(57)【要約】  本発明は、例えば、ＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合する、１つより多いＩＳＶＤまたはナノボディを含む多重特異性分子を提供する。これらの分子は、かかる分子を投与された対象の体内で先在抗体による結合の発生を低減させるように遺伝子改変されている。かかる分子を使用して免疫応答を増強する方法、がんを治療する方法および／または感染性疾患を治療する方法が提供される。【選択図】図１４Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＰＤ１に結合する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）、および、次の残基セット：
・ＶＲＶＴＶＬ（配列番号１９５のアミノ酸３３−３８）、
・ＡＤＳＱＶＴＥＶＣ（配列番号１９５のアミノ酸４１−４９）；および
・ＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧ（配列番号１９５のアミノ酸９３−１０６）；
のうちの１または複数においてヒトＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ、
を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質であって、
ここでＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤおよび／またはＰＤ１に結合するＩＳＶＤは、残基１１および８９において変異を含み、ここで前記残基番号はＫａｂａｔ残基番号であり；
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項２】
・アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）またはＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶである）またはＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹ（配列番号７）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）を含むＣＤＲ３
を含む、ＰＤ１に結合する１または複数のＩＳＶＤ、および
・アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）またはＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）またはＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）を含むＣＤＲ３
を含む、ＣＴＬＡ４に結合する１または複数のＩＳＶＤ
を含み、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項３】
ＰＤ１に結合するＩＳＶＤが、アミノ酸配列：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ  ＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡ  ＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫ  ＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１３５）を含み；そして
ＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤが、アミノ酸配列：
ＸＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ
ＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１４３）であって、ここでＸはＤまたはＥである；
または
Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＸ２ＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９６）であって、ここでＸ１はＤまたはＥであり、Ｘ２はＳ、Ｖ、Ｇ、Ｒ、Ｑ、Ｍ、Ｈ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ａ、ＹまたはＰである
を含み、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、請求項１〜２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項４】
各々のＩＳＶＤの間にペプチドリンカーを含む、請求項１〜３のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項５】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項６】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項７】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項８】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項９】
アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８６）を含むペプチドリンカーを含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１０】
配列番号１４６、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１１】
アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳ（配列番号１９９）またはＳＦＧＭＳ（配列番号１９９のアミノ酸６−１０）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００）またはＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００のアミノ酸１−１０）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号２０１）を含むＣＤＲ３
を含むヒト血清アルブミンＩＳＶＤである半減期エクステンダーを含む、請求項１〜４または９のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１２】
ヒト血清アルブミンに結合し、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧ  ＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬ  ＶＴＶＳＳＡ
（配列番号１４４）
を含むＩＳＶＤである半減期エクステンダーを含む、請求項１〜１１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１３】
アラニンであるＣ末端エクステンダーを含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１４】
ＣＴＬＡ４および／またはＰＤ１に結合する、請求項１〜１３のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をＰＤ１およびＣＴＬＡ４への結合から交差遮断する、結合性物質。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含み、さらなる治療剤を伴ってもよい、注入装置または容器。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１８】
配列番号１４５、１４８、１５０または１５２に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１７のポリヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１７〜１８のいずれか一項のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか一項のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入すること、および宿主細胞を培地中で前記ポリヌクレオチドからの前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の発現に好都合な条件下で培養することを含み、そして、前記宿主細胞および／または前記培地からＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を精製することを含んでもよい、請求項１〜１５のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を作成する方法。
【請求項２２】
請求項２１の方法により生産される、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項２３】
ＰＤ１を、さらなる治療剤を伴ってもよい請求項１〜１５および２１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質と接触させることを含む、前記ＰＤ１がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２に結合することを防ぐ方法。
【請求項２４】
ＣＴＬＡ４を、さらなる治療剤を伴ってもよい請求項１〜１５および２１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質と接触させることを含む、前記ＣＴＬＡ４がＣＤ８０および／またはＣＤ８６に結合することを防ぐ方法。
【請求項２５】
さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の請求項１〜１５および２１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を対象に投与することを含む、対象において免疫応答を増強する方法。
【請求項２６】
さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の請求項１〜１５および２１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を対象に投与することを含む、対象においてがんまたは感染性疾患を治療または予防する方法。
【請求項２７】
がんが、転移性がん、固形腫瘍、血液がん、白血病、リンパ腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎臓移行上皮がん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺がん、非小細胞がん、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎臓細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳がん、神経膠芽腫、髄膜腫、脳下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｍｙｅｌｆｉｂｒｏｓｉｓ）、軟組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、乳がんまたは胃がんである、請求項２６の方法。
【請求項２８】
感染性疾患が細菌感染症、ウイルス感染症または真菌感染症である、請求項２６の方法。
【請求項２９】
対象に、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を伴うさらなる治療剤または治療手法が投与される、請求項２６〜２８のいずれか一項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年１１月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／２５６，９８５号の利益を主張するものであり；この文献は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
コンピュータ読取可能なフォーマットのヌクレオチド／アミノ酸配列表は、参照によりその全体が組み込まれる。配列表を含有するファイルは、２０１６年１１月１５日に作成され、「２４２３６ＷＯＰＣＴＳＥＱ」と名付けられた３５３ｋバイトのＡＳＣＩＩテキストファイルである。
【０００３】
本発明は、一部において、プログラム細胞死タンパク質１（「ＰＤ１」）および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（「ＣＴＬＡ４」）に結合する二重特異性ポリペプチドに関する。とりわけ、本発明は、一部において、ＰＤ１に結合する少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）重鎖免疫グロブリン単一可変ドメイン（本明細書中で「ＩＳＶ」または「ＩＳＶＤ」とも呼ばれる）およびＣＴＬＡ４に結合する少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）重鎖免疫グロブリン単一可変ドメインを含む二重特異性ポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００４】
免疫制御性分子、例えば細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４）などを抑止することは、免疫系の操作により腫瘍退縮を誘導し、疾患を安定化し、生存を延長させる新しく有望な戦略を代表するものである。抗ＣＴＬＡ４抗体のイピリムマブは、現在、黒色腫を包含する適応症について販売されている。進行時間延長を伴う腫瘍退縮の証拠は、ＣＴＬＡ４抗体を受けた黒色腫患者において認められており、黒色腫、卵巣がん、前立腺がんおよび腎細胞がんの患者においてイピリムマブでの持続的応答が観察されている。
【０００５】
プログラム死受容体１（ＰＤ１）は、活性化されたＴ細胞およびＢ細胞上で主に発現する免疫抑制性受容体である。そのリガンドとの相互作用は、インビトロおよびインビボの両方においてＴ細胞応答を減弱させることが示されている。ＰＤ１とそのリガンドの１つであるＰＤ−Ｌ１との間の相互作用の遮断は腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞免疫を増強することが示されており、それゆえ免疫系による腫瘍細胞のクリアランスにおいて有益であろう。
【０００６】
ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断は、腫瘍特異的Ｔ細胞免疫の増強を導き、それゆえ免疫系による腫瘍細胞のクリアランスにおいて有益であり得る。この課題に取り組むため、多数の研究が行われた。侵攻性膵臓がんのマウスモデルにおいて、Ｔ．Ｎｏｍｉら（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １３：２１５１−２１５７（２００７））は、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１遮断の治療的有効性を実証した。ＰＤ１またはＰＤ−Ｌ１のいずれかに対する抗体の投与は腫瘍増殖を顕著に阻害した。抗体遮断は腫瘍内への腫瘍反応性ＣＤ８＋  Ｔ細胞の浸潤を効果的に促進し、ＩＦＮガンマ、グランザイムＢおよびパーフォリンといった抗腫瘍エフェクターのアップレギュレーションをもたらした。加えて、著者らは、ＰＤ１遮断を化学療法と組み合わせることで効果的に相乗効果を得ることができることを示した。別の研究において、扁平上皮癌のマウスモデルを用いることで、ＰＤ１またはＰＤ−Ｌ１の抗体遮断は腫瘍増殖を顕著に阻害した（Ｔｓｕｓｈｉｍａ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．  ４２：２６８−２７４（２００６））。
【０００７】
ＣＴＬＡ４およびＰＤ１を介した免疫応答のダウンレギュレーションを阻害する１つの方法は、それらを多重特異性ナノボディと結合させることによって、それらのリガンドとのそれらの相互作用を妨げることによるものである。ラマを起源とするナノボディは、例えば患者の血清中の先在抗体によるナノボディの結合によって望まれない抗薬剤免疫応答を引き起こす可能性がある。それゆえに、かかる応答を減少させるまたは除去するためにナノボディをヒト化する新規の方法は、かかる方法により生み出されるナノボディと同じく、とりわけ価値がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １３：２１５１−２１５７（２００７）
【非特許文献２】Ｔｓｕｓｈｉｍａ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．  ４２：２６８−２７４（２００６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、次の残基ＶＲＶＴＶＬ（配列番号１９５のアミノ酸３３−３８）、ＡＤＳＱＶＴＥＶＣ（配列番号１９５のアミノ酸４１−４９）およびＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧ（配列番号１９５のアミノ酸９３−１０６）のうちの１または複数において、例えば３つ全ての（ａｌｌ  ａｌｌ）部位においてヒトＣＴＬＡ４と接触することによりヒトＰＤ１およびヒトＣＴＬＡ４に結合するＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（ｂｉｎｄｅｒ）または多重特異性免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）、例えばナノボディなどを提供する。例えば、結合性物質は、重水素源、例えばＤ２Ｏなどの存在下での水素−重水素交換から残基を保護する。本発明のある実施形態において、ＩＳＶＤはヒトＣＴＬＡ４に結合し、図１７に本質的に示されるような結合ヒートマップ（例えば水素−重水素（ｄｕｅｔｅｒｉｕｍ）交換アッセイにおいて生成されるもの）を生成する。
【００１０】
本発明はまた、アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）またはＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶである）またはＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹ（配列番号７）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）を含むＣＤＲ３を含むＰＤ１に結合する１または複数のＩＳＶＤ、ならびに、アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）またはＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）またはＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）を含むＣＤＲ３を含むＣＴＬＡ４に結合する１または複数のＩＳＶＤを含み、半減期エクステンダー（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）および／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよいＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を提供する。本発明のある実施形態において、結合性物質中の各ＩＳＶＤ間にはペプチドリンカー、例えば３５ＧＳリンカーがある。
【００１１】
本発明はまた、アミノ酸配列：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ  ＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡ  ＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫ  ＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３５）を含む、ＰＤ１に結合するＩＳＶＤ；およびアミノ酸配列：
【表１】
2019502370.tif 000003
【００１２】
（配列番号１４３）であって、ここでＸはＤまたはＥであるアミノ酸配列、または、
Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＸ２ＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９６）であって、ここでＸ１はＤまたはＥであり、Ｘ２はＳ、Ｖ、Ｇ、Ｒ、Ｑ、Ｍ、Ｈ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ａ、ＹまたはＰであるアミノ酸配列を含む、ＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤを含み、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでいてもよいＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を提供する。本発明のある実施形態において、結合性物質中の各ＩＳＶＤ間にはペプチドリンカー、例えば３５ＧＳリンカーがある。
【００１３】
本発明はまた、
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
または：
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
または
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
または
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を提供する。
【００１４】
例えば、本発明は、配列番号１４６、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を提供する。
【００１５】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、半減期エクステンダー、例えばＨＳＡ結合性物質、例えば
アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳ（配列番号１７７）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号１７８）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号１７９）を含むＣＤＲ３を含むヒト血清アルブミンＩＳＶＤ、例えばアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧ  ＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬ  ＶＴＶＳＳＡ（配列番号１４４）を含むものを含む。
【００１６】
加えて、本発明は、本明細書中に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をＰＤ１および／またはＣＴＬＡ４との結合から交差遮断する結合性物質（例えば抗体、その抗原結合断片、ＩＳＶＤまたはナノボディ）を提供する。
【００１７】
本発明は、（ｉ）配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を含むが、さらに配列番号１または２中のアミノ酸配列に対して１１位、８９位、１１０位および１１２位の１または複数において変異を含み、ここで前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされ、さらに本明細書中または他に示される任意の数の付加的な変異、例えば１０個まで（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の）付加的な変異（例えば点変異、置換、欠失、挿入）を含んでもよいＰＤ１に結合する結合部分；ならびに（ｉｉ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むが、さらに配列番号９中のアミノ酸配列に対して１１位、８９位、１１０位および１１２位の１または複数において変異を含み、ここで前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされ、さらに本明細書中または他に示される任意の数の付加的な変異、例えば１０個まで（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の）付加的な変異（例えば点変異、置換、欠失、挿入）を含んでもよいＣＴＬＡ４に結合する結合部分を含む、ＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質（例えば多重特異性ＩＳＶＤ、例えばナノボディなど）を提供する。本発明のある実施形態において、ＰＤ１に結合する結合部分は、配列番号１または２のアミノ酸配列に対して１または複数の変異を含み、ここで１１位におけるアミノ酸残基はＬもしくはＶから選択され；８９位におけるアミノ酸残基はＴ、Ｖ、ＩもしくはＬから選択され；１１０位におけるアミノ酸残基はＴ、ＫもしくはＱから選択され；および／または１１２位におけるアミノ酸残基はＳ、ＫもしくはＱから選択され；ならびにＣＴＬＡ４に結合する結合部分は、配列番号９のアミノ酸配列に対して１または複数の変異を含み、ここで１１位におけるアミノ酸残基はＬもしくはＶから選択され；８９位におけるアミノ酸残基はＴ、ＶもしくはＬから選択され；１１０位におけるアミノ酸残基はＴ、ＫもしくはＱから選択され；および／または１１２位におけるアミノ酸残基はＳ、ＫもしくはＱから選択される。本発明のある実施形態において、ＰＤ１に結合する結合部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列に対して１もしくは複数の変異を含み、ここで８９位はＬ、１１位はＶであり；もしくは８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱであり；もしくは１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱであり；および／またはＣＴＬＡ４に結合する結合部分は、配列番号９のアミノ酸配列に対して１もしくは複数の変異を含み、ここで８９位はＬ、１１位はＶであり；もしくは８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは８９位はＬ、１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱであり；もしくは１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱであり；もしくは１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱである。本発明のある実施形態において、多重特異性結合性物質は、配列番号１、２および／または９に対して１１位、８９位、１１０位および１１２位において表に示されるもののいずれかである変異を含む。
【表２】
2019502370.tif 000004
【００１８】
本発明のある実施形態において、（ｉ）ＰＤ１に結合する結合部分は、さらに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列に対して１位、１４位、４１位、７４位、８３位および８７位よりなる群から選択される位置において１もしくは複数の変異を含み、ここで前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされ；ならびに／または（ｉｉ）ＣＴＬＡ４に結合する結合部分は、さらに配列番号９のアミノ酸配列に対して１位、１４位、４１位、７４位、８３位および８７位よりなる群から選択される位置において１もしくは複数の変異を含み、ここで前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされる。本発明のある実施形態において、多重特異性結合性物質は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸であるＣ末端伸長を含む。例えば、本発明のある実施形態において、Ｃ末端伸長は、式−Ｘ（ｎ）を持ち、ここでＸおよびｎは：（ａ）ｎ＝１およびＸ＝Ａｌａ；（ｂ）ｎ＝２および各々のＸ＝Ａｌａ；（ｃ）ｎ＝３および各々のＸ＝Ａｌａ；（ｄ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｅ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｆ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ａｌａであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｇ）ｎ＝１およびＸ＝Ｇｌｙ；（ｈ）ｎ＝２および各々のＸ＝Ｇｌｙ；（ｉ）ｎ＝３および各々のＸ＝Ｇｌｙ；（ｊ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｋ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｌ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ｇｌｙであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；（ｍ）ｎ＝２および各々のＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ；（ｎ）ｎ＝３および各々のＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ；（ｏ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれる；または（ｐ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙであり、ここで残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるものであり、例えばＡ、ＡＡ、ＡＡＡ、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＡＧ、ＧＡ、ＡＡＧ、ＡＧＧ、ＡＧＡ、ＧＧＡ、ＧＡＡおよびＧＡＧよりなる群から選択されるＣ末端伸長である。
【００１９】
本発明はまた、（ｉ）配列番号１もしくは２に示されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む配列番号１、２および１６−４７よりなる群から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９または１００％）の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む、ＰＤ１に結合する結合部分であって、ここで前記結合部分は配列番号１もしくは２に示されるアミノ酸配列に関して少なくとも１つの変異を含み、前記少なくとも１つの変異は１１位、８９位、１１０位および１１２位よりなる群から選択される位置におけるものであり、前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされる前記結合部分；ならびに／または（ｉｉ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む配列番号９および４８−８３よりなる群から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む、ＣＴＬＡ４に結合する結合部分であって、ここで前記結合部分は配列番号９に示されるアミノ酸配列に関して少なくとも１つの変異を含み、前記少なくとも１つの変異は１１位、８９位、１１０位および１１２位よりなる群から選択される位置におけるものであり、前記位置はＫａｂａｔに従ってナンバリングされる前記結合部分を含む、多重特異性結合性物質（例えばナノボディのような多重特異性ＩＳＶＤ）を含む。
【００２０】
本発明は、配列番号１６−８３および１０３−１３４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む多重特異性結合性物質またはポリペプチドを提供する。
【００２１】
本発明は、（ｉ）配列番号１６−４７よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＰＤ１に結合する結合部分および（ｉｉ）配列番号４８−８３よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４に結合する結合部分を含む、多重特異性結合性物質を包含する。
【００２２】
本発明のある実施形態において、多重特異性結合性物質（例えばナノボディのような多重特異性ＩＳＶＤ）は、さらに１または複数の免疫グロブリン単一可変ドメイン、ナノボディ、抗体またはその抗原結合断片に連結される。本発明のある実施形態において、多重特異性結合性物質は、ＣＤ２７、ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２  ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７またはＴＳＬＰに結合する１または複数の他の結合部分（例えば免疫グロブリン単一可変ドメイン、ナノボディ、抗体またはその抗原結合断片）を包含する。
【００２３】
本発明は、さらなる治療剤、例えばペンブロリズマブなどを伴うＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を包含する。本発明はまた、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を含み、さらなる治療剤、例えばペンブロリズマブなどを伴ってもよい注入装置または容器を包含する。本発明はまた、本明細書中に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質をコードするポリヌクレオチド（例えば配列番号１４５、１４８、１５０または１５２に示されるヌクレオチド配列を含む）、並びにかかるポリヌクレオチドを含むベクターならびにかかるポリヌクレオチドおよびベクターを含む宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞またはピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞）を提供する。
【００２４】
本発明は、免疫グロブリンをコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入すること、および宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞またはピキア細胞）を培地中で前記ポリヌクレオチドからの前記免疫グロブリンの発現に好都合な条件下で培養することを含み、前記宿主細胞および／または前記培地から免疫グロブリンを精製することを含んでもよい、本明細書中に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を作成する方法を提供する。かかる方法により生産されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質は、本発明の一部である。
【００２５】
本発明はまた、ＰＤ１を、さらなる治療剤を伴ってもよい本明細書中に記載される前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質と接触させることを含む、ＰＤ１がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２に結合することを防ぎ、ならびにＴ細胞上のＣＴＬＡ４が抗原提示細胞上のＣＤ８０および／またはＣＤ８６に結合することを防ぐ方法を提供する。
【００２６】
本発明は、さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の本明細書中に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を対象（例えばヒトのような哺乳類）に投与することを含む、対象において免疫応答を増強する方法を提供する。
【００２７】
本発明はまた、さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の本明細書中に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を対象に投与することを含む、対象においてがんまたは感染性疾患を治療または予防する方法を提供する。例えば、本発明のある実施形態において、がんは、転移性がん、固形腫瘍、血液がん、白血病、リンパ腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎臓移行上皮がん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺がん、非小細胞がん、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎臓細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳がん、神経膠芽腫、髄膜腫、脳下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｍｙｅｌｆｉｂｒｏｓｉｓ）、軟組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、乳がんまたは胃がんである。本発明のある実施形態において、感染性疾患は、細菌感染症、ウイルス感染症または真菌感染症である。本発明のある実施形態において、対象は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または多重特異性結合性物質を伴ってさらなる治療剤および／または治療手法を投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本明細書中で具体的に言及されるアミノ酸位置のうちのいくつか、およびいくつかの代替的ナンバリング方式（例えばＡｈｏおよびＩＭＧＴなど）によるそれらのナンバリングを載せた表を示す。
【図２】ナノボディ１０２Ｃ１２およびリファレンスＡの配列（ＷＯ２００８／０７１４４７、配列番号３４８を参照されたい）を示す。
【図３（Ａ−Ｂ）】（Ａ）本発明のＰＤ１結合部分の配列を示す。（Ｂ）配列番号１および２のアミノ酸配列とＰＤ１結合部分とのアラインメントを示す。
【図４（Ａ−Ｂ）】（Ａ）本発明のＣＴＬＡ４結合部分の配列を示す。（Ｂ）配列番号９のアミノ酸配列とＣＴＬＡ４結合部分とのアラインメントを示す。
【図５】本発明の結合性物質に連結され得る配列を示す。
【図６】本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の配列を示す。
【図７】チャイニーズハムスター卵巣細胞中で生産されるモノクローナル抗体について主要なＮ−結合型グリカン（ＣＨＯ  Ｎ−結合型グリカン）および遺伝子改変酵母細胞中で生産されるモノクローナル抗体について主要なＮ−結合型グリカン（遺伝子改変酵母  Ｎ−結合型グリカン）を示す：正方形：Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）；丸：マンノース（Ｍａｎ）；菱形：ガラクトース（Ｇａｌ）；三角形：フコース（Ｆｕｃ）。
【図８】ナノボディＦ０２３７００９２５、Ｆ０２３７００９１８およびＦ０２３７００９１２ならびに対照ナノボディ（ＩＲＲ０００５１；抗ＨＥＲ２／ＥＲＢＢ２（アルブミン結合性物質につながれた３５ＧＳを有する二価の抗ＨＥＲ２））のヒトＣＴＬＡ４を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合を示す。
【図９】ナノボディＦ０２３７００９２５、Ｆ０２３７００９１２および対照ナノボディ（ＩＲＲ０００５１）の、ヒトＰＤ１を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合を示す。
【図１０（Ａ−Ｂ）】Ｆ０２３７００９０６、Ｆ０２３７０１０５１、Ｆ０２３７０１０５４およびＦ０２３７０１０６１による、（ＣＨＯ−Ｋ１細胞上の）ヒトＣＴＬＡ４の（Ａ）ヒトＣＤ８０または（Ｂ）ヒトＣＤ８６への結合の遮断を示す。
【図１１（Ａ−Ｈ）】ナノボディＦ０２３７００９１２もしくはＦ０２３７００９２５または対照ナノボディ（ＩＲＲ０００５１）の、（Ａ）陰性対照のＬ細胞、（Ｂ）陰性対照のＣＨＯ−Ｋ１細胞、（Ｃ）ｈｕＣＤ２８＋Ｌ細胞、（Ｄ）ｈｕＣＤ８アルファ＋Ｌ細胞、（Ｅ）ｈｕＬａｇ−３＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞、（Ｆ）ｈｕＢＴＬＡ＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞、（Ｇ）ｈｕＣＴＬＡ−４＋ＣＨＯ−Ｋ細胞または（Ｈ）ｈｕＰＤ−１＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合を示す。
【図１２（Ａ−Ｂ）】ナノボディＦ０２３７０９０６、Ｆ０２３７１０５１、Ｆ０２３７０１０５４またはＦ０２３７０１０６１による、（ＣＨＯ−Ｋ１細胞上の）ヒトＣＴＬＡ４の（Ａ）ヒトＣＤ８０または（Ｂ）ヒトＣＤ８６への結合の遮断を示す。
【図１３（Ａ−Ｊ）】平均ｐａｎｃ０８／．１３腫瘍体積±ＳＥＭ（Ａ）、および３７日目の個々の腫瘍体積（Ｂ）、および（Ｃ）アイソタイプコントロール抗体、（Ｄ）イピリムマブ（Ｎ２９７Ａ）、（Ｅ）イピリムマブ、（Ｆ）ペンブロリズマブ、（Ｇ）イピリムマブ＋ペンブロリズマブ、（Ｈ）ＣＴＬＡ４ナノボディＦ０２３７００９１２（５ｍｐｋ）、（Ｉ）ＣＴＬＡ４ナノボディＦ０２３７００９１２（１５ｍｐｋ）または（Ｊ）ペンブロリズマブ＋ＣＴＬＡ４ナノボディＦ０２３７００９１２（１５ｍｐｋ）で処置したマウスにおける実験の間にわたる個々のヒト化マウスにおける腫瘍体積を示す。
【図１４（Ａ−Ｂ）】（ａ）健常者および（ｂ）がん患者からの先在抗体のナノボディＦ０２３７００９１２、Ｆ０２３７００９２５または三価の対照ナノボディＴ０１３７００１１２（先在抗体の結合を低減させる変異を欠いているもの）への結合を示す。
【図１５（Ａ−Ｄ）】本発明の配列を示す。
【図１６（Ａ−Ｂ）】本発明の結合性物質構成物の説明を示す。
【図１７】Ｆ０２３７００９１２  ＣＴＬＡ４結合性物質によるヒトＣＴＬＡ４結合の重水素標識差分ヒートマップを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、先在抗体（プレ抗体）のＩＳＶＤ内ネオエピトープへの反応性を遮断する変異を含むＩＳＶＤを提供する。ネオエピトープは、タンパク質が変異（例えばトランケート）したとき、またはそのフォールディングが変わったときに現れるタンパク質内のエピトープである。先在抗体は、ＩＳＶＤを受ける前の患者の体内に存在している抗体である。本発明のＩＳＶＤは、部分的に、Ｃ末端定常領域が除去されたラマ抗体に基づき；それゆえに、結果として得られたＶＨＨのＣ末端中のネオエピトープをプレ抗体結合に曝露している。残基１１および８９の変異の組み合わせ（例えばＬ１１ＶおよびＩ８９ＬまたはＶ８９Ｌ）は驚くべきプレ抗体結合欠如を導くことが発見されている。残基１１２における変異もまたプレ抗体結合を著しく低減させることが示されている。Ｂｕｙｓｅ  ＆  Ｂｏｕｔｔｏｎ（ＷＯ２０１５／１７３３２５）は、Ｌ１１ＶおよびＶ８９Ｌ変異の組み合わせがＬ１１Ｖ変異単独またはＶ８９Ｌ変異単独と比べてプレ抗体結合の低減に著しい改良を与えることを示すデータを包含していた。例えば、Ｂｕｙｓｅ  ＆  Ｂｏｕｔｔｏｎ、９７ページの表Ｈは、Ｖ８９Ｌ変異を単独で有するＩＳＶＤ（Ｃ末端伸長があるものまたはないもの）とＶ８９Ｌ変異をＬ１１Ｖ変異と組み合わせて有する同ＩＳＶＤ（やはり、Ｃ末端伸長があるものまたはないもの）との比較データを示した。また、２つの別々の実験中に生成されたにもかかわらず、Ｌ１１Ｖ／Ｖ８９Ｌの組み合わせについて表Ｈ中に示されたデータは、（同じＩＳＶＤ中の）Ｌ１１Ｖ変異単独について表Ｂ中に与えられたデータと比べて、Ｌ１１Ｖ／Ｖ８９Ｌの組み合わせにより得られるプレ抗体結合低減がＬ１１Ｖ変異単独についてのそれよりも大きいことを示した。ラマ抗体のスキャフォールド構造は非常に高度に保存されていることが知られていることから、１１位および８９位における変異の効果はあらゆるＩＳＶＤについて存在する可能性が高い。実際、その効果は図１４において、本発明の結合性物質Ｆ０２３７００９１２、Ｆ０２３７００９２５を使用して実証され、これらは非常に低レベルのプレ抗体結合を呈することが示された。
【００３０】
本出願において、免疫グロブリン重鎖可変ドメインにおけるアミノ酸残基／位置は、Ｋａｂａｔによるナンバリングを使用して指し示される。便宜上、図１は、本明細書中で具体的に言及されるアミノ酸位置のうちのいくつか、およびいくつかの代替的ナンバリング方式（例えばＡｈｏおよびＩＭＧＴなど。注：明示的に指示されないかぎり、本説明および特許請求の範囲については、Ｋａｂａｔナンバリングが決定的であり；他のナンバリング方式は参照のためにのみ与えられる）によるそれらのナンバリングを載せた表を与える。
【００３１】
ＣＤＲに関しては、当該技術分野で周知であるように、ＶＨまたはＶＨＨ断片のＣＤＲを定義して説明するための複数の慣行があり、例えばＫａｂａｔ定義（配列変化性に基づくものであり、最も通例的に用いられる）およびＣｈｏｔｉａ定義（構造ループ領域の位置に基づくもの）などがある。例えばウェブサイトｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／への参照がなされる。本明細書および特許請求の範囲の目的のため、ＫａｂａｔによるＣＤＲも言及され得るとしても、ＣＤＲは最も好ましくはＡｂｍ定義（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ´ｓ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアに基づくもの）を基礎として定義され、その理由は、これはＫａｂａｔ定義とＣｈｏｔｉａ定義との間の最適な中間物であると考えられるからである。やはり、ウェブサイトｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／への参照がなされる。Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）  Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．  ３２：１−７５；Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ（１９８７）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７；Ｅｌｖｉｎ  Ａ．Ｋａｂａｔ，Ｔａｉ  Ｔｅ  Ｗｕ，Ｃａｒｌ  Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｈａｒｏｌｄ  Ｍ．Ｐｅｒｒｙ，Ｋａｙ  Ｓ．Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．  Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。本発明のある実施形態において、ＣＤＲ決定はＫａｂａｔに従い、例えばＶＨＨのＦＲ１は１−３０位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ１は３１−３５位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ２は３６−４９位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ２は５０−６５位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ３は６６−９４位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ３は９５−１０２位のアミノ酸残基を含み、およびＶＨＨのＦＲ４は１０３−１１３位のアミノ酸残基を含む。
【００３２】
本発明のある実施形態において、ＣＤＲは、ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（Ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖｏｌ  ２，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｍａｒｔｉｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，ｐｐ．３３−５１，２０１０）に従って決定される。
【００３３】
本発明は、改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質、とりわけ改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性ＩＳＶＤ、およびよりとりわけには改良された抗ＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性ナノボディを提供することを目的とする。本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、１位、１１位、１４位、４５位、７３位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位が変異した配列番号９のアミノ酸配列を含むポリペプチドのバリアントであるポリペプチドを包含するＣＴＬＡ４結合部分；ならびに１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位が変異した配列番号１または２のアミノ酸配列を含むポリペプチドのバリアントであるポリペプチドを包含するＰＤ１結合部分を包含するもの（いずれの順番でもよい）を包含する。本発明により提供される改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性結合性物質はまた、本明細書中で「本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性結合性物質」または「ＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性結合性物質」または「ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質」とも呼ばれる。これらの用語は、本明細書に示されるＣＴＬＡ４結合部分およびＰＤ１結合部分を包含する任意の分子を含む。例えば、この用語は、ＣＴＬＡ４結合部分（例えば配列番号１４３または１９６から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列を含むＩＳＶＤ）およびＰＤ１結合部分（例えば配列番号１０３−１３４、１３５、１３６、１３７、１４０、１４１および１４２よりなる群から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列を含むＩＳＶＤ）を包含する分子であって、融合タンパク質であってもよく、および／または慣用的な抗体またはその抗原結合断片に付着していてもよい分子を包含する。ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、ＣＴＬＡ４結合部分（例えば配列番号１４３または１９６よりなる群から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列を包含するもの）およびＰＤ１結合部分（例えば配列番号１０３−１３４、１３５、１３６、１３７、１４０、１４１および１４２よりなる群から選択されるメンバーに示されるアミノ酸配列を包含するもの）を含み、別のエピトープ、例えばＣＤ２７、ＬＡＧ３など、ＣＴＬＡ４の異なるエピトープ、ＰＤ１の異なるエピトープ、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２  ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７および／またはＴＳＬＰにも結合する任意の多重特異性結合性物質を含む。
【００３４】
論じているように、本発明の「ＰＤ１結合性物質」は、本明細書中に記載されるＰＤ１に結合する分子のいずれか（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）、並びにＰＤ１に結合する任意の抗体またはその抗原結合断片であり、本明細書中に記載されるＰＤ１結合部分のいずれかを含む。ＰＤ１結合性物質はＰＤ１に選択的であってもよく、またはＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ４、ＨＳＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２  ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＴＳＬＰに結合する結合性物質を付加的に含むもの、例えばＬＡＧ３結合部分およびＣＴＬＡ４結合部分；ＬＡＧ３結合部分およびＢＴＬＡ結合部分；１もしくは２つのＰＤ１結合部分、１もしくは２つのＬＡＧ３結合部分およびＨＳＡ結合部分；またはＬＡＧ３結合部分およびＢＴＬＡ結合部分を含むものであってもよい。個々のＰＤ１結合性物質は、高分子、例えば多価分子、例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５などの一部である場合は、ＰＤ１結合部分と呼ばれ得る。
【００３５】
論じているように、本発明の「ＣＴＬＡ４結合性物質」は、本明細書中に記載されるＣＴＬＡ４に結合する分子のいずれか（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）、並びにＣＴＬＡ４に結合する任意の抗体またはその抗原結合断片であり、本明細書中に記載されるＣＴＬＡ４結合部分のいずれかを含む。ＣＴＬＡ４結合性物質は、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＨＳＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２  ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＴＳＬＰに結合する結合性物質を包含するもの、例えばＬＡＧ３結合部分およびＰＤ１結合部分；ＬＡＧ３結合部分およびＢＴＬＡ結合部分；１もしくは２つのＰＤ１結合部分、１もしくは２つのＬＡＧ３結合部分およびＨＳＡ結合部分；またはＬＡＧ３結合部分およびＢＴＬＡ結合部分を含むものであり得る。個々のＣＴＬＡ４結合性物質は、高分子、例えば多価分子、例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５などの一部である場合は、ＣＴＬＡ４結合部分と呼ばれ得る。
【００３６】
一般的に、基本的な抗体構造単位はテトラマーを含む。各々のテトラマーは、２つの同一のポリペプチド鎖の対を包含し、各々の対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０−７０ｋＤａ）を持つ。各々の鎖のアミノ末端部は、主に抗原認識に関与する約１００から１１０個またはそれより多くのアミノ酸でできた可変領域を包含する。重鎖のカルボキシ末端部は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を規定し得る。典型的に、ヒト軽鎖はカッパ軽鎖およびラムダ軽鎖に分類される。さらには、ヒト重鎖は典型的にミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥに規定する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は約１２個またはそれより多くのアミノ酸でできた「Ｊ」領域につながれ、重鎖はまた約１０個より多くのアミノ酸でできた「Ｄ」領域も包含する。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）を参照されたい。抗原結合断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２およびＦｖ断片および一本鎖Ｆｖ分子が挙げられる。
【００３７】
用語「免疫グロブリン単一可変ドメイン」（「ＩＳＶ」または「ＩＳＶＤ」とも呼ばれる）は、一般に、別の可変ドメインとの相互作用がない（例えば慣用的な四本鎖モノクローナル抗体のＶＨドメインとＶＬドメインとの間に必要とされるＶＨ／ＶＬ相互作用がない）機能的抗原結合部位を形成することができる免疫グロブリン可変ドメイン（重鎖ドメインであっても軽鎖ドメインであってもよく、ＶＨドメイン、ＶＨＨドメインまたはＶＬドメインを包含するもの）を指すために用いられる。ＩＳＶＤの例は当業者に明らかであり、例えばナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨおよび／またはラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨなどを包含するもの）、ＩｇＮＡＲ、ドメイン、ＶＨドメインであるかまたはＶＨドメインに由来する（単一ドメイン）抗体（例えばｄＡｂｓ（商標）など）およびＶＬドメインであるかまたはＶＬドメインに由来する（単一ドメイン）抗体（例えばｄＡｂｓ（商標）など）が挙げられる。重鎖可変ドメイン（例えばＶＨドメインまたはＶＨＨドメインなど）に基づくおよび／またはこれに由来するＩＳＶＤが一般に好ましい。最も好ましくは、ＩＳＶＤはナノボディである。
【００３８】
用語「ナノボディ」は、一般にＷＯ２００８／０２００７９またはＷＯ２００９／１３８５１９中に定義されるとおりであり、それゆえに具体的態様において、一般に、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨもしくはラクダ化ＶＨ（例えばラクダ化ヒトＶＨなど）または一般に配列最適化されたＶＨＨ（例えば化学的安定性および／または溶解性、公知のヒトフレームワーク領域との最大のオーバーラップならびに最大の発現のために最適化されたものなど）を意味する。なお、用語ナノボディまたはナノボディ類はＡｂｌｙｎｘ  Ｎ．Ｖ．の登録商標であり、それゆえにナノボディ（登録商標）および／またはナノボディ類（登録商標）とも呼ばれる）。
【００３９】
多重特異性結合性物質は、第一および第二のＣＴＬＡ４およびＰＤ１（またはＰＤ１およびＣＴＬＡ４）結合部分（例えばＩＳＶＤまたはナノボディ）を含み、ＣＴＬＡ４およびＰＤ１結合部分のエピトープ以外のエピトープ（例えばＣＤ２７、ＬＡＧ３および／またはＢＴＬＡ）に結合する１または複数の（例えば１、２、３、４、５個の）付加的な結合部分（例えばＩＳＶＤまたはナノボディ）を含んでもよい分子である。例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０およびＦ０２３７００９２５は、ＨＳＡ結合性物質を包含する多重特異性ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質である。
【００４０】
結合部分または結合ドメインまたは結合ユニットは、抗原に結合する、例えばＩＳＶＤまたはナノボディなどの分子である。結合部分または結合ドメインまたは結合ユニットは、例えば多価または多重特異性結合性物質などのより大きな分子の一部分であり得て、この分子は、１つより多くの部分、ドメインもしくはユニットを包含するおよび／または別の機能的要素、例えば半減期エクステンダー（ＨＬＥ）、標的化ユニットおよび／もしくは例えば（ｓｕｃｈ  ａ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの低分子を含む。例えば１０２Ｃ１２（Ｅ１Ｄ，Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｉ８９Ｌ）は、Ｆ０２３７００９１０のＰＤ１結合部分ＩＳＶＤである。
【００４１】
一価のＣＴＬＡ４またはＰＤ１結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、単一の抗原結合ドメインを含む分子である。二価のＣＴＬＡ４／ＰＤ１結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、ＣＴＬＡ４およびＰＤ１に結合する２つの抗原結合ドメインを含む（例えば二重特異性抗体を包含する慣用的な抗体）。多価結合性物質は、１つより多くの抗原結合ドメインを含む。三価結合性物質は、３つの抗原結合ドメインを含む。
【００４２】
単一特異性ＣＴＬＡ４またはＰＤ１結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、単一の抗原（ＣＴＬＡ４またはＰＤ１）に結合し；二重特異性ＣＴＬＡ４／ＰＤ１結合性物質は２つの異なる抗原（ＰＤ１およびＣＴＬＡ４）に結合し、多重特異性結合性物質は１より多くの抗原に結合する。三重特異性結合性物質は、３つの異なる抗原（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４および、例えばＣＤ２７、ＬＡＧ３またはＢＴＬＡ）に結合する。
【００４３】
二重パラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ）結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、単一特異性であるが、同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合する。多重パラトピック（ｍｕｌｔｉｐａｒａｔｏｐｉｃ）結合性物質は、同じ抗原に結合するが、抗原中の１つより多くのエピトープに結合する。
【００４４】
また、本明細書中で既に指示しているように、ナノボディのアミノ酸残基は、ＲｉｅｃｈｍａｎｎおよびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０００  Ｊｕｎ  ２３；２４０（１−２）：１８５−１９５の論文中でラクダ科動物からのＶＨＨドメインに適用されたように、または本明細書中で言及されるように、Ｋａｂａｔら（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，ＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１）により与えられるＶＨについての一般的ナンバリングに従ってナンバリングされる。
【００４５】
ＶＨドメインのアミノ酸残基をナンバリングする代替的な方法は、ラクダ科動物からのＶＨＨドメインおよびナノボディと同様に適用することができる方法であり、Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｎａｔｕｒｅ  ３４２，８７７−８８３（１９８９））により記載される方法、いわゆる「ＡｂＭ定義」およびいわゆる「接触定義（ｃｏｎｔａｃｔ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）」である。しかしながら、本明細書、態様および図においては、特に指示がないかぎり、ＲｉｅｃｈｍａｎｎおよびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓによりＶＨＨドメインに適用されたようにＫａｂａｔによるナンバリングに従う。
【００４６】
本明細書中で結合性物質、例えばＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質など（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）との関係で（ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ）用いられる用語「半減期」は、一般に、ＷＯ２００８／０２００７９の５７ページ段落ｏ）中に記載されるように定義することができ、その中で言及されているように、アミノ酸配列、化合物またはポリペプチドの血清濃度が、例えば天然のメカニズムによるその配列もしくはＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の分解および／またはその配列もしくはＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のクリアランスもしくは隔離のためにインビボで５０％低減するのにかかる時間をいう。本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のインビボ半減期は、それ自体公知の任意の方法で、例えば薬物動態学的分析などにより決定することができる。好適な技術は当業者に明らかであり、例えば一般にＷＯ２００８／０２００７９の５７ページ段落ｏ）中に記載されるとおりであり得る。ＷＯ２００８／０２００７９の５７ページ段落ｏ）中にも言及されているように、半減期は、例えばｔ１／２−アルファ、ｔ１／２−ベータおよび曲線下面積（ＡＵＣ）などのパラメーターを用いて表現することができる。なお、この点で、本明細書中で用いられる用語「半減期」は、とりわけ、ｔ１／２−ベータまたは終末相半減期（ここではｔ１／２−アルファおよび／もしくはＡＵＣまたは両方が考慮されないことがある）をいう。例えば下の実験部を、並びに標準的なハンドブック、例えばＫｅｎｎｅｔｈ，Ａ  ｅｔ  ａｌ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｆｏｒ  ＰｈａｒｍａｃｉｓｔｓおよびＰｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（１９９６）などを参照されたい。また、“Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ”，Ｍ  Ｇｉｂａｌｄｉ  ＆  Ｄ  Ｐｅｒｒｏｎ，出版元Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，改訂２版（１９８２）も参照されたい。同様に、用語「半減期の増加」または「半減期増加」もまたＷＯ２００８／０２００７９の５７ページ段落ｏ）中に定義されているとおりであり、とりわけ、ｔ１／２−アルファおよび／もしくはＡＵＣまたは両方の増加を伴うまたは伴わない、ｔ１／２−ベータの増加をいう。
【００４７】
フレーズ「制御配列」は、特定の宿主生物中での作動可能に連結されたコーディング配列の発現のために必要なポリヌクレオチドをいう。原核生物に適した制御配列は、例えばプロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を包含する。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが知られている。
【００４８】
核酸またはポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチドとの機能的関係に置かれたときに「作動可能に連結され」ている。例えばプレ配列もしくは分泌リーダーのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関係するタンパク質前駆体として発現するならばポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されており；プロモーターもしくはエンハンサーは、それがコーディング配列の転写に影響するならばコーディング配列に作動可能に連結されており；またはリボソーム結合部位は、それが転写を容易にするように位置するならばコーディング配列に作動可能に連結されている。常にではないが、一般に、「作動可能に連結されている」とは、連結されるＤＮＡ配列が近接すること、分泌リーダーの場合は近接し、かつリーディングフェーズ（ｒｅａｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは近接する必要はない。連結は、好都合な制限部位におけるライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しないならば、慣行的実務に従って合成オリゴヌクレオチドのアダプターまたはリンカーが用いられる。
【００４９】
「単離された」ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）、ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよびベクターは、細胞またはそれらが生産された細胞培養物からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含まない。かかる生物学的分子としては、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物または他の材料、例えば細胞デブリおよび増殖培地などが挙げられる。「単離された」ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、さらに、発現系の構成成分、例えば宿主細胞からのまたはその増殖培地の生物学的分子などを少なくとも部分的に含まないものであり得る。一般に、用語「単離された」は、かかる生物学的分子の完全な不存在を、または水、バッファーもしくは塩の不存在を、または抗体もしくは断片を包含する医薬製剤の構成成分を指すことを意図しない。
【００５０】
なおまた、図、任意の配列表および実験部／実施例は本発明をさらに説明することのみのために与えられたものであって、本明細書中に明示的に指示がないかぎり、本発明の範囲および／または添付の特許請求の範囲を何らか制限するものと理解または解釈すべきではない。
【００５１】
用語が本明細書中で具体的に定義されていない場合、それは当該技術分野におけるその通常の意味を持ち、これは当業者に明らかである。例えば標準的なハンドブック、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”（２ｎｄ．Ｅｄ．），Ｖｏｌｓ．１−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）；Ｌｅｗｉｎ，“Ｇｅｎｅｓ  ＩＩ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９８５）；Ｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ（１９８１）；Ｒｏｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（６ｔｈ．Ｅｄ．），Ｍｏｓｂｙ／Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ（２００１）；Ｒｏｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｏｉｔｔ´ｓ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０ｔｈ  Ｅｄ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＵＫ（２００１）；およびＪａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ”（６ｔｈ  Ｅｄ．），Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ／Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００５）などを、並びに本明細書中で引用される一般的背景技術を参照されたい。
【００５２】
次の性質は、ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２中で指し示された変異に関連する：
Ｅ１Ｄ：コンストラクトＥ１の最初のアミノ酸におけるピログルタミン酸形成を防ぐ
Ｌ１１Ｖ：プレ抗体結合を減少させる
Ａ１４Ｐ：ヒト化
Ｗ５２ａＶ：Ｗ５２ａの酸化を防ぐ
Ｎ７３Ｐ：Ｎ７３脱アミド化を防ぐ
Ｎ７３Ｑ：Ｎ７３脱アミド化を防ぐ
Ｎ７３Ｓ：Ｎ７３脱アミド化を防ぐ
Ａ７４Ｓ：ヒト化
Ｋ８３Ｒ：ヒト化
Ｉ８９Ｌ：プレ抗体結合を減少させる
Ｗ１００ａＦ：Ｗ１００ａの酸化を防ぐ
またはＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ１中で指し示された変異に関連する：
Ｅ１Ｄ：コンストラクトＥ１の最初のアミノ酸におけるピログルタミン酸形成を防ぐ
Ｌ１１Ｖ：プレ抗体結合を減少させる
Ａ１４Ｐ：ヒト化
Ｑ４５Ｒ：安定性を向上させるための変異
Ａ７４Ｓ：ヒト化
Ｋ８３Ｒ：ヒト化
Ｉ８９Ｌ：プレ抗体結合を減少させる
Ｍ９６Ｐ、ＱまたはＲ：Ｍ９６の酸化を防ぐ
Ｑ１０８Ｌ：ヒト化。
【００５３】
本発明の範囲は、図１５に示される多価ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質、または図１６に示される部分の配列を含む多価ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。本発明の範囲はまた、図１５に示されるＰＤ１結合性物質（もしくはかかるＰＤ１結合性物質のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む任意のＰＤ１結合性物質）のいずれかもしくは図１６に示されるＰＤ１結合部分の配列を含む多価ＰＤ１結合性物質（もしくはその任意のＰＤ１結合部分のうちの１もしくは複数）のいずれか、および／または図１５に示されるいずれかのＣＴＬＡ４結合性物質（もしくはかかるＬＡＧ３結合性物質のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む任意のＣＴＬＡ４結合性物質）もしくは図１６に示されるＣＴＬＡ４結合部分の配列を含む多価ＣＴＬＡ４結合性物質（もしくはその任意のＣＴＬＡ４結合部分のうちの１もしくは複数）のいずれかを含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。図１５に示される結合性物質は、本発明のある実施形態において、その中にあるＣ末端エクステンダー（例えばＡ）、ＦＬＡＧおよび／またはＨＩＳタグ（例えばＨＨＨＨＨＨ（配列番号１７６のアミノ酸１４８−１５３）；ＡＡＨＨＨＨＨＨ（配列番号１７６のアミノ酸１４６−１５３）；またはＡＡＡＤＹＫＤＨＤＧＤＹＫＤＨＤＩＤＹＫＤＤＤＤＫＧＡＡＨＨＨＨＨＨ（配列番号１７６）のアミノ酸１２０−１５３）を包含しない。任意のかかる結合性物質またはＣＤＲは、本発明のある実施形態において、図１５に示されるもののバリアントであり得て、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の点変異（例えば保存的置換または欠失）を含む。
【００５４】
本発明のある実施形態において、ＣＴＬＡ４はヒトＣＴＬＡ４である。本発明のある実施形態において、ヒトＣＴＬＡ４は、アミノ酸配列：
【表３】
2019502370.tif 000005
2019502370.tif 000006
【００５５】
（配列番号１９７）を含む。
【００５６】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１はヒトＰＤ１である。本発明のある実施形態において、ヒトＰＤ１は、アミノ酸配列：
【表４】
2019502370.tif 000007
【００５７】
（配列番号１９８）を含む。
【００５８】
ＰＤ１結合部分
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在する１または複数の（例えば１つまたは２つなどの）ＰＤ１結合部分は、好ましくは次のとおりである（なお、２またはそれより多いＰＤ１結合部分が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するとき、それらは同じであっても異なってもよく、それらが異なるとき、好ましくは、それらは全て本明細書中に記載される１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異の好適な組み合わせを含有し、また好ましくは本明細書中に記載されるものと同じＣＤＲを持つ。本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるＰＤ１結合部分の、いくつかの好ましいが限定されない例のアミノ酸配列は、図３Ａ中に収載される。図３Ｂは、これらのＰＤ１結合部分と配列番号１および２のアミノ酸配列とのアラインメントを与える。
【００５９】
言及されているように、本明細書中に記載される本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在するＰＤ１結合部分は、ＰＤ１に結合することができる（とりわけ特異的に結合することができる）。とりわけ、それらはＰＤ１に結合してＰＤ１とＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２との間の結合を阻害することができる。例えば、本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質はＰＤ１に結合し、（例えばＰＤ１を介した増殖およびサイトカイン産生阻害からＴ細胞を解放することにより）Ｔ細胞介在性免疫応答のＰＤ１経路を介した阻害からＴ細胞を解放する。
【００６０】
本明細書中にさらに記載されるように、本発明のある実施形態において本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の中にある本発明のＰＤ１結合性物質は、好ましくは、１０２Ｃ１２もしくはリファレンスＡ中に存在するものと、または１０２Ｃ１２もしくはリファレンスＡの配列（配列番号１または２）を含む結合性物質中に存在するものと同じＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）の組み合わせを持つ。表Ａ−１を参照されたい。
【００６１】
本発明はまた、下の表Ａ−２中に示されるアミノ酸配列を含む１０２Ｃ１２のバリアントであるＰＤ１結合性物質を包含する。本発明の範囲は、下の表Ａ−２中に示される前記バリアント（ｖａｒａｉｎｔｓ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＰＤ１結合性物質を包含する。
【００６２】
加えて、本発明は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＰＤ１結合部分または１０２Ｃ１２アミノ酸配列または下の表Ａ−２中に示されるそのバリアントのうちの１つを含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。
【００６３】
表Ａ−１．ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２
【表５】
2019502370.tif 000008
【００６４】
表Ａ−２  配列最適化バリアント１０２Ｃ１２  ＰＤ１結合性物質
【表６】
2019502370.tif 000009
2019502370.tif 000010
2019502370.tif 000011
2019502370.tif 000012
2019502370.tif 000013
【００６５】
本発明は、ＰＤ１結合性物質のＣＤＲのうちの１つ、２つまたは３つが表Ａ−１もしくはＡ−２（例えばこの結合性物質は配列番号１、２、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２または１６−４７のアミノ酸配列を含む））または図３に示され、各々のＣＤＲが０、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸置換、例えば保存的置換を含み、および／または表Ａ−１もしくはＡ−２に示されるＣＤＲ配列に対して１００、９９、９８、９７、９６または９５％の配列同一性を含み、かかるＣＤＲを持つＰＤ１結合性物質がＰＤ１に結合する能力を保持する実施形態を包含する。本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１結合性物質の最初のアミノ酸はＥである。本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１結合性物質の最初のアミノ酸はＤである。
【００６６】
表Ａ−１に示されるＰＤ１  ＩＳＶＤの特定の残基についてのＫａｂａｔ残基番号は下の配列中に示される：
【表７】
2019502370.tif 000014
【００６７】
ＩＳＶＤ  １０２Ｃ１２の特定の残基についてのＫａｂａｔ残基番号（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）は下の配列中に示される：
【表８】
2019502370.tif 000015
【００６８】
（配列番号１３５）
ＷＯ２００８／０７１４４７は、ＰＤ１に結合することができるナノボディおよびその使用を記載している。ＷＯ２００８／０７１４４７の配列番号３４８は１０２Ｃ１２と呼ばれるＰＤ１特異的ナノボディを開示し、その配列は本明細書中に配列番号１として与えられる。この配列およびそのＣＤＲは、下の表Ａ中にも与えられる（図２も参照されたい）。配列番号２は、配列番号１に基づくがヒト化するＱ１０８Ｌ変異を有する参照配列である。
【００６９】
変異は本明細書中で言及され得て、上に示されるようにそれらのＫａｂａｔ番号により指定される。
【００７０】
ＷＯ２００８／０７１４４７はまた、ＣＴＬＡ４に結合することができるナノボディおよびその使用を記載している。ＷＯ２００８／０７１４４７の配列番号１３０６は１１Ｆ０１と呼ばれるＣＴＬＡ４特異的ナノボディを開示し、その配列は本明細書中に配列番号９として与えられている（図２も参照されたい）。この配列およびそのＣＤＲは下の表Ｂ中にも与えられている。
【００７１】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、次の性質：
・例えば約１ｎＭ（例えば約１．２ｎＭ）のＫＤでＣＴＬＡ４に結合する（例えばヒトおよび／またはカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）ＣＴＬＡ４）（例えばＣＴＬＡ４−Ｆｃ融合タンパク質）；
・細胞、例えばＣＨＯ細胞の表面上のＣＴＬＡ４に結合する（例えばヒトＣＴＬＡ４）；
・細胞、例えばＣＨＯ細胞の表面上のＰＤ１に結合する（例えばヒトＰＤ１）；
・ＣＤ８０および／またはＣＤ８６のＣＴＬＡ４への、例えば細胞表面に発現した、例えばＣＨＯ細胞表面上のＣＴＡＬ４への結合を遮断する；
・例えば細胞、例えばＣＨＯ細胞などの表面上のＣＤ２８（例えばヒト）、ＣＤ８アルファ（例えばヒト）、ＬＡＧ３（例えばヒト）またはＢＴＬＡ（例えばヒト）に結合しない；
・（結合性物質が血清アルブミン結合性物質、例えばＡＬＢ１１００２などを包含するとき）ヒト、アカゲザルおよび／またはサルの血清アルブミンに結合する；
・（例えば膵臓腫瘍、例えばヒト免疫細胞を持つマウスにおけるヒト膵臓腫瘍の）腫瘍増殖を阻害する
のうち１または複数を持つ。
【００７２】
本発明は、配列番号１または２（１０２Ｃ１２、ＷＯ２００８／０７１４４７：配列番号３４８；リファレンスＡ）のバリアントである１または複数のＰＤ１結合部分を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）であって、配列番号１または２のアミノ酸配列を含むが配列番号１または２の配列に対する次の変異：
−  １Ｄもしくは１Ｅ；
−  １１Ｖ；
−  １４Ｐ；
−  ５２ａＶ；
−  ７３Ｑ、７３Ｐもしくは７３Ｓ；
−  ７４Ｓ；
−  ８３Ｒ；
−  ８９Ｔ；
−  ８９Ｌ；または
−  １００ａＦ；
のうちの１または複数を含む前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を包含し、例えば、ＰＤ１結合部分は次の変異セット：
−  １Ｄもしくは１Ｅと、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１００ａＦとの、および任意選択で１Ｄとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒとの、および任意選択で１Ｄとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦおよび１Ｄもしくは１Ｅとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦおよび１Ｄもしくは１Ｅとの組み合わせ；
−  １Ｄもしくは１Ｅと、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌ；および１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｄもしくは１Ｅと、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌ；および１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
のうちの１または複数を含む。
【００７３】
とりわけ、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在するＰＤ１結合部分は、配列番号１または２のアミノ酸配列を含み、ここで：
−  １位におけるアミノ酸残基は、ＥおよびＤから選ばれ；
−  １１位におけるアミノ酸残基は、ＬおよびＶから選ばれ；
−  １４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＰから選ばれ；
−  ５２ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＶから選ばれ；
−  ７３位におけるアミノ酸残基は、Ｐ、Ｓ、ＮおよびＱから選ばれ；
−  ７４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＳから選ばれ；
−  ８３位におけるアミノ酸残基は、ＫおよびＲから選ばれ；
−  ８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、ＩおよびＬから選ばれ；
−  １００ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＦから選ばれ；
−  １１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫおよびＱから選ばれ；ならびに
−  １１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫおよびＱから選ばれ；
例えば次のもの：
（ｉ）１位は、Ｄである；
（ｉｉ）１位は、Ｅである；
（ｉｉｉ）１１位は、Ｖである；
（ｉｖ）１４位は、Ｐである；
（ｖ）５２ａ位は、Ｖである；
（ｖｉ）７３位は、Ｑ、ＰまたはＳである；
（ｖｉｉ）７４位は、Ｓである；
（ｖｉｉｉ）８３位は、Ｒである；
（ｉｘ）８９位は、Ｔである；
（ｘ）８９位は、Ｌである；
（ｘｉ）１００ａ位は、Ｆである；
のうちの１または複数が当てはまるようになっており、
例えば、ここでＰＤ１結合部分は次の変異セット：
配列番号１または２のアミノ酸配列に対して、
ａ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ；および８９位はＬである；
ｂ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ；７３位はＱ、ＰもしくはＳ；７４位はＳ、８３位はＲ；８９位はＬ；および１００ａ位はＦである；
ｃ．８９位はＬ、１１位はＶである；
ｄ．８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｅ．８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｆ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ；７３位はＱ、ＰもしくはＳ；７４位はＳ、８３位はＲ；８９位はＬ；１００ａ位はＦ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｇ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ；７３位はＱ、ＰもしくはＳ；７４位はＳ、８３位はＲ；８９位はＬ；１００ａ位はＦ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｈ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ；８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｉ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ；８９位はＬ；および１１２位はＫもしくはＱである；
ｊ．８９位はＬ、１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｋ．８９位はＬ、１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｌ．１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱである；または
ｍ．１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を含む。
【００７４】
特定の実施形態において、本発明のＰＤ１結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、配列番号１または配列番号２のバリアントであるアミノ酸配列を含み、ここで８９位はＴもしくはＬであり；または１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ；７３位はＳ、ＱもしくはＰ；７４位はＳ、８３位はＲおよび８９位はＬおよび／もしくは１００ａ位はＦであり；または１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲおよび８９位はＬであり；または１１位はＶおよび８９位はＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ことがとりわけ好ましい。本発明は、１１位がＶ、８９位がＬであって、１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異を有してもよいアミノ酸配列を包含する。
【００７５】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは次のＣＤＲ（Ｋａｂａｔ慣行による）：
−  アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶである）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）
を含む。
【００７６】
あるいは、ＣＤＲがＡｂｍ慣行に従って与えられるとき、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは次のＣＤＲ：
−  アミノ酸配列ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹ（配列番号７）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号８、これは配列番号５と同じであって；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）
を含む。
【００７７】
上の好ましいＣＤＲは、１０２Ｃ１２（配列番号１）中に、リファレンスＡ（配列番号２）中に、または配列番号１６−４７もしくは１３５−１４２のアミノ酸配列を含む結合性物質中に存在するものと同じである。かかる結合性物質のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を持つ結合性物質は、本発明の一部である。
【００７８】
本発明のある実施形態において本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）はまた、以下を持つ：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２の参照アミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）であって、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択されるもの（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；ならびに／または
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との、７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）。
【００７９】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）の様々な態様および好ましい態様に関して、配列番号１もしくは２に関する配列同一度ならびに／または本発明のかかる結合性物質中に（すなわち配列番号１または２の配列と比べて）存在し得る「アミノ酸の相違」の数および種類に関していうと、
（ｉ）ＰＤ１結合部分が、配列番号１または２の配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持つといえるとき；ならびに／または
（ｉｉ）ＰＤ１結合部分が、配列番号１もしくは２の配列と７未満、好ましくは５未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（やはり、存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮されず、関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は考慮されない）を持つといえるとき、
これはまた、関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異ならびに存在し得る任意のＣ末端伸長以外に配列番号１または２の配列とアミノ酸の相違がない配列を包含する。
【００８０】
それゆえに、本発明の１つの具体的態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、配列番号１または２との１００％の配列同一性（そのＣＤＲを包含するが、本明細書中に開示される１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／もしくは１１２位における変異（複数可）もしくは変異の組み合わせならびに／または存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮されない）を持ち得て、ならびに／または配列番号１または２とのアミノ酸の相違（すなわち、本明細書中に開示される１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異（複数可）または変異の組み合わせならびに存在し得る任意のＣ末端伸長以外のもの）を持たないものであり得る。
【００８１】
何らかのアミノ酸の相違が（すなわち、任意のＣ末端伸長ならびに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のほかに）存在するとき、これらのアミノ酸の相違はＣＤＲ中および／またはフレームワーク領域中にあり得るが、それらは好ましくはフレームワーク領域（Ａｂｍ慣行により定義されるもの、すなわちＡｂｍ慣行に従って定義されるＣＤＲ中ではない）中にのみ、すなわち、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が配列番号１または２中に存在するものと同じＣＤＲ（Ａｂｍ慣行に従って定義される）を持つように、存在する。
【００８２】
また、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が、配列番号１または２の配列と１または複数のアミノ酸の相違を（関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のほかに）持つとき、（すなわち、配列番号１または２の配列と比べて）存在し得るかかる変異／アミノ酸の相違のいくつかの具体的であるが限定されない例は、例えばＰ４１Ａ、Ｐ４１Ｌ、Ｐ４１ＳまたはＰ４１Ｔ（とりわけＰ４１Ａ）および／またはＴ８７Ａである。変異の他の例は、１または複数の好適な「ヒト化」置換（の好適な組み合わせ）であり；例えばＷＯ２００９／１３８５１９（またはＷＯ２００９／１３８５１９中で引用される従来技術中に）およびＷＯ２００８／０２００７９（またはＷＯ２００８／０２００７９中で引用される従来技術中に）、並びにＷＯ２００８／０２００７９からの表Ａ−３からＡ−８（これは可能なヒト化置換を示すリストである）への参照がなされる。
【００８３】
また、ＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端部に存在するおよび／またはこれを形成するとき、これは好ましくは１位にＤ（すなわち、リファレンスＡまたは１０２Ｃ１２と比べたＥ１Ｄ変異）を含有する。かかるＮ末端ＰＤ１結合部分の好ましいが限定されない例は、配列番号３１として与えられる（だが、Ｅ１Ｄ変異を有する他のＰＤ１結合部分を用いることもできる）。同様に、配列番号３１のＰＤ１結合部分が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中のＮ末端に存在しないがどこかに存在するとき、これは好ましくはＤ１Ｅ変異を含有する）。したがって、さらなる態様において、本発明は、そのＮ末端にＰＤ１結合部分（これは本明細書中にさらに記載されるとおりである）を持つ本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（これは本明細書中にさらに記載されるとおりである）に関し、ここで前記ＰＤ１結合部分は１位にＤを持ち、好ましくは配列番号３１、１３５、１４０、１４１または１４２である。
【００８４】
本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異および／またはＩ８９Ｌ変異の、ならびに任意選択でＥ１Ｄ変異の好適な組み合わせを、好ましくはこれらの変異のうちのいずれか２つの好適な組み合わせを、例えばこれらの変異の全てなどを含有するようなものである。ＰＤ１結合部分が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは配列番号１または２のアミノ酸配列に対するＥ１Ｄ変異もである。好ましいが限定されない例を使用すると、配列番号３０、３１、４６、４７、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１または１４２は、配列番号１または２とのさらなるアミノ酸の相違、すなわちＡ１４Ｐ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒを持つＰＤ１結合部分の例である（加えて、前の段落中で指し示すように、配列番号３１および４７および１３５はＥ１Ｄ変異も持つ）。
【００８５】
それゆえに、第一の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶ）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＰＤ１結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷまたはＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｎ、Ｐ、ＳまたはＱから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、ＩまたはＬから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１００ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷまたはＦから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫまたはＱから選ばれ；ならびに
−  ＰＤ１結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫまたはＱから選ばれ；
例えば、ＰＤ１結合部分は次のもの：
（ｉ）１位は、ＥもしくはＤである；
（ｉｉ）１１位は、Ｖである；
（ｉｉｉ）１４位は、Ｐである；
（ｉｖ）５２ａ位は、Ｖである；
（ｖ）７３位は、Ｑ、ＰもしくはＳである；
（ｖｉ）７４位は、Ｓである；
（ｖｉｉ）８３位は、Ｒである；
（ｖｉｉｉ）８９位は、ＬもしくはＴである；または
（ｉｘ）１００ａ位は、Ｆである；
のうちの１または複数を持つようになっており、
例えば、ここでＰＤ１結合部分は次の変異セット：
ａ．８９位はＬ、１１位はＶである；
ｂ．８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｃ．８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｄ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ；７３位はＳ、ＱもしくはＰ；７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１００ａ位はＦである；
ｅ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬである；
ｆ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬである；
ｇ．８９位はＬ、１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｈ．８９位はＬ、１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｉ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｊ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｋ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｌ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ、７３位はＳ、ＱもしくはＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１００ａ位は（ｉｆ）Ｆ、１１０位はＫもしくはＱである；
ｍ．１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ、７３位はＳ、ＱもしくはＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１００ａ位は（ｉｆ）Ｆ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｎ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
ｏ．１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱである；または
ｐ．１１位はＶ、１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を含む。
【００８６】
さらなる態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶ）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
前記ＰＤ１結合部分は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１または２のアミノ酸配列と比べた変異）：
−  ８９Ｔもしくは８９Ｌ；
−  １Ｄもしくは１Ｅ；
−  １４Ｐ；
−  ５２ａＶ；
−  ７３Ｑ、７３Ｓもしくは７３Ｐ；
−  ７４Ｓ；
−  ８３Ｒ；
−  ８９Ｌ；または
−  １００ａＦ；
のうちの１または複数を含むようになっており、
例えば、ＰＤ１結合部分は次の変異セット：
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ；７４Ｓ、８３Ｒおよび／もしくは１００ａＦとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ；７４Ｓ、８３Ｒおよび／もしくは１００ａＦとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
のうちの１または複数を含む。
【００８７】
言及されているように、ＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に（Ｃ末端に存在するとき、ＰＤ１結合部分（およびその結果として、得られる本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質）は、好ましくは、本明細書中に記載されるおよび／またはＷＯ２０１２／１７５７４１もしくはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持つ。
【００８８】
言及されているように、本発明において、１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ、１４位がＰ、７４位がＳ、８３位がＲおよび８９位がＬである；または８９位がＴである、または１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ、１４位がＰ、５２ａ位がＶ、７３位がＳ、ＱもしくはＰ、７４位がＳ、８３位がＲ、８９位がＬおよび／もしくは１００ａ位がＦである；または１１位がＶおよび８９位がＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ＰＤ１結合部分が好ましい。なおより好ましいのは、１１位がＶおよび８９位がＬであって、１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異を有してもよいＰＤ１結合部分である。
【００８９】
それゆえに、１つの好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶ）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＰＤ１結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥおよびＤから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬおよびＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＰから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｎ、Ｐ、ＳおよびＱから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＳから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫおよびＲから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｌ、ＩおよびＶから選ばれ；
−  １００ａ位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＷおよびＦから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫおよびＱから選ばれ（好ましくはＴである）；ならびに
−  ＰＤ１結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫおよびＱから選ばれる（好ましくはＳにおいて）。
【００９０】
別の好ましい態様において、ＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合する本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶ）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、ここで次のもの：
−  ＰＤ１部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥもしくはＤである；
−  ＰＤ１部分の１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＰＤ１部分の１４位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＰＤ１部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＰＤ１部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＱもしくはＰである；
−  ＰＤ１部分の７４位におけるアミノ酸残基は、Ｓである；
−  ＰＤ１部分の８３位におけるアミノ酸残基は、Ｒであり
−  ＰＤ１部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり；
−  ＰＤ１部分の１００ａ位におけるアミノ酸残基は、Ｆである；
−  ＰＤ１部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＫもしくはＱから選ばれ；または
−  ＰＤ１部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、ＫもしくはＱから選ばれる
のうちの１または複数が当てはまる。
【００９１】
１つの具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  １１Ｖと８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｅ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌ、１Ｄ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９２】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、８９Ｌ、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、８９Ｌ、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび／もしくは１Ｄもしくは１Ｅとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、８９Ｌ、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ；および１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、８９Ｌ、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ；および１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦ、１１０Ｋもしくは１１０Ｑおよび／もしくは１Ｄもしくは１Ｅとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦ、１１２Ｋもしくは１１２Ｑおよび／もしくは１Ｄもしくは１Ｅとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９３】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１４Ｐとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、５２ａＶとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、７４Ｓとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８３Ｒとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１００ａＦとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９４】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１４Ｐとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、５２ａＶとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、７４Ｓとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８３Ｒとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１００ａＦとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９５】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は８９位にＴを含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９６】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は１１位にＶおよび８９位にＬを含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【００９７】
言及されているように、本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異および／またはＩ８９Ｌ変異の、ならびに任意選択でＥ１Ｄ変異の好適な組み合わせを、好ましくはこれらの変異のうちのいずれか２つの好適な組み合わせを、例えばこれらの変異の全てなどを含有するようなものである（およびやはり、ＰＤ１結合部分が本発明のポリペプチドのＮ末端に存在するとき、好ましくはＥ１Ｄ変異もである）（配列番号１または２のアミノ酸配列に対するもの）。
【００９８】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹ（配列番号７；ここでＸはＷまたはＶである）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＰＤ１結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥもしくはＤから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬもしくはＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡもしくはＰから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｐ、Ｓ、ＮおよびＱから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＲから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、ＩもしくはＬから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１００ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＦから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫもしくはＱから選ばれ；ならびに
−  ＰＤ１結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫもしくはＱから選ばれ；
例えば、ＰＤ１結合部分は次の変異または変異セット：
（ｉ）８９位はＴもしくはＬである；
（ｉｉ）８９位はＬおよび１１位はＶである；
（ｉｉｉ）１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲおよび８９位はＬである；
（ｉｖ）１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲおよび８９位はＬである；
（ｖ）１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ、７３位はＳ、ＱもしくはＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬおよび１００ａ位はＦである；
（ｖｉ）８９位はＬ、１１０位はＫもしくはＱである；
（ｖｉｉ）８９位はＬ、１１２位はＫもしくはＱである；
（ｖｉｉｉ）８９位はＬ、１１位はＶ、１１０位はＫもしくはＱである；
（ｉｘ）８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘ）１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；および１１０位はＫもしくはＱである；
（ｘｉ）１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；および１１０位はＫもしくはＱである；
（ｘｉｉ）１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；および１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘｉｉｉ）１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；および１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘｉｖ）１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ、７３位はＳ、ＰもしくはＱ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；１００ａ位はＦおよび１１０位はＫもしくはＱである；
（ｘｖ）１位はＤもしくはＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、５２ａ位はＶ、７３位はＳ、ＰもしくはＱ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ；１００ａ位はＦおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘｖｉ）１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；または
（ｘｖｉｉ）１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を持つようになっている。
【００９９】
さらなる態様において、本発明の結合部分中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹ（配列番号７；ここでＸはＷまたはＶである）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
前記ＰＤ１結合部分は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２のアミノ酸配列と比べた変異）：
−  ８９Ｔもしくは８９Ｌ；
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１００ａＦとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｐもしくは７３Ｑ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含むようになっている。
【０１００】
言及されているように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が一価の型で用いられるとき、および／または本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（本明細書中に定義されているもの）のＣ末端に存在するとき、ＰＤ１結合部分（およびその結果として、得られる本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質）は、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持ち、このＣ末端伸長は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質について本明細書中に記載されるとおりであり得て、および／またはＷＯ２０１２／１７５７４１もしくはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりであり得る。
【０１０１】
言及されているように、本発明において、１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ、１４位がＰ、７４位がＳ、８３位がＲおよび８９位がＬである、または８９位がＴである、または１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ、１４位がＰ、５２ａ位がＶ、７３位がＳ、ＰもしくはＱ、７４位がＳ、８３位がＲ、８９位がＬおよび／もしくは１００ａ位がＦである、または１１位がＶおよび８９位がＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ＰＤ１結合部分が好ましい。また好ましいのは、（配列番号１または２のアミノ酸配列に対して）１１位がＶおよび８９位がＬであって、１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異を有してもよいＰＤ１結合部分である。
【０１０２】
それゆえに、１つの好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹ（配列番号７；ここでＸはＷまたはＶである）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで
−  ＰＤ１結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＶから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｐ、Ｎ、ＳおよびＱから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、ＩまたはＬから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１００ａ位におけるアミノ酸残基は、ＷおよびＦから選ばれ；
−  ＰＤ１結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫまたはＱから選ばれ（好ましくはＴであり）；ならびに
−  ＰＤ１結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫまたはＱから選ばれる（好ましくはＳである）。
【０１０３】
別の好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分は：
−  アミノ酸配列ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹ（配列番号７；ここでＸはＷまたはＶである）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号１もしくは２のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号１または２と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで次のもの：
−  ＰＤ１結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＤまたはＥである；
−  ＰＤ１結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＰＤ１結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＰＤ１結合部分の５２ａ位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＰＤ１結合部分の７３位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＰまたはＱである；
−  ＰＤ１結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、Ｓである；
−  ＰＤ１結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、Ｒである；
−  ＰＤ１結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり；
−  ＰＤ１結合部分の１００ａ位におけるアミノ酸残基は、Ｆである；
−  ＰＤ１結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫおよびＱから選ばれる；または
−  ＰＤ１結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫおよびＱから選ばれる
うちの１または複数が当てはまる。
【０１０４】
１つの具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  １１Ｖと８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦ、１１０Ｋもしくは１１０Ｑおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、１００ａＦ、１１２Ｋもしくは１１２Ｑおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ，１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ，１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１０５】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓおよび８３Ｒとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦ、１１０Ｋもしくは１１０Ｑおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、１００ａＦ、１１２Ｋもしくは１１２Ｑおよび１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１０６】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号２の配列と比べた変異）：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦ、および１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ．
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１０７】
別の具体的であるが限定されない態様において、
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号１または２の配列と比べた変異）：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒおよび８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖ、１４Ｐ、５２ａＶ、７３Ｓもしくは７３Ｑもしくは７３Ｐ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌおよび１００ａＦ、および１Ｅもしくは１Ｄとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１０８】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在するＰＤ１結合性物質（複数可）は、８９位にＴまたはＬを含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１０９】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、１１位にＶおよび８９位にＬを含み、ＣＤＲ、例えば配列番号１、２、１６−４７または１３５−１４２に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号１または２のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１１０】
言及されているように、本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは、任意にＥ１Ｄ変異、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異および／またはＩ８９Ｌ変異の好適な組み合わせを；好ましくはこれらの変異のうちのいずれか２つの好適な組み合わせを、例えばこれらの変異のうち５つ全てまたは６つ全てなどを含有するようなものである（ＰＤ１結合部分が本発明のポリペプチドのＮ末端に存在するとき、好ましくはＥ１Ｄ変異もである）（配列番号１または２のアミノ酸配列に対するもの）。
【０１１１】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるＰＤ１結合部分のいくつかの好ましいが限定されない例は、配列番号１６から４７または１３５−１４２中に与えられ、これらの配列のうちの１または複数を好適に含む本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１１２】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるＰＤ１結合部分のいくつかの好ましいＰＤ１結合部分は、配列番号３０、３１、１６−４７または１３５−１４２の配列である。これらのうち、配列番号３１は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在させるのにとりわけ適しており、配列番号４６は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在させるのにとりわけ適している。
【０１１３】
ＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するおよび／またはこれを形成するとき、これは、好ましくは式（Ｘ）ｎのＣ末端伸長を持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、天然に存在するアミノ酸残基から独立して選ばれる（だが、好ましい１つの態様によると、これはシステイン残基を何ら含まない）、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基である。
【０１１４】
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）のいくつかの好ましいが限定されない例によると、Ｘおよびｎは、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）について本明細書中にさらに記載されるとおりであることができる。
【０１１５】
本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が（配列番号１または２のアミノ酸配列に対して）１１０位または１１２位において変異を含有するとき（本明細書中に記載される１位、１１位、１４位、７４位、８３位および／または８９位における変異と組み合わせてもよい）、フレームワーク４（１０９位から開始する）の５つのＣ末端アミノ酸残基は次のように置換することができる：
（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＫＳ（配列番号８８）、ＶＴＶＱＳ（配列番号８９）、ＶＫＶＳＳ（配列番号９０）もしくはＶＱＶＳＳ（配列番号９１）；または
（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＫＳＸ（ｎ）（配列番号９２）、ＶＴＶＱＳＸ（ｎ）（配列番号９３）、ＶＫＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号９４）もしくはＶＱＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号９５）、例えばＶＴＶＫＳＡ（配列番号９６）、ＶＴＶＱＳＡ（配列番号９７）、ＶＫＶＳＳＡ（配列番号９８）もしくはＶＱＶＳＳＡ（配列番号９９）など。
【０１１６】
本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＰＤ１結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が（配列番号１または２のアミノ酸配列に対して）１１０位または１１２位において変異を含有しない（が、本明細書中に記載される１位（任意選択で）、１１位、１４位、７４位、８３位および／または８９位における変異のみを含有する）とき、フレームワーク４（１０９位から開始する）の５つのＣ末端アミノ酸残基は通常、次のように置換される：
（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しないとき：ＶＴＶＳＳ（配列番号１００）（配列番号２の配列におけるもののように）；または
（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在するとき：ＶＴＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号１０１）、例えばＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０２）など。これらのＣ末端配列において、Ｘおよびｎは、Ｃ末端伸長について本明細書中に定義されているとおりである。
【０１１７】
ＣＴＬＡ４結合部分
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の中に存在する１または複数の（例えば１つまたは２つなどの）ＣＴＬＡ４結合部分は、好ましくは次のとおりである（なおまた、２またはそれより多いＣＴＬＡ４結合部分が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するとき、それらは同じであっても異なってもよく、それらが異なるとき、好ましくはそれらは全て、本明細書中に記載される１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位における変異（の好適な組み合わせ）を含有し、また好ましくは本明細書中に記載されるものと同じＣＤＲを持つ（配列番号９のアミノ酸配列に対して）。本発明のポリペプチド（例えばＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質）中に存在することができるＣＴＬＡ４結合性物質の、いくつかの好ましいが限定されない例のアミノ酸配列は、図４Ａ中に収載される。図４Ｂは、これらのＣＴＬＡ４結合部分と配列番号９の配列とのアラインメントを与える。
【０１１８】
本明細書中にさらに記載されるように、本発明のある実施形態において本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の中にある本発明のＣＴＬＡ４結合性物質は、好ましくは、１１Ｆ１中に存在するものと、または１１Ｆ１の配列（配列番号９）を含む結合性物質中に存在するものと同じＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）の組み合わせを持つ。表Ｂ−１を参照されたい。
【０１１９】
本発明はまた、下の表Ｂ−２中に示されるアミノ酸配列を含む１１Ｆ１バリアントであるＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。本発明の範囲は、下の表Ｂ−２中に示される前記バリアント（ｖａｒａｉｎｔｓ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を包含するＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。
【０１２０】
加えて、本発明は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３またはアミノ酸配列１１Ｆ１または下の表Ｂ−２中に示されるそのバリアントのうちの１つを包含するＣＴＬＡ４結合部分を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を包含する。
【０１２１】
表Ｂ−１．ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ１（１１Ｆ０１）
【表９】
2019502370.tif 000016
【０１２２】
表Ｂ−２．ＣＴＬＡ４結合性物質  １１Ｆ１バリアント
【表１０】
2019502370.tif 000017
2019502370.tif 000018
【０１２３】
＊ＣＤＲは下線および／または太字
本発明は、ＣＴＬＡ４結合性物質のＣＤＲのうちの１つ、２つまたは３つが表Ｂ−１またはＢ−２に示され（例えば１１Ｆ０１または１１Ｆ０１のもの（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ））、各々のＣＤＲが０、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸置換、例えば保存的置換を含み、および／または表Ｂ−１もしくはＢ−２に示されるＣＤＲ配列に対して１００、９９、９８、９７、９６もしくは９５％の配列同一性を含み、かかるＣＤＲを持つＣＴＬＡ４結合性物質がＣＴＬＡ４に結合する能力を保持する実施形態を包含する。本発明のある実施形態において、本発明のＣＴＬＡ４結合性物質の最初のアミノ酸はＥである。本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１結合性物質の最初のアミノ酸はＤである。
【０１２４】
残基１または配列番号１０４は、ＤまたはＥであることができる。残基１がＤである場合、ＣＴＬＡ４結合性物質は１Ｄとして指定され得て、残基１がＥである場合、ＣＴＬＡ４結合性物質は１Ｅとして指定され得る。
【０１２５】
本明細書に示されるナノボディ１１Ｆ０１に基づくＣＴＬＡ４結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）の特定の残基についてのＫａｂａｔ残基番号は下の配列中に示される：
【表１１】
2019502370.tif 000019
【０１２６】
（配列番号９）
本明細書に示されるＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１の特定の残基についてのＫａｂａｔ残基番号（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）は下の配列中に示される：
【表１２】
2019502370.tif 000020
2019502370.tif 000021
【０１２７】
（配列番号１４３）
変異は本明細書中で言及され得て、上に示されるようにそれらのＫａｂａｔ番号により指定される。
【０１２８】
本発明のある実施形態において、ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１は７３位に変異、例えばＮ７３Ｘを含み、ここでＸはＳ、Ｖ、Ｇ、Ｒ、Ｑ、Ｍ、Ｈ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ａ、ＹまたはＰ（またはＮ以外の任意のアミノ酸）である。
【０１２９】
言及されているように、本明細書中に記載される本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、ＣＴＬＡ４に結合することができる（とりわけ特異的に結合することができる）。とりわけ、それらはＣＴＬＡ４に結合し、それによって例えば抗原提示細胞上のＣＤ８０および／またはＣＤ８６が例としてＴ細胞上のＣＴＬＡ４に結合することを防ぐことができる。本発明のある実施形態において、結果として得られるＣＴＬＡ４シグナル伝達の遮断は、Ｔ細胞活性化を長引かせ、Ｔ細胞増殖を回復させ、それゆえにＴ細胞介在性免疫を増幅し、これは理論的に患者の抗腫瘍免疫応答を開始する能力を増強する。
【０１３０】
一般に、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、次の変異または変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  ８９Ｔもしくは８９Ｌ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含む配列番号９（１１Ｆ０１、ＷＯ２００８／０７１４４７：配列番号１３０６）のバリアントである。
【０１３１】
本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）において：
−  １位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ；
−  １１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  １４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ４５位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＲから選ばれ；
−  ７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＶまたはＬから選ばれ；
−  ９６位におけるアミノ酸残基は、ＭまたはＰから選ばれ；
−  １０８位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＬから選ばれ；
−  １１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫまたはＱから選ばれ；および
−  １１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫまたはＱから選ばれ；
例えば、ＣＴＬＡ４結合部分は、次の変異または変異セット：
（ｉ）８９位はＴもしくはＬである；
（ｉｉ）８９位はＬおよび１１位はＶである；
（ｉｉｉ）８９位はＬ、１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
（ｉｖ）８９位はＬ、１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
（ｖ）８９位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
（ｖｉ）８９位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｖｉｉ）８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；
（ｖｉｉｉ）８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｉｘ）８９位はＬ、１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである
（ｘ）８９位はＬ、１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである
（ｘｉ）８９位はＬ、１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘｉｉ）８９位はＬ、１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
（ｘｉｉｉ）１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；または
（ｘｉｖ）１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を持つようになっている。
【０１３２】
８９位がＴである、または１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ、１４位がＰ、４５位がＲ、７４位がＳ、８３位がＲ、８９位がＬ、９６位がＰ、１０８位がＬである、または１１位がＶおよび８９位がＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ＣＴＬＡ４結合部分の存在が好ましい。また好ましいのは、１１位がＶおよび８９位がＬであって、１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異を有してもよいＣＴＬＡ４結合部分である。
【０１３３】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは次のＣＤＲ（Ｋａｂａｔ慣行によるによる）：
−  アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を含む。
【０１３４】
あるいは、ＣＤＲがＡｂｍ慣行に従って与えられるとき、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは次のＣＤＲ：
−  アミノ酸配列ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１５、配列番号４と同じもの；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を含む。
【０１３５】
上の好ましいＣＤＲは、１１Ｆ０１（配列番号９）中に存在するものと同じである。
【０１３６】
好ましいＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）はまた：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持つ。
【０１３７】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときの様々な態様および好ましい態様であって、アルゴリズムのパラメーターがそれぞれの配列の間で本発明により提供される本発明のそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択される（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）態様に関して、配列番号９に関する配列同一度ならびに／または本発明のかかる結合性物質中に（すなわち配列番号９の配列と比べて）存在し得る「アミノ酸の相違」の数および種類に関していうと、
（ｉ）ＣＴＬＡ４結合部分が、配列番号９の配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持つといえるとき；ならびに／または
（ｉｉ）ＣＴＬＡ４結合部分が、配列番号９の配列と７未満、好ましくは５未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（やはり、存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮されず、関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は考慮されない）を持つといえるとき、
これはまた、関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異ならびに存在し得る任意のＣ末端伸長以外に配列番号９の配列とアミノ酸の相違がない配列を包含する。
【０１３８】
それゆえに、本発明の１つの具体的態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、配列番号９との１００％の配列同一性（ＣＤＲを包含するが、本明細書中に開示される１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異（複数可）もしくは変異の組み合わせならびに／または存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮されない）を持ち得て、ならびに／または配列番号９とのアミノ酸の相違（すなわち、本明細書中に開示される１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異（複数可）または変異の組み合わせならびに存在し得る任意のＣ末端伸長以外のもの）を持たないものであり得る。
【０１３９】
何らかのアミノ酸の相違が（すなわち、任意のＣ末端伸長ならびに関係する本発明の具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のほかに）存在するとき、これらのアミノ酸の相違はＣＤＲ中および／またはフレームワーク領域中にあり得るが、それらは好ましくはフレームワーク領域（Ａｂｍ慣行により定義されるもの、すなわちＡｂｍ慣行に従って定義されるＣＤＲ中ではない）中にのみ、すなわち、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分が配列番号４８−８３または１４３中に存在するものと同じＣＤＲ（Ａｂｍ慣行に従って定義される）を持つように、存在する。
【０１４０】
また、本発明の任意の態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が、配列番号９の配列と１または複数のアミノ酸の相違を（関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のほかに）持つとき、（すなわち、配列番号９の配列と比べて）存在し得るかかる変異／アミノ酸の相違のいくつかの具体的であるが限定されない例は、例えばＰ４１Ａ、Ｐ４１Ｌ、Ｐ４１ＳまたはＰ４１Ｔ（とりわけＰ４１Ａ）および／またはＴ８７Ａである。変異の他の例は、１または複数の好適な「ヒト化」置換（の好適な組み合わせ）、例えばＱ１０８Ｌなどであり；例えばＷＯ２００９／１３８５１９（またはＷＯ２００９／１３８５１９中で引用される従来技術中に）およびＷＯ２００８／０２００７９（またはＷＯ２００８／０２００７９中で引用される従来技術中に）、並びにＷＯ２００８／０２００７９からの表Ａ−３からＡ−８（これは可能なヒト化置換を示すリストである）への参照がなされる。好ましくは、本発明のポリペプチド中に存在するＣＴＬＡ４結合性物質（複数可）は、少なくとも、Ｑ１０８Ｌヒト化置換を含有する。また、９６位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるメチオニン残基は、別の天然に存在するアミノ酸残基、例えばＰｒｏなど（Ｃｙｓ、ＡｓｐまたはＡｓｎ以外のもの）に置き換え得る。
【０１４１】
また、ＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端部に存在するおよび／またはこれを形成するとき、これは好ましくは１位にＤ（配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を含有する。かかるＮ末端ＣＴＬＡ４結合部分の好ましいが限定されない例は、配列番号６４および６５および１４３として与えられる（だが、Ｅ１Ｄ変異を有する他のＣＴＬＡ４結合部分を用いることもできる）。同様に、配列番号６４または６５または１４３のＣＴＬＡ４結合部分が本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中のＮ末端に存在しないがどこかに存在するとき、これは好ましくはＤ１Ｅ変異（１Ｅ）を含有する。したがって、さらなる態様において、本発明は、そのＮ末端にＣＴＬＡ４結合部分（これは本明細書中にさらに記載されるとおりである）を持つ本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（これは本明細書中にさらに記載されるとおりである）に関し、ここで前記ＣＴＬＡ４結合部分は１位にＤ（１Ｄ）を持ち、好ましくは配列番号６４または６５または１４３である。
【０１４２】
本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＣＴＬＡ４結合部分は、好ましくは、任意にＥ１Ｄ変異、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ｑ４５Ｒ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異、Ｖ８９Ｌ変異、Ｍ９６Ｐ変異およびＱ１０８Ｌ変異の好適な組み合わせを含有するようなものである。本発明のある実施形態において、かかるＣＴＬＡ４結合部分は、Ｑ１０８Ｌと他のＥ１Ｄ（任意選択で）、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ変異のうちのいずれか１つとの好適な組み合わせを含む。好ましくはＣＴＬＡ４結合部分は、かかる変異のいずれか、例えばこれらの他の変異のうちのいずれか２つとの、より好ましくはこれらの変異のいずれか３つとの（例えば組み合わせＡ１４Ｐ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒなどとの）、例えばこれらの変異の４個全てまたは９個全てまたは１０個全てなどとの組み合わせを含む（およびやはり、ＣＴＬＡ４結合部分が一価であるとき、または本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくはＥ１Ｄ変異もである）（配列番号９のアミノ酸配列に対するもの）。また、本発明のある実施形態において、ＣＴＬＡ４結合部分（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｉｅｔｉｙ）の９６位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるメチオニン残基は、別の天然に存在するアミノ酸残基、例えばＰｒｏなど（例えばＣｙｓ、ＡｓｐまたはＡｓｎ以外のもの）に置き換え得る。好ましいが限定されない例を使用すると、配列番号６２から６５および８０から８３および１４３は、配列番号９とのさらなるアミノ酸の相違、例えばＥ１Ｄ（任意選択で）、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６ＰおよびＱ１０８Ｌを持つＣＴＬＡ４結合部分の例である（加えて、前の段落中で指し示すように、配列番号６４、６５および８２および８３もまたＥ１Ｄ変異を持つ）。
【０１４３】
それゆえに、第一の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、８９位、１１０位または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＶまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、ＭまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫまたはＱから選ばれ；および
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫまたはＱから選ばれ；
例えば、ＣＴＬＡ４結合部分は次の変異：
（ｉ）１位は、ＥまたはＤである；
（ｉｉ）１１位は、Ｖである；
（ｉｉｉ）１４位は、Ｐである；
（ｉｖ）４５位は、Ｒである；
（ｖ）７４位は、Ｓである；
（ｖｉ）８３位は、Ｒである；
（ｖｉｉ）８９位は、ＬまたはＴである；
（ｖｉｉｉ）９６位は、Ｐである；
（ｉｘ）１０８位は、Ｌである；
のうちの１または複数を含むようになっており、
例えば、ここでＣＴＬＡ４結合部分は次の変異セット：
ａ．８９位はＬおよび１１位はＶである；
ｂ．８９位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｃ．８９位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｄ．８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｅ．８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｆ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
ｇ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
ｈ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｉ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｊ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｋ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｌ．１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；または
ｍ．１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を含む。
【０１４４】
さらなる態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＣＴＬＡ４結合部分は：
−  アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、８９位、１１０位または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
前記ＣＴＬＡ４結合部分は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次のアミノ酸残基（すなわち、配列番号９のアミノ酸配列と比べた変異）：
−  １Ｄまたは１Ｅ；
−  １１Ｖ；
−  １４Ｐ；
−  ４５Ｒ；
−  ７４Ｓ；
−  ８３Ｒ；
−  ８９Ｌまたは８Ｔ；
−  ９６Ｐ；
−  １０８Ｌ；
のうちの１または複数を含むようになっており、
例えば、ここでＣＴＬＡ４結合部分は次の変異セット：
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；および１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；および１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
のうちの１または複数を含む。
【０１４５】
言及されているように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が一価の型で用いられるとき、および／または本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（本明細書中に定義されているもの）のＣ末端に存在するとき、ＣＴＬＡ４結合部分（およびその結果として、得られる本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質）は、好ましくは、記載されるおよび／またはＷＯ２０１２／１７５７４１もしくはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持つ。
【０１４６】
言及されているように、本発明において、８９位がＴ、または１位がＥもしくはＤ、１１位がＶ；１４位がＰ；４５位がＲ；７４位がＳ；８３位がＲ；８９位がＬ；９６位がＰ；および１０８位がＬである、または１１位がＶおよび８９位がＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ＣＴＬＡ４結合部分が好ましい。また好ましいのは、１１位がＶおよび８９位がＬであって、１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異を有してもよいＣＴＬＡ４部分である。
【０１４７】
それゆえに、１つの好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＶまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、ＭまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＫまたはＱから選ばれ（好ましくはＴであり）；および
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、ＫまたはＱから選ばれる（好ましくはＳである）。
【０１４８】
別の好ましい態様において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）であるＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、８９位、１１０位または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、ここで次のもの：
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、Ｒである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、Ｓである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、Ｒである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｌである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫもしくはＱから選ばれる；または
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫもしくはＱから選ばれる
のうちの１または複数が当てはまる。
【０１４９】
１つの具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１Ｖと８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５０】
別の具体的であるが限定されない態様において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５１】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５２】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５３】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、８９位にＴまたはＬを含み（例えば１Ｄまたは１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌ）、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（Ｋａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５４】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、１１位にＶおよび８９位にＬを含み（例えば１Ｄまたは１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌ）、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＫａｂａｔによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１５５】
言及されているように、本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、好ましくは、任意にＥ１Ｄ変異、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ｑ４５Ｒ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異、Ｖ８９Ｌ変異、Ｍ９６Ｐ変異および／またはＱ１０８Ｌ変異の好適な組み合わせを、好ましくはＱ１０８Ｌと他のＡ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒ変異のうちのいずれか１つとの好適な組み合わせを、好ましくはこれらの他の変異のうちのいずれか２つとの組み合わせで、より好ましくはこれらの他の変異のうちのいずれか３つとの（例えば組み合わせＡ１４Ｐ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒなどとの）組み合わせで、例えばこれらの変異のうちの４つ全てなどとの組み合わせを含有するようなものである（およびやはり、ＣＴＬＡ４結合性物質が一価であるとき、または本発明の化合物もしくはポリペプチドのＮ末端に存在するとき、好ましくはＥ１Ｄ変異もである）（配列番号９のアミノ酸配列に対するもの）。また、９６位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるメチオニン残基は、別の天然に存在するアミノ酸残基、例えばＰｒｏなど（例えばＣｙｓ、ＡｓｐまたはＡｓｎ以外のもの）に置き換え得る。
【０１５６】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで：
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥまたはＤから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬまたはＶから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡまたはＳから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫまたはＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＶまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、ＭまたはＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、ＱまたはＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫまたはＱから選ばれ；および
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫまたはＱから選ばれ；
例えば次のもの：
（ｉ）１位は、ＥまたはＤである；
（ｉｉ）１１位は、Ｖである；
（ｉｉｉ）１４位は、Ｐである；
（ｉｖ）４５位は、Ｒである；
（ｖ）７４位は、Ｓである；
（ｖｉ）８３位は、Ｒである；
（ｖｉｉ）８９位は、ＬまたはＴである；
（ｖｉｉｉ）９６位は、Ｐである；
（ｉｘ）１０８位は、Ｌである；
のうちの１または複数が当てはまるようになっており、
例えば、ここでＣＴＬＡ４結合性物質は次の変異セット：
ａ．８９位はＬおよび１１位はＶである；
ｂ．８９位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｃ．８９位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｄ．８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｅ．８９位はＬおよび１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｆ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
ｇ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰおよび１０８位はＬである；
ｈ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｉ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１０位はＫもしくはＱである；
ｊ．１位はＤ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｋ．１位はＥ、１１位はＶ、１４位はＰ、４５位はＲ、７４位はＳ、８３位はＲ、８９位はＬ、９６位はＰ、１０８位はＬおよび１１２位はＫもしくはＱである；
ｌ．１１位はＶおよび１１０位はＫもしくはＱである；または
ｍ．１１位はＶおよび１１２位はＫもしくはＱである
のうちの１または複数を含む。
【０１５７】
さらなる態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のポリペプチドのＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
前記ＣＴＬＡ４結合部分は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次のアミノ酸残基（すなわち、配列番号９のアミノ酸配列と比べた変異）：
−  １Ｅもしくは１Ｄ；
−  １１Ｖ；
−  １４Ｐ；
−  ４５Ｒ；
−  ７４Ｓ；
−  ８３Ｒ；
−  ８９Ｌもしくは８９Ｔ；
−  ９６Ｐ；または
−  １０８Ｌ；
のうちの１または複数を含むようになっており、
例えば、ここでＣＴＬＡ４結合部分は次の変異セット：
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；および１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；および１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｅと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １Ｄと、１１Ｖ；１４Ｐ；４５Ｒ；７４Ｓ；８３Ｒ；８９Ｌ；９６Ｐ；１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
のうちの１または複数を含む。
【０１５８】
言及されているように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が一価の型で用いられるとき、および／または本発明のポリペプチド（本明細書中に定義されているもの）のＣ末端に存在するとき、ＣＴＬＡ４結合性物質（およびその結果として、得られる本発明のポリペプチド）は、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持ち、このＣ末端伸長は本発明のポリペプチド中に存在するＣＴＬＡ４結合性物質（複数可）について本明細書中に記載されるとおりであり得て、および／またはＷＯ２０１２／１７５７４１もしくはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりであり得る。
【０１５９】
言及されているように、本発明において、８９位がＴである、または１１位がＶおよび８９位がＬである（１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ変異との好適な組み合わせであってもよく、とりわけ１１０Ｋまたは１１０Ｑ変異との組み合わせであってもよい）ＣＴＬＡ４部分が好ましい。また好ましいのは、１１位がＶおよび８９位がＬであって、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ変異を有してもよい；または１位がＤもしくはＥ、１１位がＶ；１４位がＰ；４５位がＲ；７４位がＳ；８３位がＲ；８９位がＬ；９６位がＰおよび１０８位がＬであるＣＴＬＡ４結合性物質である。
【０１６０】
それゆえに、１つの好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥおよびＤから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、ＬおよびＶから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、ＱおよびＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、ＡおよびＳから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、ＫおよびＲから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＶおよびＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、ＭおよびＰから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、ＱおよびＬから選ばれ；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、ＫおよびＱから選ばれ（好ましくはＴであり）；ならびに
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、ＫおよびＱから選ばれる（好ましくはＳである）。
【０１６１】
別の好ましい態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は：
−  アミノ酸配列ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
を持ち、ならびに：
−  ＢＬＡＳＴアルゴリズムによる比較を実施したときに配列番号９のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここでＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、並びに関係する具体的態様により必要とされる１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異は、配列同一度を決定するために考慮されない）を持ち、ここでアルゴリズムのパラメーターはそれぞれの配列の間でそれぞれの参照配列の全長にわたって最大マッチを与えるように選択され（例えばｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０；ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｍａｘ  ｍａｔｃｈｅｓ  ｉｎ  ａ  ｑｕｅｒｙ  ｒａｎｇｅ：０；ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｍａｔｒｉｘ；ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ：ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）；
ならびに／または：
−  配列番号９のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（本明細書中に定義されているとおりであり、上で挙げた存在し得る１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位における変異のいずれも考慮されず、存在し得るいずれのＣ末端伸長も考慮されない）（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）を持ち；
ならびに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するとき、好ましくは：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎを持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれる、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり；
ならびに本発明のポリペプチドのＮ末端に存在するとき、好ましくは１位にＤ（すなわち、配列番号９と比べたＥ１Ｄ変異）を持ち、
ここで次のもの：
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１位におけるアミノ酸残基は、ＥもしくはＤである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１４位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の４５位におけるアミノ酸残基は、Ｒである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の７４位におけるアミノ酸残基は、Ｓである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８３位におけるアミノ酸残基は、Ｒである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の９６位におけるアミノ酸残基は、Ｐである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｌである；
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＫおよびＱから選ばれる；または
−  ＣＴＬＡ４結合部分の１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、ＫおよびＱから選ばれる
のうちの１または複数が当てはまる。
【０１６２】
１つの具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１Ｖと８９Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｄ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１Ｅ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６３】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  ８９Ｌと１１Ｖとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、９６Ｐ、１０８Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６４】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６５】
別の具体的であるが限定されない態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、言及された位置（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされたもの）において次の変異セット（すなわち、配列番号９の配列と比べた変異）：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｄ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌとの組み合わせ；
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ
を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６６】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、８９位にＴまたはＬを含み（例えば１Ｄまたは１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌ）を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６７】
別の態様において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、１１位にＶおよび８９位にＬ（例えば１Ｄまたは１Ｅ、１１Ｖ、１４Ｐ、４５Ｒ、７４Ｓ、８３Ｒ、８９Ｌ、９６Ｐおよび１０８Ｌ）を含み、ＣＤＲ、例えば配列番号９または４８−８３または１４３に示されるもの（例えばＡｂｍによるもの）などを持ち、本明細書中に記載されるとおりである配列番号９のアミノ酸配列と全体的な配列同一度を持つ。
【０１６８】
言及されているように、本明細書中に記載される態様による本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分は、好ましくは、任意にＥ１Ｄ変異、Ｌ１１Ｖ変異、Ａ１４Ｐ変異、Ｑ４５Ｒ変異、Ａ７４Ｓ変異、Ｋ８３Ｒ変異、Ｖ８９Ｌ変異、Ｍ９６Ｐ変異およびＱ１０８Ｌ変異の好適な組み合わせを、好ましくはＱ１０８Ｌと他のＡ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒ変異のうちのいずれか１つとの好適な組み合わせを、好ましくはこれらの他の変異のうちのいずれか２つとの組み合わせで、より好ましくはこれらの他の変異のうちのいずれか３つとの（例えば組み合わせＡ１４Ｐ、Ａ７４ＳおよびＫ８３Ｒなどとの）組み合わせで、例えばこれらの変異のうちの４つ全てなどとの組み合わせを含有するようなものである（およびやはり、ＣＴＬＡ４結合部分が一価であるとき、または本発明の化合物もしくはポリペプチドのＮ末端に存在するとき、好ましくはＥ１Ｄ変異もである）（配列番号９のアミノ酸配列に対するもの）。また、９６位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるメチオニン残基は、別の天然に存在するアミノ酸残基、例えばＰｒｏなど（Ｃｙｓ、ＡｓｐまたはＡｓｎ以外のもの）に置き換え得る。
【０１６９】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）のいくつかの好ましいが限定されない例は配列番号５０から８３および１４３中に与えられ、これらの配列のうちの１または複数を好適に含む本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１７０】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）の例は、配列番号６２から６５および８０から８３および１４３の配列である。これらのうち、配列番号６４および６５は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＮ末端に存在させるのにとりわけ適しており、配列番号８０および８１は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在させるのにとりわけ適している。
【０１７１】
ＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が、それらが存在するＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のＣ末端に存在するおよび／またはこれを形成するとき（またはそうでなければ、それらがかかるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に、ＩＳＶＤのＣ末端が定常ドメイン（例えばＣＨ１ドメインなど）と会合していないもしくは連結されていないことを一般に意味する「露出した」Ｃ末端を持つとき；やはりＷＯ２０１２／１７５７４１およびＰＣＴ／ＥＰ２０１５／６０６４３（ＷＯ２０１５１７３３２５）、への参照がなされる）、これはまた、好ましくは式（Ｘ）ｎのＣ末端伸長を持ち、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、天然に存在するアミノ酸残基から独立して選ばれる（だが、好ましい１つの態様によると、これはシステイン残基を何ら含まない）、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基である。
【０１７２】
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）のいくつかの好ましいが限定されない例によると、Ｘおよびｎは、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）について本明細書中にさらに記載されるとおりであることができる。
【０１７３】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が（配列番号９のアミノ酸配列に対して）１１０位または１１２位において変異を含有するとき（本明細書中に記載される１１位および／または８９位における変異と組み合わせてもよい）、フレームワーク４（１０９位から開始する）の５つのＣ末端アミノ酸残基は次のように置換することができる：
（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＫＳ（配列番号８８）、ＶＴＶＱＳ（配列番号８９）、ＶＫＶＳＳ（配列番号９０）もしくはＶＱＶＳＳ（配列番号９１）；または
（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＫＳＸ（ｎ）（配列番号９２）、ＶＴＶＱＳＸ（ｎ）（配列番号９３）、ＶＫＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号９４）もしくはＶＱＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号９５）、例えばＶＴＶＫＳＡ（配列番号９６）、ＶＴＶＱＳＡ（配列番号９７）、ＶＫＶＳＳＡ（配列番号９８）もしくはＶＱＶＳＳＡ（配列番号９９）など。
【０１７４】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）が１１０位または１１２位において変異を含有しない（が、本明細書中に記載される１位、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位および／または１０８位における変異のみを含有する）とき、フレームワーク４（１０９位から開始する）のＣ末端アミノ酸残基は通常、次のいずれかである：
（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しないとき：ＶＴＶＳＳ（配列番号１００）（配列番号２の配列におけるもののように）；または
（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在するとき：ＶＴＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号１０１）、例えばＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０２）など。これらのＣ末端配列において、Ｘおよびｎは、Ｃ末端伸長について本明細書中に定義されているとおりである。
【０１７５】
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質
本明細書中にさらに記載されるように、本発明により提供されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）は、本明細書中に記載される少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）ＰＤ１結合部分および本明細書中に記載される少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）ＣＴＬＡ４結合部分を含み、半減期エクステンダーを、例えば血清タンパク質に、例えば血清アルブミンなどに、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合するＩＳＶＤを、例えばＡＬＢ１１００２を含んでもよい。本発明は、本明細書に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質Ｆ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０およびＦ０２３７００９２５を提供する。
【０１７６】
本発明は、改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質、とりわけ改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性ＩＳＶＤ、よりとりわけには改良されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４二重特異性ナノボディを提供することを目的とする。本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、１１位、１４位、４５位、７４位、８３位、８９位、９６位、１０８位、１１０位および／または１１２位において変異した配列番号９のアミノ酸配列（例えば配列番号１４３）を含むポリペプチドのバリアントであるポリペプチドを包含するＣＴＬＡ４結合部分を包含するもの；ならびに１位、１１位、１４位、５２ａ位、７３位、７４位、８３位、８９位、１００ａ位、１１０位および／または１１２位が変異した配列番号１または２のアミノ酸配列（例えば配列番号１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１または１４２）を含むポリペプチドのバリアントであるポリペプチドを包含するＰＤ１結合部分を包含するものを包含する。本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、配列番号１０３−１３４、１４６、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む。
【０１７７】
とりわけ、本発明のポリペプチド中に存在するＰＤ１結合性物質（複数可）、並びに本発明のポリペプチド中に存在するＣＴＬＡ４結合性物質（複数可）の両方とも、本明細書中にさらに記載されるとおりである１１位、８９位、１１０位および／または１１２位における変異の組み合わせを含む（Ｋａｂａｔナンバリングを用いたもの）。
【０１７８】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）はまた、本発明のある実施形態において、本明細書中にさらに記載されるようにＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を含む。ＷＯ２０１２／１７５７４１中に（これだけでなく例えばＷＯ２０１３／０２４０５９およびＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中にも）記載されるように、Ｃ末端のアラニン伸長は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＩＳＶＤ、例えばナノボディ）のＣ末端領域に位置する推定エピトープへのいわゆる「先在抗体」（ＩｇＧであると推定される）の結合を防ぐことができる。このエピトープは、他の残基のなかでも、Ｃ末端配列ＶＴＶＳＳ（配列番号１００）の表面に露出したアミノ酸残基、並びに１４位におけるアミノ酸残基（ならびにアミノ酸配列中で同残基の隣の／近いアミノ酸残基、例えば１１位、１３位および１５位など）を包含するものと推定され、また８３位におけるアミノ酸残基（ならびにアミノ酸配列中で同残基の隣の／近いアミノ酸残基、例えば８２位、８２ａ位、８２ｂ位および８４位など）および／または１０８位におけるアミノ酸残基（ならびにアミノ酸配列中で同残基の隣の／近いアミノ酸残基、例えば１０７位など）を含み得る。
【０１７９】
しかしながら、かかるＣ末端アラニン（または一般にＣ末端伸長）の存在はある範囲の対象（患者としての健常対象の両方）からの血清中に見出すことができる「先在抗体」の結合を大きく低減させる（いくつかの場合において本質的に完全に防ぐ）ことができるが、何人かの対象からの血清（例えばいくつかの免疫疾患、例えばＳＬＥなどを有する患者からの血清など）は、ＩＳＶＤがかかるＣ末端アラニン（またはより一般にはかかるＣ末端伸長）を含有するときであってもＩＳＶＤのＣ末端領域に（かかる領域が曝露されたときに）結合することができる先在抗体を含有することがあることが見出されている。やはり、譲受人による２０１５年５月１３日に出願された「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ（改良された免疫グロブリン可変ドメイン）」という名称の、共に係属中で未公開のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）への参照がなされる。
【０１８０】
したがって、本発明の１つの具体的目的は、いわゆる「先在抗体」、とりわけＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載された種類のもの（例えばＣ末端伸長の存在下であってもＩＳＶの露出したＣ末端領域に結合することができる先在抗体）による結合性が低い（または低減された）ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）を提供することである。
【０１８１】
本発明によると、この目的は以下により達成される。
【０１８２】
（ｉ）本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中でのＣ末端伸長Ｘ（ｎ）の存在；これと組み合わせて
（ｉｉ）本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のうちの１または複数、好ましくはこれらの全ての中での、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の１１位、８９位、１１０位および／または１１２位（上に示される配列番号１、２および９に対して）における特定のアミノ酸残基／変異の存在。ここで残基／変異は本明細書中にさらに記載されるとおりである。好ましくは、前記変異は、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の少なくともＣ末端のＰＤ１結合部分またはＣＴＬＡ４結合部分の中に、より好ましくは本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在する結合部分の全ての中に、すなわち、ＰＤ１結合部分の中およびＣＴＬＡ４結合部分の中およびまた血清アルブミン結合部分（存在する場合）の中に存在する。
【０１８３】
表Ｃは、本発明のポリペプチド中に存在するＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の１１位、８９位、１１０位および１１２位に存在することができるアミノ酸残基についての、いくつかの好ましいが限定されない可能な組み合わせを収載する。
【０１８４】
表Ｃ：配列番号１、２および／または９のＰＤ１結合部分およびＣＴＬＡ４結合部分中のアミノ酸１１位、８９位、１１０位および１１２位における変異の可能な組み合わせ
【表１３】
2019502370.tif 000022
【０１８５】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１および／またはＣＴＬＡ４に結合する結合部分は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個またはそれより多い付加的な変異であって、例えば置換、挿入および欠失から各々独立して選ばれる変異を含む。
【０１８６】
発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＣ末端伸長は、ＷＯ２０１２／１７５７４１およびＰＣＴ／ＥＰ２０１５／６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりであり得て、好ましくは式（Ｘ）ｎのものであり、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、天然に存在するアミノ酸残基から独立して選ばれる（だが、好ましい１つの態様によると、これはシステイン残基を何ら含まない）、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基である。
【０１８７】
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）のいくつかの好ましいが限定されない例によると、Ｘおよびｎは次のもの：
（ａ）ｎ＝１およびＸ＝Ａｌａ；
（ｂ）ｎ＝２および各々のＸ＝Ａｌａ；
（ｃ）ｎ＝３および各々のＸ＝Ａｌａ；
（ｄ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｅ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｆ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｇ）ｎ＝１およびＸ＝Ｇｌｙ；
（ｈ）ｎ＝２および各々のＸ＝Ｇｌｙ；
（ｉ）ｎ＝３および各々のＸ＝Ｇｌｙ；
（ｊ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｋ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｌ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；
（ｍ）ｎ＝２および各々のＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ；
（ｎ）ｎ＝３および各々のＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ；
（ｏ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）；または
（ｐ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝ＡｌａもしくはＧｌｙ（残りのアミノ酸残基（複数可）Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選ばれるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選ばれる）
であることができ、態様（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｍ）および（ｎ）が好ましく、ｎ＝１または２である態様が好ましく、ｎ＝１である態様が好ましい。
【０１８８】
なお、好ましくは、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するあらゆるＣ末端伸長は、（遊離の）システイン残基を含有しない（前記システイン残基がさらなる機能付与、例えばＰＥＧ化のために用いられるまたは意図されるものでないかぎり）。
【０１８９】
有用なＣ末端伸長のいくつかの具体的だが限定されない例は、次のアミノ酸配列：Ａ、ＡＡ、ＡＡＡ、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＡＧ、ＧＡ、ＡＡＧ、ＡＧＧ、ＡＧＡ、ＧＧＡ、ＧＡＡまたはＧＡＧである。
【０１９０】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）はまた、本発明のある実施形態において、１位にアスパラギン酸残基（Ｄ）を含む（すなわち、ポリペプチドのＮ末端における最初のアミノ酸残基は好ましくはＤである）。
【０１９１】
本発明のある実施形態において、半減期エクステンダーは、血清タンパク質に、例えば血清アルブミンなどに、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）である。とりわけ、かかる血清アルブミン結合ＩＳＶＤまたはナノボディは、例えばＥＰ２１３９９１８、ＷＯ２０１１／００６９１５、ＷＯ２０１２／１７５４００、ＷＯ２０１４／１１１５５０中に記載されるヒト血清アルブミンに対する（単一）ドメイン抗体またはｄＡｂであり得て、とりわけＷＯ２００４／０４１８６５、ＷＯ２００６／１２２７８７、ＷＯ２０１２／１７５４００またはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載される血清アルブミン結合ナノボディであり得る。好ましい血清アルブミン結合ＩＳＶＤは、ナノボディＡｌｂ−１（ＷＯ２００６／１２２７８７を参照されたい）またはそのヒト化バリアント、例えばＡｌｂ−８（ＷＯ２００６／１２２７８７、配列番号６２）、Ａｌｂ−２３（ＷＯ２０１２／１７５４００、配列番号１）など、ならびに他のヒト化された（好ましくは配列最適化もされた）Ａｌｂ−１のバリアントおよび／またはＡｌｂ−８もしくはＡｌｂ−２３のバリアント（またはより一般には、Ａｌｂ−１、Ａｌｂ−８およびＡｌｂ−２３と本質的に同じＣＤＲを持つＩＳＶＤ）である。本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在することができるいくつかの好ましいが限定されない血清アルブミン結合性物質のアミノ酸配列は、配列番号８４および８５として図５中に与えられる。本発明のある実施形態において、ＨＳＡ結合ＩＳＶＤはＡＬＢ１１００２である。
【０１９２】
かかる血清アルブミン結合ＩＳＶＤは、存在するとき、その配列内に先在抗体による結合を低減させる１または複数のフレームワーク変異を含有し得る。とりわけ、かかる血清アルブミン結合ＩＳＶＤがＶＨドメインである、本質的にこれからなるおよび／またはこれに由来するナノボディまたは（単一）ドメイン抗体であるとき、血清アルブミン結合ＩＳＶＤは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりである、ならびに／または本質的に本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）中に存在するＣＴＬＡ４結合部分およびＰＤ１結合部分について本明細書中に記載されるとおりである１１位、８９位、１１０位および／または１１２位におけるアミノ酸残基／変異（の好適な組み合わせ）を含有し得る。例えば、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）は、本発明の化合物中で用いることができる、先在抗体による結合を低減させる１１位、８９位、１１０位および／または１１２位におけるアミノ酸残基／変異を含有するＡｌｂ−１、Ａｌｂ−８およびＡｌｂ−２３の多数のバリアントを記載している。
【０１９３】
かかる血清アルブミン結合ＩＳＶＤが本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のＣ末端に存在するとき、血清アルブミン結合ＩＳＶＤ（および結果として本発明の化合物）は、本発明のある実施形態においてＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持ち、このＣ末端伸長は本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＰＤ１結合部分もしくはＣＴＬＡ４結合部分について本明細書中に記載されるとおりであり得て、および／またはＷＯ２０１２／１７５７４１もしくはＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりであり得る。これはまた、本発明のある実施形態において先在抗体の結合を低減させる変異を、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載される１１位、８９位、１１０位および／または１１２位におけるアミノ酸残基／変異（の好適な組み合わせ）などを持つ。
【０１９４】
血清アルブミン結合ＩＳＶＤの存在／使用は半減期が増加した本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）を提供する好ましい方法であるが、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の半減期を増加させる他の手段、例えば血清アルブミンに結合する他の結合ドメインの使用、他の血清タンパク質、例えばトランスフェリンまたはＩｇＧなどに結合するＩＳＶＤの使用、ＰＥＧ化、ヒトアルブミン（例えばＨＳＡ）もしくは好適なその断片との融合、または好適な血清アルブミン結合ペプチドの使用などもまた、本発明の範囲の中に包含される。
【０１９５】
それゆえに、さらなる態様において、本発明は、本明細書中に記載される少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）ＰＤ１結合部分および本明細書中に記載される少なくとも１つの（例えば１つまたは２つなどの）ＣＴＬＡ４結合部分を含み、１または複数の（例えば１つまたは２つなどの）半減期エクステンダー、例えば血清タンパク質に、例えば血清アルブミンなどに結合する１つまたは２つなどのＩＳＶＤ、例えばＨＳＡ（例えばＡＬＢ１１００２）を含んでもよいＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）に関し、ここで前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質はヒト対象において少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば少なくとも１０日などの半減期（本明細書中に定義されるもの）を持つ。
【０１９６】
言及されているように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）は、好ましくはまた、増加した半減期（本明細書中に定義されるもの）を持ち、これは一般に、ポリペプチドが本発明のポリペプチド中に存在する一価のＰＤ１結合性物質の半減期よりも少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍または２０倍よりも長い半減期（本明細書中に定義されるもの）を、並びに本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在する一価のＣＴＬＡ４結合部分の半減期よりも少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍または２０倍よりも長い半減期（本明細書中に定義されるもの）を持つことを意味する（ヒトおよび／または好適な動物モデル、例えばマウスまたはカニクイザルなどのいずれかにおいて測定されるように）。
【０１９７】
本発明のある実施形態において、半減期エクステンダーはヒト血清アルブミンに結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）であり、例えばＡＬＢ１１００２が下の表Ｄまたは図５中にまとめられる。
【０１９８】
表Ｄ．ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合性物質ＡＬＢ１１００２
【表１４】
2019502370.tif 000023
2019502370.tif 000024
【０１９９】
＊ＣＤＲは下線および／または太字。ＡＬＢ１１００２はＣ末端アラニンを欠いていてもよい。ＨＳＡ結合性物質は、配列番号１４４に示されるが１１Ｌおよび／または９３Ｖを含むアミノ酸配列、例えばＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４４）を含んでもよい。
【０２００】
本発明のある実施形態において、半減期エクステンダーは、ＨＳＡ  ＩＳＶＤ（例えばナノボディ）であって、
−  アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳ（配列番号１９９）またはＳＦＧＭＳ（配列番号１９９のアミノ酸６−１０）を含むＣＤＲ１；および
−  アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００）またはＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００のアミノ酸１−１０）を含むＣＤＲ２；および
−  アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号２０１）を含むＣＤＲ３
を含み、ならびに
−  配列番号８４、８５もしくは１４４のアミノ酸配列との少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一度（ここで存在し得る任意のＣ末端伸長、並びにＣＤＲは配列同一度を決定するために考慮されない）；
および／または
−  配列番号８４、８５もしくは１４４のアミノ酸配列との７未満、例えば５未満など、好ましくは３未満、例えば３つ、２つもしくは１つだけの「アミノ酸の相違」（ここで前記アミノ酸の相違は、存在する場合はフレームワークおよび／またはＣＤＲの中に存在し得るが、好ましくはフレームワーク中にのみ存在し、ＣＤＲ中に存在しない）
を持ってもよく、
及び、任意に
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎであって、ここでｎは１から１０、好ましくは１から５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各々のＸは、独立して選ばれ、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）よりなる群から独立して選ばれる（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基を有する。
【０２０１】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）において、ＰＤ１結合部分、ＣＴＬＡ４結合部分（および存在する場合は血清アルブミン結合ＩＳＶ）は、互いに直接的に、または１もしくは複数の好適なリンカーを介して連結することができる。いくつかの好ましいが限定されないリンカーは、９ＧＳ、１５ＧＳまたは３５ＧＳリンカー（９、１５または３５個のＧおよびＳアミノ酸の任意の組み合わせ、例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号８６）である。本発明のある実施形態において、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）であり、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。
【０２０２】
本発明は、１または複数のＰＤ１結合部分、１または複数のＣＴＬＡ４結合部分および任意に血清アルブミン結合ＩＳＶＤ（存在する場合）のほかに１または複数の他のアミノ酸配列、化学物質または部分を含有することができる、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）を包含する。これらの他のアミノ酸配列、化学物質または部分は、（結果として得られる）本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質に１もしくは複数の所望の性質を付与し、および／または（結果として得られる）本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の性質を所望のように変えること、例えば、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質に所望の生物学的および／もしくは治療活性を提供すること（例えば、結果として得られる化合物がＰＤ１、ＣＴＬＡ４およびその他の治療関連標的に関して「三重特異性」になるように、結果として得られる本発明の化合物にアフィニティーならびに好ましくはＰＤ１およびＣＴＬＡ４のほかの別の治療関連標的に対する効力を提供すること）、薬物動態学的および／もしくは薬力学的性質を改変もしくは改良すること、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を特異的な細胞、組織もしくは器官（がん細胞およびがん組織を包含する）に標的化すること、細胞傷害効果を与えること、ならびに／または検出可能なタグもしくは標識として働くことができる。かかる他のアミノ酸配列、化学物質または部分のいくつかの限定されない例は：
−  ＰＤ１およびＣＴＬＡ４以外の治療関連標的に対する１もしくは複数の結合ドメインもしくは結合ユニット（すなわち、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４および他の治療関連標的、例えばＣＤ２７、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２  ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７またはＴＳＬＰについて三重特異性である本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を提供するためのもの）；ならびに／または
−  本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を所望の細胞、組織もしくは器官（例えばがん細胞など）に標的化する１もしくは複数の結合ドメインもしくは結合ユニット；ならびに／または
−  ＰＤ１に対する特異性の向上を提供する１もしくは複数の結合ドメインもしくは結合ユニット（通常、これらはＰＤ１に結合することが可能だが、一般にそれら自体は本質的にＰＤ１に対して機能的ではない）；ならびに／または
−  ＣＴＬＡ４に対する特異性の向上を提供する１もしくは複数の結合ドメインもしくは結合ユニット（通常、これらはＣＴＬＡ４に結合することが可能だが、一般にそれら自体は本質的にＣＴＬＡ４に対して機能的ではない）；ならびに／または
−  本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質が（所望の）細胞内に内部移行することを可能にする結合ドメイン、結合ユニットもしくは他の化学物質（例えばＷＯ２００５／０４４８５８中に記載される内部移行性の抗ＥＧＦＲナノボディ）；ならびに／または
−  ペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）、例えば細胞傷害性ペイロードなど；ならびに／または
−  検出可能な標識もしくはタグ、例えば放射性標識もしくは蛍光標識など；ならびに／または
−  本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の固定化、検出および／もしくは精製に役立つことができるタグ、例えばＨＩＳもしくはＦＬＡＧ３タグなど；ならびに／または
−  機能付与することができるタグ、例えばＣ末端のＧＧＣもしくはＧＧＧＣタグなど
である。
【０２０３】
本発明の範囲は、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）が（好ましくはヒトの）慣用的抗体（例えばＦｃ部分またはその機能的断片または１もしくは複数の定常ドメインなど）の、および／またはラクダ科動物の重鎖のみの抗体（例えば１または複数の定常ドメインなど）からの１または複数の部分または断片を含有することもできることを包含する。
【０２０４】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）が１または複数のさらなる結合ドメインまたは結合ユニット（例えば前の段落中に記載されるようなもの）を含有するとき、これらの他の結合ドメインまたは結合ユニットは、好ましくは１または複数のＩＳＶＤを含み、より好ましくは全てＩＳＶＤである。例えば、限定ではなく、これらの１または複数のさらなる結合ドメインまたは結合ユニットは、１または複数のナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨおよび／またはラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨなどを包含する）、ＶＨドメインであるもしくはＶＨドメインに由来する（単一ドメイン）抗体、ＶＨドメインであるもしくはＶＨドメインからなるもしくはＶＨドメインに由来するｄＡｂ、またはさらにはＶＬドメインであるもしくは本質的にＶＬドメインからなる（単一）ドメイン抗体もしくはｄＡｂであることができる。とりわけ、これらの１または複数の結合ドメインまたは結合ユニットは、存在するとき、１または複数のナノボディを含み得て、よりとりわけ、全てナノボディである。
【０２０５】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質がそのＣ末端においてＩＳＶＤを持つとき（ここでＣ末端結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）は、ＰＤ１結合部分、ＣＴＬＡ４結合部分、ヒト血清アルブミン結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ、例えばＡＢＬ１００２）または前の段落中で言及されているような別のＩＳＶＤであり得る）、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（すなわち、前記Ｃ末端ＩＳＶＤ）は、好ましくは本明細書中に記載されるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持つ。
【０２０６】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）が１または複数のＰＤ１結合部分、１または複数のＣＴＬＡ４結合部分および血清アルブミン結合部分（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）（存在する場合）に加えて、任意のさらなる結合部分（例えばＩＳＶＤ）（前の段落中で言及されているようなもの）を含有し、ここで、かかるさらなるＩＳＶＤがナノボディであるかまたはＶＨ配列から本質的になるおよび／またはＶＨ配列に由来するＩＳＶＤである場合、本発明の好ましい態様によると、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在する前記１または複数の（好ましくは全ての）かかるＩＳＶＤは、それらの配列内に、先在抗体による結合を低減させる１または複数のフレームワーク変異を含有する。とりわけ、本発明のこの態様によると、かかるさらなるＩＳＶＤは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６０６４３（ＷＯ２０１５／１７３３２５）中に記載されるとおりである、ならびに／または本質的にＰＤ１結合部分およびＣＴＬＡ４結合部分について本明細書中に記載されるとおりである１１位、８９位、１１０位および／または１１２位におけるアミノ酸残基／変異（の好適な組み合わせ）を含有し得る。１つの具体的態様において、本発明のポリペプチドがそのＣ末端においてＩＳＶＤを持つとき（ここでＣ末端ＩＳＶＤは、ＰＤ１結合性物質、ＣＴＬＡ４結合部分、血清アルブミン結合部分（例えばＩＳＶＤ）または前の段落中で言及されているような別のＩＳＶＤであり得る）、少なくともＣ末端に存在するおよび／またはこれを形成する前記ＩＳＶＤは、先在抗体による結合を低減させるかかるフレームワーク変異を持つ（および前記Ｃ末端ＩＳＶＤは、好ましくはまた本明細書中に記載されるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を持つ）。
【０２０７】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つのＰＤ１結合部分（例えばＩＳＶＤ）および少なくとも１つのＣＴＬＡ４結合部分（例えばＩＳＶＤ）を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）に関し（ここでＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は本明細書中にさらに記載されるとおりである）、ここでＰＤ１結合部分（例えばＩＳＶＤ）は配列番号１６から４７および１３５−１４２から選ばれ、ＣＴＬＡ４結合部分（例えばＩＳＶＤ）は配列番号５０から８３、１４３および１９６から選ばれる。
【０２０８】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つのＰＤ１結合部分（例えばＩＳＶＤ）および少なくとも１つのＣＴＬＡ４結合部分（例えばＩＳＶＤ）を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）に関し（ここでＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は本明細書中にさらに記載されるとおりである）、ここでＰＤ１結合部分（例えばＩＳＶＤ）は配列番号３０、３１、４６、４７および１３５から選ばれ、ＣＴＬＡ４結合部分（例えばＩＳＶＤ）は配列番号６２から６５および／または８０から８３および／または１４３から選ばれる。
【０２０９】
やはり、これら全てのＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）は、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）（本明細書中に記載されるもの）および１位においてＤを含有し、本明細書中にさらに記載されるように血清アルブミン結合部分（例えばＩＳＶＤ）を含有し得る。
【０２１０】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）は少なくとも２つの結合部分（例えばＩＳＶＤｓ、例えばナノボディなど）を持ち（すなわち、少なくとも二価であり）、少なくともＰＤ１およびＣＴＬＡ４に対するものである（すなわち、少なくとも二重特異性である）ことは本明細書中の開示から明らかである。ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質はさらに、異なる「型」を持つことができ、すなわち、本質的に二価、三価または多価であることができ、二重特異性、三重特異性または多重特異性であることができ、ＰＤ１および／またはＣＴＬＡ４に関して二重パラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ）（本明細書中に定義されるおよび例えばＷＯ２００９／０６８６２５中で定義されるもの）であることができる。例えば、限定ではなく、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は：
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）および１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に２つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）および１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）および２つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に２つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）および２つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびヒト血清アルブミンに対する１つの結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に２つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびヒト血清アルブミンに対する１つのＩＳＶＤ結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、２つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびヒト血清アルブミンに対する１つの結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に２つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、２つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびヒト血清アルブミンに対する１つの結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびＰＤ１に対する１つのさらなる結合部分（例えばＩＳＶＤ）（ＰＤ１に関して機能的であってもなくてもよい）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）およびＣＴＬＡ４に対する１つのさらなる結合部分（例えばＩＳＶＤ）（ＣＴＬＡ４に関して機能的であってもなくてもよい）からなる；
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）、ＰＤ１に対する１つのさらなる結合部分（例えばＩＳＶＤ）（ＰＤ１に関して機能的であってもなくてもよい）およびヒト血清アルブミンに対する１つの結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる；または
−  本質的に１つのＰＤ１結合部分（本明細書中に記載されるもの）、１つのＣＴＬＡ結合部分（本明細書中に記載されるもの）、ＣＴＬＡ４に対する１つのさらなる結合部分（例えばＩＳＶＤ）（ＣＴＬＡ４に関して機能的であってもなくてもよい）およびヒト血清アルブミンに対する１つの結合部分（例えばＩＳＶＤ）（本明細書中に記載されるもの）からなる
ことができる。
【０２１１】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）の他の好適な型は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかである。
【０２１２】
当業者に明らかであるように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）が局所使用（すなわち、皮膚上または眼内）を意図されたとき、または例えば消化管中のどこかで（すなわち、経口投与または坐剤による投与の後に）、もしくは肺中のどこかで（すなわち、吸入による投与の後に）（局所化された）治療作用を持つ予定であるとき、またはそうでなければその意図される作用位置に直接的に（例えば直接的な注射により）適用する予定であるとき、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、通常、半減期延長を必要としない。これらの場合、本発明の二価の二重特異性ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または半減期が延長されていない別の本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の使用が好ましいものであり得る。
【０２１３】
半減期が延長されていない本発明のポリペプチドのいくつかの好ましいが限定されない例は下の表Ｃ−１中に模式的に表され、これらの各々は本発明のさらなる態様を形成する。半減期が延長されていない本発明の好適なポリペプチドの他の例は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかである。やはり、これらのポリペプチドは、好ましくは１位にＤを持つ。
【０２１４】
表Ｃ−１．半減期延長性ＩＳＶＤを有さない本発明のいくつかのＣＴＬＡ４／ＰＤ１結合性物質の略図
【表１５】
2019502370.tif 000025
2019502370.tif 000026
2019502370.tif 000027
【０２１５】
当業者に明らかであるように、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）が全身投与ならびに／または慢性疾患もしくは障害の予防および／もしくは治療を意図されたとき、通常、本発明の前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は半減期（本明細書中に定義されるもの）が増加したもの、すなわち本発明のかかるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質中に存在するＣＴＬＡ４結合部分およびＰＤ１結合部分と比べて増加したものであることが好ましい。より好ましくは、本発明のかかるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、半減期延長性結合部分、例えば好ましくはヒト血清アルブミンに結合するＩＳＶＤ、およびとりわけにはナノボディ（本明細書中に記載されるもの）を含有する。
【０２１６】
本発明のかかるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のいくつかの好ましいが限定されない例は下の表Ｃ−２中に模式的に表され、これらの各々は本発明のさらなる態様を形成する。半減期が延長された本発明の好適なＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の他の例は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかである。一般に、半減期が延長された本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質については、Ｃ末端伸長の存在が大いに好ましい。やはり、これらのポリペプチドは、好ましくは１位にＤを持つ。
【０２１７】
表Ｃ−２．半減期延長性部分を有する本発明のいくつかのＣＴＬＡ４／ＰＤ１結合性物質の略図
【表１６】
2019502370.tif 000028
2019502370.tif 000029
【０２１８】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、構造：
・［ＰＤ１結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＰＤ１結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＰＤ１結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［アルブミン結合部分］；
・［ＰＤ１結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［ＣＴＬＡ４結合部分］−［アルブミン結合部分］；または
・［ＣＴＬＡ４結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［ＰＤ１結合部分］−［アルブミン結合部分］；
を含み、各々Ｃ末端アラニンを包含してもよい。
【０２１９】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）のいくつかの好ましいが限定されない例は、図６または配列番号１０３−１３４、１４６、１４９、１５１もしくは１５３中に与えられる。
【０２２０】
本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、次のＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５である。
【０２２１】
Ｆ０２３７００９１０は、ヌクレオチド配列：
【表１７】
2019502370.tif 000030
2019502370.tif 000031
2019502370.tif 000032
【０２２２】
（配列番号１４５）を含むポリヌクレオチドによりコードされ得る。
【０２２３】
Ｆ０２３７００９１０は、アミノ酸配列：
【表１８】
2019502370.tif 000033
2019502370.tif 000034
【０２２４】
（配列番号１４６）を含み；シグナルペプチド、例えばＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号１４７）などを含んでもよい。
【０２２５】
Ｆ０２３７００９１０は、次の部分：
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ヒト血清アルブミン結合性物質ＡＬＢ１１００２；
・Ｃ末端エクステンダーのアラニン、
例えば：
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＨＳＡ結合性物質  配列番号１４４；
・アラニン
を含む。
【０２２６】
Ｆ０２３７００９１８は、ヌクレオチド配列：
【表１９】
2019502370.tif 000035
2019502370.tif 000036
2019502370.tif 000037
2019502370.tif 000038
【０２２７】
（配列番号１４８）を含むポリヌクレオチドによりコードされ得る。
【０２２８】
Ｆ０２３７００９１８は、アミノ酸配列：
【表２０】
2019502370.tif 000039
2019502370.tif 000040
【０２２９】
（配列番号１４９）を含み；シグナルペプチド、例えばＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号１４７）などを含んでもよい。
【０２３０】
Ｆ０２３７００９１８は、次の部分：
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ヒト血清アルブミン結合性物質ＡＬＢ１１００２；
・Ｃ末端エクステンダーのアラニン、
例えば：
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＨＳＡ結合性物質  配列番号１４４；
・アラニン
を含む。
【０２３１】
Ｆ０２３７００９２０は、ヌクレオチド配列：
【表２１】
2019502370.tif 000041
2019502370.tif 000042
2019502370.tif 000043
2019502370.tif 000044
【０２３２】
（配列番号１５０）を含むポリヌクレオチドによりコードすることができる。
【０２３３】
Ｆ０２３７００９２０は、アミノ酸配列：
【表２２】
2019502370.tif 000045
2019502370.tif 000046
【０２３４】
（配列番号１５１）を含み；シグナルペプチド、例えばＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号１４７）などを含んでもよい。
【０２３５】
Ｆ０２３７００９２０は、次の部分：
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ヒト血清アルブミン結合性物質ＡＬＢ１１００２；
・Ｃ末端エクステンダーのアラニン
例えば：
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＨＳＡ結合性物質  配列番号１４４；
・アラニン
を含む。
【０２３６】
Ｆ０２３７００９２５は、ヌクレオチド配列：
【表２３】
2019502370.tif 000047
2019502370.tif 000048
2019502370.tif 000049
2019502370.tif 000050
【０２３７】
（配列番号１５２）を含むポリヌクレオチドによりコードされ得る。
【０２３８】
Ｆ０２３７００９２５は、アミノ酸配列：
【表２４】
2019502370.tif 000051
2019502370.tif 000052
【０２３９】
（配列番号１５３）を含み；シグナルペプチド、例えばＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＥＫＲ（配列番号１４７）などを含んでもよい。
【０２４０】
Ｆ０２３７００９２５は、次の部分：
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＰＤ１結合性物質１０２Ｃ１２（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｉ８９Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ）；
・ペプチドリンカー；
・ヒト血清アルブミン結合性物質ＡＬＢ１１００２；
・Ｃ末端エクステンダーのアラニン、
例えば：
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＰＤ１結合性物質  配列番号１３５（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＣＴＬＡ４結合性物質  配列番号１４３（任意選択でＤ１Ｅ）；
・３５ＧＳリンカー  配列番号８６；
・ＨＳＡ結合性物質  配列番号１４４；
・アラニン
を含む。
【０２４１】
本発明は、Ｆ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５のＰＤ１結合部分、ＣＴＬＡ４結合部分およびＨＳＡ結合部分を含む任意の結合性物質を包含する。
【０２４２】
本発明は、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質が０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換を含み、ならびに／または配列番号１４６、１４９、１５１もしくは１５３に示される配列に対して８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の配列同一性を含み、例えば、かかる置換および／もしくは配列同一性を持つＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質がＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合する能力を保持する実施形態を包含する。本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の最初のアミノ酸はＥである。本発明のある実施形態において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の最初のアミノ酸はＤである。
【０２４３】
本発明はまた、本明細書に示されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドのうちのいずれか、またはそれらの医薬組成物を含む注入装置を提供する。注入装置は、非経口の経路、例えば筋肉内、皮下または静脈内を介して患者の体内に物質を導入する装置である。例えば、注入装置は、シリンジ（例えば医薬組成物を予め充填したもの、例えば自動注入器など）であり得て、これは例えば注入される液体（例えばＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物を含むもの）を入れるためのシリンダーもしくは注射外筒、液体の注入のために皮膚および／または血管を貫くための針；ならびに液体をシリンダーから押し出して針穴を通すためのプランジャーを包含する。本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物を含む注入装置は、静脈内（ＩＶ）注入装置である。かかる装置は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物をカニューレまたはトロカール／針の中に包含し、これは、そのカニューレまたはトロカール／針を通じて対象の体内に導入される液体（例えば生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、グルコースを包含してもよい乳酸リンゲル溶液）を入れるためのバッグまたはリザーバーに取り付け得るチューブに取り付け得る。本発明のある実施形態において、トロカールおよびカニューレが対象の静脈内に挿入されてトロカールが挿入されたカニューレから取り外されると、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物は装置内に導入され得る。ＩＶ装置は、例えば末梢静脈内（例えば手または腕の中）に；上大静脈もしくは下大静脈内に、もしくは右心房内（例えば中心ＩＶ）に；または例えば上大静脈もしくは右心房に達するまで心臓に向かって進む鎖骨下、内頚もしくは大腿静脈内（例えば中心静脈ライン）に挿入され得る。本発明のある実施形態において、注入装置は自動注射器；ジェット式注射器または外部注入ポンプである。ジェット式注射器は、表皮に浸透する液体の高圧で細い噴射を用いることで、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物を患者の体に導入する。外部注入ポンプは、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質またはその医薬組成物を制御された量で患者の体内に送達させる医療機器である。外部注入ポンプは、電気的に動いても機械的に動いてもよい。異なるポンプは異なる方法で作動し、例えばシリンジポンプは液体をシリンジリザーバー中に入れて可動ピストンが液体の運搬を制御し、エラストマーポンプは液体を伸縮性バルーンリザーバー中に入れて弾力のあるバルーン壁からの圧力が液体の運搬を駆動する。ペリスタルティックポンプにおいては、ローラーのセットが１本のフレキシブルチューブを挟んで下り、液体を前に押す。マルチチャネルポンプにおいては、複数のリザーバーから複数の速度で液体を運搬することができる。
【０２４４】
エピトープ結合および交差遮断
本発明は、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を、並びにかかる結合性物質の同じＰＤ１および／またはＣＴＬＡ４エピトープに結合する結合性物質、例えばＩＳＶＤ（例えばナノボディ）および抗体およびその抗原結合断片を提供する。例えば、本発明は、Ｆ０２３７００９１２（配列番号１９３）と同じ残基に接触することによりヒトＣＴＬＡ４に結合する結合性物質、またはそのＣＴＬＡ４結合部分（１１Ｆ０１（Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｖ、Ａ１４Ｐ、Ｑ４５Ｒ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ９６Ｐ、Ｑ１０８Ｌ））と同じ残基に接触する結合性物質を包含する。例えば、本発明は、ヒトＣＴＬＡ４の残基ＶＲＶＴＶＬ（配列番号１９５の残基３３−３８）、ＡＤＳＱＶＴＥＶＣ（配列番号１９５の残基４１−４９）、および／またはＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧ（配列番号１９５の残基９３−１０６）、例えば３つ全ての部位においてヒトＣＴＬＡ４に結合する結合性物質を提供する。本発明のある実施形態において、結合性物質はヒトＣＴＬＡ４のこれらの残基における結合を水素−重水素交換アッセイにおいて実証しており、例えば、図１７に本質的に示される結合ヒートマップにより表されるように、重水素、例えばＤ２Ｏなどの存在下での水素の重水素への交換から残基を保護する。
【０２４５】
本発明はまた、本明細書中に開示される結合性物質のいずれかの結合を交差遮断することが可能な交差遮断結合性物質（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を提供する。かかる交差遮断結合性物質は、かかる交差遮断を呈する任意の分子、例えばＩＳＶＤ、ナノボディ、抗体またはその抗原結合断片であり得る。
【０２４６】
一般的に、参照結合性物質を「交差遮断」するまたは参照結合性物質と「交差競合」する結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）または抗体もしくはその抗原結合断片（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５など）は、交差遮断アッセイにおいて参照結合性物質のその抗原への結合を５０％またはそれより多く遮断する結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）または抗体もしくはその抗原結合断片をいい、逆に、参照結合性物質は交差遮断アッセイにおいて結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）または抗体もしくはその抗原結合断片のその抗原への結合を５０％またはそれより多く遮断する。交差遮断は、表面（ｓｕｆａｃｅ）プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーといった当該技術分野で知られている任意のアッセイを用いて決定することができる。
【０２４７】
本発明のある実施形態において、交差遮断はＢｉａｃｏｒｅアッセイの使用により決定される。便宜上、２つの結合性物質への参照がなされるが、本発明の範囲は、本発明の結合性物質を交差遮断する抗体およびその抗原結合断片、例えばＦａｂ断片を包含する。Ｂｉａｃｏｒｅ装置（例えばＢｉａｃｏｒｅ  ３０００）は、製造業者の推奨に沿って操作される。
【０２４８】
それゆえに、１つの交差遮断アッセイにおいて、ＰＤ１またはＣＴＬＡ４は、標準的なアミンカップリング化学を用いてＣＭ５  Ｂｉａｃｏｒｅチップにカップリングされることで、ＰＤ１またはＬＡＧ３がコーティングされた表面を生成する。例えば、ＰＤ１またはＣＴＬＡ４の２００−８００共鳴単位がチップにカップリングされる（または容易に測定可能な結合レベルを与えるが用いられる試験試薬の濃度により容易に飽和可能である任意の量）。
【０２４９】
互いに交差遮断するそれらの能力が判定される２つの結合性物質（Ａ＊およびＢ＊と名付ける）を好適なバッファー中で１：１の結合部分のモル比で混合することで、試験混合物を作る。
【０２５０】
試験ミックス中の各々の結合性物質濃度は、Ｂｉａｃｏｒｅチップ上に捕捉されたＰＤ１分子またはＣＴＬＡ４分子上のその結合性物質に対する結合部位を容易に飽和するのに十分に高いものであるべきである。混合物中の結合性物質は同じモル濃度である。
【０２５１】
結合性物質Ａ＊を単独で、および結合性物質Ｂ＊を単独で含有する別々の溶液も調製する。これらの溶液中の結合性物質Ａ＊および結合性物質Ｂ＊は、試験ミックスと同じバッファー中で、同じ濃度であるべきである。
【０２５２】
試験混合物を、ＰＤ１またはＣＴＬＡ４がコーティングされたＢｉａｃｏｒｅチップ上を通過させ、総結合量を記録する。チップを次いで、チップに結合したＰＤ１またはＣＴＬＡ４を損なわずに結合した結合性物質を除去するように処理する。本発明のある実施形態において、これは、チップを３０ｍＭ  ＨＣｌで６０秒間処理することによりなされる。
【０２５３】
結合性物質Ａ＊の溶液を単独で、次いでＰＤ１またはＣＴＬＡ４がコーティングされた表面上を通過させ、結合量を記録する。チップを再度、チップに結合したＰＤ１またはＣＴＬＡ４を損なわずに結合した結合性物質の全てを除去するように処理する。
【０２５４】
結合性物質Ｂ＊の溶液を単独で、次いでＰＤ１またはＣＴＬＡ４がコーティングされた表面上を通過させ、結合量を記録する。
【０２５５】
結合性物質Ａ＊および結合性物質Ｂ＊の混合物の最大理論的結合を次に算出し、これはＰＤ１またはＣＴＬＡ４表面上を単独で通過したときの各々の結合性物質の結合の合計である。実際に記録された混合物の結合がこの理論的最大値より小さい場合、２つの結合性物質は互いに交差遮断する。
【０２５６】
それゆえに、一般的に、本発明による交差遮断結合性物質は、上のＢｉａｃｏｒｅ交差遮断アッセイにおいて、アッセイの際に第二の結合性物質の存在下で記録される結合が、例えば組み合わせた２つの結合性物質の最大理論的結合の８０％から０．１％の間（例えば８０％から４％）、例えば最大理論的結合の７５％から０．１％の間（例えば７５％から４％）、例えば最大理論的結合（ちょうど上で定義されているもの）の７０％から０．１％の間（例えば７０％から４％）になるように、ＰＤ１またはＣＴＬＡ４に結合するものである。
【０２５７】
本発明のある実施形態において、本発明によってＰＤ１および／またはＣＴＬＡ４結合性物質が交差遮断するか、または交差遮断の能力があるかを決定するため、ＥＬＩＳＡアッセイが用いられる。
【０２５８】
アッセイの一般原則は、ＰＤ１結合性物質またはＣＴＬＡ４結合性物質をＥＬＩＳＡプレートのウェル上にコーティングすることである。過剰量の第二の潜在的に交差遮断性の抗ＰＤ１結合性物質またはＣＴＬＡ４結合性物質を溶液中に加える（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートに結合していない）。限定的な量のＰＤ１またはＣＴＬＡ４を次いでウェルに加える。コーティングされた結合性物質と溶液中の結合性物質は限定的な量のＰＤ１分子またはＣＴＬＡ４分子の結合を競合する。プレートを洗浄して、コーティングされた結合性物質によって結合していないＰＤ１またはＣＴＬＡ４を除去し、また第二の溶液相の結合性物質、並びに第二の溶液相の結合性物質とＰＤ１またはＣＴＬＡ４との間に形成された何らかの複合体も除去する。結合したＰＤ１またはＣＴＬＡ４の量を次いで適切なＰＤ１またはＣＴＬＡ４検出試薬を用いて測定する。コーティングされた結合性物質を交差遮断することが可能な溶液中の結合性物質は、コーティングされた結合性物質が第二の溶液相の結合性物質の非存在下で結合することができるＰＤ１分子またはＣＴＬＡ４分子の数に対する、コーティングされた結合性物質が結合することができるＰＤ１分子またはＣＴＬＡ４分子の数の減少を引き起こすことが可能である。
【０２５９】
発現方法
本発明は、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばナノボディのようなＩＳＶＤ）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を作成する組換え方法であって、（ｉ）前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを導入し、例えばここで前記ポリヌクレオチドはベクター中にあり、および／またはプロモーターに作動可能に連結されており；（ｉｉ）宿主細胞（例えばＣＨＯまたはピキアまたはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））を前記ポリヌクレオチドの発現に好都合な条件下で培養し、及び（ｉｉｉ）場合により前記宿主細胞および／または宿主細胞が増殖した培地からＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を単離することを含む方法を包含する。例えば、ＷＯ０４／０４１８６２、ＷＯ２００６／１２２７８６、ＷＯ２００８／０２００７９、ＷＯ２００８／１４２１６４またはＷＯ２００９／０６８６２７を参照されたい。
【０２６０】
本発明はまた、本明細書中に記載されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）をコードするポリヌクレオチドに関する。ポリヌクレオチドは、本発明のある実施形態において、１または複数の制御配列に作動可能に連結され得る。ポリヌクレオチドは、プラスミドまたはベクターの形態であり得る。やはり、かかるポリヌクレオチドは、一般に、Ａｂｌｙｎｘ  Ｎ．Ｖ．の公開された特許出願中に、例えばＷＯ０４／０４１８６２、ＷＯ２００６／１２２７８６、ＷＯ２００８／０２００７９、ＷＯ２００８／１４２１６４またはＷＯ２００９／０６８６２７などの中に記載されるとおりのものであることができる。
【０２６１】
本発明はまた、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）をコードするヌクレオチド配列または核酸に関する。本発明はさらに、前述のヌクレオチド配列または核酸およびそれ自体公知である１または複数の遺伝子コンストラクトのエレメントを包含する遺伝子コンストラクトを包含する。遺伝子コンストラクトは、プラスミドまたはベクターの形態であり得る。やはり、かかるコンストラクトは、一般に、Ａｂｌｙｎｘ  Ｎ．Ｖ．の公開された特許出願中に、例えばＷＯ２００４／０４１８６２、ＷＯ２００６／１２２７８６、ＷＯ２００８／０２００７９、ＷＯ２００８／１４２１６４またはＷＯ２００９／０６８６２７などの中に記載されるとおりのものであることができる。
【０２６２】
本発明はまた、かかるヌクレオチド配列もしくは核酸を含有する、および／または本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を発現する（もしくは発現する能力がある）宿主または宿主細胞に関する。やはり、かかる宿主細胞は、一般に、Ａｂｌｙｎｘ  Ｎ．Ｖ．の公開された特許出願中に、例えばＷＯ２００４／０４１８６２、ＷＯ２００６／１２２７８６、ＷＯ２００８／０２００７９、ＷＯ２００８／１４２１６４またはＷＯ２００９／０６８６２７などの中に記載されるとおりのものであることができる。
【０２６３】
本明細書中に記載されるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）、ポリペプチド、化合物およびポリヌクレオチド（例えばベクター）は、好ましくは循環に投与される。それらはそれ自体で、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質、ポリペプチド、化合物およびポリヌクレオチドが循環に入ることを可能にする任意の好適な方法で、例えば静脈内などに、注射もしくは注入を通じて、またはＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質、ポリペプチド、化合物およびポリヌクレオチドが循環に入ることを可能にする任意の他の好適な方法（経口投与、皮下投与、筋肉内投与、皮膚を通じた投与、鼻腔内投与、肺を介した投与などを包含するもの）で投与することができる。好適な投与方法および経路は、やはり、例えばまたＡｂｌｙｎｘ  Ｎ．Ｖ．の公開された特許出願、例えばＷＯ０４／０４１８６２、ＷＯ２００６／１２２７８６、ＷＯ２００８／０２００７９、ＷＯ２００８／１４２１６４またはＷＯ２００９／０６８６２７などの教示からも当業者に明らかである。
【０２６４】
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５））の発現のための宿主としての哺乳動物細胞を包含する真核生物および原核生物の宿主細胞は、当該技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を包含する。これらとしては、なかでも、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、Ｈｅｌａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞および多数の他の細胞株が挙げられる。哺乳動物宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスターの細胞が挙げられる。とりわけ好ましい細胞株は、どの細胞株の発現レベルが高いかを決定することを通じて選択される。用いられ得る他の細胞株は昆虫細胞株（例えばスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）またはトリコプルシア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ））、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。真菌細胞としては酵母および糸状真菌細胞が挙げられ、例えばピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ミヌータ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌータ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピキア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピキア・オプンティアエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スティプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クリベロマイセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クリベロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコ���ルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）が挙げられる。ピキア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、任意のサッカロマイセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクリベロマイセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）。
【０２６５】
さらに、産生細胞株からのＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の発現は、多数の公知の技術を用いて増大させることができる。例えばグルタミン合成酵素遺伝子発現系（ＧＳ系）はある条件下で発現を増大させるための通例のアプローチである。ＧＳ系は、欧州特許第０２１６８４６号、第０２５６０５５号および第０３２３９９７ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号との関係で全体的にまたは一部が論じられている。それゆえに、本発明のある実施形態において、哺乳動物宿主細胞（例えばＣＨＯ）はグルタミン合成酵素遺伝子を欠損していて培地中でグルタミン酸の非存在下で増殖するが、免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドはグルタミン合成酵素遺伝子を含み、これは宿主細胞中の遺伝子欠損を補う。
【０２６６】
本発明は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含む試料（例えば培養培地、細胞溶解液または細胞溶解液フラクション、例えば溶解液の可溶性フラクション）を精製媒体（例えばカチオン交換媒体、アニオン交換媒体、疎水性交換媒体、アフィニティー精製媒体（例えばプロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、プロテインＬ））に導入すること、および媒体に結合しない前記試料のフロースルーフラクションから精製されたＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を回収すること；またはフロースルーフラクションを捨て、結合したＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を媒体から溶出させて溶出物を回収することのいずれかを含む、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を精製する方法を包含する。本発明のある実施形態において、媒体は試料がアプライされるカラムの中にある。本発明のある実施形態において、宿主細胞中での抗体または断片の組換え発現の後に精製方法が行われ、例えばここでは宿主細胞が最初に溶解され、および溶解液は媒体上での精製の前に不溶性材料から精製されてもよく；またはここではＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質が宿主細胞により培養培地中に分泌され、培地もしくはそのフラクションが精製媒体にアプライされる。
【０２６７】
一般的に、特定の細胞株または遺伝子導入動物中で生産される糖タンパク質は、その細胞株または遺伝子導入動物中で生産される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを持つ。それゆえ、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の特定のグリコシル化パターンは、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の生産のために用いられるその特定の細胞株または遺伝子導入動物に依存したものとなる。非フコシル化Ｎ−グリカンのみを含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は本発明の一部であり、非フコシル化抗体は典型的にインビトロおよびインビボの両方でそのフコシル化された対応物よりも強力な有効性を呈することが示されていることから、有利であり得る（例えばＳｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７８：３４６６−３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらのＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、それらの炭化水素構造はヒト血清ＩｇＧ中に存在するポピュレーションの正常な構成成分であることから、免疫原性である可能性は低い。
【０２６８】
本発明は、チャイニーズハムスター卵巣細胞中で生産される免疫グロブリンに典型的に付加されるＮ−結合型グリカン（ＣＨＯ  Ｎ−結合型グリカン）または遺伝子改変酵母細胞、例えばピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）などの中で生産される免疫グロブリンに典型的に付加されるＮ−結合型グリカン（遺伝子改変酵母  Ｎ−結合型グリカン）を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を包含する。例えば、本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、図７に示される「遺伝子改変酵母  Ｎ−結合型グリカン」または「ＣＨＯ  Ｎ−結合型グリカン」のうちの１または複数（例えばＧ０および／またはＧ０−Ｆおよび／またはＧ１および／またはＧ１−Ｆおよび／またはおよび／またはＧ２−Ｆおよび／またはＭａｎ５）を含む。本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、遺伝子改変酵母  Ｎ−結合型グリカンを、すなわち、Ｇ０および／またはＧ１および／またはＧ２を含み、さらにＭａｎ５を包含してもよい。本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、ＣＨＯ  Ｎ−結合型グリカンを、すなわち、Ｇ０−Ｆ、Ｇ１−ＦおよびＧ２−Ｆを含み、さらにＧ０および／またはＧ１および／またはＧ２および／またはＭａｎ５を包含してもよい。本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質上の全てのＮ−結合型グリカンのうちの約８０％から約９５％（例えば約８０−９０％、約８５％、約９０％または約９５％）が遺伝子改変酵母  Ｎ−結合型グリカンまたはＣＨＯ  Ｎ−結合型グリカンである。Ｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｙｅａｓｔ．  ２８（３）：２３７−２５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ３１３（５７９２）：１４４１−１４４３（２００６）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １８（５）：３８７−３９２（２００７）を参照されたい。例えば、本発明のある実施形態において、遺伝子改変酵母細胞は、ＧＦＩ５．０またはＹＧＬＹ８３１６または米国特許第７，７９５，００２号もしくはＺｈａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ９８８：３１−４３（２０１３）に示される株である。国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０６６７６５号も参照されたい。
【０２６９】
組み合わせ
特定の実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、例えば本明細書中で論じられる任意の疾患、例えばがんなどを治療または予防するため、かかる治療または予防の必要がある対象において、単独で、または他のさらなる治療剤および／もしくは治療手法を伴って用いられ得る。さらなる治療剤を伴うかかる結合性物質を含む組成物またはキット、例えば薬学的に許容される担体を含む医薬組成物もまた本発明の一部である。
【０２７０】
用語「伴う」は、構成成分であるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）が例えばペンブロリズマブまたはニボルマブのような別の剤と一緒に、例えば同時送達のために１つの組成物に、または別々に２つもしくはそれより多い組成物（例えばキット）に製剤化することができることを指し示す。各々の構成成分は、他の構成成分が投与されるのと異なる時に対象に投与することができ；例えば各々の投与は、間をあけて、所与の時間にわたって、同時でなく（例えば別々にまたは逐次的に）投与され得る。そのうえ、別々の構成成分は、同じ経路によりまたは異なる経路により対象に投与され得る（例えば、ここで本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は非経口的に投与され、パクリタキセルは経口的に投与される）。
【０２７１】
特定の実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、抗がん治療剤または例えば免疫調節受容体阻害剤のような免疫調節薬剤、例えば受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を伴って用いられ得る。
【０２７２】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、阻害剤（例えば有機低分子または抗体もしくはその抗原結合断片）、例えばＭＴＯＲ（哺乳類ラパマイシン標的）阻害剤、細胞傷害剤、白金剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、微小管安定剤、タキサン、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ５２阻害剤、ＣＤ３０阻害剤、ＲＡＮＫ（核内因子カッパ−Ｂ受容体活性化因子）阻害剤、ＲＡＮＫＬ（核内因子カッパ−Ｂ受容体活性化因子リガンド）阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＥＲ１阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＨＥＲ４阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＣＤ２２阻害剤、ＣＤ７９ｂ阻害剤、ＥｒｂＢ２阻害剤またはファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤などのうちの１または複数を伴う。
【０２７３】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片（例えばイピリムマブ）、抗ＰＤ１抗体もしくはその抗原結合断片（例えばペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＣＴ−０１１）、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＴＩＭ３、抗ＣＳ１、（例えばエロツズマブ）、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３（例えばリリルマブ）、抗ＣＤ２７、抗ＣＤ１３７（例えばウレルマブ）、抗ＧＩＴＲ（例えばＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ−Ｌ１（例えばＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＩＬＴ１、抗ＩＬＴ２、抗ＩＬＴ３、抗ＩＬＴ４、抗ＩＬＴ５、抗ＩＬＴ６、抗ＩＬＴ７、抗ＩＬＴ８、抗ＣＤ４０、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ１３７、抗ＫＩＲ２ＤＬ１、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３、抗ＫＩＲ２ＤＬ４、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、抗ＫＩＲ３ＤＬ１、抗ＫＩＲ３ＤＬ２、抗ＫＩＲ３ＤＬ３、抗ＮＫＧ２Ａ、抗ＮＫＧ２Ｃ、抗ＮＫＧ２Ｅ、またはかかる標的；ＩＬ−１０、抗ＩＬ１０、抗ＴＳＬＰ（胸腺間質性リンパ球新生因子）もしくはＰＥＧ化ＩＬ−１０の任意の有機低分子阻害剤のうちの１または複数を伴う。
【０２７４】
本発明のある実施形態において、ＰＥＧ化ＩＬ−１０分子上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分の分子量は、約１２，０００ダルトンまたは約２０，０００ダルトンである。本発明のある実施形態において、ＰＥＧ化ＩＬ−１０（例えばＰＥＧ化ヒトＩＬ−１０）は、リンカー（例えばＣ２−１２アルキル、例えば−−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−−など）を介してＩＬ−１０の単一サブユニットの単一のアミノ酸残基に共有結合した１または複数のポリエチレングリコール分子を含み、ここで前記アミノ酸残基はＮ末端アミノ酸残基のアルファアミノ基またはリジン残基のイプシロンアミノ基である。本発明のある実施形態において、ＰＥＧ化ＩＬ−１０は（ＰＥＧ）ｂ−Ｌ−ＮＨ−ＩＬ−１０であり、ここでｂは１−９、ＬはＩＬ−１０の単一のアミノ酸残基の窒素（Ｎ）に共有結合したＣ２−１２アルキルリンカー部分である。本発明のある実施形態において、ＰＥＧ化ＩＬ−１０のＩＬ−１０は式：［Ｘ−−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ］ｂ−Ｌ−ＮＨ−ＩＬ−１０であり、ここでＸはＨまたはＣ１−４アルキル；ｎは２０から２３００；ｂは１から９；およびＬはＣ１−１１アルキルリンカー部分であって、これは１つのＩＬ−１０サブユニットのアミノ末端におけるアルファアミノ基の窒素（Ｎ）に共有結合しており；ただしｂが１より大きいとき、ｎの総数は２３００を超えない。ＵＳ７，０５２，６８６を参照されたい。
【０２７５】
本発明のある実施形態において、抗ＩＬ−１０抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト化抗体）は、下に示されるＣＤＲ：
ＣＤＲ−Ｌ１：ＫＴＳＱＮＩＦＥＮＬＡ（配列番号１５４）；
ＣＤＲ−Ｌ２：ＮＡＳＰＬＱＡ（配列番号１５５）；
ＣＤＲ−Ｌ３：ＨＱＹＹＳＧＹＴ（配列番号１５６）；
ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＦＴＦＳＤＹＨＭＡ（配列番号１５７）；
ＣＤＲ−Ｈ２：ＳＩＴＬＤＡＴＹＴＹＹＲＤＳＶＲＧ（配列番号１５８）；
ＣＤＲ−Ｈ３：ＨＲＧＦＳＶＷＬＤＹ（配列番号１５９）
を含む（ＵＳ７，６６２，３７９を参照されたい）。
【０２７６】
本発明のある実施形態において、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト化抗体）は、下に示されるＣＤＲ：
ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＩＦＴＤＹＡＭＨ（配列番号１６０）；
ＣＤＲ−Ｈ２：ＴＦＩＰＬＬＤＴＳＤＹＮＱＮＦＫ（配列番号１６１）；
ＣＤＲ−Ｈ３：ＭＧＶＴＨＳＹＶＭＤＡ（配列番号１６２）；
ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＰＩＳＩＳＶＨ（配列番号１６３）；
ＣＤＲ−Ｌ２：ＦＡＳＱＳＩＳ（配列番号１６４）；
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＴＦＳＬＰＹＴ（配列番号１６５）
を含む（ＷＯ２００８／７６３２１を参照されたい）。
【０２７７】
本発明のある実施形態において、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト化抗体）は、下に示されるＣＤＲ：
ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＦＩＩＫＡＴＹＭＨ（配列番号１６６）；
ＣＤＲ−Ｈ２：ＲＩＤＰＡＮＧＥＴＫＹＤＰＫＦＱＶ（配列番号１６７）；
ＣＤＲ−Ｈ３：ＹＡＷＹＦＤＶ（配列番号１６８）；
ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＥＮＩＹＳＦＬＡ（配列番号１６９）；
ＣＤＲ−Ｌ２：ＨＡＫＴＬＡＥ（配列番号１７０）；
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＨＹＹＧＳＰＬＴ（配列番号１７１）；
を含む（ＷＯ２０１２／０４３６７を参照されたい）。
【０２７８】
それゆえに、本発明は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を含むもの）をペンブロリズマブを伴って含む組成物；同様に、ペンブロリズマブ（例えばペンブロリズマブ２００ｍｇを３週毎に１回投薬）を伴う有効量のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を対象に投与することを含む、対象においてがんを治療または予防する方法を包含する。対象は別のさらなる治療剤を伴って投与されてもよい。
【０２７９】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、アミノ酸配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
（配列番号１７２）を含む免疫グロブリン重鎖（またはそのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３）、およびアミノ酸配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号１７３）を含む免疫グロブリン軽鎖（またはそのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）を含むペンブロリズマブ抗体を伴う。
【０２８０】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、アミノ酸配列：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１７４）を含む免疫グロブリン重鎖（またはそのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３）、およびアミノ酸配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号１７５）を含む免疫グロブリン軽鎖（またはそのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）を含む抗体を伴う。
【０２８１】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、４−ヒドロキシタモキシフェン、５−デオオキシウリジン（ｄｅｏｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、５´−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、６−メカプトプリン（ｍｅｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、７−ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ−４４３６５４、酢酸アビラテロン、アブラキサン、ＡＢＴ−５７８、アコルビフェン、ＡＤＳ−１００３８０、アフリバーセプト、ＡＬＴ−１１０、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンジオスタチン、ＡＰ−２３５７３、ＡＲＱ−１９７、アルゾキシフェン、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴＩ３３８７、ＡＴ−９２６３、アトラセンタン、アキシチニブ、ＡＺＤ１１５２、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン、ＢＣ−２１０、ベソドトクス（ｂｅｓｏｄｕｔｏｘ）、ベバシズマブ、ＢＧＪ３９８、ビカルタミド、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ＢＫＭ１２０、ブレオマイシン、ＢＭＳ−２１４６６２、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−２７５２９１、ＢＭＳ−３１０７０５、ボルテジミブ（ｂｏｒｔｅｚｉｍｉｂ）、ブセレリン、ブスルファン、カルシトリオール、カンプトテシン、カネルチニブ、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ＣＣ８４９０、ＣＥＡ（組換えワクシニア−がん胎児抗原ワクチン）、セジラニブ、ＣＧ−１５２１、ＣＧ−７８１、クラミドシン、クロラムブシル、クロロトキシン、シレンジタイド、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コビメトニブ（ｃｏｂｉｍｅｔｎｉｂ）、ＣＯＬ−３、ＣＰ−７２４７１４、シクロホスファミド、シプロテロン、酢酸シプロテロン、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダシノスタット、ダクチノマイシン、ダロツズマブ、ダヌセルチブ、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ダウノルビシン、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、デグエリン、デニロイキン、デオキシコホルマイシン、デプシペプチド、ジアリルプロピオニトリル、ジエチルスチルベストロール、ジフチトクス、ＤＮＥ０３、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、エドテカリン、イットリウム−９０標識エドトレオチド、エドトレオチド、ＥＫＢ−５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンコラフェニブ、エンドスタチン、エンザルタミド、エンザスタウリン、エピルビシン、エピチロンＢ（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ  Ｂ）、ＥＲＡ−９２３、アービタックス、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、フィクラツズマブ、フィナステリド、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロ��、フルタミド、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベストラント、ガレテロン、ガネテスピブ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ジャイマテカン、グルコピラノシルリピドＡ、ゴセレリン、酢酸ゴセレリン、ゴシポール、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ−３３３９、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシウレア、ＩＣ８７１１４、イダルビシン、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、イホスファミド、ＩＭ８６２、イマチニブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、イミキモド、ＩＮＣ２８０、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン、インターロイキン−２、インターロイキン−１２、イピリムマブ、イリノテカン、ＪＮＪ−１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ−０４０２、ラパチニブ、ラソフォキシフェン、ＬＥＥ０１１、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、リポソーム内包パクリタキセル、ロムスチン、ロナファルニブ、ルカントン、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、ＬＹ３００９１２０、マリマスタット、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ＭＥＫ１６２、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、加熱死菌マイコバクテリウム・オブエンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｂｕｅｎｓｅ）懸濁物、トザセルチブ、ＭＬＮ８０５４、ナチトクラクス（ｎａｔｉｔｏｃｌａｘ）、ネオバスタット、ネラチニブ、ノイラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ、ニルチミド（ｎｉｌｕｔｉｍｉｄｅ）、ノラトレキセド、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、オブリメルセン、オクトレオチド、オファツムマブ、オレゴボマブ、オルナツズマブ（ｏｒｎａｔｕｚｕｍａｂ）、オルテロネル、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パミドロネート、パニツムマブ、パゾパニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ−インターフェロン、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペリホシン、フェニルアラニンマスタード、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＩＫ−７５、ピペンドキシフェン、ＰＫＩ−１６６、プリカマイシン、ポリ−ＩＣＬＣ、ポルフィマー、プレドニゾン、プロカルバジン、プロゲスチン類、ＰＳＫタンパク質結合多糖（担子菌コリオルス・ベルシカラー（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）由来）、ＰＬＸ８３９４、ＰＸ−８６６、Ｒ−７６３、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、リダフォロリムス、リツキシマブ、ロミデプシン、ＲＴＡ７４４、ルビテカン、スクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、Ｓｄｘ１０２、セリシクリブ、セルメチニブ、セマクサニブ、ＳＦ１１２６、シロリムス、ＳＮ３６０９３、ソラフェニブ、スピロノラクトン、スクワラミン、ＳＲ１３６６８、ストレプトゾシン、ＳＵ６６６８、スベロイルアナリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎａｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、スニチニブ、合成エストロゲン、タランパネル、タリモジーン・ラハーパレプベック、タモキシフェン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テスミリフェン、テストステロン、テトランドリン、ＴＧＸ−２２１、サリドマイド、６−チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ、チピファルニブ、チボザニブ、ＴＫＩ−２５８、ＴＬＫ２８６、ＴＮＦ□（腫瘍壊死因子アルファ）、トポテカン、クエン酸トレミフェン、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレチノイン、トリコスタチンＡ、トリシリビンホスフェート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）一水和物、パモ酸トリプトレリン、ＴＳＥ−４２４、ウラシルマスタード、バルプロ酸、バルルビシン、バンデタニブ、バタラニブ、ＶＥＧＦトラップ、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビタキシン、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、ボリノスタット、ＶＸ−７４５、ワートマニン、Ｘｒ３１１、Ｚ−１００バチルス・ツベルクロシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）熱水抽出物、ザノリムマブ、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ−３０４７０９、ＺＭ３３６３７２またはＺＳＴＫ４７４のうちのいずれか１つまたは複数を伴う。
【０２８２】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、１または複数の制吐薬を伴い、これらとしては、限定されるものではないが、カソピタント（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）および他のＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ＭＧＩ  ＰｈａｒｍａによりＡｌｏｘｉとして販売）、アプレピタント（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＥｍｅｎｄとして販売）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｔａｒａｘ（登録商標）として販売）、メトクロプラミド（ＡＨ  Ｒｏｂｉｎｓ  Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡによりＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売）、ロラゼパム（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪによりＡｔｉｖａｎ（登録商標）として販売）、アルプラゾラム（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＸａｎａｘ（登録商標）として販売）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪによりＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販売）、ドロペリドール（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，ＧＡによりＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）として販売）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによりＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売）、グラニセトロン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪによりＫｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売）、オンダンセトロン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによりＺｏｆｒａｎ（登録商標）として販売）、ドラセトロン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売）、トロピセトロン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪによりＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売）が挙げられる。
【０２８３】
がん治療の他の副作用としては、赤血球細胞および白血球細胞の欠乏が挙げられる。したがって、本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、かかる欠乏を治療または予防する剤、例えばフィルグラスチム、ＰＥＧ−フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンアルファまたはダルベポエチンアルファなどを伴う。
【０２８４】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、ワクチンを伴う。本発明のある実施形態において、ワクチンは、抗がんワクチン、ペプチドワクチン、ＲＮＡワクチンまたはＤＮＡワクチンである。例えば、本発明のある実施形態において、ワクチンは腫瘍細胞（例えば放射線照射腫瘍細胞）または樹状細胞（例えば腫瘍ペプチドをパルスした樹状細胞）である。
【０２８５】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、治療手法を伴う。治療手法は、対象の治療において医師または臨床家により行われる１または複数のステップであって、何かしら臨床的に測定可能な程度、かかる症候の退縮もしくは消失を誘導することによって、またはかかる症候（複数可）、例えばがんの症候、例えば腫瘍増殖もしくは転移などの進行を阻害することによって治療された対象において（例えばがんおよび／または感染性疾患の）１または複数の症候を緩和することが意図されるものである。
【０２８６】
本発明のある実施形態において、治療手法は抗がん放射線療法である。例えば、本発明のある実施形態において、放射線療法は外部照射療法（ＥＢＴ）であり：これは高エネルギーＸ線ビームを腫瘍の場所に送達させる方法である。ビームは患者の外で（例えば直線加速器により）生成され、腫瘍部位に標的化される。これらのＸ線はがん細胞を破壊することができ、慎重な治療計画により周辺の正常組織を温存することが可能になる。放射線源は患者の体内に設置されない。本発明のある実施形態において、放射線療法は、プロトンビーム療法であり：これはＸ線の代わりにプロトンを罹患組織に照射する、あるタイプの原体療法である。本発明のある実施形態において、放射線療法は原体外部照射放射線療法であり：これは放射線療法を個々の体の構造に適合させるための先進的技術を使用する手法である。
【０２８７】
本発明のある実施形態において、放射線療法はブラキセラピーであり：これは、体内への一時的な放射性材料の設置であり、通常、ある領域に追加用量またはブーストの放射線照射を与えるために使用される。
【０２８８】
本発明のある実施形態において、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）を伴って投与される外科的手法は、外科的腫瘍摘出術である。
【０２８９】
治療的使用
本発明は、さらなる治療剤または治療手法を伴ってもよい本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の使用により予防または治療することができる少なくとも１つの疾患または障害を予防および／または治療する方法を包含し、この方法は、その必要がある対象に薬学的活性量のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質および／またはこれを含む医薬組成物を投与することを含む。
【０２９０】
「治療する」または「治療すること」は、例えば薬剤が治療活性を持つがんもしくは感染性疾患を持つまたはがんもしくは感染性疾患を持つことが疑われる対象の治療において、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質が有効な１または複数の疾患症候を持つ対象（例えばヒトのような哺乳類）に投与することを意味する。典型的に、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、何かしら臨床的に測定可能な程度、かかる症候の退縮もしくは消失を誘導することによって、またはかかる症候（複数可）、例としてがんの症候、例えば腫瘍増殖もしくは転移などの進行を阻害することによって治療された対象または集団において（例としてがんまたは感染性疾患の）１または複数の症候を緩和する「有効量」または「有効用量」で投与される。ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の有効量は、例えば患者の疾患ステージ、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を誘起する薬剤の能力などの因子に応じて変わり得る。
【０２９１】
治療される対象は任意の温血動物であり得るが、とりわけ哺乳類、よりとりわけにはヒトである。当業者に明らかであるように、治療される対象はとりわけ、本明細書中に言及される疾患および障害に罹患しているまたはそのリスクがあるヒトである。
【０２９２】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の医薬組成物または滅菌組成物を調製するため、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。かかる組成物は本発明の一部である。
【０２９３】
本発明の範囲は、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）または薬学的に許容される担体を包含し実質的に水を含まないその医薬組成物を含む、乾燥された、例えば凍結乾燥された組成物を包含する。
【０２９４】
治療薬および診断薬の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態の許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより調製され得る（例えばＨａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ´ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０２９５】
一般に、本明細書中に言及される疾患および障害の予防および／または治療のため、治療される具体的な疾患または障害、用いられるＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の効力および／または半減期、用いられる具体的な投与経路および具体的な医薬製剤または組成物に応じて、本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、一般に、１グラム／ｋｇ体重／日から０．０１マイクログラム／ｋｇ体重／日の間の量で、好ましくは０．１グラム／ｋｇ体重／日から０．１マイクログラム／ｋｇ体重／日の間の量で、例えば約１、１０、１００または１０００マイクログラム／ｋｇ体重／日の量で、連続的に（例えば注入による）、１日１回用量としてまたは１日の間で複数回に分けた用量として投与される。臨床家は、一般に、本明細書中に言及される因子に応じて好適な１日用量を決定することが可能である。また、具体的な場合において、臨床家は、例えば上で引用される因子および自身の専門的判断を基にして、これらの量から逸脱することを選択し得ることも明らかである。一般に、投与量についてのいくつかのガイダンスは、本質的に同じ経路を介して投与される同じ標的に対する同等の慣用的抗体または抗体断片が通常投与される量から、親和性／結合性、有効性、体内分布、半減期および当業者に周知の同様の因子の相違を考慮して、得ることができる。
【０２９６】
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）の対象への投与様式は変えることができる。投与経路としては、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼球内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が挙げられる。
【０２９７】
適切な用量の決定は、臨床家により、例えば当該技術分野において治療に影響することが知られているまたはその可能性があるパラメーターまたは因子を用いてなされる。一般に、用量の決定において、用量は最適用量よりもいくらか少ない量で始めて、その後、何らかのネガティブな副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増加させる。重要な診断的測定値としては、症候の、例えば炎症の症候の測定値、または生産される炎症性サイトカインのレベルが挙げられる。一般的に、用いられる生物学的物質は治療の標的となる動物と同じ種に由来することが望ましく、それによって試薬に対する何らかの免疫応答を最小化することができる。ヒト対象の場合、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましいものであり得る。適切な用量の選択におけるガイダンスが利用可能である（例えばＷａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；  Ｂａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０２９８】
疾患症候が緩和されたかどうかは、その症候の重症度または進行状態を判定するために医師または他の専門の医療提供者により典型的に用いられる任意の臨床的測定により判定することができる。本発明のある実施形態（例えば治療方法または製造物）はあらゆる対象における標的の疾患症候（複数可）の緩和において有効でないこともあるが、当該技術分野で公知である任意の統計的検定、例えばＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定、カイ２乗検定、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙによるＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定およびＷｉｌｃｏｘｏｎ検定などにより決定されるように、統計的に有意な数の対象において標的の疾患症候（複数可）を緩和する。
【０２９９】
治療される対象は、任意の哺乳類、例えばイヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、マウス、ウシ、サルまたはゴリラであり得て、好ましくはヒトである。当業者に明らかであるように、治療される対象は、とりわけ、本明細書中に言及される疾患および障害に罹患しているまたはそのリスクがあるヒトである。
【０３００】
一般に、治療レジメンは、所望の治療効果が達成されるまで、および／または所望の治療効果が維持されているかぎり続けられる。やはり、これは臨床家が決定することができる。
【０３０１】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）はＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合する能力があることから、これらはとりわけ、がん、転移性がん、固形腫瘍、血液がん、白血病、リンパ腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎臓移行上皮がん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺がん、非小細胞がん、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎臓細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳がん、神経膠芽腫、髄膜腫、脳下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｍｙｅｌｆｉｂｒｏｓｉｓ）、軟組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、乳がんおよび胃がんの治療または予防のために用いることができる。
【０３０２】
本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）は、感染性疾患、例えばウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症または寄生生物感染症などの治療または予防のために用いることができる。本発明のある実施形態において、ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エボラウイルス、肝炎ウイルス（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えばＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス類、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス脳炎ウイルスよりなる群から選択されるウイルスの感染症である。本発明のある実施形態において、細菌感染症は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、桿菌、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、バチルス・アントリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、エルシニア・ペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）およびボリエラ（Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ）よりなる群から選択される細菌の感染症である。本発明のある実施形態において、真菌感染症は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ目の属（ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ））、スポロトリクス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシ��オイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラズマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）よりなる群から選択される真菌の感染症である。本発明のある実施形態において、寄生生物感染症は、エントアメーバ・ヒストリチカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスティス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、ニッポストロンギルス・ブラジリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）よりなる群から選択される寄生生物の感染症である。
【０３０３】
本発明はまた、一般に、その必要がある対象（すなわち、前述の疾患のうちの１つに罹患している対象）に治療的有効量の本発明のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）（例えばＦ０２３７００９１０、Ｆ０２３７００９１８、Ｆ０２３７００９２０またはＦ０２３７００９２５）を投与することを含む、前述の疾患および障害を治療する方法に関する。本発明はまた、前述の疾患または障害のうちの１つの予防または治療における使用のためのＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質（例えばＰＤ１およびＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ（例えばナノボディ）を含むもの）に関する。
【０３０４】
本発明の他の態様、実施形態、利点および用途は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
【実施例】
【０３０５】
これらの例は本発明を例証することを意図しており、限定するものではない。実施例に示される組成物および方法は本発明の一部を形成する。
【０３０６】
実施例１：Ｆ０２３７００９０６ナノボディのＣＴＬＡ−４−Ｆｃへの結合
Ｆ０２３７００９２５の構成ブロックである一価のＦ０２３７００９０６ナノボディ（ＣＴＬＡ４結合性物質１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−ＦＬＡＧ３−ＨＩＳ６）は、ヒトおよびカニクイザルの両方からのＣＴＬＡ−４−Ｆｃ融合分子への結合を実証した。オン・レート（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフ・レート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）およびアフィニティーは、ヒトおよびカニクイザルのＣＴＬＡ４−ｈＦｃを用いて決定した（下表）。
【０３０７】
表Ｅ．Ｆ０２３７００９０６のヒトおよびカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  Ｍｏｎｄａｙ）のＣＴＬＡ４への結合
【表２５】
2019502370.tif 000053
【０３０８】
実施例２：Ｆ０２３７００９１８およびＦ０２３７００９２５のヒトＣＴＬＡ−４への結合
Ｆ０２３７００９１８およびＦ０２３７００９２５は、細胞表面上に発現したヒトＣＴＬＡ−４への結合を実証した。Ｆ０２３７００９１８（黒の正方形）、Ｆ０２３７００９２５（黒の三角形）、Ｆ０２３７００９１２（黒の丸）および無関係の（ｉｒｒｅｌａｖａｎｔ）Ｎｂ（菱形）のｈＣＴＬＡ４過剰発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合をフローサイトメトリーにより調べた。ナノボディは、ＡＬＢ１１結合ｍＡＢ  ＡＢＨ００７４によって検出した。この実験において生成されたフローサイトメトリーのデータは、図８中にある。
【０３０９】
実施例３：Ｆ０２３７００９２５によるヒトＰＤ−１細胞表面結合
Ｆ０２３７００９２５は、細胞表面上に発現したヒトＰＤ−１への結合を実証した。Ｆ０２３７００９２５（黒の正方形）およびＦ０２３７００９１２（黒の丸）および無関係の（ｉｒｒｅｌａｖａｎｔ）Ｎｂ  ＩＲＲ０００５１（黒の三角形）のバッチのｈＰＤ１過剰発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合をフローサイトメトリーにより調べた。Ｎｂは、ＡＬＢ１１結合ｍＡＢ  ＡＢＨ００７４によって検出した。この実験において生成されたフローサイトメトリーのデータは、図９中にある。
【０３１０】
実施例４：ヒトＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０およびＣＤ８６遮断アッセイ
Ｆ０２３７００９２５の構成ブロックであるＦ０２３７００９０６、並びにＦ０２３７０１０５１、Ｆ０２３７０１０５４およびＦ０２３７０１０６１は、ヒトＣＴＬＡ−４のそのリガンドＣＤ８０およびＣＤ８６への結合を遮断した。ｈＣＴＬＡ４過剰発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞上の固定濃度（ＥＣ３０）の（Ａ）ｈＣＤ８０−ｈＦｃまたは（Ｂ）ｈＣＤ８６−ｈＦｃを使用したＮｂ  Ｆ０２３７００９０６（黒の丸）のＮ７３Ｘバリアント（黒の正方形、黒の三角形、黒の逆三角形）の発見バッチのフローサイトメトリー解析である。リガンドは、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ融合タンパク質によって検出した。この実験において生成されたフローサイトメトリーのデータは、図１０（Ａ−Ｂ）中にある。
【０３１１】
実施例５：結合特異性アッセイ
Ｆ０２３７００９２５の特異性判定は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１への選択的結合を予測した。ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３およびＣＤ２８に対する特異性判定は、フローサイトメトリーを用いて過剰発現細胞上で実施したが、ＩＣＯＳ結合は組換えタンパク質（ｈＩＣＯＳ−ｈＦｃ）としてＥＬＩＳＡ中で評価した。ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＣＤ２８の発現は、直接標識した標的特異的Ａｂによって判定した。抗ｈＩＣＯＳおよび抗ｈＣＴＬＡ４／抗ｈＰＤ１陽性対照は全て陽性であった。ＥＬＩＳＡアッセイにおいてｈＩＣＯＳへの結合は観察されなかった。図１１（Ａ−Ｈ）は、それぞれ陰性対照のＬ細胞、陰性対照のＣＨＯ−Ｋ１細胞、ｈｕＣＤ２８＋  Ｌ細胞、ｈｕＣＤ８ａｌｐｈａ＋  Ｌ細胞、ｈｕＬａｇ−３＋  ＣＨＯ−Ｋ１、ｈｕＢＴＬＡ＋  ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ｈｕＣＴＬＡ−４＋  ＣＨＯ−Ｋ細胞およびｈｕＰＤ−１＋  ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合を示した。ＢＴＬＡ、ＣＤ８、ＬＡＧ３、ＣＤ２８への結合はＦ０２３７００９２５について観察することができなかったが、Ｆ０２３７００９２５の強力な結合がＰＤ−１＋またはＣＴＬＡ−４＋  ＣＨＯ−Ｋ１細胞上で観察された。この実験において生成されたフローサイトメトリーのデータは、図１１（Ａ−Ｈ）中にある。
【０３１２】
実施例６：血清アルブミン結合アッセイ
Ｆ０２３７００９２５はヒト、アカゲザルおよびマウスのアルブミンに結合し、非アルブミン結合ナノボディと比べたときの半減期の延長を予測した。表面プラスミン共鳴（ＳＰＲ）を用いて分析したとき、ヒト、アカゲザルおよびマウスの血清アルブミンへの結合が観察された。
【０３１３】
表Ｆ．Ｆ０２３７００９２５のヒト、アカゲザルおよびマウスの血清アルブミンへの結合分析
【表２６】
2019502370.tif 000054
【０３１４】
ヒト血清アルブミン：ｃａｔ  Ａ３７８２、Ｓｉｇｍａ、ｌｏｔ．ＳＬＢＤ７２０４Ｖ
アカゲザル血清アルブミン：ＢｉｏＷｏｒｌｄ、ｃａｔ  ２２０７００９９−１、ｌｏｔ  Ｌ１５０９１００１ＤＡ、
マウス血漿アルブミン：Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｌｏｔ  １０１２、
機器およびセンサーチップ：Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）；ＣＭ５（ＩＤ  Ｔ１６０７１３−２、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ｌｏｔ  １０２４２５９９
Ｆ０２３７００９１２は１１Ｆ０１（Ｅ１Ｄ，Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−３５ＧＳ−１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−３５ＧＳ−ＡＬＢ１１００２−Ａである。
【０３１５】
実施例７：バリアントの結合カイネティクス分析
Ｆ０２３７００９２５の構成ブロックであるＦ０２３７００９０６のＮ７３位におけるいくつかのバリアントは、この部位における脱アミド化を回避するように生成された。全ての可能な置換を現行のＳＯ  Ｆ０２３７００９０６と一緒に、オフ・レート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）において評価した（表Ｇ）。バリアントのＦ０２３７０１０５１［１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ｎ７３Ｑ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−ＦＬＡＧ３−ＨＩＳ６］、Ｆ０２３７０１０５４［１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ｎ７３Ｔ，Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−ＦＬＡＧ３−ＨＩＳ６］およびＦ０２３７０１０６１［１１Ｆ０１（Ｌ１１Ｖ，Ａ１４Ｐ，Ｑ４５Ｒ，Ｎ７３Ｙ、Ａ７４Ｓ，Ｋ８３Ｒ，Ｖ８９Ｌ，Ｍ９６Ｐ，Ｑ１０８Ｌ）−ＦＬＡＧ３−ＨＩＳ６］を、（Ａ）ＣＤ８０または（Ｂ）ＣＤ８６のＣＴＬＡ−４発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合（ｂｉｄｎｉｎｇ）を遮断するそれらの能力をＦ０２３７００９０６と比較した。全てのこれらのバリアントは、ＣＤ８０およびＣＤ８４のＣＴＬＡ−４への結合を遮断することが可能であった。この実験において生成されたフローサイトメトリーのデータは、図１２（Ａ−Ｂ）中にある。
【０３１６】
実施例８：Ｆ０２３７００９１２はヒト化マウスにおいて定着固形腫瘍を根絶する
ヒト化マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にＰａｎｃ  ０８．１３腫瘍細胞を移植した。定着腫瘍を有するマウス（約１００ｍｍ３、ｎ＝９−１０／群）を次のように処置した：１−アイソタイプコントロール（ｈＩｇＧ１−２ｍｇ／ｋｇおよびｈＩｇＧ４−３ｍｇ／ｋｇ）；２−イピリムマブ−Ｎ２９７Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）；３−イピリムマブ（３ｍｇ／ｋｇ）；４−ペンブロリズマブ（２ｍｇ／ｋｇ）；５−イピリムマブ（３ｍｇ／ｋｇ）＋ペンブロリズマブ（２ｍｇ／ｋｇ）；６−Ｆ０２３７００９１２（５ｍｇ／ｋｇ；ＣＴＬＡ４−Ｎａｂ  ５として指し示される）、７−Ｆ０２３７００９１２（１５ｍｇ／ｋｇ；ＣＴＬＡ４−Ｎａｂ−１５として指し示される）および８−Ｆ０２３７００９１２（１５ｍｇ／ｋｇ）＋ペンブロリズマブ（２ｍｇ／ｋｇ）。全ての抗体は、７日毎に６回皮下注射した。Ｆ０２３７００９１２は、３．５日毎に１１回皮下投与した。腫瘍体積および体重は４−５日毎に測定した。平均腫瘍体積±ＳＥＭ（Ａ）、３７日目の個々の腫瘍体積（Ｂ）、および実験期間にわたる個々のマウスにおける腫瘍体積（Ｃ）が示される。各処置群における平均（平均±ＳＥＭ）（Ｄ）および個々の（Ｅ）体重変化もまた示された。死亡が見出されたまたは体重低下のため人道的に安楽死させたマウスの数は「＃」として指し示される。「↑」は抗体を指し示し、「↑（白抜き矢印）」はナノボディ投薬スケジュールを指し示す。この実験において生成された腫瘍体積のデータは、図１３（Ａ−Ｊ）中にある。これらのデータは、Ｆ０２３７００９１２が腫瘍増殖の阻害に高度に有効であることを実証した。
【０３１７】
実施例９：Ｆ０２３７００９１２およびＦ０２３７００９２５の健常対象およびがん患者からの先在抗体への結合
三価の参照ナノボディ０１３７００１１２（先在抗体の結合を低減させるために改変されていない）は、（図１４Ａ）健常対象または（図１４Ｂ）がん患者由来のいくつかの血清試料への結合を実証した。同様のサイズである配列最適化された三価のナノボディＦ０２３７００９１２は、同じ血清試料への結合頻度がより低いことを実証した。Ｆ０２３７００９２５はＦ０２３７００９１２と同じ構成ブロックを含んでいた。サイズがより大きいにもかかわらず、五価のＦ０２３７００９２５ナノボディは、参照ナノボディ０１３７００１１２よりも多くない、先在しているＡｂへの結合を呈した。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上に捕捉されたナノボディへの先在抗体の結合を、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて評価した。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ２０）をランニングバッファーとして用いて、２５℃で実験を実施した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＧＬＣセンサーチップのリガンドレーンをＥＤＣ／ＮＨＳ（流速３０μｌ／分）で活性化し、ＨＳＡをＰｒｏｔｅＯｎ  Ａｃｅｔａｔｅバッファー  ｐＨ４．５中に１０μｇ／ｍｌで注入（流速１００μｌ／分）することで固定化レベルを約３６００ＲＵにした。固定化の後、表面をエタノールアミンＨＣｌ（流速３０μｌ／分）で不活性化した。ナノボディをＨＳＡ表面上に４５μｌ／分で２分間注入し、ナノボディ捕捉レベルを三価のＦ０２３７００９１２について約６００ＲＵに、五価のＦ０２３７００９２５について約１０００ＲＵにした。先在抗体を含有する試料をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（０．００５％）中で１：１０に希釈してから、４５μｌ／分で２分間注入し、その後に続いて４００秒の解離ステップを行った。各サイクルの後（すなわち、新たなナノボディ捕捉および血液試料注入ステップの前）、４５μｌ／分で２分間のＨＣｌ（１００ｍＭ）注入でＨＳＡ表面を再生させた。センサーグラムの加工およびデータ解析は、ＰｒｏｔｅＯｎ  Ｍａｎａｇｅｒ  ３．１．０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して実施した。１）ナノボディ−ＨＳＡ解離および２）ＨＳＡのみを含有する参照リガンドレーンへの非特異的結合を差し引くことによる二重参照の後に、先在抗体の結合を示すセンサーグラムを得た。先在抗体の結合レベルは、レポート時を１２５秒（会合終了の５秒後）に設定することにより決定した。参照として、先在抗体を含有する試料はまた、これらの先在抗体（Ｔ０１３７００１１２）の結合を低減させるために改変されていない三価のナノボディの結合についても試験した。
【０３１８】
実施例１０：水素重水素交換質量分析による抗ｈＣＴＬＡ４ナノボディのエピトープマッピング
抗ｈＣＴＬＡ４ナノボディ、Ｆ０２３７００９１２との間の接触面を水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）の使用により決定した。ＨＤＸ−ＭＳはタンパク質のアミド骨格への重水素の取り込みを測定し、この取り込みの変化は水素の溶媒曝露の影響を受ける。抗原単独の試料とナノボディ結合試料とで重水素交換レベルの比較を行い、ナノボディと接触し得る抗原領域を同定した。
【０３１９】
ナノボディＦ０２３７００９１２により重水素化から最も強く保護されたヒトＣＴＬＡ４残基は、ＶＲＶＴＶＬ（配列番号１９５の残基３３−３８）、ＡＤＳＱＶＴＥＶＣ（配列番号１９５の残基４１−４９）およびＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧ（配列番号１９５の残基９３−１０６）であった。
【０３２０】
表Ｇ．アミノ酸配列（配列番号１９５）
【表２７】
2019502370.tif 000055
【図１】
2019502370.tif 000056
【図２】
2019502370.tif 000057
【図３Ａ−１】
2019502370.tif 000058
【図３Ａ−２】
2019502370.tif 000059
【図３Ａ−３】
2019502370.tif 000060
【図３Ａ−４】
2019502370.tif 000061
【図３Ｂ−１】
2019502370.tif 000062
【図３Ｂ−２】
2019502370.tif 000063
【図４Ａ−１】
2019502370.tif 000064
【図４Ａ−２】
2019502370.tif 000065
【図４Ａ−３】
2019502370.tif 000066
【図４Ａ−４】
2019502370.tif 000067
【図４Ｂ−１】
2019502370.tif 000068
【図４Ｂ−２】
2019502370.tif 000069
【図５】
2019502370.tif 000070
【図６−１】
2019502370.tif 000071
【図６−２】
2019502370.tif 000072
【図６−３】
2019502370.tif 000073
【図６−４】
2019502370.tif 000074
【図６−５】
2019502370.tif 000075
【図６−６】
2019502370.tif 000076
【図６−７】
2019502370.tif 000077
【図６−８】
2019502370.tif 000078
【図６−９】
2019502370.tif 000079
【図７】
2019502370.tif 000080
【図８】
2019502370.tif 000081
【図９】
2019502370.tif 000082
【図１０Ａ】
2019502370.tif 000083
【図１０Ｂ】
2019502370.tif 000084
【図１１Ａ】
2019502370.tif 000085
【図１１Ｂ】
2019502370.tif 000086
【図１１Ｃ】
2019502370.tif 000087
【図１１Ｄ】
2019502370.tif 000088
【図１１Ｅ】
2019502370.tif 000089
【図１１Ｆ】
2019502370.tif 000090
【図１１Ｇ】
2019502370.tif 000091
【図１１Ｈ】
2019502370.tif 000092
【図１２Ａ】
2019502370.tif 000093
【図１２Ｂ】
2019502370.tif 000094
【図１３Ａ】
2019502370.tif 000095
【図１３Ｂ】
2019502370.tif 000096
【図１３Ｃ】
2019502370.tif 000097
【図１３Ｄ】
2019502370.tif 000098
【図１３Ｅ】
2019502370.tif 000099
【図１３Ｆ】
2019502370.tif 000100
【図１３Ｇ】
2019502370.tif 000101
【図１３Ｈ】
2019502370.tif 000102
【図１３Ｉ】
2019502370.tif 000103
【図１３Ｊ】
2019502370.tif 000104
【図１４Ａ】
2019502370.tif 000105
【図１４Ｂ】
2019502370.tif 000106
【図１５Ａ】
2019502370.tif 000107
【図１５Ｂ】
2019502370.tif 000108
【図１５Ｃ】
2019502370.tif 000109
【図１５Ｄ】
2019502370.tif 000110
【図１６Ａ】
2019502370.tif 000111
【図１６Ｂ】
2019502370.tif 000112
【図１７】
2019502370.tif 000113
【配列表】
2019502370000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年7月24日(2018.7.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＰＤ１に結合する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）、および、次の残基セット：
・ＶＲＶＴＶＬ（配列番号１９５のアミノ酸３３−３８）、
・ＡＤＳＱＶＴＥＶＣ（配列番号１９５のアミノ酸４１−４９）；および
・ＣＫＶＥＬＭＹＰＰＰＹＹＬＧ（配列番号１９５のアミノ酸９３−１０６）；
のうちの１または複数においてヒトＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤ、
を含むＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質であって、
ここでＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤおよび／またはＰＤ１に結合するＩＳＶＤは、残基１１および８９において変異を含み、ここで前記残基番号はＫａｂａｔ残基番号であり；
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質は、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項２】
・アミノ酸配列ＩＨＡＭＧ（配列番号３）またはＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号６）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＶＩＴＸＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４；ここでＸはＷまたはＶである）またはＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹ（配列番号７）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＤＫＨＱＳＳＸＹＤＹ（配列番号５；ここでＸはＷまたはＦである）を含むＣＤＲ３
を含む、ＰＤ１に結合する１または複数のＩＳＶＤ、および
・アミノ酸配列ＦＹＧＭＧ（配列番号１０）またはＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１３）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）またはＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号１４）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＥＸＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号１２；ここでＸはＭまたはＰである）を含むＣＤＲ３
を含む、ＣＴＬＡ４に結合する１または複数のＩＳＶＤ
を含み、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項３】
ＰＤ１に結合するＩＳＶＤが、アミノ酸配列：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ  ＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡ  ＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫ  ＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１３５）を含み；そして
ＣＴＬＡ４に結合するＩＳＶＤが、アミノ酸配列：
ＸＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ
ＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
（配列番号１４３）であって、ここでＸはＤまたはＥである；
または
Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＸ２ＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９６）であって、ここでＸ１はＤまたはＥであり、Ｘ２はＳ、Ｖ、Ｇ、Ｒ、Ｑ、Ｍ、Ｈ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｗ、Ｆ、Ｋ、Ａ、ＹまたはＰである
を含み、半減期エクステンダーおよび／またはＣ末端エクステンダーを含んでもよい、請求項１〜２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項４】
各々のＩＳＶＤの間にペプチドリンカーを含む、請求項１〜３のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項５】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項６】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項７】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項８】
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ４  ＩＳＶＤ（Ｄ１Ｅ）；
・配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む３５ＧＳリンカー；
・配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＳＡ  ＩＳＶＤ；および
・Ｃ末端アラニン
を含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項９】
アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８６）を含むペプチドリンカーを含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１０】
配列番号１４６、１４９、１５１または１５３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１１】
アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳ（配列番号１９９）またはＳＦＧＭＳ（配列番号１９９のアミノ酸６−１０）を含むＣＤＲ１；
アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００）またはＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬ（配列番号２００のアミノ酸１−１０）を含むＣＤＲ２；および
アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号２０１）を含むＣＤＲ３
を含むヒト血清アルブミンＩＳＶＤである半減期エクステンダーを含む、請求項１〜４または９のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１２】
ヒト血清アルブミンに結合し、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤ  ＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧ  ＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬ  ＶＴＶＳＳＡ
（配列番号１４４）
を含むＩＳＶＤである半減期エクステンダーを含む、請求項１〜１１のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１３】
アラニンであるＣ末端エクステンダーを含む、請求項１〜４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１４】
ＣＴＬＡ４および／またはＰＤ１に結合する、請求項１〜１３のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をＰＤ１およびＣＴＬＡ４への結合から交差遮断する、結合性物質。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または請求項１５の結合性物質を含み、さらなる治療剤を伴ってもよい、注入装置または容器。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質または請求項１５の結合性物質をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１８】
配列番号１４５、１４８、１５０または１５２に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１７のポリヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１７〜１８のいずれか一項のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか一項のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入すること、および宿主細胞を培地中で前記ポリヌクレオチドからの前記ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質の発現に好都合な条件下で培養することを含み、そして、前記宿主細胞および／または前記培地からＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を精製することを含んでもよい、請求項１〜１４のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を作成する方法。
【請求項２２】
請求項２１の方法により生産される、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質。
【請求項２３】
さらなる治療剤を伴ってもよい請求項１〜１４および２２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含む、ＰＤ１がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２に結合することを防ぐための医薬組成物。
【請求項２４】
さらなる治療剤を伴ってもよい請求項１〜１４および２２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含む、ＣＴＬＡ４がＣＤ８０および／またはＣＤ８６に結合することを防ぐための医薬組成物。
【請求項２５】
さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の請求項１〜１４および２２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含む、対象において免疫応答を増強するための医薬組成物。
【請求項２６】
さらなる治療剤を伴ってもよい有効量の請求項１〜１４および２２のいずれか一項のＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を含む、対象においてがんまたは感染性疾患を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２７】
がんが、転移性がん、固形腫瘍、血液がん、白血病、リンパ腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎臓移行上皮がん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺がん、非小細胞がん、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎臓細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳がん、神経膠芽腫、髄膜腫、脳下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｍｙｅｌｆｉｂｒｏｓｉｓ）、軟組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、乳がんまたは胃がんである、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２８】
感染性疾患が細菌感染症、ウイルス感染症または真菌感染症である、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２９】
対象に、ＰＤ１／ＣＴＬＡ４結合性物質を伴うさらなる治療剤または治療手法が投与される、請求項２６〜２８のいずれか一項の医薬組成物。
【国際調査報告】
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