(57)【要約】  本発明は、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子に関し、より詳細には低線量率低レベル放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子の検出方法に関する。記のような本発明によれば、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子を検出することで、放射線照射による細胞枯死調節遺伝子の機能を明らかにし、遺伝子プロファイルを提供する効果がある。また、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子は、低レベル放射線の環境で生活する産業及び医療従事者の線量−反応関連性を評価できる遺伝子プロファイルの構成に用いることができる。放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子は、胸腺リンパ腫患者の癌の進行程度及び治療程度を評価できる指標として用いることができる。放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子の検出方法は、胸腺リンパ腫診断用組成物及び診断キットの製作に用いることができる。【選択図】図１ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
胸腺リンパ腫細胞に低線量率低レベル放射線を照射する段階と、
前記放射線が照射されたそれぞれのマウス胸腺リンパ腫細胞から遺伝子発現に変化のある細胞枯死調節遺伝子を検出する段階とを含む、胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法。
【請求項２】
前記胸腺リンパ腫細胞はマウス（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）胸腺リンパ腫ＥＬ４細胞株であることを特徴とする、請求項１に記載の胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法。
【請求項３】
前記低線量率低レベル放射線は、２．５８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が６１．９２ｍＧｙとなるように照射すること、５．８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が１３９．２ｍＧｙとなるように照射すること、及び２３．２２ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が５５７．２８ｍＧｙとなるように照射することを特徴とする、請求項１に記載の胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法。
【請求項４】
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階は、重合酵素連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）及びウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行うことを特徴とする、請求項１に記載の胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法。
【請求項５】
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階で検出された遺伝子は、Ｂｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）であることを特徴とする、請求項１に記載の胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法。
【請求項６】
胸腺リンパ腫の細胞枯死調節遺伝子であるＢｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）よりなる群から１以上選ばれる細胞枯死調節遺伝子の塩基配列またはこれに相補的な塩基配列を含む、胸腺リンパ腫診断用組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の胸腺リンパ腫診断用組成物を含む、胸腺リンパ腫診断用診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子に関し、さらに詳細には、低線量率低レベル放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、高レベル放射線は、ＤＮＡを損傷させて癌を発生させると知られている。一方、低線量放射線は、癌を抑制すると知られているが、関連遺伝子と癌抑制機転については知られていない。
低線量放射線は、強度が低い放射線を指し、一般に１００ｍＳｖ以下の放射線を意味する。多量の放射線は、生物体に害を与えが、低い線量の低線量放射線は、生命体の生理活動が促進され、寿命が延長されるか成長促進または腫瘍発生率が低下するなど有益な効果がある。このような効果を放射線ホルミシス（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｈｏｒｍｅｓｉｓ）と言う。
ミリグレイ（ｍｉｌｌｉｇｒａｙ、ｍＧｙ）範囲の低線量放射線は、高線量放射線とは異なり疾病に対する抵抗性を誘発して適応保護（ａｄａｐｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）効果を表わすと報告されており（非特許文献１〜３）、糖尿病遺伝因子を有する実験用マウスに一定量の低線量放射線を照射すると、病勢が好転したという報告がある（非特許文献４）。また、０．２５Ｇｙ以下の放射線は、ＤＮＡ損傷を防御し、損傷されたＤＮＡを復旧する効果（非特許文献５  ）があり、低線量放射線は、免疫増強効果があると報告されている（非特許文献６〜７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｓａｋａｉ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｏｓｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、２００６、４（４）：３２７〜３３２
【非特許文献２】Ｓａｋａｉ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｌｏｗ  Ｒａｄｉａｔ．，２００３、１（１）：１４２〜１４６
【非特許文献３】Ｓｃｏｔｔ  ＢＲ．，Ｄｏｓｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、２００８  ６（３）：２９９〜３１８
【非特許文献４】Ｓａｋａｉ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｏｓｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、２００６、４（４）：３２７〜３３２
【非特許文献５】Ｌｅ  ＸＣ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９８、２８０（５３６６）：１０６６〜１０６９
【非特許文献６】Ｎｏｇａｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．  Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．  Ｂｉｏｌ．，１９９３、６３（６）：７７５〜７８３
【非特許文献７】Ｎｏｇａｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｄｉａｔ．  Ｒｅｓ．，１９９４、１３９（１）：４７〜５２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子に関し、より詳細には、低線量低レベル放射線照射された胸腺癌細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法を提供することにある。
本発明の別の目的は、細胞枯死調節遺伝子の塩基配列またはこれに相補的な塩基配列を含む胸腺リンパ腫診断用組成物を提供することにある。また、前記胸腺リンパ腫診断用組成物を含む胸腺リンパ腫診断用キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は、胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法は、胸腺リンパ腫細胞に低線量率低レベル放射線を照射する段階と、前記放射線が照射されたそれぞれのマウス胸腺リンパ腫細胞から遺伝子発現に変化のある細胞枯死調節遺伝子を検出する段階とを含む。
前記胸腺リンパ腫細胞は、マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）胸腺リンパ腫ＥＬ４細胞株であることが好ましい。前記低線量率低レベル放射線は、２．５８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が６１．９２ｍＧｙとなるように照射すること、５．８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が１３９．２ｍＧｙとなるように照射すること、及び２３．２２ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が５５７．２８ｍＧｙとなるように照射することであり得る。
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階は、重合酵素連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）及びウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行うことを含み得る。
【０００６】
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階で検出された遺伝子は、Ｂｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）であることが好ましい。
また、本発明の胸腺リンパ腫診断用組成物は、胸腺リンパ腫の細胞枯死調節遺伝子であるＢｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）よりなる群から１以上選ばれた細胞枯死調節遺伝子の塩基配列またはこれに相補的な塩基配列を含む。
また、本発明の胸腺リンパ腫診断用診断キットは、前記胸腺リンパ腫診断用組成物を含む。
【発明の効果】
【０００７】
上述したような本発明によれば、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子を検出することで、放射線照射による細胞枯死調節遺伝子の機能を明らかにし、遺伝子プロファイルを提供する効果がある。
また、放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子は、低レベル放射線の環境で生活する産業及び医療従事者の線量−反応関連性を評価できる遺伝子プロファイルの構成に用いることができる。
放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子は、胸腺リンパ腫患者の癌の進行程度及び治療程度を評価できる指標として用いることができる。
放射線照射された胸腺リンパ腫細胞から発掘された細胞枯死調節遺伝子の検出方法は、胸腺リンパ腫診断用組成物及び診断キットの製作に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１ａ】線量率及び累積線量によるＲＮＡ水準における細胞枯死調節遺伝子の発現変化を示す図である。
【図１ｂ】線量率及び累積線量によるＲＮＡ水準における細胞枯死調節遺伝子の発現変化を示す図である。
【図１ｃ】線量率及び累積線量によるＲＮＡ水準における細胞枯死調節遺伝子の発現変化を示す図である。
【図１ｄ】線量率及び累積線量によるＲＮＡ水準における細胞枯死調節遺伝子の発現変化を示す図である。
【図２】線量率及び累積線量による細胞枯死調節タンパク質の発現変化を示す図である。
【図３】マウス胸腺リンパ腫細胞における低線量率低レベル放射線照射による分子的変化とそれによる癌抑制機転を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明の一実施例による胸腺リンパ腫細胞から細胞枯死調節遺伝子を検出する方法は、胸腺リンパ腫細胞にそれぞれ低線量率低レベル放射線、高線量率低レベル放射線及び高レベル放射線を照射する段階と、前記放射線が照射されたそれぞれのマウス胸腺リンパ腫細胞から遺伝子発現に変化のある細胞枯死調節遺伝子を検出する段階とを含む。
前記胸腺リンパ腫細胞は、マウス（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）胸腺リンパ腫に由来したものが好ましい。
マウス胸腺リンパ腫細胞であるＥＬ４細胞株は、化学発癌剤が投与された純系マウスであるＣ５７ＢＬ／６系に発生したリンパ腫で確立されたＴ細胞系細胞株である。細胞表面にＴｈｙ−１、２及びＨ２ｂなどを発現し、植物性血球凝集素（ＰＨＡ）に反応性がある。インターロイキン２（ＩＬ−２）を生産するため細胞性免疫実験などに用いられる。
前記低線量率低レベル放射線は、２．５８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が６１．９２ｍＧｙになるように照射すること、５．８ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が１３９．２ｍＧｙになるように照射すること、または２３．２２ｍＧｙ／時間の線量率で最終累積線量が５５７．２８ｍＧｙになるように照射することが好ましい。
【００１０】
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階は、重合酵素連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）及びウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を含み得る。
前記細胞枯死調節遺伝子を検出する段階で検出された遺伝子は、Ｂｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）を含み得る。
本発明の他の一形態による胸腺リンパ腫診断用組成物は、胸腺リンパ腫の細胞枯死調節遺伝子であるＢｉｋ（（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７５４６）、Ｂｍｆ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１３８３１３）、Ｄｄｉｔ３（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿００７８３７）、Ｎｏｄ１（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿１７２７２９）及びＴｎｆｒｓｆ１９（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ＿０１３８６９）よりなる群から１以上選ばれた細胞枯死調節遺伝子の塩基配列またはこれに相補的な塩基配列を含む。
【実施例】
【００１１】
以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明する。これらの実施例は、単に本発明を例示するためであり、本発明の範囲はこれらの実施例によって制限されるものとして解析されないことは、当業界における通常の知識を有する者に自明である。
【００１２】
実施例１．マウス胸腺リンパ腫細胞の培養及び放射線照射
マウス胸腺リンパ腫細胞（ＥＬ４）（ＴＩＢ−３９、ＡＴＣＣ）は、１０％ウシ胎児血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で使用し、３７℃、５％ＣＯ２条件の細胞培養器で培養した。培養した細胞を１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に調整して細胞を準備した。
低線量率低レベル放射線照射細胞群は、前記準備した細胞に低線量率低レベル放射線（２．５８ｍＧｙ／時間、５．８ｍＧｙ／時間、２３．２２ｍＧｙ／時間）を２４時間照射して細胞の累積線量が各々６１．９２ｍＧｙ、１３９．２ｍＧｙ及び５５７．２８ｍＧｙになるように照射した。
低線量率低レベル放射線照射細胞群と比べるための高線量率低レベル放射線照射細胞群は、前記準備した細胞に高線量率低レベル放射線（０．８Ｇｙ／分）を最終累積線量が各々６１．９２ｍＧｙ、１３９．２ｍＧｙ及び５５７．２８ｍＧｙになるように照射した。
また、高線量率高レベル放射線照射細胞群は、高線量率高レベル放射線（０．８Ｇｙ／分）を最終累積線量が２Ｇｙになるように照射した。
【００１３】
実施例２．放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞の細胞枯死調節遺伝子のスクリーニング及びＲＮＡ水準における発現測定
２−１放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞の細胞枯死調節遺伝子のスクリーニング
放射線照射による細胞枯死調節遺伝子をスクリーニングするためにマイクロアレイ（ｍｉｃｒｏ  ａｒｒａｙ）を行った。
前記実施例１の低線量率低レベル放射線照射細胞群の全体ＲＮＡを抽出し、Ｃｙａｎｉｎｅ３と標識する。全体ＤＮＡの遺伝子がすべて配列されているマイクロアレイチップとＣｙａｎｉｎｅ３と標識された全体ＲＮＡを反応させる。前記反応による信号を分析して各ＲＮＡの発現程度を確認した。
また、高線量率低レベル放射線照射細胞群及び高線量率高レベル放射線照射細胞群も前記のような方法でマイクロアレイを行った。
前記マイクロアレイ遂行結果によれば、非照射細胞群に比べて、低線量率低レベル放射線照射細胞群において発現が２倍以上増加した遺伝子を選別した。前記選別された遺伝子は、Ａｄｍ、Ｂｔｇ２、Ｉｌ１２ａ、Ｍａｐｔ、Ｍｎｄａ、Ｂｍｆ、Ｎｏｄ１、Ｂｉｋ、Ｄｄｉｔ３、Ｐｒｋｃｚ及びＴｎｆｒｓｆ１９である。
【００１４】
２−２放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞の細胞枯死調節遺伝子のＲＮＡ水準における発現測定
前記マイクロアレイ遂行により選別された１１個の遺伝子のＲＮＡ水準における発現を確認するために、重合酵素連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）を行った。
Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）を用いて、細胞枯死調節遺伝子のＲＮＡを逆転写（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）した。表１に記載したプライマを用いて逆転写したＲＮＡのＰＣＲを行った。ＰＣＲの遂行結果は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨを用いて標準化した。
また、高線量率低レベル放射線照射細胞群及び高線量率高レベル放射線照射細胞群も同様方法により細胞枯死調節遺伝子の発現量を測定した。
【００１５】
【表１】
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【００１６】
放射線照射による細胞枯死調節遺伝子のＲＮＡ水準における発現の測定結果は、図１ａ乃至図１ｄに示した。
低線量低レベル放射線照射時、前記実施例２−１から選別された細胞枯死調節遺伝子のうちＲＮＡ水準において非照射細胞群より発現が増加した遺伝子を検出した。前記検出された遺伝子は、Ａｄｍ、Ｂｔｇ２、Ｉｌ１２ａ、Ｍｎｄａ、Ｂｍｆ、Ｎｏｄ１、Ｂｉｋ、Ｄｄｉｔ３及びＴｎｆｒｓｆ１９である。
高線量率低レベル放射線照射細胞群及び高線量率高レベル放射線照射細胞群において、細胞枯死調節遺伝子は、ＲＮＡ水準における発現が減少する傾向を示した。
【００１７】
実施例３．放射線照射されたマウス胸腺リンパ腫細胞の細胞枯死調節タンパク質発現の測定
前記実施例２−２から検出された細胞枯死調節遺伝子のタンパク質発現を測定するために、ウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行った。
細胞溶解緩衝剤は、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ０１９９、  ０．１％  ＳＤＳ、０．５％  ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを混合して製造した。また、製造された細胞溶解緩衝剤にプロテアーゼ抑制剤（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を溶液全体の１％濃度になるように混合した。
実施例１の低線量率低レベル放射線照射細胞群と前記細胞溶解緩衝剤とを混合して細胞を溶解させてタンパク質サンプルを製造した。前記タンパク質サンプルを用いてウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行い、タンパク質発現量を測定した。前記ウエスタンブロット遂行時、Ｄｄｉｔ３、Ｔｎｆｒｓｆ１９を検出するための抗体（１：２００、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）及びＮｏｄ１、Ｂｍｆ、及びＢｉｋを検出するための抗体（１：２００、Ｏｒｉｇｅｎｅ）を使用した。
【００１８】
また、実施例１の高線量率低レベル放射線照射細胞群及び高線量率高レベル放射線照射細胞群も同様の方法により細胞枯死調節タンパク質の発現量を測定した。
放射線照射による細胞枯死調節タンパク質の発現量の測定結果は、図２に示した。低線量率低レベル放射線照射細胞群において、細胞枯死調節タンパク質であるＢｍｆ、Ｎｏｄ１、Ｂｉｋ、Ｄｄｉｔ３及びＴｎｆｒｓｆ１９は、非照射群に比べてタンパク質発現が増加した。
前記結果から、マウス胸腺リンパ腫細胞に低線量率低レベル放射線照射時にＲＮＡ及びタンパク質水準で発現が増加する細胞枯死調節遺伝子を検出した。前記検出された遺伝子は、Ｂｍｆ、Ｎｏｄ１、Ｂｉｋ、Ｄｄｉｔ３及びＴｎｆｒｓｆ１９である。前記検出された細胞枯死調節遺伝子は、マウス胸腺リンパ腫細胞に低線量率低レベル放射線照射時、ＲＮＡ及びタンパク質水準において発現が増加して細胞枯死を促進させることで、胸腺リンパ腫が抑制されることが分かる（図３）。
以上、本発明内容の特定の部分を詳しく記述したので、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な技術は、単に好ましい実施様態であり、これにより本発明の範囲は制限されないことは明白であろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物によって定義されるといえる。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図２】
2019523655.tif 000008
【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2019523655.tif 000011
2019523655.tif 000012
2019523655.tif 000013
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