(57)【要約】  本発明は、式(I)の化合物及びその塩、このような化合物を含有する医薬組成物、並びに療法におけるそれらの使用に関する。【化１】2019510782.tif 000388【選択図】  なし
2019510782.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2019510782.tif 000387
で表される化合物又はその塩
(式中、
R1は、-C1-3アルキル又はシクロプロピルであり；
R2は、-C0-4アルキル-ヘテロシクリル、-CH2CH(OH)-ヘテロシクリル又は-(CH2)pO-ヘテロシクリルであり、各ヘテロシクリルは、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR5基で場合により置換されており；
R3は、-H、-C1-4アルキル、シクロプロピル、フルオロ、クロロ、-CH2F、-C0-3アルキルOR10又はC0-3アルキルCNであり；
R4は、フェニル又はヘテロアリール基であり、それぞれは同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されており；
各R5は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、C3-4シクロアルキル、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3アルキルOR8、-C0-3アルキルNR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、オキソ、-CO2R8、-C(O)R8又は-C(O)NR11R12であり；
各R6は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキルOR7、オキソ、-CO2R8、-C0-3アルキルNR16R17、-C0-3アルキル-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3アルキル又は-SO2NR16R17であり；
R7は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR16R17又は-C2-3アルキルOHであり；
R8は、-H又は-C1-4アルキルであり；
R10は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR14R15又は-C2-3アルキルOHであり；
R11及びR12は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR11及びR12は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R14及びR15は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR14及びR15は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R16及びR17は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR16及びR17は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
pは、2、3又は4から選択される整数である)。
【請求項２】
R1がメチルである、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
R2が-C0-4アルキル-ヘテロシクリルであり、該ヘテロシクリル基が、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されている、請求項１又は請求項２に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
ヘテロシクリル基が、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されているオキセタニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロ-2H-ピラニル、(1r,5s)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサニル及び(1r,5s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサニルから選択される、請求項３に記載の化合物又はその塩。
【請求項５】
ヘテロシクリル基が、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されている(1r,5s)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサニル及び(1r,5s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサニルから選択される、請求項４に記載の化合物又はその塩。
【請求項６】
R3が、-H、メチル、エチル、フルオロ、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OMe又は-CH2CNである、請求項１〜５のいずれか1項に記載の化合物又はその塩。
【請求項７】
R4が、-C1-4アルキル、-C0-3アルキル-OR7及びCNから選択される、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているフェニルである、請求項１〜６のいずれか1項に記載の化合物又はその塩。
【請求項８】
R4が、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているインドリルであるヘテロアリール基である、請求項１〜６のいずれか1項に記載の化合物又はその塩。
【請求項９】
R4が、1H-インドール-4-イルであるヘテロアリール基である、請求項８に記載の化合物又はその塩。
【請求項１０】
R5が、ハロ、C1-4アルキル、-CH2CHF2、オキソ、-C0-3アルキルNR11R12、-CO2C(CH3)3及び-C(O)R8から選択される、請求項１〜９のいずれか1項に記載の化合物又はその塩。
【請求項１１】
R5が、フルオロ、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-C(O)CH3、オキソ及びメチルから選択される、請求項１０に記載の化合物又はその塩。
【請求項１２】
実施例1〜172から選択される化合物又はその塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか1項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と1種以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、1種以上の他の治療上活性な薬剤と共に含む組合せ物。
【請求項１６】
療法において使用するための、請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療において使用するための、請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
疾患又は状態が急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態である、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項１９】
疾患又は状態が、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項２０】
疾患又は状態がウイルス感染症である、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項２１】
疾患又は状態が癌である、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項２２】
疾患又は状態がリウマチ性関節炎である、請求項１７に記載の使用のための化合物。
【請求項２３】
ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療のための医薬の製造における、請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２４】
治療有効量の請求項１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象におけるブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療方法。
【請求項２５】
疾患又は状態が、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態である、請求項２４に記載の治療方法。
【請求項２６】
疾患又は状態が、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う、請求項２４に記載の治療方法。
【請求項２７】
疾患又は状態がウイルス感染症である、請求項２４に記載の治療方法。
【請求項２８】
疾患又は状態が癌である、請求項２４に記載の治療方法。
【請求項２９】
疾患又は状態がリウマチ性関節炎である、請求項２４に記載の治療方法。
【請求項３０】
対象がヒトである、請求項２４から２９のいずれか1項に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブロモドメイン阻害薬であるピリジル誘導体、それらの調製方法、その化合物を含む医薬組成物、並びに種々の疾患又は状態、例えば急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態、ウイルス感染症及び癌の治療におけるその化合物又は組成物の使用を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
真核生物のゲノムは、細胞の核内で高度に組織化されている。二本鎖DNAの長いストランドは、ヒストンタンパク質の八量体(最も一般的には、ヒストンH2A、H2B、H3及びH4の2組のコピーを含む)の周囲に巻きつけられ、ヌクレオソームを形成する。次いで、この基本単位は、ヌクレオソームの凝集及び折り畳みによりさらに圧縮され、高度に凝縮されたクロマチン構造を形成する。様々な異なる凝縮状態が可能であり、この構造の密集度は細胞周期中に変化し、細胞分裂の過程中に最も密集している。クロマチン構造は遺伝子転写の調節において重要な役割を果たし、高度に凝縮したクロマチンからは、遺伝子転写は効率的には起こり得ない。クロマチン構造は、ヒストンタンパク質、とりわけヒストンH3及びH4に対する、最も一般的にはコアヌクレオソーム構造を越えて伸びるヒストン尾部内での一連の翻訳後修飾により制御される。これらの修飾としては、アセチル化、メチル化、リン酸化、ユビキチン化、SUMO化が挙げられる。これらのエピジェネティックなマークは、特定の酵素により書き込まれ且つ消去され、該酵素は、ヒストン尾部内の特定の残基上にタグを配置し、これによりエピジェネティックコードを形成し、次にこのコードが細胞により解釈されてクロマチン構造の遺伝子特異的な調節及びそれによる転写を可能とする。
【０００３】
ヒストンアセチル化は、その修飾が、静電作用を変化させることによりDNAとヒストン八量体との相互作用を緩めるため、最も一般的には遺伝子転写の活性化を伴う。この物理的変化に加え、特定のタンパク質は、ヒストン内のアセチル化されたリシン残基を認識してこれに結合し、エピジェネティックコードを読み取る。ブロモドメインは、ヒストンに関して、アセチル化リシン残基に専らではないが一般的に結合する、タンパク質内の小さく(約110アミノ酸)特徴的なドメインである。ブロモドメインを含有することが知られている約50のタンパク質のファミリーが存在し、これらは細胞内で様々な機能を担う。
【０００４】
ブロモドメイン含有タンパク質のBETファミリーは、2つのアセチル化リシン残基に極めて近接して結合し、相互作用の特異性を高めることができる直列のブロモドメインを含む4つのタンパク質(BRD2、BRD3、BRD4及びBRDT)を含む。各BETタンパク質のN末端から番号付けして、直列のブロモドメインは、典型的には、結合ドメイン1(BD1)及び結合ドメイン2(BD2)と名付けられる(Chung et al, J Med. Chem., 2011, 54, 3827-3838)。
【０００５】
Chanらは、BETブロモドメイン阻害がヒト単球においてサイトカイン-Jak-STATシグナル伝達に対する転写応答を遺伝子特異的に抑制し、このことは、BET阻害がサイトカイン活性の抑制を通して炎症を部分的に低下させることを示唆していると報告している(Chan et al., Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297)。
【０００６】
Kleinらは、ブロモドメインタンパク質阻害薬I-BET151が、リウマチ性関節炎滑膜線維芽細胞において炎症遺伝子の発現及びマトリックス分解酵素を抑制し、このことは、リウマチ性関節炎におけるエピジェネティックリーダータンパク質(epigenetic reader protein)の標的化における治療能力を示唆していると報告している(Klein et al., Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8)。
【０００７】
Park-Minらは、アセチル化ヒストンに結合することによりクロマチン状態を「読み取る」ブロモドメイン及びエキストラ末端(BET)タンパク質を標的とするI-BET151が、破骨細胞形成を強く抑制すると報告している(Park-Min et al. Nature Communications, 2014, 5, 5418)。
【０００８】
PCT特許出願PCT/EP2016/070519、PCT/EP2016/072216及びPCT/EP2016/073532はそれぞれ、ブロモドメイン阻害薬としての一連のピリドン誘導体について記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】PCT/EP2016/070519
【特許文献２】PCT/EP2016/072216
【特許文献３】PCT/EP2016/073532
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Chung et al, J Med. Chem., 2011, 54, 3827-3838
【非特許文献２】Chan et al., Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297
【非特許文献３】Klein et al., Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8
【非特許文献４】Park-Min et al. Nature Communications, 2014, 5, 5418
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、式(I)：
【００１２】
【化１】
2019510782.tif 000003
で表される化合物又はその塩
(式中、
R1は、-C1-3アルキル又はシクロプロピルであり；
R2は、-C0-4アルキル-ヘテロシクリル、-CH2CH(OH)-ヘテロシクリル又は-(CH2)pO-ヘテロシクリルであり、各ヘテロシクリルは、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR5基で場合により置換されており；
R3は、-H、-C1-4アルキル、シクロプロピル、フルオロ、クロロ、-CH2F、-C0-3アルキルOR10又はC0-3アルキルCNであり；
R4は、フェニル又はヘテロアリール基であり、それぞれは同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されており；
各R5は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、C3-4シクロアルキル、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3アルキルOR8、-C0-3アルキルNR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、オキソ、-CO2R8、-C(O)R8又は-C(O)NR11R12であり；
各R6は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキルOR7、オキソ、-CO2R8、-C0-3アルキルNR16R17、-C0-3アルキル-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3アルキル又は-SO2NR16R17であり；
R7は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR16R17又は-C2-3アルキルOHであり；
R8は、-H又は-C1-4アルキルであり；
R10は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR14R15又は-C2-3アルキルOHであり；
R11及びR12は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR11及びR12は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R14及びR15は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR14及びR15は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R16及びR17は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR16及びR17は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
pは、2、3又は4から選択される整数である)。
を対象とする。
【００１３】
本発明の化合物は、ブロモドメイン阻害薬であって、特にBD2選択的であることが示されており、様々な疾患又は状態、例えば急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態、例えばリウマチ性関節炎及び癌の治療において有用であり得る。従って、本発明はさらに、式(I)の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を対象とする。本発明は、なおさらに、式(I)の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は式(I)の化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を用いるブロモドメインに関連する疾患又は状態の治療方法を対象とする。本発明は、よりさらに、式(I)の化合物の調製方法を対象とする。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
式(I)の化合物及びその塩は、本明細書中「本発明の化合物」と呼ばれる。
【００１５】
「BD2」は、BETファミリーのタンパク質BRD2、BRD3、BRD4又はBRDTのいずれかの結合ドメイン2を指す。
【００１６】
「アルキル」は、特定数の炭素原子を有する飽和炭化水素鎖を指す。例えば、本明細書中で使用される用語「C1-6アルキル」は、1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝のアルキル基を指す。例えば、用語「C0-3アルキル」は、0(すなわち結合)〜3個の炭素原子を有する直鎖又は分枝のアルキル基を指す。代表的な分枝アルキル基は、1つ、2つ又は3つの分枝を有する。アルキル基は鎖の一部を形成していてもよく、例えば、-C0-4アルキル-ヘテロシクリルは、ヘテロシクリルに結合している0(すなわち結合)〜4個の炭素原子を有する直鎖又は分枝のアルキル鎖を指す。「アルキル」としては、限定するものではないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソ-プロピル、n-ブチル、イソ-ブチル、t-ブチル、ペンチル及びへキシルが挙げられる。
【００１７】
「シクロアルキル」は、環内に特定数の員原子を有する、飽和炭化水素の単環式環若しくは二環式環又は飽和スピロ結合した二環式炭化水素環を指す。例えば、本明細書中で使用される用語「C3-7シクロアルキル」は、3〜7個の員原子を有するシクロアルキル基を指す。C3-7シクロアルキル基の例として、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、及びスピロ[3.3]へプタンが挙げられる。
【００１８】
「エナンチオマー過剰率」(ee)は、パーセントとして表される、一方のエナンチオマーの他方に対する過剰率である。ラセミ修飾体においては、両方のエナンチオマーが等量で存在するので、エナンチオマー過剰率はゼロ(0％ee)である。しかし、一方のエナンチオマーが生成物の95％を構成するように富化された場合、エナンチオマー過剰率は90％eeとなるだろう(富化されたエナンチオマーの量(95％)−他方のエナンチオマーの量(5％))。
【００１９】
「鏡像異性的に富化された」は、エナンチオマー過剰率(ee)がゼロより大きい生成物を指す。例えば、「鏡像異性的に富化された」は、エナンチオマー過剰率が50％eeより大きい生成物、75％eeより大きい生成物、及び90％eeより大きい生成物を指す。
【００２０】
本明細書中で用いられる「鏡像異性的に純粋」は、エナンチオマー過剰率が99％以上である生成物を指す。
【００２１】
「半減期」は、in vitro又はin vivoにおいてある物質の量の半分を別の化学的に区別される種に変換するために必要とされる時間を指す。
【００２２】
「ハロ」は、ハロゲン基、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードを指す。
【００２３】
「ヘテロアリール」は、基の少なくとも一部が芳香族である、窒素、硫黄及び酸素から独立して選択される1、2又は3個のヘテロ原子を含む、5、6、8、9、10又は11個の員原子を有する単環式基又は二環式基を指す。分子の残部への結合点は、任意の好適な炭素原子又は窒素原子によるものであり得る。「ヘテロアリール」基の例としては、限定するものではないが、フラニル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフリル、2,3-ジヒドロベンゾフリル、1,3-ベンゾジオキソリル、ジヒドロベンゾジオキシニル、ベンゾチエニル、ベンズアゼピニル、2,3,4,5-テトラヒドロ-1H-ベンゾ[d]アゼピニル、インドリジニル、インドリル、インドリニル、イソインドリル、ジヒドロインドリル、ベンズイミダゾリル、ジヒドロベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ジヒドロベンゾイソチアゾリル、インダゾリル、イミダゾピリジニル、ピラゾロピリジニル、ピロロピリジニル、ベンゾトリアゾリル、トリアゾロピリジニル、プリニル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、キノキサリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、1,5-ナフチリジニル、1,6-ナフチリジニル、1,7-ナフチリジニル、1,8-ナフチリジニル及びプテリジニルが挙げられる。
【００２４】
「ヘテロ原子」は、窒素、硫黄、又は酸素原子を指す。
【００２５】
「ヘテロシクリル」は、窒素、酸素又は硫黄から選択される1個のヘテロ原子を含み、場合によりさらなるヘテロ原子を含有する、4、5、6、7、8、9又は10個の環員原子を含有する非芳香族複素環式の単環式又は二環式環系を指す。「ヘテロシクリル」基の例としては、限定するものではないが、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、オキサゾリニル、チアゾリニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、1,3-ジオキソラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、1,3-ジオキサニル、1,4-ジオキサニル、1,3-オキサチオラニル、1,3-オキサチアニル、1,3-ジチアニル、1,4-オキサチオラニル、1,4-オキサチアニル、1,4-ジチアニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ヘキサヒドロ-1H-1,4-ジアゼピニル、アザビシクロ[3.2.1]オクチル、アザビシクロ[3.3.1]ノニル、アザビシクロ)[4.3.0]ノニル、オキサビシクロ[2.2.1]ヘプチル、1,1-ジオキシドテトラヒドロ-2H-チオピラニル、1,5,9-トリアザシクロドデシル、3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサニル及び3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサニルが挙げられる。「4〜7員のヘテロシクリル」は、窒素、酸素又は硫黄から選択される1個のヘテロ原子を含み、場合によりさらなるヘテロ原子を含有する、4、5、6又は7個の環員原子を含有する非芳香族複素環式の単環式又は二環式環系を指す。
【００２６】
「員原子」は、鎖又は環を形成する原子(1個又は複数個)を指す。2個以上の員原子が鎖中及び環内に存在する場合、各員原子は鎖又は環中の隣接員原子と共有結合している。鎖又は環に結合している置換基を構成する原子は、鎖又は環中の員原子ではない。
【００２７】
ある基に関して「置換された」とは、基内の員原子に結合している水素原子が置き換えられていることを示唆する。用語「置換された」は、かかる置換が置換された原子及び置換基の許容される原子価に従うものであり、且つその置換が安定な化合物(すなわち転位、環化、又は脱離などの変換を自然には受けない化合物)をもたらすという暗黙の条件を包含することが理解されるべきである。特定の実施形態において、単一原子は、置換がその原子の許容される原子価に従う限り、2つ以上の置換基で置換され得る。本明細書中、各置換基、又は場合により置換された基について好適な置換基が定義されている。
【００２８】
「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、又は他の問題若しくは合併症を伴うことなく人間及び動物の組織と接触させて使用するのに適しており、合理的な利益/リスク比で釣り合っている化合物、材料、組成物、及び剤形を指す。
【００２９】
「薬学的に許容される賦形剤」は、医薬組成物に形又は稠度を与えることに関与する薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクルを指す。各賦形剤は、患者に投与される場合に式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の効力を実質的に低下させ得る相互作用が回避されるように、混合される際に医薬組成物の他の成分と適合するものでなければならない。さらに、当然のことながら各賦形剤は薬学的に許容されるもの、例えば十分に高純度のものでなければならない。
【００３０】
「rac」は、式(I)の化合物のラセミ混合物を指す。
【００３１】
本発明の化合物は、固体形態又は液体形態で存在し得る。固体状態において、本発明の化合物は、結晶形態若しくは非晶質形態、又はそれらの混合物として存在し得る。結晶形態の本発明の化合物について、当業者は、結晶化中に溶媒分子が結晶格子中に組み込まれた薬学的に許容される溶媒和物が形成され得ることを認識するであろう。溶媒和物は、エタノール、イソ-プロピルアルコール、N,N-ジメチルスルホキシド(DMSO)、酢酸、エタノールアミン、及び酢酸エチルなどの非水性溶媒を含んでいてもよく、又は結晶格子中に組み込まれた溶媒として水を含んでいてもよい。水が結晶格子中に組み込まれた溶媒である溶媒和物は、典型的には、「水和物」と呼ばれる。水和物は、化学量論的水和物並びに可変量の水を含有する組成物を含む。本発明は、このような溶媒和物を全て包含する。
【００３２】
その種々の溶媒和物を含め結晶形態で存在する本発明の特定の化合物は、結晶多形(すなわち様々な結晶構造で存在する能力)を示し得ることがさらに認識されるであろう。これらの様々な結晶形態は、典型的には「多形体」として知られている。本発明は、このような多形体を包含する。多形体は同一の化学組成を有するが、結晶固体状態の充填、幾何学的配置、及びその他の記述的特性が異なる。従って、多形体は、異なる物理的特性、例えば形、密度、硬度、変形能、安定性、及び溶解特性を有し得る。多形体は、典型的には、異なる融点、IRスペクトル、及びX線粉末回折パターンを示し、これらは同定のために使用することができる。例えばその化合物を作製する際に用いられる反応条件又は試薬を変更又は調整することにより、様々な多形体が生成され得ることが認識されるであろう。例えば、温度、圧力、又は溶媒の変更は多形体を生じさせ得る。さらに、1つの多形体が特定の条件下で別の多形体に自然に変換することがある。式(I)の化合物の多形形態は、多くの従来の分析技術、例えば、限定するものではないが、X線粉末回折(XRPD)パターン、赤外(IR)スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱量測定(DSC)、熱重量分析(TGA)及び固体状態核磁気共鳴(SSNMR)を用いて特性決定及び区別することができる。
【００３３】
式(I)による化合物は、1以上の不斉中心(キラル中心とも呼ばれる)を含有する可能性があり、従って、個々のエナンチオマー、ジアステレオ異性体、若しくは他の立体異性体の形態で、又はそれらの混合物として存在し得る。キラル炭素原子などのキラル中心は、アルキル基などの置換基中にも存在し得る。式(I)中、又は本明細書中に示される任意の化学構造中に存在するキラル中心の立体化学が特定されていない場合、その構造は任意の立体異性体及びそれらの全ての混合物を包含することが意図される。このため、1以上のキラル中心を含有する式(I)による化合物は、ラセミ混合物として、鏡像異性的に富化された混合物として、又は鏡像異性的に純粋な個々の立体異性体として使用し得る。従って、本発明は、他の異性体を実質的に含まないように単離された(すなわち純粋な)個々の異性体としてであるか、又は混合物(すなわちラセミ混合物)としてであるかに関わらず、式(I)の化合物の全ての異性体を包含する。他の異性体を実質的に含まないように単離される(すなわち純粋な)個々の異性体は、10％未満、特に約1％未満、例えば、約0.1％未満の他の異性体が存在するように単離することができる。
【００３４】
単一の立体中心を有するラセミ化合物は、立体化学なし(単結合)であるか、又は注記(+/-)若しくはracを有するように示される。2以上の立体中心を有するラセミ化合物は、相対立体化学が既知である場合、その構造中に描かれるようにcis又はtransと示される。絶対立体化学は未知であるが相対立体化学が既知の分割された単一のエナンチオマーは(R*又はS*)を付けて呼ばれ、適切な相対立体化学が示される。
【００３５】
ジアステレオ異性体が示され、相対立体化学のみが言及される場合、太字又は点線の中実結合記号
【００３６】
【化２】
2019510782.tif 000004
が使用される。絶対立体化学が既知であり、化合物が単一エナンチオマーである場合、太字又は点線の楔形記号
【００３７】
【化３】
2019510782.tif 000005
が適宜使用される。
【００３８】
1以上の不斉中心を含有する式(I)による化合物の個々の立体異性体は、当業者に公知の方法により分割することができる。例えば、このような分割は、(1)ジアステレオ異性体の塩、錯体又はその他の誘導体の形成により、(2)立体異性体特異的試薬との選択的反応により、例えば酵素的酸化若しくは還元により、又は(3)キラル環境における(例えば、結合キラル配位子を有するシリカなどのキラル支持体上の、若しくはキラル溶媒の存在下での)ガス液体クロマトグラフィー又は液体クロマトグラフィーによって行うことができる。所望の立体異性体が上記分離手順の1つにより別の化学実体に変換される場合、所望の形態を遊離させるためにさらなるステップが必要になることが認識されるであろう。あるいは、特定の立体異性体を、光学的に活性な試薬、基質、触媒若しくは溶媒を用いる不斉合成によって、又は不斉転換により1つのエナンチオマーを他のものに変換することによって合成してもよい。
【００３９】
式(I)の化合物について、互変異性体が観察され得ることが認識されるであろう。互変異性体の生物学的活性に関する解説はいずれも、両互変異性体を包含すると解されるべきである。
【００４０】
本明細書において、式(I)の化合物及びその塩に対する言及は、遊離塩基として、又はその塩としての、例えばその薬学的に許容される塩としての式(I)の化合物を包含することを理解されたい。従って、一実施形態において、本発明は、遊離塩基としての式(I)の化合物を対象とする。別の実施形態において、本発明は、式(I)の化合物及びその塩を対象とする。さらなる実施形態において、本発明は、式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩を対象とする。
【００４１】
医療におけるそれらの潜在的用途のため、式(I)の化合物の塩は、望ましくは薬学的に許容される。好適な薬学的に許容される塩は、酸付加塩又は塩基付加塩を包含し得る。好適な薬学的に許容される塩に関する概説については、Berge et al., J.Pharm.Sci., 66:1-19(1977)を参照されたい。典型的には、薬学的に許容される塩は、所望の酸又は塩基を適宜用いて容易に調製することができる。結果として得られる塩は、溶液から沈殿させて濾過により回収することができるか、あるいは溶媒の蒸発によって回収することができる。
【００４２】
薬学的に許容される酸付加塩は、式(I)の化合物を、好適な無機酸又は有機酸(例えば、臭化水素酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、コハク酸、マレイン酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、安息香酸、サリチル酸、アスパラギン酸、p-トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸(例えば2-ナフタレンスルホン酸)、又はヘキサン酸)と、場合により有機溶媒などの好適な溶媒中で反応させて塩を得ることによって形成することが可能であり、この塩は、通常、例えば結晶化及び濾過により、又は蒸発及びそれに続く粉砕によって単離される。式(I)の化合物の薬学的に許容される酸付加塩は、例えば、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩(例えば2-ナフタレンスルホン酸塩)、又はヘキサン酸塩を包含し得るか又はそれらであり得る。
【００４３】
他の薬学的に許容されない塩、例えば、ギ酸塩又はトリフルオロ酢酸塩は、例えば、式(I)の化合物の単離において使用することが可能であり、本発明の範囲内に包含される。
【００４４】
本発明は、その範囲内に、式(I)の化合物の塩の全ての可能な化学量論的形態又は非化学量論的形態を包含する。
【００４５】
上記から、本発明の範囲内には、式(I)の化合物及びその塩の溶媒和物、異性体及び多形形態が包含されることが認識されるであろう。
【００４６】
発明の陳述
第1の態様において、式(I)：
【００４７】
【化４】
2019510782.tif 000006
で表される化合物又はその塩
(式中、
R1は、-C1-3アルキル又はシクロプロピルであり；
R2は、-C0-4アルキル-ヘテロシクリル、-CH2CH(OH)-ヘテロシクリル又は-(CH2)pO-ヘテロシクリルであり、各ヘテロシクリルは、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR5基で場合により置換されており；
R3は、-H、-C1-4アルキル、シクロプロピル、フルオロ、クロロ、-CH2F、-C0-3アルキルOR10又はC0-3アルキルCNであり；
R4は、フェニル又はヘテロアリール基であり、それぞれは同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されており；
各R5は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、C3-4シクロアルキル、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3アルキルOR8、-C0-3アルキルNR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、オキソ、-CO2R8、-C(O)R8又は-C(O)NR11R12であり；
各R6は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキルOR7、オキソ、-CO2R8、-C0-3アルキルNR16R17、-C0-3アルキル-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3アルキル又は-SO2NR16R17であり；
R7は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR16R17又は-C2-3アルキルOHであり；
R8は、-H又は-C1-4アルキルであり；
R10は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR14R15又は-C2-3アルキルOHであり；
R11及びR12は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR11及びR12は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R14及びR15は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR14及びR15は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R16及びR17は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR16及びR17は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
pは、2、3又は4から選択される整数である)
が提供される。
【００４８】
一実施形態において、式(I)の化合物又はその塩であって、式中、
R1は、-C1-3アルキル又はシクロプロピルであり；
R2は、-C0-4アルキル-ヘテロシクリル、-CH2CH(OH)-ヘテロシクリル又は-(CH2)pO-ヘテロシクリルであり、各ヘテロシクリルは、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR5基で場合により置換されており；
R3は、-H、-C1-4アルキル、シクロプロピル、フルオロ又はC0-3アルキルOR10であり；
R4は、フェニル又はヘテロアリール基であり、それぞれは同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されており；
各R5は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、C3-4シクロアルキル、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F、-OCH2CH2OR8、-C0-3アルキルOR8、-C0-3アルキルNR11R12、-NHCH2CH2OR8、-NHCO2R8、オキソ、-CO2R8、-C(O)R8又は-C(O)NR11R12であり；
各R6は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキルOR7、-C0-3アルキルNR16R17、-C0-3アルキル-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3アルキル又は-SO2NR16R17であり；
R7は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR16R17又は-C2-3アルキルOHであり；
R8は、-H又は-C1-4アルキルであり；
R10は、-H、-C1-3アルキル、-C2-3アルキルNR14R15又は-C2-3アルキルOHであり；
R11及びR12は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR11及びR12は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R14及びR15は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR14及びR15は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
R16及びR17は、それぞれ独立して、-H及び-C1-3アルキルから選択され；又はR16及びR17は、それらが結合している窒素と一緒になって、3個以下のフッ素原子で場合により置換されている-C1-3アルキル、-C2-4アルキルOH、-OH及びFから独立して選択される1個又は2個の置換基で場合により置換されている4〜7員のヘテロシクリルを形成していてもよく；
pは、2、3及び4から選択される整数である、
上記式(I)の化合物又はその塩が提供される。
【００４９】
一実施形態において、R1はメチルである。別の実施形態において、R1はエチルである。
【００５０】
一実施形態において、R2は-C0-4アルキル-ヘテロシクリルであり、ヘテロシクリル基は、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR5基で場合により置換されている。別の実施形態において、R2は-C0-4アルキル-ヘテロシクリルであり、ヘテロシクリル基は、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されているオキセタニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロ-2H-ピラニル、(1r,5s)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサニル及び(1r,5s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサニルから選択される。さらなる実施形態において、R2は-C0-4アルキル-ヘテロシクリルであり、ヘテロシクリル基は、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されている(1R,5S)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサニルである。さらなる実施形態において、R2は-C0-4アルキル-ヘテロシクリルであり、ヘテロシクリル基は、同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR5基で場合により置換されている1,3-ジオキサン-2-イルである。
【００５１】
一実施形態において、R3は、-H、-C1-4アルキル、シクロプロピル、フルオロ又は-C0-3アルキルOR10である。一実施形態において、R3は、-H、メチル、エチル、フルオロ、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OMe又は-CH2CNである。一実施形態において、R3は、-H、メチル、フルオロ、-OCH3又は-OHである。
【００５２】
一実施形態において、R4は、-C1-4アルキル、-C0-3アルキル-OR7及びCNから選択される同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているフェニルである。一実施形態において、R4は、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキル-OR7及びCNから選択される同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているフェニルである。一実施形態において、R4は、クロロ、メチル、及び-OCH3から選択される同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR6基で場合により置換されているフェニルである。
【００５３】
別の実施形態において、R4は、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているインドリニルであるヘテロアリール基である。一実施形態において、R4は、オキソで場合により置換されているインドリニルであるヘテロアリール基である。
【００５４】
別の実施形態において、R4は、同一であっても異なっていてもよい1、2又は3個のR6基で場合により置換されているインドリルであるヘテロアリール基である。別の実施形態において、R4は、フルオロ、メチル、-CN、又は-CH2CH2OHから選択される同一であっても異なっていてもよい1個又は2個のR6基で場合により置換されているインドリルであるヘテロアリール基である。別の実施形態において、R4は、1H-インドール-4-イルであるヘテロアリール基である。
【００５５】
一実施形態において、各R6は、独立して、ハロ、-C1-4アルキル、-C0-3アルキルOR7、-C0-3アルキルNR16R17、-C0-3アルキル-CONR16R17、-CN、-SO2-C1-3アルキル又は-SO2NR16R17である。一実施形態において、各R5は、ハロ、C1-4アルキル、-CH2CHF2、オキソ、-C0-3アルキルNR11R12、-CO2C(CH3)3及び-C(O)R8から選択される。一実施形態において、R5は、ハロ、C1-4アルキル、-CH2CHF2、オキソ、-CO2C(CH3)3及び-C(O)R8から選択される。別の実施形態において、R5は、フルオロ、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-C(O)CH3、オキソ及びメチルから選択される。別の実施形態において、各R5は、フルオロ、-CO2C(CH3)3、-CH2CHF2、-CH(CH3)2、-NH2、-N(Me)2、-C(O)CH3、オキソ及びメチルから選択される。
【００５６】
本発明は、本明細書中上記の置換基の全ての組合せを包含することを理解されたい。
【００５７】
本発明の化合物は、実施例1〜172の化合物及びそれらの塩を包含する。
【００５８】
本発明の化合物は、実施例1〜87の化合物及びそれらの塩を包含する。
【００５９】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド；
N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド；
6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド；及び
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S)-ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
又はそれらの塩から選択される。
【００６０】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド；
N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド；
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(インドリン-4-イルメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド；及び
N4-(3-((2r,5S)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-((R*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
又はそれらの塩から選択される。
【００６１】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００６２】
【化５】
2019510782.tif 000007
又はその塩である。
【００６３】
別の実施形態において、式(I)の化合物は：
【００６４】
【化６】
2019510782.tif 000008
の塩である。
【００６５】
さらなる実施形態において、式(I)の化合物は：
【００６６】
【化７】
2019510782.tif 000009
である。
【００６７】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００６８】
【化８】
2019510782.tif 000010
又はその塩である。
【００６９】
別の実施形態において、式(I)の化合物は：
【００７０】
【化９】
2019510782.tif 000011
の塩である。
【００７１】
さらなる実施形態において、式(I)の化合物は：
【００７２】
【化１０】
2019510782.tif 000012
である。
【００７３】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００７４】
【化１１】
2019510782.tif 000013
又はその塩である。
【００７５】
別の実施形態において、式(I)の化合物は：
【００７６】
【化１２】
2019510782.tif 000014
の塩である。
【００７７】
さらなる実施形態において、式(I)の化合物は：
【００７８】
【化１３】
2019510782.tif 000015
である。
【００７９】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００８０】
【化１４】
2019510782.tif 000016
又はその塩である。
【００８１】
別の実施形態において、式(I)の化合物は：
【００８２】
【化１５】
2019510782.tif 000017
の塩である。
【００８３】
さらなる実施形態において、式(I)の化合物は：
【００８４】
【化１６】
2019510782.tif 000018
である。
【００８５】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００８６】
【化１７】
2019510782.tif 000019
又はその塩である。
【００８７】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００８８】
【化１８】
2019510782.tif 000020
又はその塩である。
【００８９】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００９０】
【化１９】
2019510782.tif 000021
又はその塩である。
【００９１】
一実施形態において、式(I)の化合物は：
【００９２】
【化２０】
2019510782.tif 000022
又はその塩である。
【００９３】
本発明の第2の態様において、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩と1種以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。
【００９４】
本発明の第3の態様において、療法、特にブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。
【００９５】
本発明の第4の態様において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態を治療する方法が提供される。
【００９６】
本発明の第5の態様において、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【００９７】
使用の陳述
【００９８】
式(I)の化合物及びその塩はブロモドメイン阻害薬であり、従って、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療において潜在的有用性を有すると考えられる。
【００９９】
ブロモドメイン阻害薬は、全身性炎症又は組織炎症、感染に対する炎症応答又は低酸素症、細胞の活性化及び増殖、脂質代謝、線維症に関連する様々な疾患又は状態の治療において、並びにウイルス感染症の予防及び治療において有用であると考えられる。
【０１００】
ブロモドメイン阻害薬は、広範な種類の急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、急性痛風、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、炎症性腸疾患(クローン病及び潰瘍性大腸炎)、喘息、慢性閉塞性気道疾患、肺炎、心筋炎、心膜炎、筋炎、湿疹、皮膚炎(アトピー性皮膚炎を含む)、脱毛症、白斑、水疱性皮膚疾患、腎炎、血管炎、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、シェーグレン症候群、唾液腺炎、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、アーヴァイン・ガス症候群(白内障後及び術後)、網膜色素変性症、毛様体扁平部炎、バードショット網膜脈絡膜症、網膜上膜、嚢胞性黄斑浮腫、傍中心窩毛細血管拡張症、牽引性黄斑症、硝子体黄斑牽引症候群、網膜剥離、神経網膜炎、特発性黄斑浮腫、網膜炎、ドライアイ(乾性角結膜炎)、春季角結膜炎、アトピー性角結膜炎、ぶどう膜炎(前部ぶどう膜炎、全ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎、ぶどう膜炎関連黄斑浮腫など)、強膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢性黄斑ジストロフィー、肝炎、膵炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、アジソン病、下垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、巨細胞性動脈炎、ループス腎炎を含む腎炎、糸球体腎炎などの臓器合併症を伴う血管炎、巨細胞性動脈炎を含む血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発性動脈炎、ベーチェット病、川崎病、高安動脈炎、壊疽性膿皮症、臓器合併症を伴う血管炎、移植臓器の急性拒絶、及び全身性硬化症の治療において有用であり得る。
【０１０１】
一実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症又はアルツハイマー病などの、APO-A1の調節を介して媒介される脂質代謝の障害である。
【０１０２】
別の実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、喘息又は慢性閉塞性気道疾患などの呼吸器障害である。
【０１０３】
別の実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、リウマチ性関節炎、骨関節炎、急性痛風、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、又は炎症性腸疾患(クローン病又は潰瘍性大腸炎)などの、全身性炎症性障害である。
【０１０４】
別の実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、多発性硬化症である。
【０１０５】
別の実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、I型糖尿病である。
【０１０６】
別の実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態は、リウマチ性関節炎である。
【０１０７】
ブロモドメイン阻害薬は、鬱病の治療において有用であり得る。
【０１０８】
ブロモドメイン阻害薬は、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う疾患又は状態、例えば、敗血症、急性敗血症、敗血症症候群、敗血症性ショック、内毒素血症、全身性炎症反応症候群(SIRS)、多臓器不全症候群、中毒性ショック症候群、急性肺損傷、ARDS(成人呼吸窮迫症候群)、急性腎不全、劇症肝炎、火傷、急性膵炎、術後症候群、サルコイドーシス、ヘルクスハイマー反応、脳炎、脊髄炎、髄膜炎、マラリア、並びにインフルエンザ、帯状ヘルペス、単純ヘルペス及びコロナウイルスなどのウイルス感染症を伴うSIRSの治療において有用であり得る。一実施形態において、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う疾患又は状態は、急性敗血症である。
【０１０９】
ブロモドメイン阻害薬は、心筋梗塞、脳血管虚血(脳卒中)、急性冠動脈症候群、腎再灌流傷害、臓器移植、冠動脈バイパス移植、心肺バイパス処置、肺塞栓症、腎塞栓症、肝塞栓症、胃腸管塞栓症又は末梢肢塞栓症などの虚血再灌流傷害を伴う状態の治療において有用であり得る。
【０１１０】
ブロモドメイン阻害薬は、心血管疾患、例えば、冠動脈疾患(例えば、狭心症及び心筋梗塞)、肺動脈高血圧症、脳血管虚血(脳卒中)、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患、心筋症、心房細動、先天性心疾患、心内膜炎、大動脈瘤又は末梢動脈疾患の治療において有用であり得る。
【０１１１】
ブロモドメイン阻害薬は、線維性状態、例えば、特発性肺線維症、肺線維症、嚢胞性線維症、進行性塊状線維症、腎線維症、肝線維症、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)、術後狭窄、ケロイド性瘢痕形成、強皮症(限局性強皮症及び全身性硬化症を含む)、心線維症、心房線維症、心内膜心筋線維症、陳旧性心筋梗塞、関節線維化、デュピュイトラン拘縮、縦隔(mediastinal)、骨髄線維症、ペイロニー病、腎性全身性線維症、後腹膜線維症及び癒着性関節包炎の治療において有用であり得る。
【０１１２】
ブロモドメイン阻害薬は、ウイルス感染症、例えば、単純ヘルペス感染症及び再活性化、口唇ヘルペス、帯状ヘルペス感染症及び再活性化、水痘、帯状疱疹、ヒトパピローマウイルス(HPV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、頸部腫瘍、アデノウイルス感染症(急性呼吸器疾患を含む)、ポックスウイルス感染症(牛痘又は天然痘など)、又はアフリカブタ熱ウイルスの治療において有用であり得る。一実施形態において、ウイルス感染症は、皮膚又は頸部上皮のHPV感染症である。別の実施形態において、ウイルス感染症は、潜伏性HIV感染症である。
【０１１３】
ブロモドメイン阻害薬は、広範囲の骨障害、例えば、骨粗鬆症、骨減少症、骨関節炎及び強直性脊椎炎の治療において有用であり得る。
【０１１４】
ブロモドメイン阻害薬は、癌、例えば血液癌(白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫を含む)、上皮癌(肺、乳房又は結腸癌を含む)、正中癌、又は間葉腫瘍、肝腫瘍、腎腫瘍又は神経学的腫瘍などの治療において有用であり得る。
【０１１５】
ブロモドメイン阻害薬は、脳癌(神経膠腫)、神経膠芽腫、バナヤン・ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット・デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、結腸直腸癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、脳室上衣細胞腫、髄芽腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、扁平上皮癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫癌、骨肉腫、骨の巨細胞腫、甲状腺癌、リンパ芽球性T細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、プラズマ細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、外套細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、混合系統系白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性T細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸部癌、子宮内膜癌、腎癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽腔癌、頬側癌、口腔癌、GIST(消化管間質性腫瘍)、NUT-正中癌、及び精巣癌から選択される1種以上の癌の治療において有用であり得る。
【０１１６】
一実施形態において、癌は、白血病、例えば、急性単球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、及び混合系統系白血病(MLL)から選択される白血病である。別の実施形態において、癌はNUT-正中癌である。別の実施形態において、癌は多発性骨髄腫である。別の実施形態において、癌は小細胞肺癌(SCLC)などの肺癌である。別の実施形態において、癌は神経芽細胞腫である。別の実施形態において、癌はバーキットリンパ腫である。別の実施形態において、癌は子宮頸部癌である。別の実施形態において、癌は食道癌である。別の実施形態において、癌は卵巣癌である。別の実施形態において、癌は乳癌である。別の実施形態において、癌は結腸直腸癌である。別の実施形態において、癌は前立腺癌である。別の実施形態において、癌は去勢抵抗性前立腺癌である。
【０１１７】
ブロモドメイン阻害薬は、全身性炎症応答症候群を伴う疾患、例えば、敗血症、火傷、膵炎、大外傷、出血、及び虚血などの治療において有用であり得る。この実施形態において、ブロモドメイン阻害薬は、診断時点で、SIRS、ショック、多臓器不全症候群の発症(急性肺損傷、ARDS、急性の腎損傷、肝損傷、心損傷又は胃腸管損傷の発症を含む)及び死亡、の発生率を低下させるために投与され得る。別の実施形態において、ブロモドメイン阻害薬は、敗血症、出血、広範な組織損傷、SIRS、又はMODS(多臓器不全症候群)の高いリスクを伴う外科手術又はその他の処置に先立って投与される。特定の実施形態において、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態は、敗血症、敗血症症候群、敗血症性ショック、及び内毒素血症である。別の実施形態において、ブロモドメイン阻害薬は、急性又は慢性の膵炎の治療に適応である。別の実施形態において、ブロモドメインは、火傷の治療に適応である。
【０１１８】
従って、本発明は、療法において使用するための式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩は、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療において使用することができる。
【０１１９】
従って、本発明は、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。一実施形態において、リウマチ性関節炎の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う疾患又は状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、虚血再灌流傷害を伴う状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、心血管疾患の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、線維性状態の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、ウイルス感染症の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、骨障害の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。別の実施形態において、癌の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。さらなる実施形態において、全身性炎症応答症候群を伴う疾患の治療において使用するための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が提供される。
【０１２０】
また、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用も提供される。一実施形態において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。一実施形態において、リウマチ性関節炎の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う疾患又は状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、虚血再灌流傷害を伴う状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、心血管疾患の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、線維性状態の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、ウイルス感染症の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。別の実施形態において、癌の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。さらなる実施形態において、全身性炎症応答症候群を伴う疾患の治療のための医薬の製造における、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【０１２１】
また、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患又は状態を治療する方法も提供される。一実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、急性又は慢性の自己免疫状態及び/又は炎症状態を治療する方法が提供される。一実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、リウマチ性関節炎を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物による感染又はこれらの毒素に対する炎症応答を伴う疾患又は状態を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、虚血再灌流傷害を伴う状態を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、心血管疾患を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、線維性状態を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、ウイルス感染症を治療する方法が提供される。別の実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、癌を治療する方法が提供される。さらなる実施形態において、治療有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とする対象において、全身性炎症応答症候群を伴う疾患を治療する方法が提供される。
【０１２２】
好適には、それを必要とする対象は哺乳動物、特にヒトである。
【０１２３】
本発明は、タンパク質を含むブロモドメインに式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を接触させることを含む、タンパク質を含むブロモドメインを阻害する方法をさらに提供する。
【０１２４】
本明細書中で用いられる、特定の疾患又は状態の「治療」への言及は、このような疾患又は状態の防止又は予防を包含する。
【０１２５】
医薬組成物/投与経路/用量
組成物
療法において使用するため、式(I)の化合物並びにその薬学的に許容される塩を未加工の化学物質として投与することも可能であるが、活性成分を医薬組成物として提供するのが一般的である。式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩は、通常、必ずしもではないが、患者への投与の前に医薬組成物に製剤化される。従って、別の態様において、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び1種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。式(I)の化合物及び薬学的に許容される塩は、上記のとおりである。賦形剤(1つ又は複数)は、組成物の他の成分と適合性であり、且つその受容者に対して有害でないという意味において許容可能でなければならない。本発明の別の態様によれば、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を1種以上の薬学的に許容される賦形剤と混合することを含む、医薬組成物の調製方法も提供される。式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物は、例えば、周囲温度及び大気圧で混合することにより調製することができる。この医薬組成物は、本明細書に記載される状態のいずれかの治療において使用することができる。
【０１２６】
さらなる態様において、本発明は、ブロモドメイン阻害薬が適応である疾患若しくは状態の治療のための、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を対象とする。
【０１２７】
式(I)の化合物は医薬組成物における使用が意図されているため、式(I)の化合物はそれぞれ、好ましくは、実質的に純粋な形態で、例えば、少なくとも85％の純度、特に少なくとも98％の純度(重量基準で重量％)で提供されることが容易に理解されるであろう。
【０１２８】
医薬組成物は、単位用量当たり所定量の活性成分を含む単位用量形態で提供することができる。好ましい単位用量組成物は、活性成分の1日用量又はサブ用量、又はその適切な割合を含む組成物である。従って、このような単位用量は、1日に2回以上投与し得る。好ましい単位用量組成物は、本明細書中上記に挙げられる活性成分の1日用量又はサブ用量(1日に2回以上の投与について)、又はその適切な割合を含む組成物である。
【０１２９】
医薬組成物は、任意の適切な経路による、例えば、経口(頬側又は舌下を含む)、直腸、吸入、鼻腔内、局所(頬側、舌下又は経皮を含む)、眼(局所、眼内、結膜下、強膜上、テノン嚢下を含む)、膣、又は非経口(皮下、筋内、静脈内又は皮内を含む)経路による投与に適合させることができる。このような組成物は、製薬の技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、活性成分を担体(1つ又は複数)又は賦形剤(1つ又は複数)と一緒にすることによって調製することができる。
【０１３０】
本発明の医薬組成物は、安全且つ有効量の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を抽出して、例えば散剤又はシロップ剤と共に患者に与えることができるバルク形態で調製し、パッケージすることができる。あるいは、本発明の医薬組成物は、各々の物理的に分離した単位が式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する単位剤形で調製し、パッケージすることができる。単位剤形で調製される場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、例えば0.25mg〜1g、又は0.5mg〜500mg、又は1mg〜100mgの式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有し得る。
【０１３１】
式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤(1つ又は複数)は、典型的には、所望の投与経路による患者への投与に適合した剤形に製剤化される。例えば、剤形としては、(1)経口投与に適合した剤形(例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸剤、トローチ剤、散剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤、液剤、乳剤、サシェ剤、及びカシェ剤)；(2)非経口投与に適合した剤形(例えば、滅菌液剤、懸濁剤及び再構成用散剤)；(3)経皮投与に適合した剤形(例えば経皮パッチ剤)；(4)直腸投与に適合した剤形(例えば坐剤)；(5)吸入に適合した剤形(例えば、エアロゾル剤、液剤、及び乾燥散剤)；並びに(6)局所投与に適合した剤形(例えばクリーム剤、軟膏剤、ローション剤、液剤、ペースト剤、噴霧剤、発泡剤、及びゲル剤)が挙げられる。
【０１３２】
好適な薬学的に許容される賦形剤は、選択される特定の剤形に応じて異なるだろう。さらに、好適な薬学的に許容される賦形剤は、それらが組成物中で果たし得る特定の機能について選択され得る。例えば、特定の薬学的に許容される賦形剤は、均一な剤形の製造を容易にするそれらの能力について選択され得る。特定の薬学的に許容される賦形剤は、安定な剤形の製造を容易にするそれらの能力について選択され得る。特定の薬学的に許容される賦形剤は、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が患者に投与された際に、1つの器官又は身体の部分から別の器官又は身体の部分への運搬又は輸送を容易にするそれらの能力について選択することができる。特定の薬学的に許容される賦形剤は、対象コンプライアンスを高めるそれらの能力について選択され得る。
【０１３３】
好適な薬学的に許容される賦形剤としては、以下の種類の賦形剤：担体、希釈剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤、造粒剤、コーティング剤、湿潤剤、溶媒、共溶媒、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、味マスキング剤、着色剤、抗ケーキング剤、保湿剤、キレート剤、可塑剤、粘度増加剤、抗酸化剤、保存剤、安定化剤、界面活性剤、及び緩衝剤が挙げられる。当業者であれば、特定の薬学的に許容される賦形剤が、2つ以上の機能を果たし得ることと、さらにどのくらいの量の賦形剤が製剤中に存在するか、また他のどのような賦形剤が製剤中に存在するかに応じて代替的な機能を果たし得ることを認識するであろう。
【０１３４】
当業者は、彼らが本発明における使用のために適切な量の好適な薬学的に許容される賦形剤を選択することを可能とする、当技術分野における知識及び技能を有する。さらに、薬学的に許容される賦形剤について記載しており、また好適な薬学的に許容される賦形剤の選択において有用な、当業者が入手可能な多数の資料が存在する。例としては、Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)、The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)及びThe Handbook of Pharmaceutical Exipients(the American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press)が挙げられる。
【０１３５】
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の技術及び方法を用いて調製される。当技術分野において一般的に用いられている方法の幾つかは、Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)に記載されている。
【０１３６】
一実施形態において、医薬組成物は、非経口投与、特に静脈内投与用に適合されている。
【０１３７】
一実施形態において、医薬組成物は、経口投与用に適合されている。
【０１３８】
一実施形態において、医薬組成物は、局所投与用に適合されている。
【０１３９】
非経口投与用に適合された医薬組成物としては、水性及び非水性の滅菌注射溶液(これらは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び組成物を意図される受容者の血液と等張する溶質を含み得る)、並びに水性及び非水性の滅菌懸濁液(これらは、懸濁化剤及び増粘剤を含み得る)が挙げられる。組成物は、単位用量容器又は複数回用量容器(例えば、密封アンプル及び密封バイアル)で提供することが可能であり、且つ使用直前に滅菌液体担体(例えば注射用水)を添加することのみを必要とするフリーズドライ(凍結乾燥)状態で保存することができる。即席の注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。
【０１４０】
経口投与用に適合された医薬組成物は、カプセル剤又は錠剤、散剤又は顆粒剤、水性又は非水性液体中の液剤又は懸濁剤、可食発泡剤(edile foams)又は起泡剤(whips)、あるいは水中油型液体乳剤又は油中水型液体乳剤などの個別の単位として提供することができる。
【０１４１】
例えば、錠剤又はカプセル剤の形態での経口投与について、活性薬物成分を、エタノール、グリセロール、水などの、経口用、非毒性の薬学的に許容可能な不活性担体と組み合わせることができる。錠剤又はカプセル剤中に組み込むのに適した粉末は、化合物を好適な微細サイズに低減し(例えば微粒子化により)、同様に調製された可食炭水化物(例えばデンプン又はマンニトール)などの医薬担体と混合することによって調製することができる。風味剤、保存剤、分散剤及び着色剤も存在し得る。
【０１４２】
カプセル剤は、上記のような粉末混合物を調製し、形成されたゼラチン鞘に充填することによって作製することができる。充填操作の前に、粉末混合物に、コロイド状シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、又は固形ポリエチレングリコールなどの流動促進剤及び滑沢剤を添加することができる。カプセル剤が摂取された場合の医薬のアベイラビリティを改善するため、寒天-寒天、炭酸カルシウム、又は炭酸ナトリウムなどの崩壊剤又は可溶化剤を添加することもできる。
【０１４３】
さらに、望ましいか又は必要である場合、混合物中に好適な結合剤、流動促進剤、滑沢剤、甘味剤、風味剤、崩壊剤及び着色剤を組み込むこともできる。好適な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然糖(例えばグルコース又はベータ-ラクトース)、トウモロコシ甘味剤、天然ガム及び合成ガム(例えばアラビアガム、トラガカントガム又はアルギン酸ナトリウム)、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられる。これらの剤形中で使用される滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、造粒又はスラグ化し、滑沢剤及び崩壊剤を添加し、錠剤に圧縮することによって製剤化される。粉末混合物は、好適には粉砕された化合物を、上記の希釈剤又は基剤と、また場合によりカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン又はポリビニルピロリドンなどの結合剤、パラフィンなどの溶解遅延剤、第四級塩などの再吸収促進剤、及び/又はベントナイト、カオリン又はリン酸二カルシウムなどの吸収剤と混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプン糊、アカディア粘液、又はセルロース系材料若しくはポリマー系材料の溶液などの結合剤により湿潤化し、スクリーンを通過させることによって造粒することができる。造粒の代わりに、粉末混合物を打錠機に通すことが可能であり、その結果不完全に形成されたスラグが生じ、スラグは崩壊して顆粒となる。この顆粒は、錠剤形成用金型への粘着を防ぐため、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、又はミネラルオイルの添加により滑沢化され得る。次いで、滑沢化された混合物は、錠剤に圧縮される。式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩を、自由流動性の不活性担体と組み合わせて、造粒ステップ又はスラグ化ステップを経ることなく直接錠剤に圧縮することもできる。セラックの密封コートからなる透明又は不透明の保護コーティング、糖又はポリマー材料からなるコーティング、及びワックスからなる光沢コーティングを提供することができる。異なる単位用量を区別するために、これらのコーティングに色素を添加することができる。
【０１４４】
液剤、シロップ剤及びエリキシル剤などの経口用流体は、所与の量が所定量の化合物を含むような投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を好適に味付けされた水性溶液に溶解させることによって調製することが可能であり、他方、エリキシル剤は、非毒性アルコール系ビヒクルの使用を通して調製される。懸濁剤は、化合物を非毒性ビヒクル中に分散させることによって製剤化することができる。エトキシル化イソステアリルアルコール及びポリオキシエチレンソルビトールエーテルなどの可溶化剤及び乳化剤、保存剤、ペパーミント油などの風味添加剤、あるいは天然甘味剤若しくはサッカリン又はその他の人工甘味剤なども添加することができる。
【０１４５】
経口投与用の組成物は、治療上活性な薬剤の放出を持続させるかあるいは制御するように改変された放出プロファイルを提供するように設計することができる。
【０１４６】
適切であれば、経口投与用の投与単位組成物は、マイクロカプセル化することができる。この組成物は、例えば、粒子状材料をポリマー、ワックスなどでコーティングすること又はそれらの中に包埋することにより、放出を延長するか又は持続させるように調製することができる。
【０１４７】
経口投与に適した及び/又は経口投与用に適合された組成物については、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば微粒子化により得られた粒径を小さくした形態であってよい。サイズを小さくした(例えば、微粒子化された)化合物又は塩の好ましい粒径は、(例えば、レーザー回折を使用して測定された)約0.5〜約10μmのD50値によって規定される。
【０１４８】
式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩は、小単層ベシクル、大単層ベシクル及び多層ベシクルなどのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、又はホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【０１４９】
局所投与用に適合された医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、乳剤、ローション剤、散剤、液剤、ペースト剤、ゲル剤、発泡剤、噴霧剤、エアロゾル剤、又は油剤として製剤化することができる。このような医薬組成物は従来の添加物を含んでいてよく、従来の添加物としては、限定するものではないが、保存剤、薬物浸透を補助するための溶媒、共溶媒、皮膚軟化剤、噴射剤、粘度調整剤(ゲル化剤)、界面活性剤、及び担体が挙げられる。一実施形態において、組成物の0.01〜10重量％、又は0.01〜1重量％の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、局所投与用に適合された医薬組成物が提供される。
【０１５０】
眼又は他の外部組織(例えば口及び皮膚)の治療について、組成物は、好ましくは、局所用の軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、噴霧剤、又は発泡剤として適用される。軟膏剤に製剤化される場合、活性成分は、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤のいずれかと共に用いることができる。あるいは、活性成分を、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤と共にクリーム剤に製剤化してもよい。
【０１５１】
眼への局所投与用に適合された医薬組成物としては、活性成分を好適な担体、特に水性溶媒に溶解又は懸濁させた点眼剤が挙げられる。眼に投与される組成物は、眼科的に適合性のpH及びモル浸透圧濃度を有する。1種以上の眼科的に許容されるpH調整剤及び/又は緩衝剤、例えば、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、及び塩酸などの酸、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び乳酸ナトリウムなどの塩基、並びにクエン酸塩/デキストロース、重炭酸ナトリウム及び塩化アンモニウムなどの緩衝剤を、本発明の組成物中に含めることができる。このような酸、塩基、及び緩衝剤は、組成物のpHを眼科的に許容される範囲に維持するのに必要な量で含めることができる。1種以上の眼科的に許容される塩は、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容される範囲内とするのに十分な量で組成物中に含めることができる。このような塩としては、ナトリウム、カリウム又はアンモニウムのカチオン、及び塩酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、又は重亜硫酸塩のアニオンを有する塩が挙げられる。
【０１５２】
眼用送達デバイスは、複数の定義された放出速度及び持続性投与動態並びに浸透性を有する、1種以上の治療剤の制御放出用に設計することができる。制御放出は、生分解性/生体侵食性ポリマー(例えば、ポリ(エチレンビニル)アセテート(EVA)、超加水分解PVA)、ヒドロキシアルキルセルロース(HPC)、メチルセルロース(MC)、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)、ポリカプロラクトン、ポリ(グリコール)酸、ポリ(乳)酸、ポリ無水物の、薬物の拡散、侵食、溶解及び浸透を促進するであろうポリマー分子量、ポリマー結晶化度、コポリマー比、加工状態、表面仕上げ、幾何学的構造、賦形剤添加及びポリマーコーティングの様々な選択及び特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計を通して得ることができる。
【０１５３】
眼送達用の医薬組成物はまた、in situでゲル化可能な水性組成物も包含する。このような組成物は、眼又は涙液と接触するとゲル化を促進するのに有効な濃度のゲル化剤を含む。好適なゲル化剤としては、限定するものではないが、熱硬化性ポリマーが挙げられる。本明細書中で使用される用語「in situでゲル化可能な」は、眼又は涙液と接触するとゲルを形成する低粘度の液体を包含するだけでなく、眼に投与されると粘度の実質的な増大又はゲル剛性を示す半流体及びチクソ性ゲルなどのより粘性の液体も包含する。例えば、Ludwig (2005) Adv.Drug Deliv.Rev.3；57:1595-639(眼への薬物送達において使用するためのポリマーの例の教示の目的で、参照により本明細書に組み込まれる)を参照されたい。
【０１５４】
経鼻投与又は吸入投与用の剤形は、エアロゾル剤、液剤、懸濁剤、ゲル剤、又は乾燥散剤として好都合に製剤化することができる。
【０１５５】
吸入投与に適した及び/又は吸入投与用に適合された組成物については、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば微粒子化により得られた粒径を小さくした形態であることが好ましい。サイズを小さくした(例えば微粒子化された)化合物又は塩の好ましい粒径は、(例えば、レーザー回折を使用して測定された)約0.5〜約10μmのD50値によって規定される。
【０１５６】
例えば吸入投与用のエアロゾル製剤は、薬学的に許容される水性溶媒又は非水性溶媒中の活性物質の溶液又は微細懸濁液を含み得る。エアロゾル製剤は、噴霧デバイス又は吸入器と共に使用するためのカートリッジ又はリフィルの形を採り得る密封容器中の滅菌形態の単回用量又は複数回用量で提供することができる。あるいは、密封容器は、単回用量経鼻吸入器などの単一分配デバイス、又は容器の内容物が使い尽くされたら廃棄されることが意図される定量バルブ(定量吸入器)が取り付けられたエアロゾルディスペンサーであってもよい。
【０１５７】
剤形がエアロゾルディスペンサーを含む場合、このディスペンサーは、好ましくは、圧縮空気などの加圧下で好適な噴射剤(二酸化炭素)、又はハイドロフルオロカーボン(HFC)などの有機噴射剤などを含有する。好適なHFC噴射剤としては、1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロプロパン及び1,1,1,2-テトラフルオロエタンが挙げられる。エアロゾル剤形はまた、ポンプアトマイザーの形態も採り得る。加圧エアロゾルは、活性化合物の溶液又は懸濁液を含有することができる。この加圧エアロゾルは、懸濁製剤の分散特性及び均一性を改善するためのさらなる賦形剤、例えば共溶媒及び/又は界面活性剤の組み込みを必要とし得る。溶液製剤は、また、エタノールなどの共溶媒の添加も必要とし得る。
【０１５８】
吸入投与に適した及び/又は吸入投与用に適合された医薬組成物については、この医薬組成物は、吸入可能な乾燥粉末組成物であり得る。このような組成物は、ラクトース、グルコース、トレハロース、マンニトール又はデンプンなどの粉末基剤、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を(好ましくは粒径を小さくした形態、例えば微粒子化形態で)含むことが可能であり、場合によりL-ロイシン若しくは別のアミノ酸及び/又はステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウムなどのステアリン酸の金属塩などの性能調整剤を含み得る。好ましくは、吸入可能な乾燥粉末組成物は、ラクトース(例えばラクトース一水和物)と式(I)の化合物又はその塩との乾燥粉末ブレンドを含む。このような組成物は、例えばGB2242134Aに記載されている、GlaxoSmithKline社により販売されているDISKUS(登録商標)デバイスなどの好適なデバイスを用いて患者に投与することができる。
【０１５９】
式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩は、流体ディスペンサー(例えば分配ノズル又は分配オリフィスを有する流体ディスペンサーであって、使用者が流体ディスペンサーのポンプ機構に力を加えると上記のノズル又はオリフィスを通して計量用量の流体製剤が分配される)から送達するための流体製剤として製剤化することができる。このような流体ディスペンサーは、一般に、複数回計量用量の流体製剤のリザーバを備え、この用量は連続的なポンプの作動により分配可能である。分配ノズル又はオリフィスは、流体製剤の鼻腔内への噴霧分配のため、使用者の鼻孔内へ挿入するように構成することができる。上述のタイプの流体ディスペンサーは、国際特許出願公開第WO 2005/044354 A1号に記載及び例示されている。
【０１６０】
式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の治療有効量は、例えば、患者の年齢及び体重、治療を必要とする正確な状態及びその重症度、製剤の性質、並びに投与経路などの多数の因子によって決定され、最終的には担当医師又は獣医師の裁量により決定される。本医薬組成物において、経口投与又は非経口投与のための各投与単位は、遊離塩基として計算して、好ましくは0.01mg〜3000mg、より好ましくは0.5mg〜1000mgの式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する。経鼻又は吸入投与のための各投与単位は、遊離塩基として計算して、好ましくは0.001mg〜50mg、より好ましくは0.01mg〜5mgの式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する。
【０１６１】
薬学的に許容される式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩は、遊離塩基として計算して、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の1日用量(成人患者について)(例えば1日当たり0.01mg〜3000mg、1日当たり0.5mg〜1000mg、又は1日当たり100mg〜2500mgの経口用量又は非経用量、あるいは1日当たり0.001mg〜50mg、又は1日当たり0.01mg〜5mgの経鼻用量又は吸入用量)で投与することができる。この量は、1日1回用量で与えてもよく、より一般的には、総1日用量が同じであるように1日数回(2、3、4、5又は6回など)のサブ用量で与えてもよい。その塩の有効量は、式(I)の化合物自体の有効量の比として決定することができる。
【０１６２】
式(I)の化合物及びその薬学的に許容される塩は単独で用いてもよく、その他の治療剤と組み合わせて用いてもよい。従って、本発明による組合せ療法は、少なくとも1種の式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩の投与、及び少なくとも1種の他の治療上活性な薬剤の使用を含む。式(I)の化合物(1つ又は複数)及びその薬学的に許容される塩、並びに他の治療上活性な薬剤(1つ又は複数)は、単一医薬組成物として一緒に投与しても、又は別々に投与してもよく、別々に投与される場合、この投与は同時に行ってもよいし、又は任意の順序で連続的に行ってもよい。式(I)の化合物(1つ又は複数)及びその薬学的に許容される塩、並びに他の治療上活性な薬剤(1つ又は複数)の量、さらに投与の相対的タイミングは、所望の組合せ治療効果を達成するように選択される。従って、さらなる態様において、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を、1種以上の他の治療上活性な薬剤と共に含む組合せ物が提供される。
【０１６３】
従って、一態様において、本発明による式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物は、例えば、抗生物質、抗ウイルス薬、グルココルチコステロイド、ムスカリン拮抗薬、ベータ-2作動薬、及びビタミンD3類似体から選択される1種以上の他の治療剤と組み合わせて使用することができるか、又はこれらを含み得る。さらなる実施形態において、式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩は、癌の治療に適したさらなる治療剤と組み合わせて使用することができる。このようなさらなる治療剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology by V. T. Devita and S. Hellman(editors), 6thedition(2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers中に記載されている。当業者であれば、関与する薬物及び癌の特定の特徴に基づいて、薬剤のどの組合せが有用であり得るかを識別することができる。式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて用いられるさらなる治療剤としては、限定するものではないが、抗微小管剤(ジテルペノイド及びビンカアルカロイドなど)、白金配位錯体、アルキル化剤(ナイトロジェンマスタード、オキサザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソウレア及びトリアゼン類など)、抗生物質剤(アントラサイクリン、アクチノマイシン及びブレオマイシン類など)、トポイソメラーゼII阻害薬(エピポドフィロトキシン類など)、代謝拮抗薬(プリン類似体及びピリミジン類似体、並びに抗葉酸化合物など)、トポイソメラーゼI阻害薬(カンプトテシン類、ホルモン及びホルモン類似体など)、シグナル伝達経路阻害薬(チロシン受容体阻害薬など)、非受容体チロシンキナーゼ血管新生阻害薬、免疫療法剤(ニボルマブ及びペムブロリズマブを含むPD-1阻害剤、並びにイピリムマブを含むCTLA-4阻害剤など)、アポトーシス促進剤、エピジェネティックモジュレーター又は転写モジュレーター(ヒストンデアセチラーゼ阻害薬など)及び細胞周期シグナル伝達阻害薬が挙げられる。
【０１６４】
式(I)の化合物又はその薬学的に許容される塩が、通常は吸入経路、静脈内経路、経口経路又は鼻腔内経路で投与される他の治療剤と組み合わせて投与される場合、結果として生じる医薬組成物は、同じ経路で投与し得ることが認識されるであろう。あるいは、組成物の個々の成分を異なる経路で投与してもよい。
【０１６５】
適切であれば、他の治療成分(1つ又は複数)を、塩の形態で、例えばアルカリ金属塩若しくはアミン塩として、又は酸付加塩若しくはプロドラッグとして、あるいはエステル(例えば低級アルキルエステル)として、あるいは溶媒和物(例えば水和物)として用いて、治療剤の活性及び/又は安定性及び/又は溶解度などの物理的特性を最適化し得ることは当業者に明らかであろう。適切であれば、治療剤を光学的に純粋な形態で使用し得ることも明らかであろう。
【０１６６】
上記で言及した組合せ物は、好都合には、医薬組成物の形態で使用するために提供することが可能であり、従って、上記に定義される組合せ物を薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物は、本発明のさらなる態様に相当する。
【０１６７】
一般的な合成経路
本発明の化合物は、様々な方法によって作製することができる。任意の先に定義された変数は、別段に指示されない限り、引き続き先に定義された意味を有する。例示的な一般的合成法は以下のスキームに示され、本発明の他の化合物を調製するために容易に適合させることができる。本発明の具体的な化合物は、実施例の節において調製される。
【０１６８】
式(I)の化合物は、以下のスキームのいずれかに記載されるように調製することができる。
【０１６９】
【化２１】
2019510782.tif 000023
(式中、R1、R2、R3及びR4は上記のとおりであり、Halは塩素又は臭素であり、XはHであるか、又は一緒になって-C(Me)2C(Me)2-などの環式ボロン酸エステルを形成する)。
【０１７０】
上記のスキーム1に示されるステップに関して、以下の反応条件を利用し得る：
ステップ1は根岸クロスカップリングであり、式R4CH(R3)ZnHalのハロゲン化ベンジル亜鉛を用いて、PdCl2(PPh3)2などのパラジウム触媒の存在下に、場合により別のホスフィン配位子の存在下、THFなどの好適な溶媒中、70℃などの好適な温度で実施することができる。
ステップ2は酸又は塩基-媒介性エステル切断であり、TFAなどの任意の好適な酸又はNaOHなどの任意の好適な塩基を用いて、場合によりDCM又はMeOHなどの適切な溶媒中、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ3はアミドカップリング反応であり、アミン試薬R2-NH2を用いて、トリエチルアミン又はDIPEAなどの好適な第三級アミンの存在下に、HATUなどの好適なアミドカップリング反応物の存在下、DCM又はDMFなどの好適な溶媒中、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ4はBOCなどの保護基を除去するための任意選択の脱保護ステップであり、TFA又はHClなどの酸を用いて、DCM又は1,4-ジオキサンなどの好適な溶媒の存在下に、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ5は、好適なキラルHPLCカラム及び好適な溶媒系を用いた任意選択のキラル分離である。
ステップ6はカルボニル化反応であり、EtOHなどのアルコール試薬を用いて、トリエチルアミンなどの第三級アミンの存在下に、[(R)-(+)-2,2′-ビス(ジフェニルホスフィノ)-1,1′-ビナフチル]パラジウム(II)クロリドなどのパラジウム触媒の存在下で、場合により別のホスフィン配位子の存在下に、一酸化炭素の存在下で、DMFなどの好適な溶媒中、70℃などの好適な温度で実施することができる。
ステップ7は還元であり、還元剤、又は水素化ホウ素ナトリウム及び塩化カルシウムなどの試薬の組み合わせを用いて、エタノール及び2-MeTHFなどの好適な溶媒又は溶媒混合物中、0℃〜室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ8は塩素化反応であり、塩化チオニルなどの塩素化試薬を用いて、DCMなどの好適な溶媒の存在下に、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ9は鈴木カップリングなどのクロスカップリング反応であり、アリールボロン酸又はアリールボロン酸エステルR4-B(OX)2などのアリール金属種を用いて、PdCl2(PPh3)2などの好適なパラジウム触媒の存在下、場合により別のホスフィン配位子の存在下に、炭酸カリウムなどの好適な塩基の存在下、1,4-ジオキサン及び水などの好適な溶媒又は溶媒混合物の存在下で、120℃などの好適な温度にて実施することができる。
ステップ10は酸化であり、デス-マーチンペルヨージナンなどの好適な酸化剤を用いて、DCMなどの好適な溶媒中、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ11は、THFなどの好適な溶媒中、0℃などの好適な温度で臭化フェニルマグネシウムなどの好適なグリニャール試薬を用いる、アルデヒドへのグリニャール付加である。
ステップ12は、Proton Sponge(登録商標)などの好適な塩基の存在下に、ジクロロメタンなどの好適な溶媒中、室温などの好適な温度でMeerwein塩などの好適なアルキル化試薬を用いる、メチル化などのアルキル化反応である。
【０１７１】
【化２２】
2019510782.tif 000024
【０１７２】
上記のスキーム2に示されるステップに関して、以下の反応条件を利用し得る：
ステップ13は鈴木カップリングなどのクロスカップリング反応であり、トリビニルシクロトリボロキサンピリジン複合体などのアリール金属種を用いて、PdCl2(dppf)などの好適なパラジウム触媒の存在下、場合により別のホスフィン配位子の存在下に、炭酸カリウムなどの好適な塩基の存在下、エタノール及びトルエンなどの好適な溶媒又は溶媒混合物の存在下で、120℃などの好適な温度にて、場合によりマイクロ波照射を用いて実施することができる。
ステップ14は2ステップの臭素化／除去反応であり、第1ステップは臭素などの好適な臭素化試薬を用いて、ジクロロメタンなどの好適な溶媒又は溶媒混合物の存在下で、室温などの好適な温度で実施することが可能であり；第2ステップは、水酸化カリウムなどの好適な塩基を用いて、EtOHなどの好適な溶媒中、50℃などの好適な温度で実施することができる。
ステップ15は鈴木カップリングなどのクロスカップリング反応であり、アリールボロン酸又はアリールボロン酸エステルR4-B(OX)2などのアリール金属種を用いて、PEPPSI-iPrなどの好適なパラジウム触媒の存在下、場合により別のホスフィン配位子の存在下に、リン酸三カリウムなどの好適な塩基の存在下、1,4-ジオキサン及び水などの好適な溶媒又は溶媒混合物の存在下で、室温などの好適な温度にて実施することができる。
ステップ16は水素化反応であり、水素雰囲気下に、10％Pd/Cなどの好適な金属触媒の存在下、EtOHなどの好適な溶媒の存在下で、室温などの好適な温度にて実施することができる。
ステップ17はヒドロホウ素化反応であり、(2,3-ジメチルブタン-2-イル)ボランなどの好適なヒドロホウ素化試薬を用いて、THFなどの好適な溶媒の存在下、0℃などの好適な温度で、0℃〜室温などの好適な温度における水、過酸化水素及び水酸化ナトリウムの添加などの好適な酸化的後処理により実施することできる。
ステップ18は酸又は塩基媒介性エステル切断であり、TFAなどの任意の好適な酸又はNaOHなどの任意の好適な塩基を用いて、場合によりDCM又はMeOHなどの好適な溶媒中、室温などの好適な温度で実施することができる。
ステップ19はアミドカップリング反応であり、アミン試薬R2-NH2を用いて、トリエチルアミン又はDIPEAなどの好適な第三級アミンの存在下に、HATUなどの好適なアミドカップリング反応物の存在下、DCM又はDMFなどの好適な溶媒中、室温などの好適な温度で実施することができる。
【０１７３】
上記化合物の1個以上の官能基を保護することが有利であり得ることが当業者に認識されるであろう。保護基の例及びそれらの除去のための手段はT. W. Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis’ (4th edition, J. Wiley and Sons, 2006)中に見出すことが可能であり、このような手段に関して、参照により本明細書中に組み込まれる。
【０１７４】
好適なアミン保護基としては、アシル(例えば、アセチル、カルバメート(例えば、2',2',2'-トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はt-ブトキシカルボニル)及びアリールアルキル(例えば、ベンジル)が挙げられ、これらは、酸媒介性切断により(例えば1,4-ジオキサン中塩酸又はジクロロメタン中トリフルオロ酢酸などの酸を用いて)、又は還元的に(例えば、ベンジル基又はベンジルオキシカルボニル基の水素化分解又は酢酸中亜鉛を用いた2',2',2'-トリクロロエトキシカルボニル基の還元的除去)、適宜除去することができる。他の好適なアミン保護基として、トリフルオロアセチル(-C(O)CF3)が挙げられるが、これは塩基触媒性加水分解により除去することができる。
【０１７５】
上記経路のいずれにおいても、様々な基及び部分が分子中に導入される合成ステップの正確な順序は変動し得ることが理解されるであろう。確実に、工程の一つの段階で導入される基又は部分が後続の変換及び反応により影響を受けないようにし、これに従って合成ステップの順序を選択することは、当業者の技能の範囲内であろう。
【０１７６】
上記の特定の中間体化合物は、本発明のなおさらなる態様を形成する。
【実施例】
【０１７７】
一般方法
全般的な実験の詳細
【０１７８】
本明細書中で用いられる、これらの方法、スキーム及び実施例において使用される記号及び慣習は、現代の科学文献、例えば、the Journal of the American Chemical Societyにおいて使用される記号及び慣習と一致する。特記しない限り、全ての出発材料は商業的供給業者から入手し、さらに精製することなく使用した。具体的には、以下の略語が、実施例中で及び明細書を通じて使用され得る。
【０１７９】
【表１】
2019510782.tif 000025
2019510782.tif 000026
【０１８０】
以下の化合物の名称は、化合物命名プログラム「ACD Name Pro 6.02」を使用するか、又はChemDraw ULtra 12.0の命名機能を使用して得られた。
【０１８１】
LCMS法
ギ酸法
LC条件
UPLC分析は、Acquity UPLC CSH C18カラム(50mm×内径2.1mm、充填直径1.7μm)上で、40℃にて行った。
利用した溶媒は以下のとおりであった：
A=水中0.1(v/v)％ギ酸溶液
B=アセトニトリル中0.1(v/v)％ギ酸溶液
【０１８２】
利用した勾配は以下のとおりであった：
【０１８３】
【表２】
2019510782.tif 000027
【０１８４】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの合計シグナルであった。
MS条件
MS           ：Waters ZQ
イオン化方式  ：交互走査陽及び陰エレクトロスプレー
走査範囲      ：100〜1000AMU
走査時間      ：0.27秒
走査間遅延    ：0.10秒
【０１８５】
高pH法
LC条件
UPLC分析は、Acquity UPLC CSH C18カラム(50mm×内径2.1mm、充填直径1.7μm)上で、40℃にて行った。
利用した溶媒は以下のとおりであった：
A=アンモニア溶液でpH10に調整された水中10mM炭酸水素アンモニウム
B=アセトニトリル
利用した勾配は以下のとおりであった：
【０１８６】
【表３】
2019510782.tif 000028
【０１８７】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの合計シグナルであった。
MS条件
MS           ：Waters ZQ
イオン化方式  ：交互走査陽及び陰エレクトロスプレー
走査範囲      ：100〜1000AMU
走査時間      ：0.27秒
走査間遅延    ：0.10秒
【０１８８】
TFA法
LC条件
UPLC分析は、Acquity UPLC CSH C18カラム(50mm×内径2.1mm、充填直径1.7μm)上で、40℃にて行った。
利用した溶媒は以下のとおりであった：
A=水中0.1(v/v)％トリフルオロ酢酸溶液
B=アセトニトリル中0.1(v/v)％トリフルオロ酢酸溶液
利用した勾配は以下のとおりであった：
【０１８９】
【表４】
2019510782.tif 000029
【０１９０】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの合計シグナルであった。
MS条件
MS           ：Waters ZQ
イオン化方式  ：交互走査陽及び陰エレクトロスプレー
走査範囲      ：100〜1000AMU
走査時間      ：0.27秒
走査間遅延    ：0.10秒
【０１９１】
一般的なMDAP精製法
以下に、化合物精製において使用されているか、又は使用され得る質量分析計直結自動分取クロマトグラフィー(mass-directed autopreparative chromatography)(MDAP)法の例を挙げる。
【０１９２】
MDAP(高pH法)。HPLC分析は、アンモニア溶液でpH10に調整された水中10mM重炭酸アンモニウム(溶媒A)及びアセトニトリル(溶媒B)で、0〜100％溶媒Bの溶出勾配を用いて15分間又は25分間かけて溶出するXselect CSH C18カラム(150mm×内径30mm、充填直径5μm)上で、周囲温度にて行った。
【０１９３】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの平均シグナルであった。質量スペクトルは、交互走査陽及び陰エレクトロスプレーを使用して、Waters ZQ Mass Spectrometerに記録した。イオン化データは最も近い整数に丸めた。
【０１９４】
MDAP(ギ酸法)。HPLC分析は、水中0.1％ギ酸(溶媒A)及びアセトニトリル中0.1％ギ酸(溶媒B)で、0〜100％溶媒Bの溶出勾配を用いて15分間又は25分間かけて溶出するXselect CSH C18カラム(150mm×内径30mm、充填直径5μm)上で、周囲温度にて行った。
【０１９５】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの平均シグナルであった。質量スペクトルは、交互走査陽及び陰エレクトロスプレーを使用して、Waters ZQ Mass Spectrometerに記録した。イオン化データは最も近い整数に丸めた。
【０１９６】
MDAP(TFA法)。HPLC分析は、水中0.1(v/v)％トリフルオロ酢酸溶液(溶媒A)及びアセトニトリル中0.1(v/v)％トリフルオロ酢酸溶液(溶媒B)で、0〜100％溶媒Bの溶出勾配を用いて15分間又は25分間かけて溶出するXselect CSH C18カラム(150mm×内径30mm、充填直径5μm)上で、周囲温度にて行った。
【０１９７】
UV検出は、210nm〜350nmの波長からの平均シグナルであった。質量スペクトルは、交互走査陽及び陰エレクトロスプレーを使用して、Waters ZQ Mass Spectrometerに記録した。イオン化データは最も近い整数に丸めた。
【０１９８】
NMR
スペクトルは、400MHz NMR装置又は600MHz NMR装置上で、302Kにて実行した。
【０１９９】
中間体：
中間体1：(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸
【０２００】
【化２３】
2019510782.tif 000030
【０２０１】
LiOH(751mg、31.4mmol)を、室温の(1R,5S,6r)-エチル3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボキシレート(1000mg、6.27mmol、例えばPharmablockから市販されているもの)の水(10mL)、THF(10mL)及びMeOH(10mL)中溶液に添加した。得られた懸濁液を3時間撹拌した。後処理のため、混合物を蒸発させ、残りの粗固体を最小量の水に溶解させ、HCl(5mL、25％m/m)でクエンチし、MeOH/DCM溶媒で4回抽出し、合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させ、真空中で蒸発させて、所望の化合物(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸(750mg、5.85mmol、収率93％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.13(s, 1 H) 3.80(d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.62(d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.00-2.15(m, 2 H) 1.32(t, J=3.1 Hz, 1 H)。
【０２０２】
中間体2：ベンジル(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバメート
【０２０３】
【化２４】
2019510782.tif 000031
【０２０４】
(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸(340mg、2.65mmol)をトルエン(12mL)に溶解させ、次いでEt3N(1.110mL、7.96mmol)、ジフェニルホスホロアジデート(0.686mL、3.18mmol)及びベンジルアルコール(0.552mL、5.31mmol)を添加し、混合物を還流で2時間加熱した。この溶液をEtOAc(10mL)で希釈し、水(10mL)及びNaHCO3溶液(10mL)で洗浄し、有機層を乾燥及び蒸発させ、残渣を0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、ベンジル(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバメート(460mg、1.972mmol、収率74.3％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.83分、[MH]+=234.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 7.29-7.41(m, 5 H) 5.11(br. s., 2 H) 4.86(br. s., 1 H) 3.98(d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.72(d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.45-2.52(m, 1 H) 1.80(br. s, 2 H)。
【０２０５】
中間体3：(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩
【０２０６】
【化２５】
2019510782.tif 000032
【０２０７】
ベンジル(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバメート(460mg、1.972mmol)をEtOH(20mL)に溶解させ、この反応を、H-cube(設定：室温、1バール、流速1mL/分)及び触媒としての10％Pd/C CatCart 30を用いて水素化した。反応を、H-Cubeを通して1.5時間循環させ、その後混合物をHCl(7M水性、1.332mL、9.86mmol)で酸性化し、真空中で蒸発させて油性固体を得た。この固体を真空中で2日間かけて乾燥させ、所望の生成物(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(262mg、1.836mmol、収率93％)をオフホワイトの固体として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.48(br. s., 3 H) 3.80(d, J=8.8 Hz, 2 H) 3.59(d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.24(t, J=2. 3 Hz, 1 H) 2.07(t, J=26Hz, 2 H)。
【０２０８】
中間体4：(+/-)-エチル2-(4-ベンジルモルホリン-2-イル)アセテート
【０２０９】
【化２６】
2019510782.tif 000033
【０２１０】
2-(ベンジルアミノ)エタノール(6.57mL、46.3mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)及びEt3N(6.45mL、46.3mmol)の水(40mL)中混合物を加熱還流した。(E)-エチル4-ブロモブタ-3-エノエート(8.5mL、49.4mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)を滴下添加し、反応混合物を還流で2時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、NaOH(2M溶液、10mL、20.00mmol)を添加した。反応混合物をEtOAcと水とに分配した。有機層を分離し、水性層をEtOA(2×30mL)でさらに抽出した。合わせた有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮して約11gの褐色油状物を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 340gカートリッジ、5〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。適切な画分を合わせ、濃縮して所望の生成物(4.17g)を薄黄色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.43分、[MH]＋=264.2。
【０２１１】
中間体5：(+/-)-エチル2-(モルホリン-2-イル)
【０２１２】
【化２７】
2019510782.tif 000034
【０２１３】
エチル2-(4-ベンジルモルホリン-2-イル)アセテート(3.15g、11.96mmol)のEtOH(70mL)中溶液に、ギ酸アンモニウム(3.77g、59.8mmol)及び10％Pd/C(3.82g、35.9mmol)を添加した。反応混合物を室温でN2下に一晩撹拌した。
【０２１４】
それとは別に、エチル2-(4-ベンジルモルホリン-2-イル)アセテート(375mg、1.424mmol)のEtOH(10mL)中溶液に、ギ酸アンモニウム(449mg、7.12mmol)及び10％Pd/C(555mg、5.21mmol)を添加した。反応混合物を室温でN2下に一晩撹拌した。
【０２１５】
上記の2つの反応混合物を合わせ、セライト(登録商標)を通して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、エチル2-(モルホリン-2-イル)アセテート(2.45g、12.02mmol)をオフホワイトのガム状固体として得、これをそのまま後続の反応で使用した。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.05(q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.67-3.82(m, 2 H) 3.46(td, J=11.3, 2.8 Hz, 1 H) 2.87(br. d, J=12.2 Hz, 1 H) 2.75(br. d, J=12.5 Hz, 1 H) 2.60-2.70(m, 1 H) 2.40-2.48(m, 2 H) 2.34(dd, J=15.7, 8.6 Hz, 1 H) 1.17(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２１６】
中間体6：(+/-)-tert-ブチル2-(2-エトキシ-2-オキソエチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２１７】
【化２８】
2019510782.tif 000035
【０２１８】
エチル2-(モルホリン-2-イル)アセテート(2.45g、14.14mmol)のDCM(30mL)中溶液に、Et3N(3.94mL、28.3mmol)、Boc2O(4.93mL、21.22mmol)及びDMAP(0.086g、0.707mmol)を添加し、反応混合物をN2下に室温で一晩撹拌した。反応混合物を、DCMと1M HClとに分配した。有機層を分離し、飽和NaHCO3溶液で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、その後濃縮して3.03gのオレンジ色油状物を得た。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 4.14(q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.95(dt, J=13.0, 1.9 Hz, 1 H) 3.71-3.87(m, 3 H) 3.49(td, J=11.7, 2.8 Hz, 1 H) 2.86-3.00(m, 1 H) 2.60-2.77(m, 1 H) 2.49(dd, J=6.6, 1.5 Hz, 2 H) 1.47(s, 9 H) 1.25(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２１９】
中間体7：(+/-)-tert-ブチル2-(2-ヒドロキシエチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２２０】
【化２９】
2019510782.tif 000036
【０２２１】
tert-ブチル2-(2-エトキシ-2-オキソエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.8g、10.24mmol)をTHF(50mL)に溶解させ、LiBH4(0.893g、41.0mmol)を添加し、次いで混合物を週末かけて撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液(50mL)でクエンチし、次いで1時間撹拌し、EtOAc(2×100mL)で抽出した。合わせた有機物をNa2SO4で乾燥させ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(2-ヒドロキシエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.2g、9.51mmol、収率93％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.74-4.02(m, 5 H) 3.44-3.65(m, 2 H) 2.84-3.01(m, 1 H) 2.56-2.76(m, 1 H) 1.63-1.83(m, 2 H) 1.47(s, 9 H)。
【０２２２】
中間体8：(+/-)-tert-ブチル2-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２２３】
【化３０】
2019510782.tif 000037
【０２２４】
Ms-Cl(0.815mL、10.46mmol)を、0℃のtert-ブチル2-(2-ヒドロキシエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.2g、9.51mmol)及びEt3N(1.458mL、10.46mmol)のDCM(50mL)中溶液に添加した。得られた混合物を0℃で1時間撹拌し、次いで水(50mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(3.0g、9.70mmol、収率102％)を薄黄色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.30-4.44(m, 2 H) 3.78-4.00(m, 3 H) 3.45-3.57(m, 2 H) 3.01(s, 3 H) 2.85-2.98(m, 1 H) 2.56-2.72(m, 1 H) 1.78-1.98(m, 2 H) 1.47(s, 9 H)。
【０２２５】
中間体9：(+/-)-tert-ブチル2-(2-シアノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２２６】
【化３１】
2019510782.tif 000038
【０２２７】
tert-ブチル2-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(3.0g、9.70mmol)をDMSO(30mL)に溶解させ、次いでKI(1.610g、9.70mmol)及びKCN(0.947g、14.55mmol)を添加し、混合物を80℃で1時間加熱した。得られた褐色懸濁液を水(100mL)で希釈し、EtOAc(2×50mL)で抽出した。合わせた有機物を水(2×100mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、得られた油状物を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上で精製した。生成物含有画分(ニンヒドリンで可視化した)を合わせ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(2-シアノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.42g、5.91mmol、収率60.9％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.80-4.00(m, 3 H) 3.39-3.58(m, 2 H) 2.83-3.01(m, 1 H) 2.56-2.71(m, 1 H) 2.50(t, J=7.2 Hz, 2 H) 1.69-1.87(m, 2 H) 1.47(s, 9 H。
【０２２８】
中間体10：(+/-)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２２９】
【化３２】
2019510782.tif 000039
【０２３０】
tert-ブチル2-(2-シアノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.4g、5.83mmol)をTHF(20mL)に溶解させ、BH3・THF(THF中1M、23.30mL、23.30mmol)を添加し、次いで混合物を70℃で2時間加熱した。その後、溶液を氷浴中で冷却し、MeOH(20mL)の注意深い添加(発泡)によりクエンチし、次いで真空中で蒸発させた。残渣をMeOH(20mL)に溶解させ、AcOH(2mL)を添加し、溶液を2時間撹拌し、その後真空中で蒸発させて、残渣をMeOH/DCM中0〜15％2M NH3で溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、2つの主要なニンヒドリン活性成分を得た。より極性の高い成分を回収し、tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(180mg、0.737mmol、収率12.64％)を無色油状物として得た。早いランニング成分(earlier running component)はボラン複合体であると考えられた。これを回収し、真空中で蒸発させて無色油状物(0.20g)を得た。この物質をMeOH(10mL)に溶解させ、2M NaOH(10mL)を添加し、次いで混合物を還流で6時間撹拌し、その後真空中で蒸発させて、残渣を水(10mL)とDCM(10mL)とに分配した。有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて無色油状物を得、これをMeOH/DCM中0〜20％MeOHNH3中2M NH3で溶出する10g SNAP ultraカートリッジ上のクロマトグラフィーにより精製し、さらなる所望の生成物(100mg)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.70-3.97(m, 3 H) 3.44-3.55(m, 1 H) 3.26-3.40(m, 1 H) 2.92(br. t, J=10.8, 10.8 Hz, 1 H) 2.67-2.77(m, 2 H) 2.49-2.66(m, 1 H) 1.39-1.68(m, 13 H)。
【０２３１】
中間体11：(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート、E/Z異性体の77：23混合物
【０２３２】
【化３３】
2019510782.tif 000040
【０２３３】
(R)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.5g、2.301mmol、例えばActivate Scientificから市販されているもの)をDCM(10mL)に溶解させ、デス-マーチンペルヨージナン(1.171g、2.76mmol)を添加し、次いで溶液を室温で2時間撹拌した。混合物をNaHCO3溶液(20mL)で洗浄し、有機層を乾燥させ、蒸発させて無色固体を得た。NMRは所望のアルデヒドの存在を示す。粗中間体をトルエン(20mL)に溶解させ、エチル2-(トリフェニルホスホラニリデン)アセテート(1.042g、2.99mmol)を添加し、その後混合物を90℃で一晩加熱した。得られた懸濁液を濾過し、濾液を水で洗浄し、次いで有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.45g、1.577mmol、収率68.5％)を、無色ガム状物として及びZ異性体とE異性体の混合物として得、これを次のステップで使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 6.83(dd, J=15.8, 4.3 Hz, 1 H) 6.06-6.18(m, 1.3 H) 5.87(dd, J=11.7, 1.5 Hz, 0.3 H) 4.15-4.30(m, 26時間) 3.78-4.12(m, 5.2 H) 3.51-3.65(m, 1.3 H) 2.97(br. t, J=10.6, 10.6 Hz, 1.3 H) 2.56-2.77(m, 1.3 H) 1.48(s, 11.7 H) 1.22-1.36(m, 3.9 H)。
【０２３４】
中間体12：(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２３５】
【化３４】
2019510782.tif 000041
【０２３６】
(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.45g、1.577mmol)をEtOH(50mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/C触媒カートリッジを用いて流速1mL/分で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.40g、1.392mmol、収率88％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.14(q, J=7.3 Hz, 2 H) 3.74-3.98(m, 3 H) 3.48(td, J=11.7, 2.8 Hz, 1 H) 3.36(dddd, J=10.4, 7.8, 4.8, 2.7 Hz, 1 H) 2.92(br. t, J=11.1, 11.1 Hz, 1 H) 2.60(br. t, J=9.5, 9.5 Hz, 1 H) 2.35-2.53(m, 2 H) 1.70-1.86(m, 2 H) 1.47(s, 9 H) 1.26(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２３７】
中間体13：(S)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２３８】
【化３５】
2019510782.tif 000042
【０２３９】
LiBH4(0.121g、5.57mmol)を、0℃の(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.40g、1.392mmol)のTHF(10mL)中溶液に添加し、次いで混合物を一晩撹拌し、これを室温に温めた。反応混合物を、塩化アンモニウム溶液(20mL)の極めて注意深い添加によりクエンチし、EtOAc(2×20mL)で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させて、(S)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.30g、1.223mmol、収率88％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.73-3.99(m, 3 H) 3.58-3.69(m, 2 H) 3.49(td, J=11.7, 2.8 Hz, 1 H) 3.30-3.40(m, 1 H) 2.91(br. t, J=10.8, 10.8 Hz, 1 H) 2.49-2.68(m, 1 H) 2.16-2.40(m, 1 H) 1.62-1.76(m, 2 H) 1.48-1.60(m, 2 H) 1.45(s, 9 H)。
【０２４０】
中間体14：(S)-tert-ブチル2-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２４１】
【化３６】
2019510782.tif 000043
【０２４２】
(S)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.30g、1.223mmol)をDCM(10mL)に溶解させ、Et3N(0.256mL、1.834mmol)及びMs-Cl(0.124mL、1.590mmol)を添加した。溶液を2時間撹拌し、次いで水で洗浄して有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて、(S)-tert-ブチル2-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.39g、1.206mmol、収率99％)を得、これをすぐに次のステップで使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.20-4.33(m, 2 H) 3.76-3.97(m, 3 H) 3.44-3.57(m, 1 H) 3.30-3.41(m, 1 H) 3.01(s, 3 H) 2.84-2.97(m, 1 H) 2.53-2.67(m, 1 H) 1.78-2.01(m, 2 H) 1.53-1.61(m, 2 H) 1.47(s, 9 H)。
【０２４３】
中間体15：(S)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２４４】
【化３７】
2019510782.tif 000044
【０２４５】
(S)-tert-ブチル2-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.39g、1.206mmol)をDMF(5mL)に溶解させ、アジ化ナトリウム(0.235g、3.62mmol)を添加し、次いで混合物を80℃で2時間加熱した。混合物を水(20mL)で希釈し、EtOAc(20mL)で抽出し、有機層を水(2×10mL)で洗浄し、乾燥させ、真空中で蒸発させて、(S)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(300mg、1.110mmol、収率92％)を無色ガム状物として得た。粗生成物を精製することなく次のステップに持ち越した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.74-3.99(m, 3 H) 3.49(td, J=11.7, 2.8 Hz, 1 H) 3.24-3.40(m, 3 H) 2.85-3.00(m, 1 H) 2.49-2.68(m, 1 H) 1.61-1.85(m, 2 H) 1.45-1.58(m, 11 H)。
【０２４６】
中間体16：(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２４７】
【化３８】
2019510782.tif 000045
【０２４８】
(S)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(300mg、1.110mmol)をEtOH(30mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/C触媒カートリッジ上流速1mL/分で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(190mg、0.778mmol、収率70.1％)を得、これを後続の化学反応で使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.73-3.99(m, 3 H) 3.44-3.57(m, 1 H) 3.27-3.40(m, 1 H) 2.84-3.00(m, 1 H) 2.73(t, J=6.7 Hz, 2 H) 2.51-2.65(m, 1 H) 1.38-1.67(m, 13 H)。
【０２４９】
中間体17：(R,E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２５０】
【化３９】
2019510782.tif 000046
【０２５１】
(S)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(5g、23.01mmol、例えばAOK Chemから市販されているもの)をDCM(10mL)に溶解させ、デス-マーチンペルヨージナン(11.71g、27.6mmol)を添加し、次いで溶液を室温で2時間撹拌した。混合物をNaHCO3溶液(20mL)で洗浄し、有機層を乾燥させ、蒸発させて無色固体を得た。NMRは所望のアルデヒドの存在を示す。粗中間体をトルエン(20mL)に溶解させ、エチル2-(トリフェニルホスホラニリデン)アセテート(10.42g、29.9mmol)を添加し、その後混合物を90℃で一晩加熱した。得られた懸濁液を濾過し、濾液を水で洗浄し、次いで有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(R,E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.9g、6.66mmol、収率28.9％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 6.84(dd, J=15.9, 4.2 Hz, 1 H) 6.02-6.24(m, 1 H) 4.15-4.34(m, 2 H) 4.02-4.12(m, 1 H) 3.80-3.99(m, 2 H) 3.49-3.67(m, 1 H) 2.98(t, J=10.6 Hz, 1 H) 2.70(br. s., 1 H) 1.49(s, 9 H) 1.26-1.36(m, 4 H)。
【０２５２】
中間体18：(R)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２５３】
【化４０】
2019510782.tif 000047
【０２５４】
(R,E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.8g、6.31mmol)をEtOH(60mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/C触媒カートリッジ上流速1mL/分で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.7g、5.92mmol、収率94％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.14(q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.73-3.95(m, 3 H) 3.43-3.53(m, 1 H) 3.26-3.40(m, 1 H) 2.86-2.97(m, 1 H) 2.56-2.65(m, 1 H) 2.44(spt, J=7.5 Hz, 2 H) 1.72-1.82(m, 2 H) 1.44-1.48(m, 9 H) 1.26(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２５５】
中間体19：(R)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２５６】
【化４１】
2019510782.tif 000048
【０２５７】
LiBH4(0.121g、5.57mmol)を、0℃の(S)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.40g、1.392mmol)のTHF(10mL)中溶液に添加し、次いで混合物を一晩撹拌し、これを室温に温めた。反応混合物を塩化アンモニウム溶液(20mL)の極めて注意深い添加によりクエンチし、EtOAc(2×20mL)で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させ、(S)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.30g、1.223mmol、収率88％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 5.32(s, 1 H) 3.88(br. s., 3 H) 3.75-3.80(m, 1 H) 3.67(br. d, J=2. 2 Hz, 1 H) 3.53(td, J=11.0, 3.0 Hz, 1 H) 3.34-3.43(m, 1 H) 2.88-2.99(m, 1 H) 2.57-2.68(m, 1 H) 1.71(q, J=6.6 Hz, 2 H) 1.53-1.62(m, 2 H) 1.48(s, 9 H)。
【０２５８】
中間体20：(R)-tert-ブチル2-(3-(メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２５９】
【化４２】
2019510782.tif 000049
【０２６０】
(R)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.34g、5.46mmol)をDCM(10mL)に溶解させ、Et3N(1.142mL、8.19mmol)及びMs-Cl(0.553mL、7.10mmol)を添加した。溶液を2時間撹拌し、次いで水で洗浄して有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて薄黄色油状物を得た。これを、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル2-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.22g、3.77mmol、収率69.1％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.21-4.35(m, 2 H) 3.76-3.95(m, 3 H) 3.45-3.55(m, 1 H) 3.32-3.41(m, 1 H) 3.02(s, 3 H) 2.84-2.97(m, 1 H) 2.55-2.66(m, 1 H) 1.91-2.02(m, 1 H) 1.78-1.90(m, 1 H) 1.52-1.65(m, 2 H) 1.48(s, 9 H)。
【０２６１】
中間体21：(R)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２６２】
【化４３】
2019510782.tif 000050
【０２６３】
(R)-tert-ブチル2-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(1.2g、3.71mmol)をDMF(5mL)に溶解させ、アジ化ナトリウム(0.724g、11.13mmol)を添加し、次いで混合物を80℃で2時間加熱した。混合物を水(20mL)で希釈し、EtOAc(20mL)で抽出した。有機層を水(2×10mL)で洗浄し、乾燥させ、真空中で蒸発させて、(R)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.96g、3.55mmol、収率96％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.12(q, J=7.3 Hz, 1 H) 3.74-3.97(m, 3 H) 3.49(td, J=11.7, 2.8 Hz, 1 H) 3.20-3.41(m, 2 H) 2.89-2.95(m, 1 H) 2.59(br. s., 1 H) 1.60-1.85(m, 2 H) 1.49-1.56(m, 2 H) 1.47(s, 9 H)。
【０２６４】
中間体22：(R)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２６５】
【化４４】
2019510782.tif 000051
【０２６６】
(R)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.96g、3.55mmol)をEtOH(30mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/C触媒カートリッジ上流速1mL/分で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(0.81g、3.32mmol、収率93％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.70-4.00(m, 3 H) 3.41-3.56(m, 1 H) 3.23-3.40(m, 2 H) 2.79-3.12(m, 2 H) 2.47-2.69(m, 1 H) 1.80-1.98(m, 1 H) 1.25-1.72(m, 12 H)。
【０２６７】
中間体23：(S)-tert-ブチル2-(((メチルスルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２６８】
【化４５】
2019510782.tif 000052
【０２６９】
0℃にて、(S)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(例えばActivate Scientificから市販されているもの)(3g、13.81mmol)及びEt3N(3.85mL、27.6mmol)をDCM(30mL)中で撹拌した。Ms-Cl(1.614mL、20.71mmol)を5分間かけて少しずつ添加し、反応を室温で4時間撹拌した。反応をさらなるDCMで希釈し、1N HCl(水性)、NaHCO3(水性)及び水で洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮し、(S)-tert-ブチル2-(((メチルスルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(4.242g、14.36mmol、収率104％)を黄色油状物として得、これを次のステップで粗生成物として使用した。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.13-4.35(m, 2 H) 3.76-3.95(m, 2 H) 3.71(br. d, J=13.2 Hz, 1 H) 3.62(br. ddt, J=10.6, 5.9, 3.1, 3.1 Hz, 1 H) 3.43(td, J=11.6, 2.7 Hz, 1 H) 3.14-3.31(m, 3 H) 2.62-2.99(m, 2 H) 1.31-1.52(m, 9 H)。
【０２７０】
中間体24：(R)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２７１】
【化４６】
2019510782.tif 000053
【０２７２】
(S)-tert-ブチル2-(((メチルスルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(4.2g、14.22mmol)及びKI(3.54g、21.33mmol)を、DMSO(30mL)中100℃で4時間撹拌した。反応を水で希釈し、EtOAcで抽出し、有機層を水及びブラインで洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮して黄色油状物とした。この油状物を、SNAP 50g Siカラムを用いて0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するSP4フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、(R)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.393g、10.58mmol、収率74.4％)を白色固体として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.85(br. dd, J=11.5, 2.2 Hz, 2 H) 3.70(br. d, J=13.2 Hz, 1 H) 3.52-3.63(m, 1 H) 3.44(td, J=11.6, 2.9 Hz, 1 H) 2.79-2.93(m, 2 H) 2.67-2.79(m, 1 H) 2.57-2.67(m, 1 H) 1.41(s, 9 H)。
【０２７３】
中間体25：(R)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２７４】
【化４７】
2019510782.tif 000054
【０２７５】
(R)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.39g、10.56mmol)をTHF(20mL)にとって室温で撹拌し、BH3・THF(THF中1M、15.84mL、15.84mmol)を10分間かけて添加し、反応を室温で2時間撹拌した。反応を、全ての発泡が止まるまでMeOHを注意深く添加することによりクエンチした。反応を濃縮してMeOHで希釈し、1M NaOH(50mL)で処理し、室温で2時間撹拌して、沈殿物を生じさせた。反応を濃縮してMeOHを除去し、水で希釈してEtOAcで抽出した。合わせた有機物を水で洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮して粗生成物を無色油状物として得た。これを、SNAP 50g Siカラムを用いてMeOH：DCM中0〜8％2M NH3で溶出するSP4フラッシュクロマトグラフィーを用いてさらに精製し、(R)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(965mg、4.19mmol、収率39.7％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm：3.56-3.90(m, 3 H) 3.23-3.46(m, 2 H) 2.01-3.11(obs m, 6 H) 1.28-1.62(m, 11 H)。
【０２７６】
中間体26：(S)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２７７】
【化４８】
2019510782.tif 000055
【０２７８】
(R)-tert-ブチル2-(((メチルスルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(4g、13.54mmol、例えばMatrix Scientificから市販されているもの)、KCN(0.926g、14.22mmol)及びKI(3.37g、20.31mmol)を、DMSO(30mL)中80℃で4時間、次いで100℃で3時間撹拌した。反応を水で希釈し、EtOAcで抽出し、有機層を水及びブラインで洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮して黄色油状物とした。この油状物を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するSP4 SNAP 50g Siカラムを用いて精製した。適切な画分を回収し、真空中で濃縮して、(S)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.693g、11.90mmol、収率88％)を白色固体として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.78-3.92(m, 2 H) 3.70(br. d, J=13.4 Hz, 1 H) 3.53-3.63(m, 1 H) 3.45(td, J=11.6, 2.9 Hz, 1 H) 2.80-2.92(m, 2 H) 2.73(dd, J=17.1, 7.1 Hz, 1 H) 2.59-2.68(m, 1 H) 1.41(s, 9 H)。
【０２７９】
中間体27：(S)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０２８０】
【化４９】
2019510782.tif 000056
【０２８１】
(S)-tert-ブチル2-(シアノメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(2.6g、11.49mmol)をTHF(20mL)にとって室温で撹拌し、ボランテトラヒドロフラン複合体(THF中1M、17.24mL、17.24mmol)を10分間かけて添加し、反応を室温で2時間撹拌した。反応を、全ての発泡が止まるまでMeOHを注意深く添加することによりクエンチした。反応を濃縮してMeOHで希釈し、1M NaOH(50mL)で処理し、室温で2時間撹拌し、沈殿物を生じさせた。反応を濃縮してMeOHを除去し、水で希釈してEtOAcで抽出し、合わせた有機物を水で洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮して無色油状物とした。NMRは回収されたSM(recovered SM)のみを示す。この油状物を再度THF(20mL)にとり、ボランテトラヒドロフラン複合体(THF中1M、17.24mL、17.24mmol)で処理し、還流条件下、70℃で4時間撹拌した。反応を、全ての発泡が止まるまでMeOHを注意深く添加することによりクエンチした。この反応を濃縮してMeOHで希釈し、1M NaOH(50mL)で処理し、室温で1時間撹拌して沈殿物を生じさせた。反応を濃縮してMeOHを除去し、水で希釈してEtOAcで抽出し、合わせた有機物を水で洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、濃縮して所望の生成物(S)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(763mg、3.31mmol、収率28.8％)を無色粘性油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.64-3.81(m, 3 H) 3.24-3.42(m, 3 H) 2.76-2.89(m, 1 H) 2.53-2.63(m, 2 H) 1.38-1.54(m, 11 H)。
【０２８２】
中間体28：(+/-)-1-tert-ブチル3-エチル3-フルオロピペリジン-1,3-ジカルボキシレート
【０２８３】
【化５０】
2019510782.tif 000057
【０２８４】
THF(20mL)中の1-tert-ブチル3-エチルピペリジン-1,3-ジカルボキシレート(5g、19.43mmol、例えばSigma Aldrichから市販されているもの)を、窒素下で-78℃のリチウムビス(トリメチルシリル)アミド(38.9mL、38.9mmol)のTHF(20mL)中溶液に滴下添加し、次いでこの溶液を1時間かけて−20℃に温め、その後-78℃に再冷却した。N-フルオロ-N-(フェニルスルホニル)ベンゼンスルホンアミド(12.25g、38.9mmol)のTHF(30mL)中溶液を滴下添加し、次いで混合物を2時間撹拌し、これを徐々に室温に温めた。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液(100mL)でクエンチし、EtOAc(100mL)で抽出した。有機層を1M NaOH溶液(100mL)及びブラインで洗浄し、その後乾燥させて蒸発させ、黄色油状物を得た。粗生成物をDCMに溶解させ、50gシリカカラム上にロードし、次いで0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出して、1-tert-ブチル3-エチル3-フルオロピペリジン-1,3-ジカルボキシレート(3.5g、12.71mmol、収率65.4％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) d ppm 4.27(q, J=7.3 Hz, 2 H) 3.17-3.44(m, 1 H) 2.70-2.92(m, 1 H) 1.98-2.21(m, 2 H) 1.78-1.96(m, 2 H) 1.60-1.72(m, 2 H) 1.45-1.51(m, 9 H) 1.33(s, 3 H)。
【０２８５】
中間体29：(+/-)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(ヒドロキシメチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０２８６】
【化５１】
2019510782.tif 000058
【０２８７】
1-tert-ブチル3-エチル3-フルオロピペリジン-1,3-ジカルボキシレート(3.5g、12.71mmol)をTHF(50mL)に溶解させ、LiBH4(0.831g、38.1mmol)を添加し、その後混合物を室温で4時間撹拌した。塩化アンモニウム(50mL)を、最初は極めて注意深く滴下添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、EtOAc(2×100mL)で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル3-フルオロ-3-(ヒドロキシメチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(2.2g、9.43mmol、収率74.2％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.54-3.74(m, 3 H) 1.92(br. s., 2 H) 1.72-1.82(m, 2 H) 1.58-1.62(m, 1 H) 1.51-1.57(m, 2 H) 1.48(s, 9 H)。
【０２８８】
中間体30：(+/-)-(E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０２８９】
【化５２】
2019510782.tif 000059
【０２９０】
tert-ブチル3-フルオロ-3-(ヒドロキシメチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(2.2g、9.43mmol)をDCM(60mL)に溶解させ、デス-マーチンペルヨージナン(4.80g、11.32mmol)を添加し、混合物を室温で18時間撹拌し、次いで水で洗浄して有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、清浄な乾燥したフラスコにデカントした。エチル2-(トリフェニルホスホラニリデン)アセテート(4.93g、14.15mmol)を添加し、混合物を一晩撹拌し、その後水で洗浄して有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上で精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2.2g、7.30mmol、収率77％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 6.89(dd, J=19.4, 15.8 Hz, 1 H) 6.15(d, J=15.9 Hz, 1 H) 4.22(q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.76-4.13(m, 2 H) 3.01 - 3.29(m, 1 H) 2.90-3.01(m, 1 H) 1.63-2.01(m, 4 H) 1.54-1.62(m, 1 H) 1.45-1.52(m, 10 H) 1.31(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２９１】
中間体31：(+/-)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０２９２】
【化５３】
2019510782.tif 000060
【０２９３】
(E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2g、6.64mmol)をEtOH(50mL)に溶解させ、5％Pd/C上で大気圧にて一晩水素化した。次いで、混合物を、N2下にセライト(登録商標)を通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2.0g、6.59mmol、収率99％)を無色油状物として得た。NMRが有意量の残留出発材料を示したため、粗生成物をEtOH(50mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/Cカートリッジ上で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、無色油状物を得た。NMRは一部の残留出発材料を示し、溶液をH-Cube中で再度水素化し、次いで溶出液を真空中で蒸発させ、tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2.0g、6.59mmol、収率99％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 4.14(q, J=6.9 Hz, 2 H) 3.70-3.99(m, 2 H) 2.91-3.24(m, 2 H) 2.47(t, J=7.9 Hz, 2 H) 1.71-2.04(m, 4 H) 1.42-1.66(m, 11 H) 1.26(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０２９４】
中間体32：(+/-)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０２９５】
【化５４】
2019510782.tif 000061
【０２９６】
LiBH4(0.431g、19.78mmol)を、窒素下で室温のtert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2g、6.59mmol)のTHF(30mL)中溶液に添加し、混合物を一晩撹拌し、次いで、極めて注意深く、塩化アンモニウム溶液(50mL)を最初に滴下添加することによりクエンチした。混合物を30分間激しく撹拌し、その後EtOAc(2×50mL)で抽出し、合わせた有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させて無色油状物を得た。これをDCMに溶解させ、50gシリカカラム上にロードし、次いで0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出し、その後生成物含有画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.6g、6.12mmol、収率93％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.59-3.93(m, 4 H) 2.93-3.17(m, 2 H) 1.86-2.01(m, 1 H) 1.48-1.85(m, 9 H) 1.43-1.48(m, 9 H)。
【０２９７】
中間体33：(+/-)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０２９８】
【化５５】
2019510782.tif 000062
【０２９９】
tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.6g、6.12mmol)をDCM(50mL)に溶解させ、Et3N(1.280mL、9.18mmol)を添加し、次いで混合物を室温で2時間撹拌した。溶媒を水(20mL)で洗浄し、乾燥させ、真空中で蒸発させて黄色油状物(2.5g)を得、これを直接使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.20-4.32(m, 2 H) 3.70-3.97(m, 2 H) 3.07-3.19(m, 1 H) 2.97-3.06(m, 4 H) 1.86-2.00(m, 3 H) 1.58-1.85(m, 4 H) 1.49-1.57(m, 1 H) 1.46(s, 9 H)。
【０３００】
中間体34：(+/-)-tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３０１】
【化５６】
2019510782.tif 000063
【０３０２】
tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(2.5g、7.37mmol)をDMF(30mL)に溶解させ、次いでアジ化ナトリウム(0.958g、14.73mmol)を添加し、混合物を80℃で2時間加熱した。得られた懸濁液を水(100mL)で希釈し、EtOAc(2×50mL)で抽出した。合わせた有機物を水(2×50mL)で洗浄し、乾燥させ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2.8g、9.78mmol)を薄黄色油状物として得、これを精製することなく次のステップで使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.75(dt, J=13.1, 4.1 Hz, 2 H) 3.32(t, J=6.5 Hz, 2 H) 2.97-3.06(m, 2 H) 1.86-2.00(m, 1 H) 1.58-1.85(m, 6 H) 1.43-1.57(m, 10 H)。
【０３０３】
中間体35：(+/-)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３０４】
【化５７】
2019510782.tif 000064
【０３０５】
tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(2.8g、5.87mmol)をEtOH(60mL)に溶解させ、H-Cube中、フルモードで、Pd/C触媒カートリッジ上で水素化した。溶出液を真空中で蒸発させ、薄黄色油状物を得た。粗材料をDCMに溶解させ、25gシリカカラム上にロードし、次いでMeOH/DCM中0〜20％2M NH3で溶出し、適切な画分を真空中で濃縮して、tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(1.2g、4.61mmol、収率79％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.72-4.03(m, 2 H) 2.90-3.13(m, 2 H) 2.72(t, J=6.5 Hz, 2 H) 1.87-1.98(m, 1 H) 1.72-1.87(m, 1 H) 1.33-1.69(m, 17 H)。
【０３０６】
中間体36：(R)-3-(1-(tert-ブトキシカルボニル)-3-フルオロピペリジン-3-イル)プロパン酸
【０３０７】
【化５８】
2019510782.tif 000065
【０３０８】
(R)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(9.6g、31.6mmol)をEtOH(50mL)に溶解させ、NaOH(2M水性、47.5mL、95mmol)を添加し、次いでこの溶液を室温で4時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を水(100mL)とエーテル(100mL)とに分配した。水性層を2M HClで約pH2に酸性化し、次いでEtOAc(2×100mL)で抽出した。有機層を水(100mL)で洗浄し、その後乾燥させて真空中で蒸発させ、(R)-3-(1-(tert-ブトキシカルボニル)-3-フルオロピペリジン-3-イル)プロパン酸(8.6g、31.2mmol、収率99％)を無色固体として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.76(dt, J=13.4, 4.2 Hz, 1 H) 3.06(d, J=8.6 Hz, 1 H) 2.55(t, J=7.8 Hz, 2 H) 1.98-2.08(m, 2 H) 1.88-1.97(m, 2 H) 1.68-1.81(m, 2 H) 1.51-1.60(m, 2 H) 1.45-1.50(m, 9 H)。
【０３０９】
中間体37：(R)-tert-ブチル3-(2-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３１０】
【化５９】
2019510782.tif 000066
【０３１１】
ジフェニルホスホロアジデート(8.08mL、37.5mmol)を、(R)-3-(1-(tert-ブトキシカルボニル)-3-フルオロピペリジン-3-イル)プロパン酸(8.6g、31.2mmol)及びEt3N(13.06mL、94mmol)のトルエン(50mL)中混合物に添加し、次いで溶液を30分間室温で撹拌した。ベンジルアルコール(6.50mL、62.5mmol)を添加し、混合物を還流で3時間加熱した。反応混合物をEtOAc(100mL)で希釈して水(100mL)で洗浄し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する340gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を合わせ、真空中で蒸発させて、(R)-tert-ブチル3-(2-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(8.9g、23.39mmol、収率74.9％)を無色ガム状物として得た。
1H NMR(400 MHz, 393 K, DMSO-d6) δ ppm 7.25-7.43(m, 5 H) 6.69(br. s., 1 H) 5.05(s, 2 H) 3.74-3.82(m, 1 H) 3.70(dt, J=13.1, 4.2 Hz, 1 H) 3.16-3.24(m, 2 H) 3.01-3.15(m, 1 H) 2.90-3.00(m, 1 H) 1.75-1.90(m, 3 H) 1.56-1.74(m, 2 H) 1.40-1.54(m, 10 H)。
【０３１２】
中間体38：(R)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３１３】
【化６０】
2019510782.tif 000067
【０３１４】
(R)-tert-ブチル3-(2-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(8.9g、23.39mmol)をEtOH(100mL)に溶解させ、5％Pd/C(2g)に真空下で添加し、次いで大気圧で週末かけて水素化した。この混合物を、N2下にセライト(登録商標)を通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(6.0g、24.36mmol、収率104％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.80(ddd, J=13.7, 9.8, 1.5 Hz, 1 H) 3.69-3.75(m, 1 H) 3.01-3.13(m, 1 H) 2.90-2.99(m, 1 H) 2.74(t, J=7.5 Hz, 2 H) 1.80-1.87(m, 1 H) 1.66-1.76(m, 3 H) 1.56-1.64(m, 1 H) 1.46-1.53(m, 1 H) 1.43(s, 9 H)。
【０３１５】
中間体39：(R,E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３１６】
【化６１】
2019510782.tif 000068
【０３１７】
(S)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(ヒドロキシメチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(10g、42.9mmol、調製は文献：Org. Process Res. Dev. 2015, 19, 7, 865-871に記載されている))をDCM(60mL)に溶解させ、デス-マーチンペルヨージナン(23.64g、55.7mmol)を添加し、混合物を室温で18時間撹拌し、次いで水で洗浄し、有機層をNa2SO4で乾燥させ、清浄な乾燥したフラスコにデカントした。エチル2-(トリフェニルホスホラニリデン)アセテート(19.41g、55.7mmol)を添加し、混合物を一晩撹拌し、その後水で洗浄し、有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上で精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(R,E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(10.5g、34.8mmol、収率81％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 6.89(dd, J=19.6, 15.7 Hz, 1 H) 6.15(d, J=15.7 Hz, 1 H) 4.13-4.28(m, 2 H) 3.80-4.10(m, 2 H) 2.86-3.25(m, 2 H) 1.52-2.04(m, 4 H) 1.46(s, 9 H) 1.30(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０３１８】
中間体40：(R)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３１９】
【化６２】
2019510782.tif 000069
【０３２０】
(R,E)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(10g、33.2mmol)をEtOH(100mL)に溶解させ、N2下で5％Pd-C(2g、18.79mmol)に添加し、次いで混合物を大気圧で6時間水素化し、期待された水素の取り込みを得た。混合物をN2下にセライト(登録商標)を通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(9.5g、31.3mmol、収率94％)を薄黄色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.05-4.22(m, 2 H) 3.66-4.01(m, 2 H) 2.88-3.23(m, 2 H) 2.47(t, J=8.1 Hz, 2 H) 1.84-2.12(m, 3 H) 1.71-1.84(m, 1 H) 1.47-1.71(m, 2 H) 1.45(s, 9 H) 1.21-1.32(m, 3 H)。
【０３２１】
中間体41：(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３２２】
【化６３】
2019510782.tif 000070
【０３２３】
LiBH4(2.046g、94mmol)を、(R)-tert-ブチル3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(9.5g、31.3mmol)のTHF(100mL)中溶液に添加し、混合物を室温でN2下に48時間撹拌し、次いで氷浴中で冷却し、極めて注意深く、塩化アンモニウム溶液(100mL)を最初に滴下添加することによりクエンチし(添加の際強発泡性)、その後混合物を20分間撹拌し、EtOAc(100mL)で希釈し、合わせた有機物を分離し、Na2SO4で乾燥させ、真空中で蒸発させて薄黄色油状物を得た。粗材料をDCMに溶解させ、100gシリカカラム上にロードし、次いで0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出し、生成物含有画分を真空中で蒸発させて、(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(6.0g、22.96mmol、収率73.3％)を得、これをすぐに次のステップに持ち越した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.61-3.93(m, 4 H) 2.94-3.14(m, 2 H) 1.87-1.99(m, 1 H) 1.48-1.86(m, 7 H) 1.45(s, 9 H)。
【０３２４】
中間体42：(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３２５】
【化６４】
2019510782.tif 000071
【０３２６】
(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-ヒドロキシプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(6g、22.96mmol)をDCM(100mL)に溶解させ、Et3N(4.80mL、34.4mmol)を添加し、混合物を氷浴中で冷却し、次いでMs-Cl(2.326mL、29.8mmol)を滴下添加し(発熱)、混合物を2時間撹拌し、これを室温に温めた。この溶液を水(100mL)及びブライン(100mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて、(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(7.2g、21.21mmol、収率92％)を無色油状物として得、これを次のステップで使用した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.20-4.32(m, 2 H) 3.70-3.96(m, 2 H) 3.68(s, 1 H) 3.04-3.15(m, 1 H) 3.00-3.03(m, 3 H) 1.88-1.99(m, 3 H) 1.49-1.83(m, 5 H) 1.43-1.48(m, 9 H)。
【０３２７】
中間体43：(R)-tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３２８】
【化６５】
2019510782.tif 000072
【０３２９】
アジ化ナトリウム(2.68g、41.2mmol)を、(R)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-((メチルスルホニル)オキシ)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(7g、20.62mmol)のDMF(50mL)中溶液に添加し、混合物を70℃で2時間加熱し、次いで水(200mL)で希釈してEtOAc(2×100mL)で抽出した。合わせた有機物を水(2×100mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、粗生成物を無色油状物として得た。粗生成物をDCM(10mL)に溶解させ、100gシリカカラム上にロードし、その後0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出し、生成物含有画分(ニンヒドリンで可視化した)を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(5.2g、18.16mmol、収率88％)を無色油状物として得、これをさらに精製することなく次のステップに持ち越した。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.69-3.99(m, 2 H) 3.33(t, J=6.5 Hz, 2 H) 2.96-3.17(m, 2 H) 1.86-1.98(m, 1 H) 1.58-1.83(m, 6 H) 1.49-1.58(m, 1 H) 1.47(s, 9 H)。
【０３３０】
中間体44：(S)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３３１】
【化６６】
2019510782.tif 000073
【０３３２】
(R)-tert-ブチル3-(3-アジドプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(5.0g、17.46mmol)をTHF(50mL)に溶解させ、PPh3(5.50g、20.95mmol)を添加し、次いで混合物を室温で週末かけて撹拌した。水(50mL)を添加し、混合物を2時間激しく撹拌し、その後EtOAc(100mL)及びブライン(50mL)で希釈し、有機層を分離し、乾燥させて真空中で蒸発させ、薄黄色油状物を得た。粗生成物をDCM(20mL)に溶解させ、100gシリカカラム上にロードし、次いで0〜20％2Mメタン酸アンモニア/DCMで溶出し、生成物含有画分(ニンヒドリンで可視化した)を真空中で蒸発させ、(S)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(4.0g、15.36mmol、収率88％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 3.72-4.02(m, 2 H) 2.89-3.12(m, 2 H) 2.72(t, J=6.6 Hz, 2 H) 1.86-1.98(m, 1 H) 1.72-1.85(m, 1 H) 1.48-1.70(m, 6 H) 1.46(s, 9 H)。
【０３３３】
中間体45：(S)-tert-ブチル2-((((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０３３４】
【化６７】
2019510782.tif 000074
【０３３５】
N2雰囲気下の(S)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)モルホリン-4-カルボキシレート(200g、921mmol)(例えばAOK Chemから市販されているもの)のDCM(1800mL)中撹拌溶液を、-20℃に冷却した。ピリジン(82mL、1013mmol)を添加し、その後Tf2O(171mL、1013mmol)の溶液を添加して、DCM(200mL)に30分間かけて溶解させた。反応温度を-25℃に1時間維持した。反応混合物を0℃に温め、1N水性HCl(466mL)で希釈し、有機層を分離し、水(3×800mL)、ブライン溶液(800mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過して真空下で濃縮し、粗化合物を得た。粗生成物をヘキサン(120mL)で粉砕した。得られた固体を、Buchner漏斗を通して濾過し、ヘキサン(60mL)で洗浄し、真空下で乾燥させて、(S)-tert-ブチル2-((((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(203g、562mmol、収率61.0％)が薄黄色固体として得られた。
LCMS(5分、ギ酸法)：Rt=2.50分、[MH]+＝349.9。
LCMS 5分間 ギ酸法：Acquity法条件：RND-FA-4.5-MIN；カラム：Acquity BEH C18(50mm×2.1mm、1.7μm)；移動相：A:水中0.1％ギ酸；B：ACN中0.1％ギ酸；時間(分)/％B：0/3、0.4/3、3.2/98、3.8/98、4.2/3、4.5/3；カラム温度：35℃、流速：0.6mL/分。
【０３３６】
中間体46：(S)-tert-ブチル2-(シアノ(ヒドロキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの混合物
【０３３７】
【化６８】
2019510782.tif 000075
【０３３８】
KCN(5.59g、86mmol)を、氷浴中で冷却しながら(S)-tert-ブチル2-((((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(20g、57.3mmol)のDMSO(50mL)中溶液に添加し、次いで混合物を30分間撹拌し、その後一晩室温に温めた。混合物を水(500mL)で希釈し、EtOAc(2×200mL)で抽出した。合わせた有機物を水(2×200mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、暗褐色油状物を得た。これを0〜60％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する340gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分(ニンヒドリンで可視化した)を濾過により回収して、無色油状物(S)-tert-ブチル2-(シアノ(ヒドロキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(10.2g、42.1mmol、収率73.5％)を得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.48(ddd, J=12.1, 8.2, 4.4 Hz, 1 H) 4.04-4.10(m, 1 H) 4.00(d, J=11.5 Hz, 1 H) 3.91(d, J=12.0 Hz, 1 H) 3.66-3.75(m, 1 H) 3.56-3.65(m, 1 H) 2.76-3.12(m, 2 H) 1.45-1.53(m, 9 H)。
【０３３９】
中間体47：(S)-tert-ブチル2-(2-アミノ-1-ヒドロキシエチル)モルホリン-4-カルボキシレート、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの混合物
【０３４０】
【化６９】
2019510782.tif 000076
【０３４１】
(S)-tert-ブチル2-(シアノ(ヒドロキシ)メチル)モルホリン-4-カルボキシレート(8g、33.0mmol)をTHF(10mL)に溶解させ、BH3.THF(THF中1M、99mL、99mmol)を添加し、次いで混合物をN2下に60℃で2時間加熱した。混合物を氷浴中で冷却し、その後MeOH(1000mL)を最初に滴下添加することによりクエンチした。得られた溶液を還流で1時間加熱し、次いで真空中で蒸発させ、残渣を、MeOH/DCM中0〜20％NH3で溶出する100gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物(6.2g)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.00(d, J=12.7 Hz, 1 H) 3.75-3.85(m, 2 H) 3.70(d, J=12.5 Hz, 2 H) 3.27-3.40(m, 4 H) 3.19-3.25(m, 1 H) 3.18(s, 9 H)。
【０３４２】
中間体48：(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３４３】
【化７０】
2019510782.tif 000077
【０３４４】
室温の(±)-2-(1-(tert-ブトキシカルボニル)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)酢酸(1.99g、7.13mmol、Activate Scientificから市販されているもの)のTHF(50mL)中撹拌溶液に、BH3・THF(THF中1.0M、29.0mL、29.0mmol)を少しずつ(5mLアリコート)添加した。この混合物を室温でN2下に15.5時間撹拌し、その後MeOH(50mL)を注意深く添加した。さらに20分間撹拌した後、混合物を真空中で蒸発させ、残渣をEtOAc(50mL)と水(50mL)とに分配した。相分離を補助するために飽和水性ブライン溶液(10mL)を添加し、相を分離した。水相をさらなるEtOAc(3×40mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、薄黄色の粘性油状物；(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.942g、7.32mmol、収率103％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.50(t, J=5.5Hz, 1 H) 4.06(br s, 1H) 3.89(br d, 1 H) 3.38 - 3.54(m, 2 H) 3.18(br s, 1 H) 2.87(br s, 1 H) 2.02 - 2.19(m, 1 H) 1.79 - 1.87(m, 2 H) 1.40(s, 9 H) 1.19 - 1.34(m, 2 H)。
【０３４５】
中間体49：(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３４６】
【化７１】
2019510782.tif 000078
【０３４７】
(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.884g、7.10mmol)をDCM(60mL)に溶解させ、Et3N(1.48mL、10.62mmol)及びMs-ClMs-Cl(0.719mL、9.23mmol)を添加した。この溶液を室温で2.75時間撹拌し、次いで水(100mL)で洗浄し、水相をDCM(2×100mL)で抽出した。合わせた有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジにそれらを通過させることにより乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させて透明な油状物を得、これを結晶化させて、白色固体；(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(2.467g、7.18mmol、収率101％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.23 - 4.33(m, 2 H) 4.09(br s, 1 H) 3.91(br d, 1 H) 3.21(br s, 1 H) 3.19(s, 3 H) 2.89(br s, 1 H) 2.02 - 2.23(m, 2 H) 1.85(br dt, 1 H) 1.56 - 1.66(m, 1 H) 1.40(s, 9 H) 1.24 - 1.38(m, 2 H)。
【０３４８】
中間体50：(±)-tert-ブチル4-(2-アジドエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３４９】
【化７２】
2019510782.tif 000079
【０３５０】
(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.332g、3.88mmol)をDMF(10mL)に溶解させ、アジ化ナトリウム(301.5mg、4.64mmol)を添加した。混合物をN2下に80℃で4時間撹拌した。冷却後、混合物を1M水性Na2CO3溶液(50mL)で希釈し、EtOAc(3×30mL)で抽出した[分離において3つの相が観察され、EtOAc抽出物が最小密度であり；2回目及び3回目の抽出では下方相において多少の固体の塩析が生じ、水(約10ｍL)を添加して分離を補助したことに留意されたい]。合わせた有機物を水(2×40mL)で洗浄し[2回目の水洗浄により層の乳化が生じ、飽和ブライン溶液(約10ｍL)を添加して相の分離を補助したことに留意されたい]、次いで乾燥させて真空中で蒸発させ、薄黄色油状物；約0.33当量のDMFを含有する(±)-tert-ブチル4-(2-アジドエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(1.23g、4.24mmol、収率109％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.08(br s, 1 H) 3.89(br d, 1 H) 3.36 - 3.53(m, 2 H) 3.19(br s, 1 H) 2.88(br s, 1 H) 2.01 - 2.17(m, 1 H) 1.79 - 1.94(m, 1 H) 1.42 - 1.51(m, 1 H) 1.40(s, 9 H) 1.22 - 1.33(m, 1 H)。
【０３５１】
中間体51：(±)-tert-ブチル4-(2-アミノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３５２】
【化７３】
2019510782.tif 000080
【０３５３】
(±)-tert-ブチル4-(2-アジドエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(1.22g、4.20mmol)のEtOAc(50mL)中溶液を、Thales「H-Cube」フロー装置をフル水素モードにおいて20℃で用いて、10％Pd/C触媒カートリッジ上で水素化した。回収した溶液から溶媒を真空中で蒸発させて無色油状物を得、これはNMR分析により、出発アジドと生成物アミンの6：5混合物であると決定された。残渣をEtOH(50mL)に再溶解させ、Thales「H-Cube」フロー装置をフル水素モードにおいて用いて、10％Pd/C触媒カートリッジ上で再度水素化したが、今回は40℃で実施した。回収した溶液から溶媒を真空中で蒸発させ、無色油状物(982.1mg)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.06(br s, 1 H) 3.88(br d, 1 H) 3.16(br s, 1 H) 2.86(br s, 1 H) 2.50 - 2.68(m, 2 H) 2.00 - 2.14(m, 1 H) 1.66 - 1.82(m, 2 H) 1.40(s, 9 H) 1.17 - 1.29(m, 2 H)。
【０３５４】
中間体52：(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３５５】
【化７４】
2019510782.tif 000081
【０３５６】
室温の(±)-2-(1-(tert-ブトキシカルボニル)-4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)酢酸(197.0mg、0.705mmol、Activate Scientificから市販されているもの)のTHF(5mL)中撹拌溶液に、BH3・THF(THF中1.0M、2.8mL、2.80mmol)を添加した。混合物を室温でN2下に2.5時間撹拌し、その後MeOH(5mL)を注意深く添加した。さらに10分間撹拌した後、混合物を真空中で蒸発させて、残渣をEtOAc(5mL)と水(5mL)とに分配した。水相をさらなるEtOAc(3×4mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒をN2流下で蒸発させて、無色ガム状物；(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(162.0mg、0.611mmol、収率87％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.56(t, J=5.0Hz, 1 H) 3.69(br s, 2 H) 3.42 - 3.53(m, 2 H) 3.20(br s, 1 H) 2.97(br s, 1 H) 1.94 - 2.09(m, 2 H) 1.69 - 1.92(m, 2 H) 1.41(s, 9 H) 1.24 - 1.32(m, 1 H)。
【０３５７】
中間体53：(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０３５８】
【化７５】
2019510782.tif 000082
【０３５９】
(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(883mg、3.33mmol)をDCM(30mL)に溶解させ、Et3N(0.70mL、5.02mmol)及びMs-Cl(0.337mL、4.33mmol)を添加した。溶液を室温で2.75時間撹拌し、次いで水(50mL)で洗浄し、水相をDCM(2×50mL)で抽出した。合わせた有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジにそれらを通過させることにより乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させ、白色固体；(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.141g、3.32mmol、収率100％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.30(dt, J=6.5 Hz, 2 H) 3.81(br s, 1 H) 3.71(br d, 1 H) 3.20(s, 3 H) 3.15 - 3.22(m, 1 H) 2.99(br s, 1 H) 1.81 - 2.14(m, 4 H) 1.56 - 1.64(m, 1 H) 1.42(s, 9 H)。
【０３６０】
中間体54：(±)-tert-ブチル3-(2-シアノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３６１】
【化７６】
2019510782.tif 000083
【０３６２】
(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(207mg、0.602mmol)をDMSO(5mL)に溶解させ、NaCN(31.5mg、0.643mmol)を添加した。混合物をN2下に55℃で17時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水(10mL)とジエチルエーテル(10mL)とに分配した。相を分離し、水相をさらなるジエチルエーテル(3×10mL)で抽出した。合わせた有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過することにより乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させて、黄色油状物；粗(±)-tert-ブチル3-(2-シアノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(150.6mg、0.549mmol、収率91％)を得た。
【０３６３】
中間体55：(±)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３６４】
【化７７】
2019510782.tif 000084
【０３６５】
室温の粗(±)-tert-ブチル3-(2-シアノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(71.7mg、0.261mmol)のTHF(2mL)中撹拌溶液に、BH3・THF(THF中1.0M、1.0mL、1.000mmol)を添加した。混合物を70℃でN2下に18.75時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、その後MeOH(3mL)を注意深く添加した。さらに70分間撹拌した後、混合物を真空中で蒸発させて、残渣をEtOAc(5mL)と水(5mL)とに分配した。水相をさらなるEtOAc(3×4mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒をN2流下で蒸発させて無色ガム状物を得た。このガム状物をMeCN(約2mL)に再溶解させ、MeCNで予め湿らせた1g SCX-2イオン交換カートリッジに適用した。このカートリッジをMeCN(2×5mL)及びMeOH(2×5mL)で溶出し、その後MeOH中2Mアンモニア溶液(3×5mL)で溶出した。SCX-2精製から得られたアンモニア溶液溶出画分の最初の10mLをN2流下で蒸発させ、無色ガム状物；粗(±)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(6.8mg、0.024mmol、収率9.35％)を得た。
【０３６６】
中間体56：(±)-tert-ブチル3-(2-アジドエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３６７】
【化７８】
2019510782.tif 000085
【０３６８】
(±)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.138g、3.31mmol)をDMF(20mL)に溶解させ、アジ化ナトリウム(263.3mg、4.05mmol)を添加した。混合物をN2下に80℃で4時間撹拌した。冷却後、混合物を1M水性Na2CO3溶液(50mL)で希釈し、EtOAc(3×30mL)で抽出した[分離において3つの相が観察され、EtOAc抽出物が最小密度であったことに留意されたい]。合わせた有機物を水(2×40mL)で洗浄し、次いで乾燥させて真空中で蒸発させ、薄黄色油状物；約0.2当量のDMFを含有する(±)-tert-ブチル3-(2-アジドエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(0.980g、3.38mmol、収率102％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.75(br s, 1 H) 3.68(br d, 1 H) 3.39 - 3.55(m, 2 H) 3.20(br t, 1 H) 2.99(br s, 1 H) 1.77 - 2.09(m, 4 H) 1.42(s, 9 H) 1.36 - 1.49(m, 1 H)。
【０３６９】
中間体57：(±)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０３７０】
【化７９】
2019510782.tif 000086
【０３７１】
(±)-tert-ブチル3-(2-アジドエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(978mg、3.37mmol)のEtOAc(50mL)中溶液を、Thales「H-Cube」フロー装置をフル水素モードにおいて20℃で用いて、10％Pd/C触媒カートリッジ上で水素化した。回収した溶液から溶媒を真空中で蒸発させて無色油状物を得、これはNMR分析により出発アジドと生成物アミンの5：4混合物であると決定された。残渣をEtOH(50mL)に再溶解させ、Thales「H-Cube」フロー装置をフル水素モードにおいて用いて、10％Pd/C触媒カートリッジ上で再度水素化したが、今回は40℃で実施した。回収した溶液から溶媒を真空中で蒸発させて、無色油状物、(±)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(796.3mg、3.01mmol、収率89％)を得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.65(br s, 2 H) 3.23(br s, 1 H) 2.95(br s, 1 H) 2.63 - 2.69(m, 1 H) 2.52 - 2.59(m, 1 H) 1.93 - 2.08(m, 2 H) 1.76 - 1.91(m, 1 H) 1.56 - 1.65(m, 1 H) 1.47(br s 1H) 1.41(s, 9 H) 1.15 - 1.27(m, 1 H)。
【０３７２】
中間体58：tert-ブチル4-(3-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート
【０３７３】
【化８０】
2019510782.tif 000087
【０３７４】
水素化ナトリウム(鉱油中60％分散液、0.1209g、3.02mmol)のTHF(5mL)中混合物に、tert-ブチル3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(0.5019g、2.507mmol、Alfa Aesarから市販されているもの)のTHF(10mL)中懸濁液を添加した。混合物を室温で45分間撹拌し、その後2-(3-ブロモプロピル)イソインドリン-1,3-ジオン(0.6855g、2.56mmol、Sigma-Aldrichから市販されているもの)を添加した。混合物を室温でさらに65時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム(約8mL)と水(約8mL)でクエンチし、層を分離した。水性層をEtOAc(2×15mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させて黄色油性固体を得、これを約3:1のDMSO:MeCN(9mL)に再溶解させ、MDAP(3×3mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、無色ガラス状固体を得た。これをMeOH(約5mL)に再溶解させ、10g Isoluteアミノプロピルイオン交換カラムのトップに直接適用した。カラムを4カラム体積のMeOHで溶出した。第1画分を真空中で蒸発させ、無色ガム状物を得た。tert-ブチル4-(3-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(237.4mg、0.613mmol、収率24.45％)。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=1.00分、[MH]＋についてm/z=388。
【０３７５】
中間体59：tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート
【０３７６】
【化８１】
2019510782.tif 000088
【０３７７】
tert-ブチル4-(3-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(225.6mg、0.582mmol)のEtOH(5mL)中溶液に、ヒドラジン水和物(0.055mL、1.771mmol)を添加した。反応混合物を40℃に温め、20時間30分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却して濾過し、濾液をN2流下で蒸発させ、白色固体を得た。これをMeOH(2mL)に再溶解させ、MDAP(2×1mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、無色粘性油状物を得た。tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(47.3mg、0.184mmol、収率31.6％)。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.67分、[MH]+についてm/z=258。
【０３７８】
中間体60：2-(3-(3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０３７９】
【化８２】
2019510782.tif 000089
【０３８０】
3-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)プロパナール(499.4mg、2.458mmol、Fluorochemから市販されているもの)、ピペラジン-2-オン(376.1mg、3.76mmol、Sigma Aldrichから市販されているもの)及びNa(OAc)3BH(779.9mg、3.68mmol)の2-MeTHF(20mL)中混合物を、室温で21時間40分間撹拌した。さらなるNa(OAc)3BH(516.6mg、2.437mmol)を3時間後に添加した。AcOH(0.014mL、0.246mmol)を4時間45分後に添加した。20時間40分後に、さらなる2-MeTHF(5mL)を添加し、反応混合物を60℃に加熱した。3時間20分後に、さらなるNa(OAc)3BH(279.9mg、1.321mmol)を60℃で添加した。25時間45分後に、さらなるNa(OAc)3BH(496.8mg、2.344mmol)を60℃で添加した。合計31時間後に、混合物を60℃の加熱及び撹拌から外し、室温に冷却した。この混合物に、飽和NaHCO3(2mL)及び水(8mL)を添加した。混合物を室温で20分間撹拌し、EtOAc(3×10mL)で抽出した。有機層を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、揮発性物質を真空中で蒸発させて油状物を得、これをMeOH(約5mL)に再溶解させ、20g Isoluteアミノプロピルイオン交換カラムのトップに適用した。カラムを4カラム体積のMeOH及び4カラム体積の水性2M HClで溶出した。第2のMeOH画分を真空中で蒸発させ、薄黄色固体；2-(3-(3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン(595.1mg、2.071mmol、収率84％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.71分、[MH]+についてm/z=288。
【０３８１】
中間体61：4-(3-アミノプロピル)ピペラジン-2-オン
【０３８２】
【化８３】
2019510782.tif 000090
【０３８３】
2-(3-(3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン(590.1mg、2.054mmol)のEtOH(12mL)中混合物に、ヒドラジン水和物(0.191mL、6.16mmol)を添加した。混合物を室温で24.5時間撹拌した。次いで、この混合物を20g Isolute SCX-2イオン交換カートリッジのトップに適用した。このカートリッジを、4カラム体積のMeOH及び4カラム体積のMeOH中2M NH3で溶出した。塩基性画分を真空中で蒸発させて、残渣を10mM重炭酸アンモニウムバッファー水溶液(pH10、6mL)に溶解させ、MDAP(2×3mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、薄黄色の粘性油状物；4-(3-アミノプロピル)ピペラジン-2-オン(273.6mg、1.740mmol、収率85％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.21分、[MH]+についてm/z=158。
【０３８４】
中間体62：2-(3-(4-メチル-3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０３８５】
【化８４】
2019510782.tif 000091
【０３８６】
3-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)プロパナール(515mg、2.53mmol、Fluorochemから市販されているもの)及びNa(OAc)3BH(815.9mg、3.85mmol)の2-MeTHF(20mL)中混合物に、1-メチルピペラジン-2-オン(0.420mL、3.82mmol、Fluorochemから市販されているもの)を添加した。混合物を室温で4時間45分間撹拌した。反応混合物に水性2M Na2CO3(10mL)を添加し、この混合物を室温で10分間撹拌し、約pH10の水相を得た。層を分離し、水性層をEtOAc(2×10mL)で洗浄した。有機層を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、薄黄色結晶固体を得た。2-(3-(4-メチル-3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン(660.5mg、2.192mmol、収率86％)。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.74分、[MH]+についてm/z=302。
【０３８７】
中間体63：4-(3-アミノプロピル)-1-メチルピペラジン-2-オン
【０３８８】
【化８５】
2019510782.tif 000092
【０３８９】
2-(3-(4-メチル-3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)イソインドリン-1,3-ジオン(656.7mg、2.179mmol)のEtOH(15mL)中混合物に、ヒドラジン水和物(0.200mL、6.44mmol)を添加し、混合物を室温で41.5時間撹拌した。混合物を40℃に加熱し、さらに7時間25分間撹拌した。混合物を加熱及び撹拌から外し、室温に冷却した。次いで、混合物を濾過し、濾液を20g Isolute SCX-2イオン交換カラムのトップに適用した。このカラムを4カラム体積のMeOH及び4カラム体積のMeOH中2M NH3で溶出した。塩基性画分を真空中で蒸発させ、黄色油状物を得た。これをMeOH(6mL)に再溶解させ、MDAP(2×3mL注入、高pH法)により精製した。所要の画分を真空中で蒸発させ、DCM(約10mL)に再溶解させ、真空中で蒸発させて薄黄色の粘性油状物；4-(3-アミノプロピル)-1-メチルピペラジン-2-オン(260.9mg、1.524mmol、収率69.9％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.35分、[MH]+についてm/z=172。
【０３９０】
中間体64：tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０３９１】
【化８６】
2019510782.tif 000093
【０３９２】
2,4,6-トリプロピル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン2,4,6-トリオキシド(40.7g、64.0mmol)を、室温の4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-クロロピコリン酸(15g、58.2mmol、例えばAnichemから市販されているもの)及びEt3N(16.23mL、116mmol)のDCM(100mL)中溶液に添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、メタンアミン(THF中2M、38.8mL、78mmol)を添加した。混合物を2時間撹拌し、その後水(100mL)及び飽和NaHCO3溶液で洗浄し、次いで乾燥させて真空中で蒸発させ、薄黄色ガム状物を得た。これをDCMに溶解させ、340gシリカカラム上にロードし、その後0〜40％EtOAc/シクロヘキサンで溶出し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(6.9g、25.5mmol、収率43.8％)を薄黄色ガム状物として得、これを静置して結晶化させた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.16分、[MH]+=271.2。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.55(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.95(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.79(br. s, 1 H) 3.05(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.61(s, 9 H)。
【０３９３】
中間体65：4-tert-ブチル2-エチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート
【０３９４】
【化８７】
2019510782.tif 000094
【０３９５】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(4.2g、15.51mmol)をDMF(50mL)及びEtOH(50mL)の混合物に溶解させ、次いでEt3N(4.71g、46.5mmol)及び[(R)-(+)-2,2′-ビス(ジフェニルホスフィノ)-1,1′-ビナフチル]パラジウム(II)クロリド(0.621g、0.776mmol)を添加し、この混合物を一酸化炭素でパージし、その後密封して、一酸化炭素で満たされたバルーンを取り付けた。この混合物を週末かけて70℃で加熱し、次いで真空中で蒸発させて、残渣を水(100mL)とEtOAc(100mL)とに分配した。有機層を水(100mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させた。暗褐色の残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する100gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、4-tert-ブチル2-エチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(4.2g、13.62mmol、収率88％)を薄黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.11分、[MH]+=309.2。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.80(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.67(d, J=1.7 Hz, 1 H) 8.08(br. d, J=3.4 Hz, 1 H) 4.50(q, J=7.1 Hz, 2 H) 3.08(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.63(s, 9 H) 1.46(t, J=7.1 Hz, 3 H)。
【０３９６】
中間体66：tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０３９７】
【化８８】
2019510782.tif 000095
【０３９８】
塩化カルシウム(4.54g、40.9mmol)を、0℃の4-tert-ブチル2-エチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(4.2g、13.62mmol)のEtOH(50mL)及び2-MeTHF(50.0mL)の混合物中溶液に添加し、次いでNaBH4(0.773g、20.43mmol)を添加し、得られた赤色混合物を2時間撹拌し、混合物を室温に温めた。この混合物を一晩静置し、その後氷浴中で冷却し、塩化アンモニウム溶液(100mL)を20分間かけてゆっくりと添加した。混合物をEtOAc(2×150mL)で抽出し、次いで有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させて、残渣を50gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(2.2g、8.26mmol、収率60.6％)をベージュ色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.84分、[MH]+=267.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.49-8.58(m, 1 H) 7.90-8.02(m, 2 H) 4.87(s, 2 H) 3.05(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.61(s, 9 H)。
【０３９９】
中間体67：tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４００】
【化８９】
2019510782.tif 000096
【０４０１】
tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.5g、5.63mmol)をDCM(5mL)に溶解させ、塩化チオニル(1.257mL、16.90mmol)を添加し、反応を室温で4時間撹拌し、次いで混合物を飽和NaHCO3溶液の添加によりクエンチし、混合物を20分間撹拌し、その後有機層を分離し、乾燥させて真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.35g、4.74mmol、収率84％)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.13分、[MH]+=285.2。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.59(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.11(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.95(br. s., 1 H) 4.72(s, 2 H) 3.07(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.62(s, 9 H)。
【０４０２】
中間体68：tert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４０３】
【化９０】
2019510782.tif 000097
【０４０４】
tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(543mg、2.039mmol)をDCM(5mL)に溶解させた。デス-マーチンペルヨージナン(1009mg、2.380mmol)を添加し、混合物を室温で3時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウムを反応混合物に添加し、次いでNaHCO3も添加した。得られた混合物を15分間撹拌した。水相をDCMで3回抽出し、合わせた有機層をMgSO4で乾燥させて蒸発させた。粗生成物を、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10g、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、tert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(501mg、1.706mmol、収率84％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.97分、[MH]+=265.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 10.14(s, 1 H) 8.88(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.55(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.00(br. s., 1 H) 3.12(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.62-1.66(m, 9 H)。
【０４０５】
中間体69：tert-ブチル2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４０６】
【化９１】
2019510782.tif 000098
【０４０７】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(5g、18.47mmol、例えばAnichemから市販されているもの)及びPdCl2(PPh3)2(1.296g、1.847mmol)をTHF(50mL)に溶解させ、ベンジル亜鉛(II)ブロミド(THF中0.5M、55.4mL、27.7mmol)を添加し、次いで混合物を70℃で2時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する100gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、tert-ブチル2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(5.7g、17.46mmol、収率95％)を暗褐色油状物として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.30分、[MH]+=327.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.48(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.97-8.07(m, 1 H) 7.81(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.30-7.37(m, 2 H) 7.21-7.29(m, 3 H) 4.24(s, 2 H) 3.07(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.55-1.64(m, 9 H)。
【０４０８】
中間体70：2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４０９】
【化９２】
2019510782.tif 000099
【０４１０】
tert-ブチル2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(2.5g、7.66mmol)をDCM(30mL)に溶解させ、次いでTFA(10mL、130mmol)を添加し、混合物を3時間室温で撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、薄黄色ガム状物を得た。粗材料をDCM(100mL)に溶解させ、水(100mL)で洗浄し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(2.0g、7.40mmol、収率97％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.63分、[MH]+=271.3。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.77(s, 1 H) 8.22(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.83(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.35-7.39(m, 2 H) 7.31(t, J=7.6 Hz, 2 H) 7.19-7.25(m, 1 H) 4.26(s, 2 H) 2.86(d, J=4.9 Hz, 3 H)。1つの交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０４１１】
中間体71：tert-ブチル2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４１２】
【化９３】
2019510782.tif 000100
【０４１３】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.5g、5.54mmol)をTHF(20mL)に溶解させ、PdCl2(PPh3)2(0.389g、0.554mmol)を添加した。溶液をN2で5分間スパージし、次いで(3-メトキシベンジル)亜鉛(II)ブロミド(THF中0.5M、20mL、10.00mmol)を添加し、混合物を70℃で2時間加熱した。この溶液をEtOAc(100mL)で希釈し、水(100mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させた。残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.65g、4.63mmol、収率84％)を暗黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.29分、[MH]+=357.3。
【０４１４】
中間体72：2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４１５】
【化９４】
2019510782.tif 000101
【０４１６】
tert-ブチル2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(2.5g、7.01mmol)をDCM(30mL)に溶解させ、次いでTFA(10mL、130mmol)を添加し、混合物を18時間室温で撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、薄黄色ガム状物を得た。これをDCM(50mL)に溶解させ、水(50mL)で洗浄した。有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(1.8g、5.99mmol、収率85％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.64分、[MH]+=301.2。
【０４１７】
中間体73：(+/-)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート
【０４１８】
【化９５】
2019510782.tif 000102
【０４１９】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(0.5g、1.847mmol)をTHF(20mL)に溶解させ、PdCl2(PPh3)2(0.130g、0.185mmol)を添加した。溶液をN2で5分間スパージし、次いで(1-フェニルエチル)亜鉛(II)ブロミド(THF中0.5M、7.39mL、3.69mmol、例えばSigma Aldrichから市販されているもの)を添加し、混合物を70℃で2時間加熱した。
【０４２０】
この溶液をEtOAc(100mL)で希釈し、水(100mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させた。残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(0.41g、1.204mmol、収率65.2％)を暗黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.37分、[MH]+=341.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.45(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.02(br. s., 1 H) 7.81(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.18-7.36(obs. m, 5 H) 4.38(q, J=7.3 Hz, 1 H) 3.07(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.74(d, J=7.3 Hz, 3 H) 1.59(s, 9 H)。
【０４２１】
中間体74：(+/-)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸
【０４２２】
【化９６】
2019510782.tif 000103
【０４２３】
tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(0.41g、1.204mmol)をTFA(6mL)に溶解させ、3時間室温で撹拌し、次いで混合物を真空中で蒸発させて、残渣を水(20mL)とDCM(20mL)とに分配した。有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(305mg、1.073mmol、収率89％)を灰色泡状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.69分、[MH]+=285.2。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.74(br. s., 1 H) 8.75(m, J=4.9 Hz, 1 H) 8.21(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.82(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.42(br. d, J=7.1 Hz, 1 H) 7.30(t, J=7.5 Hz, 2 H) 7.16-7.23(m, 1 H) 4.47(q, J=7.1 Hz, 1 H) 2.89(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.72(d, J=7.3 Hz, 3 H)。
【０４２４】
中間体75：(R*)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート
中間体76：(S*)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート
【０４２５】
【化９７】
2019510782.tif 000104
【０４２６】
tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(1500mg)をキラル精製に供した。ラセミ体を、超音波処理し且つ穏やかに加熱しながらEtOH(60mL)に溶解させた。カラム上へ分取オートサンプラを介した1250μL自動注入を行い、これをヘプタン:EtOH:イソプロピルアミン(2000:40:4、予混合)、流速=42.5mL/分、検出：280nmのUVダイオードアレイ(帯域幅140nm、基準400nm帯域幅100nm)、カラム：Chiralcel OD-H(250×30mm)で溶出した。回収は、漏斗床(funnel bed)フラクションコレクターにより、9分後に回収を開始するUV閾値を用いて始動した。10〜12分からの画分をまとめてピーク1と標識し、13.5〜17分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後EtOH(3×4mL)にとり、風袋したガラスバイアルに移し、これらをN2流下で吹きつけて乾固した。
【０４２７】
ピーク1は、中間体75(497mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.3。
【０４２８】
ピーク2は、中間体76(517mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.3。
【０４２９】
中間体77：(R*)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸
【０４３０】
【化９８】
2019510782.tif 000105
【０４３１】
(R*)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(497mg、1.460mmol、中間体75)をDCM(5mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。TFA(0.5mL、6.49mmol)を再度添加し、反応を50℃で3時間還流した。さらなるTFA(1mL)を反応に添加し、次いでこれをさらに2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードしてスルホン酸SPE(SCX)2gにより精製し、MeOHを通して溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所要の生成物(350mg)をピンク色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.68分、[MH]+=285.2。
【０４３２】
中間体78：2-(3-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４３３】
【化９９】
2019510782.tif 000106
【０４３４】
2mLマイクロウェーブバイアル中で、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(100mg、0.351mmol)を、1,4-ジオキサン(2mL)及び水(1mL)中の(3-シアノフェニル)ボロン酸(103mg、0.702mmol)、K2CO3(291mg、2.107mmol)及びPdCl2(dppf)(55mg、0.075mmol)と合わせた。これを120℃で40分間加熱した。この溶液を、セライト(登録商標)を通して濾過し、EtOAc(10mL)と水(10mL)とに分配し、EtOAc(2×10mL)で抽出し、疎水性フリットを通して乾燥させて濃縮した。カルボン酸は水性層中に存在していることがわかったため、有機残渣を捨てた。水性層を2M HClでpH6に調整し、EtOA(2×30mL)でさらに抽出した。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮して所望の生成物(47mg)を薄橙色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.87分、[MH]+=296.3。
【０４３５】
中間体79：tert-ブチル2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４３６】
【化１００】
2019510782.tif 000107
【０４３７】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(206.9mg、0.764mmol)及びPdCl2(PPh3)2(84.0mg、0.120mmol)のTHF(2.0mL)中混合物を、マイクロウェーブバイアル中で室温にてN2流下に5分間撹拌し、バイアルをパージした。これに、(2-メトキシベンジル)亜鉛(II)クロリド(THF中0.5M、2.2mL、1.100mmol、Sigma Aldrichから市販されているもの)を添加し、このバイアルを再密封し、混合物をマイクロウェーブ反応器中で110℃にて30分間加熱した。次いで反応混合物を、2.5gセライト(登録商標)カートリッジを通して濾過し、EtOAc(約20mL)で洗浄した。濾液に2M水性Na2CO3(20mL)及び水(5mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなるEtOAc(2×20mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させて粘性黒色油状物を得、これをDCM(約5mL)に再溶解させ、25g SNAPシリカカラムのトップに直接適用し、Biotage(登録商標)SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中10％〜50％EtOAcの勾配で溶出した。所要の画分を真空中で蒸発させ、淡黄色ガム状物；tert-ブチル2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(232.3mg、0.652mmol、収率85％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=1.31分、[MH]+についてm/z=357。
【０４３８】
中間体80：2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４３９】
【化１０１】
2019510782.tif 000108
【０４４０】
tert-ブチル2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(228.0mg、0.640mmol)のDCM(10mL)中溶液に、TFA(2.0mL、26.0mmol)を滴下添加した。得られた黄色溶液を室温で53時間撹拌し、その後これを真空中で蒸発させて黄色ガム状物を得た。これをMeCN(約10mL)で粉砕し、上清を除去して、残りの白色固体を真空中で乾燥させた。上清をN2流下で蒸発させ、残渣をジエチルエーテル(約2mL)で粉砕した。エーテル上清を除去し、残渣を先の白色固体に添加した。合わせた固体を真空中で乾燥させ、白色固体；2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(157.7mg、0.525mmol、収率82％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.65分、[MH]+についてm/z=301。
【０４４１】
中間体81：tert-ブチル2-(3-ヒドロキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４４２】
【化１０２】
2019510782.tif 000109
【０４４３】
tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(130mg、0.457mmol)、3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェノール(151mg、0.685mmol)、K2CO3(189mg、1.370mmol)及びPdCl2(dppf)(33.4mg、0.046mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加し、2-MeTHF(2mL)及び水(1mL)を添加し、混合物を100℃で1時間加熱した。混合物をEtOAc(10mL)で希釈し、飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する10gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、tert-ブチル2-(3-ヒドロキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(95mg、0.277mmol、収率60.8％)を薄黄色泡状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.11分、[MH]+=343.2。
【０４４４】
中間体82：tert-ブチル2-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４４５】
【化１０３】
2019510782.tif 000110
【０４４６】
tert-ブチル2-(3-ヒドロキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(90mg、0.263mmol)をDMF(2mL)に溶解させ、K2CO3(109mg、0.789mmol)及び1,3-ジオキソラン-2-オン(69.4mg、0.789mmol)を添加し、次いで混合物を、100℃で3時間加熱した。混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAcで抽出し、有機層を水(10mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する10gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、tert-ブチル2-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(55mg、0.142mmol、収率54.1％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.10分、[MH]+=387.4。
【０４４７】
中間体83：2-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４４８】
【化１０４】
2019510782.tif 000111
【０４４９】
HCl(1,4-ジオキサン中4M、2mL、8.00mmol)を、tert-ブチル2-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(166mg、0.430mmol)に添加し、得られた混合物を週末かけて撹拌した。溶媒を除去し、次いでTFA(1mL、12.98mmol)を添加して、得られた混合物を6時間撹拌した。溶媒を除去し、その後ジメチルアミン(THF中2M、3mL、6.00mmol)を添加して、得られた混合物を15分間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮して所望の生成物(296mg)を45％の純度で得、これをさらに精製することなく使用した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.76分、[MH]+=331.1。
【０４５０】
中間体84：tert-ブチル2-(4-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４５１】
【化１０５】
2019510782.tif 000112
【０４５２】
2mLマイクロウェーブバイアル中で、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(75mg、0.263mmol)を、1,4-ジオキサン(2mL)及び水(1mL)中の(4-シアノフェニル)ボロン酸(77mg、0.527mmol)、K2CO3(218mg、1.580mmol)及びPdCl2(dppf)(40mg、0.055mmol)と合わせた。これを120℃で40分間加熱した。溶液を、セライト(登録商標)を通して濾過し、EtOAc(10mL)と水(10mL)とに分配し、EtOAc(2×10mL)で抽出し、疎水性フリットで乾燥させ、濃縮して217mgの粗褐色残渣を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP25gカートリッジ、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、所望の生成物(66mg)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.19分、[MH]+=352.1。
【０４５３】
中間体85：2-(4-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４５４】
【化１０６】
2019510782.tif 000113
【０４５５】
tert-ブチル2-(4-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(66mg、0.188mmol)のDCM(2mL)中溶液に、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応混合物をN2下に室温で2日間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をEtOAcと水とに分配した。有機層を分離し、疎水性フリットで乾燥させ、濃縮して所望の生成物(62mg)を橙色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.86分、[MH]+=296.1。
【０４５６】
中間体86：tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４５７】
【化１０７】
2019510782.tif 000114
【０４５８】
2mLマイクロウェーブバイアル中で、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(100mg、0.351mmol)を、1,4-ジオキサン(1mL)及び水(0.5mL)中の(1H-インドール-4-イル)ボロン酸(113mg、0.702mmol)、K2CO3(291mg、2.107mmol)及びPdCl2(dppf)(51.4mg、0.070mmol)と合わせた。これを120℃で40分間加熱した。この溶液を、EtOAc(10mL)で溶出するセライト(登録商標)を通して濾過し、乾燥させて濃縮した。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP10g、0〜60％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(75.4mg、0.165mmol、収率47.0％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.20分、[MH]+=366.2。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.30(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.76(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.31(d, J=8.3 Hz, 1 H) 7.21(d, J=3.2 Hz, 1 H) 7.03-7.11(m, 1 H) 6.91(br. d, J=7.1 Hz, 1 H) 4.52(s, 2 H) 2.99(s, 3 H) 1.54(s, 9 H)。
【０４５９】
中間体87：2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４６０】
【化１０８】
2019510782.tif 000115
【０４６１】
tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(75.4mg、0.165mmol)のDCM(3mL)中溶液に、TFA(0.60mL、7.79mmol)を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。さらなるTFA(0.3mL、0.165mmol)を添加し、得られた混合物を3時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(184mg、0.149mmol、収率90％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]+=310.1。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.59-12.89(m, 1 H) 11.11(br. s., 1 H) 8.76(d, J=4.9 Hz, 1 H) 8.19(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.71(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.21-7.39(m, 2 H) 7.05(t, J=7.6 Hz, 1 H) 6.95(d, J=6.8 Hz, 1 H) 6.46-6.56(m, 1 H) 4.48(s, 2 H) 2.88(d, J=4.9 Hz, 3 H)。
【０４６２】
中間体88：tert-ブチル2-(4-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４６３】
【化１０９】
2019510782.tif 000116
【０４６４】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(500mg、1.847mmol)及びPdCl2(PPh3)2(194mg、0.277mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加し、その後密封した。この容器をN2でパージし、その後THF(1mL)及び(4-メチルベンジル)亜鉛(II)クロリド(THF中0.5M、5.54mL、2.77mmol)を添加した。反応を、Biotage(登録商標)Initiatorマイクロウェーブ中で110℃にて30分間加熱した。さらなる(4-メチルベンジル)亜鉛(III)クロリド(THF中0.5M、3mL)を添加し、反応を、Biotage(登録商標)Initiatorマイクロウェーブ中で、さらに30分間110℃に加熱した。次いで反応を、セライト(登録商標)を通して濾過した。粗生成物を最小限のDCM中で25g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、DCM中0％〜50％(DCM中MeOH中10％2M NH3)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、表題化合物(834mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.2。
【０４６５】
中間体89：2-(4-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４６６】
【化１１０】
2019510782.tif 000117
【０４６７】
tert-ブチル2-(4-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(834mg、2.450mmol)をDCM(10mL)にとった。TFA(1mL、12.98mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。さらなるTFA(1mL、12.98mmol)を再度添加し、反応をさらに3時間撹拌したままにした。反応は依然として完了していなかった。反応を50℃に加熱し、さらに2時間放置した。反応を真空中で濃縮して表題化合物(662mg)が得られ、これを次のステップで直接使用した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.01分、[MH]+=285.1。
【０４６８】
中間体90：(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４６９】
【化１１１】
2019510782.tif 000118
【０４７０】
0℃のtert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(118mg、0.447mmol)のTHF(1.5mL)中溶液に、臭化フェニルマグネシウム(2mL、2.000mmol)を滴下添加した。反応混合物を2時間撹拌した。反応混合物を塩化アンモニウム水溶液上に注ぎ、EtOAc(20mL×3)で抽出した。有機層をMgSO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10g、0〜60％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(43mg、0.107mmol、収率23.91％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.09分、[MH]+=343.3。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.38(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.05(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.42-7.47(m, 2 H) 7.22-7.36(m, 3 H) 5.95(s, 1 H) 2.99(s, 3 H) 1.60(s, 9 H)。
【０４７１】
中間体91：(+/-)-2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４７２】
【化１１２】
2019510782.tif 000119
【０４７３】
tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(43mg、0.126mmol)のDCM(0.5mL)中溶液に、TFA(0.4mL、5.19mmol)を添加し、反応混合物を2時間撹拌し、その後一晩置いた。さらなるTFA(0.4mL、0.126mmol)を添加し、反応混合物を5時間撹拌し、次いで溶媒を除去して、2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(47.9mg、0.117mmol、収率93％、純度70％)を得、これを次のステップで直接使用した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.74分、[MH]+=287.1。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.45(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.10(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.41-7.48(m, 2 H) 7.21-7.38(m, 3 H) 5.97(s, 1 H) 2.99(s, 3 H)。
【０４７４】
中間体92：tert-ブチル2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０４７５】
【化１１３】
2019510782.tif 000120
【０４７６】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(500mg、1.847mmol)及びPdCl2(PPh3)2(194mg、0.277mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加し、その後密封した。この系をN2でパージし、その後(3-メチルベンジル)亜鉛(II)クロリド(THF中0.5M、5.54mL、2.77mmol)及びTHF(1mL)を添加した。反応容器を密封し、Biotage(登録商標) Initiatorマイクロウェーブ中で、30分間110℃に加熱した。次いで、反応を真空中で濃縮した。粗生成物を、最小限のDCM中で25g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、0〜75％(DCM中MeOH中10％2M NH3)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.1。
【０４７７】
中間体93：2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０４７８】
【化１１４】
2019510782.tif 000121
【０４７９】
tert-ブチル2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(592mg、1.739mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(1mL、12.98mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を50℃で一晩撹拌した。反応を真空中で濃縮し、表題化合物(472mg)が得られ、これを次のステップで直接使用した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.00分、[MH]+=285.1。
【０４８０】
中間体94：tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０４８１】
【化１１５】
2019510782.tif 000122
【０４８２】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(70mg、0.259mmol)、HATU(156mg、0.410mmol)、DIPEA(0.14mL、0.802mmol)及びDMF(3mL)をN2下に室温で撹拌し、次いでtert-ブチル4-(2-アミノエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(120mg、0.526mmol)を添加し、反応を室温でN2下に3時間撹拌した。さらなるtert-ブチル4-(2-アミノエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(120mg、0.526mmol)を添加し、反応をN2下に室温で1時間撹拌した。さらなるHATU(147mg、0.387mmol)、DIPEA(0.14mL、0.802mmol)、tert-ブチル4-(2-アミノエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(118mg、0.518mmol)及びDMF(3mL)を添加し、反応を18時間撹拌した。溶液を濃縮し、1.2gのオレンジ色油状物を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 25gカートリッジ、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。適切な画分を濃縮し、44mgの黄色油状物を得た。これをMDAP(ギ酸法)によりさらに精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮し、tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(15mg、0.028mmol、収率10.85％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.23分、[MH]+=481.5。
【０４８３】
中間体95：(S)-tert-ブチル2-(3-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０４８４】
【化１１６】
2019510782.tif 000123
【０４８５】
2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(184mg、0.149mmol)のDMF(0.85mL)中溶液に、HATU(91mg、0.239mmol)を添加し、その後(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(72.7mg、0.297mmol)及びDIPEA(0.130mL、0.744mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を、飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、次いで乾燥させ、真空中で濃縮し、(S)-tert-ブチル2-(3-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(28.7mg、0.048mmol、収率32.4％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.10分、[MH]+=536.4。
【０４８６】
中間体96：(S)-tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０４８７】
【化１１７】
2019510782.tif 000124
【０４８８】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(40mg、0.148mmol)のDMF(0.7mL)中溶液に、HATU(91mg、0.239mmol)を添加し、その後(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(68mg、0.278mmol)及びDIPEA(0.10mL、0.573mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を飽和Na2CO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、次いで乾燥させ、真空中で濃縮して、(S)-tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(56mg、0.101mmol、収率68.6％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.16分、[MH]＋=497.2。
【０４８９】
中間体97：(S)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０４９０】
【化１１８】
2019510782.tif 000125
【０４９１】
(S)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(320mg、1.387mmol)のDMF(2mL)中溶液に、2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(250mg、0.925mmol)を添加し、その後HATU(528mg、1.387mmol)及びDIPEA(0.65mL、3.72mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応をLiCl及びEtOAcで3回抽出し、次いで2M HClで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ、その後真空中で濃縮した。粗生成物をSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10g、0〜60％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮して粗生成物を得た。これを2回塩基洗浄し、DCMで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ、次いで真空中で濃縮し、(S)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(92mg、0.172mmol、収率18.55％)を得た。
【０４９２】
同カラムを、EtOAc中25％EtOHでフラッシュした。さらなる生成物含有画分を真空中で濃縮し、次いで得られた黄色油状物を塩基洗浄し、DCMで3回抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、その後真空中で濃縮し、さらなる生成物 (S)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(77mg、0.144mmol、収率15.53％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.13分、[MH]+=483.3。
【０４９３】
中間体98：(R)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０４９４】
【化１１９】
2019510782.tif 000126
【０４９５】
(R)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(205mg、0.888mmol)及び2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(200mg、0.740mmol)をDCM(5mL)中で合わせ、HATU(366mg、0.962mmol)及びEt3N(0.134mL、0.962mmol)を添加し、次いで混合物を一晩室温で撹拌し、その後水(10mL)で洗浄し、有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(R)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(280mg、0.580mmol、収率78％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.16分、[MH]+=483。
【０４９６】
中間体99：(R)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０４９７】
【化１２０】
2019510782.tif 000127
【０４９８】
(R)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(182mg、0.740mmol)及び2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(200mg、0.740mmol)をDCM(5mL)中で合わせ、次いでHATU(366mg、0.962mmol)及びEt3N(0.206mL、1.480mmol)を添加し、混合物を2時間室温で撹拌し、その後水、0.5M HCl及びNaHCO3溶液で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、灰色ガム状物を得た。これを0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する10gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を合わせ、真空中で蒸発させて、(R)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(220mg、0.441mmol、収率59.6％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.20分、[MH]+=499。
【０４９９】
中間体100：(S)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０５００】
【化１２１】
2019510782.tif 000128
【０５０１】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(212mg、0.784mmol)のDMF(2mL)中溶液に、HATU(449mg、1.182mmol)を添加し、その後(S)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(204mg、0.784mmol)及びDIPEA(0.6mL、3.44mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。これを飽和LiCl溶液及びEtOAcで3回抽出し、次いで2M HClで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ、その後真空中で濃縮した。粗生成物を、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標)SNAP 10g、0〜40％EtOAc/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮して生成物を得たが、これは依然として不純であった。反応混合物をMDAP(高pH法)により精製した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮し、(S)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(190.5mg、0.353mmol、収率45.0％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.22分、[MH]+=513.2。
【０５０２】
中間体101：(3S)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０５０３】
【化１２２】
2019510782.tif 000129
【０５０４】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(80mg、0.281mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.147mL、0.844mmol)及びHATU(160mg、0.422mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(S)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(110mg、0.422mmol)を添加し、反応を一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)で洗浄した。有機相をブラインで洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のDMSO:MeCN(3mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(147mg)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.28分、[MH]+=527.4。
【０５０５】
中間体102：(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート
【０５０６】
【化１２３】
2019510782.tif 000130
【０５０７】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(50mg、0.185mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.097mL、0.555mmol)、HATU(106mg、0.277mmol)及び(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(50mg、0.252mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.13分、[MH]+=451.4。
【０５０８】
中間体103：6-ベンジル-N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０５０９】
【化１２４】
2019510782.tif 000131
【０５１０】
(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(111mg、0.246mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードして、MeOH、その後2Mアンモニア/MeOHを用いるスルホン酸SPE(SCX)1gにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。粗生成物を、最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、0〜100％(DCM中MeOH中10％2M NH3)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮した。別の生成物の交差混入が生じた。サンプルを1:1のDMSO:MeCN(3mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(27mg)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.82分、[MH]+=351.3。
【０５１１】
中間体104：(S)-tert-ブチル2-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((R*)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０５１２】
【化１２５】
2019510782.tif 000132
【０５１３】
(R*)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(100mg、0.352mmol)をDMFにとった。DIPEA(184μL、1.055mmol)及びHATU(201mg、0.528mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(129mg、0.528mmol)を添加し、反応をさらに1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3溶液(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、0〜75％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮し、所望の生成物(151mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.22分、[MH]+=511.4。
【０５１４】
中間体105：(R)-tert-ブチル2-(2-(2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０５１５】
【化１２６】
2019510782.tif 000133
【０５１６】
2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(52mg、0.183mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.096mL、0.549mmol)、HATU(104mg、0.274mmol)及び(R)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(42.1mg、0.183mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。次いで、反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、0〜100％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮し、所望の生成物(50mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.19分、[MH]+=497.5。
【０５１７】
中間体106：(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート
【０５１８】
【化１２７】
2019510782.tif 000134
【０５１９】
2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(168mg、0.543mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.285mL、1.629mmol)及びHATU(310mg、0.815mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。tert-ブチル6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(108mg、0.543mmol)を添加し、反応をさらに1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3溶液(10mL)で抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮し、所望の生成物(350mg)が褐色固体として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.08分、[MH]+=490.4。
【０５２０】
中間体107：(R)-tert-ブチル3-(3-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０５２１】
【化１２８】
2019510782.tif 000135
【０５２２】
2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(150mg、0.485mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.254mL、1.455mmol)及びHATU(277mg、0.727mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(1R,5S,6s)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(126mg、0.485mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)を添加し、反応をさらに2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3溶液(10mL)で洗浄した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、所望の生成物(340mg)が褐色固体として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.17分、[MH]+=552.4。
【０５２３】
中間体108：(2R)-tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０５２４】
【化１２９】
2019510782.tif 000136
【０５２５】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(100mg、0.352mmol)をDMF(4mL)にとり、DIPEA(0.184mL、1.055mmol)を添加し、その後すぐにHATU(201mg、0.528mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(R)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(122mg、0.528mmol)を添加し、反応をさらに3時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(20mL)に溶解させ、NaHCO3(20mL)で洗浄した。有機相をブライン(20mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、5〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、所望の生成物(133mg)が黄色油状物として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.21分、[MH]+=497.4。
【０５２６】
中間体109：(2S)-tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０５２７】
【化１３０】
2019510782.tif 000137
【０５２８】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(100mg、0.352mmol)をDMF(4mL)にとった。DIPEA(0.184mL、1.055mmol)を添加し、その後すぐにHATU(201mg、0.528mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(S)-tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(122mg、0.528mmol)を添加し、反応を5時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(20mL)にとり、NaHCO3(20mL)で抽出した。有機相をブライン(20mL)で洗浄し、その後疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で25g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、5〜50％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、所望の生成物(87.1mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.21分、[MH]+=497.4。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.25(s, 1 H) 7.73(s, 1 H) 7.20-7.36(m, 4 H) 7.10-7.18(m, 1 H) 4.38(q, J=6.8 Hz, 1 H) 3.73-3.90(m, 3 H) 3.36-3.54(m, 4 H) 2.99(s, 3 H) 2.89(br. s., 1 H) 2.50-2.75(m, 1 H) 1.66-1.79(m, 5 H) 1.42(s, 9 H)。
【０５２９】
中間体110：(±)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０５３０】
【化１３１】
2019510782.tif 000138
【０５３１】
HATU(15.3mg、0.040mmol)、(±)-tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(6.8mg、0.024mmol)及び2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(7.6mg、0.028mmol)のDMF(0.5mL)中溶液に、DIPEA(12.0μL、0.069mmol)を添加した。混合物を室温で90分間撹拌した。混合物をEtOAc(2mL)と1M水性Na2CO3溶液(2mL)とに分配した。水相をさらなるEtOAc(3×2mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒をN2流下で蒸発させ、橙色ガム状物を得た。このガム状物をDCM(約 2mL)に再溶解させ、シクロヘキサンで予め湿らせた2g SPEシリカカートリッジに適用した。カートリッジを、溶媒の溶出性勾配(elutropic gradient)；シクロヘキサン(2×7mL)、DCM(2×7mL)、クロロホルム(7mL)、ジエチルエーテル(7mL)及びEtOAc(3×7mL)で溶出した。各7mL画分をN2流下で蒸発させた；画分7(第1EtOAc画分)をDCMとEtOAcの1:1混合物(約2mL)に再溶解させ、N2流下で蒸発させ、黄色ガラス状物；(±)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(7.1mg、0.013mmol、収率54.8％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=1.27分、[MH]+についてm/z=531。
【０５３２】
中間体111：tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート
【０５３３】
【化１３２】
2019510782.tif 000139
【０５３４】
tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(47.3mg、0.184mmol)、2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(44.1mg、0.163mmol)及びHATU(73.3mg、0.193mmol)のDMF(1mL)中混合物に、DIPEA(0.085mL、0.489mmol)を添加した。混合物を室温で4時間撹拌した。反応混合物をDMSO(約1mL)で希釈し、MDAP(2×1mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、真空中で乾燥させて、薄ピンク色のガラス状固体；tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(50.2mg、0.099mmol、収率60.4％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=1.06分、[MH]+についてm/z=510。
【０５３５】
中間体112：3-フルオロ-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール
【０５３６】
【化１３３】
2019510782.tif 000140
【０５３７】
4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(1008mg、3.97mmol)、4-ブロモ-3-フルオロ-1H-インドール(500mg、2.34mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)、PdCl2(dppf)(171mg、0.23mmol)及び酢酸カリウム(688mg、7.01mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加し、この系をパージした。1,4-ジオキサン(15mL)を添加し、反応容器を密封して、Biotage Initiatorマイクロウェーブ中で30分間100℃に加熱した。冷却後、反応を、セライトを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。反応を真空中で濃縮した。次いで、残渣を、酢酸エチル(20mL)及び水(20mL)及びブライン(20mL)を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、3-フルオロ-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール(490mg、1.877mmol、収率80％)が褐色固体として得られ、これを精製することなく次のステップで使用した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.17分、[MH]+=262.3。
【０５３８】
中間体113：2-(4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-1-イル)エタノール
【０５３９】
【化１３４】
2019510782.tif 000141
【０５４０】
4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(1100mg、4.33mmol)、2-(4-ブロモ-1H-インドール-1-イル)エタノール(612mg、2.55mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)、酢酸カリウム(750mg、7.65mmol)及びPdCl2(dppf)(187mg、0.26mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加した。1,4-ジオキサン(10mL)を添加し、反応容器を密封して、Biotage Initiatorマイクロウェーブ中で30分間110℃に加熱した。冷却後、セライトを通して反応を濾過し、酢酸エチル(20mL)で洗浄した。濾液を、水(20mL)及びブライン(20mL)を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、生成物、2-(4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-1-イル)エタノール(915mg、2.55mmol、収率100％)が褐色油状物として得られ、これは、次のステップへと持ち越すのに十分な純度であった。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.11分、[MH]+=288.1。
【０５４１】
中間体114：4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-2-オン
【０５４２】
【化１３５】
2019510782.tif 000142
【０５４３】
4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(1.903g、7.49mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)、4-ブロモインドリン-2-オン(1.038g、4.90mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(ジクロロメタンとの複合体)[Pd(dppf)Cl2.DCM](0.601g、0.73mmol)及び酢酸カリウム(1.480g、15.08mmol)の1,4-ジオキサン(30mL)中混合物を、110℃で2時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、その後10gセライトカートリッジを通して濾過した。カートリッジを、酢酸エチル(3×30mL)を通して洗浄し、合わせた濾液を真空中で蒸発させて褐色液体を得、これをDCM(約10mL)に再溶解させ、100g SNAPシリカカートリッジ上にロードし、シクロヘキサン中20〜50％酢酸エチルの勾配で溶出するBiotage SP4半自動フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させ、これをDCM(約10mL)に再溶解させて、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させた。残渣をエーテル(5×5mL)で粉砕し、母液を毎回デカント除去し、残渣を窒素流下且つ真空中で乾燥させ、所望の生成物4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-2-オン(941.8mg、3.63mmol、収率74％)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.93分、[MH]+=260.3。
【０５４４】
中間体115：4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボキサミド
【０５４５】
【化１３６】
2019510782.tif 000143
【０５４６】
4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボン酸(0.276mL、2.12mmol、例えばArk Pharmから市販されているもの)のジクロロメタン(15mL)中懸濁液に、塩化オキサリル(0.220mL、2.51mmol)を添加した。この懸濁液を室温で合計約3日間撹拌した。この間、5.5時間後にDMF(0.020mL、0.26mmol)を添加した。23.75時間後にさらなる塩化オキサリル(0.100mL、1.14mmol)を添加した。27.15時間後にさらなる塩化オキサリル(0.100mL、1.142mmol)を添加した。反応混合物を週末かけて撹拌したままにし、この間に溶媒を蒸発させて粘性の淡褐色固体を得た。これをジクロロメタン(15mL)に再溶解させ、この溶液に塩化オキサリル(0.100mL、1.14mmol)及びDMF(0.020mL、0.26mmol)を添加した。得られた溶液をさらに2時間45分撹拌し、褐色溶液が得られた。この溶液を、アンモニア(水中35％)(10mL、162mmol)及び氷(約10g)の撹拌溶液に滴下添加し、得られた混合物を約3時間静置した。これに酢酸エチル(10mL)及び水(10mL)を添加し、層を分離した。水性層にブライン(約5mL)を添加し、これをさらなる酢酸エチル(3×30mL)で抽出した。有機層(褐色沈殿物を含有していた)を合わせ、真空中で蒸発させて褐色固体を得た。これをメタノール(約10mL)中に移し、このエマルションを真空中で蒸発させて褐色固体を得た。この固体をジクロロメタン(約3×20mL)で粉砕し、上清を濾過した。濾液を約10mLに濃縮し、50g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このカラムをシクロヘキサン中20％〜70％酢酸エチルの勾配で溶出した。所要の画分を真空中で蒸発させ、4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボキサミド(95.0mg、0.40mmol、収率19％)をオフホワイトの固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.87分、[M-H]-=237.1。
【０５４７】
中間体116：4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボニトリル
【０５４８】
【化１３７】
2019510782.tif 000144
【０５４９】
マイクロウェーブバイアル中の、4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボキサミド(207.3mg、0.87mmol)の酢酸エチル(8mL)中溶液に、2,4,6-トリプロピル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン2,4,6-トリオキシド(酢酸エチル中50％、0.630mL、1.06mmol)を添加した。バイアルを密封し、混合物をマイクロウェーブ反応器中で100℃にて1.5時間撹拌した。このバイアルを再密封し、混合物を、マイクロウェーブ反応器中で100℃にてさらに合計2時間撹拌した。さらなる2,4,6-トリプロピル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン2,4,6-トリオキシド(酢酸エチル中50％、0.250mL、0.42mmol)を添加し、バイアルを再密封して、混合物をマイクロウェーブ反応器中で100℃にてさらに3.5時間撹拌した。反応混合物に水(10mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×10mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、淡黄色結晶固体を得た。これをDMSO(2mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、メタノール(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、所望の生成物4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボニトリル(145.0mg、0.66mmol、収率76％)をガラス状白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.14分、[M-H]-=219.0。
【０５５０】
中間体117：4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-2-カルボニトリル
【０５５１】
【化１３８】
2019510782.tif 000145
【０５５２】
4-ブロモ-1H-インドール-2-カルボニトリル(141.3mg、0.64mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(263.8mg、1.04mmol)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(44.3mg、0.06mmol)及び酢酸カリウム(182.7mg、1.86mmol)の1,4-ジオキサン(5mL)中混合物を、還流で5.75時間撹拌し、その後これを加熱から外し、撹拌しながら放置して室温に冷却した。混合物を窒素下で一晩静置した。この混合物を、2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(約20mL)で洗浄した。濾液にブライン(25mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×25mL)で抽出した。有機相を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン(約5mL)に再溶解させ、25g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜40％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-2-カルボニトリル(72.4mg、0.27mmol、収率42％)を無色ガム状物として得、これを静置するとゆっくりと無色結晶を形成した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.29分、[M-H]-=267.2。
【０５５３】
中間体118：4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-3-カルボニトリル
【０５５４】
【化１３９】
2019510782.tif 000146
【０５５５】
4-ブロモ-1H-インドール-3-カルボニトリル(500.3mg、2.26mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(694.3mg、2.73mmol)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(169.6mg、0.23mmol)及び酢酸カリウム(668.8mg、6.81mmol)の1,4-ジオキサン(12mL)中混合物を、還流で21.5時間撹拌した。5.5時間後に、さらなる4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(288.4mg、1.14mmol)を添加した。混合物を加熱から外し、放置して室温に冷却し、その後、10gセライトカートリッジを通してこれを濾過した。これを酢酸エチル(約3×10mL)で洗浄した。濾液に水(10mL)及びブライン(30mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×30mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、ジクロロメタン(約10mL)に再溶解させ、100g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜40％酢酸エチルの勾配で溶出した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-3-カルボニトリル(純度80重量パーセント、481.8mg、1.44mmol、収率64％)を粘性黄色油状物として得、これを静置すると淡黄色結晶を形成した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.08分、[M-H]-=269.3。
【０５５６】
中間体119：ベンジル4-ブロモインドリン-1-カルボキシレート
【０５５７】
【化１４０】
2019510782.tif 000147
【０５５８】
4-ブロモインドリン(991.8mg、5.01mmol、Fluorochemから市販されているもの)及び重炭酸ナトリウム(1.100g、13.09mmol)の水(30mL)及びテトラヒドロフラン(12mL)中撹拌混合物に、ベンジルクロロホルメート(0.85mL、5.98mmol)を滴下添加した。混合物を室温で24時間撹拌し、その後20時間静置した。混合物を酢酸エチル(3×80mL)で抽出し、合わせた有機相を飽和水性ブライン溶液(30mL)で洗浄し、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通した濾過により乾燥させた。有機相から溶媒を真空中で蒸発させて淡褐色結晶固体を得、これをジクロロメタン(約12mL)に再溶解させ、シクロヘキサン中0〜30％酢酸エチルの勾配で溶出するSP4フラッシュカラムクロマトグラフィー(100gシリカカートリッジ)により精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン(約12mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、ベンジル4-ブロモインドリン-1-カルボキシレート(1.602g、4.82mmol、収率96％)を薄桃色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.44分、[MH]+についてm/z=332、334。
【０５５９】
中間体120：ベンジル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-1-カルボキシレート
【０５６０】
【化１４１】
2019510782.tif 000148
【０５６１】
ベンジル4-ブロモインドリン-1-カルボキシレート(1.108g、3.34mmol)、酢酸カリウム(0.965g、9.83mmol)及びビス(ピナコラト)ジボロン(1.014g、3.99mmol)の1,4-ジオキサン(15mL)中撹拌混合物に、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(ジクロロメタンとの複合体)(259.6mg、0.36mmol)を添加した。混合物を100℃で140分間撹拌し、その後酢酸エチル(10mL)で希釈し、10gセライトカートリッジを通して濾過した。このカートリッジを、さらなる酢酸エチル(3×20mL)を通して洗浄した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を酢酸エチル(100mL)に再溶解させ、水(50mL)及び飽和ブライン溶液(相分離を補助するため約30mL添加した)で洗浄した。有機相を、水(50mL)及び飽和ブライン溶液(30mL)のさらなる部分で洗浄し、相を分離し、有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通した濾過により乾燥させた。有機相から溶媒を真空中で蒸発させて暗褐色油状物を得、これをジクロロメタン(約10ｍL)に再溶解させ、溶液を50g SNAPシリカカートリッジに適用した。サンプルを、シクロヘキサン中0〜25％酢酸エチルの勾配で溶出するBiotage SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を真空中で乾燥させ、純度約85％のベンジル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-1-カルボキシレート(1.148g、3.03mmol、収率91％)を薄黄色の粘性油状物として得、これを静置して結晶化させ、薄黄色固体とした。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.55分、[MH]+についてm/z=380。
【０５６２】
中間体121：(±)-tert-ブチル4-(2-シアノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０５６３】
【化１４２】
2019510782.tif 000149
【０５６４】
(±)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-((メチルスルホニル)オキシ)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(1.095g、3.19mmol)をジメチルスルホキシド(23mL)に溶解させ、シアン化ナトリウム(165.5mg、3.38mmol)を添加した。混合物を室温で3.5時間撹拌し、その後55℃で25時間加熱した。混合物を冷却し、室温で48時間静置した後、水(50mL)とエーテル(50mL)とに分配した。相を分離し、水相をさらなるエーテル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過することにより乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させて薄黄色油状物を得た。この油状物をジクロロメタン(約8mL)に再溶解させ、Biotage SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した(サンプルを、シクロヘキサンで予め湿らせたSNAP 25gシリカカートリッジに適用した)。カラムを、シクロヘキサン中0〜40％酢酸エチルの勾配で溶出した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させて、残りの無色油状物をジクロロメタン(約10mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させて、(±)-tert-ブチル4-(2-シアノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(752.9mg、2.74mmol、収率86％)を可動性の無色油状物として得、これを一週間かけて結晶化させて白色固体を得た。
TLC(シリカプレート；1:1の酢酸エチル/シクロヘキサン) Rf=0.63、KMnO4で可視化した(最初はかすかに発色し、その後何時間もかけて色が濃くなり、黄色スポットとなる)。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 4.33(br s, 1 H) 4.19(br s, 1 H) 2.97(br d, 1 H) 2.78(br s, 1 H) 2.43 - 2.59(m, 2 H) 2.11 - 2.20(m, 1 H) 1.96 - 2.10(m, 1 H) 1.76 - 1.83(m, 1 H) 1.62 - 1.71(m, 1 H) 1.49 - 1.57(m, 1 H) 1.48(s, 9 H)。
【０５６５】
中間体122：(±)-tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０５６６】
【化１４３】
2019510782.tif 000150
【０５６７】
(±)-tert-ブチル4-(2-シアノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(108.6mg、0.40mmol)及び水素化ホウ素ナトリウム(34.7mg、0.92mmol)のTHF中(3mL)混合物を窒素下で撹拌し、0℃に冷却し(氷浴)、その後ヨウ素(100mg、0.40mmol)のTHF(2mL)中溶液を50分間かけて滴下添加した。混合物を窒素下に還流で3.75時間加熱し、その後メタノール(1mL)を添加し(激しい反応のため要注意)、混合物を還流でさらに30分間加熱した。室温に冷却した後、混合物を、メタノールで予め湿らせた5g Isolute SCX-2イオン交換カートリッジに直接適用した。カートリッジをメタノール(2×10mL)で溶出し、その後メタノール中2Mアンモニア溶液(3×10mL)で溶出した。塩基性画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させて無色油状残渣を得、これを2:1のジクロロメタン/メタノール(約8mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、(±)-tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(51.6mg、0.19mmol、収率47％)を無色粘性油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.05(br s, 1 H) 3.88(br d, 1 H) 3.16(br s, 2 H) 2.87(br s, 1 H) 2.51 - 2.56(m, 2 H) 1.62 - 1.99(m, 4 H) 1.14 - 1.50(m, 4 H) 1.40(s, 9 H)。
【０５６８】
中間体123：(+/-)-4-tert-ブチル2-エチル2-メチルモルホリン-2,4-ジカルボキシレート
【０５６９】
【化１４４】
2019510782.tif 000151
【０５７０】
THF(10mL)中の4-tert-ブチル2-エチルモルホリン-2,4-ジカルボキシレート(3g、11.57mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)を、-78℃のLiHMDS(THF中1M、11.57mL、11.57mmol)のTHF(20mL)中溶液に添加し、溶液を20分間撹拌し、次いでMeI(1.447mL、23.14mmol)を添加し、混合物を-78℃で1時間撹拌し、その後室温に温めた。混合物を水(100mL)で希釈し、EtOAc(2×100mL)で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させた。粗生成物を、0〜50％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させて、(+/-)-4-tert-ブチル2-エチル2-メチルモルホリン-2,4-ジカルボキシレート(1.8g、6.59mmol、収率56.9％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 4.37(dd, J=13.2, 1.0 Hz, 1 H) 4.32-4.14(m, 2 H) 3.92-3.65(m, 3 H) 3.03(br. s., 1 H) 2.87(d, J=13.2 Hz, 1 H) 1.50-1.42(m, 9 H) 1.40-1.36(m, 3 H) 1.34-1.24(m, 3 H)。
【０５７１】
中間体124：(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５７２】
【化１４５】
2019510782.tif 000152
【０５７３】
(+/-)-4-tert-ブチル2-エチル2-メチルモルホリン-2,4-ジカルボキシレート(1.8g、6.59mmol)を2-メチルTHF(30mL)に溶解させ、氷浴中で冷却し、次いでLiBH4(0.574g、26.3mmol)を添加し、混合物を窒素下で一晩撹拌した。混合物を、メタノール(20mL)を極めて注意深く滴下添加することによりクエンチし、次いで真空中で蒸発させて、残渣を0.5M HCl(50mL)とEtOAc(50mL)とに分配し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(1.6g、6.92mmol、収率105％)を無色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.67-3.56(m, 2 H) 3.49-3.41(m, 1 H) 3.38-3.28(m, 3 H) 3.21-3.12(m, 2 H) 1.47-1.40(m, 9 H) 1.10(s, 3 H)。1つの交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０５７４】
中間体125：(+/-)-tert-ブチル2-ホルミル-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５７５】
【化１４６】
2019510782.tif 000153
【０５７６】
(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシメチル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(0.8g、3.46mmol)を窒素下でジクロロメタン(30mL)にとり、氷浴中で冷却した。DMP(1.614g、3.80mmol)を添加し、反応を撹拌したままにして一晩温めた。反応を飽和NaHCO3(25mL)でクエンチし、30分間撹拌した。混合物を分配し、水性層をDCM中20％MeOH(25mL)で再抽出した。合わせた有機物をブライン(50mL)で洗浄し、疎水性フリットを通して濾過し、次いで真空中で濃縮して、(+/-)-tert-ブチル2-ホルミル-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(純度90重量パーセント、0.7g、2.75mmol、収率79％)をクリーム色固体として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 9.61(s, 1 H) 4.14(dd, J=14.2, 7.1 Hz, 1 H) 3.96-3.58(m, 3 H) 3.15-3.01(m, 1 H) 2.93(d, J=13.4 Hz, 1 H) 1.57-1.35(m, 9 H) 1.31-1.11(m, 3 H)。
【０５７７】
中間体126：(+/-)-(E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５７８】
【化１４７】
2019510782.tif 000154
【０５７９】
(+/-)-tert-ブチル2-ホルミル-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(90重量％、0.7g、3.05mmol)をトルエン(25mL)に懸濁させた。(カルベトキシメチレン)トリフェニルホスホラン(1.276g、3.66mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをトルエン(25mL)及び水(50mL)で洗浄した。濾液を分離し、疎水性フリットを通して有機層を溶出させ、次いで真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で25g SNAPカートリッジに適用し、シクロヘキサン中0〜50％酢酸エチルで溶出した。適切な画分を真空中で濃縮し、(+/-)-(E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(495mg、1.57mmol、収率57％)を黄色油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 6.84(d, J=16.1 Hz, 1 H) 6.09(d, J=16.1 Hz, 1 H) 4.30-4.12(m, 2 H) 3.81(d, J=13.4 Hz, 1 H) 3.70(d, J=3.2 Hz, 3 H) 3.26-3.04(m, 2 H) 1.55-1.40(m, 9 H) 1.36-1.20(m, 6 H)。
【０５８０】
中間体127：(+/-)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５８１】
【化１４８】
2019510782.tif 000155
【０５８２】
(+/-)-(E)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロパ-1-エン-1-イル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(495mg、1.65mmol)をエタノール(10mL)にとった。ギ酸アンモニウム(521mg、8.27mmol)及び5％Pd/Cペースト(50mg、0.47mmol)を添加し、反応を85℃に2時間加熱した。反応を冷却し、セライトを通して濾過した。濾過ケーキををエタノール(10mL)で洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をエタノール(10mL)にとった。ギ酸アンモニウム(521mg、8.27mmol)及び5％Pd/Cペースト(50mg、0.47mmol)を添加し、反応を85℃に4時間加熱した。反応を冷却し、セライトを通して濾過した。濾過ケーキをエタノール(10mL)で洗浄し、濾液を真空中で濃縮して、(+/-)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(556mg、1.66mmol、収率100％)を白色固体として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 4.12(q, J=7.2 Hz, 2 H) 3.62(t, J=4.8 Hz, 2 H) 3.44-3.30(m, 2 H) 3.29-3.10(m, 2 H) 2.35(t, J=8.2 Hz, 2 H) 2.08 - 1.97(m, 1 H) 1.68(dt, J=14.4, 8.1 Hz, 1 H) 1.49-1.38(m, 9 H) 1.24(t, J=7.1 Hz, 3 H) 1.12(s, 3 H)。
【０５８３】
中間体128：(+/-)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５８４】
【化１４９】
2019510782.tif 000156
【０５８５】
(+/-)-tert-ブチル2-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(556mg、1.85mmol)を窒素下でテトラヒドロフラン(10mL)にとり、氷浴中で冷却した。LiBH4(THF中2M、2.77mL、5.53mmol)をゆっくりと加え、反応を撹拌したままにし、一晩温めた。反応を氷浴中で冷却し、NH4Cl溶液(20mL)で注意深くクエンチした。反応混合物をEtOAc(25mL)と水(25mL)とに分配し、水性層をEtOAc(25mL)で再抽出した。合わせた有機物を疎水性フリットを通して溶出し、真空中で濃縮した。残渣を窒素下でテトラヒドロフラン(10mL)にとり、氷浴中で冷却した。LiBH4(THF中2M、2.77mL、5.53mmol)をゆっくりと加え、反応を撹拌したままにし、一晩温めた。反応混合物を冷却し、飽和NH4Cl溶液(50mL)で注意深くクエンチした。混合物を、EtOAc(50mL)と水(50mL)とに分配し、水性層をEtOAc(50mL)で再抽出した。合わせた有機物を、疎水性フリットを通して溶出させ、次いで真空中で濃縮し、(+/-)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(純度90重量パーセント、400mg、1.39mmol、収率75％)を透明油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.83-3.71(m, 1 H) 3.70-3.56(m, 3 H) 3.50-3.14(m, 4 H) 2.13(br. s., 1 H) 1.77-1.40(m, 13 H) 1.18-1.09(m, 3 H)。
【０５８６】
中間体129：(+/-)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５８７】
【化１５０】
2019510782.tif 000157
【０５８８】
(+/-)-tert-ブチル2-(3-ヒドロキシプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(90重量％、400mg、1.39mmol)をジクロロメタン(10mL)にとり、氷浴中で冷却した。Et3N(0.645mL、4.63mmol)を添加し、その後塩化メタンスルホニル(0.180mL、2.31mmol)を添加した。反応を撹拌したままにし、室温に温めた。5時間後、反応をDCM(10mL)で希釈し、水(20mL)で洗浄した。有機層を、疎水性フリットを通して溶出し、真空中で濃縮した。残渣をDMF(5mL)にとった。アジ化ナトリウム(175mg、2.68mmol)を添加し、反応を70℃に4時間加熱した。反応を冷却し、EtOAc(25mL)と飽和NaHCO3溶液(25mL)とに分配した。水性層をEtOAc(2×25mL)で再抽出し、合わせた有機物を疎水性フリットを通して溶出させ、次いで真空中で濃縮し、(+/-)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(純度90重量パーセント、326mg、1.03mmol、収率85％)を透明油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.80-3.15(m, 8 H) 1.81-1.38(m, 13 H) 1.11-1.23(m, 3 H)。
【０５８９】
中間体130：(+/-)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０５９０】
【化１５１】
2019510782.tif 000158
【０５９１】
(+/-)-tert-ブチル2-(3-アジドプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(90重量％、353mg、1.12mmol)を、テトラヒドロフラン(5mL)及び水(5mL)にとった。Ph3P(391mg、1.49mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌し、次いで3日間静置した。反応をEtOAc(25mL)とブライン(25mL)とに分配した。有機層を、疎水性フリットを通して溶出し、その後真空中で濃縮して黄色油状物を得た。粗生成物を最小限のDCM中で10g SNAP Ultraカートリッジに適用し、DCM中メタノール中1〜10％2M NH3で溶出した。適切な画分を真空中で濃縮し、(+/-)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(純度90重量パーセント、180.9mg、0.63mmol、収率56％)を透明油状物として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 3.63-3.42(m, 2 H) 3.37-3.01(m, 4 H) 2.67-2.49(m, 2 H) 1.64-1.20(m, 15 H) 1.10-0.97(m, 3 H)。
【０５９２】
中間体131：2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０５９３】
【化１５２】
2019510782.tif 000159
【０５９４】
2-アミノプロパン-1,3-ジオール(327.2mg、3.59mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)のDMF(15mL)中撹拌溶液に、フタル酸無水物(533.6mg、3.60mmol)を少しずつ添加した。得られた無色溶液を90℃で窒素下に5時間撹拌し、その後反応混合物を室温に冷却し、揮発性物質を真空中で蒸発させた。これを酢酸エチル(25mL)と水(25mL)とに分配し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(4×25mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させた。これを酢酸エチル(約4mL)及び3:1の酢酸エチル:エタノール(約4mL)に再溶解させ、25g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このカラムをシクロヘキサン中0％〜40％(3:1の酢酸エチル:エタノール)の勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(380.0mg、1.72mmol、収率48％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.55分、[MH]+=222.3。
【０５９５】
中間体132：2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０５９６】
【化１５３】
2019510782.tif 000160
【０５９７】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(5.06g、18.69mmol、例えばAnichemから市販されているもの)のDCM(20mL)中溶液にTFA(10mL、130mmol)を添加し、反応混合物をN2下に室温で4時間撹拌した。反応混合物を真空中で長時間濃縮して可能な限り多くのTFA残渣を除去し、2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(4.21g、18.64mmol、収率100％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.71分、[MH]＋=215.1。
【０５９８】
中間体133：4-tert-ブチル2-メチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート 
【０５９９】
【化１５４】
2019510782.tif 000161
【０６００】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(10g、36.9mmol、例えばAnichemから市販されているもの)、パラジウム(II)アセテート(0.829g、3.69mmol)、Xantphos(2.137g、3.69mmol)、トリエチルアミン(15.45mL、111mmol)、DMF(100mL)及びメタノール(100mL)を合わせた。混合物を窒素、次いで一酸化炭素でパージし、その後混合物を一酸化炭素のバルーン下に48時間加熱した。混合物を真空中で蒸発させて、残渣を水(500mL)とEtOAc(500mL)とに分配した。有機層を水(500mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する100gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、4-tert-ブチル2-メチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(5.8g、19.71mmol、収率53％)を薄黄色固体として得た。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 8.81(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.68(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.06(br. s., 1 H) 4.04(s, 3 H) 3.08(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.63(s, 9 H)。
【０６０１】
中間体134：2-(メトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６０２】
【化１５５】
2019510782.tif 000162
【０６０３】
4-tert-ブチル2-メチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(3g、10.19mmol)をDCM(20mL)に溶解させ、2,2,2-トリフルオロ酢酸(11.62g、102mmol)を添加し、次いで溶液を室温で4時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、2-(メトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(2.55g、10.71mmol、収率105％)を薄黄色固体として得、これを精製することなく次のステップで使用した。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.61(d, J=4.9 Hz, 1 H) 8.55(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.50(d, J=1.5 Hz, 1 H) 3.96(s, 3 H) 2.88(d, J=4.9 Hz, 3 H)。
【０６０４】
中間体135：2-(エトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６０５】
【化１５６】
2019510782.tif 000163
【０６０６】
4-tert-ブチル2-エチル6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(55.6mg、0.18mmol)のジクロロメタン(1mL)中溶液に、トリフルオロ酢酸(0.550mL、7.14mmol)を添加した。得られた橙色溶液を室温で1時間10分間撹拌した。揮発性物質を窒素流下で蒸発させた。粗生成物をジエチルエーテル(2×1mL)で粉砕し、得られた白色固体残渣を窒素流下で乾燥させ、2-(エトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(34.5mg、0.14mmol、収率76％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.45分、[MH]＋=253.3。
【０６０７】
中間体136：エチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート
【０６０８】
【化１５７】
2019510782.tif 000164
【０６０９】
2-(エトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(0.621g、2.46mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(0.410g、3.02mmol)及びHATU(1.167g、3.07mmol)のDMF(20mL)中溶液に、DIPEA(1.70mL、9.73mmol)を添加した。溶液を室温で5時間撹拌した。さらなる(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(0.130g、0.96mmol)を2.5時間後に添加した。さらなるHATU(0.283g、0.74mmol)及びDIPEA(0.250mL、1.43mmol)を3時間40分後に添加した。溶液を撹拌から外し、揮発性物質を真空中で蒸発させた。これに酢酸エチル(20mL)、2M水性Na2CO3(10mL)及び水(20mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、ジクロロメタン(約10mL)に再溶解させ、50g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このカラムをシクロヘキサン中10％〜50％酢酸エチル:エタノール(3:1)の勾配で溶出した。所要の画分を真空中で蒸発させ、エチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート(704.9mg、2.12mmol、収率86％)を黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.70分、[MH]＋=334.2。
【０６１０】
中間体137：メチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート
【０６１１】
【化１５８】
2019510782.tif 000165
【０６１２】
2-(メトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(2.4g、10.08mmol)をDCM(50mL)に懸濁させ、Et3N(4.21mL、30.2mmol)及びHATU(5.75g、15.11mmol)を添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(2.049g、15.11mmol)を添加した。溶液を2時間撹拌し、その後水(2×100mL)で洗浄して有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。これをEtOAc(20mL)に懸濁させ、10分間超音波処理し、次いで濾過により固体を回収してエーテル(20mL)で洗浄し、メチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート(1.20g、3.76mmol、収率37％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.59分、[MH]＋=320.1。
【０６１３】
中間体138：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０６１４】
【化１５９】
2019510782.tif 000166
【０６１５】
エチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート(615.8mg、1.85mmol)及び塩化カルシウム(411.8mg、3.71mmol)のエタノール(12mL)及び2-メチルテトラヒドロフラン(12mL)中懸濁液を、氷浴中で約0℃に冷却した。これに水素化ホウ素ナトリウム(116.8mg、3.09mmol)を少しずつ添加した。得られた淡ピンク色溶液を室温に温めて16時間撹拌し、その後飽和水性NH4Cl(5mL)を添加し、溶液を室温でさらに10分間撹拌した。この混合物に水(15mL)を添加し、得られた曇白色の混合物を真空中で濃縮し、有機溶媒を除去した。得られた溶液を酢酸エチル(3×20mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。水相を約5mLに濃縮し、これにブライン(15mL)を添加した。これをさらなる酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、最初の抽出に由来する濾過された有機相と合わせた。水相を真空中で蒸発させ、最小体積の水(約15mL)に再溶解させた。次いで、これをさらなる酢酸エチル(4×15mL)で抽出した。これらの有機相を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、先に合わせた有機相と合わせた。この溶液を真空中で蒸発させて、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(純度85重量パーセント、530.6mg、1.55mmol、収率84％)を粘性淡褐色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.52分、[MH]＋=292.3。
【０６１６】
代替手段：
メチル4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピコリネート(1.94g、6.08mmol)を2-メチルTHF(70mL)及びエタノール(70mL)の混合物に溶解させ、次いで塩化カルシウム(2.023g、18.23mmol)を添加し、混合物を10分間激しく撹拌した。その後、混合物を窒素下に氷浴中で冷却し、テトラヒドロホウ酸ナトリウム(0.345g、9.11mmol)を少量ずつ20分間かけて添加した。得られた混合物を一晩急速に撹拌し、これを室温に温め、次いで塩化アンモニウム溶液(100mL)の滴下添加によりクエンチした。混合物をEtOAc(3×100mL)で抽出し、合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、無色固体を得た。粗生成物をDCM(20mL)及びメタノール(3mL)の混合物に大部分溶解させ、100gシリカカラム上にロードした。カラムを0〜100％(25％EtOH/EtOAc)/シクロヘキサンで溶出し、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.80g、2.75mmol、収率45.2％)を無色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.47分、[MH]＋=292.3。
【０６１７】
中間体139：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０６１８】
【化１６０】
2019510782.tif 000167
【０６１９】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(85重量％、502.3mg、1.47mmol)のジクロロメタン(15mL)中懸濁液に、塩化チオニル(0.400mL、5.48mmol)を滴下添加した。懸濁液を40℃で2.75時間撹拌し、その後これを室温に冷却し、揮発性物質を真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン(約5mL)及び酢酸エチル(約5mL)に再溶解させて25g SNAPカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このカラムをシクロヘキサン中0％〜40％酢酸エチル:エタノール(3:1)の勾配で溶出した。所要の画分を真空中で蒸発させ、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(249.5mg、0.81mmol、収率55％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.70分、[MH]＋=310.2。
【０６２０】
中間体140：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０６２１】
【化１６１】
2019510782.tif 000168
【０６２２】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(1.072g、3.68mmol)をジクロロメタン(50mL)にとった。デス-マーチンペルヨージナン(1.717g、4.05mmol)を添加し、反応を2時間撹拌したままにした。チオ硫酸ナトリウム溶液(50mL)を添加し、反応をさらに15分間撹拌したままにした。有機相と水相を分離した。水相をDCM(2×50mL)で洗浄した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、その後真空中で濃縮した。水相を、DCM(2×20mL)を用いて再抽出し、その後EtOAc(2×20mL)を用いてさらに抽出した。合わせた有機物を先の残渣と合わせ、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(674mg、2.33mmol、収率63％)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.54.分、[MH]＋=290.2。
【０６２３】
中間体141：tert-ブチル2-クロロ-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６２４】
【化１６２】
2019510782.tif 000169
【０６２５】
4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-クロロピコリン酸(4.085g、15.85mmol、例えばAnichemから市販されているもの)、エチルアミン塩酸塩(4.528g、55.5mmol)及びHATU(7.093g、18.65mmol)のDMF(41mL)中混合物を、窒素下に室温で撹拌した。トリエチルアミン(10mL、71.7mmol)を添加し、混合物を2時間撹拌した。揮発性物質の大部分を真空中で蒸発させて橙色/褐色スラリーを得、これを酢酸エチル(100mL)と2M炭酸ナトリウム水溶液(100mL)とに分配した。相を分離し、水相をさらなる酢酸エチル(2×50mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を水(50mL)及び飽和ブライン溶液(50mL)で洗浄し、その後疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。溶媒を真空中で蒸発させて粘性の橙色/褐色油状物を得、これをジクロロメタン(約10ｍL)に再溶解させ、100g SNAPシリカカートリッジ上にロードし、シクロヘキサン中0〜30％酢酸エチルの勾配で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、残渣をジクロロメタン(約15mL)に再溶解させ、溶媒を真空中で蒸発させて残渣を真空中で乾燥させ、tert-ブチル2-クロロ-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(2.607g、9.15mmol、収率58％)を薄黄色油状物として得、これを静置して結晶化させ、薄黄色結晶固体とした。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.21分、[MH]＋=285.2。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 8.56(s, 1 H) 7.96(s, 1 H) 7.80(br. s., 1 H) 3.53(quin, J=6.8 Hz, 2 H) 1.61(s, 9 H) 1.29(t, J=7.2 Hz, 3 H)。
【０６２６】
中間体142：4-tert-ブチル2-メチル6-(エチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート
【０６２７】
【化１６３】
2019510782.tif 000170
【０６２８】
tert-ブチル2-クロロ-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(1005mg、3.53mmol)、XantPhos(211.1mg、0.37mmol)及びパラジウム(II)アセテート(85.6mg、0.38mmol)のメタノール(15mL)及びDMF(15mL)中溶液に、トリエチルアミン(1.48mL、10.62mmol)を添加した。一酸化炭素ガスをこの溶液に通して室温で約5分間泡立て、その後一酸化炭素のバルーンを取り付けて、溶液を70℃で2.5時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、一酸化炭素雰囲気下で一晩静置し、その後フラスコを窒素でパージして、揮発性物質を真空中で蒸発させた。残渣を酢酸エチル(40mL)と1:1の飽和水性塩化リチウム:水(40mL)とに分配し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(2×40mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、ジクロロメタン(5mL)及び酢酸エチル(3mL)に再溶解させ、100g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜40％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、ジクロロメタン(約10mL)中に移し、この溶液を真空中で蒸発させせて、4-tert-ブチル2-メチル6-(エチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(899.9mg、2.92mmol、収率83％)を粘性の黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.04分、[MH]＋=309.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 8.82(s, 1 H) 8.68(s, 1 H) 8.11(br. s., 1 H) 4.05(s, 3 H) 3.56(quin, J=6.8 Hz, 2 H) 1.63(s, 9 H) 1.30(t, J=7.2 Hz, 3 H)。
【０６２９】
中間体143：tert-ブチル2-(エチルカルバモイル)-6-(ヒドロキシメチル)イソニコチネート
【０６３０】
【化１６４】
2019510782.tif 000171
【０６３１】
窒素下で0℃の4-tert-ブチル2-メチル6-(エチルカルバモイル)ピリジン-2,4-ジカルボキシレート(900mg、2.92mmol)及び塩化カルシウム(656.3mg、5.91mmol)のエタノール(10mL)及び2-メチルテトラヒドロフラン(10mL)中撹拌懸濁液に、水素化ホウ素ナトリウム(163.2mg、4.31mmol)を少しずつ添加した。反応混合物を室温に温め、窒素下でさらに43時間撹拌した。さらなる水素化ホウ素ナトリウム(81.8mg、2.16mmol)を19.5時間後に添加した。反応混合物を飽和水性NH4Cl(5mL)でクエンチし、得られた混合物を室温でさらに1時間撹拌し、さらに4時間静置した。これに水(10mL)を添加し、有機溶媒を真空中で除去した。得られた混合物に、さらなる水(20mL)及び酢酸エチル(30mL)を添加し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(2×30mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、次いでジクロロメタン(2mL)に再溶解させ、25g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用して、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムを、シクロヘキサン中20％〜70％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(エチルカルバモイル)-6-(ヒドロキシメチル)イソニコチネート(371.1mg、1.32mmol、収率45％)を粘性の淡黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.90分、[MH]＋=281.2。
【０６３２】
中間体144：tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６３３】
【化１６５】
2019510782.tif 000172
【０６３４】
tert-ブチル2-(エチルカルバモイル)-6-(ヒドロキシメチル)イソニコチネート(340mg、1.213mmol)のジクロロメタン(10mL)中撹拌溶液に、塩化チオニル(0.450mL、6.17mmol)を滴下添加した。得られた混合物を室温で窒素下に合計45.5時間撹拌し、この間、21.75時間後にさらなる塩化チオニル(0.400mL、5.48mmol)を添加した。揮発性物質を窒素流下で蒸発させ、その後粗生成物をアセトニトリル(3×10mL)と共沸し、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(348.1mg、1.165mmol、収率96％)を粘性の褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.17分、[MH]＋=299.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3-d) δ ppm 8.59(d, J=1.0 Hz, 1 H) 8.11(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.96(br. s., 1 H) 4.73(s, 2 H) 3.62-3.50(m, 2 H) 1.71-1.53(m, 9 H) 1.30(t, J=7.2 Hz, 3 H)。
【０６３５】
中間体145：6-クロロ-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０６３６】
【化１６６】
2019510782.tif 000173
【０６３７】
2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(2g、8.85mmol)及びHATU(3.70g、9.74mmol)のDMF(20mL)中溶液に、DIPEA(3.09mL、17.71mmol)を添加し、その後4,4-ジエトキシブタン-1-アミン(1.68mL、9.74mmol)を添加した。得られた溶液を室温で16時間撹拌した。水(60mL)及びEtOAc(60mL)を添加し、層を分離した。水性層を酢酸エチル(2×30mL)でさらに抽出した。合わせた有機物を水(2×30mL)及び飽和水性LiCl(30mL)で逆抽出し、その後乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、真空中で濃縮して暗色油状物を得た。これをDCMに再溶解させ、100g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このカラムをシクロヘキサン中30〜70％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を回収し、真空中で濃縮して、生成物、6-クロロ-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(2.39g、6.68mmol、収率75％)が黄色油状物として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.92分、[MH]-=356.2。
【０６３８】
中間体146：6-クロロ-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０６３９】
【化１６７】
2019510782.tif 000174
【０６４０】
6-クロロ-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(2.39g、6.68mmol)のトルエン(30mL)中溶液に、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(1.477g、6.68mmol)及びp-トルエンスルホン酸一水和物(0.254g、1.34mmol)を添加した。得られた懸濁液を90℃で窒素下に2時間撹拌し、その後反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル(100mL)と飽和水性重炭酸ナトリウム(100mL)とに分配し、層を分離した。大量の沈殿物が水性層に残った。水相をさらなる酢酸エチル(2×100mL)で抽出し、これが沈殿物を徐々に溶解し、有機相を懸濁液と合わせて真空中で直接蒸発させて黄色固体を得たが、これは依然として不純であった。難溶性の生成物をEt2Oで粉砕し、濾過した。残渣を回収し、真空中で乾燥させて、所望の6-クロロ-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(1.666g、3.42mmol、収率51％)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.01分、[MH]＋=487.3。
【０６４１】
中間体147：tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-ビニルイソニコチネート
【０６４２】
【化１６８】
2019510782.tif 000175
【０６４３】
密封したマイクロウェーブバイアル中のtert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(0.801g、2.96mmol)、2,4,6-トリビニルシクロトリブロキサンピリジン複合体(1.063g、4.42mmol)、PdCl2(dppf)(0.1040g、0.142mmol)及び炭酸カリウム(1.2526g、9.06mmol)のエタノール(5mL)及びトルエン(5mL)中懸濁液を、マイクロウェーブ反応器中で120℃にて40分間加熱した。このバイアルを再密封し、混合物をマイクロウェーブ反応器中でさらに20分間加熱した。反応混合物を、10gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(約30mL)で洗浄した。濾液を真空中で蒸発させて、粘性の暗赤色油状物(1.30g)を得た。これをDCM(約3mL)に再溶解させ、50g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜40％EtOAcの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、粘性の暗褐色油状物(816mg)を得た。これをDCM(約3mL)に再溶解させ、50g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーによりさらに精製した。カラムをシクロヘキサン中15％〜40％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所望の生成物を粘性の淡黄色油状物(738.1mg)：tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-ビニルイソニコチネート(738.1mg、2.81mmol、収率95％)として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.14分、[MH]＋=263.3。
【０６４４】
中間体148：tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６４５】
【化１６９】
2019510782.tif 000176
【０６４６】
臭素(0.34mL、6.64mmol)を、DCM(6mL)中のtert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-ビニルイソニコチネート(910mg、3.47mmol)に添加した。得られた溶液を室温で30分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、次いで50℃のKOH(389mg、6.94mmol)を有するEtOH(8mL)を添加し、反応混合物を15分間撹拌した。反応混合物を、水(10mL)及びブライン(2mL)とEtOAc(10mL)とに分配した。有機層を分離し、水性層をEtOAc(3×10mL)のさらなる部分で抽出した。合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させ、次いで真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.31g、3.30mmol、収率95％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.26分、[MH]＋=341.1、343.1。
【０６４７】
中間体149：tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６４８】
【化１７０】
2019510782.tif 000177
【０６４９】
tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.31g、3.84mmol)、(1H-インドール-4-イル)ボロン酸(0.742g、4.61mmol)、リン酸三カリウム(2.445g、11.52mmol)及びPEPPSI iPr(0.262g、0.384mmol)を窒素下で10分間パージした。1,4-ジオキサン(20mL)及び水(10mL)を添加し、反応を室温で3時間撹拌したままにした。PEPPSI iPr(0.262g、0.384mmol)を再度添加し、反応を一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をDCM(40mL)にとり、水(2×40mL)及びブライン(40mL)で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.5g、3.18mmol、収率83％)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.25分、[MH]＋=378.4。
【０６５０】
中間体150：tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６５１】
【化１７１】
2019510782.tif 000178
【０６５２】
tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.31g、3.84mmol)、(1H-インドール-4-イル)ボロン酸(0.742g、4.61mmol)、リン酸三カリウム(2.445g、11.52mmol)及びPEPPSI iPr(0.262g、0.384mmol)を窒素下で10分間パージした。1,4-ジオキサン(20mL)及び水(10mL)を添加し、反応を室温で3時間撹拌したままにした。さらなるPEPPSI iPr(0.262g、0.384mmol)を添加し、反応を一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をDCM(40mL)にとり、水(2×40mL)及びブライン(40mL)で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.5g、3.18mmol、収率83％)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.25分、[MH]＋=378.4。
【０６５３】
中間体151：(+/-)-tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６５４】
【化１７２】
2019510782.tif 000179
【０６５５】
tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.5g、3.18mmol)を、エタノール(20mL)中Pd-C(0.068g、0.636mmol)触媒を用いて水素化した。反応を室温で一晩撹拌したままにした。セライトを通して反応を濾過し、その後真空中で濃縮した。粗生成物を、最小限のDCM中でSNAP ULTRAシリカカートリッジ(100g)に適用し、シクロヘキサン中5〜50％EtOAcで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(512mg、1.35mmol、収率42％)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.24分、[MH]＋=380.4。
【０６５６】
中間体152：(+/-)-2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６５７】
【化１７３】
2019510782.tif 000180
【０６５８】
tert-ブチル2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(512mg、1.35mmol)をメタノール(7.5mL)及びTHF(7.5mL)にとった。NaOH(6.75mL、13.49mmol、2M)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を水にとり、2M HClを用いてpH2に酸性化した。沈殿物を濾別し、所望の生成物、2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(450mg、1.39mmol)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.63分、[MH]＋=324.3。
【０６５９】
中間体153：(R)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート
中間体154：(S)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート
【０６６０】
【化１７４】
2019510782.tif 000181
【０６６１】
中間体73(7.78g)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(150mL)に溶解させた。注入：1.1mLの溶液を、分取オートサンプラを介してカラム上に注入した(20％EtOH/ヘプタン＋0.2％イソプロピルアミン、流速=42.5mL/分、検出波長=280nm、帯域幅140nm、基準400nm帯域幅100nm、カラム30mm×25cm Chiralcel OJ-H)。11.2〜13.7分からの画分をまとめてピーク1と標識した。15.7〜19分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【０６６２】
ピーク1に対応する画分を回収し、中間体153(2.84g)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.3。
【０６６３】
ピーク2に対応する画分を回収し、中間体154(2.80g)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.35分、[MH]+=341.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.46(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.03(br. s., 1 H) 7.82(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.20-7.36(m, 5 H) 4.39(q, J=7.2 Hz, 1 H) 3.08(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.76(d, J=7.1 Hz, 3 H) 1.60(s, 9 H)。
【０６６４】
中間体155：(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸
【０６６５】
【化１７５】
2019510782.tif 000182
【０６６６】
(S)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(2.19g、6.43mmol、中間体154)及びトリフルオロ酢酸(10mL、130mmol)のDCM(15mL)中混合物を、室温で19時間撹拌した。揮発性物質を混合物から真空中で蒸発させ、油性残渣をアセトニトリル(約10mL)に再溶解させ、溶媒を真空中で蒸発させた。この橙色油性残渣にエーテル(約10mL)を添加し、白色固体を沈殿させた。この固体を濾過し、エーテル(2×5mL)で洗浄して真空中で乾燥させ、所望の生成物を白色固体；(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(1.18g、4.14mmol、収率64％)として得た。
【０６６７】
2回目のエーテル洗浄の母液に由来する溶媒を窒素流下で蒸発させ、所望の生成物の第2バッチを白色固体；(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(95.6mg、0.336mmol、収率5.23％)として得た。
【０６６８】
最初の粉砕物と第1エーテル洗浄物とを合わせた母液に由来する溶媒を窒素流下で蒸発させ、生じた橙色粘性油状物をエーテル(5mL)で粉砕した。母液をデカント除去し、固体をさらなるエーテル(3×5mL)で粉砕し、毎回母液をデカントした。この固体を真空中で乾燥させ、所望の生成物の第3バッチを、クリーム色固体；(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(310.8mg、1.09mmol、収率17％)として得た。
【０６６９】
上記のバッチの単離に由来する合わせた母液を窒素流下で蒸発させ、得られた橙色の半結晶固体をエーテル(3mL)で洗浄した。母液をデカント除去し、固体をさらなるエーテル(3×3mL)で粉砕し、毎回母液をデカントした。この固体を真空中で乾燥させ、所望の生成物の第4バッチをクリーム色固体(100.4mg)として得た。
【０６７０】
4バッチにわたり合計された、単離された総生成物=1.68g、92％。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.00分、[MH]＋=285.3。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.81(br. s., 1 H) 8.80(q, J=4.5 Hz, 1 H) 8.22(s, 1 H) 7.83(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.43(d, J=7.1 Hz, 2 H) 7.27-7.34(m, 2 H) 7.16-7.24(m, 1 H) 4.48(q, J=7.3 Hz, 1 H) 2.90(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.73(d, J=7.3 Hz, 3 H)。
【０６７１】
中間体156：(R)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸
【０６７２】
【化１７６】
2019510782.tif 000183
【０６７３】
(R)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチネート(497mg、1.46mmol、中間体10)をDCM(5mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加して、反応を室温で一晩撹拌したままにした。TFA(0.5mL、6.49mmol)を再度添加し、反応を50℃で3時間還流した。さらなるTFA(1mL)を反応に添加し、次いでこれをさらに2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをメタノール中にロードし、スルホン酸SPE(SCX、2g)により精製し、メタノールを通して溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所要の生成物をピンク色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.68分、[MH]+=285.2。
【０６７４】
中間体157：tert-ブチル2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６７５】
【化１７７】
2019510782.tif 000184
【０６７６】
密封したマイクロウェーブバイアル中の、tert-ブチル2-クロロ-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(228mg、0.80mmol)及びビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(55.6mg、0.08mmol)のテトラヒドロフラン(6mL)中溶液を窒素下に室温で10分間撹拌し、その後ベンジル亜鉛(II)ブロミド(THF中0.5M、2.40mL、1.20mmol)を滴下添加した。バイアルを再密封し、混合物を、マイクロウェーブ反応器中で110℃にて30分間加熱した。反応混合物を、2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(20mL)で洗浄した。濾液に水(20mL)及びブライン(5mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×25mL)で抽出し、合わせた有機層をブライン(2×20mL)で洗浄し、10gセライトカートリッジを通して濾過した。カートリッジを酢酸エチル(30mL)で洗浄し、濾液を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。この濾液を真空中で蒸発させ、次いでジクロロメタン(3mL)に再溶解させ、25g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜30％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、残渣をジクロロメタン(約5mL)に移し、この溶液を真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(212.7mg、0.63mmol、収率78％)を粘性の暗黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.35分、[MH]＋=341.3。
【０６７７】
中間体158：2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６７８】
【化１７８】
2019510782.tif 000185
【０６７９】
tert-ブチル2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(212mg、0.62mmol)のジクロロメタン(6mL)中撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸(1.5mL、19.47mmol)を滴下添加した。得られた溶液を室温で窒素下に17.5時間撹拌し、その後揮発性物質を真空中で蒸発させて、アセトニトリル(2×5mL)及びジエチルエーテル(5mL)と共沸し、2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸(170.1mg、0.60mmol、収率96％)を黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.68分、[MH]＋=285.3。
【０６８０】
中間体159：tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６８１】
【化１７９】
2019510782.tif 000186
【０６８２】
tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(345mg、1.16mmol)、(1H-インドール-4-イル)ボロン酸(273.7mg、1.70mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(166.2mg、0.23mmol)及び炭酸カリウム(475.1mg、3.44mmol)の1,4-ジオキサン(8mL)及び水(4mL)中懸濁液を、室温で窒素下に3.5時間撹拌した。反応混合物に、酢酸エチル(10mL)及び水(10mL)を添加し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(2×10mL)で抽出し、有機層を合わせ、10gセライトカートリッジを通して濾過した。カートリッジを酢酸エチル(2×10mL)で洗浄し、濾液を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。この濾液を真空中で蒸発させ、ジクロロメタン(約3mL)に再溶解させ、25g SNAPシリカカートリッジのトップに直接適用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中0％〜30％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(256.5mg、0.68mmol、収率59％)をふんわりしたクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.26分、[MH]＋=380.2。
【０６８３】
中間体160：2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸 
【０６８４】
【化１８０】
2019510782.tif 000187
【０６８５】
tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチネート(114.7mg、0.30mmol)のメタノール(1.5mL)及びTHF(1.5mL)中溶液に、水酸化ナトリウム(94.3mg、2.36mmol)を添加した。得られた無色溶液を室温で100分間撹拌し、その後揮発性物質を窒素流下で蒸発させた。ガム状残渣を水(1mL)に再溶解させ、薄ピンク色溶液を得て、揮発性物質を窒素流下で再度蒸発させて黄色固体を得た。残渣を水(5mL)に再溶解させ、桃色の透明溶液(そのpHは14であることが確認された)を得、この溶液に2M塩酸(2mL)を添加して、黄色沈殿物(上清pHは1であることが確認された)が得られた。沈殿物を濾過し、濾過された固体をさらなる2M塩酸(4mL)で洗浄し、その後エーテル(約10mL)を用いて固体を洗浄しようとしたが、固体はエーテルに溶解した。エーテル相を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、所望の生成物を橙色固体、2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸(91.7mg、0.28mmol、収率94％)として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.65分、[MH]＋=324.4。
【０６８６】
中間体161：tert-ブチル2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０６８７】
【化１８１】
2019510782.tif 000188
【０６８８】
2mLマイクロウェーブバイアル中で、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(30mg、0.105mmol)を、1,4-ジオキサン(1mL)及び水(0.5mL)中の4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン(50mg、0.21mmol)、炭酸カリウム(50mg、0.36mmol)及びPdCl2(dppf)(15.42mg、0.02mmol)と合わせた。これを110℃で40分間加熱した。この溶液を、セライトを通して濾過し(溶出液EtOAc(10mL))、次いで水で洗浄した。水相をEtOAcで3回抽出した。その後、合わせた有機相を乾燥させ、真空中で濃縮した。これをSiO2上のクロマトグラフィー(シクロヘキサン中0〜50％酢酸エチル、次いでシクロヘキサン中30〜100％(25％EtOH/EtOAc)で溶出するBiotage SNAP 10gカートリッジ)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、tert-ブチル2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(40mg、0.10mmol、収率93％)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.63分、[MH]+=367.3。
【０６８９】
中間体162：2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６９０】
【化１８２】
2019510782.tif 000189
【０６９１】
tert-ブチル2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(40mg、0.11mmol)のDCM(0.5mL)中溶液に、2,2,2-トリフルオロ酢酸(0.3mL、3.89mmol)を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、次いでMeOH(5mL)及びDCM(5mL)を添加し、溶媒を真空中で除去してその後エーテル(10mL)を添加し、溶媒を真空中で除去して、2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(67mg、0.11mmol、収率99％、純度50％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.41分、[MH]＋=311.2。
【０６９２】
中間体163：ベンジル4-((4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート
【０６９３】
【化１８３】
2019510782.tif 000190
【０６９４】
2mLマイクロウェーブバイアル中で、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(110mg、0.386mmol)を、1,4-ジオキサン(1mL)及び水(0.5mL)中のベンジル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-1-カルボキシレート(285.5mg、0.602mmol)、炭酸カリウム(183mg、1.321mmol)及びPdCl2(dppf)(56.5mg、0.077mmol)と合わせた。これを120℃で40分間加熱した。次いで、溶液を、セライト(登録商標)(溶出液はEtOAc)を通して濾過し、乾燥させ、その後濃縮した。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10g、0〜30％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、ベンジル4-((4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート(138.7mg、0.249mmol、収率64％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.44分、[MH]＋502.2。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.33(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.55-7.77(m, 2 H) 7.25-7.45(m, 5 H) 7.11(t, J=7.2 Hz, 1 H) 6.84(d, J=7.6 Hz, 1 H) 5.21(br. s., 2 H) 4.18(s, 2 H) 3.97(t, J=8.7 Hz, 2 H) 2.92-3.05(m, 5 H) 1.56(s, 9 H)。交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０６９５】
中間体164：2-((1-((ベンジルオキシ)カルボニル)インドリン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０６９６】
【化１８４】
2019510782.tif 000191
【０６９７】
ベンジル4-((4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート(138.7mg、0.221mmol)のDCM(4mL)中溶液に、2,2,2-トリフルオロ酢酸(0.7mL、9.09mmol)を添加し、反応混合物を4時間撹拌した。さらなる2,2,2-トリフルオロ酢酸(1mL、12.98mmol)を添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、褐色固体を得た。この褐色固体にEtOAc(10mL)を添加し、次いで得られた混合物を重炭酸ナトリウム溶液で5回塩基洗浄し、その後水相を2M HClの溶液(10mL)で中和し、次いでこれをEtOAcで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(固体が出現しため溶液を濾過した)、その後真空中で濃縮し、褐色油状物：2-((1-((ベンジルオキシ)カルボニル)インドリン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(109mg、0.196mmol、収率88％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.18分、[MH]＋446.2。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.40(d, J=1.0 Hz, 1 H) 7.78(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.68(br. s., 1 H) 7.25-7.44(m, 5 H) 7.12(br. t, J=7.0, 7.0 Hz, 1 H) 6.86(d, J=7.8 Hz, 1 H) 5.22(br. s., 2 H) 4.20(s, 2 H) 3.99(t, J=8.7 Hz, 2 H) 2.93-3.06(m, 5 H)。交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０６９８】
中間体165：ベンジル4-(1-(4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)ビニル)インドリン-1-カルボキシレート
【０６９９】
【化１８５】
2019510782.tif 000192
【０７００】
ベンジル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-1-カルボキシレート(453.8mg、1.197mmol)、tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(393mg、0.979mmol)、[1,3-ビス(2,6-ジイソプロピルフェニル)イミダゾール-2-イリデン](3-クロロピリジル)パラジウム(II)ジクロリド(PEPPSI-iPr)(69.0mg、0.10mmol)及びリン酸三カリウム(640.9mg、3.02mmol)の1,4-ジオキサン(6mL)及び水(3mL)中混合物を窒素で5分間脱気し、その後、これを室温で光を排除しながら(フラスコをホイルに包んだ)窒素下に23時間撹拌した。室温に冷却して46時間静置した後、混合物を2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、これをその後酢酸エチル(3×10mL)で洗浄した。合わせた濾液を水(20mL)及び飽和ブライン溶液(10mL)の混合物で洗浄し、水相を酢酸エチル(15mL)で逆抽出した。合わせた有機相を水(10mL)及び飽和ブライン溶液(50mL)のさらなる混合物で洗浄し、有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過することにより乾燥させた。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をジクロロメタン(約6mL)に再溶解させ、溶液を25g SNAP Ultraシリカカートリッジに適用した。サンプルを、シクロヘキサン中0〜30％酢酸エチルの勾配で溶出するBiotage SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を真空中で乾燥させ、ベンジル4-(1-(4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)ビニル)インドリン-1-カルボキシレート(230.0mg、0.45mmol、収率46％)を薄黄色のパリパリした泡状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.49分、[MH]＋についてm/z=514。
【０７０１】
中間体166：(±)-tert-ブチル2-(1-(インドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７０２】
【化１８６】
2019510782.tif 000193
【０７０３】
(±)-ベンジル4-(1-(4-(tert-ブトキシカルボニル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)ビニル)インドリン-1-カルボキシレート(227.5mg、0.44mmol)のエタノール(10mL)中溶液を、Thales「H-Cube」フロー装置をフル水素モードにおいて20℃で用いて、10％Pd/C触媒カートリッジ上で水素化した。この混合物を、2回目に同じ条件下でH-Cubeに通過させ、溶媒を真空中で蒸発させ、薄黄色のパリパリした泡状物を得た。この生成物を、ジクロロメタン(約3mL)に再溶解させ、シクロヘキサンで予め湿らせた10g SNAP Ultraシリカカートリッジのトップに適用した。このカートリッジを、Biotage SP4フラッシュクロマトグラフィーを用いて、シクロヘキサン中0〜100％酢酸エチルの勾配で溶出した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させて残渣を得、これをジクロロメタン(約4mL)に再溶解させて風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(±)-tert-ブチル2-(1-(インドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(145.8mg、0.38mmol、収率86％)を薄黄色結晶固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.81分、[MH]＋についてm/z=382。
【０７０４】
中間体167：(±)-2-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７０５】
【化１８７】
2019510782.tif 000194
【０７０６】
(±)-tert-ブチル2-(1-(インドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(145.8mg、0.38mmol)の水(2mL)及びテトラヒドロフラン(2mL)中溶液に、水酸化ナトリウム(196.3mg、4.91mmol)を添加し、室温で105分間撹拌した。メタノール(2mL)を添加し、室温での撹拌をさらに90分間続けた。混合物を窒素流下で濃縮し、残渣を2M水性塩酸(5mL)と酢酸エチル(5mL)とに分配した。相を分離し(水相pHを確認し、約1であることがわかった)、水相をさらなる酢酸エチル(3×5mL)で抽出した。水相を窒素流下で蒸発させ、残渣をメタノール(4mL)及び水(2mL)に再溶解させ、溶液をメタノールで予め湿らせた「Isolute」アミノプロピルイオン交換カートリッジに適用した。このカートリッジをメタノール(3×20mL)で溶出し、その後水(2×20mL)、次いで2M塩酸(2×20mL)で溶出した。中性画分の溶媒を窒素流下で蒸発させ、その後残渣をメタノール／水の3:1混合物(3mL)に懸濁させ、上清を除去し、MDAP(3×1mL注入；ギ酸法)により精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をメタノール(約6mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(±)-2-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(110.8mg、0.31mmol、収率82％)を無色粘性固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.84分、[MH]＋についてm/z=354。
【０７０７】
中間体168：tert-ブチル2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７０８】
【化１８８】
2019510782.tif 000195
【０７０９】
tert-ブチル2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(110mg、0.31mmol)及びパラジウム(II)アセテート(62.4mg、0.28mmol)を、THF(1mL)に溶解させ、N2下にドライアイス(cardice)/アセトン浴中で-78℃に冷却した。LiHMDS(THF中1M、0.95mL、0.950mmol)を滴下添加し、反応混合物を45分間撹拌したままにした。MeI(0.03mL、0.480mmol)を添加し、得られた混合物を2時間撹拌した。さらなるMeI(0.01mL、0.160mmol)を添加し、得られた混合物を1時間撹拌した。MeI(0.02mL、0.320mmol)を反応混合物に添加し、得られた混合物を1.5時間撹拌した。次いで、溶液を温め、水(2mL)を添加して反応混合物の第1バッチを得た。
【０７１０】
別のフラスコ中で、tert-ブチル2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(39mg、0.11mmol)をTHF(0.35mL)に溶解させ、N2下にドライアイス(cardice)/アセトン浴中で-78℃に冷却した。LiHMDS(THF中1M、0.33mL、0.330mmol)を滴下添加し、反応混合物を45分間撹拌したままにした(色変化：無色から黄色、それから暗緑色)。MeI(0.06mL、0.320mmol、0.06mL THF中0.03mL MeIのストック溶液由来)を添加し(色変化：暗緑色から黄色溶液)、得られた混合物を1時間撹拌して、反応混合物の第2バッチを得た。
【０７１１】
反応混合物を合わせ、水(10mL)及びEtOAc(3×10mL)で抽出した。合わせた有機相を疎水性フィルターで乾燥させ、次いで溶媒を真空中で除去した。粗生成物を、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAPカラム(10g)、溶出液は0〜40％酢酸エチル/シクロヘキサン)により精製した。合わせた所望の画分を真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(57.3mg、0.15mmol、収率32％)を橙色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.31分、[MH]＋=371.3。
【０７１２】
中間体169：2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７１３】
【化１８９】
2019510782.tif 000196
【０７１４】
tert-ブチル2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(57.3mg、0.16mmol)のDCM(0.5mL)中溶液に、2,2,2-トリフルオロ酢酸(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応混合物を週末かけて撹拌した。2,2,2-トリフルオロ酢酸(0.5mL、6.49mmol)のさらなる部分を添加し、反応混合物を2時間撹拌した。溶媒を真空中で除去して、2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(81mg、0.14mmol、92％、純度55％)を黒色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.00分、[MH]＋=315.2。
【０７１５】
中間体170：tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1フェニルプロピル)イソニコチネート
【０７１６】
【化１９０】
2019510782.tif 000197
【０７１７】
tert-ブチル2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(100mg、0.29mmol)をTHF(0.5mL)に溶解させ、N2下にドライアイス(cardice)/アセトン浴中で-78℃に冷却した。LiHMDS(0.7mL、0.700mmol、THF中1M)を滴下添加し、反応混合物を35分間撹拌したままにした。ヨードエタン(0.04mL、0.50mmol)を添加し、得られた混合物を1時間撹拌し、次いで温めた。反応混合物を室温で1.5時間撹拌した。水(0.1mL)を添加した。反応を水(10mL)で洗浄し、EtOAc(3×15mL)で3回抽出し、その後合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させて、次いで真空中で濃縮した。これを、シクロヘキサン中0〜30％酢酸エチルで溶出するシリカカラム(10g)上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。合わせた所望の画分を真空中で濃縮して、tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルプロピル)イソニコチネート(75.3mg、0.20mmol、収率69％)が無色油状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.39分、[MH]＋=355.3。
【０７１８】
中間体171：2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルプロピル)イソニコチン酸
【０７１９】
【化１９１】
2019510782.tif 000198
【０７２０】
tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルプロピル)イソニコチネート(75mg、0.212mmol)をTHF(2mL)に溶解させ、塩酸(2M、1.1mL、2.20mmol)を添加した。混合物を還流下で一晩撹拌した。さらなる1mLのHCl(5M)を添加し、得られた混合物を還流下で22時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させて白色固体、2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルプロピル)イソニコチン酸(80mg、0.20mmol、収率95％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.08分、[MH]＋=299.2。
【０７２１】
中間体172：tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルビニル)イソニコチネート
【０７２２】
【化１９２】
2019510782.tif 000199
【０７２３】
(1-フェニルビニル)ボロン酸(2.62g、17.73mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)、tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(4g、14.78mmol、例えばAnichemから市販されているもの)、リン酸三カリウム(9.41g、44.3mmol)及びPEPPSI iPr(1.004g、1.478mmol)を、1,4-ジオキサン(24mL)及び水(12mL)に室温で溶解させ、窒素下で脱気した。得られた溶液を70℃で2時間撹拌した。反応を室温に冷却し、水(20mL)で希釈し、DCM(3×25mL)で抽出した。合わせた有機物を疎水性フリットに通過させ、真空中で濃縮し、黄色泡状物を得た。これをSiO2上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し(Biotage SNAP 100gカートリッジ、0〜60％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)、tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルビニル)イソニコチネート(4.06g、11.40mmol、収率77％、純度95％)を薄黄色泡状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.35分、[MH]＋=339.2。
【０７２４】
中間体173：tert-ブチル2-(2-ヒドロキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７２５】
【化１９３】
2019510782.tif 000200
【０７２６】
丸底フラスコ中で、(2,3-ジメチルブタン-2-イル)ボラン(THF中0.66M、30.0mL、19.80mmol、その調製は文献：例えば、H. C. Brown and E. Negishi, J. Am. Chem. Soc., 94, 3567(1972)に記載されている)を、tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルビニル)イソニコチネート(3.94g、9.90mmol)に、窒素下で0℃にて添加した。反応混合物を室温で1.5時間撹拌し、次いで水(30mL)を添加した。過酸化水素(水中35％w/w、24.26mL、277mmol)及び水酸化ナトリウム(2M、24.74mL、49.5mmol)を0℃で添加した。反応混合物を0℃で25分間撹拌し、その後温めた。次いで、反応混合物を2時間撹拌した。クエン酸(10％、30mL)及びEtOAc(30mL)を添加した。有機層を分離し、水性層をEtOAc(3×50mL)のさらなる部分で抽出した。合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させ、その後真空中で濃縮した。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 50g、溶出液：0〜100％EtOAc/シクロヘキサン)により精製した。合わせた所望の画分を真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(2-ヒドロキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.15g、3.07mmol、収率31％、純度95％)を得た。。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.08分、[MH]＋=357.3。
【０７２７】
中間体174：tert-ブチル2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７２８】
【化１９４】
2019510782.tif 000201
【０７２９】
tert-ブチル2-(2-ヒドロキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(80mg、0.22mmol)及びN1,N1,N8,N8-テトラメチルナフタレン-1,8-ジアミン(144mg、0.67mmol)をDCM(1mL)に溶解させた。トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート(100mg、0.67mmol)をゆっくりと加え、反応混合物を窒素下で30時間撹拌した。N1,N1,N8,N8-テトラメチルナフタレン-1,8-ジアミン(144mg、0.67mmol)及びトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート(100mg、0.67mmol)を添加し、反応混合物を窒素下で20時間撹拌した。重炭酸ナトリウム溶液(10mL)をDCM(10mL)と一緒に添加した。層を分離し、水相をDCM(2×10mL)のさらなる部分で抽出した。合わせた有機相を疎水性フリット上で乾燥させ、次いで真空中で濃縮した。これをSiO2上のクロマトグラフィーにより精製した(Biotage SNAP 10g、溶出液：0〜30％EtOAc/シクロヘキサン)。合わせた所望の画分を真空中で濃縮し、粗表題生成物を得た。2M HClの溶液(10mL)をDCM(10mL)と一緒に添加した。層を分離し、水相をDCM(2×10mL)のさらなる部分で抽出した。合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させ、次いで真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(42mg、0.10mmol、収率45％、純度89％)をピンク色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.24分、[MH]＋=371.4。
【０７３０】
中間体175：2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７３１】
【化１９５】
2019510782.tif 000202
【０７３２】
tert-ブチル2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(38mg、0.09mmol、89重量％)のDCM(1mL)中溶液に、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応混合物を3時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、次いでDCM(5mL)を添加し、反応混合物を真空中で濃縮した。エーテル(5mL)を添加し、反応混合物を真空中で濃縮し(4回)、2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(73mg、0.08mmol、収率89％、純度35％)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.91分、[MH]＋=315.2。
【０７３３】
中間体176：tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)ビニル)イソニコチネート
【０７３４】
【化１９６】
2019510782.tif 000203
【０７３５】
tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(350mg、0.72mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インドリン-2-オン(276.9mg、1.07mmol)、[1,3-ビス(2,6-ジイソプロピルフェニル)イミダゾール-2-イリデン](3-クロロピリジル)パラジウム(II)ジクロリド(PEPPSI-iPr)(71.0mg、0.10mmol)及びリン酸三カリウム(566.8mg、2.67mmol)の1,4-ジオキサン(6mL)及び水(3mL)中溶液を、窒素下で室温にて暗中で19時間撹拌した。反応混合物を、2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、このカートリッジを酢酸エチル(約10mL)で洗浄した。濾液に水(5mL)及びブライン(5mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×10mL)で抽出し、有機相を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させて、粘性の褐色固体(556.7mg)を得た。これをDMSO(6mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)ビニル)イソニコチネート(157.7mg、0.40mmol、収率56％)を淡黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.05分、[MH]＋=394.4。
【０７３６】
中間体177：(+/-)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチネート
【０７３７】
【化１９７】
2019510782.tif 000204
【０７３８】
tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)ビニル)イソニコチネート(260mg、0.66mmol)の酢酸エチル中(20mL)及びエタノール(20mL)中溶液を、Thales H-Cube装置を20℃にてフルH2モードで用いて、10％炭素上パラジウム触媒カートリッジ上1通過で水素化した。溶液を真空中で蒸発させ、(±)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチネート(257.1mg、0.65mmol、収率98％)を黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.05分、[MH]＋=396.4。
【０７３９】
中間体178：(+/-)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチン酸
【０７４０】
【化１９８】
2019510782.tif 000205
【０７４１】
(±)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチネート(257mg、0.65mmol)を、DCM(8mL)中の(±)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチネート(約10mg)の第2粗バッチと合わせた。トリフルオロ酢酸(1.0mL、12.98mmol)を滴下添加した。得られた橙色溶液を室温で窒素下に合計2日間撹拌し、この間、さらなるDCM(4.0mL、7.5時間後)及びトリフルオロ酢酸(0.5mL、6.49mmol、23.75時間後)を添加した。揮発性物質を真空中で蒸発させて暗赤色ガム状物を得、これをアセトニトリル(3×5mL)と共沸し、揮発性物質を真空中で蒸発させて粘性のピンク色固体を得た。これに水(5mL)及びDCM(5mL)を添加し、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを用いて層を分離した。水性層をさらなるDCM(2×5mL)で洗浄し、真空中で蒸発させて褐色ガム状物を得た。これをジエチルエーテル(5mL)と共沸し、揮発性物質を真空中で蒸発させて、(±)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチン酸(158.9mg、0.40mmol、収率61％)を褐色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.54分、[MH]＋=340.2。
【０７４２】
中間体179：(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７４３】
【化１９９】
2019510782.tif 000206
【０７４４】
0℃のtert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(118mg、0.447mmol)のTHF(1.5mL)中溶液に、臭化フェニルマグネシウム(THF中1M、2mL、2mmol)を滴下添加した。反応混合物を2時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液上に注ぎ、EtOAc(20mL×3)で抽出した。有機層をMgSO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10g、0〜60％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を濃縮し、tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(43mg、0.107mmol、収率24％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.09分、[MH]＋=343.3。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.38(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.05(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.42-7.47(m, 2 H) 7.22-7.36(m, 3 H) 5.95(s, 1 H) 2.99(s, 3 H) 1.60(s, 9 H)。交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０７４５】
中間体180：tert-ブチル2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７４６】
【化２００】
2019510782.tif 000207
【０７４７】
3-フルオロ-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール(330mg、1.26mmol)、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(300mg、1.054mmol)、PdCl2(dppf)(77mg、0.11mmol)及び炭酸カリウム(437mg、3.16mmol)を、窒素で10分間脱気した。1,4-ジオキサン(4mL)及び水(2mL)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。さらなるPdCl2(dppf)(77mg、0.11mmol)を再度添加し、反応をさらに1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をDCM(15mL)にとり、水(15mL)及びブライン(15mL)で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、最小限のDCM中でSNAP ULTRAシリカカートリッジ(25g)に適用し、シクロヘキサン中0〜30％EtOAcで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、所望の生成物、tert-ブチル2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(134mg、0.35mmol、収率33％)がクリーム色固体として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.23分、[MH]＋=384.4。
【０７４８】
中間体181：2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７４９】
【化２０１】
2019510782.tif 000208
【０７５０】
tert-ブチル2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(203mg、0.53mmol)をメタノール(2mL)及びTHF(2mL)にとった。NaOH(2.65mL、5.29mmol、2M)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を水に溶解させ、HClを用いてpH2に酸性化した。沈殿物を濾別し、2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(154mg、0.47mmol、収率89％)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.62分、[MH]＋=328.2。
【０７５１】
中間体182：tert-ブチル2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７５２】
【化２０２】
2019510782.tif 000209
【０７５３】
2-(4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-1-イル)エタノール(732mg、2.55mmol)、tert-ブチル2-(クロロメチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(653mg、2.29mmol)、PdCl2(dppf)(187mg、0.26mmol)及び炭酸カリウム(1057mg、7.65mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加した。1,4-ジオキサン(10mL)及び水(5mL)を添加し、反応容器を密封して、Biotage Initiatorマイクロウェーブ中で30分間110℃に加熱した。冷却後、セライトを通して反応を濾過し、酢酸エチル(15mL)で洗浄した。濾液を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(20mL)にとり、水(20mL)及びブライン(20mL)で洗浄した。有機相を、セライトを通して濾過し、その後疎水性フリットを通してさらに濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(3mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させて、所要の生成物、tert-ブチル2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(149mg、0.36mmol、収率14％)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.13分、[MH]＋=410.4。
【０７５４】
中間体183：2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７５５】
【化２０３】
2019510782.tif 000210
【０７５６】
tert-ブチル2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(149mg、0.36mmol)をDCM(2mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で3時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮し、生成物、2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(129mg、0.364mmol、収率100％)を次のステップで直接使用した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.60分、[MH]＋=354.3。
【０７５７】
中間体184：2-(メチルカルバモイル)-6-((3-(2,2,2-トリフルオロアセチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)イソニコチン酸
【０７５８】
【化２０４】
2019510782.tif 000211
【０７５９】
TFA(5mL、64.9mmol)を、tert-ブチル2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.32g、3.61mmol)のDCM(10mL)中溶液に添加し、溶液を一晩撹拌し、次いで真空中で蒸発させて暗赤色ガム状物を得た。粗生成物をメタノール(20mL)に溶解させて静置し、濃ベージュ色固体沈殿物を得、これを乾燥させて、2-(メチルカルバモイル)-6-((3-(2,2,2-トリフルオロアセチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)イソニコチン酸(550mg、1.36mmol、収率38％)を得た。化合物を次のステップへ持ち越した。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.97分、[MH]＋=406.2。
【０７６０】
中間体185：(+/-)-tert-ブチル2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７６１】
【化２０５】
2019510782.tif 000212
【０７６２】
トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート(1.426g、9.64mmol)を、室温のtert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.1g、3.21mmol)及びN1,N1,N8,N8-テトラメチルナフタレン-1,8-ジアミン(2.066g、9.64mmol)のDCM(10mL)中混合物に添加し、混合物を4時間撹拌し、次いでEtOAc(50mL)で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液(50mL)及び0.5M HCl(50mL)で洗浄した。有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を、0〜60％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するシリカカラム(25g)上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(+/-)-tert-ブチル2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(440mg、1.23mmol、収率38％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.25分、[MH]＋=357.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.51(s, 1 H) 8.18(s, 1 H) 7.91(br. s., 1 H) 7.40-7.45(m, 2 H) 7.36(t, J=7.3 Hz, 2 H) 7.26-7.32(m, 1 H) 5.42(s, 1 H) 3.46(s, 3 H) 3.05(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.62(s, 9 H)。
【０７６３】
中間体186：(+/-)-2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７６４】
【化２０６】
2019510782.tif 000213
【０７６５】
tert-ブチル2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(400mg、1.12mmol)をメタノールに溶解させ、次いでNaOH(2mL、4.00mmol、2M)を添加し、混合物を3時間室温で撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣を水(10mL)に溶解させ、2M HClでpH4に酸性化し、その後DCM(2×20mL)で抽出した。溶媒を乾燥させて真空中で蒸発させ、2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(325mg、1.08mmol、収率96％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.60分、[MH]＋=301.2。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.71(s, 1 H) 8.30(s, 1 H) 7.90-7.99(m, 1 H) 7.41-7.47(m, 2 H) 7.37(t, J=7.5 Hz, 2 H) 7.28-7.33(m, 1 H) 5.45(s, 1 H) 3.48(s, 3 H) 3.08(d, J=4.9 Hz, 3 H)。1つの交換可能なプロトンは観察されなかった。
【０７６６】
中間体187：tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７６７】
【化２０７】
2019510782.tif 000214
【０７６８】
tert-ブチル2-(1-ブロモビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(207.9mg、0.24mmol)、2-(2-メトキシフェニル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(97.4mg、0.42mmol)、[1,3-ビス(2,6-ジイソプロピルフェニル)イミダゾール-2-イリデン](3-クロロピリジル)パラジウム(II)ジクロリド(20.2mg、0.03mmol)及びリン酸三カリウム(189.5mg、0.89mmol)の1,4-ジオキサン(3mL)及び水(1.5mL)中混合物を、窒素で5分間脱気した。混合物を室温にて暗中で窒素下に21時間撹拌した。反応混合物を、10gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(約20mL)で洗浄した。濾液に水(20mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、有機相を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、DMSO(2mL)に再溶解させてMDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(36.7mg、0.10mmol、収率41％)を褐色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.34分、[MH]+=369.3。
【０７６９】
中間体188：(+/-)-tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７７０】
【化２０８】
2019510782.tif 000215
【０７７１】
tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)ビニル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(73mg、0.20mmol)の酢酸エチル(5mL)中溶液を、Thales H-Cube装置を20℃にてフルH2モードで用いて、第1通過の後45分間当該装置を通して再循環させながら10％炭素上パラジウム触媒カートリッジ上で水素化した。反応混合物を真空中で蒸発させ、(+/-)-tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(74.5mg、0.20mmol)を黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.36分、[MH]＋=371.3。
【０７７２】
中間体189：(+/-)-2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７７３】
【化２０９】
2019510782.tif 000216
【０７７４】
(+/-)-tert-ブチル2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(74.5mg、0.20mmol)及び水酸化ナトリウム(70.1mg、1.75mmol)のメタノール(1mL)及びテトラヒドロフラン(1mL)中混合物を、室温で1.25時間撹拌した。揮発性物質を窒素流下で蒸発させた。これに水(5mL)及び2M水性HCl(約1mL)を添加し、これにより淡黄色沈殿物が得られた。懸濁液を濾過し、濾液を酢酸エチル(5mL)で抽出した。この固体沈殿物を有機抽出物と合わせ；この溶液を窒素流下で蒸発させて、残渣を真空中で乾燥させ、(+/-)-2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(56.1mg、0.18mmol、収率89％)を粘性の橙色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.69分、[MH]＋=315.2。
【０７７５】
中間体190：(S*)-2-((3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７７６】
【化２１０】
2019510782.tif 000217
【０７７７】
(3-フルオロフェニル)マグネシウムブロミド(10.41mL、10.41mmol、THF中1M)を、-78℃のtert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.1g、4.16mmol)のTHF中溶液に滴下添加し、混合物を30分間撹拌し、次いで-20℃に温め、その後混合物を飽和塩化アンモニウム溶液(10mL)でクエンチし、EtOAc(20mL)で抽出した。有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させて橙色ガム状物を得、これを0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するシリカカラム(50g)上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空中で蒸発させ、tert-ブチル2-((3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1.25g、3.47mmol、収率83％)を無色ガム状物として得た。不純な生成物をメタノールに溶解させてNaOH(6mL、12.00mmol、2M水性)を添加し、次いで混合物を室温で週末かけて静置した。溶媒をその元の体積の半分まで蒸発させ、得られた溶液を2M HClでpH3に酸性化し、その後2時間静置して濃沈殿物を得た。これを濾過により回収し、水で洗浄して、次いで固体を真空オーブン中で乾燥させて、2-((3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(0.71g、2.33mmol、収率56％)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.52分、[MH]＋=305.4。
【０７７８】
中間体191：(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７７９】
【化２１１】
2019510782.tif 000218
【０７８０】
o-トリルマグネシウムブロミド(エーテル中2M、4.73mL、9.46mmol)を、-78℃のtert-ブチル2-ホルミル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(1000mg、3.78mmol)のTHF中溶液に添加し、混合物を-78℃で30分間撹拌し、次いで室温に温めた。塩化アンモニウム溶液(5mL)を滴下添加し、その後混合物を水(20mL)で希釈してEtOAc(2×20mL)で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させた。粗生成物を、0〜100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出する50gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、生成物含有画分を真空中で蒸発させて、(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(純度80重量パーセント、0.74g、1.66mmol、収率44％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.14.分、[MH]＋=357.3。
【０７８１】
中間体192：(+/-)-2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７８２】
【化２１２】
2019510782.tif 000219
【０７８３】
NaOH(2M、2.491mL、4.98mmol)を、室温の(+/-)-tert-ブチル2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(80重量％、0.74g、1.66mmol)のメタノール(10mL)中溶液に添加し、溶液を2時間撹拌し、次いで真空中で蒸発させて、残渣を水(20mL)とエーテル(20mL)とに分配した。水性層を2M HClでpH4に酸性化し、その後EtOAc(2×20mL)で抽出した。混合物は界面に固体を含有しており、これを濾過により回収し、EtOAcで洗浄して真空オーブン中で乾燥させ、(+/-)-2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(220mg、0.73mmol、収率44％)を無色固体として得た。濾液を分離漏斗に移し、有機層を分離して第1EtOAc抽出物(20mL、上記)と合わせ、その後合わせた有機物を乾燥させて真空中で蒸発させ、さらなる2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(170mg、0.566mmol、収率34％)を無色泡状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.54分、[MH]＋=301.2。
【０７８４】
中間体193：tert-ブチル2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート
【０７８５】
【化２１３】
2019510782.tif 000220
【０７８６】
tert-ブチル2-クロロ-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(276mg、1.02mmol)、(4-フルオロベンジル)亜鉛(II)クロリド(2100μL、1.05mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(185mg、0.26mmol)をTHF(600μL)に溶解させ、マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。さらなる(4-フルオロベンジル)亜鉛(II)クロリド(1600μL、0.80mmol、THF中0.5M)を添加し、その後マイクロウェーブ中で100℃にてさらに加熱した。反応混合物を、セライトを通して濾過した(溶出液はEtOAc)。溶媒を真空中で除去し、1.422gの粗黒色油状物を得た。これを数滴のメタノールと共にDCMに溶解させ、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 50g、0〜40％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(325mg、0.85mmol、収率83％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.27分、[MH]＋=345.1。
【０７８７】
中間体194：2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０７８８】
【化２１４】
2019510782.tif 000221
【０７８９】
tert-ブチル2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(325mg、0.94mmol)の1,4-ジオキサン(2.4mL)中溶液に、LiOH(49mg、2.05mmol)を添加し、その後水(2.4mL)を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、その後水に溶解させた。この溶液に、pH4が達成されるまで酢酸を添加した。次いで、溶液を水とEtOAcとに分配した。層を分離し、その後2部のEtOAc(2×15mL)を用いて2回のさらなる水性抽出を行った。有機層を合わせ、乾燥させて(疎水性フリット)真空中で濃縮し、2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(262mg、0.82mmol、収率87％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.94分、[MH]＋=289.1。
【０７９０】
中間体195：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０７９１】
【化２１５】
2019510782.tif 000222
【０７９２】
0℃のN4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(191mg、0.468mmol、90重量％)のDCM(8mL)中溶液に、塩化チオニル(0.25mL、3.43mmol)を滴下添加した。次いで、反応混合物を室温で一晩撹拌した。SOCl2(0.1mL)を添加し、得られた混合物を1時間撹拌し、その後真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(300mg、0.43mmol、収率91％、純度55％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.94分、[MH]＋=386.2。
【０７９３】
中間体196：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０７９４】
【化２１６】
2019510782.tif 000223
【０７９５】
塩化リチウム(101mg、2.38mmol)を有する乾燥したN2下の丸底フラスコ中に、2-ブロモピリジン(0.289mL、2.97mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)及びTHF(0.5mL)を室温で添加した。次いで、反応混合物を室温で30分間撹拌し、その後塩化イソプロピルマグネシウム溶液(THF中2M、1.48mL、2.96mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)を添加し、得られた混合物を45分間撹拌し、ピリジン-2-イルマグネシウムクロリドを得た(収率は100％であると考えられ、反応混合物を次のステップにおいて直接粗で使用した)。窒素下で0℃のピリジン-2-イルマグネシウムクロリド(410mg、2.249mmol)のTHF(0.5mL)中溶液に、THF(2mL)中のN4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(180mg、0.56mmol、90重量％)を滴下添加した。反応混合物を室温に温め、2時間撹拌した。塩化アンモニウム水溶液(0.5mL)を添加した。反応混合物を真空中で濃縮した。MeOH(2mL)を添加し、これをMDAP(高pH法)により精製した。所望の画分を濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(62mg、0.16mmol、29％収率)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.46分、[MH]＋=369.3。
【０７９６】
中間体197：(±)-tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０７９７】
【化２１７】
2019510782.tif 000224
【０７９８】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(41.4mg、0.15mmol)、(±)-tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(45.4mg、0.16mmol)及びHATU(95.8mg、0.25mmol)のDMF(1.5mL)中溶液に、DIPEA(0.080mL、0.46mmol)を添加した。混合物を室温で50分間撹拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで総体積2mLに希釈し、MDAP(2×1mL注入；ギ酸法)により直接精製して、所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタンに懸濁させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させて、(±)-tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(52.3mg、0.10mmol、収率64％)を無色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.26分、[MH]＋についてm/z=531。
【０７９９】
中間体198：(S)-tert-ブチル2-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０８００】
【化２１８】
2019510782.tif 000225
【０８０１】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(100mg、0.35mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.184mL、1.06mmol)及びHATU(201mg、0.53mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(129mg、0.528mmol)を添加し、反応を一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(10mL)にとり、重炭酸ナトリウム溶液(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、シクロヘキサン中0〜75％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、表題化合物(108mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.22分、[MH]＋=511.4。
【０８０２】
中間体199：(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート
【０８０３】
【化２１９】
2019510782.tif 000226
【０８０４】
2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(160mg、0.56mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.295mL、1.69mmol)、HATU(321mg、0.84mmol)及び(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(167mg、0.84mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(10mL)にとり、水性重炭酸ナトリウム溶液(10mL)を用いて抽出した。有機相をブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して表題化合物(295mg)が得られ、これを精製することなく次のステップで使用した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.19分、[MH]＋=465.4。
【０８０５】
中間体200：ベンジル4-((4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イルカルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート
【０８０６】
【化２２０】
2019510782.tif 000227
【０８０７】
2-((1-((ベンジルオキシ)カルボニル)インドリン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(122.1mg、0.27mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(55.4mg、0.41mmol)及びHATU(161.3mg、0.42mmol)の混合物に、DIPEA(0.168mL、0.96mmol)及びDMF(2mL)を添加し、混合物を室温で70分間撹拌した。混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで3mLとして、その後MDAP(1×3mL注入；高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、残渣をジクロロメタン(約4mL)に再溶解させ、合わせて風袋したバイアルに移した。溶媒を窒素流下で蒸発させ、真空中で乾燥させて、ベンジル4-((4-(((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)カルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート(101.3mg、0.19mmol、70％収率)を黄色のパリパリした泡状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.12分、[MH]＋についてm/z= 527。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.17(s, 1 H) 7.93-8.02(m, 1 H) 7.76-7.92(m, 1 H) 7.72(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.31-7.48(m, 5 H) 7.09-7.22(m, 1 H) 6.82(d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.63(br. s., 1 H) 5.28(br. s., 2 H) 4.14(s, 2 H) 4.00-4.09(m, 4 H) 3.76(d, J=8.3 Hz, 2 H) 2.94-3.08(m, 5 H) 2.75(br. d, J=2. 2 Hz, 1 H) 1.89(s, 2 H)。
【０８０８】
中間体201：(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)
中間体202：(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)
【０８０９】
【化２２１】
2019510782.tif 000228
【０８１０】
実施例117(84.4mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：2×1mLの溶液をカラム上に注入した[20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01]。注入総数=2。23.5〜27分からの画分をまとめてピーク1と標識した。29-35分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分の各セットを真空中で濃縮し、その後風袋したバイアルに移し、真空中で乾燥させた。
【０８１１】
ピーク1に対応する画分を回収し、(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(35.0mg、0.06mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.30分間、[MH]＋についてm/z=545。
ピーク2に対応する画分を回収し、(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(39.4mg、0.07mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.30分間、[MH]＋についてm/z=545。
【０８１２】
中間体203：(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)
中間体204：(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)
【０８１３】
【化２２２】
2019510782.tif 000229
【０８１４】
実施例118(74.6mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：2mLの溶液をカラム上に注入した[40％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01]。注入総数=1。12.5〜14.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。18〜23分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分の各セットを真空中で濃縮し、その後風袋したバイアルに移し、真空中で乾燥させた。
【０８１５】
ピーク1に対応する画分を回収し、(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(31.8mg、0.06mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.27分、[MH]＋についてm/z=531。
【０８１６】
ピーク2に対応する画分を回収し、(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(32.8mg、0.06mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.27分、[MH]＋についてm/z=531。
【０８１７】
中間体205：(S*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)
中間体206：(R*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)
【０８１８】
【化２２３】
2019510782.tif 000230
【０８１９】
実施例119(59.2mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：2×1mLの溶液をカラム上に注入した[20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01]。注入総数=2。23〜26分からの画分をまとめてピーク1と標識した。28.5〜33分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分の各セットを真空中で濃縮し、その後風袋したバイアルに移し、真空中で乾燥させた。
【０８２０】
ピーク1に対応する画分を回収し、(S*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(24.9mg、0.05mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.28分、[MH]＋についてm/z=531。
【０８２１】
ピーク2に対応する画分を回収し、(R*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(25.7mg、0.05mmol)が無色ガラス状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.28分、[MH]＋についてm/z=531。
【０８２２】
中間体207：(+/-)-tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート
【０８２３】
【化２２４】
2019510782.tif 000231
【０８２４】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(55mg、0.20mmol)をDMF(2mL)にとった。DIPEA(0.071mL、0.41mmol)、次いでHATU(116mg、0.31mmol)を添加し、反応を室温で5分間撹拌した。ジクロロメタン(2mL)中の(+/-)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(90重量％、60mg、0.21mmol)を添加し、反応を45分間室温で撹拌した。反応を一晩静置し、その後真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(25mL)と飽和NaHCO3(25mL)とに分配した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中で10g SNAP Ultraカートリッジに適用し、シクロヘキサン中5〜40％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出した。適切な画分を真空中で濃縮し、tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(純度70重量パーセント、91.6mg、0.13mmol、62％収率)を黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.17分、[MH]＋=511.4。
【０８２５】
中間体208：6-ベンジル-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８２６】
【化２２５】
2019510782.tif 000232
【０８２７】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(522.1mg、1.93mmol)及びHATU(1.071g、2.82mmol)のDMF(7mL)中混合物に、4,4-ジエトキシブタン-1-アミン(0.467mL、2.70mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)を添加し、その後DIPEA(1.0mL、5.73mmol)を添加した。混合物を室温で窒素下に17.25時間撹拌し、その後真空中で濃縮した。混合物をアセトニトリル(7mL)で希釈し、MDAP(3×3mL注入；高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン(約10mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、その後溶媒を窒素流下で蒸発させ、真空中で乾燥させて、6-ベンジル-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.651g、1.58mmol、収率82％)を薄黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.08分、[MH]＋についてm/z=414。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.23(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.98-8.10(m, 1 H) 7.80(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.30-7.36(m, 2 H) 7.22-7.29(m, 3 H) 6.73-6.82(m, 1 H) 4.51-4.56(m, 1 H) 4.23(s, 2 H) 3.69(dq, J=9.3, 7.1 Hz, 2 H) 3.46-3.57(m, 4 H) 3.07(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.70-1.76(m, 4 H) 1.21(t, J=7.1 Hz, 6 H)。
【０８２８】
中間体209：6-ベンジル-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８２９】
【化２２６】
2019510782.tif 000233
【０８３０】
6-ベンジル-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.648g、1.57mmol)、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(0.362g、1.64mmol)及びp-トルエンスルホン酸一水和物(62.7mg、0.33mmol)のトルエン(13.5mL)中混合物を、70℃で窒素下に125分間撹拌し、その後室温に冷却した。混合物を酢酸エチル(30mL)と1M炭酸ナトリウム溶液(30mL)とに分配した。相を分離し、水相をさらなる酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン溶液(20mL)で逆洗浄した。有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をDCM(約5mL)に溶解させ、50gシリカカートリッジ上にロードし、シクロヘキサン中20〜60％酢酸エチルの勾配で溶出するBiotage SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。所要の画分を合わせ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン(約15mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、その後溶媒を窒素流下で蒸発させ、その後真空中で乾燥させて、6-ベンジル-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.510g、0.94mmol、60％収率)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.13分、[MH]＋についてm/z= 543。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.21(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.99-8.07(m, 1 H) 7.81-7.90(m, 3 H) 7.72-7.79(m, 2 H) 7.20-7.36(m, 5 H) 4.74-4.79(m, 1 H) 4.55-4.65(m, 1 H) 4.41-4.50(m, 2 H) 4.24(s, 2 H) 4.04-4.14(m, 3 H) 3.47-3.56(m, 2 H) 3.02(d, J=5.1 Hz, 3 H) 1.78-1.85(m, 4 H)。
【０８３１】
中間体210：6-ベンジル-N4-(3,3-ジエトキシプロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８３２】
【化２２７】
2019510782.tif 000234
【０８３３】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(77.8mg、0.29mmol)及びHATU(142.9mg、0.38mmol)のDMF(1.5mL)中混合物に、3,3-ジエトキシプロパン-1-アミン(0.061mL、0.37mmol)及びDIPEA(0.151mL、0.86mmol)を添加した。混合物を室温で4.5時間撹拌し、その後揮発性物質を窒素流下で蒸発させた。これをDMSO(3mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、6-ベンジル-N4-(3,3-ジエトキシプロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(91.3mg、0.23mmol、収率79％)を淡褐色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.08分、[MH]＋=400.4。
【０８３４】
中間体211：6-ベンジル-N4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８３５】
【化２２８】
2019510782.tif 000235
【０８３６】
6-ベンジル-N4-(3,3-ジエトキシプロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(87.6mg、0.22mmol)、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(48.8mg、0.22mmol)及びp-トルエンスルホン酸一水和物(8.5mg、0.05mmol)のトルエン(3mL)中混合物を、110℃で窒素下に2時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、揮発性物質を真空中で蒸発させて黄色固体を得た。これを、酢酸エチル(5mL)、水(3mL)と飽和水性Na2CO3(2mL)とに分配し、層を分離した。水相をジクロロメタン(3×5mL)及び酢酸エチル(5mL)で抽出し、有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を窒素流下で蒸発させた。これをDMSO(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、6-ベンジル-N4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(71.0mg、0.13mmol、収率61％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.12分、[MH]＋=529.4。
【０８３７】
中間体212：6-(3-クロロベンジル)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８３８】
【化２２９】
2019510782.tif 000236
【０８３９】
6-クロロ-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(152mg、0.312mmol)、(3-クロロベンジル)亜鉛(II)クロリド(1300μL、0.650mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(36mg、0.05mmol)をTHF(210μL)に溶解させ、マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。さらなる(3-クロロベンジル)亜鉛(II)クロリド(620μL、0.310mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(32.9mg、0.05mmol)を反応混合物に添加し、その後100℃で30分間加熱した。反応混合物を、セライトを通して濾過した(溶出液はEtOAc)。溶媒を真空中で除去し、637mgの粗褐色固体を得た。これを数滴のメタノールと共にDCMに溶解させ、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 10g、0〜50％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、6-(3-クロロベンジル)-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(50mg、0.07mmol、収率24％、純度85％)を極めて薄褐色(ほぼ白色)の固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.20分、[MH]＋=577.0。
【０８４０】
中間体213：6-(2-クロロベンジル)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８４１】
【化２３０】
2019510782.tif 000237
【０８４２】
6-クロロ-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(155mg、0.32mmol)、(2-クロロベンジル)亜鉛(II)クロリド(1300μL、0.650mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(35mg、0.05mmol)をTHF(210μL)に溶解させ、マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。さらなる量の(2-クロロベンジル)亜鉛(II)クロリド(640μL、0.320mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(15.64mg、0.02mmol)を添加し、その後反応混合物をマイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。反応混合物を、セライトを通して濾過した(溶出液はEtOAc)。溶媒を真空中で除去し、587mgの粗褐色/黒色固体を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 10g、0〜40％(25％エタノール:酢酸エチル)/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、6-(2-クロロベンジル)-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(117mg、0.18mmol、収率57％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.19分、[MH]＋=577.3。
【０８４３】
中間体214：N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８４４】
【化２３１】
2019510782.tif 000238
【０８４５】
6-クロロ-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(154mg、0.32mmol)、(3-メチルベンジル)亜鉛(II)クロリド(1300μL、0.650mmol、THF中0.5M)、及びPdCl2(PPh3)2(42mg、0.060mmol)をTHF(211μL)に溶解させ、マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。さらなる(3-メチルベンジル)亜鉛(II)クロリド(630μL、0.315mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(19mg、0.03mmol)を添加し、その後マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。反応混合物を、セライトを通して濾過した(溶出液はEtOAc)。溶媒を真空中で除去し、602mgの粗褐色固体を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 10g、0〜50％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(67mg、0.12mmol、収率38％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.18分、[MH]＋=557.4。
【０８４６】
中間体215：N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８４７】
【化２３２】
2019510782.tif 000239
【０８４８】
6-クロロ-N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(153mg、0.314mmol)、(2-メトキシベンジル)亜鉛(II)クロリド(1300μL、0.65mmol、THF中0.5M)及びPdCl2(PPh3)2(47mg、0.07mmol)をTHF(210μL)に溶解させ、マイクロウェーブ中で100℃にて30分間加熱した。さらなるPdCl2(PPh3)2(37mg、0.05mmol)及び(2-メトキシベンジル)亜鉛(II)クロリド(628μL、0.31mmol、THF中0.5M)を添加し、その後マイクロウェーブ中でさらに30分間100℃にて加熱した。反応混合物を、セライトを通して濾過した(溶出液はEtOAc)。溶媒を真空中で除去し、589mgの粗褐色固体を得た。これを数滴のメタノールと共にDCMに溶解させ、SiO2上のクロマトグラフィーにより精製した(Biotage SNAP 10g、0〜60％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)。所望の画分を真空中で濃縮し、表題化合物を、依然として不純な、黒色固体を有する黄色油状物として得た。134mgの依然として不純な生成物をDCM及び数滴のメタノールに再溶解させ、SiO2上のクロマトグラフィー(Biotage SNAP 10g、0〜60％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。所望の画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2s,5s)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(51mg、0.08mmol、収率24％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.14分、[MH]＋=573.1。
【０８４９】
中間体216：(S)-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８５０】
【化２３３】
2019510782.tif 000240
【０８５１】
(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(120.1mg、0.42mmol)及びHATU(243.8mg、0.64mmol)のDMF(2mL)中溶液に、4,4-ジエトキシブタン-1-アミン(0.110mL、0.63mmol)及びDIPEA(0.221mL、1.27mmol)を添加した。得られた溶液を室温で1.5時間撹拌し、その後これをDMSO(4mL)で希釈し、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、メタノールに再溶解させて合わせた。この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(S)-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(152.2mg、0.36mmol、収率84％)を黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.14分、[MH]＋=428.5。
【０８５２】
中間体217：N4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８５３】
【化２３４】
2019510782.tif 000241
【０８５４】
(S)-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(150mg、0.35mmol)のトルエン(3mL)中溶液に、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(79.3mg、0.36mmol)及びp-トルエンスルホン酸一水和物(14.2mg、0.08mmol)を添加した。得られた懸濁液を70℃で窒素下に2時間撹拌し、その後反応混合物を室温に冷却し、揮発性物質を真空中で蒸発させた。これを酢酸エチル(5mL)と1M水性炭酸ナトリウム(5mL)とに分配し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(2×5mL)で抽出し、有機相を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を窒素流下で蒸発させた。これをDMSO(1mL)及びアセトニトリル(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、N4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(113.0mg、0.20mmol、収率58％)が白色固体として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.18分、[MH]＋=557.4。
【０８５５】
中間体218：(+/-)-N4-(4,4-ジエトキシブチル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８５６】
【化２３５】
2019510782.tif 000242
【０８５７】
2-(メトキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(150mg、0.50mmol)及びHATU(209mg、0.55mmol)のDMF(1.5mL)中溶液に、DIPEA(0.174mL、1.00mmol)を添加し、その後4,4-ジエトキシブタン-1-アミン(0.095mL、0.55mmol)を添加した。得られた溶液を室温で2時間撹拌した。さらなるHATU(50mg)、DIPEA(43μL)及び4,4-ジエトキシブタン-1-アミン(24μL)を続けて添加し、反応をさらに2時間撹拌し、その後クエンチした。水(20mL)及びEtOAc(20mL)を添加し、層を分離した。水性層を酢酸エチル(2×10mL)でさらに抽出した。合わせた有機物を水(2×10mL)及び飽和水性LiCl(10mL)で逆抽出し、その後乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、真空中で濃縮して暗色油状物を得た。これをDCMに再溶解させ、SNAPシリカカートリッジ(10g)のトップに直接適用し、SP4フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムをシクロヘキサン中30〜100％酢酸エチルの勾配で溶出した。適切な画分を回収し、真空中で濃縮して、生成物 N4-(4,4-ジエトキシブチル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(183mg、0.41mmol、収率83％)が黄色油状物として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.07分、[MH]＋=444.4。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.98(t, J=5.5 Hz, 1 H) 8.63(q, J=4.6 Hz, 1 H) 8.30(d, J=1.7 Hz, 1 H) 8.04(d, J=1.7 Hz, 1 H) 7.45-7.52(m, 2 H) 7.31-7.38(m, 2 H) 7.23-7.30(m, 1 H) 5.49(s, 1 H) 4.45-4.50(m, 1 H) 3.55(dq, J=9.5, 7.1 Hz, 2 H) 3.42(dq, J=9.5, 7.0 Hz, 2 H) 3.37(s, 3 H) 3.23-3.30(obs. m, 2 H) 2.86(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.51-1.59(m, 4 H) 1.10(t, J=7.0 Hz, 6 H)。
【０８５８】
中間体219：(+/-)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８５９】
【化２３６】
2019510782.tif 000243
【０８６０】
N4-(4,4-ジエトキシブチル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(183mg、0.41mmol)のトルエン(2mL)中溶液に、2-(1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)イソインドリン-1,3-ジオン(91mg、0.41mmol)及びp-トルエンスルホン酸一水和物(15.7mg、0.08mmol)を添加した。得られた懸濁液を90℃で窒素下に2時間撹拌し、その後反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル(20mL)と飽和水性重炭酸ナトリウム(20mL)とに分配し、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、濾液を真空中で濃縮して黄色油状物とした。残渣をDCMにとり、SNAP シリカ(10g)カートリッジに添加して、30->100％EtOAc/シクロヘキサンで溶出するフラッシュSP4クロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を回収し、真空中で乾燥させて、所望の生成物 N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(162mg、0.283mmol、69％収率)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.12分、[MH]＋=573.3。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.00(t, J=5.5 Hz, 1 H) 8.63(q, J=4.3 Hz, 1 H) 8.31(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.06(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.80-7.90(m, 4 H) 7.49(d, J=7.1 Hz, 2 H) 7.35(t, J=7.5 Hz, 2 H) 7.22-7.30(m, 1 H) 5.49(s, 1 H) 4.67(t, J=4.4 Hz, 1 H) 4.19-4.29(m, 3 H) 4.00-4.07(obs. m, 2 H) 3.37(s, 3 H) 3.25-3.33(観測値 m, 2 H) 2.87(d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.56-1.71(m, 4 H)。
【０８６１】
中間体220：(+/-)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(2-((メチルスルホニル)オキシ)-1-フェニルエチル)イソニコチネート
【０８６２】
【化２３７】
2019510782.tif 000244
【０８６３】
(+/-)-tert-ブチル2-(2-ヒドロキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(200mg、0.561mmol)を窒素下でDCM(5mL)にとった。Et3N(0.235mL、1.683mmol)を添加し、その後Ms-Cl(0.066mL、0.842mmol)を添加し、反応を室温で1時間撹拌した。反応をDCMと水(10mL)とに分配し、水性層をDCM(2×10mL)で再抽出した。合わせた有機物を、疎水性フリットを通して溶出させ、次いで真空中で濃縮して、(+/-)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(2-((メチルスルホニル)オキシ)-1-フェニルエチル)イソニコチネート(313mg、0.540mmol、収率96％、75重量％)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法) Rt=1.20分、[MH]＋についてm/z=435.6。
【０８６４】
中間体221：(+/-)-2-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸
【０８６５】
【化２３８】
2019510782.tif 000245
【０８６６】
マイクロウェーブバイアル中で、(+/-)-tert-ブチル2-(メチルカルバモイル)-6-(2-((メチルスルホニル)オキシ)-1-フェニルエチル)イソニコチネート(313mg、0.54mmol、75重量％)、Et3N(0.226mL、1.621mmol)及びNaCN(61mg、1.245mmol)をDMSO(5mL)中で合わせ、Biotage Initiatorマイクロウェーブ中で160℃に30分間加熱した。反応混合物をEtOAcと水とに分配した(各15mL)。水性層をEtOAc(2×15mL)で再抽出し、合わせた有機物を乾燥させ(Na2SO4)、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮してオレンジ色油状物を得た。粗生成物を、最小限のDCM中で25g ULTRA シリカ SNAPカートリッジに適用し、シクロヘキサン中5〜40％EtOAcで溶出した。適切な画分を真空中で濃縮し、(+/-)-tert-ブチル2-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(78mg、0.203mmol、収率38％)を黄色固体として得た。水性層のLCMSが酸の存在を示したため、これを2N HClで注意深く酸性化し、EtOAc(2×15mL)で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ(Na2SO4)、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して、(+/-)-2-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(182mg、0.294mmol、収率55％)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法) Rt=0.62分、[MH]＋についてm/z=310.4。
【０８６７】
実施例
実施例1：tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０８６８】
【化２３９】
2019510782.tif 000246
【０８６９】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(50mg、0.185mmol)、HATU(112mg、0.295mmol)、DIPEA(0.097mL、0.555mmol)及びDMF(3mL)を室温でN2下に撹拌し、次いでtert-ブチル4-(3-アミノプロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(100mg、0.413mmol)を添加し、反応を室温でN2下に2時間撹拌した。溶液を濃縮し、300mgのオレンジ色油状物を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 25gカートリッジ、0〜100％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)により精製した。適切な画分を濃縮し、25mgの黄色油状物を得た。反応をMDAP(ギ酸法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮し、tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(18mg、0.033mmol、17.70％収率)をオフホワイトの固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.28分、[MH]＋=495.5。
【０８７０】
実施例2：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(ピペリジン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８７１】
【化２４０】
2019510782.tif 000247
【０８７２】
tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(10mg、0.021mmol)及びTFA(0.5mL、6.49mmol)を、DCM(2mL)中室温で1時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、1g SCXカートリッジ(MeOHで予め調整した)上にロードし、MeOH(20mL)で溶出し、その後MeOH中2M NH3(20mL)で溶出した。生成物を含有するアンモニア画分を合わせ、濃縮し、6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(ピペリジン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(7mg、0.017mmol、収率80％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.59分、[MH]＋=381.3。
【０８７３】
実施例3：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(ピペリジン-4-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８７４】
【化２４１】
2019510782.tif 000248
【０８７５】
tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(15mg、0.030mmol)及びTFA(0.5mL、6.49mmol)を、DCM(2mL)中室温で1時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、1g SCXカートリッジ(MeOHで予め調整した)上にロードし、MeOH(20mL)で溶出し、その後MeOH中2M NH3(20mL)で溶出した。生成物を含有するアンモニア画分を合わせ、濃縮し、19mgのオフホワイトの固体を得た。これを、MDAP(ギ酸法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮し、6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(ピペリジン-4-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(5mg、0.011mmol、37.6％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.61分、[MH]＋=395.3。
【０８７６】
実施例4：6-ベンジル-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８７７】
【化２４２】
2019510782.tif 000249
【０８７８】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸、トリフルオロ酢酸塩(100mg、0.260mmol)及びHATU(198mg、0.520mmol)のDMF(2400μL)中溶液に、DIPEA(227μL、1.301mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(53mg、0.391mmol)を添加した。反応混合物を水:飽和NaHCO3(1:1)上に注ぎ、EtOAc(3×10mL)で抽出した。合わせた有機物をブライン(2×5mL)で洗浄し、疎水性フリットを通して乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣(102mg)をDCM中で10g SNAPカートリッジ上にロードし、12〜62％(3:1のEtOAc:EtOH)/シクロヘキサンで溶出するBiotage(登録商標)SP4フラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所望の生成物を無色ガラス状物として得た。このガラス状物をジエチルエーテルで超音波処理し、もう一度蒸発させて、6-ベンジル-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(51mg、0.138mmol、53.0％収率)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.87分、[MH]＋=352.4。
【０８７９】
実施例5：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(オキセタン-3-イル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８８０】
【化２４３】
2019510782.tif 000250
【０８８１】
シンチレーションバイアル中で、2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(58mg、0.215mmol)をDCM(10mL)中に懸濁させ、Et3N(0.060mL、0.429mmol)及びHATU(106mg、0.279mmol)を添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、オキセタン-3-アミン(31.4mg、0.429mmol)を添加した。得られた黄色溶液を2時間撹拌し、その後水(10mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を10gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、6-ベンジル-N2-メチル-N4-(オキセタン-3-イル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(15mg、0.046mmol、収率21.48％)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.87分、[MH]＋=326.2。
【０８８２】
実施例6：(+/-)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８８３】
【化２４４】
2019510782.tif 000251
【０８８４】
シンチレーションバイアル中で、2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(40mg、0.133mmol)をDCM(10mL)に懸濁させ、Et3N(0.037mL、0.266mmol)及びHATU(65.8mg、0.173mmol)を添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、tert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(40mg、0.174mmol、その調製は国際特許出願公開第WO 2003/097618号に報告されている)を添加した。得られた黄色溶液を2時間撹拌し、次いで水(10mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、薄黄色ガム状物を得た。不純材料をDCM(2mL)に溶解させ、TFA(1mL)で処理した。溶液を1時間室温で撹拌し、次いで真空中で蒸発させて残渣をMeOHに溶解させ、5g SCXカートリッジ上にロードした。これをMeOH(20mL)で洗浄し、その後MeOH中2M NH3で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(20mg、0.048mmol、36.4％収率)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.83分、[MH]＋=413.4。
【０８８５】
実施例7：(+/-)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(2-(4-メチルモルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８８６】
【化２４５】
2019510782.tif 000252
【０８８７】
2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(70mg、0.233mmol)のDMF(1mL)中溶液に、HATU(133mg、0.350mmol)を添加し、その後2-(4-メチルモルホリン-2-イル)エタンアミン、ビス塩酸塩(76mg、0.350mmol、例えばAzepine製品リストから市販されているもの)及びDIPEA(0.204mL、1.165mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で4時間撹拌した(黄色溶液が形成された)。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、乾燥させ(Na2SO4)、真空中で濃縮して、6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(2-(4-メチルモルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(35mg、0.074mmol、31.7％収率)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.62分、[MH]＋=427.3。
【０８８８】
実施例8：(+/-)-tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート
【０８８９】
【化２４６】
2019510782.tif 000253
【０８９０】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(50mg、0.176mmol)をDMF(2mL)にとり、HATU(100mg、0.264mmol)を添加し、その後すぐにDIPEA(0.092mL、0.528mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。DMF(1mL)に溶解させたtert-ブチル2-(2-アミノエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(60.8mg、0.264mmol、その調製は特許：WO2003097618において報告されている)を添加し、反応を1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(10mL)に溶解させ、NaHCO3(10mL)で洗浄した。水性層をEtOAc(10mL)で洗浄した。合わせた有機層をブライン(10mL)で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過した。混合物を真空中で濃縮した。粗生成物を、MDAP(高pH法)により精製した。適切な画分を真空中で濃縮して、tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(11.9mg、0.024mmol、収率13.63％)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.22分、[MH]＋=497.4。
【０８９１】
実施例9〜11及び15：2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸モノマーのアミドアレイ
【０８９２】
【表５】
2019510782.tif 000254
【０８９３】
DMF(3mL)に一緒に溶解させた2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(162mg)とHATU(228mg)を含むストック溶液を調製した。DIPEA(330μL)を添加し、バイアルをキャップして振盪し、溶解を補助した。1アリコートのこの反応混合物(0.5mL、0.1mmol)を、マトリックスバイアル(1.2mL)中で、上記に示される構造を有する予め秤量したアミン(0.12mmol)のセットに添加した。バイアルをキャップし、振盪して内容物を分散させ、室温で18時間静置した。サンプルをそのまま注入し(0.6mL)、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒をN2流下で乾燥させ、所要の生成物を得た。
【０８９４】
実施例11のBOC脱保護：Boc-保護された中間体を4N HCl/1,4-ジオキサン(0.5mL)に再溶解させ、DCM(0.5mL)を添加した。バイアルをキャップし、室温で1時間静置した。溶媒を除去して乾固し、実施例11がそのHCl塩として得られた。
【０８９５】
実施例
【０８９６】
【表６】
2019510782.tif 000255
【０８９７】
実施例12：(+/-)-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０８９８】
【化２４７】
2019510782.tif 000256
【０８９９】
tert-ブチル2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)モルホリン-4-カルボキシレート(8.1mg、0.017mmol)をDCM(2mL)に溶解させ、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で30分間撹拌したままにした。混合物を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、MeOHで溶出した後2Mアンモニア/MeOHで溶出するスルホン酸SPE(SCX)500mgにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所望の生成物(4.3mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.89分、[MH]＋=397.4。
【０９００】
実施例13：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９０１】
【化２４８】
2019510782.tif 000257
【０９０２】
2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(48mg、0.160mmol)のDMF(1mL)中溶液に、HATU(91mg、0.240mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(31.7mg、0.234mmol)及びDIPEA(0.140mL、0.799mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で1時間撹拌した(黄色溶液が形成された)。反応混合物を室温でさらに2時間撹拌した。HATU(70mg、0.184mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(30mg、0.221mmol)のさらなる部分を添加し、反応を室温でさらに1時間撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を、飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、乾燥させ(Na2SO4)、真空中で濃縮して、N4-(3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(44mg、0.115mmol、72.2％収率)を白色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]＋=382.2。
【０９０３】
実施例14：(+/-)-tert-ブチル4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート
【０９０４】
【化２４９】
2019510782.tif 000258
【０９０５】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(50mg、0.176mmol)をDMF(2mL)にとった。DIPEA(0.092mL、0.528mmol)を添加し、その後すぐにHATU(100mg、0.264mmol)を添加して、反応を室温で10分間撹拌したままにした。DMF(1mL)に溶解させたtert-ブチル4-(2-アミノエチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(0.01061mL、0.176mmol)を反応に添加し、これをさらに1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)に溶解させ、次いでNaHCO3(10mL)で洗浄した。水性層をEtOAc(10mL)で洗浄し、任意の残りの有機化合物を除去した。合わせた有機層をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過した。サンプルを1:1のMeOH:DMSO(0.8mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(42.7mg)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.30分、[MH]＋=495.4。
【０９０６】
実施例16：(+/-)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)-N4-(2-(ピペリジン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９０７】
【化２５０】
2019510782.tif 000259
【０９０８】
tert-ブチル4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(39.7mg、0.080mmol)をDCM(2mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で30分間撹拌したままにした。反応をさらに1.5時間撹拌したままにした。次いで、反応を一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、スルホン酸SPE(SCX、500mg)により精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて、所要の生成物(3.7mg)を黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.94分、[MH]＋=395.4。
【０９０９】
実施例17：N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９１０】
【化２５１】
2019510782.tif 000260
【０９１１】
(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(342mg、0.712mmol)のDCM(5mL)中溶液に、TFA(1mL、12.98mmol)を添加し、反応混合物をN2下に室温で2時間撹拌した。反応混合物を濃縮して983mgの黄色油状物を得、5g SCXカートリッジ(MeOHで予め調整した)上にロードし、MeOH(30mL)で溶出し、その後MeOH中2M NH3(30mL)で溶出した。生成物を含有するアンモニア画分を合わせ、濃縮して、N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(229mg、0.602mmol、84.6％収率)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.56分、[MH]＋=381.3。
【０９１２】
実施例18：(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート
【０９１３】
【化２５２】
2019510782.tif 000261
【０９１４】
2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(250mg、0.832mmol)のDMF(3mL)中溶液に、HATU(475mg、1.249mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-tert-ブチル6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(248mg、1.249mmol、例えばFluorochemから市販されているもの)及びDIPEA(0.582mL、3.33mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で1時間撹拌した(黄色溶液が形成された)。次いで、これをLiCl(20mL)で洗浄し、EtOAc(40mL)と水(40mL)とに分配し、水相をEtOAc(2×40mL)で抽出し、疎水性フリットで乾燥させ、濃縮して、930mgのオレンジ色油状物を得た。これをKP-Sil 50g SNAP Biotage(登録商標)カートリッジ上にロードし、フラッシュクロマトグラフィー(勾配：10％〜80％酢酸エチル/シクロヘキサン)により精製した。生成物含有画分を合わせ、濃縮して、表題化合物(350mg)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.11分、[MH]＋=481.2。
【０９１５】
実施例19：6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-((1R,5S,6s)-3-メチル-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９１６】
【化２５３】
2019510782.tif 000262
【０９１７】
N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(56mg、0.147mmol)、ギ酸(0.011mL、0.294mmol)、水中37％ホルムアルデヒド(0.022mL、0.294mmol)及びMeOH(2mL)を、45℃でN2下に2時間加熱した。NaHCO3溶液(10mL)を添加した。反応混合物をDCM(3×30mL)で抽出し、疎水性フリットで乾燥させ、濃縮して190mgの粗薄黄色残渣を得た。これをSiO2上のクロマトグラフィー(Biotage(登録商標) SNAP 10gカートリッジ、MeOH/DCM中10〜60％2M NH3で溶出)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-((1R,5S,6s)-3-メチル-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(60mg、0.137mmol、収率93％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.58分、[MH]＋=395.3。
【０９１８】
実施例20：N4-((1R,5S,6s)-3-アセチル-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９１９】
【化２５４】
2019510782.tif 000263
【０９２０】
N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(57.8mg、0.152mmol)をDMF(1mL)に溶解させ、次いでEt3N(0.025mL、0.182mmol)及び塩化アセチル(0.013mL、0.182mmol)を添加し、混合物を室温で1.5時間撹拌した。Et3N(0.025mL、0.182mmol)及び塩化アセチル(0.013mL、0.182mmol)のさらなる部分を反応混合物に添加し、反応を2時間撹拌した。Et3N(0.025mL、0.182mmol)及び塩化アセチル(0.013mL、0.182mmol)のさらなる部分を反応混合物に添加し、反応混合物を一晩撹拌した。Et3N(0.025mL、0.182mmol)及び塩化アセチル(0.013mL、0.182mmol)のさらなる部分を、(不溶性化合物を溶解させるのを補助するため1mLのDMF中数滴のDCMと共に)反応混合物に添加し、反応混合物を一晩撹拌した。溶液をMDAP(ギ酸法)により精製し、無色固体として、N4-((1R,5S,6s)-3-アセチル-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(27.1mg、0.058mmol、38.0％収率)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.83分、[MH]＋=423.2。
【０９２１】
実施例21〜22：2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸モノマーのアミドアレイ
【０９２２】
【表７】
2019510782.tif 000264
【０９２３】
DMF(4.5mL)に一緒に溶解させた2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(0.243g)とHATU(0.342g)のストック溶液を調製した。DIPEAを添加し(480μL)、バイアルをキャップして振盪し、溶解を補助した。1アリコートのこの反応混合物(0.75mL、0.15mmol)を、マトリックスバイアル(1.2mL)中で、上記の表に示される予め秤量したアミン(0.180mmol)のセットに添加した。これらのバイアルをキャップし、振盪して内容物を分散させ、室温で2時間静置した。サンプルをそのまま注入し、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒をN2流下で乾燥させ、所要の生成物アミドを得た。
【０９２４】
実施例22の化合物のBOC脱保護：Boc-保護された中間体を、4M HCl/1,4-ジオキサン(0.75mL)に再溶解させ、DCM(0.75mL)を添加した。バイアルをキャップし、室温で1時間静置した。溶媒を除去して乾固し、所望の生成物がそのHCl塩として得られた。
【０９２５】
実施例
【０９２６】
【表８】
2019510782.tif 000265
【０９２７】
実施例23：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９２８】
【化２５５】
2019510782.tif 000266
【０９２９】
2-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(98mg、0.297mmol)のDMF(1mL)中溶液に、HATU(169mg、0.445mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン(58.8mg、0.593mmol)及びDIPEA(0.259mL、1.483mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をMDAP(TFA法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を、飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、次いで乾燥させ、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(7mg、0.015mmol、5.16％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.74分、[MH]＋=412.1。
【０９３０】
実施例24〜25：2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸モノマーのアミドアレイ
【０９３１】
【表９】
2019510782.tif 000267
【０９３２】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸を、HATU(0.038g、0.100mmol)及びDIPEA(0.052mL、0.300mmol)に添加し、DMF(0.5mL)に溶解させて5分間放置した。この溶液を表中に示されるアミンモノマー(0.100mmol)に分注し、22℃で24時間放置した。サンプルをMDAP(高pH法)により直接精製した。溶媒をN2流下で乾燥させ、所要の生成物を得た。実施例24については、Boc-保護された中間体をDCM(300μL)に溶解させ、この溶液に1,4-ジオキサン中4M HCl(500μL)を添加した。溶液を20℃で2時間放置した。溶媒を吹き付けユニット中で除去し、実施例25をそのHCl塩として提供した。
【０９３３】
実施例
【０９３４】
【表１０】
2019510782.tif 000268
【０９３５】
実施例26：(+/-)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９３６】
【化２５６】
2019510782.tif 000269
【０９３７】
tert-ブチル2-(3-(2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(60mg、0.114mmol)をDCM(2mL)とTFA(1mL)の混合物に溶解させ、溶液を2時間室温で撹拌し、次いで真空中で蒸発させて、残渣をMeOHに溶解させ、5g SCXカートリッジ上にロードした。これをMeOH(20mL)で洗浄し、次いでMeOH中2M NH3(20mL)で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(40mg、0.094mmol、収率82％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.86分、[MH]＋=427.4。
【０９３８】
実施例27：N2-メチル-N4-(3-((S)-モルホリン-2-イル)プロピル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０９３９】
【化２５７】
2019510782.tif 000270
【０９４０】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(40mg、0.141mmol)、HATU(80mg、0.211mmol)、Et3N(39.2μL、0.281mmol)及び(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(44.7mg、0.183mmol)をDMF(1mL)に溶解させ、1時間撹拌し、次いで混合物を室温で1時間撹拌した。混合物をMDAP(高pH法)により精製し、中間体の、Boc-保護された化合物：(2S)-tert-ブチル2-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(35mg、0.069mmol、48.7％収率)を得た。
【０９４１】
Boc-保護された化合物をDCM(1mL)に溶解させ、TFA(0.5mL)で処理し、混合物を1時間室温で撹拌し、次いで真空中で蒸発させて、残渣をMeOHに溶解させ、5g SCXカートリッジ上にロードした。これをMeOH(10mL)で洗浄し、その後MeOH中2M NH3で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、N2-メチル-N4-(3-((S)-モルホリン-2-イル)プロピル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(18mg、0.044mmol、31.2％収率)を薄黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.92分、[MH]＋=411.4。
【０９４２】
実施例28：(R)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９４３】
【化２５８】
2019510782.tif 000271
【０９４４】
20mLバイアルに、2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(80mg、0.266mmol)をDMF(2mL)中で溶解させ、次いでHATU(152mg、0.400mmol)及びEt3N(0.074mL、0.533mmol)を添加し、混合物を室温で20分間撹拌し、その後(R)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(85mg、0.346mmol)を添加して、溶液を2時間撹拌した。得られた混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAc(10mL)で抽出した。溶媒を真空中で蒸発させ、次いで残渣をDCMに溶解させ、TFA(1mL)で処理した。溶液を1時間静置し、その後真空中で蒸発させて、残渣をMDAP(高pH法)により精製し、(R)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(40mg、0.094mmol、35.2％収率)を薄黄色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.86分、[MH]＋=427。
【０９４５】
実施例29：(S)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９４６】
【化２５９】
2019510782.tif 000272
【０９４７】
20mLバイアルに、2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(80mg、0.266mmol)をDMF(2mL)中で溶解させ、次いでHATU(152mg、0.400mmol)及びEt3N(0.074mL、0.533mmol)を添加し、混合物を室温で20分間撹拌し、その後(S)-tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(85mg、0.346mmol)を添加して、溶液を2時間撹拌した。得られた混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAc(10mL)で抽出した。溶媒を真空中で蒸発させ、次いで残渣をDCMに溶解させ、TFA(1mL)で処理した。溶液を1時間静置し、その後真空中で蒸発させて、残渣をMDAP(高pH法)により精製し、(S)-6-(3-メトキシベンジル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(40mg、0.094mmol、35.2％収率)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.86分、[MH]＋=427。
【０９４８】
実施例30：N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０９４９】
【化２６０】
2019510782.tif 000273
【０９５０】
(2S)-tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(87.1mg、0.175mmol)をDCM(2mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、スルホン酸SPE(SCX、1g)により精製し、カラムをMeOHで溶出し、その後MeOH中2M NH3で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて粗生成物を得た。これを1:1のMeOH:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させて、所望の生成物(25.1mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.90分、[MH]＋=397.4。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.24(d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.73(d, J=1.0 Hz, 1 H) 7.22-7.38(m, 4 H) 7.11-7.21(m, 1 H) 4.41(q, J=7.3 Hz, 1 H) 3.82(d, J=11.5 Hz, 1 H) 3.38-3.66(m, 5 H) 3.00(s, 3 H) 2.86(br. d, J=12.2 Hz, 1 H) 2.78(m, J=5.4 Hz, 2 H) 2.52(dd, J=12.2, 10.8 Hz, 1 H) 1.64-1.80(m, 5 H)。
【０９５１】
実施例31：N2-メチル-N4-(2-((R)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【０９５２】
【化２６１】
2019510782.tif 000274
【０９５３】
(2R)-tert-ブチル2-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(133mg、0.268mmol)をDCM(2mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加して、反応を室温で一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、スルホン酸SPE(SCX、1g)により精製して、カラムをMeOHで溶出し、その後MeOH中2M NH3で溶出した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて粗生成物を得た。これを1:1のMeOH:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(32.3mg)を黄色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.90分、[MH]＋=397.4。
【０９５４】
実施例32：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９５５】
【化２６２】
2019510782.tif 000275
【０９５６】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(140mg、0.492mmol)をDMF(4mL)にとり、DIPEA(0.258mL、1.477mmol)、HATU(281mg、0.739mmol)及び3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(100mg、0.739mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(20mL)にとり、NaHCO3溶液(20mL)で洗浄し、有機相をブライン(20mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、最小限のDCM中で10g SNAP ULTRAシリカカートリッジに適用し、0〜50％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮した。20mgのサンプルをDCM(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(14mg)を白色固体として得た。MDAPに適用されなかった残りの生成物をキラル分離に供した(実施例38及び39を参照)。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.98分、[MH]＋=366.3。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.22(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.73(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.23-7.38(m, 4 H) 7.18(t, J=7.6 Hz, 1 H) 4.42(q, J=7.3 Hz, 1 H) 3.99(d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.73(d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.01(s, 3 H) 2.63(t, J=2. 3 Hz, 1 H) 1.94(br. s, 2 H) 1.76(d, J=7.3 Hz, 3 H)。
【０９５７】
実施例33：(+/-)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９５８】
【化２６３】
2019510782.tif 000276
【０９５９】
tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(140mg、0.273mmol)をDCM(3mL)に溶解させ、TFA(1mL)を添加し、次いで混合物を室温で2時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をMeOHに溶解させて、5g SCXカートリッジ上にロードした。これをMeOH(20mL)で洗浄し、その後MeOH中2M NH3(20mL)で溶出した。溶出液を真空中で蒸発させ、6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(90mg、0.218mmol、収率80％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.96分、[MH]＋=413。
【０９６０】
実施例34：(+/-)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【０９６１】
【化２６４】
2019510782.tif 000277
【０９６２】
tert-ブチル3-(3-アミノプロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(173mg、0.666mmol)及び2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(150mg、0.555mmol)をDCM(5mL)中で合わせ、HATU(274mg、0.721mmol)及びEt3N(0.101mL、0.721mmol)を添加し、次いで混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をMDAP(高pH法)(2回注入)により精製し、tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(160mg、0.312mmol、56.2％収率)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.23分、[MH]＋=513。
【０９６３】
実施例35：(S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９６４】
【化２６５】
2019510782.tif 000278
【０９６５】
(S)-tert-ブチル2-(3-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(28.7mg、0.048mmol)のDCM(1mL)中溶液に、TFA(0.05mL、0.649mmol)を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。さらなるTFA(0.05mL、0.048mmol)を添加し、溶液を1時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。反応混合物をMeOHにとり、SCXカートリッジ(1g)に添加した。最初にカートリッジをMeOHで溶出し、次いで生成物をMeOH中2M NH3で溶出した。所望の画分を合わせ、濃縮し、(S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(23.0mg、0.048mmol、収率99％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.58分、[MH]＋=436.3。
【０９６６】
実施例36：(R)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９６７】
【化２６６】
2019510782.tif 000279
【０９６８】
(R)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(280mg、0.580mmol)をDCM(5mL)に溶解させ、その後TFA(2mL、26.0mmol)を添加し、混合物を室温で2時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をMeOHに溶解させ、5g SCX2カートリッジ上にロードした。これをMeOH(20mL)で洗浄し、次いでMeOH中2M NH3(20mL)で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、(R)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(180mg、0.471mmol、収率81％)を無色泡状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.84分、[MH]＋=383。
【０９６９】
実施例37：(S)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９７０】
【化２６７】
2019510782.tif 000280
【０９７１】
(S)-tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(56mg、0.113mmol)のDCM(1mL)中溶液に、TFA(0.17mL、2.207mmol)を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。反応混合物をMeOHにとり、SCXカートリッジ(1g)に添加した。最初にカートリッジをMeOHで溶出し、次いで生成物をMeOH中2M NH3で溶出した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮して、(S)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(40.1mg、0.096mmol、収率85％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.59分、[MH]＋=397.3。
【０９７２】
実施例38：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例39：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((R*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９７３】
【化２６８】
2019510782.tif 000281
【０９７４】
(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(75mg)をキラル精製に供した。ラセミ体(75mg)をEtOH(3mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(25％EtOH/ヘプタン、流速=30mL/分、波長=215nm、カラム：30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、注入総数=3)。14.5分〜16.5分からの画分をまとめてピーク1と標識し、18〜21分からの画分をまとめてピーク2と標識した(純度を高めるためにピーク2のさらなる分取が必要とされ、これは上記の方法を用いた1回注入を要した)。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。固体を得るため、最終化合物をDCM及びヘプタンから回収した。
【０９７５】
ピーク1は、実施例39(11.2mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.98分、[MH]＋=366.3。
【０９７６】
ピーク2は、実施例38(24mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.98分、[MH]＋=366.3。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.22(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.73(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.23-7.38(m, 4 H) 7.18(t, J=7.6 Hz, 1 H) 4.42(q, J=7.3 Hz, 1 H) 3.99(d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.73(d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.01(s, 3 H) 2.63(t, J=2. 3 Hz, 1 H) 1.94(br. s, 2 H) 1.76(d, J=7.3 Hz, 3 H)。
【０９７７】
実施例40：N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((R*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例41：N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９７８】
【化２６９】
2019510782.tif 000282
【０９７９】
(+/-)-(N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド)(23mg)をキラル精製に供した。ラセミ体(23mg)をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(30％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、波長=215nm、カラム：30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、注入総数=1)。30〜40分からの画分をまとめてピーク1と標識し、46〜66分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。固体を得るため、最終化合物をDCM及びヘプタンから回収した。
【０９８０】
ピーク1は、実施例41(6.9mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.91分、[MH]＋=397.4。
1H NMR(400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.24(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.73(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.23-7.38(m, 4 H) 7.13-7.22(m, 1 H) 4.43(q, J=7.1 Hz, 1 H) 3.82(br. d, J=11.2 Hz, 1 H) 3.43-3.61(m, 4 H) 3.01(s, 3 H) 2.83(dd, J=12.5, 2.2 Hz, 1 H) 2.72-2.78(m, 2 H) 2.50(dd, J=12.5, 10.3 Hz, 1 H) 1.76(d, J=7.3 Hz, 3 H) 1.63-1.73(m, 2 H)。
【０９８１】
ピーク2は、実施例40(6.3mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.91分、[MH]＋=397.4。
【０９８２】
実施例41b：N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩
【０９８３】
【化２７０】
2019510782.tif 000283
【０９８４】
N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(122mg、0.308mmol)(ハイスタック(haystack)バイアル中のガム状物)を、超音波処理を用いてDCM(1mL)にとった。HCl(Et2O中1M、0.308mL、0.308mmol)を添加し、バイアルを5分間超音波処理し、その後N2下で吹き付けた。得られた褐色ガム状物をEt2O(1mL)で粉砕し、N2下で再度吹き付け、生成物がクリーム色固体 N2-メチル-N4-(2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(102mg、0.236mmol、収率77％)として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.63分、[MH]＋=397.3。
【０９８５】
実施例42：(S)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９８６】
【化２７１】
2019510782.tif 000284
【０９８７】
(S)-tert-ブチル2-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(92mg、0.191mmol)のDCM(2mL)中溶液に、TFA(0.8mL、10.38mmol)を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。反応混合物をMeOHにとり、SCXカートリッジ(1g)に添加した。最初にカートリッジをMeOHで溶出し、次いで生成物をMeOH中2M NH3で溶出した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮して、(S)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(65.6mg、0.154mmol、収率81％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.58分、[MH]＋=383.3。
【０９８８】
実施例43：(S)-6-ベンジル-N4-(3-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９８９】
【化２７２】
2019510782.tif 000285
【０９９０】
(S)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(47mg、0.119mmol)のMeOH(0.5mL)中溶液に、NaCNBH3(15mg、0.239mmol)、プロパン-2-オン(35μL、0.476mmol)及びAcOH(2.71μL、0.047mmol)を添加した。得られた混合物を室温で2時間撹拌した。AcOH(2.71μL、0.119mmol)、NaCNBH3(7.45mg、0.119mmol)及びプロパン-2-オン(20μL、0.119mmol)を添加し、得られた混合物を室温で45分間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により精製した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮して、所望の生成物を無色油状物 (S)-6-ベンジル-N4-(3-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(21.7mg、0.047mmol、収率39.7％)として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.05分、[MH]＋=439.5。
【０９９１】
実施例44：6-ベンジル-N4-((R*)-2-ヒドロキシ-2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例45：6-ベンジル-N4-((S*)-2-ヒドロキシ-2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９９２】
【化２７３】
2019510782.tif 000286
【０９９３】
(S)-tert-ブチル2-(2-アミノ-1-ヒドロキシエチル)モルホリン-4-カルボキシレート(416mg、1.687mmol)及び2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(380mg、1.406mmol)をDCM(5mL)中で合わせ、HATU(695mg、1.828mmol)及びEt3N(0.255mL、1.828mmol)を添加し、次いで混合物を室温で一晩撹拌した。1mLの反応混合物をMDAP(高pH法)により精製し、2つの別個の画分を得、これを真空中で蒸発させた。両画分をDCM(各5mL)に溶解させ、TFA(1mL)を添加し、その後溶液を3時間静置し、次いで真空中で蒸発させて残渣をMeOHに溶解させ、5g SCXカートリッジ上にロードし、これをMeOH(10mL)で洗浄し、その後MeOH中2M NH3で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、以下のものを得た：
実施例44：6-ベンジル-N4-((R*)-2-ヒドロキシ-2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(20mg、0.050mmol、収率3.57％)。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.78分、[MH]＋=399。
実施例45：6-ベンジル-N4-((S*)-2-ヒドロキシ-2-((S)-モルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(18mg、0.045mmol、収率3.21％)。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.79分、[MH]＋=399。
【０９９４】
実施例46：(S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-(3-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９９５】
【化２７４】
2019510782.tif 000287
【０９９６】
((S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチル-N4-(3-(モルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(19mg、0.044mmol)のMeOH(0.5mL)中溶液に、NaCNBH3(10.97mg、0.175mmol)、プロパン-2-オン(0.01mL、0.136mmol)及びAcOH(1.048mg、0.017mmol)を添加した。得られた混合物を室温で5時間撹拌した。さらなるプロパン-2-オン(7.60mg、0.131mmol)、AcOH(1.048mg、0.017mmol)及びNaCNBH3(10.97mg、0.175mmol)を添加し、得られた混合物を室温で1時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により精製した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮し、(S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-(3-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(16.2mg、0.031mmol、70.0％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.61分、[MH]＋=478.3。
【０９９７】
実施例47：(R)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【０９９８】
【化２７５】
2019510782.tif 000288
【０９９９】
(S)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(190.5mg、0.372mmol)のDCM(2mL)中溶液に、2,2,2-TFA(0.40mL、5.19mmol)を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。反応混合物をMeOHにとり、SCXカートリッジ(5g)に添加した。最初にカートリッジをMeOHで溶出し、次いで生成物をMeOH中2M NH3で溶出した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮し、(R)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(153.6mg、0.354mmol、収率95％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.61分、[MH]＋=413.3。
【１０００】
実施例48：(S)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロ-1-イソプロピルピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１００１】
【化２７６】
2019510782.tif 000289
【１００２】
((R)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(30mg、0.073mmol)のMeOH(0.5mL)中溶液に、NaCNBH3(22.85mg、0.364mmol)、プロパン-2-オン(0.02mL、0.273mmol)及びAcOH(4.37mg、0.073mmol)を添加した。得られた混合物を室温で2時間撹拌した。さらなるプロパン-2-オン(0.02mL、0.273mmol)、AcOH(4.37mg、0.073mmol)及びNaCNBH3(22.85mg、0.364mmol)を添加し、得られた混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により精製した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮し、(S)-6-ベンジル-N4-(3-(3-フルオロ-1-イソプロピルピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(22mg、0.044mmol、59.9％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.64分、[MH]＋=455.3。
【１００３】
実施例49：(R)-6-ベンジル-N4-(2-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１００４】
【化２７７】
2019510782.tif 000290
【１００５】
(R)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(180mg、0.471mmol)をDCM(10mL)に溶解させ、アセトン(0.173mL、2.353mmol)及びNa(OAc)3BH(499mg、2.353mmol)を添加し、次いで混合物を室温で週末かけて撹拌した。混合物をNaHCO3溶液(50mL)でクエンチし、DCM(30mL)で抽出し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、無色ガム状物を得た。粗生成物を、MeOH/DCM中0〜10％2M NH3で溶出する25g SNAPカートリッジ上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空中で蒸発させ、(R)-6-ベンジル-N4-(2-(4-イソプロピルモルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(110mg、0.259mmol、55.1％収率)を無色泡状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.61分、[MH]＋=425。
【１００６】
実施例50：(±)-6-ベンジル-N4-(3-(4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１００７】
【化２７８】
2019510782.tif 000291
【１００８】
(±)-tert-ブチル3-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(7.1mg、0.013mmol)の1,4-ジオキサン(0.1mL)中溶液に、HCl(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、200μL、0.800mmol)を添加した。混合物を室温で3.5時間撹拌した。混合物をN2流下で蒸発乾固させ、残渣をMeOH(約0.5mL)に再溶解させ、MeOHで予め湿らせた1g SCX2イオン交換カートリッジに適用した。カートリッジをMeOH(2×5mL)で溶出し、その後MeOH中2Mアンモニア溶液(3×5mL)で溶出した。SCX精製に由来する塩基性画分を合わせ、N2流下で蒸発させて、黄色ガラス状物；(±)-6-ベンジル-N4-(3-(4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(4.0mg、9.29μmol, 69.4％収率)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=0.64分、[MH]＋についてm/z=431。
【１００９】
実施例51：6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０１０】
【化２７９】
2019510782.tif 000292
【１０１１】
2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(150mg、0.485mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.254mL、1.455mmol)及びHATU(277mg、0.727mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(1R,5S,6s)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(132mg、0.970mmol)を添加し、反応をさらに3時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3溶液(10mL)で抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のDMSO:MeCN(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(28.5mg)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.86分、[MH]＋=391.4。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.58(br. s., 1 H) 8.25(d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.03-8.16(m, 1 H) 7.78(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.32(br. d, J=2. 4 Hz, 1 H) 7.27(d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.07-7.16(m, 2 H) 6.93(d, J=7.1 Hz, 1 H) 6.51(t, J=2. 1 Hz, 1 H) 4.46(s, 2 H) 3.99(d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.70(d, J=8.6 Hz, 2 H) 2.96(d, J=5.1 Hz, 3 H) 2.68(d, J=2. 4 Hz, 1 H) 1.83(br. s, 2 H)。
【１０１２】
実施例52：(S)-6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-(3-(3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０１３】
【化２８０】
2019510782.tif 000293
【１０１４】
(R)-tert-ブチル3-(3-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(340mg、0.616mmol)をDCM(5mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、MeOHで溶出した後2Mアンモニア/MeOHで溶出するスルホン酸SPE(SCX、2g)により精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。粗生成物を1:1のDMSO:MeCN(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(112mg)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.88分、[MH]＋=452.5。
【１０１５】
実施例53：N2-メチル-N4-(2-((R)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例54：N2-メチル-N4-(2-((R)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-((R*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０１６】
【化２８１】
2019510782.tif 000294
【１０１７】
N2-メチル-N4-(2-((R)-モルホリン-2-イル)エチル)-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(30mg)をキラル分離に供した。カラム上に0.5mL注入を行い、これを10％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)で溶出した、流速=42.5mL/分、検出：280nmのUVダイオードアレイ(帯域幅140nm、基準400nm帯域幅100nm)、カラム：Chiralcel OD-H(250×30mm)。18〜20.5分からの画分をまとめてピーク1と標識し、22〜25分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後EtOH(3×4mL)にとり、風袋したガラスバイアルに移して、これらをN2流下で吹き付けて乾固させた。
【１０１８】
ピーク1は、実施例53(8.7mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.88分、[MH]＋=397.4。
【１０１９】
ピーク2は、実施例54(9.9mg)を提供した。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.88分、[MH]＋=397.4。
【１０２０】
実施例55：6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０２１】
【化２８２】
2019510782.tif 000295
【１０２２】
(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(340mg、0.694mmol)をDCM(5mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。TFA(0.5mL、6.49mmol)を再度添加し、反応をさらに1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをMeOH中にロードし、MeOHで溶出した後2Mアンモニア/MeOHで溶出するスルホン酸SPE(SCX、2g)により精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させて粗生成物を得た。粗生成物を1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させたが、依然として不純であった。粗生成物を1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(24mg)を黄色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.77分、[MH]＋=390.4。
【１０２３】
実施例56：(R)-6-ベンジル-N4-(2-(3-フルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０２４】
【化２８３】
2019510782.tif 000296
【１０２５】
(R)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート(200mg、0.401mmol)をDCM(3mL)に溶解させ、TFA(1mL)を添加し、次いで混合物を室温で2時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をMeOHに溶解させて5g SCXカートリッジ上にロードし、これをMeOH(20mL)で洗浄し、その後MeOH中2M NH3で溶出し、溶出液を真空中で蒸発させて、(R)-6-ベンジル-N4-(2-(3-フルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(135mg、0.339mmol、収率84％)を無色泡状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.61分、[MH]＋=399。
【１０２６】
実施例57：N2-メチル-N4-(3-((S)-モルホリン-2-イル)プロピル)-6-((R*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０２７】
【化２８４】
2019510782.tif 000297
【１０２８】
(S)-tert-ブチル2-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((R*)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(151mg、0.296mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で一晩撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮し、サンプルをMeOH中にロードし、MeOHで溶出した後2Mアンモニア/MeOHで溶出するスルホン酸SPE(SCX)1gにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(36.6mg)を黄色ゲル状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.91分、[MH]＋=411.4。
【１０２９】
実施例58：N4-((1R,5S,6s)-3-アセチル-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０３０】
【化２８５】
2019510782.tif 000298
【１０３１】
6-ベンジル-N4-((1R,5S)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(120mg、0.342mmol)をDMF(5mL)にとった。塩化アセチル(0.146mL、2.055mmol)及びEt3N(0.095mL、0.685mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、水(10mL)で洗浄した。有機相をNa2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)で洗浄した。有機相を真空中で濃縮し、所望の生成物(53mg)が褐色油状物として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.84分、[MH]＋=393.4。
【１０３２】
実施例59：(R)-6-ベンジル-N4-(2-(4-(2,2-ジフルオロエチル)モルホリン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０３３】
【化２８６】
2019510782.tif 000299
【１０３４】
MeCN(1mL)中の(R)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(22mg、0.058mmol)、2-ブロモ-1,1-ジフルオロエタン(25.01mg、0.173mmol)、K2CO3(15.90mg、0.115mmol)をマイクロウェーブバイアル中に密封し、Biotage(登録商標) Initiatorマイクロウェーブ中で140℃に2時間加熱した。さらなる2-ブロモ-1,1-ジフルオロエタン(25.01mg、0.173mmol)を添加し、反応を密封して、マイクロウェーブ中でさらに1時間140℃に加熱した。反応を真空中で濃縮し、残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)で抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(9.3mg)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.02分、[MH]＋=447.4。
【１０３５】
実施例60：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(4-メチル-3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０３６】
【化２８７】
2019510782.tif 000300
【１０３７】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(51.9mg、0.192mmol)、4-(3-アミノプロピル)-1-メチルピペラジン-2-オン(35.0mg、0.204mmol)及びHATU(96mg、0.252mmol)のDMF(1mL)中混合物に、DIPEA(0.100mL、0.573mmol)を添加した。混合物を室温で3時間20分間撹拌した。さらなるDMF(0.20mL)中4-(3-アミノプロピル)-1-メチルピペラジン-2-オン(11.5mg、0.067mmol)を添加し、混合物をさらに1時間撹拌した。さらなるHATU(28.0mg、0.074mmol)を添加した。撹拌をさらに30分間続けた。混合物を約65時間静置し、その後これを室温でさらに2.5時間撹拌した。溶液をDMSO(1mL)で希釈し、MDAP(2×1mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、黄色ガム状物；6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(4-メチル-3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(53.2mg、0.126mmol、収率65.4％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.84分、[MH]＋についてm/z=424。
【１０３８】
実施例61：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０３９】
【化２８８】
2019510782.tif 000301
【１０４０】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(53.2mg、0.197mmol)、4-(3-アミノプロピル)ピペラジン-2-オン(35.3mg、0.225mmol)及びHATU(89mg、0.234mmol)のDMF(1mL)中混合物に、DIPEA(0.100mL、0.573mmol)を添加した。混合物を室温で9時間撹拌した。3時間10分後に、さらなるDMF(0.20mL)中の4-(3-アミノプロピル)ピペラジン-2-オン(8.9mg、0.057mmol)を添加した。4時間20分後に、さらなるHATU(26.7mg、0.070mmol)を添加した。溶液をDMSO(合計約2mL以下)で希釈し、MDAP(2×1mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、淡黄色のガラス状固体；6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(3-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(57.9mg、0.141mmol、71.8％収率)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.80分、[MH]＋についてm/z=410。
【１０４１】
実施例62：(±)-tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【１０４２】
【化２８９】
2019510782.tif 000302
【１０４３】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(97.4mg、0.360mmol)、(±)-tert-ブチル4-(2-アミノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(99.6mg、0.377mmol)及びHATU(203.6mg、0.535mmol)のDMF(1.8mL)中溶液に、DIPEA(0.189mL、1.081mmol)を添加した。混合物を室温で45分間撹拌した。反応混合物をMeCNで総体積3mLに希釈し、MDAP(3×1mL注入；ギ酸法)により直接精製し、所要の画分を合わせて真空中で蒸発させた。残渣をDCMに懸濁させ、風袋したバイアルに移し、溶媒をN2流下で蒸発させて、白色のパリパリした泡状物；(±)-tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(114.3mg、0.221mmol、61.4％収率)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=1.23分、[MH]＋についてm/z=517。
【１０４４】
実施例63：N4-(3-((R)-3-フルオロピペリジン-3-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド、未定義の立体中心におけるジアステレオマーの1:1混合物
【１０４５】
【化２９０】
2019510782.tif 000303
【１０４６】
(3S)-tert-ブチル3-フルオロ-3-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(147mg、0.28mmol)をDCM(5mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮し、所望の生成物(83mg)が褐色油状物として得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.00分、[MH]＋=427。
【１０４７】
実施例64：6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩
【１０４８】
【化２９１】
2019510782.tif 000304
【１０４９】
tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート(50.2mg、0.099mmol)の1,4-ジオキサン(1mL)中溶液に、HCl(1,4-ジオキサン中4.0M、1.0mL、4.00mmol)を滴下添加した。混合物を室温で5時間10分間撹拌した。さらなるHCl(1,4-ジオキサン中4.0M、0.2mL、0.800mmol)を3時間20分後に添加した。混合物をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、黄色固体(48.6mg)を得た。これをジエチルエーテル(2×1mL)で粉砕し、残渣を空気中で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、黄色固体；6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-オキソピペラジン-1-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(39.3mg、0.088mmol、収率89％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.79分、[MH]＋についてm/z=410。
【１０５０】
実施例65：6-ベンジル-N4-((1R,5S,6s)-3-(2,2-ジフルオロエチル)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０５１】
【化２９２】
2019510782.tif 000305
【１０５２】
6-ベンジル-N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(27mg、0.077mmol)、K2CO3(21.30mg、0.154mmol)、DMF(1mL)及び2-ブロモ-1,1-ジフルオロエタン(33.5mg、0.231mmol)をマイクロウェーブバイアルに添加した。反応容器を密封し、Biotage(登録商標) Initiatorマイクロウェーブ中で140℃に1時間加熱した。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(12mg)を褐色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.63分、[MH]＋=415.2。
【１０５３】
実施例66：(±)-6-ベンジル-N4-(2-(4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩
【１０５４】
【化２９３】
2019510782.tif 000306
【１０５５】
(±)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(119.6mg、0.232mmol)の1,4-ジオキサン(2mL)中溶液に、HCl(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、2.3mL、9.20mmol)を添加した。混合物を室温で2.25時間撹拌した。混合物をN2流下で蒸発乾固させ、残渣をジエチルエーテル(2×4mL)で粉砕した。この固体材料を真空中で乾燥させ、クリーム色固体；(±)-6-ベンジル-N4-(2-(4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(110.6mg、0.244mmol)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=0.62分、[MH]＋についてm/z=417。
【１０５６】
実施例67：(±)-6-ベンジル-N4-(2-(3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩
【１０５７】
【化２９４】
2019510782.tif 000307
【１０５８】
(±)-tert-ブチル4-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(103.5mg、0.200mmol)の1,4-ジオキサン(2mL)中溶液に、HCl(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、2.0mL、8.00mmol)を添加した。混合物を室温で2.25時間撹拌した。混合物をN2流下で蒸発乾固させ、残渣をジエチルエーテル(2×4mL)で粉砕した。この固体材料を真空中で乾燥させ、クリーム色固体；(±)-6-ベンジル-N4-(2-(3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(93.4mg、0.206mmol)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=0.60分、[MH]＋についてm/z=417。
【１０５９】
実施例68：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(4-シアノベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０６０】
【化２９５】
2019510782.tif 000308
【１０６１】
2-(4-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(57mg、0.193mmol)のDMF(0.8mL)中溶液に、HATU(110mg、0.290mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(40mg、0.295mmol)及びDIPEA(0.169mL、0.965mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温にて空気中で1時間撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により精製し、所望の生成物を含有する画分を飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層をDCM(2×20mL)で抽出し、乾燥させ(Na2SO4)、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(4-シアノベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(33mg、0.079mmol、40.9％収率)を薄桃色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.82分、[MH]＋=377.2。
【１０６２】
実施例69：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(4-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０６３】
【化２９６】
2019510782.tif 000309
【１０６４】
2-(4-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(50mg、0.176mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.092mL、0.528mmol)及びHATU(100mg、0.264mmol)を添加し、反応を室温で10分間撹拌したままにした。(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(35.8mg、0.264mmol)を添加し、反応をさらに2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(9.8mg)を褐色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.99分、[MH]＋=366.3。
【１０６５】
実施例70：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S)-ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例71：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R)-ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０６６】
【化２９７】
2019510782.tif 000310
【１０６７】
(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(15mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1.5mL)に溶解させた。注入：1.5mLの溶液をカラム上に注入した(30％EtOH/ヘプタン、流速=20mL/分、検出波長=215nm、カラム2cm×25cm(R:R) Whelk-O1、シリアルNo.49788)。17〜19.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。20.5〜24分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１０６８】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例70(7mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.72分、[MH]＋=368.3。
【１０６９】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例71(7mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.72分、[MH]＋=368.3。
【１０７０】
実施例72：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０７１】
【化２９８】
2019510782.tif 000311
【１０７２】
2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(50mg、0.176mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.092mL、0.528mmol)、HATU(100mg、0.264mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(35.8mg、0.264mmol)を添加し、反応を室温で1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAc(10mL)にとり、NaHCO3(10mL)を用いて抽出した。有機相をブライン(10mL)で洗浄し、その後Na2SO4で乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(23mg)を白色粉末として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.96分、[MH]＋=366.4。
【１０７３】
実施例73：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-シアノベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０７４】
【化２９９】
2019510782.tif 000312
【１０７５】
2-(3-シアノベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(47mg、0.159mmol)のDMF(0.8mL)中溶液に、HATU(91mg、0.239mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(40mg、0.295mmol)及びDIPEA(0.139mL、0.796mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温にて空気中で1時間撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を飽和NaHCO3溶液とDCMとに分配した。有機層(2×20mL)を抽出し、乾燥させ(Na2SO4)、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(3-シアノベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(37mg、0.088mmol、55.6％収率)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.83分、[MH]＋=377.3。
【１０７６】
実施例74：(R)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)-N4-(2-(モルホリン-2-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０７７】
【化３００】
2019510782.tif 000313
【１０７８】
(R)-tert-ブチル2-(2-(2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)モルホリン-4-カルボキシレート(50mg、0.101mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。次いで、反応を真空中で濃縮した。粗生成物をMeOH中にロードし、MeOH、その後2Mアンモニア/MeOHを用いたスルホン酸SPE(SCX)1gにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。粗生成物を、最小限のDCM中で10g SNAPシリカカートリッジに適用し、0〜100％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。カラムを、DCM中0〜100％(MeOH中10％2M NH3)を用いて伸長(extend)させた。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(15mg)を黄色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.90分、[MH]＋=397.4。
【１０７９】
実施例75：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０８０】
【化３０１】
2019510782.tif 000314
【１０８１】
2-(2-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(47.8mg、0.159mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(23.40mg、0.173mmol、Manchester Organicsから市販されている)及びHATU(75mg、0.197mmol)のDMF(1mL)中溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.111mL、0.637mmol)を添加した。溶液を室温で30分間撹拌し、その後揮発性物質をN2流下で蒸発させて、粘性の暗橙色固体を得た。これを約1:1のDMSO:DMF(2mL)に再溶解させ、MDAP(2×1mL注入、高pH法)により直接精製した。所要の画分をN2流下で蒸発させ、MeOH(各約2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液をN2流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、白色固体；N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(49.1mg、0.129mmol、収率81％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)；Rt=0.93分、[MH]＋についてm/z=382。
【１０８２】
実施例76：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０８３】
【化３０２】
2019510782.tif 000315
【１０８４】
2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(47.9mg、0.167mmol)のDMF(0.7mL)中溶液に、HATU(95mg、0.251mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン(25mg、0.252mmol)及びDIPEA(0.10mL、0.573mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(18.4mg、0.048mmol、28.4％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.73分、[MH]＋=368.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.28(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.85-8.00(m, 2 H) 7.21-7.45(obs. m, 5 H) 6.85(br. s., 1 H) 5.90(s, 1 H) 4.05(dd, J=8.6, 1.7 Hz, 2 H) 3.87-3.99(m, 1 H) 3.75(d, J=9.0 Hz, 2 H) 3.04(d, J=5.1 Hz, 3 H) 2.70-2.79(m, 1 H) 1.83-1.95(m, 2 H)。
【１０８５】
実施例77：(+/-)-tert-ブチル2-(3-(2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート
【１０８６】
【化３０３】
2019510782.tif 000316
【１０８７】
2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(80mg、0.266mmol)をDMF(2mL)に溶解させ、次いでHATU(152mg、0.400mmol)及びEt3N(0.074mL、0.533mmol)を添加し、混合物を室温で20分間撹拌して、その後tert-ブチル2-(3-アミノプロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(65.1mg、0.266mmol)を添加し、溶液を2時間撹拌した。得られた混合物をMDAP(高pH法)により直接精製し、tert-ブチル2-(3-(2-(3-メトキシベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(85mg、0.161mmol、収率60.6％)を薄黄色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=1.17分、[MH]＋=527.4。
【１０８８】
実施例78：(±)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート
【１０８９】
【化３０４】
2019510782.tif 000317
【１０９０】
2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(99.0mg、0.366mmol)、(±)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(99.7mg、0.377mmol)及びHATU(202.9mg、0.534mmol)のDMF(1.8mL)中溶液に、DIPEA(0.192mL、1.099mmol)を添加した。混合物を室温で45分間撹拌した。反応混合物をMeCNで総体積3mLに希釈し、MDAP(3×1mL注入；ギ酸法)により直接精製し、所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させた。残渣をDCMに懸濁させ、風袋したバイアルに移し、溶媒をN2流下で蒸発させて、白色のパリパリした泡状物；(±)-tert-ブチル3-(2-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)エチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(131.5mg、0.255mmol、69.5％収率)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)；Rt=1.23分、[MH]についてm/z=517。
【１０９１】
実施例79〜87：
実施例79〜87を、先の実施例と同様に調製した。
【１０９２】
【表１１】
2019510782.tif 000318
2019510782.tif 000319
【１０９３】
実施例88：N2-メチル-N4-(3-((S)-モルホリン-2-イル)プロピル)-6-((S*)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０９４】
【化３０５】
2019510782.tif 000320
【１０９５】
(2S)-tert-ブチル2-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)モルホリン-4-カルボキシレート(108mg、0.21mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをメタノール中にロードし、メタノールで溶出した後2Mアンモニア/メタノールで溶出するスルホン酸SPE(SCX、1g)により精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(1mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(32mg)を透明油状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.90分、[MH]＋=411.2。
【１０９６】
実施例89：6-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１０９７】
【化３０６】
2019510782.tif 000321
【１０９８】
2-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(67mg、0.11mmol、50重量％)のDMF(0.8mL)中溶液に、DIPEA(0.06mL、0.344mmol)を添加し、その後HATU(61.6mg、0.16mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(21.96mg、0.162mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、6-((1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(15mg、0.036mmol、収率34％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.43分、[MH]＋=392.3。
【１０９９】
実施例90：N4-((1R,5S,6s)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１００】
【化３０７】
2019510782.tif 000322
【１１０１】
(1R,5S,6s)-tert-ブチル6-(2-(3-メチルベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサン-3-カルボキシレート(295mg、0.635mmol)をDCM(5mL)にとった。TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加し、反応を室温で3時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルをメタノール中にロードし、メタノールで溶出した後2Mアンモニア/メタノールで溶出するスルホン酸SPE(SCX、1g)により精製した。適切な画分を合わせ、真空中で蒸発させた。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(3mL)に溶解させ、MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物(68mg)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.62分、[MH]＋=365.3。
【１１０２】
実施例91：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１０３】
【化３０８】
2019510782.tif 000323
【１１０４】
2-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(154mg、0.471mmol)をDMF(5mL)にとった。DIPEA(0.247mL、1.41mmol)、HATU(268mg、0.71mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(96mg、0.706mmol)を添加し、反応を2時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(15mL)にとり、水性重炭酸ナトリウム溶液(15mL)及びブライン(2×15mL)を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中でSNAP ULTRAシリカカートリッジ(25g)に適用し、シクロヘキサン中5〜50％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((3-フルオロ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(96mg、0.235mmol、50％収率)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.89分、[MH]＋=409.4。
【１１０５】
実施例92：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１０６】
【化３０９】
2019510782.tif 000324
【１１０７】
2-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(81mg、0.142mmol、55重量％)のDMF(0.7mL)中溶液に、DIPEA(0.06mL、0.344mmol)を添加し、その後HATU(85mg、0.224mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(30mg、0.22mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(3-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(34mg、0.08mmol、収率58％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.95分、[MH]＋=396.3。
【１１０８】
実施例93：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((2-シアノ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１０９】
【化３１０】
2019510782.tif 000325
【１１１０】
密封したマイクロウェーブバイアル中の、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-2-カルボニトリル(27.0mg、0.10mmol)、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(30.9mg、0.10mmol)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(11.0mg、0.02mmol)及び炭酸カリウム(29.0mg、0.21mmol)の1,4-ジオキサン(0.80mL)及び水(0.40mL)中混合物を、マイクロウェーブ反応器中で80℃にて30分間加熱した。反応混合物を、2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(約10mL)で洗浄した。濾液に水(10mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、褐色ガム状物を得た。これをDMSO(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。適切な画分を窒素流下で蒸発させ、メタノール(約2mL)及びジクロロメタン(約2mL)に再溶解させた。この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((2-シアノ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(8.7mg、0.02mmol、21％収率)を白色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]＋=416.4。
【１１１１】
実施例94：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((3-シアノ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１１２】
【化３１１】
2019510782.tif 000326
【１１１３】
密封したマイクロウェーブバイアル中の、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-インドール-3-カルボニトリル(80重量％、23.8mg、0.07mmol)、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(20.6mg、0.07mmol)、[1,1′-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(8.9mg、0.01mmol)及び炭酸カリウム(18.2mg、0.13mmol)の1,4-ジオキサン(0.50mL)及び水(0.25mL)中混合物を、マイクロウェーブ反応器中で80℃にて30分間加熱した。反応混合物を、2.5gセライトカートリッジを通して濾過し、カートリッジを酢酸エチル(約10mL)で洗浄した。濾液にブライン(10mL)を添加し、層を分離した。水性層をさらなる酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。有機層を合わせ、水(2×10mL)で洗浄した。有機相を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させ、褐色固体を得た。これをDMSO(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、メタノール(約2mL)及びジクロロメタン(約2mL)に再溶解させた。この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((3-シアノ-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(14.0mg、0.03mmol、収率51％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.82分、[MH]＋=416.4。
【１１１４】
実施例95：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-フェニルプロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１１５】
【化３１２】
2019510782.tif 000327
【１１１６】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルプロピル)イソニコチン酸(80mg、0.20mmol)のDMF(0.7mL)中溶液に、DIPEA(0.10mL、0.573mmol)を添加し、その後HATU(115mg、0.302mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(40.9mg、0.30mmol)を添加した。得られた反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により直接精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-フェニルプロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(26mg、0.07mmol、32％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.02分、[MH]＋=380.3。
【１１１７】
実施例96：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((R*)-1-フェニルプロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例97：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((S*)-1-フェニルプロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１１８】
【化３１３】
2019510782.tif 000328
【１１１９】
実施例95(24mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(10％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralpak AD-H(5μm)、ロット番号#ADH13231)。注入総数=1。25〜28.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。31〜36分からの画分をまとめてピーク2と標識した。ピーク2からの画分は、純度を高めるために上記のようなさらなる精製を要した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１１２０】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例96(10mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.02分、[MH]＋=380.3。
【１１２１】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例97(11mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=1.02分、[MH]＋=380.3。
【１１２２】
実施例98：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１２３】
【化３１４】
2019510782.tif 000329
【１１２４】
2-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(129mg、0.37mmol)をDMF(5mL)にとった。(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(74.2mg、0.548mmol)、HATU(208mg、0.548mmol)及びDIPEA(0.191mL、1.10mmol)を添加し、反応を室温で1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。サンプルを1:1のMeCN:DMSO(3mL)に溶解させ、 MDAP(高pH法)により精製した。溶媒を真空中で蒸発させ、所要の生成物、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(43mg、0.099mmol、27％収率)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.82分、[MH]＋=435.4。
【１１２５】
実施例99：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((3-(2,2,2-トリフルオロアセチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１２６】
【化３１５】
2019510782.tif 000330
【１１２７】
2-(メチルカルバモイル)-6-((3-(2,2,2-トリフルオロアセチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)イソニコチン酸(550mg、1.36mmol)をDCM(20mL)に懸濁させ、Et3N(0.473mL、3.39mmol)を添加し、透明溶液を得た。HATU(1032mg、2.71mmol)を添加し、得られた懸濁液を20分間撹拌し、次いで(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(368mg、2.71mmol)を添加して混合物を3時間撹拌し、濃懸濁液を得た。これを真空中で蒸発させ、残渣を水(20mL)で2時間撹拌し、その後得られた懸濁液を濾過して水(10mL)及びエーテル(10mL)で洗浄し、薄黄色の不純固体を得た。100mgの固体をMDAP(ギ酸法)により精製し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((3-(2,2,2-トリフルオロアセチル)-1H-インドール-4-イル)メチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(45mg、0.093mmol、7％収率)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.95分、[MH]＋=487.3。
【１１２８】
実施例100：(±)-6-ベンジル-N4-(3-(3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩
【１１２９】
【化３１６】
2019510782.tif 000331
【１１３０】
(±)-tert-ブチル4-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(46.5mg、0.09mmol)の1,4-ジオキサン(15mL)中溶液に、塩酸(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、0.90mL、3.60mmol)を添加した。混合物を室温で5.75時間撹拌した。5時間後、さらなる塩酸(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、1.0mL、4.00mmol)を添加し、さらに50分間撹拌を続けた。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、粘性の黄色残渣をエーテル(3×5mL)中で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣をエーテル(3mL)中懸濁液として風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(±)-6-ベンジル-N4-(3-(3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(39.4mg、0.08mmol、収率96％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.62分、[MH]＋についてm/z=431。
【１１３１】
実施例101：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１３２】
【化３１７】
2019510782.tif 000332
【１１３３】
メタノール(3mL)中のN4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(300mg、0.43mmol、55重量％)を、マイクロウェーブバイアルに添加した。これを60℃で45分間加熱した。反応混合物をマイクロウェーブに75℃で40分間再び供した。反応混合物をマイクロウェーブに85℃で3時間45分間再び供した。反応混合物を真空中で濃縮した。SiO2上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を実施した(Biotage SNAP 10g、40〜100％酢酸エチル/シクロヘキサンで溶出)。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮して、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(52mg、0.12mmol、29％収率)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.86分、[MH]＋=382.3。
【１１３４】
実施例102：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-1-(3-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例103：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-1-(3-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１３５】
【化３１８】
2019510782.tif 000333
【１１３６】
実施例92(30mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させ、次いで1体積の移動相で希釈した。注入：レオダイン製バルブを介した0.4mL手動注入。カラム：Chiralcel OJ-H(250×30mm)。流速：42.5mL/分(54バール)。検出：280nmのUVダイオードアレイ(帯域幅140nm、基準400nm帯域幅100nm)。移動相A：0.2(v/v)％イソプロピルアミンを含有するヘプタン。移動相B：0.2(v/v)％イソプロピルアミンを含有するエタノール。均一濃度法 - 95:5の移動相A:移動相B。ランタイム- 55分間。39〜43分からの画分をまとめてピーク1と標識した。45〜51分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１１３７】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例102(10mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.95分、[MH]＋=396.3。
【１１３８】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例103(20mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.95分、[MH]＋=396.3。
【１１３９】
実施例104：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例105：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１４０】
【化３１９】
2019510782.tif 000334
【１１４１】
tert-ブチル2-(ヒドロキシ(フェニル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチネート(0.42g、1.23mmol)をジクロロメタン(10mL)に溶解させ、N1,N1,N8,N8-テトラメチルナフタレン-1,8-ジアミン(0.789g、3.68mmol)を添加し、その後トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート(0.544g、3.68mmol)を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。さらなるトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート(0.544g、3.68mmol)を添加し、次いで混合物を室温で24時間撹拌した。溶液を0.5M HCl(50mL)とEtOAc(50mL)とに分配した。有機層を乾燥させ、真空中で蒸発させた。その後、残渣をEtOAc(20mL)と0.5M NaOH溶液とに分配し、有機層を捨てて、水性層を2M HClで酸性化した。次いで、これをEtOAc(2×20mL)で抽出し、合わせた有機物を乾燥させて真空中で蒸発させ、ベージュ色固体を得た。粗材料をDCM(10mL)中に懸濁させ、Et3N(0.513mL、3.68mmol)、HATU(0.700g、1.84mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(0.249g、1.84mmol)を添加し、次いで混合物を室温で1時間撹拌した。溶液を水(2×10mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を0〜25％EtOH/EtOAcで溶出する25gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空中で蒸発させ、薄黄色ガム状物(70mg)を得た。
【１１４２】
これをキラルHPLCにより精製した。材料をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(50％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01)。注入総数=2。10.5〜12分からの画分をまとめてピーク1と標識した。13〜15分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１１４３】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例104(18mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.87分、[MH]＋=382.3。
【１１４４】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例105(22mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.87分、[MH]＋=382.3。
1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ ppm 8.29(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.16(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.89-7.98(m, 1 H) 7.39-7.44(m, 2 H) 7.33-7.38(m, 2 H) 7.26-7.32(m, 1 H) 6.87(br. s., 1 H) 5.41(s, 1 H) 4.08(d, J=8.6 Hz, 2 H) 3.78(d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.45(s, 3 H) 3.03(d, J=5.1 Hz, 3 H) 2.79(q, J=2. 3 Hz, 1 H) 1.92(s, 2 H)。
【１１４５】
実施例106：(+/-)-6-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１４６】
【化３２０】
2019510782.tif 000335
【１１４７】
2-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(450mg、1.39mmol)をDMF(15mL)にとった。DIPEA(0.73mL、4.18mmol)、HATU(794mg、2.09mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(283mg、2.09mmol)を添加し、反応を室温で1時間撹拌したままにした。反応を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル(20mL)にとり、水性重炭酸ナトリウム溶液(2×20mL)及びブライン(20mL)を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を最小限のDCM中でSNAP ULTRAシリカカートリッジ(25g)に適用し、シクロヘキサン中5〜40％(3:1のEtOAc:EtOH)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適切な画分を合わせ、真空中で濃縮して、6-(1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(530mg、1.310mmol、収率94％)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.89分、[MH]＋=405.4。
【１１４８】
実施例107：(+/-)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-メチルモルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１４９】
【化３２１】
2019510782.tif 000336
【１１５０】
(+/-)-tert-ブチル2-(3-(2-ベンジル-6-(メチルカルバモイル)イソニコチンアミド)プロピル)-2-メチルモルホリン-4-カルボキシレート(70重量％、91.6mg、0.13mmol)をジクロロメタン(4mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加した。反応を室温で1時間撹拌した。反応を真空中で濃縮した。残渣をジクロロメタン(4mL)にとり、TFA(0.5mL、6.49mmol)を添加して、反応を室温で90分間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、MDAP(高pH法)により精製した。適切な画分を真空中で濃縮し、(+/-)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-メチルモルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(37.3mg、0.09mmol、収率48％)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.87分、[MH]＋=411.5。
【１１５１】
実施例108：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１５２】
【化３２２】
2019510782.tif 000337
【１１５３】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(68mg、0.18mmol)のDCM(1mL)中溶液に、塩化チオニル(0.05mL、0.69mmol)を滴下添加した。次いで、反応混合物を室温で一晩撹拌した。塩化チオニル(0.4mL)を添加し、得られた混合物を1時間撹拌し、次いで真空中で濃縮して、粗N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(97mg、0.13mmol、収率76％、純度53％)を得、これを粗のまま持ち越した。
【１１５４】
メタノール(1.5mL)中のN4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(97mg、0.14mmol、55重量％)をマイクロウェーブバイアルに入れた。これを90℃で1時間加熱した。反応混合物をマイクロウェーブに100℃で30分間再び供した。反応混合物をマイクロウェーブに110℃で20分間再び供した。DMAP(3.4mg、0.03mmol)を添加し、反応混合物をマイクロウェーブに110℃で20分間再び供した。反応混合物を110℃で20分間マイクロウェーブに再び供した。MDAP(高pH法)により精製を実施し、未反応の塩化物を回収した。所望の画分を合わせ、真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(クロロ(ピリジン-2-イル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(15mg、0.04mmol、25％収率、純度90％)を無色油状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.79分、[MH]＋=387.3。
【１１５５】
実施例109：N4-(2-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)エチル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１５６】
【化３２３】
2019510782.tif 000338
【１１５７】
6-ベンジル-N4-(2-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(65mg、0.12mmol)のエタノール(3mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(20.0μL、0.41mmol)を添加した。懸濁液を室温で22.5時間撹拌し、40℃でさらに26時間撹拌した。合計41時間後にさらなるヒドラジン水和物(20.0μL、0.41mmol)添加した。48.5時間後にさらなるエタノール(3mL)を添加し、混合物を室温でをさらに2日間撹拌した。反応混合物を濾過し、カートリッジをエタノール(約20mL)で洗浄した。濾液を真空中で蒸発させた。これをDMSO(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、N4-(2-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)エチル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(24.0mg、0.06mmol、49％収率)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.82分、[MH]＋=399.4。
【１１５８】
実施例110：6-((S*)-1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例111：6-((R*)-1-(1H-インドール-4-イル)エチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１５９】
【化３２４】
2019510782.tif 000339
【１１６０】
実施例106(486mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(50mL)に溶解させた。注入：1.5mLの溶液を、オートサンプラを介してカラム上に注入した(35％EtOH/ヘプタン、流速=20mL/分、検出：280nmのUVダイオードアレイ(帯域幅140nm、基準400nm帯域幅100nm)、カラム 20mm×25cm Regis Whelk O1 [R,R] (5μm))。22〜26分からの画分をまとめてピーク1と標識した。28〜33分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後EtOHを用いて秤量したフラスコに移し、窒素ガス流下でサンプルを吹き付けて乾固させた。
【１１６１】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例110(158mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.90分、[MH]＋=405.3。
【１１６２】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例111(173mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.90分、[MH]＋=405.3。
【１１６３】
実施例112：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１６４】
【化３２５】
2019510782.tif 000340
【１１６５】
(+/-)-2-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(52.3mg、0.17mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(29.5mg、0.22mmol)及びHATU(82.2mg、0.22mmol)のDMF(1.5mL)中混合物に、DIPEA(0.120mL、0.69mmol)を添加した。混合物を室温で2.5時間撹拌し、その後これをDMSOで希釈して、MDAP(ギ酸法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(2-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(53.5mg、0.14mmol、収率81％)を淡黄色ガム状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.98分、[MH]＋=396.3。
【１１６６】
実施例113：N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１６７】
【化３２６】
2019510782.tif 000341
【１１６８】
エタノール(6mL)中の6-ベンジル-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.508g、0.94mmol)に、ヒドラジン水和物(0.184mL、3.75mmol)を添加した。混合物を室温で21.5時間撹拌し、その後さらなるエタノール(20mL)で希釈し、室温でさらに67.5時間撹拌した。混合物を55℃で4.5時間加熱し、その後冷却し、次いで濾過した。溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をメタノール(約20mL)で希釈し、その後窒素流下で蒸発させた。残渣をDMSO(約6mL)に溶解させ、MDAP(2×3mL注入；高pH法)により直接精製した。所要の画分の溶媒を窒素流下で蒸発させた。残渣をメタノールに溶解させて合わせ、その後溶媒を窒素流下で蒸発させて黄色油状物を得、これを真空中で乾燥させた。残渣をエーテル(2×5mL)で粉砕し、母液を毎回デカント除去した。この固体を窒素流下、且つ真空中で乾燥させ、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(0.244g、0.59mmol、収率63％)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)、ピークRt=0.58分、[MH]＋についてm/z=413。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.87(t, J=5.5 Hz, 1 H) 8.65-8.74(m, 1 H) 8.24(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.79(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.27-7.40(m, 4 H) 7.18-7.25(m, 1 H) 4.39(t, J=4.8 Hz, 1 H) 4.22(s, 2 H) 3.92(dd, J=11.0, 4.9 Hz, 2 H) 3.20-3.28(obs. m, 2 H) 3.15(t, J=10.8 Hz, 2 H) 2.87(d, J=4.6 Hz, 3 H) 2.71-2.82(m, 1 H) 1.47-1.63(m, 4 H)。2つの交換可能なプロトンは観測されなかった。
【１１６９】
実施例114：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１７０】
【化３２７】
2019510782.tif 000342
【１１７１】
2-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(73mg、0.12mmol)のDMF(0.8mL)中溶液に、HATU(66.2mg、0.174mmol)を添加し、その後DIPEA(0.05mL、0.29mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(23.6mg、0.17mmol)を添加した。得られた反応混合物を週末かけて撹拌した。反応混合物を、飽和LiCl溶液(10mL)とEtOAc(10mL)とに分配した。有機層を分離し、水性層をEtOAc(3×10mL)のさらなる部分で抽出した。合わせた有機相を疎水性フリットで乾燥させ、次いで真空中で濃縮した。これをSiO2上のフラッシュクロマトグラフィー(Biotage SNAP 10gカートリッジ、溶出液：1〜100％EtOAc/シクロヘキサン、0〜100％(EtOAc中25％EtOH)/シクロヘキサン)により精製した。合わせた所望の画分を真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-メトキシ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(40.9mg、0.10mmol、収率85％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]＋=396.4。
【１１７２】
実施例115：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１７３】
【化３２８】
2019510782.tif 000343
【１１７４】
2-(メチルカルバモイル)-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)イソニコチン酸(74mg、0.22mmol)をDMF(0.8mL)に溶解させた。DIPEA(0.190mL、1.09mmol)を添加し、その後HATU(120mg、0.32mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(48mg、0.35mmol)を添加した。反応混合物を窒素下で2.5時間撹拌した。反応混合物をMDAP(高pH法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-(1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(48mg、0.10mmol、収率47％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.75分、[MH]＋=421.4。
【１１７５】
実施例116：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(2-メトキシフェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１７６】
【化３２９】
2019510782.tif 000344
【１１７７】
窒素下で約0℃の(2-メトキシフェニル)マグネシウムブロミド(THF中1.0M、1.4mL、1.40mmol)の撹拌溶液に、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(99.3mg、0.34mmol)の無水テトラヒドロフラン(3mL)中懸濁液を滴下添加した。得られた褐色懸濁液を0℃で窒素下に3.5時間撹拌した。2.5時間後、さらなる(2-メトキシフェニル)マグネシウムブロミド(THF中1.0M、0.50mL、0.50mmol)を滴下添加した。反応混合物に、飽和水性塩化アンモニウム溶液(2mL)及び水(2mL)を滴下添加し、混合物を0℃でさらに5分間撹拌した。層を分離し、水相を酢酸エチル(3×5mL)で抽出した。有機層を合わせ、疎水性フリットを取り付けたカートリッジを通して濾過した。濾液を窒素流下で蒸発させた。これをDMSO(2mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させ、次いでメタノール(約5mL)中に移し、この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(2-メトキシフェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(56.4mg、0.14mmol、収率41％)を橙色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.77分、[MH]＋=398.4。
【１１７８】
実施例117：tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマーの混合物)
【１１７９】
【化３３０】
2019510782.tif 000345
【１１８０】
(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(64.5mg、0.23mmol)及びHATU(104.4mg、0.28mmol)の混合物に、(±)-tert-ブチル4-(3-アミノプロピル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(67.8mg、0.24mmol)のDMF(1.8mL)中溶液を添加した。DIPEA(0.119mL、0.68mmol)を添加し、混合物を室温で2.5時間撹拌した。混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで総体積2mLに希釈し、MDAP(2×1mL注入；ギ酸法)により直接精製し、所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン/メタノール(約10mL)の2:1混合物に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(88.7mg、0.16mmol、72％収率)を無色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)、ピークRt=1.30分間、[MH]＋についてm/z=545。
【１１８１】
実施例118：tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマーの混合物)
【１１８２】
【化３３１】
2019510782.tif 000346
【１１８３】
(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(66.0mg、0.23mmol)及びHATU(105.0mg、0.28mmol)の混合物に、(±)-tert-ブチル4-(2-アミノエチル)-3,3-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(74.7mg、0.28mmol)のDMF(1.8mL)中溶液を添加した。DIPEA(0.122mL、0.70mmol)を添加し、混合物を室温で2.5時間撹拌した。混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで総体積2mLに希釈し、MDAP(2×1mL注入；ギ酸法)により直接精製し、所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン/メタノール(約10mL)の2:1混合物に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(79.6mg、0.15mmol、65％収率)を無色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)、ピークRt=1.28分、[MH]＋についてm/z=531。
【１１８４】
実施例119：tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマーの混合物)
【１１８５】
【化３３２】
2019510782.tif 000347
【１１８６】
(S)-2-(メチルカルバモイル)-6-(1-フェニルエチル)イソニコチン酸(66.4mg、0.234mmol)及びHATU(108.0mg、0.28mmol)の混合物に、(±)-tert-ブチル3-(2-アミノエチル)-4,4-ジフルオロピペリジン-1-カルボキシレート(52.4mg、0.20mmol)のDMF(1.8mL)中溶液を添加した。DIPEA(0.122mL、0.70mmol)を添加し、混合物を室温で2.5時間撹拌した。混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで総体積2mLに希釈し、MDAP(2×1mL注入；ギ酸法)により直接精製し、所要の画分を合わせ、真空中で蒸発させた。残渣をジクロロメタン/メタノール(約10mL)の2:1混合物に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(63.7mg、0.12mmol、収率51％)を無色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=1.28分、[MH]＋についてm/z=531。
【１１８７】
実施例167：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-2-メトキシ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例120：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-2-メトキシ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１８８】
【化３３３】
2019510782.tif 000348
【１１８９】
実施例114(35mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)及びヘプタン(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(10％EtOH/ヘプタン、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralcel OD-H(5μm)、ロット番号#ODH11158-01)。注入総数=4。18〜20.6分からの画分をまとめてピーク1と標識した。20.6〜21.2分からの画分をまとめて混合と標識し、21.2〜24.6分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた混合画分を真空中で濃縮し、上記の方法を用いて再処理した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１１９０】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例167(10mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]＋=396.4。
【１１９１】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例120(8mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.88分、[MH]＋=396.4。
【１１９２】
実施例121：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-ヒドロキシ(2-メトキシフェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例122：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-ヒドロキシ(2-メトキシフェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１１９３】
【化３３４】
2019510782.tif 000349
【１１９４】
実施例116(48mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH/ヘプタン、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralcel OD-H(5μm)、ロット番号ODH11158-01)。注入総数=1。10.5〜13分からの画分をまとめてピーク1と標識した。15.5〜20分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１１９５】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例121(17.1mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.77分、[MH]＋=398.4。
【１１９６】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例122(14.4mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.77分、[MH]＋=398.4。
【１１９７】
実施例123：N4-(2-((S*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー1)
【１１９８】
【化３３５】
2019510782.tif 000350
【１１９９】
(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(31.8mg、0.06mmol、中間体203)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液)(1.0mL、4.00mmol)を添加した。混合物を室温で5時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(2-((S*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー1)(27.8mg、0.06mmol、収率99％)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.64分、[MH]＋についてm/z=431。
【１２００】
実施例124：N4-(2-((R*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)
【１２０１】
【化３３６】
2019510782.tif 000351
【１２０２】
(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(32.8mg、0.06mmol、中間体204)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、1.0mL、4.00mmol)を添加した。混合物を室温で5時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(2-((R*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)(29.1mg、0.06mmol)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.64分、[MH]＋についてm/z=431。
【１２０３】
実施例125：(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２０４】
【化３３７】
2019510782.tif 000352
【１２０５】
(±)-2-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(59.4mg、0.168mmol)及びHATU(99.8mg、0.26mmol)の混合物に、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(26.2mg、0.19mmol)及びDMF(0.8mL)を添加した。DIPEA(0.088mL、0.50mmol)を添加し、混合物を室温で90分間撹拌した。さらなる(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(17.2mg、0.13mmol)を添加し、30分間撹拌を続け、その後さらなるHATU(69.5mg、0.18mmol)及びDIPEA(0.060mL、0.34mmol)を添加し、さらに45分間撹拌を続けた。15時間静置した後、混合物を窒素流下で濃縮し、アセトニトリルで総体積2mLに希釈し、MDAP(2×1mL注入；ギ酸法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、残渣をそれぞれ1:1のメタノール/ジクロロメタン(約6mL)に再溶解させ、合わせて風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(64.0mg、0.15mmol、収率88％)をクリーム色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.79分、[MH]＋についてm/z=435。
【１２０６】
実施例126：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-1-(2-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例127：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-1-(2-メトキシフェニル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２０７】
【化３３８】
2019510782.tif 000353
【１２０８】
実施例112(43mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(5mL)に溶解させた。注入：0.25mLの溶液をカラム上に注入した(25％EtOH/ヘプタン、流速=20mL/分、検出波長=280nm、4. Ref 400、100、カラム21.1mm×25cm(R-R) Whelk O-1(5μm))。注入総数=20。24〜27分からの画分をまとめてピーク1と標識した。29〜34分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１２０９】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例126(16.9mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.97分、[MH]＋=396.4。
【１２１０】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例127(18.0mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.97分、[MH]＋=396.4。
【１２１１】
実施例128：(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(インドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２１２】
【化３３９】
2019510782.tif 000354
【１２１３】
(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(1-ホルミルインドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(52.7mg、0.12mmol)の水(1mL)及びメタノール(2mL)中溶液に、水酸化ナトリウム(106.8mg、2.67mmol)を添加し、室温で30時間撹拌した。メタノールを窒素流下で混合物から蒸発させ、水(3mL)を添加し、水性混合物を酢酸エチル(4×5mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを取り付けたカートリッジに通過させることにより乾燥させ、溶媒を窒素流下で蒸発させた。残渣をメタノール(1mL)に再溶解させ、MDAP(1mL注入；高pH法)により精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、残渣をジクロロメタン(約6mL)に再溶解させ、風袋したバイアルに移し、溶媒を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、(±)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(1-(インドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(27.0mg、0.07mmol、収率55％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)、ピークRt=0.51分、[MH]＋についてm/z=407。
【１２１４】
実施例129：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(m-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２１５】
【化３４０】
2019510782.tif 000355
【１２１６】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(90mg、0.31mmol)をTHF(10mL)に懸濁させ、窒素下に氷浴中で冷却し、次いでm-トリルマグネシウムブロミド(THF中0.5M、2.178mL、1.09mmol)を滴下添加し、混合物を2時間撹拌した。飽和水性塩化アンモニウム溶液(5mL)を添加し、その後混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAc(2×10mL)で抽出した。有機物を乾燥させ、真空中で蒸発させて、残渣を10gシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製し、(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(m-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(92mg、0.24mmol、収率78％)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.79分、[MH]＋=382.4。
【１２１７】
実施例130：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(インドリン-4-イルメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２１８】
【化３４１】
2019510782.tif 000356
【１２１９】
ベンジル4-((4-(((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)カルバモイル)-6-(メチルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)インドリン-1-カルボキシレート(99.3mg、0.19mmol)のエタノール(10mL)中溶液を、担体溶媒としてエタノールを使用し、Thales H-Cube装置上の10％炭素上パラジウムカートリッジを用いて水素化した。溶媒を真空中で蒸発させて黄色油状物を得、これをメタノールに溶解させて窒素流下で濃縮した。残渣をDMSO(約2mL)に再溶解させ、MDAP(2×1mL注入；高pH法)により直接精製した。所望の生成物が回収されなかったため、合わせた廃液を真空中で蒸発させて、残った淡褐色油状物をDMSOに溶解させてバイアルに移し、その後窒素流下で濃縮した。残渣を温エタノールに溶解させ、冷却すると固体が析出した。この固体を濾過し、エーテルで洗浄し、その後真空中で乾燥させて、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(インドリン-4-イルメチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(36.5mg、0.09mmol、49％収率)を淡褐色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法) ピークRt=0.79分、[MH]＋についてm/z=393。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.94(br. d, J=3.2 Hz, 1 H) 8.65(br. d, J=4.4 Hz, 1 H) 8.25(s, 1 H) 7.67(s, 1 H) 6.87(t, J=7.6 Hz, 1 H) 6.33-6.46(m, 2 H) 5.47(br. s., 1 H) 4.11(s, 2 H) 3.86(d, J=8.3 Hz, 2 H) 3.64(d, J=8.1 Hz, 2 H) 3.40(t, J=8.3 Hz, 2 H) 2.78-2.95(m, 5 H) 2.61(br. s., 1 H) 1.93(br. s., 2 H)。
【１２２０】
実施例131：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２２１】
【化３４２】
2019510782.tif 000357
【１２２２】
(+/-)-2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(200mg、0.67mmol)をDMF(3mL)に溶解させ、HATU(329mg、0.87mmol)、Et3N(0.278mL、2.00mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(135mg、1.00mmol)を添加し、次いで混合物を室温で2時間撹拌した。溶液を一晩静置し、次いでMDAP(高pH法)により直接精製して、(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(12mg、0.03mmol、5％収率)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.79分、[MH]＋=382.3。
【１２２３】
実施例132：N4-(3-((2r,5S)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２２４】
【化３４３】
2019510782.tif 000358
【１２２５】
N4-(3-((2r,5S)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(113mg、0.20mmol)のエタノール(3mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(0.030mL、0.61mmol)を添加した。この懸濁液を窒素下に室温で28時間撹拌し、その後反応混合物を濾過し、固体をエタノール(3×5mL)で洗浄した。濾液を真空中で蒸発させ、次いでDMSO(1mL)に再溶解させ、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を真空中で蒸発させ、N4-(3-((2r,5S)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(44.4mg、0.10mmol、収率51％)を無色ガム状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.62分、[MH]＋=427.5。
【１２２６】
実施例133：N4-(3-((S*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー1)
【１２２７】
【化３４４】
2019510782.tif 000359
【１２２８】
(S*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(35.0mg、0.06mmol、中間体201)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、0.80mL、3.20mmol)を添加した。混合物を室温で4.75時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(3-((S*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)(29.3mg、0.06mmol、収率95％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.67分、[MH]＋についてm/z=445。
【１２２９】
実施例134：N4-(3-((R*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)
【１２３０】
【化３４５】
2019510782.tif 000360
【１２３１】
(R*)-tert-ブチル3,3-ジフルオロ-4-(3-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)プロピル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(39.4mg、0.07mmol、中間体202)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、0.80mL、3.20mmol)を添加した。混合物を室温で4.75時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(3-((R*)-3,3-ジフルオロピペリジン-4-イル)プロピル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)(34.5mg、0.072mmol、収率99％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.66分、[MH]＋についてm/z=445。
【１２３２】
実施例135：N4-(2-((S*)-4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー1)
【１２３３】
【化３４６】
2019510782.tif 000361
【１２３４】
(S*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー1)(24.9mg、0.05mmol、中間体205)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、0.60mL、2.40mmol)を添加した。混合物を室温で4.75時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(2-((S*)-4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー1)(20.1mg、0.04mmol、収率92％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.67分、[MH]＋についてm/z=431。
【１２３５】
実施例136：N4-(2-((R*)-4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)
【１２３６】
【化３４７】
2019510782.tif 000362
【１２３７】
(R*)-tert-ブチル4,4-ジフルオロ-3-(2-(2-(メチルカルバモイル)-6-((S)-1-フェニルエチル)イソニコチンアミド)エチル)ピペリジン-1-カルボキシレート(ジアステレオマー2)(25.7mg、0.05mmol、中間体206)の1,4-ジオキサン(0.5mL)中溶液に、塩化水素(1,4-ジオキサン中4.0M溶液、0.60mL、2.40mmol)を添加した。混合物を室温で4.75時間撹拌した。混合物を窒素流下で蒸発乾固させ、残渣をエーテル(2×3mL)で粉砕し、上清を毎回デカント除去した。この固体残渣を窒素流下で乾燥させ、その後真空中で乾燥させて、N4-(2-((R*)-4,4-ジフルオロピペリジン-3-イル)エチル)-N2-メチル-6-((S)-1-フェニルエチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド塩酸塩(ジアステレオマー2)(19.8mg、0.04mmol、収率88％)を薄黄色固体として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.66分、[MH]＋についてm/z=431。
【１２３８】
実施例137：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(p-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２３９】
【化３４８】
2019510782.tif 000363
【１２４０】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(200mg、0.691mmol)をTHF(10mL)に懸濁させ、窒素下に氷浴中で冷却し、次いでp-トリルマグネシウムブロミド(2.074mL、2.074mmol、THF中1M、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)を滴下添加し、混合物を2時間撹拌した。塩化アンモニウム溶液(飽和水性、5mL)を添加し、その後混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAc(2×10mL)で抽出した。有機物を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を0〜100％(25％EtOH/EtOAc)/シクロヘキサンで溶出するシリカカラム(10g)上のクロマトグラフィーにより精製し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(p-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(23mg、0.060mmol、9％収率)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.81分、[MH]＋=382.4。
【１２４１】
実施例138：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((2-クロロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２４２】
【化３４９】
2019510782.tif 000364
【１２４３】
1-ブロモ-2-クロロベンゼン(1.221mL、10.45mmol、例えばSigma-Aldrichから市販されているもの)を、マグネシウム(0.279g、11.49mmol)及びTHF(20mL)を含むフラスコに20分間かけて滴下添加した。ヨウ素(20mg、0.079mmol)を添加し、混合物を窒素下に室温で2時間撹拌し、削り状マグネシウム(magnesium turnings)の完全消費をもたらした。この溶液を特性決定せずに直接使用した。
【１２４４】
N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-ホルミル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(200mg、0.691mmol)をTHF(10mL)に懸濁させ、窒素下に氷浴中で冷却し、次いで(2-クロロフェニル)マグネシウムブロミド(4.15mL、2.074mmol、THF中0.5M)を滴下添加し、混合物を2時間撹拌し、橙色懸濁液を得た。塩化アンモニウム溶液(飽和水性、5mL)を添加し、その後混合物を水(10mL)で希釈し、EtOAc(2×10mL)で抽出した。有機物を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を0〜100％(25％EtOH/EtOAc)/シクロヘキサンで溶出するシリカカラム(10g)上のクロマトグラフィーにより精製し、薄黄色ガム状物を得た。粗生成物をDCMに溶解させ、シリカカラム(25g)上にロードし、次いで0〜100％(25％EtOH/EtOAc)/シクロヘキサンで溶出して、生成物含有画分を真空中で蒸発させ、無色泡状物(85mg)を得た。これをMDAP(高pH法)により精製し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((2-クロロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(58mg、0.144mmol、21％収率)を無色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.81分、[MH]＋=402.3。
【１２４５】
実施例139：(R*)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-メチルモルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例140：(S*)-6-ベンジル-N2-メチル-N4-(3-(2-メチルモルホリン-2-イル)プロピル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２４６】
【化３５０】
2019510782.tif 000365
【１２４７】
実施例107(35mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01)。30〜32.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。35〜39分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１２４８】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例139(6mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.86分、[MH]＋=411.4。
【１２４９】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例140(6mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.85分、[MH]＋=411.5。
【１２５０】
実施例141：6-ベンジル-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-エチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２５１】
【化３５１】
2019510782.tif 000366
【１２５２】
2-ベンジル-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸(52.2mg、0.18mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(36.3mg、0.27mmol)及びHATU(100.0mg、0.26mmol)のDMF(1mL)中溶液に、DIPEA(0.128mL、0.73mmol)を添加した。反応混合物を室温で2.5時間撹拌し、その後これをDMSO(2mL)で希釈し、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、アセトニトリル(約2mL)中に移し、揮発性物質を窒素流下で蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させて、6-ベンジル-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-エチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(56.7mg、0.16mmol、収率85％)をガラス状白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.96分、[MH]＋=366.4。
【１２５３】
実施例168：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-ヒドロキシ(p-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例142：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-ヒドロキシ(p-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２５４】
【化３５２】
2019510782.tif 000367
【１２５５】
実施例137(24mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01)。27〜29分からの画分をまとめてピーク1と標識した。31〜34分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１２５６】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例168(9mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.78分、[MH]＋=382.4。
【１２５７】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例142(10mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.78分、[MH]＋=382.4。
【１２５８】
実施例169：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例143：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２５９】
【化３５３】
2019510782.tif 000368
【１２６０】
2-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(220mg、0.73mmol)をDCM(10mL)に溶解させ、HATU(362mg、0.952mmol)、Et3N(0.306mL、2.20mmol)及び(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(149mg、1.099mmol)を添加し、次いで混合物を室温で2時間撹拌した。溶液を水(2×20mL)及び飽和重炭酸ナトリウム溶液(20mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(ヒドロキシ(o-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(275mg、0.721mmol、収率98％)を無色ガム状物として得た。
【１２６１】
ラセミ体(200mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(5mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak IC (5μm)、ロット番号IC10028-01)。注入総数=7。29.5〜31分からの画分をまとめてピーク1と標識した。31〜34分からの画分をまとめて、混合と標識した。34〜39分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた混合画分を減圧除去し(vac'ed down)、上記の分取法を用いて再処理した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。注記：異性体2は、純度を高めるためにさらなる精製を要した。これは、2回注入を要した。
【１２６２】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例169(104mg)(103mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.79分、[MH]＋=382.3。
【１２６３】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例143(104mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.79分、[MH]＋=382.3。
【１２６４】
実施例144：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-1-(インドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例145：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-1-(インドリン-4-イル)エチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２６５】
【化３５４】
2019510782.tif 000369
【１２６６】
実施例128(22.3mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(1mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した[20％EtOH/ヘプタン、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralcel OD-H(5μm)、ロット番号ODH11158-01]。注入総数=1。22〜26分からの画分をまとめてピーク1と標識した。31〜38分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分の各セットを真空中で濃縮し、その後風袋したバイアルに移し、真空中で乾燥させた。
【１２６７】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例144(9.1mg、0.02mmol)が黄褐色固体として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.52分、[MH]＋についてm/z=407。
【１２６８】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例145(9.1mg、0.02mmol)が黄褐色固体として得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.51分、[MH]＋についてm/z=407。
【１２６９】
実施例146：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-(2-クロロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例147：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-(2-クロロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２７０】
【化３５５】
2019510782.tif 000370
【１２７１】
実施例138(50mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体を加熱しながらEtOH(1.5mL)に溶解させた。注入：1.5mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH/ヘプタン、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、ロット番号ADH13231)。注入総数=2。20〜22.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。22.5〜26分からの画分をまとめて混合と標識した。26〜32分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた混合画分を真空中で濃縮し、同じ方法を用いて再処理した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。固体を生成するために最終異性体をDCM及びヘプタンに再溶解させ、これは首尾よく行われた。
【１２７２】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例146(23mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.80分、[MH]＋=402.3。
【１２７３】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例147(22mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.80分、[MH]＋=402.3。
【１２７４】
実施例148：6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-エチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２７５】
【化３５６】
2019510782.tif 000371
【１２７６】
2-((1H-インドール-4-イル)メチル)-6-(エチルカルバモイル)イソニコチン酸(49.3mg、0.15mmol)、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(31.7mg、0.23mmol)及びHATU(84.0mg、0.22mmol)のDMF(1mL)中懸濁液に、DIPEA(0.107mL、0.61mmol)を添加した。得られた混合物を室温で2時間撹拌し、その後これをDMSO(約2mL)で希釈し、MDAP(高pH法)により直接精製した。所要の画分を窒素流下で蒸発させ、アセトニトリル(各2mL)に再溶解させて合わせた。この溶液を窒素流下で蒸発させ、残渣をジエチルエーテル(約1mL)で粉砕し、揮発性物質を窒素流下で蒸発させ、6-((1H-インドール-4-イル)メチル)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-エチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(51.5mg、0.13mmol、収率84％)を白色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.91分、[MH]＋=405.4。
【１２７７】
実施例149：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((R*)-1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例150：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-N2-メチル-6-((S*)-1-(2-オキソインドリン-4-イル)エチル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２７８】
【化３５７】
2019510782.tif 000372
【１２７９】
実施例115(45mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(20％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出波長=215nm、4. Ref 550、100、カラム30mm×25cm Chiralcel OD-H(5μm)、ロット番号 ODH11158-01)。注入総数=2。15.5〜20分からの画分をまとめてピーク1と標識した。23〜30分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１２８０】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例149(17mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.75分、[MH]＋=421.4。
【１２８１】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例150(14mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.75分、[MH]＋=421.4。
【１２８２】
実施例151：N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(3-クロロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２８３】
【化３５８】
2019510782.tif 000373
【１２８４】
6-(3-クロロベンジル)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(50mg、0.09mmol)のエタノール(7mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(90μL、1.84mmol)を添加した。反応を40℃で一晩撹拌した。粗生成物をDMSO:メタノールに溶解させ、コットンウールを通して濾過し、MDAP(高pH法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(3-クロロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(25mg、0.05mmol、収率58％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.91分、[MH]＋=447.2。
【１２８５】
実施例152：N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-クロロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２８６】
【化３５９】
2019510782.tif 000374
【１２８７】
6-(2-クロロベンジル)-N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(111mg、0.192mmol)のエタノール(7mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(210μL、4.28mmol)を添加した。反応を40℃で一晩撹拌した。粗生成物をDMSO:メタノールに溶解させ、セライトを通して濾過し、MDAP(高pH法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-クロロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(56mg、0.11mmol、収率59％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.68分、[MH]＋=447.4。
【１２８８】
実施例153：N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２８９】
【化３６０】
2019510782.tif 000375
【１２９０】
N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(64mg、0.12mmol)のエタノール(5mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(150μL、3.06mmol)を添加した。反応を40℃で一晩撹拌した。粗生成物をDMSO:メタノールに溶解させ、コットンウールを通して濾過し、MDAP(高pH法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチル-6-(3-メチルベンジル)ピリジン-2,4-ジカルボキサミド(33mg、0.07mmol、収率61％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.66分、[MH]＋=427.5。
【１２９１】
実施例154：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-ヒドロキシ(m-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例170：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-ヒドロキシ(m-トリル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２９２】
【化３６１】
2019510782.tif 000376
【１２９３】
実施例129(78mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：2mLの溶液をカラム上に注入した(30％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、ロット番号ADH13231)。注入総数=1。11〜14分からの画分をまとめてピーク1と標識した。19〜23分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１２９４】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例154(36mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.80分、[MH]＋=382.3。
【１２９５】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例170(34mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.80分、[MH]＋=382.4。
【１２９６】
実施例155：(+/-)-N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１２９７】
【化３６２】
2019510782.tif 000377
【１２９８】
N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(162mg、0.28mmol)のエタノール(2mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(0.100mL、2.06mmol)を添加した；得られた懸濁液を40℃で一晩撹拌した。溶媒を正圧の窒素下で除去し、次いで粗生成物をDMSO(2.7mL)に再溶解させ、濾過してMDAP(3×高pH法)により精製した。適切な画分を回収し、真空中で濃縮して、所望の遊離塩基、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(75mg、0.17mmol、60％収率)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.60分、[MH]＋=443.4。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.97(t, J=5.5 Hz, 1 H) 8.63(q, J=4.4 Hz, 1 H) 8.30(d, J=1.7 Hz, 1 H) 8.04(d, J=1.7 Hz, 1 H) 7.44-7.52(m, 2 H) 7.31-7.40(m, 2 H) 7.23-7.30(m, 1 H) 5.49(s, 1 H) 4.39(t, J=4.8 Hz, 1 H) 3.91(dd, J=11.0, 4.9 Hz, 2 H) 3.37(s, 3 H) 3.22-3.31(obs. m, 2 H) 3.13(t, J=10.9 Hz, 2 H) 2.86(d, J=4.9 Hz, 3 H) 2.74(tt, J=10.4, 5.0 Hz, 1 H) 1.48-1.65(m, 4 H)。2つの交換可能なプロトンは観測されなかった。
【１２９９】
実施例156：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((S*)-(3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例157：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((R*)-(3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３００】
【化３６３】
2019510782.tif 000378
【１３０１】
2-((3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(100mg、0.33mmol)をDCM(5mL)に懸濁させ、Et3N(0.137mL、0.99mmol)及びHATU(187mg、0.49mmol)を添加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(66.8mg、0.49mmol)を添加した。得られた溶液を2時間撹拌し、その後水(10mL)で洗浄し、有機層を乾燥させて真空中で蒸発させ、残渣を0〜100％(25％EtOH/EtOAc)/シクロヘキサンで溶出するシリカカラム(25g)上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空中で蒸発させ、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-((3-フルオロフェニル)(ヒドロキシ)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(124mg、0.32mmol、収率98％)を得た。
【１３０２】
ラセミ体(100mg)をキラルHPLCにより精製した。このラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(25％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、ロット番号ADH13231)。注入総数=2。14.5〜17.5分からの画分をまとめてピーク1と標識した。21〜25分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１３０３】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例156(50mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.80分、[MH]＋=382.3。
【１３０４】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例157(50mg)が得られた。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.80分、[MH]＋=382.4。
【１３０５】
実施例158：N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３０６】
【化３６４】
2019510782.tif 000379
【１３０７】
N4-(3-((2r,5r)-5-(1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(51mg、0.089mmol)のエタノール(3mL)中懸濁液に、ヒドラジン水和物(90μL、1.84mmol)を添加した。反応を40℃で一晩撹拌した。粗生成物をDMSO:メタノールに溶解させ、コットンウールを通して濾過し、MDAP(高pH法)により精製した。所望の生成物を含有する画分を真空中で濃縮し、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-(2-メトキシベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(23mg、0.05mmol、収率53％)を得た。
LCMS(2分、高pH法)：Rt=0.85分、[MH]＋=443.3。
【１３０８】
実施例159：N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(4-フルオロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３０９】
【化３６５】
2019510782.tif 000380
【１３１０】
2-(4-フルオロベンジル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(127mg、0.441mmol)をDMF(1mL)に溶解させた。HATU(251mg、0.661mmol)を添加し、その後(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(106mg、0.782mmol)、次いでDIPEA(0.385mL、2.20mmol)を添加した。反応混合物を窒素下で16時間撹拌した。反応混合物をMDAP(ギ酸法)により精製した。所望の生成物を含有する画分をDCMと飽和重炭酸ナトリウム溶液とに分配した。層を分離し(疎水性フリットによる)、その後さらに2回水性層からDCM(2×15mL)で抽出した。有機層を合わせ、真空中で濃縮し、N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(4-フルオロベンジル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(157mg、0.38mmol、収率87％)を得た。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.89分、[MH]＋=370.2。
【１３１１】
実施例160：N4-(3-((2r,5S)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-((S*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
実施例161：N4-(3-((2r,5S)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-((R*)-メトキシ(フェニル)メチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３１２】
【化３６６】
2019510782.tif 000381
【１３１３】
実施例155(55mg)をキラルHPLCにより精製した。ラセミ体をEtOH(2mL)に溶解させた。注入：1mLの溶液をカラム上に注入した(30％EtOH(+0.2％イソプロピルアミン)/ヘプタン(+0.2％イソプロピルアミン)、流速=30mL/分、検出：波長、215nm、4. Ref. 550、100；カラム30mm×25cm Chiralpak AD-H (5μm)、ロット番号ADH13231)。注入総数=3。20〜23分からの画分をまとめてピーク1と標識した。23〜26分からの画分をまとめて混合と標識した。26〜31分からの画分をまとめてピーク2と標識した。まとめた混合画分を真空中で濃縮し、上記の手法を用いて再処理した。まとめた純粋画分を真空中で濃縮し、その後秤量したフラスコに移した。
【１３１４】
ピーク1に対応する画分を回収し、実施例160(26mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.57分、[MH]＋=443.2。
【１３１５】
ピーク2に対応する画分を回収し、実施例161(26mg)が得られた。
LCMS(2分、ギ酸法)：Rt=0.57分、[MH]＋=443.2。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.98(t, J=5.5 Hz, 1 H) 8.64(q, J=4.6 Hz, 1 H) 8.30(d, J=1.5 Hz, 1 H) 8.04(d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.45-7.53(m, 2 H) 7.31-7.39(m, 2 H) 7.23-7.30(m, 1 H) 5.49(s, 1 H) 4.39(t, J=4.8 Hz, 1 H) 3.90(dd, J=11.2, 4.9 Hz, 2 H) 3.37(s, 3 H) 3.25(q, J=6.5 Hz, 2 H) 3.13(t, J=11.0 Hz, 2 H) 2.86(d, J=5.0 Hz, 3 H) 2.74(tt, J=10.4, 5.1 Hz, 1 H) 1.49-1.65(m, 4 H)。2つの交換可能なプロトンは観測されなかった。
【１３１６】
実施例162：6-ベンジル-N4-(3-((2r,5r)-5-(ジメチルアミノ)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３１７】
【化３６７】
2019510782.tif 000382
【１３１８】
マイクロウェーブバイアル中で、N4-(3-((2r,5r)-5-アミノ-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-6-ベンジル-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(33.6mg、0.081mmol)のホルムアルデヒド(水中37％溶液、0.334mL、4.48mmol)及び水(0.5mL)中混合物に、ギ酸(0.172mL、4.48mmol)を添加した。このバイアルを密封し、混合物をマイクロウェーブ反応器中で110℃にて30分間加熱した。混合物を窒素流下で濃縮し、残りの残渣をDMSOで総体積1mLに希釈し、MDAP(1×1mL注入；高pH法)により精製した。所望の画分を窒素流下で濃縮した。残渣をDCM(5mL)に溶解させ、風袋したバイアルに移し、その後窒素流下で濃縮して真空中で乾燥させ、6-ベンジル-N4-(3-((2r,5r)-5-(ジメチルアミノ)-1,3-ジオキサン-2-イル)プロピル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(3.9mg、8.85μmol、11％収率)を無色ガラス状物として得た。
LCMS(2分、ギ酸法) ピークRt=0.60分、[MH]＋についてm/z=441。
【１３１９】
実施例172：(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド
【１３２０】
【化３６８】
2019510782.tif 000383
【１３２１】
2-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-6-(メチルカルバモイル)イソニコチン酸(180mg、0.291mmol)をDMF(2mL)にとった。DIPEA(0.152mL、0.873mmol)、次いでHATU(166mg、0.436mmol)を添加し、溶液を室温で10分間撹拌した。(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(59.2mg、0.436mmol)を添加し、室温で1時間撹拌を続けた。(1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-アミン塩酸塩(59.2mg、0.436mmol)、DIPEA(0.152mL、0.873mmol)及びHATU(166mg、0.436mmol)のさらなる部分を添加し、室温で1時間撹拌を続け、その後一晩撹拌を続けた。反応を真空中で濃縮した。残渣をEtOAcと飽和NaHCO3溶液(各10mL)とに分配した。水性層をEtOAc(10mL)で再抽出し、合わせた有機物をブライン(25mL)で洗浄し、次いで乾燥させ(Na2SO4)、疎水性フリットを通して濾過し、真空中で濃縮して褐色油状物を得た。粗生成物をMDAP(高pH法)により精製した。適切な画分を真空中で濃縮し、(+/-)-N4-((1R,5S,6r)-3-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-イル)-6-(2-シアノ-1-フェニルエチル)-N2-メチルピリジン-2,4-ジカルボキサミド(20.5mg、0.050mmol、収率17％)を橙色固体として得た。
LCMS(2分、高pH法) Rt=0.87分、[MH]＋についてm/z=391.6。
【１３２２】
実施例163〜166及び171：
実施例163〜166及び171を、先の実施例と同様に調製した：
【１３２３】
【表１２】
2019510782.tif 000384
2019510782.tif 000385
【１３２４】
生物学的データ
式(I)の化合物は、以下のアッセイの1つ以上において試験することができる。
【１３２５】
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(TR-FRET)アッセイ
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(TR-FRET)競合アッセイを利用して、ブロモドメイン結合を評価した。このアプローチを可能にするために、公知の高親和性pan-BET相互作用小分子を、遠赤蛍光染料(参照化合物X)であるAlexa Fluor(登録商標)647で標識した。参照化合物Xは、ブロモドメイン結合のレポーターとして作用し、TR-FRET対のアクセプターフルオロフォア成分である。抗-6*His抗体にコンジュゲートされたユーロピウムキレートを、TR-FRET対のドナーフルオロフォアとして利用した。抗-6*His抗体は、この研究において用いられたBETタンデムブロモドメインタンパク質構築物のそれぞれのアミノ末端に付加された6ヒスチジン精製エピトープに選択的に結合する。TR-FRETシグナルは、ドナーフルオロフォアとアクセプターフルオロフォアが20〜80Åに接近した場合(このアッセイでは、参照化合物Xがブロモドメインタンパク質に結合することにより可能となる)に発生する。
【１３２６】
参照化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-クロロフェニル)-8-メトキシ-1-メチル-4H-ベンゾ[f][1,2,4]トリアゾロ[4,3-a][1,4]ジアゼピン-4-イル)アセトアミド)ペンチル)アミノ)-6-オキソヘキシル)-2-((2E,4E)-5-(3,3-ジメチル-5-スルホ-1-(4-スルホブチル)-3H-インドール-1-イウム-2-イル)ペンタ-2,4-ジエン-1-イリデン)-3-メチル-5-スルホインドリン-1-イル)ブタン-1-スルホネート)
【１３２７】
【化３６９】
2019510782.tif 000386
【１３２８】
DMF(40μL)中のN-(5-アミノペンチル)-2-((4S)-6-(4-クロロフェニル)-8-メトキシ-1-メチル-4H-ベンゾ[f][1,2,4]トリアゾロ[4,3-a][1,4]ジアゼピン-4-イル)アセトアミド(調製については、参照化合物J、WO2011/054848A1を参照、1.7mg、3.53μmol)の溶液に、やはりDMF(100μL)中のAlexaFluor 647-ONSu(2.16mg、1.97μmol)の溶液を添加した。この混合物をDIPEA(1μl、5.73μmol)で塩基性とし、ボルテックスミキサー上で一晩撹拌した。
【１３２９】
反応混合物を蒸発乾固させた。固体を、MeCN/水/AcOH(5/4/1、<1mL)に溶解させ、濾過し、Phenomenex Jupiter C18分取カラムに適用し、以下の勾配(A=水中0.1％トリフルオロ酢酸、B=0.1％TFA/90％MeCN/10％水)、流速=10mL/分、AU=20/10(214nm)で溶出した：
5〜35％、t=0分：B=5％；t=10分：B=5％；t=100分：B=35％；t=115分：B=100％(分離勾配：0.33％/分)。
【１３３０】
主成分を26〜28％Bの範囲にわたり溶出したが、2つのピークからなるように見えた。「両」成分を含有するはずの中間画分(F1.26)を分析HPLC(Spherisorb ODS2、60分にわたり1〜35％)で分析した。28％Bで単一成分が溶出した。
【１３３１】
画分F1.25/26及び27を合わせ、蒸発乾固させた。DMFと共に移し、蒸発乾固させ、乾燥エーテルで粉砕し、青色固体を<0.2mbarで一晩乾燥させ、1.54mgを得た。
【１３３２】
分析HPLC(Spherisorb ODS2、60分にわたり1〜35％B)：MSM 10520-1：[M＋H]＋(実測値)：661.8(M-29に対応)。この値は、M-29である計算質量1320.984についての[(M＋2H)/2]＋に等しい。これは、Alexa Fluor 647色素を用いた場合の標準的な出現率であり、質量分光計条件下での2つのメチレン基の理論的損失を表す。
【１３３３】
アッセイ原理：
TR-FRETシグナルを発生させるため、ドナーフルオロフォアをλ337nmのレーザーで励起すると、これがその後λ618nmの発光を生じさせる。アクセプターフルオロフォアが近接していると、エネルギー移動が起こり得、これがλ665nmでのAlexa Fluor(登録商標)647の発光を生じさせる。競合化合物の存在下では、参照化合物Xはブロモドメインに対する結合から変位され得る。変位が起こる場合、アクセプターフルオロフォアはもはやドナーフルオロフォアに近接しておらず、これが蛍光エネルギー移動を妨げ、続いてλ665nmのAlexa Fluor(登録商標)647発光の損失が生じる。
【１３３４】
BETファミリー(BRD2、BRD3、BRD4及びBRDT)に対する結合についての式(I)の化合物と参照化合物Xの競合を、ブロモドメイン1(BD1)とブロモドメイン2(BD2)の両方にまたがるタンパク質トランケートを用いて評価した。BD1又はBD2のいずれかに対する異なる結合をモニターするため、アセチルリジン結合ポケット内に、キーとなるチロシンのアラニンへの単一残基突然変異を作製した。このアプローチを有効にするために、BETファミリーメンバーのそれぞれについて二重残基突然変異タンデムドメインタンパク質を作製した。蛍光偏光アプローチを利用して、参照化合物Xに対する単一突然変異体及び二重突然変異体のそれぞれの結合親和性を決定した。参照化合物Xに対する二重突然変異体タンデムタンパク質の親和性は、非変異野生型タンデムBETタンパク質と比較して大きく低下した(Kdが1000分の1未満に低下)。参照化合物Xに対する単一突然変異ブロモドメインタンデムタンパク質の親和性は、対応する非変異BETタンパク質と同等の効力であった。これらのデータは、チロシンのアラニンへの単一突然変異が、変異ブロモドメインと参照化合物Xとの間の相互作用のKdを1000分の1未満に低下させることを示した。TR-FRET競合アッセイにおいて、参照化合物Xは、非変異ブロモドメインに対するKdと同等の濃度で使用され、これにより変異ブロモドメインにおける結合が検出されないことが確保される。
【１３３５】
タンパク質産生：
N-末端に6-Hisタグを有する組換えヒトブロモドメイン[(BRD2(1-473)(Y113A)及び(Y386A)、BRD3(1-435)(Y73A)及び(Y348A)、BRD4(1-477)(Y97A)及び(Y390A)、並びにBRDT(1-397)(Y66A)及び(Y309A)]を、(BRD2/3/4についてはpET15bベクター中、BRDTについてはpET28aベクター中で)大腸菌(E.coli)細胞中で発現させた。His-タグされたブロモドメインペレットを、50mM HEPES(pH7.5)、300mM NaCl、10mMイミダゾール、及び1μL/mLプロテアーゼ阻害剤のカクテルに再懸濁させ、超音波処理を用いて大腸菌細胞から抽出し、ニッケルセファロース高速カラムを用いて精製し、タンパク質を洗浄し、次いで、20カラム体積にわたる、0〜500mMイミダゾールと、50mM HEPES(pH7.5)、150mM NaCl、500mMイミダゾールからなるバッファーの線形勾配で溶出した。最終精製は、Superdex 200分取等級サイズ排除カラムにより完了した。精製タンパク質は、-80℃にて、20mM HEPES(pH7.5)及び100mM NaCl中で保存した。タンパク質同定は、ペプチド質量フィンガープリンティング及び質量分析により確認された予想分子量によって確認された。
【１３３６】
ブロモドメインBRD2、3、4及びT、BD1＋BD2突然変異体TR-FRET競合アッセイのためのプロトコール：
全アッセイ成分を、50mMのHEPES(pH7.4)、50mMのNaCl、5％のグリセロール、1mMのDTT及び1mMのCHAPSからなるアッセイバッファーに溶解させた。参照化合物Xを、20nMの単一突然変異体タンデムブロモドメインタンパク質を含有するアッセイバッファーに、このブロモドメインに対する2*Kdと同等の濃度まで希釈した。Greiner 384ウェル黒色低体積マイクロタイタープレート中で、ブロモドメイン及び参照化合物Xを含有する溶液を、試験化合物又はDMSOビヒクル(このアッセイでは最大0.5％のDMSOが用いられる)の用量応答希釈まで添加し、その後30分間室温でインキュベートした。等体積の3nMの抗-6*Hisユーロピウムキレートを全ウェルに添加し、その後さらに30分間室温でインキュベートした。TR-FRETは、Perkin Elmer Multimodeプレートリーダーを用いて、ドナーフルオロフォアをλ337nmで励起し、その後、50μ秒間の遅延後、それぞれλ615nm及びλ665nmのドナーフルオロフォア及びアクセプターフルオロフォアの発光を測定することにより検出した。これらのアッセイを制御するため、それぞれ16反復の非阻害(DMSOビヒクル)TR-FRETアッセイ及び阻害(WO2011/054846A1の実施例11の10*IC50濃度)TR-FRETアッセイを、マイクロタイタープレート毎に含めた。
【１３３７】
次いで、以下の形の4パラメータ曲線適合を適用した。
y=a＋((b-a)/(1＋(10^x/10^c)^d)
(式中、「a」は最小値であり、「b」はHill勾配であり、「c」はpIC50であり、「d」は最大値である)。
【１３３８】
全化合物(実施例)を、本質的には上記のとおりのBRD4 BD1 TR-FRETアッセイ及びBRD4 BD2 TR-FRETアッセイにおいてそれぞれ試験した。当業者であれば、機能活性についてのin vitro結合アッセイ及び細胞ベースのアッセイは実験的変動を受けることを認識するであろう。従って、以下に示されるpIC50値は例示にすぎないことを理解されたい。pIC50値は、log10単位として表される。
【１３３９】
全試験化合物は、少なくとも1つの上記アッセイにおいてpIC50≧5.0を有することが見出された。
【１３４０】
実施例84、85、87、164、165、及び166は、BRD4 BD2アッセイにおいて、pIC50≧5.0及び＜6.0を有することが見出された。
【１３４１】
他の全ての試験化合物は、BRD4 BD2アッセイにおいて≧6.0〜≦8.2の範囲内のpIC50を有することが見出された。特に、実施例38は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.9のpIC50(n=3)を有することが見出され；実施例41は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.4のpIC50(n=2)を有することが見出され；実施例51は、BRD4 BD2アッセイにおいて8.1のpIC50(n=3)を有することが見出され；実施例70は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.8のpIC50(n=3)を有することが見出され；実施例105は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.5のpIC50(n=8)を有することが見出され；実施例113は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.5のpIC50(n=7)を有することが見出され；実施例130は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.3のpIC50(n=5)を有することが見出され；実施例161は、BRD4 BD2アッセイにおいて7.6のpIC50(n=3)を有することが見出された。
【１３４２】
BRD4 BD1と比較したBRD4 BD2に対する選択性の計算
BRD4 BD1と比較したBRD4 BD2に対する選択性を、以下のとおりに計算した：
選択性=BRD4 BD2 pIC50-BRD4 BD1 pIC50
【１３４３】
全実施例は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して1 log単位以上のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも10倍選択的である。
【１３４４】
実施例1〜75及び88〜162並びに172は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して2 log単位以上のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも100倍選択的である。
【１３４５】
実施例38は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.1log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【１３４６】
実施例41は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.0log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【１３４７】
実施例51は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.5log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【１３４８】
実施例70は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.1log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【１３４９】
実施例113は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.1log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【１３５０】
実施例161は、上記のTR-FRETアッセイの少なくとも1つにおいて、BRD4 BD1と比較して3.2log単位のBRD4 BD2に対する選択性を有することが見出され、従って、BRD4 BD1と比較して、BRD4 BD2に対して少なくとも1000倍選択的である。
【国際調査報告】
2019510782.tif 000389
2019510782.tif 000390
2019510782.tif 000391