(57)【要約】  疾患、例えば癌、例えば抗原、例えばＣＤ１９の発現に関連する疾患を治療するための組成物及び方法であって、抗原、例えばＣＤ１９に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞をＰＤ−１阻害薬と併用して投与することを含む方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ−１阻害薬との併用での使用のための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の用量は、例えば、２週間、３週間、４週間、又は５週間毎に投与される約２００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、例えば約３００ｍｇ〜約４００ｍｇである、ＣＡＲ療法。
【請求項２】
癌を有する対象を治療する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を前記対象に投与することを含み、前記ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の用量は、例えば、２週間、３週間、４週間、又は５週間毎に投与される約２００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、例えば約３００ｍｇ〜約４００ｍｇである、方法。
【請求項３】
ＰＤ−１阻害薬との併用での使用のための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法の投与後２０日以内に開始される、ＣＡＲ療法。
【請求項４】
癌を有する対象を治療する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を前記対象に投与することを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法の投与後２０日以内に開始される、方法。
【請求項５】
前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法の投与後１６日以内、１５日以内、１４日以内、１３日以内、１２日以内、１１日以内、１０日以内、９日以内、８日以内、７日以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、又は２日以内に開始される、請求項３又は４に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６】
ＰＤ−１阻害薬との併用での使用のための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記対象が以下：
（ａ）前記ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）前記ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）前記ＣＡＲ療法に不応性の癌、
（ｄ）前記ＣＡＲ療法後の進行型の前記癌、又は
（ｅ）前記ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有するか、又は有すると同定された後に開始される、ＣＡＲ療法。
【請求項７】
癌を有する対象を治療する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を前記対象に投与することを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記対象が以下：
（ａ）前記ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）前記ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）前記ＣＡＲ療法に不応性の癌、又は
（ｄ）前記ＣＡＲ療法後の進行型の前記癌、又は
（ｅ）前記ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有するか、又は有すると同定された後に開始される、方法。
【請求項８】
ＰＤ−１阻害薬との併用での使用のための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法の投与後に開始され、及び前記対象は、以下：
（ａ）前記ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）前記ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）前記ＣＡＲ療法に不応性の癌、
（ｄ）進行型の前記癌、又は
（ｅ）前記ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有しないか、又は有すると同定されていない、ＣＡＲ療法。
【請求項９】
癌を有する対象を治療する方法であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、前記ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を前記対象に投与することを含み、前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法の投与後に開始され、及び前記対象は、以下：
（ａ）ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）ＣＡＲ療法に不応性の癌、
（ｄ）進行型の前記癌、又は
（ｅ）ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有しないか、又は有すると同定されていない、方法。
【請求項１０】
１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量の前記ＰＤ−１阻害薬を投与することを更に含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１１】
最大６用量の前記ＰＤ−１阻害薬は、投与される、請求項１０に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１２】
前記方法は、前記対象におけるＣＲＳの存在又は非存在を評価することを更に含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１３】
前記対象は、前記ＣＡＲ療法後にＣＲＳ、例えば重症ＣＲＳ（例えば、ＣＲＳグレード３又はグレード４）を有しないか、又は有しないと同定される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１４】
前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記対象が前記ＣＡＲ療法後にＣＲＳ、例えば重症ＣＲＳ（例えば、ＣＲＳグレード３又はグレード４）を有しないと同定された後に開始される、請求項１２又は１３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１５】
前記ＰＤ−１阻害薬の投与は、前記ＣＡＲ療法後のＣＲＳの治療後、例えばＣＲＳ消散後に開始される、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１６】
前記ＣＡＲ療法及び前記ＰＤ−１阻害薬は、治療インターバルにわたって投与され、前記治療インターバルは、単回用量の前記ＰＤ−１阻害薬及び単回用量の前記ＣＡＲ発現細胞を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１７】
前記治療インターバルは、前記ＣＡＲ療法の前記用量の投与で開始され、且つ前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量の投与で完了される、請求項１６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１８】
前記治療インターバルは、１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量の前記ＰＤ−１阻害薬を投与することを更に含む、請求項１６又は１７に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１９】
最大６用量の前記ＰＤ−１阻害薬は、前記治療インターバル中に投与される、請求項１８に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２０】
前記ＣＡＲ療法の前記用量は、ＰＤ−１阻害薬の前記用量が投与される少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも１６日、少なくとも１７日、少なくとも１８日、少なくとも１９日、又は少なくとも２０日前に投与される、請求項１若しくは２又は６〜１９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２１】
前記ＣＡＲ療法の前記用量は、前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量が投与される２５〜４０日前（例えば、約２５〜３０、３０〜３５、又は３５〜４０日、例えば約３５日前）に投与される、請求項２０に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２２】
前記ＣＡＲ療法及び前記ＰＤ−１阻害薬は、治療インターバルにわたって投与され、前記治療インターバルは、第１及び第２の用量の前記ＰＤ−１阻害薬と、ある用量の前記ＣＡＲ療法とを含み、前記ＣＡＲ療法の前記用量は、前記ＰＤ−１阻害薬の前記第１の用量の投与後であるが、前記ＰＤ−１阻害薬の前記第２の用量の投与前に投与される、請求項１若しくは２又は１２〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２３】
前記治療インターバルは、前記ＰＤ−１阻害薬の前記第１の用量の投与で開始され、且つ前記ＰＤ−１阻害薬の前記第２の用量の投与で完了される、請求項２２に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２４】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記第２の用量は、前記ＰＤ−１阻害薬の前記第１の用量の投与の少なくとも５日、７日、１週間、２週間、又は３週間後に投与される、請求項２２又は２３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２５】
前記ＣＡＲ療法の前記用量は、前記ＰＤ−１阻害薬の前記第１の用量の投与の少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間後に投与される、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２６】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記第２の用量は、前記ＣＡＲ療法の前記用量の投与の少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間後に投与される、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２７】
前記治療インターバルは、例えば、１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の更なる回数だけ繰り返される、請求項１６〜２６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２８】
前記治療インターバル後、１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の後続の治療インターバルが続く、請求項１６〜２７のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項２９】
前記１回以上の後続の治療インターバルは、初回又は前回の治療インターバルと異なる、請求項２８に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３０】
前記１回以上の後続の治療インターバルは、前記初回又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日後、例えば少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも２週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも６ヵ月、又は少なくとも１年後に投与される、請求項２８又は２９に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３１】
１用量以上の後続用量、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える前記ＰＤ−１阻害薬は、１回以上の治療インターバルの完了後に投与される、請求項１６〜３０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３２】
ある用量の前記ＰＤ−１阻害薬は、１回以上の治療インターバルの完了後、５日、６日、７日、１０日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３３】
前記治療インターバルは、前記ＰＤ〜１阻害薬の前記用量が投与される２〜２０日、５〜１７日、７〜１６日、８〜１６日、１０〜１５日、１４〜２１日、又は２〜３週間前に投与されるある用量のＣＡＲ療法を含み、前記治療インターバルは、０〜５２回だけ繰り返され、前記治療インターバルは、前記前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも２週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも６ヵ月、又は少なくとも１年後に開始される、請求項１６〜３２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３４】
１用量以上の後続用量の前記ＰＤ−１阻害薬は、２回目の治療インターバル後、５日、７日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される、請求項３３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３５】
前記対象は、単回用量のＣＡＲ発現細胞及び単回用量のＰＤ−１阻害薬を投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３６】
前記ＣＡＲ発現細胞の前記単回用量は、前記ＰＤ−１阻害薬の前記単回用量の投与の少なくとも２日前、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０日前に投与される、請求項３５に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３７】
前記ＣＡＲ療法は、ＲＮＡ  ＣＡＲ分子、例えばインビトロ転写（ＩＶＴ）ＲＮＡを含み、１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量の後続用量のＣＡＲ療法は、前記ＣＡＲ療法の初回用量後に前記対象に投与される、請求項３５又は３６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３８】
前記ＣＡＲ発現細胞の前記１用量以上の後続用量は、前記ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも２日後、例えば２、３、４、５、６、７日、２週間、又は３週間後に投与される、請求項３７に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項３９】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記単回用量の投与後に１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量のＰＤ−１阻害薬は、投与される、請求項２７〜３８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４０】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記１用量以上の後続用量は、ＰＤ−１阻害薬の前記前回用量の少なくとも５日、７日、２週間、３週間、又は４週間後に投与される、請求項３９に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４１】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記１用量以上の後続用量は、前記ＣＡＲ療法の用量、例えば前記ＣＡＲ療法の前記初回用量の少なくとも１、２、３、４、５、６若しくは７日後又は２週間若しくは３週間後に投与される、請求項３９又は４０に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４２】
前記ＣＡＲ発現細胞の前記１用量以上及びＰＤ−１阻害薬の前記１用量以上の投与は、繰り返される、請求項２７〜４１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４３】
前記ＣＡＲ療法は、約１０４〜約１０９細胞／ｋｇ、例えば約１０４〜約１０５細胞／ｋｇ、約１０５〜約１０６細胞／ｋｇ、約１０６〜約１０７細胞／ｋｇ、約１０７〜約１０８細胞／ｋｇ、約１０８〜約１０９細胞／ｋｇ、又は約１〜５×１０７細胞／ｋｇ〜約１〜５×１０８細胞／ｋｇを含むＣＡＲ発現細胞の用量を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４４】
ＣＡＲ発現細胞の前記用量は、約１〜５×１０７細胞／ｋｇである、請求項４３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４５】
ＣＡＲ発現細胞の前記用量は、約１〜５×１０８細胞／ｋｇである、請求項４３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４６】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量は、１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１〜２５ｍｇ／ｋｇ、約２〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２〜５ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ若しくは約５ｍｇ／ｋｇである、請求項３〜４５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４７】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量は、例えば、２週間、３週間、４週間、又は５週間毎に投与される約１〜２０ｍｇ／ｋｇ又は約２〜５ｍｇ／ｋｇである、請求項４６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４８】
前記ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の前記用量は、例えば、２週間、３週間、４週間、又は５週間毎に投与される約２００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、例えば約２００ｍｇ〜約４００ｍｇである、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項４９】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量は、例えば、３週間毎に例えば静脈内注入によって投与される約２００ｍｇ又は約３００ｍｇである、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５０】
前記ＰＤ−１阻害薬の前記用量は、例えば、４週間毎に例えば静脈内注入によって投与される約４００ｍｇである、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５１】
前記ＰＤ−１阻害薬は、ＰＤ−１抗体分子であり、且つ約３００ｍｇの用量で２週間、３週間、又は４週間毎に投与され、及び前記ＣＡＲ療法は、１〜５×１０８細胞の用量で投与される、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５２】
前記ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡを含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５３】
前記ＰＤ−１阻害薬は、以下：
ａ．ＰＤ−１発現、例えばＰＤ−１の転写又は翻訳を阻害するか又は低下させること、
ｂ．ＰＤ−１活性を阻害するか又は低下させる、例えばＰＤ−１のそのコグネイトリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２への結合を阻害するか又は低下させること、又は
ｃ．ＰＤ−１又はそのリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に結合すること
の１つ以上によって特徴付けられる、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５４】
前記ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５５】
前記ＰＤ−１阻害薬は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＰＤＲ００１、ピジリズマブ、ＡＭＰ  ５１４、ＡＭＰ−２２４、及び表６に提供される任意の抗ＰＤ−１抗体分子からなる群から選択される、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５６】
前記ＰＤ−１阻害薬は、
ａ．表６に挙げられる任意のＰＤ−１抗体分子アミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び
ｂ．表６に挙げられる任意のＰＤ−１抗体分子アミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）
を含む抗ＰＤ−１抗体分子を含む、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５７】
前記その抗ＰＤ−１抗体分子は、
ａ）配列番号１３７又は１４０から選択されるＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８又は１４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び
ｂ）配列番号１４６又は１４９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７又は１５０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１４８、１５１、１６６、又は１６７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、配列番号１６６又は１６７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列）
を含む、請求項５６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５８】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）表６に挙げられる任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０、
ｉｉ）表６に提供される任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｉｉｉ）表６に提供される任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む重鎖可変領域を含む、請求項５６又は５７に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項５９】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）表６に挙げられる任意の重鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６、
ｉｉ）表６に挙げられる任意の重鎖、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｉｉｉ）表６に挙げられる任意の重鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む重鎖を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６０】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）表６に挙げられる任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２、
ｉｉ）表６に提供される任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｉｉｉ）表６に提供される任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６１】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）表６に挙げられる任意の軽鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４、
ｉｉ）表６に挙げられる任意の軽鎖、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｉｉｉ）表６に挙げられる任意の軽鎖に対するアミノ酸配列、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む軽鎖を含む、請求項５６〜６０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６２】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｉ）配列番号１４２又は１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｉｉ）配列番号１５４又は１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｖ）配列番号１５４又は１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｘ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｖ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉｉｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｘ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、又は
ｘｘｉｖ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項５６〜６１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６３】
前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｉ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｉｉ）配列番号１５６又は１６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｖ）配列番号１５６又は１６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉｉｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｘ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｉｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｖ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉｉｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｘ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉｉｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｘｘｉｖ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項５６〜６２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６４】
前記ＰＤ−１阻害薬は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む抗ＰＤ−１抗体分子を含む、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６５】
前記抗ＰＤ１抗体分子は、
（ｉ）配列番号５０３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、及び
（ｉｉ）配列番号５００のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、又は
少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列
を含む、請求項６４に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６６】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、表２又は表３に挙げられる任意のＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに表２又は表３に挙げられる任意のＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６７】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、表４のＨＣ  ＣＤＲアミノ酸配列に係るＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３、並びに表５のＬＣ  ＣＤＲアミノ酸配列に係るＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項６６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６８】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、
ａ．表２又は表３に挙げられるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、
ｂ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｃ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項６９】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、
ａ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖のアミノ酸配列、
ｂ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｃ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の重鎖に対するアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７０】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、
ａ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、
ｂ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｃ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１〜６９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７１】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、
ａ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖のアミノ酸配列、
ｂ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｃ．表２又は表３に提供されるＣＤ１９結合ドメインの任意の軽鎖に対するアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１〜７０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７２】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、表２又は表３に挙げられる任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、表２又は表３に挙げられる任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む、請求項１〜７１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７３】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、
ａ．配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５からなる群から選択されるアミノ酸配列、
ｂ．配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５のいずれかに対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
ｃ．配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５のいずれかに対するアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７４】
前記膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質からの膜貫通ドメインを含む、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７５】
前記膜貫通ドメインは、
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を含むアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列
を含む、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７６】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、ヒンジ領域によって前記膜貫通ドメインに結合される、請求項１〜７５のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７７】
前記ヒンジ領域は、配列番号２又はそれと少なくとも９５％同一である、例えば９５〜９９％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜７６のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７８】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質から得られる機能性シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜７７のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項７９】
共刺激ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８１】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列、或いは配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、或いは配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８２】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び配列番号９又は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインを含むアミノ酸配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８３】
前記ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列を更に含む、請求項１〜８２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８４】
前記ＣＡＲは、
（ｉ）配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかのアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかに対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかと少なくとも９５同一のアミノ酸配列
を含む、請求項１〜８３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８５】
ＣＡＲを含む前記細胞は、前記ＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項１〜８４のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８６】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルスベクターである、請求項８５に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８７】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルス形質導入によって前記細胞に導入される、請求項８５又は８６に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８８】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡである、請求項８５〜８７のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項８９】
前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、電気穿孔によって前記細胞に導入される、請求項８８に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９０】
前記細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、請求項１〜８９のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９１】
前記Ｔ細胞は、自己又は同種異系Ｔ細胞である、請求項９０に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９２】
追加の抗癌剤を投与することを更に含む、請求項１〜９１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９３】
前記癌は、血液癌である、請求項１〜９２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９４】
前記癌は、リンパ腫又は白血病である、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９５】
前記癌は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つ以上から選択される、請求項９３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９６】
前記癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、例えば小児Ｂ−ＡＬＬ、又はＢ細胞リンパ腫、例えば小児Ｂ細胞リンパ腫である、請求項９３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９７】
前記癌は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、例えば再発性又は不応性ＤＬＢＣＬである、請求項９３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９８】
前記対象は、哺乳類、例えばヒトである、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項９９】
前記対象は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及び／又はＰＤ−Ｌ２を発現する、請求項１〜９８のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１００】
前記対象における癌細胞又は癌細胞に近接した細胞は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及び／又はＰＤ−Ｌ２を発現する、請求項９９に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０１】
前記癌細胞は、ＤＬＢＣＬ試料からのもの、例えば再発性又は不応性ＤＬＢＣＬ試料からのものである、請求項９９又は１００に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０２】
ＣＡＲを発現する前記細胞は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及び／又はＰＤ−Ｌ２を発現する、請求項１〜１０１のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０３】
前記対象は、基準値、例えば前記ＣＡＲ療法に対する完全奏効者と比較してより多数又はより高い割合の、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、又はＴＩＭ−３の１、２、３つ、又は全てを発現する免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞を有するか、又は有すると同定される、請求項１〜１０２のいずれか一項に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０４】
前記対象は、多数の、ＰＤ−１を発現する免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞、ＰＤ−１及びＬＡＧ−３を発現する免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞、ＰＤ−１及びＴＩＭ−３を発現する免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＬＡＧ−３を発現する免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞を有するか、又は有すると同定される、請求項１０３に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０５】
前記免疫エフェクター細胞、例えばＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲを共発現する、請求項１０３又は１０４に記載の使用のためのＣＡＲ療法又は方法。
【請求項１０６】
対象の癌の治療における使用のための、
ＣＡＲを含む細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、前記ＣＡＲは、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、細胞、及び
ペンブロリズマブ、ニボルマブ、又は例えば配列番号２０４及び配列番号１７２の可変軽鎖及び可変重鎖アミノ酸配列を含む、表６からの抗体分子のいずれかから選択されるＰＤ−１阻害薬
を含む併用。
【請求項１０７】
ＣＡＲを含む細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団であって、前記ＣＡＲは、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、細胞、及び
例えば、配列番号２０４及び配列番号１７２の可変軽鎖及び可変重鎖アミノ酸配列を含む、表６から選択されるＰＤ−１阻害薬
を含む組成物（例えば、１つ以上の組成物又は剤形）。
【請求項１０８】
前記ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０９のアミノ酸配列であるか、又は前記ＣＡＲは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１０７のいずれか一項に記載の方法、併用、又は組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１６年７月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／３６８１００号明細書、２０１７年２月６日に出願された米国特許出願第６２／４５５，５４７号明細書、２０１７年４月７日に出願された米国仮特許出願第６２／４８２８４６号明細書、及び２０１７年６月２日に出願された米国仮特許出願第６２／５１４５４２号明細書に対する優先権を主張し、これらの全ての内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、全体として参照により本明細書に援用される。２０１７年７月２７日に作成された前記ＡＳＣＩＩ複製物は、Ｎ２０６７−７１０９ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが９０７，５８２バイトである。
【０００３】
本発明は、概して、疾患を治療するためのＰＤ−１阻害薬との併用での、抗原、例えばＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された細胞、例えば免疫エフェクター細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
多くのＢ細胞悪性腫瘍患者は、標準療法では不治である。加えて、従来の治療選択肢は、多くの場合に重篤な副作用を有する。癌免疫療法において試みがなされているものの、幾つかの障害により、これは、臨床効果の実現が極めて困難な目標となっている。何百ものいわゆる腫瘍抗原が同定されているが、それらは、概して自己由来であり、従って免疫原性が低い。更に、腫瘍は、幾つかの機構を用いて自らを免疫攻撃の惹起及び伝播に不適にする。
【０００５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変自己Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）療法を用いた最近の展開は、Ｔ細胞をＢ細胞悪性腫瘍などの癌細胞上の好適な細胞表面分子に仕向け直すことに依存するものであり、免疫系の力を利用したＢ細胞悪性腫瘍及び他の癌の治療において有望な結果を示している（例えば、非特許文献１を参照されたい）。マウス由来ＣＡＲＴ１９（即ち「ＣＴＬ０１９」）の臨床結果は、ＣＬＬ並びに小児ＡＬＬに罹患している患者において完全寛解が得られる見込みを示している（例えば、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４を参照されたい）。遺伝子改変Ｔ細胞上のキメラ抗原受容体が標的細胞を認識して破壊する能力に加えて、治療的Ｔ細胞療法の成功には、白血病再発を監視するため、増殖して長期間持続する能力を有することが必要である。アネルギー、抑制、又は枯渇に起因したＴ細胞品質のばらつきがＣＡＲ形質転換Ｔ細胞の性能に影響を及ぼし得るが、これに関して現時点で当業者の制御は限られている。有効であるために、ＣＡＲ形質転換患者Ｔ細胞が持続し、且つコグネイト抗原に応答して増殖する能力を維持する必要がある。ＡＬＬ患者Ｔ細胞は、マウスｓｃＦｖを含むＣＡＲＴ１９でこれを行い得ることが示されている（例えば、非特許文献５を参照されたい）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ３：３８８−３９８（２０１３）
【非特許文献２】Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ３：９５ｒａ７３（２０１１）
【非特許文献３】Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ３６５：７２５−７３３（２０１１）
【非特許文献４】Ｇｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ３６８：１５０９−１５１８（２０１３）
【非特許文献５】Ｇｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ３６８：１５０９−１５１８（２０１３）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、少なくとも一部には、抗原、例えば本明細書に記載される抗原、例えばＣＤ１９に特異的に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞（本明細書では「ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞」とも称される）（本明細書では「ＣＡＲ療法」とも称される）と、プログラム死１の阻害薬（本明細書では「ＰＤ−１阻害薬」とも称される）とを含む併用療法を用いることにより、対象の疾患（例えば、癌）、例えば抗原に関連する疾患、例えばＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば癌を治療するための方法及び組成物を特徴とする。一部の実施形態において、抗原、例えばＣＤ１９に特異的に結合するＣＡＲは、例えば、本明細書に記載されるとおりの抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１９結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、ポリペプチド、小分子、又はポリヌクレオチド、例えば阻害核酸である。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、例えば本明細書に記載される抗体分子である。理論によって拘束されることを望むものではないが、疾患（例えば、癌）、例えばＣＤ１９発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載される癌を有する対象を、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とＰＤ−１阻害薬とを含む併用療法で治療すると、例えば、疾患を有する対象をＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）又はＰＤ−１阻害薬のいずれか単独で治療するのと比較して、対象における腫瘍進行の阻害又は低減の向上がもたらされると考えられる。例えば、ＣＡＲ療法との併用でのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害は、（ｉ）ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の活性化（又は再活性化）、（ｉｉ）ＣＡＲ発現細胞の集団の拡大、（ｉｉｉ）ＣＡＲ療法に対する長期間の治療応答、（ｉｖ）ＣＡＲ療法の持続性の増加、（ｖ）枯渇エフェクターＴ細胞機能の低減、（ｖｉ）Ｔ細胞枯渇の逆転又は軽減、（ｖｉｉ）サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、又はＩＬ−２）レベルの増加、又は（ｖｉｉｉ）免疫エフェクター細胞上（例えば、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋細胞、例えばＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞上）のチェックポイント阻害薬（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、又はＬＡＧ−３の１つ以上）の発現低下の１つ以上をもたらすことができ、従って、例えばＣＡＲ療法単独又はＰＤ−１阻害薬単独を受ける対象と比較して、併用療法で治療される対象において治療結果の向上がもたらされ得る。
【０００８】
従って、一態様において、本開示は、疾患（例えば、癌）、例えば抗原に関連する疾患、例えばＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載されるとおりの癌を有する対象を治療する方法を特徴とする。本方法は、抗原、例えばＣＤ１９に特異的に結合するＣＡＲを含む、例えば発現する細胞、例えば細胞の集団（本明細書ではＣＡＲ療法とも称される）と、ＰＤ−１阻害薬とを対象に投与することを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害薬とは、逐次的に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の投与前に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の投与後に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬とＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とは、同時に又は並行して投与される。
【０００９】
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害薬とは、逐次的に、例えば任意の順序で投与される。一実施形態において、併用は、治療インターバル中に投与される。一実施形態において、治療インターバルは、単回用量のＰＤ−１阻害薬及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を（例えば、任意の順序で）含む。別の実施形態において、治療インターバルは、複数回用量（例えば、第１及び第２の用量）のＰＤ−１阻害薬と、ある用量のＣＡＲ発現細胞とを（例えば、任意の順序で）含む。
【００１０】
関連する態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、
（ｉ）ＣＡＲを含む、例えば発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を対象に投与することを含む。
【００１１】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の用量は、例えば、２週間、３週間、４週間、又は５週間毎に投与される約２００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、例えば約３００ｍｇ〜約４００ｍｇである。
【００１２】
別の態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、
（ｉ）ＣＡＲを含む、例えば発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を対象に投与することを含む。
【００１３】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、ＣＡＲ療法の投与後２０日以内に開始される。例えば、ＰＤ−１阻害薬の投与は、ＣＡＲ療法の投与後１６日以内、１５日以内、１４日以内、１３日以内、１２日以内、１１日以内、１０日以内、９日以内、８日以内、７日以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内に開始される。
【００１４】
別の態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、
（ｉ）ＣＡＲを含む、例えば発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を対象に投与することを含む。
【００１５】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、対象が以下：
（ａ）ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）ＣＡＲ療法に不応性の癌、
（ｄ）ＣＡＲ療法後の進行型の癌、又は
（ｅ）ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有するか、又は有すると同定された後に開始される。
【００１６】
更に別の態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、例えば発現する免疫エフェクター細胞の集団を含むＣＡＲ療法であって、ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１９）結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、ＣＡＲ療法、及び
（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬
を対象に投与することを含む。
【００１７】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、ＣＡＲ療法の投与後に開始され、及び対象は、以下：
（ａ）ＣＡＲ療法に対する部分奏効又は検出可能な奏効なし、
（ｂ）ＣＡＲ療法後の再発癌、
（ｃ）ＣＡＲ療法に不応性の癌、
（ｄ）進行型の癌、又は
（ｅ）ＣＡＲ療法後、例えば３ヵ月未満のＢ細胞回復
の１つ以上を有しないか、又は有すると同定されていない。
【００１８】
別の態様において、本開示は、本明細書に開示される方法のいずれかにおいてＰＤ−１阻害薬との併用で使用するためのＣＡＲ療法を提供する。他の実施形態において、本明細書には、障害、例えば増殖性障害、例えば癌の治療用薬剤の調製におけるＰＤ−１阻害薬と併用したＣＡＲ療法の使用が開示される。
【００１９】
本明細書に開示される任意の方法、使用、組成物又は併用の更なる特徴又は実施形態は、以下の１つ以上を含む。
【００２０】
一部の実施形態において、１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量のＰＤ−１阻害薬が投与され得る。一実施形態において、最大６用量のＰＤ−１阻害薬が投与される。
【００２１】
一部の実施形態において、本方法又は使用は、対象におけるＣＲＳの存在又は非存在を評価することを更に含む。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ療法後にＣＲＳ、例えば重症ＣＲＳ（例えば、ＣＲＳグレード３又はグレード４）を有しないか、又は有しないと同定される。
【００２２】
他の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、対象がＣＡＲ療法後にＣＲＳ、例えば重症ＣＲＳ（例えば、ＣＲＳグレード３又はグレード４）を有しないと同定された後に開始される。
【００２３】
他の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、ＣＡＲ療法後のＣＲＳの治療後、例えばＣＲＳ消散後に開始される。一実施形態において、ＣＲＳは、グレード１まで消散する。ある実施形態において、ＣＲＳは、検出不能なレベルまで消散する。
【００２４】
治療インターバルが単回用量のＰＤ−１阻害薬及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を含む場合、特定の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、同時に又は並行して投与される。例えば、ＰＤ−１阻害薬の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、互いから２０日、１８日、１６日、１５日、１２日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間以内に、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、治療インターバルは、初回投与用量の投与で開始され、且つ最終回投与用量の投与で完了される。
【００２５】
治療インターバルが単回用量のＰＤ−１阻害薬及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を含む場合、特定の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、逐次的に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の用量前に投与され、及び治療インターバルは、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与で開始され、且つＰＤ−１阻害薬の用量の投与で完了される。他の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量前に投与され、及び治療インターバルは、ＰＤ−１阻害薬の用量の投与で開始され、且つＣＡＲ発現細胞の用量の投与で完了される。一実施形態において、治療インターバルは、１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量のＰＤ−１阻害薬を更に含む。かかる実施形態において、治療インターバルは、２、３、４、５、６用量又はそれを超えるＰＤ−１阻害薬及び１用量のＣＡＲ発現細胞を含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の用量が投与される少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、又は少なくとも２週間前又は後に投与される。２用量以上のＰＤ−１阻害薬が投与される実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量が投与される少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、又は少なくとも２週間前若しくは後、又は治療インターバルの開始後に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量が投与されてから約２５〜４０日後（例えば、約２５〜３０、３０〜３５、又は３５〜４０日、例えば約３５日後）又は約２〜７週間後（例えば、２、３、４、５、６、又は７週間後）に投与される。実施形態において、２用量以上のＰＤ−１阻害薬が投与される場合、第２のＰＤ−１阻害薬用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量が投与されてから約１５〜３０日後（例えば、約１５〜２０、２０〜２５、又は２５〜３０日、例えば約２０日後）又は約２〜５週間後（例えば、２、３、４、又は５週間後）に投与される。
【００２６】
治療インターバルが複数回用量（例えば、第１及び第２の並びに任意選択で１用量以上の後続用量）のＰＤ−１阻害薬と、ある用量のＣＡＲ発現細胞とを含む場合、特定の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量とＰＤ−１阻害薬の第１の用量とは、同時に又は並行して、例えば互いから２日以内に（例えば、２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間以内に、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、（ｉ）ＣＡＲ発現細胞の用量又は（ｉｉ）ＰＤ−１阻害薬の第１の用量のいずれか遅い方の後に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、（ｉ）又は（ｉｉ）の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量後に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量は、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、ＰＤ−１阻害薬の第１の投与用量の投与で開始され、且つ第２の用量（又は後続用量）の投与で完了される。
【００２７】
治療インターバルが複数回用量（例えば、第１及び第２の並びに任意選択で後続用量）のＰＤ−１阻害薬と、ある用量のＣＡＲ発現細胞とを含む他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量とＰＤ−１阻害薬の第１の用量とは、逐次的に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与後であるが、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量の投与前に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量後に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与で開始され、且つＰＤ−１阻害薬の第２の用量（又は後続用量）の投与で完了される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。ある実施形態において、ＰＤ−１阻害薬が阻害性ＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡである場合、第２の用量は、２日毎〜２週間毎に投与される。ある実施形態において、ＰＤ−１阻害薬が抗体分子である場合、第２の用量は、２〜３週間毎に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子）は、治療インターバル中に２〜３週間毎（例えば、２週間毎又は３週間毎）に投与される。
【００２８】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与前に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、ＣＡＲ発現細胞の投与で開始され、且つＰＤ−１阻害薬の第１の用量（又は後続用量）の投与で完了される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量は、ＣＡＲ発現細胞の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも２週間、少なくとも１５日、少なくとも１６日、少なくとも１７日、少なくとも１８日、少なくとも１９日、少なくとも２０日、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間又はそれを超えて後）に投与される。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与は、ＣＡＲ発現細胞の投与の約５〜約１０日後、例えば約８日後に行われる。他の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与は、ＣＡＲ発現細胞の投与の約１０〜約２０日後、例えば約１５又は１６日後に行われる。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、２週間、少なくとも１５日、少なくとも１６日、少なくとも１７日、少なくとも１８日、少なくとも１９日、少なくとも２０日、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の約２〜４週間後、例えば３週間後に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、ＰＤ−１阻害薬の前回用量の約２〜４週間後、例えば３週間後に投与される。実施形態において、ＰＤ１阻害薬の第１の用量は、ＣＡＲ発現細胞の投与の少なくとも２日後（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週、２週間、３週間、４週間、５週間又はそれを超えて後）に投与される。
【００２９】
一部の実施形態において、治療インターバルは、１、２、又は３用量（例えば、第１及び第２の、及び第３の用量）のＰＤ−１阻害薬と、ある用量のＣＡＲ発現細胞とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量とＰＤ−１阻害薬の第１の用量とは、逐次的に投与される。例えば、対象、例えば患者は、ＰＤ−１阻害薬の１、２、又は３用量をＣＡＲ発現細胞の投与後、例えばＣＡＲ発現細胞の用量の投与の約１週間〜４ヵ月、例えば約１４日〜２ヵ月後に開始して投与される。
【００３０】
一実施形態において、本明細書に記載される治療インターバルのいずれも、１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の更なる回数だけ繰り返され得る。一実施形態において、治療インターバルは、１回だけ繰り返され、結果として２回の治療インターバルを含む治療レジメンとなる。ある実施形態において、繰り返しの治療インターバルは、初回又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日後、例えば少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも２週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも６ヵ月、少なくとも１年又はそれを超えて後に投与される。ある実施形態において、繰り返しの治療インターバルは、初回又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも３日後に投与される。
【００３１】
一実施形態において、本明細書に記載される治療インターバルのいずれも、その後に１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の後続の治療インターバルが続くことができる。１回以上の後続の治療インターバルは、初回又は前回の治療インターバルと異なる。例として、単回用量のＰＤ−１阻害薬と単回用量のＣＡＲ発現細胞とからなる第１の治療インターバル後、複数回用量（例えば、２、３、４用量又はそれを超える）のＰＤ−１阻害薬と単回用量のＣＡＲ発現細胞とからなる第２の治療インターバルが続く。一実施形態において、１回以上の後続の治療インターバルは、初回又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日後、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間後に投与される。
【００３２】
本明細書に記載される任意の方法において、１回以上の治療インターバルの完了後、１用量以上の後続用量、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超えるＰＤ−１阻害薬が投与される。治療インターバルが繰り返されるか又は２回以上の治療インターバルが投与される実施形態において、１回の治療インターバルの完了後且つ別の治療インターバルの開始前に１用量以上の後続用量、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超えるＰＤ−１阻害薬が投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の用量は、１回以上の又は各々の治療インターバルの完了後、５日、７日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される。
【００３３】
本明細書に記載される任意の方法において、１回以上の治療インターバルの完了後、１用量以上、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超える後続用量のＣＡＲ発現細胞が投与される。治療インターバルが繰り返されるか又は２回以上の治療インターバルが投与される実施形態において、１用量以上の後続用量、例えば１、２、３、４若しくは５用量又はそれを超えるＣＡＲ発現細胞は、１回の治療インターバルの完了後且つ別の治療インターバルの開始前に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、１回以上の又は各々の治療インターバルの完了後、２日、３日、４日、５日、７日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される。
【００３４】
一実施形態において、治療インターバルは、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量前に投与される単回用量のＣＡＲ発現細胞を含む。この実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量は、ＣＡＲ発現細胞の投与の約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２５、約３０、又は約３５日後に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与後に第２の用量のＰＤ−１阻害薬が投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の投与の約２０日後、例えばＰＤ−１阻害薬の第１の用量の約２〜４週間後、例えば３週間後に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の第２の用量後、例えばＰＤ−１阻害薬の前回の用量後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、５日、７日、１０日、１４日、２０日、２５日、３０日、又は３５日毎、例えば約２〜４週間毎、例えば３週間毎にＰＤ−１阻害薬の後続用量が投与される。
【００３５】
ある実施形態において、本方法は、例えば、ＣＡＲ発現細胞の投与前に対象にリンパ球枯渇化学療法を投与することを含む。実施形態において、リンパ球枯渇化学療法は、例えば、１〜１０用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０用量）にわたる、例えば約２００〜４００ｍｇ／ｍ２、例えば約３００ｍｇ／ｍ２の用量のシクロホスファミド、例えば多分割シクロホスファミドを含む。実施形態において、本方法は、ある用量のＣＡＲ発現細胞と複数回用量のＰＤ−１阻害薬とを含む治療インターバルを投与することを含む。実施形態において、治療インターバルは、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量前、例えばＰＤ−１阻害薬の第１の用量の少なくとも２週間（例えば、２、３、４、５、６週間又はそれを超えて）前（例えば、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６日又はそれを超えて前）に投与される単回用量のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を含む。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、ＰＤ−１阻害薬の第１の用量の約３〜４週間前に投与される。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、治療インターバル中に２〜４週間毎（例えば、２〜３週間又は３〜４週間毎、例えば３週間毎）に投与される）。実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、約１〜３ｍｇ／ｋｇ、例えば約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、約１〜１０×１０６細胞／ｋｇ、例えば約５×１０６細胞／ｋｇ、例えば約５．３×１０６細胞／ｋｇの用量で投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、輸注１回当たり約１〜１０×１０８細胞、例えば輸注１回当たり約５×１０８細胞の用量で投与される。
【００３６】
本明細書に記載される任意の方法において、対象は、単回用量のＣＡＲ発現細胞及び単回用量のＰＤ−１阻害薬を投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の単回用量は、ＰＤ−１阻害薬の単回用量の投与の少なくとも２日前、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２５、３０、３５、４０日若しくは２週間、３週間、４週間又はそれを超えて前に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の単回用量は、ＰＤ−１阻害薬の投与の約３５日前に投与される。
【００３７】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の初回用量後に１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量の後続用量のＣＡＲ発現細胞が対象に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも２日後、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、２０、２５、３０、３５、４０日若しくは２週間、３週間、４週間又はそれを超えて後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも１ヵ月後、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０ヵ月又はそれを超えて後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも５日後に投与される。一実施形態において、対象は、週に３用量のＣＡＲ発現細胞又は２日毎に１用量を投与される。
【００３８】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の単回用量の投与後に１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量の後続用量のＰＤ−１阻害薬が投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の１用量以上の後続用量は、ＰＤ−１阻害薬の前回用量の少なくとも５日、７日、１０日、１４日、２０日、２５日、３０日、２週間、３週間、４週間、又は５週間後、例えば３週間後に投与される。
【００３９】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量、例えばＣＡＲ発現細胞の初回用量の少なくとも１、２、３、４、５、６、又は７日後に投与される。
【００４０】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量前に１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量のＰＤ−１阻害薬が投与される。
【００４１】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量後、例えばＣＡＲ発現細胞の第１の用量の２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、又は８週間後に、１用量以上、例えば１、２、３、４、５、又は６用量のＰＤ−１阻害薬が投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量は、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量後、例えばＣＡＲ発現細胞の第１の用量の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０ヵ月後に投与される。
【００４２】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量後に投与される１用量以上、例えば１、２、３、４、５、又は６用量のＰＤ−１阻害薬は、少なくとも１ヵ月にわたり、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２ヵ月又はそれを超えて２〜３週間毎、例えば２、３、４、又は５週間毎に投与される。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の１用量以上は、ＰＤ−１阻害薬の前回の用量の例えば約２〜４週間後、例えば３週間後に例えば最大６用量にわたって投与される。
【００４３】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上及びＰＤ−１阻害薬の１用量以上の投与は、例えば、１、２、３、４、又は５回の更なる回数だけ繰り返される。
【００４４】
本明細書に記載される任意の方法では、実施形態において、対象は、化学療法、例えば本明細書に記載される化学療法を更に投与される。実施形態において、化学療法は、ＣＡＲ発現細胞の投与前に投与される。実施形態において、化学療法は、ＣＡＲ発現細胞の投与の約１〜１０日前（例えば、約１〜４、１〜５、４〜８、４〜１０、又は５〜１０日前）に投与される。
【００４５】
本明細書に開示される治療剤の投薬量及び治療レジメンは、当業者が決定することができる。
【００４６】
本明細書に記載される任意の投与レジメン又は治療インターバルでは、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約１０４〜約１０９細胞／ｋｇ、例えば約１０４〜約１０５細胞／ｋｇ、約１０５〜約１０６細胞／ｋｇ、約１０６〜約１０７細胞／ｋｇ、約１０７〜約１０８細胞／ｋｇ若しくは約１０８〜約１０９細胞／ｋｇ、又は１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９若しくは５×１０９細胞の少なくとも１つを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、少なくとも約１〜５×１０７〜１〜５×１０８個のＣＡＲ発現細胞を含む。一部の実施形態において、対象は、約１〜５×１０７個のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を投与される。他の実施形態において、対象は、約１〜５×１０８個のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を投与される。
【００４７】
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）は、用量分割、例えば部分用量の１、２、３回、又はそれを超える個別の投与によって対象に投与される細胞の総用量を含む投与レジメンに従って対象に投与される。実施形態において、治療１日目に総用量の第１の割合が投与され、後続の（例えば、２、３、４、５、６若しくは７日目又はそれ以降の）治療日に総用量の第２の割合が投与され、及び任意選択で、更に後続の（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０日目又はそれ以降の）治療日に総用量の第３の割合（例えば、残りの割合）が投与される。例えば、治療１日目に総用量の１０％の細胞が送達され、２日目に総用量の３０％の細胞が送達され、及び３日目に総用量の残り６０％の細胞が送達される。例えば、総細胞用量は、１〜５×１０７又は１〜５×１０８個のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を含む。
【００４８】
本明細書に記載される任意の投与レジメンにおいて、ＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、又は表６に提供される抗ＰＤ−１抗体分子）の用量は、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２〜１５ｍｇ／ｋｇ、約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、又は約１０ｍｇ／ｋｇを含む。一実施形態において、用量は、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇを含む。一実施形態において、用量は、約１〜５ｍｇ／ｋｇを含む。一実施形態において、用量は、５ｍｇ／ｋｇ未満、４ｍｇ／ｋｇ未満、３ｍｇ／ｋｇ未満、２ｍｇ／ｋｇ未満、又は１ｍｇ／ｋｇ未満である。一実施形態において、用量は、約２ｍｇ／ｋｇである。
【００４９】
実施形態において、本明細書に記載される任意の投与レジメンにおいて、ＰＤ−１阻害薬の用量は、１〜４週間毎、例えば毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に投与される。
【００５０】
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、又は表６に提供される抗ＰＤ−１抗体分子）は、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２〜１５ｍｇ／ｋｇ、約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇの用量で注射によって（例えば、皮下又は静脈内に）投与される。投薬スケジュールは、例えば、週１回から２、３、又は４週間に１回まで異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、隔週で約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一実施形態において、用量は、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に約１〜５ｍｇ／ｋｇである。一実施形態において、用量は、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に５ｍｇ／ｋｇ未満、４ｍｇ／ｋｇ未満、３ｍｇ／ｋｇ未満、２ｍｇ／ｋｇ未満、又は１ｍｇ／ｋｇ未満である。一実施形態において、用量は、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に約２ｍｇ／ｋｇである。
【００５１】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１又は表６に提供される抗ＰＤ−１抗体分子）の用量は、一定用量である。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、約３００ｍｇ若しくは約４００ｍｇの用量（例えば、一定用量）で注射によって（例えば、皮下又は静脈内に）投与される。投薬スケジュール（例えば、一定用量投与スケジュール）は、例えば、週１回から２、３、４、５、又は６週間に１回まで異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇからの用量で３週間に１回又は４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ用量で３週間に１回又は４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇからの用量で３週間に１回、例えばｉ．ｖ．注入によって投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇからの用量で３週間に１回、例えばｉ．ｖ．注入によって投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇからの用量で４週間に１回、例えばｉ．ｖ．注入によって投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇからの用量で４週間に１回、例えばｉ．ｖ．注入によって投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇからの用量で３週間に１回、例えばｉ．ｖ．注入によって投与される。
【００５２】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、２００ｍｇで３週間毎に最大６用量にわたって投与されるペンブロリズマブである。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、３００ｍｇで３週間毎に最大６用量にわたって投与されるペンブロリズマブである。
【００５３】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤＲ００１、ＡＭＰ  ５１４、ＡＭＰ−２２４、及び表６に提供される任意の抗ＰＤ−１抗体分子からなる群から選択される。
【００５４】
一部の実施形態において、本開示は、ＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば血液癌（例えば、ＤＬＢＣＬ（例えば、原発性ＤＬＢＣＬ）又はＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ））を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、ＣＤ１９に結合するＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９  ＣＡＲを発現する有効な数の細胞の集団（「ＣＤ１９  ＣＡＲ療法」）をＰＤ１阻害薬、例えば本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ１抗体と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、ＰＤ−１阻害薬の前に、それと同時に、又はその後に投与される。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、ＰＤ−１阻害薬の前に投与される。例えば、１用量以上のＰＤ−１阻害薬がＣＤ１９  ＣＡＲ療法後に（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法の５日〜４ヵ月後、例えば１０日〜３ヵ月後、例えば１４日〜２ヵ月後に開始して）投与され得る。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法とＰＤ−１阻害薬療法との併用は、繰り返される。
【００５５】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９  ＣＡＲを発現する細胞による１つ以上の治療を含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子は、例えば、本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ及びＰＤ−１阻害薬療法は、本明細書に記載される投薬量で投与される。
【００５６】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ（又はそれをコードする核酸）は、表２又は表３のいずれかに示される配列を含む。
【００５７】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、本明細書に記載されるマウスＣＡＲ分子、例えば表３の又は表４及び表５に示されるとおりのＣＤＲを有するマウスＣＤ１９  ＣＡＲ分子を発現する細胞による１つ以上の治療を含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、例えば、本明細書に記載されるとおりのＣＴＬ０１９である。
【００５８】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の別の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば表２に係る又は表４及び表５に示されるとおりのＣＤＲを有するヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば表２に係るＣＡＲ２、例えばＣＴＬ１１９を発現する細胞による１つ以上の治療を含む。
【００５９】
一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、表４及び表５のマウス又はヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲの重鎖可変領域からの１、２、及び／若しくは３つのＣＤＲ並びに／又は軽鎖可変領域からの１、２、及び／若しくは３つのＣＤＲを含む。
【００６０】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の別の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ＰＤ−１に対する抗体である。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１（例えば、表６の抗体分子）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＡＭＰ−２２４、ＲＥＧＮ−２８１０、又はＢＧＢ−Ａ３１７から選択される。
【００６１】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ペンブロリズマブである。一実施形態において、抗体分子は、
（ｉ）配列番号５０３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、及び
（ｉｉ）配列番号５００のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、又は
少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一の高いアミノ酸配列
を含む。
【００６２】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の別の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に記載されるとおりの、又は表１のヌクレオチド配列によってコードされる、又は本明細書の表６のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５、又は６つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は近縁のＣＤＲ、例えば同一であるか、若しくは少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、若しくは４つ以下の変化（例えば、置換、欠失若しくは挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
【００６３】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の更に別の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に記載されるとおりの、又は表１のヌクレオチド配列によってコードされる、又は本明細書の表６のヌクレオチド配列によってコードされる少なくとも１、２、３、又は４つの可変領域、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【００６４】
実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤＲ−００１であり、これは、表６に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの可変軽鎖及び可変重鎖アミノ酸配列を含む。
【００６５】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えばペンブロリズマブは、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法後に（例えば、ＣＴＬ０１９後又はＣＴＬ１１９療法後、又はＣＴＬ０１９とＣＴＬ１１９との併用療法後５日〜４ヵ月、例えば１０日〜３ヵ月、例えば１４日〜２ヵ月で開始して）投与される。実施形態において、療法の投与は、Ｂ−ＡＬＬ、例えば再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬを有する対象に対するものである。
【００６６】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の更に別の実施形態において、血液癌は、Ｂ−ＡＬＬ又はＤＬＢＣＬ、例えば再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬ又はＤＬＢＣＬである。一実施形態において、対象は、血液学的悪性腫瘍、例えばＢ−ＡＬＬ又はＤＬＢＣＬを有し、ＣＡＲ  Ｔ療法に応答しないこともあり、又は例えばＣＡＲ  Ｔ細胞持続性の不足に起因して再発することもある。ＣＤ１９  ＣＡＲ療法−ＰＤ１阻害薬療法の一実施形態において、対象は、治療結果の改善を示し、例えば、対象は、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法−ＰＤ１阻害薬療法、例えば１サイクル以上のＣＤ１９  ＣＡＲ療法−ＰＤ１阻害薬療法に応答して、部分寛解、完全寛解、又は長期ＣＡＲ  Ｔ細胞持続性の１つ以上を実現する。
【００６７】
ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ１阻害薬とを含む療法の一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与前に、対象は、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法による前治療、例えばＣＴＬ０１９及びＣＴＬ１１９の一方又は両方による前治療に対して再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬ又はＤＬＢＣＬを有する。一部の実施形態において、対象は、ＣＡＲ  Ｔ細胞持続性の低下又は不足を示す。一部の実施形態において、対象は、ＣＴＬ０１９と、その後に続くＣＴＬ１１９とで治療されるか、又は治療されたことがある。
【００６８】
一部の実施形態において、対象は、ＣＤ１９＋再発を示す。一部の実施形態において、対象は、再発性又は不応性ＣＤ１９＋  Ｂ−ＡＬＬを有する。一部の実施形態において、対象は、再発性又は不応性ＣＤ１９＋  ＤＬＢＣＬを有する。一実施形態において、対象は、リンパ節病変を伴う再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬを有し、例えばリンパ腫様疾患を有する。
【００６９】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法による前治療に対し、リンパ節病変を伴う再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬを有する、例えばリンパ腫様疾患を有する対象は、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法−ＰＤ１阻害薬療法に応答して、例えば１サイクル以上のＣＤ１９  ＣＡＲ療法−ＰＤ１阻害薬療法に応答して、ＰＥＴ集積病変の低下を示し、例えば病変部の数又は強度の減少を示す。
【００７０】
一部の実施形態において、対象、例えばＣＤ１９ＣＡＲ療法後にＣＤ１９＋再発を示す対象には、ＰＤ−１阻害薬、例えばペンブロリズマブと併用した更なるＣＤ１９  ＣＡＲ療法が投与される。実施形態において、併用療法の更なる投与により治療結果の改善がもたらされ、例えば、対象は、部分寛解、完全寛解、又は長期ＣＡＲ  Ｔ細胞持続性の１つ以上を実現する。ある実施形態において、併用療法の投与により、ＣＡＲ  Ｔ細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の長期持続性がもたらされる。ある実施形態において、併用療法の投与により、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ療法単独で治療された対象と比較してＢ細胞回復の時間が長くなり、例えばＢ細胞形成不全までの時間が長くなる。一部の実施形態において、本明細書に開示される併用による治療後の対象は、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法単独で治療される対象と比較して、（ｉ）再発リスクの低下、（ｉｉ）再発の発生タイミングの遅延、又は（ｉｉｉ）再発の重症度の低下の１つ以上を有する。ある実施形態において、併用療法の投与により、客観的臨床応答がもたらされる。
【００７１】
ある実施形態において、対象、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ療法後に再発を示す対象は、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法の反復投与、例えば第２、第３、又は第４の用量を受けるのに適格である。ある実施形態において、対象は、ＰＤ−１阻害薬と共にＣＤ１９  ＣＡＲ療法の反復投与、例えば第２、第３、又は第４の用量を受けるのに適格である。ある実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ療法の初回投与後にＣＤ１９  ＣＡＲ療法の持続性が低いことを示す対象は、ＰＤ−１阻害薬と共にＣＤ１９  ＣＡＲ療法の反復投与、例えば第２、第３、又は第４の用量を受けるのに適格である。
【００７２】
任意選択で、対象は、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％のＣＤ３＋／ＰＤ１＋である癌細胞、例えばＤＬＢＣＬ細胞を有するか、又は有すると同定される。
【００７３】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）を発現する細胞と、本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬とを含む組成物（例えば、１つ以上の投薬製剤、併用、又は１つ以上の医薬組成物）を特徴とする。一実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）は、本明細書に記載されるとおりの抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９抗原結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表２又は表３に挙げられるＣＤ１９抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを含む。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、例えばペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、又は表６に挙げられる抗体分子を含む。ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害薬とは、同じ又は異なる製剤又は医薬組成物中にあり得る。
【００７４】
別の態様において、本開示は、疾患（例えば、癌）、例えばＣＤ１９の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載される癌を治療する方法における使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）を発現する細胞と、本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬とを含む組成物（例えば、１つ以上の投薬製剤、併用、又は１つ以上の医薬組成物）を特徴とする。一実施形態において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）は、本明細書に記載されるとおりの抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９抗原結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表２又は表３に挙げられるＣＤ１９抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡを含む。一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、例えばペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、又は表６に挙げられる抗体分子を含む。ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害薬とは、同じ又は異なる製剤又は医薬組成物中にあり得る。
【００７５】
ＰＤ−１阻害薬
本明細書では、本明細書に記載される方法又は組成物のいずれかにおける使用のためのＰＤ−１阻害薬が提供される。本明細書に記載される任意の方法又は組成物において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡを含む。
【００７６】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、以下：ＰＤ−１発現、例えばＰＤ−１の転写又は翻訳を阻害するか又は低下させること、ＰＤ−１活性を阻害するか又は低下させる、例えばＰＤ−１のそのリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１への結合を阻害するか又は低下させること、又はＰＤ−１又はそのリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１に結合することの１つ以上によって特徴付けられる。
【００７７】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、抗体分子である。
【００７８】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、表６に挙げられる任意のＰＤ−１抗体分子アミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、及び／又は表６に挙げられる任意のＰＤ−１抗体分子アミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む抗ＰＤ−１抗体分子を含む。一実施形態において、抗ＰＤ１抗体分子は、配列番号１３７又は１４０から選択されるＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８又は１４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び／又は配列番号１４６又は１４９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７又は１５０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１４８、１５１、１６６、又は１６７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、配列番号１３７又は１４０から選択されるＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８又は１４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列、及び／又は配列番号１４６又は１４９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７又は１５０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６又は１６７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
【００７９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に提供される任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に提供される任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１４２、１４４、１５４、１５８、１５４、１５８、１７２、１８４、２１６、又は２２０と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００８０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の重鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の重鎖、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の重鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１５６、１６０、１７４、１８６、２１８、２２２、２２５、又は２３６と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００８１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に提供される任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に提供される任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、例えば配列番号１５２、１６２、１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００８２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の軽鎖のアミノ酸配列、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の軽鎖、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４に対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に挙げられる任意の軽鎖に対するアミノ酸配列、例えば配列番号１６４、１７０、１７８、１８２、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、又は２１４と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００８３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｉ）配列番号１５６又は１６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｉｉ）配列番号１５６又は１６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖
ｉｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｖｉｉｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉｘ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｉｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｖｉｉｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｉｘ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｘｘｉｉｉ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｘｘｉｖ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む。
【００８４】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
ｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｉ）配列番号１４２又は１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｉｉ）配列番号１５４又は１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｖ）配列番号１５４又は１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｖｉｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｉｘ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｖ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｖｉｉｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｉｘ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
ｘｘｉｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、又は
ｘｘｉｖ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
【００８５】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりのアミノ酸配列、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む、少なくとも１又は２つの重鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、少なくとも１又は２つの軽鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、又は両方を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、任意選択で、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表４に示されるとおりの重鎖、軽鎖、又は両方からのリーダー配列又はそれと実質的に同一の配列を含む。
【００８６】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【００８７】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。
【００８８】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲに置換を含み、例えば軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３に１つ以上の置換を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖可変領域の１０２位における軽鎖ＣＤＲ３に置換、例えば表６に係る軽鎖可変領域（例えば、マウス又はキメラ、非改変型について配列番号１５２又は１６２、又は改変配列について配列番号１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２のいずれか）の１０２位におけるシステインからチロシンへの又はシステインからセリン残基への置換を含む。
【００８９】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５又は６つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。
【００９０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ａ）配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）（それぞれ米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に開示される）、
（ｂ）配列番号１３７から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ（それぞれ米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に開示される）、
（ｃ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ（それぞれ米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に開示される）、又は
（ｄ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ（それぞれ米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に開示される）
を含む。
【００９１】
本明細書における以下の併用では、別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、（ｉ）配列番号１３７、配列番号１４０、又は配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８又は配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに（ｉｉ）配列番号１４６又は配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７又は配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６又は配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）（それぞれ米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１、又は本明細書の表６に開示される）を含む。
【００９２】
実施形態において、ＰＤ−１阻害薬、例えば抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤＲ−００１であり、これは、表６に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの可変軽鎖及び可変重鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００９３】
一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ  ５１４、ＡＭＰ−２２４、又は米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書、及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載される抗ＰＤ１抗体から選択される。
【００９４】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、ペンブロリズマブである。一実施形態において、抗体分子は、
（ｉ）配列番号５０３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、及び
（ｉｉ）配列番号５００のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５０２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、又は
少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一の高いアミノ酸配列
を含む。
【００９５】
ＣＡＲ発現細胞
本明細書には、本明細書に記載される方法又は組成物のいずれかにおける使用のための、抗原（例えば、ＣＤ１９）を標的とする、例えばそれに特異的に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞が提供される。抗原Ｘに特異的に結合するＣＡＲは、本明細書では「Ｘ  ＣＡＲ」とも称される。例えば、ＣＤ１９に特異的に結合するＣＡＲは、本明細書では「ＣＤ１９  ＣＡＲ」とも称される。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）によって発現されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）は、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む。
【００９６】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）とを含む。
【００９７】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、例えば、以下の１つ以上から選択される、本明細書に記載される抗原、例えば腫瘍抗原への結合能を有する抗原結合ドメインを含む：ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４とも称される）、Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１又はＣＬＥＣＬ１）、ＣＤ３３、上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ）、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）、Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン−１３受容体サブユニットα−２（ＩＬ−１３Ｒａ２又はＣＤ２１３Ａ２）、メソテリン、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ−１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（テスチシン又はＰＲＳＳ２１）、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）、ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＣＤ２０、葉酸受容体α、受容体チロシン−プロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、プロスターゼ、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）、エフリンＢ２、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びエーベルソンマウス白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質（ｂｃｒ−ａｂｌ）、チロシナーゼ、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ）、トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、グロボＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレノセプターβ３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）、メラノーマ関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）、ＥＴＳ転座変異体遺伝子６、染色体１２ｐに位置する（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンギオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）、メラノーマ癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）、メラノーマ癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）、Ｆｏｓ関連抗原１、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ｐ５３突然変異体、プロステイン、サーバイビング、テロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１又はガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原１（メランＡ又はＭＡＲＴ１）、ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、サルコーマ転座切断点、メラノーマアポトーシス阻害因子（ＭＬ−ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス性癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ又は刷り込み部位の調節因子のブラザー（Ｂｒｏｔｈｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  Ｓｉｔｅｓ））、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳ１）、リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）、滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）、後期糖化最終産物受容体（ＲＡＧＥ−１）、腎臓遍在性１（ＲＵ１）、腎臓遍在性２（ＲＵ２）、レグマイン、ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）、ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）、腸カルボキシルエステラーゼ、熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レク���ンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、及び免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）。
【００９８】
一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、及び／又はＣＤ７９ａに結合する。
【００９９】
実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３に結合する。
【０１００】
実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。
【０１０１】
他の実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。
【０１０２】
実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＬＬに結合する。
【０１０３】
ＣＤ１９抗原結合ドメイン
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表２又は表３に挙げられる任意のＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに表２又は表３に挙げられる任意のＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表４のＨＣ  ＣＤＲアミノ酸配列に係るＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３、並びに表５のＬＣ  ＣＤＲアミノ酸配列に係るＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１０４】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５のいずれかに対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０９、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１１０、配列番号１１２、又は配列番号１１５のいずれかに対するアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１０５】
ＣＡＲ分子の更なるドメイン
一実施形態において、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質、例えば本明細書に記載されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列を含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を含むアミノ酸配列、又は配列番号６のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、膜貫通ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１７のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１０６】
一実施形態において、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９結合ドメイン）は、ヒンジ領域、例えば本明細書に記載されるヒンジ領域によって膜貫通ドメインに結合される。一実施形態において、コードされるヒンジ領域は、配列番号２又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、ヒンジ領域をコードする核酸配列は、配列番号１３のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１０７】
一実施形態において、単離核酸分子は、共刺激ドメイン、例えば本明細書に記載される共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインを含む。実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む。
【０１０８】
一実施形態において、共刺激ドメインは、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、例えば本明細書に記載されるタンパク質からの機能性シグナル伝達ドメインである。
【０１０９】
一実施形態において、４−１ＢＢの共刺激ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、コードされる共刺激ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１８のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。別の実施形態において、ＣＤ２８の共刺激ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号３６のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＣＤ２８の共刺激ドメインをコードする核酸配列は、配列番号３７のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。別の実施形態において、ＣＤ２７の共刺激ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、ＣＤ２７の共刺激ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１９のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。別の実施形態において、ＩＣＯＳの共刺激ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ＩＣＯＳの共刺激ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号３８のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＩＣＯＳの共刺激ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４４のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＩＣＯＳ共刺激ドメイン突然変異体（例えば、ＹからＦへの突然変異体）を含む。
【０１１０】
一部の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。実施形態において、ＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインは、配列番号９（突然変異体ＣＤ３ζ）若しくは配列番号１０（野生型ヒトＣＤ３ζ）のアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１１１】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のＣＤ３ζアミノ酸配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列及び配列番号９又は配列番号１０の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現する。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１８のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列、及び／又は配列番号２０若しくは配列番号２１のＣＤ３ζヌクレオチド配列若しくはそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１１２】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７の機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ２７のコードされる細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のＣＤ３ζアミノ酸配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８の配列及び配列番号９又は配列番号１０の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現する。一実施形態において、ＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１９のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列、及び／又は配列番号２０若しくは配列番号２１のＣＤ３ζヌクレオチド配列若しくはそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１１３】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のＣＤ３ζアミノ酸配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号３６のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６の配列及び配列番号９又は配列番号１０の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現する。一実施形態において、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号３７のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列、及び／又は配列番号２０若しくは配列番号２１のＣＤ３ζヌクレオチド配列若しくはそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１１４】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳの機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のＣＤ３ζアミノ酸配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号３８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８の配列及び配列番号９又は配列番号１０の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現する。一実施形態において、ＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４４のヌクレオチド配列又はそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列、及び／又は配列番号２０若しくは配列番号２１のＣＤ３ζヌクレオチド配列若しくはそれと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）配列を含む。
【０１１５】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列を更に含む。
【０１１６】
例示的ＣＡＲ分子
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかのアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかに対して少なくとも１、２、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、配列番号１０８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１１１、配列番号１１４、又は配列番号１１６のいずれかと少なくとも９５％同一の（例えば、９５〜９９％の同一性を有する）アミノ酸配列を含む。
【０１１７】
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ１２３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１１８】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１１９】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１２０】
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＬＬ１  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＬＬ１  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＬＬ１  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１２１】
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ３３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ３３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１２２】
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１２３】
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０１２４】
本明細書に記載される方法及び組成物のいずれかの実施形態において、ＣＡＲを含む細胞は、ＣＡＲをコードする核酸を含む。
【０１２５】
一実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、レンチウイルスベクターである。一実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、レンチウイルス形質導入によって細胞に導入される。一実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡである。一実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、電気穿孔によって細胞に導入される。
【０１２６】
本明細書に記載される方法及び組成物のいずれかの実施形態において、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞である。
【０１２７】
一実施形態において、本方法は、本明細書に記載される疾患の治療のための追加の療法剤、例えば抗癌療法剤を投与することを更に含む。実施形態において、本方法は、例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及び／又はＰＤ−１阻害薬を含む投与の前、それと並行して、又はその後に、例えば本明細書に記載されるリンパ球枯渇剤を投与することを更に含む。実施形態において、リンパ球枯渇剤は、限定されないが、メルファラン、シクロホスファミド、フルダラビン、ベンダムスチン、及びシクロホスファミド−放射線療法を含め、１つ以上の化学療法剤、化学療法剤の併用、放射線療法、又は併用化学療法−放射線療法を含む。
【０１２８】
本明細書に記載される方法及び組成物のいずれかの実施形態において、疾患（例えば、癌）、例えばＣＤ１９発現に関連する疾患は、癌である。一実施形態において、癌は、血液癌である。実施形態において、血液癌は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つ以上から選択される。実施形態において、血液癌は、白血病、例えば急性白血病又は慢性白血病である。他の実施形態において、血液癌は、リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫又はホジキンリンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性白血病（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、及びマントル細胞リンパ腫、菌状息肉症、未分化大細胞型リンパ腫、又は前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫である。
【０１２９】
一実施形態において、癌は、ＣＤ１９を発現し、例えばＣＤ１９を発現する。他の実施形態において、癌は、再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬである。一実施形態において、癌は、リンパ節病変、例えばリンパ腫様疾患を伴う再発性又は不応性Ｂ−ＡＬＬである。他の実施形態において、癌は、ＤＬＢＣＬ、例えば再発性又は不応性ＤＬＢＣＬである。
【０１３０】
一部の実施形態において、ＣＡＲ療法、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ療法は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば再発性又は不応性ＨＬを有する対象にＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載されるとおりのＰＤ−１阻害薬と併用して投与される。ある実施形態において、ＣＡＲ療法は、再発性及び／又は不応性ＨＬを有する対象にＰＤ−１阻害薬後に投与される。別の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、再発性及び／又は不応性ＨＬを有する対象に、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＡＲ療法後に投与される。別の実施形態において、ＰＤ−１阻害薬の投与は、例えば、本明細書に記載されるとおりのＣＡＲ療法の投与後２０日以内に開始される。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９ＣＡＲをコードするＲＮＡが例えば電気穿孔によって導入された細胞である。実施形態において、対象は、ＣＤ１９陰性及びＣＤ１９陽性癌細胞を含む。実施形態において、対象は、６用量のＣＡＲ発現細胞で例えば２週間にわたって治療される。実施形態において、用量は、例えば、＜８０ｋｇの対象について、１用量当たり１×１０５〜５×１０６個又は８×１０５〜１．５×１０６個のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、又は例えば≧８０ｋｇの対象について、１用量当たり１×１０８個（±５０％）又は１×１０８個（±２０％）のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞を含む。実施形態において、用量は、１用量当たり約１×１０５〜１．５×１０６個のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞を含む。実施形態において、対象は、ＣＲＳを経験しないか、又は重症ＣＲＳを経験しない。実施形態において、対象は、完全奏効、部分奏効、又は安定疾患を経験する。
【０１３１】
対象
一実施形態において、対象、例えば免疫細胞を取得する対象及び／又は治療する対象は、ヒト、例えば癌患者である。特定の実施形態において、対象は、１８歳以下（例えば、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１歳又はそれ未満（例えば、１２ヵ月、６ヵ月、３ヵ月又はそれ未満））である。一実施形態において、対象は、小児癌患者である。
【０１３２】
他の実施形態において、対象は、成人であり、例えば、対象は、１８歳超（例えば、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０歳超又はそれを超える）である。一実施形態において、対象は、成人癌患者である。
【０１３３】
特定の実施形態において、対象は、腫瘍関連又は癌関連抗原の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載されるとおりの疾患を有する。一実施形態において、対象は、癌、例えば本明細書に記載されるとおりの癌を有する。
【０１３４】
一実施形態において、対象は、血液癌、固形腫瘍、又はその転移性病変から選択される癌を有する。例示的癌としては、限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前骨髄球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症が挙げられる。一実施形態において、癌は、ＡＬＬである。別の実施形態において、癌は、ＣＬＬである。一実施形態において、癌は、ＤＬＢＣＬ、例えば再発性又は不応性ＤＬＢＣＬである。
【０１３５】
実施形態において、対象は、白血病、例えばＡＬＬ（例えば、Ｂ−ＡＬＬ）を有する。実施形態において、対象は、白血病、例えばＡＬＬを有し、及び小児患者であり、例えば１８歳以下（例えば、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１歳又はそれ未満（例えば、１２ヵ月、６ヵ月、３ヵ月又はそれ未満））である。
【０１３６】
実施形態において、対象は、リンパ腫、例えばＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、リンパ腫、例えばＤＬＢＣＬ（例えば、再発性又は不応性ＤＬＢＣＬ）を有し、及び成人患者であり、例えば１８歳超（例えば、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０歳超又はそれ未満）である。
【０１３７】
実施形態において、対象は、本明細書に記載される疾患（例えば、癌）、例えばＣＤ１９発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９発現に関連する癌を有する（例えば、それと診断される）。実施形態において、対象は、再発性及び／又は不応性癌、例えば再発性又は不応性リンパ腫、例えばＣＤ１９＋リンパ腫を有する。実施形態において、対象は、ＤＬＢＣＬ、例えばＣＤ１９＋ＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫から形質転換したＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、ＤＬＢＣＬ及び進行性リンパ腫を有する。実施形態において、対象は、縦隔原発ＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、以前にリンパ腫、例えばＤＬＢＣＬの治療を受けたことがあり、不応性リンパ腫、例えば不応性ＤＬＢＣＬを有する。
【０１３８】
実施形態において、対象は、例えば、第１の用量が投与される前に高腫瘍負荷の癌を有する（例えば、それと診断される）。一実施形態において、癌は、ＡＬＬ又はＣＬＬである。実施形態において、対象は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％、例えば少なくとも５％の骨髄芽球レベルを有する。実施形態において、対象は、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶの癌を有する。実施形態において、対象は、例えば、単一の腫瘍又は複数の腫瘍で少なくとも１、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、又は１０００ｇの腫瘍量を有する。
【０１３９】
実施形態において、対象は、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害薬を含む投与前に化学療法、例えば本明細書に記載される化学療法（例えば、リンパ球枯渇化学療法、例えばカルボプラチン及び／又はゲムシタビン）を投与されている。実施形態において、対象は、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害薬を含む投与前に免疫療法、例えば同種骨髄移植を投与されている。
【０１４０】
本明細書に記載される方法及び組成物のいずれかの実施形態において、対象は、哺乳類、例えばヒトである。一実施形態において、対象は、ＰＤ−１を発現する。一実施形態において、対象の癌細胞又は癌細胞に近接している細胞、例えば癌関連細胞は、ＰＤ−１又はＰＬ−Ｌ１を発現する。ある実施形態において、癌関連細胞は、抗腫瘍免疫細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。
【０１４１】
一実施形態において、ＣＡＲを発現する細胞、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−１を発現する。
【０１４２】
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明の実施又は試験では、本明細書に記載されるものと同様の又は均等な方法及び材料を使用し得るが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献の全ては、全体として参照により援用される。加えて、材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。見出し、副見出し、又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、工程若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はなく、又は工程若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１Ａ】患者のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞におけるＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４）発現の画像である。生検は、ＣＡＲＴ１９細胞注入前に採取した。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇからの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（クローンＥ１Ｊ２Ｊ、カタログ番号１５１６５ＢＦ）による免疫組織化学染色。メイン画像は、４０倍の倍率であり、右上隅の差し込み画像は、１００倍である。
【図１Ｂ】３週間後のペンブロリズマブに対する臨床応答を実証するＣＴスキャンのパネルである。左の画像は、ペンブロリズマブ注入日（２６日目）であり、右の画像は、ペンブロリズマブ注入３週間後（４５日目）である。
【図２Ａ−２Ｌ】ＣＡＲＴ１９注入及びペンブロリズマブ注入に対するＴ細胞サブセットの変化を調べる相関研究を示すグラフである。（図２Ａ）末梢血中のＣＡＲＴ１９＋ＣＤ３＋細胞のパーセンテージ。ＣＡＲＴ１９注入前（前）、ＣＡＲＴ１９注入後３日（３日目）、ＣＡＲＴ１９後７日（７日目）、ＣＡＲＴ１９後１０日（１０日目）、ＣＡＲＴ１９後１４日（１４日目）、ＣＡＲＴ１９注入後２６日及びペンブロリズマブ注入後１時間（２６日目）、ＣＡＲＴ１９注入後２７日及びペンブロリズマブ後１日（２７日目）、ＣＡＲＴ１９注入後２８日及びペンブロリズマブ後２日（２８日目）、並びにＣＡＲＴ１９後４５日及びペンブロリズマブ後１４日（４５日目）のＣＤ３＋細胞のパーセンテージＣＡＲＴ１９＋。（図２Ｂ）ＩＬ−６血清レベルのベースラインからの倍率変化。（図２Ｃ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ４＋細胞及びＰＤ１＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｄ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ８＋細胞及びＰＤ１＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｅ）末梢血中のＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＤ４＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｆ）末梢血中のＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＤ８＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｇ）末梢血中のグランザイムＢ＋ＣＤ４＋細胞及びグランザイムＢ＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｈ）末梢血中のグランザイムＢ＋ＣＤ８＋細胞及びグランザイムＢ＋ＣＡＲＴ１９＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｉ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ４＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｊ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ４＋ＣＡＲＴ１９＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＤ４＋ＣＡＲＴ１９＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｋ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ８＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋Ｃ８＋細胞のパーセンテージ。（図２Ｌ）末梢血中のＰＤ１＋ＣＤ８＋ＣＡＲＴ１９＋細胞及びＰＤ１＋Ｅｏｍｅｓ＋ＣＤ８＋ＣＡＲＴ１９＋細胞のパーセンテージ。
【図３】５人のＣＲ患者、１人の未分類患者、及び６人のＰＤ患者からのリンパ節（ＬＮ）及び骨髄（ＢＭ）試料中のＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３（各組の４本のバーの左から右に）の発現を示す。
【図４Ａ−４Ｄ】Ｔ細胞上のＰＤ１及びＣＡＲ１９発現のフローサイトメトリー解析を示す。図４Ａ及び図４Ｂは、ＣＡＲＴ療法に対して完全奏効者（ＣＲ）又は非奏効者（ＮＲ）である対象からのＣＤ４＋  Ｔ細胞上のＰＤ−１及びＣＡＲ１９発現の分布を実証する代表的なフローサイトメトリープロファイルである。図４Ｃは、ＣＡＲＴ療法に対する応答が異なる対象群からのＣＤ４＋  Ｔ細胞集団中のＰＤ１細胞のパーセントを示すグラフである。図４Ｄは、ＣＡＲＴ療法に対する応答が異なる対象群からのＣＤ８＋  Ｔ細胞集団中のＰＤ１細胞のパーセントを示すグラフである。
【図５Ａ−５Ｂ】ＣＡＲＴ療法に対する応答が異なる対象群からのＣＤ４及びＣＡＲ１９発現細胞（図５Ａ）又はＣＤ８及びＣＡＲ１９発現細胞（図５Ｂ）におけるＰＤ１発現の分布を示す。
【図６】ＣＡＲＴ療法に対して完全奏効者（ＣＲ）又は非奏効者（ＮＲ）である対象からのＴ細胞上のＰＤ１、ＣＡＲ  １９、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３発現のフローサイトメトリー解析を示す。
【図７Ａ−７Ｂ】ＣＡＲＴ療法に対する応答が異なる対象群からのＰＤ１及びＬＡＧ３発現（図７Ａ）又はＰＤ１及びＴＩＭ３発現（図７Ｂ）の分布を示す。
【図８】原発性及び二次性ヒトＤＬＢＣＬ患者試料中のＣＤ３＋／ＰＤ−１＋細胞集団間の有意差を示す多重ＦＩＨＣ  ＡＱＵＡ解析を示す。
【図９】ＤＬＢＣＬ試料の原発及び二次部位におけるＣＤ１９（下のパネル）及びＰＤ−Ｌ１（上のパネル）の様々なレベルを示すＡＱＵＡ解析を示す。原発部位２５例及び二次部位１５例の合計４０例のヒトＤＬＢＣＬ患者試料を多重ＦＩＨＣに供し、続いてＡＱＵＡ解析によりＣＤ１９及びＰＤ−Ｌ１タンパク質の発現レベルを同定した。
【図１０】ＣＡＲＴ１９細胞を単独で注入した後又はＣＡＲＴ１９細胞をある用量のペンブロリズマブと共に注入した後の症例３の患者におけるＣＡＲＴ１９細胞のパーセンテージを示す。
【図１１】ｈｕＣＡＲＴ１９のみ又はｈｕＣＡＲＴ１９及びペンブロリズマブの投与を受ける患者のｈｕＣＡＲＴ１９注入後の月数に対するＢ細胞回復の確率のグラフを示す。
【図１２】ＣＡＲＴ１９単独を注入した（丸）及びペンブロリズマブによる治療後の（四角）症例６の患者におけるＣＡＲＴ１９のパーセンテージを示す。
【図１３】ペンブロリズマブによる治療前及び治療後のＰＥＴスキャンデータと統合した、ペンブロリズマブによる治療前及び治療後のＣＡＲＴ１９による症例６の患者におけるＣＡＲＴ１９のパーセンテージを示す。
【図１４】ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９療法を受けた４人の患者の末梢血中のＣＡＲＴ１９  ＲＮＡ発現レベルを描くグラフである。各注入前及び注入後に収集した細胞に関して定量的ＲＴ−ＰＣＲを実施した（０、２、４、９、１１及び１４日目）。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【０１４５】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
【０１４６】
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
【０１４７】
「併用して」投与するとは、本明細書で使用されるとき、対象の障害への罹患の経過中に対象に２つの（又はそれを超える）異なる治療が送達されること、例えば対象が障害と診断された後、及び障害を治癒若しくは除去し終える前又は治療が他の理由で中止される前に２つ以上の治療が送達されることを意味する。一部の実施形態では、一方の治療の送達は、第２の治療の送達の開始時になおも行われており、従って投与の点で重複がある。これは、ときに、本明細書において「同時」又は「並行送達」と称される。他の実施形態では、一方の治療の送達が他方の治療の送達開始前に終了している。いずれの場合にも、一部の実施形態において、治療は、併用投与に起因して有効性が高くなる。例えば、第２の治療が第１の治療なしに投与された場合に見られたであろうものと比べて、第２の治療は、有効性が高くなり、例えばより少ない第２の治療で均等な効果が見られ、又は第２の治療は、症状をより大きく低減するか、若しくは類似の状況が第１の治療で見られる。一部の実施形態において、送達は、症状又は障害に関連する他のパラメータの低減が、一方の治療を他方なしに送達して観察されるであろうものと比べて大きくなるようなものである。２つの治療の効果は、部分的に相加的なもの、完全に相加的なもの、又は相加的を上回るものであり得る。送達は、送達される第１の治療の効果が第２の治療の送達時になおも検出可能であるようなものである。
【０１４８】
用語「キメラ抗原受容体」又は代わりに「ＣＡＲ」は、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義するとおりの刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む組換えポリペプチドコンストラクトを指す。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、同じポリペプチド鎖にあり、例えばキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、互いに連続しておらず、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲに提供されるように、例えば異なるポリペプチド鎖にある。
【０１４９】
一態様において、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連したζ鎖である。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義するとおりの少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能性シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激分子は、４−１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択により、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
【０１５０】
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。一部の態様において、本明細書に記載されるＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、本明細書に記載される刺激分子又は共刺激分子に由来するか、又は合成若しくは操作されたシグナル伝達ドメインである。
【０１５１】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ１９」は、白血病前駆細胞上に検出可能な抗原決定基である分化クラスター１９タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として見付けることができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８で見付けることができる。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１９」には、完全長野生型ＣＤ１９の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質が含まれる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病及び非ホジキンリンパ腫を含むほとんどのＢ細胞系列癌に発現する。ＣＤ１９を発現する他の細胞は、以下の「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」の定義に提供する。これは、Ｂ細胞前駆細胞の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）を参照されたい。一態様において、ＣＡＲＴの抗原結合部分は、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ１９タンパク質は、癌細胞上に発現する。
【０１５２】
用語「抗体」又は「抗体分子」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質、又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであり得、及び天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。一実施形態において、抗体又は抗体分子は、抗体断片を含み、例えばそれからなる。
【０１５３】
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体又はその組換え変異体の少なくとも一部分を指し、及び抗原などの標的に対する抗体断片の認識及び特異的結合をもたらすのに十分である、インタクトな抗体の抗原結合ドメイン、例えば抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、線状抗体、ｓｄＡｂなどのシングルドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン、及びヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片で形成された多重特異性抗体、及び抗体の単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片は、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
【０１５４】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得るか又はＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【０１５５】
用語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、本明細書で使用されるとき、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内にあるアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）及び各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）がある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）、又はこれらの組み合わせを含め、幾つもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。Ｋａｂａｔ付番スキームに基づき、一部の実施形態において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキームに基づき、一部の実施形態において、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は、２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、及びＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの組み合わせでは、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、又は両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば哺乳類ＶＨ、例えばヒトＶＨのアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）、及びＶＬ、例えば哺乳類ＶＬ、例えばヒトＶＬのアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）に対応する。
【０１５６】
抗体又はその抗体断片を含む本発明のＣＡＲの一部分は、種々の形態で存在することができ、ここで、抗原結合ドメインは、例えば、ｓｃＦｖ抗体断片、線状抗体、ｓｄＡｂなどのシングルドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン、ヒト化抗体、二重特異性抗体、抗体コンジュゲートを含め、連続ポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
【０１５７】
本明細書で使用されるとき、用語「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。用語の抗体分子は、抗体及び抗体断片を包含する。一実施形態において、抗体分子は、「結合ドメイン」（本明細書では「抗標的（例えば、ＣＤ１９）結合ドメイン」又は「標的（例えば、ＣＤ１９）結合ドメイン」とも称される）を包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数個のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数個のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
【０１５８】
用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
【０１５９】
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【０１６０】
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
【０１６１】
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生、又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること、及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得、又は生体試料から得られ得、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。
【０１６２】
用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少、又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の低下、腫瘍細胞数の低下、腫瘍細胞増殖の低下、又は腫瘍細胞生存の低下を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。
【０１６３】
用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
【０１６４】
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
【０１６５】
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
【０１６６】
用語「癌」は、異常細胞の無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性、並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【０１６７】
用語「癌関連抗原」、又は「腫瘍抗原」、又は「増殖性障害抗原」、又は「増殖性障害に関連する抗原」は、正常細胞と比較して、完全に又は断片として（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）のいずれかで癌細胞の表面上に優先的に発現し、且つ癌細胞への薬理学的薬剤の優先的なターゲティングに有用な分子（典型的には、タンパク質、炭水化物又は脂質）を同義的に指す。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。特定の態様において、本発明の腫瘍抗原は、限定されないが、原発性又は転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌及び腺癌、例えば乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵癌などを含めた癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、特定の増殖性障害に共通する抗原である。一部の実施形態において、癌関連抗原は、正常細胞と比較して、例えば正常細胞と比較して１倍過剰発現、２倍過剰発現、３倍過剰発現又はそれを超えて癌細胞で過剰発現する細胞表面分子である。一部の実施形態において、癌関連抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞上に発現する分子と比較して欠失、付加、又は突然変異を含む分子である。一部の実施形態において、癌関連抗原は、癌細胞の細胞表面上にのみ、完全に又は断片として（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）発現することになり、正常細胞の表面上に合成されないか又は発現しない。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体断片）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞が構成的に発現する。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体は、免疫療法のためのユニークな細胞表面標的クラスに相当する。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１又はＨＬＡ−Ａ２に関連して、ウイルス又は腫瘍抗原に由来するペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｄ，２０１１  １１７（１６）：４２６２−４２７２；Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００１  ８（２１）：１６０１−１６０８；Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなどのライブラリのスクリーニングから同定することができる。
【０１６８】
語句「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含め、ＣＤ１９（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１９）の発現に関連する疾患又はＣＤ１９（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１９）を発現するか、若しくはいずれかの時点で発現した細胞に関連する病態、又はＣＤ１９を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＤ１９の発現に関連する疾患には、例えばＣＤ１９を標的とする分子、例えばＣＤ１９  ＣＡＲによる治療によって例えばＣＤ１９発現が下方制御されているため、現在ではＣＤ１９を発現しないが、かつてはＣＤ１９を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＤ１９の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＣＤ１９の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。更に、ＣＤ１９発現の発現に関連する疾患には、限定されないが、例えばＣＤ１９の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、ＣＤ１９発現細胞は、ＣＤ１９  ｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、ＣＤ１９発現細胞は、ＣＤ１９タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、ＣＤ１９タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、ＣＤ１９発現細胞は、一時的に検出可能なレベルのＣＤ１９タンパク質を産生したが、続いて検出可能なＣＤ１９タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１６９】
本明細書で使用されるとき、用語「プログラム死１」又は「ＰＤ−１」には、アイソフォーム、哺乳類、例えばヒトＰＤ−１、ヒトＰＤ−１の種ホモログ、及びＰＤ−１との少なくとも１つの共通のエピトープを含む類似体が含まれる。ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、当技術分野において公知である。例えば、Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２３（３）：７０４−６；Ｆｉｎｇｅｒ  ＬＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ（１９９７）１９７（１−２）：１７７−８７。
【０１７０】
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、この変化したＣＡＲは、例えば、ＣＤ１９に結合する能力に関して本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
【０１７１】
用語「刺激」は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体又はＣＡＲ）がそのコグネイトリガンド（又はＣＡＲの場合には腫瘍抗原）に結合して、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達又は適切なＮＫ受容体若しくはＣＡＲのシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達など、シグナル伝達イベントが媒介されることによって誘導される一次応答を指す。刺激は、ＴＧＦ−βの下方制御、及び／又は細胞骨格構造の再構築など、特定の分子の発現変化を媒介することができる。
【０１７２】
用語「刺激分子」は、免疫エフェクター細胞シグナル伝達経路、例えばＴ細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面に関して刺激的な方法で免疫エフェクター細胞の活性化を調節する、１つ又は複数の細胞質シグナル伝達配列を提供する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される分子を指す。一態様において、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドが負荷されたＭＨＣ分子との結合によって惹起され、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含めたＴ細胞応答の媒介につながる一次シグナルである。刺激的方法で機能する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、及びＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号９として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号１０に提供されるとおりのアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１７３】
用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
【０１７４】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される範囲で、かかるトランケートされた一部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、それがインタクトな鎖の代わりに使用され得る。従って、用語の細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことが意図される。
【０１７５】
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激、又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル、又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、合成又は操作される。例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
【０１７６】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、限定されないが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ  ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。
【０１７７】
用語「ζ」若しくは代わりに「ζ鎖」、「ＣＤ３−ζ」又は「ＴＣＲ−ζ」は、ＧｅｎＢａｎ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義され、「ζ刺激ドメイン」若しくは代わりに「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ−ζ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なζ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。一態様において、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４又はその機能性オルソログである非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を含む。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号１０として提供される配列である。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号９として提供される配列である。また、本明細書には、本明細書に記載されるアミノ酸配列、例えば配列番号９に対して１つ以上の突然変異を含むＣＤ３ζドメインも包含される。
【０１７８】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定されないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。
【０１７９】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はその機能性断片を含み得る。
【０１８０】
用語「４−１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、及び「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義される。一態様において、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号７として提供される配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１８１】
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β  Ｔ細胞及びγ／δ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞、及び骨髄由来食細胞が挙げられる。
【０１８２】
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
【０１８３】
用語「エフェクター機能」は、細胞の特化した機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。
【０１８４】
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（即ちｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖、及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
【０１８５】
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
【０１８６】
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載されるとおりの化合物、製剤、材料、又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１８７】
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の、又はその内部で産生される任意の材料を指す。
【０１８８】
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
【０１８９】
用語「発現」は、そのプロモーターによってドライブされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。
【０１９０】
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１９１】
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
【０１９２】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１９３】
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供されるとおりの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
【０１９４】
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
【０１９５】
用語「ヒト化」は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体断片の性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの大部分を含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、及びＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
【０１９６】
用語「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体断片などの免疫グロブリンを指す。
【０１９７】
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができ、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
【０１９８】
本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。
【０１９９】
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
【０２００】
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
【０２０１】
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、ある詳細な核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択の（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作成することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０２０２】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、組換えペプチド、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【０２０３】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０２０４】
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
【０２０５】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０２０６】
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０２０７】
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０２０８】
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数（配列番号４０）、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である（配列番号４１））を含む。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）３（配列番号２８）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号２９）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
【０２０９】
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
【０２１０】
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
【０２１１】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現用のコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０〜５０００（配列番号３０）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
【０２１２】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分、又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行、及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
【０２１３】
本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０２１４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／又は持続期間の低減又は改善、又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメータの改善を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメータの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。
【０２１５】
投薬量レジメン、例えば治療投薬量レジメンは、１回以上の治療インターバルを含み得る。投薬量レジメンは、検出可能であるか又は検出不能であるかに関わらず、限定されないが、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患の状態の安定化（即ち悪化させないこと）、疾患の進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は緩和を含めた少なくとも１つの有益な又は所望の臨床結果をもたらすことができる。
【０２１６】
本明細書で使用されるとき、「治療インターバル」は、例えば、定期的スケジュールで繰り返され得る治療サイクル、例えば治療剤の投与コースを指す。実施形態において、投薬量レジメンは、治療インターバルにわたって治療剤を投与しない期間を１つ以上有し得る。例えば、治療インターバルは、第２の治療剤、例えば阻害薬（例えば、本明細書に記載されるとおりのキナーゼ阻害薬）の投与と併用して（その前に、それと並行して、又はその後に）投与される１用量のＣＡＲ分子を含み得る。
【０２１７】
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
【０２１８】
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。ある実施形態において、対象は、哺乳類である。ある実施形態において、対象は、ヒトである。ある実施形態において、対象は、患者である。一実施形態において、対象は、小児対象である。他の実施形態において、対象は、成人である。
【０２１９】
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
【０２２０】
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解、又は根絶によって達成される。
【０２２１】
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の防止又は防御的治療を意味する。
【０２２２】
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
【０２２３】
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在する結合パートナー（例えば、腫瘍抗原）タンパク質を認識し、それと結合する抗体、又はリガンドであって、しかし、試料中の他の分子は、実質的に認識又は結合しない、抗体又はリガンドを指す。
【０２２４】
本明細書で使用されるとおりの「調節可能なキメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、免疫エフェクター細胞内にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性、及び調節可能な細胞内シグナル生成を細胞に付与するポリペプチドの組、最も単純な実施形態では典型的には２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、ＣＡＲ分子に関連して本明細書に定義されるとおりの刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む。一部の実施形態において、ＲＣＡＲのポリペプチドの組は、互いに連続しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖にある。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、二量化スイッチを含み、このスイッチは、二量化分子の存在を受けてポリペプチドを互いにカップリングすることができ、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることができる。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりの細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）、例えばＲＣＡＲ発現細胞（本明細書では「ＲＣＡＲＸ細胞」とも称される）に発現する。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称される。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称される。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性、及び調節可能な細胞内シグナル生成又は増殖を付与することができ、これがＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。実施形態において、ＲＣＡＲ細胞は、抗原結合ドメインによって結合される抗原を含む標的細胞に対する特異性を付与するために、少なくとも一部には抗原結合ドメインに依存する。
【０２２５】
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
【０２２６】
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、その断片、又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。
【０２２７】
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
【０２２８】
用語「生物学的に均等」は、参照用量又は参照量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）によって生じる効果と均等な効果を生じさせるのに必要な量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）以外の薬剤を指す。ある実施形態において、効果は、例えば、Ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害によって測定したときの、例えばインビボ又はインビトロアッセイで評価したときの、例えば本明細書に記載されるアッセイ、例えばブーレイ（Ｂｏｕｌａｙ）アッセイ、又はウェスタンブロットによるリン酸化Ｓ６レベルの測定によって測定したときのｍＴＯＲ阻害レベルである。ある実施形態において、効果は、細胞選別によって測定したときのＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞の比の変化である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰ７０  Ｓ６キナーゼ阻害を達成する量又は用量である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞の比の変化を達成する量又は用量である。
【０２２９】
用語「低免疫増強用量」は、ｍＴＯＲ阻害薬、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害薬、例えばＲＡＤ００１又はラパマイシン、又は触媒ｍＴＯＲ阻害薬と併せて使用されるとき、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼ活性の阻害によって測定したときのｍＴＯＲ活性を、完全ではないが、部分的に阻害するｍＴＯＲ阻害薬の用量を指す。ｍＴＯＲ活性の、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼの阻害による評価方法は、本明細書で考察される。用量は、完全な免疫抑制をもたらすには不十分であるが、免疫応答を増強するには十分である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の数の減少、及び／又はＰＤ−１陰性Ｔ細胞の数の増加、又はＰＤ−１陰性Ｔ細胞／ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の比の増加をもたらす。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ナイーブＴ細胞の数の増加をもたらす。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、以下の１つ以上をもたらす：
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、以下のマーカー：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈ、ＣＤ１２７ｈｉｇｈ、ＣＤ２７＋、及びＢＣＬ２の１つ以上の発現の増加、
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、ＫＬＲＧ１の発現の減少、及び
メモリーＴ細胞前駆体、例えば以下の特性：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈの増加、ＣＤ１２７ｈｉｇｈの増加、ＣＤ２７＋の増加、ＫＬＲＧ１の減少、及びＢＣＬ２の増加のいずれか１つ又は組み合わせを有する細胞の数の増加。
ここで、上記に記載される変化のいずれも、例えば未治療対象と比較したとき、例えば少なくとも一過性に起こる。
【０２３０】
「進行性」は、本明細書で使用されるとき、進行又は悪化している疾患、例えば癌を指す。固形腫瘍、例えば肺癌では、進行性疾患は、典型的には、治療開始以降の少なくとも２０％の腫瘍のサイズの成長又は腫瘍の広がりを示す。
【０２３１】
「不応性」は、本明細書で使用されるとき、治療に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、不応性癌は、治療の開始前又は開始時点で治療に抵抗性であり得る。他の実施形態において、不応性癌は、治療中に抵抗性になり得る。不応性癌は、抵抗性癌とも称される。
【０２３２】
「再発した」又は「再発する」は、本明細書で使用されるとき、改善又は奏効期間後、例えば療法、例えば癌療法の前治療後における疾患（例えば、癌）又は癌などの疾患の徴候及び症状の再来又は再出現を指す。初期奏効期間は、特定の閾値を下回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％、又は１％を下回るレベルの癌細胞を伴い得る。再出現は、特定の閾値を上回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％、又は１％を上回るレベルの癌細胞を含み得る。例えば、例としてＢ−ＡＬＬのコンテクストにおいて、再出現は、例えば、完全奏効後の血液、骨髄（＞５％）、又は任意の髄外部位における芽球の再出現を含み得る。これに関連して、完全奏効は、＜５％ＢＭ芽球を含み得る。より一般的には、ある実施形態において、奏効（例えば、完全奏効又は部分奏効）は、検出可能なＭＲＤ（微小残存病変）が存在しないことを含み得る。ある実施形態において、初期奏効期間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６日、少なくとも１、２、３、又は４週間、少なくとも１、２、３、４、６、８、１０、又は１２ヵ月、又は少なくとも１、２、３、４、又は５年続く。
【０２３３】
「完全奏効」又は「ＣＲ」は、治療に対して疾患、例えば癌の検出可能なエビデンスがないこと、例えば完全寛解を指す。完全奏効は、例えば、本明細書に記載されるとおり、ＮＣＣＮガイドライン（登録商標）、又はＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １７：１２４４（１９９９）及びＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ”，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２５：５７９−５８６（２００７）（これらの両方は、全体として参照により本明細書に援用される）を用いて同定され得る。例えば、Ｂ−ＡＬＬに関連して、完全奏効は、＜５％ＢＭ芽球を伴い得る。
【０２３４】
「完全奏効者」は、本明細書で使用されるとき、疾患、例えば癌を有する対象であって、治療に対して完全奏効、例えば完全寛解を呈する対象を指す。
【０２３５】
「部分奏効」又は「ＰＲ」は、例えば、なおも検出可能な疾患が存在するものの、疾患、例えば癌の低下を指す。
【０２３６】
「部分奏効者」は、本明細書で使用されるとき、疾患、例えば癌を有する対象であって、治療に対して部分奏効、例えば部分寛解を呈する対象を指す。部分奏効は、例えば、本明細書に記載されるとおりのＮＣＣＮガイドライン（登録商標）、又はＣｈｅｓｏｎ基準を用いて同定され得る。
【０２３７】
「非奏効者」は、本明細書で使用されるとき、疾患、例えば癌を有する対象であって、治療に対する応答を呈しない対象を指し、例えば、この患者は、治療、例えば本明細書に記載される治療の投与後に安定疾患又は進行性疾患を有する。非奏効者は、例えば、ＮＣＣＮガイドライン（登録商標）、又は本明細書に記載されるとおりのＣｈｅｓｏｎ基準を用いて同定され得る。
【０２３８】
患者が治療に応答するかどうかは、例えば、腫瘍学のＮＣＣＮ臨床実践ガイドライン（ＮＣＣＮ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）（ＮＣＣＮガイドライン（登録商標））によって提供される基準を含め、幾つかの方法を用いて決定することができる。例えば、Ｂ−ＡＬＬに関連して、完全奏効又は完全奏効者は、＜５％ＢＭ芽球、＞１０００好中球／ＡＮＣ（／μＬ）、循環芽球又は髄外疾患を伴わない（リンパ節症、脾腫、皮膚／歯肉浸潤／精巣腫瘤／ＣＮＳ病変を伴わない）＞１００，０００血小板（／μＬ）、三血球系造血、及び４週間無再発の１つ以上を伴い得る。部分奏効者は、ＢＭ芽球の≧５０％減少、＞１０００好中球／ＡＮＣ（／μＬ）、＞１００，０００血小板（／μＬ）の１つ以上を伴い得る。非奏効者は、疾患の進行、例えば＞２５％のＢＭ芽球を示し得る。
【０２３９】
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、及び９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％及び９８〜９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０２４０】
説明
本明細書には、ＰＤ−１阻害薬と併用して、抗原、例えば本明細書に記載される抗原、例えばＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体、例えばＣＤ１９  ＣＡＲを含む細胞を投与することにより、癌などの疾患を治療するための組成物及び方法が提供される。ＣＡＲ分子、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ及びＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を作成するための例示的構成要素は、本明細書に開示される。例示的ＰＤ−１阻害薬も本明細書に記載される。
【０２４１】
実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）と、本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬との併用療法は、以下の１つ以上をもたらす：ＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍活性の向上又は増加、ＣＡＲ発現細胞の増殖又は持続性の増加、ＣＡＲ発現細胞の浸潤の向上又は増加、腫瘍進行の阻害の向上、腫瘍進行の遅延、癌細胞増殖の阻害又は低下、及び／又は腫瘍負荷、例えば腫瘍容積、又はサイズの低下。ある実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞と、本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬との併用療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の持続性の増加又は向上、例えば複数のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の持続性の増加又は向上をもたらす。
【０２４２】
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の投与前又は投与後にＰＤ−１阻害薬を投与すると、例えばＰＤ−１阻害薬又はＣＡＲ発現細胞単独の投与と比較したとき、一部の癌において治療有効性の増加、例えば腫瘍進行及び／又は腫瘍成長の阻害の増加がもたらされる。
【０２４３】
ＰＤ−１は、免疫応答、例えば抗腫瘍免疫応答を下方制御することが知られている。ＰＤ−１及び／又はＰＤ−Ｌ１は、癌細胞又は癌関連細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）によっても発現され得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、一部の実施形態において、本明細書に記載される併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とＰＤ−１阻害薬とを投与される対象は、対象が以下の１つ以上：ＰＤ−１及び／又はＰＤ−Ｌ１を発現する、例えば高度に発現する癌、抗腫瘍免疫細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）が浸潤する癌、及び／又はＰＤ−１及び／又はＰＤ−Ｌ１を発現する、例えば高度に発現する癌関連細胞を有する場合、併用療法を投与されない対象又はＣＡＲ発現細胞若しくはＰＤ−１阻害薬を単独で投与される対象と比較して増加した抗腫瘍活性を有する可能性が高い。例えば、理論によって拘束されることを望むものではないが、ＰＤ−１阻害薬による治療により、抗腫瘍免疫応答の下方制御、例えば抗腫瘍免疫細胞、例えばＴＩＬの枯渇が防止されるか又は低下し、それによりＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍有効性が増加する。理論によって拘束されることを望むものではないが、併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞と、免疫チェックポイント阻害薬、例えばＰＤ−１阻害薬との投与により、Ｔ細胞の枯渇を低下させることができ、ＣＡＲ発現細胞の持続性の向上、例えば長期化につながる。ある実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害薬との併用の投与により、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の持続性の向上、例えば長期化がもたらされ得る。
【０２４４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本開示は、抗原、例えば本明細書に記載される抗原、例えばＣＤ１９を標的とする、例えばそれに特異的に結合するＣＡＲ分子（ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ）を含む免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を包含する。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲを発現するように操作される。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸配列を含む組換え核酸コンストラクトを含む。
【０２４５】
実施形態において、ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲは、抗原、例えばＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメイン、例えば抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、抗原結合ドメインの配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と連続しており、同じリーディングフレームにある。細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインとは、共刺激分子の細胞内ドメインの少なくとも一部分を含むＣＡＲの一部分を指す。
【０２４６】
本明細書に記載されるＣＡＲ分子（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子）の一部となり得る様々な構成要素の非限定的な例の配列が表１に挙げられ、ここで、「ａａ」は、アミノ酸を表し、「ｎａ」は、対応するペプチドをコードする核酸を表す。
【０２４７】
本明細書に記載される任意の方法又は組成物において、実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ１２３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＬＬ１  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＬＬ１  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＬＬ１  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ３３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ３３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
【０２４８】
【表１】
2019523301.tif 000002
【０２４９】
【表２】
2019523301.tif 000003
【０２５０】
【表３】
2019523301.tif 000004
【０２５１】
【表４】
2019523301.tif 000005
【０２５２】
【表５】
2019523301.tif 000006
【０２５３】
【表６】
2019523301.tif 000007
【０２５４】
一態様において、例示的ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、及び細胞内刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される細胞内刺激ドメイン）を含む。一態様において、例示的ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメイン）及び／又は細胞内一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン）を含む。
【０２５５】
一態様において、本発明のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）は、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナルドメイン、及びこれらの任意の組み合わせの群から選択される少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様において、本発明のＣＡＲは、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２８、ＣＤ２７、又はＩＣＯＳから選択される１つ以上の共刺激分子からのものである。
【０２５６】
例示的ＣＤ１９  ＣＡＲは、本明細書に記載される、例えば本明細書に記載される１つ以上の表中にあるＣＤ１９  ＣＡＲ、又はＸｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２３．２４（２０１４）：３７５０−９；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．２５（２０１３）：４１２９−３９、Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．１７（２０１３）：２９６５−７３、ＮＣＴ００５８６３９１、ＮＣＴ０１０８７２９４、ＮＣＴ０２４５６３５０、ＮＣＴ００８４０８５３、ＮＣＴ０２６５９９４３、ＮＣＴ０２６５０９９９、ＮＣＴ０２６４０２０９、ＮＣＴ０１７４７４８６、ＮＣＴ０２５４６７３９、ＮＣＴ０２６５６１４７、ＮＣＴ０２７７２１９８、ＮＣＴ００７０９０３３、ＮＣＴ０２０８１９３７、ＮＣＴ００９２４３２６、ＮＣＴ０２７３５０８３、ＮＣＴ０２７９４２４６、ＮＣＴ０２７４６９５２、ＮＣＴ０１５９３６９６、ＮＣＴ０２１３４２６２、ＮＣＴ０１８５３６３１、ＮＣＴ０２４４３８３１、ＮＣＴ０２２７７５２２、ＮＣＴ０２３４８２１６、ＮＣＴ０２６１４０６６、ＮＣＴ０２０３０８３４、ＮＣＴ０２６２４２５８、ＮＣＴ０２６２５４８０、ＮＣＴ０２０３０８４７、ＮＣＴ０２６４４６５５、ＮＣＴ０２３４９６９８、ＮＣＴ０２８１３８３７、ＮＣＴ０２０５０３４７、ＮＣＴ０１６８３２７９、ＮＣＴ０２５２９８１３、ＮＣＴ０２５３７９７７、ＮＣＴ０２７９９５５０、ＮＣＴ０２６７２５０１、ＮＣＴ０２８１９５８３、ＮＣＴ０２０２８４５５、ＮＣＴ０１８４０５６６、ＮＣＴ０１３１８３１７、ＮＣＴ０１８６４８８９、ＮＣＴ０２７０６４０５、ＮＣＴ０１４７５０５８、ＮＣＴ０１４３０３９０、ＮＣＴ０２１４６９２４、ＮＣＴ０２０５１２５７、ＮＣＴ０２４３１９８８、ＮＣＴ０１８１５７４９、ＮＣＴ０２１５３５８０、ＮＣＴ０１８６５６１７、ＮＣＴ０２２０８３６２、ＮＣＴ０２６８５６７０、ＮＣＴ０２５３５３６４、ＮＣＴ０２６３１０４４、ＮＣＴ０２７２８８８２、ＮＣＴ０２７３５２９１、ＮＣＴ０１８６０９３７、ＮＣＴ０２８２２３２６、ＮＣＴ０２７３７０８５、ＮＣＴ０２４６５９８３、ＮＣＴ０２１３２６２４、ＮＣＴ０２７８２３５１、ＮＣＴ０１４９３４５３、ＮＣＴ０２６５２９１０、ＮＣＴ０２２４７６０９、ＮＣＴ０１０２９３６６、ＮＣＴ０１６２６４９５、ＮＣＴ０２７２１４０７、ＮＣＴ０１０４４０６９、ＮＣＴ００４２２３８３、ＮＣＴ０１６８０９９１、ＮＣＴ０２７９４９６１、若しくはＮＣＴ０２４５６２０７（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載される抗ＣＤ１９  ＣＡＲを含む。
【０２５７】
抗原結合ドメイン
一態様において、本開示のＣＡＲは、別様には抗原結合ドメインと称される標的特異的結合エレメントを含む。一実施形態において、ＣＡＲのうちの抗原結合ドメインを含む部分は、抗原、例えば本明細書に記載される抗原、例えばＣＤ１９を標的とする、例えばそれに特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９を標的とし、例えばそれに特異的に結合する。
【０２５８】
抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びその機能性断片、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体、及び組換えフィブロネクチンドメインなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のドメインであり得る。一部の例では、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用されることになる同じ種に由来することが有益である。例えば、ヒトでの使用には、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体又は抗体断片の抗原結合ドメインにヒト又はヒト化残基を含むことが有益であり得る。従って、一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト抗体又は抗体断片を含む。
【０２５９】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載される抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗体）からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３、及び／又は本明細書に記載される抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗体）からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
【０２６０】
実施形態において、抗原結合ドメインは、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗原結合ドメインである。
【０２６１】
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを標的とし、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書に記載される。
【０２６２】
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９を標的とし、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書に記載される。
【０２６３】
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３を標的とし、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載される。
【０２６４】
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＬＬを標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に記載される。
【０２６５】
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ３３を標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に記載される。
【０２６６】
ＣＡＲ発現細胞を使用して標的化することのできる例示的標的抗原には、例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット、及び国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレット（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるとおり、限定されないが、特にＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ、及びＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４が含まれる。
【０２６７】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ヒト化ＣＤ１９に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含み得る。ＣＤ１９  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに指定される。
【０２６８】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表１〜表２に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１〜ＣＡＲ８のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに指定される。
【０２６９】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２、表６、及び表９に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１２３−１〜ＣＡＲ１２３−４及びｈｚＣＡＲ１２３−１〜ｈｚＣＡＲ１２３−３２のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに指定される。
【０２７０】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２又は配列番号１１に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットに指定される。
【０２７１】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ３３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２又は表９に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ３３−１〜ＣＡＲ−３３−９のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ３３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットに指定される。
【０２７２】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、メソテリンに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２〜表３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。メソテリンＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに指定される。
【０２７３】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表１又は表１６、配列番号２７１又は配列番号２７３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに指定される。
【０２７４】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＬＬ−１に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＬＬ−１  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットに指定される。
【０２７５】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに指定される。
【０２７６】
一実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ分子のいずれか（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ、及びＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４のいずれか）の抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３、及び／又は上記に挙げた抗原結合ドメインからの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた又は記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
【０２７７】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４５〜５６、６９〜８０、１０６、１０９、１１０、１１２、又は１１５から選択されるＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）、並びに配列番号４５〜５６、６９〜８０、１０６、１０９、１１０、１１２、又は１１５から選択されるＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載される（例えば、表２又は表３にある）軽鎖可変領域及び／又は本明細書に記載される（例えば、表２又は表３にある）重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表２又は表３のアミノ酸配列の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含むｓｃＦｖである。ある実施形態において、ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦＶ）は、表２又は表３に提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２又は表３のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表２又は表３に提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表２又は表３のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２７８】
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載される、例えば表２又は表３にあるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、本明細書に記載される、例えば表２又は表３にあるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載されるリンカーを介して付加される。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、又は６、好ましくは３又は４である。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向き：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域のいずれでもあり得る。
【０２７９】
別の実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する当技術分野において公知の任意の抗体又はその抗体断片を含む。
【０２８０】
一態様において、本発明の抗体は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、ｓｄＡｂなどのシングルドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片で形成される多重特異性抗体、及び抗体の単離ＣＤＲ又は他のエピトープ結合断片を含め、種々の他の形態で存在し得る。一態様において、本明細書に提供される抗体断片は、ｓｃＦｖである。一部の例では、ヒトｓｃＦｖは、酵母ディスプレイライブラリにも由来し得る。
【０２８１】
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に援用される欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書及び同第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）、ベニアリング又はリサーフェシング（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に援用される欧州特許第５９２，１０６号明細書及び同第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３を参照されたい）、鎖シャッフリング（例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）、並びに例えばそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９−２５（２００２），Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３−６０（２０００），Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−７９（２０００），Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７），Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５−９０４（１９９６），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ  Ｊ  Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）に記載の技術を含むが、これらに限定されない、当技術分野で知られる多様な方法を使用して産生できる。フレームワーク領域及びヒト化抗体に関する更なる情報は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（その全体が参照により援用される）の１６９〜１７０頁に記載されている。
【０２８２】
ヒト化抗体を製造するために使用する軽及び重の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少するためである。いわゆる「ベストフィット」法により、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を既知ヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングする。齧歯類に最も近いヒト配列を、その後、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れる（その内容全体が参照により本明細書に援用されるＳｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）を参照されたい）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖又は重鎖の全抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、数種の異なるヒト化抗体のために使用され得る（例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用されるＮｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）。一実施形態において、重鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＨ４＿４−５９生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、（例えば、配列番号１０９の）対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。一実施形態において、軽鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＫ３＿１．２５生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、（例えば、配列番号１０９の）対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。三次元コンホメーション構造に基づくヒト化抗体又は抗体断片の設計は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（その全体が参照により援用される）の１７１頁に詳細に記載されている。
【０２８３】
ヒト化抗体又は抗体断片は、元の抗体と同様の抗原特異性、例えば本開示ではヒトＣＤ１９結合能力を保持し得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体又は抗体断片は、ヒトＣＤ１９への結合の向上した親和性及び／又は特異性を有し得る。
【０２８４】
一態様において、結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９に結合する抗原結合ドメイン）は、断片、例えば単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。一態様において、結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、又は二機能性（例えば、二重特異性）ハイブリッド抗体である（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））。一態様において、本発明の抗体及びその断片は、野生型の又は増進した親和性でＣＤ１９タンパク質と結合する。
【０２８５】
ある例において、ｓｃＦｖは、当技術分野で知られる方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域とを一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合、（例えば、５〜１０のアミノ酸）、鎖内折りたたみが阻止される。鎖内折りたたみは、２つの可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例については、例えば、参照により本明細書に援用されるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号明細書、同第２００５／０１７５６０６号明細書、同第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。
【０２８６】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。一実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。別の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数である）などの一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２５）。一実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２８）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。
【０２８７】
一部の実施形態において、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９に結合する抗原結合ドメイン）若しくは他の部分又はＣＡＲ全体のアミノ酸配列は、改変することができ、例えば、本明細書に記載されるアミノ酸配列は、例えば、保存的置換によって改変することができる。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
【０２８８】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関連してパーセント同一性とは、同じである２つ以上の配列を指す。２つの配列は、比較ウィンドウ又は指示される領域にわたって最大限の一致となるように比較及びアラインメントしたとき、以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いて計測されるか、又は手動でのアラインメント及び目視検査によって計測されるとおりの同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドが指定の割合だけ２つの配列にある場合（例えば、指定の領域にわたって又は指定されない場合には配列全体にわたって６０％の同一性、任意選択で７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）、「実質的に同一」である。任意選択で、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド長（又は１０アミノ酸長）の領域にわたって又は１００〜５００又は１０００又はそれを超えるヌクレオチド長（又は２０、５０、２００又はそれを超えるアミノ酸長）の領域にわたって存在する。
【０２８９】
配列比較には、典型的には一方の配列が参照配列としての役割を果たし、それと試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験配列及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて部分配列の座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトプログラムパラメータを使用することができ、又は別のパラメータを指定し得る。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、参照配列と比べた試験配列のパーセント配列同一性を計算する。比較のための配列のアラインメント方法は、当技術分野において周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所的相同性アルゴリズムによるか、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによるか、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４の類似性検索方法によるか、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装によるか（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は手動でのアラインメント及び目視検査によって行うことができる（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）。
【０２９０】
パーセント配列同一性及び配列類似性の決定に好適なアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらについては、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を通じて公的に利用可能である。
【０２９１】
２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティーを使用した、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２行列又はＰＡＭ２５０行列のいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ重み付け及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重み付けを使用した、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズムを用いて決定することができる。
【０２９２】
一態様において、本開示は、機能上均等な分子を生じさせる出発抗体又は断片（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列の改変を企図する。例えば、ＣＡＲに含まれる結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９に結合する抗原結合ドメイン）、例えばｓｃＦｖのＶＨ又はＶＬは、抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの出発ＶＨ又はＶＬフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変することができる。本発明は、機能上均等な分子を生じさせるためのＣＡＲコンストラクト全体の改変、例えばＣＡＲコンストラクトの様々なドメインの１つ以上のアミノ酸配列の改変を企図する。ＣＡＲコンストラクトは、出発ＣＡＲコンストラクトの少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変することができる。
【０２９３】
一部の例では、ｓｃＦｖは、当技術分野において公知の方法により調製することができる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域を例えば可動性ポリペプチドリンカーを使用して共に連結することにより作製され得る。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さ及び／又はアミノ酸組成のリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含み得る。リンカー長さは、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折り畳まれて相互作用するかに大きい影響を与え得る。実際に、短いポリペプチドリンカー（例えば、５〜１０アミノ酸）が利用される場合、鎖内での折り畳みが妨げられる。２つの可変領域が一体となって機能性エピトープ結合部位を形成するには、鎖間の折り畳みも必要である。リンカーの向き及びサイズの例については、例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号明細書、同第２００５／０１７５６０６号明細書、同第２００７／００１４７９４号明細書、及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び同第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたく、参照により本明細書に援用される。
【０２９４】
例示的ＣＤ１９抗原結合ドメイン及びＣＡＲコンストラクト
本明細書に開示される例示的ＣＤ１９  ＣＡＲコンストラクトは、任意選択で任意選択のリーダー配列（例えば、それぞれ例示的リーダーアミノ酸及びヌクレオチド配列について配列番号１及び配列番号１２）が先行する、本明細書の表２又は表３に開示されるとおりのｓｃＦｖ（例えば、ヒトｓｃＦｖ）を含む。ｓｃＦｖ断片の配列（配列番号４５〜５６、６９〜８０、１０６、１０９、１１０、１１２、又は１１５のアミノ酸配列）は、本明細書の表２又は表３に提供される。ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物は、任意選択によるヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン（例えば、配列番号２又は配列番号１３の核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号６又は配列番号１７のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；細胞内ドメイン、例えば４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号７又は配列番号１８のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含み、及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメイン（例えば、配列番号９若しくは１０又は配列番号２０若しくは２１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）を更に含む。一実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するか又はその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のようなＲＣＡＲ分子におけるような別々のポリペプチドにある。
【０２９５】
一実施形態において、全長ＣＤ１９  ＣＡＲ分子は、表２若しくは３に提供するＣＡＲ１〜ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１〜ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５−Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、９５〜９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列のアミノ酸配列を含むか、又はこれらのヌクレオチド配列によりコードされる。
【０２９６】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表２若しくは３に提供するＣＡＲ１〜ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１〜ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５−Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、９５〜９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はこれらのヌクレオチド配列によりコードされる。
【０２９７】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表２若しくは３に提供するＣＡＲ１〜ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１〜ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５−Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、９５〜９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
【０２９８】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表２若しくは３に提供するＣＡＲ１〜ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１−ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５−Ｃ１の重鎖可変領域からの１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／若しくはＨＣＤＲ３）、及び／又は表２若しくは３に提供するＣＡＲ１〜ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１−ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５−Ｃ１の軽鎖可変領域の１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／若しくはＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、９５〜９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
【０２９９】
ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表４及び軽鎖可変ドメインについて表５に示す。
【０３００】
ＣＤ１９  ｓｃＦｖドメイン及びＣＤ１９  ＣＡＲ分子のアミノ酸及び核酸配列を表２及び３に提供する。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子は、例えば、表２及び３に提供される配列において下線を引いた本明細書に記載のリーダー配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ分子は、リーダー配列を含まない。
【０３０１】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＣＤ１９  ＣＡＲ）を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９を標的とする。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）に記載のＦＭＣ６３  ｓｃＦｖフラグメントと同一又は類似の結合特異性を有する。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）に記載のｓｃＦｖフラグメントを含む。ＣＤ１９抗体分子は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載の抗体分子（例えば、ヒト化抗ＣＤ１９抗体分子）であり得る。国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットは、様々なＣＡＲ構築物の結合及び有効性をアッセイする方法も記載している。
【０３０２】
一態様において、親マウスｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に提供され、本明細書に配列番号１０８として提供されるＣＡＲ１９構築物である。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載され、本明細書に配列番号１０９で提供されるｓｃＦｖである。
【０３０３】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに配列番号１２として提供され、本明細書に配列番号１０８として提供されるポリペプチド配列を含み、ここで、ｓｃＦｖドメインは、配列番号９３〜１０４から選択される１つ以上の配列によって置換される。一実施形態において、配列番号９３〜１０４のｓｃＦｖドメインは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するマウス由来のｓｃＦｖフラグメントである配列番号１０９のｓｃＦｖドメインのヒト化変異体である。このマウスｓｃＦｖのヒト化は、ＣＡＲＴ１９処置、例えばＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞での処置を受けている患者において、マウス特異的な残基がヒト抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導することが可能な臨床条件にとって望ましい場合がある。
【０３０４】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットで配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態において、アミノ酸配列は、
【化１】
2019523301.tif 000008
又はそれと実質的に相同な配列である。
【０３０５】
一実施形態において、アミノ酸配列は、
【化２】
2019523301.tif 000009
又はそれと実質的に相同な配列である。
【０３０６】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＵＳＡＮ名ＴＩＳＡＧＥＮＬＥＣＬＥＵＣＥＬ−Ｔを有する。実施形態では、ＣＴＬ０１９は、Ｔ細胞の遺伝子改変によって作製され、この改変は、ＥＦ−１αプロモーターの制御下のＣＴＬ０１９導入遺伝子を含有する自己不活性化、複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターでの形質導入による安定的挿入によって媒介される。ＣＴＬ０１９は、パーセント導入遺伝子陽性Ｔ細胞に基づいて対象に送達される導入遺伝子陽性Ｔ細胞と導入遺伝子陰性Ｔ細胞の混合物であり得る。
【０３０７】
他の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。
【０３０８】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のヒト化ＣＡＲ分子、例えば表２のヒト化ＣＤ１９ＣＡＲ分子であるか、又は表４及び５に記載のＣＤＲを有する。
【０３０９】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のマウスＣＡＲ分子、例えば表３のマウスＣＤ１９ＣＡＲ分子であるか、又は表４及び５に記載のＣＤＲを有する。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ分子は、表４及び５のマウス又はヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲの重鎖可変領域からの１つ、２つ、及び／若しくは３つのＣＤＲ、並びに／又は軽鎖可変領域からの１つ、２つ、及び／若しくは３つのＣＤＲを含む。
【０３１１】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３、並びに／又は本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に列挙した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
【０３１２】
マウス抗ＣＤ１９抗体のヒト化
マウスＣＤ１９抗体のヒト化は、ＣＡＲＴ１９処置、即ちＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞での処置を受けている患者において、マウス特異的な残基がヒト抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導することが可能な臨床条件にとって望ましい。ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ配列の産生、特徴付け及び効能は、実施例１〜５（１１５〜１５９頁）、例えば表３、４及び５（１２５〜１４７頁）を含めて、その全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットにおいて説明されている。
【０３１３】
ＣＡＲ構築物、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ構築物
国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載のＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の特定の配列を本明細書において再現する。
【０３１４】
ヒト化ｓｃＦｖ断片の配列（配列番号４５〜５６）を以下の表２に提供する。完全ＣＡＲコンストラクトは、配列番号４５〜５６を例えば表１からの以下に示す追加の配列と共に使用して作成して、配列番号９３〜１０４の完全ＣＡＲコンストラクトを作成した。
【０３１５】
これらのクローンの全ては、４−１ＢＢに由来する共刺激ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含んだ。
【０３１６】
【表７】
2019523301.tif 000010
【０３１７】
【表８】
2019523301.tif 000011
【０３１８】
【表９】
2019523301.tif 000012
【０３１９】
【表１０】
2019523301.tif 000013
【０３２０】
【表１１】
2019523301.tif 000014
【０３２１】
【表１２】
2019523301.tif 000015
【０３２２】
【表１３】
2019523301.tif 000016
【０３２３】
【表１４】
2019523301.tif 000017
【０３２４】
【表１５】
2019523301.tif 000018
【０３２５】
【表１６】
2019523301.tif 000019
【０３２６】
【表１７】
2019523301.tif 000020
【０３２７】
【表１８】
2019523301.tif 000021
【０３２８】
【表１９】
2019523301.tif 000022
【０３２９】
【表２０】
2019523301.tif 000023
【０３３０】
【表２１】
2019523301.tif 000024
【０３３１】
【表２２】
2019523301.tif 000025
【０３３２】
【表２３】
2019523301.tif 000026
【０３３３】
【表２４】
2019523301.tif 000027
【０３３４】
【表２５】
2019523301.tif 000028
【０３３５】
【表２６】
2019523301.tif 000029
【０３３６】
【表２７】
2019523301.tif 000030
【０３３７】
【表２８】
2019523301.tif 000031
【０３３８】
【表２９】
2019523301.tif 000032
【０３３９】
【表３０】
2019523301.tif 000033
【０３４０】
【表３１】
2019523301.tif 000034
【０３４１】
【表３２】
2019523301.tif 000035
【０３４２】
【表３３】
2019523301.tif 000036
【０３４３】
【表３４】
2019523301.tif 000037
【０３４４】
【表３５】
2019523301.tif 000038
【０３４５】
【表３６】
2019523301.tif 000039
【０３４６】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、表２又は３に列挙する重鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を更に含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、表２又は３に列挙する軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、表２又は３に記載する軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３の１つ、２つ、又は全て、並びに表２又は３に記載する重鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３の１つ、２つ、又は全てを含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、又はそれらの組み合わせに従って定義される。
【０３４９】
ｓｃＦｖドメインのヒト化ＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表４及び軽鎖可変ドメインについて表５に示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
【０３５０】
【表３７】
2019523301.tif 000040
【０３５１】
【表３８】
2019523301.tif 000041
【０３５２】
次にＣＡＲ  ｓｃＦｖ断片をレンチウイルスベクターにクローニングして、単一のコードフレームに、発現にＥＦ１αプロモーター（配列番号１１）を使用した完全長ＣＡＲコンストラクトを作成した。
【０３５３】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単一特異性又は二重特異性抗体）又はその断片若しくはコンジュゲートに由来する（例えば、そのアミノ酸配列を含む）抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３）（参照により本明細書に援用される）に記載されるとおりのヒト化抗原結合ドメイン、又はそのコンジュゲートである。他の例示的抗ＣＤ１９抗体又はその断片若しくはコンジュゲートとしては、限定されないが、ＣＤ１９を標的とする二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ｅｎｇａｇｅｒ）（例えば、ブリナツモマブ）、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＥＤＩ−５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ  ＬＬＣ）、コンボトックス（Ｃｏｍｂｏｔｏｘ）、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（Ｍａｓｏｎｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、ＭＯＲ−２０８（ＸｍＡｂ−５５７４とも称される；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＸｍＡｂ−５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ−１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）が挙げられる。例えば、Ｈａｍｍｅｒ．ＭＡｂｓ．４．５（２０１２）：５７１−７７を参照されたい。ブリナツモマブは、１つがＣＤ１９に結合し、１つがＣＤ３に結合する、２つのｓｃＦｖで構成される二重特異性抗体である。ブリナツモマブは、Ｔ細胞が癌細胞を攻撃するように仕向ける。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；臨床試験識別番号ＮＣＴ００２７４７４２及びＮＣＴ０１２０９２８６を参照されたい。ＭＥＤＩ−５５１は、Ｆｃが増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有するように操作されているヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及び臨床試験識別番号ＮＣＴ０１９５７５７９を参照されたい。コンボトックスは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する免疫毒素の混合物である。免疫毒素は、脱グリコシル化リシンＡ鎖に融合したｓｃＦｖ抗体断片で構成される。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；ａｎｄ  Ｈｅｒｒｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３１．１２（２００９）：９３６−４１；Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５４．４（２０１１）：４７１−６を参照されたい。ＤＴ２２１９ＡＲＬは、２つのｓｃＦｖ及びトランケート型ジフテリア毒素を含む、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする二重特異性免疫毒素である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及び臨床試験識別番号ＮＣＴ００８８９４０８を参照されたい。ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａは、合成細胞傷害性細胞死滅剤のモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）に連結した抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及び臨床試験識別番号ＮＣＴ０１７８６０９６及びＮＣＴ０１７８６１３５を参照されたい。ＳＡＲ３４１９は、切断可能なリンカーを介してメイタンシン誘導体にコンジュゲートした抗���Ｄ１９ヒト化モノクローナル抗体を含む抗ＣＤ１９抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０．２（２０１２）：２７７６−８２；Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；臨床試験識別番号ＮＣＴ００５４９１８５；及びＢｌａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１１；１７：６４４８−５８を参照されたい。ＸｍＡｂ−５８７１は、Ｆｃ操作ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。ＭＤＸ−１３４２は、増強されたＡＤＣＣを有するヒトＦｃ操作抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。実施形態において、抗体分子は、二重特異性抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ３分子である。例えば、ＡＦＭ１１は、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的とする二重特異性抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；及び臨床試験識別番号ＮＣＴ０２１０６０９１を参照されたい。一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体は、療法剤、例えば化学療法剤、ペプチドワクチン（Ｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載されるものなど）、免疫抑制剤、又は免疫除去剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、ＦＫ５０６、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、サイトキシン、フルダラビン、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、又はサイトカインにコンジュゲートされるか、又は他の方法で結合する。
【０３５４】
一実施形態において、ＣＤ１９に対する抗原結合ドメインは、本明細書の表に記載される抗原結合ドメインの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＤ１９抗原結合ドメインは、任意のＣＤ１９  ＣＡＲ、例えばＬＧ−７４０からのものであり得る；米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１３  ５４（２）：２５５−２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（１７）：２９６５−２９７３（２０１３）；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７−４８２８（２０１１）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１６（２０）：４０９９−１０２（２０１０）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２５）：４１２９−３９（２０１３）；及び１６ｔｈ  Ａｎｎｕ  Ｍｅｅｔ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｇｅｎ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ  １５−１８，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ  １０（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０３５５】
例示的ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン及びＣＡＲコンストラクト
実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト又はヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、ここで、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表７又は表８に挙げられる任意の抗ＢＭＣＡ重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む。
【０３５６】
一実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載される（例えば、表７又は表８にある）軽鎖可変領域及び／又は本明細書に記載される（例えば、表７又は表８にある）重鎖可変領域を含む。
【０３５７】
一実施形態において、コードされる抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表７又は表８のアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。
【０３５８】
ある実施形態において、ヒト又はヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表７又は表８に提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％（例えば、９５〜９９％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表７又は表８に提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％（例えば、９５〜９９％）の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０３５９】
【表３９】
2019523301.tif 000042
【０３６０】
【表４０】
2019523301.tif 000043
【０３６１】
【表４１】
2019523301.tif 000044
【０３６２】
【表４２】
2019523301.tif 000045
【０３６３】
【表４３】
2019523301.tif 000046
【０３６４】
【表４４】
2019523301.tif 000047
【０３６５】
【表４５】
2019523301.tif 000048
【０３６６】
【表４６】
2019523301.tif 000049
【０３６７】
【表４７】
2019523301.tif 000050
【０３６８】
【表４８】
2019523301.tif 000051
【０３６９】
【表４９】
2019523301.tif 000052
【０３７０】
【表５０】
2019523301.tif 000053
【０３７１】
【表５１】
2019523301.tif 000054
【０３７２】
【表５２】
2019523301.tif 000055
【０３７３】
【表５３】
2019523301.tif 000056
【０３７４】
【表５４】
2019523301.tif 000057
【０３７５】
【表５５】
2019523301.tif 000058
【０３７６】
【表５６】
2019523301.tif 000059
【０３７７】
【表５７】
2019523301.tif 000060
【０３７８】
【表５８】
2019523301.tif 000061
【０３７９】
【表５９】
2019523301.tif 000062
【０３８０】
【表６０】
2019523301.tif 000063
【０３８１】
【表６１】
2019523301.tif 000064
【０３８２】
【表６２】
2019523301.tif 000065
【０３８３】
【表６３】
2019523301.tif 000066
【０３８４】
【表６４】
2019523301.tif 000067
【０３８５】
【表６５】
2019523301.tif 000068
【０３８６】
【表６６】
2019523301.tif 000069
【０３８７】
【表６７】
2019523301.tif 000070
【０３８８】
【表６８】
2019523301.tif 000071
【０３８９】
【表６９】
2019523301.tif 000072
【０３９０】
【表７０】
2019523301.tif 000073
【０３９１】
【表７１】
2019523301.tif 000074
【０３９２】
【表７２】
2019523301.tif 000075
【０３９３】
【表７３】
2019523301.tif 000076
【０３９４】
【表７４】
2019523301.tif 000077
【０３９５】
【表７５】
2019523301.tif 000078
【０３９６】
【表７６】
2019523301.tif 000079
【０３９７】
【表７７】
2019523301.tif 000080
【０３９８】
【表７８】
2019523301.tif 000081
【０３９９】
【表７９】
2019523301.tif 000082
【０４００】
【表８０】
2019523301.tif 000083
【０４０１】
【表８１】
2019523301.tif 000084
【０４０２】
【表８２】
2019523301.tif 000085
【０４０３】
【表８３】
2019523301.tif 000086
【０４０４】
【表８４】
2019523301.tif 000087
【０４０５】
【表８５】
2019523301.tif 000088
【０４０６】
【表８６】
2019523301.tif 000089
【０４０７】
【表８７】
2019523301.tif 000090
【０４０８】
【表８８】
2019523301.tif 000091
【０４０９】
【表８９】
2019523301.tif 000092
【０４１０】
【表９０】
2019523301.tif 000093
【０４１１】
【表９１】
2019523301.tif 000094
【０４１２】
【表９２】
2019523301.tif 000095
【０４１３】
【表９３】
2019523301.tif 000096
【０４１４】
【表９４】
2019523301.tif 000097
【０４１５】
【表９５】
2019523301.tif 000098
【０４１６】
【表９６】
2019523301.tif 000099
【０４１７】
【表９７】
2019523301.tif 000100
【０４１８】
【表９８】
2019523301.tif 000101
【０４１９】
【表９９】
2019523301.tif 000102
【０４２０】
【表１００】
2019523301.tif 000103
【０４２１】
【表１０１】
2019523301.tif 000104
【０４２２】
【表１０２】
2019523301.tif 000105
【０４２３】
【表１０３】
2019523301.tif 000106
【０４２４】
【表１０４】
2019523301.tif 000107
【０４２５】
【表１０５】
2019523301.tif 000108
【０４２６】
【表１０６】
2019523301.tif 000109
【０４２７】
【表１０７】
2019523301.tif 000110
【０４２８】
【表１０８】
2019523301.tif 000111
【０４２９】
【表１０９】
2019523301.tif 000112
【０４３０】
【表１１０】
2019523301.tif 000113
【０４３１】
【表１１１】
2019523301.tif 000114
【０４３２】
【表１１２】
2019523301.tif 000115
【０４３３】
【表１１３】
2019523301.tif 000116
【０４３４】
【表１１４】
2019523301.tif 000117
【０４３５】
二特異性ＣＡＲ
一実施形態において、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２以下の抗原に特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する第１免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）である。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複する。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複しない。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）にある。ある実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントを含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントを含む。
【０４３６】
一実施形態において、抗体分子は、多特異性（例えば、二特異性又は三特異性）抗体分子である。二特異性又はヘテロ二量体抗体分子を産生するためのプロトコルは、当技術分野で知られており、例えば米国特許第５７３１１６８号明細書に記載の「ノブインアホール」アプローチ；例えば、国際公開第０９／０８９００４号パンフレット、国際公開第０６／１０６９０５号パンフレット及び国際公開第２０１０／１２９３０４号パンフレットに記載のような静電的ステアリングＦｃ対形成；例えば、国際公開第０７／１１０２０５号パンフレットに記載のような鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、国際公開第０８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットに記載のようなＦａｂアーム交換；例えば、米国特許第４４３３０５９号明細書に記載のような、例えばアミン反応性基及びスルフヒドリル反応性基を有するヘテロ二官能性試薬を使用して二特異性構造を製造するための、抗体架橋結合による二重抗体コンジュゲート；例えば、米国特許第４４４４８７８号明細書に記載のような、２つの鎖間のジスルフィド結合の還元及び酸化のサイクルを経る異なる抗体からの半抗体（重−軽鎖対又はＦａｂ）の組み換えにより産生する二特異性抗体決定基；例えば、米国特許第５２７３７４３号明細書に記載のような、三機能性抗体、スルフヒドリル反応性基により架橋された３Ｆａｂ’フラグメント；例えば、米国特許第５５３４２５４号明細書に記載のような、生合成結合タンパク質、例えばＣ末端テール、好ましくはジスルフィド又はアミン反応性化学架橋結合により架橋されたｓｃＦｖの対；例えば、米国特許第５５８２９９６号明細書に記載のような、二機能性抗体、例えば置換された定常ドメインを有する、ロイシンジッパー（例えば、ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｊｕｎ）により二量体化された異なる結合特性を有するＦａｂフラグメント；例えば、米国特許第５５９１８２８号明細書に記載のような、二特異性及びオリゴ特異性一価及びオリゴ価受容体、例えば一方の抗体のＣＨ１領域と他方の典型的には軽鎖を伴う抗体のＶＨ領域との間のポリペプチドスペーサーを経て連結した２つの抗体（２つのＦａｂフラグメント）のＶＨ−ＣＨ１領域；例えば、米国特許第５６３５６０２号明細書に記載のような、二特異性ＤＮＡ−抗体コンジュゲート、例えば二本鎖切片のＤＮＡを経た抗体又はＦａｂフラグメントの架橋；例えば、米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のような、二特異性融合タンパク質、例えば親水性らせん状ペプチドリンカーを間に含み、完全定常領域を含む、２つのｓｃＦｖを含む発現構築物；例えば、米国特許第５８３７２４２号明細書に記載のような、多価及び多特異性結合タンパク質、例えばＩｇ重鎖可変領域の結合領域を有する第１ドメイン及びＩｇ軽鎖可変領域の結合領域を有する第２ドメインを有し、一般に二特異性抗体（二特異性、三特異性、四特異性の分子を作るための高次構造も包含される）と呼ばれるポリペプチドの二量体；例えば、米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のような、二特異性／多価分子を形成するように二量体化できる、ペプチドスペーサーで抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域に更に結合された、連結ＶＬ鎖及びＶＨ鎖を有するミニボディ構築物；二特異性抗体を形成するように二量体を形成できる、いずれかの方向で短ペプチドリンカー（例えば、５つ又は１０のアミノ酸）により、又はリンカーなしで連結されたＶＨ及びＶＬドメイン；例えば、米国特許第５８４４０９４号明細書に記載のような三量体及び四量体；例えば、米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のような、一連のＦＶ（又はｓｃＦｖ）を形成するように更にＶＬドメインと結合した、Ｃ末端で架橋可能基とのペプチド結合により連結した一連のＶＨドメイン（又はファミリーメンバーにおけるＶＬドメイン）；及び例えば、米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のような、ｓｃＦＶ又は二特異性抗体形態の両方を使用して、例えばホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成するように非共有又は化学架橋により多価構造に合わさっている、ペプチドリンカーにより連結したＶＨドメイン及びＶＬドメインの両方を有する一本鎖結合ポリペプチドを例えば含むが、これらに限定されない。多特異性及び二特異性分子並びにそれを製造するための更なる例は、例えば、米国特許第５９１０５７３号明細書、米国特許第５９３２４４８号明細書、米国特許第５９５９０８３号明細書、米国特許第５９８９８３０号明細書、米国特許第６００５０７９号明細書、米国特許第６２３９２５９号明細書、米国特許第６２９４３５３号明細書、米国特許第６３３３３９６号明細書、米国特許第６４７６１９８号明細書、米国特許第６５１１６６３号明細書、米国特許第６６７０４５３号明細書、米国特許第６７４３８９６号明細書、米国特許第６８０９１８５号明細書、米国特許第６８３３４４１号明細書、米国特許第７１２９３３０号明細書、米国特許第７１８３０７６号明細書、米国特許第７５２１０５６号明細書、米国特許第７５２７７８７号明細書、米国特許第７５３４８６６号明細書、米国特許第７６１２１８１号明細書、米国特許出願公開第２００２００４５８７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２０７６４０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２１０３３４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２０７３４６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２１１０７８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２１９６４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２２０３８８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２４２８４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００３４０３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００４３５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０６９５５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０７９１７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１００５４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１６３７８２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５２６６４２５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６０８３７４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６１２０９６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２６３３６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７００４９０９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７０８７３８１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１２８１５０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１４１０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１５４９０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７２７４９８５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０５０３７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０６９８２０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１５２６４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１７１８５５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２４１８８４Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２５４５１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２６０７３８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１３０１０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１４８９０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１５５２７５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３５９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３２８１１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３４１０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２６３３９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２７４６４９Ａ１号明細書、欧州特許第３４６０８７Ａ２号明細書、国際公開第０００６６０５Ａ２号パンフレット、国際公開第０２０７２６３５Ａ２号パンフレット、国際公開第０４０８１０５１Ａ１号パンフレット、国際公開第０６０２０２５８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０４４８８７Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０９５３３８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７１３７７６０Ａ２号パンフレット、国際公開第２００８１１９３５３Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０２１７５４Ａ２号パンフレット、国際公開第２００９０６８６３０Ａ１号パンフレット、国際公開第９１０３４９３Ａ１号パンフレット、国際公開第９３２３５３７Ａ１号パンフレット、国際公開第９４０９１３１Ａ１号パンフレット、国際公開第９４１２６２５Ａ２号パンフレット、国際公開第９５０９９１７Ａ１号パンフレット、国際公開第９６３７６２１Ａ２号パンフレット、国際公開第９９６４４６０Ａ１号パンフレットに見ることができる。上に引用した出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０４３７】
二特異性抗体分子の各抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流にあり得る。一実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）の上流のそのＶＨ（ＶＨ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）の上流のそのＶＨ（ＶＨ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有する。他の実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）の上流のそのＶＬ（ＶＬ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）の上流のそのＶＬ（ＶＬ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有する。任意選択により、リンカーは、２つの抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２として配列される場合にＶＬ１とＶＬ２との間に、又は構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２として配置される場合にＶＨ１とＶＨ２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）であり得る。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。任意選択により、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。任意選択により、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数リンカーを有する構築物において、リンカーの任意の２つ以上は、同じであるか又は異なり得る。従って、一実施形態において、二特異性ＣＡＲは、本明細書に記載のような配置でＶＬ、ＶＨ及び任意選択により１つ以上のリンカーを含む。
【０４３８】
特定の実施形態において、抗体分子は、第１のＢ細胞エピトープに対する第１の結合特異性と、別のＢ細胞抗原に対する第２の結合特異性とを有する二重特異性抗体分子である。例えば、一部の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＣＤ１９に対する第１の結合特異性と、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａの１つ以上に対する第２の結合特異性とを有する。一部の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＣＤ１９に対する第１の結合特異性と、ＣＤ２２に対する第２の結合特異性とを有する。
【０４３９】
キメラＴＣＲ
一態様において、本発明のＣＤ１９抗原及び抗原フラグメント（例えば、表２又は３に開示されるもの）を、ＣＤ１９に特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）鎖の１つ以上の定常ドメイン、例えばＴＣＲα又はＴＣＲβ鎖に移植できる。理論に拘束されないが、キメラＴＣＲは、抗原結合によりＴＣＲ複合体を経てシグナル伝達すると考えられる。例えば、本明細書に記載するようなＣＤ１９  ｓｃＦｖを、ＴＣＲ鎖、例えばＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の定常ドメイン、例えば少なくとも細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの部分に移植できる。別の例として、ＣＤ１９抗体フラグメント、例えば本明細書に記載のようなＶＬドメインを、ＴＣＲα鎖の定常ドメインに移植でき、ＣＤ１９抗体フラグメント、例えば本明細書に記載のようなＶＨドメインを、ＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植できる（又は代替的にＶＬドメインをＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植し得、ＶＨドメインをＴＣＲα鎖に移植し得る）。別の例として、ＣＤ１９抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲ、例えば表４又は５に記載のＣＤ１９抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲをＴＣＲα及び／又はβ鎖に移植して、ＣＤ１９に特異的に結合するキメラＴＣＲを生成し得る。例えば、本明細書に記載のＬＣＤＲをＴＣＲα鎖の可変ドメインに移植し得、本明細書に記載のＨＣＤＲをＴＣＲβ鎖の可変ドメインに移植し得、又はその逆も可能である。このようなキメラＴＣＲは、当技術分野で知られる方法により産生し得る（例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０００；７：１３６９−１３７７；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００４；１１：４８７−４９６；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ａｐｒ；１９（４）：３６５−７４）。
【０４４０】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５アミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関係する１つ以上の更なるアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５アミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つに関連するものであり、使用され、例えば、一実施形態において、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン又はヒンジドメインが由来するのと同じタンパク質からのものであり得る。別の態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの任意の他のドメインが由来するのと同じタンパク質に由来しない。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択され又はアミノ酸置換による改変ができる。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。
【０４４１】
膜貫通ドメインは、天然由来又は組み換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通ドメインを含み得る。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、及びＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０４４２】
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、一実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載されるＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号２のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号６の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
【０４４３】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列の配列番号３のヒンジを含む。
【０４４４】
一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、ヌクレオチド配列の配列番号１４によってコードされるヒンジを含む。
【０４４５】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列の配列番号４のヒンジを含む。
【０４４６】
一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１５のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０４４７】
一態様において、膜貫通ドメインは組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
【０４４８】
任意選択により、２〜１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達領域との間に結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む（配列番号５）。一実施形態において、リンカーは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣのヌクレオチド配列によりコードされる（配列番号１６）。
【０４４９】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ及びその一部分を含む。
【０４５０】
細胞質ドメイン
ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、概して、ＣＡＲが導入された免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化した機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。従って、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、且つ細胞が特殊化した機能を果たすように仕向けるタンパク質の一部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を利用し得るが、多くの場合、必ずしも鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケート部分が使用される範囲において、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりにかかるトランケート部分が使用され得る。従って、用語の細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケート部分を含むことが意味される。
【０４５１】
本発明のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又はバリアント及び同じ機能的能力を有するあらゆる組み換え配列を含む。
【０４５２】
ＴＣＲ単独により産生されたシグナルは、Ｔ細胞の完全活性化には不十分であり、二次及び／又は共刺激性シグナルも必要であることが知られている。そのため、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激性シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。
【０４５３】
一次細胞質シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０４５４】
本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインの例には、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２のものが含まれる。一実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、例えば本明細書に記載されるＣＤ３−ζ配列の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば一次シグナル伝達ドメインを含む。
【０４５５】
一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
【０４５６】
本発明で特に有用である初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む分子の更なる例は、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ３２のものを含む。
【０４５７】
ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをそれ自体で含むことができ又は本発明のＣＡＲに関連して、有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激性分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１（ＰＤ１としても知られる）、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の拡大培養、エフェクター機能、及び生存を亢進させることが実証されており、インビボでヒトＴ細胞持続性及び抗腫瘍活性を増大させる（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６−７０６）。かかる共刺激分子の更なる例としては、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、インビボでヒトＴ細胞残留性及び抗腫瘍活性を増強することが示されている（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６−７０６）。
【０４５８】
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達ドメインは、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択により、例えば、２〜１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達ドメイン間に結合を形成し得る。一実施形態において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。一実施形態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
【０４５９】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、リンカー分子はグリシン残基である。一実施形態において、リンカー分子はアラニン残基である。
【０４６０】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号７のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号９（変異体ＣＤ３ζ）又は配列番号１０（野生型ヒトＣＤ３ζ）のシグナル伝達ドメインである。
【０４６１】
一態様において、細胞内は、ＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメインと４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインとを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１８の核酸配列によってコードされる。
【０４６２】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号４４の核酸配列によりコードされる。
【０４６３】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３７の核酸配列によりコードされる。
【０４６４】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号３８又は４３のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４４の核酸配列によりコードされる。
【０４６５】
ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
ある実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ分子は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の１つ以上の成分を含み、それによりＮＫＲ−ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、以下のナチュラルキラー細胞受容体：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、例えばＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１、及びＫＩＲ３ＤＰ１；自然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）、例えばＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー、例えばＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ−Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、及びＣＤ２Ｆ−１０；Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＣＤ１６、及びＣＤ６４；及びＬｙ４９受容体、例えばＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃのいずれかからの膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン、又は細胞質ドメインであり得る。本明細書に記載されるＮＫＲ−ＣＡＲ分子は、アダプター分子又は細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ成分を含むＣＡＲ分子の例示的構成及び配列は、国際公開第２０１４／１４５２５２号パンフレット（この内容は、参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【０４６６】
スプリットＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲ手法については、国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び同第２０１４／０５５６５７号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に更に詳細に記載される。簡潔に言えば、スプリットＣＡＲシステムは、第１の抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢ）を有する第１のＣＡＲを発現する細胞を含み、この細胞は、第２の抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を有する第２のＣＡＲも発現する。細胞が第１の抗原に遭遇すると、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２の抗原に遭遇すると、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、細胞死滅活性が始まる。従って、このＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下に限り完全に活性化される。実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、本明細書に記載される腫瘍抗原又はＢ細胞抗原を認識し、例えば本明細書に記載される抗原結合ドメインを含み、且つ第２の抗原結合ドメインは、第２の抗原、例えば本明細書に記載される第２の腫瘍抗原又は第２のＢ細胞抗原を認識する。
【０４６７】
ＣＡＲと他の分子又は薬剤との共発現
第２のＣＡＲの共発現
一態様において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、例えば、同じ標的（ＣＤ１９）又は異なる標的（例えば、ＣＤ１９以外の標的、例えばＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）に対する第２のＣＡＲ、例えば異なる抗原結合ドメインを含む第２のＣＡＲを更に含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ、及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。第１のＣＡＲへの共刺激性シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ−４０又はＩＣＯＳ及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９結合ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインとを含む第１のＣＤ１９  ＣＡＲと、ＣＤ１９以外の抗原（例えば、ＣＤ１９以外の標的、例えばＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）を標的とする第２のＣＡＲであって、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、一次シグナル伝達ドメインとを含む第２のＣＡＲとを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９結合ドメインと、膜貫通ドメインと、一次シグナル伝達ドメインとを含む第１のＣＤ１９  ＣＡＲと、ＣＤ１９以外の抗原（例えば、ＣＤ１９以外の標的、例えばＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）を標的とする第２のＣＡＲであって、その抗原に対する抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激シグナル伝達ドメインとを含む第２のＣＡＲとを含む。
【０４６８】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばＣＤ１９を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβの細胞内ドメインであり得る。
【０４６９】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が２つ以上の異なるＣＡＲを含むとき、種々のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものである。例えば、第１及び第２のＣＡＲを発現する細胞は、第２のＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えばＶＨＨである第２のＣＡＲの抗原結合ドメインと結合を形成しない、例えばフラグメント、例えばｓｃＦｖとしての第１のＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。
【０４７０】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子を含み、相補的決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４鎖抗体由来の単一ドメイン、操作されたドメイン及び抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドを含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の又は将来的な単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
【０４７１】
一態様において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であるような、魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域由来の単一ドメイン分子を製造する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。
【０４７２】
別の態様によると、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８に記載されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインは、ここでは、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するためにＶＨＨ又はナノボディとして知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコ由来であり得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
【０４７３】
ＳＤＡＢ分子は、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロ産生され得る（例えば、ファージディスプレイにより選択）。
【０４７４】
受容体の抗原結合ドメイン間を相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１つ以上がその同族抗原に結合することを阻止するため、望ましくない可能性があることも判明した。従って、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する、抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。また、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸並びにこのような細胞及び核酸を製造及び使用する方法である。一実施形態において、第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の抗原結合ドメインの一方は、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。
【０４７５】
一実施形態において、本発明は、第１及び第２のＣＡＲを含み、ここで、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０４７６】
一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０４７７】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの存在により実質的に低減されない。一実施形態において、第２のＣＡＲの存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの非存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。
【０４７８】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１及び第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なく互いに結合する。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく互いに結合する。
【０４７９】
ＣＡＲ活性を増強する薬剤の共発現
別の態様において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性又は適合性を増強する薬剤を更に発現することができる。
【０４８０】
例えば、一実施形態において、薬剤は、Ｔ細胞機能を調整又は調節する、例えば阻害する分子を阻害する薬剤であり得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能を調整又は調節する分子は、阻害性分子である。阻害性分子、例えばＰＤ−１は、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下させ得る。阻害性分子の例としては、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβが挙げられる。
【０４８１】
実施形態において、薬剤、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ、又は例えば本明細書に記載されるとおりの例えば阻害性タンパク質又はシステム、例えばクラスター化した規則的な間隔の短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又はジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＣＡＲ発現細胞におけるＴ細胞機能を調整又は調節する、例えば阻害する分子の発現を阻害することができる。ある実施形態において、薬剤は、ｓｈＲＮＡ、例えば本明細書に記載されるｓｈＲＮＡである。ある実施形態において、Ｔ細胞機能を調整又は調節する、例えば阻害する薬剤は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。例えば、Ｔ細胞機能を調整又は調節する、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子は、ＣＡＲの成分、例えば全ての成分をコードする核酸に連結される。
【０４８２】
一実施形態において、阻害性分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメインと会合した第１のポリペプチド、例えば阻害性分子を含む。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ−１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド並びに本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７６５−７５）。ＰＤ−１に対する２リガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。
【０４８３】
一実施形態において、阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ−１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む薬剤を膜貫通ドメイン及び４−１ＢＢ及びＣＤ３ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合できる（本明細書ではＰＤ１  ＣＡＲと称する）。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲと組み合わせで使用したとき、Ｔ細胞の残留性を改善する。一実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２４に下線で示されるＰＤ−１の細胞外ドメイン及び配列番号２４のアミノ酸１〜２１におけるシグナル配列を含むＰＤ１  ＣＡＲである。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
【０４８４】
一実施形態において、Ｎ末端シグナル配列を含まないＰＤ１  ＣＡＲは、配列番号２２に提供されるアミノ酸配列を含む。
【０４８５】
一実施形態において、薬剤は、Ｎ末端シグナル配列を含むＰＤ１  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＰＤ１  ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲの核酸配列は、表１に示され、配列番号２３においてＰＤ１  ＥＣＤに下線を付す。
【０４８６】
別の例において、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、共刺激分子又は共刺激分子リガンドであり得る。共刺激分子の例としては、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体、並びにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられる。かかる共刺激分子の更なる例としては、例えば、本明細書に記載されるとおりのＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが挙げられる。共刺激分子リガンドの例としては、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＧＩＴＲＬ、及びＬＩＧＨＴが挙げられる。実施形態において、共刺激分子リガンドは、ＣＡＲの共刺激分子ドメインと異なる共刺激分子のリガンドである。実施形態において、共刺激分子リガンドは、ＣＡＲの共刺激分子ドメインと同じ共刺激分子のリガンドである。ある実施形態において、共刺激分子リガンドは、４−１ＢＢＬである。ある実施形態において、共刺激リガンドは、ＣＤ８０又はＣＤ８６である。ある実施形態において、共刺激分子リガンドは、ＣＤ７０である。実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、１つ以上の追加の共刺激分子又は共刺激分子リガンドを発現するように更に操作することができる。
【０４８７】
ＣＡＲ及びケモカイン受容体の共発現
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、ケモカイン受容体分子を更に含む。Ｔ細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂ又はＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、黒色腫及び神経芽腫を含むＣＣＬ２−又はＣＸＣＬ１分泌固形腫瘍への輸送を促進する（Ｃｒａｄｄｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０  Ｏｃｔ；３３（８）：７８０−８及びＫｅｒｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００２  Ｎｏｖ  １；１３（１６）：１９７１−８０）。そのため、理論に拘束されることを望まないが、腫瘍、例えば固形腫瘍により分泌されるケモカインを認識するＣＡＲ発現細胞で発現されるケモカイン受容体は、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への帰巣を改善し、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への浸潤を促進し、ＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍効果を増強すると考えられる。ケモカイン受容体分子は、天然に存在する又は組み換えケモカイン受容体又はそのケモカイン結合フラグメントを含む。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔｘ）における発現に適するケモカイン受容体分子は、ＣＸＣケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６又はＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０又はＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例えば、ＣＸ３ＣＲ１）、ＸＣケモカイン受容体（例えば、ＸＣＲ１）又はそのケモカイン結合フラグメントを含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲと共に発現するケモカイン受容体分子は、腫瘍により発現されるケモカインに基づいて選択する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＣＲ２ｂ受容体又はＣＸＣＲ２受容体を更に含み、例えば発現する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、同じベクターにあるか又は２つの異なるベクターにある。本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子が同じベクターにある実施形態において、ＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、それぞれ２つの異なるプロモーターの制御下にあるか又は同じプロモーターの制御下にある。
【０４８８】
ＣＡＲをコードする核酸コンストラクト
本発明は、本発明の１つ以上のＣＡＲコンストラクトをコードする核酸配列を含むＣＡＲトランス遺伝子を提供する。一態様において、ＣＡＲトランス遺伝子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。一態様において、ＣＡＲトランス遺伝子は、ＤＮＡコンストラクトとして提供される。
【０４８９】
従って、一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子に関し、ここで、ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、マウス抗ＣＤ１９結合ドメイン又はヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば配列番号４５〜５６、６９〜８０、１０６、１０９、１１０、１１２、又は１１５からなる群から選択される配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む抗ＣＤ１９結合ドメインである。一実施形態において、単離核酸分子は、共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインである。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域、例えば本明細書に記載のヒンジによって接続されている。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１６若しくは配列番号３９又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、単離核酸分子は、共刺激性ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質の機能性シグナル伝達ドメインである。かかる共刺激分子の更なる例としては、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、及びＰＡＧ／Ｃｂｐが挙げられる。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号７の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列若しくは配列番号８又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列及び配列番号９若しくは配列番号１０の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される。別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号１０６、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１２、及び配列番号１１５からなる群から選択される配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有するｓｃＦｖドメイン、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１６、又は配列番号３９（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）のヒンジ領域、配列番号６の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有する４−１ＢＢ共刺激性ドメイン又は配列番号８の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、及び配列番号９又は配列番号１０の配列（又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ３ζ刺激性ドメインを含む、ＣＡＲ構築物をコードする単離核酸分子に関する。
【０４９０】
別の態様において、本発明は、核酸分子によってコードされる単離ポリペプチド分子に関する。一実施形態において、単離ポリペプチド分子は、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１４、及び配列番号１１６からなる群から選択される配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０４９１】
別の態様において、本発明は、抗ＣＤ１９結合ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子をコードする単離核酸分子に関し、ここで、抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸は、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、及び配列番号１０５からなる群から選択される配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０４９２】
一実施形態において、コードされるＣＡＲ分子は、共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質の機能性シグナル伝達ドメインである。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号７の配列を含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインである。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能性シグナル伝達ドメインとζの機能性シグナル伝達ドメインとを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列と配列番号９の配列とを含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現する。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに結合される。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号２を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１６、又は配列番号３９を含む。
【０４９３】
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号４５〜４６、１０９、１１０、１１２、及び１１５からなる群から選択される配列を有するｓｃＦｖドメイン、又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列、配列番号２、又は配列番号３、又は配列番号４、配列番号５、配列番号１６、又は配列番号３９のヒンジ領域、配列番号６の配列を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列を有する４−１ＢＢ共刺激性ドメイン、又は配列番号８の配列を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、及び配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激性ドメインを含む単離ＣＡＲ分子に関する。一実施形態において、コード化ＣＡＲ分子は、配列番号９３〜１０４、１０８、１１１、１１４、１１６からなる群から選択される配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０４９４】
本発明は、ＣＡＲトランス遺伝子を含むベクターを更に提供する。一態様において、ＣＡＲベクターは、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入することができる。一態様において、ベクターは、クローニングベクター又は発現ベクター、例えば、限定されないが、１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクターコンストラクトを含むベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳類Ｔ細胞又はＮＫ細胞でＣＡＲコンストラクトを発現する能力を有する。一態様において、哺乳類Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞又はヒトＮＫ細胞である。
【０４９５】
本発明は、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接トランスフェクトすることのできるＣＡＲコードＲＮＡコンストラクトも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法は、特別に設計されたプライマーによる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリＡ付加とを伴い、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させる遺伝子、及びポリＡテール、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３５）を含むコンストラクトが作製される。このように作製されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
【０４９６】
一態様において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）トランス遺伝子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。一態様において、ＣＡＲトランス遺伝子をコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲＴ細胞の作製のためＴ細胞に、又はＮＫ細胞に導入される。
【０４９７】
ベクター
本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。更に低免疫原性であるという付加的利点も有する。
【０４９８】
一実施形態において、本発明の所望のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、又はレトロウイルスベクターである。レトロウイルスベクターは、例えば、γレトロウイルスベクターでもあり得る。γレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２）末端反復配列（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えばＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。γレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖなどのウイルス構造的遺伝子を欠き得る。例示的なγレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）及びそれら由来のベクターを含む。他のγレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ  Ｍａｅｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１  Ｊｕｎ；３（６）：６７７−７１３に記載される。
【０４９９】
別の実施形態において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ、ＣＲＩＳＰＲ、ＣＡＳ９及び亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用されるＪｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６を参照されたい。
【０５００】
概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
【０５０１】
本発明の構築物の発現は、標準遺伝子送達プロトコルを使用する核酸免疫化及び遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子送達のための方法が当技術分野で知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第５，３９９，３４６号明細書、同第５，５８０，８５９号明細書、同第５，５８９，４６６号明細書を参照されたい。別の実施形態において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０５０２】
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシークエンシングベクターを含む。
【０５０３】
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １  −４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
【０５０４】
多数のウイルスベースの系が哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組み換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当技術分野で知られている。一実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。一実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。
【０５０５】
更なるプロモーター要素、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０〜１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間は、多くの場合、可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。例示的プロモーターとしては、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣ、又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。
【０５０６】
哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲ導入遺伝子の発現ができるプロモーターの例は、ＥＦ１αプロモーター（ＥＦ１ａ又はＥＦ１α）である。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子−１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された導入遺伝子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。一態様において、ＥＦ１ａプロモーターは、配列番号１１として提供される配列を含む。
【０５０７】
プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子−１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに活性化し、発現が望まれないときに遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０５０８】
プロモーターの別の例は、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、切断ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき、１つ以上、例えば１つ、２つ、５つ、１０、１００、２００、３００又は４００のヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいことがある。例示的ＰＧＫプロモーターのヌクレオチド配列は、配列番号１２６における野生型ＰＧＫプロモーター、又はトランケート型のＰＧＫプロモーター、例えば配列番号１２７に提供されるとおりのＰＧＫ１００、配列番号１２８に提供されるとおりのＰＧＫ２００、配列番号１２９に提供されるとおりのＰＧＫ３００、及び配列番号１３０に提供されるとおりのＰＧＫ４００として提供される。
【０５０９】
ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野で知られる他のもの）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。
【０５１０】
ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両方を含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用される。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【０５１１】
レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２）。適当な発現系は、周知であり、既知技術により製造できるか又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用され得る。
【０５１２】
一実施形態において、ベクターは、第２のＣＡＲをコードする核酸を更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ１９以外の標的（例えば、ＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ベクターは、第１の抗原を標的とし、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第１のＣＡＲをコードする核酸配列を含み、第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一実施形態において、ベクターは、ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性ドメインを含む第１のＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸及びＣＤ１９以外の抗原（例えば、ＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。別の実施形態において、ベクターは、ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸及びＣＤ１９以外の抗原（例えば、ＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３，ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）を標的とし、その抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。
【０５１３】
一実施形態において、ベクターは、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）をコードする核酸及び阻害性ＣＡＲをコードする核酸を含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばまたＣＤ１９を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、及び／又はＴＧＦβの細胞内ドメインであり得る。
【０５１４】
実施形態において、ベクターは、２つ以上の核酸配列を含み得、ここで、核酸配列の一方は、本明細書に記載されるＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲをコードする。一実施形態において、他方の核酸は、第２のＣＡＲ、例えば阻害性ＣＡＲ又はＣＤ１９以外の抗原（例えば、ＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）に特異的に結合するもの、又は本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）の活性を調節し得るポリペプチドをコードし得る。かかる実施形態において、例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）及び第２のＣＡＲ又は他のポリペプチドをコードする２つ以上の核酸配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として単一の核酸分子によってコードされる。一実施形態において、２つ以上のポリペプチドは、１つ以上のペプチド切断部位（例えば、自己切断部位又は細胞内プロテアーゼの基質）によって分離され得る。ペプチド切断部位の例としては、以下が挙げられ、ここで、ＧＳＧ残基は、任意選択である：配列番号１３１に提供されるとおりのＴ２Ａ、配列番号１３２に提供されるとおりのＰ２Ａ、配列番号１３３に提供されるとおりのＥ２Ａ、及び配列番号１３４に提供されるとおりのＦ２Ａ。
【０５１５】
遺伝子を細胞に導入し、発現させる方法は、当技術分野において公知である。発現ベクターとの関連において、ベクターは、当技術分野の任意の方法によって宿主細胞、例えば哺乳類、細菌、酵母、又は昆虫細胞に容易に導入することができ、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（その全体が参照により援用される）の２０８〜２１０頁に記載されている。
【０５１６】
本発明は、ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを更に提供する。一態様において、ＣＡＲベクターを細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入し得る。一態様において、ベクターは、クローニング又は発現ベクター、例えば１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳類Ｔ細胞でＣＡＲコンストラクトを発現する能力を有する。一態様において、哺乳類Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。一態様において、哺乳類細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
【０５１７】
ＲＮＡトランスフェクション
本明細書には、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲの作製方法が開示される。本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることのできるＣＡＲコードＲＮＡコンストラクトも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法は、特別に設計されたプライマーによる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリＡ付加とを伴うこともあり、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させる核酸、及びポリＡテール、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３５）を含むコンストラクトが作製される。このように作製されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
【０５１８】
一態様において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。一態様において、ＣＡＲをコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ  ＮＫ細胞の作製のため、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に導入される。更なるＲＮＡトランスフェクション方法は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（その全体が参照により援用される）の１９２〜１９６頁に記載されている。
【０５１９】
非ウイルス送達方法
一部の態様において、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸を細胞、又は組織、又は対象に送達するために非ウイルス方法を用いることができる。一部の実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転移因子とも称される）の使用を含む。一部の実施形態において、トランスポゾンは、それ自体をゲノム内の位置に挿入することのできるＤＮＡの断片、例えば自己複製し且つそのコピーをゲノムに挿入する能力を有するＤＮＡの断片、又はより長い核酸からスプライスアウトされ、且つゲノム内の別の場所に挿入され得るＤＮＡの断片である。追加の例示的なトランスポゾン及び非ウイルス送達方法は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（その全体が参照により援用される）の１９６〜１９８頁に記載されている。
【０５２０】
細胞供給源
拡大培養及び例えば本明細書に記載されるＣＡＲを発現させるための遺伝子改変に先立ち、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の供給源を対象から入手することができる。用語「対象」は、免疫応答が惹起できる生存生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種を含む。
【０５２１】
実施形態において、免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞集団）、例えばＴ細胞は、幹細胞、例えば胚性幹細胞又は多能性幹細胞、例えば人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来（例えば、分化）する。実施形態において、細胞は、自己又は同種である。細胞が同種である実施形態において、例えば幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）由来細胞を改変して、そのアロ反応性を低減する。例えば、細胞を、例えばＴ細胞受容体の改変（例えば、破壊）により、アロ反応性を低減するように改変できる。実施形態において、部位特異的ヌクレアーゼを使用して、例えばＴ細胞分化後にＴ細胞受容体を破壊できる。他の例において、細胞、例えばｉＰＳＣ由来Ｔ細胞をウイルス特異的Ｔ細胞から産生でき、これは、病原体由来抗原の認識により、移植片対宿主病を引き起こす可能性が低い。更に他の例において、アロ反応性を、適合、無関係レシピエント対象と組織適合性であるように、共通ＨＬＡハプロタイプからのｉＰＳＣの産生により、減少、例えば最小化できる。更に他の例において、アロ反応性を、遺伝子改変によりＨＬＡ発現を抑制することより、減少、例えば最小化できる。例えば、ｉＰＳＣ由来Ｔ細胞を、例えば参照により本明細書に援用されるＴｈｅｍｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１．１０（２０１３）：９２８−３５に記載のとおり処理できる。ある例において、幹細胞由来免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１６５７０７号パンフレットに記載音方法を使用して処理／産生できる。同種細胞が関係する更なる実施形態は、本明細書において、例えば本明細書の「同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞」の節に記載される。
【０５２２】
Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。本開示の一態様において、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞系を使用し得る。本開示の一態様において、Ｔ細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に知られるあらゆる技術を使用して、対象から採取した血液の単位から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れる。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
【０５２３】
本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。
【０５２４】
一態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離又は向流遠心溶出法により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的下位集団を陽性又は陰性選択技術により更に単離し得る。例えば、一態様において、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズとインキュベーションすることにより単離する。一態様において、時間は、約３０分である。更なる態様において、時間は、３０分〜３６時間又はそれより長い範囲及びその間の任意の整数値である。更なる態様において、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。別の好ましい態様において、時間は、１０〜２４時間である。一態様において、インキュベーション時間は、２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。更に、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短くするか若しくは長くし、及び／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加若しくは減少させる（更に本明細書に記載のとおり）ことにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。複数回の選択も本発明で使用できることを当業者は認識する。一態様において、選択過程を実施し、「未選択」細胞を活性化及び増殖過程で使用することが望ましいことがある。「未選択」細胞も更なる選択に付され得る。
【０５２５】
陰性選択によるＴ細胞集団富化は、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。一態様において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞について富化又は陽性選択することが望ましいことがある。代わりに、一態様において、Ｔ制御性細胞を抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似選択法により枯渇させる。
【０５２６】
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０５２７】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去する。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
【０５２８】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
【０５２９】
一実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９〜１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
【０５３０】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２−０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
【０５３１】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０５３２】
一実施形態において、製造法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。
【０５３３】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。
【０５３４】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。
【０５３５】
一実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
【０５３６】
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。
【０５３７】
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。
【０５３８】
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＰＤ１、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ及びＬＡＩＲ１を含む。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序の順番でも生じ得る。
【０５３９】
一実施形態において、Ｔ細胞ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
【０５４０】
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０５４１】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０ｅ６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ〜１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
【０５４２】
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２〜１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
【０５４３】
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後凍結させ得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接−２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
【０５４４】
一態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本開示の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
【０５４５】
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、Ｔ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどのＴ細胞治療からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、Ｔ細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、Ｔ細胞をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
【０５４６】
本開示の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本開示に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
【０５４７】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
【０５４８】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
【０５４９】
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現せず、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
【０５５０】
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０５５１】
同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞
本明細書に記載の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
【０５５２】
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され、又はその表面に微少の機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異した又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」は、このＴＣＲが宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。
【０５５３】
本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。
【０５５４】
一実施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。
【０５５５】
機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用したＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０５５６】
一実施形態において、同種細胞は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにより、阻害性分子を発現しないか又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下できる、阻害分子を発現しないか又は阻害分子を低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載の阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用できる。
【０５５７】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、細胞、例えばＴ細胞におけるＴＣＲ、及び／又はＨＬＡ、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。
【０５５８】
ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの発現システム、及び例示的ｓｈＲＮＡについては、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット（その全体が参照により援用される）の段落６４９及び６５０に記載されている。
【０５５９】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
本明細書で使用する「ＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、一連の群生性等間隔短回文反復配列又はこのような一連の反復を含む系を指す。本明細書で使用する「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。
【０５６０】
「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、細胞、例えばＴ細胞におけるＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の発現抑制又は変異に使用できる、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ由来の系を指す。
【０５６１】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、及びその使用については、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット（その全体が参照により援用される）の段落６５１〜６５８に記載されている。
【０５６２】
ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するＴＡＬＥＮ
「ＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するＴＡＬＥＮ」は、細胞、例えばＴ細胞内でのＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子、及び／又は本明細書に記載される阻害性分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、及びＴＧＦβ）の編集に使用し得る人工ヌクレアーゼである転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼを指す。
【０５６３】
ＴＡＬＥＮ、及びその使用については、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット（その全体が参照により援用される）の段落６５９〜６６５に記載されている。
【０５６４】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するジンクフィンガーヌクレアーゼ
「ＺＦＮ」、又は「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するＺＦＮ」は、細胞、例えばＴ細胞内でのＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子、及び／又は本明細書に記載される阻害性分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、及びＴＧＦβ）の編集に使用し得る人工ヌクレアーゼであるジンクフィンガーヌクレアーゼを指す。
【０５６５】
ＺＦＮ、及びその使用については、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット（その全体が参照により援用される）の段落６６６〜６７１に記載されている。
【０５６６】
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、治療的Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアのために患者における残留性が短く、従って、テロメラーゼ遺伝子を用いるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅ，“Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６−１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、異所性にテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。いくつかの態様において、本開示は、細胞をテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前に、同時に又は後に核酸と接触させ得る。
【０５６７】
一態様において、本開示は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を製造する方法に関する。一実施形態において、本方法は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、免疫エフェクター細胞集団を、ＣＡＲをコードする核酸と接触させ、免疫エフェクター細胞集団をテロメラーゼサブユニット、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と、ＣＡＲ及びテロメラーゼ発現を可能とする条件下で接触させることを含む。
【０５６８】
一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡである。一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、テロメラーゼサブユニットの発現を駆動できるプロモーターを含む。
【０５６９】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３５に提供されるようにＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＩＤ  ＡＡＣ５１７２４．１のアミノ酸配列を有する（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ，Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  ９０，Ｉｓｓｕｅ  ４，２２  Ａｕｇｕｓｔ  １９９７，Ｐａｇｅｓ  ７８５−７９５）。
【０５７０】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６＾、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３５の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方に欠失（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方にトランスジェニックアミノ酸配列（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。
【０５７１】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３６に提供されるようにＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＦ０１８１６７の核酸配列によりコードされる（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ，Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  ９０，Ｉｓｓｕｅ  ４，２２  Ａｕｇｕｓｔ  １９９７，Ｐａｇｅｓ  ７８５−７９５）。
【０５７２】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６、９７％、９８％又は９９％同一である配列を有する核酸によりコードされる。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１３６の核酸によりコードされる。
【０５７３】
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び拡大培養
Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、概して、例えば米国特許第６，３５２，６９４号明細書、同第６，５３４，０５５号明細書、同第６，９０５，６８０号明細書、同第６，６９２，９６４号明細書、同第５，８５８，３５８号明細書、同第６，８８７，４６６号明細書、同第６，９０５，６８１号明細書、同第７，１４４，５７５号明細書、同第７，０６７，３１８号明細書、同第７，１７２，８６９号明細書、同第７，２３２，５６６号明細書、同第７，１７５，８４３号明細書、同第５，８８３，２２３号明細書、同第６，９０５，８７４号明細書、同第６，７９７，５１４号明細書、同第６，８６７，０４１号明細書、及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載されるとおりの方法を用いて活性化し、拡大培養することができる。
【０５７４】
概して、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団は、それを結合させた表面と、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及び免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを接触させることにより拡大培養し得る。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドを使用する。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体である。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０５７５】
一態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本開示におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０５７６】
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本開示の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１〜約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１〜１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。本開示の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。本発明の一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
【０５７７】
１：５００〜５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００〜１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９〜９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１〜１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１〜１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本開示における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
【０５７８】
本開示の更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
【０５７９】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４〜１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本開示に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、及び特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０５８０】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）〜約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一実施形態において、細胞は、４〜９日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
【０５８１】
本開示の一態様において、混合物を数時間（約３時間）〜約１４日又はその間の任意の時間的整数値だけ培養し得る。一態様において、混合物を２１日培養し得る。本発明の一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に約８日培養する。一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に２〜３日培養する。Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ−α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ−アセチル−システイン、及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５及びＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
【０５８２】
一実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一実施形態において、細胞は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７（例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の存在下で増殖させる。
【０５８３】
ある実施形態において、本明細書に記載される細胞（例えば、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＴＬ−０１９）の拡大培養方法（例えば、エキソビボ拡大培養）は、細胞をＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子、例えばＰＤＲ−００１と接触させることを含む。
【０５８４】
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７の存在下で増殖させる。
【０５８５】
ある実施形態において、本明細書に記載される方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造方法は、細胞（例えば、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＴＬ−０１９）をＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬、例えば本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子、例えばＰＤＲ−００１と接触させることを含む。
【０５８６】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。
【０５８７】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
【０５８８】
一実施形態において、細胞は、血清を含む培地中で培養される（例えば、拡大、刺激、及び／又は形質導入される）。血清は、例えば、ヒトＡＢ血清（ｈＡＢ）であり得る。一部の実施形態において、ｈＡＢ血清は、約２％、約５％、約２〜３％、約３〜４％、約４〜５％、又は約２〜５％で存在する。２％及び５％血清は、それぞれＴ細胞の何倍もの拡大培養を可能にする好適なレベルである。更に、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に示されるとおり、２％ヒトＡＢ血清を含有する培地がＴ細胞のエキソビボ拡大培養に好適である。
【０５８９】
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８〜９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
【０５９０】
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
【０５９１】
一部の実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸で形質導入された細胞は、例えば、ＣＣＬ２０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＴＮＦα、及び／又はこれらの組み合わせの１つ以上のタンパク質発現レベルに基づいて投与に選択することができる。一部の実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸で形質導入された細胞は、例えば、ＣＣＬ２０、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−６、及びこれらの組み合わせのタンパク質発現レベルに基づいて投与に選択することができる。
【０５９２】
更に、細胞拡大培養プロセス中、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、大きく異なるが、大部分は再現性がある。従って、かかる再現性により、活性化Ｔ細胞産物を特定の目的に合わせて調整する能力が実現する。
【０５９３】
ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。ＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲの効果を評価するアッセイは、例えば、２０１４年１２月１９日に出願された国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（その全体が参照により援用される）の段落［０４１７］〜［００４２３］に記載されている。
【０５９４】
ＣＡＲ細胞の集団
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞の集団、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の集団を提供する。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、異なるＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。
【０５９５】
例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞と、第１の細胞が発現するＣＡＲの抗ＣＤ１９結合ドメインと異なる別の抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞とを含み得る。
【０５９６】
別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、本明細書に記載されるとおりの抗ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞と、ＣＤ１９以外の標的（例えば、ＣＤ１９以外のＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａ）に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞とを含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞と、二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞とを含む。
【０５９７】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、抗ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞と、Ｂ細胞上に発現する抗原、又はＢ細胞抗原を標的とする、例えばそれに特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞とを含み得る。一実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９であり、例えば、ここで、第１の細胞と第２の細胞とは、異なるＣＤ１９  ＣＡＲを発現する。別の実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９以外の抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａである。
【０５９８】
別の態様において、本発明は、集団中の少なくとも１つの細胞が、本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、及び第２の細胞が別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性又は機能を増強する薬剤を発現する細胞の集団を提供する。例えば、一実施形態において、薬剤は、Ｔ細胞機能を調整又は調節する、例えば阻害する薬剤であり得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能を調整又は調節する分子は、阻害性分子、例えば本明細書に記載される薬剤である。阻害性分子は、例えば、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下させ得る。阻害性分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβが挙げられる。一実施形態において、阻害性分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメインに会合した第１のポリペプチド、例えば阻害性分子を含む。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβなどの阻害性分子の第１のポリペプチド、又はこれらのいずれかの断片（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくとも一部分）と、本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、例えば本明細書に記載されるとおりの４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、又はＩＣＯＳ）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドとを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１の第１のポリペプチド又はその断片（例えば、ＰＤ１の細胞外ドメインの少なくとも一部分）と、本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載されるＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドとを含む。
【０５９９】
一態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の集団、例えば異なるＣＡＲを発現する細胞の混合物を別の薬剤、例えば本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬などのＰＤ−１阻害薬と併用して投与することを含む方法を提供する。別の態様において、本発明は、集団中の少なくとも１つの細胞が、本明細書に記載されるとおりの抗ＣＤ１９結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、及び第２の細胞が別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性又は適合性を増強する薬剤を発現する細胞の集団を別の薬剤、例えば本明細書に記載されるＰＤ−１阻害薬などのＰＤ−１阻害薬と併用して投与することを含む方法を提供する。
【０６００】
ＰＤ−１阻害薬
免疫系は、腫瘍細胞を認識し、それを除去する能力を有する。しかしながら、腫瘍は、複数の戦略を用いて免疫を逃れることができる。免疫チェックポイントの遮断は、治療的抗腫瘍免疫を活性化又は再活性化する手法である。ＰＤ−１は、例示的な免疫チェックポイント分子である。
【０６０１】
ＰＤ−１は、例えば、活性化ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、及びＢ細胞上に発現するＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーメンバーである。例えば、Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７６５−７５を参照されたい。ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、及びＢＴＬＡも含むＣＤ２８受容体ファミリーの抑制性メンバーである。ＰＤ−１は、エフェクターＴ細胞シグナル伝達及び機能を負に調節する。ＰＤ−１は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞上に誘導され、機能枯渇又は機能不全をもたらし得る（Ｋｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−１は、その２つのリガンド、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）又はプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）のいずれかに結合すると、共抑制シグナルを送出する。ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−１との結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａ．２０００  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、上皮細胞、血管内皮細胞、並びに多くの種類の腫瘍を含め、幾つもの細胞型に発現する。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌に豊富にあり（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）、マウス及びヒト腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１の高発現は、種々の癌の臨床転帰不良と関係付けられている（Ｋｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−Ｌ２は、樹状細胞、マクロファージ、及び一部の腫瘍に発現する。ＰＤ−１経路の遮断は、癌免疫療法向けに前臨床及び臨床でバリデートされている。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的相互作用の阻害によって逆転させることができる。前臨床試験及び臨床試験の両方で抗ＰＤ−１遮断がエフェクターＴ細胞の活性を回復させることができ、ロバストな抗腫瘍応答を生じさせることが実証されている。例えば、ＰＤ−１経路の遮断は、枯渇した／機能不全のエフェクターＴ細胞機能（例えば、増殖、ＩＦＮ−γ分泌、又は細胞溶解機能）を回復させ、及び／又はＴｒｅｇ細胞機能を阻害することができる（Ｋｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−１経路の遮断は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２の抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドによって影響を及ぼすことができる。
【０６０２】
ＰＤ−１に対する抗体分子
一実施形態において、ＰＤ−１阻害薬は、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の２０１５年７月３０日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子である。
【０６０３】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、単離又は組換え抗体分子）は、以下の特性の１つ以上を有する：
（ｉ）ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１に高親和性、例えば少なくとも約１０７Ｍ−１、典型的には約１０８Ｍ−１、及びより典型的には約１０９Ｍ−１〜１０１０Ｍ−１又はそれより強い親和性定数で結合する、
（ｉｉ）ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ又はＢＴＬＡに実質的に結合しない、
（ｉｉｉ）ＰＤ−１によるＰＤ−１リガンド、例えばＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２、又は両方への結合を阻害するか又は低下させる、
（ｉｖ）ＰＤ−１上のエピトープ、例えばマウスモノクローナル抗体ＢＡＰ０４９又はキメラ抗体ＢＡＰ０４９、例えばＢＡＰ０４９−ｃｈｉ又はＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−Ｙによって認識されるエピトープと同じ又は同様のエピトープに特異的に結合する、
（ｖ）ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかと同じ又は同様の結合親和性若しくは特異性又は両方を示す、
（ｖｉ）表６に記載される抗体分子（例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）と同じ又は同様の結合親和性若しくは特異性又は両方を示す、
（ｖｉｉ）表６に示されるアミノ酸配列を有する抗体分子（例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）と同じ又は同様の結合親和性若しくは特異性又は両方を示す、
（ｖｉｉｉ）表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされる抗体分子（例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）と同じ又は同様の結合親和性若しくは特異性又は両方を示す、
（ｉｘ）第２の抗体分子によるＰＤ−１への結合を阻害する、例えば競合的に阻害し、ここで、第２の抗体分子は、本明細書に記載される抗体分子、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから例えば選択される抗体分子である、
（ｘ）ＰＤ−１に対する第２の抗体分子と同じ又は重複するエピトープに結合し、ここで、第２の抗体分子は、本明細書に記載される抗体分子、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから例えば選択される抗体分子である、
（ｘｉ）ＰＤ−１に対する第２の抗体分子と結合に関して競合し、及び／又はそれと同じエピトープに結合し、ここで、第２の抗体分子は、本明細書に記載される抗体分子、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから例えば選択される抗体分子である、
（ｘｉｉ）本明細書に記載される抗体分子、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから例えば選択される抗体分子の１つ以上の生物学的特性を有する、
（ｘｉｉｉ）本明細書に記載される抗体分子、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから例えば選択される抗体分子の１つ以上の薬物動態特性を有する、
（ｘｉｖ）ＰＤ−１の１つ以上の活性を阻害する、例えば腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の増加、又は癌性細胞による免疫回避の低下の１つ以上をもたらす、
（ｘｖ）ヒトＰＤ−１に結合し、及びカニクイザルＰＤ−１と交差反応性を有する、
（ｘｖｉ）ＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖、若しくはＦＧループ、又はＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖若しくはＦＧループの組み合わせの２、３つ又は全ての範囲内にある１つ以上の残基に結合し、例えば、ここで、結合は、ＥＬＩＳＡ又はＢｉａｃｏｒｅを用いてアッセイされる、又は
（ｘｖｉｉ）ＶＨ領域よりも多くＰＤ−１への結合に寄与するＶＬ領域を有する。
【０６０４】
一部の実施形態において、抗体分子は、高親和性で、例えばマウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載されるマウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤとほぼ同じ、又はそれより少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％若しくは９０％高い又は低いＫＤでＰＤ−１に結合する。一部の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定して約０．４、０．３、０．２、０．１、又は０．０５ｎＭ未満である。一部の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、約０．２ｎＭ未満、例えば約０．１３５ｎＭである。他の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、例えば、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、３００．１９細胞）に対する結合によって測定して約１０、５、３、２、又は１ｎＭ未満である。一部の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、約５ｎＭ未満、例えば約４．６０ｎＭ（又は約０．６９μｇ／ｍＬ）である。
【０６０５】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１×１０−４、５×１０−５、又は１×１０−５ｓ−１より遅いＫｏｆｆ、例えば約１．６５×１０−５ｓ−１でＰＤ−１に結合する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１×１０４、５×１０４、１×１０５、又は５×１０５Ｍ−１ｓ−１より速いＫｏｎ、例えば約１．２３×１０５Ｍ−１ｓ−１でＰＤ−１に結合する。
【０６０６】
一部の実施形態において、抗体分子の発現レベルは、マウス又はキメラ抗体分子、例えば本明細書に記載されるマウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子の発現レベルよりも高く、例えば少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍高い。一部の実施形態において、抗体分子は、ＣＨＯ細胞において発現する。
【０６０７】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載されるマウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０とほぼ同じ又はそれより低い、例えば少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％低いＩＣ５０（５０％阻害の濃度）で１つ以上のＰＤ−１関連活性を低下させる。一部の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０は、例えば、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、３００．１９細胞）に対する結合によって測定して約６、５、４、３、２、又は１ｎＭ未満である。一部の実施形態において、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０は、約４ｎＭ未満、例えば約３．４０ｎＭ（又は約０．５１μｇ／ｍＬ）である。一部の実施形態において、低下するＰＤ−１関連活性は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２の結合である。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）によって活性化した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に特異的に結合する。他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＳＥＢによって活性化した全血におけるＩＬ−２の発現を増加させる。例えば、抗ＰＤ−１抗体は、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＬ−２の発現と比較してＩＬ−２の発現を少なくとも約２、３、４、又は５倍増加させる。
【０６０８】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、マウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載されるマウス又はキメラ抗ＰＤ−１抗体分子と比べて向上した安定性を有し、例えばインビボ又はインビトロで少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍安定性が高い。
【０６０９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ヒト化抗体分子であり、Ｔ細胞エピトープ分析に基づいて３００〜７００、４００〜６５０、４５０〜６００のリスクスコア、又は本明細書に記載されるとおりのリスクスコアを有する。
【０６１０】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの少なくとも１つの抗原結合領域、例えば可変領域又はその抗原結合断片、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１１】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの少なくとも１、２、３、又は４つの可変領域、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１２】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの少なくとも１又は２つの重鎖可変領域、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１３】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの少なくとも１又は２つの軽鎖可変領域、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１４】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ４、例えばヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵ付番による位置２２８に置換（例えば、ＳｅｒからＰｒｏへの置換）を含む。なおも別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ１、例えばヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２９７に置換（例えば、ＡｓｎからＡｌａへの置換）を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２６５の置換、ＥＵ付番による位置３２９の置換、又は両方（例えば、位置２６５のＡｓｐからＡｌａへの置換及び／又は位置３２９のＰｒｏからＡｌａへの置換）を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２３４の置換、ＥＵ付番による位置２３５の置換、又は両方（例えば、位置２３４のＬｅｕからＡｌａへの置換及び／又は位置２３５のＬｅｕからＡｌａへの置換）を含む。一実施形態において、重鎖定常領域は、表３に示されるアミノ配列又はそれと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１５】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、κ軽鎖定常領域、例えばヒトκ軽鎖定常領域を含む。一実施形態において、軽鎖定常領域は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるアミノ配列又はそれと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１６】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ４、例えばヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域、及びκ軽鎖定常領域、例えばヒトκ軽鎖定常領域、例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるアミノ配列又はそれと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む重鎖及び軽鎖定常領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵ付番による位置２２８に置換（例えば、ＳｅｒからＰｒｏへの置換）を含む。更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ１、例えばヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域、及びκ軽鎖定常領域、例えばヒトκ軽鎖定常領域、例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるアミノ配列又はそれと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む重鎖及び軽鎖定常領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２９７に置換（例えば、ＡｓｎからＡｌａへの置換）を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２６５の置換、ＥＵ付番による位置３２９の置換、又は両方（例えば、位置２６５のＡｓｐからＡｌａへの置換及び／又は位置３２９のＰｒｏからＡｌａへの置換）を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵ付番による位置２３４の置換、ＥＵ付番による位置２３５の置換、又は両方（例えば、位置２３４のＬｅｕからＡｌａへの置換及び／又は位置２３５のＬｅｕからＡｌａへの置換）を含む。
【０６１７】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び定常領域、軽鎖可変ドメイン及び定常領域若しくは両方、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、任意選択で、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表４に示されるとおりの重鎖、軽鎖、又は両方からのリーダー配列又はそれと実質的に同一の配列を含む。
【０６１８】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６１９】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。
【０６２０】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列を含む。
【０６２１】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲに置換を含み、例えば軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３に１つ以上の置換を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖可変領域の１０２位における軽鎖ＣＤＲ３に置換を含み、例えば表６に係る軽鎖可変領域（例えば、マウス又はキメラ、非改変型について配列番号１５２又は１６２、又は改変配列について配列番号１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２のいずれか）の１０２位にシステインからチロシンへの又はシステインからセリン残基への置換を含む。
【０６２２】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５又は６つのＣＤＲ（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表６に示される、又は表６に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する。
【０６２３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体からの、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの６つ全てのＣＤＲ、又は近縁のＣＤＲ、例えば同一であるか、若しくは少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３若しくは４つ以下の変化（例えば、置換、欠失若しくは挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される任意のＣＤＲを含み得る。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲに置換を含み、例えば軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３に１つ以上の置換を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖可変領域の１０２位における軽鎖ＣＤＲ３に置換を含み、例えば表６に係る軽鎖可変領域（例えば、マウス又はキメラ、非改変型について配列番号１５２又は１６２、又は改変配列について配列番号１６８、１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２のいずれか）の１０２位にシステインからチロシンへの又はシステインからセリン残基への置換を含む。
【０６２４】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖可変領域からのＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔの定義による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は表６に示されるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、又は３つのＣＤＲと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６２５】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの軽鎖可変領域からのＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔの定義による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は表６に示されるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、又は３つのＣＤＲと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６２６】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖及び軽鎖可変領域からのＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による少なくとも１、２、３、４、５、又は６つのＣＤＲ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔの定義による少なくとも１、２、３、４、５、又は６つのＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は表６に示されるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、３、４、５、又は６つのＣＤＲと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６２７】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖及び軽鎖可変領域からのＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による６つ全てのＣＤＲ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔの定義による６つ全てのＣＤＲ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は表６に示されるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．による６つ全てのＣＤＲと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される任意のＣＤＲを含み得る。
【０６２８】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣｈｏｔｈｉａ超可変ループ（例えば、表６に示されるとおりのＣｈｏｔｈｉａの定義による少なくとも１、２、又は３つの超可変ループ）、又は少なくとも、ＰＤ−１に接触する超可変ループからのアミノ酸、又は表６に示されるＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、又は３つの超可変ループと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６２９】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの軽鎖可変領域の少なくとも１、２、又は３つのＣｈｏｔｈｉａ超可変ループ（例えば、表６に示されるとおりのＣｈｏｔｈｉａの定義による少なくとも１、２、又は３つの超可変ループ）、又は少なくとも、ＰＤ−１に接触する超可変ループからのアミノ酸、又は表６に示されるＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、又は３つの超可変ループと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６３０】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５、又は６つの超可変ループ（例えば、表６に示されるとおりのＣｈｏｔｈｉａの定義による少なくとも１、２、３、４、５、又は６つの超可変ループ）、又は少なくとも、ＰＤ−１に接触する超可変ループからのアミノ酸、又は表６に示されるＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．による１、２、３、４、５又は６つの超可変ループと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６３１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の６つ全ての超可変ループ（例えば、表６に示されるとおりのＣｈｏｔｈｉａの定義による６つ全ての超可変ループ）、又は近縁の超可変ループ、例えば同一であるか、若しくは少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３若しくは４つ以下の変化（例えば、置換、欠失若しくは挿入、例えば保存的置換）を有する超可変ループ、又は表６に示されるＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．による６つ全ての超可変ループと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される任意の超可変ループを含み得る。
【０６３２】
なおも別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の対応する超可変ループと同じカノニカル構造、例えば本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインの少なくともループ１及び／又はループ２と同じカノニカル構造を有する少なくとも１、２、又は３つの超可変ループを含む。超可変ループカノニカル構造の説明については、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８を参照されたい。これらの構造は、これらの参考文献に記載される表を調べることにより決定し得る。
【０６３３】
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．により定義されるＣＤＲ又は超可変ループの組み合わせを含む。
【０６３４】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義による、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ又は超可変ループ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ又は超可変ループ）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一の）配列、又は表６に示されるＫａｂａｔ及び／又はＣｈｏｔｈｉａによる１、２、又は３つのＣＤＲ又は超可変ループと比べて少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するものを含む。
【０６３５】
例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ  ＣＤＲ１又はＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１、又はこれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号２８６）又はそれと実質的に同一の（例えば、少なくとも１つのアミノ酸変化であるが、２、３、又は４つ以下の変化（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表６に示されるとおりの例えばＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ  ＣＤＲ２〜３及びＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＬ  ＣＤＲ１〜３を更に含み得る。従って、一部の実施形態において、フレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．により定義されるＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．により定義される超可変ループの組み合わせに基づいて定義される。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表６に示されるとおりのＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１に基づいて定義されるＶＨ  ＦＲ１及びＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ  ＣＤＲ１〜２に基づいて定義されるＶＨ  ＦＲ２を含み得る。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＨ  ＣＤＲ２〜３に基づいて定義されるＶＨ  ＦＲ３〜４及びＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によるＶＬ  ＣＤＲ１〜３に基づいて定義されるＶＬ  ＦＲ１〜４を更に含み得る。
【０６３６】
抗ＰＤ−１抗体分子は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義によるＣＤＲ又は超可変ループの任意の組み合わせを含むことができる。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義による、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ（例えば、表６に示されるとおりのＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義による少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ）を含む。
【０６３７】
ある実施形態、例えば本明細書で例えば表６に言及される可変領域、ＣＤＲ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ又はＫａｂａｔ  ＣＤＲ）、又は他の配列を含む実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子、二重特異性抗体分子であり、又は抗体の抗原結合断片を含む抗体分子、例えば半抗体又は半抗体の抗原結合断片である。特定の実施形態において、抗体分子は、ＰＤ−１に対する第１の結合特異性と、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に対する第２の結合特異性とを有する二重特異性抗体分子である。
【０６３８】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ａ）配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｂ）配列番号１３７から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、又は
（ｄ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
【０６３９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０６４０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１３７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０６４１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０６４２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０６４３】
一実施形態において、抗体分子は、ヒト化抗体分子である。別の実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子である。更に別の実施形態において、抗体分子は、二重特異性抗体分子である。
【０６４４】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１３７、配列番号１４０又は配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び
（ｉｉ）配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
【０６４５】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１３７、配列番号１４０又は配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び
（ｉｉ）配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
【０６４６】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１３７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。
【０６４７】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の軽鎖又は重鎖可変フレームワーク（例えば、少なくともＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び任意選択でＦＲ４を含む領域）は、（ａ）ヒト軽鎖又は重鎖可変フレームワークからのアミノ酸残基、例えばヒト成熟抗体、ヒト生殖系列配列、又はヒトコンセンサス配列からの軽鎖又は重鎖可変フレームワーク残基の少なくとも８０％、８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％、９８％、又は好ましくは１００％を含む軽鎖又は重鎖可変フレームワーク、（ｂ）ヒト軽鎖又は重鎖可変フレームワークからのアミノ酸残基、例えばヒト成熟抗体、ヒト生殖系列配列、又はヒトコンセンサス配列からの軽鎖又は重鎖可変フレームワーク残基の２０％〜８０％、４０％〜６０％、６０％〜９０％、又は７０％〜９５％を含む軽鎖又は重鎖可変フレームワーク、（ｃ）非ヒトフレームワーク（例えば、げっ歯類フレームワーク）、又は（ｄ）例えば抗原性又は細胞毒性決定基が除去されるように改変された、例えば脱免疫化された、又は部分的にヒト化された非ヒトフレームワークから選択することができる。一実施形態において、軽鎖又は重鎖可変フレームワーク領域（特にＦＲ１、ＦＲ２及び／又はＦＲ３）は、ヒト生殖系列遺伝子のＶＬ又はＶＨセグメントのフレームワークと少なくとも７０、７５、８０、８５、８７、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であるか、又は同一の軽鎖又は重鎖可変フレームワーク配列を含む。
【０６４８】
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図９Ａ〜図９Ｂ、又は配列番号１５４、１５６、１５８又は１６０に示される、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＨＣのアミノ酸配列、例えば可変領域全体におけるＦＲ領域のアミノ酸配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する重鎖可変ドメインを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図９Ａ〜図９Ｂ、又は配列番号１５４、１５６、１５８又は１６０に示される、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＨＣのアミノ酸配列、例えば可変領域全体におけるＦＲのアミノ酸配列の位置１のＥ、位置５のＶ、位置９のＡ、位置１１のＶ、位置１２のＫ、位置１３のＫ、位置１６のＥ、位置１８のＬ、位置１９のＲ、位置２０のＩ又はＶ、位置２４のＧ、位置３７のＩ、位置４０のＡ又はＳ、位置４１のＴ、位置４２のＳ、位置４３のＲ、位置４８のＭ又はＬ、位置６８のＶ又はＦ、位置６９のＴ、位置７０のＩ、位置７１のＳ、位置７２のＡ又はＲ、位置７４のＫ又はＮ、位置７６のＴ又はＫ、位置７７のＳ又はＮ、位置７９のＬ、位置８１のＬ、位置８２のＥ又はＱ、位置８３のＭ、位置８４のＳ又はＮ、位置８７のＲ、位置８８のＡ、又は位置９１のＴの１つ以上を有する重鎖可変ドメインを含む。
【０６４９】
代わりに又は本明細書に記載されるＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＨＣの重鎖置換との組み合わせで、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＬＣのアミノ酸配列、例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図１０Ａ〜図１０Ｂ、又は配列番号１６２又は１６４に示されるアミノ酸配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０又はそれを超えるアミノ酸変化、例えばアミノ酸置換又は欠失を有する軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＬＣのアミノ酸配列、例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図１０Ａ〜図１０Ｂ、又は配列番号１６２又は１６４に示されるアミノ酸配列の位置１のＥ、位置２のＶ、位置３のＱ、位置４のＬ、位置７のＴ、位置９のＤ又はＬ又はＡ、位置１０のＦ又はＴ、位置１１のＱ、位置１２のＳ又はＰ、位置１３のＬ又はＡ、位置１４のＳ、位置１５のＰ又はＬ又はＶ、位置１６のＫ、位置１７のＱ又はＤ、位置１８のＲ、位置１９のＡ、位置２０のＳ、位置２１のＩ又はＬ、位置２２のＴ、位置４３のＬ、位置４８のＫ、位置４９のＡ又はＳ、位置５１のＲ又はＱ、位置５５のＹ、位置６４のＩ、位置６６のＳ又はＰ、位置６９のＳ、位置７３のＹ、位置７４のＧ、位置７６のＥ、位置７９のＦ、位置８２のＮ、位置８３のＮ、位置８４のＬ又はＩ、位置８５のＥ、位置８６のＳ又はＰ、位置８７のＤ、位置８９のＡ又はＦ又はＩ、位置９１のＴ又はＹ、位置９３のＦ、又は位置１０２のＹの１つ以上を有する重鎖可変ドメインを含む。
【０６５０】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１、２、３、又は４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示される、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＦＷアミノ酸配列）又はそれと実質的に同一の配列を含む。
【０６５１】
更に他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１、２、３、又は４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示される、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＦＷアミノ酸配列）又はそれと実質的に同一の配列を含む。
【０６５２】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１、２、３、又は４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示される、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＦＷアミノ酸配列）又はそれと実質的に同一の配列、及び１、２、３、又は４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示される、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＦＷアミノ酸配列）又はそれと実質的に同一の配列を含む。
【０６５３】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４又はＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５１）を含む。
【０６５４】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域２（ＶＨＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５３）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｄの重鎖フレームワーク領域２（ＶＨＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５７）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６の重鎖フレームワーク領域２（ＶＨＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６０）を含む。
【０６５５】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域３（ＶＨＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６２）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｄの重鎖フレームワーク領域３（ＶＨＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６６）を含む。
【０６５６】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域４（ＶＨＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６９）を含む。
【０６５７】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｃの軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８１）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８３）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、又はＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷ１）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５）を含む。
【０６５８】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域２（ＶＬＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８７）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｃの軽鎖フレームワーク領域２（ＶＬＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１９１）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２の軽鎖フレームワーク領域２（ＶＬＦＷ２）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１９４）を含む。
【０６５９】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域３（ＶＬＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１９６）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２又はＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３の軽鎖フレームワーク領域３（ＶＬＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２００）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ａの軽鎖フレームワーク領域３（ＶＬＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０２）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｂの軽鎖フレームワーク領域３（ＶＬＦＷ３）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０５）を含む。
【０６６０】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域４（ＶＬＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０８）を含む。
【０６６１】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｄの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４又はＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５１（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１６０（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域４（ＶＨＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６９）を更に含む。
【０６６２】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ａの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２０２（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２又はＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２００（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｂの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２０５（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８１（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｃの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９４（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８３（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域４（ＶＬＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０８）を更に含む。
【０６６３】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ａの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ａの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２０２（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６４】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２００（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６５】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２００（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６６】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２０５（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６７】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｂの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｂの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号２０５（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６８】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８１（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６６９】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７０】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７１】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｃの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｃの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７２】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｄの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｄの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７３】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７４】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８５（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９４（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７５】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５３（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６２（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８３（ＶＬＦＷ１）、配列番号１９１（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７６】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５１（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７７（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７７】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５１（ＶＨＦＷ１）、配列番号１５７（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７８】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６の重鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７（ＶＨＦＷ１）、配列番号１６０（ＶＨＦＷ２）、及び配列番号１６６（ＶＨＦＷ３））及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６の軽鎖フレームワーク領域１〜３（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４（ＶＬＦＷ１）、配列番号１８７（ＶＬＦＷ２）、及び配列番号１９６（ＶＬＦＷ３））を含む。
【０６７９】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの重鎖フレームワーク領域４（ＶＨＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６９）及びＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅの軽鎖フレームワーク領域４（ＶＬＦＷ４）（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０８）を更に含む。
【０６８０】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図５又は図７に示されるとおりのフレームワーク領域ＦＷ１、ＦＷ２及びＦＷ３の組み合わせを有する重鎖フレームワーク領域を含む。他の実施形態において、抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図５又は図７に示されるとおりのフレームワーク領域ＦＷ１、ＦＷ２及びＦＷ３の組み合わせを有する軽鎖フレームワーク領域を含む。更に他の実施形態において、抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図５又は図７に示されるとおりのフレームワーク領域ＦＷ１、ＦＷ２及びＦＷ３の組み合わせを有する重鎖フレームワーク領域と、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の図５又は図７に示されるとおりのフレームワーク領域ＦＷ１、ＦＷ２及びＦＷ３の組み合わせを有する軽鎖フレームワーク領域とを含む。
【０６８１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の重鎖又は軽鎖可変ドメイン、又は両方は、本明細書に開示されるアミノ酸と実質的に同一である、例えば本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の、又は表６に記載される、又は表６のヌクレオチド配列によってコードされるとおりの可変領域と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列、又は本明細書に記載される抗体の可変領域と１又は５残基以上４０、３０、２０、又は１０残基以下異なるものを含む。
【０６８２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の重鎖又は軽鎖可変領域、又は両方は、本明細書に記載される核酸配列、又は例えば低いストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシー、又は高いストリンジェンシー、又は本明細書に記載される他のハイブリダイゼーション条件下で本明細書に記載される核酸配列（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表１及び表２、又は本明細書の表６に示されるとおりの核酸配列）又はその相補体にハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【０６８３】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示されるとおりのアミノ酸配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の配列、又は表６に示される配列と１、２、５、１０、又は１５アミノ酸残基以下だけ異なるものを有する少なくとも１、２、３、又は４つの抗原結合領域、例えば可変領域を含む。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示されるとおりのヌクレオチド配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の配列、又は表６に示される配列と３、６、１５、３０、又は４５ヌクレオチド以下だけ異なるものを有する核酸によってコードされるＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。
【０６８４】
更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示されるとおりのアミノ酸配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一であり、及び／又は１、２、３つ又はそれを超える置換、挿入又は欠失、例えば保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲを含む。更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示されるとおりのアミノ酸配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一であり、及び／又は１、２、３つ又はそれを超える置換、挿入又は欠失、例えば保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲを含む。更に別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表６に示されるとおりのアミノ酸配列）又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一であり、及び／又は１、２、３つ又はそれを超える置換、挿入又は欠失、例えば保存された置換を有する配列）を有する重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５又は６つのＣＤＲを含む。
【０６８５】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えば表６に要約されるとおりのＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体のアミノ酸配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一であり、及び／又は１、２、３つ又はそれを超える置換、挿入又は欠失、例えば保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ及び／又は超可変ループを含む。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えば表６に要約されるとおりのＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｄ、又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体のアミノ酸配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一であり、及び／又は１、２、３つ又はそれを超える置換、挿入又は欠失、例えば保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、又は３つのＣＤＲ及び／又は超可変ループを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される、例えば表６に記載される６つ全てのＣＤＲ及び／又は超可変ループを含む。
【０６８６】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される可変領域（例えば、本明細書に開示されるＦＲ領域）と配列が同一であるか、又は１、２、３、又は４アミノ酸だけ異なる可変領域を有する。
【０６８７】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、完全抗体又はその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））である。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、モノクローナル抗体又は単一特異性を有する抗体である。抗ＰＤ−１抗体分子は、ヒト化、キメラ、ラクダ科動物、サメ、又はインビトロ生成抗体分子でもあり得る。一実施形態において、その抗ＰＤ−１抗体分子は、ヒト化抗体分子である。抗ＰＤ−１抗体分子の重鎖及び軽鎖は、完全長であり得（例えば、抗体は少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖と、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖とを含み得る）、又は抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ断片、シングルドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、二価抗体、又は二重特異性抗体又はその断片、そのシングルドメイン変異体、又はラクダ科動物抗体）を含み得る。
【０６８８】
更に他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、詳細には例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域、より詳細にはＩｇＧ１又はＩｇＧ２（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４）の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（Ｆｃ）を有する。一実施形態において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１である。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、κ又はλ、好ましくはκ（例えば、ヒトκ）の軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。一実施形態において、定常領域は、抗ＰＤ−１抗体分子の特性が改変されるように（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基数、エフェクター細胞機能、又は補体機能の１つ以上が増加又は減少するように）変化、例えば突然変異している。例えば、定常領域は、Ｆｃ受容体結合が変化するように位置２９６（ＭからＹ）、２９８（ＳからＴ）、３００（ＴからＥ）、４７７（ＨからＫ）及び４７８（ＮからＦ）で突然変異している（例えば、突然変異位置は、配列番号２１２又は２１４の位置１３２（ＭからＹ）、１３４（ＳからＴ）、１３６（ＴからＥ）、３１３（ＨからＫ）及び３１４（ＮからＦ）、又は配列番号２１５、２１６、２１７又は２１８の位置１３５（ＭからＹ）、１３７（ＳからＴ）、１３９（ＴからＥ）、３１６（ＨからＫ）及び３１７（ＮからＦ）に対応する）。別の実施形態において、ＩｇＧ４、例えばヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、ＥＵ付番による位置２２８で（例えば、ＳからＰに）突然変異している。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、ＥＵ付番による位置２２８で（例えば、ＳからＰに）突然変異したヒトＩｇＧ４、及び例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、κ軽鎖定常領域を含む。なおも別の実施形態において、ＩｇＧ１、例えばヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、ＥＵ付番による位置２９７（例えば、ＮからＡ）、ＥＵ付番による位置２６５（例えば、ＤからＡ）、ＥＵ付番による位置３２９（例えば、ＰからＡ）、ＥＵ付番による位置２３４（例えば、ＬからＡ）、又はＥＵ付番による位置２３５（例えば、ＬからＡ）の１つ以上で突然変異している。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、前記位置の１つ以上で突然変異したヒトＩｇＧ１、及び例えば米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の表３に示されるとおり、κ軽鎖定常領域を含む。
【０６８９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、単離又は組換えである。
【０６９０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ヒト化抗体分子である。
【０６９１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、Ｔ細胞エピトープ分析に基づいて７００、６００、５００、４００又はそれ未満のリスクスコアを有する。
【０６９２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ヒト化抗体分子であり、Ｔ細胞エピトープ分析に基づいて３００〜７００、４００〜６５０、４５０〜６００のリスクスコア、又は本明細書に記載されるとおりのリスクスコアを有する。
【０６９３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ａ）配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｂ）配列番号１３７から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、又は
（ｄ）配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
【０６９４】
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１３７、配列番号１４０又は配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び
（ｉｉ）配列番号１４６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
【０６９５】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１３７、配列番号１４０又は配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び
（ｉｉ）配列番号１４９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１６７のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
【０６９６】
前記抗体分子の実施形態において、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態において、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列である。
【０６９７】
実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６、又は１６９のいずれかのアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％同一であるか、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６、又は１６９のいずれかのアミノ酸配列と比較して２アミノ酸以下の置換、挿入又は欠失を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク（ＦＷ）領域を含む重鎖可変領域を有する。
【０６９８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６、又は１６９のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を有する。
【０６９９】
更に他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６、又は１６９のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも２、３、又は４つのフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を有する。
【０７００】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１４７又は１５１のＶＨＦＷ１アミノ酸配列、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１５３、１５７、又は１６０のＶＨＦＷ２アミノ酸配列、及び米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６２又は１６６のＶＨＦＷ３アミノ酸配列を含み、及び任意選択で、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１６９のＶＨＦＷ４アミノ酸配列を更に含む。
【０７０１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５、又は２０８のいずれかのアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％同一であるか、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５、又は２０８のいずれかのアミノ酸配列と比較して２アミノ酸以下の置換、挿入又は欠失を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
【０７０２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５、又は２０８のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
【０７０３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５、又は２０８のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも２、３、又は４つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
【０７０４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、又は１８５のＶＬＦＷ１アミノ酸配列、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１８７、１９１、又は１９４のＶＬＦＷ２アミノ酸配列、及び米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号１９６、２００、２０２、又は２０５のＶＬＦＷ３アミノ酸配列を含み、及び任意選択で、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２０８のＶＬＦＷ４アミノ酸配列を更に含む。
【０７０５】
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号１７２、１８４、２１６、又は２２０のいずれかと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７０６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２、１８４、２１６、又は２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７０７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２のいずれかと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７０８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７６、１８０、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、又は２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７０９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７１０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０７１１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０７１２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７１３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８６又は配列番号２３６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０７１４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７１５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０７１６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０７１７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０７１８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７１９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７２０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７２１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７２２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７２３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７２４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７２５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７２６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７２７】
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７２８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７２９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７３０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７３１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７３２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７３３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７３４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０７３５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０７３６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７３７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７３８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７３９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７４９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７５０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７５１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【０７５２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２３６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７５９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６２】
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７６９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７７０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７７１】
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７７２】
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７７３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）から選択される。
【０７７４】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を含む。
【０７７５】
他の実施形態において、前記抗体分子は、κ又はλの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を含む。
【０７７６】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による位置２２８又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１２又は２１４の位置１０８に突然変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
【０７７７】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による位置２２８又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１２又は２１４の位置１０８にセリンからプロリンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
【０７７８】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による位置２９７又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１６の位置１８０にアスパラギンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
【０７７９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による位置２６５又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１７の位置１４８にアスパラギン酸からアラニンへの突然変異を有し、且つＥＵ付番による位置３２９又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１７の位置２１２にプロリンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
【０７８０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による位置２３４又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１８の位置１１７にロイシンからアラニンへの突然変異を有し、且つＥＵ付番による位置２３５又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９Ａ１号明細書の配列番号２１８の位置１１８にロイシンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
【０７８１】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ヒトＰＤ−１に約０．２ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する能力を有する。
【０７８２】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、約０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、又は０．０２ｎＭ未満、例えば約０．１３ｎＭ〜０．０３ｎＭ、例えば約０．０７７ｎＭ〜０．０８８ｎＭ、例えば約０．０８３ｎＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する。
【０７８３】
他の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、約０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、又は０．０２ｎＭ未満、例えば約０．１１ｎＭ〜０．０８ｎＭ、例えば約０．０９３ｎＭのＫＤでカニクイザルＰＤ−１に結合する。
【０７８４】
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、同様の、例えばｎＭ範囲のＫＤでヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、約０．１ｎＭ、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、又は０．０１ｎＭ未満、例えば約０．０４ｎＭのＫＤでヒトＰＤ−１−Ｉｇ融合タンパク質に結合する。
【０７８５】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約０．１ｎＭ、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、又は０．０１ｎＭ未満、例えば約０．０６ｎＭのＫＤで、ヒトＰＤ−１を発現するジャーカット細胞（例えば、ヒトＰＤ−１トランスフェクトジャーカット細胞）に結合する。
【０７８６】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、又は０．１ｎＭ未満、例えば約０．４ｎＭのＫＤでカニクイザルＴ細胞に結合する。
【０７８７】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、又は０．０１ｎＭ未満、例えば約０．６ｎＭのＫＤで、カニクイザルＰＤ−１を発現する細胞（例えば、カニクイザルＰＤ−１がトランスフェクトされた細胞）に結合する。
【０７８８】
特定の実施形態において、前記抗体分子は、マウス又はラットＰＤ−１と交差反応性でない。他の実施形態において、前記抗体は、アカゲザルＰＤ−１と交差反応性である。例えば、交差反応性は、Ｂｉａｃｏｒｅ法又はＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）を使用した結合アッセイによって測定することができる。他の実施形態において、前記抗体分子は、ＰＤ−１の細胞外Ｉｇ様ドメインに結合する。
【０７８９】
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＰＤ−１によるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、又は両方、又はＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、若しくは両方を発現する細胞への結合を低下させる能力を有する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、約１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．８ｎＭ、０．６ｎＭ、０．４ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ未満、例えば約０．７９ｎＭ〜約１．０９ｎＭ、例えば約０．９４ｎＭ、又は約０．７８ｎＭ以下、例えば約０．３ｎＭのＩＣ５０で、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ１結合を低下させる（例えば、遮断する）。一部の実施形態において、前記抗体は、約２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、又は０．２ｎＭ未満、例えば約１．０５ｎＭ〜約１．５５ｎＭ、又は約１．３ｎＭ以下、例えば約０．９ｎＭのＩＣ５０で、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ２結合を低下させる（例えば、遮断する）。
【０７９０】
他の実施形態において、前記抗体分子は、抗原特異的Ｔ細胞応答を増強する能力を有する。
【０７９１】
実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子又は二重特異性抗体分子である。実施形態において、抗体分子は、ＰＤ−１に対する第１の結合特異性と、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に対する第２の結合特異性とを有する。実施形態において、抗体分子は、抗体の抗原結合断片、例えば半抗体又は半抗体の抗原結合断片を含む。
【０７９２】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＳＥＢ  Ｔ細胞活性化アッセイ又はヒト全血エキソビボアッセイで測定したとき、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（例えば、２５μｇ／ｍＬ）によって活性化された細胞からのＩＬ−２の発現を、ＩＬ−２アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約２〜３倍、例えば約２〜２．６倍、例えば約２．３倍増加させる。
【０７９３】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、抗ＣＤ３（例えば、０．１μｇ／ｍＬ）によって刺激されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約１．２〜３．４倍、例えば約２．３倍増加させる。
【０７９４】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、ＳＥＢ（例えば、３ｐｇ／ｍＬ）によって活性化されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約０．５〜４．５倍、例えば約２．５倍増加させる。
【０７９５】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、ＣＭＶペプチドで活性化されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約２〜３．６倍、例えば約２．８倍増加させる。
【０７９６】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、少なくともｎ回の（例えば、ｎ＝２又は４）細胞分裂を経過したＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージによって測定したとき、ＣＭＶペプチドで活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較して少なくとも約１、２、３、４、５倍、例えば約１．５倍増加させる。
【０７９７】
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、サルで測定したとき、約１００μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１５０μｇ／ｍＬ〜約４５０μｇ／ｍＬ、約２５０μｇ／ｍＬ〜約３５０μｇ／ｍＬ、又は約２００μｇ／ｍＬ〜約４００μｇ／ｍＬ、例えば約２９２．５μｇ／ｍＬのＣｍａｘを有する。
【０７９８】
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、サルで測定したとき、約２５０時間〜約６５０時間、約３００時間〜約６００時間、約３５０時間〜約５５０時間、又は約４００時間〜約５００時間、例えば約４６５．５時間のＴ１／２を有する。
【０７９９】
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、５×１０−４、１×１０−４、５×１０−５、又は１×１０−５ｓ−１、例えば約２．１３×１０−４ｓ−１よりも遅いＫｄでＰＤ−１に結合する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、１×１０４、５×１０４、１×１０５、又は５×１０５Ｍ−１ｓ−１、例えば約２．７８×１０５Ｍ−１ｓ−１よりも速いＫａでＰＤ−１に結合する。
【０８００】
一部の実施形態において、前記抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖及びＦＧループの範囲内の１つ以上の残基に結合する。ＰＤ−１のドメイン構造については、例えば、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３，２８８：１１７７１−１１７８５に記載されている。Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ．ａｌ．に記載されるとおり、Ｃ鎖は、残基Ｆ４３〜Ｍ５０を含み、ＣＣ’ループは、Ｓ５１〜Ｎ５４を含み、Ｃ’鎖は、残基Ｑ５５〜Ｆ６２を含み、及びＦＧループは、残基Ｌ１０８〜Ｉ１１４を含む（アミノ酸付番は、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．前掲による）。従って、一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１の範囲Ｆ４３〜Ｍ５０、Ｓ５１〜Ｎ５４、Ｑ５５〜Ｆ６２、及びＬ１０８〜Ｉ１１４の１つ以上にある少なくとも１つの残基に結合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１の範囲Ｆ４３〜Ｍ５０、Ｓ５１〜Ｎ５４、Ｑ５５〜Ｆ６２、及びＬ１０８〜Ｉ１１４の２、３、又は４つ全てにある少なくとも１つの残基に結合する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の一方又は両方に対する結合部位の一部であるＰＤ−１内の残基に結合する。
【０８０１】
別の態様において、本発明は、前記抗体分子、そのベクター及び宿主細胞のいずれかをコードする単離核酸分子を提供する。
【０８０２】
任意の前記抗体分子の抗体重鎖可変領域又は軽鎖可変領域、又は両方をコードする単離核酸も提供される。
【０８０３】
一実施形態において、単離核酸は、重鎖ＣＤＲ１〜３をコードし、ここで、前記核酸は、配列番号２４２〜２４６、２５５、２５６〜２６０、２６７〜２７１、又は２７８〜２８０のヌクレオチド配列を含む。
【０８０４】
別の実施形態において、単離核酸は、軽鎖ＣＤＲ１〜３をコードし、ここで、前記核酸は、配列番号２４７〜２５４、２６１〜２６６、又は２７２〜２７７のヌクレオチド配列を含む。
【０８０５】
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７３、１８５、２１７、２２１、２２４、２２９、又は２３５のいずれかと少なくとも８５％同一である。
【０８０６】
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７３、１８５、２１７、２２１、２２４、２２９、又は２３５のいずれかを含む。
【０８０７】
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７５、１８７、２１９、２２３、２２６、２３０、又は２３７のいずれかと少なくとも８５％同一である。
【０８０８】
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７５、１８７、２１９、２２３、２２６、２３０、又は２３７のいずれかを含む。
【０８０９】
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７７、１８１、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２２７、２３１、２３３、２３８、又は２４０のいずれかと少なくとも８５％同一である。
【０８１０】
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７７、１８１、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２２７、２３１、２３３、２３８、又は２４０のいずれかを含む。
【０８１１】
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７９、１８３、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２２８、２３２、２３４、２３９又は２４１のいずれかと少なくとも８５％同一である。
【０８１２】
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号１７９、１８３、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２２８、２３２、２３４、２３９又は２４１のいずれかを含む。
【０８１３】
特定の実施形態において、前記核酸を含む１つ以上の発現ベクター及び宿主細胞が提供される。
【０８１４】
遺伝子発現に好適な条件下で本明細書に記載されるとおりの宿主細胞を培養することを含む、抗体分子又はその断片の作製方法も提供される。
【０８１５】
一態様において、本開示は、本明細書に記載される抗体分子を提供する方法を特徴とする。この方法は、ＰＤ−１抗原（例えば、ＰＤ−１エピトープの少なくとも一部分を含む抗原）を提供すること、ＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合する抗体分子を入手すること、及び抗体分子がＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを評価すること、又はＰＤ−１の活性の調節、例えば阻害における抗体分子の有効性を評価することを含む。本方法は、対象、例えばヒト又は非ヒト動物に抗体分子を投与することを更に含み得る。
【０８１６】
別の態様において、本開示は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と、本明細書に記載される治療剤、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の少なくとも１つとを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。一実施形態において、本組成物、例えば医薬組成物は、抗体分子と、１つ以上の薬剤、例えば本明細書に記載されるとおりの治療剤又は他の抗体分子との組み合わせを含む。一実施形態において、抗体分子は、標識又は治療剤にコンジュゲートされる。
【０８１７】
【表１１５】
2019523301.tif 000118
【０８１８】
【表１１６】
2019523301.tif 000119
【０８１９】
【表１１７】
2019523301.tif 000120
【０８２０】
【表１１８】
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【０８２１】
【表１１９】
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【０８２２】
【表１２０】
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【０８２３】
【表１２１】
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【０８２４】
【表１２２】
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【０８２５】
【表１２３】
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【０８２６】
【表１２４】
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【０８２７】
【表１２５】
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【０８２８】
【表１２６】
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【０８２９】
【表１２７】
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【０８３０】
【表１２８】
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【０８３１】
【表１２９】
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【０８３２】
【表１３０】
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【０８３３】
【表１３１】
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【０８３４】
【表１３２】
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【０８３５】
【表１３３】
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【０８３６】
【表１３４】
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【０８３７】
【表１３５】
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【０８３８】
【表１３６】
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【０８３９】
【表１３７】
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【０８４０】
【表１３８】
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【０８４１】
【表１３９】
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【０８４２】
【表１４０】
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【０８４３】
【表１４１】
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【０８４４】
【表１４２】
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【０８４５】
【表１４３】
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【０８４６】
【表１４４】
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【０８４７】
【表１４５】
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【０８４８】
【表１４６】
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【０８４９】
【表１４７】
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【０８５０】
【表１４８】
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【０８５１】
【表１４９】
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【０８５２】
【表１５０】
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【０８５３】
【表１５１】
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【０８５４】
【表１５２】
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【０８５５】
【表１５３】
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【０８５６】
【表１５４】
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【０８５７】
【表１５５】
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【０８５８】
【表１５６】
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【０８５９】
【表１５７】
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【０８６０】
【表１５８】
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【０８６１】
【表１５９】
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【０８６２】
【表１６０】
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【０８６３】
【表１６１】
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【０８６４】
【表１６２】
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【０８６５】
【表１６３】
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【０８６６】
【表１６４】
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【０８６７】
【表１６５】
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【０８６８】
【表１６６】
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【０８６９】
【表１６７】
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【０８７０】
【表１６８】
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【０８７１】
【表１６９】
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【０８７２】
【表１７０】
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【０８７３】
【表１７１】
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【０８７４】
【表１７２】
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【０８７５】
【表１７３】
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【０８７６】
【表１７４】
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【０８７７】
【表１７５】
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【０８７８】
【表１７６】
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【０８７９】
【表１７７】
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【０８８０】
【表１７８】
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【０８８１】
【表１７９】
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【０８８２】
【表１８０】
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【０８８３】
【表１８１】
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【０８８４】
【表１８２】
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【０８８５】
【表１８３】
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【０８８６】
【表１８４】
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【０８８７】
【表１８５】
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【０８８８】
【表１８６】
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【０８８９】
【表１８７】
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【０８９０】
【表１８８】
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【０８９１】
【表１８９】
2019523301.tif 000192
【０８９２】
【表１９０】
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【０８９３】
【表１９１】
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【０８９４】
【表１９２】
2019523301.tif 000195
【０８９５】
【表１９３】
2019523301.tif 000196
【０８９６】
【表１９４】
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【０８９７】
【表１９５】
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【０８９８】
【表１９６】
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【０８９９】
【表１９７】
2019523301.tif 000200
【０９００】
【表１９８】
2019523301.tif 000201
【０９０１】
【表１９９】
2019523301.tif 000202
【０９０２】
【表２００】
2019523301.tif 000203
【０９０３】
【表２０１】
2019523301.tif 000204
【０９０４】
【表２０２】
2019523301.tif 000205
【０９０５】
【表２０３】
2019523301.tif 000206
【０９０６】
【表２０４】
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【０９０７】
【表２０５】
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【０９０８】
【表２０６】
2019523301.tif 000209
【０９０９】
【表２０７】
2019523301.tif 000210
【０９１０】
【表２０８】
2019523301.tif 000211
【０９１１】
【表２０９】
2019523301.tif 000212
【０９１２】
【表２１０】
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【０９１３】
【表２１１】
2019523301.tif 000214
【０９１４】
【表２１２】
2019523301.tif 000215
【０９１５】
【表２１３】
2019523301.tif 000216
【０９１６】
【表２１４】
2019523301.tif 000217
【０９１７】
【表２１５】
2019523301.tif 000218
【０９１８】
【表２１６】
2019523301.tif 000219
【０９１９】
【表２１７】
2019523301.tif 000220
【０９２０】
【表２１８】
2019523301.tif 000221
【０９２１】
【表２１９】
2019523301.tif 000222
【０９２２】
【表２２０】
2019523301.tif 000223
【０９２３】
【表２２１】
2019523301.tif 000224
【０９２４】
【表２２２】
2019523301.tif 000225
【０９２５】
【表２２３】
2019523301.tif 000226
【０９２６】
【表２２４】
2019523301.tif 000227
【０９２７】
【表２２５】
2019523301.tif 000228
【０９２８】
【表２２６】
2019523301.tif 000229
【０９２９】
【表２２７】
2019523301.tif 000230
【０９３０】
【表２２８】
2019523301.tif 000231
【０９３１】
【表２２９】
2019523301.tif 000232
【０９３２】
【表２３０】
2019523301.tif 000233
【０９３３】
【表２３１】
2019523301.tif 000234
【０９３４】
【表２３２】
2019523301.tif 000235
【０９３５】
実施形態において、ＰＤ−１の阻害剤は、抗体又はそのフラグメント以外の分子である。実施形態において、ＰＤ−１の阻害剤は、ＲＮＡ分子、例えばｄｓＲＮＡ分子、例えば２０１４年１２月１９日に出願された国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に援用される）の段落［００４８９］並びに表１６及び１７に記載されているように、ＰＤ−１を標的化及び調節又は制御、例えば阻害するｄｓＲＮＡ分子（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）などのＲＮＡｉ剤）を含む。
【０９３６】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で入手可能であり、本明細書に記載される本開示のＣＡＲ発現細胞と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、ピジリズマブ（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＢＧＢ−１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）、又はＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）から選択される。
【０９３７】
ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８又はＭＤＸ−１１０６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ−１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。
【０９３８】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブの別名として、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）又はＢＭＳ−９３６５５８が挙げられる。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。ニボルマブは、ＰＤ１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。一実施形態では、ＰＤ−１の阻害剤は、ニボルマブであり、本明細書に開示される配列（又はそれと実質的に同一若しくは類似の配列、例えば指定される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくはそれを超えて同一の配列）を有する。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ニボルマブのＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９３９】
ニボルマブの重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、以下のとおりである。
【０９４０】
重鎖
【化３】
2019523301.tif 000236
【０９４１】
軽鎖
【化４】
2019523301.tif 000237
【０９４２】
ペンブロリズマブ（以前はランブロリズマブとして知られ、ＭＫ０３４７５とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペンブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示されている。ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示）は、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１との相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。他の抗ＰＤ−１抗体としては、とりわけＡＭＰ  ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書、及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書に開示されている抗ＰＤ−１抗体が挙げられる。
【０９４３】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（また、ランブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５又はＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペンブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示されている。
【０９４４】
ペンブロリズマブ
一実施形態では、ＰＤ−１の阻害剤は、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示されており、且つ本明細書に開示される配列（又はそれと実質的に同一若しくは類似の配列、例えば指定される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくはそれを超えて同一の配列）を有するペンブロリズマブである。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ペンブロリズマブのＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９４５】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号５３０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５３１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５３２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、及び
（ｉｉ）配列番号５２７のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５２８のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号５２９のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、又は
それらと類似の配列、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％若しくはそれを超えて同一の配列
を含む。
【０９４６】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２８３のアミノ酸を含む重鎖、及び配列番号２８４のアミノ酸を含む軽鎖、又はそれらと同一若しくは類似の配列、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％若しくはそれを超えて同一の配列を含む。
【０９４７】
ペンブロリズマブの重鎖、軽鎖、重鎖ＣＤＲ、及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列は、以下に開示するとおりである。
【０９４８】
重鎖
【化５】
2019523301.tif 000238
【０９４９】
軽鎖
【化６】
2019523301.tif 000239
【０９５０】
軽鎖ＣＤＲ１：ＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨ（配列番号５２７）
軽鎖ＣＤＲ２：ＬＡＳＹＬＥＳ（配列番号５２８）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＨＳＲＤＬＰＬＴ（配列番号５２９）
重鎖ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＹ（配列番号５３０）
重鎖ＣＤＲ２：ＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮ（配列番号５３１）
重鎖ＣＤＲ３：ＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹ（配列番号５３２）
【０９５１】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ピジリズマブである。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレット、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３４（５）：４０９−１８、米国特許第７，６９５，７１５号明細書、米国特許第７，３３２，５８２号明細書、及び米国特許第８，６８６，１１９号明細書に開示されており、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ピジリズマブのＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５２】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）であり、これは、ＡＭＰ−５１４としても知られている。ＭＥＤＩ０６８０及び他の抗ＰＤ−１抗体は、米国特許第９，２０５，１４８号明細書及び国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレットに開示されており、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＭＥＤＩ０６８０のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５３】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５４】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＦ−０６８０１５９１のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５５】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＧＢ−Ａ３１７又はＢＧＢ−１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＧＢ−Ａ３１７又はＢＧＢ−１０８のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５６】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）であり、これは、ＩＮＣＳＨＲ０１２１０又はＳＨＲ１２１０としても知られている。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ１２１０のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５７】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）であり、これは、ＡＮＢ０１１としても知られている。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＴＳＲ−０４２のＣＤＲ配列（若しくは集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。
【０９５８】
他の抗ＰＤ−１抗体は、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、とりわけ例えば米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書、及び／又は米国特許出願第２０１２０１１４６４９号明細書に開示されている抗ＰＤ−１抗体が挙げられる。更に別の公知の抗ＰＤ−１抗体として、例えば国際公開第２０１５／１１２８００号パンフレット、国際公開第２０１６／０９２４１９号パンフレット、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット、国際公開第２０１４／１７９６６４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４３０２号パンフレット、国際公開第２０１４／２０９８０４号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、米国特許第８，７３５，５５３号明細書、米国特許第７，４８８，８０２号明細書、米国特許第８，９２７，６９７号明細書、米国特許第８，９９３，７３１号明細書及び米国特許第９，１０２，７２７号明細書に記載されているものがあり、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０９５９】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体の１つとＰＤ−１上の同じエピトープへの結合について競合し、且つ／又はそのエピトープに結合する抗体である。
【０９６０】
一実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、例えば、米国特許第８，９０７，０５３号明細書（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されているように、ＰＤ−１シグナル伝達経路を阻害するペプチドである。一部の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、免疫アドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１若しくはＰＤ−Ｌ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含む免疫アドヘシンである。一部の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示されている）であり、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１との相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２Ｆｃ融合可溶性受容体である。
【０９６１】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体又はそのフラグメントは、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載のような抗ＰＤ−１抗体分子である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｄ、若しくはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅのいずれかから選択される抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つのＣＤＲ（又は集合的に全てのＣＤＲ）、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１に記載されているもの、若しくは表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの、又は前述した配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％若しくはそれを超えて同一）である配列、又は密接に関連するＣＤＲ、例えば同一であるか、若しくは少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ若しくは４つ以下の改変（例えば、置換、欠失、若しくは挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
【０９６２】
また別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｄ、若しくはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅのいずれかから選択される抗体からの少なくとも１つ、２つ、３つ若しくは４つの可変領域、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１に記載されているもの、若しくは表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの、又は前述した配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％若しくはそれを超えて同一）である配列を含む。
【０９６３】
疾患及び障害のための治療適用
抗原（例えばＣＤ１９）関連疾患及び／又は障害
本開示は、例えば、抗原、例えばＣＤ１９の発現に関連する疾患及び障害（例えば、癌）を治療するための組成物及び方法を提供する。一態様では、本発明は、疾患を治療する方法を提供し、ここで、癌の一部は、抗原、例えばＣＤ１９について陰性であり、癌の一部は、抗原、例えばＣＤ１９について陽性である。
【０９６４】
例えば、本発明の方法及び組成物は、再発した又は難治性疾患（例えば、癌、例えばＣＤ１９＋癌）を有する対象を治療する上で有用である。
【０９６５】
特定の実施形態では、対象は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤の投与前に化学療法、例えば本明細書に記載される化学療法（例えば、リンパ球除去化学療法、カルボプラチン、及び／若しくはゲムシタビン）を投与されたことがある。実施形態において、対象は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤の投与前に免疫療法、例えば同種骨髄移植を投与されたことがある。実施形態において、対象は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤の投与前に放射線療法を受けたことがある。
【０９６６】
本発明に記載される併用療法（例えば、ＣＡＲ発現細胞及びＰＤ−１阻害剤）で治療することができる癌の例として、血液癌が挙げられる。血液癌の例は、以下により詳細に記載される。
【０９６７】
本開示は、（とりわけ）ある種の細胞治療を含み、ここで、Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に改変され、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与されたＴ細胞又はその子孫は、患者において、患者にＴ細胞を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
【０９６８】
本発明は、ある種の細胞治療も含み、ここで、免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞又はＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように例えばインビトロ転写ＲＮＡにより改変され、ＣＡＲ発現（例えば、ＣＡＲＴ）細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで癌細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与したＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞は、患者にＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満持続する。
【０９６９】
特定の理論に拘束されることを望まないが、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞により誘発される抗癌免疫応答は、能動的若しくは受動的免疫応答であるか、又は直接及び間接免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ）形質導入Ｔ細胞は、標的抗原（例えば、ＣＤ１９）を発現するヒト癌細胞に応答して特異的な炎症性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解活性を示し、可溶性標的抗原阻害に抵抗し、バイスタンダー細胞死を媒介すると共に、定着したヒト癌の退縮を媒介する。例えば、標的抗原を発現する癌の不均一な場における抗原低癌細胞は、隣接する抗原陽性癌細胞に対して先に反応している標的抗原再指向Ｔ細胞による間接的破壊に対して感受性となり得る。
【０９７０】
一態様において、本開示は、対象の癌を治療する方法を特徴とする。本方法は、対象に併用療法を投与する工程を含み、この併用療法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とＰＤ−１阻害剤とを投与して対象の癌を治療する工程を含む。本明細書に記載の併用療法により治療が可能な癌の例は、抗原、例えばＣＤ１９の発現に関連する癌である。一態様では、抗原、例えばＣＤ１９の発現に関連する癌は、本明細書に記載される血液癌、例えばリンパ腫、例えば濾胞性リンパ腫又はＤＬＢＣＬのいずれかから選択される。
【０９７１】
一実施形態において、本明細書に記載するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とＰＤ−１阻害剤との併用療法により、例えばＣＡＲ発現細胞又はＰＤ−１阻害剤単独の単剤療法と比較して、以下の１つ以上：ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の抗腫瘍活性の向上若しくは増大、ＣＡＲ発現細胞の増殖若しくは持続性の向上、ＣＡＲ発現細胞の浸潤の向上若しくは増大、腫瘍進行の阻害の向上、腫瘍進行の遅延、癌細胞増殖の阻害若しくは抑制、及び／又は腫瘍負荷、例えば腫瘍体積若しくはサイズの低減が達成される。一実施形態では、併用療法により、ＣＡＲ発現細胞の持続性の増大、及び例えばＢ細胞形成不全として発現される長期間のＢ細胞回復が達成される。一実施形態では、併用療法により、ＣＡＲ発現細胞の持続性の増大、及び再発リスクの低下、例えば減少が達成される。
【０９７２】
本発明は、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞集団の増殖を阻害するか、又はそうした集団を低減する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）、又はＣＡＲ発現細胞の集団と、ＰＤ−１阻害剤とを含む組み合わせを投与する工程を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、ＣＡＲ発現（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現）細胞又はＰＤ−１阻害剤単独で治療した対象の細胞及び／又は癌細胞の数量、数、量若しくはパーセンテージと比較して、抗原（例えば、ＣＤ１９）若しくは抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に関連する別の癌を有する対象又はその動物モデルにおいて、細胞及び／又は癌細胞の数量、数、量若しくはパーセンテージを少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％低減する。一実施形態において、対象は、ヒトである。一実施形態において、対象は、サル、例えばカニクイザルである。
【０９７３】
本発明は、障害、例えば抗原発現細胞（例えば、ＣＤ１９発現細胞）に関連する障害（例えば、本明細書に記載する癌）を予防、治療及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、それを必要とする対象に、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）、又はＣＡＲ発現細胞の集団と、ＰＤ−１阻害剤とを投与する工程を含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０９７４】
一態様において、本発明は、癌細胞（例えば、抗原発現、例えばＣＤ１９発現、癌細胞）の増殖を阻害する方法に関し、これは、癌細胞をＣＡＲ発現（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現）細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞、及び例えば本明細書に記載するような１つ以上の他のＣＡＲ発現細胞と接触させる工程であって、それにより、ＣＡＲＴは、抗原に応答して活性化されて癌細胞を標的化する、工程を含み、これにより癌の増殖が阻害される。ＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞は、ＰＤ−１、例えば本明細書に記載のＰＤ−１と組み合わせて投与される。
【０９７５】
本開示は、疾患、例えば抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に関連する疾患（例えば、抗原、例えばＣＤ１９を発現する血液癌又は非定型癌）を予防、治療及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、それを必要とする対象に、抗原発現細胞に結合するＣＡＲ発現（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現）細胞を投与する工程と、本明細書に記載のＰＤ−１阻害剤を投与する工程とを含む。一態様において、対象は、ヒトである。抗原（例えば、ＣＤ１９）発現細胞に関連する障害の非限定的な例として、自己免疫障害（例えば、狼瘡など）、炎症性障害（例えば、アレルギー及び喘息など）並びに癌（例えば、抗原、例えばＣＤ１９を発現する血液癌又は非定型癌など）が挙げられる。
【０９７６】
本開示は、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に関連する疾患を予防、治療及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、それを必要とする対象に、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に結合する本発明のＣＡＲＴ細胞（例えば、抗ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞）を投与する工程を含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０９７７】
本開示は、例えば、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に関連する癌の再発を予防する方法を更に提供し、本方法は、それを必要とする対象に、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に結合する本発明のＣＡＲＴ細胞（例えば、抗ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞）を投与する工程を含む。一態様において、本方法は、それを必要とする対象に、有効量の別の治療薬、例えばＰＤ−１阻害剤と組み合わせて、抗原発現（例えば、ＣＤ１９発現）細胞に結合する有効量の本明細書に記載のＣＡＲＴ細胞（例えば、抗ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞）を投与する工程を含む。
【０９７８】
例えば、抗原（例えば、ＣＤ１９）の発現に関連する非癌関連適応として、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、狼瘡）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が挙げられる。
【０９７９】
本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、単独で、或いは希釈剤及び／又はＩＬ−２若しくは他のサイトカイン又は細胞集団などの他の成分と組み合わせた医薬組成物としてのいずれかで投与され得る。
【０９８０】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９発現細胞）を用いて、Ｂ細胞（例えば、Ｂ細胞、例えば制御性Ｂ細胞の集団）を枯渇させる。特定の理論に拘束されることを望まないが、Ｂ細胞、例えば制御性Ｂ細胞の枯渇は、併用療法（例えば、本明細書に記載の併用療法）がより有効になる（例えば、Ｂ細胞の枯渇なしと比較して）ように、腫瘍微小環境を改善し得ると考えられている。従って、本明細書には、制御性細胞（例えば、制御性Ｂ細胞）を減少、例えば枯渇させる方法が提供される。本方法は、制御性細胞を減少させるのに十分な量で本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本方法を使用して、腫瘍微小環境を調節する、例えば本明細書に記載の治療法の有効性を高めることができる。
【０９８１】
血液癌
血液癌状態は、白血病、リンパ腫、並びに血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌の種類である。
【０９８２】
一実施形態において、血液癌は、白血病である。一実施形態において、癌は、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を包含する、１種又は複数の急性白血病；これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を包含する、１種又は複数の慢性白血病；これらに限定されないが、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せもつ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」を包含する追加の血液癌又は血液学的状態からなる群から選択される。抗原（例えば、ＣＤ１９）の発現に関連する疾患として、抗原（例えば、ＣＤ１９）を発現する非定型及び／若しくは非古典的癌、悪性疾患、前癌状態又は増殖性疾患、並びにこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０９８３】
白血病は、急性白血病及び慢性白血病に分類できる。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として更に分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連する状態は、骨髄球性血液細胞の産生不良（又は異形成）によりまとめられる血液学的状態の多様な集合であり、ＡＭＬに癌化するリスクがある骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病状態」として知られる）である。
【０９８４】
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。代表的リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む。
【０９８５】
一態様において、本発明は、ホジキンリンパ腫を有する哺乳動物を治療する方法に関し、これは、ＣＡＲ分子、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ分子を発現する有効量の細胞と、Ｂ細胞阻害剤とを哺乳動物に投与する工程を含む。
【０９８６】
一態様において、本発明の組成物及びＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、非ホジキンリンパ腫、例えばＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、又はＣＬＬなどのＢ細胞悪性腫瘍を処置するのに特に有用である。
【０９８７】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、Ｂ細胞又はＴ細胞のいずれかから形成される、リンパ球の癌の群である。ＮＨＬは、あらゆる年齢で起こり、多くの場合、正常なものより大きいリンパ節、体重減少及び発熱を特徴とする。異なるＮＨＬ型は、中悪性度（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）（急速進行）及び低悪性度（緩徐進行）型として大別される。Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、及びマントル細胞リンパ腫を包含する。Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫の例としては、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、及び前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。骨髄又は幹細胞移植後に起こるリンパ腫は、典型的にはＢ細胞非ホジキンリンパ腫である。例えば、Ｍａｌｏｎｅｙ．ＮＥＪＭ．３６６．２１（２０１２）：２００８−１６を参照されたい。一部の実施形態において、非ホジキンリンパ腫、例えばＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、又はＣＬＬは、ＰＤ−Ｌ１の高度発現を有し得、これは、臨床転帰不良に関連し得る。
【０９８８】
びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）は、Ｂ細胞から発生するＮＨＬの一形態である。ＤＬＢＣＬは、リンパ節内又はリンパ系の外部、例えば胃腸管、精巣、甲状腺、皮膚、乳房、骨又は脳において生じ得る中悪性度リンパ腫である。ＤＬＢＣＬでは、細胞の形状の３つの変異体、中心芽球型、免疫芽球型及び未分化型が一般に観察される。中心芽球型の形状が最もよく見られ、最小の細胞質を伴う中〜大型リンパ球の外観を有する。ＤＬＢＣＬにはいくつかの亜型がある。例えば、原発性中枢神経系リンパ腫は、もっぱら脳を冒すＤＬＢＣＬの１つの型を指し、脳外の領域を冒すＤＬＢＣＬとは別ものとして処置される。ＤＬＢＣＬのもう１つの型は、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫であり、これは、多くの場合、若年患者において起こり、胸部で急速に進行する。ＤＬＢＣＬの症状としては、肥大したリンパ節に起因する頸部、腋窩部又は鼠径部における無痛の急速な腫脹が挙げられる。一部の対象については、腫脹が有痛であることもある。ＤＬＢＣＬの他の症状としては、寝汗、原因不明の発熱、及び体重減少が挙げられる。ＤＬＢＣＬを有するほとんどの患者は、成人であるが、この疾患が小児において起こることもある。
【０９８９】
一部の実施形態において、ＤＬＢＣＬ患者のサブセットは、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２遺伝子座改変を示す。例えば、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２遺伝子座の改変は、１９％の患者に観察され、そのうちの１２％の患者は、コピー数増加を示し、３％は、増幅を呈示し、４％は、転座を示した。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１発現は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２遺伝子座の転座又は増幅を有するものを含む患者由来の試料中の免疫組織化学（ＩＨＣ）により検出することができる。
【０９９０】
遺伝子改変は、ＤＬＢＣＬの非ＧＣＢ（胚中心Ｂ細胞）サブタイプにも存在し得る。一部の実施形態において、非ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ患者にＰＤ−Ｌ１発現を認めることができる。一部の実施形態において、非ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ患者は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２発現又は遺伝子改変に関して古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）に類似している。
【０９９１】
ＤＬＢＣＬの処置としては、化学療法（例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、エトポシド）、抗腫瘍薬（例えば、ピキサントロン）、抗体（例えば、リツキサン）、アントラサイクリン含有レジメン、放射線、又は幹細胞移植、例えば自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）若しくは同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）が挙げられる。一部の実施形態において、ＤＬＢＣＬの処置は、併用療法を含むことができ、こうした療法として、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｒ−ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン／プレドニゾロン、及びリツキシマブ）、Ｒ−ＩＣＥ（リツキシマブ、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド）、Ｒ−ＤＨＡＰ（リツキシマブ、デキサメタゾン、シタラビン及びシスプラチン）、Ｒ−ＧＤＰ（リツキシマブ、デキサメタゾン、ゲムシタビン及びシスプラチン）、ＧｅｍＯＸ（ゲムシタビン及びオキサリプラチン）、又はＨＤＣＴ（高用量化学療法）及びＡＳＣＴ。
【０９９２】
ＤＬＢＣＬのこれらの処置、例えば複数の選択療法は、第１選択療法、第２選択療法、第３選択療法、又は第４選択療法として投与することができる。一部の実施形態において、ＤＬＢＣＬの処置は、１つ以上の選択療法、例えば１つ、２つ、３つ、又は４つの選択療法を含み得る。一部の実施形態では、ＤＬＢＣＬの治療は、本明細書に開示される治療のいずれか１つ以上、又はこれらの組み合わせを含み得る。
【０９９３】
一部の実施形態において、第１選択療法は、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、Ｒ−ＧＤＰ、ＧｅｍＯｘ、リツキシマブ、ＨＤＣＴ及びＡＳＣＴ、ピキサントロン、同種ＨＳＣＴ、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）、又は検査薬を含む。一部の実施形態では、第１療法は、Ｒ−ＣＨＯＰである。
【０９９４】
一部の実施形態において、第２選択療法は、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、Ｒ−ＧＤＰ、ＧｅｍＯｘ、リツキシマブ、ＨＤＣＴ及びＡＳＣＴ、ピキサントロン、同種ＨＳＣＴ、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）、又は検査薬を含む。一部の実施形態では、第２選択療法は、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、Ｒ−ＧＤＰ、ＧｅｍＯｘ、リツキシマブ、ＨＤＣＴ及びＡＳＣＴ、又は検査薬を含む。一部の実施形態では、第２選択療法は、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、又はＲ−ＧＤＰである。一部の実施形態では、第２選択療法は、ＡＳＣＴと組み合わせたＨＤＣＴである。一部の実施形態では、第２選択療法は、リツキシマブである。一部の実施形態では、第２選択療法は、ＧｅｍＯｘである。一部の実施形態では、第２選択療法は、検査薬である。
【０９９５】
一部の実施形態において、第３選択療法は、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、Ｒ−ＧＤＰ、ＧｅｍＯｘ、リツキシマブ、ＨＤＣＴ及びＡＳＣＴ、ピキサントロン、同種ＨＳＣＴ、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）、又は検査薬を含む。一部の実施形態では、第３選択療法は、ピキサントロンである。一部の実施形態では、第３選択療法は、検査薬である。一部の実施形態では、第３選択療法は、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）である。他の実施形態では、第３選択療法は、同種ＨＳＣＴである。
【０９９６】
一部の実施形態において、第４選択療法は、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒ−ＤＨＡＰ、Ｒ−ＧＤＰ、ＧｅｍＯｘ、リツキシマブ、ＨＤＣＴ及びＡＳＣＴ、ピキサントロン、同種ＨＳＣＴ、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）、又は検査薬を含む。一部の実施形態では、第４選択療法は、検査薬を含む。
【０９９７】
患者の約６０％がリツキシマブ含有の第１選択療法に応答する。一部の実施形態において、２つを超える選択療法、例えば２つ、３つ、又は４つの選択療法を受ける患者は、予後が不良である。第２選択療法としてＲ−ＤＨＡＰ及びＯ−ＤＨＡＰを受ける患者は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値がそれぞれ２．１及び１．８ヶ月であり、全生存期間（ＯＳ）中央値がそれぞれ１３．２及び１３．７ヶ月である。自己ＨＳＣＴ後にサルベージ療法に失敗したか又は再発した患者は、４．４ヶ月のＯＳ中央値を有する。これらの患者の１年ＯＳは、２３％であり、これらの患者の２年ＯＳは、１５．７％である。加えて、第３選択化学療法、又は自己移植に失敗したか若しくは自己移植が不適格な患者のための標準治療はない。従って、ｒ／ｒＤＬＢＣＬには、満たされていない必要性が存在する。
【０９９８】
ＣＡＲＴ療法は、潜在的に治効があると考えられるが、全てのｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者に対してではない。ＣＡＲＴ療法は、既存の療法に対して改善された転帰をもたらすが、ｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者の約２／３は、ＣＡＲＴ療法に対して持続性奏効を示さないであろう。ＣＡＲＴ療法とチェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ）との併用は、ｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者の応答を改善することができる。
【０９９９】
一部の実施形態において、ＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９若しくはＢＣＭＡ  ＣＡＲ）とチェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ）との併用を第３選択療法として使用することができる。一部の実施形態において、併用療法は、例えば、ｒ／ｒＤＬＢＣＬを有する患者において持続性奏効率を達成することができる。一部の実施形態では、併用療法は、腫瘍部位（例えば、血液、骨髄、又は脾臓）におけるＣＡＲＴ療法（例えば、ＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９、又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ）の持続性を延長することができる。他の実施形態では、併用療法は、ＣＡＲＴ単剤療法、例えばＣＴＬ０１９、ＣＴＬ１１９、又はＢＣＭＡ  ＣＡＲの単剤療法よりも優れている可能性がある。一部の実施形態において、併用療法は、例えば、リンパ球枯渇後の、対象の正常Ｔ細胞集団の回復時に奏効期間を増大することができる。他の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ）は、自発的免疫応答のＰＤ−１媒介阻害を遮断することができる。一部の実施形態では、併用療法を受ける対象は、ＤＬＢＣＬ、例えばＧＣＢ又は非ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬを有する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１発現又は遺伝子改変に基づいて、ＤＬＢＣＬ、例えばＧＣＢ又は非ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬを有する対象を併用療法のために選択することができる。
【１０００】
非ホジキンリンパ腫の１つの型である濾胞性リンパ腫は、少なくとも部分的に濾胞性のパターンを有する濾胞中心Ｂ細胞（セントロサイト及び中心芽球）のリンパ腫である。濾胞性リンパ腫細胞は、Ｂ細胞マーカーＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２を発現する。濾胞性リンパ腫細胞は、一般に、ＣＤ５に関して陰性である。形態学的には、濾胞性リンパ腫腫瘍は、セントロサイト（くびれのある濾胞中心細胞又は小細胞とも呼ばれる）と中心芽球（くびれのない大型濾胞中心細胞又は大細胞とも呼ばれる）の混合物を含有する濾胞で構成されている。濾胞は、非悪性細胞、主にＴ細胞によって包囲されている。濾胞は、主としてセントロサイトを含有し、少数の中心芽細胞を有する。世界保健機関（ＷＨＯ）は、形態学的にこの疾患を次のように分類している：グレード１［高倍率視野（ｈｐｆ）当たり＜５個の中心芽球］、グレード２（６〜１５個の中心芽球／ｈｐｆ）、グレード３（＞１５個の中心芽球／ｈｐｆ）。グレード３は、以下のグレードに更に細分される：グレード３Ａ（セントロサイトが依然として存在する）、グレード３Ｂ（濾胞がほぼ全て中心芽球からなる）。
【１００１】
濾胞性リンパ腫の処置としては、化学療法、例えばアルキル化剤、ヌクレオシド類似体、アントラサイクリン含有レジメン、例えばＣＨＯＰと呼ばれる併用療法−シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン／プレドニゾロン、抗体（例えば、リツキシマブ）、放射免疫療法、及び造血幹細胞移植が挙げられる。
【１００２】
ＣＬＬは、骨髄、血液、リンパ節及び脾臓における新生物細胞増殖及び蓄積を特徴とするＢ細胞悪性腫瘍である。ＣＬＬの診断時の年齢中央値は、約６５歳である。現行の処置としては、化学療法、放射線療法、生物学的療法、又は骨髄移植が挙げられる。症状は、外科的に（例えば、肥大した脾臓の脾摘出術での除去）、又は放射線療法（例えば、腫脹したリンパ節を減量すること）によって処置されることもある。ＣＬＬを処置するための化学療法剤としては、例えば、フルダラビン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、シクロホスファミド、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ）、ドキソルビシン及びプレドニゾンが挙げられる。ＣＬＬのための生物学的療法としては、抗体、例えばアレムツズマブ、リツキシマブ及びオファツムマブ；並びにチロシンキナーゼ阻害剤療法が挙げられる。多数の基準、例えばＲａｉ又はＢｉｎｅｔシステムを使用して、ＣＬＬの病期を分類することができる。Ｒａｉシステムは、５つの病期を有するものとして（ｈａｓ  ｈａｖｉｎｇ）ＣＬＬを説明する：リンパ球増加のみが存在する病期０；リンパ節腫大が存在する病期Ｉ；巨脾症、リンパ節腫大、又は両方が存在する病期ＩＩ；貧血、臓器肥大、又は両方が存在する病期ＩＩＩ（進行は体重減少、疲労、発熱、広範囲の臓器肥大、及びリンパ球数急増によって定義される）；及び貧血、血小板減少症、臓器肥大、又はこれらの組み合わせが存在する病期ＩＶ。Ｂｉｎｅｔ病期分類システムのもとには３つのカテゴリーがある：リンパ球増加が存在し、３つ未満のリンパ節が肥大している病期Ａ（この病期は、Ｒａｉ病期０の患者全て、Ｒａｉ病期Ｉの患者の半分、及びＲａｉ病期ＩＩの患者の３分の１を含む）；３つ以上のリンパ節が罹患している病期Ｂ；及び貧血若しくは血小板減少症、又は両方が存在する病期Ｃ。これらの分類システムを免疫グロブリン遺伝子の変異の測定値と併用して、その疾患の状況のより正確な特徴付けを行うことができる。変異した免疫グロブリン遺伝子の存在は、予後改善と相関する。
【１００３】
別の実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、例えば、白血病幹細胞を用いて、癌又は白血病を処置するために使用される。例えば、白血病幹細胞は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−白血病細胞である。
【１００４】
併用療法
本明細書に記載する方法のいずれかを他の既知薬剤及び療法と組み合わせて使用し得る。
【１００５】
本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤、並びに少なくとも１種の追加治療薬は、同時に、同じ若しくは個別の組成物で、又は順次投与することができる。順次投与する場合、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤は、追加治療薬後に投与され得、又は投与順序が逆にされ得、その場合、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤後に追加治療薬を投与することができる。或いは、ＣＡＲ発現細胞とＰＤ−１阻害剤との投与の間に追加治療薬を投与することもできる。
【１００６】
別の態様では、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、手術、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６、抗体、又は他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、又は他の抗体治療剤、シトキシン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、及び照射、ペプチドワクチン（例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載のもの）と併用した治療レジメンで使用し得る。
【１００７】
一実施形態では、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、化学療法剤と組み合わせて使用することができる。例示的な化学療法剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、サリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤を含む。
【１００８】
一般的な化学療法剤は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に援用される）の２６８〜２６９頁に開示されている。
【１００９】
例示的なアルキル化剤は、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に援用される）の２７０〜２７１頁に開示されている。
【１０１０】
例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス（以前はデフェロリムスとして知られる（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られ、国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）又はＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（ＣＡＳ  １６４３０１−５１−３）；エムシロリムス、（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ  １０１３１０１−３６−４）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−、分子内塩（配列番号５２６）（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ  ９３６４８７−６７−１）及びＸＬ７６５を含む。
【１０１１】
例示的な免疫調節剤は、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；レナリドマイド（ＣＣ−５０１３、レブリミド（登録商標））；サリドマイド（サロミド（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）；並びにＩＲＸ−２（インターロイキン１、インターロイキン２及びインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ  ９５１２０９−７１−５、ＩＲＸ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）を含む。
【１０１２】
例示的なアントラサイクリンは、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；並びにデスアセチルラビドマイシンを含む。
【１０１３】
例示的なビンカアルカロイドは、例えば、酒石酸ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（別名：硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標））；並びにビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【１０１４】
例示的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カーフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イキサゾミブクエン酸エステル（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；及びＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）を含む。
【１０１５】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、ブレンツキシマブと組み合わせて対象に投与される。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体及びモノメチルオーリスタチンＥの抗体−薬物コンジュゲートである。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば再発性又は難治性ＨＬを有する。実施形態において、対象は、ＣＤ３０＋  ＨＬを含む。実施形態において、対象は、自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けている。実施形態において、対象は、ＡＳＣＴを受けていない。実施形態において、ブレンツキシマブを約１〜３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２ｍｇ／ｋｇ、２〜２．５ｍｇ／ｋｇ、又は２．５〜３ｍｇ／ｋｇ）の用量で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
【１０１６】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、ブレンツキシマブ及びダカルバジンと組み合わせて、又はブレンツキシマブ及びベンダムスチンと組み合わせて対象に投与される。ダカルバジンは、化学名５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼニル）イミダゾール−４−カルボキサミドを有するアルキル化剤である。ベンダムスチンは、化学名４−［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−１−メチルベンズイミダゾール−２−イル］ブタン酸を有するアルキル化剤である。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する。実施形態において、対象は、癌治療剤で先に処置されていない。実施形態において、対象は、少なくとも６０歳、例えば６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳又はそれを超える年齢である。実施形態において、ダカルバジンを約３００〜４５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約３００〜３２５ｍｇ／ｍ２、３２５〜３５０ｍｇ／ｍ２、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、又は４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ベンダムスチンを約７５〜１２５ｍｇ／ｍ２（例えば、７５〜１００ｍｇ／ｍ２又は１００〜１２５ｍｇ／ｍ２、例えば約９０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ブレンツキシマブを約１〜３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２ｍｇ／ｋｇ、２〜２．５ｍｇ／ｋｇ、又は２．５〜３ｍｇ／ｋｇ）の用量で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
【１０１７】
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を対象にＣＤ２０阻害剤、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、抗ＣＤ２０単一若しくは二重特異的抗体）又はそのフラグメントと組み合わせて投与する。例示的な抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、オカラツズマブ及びＰｒｏ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．９５．１（２０１０）：１３５−４３を参照されたい。
【１０１８】
一部の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブを含む。リツキシマブは、例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１０／１０３７０５ｓ５３１１ｌｂｌ．ｐｄｆに記載のように、ＣＤ２０に結合し、ＣＤ２０発現細胞の細胞溶解を起こすキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ１κである。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
【１０１９】
一部の実施形態において、リツキシマブを静脈内に例えば静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約５００〜２０００ｍｇ（例えば、約５００〜５５０ｍｇ、５５０〜６００ｍｇ、６００〜６５０ｍｇ、６５０〜７００ｍｇ、７００〜７５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、８００〜８５０ｍｇ、８５０〜９００ｍｇ、９００〜９５０ｍｇ、９５０〜１０００ｍｇ、１０００〜１１００ｍｇ、１１００〜１２００ｍｇ、１２００〜１３００ｍｇ、１３００〜１４００ｍｇ、１４００〜１５００ｍｇ、１５００〜１６００ｍｇ、１６００〜１７００ｍｇ、１７００〜１８００ｍｇ、１８００〜１９００ｍｇ、又は１９００〜２０００ｍｇ）のリツキシマブを提供する。一部の実施形態において、リツキシマブを１５０ｍｇ／ｍ２〜７５０ｍｇ／ｍ２、例えば約１５０〜１７５ｍｇ／ｍ２、１７５〜２００ｍｇ／ｍ２、２００〜２２５ｍｇ／ｍ２、２２５〜２５０ｍｇ／ｍ２、２５０〜３００ｍｇ／ｍ２、３００〜３２５ｍｇ／ｍ２、３２５〜３５０ｍｇ／ｍ２、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２、４７５〜５００ｍｇ／ｍ２、５００〜５２５ｍｇ／ｍ２、５２５〜５５０ｍｇ／ｍ２、５５０〜５７５ｍｇ／ｍ２、５７５〜６００ｍｇ／ｍ２、６００〜６２５ｍｇ／ｍ２、６２５〜６５０ｍｇ／ｍ２、６５０〜６７５ｍｇ／ｍ２、又は６７５〜７００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、ここで、ｍ２は、対象の体表面積を示す。一部の実施形態において、リツキシマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日、又はそれを超える投薬インターバルで投与する。例えば、リツキシマブを少なくとも０．５週間、例えば０．５週間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、又はそれを超える投薬インターバルで投与する。一部の実施形態において、リツキシマブを一定期間、例えば少なくとも２週間、例えば少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、又はそれより長く、本明細書に記載の用量及び投薬インターバルで投与する。例えば、リツキシマブを本明細書に記載の用量及び投薬インターバルで１処置サイクル当たり計少なくとも４回の投与で投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６回又はそれを超える投与）。
【１０２０】
一部の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブを含む。オファツムマブは、分子量約１４９ｋＤａを有する抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１κヒトモノクローナル抗体である。例えば、オファツムマブは、トランスジェニックマウス及びハイブリドーマ技術を使用して産生し、組み換えマウス細胞株（ＮＳ０）から発現及び精製する。例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２００９／１２５３２６ｌｂｌ．ｐｄｆ；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＣＴ０１３６３１２８、ＮＣＴ０１５１５１７６、ＮＣＴ０１６２６３５２及びＮＣＴ０１３９７５９１を参照されたい。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をオファツムマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
【１０２１】
一部の実施形態において、オファツムマブを静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約１５０〜３０００ｍｇ（例えば、約１５０〜２００ｍｇ、２００〜２５０ｍｇ、２５０〜３００ｍｇ、３００〜３５０ｍｇ、３５０〜４００ｍｇ、４００〜４５０ｍｇ、４５０〜５００ｍｇ、５００〜５５０ｍｇ、５５０〜６００ｍｇ、６００〜６５０ｍｇ、６５０〜７００ｍｇ、７００〜７５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、８００〜８５０ｍｇ、８５０〜９００ｍｇ、９００〜９５０ｍｇ、９５０〜１０００ｍｇ、１０００〜１２００ｍｇ、１２００〜１４００ｍｇ、１４００〜１６００ｍｇ、１６００〜１８００ｍｇ、１８００〜２０００ｍｇ、２０００〜２２００ｍｇ、２２００〜２４００ｍｇ、２４００〜２６００ｍｇ、２６００〜２８００ｍｇ、又は２８００〜３０００ｍｇ）のオファツムマブを投与する。実施形態において、オファツムマブを約３００ｍｇの出発用量、続いて２０００ｍｇ、例えば約１１用量で例えば２４週間投与する。一部の実施形態において、オファツムマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日、又はそれを超える投薬インターバルで投与する。例えば、オファツムマブを少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、２４週間、２６週間、２８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、又はそれを超える投薬インターバルで投与する。一部の実施形態において、オファツムマブを一定期間、例えば少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、４０週間、５０週間、６０週間若しくはそれを超えるか、又は１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月若しくはそれを超えるか、又は１年、２年、３年、４年、５年若しくはそれを超える期間にわたり、本明細書に記載の用量及び投薬インターバルで投与する。例えば、オファツムマブを１処置サイクル当たり計少なくとも２用量について本明細書に記載の用量及び投薬インターバルで投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、又はそれを超える用量）。
【１０２２】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブを含む。オクレリズマブは、例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０００７７８７０、ＮＣＴ０１４１２３３３、ＮＣＴ００７７９２２０、ＮＣＴ００６７３９２０、ＮＣＴ０１１９４５７０及びＫａｐｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．１９．３７８（２０１１）：１７７９−８７に記載のようなヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。
【１０２３】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブを含む。ベルツズマブは、ＣＤ２０に対するヒト化モノクローナル抗体である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００５４７０６６、ＮＣＴ００５４６７９３、ＮＣＴ０１１０１５８１、及びＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．５１（５）（２０１０）：７４７−５５を参照されたい。
【１０２４】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１を含む。ＧＡ１０１（オビヌツズマブ又はＲＯ５０７２７５９とも称する）は、ヒト化及び糖鎖改変抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．１０．６（２００９）：５８８−９６；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｕｍｂｅｒｓ：ＮＣＴ０１９９５６６９、ＮＣＴ０１８８９７９７、ＮＣＴ０２２２９４２２及びＮＣＴ０１４１４２０５；並びにｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１３／１２５４８６ｓ０００ｌｂｌ．ｐｄｆを参照されたい。
【１０２５】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＡＭＥ−１３３ｖを含む。ＡＭＥ−１３３ｖ（ＬＹ２４６９２９８又はオカラツズマブとも称する）は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａ受容体に対する親和性が増加し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が増強された、ＣＤ２０に対するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５；及びＦｏｒｅｒｏ−Ｔｏｒｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１８．５（２０１２）：１３９５−４０３を参照されたい。
【１０２６】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＰＲＯ１３１９２１を含む。ＰＲＯ１３１９２１は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａへの結合が良好であり、ＡＤＣＣが増強されるように操作されたヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５；及びＣａｓｕｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４．１（２０１４）：３７−４６；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００４５２１２７を参照されたい。
【１０２７】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ−０１５を含む。ＴＲＵ−０１５は、ＣＤ２０に対する抗体のドメイン由来の抗ＣＤ２０融合タンパク質である。ＴＲＵ−０１５は、モノクローナル抗体より小さいが、Ｆｃ介在エフェクター機能を保持する。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５を参照されたい。ＴＲＵ−０１５は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに連結した抗ＣＤ２０一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むが、ＣＨ１及びＣＬドメインを欠く。
【１０２８】
一部の実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ２０抗体を治療剤、例えば本明細書に記載の化学療法剤（例えば、シトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、脱メチル化剤、ペプチドワクチン、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗微小管又は有糸分裂阻害剤）、抗アレルギー剤、制吐剤（又は鎮吐剤）、鎮痛剤若しくは細胞保護的薬剤にコンジュゲート、又は他の方法で結合する。
【１０２９】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ−２）阻害剤（例えば、ベネトクラックス、ＡＢＴ−１９９又はＧＤＣ−０１９９とも呼ばれる）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をベネトクラクス及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ベネトクラクスは、抗アポトーシスタンパク質、ＢＣＬ−２を阻害する小分子である。ベネトクラックスは、化学名：（４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド）を有する。
【１０３０】
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている。実施形態において、ベネトクラクスを約１５〜６００ｍｇ（例えば、１５〜２０ｍｇ、２０〜５０ｍｇ、５０〜７５ｍｇ、７５〜１００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、４００〜５００ｍｇ、又は５００〜６００ｍｇ）の用量で例えば毎日投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２、又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に例えば毎月投与する。
【１０３１】
一部の実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与される。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞内で選択的に複製し、その死を誘発するか又は増殖を遅延することができる。ある場合、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞に効果を有しないか又は効果が最小である。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス又は腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｖｉｒｕｓ）（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス又は腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））を含むが、これらに限定されない。
【１０３２】
一部の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のウイルス、例えば組み換え腫瘍溶解性ウイルスである。一部の実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のような、免疫又は炎症性応答の阻害剤をコードする核酸配列（例えば、異種核酸配列）を含む。実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ＮＤＶは、アポトーシス促進性タンパク質（例えば、アポプチン）、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子−α）、免疫グロブリン（例えば、ＥＤ−Ｂフィブロネクチンに対する抗体）、腫瘍関連抗原、二重特異性アダプタータンパク質（例えば、ＮＤＶ  ＨＮタンパク質及びＣＤ３若しくはＣＤ２８などのＴ細胞共刺激性受容体に対して指向される二重特異性抗体又は抗体フラグメント、又はヒトＩＬ−２とＮＤＶ  ＨＮタンパク質に対して指向される一本鎖抗体との融合タンパク質）を含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用されるＺａｍａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７．３（２０１２）：３４７−６７を参照されたい。一部の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、参照によりそれぞれその全体が本明細書に援用される米国特許第８５９１８８１Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１２２１８５Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６７７Ａ１号明細書に記載のキメラ腫瘍溶解性ＮＤＶである。
【１０３３】
一部の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、排他的に癌細胞において複製するように設計された条件的複製アデノウイルス（ＣＲＡｄ）を含む。例えば、Ａｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（２０００）：７２３−２７を参照されたい。一部の実施形態において、腫瘍溶解性アデノウイルスは、参照によりその全体が本明細書に援用されるＡｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．の７２５頁の表１に記載のものを含む。
【１０３４】
例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、次のものを含むが、これらに限定されない：
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス（ＣｏｌｏＡｄ１）（ＰｓｉＯｘｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２０５３２２０を参照されたい）、
顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ−１０２（以前はＣＧＴＧ−１０２と呼ばれた）（Ｏｎｃｏｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１５９８１２９を参照されたい）、
ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的に改変された腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ−０１（ＶＣＮ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓ．Ｌ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０２０４５６０２及びＮＣＴ０２０４５５８９を参照されたい）、
網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路の脱制御を伴い癌細胞で選択的に複製するように改変されている野生型ヒトアデノウイルス血清型５（Ｈａｄ５）由来のウイルスである条件的複製アデノウイルスＩＣＯＶＩＲ−５（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃａｔａｌａ  ｄ’Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８６４７５９を参照されたい）、
ＩＣＯＶＩＲ５、腫瘍溶解性アデノウイルスで感染させた骨髄由来自己間葉性幹細胞（ＭＳＣ）を含むＣｅｌｙｖｉｒ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｉｎｆａｎｔｉｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉｏ  Ｎｉｎｏ  Ｊｅｓｕｓ，Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ／Ｒａｍｏｎ  Ａｌｅｍａｎｙ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８４４６６１を参照されたい）、
ヒトＥ２Ｆ−１プロモーターが必須Ｅ１ａウイルス遺伝子の発現を駆動し、それによりＲｂ経路欠損腫瘍細胞に対するウイルス複製及び細胞毒性を制限する、条件複製腫瘍溶解性血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）であるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２１４３８０４を参照されたい）、又は
網膜芽細胞腫（Ｒｂ）経路欠損細胞で選択的に複製し、ある種のＲＧＤ結合インテグリンをより効率的に発現する細胞に感染するように操作されているアデノウイルスであるＤＮＸ−２４０１（以前はデルタ−２４−ＲＧＤと称された）（Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ／ＤＮＡｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１９５６７３４を参照されたい）。
【１０３５】
一部の実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを注射、例えば皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、髄腔内又は腹腔内注射により投与する。実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを腫瘍内、経皮、経粘膜、経口、鼻腔内又は肺投与により投与する。
【１０３６】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を、Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる分子と組み合わせて対象に投与する。Ｔｒｅｇ細胞数を減らす（例えば、枯渇させる）方法は、当技術分野で知られ、例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、ＧＩＴＲ機能改変を含む。理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又は本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞投与前に対象におけるＴｒｅｇ細胞数を減らすことにより、腫瘍微小環境における不要な免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の数が減少すると共に、対象の再発のリスクが低下すると考えられる。
【１０３７】
一実施形態において、本明細書に記載する併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させるＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＧＩＴＲ抗体など、ＧＩＴＲを標的とする分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子と組み合わせて対象に投与される。一実施形態において、ＧＩＴＲ結合分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＴｒｅｇ枯渇ＧＩＴＲ抗体）をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与することができる。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号明細書、欧州特許第０９０５０５Ｂ１号明細書、米国特許第８，５８６，０２３号明細書、国際公開第２０１０／００３１１８号パンフレット及び同第２０１１／０９０７５４号パンフレットに記載のＧＩＴＲ融合タンパク質、又は例えば米国特許第７，０２５，９６２号明細書、欧州特許第１９４７１８３Ｂ１号明細書、米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第８，５９１，８８６号明細書、欧州特許第１８６６３３９号明細書、国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、国際公開第２０１３／０３９９５４号パンフレット、国際公開第２００５／００７１９０号パンフレット、国際公開第２００７／１３３８２２号パンフレット、国際公開第２００５／０５５８０８号パンフレット、国際公開第９９／４０１９６号パンフレット、国際公開第２００１／０３７２０号パンフレット、国際公開第９９／２０７５８号パンフレット、国際公開第２００６／０８３２８９号パンフレット、国際公開第２００５／１１５４５１号パンフレット、米国特許第７，６１８，６３２号明細書及び国際公開第２０１１／０５１７２６号パンフレットに記載のような抗ＧＩＴＲ抗体など、例えばＧＩＴＲ融合タンパク質及び抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）を含む。
【１０３８】
一実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスなどのラパログと組み合わせて対象に投与される。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤を細胞のアフェレーシス前に投与することができる。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。
【１０３９】
一実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、ＧＩＴＲアゴニスト、例えば本明細書に記載のＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて対象に投与される。一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストをＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与することができる。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。
【１０４０】
一実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば本明細書に記載のタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−１阻害剤、例えばスチボグルコン酸ナトリウムなど、例えば本明細書に記載のＳＨＰ−１阻害剤である。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−２阻害剤である。
【１０４１】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、キナーゼ阻害剤と組み合わせて使用することができる。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤、例えば６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ヒドロクロライド（パルボシクリブ又はＰＤ０３３２９９１とも呼ばれる）など、例えばＣＤＫ４／６阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブなど、例えば本明細書に記載のＢＴＫ阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ−０２７など、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなど、例えば本明細書に記載のＭＮＫ阻害剤である。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａ及び／又はＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、例えばＰＦ−０４６９５１０２など、本明細書に記載の二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤である。
【１０４２】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、アロイシンＡ；フラボピリドール又はＨＭＲ−１２７５、２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４−クロメノン；クリゾチニブ（ＰＦ−０２３４１０６６；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（２Ｒ，３Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−３−ピロリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、ヒドロクロライド（Ｐ２７６−００）；１−メチル−５−［［２−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−４−ピリジニル］オキシ］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−アミン（ＲＡＦ２６５）；インジスラム（Ｅ７０７０）；ロスコビチン（ＣＹＣ２０２）；パルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）；ジナシクリブ（ＳＣＨ７２７９６５）；Ｎ−［５−［［（５−ｔｅｒｔ−ブチルオキサゾール−２−イル）メチル］チオ］チアゾール−２−イル］ピペリジン−４−カルボキサミド（ＢＭＳ  ３８７０３２）；４−［［９−クロロ−７−（２，６−ジフルオロフェニル）−５Ｈ−ピリミド［５，４−ｄ］［２］ベンズアゼピン−２−イル］アミノ］−安息香酸（ＭＬＮ８０５４）；５−［３−（４，６−ジフルオロ−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］−Ｎ−エチル−４−メチル−３−ピリジンメタンアミン（ＡＧ−０２４３２２）；４−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸Ｎ−（ピペリジン−４−イル）アミド（ＡＴ７５１９）；４−［２−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−２−ピリミジンアミン（ＡＺＤ５４３８）；及びＸＬ２８１（ＢＭＳ９０８６６２）から選択されるＣＤＫ４阻害剤である。
【１０４３】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えばパルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）であり、パルボシクリブを一定期間にわたり１日約５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１００ｍｇ、又は１２５ｍｇ）の用量で例えば２８日サイクルの１４〜２１日間毎日又は２１日サイクルの７〜１２日間毎日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル、又はそれを超えるサイクルのパルボシクリブを投与する。
【１０４４】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４又は６阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤又はＣＤＫ６阻害剤と組み合わせて対象に投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６の両方を標的とする阻害剤）、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４／６阻害剤と組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、対象は、ＭＣＬを有する。ＭＣＬは、現在利用可能な治療に対して応答性が低く、即ち本質的に不治の侵襲性癌である。ＭＣＬの多くの症例において、サイクリンＤ１（ＣＤＫ４／６のレギュレーター）がＭＣＬ細胞で発現される（例えば、免疫グロブリン及びサイクリンＤ１遺伝子が関与する染色体転座のため）。そのため、理論に拘束されないが、ＭＣＬ細胞は、高特異性（即ち正常免疫細胞に対する最小限の影響）でＣＤＫ４／６阻害に高度に感受性であると考えられる。ＣＤＫ４／６阻害剤単独でＭＣＬの処置にいくぶん有効性を有しているが、部分奏効のみを達成し、再発率が高い。例示的なＣＤＫ４／６阻害剤は、ＬＥＥ０１１（リボシクリブとも呼ばれる）であり、その構造を下に示す。
【化７】
2019523301.tif 000240
【１０４５】
理論に拘束されないが、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＬＥＥ０１１又は本明細書に記載の他のＣＤＫ４／６阻害剤）と一緒に投与すれば、例えばＣＤＫ４／６阻害剤単独と比較して高い応答性、例えば高い奏効率及び／又は低い再発率を達成できると考えられる。
【１０４６】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【１０４７】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５とも称す）と組み合わせて対象に投与する。イブルチニブは、化学名（１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロプ−２−エン−１−オン）を有する。
【１０４８】
実施形態において、対象は、ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬ又はＳＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に１つ、２つ、３つ、又は４つの癌治療を投与されている）。実施形態において、対象は、難治性ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。他の実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫、例えば再発性又は難治性濾胞性リンパ腫を有する。一部の実施形態において、イブルチニブを約３００〜６００ｍｇ／日（例えば、約３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０又は５５０〜６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日又は約５６０ｍｇ／日）で例えば経口により投与する。実施形態において、イブルチニブを約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量で連日一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるイブルチニブを投与する。
【１０４９】
一部の実施形態において、イブルチニブをリツキシマブと組み合わせて投与する。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ  Ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ｉＲ）Ｉｓ  Ｗｅｌｌ  Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  Ｈｉｇｈ  Ｒａｔｅ  Ｏｆ  Ｄｕｒａｂｌｅ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ−Ｒｉｓｋ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）：Ｎｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｎ  ４０  Ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６７５  ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ５５ｔｈ  ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ  ７−１０  Ｄｅｃを参照されたい。理論に拘束されないが、イブルチニブの添加はＴ細胞増殖性応答を増強し、Ｔ細胞をＴ−ヘルパー−２（Ｔｈ２）からＴ−ヘルパー−１（Ｔｈ１）表現型にシフトさせ得ると考えられる。Ｔｈ１及びＴｈ２は、ヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１とＴｈ２とで異なる免疫応答経路を指向する。Ｔｈ１表現型は、例えば、細胞内病原体／ウイルス又は癌性細胞などの細胞を死傷するための炎症誘発性応答又は自己免疫性応答永続化と関係する。Ｔｈ２表現型は、好酸球蓄積及び抗炎症性応答と関係する。
【１０５０】
本明細書における方法、使用及び組成物の一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第／２０１５／０７９４１７号パンフレットに記載のＢＴＫ阻害剤である。例えば、一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【化８】
2019523301.tif 000241
式中、
Ｒ１は、水素、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素又はハロゲンであり、又は
Ｒ４とＲ５とは、互いに結合し、結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−、又は−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−を意味し、
Ｒ６及びＲ７は、互いに独立してＨ、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択によりハロゲン又はヒドロキシ又はハロゲンで置換され得るＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１は、互いに独立してＨ又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルであり、又はＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１の任意の２個は、それらが結合している炭素原子と一体となって３〜６員飽和炭素環式環を形成し得、
Ｒ１２は、水素又は任意選択によりハロゲン若しくはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルであり、又は
Ｒ１２及びＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０又はＲ１１のいずれか１つは、それらが結合している原子と一体となって、４員、５員、６員又は７員アザシクロ環を形成し得、その環は、任意選択によりハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得、
ｎは、０又は１であり、
Ｒ１３は、任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキル若しくはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＮ，Ｎ−ジ−Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノＣ２−Ｃ６アルキニル、又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２−Ｃ６アルキレニルオキシドである。
【１０５１】
一部の実施形態において、式ＩのＢＴＫ阻害剤は、Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−３−イル）オキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−エノイル）アゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−プロピオロイルアゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−イノイル）アゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）オキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−エンアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルプロピオルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（４−メトキシ−Ｎ−メチルブタ−２−エンアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−インアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルオキシラン−２−カルボキサミド；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）フェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−（３−（５−（２−アクリルアミドエトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−エチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−（２−フルオロエチル）アクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（１−アクリルアミドシクロプロピル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（２−アクリルアミドプロポキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（ブタ−２−インアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−インアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（３−（Ｎ−メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−２−（３−（５−（（１−アクリロイルピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（６−シクロプロピル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；２−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−フルオロピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−フルオロピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−プロピオロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−２−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；（Ｒ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｒ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｒ，３Ｓ）−１−アクリロイル−３−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；又はＮ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミドから選択される。
【１０５２】
特に断らない限り、上記式ＩのＢＴＫ阻害剤で使用した化学的用語は、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第／２０１５／０７９４１７号パンフレットに示す意味に従って使用される。
【１０５３】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス；リダフォロリムス（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ、２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３、２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる；エベロリムス（ＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９）；セマピモド；（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−、分子内塩（配列番号５２６）（ＳＦ１１２６）；及びＸＬ７６５から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である。
【１０５４】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンであり、ラパマイシンを約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ（例えば、６ｍｇ）の用量で連日、一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるラパマイシンを投与する。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスであり、エベロリムスを一定期間にわたり１日約２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ（例えば、１０ｍｇ）の用量において例えば２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるエベロリムスを投与する。
【１０５５】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−（ｐ−フルオロフェニルアミノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＣＧＰ５７３８０）；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５〜２；及び４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【１０５６】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ−０４６９１５０２）；Ｎ−［４−［［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］カルボニル］フェニル］−Ｎ’−［４−（４，６−ジ−４−モルホリニル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７）；２−メチル−２−｛４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル｝プロパンニトリル（ＢＥＺ−２３５）；アピトリシブ（ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８−（６−メトキシピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−（ピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２（３Ｈ）−オンマレイン酸（ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６）；３−［４−（４−モルホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル］フェノール（ＰＩ−１０３）；５−（９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリミジン−２−アミン（ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３）；及びＮ−［２−［（３，５−ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン−３−イル］−４−［（４−メチル−３−メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
【１０５７】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−（ｐ−フルオロフェニルアミノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＣＧＰ５７３８０）；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５−２；及び４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【１０５８】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤、例えばイデラリシブ又はドゥベリシブ）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイデラリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をドゥベリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。イデラリシブ（ＧＳ−１１０１又はＣＡＬ−１０１とも呼ばれる；Ｇｉｌｅａｄ）は、ＰＩ３Ｋのデルタアイソフォームを遮断する小分子である。イデラリシブは、化学名：（５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］  −４（３Ｈ）−キナゾリノン）を有する。
【１０５９】
デュベリシブ（ＩＰＩ−１４５とも呼ばれる；Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ａｂｂｖｉｅ）は、ＰＩ３Ｋ−δ，γを遮断する小分子である。デュベリシブは、化学名：（８−クロロ−２−フェニル−３−［（１Ｓ）−１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）エチル］−１（２Ｈ）−イソキノリノン）を有する。
【１０６０】
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に抗ＣＤ２０抗体を投与されているか又は先にイブルチニブを投与されている）。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、対象は、染色体１１の長腕に欠失を有する（ｄｅｌ（１１ｑ））。他の実施形態において、対象は、ｄｅｌ（１１ｑ）を有しない。実施形態において、イデラリシブを約１００〜４００ｍｇ（例えば、１００〜１２５ｍｇ、１２５〜１５０ｍｇ、１５０〜１７５ｍｇ、１７５〜２００ｍｇ、２００〜２２５ｍｇ、２２５〜２５０ｍｇ、２５０〜２７５ｍｇ、２７５〜３００ｍｇ、３２５〜３５０ｍｇ、３５０〜３７５ｍｇ又は３７５〜４００ｍｇ）で例えばＢＩＤ投与する。実施形態において、ドゥベリシブを約１５〜１００ｍｇ（例えば、約１５〜２５、２５〜５０、５０〜７５又は７５〜１００ｍｇ）で例えば１日２回投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内投与する。
【１０６１】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ−０４６９１５０２）；Ｎ−［４−［［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］カルボニル］フェニル］−Ｎ’−［４−（４，６−ジ−４−モルホリニル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７）；２−メチル−２−｛４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル｝プロパンニトリル（ＢＥＺ−２３５）；アピトリシブ（ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８−（６−メトキシピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−（ピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２（３Ｈ）−オンマレイン酸（ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６）；３−［４−（４−モルホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル］フェノール（ＰＩ−１０３）；５−（９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリミジン−２−アミン（ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３）；及びＮ−［２−［（３，５−ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン−３−イル］−４−［（４−メチル−３−メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
【１０６２】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。例示的なＡＬＫキナーゼは、クリゾチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、セリチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、アレクチニブ（中外）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３とも呼ばれる；Ａｒｉａｄ）、エントレクチニブ（Ｉｇｎｙｔａ）、ＰＦ−０６４６３９２２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＴＳＲ−０１１（Ｔｅｓａｒｏ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０２０４８４８８を参照されたい）、ＣＥＰ−３７４４０（Ｔｅｖａ）及びＸ−３９６（Ｘｃｏｖｅｒｙ）を含む。一実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌、例えば肺癌を有する。
【１０６３】
クリゾチニブの化学名は、３−［（１Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ］−５−（１−ピペリジン−４−イルピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミンである。セリチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−［２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（４−ピペリジニル）フェニル］−Ｎ４−［２−（イソプロピルスルホニル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。アレクチニブの化学名は、９−エチル−６，６−ジメチル−８−（４−モルホリノピペリジン−１−イル）−１１−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］カルバゾール−３−カルボニトリルである。ブリガチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−｛４−［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］−２−メトキシフェニル｝−Ｎ４−［２−（ジメチルホスホリル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。エントレクチニブの化学名は、Ｎ−（５−（３，５−ジフルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）ベンズアミドである。ＰＦ−０６４６３９２２の化学名は、（１０Ｒ）−７−アミノ−１２−フルオロ−２，１０，１６−トリメチル−１５−オキソ−１０，１５，１６，１７−テトラヒドロ−２Ｈ−８，４−（メテノ）ピラゾロ［４，３−ｈ］［２，５，１１］−ベンズオキサジアザシクロテトラデシン−３−カルボニトリルである。ＣＥＰ−３７４４０の化学名は、（Ｓ）−２−（（５−クロロ−２−（（６−（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミドである。Ｘ−３９６の化学名は、（Ｒ）−６−アミノ−５−（１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）ピリダジン−３−カルボキサミドである。
【１０６４】
カルシウム依存的ホスファターゼカルシニューリンを阻害する（シクロスポリン及びＦＫ５０６）又は増殖因子誘発シグナル伝達に重要であるｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物（ラパマイシン）（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：８０７−８１５，１９９１；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ．７３：３１６−３２１，１９９１；Ｂｉｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３−７７３，１９９３）も使用できる。更なる態様において、本開示の細胞組成物を、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド及び／又はＯＫＴ３又はＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体を使用するＴ細胞除去療法と組み合わせて（例えば、その前に、それと同時に、又はその後に）患者に投与し得る。一態様において、本開示の細胞組成物を、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えばリツキサンなどのＢ細胞除去療法後に投与する。例えば、一実施形態において、対象を高用量化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付す。一実施形態において、移植後、対象は、本開示の増殖した免疫細胞の注入を受ける。更なる実施形態において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【１０６５】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与される。ＩＤＯは、アミノ酸、Ｌ−トリプトファンのキヌレニンへの分解を触媒する酵素である。多くの癌、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌及び肺癌がＩＤＯを過発現する。ｐＤＣ、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）がＩＤＯを発現できる。理論に拘束されないが、Ｌ−トリプトファンの減少（例えば、ＩＤＯによる触媒）は、Ｔ細胞アネルギー及びアポトーシスの誘発による免疫抑制性環境をもたらすと考えられる。そのため、理論に拘束されないが、ＩＤＯ阻害剤は、例えば、ＣＡＲ発現免疫細胞の抑制又は死を減少させることにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強できると考えられる。実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌又は肺癌を有する。例示的なＩＤＯ阻害剤は、１−メチル−トリプトファン、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１１９１２１６；ＮＣＴ０１７９２０５０を参照されたい）及びＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１６０４８８９；ＮＣＴ０１６８５２５５を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【１０６６】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）のモジュレーターと組み合わせて対象に投与される。ＭＤＳＣは、末梢及び多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞は、Ｔ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の効果を障害する。理論に拘束されないが、ＭＤＳＣモジュレーター投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強すると考えられる。一実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば神経膠芽腫を有する。例示的なＭＤＳＣのモジュレーターは、ＭＣＳ１１０及びＢＬＺ９４５を含むが、これらに限定されない。ＭＣＳ１１０は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００７５７７５７を参照されたい。ＢＬＺ９４５は、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）の小分子阻害剤である。例えば、Ｐｙｏｎｔｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９（２０１３）：１２６４−７２を参照されたい。ＢＬＺ９４５の構造を下に示す。
【化９】
2019523301.tif 000242
【１０６７】
実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えば本明細書におけるＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、免疫抑制性形質細胞の活性を阻害又は低減する薬剤と組み合わせて対象に投与される。免疫抑制性形質細胞は、オキサリプラチンなどのＴ細胞依存性免疫原性化学療法を妨害することが示されている（Ｓｈａｌａｐｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１５，５２１：９４−  １０１）。一実施形態において、免疫抑制性形質細胞は、ＩｇＡ、インターロイキン（ＩＬ）−１０及びＰＤ−Ｌ１の１つ以上を発現できる。一実施形態において、薬剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞である。
【１０６８】
一部の実施形態において、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド、又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５（Ａｄｍｕｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）と組み合わせて対象に投与される。ｈｅｔＩＬ−１５は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒａとのヘテロ二量体非共有複合体である。ｈｅｔＩＬ−１５は、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第８，１２４，０８４号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１７７５９８号明細書、米国特許出願公開第２００９／００８２２９９号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１４１４１３号明細書及び米国特許出願公開第２０１１／００８１３１１号明細書に記載されている。実施形態において、ｈｅｔ−ＩＬ−１５を皮下投与する。実施形態において、対象は、癌、例えば固形癌、例えば黒色腫又は結腸癌を有する。実施形態において、対象は、転移癌を有する。
【１０６９】
実施形態において、本明細書に記載の疾患を有する対象に、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤を薬剤、例えば細胞毒性又は化学療法剤、生物学的治療（例えば、抗体、例えばモノクローナル抗体又は細胞治療）又は阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）と組み合わせて投与する。実施形態において、対象は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を細胞毒性剤、例えばＣＰＸ−３５１（Ｃｅｌａｔｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シタラビン、ダウノルビシン、ボサロキシン（Ｓｕｎｅｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、サパシタビン（Ｃｙｃｌａｃｅｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、イダルビシン又はミトキサントロンと組み合わせて投与される。ＣＰＸ−３５１は、シタラビン及びダウノルビシンを５：１モル比で含むリポソーム製剤である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を低メチル化剤、例えばＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばアザシチジン又はデシタビンと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を生物学的治療、例えば抗体又は細胞治療、例えば２２５Ａｃリンツズマブ（Ａｃｔｉｍａｂ−Ａ；Ａｃｔｉｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＰＨ２１０２（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）又はゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ；Ｐｆｉｚｅｒ）と組み合わせて対象に投与する。ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａは、抗ＣＤ３３抗体に結合するピロロベンゾジアゼピン二量体を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。Ａｃｔｉｍａｂ−Ａは、アクチニウムで標識された抗ＣＤ３３抗体（リンツズマブ）である。ＩＰＨ２１０２は、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を標的とするモノクローナル抗体である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＦＬＴ３阻害剤、例えばソラフェニブ（Ｂａｙｅｒ）、ミドスタウリン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、キザルチニブ（第１三共）、クレノラニブ（Ａｒｏｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＬＸ３３９７（第１三共）、ＡＫＮ−０２８（Ａｋｉｎｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＳＰ２２１５（アステラス）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイソシトレートデヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）阻害剤、例えばＡＧ−２２１（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｇｉｏｓ）又はＡＧ−１２０（Ａｇｉｏｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を細胞サイクルレギュレーター、例えばポロ様キナーゼ１（Ｐｌｋ１）阻害剤、例えばボラセルチブ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；又はサイクリン依存性キナーゼ９（Ｃｄｋ９）阻害剤、例えばアルボシジブ（Ｔｏｌｅｒｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｓａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢ細胞受容体シグナル伝達ネットワーク阻害剤、例えばＢ細胞リンパ腫２（Ｂｃｌ−��）阻害剤、例えばベネトクラクス（Ａｂｂｖｉｅ／Ｒｏｃｈｅ）；又はブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害剤、例えばイブルチニブ（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＭ１アミノペプチダーゼ阻害剤、例えばトセドスタット（ＣＴＩ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ／Ｖｅｒｎａｌｉｓ）；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えばｐｒａｃｉｎｏｓｔａｔ（ＭＥＩ  Ｐｈａｒｍａ）；多キナーゼ阻害剤、例えばリゴサチブ（Ｏｎｃｏｎｏｖａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／Ｂａｘｔｅｒ／ＳｙｍＢｉｏ）；又はペプチド性ＣＸＣＲ４逆アゴニスト、例えばＢＬ−８０４０（ＢｉｏＬｉｎｅＲｘ）と組み合わせて対象に投与する。
【１０７０】
別の実施形態において、対象は、細胞の移植、例えば同種幹細胞移植前にＣＡＲ発現細胞、例えば本開示の組成物の注入を受ける。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、例えば、ＣＡＲをコードするｍＲＮＡのエレクトロポレーションにより一過性にＣＡＲを発現し、それにより、ドナー幹細胞の注入前にＣＡＲの発現を停止させて生着失敗を回避する。
【１０７１】
投与中又は後に本開示の化合物及び／又は他の抗癌剤に対するアレルギー反応を経験する患者がいる場合があり、そのため、多くの場合、アレルギー反応のリスクを最小化するために抗アレルギー剤を投与する。適当な抗アレルギー剤は、デキサメサゾン（例えば、デカドロン（登録商標））、ベクロメタゾン（例えば、Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標））、ヒドロコルチゾン（コルチゾン、ヒドロコルチゾンナトリウムスクシネート、ヒドロコルチゾンナトリウムホスフェートとしても知られ、商品名Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）、ヒドロコルチゾンホスフェート、Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）及びＬａｎａｃｏｒｔ（登録商標）として販売）、プレドニゾロン（商品名Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｌ（登録商標）、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）及びＰｒｅｌｏｎｅ（登録商標）として販売）、プレドニゾン（商品名Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｒｅｄ（登録商標）、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）及びＯｒａｓｏｎｅ（登録商標）として販売）、メチルプレドニゾロン（６−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセテート、メチルプレドニゾロンナトリウムスクシネートとしても知られ、商品名Ｄｕｒ単独（登録商標）、Ｍｅｄｒ単独（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）及びＳｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売）などのコルチコステロイド；ジフェンヒドラミン（例えば、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標））、ヒドロキシジン及びシプロヘプタジンなどの抗ヒスタミン剤；及びβ−アドレナリン受容体アゴニスト、アルブテロール（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標））及びテルブタリン（Ｂｒｅｔｈｉｎｅ（登録商標））などの気管支拡張剤を含む。
【１０７２】
本開示の化合物及び／又は他の抗癌剤の投与中及び後に悪心を経験する患者がいる場合があり、そのため、悪心（胃上部）及び嘔吐の予防に制吐剤を使用する。適当な制吐剤は、アプレピタント（Ｅｍｅｎｄ（登録商標））、オンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ（登録商標））、グラニセトロンＨＣｌ（Ｋｙｔｒｉｌ（登録商標））、ロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標）、デキサメサゾン（デカドロン（登録商標））、プロクロルペラジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標））、カソピタント（Ｒｅｚｏｎｉｃ（登録商標）及びＺｕｎｒｉｓａ（登録商標））及びこれらの組み合わせを含む。
【１０７３】
処置中に経験する疼痛を軽減する投薬も、多くの場合、患者がより快適になるように処方される。タイレノール（登録商標）のような一般的非処方鎮痛剤が多くの場合に使用される。しかしながら、ヒドロコドン／パラセタモール又はヒドロコドン／アセトアミノフェン（例えば、Ｖｉｃｏｄｉｎ（登録商標））、モルヒネ（例えば、Ａｓｔｒａｍｏｒｐｈ（登録商標）又はＡｖｉｎｚａ（登録商標））、オキシコドン（例えば、ＯｘｙＣｏｎｔｉｎ（登録商標）又はＰｅｒｃｏｃｅｔ（登録商標））、塩酸オキシモルホン（Ｏｐａｎａ（登録商標））及びフェンタニル（例えば、Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ（登録商標））などのオピオイド鎮痛剤剤も軽度又は重度疼痛に有用である。
【１０７４】
正常細胞を処置毒性から保護する及び臓器毒性を制限する試みにおいて、細胞保護剤（例えば、神経保護剤、フリーラジカルスカベンジャー、心保護剤、アントラサイクリン溢血中和剤、栄養素など）を補助剤治療として使用し得る。適当な細胞保護剤は、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、グルタミン、ジメスナ（Ｔａｖｏｃｅｐｔ（登録商標））、メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））、デクスラゾキサン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）又はＴｏｔｅｃｔ（登録商標））、キサリプロデン（Ｘａｐｒｉｌａ（登録商標））及びロイコボリン（カルシウムロイコボリン、シトロボラム因子及びフォリン酸としても既知）を含む。コード番号、一般名又は商品名により同定した活性化合物の構造は、標準参考書「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」の現行版又はデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から取られ得る。
【１０７５】
本開示の化合物と組み合わせて使用できる上記化合物を、上に引用した文献に記載のものなど、当技術分野で記載されるように製造し、投与できる。
【１０７６】
一実施形態において、本開示は、少なくとも１つの本開示の化合物（例えば、本開示の化合物）又はその薬学的に許容される塩を、ヒト又は動物対象の投与に適する薬学的に許容される担体と共に、単独で又は他の抗癌剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。
【１０７７】
一実施形態において、本開示は、癌などの細胞増殖性疾患を有するヒト又は動物対象を処置する方法を提供する。本開示は、治療有効量の本開示の化合物（例えば、本開示の化合物）又はその薬学的に許容される塩を、単独で又は他の抗癌剤と組み合わせて対象に投与することを含む、処置を必要とするヒト又は動物対象を処置する方法を提供する。
【１０７８】
特に、組成物は、併用療法として製剤するか又は別々に投与することができる。
【１０７９】
併用療法において、本開示の化合物及び他の抗癌剤を同時に、一緒に、又は逐次的に特定の時間制限なく投与し得、ここで、このような投与は、患者体内で２化合物の治療的有効なレベルを提供する。
【１０８０】
好ましい実施形態において、本開示の化合物及び他の抗癌剤を一般に任意の順番で注入又は経口により逐次的に投与する。投薬レジメンは、疾患ステージ、患者の体力、個々の薬物の安全性プロファイル及び個々の薬物の耐容性、並びに組み合わせを投与する処置医及び医療従事者に周知の他の基準により変わり得る。本開示の化合物及び他の抗癌剤を、処置に使用する特定のサイクルにより、互いに数分、数時間、数日又は数週間離れて投与する。加えて、サイクルは、処置サイクル中、一方の薬剤の他方より多い投与及び薬物投与当たりの異なる用量を含む。
【１０８１】
本開示の別の態様において、本明細書に開示されるような１つ以上の本開示の化合物及び組み合わせパートナーを含むキットが提供される。代表的キットは、（ａ）本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩、（ｂ）例えば、上記のような少なくとも１つの組み合わせパートナーを含み、それにより、このようなキットは、投与指示を含む添付文書又は他のラベリングを含み得る。
【１０８２】
本開示の化合物は、既知治療法、例えばホルモン投与又は特に放射線と組み合わせても有利に使用され得る。本開示の化合物は、特に放射線療法に低感受性を示す腫瘍の処置のために特に放射線増感剤として使用され得る。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用を低減又は緩和する薬剤を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞の投与に付随する副作用は、ＣＲＳ及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる血液貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）を含むが、これらに限定されない。
【１０８３】
従って、本明細書に記載の方法は、対象に本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を投与し、更にＣＡＲ発現細胞処置に由来する可溶性因子のレベル増加を管理する１つ以上の薬剤の投与を含み得る。一実施形態において、対象で増加し得る可溶性因子は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−２及びＩＬ−６の１つ以上である。一実施形態において、対象において増加する因子は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−５及びフラクタルカインの１つ以上である。そのため、これらの副作用を処置するために投与する薬剤は、これらの可溶性因子の１つ以上を中和する薬剤であり得る。一実施形態において、これらの可溶性形態の１つ以上を中和する薬剤は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。このような薬剤の例は、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、ＴＮＦα阻害剤及びＩＬ−６阻害剤を含むが、これらに限定されない。ＴＮＦα阻害剤の例は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール及びゴリムマブなどの抗ＴＮＦα抗体分子である。ＴＮＦα阻害剤の別の例は、エンタネルセプトなどの融合タンパク質である。小分子ＴＮＦα阻害剤は、キサンチン誘導体（例えば、ペントキシフィリン）及びブプロピオンを含むが、これらに限定されない。ＩＬ−６阻害剤の例は、トシリズマブ（ｔｏｃ）、サリルマブ、エルシリモマブ、ＣＮＴＯ  ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＣＮＴＯ  １３６、ＣＰＳＩ−２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ−１０９、ＦＥ３０１及びＦＭ１０１などの抗ＩＬ−６抗体分子である。一実施形態において、抗ＩＬ−６抗体分子は、トシリズマブである。ＩＬ−１Ｒベースの阻害剤の例は、アナキンラである。
【１０８４】
一部の実施形態において、対象にとりわけ例えばメチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなどのコルチコステロイドを投与する。
【１０８５】
一部の実施形態において、対象に例えばノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、バソプレシン又はこれらの組み合わせなどの昇圧剤を投与する。
【１０８６】
一部の実施形態において、対象に解熱剤を投与できる。一実施形態において、対象に鎮痛剤を投与できる。
【１０８７】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性又は適性を増強する薬剤も更に対象に投与することができる。例えば、一実施形態において、薬剤は、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子を阻害する薬剤であり得る。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能を調節又は制御する分子は、阻害分子である。阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）又はＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１）は、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低減し得る。阻害分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害により、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞の性能を最適化することができる。実施形態において、薬剤、例えば阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写−アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＣＡＲ発現細胞の阻害分子の発現を阻害できる。一実施形態において、阻害剤は、ｓｈＲＮＡである。
【１０８８】
一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する薬剤は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子を、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てをコードする核酸に連結させる。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子を、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が例えばＣＡＲ発現細胞内で発現されるようにプロモーター、例えばＨ１又はＵ６駆動プロモーターに操作可能に連結する。例えば、Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ  Ｇ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｉＲＮＡ，”Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ：Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ＲＮＡ（ｅｄｓ．Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉ）を参照されたい。Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ，２００７；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ＴＲ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４９７−５００。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てをコードする核酸分子を含む同じベクター、例えばレンチウイルスベクター上に存在する。このような実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てをコードする核酸に対して５’又は３’側に位置するベクター、例えばレンチウイルスベクターに位置する。Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てをコードする核酸と同一又は異なる方向で転写され得る。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てをコードする核酸分子を含むベクター以外のベクターに存在する。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞内で一過性に発現される。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞のゲノムに安定に統合される。Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子と共に、ＣＡＲの成分、例えば成分の全てを発現する例示的なベクターの構成は、例えば、参照により本明細書に援用される、２０１４年１２月１９日に出願された国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットの図４７に提供される。
【１０８９】
チェックポイント分子の阻害剤との併用療法
一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する薬剤は、阻害分子に結合する抗体又は抗体フラグメントであり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２又はＣＴＬＡ４に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０及びＭＤＸ−１０１とも呼ばれ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）として市販されている；Ｂｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから市販されているＩｇＧ２モノクローナル抗体、旧名チシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）であり得る。一実施形態において、薬剤は、ＴＩＭ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。一実施形態において、薬剤は、ＬＡＧ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体又は抗体フラグメントである。
【１０９０】
ＰＤ−１は、上文で詳しく説明されている。ＰＤ１に対する２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが明らかにされている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａ．２０００  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転することができる。「プログラム細胞死リガンド１」又は「ＰＤ−Ｌ１」という用語は、ヒトＰＤ−１のアイソフォーム、哺乳動物、例えばヒトＰＤ−Ｌ１、種相同体、及びＰＤ−Ｌ１と少なくとも１つの共通のエピトープを含む類似体を含む。ＰＤ−Ｌ１、例えばヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、当技術分野、例えばＤｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ  Ｍｅｄ．５（１２）：１３６５−９；Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９２（７）：１０２７−３４）において公知である。
【１０９１】
例えば、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤（例えば、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ阻害剤）は、当技術分野で入手可能であり、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）（例えば、及びＰＤ−１阻害剤）と組み合わせて使用され得る。ＭＥＤＩ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）は、ＰＤＬ１に結合して、リガンドとＰＤ１との相互作用を阻害するヒトモノクローナル抗体である。
【１０９２】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照により援用される２０１６年４月２１日公開の「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１６／０１０８１２３号明細書に開示されるような抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である。
【１０９３】
一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ又はアベルマブとも呼ばれる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。例示的なヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に開示されており、本明細書に開示される配列（又はそれと実質的に同一であるか若しくは類似する配列、例えば指定される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列）を有する。
【１０９４】
ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａは、アテゾリズマブとしても知られ、ＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、参照により本明細書に援用される米国特許第７，９４３，７４３号明細書及び米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号明細書に開示されている。
【１０９５】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、アテゾリズマブのＣＤＲ配列（又は集合的にＣＤＲ配列全部）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は重鎖若しくは軽鎖配列の１つ以上を含む。実施形態において、ＣＡＲと組み合わせてアテゾリズマブを投与する。
【１０９６】
一実施形態において、ＣＡＲ療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞）は、リンパ腫、例えばＤＬＢＣＬを有する対象を治療するための抗ＰＤＬ１抗体（例えば、アテゾリズマブ）と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、対象は、ＤＬＢＣＬ、例えばｒ／ｒＤＬＢＣＬを有し、以前に抗ＣＤ２０及びアントラサイクリン療法を受けている。一部の実施形態では、ＣＡＲ療法（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の投与と同時に、投与前、又は投与後にアテゾリズマブを投与することができる。一部の実施形態では、ＣＡＲ療法（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）と同時にアテゾリズマブを投与する。一部の実施形態では、３週間毎に１２００ｍｇ（例えば、１０００、１２００、１５００又は２０００ｍｇ）の用量で、少なくとも１回（例えば、１、２、３、４、５、６若しくはそれ以上の回数）アテゾリズマブを投与する。一部の実施形態では、３週間毎に１２００ｍｇの用量で４回アテゾリズマブを投与する。
【１０９７】
他の抗ＰＤ−Ｌ１結合剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（重鎖及び軽鎖可変領域は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットの配列番号２０及び２１に示される）及びＭＤＸ−１１０５（別名ＢＭＳ−９３６５５９及び例えば国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに開示される抗ＰＤ−Ｌ１結合剤）である。ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示）は、ＰＤ１とＢ７−Ｈ１の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。ＲＮＡｉ剤の例は、長鎖ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｍｉｃｒｏＲＮＡを含む。本明細書に記載の阻害性核酸は、アプタマー、モルホリノ、リボザイム、並びに長鎖ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｍｉｃｒｏＲＮＡを含むか又はコードする核酸配列、例えばプラスミド若しくはベクターを含むが、これらに限定されない。
【１０９８】
ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリン−３）も、特にＩＦＮ−ｇ分泌ＣＤ４＋Ｔヘルパー１及びＣＤ８＋Ｔ細胞毒性１細胞においてＴ細胞機能を負に制御し、Ｔ細胞疲弊に重要な役割を有する。ＴＩＭ３とそのリガンド、例えばガレクチン−９（Ｇａｌ９）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＨＭＧＢ１の相互作用の阻害は、免疫応答を高め得る。ＴＩＭ３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）と組み合わせて使用され得る。例えば、ＴＩＭ３を標的とする抗体、抗体フラグメント、小分子又はペプチド阻害剤は、そのリガンドとの相互作用を阻害するためにＴＩＭ３のＩｇＶドメインに結合する。ＴＩＭ３を阻害する抗体及びペプチドは、国際公開第２０１３／００６４９０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１００２４７５２１号明細書に開示されている。他の抗ＴＩＭ３抗体は、ＲＭＴ３−２３のヒト化バージョン（Ｎｇｉｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，７１：３５４０−３５５１に開示）及びクローン８Ｂ．２Ｃ１２（Ｍｏｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎａｔｕｒｅ，４１５：５３６−５４１に開示）を含む。ＴＩＭ３及びＰＤ−１を阻害する二特異性抗体は、米国特許出願公開第２０１３０１５６７７４号明細書に開示されている。
【１０９９】
一実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体又はそのフラグメントは、参照によりその全体が本明細書に援用される「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＴＩＭ３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書に記載のような抗ＴＩＭ３抗体である。一実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体分子は、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２３のいずれかから選択される抗体からの重鎖及び軽鎖可変領域の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲ（又は集合的にＣＤＲ全部）、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書の表１〜４に記載されるような若しくは表１〜４のヌクレオチド配列によりコード化されるか、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列又は密接に関係するＣＤＲ、例えば少なくとも１つのアミノ酸改変を有するが、改変（例えば、置換、欠失又は挿入、例えば保存的置換）が２つ、３つ、又は４つ以下ＣＤＲを含む。
【１１００】
更に別の実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２３のいずれかから選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの可変領域、又は米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書の表１〜４に記載のような若しくは表１〜４のヌクレオチド配列によりコード化されるか、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列を含む。
【１１０１】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５阻害剤）である。一実施形態において、ＣＥＡＣＡＭの阻害剤は、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体分子である。例示的な抗ＣＥＡＣＡＭ−１抗体は、国際公開第２０１０／１２５５７１号パンフレット、国際公開第２０１３／０８２３６６号パンフレット、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレット及び国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレットに開示され、例えばモノクローナル抗体３４Ｂ１、２６Ｈ７及び５Ｆ４、又は例えば米国特許出願公開第２００４／００４７８５８号明細書、米国特許第７，１３２，２５５号明細書及び国際公開第９９／０５２５５２号パンフレットに開示のようなその組み換え形態である。他の実施形態において、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体は、例えば、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｓｅｐ  ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９（ＤＯＩ：１０：１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２１１４６）に記載のようにＣＥＡＣＡＭ−５と結合するか、又は例えば国際公開第２０１３／０５４３３１号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１８号明細書に記載のようにＣＥＡＣＡＭ−１及びＣＥＡＣＡＭ−５と交差反応する。
【１１０２】
理論に拘束されることを望まないが、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＣＥＡＣＡＭ−５などの癌胎児性抗原細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）は、少なくとも部分的に抗腫瘍免疫応答の阻害を仲介すると考えられる（例えば、Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２  Ｍａｒ  １５；１６８（６）：２８０３−１０；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６  Ｎｏｖ  １；１７７（９）：６０６２−７１；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９  Ｆｅｂ；１２６（２）：１８６−２００；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０  Ｆｅｂ；５９（２）：２１５−３０；Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ｊｕｎ；１１（６）：１３００−１０；Ｓｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５  Ｊｕｎ  １；１７４（１１）：６６９２−７０１；Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｓｅｐ  ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９を参照されたい）。例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１は、ＴＩＭ−３のヘテロ親和性リガンドとして、及びＴＩＭ−３介在Ｔ細胞耐容性及び疲弊に役割を有するとして記載されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１３８４８）。実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＴＩＭ−３の共遮断は、異種移植結腸直腸癌モデルにおいて抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）、前掲を参照されたい）。他の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＰＤ−１の共遮断は、例えば、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレットに記載されるようにＴ細胞耐容性を減少させる。そのため、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤を、本明細書に記載の他の免疫調節剤（例えば、抗ＰＤ−１及び／又は抗ＴＩＭ−３阻害剤）と使用して、癌、例えば黒色腫、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌及び本明細書に記載の他の癌に対する免疫応答を増強させ得る。
【１１０３】
ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子−３又はＣＤ２２３）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊に役割を有することが示されている、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞に発現される細胞表面分子である。ＬＡＧ−３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で入手可能であり、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）と組み合わせて使用され得る。例えば、ＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂ）は、ＬＡＧ３を標的とするモノクローナル抗体である。ＩＭＰ７０１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）は、アンタゴニストＬＡＧ−３抗体であり、ＩＭＰ７３１（Ｉｍｍｕｔｅｐ及びＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、枯渇性ＬＡＧ−３抗体である。他のＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ３の可溶性部分とＭＨＣクラスＩＩ分子のＩｇの組み換え融合タンパク質であり、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）である。他の抗体は、例えば、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレットに開示されている。
【１１０４】
一実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体又はそのフラグメントは、参照によりその全体が本明細書に援用される「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＬＡＧ３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書に記載のような抗ＬＡＧ３抗体である。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−Ｓｅｒ又はＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｉ又はＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊのいずれかから選択される抗体からの重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＣＤＲ（又は集合的に全てのＣＤＲ）、又は米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書の表１に記載されるもの、又は表１のヌクレオチド配列によってコードされるもの、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列、又は密接に関連するＣＤＲ、例えば同一であるか若しくは少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、又は４つ以下の改変（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
【１１０５】
更に別の実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−Ｓｅｒ又はＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｉ又はＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊのいずれかから選択される抗体からの少なくとも１つ、２つ、３つ又は４つの可変領域、又は米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書の表１に記載されるもの、又は表１のヌクレオチド配列によってコードされるもの、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列を含む。
【１１０６】
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、例えば、第１ドメイン及び第２ドメインを含む融合タンパク質であり得、ここで、第１ドメインは、阻害分子又はそのフラグメントであり、第２ドメインは、陽性シグナルと関係するポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである。一実施形態において、陽性シグナルと結合するポリペプチドは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８、ＣＤ２７及び／又はＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は例えば本明細書に記載の例えばＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態において、融合タンパク質は、ＣＡＲを発現するのと同じ細胞により発現される。別の実施形態において、融合タンパク質は、本開示のＣＡＲを発現しない細胞、例えばＴ細胞により発現される。
【１１０７】
実施形態において、追加薬剤（本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及びＰＤ−１阻害剤と更に組み合わせて）を対象に投与し、ここで、追加薬剤は、阻害性分子の阻害剤、例えばチェックポイント分子、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、又はＴＧＦβである。実施形態では、追加薬剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤、例えばＦＡＺ０５３（ｈＩｇＧ４ヒト化抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、デュルバルマブ（ＤＥＭＩ−４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ）、又はＢＭＳ−９３６５５９である。実施形態において、追加薬剤は、ＰＤ−１の追加阻害剤、例えばペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＡＭＰ−２２４、ＲＥＧＮ−２８１０、又はＢＧＢ−Ａ３１７である。実施形態では、追加薬剤は、ＣＴＬＡ−４の阻害剤、例えばイピリムマブである。実施形態では、追加薬剤は、ＬＡＧ−３、例えばＬＡＧ５２５（ｈＩｇＧ４ヒト化抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体）である。実施形態では、追加薬剤は、ＴＩＭ−３の阻害剤、例えばＭＢＧ４５３（ｈＩｇＧ４ヒト化抗ＴＩＭ−３モノクローナル抗体）である。実施形態では、追加薬剤は、酵素、Ｂ−Ｒａｆの阻害剤、例えばダブラフェニブ（ＧＳＫ２１１８４３６；Ｎ−｛３−［５−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミド）である。実施形態では、追加薬剤は、ＭＥＫ１及び／又はＭＥＫ２、例えばトラメチニブ（Ｎ−（３−｛３−シクロプロピル−５−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝フェニル）アセトアミド）である。実施形態では、追加薬剤は、ダブラフェニブ及びトラメチニブを含む。実施形態では、追加薬剤は、ＧＩＴＲの阻害剤、例えばＧＷＮ３２３である。実施形態では、追加薬剤は、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｓ））のアゴニスト、例えばＭＩＷ８１５である。実施形態では、追加薬剤は、ＩＬ−１５アゴニスト、例えばＮＩＺ９８５である。実施形態では、追加薬剤は、アデノシン受容体の阻害剤、例えばＮＩＲ１７８である。実施形態では、追加薬剤は、マクロファージコロニー刺激因子（ＣＳＦ−１）の阻害剤、例えばＭＣＳ１１０である。実施形態では、追加薬剤は、ｃＭｅｔの阻害剤、例えばＩＮＣ２８０である。実施形態では、追加薬剤は、ポルクピン（ＰＯＲＣＮ）の阻害剤、例えばＷＮＴ９７４である。実施形態では、追加薬剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えば���ノビノストである。実施形態では、追加薬剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスである。実施形態では、追加薬剤は、セカンドミトコンドリア由来カスパーゼ活性化剤（Ｓｅｃｏｎｄ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  Ｃａｓｐａｓｅ）（ＳＭＡＣ）模倣物及び／又はＩＡＰ（アポトーシスタンパク質の阻害剤）タンパク質ファミリーの阻害剤、例えばＬＣＬ１６１である。実施形態では、追加薬剤は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の阻害剤、例えばＥＧＦ８１６である。実施形態では、追加薬剤は、ＩＬ−１７の阻害剤、例えばＣＪＭ１１２である。実施形態では、追加薬剤は、ＩＬ−１βの阻害剤、例えばＩＬＡＲＩＳである。
【１１０８】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ｍｉＲ−１７−９２である。
【１１０９】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの活性を増強する薬剤は、サイトカインである。サイトカインは、Ｔ細胞増殖、分化、生存及び恒常性に関連する重要な機能を有する。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を受ける対象に投与できるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１又はこれらの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５又はＩＬ−２１又はこれらの組み合わせである。サイトカインを１日１回又は１日２回以上、例えば１日２回、１日３回又は１日４回投与できる。サイトカインを２日以上投与でき、例えばサイトカインを２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間又は４週間投与する。例えば、サイトカインを１日１回、７日間投与する。
【１１１０】
実施形態では、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤と組み合わせてサイトカインを投与する。サイトカインをＣＡＲ発現細胞と同時に又は一緒に投与でき、例えば同じ日に投与する。サイトカインをＣＡＲ発現細胞と同じ医薬組成物に製剤するか又は別の医薬組成物に製剤することができる。代わりに、サイトカインをＣＡＲ発現細胞の投与後間もなく、例えばＣＡＲ発現Ｔ細胞投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後に投与し得る。１日を超える投薬レジメンでサイトカインを投与する実施形態において、サイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現細胞の投与と同じ日であり得、又はサイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現細胞の投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後であり得る。一実施形態において、１日目にＣＡＲ発現細胞を対象に投与し、２日目にサイトカインを１日１回、翌７日間投与する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現細胞と組み合わせて投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５又はＩＬ−２１である。
【１１１１】
他の実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞の投与から一定期間後、例えばＣＡＲ発現細胞の投与から少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に投与する。一実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞に対する対象の応答の評価後に投与する。例えば、対象に本明細書に記載の用量及びレジメンに従い、ＣＡＲ発現細胞を投与する。ＣＡＲＴ治療に対する対象の応答を、腫瘍増殖阻止、循環腫瘍細胞減少又は腫瘍退縮を含む本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ発現細胞の投与２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に評価する。ＣＡＲ発現細胞治療に対して十分な応答を示さない対象にサイトカインを投与し得る。ＣＡＲ発現細胞治療に対して応答が最適以下である対象へのサイトカインの投与は、ＣＡＲ発現細胞有効性又は抗腫瘍活性を改善する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与するサイトカインは、ＩＬ−７である。
【１１１２】
低用量のｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせ
一実施形態では、本明細書に記載の併用療法、例えばＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）及びＰＤ−１阻害剤を低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて投与する。
【１１１３】
別の実施形態では、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与により、例えば非処置のＣＡＲ発現細胞又は非処置の対象と比較して、例えば培養物又は対象におけるＣＡＲ発現細胞の増殖の増大又は延長がもたらされる。実施形態では、増殖の増大は、ＣＡＲ発現細胞の数の増加と関連する。増殖の増大又は延長を測定する方法は、本明細書の実施例に記載する。別の実施形態では、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与により、例えば非処置のＣＡＲ発現細胞又は非処置の対象と比較して、例えば培養物又は対象におけるＣＡＲ発現細胞による癌細胞殺傷の増大がもたらされる。実施形態では、癌細胞殺傷の増大は、腫瘍体積の縮小を伴う。
【１１１４】
一実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１、又は触媒ｍＴＯＲ阻害剤などのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて投与する。例えば、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与前に開始するか、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与前に完了するか、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与と同時に開始するか、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与と重複するか、又は本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与後に継続することができる。
【１１１５】
代わりに又は加えて、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞を最適化できる。このような実施形態において、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１、又は触媒阻害剤などのアロステリック阻害剤の投与は、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞若しくはＮＫ細胞を対象から採取する前に開始又は完了する。
【１１１６】
別の実施形態では、例えば対象からの採取後、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞若しくはＮＫ細胞、又は例えば対象への投与前のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞若しくはＮＫ細胞は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の存在下で培養することができる。
【１１１７】
本明細書で使用される場合、「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、細胞中のｍＴＯＲキナーゼを阻害する化合物若しくはリガンド、又は薬学的に許容可能なその塩を指す。一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、アロステリック阻害剤である。一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、触媒阻害剤である。
【１１１８】
アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、中性三環式化合物ラパマイシン（シロリムス）、ラパマイシン関連化合物、即ちラパマイシンとの構造及び機能的に類似性を有する化合物であり、例えばラパマイシン誘導体、ラパマイシン類似体（ラパログとも呼ばれる）、及びｍＴＯＲ活性を阻害する他のマクロライド化合物を含む。
【１１１９】
ラパマイシンは、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）により産生される公知のマクロライド抗生物質である。他の好適なラパマイシン類似体は、限定されないが、ＲＡＤ００１、別名：エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））を含み、化学名（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｅ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１２−｛（１Ｒ）−２−［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−１１，３６−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−２，３，１０，１４，２０−ペンタオン、シロリムス（ラマパイシン、ＡＹ−２２９８９）、４０−［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート］−ラマパイシン（テムシロリムス若しくはＣＣＩ−７７９とも呼ばれる）及びリダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３／ＭＫ−８６６９）を有する。アロステリックｍＴｏｒ阻害剤の他の例は、参照によりその内容が援用される米国特許出願公開第２００５／０１０１６２４号明細書に記載されるように、ゾタロリムス（ＡＢＴ５７８）及びウミロリムスを含む。他の好適なｍＴＯＲ阻害剤は、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落９４６〜９６４に記載されており、これは、参照により援用される。低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、低用量のｍＴＯＲ阻害剤に関連するｍＴＯＲ阻害の好適なレベル、ｍＴＯＲ阻害のレベルを検出する方法、及びその好適な医薬組成物は、参照によりその全体が援用される、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落９３６〜９４５及び段落９６５〜１００３にも記載されている。
【１１２０】
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、癌免疫療法、例えば癌抗体療法又はＴ細胞免疫療法（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）の結果として起こり得る潜在的に生命を脅かすサイトカイン関連毒性である。ＣＲＳは、多数のリンパ球及び／又は骨髄細胞が、活性化時に炎症性サイトカインを放出する際の高レベルの免疫活性化に起因する。ＣＲＳの重症度及び症状開始のタイミングは、対象における免疫細胞活性化の規模、投与される治療法の種類、及び／又は腫瘍負荷の程度に応じて変動し得る。癌のためのＴ細胞療法の場合、症状の開始は、インビボでのＴ細胞増殖のピークがある場合、典型的には、Ｔ細胞療法の投与後の数日〜数週間である。例えば、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２４．２（２０１４）：１８８−９５を参照されたい。
【１１２１】
ＣＲＳの症状は、神経毒性、播種性血管内凝固、心機能障害、成人呼吸窮迫症候群、腎不全、及び／又は肝不全を含み得る。例えば、ＣＲＳの症状は、高熱、悪心、一過性低血圧、低酸素症などを含む。ＣＲＳは、発熱、疲労、拒食症、筋肉痛、関節痛、悪心、嘔吐、及び頭痛などの臨床的全身徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、発疹などの臨床的皮膚徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、悪心、嘔吐及び下痢などの臨床的消化管徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻呼吸及び低酸素血症などの臨床的呼吸器徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻脈、脈圧拡大、低血圧、心拍出量増加（前期）及び心拍出量の潜在的な低下（後期）などの臨床的心血管徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、Ｄ−ダイマーの上昇、出血を伴う又は伴わない低フィブリノゲン血症などの臨床的凝固徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、高窒素血症などの臨床的腎徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、高トランスアミナーゼ血症及び高ビリルビン血症などの臨床的肝徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頭痛、精神状態の変化、混乱、せん妄、喚語困難又は明らかな失語症、幻覚、振戦、ディスメトリア、異常歩行、及び発作などの臨床的神経徴候及び症状を含み得る。
【１１２２】
ＩＬ−６は、ＣＲＳ毒性のメディエータであると考えられる。例えば、同上を参照されたい。高いＩＬ−６レベルは、前炎症性ＩＬ−６シグナル伝達カスケードを開始させ、１つ以上のＣＲＳ症状を引き起し得る。一部の例では、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）（例えば、ＩＬ−６に応答して肝臓により産生される生体分子）のレベルが、ＩＬ−６活性の測定値となり得る。一部の例では、ＣＲＰレベルは、ＣＲＳ中に数倍（例えば、数ログ）増加し得る。ＣＲＰレベルは、本明細書に記載の方法、及び／又は当技術分野で利用可能な標準的な方法を用いて測定することができる。
【１１２３】
ＣＲＳグレード付け
一部の実施形態において、ＣＲＳを以下のような１〜５の重症度にグレード付けすることができる。グレード１〜３は、重症ＣＲＳ未満である。グレード４〜５は、重症ＣＲＳである。グレード１のＣＲＳについては、対症処置のみが必要であり（例えば、悪心、発熱、疲労、筋肉痛、不快感、頭痛）、症状は、生命を脅かすものではない。グレード２のＣＲＳについては、症状は適度の介入を必要とし、一般的に適度の介入に応答する。グレード２のＣＲＳを有する対象は、液体若しくは１種の低用量昇圧剤に応答する低血圧を発症するか、又は対象は、グレード２の臓器毒性若しくは低流量の酸素（４０％未満の酸素）に応答する軽度の呼吸器症状を発症する。グレード３のＣＲＳ対象では、低血圧は、一般的に、液体療法又は１回の低用量昇圧剤によって逆転させることができない。これらの対象は、一般的に、低流量酸素より多くのものを必要とし、グレード３の臓器毒性（例えば、腎若しくは心機能障害又は血液凝固障害）及び／又はグレード４の高トランスアミナーゼ血症を有する。グレード３のＣＲＳ対象は、より積極的な介入、例えば４０％以上の酸素、高用量昇圧剤、及び／又は複数の昇圧剤を必要とする。グレード４のＣＲＳ対象は、グレード４の臓器毒性又は機械的人工換気の必要性を含む、直ちに生命を脅かす症状に罹患する。グレード４のＣＲＳ対象は、一般的に、高トランスアミナーゼ血症を有さない。グレード５のＣＲＳ対象では、毒性は、死亡の原因となる。例えば、ＣＲＳをグレード付けするための基準は、表Ａとして本明細書に提供される。特に指定がない限り、本明細書で使用されるＣＲＳは、表Ａの基準によるＣＲＳを指す。
【１１２４】
【表２３３】
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【１１２５】
ＣＲＳ療法
ＣＲＳのための療法としては、ＩＬ−６阻害剤又はＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ又はシルツキシマブ）、ｓｇｐ１３０遮断剤、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、及び機械的人工換気が挙げられる。ＣＲＳのための例示的療法は、国際公開第２０１４０１１９８４号パンフレットに記載され、これは、参照により本明細書に援用される。
【１１２６】
トシリズマブは、ヒト化された免疫グロブリンＧ１κ抗ヒトＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体である。例えば、同上を参照されたい。トシリズマブは、ＩＬ−６の可溶型及び膜結合型ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）への結合を遮断し、従って古典的及びトランス−ＩＬ−６シグナル伝達を阻害する。実施形態において、トシリズマブは、約４〜１２ｍｇ／ｋｇ、例えば成人の対象の場合、約４〜８ｍｇ／ｋｇ、小児の対象の場合、約８〜１２ｍｇ／ｋｇの用量で例えば１時間の経過にわたって投与される。
【１１２７】
一部の実施形態において、ＣＲＳ治療剤は、ＩＬ−６シグナル伝達の阻害剤、例えばＩＬ−６又はＩＬ−６受容体の阻害剤である。一実施形態において、阻害剤は、抗ＩＬ−６抗体、例えばシルツキシマブなどの抗ＩＬ−６キメラモノクローナル抗体である。他の実施形態では、阻害剤は、ＩＬ−６シグナル伝達を遮断することができる可溶性ｇｐ１３０又はそのフラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｇｐ１３０又はそのフラグメントは、異種ドメイン、例えばＦｃドメインに融合され、例えばＦＥ３０１などのｇｐ１３０−Ｆｃ融合タンパク質である。実施形態において、ＩＬ−６シグナル伝達の阻害剤は、抗体、例えばサリルマブ、オロキズマブ（ＣＤＰ６０３８）、エルシリモマブ、シルクマブ（ＣＮＴＯ１３６）、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＡＲＧＸ−１０９、又はＦＭ１０１など、ＩＬ−６受容体に対する抗体を含む。一部の実施形態において、ＩＬ−６シグナル伝達の阻害剤は、ＣＰＳＩ−２３６４などの低分子を含む。
【１１２８】
例示的な血管作動性薬剤としては、これらに限定されないが、アンギオテンシン−１１、エンドセリン−１、αアドレナリンアゴニスト、ロスタノイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、循環作動薬（例えば、アドレナリン、ドブタミン、イソプレナリン、エフェドリン）、昇圧剤（例えば、ノルアドレナリン、バソプレッシン、メタラミノール、バソプレッシン、メチレンブルー）、強心性血管拡張薬（例えば、ミルリノン、レボシメンダン）、及びドーパミンが挙げられる。
【１１２９】
例示的な昇圧剤としては、これらに限定されないが、ノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、及びバソプレッシンが挙げられる。一部の実施形態において、高用量昇圧剤は、２０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン単剤療法、１０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ以上のドーパミン単剤療法、２００μｇ／ｍｉｎ以上のフェニレフリン単剤療法、及び／又は１０μｇ／ｍｉｎ以上のエピネフリン単剤療法の１つ以上を含む。一部の実施形態において、対象がバソプレッシンを投与中の場合、高用量昇圧剤は、バソプレッシン＋１０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン均等物（ここで、ノルエピネフリン均等物用量＝［ノルエピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［ドーパミン（μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）／２］＋［エピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［フェニレフリン（μｇ／ｍｉｎ）／１０］である）を含む。一部の実施形態において、対象が組み合わせ昇圧剤（バソプレッシンではない）を投与中の場合、高用量昇圧剤は、２０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン均等物（ここで、ノルエピネフリン均等物用量＝［ノルエピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［ドーパミン（μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）／２］＋［エピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［フェニレフリン（μｇ／ｍｉｎ）／１０］である）を含む。例えば、同上を参照されたい。
【１１３０】
一部の実施形態において、低用量昇圧剤は、高用量昇圧剤について上記に列挙された１つ以上の用量を下回る用量で投与される昇圧剤である。
【１１３１】
例示的なコルチコステロイドとしては、これらに限定されないが、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニゾロンが挙げられる。実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇの用量のデキサメタゾンが使用される。実施形態では、１０ｍｇ／用量の最大用量のデキサメタゾンが使用される。実施形態では、２ｍｇ／ｋｇ／日の用量のメチルプレドニゾロンが使用される。
【１１３２】
例示的な免疫抑制剤としては、これらに限定されないが、ＴＮＦαの阻害剤又はＩＬ−１の阻害剤が挙げられる。実施形態において、ＴＮＦαの阻害剤は、抗ＴＮＦα抗体、例えばモノクローナル抗体、例えばインフリキシマブを含む。実施形態において、ＴＮＦαの阻害剤は、可溶性ＴＮＦα受容体（例えば、エタネルセプト）を含む。実施形態において、ＩＬ−１又はＩＬ−１Ｒ阻害剤は、アナキンラを含む。
【１１３３】
一部の実施形態において、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象に抗ＩＦＮ−γ又は抗ｓＩＬ２Ｒａ療法、例えばＩＦＮ−γ又はｓＩＬ２Ｒａに対して指向される抗体分子を投与する。
【１１３４】
実施形態において、ブリナツモマブなどの治療抗体分子を受け、ＣＲＳを有するか、又はＣＲＳを発症するリスクがある対象については、治療抗体分子を低用量及び／若しくは低頻度で投与するか、又は治療抗体分子の投与を停止する。
【１１３５】
実施形態において、ＣＲＳを有するか又はＣＲＳを発症するリスクがある対象を、アセトアミノフェンなどの解熱剤を用いて処置する。
【１１３６】
実施形態において、本明細書の対象に、任意の組み合わせの、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞と組み合わせた本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与又は提供する。
【１１３７】
実施形態において、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクがある（例えば、重症ＣＲＳを発症する高リスク状態にあると同定された）対象に、任意の組み合わせの、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞と組み合わせた本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与する。
【１１３８】
実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）は、集中治療室に移送される。一部の実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）は、発熱、心拍数の上昇、血液凝固障害、ＭＯＤＳ（多臓器不全症候群）、心血管機能障害、血液分布異常性ショック、心筋症、肝機能障害、腎機能障害、脳症、臨床的発作、呼吸器不全、又は頻脈など、ＣＲＳと関連する１つ以上の症状又は状態についてモニタリングされる。一部の実施形態において、本明細書の方法は、ＣＲＳと関連する症状又は状態の１つのための療法を投与することを含む。例えば、実施形態において、例えば対象が血液凝固障害を発症する場合、方法は、寒冷沈降物を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が心血管機能障害を発症する場合、方法は、血管作動性注入支持を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が血液分布異常性ショックを発症する場合、方法は、αアゴニスト療法を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が心筋症を発症する場合、方法は、ミルリノン療法を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が呼吸器不全を発症する場合、方法は、機械的人工換気（例えば、侵襲的機械的人工換気又は非侵襲的機械的人工換気）を実施することを含む。一部の実施形態において、例えば対象がショックを発症する場合、方法は、晶質液及び／又はコロイド液を投与することを含む。
【１１３９】
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与前に、それと同時に、又はその後に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与の２週間以内に（例えば、２若しくは１週間以内、又は１４日以内、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１日以内、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与前又は後、少なくとも１日（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、３ヶ月、又はそれを超える）で投与される。
【１１４０】
実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）に単回用量のＩＬ−６阻害剤又はＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）を投与する。実施形態において、対象に複数用量（例えば、２、３、４、５、６、又はそれを超える用量）のＩＬ−６阻害剤又はＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）を投与する。
【１１４１】
実施形態において、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクが低いか又はリスクがない対象（例えば、重症ＣＲＳを発症する低リスク状態を有すると同定された対象）には、本明細書に記載のＣＲＳのための療法、例えばＩＬ−６阻害剤若しくはＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与しない。
【１１４２】
一部の実施形態において、本明細書に開示の方法により処置される対象は、例えば、グレード１、グレード２又はグレード３という低い重症度のＣＲＳを有する。
【１１４３】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与用に製剤される。
【１１４４】
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
【１１４５】
一実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【１１４６】
処置方法
「免疫学的に有効量」、「有効用量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び状態の個体差を考慮して医師が決定することができる。
【１１４７】
対象に投与すべき前述の処置の用量は、処置しようとする状態の正確な性質及び処置のレシピエントに応じて変動し得る。ヒトへの投与のための用量のスケーリングは、当技術分野で認識されている慣例に従って実施することができる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者の場合１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、１〜３０日の期間にわたって毎日投与する。好ましい１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例では、最大４０ｍｇ／日までの高用量を用い得る（米国特許第６，１２０，７６６号明細書に記載）。
【１１４８】
本明細書に記載の組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、又は腹腔内に投与し得る。一実施形態において、例えばＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤を含む、本明細書に記載の組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。一実施形態において、例えばＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤を含む、本明細書に記載の組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。例えば、ＣＡＲ発現細胞及び／又はＰＤ−１阻害剤を含む、本明細書に記載の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
【１１４９】
概して、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞を含む医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、ある例では１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の用量で投与することができ、これらの範囲内の全ての整数値を含むと述べることができる。また、免疫エフェクター細胞組成物は、上記の用量で複数回投与することもできる。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【１１５０】
特定の態様において、活性化免疫エフェクター細胞を対象に投与し、続いて血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからの細胞を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させた細胞を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一態様において、細胞を、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、細胞を、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
【１１５１】
特定の例示的態様において、対象は、白血球を採取し、エクスビボで富化又は枯渇させて、目的の細胞、例えばＴ細胞を選択及び／又は単離する白血球除去を受け得る。これらのＴ細胞単離体を当技術分野で知られる方法により増殖させ、１つ以上の本発明のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ  Ｔ発現が創製されるように処理し得る。処置を必要とする対象を、その後、高用量の化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付し得る。一態様において、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖させた本発明のＣＡＲ発現細胞の注入を受ける。更なる態様において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【１１５２】
一実施形態において、ＣＡＲを、例えばインビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞に導入し、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ発現細胞の初期投与及びその後の本発明のＣＡＲ発現細胞の１回以上の投与を受け、ここで、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日未満で行う。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間当たりに行い、例えば本発明のＣＡＲ発現細胞の２、３又は４投与を１週間当たりに投与する。一部の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、毎週２回以上のＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、毎週２、３若しくは４回の投与）（本明細書では、サイクルとも呼ばれる）を受け、続く１週間はＣＡＲ発現細胞を投与せず、その後、更に１回以上のＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、毎週２回以上のＣＡＲ発現細胞の投与）を対象に実施する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、２つ以上のＣＡＲ発現細胞のサイクルを受け、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４、又は３日未満である。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、毎週３回の投与の場合、隔日に投与する。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８週間にわたって又はそれを超えて投与する。
【１１５３】
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約１０４〜約１０９細胞／ｋｇ、例えば約１０４〜約１０５細胞／ｋｇ、約１０５〜約１０６細胞／ｋｇ、約１０６〜約１０７細胞／ｋｇ、約１０７〜約１０８細胞／ｋｇ、又は約１０８〜約１０９細胞／ｋｇを含む。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、約０．６×１０６細胞／ｋｇ〜約２×１０７細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約２×１０５、１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、少なくとも約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、最大約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約１．１×１０６〜１．８×１０７細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、少なくとも約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、最大約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９細胞を含む。
【１１５４】
一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、最大約１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、最大１〜３×１０７〜１〜３×１０８を含む。一部の実施形態では、対象は、１〜３×１０７のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞を投与される。他の実施形態では、対象は、１〜３×１０８のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞を投与される。
【１１５５】
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）の用量は、約１×１０６細胞／ｍ２〜約１×１０９細胞／ｍ２、例えば約１×１０７／ｍ２〜約５×１０８細胞／ｍ２、例えば約１．５×１０７／ｍ２、約２×１０７細胞／ｍ２、約４．５×１０７／ｍ２、約１０８細胞／ｍ２、約１．２×１０８／ｍ２、又は約２×１０８細胞／ｍ２を含む。
【１１５６】
実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、複数の用量、例えば第１の用量、第２の用量、及び任意選択的に第３の用量で投与される。実施形態において、方法は、癌（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ））を有する対象（例えば、成人対象）を処置することを含み、これは、対象に第１の用量、第２の用量、及び任意選択的に１つ以上の追加用量を投与する工程を含み、各用量は、ＣＡＲ分子、例えばＣＤ１９ＣＡＲ分子、例えば配列番号１０８に従うＣＡＲ分子を発現する免疫エフェクター細胞を含む。
【１１５７】
実施形態において、方法は、２〜５×１０６の生存ＣＡＲ発現細胞／ｋｇの用量を投与する工程（この場合、対象は、５０ｋｇ未満の体重を有する）、又は１．０〜２．５×１０８の生存ＣＡＲ発現細胞／ｋｇの用量を投与する工程（この場合、対象は、少なくとも５０ｋｇの体重を有する）を含む。
【１１５８】
実施形態において、単回用量を対象、例えば小児対象に投与する。
【１１５９】
実施形態において、用量を連日、例えば第１の用量を１日目に、第２の用量を２日目に、任意選択の第３の用量（もし投与されれば）を３日目に投与する。
【１１６０】
実施形態において、第４、第５、若しくは第６の用量、又はそれを超える用量を投与する。
【１１６１】
実施形態において、第１の用量は、総用量の約１０％を含み、第２の用量は、総用量の約３０％を含み、第３の用量は、総用量の約６０％を含み、ここで、前述のパーセンテージの合計は、１００％である。実施形態において、第１の用量は、総用量の約９〜１１％、８〜１２％、７〜１３％、又は５〜１５％を含む。実施形態において、第２の用量は、総用量の約２９〜３１％、２８〜３２％、２７〜３３％、２６〜３４％、２５〜３５％、２４〜３６％、２３〜３７％、２２〜３８％、２１〜３９％又は２０〜４０％を含む。実施形態において、第３の用量は、総用量の約５５〜６５％、５０〜７０％、４５〜７５％、又は４０〜８０％を含む。実施形態において、総用量は、１週間、２週間、３週間、又は４週間の期間にわたって投与される生存ＣＡＲ発現細胞の総数を指す。２回の用量を投与する一部の実施形態において、総用量は、第１及び第２の用量で対象に投与される生存ＣＡＲ発現細胞の総数を指す。３回の用量を投与する一部の実施形態では、総用量は、第１、第２及び第３の用量で対象に投与される生存ＣＡＲ発現細胞の総数を指す。
【１１６２】
実施形態において、用量は、それに含まれる生存ＣＡＲ発現細胞の数に従って測定される。ＣＡＲ発現は、例えば、ＣＡＲ分子及び検出可能な標識に結合する抗体分子を用いたフローサイトメトリーによって測定することができる。生存性は、例えば、セロメータによって測定することができる。
【１１６３】
実施形態において、生存ＣＡＲ発現細胞は、漸増用量で投与する。実施形態において、第２の用量は、第１の用量より大きく、例えば１０％、２０％、３０％又は５０％大きい。実施形態において、第２の用量は、第１の用量の量の２倍、３倍、４倍、又は５倍である。実施形態において、第３の用量は、第２の用量より大きく、例えば１０％、２０％、３０％又は５０％大きい。実施形態において、第３の用量は、第２の用量の量の２倍、３倍、４倍、又は５倍である。
【１１６４】
特定の実施形態において、方法は、以下のａ）〜ｈ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は全部を含む：
ａ）第１の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、第２の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数の１／３以下である、
ｂ）第１の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、投与されるＣＡＲ発現生存細胞の総数の１／Ｘ以下であり、ここで、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、又は５０である、
ｃ）第１の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、又は５×１０８以下のＣＡＲ発現生存細胞であり、第２の用量は、第１の用量より大きい、
ｄ）第２の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、第３の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数の１／２以下である、
ｅ）第２の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、投与されるＣＡＲ発現生存細胞の総数の１／Ｙ以下であり、ここで、Ｙは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、又は５０である、
ｆ）第２の用量で投与されるＣＡＲ発現生存細胞の数は、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、又は５×１０８以下のＣＡＲ発現生存細胞であり、第３の用量は、第２の用量より大きい、
ｈ）第１の用量、第２の用量、及び任意選択的に第３の用量の投与の用量及び期間は、対象が４、３、２又は１以下のレベルのＣＲＳを経験するように選択される。
【１１６５】
実施形態において、総用量は、約５×１０８のＣＡＲ発現生存細胞である。実施形態において、総用量は、約５×１０７〜５×１０８のＣＡＲ発現生存細胞である。実施形態において、第１の用量は、約５×１０７（例えば、±１０％、２０％又は３０％）のＣＡＲ発現生存細胞であり、第２の用量は、約１．５×１０８（例えば、±１０％、２０％又は３０％）のＣＡＲ発現生存細胞であり、第３の用量は、約３×１０８（例えば、±１０％、２０％又は３０％）のＣＡＲ発現生存細胞である。
【１１６６】
実施形態において、１用量を受けた後、例えば第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量を受けた後、対象をＣＲＳについて評価する。
【１１６７】
実施形態において、対象は、ＣＲＳ処置、例えばトシリズマブ、コルチコステロイド、エタネルセプト、又はシルツキシマブを受ける。実施形態において、ＣＲＳ処置は、ＣＡＲ分子を含む細胞の第１の用量前又は後に投与される。実施形態において、ＣＲＳ処置は、ＣＡＲ分子を含む細胞の第２の用量前又は後に投与される。実施形態において、ＣＲＳ処置は、ＣＡＲ分子を含む細胞の第３の用量前又は後に投与される。実施形態において、ＣＲＳ処置は、ＣＡＲ分子を含む細胞の第１の用量と第２の用量との間、及び／又はＣＡＲ分子を含む細胞の第２の用量と第３の用量との間に投与される。
【１１６８】
実施形態において、第１の用量後にＣＲＳ、例えばＣＲＳグレード１、２、３又は４を有する対象の場合、第１の用量の少なくとも２、３、４又は５日後に第２の用量を投与する。実施形態において、第２の用量後にＣＲＳ、例えばＣＲＳグレード１、２、３又は４を有する対象の場合、第２の用量の少なくとも２、３、４又は５日後に第３の用量を投与する。実施形態において、第１の用量後にＣＲＳを有する対象の場合、ＣＡＲ発現細胞の第２の用量は、対象がＣＲＳを有していないと仮定して第２の用量が投与されていたときより遅延される。実施形態において、第２の用量後にＣＲＳを有する対象の場合、ＣＡＲ発現細胞の第３の用量は、対象がＣＲＳを有していないと仮定して第３の用量が投与されていたときより遅延される。
【１１６９】
実施形態において、対象は、第１の用量が投与される前に高い疾病負荷の癌を有する。実施形態において、対象は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％、例えば少なくとも５％の骨髄芽球レベルを有する。実施形態において、対象は、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶの癌を有する。実施形態において、対象は、例えば、単一腫瘍又は複数の腫瘍で少なくとも１、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、又は１０００ｇの腫瘍質量を有する。
【１１７０】
一部の実施形態において、対象は、癌（例えば、本明細書に記載の固形癌又は血液癌）を有する。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、ＡＬＬを有する。他の実施形態では、対象は、複数の骨髄腫を有する。
【１１７１】
一実施形態において、癌は、例えば本明細書に記載するように、ＣＤ１９発現に関連する疾患である。他の実施形態では、癌は、例えば本明細書に記載するように、腫瘍抗原に関連する疾患である。実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載するＣＡＲ分子である。
【１１７２】
一態様では、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、レンチウイルスなどのレンチウイルスベクターを用いて産生する。このようにして産生されたＣＡＲ発現細胞は、安定したＣＡＲ発現を有する。
【１１７３】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞は、形質導入４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日後、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ  ＣＡＲベクター送達により行われ得る。一態様において、ＣＡＲ  ＲＮＡを電気穿孔法によりＴ細胞に形質導入する。
【１１７４】
一過性に発現されるＣＡＲ発現細胞（特にマウスｓｃＦｖ担持ＣＡＲ発現細胞を伴う）を使用して処置される患者で生じ得る可能性のある問題は、複数処置後のアナフィラキシーである。
【１１７５】
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０〜１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
【１１７６】
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲ発現細胞注入中断は、１０〜１４日を超えて継続してはならない。
【１１７７】
ヒト（マウスではなく）ｓｃＦｖと一緒にＣＡＲを使用すると、抗ＣＡＲ応答を有する患者の可能性及び強度を低減することができる。
【１１７８】
ＰＤ−１阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体分子の用量及び治療レジメンは、当業者が決定することができる。使用する分子の好適な用量は、対象の年齢及び体重並びに使用する具体的な薬剤に応じて変動し得る。
【１１７９】
抗体分子を投与する方法は、当技術分野で公知であり、以下に説明する。使用する分子の好適な用量は、対象の年齢及び体重及び使用する具体的な薬剤に応じて変動し得る。抗ＰＤ−１抗体分子の用量及び治療レジメンは、当業者により決定され得る。
【１１８０】
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、又は約３ｍｇ／ｋｇの用量で注射（例えば、皮下又は静脈内）により投与する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１〜３ｍｇ／ｋｇ又は約３〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約０．５〜２、２〜４、２〜５、５〜１５、又は５〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。投与スケジュールは、例えば、１週間毎に１回〜２、３、又は４週間毎に１回など、変動し得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与する。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、２週間毎に１回約１ｍｇ／ｋｇ、２週間毎に１回約３ｍｇ／ｋｇ、２週間毎に１回約１０ｍｇ／ｋｇ、４週間毎に１回約３ｍｇ／ｋｇ、又は４週間毎に１回約５ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。
【１１８１】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、又は約３００ｍｇ若しくは約４００ｍｇの用量（例えば、固定用量）で注射（例えば、皮下若しくは静脈内）により投与する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、又は約５００ｍｇの用量で投与する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ又は３００ｍｇの用量で投与する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、又は約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で投与する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜３００ｍｇ、２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、３５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、又は４００ｍｇ〜５００ｍｇの用量で投与する。投与スケジュールは、例えば、１週間毎に１回〜２、３、４、５又は６週間毎に１回など、変動し得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回又は４週間毎に１回約３００〜４００ｍｇの用量で投与する。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回約３００ｍｇの用量で投与する。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、４週間毎に１回約４００ｍｇの用量で投与する。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、４週間毎に１回約３００ｍｇの用量で投与する。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回約４００ｍｇの用量で投与する。抗ＰＤ−１抗体分子は、１回以上、例えば１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、又はそれを超える回数投与することができる。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、６回投与する。抗ＰＤ−１抗体分子は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９（例えば、ＣＬＴ０１９若しくはＣＴＬ１１９）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の投与後少なくとも５日、例えば５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、２０、２５、３０、３５又は４０日で投与することができる。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９発現細胞（例えば、ＣＬＴ０１９若しくはＣＴＬ１１９）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の投与後約８日又は約１５日で投与することができる。
【１１８２】
抗体分子は、当技術分野で公知の様々な方法により投与することができるが、多くの治療用途の場合、好ましい投与経路／モードは、静脈内注射又は注入である。例えば、約３５〜４４０ｍｇ／ｍ２、典型的には約７０〜３１０ｍｇ／ｍ２、より典型的には約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、２０ｍｇ／ｍｉｎ超、例えば２０〜４０ｍｇ／ｍｉｎ、典型的には４０ｍｇ／ｍｉｎ以上の速度で抗体分子を静脈内注入により投与することができる。実施形態において、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、１０ｍｇ／ｍｉｎ未満、好ましくは５ｍｇ／ｍｉｎ以下の速度で抗体分子を静脈内注入により投与することができる。当業者は、投与経路／モードが所望の結果に応じて変動し得ることを理解するであろう。特定の実施形態では、急速な放出から化合物を保護する担体、例えばインプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などと一緒に活性化合物を調製し得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸など、生物分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。こうした製剤の調製のための多くの方法が特許となっており、当業者に周知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【１１８３】
約３５〜４４０ｍｇ／ｍ２、典型的には約７０〜３１０ｍｇ／ｍ２、より典型的には約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、２０ｍｇ／ｍｉｎ超、例えば２０〜４０ｍｇ／ｍｉｎ、典型的には４０ｍｇ／ｍｉｎ以上の速度で抗体分子を静脈内注入により投与することができる。実施形態において、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の注入速度は、約３ｍｇ／ｋｇのレベルを達成する。他の実施形態において、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、例えば約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２、又は約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、１０ｍｇ／ｍｉｎ未満、例えば５ｍｇ／ｍｉｎ以下の速度で抗体分子を静脈内注入により投与することができる。一部の実施形態において、抗体は、約３０分の期間にわたって注入する。
【１１８４】
用量の値が、改善しようとする状態の種類及び重症度に応じて変動し得ることに留意すべきである。更に、いずれか特定の対象について、個別の必要性に従い、且つ組成物を投与する、又は投与を監督する人の専門的な判断に従って、具体的な投与レジメンを経時的に調節すべきであること、並びに本明細書に記載する用量の範囲が例示的なものに過ぎず、特許請求される組成物の範囲又は実施の限定を意図しないことも理解すべきである。
【実施例】
【１１８５】
本発明を、次の実験的実施例を参照して更に詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。
【１１８６】
実施例１：ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞及びＰＤ−１阻害剤は、ヒト対象の腫瘍負荷を低減した
「ダブルヒット」ＤＬＢＣＬに変化した濾胞性リンパ腫を有する３４歳の女性を、ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせたＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞注入により処置した。女性は、同種骨髄移植を含む１１種の選択化学療法及び免疫療法を以前に受けていたが、これまでの治療法に対して非応答性であった。女性は、ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞（ＣＴＬ０１９）の投与前に、リンパ球枯渇化学療法（例えば、カルボプラチン及びゲムシタビン）を受けた。ＣＴＬ０１９を女性に投与し、続く放射線療法の後、ＰＤ−１アンタゴニスト、ペンブロリズマブ（ヒト化ＩｇＧ４抗ＰＤ−１モノクローナル抗体）を投与した。ＣＴＬ０１９の投与と放射線療法との間に生検を採取し、フローサイトメトリー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、及び蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）により生検を分析した。フローサイトメトリーにより、試料は、κ軽鎖、ＣＤ１０、及びＣＤ１９について陽性であった。ＩＨＣにより、試料は、大きいＰＡＸ５＋Ｂ細胞を有し、ＰＤＬ１＋であった。ＦＩＳＨにより、試料は、再編集ｃ−ＭＹＣ及びＢＣＬ−２を有した。ペンブロリズマブ処置後に第２の生検を採取した。第２の生検には広範な壊死が観察され、腫瘍は一切検出されなかった。従って、データは、ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞とＰＤ−１アンタゴニストとの組み合わせがヒトの腫瘍負荷を低減する上で有効であったことを証明している。
【１１８７】
実施例２：ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＲ−００１の特性決定
ＰＤＲ−００１は、ヒトＰＤ−１に対して指向されるヒト化モノクローナル抗体である。ＰＤＲ−００１は、分子解離及びハーフ抗体の形成を防止するための安定化ヒンジ突然変異を有する。ＰＤＲ−００１は、ＩｇＧ４／κアイソタイプサブクラスに属する。
【１１８８】
ＰＤＲ−００１を、ヒトＰＤ−１に対するその親和性及び活性についてインビトロで特性決定した。ＰＤＲ−００１をＣＨＯ細胞株において発現させた。ＰＤＲ−００１は、ヒトＰＤ−１と高い親和性で結合した。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイでは、ヒトＰＤ−１に対するＰＤＲ−００１のＫｄは、０．８３ｎＭであった。エクスビボでのヒト血液を用いたリンパ球刺激アッセイにおいて、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）によるスーパー抗原刺激に応答して、ＰＤＲ−００１は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）産生を約２倍増大した。ＰＤＲ−００１は、げっ歯類ＰＤ−１と交差反応しなかったが、カニクイザルＰＤ−１と交差反応し、機能的に活性であったため、カニクイザルは、毒性試験について関連種となった。カニクイザルＰＤ−１に対するＰＤＲ−００１の親和性は、０．９３Ｍであり、これは、ヒトＰＤ−１のＫｄと類似している。
【１１８９】
加えて、安全薬理学エンドポイント及び８週間回復と共に、５週間のグッドラボラトリープラクティス（ｇｏｏｄ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＧＬＰ）毒性学試験でＰＤＲ−００１の非臨床毒性を試験した。生存中の薬物関連死、臓器重量変化、又は肉眼的所見もなく、１００ｍｇ／ｋｇ／週という高い用量を評価した。試験した最高用量で脾臓内のマクロファージ浸潤物、並びに血管及び血管周囲腔内の限定的な単核浸潤物が認められた。
【１１９０】
実施例３：ＰＤＲ−００１による臨床結果
進行した悪性疾患を有する患者のＰＤＲ−００１について臨床試験を実施した。１、３、及び１０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｗ、並びに３及び５ｍｇ／ｋｇのＱ４Ｗの用量レベルで患者を処置した。用量制限毒性を呈示した患者はおらず、毒性プロフィールは、市販のＰＤ−１阻害剤の毒性プロフィールと類似していることがわかった。用量漸増及び曝露データのモデル化から得られた薬物動態学的データは、４週間毎に投与される４００ｍｇのＰＤＲ−００１の固定用量の使用を支持するものであった。トラフ濃度（Ｃｔｈｒｏｕｇｈ）は、数種の癌で実質的な効果を有することが立証されたペンブロリズマブについて観察された定常状態平均トラフ濃度と合致した。これらのデータも、例えば併用療法レジメンにおいて、代替用量レジメンとしての３００ｍｇのＱ３Ｗの使用を支持するものであった。
【１１９１】
実施例４：ＣＴＬ０１９及びＰＤＲ−００１の組み合わせを用いた臨床試験
試験の対象は、ＣＤ１９＋と識別されたびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。対象は、次の特徴の１つ以上を有する：（ｉ）一次治療後の残存病変、従って自己幹細胞移植に不適格である、（ｉｉ）以前の自己幹細胞移植後、再発若しくは持続疾患、（ｉｉｉ）再発若しくは持続疾患について最初の完全奏効（ＣＲ）を過ぎており、且つ従来の同種又は自己幹細胞移植に不適格若しくは不適性である、及び／又は（ｉｖ）濾胞性リンパ腫若しくはＣＬＬ／ＳＬＬの既往歴。
【１１９２】
対象は、ＣＡＲＴ−１９（例えば、ＣＴＬ０１９細胞、例えば本明細書に詳述したもの）の注入を受ける。ＣＡＲＴ−１９細胞は、注入可能な凍結保存培地（ｃｒｙｏｍｅｄｉａ）中に凍結保存し、単一注入物として投与する。細胞バッグは、以下の注入可能なグレード試薬（％ｖ／ｖ）を含有する凍結保存培地をそれぞれ含む：３１．２５％ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース（５％）、０．４５％ＮａＣｌ、最大７．５％ＤＭＳＯ、１％デキストラン４０、及び５％ヒト血清アルブミン。単回用量のＣＡＲＴ−１９細胞を、ＣＤ１９  ＴＣＲζ／４−１ＢＢベクターで形質導入した１〜５×１０８細胞を含有する注入により静脈内投与する。注入は、化学療法後約１〜４日で実施する。ＣＡＲＴ−１９は、マウスＣＡＲＴ−１９（例えば、ＣＴＬ０１９）である。
【１１９３】
対象は、ＰＤＲ−００１も受ける。ＰＤＲ−００１は、ＣＨＯ細胞に発現される。ＰＤＲ−００１製剤は、１バイアル当たり１００ｍｇ／凍結乾燥物でバイアル内に含まれる凍結乾燥粉末である。１．０ｍＬの注射液で凍結乾燥粉末を再構成した後、得られた溶液は、ｐＨ５．５で、１００ｍｇ／ｍＬのＰＤＲ−００１、ヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、スクロース、ポリソルベート−２０を含有する。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が発症しなければ、ＣＡＲＴ−１９注入後にＰＤＲ−００１を投与する。ＣＡＲＴ−１９注入後にＣＲＳが発症したら、ＣＲＳが解消した後にＰＤＲ−００１を投与する。
【１１９４】
実施例５：低用量ＲＡＤ００１は、細胞培養モデルにおいてＣＡＲＴ増殖を刺激する
インビトロでのＣＡＲ  Ｔ細胞増殖に対する低用量ＲＡＤ００１の作用は、例えば、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書の実施例８に記載されており、同出願の全体が参照により本明細書で援用される。
【１１９５】
実施例６：低用量ＲＡＤ００１は、インビボでＣＡＲＴ増殖を刺激する
インビボでのＣＡＲＴ細胞増殖に対する低用量ＲＡＤ００１の作用は、例えば、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書の実施例９に記載されており、同出願の全体が参照により本明細書で援用される。
【１１９６】
実施例７：ＰＤ−１遮断調節キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞を改変し、腫瘍退縮を誘導した
Ｔ細胞に対するプログラム死１受容体（ＰＤ−１）を遮断する抗体は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１免疫阻害軸を破壊することにより、複数の癌で腫瘍退縮を引き起こす。例えば、Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１２；３６６：２４４３−５４；Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１２；３６６：２４５５−６５；Ｈａｍｉｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１３；３６９：１３４−４４；Ｗｏｌｃｈｏｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１３；３６９：１２２−３３；及びＴｏｐａｌｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１４；３２：１０２０−３０を参照されたい。癌免疫療法に対するこの手法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞療法にとって優れたパートナーとなり得るが、その組み合わせは、依然として試験されていない。この実施例は、ＰＤ−１遮断抗体を難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び進行性リンパ腫を有する患者に、ＣＤ１９（ＣＡＲＴ１９）に対して指向されるＣＡＲ修飾Ｔ細胞による療法後に投与した実験を説明する。ＰＤ−１遮断後、患者は、頑健な抗腫瘍応答、ＣＡＲＴ１９細胞の拡大を有すると共に、ＣＡＲＴ１９細胞によりＰＤ−１及びエオメス（Ｅｏｍｅｓ）の同時発現が低減した。これらの結果は、抗ＰＤ−１が、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞療法に応答しない癌に対して高度に有効となり得ることを示唆している。これは、ＰＤ−１経路が、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞療法に対する応答を決定する上で重要となり得ることも示唆している。
【１１９７】
診断時に小腸の結節外病変と、増悪時に縦隔、肺、心筋及び心膜の結節外病変とを有し、以前に複数回治療を受けた縦隔原発由来の難治性ＤＬＢＣＬを患う３５歳男性をペンシルバニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）の臨床試験において、マウス抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ及び４−１ＢＢ−ＣＤ３ζ共刺激−活性化ドメインを発現する自己ＣＡＲＴ１９細胞を用いて処置した（ＮＣＴ０２０３０８３４）。Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２６（２３）：１８３（要約）を参照されたい。ＣＡＲＴ１９細胞は、以前に記載されているように製造した。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ  Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９；及びＭｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００９；１７（８）：１４５３−６４を参照されたい。患者は、２０１５年１０月１６日に多分割したシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２×６用量）を用いたリンパ球枯渇化学療法、続いて自己ＣＡＲＴ１９細胞注入（５×１０８ＣＡＲＴ１９細胞又は５．３４×１０６細胞／ｋｇ）を受けた。呼吸困難の悪化を評価するために２０１５年１１月１１日に実施したフォローアップ胸部ＣＴスキャンは、縦隔及び心膜腫瘍の拡大と共に新たな肺結節の拡大を伴う進行性リンパ腫を示した（図１Ａ）。心臓ＭＲＩは、心筋及び心膜浸潤を記録した。急速な進行性低酸素症及び呼吸困難を伴う患者の臨床状態を考慮し、縦隔鏡検査又は胸腔鏡肺生検は実施しなかった。従って、ＣＴＬ０１９後に縦隔リンパ節及び肺実質病変拡大の原因としての偽性進行を排除することは不可能であった。患者は、２０１５年１１月１１日にペンブロリズマブ、２ｍｇ／ｋｇを受けた。抗ＰＤ−１療法は、遺伝子修飾Ｔ細胞により定着腫瘍の根絶を強力に増強することを示す以前の臨床データ（例えば、Ｊｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１３；１９（２０）：５６３６−４６を参照されたい）により、ペンブロリズマブが治療法のために選択され、患者の腫瘍細胞は、強力にＰＤ−Ｌ１を発現した（図１Ｂ）。発熱を除けば、治療法の耐容性は良好であった。２０１５年１１月３０日までに有意な臨床的改善が認められた。その時点での胸部ＣＴは、複数の肺結節、胸水、縦隔リンパ節腫脹、並びに心膜結節形成の回復期を示した（図１Ａ）。従って、ペンブロリズマブの投与後、更なる進行ではなく、病変のサイズ縮小があったことから、ＣＡＲＴ１９後の偽性進行は可能性が低いと考えられた。治療法から３週間後までに、患者は、仕事に復帰することができた。ペンブロリズマブ、２ｍｇ／ｋｇを３週間毎に継続した。２０１５年１２月２２日及び２０１６年４月２０日のＰＥＴ／ＣＴスキャンは、残留ＦＤＧ取込み（部分的代謝応答）と共に縦隔リンパ節腫脹の継続的な解剖学的改善、リンパ腫による肺病変が解消されたことを示した。ペンブロリズマブの開始から１２ヵ月後、患者は、臨床的に良好な状態が続いている。
【１１９８】
フローサイトメトリーによるｑＰＣＲパーセンテージＣＡＲＴ１９細胞によるＣＡＲＴ１９ＤＮＡの変化（データは示していない）、及び血清サイトカインの変化について抹消血を分析した（図２Ａ、２Ｂ）。Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９を参照されたい。ＣＡＲＴ１９ＤＮＡコピー数は、ＣＡＲＴ１９細胞注入後に１ｍｃｇＤＮＡ当たり２，３５０コピーの最大値まで増加し、ペンブロリズマブ前１４日目の１ｍｃｇ当たり４９７コピーから、ペンブロリズマブ後２６日目の１ｍｃｇ当たり１，５３０コピーまで再度増加し、ペンブロリズマブの開始後、明らかに増加が持続した。第１０〜１４日付近のＣＡＲＴ１９注入安定化後、ＣＡＲ１９発現Ｔ細胞のパーセンテージは、増加したが、ペンブロリズマブ後４８時間中にＣＡＲ１９＋Ｔ細胞の最も高いパーセンテージが観察された（図２Ａ）。これは、ペンブロリズマブ後のＣＡＲ１９＋ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の両方の増加、特にＣＡＲＴ１９＋ＣＤ８＋細胞の増加を表している（データは示していない）。最も高い血清ＩＬ−６レベルは、ＣＡＲＴ１９注入後の３〜７日目及びペンブロリズマブ後２４時間中に観察された（図２Ｂ）。ペンブロリズマブ注入後、ＣＤ４＋ＣＡＲＴ１９＋細胞（図２Ｅ、２Ｉ及び２Ｊ）並びにＣＤ８＋ＣＡＲＴ１９＋細胞（図２Ｆ、２Ｋ及び２Ｌ）において、ＰＤ１／エオメスを同時発現するＣＡＲＴ１９細胞が減少した。ＰＤ−１及びＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３又はＬＡＧ３を同時発現する細胞には変化が認められなかった（データは示していない）。グランザイムＢ＋発現は、ペンブロリズマブ後、両方のＴ細胞サブセット、特にＣＡＲＴ１９＋ＣＤ８＋細胞で増加した（図２Ｇ〜２Ｈ）。
【１１９９】
ＴＣＲβディープシーケンシングをアフェレーシス産物、ＣＡＲＴ１９形質導入細胞産物、及び抹消血に対して１４日目（ペンブロリズマブ前）、２６日目（ペンブロリズマブから１時間後）、及び４５日目（ペンブロリズマブから１９日後）に実施した。ペンブロリズマブ後、濃厚さ（生産的再編成）及び生産的クローン性の増加が観察された（データは示していない）。ペンブロリズマブ後、８つの優性クローン（頻度≧１％、範囲１．２％〜１３．１％）が観察された。これらのクローンの２つは、最初に、ＣＡＲＴ１９注入後に拡大し（１４日目、クローン１：６．１％、クローン２：２．４％）、ペンブロリズマブ後に更に拡大し続けた（２６日目及び４５日目、クローン１：６．１％〜１３．１１％及びクローン２：２．９％〜６．４５％）。４つのクローンは、ＣＡＲＴ１９注入後に低レベルで存在し、ペンブロリズマブ後に拡大した（１４日目〜２６日目〜４５日目、クローン４：０．４％〜０．４％〜２．１％、クローン５：０．１％〜０．３％〜１．５％、クローン７：０．６％〜０．９％〜１．３％、クローン８：０．１％〜０．３％〜１．２％）。また、優性２つのクローンは、ペンブロリズマブ後にのみ存在した（１４日目〜２６日目〜４５日目、クローン３：０％〜０．２７％〜３．５７％、クローン６：０％〜０．０４％〜１．４６％）。相関する臨床的観察を実験結果と組み合わせると、ペンブロリズマブは、恐らく他の腫瘍指向クローンの増殖の誘導に加えて、ＣＡＲＴ１９細胞の効力も増強し得ることが示唆される。これは、概して、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞免疫療法におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の潜在的に重要な役割も示唆している。本明細書に記載する結果に基づき、ＣＡＲＴ１９療法（ＮＣＴ０２６５０９９９）に応答しないＣＤ１９＋リンパ腫を有する患者において、ペンブロリズマブの第Ｉ／ＩＩ相臨床試験が実施されている。
【１２００】
実施例８：低レベルの免疫チェックポイント分子は、転帰の改善に関連する
免疫組織化学により、リンパ腫からの試料中に免疫チェックポイント分子（ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３）を検出した。また、陽性及び陰性対照組織及び細胞株も実施した。免疫チェックポイント発現分析は、腫瘍細胞と、免疫細胞などの非腫瘍細胞を含み得る目的の領域に対する定量的画像分析を用いて実施した。組織、リンパ節、又は骨髄から試料を採取した。
【１２０１】
ＣＤ１９を標的化するＣＡＲ療法による処置後、完全奏効者（ＣＲ）及び進行性疾患（ＰＤ）を有する患者において、免疫チェックポイントタンパク質発現を比較した。図３に示すように、ＣＲ患者は、処置の前後で低レベルのＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３を有する傾向があるのに対し、ＰＤ患者は、処置の前後で高レベルの上記分子を有する傾向がある。この実施例は、ＣＡＲ発現細胞及び免疫チェックポイント阻害剤の併用療法を支持すると共に、ＣＡＲ療法を受ける患者の免疫チェックポイント分子レベルを決定する試験を支持する。
【１２０２】
実施例９：ＣＬＬ患者の非奏効者サブセットは、免疫チェックポイント阻害剤分子の発現増大を呈示する
この試験では、３４人のＣＬＬ患者由来の治験製剤からのＣＡＲＴ１９細胞をＰＤ−１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３などの免疫チェックポイント阻害剤分子の発現について評価した。このコホートのＣＡＲＴ１９に対する応答はわかっていたため、応答とバイオマーカー発現パターンとの相関を評価することができた。
【１２０３】
ＣＡＲＴ療法に対して異なる応答を有するＣＬＬ患者から製造されたＣＡＲＴ１９細胞をフローサイトメトリーにより分析して、ＣＡＲの発現、並びに免疫チェックポイント阻害剤分子ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３を決定した。ＣＡＲＴ１９細胞は、健常なドナー（ＨＤ）（ｎ＝２）；ＣＡＲＴ療法に応答したＣＬＬ患者（ＣＲ）（ｎ＝５）；ＣＡＲＴ療法に部分的に応答したＣＬＬ患者（ＰＲ）（ｎ＝８）；ＣＡＲＴ療法に応答しなかったＣＬＬ患者（ＮＲ）（ｎ＝２１）に由来した。当技術分野で公知のフローサイトメトリー分析の標準的な方法に従って、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＡＲ１９分子、並びに免疫チェックポイント分子ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３を特異的に認識する蛍光標識抗体で細胞を染色した。各マーカー、例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋などの発現をフローサイトメトリー分析ソフトウェアにより決定し、亜集団（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＣＡＲ１９発現Ｔ細胞）を免疫チェックポイント分子ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３の発現について更に分析した。
【１２０４】
表面マーカー発現を決定するために使用するフローサイトメトリープロフィール分析の一例を図４Ａ及び４Ｂに示す。フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ４を発現するＴ細胞を決定し、ＣＡＲ１９及びＰＤ−１発現について更に分析したが、その際、プロフィールのｘ軸は、ＣＡＲ１９発現を示し（左上（Ｑ５）及び左下（Ｑ８）象限は、ＣＡＲ１９陰性ＣＤ４＋細胞を示し、右上（Ｑ６）及び右下（Ｑ７）象限は、ＣＡＲ１９発現ＣＤ４＋細胞を示す）、ｙ軸は、ＰＤ−１発現を示す（左下（Ｑ８）及び右下（Ｑ７）象限は、ＰＤ−１陰性ＣＤ４＋細胞を示し、左上（Ｑ５）及び右上（Ｑ６）は、ＰＤ−１発現ＣＤ４＋細胞を示す）。ＣＡＲＴ奏効者からのＣＤ４＋集団において、ＣＤ４＋細胞全体の４４．７％は、ＰＤ−１を発現し、ＣＡＲ１９発現細胞の約２２．３％は、ＰＤ−１陽性であったが、ＣＡＲ１９発現細胞の２７．２％は、ＰＤ−１陰性であった（図４Ａ）。対照的に、非奏効者由来のＣＤ４＋集団には、ＣＡＲ１９発現細胞全体の有意な減少が認められ（ＣＲの４９．５％と比較して約１５．３％）、ＣＡＲ１９発現細胞の１４．７％は、ＰＤ−１陽性であったのに対し、ＰＤ−１陰性は、０．６４％に過ぎなかった（図４Ｂ）。図４Ａ及び図４Ｂを比較すると、ＣＡＲＴ奏効者（約４４．７％）に対して、非奏効者由来のはるかに高いパーセンテージのＣＤ４＋細胞がＰＤ−１を発現する（約９２．９％）ことがわかる。
【１２０５】
上述した方法及び分析を用いて、ＣＤ４＋集団及びＣＤ８＋集団のＰＤ−１発現（ＰＤ−１＋）細胞のパーセンテージを各応答群の各患者について決定した。非奏効者は、ＣＡＲ療法に応答した者（ＣＲ）と比較して、ＣＤ４＋（図４Ｃ）及びＣＤ８＋（図４Ｄ）集団の両方で高いパーセンテージのＰＤ−１＋細胞を有することが判明した。平均ＰＤ−１パーセンテージの増加は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋集団の両方で統計的に有意であった。部分奏効者（ＰＲ）は、ＣＤ４＋（図４Ｃ）及びＣＤ８＋（図４Ｄ）両集団の奏効者（ＣＲ）よりも高いパーセンテージのＰＤ−１＋細胞を示した。
【１２０６】
次に、ＣＡＲ１９発現ＣＤ４＋集団及びＣＡＲ１９発現ＣＤ８＋集団のＰＤ−１発現（ＰＤ−１＋）細胞のパーセンテージを各応答群の各患者について決定した。ＣＡＲ１９発現についてＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞を分析する工程と、ＣＡＲ１９発現細胞の同定後、ＣＡＲ１９発現細胞の集団からＰＤ−１発現を有する細胞のパーセンテージを決定する工程とを追加して、前述と同様の分析を実施した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋全集団で観察されたものと類似する傾向がＣＡＲ１９発現ＣＤ４＋及びＣＤ８＋集団についても観察され、非奏効者は、ＣＡＲ療法に応答した者（ＣＲ）と比較して、ＣＤ４＋（図５Ａ）及びＣＤ８＋（図５Ｂ）集団の両方で高いパーセンテージのＰＤ−１＋細胞を有することが判明し、平均ＰＤ−１パーセンテージの増加は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋集団の両方で統計的に有意であった。部分奏効者（ＰＲ）は、ＣＤ４＋（図５Ａ）及びＣＤ８＋（図５Ｂ）両集団の奏効者（ＣＲ）よりも高いパーセンテージのＰＤ−１＋細胞を示した。
【１２０７】
ＣＡＲ療法に対して異なる応答を有する患者由来のＰＤ−１、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３発現細胞の分布を決定するために更なる分析を実施した。ＣＤ４＋集団におけるＰＤ−１、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３発現の代表的な細胞プロフィール分析を図６に示す。細胞集団をまずＣＤ４＋及びＣＤ８＋発現について分析した。次に、ＣＤ４＋集団（又はＣＤ８＋集団、示していない）をＰＤ−１及びＣＡＲ１９発現について分析した（図６、左のプロフィール）。既述したように、非奏効者（ＮＲ）は、ＣＡＲＴ奏効者（ＣＲ）に比べ、ＰＤ−１＋全体であった細胞の有意に増加したパーセンテージを有した（ＣＲについて４４．７％ＰＤ−１陽性に対してＮＲについて約９２．９％ＰＤ−１陽性）。更に、非奏効者において、ＣＡＲ１９発現細胞は、大部分がＰＤ−１陽性であった（０．６４％ＰＤ−１陰性及びＣＡＲ＋に対して１４．７％ＰＤ−１陽性及びＣＡＲ＋）。次に、集団をＰＤ−１及びＬＡＧ３同時発現について分析した（図６、中央のプロフィール）。ＰＤ−１及びＬＡＧ３の両方を発現した細胞は、右上象限（Ｑ２）に示す。非奏効者は、ＣＡＲＴ奏効者に比べ、免疫チェックポイント阻害剤、ＰＤ−１及びＬＡＧ３の両方を発現した細胞の有意に増加したパーセンテージを有した（７．３１％に対して６７．３％）。ＴＩＭ３発現と一緒にＰＤ−１発現も分析した。図６、右側プロフィールにおいて、ボックスは、ＰＤ−１とＴＩＭ３との両方を発現する細胞を示す。ＰＤ−１及びＬＡＧ３で得られた結果と同様に、非奏効者は、ＣＡＲＴ奏効者に比べ、免疫チェックポイント阻害剤、ＰＤ−１及びＴＩＭ３の両方を発現した細胞の有意に高いパーセンテージを有した（２８．５％に対して８３．３％）。前述のようにフローサイトメトリー分析を用いて、ＰＤ−１発現細胞（ＰＤ１＋）、ＰＤ−１及びＬＡＧ３発現細胞（ＰＤ１＋ＬＡＧ３＋）、並びにＰＤ−１及びＴＩＭ３発現細胞（ＰＤ１＋ＴＩＭ３＋）のパーセンテージを各応答群の各患者について決定した。非奏効者は、ＣＡＲＴ奏効者と比較して、高いパーセンテージのＰＤ１＋ＬＡＧ３＋細胞（図７Ａ）及びＰＤ１＋ＴＩＭ３＋細胞（図７Ｂ）を有することが判明し、これは、両細胞集団について統計的に有意であった。部分奏効者も、ＣＡＲＴ奏効者と比較して高いパーセンテージの両細胞集団を示したが、その平均は、非奏効者よりも低かった。
【１２０８】
これらの結果は、ＣＡＲ療法に応答しない患者が、ＣＡＲ療法に応答するか又は部分的に応答する患者に比べ、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３）の高い発現を呈示することを示している。従って、これらの結果から、免疫チェックポイント阻害剤、例えばＰＤ−１、ＬＡＧ３、又はＴＩＭ３の発現を阻害又は低減する薬剤は、免疫チェックポイント経路（例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、又はＴＩＭ３により媒介される）を介した免疫抑制を阻止し、それによってＣＡＲ発現細胞の効力を高めるために、ＣＡＲ療法を受ける患者への投与に有用となり得ることがわかる。
【１２０９】
実施例１０：原発性ＤＬＢＣＬを有する特定の患者は、ＣＤ３＋／ＰＤ１＋二重陽性癌細胞を示す
近年、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞及びチェックポイント阻害剤の形態で癌免疫療法空間において強力な進歩が達成されているが、それらの組み合わせの治療メカニズムを探究するための高度なツールは、広く入手可能ではない。この高まる要求に対処する目的で、チェックポイント阻害剤発現を評価し、ＣＡＲ  Ｔ細胞を計数し、新規の同時局在化アルゴリズムにより腫瘍細胞と免疫細胞との相互作用を決定するために、多重ＡＱＵＡ（自動定量解析）技術を用いた頑健な定量蛍光免疫組織化学プラットフォームが開発された。この方法の有用性は、臨床前及び臨床モデル系の両方で特性決定された。Ｂ細胞リンパ腫の免疫欠損マウスモデルで一次リンパ器官中の悪性Ｂ細胞へのＣＡＲ  Ｔ細胞のホーミングを評価した。ＣＤ４、ＣＤ８、ＰＤ１及びＦＯＸＰ３発現の多重分析によるＣＡＲ  Ｔ細胞の表現型及び機能状態を決定した。更に、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）状況における併用免疫療法を可能にするために、免疫及び腫瘍細胞コンパートメントにおけるＰＤ１及びＰＤ−Ｌ１発現の形態の適応免疫耐性の出現率を、ＤＬＢＣＬ患者（ｎ＝６３）からの一次及び二次生検の両方における細胞質及び核染色により作製したランドマークによって調べた。ＣＡＲ  Ｔ試験の患者の選択を支持するために、従来の方法によって再現可能にスコアリングできない関連腫瘍抗原の発現及び出現率を定量して、客観的なカットポイントを取得した。患者の最適な選択のためのこれらの定量的多重化ＩＨＣ法は、次の新しい併用免疫療法試験に使用することができる。
【１２１０】
ＤＬＢＣＬ組織試料のためのイメージングの試料調製、イメージング、及び分析を原発性ＤＬＢＣＬ（ｎ＝４９）及び続発性ＤＬＢＣＬ（１５）ヒト患者に対して実施した。
【１２１１】
試料調製。ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料を脱パラフィン処理した。次に、スライドを一連のキシレンからアルコール洗浄剤で再水和した後、蒸留水中でインキュベートした。次に、高圧及び高温条件を用いて、熱誘導による抗原回収を実施し、冷却させた後、Ｔｒｉｓ緩衝食塩水に移した。続いて、染色を実施したが、その際、次の工程を実施した。最初に、内在性ペルオキシダーゼを遮断した後、非特異的抗体染色を低減するためにタンパク質遮断溶液と一緒にインキュベートした。次に、スライドをマウス抗ＰＤ１一次抗体で染色した。その後、スライドを洗浄してから、抗マウスＨＲＰ二次抗体と一緒にインキュベートした。スライドを洗浄した後、ＴＳＡ＋Ｃｙ（登録商標）５（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてＰＤ−１染色を検出した。次に、マイクロ波により一次及び二次抗体試薬を除去した。スライドを再度洗浄してから、ウサギ抗ＣＤ３一次抗体で染色した。スライドを洗浄した後、抗ウサギＨＲＰ二次抗体と４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）のカクテルとを一緒にインキュベートした。スライドを洗浄した後、ＴＳＡ−Ｃｙ（登録商標）３（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてＣＤ３染色を検出した。スライドを最後に洗浄した後、封入剤と一緒にカバーガラスを載せて室温で一晩乾燥させた。
【１２１２】
試料イメージング及び分析。次に、Ｖｅｃｔｒａソフトウェアバージョン２．０．８（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用し、Ｖｅｃｔｒａ  ２  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｓｌｉｄｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて蛍光画像を取得した。最初に、ＤＡＰＩを用いた４×倍率でスライドのモノクロームイメージングを実施した。自動アルゴリズム（ｉｎＦｏｒｍを用いて開発された）を使用して、組織を含有するスライドの領域を識別した。
【１２１３】
組織を含有するとして識別されたスライドの領域をＤＡＰＩ（青）、Ｃｙ（登録商標）３（緑）、及びＣｙ（登録商標）５（赤）と結合したチャンネルについて４×倍率でイメージングして、ＲＧＢ画像を作製した。これらの４×倍率画像は、ビューセレクターの視界内において、自動エンリッチメントアルゴリズム（ｉｎＦｏｒｍを用いて開発された）を用いて処理することにより、最も高いＣｙ（登録商標）発現に従って可能な２０×倍率視野を識別及びランク付けした。
【１２１４】
上位４０の視野をＤＡＰＩ、Ｃｙ（登録商標）３、及びＣｙ（登録商標）５波長を介して２０×倍率でイメージングした。生画像を容認可能性について審査し、焦点が外れている、腫瘍細胞が一切ない、高度に壊死性である、又は予想される抗体局在化と無関係の高レベルの蛍光シグナル（例えば、バックグラウンド染色）を含む画像は、分析前に排除した。容認された画像は、ＡＱＵＡｄｕｃｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて処理し、各蛍光団をスペクトル分離装置により個々のチャンネルにスペクトル分離し、個別のファイルとして保存した。
【１２１５】
処理済のファイルは、ＡＱＵＡｎａｌｙｓｉｓ（商標）を用いて、又はＡＱＵＡｓｅｒｖｅ（商標）を用いた完全自動プロセスにより、更に分析した。各ＤＡＰＩ画像をセルマスカーにより処理して画像内の全ての細胞核を同定した後、２ピクセル拡大することにより、細胞全体の近似サイズを表示した。これによって得られたマスクは、その画像内の全ての細胞を表示した。各Ｃｙ（登録商標）５画像をバイオマーカーマスカーにより処理して、ＰＤ−１陽性である全ての細胞のバイナリマスクを作製した。各Ｃｙ（登録商標）３画像をバイオマーカーマスカーにより処理して、ＣＤ３陽性である全ての細胞のバイナリマスクを作製した。ＰＤ−１陽性及びＣＤ３陽性の全ての細胞のバイナリマスクを合わせて、ＰＤ−１及びＣＤ３について二重陽性である全ての細胞のバイナリマスクを作製した。陽性率計算機を用い、ピクセルで測定され、面積計算機により決定された全てのＰＤ−１陽性腫瘍細胞のマスクの総面積を、ピクセルで測定され、面積計算機により決定された全てのＣＤ３陽性腫瘍細胞のマスクの総面積で割ることにより、ＰＤ−１を発現する全てのＣＤ３細胞のバイオマーカー陽性率（ＰＢＰ）％を導き出した。原発性及び続発性ＤＬＢＣＬヒト試料中でＰＤ−１を発現する全てのＣＤ３陽性細胞のＰＢＰの代表値を図８に示す。ＣＤ３及びＰＤ−１状態は、原発性におけるＣＤ３＋／ＰＤ−１＋細胞の出現率が続発性ＤＬＢＣＬ状況より高いことを示したが、これは、単剤又は併用療法のいずれかの患者を選択する機会を提供するものである。
【１２１６】
類似の実験を実施したが、この場合、原発性ＤＬＢＣＬヒト患者由来のＤＬＢＣＬ組織試料で、ウサギ抗ＰＤＬ１一次抗体及びＴＳＡ＋Ｃｙ５（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてＰＤ−Ｌ１を検出した。同じ試料でＰＤ１及びＣＤ３も検出した。この実験により、腫瘍微小環境は、ＰＤ１、ＣＤ３及びＰＤＬ１を発現する細胞を含むことが判明した。実験は、ＣＤ３＋ＰＤ１＋である細胞の亜集団も同定した（データは示していない）。これらの結果は、腫瘍微小環境が、ＰＤ１＋又はＰＤ−Ｌ１細胞に特異的な薬剤で標的化することができる免疫抑制細胞を育成するモデルを支持するものである。
【１２１７】
実施例１１：ＤＬＢＣＬ細胞を含む試料中のＣＤ１９及びＰＤ−Ｌ１の相互排他的な発現
試料調製。ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料を脱パラフィン処理した。次に、スライドを一連のキシレンからアルコール洗浄剤で再水和した後、蒸留水中でインキュベートした。次に、高圧及び高温条件を用いて、熱誘導による抗原回収を実施し、冷却させた後、Ｔｒｉｓ緩衝食塩水に移した。続いて、染色を実施したが、その際、次の工程を実施した。最初に、内在性ペルオキシダーゼを遮断した後、非特異的抗体染色を低減するためにタンパク質遮断溶液と一緒にインキュベートした。次に、スライドをウサギ抗ＰＤＬ１一次抗体で染色した。その後、スライドを洗浄してから、抗ウサギＨＲＰ二次抗体と一緒にインキュベートした。スライドを洗浄した後、ＴＳＡ＋Ｃｙ（登録商標）３（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてＰＤＬ１染色を検出した。次に、マイクロ波により一次及び二次抗体試薬を除去した。スライドを再度洗浄してから、マウス抗ＣＤ１９一次抗体で染色した。スライドを洗浄した後、抗マウスＨＲＰ二次抗体と４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）のカクテルとを一緒にインキュベートした。スライドを洗浄した後、ＴＳＡ−Ｃｙ（登録商標）５（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてＣＤ１９染色を検出した。スライドを最後に洗浄した後、封入剤と一緒にカバーガラスを載せて室温で一晩乾燥させた。
【１２１８】
試料イメージング及び分析。次に、Ｖｅｃｔｒａソフトウェアバージョン２．０．８（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用し、Ｖｅｃｔｒａ  ２  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｓｌｉｄｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて蛍光画像を取得した。最初に、ＤＡＰＩを用いた４×倍率でスライドのモノクロームイメージングを実施した。自動アルゴリズム（ｉｎＦｏｒｍを用いて開発）を使用して、組織を含有するスライドの領域を識別した。
【１２１９】
組織を含有するとして識別されたスライドの領域をＤＡＰＩ（青）、Ｃｙ（登録商標）３（緑）、及びＣｙ（登録商標）５（赤）と結合したチャンネルについて４×倍率でイメージングして、ＲＧＢ画像を作成した。これらの４×倍率画像は、ビューセレクターの視界内において、自動エンリッチメントアルゴリズム（ｉｎＦｏｒｍを用いて開発）を用いて処理することにより、最も高いＣｙ（登録商標）３発現に従って可能な２０×倍率視野を識別及びランク付けした。
【１２２０】
上位４０の視野をＤＡＰＩ、Ｃｙ（登録商標）３、及びＣｙ（登録商標）５波長を介して２０×倍率でイメージングした。生画像を容認可能性について審査し、焦点が外れている、腫瘍細胞が一切ない、高度に壊死性である、又は予想される抗体局在化と無関係の高レベルの蛍光シグナル（例えば、バックグラウンド染色）を含む画像は、分析前に排除した。容認された画像は、ＡＱＵＡｄｕｃｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて処理し、各蛍光団をスペクトル分離装置により個々のチャンネルにスペクトル分離し、個別のファイルとして保存した。
【１２２１】
処理済のファイルは、上記実施例で説明したように、ＡＱＵＡｎａｌｙｓｉｓ（商標）を用いて、又はＡＱＵＡｓｅｒｖｅ（商標）を用いた完全自動プロセスにより、更に分析した。
【１２２２】
原発性及び続発性ＤＬＢＣＬヒト試料中の全てのＣＤ１９陽性及びＰＤ−Ｌ１陽性細胞のＰＢＰの代表的な値を図９に示す。ＣＤ１９及びＰＤＬ１発現は、ＤＬＢＣＬ試料において様々であった。ＣＤ１９及びＰＤＬ１発現は、相互排他的な傾向であった。即ち、概して、特定の細胞は、ＣＤ１９又はＰＤ−Ｌ１を発現したが、両方を発現しなかった。理論に拘束されることを望まないが、これは、ＣＤ１９は、ＤＬＢＣＬ腫瘍細胞に発現されるのに対し、ＰＤ−Ｌ１は、非腫瘍細胞、例えば腫瘍微小環境を支持する細胞に発現されるためであろう。この知見は、ＣＤ１９阻害剤（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞）とＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の阻害剤との併用療法が、これらの２つの細胞集団を標的化する上で有用となり得ることを示唆している。
【１２２３】
例えば、ＡＱＵＡ分析がＣＡＲＴ１９効力をモニタリングする能力を証明するために類似の実験を実施した。この試験では、ＣＡＲＴ１９＋Ｊｕｒｋａｔ細胞及びＣＤ１９＋ＲＥＨ細胞と共に混合細胞株を含む試料中のＣＤ１９、ＣＤ３、及びＣＡＲＴ１９核酸をモニタリングした。ＣＤ１９及びＣＤ３タンパク質は、抗体により検出し、ＣＡＲＴ１９は、ＣＡＲ核酸の３’ＵＴＲに対するＲＮＡプローブを用いて検出した。この実験から、細胞株試料は、ＣＤ１９、ＣＤ３、及びＣＡＲＴ１９を発現する細胞を含むことが判明した（データは示していない）。この実験は、細胞株試料が、ＣＤ３＋／ＣＡＲＴ１９＋である細胞の亜集団を含むことも明らかにした（データは示していない）。近接分析を実施し、これにより、ＣＡＲＴ１９細胞は、ＣＤ１９＋細胞と物理的に近接していることがわかった（データは示していない）。これらの実験は、ＣＤ３＋ＣＡＲＴ１９細胞が、ＣＤ１９＋細胞を含む腫瘍微小環境に浸潤し、ＣＤ１９及びＣＡＲＴ１９細胞の物理的位置がＣＡＲＴ１９療法の効力に変換されるモデルを支持する。
【１２２４】
実施例１２：応答を高めるためにＣＤ１９標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞と組み合わせたペンブロリズマブ
注記：別に記載されない限り、この実施例で使用されるペンブロリズマブの用量は、２００ｍｇの用量に達するまで患者の体重に基づいて２ｍｇ／ｋｇであり、２００ｍｇの用量に達した時点から２００ｍｇの固定用量を投与した。
【１２２５】
ＣＤ１９標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞は、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）において９０％を超える完全奏効（ＣＲ）率を示した。患者のサブセットは、ＣＡＲ  Ｔ療法に応答しないか、又はＣＡＲ  Ｔ細胞の持続性が低いために再発する恐れがある。この実施例に記載する試験では、ＰＤ−１チェックポイント経路の阻害がＣＡＲ  Ｔ細胞機能及び持続性を改善し得るか否かを調べた。
【１２２６】
マウス（ＣＴＬ０１９）又はヒト化（ＣＴＬ１１９）抗ＣＤ１９ＣＡＲ  Ｔ細胞で処置した患者は、ＣＡＲ  Ｔ細胞注入後１４日〜２ヶ月で開始する１〜３用量のＰＤ−１阻害剤ペンブロリズマブの投与を受けた。再発／難治性Ｂ−ＡＬＬを有する４人の小児は、ＣＴＬ０１９（ｎ＝１）又はＣＴＬ１１９（ｎ＝３）注入後、部分奏効／無奏効（ｎ＝３）又はＣＡＲ  Ｔ細胞低持続性の病歴（ｎ＝１）のためにペンブロリズマブの投与を受けた。ペンブロリズマブは、良好な耐容性を示し、２人に発熱があったが、自己免疫毒性はなかった。ペンブロリズマブの投与後４人の小児全員に、検出可能な循環ＣＡＲ＋Ｔ細胞の増加（フローサイトメトリーによるＣＤ３＋細胞の％）及び／又は長期にわたる検出（以前の注入と比較して）が観察された。
【１２２７】
患者１及び２は、先のマウスＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞後のＣＤ１９＋再発のためにＣＴＬ１１９を受け、ＣＴＬ１１９に対する部分奏効又は無奏効のためにペンブロリズマブで処置した。両方とも、ペンブロリズマブの投与後、進行性疾患を有し、ＣＤ１９発現を１人が保持し、もう１人が低減した。
【１２２８】
２人の患者は、ペンブロリズマブの追加に対して客観的奏効を示した。患者３の場合、ＣＴＬ０１９及びＣＴＬ１１９の両方を用いた先の処置では、ＣＡＲ  Ｔ細胞低持続性のＣＲがもたらされ、その後、ＣＤ１９＋が再発した。ペンブロリズマブと組み合わせた反復ＣＴＬ１１９融合後、患者３は、延長されたＣＡＲ  Ｔ細胞持続性（初期ＣＴＬ１１９注入後３６日までの喪失と比較して５０日に検出可能）を有するＣＲを達成した。患者４は、ＣＡＲ  Ｔ細胞処置の治療歴がなく、骨髄中の形態学的奏効にもかかわらず、ＣＴＬ０１９融合後２８日目にリンパ節転移が広がったため、ペンブロリズマブを受けた。ペンブロリズマブ投与後のＣＡＲ  Ｔ細胞増殖は、ＣＴＬ０１９後３ヶ月までにＰＥＴ−ａｖｉｄ疾患の顕著な軽減を伴った。
【１２２９】
これらの結果から、ペンブロリズマブは、ＣＡＲ  Ｔ細胞処置と安全に併用され、ＣＡＲ＋Ｔ細胞検出の増大又は延長をもたらすと共に、客観的奏効が観察されたことがわかる。従って、免疫チェックポイント経路は、ＣＡＲ  Ｔ細胞処置に対する応答に影響をもたらし得る。
【１２３０】
実施例１３：再発した急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）のＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する応答を高めるためのペンブロリズマブ
注記：別に記載されない限り、この実施例で使用されるペンブロリズマブの用量は、２００ｍｇの用量に達するまで患者の体重に基づいて２ｍｇ／ｋｇであり、２００ｍｇの用量に達した時点から２００ｍｇの固定用量を投与した。
【１２３１】
試験設計
ＣＡＲ  Ｔ細胞の低持続性を示したＣＤ１９  ＣＡＲ発現Ｔ細胞で先に処置した再発性難治性ＡＬＬ患者は、ペンブロリズマブを含むか又は含まないＣＡＲ  Ｔ細胞の反復注入を受けるのに適格であった。Ｒ／Ｒ  ＡＬＬ患者は、臨床試験に登録した（ＮＣＴ０２３７４３３３）。患者は、最初のＣＡＲ  Ｔ細胞の注入前に化学療法及びリンパ球枯渇を受けた。１日目にベースライン評価を実施した後、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＣＴＬ１１９）の最初の注入を実施した。２８日目に応答について患者を評価し、経過観察評価を３、６、９及び１２ヶ月目に実施した。微小残存病変（ＭＲＤ）、Ｂ細胞形成不全及びＣＴＬ１１９持続性について患者をモニタリングした。ＣＴＬ１１９持続性の状態に基づいて患者にＣＴＬ１１９を再注入した。一部の患者は、再注入、又はＣＲＳからの回復から少なくとも２週間後にペンブロリズマブでも処置した。図１０は、試験設計を示す。
【１２３２】
結果
症例１：部分奏効のためのペンブロリズマブ
症例１は、先のＣＤ１９  ＣＡＲ療法に対して応答なし（ＮＲ）のＲ／Ｒ  ＡＬＬを有する患者を表す。ｈｕＣＡＲＴ１９の増殖がこの患者に観察され、２８日目に患者は、１．２％ＣＤ１９＋ＭＲＤの完全奏効（ＣＲ）として認定された。注入から７週間後、患者は、ＣＤ１９＋疾患を再発し、ｈｕＣＡＲＴ１９は、低レベルであった。続いて、５２日目にペンブロリズマブを患者に投与した。ｈｕＣＡＲＴ１９の控え目な増加が観察され、末梢血芽球の一過性クリアランスに続いて疾患の進行が起こった。
【１２３３】
症例２：応答なしのためのペンブロリズマブ
症例２は、先のＣＤ１９  ＣＡＲ療法から１２ヶ月後にＣＤ１９＋再発を伴うＲ／Ｒ  ＡＬＬを有する患者を表す。この患者ではｈｕＣＡＲＴ１９の良好な増殖が観察された。２８日目に、患者は、ＣＤ１９＋再発と共にＮＲとして認定された。６週間後、この患者にｈｕＣＡＲＴ１９を注入し、再注入から１４日後にペンブロリズマブでの処置を行った。細胞の持続性延長と共に、ｈｕＣＡＲＴ１９の良好な増殖が観察された。再注入後２８日目の評価で、患者は、変動性のＣＤ１９発現を伴う持続性の疾患を示した。
【１２３４】
症例３〜５：低持続性のためのペンブロリズマブ
症例３、４及び５は、先のｈｕＣＡＲＴ１９の注入を受けたが、ＣＡＲ  Ｔ細胞の低持続性を示したＲ／Ｒ  ＡＬＬを有する患者を表す。これらの患者は、良好な初期ｈｕＣＡＲＴ１９増殖を有した。３人の患者全員にｈｕＣＡＲＴ１９の再注入を行い、その１４日後に１用量のペンブロリズマブを投与した。
【１２３５】
症例３は、ｈｕＣＡＲＴ１９の以前の注入から９ヶ月後にＣＤ１９＋再発を伴うＲ／Ｒ  ＡＬＬを有した患者を表す。ｈｕＣＡＲＴ１９の最初の注入後２８日目の評価は、ＣＲを示し、ＭＲＤは検出されなかった。ＣＡＲ  Ｔ細胞は、増殖したが、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、短期間のみ持続し、Ｂ細胞の回復は、２ヵ月後であった。注入から１５ヶ月後、患者は、再発し、１７ヶ月でｈｕＣＡＲＴ１９の再注入を行い、その１４日後に１用量のペンブロリズマブを投与した。この患者は、３週間毎に１回投与されるペンブロリズマブにより、持続性の延長を示すと共に、Ｂ細胞形成不全が続いた。図１１は、ペンブロリズマブ処置の存在又は非存在下における、ｈｕＣＡＲＴ１９注入から数日後のｈｕＣＡＲＴ１９細胞のパーセンテージを示す。ペンブロリズマブは、ｈｕＣＡＲＴ１９細胞の持続性を増大する。
【１２３６】
症例４は、先のｈｕＣＡＲＴ１９注入から９ヶ月後にＣＤ１９＋再発を伴うＲ／Ｒ  ＡＬＬを呈示した患者を表す。ｈｕＣＡＲＴ１９の最初の注入後２８日目の評価は、ＣＲを示し、ＭＲＤは検出されなかった。良好なＣＡＲ  Ｔ細胞増殖が観察されたが、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、短期間のみ持続し、Ｂ細胞の回復は、２ヵ月で観察された。注入から１２ヶ月後、患者は、再発し、１４ヶ月でｈｕＣＡＲＴ１９の再注入を行い、その１４日後に１用量のペンブロリズマブを投与した。ｈｕＣＡＲＴ１９の増殖は観察されず、２回目の注入後の２８日目の評価から、反応なし（ＮＲ）が明らかになると共に、ＣＤ１９＋ＭＲＤが検出された。
【１２３７】
症例５は、先のｈｕＣＡＲＴ１９注入から１２ヶ月後にＣＤ１９＋再発を伴うＲ／Ｒ  ＡＬＬを有するとして認定された患者を表す。ｈｕＣＡＲＴ１９の最初の注入後２８日目の評価は、ＣＲを示し、ＭＲＤは検出されなかった。良好なＣＡＲ  Ｔ細胞増殖が観察されたが、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、短期間のみ持続した。最初の注入から６ヶ月後、患者は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の短い持続性により、２回目の注入を受けた。最初の注入から８ヶ月後、患者は、もう１回ｈｕＣＡＲＴ１９の注入を受け、その１４日後に１用量のペンブロリズマブを受けた。この患者は、３週間毎に１回投与されるペンブロリズマブにより、持続性延長を示すと共に、Ｂ細胞形成不全が続いた。図１２は、ｈｕＣＡＲＴ１９のみを受けた患者（ｎ＝４）及びｈｕＣＡＲＴ１９とペンブロリズマブを受けた患者（ｎ＝７）のＢ細胞回復の確率を比較するグラフを示す。
【１２３８】
症例６：リンパ腫様疾患のためのペンブロリズマブ
症例６は、骨髄中のＭ３期のＲ／Ｒ  ＡＬＬと共に、広範囲のリンパ腫様疾患（ＬＡＤ）を有する患者を表す。この患者は、ＣＡＲＴ１９の注入を受け、細胞は良好に増殖した。２８日目の評価は、骨髄中にＣＲを示したが、ＰＥＴ分析は、リンパ節中への広範囲の取り込みを示した。患者には注入後３２日目にペンブロリズマブを投与し、２〜３週間毎に１回投与した。図１３に示すように、ペンブロリズマブ処置は、ＣＡＲＴ１９細胞のパーセンテージを増加した。ペンブロリズマブによる処置後、ＰＥＴａｖｉｄ病変の減少も認められた（図１４）。
【１２３９】
実施例１４：再発性／難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫患者（ｒ／ｒＤＬＢＣＬ）においてペンブロリズマブと組み合わせたＣＤ１９標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞
研究実施の根拠
ＣＤ１９標的化ＣＡＲＴ療法（ＣＴＬ０１９）は、３６〜４５％の患者のｒ／ｒＤＬＢＣＬにおいて潜在的に治療性である。しかし、ＰＤ−Ｌ１は、ＤＬＢＣＬで高度に発現されるため、形質導入Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９細胞上でのＰＤ−１の活性化を引き起こす。ＣＴＬ０１９細胞上でＰＤ−１の活性化は、ＣＴＬ０１９療法の機能を損なう。抗ＰＤ−１による処置は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、ＤＬＢＣＬを有する患者からのＣＴＬ０１９細胞を再活性化して、奏効率を改善することができる。
【１２４０】
ｒ／ｒＤＬＢＣＬにおけるＣＴＬ０１９のＣ２２０１（ＪＵＬＩＥＴ）試験の初期分析から、相関するＣＴＬ０１９最終製剤中のチェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１及びＴＩＭ３）のより高い発現は、奏効者と比較して、ＣＴＬ０１９療法に対する非奏効者である患者に観察されることが判明した。サイトカイン放出症候群がこの試験の患者の５７％（９９人のうちの５７．６人）に観察され、そのうちの１１％は、グレード１  ＣＲＳを有し、２３％は、グレード２  ＣＲＳを有し、１５％は、グレード３  ＣＲＳを有し、８％は、グレード４  ＣＲＳを有した。ＣＲＳを有した患者のうち、ＣＲＳの開始までの平均時間（日）は、４．１日であり、中央値は、３．０日であった。最も早い患者が発症したＣＲＳは、ＣＴＬ０１９投与から１日後であり、ＣＲＳが観察された最も遅い時点は、ＣＴＬ０１９投与から５１日後であった。これらの患者のＣＲＳの平均持続時間は、８．３日であり、中央値は、７．０日であり、ＣＲＳの持続時間の範囲は、全患者で２〜３０日であった。平均して、グレード３又はグレード４  ＣＲＳの場合、発症までに４．２日を要した。グレード３又はグレード４  ＣＲＳが観察された最も早い時点は、２日であり、グレード３又はグレード４  ＣＲＳが観察された最も遅い時点は、８日であった。
【１２４１】
ｒ／ｒＤＬＢＣＬのＡ２１０１Ｊ（ＤＬＢＣＬ）試験では、チェックポイント阻害剤（例えば、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１）のより高度の発現は、奏効者から得られた試料と比較して、生検試料中及び非奏効者からインビボで採取したＣＴＬ０１９細胞中に観察された。リンパ節及び骨髄試料の免疫組織化学分析から、進行性疾患（ＰＤ）を有する患者において、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１のより高度の発現が示された。更に、ｒ／ｒＤＬＢＣＬにおいてペンブロリズマブを調べるこの試験では、ＣＴＬ０１９を受けた後に増悪した９人の患者のうちの５人がペンブロリズマブによる処置に応答したこともわかった。ペンブロリズマブに応答した患者にＣＲＳ事象は観察されず、奏効期間（ＤｏＲ）は１年を超えた。
【１２４２】
総合すると、これらの試験からのデータは、ＣＴＬ０１９と併用した抗ＰＤ−１療法が有効な治療レジメンとなり得ることを示唆するものであり、この治療レジメンは、より高い総合及び完全奏効率によって立証されるように、移植に不適格であるｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者に対して治癒の可能性をもたらす。抗ＰＤ−１及びＣＴＬ０１９の併用も、ＣＴＬ０１９単独及び別の治療選択と比較すると、持続的な奏効期間を示した。併用療法は、ＣＴＬ０１９単剤療法と同様の副作用プロフィールを有し、それ以外の望ましくない長期作用はない。従って、患者の転帰改善を伴うペンブロリズマブとＣＴＬ０１９の併用は、それをより優れた且つ費用効果的な治療レジメンにする。加えて、併用療法は、互いに短期間内に投与することができ、例えば、抗ＰＤ−１抗体は、例えば、ＣＲＳを発症していない患者へのＣＴＬ０１９投与から直ちに（例えば、５〜１５日後）投与することができる。ＣＴＬ０１９療法後ＣＲＳを有する患者については、例えば、ＣＲＳの解消後に抗ＰＤ−１抗体を投与することができる。
【１２４３】
試験設計
ｒ／ｒ（ＪＵＬＩＥＴ）ＤＬＢＣＬ患者集団におけるＣＴＬ０１９とペンブロリズマブとの同時投与の第Ｉ／ＩＩ相試験を実施する。単一アーム試験には２０〜２５人の患者が登録される予定であり、用量タイミング設定の導入期（ｒｕｎ−ｉｎ）を含む。移植に適格ではないｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者がこの試験に参加する予定である。治療法の開始５週間前（−５週目）に自己ＣＴＬ０１９細胞を作製し、凍結保存する。この期間にサルベージ療法を開始し、ＣＴＬ０１９注入の１週間前（−１週目）に疾患の病期決定を実施する。次に、ＣＴＬ０１９を患者に注入する。ペンブロリズマブ療法をＣＴＬ０１９注入から少なくとも５日後に投与する。３週間毎に１回３００ｍｇの用量で６回のペンブロリズマブ投与を行う。注入から最初の６ヶ月間では毎月、７〜２４ヶ月目では３ヶ月毎、その後では６ヶ月毎に患者を評価する。患者は、遺伝子移入プロトコルのＦＤＡ規定に従って１５年間経過観察する。
【１２４４】
この試験の結果は、９０人の患者を含む２アームランダム割付第ＩＩ相登録試験の開始を導くことになる。移植に適格ではないｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者がこの試験に登録される予定である。第ＩＩ相試験では、患者６０人の１コホートは、ＣＴＬ０１９と組み合わせたペンブロリズマブの同時投与を受け、患者３０人の別の１コホートは、ＣＴＬ０１９単独の投与を受けることになる。この試験の主な目的は、ペンブロリズマブと組み合わせたＣＴＬ０１９の効果を評価することである。この試験の主要エンドポイントは、処置から３ヶ月後の患者の奏効率（ＲＲ）である。この試験の副次目的は、ＣＴＬ０１９を単独で受けた患者と比較して、併用療法を受けた患者同士の３ヵ月後のＲＲの差を評価することである。
【１２４５】
実施例１５：先にＣＤ１９標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞で治療した再発性／難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫患者（ｒ／ｒＤＬＢＣＬ）のためのペンブロリズマブ療法
ＣＴＬ０１９注入後に増悪が記録されたｒ／ｒＤＬＢＣＬ患者において、ペンブロリズマブを用いた臨床試験を開始した。増悪が観察及び記録された直後に１回目用量のペンブロリズマブを投与した。ペンブロリズマブは、２年にわたって３週間毎に１回投与する。患者は、ＣＴＬ０１９注入から約２８日後にペンブロリズマブを受けた。
【１２４６】
先にＣＴＬ０１９を受け、後にペンブロリズマブで処置した進行性ＤＬＢＣＬを有する患者９人のうちの５人は、この療法に対して応答を示した。最も長い奏効期間は、１年を超えた。これらの患者にＣＲＳは観察されなかった。
【１２４７】
実施例１６：難治性／再発性ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する患者における非ウイルス性、ＲＮＡ再指向自己抗ＣＤ１９Ｔ細胞
背景
抗ＣＤ１９自己キメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲＴ１９）細胞を用いた細胞療法は、Ｂ細胞由来のいくつかの血液系悪性疾患において有望な転帰を示したが、この療法は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）患者で研究されていない。腫瘍性ＨＬ  Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（ＨＲＳ）細胞は、ＣＤ１９陰性であると考えられるが、循環ＣＤ１９陽性クローンＨＲＳ細胞前駆体、及びＨＲＳ腫瘍微小環境内のＣＤ１９陽性反応性細胞は、ＨＬにおけるＣＡＲＴ１９の潜在的治療標的となる。
【１２４８】
方法
他の治療的処置オプションがなく、２つ以上の標準的サルベージ選択療法に対して非応答性であるか、又は非耐性である再発性／難治性ＨＬ患者におけるＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞注入の実現可能性、安全性及び効果を評価するために、非盲検予備試験を設計した。これらの患者には、一過性ＣＤ１９標的化を可能にし、且つ短期及び長期毒性に関するウィンドウを制限するために、レンチウイルス導入で操作したより持続性の細胞ではなく、キメラ抗ＣＤ１９免疫受容体ｓｃＦｖ（ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞）をエレクトロポレーションした自己Ｔ細胞を使用した。フェレーシス及びＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞の製造後、患者は、体重８０ｋｇ未満の患者の場合、８×１０５〜１．５×１０６ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞／ｋｇ／用量、体重８０ｋｇを超える患者の場合、１×１０８ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞／ｋｇ／用量（±２０％）の最大６回の静脈内（ＩＶ）注入を受ける。生着を促進するために、１回目及び４回目のＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞用量前に静脈内シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。試験全体を通して、所定の時点において、Ｃｈｅｓｏｎ  ２００７基準を用いた安全性及び応答評価を測定した。主要な目的は、再発性ＨＬにおけるＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞の製造実現可能性、安全性及び生着を記述することであった。副次目的は、総合奏効率（ＯＲＲ）により効果、及びまた全身可溶性免疫因子に対するＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞の作用を推定することであった。
【１２４９】
結果
５人の患者が登録され、ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９が製造され、４人の患者が注入されて、応答及び／又は毒性について評価された。登録時の５人の患者の特徴は以下を含む：ｉ）年齢中央値は、２４歳であり、その範囲は、２１〜４２歳である、ｉｉ）４人の患者は、ＩＶ期／節外病変を有する、ｉｉｉ）以前の治療法の数の中央値は、５であり、その範囲は、０〜８療法であった、ｉｖ）４人の患者は、幹細胞移植を有した（そのうちの３人の患者は、自己幹細胞移植を有し、１人は、自己及び同種幹細胞移植の両方を有した）。ＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞で処置した患者のうち、３人の患者（６０％）は、以前ＰＤ−１阻害剤を受けて増悪した。フェレーシス時の絶対リンパ球数中央値は、１，０３０ｍｍｏｌ／μＬ（範囲：８３０〜２，６５０）であった。患者全員についてＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９の製造が成功した。２人の患者は、架橋化学療法を必要とし、そのうちの１人の患者は、ブレンツキシマブを受け、もう１人の患者は、ベンダムスチンとペンブロリズマブとを受けた。４人の処置患者全員がプロトコルに従ってシクロホスファミドと一緒にリンパ球枯渇処置を受けた。ＣＡＲＴ１９細胞／ｋｇ／用量の数の中央値は、１．５×１０６（範囲：７．３×１０５〜１．５２×１０６）であった。各患者は、２週間の期間にわたってＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９細胞の６回の個別用量又は注入を受けた。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて、８０％の注入後直ちに抹消血試料中にＲＮＡ  ＣＡＲＴ１９を一過性検出した（図１４）。試験に関係する死亡又はグレード３〜４の非血液系毒性はなかった。最も一般的なグレード１〜２毒性は、３人の患者に認められた一過性の頭痛、及び２人の患者に認められた不眠症を含んだ。サイトカイン放出症候群のエビデンスはなかった。注入から１ヶ月後の総合奏効率（ＯＲＲ）は、５０％であり、１人の完全奏効（ＣＲ）と１人の部分奏効（ＰＲ）とが観察された。もう１人の患者は、安定疾患（ＳＤ）を有した。ＣＲ患者は、３ヶ月後に増悪し、ＰＲ患者は、他の治療法を受けるために試験から外れた。ＳＤを有する患者は、３ヶ月後に増悪した。現在、２人の患者がＰＤ−１阻害剤でＣＲである。１人の患者は、レナリドミドでＰＲであり、１人は進行性疾患のために死亡した。明らかな長期の毒性は見られなかった。
【１２５０】
結論
これらのデータは、非ウイルス性、ＲＮＡ再指向ＣＡＲＴ１９細胞を用いた細胞療法が再発性／難治性ＨＬ患者において実現可能且つ安全であることを示唆している。
【１２５１】
均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的態様を参照して開示しているが、本発明の他の態様及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような態様及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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