の実施形態では、処置の間にわたって約１０Ｇｙ〜約６５Ｇｙ（例えば、約１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、２５Ｇｙ、３０Ｇｙ、３５Ｇｙ、４０Ｇｙ、４５Ｇｙ、５０Ｇｙ、５５Ｇｙまたは６０Ｇｙ）を施す。いくつかの実施形態では、１日のうちに放射線の全線量を施すことができるが、総線量を分割して数日間にわたって施すことが理想的である。望ましくは、少なくとも３日間、例えば少なくとも５、７、１０、１４、１７、２１、２５、２８、３２、３５、３８、４２、４６、５２または５６日間（約１〜８週間）にわたって放射線療法を施す。したがって、放射線の一日線量は、おおよそ１〜５Ｇｙ（例えば、約１Ｇｙ、１．５Ｇｙ、１．８Ｇｙ、２Ｇｙ、２．５Ｇｙ、２．８Ｇｙ、３Ｇｙ、３．２Ｇｙ、３．５Ｇｙ、３．８Ｇｙ、４Ｇｙ、４．２Ｇｙまたは４．５Ｇｙ）または１〜２Ｇｙ（例えば１．５〜２Ｇｙ）を含む。放射線の一日線量は、標的細胞の破壊を誘導するのに十分でなければならない。ある期間にまたがる場合、放射線は、一実施形態では毎日施されず、それによって、動物が休息すること及び治療効果が実現されることを可能にする。例えば、放射線は、処置１週間につき５日間は連続で施し、２日間は施さないことが望ましく、それによって１週間あたり２日間の休息が可能となる。しかしながら、放射線は、動物の応答性及び何らかの可能性のある副作用に応じて１日／週、２日／週、３日／週、４日／週、５日／週、６日／週、または丸７日／週施すことができる。放射線療法は、治療期間中、いつ開始してもよい。一実施形態では、放射線を第１週または第２週に開始し、治療期間の残りの存続期間にわたって施してもよい。例として、放射線は、例えば固形腫瘍を治療するための６週間を含む治療期間のうち第１〜６週または第２〜６週に施す。あるいは、放射線は、５週間を含む治療期間のうち第１〜５週または第２〜５週に施す。しかしながら、これらの例示的な放射線療法施行スケジュールは、本発明を限定することを意図したものではない。
【０１０１】
また、抗微生物性治療剤を本発明において治療剤として使用してもよい。微生物の殺傷、抑制、あるいは機能の減衰をもたらすことができる任意の薬剤、ならびにそのような活性を有すると考えられる任意の薬剤が使用され得る。抗微生物剤としては、限定されないが例えば、単独でまたは組み合わせて使用される、天然及び合成の抗生物質、抗体、阻害タンパク質（例えばディフェンシン）、アンチセンス核酸、膜破壊剤などが挙げられる。実際、限定されないが抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤などを含めたいかなる種類の抗生物質をも使用してもよい。
【０１０２】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明の化合物と、１つ以上の治療剤または抗がん剤とを下記うちの１つ以上の条件の下で動物に投与する：様々な周期性、様々な継続期間、様々な濃度で、種々の投与経路など。いくつかの実施形態では、化合物を、治療剤または抗がん剤の前、例えば、治療剤または抗がん剤の投与の０．５、１、２、３、４、５、１０、１２もしくは１８時間前、１、２、３、４、５もしくは６日前、または１、２、３もしくは４週間前に投与する。いくつかの実施形態では、化合物を治療剤または抗がん剤の後、例えば抗がん剤の投与から０．５、１、２、３、４、５、１０、１２もしくは１８時間後、１、２、３、４、５もしくは６日後、または１、２、３もしくは４週間後に投与する。いくつかの実施形態では、化合物と、治療剤または抗がん剤とを、同時進行でありながらも異なるスケジュールで投与し、例えば、化合物を毎日投与する一方で治療剤または抗がん剤を週に１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回投与する。他の実施形態では、化合物を週に１回投与する一方で治療剤または抗がん剤を毎日、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回投与する。
【０１０３】
本発明の範囲に入る組成物は、本発明の化合物をその意図された目的が達成されるのに有効な量で含有しているあらゆる組成物を含む。個々の必要性は様々であるが、各成分の有効量の最適範囲の決定は当業者の技量範囲内である。典型的には、化合物は、アポトーシスの誘導に応答する障害が処置される哺乳動物の体重に対して１日あたり、０．００２５〜５０ｍｇ／ｋｇ（または、薬学的に許容できるその塩の当量）の用量で哺乳動物（例えばヒト）に経口投与され得る。一実施形態では、そのような障害を処置、改善または防止するために約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇを経口投与する。筋肉内注射の場合、用量は一般的には経口用量の約半分である。例えば、適する筋肉内用量は、約０．００２５〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇであろう。
【０１０４】
単位経口用量は、化合物を約０．０１〜約１０００ｍｇ、例えば約０．１〜約１００ｍｇ含み得る。単位用量は、各々が化合物またはその溶媒和物を約０．１〜約１０ｍｇ、好適には約０．２５〜約５０ｍｇ含有している１つ以上の錠剤またはカプセル剤として、１日１回以上投与され得る。
【０１０５】
局所用製剤中で化合物は、担体１グラムあたり約０．０１〜１００ｍｇの濃度で存在し得る。化合物は、一実施形態では約０．０７〜１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１〜０．５ｍｇ／ｍｌ、またある実施形態では約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【０１０６】
本発明の化合物は、化合物を未加工の化学物質として投与する以外に、賦形剤と、化合物を加工して薬学的に使用可能な調合剤にすることを容易にする助剤とを含んでいる薬学的に許容できる適切な担体を含有する医薬調合剤の一部として投与してもよい。調合剤、特に、経口投与または局所投与することができ、かつ、一種類の投与のために施用することができる調合剤、例えば、錠剤、糖衣錠、徐放性口内錠及びカプセル剤、口内洗浄剤及び洗口液、ゲル剤、懸濁液、ヘアーリンス、ヘアージェル、シャンプー、さらには、直腸投与することができる調合剤、例えば坐剤、ならびに静脈内点滴、注射、局所または経口による投与に適した液剤は、約０．０１〜９９パーセント、一実施形態では約０．２５〜７５パーセントの活性化合物（複数可）を賦形剤と共に含有する。
【０１０７】
本発明の医薬組成物は、本発明の化合物の恩恵的効果を体験し得る任意の患者に投与され得る。そのような患者の中で最も重要なのは哺乳動物、例えばヒトであるが、本発明をそのように限定することは意図されない。他の患者としては、例えば獣医学的動物（ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコなど）が挙げられる。
【０１０８】
化合物及びその医薬組成物は、それらの意図される目的を達成するいかなる手段でも投与されてよい。例えば、投与は、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、頬側、クモ膜下腔内、頭蓋内、鼻腔内または局所の経路によるものであってもよい。代わりに、または同時に、投与が経口経路によるものであってもよい。投与される投薬量は、受容者の年齢、健康状態及び体重、併用処置（あるならば）の種類、処置の頻度、及び望まれる作用の性質に依存するであろう。
【０１０９】
本発明の薬学的調製物は、それ自体知られている方法、例えば、従来の混合、造粒、糖衣作製、溶解または凍結乾燥のプロセスによって製造される。したがって、経口用の医薬調合剤は、活性化合物を固体賦形剤と混合し、場合によっては結果として得られる混合物を粉砕し、所望によるかまたは必要に応じて適切な助剤を添加した後に顆粒の混合物を加工して錠剤または糖衣錠コアを得ることにより、得ることができる。
【０１１０】
適する賦形剤は、とりわけ、フィラー、例えば、糖類（例えば、乳糖または蔗糖、マンニトールまたはソルビトール）、セルロース調製物及び／またはリン酸カルシウム（例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム）、ならびに結合剤、例えば、デンプンペースト（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプンを使用したもの）、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／またはポリビニルピロリドンである。所望により、崩壊剤、例えば、上記のデンプン、さらにはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムが添加され得る。助剤は、とりわけ、流動性調節剤及び滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、及び／またはポリエチレングリコールである。糖衣コアには、所望によっては胃液に対して耐性である、適切なコーティング剤が提供される。この目的のためには高濃度の糖溶液が使用され得、それは場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール及び／または二酸化チタン、ラッカー溶液及び、適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含有し得る。胃液に対して耐性であるコーティングを作るためには、適切なセルロース調製物、例えばアセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチル−セルロースフタレートを使用する。染料または顔料を錠剤または糖衣コーティングに、例えば識別のためまたは活性化合物用量の併用を特徴付けるために添加してもよい。
【０１１１】
経口的に使用することができるその他の医薬調合物としては、例えば、ゼラチンで作られた押込式カプセル剤及び、ゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とで作られた密封型軟カプセル剤が挙げられる。押込式カプセル剤は、顆粒形態の活性化合物を含有することができ、それは乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、及び／または滑沢剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウムならびに場合によって安定剤と混ざっていてもよい。軟カプセル剤において活性化合物は、一実施形態では適切な液体、例えば脂肪油または流動パラフィンの中に溶解または懸濁している。さらに、安定剤を添加してもよい。
【０１１２】
直腸に使用することができる可能な医薬調合剤としては、例えば、１つ以上の活性化合物と坐剤基剤との組み合わせからなる坐剤が挙げられる。適する坐剤基剤は、例えば、天然もしくは合成のトリグリセリド、またはパラフィン炭化水素である。さらに、活性化合物と基剤との組み合わせからなるゼラチン直腸カプセル剤を使用することも可能である。可能な基剤材料としては、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、またはパラフィン炭化水素が挙げられる。
【０１１３】
非経口投与用の適する製剤としては、例えば、水溶性形態の活性化合物の水溶液、例えば水溶性塩及びアルカリ性溶液が挙げられる。さらに、ふさわしい注射用油性懸濁剤としての活性化合物の懸濁剤を投与してもよい。適する親油性の溶媒またはビヒクルとしては、例えば、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドまたはポリエチレングリコール−４００が挙げられる。注射用水性懸濁剤は、懸濁剤の粘度を向上させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／またはデキストランを含有していてもよい。場合により、懸濁剤はさらに安定剤を含有していてもよい。
【０１１４】
一実施形態において、本発明の局所用組成物は、ふさわしい担体の選択によって油剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤などとして製剤化される。適した担体としては、例えば、植物油または鉱油、白色ワセリン（白色軟質パラフィン）、分岐鎖の脂肪または油、動物性脂肪、及び高分子量アルコール（Ｃ１２より大きい）が挙げられる。担体は、有効成分が中で可溶性となるものであり得る。さらに、乳化剤、安定剤、湿潤剤及び抗酸化剤、ならびに所望によっては色彩または芳香をもたせる薬剤を含んでいてもよい。さらに、経皮透過促進剤をこれらの局所用製剤において採用することができる。そのような促進剤の例は、米国特許第３，９８９，８１６号及び第４，４４４，７６２号（各々を参照によってその全体を本明細書に援用する）にみることができる。
【０１１５】
軟膏剤は、活性成分の植物油溶液、例えばアーモンド油溶液を温かい軟質パラフィンと混合して混合物を冷却させることによって製剤化され得る。そのような軟膏剤の典型的な例は、約３０重量％のアーモンド油と約７０重量％の白色軟質パラフィンとを含むものである。ローション剤は、適切な高分子量アルコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールの中に活性成分を溶解させることによって好適に調製され得る。
【０１１６】
当該技術分野において通常の技量を有する者であれば、上記が単に本発明のある特定の好ましい実施形態の詳細な説明を表していることを認識するであろう。上記の組成物及び方法の様々な改変及び変更は、当該技術分野において利用可能な専門知識を用いて容易に成し遂げることができるものであり、本発明の範囲内に入る。
【実施例】
【０１１７】
以下の実施例は、本発明の化合物、組成物及び方法の例説であり、それらを限定するものではない。当業者にとって自明な、臨床治療において通常遭遇する種々の条件及びパラメーターの他の適切な改変及び調整は、本発明の趣旨及び範囲に含まれる。
【０１１８】
〔実施例Ｉ〕
この実施例は、ＱＤ化合物が膵臓癌細胞の増殖を阻害することを実証する。
【０１１９】
ＱＤ系化合物の堅牢な構造−活性関係性を確立するために、先の先導化合物ＱＤ２３２の２５個の類縁体を設計及び合成してそれらの作用機序をよりよく解明した。まず、これらの化合物の細胞毒性を、３つのＰＤＡＣ細胞系統であるＭｉａＰａＣａ−２、Ｐａｎｃ−１及びＢｘＰＣ−３においてＭＴＴアッセイを用いて試験した。これらの新規類縁体のうちの９個が、少なくとも２つの細胞系統において向上した細胞毒性を示した（表１）。ＱＤ３２５は、３つのＰＤＡＣ細胞系統においてＩＣ５０＜１μＭとなる最良の類縁体であることが示された。
【０１２０】
【表２】
2019510084.tif 000050
【０１２１】
ＱＤ類縁体は化学構造によって主に５つの部類に分類することができる（表２）。ＱＤ２３２に対してフェニル基による置換を行ったものであるＱＤ３２５は、２倍を上回る細胞毒性の向上を達成するものの、アルキル、メトキシ、アミンまたはフッ素で置換されたフェニル基によるさらなる改変は効力をさらに向上させなかった。別の大幅な効力向上はＱＤ２３２に対するメトキシ置換によって達成された。
【０１２２】
表２．ＭＴＴアッセイによるＭｉａＰａＣａ−２、Ｐａｎｃ−１及びＢｘＰＣ−３細胞におけるＱＤ化合物の構造及び細胞毒性。ＱＤ化合物は構造によって分類されている。
【０１２３】
【表３】
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【０１２４】
〔実施例ＩＩ〕
この実施例は、ＱＤ化合物の細胞毒性がＲＯＳ生成に相関することを実証する。
【０１２５】
レドックス調節剤によるＲＯＳ誘導を定量するために、ＲＯＳ検出プローブとしてＨ２ＤＣＦＤＡを使用する３８４ウェルプレートにおける高処理能ＲＯＳアッセイを開発した（図１Ａ）。陽性対照としてＨ２Ｏ２を使用してＺ係数０．８７９での時間依存的及び用量依存的な変化を測定し、アッセイの良好な感度及び再現性が実証された（図１Ｂ）。
【０１２６】
ＱＤ化合物による処理は、ＭｉａＰａＣａ−２細胞における著しいＲＯＳ蓄積を誘起した。２５個の類縁体のなかでもＱＤ３２５、ＱＤ３３５及びＱＤ３２６は２４時間の処理の後に先導化合物ＱＤ２３２よりも著しく高いＲＯＳ誘導を呈した（図１Ｃ）が、これに対してその他６つの類縁体は初期の先導物質と同程度のＲＯＳ誘導を示す。全ての化合物は２４時間後にＲＯＳ依存的ＤＣＦ蛍光が横這いとなり、この時点を化合物比較のために選択した。ＱＤ化合物による細胞増殖の阻害及びＲＯＳ誘導は、ピアソンの相関係数ｒが３．３μＭ（ｐ＝０．００００２）において０．６６、１０μＭ（ｐ＜０．０００１）において０．７０８０となって線形相間を示し、どちらの場合にも正の相関が指し示された（図２）。概して、細胞毒性の最も高い化合物は強いＲＯＳ誘導剤でもあった（表２）。
【０１２７】
細胞毒性の機序としてのＲＯＳ誘導を検証するために、ＱＤ化合物の効果を抗酸化物質Ｎ−アセチル−システイン（ＮＡＣ）の存在下及び非存在下で評価した。先導化合物ＱＤ２３２ならびに２つの活性類縁体ＱＤ３２５及びＱＤ３２６の場合には時間依存的及び用量依存的なＲＯＳの蓄積が認められた（図３Ａ）。アッセイに干渉する化合物の潜在的蛍光を排除するために、Ｈ２ＤＣＦＤＡプローブを使用しない陰性対照を含めた。Ｈ２Ｏ２による処理はＨ２ＤＣＦＤＡの蛍光ＤＣＦへの即時変換をもたらすのに対し、ＱＤ化合物による処理は、蛍光信号の漸増誘導をもたらし、これはＲＯＳの蓄積を示唆する。ＱＤ２３２、ＱＤ３２５及びＱＤ３２６による処理の場合、ＲＯＳ蓄積は４〜６時間後にピークのレベルに達する。ＱＤ３２５とＱＤ３２６の双方が、１０μＭ及び３．３μＭでは急速かつ高度なＲＯＳ蓄積を誘導する。
【０１２８】
細胞を５ｍＭのＮＡＣで前処理した場合、Ｈ２Ｏ２及びＱＤ化合物によるＲＯＳ誘導は遮断された（図３Ｂ）。ＭＴＴアッセイにおいてＮＡＣは、Ｈ２Ｏ２、ＱＤ２３２、ＱＤ３２５及びＱＤ３２６の細胞毒性を低下させた（図３Ｃ）。これらの結果は、ＲＯＳ蓄積がＱＤ化合物の細胞毒性の主な機序であることを実証する。しかしながら、ＮＡＣ処理はＱＤ及びＨ２Ｏ２の細胞毒性を完全には遮断せず、別の細胞作用が細胞増殖の阻害の一因となっていることが示唆された。
【０１２９】
〔実施例ＩＩＩ〕
この実施例は、ＱＤ化合物が酸化ストレス及び異常タンパク質応答を誘導することを実証する。
【０１３０】
これらの新規薬剤の分子機序をよりよく特徴付けるためにブロモウリジン標識ＲＮＡ配列決定（Ｂｒｕ−ｓｅｑ）技術を用いた。Ｂｒｕ−ｓｅｑは、ＲＮＡ安定性または偏った遺伝子選択による干渉を伴うことなく全体的な遺伝子転写についての情報を提供すべく新生ＲＮＡのリアルタイムでの合成を捉えることができる（Ｐａｕｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｐａｕｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）または遺伝子セット富化分析（ＧＳＥＡ）により、ＱＤ２３２及びＱＤ３２５では類似の転写シグネチャが認められ（図４、図５、図６、図７）、２つの化合物において作用機序が類似していることを含意していた。ＱＤ２３２またはＱＤ３２５で処理した際に発現変化が１．５倍を上回っている全ての遺伝子を特性評価することにより、ＮＲＦ２媒介性酸化ストレス応答及び異常タンパク質応答（ＵＰＲ）が、薬物作用に関与する肝要な経路として特定された（図８Ａ）。
【０１３１】
ＮＲＦ２（ＮＦＥ２Ｌ２、核因子である赤血球由来２様２）は、脱酸素酵素の転写を調節することによって酸化ストレス及び求電子的ストレスに対する応答において極めて重要な役割を果たす、Ｃａｐ’ｎ’ｃｏｌｌａｒ（ＣＮＣ）ファミリー由来の転写因子である（Ｊａｉｓｗａｌ，２００４）。酸化攻撃の際、Ｎｒｆ２はその細胞質性阻害剤タンパク質ＫＥＡＰ１から解離し、核へ移行し（Ｄｉｎｋｏｖａ−Ｋｏｓｔｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２、Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｎｉｎｋ，２００３）、ＡＲＥ（抗酸化物質応答エレメント）またはＭＡＲＥ（ＭＡＦ認識エレメント）シス作用性エンハンサーを含有する抗酸化物質遺伝子の転写を活性化する。
【０１３２】
ＮＱＯ１及びＨＭＯＸ１は、酸化ストレスに対する応答を媒介するＮＲＦ２シグナル伝達経路の２つの標的遺伝子である（Ａｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９、Ｎｉｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。ＮＱＯ１は、キノンからヒドロキノンへの２電子還元を触媒するフラボタンパク質ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノン酸化還元酵素１をコードし、化学防護作用を呈する（Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００、Ｄｉｎｋｏｖａ−Ｋｏｓｔｏｖａ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，２０００）。ＨＭＯＸ１は、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）をコードし、その抗酸化特性は、酸化促進物質であるヘムの分解とビリベルジンからの抗酸化物質ビリルビンの産生とから生じる（Ｃｈｏｉ  ａｎｄ  Ａｌａｍ，１９９６）。Ｂｒｕ−ｓｅｑによって明らかになったことであるが、ＮＱＯ１及びＨＭＯＸ１のＲＮＡの合成は、ＱＤ２３２及びＱＤ３２５による処理によって用量依存的に上方制御される（図８Ｂ）。
【０１３３】
ＵＰＲは、ＥＲ膜貫通タンパク質であるイノシトール要求性酵素１ａ（ＩＲＥ１ａ）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、及びタンパク質キナーゼＲＮＡ様小胞体キナーゼ（ＰＥＲＫ）によってそれぞれ調節される３つの異なる経路を含む（Ｓｈａｍｕ  ａｎｄ  Ｗａｌｔｅｒ，１９９６、Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０００、Ｈａｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。ＥＲストレスの間、ＥＲ内腔内のミスフォールドタンパク質は、ＥＲシャペロンである７８ｋＤａグルコース調節タンパク質（ＧＲＰ７８）に競合的に結合し、ＩＲＥ１ａ、ＡＴＦ６及びＰＥＲＫの活性化、ならびにＵＰＲに対する下流応答をもたらす（Ｈｅｔｚ，２０１２）。ＥＲストレスの重大性及び持続期間に応じて、ＵＰＲは、生存促進機構として機能することができるか、恒常性を回復させることができるか、またはストレス負担がこの適応応答の容量を超える場合にアポトーシスを誘発することができる（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｖｅｒｆａｉｌｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１３４】
ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５はＵＰＲシグナル伝達の代表的な遺伝子である。ＨＳＰＡ５は、ＥＲストレスの主たる調節タンパク質であるＧＲＰ７８をコードする。ＤＤＩＴ３は、ＵＰＲの３つのアーム全てに応答する下流標的遺伝子である。転写因子として、ＤＤＩＴ３遺伝子産物ＣＨＯＰ（ＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質相同タンパク質）は、長引くＥＲストレス下においてアポトーシスを促進する（Ｎｉｓｈｉｔｏｈ，２０１２、Ｏｙａｄｏｍａｒｉ  ａｎｄ  Ｍｏｒｉ，２００４）。２つのストレス応答遺伝子ＤＤＩＴ３及びＨＳＰＡ５の転写は、ＱＤ２３２またはＱＤ３２５による処理によって用量依存的に顕著に増加する（図８Ｃ）。
【０１３５】
ｍＲＮＡ合成の上方制御は、さらにはこれらの主要なストレス応答遺伝子のタンパク質レベルの上昇につながる。ＭｉａＰａＣａ−２、Ｐａｎｃ−１及びＢｘＰＣ−３細胞においてＣＨＯＰ及びＧＲＰ７８のタンパク質レベルの上昇が認められ（図９Ａ〜Ｃ）、ＵＰＲが主要な機序として確認された。酸化応答遺伝子ＨＯ−１は、ＭｉａＰａＣａ−２及びＢｘＰＣ−３においてＱＤ処理によって上方制御されたが、一方Ｐａｎｃ−１では顕著な変化が検出されなかった。特筆すべきことは、Ｐａｎｃ−１細胞内にＮＱＯ１遺伝子が欠失しており、遺伝子の発現がこの細胞系統で認められなかったということである。ＭｉａＰａＣａ−２及びＢｘＰＣ−３では、ＮＱＯ１は高い基底発現レベルを示し、それゆえ、さらなる誘導は認められなかった。これらの結果は、ＭｉａＰａＣａ−２及びＢｘＰＣ−３細胞では酸化ストレス応答の感受性がより高いということを含意している。
【０１３６】
酸化ストレスに対する応答はＲＯＳ蓄積の結果として誘発されてレドックス恒常性を回復させるが、ストレスが修復の限度を超えている場合にはストレスシグナル伝達が切り替わって細胞を排除のためのアポトーシス経路へと差し向ける。ＩＰＡ分析は、より高い濃度のＱＤ２３２（ＩＣ５０の３倍）またはＱＤ３２５（ＩＣ５０の５倍）による４時間の処理の後でのアポトーシスシグナル伝達の活性化が顕著であることを示唆している（図４）。
【０１３７】
〔実施例ＩＶ〕
この実施例は、ＱＤ化合物がＤループからのｍｔＤＮＡの転写を阻止することを実証する。
【０１３８】
ミトコンドリアは、哺乳動物細胞のレドックス恒常性において重要な役割を果たす。ミトコンドリア遺伝子の調節解除はＯＸＰＨＯＳプロセスの妨害及びＲＯＳの蓄積を引き起こし得る。ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）は、電子伝達鎖における重要な機能を保有している１３個の遺伝子をコードする。二本鎖環状ＤＮＡは、グアニンに富む重鎖とシチジンに富む軽鎖とを含む。Ｂｒｕ−ｓｅｑを用いて、より高い濃度のＱＤ化合物による４時間の処理の後にｍｔＤＮＡ転写の顕著な阻害が認められた（図１０Ａ、図１１）。どちらの化合物もＣＯＸＩＩＩタンパク質レベルを低下させ、ｍｔＤＮＡ遺伝子産物の減少を裏付けた（図１０Ｂ）。これらの結果はミトコンドリア機能の撹乱を強く示唆している。
【０１３９】
より低いレベルの転写は、ＤＮＡ鋳型の減少または転写効率に対する影響の結果である可能性がある。ｍｔＤＮＡ特異的なプライマーを使用して、異なる処理間でミトコンドリアＤＮＡ含有量を比較した。Ｈ２Ｏ２またはＱＤによる処置から６時間後にｍｔＤＮＡ含有量のわずかではあるが有意な減少が認められた（図１１）。ｍｔＤＮＡ含有量の下方制御は時間依存的な効果である。このＤＮＡ鋳型の減少は、Ｈ２Ｏ２処理によって示唆されるように、ｍｔＤＮＡの損傷及び分解を招くＲＯＳの蓄積によって引き起こされている可能性がある（Ｓｈｏｋｏｌｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１４０】
Ｄループ（置換ループ）は、ｍｔＤＮＡの複製及び転写の調節に必要とされる短い三本鎖構造からなるｍｔＤＮＡの非コード領域である。この領域は、ｍｔＤＮＡの２本のストランドからの転写のためのプロモーター（ＨＳＰ及びＬＳＰ）とｍｔＤＮＡ複製起点（ＯＨ）を含有する。Ｄループ領域におけるｍｔＤＮＡ変化は、肺癌、肝細胞癌、大腸癌及び子宮頸癌における頻繁な事象として報告されている（Ｇｕｌｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５、Ｋａｂｅｋｋｏｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｓｕｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３、Ｗｈｅｅｌｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。Ｄループ突然変異を有するかまたは特にｍＤＮＡのＤループ多型のヘテロプラスミーを有するがん患者は、予後が著しく悪い（Ｌｉｅｖｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５、Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１４１】
ＱＤは、Ｄループ上の重鎖プロモーターＨＳＰ２（図１０Ａ中の上側の長い矢印）と軽鎖プロモーターＬＳＰ（下側矢印）との両方からのｍｔＤＮＡの転写を阻害し、これによって、ミトコンドリア酸化的リン酸化にとって必須なミトコンドリア遺伝子の発現を阻害した。しかしながら、１２ｓ  ｒＲＮＡ及び１６ｓ  ｒＲＮＡの転写を調節するものである重鎖プロモーターＨＳＰ１（上側の短い矢印）の活性はＱＤによる影響を受けなかった。この知見を支持するさらなる証拠を提供するために、十分に確立されたＲＯＳ誘導剤であるＵＶを使用して同様の試験を行った。ミトコンドリアプロモーターからの転写に対するＵＶの有意な影響は見受けられなかった。同様に、さらに１６個の新規薬物及びＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤カンプトテシンに関してそのような影響は認められなかった。したがって、Ｂｒｕ−ｓｅｑデータは、ＱＤ２３２及びＱＤ３２５によってミトコンドリア機能を阻害しＲＯＳを誘導する独特な機序はミトコンドリアゲノムからの転写の遮断に少なくとも部分的に関係している可能性があるということを示唆している。
【０１４２】
〔実施例Ｖ〕
この実施例は、ＱＤ３２５が全身毒性を伴わずに腫瘍成長を遅延させることを実証する。
【０１４３】
ＱＤ２３２、ＱＤ３２５、ＱＤ３２６は全て、ＭｉａＰａＣａ−２及びゲムシタビン耐性細胞系統ＭｉａＰａＣａ−２−ＧＲにおいて同様の細胞毒性を示した（Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）（表４）。ゲムシタビンは、ＨＰＶ１６−Ｅ６Ｅ７遺伝子不死化膵臓細胞系統であるＨＰＤＥ（Ｏｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）において、ＭｉａＰａＣａ−２細胞での場合と同程度のＩＣ５０を呈するが、他方、最も有力なＱＤ３２５は、ＭｉａＰａＣａ−２に対する３倍の選択性を示した（表４）。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスのＭｉａＰａＣａ−２由来異種移植片においてＱＤ３２５（５ｍｇ／ｋｇ）による処置は４４日間の処置期間に腫瘍の成長を有意に遅延させた。４４日目に、対照群では腫瘍の大きさの平均が１２９１±１６８ｍｍ３であったのに対し、ＱＤ３２５処置群ではそれがたったの３０８±７２ｍｍ３（ｐ＝２．１Ｅ６）であった（図１２Ａ）。
【０１４４】
総体的な毒性の症候、例えば、虚弱、体重減少または不活発はどの処置群においても認められなかった（図１２Ｂ）。Ｈ＆Ｅ染色された肝臓、腎臓、心臓、肺、脾臓及び膵臓の臓器切片は主要な組織病理学的変化をみせず、ＱＤ３２５の生体内での安全性がさらに裏付けられた（図１２Ｃ）。４４日間の処置に続いて２匹のマウスを各群に保ってより高い用量でのＱＤ３２５の有効性及び安全性を評価した。対照群の腫瘍は急速な成長を呈したが、ＱＤ３２５処置は腫瘍の成長を遅延させることができ、２０ｍｇ／ｋｇの高用量においても全身毒性は認められなかった（図１３Ａ〜Ｂ）。
【０１４５】
腫瘍成長阻害と一致してＱＤ３２５処置は腫瘍組織におけるＫｉ６７レベルを低下させ、細胞増殖の阻害を示唆していた（図１２Ｄ）。ＱＤ３２５の生体内での作用機序をさらに評価するために、腫瘍溶解物中のストレス応答マーカーのタンパク質レベルを調べた。ＮＱＯ１、ＨＯ−１、ＣＨＯＰ及びＧＲＰ７８タンパク質レベルは、ビヒクル対照と比較してＱＤ３２５処置腫瘍において有意に上方制御され、膵臓癌モデルにおけるＱＤ３２５の主要な作用機序として酸化ストレス及びＵＰＲの誘導をさらに裏付けた（図１２Ｅ）。
【０１４６】
ゲムシタビンは、膵臓眼患者の標準医療処置の肝要な構成要素である。残念なことに、ゲムシタビンに対する生得的／後天的な耐性はこの疾患の処置にとって主要な難題を代表している。これを考慮して、ＱＤ３２５を単独薬剤としてまたはゲムシタビンと組み合わせて投与する可能性を探究した。
【０１４７】
マウス試験において、ゲムシタビンは大抵、高用量（４０〜１６０ｍｇ／ｋｇ）で週に２回与える。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるその低い忍容性を考慮して、このマウス系統のＭｉａＰａＣａ−２異種移植片における２つの異なるゲムシタビン処置計画の抗腫瘍活性を比較した：１）１５ｍｇ／ｋｇを週に１回、４８日間；２）１５ｍｇ／ｋｇを週に２回、最初の１５日間。どちらの計画によっても同程度の抗腫瘍活性が獲得された（図１３Ｃ）。どちらの事例でもゲムシタビンは良好に忍容され、体重減少は認められなかった（図１３Ｄ）。それゆえ、５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５、及びゲムシタビンとＱＤ３２５との組み合わせに関して有効性を比較するために計画１を用いた。ＱＤ３２５は５ｍｇ／ｋｇを週に５回与え、ゲムシタビンは１５ｍｇ／ｋｇを週に１回与えた（図１３Ｅ）。４８日間の処置期間の終了時に腫瘍の大きさの平均は、対照群では１５０３±１８９ｍｍ３であり、ゲムシタビンでは３８７±７４ｍｍ３（ｐ＝０．００４９）であり、ＱＤ３２５では２４８±７２ｍｍ３（ｐ＝０．００３０）であり、ゲムシタビンとＱＤ３２５との組み合わせでは１６３±８３ｍｍ３（ｐ＝０．００２３）であった（図１３Ｅ）。５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５による単独薬剤処置はゲムシタビンと同程度の抗腫瘍活性を示した。この実験では、ゲムシタビンもＱＤ３２５も単独薬剤として腫瘍成長を大幅に阻害した。重要なことに、どの処置群においても、組み合わせは良好に忍容され、体重減少は認められず、薬剤併用の妥当な安全特性が示唆された（図１３Ｆ）。
【０１４８】
〔実施例６〕
この実施例は、ＱＤ３２５〜ＱＤ３４０、ＱＤ３５３〜ＱＤ３５９及び中間体の調製の一般手順を実証する。
【０１４９】
化合物ＱＤ３２５〜ＱＤ３３８、ＱＤ３５３〜ＱＤ３５７（表２）の合成は、Ｂｒａｃｈｅｒの方法論を用い、以前に報告された手順に倣うとともに少し改変して行った。
【０１５０】
スキーム１は、容易に入手できるジメトキシベンズアルデヒド１からの肝要なシントンＱＤ３２３の合成を示す。無水酢酸の存在下、単純な磁気撹拌下において濃硝酸により化合物１をニトロ化することにより、３，６−ジメトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド（２）が良好な収率で得られた。この位置異性体を気体状ＨＣｌに曝露することによってジホルムアミド誘導体３に変換した。次いで、亜鉛粉末及び酢酸による処理によって化合物３をジメトキシキナゾリン４へと環化させた。硝酸セリウムアンモニウムによる最終的な酸化はキナゾリン−５，８−ジオンＱＤ３２３の生成をもたらした。Ｃｅ（ＩＩＩ）イオンの存在下で適切なアミノアシルベンゼンでＱＤ３２３を位置選択的に置換することによってＱＤ３２５〜ＱＤ３３８、ＱＤ３５３〜３５７が得られた。（スキーム２及び３）。
【０１５１】
【化１４】
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【０１５２】
【化１５】
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【０１５３】
【化１６】
2019510084.tif 000054
【０１５４】
ＲＯＳ調節に関する潜在的な相乗効果を評価するために、キナゾリン−５，８−ジオン足場とトリフェニルホスホニウム官能基との結合を試みた。より具体的には、化合物ＱＤ３３１及びＱＤ２３２のトリフェニルホスホニウム系モデル誘導体を得ることが望まれた。それゆえ、以前に本発明者らが用いたホスフィン結合法を適合させることによって化合物ＱＤ３４０及びＱＤ３５９を設計した。トリフェニルホスホニウム系化合物ＱＤ３４０及びＱＤ３５９の合成をスキーム４及びスキーム５に示す。最初に、アセトニトリル還流下で３−ブロモプロピルアミン臭化水素塩（５）をトリフェニルホスフィンと１６時間反応させ、結果として生じるトリフェニルホスホニウム中間体（６）は、ｎ−ヘキサン／ジエチルエーテル／イソプロパノールによる処理の後に簡単に単離された。次に、４−及び３−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイドＱＤ３３９及びＱＤ３５８はそれぞれ、ＣＨ２Ｃｌ２中でＤＩＰＥＡ、ＨＢｔＵ、ＤＭＡＰを使用する標準的なカップリングプロトコールによって６と４−または３−アミノ安息香酸とを結合させることで調製した。最後に、ＱＤ３４０及びＱＤ３５９は、Ｃｅ（ＩＩＩ）の存在下、上記手順に倣い、適切な３−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（ＱＤ３３９またはＱＤ３５８）で５を位置選択的に置換することによって得られた。
【０１５５】
【化１７】
2019510084.tif 000055
【０１５６】
【化１８】
2019510084.tif 000056
【０１５７】
３，６−ジメトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド（２）の調製
硝酸（８．０ｍＬ、１７９．０２ｍｍｏｌ）、無水酢酸（８．０ｍＬ、８４．２４ｍｍｏｌ）及び２，５−ジメトキシベンズアルデヒド（１、４．０ｇ、２４．０７ｍｍｏｌ）を０℃で撹拌しながらそれぞれ加えた。１．５時間撹拌した後、混合物を２０ｍＬの氷／水に注いだ。結果として生じた黄色固体を濾過し、冷水で洗浄し、その後、酢酸エチル−石油エーテル（１：１）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製してまず位置異性体２，５−ジメトキシ−４−ニトロベンズアルデヒドを得、その後（酢酸エチルのみによるさらなる溶出によって）所望の化合物２を得た。収率：６８％。Ｒｆ＝０．１０（酢酸エチル−石油エーテル５：５）；融点：１６７℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．２５（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，１Ｈ），７．４８（ｄ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１０．３９（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｄ，１Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ２１１［Ｍ］＋。
【０１５８】
Ｎ，Ｎ’−［（３，６−ジメトキシ−２−ニトロフェニル）メタンジイル）ジホルムアミド（３）の調製
４０℃に加熱した３，６−ジメトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド（２、１１．９０ｇ、５６．３５ｍｍｏｌ）のホルムアミド（６６．５当量、１５０ｍＬ）溶液を温度が８０℃になるまで乾燥ＨＣｌガスに曝露した（１時間）。その後、溶液を室温に冷却し、水／氷を加えた。淡黄色の沈殿物が形成され、それを濾過し、乾燥させ、酢酸エチル及び石油エーテルを使用してすり潰して所望の化合物を得た。収率：９０％。Ｒｆ＝０．２６（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：２５５℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．６７（ｄ，２Ｈ），７．９２（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｓ，２Ｈ），６．７７（ｔ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ２８３［Ｍ＋］。
【０１５９】
５，８−ジメトキシキナゾリン（４）の調製
Ｎ，Ｎ’−［（３，６−ジメトキシ−２−ニトロフェニル）メタンジイル）］ジホルアミド（３、７．０ｇ、２４．７１ｍｍｏｌ）の、粉砕氷（９２  ｇ）及び氷酢酸（３２ｍＬ）中の懸濁物に、亜鉛粉末（２２．９ｇ）を定常的な磁気撹拌下で添加した。反応混合物を２時間氷浴中で撹拌し、室温で４時間撹拌した。次に、冷却した５０％のＮａＯＨ（１２０ｍＬ）に反応混合物を滴加し、そうして形成された黄色懸濁液を撹拌せずに１時間放置した。その後、懸濁液を濾過して黄色粉末を得、それを酢酸エチルに溶解させ、濾過し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮乾燥して所望の化合物を得た。収率：７９％。Ｒｆ＝０．４６（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：１０６℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６４（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，１Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ  １９０［Ｍ］＋。
【０１６０】
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３）の調製
５，８−ジメトキシキナゾリン（４、０．３５ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の（７：３）アセトニトリル：水（１０ｍＬ）溶液を氷浴中、０℃で冷却し、硝酸セリウムアンモニウム（２．７当量、２．７２ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）の（９：１）アセトニトリル：水（１０ｍＬ）溶液を滴加した。反応混合物を２０分間撹拌し、次いで氷／水中に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮乾燥して褐色粉末を得た。収率：６９％。Ｒｆ＝０．６２（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：＞３２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６９（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｄ，１Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８４．０７，１８２．８８，１６２．０８，１５６．２７，１５２．６１，１３９．４６，１３７．７４，１２４．６１。ＭＳ：ｍ／ｚ １６０［Ｍ］＋。
【０１６１】
化合物ＱＤ３２４〜ＱＤ３２７、ＱＤ３２９、ＱＤ３３１、ＱＤ３３２、ＱＤ３３４〜ＱＤ３３６、ＱＤ３３８、ＱＤ３５３〜３５７の調製。
【０１６２】
一般的方法Ａ
キナゾリン−５，８−ジオンと塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量）と（３，４，５）−置換アニリン（１．１当量）との無水エタノール溶液を室温で１〜２時間撹拌した。次に、エタノールの大半を真空下で除去し、水を添加し、続いてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮乾燥した。その後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、予期した生成物を得た。
【０１６３】
６−（（４−フェノキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２４）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．１０ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．２６ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、４−フェノキシアニリン（１．１当量、０．１３ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（１１ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６：４）によって化合物ＱＤ３２４を紫色粉末として得た。収率：６５％。Ｒｆ＝０．３０（酢酸エチル−石油エーテル６：４）；融点：１６９〜１７１℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｔ，２Ｈ），７．２５（ｄ，２Ｈ），７．２０〜７．１５（ｍ，１Ｈ），７．０９〜７．０４（ｍ，４Ｈ），６．５３（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６５，１８０．３９，１６３．７６，１５６．４８，１５６．３１，１５４．４０，１４５．１５，１３０．９０，１３０．０１，１２５．２５，１２４．０４，１２３．３４，１１９．７６，１１９．２８，１０４．６５。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４３［Ｍ］＋。
【０１６４】
６−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２５）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．１６ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．４１ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、４−アミノビフェニル（１．１当量、０．１９ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（１９ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル７：３）によって化合物ＱＤ３２５を紫色粉末として得た。収率：５８％。Ｒｆ＝０．４８（酢酸エチル−石油エーテル８：２）；融点：２３０℃。１Ｈ−ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６８（ｓ，１Ｈ），９．５１（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄ，２Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，２Ｈ），７．４８（ｔ，２Ｈ），７．４２〜７．３６（ｍ，３Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６７，１８０．５２，１６３．７８，１５６．３９，１５４．３２，１４４．３３，１３９．７１，１３５．４４，１２８．９９，１２８．５３，１２７．５３，１２７．００，１２３．２６，１０５．２０。ＭＳ：ｍ／ｚ ３２７［Ｍ］＋。
【０１６５】
６−（（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２６）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０７ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１８ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシアニリン（１．１当量、０．０９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（８ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル７：３〜８：２）によって化合物ＱＤ３２６を紫色粉末として得た。収率：８８％。Ｒｆ＝０．１８（酢酸エチル−石油エーテル８：２）；融点：１６１〜１６２℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６７（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６１，１８０．４０，１６３．７７，１５６．３３，１５４．１５，１４４．９０，１３６．９６，１３１．８７，１２３．３０，１０５．００，１０１．２０，６１．０７，５６．３９。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４１［Ｍ］＋。
【０１６６】
６−（（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２７）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、４−（トリフルオロメトキシ）アニリン（１．１当量、０．０４６ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタノール９．７：０．３）によって化合物ＱＤ３２７を暗赤色粉末として得た。収率：６７％。Ｒｆ＝０．５３（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：１１４℃。１Ｈ−ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６８（ｓ，１Ｈ），９．５１（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，４Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３５［Ｍ］＋。
【０１６７】
６−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２９）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、４−アミノベンジルアルコール（１．１当量、０．０４ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタノール９．７：０．３）によって化合物ＱＤ３２９を赤褐色粉末として得た。収率：２７％。Ｒｆ＝０．３０（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：２０３℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６７（ｓ，１Ｈ），９．５０（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｄ，２Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３０３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１６８】
４−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）安息香酸メチル（ＱＤ３３１）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１５ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、４−アミノ安息香酸メチル（１．１当量、０．０６ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（７．２ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６：４〜７：３）によって化合物ＱＤ３３１を赤色粉末として得た。収率：４２％。Ｒｆ＝０．３５（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２２６〜２３０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６９（ｓ，１Ｈ），９．５２（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，２Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．７５，１８０．４０，１６５．９６，１６３．８５，１５６．５７，１５３．９６，１４３．３４，１４０．６４，１３１．５１，１２７．６９，１２３．２７，１２１．６６，１２１．５５，１０６．３５，５２．３５。ＭＳ：ｍ／ｚ ３０９［Ｍ］＋。
【０１６９】
４−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）安息香酸エチル（ＱＤ３３２）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．１３ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．３３ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、４−アミノ安息香酸エチル（１．１当量、０．１５ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（１６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６．５：３．５）によって化合物ＱＤ３３２を赤色粉末として得た。収率：３９％。Ｒｆ＝０．３６（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２０６〜２０７℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６９（ｓ，１Ｈ），９．５２（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，２Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），４．４３〜４．３８（ｑ，２Ｈ），１．４２（ｔ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．７４，１８０．４２，１６５．４９，１６３．８５，１５６．５６，１５３．９８，１４３．３８，１４０．５３，１３１．４７，１２８．０８，１２３．２７，１２１．６５，１０６．３１，６１．３１，１４．３４。ＭＳ：ｍ／ｚ ３２３［Ｍ］＋。
【０１７０】
６−（（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３３４）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、４−アミノ−４’−フルオロビフェニル（１．１当量、０．０６ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル７：３〜８：２）によって化合物ＱＤ３３４を黄色粉末として得た。収率：２９％。Ｒｆ＝０．３２（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２８５〜２８９℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６８（ｓ，１Ｈ），９．５１（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，２Ｈ），７．５５（ｔ，２Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｄ，２Ｈ），７．１６（ｔ，２Ｈ），６．７２（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６４，１８０．５３，１６３．９７，１６３．７９，１６１．５１，１５６．３９，１５４．３０，１４４．３３，１３８．７０，１３５．９８，１３５．４７，１２８．６５，１２８．３９，１２３．３３，１１６．０３，１１５．８２，１０５．２１。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４５［Ｍ］＋。
【０１７１】
６−（（４’−エチル−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３３５）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、４−アミノ−４’−エチルビフェニル（１．１当量、０．０７ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６．５ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６：４から７：３）によって化合物ＱＤ３３５を赤紫色粉末として得た。収率：６０％。Ｒｆ＝０．３６（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２３２℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｄ，２Ｈ），７．５１（ｄ，２Ｈ），７．３４（ｄ，２Ｈ），７．３０（ｄ，２Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），２．７４〜２．６８（ｑ，２Ｈ），１．２９（ｔ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６７，１８０．４８，１６３．７３，１５６．３５，１５４．３４，１４４．３５，１４４．０９，１３９．６４，１３７．０３，１３５．１５，１２８．５３，１２８．４６，１２６．８９，１２３．３５，１２３．２４，１０５．１１，２８．５４，１５．５５。ＭＳ：ｍ／ｚ ３５６［Ｍ＋１］＋。
【０１７２】
６−（（４’−メトキシ［１，１’−ビフェニル］−４−イル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３３６）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、４’−メトキシ−ビフェニル−４−イルアミン（１．１当量、０．０７ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６．５ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル７：３から１０：０）によって化合物ＱＤ３３６を暗紫色粉末として得た。収率：６９％。Ｒｆ＝０．２９（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２７０〜２７２℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６７（ｓ，１Ｈ），９．５１（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ），７．３２（ｄ，２Ｈ），７．０１（ｄ，２Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６７，１８０．４７，１６３．７７，１５９．５８，１５６．３６，１５４．３７，１４４．３８，１３９．３８，１３４．８１，１３２．２０，１２８．０５，１２８．０１，１２３．２９，１２３．１９，１１４．４４，１０５．０９，５５．４０。ＭＳ：ｍ／ｚ ３５７［Ｍ］＋。
【０１７３】
６−（（２−フルオロ−４’−メチル−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３３８）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１４ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−４’−メチル−ビフェニル−４−イルアミン（１．１当量、０．０８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び無水エタノール（６．７ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル、６：４から８：２）によって化合物ＱＤ３３８を紫色粉末として得た。収率：６０％。Ｒｆ＝０．２６（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２８２〜２８３℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６９（ｓ，１Ｈ），９．５２（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｔ，１Ｈ），７．４５（ｄ，２Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ），７．１４（ｔ，２Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６１，１８０．４７，１６３．８３，１５６．４９，１４３．９３，１３８．１４，１３１．７９，１２９．４０，１２８．８９，１２８．７１，１２３．３１，１１８．６７，１１０．８５，１１０．５８，１０５．７５，２１．２４。ＭＳ：ｍ／ｚ ３５９［Ｍ］＋。
【０１７４】
６−（（３−メトキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３５３）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、ｍ−アニシジン（１．１当量、０．３８ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６：４）によって化合物ＱＤ３５３を暗紫色粉末として得た。収率：４３％。Ｒｆ＝０．３０（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：１４２℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６７（ｓ，１Ｈ），９．５０（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｔ，１Ｈ），６．８８（ｄ，２Ｈ），６．８３（ｄ，２Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６５，１８０．５６，１６３．７６，１６０．８１，１５６．３６，１５４．２８，１４４．４５，１３７．４０，１３０．７５，１２３．３３，１１５．２５，１１２．０７，１０９．１７，１０５．３４，５５，５３。ＭＳ：ｍ／ｚ ２８１［Ｍ］＋。
【０１７５】
６−（（４−メトキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３５４）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１５ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、ｐ−アニシジン（１．１当量、０．０５ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（７．２ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６．５：３．５から８：２）によって化合物ＱＤ３５４を暗色粉末として得た。収率：４１％。Ｒｆ＝０．３２（酢酸エチル−石油エーテル７：３）；融点：２３８℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．４８（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｄ，２Ｈ），６．９８（ｄ，２Ｈ），６．４８（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．７６，１８０．２８，１６３．７３，１５６．２４，１５４．５２，１４５．３４，１２８．７５，１２５．１８，１２３．３６，１１５．１６，１０４．３４，５５，６２。ＭＳ：ｍ／ｚ ２８１［Ｍ］＋。
【０１７６】
６−（（３，４−ジメトキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３５５）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１６ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、３，４−ジメトキシアニリン（１．１当量、０．０６７ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（７．６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル７：３から１０：０）によって化合物ＱＤ３５５を暗色粉末として得た。収率：７０％。Ｒｆ＝０．２３（酢酸エチル−石油エーテル８：２）；融点：２４１〜２４２℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，２Ｈ），６．８６（ｄ，２Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），６．５３（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．７３，１８０．３１，１６３．７５，１５６．７５，１５６．２６，１５４．４８，１４９．９７，１４８．１０，１４５．２１，１２９．０２，１２３．３４，１１６．１０，１１１．７４，１０７．５０，１０４．５４，５６，１８。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３３［Ｍ＋１］＋。
【０１７７】
６−（（４−フルオロベンジル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３５６）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１６ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、４−フルオロベンジルアミン（１．１当量、０．０５ｍＬ、０．４４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（７．６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル ７：３から８：２）によって化合物ＱＤ３５６を橙色粉末として得た。収率：３５％。Ｒｆ＝０．３０（酢酸エチル−石油エーテル８：２）；融点：２０３℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６４（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｔ，２Ｈ），７．０９（ｔ，２Ｈ），６．２８（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），  ４．４０（ｄ，２Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８０．３３，１７９．６２，１６３．９３，１６３．６７，１６１．４７，１５６．１６，１５４．５７，１４６．９６，１３０．６８，１２９．４３，１２３．３５，１１６．１４，１０３．７６，４６．３０。ＭＳ：ｍ／ｚ ２８３［Ｍ］＋。
【０１７８】
６−（（３，５−ジメトキシフェニル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３５７）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０６ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１６ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、３，５−ジメトキシアニリン（１．０当量、０．０７ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（７．６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル６：４から７：３）によって化合物ＱＤ３５７を紫色粉末として得た。収率：７０％。Ｒｆ＝０．４５（酢酸エチル−石油エーテル  ８：２）；融点：２０４〜２０６℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），５．９７（ｓ，２Ｈ），５．７２（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，６Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ１８３．１４，１８２．２７，１６２．４３，１５９．３０，１５７．５４，１５２．６４，１５０．４３，１４５．４０，１３８．５４，１２５．３２，１００．９９，９１．２４，５５，７４。ＭＳ：ｍ／ｚ ２８１［Ｍ］＋。
【０１７９】
化合物ＱＤ３２８、ＱＤ３３０、ＱＤ３３３、ＱＤ３３７の調製。
【０１８０】
一般的方法Ｂ
キナゾリン−５，８−ジオンと、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量）と、（３，４，５）置換アニリン（１．１当量）との無水エタノール溶液を室温で２〜６時間撹拌した。次に、エタノールの大半を真空下で除去し、水を添加し、続いてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、そして濃縮乾燥した。その後、粗生成物を水で処理し、沈殿した固体残渣を濾過し、石油エーテルを使用してすり潰して所望の生成物を得た。
【０１８１】
４−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）ベンゼンスルホンアミド（ＱＤ３２８）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、スルファニルアミド（１．１当量、０．０６ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。沈殿物を濾過し、石油エーテルを使用してすり潰して化合物ＱＤ３２８を赤色粉末として得た。収率：５９％。Ｒｆ＝０．１６（酢酸エチル−石油エーテル８：２）；融点：＞３２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．７２（ｓ，１Ｈ），９．６４（ｓ，１Ｈ），９．４４（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，２Ｈ），７．６０（ｄ，２Ｈ），７．３８（ｓ，２Ｈ），６．４６（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．５０，１８０．３２，１６２．５８，１５５．７８，１５３．４６，１４５．３３，１４０．９１，１４０．２０，１２７．３８，１２７．０５，１２４．１９，１２３．１７，１１２．３８，１０５．１１。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３１［Ｍ＋１］＋。
【０１８２】
４−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）ベンズアミド（ＱＤ３３０）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、４−アミノベンズアミド（１．１当量、０．０５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。沈殿物を濾過し、石油エーテルを使用してすり潰して化合物ＱＤ３３０を褐色粉末として得た。収率：２４％。Ｒｆ＝０．５８（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：＞３２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６５（ｓ，１Ｈ），９．６３（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，２Ｈ），７．４９（ｄ，２Ｈ），７．３８（ｓ，２Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ２９５［Ｍ＋１］＋。
【０１８３】
（３−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）フェニル）ボロン酸（ＱＤ３３３）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、３−アミノフェニルボロン酸（１．１当量、０．０５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。沈殿物を濾過し、石油エーテルを使用してすり潰して化合物ＱＤ３３３を赤色粉末として得た。収率：４８％。Ｒｆ＝０．３７（ジクロロメタン−メタノール  ９．５：０．５）；融点：２０８〜２１０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６１（ｓ，１Ｈ），９．５２（ｓ，１Ｈ），９．４１（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，２Ｈ），７．７７〜７．７０（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｍ，２Ｈ），６．２３（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３１８［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１８４】
６−（（４’−アミノ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）アミノ）キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３３７）
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、ベンジジン（１．１当量、０．０７ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６．５ｍＬ）。沈殿物を濾過し、石油エーテルを使用してすり潰して化合物ＱＤ３３７を暗紫色粉末として得た。収率：１６％。Ｒｆ＝０．７１（ジクロロメタン−メタノール９．５：０．５）；融点：＞３２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６６（ｓ，１Ｈ），９．６３（ｓ，１Ｈ），９．４４（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，２Ｈ），７．６４（ｄ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ），７．４０（ｄ，２Ｈ），６．６５（ｄ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），５．２７（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４２［Ｍ］＋。
【０１８５】
（３−アミノプロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド臭化水素塩（６）の調製
磁気撹拌棒を装着した５０ｍＬの丸底フラスコに、トリフェニルホスフィン（１．０当量、１．０ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、３−ブロモプロピルアミン臭化水素塩（５、１．０当量、０．８４ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリル（７ｍＬ）を加えた。結果として生じる懸濁液を加熱還流させて混合物を１６時間撹拌した。反応を室温に冷やし、次いでｎ−ヘキサンを添加し、結果として生じる固体を濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、１００ｍＬのイソプロパノール中に溶かし、冷えたジエチルエーテルを使用して沈殿させて、白色粉末を得た。収率：５０％；Ｒｆ＝０．２８（ジクロロメタン−メタノール  ９：１）；融点：２００℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ７．９５〜７．９２（ｍ，３Ｈ），７．８４〜７．７４（ｍ，１５  Ｈ），３．７４（ｍ，２Ｈ），３．００−２．９８（ｍ，２Ｈ），１．８５（ｍ，２Ｈ）。
【０１８６】
（３−（４−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（ＱＤ３３９）の調製
４−アミノ安息香酸（１．０当量、０．０７６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、５当量、０．４８ｍＬ、２．７５ｍｍｏｌ）及びＨＢｔＵ（１．０当量、０．２０６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、（３−アミノプロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（６、３当量、０．８０ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０４当量、２．７μｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じた混合物を室温で５時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そして濃縮乾燥した。ジクロロメタン−イソプロパノール（９．５：０．５）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製してベージュ色の粉末を得た。収率：７０％；Ｒｆ＝０．２７（ジクロロメタン−メタノール９：１）；融点：２０３〜２０５℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ８．９１（ｔ，１Ｈ），８．１０（ｄ，２Ｈ），７．７７〜７．７２（ｍ，９Ｈ），７．６１〜７．５８（ｍ，６Ｈ），６．７０（ｄ，２Ｈ），３．９４−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７２〜３．７１（ｍ，２Ｈ），１．９５（ｍ，２Ｈ）。
（３−（４−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）ベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（ＱＤ３４０）の調製
キナゾリン−５，８−ジオン（５、１．０当量、０．０４ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１０２ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と、（３−（４−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（１．１当量、０．１４３ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）との無水エタノール（５ｍＬ）溶液を室温で２時間撹拌した。その後、エタノールの大半を真空下で除去し、水を添加し、続いてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濃縮乾燥した。石油エーテルを使用して粗生成物をすり潰して赤色粉末を得た。収率：４２％；Ｒｆ＝０．４５（ジクロロメタン−メタノール９：１）；融点：２０５℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．９０（ｔ，１Ｈ），９．６７（ｓ，１Ｈ），９．５０（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，２Ｈ），７．７９〜７．７２（ｍ，１０Ｈ），７．６５〜７．６２（ｍ，６Ｈ），７．３７（ｄ，２Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），３．９７〜３．９３（ｍ，２Ｈ），３．７５〜３．７４（ｍ，２Ｈ），２．００（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ  ３４２［Ｍ−１］＋。
（３−（３−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（ＱＤ３５８）の調製
３−アミノ安息香酸（１．０当量、０．０７６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、５当量、０．４８ｍＬ、２．７５ｍｍｏｌ）及びＨＢｔＵ（１．０当量、０．２０６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、その後、（３−アミノプロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（６、３当量、０．８０ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０４当量、２．７μｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じた混合物を室温で５時間撹拌し、濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そして濃縮乾燥した。ジクロロメタン−イソプロパノール（９．５：０．５）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して橙色粉末を得た。収率：５９％；Ｒｆ＝０．４５（ジクロロメタン−メタノール９：１）；融点：２２３℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ８．９７（ｔ，１Ｈ），７．７７〜７．７３（ｍ，１０Ｈ），７．６２〜７．６０（ｍ，６Ｈ），７．５５（ｄ，１Ｈ），７．２１（ｔ，１Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ），３．９２〜３．８８（ｍ，２Ｈ），３．７３〜３．７２（ｍ，２Ｈ），１．９７（ｍ，２Ｈ）。
（３−（３−（（５，８−ジオキソ−５，８−ジヒドロキナゾリン−６−イル）アミノ）ベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（ＱＤ３５９）の調製
キナゾリン−５，８−ジオン（１．０当量、０．０４ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１０２ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と、（３−（３−アミノベンズアミド）プロピル）トリフェニルホスホニウムブロマイド（１．０当量、０．１３０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）との無水エタノール（５ｍＬ）溶液を室温で１．５時間撹拌した。その後、エタノールの大半を真空下で除去し、水を添加し、続いてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濃縮乾燥した。ジクロロメタン−イソプロパノール（９．４：０．４）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して赤色粉末を得た。収率：３０％；Ｒｆ＝０．２１（ジクロロメタン−メタノール９：１）；融点：１０８〜１１０℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）：δ９．７８（ｔ，１Ｈ），９．６４（ｓ，１Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｄ，２Ｈ），８．１９（ｄ，２Ｈ），７．７７〜７．７３（ｍ，１０Ｈ），７．６４〜７．６２（ｍ，６Ｈ），７．５４（ｔ，１Ｈ），７．４５（ｄ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），３．９２〜３．８８（ｍ，２Ｈ），３．７４〜３．７３（ｍ，２Ｈ），２．０５〜２．００（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４２［Ｍ−１］＋。
【０１８７】
【化１９】
2019510084.tif 000057
【０１８８】
【化２０】
2019510084.tif 000058
【０１８９】
【化２１】
2019510084.tif 000059
【０１９０】
【化２２】
2019510084.tif 000060
【０１９１】
化合物ＱＤ３８５、ＱＤ３８６、ＱＤ３８７、ＱＤ３８８、ＱＤ３８９、ＱＤ３９０、ＱＤ３９１、ＱＤ３９２、ＱＤ３９３、ＱＤ３９４、ＱＤ３９５の調製。
【０１９２】
一般的方法Ｃ
キナゾリン−５，８−ジオンと、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量）と、置換アニリン（１．０当量）との無水エタノール溶液を室温で１．５時間撹拌した。次に、エタノールの大半を真空下で除去した後、粗残渣を希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、そして濃縮乾燥した。その後、粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して所望の生成物を得た。
【０１９３】
化合物ＱＤ３９６、ＱＤ３９７、ＱＤ３９８、ＱＤ３９９、ＱＤ４００、ＱＤ４０１、ＱＤ４０２、ＱＤ４０３、ＱＤ４０４、ＱＤ４０５、ＱＤ４０６、ＱＤ４０７、ＱＤ４０８、ＱＤ４０９、ＱＤ４１０、ＱＤ４１１、ＱＤ４１２、ＱＤ４１３、ＱＤ４１４、ＱＤ４１５、ＱＤ４１６、ＱＤ４１７、ＱＤ４１８、ＱＤ４１９、ＱＤ４２０、ＱＤ４２１、ＱＤ４２２、ＱＤ４２３、ＱＤ４２４の調製のための一般的方法。
【０１９４】
キナゾリン−５，８−ジオンと、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量）と、置換アニリン（１．０当量）との無水エタノール溶液を室温で１．５時間撹拌した。次に、エタノールの大半を真空下で除去した後、粗残渣を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、濃縮乾燥し、沈殿した固体を石油エーテルですり潰した。その後、固体残渣を濾過し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して所望の生成物を得た。
【０１９５】
６−（ビフェニル−３−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３８５］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、３−アミノビフェニル（１．０当量、０．０５３ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタノール＝９．８：０．２）によって化合物ＱＤ３８５を紫色粉末として得た。収率％：２０。Ｒｆ：０．４１（石油エーテル：酢酸エチル＝３：７）。融点：１９９〜２００℃。１Ｈ−ＮＭＲ ４００ＭＨｚ １Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６３（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．６９〜７．６７（ｍ，３Ｈ），７．６１〜７．５９（ｄ，２Ｈ），７．４９〜７．４６（ｔ，２Ｈ），７．４１〜７．３６（ｔ，３Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６３．７８，１３０．３３，１２９．０３，１２７．１５，１２５．６１，１２１．７４，１０５．１５。ＭＳ：ｍ／ｚ ３２７（Ｍ＋）。
【０１９６】
６−（４’−クロロビフェニル−４−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３８６］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−アミノ−４’−クロロビフェニル（１．０当量、０．０６４ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝５：５）によって化合物ＱＤ３８６を紫色粉末として得た。収率％：９５。Ｒｆ：０．２０（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２９２〜２９３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６２（ｓ，２Ｈ），９．４２（ｓ，１Ｈ），７．７９〜７．７７（ｄ，２Ｈ），７．７６〜７．７４（ｄ，２Ｈ），７．５５〜７．５３（ｄ，２Ｈ），７．５０〜７．４８（ｄ，２Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．５２，１８０．０３，１６２．５９，１５５．６７，１５３．７４，１４５．８９，１３８．０７，１３７．４２，１３５．７７，１３２．３４，１２８．９１，１２８．２６，１２７．５３，１２４．０６，１０４．０６。ＭＳ：ｍ／ｚ ３６１（Ｍ＋）。
【０１９７】
６−（３’，５’−ジクロロビフェニル−４−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３８７］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ），４−アミノ−３’，５’−ジクロロビフェニル（１．０当量、０．０７４ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝５：５）によって化合物ＱＤ３８７を紫色粉末として得た。収率％：９５。Ｒｆ：０．５０（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２６０〜２６１℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６３（ｓ，２Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．８７〜７．８５（ｄ，２Ｈ），７．７９（ｓ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５２〜７．５０（ｄ，２Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．４７，１８０．１５，１６２．６０，１５５．７０，１５３．６８，１４５．７５，１４２．８０，１３８．２８，１３４．６８，１３３．９９，１２８．０２，１２５．２０，１２３．９１，１０４．３４。ＭＳ：ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋）。
【０１９８】
６−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３８８］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−（１−ピペリジニル）アニリン（１．０当量、０．０５５ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）によってＱＤ３８８を紫色粉末として得た。収率％：６６。Ｒｆ：０．２９（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２０９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６０（ｓ，１Ｈ），９．３８（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．２２〜７．２０（ｄ，２Ｈ），７．０２〜７．００（ｄ，２Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），３．１６（ｓ，４Ｈ），１．６３〜１．５６（ｄ，６Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．６５，１７９．３０，１６２．５９，１５５．５１，１５４．０８，１４９．５２，１４６．４７，１２７．７１，１２４．９３，１２４．１２，１１５．９１，１０２．５９，４９．２３，２５．０９，２３．８３。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３４（Ｍ＋）。
【０１９９】
６−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３８９］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−（４−モルホリニル）アニリン（１．０当量、０．０５６ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）によって化合物ＱＤ３８９を紫色粉末として得た。収率％：８８。Ｒｆ：０．１０（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２２６〜２２７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６０（ｓ，１Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−Ｎ），９．３９（ｓ，１Ｈ），７．２６〜７．２４（ｄ，２Ｈ），７．０５〜７．０３（ｄ，２Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，４Ｈ），３．１５（ｓ，４Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．６２，１７９．４１，１６２．５９，１５５．５３，１４９．０３，１４６．４９，１２８．５６，１２４．９７，１１５．４０，１０２．７０，６６．００，４８．１８。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３６（Ｍ＋）。
【０２００】
６−（９Ｈ−フルオレン−４−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９０］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、１−アミノフルオレン（１．０当量、０．０５７ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）によって化合物ＱＤ３９０を紫色粉末として得た。収率％：６９。Ｒｆ：０．４６（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２１７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ９．６８（ｓ，１Ｈ），９．５３（ｓ，１Ｈ），７．５７〜７．５５（ｄ，２Ｈ），７．５２〜７．４９（ｔ，１Ｈ），７．４５〜７．４１（ｔ，１Ｈ），７．３８〜７．３５（ｔ，１Ｈ），７．３１〜７．２９（ｄ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１６３．７８，１５６．３３，１２８．７９，１２７．７４，１２７．２５，１２５．１８，１２１．７０，１２０．４２，１１９．０４，１０５．５３。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３９（Ｍ＋）。
【０２０１】
６−（９Ｈ−フルオレン−２−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９１］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、２−アミノフルオレン（１．０当量、０．０５７ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝５：５）によって化合物ＱＤ３９１を紫色粉末として得た。収率％：９２。Ｒｆ：０．１４（酢酸エチル−石油エーテル＝７：３）。融点：２３６〜２３７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６２（ｓ，２Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），８．００〜７．９７（ｄ，１Ｈ），７．９２〜）７．９１（ｄ，１Ｈ），７．６２〜７．６０（ｄ，２Ｈ），７．４３〜７．３９（ｔ，２Ｈ），７．３５〜７．３２（ｔ，１Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ），４．００（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１５５．６４，１５３．８２，１４６．１３，１４４．２７，１４３．１９，１４０．４２，１３８．７８，１３６．２５，１２６．８４，１２５．１３，１２４．１４，１２２．７７，１２０．６７，１２０．５４，１１９．９９，１０３．７４，６５．７０。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３９（Ｍ＋）。
【０２０２】
６−（４’−エチルビフェニル−４−イルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９２］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−アミノ−４’−エチルビフェニル（１．０当量、０．０６１ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝５：５）によって化合物ＱＤ３９２を紫色粉末として得た。収率％：７７。Ｒｆ：０．１９（石油エーテル：酢酸エチル＝５：５）。融点：２４７℃。１Ｈ−ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６３（ｓ，２Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），７．７６〜７．７４（ｄ，２Ｈ），７．６４〜７．６２（ｄ，２Ｈ），７．４９〜７．４７（ｄ，２Ｈ），７．３３〜７．３１（ｄ，２Ｈ），６．３６（ｓ，１Ｈ），２．６９〜２．６３（ｍ，２Ｈ），１．２４〜１．２１（ｔ，３Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ  １００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８５．７８，１８５．２４，１６７．７３，１６１．００，１５９．０１，１５１．１９，１４８．４０，１４２．５３，１４１．９１，１３３．６３，１３２．５４，１３１．６８，１２９．３３，１０９．１２，３３．０２，２０．７７。ＭＳ：ｍ／ｚ３５５（Ｍ＋）。
【０２０３】
６−（４−シクロヘキシルフェニルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９３］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−シクロヘキシルアニリン（１．０当量、０．０５５ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝５：５）によって化合物ＱＤ３９３を紫色粉末として得た。収率％：５３。Ｒｆ：０．２４（石油エーテル：酢酸エチル＝５：５）。融点：２３４℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６１（ｓ，１Ｈ），９．５３（ｓ，１Ｈ），９．４０（ｓ，１Ｈ），７．３４〜７．２８（ｍ，４Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），１．８２〜１．８０（ｍ，５Ｈ），１．７３〜１．７０（ｄ，１Ｈ），１．４７〜１．３３（ｍ，５Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８０．６０，１６２．５８，１５５．５９，１５３．８５，１４５．３２，１２７．５３，１２３．９１，４３．２６，３８．８７，２６．２９，２５．５３。ＭＳ：ｍ／ｚ ３３３（Ｍ＋）。
【０２０４】
６−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９４］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０５０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１２８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（１．０当量、０．０６０ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（６ｍＬ）。石油エーテルと１〜２滴のジエチルエーテルとを使用してすり潰すことによって化合物ＱＤ３９４を紫色粉末として得た。収率％：４１。Ｒｆ：０．１５（石油エーテル：酢酸エチル＝３：７）。融点：２０４〜２０５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６０（ｓ，１Ｈ），９．４６（ｓ，１Ｈ），９．３９（ｓ，１Ｈ），７．２４〜７．２２（ｄ，２Ｈ），７．０４〜７．０１（ｄ，２Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），３．１９〜３．１７（ｍ，４Ｈ），２．４７（ｓ，４Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３４９（Ｍ＋）。
【０２０５】
６−（４−（ピリジン−２−イル）フェニルアミノ）キナゾリン−５，８−ジオン［ＱＤ３９５］
キナゾリン−５，８−ジオン（ＱＤ３２３、０．０７５ｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ、１．１当量、０．１９２ｇ、０．５１５ｍｍｏｌ）、４−（２−ピリジル）アニリン（１．０当量、０．０８０ｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）、及び無水エタノール（９ｍＬ）。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル−石油エーテル＝２：８）によって化合物ＱＤ３９５を紫色粉末として得た。収率％：５４。Ｒｆ：０．１６（石油エーテル：酢酸エチル＝２：８）。融点：２３９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．６７（ｓ，１Ｈ），９．６３（ｓ，１Ｈ），９．４４（ｓ，１Ｈ），８．６９〜８．６５（ｄ，１Ｈ），８．２１〜８．１８（ｄ，２Ｈ），８．０１〜７．９９（ｄ，１Ｈ），７．９２〜７．８８（ｍ，１Ｈ），７．５６〜７．５３（ｄｄ，２Ｈ），（ｍ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３２８（Ｍ＋）。
【０２０６】
〔実施例ＶＩＩ〕
この実施例は、実施例Ｉ〜ＶＩの実験手順を説明する。
【０２０７】
細胞培養物。ＭｉａＰａＣａ−２、Ｐａｎｃ−１及びＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞株はＡＴＣＣから入手した。正常膵臓細胞ＨＰＤＥ及びＨＰＮＥは好意により提供を受けたものである（Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｒｏｇｒａｍ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）。ゲムシタビン耐性細胞株ＭｉａＰａＣａ−２−ＧＲ（ゲムシタビン耐性）は好意により提供を受けたものである（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｗａｙｎｅ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）。全ての細胞株を単層として培養し、５％のＣＯ２を含んだ３７℃の湿潤雰囲気において、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ１６４０中で維持した。ＭｉａＰａＣａ−２−ＧＲ培養物には２００ｎＭのゲムシタビンを補充した。
【０２０８】
［ＭＴＴアッセイ］
３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）アッセイによって化合物の細胞毒性を評価した。細胞を９６ウェルプレートに３０００〜８０００細胞／ウェルで入れた。一晩接着させた後、化合物を順次希釈してウェルに加えた（ほとんどの細胞系統は３０ｎＭ〜１０μＭ）。７２時間の処理の後、ＭＴＴを培地に添加して最終濃度を３００μｇ／ｍＬにした。細胞を３時間３７℃でインキュベートし、生細胞によって変換された不溶なホルマザンを１５０μＬのＤＭＳＯに溶かした。５７０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）によって読み取り、細胞増殖の阻害を、次式を用いて算出した：細胞増殖の阻害（％）＝（１−ＯＤ処理／ＯＤ対照）×１００％。
【０２０９】
［ＲＯＳ検出アッセイ］
０．０５％のトリプシン−ＥＤＴＡによって細胞を剥がし、中和し、遠心分離し（１２００ｒｐｍ、５分）、細胞培地中に再懸濁させた。その後、懸濁液を２０μＭの細胞透過性Ｈ２ＤＣＦＤＡで３０分間３７℃で処理した。その後、細胞を遠心分離し（１２００ｒｐｍ、５分）、細胞培地で洗浄して余分なプローブを除去した。洗浄後、細胞を黒色壁３８４ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルで入れ、３０分間インキュベートし、指定した条件で化合物によって処理した。その後、ＲＯＳ検出のためにＢｉｏＴｅｋ  Ｈ１プレートリーダーで４９３ｎｍ／５２３ｎｍでの蛍光信号を読み取った。
【０２１０】
［新生ＲＮＡ合成に対するＢｒｕ−ｓｅｑ分析］
Ｂｒｕ−ｓｅｑ分析は、以前に報告（Ｐａｕｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）されているとおりに実施した。簡単に述べると、１日目に４×１０６個のＭｉａＰａＣａ−２細胞を１０ｃｍ皿に入れた。２日目に細胞をＤＭＳＯ、ＱＤ２３２またはＱＤ３２５で４時間処理した。処理が残り３０分となった時に、新しく合成された新生ＲＮＡを標識するべくブロモウリジンを培地に添加して最終濃度を２ｍＭにした。その後、細胞をＴＲＩＺＯＬ中に採取し、全ＲＮＡを単離した。ブロモウリジン含有ＲＮＡ集団をさらに単離し、配列決定のために送付した。配列決定の読み値をＨＧ１９参照ゲノムにマッピングした。各処理につき、対照と比べたときの遺伝子合成レベルの倍率変化によって順位付けすることによって予め順位付けした遺伝子一覧を生成し、ＧＳＥＡ（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＭＡ）によって分析した（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５、Ｍｏｏｔｈａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０２１１】
［ウェスタンブロッティング］
細胞（４×１０５個）を６０ｍｍの組織皿内で培養し、指定した濃度のＤＦＣ化合物で処理した。処理後に細胞を４℃で３０分間、細胞溶解用緩衝液で溶解させ、遠心分離した（１２０００ｒｐｍ、１０分、４℃）。上清のタンパク質濃度をＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。試料１つあたり４０μｇのタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に供した。その後、タンパク質を、メタノールによって活性化されたｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＦＬ  ＰＶＤＦ膜（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）へ電気転写した。膜をＴＢＳＴ緩衝液中５％のスキムミルクでブロッキングし、１：１０００希釈の一次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ提供の抗ＮＱＯ１、抗ＨＯ−１、抗ＣＨＯＰ及び抗ＧＡＰＤＨ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ提供の抗ＣＯＸＩＩＩ、抗ＡＣＴＩＮ及び抗ＧＲＰ７８）と共に一晩４℃でインキュベートした。その後、膜をＴＢＳＴで洗浄し（１０分×３）、５％のミルクで１：５０００に希釈されたＤｙｌｉｇｈｔ８００結合二次抗体と共に１時間室温でインキュベートし、ＴＢＳＴ（１０分×２）及びＴＢＳ（１０分）で洗浄した。その後、蛍光信号をＯｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ）によって走査した。
【０２１２】
［ｑＰＣＲによるｍｔＤＮＡ含有量の測定］
ｍｔＤＮＡ含有量を評価するために、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ）を使用してゲノムＤＮＡをＭｉａＰａＣａ−２細胞から単離した。ｍｔＤＮＡ含有量は、ミトコンドリア１２Ｓ  ｒＲＮＡをコードするＤＮＡ断片（順方向プライマー：５’−ＴＡＧＣＣＣＴＡＡＡＣＣＴＣＡＡＣＡＧＴ−３’；逆方向プライマー：５’−ＴＧＣＧＣＴＴＡＣＴＴＴＧＴＡＧＣＣＴＴＣＡＴ−３’）と核１８Ｓ  ｒＲＮＡをコードするＤＮＡ断片（順方向プライマー：５’−ＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣＣ−３’；逆方向プライマー：５’−ＧＡＴＣＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＣＴＡ−３’）とを共増幅することによって評価した。（Ｖａｄｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）リアルタイムｑＰＣＲは、Ｖｉｉａ７サイクラー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において実施した。増幅は、Ｆａｓｔ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｙｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって蛍光色素のインターカレーションを測定することによって追跡及び分析した。相対ｍｔＤＮＡ含有量は、１８Ｓ  ｒＲＮＡを遺伝子参照として用いることによって算出した。
【０２１３】
［異種移植片試験］
ＲＰＭＩ１６４０中のＭｉａＰａＣａ−２細胞（２．０×１０６個）の懸濁液１００μＬを６週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの背側脇腹に皮下注射した。腫瘍の大きさは、次の等式を用いてキャリパー測定によって週に２回、追跡測定した：Ｖ＝ｄ２×Ｄ／２（ここで、ｄは幅を表し、Ｄは腫瘍の長さを表す）。試験１では、腫瘍の大きさの平均が６５ｍｍ３に達したときにマウスを無作為に群に割り当てた（群１つあたりｎ＝５）。２日間休んで５日間毎日という周期の処置を与えた。１００μＬのビヒクル（５％のＤＭＳＯ、６０％のプロピレングリコール、３５％の生理食塩水）中、５ｍｇ／ｋｇのＱＤ３２５を、腹腔内注射によって与えた。群の腫瘍の大きさの平均が１２００ｍｍ３に達したときに４４日目に試験を完結させた。データ解析のために、対応のない独立２群のｔ検定を実施し、ｐ＜０．０５を有意であるとみなした。忍容性試験に関して、各群において４４日目を超えて２匹のマウスが残存し、ＱＤ３２５用量は６７日目まで徐々に２０ｍｇ／ｋｇまで増やした。ゲムシタビン処置を用いる試験２の手順は補足情報において詳細に述べられている。
【０２１４】
［組織化学的解析］
剖検時に腫瘍、心臓、腎臓、肝臓、肺、脾臓及び膵臓を採取し、１０％の中性緩衝ホルマリン中に固定し、パラフィンに包埋し、薄片にした。組織学的検査を容易にするために、切片（５μＭ）をヘマトキシリン及びエオシンで染色した。Ｋｉ６７発現レベルに関しては、Ｋｉ６７抗体を使用して切片に対して免疫組織化学的染色を実施した。試料の包埋、薄片化及び染色は、動物研究のためのＵＬＡＭ病理コアによってミシガン大学で実施した。代表的な画像を、倍率２０ＸのＯｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ８３顕微鏡で撮影した。
【０２１５】
いまや本発明を完全に説明したが、当業者であれば、本発明またはその任意の実施形態の範囲に影響を与えることなく条件、配合及び他のパラメーターの広く等価な範囲内でそれを実施することができることを理解するであろう。本明細書中で引用する全ての特許、特許出願及び刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書において完全に援用される。
【０２１６】
〔参考文献の組込み〕
本明細書中で言及する特許文献及び科学論文の各々の開示全体を参照によりあらゆる目的のために援用する。
【０２１７】
以下の科学論文の各々の開示全体を参照によりあらゆる目的のために援用する：
ＡＬＡＭ，Ｊ．，ＳＴＥＷＡＲＴ，Ｄ．，ＴＯＵＣＨＡＲＤ，Ｃ．，ＢＯＩＮＡＰＡＬＬＹ，Ｓ．，ＣＨＯＩ，Ａ．Ｍ．＆ＣＯＯＫ，Ｊ．Ｌ．１９９９．Ｎｒｆ２，ａ  Ｃａｐ’ｎ’Ｃｏｌｌａｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ，ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅｍｅ  ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１  ｇｅｎｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７４，２６０７１−８
ＡＬＥＸＥＹＥＶ，Ｍ．，ＳＨＯＫＯＬＥＮＫＯ，Ｉ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｇ．＆ＬＥＤＯＵＸ，Ｓ．２０１３．Ｔｈｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ−−ｃｒｉｔｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｕｐｄａｔｅ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｂｉｏｌ，５，ａ０１２６４１
ＡＬＩ，Ｓ．，ＡＬＭＨＡＮＮＡ，Ｋ．，ＣＨＥＮ，Ｗ．，ＰＨＩＬＩＰ，Ｐ．Ａ．＆ＳＡＲＫＡＲ，Ｆ．Ｈ．２０１０．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｍｉＲＮＡｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｍａｙ  ｐｒｏｖｉｄｅ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ，３，２８−４７
ＡＲＬＴ，Ａ．，ＳＥＢＥＮＳ，Ｓ．，ＫＲＥＢＳ，Ｓ．，ＧＥＩＳＭＡＮＮ，Ｃ．，ＧＲＯＳＳＭＡＮＮ，Ｍ．，ＫＲＵＳＥ，Ｍ．Ｌ．，ＳＣＨＲＥＩＢＥＲ，Ｓ．＆ＳＣＨＡＦＥＲ，Ｈ．２０１３．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｒｆ２  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｙ  ｔｈｅ  ａｌｋａｌｏｉｄ  ｔｒｉｇｏｎｅｌｌｉｎｅ  ｒｅｎｄｅｒｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｍｏｒｅ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ｔｏ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，３２，４８２５−３５
ＣＨＯＩ，Ａ．Ｍ．＆ＡＬＡＭ，Ｊ．１９９６．Ｈｅｍｅ  ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１：ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｏｘｉｄａｎｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，１５，９−１９
ＣＯＨＥＮ，Ｓ．Ｊ．，ＺＡＬＵＰＳＫＩ，Ｍ．Ｍ．，ＭＯＤＩＡＮＯ，Ｍ．Ｒ．，ＣＯＮＫＬＩＮＧ，Ｐ．，ＰＡＴＴ，Ｙ．Ｚ．，ＤＡＶＩＳ，Ｐ．，ＤＯＲＲ，Ｒ．Ｔ．，ＢＯＹＴＩＭ，Ｍ．Ｌ．＆ＨＥＲＳＨ，Ｅ．Ｍ．２０１０．Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｉｍｅｘｏｎ  ｐｌｕｓ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，６６，２８７−９４
ＣＯＮＲＯＹ，Ｔ．，ＤＥＳＳＥＩＧＮＥ，Ｆ．，ＹＣＨＯＵ，Ｍ．，ＢＯＵＣＨＥ，Ｏ．，ＧＵＩＭＢＡＵＤ，Ｒ．，ＢＥＣＯＵＡＲＮ，Ｙ．，ＡＤＥＮＩＳ，Ａ．，ＲＡＯＵＬ，Ｊ．Ｌ．，ＧＯＵＲＧＯＵ−ＢＯＵＲＧＡＤＥ，Ｓ．，ＤＥ  ＬＡ  ＦＯＵＣＨＡＲＤＩＥＲＥ，Ｃ．，ＢＥＮＮＯＵＮＡ，Ｊ．，ＢＡＣＨＥＴ，Ｊ．Ｂ．，ＫＨＥＭＩＳＳＡ−ＡＫＯＵＺ，Ｆ．，ＰＥＲＥ−ＶＥＲＧＥ，Ｄ．，ＤＥＬＢＡＬＤＯ，Ｃ．，ＡＳＳＥＮＡＴ，Ｅ．，ＣＨＡＵＦＦＥＲＴ，Ｂ．，ＭＩＣＨＥＬ，Ｐ．，ＭＯＮＴＯＴＯ−ＧＲＩＬＬＯＴ，Ｃ．，ＤＵＣＲＥＵＸ，Ｍ．，ＧＲＯＵＰＥ  ＴＵＭＥＵＲＳ  ＤＩＧＥＳＴＩＶＥＳ  ＯＦ，Ｕ．＆ＩＮＴＥＲＧＲＯＵＰ，Ｐ．２０１１．ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ  ｖｅｒｓｕｓ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６４，１８１７−２５
ＤＥＮＩＣＯＬＡ，Ｇ．Ｍ．，ＫＡＲＲＥＴＨ，Ｆ．Ａ．，ＨＵＭＰＴＯＮ，Ｔ．Ｊ．，ＧＯＰＩＮＡＴＨＡＮ，Ａ．，ＷＥＩ，Ｃ．，ＦＲＥＳＥ，Ｋ．，ＭＡＮＧＡＬ，Ｄ．，ＹＵ，Ｋ．Ｈ．，ＹＥＯ，Ｃ．Ｊ．，ＣＡＬＨＯＵＮ，Ｅ．Ｓ．，ＳＣＲＩＭＩＥＲＩ，Ｆ．，ＷＩＮＴＥＲ，Ｊ．Ｍ．，ＨＲＵＢＡＮ，Ｒ．Ｈ．，ＩＡＣＯＢＵＺＩＯ−ＤＯＮＡＨＵＥ，Ｃ．，ＫＥＲＮ，Ｓ．Ｅ．，ＢＬＡＩＲ，Ｉ．Ａ．＆ＴＵＶＥＳＯＮ，Ｄ．Ａ．２０１１．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｎｒｆ２  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ＲＯＳ  ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ，４７５，１０６−９
ＤＨＩＬＬＯＮ，Ｈ．，ＣＨＩＫＡＲＡ，Ｓ．＆ＲＥＩＮＤＬ，Ｋ．Ｍ．２０１４．Ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｒｅｐ，１，３０９−３１８
ＤＩＮＫＯＶＡ−ＫＯＳＴＯＶＡ，Ａ．Ｔ．，ＨＯＬＴＺＣＬＡＷ，Ｗ．Ｄ．，ＣＯＬＥ，Ｒ．Ｎ．，ＩＴＯＨ，Ｋ．，ＷＡＫＡＢＡＹＡＳＨＩ，Ｎ．，ＫＡＴＯＨ，Ｙ．，ＹＡＭＡＭＯＴＯ，Ｍ．＆ＴＡＬＡＬＡＹ，Ｐ．２００２．Ｄｉｒｅｃｔ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ  ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  Ｋｅａｐ１  ａｒｅ  ｔｈｅ  ｓｅｎｓｏｒｓ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈａｓｅ  ２  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｔｅｃｔ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｎｔｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，９９，１１９０８−１３
ＤＩＮＫＯＶＡ−ＫＯＳＴＯＶＡ，Ａ．Ｔ．＆ＴＡＬＡＬＡＹ，Ｐ．２０００．Ｐｅｒｓｕａｓｉｖｅ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｑｕｉｎｏｎｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｔｙｐｅ  １（ＤＴ  ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ）  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｃｅｌｌｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓ  ａｎｄ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｏｘｙｇｅｎ．Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，２９，２３１−４０
ＤＯＲＲ，Ｒ．Ｔ．，ＲＡＹＭＯＮＤ，Ｍ．Ａ．，ＬＡＮＤＯＷＳＫＩ，Ｔ．Ｈ．，ＲＯＭＡＮ，Ｎ．Ｏ．＆ＦＵＫＵＳＨＩＭＡ，Ｓ．２００５．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ａｒｒｅｓｔ  ｂｙ  ｉｍｅｘｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，３６，１５−２８
ＦＡＬＫＥＮＢＥＲＧ，Ｍ．，ＬＡＲＳＳＯＮ，Ｎ．Ｇ．＆ＧＵＳＴＡＦＳＳＯＮ，Ｃ．Ｍ．２００７．ＤＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，７６，６７９−９９
ＦＲＵＥＨＡＵＦ，Ｊ．Ｐ．＆ＭＥＹＳＫＥＮＳ，Ｆ．Ｌ．，ＪＲ．２００７．Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ：ａ  ｂｒｅａｔｈ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ｏｒ  ｄｅａｔｈ？  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１３，７８９−９４
ＧＵＬＥＮＧ，Ｇ．，ＬＯＶＩＧ，Ｔ．，ＭＥＬＩＮＧ，Ｇ．Ｉ．，ＡＮＤＥＲＳＥＮ，Ｓ．Ｎ．＆ＲＯＧＮＵＭ，Ｔ．Ｏ．２００５．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ−−ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ａｎｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ，２１９，９７−１０３
ＨＡＬＬＩＷＥＬＬ，Ｂ．＆ＡＲＵＯＭＡ，Ｏ．Ｉ．１９９１．ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  ｏｘｙｇｅｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｉｔｓ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｓｙｓｔｅｍｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，２８１，９−１９
ＨＡＲＤＩＮＧ，Ｈ．Ｐ．，ＺＨＡＮＧ，Ｙ．，ＢＥＲＴＯＬＯＴＴＩ，Ａ．，ＺＥＮＧ，Ｈ．＆ＲＯＮ，Ｄ．２０００．Ｐｅｒｋ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ，５，８９７−９０４
ＨＡＹＥＳ，Ｊ．Ｄ．＆ＭＣＭＡＨＯＮ，Ｍ．２００９．ＮＲＦ２  ａｎｄ  ＫＥＡＰ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ：ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ，３４，１７６−８８
ＨＡＺＥ，Ｋ．，ＹＯＳＨＩＤＡ，Ｈ．，ＹＡＮＡＧＩ，Ｈ．，ＹＵＲＡ，Ｔ．＆ＭＯＲＩ，Ｋ．１９９９．Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＡＴＦ６  ｉｓ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ  ａｓ  ａ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ，１０，３７８７−９９
ＨＥＴＺ，Ｃ．２０１２．Ｔｈｅ  ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ｆａｔｅ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ  ｕｎｄｅｒ  ＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｂｅｙｏｎｄ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１３，８９−１０２
ＪＡＩＳＷＡＬ，Ａ．Ｋ．２００４．Ｎｒｆ２  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，３６，１１９９−２０７
ＫＡＢＥＫＫＯＤＵ，Ｓ．Ｐ．，ＢＨＡＴ，Ｓ．，ＭＡＳＣＡＲＥＮＨＡＳ，Ｒ．，ＭＡＬＬＹＡ，Ｓ．，ＢＨＡＴ，Ｍ．，ＰＡＮＤＥＹ，Ｄ．，ＫＵＳＨＴＡＧＩ，Ｐ．，ＴＨＡＮＧＡＲＡＪ，Ｋ．，ＧＯＰＩＮＡＴＨ，Ｐ．Ｍ．＆ＳＡＴＹＡＭＯＯＲＴＨＹ，Ｋ．２０１４．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ，１６，７３−８２
ＫＩＭ，Ｒ．，ＥＭＩ，Ｍ．，ＴＡＮＡＢＥ，Ｋ．＆ＭＵＲＡＫＡＭＩ，Ｓ．２００６．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，１１，５−１３
ＫＯＮＧ，Ｂ．，ＱＩＡ，Ｃ．，ＥＲＫＡＮ，Ｍ．，ＫＬＥＥＦＦ，Ｊ．＆ＭＩＣＨＡＬＳＫＩ，Ｃ．Ｗ．２０１３．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｎ  ｈｏｗ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  Ｋｒａｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｌｏｗ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ＲＯＳ  ｌｅｖｅｌｓ．Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，４，２４６
ＬＩ，Ｘ．，ＦＡＮＧ，Ｐ．，ＭＡＩ，Ｊ．，ＣＨＯＩ，Ｅ．Ｔ．，ＷＡＮＧ，Ｈ．＆ＹＡＮＧ，Ｘ．Ｆ．２０１３．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ，６，１９
ＬＩＥＶＲＥ，Ａ．，ＣＨＡＰＵＳＯＴ，Ｃ．，ＢＯＵＶＩＥＲ，Ａ．Ｍ．，ＺＩＮＺＩＮＤＯＨＯＵＥ，Ｆ．，ＰＩＡＲＤ，Ｆ．，ＲＯＩＧＮＯＴ，Ｐ．，ＡＲＮＯＵＬＤ，Ｌ．，ＢＥＡＵＮＥ，Ｐ．，ＦＡＩＶＲＥ，Ｊ．＆ＬＡＵＲＥＮＴ−ＰＵＩＧ，Ｐ．２００５．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２３，３５１７−２５
ＬＩＳＴＥＲ，Ａ．，ＮＥＤＪＡＤＩ，Ｔ．，ＫＩＴＴＥＲＩＮＧＨＡＭ，Ｎ．Ｒ．，ＣＡＭＰＢＥＬＬ，Ｆ．，ＣＯＳＴＥＬＬＯ，Ｅ．，ＬＬＯＹＤ，Ｂ．，ＣＯＰＰＬＥ，Ｉ．Ｍ．，ＷＩＬＬＩＡＭＳ，Ｓ．，ＯＷＥＮ，Ａ．，ＮＥＯＰＴＯＬＥＭＯＳ，Ｊ．Ｐ．，ＧＯＬＤＲＩＮＧ，Ｃ．Ｅ．＆ＰＡＲＫ，Ｂ．Ｋ．２０１１．Ｎｒｆ２  ｉｓ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ，１０，３７
ＭＡＬＨＯＴＲＡ，Ｊ．Ｄ．＆ＫＡＵＦＭＡＮ，Ｒ．Ｊ．２００７．Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ：ａ  ｖｉｃｉｏｕｓ  ｃｙｃｌｅ  ｏｒ  ａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｅｄｇｅｄ  ｓｗｏｒｄ？  Ａｎｔｉｏｘｉｄ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ，９，２２７７−９３
ＭＯＮＴＯＹＡ，Ｊ．，ＧＡＩＮＥＳ，Ｇ．Ｌ．＆ＡＴＴＡＲＤＩ，Ｇ．１９８３．Ｔｈｅ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｒＲＮＡ  ｇｅｎｅｓ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｔｗｏ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｕｎｉｔｓ．Ｃｅｌｌ，３４，１５１−９
ＭＯＯＮ，Ｅ．Ｊ．＆ＧＩＡＣＣＩＡ，Ａ．２０１４．Ｄｕａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＮＲＦ２  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ
ＭＯＯＴＨＡ，Ｖ．Ｋ．，ＬＩＮＤＧＲＥＮ，Ｃ．Ｍ．，ＥＲＩＫＳＳＯＮ，Ｋ．Ｆ．，ＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＮ，Ａ．，ＳＩＨＡＧ，Ｓ．，ＬＥＨＡＲ，Ｊ．，ＰＵＩＧＳＥＲＶＥＲ，Ｐ．，ＣＡＲＬＳＳＯＮ，Ｅ．，ＲＩＤＤＥＲＳＴＲＡＬＥ，Ｍ．，ＬＡＵＲＩＬＡ，Ｅ．，ＨＯＵＳＴＩＳ，Ｎ．，ＤＡＬＹ，Ｍ．Ｊ．，ＰＡＴＴＥＲＳＯＮ，Ｎ．，ＭＥＳＩＲＯＶ，Ｊ．Ｐ．，ＧＯＬＵＢ，Ｔ．Ｒ．，ＴＡＭＡＹＯ，Ｐ．，ＳＰＩＥＧＥＬＭＡＮ，Ｂ．，ＬＡＮＤＥＲ，Ｅ．Ｓ．，ＨＩＲＳＣＨＨＯＲＮ，Ｊ．Ｎ．，ＡＬＴＳＨＵＬＥＲ，Ｄ．＆ＧＲＯＯＰ，Ｌ．Ｃ．２００３．ＰＧＣ−１ａｌｐｈａ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ，３４，２６７−７３
ＮＡ，Ｈ．Ｋ．＆ＳＵＲＨ，Ｙ．Ｊ．２０１４．Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  Ｎｒｆ２  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｒｉｎｃｉｐａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｅｍｅ  ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１．Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，６７，３５３−６５
ＮＩＯＩ，Ｐ．，ＭＣＭＡＨＯＮ，Ｍ．，ＩＴＯＨ，Ｋ．，ＹＡＭＡＭＯＴＯ，Ｍ．＆ＨＡＹＥＳ，Ｊ．Ｄ．２００３．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｎｒｆ２−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ（ＡＲＥ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  １  ｇｅｎｅ：ｒｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＲＥ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，３７４，３３７−４８
ＮＩＳＨＩＴＯＨ，Ｈ．２０１２．ＣＨＯＰ  ｉｓ  ａ  ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，１５１，２１７−９
ＯＪＡＬＡ，Ｄ．，ＭＯＮＴＯＹＡ，Ｊ．＆ＡＴＴＡＲＤＩ，Ｇ．１９８１．ｔＲＮＡ  ｐｕｎｃｔｕａｔｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｎａｔｕｒｅ，２９０，４７０−４
ＯＵＹＡＮＧ，Ｈ．，ＭＯＵ，Ｌ．，ＬＵＫ，Ｃ．，ＬＩＵ，Ｎ．，ＫＡＲＡＳＫＯＶＡ，Ｊ．，ＳＱＵＩＲＥ，Ｊ．＆ＴＳＡＯ，Ｍ．Ｓ．２０００．Ｉｍｍｏｒｔａｌ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｄｕｃｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅａｒ  ｎｏｒｍａｌ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，１５７，１６２３−３１
ＯＹＡＤＯＭＡＲＩ，Ｓ．＆ＭＯＲＩ，Ｍ．２００４．Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＣＨＯＰ／ＧＡＤＤ１５３  ｉｎ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ，１１，３８１−９
ＰＡＴＨＡＮＩＡ，Ｄ．，ＫＵＡＮＧ，Ｙ．，ＳＥＣＨＩ，Ｍ．＆ＮＥＡＭＡＴＩ，Ｎ．２０１５．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｄｉｏｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｒｅｄｏｘ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ，ＱＤ２３２，ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１７２，５０−６３
ＰＡＴＨＡＮＩＡ，Ｄ．，ＳＥＣＨＩ，Ｍ．，ＰＡＬＯＭＢＡ，Ｍ．，ＳＡＮＮＡ，Ｖ．，ＢＥＲＲＥＴＴＩＮＩ，Ｆ．，ＳＩＡＳ，Ａ．，ＴＡＨＥＲＩ，Ｌ．＆ＮＥＡＭＡＴＩ，Ｎ．２０１４．Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｄｉｏｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｒｅｄｏｘ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８４０，３３２−４３
ＰＡＵＬＳＥＮ，Ｍ．Ｔ．，ＶＥＬＯＳＯ，Ａ．，ＰＲＡＳＡＤ，Ｊ．，ＢＥＤＩ，Ｋ．，ＬＪＵＮＧＭＡＮ，Ｅ．Ａ．，ＭＡＧＮＵＳＯＮ，Ｂ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｔ．Ｅ．＆ＬＪＵＮＧＭＡＮ，Ｍ．２０１４．Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｂｒｕ−Ｓｅｑ  ａｎｄ  ＢｒｕＣｈａｓｅ−Ｓｅｑ  ｆｏｒ  ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ＲＮＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６７，４５−５４
ＰＡＵＬＳＥＮ，Ｍ．Ｔ．，ＶＥＬＯＳＯ，Ａ．，ＰＲＡＳＡＤ，Ｊ．，ＢＥＤＩ，Ｋ．，ＬＪＵＮＧＭＡＮ，Ｅ．Ａ．，ＴＳＡＮ，Ｙ．Ｃ．，ＣＨＡＮＧ，Ｃ．Ｗ．，ＴＡＲＲＩＥＲ，Ｂ．，ＷＡＳＨＢＵＲＮ，Ｊ．Ｇ．，ＬＹＯＮＳ，Ｒ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｄ．Ｒ．，ＫＵＭＡＲ−ＳＩＮＨＡ，Ｃ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｔ．Ｅ．＆ＬＪＵＮＧＭＡＮ，Ｍ．２０１３．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｃｕｔｅ  ＴＮＦ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１１０，２２４０−５
ＰＥＬＩＣＡＮＯ，Ｈ．，ＣＡＲＮＥＹ，Ｄ．＆ＨＵＡＮＧ，Ｐ．２００４．ＲＯＳ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ  Ｕｐｄａｔ，７，９７−１１０
ＲＯＳＳ，Ｄ．，ＫＥＰＡ，Ｊ．Ｋ．，ＷＩＮＳＫＩ，Ｓ．Ｌ．，ＢＥＡＬＬ，Ｈ．Ｄ．，ＡＮＷＡＲ，Ａ．＆ＳＩＥＧＥＬ，Ｄ．２０００．ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  １（ＮＱＯ１）：ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ｂｉｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｇｅｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ．Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔ，１２９，７７−９７
ＲＹＡＮ，Ｄ．Ｐ．，ＨＯＮＧ，Ｔ．Ｓ．＆ＢＡＲＤＥＥＳＹ，Ｎ．２０１４．Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３７１，１０３９−４９
ＳＡＢＨＡＲＷＡＬ，Ｓ．Ｓ．＆ＳＣＨＵＭＡＣＫＥＲ，Ｐ．Ｔ．２０１４．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＲＯＳ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｉｎｉｔｉａｔｏｒｓ，ａｍｐｌｉｆｉｅｒｓ  ｏｒ  ａｎ  Ａｃｈｉｌｌｅｓ’  ｈｅｅｌ？  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，１４，７０９−２１
ＳＡＬＡＺＡＲ，Ｊ．Ｊ．＆ＶＡＮ  ＨＯＵＴＥＮ，Ｂ．１９９７．Ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｉｎｊｕｒｙ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｓ  ａ  ｓｔｅａｄｙ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｍｕｔａｔ  Ｒｅｓ，３８５，１３９−４９
ＳＨＡＭＵ，Ｃ．Ｅ．＆ＷＡＬＴＥＲ，Ｐ．１９９６．Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｒｅ１ｐ  ｋｉｎａｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ，１５，３０２８−３９
ＳＨＯＫＯＬＥＮＫＯ，Ｉ．Ｎ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｇ．Ｌ．＆ＡＬＥＸＥＹＥＶ，Ｍ．Ｆ．２０１３．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．ＤＮＡ  Ｒｅｐａｉｒ（Ａｍｓｔ），１２，４８８−９９．
ＳＩＥＧＥＬ，Ｒ．，ＭＡ，Ｊ．，ＺＯＵ，Ｚ．＆ＪＥＭＡＬ，Ａ．２０１４．Ｃａｎｃｅｒ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１４．ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ，６４，９−２９
ＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＮ，Ａ．，ＴＡＭＡＹＯ，Ｐ．，ＭＯＯＴＨＡ，Ｖ．Ｋ．，ＭＵＫＨＥＲＪＥＥ，Ｓ．，ＥＢＥＲＴ，Ｂ．Ｌ．，ＧＩＬＬＥＴＴＥ，Ｍ．Ａ．，ＰＡＵＬＯＶＩＣＨ，Ａ．，ＰＯＭＥＲＯＹ，Ｓ．Ｌ．，ＧＯＬＵＢ，Ｔ．Ｒ．，ＬＡＮＤＥＲ，Ｅ．Ｓ．＆ＭＥＳＩＲＯＶ，Ｊ．Ｐ．２００５．Ｇｅｎｅ  ｓｅｔ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ：ａ  ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ−ｂａｓｅｄ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｎｇ  ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１０２，１５５４５−５０
ＳＵＺＵＫＩ，Ｍ．，ＴＯＹＯＯＫＡ，Ｓ．，ＭＩＹＡＪＩＭＡ，Ｋ．，ＩＩＺＡＳＡ，Ｔ．，ＦＵＪＩＳＡＷＡ，Ｔ．，ＢＥＫＥＬＥ，Ｎ．Ｂ．＆ＧＡＺＤＡＲ，Ａ．Ｆ．２００３．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｌｏｏｐ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，９，５６３６−４１
ＶＡＤＲＯＴ，Ｎ．，ＧＨＡＮＥＭ，Ｓ．，ＢＲＡＵＴ，Ｆ．，ＧＡＶＲＩＬＥＳＣＵ，Ｌ．，ＰＩＬＡＲＤ，Ｎ．，ＭＡＮＳＯＵＲＩ，Ａ．，ＭＯＲＥＡＵ，Ｒ．＆ＲＥＹＬ−ＤＥＳＭＡＲＳ，Ｆ．２０１２．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｇｌｙｃｏｇｅｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ３ｂｅｔａ  ａｎｄ  ｐ５３  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，７，ｅ４０８７９
ＶＥＲＦＡＩＬＬＩＥ，Ｔ．，ＧＡＲＧ，Ａ．Ｄ．＆ＡＧＯＳＴＩＮＩＳ，Ｐ．２０１３．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ，３３２，２４９−６４
ＶＯＮ  ＨＯＦＦ，Ｄ．Ｄ．，ＥＲＶＩＮ，Ｔ．，ＡＲＥＮＡ，Ｆ．Ｐ．，ＣＨＩＯＲＥＡＮ，Ｅ．Ｇ．，ＩＮＦＡＮＴＥ，Ｊ．，ＭＯＯＲＥ，Ｍ．，ＳＥＡＹ，Ｔ．，ＴＪＵＬＡＮＤＩＮ，Ｓ．Ａ．，ＭＡ，Ｗ．Ｗ．，ＳＡＬＥＨ，Ｍ．Ｎ．，ＨＡＲＲＩＳ，Ｍ．，ＲＥＮＩ，Ｍ．，ＤＯＷＤＥＮ，Ｓ．，ＬＡＨＥＲＵ，Ｄ．，ＢＡＨＡＲＹ，Ｎ．，ＲＡＭＡＮＡＴＨＡＮ，Ｒ．Ｋ．，ＴＡＢＥＲＮＥＲＯ，Ｊ．，ＨＩＤＡＬＧＯ，Ｍ．，ＧＯＬＤＳＴＥＩＮ，Ｄ．，ＶＡＮ  ＣＵＴＳＥＭ，Ｅ．，ＷＥＩ，Ｘ．，ＩＧＬＥＳＩＡＳ，Ｊ．＆ＲＥＮＳＣＨＬＥＲ，Ｍ．Ｆ．２０１３．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｎａｂ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｌｕｓ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６９，１６９１−７０３
ＷＨＥＥＬＨＯＵＳＥ，Ｎ．Ｍ．，ＬＡＩ，Ｐ．Ｂ．，ＷＩＧＭＯＲＥ，Ｓ．Ｊ．，ＲＯＳＳ，Ｊ．Ａ．＆ＨＡＲＲＩＳＯＮ，Ｄ．Ｊ．２００５．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｄ−ｌｏｏｐ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ｌｉｖｅｒ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｌｉｖｅｒ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，９２，１２６８−７２
ＹＡＫＥＳ，Ｆ．Ｍ．＆ＶＡＮ  ＨＯＵＴＥＮ，Ｂ．１９９７．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｉｓ  ｍｏｒｅ  ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｉｓｔｓ  ｌｏｎｇｅｒ  ｔｈａｎ  ｎｕｃｌｅａｒ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，９４，５１４−９
ＹＥ，Ｋ．，ＬＵ，Ｊ．，ＭＡ，Ｆ．，ＫＥＩＮＡＮ，Ａ．＆ＧＵ，Ｚ．２０１４．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｍｙ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１１１，１０６５４−９
ＺＨＡＮＧ，Ｄ．Ｄ．＆ＨＡＮＮＩＮＫ，Ｍ．２００３．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｉｎ  Ｋｅａｐ１  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｋｅａｐ１−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｒｆ２  ａｎｄ  ｆｏｒ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｒｆ２  ｂｙ  ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，２３，８１３７−５１。
【０２１８】
〔均等物〕
本発明は、その趣旨または本質的特徴から逸脱することなく他の特定形態で具現化され得る。それゆえ、上記実施形態は、あらゆる点において、本明細書に記載の本発明を限定するのではなく例示的なものであるとみなされるべきである。したがって、本発明の範囲は、上記記載によってではなく別記の特許請求の範囲によって指し示され、特許請求の範囲の均等性の趣意及び範囲に入るあらゆる変更をその中に包含することが意図される。
【図１】
2019510084.tif 000077
【図２】
2019510084.tif 000078
【図３】
2019510084.tif 000079
【図４】
2019510084.tif 000080
【図５】
2019510084.tif 000081
【図６】
2019510084.tif 000082
【図７】
2019510084.tif 000083
【図８−１】
2019510084.tif 000084
【図８−２】
2019510084.tif 000085
【図９】
2019510084.tif 000086
【図１０】
2019510084.tif 000087
【図１１】
2019510084.tif 000088
【図１２】
2019510084.tif 000089
【図１３】
2019510084.tif 000090
【国際調査報告】
2019510084.tif 000091
2019510084.tif 000092