(57)【要約】  本明細書には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ、ｃＦＬＩＰ−Ｌ、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２、ＨＴＬＶ１−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘから選択される１つまたは複数のシグナル伝達タンパク質とをコードする核酸を含む細胞を含む、組成物であって、ＣＡＲが、ａ）細胞外抗原特異的ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含み；ｃ）が、キメラ受容体のＣ末端に位置する、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは１つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む。本明細書には、本明細書に記載される組成物を用いて疾患を治療する方法も提供される。【選択図】図１６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とＫ１３−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質とをコードする核酸を含む細胞であって、前記ＣＡＲが、ａ）細胞外抗原特異的ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、ｃ）が、前記キメラ受容体のＣ末端に位置する、細胞。
【請求項２】
ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする核酸をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記ＣＡＲが、１つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項４】
ＩＬ６および／またはＩＬ６受容体アルファを標的とするｓｃＦｖをコードする核酸をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項５】
ＣＡＲ療法に関連する毛細血管漏出を軽減するようペプチドＦＸ０６をコードする核酸をさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の細胞。
【請求項６】
前記シグナル伝達タンパク質が、１コピーまたは複数コピーのＦＫＢＰドメインと融合した状態で発現する、請求項１〜４のいずれかに記載の細胞。
【請求項７】
前記シグナル伝達タンパク質の活性が、二量体化剤の存在下でＦＫＢＰドメインの二量体化により翻訳後に制御される、請求項６に記載の細胞。
【請求項８】
前記二量体化剤がＡＰ２０１８７である、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項１０】
前記抗原特異的ドメインが２種類の抗原を標的とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項１１】
前記２種類の抗原がＭＰＬとＣＤ１２３である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
前記ＣＡＲの抗原特異的ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２３、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤＨ１７９ｂ、ＦＬＴ３、ＧＣＣ、Ｍｕｃ１、ＣＳＦ２ＲＡ、ＧＦＲａ４、ＣＤ３２、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ、ＮＹＢＲ１、ＳＬｅａ、ＣＤ２００Ｒ、ＴＧＦベータＲ２、ＣＤ２７６、ＴＲＯＰ２、ＬＡＭＰ１、ＰＴＫ７、ＤＬＬ３、ＣＤＨ１、ＣＤＨ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ１９、ＴＳＨＲおよびチロシナーゼを標的とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項１３】
前記ＣＡＲの抗原特異的ドメインが、ＭＰＬを標的とし、１６１（配列番号２５００および２５０１）、１７５（配列番号２４９９）、１７８（配列番号２５０３）、１１１（配列番号２５０２）、ＡＢ３１７（配列番号２４０４）、１２Ｅ１０（配列番号２５０５）もしくはｈｕＶＢ２２Ｂｗ５（配列番号２５０６）から選択されるｓｃＦｖフラグメントまたはｈＴＰＯ（配列番号２３２３）もしくはｍＴＰＯ（配列番号２３２３）の細胞外受容体結合ドメインから選択されるリガンドを１つまたは複数含む、請求項９に記載の細胞。
【請求項１４】
前記ＣＡＲの抗原特異的ドメインが、ＣＤ１９を標的とし、ＣＤ１９Ｂｕ１２またはＣＤ１９ＭＭから選択されるｓｃＦｖフラグメントを１つまたは複数含む、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１５】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である、請求項１に記載の細胞。
【請求項１６】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１に記載の細胞。
【請求項１７】
請求項１に記載のＣＡＲをコードする第一のポリヌクレオチドと、請求項１に記載のシグナル伝達タンパク質をコードする第二のポリヌクレオチドとを含む、核酸。
【請求項１８】
前記ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする第三のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１７に記載の核酸。
【請求項１９】
請求項１７または１８に記載の核酸によりコードされるポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１７または１８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２１】
請求項１〜１６のいずれかに記載の細胞、請求項１７〜１８のいずれかに記載の核酸、請求項１９のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項２０に記載のベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項２２】
ＭＰＬ発現癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項１３に記載の細胞を対象に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
前記癌が血液癌である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２４】
前記血液癌が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、リンパ腫、多発性骨髄腫および急性リンパ球性白血病のいずれか１つまたは複数のものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象にチロシンキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含み、前記阻害剤がキナーゼのｓｒｃファミリーを阻害する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記阻害剤がＬｃｋを阻害する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記阻害剤が、ダサチニブ、ポナチニブまたはＡ−７７００４１のいずれか１つまたは複数のものである、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府支援研究または開発に関する記載
本発明は、米国国立衛生研究所により授与された認可番号第ＤＥ０１９８１１号に基づく政府の支援によりなされた。米国政府は本発明に対し一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年３月２９日に出願された米国特許仮出願第６２／３１４，８６４号に対して、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づいて優先権の利益を主張する。この特許仮出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
発明の分野
本明細書で提供されるのは、癌を処置するためのキメラ抗原受容体である。
【背景技術】
【０００４】
本明細書の全ての出版物は、個々の出版物または特許出願それぞれが、具体的に個々に参照により組み込まれると示されているのと同じ程度に、参照により組み込まれる。以下の記載は、本発明の理解に有用であり得る情報を含む。本明細書で提供される情報のいずれかが本請求発明に対する先行技術であるということ、もしくはこれに関連するということ、または、明確にもしくは暗示的に参照されるいずれかの出版物が先行技術であるということを認めるものではない。
【０００５】
養子Ｔ細胞免疫療法は、癌の処置手法の最前線に立っている。Ｔ細胞を遺伝子改変して、腫瘍関連抗原を認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の遺伝子を発現させることができる。ＣＡＲは、合成免疫受容体であり、これは、腫瘍細胞を選択的に死滅させるようにＴ細胞を向け直すことができる。癌免疫療法におけるこれらの使用の一般的な前提は、能動免疫獲得の障壁および漸増動力学を迂回することにより腫瘍標的Ｔ細胞を素早く生成し、「リビングドラッグ」として作用させることである。ＨＬＡペプチド複合体と結合している生理学的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）とは異なり、ＣＡＲは、ペプチドプロセッシングまたは認識されるＨＬＡ発現を必要としない分子と結合する。したがって、ＣＡＲは、患者のハプロタイプに適合する必要があるＴＣＲとは対照的に、任意のＨＬＡバックグラウンドの抗原を認識する。さらに、ＣＡＲは、ＴＣＲ媒介免疫から腫瘍エスケープの一因となる２つの機序の、低下したＨＬＡ発現またはプロテアソーム抗原プロセッシングを有する腫瘍細胞を標的とすることができる。ＣＡＲの広範な適用性の別の特徴は、タンパク質だけでなく炭水化物および糖脂質構造物にも結合する能力であり、これもまた、適用可能な標的の範囲を拡大する。
【０００６】
最初の第１世代ＣＡＲは、ｓｃＦｖ（単鎖可変フラグメント）ベース抗原結合ドメインと、ＣＤ３ζ由来細胞質シグナル伝達ドメインまたはＦｃ受容体γ鎖に連結した、不活性ＣＤ８膜貫通ドメインとの融合により構築された（図１）。
【０００７】
ＣＤ３ζ鎖の凝集はＴ細胞の溶解活性を可能にするには十分であるが、抗原への反復曝露時にインターロイキン２（ＩＬ２）を含む活発なサイトカイン応答の誘発、およびＴ細胞増殖の支援を行うことができなかった。最適活性化および増殖のために、Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体結合およびシグナル伝達、ならびに標的化腫瘍細胞または抗原提示細胞により発現されたリガンド（すなわち、ＣＤ８０／８６、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ）に結合する、Ｔ細胞上の同族の共刺激受容体（すなわち、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０）を介した共刺激シグナル伝達の両方を必要とする。Ｔ細胞共刺激の欠乏を克服す
るために、第一世代ＣＡＲは、Ｔ細胞共刺激受容体の細胞質シグナル伝達ドメインの組み込みによりさらに改変された。これらの第二世代ＣＡＲ（図１）は、改変Ｔ細胞のシグナル伝達強度および持続性を高め、優れた抗腫瘍作用をもたらした。しかし、いずれの第二世代ＣＡＲが最良であるかはわからず、それぞれは、それ自体の強みや弱点を有する。例えば、医院では、４−１ＢＢ設計は、持続性の点では有利であり、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、大部分の患者で少なくとも６ヶ月間にわたり検出可能であり、一方、ＣＤ２８共刺激ドメイン含有ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞は通常、３ヶ月を超えると検出不能であるが、ＣＤ２８ベースＣＡＲ  Ｔ細胞を用いて、より低い重篤度のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）およびより小さいＣＤ１９陰性再発率が観察された。
【０００８】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の成功にもかかわらず、この手法には、いくつかの制約が存在する。改変ＣＡＲ  Ｔ細胞に応答する大部分の患者では、炎症促進性のサイトカインの過剰な放出が、発熱、低血圧、低酸素血症、心機能不全、腎不全および電解質異常を含む、ひとまとめにして「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）と呼ばれる症状を引き起こす。いくつかの事例では、ＣＡＲ療法は、振戦、発作を含む神経系症状をもたらす場合があり、また、致命的になる場合もある。ＣＲＳおよび神経学的合併症の影響を弱める戦略には、免疫抑制剤（例えば、ステロイド）およびトシリズマブ（ＩＬ−６受容体に対するモノクローナル抗体）が含まれる。しかし、これらの戦略は、一律にうまくいくとは限らない。本発明は、上記合併症を防止および／または処置するように、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を制御する新規な手法を提供する。
【０００９】
現在の臨床使用におけるＣＡＲ構築物は、いくつかの異なるタンパク質の融合体であるので、人為的設計によるものである。特に、ＣＡＲ構築物中の共刺激ドメインの組み込みは、受容体を通る非生理学的シグナル伝達をもたらし、これは、次に、それらの毒性の一因となり得る。いくつかのＣＡＲは、持続性抗原非依存性シグナル伝達を示し、これは、無拘束細胞活性化につながり、最終的に、アポトーシス、同族抗原とは無関係の過剰サイトカイン放出、および免疫疲弊に繋がる。Ｆｒｉｇａｕｌｔらは、ＣＤ２８およびＣＤ３ｚを含むいくつかのＣＡＲタンデム型シグナル伝達ドメインは、形質導入一次ヒトＴ細胞の恒常的活性化および増殖をもたらし、これが、ｉｎ  ｖｉｖｏ効力の低下に関連したことを示す（Ｆｒｉｇａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３：３５６−６７，２０１５）。連続的なＴ細胞増殖特性を備えたＣＡＲの表現型を生じると考えられた１つの機序は、細胞表面の高密度のＣＡＲであった（Ｆｒｉｇａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３：３５６−６７，２０１５）。Ｌｏｎｇらは、早期Ｔ細胞枯渇は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の抗腫瘍効力を制限する主要因であること、およびＣＡＲ構造がＣＡＲ  Ｔ細胞を慢性的活性化および枯渇しやすくするのに中心的な役割を有することを示した（Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２１：５８１−９０，２０１５）。彼らは、持続性ＣＡＲ  ＣＤ３−ｚリン酸化が、ＣＡＲ単鎖可変フラグメントの抗原非依存性クラスタリングが引き金になって、抗腫瘍効力を制限するＣＡＲ  Ｔ細胞の早期枯渇を誘導できることを示した（Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２１：５８１−９０，２０１５）。したがって、ＣＲＳなどの過度の毒性のリスクなしに、ＣＡＲ改変Ｔ細胞の長期持続性を達成するために、ＣＡＲ設計を改善する必要性がある。
【００１０】
現在の臨床試験における大抵のＣＡＲ構築物は、マウスモノクローナル抗体に基づいている。これらのマウスモノクローナル抗体ベースの構築物の免疫原性も同様に、それらのｉｎ  ｖｉｖｏ持続性および効力を制限すると想定されている。この問題は、ヒトまたはヒト化抗体をベースにした本明細書に記載のＣＡＲ構築物の使用により克服できる。
【００１１】
免疫応答のポリクローナル的性質は、種々の感染の制御での成功へのキーである。対照的に、現在のＣＡＲ療法は通常、単一抗原および／または単一抗原の単一エピトープの標的化に依存している。標的抗原または標的エピトープの減少は、現在のＣＡＲ療法の失敗の原因となることがよくある。この制限を克服するために、本発明は、複数の抗原に対するおよび単一抗原の複数のエピトープに対するＣＡＲを提供する。これらのＣＡＲは、癌、感染症、自己免疫疾患、アレルギー性疾患および変性疾患などの疾患の防止または処置のために、ポリクローナルな獲得免疫反応をもたらす好適な組み合わせで使用できる。
【００１２】
ＣＤ１９は、免疫療法のための魅力的な標的である。理由は、ＣＤ１９は、大多数のＢ細胞悪性腫瘍により均一に発現され、正常な非造血組織には発現されず、Ｂ系統リンパ球系細胞によってのみ発現されるためである。初期の実験は、抗ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的にＴ細胞を活性化し得ることを示した。これらのＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＤ１９＋一次白血病細胞をインビトロで死滅させ、マウス異種移植モデルにおけるＣＤ１９＋標的細胞を除去可能であった。第１世代ＣＤ１９標的化ＣＡＲ改変Ｔ細胞を用いた初期の臨床成績は期待はずれであったが、第二世代ＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞は、すばらしい臨床的効力を示して多くのＢ細胞悪性腫瘍に対する患者転帰の顕著な改善をもたらし、再発性Ｂ細胞ＡＬＬの患者で劇的な臨床応答が観察されたことは注目に値する。
【００１３】
概念実証としての抗ＣＤ１９  ＣＡＲＴ療法は、ＣＤ１９のＢ細胞への組織制限により、および長期Ｂ細胞欠乏の臨床的許容性により、一部分は成功した。しかし、その他の設定では、正常組織による低レベル発現抗原のＣＡＲＴベース標的化は、顕著な毒性をもたらした。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および骨髄異形成症候群ＭＤＳなどの骨髄性悪性腫瘍における、十分に特徴付けられた、真に腫瘍特異的な表面抗原の不足により、骨髄などの正常組織にも影響を与える可能性のあるＣＡＲ−Ｔ腫瘍標的化戦略を検討することが必要となった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｆｒｉｇａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３：３５６−６７，２０１５
【非特許文献２】Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２１：５８１−９０，２０１５
【発明の概要】
【００１５】
以下の実施形態およびそれらの態様は、システム、組成物、および方法に関連付けて説明および例示するが、それらは代表的な例示であり、範囲を限定するものではないことが意図されている。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明は、癌、感染症、自己免疫疾患および変性疾患の処置のための養子免疫細胞療法で使用できるキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子改変されたエフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞およびＴ細胞）を含む組成物を提供する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメイン（ＡＳＤ）、細胞外ヒンジまたはスペーサー領域（ＨＲ）、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、共刺激ドメイン（ＣＳＤ）および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）を含み、抗原結合ドメインが表２１に示される標的のいずれか１種または複数を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドが本明細書で提供される。一実施形態では、ＣＡＲはＣＤ１９を標的とし、表２１に記載のＢｕ１２のＶＬおよびＶＨを含み、配列番号１４７０および配列番号３２１５に示される。一実施形態では、ＣＡＲはＣＤ１９を標的とし、表２１に記載のＭＭのＶＬおよびＶＨを含み、配列番号１４７１および配列番号３２１６に示される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ（表１）のいずれかおよびバックボーン１〜６２（表２）をコードするポリヌクレオチドが本明細書で提供され、それぞれのバックボーンは、ＣＡＲ成分（表１）および表２に示す１種または複数の補助モジュールを含む。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分およびそれぞれのバックボーンの１種または複数の副成分が単一ポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分は、第１のポリヌクレオチド分子によりコードされ、１種または複数の補助モジュールは、第２のポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、バックボーンは従来のＣＡＲ成分および２種以上の補助モジュールを含み、第１のポリヌクレオチド分子は従来のＣＡＲ成分をコードし、第２のポリヌクレオチド分子は第１の補助分子をコードし、第３のポリヌクレオチド分子は第２の補助分子をコードする。例えば、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１は、単一ポリヌクレオチド分子ポリヌクレオチド分子により、または２つのポリヌクレオチド分子によりコードされ得、第１のポリヌクレオチド分子は従来のＣＡＲ  Ｉをコードし、第２のポリヌクレオチド分子はＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードする。種々の実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩ（表１）またはバックボーン（表２）のＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチド分子は、１種または複数の抗原特異的ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＬ（またはｖＬ）フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＨ（またはｖＨ）フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の抗原に特異的な１種または複数のｓｃＦＶ（またはｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦｖフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の（Ｆａｂ’）２フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のラクダ科ＶＨＨ（またはｖＨＨ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、非免疫グロブリン足場、例えば、ＤＡＲＰＩＮ、アフィボディ、アフィリン、アドネクチン、アフィチン、Ｏｂｏｄｉｅｓ、リピボディ、フィノマー、アルファボディ、アビマー、アトリマー、センチリン、プロネクチン、アンチカリン、クニッツドメイン、アルマジロリピートタンパク質、自己抗原、受容体またはリガンドの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のリガンドを含む。
【００１９】
本明細書に記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。種々の実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩ（表１）またはバックボーン（表２）のＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチド分子によりコードされるポリペプチドは、１種または複数の抗原特異的ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＬ（またはｖＬ）フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＨ（またはｖＨ）フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の抗原に特異的な１種または複数のｓｃＦＶを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦｖフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の（Ｆａｂ’）２フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のラクダ科ＶＨＨ（ｖＨＨ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦｖフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、非免疫グロブリン足場、例えば、ＤＡＲＰＩＮ、アフィボディ、アフィリン、アドネクチン、アフィチン、オーボディ(Ｏｂｏｄｉｅｓ)、リピボディ、フィノマー、アルファボディ、アビマー、アトリマー、センチリン、プロネクチン、アンチカリン、クニッツドメイン、アルマジロリピートタンパク質、自己抗原、受容体またはリガンドの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のリガンドを含む。
【００２０】
従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩ（表１）またはバックボーン１〜６２（表２）のいずれかをコードする核酸を含む１種または複数のベクターが本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態では、それぞれのバックボーンの全ての成分は、単一ベクターによりコードされる。いくつかの実施形態では、バックボーンのそれぞれの成分は、異なるベクターによりコードされる。例えば、バックボーンは、従来のＣＡＲ成分および単一補助モジュールを含み、第１のベクターは従来のＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは補助モジュールをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、バックボーンは、従来のＣＡＲ成分および２種以上の補助モジュールを含み、第１のベクターは従来のＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは補助モジュールをコードするポリヌクレオチドを含む。あるいは、第１のベクターは従来のＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは第１の補助モジュールをコードするポリヌクレオチドを含み、第３のベクターは第２の補助モジュールをコードするポリヌクレオチドを含む。種々の実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーンのＣＡＲ成分をコードするポリヌクレオチド分子をコードするベクターは、１種または複数の抗原特異的ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＬフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＨフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の抗原に特異的な１種または複数のｓｃＦＶを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦｖフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の（Ｆａｂ’）２フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数の単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のラクダ科ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のＦｖフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、非免疫グロブリン足場、例えば、ＤＡＲＰＩＮ、アフィボディ、アフィリン、アドネクチン、アフィチン、Ｏｂｏｄｉｅｓ、リピボディ、フィノマー、アルファボディ、アビマー、アトリマー、センチリン、プロネクチン、アンチカリン、クニッツドメイン、アルマジロリピートタンパク質、自己抗原、受容体またはリガンドの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、１種または複数のリガンドを含む。
【００２１】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１〜６２をコードするポリヌクレオチドをコードするベクターを含む遺伝子改変細胞が本明細書でさらに提供され、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーンからなるＣＡＲは、本明細書に記載の抗原特異的ドメインを含む。種々の実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＶＬフラグメント、ＶＨフラグメント、ＶＨＨドメイン、ｓｃＦｖ、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、（Ｆａｂ’）２フラグメント、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）フラグメント、および／または非免疫グロブリン足場（これらは、抗原特異的ドメインによりコードされる）を介して、癌細胞などの標的細胞上の抗原を標的とする。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＬフラグメントを含む。代表的実施形態では、１種または複数のＶＬフラグメントは、表４に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＬフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１〜２４９の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＬフラグメントをコードするポリペプチドは、配列番号１７８５〜２０２３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号１７８５〜２０２３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）中の配列番号１７８５〜２０２３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号１７８５〜２０２３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数のＶＨフラグメントを含む。代表的実施形態では、１種または複数のＶＨフラグメントは、表６に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＨフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２５９〜４９８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＨフラグメントをコードするポリペプチドは、配列番号２０２８〜２２６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２０２８〜２２６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）中の配列番号２０２８〜２２６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号２０２８〜２２６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数のナノボディ（ＶＨＨドメイン）を含む。代表的実施形態では、１種または複数のＶＨＨドメインは、表７に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＨＨフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号４９９〜５２３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のＶＨＨフラグメントをコードするポリペプチドは、配列番号２２６９〜２２９３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２２６９〜２２９３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）中の配列番号２２６９〜２２９３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号２２６９〜２２９３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数の非免疫グロブリン抗原結合足場を含む。代表的実施形態では、１種または複数の非免疫グロブリン抗原結合足場は、表８に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数の非免疫グロブリン抗原結合足場をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５２４〜５２８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数の非免疫グロブリン抗原結合足場をコードするポリペプチドは、配列番号２２９４〜２２９８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２２９４〜２２９８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号２２６９〜２２９３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数のリガンドを含む。代表的実施形態では、リガンドは、表１０に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数のリガンドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５５３〜５６３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のリガンド結合ドメインをコードするポリペプチドは、配列番号２３２３〜２３３３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２３２３〜２３３３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号２３２３〜２３３３の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、１種または複数のｓｃＦｖを含む。代表的実施形態では、ｓｃＦｖフラグメントは、表１１に記載されている。いくつかの実施形態では、１種または複数のｓｃＦｖフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５６４〜７９８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のｓｃＦｖフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示されるポリペプチド配列をコードする配列、または６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）中の配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有するポリペプチド配列をコードする配列、または標的抗原上の配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合するポリペプチド配列をコードする配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数のｓｃＦｖフラグメントをコードするポリペプチドは、配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）中の配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に８０〜９９％の同一性を有する配列、または標的抗原上の配列番号２３３４〜２５６８の内のいずれか１つまたは複数に示される配列と同じ標的抗原または同じエピトープに結合する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ（表１）および表２で本明細書に記載のバックボーン１〜６２のいずれかをコードするポリヌクレオチドが本明細書で提供され、それぞれのバックボーンは、従来のＣＡＲ成分（表１）および表２に示す１種または複数の補助モジュールを含む。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分およびそれぞれのバックボーンの１種または複数の副成分が単一ポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分は、第１のポリヌクレオチド分子によりコードされ、１種または複数の補助モジュールは、第２のポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、バックボーンは、従来のＣＡＲ成分および２種以上の補助モジュールを含み、第１のポリヌクレオチド分子は、従来のＣＡＲ成分をコードし、第２のポリヌクレオチド分子は、第１の補助分子をコードし、第３のポリヌクレオチド分子は、第２の補助分子をコードする。
【００２８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ（表１）および表２で本明細書に記載のバックボーン１〜６２のいずれかをコードするポリペプチドが本明細書で提供され、それぞれのバックボーンは、ＣＡＲ成分（表１）および表２に示す１種または複数の補助モジュールを含む。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分およびそれぞれのバックボーンの１種または複数の補助モジュール成分をコードするポリペプチドが単一ポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分をコードするポリペプチドは、第１のポリヌクレオチド分子によりコードされ、１種または複数の補助モジュールは、第２のポリヌクレオチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分およびそれぞれのバックボーンの１種または複数の補助モジュール成分をコードするポリペプチドが単一ポリペプチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ成分をコードするポリペプチドは、第１のポリペプチド分子によりコードされ、１種または複数の補助モジュールは、第２またはさらに多くのポリペプチド分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、バックボーンは従来のＣＡＲ成分および２種以上の補助モジュールを含み、第１のポリヌクレオチド分子は従来のＣＡＲ成分をコードし、第２のポリヌクレオチド分子は第１の補助分子をコードし、第３のポリヌクレオチド分子は第２の補助分子をコードする。いくつかの実施形態では、バックボーンは従来のＣＡＲ成分および２種以上の補助モジュールを含み、第１のポリペプチド分子は従来のＣＡＲ成分をコードし、第２のポリペプチド分子は第１の補助分子をコードし、第３のポリペプチド分子は第２の補助分子をコードする。
【００２９】
いくつかの実施形態では、１種または複数の補助モジュールをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８５０〜９０４の内のいずれか１つまたは複数に示される配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数の補助モジュールをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２６１３〜２６６７の内のいずれか１つまたは複数に示されるポリペプチド配列をコードする配列、または配列番号２６１３〜２６６７の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に７０〜９９％の同一性を有するポリペプチド配列をコードする配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。いくつかの実施形態では、１種または複数の補助モジュールをコードするポリペプチドは、配列番号２６１３〜２６６７の内のいずれか１つまたは複数に示される配列、または配列番号２６１３〜２６６７の内のいずれか１つまたは複数に示される配列に７０〜９９％の同一性を有する配列を含む、その配列からなるまたはその配列から本質的になる。
【００３０】
代表的実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが目的の抗原を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードする核酸は、表１９に記載されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、表１９に記載の目的の抗原を標的とするバックボーン１をコードする核酸フラグメントの配列は、配列番号９２７〜１１９６に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、表１９に記載の目的の抗原を標的とするバックボーン１をコードするポリペプチド配列は、配列番号２６７２〜２９４１に示されている。配列番号９２７〜１１９６の核酸配列および配列番号２６７２〜２９４１のポリペプチド配列はまた、ピューロマイシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰｕｒｏＲ）フラグメントをコードし、このフラグメントは細胞の選択に使用できるが、ＣＡＲの機能に不可欠なものではない。
【００３１】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とし、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離核酸フラグメントの配列は、配列番号９２７〜９４１に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とし、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離ポリペプチドの配列は、配列番号２６７２〜２６８６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５６４〜５７７および配列番号２３３４〜２３４７に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３２】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬまたはトロンボポエチン受容体を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とし、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰを共発現する単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１１１７〜１１２４に示されている。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号２８６２〜２８６９に示されている。いくつかの実施形態では、ＭＰＬを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２９〜７３６および配列番号２４９９〜２５０６に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターも本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３３】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１０９に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とする単離ポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８５４に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２３および配列番号２４９３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３４】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１１１０に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号２８５５に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２４および配列番号２４９４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３５】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とする単離核酸の配列は、配列番号１０７８に示されている。代表的実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするポリペプチドの配列は、配列番号２８２３に示されている。いくつかの実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７０３および配列番号２４７３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３６】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９９５〜９９６に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７４０〜２７４１に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６２８および配列番号２３９８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３７】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＡＬＫを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＡＬＫを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９４６〜９４７に示されている。代表的実施形態では、ＡＬＫを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２６９１〜２６９２に示されている。いくつかの実施形態では、ＡＬＫを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５８２〜５８３および配列番号２３５２〜２３５３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＡＬＫを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＡＬＫを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＡＬＫを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３８】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＢＣＭＡを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＢＣＭＡを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９５１〜９５７に示されている。代表的実施形態では、ＢＣＭＡを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２６９６〜２７０２に示されている。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５８６〜５９２および配列番号２３５６〜２３６２に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＢＣＭＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＢＣＭＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＢＣＭＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００３９】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２０を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ２０を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９６４〜９７６に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ２０を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７０９〜２７２１に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５９６〜５９７；５９９〜６１０および配列番号２３６６〜２３６７；２３６９〜２３８０に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４０】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２２を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ２２を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９７７〜９８０および配列番号１１９２〜１１９６に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ２２を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７２２〜２７２５および配列番号２９３７〜２９４１に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５９８、６１１〜６１３および配列番号２３６８、２３８１〜２３８４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２２を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４１】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３０を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ３０を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９８１〜９８２に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ３０を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７２６〜２７２７に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６１４〜６１５および配列番号２３８４〜２３８５に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３０を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４２】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ３２を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９８３に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ３２を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７２８に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６１６および配列番号２３８６に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４３】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３３を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ３３を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９８４〜９９１に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ３３を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７２９〜２７３６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６１７〜６２４および配列番号２３８７〜２３９４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３３を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４４】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１２３を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ１２３を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９９８〜１０１０に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ１２３を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７４３〜２７５５に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６３０〜６４２および配列番号２４００〜２４１２に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１２３を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１２３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１２３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４５】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１３８を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ１３８を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０１１に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ１３８を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７５６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３８を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６４３および２４１３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１３８を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１３８を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１３８を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４６】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＬＬ１を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＬＬ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０２４〜１０２９に示されている。代表的実施形態では、ＣＬＬ１を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７６９〜２７７４に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＬＬ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６５５〜６６０および配列番号２４２５〜２４３０に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＬＬ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＬＬ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＬＬ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４７】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳ１を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＳ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０３１〜１０３９に示されている。代表的実施形態では、ＣＳ１を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７７６〜２７８４に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＳ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６６２〜６７０および配列番号２４３２〜２４４０に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４８】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳＦ２ＲＡを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＳＦ２ＲＡを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０４０〜１０４１に示されている。代表的実施形態では、ＣＳＦ２ＲＡを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７８５〜２７８６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ２ＲＡを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６７１〜６７２および配列番号２４４１〜２４４２に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳＦ２ＲＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳＦ２ＲＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＳＦ２ＲＡを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００４９】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＤＬＬ３を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０４４〜１０４５に示されている。代表的実施形態では、ＤＬＬ３を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７８９〜２７９０に示されている。いくつかの実施形態では、ＤＬＬ３を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６７３〜６７４および配列番号２４４３〜２４４４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５０】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＰＲＣ５Ｄを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０７０〜１０７３に示されている。代表的実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８１５〜２８１８に示されている。いくつかの実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６９５〜６７４および配列番号２４６５〜２４６８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＰＲＣ５Ｄを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＰＲＣ５Ｄを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＰＲＣ５Ｄを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５１】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９５９、１０８９〜１０９２に示されている。代表的実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７０４、２８３４〜２８３７に示されている。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５８１、７０５〜７０８および配列番号２３５１、２４７５〜２４７８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５２】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１１Ｒａを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＩＬ１１Ｒａを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０９９に示されている。代表的実施形態では、ＩＬ１１Ｒａを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８４４に示されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ１１Ｒａを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７１５および２４８５に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１１Ｒａを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１１Ｒａを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１１Ｒａを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５３】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１３Ｒａ２を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＩＬ１３Ｒａ２を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１０１〜１１０２に示されている。代表的実施形態では、ＩＬ１３Ｒａ２を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８４６〜２８４７に示されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ１３Ｒａ２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７１６〜７１７および配列番号２４８６〜２４８７に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１３Ｒａ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１３Ｒａ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＩＬ１３Ｒａ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５４】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＡＭＰ１を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＬＡＭＰ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１０４〜１１０５に示されている。代表的実施形態では、ＬＡＭＰ１を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８４９〜２８５０に示されている。いくつかの実施形態では、ＬＡＭＰ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７１９〜７２０および配列番号２４８９〜２４９０に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＡＭＰ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＡＭＰ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＡＭＰ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５５】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＮＹ−ＢＲ１を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＮＹ−ＢＲ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１３１に示されている。代表的実施形態では、ＮＹ−ＢＲ１を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８７６に示されている。いくつかの実施形態では、ＮＹ−ＢＲ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７４２および２５１２に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＮＹ−ＢＲ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＮＹ−ＢＲ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＮＹ−ＢＲ１を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５６】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１６０〜１１６１に示されている。代表的実施形態では、ＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９０５〜２９０６に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７７０〜７７１および配列番号２５４０〜２５４１に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＩＭ１／ＨＡＶＣＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５７】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＲＯＰ２を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＲＯＰ２を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１６５〜１１６６に示されている。代表的実施形態では、ＴＲＯＰ２を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９１０〜２９１１に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＲＯＰ２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７７４〜７７５および配列番号２５４４〜２５４５に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＲＯＰ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＲＯＰ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＲＯＰ２を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５８】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＨＲを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＳＨＲを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１６７〜１１７０に示されている。代表的実施形態では、ＴＳＨＲを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９１２〜２９１４に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＳＨＲを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７７６〜７７８および配列番号２５４６〜２５４８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＨＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＨＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＨＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００５９】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＬＰＲを標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＳＬＰＲを標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１７１に示されている。代表的実施形態では、ＴＳＬＰＲを標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９１６に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＳＬＰＲを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７７９および２５４９に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＬＰＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸フラグメントによりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＬＰＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＳＬＰＲを標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６０】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ１９を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤＨ１９を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０１９および１１８０に示されている。代表的実施形態では、ＣＤＨ１９を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７６４および２９２５に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤＨ１９を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６５１、７８８および配列番号２４２１および２５５８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ１９を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６１】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ６を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤＨ６を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０１７〜１０１８に示されている。代表的実施形態では、ＣＤＨ６を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７６１〜２７６２に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤＨ６を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６４８〜６４９および配列番号２４１８〜２４１９に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ６を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ６を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤＨ６を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６２】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ３２４を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１０１４〜１０１５に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ３２４を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７５９〜２７６０に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２４を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６４６〜６４７および配列番号２４１６〜２４１７に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６３】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１５５に示されている。代表的実施形態では、ＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９００に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７６５および配列番号２５３５に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲガンマ−デルタ（ＴＣＲｇｄ）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６４】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１５１〜１１５２に示されている。代表的実施形態では、ＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８９６〜２８９７に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７６１〜７６２および配列番号２５３１〜２５３２に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ１（ＴＣＲベータ１定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６５】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１５３〜１１５４に示されている。代表的実施形態では、ＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２８９８〜２８９９に示されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７６３〜７６４および配列番号２５３３〜２５３４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＴＣＲＢ２（ＴＣＲベータ２定常鎖）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６６】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１８２〜１１８３に示されている。代表的実施形態では、ＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９２７〜２９２８に示されている。いくつかの実施形態では、ＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７９０〜７９１および配列番号２５６０〜２５６１に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００６７】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする（表１９）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号９６１〜９６２に示されている。代表的実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２７０７〜２７０８に示されている。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする受容体は、ＣＤ１６の細胞外リガンド結合ドメイン（ＦＣＧＲ３Ａ）またはそのバリアントＶ１５８またはそのバリアントＦ１５８を含む、それからなるまたはそれから基本的になる。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を使って、抗体依存性細胞傷害作用を強化し、および／または抗体免疫療法、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０１３９９４３Ａ１号に記載のような癌免疫療法を強化できる。
【００６８】
代表的実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが目的の抗原を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードする核酸は、表２０に記載されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、表２０に記載の目的の抗原を標的とするバックボーン３２をコードする核酸フラグメントの配列は、配列番号１１９７〜１４６６に示されている。従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、表２０に記載の目的の抗原を標的とするバックボーン３２をコードするポリペプチド配列は、配列番号２９４２〜３２１１に示されている。配列番号１１９７〜１４６６の核酸配列および配列番号２９４２〜３２１１のポリペプチド配列はまた、ピューロマイシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰｕｒｏＲ）フラグメントをコードし、このフラグメントは細胞の選択に使用できるが、ＣＡＲの機能に不可欠なものではない。
【００６９】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１１９７〜１２１１に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号２９４２〜２９５６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５６４〜５７７および配列番号２３３４〜２３４７に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７０】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１３８７〜１３９４に示されている。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号３１３２〜３１３９に示されている。いくつかの実施形態では、ＭＰＬを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２９〜７３６および配列番号２４９９〜２５０６に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７１】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１３７９に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号３１２４に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２３および配列番号２４９３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７２】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１３８０に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号３１２５に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２４および配列番号２４９４に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７３】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１３４８に示されている。代表的実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号３０９３に示されている。いくつかの実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７０３および配列番号２４７３に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＧＲＰ−７８を標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７４】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とする（表２０）バックボーン３２をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とするＶＬ−ＶＨの核酸配列は、配列番号１３８１に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とするＶＬ−ＶＨのポリペプチド配列は、配列番号３１２６に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６２８および配列番号２３９８に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン３２をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ７９ｂを標的とするバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７５】
一実施形態では、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする（表２０）バックボーン１をコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１２３２〜１２３３に示されている。代表的実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号２９７７〜２９７８に示されている。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とする受容体は、ＣＤ１６の細胞外リガンド結合ドメイン（ＦＣＧＲ３Ａ）またはそのバリアントＶ１５８またはそのバリアントＦ１５８を含む、それからなるまたはそれから基本的になる。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが免疫グロブリンのＦｃ領域を標的とするバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を使って、抗体依存性細胞傷害作用を強化し、および／または抗体免疫療法、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０１３９９４３Ａ１号に記載のような癌免疫療法を強化できる。
【００７６】
代表的実施形態では、核酸は、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードし、ＣＡＲの抗原特異的ドメインが目的の抗原を標的とする（表２１）。従来のＣＡＲ  ＩＩおよび表２１に記載の目的の標的化抗原をコードする核酸フラグメントの配列は、配列番号１４６７〜１７３０に示されている。従来のＣＡＲ  ＩＩおよび表２１に記載の目的の標的化抗原を含むポリペプチドの配列は、配列番号３２１２〜３４７５に示されている。配列番号１４６７〜１７３０の核酸配列および配列番号３２１２〜３４７５のポリペプチド配列はまた、ピューロマイシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰｕｒｏＲ）フラグメントをコードし、このフラグメントは細胞の選択に使用できるが、ＣＡＲの機能に不可欠なものではない。同様に、表２２に記載のいくつかのＣＡＲ構築物は、ＰｕｒｏＲまたは高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）をコードしており、これは、これらのＣＡＲ構築物の機能にとって不可欠ではないが、これらのＣＡＲ構築物を発現している細胞の選択または濃縮のために使用し得る。
【００７７】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１４７０〜１４８１、１７７２に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３２１５〜３２２５、３５１７に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５６６〜５７７および配列番号２３３６〜２３４７に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ１９を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７８】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬまたはトロンボポエチン受容体を標的とする（表２１）、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的する単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１６５７〜１６６４、１７３１〜１７３７に示されている。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３４０２〜３４０９、３４７６〜３４８４に示されている。いくつかの実施形態では、ＭＰＬを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２９〜７３６および配列番号２４９９〜２５０６に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＰＬを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００７９】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１６４９に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とする単離ポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号３３９４に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ１を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２３および配列番号２４９３に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ１を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８０】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１６５０に示されている。代表的実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３３９５に示されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｍ２を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７２４および配列番号２４９４に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＬｙｍ２を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８１】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＤＬＬ３を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１３１４〜１３１５に示されている。代表的実施形態では、ＤＬＬ３を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３０５９〜３０６０に示されている。いくつかの実施形態では、ＤＬＬ３を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６７３〜６７４および配列番号２４４３〜２４４４に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＤＬＬ３を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８２】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ３２４を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１５５４〜１５５５に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ３２４を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３２９９〜３３００に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２４を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６４６〜６４７および配列番号２４１６〜２４１７に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ３２４を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８３】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２７６を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＣＤ２７６を標的とする核酸フラグメントの配列は、配列番号１５５３に示されている。代表的実施形態では、ＣＤ２７６を標的とする単離ポリペプチドフラグメントの配列は、配列番号３２９８に示されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号６４５および２４１５に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２７６を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２７６を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＣＤ２７６を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８４】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＰＴＫ７を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＰＴＫ７を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１６８３〜１６８４に示されている。代表的実施形態では、ＰＴＫ７を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３４２８〜３４２９に示されている。いくつかの実施形態では、ＰＴＫ７を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７５３〜７５４および配列番号２５２３〜２５２４に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＰＴＫ７を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＰＴＫ７を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＰＴＫ７を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８５】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１４８５に示されている。代表的実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３２３０に示されている。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号５８１および２３５１に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０を標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。
【００８６】
一実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＨＣクラスＩ複合体に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする（表２１）従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする単離核酸が本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする単離核酸フラグメントの配列は、配列番号１７１２〜１７１４に示されている。代表的実施形態では、ＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする単離ポリペプチドの配列は、配列番号３４５７〜３４５９に示されている。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とするｓｃＦｖフラグメントは表１１に記載されており、配列番号７８０〜７８２および配列番号２５５０〜２５５２に示されている。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸によりコードされるポリペプチドも本明細書で提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターが本明細書でさらに提供される。ＣＡＲの抗原特異的ドメインがＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたチロシナーゼ由来ペプチドを標的とする、従来のＣＡＲ  ＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）も本明細書で提供される。代表的実施形態では、ＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ−Ａ２）に組み込まれたＣＡＲにより標的とされるチロシナーゼ由来ペプチドの配列は、−ＹＭＤＧＴＭＳＱＶ−（表２３）である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲまたは新規バックボーン（従来のＣＡＲおよび補助モジュールを含む）をコードする核酸配列を含むベクターが本明細書で提供される。代表的実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターの内のいずれかである。ある実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のレンチウイルスベクターである。ある実施形態では、ベクターはｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１α（配列番号９０５）である。別の実施形態では、ベクターはｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＤＷＰＲＥ（配列番号９０６）である。別の実施形態では、ベクターはＭＳＣＶ−Ｂｇｌ２−ＡｖｒＩＩ−Ｂａｍ−ＥｃｏＲ１−Ｘｈｏ−ＢｓｔＢ１−Ｍｌｕ−Ｓａｌ−ＣｌａＩ．Ｉ０３（配列番号９０７）である。別の実施形態では、ベクターはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターである。別の実施形態では、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターは、ｐＳＢｂｉ−Ｐｕｒ（配列番号９０８）である。一実施形態では、ベクターは、さらにプロモーターを含む。プロモーターの非限定的例には、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−ｌａプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、またはホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが含まれる。一実施形態では、プロモーターはＥＦ−１プロモーター（配列番号９０９）である。一実施形態では、プロモーターは、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩおよびバックボーン１〜６２をコードするポリヌクレオチド配列の発現を、このような発現が望ましい場合にオンにすることができ、この発現が望ましくない場合にオフにできるように動作可能に連結された分子スイッチを提供する誘導性プロモーターである。誘導性プロモーターの例には、限定されないが、メタロチオネイン誘導性プロモーター、グルココルチコイド誘導性プロモーター、プロゲステロン誘導性プロモーター、およびテトラサイクリン誘導性プロモーターが挙げられる。ＲｈｅｏＳｗｉｔｃｈ（登録商標）システム（Ａｇａｒｗａｌ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、本発明の従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２の発現を制御するための、別の転写制御因子プラットホームである。一実施形態では、ＣＡＲの活性を制御するために最近記載されたように、１つの抗原に対する合成ノッチ受容体が、第２の抗原を標的とする従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２の発現を誘導する、組み合わせ的に活性化されるＴ細胞回路を設計できる（Ｒｏｙｂａｌ  ＫＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１６４：１−１０  ２０１６）。一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のインビトロ転写ベクター（例えば、ＲＮＡをＤＮＡ分子から転写するベクター）である。一実施形態では、ベクター中の核酸配列は、ポリＡテール、例えば、本明細書に記載の、例えば、約１００〜１５０個のアデノシン塩基を含むポリＡテールをさらに含む。例えば、約１５０個の���デノシン塩基（配列番号９２２）を含むポリＡテールが本明細書で意図されている。一実施形態では、ベクター中の核酸配列は、３’ＵＴＲ、例えば、ヒトベータグロブリン由来の少なくとも１つの３’ＵＴＲ反復を含む本明細書に記載の３’ＵＴＲ、をさらに含む。
【００８８】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターは、１種または複数の抑制分子をコードする核酸配列をさらに含み得る。本明細書で意図されている抑制分子の非制限的例には、ｉｎｈＫＩＲ細胞質ドメイン；膜貫通ドメイン、例えば、ＫＩＲ膜貫通ドメイン；阻害剤細胞質ドメイン、例えば、ＩＴＩＭドメイン、例えば、ｉｎｈＫＩＲ  ＩＴＩＭドメインが挙げられる。ＬＡＩＬＲ１の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む代表的抑制分子は、配列番号８４９および２６１２で表される。異なる抗原を標的とする抑制性の従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２は、表１１に記載のｓｃＦｖフラグメントをＬＡＩＬＲ１（配列番号８４９および２６１２）の膜貫通および細胞質ドメインに連結することにより容易に構築できる。このような抑制性ＣＡＲは、単独で、または活性化ＣＡＲ、例えば、表１９〜２２に記載のＣＡＲと組み合わせて発現されさせることができる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲのＡＳＤは、標的抗原に対し、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−６Ｍまたは１０−７Ｍの結合親和性（ＫＤ）を有する。
【００９０】
遺伝子改変細胞、例えば、本明細書に記載の核酸、ポリペプチドまたはベクターを含む免疫エフェクター細胞（例えば、細胞集団、例えば、免疫エフェクター細胞集団）および／または幹細胞（例えば、造血幹細胞、末梢血幹細胞、骨髄由来幹細胞、免疫幹細胞、誘導多能性幹細胞またはｉＰＳＣ）も本明細書で提供される。
【００９１】
一実施形態では、細胞はヒトＴ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。免疫細胞の非限定的例には、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。さらに、Ｔ細胞の非限定的例には、Ｔｒｅｇ，ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＣＤ４＋  Ｔ細胞が含まれる。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞は、組織常在性ガンマ−デルタＴ細胞または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であり得、これらは、本発明のＣＡＲおよび新規バックボーンの発現の前および／または後でインビトロ培養および増殖できる。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はイヌの細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はサルの細胞である。
【００９２】
一実施形態では、細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞は１種または複数の内在性Ｔ細胞受容体鎖を欠いている。本発明による機能的ＴＣＲの発現を安定的に欠いているＴ細胞は、種々の手法、例えば、内在性Ｔ細胞受容体鎖を標的とするジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９およびｓｈＲＮＡを用いて製造し得る。ｓｈＲＮＡに関する限定されない代表的方法は、米国特許出願公開第２０１２／０３２１６６７Ａ１号に記載されている。ＴＣＲのαおよびβ鎖の定常領域を標的とするＺＦＮを用いた内在性ＴＣＲ発現の除去に関する別の限定されない代表的方法が記載されている（Ｔｏｒｉｋａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９：２４，２０１２）。
【００９３】
一実施形態では、細胞は幹細胞であり、幹細胞は１種または複数の内在性Ｔ細胞受容体鎖を欠いている。別の実施形態では、細胞は幹細胞であり、ＣＡＲの１種または複数の標的抗原が、もはやＣＡＲにより認識されない形態に欠失または変異している。非限定的例では、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＣＤ１９を欠乏させた幹細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造されたＢ細胞は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。別の非限定的例では、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、内在性ＣＤ１９遺伝子がＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＣＡＲにより標的とされない形態に変異された幹細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造されたＢ細胞は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。別の非限定的例では、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞中で発現され、自己または同種ドナー由来の幹細胞は、ＣＡＲの標的抗原の発現を欠くかまたはＣＡＲにより認識されない変異型のＣＡＲ標的抗原を発現するように遺伝子改変される。別の非限定的例では、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＣＤ１９を欠乏させた自己または同種造血幹細胞と共に患者に注入されるＴ細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造されたＢ細胞は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。別の非限定的例では、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、内在性ＣＤ１９遺伝子がＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＣＡＲにより標的とされない形態に変異された自己または同種造血幹細胞と共に患者に注入されるＴ細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造されたＢ細胞は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。その他の非限定的例では、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、ジンクフィンガーヌクレアーゼまたはｓｉＲＮＡ／ｓｈＲＮＡによる手法を、抗原が疾患関連または病原性細胞上に発現される特定の疾患の処置のために、これらの抗原を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞を投与される対象の幹細胞中のその他の内在性抗原（例えば、ＭＰＬ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、など）を変異または除去するために使用される。非限定的例では、ＭＰＬを標的とするＣＡＲは、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＭＰＬを欠乏させた幹細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造された血液細胞は、ＭＰＬ標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。別の非限定的例では、ＭＰＬ（例えば、配列番号１６５７〜１６６０）を標的とするＣＡＲは、内在性ＭＰＬ遺伝子がＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＭＰＬ指向性ＣＡＲにより標的とされない形態に変異された幹細胞中で発現され、その結果、このような幹細胞により製造された血液細胞は、ＭＰＬ標的化ＣＡＲを発現するＴ細胞により除去されない。別の非限定的例では、ＭＰＬを標的とするＣＡＲは、内在性ＭＰＬ遺伝子がＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて、ＣＡＲにより標的とされない形態に変異された自己または同種造血幹細胞と共に患者に注入されるＴ細胞中で発現される。代表的実施形態では、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはジンクフィンガーヌクレアーゼによるＭＰＬ指向性ＣＡＲにより標的とされない形態への変異のために標的とされるＭＰＬ遺伝子の領域は、ペプチド配列−ＰＷＱＤＧＰＫ−をコードする。
【００９４】
種々の実施形態では、ＣＡＲは、癌細胞などの病原性細胞または疾患関連細胞上の、１、２、３、４種またはそれを超える抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、２種以上のＡＳＤを含むＣＡＲは、病原性細胞または疾患関連細胞上の同じ抗原を標的とする。別の実施形態では、２種以上のＡＳＤを含むＣＡＲは、病原性細胞または疾患関連細胞上の異なる抗原を標的とする。
【００９５】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、補助モジュールをコードする、核酸、ポリペプチドまたはベクターをさらに含む。いくつかの実施形態では、補助モジュールは、ＣＡＲに付随する毒性を減らすまたは防止する。いくつかの実施形態では、補助モジュールは、サイトカインまたはケモカイン阻害剤、例えば、関与するサイトカインおよび／またはケモカインに対するｓｉＲＮＡ（ｓｈＲＮＡまたはＭｉｒベースｓｈＲＮＡ）であり、ＣＡＲと同じベクターから発現される。例えば、ＩＬ６、ＩＬ１０およびＩＴＮγの内のいずれか１種または複数を標的とし得る。いくつかの実施形態では、ケモカインまたはサイトカインの発現は、ケモカインまたはサイトカインまたはその受容体を標的とするブロッキングｓｃＦｖフラグメントの発現により阻止できる。このような補助モジュールの非限定的例には、ＩＬ６Ｒ−３０４−ｖＨＨ（配列番号８８４および２６４７）、ＩＧＨＳＰ２−ＩＬ６Ｒ−３０４−ＶＨＨ−ＡＬＢ８−ＶＨＨ（配列番号８８６および２６４９）、ＣＤ８ＳＰ２−ＰＤ１−４Ｈ１−ｓｃＦｖ（配列番号８８９および２６５２）、ＣＤ８ＳＰ２−ＰＤ１−５Ｃ４−ｓｃＦｖＣＤ８ＳＰ２−ＣＴＬＡ４−イピリムマブ−ｓｃＦｖ（配列番号８９１および２６５４）、ＣＤ８ＳＰ２−ＰＤ１−４Ｈ１−Ａｌｂ８−ｖＨＨ（配列番号８９２および２６５５）、ＣＤ８ＳＰ２−ＰＤ１−５Ｃ４−Ａｌｂ８−ｖＨＨ（配列番号８９３および２６５６）、ＣＤ８ＳＰ２−ＣＴＬＡ４−イピリムマブ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ（配列番号８９４および２６５７）、ＩｇＳＰ−ＩＬ６−１９Ａ−ｓｃＦＶ（配列番号８９９および２６６２）、ＣＤ８ＳＰ２−ｓＨＶＥＭ（配列番号９０１および２６６４）、ＣＤ８ＳＰ２−ｓＨＶＥＭ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ（配列番号９０２および２６６５）、ｈＴＥＲＴ（配列番号９０３および２６６６）、ヘパリナーゼ（配列番号９０４および２６６７）、ＩＬ１２Ｆ（配列番号８６３および２６２６）、４１ＢＢ−Ｌ（配列番号８６４  ２６２７）、ＣＤ４０Ｌ（配列番号８６５  ２６２８）およびＢｒｄ４（配列番号９１９）を標的とするｓｈＲＮＡが挙げられる。本発明の従来のＣＡＲおよび新規バックボーン１〜６２をクローン化するのに使用できるＨ１プロモーター駆動ｓｈＲＮＡ標的化Ｂｒｄ４を発現する代表的ベクターは、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ｓｈＲＮＡ−ＢＲＤ４−ＤＷＰＲＥ（配列番号９２０）である。ｓｈＲＮＡ標的化Ｂｒｄ４を共発現するバックボーン１中の代表的ＣＡＲは、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ−Ｈ１−ｐｒｏｍ−ｓｈＲＮＡ−ＢＲＤ４−ＤＷＰＲＥ（配列番号９２１）である。
【００９６】
毛細管漏出症候群は、ＣＡＲの別の主要合併症である。フィブリンの天然プラスミン消化生成物のペプチドＢＢ１５−４２（ＦＸ０６とも呼ばれる）は、血液漏出を大きく減らすことが示された（Ｇｒｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ４：ｅ５３９１，２００９）。ＦＸ０６ペプチドは、毛細血管漏出を阻止することが示された。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ＦＸ０６（配列番号９００および２６６３）は、同じベクターから本明細書に記載のＣＡＲと共発現させて、ＣＡＲ療法に関連する毛細血管漏出を軽減できる。ＦＸ０６を共発現する代表的ＣＡＲの核酸およびタンパク質配列は、それぞれ、配列番号１７６４および３５０９により示される。
【００９７】
Ｔ細胞を用いた養子細胞療法のための現在の技術の制限は、患者に注入された場合の、遺伝子改変Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞の限られた寿命にある。遺伝子改変Ｔ細胞の寿命を延長するために、Ｔ細胞の増殖を刺激するおよび／または活性化誘導細胞死からそれらを保護するための、いくつかのウイルス性および細胞タンパク質を連結したＣＡＲを発現するベクターが本明細書で提供される。しかしながら、これらのタンパク質の使用は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞に限定されず、それらを使って、養子免疫療法の目的に使用され得る任意の免疫細胞の寿命を延長でき、これらの免疫細胞には、限定されないが、任意のＴ細胞（例えば、自己Ｔ細胞または同種Ｔ細胞）、Ｔ細胞サブセット（例えば、ＣＤ８、ＣＤ４、ＴＩＬ）、特定の腫瘍抗原または感染病原体に対するＴ細胞、外来性のＴ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＴＣＲ遺伝子療法）、および合成またはキメラＴ細胞受容体を発現するＴ細胞が含まれる。ＣＡＲ発現Ｔ細胞の増殖および生存を促進できるいくつかのタンパク質のＤＮＡおよびタンパク質配列は、それぞれ、配列番号８６２〜８８２および配列番号２６２５〜２６４５（表１６）に与えられている。代表的実施形態では、これらのタンパク質には、本明細書に記載のウイルスタンパク質Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ（配列番号８６６および２６２９）およびＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ（配列番号８６７および２６３０）の内の１種または複数が含まれる。さらなる実施形態では、これらのタンパク質には、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴ−アルファ（配列番号８７３および２６３６）およびｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号８７４および２６３７）が含まれる。さらなる実施形態では、これらのタンパク質には、ヒトＴ細胞白血病／リンパ腫ウイルス（ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２）由来のＴａｘおよびＴａｘ変異体（配列番号８７５〜８７７および配列番号２６３８〜２６４０）、ヘルペスウイルスアテレス由来Ｔｉｏタンパク質、ヘルペスウイルスサイミリ由来ｓｔｐＣ  Ｔｉｐ、の内のいずれか１種、２種または複数が含まれる。しかし、Ｔ細胞の生存と増殖を推進するためのウイルス性および細胞質タンパク質の使用は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞に限定されない。さらなる実施形態では、これらのウイルス性および細胞質タンパク質を用いて、外来性Ｔ細胞受容体または合成Ｔ細胞受容体を発現するものを含む任意のＴ細胞の生存および増殖を促進できる。
【００９８】
一実施形態では、Ｔ細胞の増殖を刺激すること、および／または活性化誘導細胞死から保護することが知られているウイルス性および細胞質タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞中で構成的に発現させることができる。別の実施形態では、Ｔ細胞の増殖を刺激すること、および／または活性化誘導細胞死から保護することが知られているウイルス性および細胞質タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞中で、例えば、誘導性プロモーターを使って誘導方式で発現させることができる。誘導性プロモーターの例には、限定されないが、メタロチオネイン誘導性プロモーター、グルココルチコイド誘導性プロモーター、プロゲステロン誘導性プロモーター、およびテトラサイクリン誘導性プロモーターが挙げられる。ＲｈｅｏＳｗｉｔｃｈ（登録商標）システムは、本発明のＣＡＲの発現を制御するための別の転写制御因子プラットホームである（Ａｇａｒｗａｌ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）。別の実施形態では、Ｔ細胞の増殖を刺激すること、および／または活性化誘導細胞死から保護することが知られているウイルス性および細胞質タンパク質の活性は、二量体化ドメインとの融合体中でそれらを発現することにより制御される。二量体化ドメインの非限定的例には、ＦＫＢＰ（配列番号８５７〜８５８および配列番号２６２０および２６２１）、ＦＫＢＰｘ２（配列番号８５９および２６２２）およびＭｙｒ−ＦＫＢＰが挙げられる。ＦＫＢＰドメインとの融合体中のいくつかのウイルス性および細胞質タンパク質の非限定的例は、配列番号８７８〜８８２および配列番号２６４１〜２６４５（表１６）で与えられる。ＦＫＢＰ二量体化ドメイン（単一または複数）との融合対中でウイルスタンパク質を共発現する代表的ＣＡＲ構築物のＤＮＡおよびタンパク質配列は、配列番号１７５５〜１７５８および配列番号３５００〜３５０３で与えられる。
【００９９】
さらに、Ｓｒｃ阻害剤を使って、ＣＡＲ発現細胞の投与に付随する毒性を防止および／または処置することができる。いくつかの実施形態では、Ｓｒｃ阻害剤は、遺伝子改変Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲまたは外来性のＴＣＲまたはキメラＴＣＲを発現するＴ細胞）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒ）（ＢｉＴＥ）およびＤＡＲＴ（二重親和性再標的化タンパク質）の使用に付随するサイトカイン放出症候群および神経学的合併症の処置に特に有用である。
【０１００】
疾患の処置を必要としている対象を処置する方法も本明細書で提供され、該方法は、１種または複数の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする治療有効量の核酸、１種または複数のＣＡＲおよび少なくとも１種の補助モジュール（バックボーン１〜６２）をコードする治療有効量の核酸、１種または複数の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸によりコードされる治療有効量のポリペプチド、１種または複数のＣＡＲおよび少なくとも１種の補助モジュール（バックボーン１〜６２）をコードする核酸によりコードされる治療有効量のポリペプチド、１種または複数の従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸を含む本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞、または１種または複数の従来のＣＡＲおよび少なくとも１種の補助モジュール（バックボーン１〜６２）をコードする核酸を含む本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含む。一実施形態では、核酸、ポリペプチド、ベクターおよび遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  ＩＩを含む。一実施形態では、核酸、ポリペプチド、ベクターおよび遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１を含む。一実施形態では、核酸、ポリペプチド、ベクターおよび遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２を含む。一実施形態では、ＣＡＲにより処置または予防される疾患は癌である。他の実施形態では、ＣＡＲにより処置または予防される疾患は、感染症、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、変性疾患、またはこれらの組み合わせである。
【０１０１】
一実施形態では、疾患の重症度の処置、抑制、低減、疾患の転移の予防、および／または疾患の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法が本明細書で提供され、該方法は、対象に１種または複数の従来のＣＡＲをコードする核酸を含む治療有効量の遺伝子改変細胞を投与することを含む。一実施形態では、遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩＩをコードするベクターを含む。一実施形態では、癌の重症度の処置、抑制、低減、癌の転移の予防、および／または癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法が本明細書で提供され、該方法は、対象に１種または複数の従来のＣＡＲおよび少なくとも１種の補助モジュール（バックボーン１〜６２）をコードする核酸を含む治療有効量の遺伝子改変細胞を投与することを含む。一実施形態では、遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードするベクターを含む。一実施形態では、遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、癌細胞上の、２つ、３つまたはそれを超える抗原を標的とする。一実施形態では、１種または複数のＣＡＲをコードする核酸を含む遺伝子改変細胞の投与により処置または予防される疾患は、癌である。一実施形態では、１種または複数のＣＡＲをコードする核酸を含む遺伝子改変細胞の投与により処置または予防される疾患は、感染症、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、変性疾患、またはこれらの組み合わせである。
【０１０２】
代表的実施形態では、癌は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸肺癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期の固形腫瘍、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性体液性リンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境により誘導される癌、前記癌の組み合わせ、および前記癌の転移巣の内のいずれかである。
【０１０３】
一実施形態では、血液癌の重症度の処置、抑制、低減、血液癌の転移の予防、および／または血液癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法も本明細書で提供され、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含み、遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩＩをコードするベクターを含む。
【０１０４】
血液癌の重症度の処置、抑制、低減、血液癌の転移の予防、および／または血液癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法も本明細書で提供され、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含み、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードするベクターまたはＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードするベクターを含む。一実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤはＭＰＬを標的とする。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とする従来のＣＡＲ  ＩＩは、表２１および２２に記載され、配列番号１６５７〜１６６４および１７３１〜１７３９に示される核酸配列を含み、配列番号３４０２〜３４０９および３４７６〜３４８４に示されるポリペプチド配列を含む。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とする従来のＣＡＲ  Ｉおよび共発現するＫ１３−ｖＦＬＩＰ（バックボーン１）は、表１９に記載され、配列番号１１１７〜１１２４および１７４７に示される核酸配列を含み、配列番号２８６２〜２８６９および３４９２に示されるポリペプチド配列を含む。代表的実施形態では、ＭＰＬを標的とする従来のＣＡＲ  ＩＩおよび共発現するＫ１３−ｖＦＬＩＰ（バックボーン３２）は、表２０および２２に記載され、配列番号１３８７〜１３９４および１７４７に示される核酸配列を含み、配列番号３１３２〜３１３９および３４９２に示されるポリペプチド配列を含む。ＭＰＬを標的とするＣＡＲを発現している細胞の投与により処置または予防される血液癌の非限定的例には、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病および骨髄異形成症候群が挙げられる。
【０１０５】
ＣＤ１９発現癌（例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、低悪性度リンパ腫）の重症度の処置、抑制、低減、ＣＤ１９発現癌の転移の予防、および／またはＣＤ１９発現癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法も本明細書で提供され、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含み、遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の従来のＣＤ１９を標的とするＣＡＲ  ＩＩをコードするベクターを含む。
【０１０６】
ＣＤ１９発現癌の重症度の処置、抑制、低減、ＣＤ１９発現癌の転移の予防、および／またはＣＤ１９発現癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法も本明細書で提供され、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含み、遺伝子改変細胞は、ＣＤ１９を標的とする従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードするベクターまたはＣＤ１９を標的とするＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードするベクターを含む。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とする従来のＣＡＲ  ＩＩは、表２１に記載され、配列番号１４７０〜１４８０に示される核酸配列を含み、配列番号３２１５〜３２２５に示されるポリペプチド配列を含む。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とする従来のＣＡＲ  Ｉおよび共発現するＫ１３−ｖＦＬＩＰ（バックボーン１）は、表１９に記載され、配列番号９２７〜９４１に示される核酸配列を含み、配列番号２６７２〜２６８６に示されるポリペプチド配列を含む。代表的実施形態では、ＣＤ１９を標的とする従来のＣＡＲ  ＩＩおよび共発現するＫ１３−ｖＦＬＩＰ（バックボーン３２）は、表２０および２２に記載され、配列番号１１９７〜１２１１および１７５９に示される核酸配列を含み、配列番号２９４２〜２９５６および３５０４に示されるポリペプチド配列を含む。
【０１０７】
ＧＲＰ−７８発現癌の重症度の処置、抑制、低減、ＧＲＰ−７８発現癌の転移の予防、および／またはＧＲＰ−７８発現癌の再発の低減を、それを必要としている対象に対し実施する方法も本明細書で提供され、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の遺伝子改変細胞を対象に投与することを含み、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードするベクターまたはＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードするベクターを含む。一実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤはＧＲＰ−７８を標的とする。代表的実施形態では、ＧＲＰ−７８を標的とするＣＡＲおよび補助モジュールは、表２２に記載され、配列番号１７７１および１７７５に示される核酸配列を含み、配列番号３５１６および３５２０に示されるポリペプチド配列を含む。
【０１０８】
種々の実施形態では、本発明で使用するための追加の抗原標的、ＣＡＲ構築物および補助モジュールは、当業者には明らかであろう。好ましい実施形態は、表２〜２２に示される。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、治療有効量の遺伝子改変細胞は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの事例では、１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重（これらの範囲の全ての整数値を含む）で投与される。Ｔ細胞組成物は、これらの投与量で複数回投与してもよい。細胞は、免疫療法でよく知られている輸注技術を用いて投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。細胞は、病変部位に注射により投与できる（例えば、腫瘍内注射）。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、順次または同時に既存の治療法を対象に投与することをさらに含む。既存の癌治療法の例としては、積極的監視、観察、外科的介入、化学療法、免疫療法、放射線療法（外部照射、定位放射線手術（ガンマナイフ）、および分割定位放射線療法（ＦＳＲ）など）、局所療法、全身療法、ワクチン療法、ウイルス療法、分子標的療法、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＮＫ阻害剤、ＢＲＤ４阻害剤または二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、またはこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数を、順次または同時に対象に投与することをさらに含む。
【０１１２】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ダサチニブなどのＳｒｃファミリーキナーゼ阻害剤である。
【０１１３】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４／６阻害剤などのＣＤＫ４阻害剤で、リボシクリブ、アベマシクリブおよびパルボシクリブから選択される。
【０１１４】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ−０２７である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣｌ阻害剤および／またはｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。
【０１１５】
一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば、４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンである。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫｌａ、ＭＮＫｌｂ、ＭＮＫ２ａおよび／またはＭＮＫ２ｂであり得る。二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ＰＦ−０４６９５１０２であり得る。
【０１１６】
一実施形態では、阻害剤は、Ｂｒｄ４阻害剤であり、ＪＱ１、ＭＳ４１７、ＯＴＸＯ１５、ＬＹ３０３５１１および米国特許出願公開第２０１４０２５６７０６Ａ１号に記載のＢｒｄ４およびこれらのいずれかの類似体から選択される。
【０１１７】
本明細書に記載の方法の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば、パルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）であり、パルボシクリブは、約５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１００ｍｇまたは１２５ｍｇ）の投与量で、一定期間にわたり毎日、例えば、２８日サイクルの１４〜２１日間毎日、または２１日サイクルの７〜１２日間毎日投与される。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはこれを超えるサイクルのパルボシクリブが投与される。
【０１１８】
本明細書に記載の方法の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；およびＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。一実施形態では、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン２誘導型キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減または阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；およびＬＦＭ−Ａ１３から選択される。本明細書に記載の方法または使用の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えば、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）であり、イブルチニブは、約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇまたは５６０ｍｇ）の投与量で、一定期間にわたり毎日、例えば、２１日サイクルで毎日、または２８日サイクルで毎日投与される。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはこれを超えるサイクルのイブルチニブが投与される。
【０１１９】
本明細書に記載の方法または使用の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ＩＴＫのキナーゼ活性を阻害しないＢＴＫ阻害剤、例えば、ＲＮ−４８６であり、ＲＮ−４８６は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ（例えば、１５０ｍｇ、２００ｍｇまたは２５０ｍｇ）の投与量で、一定期間にわたり毎日、例えば、２８日サイクルで毎日投与される。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、またはこれを超えるサイクルのＲＮ−４８６が投与される。
【０１２０】
本明細書に記載の方法の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、下記から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である：テムシロリムス；リダフォロリムス（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート（ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても知られる）；エベロリムス（ＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９）；セマピモド（ｓｉｍａｐｉｍｏｄ）；（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［ｉｒａｎ５−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−Ｊ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２）；およびＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−ａ−アスパルチルＬ−セリン−、分子内塩（ＳＦ１１２６）；およびＸＬ７６５。
【０１２１】
本明細書に記載の方法または使用の一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシンであり、ラパマイシンは、約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ（例えば、６ｍｇ）の投与量で、一定期間にわたり毎日、例えば、２１日サイクルで毎日、または２８日サイクルで毎日投与される。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはこれを超えるサイクルのラパマイシンが投与される。一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、エベロリムスであり、エベロリムスは、約２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ（例えば、１０ｍｇ）の投与量で、一定期間にわたり毎日、例えば、２８日サイクルで毎日投与される。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはこれを超えるサイクルのエベロリムスが投与される。
【０１２２】
本明細書に記載の従来のＣＡＲまたは新規バックボーン上のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを細胞に遺伝子導入することを含む遺伝子改変細胞を調製する方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒトＴ細胞またはヒトＮＫ細胞などの免疫エフェクター細胞、または免疫エフェクター細胞を生ずる幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、自己ヒトＴ細胞または自己ヒトＮＫ細胞または自己ヒト幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、同種ヒトＴ細胞または同種ヒトＮＫ細胞または同種ヒト幹細胞である。
【０１２３】
一実施形態では、遺伝子改変細胞を調製する方法は、細胞集団を取得することおよび、例えば、ＣＤ２５に特異的な抗体を用いて、ＣＤ２５＋  Ｔ調節細胞を枯渇させることを含む。細胞集団からＣＤ２５＋  Ｔ調節細胞を枯渇させる方法は、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇細胞は、３０％、２０％、１０％、５％、またはそれ未満のＴｒｅｇ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターは、Ｔｒｅｇ枯渇細胞に遺伝子導入される。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、遺伝子導入の前に、Ｔｒｅｇ枯渇細胞は、チェックポイント阻害剤を発現する細胞がさらに枯渇される。チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ３、Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、およびＬＡＩＲ１の内のいずれか１種または複数であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、３０％、２０％、１０％、５％、またはそれ未満のチェックポイント阻害剤を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターは、Ｔｒｅｇ枯渇およびチェックポイント阻害剤枯渇細胞に遺伝子導入される。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞を調製する方法は、細胞集団を取得することおよびＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯの内のいずれか１種または複数を発現する細胞を選択することを含む。特定の実施形態では、用意された免疫エフェクター細胞集団はＣＤ３＋および／またはＣＤ２８＋である。
【０１２６】
一実施形態では、遺伝子改変細胞を調製する方法は、細胞集団を取得することおよび、例えば、例えば、ＣＤ２５に特異的な抗体を用いて、ＣＤ２５＋  Ｔ調節細胞を濃縮することを含む。細胞集団からＣＤ２５＋  Ｔ調節細胞を濃縮する方法は、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ濃縮細胞は、３０％、２０％、１０％、５％、またはそれ未満の非Ｔｒｅｇ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターは、Ｔｒｅｇ濃縮細胞に遺伝子導入される。ＣＡＲを発現しているＴｒｅｇ濃縮細胞は、ＣＡＲにより標的とされる抗原に対する耐性を誘導するために使用し得る。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターが細胞に遺伝子導入されるされた後で、細胞集団を増殖させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞集団は、８日間またはそれ未満の期間、増殖される。特定の実施形態では、細胞集団は、５日間の培養で増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下で９日間の培養により増殖された同じ細胞より強力である。他の実施形態では、５日間の培養で増殖された細胞集団は、同じ培養条件下で９日間の培養により増殖された同じ細胞に比べて、抗原刺激時に、細胞倍加の、少なくとも、１、２、３または４倍の増加を示す。いくつかの実施形態では、細胞集団は、フローサイトメトリーで測定して、１４日間にわたる増殖期間で細胞の少なくとも２００倍、２５０倍、３００倍、または３５０倍の増加が得られる１種または複数のインターロイキンを含む適切な培地中で増殖される。
【０１２８】
種々の実施形態では、増殖細胞は、本明細書に記載の１種または複数のＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、増殖細胞は、１つ、２つ、３つまたはそれを超えるＡＳＤと共に、１つのＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、増殖細胞は、本明細書に記載の補助モジュールおよび治療制御剤をさらに含む。
【０１２９】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＫ１３−ｖＦＬＩＰ、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ、ｃＦＬＩＰ−Ｌ、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２、ＨＴＬＶ１−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘから選択される１種または複数のシグナル伝達タンパク質をコードする核酸を含む細胞が本明細書で提供され、ＣＡＲは、ａ）細胞外抗原特異的ドメイン、ｂ）膜貫通ドメインおよびｃ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ｃ）はキメラ受容体のＣ末端に位置している。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１種または複数の共刺激ドメインをさらに含む。
【０１３０】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＫ１３−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする核酸を含む細胞も本明細書で提供され、ＣＡＲは、ａ）細胞外抗原特異的ドメイン、ｂ）膜貫通ドメインおよびｃ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ｃ）はキメラ受容体のＣ末端に位置している。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１種または複数の共刺激ドメインをさらに含む。
【０１３１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする核酸を含む細胞も本明細書で提供され、ＣＡＲは、ａ）細胞外抗原特異的ドメイン、ｂ）膜貫通ドメインおよびｃ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ｃ）はキメラ受容体のＣ末端に位置している。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１種または複数の共刺激ドメインをさらに含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする核酸をさらに含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ６および／またはＩＬ６受容体アルファを標的とするｓｃＦｖをコードする核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＡＲ療法に付随する毛細血管漏出を軽減するように、ペプチドＦＸ０６をコードする核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達タンパク質は、ＦＫＢＰドメインの１種または複数の複製物との融合体中で発現される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達タンパク質の活性は、二量体化剤の存在下で、ＦＫＢＰドメインの二量体化により翻訳後に制御される。いくつかの実施形態では、二量体化剤はＡＰ２０１８７である。
【０１３４】
代表的実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＰＬを標的とする。いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、２つの抗原を標的とし、該２つの抗原は、ＭＰＬおよびＣＤ１２３である。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２３、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤＨ１７９ｂ、ＦＬＴ３、ＧＣＣ、Ｍｕｃ１、ＣＳＦ２ＲＡ、ＧＦＲａ４、ＣＤ３２、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ、ＮＹＢＲ１、ＳＬｅａ、 ＣＤ２００Ｒ、ＴＧＦＢｅｔａＲ２、ＣＤ２７６、ＴＲＯＰ２、ＬＡＭＰ１、ＰＴＫ７、ＤＬＬ３、ＣＤＨ１、ＣＤＨ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ１９、ＴＳＨＲおよびチロシナーゼを標的とする。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的はＭＰＬを標的とし、１６１（配列番号２５００および２５０１）、１７５（配列番号２４９９）、１７８（配列番号２５０３）、１１１（配列番号２５０２）、ＡＢ３１７（配列番号２４０４）、１２Ｅ１０（配列番号２５０５）もしくはｈｕＶＢ２２Ｂｗ５（配列番号２５０６）から選択される１種または複数のｓｃＦｖフラグメントまたはｈＴＰＯ（配列番号２３２３）もしくはｍＴＰＯ（配列番号２３２３）の細胞外受容体結合ドメインから選択されるリガンドを含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ１９を標的とし、ＣＤ１９Ｂｕ１２またはＣＤ１９ＭＭから選択される１種または複数のｓｃＦｖフラグメントを含む。
【０１３８】
一実施形態では、細胞はＴリンパ球（Ｔ細胞）である。別の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
【０１３９】
請求項に記載のＣＡＲをコードする第１のポリヌクレオチドおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを含む核酸も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰシグナル伝達タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含む。本明細書に記載の核酸によりコードされるポリペプチドおよび本明細書に記載の核酸をコードするベクターも本明細書で提供される。
【０１４０】
本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の核酸、本明細書に記載の核酸によりコードされるポリペプチドまたは本明細書に記載の核酸を含むベクター、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物が本明細書でさらに提供される。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ＭＰＬ発現癌を処置する方法が本明細書で提供され、該方法は、対象に治療有効量の本明細書に記載の細胞を投与することを含み、ＣＡＲはＭＰＬを標的とする。いくつかの実施形態では、癌は血液癌であり、血液癌は、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、リンパ腫、多発性骨髄腫および急性リンパ性白血病の内のいずれか１種または複数である。いくつかの実施形態では、方法は、対象にチロシンキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含み、阻害剤は、Ｓｒｃキナーゼファミリーを阻害する。いくつかの実施形態では、阻害剤はＬｃｋを阻害する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ダサチニブ、ポナチニブまたはＡ−７７００４１の内のいずれか１種または複数である。
【０１４２】
代表的実施形態は、参照図で示される。本明細書に開示される実施形態および図面は、限定するものではなく、例示するものと見なされることを意図している。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１】図１は、本発明の種々の実施形態による、３世代のＣＡＲを示す図である。緑色のｓｃＦｖセグメントおよび赤、青および黄色の種々のＴＣＲシグナル伝達成分を有する第１、第２および第３世代キメラ抗原受容体の図である（Ｃａｓｕｃｃｉ，Ｍｏｎｉｃａ  ａｎｄ  Ａｔｔｉｌｉｏ  Ｂｏｎｄａｎｚａ（２０１１）．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．２：３７８−３８２）。
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｄは、本発明の種々の実施形態によるＭＰＬ遺伝子発現を示す。図２Ａは、正常組織におけるＭＰＬ遺伝子発現を示す。ＭＰＬは、正常組織においては発現が極めて限られている。
【図２Ｂ】図２Ｂは、急性骨髄性白血病の５４２人の患者試料におけるＭＰＬ遺伝子発現を示す。ＭＰＬは、ほとんどのＡＭＬ試料で発現している。
【図２Ｃ】図２Ｃは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の２０６試料におけるＭＰＬ遺伝子発現を示す。ＭＰＬは、ほとんどのＭＤＳ試料で発現している。
【図２Ｄ】図２Ｄは、ＣＭＬの７６試料におけるＭＰＬ遺伝子発現を示す。ＭＰＬは、ほとんどのＣＭＬ試料で発現している。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｂは、本発明の種々の実施形態において、ＨＥＬ．９２．１．７−Ｇｌｕｃ−ベクター細胞上で、１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５との強い結合が観察され、ＭＰＬの顕著な内因性発現を示唆している。
【図３Ｂ】図３Ａの続きである。
【図４Ａ】図４Ａ〜図４Ｂは、本発明の種々の実施形態における、２９３ＦＴ細胞中のＣＡＲの発現を測定するＮＬｕｃアッセイを示す。非遺伝子導入２９３ＦＴ細胞、およびＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］ＣＡＲを遺伝子導入した細胞を、材料および方法のセクションで記載のＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号９２６］およびＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号９２５］上清と共にインキュベートし、続けて、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳで希釈したセレンテラジン（ＣＴＺ；Ｎａｎｏｌｉｇｈｔ）によりＮＬｕｃ活性を測定した。発光は、ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを用いて定量化した。データは、３重ウェルの平均値±標準偏差（ＳＤ）を示す。
【図４Ｂ】図４Ａの続きである。
【図５】図５は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５の、ｈＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｕ０４）［配列番号１７３８］およびｍＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｖ０３）［配列番号１７３９］構築物を遺伝子導入した２９３ＦＴ細胞への中程度の結合、およびＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］構築物を遺伝子導入した２９３ＦＴ細胞への強い結合を、非遺伝子導入細胞またはコントロールＣＡＲ構築物を遺伝子導入した細胞と比較して示す。
【図６】図６は、本発明の種々の実施形態における、ＥＧＦＰ蛍光の増大およびＡＰＣ−Ｍｙｃによる染色の増大により測定したＴ細胞の表面上のＭＰＬ  ＣＡＲの発現を、非感染Ｔ細胞（ＵＩ）と比較して示す。
【図７】図７は、本発明の種々の実施形態における、ＮＬｕｃアッセイにより測定した、ＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ  ＡｃＶ５上澄に対する、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、およびＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−ＶＢ２２Ｂｗ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｂ０６）［配列番号３５３６］ＣＡＲを発現しているＴ細胞の強い結合、ならびにＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］およびＣＤ８ＳＰ−１２Ｅ１０−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｓ０３）［配列番号１７３６］を発現しているＴ細胞の中程度の結合を示す。配列番号９２５は、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−Ｎｌｕｃ−ＡｃＶ５を含む。配列番号９２６は、ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５を含む。配列番号１７３４は、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）を含む。配列番号３５３４は、ＣＤ８ＳＰ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−Ｐａｃ（０３１６１５−Ｗ０５）を含む。
【図８】図８は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ特異的ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］を発現するＴ細胞と共培養後の、Ｇｌｕｃ活性の増加を、異なるＭＰＬ−ＣＡＲ−Ｔ細胞による標的細胞の溶解を示す非感染Ｔ細胞と比較して示す。
【図９】図９は、本発明の種々の実施形態における、ＰＢＭＣを発現しているＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］ＣＡＲによるＨＥＬ−Ｇｌｕｃ細胞の死滅の増加を、ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］ＰＢＭＣまたは非感染ＰＢＭＣと比較して示す。
【図１０】図１０は、本発明の種々の実施形態における、ＰＢＭＣを発現しているＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］ＣＡＲによるＨＥＬ−Ｇｌｕｃ細胞の死滅の増加を、非感染ＰＢＭＣと比較して示す。
【図１１】図１１は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現しているＴ細胞と共培養後の、標的細胞の溶解を示すＧｌｕｃ活性の増加を示し、これは、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］，ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、およびＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］構築物ではより強く、また、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］構築物では中程度の強さであったことを、非感染Ｔ細胞に比べて示す。
【図１２】図１２は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現しているＴ細胞と共培養後の、標的細胞の溶解を示すＧｌｕｃ活性の増加を示し、これは、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］，ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、ＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］およびＣＤ８ＳＰ−１２Ｅ１０−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｓ０３）［配列番号１７３６］構築物ではより強く、また、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］およびＣＤ８ＳＰ−ＶＢ２２Ｂｗ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｂ０６）［配列番号３５３６］構築物では中程度の強さであったことを、非感染Ｔ細胞に比べて示す。
【図１３】図１３は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ特異的ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］ＣＡＲを発現しているＮＫ９２ＭＩ細胞と共培養後の、標的細胞の溶解を示す、Ｇｌｕｃ活性の増加を示す。
【図１４】図１４は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現しているＮＫ９２ＭＩ細胞と共培養後の、標的細胞の溶解を示す、Ｇｌｕｃ活性の増加を示す。
【図１５】図１５は、本発明の種々の実施形態における、ＭＰＬを標的とするＣＡＲを発現しているＴ細胞と、ＨＥＬ細胞の共培養時のＴＮＦαの分泌の増加を、コントロールとして用いられる非感染Ｔ細胞と比較して示す。
【図１６】図１６は、本発明の実施形態において、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］発現ＮＫ９２ＭＩ細胞を投与されたマウスの生存期間中央値は、３１．５日であり、これは、非改変ＮＫ９２ＭＩ細胞を投与されたマウス（２８．５日；ｐ＝０．０３）またはコントロールＣＤ８ＳＰ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１００８１４−Ｋ０６）［配列番号３５３７］ＣＡＲを発現しているＮＫ９２ＭＩ細胞を投与されたマウス（２８日；ｐ＝０．０４）より有意に高かったことを示す。
【図１７】図１７は、本発明の種々の実施形態における、ＡＰＣ−Ｍｙｃによる染色により測定した、Ｔ細胞表面上の異なるＣＤ１９  ＣＡＲの発現の増大（灰色の線で示す）を、非感染Ｔ細胞（ＵＩ：点線で示す）と比較して示す。示した構築物には、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］；ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］；ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］；ＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］が含まれる。
【図１８】図１８は、本発明の種々の実施形態において、ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５  ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６７１］上澄は、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］ＣＡＲ構築物を発現しているジャーカット細胞に対し強い結合を示し、一方、親細胞またはＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］コントロールＣＡＲを発現している細胞に対しては有意な結合は観察されなかったことを示す。
【図１９】図１９は、本発明の種々の実施形態において、ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５  ［配列番号２６７１］上澄は、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７０］，ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７１］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６７］ＣＡＲ構築物を発現しているＴ細胞に対し強い結合を示し、一方、親細胞またはＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］コントロールＣＡＲを発現している細胞に対しては有意な結合は観察されなかったことを示す。
【図２０】図２０は、本発明の種々の実施形態における、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現しているＴ細胞と共培養後の、ラージ標的細胞の溶解を示す、Ｇｌｕｃ活性の増加を、非感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）またはコントロールＣＡＲ  ４Ｃ３を発現している細胞と比較して示す。示した構築物には、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６７］；ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７１］；ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７０］；ＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４３］；が含まれる。（−）は、ピューロマイシン選択なしで使用されたＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を示し；（＋）は、ピューロマイシン選択で使用したＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を示す。
【図２１】図２１は、本発明の種々の実施形態における、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現しているＴ細胞と共培養後の、ラージ標的細胞の溶解を示す、Ｇｌｕｃ活性の増加を、非感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）またはコントロールＣＡＲ  ４Ｃ３を発現している細胞と比較して示す。示した構築物には、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６７］；ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７１］；ＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４３］；が含まれる。（−）は、ピューロマイシン選択なしで使用されたＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を示し；（＋）は、ピューロマイシン選択で使用したＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を示す。
【図２２】図２２は、本発明の種々の実施形態による、特定の群のマウスの生存を示す。
【図２３Ａ】図２３は、本発明の種々の実施形態における、Ｋ１３発現Ｔ細胞のＦＩＴＣ−ＦＬＡＧ抗体による染色の増大を、非感染Ｔ細胞と比較して示す。Ｋ１３不死化Ｔ細胞は、ＣＤ８＋／ＣＤ４−（４９％）、ＣＤ８−／ＣＤ４＋（２１％）およびＣＤ８＋／ＣＤ４＋（２９％）である。
【図２３Ｂ】図２３Ａの続きである。
【図２３Ｃ】図２３Ａの続きである。
【図２４】図２４は、本発明の種々の実施形態において、ピューロマイシンで選択された、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］、およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１０１４−Ｙ１１）［配列番号１１９７］発現Ｔ細胞は、Ｇｌｕｃアッセイにより測定して、ＲＳ４１１細胞の特異的溶解を誘導することを示す。
【図２５】図２５は、本発明の種々の実施形態における、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現しているＴ細胞と共培養後の、標的細胞の溶解を示す、Ｇｌｕｃ活性の増加を、非感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）またはコントロールＣＡＲ  ４Ｃ３を発現している細胞と比較して示す。
【図２６】図２６は、本発明の種々の実施形態において、Ｋ１３、ＭＣ１５９またはＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（Ｔａｘ２）の組み込みは、４１ＢＢ共刺激ドメインの存在の有無にかかわらず、ＣＡＲの死滅させる能力に悪影響を与えることはないという確証を示す。
【図２７】図２７は、本発明の種々の実施形態において、ＭＣ１５９およびＨＴＬＶ２−Ｔａｘを共発現したＣＡＲ構築物を発現しているＴ細胞は、培養液中で２ヶ月後に、細胞傷害性を作用させ続けるが、一方、ＭＣ１５９およびＨＴＬＶ２−Ｔａｘを欠いている構築物を発現しているＴ細胞は、この能力を失っていることを示す。
【図２８Ａ】２８Ａ〜図２８Ｂは、本発明の種々の実施形態において、ＡＰ２０１８７による処置が、全ての構築物中で、Ｋ１３−およびＨＴＬＶ２−Ｔａｘ  ＲＳ変異体誘導ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ活性の増大をもたらしたことを示す。この構築物中では、Ｋ１３およびＨＴＬＶ２−Ｔａｘ変異体は、ＦＫＢＰとの融合体中で発現された。図２８Ａに示された構築物は、ＦＫＢＰＸ２−Ｋ１３［配列番号８７９］；ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１１２６１４−Ｂ０６）［配列番号１７５５］；ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１１２６１４−Ｅ０５）［配列番号１７４４］；ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰｘ２−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１２０３１４−Ｊ０３）［配列番号１７５６］；およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｍｙｒ−ＦＫＢＰｘ２−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１２０３１４−Ｎ０７）［配列番号１７５７］を含む。
【図２８Ｂ】図２８Ｂに示す構築物は、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰｘ２−ＦＬＡＧ−ＴＡＸ２Ｕ２ＲＳ−Ｔ２Ａ−ｅＧＦＰ−Ｍ０３（０１２３１５−０３）［配列番号３５３９］；およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰｘ２−ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０１２３１５−Ｏ０１）［配列番号１７５８］を含む。
【図２９Ａ】図２９Ａ〜図２９Ｂは、本発明の種々の実施形態において、ＡＰ２０１８７の添加によるＫ１３媒介ＮＦ−κＢ活性の活性化は、ＦＫＢＰ−Ｋ１３を共発現するＣＡＲ構築物により誘導される細胞死滅に対し悪影響を与えないこと示す。図２９Ａに示す構築物は、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２３１６−Ｓ０６）［配列番号１７７０］を含む。
【図２９Ｂ】図２９Ｂに示す構築物は、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２９１６−Ｕ０６）［配列番号１７４１］を含む。
【図３０Ａ】図３０Ａ〜図３０Ｂは、本発明の種々の実施形態における、Ｋ１３、ＭＣ１５９、ＨＴＬＶ２−ＴａｘまたはＨＴＬＶ２−Ｔａｘ  ＲＳ変異体を共発現する、異なるＭＰＬ指向性およびＣＤ３２指向性のＣＡＲ構築物による標的細胞死の誘導を示す。
【図３０Ｂ】図３０Ａの続きである。
【図３１】図３１は、本発明の種々の実施形態における、Ｋ１３を共発現する、ＴＲＯＰ２指向性の従来のＣＡＲ  Ｉ構築物によるＰＣ３標的細胞死の誘導を示す。
【図３２Ａ】図３２Ａ〜図３２Ｂは、本発明の種々の実施形態における、Ｋ１３を共発現する、異なるＬＡＭＰ１指向性ＣＡＲ構築物による標的細胞死の誘導を示す。
【図３２Ｂ】図３２Ａの続きである。
【図３３】図３３は、本発明の種々の実施形態において、ＡＰ２０１８７化合物の添加による、ＦＫＢＰ−Ｋ１３融合タンパク質を発現しているＴ細胞中のＫ１３シグナル伝達の活性化は、ＣＡＲ誘導ＮＦＡＴシグナル伝達の活性化に悪影響を与えないことを示す。
【図３４】図３４は、本発明の種々の実施形態における、野性型Ｋ１３および種々のＫ１３変異体によるＮＦ−κＢレポーター活性を示す。
【図３５】図３５は、本発明の種々の実施形態において、５０ｎＭおよび１００ｎＭダサチニブによる、ＣＡＲ：ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］誘導細胞死の阻害を示し、一方、イマチニブは影響を与えない。
【図３６Ａ】図３６は、本発明の種々の実施形態における、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］を発現するＴ細胞と共培養後の、Ｇｌｕｃ活性の増加を、異なるＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞による標的細胞の溶解を示す非感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）および示した投与量でのダサチニブおよびポナチニブによる阻害と比較して示す。
【図３６Ｂ】図３６Ａの続きである。
【図３７】図３７は、本発明の種々の実施形態において、Ｇｌｕｃアッセイにより測定して、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ２２−ｍ９７１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０９１５１５−Ａ０２）［配列番号１５１９］ＣＡＲを発現しているＴ細胞によりダサチニブがラージ−Ｇｌｕｃ細胞の死滅を効果的に阻止することを示す。
【図３８Ａ】図３８Ａ〜図３８Ｂは、本発明の種々の実施形態において、図３８Ａでは、Ｇｌｕｃアッセイにより測定してダサチニブがＫ５６２細胞のＮＫ９２細胞媒介死を阻止すること、および図３８Ｂでは、Ｇｌｕｃアッセイにより測定して、ダサチニブがＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］を発現しているＮＫ９２ＭＩによるラージ−Ｇｌｕｃ細胞死を阻止することを示す。
【図３８Ｂ】図３８Ａの続きである。図３８Ｂでは、Ｇｌｕｃアッセイにより測定して、ダサチニブがＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］を発現しているＮＫ９２ＭＩによるラージ−Ｇｌｕｃ細胞死を阻止することを示す。
【図３９Ａ】図３９Ａ〜図３９Ｂは、本発明の種々の実施形態において、図３９Ａでは、Ｔ細胞の存在下で、ブリナツモマブによる処置が、ラージ−Ｇｌｕｃ細胞死を強力に誘導し、これは、１００ｎＭのダサチニブにより効果的に阻止され、および図３９Ｂでは、Ｔ細胞の存在下で、ラージ−Ｇｌｕｃ細胞とブリナツモマブとの共培養がＩＦＮγ産生を強力に誘導し、これは、１００ｎＭのダサチニブにより効果的に阻止されることを示す。
【図３９Ｂ】図３９Ａの続きである。図３９Ｂでは、Ｔ細胞の存在下で、ラージ−Ｇｌｕｃ細胞とブリナツモマブとの共培養がＩＦＮγ産生を強力に誘導し、これは、１００ｎＭのダサチニブにより効果的に阻止されることを示す。
【図４０Ａ】本発明の種々の実施形態において、図４０Ａは、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共培養されなかったラージ−ｐＬｅｎｔｉ−Ｇｌｕｃ細胞に対し、顕著な毒作用を示さないことを示す。
【図４０Ｂ】図４０Ｂは、培地（Ｍｅｄ）単独で処置された細胞（図４０Ａ）に比べて、ルキソリチニブ、ホスタマチニブおよびアリセルチブは、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］ＣＡＲ−Ｔ細胞−誘導ラージ−ｐＬｅｎｔｉ−Ｇｌｕｃ細胞死の軽度から中程度の阻害を示す。ダサチニブを陽性対照として使用した。
【図４０Ｃ】図４０Ｃは、上記化合物が、示した濃度のＴ細胞媒介ブリナツモマブ誘導細胞死に対し最小限の効果しか有さないことを示す。
【図４１Ａ】本発明の種々の実施形態において、図４１Ａは、ＣＡＲ−Ｔ細胞が全くなしに単独培地の存在下で、示した薬物で処置した細胞中でＧｌｕｃの放出を示す。
【図４１Ｂ】図４１Ｂは、１００ｎＭおよび２００ｎＭのＡ−７７００４１は、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］ＣＡＲ−Ｔ細胞−誘導ラージ−ｐＬｅｎｔｉ−Ｇｌｕｃ細胞死のほぼ完全な阻害を示すが、一方、サラカチニブは有意な効果がなかった。アバシミブは、ＣＡＲ−Ｔ細胞誘導細胞死に対し、１００ｎＭで有意な効果はなかったが、１μＭで完全にそれを阻止した。
【図４１Ｃ】図４１Ｃは、１００ｎＭのＡ７７００４１による処置により、ブリナツモマブとＴ細胞の組み合わせにより誘導された細胞死を部分的に阻止したが、２００ｎＭのＡ７７００４１による処理で完全に阻害した。
【図４２Ａ】図４２Ａ〜図４２Ｂは、本発明の種々の実施形態において、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６Ｒ−Ｍ８３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｋ０４）［配列番号１７６３］を発現しているジャーカット細胞のラージ細胞との共培養によりＥＧＦＰ発現が増大したことを、ラージ細胞に曝露されなかった細胞（図４２Ａ）に比べて示す。これは、ＮＦＡＴシグナル伝達の活性化を示す。
【図４２Ｂ】図４２Ａの続きである。ラージ細胞との培養の有無に関係なく、親ジャーカット細胞（Ｊ−Ｎ−Ｇ−Ｐ）では、ＥＧＦＰ発現の増加が観察されなかった（図４２Ｂ）。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
本明細書で引用される全ての参考文献は、完全に記述されるかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用される技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２ｎｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５，２０１２）；Ｈｏｒｎｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００８）；Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２００６）；Ｓｍｉｔｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２０１３）；Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２８，２０１２）；およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ  ２０１２）は、本出願で使用される用語の多くに対する一般的なガイドを当業者に提供する。抗体の調製法に関しては、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ，２０１３）；Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７６  Ｊｕｌ，６（７）：５１１−９；Ｑｕｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｃｋ，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，５８５，０８９（１９９６  Ｄｅｃ）；およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｎａｔｕｒｅ  １９８８  Ｍａｒ  ２４，３３２（６１６２）：３２３−７、を参照されたい。
【０１４５】
当業者なら、本発明の実施において使用され得る、本明細書に記載されるものと類似または等価な多くの方法および材料に気付くであろう。本発明の他の特性、特徴および利点は、一例として本発明の実施形態の種々の特徴を示す添付の図面と併せて、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。実際に、本発明は、記載された方法および材料には全く限定されない。便宜上、明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲で採用される特定の用語を以降にまとめる。
【０１４６】
特に断りのない限り、または文脈から示されることがない限り、次の用語および語句は、以下に与えられる意味を含む。明示的に別義が示されない限り、または文脈から明らかでない限り、下記用語および語句は、その技術が属する技術分野においてその用語または語句が得ている意味を除外することはない。定義は、特定の実施形態を記述するのを支援するために提供され、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるため、特許請求された発明を限定することを意図するものではない。別段に定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に通常理解されているものと同じ意味を有する。
【０１４７】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、人工のＴ細胞受容体であり、これは、養子細胞移入と呼ばれる技術を用いて、癌の療法として研究中のものである。造血細胞が患者から取り出され、特定の形態の癌に特異的なタンパク質を認識する受容体を発現するように改変される。細胞は、患者に再導入され、その後、癌細胞を認識し、死滅させることができる。ヒトＣＤ１９抗原を標的とするＣＡＲは、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病およびリンパ腫などのＢ細胞系統ヒト血液癌に対する優れた活性を示し、いくつかの会社により商業化に向けた開発が行われている。しかし、非リンパ球系細胞上に発現する抗原を標的とするＣＡＲを開発する必要性が存在する。本発明は、いくつかのこのような抗原を標的とするＣＡＲに関する。
【０１４８】
定義
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、組成物、方法、およびそれぞれの構成成分（単数または複数）に関連して使用され、実施形態に有用であるが、指定していない要素の包含に対し、有用性の有無に関係なくオープンである。一般的に、本明細書で使われる用語は通常、「オープン」ターム（例えば、用語の「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、「〜を含むがそれに限定されない」として、用語の「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、「少なくとも〜を有する」として、用語の「挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅ）」は、「〜を含むがそれに限定されない」として、などと解釈されるべきである）として意図されていることは当業者には理解されよう。
【０１４９】
特に断りのない限り、本出願の特定の実施形態の記載において（特に、請求項において）使われる用語の「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに類似の言及は、単数形および複数形の両方を包含すると解釈できる。本明細書における値の記載の範囲は、その範囲内に入るそれぞれ別々の値を個別に参照する省略表現法として機能することを意図しているに過ぎない。本明細書で特に明示されない限り、個々の数値は、それが個別に本明細書に記述される場合と同様に本明細書に組み込まれる。本明細書で記載の全ての方法は、本明細書で別段の指示がない限り、または文脈上明らかに矛盾することがない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書の特定の実施形態に関連して用いられるいずれかのおよび全ての例、または代表を意味する用語（例えば、「ｓｕｃｈ  ａｓ」）の使用は、本出願をより良く解明する意図によるものに過ぎず、別に請求される本出願の範囲に制限を課すものではない。省略の「ｅ．ｇ．」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａからきたもので、本明細書では、非限定的例を示すために使われる。したがって、省略「ｅ．ｇ．」は、用語の「例えば（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」と同義である。明細書中のどの用語も、本出願の実施に必須のいずれかの非請求要素を示すものと解釈されるべきではない。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、測定可能な値、例えば、量、持続時間、などを意味し、指定した値から±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．５％または±０．１％の変動を包含する。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」または「ＣＡＲ（複数）」は、抗原特異性を細胞（例えば、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせなどのＴ細胞）に移植する遺伝子改変受容体を意味する。ＣＡＲはまた、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体としても知られる。種々の実施形態では、ＣＡＲは組換え型ポリペプチドであり、抗原特異的ドメイン（ＡＳＤ）、ヒンジ部（ＨＲ）、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、共刺激ドメイン（ＣＳＤ）および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）を含む。
【０１５２】
「抗原特異的ドメイン」（ＡＳＤ）は、標的細胞上の抗原に特異的に結合するＣＡＲの部分を意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のいずれかのバックボーンを含むＣＡＲのＡＳＤは、抗体またはその機能性等価物またはそのフラグメントもしくはその誘導体を含む。標的化領域は、完全長重鎖、Ｆａｂフラグメント、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、二価単鎖抗体、またはダイアボディを含み得、各々は標的抗原に特異的である。しかし、多数の代替物、例えば、結合サイトカイン（サイトカイン受容体を有する細胞の認識をもたらす）、アフィボディ、天然受容体由来のリガンド結合ドメイン、（例えば、腫瘍細胞上の）受容体の溶解性タンパク質／ペプチドリガンド、ペプチド、および免疫応答を刺激するワクチンが存在し、これらはそれぞれ、本発明の種々の実施形態で使用し得る。いくつかの実施形態では、当業者が理解するように、高親和性を有する所与の抗原に結合するほとんどの分子は、ＡＳＤとして使用することができる。いくつかの実施形態では、ＡＳＤは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその一部を含む。代表的実施形態では、ｓｃＦｖを含むＡＳＤをコードする核酸は、配列番号５６４〜７９８に示されている。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、「ヒンジ部」（ＨＲ）は、ＴＭＤとＡＳＤとの間の親水性領域を意味する。ヒンジ部には、抗体またはそのフラグメントもしくは誘導体のＦｃフラグメント、抗体またはそのフラグメントもしくは誘導体のヒンジ部、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工スペーサー配列、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ヒンジ部の例としては、ＣＤ８ａヒンジ、例えば、Ｇｌｙ３程度に小さくてもよいポリペプチドから作られる人工スペーサー、またはＩｇＧ（ヒトＩｇＧ４など）のＣＨ１およびＣＨ３ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ヒンジ部は、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部、ＣＨ２およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部およびＣＨ２、（ｉｖ）ＣＤ８ａのヒンジ部、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ部、ＣＨ２、およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ部、または（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ部およびＣＨ２、の内のいずれか１種または複数である。その他のヒンジ部は当業者に明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。
【０１５４】
本明細書で使用される場合、「膜貫通ドメイン」（ＴＭＤ）は、細胞膜と交差するＣＡＲの領域を意味する。本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜貫通タンパク質（例えば、Ｉ型膜貫通タンパク質）、人工疎水性配列、またはそれらの組み合わせの膜貫通領域である。その他の膜貫通ドメインが当業者に明白であり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。いくつかの実施形態では、ＴＭＤをコードする、本明細書に記載のいずれかのバックボーンを含むＣＡＲは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／または  ＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。
【０１５５】
本明細書で使用される場合、「共刺激ドメイン」（ＣＳＤ）は、本明細書に記載のいずれかのバックボーンを含むＣＡＲの一部を意味し、メモリー細胞の増殖、生存、および／または発生を強化する。本発明のＣＡＲは、１種または複数の共刺激ドメインを含み得る。それぞれの共刺激ドメインは、例えば、ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバー、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、またはこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数の共刺激ドメインを含む。他の共刺激ドメイン（例えば、他のタンパク質由来の）は、当業者に明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「細胞内シグナル伝達ドメイン」（ＩＳＤ）または「細胞質ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞にその特殊化された機能を実施するように指示する、本明細書に記載のいずれかのバックボーンを含むＣＡＲの一部を意味する。エフェクター機能シグナルを伝達するドメインの例としては、Ｔ細胞受容体複合体のｚ鎖またはそのホモログのいずれか（例えば、ｈ鎖、ＦｃｅＲ１ｇおよびｂ鎖、ＭＢ１（Ｉｇａ）鎖、Ｂ２９（Ｉｇｂ）鎖など）、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ３ポリペプチド（Ｄ、ｄ、およびｅ）、ｓｙｋファミリーチロシンキナーゼ（Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０など）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎなど）、ならびにＣＤ２、ＣＤ５、およびＣＤ２８などのＴ細胞伝達に関与する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる細胞内シグナル伝達ドメインが当業者に明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、「リンカー」（Ｌ）または「リンカードメイン」または「リンカー領域」は、本発明のＣＡＲのドメイン／領域のいずれかを一緒に連結する約１〜１００アミノ酸長さのオリゴまたはポリペプチド領域を意味する。リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに自由に動くように、グリシンおよびセリンのようなフレキシブル残基で構成され得る。２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にすることが望ましい場合、より長いリンカーが使用され得る。リンカーは、切断可能であってもよく、または切断可能でなくてもよい。切断可能なリンカーの例としては、２Ａリンカー（例えば、Ｔ２Ａ）、２Ａ様リンカー、またはこれらの機能的等価物、およびこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーには、ピコルナウイルス２Ａ様リンカー、ブタテスコウイルス（Ｐ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、ゾセア・アシグナウイルス（Ｔ２Ａ）、またはそれらの組み合わせ、バリアント、および機能的等価物が挙げられる。他の実施形態では、リンカー配列は、２Ａグリシンと２Ｂプロリンとの間の切断をもたらす、Ａｓｐ−Ｖａｌ／Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｘ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（２Ａ）―Ｐｒｏ（２Ｂ）モチーフを含み得る。いくつかの代表的切断可能なリンカーの核酸配列は、配列番号８３１〜配列番号８３６で与えられ、いくつかの代表的リンカーのアミノ酸配列は、配列番号２５９８〜配列番号２６０２で与えられる。他のリンカーが当業者に明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。ある実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（配列番号８３７〜８３８および配列番号２６０３）も、切断可能なリンカー配列の上流に加え、切断の効率を高められる。切断可能なリンカーの生じ得る欠点は、Ｎ末端タンパク質の末端に残された小さい２Ａタグが、タンパク質機能に影響するかもしれない、またはタンパク質の抗原性の一因となるかもしれないという可能性である。この制約を克服するために、いくつかの実施形態では、フューリン切断部位（ＲＡＫＲ）（配列番号８３９〜８４１および配列番号２６０４）を、ＳＧＳＧモチーフの上流に加えて、翻訳後の残留２Ａペプチドの切断を容易にする。
【０１５８】
「エフェクター機能」は、分化した細胞の特殊化された機能を意味する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。
【０１５９】
本明細書で使用される場合、「エンハンサー」は、その位置および配向に関係なく、発現される核酸配列に関して、核酸配列の転写を増やす、向上させるまたは改良する配列要素を意味する。エンハンサーは、単一のプロモーターから、または２種以上のプロモーターから同時に転写を強化し得る。転写を向上させるこの機能性が保持されるか、または実質的に保持される（例えば、野性型の活性、すなわち、完全長配列の活性の少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％）限り、いずれの切断された、変異されたまたはその他の方法で改変された野性型エンハンサー配列のバリアントも、上記定義の範囲に入る。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、「補助モジュール（アクセサリモジュール）」または「補助モジュール（複数）」は、ＣＡＲと共発現され、ＣＡＲまたはＣＡＲ発現細胞の発現または活性を高める、低下させるまたは変更する要素を意味する。代表的実施形態では、補助モジュールには、表１６に記載の例が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、補助モジュールはＫ１３−ｖＦＬＩＰを含む（表１６）。別の実施形態では、補助モジュールはＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰを含む（表１６）。さらなる実施形態では、補助モジュールは、ＦＫＢＰ−Ｋ１３などの、ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合タンパク質）融合タンパク質を含み、この活性は、二量体化分子の投与により制御できる。
【０１６１】
本明細書で使用される場合、「スイッチドメイン」または「二量体化ドメイン」は通常、二量体化分子の存在下で、別のスイッチドメインと会合する、ポリペプチドベースの実体を意味する。会合は、第１のスイッチドメインに連結、例えば、融合した第１の実体および第２のスイッチドメインに連結、例えば、融合した第２の実体の機能的結合をもたらす。第１と第２のスイッチドメインは、ひとまとめにして二量体化スイッチと呼ばれる。いくつかの実施形態では、第１と第２のスイッチドメインは、相互に同じであり、例えば、それらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、ひとまとめにしてホモ二量体化スイッチと呼ばれる。いくつかの実施形態では、スイッチは細胞内スイッチである。いくつかの実施形態では、スイッチドメインは、ポリペプチドベース実体、例えば、ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合タンパク質）であり、二量体化分子は、小分子、例えば、ＡＰ２０１８７である。
【０１６２】
「二量体化分子」という用語が本明細書で使用される場合、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインの会合を促進する分子を意味する。いくつかの実施形態では、二量体化分子は、対象中で天然には生じない、または顕著な二量体化をもたらすほどの濃度では生じない。いくつかの実施形態では、二量体化分子は小分子、例えば、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、ＲＡＤ００１またはＡＰ２０１８７である。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、「治療制御剤」は、ＣＡＲ発現細胞の活性を制御するために使用される成分を意味する。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ発現細胞の活性を制御するための治療制御剤は、切断型上皮成長因子受容体（ｔＥＧＦＲ）、切断型上皮成長因子受容体ｖｉｉｉ（ｔＥＧＦＲｖｉｉｉ）、切断型ＣＤ３０（ｔＣＤ３０）、切断型ＢＣＭＡ（ｔＢＣＭＡ）、切断型ＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロ還元酵素、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ヒトカスパーゼ８、ヒトカスパーゼ９、誘導型カスパーゼ９、プリンヌクレオシド過リン酸分解酵素、リナマラーゼ／リナマリン／グルコースオキシダーゼ、デオキシリボヌクレオシドキナーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）／インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、ガンマグルタミルシステインシンテターゼ、ＣＤ２０／アルファＣＤ２０、ＣＤ３４／チミジンキナーゼキメラ、ｄｏｘ依存性カスパーゼ２、変異体チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫＳＲ３９）、ＡＰ１９３０／Ｆａｓシステム、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）、選択マーカー、およびこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数を含む。いくつかの治療制御剤の核酸配列は、配列番号８５０〜配列番号８５６および配列番号８８３で提供される（表１６）。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「遺伝子改変細胞より標的とされる疾患」は、治療上有益な結果をもたらすために、遺伝子改変細胞が疾患細胞を標的とするかまたは健康な細胞を標的化するかに関係なく、何らかの形で、いずれかの疾患に関与するいずれかの細胞の、本発明の遺伝子改変細胞による標的化を包含する。遺伝子改変細胞には、遺伝子改変Ｔ細胞、ＮＫ細胞、造血幹細胞、多能性胚性幹細胞、または胚性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲおよび本発明の補助モジュールと共に従来のＣＡＲを含む新規バックボーンを発現し、このＣＡＲは、標的細胞の表面上で発現したいずれかの抗原を標的とし得る。標的とされ得る抗原の例としては、Ｂ細胞上で発現した抗原；癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、生殖細胞腫瘍、および芽細胞腫上で発現した抗原；種々の免疫細胞上で発現した抗原；ならびに種々の血液疾患、自己免疫性疾患、および／または炎症性疾患と関連する細胞上で発現した抗原が挙げられるが、これらに限定されない。標的とされる他の抗原が当業者に明らかであり、その実施形態に関連して、本発明のＣＡＲにより標的とされ得る。
【０１６５】
本明細書で使用される場合、「共発現する」は、２種以上の遺伝子の同時発現を意味する。遺伝子は、例えば、単一タンパク質または単一ポリペプチド鎖としてキメラタンパク質をコードする核酸であってよい。一実施形態では、同時発現は、ＣＡＲおよび免疫応答を調節するタンパク質をコードする単一ベクターを含む。別の実施形態では、同時発現は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび免疫応答を調節する１種または複数のタンパク質をコードする第２のベクターを含む。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、「自己」細胞は、後で細胞が再投与される個体と同じ個体から得られた細胞を意味する。
【０１６７】
本明細書で使用される場合、「遺伝子改変細胞」、「リダイレクトされた細胞」、「遺伝子改変細胞」、または「改変細胞」は、本発明のＣＡＲを発現する細胞を意味する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＣＡＲをコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、同じベクター中にＣＡＲおよび１種または複数の補助分子をコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび補助分子をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび２種以上の補助分子をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび第１の補助分子をコードする第２のベクターおよび第２の補助分子をコードする第３のベクターを含む。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「バックボーン」という用語は、従来のＣＡＲ（表１）と、表２に記載の補助モジュールとの特定の組み合わせを意味する。代表的実施形態では、種々のバックボーンを構成するＣＡＲおよび補助モジュールの特定の組み合わせは、表２に記載されている。一実施形態では、ＣＡＲおよび補助モジュールは、単一核酸分子によりコードされる。別の実施形態では、ＣＡＲは第１の核酸分子によりコードされ、補助モジュールは第２の核酸分子によりコードされる。いくつかの実施形態では、補助モジュールは、補助モジュールの構成要素に数に応じて、２つ以上の核酸分子によりコードされる。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」は、抗原提示細胞、Ｂ細胞、好塩基球、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、好酸球、顆粒球、ヘルパーＴ細胞、白血球、リンパ球、マクロファージ、マスト細胞、メモリー細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、貪食細胞、形質細胞、およびＴ細胞が含まれるが、これらに限定されない、哺乳類免疫系の細胞を意味する。
【０１７０】
用語のＣＡＲ含有細胞の「免疫エフェクター機能」は、刺激分子による刺激時に、ＣＡＲ発現細胞により示されるいずれかの活性を意味する。例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞の免疫エフェクター機能の例には、細胞溶解活性およびサイトカインの分泌を含むヘルパー活性が含まれる。
【０１７１】
本明細書で使用される場合、「免疫エフェクター細胞」は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を意味する。
【０１７２】
本明細書で使用される場合、「免疫応答」は、先天免疫、体液性免疫、細胞性免疫、免疫、炎症反応、後天（適応）免疫、自己免疫、および／または過活動免疫が含まれるが、これらに限定されない、免疫を意味する。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４リンパ球」は、ＣＤ４、すなわち、ＣＤ４＋であるリンパ球を発現するリンパ球を意味する。ＣＤ４リンパ球は、ＣＤ４を発現するＴ細胞であってもよい。
【０１７４】
「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は、相互交換可能であり、本明細書では同義に使用される。例としては、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７５】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の免疫グロブリンまたはＦｃ（結晶化可能フラグメント）領域もしくはＦｃ領域のＦｃＲｎ結合フラグメントを有するモノクローナルもしくはポリクローナル抗原結合フラグメント（本明細書においては、「Ｆｃフラグメント」または「Ｆｃドメイン」と称する）を意味する。抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術または無傷の抗体の酵素的切断もしくは化学的切断により産生され得る。抗原結合フラグメントは、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、および相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、キメラ抗体、ディアボディおよびポリペプチドに特異的抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドが挙げられる。Ｆｃドメインは、２つまたは３つのクラスの抗体をもたらす２つの重鎖の部分を含む。Ｆｃドメインは、組換えＤＮＡ技術または無傷の抗体の酵素的切断（例えば、パパイン切断）もしくは化学的切断により産生され得る。
【０１７６】
本明細書で使用される場合、用語の「抗体フラグメント」は、無傷の抗体の一部のみを含み、通常、無傷の抗体の抗原結合部位を含み、それにより抗原に結合する能力を保持するタンパク質を意味する。この定義により包含される抗体フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端に１種または複数のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントである、Ｆａｂ’フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有する、Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインならびにＣＨ１ドメインのＣ末端に１種または複数のシステイン残基を有する、Ｆｄ’フラグメント；（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有する、Ｆｖフラグメント；（ｖｉ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９））；（ｖｉｉ）単離ＣＤＲ領域；（ｖｉｉｉ）ヒンジ部でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価のフラグメントの、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｘ）単鎖抗体分子（例えば、単鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６（１９８８）；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８５：５８７９−５８８３（１９８８））；（ｘ）２つの抗原結合部位を有し、同じポリペプチド鎖中で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、「ディアボディ」（例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照）；（ｘｉ）１対のタンデム型Ｆｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含み、相補的軽鎖ポリペプチドと共に１対の抗原結合領域を形成する、「直鎖抗体」（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）；および米国特許第５，６４１，８７０号）、が挙げられる。
【０１７７】
本明細書で使用される場合、「単鎖可変フラグメント」、「単鎖抗体可変フラグメント」、または「ｓｃＦｖ」抗体は、リンカーペプチドで結合された重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のみを含む、抗体の形態を意味する。ｓｃＦｖは、単鎖ポリペプチドとして発現することができる。ｓｃＦｖはこれが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。軽鎖および重鎖は、標的抗原に対するｓｃＦｖの特異性が保持される限りにおいて、任意の順序、例えば、ＶＨ−リンカー−ＶＬまたはＶＬ−リンカー−ＶＨであってよい。
【０１７８】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、特異性および結合親和性を付与する抗体の可変領域内のアミノ酸配列を意味する。一般に、それぞれの軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）、およびそれぞれの重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲの境界は、「Ｋａｂａｔ」命番方式および／または「Ｃｈｏｔｈｉａ」命番方式を含む当該技術分野において周知の方法を用いて決定し得る（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７−９４８）。
【０１７９】
本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性による抗体と抗原との間の接触を意味する。特定の態様では、抗体は、少なくとも約１０−７Ｍの親和性、好ましくは、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍの親和性で結合する。
【０１８０】
「〜と同じエピトープに結合」は、抗体、ｓｃＦｖ、ＣＡＲの抗原特異的ドメインまたはその他の結合物質の、標的への結合能力、および例示抗体、ｓｃＦｖ、ＣＡＲの抗原特異的ドメインまたはその他の結合物質と同じエピトープを有することを意味する。一例として、例示抗体、ｓｃＦｖ、またはその他の結合物質およびその他の抗体のエピトープは、標準的エピトープマッピング技術を用いて決定できる。当該技術分野においてよく知られている、エピトープマッピング技術には、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、に記載のエピトープマッピングプロトコルが含まれる。例えば、直鎖エピトープは、例えば、固体支持体上で多数のペプチドを同時に合成し、ペプチドをタンパク質分子の一部に対応させ、ペプチドが支持物に結合している間に、ペプチドを抗体と反応させることにより決定し得る。このような技術は当技術分野において既知であり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８６）Ｍｏｌ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載されている。同様に、立体構造エピトープは、例えば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶解析および２次元核磁気共鳴でアミノ酸の空間高次構造を決定することにより、容易に特定される。例えば、前出のエピトープマッピングプロトコルを参照されたい。タンパク質の抗原性領域はまた、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを使って計算するものなどの標準的抗原性および疎水性親水性指標プロットを用いて特定できる。このコンピュータープログラムは、抗原性プロファイルを決定するために、Ｈｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８を用い；疎水性親水性指標プロット（ＭＯＲＰＨＯＳＹＳのＣＤ１９特許：国際公開第２０１３／０２４０９７号から）のために、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．１５７：１  ０５−１３２を用いる。標的（例えば、ＣＤ１９）に対して選択したモノクローナル抗体がユニークエピトープかどうかを決定するために、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）を用いて、それぞれの抗体をビオチン化できる。上述のように、ＣＤ１９細胞外ドメインコートプレートを用いて、非標識モノクローナル抗体およびビオチン化されたモノクローナル抗体を用いた競合研究を実施できる。ビオチン化ｍＡｂ結合は、ストレプトアビジンアルカリフォスファターゼプローブで検出できる。
【０１８１】
ＣＡＲにより認識されるエピトープはまた、ＣＡＲを構成するｓｃＦｖにより認識されるエピトープから決定できる。例えば、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）の抗原特異的ドメインは、ｓｃＦｖ  ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）（配列番号７３０および配列番号２５００）からなるので、ＣＡＲは、ｓｃＦｖおよびｓｃＦｖが由来する親抗体と同じエピトープを標的とすることが予測される。本発明のＣＡＲおよびバックボーンの構築に使用された、いくつかのｓｃＦｖおよび／またはそれらの親抗体により認識されるエピトープは、当技術分野において既知である。あるいは、ＣＡＲ（バックボーンの一部として存在するＣＡＲを含む）により標的とされるエピトープは、その標的抗原の一連の変異体を生成し、その変異体のＣＡＲ発現細胞に結合する能力を試験することにより決定できる。一例として、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）により認識されるエピトープは、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−Ｎｌｕｃ−ＡｃＶ５融合構築物（配列番号９２５および配列番号２６７０）の一連の変異体を生成することにより決定できる。変異体構築物は好適な細胞株（例えば、２９３ＦＴ細胞）に遺伝子導入され得、融合タンパク質を含む上澄を収集し、ＮＬｕｃ活性をアッセイして、異なる変異体ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−Ｎｌｕｃ−ＡｃＶ５融合タンパク質が上澄中に分泌されていることを確認する。その後、融合タンパク質は、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）ＣＡＲ構築物を発現している細胞（例えば、ジャーカット細胞またはＴ細胞）に結合するそれらの能力を試験され得るＣＡＲ発現細胞に結合できない変異体は、ＭＰＬ特異的ＣＡＲにより標的とされるエピトープを含む候補である。特定のＣＡＲにより認識されるエピトープを特定する別の手法には、異なる試験抗体を用いた機能的競合アッセイが含まれ得る。例えば、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）ＣＡＲを発現しているＴ細胞は、試験ＭＰＬ抗体の非存在下または漸増濃度の異なる試験ＭＰＬ抗体の存在下でＭＰＬを発現している細胞株（例えば、ＨＥＬ細胞）と同時培養され得る。試験ＭＰＬ抗体により認識されるエピトープが、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）ＣＡＲにより認識されるエピトープと重なり合う場合には、試験抗体は、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６５８および配列番号３４０３）ＣＡＲを発現しているＴ細胞により誘導される標的細胞死滅およびサイトカイン産生を用量依存性的に阻止することが予測され得る。試験抗体と同じアイソタイプの特異的抗体は、コントロールとして含め得、また、ＣＡＲ発現Ｔ細胞により誘導される標的細胞死滅およびサイトカイン産生に対し、影響を及ぼさないことが予測され得る。同様に、特異的ＣＡＲは、ジャーカット−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞中でも発現され得、標的細胞株との共培養時に、ＣＡＲ発現ジャーカット−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞によるＥＧＦＰ誘導を阻止する試験抗体の能力を用いて、試験抗体により認識されるエピトープが前記ＣＡＲにより認識されるエピトープと重なり合うかどうかを決定できる。
【０１８２】
本明細書で使用される場合、「治療薬」は、例えば、疾患を、処置する、抑制する、予防する、その影響を軽減する、その重症度を低減する、発症の可能性を低減する、その進行を遅らせる、および／またはそれを治癒するために使用される薬剤を意味する。治療薬により標的とされる疾患には、限定されないが、感染症、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞性腫瘍、芽細胞腫が含まれ、種々の免疫細胞上で発現される抗原、並びに種々の血液疾患、および／または炎症性疾患と関連している細胞上で発現される抗原が含まれる。
【０１８３】
「癌」および「癌性」は、典型的には、制御されていない細胞増殖によって特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を意味するか、または記述する。用語の「癌」は、病理組織学的侵襲性のタイプまたは段階に関係なく、全てのタイプの癌性の増殖または発癌性プロセス、転移性組織または悪性変換細胞、組織、または臓器を包含することが意図されている。固形腫瘍の例には、肝臓、肺、乳房、リンパ系、消化管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺および咽頭に影響を及ぼすものなどの種々の臓器システムの悪性腫瘍、例えば、肉腫、腺癌、および癌腫が挙げられる。腺癌は、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌および食道癌などの悪性腫瘍を含む。一実施形態では、癌は黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。上述の癌の転移性病変もまた、本発明の方法および組成物を用いて処置または予防できる。処置できる他の癌の例には、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む）、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるものを含む環境により誘導される癌、および前記癌の組み合わせが挙げられる。転移癌、例えば、ＰＤ−Ｌ１を発現する転移癌（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の処置は、本明細書に記載の抗体分子を用いて実施できる。
【０１８４】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ（相補ＤＮＡ）、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）、ｒＲＮＡ（リボソームＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ（小ヘアピンＲＮＡ）、ｓｎＲＮＡ（核内低分子ＲＮＡ）、ｓｎｏＲＮＡ（核小体低分子ＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、合成ＲＮＡ、および／またはｔＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
明示的記述なしで、また、別の目的がなければ、本開示がポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、抗体またはそのフラグメントに関する場合、これらの等価物または生物学的等価物は本開示の範囲内に入ることが意図されていることを判断されたい。本明細書で使用される場合、「その生物学的等価物」という用語は、「その等価物」と同義であることが意図されており、基準タンパク質、抗体またはそのフラグメント、ポリペプチドまたは核酸に言及される場合、これらが最小限の相同性を有し、同時に、目的の構造または機能性をまだ維持していることを意図している。本明細書で特に記述がない限り、上記のいずれも、その等価物を同様に含むことが意図されている。例えば、等価物は、少なくとも約７０％の相同性または同一性、または少なくとも約８０％の相同性または同一性、あるいは少なくとも約８５％、あるいは少なくとも約９０％、あるいは少なくとも約９５％、あるいは少なくとも約９８％の相同性または同一性を意味し、基準タンパク質、ポリペプチド、抗体もしくはそのフラグメントまたは核酸に対し、実質的に等価な生物活性を示す。あるいは、ポリヌクレオチドに言及する場合、その等価物は、ストリンジェントな条件下で基準ポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリッド形成するポリヌクレオチドである。あるいは、ポリペプチドに言及する場合、その等価物は、ストリンジェントな条件下で、基準ポリペプチドまたはタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリッド形成するポリヌクレオチドから発現したポリペプチドまたはタンパク質である。
【０１８６】
別の配列に対し、特定のパーセンテージ（例えば、８０％、８５％、９０％、または９５％）の「配列同一性」を有するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）は、整列させた場合、２つの配列の比較において、そのパーセンテージの塩基（またはアミノ酸）が同じであることを意味する。整列およびパーセント相同性または配列同一性は、当該技術分野において既知のソフトウェアプログラム、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８７）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ３０，ｓｅｃｔｉｏｎ  ７．７．１８，Ｔａｂｌｅ  ７．７．１、に記載のもの、を用いて決定できる。デフォルトパラメーターを整列させるために使用するのが好ましい。好ましい整列プログラムは、デフォルトパラメーターを用いたＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、次のデフォルトパラメーターを用いたＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。遺伝コード＝標準；フィルター＝なし；ストランド＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；説明＝５０配列；ソート＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ジェンバンク＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ジェンバンクＣＤＳ翻訳＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、次のインターネットアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴで見つけることができる。
【０１８７】
本明細書で使用される場合、用語の「単離」は、実質的にその他の材料を含まない分子または生物学的物質または細胞物質を意味する。一態様では、用語の「単離」は、天然源中に存在する、ＤＮＡまたはＲＮＡ、またはタンパク質またはポリペプチド、または細胞もしくは細胞器官、または組織もしくは臓器からそれぞれ分離された、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸、またはタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、抗体またはその誘導体）、または細胞もしくは細胞器官、または組織もしくは臓器を意味する。用語の「単離」はまた、組換えＤＮＡ技術で作製される場合には、細胞質物質、ウイルス性物質、または培地を実質的に含まない核酸またはペプチドを意味し、または化学的に合成される場合には、化学的前駆物質もしくはその他の化学薬品を実質的に含まない、核酸またはペプチドを意味する。さらに、「単離核酸」は、天然にフラグメントとして存在せず、天然の状態では見つからないはずの核酸フラグメントを含むことを意味する。本明細書で使われる場合、用語の「単離」はまた、他の細胞質タンパク質から単離されたポリペプチドを意味し、また、精製されたおよび組換え型ポリペプチドの両方を包含することを意味する。本明細書で使われる場合、用語の「単離」はまた、他の細胞または組織から単離された細胞または組織を意味し、また、培養および遺伝子改変された細胞または組織の両方を包含することを意味する。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、「ネイキッドＤＮＡ」は、発現に適切な配向で好適な発現ベクター内にクローン化されたＣＡＲをコードするＤＮＡを意味する。使用され得るウイルスベクターには、ＳＩＮレンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、泡沫状ウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ハイブリッドベクター、および／またはプラスミドトランスポゾン（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンシステム）、またはインテグラーゼ系のベクターシステムが含まれるが、これらに限定されない。本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る他のベクターが、当業者に明らかであろう。
【０１８９】
本明細書で使用される場合、「標的細胞」は、特定の疾患に関与し、本発明の遺伝子改変細胞（遺伝子改変Ｔ細胞、ＮＫ細胞、造血幹細胞、多能性幹細胞、および胚性幹細胞が挙げられるが、これらに限定されない）によって標的とされ得る細胞を意味する。他の標的細胞が当業者には明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。
【０１９０】
「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は、相互交換可能であり、本明細書では同義に使用される。例としては、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
本明細書で使用される場合、「ベクター」、「クローニングベクター」、および「発現ベクター」は、ビークルであって、これにより、宿主を形質転換しかつ導入配列の発現（例えば、転写および翻訳）を促進するように、ポリヌクレオチド配列（例えば、外来遺伝子）が宿主細胞に導入され得る、ビークルを意味する。ベクターには、プラスミド、ファージ、ウイルスなどが含まれる。
【０１９２】
「誘導体」または「バリアント」または「フラグメント」と共に使用される場合、用語の「機能的」は、誘導体またはバリアントまたはそのフラグメントの実体または分子の生物活性に実質的に類似の生物活性を有するポリペプチドを意味する。
【０１９３】
本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、目的の部位での薬剤の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法または経路により、本明細書で開示の薬剤の対象中への配置を意味する。
【０１９４】
「有益な結果」には、疾患状態の重症度を緩和するか、または軽減する、疾患状態が悪化するのを防ぐ、疾患状態を治癒する、疾患状態を発症するのを防ぐ、患者が疾患状態を発症する機会を低減する、および患者の寿命もしくは寿命の予想値を延長することが含まれ得るが、これらには全く限定されない。非限定的例として、「有益な結果」または「目的の結果」は、１種または複数の症状（単一または複数）の軽減、傷害の程度の低減、癌進行の安定化（すなわち、悪化しない）状態、転移または侵襲の遅延または緩徐化、および癌に関連する症状の改善または緩和であってよい。
【０１９５】
本明細書で使用される場合、「処置する（治療する）（ｔｒｅａｔ）」、「処置（治療）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置（治療）（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」、という用語は、治療処置を意味し、その目的は、疾患または障害に関連する状態の進行または重症度を、逆転させる、軽減する、抑制する、遅らせるまたは停止させることである。用語の「処置」は、癌などの状態、疾患または障害の少なくとも１種の有害作用または症状を低減するまたは軽減することを含む。１種または複数の症状または臨床マーカーが低減されると、処置は通常、「効果的」である。あるいは、疾患の進行が遅くなるまたは停止される場合、処置は、「効果的」である。すなわち、「処置」は、症状またはマーカーの改善だけではなく、少なくとも、処置がない場合に想定される症状の進行または悪化を示す状態が中断されることも含まれる。有益な、または望ましい臨床結果としては、検出可能であってもそうでなくても、１種または複数の症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患進行の遅れまたは緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的または全体の）が挙げられるが、これらに限定されない。用語の疾患の「処置」はまた、疾患の症状または副作用からの軽減を提供することも含む（対症療法を含む）。いくつかの実施形態では、癌の処置には、腫瘍体積の減少、癌細胞の数の低減、癌転移の抑制、余命の延長、癌細胞増殖の低減、細胞生存の低減、または癌性状態に関連する種々の生理学的症状の改善が含まれる。
【０１９６】
本明細書で使用される場合、「状態」および「病状」は、癌、腫瘍または感染症を含み得る。代表的実施形態では、何ら限定されるものではないが、状態には、任意の形態の悪性の新生細胞増殖性障害または疾患が含まれる。代表的実施形態では、状態には、腎臓癌、黒色腫、前立腺癌、乳癌、神経膠芽腫、肺癌、結腸癌、または膀胱癌の内のいずれか１種または複数が含まれる。
【０１９７】
本明細書で使用される場合、用語の「有効量」または「治療有効量（治療上有効な量）」は、少なくとも１種または複数の疾患の症状を低減するための、本明細書で開示の１種または複数のペプチドまたはその変異体、バリアント、類似体または誘導体を含む医薬組成物の量を意味し、また、目的の効果を得るのに十分な量の薬理学的組成物を意味する。本明細書で使用される場合、語句の「治療有効量」は、任意の医学的処置に適用可能な合理的なベネフィットリスク比で、障害を処置するための十分な量の組成物を意味する。
【０１９８】
治療的にまたは予防的に意味のある症状の低減は、測定されたパラメーターの、コントロールまたは非処置対象または本明細書に記載のオリゴペプチドの投与前の対象の状態と比較して、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％またはそれを超える低減である。測定されたまたは測定可能なパラメーターには、疾患の臨床的に検出可能なマーカー、例えば、生物学的マーカーならびに糖尿病の症状またはマーカーの臨床的に認められている尺度に関連するパラメーターの上昇したまたは低下したレベルが含まれる。しかしながら、本明細書で開示の組成物および製剤の総一日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることは理解されよう。必要な正確な量は、対象の処置される疾患の種類、性別、年齢、および体重などの要因に依存して変化する。
【０１９９】
語句の「第一選択」または「第二選択」または「第三選択」は、患者が受ける処置の順番を意味する。第一選択治療計画は、最初に投与される処置であり、一方、第二選択または第三選択治療は、第一選択治療または第二選択治療薬の後にそれぞれ投与される。米国国立癌研究所は、第一選択治療を「疾患または状態の最初の処置」と定義している。癌の患者では、一次処置は、手術、化学療法、放射線療法、またはこれらの療法の組み合わせであり得る。第一選択治療はまた、当業者により「一次療法および一次治療」とも呼ばれる。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｗｅｂｓｉｔｅ  ａｔ  ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ，ｌａｓｔ  ｖｉｓｉｔｅｄ  ｏｎ  Ｍａｙ  １，２００８、を参照されたい。通常、患者は、その後に化学療法計画が投与される。理由は、患者は、第一選択治療に対し良好な臨床反応または無症候性反応を示さなかった、または第一選択治療を停止したためである。
【０２００】
本明細書で使用される場合、「哺乳類」は、限定されないが、ヒトおよび非ヒト霊長動物、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿ならびにサル種；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマなどの家畜動物；イヌおよびネコなどの飼育哺乳動物；マウス、ラット、モルモットなどの齧歯動物を含む実験動物を含む、哺乳綱の任意のメンバーを意味する。この用語は特定の年齢または性別を表すものではない。このため、成体および新生児／仔の対象、ならびに胎児／仔は、雄性または雌性にかかわらず、本用語の範囲内に含まれることが意図される。
【０２０１】
キメラ抗原受容体
ＣＡＲおよび補助モジュールを含む組成物ならびにこれを用いて、癌を含む疾患を処置する方法が本明細書で提供される。本明細書で使用される場合、従来のＣＡＲ（表１）と、表２に記載の補助モジュールとの特定の組み合わせにより、「バックボーン」（表２）が定義される。
【０２０２】
表１：従来のＣＡＲ構造第一世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  Ｉ）は、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）（例えば、ＣＤ３ｚ）を有し、共刺激ドメインを有さない。第二世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  ２またはＣＡＲ  ＩＩ）は、１つの共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢまたはＣＤ２８）および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）（例えば、ＣＤ３ｚ）を有する。第三世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  ３またはＣＡＲ  ＩＩＩ）は、２つの共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢおよびＣＤ２８）および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）（例えば、ＣＤ３ｚ）を有する。
【表１】
2019510498.tif 000003
【表２】
2019510498.tif 000004
2019510498.tif 000005
2019510498.tif 000006
【０２０３】
ＣＡＲ成分の代表的実施形態は、表１〜６、８、１１、および１５に記載されている。
【０２０４】
本明細書に記載のように、種々のバックボーンは、ＣＡＲ成分および補助モジュールを含む。補助モジュールの代表的実施形態は、表１６に記載されている。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、組成物は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸を含み（表１）、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表２１および２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン１〜６２（表２）の内のいずれか１種または複数をコードする核酸を含み、コードされたＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９、２０および２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン１をコードする核酸を含み、バックボーン１中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン２をコードする核酸を含み、バックボーン２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３２をコードする核酸を含み、バックボーン３２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２０および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３３をコードする核酸を含み、バックボーン３３中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。種々の実施形態では、核酸は、癌の処置に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする核酸は、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、組成物は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの内のいずれかをコードする核酸によりコードされたポリペプチドを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２１および２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン１〜６２（表２）の内のいずれか１種または複数をコードする核酸によりコードされたポリペプチドを含み、コードされたＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２０〜２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン１をコードする核酸によりコードされたポリペプチドを含み、バックボーン１中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン２をコードする核酸によりコードされたポリペプチドを含み、バックボーン２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３２をコードする核酸を含み、バックボーン３２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２０および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３３をコードする核酸を含み、バックボーン３３中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。種々の実施形態では、ポリペプチドは、癌の処置に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする核酸によりコードされたポリペプチドは、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、組成物は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの内のいずれかをコードする核酸を含むベクターを含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２１および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン１〜６２（表２）の内のいずれか１種または複数をコードする核酸を含むベクターを含み、コードされたＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表２０〜２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含み、バックボーン１中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン２をコードする核酸をコードするベクターを含み、バックボーン２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含み、バックボーン３２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物はバックボーン３３をコードする核酸をコードするベクターを含み、バックボーン３３中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。種々の実施形態では、ベクターは、癌の処置に使用される。いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたは本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする核酸を含むベクターは、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、組成物は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１〜６２（表２）の内のいずれか１種または複数をコードする核酸を含むベクターを含むベクター含む遺伝子改変細胞を含み、コードされたＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９〜２２に記載の１種または複数の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表１９および２２に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン１をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を含み、バックボーン１中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を含み、バックボーン２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン３２をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を含み、バックボーン３２中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、組成物は、バックボーン３３をコードする核酸をコードするベクターを含む遺伝子改変細胞を含み、バックボーン３３中のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書に記載の１種または複数の癌特異的抗原を標的とする。種々の実施形態では、遺伝子改変細胞は、癌の処置に使用される。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、癌細胞上の２種以上の抗原を標的とする。
【０２０９】
種々の実施形態では、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離核酸分子は、１、２、３つまたはそれを超える抗原特異的ドメインをコードする。
【０２１０】
種々の実施形態では、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離核酸分子は、１、２、３つまたはそれを超える共刺激ドメインをコードする。
【０２１１】
種々の実施形態では、本明細書に記載のバックボーンのＣＡＲ成分をコードする単離核酸分子は、１、２、３つまたはそれを超える細胞内シグナル伝達ドメインをコードする。
【０２１２】
本明細書に記載のＣＡＲおよび補助モジュールの目的の成分をコードする核酸配列は、当該技術分野において既知の組換え法を用いて、例えば、核酸分子を発現している細胞由来のライブラリーを選別することにより、核酸分子をそれが含まれていることが既知であるベクターから取り出すことにより、または標準的技術を用いて、それを含む細胞および組織から直接に単離することにより、得ることができる。あるいは、目的の核酸は、クローン化ではなく、合成的に作製できる。代表的実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび補助モジュールの目的の成分をコードする核酸配列は、表３〜２２に記載されている。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび副成分を発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、ＣＡＲの毒性を低減する薬剤も発現する。代表的実施形態では、このような薬剤は、表１６に示されている。代表的実施形態では、このような薬剤には、限定されないが、ＩＬ−６に対するいずれか１、２、３種またはそれを超えるｓｃＦｖ（例えば、配列番号８９９）、ＩＬ−６受容体アルファに対するラクダ科ｖＨＨ（例えば、配列番号８８４）、ＩＬ−６受容体アルファおよびアルブミンを標的とする二重特異性ラクダ科ｖＨＨ（配列番号８８６）、ＦＸ０６ペプチド（配列番号９００）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび副成分を発現する本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、ＣＡＲの活性を高める薬剤も発現する。代表的実施形態では、このような薬剤は、表１６に示されている。代表的実施形態では、このような薬剤には、限定されないが、いずれか１、２、３種またはそれを超えるｈＴＥＲＴ（配列番号９０３）、ヘパリナーゼ（配列番号９０４）、可溶性ＨＶＥＭ（配列番号９０１）、可溶性ＨＶＥＭおよびアルブミンを標的とするラクダ科ｖＨＨを含む融合タンパク質（配列番号９０２）、ＰＤ１を標的とするｓｃＦｖ（配列番号８８９および８９０）、ＣＴＬＡ４を標的とするｓｃＦｖ（配列番号８９４）、ＰＤ１およびアルブミンを標的とする二重特異性タンパク質（配列番号８９２および８９３）、ＣＴＬＡ４およびアルブミンを標的とする二重特異性タンパク質（配列番号８９４）またはこれらの組み合わせが挙げられる。二重特異性タンパク質でアルブミンを標的とする理由は、ｓｃＦｖおよびｖＨＨフラグメントの半減期を延長するためである。これらのフラグメントは、このようにしなければ、それらの比較的小さいサイズのために、腎臓により急速に排除される。
【０２１５】
特定の実施形態では、ＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む従来のＣＡＲ  Ｉを含み、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ補助モジュールを共発現する、バックボーン１を含む代表的構築物が、表１９に示されている。
【０２１６】
特定の実施形態では、４１ＢＢ共刺激ドメイン、ＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む従来のＣＡＲ  ＩＩを含み、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ補助モジュールを共発現する、バックボーン３２を含む代表的構築物が、表２０に示されている。
【０２１７】
特定の実施形態では、４１ＢＢ共刺激ドメインおよびＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む代表的な従来のＣＡＲ  ＩＩ構築物が、表２１に記載されている。
【０２１８】
特定の実施形態では、本発明の種々の実施形態における代表的ＣＡＲ構築物が表２２に記載されている。
【０２１９】
抗原特異的ドメイン
本明細書に記載の種々のバックボーンを含む組成物は、本明細書に記載の癌関連抗原に特異的に結合する１種または複数のＡＳＤを含むＣＡＲを含む。ＡＳＤの配列は、ＣＡＲの残りの部分をコードする核酸配列に隣接し、その核酸配列と同じ読み枠にある。
【０２２０】
一実施形態では、それぞれの抗原特異的領域は、抗原特異性を与えるのにＶＨドメイン単独で十分である場合（「単一ドメイン抗体」）、ＶＨ、ＣＨ１、ヒンジ、ならびにＣＨ２およびＣＨ３（Ｆｃ）Ｉｇドメインを有する完全長ＩｇＧ重鎖（標的抗原に特異的）を含む。完全長ＩｇＧ重鎖は、適切な膜貫通ドメインを介して、共刺激ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結され得る。ＶＨおよびＶＬドメインの両方が、完全に活性な抗原特異的標的化領域の生成が必要な場合には、ＶＨ含有ＣＡＲおよび完全長ラムダ軽鎖（ＩｇＬ）の両方が細胞中に導入されて、活性な抗原特異的標的化領域が生成される。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、コードされたＣＡＲ分子の抗原特異的ドメインは、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨもしくはＶＬドメイン、またはラクダ科ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、マウス配列のｓｃＦｖ（これをヒト化する）に比べて、ヒト化されているｓｃＦｖ抗体フラグメントである。
【０２２２】
いくつかの事例では、ｓｃＦｖは当該技術分野において既知の方法に従って調製できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６  ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）。ｓｃＦｖ分子は、フレキシブルポリペプチドリンカーを用いて、ＶＨおよびＶＬ領域を一緒に連結することにより作製できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長さおよび／またはアミノ酸組成を備えたリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長さは、ｓｃＦｖの可変領域が折り畳まれ、相互作用する方法に大きく影響し得る。例えば、短いポリペプチドリンカーが用いられる場合（例えば、５〜１０アミノ酸）、鎖内折り畳みが妨げられる。鎖間の折り畳みはまた、２つの可変領域を一緒にして、機能的エピトープ結合部位を形成することが必要とされる。リンカー配向およびサイズの例については、例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号、同２００５／０１７５６０６号、同２００７／００１４７９４号、ならびに国際公開第２００６／０２０２５８号、および国際公開第２００７／０２４７１５号を参照されたい。これらの文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２３】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に、少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれを超えるアミノ酸残基を含み得る。リンカー配列は、任意の天然アミノ酸を含んでよい。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、アミノ酸のグリシンおよびセリンを含む。別の実施形態では、リンカー配列は、一連のグリシンおよびセリン反復、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号２５２、配列番号２５３）を含み、ｎは、１以上の正の整数である。一実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２５４、配列番号２５４）または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２５０〜配列番号２５５）であり得る。リンカー長さの変動は、活性を維持または高め得、活性試験に優れた効力をもたらす。
【０２２４】
別の態様では、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、またはそのフラグメント、例えば、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。このようなＴＣＲを作製する方法は、当技術分野において既知である。例えば、ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７：１３６９−１３７７（２０００）；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １１：４８７−４９６（２００４）；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９（４）：３６５−  ７４（２０１２）を参照されたい。（これらの文献は、その全体が本明細書に組み込まれる）。例えば、ｓｃＴＣＲは、リンカー（例えば、フレキシブルペプチド）により連結された、Ｔ細胞クローン由来のＶαおよびＶβ遺伝子を含むように遺伝子改変できる。この手法は、癌関連標的に極めて有用であり、癌関連標的それ自体は細胞内であるが、しかし、このような抗原（ペプチド）のフラグメントは、ＭＨＣにより癌細胞の表面上に提示される。
【０２２５】
一実施形態では、抗原特異的ドメインは、本明細書でリストした抗体の、１、２または３つ全ての重鎖（ｈｃ）ＣＤＲ、ｈｃＣＤＲ１、ｈｃＣＤＲ２およびｈｃＣＤＲ３、および／または本明細書でリストした抗体の、１、２または３つ全ての軽鎖（ｌｃ）ＣＤＲ、ｌｃＣＤＲ１、ｌｃＣＤＲ２およびｌｃＣＤＲ３を含む。
【０２２６】
別の実施形態では、抗原特異的ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの態様では、非ヒト抗体がヒト化され、抗体の特異的配列または領域は、ヒト中で天然に産生された抗体またはそのフラグメントに対する類似性を高めるように改変される。一態様では、抗原結合ドメインはヒト化される。ヒト化抗体は、限定されないが、下記を含む、当該技術分野において既知の種々の技術を用いて生成できる：ＣＤＲグラフト化（例えば、欧州特許第２３９，４００号；国際公開特許第９１／０９９６７号；および米国特許第５，２２５，５３９号、同５，５３０，１０１号、同５，５８５，０８９号を参照、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ベニアリングまたはリサーフェイシング（例えば、欧州特許第５９２，１０６号および同５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３を参照、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、チェーンシャッフリング（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号を参照、この特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、および、例えば、米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号、同２００５／００４８６１７号、米国特許第６，４０７，２１３号、同５，７６６，８８６号、国際公開特許第９３１７１０５号、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９−２５（２００２），Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３−６０（２０００），Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−  ７９（２０００），Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７），Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５−９０４（１９９６），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ  Ｊ  Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）（これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された技術。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントを含む本発明のＣＡＲ組成物の一部はヒト化され、標的抗原に対する高い親和性およびその他の好ましい生物学的特性を保持している。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、標的抗原に特異的なＴ細胞受容体またはＴ細胞受容体のフラグメントであり、このフラグメントは、標的抗原に対する特異性を保持している。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｓｃＦｖ抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗原特異的ｓｃＦｖ抗体フラグメントは、それらが同じ抗原に、それが由来するＩｇＧ抗体と同じまたは同等の親和性で結合するという点で機能的である。他の実施形態では、抗体フラグメントは、それが由来する抗体に比べて、抗原に対するより低い結合親和性を有するが、それは、本明細書に記載の生物学的応答をもたらすという点で機能的である。一実施形態では、ＣＡＲ分子は、標的抗原に対し、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−６Ｍまたは１０−８Ｍの結合親和性（ＫＤ）を有する抗体フラグメントを含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する。通常、内在性タンパク質由来のペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに入り、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、全ての有核細胞により構成的に発現されている。癌では、ウイルス特異的および／または腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法のためのユニークな種類の細胞表面標的を提示する。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１またはＨＬＡ−Ａ２との関連で、ウイルス性または腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒａｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１１１７（１６）：４２６２−４２７２；Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｌｍｍｕｎｏｌ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ２００１８（２１）：１６０１−１６０８；Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照されたい。）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ライブラリー、例えば、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーの選別により特定できる。ＨＬＡ−Ａ２に結合したＷＴ１を標的とするＴＣＲ様抗体をベースにした代表的ＣＡＲは、配列番号１１７６〜配列番号１１７９に示されている。本発明では、ＣＡＲは、いくつかのＨＬＡ−Ａ２拘束性細胞内ペプチドに対するＴＣＲ様抗体由来の抗原結合ドメインを用いて生成された。標的タンパク質抗原、ペプチドフラグメントおよびペプチド配列は表２３に示されている。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、当業者に理解されるように、本明細書に記載の抗体の機能性フラグメント（ｓｃＦｖフラグメントを含む）を含むＣＡＲが標的抗原に結合する場合、免疫応答の活性化、その標的抗原由来のシグナル伝達の抑制、キナーゼ活性の阻害、などの生物学的応答が誘導される。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載の補助モジュールと共に発現したＣＡＲに標的にされ得る疾患に特異的な抗原には、限定されないが、下記の内のいずれか１種または複数が挙げられる：ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＭＰＬ、ＣＤ１２３、ＣＤ３２、ＣＤ１３８、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２７６、ＣＤ３２４、ＣＤ３０、ＣＤ３２、ＦｃＲＨ５、ＣＤ９９、組織因子、アミロイド、免疫グロブリンのＦｃ領域、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣＬ１）、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ１１Ｒａ、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＰＲＳＳ２１、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、Ｐｒｏｓｔａｓｅ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、Ｅｐｈｒｉｎ  Ｂ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐｌ００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅａ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＴＣＲ−ベータ１定常鎖、ＴＣＲベータ２定常鎖、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−ｌａ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１タンパク質、ＥＢＢ  ｇｐ３５０、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０、ＭＡＧＥ−Ａｌ、ＭＡＧＥ  Ａｌ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビンおよびテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−ｌ／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、ＤＬＬ３、ＴＲＯＰ２、ＰＴＫ７、ＧＣＣ、ＡＦＰ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｂｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ＲＵｌ、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＦＩＴＣ、黄体化ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＦＩＴＣ、黄体化ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、またはこれらの組み合わせ。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載の補助モジュールと共に発現したＣＡＲに標的にされ得る疾患に特異的な抗原には、限定されないが、下記の内のいずれか１種または複数が挙げられる：４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチンのエクストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＬＡＭＰ１、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、またはそれらの組み合わせ。癌に特異的な他の抗原が当業者に明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載の補助モジュールと共に発現される場合、ＣＡＲにより標的とされ得る癌に特異的な抗原には、限定されないが、ＭＰＬ、ＣＤ１９、ＦＬＴ３、ＧＲＰ−７８、ＣＤ７９ｂ、Ｌｙ−１、Ｌｙｍ２、ＣＤ２３、ＣＤ１７９ｂ、ＣＤＨ１、ＣＤＨ６、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ１７、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＴＲＯＰ２、ＴＩＭ１、ＬＡＭＰ１またはこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＭＰＬ、ＣＤ１９、ＦＬＴ３、ＧＲＰ−７８、ＣＤ７９ｂ、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＣＤ２３、ＣＤＨ１、ＣＤＨ６、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ１７、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＴＲＯＰ２、ＴＩＭ１、ＬＡＭＰ１に特異的なＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表１１に示されるｓｃＦｖ配列を含む。
【０２３４】
ＣＡＲは、単独でまたは本明細書に記載の補助モジュールと共に使用される場合、疾患支援（ｄｉｓｅａｓｅ−ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ）抗原（例えば、本明細書に記載の疾患支援抗原）に結合した抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体フラグメント）を含むことができる。いくつかの実施形態では、疾患支援抗原は、病原性細胞の生存と増殖を支援する細胞上に存在する抗原である。いくつかの実施形態では、疾患支援抗原は、間質細胞または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）上に存在する抗原である。間質細胞は、成長因子およびサイトカインを分泌し、微小環境中で細胞増殖を促進することができる。ＭＤＳＣ細胞は、Ｔ細胞増殖および活性化を阻止することができる。理論に束縛されることを意図するものではないが、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、疾患支援細胞を破壊し、それにより、病原性細胞の増殖と生存を間接的に阻止する。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、間質細胞抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）およびテネイシンの内の１種または複数から選択される。ある実施形態では、ＦＡＰ特異的抗体は、シブロツズマブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）と結合を競合するか、またはこれと同じＣＤＲを有する。いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣは、ＣＤ３３，ＣＤ１１ｂ、Ｃ１４５、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂの内の１種または複数から選択される。したがって、いくつかの実施形態では、疾患支援抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）またはテネイシン、ＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂの内の１種または複数から選択される。
【０２３６】
さらなる実施形態では、ＣＡＲのそれぞれの抗原特異的領域は、二価（ｄｉｖａｌｅｎｔ）（または二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ））単鎖可変フラグメント（ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ）を含む。ｄｉ−ｓｃＦＶを含むＣＡＲでは、それぞれの抗原に特異的な２つのｓｃＦｖが、２つのＶＨおよび２つのＶＬ領域を有する単一ペプチド鎖を生成することにより一緒に連結され、直列ｓｃＦｖを生ずる。（Ｘｉｏｎｇ，Ｃｈｅｎｇ−Ｙｉ；Ｎａｔａｒａｊａｎ，Ａ；Ｓｈｉ，ＸＢ；Ｄｅｎａｒｄｏ，ＧＬ；Ｄｅｎａｒｄｏ，ＳＪ（２００６）．“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＭＵＣ−１  ｍｕｌｔｉｍｅｒ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉ−ｓｃＦｖ  ｕｎｐａｉｒｅｄ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｎ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ”．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（８）：３５９−３６７；Ｋｕｆｅｒ，Ｐｅｔｅｒ；Ｌｕｔｔｅｒｂｕｓｅ，Ｒａｌｆ；Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｐａｔｒｉｃｋ  Ａ．（２００４）．“Ａ  ｒｅｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２２（５）：２３８−２４４）。少なくとも２つの抗原特異的標的化領域を含むＣＡＲは、２つの抗原のそれぞれに特異的な２つのｓｃＦｖを発現することになる。得られたＡＳＤは、ヒンジ部および膜貫通ドメインを介して共刺激ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに結合される。あるいは、２つの抗原特異的標的化領域を含むＣＡＲは、それぞれの２つの抗原または同じ抗原の２つのエピトープに特異的な２つのｖＨＨを発現することになる。２つの抗原を標的とする代表的ＣＡＲは、配列番号１０４２、１０４３、１０４９、１０５０および１０８７により示されている。
【０２３７】
さらなる実施形態では、ＣＡＲの各ＡＳＤは、ダイアボディを含む。ダイアボディでは、ｓｃＦｖは、２つの可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーペプチドを用いて作製され、ｓｃＦｖを二量体化させる。さらにより短いリンカー（１つまたは２つのアミノ酸）は、三量体、いわゆるトリアボディまたはトリボディの形成をもたらす。テトラボディもまた使用され得る。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表４に記載のＶＬフラグメントを含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表６に記載のＶＨフラグメントを含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表７に記載のＶＨＨフラグメント（ナノボディ）を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表８に記載のアフィボディを含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表１０に記載のリガンドを含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＳＤは、表１１に記載のｓｃＦｖフラグメントを含む。
【０２４４】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表４および６に示す、それぞれ、この抗原を標的とするｖＬおよびｖＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４５】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表７に示す、この抗原を標的とするｖＨＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４６】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表８に示す、この抗原を標的とする非免疫グロブリン足場の抗原結合部分である。
【０２４７】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、この抗原標的抗原に結合する受容体の抗原結合部分である。
【０２４８】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原結合特異的ドメインは、この抗原標的抗原に結合するリガンドの抗原結合部分である。
【０２４９】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表１１に示す、この抗原を標的とするｓｃＦｖのｖＬおよびｖＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２５０】
別の実施形態では、本発明は、表１９〜２２に記載の異なる標的上の本発明のＣＡＲのいずれかと同じエピトープに結合するＣＡＲを提供する（すなわち、異なる標的に対する結合を、本発明のいずれかのＣＡＲと、交差競合する能力を有するＣＡＲ）。いくつかの実施形態では、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、抗体のｖＬフラグメント、ｖＨフラグメントまたはｓｃＦｖフラグメント由来であり得る。いくつかの実施形態では、表１９〜２２に記載の本発明のＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準抗体は、配列番号２３３４〜２５６８（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。代表的実施形態では、配列番号２３３４により示される基準ｓｃＦｖ  ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）を交差競合試験に用いて、表１９〜２２に記載のＦＭＣ３６ベースの従来のＣＡＲおよび本発明のバックボーン（配列番号２６７２、２９４２、３２１２、３９４５〜３５１５）により認識される標的−エピトープを特定することができる。いくつかの実施形態では、表１９〜２２に記載の本発明のＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ｖＨＨ抗体は、配列番号２２６９〜２２９３（表７）に示す配列を有するｖＨＨである。いくつかの実施形態では、表１９〜２２に記載の本発明のＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準非免疫グロブリン抗原結合足場は、配列番号２２９４〜２２９８（表８）に示す配列を有する非免疫グロブリン抗原結合足場である。いくつかの実施形態では、表１９〜２２に記載の本発明のＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準リガンドは、配列番号２３２３〜２３３３（表１０）に示す配列を有するリガンドである。いくつかの実施形態では、異なる標的に対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号２６７２〜２９４１（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２５１】
ある実施形態では、本発明のＭＰＬ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１１７〜１１２５）により認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準抗体は、米国特許出願公開第２０１２／０２６９８１４Ａ１号に記載の抗体ｍＡｂ−１．６、ｍＡｂ−１．１１１、ｍＡｂ−１．７５、ｍＡｂ−１．７８、ｍＡｂ−１．１６９、およびｍＡｂ−１．３６である。
【０２５２】
ある実施形態では、本発明のＭＰＬ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１１７〜１１２５）により認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４９９〜２５０６（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２５３】
ある実施形態では、本発明のＭＰＬ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１１７〜１１２５）により認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準リガンドは、配列番号２３２３〜２３２４（表１０）に示す配列を有するリガンドである。
【０２５４】
ある実施形態では、本発明のＭＰＬ標的化ＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１１７〜１１２５および１１６４（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２５５】
好ましい実施形態では、本発明のＭＰＬ標的化ＣＡＲは、ペプチド配列−ＰＷＱＤＧＰＫ−に対応するまたはそれに重なり合うＭＰＬ−エピトープに結合する。
【０２５６】
ある実施形態では、本発明のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号９３０〜９４１）により認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２３３６〜２３４７（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２５７】
ある実施形態では、本発明のＣＤ１９標的化ＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号９３０〜９４１（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２５８】
ある実施形態では、本発明のＣＤ２０標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号９６４〜９７７）により認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２３６６〜２３８０（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２５９】
ある実施形態では、本発明のＣＤ２０標的化ＣＡＲにより認識される標的−エピトープを特定するための、交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号９６４〜９７７（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２６０】
好ましい実施形態では、本発明のＣＤ２０標的化ＣＡＲは、配列−ＰＡＧＩＹＡＰＩ−、−ＦＬＫＭＥＳＬＮＦＩＲＡＨＴＰ−、−ＨＦＬＫＭＥＳＬＮＦＩＲＡＨＴＰＹ−、−ＹＮＡＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴＱＹ−、−ＹＮＡＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴ−および−ＹＮＣＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰ−の内の１種または複数に対応するエピトープに結合する。
【０２６１】
ある実施形態では、本発明のＤＬＬ３標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０４４〜１０４５）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４４３〜２４４４（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２６２】
ある実施形態では、本発明のＤＬＬ３標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０４４〜１０４５（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２６３】
ある実施形態では、本発明のＬＡＭＰ１標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１０４〜１１０５）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４８９〜２４９０（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２６４】
ある実施形態では、本発明のＬＡＭＰ１標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０４４〜１０４５（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２６５】
ある実施形態では、本発明のＴＲＯＰ２標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号２９１０〜２９１１）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５４４〜２５４５（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２６６】
ある実施形態では、本発明のＴＲＯＰ２標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号２９１０〜２９１１（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２６７】
ある実施形態では、本発明のＰＴＫ７標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１４３〜１１４４）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５２３〜２５２４（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２６８】
ある実施形態では、本発明のＰＴＫ７標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１４３〜１１４４（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２６９】
ある実施形態では、ＣＤ２３標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号２９３２）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５６５（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２７０】
ある実施形態では、本発明のＣＤ２３標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号２９３２（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２７１】
ある実施形態では、ＴＣＲ−ガンマ−デルタ−標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１５５）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５３５（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２７２】
ある実施形態では、本発明のＴＣＲ−ガンマ−デルタ−標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１５５（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２７３】
ある実施形態では、本発明のＣＤＨ６標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１６〜１０１７）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４１８〜２４１９（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２７４】
ある実施形態では、本発明のＣＤＨ６標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０１６〜１０１７（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２７５】
ある実施形態では、本発明のＣＤＨ１９標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１９および１１８０）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４２１および２５５８（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２７６】
ある実施形態では、本発明のＣＤＨ１９標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０１９および１１８０（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２７７】
ある実施形態では、本発明のＣＤ３２４標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１４〜１０１５）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４１６〜２４１７（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２７８】
ある実施形態では、本発明のＣＤ３２４標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０１４〜１０１５（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２７９】
ある実施形態では、ＣＤ２７６標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号２５７８）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４１５（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２８０】
ある実施形態では、本発明のＣＤ２７６標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号２５７８（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２８１】
ある実施形態では、本発明のＧＦＲａ４標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０６６〜１０６７）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４６１〜２４６２（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２８２】
ある実施形態では、本発明のＧＦＲａ４標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０６６〜１０６７（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２８３】
ある実施形態では、本発明のＣＳＦ２ＲＡ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１０４０〜１０４１）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２４４１〜２４４２（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２８４】
ある実施形態では、本発明のＣＳＦ２ＲＡ標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１０４０〜１０４１（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２８５】
ある実施形態では、本発明のＢ７Ｈ４標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号２９２９〜２９３０）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５６２〜２５６３（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２８６】
ある実施形態では、本発明のＢ７Ｈ４標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号２９２９〜２９３０（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２８７】
ある実施形態では、ＮＹ−ＢＲ１標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１３１）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５１２（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２８８】
ある実施形態では、本発明のＮＹ−ＢＲ１標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１３１（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２８９】
ある実施形態では、ＣＤ２００Ｒ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１９０）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５６８（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２９０】
ある実施形態では、本発明のＣＤ２００Ｒ標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１９０（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２９１】
ある実施形態では、ＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号９４５）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２５１２（表１１）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２９２】
ある実施形態では、本発明のＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号９４５（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２９３】
ある実施形態では、ＴＳＨＲ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１６７）に対する交差競合試験用の基準リガンドは、配列番号（表１１）に示す配列を有するリガンドである。
【０２９４】
ある実施形態では、本発明のＴＳＨＲ標的化ＣＡＲ（例えば、配列番号１１６８〜１１７０）に対する交差競合試験用の基準ｓｃＦｖは、配列番号２３３３（表１０）に示す配列を有するｓｃＦｖである。
【０２９５】
ある実施形態では、本発明のＴＳＨＲ標的化ＣＡＲに対する交差競合試験用の基準ＣＡＲは、配列番号１１６７〜１１７０（表１９）に示す配列を有するＣＡＲである。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ｈＴＥＲＴ、ＭＵＣ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＨＩＶ１−ｇａｇ、ＮＹ−ＥＳＯ、ＷＴ１、ＡＦＰ、ＨＰＶ−１６−Ｅ７、ＰＲ１を標的とするＣＡＲは、ＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ２）との複合体中の、表２３に示す標的ペプチドに結合する。
【０２９７】
リンカー
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの２種以上の機能的ドメインは、１種または複数のリンカーにより分離される。リンカーは、本発明のＣＡＲのドメイン／領域のいずれかを一緒に連結する、約１〜１００アミノ酸長さのオリゴまたはポリペプチド領域である。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、５〜１２アミノ酸長さ、５〜１５アミノ酸長さ、または５〜２０アミノ酸長さであり得る。リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに自由に動くように、グリシンおよびセリンのようなフレキシブル残基で構成され得る。より長いリンカー、例えば、１００アミノ酸よりも長いリンカーが、本発明の代替の実施形態に関連して使用されてもよく、例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にするために選択され得る。代表的実施形態では、リンカーは、配列番号２５０〜２５８（表５）に記載されている。
【０２９８】
ヒンジ領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ（これはバックボーンの一部を形成する）は、抗原特異的ドメインと膜貫通ドメインとの間にヒンジ部を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ部は、ヒトＣＤ８αまたは抗体もしくは機能的等価物、そのフラグメントもしくは誘導体のＦｃフラグメント、ヒトＣＤ８αまたは抗体もしくは機能的等価物、そのフラグメントもしくは誘導体のヒンジ部、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工スペーサー配列およびこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数を含む。代表的実施形態では、ヒンジ部は、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部、ＣＨ２およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ部およびＣＨ２、（ｉｖ）ＣＤ８ａのヒンジ部、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ部、ＣＨ２、およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ部、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ部およびＣＨ２、または（ｖｉｉ）これらの組み合わせの内のいずれか１種または複数を含む。
【０２９９】
膜貫通ドメイン
本明細書に記載のように、本明細書に記載のＣＡＲ（これはバックボーンの一部を形成する）は、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型膜貫通タンパク質のいずれかを含む、膜貫通ドメインを有する任意のタンパク質由来の膜貫通配列を含み得る。本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインはまた、人工疎水性配列を含み得る。本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインが二量体化しないように選択され得る。いくつかの実施形態では、ＴＭＤをコードする、本明細書に記載のいずれかのバックボーンを含むＣＡＲは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／または  ＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。
【０３００】
膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接する１種または複数の追加のアミノ酸、例えば、膜貫通タンパク質の細胞外領域に組み込まれた１種または複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５個の細胞外領域）および／または膜貫通タンパク質の細胞内の領域に組み込まれた１種または複数の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５個の細胞内領域）を含むことができる。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲのその他のドメインの１つと隣接している。一実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメインまたはヒンジドメインが派生する同じタンパク質由来であってよい。別の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲのいずれか他のドメインが派生するのと同じタンパク質に由来しない。
【０３０１】
キメラ抗原受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン
本明細書に記載のように、本明細書に記載のＣＡＲ（これはバックボーンの一部を形成する）は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このドメインは、細胞質であってもよく、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞にその特殊化された機能を実施するように指示し得る。細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体のζ鎖またはそのホモログのいずれか（例えば、η鎖、ＦｃεＲ１γおよびβ鎖、ＭＢ１（Ｉｇα）鎖、Ｂ２９（Ｉｇβ）鎖など）、ＣＤ３ポリペプチド（Δ、δおよびε）、ｓｙｋファミリーチロシンキナーゼ（Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０など）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎなど）、ならびにＣＤ２、ＣＤ５、およびＣＤ２８などのＴ細胞伝達に関与する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。特に、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃガンマＲＩＩＩ、ＦｃεＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質側末端、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、またはそれらの組み合わせであり得る。さらなる細胞内シグナル伝達ドメインが当業者に明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃｇＲＩＩＩ、ＦｃｅＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質側末端、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、およびそれらの組み合わせの内の１種または複数のシグナル伝達ドメインを含む。
【０３０２】
共刺激ドメイン
本明細書に記載のように、本明細書に記載のＣＡＲ（これはバックボーンの一部を形成する）は、共刺激ドメインを含む。代表的実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、およびそれらの組み合わせのいずれか１種または複数のシグナル伝達ドメインを含む。
【０３０３】
切断可能リンカー
本明細書に記載の切断可能なリンカーには、２Ａリンカー（例えば、Ｔ２Ａ）、２Ａ様リンカー、またはこれらの機能的等価物、およびこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーには、ピコルナウイルス２Ａ様リンカー、ブタテスコウイルス（Ｐ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、ゾセア・アシグナウイルス（Ｔ２Ａ）、またはそれらの組み合わせ、バリアント、および機能的等価物が挙げられる。他の実施形態では、リンカー配列は、２Ａグリシンと２Ｂプロリンとの間の切断をもたらす、Ａｓｐ−Ｖａｌ／Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｘ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（２Ａ）―Ｐｒｏ（２Ｂ）モチーフを含み得る。いくつかの代表的切断可能リンカーの核酸配列は、配列番号８３１〜配列番号８３６で与えられ、いくつかの代表的リンカーのアミノ酸配列は、配列番号２５９８〜配列番号２６０２で与えられる。他のリンカーが当業者に明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。ある実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（配列番号８３７〜８３８および配列番号２６０３）も、切断可能なリンカー配列の上流に加え、切断の効率を高められる。切断可能なリンカーの生じ得る欠点は、Ｎ末端タンパク質の末端に残された小さい２Ａタグが、タンパク質機能に影響するかもしれない、またはタンパク質の抗原性の一因となるかもしれないという可能性である。この制約を克服するために、いくつかの実施形態では、フューリン切断部位（ＲＡＫＲ）（配列番号８３９〜８４１および配列番号２６０４）を、ＳＧＳＧモチーフの上流に加えて、翻訳後の残留２Ａペプチドの切断を容易にする。ある実施形態では、切断可能リンカーは、ＣＡＲをコードするポリペプチドと、補助モジュールをコードするポリペプチドとの間に配置される。切断可能リンカーの部位での切断は、２つのポリペプチドの分離をもたらす。
【０３０４】
補助モジュール
本明細書で使用される場合、「補助モジュール（アクセサリモジュール）」は、ＣＡＲを発現しているＴ細胞の活性を高める、下げるもしくは変える、またはＣＡＲの治療反応が高められるように、ＣＡＲに付随する毒性を低減する物質を意味する。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、ウイルスタンパク質および細胞内シグナル伝達タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む。これらのタンパク質は、（ｉ）ＣＡＲを発現しているＴ細胞の寿命を延長する、（ｉｉ）Ｔ細胞増殖を指摘する、および／または（ｉｉｉ）ＣＡＲを発現しているＴ細胞をアポトーシスから保護する。代表的実施形態では、このようなタンパク質には、限定されないが、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス由来のｖＦＬＩＰ−Ｋ１３（配列番号８６６）、伝染性軟属腫ウイルス由来のＭＣ１５９（配列番号８６７）、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα（配列番号８７３）、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号８７４）ならびにヒトＴ細胞白血病／リンパ腫（ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２）由来Ｔａｘ（配列番号８７５および配列番号８７６）およびＨＴＬＶ−２由来Ｔａｘ−ＲＳ変異体（配列番号８７７）が挙げられる。
【０３０６】
一実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、さらにｖＦＬＩＰ−Ｋ１３をコードする。別の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、さらにＭＣ１５９をコードする。別の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、さらにＨＴＬＶ１−Ｔａｘをコードする。別の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、さらにＨＴＬＶ２−Ｔａｘをコードする。別の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、さらにｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴαをコードする。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、補助分子は、ベクターによりコードされ、このベクターは、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターとは別である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターを含むエフェクター細胞はまた、補助分子をコードするベクターも含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、伝染性軟属腫ウイルス由来補助分子ｖＦＬＩＰ  ＭＣ１６０、ウマヘルペスウイルス２由来のｖＦＬＩＰ  Ｅ８、ヒトヘルペスウイルスサイミリ由来のｖＦＬＩＰ、ウシヘルペスウイルス（ＢＨＶ）４由来ｖＦＬＩＰ、マカカ属サルヘルペスウイルス由来ｖＦＬＩＰおよび／またはヒト細胞性ＦＬＩＣＥ抑制タンパク質の完全長またはＮ末端フラグメント（ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴαまたはｃＦＬＩＰ−ｐ２２）をさらに発現する。（表１６）。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、サイトカインに特異的なｓｉＲＮＡまたはｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。代表的実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＦＮγまたはこれらの組み合わせの内のいずれか１種または複数である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＩＬ６受容体αおよびヒト血清アルブミンに結合する分泌性二重特異性抗体フラグメントと同時発現される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＩＬ６に結合する分泌性ｓｃＦｖフラグメントと同時発現される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ療法に付随する毛細血管漏出を軽減するように、ペプチドＦＸ０６と共発現される。
【０３１０】
さらなる実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、内在性ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＴＣＲ−γ、ＴＣＲデルタ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタを標的とするｓｉＲＮＡまたはヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。
【０３１１】
さらなる実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、選択可能マーカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。代表的実施形態では、選択可能マーカーとしては、薬剤耐性遺伝子、例えば、ピューロマイシンまたはカルシニューリン阻害剤に対する耐性を付与する遺伝子（例えば、ＣＮＢ３０；配列番号８５２）をコードすることができる。いくつかの実施形態では、選択可能マーカーとしては、ヒトＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９（配列番号８５４）、ＢＣＭＡ（配列番号８５５）、ＥＧＦＲ（配列番号８５３）、ＣＤ３４、または細胞表面上に発現され、その標的抗原を発現している細胞を除去するのに使用可能な抗体により認識され得る任意のタンパク質またはタンパク質フラグメントの細胞外および膜貫通ドメインをコードし得る。代表的実施形態では、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体のセツキシマブは、切断型ＥＧＦＲ（配列番号８５３）を共発現している本発明のＣＡＲ発現細胞を除去するのに使用される。選択可能マーカー（単一または複数）を用いて、ＣＡＲ発現細胞を濃縮する、高レベルのＣＡＲを発現する細胞を選択する、および／またはＣＡＲ発現細胞のクローン多様性を小さくすることができる。さらなる実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ＣＡＲの細胞外ドメイン上に発現されるエピトープタグをコードし得、これを用いて、ＣＡＲ発現細胞を濃縮する、高レベルのＣＡＲを発現する細胞を選択する、および／またはＣＡＲ発現細胞のクローン多様性を小さくすることができる。このようなタグの非限定的例は、配列番号５５３〜５６３および３５２６〜３５３０（表１２）で与えられる。ＣＡＲ発現同種Ｔ細胞のクローン多様性の低減は、次には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発生率の低減につながり、それにより、同種Ｔ細胞のＣＡＲ−Ｔ細胞療法への使用が可能になる。
【０３１２】
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたは本明細書に記載のバックボーン１〜６２の内のいずれか１種または複数をコードする１種または複数の核酸分子によりコードされる１種または複数のポリペプチドが本明細書で提供される（表２）。
【０３１３】
従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする１種または複数の核酸分子によりコードされる１種または複数のポリペプチドも本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の１、２、３種またはそれを超える抗原に特異的である。本明細書に記載のように、ＣＡＲのそれぞれの成分は隣接し、ＣＡＲの相互の成分と同じ読み枠中にある。いくつかの実施形態では、バックボーンを含むＣＡＲは、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０３１４】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１をコードする１種または複数の核酸分子によりコードされる１種または複数のポリペプチドも本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、バックボーン１を含むＣＡＲの抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の１、２、３種またはそれを超える抗原に特異的である。本明細書に記載のように、ＣＡＲのそれぞれの成分は隣接し、バックボーン１を含むＣＡＲの相互の成分と同じ読み枠中にある。いくつかの実施形態では、バックボーン１を含むＣＡＲは、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０３１５】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩＩおよびＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２をコードする１種または複数の核酸分子によりコードされる１種または複数のポリペプチドも本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、バックボーン３２を含むＣＡＲの抗原特異的ドメインは、癌細胞などの標的細胞上の１、２、３種またはそれを超える抗原に特異的である。本明細書に記載のように、ＣＡＲのそれぞれの成分は隣接し、ＣＡＲの相互の成分と同じ読み枠中にある。いくつかの実施形態では、バックボーン３２を含むＣＡＲは、２種以上の抗原特異的ドメインを含み、それぞれの抗原特異的ドメインは隣接し、同じＣＡＲ中のその他の抗原特異的ドメインと同じ読み枠中にある。
【０３１６】
種々の実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドは、２種、３種またはそれを超える抗原特異的ドメインをコードする。
【０３１７】
種々の実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドは、２種、３種またはそれを超える共刺激ドメインをコードする。
【０３１８】
種々の実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドは、２種、３種またはそれを超える細胞内シグナル伝達ドメインをコードする。
【０３１９】
種々の実施形態では、本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドは、１、２、３種またはそれを超えるウイルスタンパク質および／または細胞内シグナル伝達タンパク質をコードする。
【０３２０】
本明細書に記載のＣＡＲの目的の成分をコードする核酸配列は、当該技術分野において既知の組換え法を用いて、例えば、核酸分子を発現している細胞由来のライブラリーを選別することにより、核酸分子をそれが含まれていることが既知であるベクターから取り出すことにより、または標準的技術を用いて、それを含む細胞および組織から直接に単離することにより、得ることができる。あるいは、目的の核酸は、クローン化ではなく、合成的に作製できる。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表１９〜２２に記載の標的に特異的である。
【０３２２】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表４および６に示す、それぞれ、この抗原を標的とするｖＬおよびｖＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０３２３】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表７に示す、この抗原を標的とするｖＨＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０３２４】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表８に示す、この抗原を標的とする非免疫グロブリン足場の抗原結合部分である。
【０３２５】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、この抗原標的抗原に結合する受容体の抗原結合部分である。
【０３２６】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原結合特異的ドメインは、この抗原標的抗原に結合するリガンドの抗原結合部分である。
【０３２７】
一実施形態では、標的抗原に対するＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表１１に示す、この抗原を標的とするｓｃＦｖのｖＬおよびｖＨフラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表１９〜２２に記載の標的に特異的である。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、トロンボポエチン受容体、ＭＰＬに特異的である。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９に特異的である。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２０に特異的である。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２２に特異的である。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２３に特異的である。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３０に特異的である。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３２に特異的である。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３３に特異的である。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１２３に特異的である。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１３８に特異的である。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２００Ｒに特異的である。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２７６に特異的である。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３２４に特異的である。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＢＣＭＡに特異的である。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＳ１に特異的である。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＡＬＫ１に特異的である。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＲＯＲ１に特異的である。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ６に特異的である。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１６に特異的である。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１７に特異的である。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１９に特異的である。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＥＧＦＲｖｉｉｉに特異的である。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｈｅｒ２に特異的である。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｈｅｒ３に特異的である。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、メソテリンに特異的である。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、葉酸受容体アルファに特異的である。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、葉酸受容体ベータに特異的である。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＬＬ−１に特異的である。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＬＥＣ５Ａに特異的である。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＮＹ−ＥＳＯ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＰＶ１６−Ｅ７／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｇｐ１００／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｈＴＥＲＴ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＡＲＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＰＲ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＩＶ１−ｇａｇ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＩＶ１エンベロープｇｐ１２０に特異的である。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＤＬＬ３に特異的である。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＰＴＫ７に特異的である。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＲＯＰ２に特異的である。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＬＡＭＰ１に特異的である。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｔｉｍ１に特異的である。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲガンマ−デルタに特異的である。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲベータ１定常鎖に特異的である。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲベータ２定常鎖に特異的である。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＣＣに特異的である。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｂ７Ｈ４に特異的である。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＬＨＲに特異的である。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＳＨＲに特異的である。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｔｎ−Ｍｕｃ１に特異的である。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＳＬＰＲに特異的である。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、組織因子に特異的である。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＳＳＥＡ−４に特異的である。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＳＬｅａに特異的である。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｍｕｃ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｍｕｃ１６に特異的である。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＮＹＢＲ−１に特異的である。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＩＬ１３Ｒａ２に特異的である。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＩＬ１１Ｒａに特異的である。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌ１ＣＡＭに特異的である。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＥｐＣＡＭ１に特異的である。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｇｐＮＭＢに特異的である。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＲＰ７８に特異的である。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＣＰ３に特異的である。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＲＰＣ５Ｄに特異的である。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＦＲａ４に特異的である。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＦＩＴＣに特異的である。
【０４００】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ７９ｂに特異的である。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌｙｍ１に特異的である。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌｙｍ２に特異的である。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩの一部または本明細書に記載のバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などのバックボーンの一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によりコードされるポリペプチドが本明細書で提供され、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、抗体のＦｃ部（すなわち、Ｉｇ  Ｆｃ）に特異的である。Ｉｇ  Ｆｃに特異的な抗原特異的ドメインを有する代表的ＣＡＲは、配列番号２７０８により表され、抗原特異的ドメインとして、細胞外ドメインのＣＤ１６−Ｖ１５８を含む。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび／または補助分子をコードする核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物として提供される。別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲおよび／または補助分子をコードする核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
【０４０５】
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターも本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターを含む。ウイルスベクターの例には、限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルスベクターまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターが挙げられる。種々の実施形態では、本発明は、細胞に直接形質導入できるＣＡＲおよび補助分子を発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物を含む。
【０４０６】
本発明はまた、細胞中に直接遺伝子導入できるＲＮＡ構築物も含む。遺伝子導入に使用するためのｍＲＮＡを生成する方法は、特別に設計したプライマーと共にテンプレートのインビトロ転写（ＩＶＴ）と、それに続くポリＡ付加により、３’および５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’および／または５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）および／または配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現される核酸、およびポリＡテール、通常５０〜２０００塩基長（配列番号９２２）を含む構築物の生成を含む。このように、ＲＮＡは異なる種類の細胞に効率的に遺伝子導入できる。一実施形態では、テンプレートはＣＡＲのための配列を含む。ある実施形態では、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターは、電気穿孔により、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。別の実施形態では、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターは、国際公開第２０１３／０５９３４３Ａ１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６０６４６）に記載のマイクロ流体装置を用いて、細胞膜に一時的な摂動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）を生じさせることにより、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。目的の分子をコードするポリヌクレオチド配列は、当該技術分野において既知の組換え法を用いて、例えば、遺伝子を発現している細胞由来のライブラリーを選別することにより、遺伝子をそれが含まれていることが既知であるベクターから取り出すことにより、または標準的技術を用いて、それを含む細胞および組織から直接に単離することにより、得ることができる。あるいは、目的の遺伝子は、クローン化ではなく、合成的に作製できる。
【０４０７】
本発明はまた、本発明のＣＡＲをコードするＤＮＡが挿入されているベクターを提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、長期遺伝子導入を達成するのに好適なツールである。理由は、それらが、長期の、安定な導入遺伝子の組み込みおよび娘細胞へのその伝播を可能とするためである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来のベクターに比べて、さらなる利点を有する。それらはまた、低免疫原性というさらなる利点も有する。代表的レンチウイルスベクターは、配列番号９０５〜９０６に与えられている。レトロウイルスベクターは、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであってもよい。ガンマレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（Ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つまたは複数（例えば、２つ）の長末端反復配列（ＬＴＲ）、および目的の導入遺伝子、例えば、ＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。レトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖなどのウイルス構造遺伝子を欠いていてもよい。代表的ガンマレトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、および骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、およびそれら由来のベクターが挙げられる。その他のガンマレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ  Ｍａｅｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”  Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１  Ｊｕｎ；３（６）：６７７−７１３、に記載されている。代表的レトロウイルスベクターは、配列番号９０７に与えられている。別の実施形態では、本発明の目的のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。
【０４０８】
ＣＡＲをコードする天然または合成核酸の発現は通常、ＣＡＲポリペプチドまたはその一部をコードする核酸をプロモーターに操作可能なように連結し、構築物を発現ベクター中に組み込むことにより達成される。ベクターは、真核生物の複製および統合に好適なものとすることができる。典型的なクローニングベクターは、転写および翻訳ターミネーター、開始配列、および目的の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。本発明の発現構築物はまた、標準的遺伝子導入プロトコルを用いて、核酸免疫化および遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子導入の方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第号５，３９９，３４６号、同５，５８０，８５９号、同５，５８９，４６６号を参照されたい。これらの特許は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。  
【０４０９】
クローニングおよび発現方法は当業者には明らかであると思われ、また、国際公開第２０１５／１４２６７５号；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｊｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６；国際公開第０１／９６５８４号； 国際公開第０１／２９０５８号；米国特許第６，３２６，１９３号に記載の通りであり得る。これらの文献のそれぞれの内容は、あたかも本明細書で記述されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入する物理的方法、例えば、リン酸カルシウム法などは、当該技術分野において周知であり、当業者には明らかであろう。代表的実施形態では、このような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；米国特許第５，３５０，６７４号および同５，５８５，３６２号に記述されている。これらの文献のそれぞれの内容は、あたかも本明細書で記述されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ＣＡＲベクターは、国際公開第２０１３／０５９３４３Ａ１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６０６４６）およびＤｉｎｇ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１，００３９（２０１７）に記載のマイクロ流体装置を用いて、細胞膜に一時的な摂動を生じさせることにより、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。これらの文献のそれぞれの内容は、あたかも本明細書で記述されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４１０】
遺伝子改変細胞
種々の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲによる改変のための、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を含む細胞は、治療を望む対象から得てよい。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞は、組織常在性ガンマ−デルタＴ細胞であり得、これは、ＣＡＲの発現の前にインビトロで培養および増殖できる。
【０４１１】
一態様では、本発明は、いくつかのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し、該ＣＡＲは、疾患関連抗原、例えば、本明細書に記載の腫瘍抗原に特異的に結合するように遺伝子改変された抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体フラグメント、ＴＣＲまたはＴＣＲフラグメント）を含む。一態様では、本発明は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は治療特性を示す。一態様では、本発明は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は抗癌特性を示す。一態様では、細胞は、ＣＡＲで形質転換され、ＣＡＲが細胞表面上に発現される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクターで形質導入される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。いくつかのこのような実施形態では、細胞はＣＡＲを安定に発現し得る。別の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードする核酸、例えば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡを遺伝子導入される。いくつかのこのような実施形態では、細胞はＣＡＲを一時的に発現し得る。
【０４１２】
本発明は、免疫エフェクター細胞を疾患細胞または疾患関連細胞に向ける１種または複数のＣＡＲを含むように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供する。これは、ＣＡＲ上の癌関連抗原に特異的な抗原結合ドメインにより実現される。本発明のＣＡＲにより標的とされ得る癌関連抗原（腫瘍抗原）には次の２つの種類がある：（１）癌細胞の表面上に発現された癌関連複合体；および（２）癌関連抗原であって、それ自体は細胞内にあるが、この抗原（ペプチド）のフラグメントがＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）により癌細胞の表面上に提示されている癌関連抗原。
【０４１３】
さらに、本発明は、ＣＡＲおよびＣＡＲ発現細胞、ならびに特に、本明細書に記載の腫瘍抗原または疾患関連抗原を発現する細胞または組織を有する、癌またはいずれかの悪性腫瘍または自己免疫疾患または感染症または変性疾患またはアレルギー性疾患を処置する薬物またはその処置方法におけるそれらの使用を提供する。
【０４１４】
一態様では、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、遺伝子改変免疫エフェクター細胞は、抗腫瘍特性などの抗疾患特性を示す。好ましい抗原は、本明細書に記載の癌関連抗原（すなわち、腫瘍抗原）である。一態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、部分的にヒト化された抗体フラグメントを含む。一態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、部分的にヒト化されたｓｃＦｖを含む。したがって、本発明は、ヒト化抗原結合ドメインを含み、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に組み込まれたＣＡＲ、および養子療法のためのそれらの使用方法を提供する。
【０４１５】
本明細書に記載のポリヌクレオチドおよび／またはキメラ抗原受容体を含む、遺伝子改変細胞がさらに本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、細胞はＴリンパ球（Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、胚性幹細胞、または多能性幹細胞である。本発明のＣＡＲを含み、発現し得る遺伝子改変細胞には、治療的に適切な成果をもたらすことができる、Ｔ−リンパ球（Ｔ細胞）、ナイーブＴ細胞（ＴＮ）、メモリーＴ細胞（例えば、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ））、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞および／または多能性胚性／誘導性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態では、遺伝子改変細胞は、自己細胞である。ある実施形態では、遺伝子改変細胞は、同種細胞である。例えば、本発明の個々のＴ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ４−／ＣＤ８＋、ＣＤ４−／ＣＤ８−、またはＣＤ４＋／ＣＤ８＋であり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−およびＣＤ４−／ＣＤ８＋細胞の混合群、または単一クローン群であり得る。本発明のＣＤ４＋Ｔ細胞は、標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ２０＋および／またはＣＤ１９＋腫瘍細胞）とインビトロで共培養された場合、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、および他のＴ細胞エフェクターサイトカインを産生し得る。本発明のＣＤ８＋Ｔ細胞は、標的細胞とインビトロで共培養された場合、抗原特異的標的細胞を溶解し得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ナイーブ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６２Ｌ＋セントラルメモリー細胞、ＣＤ６２Ｌ−  エフェクターメモリー細胞、またはそれらの組み合わせ内のいずれか１種または複数であり得る（Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９  ２１（２）２２４−２３２）。遺伝子改変細胞は、本明細書のＣＡＲをコードするＤＮＡを細胞に安定に遺伝子導入することによって産生され得る。
【０４１６】
種々の方法は、本発明のＣＡＲを発現する安定な遺伝子導入体を生成する。一実施形態では、細胞に安定に遺伝子導入し、細胞をリダイレクトする方法は、ネイキッドＤＮＡを使用するエレクトロポレーションによるものである。ネイキッドＤＮＡを使用することによって、リダイレクトされた細胞を生成するために必要とされる時間は、著しく低減され得る。本発明のＣＡＲをコードするネイキッドＤＮＡを使用して細胞を遺伝子改変するためのさらなる方法には、（例えば、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、および／または陽イオンポリマーを使用する）化学形質転換法、非化学形質転換法（例えば、エレクトロポレーション、光学形質転換、遺伝子エレクトロトランスファー、細胞膜中で一時的な摂動および／またはハイドロダイナミックデリバリー）、および／または粒子ベースの方法（例えば、遺伝子銃を使用するインペールフェクションおよび／またはマグネトフェクション）が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子導入された細胞は、単一の組み込まれた非再配列ベクターおよびＣＡＲの発現の存在を示す遺伝子導入された細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖され得る。一実施形態では、ｅｘ  ｖｉｖｏ増殖のために選択された細胞は、ＣＤ８＋であり、抗原特異的標的細胞を特異的に認識し、その細胞を溶解する能力を示す。
【０４１７】
ウイルス形質導入法もまた、本発明のＣＡＲを発現するリダイレクトされた細胞を生成するために使用され得る。本発明のＣＡＲを発現する遺伝子改変細胞を生成するために使用され得る細胞型には、治療的に適切な成果をもたらすことができるＴリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞、および／または多能性胚性／誘導性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０４１８】
適切な条件下での抗原によるＴ細胞の刺激は、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）（増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ））および／またはＩＬ−２の産生をもたらす。本発明のＣＡＲを含む細胞は、１種または複数の抗原の、ＣＡＲの抗原特異的標的化領域への結合に応答して、数を増大する。本発明はまた、ＣＡＲを発現する細胞を作製し、増殖させる方法を提供する。方法は、ＣＡＲを発現するベクターを細胞に遺伝子導入するか、または形質導入すること、およびその細胞を、受容体に対する標的抗原、組換え標的抗原、または受容体に対する抗体を発現する細胞で刺激して、Ｔ細胞を作製し、増やすようにその細胞を増殖させる。ある実施形態では、細胞は、治療的に適切な成果をもたらすことができる、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、または多能性胚性／誘導性幹細胞の内のいずれか１種または複数であり得る。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、本明細書に記載の種々のバックボーンを発現し、バックボーンのＣＡＲ成分は、ＣＡＲの抗原特異的ドメインに基づいて標的特異性を決定する。
【０４２０】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＭＰＬに特異的である。
【０４２１】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ１９に特異的である。
【０４２２】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ２０に特異的である。
【０４２３】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＢＣＭＡに特異的である。
【０４２４】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ２２に特異的である。
【０４２５】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ３０に特異的である。
【０４２６】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ３３に特異的である。
【０４２７】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ１２３に特異的である。
【０４２８】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＤ１３８に特異的である。
【０４２９】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＬＬ１に特異的である。
【０４３０】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＴＣＲ−ベータ１定常鎖に特異的である。
【０４３１】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＴＣＲ−ベータ２定常鎖に特異的である。
【０４３２】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＡＬＫに特異的である。
【０４３３】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＰＴＫ７に特異的である。
【０４３４】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＤＬＬ３に特異的である。
【０４３５】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＴＲＯＰ２に特異的である。
【０４３６】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＴｉｍ１に特異的である。
【０４３７】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＬＡＭＰ１に特異的である。
【０４３８】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＣＳ１に特異的である。
【０４３９】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＬｙｍ１に特異的である。
【０４４０】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＬｙｍ２に特異的である。
【０４４１】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＴＳＨＲに特異的である。
【０４４２】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＮＹ−ＥＳＯ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０４４３】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。
【０４４４】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインはＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０に特異的である。
【０４４５】
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは免疫グロブリンのＦｃ領域に特異的である。
【０４４６】
種々の実施形態では、遺伝子改変細胞は、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３などの本明細書に記載のバックボーンの一部である従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩをコードする核酸分子を含み、抗原特異的ドメインは、表４、７、８、１１、１９、２０、２１または２２に記載の抗原を標的とする。
【０４４７】
本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはエンハンサーを含むＴ細胞およびＮＫ細胞などの免疫エフェクター細胞は通常、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；同６，５３４，０５５号；同６，９０５，６８０号；同６，６９２，９６４号；同５，８５８，３５８号；同６，８８７，４６６号；同６，９０５，６８１号；同７，１４４，５７５号；同７，０６７，３１８号；同７，１７２，８６９号；同７，２３２，５６６号；同７，１７５，８４３号；同５，８８３，２２３号；同６，９０５，８７４号；同６，７９７，５１４号；同６，８６７，０４１号；および米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を用いて活性化および増殖される。
【０４４８】
治療方法
疾患関連抗原または癌関連抗原の発現に関連する疾患の治療方法が本明細書で提供される。
【０４４９】
一実施形態では、本明細書に記載の治療有効量の、抗原特異的ＣＡＲ単独を、または抗原特異的ＣＡＲおよび補助分子を発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することにより、処置を必要としている対象の疾患を処置する方法が本明細書で提供され、該抗原は本明細書に記載の疾患特異的抗原であり、病原性細胞または疾患関連細胞は前記疾患特異的抗原を発現する。
【０４５０】
一実施形態では、本明細書に記載の治療有効量の、抗原特異的ＣＡＲ単独を、または抗原特異的ＣＡＲおよび補助分子を発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与することにより、処置を必要としている対象の癌を処置する方法が本明細書で提供され、該抗原は本明細書に記載の癌特異的抗原であり、癌細胞は前記腫瘍抗原を発現する。
【０４５１】
一実施形態では、癌特異的抗原は、正常細胞および癌細胞の両方上に発現されるが、正常細胞上には、より低いレベルで発現される。一実施形態では、前記方法は、抗原特異的ＣＡＲが癌細胞に結合して、死滅されることを可能とする親和性で目的の癌特異的抗原に結合するＣＡＲを選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原特異的ＣＡＲは、癌細胞を死滅させるが、癌抗原を発現している正常細胞の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、またはそれ未満を死滅させる。代表的実施形態では、抗原特異的ＣＡＲにより死滅する細胞のパーセンテージは、本明細書に記載の細胞死アッセイを用いて決定し得る。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、処置を必要としている対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の、従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩを発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を該対象に投与することを含み、ＣＡＲのＡＳＤは、癌細胞上に発現される抗原に特異的である（例えば、抗原は癌細胞上に比べて正常細胞上でより低いレベルで発現される）。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、本発明は、処置を必要としている対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の、従来のＣＡＲ  Ｉおよび補助モジュールＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン１を発現するように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を該対象に投与することを含み、ＣＡＲのＡＳＤは、癌細胞上に発現される抗原に特異的である（例えば、抗原は癌細胞上に比べて正常細胞上でより低いレベルで発現される）。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、本発明は、処置を必要としている対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の、従来のＣＡＲ  Ｉおよび補助モジュールＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン２を含むように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を該対象に投与することを含み、ＣＡＲのＡＳＤは、癌細胞上に発現される抗原に特異的である（例えば、抗原は癌細胞上に比べて正常細胞上でより低いレベルで発現される）。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、本発明は、処置を必要としている対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の、従来のＣＡＲ  ＩＩおよび補助モジュールＫ１３−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３２を含むように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を該対象に投与することを含み、ＣＡＲのＡＳＤは、癌細胞上に発現される抗原に特異的である（例えば、抗原は癌細胞上に比べて正常細胞上でより低いレベルで発現される）。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、本発明は、処置を必要としている対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の、従来のＣＡＲ  ＩＩおよび補助モジュールＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰを含むバックボーン３３を含むように改変された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を該対象に投与することを含み、ＣＡＲのＡＳＤは、癌細胞上に発現される抗原に特異的である（例えば、抗原は癌細胞上に比べて正常細胞上でより低いレベルで発現される）。
【０４５７】
代表的実施形態では、本明細書に記載の治療方法のために標的とされ得る抗原には、限定されないが、下記の内のいずれか１、２、３、４種またはそれを超える抗原が挙げられる：ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ２３，ＣＤ３０；ＣＤ３２，ＣＤ９９；組織因子；ＭＰＬ；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも呼ばれる）；Ｃ−型レクチン様分子１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）または（ＧａｌＮＡｃａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスチシンまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；ステージ特異的胎児性抗原４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−プロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＦＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）からなる癌遺伝子融合タンパク質およびエーベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着性分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体ベータ；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘ読み枠６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖類部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲｌ）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パンネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１  Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替読み枠タンパク質（ＴＡＲＰ）；ウイルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−ｌａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６、染色体１２ｐに位置する（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３変異体；プロステイン；ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原１（ＰＣＴＡ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞１により認識される黒色腫抗原（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルス性癌遺伝子神経芽腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；チトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ、すなわち、Ｂｒｏｔｈｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  Ｓｉｔｅｓ）、Ｔ細胞３により認識される扁平上皮癌抗原（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；高度糖化最終生成物に対する受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス（ｒｅｎａｌ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；ヒートショックタンパク質７０−２変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（���ＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；ならびに免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、ＰＴＫ７、ＬＡＭＰ１、ＴＲＯＰ２、Ｔｉｍ１およびＨＩＶ１外被糖タンパク質ｇｐ１２０。
【０４５８】
代表的実施形態では、本明細書に記載の治療方法のために標的とされ得る抗原には、限定されないが、下記の内のいずれか１、２、３、４種またはそれを超える抗原が挙げられる：ＴＳＨＲ、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＧＤ３、Ｔｎ  Ａｇ、ＦＬＴ３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−ｌｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＳＳＥＡ−４、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、およびＩＧＬＬ１。
【０４５９】
代表的実施形態では、本明細書に記載の治療方法のために標的とされ得る抗原には、限定されないが、下記の内のいずれか１、２、３、４種またはそれを超える抗原が挙げられる：ＷＴ−１、ｈＴＥＲＴ、ＰＲＡＭＥ、ＨＭＭＲ／Ｒｈａｍｍ、ＰＲ１、ＣＧ１、ＣＤ３３、サイクリンＡ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＨＡ−１、ＡＣＣ１、Ｔ４Ａ、ＬＢ−ＬＹ７５−ＩＫ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、Ｂ細胞受容体イディオタイプ、ＨＴＬＶ−Ｉ  Ｔａｘタンパク質、ＣＤ１９、ルイスＹ、ＣＤ２２およびＲＯＲ１。
【０４６０】
代表的実施形態では、本明細書に記載の治療方法のために標的とされ得る抗原には、限定されないが、表４、７、８、１１、１９、２０、２１または２２に記載の内のいずれか１、２、３、４種またはそれを超える標的が挙げられる。
【０４６１】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、ＭＰＬに特異的な従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌を処置する方法が提供される。この場合、癌細胞はＭＰＬを発現している。一実施形態では、処置される癌は、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、および骨髄異形成症候群である。一実施形態では、ＭＰＬ特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号１８０〜１８７に記載のＶＬフラグメント、配列番号４２７〜４３４に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号７２９〜７３６に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６２】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、ＣＤ１９に特異的な従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を処置する方法が提供される。この場合、癌細胞はＣＤ１９を発現している。一実施形態では、処置される癌は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞悪性腫瘍、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または多発性骨髄腫である。一実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号４０〜５５に記載のＶＬフラグメント、配列番号２８８〜３０３に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号５６４〜５７７に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６３】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、ＧＲＰ−７８に特異的なバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌を処置する方法が提供される。この場合、癌細胞はＧＲＰ−７８を発現している。一実施形態では、処置される癌は乳癌である。一実施形態では、ＧＲＰ−７８  ＣＡＲを発現している免疫エフェクター細胞が、ＭＰＬ  ＣＡＲも発現している場合、処置される癌は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群または多発性骨髄腫である。一実施形態では、ＧＲＰ−７８特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号７０３に記載のｓｃＦｖを含む。一実施形態では、ＭＰＬ特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号１８０〜１８７に記載のＶＬフラグメント、配列番号４２７〜４３４に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号７２９〜７３６に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６４】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、ＣＤ７９ｂに特異的なバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を処置する方法が提供される。この場合、癌細胞はＣＤ７９ｂを発現している。一実施形態では、処置される癌は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群または多発性骨髄腫である。一実施形態では、ＣＤ７９ｂ特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号９２〜９３に記載のＶＬフラグメント、配列番号３４０〜３４１に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号６２８に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６５】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、ＲＯＲ−１（受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１）に特異的な従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を処置する方法が提供される。この場合、疾患関連細胞または病原性細胞はＲＯＲ−１を発現している。いくつかの実施形態では、処置される癌は、慢性リンパ性白血病または固形組織腫瘍である。一実施形態では、ＲＯＲ−１特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号４５４〜４５５に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号７５５〜７５６に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６６】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、Ｌｙｍ−１に特異的なバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を処置する方法が提供される。一実施形態では、処置または予防される癌はＢ細胞悪性腫瘍である。一実施形態では、Ｌｙｍ−１特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号１７５に記載のＶＬフラグメント、配列番号４２１に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号７２３に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６７】
一実施形態では、本発明により、処置を必要としている対象に、Ｌｙｍ−２に特異的な従来のＣＡＲ  Ｉ〜ＩＩＩまたはバックボーン（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与することによる癌、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を処置する方法が提供される。一実施形態では、処置される癌は血液癌、卵巣癌、前立腺癌または膵臓腫瘍である。一実施形態では、Ｌｙｍ−２特異的ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、配列番号１７６に記載のＶＬフラグメント、配列番号４２２に記載のＶＨフラグメントおよび／または配列番号７２４に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６８】
一態様では、本発明により、ＣＤ１２３に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ１２３を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＡＭＬまたは骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４６９】
一態様では、本発明により、ＣＤ２２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ２２を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＢ細胞悪性腫瘍である。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患またはアレルギー性疾患である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７０】
一態様では、本発明により、ＣＤ２３に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ２３を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＢ細胞悪性腫瘍である。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患またはアレルギー性疾患である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７１】
一態様では、本発明により、ＣＳ−１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＳ−１を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患またはアレルギー性疾患である。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は形質細胞悪性腫瘍または多発性骨髄腫または原発性体液性リンパ腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７２】
一態様では、本発明により、ＢＣＭＡ−ＣＡＲを発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＢＣＭＡを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患またはアレルギー性疾患である。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は形質細胞悪性腫瘍または多発性骨髄腫または原発性体液性リンパ腫である。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７３】
一態様では、本発明により、ＣＬＬ−１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＬＬ−１を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＡＭＬまたはＭＤＳである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７４】
一態様では、本発明により、ＣＤ３０に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ３０を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はリンパ腫または白血病である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７５】
一態様では、本発明により、ＣＤ３３に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ３３を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＡＭＬまたはＭＤＳである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７６】
一態様では、本発明により、ＩＬ−１３Ｒａ２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＩＬ−１３Ｒａ２を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は神経膠芽腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７７】
一態様では、本発明により、ＩＬ−１１Ｒａ−ＣＡＲを発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＩＬ−１１Ｒａを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は骨肉腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７８】
一態様では、本発明により、ＣＤ２０−ＣＡＲを発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ２０を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫またはマントル細胞リンパ腫である。一実施形態では、処置または予防される疾患は免疫疾患またはアレルギー性疾患である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４７９】
一態様では、本発明により、葉酸受容体アルファに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、葉酸受容体アルファを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＮＳＣＬＣ、子宮内膜癌、腎臓癌、またはその他の固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８０】
一態様では、本発明により、ＴＳＨＲに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＴＳＨＲ（甲状腺刺激ホルモン受容体）を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、甲状腺癌、または多発性骨髄腫またはＴ細胞白血病またはＴ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８１】
一態様では、本発明により、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＧＰＲＣ５Ｄを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌、免疫疾患またはアレルギー性疾患である。一実施形態では、処置または予防される癌は、形質細胞障害、多発性骨髄腫または原発性体液性リンパ腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８２】
一態様では、本発明により、ＡＬＫに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＡＬＫを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、ＮＳＣＬＣ、ＡＬＣＬ（未分化大細胞リンパ腫）、ＩＭＴ（炎症性筋線維芽細胞性腫瘍）、または神経芽腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８３】
一態様では、本発明により、ＨＡＶＣＲ１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＨＡＶＣＲ１を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は腎臓癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８４】
一態様では、本発明により、ＷＴ１／ＭＨＣ  Ｉ複合体特異的ＣＡＲを発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＭＨＣクラスＩ複合体に組み込まれたＷＴ１を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌はＡＭＬまたは骨髄腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８５】
一態様では、本発明により、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＭＨＣ  １複合体に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は骨髄腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８６】
一態様では、本発明により、ＰＴＫ７に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＰＴＫ７を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、黒色腫、肺癌または卵巣癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８７】
一態様では、本発明により、ＤＬＬ３に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＤＬＬ３を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、黒色腫、肺癌または卵巣癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８８】
一態様では、本発明により、ＧＣＣに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＧＣＣを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は胃腸癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４８９】
一態様では、本発明により、ＣＣＲ４に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＣＲ４を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、Ｔ細胞白血病またはリンパ腫である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９０】
一態様では、本発明により、ＣＤＨ１／ＣＤ３２４に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤＨ１／ＣＤ３２４を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９１】
一態様では、本発明により、ＣＤ２００Ｒに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤ２００Ｒを発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９２】
一態様では、本発明により、ＣＤＨ１９に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤＨ１９を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９３】
一態様では、本発明により、ＣＤＨ１７に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤＨ１７を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９４】
一態様では、本発明により、ＣＤＨ６に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＣＤＨ６を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９５】
一態様では、本発明により、ＧＦＲａ４に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＧＦＲａ４を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は甲状腺髄様癌である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性は、ダサチニブ、ポナチニブおよび／またはＡ−７７００４１を、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞の投与と同時にまたは順次に使用して制御し得る。
【０４９６】
一態様では、本発明により、ＬＨＲに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＬＨＲ（黄体形成ホルモン受容体）を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、前立腺癌、卵巣癌または乳癌である。
【０４９７】
一態様では、本発明により、ＦＨＲに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するように改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を、それを必要としている対象に投与することによる疾患を処置または予防する方法が提供される。この場合、病原性細胞または疾患関連細胞は、ＦＨＲ（濾胞ホルモン受容体）を発現している。一実施形態では、処置または予防される疾患は癌である。一実施形態では、処置または予防される癌は、前立腺癌、卵巣癌または乳癌である。
【０４９８】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＧＲに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＧＲ（ゴナドトロピン受容体）を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。一実施形態では、治療または予防する癌は、前立腺癌、卵巣癌または乳癌である。
【０４９９】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＣＤ４５に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＣＤ４５を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。一実施形態では、治療または予防する癌は血液癌である。
【０５００】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＣＤ３２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＣＤ３２を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。一実施形態では、治療または予防する癌は血液癌である。
【０５０１】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＴＲＯＰ２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＴＲＯＰ２を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。一実施形態では、治療または予防する癌は乳癌または前立腺癌である。
【０５０２】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＬＡＭＰに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＬＡＭＰ１を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。一実施形態では、治療または予防する癌は、白血病、リンパ腫または骨髄腫である。
【０５０３】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＣＤ３２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＣＤ３２を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌である。
【０５０４】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＴＣＲＢ１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＴＣＲＢ１（Ｔ細胞受容体ベータ１定常鎖）を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌または免疫疾患。一実施形態では、治療または予防する癌はＴ細胞性白血病またはＴ細胞性リンパ腫である。一実施形態では、治療または予防する免疫障害は、多発性硬化症、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、糖尿病、移植片対宿主病または自己免疫性甲状腺炎である。
【０５０５】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＴＣＲＢ２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＴＣＲＢ２（Ｔ細胞受容体ベータ２定常鎖）を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌または免疫障害である。一実施形態では、治療または予防する癌はＴ細胞性白血病またはＴ細胞性リンパ腫である。一実施形態では、治療または予防する免疫障害は、多発性硬化症、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、糖尿病、移植片対宿主病または自己免疫性甲状腺炎である。
【０５０６】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、Ｔ細胞受容体ガンマ−デルタに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＴ細胞受容体ガンマ−デルタを発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は癌または免疫障害である。一実施形態では、治療または予防する癌はＴ細胞性白血病またはＴ細胞性リンパ腫である。一実施形態では、治療または予防する免疫障害は、多発性硬化症、関節リウマチ、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、糖尿病、移植片対宿主病または自己免疫性甲状腺炎である。
【０５０７】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＨＬＡ−Ａ２に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患は移植片対宿主病である。
【０５０８】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＨＩＶエンベロープ糖タンパクｇｐ１２０に対するバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）上にＨＩＶ１−ＣＡＲを発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＨＩＶ１エンベロープ糖タンパクｇｐ１２０を発現する、方法を提供する。一実施形態では、治療または予防する疾患はＨＩＶ１／ＡＩＤＳである。
【０５０９】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＣＭＶ特異的ＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することによりＣＭＶ（サイトメガロウイルス）感染症またはそれに関連する疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＣＭＶに感染している、方法を提供する。一態様では、ＣＭＶ  ＣＡＲおよびバックボーンはＣＭＶ  ｐｐ６５タンパク質に対するものである。一態様では、ＣＭＶ関連疾患は、肺炎、大腸炎または髄膜脳炎である。
【０５１０】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＥＢＢに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することによりＥＢＢ感染症またはＥＢＢ感染症に関連する疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＥＢＢに感染している、方法を提供する。一態様では、ＥＢＢ特異的ＣＡＲおよびバックボーンはＥＢＢ  ＥＢＮＡ３ｃタンパク質に対するものである。一態様では、ＥＢＢ特異的ＣＡＲおよびバックボーンは、ＥＢＢに対する広域中和抗体を含む。一態様では、ＥＢＢ関連疾患はリンパ腫である。
【０５１１】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＫＳＨＶに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することによりＫＳＨＶ感染症またはＫＳＨＶ感染症に関連する疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＫＳＨＶに感染している、方法を提供する。一態様では、ＫＳＨＶ関連疾患は、カポジ肉腫または原発性体液性リンパ腫または多中心性キャッスルマン病である。
【０５１２】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、ＨＴＬＶ１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することによりＨＴＬＶ１感染症またはＨＴＬＶ１感染症に関連する疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がＨＴＬＶ１に感染している、方法を提供する。一態様では、ＨＴＬＶ１に特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーンは、ＨＴＬＶ１  Ｔａｘタンパク質／ＭＨＣクラスＩ複合体を標的とする。一態様では、ＨＴＬＶ１疾患はヒトＴ細胞性白血病またはリンパ腫である。
【０５１３】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、インフルエンザＡに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することによりインフルエンザＡ感染症またはインフルエンザＡ感染症に関連する疾患を治療または予防する方法であって、疾患原因細胞または疾患関連細胞がインフルエンザＡに感染している、方法を提供する。一態様では、インフルエンザＡに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーンは、ＭＥＤＩ８８５２などのインフルエンザＡ赤血球凝集素（ＨＡ）に対する広域中和抗体に由来する抗原結合ドメインを含む。
【０５１４】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、Ｆｃ領域を介してＣＡＲのＣＤ１６ドメインに結合し疾患関連細胞に発現する抗原上に可変（ｖＬおよび／またはｖＨ）領域を介して結合する抗体または抗体フラグメントとともにＣＤ１６Ｖ１５８またはその欠失変異フラグメントもしくは点変異フラグメントをコードする汎用性の従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより癌、感染症、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を治療または予防する方法を提供する。一態様では、疾患関連細胞は、癌細胞、感染細胞、形質細胞またはＢ細胞もしくはＴ細胞である。
【０５１５】
一態様では、本発明は、必要とする対象に、疾患関連細胞に発現する抗原と結合するＦＩＴＣ標識抗体もしくは抗体フラグメントとともにＦＩＴＣに特異的な従来のＣＡＲまたはバックボーン１〜６２（例えば、バックボーン１、バックボーン２、バックボーン３２またはバックボーン３３）を発現するよう操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞を提供することにより癌、感染症、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を治療または予防する方法を提供する。一態様では、疾患関連細胞は、癌細胞、感染細胞、形質細胞またはＢ細胞もしくはＴ細胞である。
【０５１６】
増殖を阻害することができる例示的癌としては、免疫療法に通常応答性である癌が挙げられる。治療する癌の非限定的な例としては、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺癌）、乳癌、結腸癌および肺癌（例えば、非小細胞肺癌）が挙げられる。さらに、本明細書に記載される分子を用いて難治性または再発性の悪性腫瘍を治療することができる。
【０５１７】
例示的実施形態では、本明細書に記載される方法により治療される癌としては、様々な臓器系の肉腫、腺癌および癌腫などの固形腫瘍、例えば肝臓、肺、乳房、リンパ系、胃腸管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎尿路上皮細胞）、前立腺および咽頭を冒す固形腫瘍などが挙げられる。腺癌としては、悪性腫瘍、例えばほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌および食道癌などが挙げられる。一実施形態では、癌はメラノーマ、例えば進行期メラノーマである。本発明の方法および組成物を用いて上記の癌の転移性病巣も治療または予防することができる。
【０５１８】
治療することができるその他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含めた慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘発される癌を含めた環境により誘発される癌および前記癌の組み合わせが挙げられる。本明細書に記載される抗体分子を用いて転移性癌、例えばＰＤ−Ｌ１を発現する転移性癌（Ｉｗａｉら（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の治療を実施することができる。さらに、本明細書に記載される癌関連抗原の発現に関連する疾患としては、特に限定されないが、例えば、本明細書に記載される癌関連抗原の発現に関連する非定型および／または非古典的癌、悪性腫瘍、前癌状態あるいは増殖性疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現Ｔ細胞またはＮＫ細胞により、本明細書に記載される癌関連抗原を発現する細胞に関連する血液癌または別の癌を有する対象の細胞および／または癌細胞の量、数、量または割合が、陰性対照と比較して少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％または少なくとも９９％減少する。一実施形態では、対象はヒトである。
【０５１９】
一実施形態では、本発明は、必要とする対象に、トロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）に特異的な抗原特異的ＣＡＲを含む従来のＣＡＲまたはバックボーンを発現するよう設計された遺伝子改変細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供することにより血液癌を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、血液癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病および骨髄異形成症候群を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法を用いて治療することができる癌は多発性骨髄腫である。多発性骨髄腫とは、骨髄内に形質細胞クローンが蓄積することを特徴とする血液の癌のことである。現在用いられている多発性骨髄腫の治療法としては、特に限定されないが、サリドマイドのアナログであるレナリドマイドによる治療が挙げられる。レナリドマイドには、抗腫瘍活性、血管新生阻害および免疫調節を含めた活性がある。骨髄腫細胞は一般に、本明細書に記載される癌関連抗原の発現に対してフローサイトメトリーより陰性であると考えられている。したがって、いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（配列番号９５１〜９５７）を用いて骨髄腫細胞を標的とし得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ治療剤を１つまたは複数の追加の治療法、例えばレナリドマイド治療と併用し得る。
【０５２０】
一態様では、本発明は、疾患（例えば、癌、自己免疫疾患、感染症、アレルギー性疾患または変性疾患）の増殖を阻害する方法であって、ＣＡＲ−Ｔが抗原に応答して活性化され、疾患原因細胞または疾患関連細胞を標的とするように、疾患の原因となる、または疾患と関連する細胞を、従来のＣＡＲまたは補助モジュール（すなわち、バックボーン１〜６２）を有するＣＡＲを発現する本発明の遺伝子改変細胞と接触させることを含み、疾患の原因となる、または疾患と関連する細胞の増殖が阻害される、方法に関する。一態様では、本発明は、疾患を予防する方法であって、疾患のリスクのある患者に、ＣＡＲ−Ｔが抗原に応答して活性化され、疾患の原因となる、または疾患と関連する細胞を標的とするようにＣＡＲ発現細胞または本発明のＣＡＲ発現細胞を生じさせることが可能な細胞を投与することを含み、疾患の原因となる、または疾患と関連する細胞の増殖が予防される、方法に関する。一態様では、疾患は、癌、感染症、免疫疾患、アレルギー性疾患または変性疾患である。
【０５２１】
本発明の実施形態は、エフェクター細胞（Ｔ細胞およびＮＫ細胞など）またはエフェクター細胞を生じさせることができる幹細胞が本明細書に記載されるＣＡＲを発現するようこれを遺伝子改変し、必要とするレシピエントにＣＡＲ発現Ｔ細胞またはＮＫ細胞を注入する、一種の細胞療法を含む。注入された細胞はレシピエント内で腫瘍細胞を死滅させることができる。様々な態様では、患者に投与した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）またはその子孫は、患者にＴ細胞またはＮＫ細胞を投与後、患者内に少なくとも４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間または５年間存在し続ける。
【０５２２】
本発明は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）が従来のＣＡＲまたは補助モジュール（例えば、バックボーン１〜６２）を有する従来のＣＡＲを一過性に発現するようこれを例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されるＲＮＡにより改変する、一種の細胞療法も含む。必要とするレシピエントにＴ細胞またはＮＫ細胞を注入する。注入された細胞はレシピエント内で疾患関連細胞（例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞）を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者にＴ細胞またはＮＫ細胞を投与後１か月未満、例えば、３週間、２週間、１週間存在し続ける。
【０５２３】
本発明は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を生じさせることが可能な幹細胞（例えば、造血幹細胞、リンパ系幹細胞、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞）が従来のＣＡＲまたは補助モジュール（例えば、バックボーン１〜６２）を有する従来のＣＡＲを発現するようこれを改変し、必要とするレシピエントに投与する、一種の細胞療法も含む。投与された幹細胞はレシピエント内に移植された後、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を生じさせ、それ（すなわち、免疫エフェクター細胞）は疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、ＣＡＲ発現幹細胞の投与後に患者内で産生される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者に遺伝子改変幹細胞を投与後、患者内に少なくとも１週間、２週間、３週間、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間または２０年間存在し続ける。本発明は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を生じさせることが可能な幹細胞が従来のＣＡＲまたは補助モジュール（例えば、バックボーン１〜６２）を有する従来のＣＡＲを発現するようこれを改変し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化させて免疫エフェクター細胞を生じさせ、必要とするレシピエントに注入する、一種の細胞療法も含む。注入された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、レシピエント内への注入後、レシピエント内で疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、患者に投与される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者内に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１４か月間、１５か月間、１６か月間、１７か月間、１８か月間、１９か月間、２０か月間、２１か月間、２２か月間、２３か月間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間または２０年間存在し続ける。
【０５２４】
本発明は、調節免疫エフェクター細胞（例えば、ＴＲＥＧまたはＣＤ２５＋Ｔ細胞）が従来のＣＡＲまたは補助モジュール（例えば、バックボーン１〜６２）を有する従来のＣＡＲを発現し特定の抗原を標的とするようこれを改変する、一種の細胞療法も含む。このようなＣＡＲ−ＴＲＥＧを患者に投与して特定の抗原に対する免疫応答を抑制する。ＣＡＲ−ＴＲＥＧを自己免疫疾患の予防および治療ならびに免疫寛容の増強に用いることができる。
【０５２５】
ＣＡＲ改変免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）により引き起こされる抗腫瘍免疫応答は、能動免疫応答または受動免疫応答であり得、あるいは直接的免疫応答対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様では、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、本明細書に記載される疾患関連抗原を発現するヒト疾患細胞（例えば、癌細胞または感染細胞）に応答して特異的炎症誘発性サイトカイン分泌および強力な細胞溶解活性を示し、本明細書に記載される可溶性の疾患関連抗原に抵抗し、バイスタンダー殺作用を媒介し、癌を含めた確立されたヒト疾患の消退を媒介する。
【０５２６】
本発明は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を生じさせることが可能な幹細胞が従来のＣＡＲまたは補助モジュール（例えば、バックボーン１〜６２）を有する従来のＣＡＲを発現するようこれを改変し、ｅｘ  ｖｉｖｏで用いて疾患関連細胞（例えば、癌細胞）の骨髄または末梢血の造血幹細胞をパージする、一種の細胞療法も含む。一例として、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と、急性リンパ球性白血病または非ホジキンリンパ腫を有する患者から採取した骨髄または末梢血の幹細胞試料とを共培養して、骨髄または末梢血の幹細胞調製物中に存在するあらゆる白血病またはリンパ腫細胞を死滅させる。６時間〜数日の範囲であり得る適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）培養期間の後、パージされた骨髄および末梢血の試料を患者の自家移植に用いる。
【０５２７】
造血幹細胞および造血前駆細胞の体外増幅ついては、米国特許第５，１９９，９４２号に既に記載されているとともに、参照により本明細書に組み込まれ、本発明の細胞に適用することができる。ただし、本発明は細胞の体外増幅のいかなる特定の方法にも限定されず、当該技術分野で公知の他の適切な方法を用いることができる。簡潔に述べれば、ｅｘ  ｖｉｖｏ培養および造血幹細胞の増幅は、（１）哺乳動物由来のＣＤ３４＋造血幹細胞および造血前駆細胞を末梢血採取物または骨髄外植片から収集すること；ならびに（２）このような細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで増幅することを含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３およびｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子も細胞の培養および増幅に用いることができる。
【０５２８】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫感作に細胞ベースのワクチンを用いることに加えて、本発明は、患者に抗原に対する免疫応答を誘発するｉｎ  ｖｉｖｏ免疫感作のための組成物および方法も提供する。
【０５２９】
いくつかの実施形態では、本発明の完全ヒトＣＡＲ改変遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）は、哺乳動物（例えば、ヒト）のｅｘ  ｖｉｖｏ免疫感作および／またはｉｎ  ｖｉｖｏ療法のための一種のワクチンであり得る。ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫感作に関して、細胞を哺乳動物内に投与する前に以下のうち少なくとも１つのもの、すなわち、ｉ）細胞の増幅、ｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入またはｉｉｉ）細胞の凍結保存をｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施する。ｅｘ  ｖｉｖｏの方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されているように、当該技術分野で周知である。
【０５３０】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫感作に細胞ベースのワクチンを用いることに加えて、本発明は、患者に抗原に対する免疫応答を誘発するｖｉｖｏ免疫感作のための組成物および方法も提供する。
【０５３１】
本明細書にはさらに、患者に投与したＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉｓｐｅｃｉｆｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）（Ｂｌｉｎｃｙｔｏまたはブリナツモマブなど）の活性を制御する方法が記載される。いくつかの実施形態では、これらの方法を用いてサイトカイン放出症候群、毛細血管漏出症候群および神経学的合併症などのＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉＴＥによる副作用を制御することができる。操作ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブに応答する患者の大部分では、炎症誘発性サイトカインの過剰放出により発熱、低血圧、低酸素血症、心機能不全、腎不全および電解質異常を含む「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）と総称される諸症状が引き起こされる。このような患者で圧補助および人工呼吸のため集中治療施設に入院する必要がある患者は少なくない。相当数の症例で、ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブ療法が振戦、発作を含めた神経症状を引き起こし、致命的なものとなる可能性がある。これらの障害の治療にはステロイドおよびＩＬ６受容体抗体を含めた多数の治療方法が用いられるが、多数の患者がこのような治療法に難治性を示す。本発明は、特に限定されないがＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）を含めた養子細胞療法によるサイトカイン放出症候群および神経学的合併症などの合併症の治療および予防のための新規な方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、チロシンキナーゼ、具体的にはＳｃｒファミリーキナーゼ、特にＬｃｋキナーゼの阻害剤の投与を含む。一実施形態では、この方法は、Ａｂｌファミリーチロシンキナーゼおよびｐ５６Ｌｃｋ（Ｌｃｋ）を含めたＳｒｃファミリーチロシンキナーゼ（ＳＦＫ）の経口小分子阻害剤であるダサチニブ（Ｌｅｅ  ＫＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２０１０）２４，８９６−９００）の投与を含む。ダサチニブはこれまでに、抗原特異的エフェクターＴ細胞機能を阻止することが示されている（Ｗｅｉｃｈｓｅｌ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００８；１４（８），２４８４）。しかし、ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒの機能を阻止することができるかどうかはこれまでに検討されたことはない。神経学的合併症が認められる患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中にＣＡＲ発現Ｔ細胞が検出されている（Ｈｕ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２０１６９：７０）。ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉＴＥが引き起こすサイトカイン放出症候群および神経学的合併症の治療および予防に対するダサチニブの利点で特に重要なのは、ダサチニブを臨床的に許容される用量で投与すると、それが血液脳関門を通過し脳内で有効濃度に達することが可能であるという点である（Ｐｏｒｋｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００８  Ａｕｇ  １５；１１２（４）：１００５−１２）。したがって、ダサチニブは、血液脳関門を通過したＣＡＲ−Ｔ細胞のサイトカイン放出を含めたエフェクター機能を阻止することが予想される。
【０５３２】
一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＳｒｃキナーゼ阻害剤を投与して、ＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＬｃｋ阻害剤を投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、Ｌｃｋ阻害剤はＡ−７７００４１である。
【０５３３】
一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にダサチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ダサチニブを少なくとも１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日または２８０ｍｇ／日の用量で経口投与する。
【０５３４】
一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にポナチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ポナチニブを少なくとも１５ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４５ｍｇ／日、６０ｍｇ／日の用量で経口投与する。
【０５３５】
Ｔリンパ球は、最終分化状態に達した後、加齢に伴うテロメアの進行性喪失による複製老化段階に入るまでの複製寿命が短い。ヒトＴリンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養すると、約３０〜５０集団倍加という短い寿命を示す。
【０５３６】
本明細書ではさらに、養子細胞療法の目的で、末梢血単核球およびＴ細胞の生存および増殖を促進し、その複製老化を防止して免疫細胞（例えば、リンパ球およびＮＫ細胞）の寿命を延ばす方法が企図される。この方法は、生存および増殖を促進し活性化誘導細胞死を阻止するウイルスおよび細胞タンパク質の異所性発現を伴うものである。この目的に適した例示的ウイルスタンパク質としては、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ヒトヘルペスウイルス８としても知られる）がコードするウイルスＦＬＩＣＥ阻害タンパク質（ｖＦＬＩＰ）Ｋ１３、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）由来のＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰおよびＭＣ１６０  ｖＦＬＩＰ、ウマヘルペスウイルス２（ＥＨＶ２）由来のＥ８−ｖＦＬＩＰ、ウシヘルペスウイルス４がコードするｖＦＬＩＰ（ＢＨＶ−ｖＦＬＩＰ）、ヘルペスウイルスメカカ（ｍｅｃａｃａ）がコードするｖＦＬＩＰ、ヘルペスウイルスサイミリがコードするｖＦＬＩＰならびにＨＴＬＶ１がコードするＴａｘ、ＨＴＬＶ２がコードするＴａｘおよびＨＴＬＶ２がコードするＴａｘ−ＲＳ変異体が挙げられる。この目的に適した例示的細胞タンパク質としては、ｃＦＬＩＰ−ＬアイソフォームまたはＭＲＩＴ−α、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２欠失変異体またはＭＲＩＴ−ｐ２２（Ｂｅｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９４：１１７２−６，１９９７；Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：９６２１−４、１９９７；Ｔｈｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：５１７−２１，１９９７）が挙げられる。いくつかの実施形態では、上記のウイルスおよび細胞タンパク質が免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）内にその天然の状態で、または小さいエピトープタグを有する状態で発現し、恒常的に機能的活性を示す。他の実施形態では、上記のウイルスおよび細胞タンパク質が免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）内に１コピーまたは複数コピーのスイッチドメイン（または二量体化ドメイン）、例えばＦＫＢＰ（配列番号２６２０および２６２１）およびＦＫＢＰ×２（配列番号２６２２）などと融合した状態で発現する。他の実施形態では、ＦＫＢＰまたはＦＫＢＰ×２ドメインは、融合タンパク質を細胞膜に係留するためのＮ末端ミリソチル化（ｍｙｒｉｓｏｔｙｌａｔｉｏｎ）（Ｍｙｒ）配列をさらに有し得る。Ｍｙｒ配列を有する例示的ＦＫＢＰ×２−Ｋ１３融合タンパク質の配列には、配列番号２６２３で示したものがある。スイッチドメインを有する融合タンパク質は、基礎的状態では機能的に不活性であるが、ＡＰ２０１８７などの二量体化剤を添加すると活性化される。
【０５３７】
一実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６２９）、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３０）、ＭＣ１６０−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３１）、Ｅ８−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３２）、ＢＨＶ−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３５）、メカカ（ｍｅｃａｃａ）ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３４）、ヘルペスウイルスサイミリｖＦＬＩＰ（配列番号２６３３）、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα（配列番号２６３６）、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号２６３７）、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ（配列番号２６３８）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（配列番号２６３９）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ変異体（配列番号２６４０）または上記のタンパク質（配列番号２６２９〜２６４０）のアミノ酸配列と７０〜９９％の同一性を有するタンパク質からなる群より選択されるウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質を異所性に発現する。
【０５３８】
一実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、１つまたは複数のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰ（配列番号２６２０〜２６２１）、ＦＫＢＰ×２（配列番号２６２２）またはＭｙｒ−ＦＫＢＰと、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６２９）、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３０）、ＭＣ１６０−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３１）、Ｅ８−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３２）、ＢＨＶ−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３５）、メカカ（ｍｅｃａｃａ）ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３４）、ヘルペスウイルスサイミリｖＦＬＩＰ（配列番号２６３３）、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα（配列番号２６３６）、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号２６３７）、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ（配列番号２６３８）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（配列番号２６３９）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ変異体（配列番号２６４０）または配列番号２６２９〜２６４０のアミノ酸配列と７０〜９９％の同一性を有するタンパク質からなる群より選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質とを含む融合タンパク質を異所性に発現する。１つまたは複数のスイッチドメインとウイルスシグナル伝達タンパク質とを含む例示的融合タンパク質には、配列番号２６４１〜２６４５により示したものがある。
【０５３９】
いくつかの態様では、本開示は、養子細胞療法に適した免疫エフェクター細胞を作製する方法であって、細胞を、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６２９）、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３０）、ＭＣ１６０−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３１）、Ｅ８−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３２）、ＢＨＶ−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３５）、メカカ（ｍｅｃａｃａ）ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３４）、ヘルペスウイルスサイミリｖＦＬＩＰ（配列番号２６３３）、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα（配列番号２６３６）、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号２６３７）、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ（配列番号２６３８）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（配列番号２６３９）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ変異体（配列番号２６４０）または配列番号２６２９〜２６４０のアミノ酸配列と７０〜９９％の同一性を有するタンパク質からなる群より選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させることを含む、方法を提供する。
【０５４０】
いくつかの態様では、本開示は、養子細胞療法に適した免疫エフェクター細胞を作製する方法であって、細胞を、１つまたは複数のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰ（配列番号２６２０〜２６２１）、ＦＫＢＰ×２（配列番号２６２２）またはＭｙｒ−ＦＫＢＰとＫ１３−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６２９）、ＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３０）、ＭＣ１６０−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３１）、Ｅ８−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３２）、ＢＨＶ−ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３５）、メカカ（ｍｅｃａｃａ）ｖＦＬＩＰ（配列番号２６３４）、ヘルペスウイルスサイミリｖＦＬＩＰ（配列番号２６３３）、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα（配列番号２６３６）、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２（配列番号２６３７）、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ（配列番号２６３８）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（配列番号２６３９）、ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ変異体（配列番号２６４０）または配列番号２６２９〜２６４０のアミノ酸配列と７０〜９９％の同一性を有するタンパク質からなる群より選択される１つまたは複数のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質とを含む融合タンパク質をコードする核酸と接触させることを含む、方法を提供する。
【０５４１】
一実施形態では、養子細胞療法に適した細胞は、天然または合成の免疫受容体を発現する。例示的なこのような免疫受容体としては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラＴ細胞受容体（ｃＴＣＲ）、合成Ｔ細胞受容体および合成ｎｏｔｃｈ受容体が挙げられる。一実施形態では、細胞を天然または合成の免疫受容体をコードする構築物と接触させる前に、接触させるのと同時に、または接触させた後に、ウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させ得る。一実施形態では、細胞を天然または合成の免疫受容体をコードする構築物と接触させる前に、接触させるのと同時に、または接触させた後に、スイッチまたは二量体化ドメインを含むウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させ得る。
【０５４２】
一態様では、本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の集団を作製する方法を特徴とする。一実施形態では、この方法は、免疫受容体とウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質の同時発現が可能な条件下で、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団を準備し、免疫エフェクター細胞の集団を免疫受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、合成ＴＣＲ）をコードする核酸と接触させ、免疫エフェクター細胞の集団を配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と接触させることを含む。
【０５４３】
一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸はＤＮＡである。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸は、ウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質の発現を駆動することが可能なプロモーターを含む。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と免疫受容体をコードする核酸は、同じベクターから発現する。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸と免疫受容体をコードする核酸は、別個のベクターから発現する。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）をコードする核酸と免疫受容体（サブユニット２）をコードする核酸は、２番目のサブユニットの翻訳を可能にする内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む同じポリヌクレオチドフラグメントから発現する。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）をコードする核酸と免疫受容体（サブユニット２）をコードする核酸は、コードする単一のポリヌクレオチドフラグメントから発現し、異なるサブユニットが切断可能リンカー（例えば、配列番号８３１〜８３６）により分離されている。
【０５４４】
一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をコードする核酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されるＲＮＡである。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）と免疫受容体（サブユニット２）は。２番目のサブユニットの翻訳を可能にする内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む同じＲＮＡから発現する。一実施形態では、配列番号２６２９〜２６４５のウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質（サブユニット１）と免疫受容体（サブユニット２）は、単一のＲＮＡから発現し、異なるサブユニットが切断可能リンカー（例えば、配列番号８３１〜８３６）により分離されている。
【０５４５】
併用療法
本明細書に記載される治療方法は、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸を含む遺伝子改変細胞を含む組成物を使用することを含む。様々な実施形態では、本明細書に記載される治療方法を既存の治療法および薬剤と組み合わせ得る。本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸を含む遺伝子改変細胞を含む本明細書に記載の治療用組成物を少なくとも１つの追加の既知の治療法または治療剤とともに対象に投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物と追加の治療法または治療剤を連続的に投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物と追加の治療法または治療剤を同時に投与する。本明細書に記載される組成物の投与と既存の治療法の実施の最適な順序は、医師などの当業者には明らかであろう。
【０５４６】
本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞と少なくとも１つの追加の治療剤は、同時に、同じまたは別個の組成物として、または連続的に投与することができる。連続投与には、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を最初に投与し、次に追加の薬剤を投与することができ、あるいは投与順序を逆にすることもできる。
【０５４７】
疾患の持続期間にわたって対象に併用療法を実施し得る。疾患の持続期間は診断から治療の結果までを含み、治療により症状の軽減および／または症状の消失がもたらされる。様々な実施形態では、２つの治療の作用は、部分的な相加作用であるか、完全な相加作用であるか、相加作用を上回るものであり得る。送達は、２つ目の治療を実施するとき、最初に実施した治療の効果が依然として検出可能であるようなものであり得る。
【０５４８】
ＣＡＲ治療剤および／またはその他の治療剤、治療方法もしくは治療様式は、障害の活動期に、または寛解期もしくは疾患の活動が低い時期に実施することができる。ＣＡＲ治療剤は、他の治療の前に、その治療と同時に、治療後に、または障害の寛解期に投与することができる。
【０５４９】
組み合わせて実施する場合、ＣＡＲ治療剤および追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部を、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いる場合の量または用量より多い、少ない、またはこれと同じ量または用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ治療剤、追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部を投与する量または用量は、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いる場合の量または用量より（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％）少ない。他の実施形態では、所望の効果（例えば、癌の治療）が得られるＣＡＲ治療剤、追加の薬剤（例えば、第二または第三の薬剤）または全部の量または用量は、各薬剤を例えば単独療法として個別に用いて同じ治療効果を得るのに必要な量または用量より少ない（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％少ない）。
【０５５０】
さらなる方法の態様は、それぞれがＣＡＲ分子を含む有効量の細胞、例えば免疫エフェクター細胞またはその集団を、任意選択で免疫細胞の有効性および／または安全性を増大させる薬剤と組み合わせて対象に投与することに関するものである。さらなる態様では、免疫細胞の有効性および／または安全性を増大させる薬剤は、（ｉ）タンパク質ホスファターゼ阻害剤；（ｉｉ）キナーゼ阻害剤；（ｉｉｉ）サイトカイン；（ｉｖ）免疫抑制分子の阻害剤；あるいは（ｖ）ＴＲＥＧ細胞のレベルまたは活性を低下させる薬剤；ｖｉ）ＣＡＲ改変細胞の増殖および／または持続性を増大させる薬剤；ｖｉｉ）ケモカイン；ｖｉｉｉ）ＣＡＲの発現を増大させる薬剤；ｉｘ）ＣＡＲの発現または活性の制御を可能にする薬剤；ｘ）ＣＡＲ改変細胞の生存および／または持続の制御を可能にする薬剤；ｘｉ）ＣＡＲ改変細胞による副作用を制御する薬剤；ｘｉｉ）Ｂｒｄ４阻害剤；ｘｉｉｉ）疾患部位に治療剤（例えば、ｓＨＶＥＭ）または予防的剤を送達する薬剤；ｘｉｖ）ＣＡＲが対象とする標的抗原の発現を増大させる薬剤；ｘｖ）アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニストのうちの１つまたは複数のものである。
【０５５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子改変細胞を外科手術、化学療法、放射線照射、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸およびＦＫ５０６など、抗体またはその他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体またはその他の抗体治療剤、サイトキシン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカインなどならびに放射線照射、ペプチドワクチン、例えばＩｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載されているものなどと併用する治療レジメンで使用し得る。一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を化学療法剤と併用することができる。例示的化学療法剤としては、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ（ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン）を含む）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシンまたはボルテゾミブ）、免疫調節剤、例えばサリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）が挙げられる。
【０５５２】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をシクロホスファミドおよびフルダラビンと組み合わせて対象に投与する。
【０５５３】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をベンダムスチンおよびリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、対象はＣＬＬを有する。
【０５５４】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよび／または副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（Ｒ−ＣＨＯＰ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、対象はびまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。
【０５５５】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよび／またはリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよびリツキシマブ（ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を用量を調整したＥＰＯＣＨ−Ｒ（ＤＡ−ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。諸実施形態では、対象はＢ細胞リンパ腫、例えばＭｙｃ再構成中悪性度Ｂ細胞リンパ腫を有する。
【０５５６】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体とモノメチルアウリスタチンＥの抗体薬物コンジュゲートである。諸実施形態では、対象はホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば、再発性または難治性ＨＬを有する。諸実施形態では、対象はＣＤ３０＋ＨＬを有する。諸実施形態では、対象は自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けたことがある。
【０５５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をＣＤ２０阻害剤、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、抗ＣＤ２０単一特異性または二重特異性抗体）またはそのフラグメントと組み合わせて対象に投与する。
【０５５８】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスなどのラパログと組み合わせて対象に投与する。一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤を細胞のアフェレーシスの前に投与することができる。一実施形態では、対象はＣＬＬを有する。
【０５５９】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をキナーゼ阻害剤と併用することができる。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載されるＣＤＫ４阻害剤、例えばＣＤ４／６阻害剤、例えば６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン・塩酸塩（パルボシクリブまたはＰＤ０３３２９９１とも呼ばれる）などである。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＢＴＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブなどである。いくつかの実施形態では、イブルチニブを約３００〜６００ｍｇ／日（例えば、約３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０または５５０〜６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日または約５６０ｍｇ／日）の用量で、例えば経口的に投与する。諸実施形態では、イブルチニブを約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇまたは５６０ｍｇ）の用量で、一定期間にわたって連日、例えば、２１日のサイクルにわたって連日または２８日のサイクルにわたって連日投与する。一実施形態では、イブルチニブを１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクルまたはそれ以上投与する。理論に束縛されるものではないが、イブルチニブを加えることによりＴ細胞増殖性応答が増強され、Ｔ細胞がＴヘルパー２（Ｔｈ２）表現型からＴヘルパー１（Ｔｈ１）表現型にシフトし得るものと考えられる。Ｔｈ１およびＴｈ２はヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１とＴｈ２は異なる免疫応答経路を指令する。Ｔｈ１表現型は、細胞内の病原体／ウイルスもしくは癌性細胞などの細胞を死滅させる、または自己免疫応答を持続させる炎症誘発性応答と関係がある。Ｔｈ２表現型は好酸球蓄積および抗炎症性応答と関係がある。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシンアナログ、ＯＳＩ−０２７などである。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えばｍＴＯＲＣ１阻害剤および／またはｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲＣ１阻害剤および／またはｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＭＮＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＭＮＫ阻害剤、例えば４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなどである。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａおよび／またはＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。一実施形態では、キナーゼ阻害剤は、本明細書に記載されるＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ二重阻害剤、例えばＰＦ−０４６９５１０２などである。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はＳｒｃキナーゼ阻害剤である。一実施形態では、キナーゼ阻害剤はダサチニブである。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にＳｒｃキナーゼ阻害剤を投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後、患者にダサチニブを投与してＣＡＲ発現細胞の活性を制御する、または終結させる。一実施形態では、ダサチニブを少なくとも１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日または２１０ｍｇ／日の用量で経口投与する。
【０５６０】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。例示的ＡＬＫキナーゼとしては、特に限定されないが、クリゾチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ社）、セリチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）、アレクチニブ（Ｃｈｕｇａｉ社）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３とも呼ばれる；Ａｒｉａｄ社）、エントレクチニブ（Ｉｇｎｙｔａ社）、ＰＦ−０６４６３９２２（Ｐｆｉｚｅｒ社）、ＴＳＲ−０１１（Ｔｅｓａｒｏ社）（例えば、臨床試験識別番号ＮＣＴ０２０４８４８８を参照されたい）、ＣＥＰ−３７４４０（Ｔｅｖａ社）およびＸ−３９６（Ｘｃｏｖｅｒｙ社）が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は固形癌、例えば本明細書に記載される固形癌、例えば肺癌を有する。
【０５６１】
カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリン（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）阻害する薬物または増殖因子誘導性シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物（ラパマイシン）（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ６６：８０７−８１５，１９９１；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ．７３：３１６−３２１，１９９１；Ｂｉｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３−７７３，１９９３）も使用することができる。さらなる態様では、本発明の細胞組成物を骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤を用いるＴ細胞除去療法、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドおよび／またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰ  ＡＴＨなどの抗体とともに（例えば、前、同時または後に）患者に投与し得る。一態様では、本発明の細胞組成物をＣＤ２０と反応する薬剤、例えばＲｉｔｕｘａｎなどのＢ細胞除去療法の後に投与する。例えば、一実施形態では、対象に高用量化学療法による標準治療の後、末梢血幹細胞移植を実施し得る。ある特定の実施形態では、移植後、対象に増幅した本発明の免疫細胞の注入を実施する。さらなる実施形態では、増幅した細胞を外科手術の前または後に投与する。
【０５６２】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を自家幹細胞移植、同種幹細胞移植、自家骨髄移植または同種骨髄移植と組み合わせて対象に投与する。
【０５６３】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を微小移植またはＨＬＡミスマッチ同種細胞療法（Ｇｕｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２  Ｎｏｖ  ２０；３０（３３）：４０８４−９０）と組み合わせて対象に投与する。
【０５６４】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。
【０５６５】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）のモジュレーターと組み合わせて対象に投与する。ＭＤＳＣは末梢または多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞はＴ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の効果を妨げる。理論に束縛されるものではないが、ＭＤＳＣモジュレーターの投与により本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞の効果が増強されるものと考えられる。一実施形態では、対象は固形腫瘍、例えば本明細書に記載される固形腫瘍、例えば膠芽腫を有する。例示的なＭＤＳＣのモジュレーターとしては、特に限定されないが、ＭＣＳｌｌＯおよびＢＬＺ９４５が挙げられる。ＭＣＳｌｌＯはマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。例えば、臨床試験識別番号ＮＣＴ００７５７７５７を参照されたい。ＢＬＺ９４５はコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）の小分子阻害剤である。例えば、Ｐｙｏｎｔｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９（２０１３）：１２６４−７２を参照されたい。
【０５６６】
諸実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をＢｒｄ４またはＢＥＴ（ブロモドメインおよび特異的末端モチーフ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。ＢＥＴタンパク質であるＢＲＤ４は、Ｔ細胞からエフェクター記憶表現型への分化に関連する転写因子ＢＡＴＦのＣＤ８＋Ｔ細胞での発現を直接調節した。ブロモドメインおよび特異的末端モチーフ（ＢＥＴ）タンパク質の阻害剤であるＪＱ１は、幹細胞様の機能的特性を有するＣＤ８＋Ｔ細胞および中枢記憶Ｔ細胞を維持した。ＣＡＲ発現細胞と組み合わせて投与することができる例示的Ｂｒｄ４阻害剤としては、特に限定されないが、ＪＱ１、ＭＳ４１７、ＯＴＸＯ１５、ＬＹ３０３５１１および米国特許出願公開第２０１４０２５６７０６（Ａ１）号に記載されているＢｒｄ４阻害剤ならびにその任意のアナログが挙げられる。
【０５６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞をインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチドまたはＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔｉＬ−１５（Ａｄｍｕｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）と組み合わせて対象に投与する。ｈｅｔｉＬ−１５は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒａのヘテロダイマー非共有結合複合体である。ｈｅｔｉＬ−１５については、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，１２４，０８４号、米国特許出願公開第２０１２／０１７７５９８号、同第２００９／００８２２９９号、同第２０１２／０１４１４１３号および同第２０１１１００８１３１１に記載されている。諸実施形態では、ｈｅｔ−ＩＬ−１５を皮下投与する。諸実施形態では、対象は癌、例えば固形癌、例えばメラノーマまたは結腸癌を有する。諸実施形態では、対象は転移性癌を有する。
【０５６８】
一実施形態では、対象にＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用を軽減または改善する薬剤を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用としては、特に限定されないが、ＣＲＳおよびマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）が挙げられる。ＣＲＳの症状としては、高熱、嘔気、一過性低血圧、低酸素症などが挙げられる。ＣＲＳは、臨床的な全身徴候および症状、例えば発熱、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、嘔気、嘔吐および頭痛が含み得る．ＣＲＳは、発疹などの臨床的皮膚徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、嘔気、嘔吐および下痢などの臨床的消化器徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、頻呼吸および低酸素血症などの臨床的呼吸器徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、臨床的心血管徴候および症状、例えば頻脈、脈圧拡大、低血圧症、心拍出量増大（早期）および潜在的な心拍出量低下（終期）などを含み得る。ＣＲＳは、ｄダイマー上昇、出血の有無を問わない低フィブリノーゲン血症などの臨床的凝固徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、高窒素血症などの臨床的腎徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、高トランスアミナーゼ血症および高ビリルビン血症などの臨床的肝徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、臨床的神経徴候および症状、例えば頭痛、精神状態変化、錯乱、せん妄、喚語困難または明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行異常および発作などを含み得る。
【０５６９】
したがって、本明細書に記載される方法は、対象に本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与することと、ＣＡＲ発現細胞による治療に起因する可溶性因子のレベル上昇を管理するため１つまたは複数の薬剤をさらに投与することとを含み得る。一実施形態では、対象で上昇する可溶性因子は、ＩＦＮ−ｙ、ＴＮＦａ、ＩＬ−２およびＩＬ−６のうちの１つまたは複数のものである。一実施形態では、対象で上昇する可溶性因子は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびフラクタルカイン（ｆｒａｋｔａｌｋｉｎｅ）のうちの１つまたは複数のものである。したがって、この副作用を治療するために投与する薬剤は、これらの可溶性因子のうちの１つまたは複数のものを中和する薬剤であり得る。一実施形態では、これらの可溶型のうちの１つまたは複数のものを中和する薬剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。このような薬剤の例としては、特に限定されないが、ステロイド（例えば、副腎皮質ステロイド）、Ｓｒｃ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、ＴＮＦａ阻害剤およびＩＬ−６阻害剤が挙げられる。ＴＮＦａ阻害剤の例には、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルおよびゴリムマブなどの抗ＴＮＦａ抗体分子がある。ＴＮＦａ阻害剤のまた別の例には、エンタネルセプト（ｅｎｔａｎｅｒｃｅｐｔ）などの融合タンパク質がある。ＩＬ−６阻害剤の例には、抗ＩＬ−６抗体分子または抗ＩＬ−６受容体抗体分子、例えばトシリズマブ（ｔｏｅ）、サリルマブ、エルシリモマブ、ＣＮＴＯ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＣＮＴＯ１３６、ＣＰＳＩ−２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ−１０９、ＦＥ３０１およびＦＭ１０１がある。一実施形態では、抗ＩＬ−６受容体抗体分子はトシリズマブである。一実施形態では、ＩＬ−６阻害剤は、ＩＬ６Ｒおよびヒト血清アルブミンと結合するラクダ二重特異性抗体（例えば、ＩＬ６Ｒ−３０４−Ａｌｂ８）（配列番号２６４９）である。ＩＬ−１Ｒベースの阻害剤の例にはアナキンラがある。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞による副作用を治療するために投与する薬剤は、Ｓｒｃ阻害剤（例えば、ダサチニブ）である。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞による副作用を治療するために投与する薬剤は、Ｓｒｃ阻害剤ダサチニブである。諸実施形態では、ダサチニブを約１０ｍｇ／日〜２４０ｍｇ／日（例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２４０ｍｇ／日または３００ｍｇ／日）の用量で投与する。
【０５７０】
一実施形態では、対象にＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を投与することができる。例えば、一実施形態では、阻害分子を阻害する薬剤を投与することができる。阻害分子、例えばプログラム死１（ＰＤ−１）は、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下させ得る。阻害分子の例としては、ＰＤ−１、ＰＤＬｌ、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４およびＴＧＦＲベータが挙げられる。例えばＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害によりＣＡＲ発現細胞の性能が最大限に高まり得る。諸実施形態では、阻害核酸、例えば阻害核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、例えば本明細書に記載されるものを用いて、ＣＡＲ発現細胞での阻害分子の発現を阻害することができる。一実施形態では、阻害剤はｓｈＲＮＡである。一実施形態では、阻害分子はＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態では、阻害分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子がＣＡＲの構成要素、例えば全構成要素をコードする核酸と連結している。一実施形態では、阻害シグナルの阻害剤は、例えば、阻害分子と結合する抗体または抗体フラグメントであり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ４と結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０およびＭＤＸ−１０１とも呼ばれ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）として市販されている；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社；トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６として知られ、Ｐｆｉｚｅｒ社から入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体））であり得る。一実施形態では、薬剤は、ＴＩＭ３と結合する抗体または抗体フラグメントである。一実施形態では、薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）と結合する抗体または抗体フラグメントである。一実施形態では、薬剤はＬＡＧ３と結合する抗体または抗体フラグメントである。
【０５７１】
ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含まれる受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および骨髄性細胞上に発現する。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に対する２種類のリガンドが、ＰＤ−１と結合したときにＴ細胞活性化をダウンレギュレートすることが示されている。ＰＤ−Ｌ１はヒト癌に多量に存在する。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用を阻害することにより免疫抑制を逆転させることができる。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体フラグメントおよびその他の阻害剤が当該技術分野で入手可能であり、本明細書に記載される本発明のＣＡＲと併用し得る。例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社）は、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ−１と特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびその他のヒトモノクローナル抗体が米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ社）はＰＤ−１と結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。ペムブロリズマブ（以前はランブロリズマブとして知られ、ＭＫ０３４７５とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ社）はＰＤ−１と結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は米国特許第８，３５４，５０９号および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。ＭＥＤＩ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社）は、ＰＤＬ１と結合するヒトモノクローナル抗体であり、リガンドとＰＤ１との相互作用を阻害する。ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉ  Ｒｏｃｈｅ社）は、ＰＤ−Ｌ１と結合するヒトＦｅ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０ＡおよびＰＤ−Ｌ１に対するその他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号および米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されている。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤はＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５阻害剤）である。
【０５７２】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの活性を増強する薬剤は、ＣＡＲが対象とする標的抗原の発現を増大させるまた別の薬剤である。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができる薬剤としては、亜ヒ酸、ＡＴＲＡ（全トランスレチノイン酸）、化合物２７、４０、４９（Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ；２０１６年１０月１２日にオンラインで先行出版）、ＩＤＨ２阻害剤（例えば、ＡＧ−２２１）またはその組み合わせが挙げられる。一実施形態では、薬剤をＣＡＲ発現細胞の投与前に、投与と同時に、または投与後に投与する。好ましい実施形態では、これらの薬剤をＣＡＲ発現細胞の投与前に投与する。好ましい実施形態では、上記の薬剤とともに投与するＣＡＲ発現細胞はＢ細胞抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２２など）を標的とする。
【０５７３】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの活性を増強する薬剤は可溶性受容体である。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができる可溶性受容体としては、ｓＨＶＥＭ（配列番号２６６４）、ｓＨＶＥＭ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ融合タンパク質（配列番号２６６５）またはその組み合わせが挙げられる。可溶性受容体は、１日１回または１日２回以上、例えば、１日２回、１日３回または１日４回投与することができる。可溶性受容体は２日間以上投与することができ、例えば、可溶性受容体を２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間または４週間投与する。例えば、可溶性受容体を１日１回、７日間投与する。
【０５７４】
一実施形態では、正常組織に対するＣＡＲ発現細胞の毒性から保護する薬剤を対象に投与することができる。ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の限界の１つとして、正常組織に対する毒性が考えられる。例えば、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲは、同じくＣＤ１９抗原を発現する正常Ｂ細胞の長期間にわたる枯渇を引き起こす可能性がある。一実施形態では、ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ１９のノックアウトまたは変異と組み合わせることができる。一実施形態では、内因性ＣＤ１９のノックアウトまたは変異は、ＣＲＩＰＳ／Ｃａｓ９、Ｔａｌｏｎまたは当該技術分野で公知の他の適切な遺伝子編集方法を用いて達成される。現在臨床使用されているＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞が結合するＣＤ１９のエピトープは、エキソン２〜４にマッピングされている。一実施形態では、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、Ｚｎフィンガーヌクレアーゼ、Ｔａｌｏｎまたは当該技術分野で公知の他の方法を用いて、自家または同種造血幹細胞のエキソン２（またはＣＡＲ  Ｔ細胞が標的とするＣＤ１９により認識される他の適切なエキソン／領域）にミスセンスまたはナンセンス変異を生じさせる。一実施形態では、対象の疾患を抑えるＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞注入およびＣＤ１９が枯渇／変異した造血幹細胞を用いる自家または同種幹細胞移植を実施する。改変幹細胞から生じるＢ細胞がＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞の標的になることはないため、患者はＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞による副作用としてよくみられるＢ細胞無形成を回避できる。別の実施形態では、ＭＰＬ  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＭＰＬのノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ１２３  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ１２３のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ３３  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ３３のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ２０  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ２０のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＤ２２のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＳ１  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＣＳ１のノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞の内因性ＢＣＭＡのノックアウトまたは変異と組み合わせる。別の実施形態では、ＣＤ４５  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を正常造血幹細胞または免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の内因性ＣＤ４５のノックアウトまたは変異と組み合わせる。基本的に、ＣＡＲが標的とする抗原が正常造血幹細胞またはその子孫の１つにも発現する場合であれば、正常組織に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の毒性を軽減するのに同様の方法を用いることが可能である。
【０５７５】
別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）または免疫エフェクター細胞を生じさせる幹細胞のＣＡＲが標的とする内在遺伝子またはタンパク質のノックアウトまたは変異と組み合わせる。例えば、ＣＤ４５を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ４５があらゆる造血細胞に発現するため、近接するＣＤ４５−ＣＡＲＴ細胞によって死滅させられ、生じにくくなる。しかし、Ｔ細胞のＣＤ４５  ＣＡＲ発現を、ＣＤ４５  ＣＡＲを発現するＴ細胞の内因性ＣＤ４５のノックダウンまたは欠失と組み合わせれば、このような細胞を生じさせることができる。基本的に、免疫エフェクター細胞に発現する他の抗原を標的とするＣＡＲを生じさせるのに同様の方法を用いることができる。例示的なこのような抗原としては、特に限定されないが、ＣＤ５、ＴＣＲα、ＴＣＲβ１、ＴＣＲβ２、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、プレＴＣＲαおよびＮＫ細胞上に発現する様々な受容体が挙げられる。
【０５７６】
本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与する対象に投与することができるサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＬＩＧＨＴおよびＩＬ−２１またはその組み合わせが挙げられる。好ましい実施形態では、投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５もしくはＩＬ−２１、ＩＬ１２Ｆまたはその組み合わせである。サイトカインは、１日１回または１日２回以上、例えば、１日２回、１日３回または１日４回投与することができる。サイトカインは２日間以上投与することができ、例えば、サイトカインを２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間または４週間投与する。例えば、サイトカインを１日１回、７日間投与する。ＣＡＲ発現細胞療法に対する応答が最適未満の対象にサイトカインを投与することにより、ＣＡＲ発現細胞の効果または抗癌活性が改善される。好ましい実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与するサイトカインはＩＬ−７である。
【０５７７】
一実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、Ｂｒｄ４阻害剤またはＴｏｌａｎｉ，Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２９；３３（２２）：２９２８−３７．ＰＭＩＤ：２３７９２４４８（Ｔｏｌａｎｉ，Ｇｏｐａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｐｕｎｊ，ＭａｔｔａおよびＣｈａｕｄｈａｒｙ，２０１４）に記載されているＢＲＤ４を標的とするｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡである。
【０５７８】
医薬組成物
本明細書には、キメラ抗原受容体、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、ウイルスならびに／あるいは本明細書に記載される遺伝子操作細胞および／または化学物質のうちのいずれか１つあるいは複数のものと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物も提供される。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存剤を含み得る。本発明の組成物は、一態様では静脈内投与用に製剤化されている。
【０５７９】
本発明の医薬組成物は、治療する疾患に適した方法で投与し得る。投与の量および頻度は、患者の状態ならびに患者の疾患の種類および重症度などの因子によって決まるが、臨床試験により適切な用量が決定され得る。
【０５８０】
「治療有効量」が示される場合、投与するべき本発明の組成物の正確な量は、医師が患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の範囲および状態の個人差を考慮に入れて決定するものであり得る。一般に、本明細書に記載される遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物は、範囲内のあらゆる整数値を含めた１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの場合には１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の用量で投与され得ると言える。Ｔ細胞組成物は、これらの用量で複数回投与してもよい。細胞は、免疫療法で一般に知られている注入技術を用いて投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０５８１】
いくつかの実施形態では、対象に活性化させた遺伝子改変細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与し、次いで血液を再び採取し（またはアフェレーシスを実施し）、その遺伝子改変細胞を活性化させ、その活性化し増幅した遺伝子改変細胞を患者に再注入するのが望ましいものであり得る。この工程は、数週間毎に複数回実施することができる。ある特定の態様では、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採取物から免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化させることができる。ある特定の態様では、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃまたは１００ｃｃの採血物から免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化させる。
【０５８２】
「薬学的に許容される補形剤」は、医薬組成物の調製に有用であり、一般に安全で無毒性で望ましい補形剤を意味し、ヒトの製薬学的用途のみならず獣医学的使用にも許容される補形剤が含まれる。このような補形剤は、固体、液体、半固体であり得、エアゾール組成物の場合、ガス状であり得る。
【０５８３】
様々な実施形態では、本発明による医薬組成物を任意の投与経路による送達に合わせて製剤化し得る。「投与経路」は、特に限定されないが、エアゾール、経鼻、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、経粘膜、経皮、非経口、埋込み型ポンプ、持続注入、局所適用、カプセルおよび／または注射を含めた当該技術分野で公知の任意の投与経路を指し得る。
【０５８４】
本発明による医薬組成物は、任意の薬学的に許容される担体も含有し得る。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、目的の化合物をある組織、器官または身体の一部から別の組織、器官または身体の一部に運搬または輸送するのに関与する薬学的に許容される材料、組成物または賦形剤を指す。例えば、担体は、液体または固体の充填剤、希釈剤、補形剤、溶媒もしくは封入材料またはその組み合わせであり得る。担体の各成分は、それが製剤の他の成分と適合性があるものでなければならないという点で、「薬学的に許容される」ものでなければならない。また、それが接触し得る任意の組織または器官と接触させて使用するのに適したものでもなければならない、つまり、その治療利益を過剰に上回る中毒、刺激、アレルギー反応、免疫原性またはその他の合併症のリスクを伴うものであってはならない。
【０５８５】
本発明による医薬組成物は、経口投与用にカプセル化する、錠剤化する、またはエマルションもしくはシロップに製剤化することもできる。組成物を増強もしくは安定化させる、または組成物を製剤化しやすくするため、薬学的に許容される固体または液体の担体を添加し得る。液体担体としては、シロップ、ラッカセイ油、オリーブ油、グリセリン、生理食塩水、アルコールおよび水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天またはゼラチンが挙げられる。担体としては、徐放材料、例えば単独で、またはロウとともに用いるモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなども挙げ得る。
【０５８６】
医薬製剤は、錠剤形態には、必要に応じて粉砕、混合、造粒および圧縮；または硬ゼラチンカプセル形態には粉砕、混合および充填を含めた従来の製薬技術により作製する。液体担体を使用する場合、製剤は、シロップ剤、エリキシル剤、エマルションまたは水性もしくは非水性懸濁剤の形態になる。このような液体製剤は、経口で直接、または軟ゼラチンカプセルに充填して投与し得る。
【０５８７】
本発明による医薬組成物は治療有効量で送達し得る。正確な治療有効量は、所与の対象に治療効果の点で最も効果的な結果をもたらす組成物の量である。この量は、特に限定されないが、治療用化合物の特徴（活性、薬物動態、薬力学およびバイオアベイラビリティを含む）、対象の生理的状態（年齢、性別、疾患の種類および段階、全般的健康状態、所与用量に対する応答性ならびに投薬の種類を含む）、製剤中の薬学的に許容される１つまたは複数の担体の性質ならびに投与経路を含めた様々な因子によって異なり得る。臨床分野および薬理学分野の当業者であれば、慣例的な実験により、例えば、化合物投与に対する対象の応答をモニターし、それに応じて用量を調整することにより治療有効量を決定することができるであろう。さらなる指針については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，ＵＳＡ）（２０００）を参照されたい。
【０５８８】
対象組成物の投与は、エアゾール吸入、注射、輸液、埋植または移植によるものを含めた任意の好都合な方法で実施し得る。本明細書に記載される組成物は、経動脈的に、患者の皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、または腹腔内に投与し得る。一態様では、本発明のＴ細胞組成物を真皮内または皮下注射により患者に投与する。一態様では、本発明のＴ細胞組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節または感染部位内に直接注射し得る。
【０５８９】
特定の例示的態様では、対象に白血球除去を実施してよく、ここでは、白血球を採取し、ｅｘ  ｖｉｖｏで濃縮または枯渇させて目的の細胞、例えばＴ細胞を選択および／または単離する。これらのＴ細胞単離物を当該技術分野で公知の方法により増幅し、１つまたは複数の本発明のＣＡＲ構築物が導入されるよう処理し、それにより本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞を作製し得る。次いで、必要とする対象に高用量化学療法による標準治療、次いで末梢血幹細胞移植を実施し得る。ある特定の態様では、移植後または移植と同時に、対象に増幅した本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞の注入を実施する。さらなる態様では、増幅した細胞を外科手術の前または後に投与する。
【０５９０】
一実施形態では、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写を用いて、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）内に導入し、対象（例えば、ヒト）に本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の最初の投与とそれに続く１回または複数回の本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を実施し、ここでは、１回または複数回の投与を前回の投与後１５日未満、例えば投与から１４日後、１３日後、１２日後、１１日後、１０日後、９日後、８日後、７日後、６日後、５日後、４日後、３日後または２日後に実施する。一実施形態では、１週間当たり２回以上の本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を対象（例えば、ヒト）に実施し、例えば、１週間当たり２回、３回または４回の本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を実施する。一実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に１週間当たり２回以上のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与（例えば、１週間当たり２回、３回または４回の投与）（本明細書ではサイクルとも呼ぶ）を実施し、次の１週間はＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与を一切実施せず、その後、対象に追加で１回または複数回のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与（例えば、１週間当たり２回以上のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の投与）を実施する。別の実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に２サイクル以上のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与し、各サイクルの間の時間は１０日未満、９日未満、８日未満、７日未満、６日未満、５日未満、４日未満または３日未満である。一実施形態では、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を１週間当たり３回、隔日で投与する。一実施形態では、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を少なくとも２週間、２週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間またはそれ以上投与する。
【０５９１】
一過性に発現するＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖを有するＣＡＲ−Ｔ）を用いて治療を実施する患者に発生し得る問題として、複数回治療した後のアナフィラキシーが考えられる。
【０５９２】
この理論に束縛されるものではないが、そのようなアナフィラキシー応答は、体液性抗ＣＡＲ応答、すなわち、抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体を発現する患者により引き起こされるのではないかと考えられる。抗原への曝露に１０〜１４日間の休止があると患者の抗体産生細胞に（アナフィラキシーを引き起こさない）ＩｇＧアイソタイプからＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチが起こるものと考えられる。
【０５９３】
患者にＣＡＲ療法に対するアナフィラキシー応答が発現するリスクまたはＣＡＲ療法の過程でＩｇＥ型ＣＡＲ抗体応答が生じるリスクが高い場合、ＣＡＲ療法の前に、またはＣＡＲ療法の過程でオマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ）を投与することができる。
【０５９４】
一過性ＣＡＲ療法の過程で患者に抗ＣＡＲ抗体応答（ＲＮＡ形質導入により生じるものなど）が生じるリスクが高い場合、ＣＡＲＴ注入の休止が１０〜１４日より長く続かないようにするべきである。
【０５９５】
キット
本発明を実施するキットも提供される。例えば、対象の癌を治療するキットまたは本明細書に開示されるＣＡＲを１つまたは複数発現するＣＡＲ  Ｔ細胞を作製するキット。キットは、ＣＡＲをコードする核酸分子もしくはポリペプチド分子またはＣＡＲをコードするベクターを、免疫エフェクター細胞内に核酸を導入する方法とともに含み得る。キットは、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスと、ウイルス形質導入を促進するポリブレンなどの化学物質とを含み得る。キットは、ＣＡＲを発現させるＴ細胞を単離するための構成要素を含み得る。あるいは、キットは、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）または幹細胞を含み得る。キットには本開示のＣＡＲが２つ以上含まれ得る。キットは、容器と、容器上にあるか、または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含み得る。
【０５９６】
適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されたものであり得る。容器には通常、核酸分子、ウイルス、ベクター、ＣＡＲを発現するＴ細胞のうちの１つまたは複数のものを含む組成物が収納されている。いくつかの実施形態では、容器は無菌接続口を有し得る（例えば、容器は、皮下注射針を突き通すことが可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書には、組成物が特定の状態を治療するために使用されることが示されている。ラベルまたは添付文書には通常、例えば腫瘍を治療もしくは予防する方法またはＣＡＲ  Ｔ細胞を作製する方法に、開示の核酸分子、ＣＡＲまたはＣＡＲを発現するＴ細胞を使用するための指示がさらに記載されている。添付文書には通常、市販の治療薬のパッケージに通例記載され、適応症、用法、用量、投与、禁忌に関する情報および／またはそのような治療薬の使用に関する注意書きを含む指示が記載されている。指示資料は、電子形態（コンピュータディスケットまたはコンパクトディスクなど）の書面であってもよく、また、視覚的なもの（動画ファイルなど）であってもよい。キットは、キットが設計された特定の用途を容易にするためのほかの構成要素も含み得る。したがって、例えば、キットは、Ｔ細胞上でのＣＡＲの発現を測定する手段、ＣＡＲを発現するＴ細胞の数もしくは割合を求める手段またはＣＡＲＴ細胞の機能性を判定する手段をさらに含み得る。キットは、特定の方法の実施に慣例的に用いられる緩衝剤およびその他の試薬をさらに含み得る。このようなキットおよび適切な内容物は当業者に周知である。
【０５９７】
【表３】
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【０５９８】
【表４】
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【０５９９】
【表５】
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【０６００】
【表６】
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【０６０１】
【表７】
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【０６０２】
【表８】
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【０６０３】
【表９】
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【０６０４】
【表１０】
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【０６０５】
【表１１】
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【０６０６】
【表１２】
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【０６０７】
【表１３】
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【０６０８】
【表１４】
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【０６０９】
【表１５】
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【０６１０】
【表１６】
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【０６１１】
【表１７】
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【０６１２】
【表１８】
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【０６１３】
【表１９】
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【０６１４】
【表２０】
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【０６１５】
【表２１】
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【０６１６】
【表２２】
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【０６１７】
【表２３】
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【０６１８】
（実施例）
以下の実施例は、本発明に対する請求項の範囲を限定することを意図するものではなく、むしろ特定の実施形態の例示とすることを意図するものである。例示される方法で当業者に思いつく変形形態はいずれも本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【０６１９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の標的としてのＭＰＬ（ＴＰＯ受容体）
トロンボポエチンおよびその同族受容体であるｃ−Ｍｐｌは巨核球形成の主要な分子調節因子である（Ｚｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３２：１４９−６１，２０１３）。ＴＰＯが細胞表面ｃ−Ｍｐｌと結合することによりシグナル伝達事象のカスケードが活性化され、それにより巨核球前駆細胞が増殖および分化し、最終的には血小板産生がもたらされる。ＴＰＯおよびｃ−Ｍｐｌは造血幹細胞の自己再生も調節する。ＴＰＯの巨核球系列でのこれらの生物学的機能と一致するように、ｃ−Ｍｐｌ発現の大部分が非リンパ系造血組織に限定されている。ｃ−ＭｐｌのｍＲＮＡおよび細胞表面タンパク質は、ヒトＣＤ３４＋細胞、巨核球、血小板、初代白血病試料ならびに巨核球性白血病および赤芽球性白血病の細胞系で確認されている。ｃ−Ｍｐｌ  ｍＲＮＡは大部分の正常非造血組織にもリンパ系細胞系にも検出されていない。
【０６２０】
本発明者らは、公開されているＭＰＬ発現の遺伝子発現データベースを検討した。図２Ａ〜図２Ｄに示されるように、ＭＰＬの発現が正常組織に極めて限定的なものであり、１器官のみが低レベルの発現を示すことが確認された。これに対し、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の患者試料の大部分にＭＰＬの有意な発現がみられた。以上の結果は、ＭＰＬがＡＭＬ、ＭＤＳおよびＣＭＬなどの骨髄系悪性腫瘍の患者に対するキメラ抗原受容体改変Ｔ細胞を用いた治療の優れた標的となることを示唆している。
【０６２１】
細胞系および細胞
本発明に使用した細胞系およびその増殖培地を表２４に示す。５％ＣＯ２加湿恒温器内で３７℃にて細胞を培養した。細胞系は、ＡＴＣＣ、ＮＩＨ  ＡＩＤＳ試薬プログラムから入手したもの、本発明者らの研究室で入手可能なもの、または他の研究室から入手したものである。
【０６２２】
【表２４】
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【０６２３】
ＮＦＡＴ依存性ＥＧＦＰ（またはＧＦＰ）レポーター遺伝子で操作したＪｕｒｋａｔ細胞系（クローンＥ６−１）は、カリフォルニア大学サンフランシスコ校のＡｒｔｈｕｒ  Ｗｅｉｓｓ博士から寄贈されたものであり、ＣＡＲシグナル伝達を研究するために記載されている（Ｗｕ，ＣＹ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５０：２９３−３０２，２０１５）。１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを追加したＲＰＭＩ−１６４０培地でＪｕｒｋａｔ細胞を維持した。
【０６２４】
ＭＰＬに対するキメラ抗原受容体をコードするレンチウイルスベクターの作製
ｐＬｅｎｔｉ６ｖ５ｇｗ＿ｌａｃｚベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）からＬａｃＺ遺伝子を除去することによりｐＬＥＮＴＩ−Ｂｌａｓｔベクターを得た。ｐＬｅｎｔｉ−ＭＰ２はＰａｎｔｅｌｉｓ  Ｔｓｏｕｌｆａｓ氏から寄贈されたもの（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド番号３６０９７）であり、これを使用し、標準的な分子生物学技術を用いてＣＭＶプロモーターをヒトＥＦ１αプロモーターに置き換えることによりｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａまたはｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１α［配列番号９０５］レンチウイルスベクターを作製した。ｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１αベクターからＷＰＲＥ配列を欠失させることによりｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＤＷＰＲＥ［配列番号９０６］を得た。ｐｓＰＡＸ２ベクターはＤｉｄｉｅｒ  Ｔｒｏｎｏ氏から寄贈されたものである（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド番号１２２６０）。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）からｐＬＰ／ＶＳＶＧエンベローププラスミドおよび２９３ＦＴ細胞を入手した。Ｒｏｂｅｒｔ  Ｉｌｌａｒｉａ博士の研究室からレトロウイルス導入ベクターＭＳＣＶｎｅｏ、ＭＳＣＶｈｙｇｒｏおよびＭＳＣＶｐａｃならびにパッケージングベクターｐＫＡＴを入手した。ｐｈＲＧＴＫウミシイタケルシフェラーゼプラスミドはＰｒｏｍｅｇａ社製のものとした。
【０６２５】
ヒトＭＰＬを標的とするモノクローナル抗体がいくつか記載されている（米国特許出願公開第２０１２０２６９８１４（Ａ１）号、米国特許第６，３４２，２２０（Ｂ１）号、欧州特許第１６１６８８１（Ａ１）号および国際公開第０２５６８１０９号）。米国特許出願公開第２０１２０２６９８１４（Ａ１）号に記載されている１．６．１モノクローナル抗体のヌクレオチド配列を用いて、これに対応し、ヒトＣＤ８分子［配列番号１〜４］由来のシグナルペプチド、ｖＬフラグメント、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）×３リンカーおよびｖＨフラグメントをコードするヌクレオチド配列の５’末端から３’末端までからなるｓｃＦＶフラグメントを合成した。ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）ソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いてｓｃＦＶフラグメントの配列をコドン最適化し、最適化した配列をコードする遺伝子フラグメントをＧｅｎｅＡｒｔ（商標）またはＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）により合成した。この遺伝子フラグメントを、ＮｈｅＩおよびＭｌｕＩ制限酵素部位を含むカスタムプライマーを用いたＰＣＲ反応に鋳型として使用し、次いで、標準的な分子生物学技術を用いて、ＣＡＲカセットのヒンジドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む改変ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａベクターにクローン化した。ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］と称される最終ＣＡＲ構築物は、ヒトＭＰＬに対するモノクローナル抗体１．６．１由来のｓｃＦｖ（ｖＬ−ｖＨ）フラグメント［配列番号７３０］とインフレームで融合したヒトＣＤ８シグナルペプチド（ｈＣＤ８ＳＰ）、Ｍｙｃエピトープタグ［配列番号５５３］、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通ドメイン［配列番号８４２］、ヒト４１ＢＢ（ＣＤ１３７）受容体の細胞質ドメイン［配列番号８４５］、ヒトＣＤ３ｚの細胞質［配列番号８４６］、Ｔ２Ａリボソームスキップ配列［配列番号８３２］ならびに高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）をコードするｃＤＮＡからなるものであった。ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］は、ＥＧＦＰ  ｃＤＮＡがピューロマイシン耐性遺伝子のバリアントをコードするｃＤＮＡ（配列番号８５０）に置き換わっていることを除いて上記のものとほぼ同じものである。ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］では、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通ドメインならびにヒト４１ＢＢ（ＣＤ１３７）受容体の細胞質ドメインがヒトＣＤ２８のヒンジドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメイン（配列番号８４８）に置き換わっている。基本的に、同じ方法を用いて、１６１ｓｃＦｖフラグメントが様々な抗原を標的とする抗体のｓｃＦｖフラグメントに置き換わった複数の抗原に対するほかのＣＡＲをいくつか作製した。様々なｓｃＦｖフラグメントのヌクレオチド配列およびタンパク質配列の配列番号ならびにその標的抗原の名称を表１１に記載する。さらに、ｓｃＦｖ領域がヒトおよびマウスのトロンボポエチン（ＴＰＯ）の細胞外ドメイン（配列番号５５３および５５４）に置き換わったＭＰＬを標的とする２つの構築物を作製した。これらの構築物、ｈＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｕ０４）［配列番号１７３８］およびｍＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｖ０３）［配列番号１７３９］は、ＣＤ２８のヒンジドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインと融合したヒトおよびマウスのトロンボポエチン（ＴＰＯ）の細胞外受容体結合ドメインとＣＤ３ｚ細胞質ドメインとからなるものであった。ＣＡＲの作製に使用することができる様々なラクダｖＨＨフラグメント、非免疫グロブリン結合足場およびリガンドのヌクレオチド配列およびタンパク質配列の配列番号ならびにその標的抗原の名称を表７、８および１０に記載する。
【０６２６】
ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０２２４１５−Ｔ０２）［配列番号１７４７］では、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスに由来しカルボキシ末端Ｆｌａｇエピトープタグを含むＫ１３−ｖＦＬＩＰをコードするｃＤＮＡが、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ  ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列の下流に挿入されており、Ｐ２Ａ切断可能リンカーをコードするヌクレオチド配列によりそれと隔てられている。ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１３８８］は、ＣＤ８のヒンジドメインおよび膜貫通ドメインならびに４１ＢＢ共刺激ドメインが含まれていることを除いて配列番号１７４７とほぼ同じ設計である。基本的に、同じ方法を用いて、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにＭＣ１５９−ｖＦＬＩＰ、ｃＦＬＩＰ−Ｌ、ＨＴＬＶ１−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘなどの他の補助モジュールをクローン化した。構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１３８８］は、４１ＢＢ共刺激ドメイン（ＢＢ）とＣＤ３ｚ活性化ドメイン（ｚ）とを含むＣＡＲを含む。この構築物は、ＣＡＲをコードする配列の下流にあり、Ｐ２Ａ切断可能リンカーによりそれと隔てられ、Ｆｌａｇエピトープでタグ付けされたＫ１３−ｖＦＬＩＰも同時に発現する。構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１５１６−Ｎ０５）［配列番号１１１８］は、４１ＢＢ共刺激ドメインがないことを除いて配列番号１３８８とほぼ同じ設計である。様々なＣＡＲ構築物のヌクレオチド配列およびタンパク質配列の配列番号ならびにその標的抗原の名称を表１９〜２２に記載する。ＣＡＲ構築物はいずれも、標準的な分子生物学技術を用いて作製し、その配列を自動シーケンシングを用いて確認した。
【０６２７】
レンチウイルスおよびレトロウイルスベクター
基本的に既に記載されている（Ｍａｔｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．２（２）：２０６−１０．２００３）通りに、２９３ＦＴ細胞へのリン酸カルシウムベースの遺伝導入によりレンチウイルスを作製した。１０％ＦＣＳ  ４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸および１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ（本明細書ではＤＭＥＭ−１０と呼ぶ）で２９３ＦＴ細胞を増殖させた。レンチウイルスの作製には、１０ｃｍの組織培養プレートに入った抗生物質を含まないＤＭＥＭ−１０培地１０ｍｌにトランスフェクション当日の集密度が約８０になるよう２９３ＦＴ細胞を播いた。翌日、様々な遺伝子をコードするレンチウイルス発現プラスミド１０μｇ、ＰＳＰＡＸ２プラスミド７．５μｇおよびＰＬＰ／ＶＳＶＧプラスミド２μｇを用いて、トランスフェクション法により細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションから約１５〜１６時間後、培地９ｍｌを除去し、新鮮な培地５ｍｌと入れ換えた。トランスフェクションから約４８時間後、上清５ｍｌを収集（１回目の収集）し、新鮮な培地５ｍｌと入れ換えた。トランスフェクションから約７２時間後、全培地を収集（２回目の収集、通常６ｍｌ前後）した。収集した上清をプールし、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離してあらゆる細胞残屑および非付着細胞を除去した。無細胞上清を０．４５μｍのシリンジフィルターでろ過した。いくつかの場合には、上清を４℃、１８５００ｒｐｍの超遠心分離によりさらに２時間遠心分離した。ウイルスペレットを開始時体積の１／１０のＸＶＩＶＯ培地に再懸濁させた。ウイルスは、新鮮な状態で標的細胞の感染に使用するか、または等分して−８０℃で凍結保存した。
【０６２８】
Ｔ細胞およびＰＢＭＣの感染
ロサンゼルス小児科病院の血液バンクの匿名化した健常成人ドナーからバフィーコート細胞を入手し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離による末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の単離に使用した。ＰＢＭＣをそのまま使用するか、またはＣＤ３磁気マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用い、製造業者の指示に従ってＴ細胞の単離に使用した。ＰＢＭＣまたは単離Ｔ細胞を１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ２８抗体および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ社）に再懸濁させた。細胞を５％ＣＯ２加湿恒温器内で３７℃にて培養した。細胞を上記の培地中で１日活性化させた後、レンチウイルスベクターに感染させた。全般的には、別途明記されない限り、初代細胞（例えば、Ｔ細胞）を午前中、遠心感染法（１８００ｒｐｍ、３７℃で９０分間）を用いて、８μｇ／ｍｌのＰｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｈ９２６８）の存在下、ＸＶＩＶＯ培地に再懸濁させた濃縮ウイルス３００μｌに感染させた。夜に培地を交換し、さらに２日間感染を繰り返して合計３回感染させた。３回目の感染後、細胞をペレット化し、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ２８抗体および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２を含有し（必要に応じて）各抗生物質を追加した新鮮なＸＶＩＶＯ培地に再懸濁させ、選択用の細胞培養フラスコに入れる。細胞を上記の培地中で、薬物による選択を用いない場合は１０〜１５日間、薬物による選択を用いる場合は２０〜３０日間培養した。細胞をＥＧＦＰを発現するレンチウイルスに感染させる場合、薬物による選択もフローによる分取も実施せずに細胞を増幅し、ＥＧＦＰ発現細胞を富化した。癌細胞系の感染には、未濃縮のウイルス上清２ｍｌをポリブレン（登録商標）（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｈ９２６８）で総体積３ｍｌにしたもので約５００，０００個の細胞を感染させた。次いで翌朝、細胞をペレット化し、各抗生物質を含む培地に再懸濁させ、選択用の細胞培養フラスコに入れる。
【０６２９】
レトロウイルスベクターの作製には、全般的には１０ｃｍの組織培養プレートでＤＭＥＭ−１０培地１０ｍｌ中、レトロウイルス構築物１０μｇ、ｐＫＡＴ  ４μｇおよびＶＳＶＧプラスミド２μｇを用いて２９３ＦＴ細胞をトランスフェクトしたことを除いて、レンチウイルスベクター産生について上に記載したものと基本的に同じ方法を用いた。ウイルス収集および標的細胞の感染は、基本的にレンチウイルスベクターについて上に記載した通りに実施した。
【０６３０】
抗体および薬物
ブリナツモマブをＡｍｇｅｎ社から入手した。ジギトニンをＳｉｇｍａ社（カタログ番号Ｄ１４１）から購入し、ＤＭＳＯで１００ｍｇ／ｍｌのストック溶液を作製した。ＰＢＳで１ｍｇ／ｍｌの希釈ストックを作製した。細胞溶解に用いるジギトニンの最終濃度は、別途明記されない限り３０μｇ／ｍｌとした。
【０６３１】
ＥＬＩＳＡ
特定の標的細胞系と２４〜９６時間共培養したＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰエフェクター細胞またはＴ細胞の細胞培養上清中のヒトＩＬ２、ＩＦＮγ、ＩＬ６およびＴＮＦαを、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社（ミネアポリス、ミネソタ州）およびＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社の市販のＥＬＩＳＡキットを用い、製造業者の推奨に従って測定した。
【０６３２】
ＣＡＲの発現を検出するＦＡＣＳ解析
マウス抗ヒトｃ−Ｍｙｃ  ＡＰＣコンジュゲートモノクローナル抗体（カタログ番号ＩＣ３６９６Ａ）をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社（ミネアポリス、ミネソタ州）製のものとした。ビオチン化タンパク質ＬをＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ社（ピスカタウェイ、ニュージャージー州）から購入し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１ｍｇ／ｍｌに再構成し、４℃で保管した。ストレプトアビジン−ＡＰＣ（ＳＡ１００５）をＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入した。
【０６３３】
Ｍｙｃ染色を用いたＣＡＲの検出には、１×１０６個の細胞を回収し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する氷冷１×ＰＢＳ洗浄緩衝液３ｍｌで３回洗浄した。洗浄後、ＡＰＣコンジュゲートＭｙｃ抗体１０μｌを含有する氷冷洗浄緩衝液０．１ｍｌに細胞を再懸濁させ、暗所で１時間インキュベートした後、氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した。
【０６３４】
タンパク質Ｌ染色を用いたＣＡＲの検出には、１×１０６個の細胞を回収し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する氷冷１×ＰＢＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。洗浄後、タンパク質Ｌ  １μｇを含有する氷冷洗浄緩衝液０．１ｍｌに細胞を４℃で１時間再懸濁させた。細胞を氷冷洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、洗浄緩衝液０．１ｍｌ中、ＡＰＣコンジュゲートストレプトアビジン１０μｌと（暗所で）３０分間インキュベートした後、氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した。ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社のＦＡＣＳＶｅｒｓｅ分析器を用いてＦＡＣＳを実施した。
【０６３５】
細胞死アッセイ
細胞死を測定するため、Ｇｌｕｃ、ＮＬｕｃおよびその他のルシフェラーゼの異所性細胞質発現に基づく新規なアッセイをＵＳ米国特許仮出願第６２／３９６，６５０号に記載されている通りに用いた。この方法では、健常細胞内では優先的に保持されるが、死細胞および死の過程にある細胞からは放出されるか、または死細胞および死の過程にある細胞で活性が優先的に測定されるように、標的細胞にレポーターを発現させる。このアッセイに好適なレポーターには、１）カイアシ類、例えばガウシア・プリンセプス（Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓ）、プレウロマムマ・アブドミナリス（Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ  ａｂｄｏｍｉｎａｌｉｓ）、メトリディア・パシフィカ（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａ）、メトリディア・クルチカウダ（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｃｕｒｔｉｃａｕｄａ）、メトリディア・アシンメトリカ（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａ）、メトリディア・オクホテンシス（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｏｋｈｏｔｅｎｓｉｓ）、メトリディア・ロンガ（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｌｏｎｇａ）、ルシクチア・オバリフォルミス（Ｌｕｃｉｃｕｔｉａ  ｏｖａｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ヘテロラブドゥス・タンネリ（Ｈｅｔｅｒｏｒｈａｂｄｕｓ  ｔａｎｎｅｒｉ）およびプレウロマムマ・スクツラタ（Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ  ｓｃｕｔｕｌｌａｔａ）などの非分泌型ルシフェラーゼ、２）深海エビ由来の操作されたルシフェラーゼレポーター、例えばＮａｎｏＬｕｃなどがある。いくつかのこのような例示的レポーターベクターの配列を配列番号９１２〜配列番号９１８に示す。上記のベクターを用いてレトロウイルスおよびレンチウイルスを作製し、次にこれを用いて、適切な抗生物質で選択した後もＧＬｕｃ、ＮＬｕｃまたはＴｕｒｂｏＬｕｃを安定に発現するいくつかの標的細胞系のポリクローナル集団を作製した。別途明記されない限り、様々なルシフェラーゼを安定に発現する標的細胞を３８４ウェルプレートに入った標的細胞の培養に用いた培地に３連で播いた。懸濁液中で増殖した標的細胞は一般に、１ウェル当たり２〜３×１０４個の濃度で播き、付着単層として増殖した標的細胞は１ウェル当たり１〜２×１０４個の濃度で播いた。別途明記されない限り、標的細胞と遺伝子改変Ｔ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現するもの）を、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を１：１〜１０：１で変化させて、４時間〜９６時間共培養した。標的細胞が付着細胞（例えば、ＨｅＬａ細胞）として増殖した場合、ウェルの底部に一晩付着させた後、Ｔ細胞を加えた。以下に記載する通り、天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することによりＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーにより測定されるルシフェラーゼ活性の増大により、Ｔ細胞を介した標的細胞溶解の誘導をアッセイした。
【０６３６】
ＣＴＺアッセイ
ＣＴＺの経時的酸化を避けるため６Ｎ  ＨＣｌを３０μｌ追加した１００％メタノール１．１ｍｌに凍結乾燥ＣＴＺ粉末１ｍｇを溶かすことにより、天然セレンテラジン（ＣＴＺ；Ｎａｎｏｌｉｇｈｔ社、カタログ番号３０３）の１００×ストック溶液を作製した。ＣＴＺアッセイ緩衝液を作製するため、ＣＴＺの１００×ストック溶液をＰＢＳで０．５倍濃度に希釈した。別途明記されない限り、体積約５０〜６０μｌの培地に入った非分泌型ルシフェラーゼを発現する細胞を含む３８４ウェル白色プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社、３８４ウェル白色プレート、カタログ番号７８１０７５）の各ウェルに総体積１５μｌの（上記の通りに調製した）ＣＴＺアッセイ緩衝液を加え、ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙＨ４プレートリーダーを用いて、エンドポイントモードでのプレートの蛍光を読み取った。９６ウェルプレートでは、細胞を培地２００μｌに播き、０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を約５０μｌ加えた。別途明記されない限り、ＧＬｕｃ、ＴｕｒｂｏＬｕｃ１６およびＭＬｕｃ７の活性のアッセイには０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を用いた。一部の実験では、ＮＬｕｃ活性の測定にも（０．１２５倍濃度に希釈した）ＣＴＺアッセイ緩衝液を用いた（下を参照されたい）。一般に、別途明記されない限り、加えた０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液の体積は細胞を含むウェル中の液体の体積の約４分の１としたが、細胞を含む培地に０．５×ＣＴＺアッセイを１：１の体積で加え場合にもアッセイは有効であった。必要に応じて、培地のみ（Ｍｅｄ）が入ったウェルおよび標的細胞をいずれのＳＩＲ構築物にも感染させていないＴ細胞（Ｔ−ＵＩ）とインキュベートしたウェルのＧｌｕｃ活性を対照として用いた。
【０６３７】
ＮＬｕｃアッセイ：
ＮＬｕｃ活性の測定には、Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を製造業者の指示に従って使用した。簡潔に述べれば、Ｎａｎｏ−Ｇｌｏアッセイ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ社）１ｍｌにＮａｎｏ−Ｇｌｏ基質５μｌを加えることによりＮａｎｏ−Ｇｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔを調製した。別途明記されない限り、上で調整したＮａｎｏ−Ｇｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ  １５μｌを培地６０μｌに細胞が入った３８４ウェル白色プレートの各ウェルおよびプレートに手作業で直接加えた。９６ウェルプレートでは、細胞を培地２００μｌに播き、アッセイ緩衝液を約５０μｌ加えた。
【０６３８】
事前に細胞溶解を実施せずに、ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙＨ４プレートリーダーを用いてエンドポイントモードのプレートの蛍光を読み取った。一部の実験では、ＣＴＺアッセイ緩衝液を用いてＮＬｕｃ活性を測定したが、ここでは、緩衝液を０．１２５倍の最終濃度に希釈した。ＮＬｕｃ活性の測定にＣＴＺアッセイ緩衝液を用いる場合、総体積約１５μｌ（特に明示されない限り）の０．１２５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を体積約５０〜６０μｌの培地に細胞が入った３８４ウェル白色プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社、３８４ウェル白色プレート、カタログ番号７８１０７５）の各ウェルに注入器により加え、ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙＨ４プレートリーダーを用いてエンドポイントモードのプレートの蛍光を読み取った。９６ウェルプレートでは、細胞を一般に２００μｌの培地に播き、０．１２５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を約５０μｌ加えた。
【０６３９】
標的細胞上での抗原発現を検出するアッセイ
ＣＤ１９とＭＰＬ（トロンボポエチン受容体またはＴＰＯ−Ｒとしても知られる）はともに造血細胞上に発現するが、異なる系列の細胞で差次的発現を示す。ＦＭＣ６３は、ヒトＣＤ１９を特異的に認識するよく特徴付けられたマウスモノクローナル抗体である。同様に、１６１（１．６．１とも称される）は、ヒトＭＰＬを認識するモノクローナル抗体であり、米国特許出願公開第２０１２／０２６９８１４（Ａ１）号に記載されている。本発明者らは、既知のＦＭＣ６３  ｖＬおよびｖＨフラグメントの配列に基づきＦＭＣ６３一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントを作製した。ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖフラグメントをコードするｃＤＮＡは、ヒトＣＤ８分子由来のシグナルペプチド、ＦＭＣ６３  ｖＬフラグメント、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）×３リンカーおよびＦＭＣ６３−ｖＨフラグメントをコードするヌクレオチド配列の５’末端から３’末端までからなるものであった。次いで、ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖフラグメントをコードするｃＤＮＡをその３’末端でＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーを介してＡｃＶ５タグ化ＮＬｕｃをコードするｃＤＮＡとインフレームで融合し、ＦＭＣ６３−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃを作製した。次いで、得られたフラグメントをレンチウイルスベクターｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ（配列番号９０５）のヒトＥＦ１αプロモーターの下流にクローン化して構築物Ｐｌｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５−Ｕ０９を作製した。挿入フラグメントのＤＮＡおよびＰＲＴ配列をそれぞれ配列番号９２３および配列番号２６６８で示す。ＭＰＬに対する１．６．１モノクローナル抗体のｖＬおよびｖＨフラグメントを用いて、１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃをコードする構築物を同様に作製した。挿入フラグメントのＤＮＡおよびＰＲＴ配列をそれぞれ配列番号９２４および配列番号２６６９で示す。ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５およびｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−１６１（ｖＬ−ｖＨ）−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５プラスミドをリン酸カルシウム共沈殿法により２９３ＦＴ細胞内にトランスフェクトした。トランスフェクションから約２０時間後、細胞培地をＸＶＩＶＯ培地に入れ換えた。４８〜７２時間後、分泌されたＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５（ＦＭＣ６３−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５とも呼ぶ）および１６１（ｖＬ−ｖＨ）−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５（１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５とも呼ぶ）タンパク質を含有する馴化培地を収集した。
【０６４０】
ＦＭＣ６３−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５および１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５タンパク質を含有する上清を用いて、ヒトｃ−ＭＰＬ  ｃＤＮＡを発現するレンチウイルスベクターまたは空ベクターを形質導入することによりｃ−ＭＰＬ  ｃＤＮＡを発現するよう操作したＪｕｒｋａｔ細胞、Ｋ５６２細胞、ＲＡＪＩ細胞、ＲＳ−４−１１（ＲＳ４１１）細胞およびＨＥＬ．９２．１．７（ＨＥＬ）細胞の表面でのＣＤ１９およびＭＰＬの発現を検出した。細胞は、シグナルペプチドを欠くヒト化Ｇｌｕｃ  ｃＤＮＡを発現した。ベクターおよびＭＰＬを発現するＪｕｒｋａｔ−Ｇｌｕｃ細胞、Ｋ５６２−Ｇｌｕｃ細胞、ＨＥＬ．９２．１．７−Ｇｌｕｃ細胞、ＲＡＪＩ−Ｇｌｕｃ細胞およびＲＳ４１１−Ｇｌｕｃ細胞をＦＭＣ６３−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５および１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清と４℃で１時間インキュベートした後、０．１％ＢＳＡを追加した冷ＰＢＳで十分に洗浄した。細胞を冷ＰＢＳに再懸濁させ、平底３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社、３８４ウェル白色プレート、カタログ番号７８１０７５）に１ウェル当たり３０μｌの細胞懸濁液を３連で播いた。ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４プレートリーダーを用いて、ＮＬｕｃ基質として天然セレンテラジン（ＣＴＺ）を含有するＮＬｕｃアッセイ緩衝液（ＰＢＳで希釈した天然セレンテラジン３０μｌ／ウェル）を自動ディスペンサによりウェルモードで各ウェルに加え、ＮＬｕｃ活性の尺度として発光を測定した。図３Ａから、ＨＥＬ．９２．１．７−Ｇｌｕｃ−ベクター細胞上に１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５との強い結合が観察されたことがわかり、内因性のＭＰＬの有意な発現が示唆される。ＨＥＬ．９２．１．７−Ｇｌｕｃ−ＭＰＬ細胞のＭＰＬの異所性発現により１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５結合の中程度の増大がもたらされた。これに対し、ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、ＲＡＪＩ細胞およびＲＳ４１１細胞上には１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５との極めて弱い結合が観察され、ＭＰＬの異所性発現の増大はごくわずかであった。最後に、Ｋ５６２−ベクター細胞上には弱いが比較的強い１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５の結合が観察され、Ｋ５６２−ＭＰＬ細胞上では有意な増大がみられた。１６１−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５とは対照的に、ＦＭＣ６３−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清は、ベクターおよびＭＰＬを発現するＲＡＪＩ細胞上で最も強い結合を示し、ＲＳ４１１細胞上では中程度に強い結合を示し、それ以外の細胞上では極めて弱い結合ないし無視できる程度の結合を示した。
【０６４１】
ＣＤ１９およびＭＰＬ（トロンボポエチン受容体）を標的とするキメラ抗原受容体の発現を検出するアッセイ
キメラ抗原受容体の分野によくみられる問題点として、キメラ抗原受容体を発現する細胞を検出することができる高感度で特異的なアッセイがないという点がある。ＣＤ１９およびＭＰＬを標的とするＣＡＲの発現を検出するため、本発明者らは、シグナルペプチドを含めたヒトＣＤ１９およびヒトＭＰＬの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー、ＮＬｕｃ（分泌シグナルを含まない）およびＡｃＶ５エピトープタグをコードするヌクレオチド配列とインフレームで融合した。ＣＤ１９構築物の場合、シグナルペプチドと細胞外ドメインの始まり部分との間にＦＬＡＧタグを挿入した。カセット全体をレンチウイルスベクターｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１のヒトＥＦ１αプロモーターの下流にクローン化して、構築物ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１−ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５およびｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１−ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５をそれぞれ作製した。挿入フラグメントの核酸配列をそれぞれ配列番号９２６および配列番号９２５で示す。挿入フラグメントのタンパク質配列をそれぞれ配列番号２６７１および配列番号２６７０で示す。構築物をリン酸カルシウム共沈殿法により２９３ＦＴ細胞内にトランスフェクトした。トランスフェクションから約２０時間後、細胞培地を新鮮な培地に入れ換えた。４８〜７２時間後、分泌されたＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５（ＣＤ１９−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５とも呼ぶ）およびＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５（ＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５とも呼ぶ）タンパク質を含有する馴化培地を収集した。
【０６４２】
２９３ＦＴ細胞にリン酸カルシウム同時トランスフェクション法を用いてキメラ抗原受容体ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］もしくはＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］を発現するレンチウイルス構築物を一過性にトランスフェクトする（２４ウェルプレート中、体積５００μｌ）か、または未トランスフェクトとした。翌朝、トランスフェクションから約１８時間後にピペット操作により細胞を１．５ｍｌのチューブ内に収集した。チューブを１５００ＲＰＭで５分間遠心沈降した。次いで、細胞を洗浄緩衝液（ＰＢＳ中１％のＦＢＳ）で１回洗浄した後、示される分泌型ＧＧＳ  ＮＬｕｃの上清１００μｌとインキュベートした。細胞は４℃で１時間インキュベートした。
【０６４３】
インキュベーション後、細胞を緩衝液で５回（各回１ｍｌ）洗浄した。最後に、ペレットを洗浄緩衝液２００μｌに再懸濁させた。再懸濁させた細胞を３８４ウェルプレートに３連で播いた。天然レンテラジンを含有するＮＬｕｃアッセイ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ社）（各ウェル２５μｌ）を各ウェルに（１つずつ）直接加えた後、ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４プレートリーダーを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。
【０６４４】
図４Ａに示されるように、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］を発現する２９３ＦＴ細胞は、ＮＬｕｃアッセイによる測定でＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号９２６］との強い結合を示し、未感染Ｔ細胞（ＵＩ）または対照ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］を発現するＴ細胞にはごくわずかな結合がみられた。同様に、ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］を発現する２９３ＦＴ細胞は、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号９２５］上清との結合が、未トランスフェクト２９３ＦＴ細胞またはＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］をトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞より強かった（図４Ｂ）。
【０６４５】
様々なＣＡＲ構築物をトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞上にＭＰＬ（トロンボポエチン受容体）を標的とするキメラ抗原受容体の発現を検出するアッセイ
基本的に上の実施例に記載した通りに、構築物ｈＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｕ０４）［配列番号１７３８］、ｍＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｖ０３）［配列番号１７３９］、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］および無関係な抗体由来のｓｃＦｖを含む対照ＣＡＲ構築物を２９３ＦＴ細胞内に一過性にトランスフェクトし、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号９２５］上清とインキュベートした。図５から、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５が、未トランスフェクト細胞または対照ＣＡＲ構築物をトランスフェクトした細胞と比較して、ｈＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｕ０４）［配列番号１７３８］およびｍＴＰＯ−（１−１８７）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１９１５−Ｖ０３）［配列番号１７３９］構築物をトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞と中程度に結合し、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］構築物をトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞と強く結合したことがわかる。
【０６４６】
ＭＰＬ−ＣＡＲはＴ細胞表面に発現する
精製したＴ細胞にＭＰＬを標的とする様々なＭｙｃタグ化ＣＡＲ構築物をコードするレンチウイルスを感染させた。構築物はＥＧＦＰも同時に発現するものであった。ＥＧＦＰ蛍光およびＡＰＣコンジュゲートＭｙｃ抗体による免疫蛍光染色、次いでＢＤ  ｖｅｒｓｅフローサイトメータでのＦＡＣＳ解析により、Ｔ細胞上でのＣＡＲの発現を検討した。図６から、未感染Ｔ細胞（ＵＩ）と比較したＥＧＦＰ蛍光の増大およびＡＰＣ−Ｍｙｃによる染色の増大により判定されるように、Ｔ細胞の表面にＭＰＬ  ＣＡＲが発現したことがわかる。
【０６４７】
ＭＰＬ  ＣＡＲを発現するＴ細胞はＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ融合タンパク質と結合することができる
基本的に上の実施例に記載した通りに、様々なＭＰＬ  ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞をＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５およびＣＤ１９−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清とインキュベートし、十分に洗浄した後、ＮＬｕｃ活性をアッセイした。図７から、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−ＶＢ２２Ｂｗ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｂ０６）［配列番号３５３６］ＣＡＲを発現するＴ細胞はＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ  ＡｃＶ５上清と強く結合し、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］およびＣＤ８ＳＰ−１２Ｅ１０−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｓ０３）［配列番号１７３６］を発現するＴ細胞はＭＰＬ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ  ＡｃＶ５上清と中程度に結合したが、未感染Ｔ細胞または対照ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−Ｐａｃ（０３１６１５−Ｗ０５）［配列番号３５３４］を発現するＴ細胞には有意な結合は観察されなかったことがわかる。同様に、いずれのＭＰＬ  ＣＡＲ−Ｔ細胞にもＣＤ１９−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清との特異的結合は観察されず、それによりこのアッセイの特異性が示された。
【０６４８】
ＭＰＬ  ＣＡＲは抗原刺激したＪｕｒｋａｔ細胞のＴ細胞シグナル伝達を活性化する。
ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰレポーター構築物を安定に発現するＪｕｒｋａｔ細胞にＭＰＬを標的とする様々なＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスベクターを安定に形質導入した後、ピューロマイシンにより選択を実施した。次いで、細胞をＭＰＬ発現ＨＥＬ．９２．１．７（ＨＥＬ）細胞と共培養した。ＭＰＬ−ＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞とＨＥＬ細胞を共培養することより、ＦＡＣＳ解析により判定されるＥＧＦＰ発現が増大し、この増大は共培養からわずか４時間後には明らかであった。ＥＧＦＰ発現の増大は、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］およびＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］構築物を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞で最も強かった。これとは独立した実験では、ＣＤ８ＳＰ−２−ＭＰＬ−１１１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４１３１６−Ａ０３）［配列番号１６６０］ＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞をＨＥＬ細胞とともに培養した場合にも有意なＥＧＦＰ誘導が観察された。同実験を、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞をＭＰＬ発現の弱いＲＡＪＩ細胞またはヒトＭＰＬ受容体を異所性に発現するよう操作したＲＡＪＩ−ＭＰＬ細胞と共培養することにより再度実施した。ＭＰＬに対するＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞は、ＲＡＪＩ−ＭＰＬ細胞とインキュベートした場合、ＲＡＪＩ−ベクター細胞よりＥＧＦＰ発現の増大が大きかった。ＥＧＦＰ発現の増大は同じく、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］およびＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］構築物を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞で最も強かった。
【０６４９】
【表２５】
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【０６５０】
ＭＰＬ  ＣＡＲを発現するＴ細胞はＭＰＬ発現標的白血病細胞に細胞傷害を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞を、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］を発現するレンチウイルスに感染させるか、または未感染（ＵＩ）とした。示される個数のＧＬｕｃを安定に発現するＨＥＬ細胞を３８４ウェルプレートで、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］を発現するＴ細胞とともに１：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間培養した。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することによりＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーにより測定されるＧＬｕｃ活性の増大により、ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をアッセイした。図８から、ＭＰＬ−特異的ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合のＧＬｕｃ活性が未感染Ｔ細胞と比較して増大したことがわかり、このことは、様々なＭＰＬ−ＣＡＲ−Ｔ細胞による標的細胞の溶解を示している。
【０６５１】
ＰＢＭＣ発現ＭＰＬ  ＣＡＲはＭＰＬを発現する標的白血病細胞の溶解を誘導する
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離するための血液試料を匿名化した健常成人ドナーから入手した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によりバフィーコートからＰＢＭＣを単離し、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ２８および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２を追加したＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ社）に再懸濁させた。ＭＰＬを標的とするＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］ＣＡＲおよびＣＤ１９を標的とするＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］を発現するようにＰＢＭＣをそれぞれのレンチウイルスベクターに感染させることにより操作した後、ピューロマイシンによる選択を実施した。示されるＣＡＲを発現するＰＢＭＣおよび未感染ＰＢＭＣをＨＥＬ−ＧＬｕｃ標的細胞と４時間共培養し、上記のように０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を注入することにより、標的細胞の溶解を１段階の均一ＧＬｕｃアッセイにより測定した。図９から、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］ＣＡＲ発現ＰＢＭＣによるＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞の殺作用がＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］ＣＡＲ発現ＰＢＭＣまたは未感染ＰＢＭＣと比較して増大したことがわかる。
【０６５２】
ＭＰＬ  ＣＡＲを発現するＰＢＭＣはＭＰＬを発現する標的白血病細胞の溶解を誘導する
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離するための血液試料を匿名化した健常成人ドナーから入手した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によりバフィーコートからＰＢＭＣを単離し、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ２８および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２を追加したＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ社）に再懸濁させた。ＭＰＬを標的とするＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］ＣＡＲを発現するようにＰＢＭＣをレンチウイルスベクター感染により操作した後、ピューロマイシンによる選択を実施した。示されるＣＡＲを発現するＰＢＭＣおよび未感染ＰＢＭＣをＨＥＬ−ＧＬｕｃ標的細胞と４時間共培養し、上記のように０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を注入することにより、標的細胞の溶解を１段階の均一ＧＬｕｃアッセイにより測定した。図１０から、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］ＣＡＲ発現ＰＢＭＣによるＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞の殺作用が未感染ＰＢＭＣと比較して増大したことがわかる。
【０６５３】
ＭＰＬ  ＣＡＲを発現しＣＤ２８共刺激ドメインを発現するＴ細胞はＭＰＬを発現する標的白血病細胞に細胞傷害を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＭＰＬを標的とするＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］およびＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］を発現するレンチウイルスを感染させた。ピューロマイシンを用いて細胞を選択し、増幅した。ＧＬｕｃを安定に発現するＨＥＬ細胞を、ＣＡＲを発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図１１から、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられ、この増大は未感染Ｔ細胞と比較して、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］およびＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］構築物の方が強く、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］構築物は中程度であったことがわかる。
【０６５４】
ＭＰＬ  ＣＡＲを発現しＣＤ２８共刺激ドメインを発現するＴ細胞はＭＰＬを発現する標的白血病細胞に細胞傷害を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＭＰＬを標的とするＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］、ＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］、ＣＤ８ＳＰ−１２Ｅ１０−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｓ０３）［配列番号１７３６］およびＣＤ８ＳＰ−ＶＢ２２Ｂｗ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｂ０６）［配列番号３５３６］を発現するレンチウイルスを感染させた。ピューロマイシンを用いて細胞を選択し、増幅した。ＭＰＬおよびＧＬｕｃを安定に発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、ＣＡＲを発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間共培養した。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することによりＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーにより測定されるＧＬｕｃ活性の増大により、ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をアッセイした。図１２から、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられ、この増大は未感染Ｔ細胞と比較して、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］、ＣＤ８ＳＰ−１７５−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｑ０４）［配列番号１７３３］、ＣＤ８ＳＰ−ＡＢ３１７−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｔ０４）［配列番号１７３５］およびＣＤ８ＳＰ−１２Ｅ１０−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｓ０３）［配列番号１７３６］構築物の方が強く、ＣＤ８ＳＰ−１７８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｒ０４）［配列番号１７３４］およびＣＤ８ＳＰ−ＶＢ２２Ｂｗ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０３１６１５−Ｂ０６）［配列番号３５３６］構築物は中程度であったことがわかる。
【０６５５】
ＭＰＬ特異的１６１−ＣＡＲを発現するＮＫ９２ＭＩ細胞はＫ５６２細胞およびＨＥＬ．９２．１．７細胞に細胞傷害を誘導する
ナチュラルキラー細胞由来のＮＫ９２ＭＩ（ＡＴＣＣ）細胞にＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスベクターを安定に形質導入した。次いで、細胞をＧＬｕｃを発現するよう操作したＨＥＬ．９２．１．７細胞と一晩共培養した。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することにより測定されるＧＬｕｃ活性の増大により、ＣＡＲ発現ＮＫ９２ＭＩ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をアッセイした。図１３から、ＭＰＬ特異的ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］ＣＡＲを発現するＮＫ９２ＭＩ細胞と共培養した場合、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられたことがわかる。
【０６５６】
ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現するＮＫ９２ＭＩ細胞はＫ５６２−ＭＰＬ細胞に細胞傷害を誘導する
ナチュラルキラー細胞由来のＮＫ９２ＭＩ（ＡＴＣＣ）細胞にＭＰＬを標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスベクターを安定に形質導入した後、ピューロマイシンによる選択を実施した。次いで、細胞をＭＰＬおよびＧＬｕｃを発現するよう操作したＫ５６２細胞と一晩共培養した。エフェクターと標的（Ｅ：Ｔ）の比を５：１とした。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することにより測定されるＧＬｕｃ活性の増大により、ＭＰＬ−ＣＡＲ発現ＮＫ９２ＭＩ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をアッセイした。図１４から、ＭＰＬ特異的ＣＡＲを発現するＮＫ９２ＭＩ細胞との共培養した場合、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられたことがわかる。
【０６５７】
ＭＰＬを発現する標的細胞に曝露したときのＭＰＬ特異的ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞によるサイトカイン産生
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＭＰＬを標的とするＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１０１５−Ｒ０７）［配列番号１６５８］およびＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ２８ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０２１７１５−Ｚ０７）［配列番号１７３１］ＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。ピューロマイシンを用いて細胞を単離し、増幅した。ＨＥＬ細胞をＣＡＲを発現するＴ細胞と約９６時間共培養し、上清中のＴＮＦα分泌をＥＬＩＳＡにより測定した。図１５から、ＭＰＬを標的とするＣＡＲを発現するＴ細胞とＨＥＬ細胞の共培養により、ＴＮＦα分泌が対照に用いた未感染Ｔ細胞と比較して増大したことがわかる。
【０６５８】
ＭＰＬ  ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γ−／−（ＮＳＧ）マウスモデルでＭＰＬ  ＣＡＲ発現ＮＫ９２ＭＩ細胞のＨＥＬ白血病細胞系モデルに対するｉｎ  ｖｉｖｏ効果を試験した。第０日、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に致死量未満の線量２７５ｃＧｙで放射線を照射した。放射線照射から２４時間後（第１日）、マウスの静脈内に１×１０６個のＨＥＬ細胞を注射した。第９日および第１９日、マウスの静脈内に示されるＣＡＲ構築物を発現するＮＫ９２ＭＩ細胞を２００万個投与し、生存を追跡した。図１６から、ＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＣＤ８ＴＭ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０９０８１４−Ｃ０３）［配列番号１７３２］発現ＮＫ９２ＭＩ細胞を投与したマウスの生存期間中央値が３１．５日であり、これは、未感染ＮＫ９２ＭＩ細胞を投与したマウス（２８．５日；ｐ＝０．０３）または対照ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（１００８１４−Ｋ０６）［配列番号３５３７］を発現するＮＫ９２ＭＩ細胞を投与したマウス（２８日；ｐ＝．０４）より有意に高い値であったことがわかる。
【０６５９】
ヒト化ＣＤ１９抗体由来のｓｃＦｖフラグメントを有しＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体
現在臨床試験の段階にあるＣＤ１９  ＣＡＲは、マウスモノクローナル抗体由来のｃＦｖフラグメントを含むものである。マウス抗体フラグメントに対する抗体の発生は、このようなＣＡＲを発現するＴ細胞の持続性の欠如の一因となるのみならず、アナフィラキシーを含めたアレルギー反応を引き起こす可能性もある。この限界を克服するため、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８０３７３号に記載されているヒト化ＣＤ１９モノクローナル抗体ｈｕＣＤ１９−Ｂｕ１２（またはＢｕ１２）由来のｓｃＦｖフラグメント（配列番号５６６）を含むＣＤ１９  ＣＡＲを作製した。米国特許第７１１２３２４号に記載されているマウス抗体由来のｓｃＦｖ（配列番号５６７）フラグメントを含むまた別のＣＡＲを構築し、ＣＤ１９ＭＭと命名した。
【０６６０】
ヒトＣＤ８分子由来のシグナルペプチド、ｖＬフラグメント、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）×３リンカーおよびｖＨフラグメントをコードするヌクレオチド配列の５’末端から３’末端までからなる、ＣＤ１９−Ｂｕ１２およびＣＤ１９ＭＭに基づくｓｃＦｖフラグメントを設計した。ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）ソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いてｓｃＦｖフラグメントの配列をコドン最適化し、最適化した配列をコードする遺伝子フラグメントを市販のベクターを用いて合成した。この遺伝子フラグメントをカスタムプライマーを用いたＰＣＲ反応に鋳型として使用し、次いで、標準的な分子生物学技術によりＣＡＲカセットのヒンジドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む改変ｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１αベクターにクローン化した。最終ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］は、ＣＤ１９ＭＭ  ｓｃＦｖフラグメント（配列番号５６７）とインフレームで融合したヒトＣＤ８シグナルペプチド、Ｍｙｃエピトープタグ、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通ドメイン（配列番号８４２）、ヒト４１ＢＢ（ＣＤ１３７）受容体の細胞質ドメイン（配列番号８４５）、ヒトＣＤ３ｚの細胞質ドメイン（配列番号８４６）、Ｔ２Ａリボソームスキップ配列（配列番号８３２）およびピューロマイシン耐性遺伝子のバリアントをコードするｃＤＮＡ（配列番号８５０）からなるものであった。これと同様にＣＤ１９Ｂｕ１２  ｓｃＦｖフラグメント（配列番号５６６）に基づくＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］を設計した。既に記載されているマウスモノクローナル抗体ＦＭＣ６３由来のｓｃＦｖフラグメント（配列番号５６４）を含むＣＤ１９  ＣＡＲに基づきＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］を設計した。最後に、ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］は、ＫＳＨＶがコードするＫ８．１タンパク質に対する抗体に由来するｓｃＦｖフラグメント（配列番号７１８）を含むものであり、陰性対照として用いた。２９３ＦＴを用いて上記のＣＡＲをコードするレンチウイルスを作製し、ＭＰＬ  ＣＡＲについて既に記載した通りにＴ細胞の感染に用いた。
【０６６１】
ＣＤ１９−ＣＡＲはＴ細胞表面に発現する
精製したＴ細胞にＭＰＬを標的とする様々なＭｙｃタグ化ＣＡＲ構築物（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］およびＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］）をコードするレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択した。ＡＰＣコンジュゲートＭｙｃ抗体による免疫蛍光染色、次いで既に記載したＦＡＣＳ解析により、Ｔ細胞（ピューロマイシンで選択されたＴ細胞および選択されていないＴ細胞の両方）上でのＣＡＲの発現を検討した。図１７から、ＡＰＣ−Ｍｙｃによる染色により判定されるように、Ｔ細胞表面での様々なＣＤ１９  ＣＡＲ（灰色の線で示されている）の発現が未感染Ｔ細胞（ＵＩ；点線で示されている）と比較して増大したことがわかる。ピューロマイシンで選択した場合、様々なＣＡＲ構築物の発現がさらに増大した。
【０６６２】
ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞はＣＤ１９−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ融合タンパク質と結合することができる
Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−Ｌｕｃ細胞に様々なＣＤ１９標的化ＣＡＲ構築物を安定に形質導入し、ピューロマイシン中で選択した。基本的に既に記載した通りに、細胞をＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号２６７１］上清とインキュベートし、十分に洗浄した後、ＮＬｕｃ活性をアッセイした。図１８から、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ１９Ｂｕ１２（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−ＰＡＣ−Ｐ０８  ＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔはＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号２６７１］上清と強く結合したことがわかり、親細胞またはＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］対照ＣＡＲを発現する細胞には有意な結合は観察されなかった。
【０６６３】
ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＴ細胞はＣＤ１９−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ融合タンパク質と結合することができる
精製したＴ細胞に様々なＣＤ１９標的化ＣＡＲ構築物を安定に形質導入し、ピューロマイシン中で選択した。基本的に既に記載した通りに、細胞をＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号２６７１］上清とインキュベートし、十分に洗浄した後、ＮＬｕｃ活性をアッセイした。図１９から、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ１９Ｂｕ１２（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−ＰＡＣ−Ｐ０８  ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞はＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５［配列番号２６７１］上清と強く結合したことがわかり、未感染Ｔ細胞（ＵＩ）またはＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］対照ＣＡＲを発現するＴ細胞には有意な結合は観察されなかった。
【０６６４】
ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＴ細胞はＣＤ１９発現ＲＡＪＩリンパ腫細胞に細胞傷害を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ１９を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。細胞には選択を実施しないか、またはピューロマイシンによる選択を実施し、増幅した。ＧＬｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞をＣＡＲを発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で９６時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図２０から、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合、未感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）または対照ＣＡＲ  ４Ｃ３を発現するＴ細胞と比較して、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられたことがわかる。ピューロマイシンによる選択を実施したＣＤ１９  ＣＡＲ発現Ｔ細胞および実施しなかった同細胞に細胞死の増大がみられた。
【０６６５】
ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＴ細胞はＣＤ１９発現ＲＡＪＩリンパ腫細胞に細胞傷害を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ１９を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。細胞には選択を実施しないか、ピューロマイシンによる選択を実施し、増幅した。ＧＬｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞をＣＡＲを発現するＴ細胞と示されるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図２１から、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合、未感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）または対照４Ｃ３  ＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられたことがわかる。前節の結果とは対照的に、細胞死の増大は、主としてピューロマイシンにより選択したＣＤ１９  ＣＡＲ発現Ｔ細胞にみられた。このことは、前の実施例では９６時間の共培養の後に細胞死を測定し、この実施例ではわずか４時間後に細胞死を測定したことに起因するのではないかと思われる。
【０６６６】
ＣＤ１９ＭＭ−ＢＢｚおよびＣＤ１９Ｂｕ１２−ＢＢｚ  ＣＡＲＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ１９を標的とする示されるＣＡＲ構築物または対照ＣＡＲ（４Ｃ３）を発現するレンチウイルスを感染させ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増幅し、ピューロマイシン選択を実施する（有ｐｕｒｏ）か、実施せずにおいた（無ｐｕｒｏ）。ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に致死量未満の線量１７５ｃＧｙで放射線を照射した。放射線照射から２４時間後（第２日）、マウスに２．５×１０４個のＲＡＪＩ細胞を尾静脈から注射した。第３日、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］をコードするレンチウイルスに感染させ、ピューロマイシンによる選択を実施した（有ｐｕｒｏ）または実施せずにおいた（無ｐｕｒｏ）Ｔ細胞１００万個でマウス（各グループｎ＝５）を治療した。対照マウス（ｎ＝５）には、ＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］ＣＡＲを発現するＴ細胞１００万個を注射するか、またはＴ細胞を投与しなかった。図２２に各グループのマウスの生存率を示す。ＲＡＪＩ細胞単独およびＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与したマウスの生存期間中央値は、それぞれ１７日および２１日であった。これに対し、ピューロマイシン選択を実施したＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］ＣＡＲ−Ｔ細胞およびピューロマイシン選択を実施しなかった同細胞を投与したマウスの生存期間中央値は、それぞれ２６日および３０日であった。同様に、ピューロマイシン選択を実施したＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］ＣＡＲ−Ｔ細胞およびピューロマイシン選択を実施しなかった同細胞を投与したマウスの生存期間中央値は、それぞれ３０日および３１日であった。このように、このリンパ腫のＲＡＪＩ異種移植モデルでは、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］、ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］ＣＡＲを発現するＴ細胞の注入により、Ｔ細胞を投与していないマウスまたはＣＤ８ＳＰ−ＫＳＨＶ−４Ｃ３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０４２３１５−Ｎ０１）［配列番号１６４３］対照ＣＡＲを発現するＴ細胞を投与したマウスと比較してマウスの生存率に統計的に有意な改善がもたらされた。
【０６６７】
単独でまたは他の戦略と組み合わせて使用する抗ＣＤ１９ヒト化ＣＡＲ構築物の用途
本発明のヒト化ＣＡＲは、以下の方法で発現させてその安全性および有効性を増大させることができる：
【０６６８】
本発明者らは、ヒト化ＣＡＲの発現にレンチウイルスによる方法を用いてきたが、これに代わる方法、例えばエレクトロポレーションによる、または細胞膜を一過性に不安定にすることによるｍＲＮＡ／ＤＮＡトランスフェクションの使用などを用いて、標的細胞にヒト化ＣＡＲを発現させることができる。ｍＲＮＡトランスフェクションでは、発現期間を長くするため、天然ヌクレオチドまたは安定化ヌクレオチドを用い得る。また別の遺伝子送達法、例えばレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスベクターの使用などについては、文献に十分に記載されており、当業者に公知である。ヒト化ＣＡＲを発現させるＣＭＶ、ＭＳＣＶなどを含めた別のプロモーターについては、文献に記載されている。
【０６６９】
本発明のＣＡＲは、ＥＧＦＲ、ｔＥＧＦＲ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡの細胞外ドメイン配列（配列番号８５３〜８５６）などの適切な選択マーカーとともに発現させ、ＣＡＲ発現細胞を積極的に選択し、最終Ｔ細胞産物を患者への注入に使用する前にそのクローン多様性を減少させることも可能である。ＣＡＲ−Ｔ細胞産物のクローン多様性を減少させることにより、製品中の宿主反応性のＴ細胞クローンの確率および数が減少するため、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症率および重症度の低下がもたらされる。また別の耐性遺伝子、例えばカルシニューリン阻害剤に対する耐性を付与するＣＮＢ３０（配列番号８５２）などを含ませて、ＣＡＲ発現細胞を積極的に選択し、最終Ｔ細胞産物を患者への注入に使用する前にそのクローン多様性を減少させてＧＶＨＤの発症率を低下させることができる。
【０６７０】
ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の限界の１つとして、同じくＣＤ１９抗原を発現する正常Ｂ細胞の長期間にわたる枯渇がある。この問題を回避するため、ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を、ＣＲＩＰＳ／Ｃａｓ９、ＴＡＬＯＮまたは当該技術分野で公知の他の適切な遺伝子編集方法を用いる正常造血幹細胞の内因性ＣＤ１９のノックアウトまたは変異を組み合わせることができる。現在臨床使用されているＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞が結合するＣＤ１９のエピトープは、エキソン２〜４にマッピングされている。したがって、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、Ｚｎフィンガーヌクレアーゼ、Ｔａｌｏｎまたは当該技術分野で公知の他の方法を用いて、自家または同種造血幹細胞のエキソン２（またはＣＤ１９Ｂｕ１２およびＣＤ１９ＭＭ  ＣＡＲ  Ｔ細胞により認識されるその他の適切なエキソン／領域）にミスセンスまたはナンセンス変異を生じさせることができる。患者に患者の疾患を抑えるＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ１９が枯渇／変異した造血幹細胞を用いる自家または同種移植を実施することができる。改変幹細胞から生じるＢ細胞がＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞の標的になることはないため、患者はＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞による副作用としてよくみられるＢ細胞無形成を回避できる。
【０６７１】
本発明のＣＤ１９標的化ヒト化ＣＡＲを、ＣＤ２２およびＣＤ２０などの他の抗原を標的とするＣＡＲと組み合わせて、ＣＤ１９抗原消失による耐性を克服することもできる。このような二重特異性ＣＡＲについては文献に記載されており、当業者に公知である。
【０６７２】
本発明のヒト化ＣＡＲ構築物は、Ｔ細胞のみならず、明らかにされているＴ細胞のサブセット、例えばＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞、中枢記憶Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞および調節性Ｔ細胞などにも発現させることができる。同構築物は、ＮＫ細胞、ＮＫ９２細胞系、造血幹細胞およびｉＰＳＣ由来幹細胞にも発現させることができる。
【０６７３】
本発明のヒト化ＣＡＲの活性を制御するため、これを当該技術分野で公知の誘導可能な方法で発現させることができる（Ｒｏｙｂａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １６４：７７０−９，２０１６；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：１２３−３０，２０１５；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５０：ａａｂ４０７７，２０１５））。あるいは、自殺遺伝子（ｉｃａｓｐａｓｅ９など）を用いてＣＡＲ−Ｔ細胞の活性をｉｎ  ｖｉｖｏで制御することができる。
【０６７４】
ｍＴＯＲおよびＰＩ３−ＡＫＴ経路などの様々なシグナル伝達経路の阻害剤の使用により本発明のＣＡＲ−Ｔ細胞の活性をさらに調節することができる。さらに、様々なサイトカイン、ケモカインおよびその受容体ならびに共刺激リガンド（例えば、４１ＢＢ）およびその受容体（例えば、４１ＢＢ−受容体またはＣＤ１３７）を本発明のヒト化ＣＡＲと共発現させることができる。
【０６７５】
ウイルスおよび細胞のシグナル伝達タンパク質を発現する新規なキメラ抗原受容体
既に記載したように、臨床試験の段階にあるＣＡＲ構築物は、４１ＢＢ、ＣＤ２８またはその両方に由来する１つまたは複数の共刺激ドメインを含む。これらの共刺激ドメインは一般に、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）ファミリー受容体の細胞質シグナル伝達に由来するものであり、ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖および生存の増大に寄与すると考えられるＮＦ−κＢおよびＡＫＴなどのシグナル伝達経路を活性化することにより、ＣＡＲ−Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで増幅および存続させるものと考えられる。しかし、ＣＡＲなどの人工的な受容体の一部として発現させたこれらの共刺激ドメインを介した持続性のシグナル伝達は生理的なものではなく、共刺激ドメインが由来するＴＮＦファミリー受容体を介したシグナル伝達を制御するために通常存在するフィードバック調節機序による制御下にはない。このため、現在用いられているＣＡＲ構築物中に存在する共刺激ドメインによるシグナル伝達経路の安定で持続的な活性化が、現在用いられているＣＡＲ−Ｔ細胞をベースとする治療法による主な副作用であるサイトカイン放出症候群および神経毒性の一因になることが考えられる。これに関連して、サイトカイン放出症候群がＣＤ２８スーパーアゴニスト抗体に関するヒト臨床試験の主な副作用であったことに留意することが重要である。
【０６７６】
本発明は、共刺激ドメインを削除することにより、現在用いられているＣＡＲベクターの上記の限界を回避するものである。共刺激機能は代わりに、恒常的に様々な生存促進性シグナル伝達経路を活性化し、かつ／または細胞死を阻止することがわかっているウイルスおよび細胞のタンパク質によりもたらされる。この目的に適したウイルスタンパク質としては、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ヒトヘルペスウイルス８としても知られる）によりコードされるウイルスＦＬＩＣＥ阻害タンパク質（ｖＦＬＩＰ）Ｋ１３、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）のｖＦＬＩＰ  ＭＣ１５９およびＭＣ１６０、ウマヘルペスウイルス２（ＥＨＶ２）のＥ８、ウシヘルペスウイルス４に記載のよりコードされるｖＦＬＩＰ、ヘルペスウイルスメカカ（ｍｅｃａｃａ）によりコードされるｖＦＬＩＰ、ヘルペスウイルスサイミリによりコードされるｖＦＬＩＰ、ｃＦＬＩＰ−ＬアイソフォームまたはＭＲＩＴ−α、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２欠失変異体またはＭＲＩＴ−ｐ２２、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＨＴＬＶ２−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ変異体（Ｊｅａｎｇ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １２：２０７−１７．，２００１；Ｓｉｅｂｕｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７８：１０３９９−４０９，２００４）が挙げられる。これらのシグナル伝達タンパク質は、現在よく用いられるＣＡＲ構築物の構成要素である共刺激ドメインによりもたらされる生存促進性シグナルの人工的で非生理的な性質とは対照的に、同シグナル伝達タンパク質が発現する細胞に恒常的な生存促進性シグナルをもたらすよう進化してきたものである。
【０６７７】
ＫＳＨＶがコードするウイルスＦＬＩＣＥ阻害タンパク質Ｋ１３はＴ細胞を不死化させる
ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３は最初、ＫＳＨＶ感染細胞を細胞死受容体誘導性アポトーシスから保護するものと考えられていた（Ｂｅｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９４：１１７２−６，１９９７；Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：９６２１−４，１９９７；Ｔｈｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：５１７−２１，１９９７））。しかし、その後、Ｋ１３がＩＫＫ１／ＩＫＫα、ＩＫＫ２／ＩＫＫβおよびＮＥＭＯ／ＩＫＫガンマからなる約７００ｋＤａのＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体と相互作用することにより（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５７３８−４６，１９９９；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１３７４５−５１．，２００２）、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することが報告された（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５７３８−４６，１９９９；Ｃｈｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０２：１２８８５−９０，２００５）。ＨＴＬＶ１がコードするＴａｘタンパク質もＮＥＭＯ／ＩＫＫγと結合することによりＮＦ−κＢ経路を活性化することが知られている。ＴａｘはＴ細胞を不死化させることも明らかにされている（Ｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８７：３４６８３−９３，２０１２；ＲｏｂｅｋおよびＲａｔｎｅｒ，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：４８５６−６５，１９９９）。
【０６７８】
１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ２８および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ社）でヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ＣＤ３陽性Ｔ細胞およびＣＤ３陰性細胞（Ｂ細胞と称する）を培養した。細胞を５％ＣＯ２加湿恒温器内で３７℃にて培養し、１日後、ブラストサイジン耐性遺伝子を保有する空レンチウイルスベクター（ｐＬＥＮＴＩ）ならびにＣ末端Ｆｌａｇタグ化Ｋ１３（ｐＬＥＮＴＩ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ）、ＮＦ−κＢ活性がないことがわかっているＫ１３の欠失変異体（ｐＬＥＮＴＩ−Ｋ１３Δ４５−４８−ＦＬＡＧ）（Ｍａｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２７：５２４３−５３，２００８）およびＨＴＬＶ１−Ｔａｘタンパク質（ｐＬＥＮＴＩ−Ｔａｘ）を発現するレンチウイルスベクターを感染させた。Ｋ１３のヌクレオチド配列およびタンパク質配列をそれぞれ配列番号８６６および２６２９で示す。感染から約１日後、ブラストサイジンを用いて細胞を選択した。選択後、細胞をＸＶＩＶＯ培地で増殖させ、ＩＬ２を中止した。表２６から、Ｋ１３−ＦｌａｇをコードするベクターおよびＨＴＬＶ１−Ｔａｘをコードするベクターを感染させたＰＢＭＣおよびＴ細胞がともにＩＬ２中止後も長期間培養で増殖し続け、空レンチウイルスベクターを感染させた培養物またはＫ１３Δ４５−４８−ＦＬＡＧをコードするベクターを感染させた培養物では、長期間にわたって増殖する細胞が得られなかったことがわかる。これらの結果は、Ｋ１３がＨＴＬＶ１−Ｔａｘと同じく、初代Ｔ細胞およびＰＢＭＣの長期間にわたる増殖および不死化を促進することができ、この過程にはそのＮＦ−κＢ活性が不可欠であることを示している。
【０６７９】
【表２６】
2019510498.tif 000082
【０６８０】
ＦＩＴＣコンジュゲートＦＬＡＧ抗体による免疫蛍光染色、次いでＦＡＣＳ解析により、Ｔ細胞の生存培養物におけるＫ１３−ＦＬＡＧの発現を検討した。図２３から、Ｋ１３発現Ｔ細胞のＦＩＴＣ−ＦＬＡＧ抗体による染色が未感染Ｔ細胞と比較して増大したことがわかる。ＣＤ４およびＣＤ８抗体で染色することによりＫ１３不死化Ｔ細胞の免疫表現型を検討した。図２３から、Ｋ１３不死化Ｔ細胞はＣＤ８＋／ＣＤ４−（４９％）、ＣＤ８−／ＣＤ４＋（２１％）およびＣＤ８＋／ＣＤ４＋（２９％）であることがわかる。これに対し、培養中に存在し続けた未感染Ｔ細胞の大部分はＣＤ８＋／ＣＤ４−（９４％）であった。未感染Ｔ細胞とＫ１３不死化Ｔ細胞との間にＣＤ６９発現の有意差はみられなかった。
【０６８１】
Ｋ１３を発現するＦＭＣ６３  ＣＡＲはＲＳ４；１１標的細胞の溶解を誘導する能力を保持する
Ｔ細胞にＧＦＰ、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１０１４−Ｙ１１）［配列番号１１９７］をコードするレンチウイルスベクターを感染させた。ＰＡＣ含有ベクターを感染させた細胞をピューロマイシンを用いて選択するか、または選択を実施せずにおいた。図２４から、ピューロマイシンで選択されたＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］発現Ｔ細胞およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１０１４−Ｙ１１）［配列番号１１９７］発現Ｔ細胞が、アッセイによる測定でＲＳ４１１細胞の特異的溶解を誘導することがわかる。
【０６８２】
Ｋ１３、ＭＣ１５９またはＴａｘ２を含むＣＡＲを発現するＴ細胞はＲＡＪＩ−Ｇｌｕｃ細胞の特異的溶解を誘導する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ１９を標的とする以下の構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。構築物の特徴は以下の通りである：
【０６８３】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］：Ｔ２Ａ配列によりピューロマイシン耐性遺伝子から隔てられた４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚドメインを含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  ＩＩ。
【０６８４】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１２１４−Ｄ０５）［配列番号３５３８］：４１ＢＢ共刺激ドメインがなくＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む従来のＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  Ｉ。
【０６８５】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１０１４−Ｙ１１）［配列番号１１９７］：４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚドメイン、Ｐ２Ａ切断可能リンカー、Ｋ１３−Ｆｌａｇ配列、Ｔ２Ａ切断可能リンカーおよびピューロマイシン耐性遺伝子を含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  ＩＩ。
【０６８６】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１６１４−Ｂ０５）［配列番号９２７］：ＣＤ３ｚドメイン、Ｐ２Ａ切断可能リンカー、Ｋ１３−Ｆｌａｇ配列、Ｔ２Ａ切断可能リンカーおよびピューロマイシン耐性遺伝子を含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  Ｉ。
【０６８７】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＭＣ１５９−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１０１４−Ｚ１３）［配列番号１７５１］：４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚドメイン、Ｐ２Ａ切断可能リンカー、ＭＣ１５９−Ｆｌａｇ配列、Ｔ２Ａ切断可能リンカーおよびピューロマイシン耐性遺伝子を含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  ＩＩ。
【０６８８】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＭＣ１５９−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２６１４−Ｃ０６）［配列番号１７５０］：ＣＤ３ｚドメイン、Ｐ２Ａ切断可能リンカー、ＭＣ１５９−Ｆｌａｇ配列、Ｔ２Ａ切断可能リンカーおよびピューロマイシン耐性遺伝子を含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  Ｉ。
【０６８９】
ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−Ｆｌａｇ−ＨＴＬＶ２−ＴＡＸ−ＲＳ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１０１００−Ｎ０１）［配列番号１７５２］：４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚドメイン、Ｐ２Ａ切断可能リンカー、ＨＴＬＶ２がコードするＴＡＸのＲＳ変異体、Ｔ２Ａ切断可能リンカーおよびピューロマイシン耐性遺伝子を含む従来の標準的なＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  ＩＩ。
【０６９０】
細胞を選択しないでおくか、またはピューロマイシンによる選択を実施し、増幅した。Ｇｌｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞をＣＡＲを発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図２５から、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞と共培養した場合、未感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）または４Ｃ３を標的とする対照ＣＡＲ（配列番号１６４３）を発現するＴ細胞比較て、標的細胞の溶解を示すＧＬｕｃ活性の増大がみられたことがわかる。これらの結果は、４１ＢＢドメインの有無を問わず、Ｋ１３、ＭＣ１５９またはＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（Ｔａｘ２）の組込みがＣＡＲの殺作用能に負の影響を及ぼすことはないことを示している。
【０６９１】
上記の実験を１：１のＥ：Ｔで再び実施し、４８時間後に細胞死をアッセイした。図２６から、４１ＢＢドメインの有無を問わず、Ｋ１３、ＭＣ１５９またはＨＴＬＶ２−Ｔａｘ（Ｔａｘ２）の組込みがＣＡＲの殺作用能に負の影響を及ぼすことはないことが裏付けられる。
【０６９２】
同実験を、ピューロマイシンによる選択を実施し、約２か月間培養した細胞について再び実施した。図２７から、ＭＣ１５９およびＨＴＬＶ２−Ｔａｘを含むＣＡＲを発現するＴ細胞は培養２か月後も細胞傷害性を発揮し続けるが、それ以外のＣＡＲを発現するＴ細胞ではこの能力が低下したことがわかる。
【０６９３】
ｖＦＬＩＰおよびＴａｘを含むＣＡＲ  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ１９を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に致死量未満の線量１７５ｃＧｙで放射線を照射した。放射線照射から２４時間後（第２日）、マウスに２．５×１０４個のＲＡＪＩ細胞を尾静脈から注射した。第３日、ＣＡＲをコードするレンチウイルスに感染させたＴ細胞１００万個でマウス（各グループｎ＝３）を治療した。表２７に各グループのマウスの生存期間を示す。これらの結果から、生存期間が最も長い（３８日）のは、４１ＢＢ共刺激ドメインを欠くがＫ１３を発現するＦＭＣ６３ベースのＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１１６１４−Ｂ０５）［配列番号９２７］を発現するＴ細胞を注射したマウスであることがわかる。
【０６９４】
【表２７】
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【０６９５】
ＦＫＢＰとの融合によるＫ１３の誘導性発現
Ｋ１３の発現を制御するため、１コピーまたは複数コピーのＮ末端のＦＫＢＰベースのスイッチまたは二量体化ドメインと融合したＫ１３を発現する様々なベクターを作製した。さらに、２コピーのＦＫＢＰドメインをＮ末端でミリソチル化（ｍｙｒｉｓｏｔｙｌａｔｉｏｎ）シグナルと、Ｃ末端でＫ１３と融合させた構築物を構築した。上記のＫ１３の構築物を単独で、または様々なＣＡＲ構築物を発現する構築物の形で発現させた。
【０６９６】
基本的に記載されている（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５７３８−４６，１９９９）通りにＮＦ−κＢレポーターアッセイを実施した。示される構築物を４コピーのＮＦ−κＢ結合部位により駆動されるルシフェラーゼレポーター構築物およびＲＳＶ−ＬａｃＺレポーター構築物とともに２９３ＦＴ細胞に一過性にトランスフェクトした。細胞を未処理のままにするか、またはＦＫＢＰドメイン二量体化してＫ１３シグナル伝達を活性化するＡＰ２０１８７で処理した。約２４時間後、細胞を溶解させ、細胞溶解物中のＮＦ−κＢ−ＬｕｃおよびＬａｃＺの活性を測定したトランスフェクション効率の差を調整するため、ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ活性をＬａｃＺ活性に対して正規化した。図２８Ａからわかるように、Ｋ１３がＦＫＢＰと融合して発現する構築物ではいずれも、ＡＰ２０１８７（１００ｎＭ）で処理することによりＫ１３誘導性ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ活性が増大した。ＨＴＬＶ２がコードするＴａｘのＲＳ変異体がＦＫＢＰと融合して発現する場合にも基本的に同じ結果が得られた（図２８Ｂ）。したがって、Ｋ１３およびＴａｘの活性は、それを単独で発現させても、またはＣＡＲ構築物の一部として発現させても、ＦＫＢＰとの融合およびそれに続くＡＰ２０１８７の投与により制御することができる。
【０６９７】
ＡＰ２０１８７によるＫ１３活性の活性化がＣＡＲの細胞死誘導能に影響を及ぼすことはない
既に記載した通りに、ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞に構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２３１６−Ｓ０６）［配列番号１７７０］およびＣＤ８ＳＰ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２９１６−Ｕ０６）［配列番号１７４１］を発現するレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択した。Ｇｌｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞およびＨＥＬ細胞をそれぞれ、未感染Ｔ細胞または示される構築物［配列番号１７７０］および［配列番号１７４１］を発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で、１００ｎＭ  ＡＰ２０１８７（ＡＰ）化合物の不在下および存在下、４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図２９Ａおよび２９Ｂから、ＡＰ２０１８７の添加によるＫ１３媒介性ＮＦ−κＢ活性の活性化が、ＦＫＢＰ−Ｋ１３を発現する２種類のＣＡＲ構築物による殺細胞作用に悪影響を及ぼすことはないことがわかる。
【０６９８】
Ｋ１３、ＭＣ１５９、ＨＴＬＶ２−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘ  ＲＳ変異体を同時発現するＣＡＲ  ＩおよびＩＩの細胞傷害活性
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞に、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ  ＩおよびＩＩを発現し、様々な補助モジュールを同時発現する示される構築物を発現するレンチウイルスを感染させた（図３０Ａ）。既に記載した通りにピューロマイシンを用いて細胞を選択した。Ｇｌｕｃを安定に発現するＨＥＬ細胞を未感染Ｔ細胞（ＵＩ）または示される構築物を発現するＴ細胞と１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃの増大によりアッセイした。図３０Ａから、Ｋ１３、ＭＣ１５９、ＨＴＬＶ２−ＴａｘおよびＨＴＬＶ２−Ｔａｘ  ＲＳ変異体を同時発現する様々なＭＰＬ指向性ＣＡＲ構築物により標的細胞死が誘導されたことがわかる。
【０６９９】
ＣＤ３２を標的とするＣＡＲ  Ｉを発現し、Ｋ１３を同時発現する構築物（配列番号９８３）を用いて、基本的に同じ実験を実施した。図３０Ｂから、Ｇｌｕｃアッセイにより測定されるように、この構築物を発現するＴ細胞によりＨＥＬ細胞死が効果的に誘導されたことがわかる。
【０７００】
ＴＲＯＰ２を標的とする従来のＣＡＲ  Ｉを含みＫ１３を同時発現するバックボーン１構築物の細胞傷害活性
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＴＲＯＰ２を標的とする構築物ＣＤ８ＳＰ−ＴＲＯＰ２−ｈ７Ｅ６−ＳＶＧ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５２６１６−Ｄ０４）［配列番号１１６６］を発現するレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択し、既に記載したアッセイを用いて、ＧＬｕｃを発現するＰＣ３（前立腺癌）細胞に対する殺作用能を試験した。図３１から、ＣＤ８ＳＰ−ＴＲＯＰ２−ｈ７Ｅ６−ＳＶＧ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５２６１６−Ｄ０４）［配列番号１１６６］構築物を発現するＴ細胞によりＰＣ３細胞が効果的に死滅することがわかる。
【０７０１】
ＬＡＭＰ１を標的とする従来のＣＡＲ  Ｉを含みＫ１３を同時発現するバックボーン１構築物の細胞傷害活性
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＬＡＭＰ１を標的とする示される構築物を発現するレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択した。既に記載したアッセイを用いて、ＧＬｕｃを発現するＬ３６３細胞およびＵ２６６細胞に対する細胞の殺作用能を試験した。図３２Ａおよび３２Ｂから、ＣＤ８ＳＰ−ＬＡＭＰ１−ｈｕｍａｂ１−２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５１７１６−Ｔ０５）［配列番号１１０４］およびＣＤ８ＳＰ−ＬＡＭＰ１−Ｍｂ４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５１９１６−Ｂ０７）［配列番号１１０５］構築物を発現するＴ細胞によりＬ３６３細胞およびＵ２６６細胞が効果的に死滅することがわかる。
【０７０２】
ＣＤ１９指向性ＣＡＲを発現しＦＫＢＰ−Ｋ１３融合タンパク質を同時発現するＪｕｒｋａｔ細胞のＡＰ２０１８７添加によるＫ１３シグナル伝達の活性化
Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞（ＪＰ）を用いて、ＣＤ１９を標的とする従来のＣＡＲ  Ｉをコードし、ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ融合タンパク質を発現する構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２３１６−Ｓ０６）［配列番号１７７０］を安定に発現させることにより、Ｋ１３誘導性ＮＦ−κＢ活性の誘導がＣＡＲ誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達に及ぼす効果を試験した。親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞（ＪＰ）および構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２３１６−Ｓ０６）［配列番号１７７０］を発現する細胞を１００ｎＭのＡＰ２０１８７の不在下および存在下でＲＡＪＩ細胞と約１８時間共培養し、既に記載したＦＡＣＳ解析によりＮＦＡＴ駆動性ＧＦＰ発現の誘導を検討した。図３３から、ＡＰ２０１８７化合物の不在下（３８．７％のＧＦＰ発現細胞）および存在下（４５．８５％のＧＦＰ発現細胞）でＲＡＪＩ細胞と共培養した場合、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ＦＫＢＰ−Ｋ１３−ＦＬＡＧ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２３１６−Ｓ０６）［配列番号１７７０］構築物を発現するＪｕｒｋａｔ細胞にＧＦＰ発現が効果的に誘導されたことがわかる。これに対し、親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞（ＪＰ）をＲＡＪＩ細胞と共培養した場合、ＡＰ２０１８７化合物の不在下でも存在下でも有意なＧＦＰ誘導は観察されなかった。これらの結果は、ＡＰ２０１８７化合物の添加によりＦＫＢＰ−Ｋ１３融合タンパク質を発現するＴ細胞のＫ１３シグナル伝達を活性化させても、ＣＡＲ誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達の活性化に悪影響を及ぼすことはないことを示している。
【０７０３】
様々なＮＦ−κＢ活性レベルを有するＫ１３変異体の作製
様々なＮＦ−κＢ活性を有する新規なＫ１３変異体があれば養子細胞療法およびその他の用途に有用であると思われる。Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ部位特異的キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）社を用いて部位特異的変異誘発を実施し、Ｋ１３（配列番号２６２９）の様々なアミノ酸が変異したＫ１３の点変異体をいくつか作製した。例えば、変異体Ｋ１９Ａでは１９位のアミノ酸リジンがアラニンに変異している。基本的に記載されている（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５７３８−４６，１９９９）通りに、２９３ＦＴ細胞に野生型および様々な変異体構築物を４コピーのＮＦ−κＢ結合部位により駆動されるルシフェラーゼレポーター構築物およびＲＳＶ−ＬａｃＺレポーター構築物とともにトランスフェクトした。約２４ｈｒ時間後、細胞を溶解させ、細胞溶解物中のＮＦ−κＢ−ＬｕｃおよびＬａｃＺの活性を測定した。トランスフェクション効率の差を調整するため、ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ活性をＬａｃＺ活性に対して正規化した（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５７３８−４６，１９９９）。図３４から、多くの変異体に野生型Ｋ１３と比較してＮＦ−κＢ活性の増大（例えば、Ｅ４８Ａ変異体）または低下（例えば、Ｅ４７Ａ変異体）がみられることがわかる。これらの変異体には、養子細胞療法での用途および様々なＮＦ−κＢ活性レベルが必要とされるその他の用途がある。したがって、強いＮＦ−κＢ活性が望まれるＣＡＲ構築物には変異体Ｅ４８Ａを同時発現させることができ、わずかなＮＦ−κＢ活性が望ましいＣＡＲ構築物には変異体Ｒ５０Ａを発現させることができる。これらの変異体の活性も、野生型Ｋ１３について上に記載したように変異体をＦＫＢＰドメイン（配列番号２６２１および２６２２）と融合することにより制御することができる。
【０７０４】
Ｓｒｃ阻害剤のダサチニブ、ポナチニブおよびＡ−７７００４１を用いてＣＡＲ−Ｔ細胞、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）およびＤＡＲＴ（二重親和性再標的化タンパク質）の活性を制御する方法
ＣＡＲ
ＣＡＲは、抗体結合特異性とＴ細胞機能とを結び付ける合成受容体である。ＣＡＲは、所望の腫瘍抗原の特異的認識を決定付ける一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）と、Ｔ細胞エフェクター機能の活性化を可能にするＴ細胞受容体ＣＤ３ｚ鎖の細胞内シグナル伝達成分とを融合することにより作製される。ＣＡＲによるＨＬＡに依存しないＴＡＡの認識は、寛容誘導機序を最小限に抑えるのみならず、細胞表面にある非タンパク質部分を含めた実質的にあらゆる抗原を認識するようＣＡＲを多用途に設計することを可能にする。ＣＡＲはＣＤ３ｚ鎖を介してＴ細胞を活性化させるが、ＣＡＲを介するシグナル伝達にはＴＣＲ複合体の成分がすべて関与するというわけではないため、通常のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介するシグナル伝達とは異なる。例えば、通常のＴＣＲを介するシグナル伝達では複数の分子、例えばＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζおよびＣＤ４またはＣＤ８などならびにそれに関連する下流シグナル伝達タンパク質、例えばＬｃｋ、ＬＡＴ、ＺＡＰ７０およびＳＬＰ−７６などが関与する（Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ，ＡＫおよびＷｅｉｓｓ，Ａ  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：７９８−８０７，２０１４）。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を介するシグナル伝達にこれらの受容体およびシグナル伝達中間体が関与するのかどうかは明らかにされていない。ＣＡＲを介するシグナル伝達が通常のＴＣＲを介するシグナル伝達とは異なるという見解は、患者にＣＡＲを注入した場合に観察される副作用とＴＣＲの注入後に観察される副作用との比較により明らかである。サイトカイン放出症候群（ＣＳＲ）および神経学的合併症は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入した場合には頻繁に観察されるが、腫瘍浸潤リンパ球を注入した場合にも、ＮＹ−ＥＳＯなどの特定の抗原に対するＴＣＲを発現するよう操作したＴ細胞の注入後にも、それらがみられることはない（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，Ｂｌｏｏｄ  １１８：４８１７−２８，２０１１；Ｒａｐｏｐｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２１：９１４−２１，２０１５；Ｒｏｂｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２１：１０１９−２７，２０１５；Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２１５−２３，２００９；Ｔｕｒｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６３３−３９，２０１２）。
【０７０５】
Ｂｉｓｐｅｃｉｆｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）
Ｂｉｓｐｅｃｉｆｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、身体の免疫系が悪性細胞を検出し、これを標的とするのを補助することにより癌と戦うために検討されている免疫療法の１種である。改変抗体は、同時に２種類の異なる標的を用いてＴ細胞（脅威であると認識された他の細胞を死滅させることが可能な白血球の１種）を癌細胞に対して並置させるよう設計されている。ＢｉＴＥ（登録商標）抗体構築物は、Ｔ細胞が癌細胞に毒素を注入し死（アポトーシス）を誘発することを可能にする目的で、Ｔ細胞を標的細胞に届く範囲内に配置するのを助けるものである。ＢｉＴＥ（登録商標）抗体構築物は現時点で、多種多様な癌の治療に有望であるかどうかが検討されている段階にある。ＢＬＩＮＣＹＴＯ（ブリナツモマブ）は、Ｂ系列起源の細胞の表面に発現するＣＤ１９およびＴ細胞の表面に発現するＣＤ３と特異的に結合するｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ１９−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ＣＤ３  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物である。ブリナツモマブなどのＢｉＴＥはＴ細胞を活性化させるが、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ鎖ではなくＴＣＲのＣＤ３鎖と結合し、このため、ＢｉＴＥを介するシグナル伝達は生理的なものではなく、通常のＴ細胞を介するシグナル伝達と同一ではない。
【０７０６】
ＣＡＲ  Ｔ細胞および二重特異性抗体の限界
操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブに応答する患者の大部分では、炎症誘発性サイトカインの過剰放出により、発熱、低血圧、低酸素血症、心機能不全、腎臓不全および電解質異常を含む「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）と総称される諸症状が引き起こされる。このような患者で圧補助および人工呼吸のため集中治療施設に入院する必要がある患者は少なくない。相当数（最大５０％）の症例で、ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブ治療が振戦、発作を含めた神経症状を引き起こし、致命的なものとなる可能性がある。例えば、臨床試験でブリナツモマブを投与した患者の約５０％に神経学的毒性が認められている。患者の約１５％には、脳症、痙攣、発話障害、意識障害、錯乱および見当識障害ならびに協調およびバランス障害を含めた重篤で命に係わる、または致命的な神経学的毒性が認められている。ＣＲＳに対抗する戦略としては、免疫抑制剤ならびにサイトカインの放出および／または活性を阻止するサイトカインに対する抗体による治療が挙げられる。それでも、多数の施設で治療に関連する死亡が認められている。このため、ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブの活性を制御する新たな薬物／薬剤に対する満たされない喫緊の必要性が存在する。
【０７０７】
生理学的Ｔ細胞およびＮＫ機能の阻害剤としてのダサチニブ
二重ＢＣＲ−ＡＢＬ／Ｓｒｃキナーゼ阻害剤であるダサチニブは、慢性骨髄性白血病およびＰｈ＋急性リンパ芽球性白血病の治療にＦＤＡの承認を受けている。Ｓｒｃキナーゼは、生理学的Ｔ細胞活性化に重要な役割を果たしていることが知られている。これと同じく、ダサチニブは、用量依存性に抗原特異的生理学的Ｔ細胞活性化、増殖、サイトカイン産生および脱顆粒を大きく阻害することが示されている（Ｓｃｈａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１１：１３６６−７７，２００８；Ｗｅｉｃｈｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４：２４８４−９１，２００８）。ダサチニブはＮＫ細胞の活性化も阻害することが示されている。しかし、ＣＡＲ改変Ｔ細胞およびＢｉＴＥは生理学的Ｔ細胞受容体を用いない（上を参照されたい）ため、ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉＴＥを介して活性化されたＴ細胞の活性を調節するのにダサチニブを用いることができるかどうかは明らかではない。
【０７０８】
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を示される濃度のダサチニブおよびイマチニブと３７℃で約３０分間プレインキュベートした。薬物で処理したＴ細胞および未処理Ｔ細胞を白色の３８４セルプレートに播いた。１ウェル当たり３０Ｋ細胞／３０μｌの濃度のＴ細胞が入ったウェルに、ＧＬｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞をＥ：Ｔ比が５：１になるよう加えた。ダサチニブ（Ｄａｓ）およびイマチニブ（Ｉｍａｔ）を示される最終濃度が維持されるようウェルに加えた。４時間共培養した後、天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することにより、ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をＧＬｕｃ活性の増大によりアッセイした。図３５から、５０ｎＭおよび１００ｎＭのダサチニブによりＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］誘導性細胞死が阻害されたが、イマチニブは何ら効果を示さないことがわかる。
【０７０９】
ＣＡＲ改変Ｔ細胞により誘導される細胞死に対する様々なチロシンキナーゼ阻害剤の効果
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にヒトおよびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］）を標的とする示されるＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させた。基本的に上に記載した通りに、ＧＬｕｃを安定に発現するＲＡＪＩ細胞とＣＡＲを発現するＴ細胞とを示される濃度のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブおよびアキシチニブの存在下および不在下で約４時間共培養した。これらの阻害剤のうち、ダサチニブおよびポナチニブはＳｒｃキナーゼに対する活性を有することが報告されているが、それ以外の阻害剤にはこのような活性はみられない。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することによりＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーにより測定されるＧＬｕｃ活性の増大により、ＣＡＲ−Ｔ細胞を介する標的細胞溶解の誘導をアッセイした。細胞死の最大値の測定には、Ｇｌｕｃ活性の測定前に細胞をジギトニン３０μｌ（最終濃度３０μｇ／ｍｌ）で約９０分間処理した。ジギトニン誘導性細胞死を１００％とし、未処理細胞を０％として％特異的溶解を算出した。％特異的溶解を算出する式は、％特異的溶解＝１００×［（実験データ）−（自発的細胞死））］／［（細胞死の最大値）−自発的細胞死）］である。図３６から、ＣＤ１９特異的ＣＡＲであるＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（１１２０１４−Ａ１３）［配列番号１４６７］およびＣＤ８ＳＰ−２−ＣＤ１９ＭＭ−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０６２９１５−Ｄ０３）［配列番号１４７１］を発現するＴ細胞と共培養した場合、未感染Ｔ細胞（Ｔ−ＵＩ）と比較してＧＬｕｃ活性が増大したことがわかり、このことは、様々なＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞により標的細胞が溶解したことを示している。しかし、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死は、５０ｎＭダサチニブでの処理により部分的に阻止され、１００ｎＭダサチニブでの処理により全面的に阻止された。同様に、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死は１００ｎＭポナチニブでの処理により部分的に阻止された。しかし、示される用量のイマチニブ（５０ｎＭおよび５００ｎＭ）、ニロチニブ（１０ｎＭおよび１００ｎＭ）およびアキシチニブ（１μＭおよび１０μＭ）による処理はＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死に何ら効果を及ぼすことはなかった。以上の結果は、Ｓｒｃに対する活性を有するＴＫＩがＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死を効率的に阻止し得ることを示している。上記の試験で用いた用量より高い用量のイマチニブおよびニロチニブで処理すればＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死が阻止される可能性も考えられる。
【０７１０】
ダサチニブはＣＤ２２を標的とするＣＡＲにより誘導される細胞死を阻止する
ＣＤ３磁気ビーズを用いて単離したヒト末梢血Ｔ細胞にヒトＣＤ２２（ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ２２−ｍ９７１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０９１５１５−Ａ０２）［配列番号１５１９］）を標的とするＣＡＲ構築物を発現するレンチウイルスを感染させ、ピューロマイシンを用いて選択した。エフェクターと標的細胞を９６時間共培養した後、ピューロマイシンで選択されたＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が誘導するＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死に対するダサチニブの効果を検討した。図３７から、ＧＬｕｃアッセイによる測定で、ダサチニブがＣＤ８ＳＰ−ＣＤ２２−ｍ９７１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０９１５１５−Ａ０２）［配列番号１５１９］ＣＡＲを発現するＴ細胞によるＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞の殺作用を効率的に阻止することがわかる。
【０７１１】
ダサチニブは親ＮＫ９２ＭＩ細胞およびＣＡＲを発現するよう改変したＮＫ９２ＭＩ細胞により誘導される細胞傷害を阻止する
ＮＫ９２細胞は、多数の癌の治療のために臨床開発の段階にある。ダサチニブがＮＫ９２細胞の活性を阻止することができるかどうかを試験するため、ＮＫ９２ＭＩ細胞（ＩＬ２を発現するＮＫ９２細胞の派生物）を示される濃度のダサチニブの不在下および存在下でＫ５６２−Ｇｌｕｃ細胞と共培養した。標的細胞を黒色の９６セルプレートに１ウェル当たり１００Ｋ細胞／１００μｌの濃度で播き、処理のままにするか、２種類の異なる用量のダサチニブ（５０ｎＭおよび１００ｎＭ）で３０分間処理し、次いで標的細胞をＮＫ９２ＭＩＭＩエフェクター細胞と０．５：１のＥ：Ｔ比で４時間共培養した。図３８Ａから、Ｇｌｕｃアッセイによる測定でダサチニブがＮＫ９２細胞を介するＫ５６２細胞の細胞死を阻止することがわかる。
【０７１２】
ダサチニブが、ＣＡＲを発現するよう操作したＮＫ９２細胞により誘導される細胞死も阻止するかどうかを試験するため、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］を発現するようＮＫ９２ＭＩ細胞を操作した。ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］ＣＡＲを発現するＮＫ９２ＭＩ細胞をダサチニブの不在下および存在下でＣＤ１９陽性ＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ標的細胞と４時間共培養し、ＧＬｕｃアッセイにより細胞死を測定した。図３８Ｂから、Ｇｌｕｃアッセイによる測定で、ダサチニブがＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０７０８１４−Ｄ０６）［配列番号３５３５］ＣＡＲ発現ＮＫ９２ＭＩ細胞によるＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死を阻止することがわかる。
【０７１３】
ダサチニブはブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ）誘導性細胞死およびサイトカイン産生を阻止する
エフェクターＴ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社のＣＤ３マイクロビーズにより単離したもの）を未処理のままにするか、５０ｎＭまたは１００ｎＭのダサチニブと３７℃で１時間プレインキュベートし、次いで細胞をＵ底９６ウェルプレートに播いた。ＲＡＪＩ−ＭＳＣＶｈｙｇｒｏ−Ｇｌｕｃ標的細胞をＰＢＳ／２％ＦＢＳ中、二重特異性抗体（ブリナツモマブまたはＢＬＩＮＣＹＴＯ；ＡＭＧＥＮ社）と１００ｎｇ／１０６細胞で３０分間、３７℃でインキュベートした。次いで、ブリナツモマブ処理ＲＡＪＩ−Ｇｌｕｃ細胞または未処理（対照）ＲＡＪＩ−Ｇｌｕｃ細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＸＶＩＶＯ培地に再懸濁させ、９６ウェルＵ底プレート１ウェル当たり１００μｌ（１００Ｋ）の細胞を示される濃度のダサチニブの不在下および存在下で播いた（１：１のエフェクター：標的比）。培地で各ウェル中の総体積を２００μｌに調整した。プレートを迅速に遠心分離して細胞を沈降させ、５％ＣＯ２恒温器内で３７℃にて９６時間インキュベートした。細胞死の最大値には、ＧＬｕｃ細胞死アッセイを実施する１時間前に、標的細胞のみが入ったウェルに総体積６μｌのジギトニン（ストック１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ社）を加えてジギトニンの最終濃度を３０μｇ／ｍｌとした。プレートを１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清５０μｌをＧｒｅｉｎｅｒ社の３８４ウェル平底白色不透明プレートに移した。天然セロエントラジン（ｃｏｅｌｏｅｎｔｒａｚｉｎｅ）（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ社）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液をウェルモードで３８４ウェルプレートに直接注入することにより、ルシフェラーゼ活性をＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーにより測定した。図３９Ａから、Ｔ細胞の存在下でブリナツモマブで処理するとＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死が強力に誘導され、それが１００ｎＭのダサチニブにより効率的に阻止されることがわかる。上記の実験の上清をＥＬＩＳＡによりＩＦＮγ産生の測定についてもアッセイした。図３９Ｂから、ＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞をＴ細胞の存在下でブリナツモマブと共培養することによりＩＦＮγ産生が強力に誘導され、それが１００ｎＭのダサチニブにより効率的に阻止されることがわかる。
【０７１４】
ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブが誘導する細胞死に対するルキソリチニブ、フォサタマチニブ（Ｆｏｓａｔａｍａｔｉｎｉｂ）およびアリセルチブの効果
上記のアッセイを用いて、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］発現ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブが誘導するＲＡＪＩ−ｐＬｅｎｔｉ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死に対するルキソリチニブ（ＪＡＫ−１／２阻害剤）、フォサタマチニブ（Ｆｏｓａｔａｍａｔｉｎｉｂ）（ｓｙｋ阻害剤）およびアリセルチブ（Ａｕｒａｒａキナーゼ阻害剤）の効果を試験した。図４０Ａから、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共培養していないＲＡＪＩ−ｐＬｅｎｔｉ−Ｇｌｕｃ細胞に対しては様々な薬物の有意な毒性効果がみられないことがわかる。図４０Ｂから、ＲＡＪＩ−−ｐＬｅｎｔｉ−Ｇｌｕｃ細胞をＣＡＲ−Ｔ細胞とインキュベートした場合、Ｇｌｕｃ活性により測定で細胞死が有意に誘導されることがわかる。図４０Ｂから、ルキソリチニブ、フォサタマチニブ（Ｆｏｓａｔａｍａｔｉｎｉｂ）およびアリセルチブにより、ＣＡＲ−Ｔ細胞が誘導するＲＡＪＩ−ｐＬｅｎｔｉ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死が培地単独（Ｍｅｄ）で処理した細胞と比較して軽度ないし中程度に阻害されることもわかる。ダサチニブは陽性対照として用いたものであり、ＣＡＲ−Ｔ細胞が誘導するＲＡＪＩ細胞の細胞死を有意に阻害した。図４０Ｃから、上の化合物は、示される濃度ではＴ細胞を介するブリナツモマブ誘導性細胞死に対して最小限の効果のみを示すことがわかる。
【０７１５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブが誘導する細胞死に対するＡ−７７００４１、サラカチニブ、アバシミブの効果
Ａ−７７００４１は、Ｔ細胞活性化およびＩＬ２産生に必要なｓｒｃファミリーの８つのメンバーのうちの１つであるＬＣＫに対する選択的小分子阻害剤である（Ｂｕｒｃｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  １６：１１８−２２，２００６）。Ａ７７００４１はＬｃｋの１４７ｎＭ阻害剤（１ｍＭ  ＡＴＰ）であり、Ｔ細胞シグナル伝達に関与する他のｓｒｃファミリーキナーゼであるＦｙｎに対して３００倍の選択性がある。サラカチニブ（ＡＺＤ０５３０）は経口投与が可能なｓｒｃファミリーの１つである。アバシミブは、ＣＤ８細胞の抗腫瘍応答を増強することが示されている重要なコレステロールエステル化酵素、ＡＣＡＴ１の阻害剤である。
【０７１６】
次に、上記のアッセイ用いて、ＣＤ１９Ｂｕ１２（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐａｃ−Ｐ０８発現ＣＡＲ  Ｔ細胞およびブリナツモマブが誘導するＲＡＪＩ−ｐＬｅｎｔｉ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死に対するＡ−７７００４１、サラカチニブおよびアバシミブの効果を試験した。図４１Ａから、ＣＡＲ−Ｔ細胞を一切含まない培地単独の存在下で示される薬物で処理した細胞中のＧｌｕｃが放出されたことがわかる。図４１Ｂから、ＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］ＣＡＲ−Ｔ細胞が誘導するＲＡＪＩ−ｐＬｅｎｔｉ−ＧＬｕｃ細胞の細胞死は１００ｎＭおよび２００ｎＭのＡ−７７００４１によりほぼ全面的に阻害されたが、サラカチニブは有意な効果を示さなかったことがわかる。ダサチニブは上の実験の陽性対照として用いたものであり、予想通りＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死を阻止した。アバシミブは、１００ｎＭではＣＡＲ−Ｔ細胞誘導性細胞死に対して有意な効果は示さなかったが、１μＭではそれを全面的に阻止した。図４１Ｃから、１００ｎＭのＡ７７００４１による処理では、ブリナツモマブとＴ細胞の組み合わせにより誘導される細胞死が部分的に阻止され、２００ｎＭのＡ７７００４１による処理ではそれが全面的に阻害されたことがわかる。同様に、１μＭのアバシミブによる処理では、Ｔ細胞を介するブリナツモマブ誘導性細胞死が阻止された。まとめると、上記の試験から、ＬＣＫキナーゼ阻害剤はＣＡＲ−Ｔ細胞およびブリナツモマブの効果を阻止することができ、したがって、ＣＡＲ−Ｔ細胞およびブリナツモマブによる治療に関連するサイトカイン放出症候群および神経学的合併症に使用することができることがわかる。
【０７１７】
ＩＬ６Ｒを標的とするｓｃＦｖとＩＬ６Ｒを同時発現するＣＡＲ構築物の作製
ＣＡＲ療法の主要な限界の１つがサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。ＣＲＳを制御するため臨床現場で現在用いられている方法の１つに抗ＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体トシリズマブの投与がある。ＣＡＲに関連するＣＲＳを制御するため、本発明者らは、Ｍ８３と称するＩＬ６Ｒに対するｓｃＦｖをＣ末端Ｆｌａｇタグとともに発現するＣＤ１９（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６Ｒ−Ｍ８３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｋ０４）［配列番号１７６３］））およびＭＰＬ（ＣＤ８ＳＰ−１６１（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６Ｒ−Ｍ８３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０１２０１５−Ｉ２９）［配列番号１７４６］））に対する例示的ＣＡＲを構築した。ＣＲＳを制御するため、本発明者らは、ＩＬ６−１９Ａと称するＩＬ６に対するｓｃＦｖを同時発現するＣＤ１９（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６−１９Ａ（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｈ０６）［配列番号１７６２］）およびＭＰＬ（ＣＤ８ＳＰ−１６１（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６−１９Ａ（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＥＧＦＰ（０１１３１５−Ｆ０２）［配列番号１７４５］）に対する例示的ＣＡＲも構築した。これらの構築物内のｓｃＦｖフラグメントは、Ｐ２Ａ切断可能リンカーによりＣＡＲフラグメントと分離されている。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ（Ｊ−Ｎ−Ｇ）細胞にＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６−１９Ａ（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｈ０６）［配列番号１７６２］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６Ｒ−Ｍ８３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｋ０４）［配列番号１７６３］をコードするレンチウイルスを安定に形質導入した。次いで、親ＪｕｒｋａｔおよびＣＡＲ発現ＪｕｒｋａｔをＲＡＪＩ細胞と共培養し、４時間後、ＥＧＦＰ発現の誘導をＦＡＣＳ解析によりモニターした。図４２Ａから、ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６−１９Ａ（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｈ０６）［配列番号１７６２］を発現するＪｕｒｋａｔ細胞をＲＡＪＩと共培養することにより、ＲＡＪＩ細胞に曝露していない細胞と比較してＥＧＦＰ発現が増大したことがわかる。ＣＡＲ構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−ＩＬ６Ｒ−Ｍ８３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１１３１５−Ｋ０４）［配列番号１７６３］を発現するＪｕｒｋａｔでも基本的に同様の結果が得られた。親Ｊｕｒｋａｔ（Ｊ−Ｎ−Ｇ−Ｐ）には、ＲＡＪＩとの培養の有無を問わずＥＧＦＰ発現の増大は観察されなかった（図４２Ｂ）。このように、ＣＡＲは、活性を失わずに単一ベクターからＩＬ６に対するｓｃＦＶおよびＩＬ６Ｒと同時発現させることができる。
【０７１８】
ｓｃＦｖのサイズが小さいことに起因する限界の１つに、ｓｃＦｖが腎臓により迅速に除去されることによる短い半減期がある。このため、本発明者らは、（ＧＧＧＧＳ）×３リンカーを介してヒト血清アルブミン（Ａｌｂ８）に対する一本鎖ラクダ由来抗体（ｖＨＨ）と融合した３０４と称するラクダ由来ＩＬ６Ｒ一本鎖抗体（ｖＨＨ）からなる二重特異性抗体を発現するＭＰＬ（１６１）に対するＣＡＲも構築した。ＩＬ６Ｒ−Ａｌｂ８カセットは、Ｎ末端のヒトＩｇＨシグナルペプチドおよびＣ末端のＦｌａｇエピトープタグを有する。分泌された二重特異性ＩＬ６Ｒ−３０４−Ａｌｂ８抗体は、そのＡｌｂ８領域を介してヒト血清アルブミンと結合し、それにより腎臓によるその排泄が妨げられ、同抗体の半減期が長くなる。
【０７１９】
ＣＲＳ時の血管漏出増大を阻止するＦｘ０６ペプチドを発現するＣＡＲ
毛細血管漏出症候群は、ＣＡＲのもう１つの主要な合併症である。フィブリンの天然のプラスミン消化産物であるペプチドＢβ１５〜４２（ＦＸ０６とも呼ばれる）は、血管漏出を有意に減少させることが示されている（Ｇｒｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ４：ｅ５３９１，２００９）。本発明者らは、ＣＤ１９またはＭＰＬを標的とするＣＡＲをＦＸ０６ペプチドと同時発現するベクターを作製した。ＦＸ０６の細胞外分泌を促進するため、そのＮ末端にヒトＩｇＨに由来するシグナルペプチドを融合した。ＦＸ０６ペプチドとＣＡＲの同時発現により、ＣＡＲ改変Ｔ細胞注入後にサイトカイン放出症候群の一部としてみられる毛細血管漏出症候群の改善が促される。
【０７２０】
ＣＤ１９に対するＦＭＣ６３  ＣＡＲをＦＸ０６とともに発現するレンチウイルスＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−Ｆｘ０６−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１２１１５−Ｎ０４）［配列番号１７６４］をＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞に安定に形質導入した。次いで、親ＪｕｒｋａｔおよびＣＡＲ発現ＪｕｒｋａｔをＲＡＪＩ細胞と共培養し、ＥＧＦＰ発現の誘導をフローサイトメトリーによりモニターした。ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ＩｇＨＳＰ−Ｆｘ０６−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０１２１１５−Ｎ０４）［配列番号１７６４］を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞をＲＡＪＩと共培養することにより、ＲＡＪＩ細胞に曝露していない細胞と比較してＥＧＦＰ発現が増大した。Ｂｖ１７３細胞およびＮＡＬＭ６細胞との培養でも基本的に同じ結果が得られた。このように、ＣＡＲは、活性を失わずに単一ベクターからＦＸ０６とともに発現させることができる。
【０７２１】
複数の多様な抗原を標的とするＣＡＲ
本発明者らは次に、癌およびその他の疾患原因細胞または疾患関連細胞に過剰発現する多数の多様な抗原を標的とするＣＡＲをコードするレンチウイルス構築物を作製した。レンチウイルスを作製し、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰレポーター細胞系に感染させるのに用いた。様々な抗原を標的とする様々なＣＡＲおよびバックボーンを発現するようＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞を操作し、それぞれの標的抗原を発現する標的細胞と共培養したときにＮＦＡＴ依存性ＥＧＦＰレポーターを活性化させることができるかどうかを試験した。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ（親）細胞を対照として用いた。様々なＣＡＲで得られた結果を下のまとめの表２８にまとめる。アッセイでは、ＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞を標的細胞系と培養したとき、それが親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞より高い％ＧＦＰ陽性細胞を示す場合にＣＡＲが陽性であるとした。したがって、ＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｐ２Ａ−ｃＦＬＩＰ−Ｌ−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０９２２１５−Ａ０６）［配列番号１７５４］を発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞は、ＲＡＪＩ細胞と共培養したときのＥＧＦＰ発現の誘導が、ＲＡＪＩ細胞と共培養したときに親Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞に誘導されるＥＧＦＰ発現と比較して高いものであった。これらの結果は、活性化誘導細胞死を阻止することが知られている薬剤ｃＦＬＩＰ−Ｌが、そのシグナル伝達活性に悪影響を及ぼすことなくＣＡＲと同時発現し得ることも示している。表２８の結果は、４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚ活性化ドメインとを含み、新規な抗原、例えばＰＴＫ７、ＤＬＬ３、ｃＭＥＴ、ＴＳＨＲ、ＣＤ２２、Ｍｕｃ１／ＭＨＣクラスＩ複合体、チロシナーゼ／ＭＨＣクラスＩ複合体などを標的とするいくつかの従来のＣＡＲ  ＩＩ構築物の機能的活性を示している。表２８のデータは、従来のＣＡＲ  ＩとＫ１３−ｖＦＬＩＰとを含み、新規な抗原、例えばＣＤ３４、ＣＤ１７９ｂ、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＤ２００Ｒ、ＬＡＭＰ１、ＴＲＯＰ２、ＴｎＡｇ、ＣＤＨ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ１９、ＧＤ３、ＧＦＲアルファ４、Ｈｅｒ２、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＮＹＢＲ−１、ＳｌｅａおよびＴＧＦＢＲ２などを標的とするいくつかのバックボーン１構築物の機能的活性も示している。さらに、このアッセイでは、いくつかの二重特異性構築物、例えばＥＧＦＲおよびＣＥＡを標的とする構築物ならびにｃＭｅｔおよびＨｅｒ３を標的とする構築物が陽性を示した。表１９〜２２に記載されている他のＣＡＲおよびバックボーンについても、基本的に同じ実験方法を用いて機能的活性を試験することができる。
【０７２２】
【表２８】
2019510498.tif 000084
2019510498.tif 000085
2019510498.tif 000086
2019510498.tif 000087
【０７２３】
従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現するＴ細胞の増幅へのＰＩ３Ｋ阻害剤の使用
ＣＤ３磁気ビーズを用いてヒト末梢血Ｔ細胞を単離し、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ構築物（配列番号１１１６１４−Ｂ０５）を発現するレンチウイルスに感染させる。細胞を選択しないでおくか、またはピューロマイシンと用いて選択し、既に記載されている標準的なプロトコルを用い、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズおよびＩＬ２を用いるが二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤ＰＦ−０４６９１５０２（０．１０μＭ〜０．５μＭ）の不在下または存在下で増幅する。ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に致死量未満の線量１７５ｃＧｙで放射線を照射する。放射線照射から２４時間後（第２日）、マウスに２．５×１０４個のＲＡＪＩ細胞を尾静脈から注射する。第３日、ＣＡＲをコードする示されるレンチウイルスに感染させＰＦ−０４６９１５０２の不在下または存在下で増幅した５００万個のＴ細胞でマウス（各グループｎ＝５）を治療する。対照（ｎ＝５）には未感染Ｔ細胞５００万個を注射する。対照群の全マウスが死亡するまでマウスにヒトＩＬ２を隔日投与する（４００ＩＵ  ｉ．ｐ．）。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ阻害剤の存在下で増幅したＣＡＲ−Ｔ細胞を投与したマウスの生存期間中央値は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ阻害剤の不在下で増幅したＣＡＲ−Ｔ細胞を投与したマウスより長くなると予想される。
【０７２４】
ＩＬ７とＣＡＲ−Ｔ細胞との使用
この試験は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の注入から１日後に開始し、外来組換えヒトＩＬ−７を２００ｎｇ／マウスの用量で腹腔内に３回注射し、対照マウスには通常の生理食塩水を投与することを除き、前の実施例に記載した通りに実施する。ＩＬ−７を投与するマウスは、その腫瘍を拒絶し、対照マウスより長期間生存するものと予想される。
【０７２５】
自家ＣＡＲ−Ｔ細胞の養子細胞療法への使用
本発明のＣＡＲ−Ｔ細胞を養子細胞療法に使用することができる。一例として、再発性急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病または高リスク中悪性度Ｂ細胞リンパ腫の患者には、ＣＤ１９を標的する自家ＣＡＲ−Ｔ細胞を養子移植する免疫療法を実施し得る。各患者から収集した白血球除去産物にＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社のＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍを製造業者の推奨に従って用い、ＣＤ３陽性Ｔリンパ球の選択を実施する。細胞に臨床グレードのＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０８２８１５−Ｐ０８）［配列番号１４７０］を形質導入する。あるいは、臨床グレードのＣＤ８ＳＰ−ＣＤ１９Ｂｕ１２−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号９３０］ウイルスを用いる。ＣＡＲ−Ｔ細胞の選択および増幅は閉鎖系で実施する。得られた細胞産物に品質管理試験（無菌性および腫瘍特異的細胞傷害性に関する試験を含む）を実施し、凍結保存する。その一方で、白血球除去後、被験者にリンパ球枯渇化学療法（３０ｍｇ／（ｍ２・日）のフルダラビンと５００ｍｇ／（ｍ２・日）のシクロホスファミド×３日）を開始する。参加者のリンパ球枯渇レジメン終了から１日後、予め保存しておいたＣＡＲ−Ｔ細胞産物を患者のベッドサイドまで運搬し、解凍し、注入する。被験者には、ＣＡＲ形質導入リンパ球を静脈内投与した後、高用量（７２０，０００ＩＵ／ｋｇ）のＩＬ−２（アルデスロイキン；Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を８時間毎に耐容量まで投与してもよい。ＣＡＲ−Ｔ製品の用量は、試験プロトコルに従い１ｋｇ当たりＣＡＲ陽性ＣＤ３細胞１×１０４個〜５×１０９個まで変化する。ＣＡＲ−Ｔ製品は単回注入または分割注入で投与し得る。被験者には、Ｔ細胞注入の少なくとも３０分前に１５ｍｇ／ｋｇのアセトアミノフェンＰ．Ｏ．投与（最大６５０ｍｇ）および０．５〜１ｍｇ／ｋｇのジフェンヒドラミンのＩ．Ｖ．投与（最大用量５０ｍｇ）を予め実施しておく。任意選択で、被験者にヒトＩＬ−２を連日注射する。次いで、医師の判断で臨床と検査の相関追跡試験を実施し、これには、ＣＤ１９を発現するＡＬＬ／リンパ腫細胞および／または養子移植されたＴ細胞の有無に関する定量的ＲＴ−ＰＣＲ試験；ＦＤＧ−ＰＥＴおよび／またはＣＴスキャン；疾患特異的病理学的評価のための骨髄検査；リンパ節生検；ならびに／あるいはＦＤＡのＢｉｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより記載され遺伝子導入試験に適用されるガイドラインに従った長期間の追跡が含まれ得る。基本的に同じ方法を用いて、本発明の従来のＣＡＲまたは従来のＣＡＲを補助モジュール（すなわち、バックボーン１〜６２）を発現するよう操作され、ＣＡＲが疾患原因細胞または疾患関連細胞に発現する１つまたは複数の抗原を標的とする、自家免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用し他の疾患を治療する。
【０７２６】
複数の抗原を標的とする従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現する自家Ｔ細胞の養子細胞療法への使用
感染症（例えば、ＨＩＶ１、ＥＢＢ、ＣＭＶ、ＨＴＬＶ１など）、変性疾患（例えば、アルツハイマー病）、アレルギー性疾患（例えば、慢性特発性じんま疹）および多発性癌を含めた多数の様々な疾患の患者を、異なる疾患原因抗原または疾患関連抗原を標的とするＫ１３−ｖＦＬＩＰ（バックボーン１）を同時発現する自家ＣＡＲ−Ｔ細胞を養子移植する免疫療法に関するＩＲＢ承認第Ｉ相臨床試験に登録する。様々な疾患に対するＣＡＲを疾患原因細胞または疾患関連細胞でのその標的抗原の既知の発現に基づき選択する。可能な場合、ＣＡＲの抗原結合ドメインが柔軟なリンカーを介して非分泌型ＮＬｕｃタンパク質と融合している抗原結合ドメイン−ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質との結合により、疾患原因細胞または疾患関連細胞上でのＣＡＲの発現を確認する。あるいは、市販の抗体を使用する免疫組織化学法またはフローサイトメトリーを用いて、疾患原因細胞または疾患関連細胞上でのＣＡＲの標的抗原の発現を確認する。白血球除去を用いて被験者からＴ細胞を収集し、適切なレンチウイルスベクターを形質導入し、閉鎖系でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いてｅｘ  ｖｉｖｏ増幅する。得られた細胞産物に品質管理試験（無菌性および腫瘍特異的細胞傷害性に関する試験を含む）を実施した後、凍結保存する。前に実施例に記載した通りにＣＡＲ−Ｔ細胞産物を被験者に投与する。次いで、医師の判断で臨床と検査の相関追跡試験を実施することができる。
【０７２７】
ｍＴＯＲ阻害剤ＲＡＤ００１と従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現するＴ細胞との併用
この試験は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入してから１日後に開始し、被験者にｍＴＯＲ阻害剤、例えばアロステリック阻害剤、例えばＲＡＤ００１を目標トラフレベル０．１〜３ｎｇ／ｍｌが得られる用量で投与することを除き、前の実施例に記載した通りに実施し、この場合、「トラフレベル」は、次の投与の直前の血漿中薬物濃度または２回の投与間の最小薬物濃度を指す。
【０７２８】
イブルチニブと従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現するＴ細胞との併用
この試験は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入してから１日後に開始し、被験者にイブルチニブを１４０ｍｇ／ｄ〜４２０ｍｇ／ｄの用量で経口投与することを除き、前の実施例に記載した通りに実施する。イブルチニブを投与した被験者は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与しイブルチニブを投与していない被験者より重度サイトカイン放出症候群の頻度が低下するものと予想される。
【０７２９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の肝動脈注入
静脈内注入に加え、本発明に記載される従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現するＴ細胞を動脈内に注入して、疾患と関連する局所的な領域または器官のＣＡＲ−Ｔ細胞の濃度を高くすることができる。以下の実施例では、葉酸受容体アルファ（ＦＲ１）を発現する消化管癌からの肝転移を有する患者の場合にこの方法を用いる。他の腫瘍抗原を標的とする従来のＣＡＲおよびバックボーン１〜６２を発現するＴ細胞の動脈内注入にも基本的に同じ方法を用いることができる。
【０７３０】
ベースライン時、右総大腿動脈法によりマッピング血管造影を実施する。肝外灌流の発生源となる可能性のある他の動脈に加え、胃十二指腸動脈および右胃動脈にマイクロコイルを用いて塞栓術を実施する。構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１０６０］を発現するＴ細胞の投与に同じ動脈アクセス法を実施する。第０日、前の実施例に記載した通りに患者からＴ細胞を収集し、構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１０６０］をコードするレンチウイルスに感染させ、増幅する。第１４日（１０７個のＣＡＲ−Ｔ細胞）、第２８日（１０８個のＣＡＲ−Ｔ細胞）および第４４日（１０９個のＣＡＲ−Ｔ細胞）に用量を漸増させてＣＡＲ−Ｔ細胞を投与する。ＣＡＲ−Ｔ細胞は６０ｃｃのシリンジから手動で２ｃｃ／秒未満の速度で注射する。注入総体積は約１００ｃｃとする。最初の５０ｃｃの注入後およびＣＡＲ−Ｔ注入終了時に校正済みのコントラスト比で血管造影検査を実施して、動脈流が維持されていることを確認する。可能な場合、適切な肝動脈内に注入を実施する。特定の患者に右または左肝動脈が適切な肝動脈から生じていないという肝動脈の解剖学的異常がみられることがある。このような場合、葉体積の計算値に基づきＣＡＲ−Ｔ細胞の用量を分割する。このような場合、分割した用量を右肝動脈および左肝動脈内に別個に送達して、ＣＡＲ−Ｔが両肝葉に適切に送達されるようにする。
【０７３１】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の腹腔内投与
ＣＡＲ−Ｔ細胞は、基本的にＫｏｎｅｒｕ  Ｍら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２０１５；１３：１０２）に記載されている通りに腹腔内に投与することもできる。以下の実施例では、この方法を腹膜に葉酸受容体アルファ（ＦＲ１）を発現する卵巣癌が発症している患者に用いる。その他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞の腹膜内注入にも基本的に同じ方法を用いることができる。
【０７３２】
再発性高悪性度漿液性卵巣癌の患者に、癌にＦＲ１の発現がみられるかどうかを試験するスクリーニング検査のインフォームドコンセントを与える。免疫組織化学法によりＦＲ１の発現を確認した後、患者に末梢血から得られる白血球除去産物を与える。白血球除去産物から余分な血小板および赤血球夾雑物を除去し、その産物を凍結する。試験の治療段階で白血球除去産物を解凍し洗浄する。次いで、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いる磁気分離により、解凍した白血球除去産物からＣＤ３＋Ｔ細胞を単離する。活性化Ｔ細胞にレンチウイルスを用いてＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１０６０］構築物を形質導入し、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ増幅プロトコルを用いてさらに増幅する。
【０７３３】
保存された（パラフィン包埋された）腫瘍または新たに生検で得た腫瘍の免疫組織化学（ＩＨＣ）解析により確認されるＦＲ１抗原を発現することが明らかになった再発性高悪性度漿液性卵巣癌、原発性腹膜癌またはファロピウス管癌の患者を試験に適格である可能性があるものとする。
【０７３４】
試験には第Ｉ相用量漸増投与を用いる。患者３〜６例からなるコホートに用量を漸増させながら改変Ｔ細胞を注入して最大耐量（ＭＴＤ）を確立する。計画用量レベルには、ＣＡＲ−Ｔ細胞３×１０５個／ｋｇ、１×１０６個／ｋｇ、３×１０６個／ｋｇおよび１×１０７個／ｋｇの４種類がある。コホートＩおよびＩＩは３×１０５個／ｋｇのＣＡＲ−Ｔ細胞で治療するが、コホートＩＩの患者にはリンパ球枯渇シクロホスファミドも投与する。コホートＩＩ〜Ｖには、シクロホスファミドによる前治療の後、用量を漸増させながら改変Ｔ細胞を投与する。最初のＴ細胞注入の２〜４日の前、用量７５０ｍｇ／ｍ２のリンパ球枯渇シクロホスファミドを投与する。標準的な３＋３用量漸増スキームに従う。
【０７３５】
Ｔ細胞注入前にＩＰカテーテルを留置する。最初にＣＡＲ  Ｔ細胞を注入する前に患者を病院の入院病棟に入院させ、２回目のＣＡＲ  Ｔ細胞注入から少なくとも３日後までは病院に入院させておく。治療する患者の最初のコホートおよびそれに続く各コホートで最初に治療した患者を集中治療施設（ＩＣＵ）に入院させ；次いで、患者に腫瘍内科入院患者サービスを受けさせ（治療医の臨床判断を受けさせ）てもよい。
【０７３６】
ＣＡＲ改変Ｔ細胞による治療を開始する２〜４日前、患者に単回用量のリンパ球枯渇シクロホスファミド（７５０ｍｇ／ｍ２ＩＶ）による化学療法を実施する。注入前に形質導入Ｔ細胞の数、純度、生存能および無菌性に関して品質検査を実施する。全患者の静脈内に５０％の用量の遺伝子改変Ｔ細胞を投与する。患者に対する毒性を厳密にモニターする。１〜３日後、残りの用量のＴ細胞をＩＰ注入で投与する。各用量レベル内で１か月あたり２例以下の頻度で少なくとも３例の患者に用量レベル１での治療を実施する。前のコホートで治療した全患者を最初のＴ細胞注入日から最低４週間観察した後、次のコホートに増加する。治療前および治療後に全患者から血液試料を採取して、毒性、治療効果および遺伝子改変Ｔ細胞の生存能を評価する。
【０７３７】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の腫瘍内注射への使用
ＣＡＲ−Ｔ細胞は、基本的にＢｒｏｗｎ  ＣＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５；２１（１８）：４０６２−４０７２に記載されている通りに腫瘍内に注射することもできる。以下の実施例では、ＩＬ１３Ｒａ２を発現する再発性膠芽腫（ＧＢＭ）の患者の症例にこの方法を用いる。その他の腫瘍抗原を標的とする従来のＣＡＲまたは補助モジュール（バックボーン１〜６２）を発現する従来のＣＡＲを発現するＴ細胞の腫瘍内注射にも基本的に同じ方法を用いることができる。
【０７３８】
再発性ＧＢＭを対象にＣＤ８ＳＰ−ＩＬ１３Ｒａ２−Ｈｕ１０８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５０５１６−Ｆ０４）［配列番号１１０２］発現Ｔ細胞を試験するため、安全性および実現可能性に関する予備研究を実施する。全被験者に書面でのインフォームドコンセントを提出するよう求める。臨床プロトコルは、南カリフォルニア大学施設内審査委員会による承認を受け、新薬治験許可申請下で実施し、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに登録する。適格患者には、脳室／ＣＳＦ経路との連絡がみられず切除可能な腫瘍である再発性または難治性の単巣性テント上グレードＩＩＩまたはＩＶ神経膠腫を有する成人（１８〜７０歳）を含める。この試験への参加にはＩＬ１３Ｒα２（またはＩＬ１３Ｒａ２）腫瘍抗原の状態を問わない。患者を高悪性度神経膠腫（ＷＨＯグレードＩＩＩまたはＩＶ）の初期診断後に登録し、この時点で白血球除去を実施して末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を収集する。この細胞を用いて、前の実施例に記載した通りに、Ｔ細胞を対応するレンチウイルスベクターに感染させてピューロマイシン耐性遺伝子（ＰＡＣ）を含む構築物ＣＤ８ＳＰ−ＩＬ１３Ｒａ２−Ｈｕ１０８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（０５０５１６−Ｆ０４）［配列番号１１０２］を発現するよう操作する。あるいは、レトロウイルスベクターに感染させて、または眠れる森の美女トランスポゾンを用いて、またはＩＶＴ  ｍＲＮＡのトランスフェクションによりＣＡＲ−Ｔ細胞を作製することもできる。次いで、放出試験を実施した治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存し、のちに使用するために保管する。最初の腫瘍再発がみられた時点で、被験者にＲｉｃｋｈａｍリザーバー／カテーテルの留置とともに腫瘍切除術を実施する。同時に、治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を解凍し、急速膨張プロトコルに基づきＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで再増幅する。手術から回復しベースラインＭＲ撮像を実施した後、基本的に記載されている（Ｂｒｏｗｎ  ＣＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５  ２１（１８）：４０６２−４０７２）通りに、ＣＡＲ−Ｔ細胞を留置カテーテルから切除腔内に直接投与する。２１ゲージ翼状針を用い、体積２ｍＬが５〜１０分間かけて送達されるよう細胞を手動でＲｉｃｋｈａｍリザーバー内に注入し、次いで、保存剤を含まない通常の生理食塩水２ｍＬを５分間かけて流す。プロトコル治療計画には、週１回の治療サイクルからなり、５週間にわたって１２種類のＣＡＲ  Ｔ細胞用量を頭蓋内に投与することを目標とする患者内用量漸増スケジュールを明記する。サイクル１、２、４および５では、サイクル週の第１日、３日および５日にＴ細胞注入を実施し、第３週を休止サイクルとする。安全性については、サイクル１で第１日、３日および５日に注入１回当たりそれぞれ１０７個、５×１０７個および１０８個の用量のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与する患者内用量漸増戦略を用い、こののち、１０８個のＣＡＲ  Ｔ細胞注入をさらに９回、４週間にわたって実施する。第３週の休止サイクル中および第５週の後に、応答を評価するための撮像を実施する。毒性のモニタリ���グおよび有害事象の報告については、ＮＣＩ共通有害事象基準バージョン２．０（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｔｅｐ．ｉｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌ）に記載されているガイドラインに従う。
【０７３９】
移植前の骨髄または末梢血幹細胞調製物のｅｘ−ｖｉｖｏパージングへのＣＡＲ−Ｔ細胞の使用
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、幹細胞移植の前に骨髄または末梢血幹細胞調製物をパージするのに用いることができる。以下の実施例では、多発性骨髄腫の患者から採取した骨髄または末梢血幹細胞を自家幹細胞（または骨髄）移植の前にＣＤ８ＳＰ−ＣＳ１−ＨｕＬｕｃ６４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１０３２］発現Ｔ細胞を用いてパージする。
【０７４０】
患者に白血球除去を実施して末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を収集する。ＣＤ３ビーズを用いてＴ細胞を精製する。この細胞を用いて、前の実施例に記載した通りに、Ｔ細胞を対応するレンチウイルスベクターに感染させてＣＤ８ＳＰ−ＣＳ１−ＨｕＬｕｃ６４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ［配列番号１０３２］ＣＡＲを発現するよう操作する。次いで、放出試験を実施した治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存し、のちに使用するために保管するか、新鮮なまま使用する。標準法に従い多発性骨髄腫の患者から骨髄細胞および末梢血前駆細胞産物を収集する。末梢血幹細胞を動員するため、患者に３ｇｍ／ｍ２のシクロホスファミド、次いで、シクロホスファミドの２４時間後に開始して除去が完了するまで１０μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを連日皮下に投与する。末梢血ＣＤ３４＋−細胞数が１５個／μｌになってから末梢血幹細胞を収集する。収集の目標は、処理後に最低２．０回、１０６ＣＤ３４＋細胞／ｋｇに達するまで１日当たり３体積の血液を処理することとする。任意選択で、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社のＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍを製造業者の推奨に従って用い、骨髄および末梢血幹細胞産物から赤血球を枯渇させ、かつ／またはＣＤ３４発現細胞を濃縮する。その産物を新鮮な状態でｅｘ−ｖｉｖｏパージングに使用するか、または凍結保存する。パージングには、骨髄または末梢血幹細胞産物を解凍済みＣＡＲ−Ｔ細胞と５：１〜３０：１の範囲のエフェクター：標的比で４〜２４時間、１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ社）で共培養する。細胞は５％ＣＯ２加湿恒温器内で３７℃にて培養する。培養期間終了時、一定分量の細胞を採取して無菌性および品質に関する試験（ＣＦＵ−ＧＭの測定ならびにＣＤ３４陽性細胞およびＣＤ１３８陽性細胞のフローサイトメトリーを含む）に供する。残りの試料をそれまでに骨髄破壊的化学療法（例えば、総用量１４０ｍｇ／ｍ２を２つの分割用量７０ｍｇ／ｍ２にした高用量メルファラン）を受けたことのある患者に静脈内投与する。
【０７４１】
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１５．Ｒｏｙｂａｌ，Ｋ．Ｔ．，Ｌ．Ｊ．Ｒｕｐｐ，Ｌ．Ｍｏｒｓｕｔ，Ｗ．Ｊ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｋ．Ａ．ＭｃＮａｌｌｙ，Ｊ．Ｓ．Ｐａｒｋ，ａｎｄ  Ｗ．Ａ．Ｌｉｍ（２０１６），Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｓｅｎｓｉｎｇ  Ｃｉｒｃｕｉｔｓ，Ｃｅｌｌ，１６４（４），７７０−９．
１６．Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，Ｒ．Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ａｎｄ  Ｉ．Ｒｉｖｉｅｒｅ（２００９），Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ａｎｄ  ｐｉｔｆａｌｌｓ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１，２１５−２３．
１７．Ｓｃｈａｄｅ，Ａ．Ｅ．，Ｇ．Ｌ．Ｓｃｈｉｅｖｅｎ，Ｒ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ａ．Ｍ．Ｊａｎｋｏｗｓｋａ，Ｖ．Ｓｕｓｕｌｉｃ，Ｒ．Ｚｈａｎｇ，Ｈ．Ｓｚｐｕｒｋａ，ａｎｄ  Ｊ．Ｐ．Ｍａｃｉｅｊｅｗｓｋｉ（２００８），Ｄａｓａｔｉｎｉｂ，ａ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，Ｂｌｏｏｄ，１１１（３），１３６６−７７．
１８．Ｓｉｅｂｕｒｇ，Ｍ．，Ａ．Ｔｒｉｐｐ，Ｊ．Ｗ．Ｍａ，ａｎｄ  Ｇ．Ｆｅｕｅｒ（２００４），Ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １（ＨＴＬＶ−１）ａｎｄ  ＨＴＬＶ−２  ｔａｘ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，７８（１９），１０３９９−４０９．
１９．Ｔｈｏｍｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｖｉｒａｌ  ＦＬＩＣＥ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＦＬＩＰｓ）ｐｒｅｖｅｎｔ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｄｅａｔｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ，３８６（６６２４），５１７−２１．
２０．Ｔｕｒｔｌｅ，Ｃ．Ｊ．，Ｍ．Ｈｕｄｅｃｅｋ，Ｍ．Ｃ．Ｊｅｎｓｅｎ，ａｎｄ  Ｓ．Ｒ．Ｒｉｄｄｅｌｌ（２０１２），Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４，６３３−３９．
２１．Ｗｅｉｃｈｓｅｌ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８），Ｐｒｏｆｏｕｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ｄａｓａｔｉｎｉｂ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１４（８），２４８４−９１．
２２．Ｗｕ，Ｃ．Ｙ．，Ｌ．Ｊ．Ｒｕｐｐ，Ｋ．Ｔ．Ｒｏｙｂａｌ，ａｎｄ  Ｗ．Ａ．Ｌｉｍ（２０１５），Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｅｎｇｉｎｅｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３５，１２３−３０．
２３．Ｗｕ，Ｃ．Ｙ．，Ｋ．Ｔ．Ｒｏｙｂａｌ，Ｅ．Ｍ．Ｐｕｃｈｎｅｒ，Ｊ．Ｏｎｕｆｆｅｒ，ａｎｄ  Ｗ．Ａ．Ｌｉｍ（２０１５），Ｒｅｍｏｔｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−ｇａｔｅｄ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３５０（６２５８），ａａｂ４０７７．
２４．Ｚｈａｎ，Ｊ．，Ｂ．Ｆｅｌｄｅｒ，Ａ．Ｒ．Ｅｌｌｉｓｏｎ，Ａ．Ｗｉｎｔｅｒｓ，Ｈ．Ｓａｌｉｍｉ−Ｍｏｏｓａｖｉ，Ｓ．Ｓｃｕｌｌｙ，Ｊ．Ｒ．Ｔｕｒｋ，ａｎｄ  Ｐ．Ｗｅｉ（２０１３），Ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−ｃ−Ｍｐｌ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｃ−Ｍｐｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３２（３），１４９−６１．
【０７４２】
上記の様々な方法および技術は本願を実施する多数の方法を提供するものである。当然のことながら、本明細書に記載される任意の特定の実施形態に従えば必ずしも記載される目的または利点がすべて達成され得るわけではないことを理解するべきである。したがって、例えば、当業者には、本明細書に教示または示唆される他の目的または利点が必ずしも達成されなくても本明細書に教示される１つの利点または一群の利点が達成または最適化されるようこれらの方法を実施し得ることが認識されよう。本明細書には様々な代替物が記載されている。好ましい実施形態には、１つの、別のまたはいくつかの特徴が具体的に含まれる場合もあれば、１つの、別のまたはいくつかの特徴が具体的に除外される場合もあり、さらには、１つの、別のまたはいくつかの有利な特徴を含めることによりある特定の特徴が軽減される場合もあることを理解するべきである。
【０７４３】
さらに、当業者には様々な実施形態の様々な特徴の適用性が認識されよう。同様に、上述の様々な要素、特徴および段階ならびにこのような要素、特徴または段階それぞれに対する他の既知の均等物を当業者が様々な組み合わせで用いて、本明細書に記載される原理に従う方法を実施することができる。様々な要素、特徴および段階には、多様な実施形態に具体的に含まれるものもあれば、具体的に除外されるものもある。
【０７４４】
特定の実施形態および実施例と関連させて本願が開示されているが、当業者には、本願の諸実施形態が、具体的に開示される実施形態以外にも他の代替的実施形態および／または使用ならびにその修正形態および均等物まで及ぶことが理解されよう。
【０７４５】
本明細書には、本願を実施するための本発明者らが知る最良の形態を含めた本願の好ましい実施形態が記載されている。これらの好ましい実施形態に対する変形形態は、当業者には上記の説明を読めば明らかになるであろう。当業者は必要に応じてそのような変形形態を用いることができ、本願は本明細書に具体的に記載されるもの以外の方法でも実施され得ることが企図される。したがって、本願の多数の実施形態には、準拠法により認められる通りに本明細書に添付の請求項に記載される主題のあらゆる修正形態および均等物が含まれる。さらに、本明細書に特に明示されない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、上記の要素をその可能なあらゆる変形形態で任意に組み合わせたものが本願に包含される。
【０７４６】
本明細書で参照される特許、特許出願、特許出願公開およびその他の資料、例えば論文、書籍、仕様書、刊行物、文書、物などならびに／あるいはこれと同様のものなどはいずれも、あらゆる目的においてその全体が参照により本明細書に組み込まれるが、ただし、それと関連する出願経過、本文書と一致しない、もしくは矛盾するもの、または本文書と現時点で、もしくはのちに関連する請求項の最も広い範囲を限定する影響を及ぼし得るものは除く。例として、組み込まれる資料に関連する説明、定義および／または用語の使用と本文書に関連するそれとの間に不一致または矛盾がみられた場合、本文書の説明、定義および／または用語の使用が優先されるものとする。
【０７４７】
本明細書に開示される本願の諸実施形態は、本願の諸実施形態の原理を説明するものであることを理解するべきである。用い得るそれ以外の修正形態も本願の範囲内に含まれ得る。したがって、特に限定されないが例を挙げると、本願の諸実施形態の別の構成を本明細書の教示に従って用いることができる。したがって、本願の諸実施形態は、図示および記載されている通りのものに限定されるわけではない。
【０７４８】
本発明の様々な実施形態が上の「詳細な説明」に記載されている。これらの説明は上の実施形態を直接説明するものであるが、当業者には本明細書に図示および記載される特定の実施形態に対する修正形態および／または変形形態が思い付くことが理解される。この説明の範囲内に収まるこのような修正形態または変形形態はいずれも、その範囲内に含まれることが意図される。特に明記されない限り、本明細書および請求項中の単語および語句は当該技術分野（１つまたは複数）の当業者には通常かつ慣例的な意味を有するものとする。
【０７４９】
本願出願の時点で本発明者が知る本発明の様々な実施形態に関して上に記載したことは、例示および説明を目的に記載し意図したものである。本発明の記載は、網羅的なものでも、本発明を開示される正確な形態に限定するものでもなく、上の教示を踏まえれば多数の修正形態および変形形態が可能である。記載されている諸実施形態は、本発明の原理およびその実際の適用を説明し、他の当業者が本発明を様々な実施形態で、企図される特定の用途に適するよう様々な修正を加えて利用できるようにする役割を果たすものである。したがって、本発明は、本発明を実施するために開示される特定の実施形態に限定されないことが意図される。
【０７５０】
本発明の特定の実施形態が図示および記載されているが、当業者には、本明細書の教示に基づき、本発明およびそのさらに広範囲の諸態様を逸脱することなく改変および修正を施し得ること、したがって、添付の請求項はその範囲内に、そのような改変および修正を本発明の真の趣旨および範囲に含まれるものとしてすべて包含することが明らかであろう。
【０７５１】
本願および本発明には以下の番号を付した項がさらに含まれる。
【０７５２】
１．抗原特異的標的化ドメイン；ヒンジ領域；膜貫通ドメイン；および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、各抗原特異的標的化領域が、抗原特異的一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントまたは抗原特異的リガンドを含む、キメラ抗原受容体。
【０７５３】
２．１つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、項１のキメラ抗原受容体。
【０７５４】
３．抗原特異的標的化ドメインが、ＭＰＬ受容体、ＣＤ１９、ＧＲＰ−７８、ＣＤ７９ｂ、Ｌｙｍ−１、Ｌｙｍ−２、ＦＬＴ３またはその組み合わせのいずれか１つまたは複数のものを標的とする、項１のキメラ抗原受容体。
【０７５５】
４．ヒンジ領域が、ヒトＣＤ８ヒンジ領域、抗体のＦｃフラグメントまたはその機能的等価物、フラグメントもしくは誘導体、抗体のヒンジ領域またはその機能的等価物、フラグメントもしくは誘導体、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工スペーサー配列およびその組み合わせのいずれか１つまたは複数のものを含む、項１のキメラ抗原受容体。
【０７５６】
５．ヒンジ領域が、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジおよびＣＨ２領域、（ｉｖ）ＣＤ８αのヒンジ領域、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジおよびＣＨ２領域または（ｖｉｉ）その組み合わせのいずれか１つまたは複数のものを含む、項４のキメラ抗原受容体。
【０７５７】
６．膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体複合体のゼータ鎖の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ８ａおよびその組み合わせのいずれか１つまたは複数のものを含む、項１のキメラ抗原受容体。
【０７５８】
７．共刺激ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０およびその組み合わせのいずれか１つまたは複数のものに由来するシグナル伝達ドメインを含む、項２のキメラ抗原受容体。
【０７５９】
８．細胞内シグナル伝達ドメインが、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃｇＲＩＩＩ、ＦｃｅＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質側末端、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体およびその組み合わせのうち１つまたは複数のもののシグナル伝達ドメインを含む、項１のキメラ抗原受容体。
【０７６０】
９．さらにサイトカインまたはサイトカイン受容体に特異的なｓｃＦｖまたはｖＨＨまたは二重特異性抗体と同時発現する、項１のキメラ抗原受容体。
【０７６１】
１０．同時発現するサイトカインまたはサイトカイン受容体が、ＩＬ−６、ＩＬ６Ｒ、ＩＦＮγ、ＴＮＦαまたはその組み合わせのいずれか１つまたは複数のものである、項９のキメラ抗原受容体。
【０７６２】
１１．ＣＡＲ療法に関連する毛細血管漏出を軽減するようさらにペプチドＦＸ０６を同時発現する、項１のキメラ抗原受容体。
【０７６３】
１２．Ｔ細胞の活性化、増殖を刺激し、かつ／またはＴ細胞活性化誘導細胞死を阻止するウイルスまたは細胞シグナル伝達タンパク質をさらに同時発現する、項１のキメラ抗原受容体。
【０７６４】
１３．シグナル伝達タンパク質が、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、ｖＦＬＩＰ  ＭＣ１５９、ｖＦＬＩＰ  ＭＣ１６０、ｖＦＬＩＰ  Ｅ８、ＨＳＶ  ｖＦＬＩＰ、ＢＨＶ  ｖＦＬＩＰ、ヘルペスウイルスメカカ（Ｍｅｃａｃａ）ｖＦＬＩＰ、ｃＦＬＩＰ／ＭＲＩＴα、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２、ＨＴＬＶ１  Ｔａｘ、ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ  ＲＳ変異体、ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ  ＲＳ変異体、Ｔｉｏ、ＳｔｐＣ、Ｔｉｐまたはその変異体もしくは組み合わせのいずれか１つまたは複数のものである、項１２のキメラ抗原受容体。
【０７６５】
１４．シグナル伝達タンパク質が、恒常的または誘導性に発現する、項１２のキメラ抗原受容体。
【０７６６】
１５．シグナル伝達タンパク質の活性が、化合物の投与により翻訳後レベルで制御される、項１２のキメラ抗原受容体。
【０７６７】
１６．シグナル伝達タンパク質が、１コピーまたは複数コピーのＦＫＢＰドメインと融合した状態で発現する、項１２のキメラ抗原受容体。
【０７６８】
１７．タンパク質の活性が、ＦＫＢＰドメインの二量体化を誘導する治療有効量の化合物の投与により翻訳後レベルで制御される、項１６のキメラ抗原受容体。
【０７６９】
１８．ＭＰＬを標的とする抗原特異的標的化ドメインが、１６１、１７５、１７８、ＡＢ３１７、１２Ｅ１０もしくはＶＢ２２もしくはヒトＴＰＯもしくはマウスＴＰＯのｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７０】
１９．ＣＤ１９を標的とする抗原特異的標的化ドメインが、ＣＤ１９Ｂｕ１２もしくはＣＤ１９ＭＭのｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７１】
２０．ＣＤ７９ｂを標的とする抗原特異的標的化ドメインが、ｈｕＭＡ７９ｂｖ２８もしくはＣＤ７９ｂ−２Ｆ２のｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７２】
２１．ＦＬＴ３を標的とする抗原特異的標的化ドメインが、ＮＣ７のｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７３】
２２．Ｌｙｍ１抗原を標的とする抗原特異的標的化ドメインが、Ｌｙｍ１のｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７４】
２３．Ｌｙｍ２抗原を標的とする抗原特異的標的化ドメインが、Ｌｙｍ２のｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７５】
２４．ＧＲＰ−７８を標的とする抗原特異的標的化ドメインが、ＧＲＰ７８−ＧＣ１８のｓｃＦｖフラグメントまたはその変異体を含む、項１または３のキメラ抗原受容体。
【０７７６】
２５．項１、１２および１８〜２４のいずれか１項のキメラ抗原受容体をコードする、ポリヌクレオチド。
【０７７７】
２６．項２５のポリヌクレオチドをコードするポリペプチド。
【０７７８】
２７．項２５のポリヌクレオチドを含むベクター。
【０７７９】
２８．項２５のポリヌクレオチドを含むウイルス。
【０７８０】
２９．レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルスまたはヘルペスウイルスである、項２５のウイルス。
【０７８１】
３０．項２５のポリヌクレオチドまたは項１のキメラ抗原受容体を含む、遺伝子操作細胞。
【０７８２】
３１．Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である、項３０の遺伝子操作細胞。
【０７８３】
３２．ナイーブＴ細胞、中枢記憶Ｔ細胞、エフェクター記憶Ｔ細胞，Ｔｒｅｇまたはその組み合わせである、項３１の遺伝子操作細胞。
【０７８４】
３３．ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、胚性幹細胞または多能性幹細胞である、項２１の遺伝子操作細胞。
【０７８５】
３４．項１のキメラ抗原受容体、項２５のポリヌクレオチド、項２６のポリペプチド、項２７のベクター、項２８のウイルス、項３０の遺伝子操作細胞およびその組み合わせのいずれか１つまたは複数のもの；ならびに薬学的に許容されるを含む、医薬組成物。
【０７８６】
３５．癌を治療する方法であって、項３４の組成物を準備すること；および癌を治療するため対象に治療有効量の組成物を投与することを含む、方法。
【０７８７】
３６．癌が血液癌である、項３５の方法。
【０７８８】
３７．血液癌が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、リンパ腫、多発性ミレオーマ（ｍｙｌｅｏｍａ）および急性リンパ球性白血病のいずれか１つまたは複数のものである、項３６の方法。
【０７８９】
３８．項１のＣＡＲを発現するＴ細胞の活性を制御する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９０】
３９．ＣＡＲ−Ｔ細胞による治療に関連するＣＲＳを治療する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９１】
４０．ＣＡＲ−Ｔ細胞による治療に関連する神経学的合併症を治療する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９２】
４１．阻害剤がｓｒｃキナーゼＬｃｋを阻害する、項３８、３９または４０の方法。
【０７９３】
４２．阻害剤がダサチニブである、項４１の方法。
【０７９４】
４３．阻害剤がポナチニブである、項４１の方法。
【０７９５】
４４．阻害剤がＡ−７７００４１である、項４１の方法。
【０７９６】
４５．ＢｉＴＥにより活性化されるＴ細胞の活性を制御する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９７】
４６．ＢｉＴＥによる治療を原因とするＣＲＳを治療する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９８】
４７．ＢｉＴＥによる治療を原因とする神経学的合併症を治療する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０７９９】
４８．ＢｉＴＥがブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ）である、項４５、４６または４７の方法。
【０８００】
４９．阻害剤がｓｒｃキナーゼＬｃｋを阻害する、項４５、４６または４７の方法。
【０８０１】
５０．阻害剤がダサチニブである、項４９の方法。
【０８０２】
５１．阻害剤がポナチニブである、項４９の方法。
【０８０３】
５２．阻害剤がＡ−７７００４１である、項４９の方法。
【０８０４】
５３．ＣＡＲおよびＢｉＴＥによる合併症を治療する方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を投与することを含み、キナーゼがキナーゼのｓｒｃファミリーから選択される、方法。
【０８０５】
５４．ＢｉＴＥがブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ）である、項５３の方法。
【０８０６】
５５．阻害剤がｓｒｃキナーゼＬｃｋを阻害する、項５３の方法。
【０８０７】
５６．阻害剤がダサチニブである、項５５の方法。
【０８０８】
５７．阻害剤がポナチニブである、項５５の方法。
【０８０９】
５８．阻害剤がＡ−７７０４１である、項５５の方法。
【０８１０】
５９．治療有効量のアバシミブの投与によりＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢｉＴＥによるＣＲＳ、神経学的合併症およびその他の合併症を治療する方法。
【０８１１】
６０．細胞内でｖＦＬＩＰ  Ｋ１３を発現させることによりヒト末梢血単核球およびＴ細胞を不死化する方法。
【０８１２】
６１．ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３を恒常的に発現させる、項６０の方法。
【０８１３】
６２．転写後または翻訳後レベルで活性を制御することができるようにｖＦＬＩＰ  Ｋ１３を発現させる、項６０の方法。
【０８１４】
６３．ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３をＦＫＢＰの１つまたは複数のドメインと融合した状態で発現させる、項６０の方法。
【０８１５】
６４．ＦＫＢＰ−ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３融合タンパク質がＮ末端ミリストイル化配列をさらに含む、項６３の方法。
【０８１６】
６５．ＦＫＢＰドメインの二量体化およびＫ１３誘導性ＮＦ−ｋＢシグナル伝達の活性化を誘導する化学物質によりＦＫＢＰ−ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３融合タンパク質の活性を制御する、項６４の方法。
【０８１７】
６６．Ｋ１３またはＦＫＢＰ−Ｋ１３融合タンパク質を発現する末梢血単核球および／またはＴ細胞を患者に投与する、項６５の方法。
【０８１８】
６７．Ｋ１３またはＦＫＢＰ−Ｋ１３融合タンパク質を発現する末梢血単核球および／またはＴ細胞が、キメラ抗原受容体、ナイーブＴ細胞受容体または人工Ｔ細胞受容体も同時発現する、項６５の方法。
【０８１９】
６８．細胞内でＨＴＬＶ２  Ｔａｘタンパク質を発現させることによりヒト末梢血単核球およびＴ細胞を不死化する方法。
【０８２０】
６９．細胞内でＨＴＬＶ２  Ｔａｘ  ＲＳ変異体タンパク質を発現させることによりヒト末梢血単核球およびＴ細胞を不死化する方法。
【０８２１】
７０．ＨＴＬＶ２  ＴａｘおよびそのＲＳ変異体をＦＫＢＰの１つまたは複数のドメインと融合した状態で発現させる、項６８または６９の方法。
【０８２２】
７１．ＦＫＢＰ−Ｔａｘ融合タンパク質がＮ末端ミリストイル化配列をさらに含む、項７０の方法。
【０８２３】
７２．ＦＫＢＰドメインの二量体化およびＴａｘ誘導性ＮＦ−ｋＢシグナル伝達の活性化を誘導する化学物質によりＦＫＢＰ−ＴａｘおよびＦＫＢＰ−Ｔａｘ−ＲＳ融合タンパク質の活性を制御する、項７１の方法。
【０８２４】
７３．ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ  ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ−ＲＳ変異体、ＦＫＢＰ−ＴａｘまたはＦＫＢＰ−Ｔａｘ−ＲＳ変異体タンパク質を発現する末梢血単核球および／またはＴ細胞を患者に投与する、項７２の方法。
【０８２５】
７４．ＨＴＬＶ−ＴａｘまたはＦＫＢＰ−Ｔａｘ融合タンパク質を発現する末梢血単核球および／またはＴ細胞が、さらにキメラ抗原受容体、ナイーブＴ細胞受容体または人工Ｔ細胞受容体を同時発現する、項７２の方法。
【図１】
2019510498.tif 000088
【図２Ａ】
2019510498.tif 000089
【図２Ｂ】
2019510498.tif 000090
【図２Ｃ】
2019510498.tif 000091
【図２Ｄ】
2019510498.tif 000092
【図３Ａ】
2019510498.tif 000093
【図３Ｂ】
2019510498.tif 000094
【図４Ａ】
2019510498.tif 000095
【図４Ｂ】
2019510498.tif 000096
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３７】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４０Ｃ】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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