(57)【要約】  本発明は、幾つかの置換基について、ＣＣ５０と並んで抗ウイルス活性の増加に寄与し、より活性でより細胞毒性の低い化合物を与える、ベンゾフラン−２−イル基を有する２−フェニルピペラジン誘導体を提供する。それらの作用機構の更なる最適化及び特性評価がこれらの化合物に必要であるが、これらの化合物は新たなクラスの抗ウイルス性化合物の開発に対する有力なヒット候補となる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式を含む化学構造を有する化合物を含む組成物：
式Ｉ：
【化１】
2019509338.tif 000047
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、ｐ−ＣＨ３Ｐｈ、ｏ−ＣＨ３Ｐｈ、ＣＨ２−ｔＢｕ、ＣＨ２−Ｃヘキシル、ＣＨ２−Ｐｈ、ＣＨ＝ＣＨＰｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｘは、Ｓ又はＯであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ６は、Ｈ、ＣＨ３又はＰｈであり、
ｎは、０又は１である）。
【請求項２】
前記化合物が下記化学構造を含む、請求項１に記載の組成物：
式Ｖ：
【化２】
2019509338.tif 000048
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、ＣＨ２−ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３である）。
【請求項３】
前記化合物が以下の化学構造を含む、請求項１に記載の組成物：
式ＩＩＩ：
【化３】
2019509338.tif 000049
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、ＮＯ２、又はＯＣＨ３であり、
Ｘは、Ｓ又はＯである）。
【請求項４】
前記化合物が以下の化学構造を含む、請求項１に記載の組成物：
式ＩＶ：
【化４】
2019509338.tif 000050
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ、又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はＣＦ３である）。
【請求項５】
前記化合物が以下の化学構造を含む、請求項１に記載の組成物：
式ＩＩ：
【化５】
2019509338.tif 000051
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、ＮＯ２、又はＯＣＨ３である）。
【請求項６】
前記化合物が以下の化学構造を含む、請求項２に記載の組成物：
式Ｖ：
【化６】
2019509338.tif 000052
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、又はＣｌであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ又はＣＮであり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３である）。
【請求項７】
前記化合物が、以下：
ａ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｂ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｃ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｄ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｅ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＮＯ２であり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｆ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＣｌであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式Ｖの化合物、
からなる一覧から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤を更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項９】
治療において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
被験体において二本鎖ＤＮＡウイルスによって引き起こされる感染症の治療において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記二本鎖ＤＮＡウイルスがアデノウイルス又はヘルペスウイルスである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記ヘルペスウイルスがサイトメガロウイルスである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が請求項６に記載の式Ｖの化合物である、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が、請求項７に記載の化合物ａ）〜化合物ｅ）のいずれかを指す、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
前記被験体がヒト被験体であり、前記二本鎖ＤＮＡウイルスはヒトアデノウイルスである、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
前記被験体が、呼吸器疾患、結膜炎、胃腸炎、ＨＩＶ、肥満を患うヒト被験体である、又は前記ヒト被験体が免疫抑制療法を受けている、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記ヒトアデノウイルスが、以下：
ａ．Ａ種、及び１２型、１８型、３１型；
ｂ．Ｂ種、及び３型、７型、１１型、１４型、１６型、２１型、３４型、３５型、５０型、５５型；
ｃ．Ｃ種、及び１型、２型、５型、６型、５７型；
ｄ．Ｄ種、及び８型、９型、１０型、１３型、１５型、１７型、１９型、２０型、２２型、２３型、２４型、２５型、２６型、２７型、２８型、２９型、３０型、３２型、３３型、３６型、３７型、３８型、３９型、４２型、４３型、４４型、４５型、４６型、４７型、４８型、４９型、５１型、５３型、５４型、５６型；
ｅ．Ｅ種、及び４型；
ｆ．Ｆ種、並びに４０型及び４１型；並びに、
ｇ．Ｇ種、及び５２型；
の一覧のいずれかから選択され、
好ましくは、前記ヒト被験体が呼吸器疾患、結膜炎、胃腸炎、ＨＩＶ、肥満を患っている、又は前記ヒト被験体が免疫抑制療法を受けている、
請求項１５又は１６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学分野、特に抗ウイルス剤及び抗菌剤の分野に含まれ得る。
【背景技術】
【０００２】
ヒトアデノウイルス（ＨＡｄＶ）は、７つのサブグループ又は種（Ａ〜Ｇ）に分けられる６０超の血清型からなる非エンベロープ型二本鎖ＤＮＡウイルスである。健康な個体では、これらのウイルスは、急性の呼吸器及び眼の感染症からより重篤な腸疾患にまで及ぶ疾患の原因であるが、重篤な臨床症状を伴うことはめったにない。
【０００３】
他方で、免疫抑制療法の改良は、ウイルス診断ツールの進歩と共に、ＨＡｄＶが移植と関連する生命を危うくする可能性があるウイルス性疾患のより一般的な原因の１つであり、小児科ユニットでの感染増加の主な原因であることを明らかにした。小児科の同種異型造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）レシピエントでは、２％〜８０％の関連する死亡率を伴って、３％〜４７％の頻度でＨＡｄＶ感染が生じる。さらに、実質性臓器移植（ＳＯＴ）レシピエントでは、ＨＡｄＶ感染が、肝臓移植及び心臓移植のレシピエントのおよそ１０％、並びに肺レシピエントの２２％で生じる。
【０００４】
この著しい臨床的な影響にもかかわらず、現今ではＨＡｄＶ感染に対して承認された抗ウイルス療法は存在しない。免疫抑制された患者においてＨＡｄＶ感染を治療する非特異的な治療の選択肢として、非常に変化しやすい結果を伴う、ガンシクロビル、アシクロビル、ビダラビン、リバビリン及びシドフォビル等の幅広く作用する抗ウイルス剤の使用が挙げられる。リバビリン及びシドフォビルは、最も頻繁に使用されるが、いずれもＨＡｄＶ感染における特定の用途について承認されていない。リバビリンは種々のＨＡｄＶ型に対して変動的な活性を有し、サブグループＣに対して最大の活性を示すが、リバビリンによって達成される血漿濃度は、必要とされるＩＣ５０値の１０分の１である。
【０００５】
一方、シドフォビルは全てのＨＡｄＶ種に対して抗ウイルス活性を呈するが、低い経口バイオアベイラビリティー、著しい毒性（尿細管壊死）を有し、長期保護を与えない。さらに、シドフォビル（Ｖｉｓｔｉｄｅ（商標））の製造業者であるGilead Sciences社は、その製造、及び承認された適応症（サイトメガロウイルスによる網膜炎）に対する他の治療選択肢の有効性に関する問題により、欧州でのＶｉｓｔｉｄｅ（商標）の商品化に対する認可の取り消しが正式に要求されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
シドフォビルの脂質接合体、ＣＭＸ００１は、現在、第ＩＩ相臨床試験で試験されているが、治療活性が増加した他の可能性のある抗ウイルス剤がまだ必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、治療活性が増加した、可能性のある抗ウイルス剤を提供する。
【０００８】
特に、これらの化合物は、下記式を含む化学構造を有する：
式Ｉ：
【化１】
2019509338.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、ｐ−ＣＨ３Ｐｈ、ｏ−ＣＨ３Ｐｈ、ＣＨ２−ｔＢｕ、ＣＨ２−Ｃヘキシル、ＣＨ２−Ｐｈ、ＣＨ＝ＣＨＰｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｘは、Ｓ又はＯであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ６は、Ｈ、ＣＨ３又はＰｈであり、
ｎは、０又は１である）。
【０００９】
さらに、本発明は、治療活性が増加した、可能性のある抗菌剤を更に提供する。
【００１０】
特に、これらの化合物は、下記式を含む化学構造を有する：
式ＩＸ：
【化２】
2019509338.tif 000003
（式中、
Ｒ１はＯｔＢｕ、ＣＨ２ｔＢｕ、ＣＨ２Ｐｈ、又はＣＨ２Ｃヘキシルであり、
Ｒ２はＨであり、
Ｒ３はＨ、又はＣＦ３であり、
Ｒ４はＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３である）。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヒット化合物２の新たなピペラジン誘導体アナログの設計及び一般骨格の図である。
【図２】（Ａ）ＨＡｄＶ  ＤＮＡの核会合（Nuclear association：核連結）の図である。（Ｂ）核ＤＮＡ精製の特異性の制御の図である。
【図３】ヒット化合物２の新たなピペラジン誘導体アナログの設計及び一般骨格の図である。
【図４】４８２及び４９９に由来する分子の図である。
【図５】エントリーアッセイの図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の主な目的は、合計５２種の化合物である、三世代の新たな４−アシル−１フェニルアミノカルボニル−２−メチルピペラジン誘導体及び４−アシル−１フェニルアミノカルボニル−２フェニルピペラジン誘導体の設計、短く高収率の方法論による合成、及び評価を提示することである。また、本発明者らは、これらの新たな化合物の構造と活性の関係を確立し、ＨＡｄＶ及びＨＣＭＶ（ヒトサイトメガロウイルス）に対する強力な阻害剤として６種の新たな２−フェニルピペラジン誘導体を同定した。
【００１３】
本明細書に提示される結果を達成するため、本発明者らは、図１に説明される構造修飾に基づいて一般構造を設計し、幾つかの構造上の変異ポイントを有する一般骨格を得た。
【００１４】
ピペラジン誘導体が、以前、異なる作用機構を有する抗ウイルス性化合物の有効な供給源としてのそれらの実用性を示したという事実に基づき、本発明者らは、本発明者らの新たな化合物において基本的なコアとしてこの骨格を維持した。新たな化合物群を生成する、行われた最初の構造修飾は、アミド官能基又は尿素／チオ尿素官能基によりピペラジンの環から１つの窒素にカルボニル基を移動することによってピペラジン−２−オン環をピペラジンオンで置換することである。この細胞毒性のカルボニル基の存在は、本発明者らの新たな化合物に共通する特徴となる。
【００１５】
化学的多様性を生じさせるため、本発明者らの一般構造における３点の変異ポイント、すなわち、（１）ピペラジン環上の置換基（Ｒ１）、（２）１つの窒素での新たなアミド官能基又は尿素官能基の置換基（異なる電子特性を有するＲ２基）、及び（３）異なるアシル官能基が他の窒素（Ｒ３アリール基又はアルキル基を有するウレタン基又はアミド基）に位置することに言及しなければならない。
【００１６】
これらの修飾に基づいて又はそれらに由来して、３つの異なる世代の化合物を作り出した。各ファミリーに対する結果は実施例２〜実施例７に示される。これらの結果により、２−フェニルピペラジン誘導体について、ベンゾフラン−２−イル基の存在は、幾つかの置換基に対するＣＣ５０と並んで、抗ウイルス活性を増加させるのに寄与し、より活性で細胞毒性の低い化合物を与えると結論付けることができる。特に、化合物４６、化合物５９、化合物６０、化合物６３及び化合物６４がＨＡｄＶ及びＨＣＭＶのＤＮＡコピー数の著しい減少を引き起こすこと、並びに活性が、このプロセスに関与するタンパク質を干渉することによって直接的にＨＡｄＶ及びＨＣＭＶのＤＮＡ複製を阻害する結果である可能性があること、或いは、これらの化合物が、後のＤＮＡ複製に必須である最初期遺伝子の転写に影響を及ぼし得ることに言及する価値がある。
【００１７】
結果的に、実施例２〜実施例７に提供される各世代に属する一般式に含まれる大半の化合物、特に化合物４６、化合物５９、化合物６０、化合物６３、化合物６４及び化合物６５は、ＨＡｄＶとＨＣＭＶの両方においてＤＮＡ複製の顕著で広スペクトルの阻害剤であると証明された。したがって、それらの作用機構の更なる最適化及び特性評価がこれらの化合物に必要であるが、これらの化合物は、新たなクラスの抗ウイルス性化合物の開発に対する強力なヒット候補となる。
【００１８】
したがって、本発明の第１の態様は、下記式を含む化学構造を有する化合物を含む組成物に関する：
式Ｉ：
【化３】
2019509338.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、ｐ−ＣＨ３Ｐｈ、ｏ−ＣＨ３Ｐｈ、ＣＨ２−ｔＢｕ、ＣＨ２−Ｃヘキシル、ＣＨ２−Ｐｈ、ＣＨ＝ＣＨＰｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｘは、Ｓ又はＯであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ６は、Ｈ、ＣＨ３又はＰｈであり、
ｎは、０又は１である）。
【００１９】
本発明の第１の態様の好ましい実施形態では、化合物は以下の化学構造を含む。
式Ｖ：
【化４】
2019509338.tif 000005
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、ＣＨ２−ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３である）。
【００２０】
本発明の第１の態様の別の好ましい実施形態では、化合物は以下の化学構造を含む。
式ＩＩＩ：
【化５】
2019509338.tif 000006
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、ＮＯ２、又はＯＣＨ３であり、
Ｘは、Ｓ又はＯである）。
【００２１】
本発明の第１の態様の別の好ましい実施形態では、化合物は以下の化学構造を含む。
式ＩＶ：
【化６】
2019509338.tif 000007
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ又はＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈ、又はＣＦ３であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＮ、ＣＦ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はＣＦ３である）。
【００２２】
本発明の第１の態様の更に別の実施形態では、化合物は以下の化学構造を含む。
式ＩＩ：
【化７】
2019509338.tif 000008
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｐｈ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、ＮＯ２、又はＯＣＨ３である）。
【００２３】
本発明の第１の態様の更に別の好ましい実施形態では、化合物は以下の化学構造を含む。
式Ｖ：
【化８】
2019509338.tif 000009
（式中、
Ｒ１は、ＯｔＢｕ、又はベンゾフラン−２−イルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＮＯ２、又はＣｌであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＮＯ２、Ｃｌ又はＣＮであり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣＦ３である）。
【００２４】
本発明の第１の態様の更に別の好ましい実施形態では、化合物は、以下：
ａ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｂ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｃ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｄ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；
ｅ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＮＯ２であり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＨである、式Ｖの化合物；及び、
ｆ．Ｒ１がベンゾフラン−２−イルであり、Ｒ２がＣｌであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式Ｖの化合物、
からなる化合物群のいずれかから選択される。
【００２５】
本発明の第２の態様は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤を更に含む、本発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物を含む医薬組成物に関する。
【００２６】
本発明の第３の態様は、治療において使用するための、本発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物に関する。
【００２７】
本発明の第４の態様は、被験体、好ましくはヒト被験体において二本鎖ＤＮＡウイルスによって引き起こされる感染症の治療において使用するための、本発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物に関する。二本鎖ＤＮＡウイルスは、アデノウイルス又はヘルペスウイルスであることが好ましい。ヘルペスウイルスはサイトメガロウイルスであることが好ましい。二本鎖ＤＮＡウイルスはアデノウイルスであることが好ましく、より好ましくは、
ａ．Ａ種、及び１２型、１８型、３１型；
ｂ．Ｂ種、及び３型、７型、１１型、１４型、１６型、２１型、３４型、３５型、５０型、５５型；
ｃ．Ｃ種、及び１型、２型、５型、６型、５７型；
ｄ．Ｄ種、及び８型、９型、１０型、１３型、１５型、１７型、１９型、２０型、２２型、２３型、２４型、２５型、２６型、２７型、２８型、２９型、３０型、３２型、３３型、３６型、３７型、３８型、３９型、４２型、４３型、４４型、４５型、４６型、４７型、４８型、４９型、５１型、５３型、５４型、５６型；
ｅ．Ｅ種、及び４型；
ｆ．Ｆ種、並びに４０型及び４１型；並びに、
ｇ．Ｇ種、及び５２型；
からなる群から選択される。
【００２８】
被験体は、呼吸器疾患、結膜炎（form conjunctivitis）、胃腸炎、ＨＩＶ、肥満に苦しむヒト被験者であるか、又は被験体は免疫抑制療法を受けていることが更に好ましい。
【００２９】
さらに、第２の発明として、本発明者らは、以下に示される化合物２から出発して、新たな世代の抗菌活性を有する化合物の設計、短く高収率の方法論による合成、及び評価を提示する。また、本発明者らは、これらの新たな化合物の構造と活性の関係を確立し、４つの新たなファミリーの顕著な抗菌活性を有する化合物を同定した。
【化９】
2019509338.tif 000010
【００３０】
この意味で、本発明の発明者らは、図３に説明される構造修飾に基づいて一般構造を設計し、幾つかの構造上の変異ポイントを有する一般骨格を得た。
【００３１】
これらの種類の化合物の第１のファミリーは以下の一般構造を含む。
式ＶＩ：
【化１０】
2019509338.tif 000011
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００３２】
これらの種類の化合物の第２のファミリーは以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩ：
【化１１】
2019509338.tif 000012
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００３３】
これらの種類の化合物の第３のファミリーは以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩＩ：
【化１２】
2019509338.tif 000013
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００３４】
これらの種類の化合物の第４のファミリーは以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩＩ：
【化１３】
2019509338.tif 000014
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００３５】
これらの異なる４世代の化合物は、実施例９〜実施例１６に示される結果をもたらした。これらの結果により、これらの特定の誘導体は、Ａ．バウマンニ（A. baumannii）コリスチン耐性細菌等の多剤耐性細菌の場合であっても、抗菌活性の増加を示すと結論付けることができる。
【００３６】
結果的に、実施例９〜実施例１６において提供される各世代に属する一般式に含まれる大半の化合物は、細菌増殖の顕著で広スペクトルの阻害剤であることが証明された。したがって、それらの作用機構の更なる最適化及び特性評価がこれらの化合物に必要であるが、これらの化合物は新たなクラスの抗菌性化合物の開発に対する強力なヒット候補となる。
【００３７】
結果的に、第２の発明の第１の態様は、下記式を含む化学構造を有する化合物を含む組成物に関する：
式ＩＸ：
【化１４】
2019509338.tif 000015
（式中、
Ｒ１はＯｔＢｕ、ＣＨ２ｔＢｕ、ＣＨ２Ｐｈ、又はＣＨ２Ｃヘキシルであり、
Ｒ２はＨであり、
Ｒ３はＨ、又はＣＦ３であり、
Ｒ４はＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨ３、又はＯＣＨ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３である）。
【００３８】
第２の発明の第１の態様の好ましい実施形態では、化合物は以下の一般構造を含む。
式ＶＩ：
【化１５】
2019509338.tif 000016
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００３９】
第２の発明の第１の態様の別の好ましい実施形態では、化合物は以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩ：
【化１６】
2019509338.tif 000017
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００４０】
第２の発明の第１の態様の別の好ましい実施形態では、化合物は以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩＩ：
【化１７】
2019509338.tif 000018
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００４１】
第２の発明の第１の態様の別の好ましい実施形態では、化合物は以下の一般構造を含む。
式ＶＩＩＩ：
【化１８】
2019509338.tif 000019
（式中、
Ｒ４は、ＮＯ２、Ｃｌ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、又はＨであり、
Ｒ３はＨ又はＣＦ３であり、
Ｒ５はＨ又はＣＦ３であり、
式中、Ｒ６及びＲ２はＨである）。
【００４２】
第２の発明の第１の態様の更に別の好ましい実施形態では、化合物は、以下：
ａ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｂ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｃ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｄ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＦであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｅ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＦ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｆ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＯＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｇ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｈ．Ｒ１がＯｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＦ３であり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式ＶＩの化合物、
ｉ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｊ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｋ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｌ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＦであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｍ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＦ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｎ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＯＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｎ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｏ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＦ３であり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式ＶＩの化合物、
ｐ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｑ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｒ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物。
ｓ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＦであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｔ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＦ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｕ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＯＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｖ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｗｗ．Ｒ１がＣＨ２Ｃヘキシルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＦ３であり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式ＶＩの化合物、
ｘ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＮＯ２であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｙ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣｌであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ｚ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＮであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ａａ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＦであり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ａｂ．Ｒ１がＣＨ２ｔＢｕであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＦ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ａｃ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＯＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ａｄ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＨ３であり、Ｒ５がＨである、式ＶＩの化合物、
ａｅ．Ｒ１がＣＨ２Ｐｈであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＦ３であり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＦ３である、式ＶＩの化合物、
からなる一覧から選択される。
【００４３】
第２の発明の第２の態様は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤を更に含む、第２の発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物を含む医薬組成物に関する。
【００４４】
第２の発明の第３の態様は、治療において使用するための、第２の発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物に関する。
【００４５】
本発明の第４の態様は、マイコバクテリウム株、好ましくはマイコバクテリウム・テュバーキュローシス（mycobacterium tuberculosis）、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）又はクラブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）等の病原細菌によって被験体、好ましくはヒト被験体において引き起こされた感染症の治療（予防的及び／又は治療的）において使用するための、本発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかで定義される化合物に関する。かかる細菌は、球菌（球状細菌）及び桿菌（棒状細菌）の間の中間の形状を有するタイプの細菌であることが好ましい。かかる細菌の例は、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Haemophilus influenzae）、ガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）及びクラミジア・トラコマーティス（Chlamydia trachomatis）である。本発明が有用である他の細菌は、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）、Ａ．バウマンニ（A. baumannii）等のアシネトバクター（Acinetobacter）株、及びボルデテラ・パータシス（Bordetella pertussis）である。
【００４６】
本発明の第４の態様は、コリスチンに耐性の細菌によって引き起こされた感染症の治療において使用するための、第２の発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物に関する。
【００４７】
本発明の第５の態様は、コリスチン等のポリミキシン抗生物質を用いる、細菌によって引き起こされた感染症の同時又は後の治療において使用するための第２の発明の第１の態様又はその好ましい実施形態のいずれかに定義される化合物に関する。かかる併用療法は、コリスチン耐性細菌株の治療のために使用されることが好ましい。かかる株は、マイコバクテリウム株、好ましくはマイコバクテリウム・テュバーキュローシス（mycobacterium tuberculosis）、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、又はクラブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）であることが好ましい。かかる細菌は、球菌（球状細菌）及び桿菌（棒状細菌）の間の中間の形状を有するタイプの細菌であることがより好ましい。かかる細菌の例は、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Haemophilus influenzae）、ガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）及びクラミジア・トラコマーティス（Chlamydia trachomatis）である。本発明が有用である他の細菌は、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）、Ａ．バウマンニ（A. baumannii）等のアシネトバクター（Acinetobacter）株、及びボルデテラ・パータシス（Bordetella pertussis）である。より好ましくは、コリスチン等のポリミキシン抗生物質を用いる、細菌によって引き起こされた感染症の同時又は後の治療において使用するためのかかる化合物は、
【００４８】
最後に、本発明の更なる態様は、以下：
ａ．１−モノアシル誘導体の溶液にイソシアネート又はイソチオシアネートを添加し、撹拌して全ての出発材料を反応させる工程と、
ｂ．工程ａ）の溶液を蒸発乾固する工程と、
ｃ．工程ｂ）の化合物を適切な溶離液を使用することによりシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する工程と、
を含む、式Ｖ及び式ＶＩの尿素／チオ尿素誘導体の作製方法に関する。
【００４９】
本発明について、下記定義が以下に含まれる：
「含む、含んでいる（comprising）」の用語は、限定されないが、「含む、含んでいる」の単語に続くもの全てを包含することを意味する。したがって、「含む、含んでいる」の用語の使用は、列挙される要素が必要又は必須であるが、他の要素が任意であり、存在してもよく又は存在しなくてもよいことを示す。
【００５０】
「からなる（consisting of）」とは、「からなる」の句に続くもの全てを含み、それらに限定されることを意味する。したがって、「からなる」の句は、列挙される要素が必要又は必須であり、かつ他の要素が存在する可能性がないことを示す。
【００５１】
本明細書に実例として記載される本発明は、本明細書に具体的に開示されない任意の要素（単数又は複数）、限定（単数又は複数）のない状態で好適に実施されてもよい。したがって、例えば、「含む、含んでいる（comprising）」、「含む、含んでいる、挙げられる（including）」、「含有する、含有している（containing）」等の用語は、拡大的に、限定なく読まれるものとする。さらに、本明細書で採用される用語及び表現は、限定ではなく説明する用語として使用されており、かかる用語及び表現の使用において、示され記載される特徴又はそれらの一部の任意の等価物を除外する意図はなく、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲において様々な修飾が可能であることが認識される。したがって、本発明は好ましい実施形態によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される好ましい実施形態に具体化される本発明の任意の特徴、変更形態及び変形形態が当業者によって用いられてもよく、かかる変更形態及び変形形態は、本発明の範囲に含まれるものとすることが理解されるべきである。
【００５２】
本発明は、本明細書において広く包括的に記載される。また、包括的な開示に含まれるより狭い下位概念（species）及び下位（sub-generic）分類の各々が本発明の一部をなす。これは、削除されるものが具体的に本明細書に列挙されるかどうかにかかわらず、但し書き又は否定的な限定を伴って、上位概念（genus）から任意の主題を除く本発明の包括的な記載を含む。
【００５３】
他の実施形態は、添付の特許請求の範囲及び非限定的な実施例に含まれる。さらに、本発明の特徴又は態様が群によって記載される場合、当業者は、任意の個々のメンバー又はその群のメンバーのサブグループによっても本発明が説明されることを認識する。
【実施例】
【００５４】
実施例１．材料及び方法
１．１．化学
基本的な化学方法
全ての試薬、溶媒及び出発材料を、商業供給業者から得て、それ以上精製せずに使用した。ロータリーエバポレーターにおいて有機溶媒を除去することによって、減圧下で粗反応混合物を濃縮した。視覚化のためＫｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（E. Merck）プレート及びＵＶ検出器を使用する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって反応をモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィーを指定の溶離液を用いてシリカゲル６０（E. Merck）上で行った。いずれの報告された収率も精製された生成物のものであった。融点はスチュアート融点測定装置ＳＭＰ  １０（Stuart Melting Point Apparatus SMP 10）で得られ、補正されていない。質量スペクトルをＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＡＵＴＯＳＰＥＣＱ質量分析計：７０ｅＶでＥＩ及び１５０ｅＶでＣＩ、１００００の分解能によるＨＲ質量測定にて記録した。チオグリセロールマトリクスを使用してＦＡＢ質量スペクトルを記録した。ＮＭＲスペクトルを、１Ｈに対して５００ＭＨｚ及び１３Ｃ）に対して１２５ＭＨｚにおいて、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ５００スペクトロメーターで２５℃にて記録した。報告された化学シフト（δ）は百万分率（ｐｐｍ）で与えられ、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）単位である。１Ｈケミカルシフト値（δ）は、ＮＭＲ溶媒（ＤＭＳＯに対してδ＝２．５４ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３に対してδ＝７．２６ｐｐｍ）の残留する重水素化されていない成分を参照する。１３Ｃ化学シフト（δ）は、内部標準としてＣＤＣｌ３（中心ピーク、δ＝７７．１６ｐｐｍ）を参照する。スピン多重度は、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（クアドルプレット）、ｍ（マルチプレット）又はｂｒ  ｓ（ブロードシングレット）として報告される。ＣＯＳＹ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣ及びＮＯＥＳＹの実験を行って、ＮＭＲスペクトルにおいてシグナルを指定した。最終化合物の純度をＣ、Ｈ、Ｎの分析によって評価した。全ての最終化合物の純度は、燃焼によって９５％以上であると確認された。
【００５５】
基本手順１．２−置換ピペラジン（６〜９、４３〜４５）の化学選択的Ｎ−アシル化反応
２−置換ピペラジン（６．０ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（８０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ジクロロメタン（６．０ｍｍｏｌ、２０ｍＬ）中の適切なアシル化剤の溶液を３０分間滴加し、その後ピリジン（９ｍｍｏｌ）を滴加した。その反応混合物を１２時間撹拌しながら氷水浴で維持し、ＴＬＣが全ての出発材料が反応したことを示すまで室温に放置した。反応混合物を蒸発乾固して対応するモノアシル誘導体を得た。カラムクロマトグラフィーによって高収率で純粋な化合物を得た。
【００５６】
１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−メチルピペラジン（６）．３７
生成物をシロップとして得て、溶離液としてジクロロメタン−メタノール（１５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（０．９０ｇ、収率７５％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ２０１（２０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．７５〜３．７１（ｍ，２Ｈ）、２．８５〜２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．７５〜２．６９（ｍ，１Ｈ）、２．６０〜２．５４（ｍ，３Ｈ）、２．３９〜２．３４（ｍ，１Ｈ）、１．４１（ｓ，９Ｈ）、０．９６（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．５、７９．３、５１．２、５０．５、４５．５、４４．４、２８．６、１９．３。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１０Ｈ２０Ｎ２Ｏ２の算出値２００．１５２８［Ｍ］＋；実測値２００．１５２５。
【００５７】
３−メチル−１−ピバロイルピペラジン（７）．３８
生成物をシロップとして得て、溶離液としてジクロロメタン−メタノール（１５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（０．８５ｇ、収率７７％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ１８５（９０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．１１〜４．０２（ｍ，２Ｈ）、２．８９〜２．７３（ｍ，２Ｈ）、２．５９〜２．５２（ｍ，２Ｈ）、２．４５〜２．３８（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｓ，９Ｈ）、０．９７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７６．９、８０．２、５１．２、４５．２、４４．６、４０．３、２８．６、１９．０。
【００５８】
１−ベンゾイル−３−メチルピペラジン（８）．３９
生成物をシロップとして得て、溶離液としてジクロロメタン−メタノール（１５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１．０ｇ、収率８１％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ２０５（１００％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４５〜７．３４（ｍ，５Ｈ）、３．９１〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、２．９４〜２．８７（ｍ，３Ｈ）、２．７０〜２．５９（ｍ，３Ｈ）、０．９６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６８．８、１３６．１、１２８．９、１２８．０、１２６．４、５０．０、４４．９、４０．０、１８．５。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１２Ｈ１７Ｎ２Ｏの算出値２０５．１３４３［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値２０５．１３４１。
【００５９】
１−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−３−メチルピペラジン（９）
生成物を固体として得て、溶離液としてジクロロメタン−メタノール（４０：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１．１ｇ、収率７４％、融点１０１℃〜１０３℃）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７〜７．５（ｍ，５Ｈ）、４．４７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．１０（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４〜２．８６（ｍ，２Ｈ）、１．９７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、１．１３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．８、１５４．６、１４９．１、１２７．０、１２６．４、１２３．６、１２２．２、１１１．９、１１１．８、５１．１、４６．１、１９．４。Ｃ１４Ｈ１７Ｎ２Ｏ２の算出値：Ｃ，６８．５５；Ｈ，６．９９；Ｎ，１１．４２。実測値：Ｃ，６８．３２；Ｈ，６．６２；Ｎ，１１．２２。
【００６０】
１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−フェニルピペラジン（４３）
生成物をシロップとして得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１．０４ｇ、収率６６％、融点１０３℃〜１０５℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ２６３（１００％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４〜７．３（ｍ，５Ｈ）、４．０５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．７０（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ，）、３．０７（ｍ，１Ｈ）、２．９〜２．８（ｍ，２Ｈ）、２．７２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．９０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５４．８、１４１．５、１２８．５、１２７．８、１２７．０、７９．７、６０．３、５１．５、４６．１、４３．４、２８．５。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１５Ｈ２３Ｎ２Ｏ２の算出値２６３．１７５４［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値２６３．１７４８。
【００６１】
３−フェニル−１−ピバロイルピペラジン（４４）
生成物をシロップとして得て、溶離液としてジクロロメタン−メタノール（７０：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１．３６ｇ、収率９２％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ２４７（９０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６〜７．５（ｍ，５Ｈ）、４．５０（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ１Ｈ）、４．３８（ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．４３（ｔ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ，）、３．３６（ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．０５（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．８４（ｍ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）、１．２７（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７６．４、１３４．５、１２９．６、１２９．３、１２７．８、６０．１、４８．６、４４．５、４２．１、３８．８、２８．３。
【００６２】
１−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−３−フェニルピペラジン（４５）
生成物をシロップとして得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１．２１ｇ、収率６６％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３０７（１００％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８〜７．３（ｍ，１０Ｈ）、４．３９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．７８（ｍ，１Ｈ，）、３．１２（ｍ，２Ｈ）、２．８３（ｄｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５８．９、１５３．９、１４８．４、１４１．７、１２８．３、１２７．５、１２６．９、１２６．７、１２６．４、１２３．７、１２２．４、１１１．７、１１０．７、５９．８、２２．４。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１９Ｈ１９Ｎ２Ｏ２の算出値３０７．１４４１［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３０７．１４３３。Ｃ１９Ｈ１８Ｎ２Ｏ２の算出値：Ｃ，７４．４９；Ｈ，５．９２；Ｎ，９．１４。実測値：Ｃ，７４．６１；Ｈ，６．１８；Ｎ，８．９３。
【００６３】
基本手順２．アミド誘導体（１０、１１、１５、１６、２０及び２１）の合成
乾燥ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の１−モノアシル誘導体（６〜８）（１．０ｍｏｌ）の溶液に、対応するハロゲン化アシル（１．５ｍｍｏｌ）及びピリジン（１．５ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を、ＴＬＣが全ての出発材料が反応したことを示すまで室温で撹拌した。反応混合物を希塩酸、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液、及び水で連続して洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濾液を蒸発乾固した。得られた化合物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。
【００６４】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−メチル−１−（４−ニトロベンゾイル）ピペラジン（１０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１８１ｍｇ、収率５２％、融点１１５℃〜１１７℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３５０（３０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３０〜８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．６８〜７．６５（ｍ，２Ｈ）、３．９５〜３．８８（ｍ，１Ｈ）、３．７９〜３．７３（ｍ，２Ｈ）、３．１３〜３．０９（ｍ，２Ｈ）、２．９５〜２．８８（ｍ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６８．３、１５１．１、１４１．９、１２８．５、１２４．３、７９．８、５１．１、４４．２、３９．４、２８．６、１５．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２３Ｎ３Ｏ５の算出値３４９．１６３７［Ｍ］＋；実測値３４９．１６３８。Ｃ１７Ｈ２３Ｎ３Ｏ５の算出値：Ｃ，５８．４４；Ｈ，６．６４；Ｎ，１２．０３。実測値：Ｃ，５８．６２；Ｈ，６．７５；Ｎ，１１．８４。
【００６５】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−（４−メトキシベンゾイル）−２−メチルピペラジン（１１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（４：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２３７ｍｇ、収率７１％、融点８４℃〜８７℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３３５（２８％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．３８〜７．３３（ｍ，２Ｈ）、７．０１〜６．９８（ｍ，２Ｈ）、４．３５〜４．２８（ｍ，１Ｈ）、３．９３〜３．８３（ｍ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．７８〜３．７３（ｍ，１Ｈ）、２．９１〜２．８４（ｍ，２Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．８、１５５．１、１２９．２、１１４．５、７９．８、５５．９、４８．０、４３．９、３２．４、２８．５、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２６Ｎ２Ｏ４の算出値３３４．１８９０［Ｍ］＋；実測値３３４．１８９３。Ｃ１８Ｈ２６Ｎ２Ｏ４の算出値：Ｃ，６４．６５；Ｈ，７．８４；Ｎ，８．３８。実測値：Ｃ，６４．７７；Ｈ，７．４２；Ｎ，８．３３。
【００６６】
２−メチル−１−（４−ニトロベンゾイル）−４−ピバロイルピペラジン（１５）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１７３ｍｇ、収率５２％、融点１４３℃〜１４５℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３３４（７０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３０〜８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．６９〜７．６６（ｍ，２Ｈ）、４．３８〜４．１３（ｍ，３Ｈ）、３．９３〜３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．１２〜３．０３（ｍ，３Ｈ）、１．２４（ｓ，９Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７７．１、１６８．１、１４４．８、１４３．０、１２８．７、１２４．３、８０．２、５１．１、４８．８、４５．４、３８．８、２８．７、１５．８。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４Ｎ３Ｏ４の算出値３３４．１７７０［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３３４．１７６７。Ｃ１７Ｈ２３Ｎ３Ｏ４の算出値：Ｃ，６１．２５；Ｈ，６．９５；Ｎ，１２．６０。実測値：Ｃ，６１．０８；Ｈ，７．０１；Ｎ，１２．４３。
【００６７】
１−（４−メトキシベンゾイル）−２−メチル−４−ピバロイルピペラジン（１６）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１９４ｍｇ、収率６１％、融点９６℃〜９７℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３１９（３５％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．３８〜７．３５（ｍ，２Ｈ）、７．０１〜６．９９（ｍ，２Ｈ）、４．４１〜４．３１（ｍ，１Ｈ）、４．２３〜４．１２（ｍ，２Ｈ）、３．９２〜３．８５（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．０９〜２．９９（ｍ，３Ｈ）、１．２４（ｓ，９Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６，９Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２９．４、１１４．３、８０．２、５５．８、４８．４、４５．７、３８．８、２８．７、２７．４、１５．８。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２７Ｎ２Ｏ３の算出値３１９．２０１６［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３１９．２０２２。Ｃ１８Ｈ２６Ｎ２Ｏ３の算出値：Ｃ，６７．９０；Ｈ，８．２３；Ｎ，８．８０。実測値：Ｃ，６７．５５；Ｈ，８．１７；Ｎ，８．４９。
【００６８】
４−ベンゾイル−２−メチル−１−（４−ニトロベンゾイル）ピペラジン（２０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：２）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２０５ｍｇ、収率５８％、融点１０３℃〜１０５℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３５４（８５％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）８．３０〜８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．７０〜７．６７（ｍ，２Ｈ）、７．４８〜７．４０（ｍ，５Ｈ）、４．４０〜４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．１０〜３．９２（ｍ，１Ｈ）、３．８９〜３．７０（ｍ，２Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．２、１５６．８、１２９．２、１１４．５、４７．７、１５．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１９Ｈ２０Ｎ３Ｏ４の算出値３５４．１４５７［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３５４．１４５４。
【００６９】
４−ベンゾイル−１−（４−メトキシベンゾイル）−２−メチルピペラジン（２１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２１０ｍｇ、収率６２％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３３９（２０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３１〜８．２５（ｍ，２Ｈ）、７．７２〜７．６８（ｍ，２Ｈ）、７．４４〜７．３９（ｍ，５Ｈ）、４．３５〜４．２８（ｍ，１Ｈ）、３．９３〜３．８３（ｍ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．７８〜３．７３（ｍ，１Ｈ）、２．９１〜２．８４（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．２、１５５．１、１３６．４、１３３．９、１２９．９、１２８．９、１２７．３、１２２．６、１１４．５、５５．９、４８．０、４３．９、３２．４、２８．５、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２０Ｈ２３Ｎ２Ｏ３の算出値３３９．１７０９［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３３９．１７０１。
【００７０】
基本手順３．尿素／チオ尿素誘導体（１２〜１４、１７〜１９、２２〜４１、４６〜６５）の合成
乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の１−モノアシル誘導体（６〜９、４３〜４５）（１．０ｍｏｌ）の溶液に、対応するイソシアネート又はイソチオシアネート（１．２ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を、ＴＬＣが全ての出発材料が反応したことを示すまで室温で撹拌した。反応混合物を蒸発乾固した。適切な溶離液を使用するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって化合物を精製した。
【００７１】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノチオカルボニル］ピペラジン（１２）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２８９ｍｇ、収率７６％、融点１７４℃〜１７６℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４０３（９５％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１６〜８．１１（ｍ，２Ｈ）、７．６１〜７．５９（ｍ，２Ｈ）、５．１４〜５．０５（ｍ，１Ｈ）、４．４３〜４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．９２〜３．７６（ｍ，２Ｈ）、３．４２〜３．３４（ｍ，１Ｈ）、３．０４〜２．９７（ｍ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１８１．３、１５４．５、１４７．７．０、１４２．４、１２３．９、１２３．２、７９．６、５１．８、４３．０、２７．９、１４．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ４ＳＮａの算出値４０３．１４１０［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４０３．１４０５。Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ４Ｓの算出値：Ｃ，５３．６７；Ｈ，６．３６；Ｎ，１４．７３；Ｓ，８．４３。実測値：Ｃ，５３．６０；Ｈ，６．５８；Ｎ，１４．５６；Ｓ，８．２７。
【００７２】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（１３）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２６６ｍｇ、収率７３％、融点１６５℃〜１６７℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ３８７（４５％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１５〜８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．９６〜７．９３（ｍ，１Ｈ）、７．７４〜７．７０（ｍ，２Ｈ）、４．４３〜４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．９４〜３．８６（ｍ，２Ｈ）、３．７８〜３．７１（ｍ，３Ｈ）、３．１３〜３．０８（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．２、１５４．３、１４７．８、１４２．１、１２５．０、１１９．３、７９．７、５５．１、４７．２、４３．７、３９．０、２８．６、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値３８７．１６３９［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値３８７．１６３１。Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，５６．０３；Ｈ，６．６４；Ｎ，１５．３８。実測値：Ｃ，５５．９９；Ｈ，６．８０；Ｎ，１５．２８。
【００７３】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（１４）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１６８ｍｇ、収率４８％、融点１８４℃〜１８６℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３５０（１０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．３４〜７．３１（ｍ，２Ｈ）、６．８５〜６．８１（ｍ，２Ｈ）、４．３５〜４．２９（ｍ，１Ｈ）、３．９１〜３．８６（ｍ，１Ｈ）、３．８５〜３．８０（ｍ，１Ｈ）、３．７６〜３．７４（ｍ，２Ｈ）、３．７６〜３．７２（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．１１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５６．０、１５５．５、１３４．０、１２２．７、１１６．８、１１４．３、７９．５、５５．８、４６．７、４３．８、３８．７、２８．６、１５．４。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ４の算出値３４９．２００５［Ｍ］＋；実測値３４９．２００２。Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ４の算出値：Ｃ，６１．８７；Ｈ，７．７９；Ｎ，１２．０３。実測値：Ｃ，６１．６０；Ｈ，７．８２；Ｎ，１１．９９。
【００７４】
２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノチオカルボニル］−４−ピバロイルピペラジン（１７）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２２２ｍｇ、収率６１％、融点１６８℃〜１７０℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ３８７（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１７〜８．１１（ｍ，２Ｈ）、７．６３〜７．５８（ｍ，２Ｈ）、５．１５〜５．０５（ｍ，１Ｈ）、４．４７〜４．３８（ｍ，１Ｈ）、４．２３〜４．１１（ｍ，２Ｈ）、３．２３〜３．１０（ｍ，３Ｈ）、１．２５（ｓ，９Ｈ）、１．１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１８２．３、１２４．３、１２２．５、５３．５、４８．７、４５．１、４３．５、４０．５、２８．６、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ３ＳＮａの算出値３８７．１４６１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値３８７．１４５５。Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ３Ｓの算出値：Ｃ，５６．０２；Ｈ，６．６４；Ｎ，１５．３７；Ｓ，８．８０。実測値：Ｃ，５５．８３；Ｈ，６．６８；Ｎ，１５．０７；Ｓ，８．６４。
【００７５】
２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−４−ピバロイルピペラジン（１８）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２３７ｍｇ、収率６８％、融点２２０℃〜２２２℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３４９（１８％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１５〜８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．７４〜７．７１（ｍ，２Ｈ）、４．４７〜４．３８（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１２（ｍ，２Ｈ）、３．９７〜３．９２（ｍ，１Ｈ）、３．１４〜３．０６（ｍ，３Ｈ）、１．２６（ｓ，９Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７６．９、１５４．５、１４７．８、１４１．９、１２５．２、１１９．１、８０．２、５１．１、４８．３、４７．７、４５．４、３９．４、２８．６、１５．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２５Ｎ４Ｏ４の算出値３４９．１８６６［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３４９．１８７６。Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ４の算出値：Ｃ，５８．６１；Ｈ，６．９４；Ｎ，１６．０８。実測値：Ｃ，５８．４４；Ｈ，６．９８；Ｎ，１６．０２。
【００７６】
１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−メチル−４−ピバロイルピペラジン（１９）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：２）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（１９７ｍｇ、収率５９％、融点１７１℃〜１７３℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３３４（１２％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１５〜８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．３５〜７．３２（ｍ，２Ｈ）、６．８５〜７．８２（ｍ，２Ｈ）、４．４０〜４．３２（ｍ，１Ｈ）、４．１８〜４．０５（ｍ，２Ｈ）、３．９１〜３．８６（ｍ，１Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．１３〜３．０３（ｍ，３Ｈ）、１．２６（ｓ，９Ｈ）、１．１０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７７．７、１５５．７、１３４．０、１２２．７、１２１．０、１１４．３、７９．８、５５．９、４８．５、４７．４、４５．６、３９．１、２８．７、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ３の算出値３３３．２０５６［Ｍ］＋；実測値３３３．２０５２。Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６４．８４；Ｈ，８．１６；Ｎ，１２．６０。実測値：Ｃ，６４．６７；Ｈ，８．０５；Ｎ，１２．３３。
【００７７】
４−ベンゾイル−２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノチオカルボニル］ピペラジン（２２）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２５０ｍｇ、収率６５％）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３８５（３０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２２〜８．１４（ｍ，２Ｈ）、７．９５〜７．９２（ｍ，１Ｈ）、７．６４〜７．４１（ｍ，２Ｈ）、７．５０〜７．４４（ｍ，５Ｈ）、６．６６〜６．６４（ｍ，１Ｈ）、６．４１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．１６（ｂｓ，１Ｈ）、４．４７〜４．４５（ｍ，１Ｈ）、４．０８〜４．０２（ｍ，２Ｈ）、３．５０〜３．３８（ｍ，２Ｈ）、２．８６〜２．６５（ｍ，１Ｈ）１．２５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１８２．７、１５５．３、１４８．３、１４３．２、１３６．１、１２８．９、１２７．４、１２６．６、１２４．２、１２３．６、５５．１、４３．６、４０．７、４０．５、１５．５。Ｃ１９Ｈ２０Ｎ４Ｏ３Ｓの算出値：Ｃ，５９．３６；Ｈ，５．２４；Ｎ，１４．５７；Ｓ，８．３４。実測値：Ｃ，５９．１９；Ｈ，４．９６；Ｎ，１４．３５；Ｓ，８．５７。
【００７８】
４−ベンゾイル−２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（２３）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：３）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３３９ｍｇ、収率９２％、融点２０８℃〜２１０℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３６９（２０％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１５〜８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．７４〜７．７０（ｍ，２Ｈ）、７．４９〜７．４２（ｍ，５Ｈ）、４．４７〜４．４４（ｍ，１Ｈ）、４．０６〜３．８０（ｍ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６６．０、１５４．５、１４７．６、１３０．４、１２８．９、１２７．４、１２６．６、１２４．４、１１９．３、１１３．１、４７．７、３９．２、１５．６。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１９Ｈ２１Ｎ４Ｏ４の算出値３６９．１５５６［Ｍ＋Ｈ］＋；実測値３６９．１５６３。Ｃ１９Ｈ２０Ｎ４Ｏ４の算出値：Ｃ，６１．９５；Ｈ，５．４７；Ｎ，１５．２１。実測値：Ｃ，６１．７８；Ｈ，５．５７；Ｎ，１５．３３。
【００７９】
４−ベンゾイル−１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（２４）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：２）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２５１ｍｇ、収率７１％、融点１７１℃〜１７３℃）。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ３５４（１５％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４９〜７．３１（ｍ，６Ｈ）、６．８４〜６．８２（ｍ，２Ｈ）、４．３８（ｍ，１Ｈ）、３．９１〜３．８７（ｍ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．３１〜３．２３（ｍ，２Ｈ）、１．１３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７０．８、１５５．８、１３６．４、１３３．９、１２９．９、１２８．９、１２７．３、１２２．６、１１４．３、７９．５、５５．９、４７．１、３８．８、２８．６、１５．５。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２０Ｈ２３Ｎ３Ｏ３の算出値３５３．１７３７［Ｍ］＋；実測値３５３．１７３９。Ｃ２０Ｈ２３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６７．９７；Ｈ，６．５６；Ｎ，１１．８９。実測値：Ｃ，６７．７２；Ｈ，６．６３；Ｎ，１１．８２。
【００８０】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−メチル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（２５）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２４１ｍｇ、収率５９％、融点９９℃〜１０１℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４３１（４０％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２３（ｓ，１Ｈ）、８．２〜７．７（ｍ，９Ｈ）、４．４７（ｓ，１Ｈ）、４．３４（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．４〜４．３（ｍ，２Ｈ）、３．３〜３．２（ｍ，２Ｈ）、１．１６（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．８、１５４．１、１５３．９、１４７．０、１４１．１、１２６．８、１２６．５、１２５．１、１２４．６、１２３．８、１２２．６、１１８．８、１１１．８、１１１．４、５９．９、４６．９、１５．４。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４３１．１３２６［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４３１．１３１６。Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６１．７６；Ｈ，４．９４；Ｎ，１３．７２。実測値：Ｃ，６２．０３；Ｈ，５．０６；Ｎ，１３．３９。
【００８１】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（２６）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３３０ｍｇ、収率８４％、融点１７０℃〜１７２℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３９（ｓ，１Ｈ）、７．８〜６．８（ｍ，９Ｈ）、４．４〜４．３（ｍ，３Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７０（ｓ，３Ｈ）、３．２０（ｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１３（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．９、１５５．３、１５４．５、１４８．３、１３３．３、１２７．３、１２７．１、１２４．４、１２３．１、１２２．９、１２０．９、１１４．１、１１２．３、１１１．９、５５．７、５５．６、４７．２、１５．４。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２３Ｎ３Ｏ４Ｎａの算出値４１６．１５８１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１６．１５７６。Ｃ２２Ｈ２３Ｎ３Ｏ４の算出値：Ｃ，６７．１６；Ｈ，５．８９Ｎ，１０．６８。実測値：Ｃ，６７．１８；Ｈ，５．７５；Ｎ，１０．６２。
【００８２】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−クロロフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（２７）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２４７ｍｇ、収率７０％、融点１７４℃〜１７６℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ３７６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６０（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．２６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．０２（ｄｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．８４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）、１．０９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．８、１５４．５、１３９．０、１２８．２、１２５．８、１２１．６、７９．４、４６．４、２７．９、１４．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４ＣｌＮ３Ｏ３Ｎａの算出値３７６．１３９８［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値３７６．１３８９。Ｃ１７Ｈ２４ＣｌＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５７．７０；Ｈ，６．８４；Ｎ，１１．８８。実測値：Ｃ，５７．７９；Ｈ，６．５８；Ｎ，１１．７０。
【００８３】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−メチル−１−［（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（２８）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２２１ｍｇ、収率５７％、融点１８７℃〜１８９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１０（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８６（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．３０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．０５（ｄｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．８４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）、１．０８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．２、１５５．１、１４４．５、１２６．１、１２３．９、１１９．９、８０．０、４７．１、２８．５、１５．３。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２４Ｆ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４１０．１６６２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１０．１６５２。Ｃ１８Ｈ２４Ｆ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５５．８１；Ｈ，６．２４；Ｎ，１０．８５。実測値：Ｃ，５６．０３；Ｈ，６．２７；Ｎ，１０．７６。
【００８４】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−メチル−１−［（２−ニトロフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（２９）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３４５ｍｇ、収率９５％、融点１９９℃〜２０１℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ３８７（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．９７〜７．９５（ｍ，１Ｈ）、７．７１〜７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．８５〜３．７７（ｍ，２Ｈ）、３．１３〜３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．８４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．２、１５５．２、１３４．６、１３４．０、１２５．０、１２３．８、１２２．９、１１９．１、７９．０、４６．９、３８．３、２８．０、１５．０。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値３８７．１６３９［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値３８７．１６２８。Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，５６．０３；Ｈ，６．６４；Ｎ，１５．３８。実測値：Ｃ，５６．１３；Ｈ，６．４２；Ｎ，１５．４７。
【００８５】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（２−クロロ−５−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（７．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３９６ｍｇ、収率９４％、融点９８℃〜１００℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４４４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．９４〜７．９３（ｍ，１Ｈ）、７．７３〜７．７１（ｍ，２Ｈ）、７．５１〜７．４９（ｍ，１Ｈ）、４．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．８６〜３．７６（ｍ，２Ｈ）、３．１２〜３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．９０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．４、１５４．３、１３７．６、１３１．６、１３０．４、１２７．７、１２２．４、１２１．６、７９．０、４６．８、３８．３、２８．０、１４．８。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４４４．１２７２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４４４．１２５９。Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５１．２５；Ｈ，５．５０；Ｎ，９．９６。実測値：Ｃ，５１．４７；Ｈ，５．６４；Ｎ，９．７２
【００８６】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−クロロ−３−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４０４ｍｇ、収率９６％、融点１５７℃〜１５９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４４４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．０５（ｍ，１Ｈ）、７．８１〜７．７９（ｍ，２Ｈ）、７．５９〜７．５７（ｍ，１Ｈ）、４．３６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．００〜３．７５（ｍ，３Ｈ）、３．１０〜３．０４（ｍ，２Ｈ）、２．８７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．１１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．２、１４０．２、１３１．６、１３０．４、１２６．２、１２４．０、１２２．２、１１８．０、７９．０、４６．４、３８．２、２８．２、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４４４．１２７２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４４４．１２６７。Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５１．２５；Ｈ，５．５０；Ｎ，９．９６。実測値：Ｃ，５１．３３；Ｈ，５．２９；Ｎ，９．６３。
【００８７】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−クロロフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３２）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３３４ｍｇ、収率８４％、融点９７℃〜９９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４２０（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６５（ｓ，１Ｈ）、７．７〜７．３（ｍ，９Ｈ）、４．４３（ｓ，１Ｈ）、４．３２（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ１Ｈ）、４．１９（ｍ，２Ｈ）、３．３〜３．２（ｍ，２Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．８、１５４．７、１５３．９、１４７．７、１３９．０、１２８．２、１２６．８、１２６．５、１２５．９、１２３．８、１２２．６、１２１．６、１１１．８、１１１．４、５９．５、４８．７、４６．７、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４２０．１０８５［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４２０．１０７９。Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６３．４０；Ｈ，５．０７；Ｎ，１０．５６。実測値：Ｃ，６３．７９；Ｈ，５．１３；Ｎ，１０．２２。
【００８８】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−メチル−１−［（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（３３）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２６７ｍｇ、収率６２％、融点９３℃〜９５℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４５４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９１（ｓ，１Ｈ）、７．８〜７．３（ｍ，９Ｈ）、４．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３３（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．３〜３．２（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５４．５、１５３．９、１４７．７、１４３．９、１２６．８、１２６．８、１２６．５、１２５．６、１２５．５、１２３．８、１２２．６、１１９．４、１１１．８、１１１．４、５４、４８．７、４６．８、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２０Ｆ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４５４．１３４９［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４５４．１３４０。Ｃ２２Ｈ２０Ｆ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６１．２５；Ｈ，４．６７；Ｎ，９．７４。実測値：Ｃ，６１．４９；Ｈ，４．９０；Ｎ，９．４３。
【００８９】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−シアノフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３４）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：２）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３６７ｍｇ、収率９５％、融点９７℃〜９９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１１（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０２（ｓ，１Ｈ）、７．７〜７．３（ｍ，９Ｈ）、４．４２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．１０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．２３（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ）、１．１２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５４．２、１５３．９、１４４．８、１３２．８、１２６．８、１２６．５、１２５．６、１２３．８、１２２．６、１１９．４、１１８．６、１１３．６、１１１．７、１１１．４、１０３．３、５９．９、４６．８、１５．０。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２０Ｎ４Ｏ３Ｎａの算出値４１１．１４２８［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１１．１４１８。Ｃ２２Ｈ２０Ｎ４Ｏ３の算出値：Ｃ，６８．０３；Ｈ，５．１９；Ｎ，１４．４２。実測値：Ｃ，６８．１７；Ｈ，５．１０；Ｎ，１４．７５。
【００９０】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−フルオロフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３５）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３２０ｍｇ、収率８４％、融点９３℃〜９５℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４０４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５９（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．０５（ｍ，９Ｈ）、４．４２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．３３〜４．２７（ｍ，２Ｈ）、４．２３〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、３．２４〜３．１９（ｍ，２Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５８．６、１５５．１、１５３．９、１４７．７、１３６．１５、１３６．１３、１２６．８、１２６．５、１２３．８、１２２．６、１２２．２、１２２．１、１１４．９、１１４．７、４６．７、２６．７、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０ＦＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４０４．１３８１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４０４．１３６９。Ｃ２１Ｈ２０ＦＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６６．１３；Ｈ，５．２９；Ｎ，１１．０２。実測値：Ｃ，６６．０７；Ｈ，５．５９；Ｎ，１１．１９。
【００９１】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−メチル−１−［（２−ニトロフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（３６）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２９４ｍｇ、収率９５％、融点１４１℃〜１４３℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４３１（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３７（ｓ，１Ｈ）、７．９４〜７．２２（ｍ，９Ｈ）、４．３９〜４．２９（ｍ，２Ｈ）、４．２２〜４．１４（ｄ，２Ｈ）、３．５１〜３．３９（ｍ，１Ｈ）、３．３５〜３．２０（ｍ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５４．３、１５３．９、１４７．６、１４０．８、１３４．１４、１３４．１１、１２６．８、１２６．５、１２５．０、１２３．９、１２３．８、１２３．４、１２２．６、１１１．７、１１１．５、４７．３、１５．１。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４３１．１３２６［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４３１．１３１９。Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６１．７６；Ｈ，４．９４；Ｎ，１３．７２。実測値：Ｃ，６２．０５；Ｈ，５．０７；Ｎ，１３．４１。
【００９２】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２−フルオロフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３７）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２６７ｍｇ、収率７０％、融点１２７℃〜１２９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４０４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３８（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．１０（ｍ，９Ｈ）、４．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３４〜４．３２（ｍ，１Ｈ）、４．１８〜４．１１（ｍ，２Ｈ）、３．２５〜３．２１（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５５．２、１５４．０、１４７．７、１２７．０、１２６．８、１２６．５、１２５．６、１２５．５、１２４．０、１２３．８、１２２．６、１１５．６、１１１．７、４７．０、１４．８。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０ＦＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４０４．１３８１［Ｍ＋＋Ｎａ］＋；実測値４０４．１３７２。Ｃ２１Ｈ２０ＦＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６６．１３；Ｈ，５．２９；Ｎ，１１．０２。実測値：Ｃ，６６．２５；Ｈ，５．６０；Ｎ，１０．８５。
【００９３】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２−ブロモフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３８）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３８０ｍｇ、収率８６％、融点１２９℃〜１３１℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４６４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２５（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．０８（ｍ，９Ｈ）、４．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３３〜４．３２（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１７（ｍ，１Ｈ）、３．２７〜３．２２（ｍ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５５．１、１５３．９、１４７．７、１３７．５、１３２．４、１２８．０、１２７．６、１２６．８、１２６．６、１２３．８、１２２．６、１１９．８、１１１．７、７８．８、４７．１、１５．０。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２０ＢｒＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４６４．０５８０［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４６４．０５７４。Ｃ２１Ｈ２０ＢｒＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５７．０２；Ｈ，４．５６；Ｎ，９．５０。実測値：Ｃ，５７．１６；Ｈ，４．４９；Ｎ，９．４０。
【００９４】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２，４−ジフルオロフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（３９）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３２３ｍｇ、収率８１％、融点１６３℃〜１６５℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４２２（１００％）［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４０（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．００（ｍ，８Ｈ）、４．３８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３３〜４．３１（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１８（ｍ，１Ｈ）、３．２４〜３．２０（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．９、１５５．３、１５４．０、１４７．７、１２８．１、１２８．０、１２６．８、１２６．５、１２３．８、１２２．６、１１１．７、１１１．４、４７．０、１４．８。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ１９Ｆ２Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４２２．１２８７［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４２２．１２７５。Ｃ２１Ｈ１９Ｆ２Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６３．１５；Ｈ，４．８０；Ｎ，１０．５２。実測値：Ｃ，６３．３５；Ｈ，４．９７；Ｎ，１０．０６。
【００９５】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−メチルピペラジン（４０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３７３ｍｇ、収率９５％、融点１２７℃〜１２９℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１５（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．００（ｍ，９Ｈ）、４．３８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３２〜４．３０（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．２６〜３．２２（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．０、１５５．０、１５４．０、１４７．７、１２８．０、１２６．８、１２６．５、１２３．８、１２２．７、１２０．２、１１１．８、１１１．０、５５．７、４７．０、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２３Ｎ３Ｏ４Ｎａの算出値４１６．１５８１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１６．１５６８。Ｃ２２Ｈ２３Ｎ３Ｏ４の算出値：Ｃ，６７．１６；Ｈ，５．８９；Ｎ，１０．６８。実測値：Ｃ，６７．３４；Ｈ，６．０８；Ｎ，１０．４９。
【００９６】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−メチル−１−（フェニルアミノカルボニル）ピペラジン（４１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３５２ｍｇ、収率９７％、融点１３８℃〜１４０℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ３８６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５４（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．００（ｍ，１０Ｈ）、４．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３４〜４．３１（ｍ，１Ｈ）、４．２５〜４．０７（ｍ，２Ｈ）、３．２４〜３．１７（ｍ，２Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５５．２、１５４．０、１４０．０、１２８．４、１２６．８、１２６．５、１２３．８、１２２．６、１２２．３、１２０．２、１１１．８、１１１．４、７８．８、４６．７、１４．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２１Ｈ２１Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値３８６．１４７５［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値３８６．１４６３。Ｃ２１Ｈ２１Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６９．４１；Ｈ，５．８２；Ｎ，１１．５６。実測値：Ｃ，６９．６２；Ｈ，５．９５；Ｎ，１１．３３。
【００９７】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（４６）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２１３ｍｇ、収率５０％、融点１０１℃〜１０３℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４４９（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．０〜７．３（ｍ，９Ｈ）、６．６５（ｍ，１Ｈ）、５．１（ｍ，１Ｈ）、４．５〜３．３（ｍ６Ｈ）、１．４１（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５４．３、１４４．９、１４２．７、１３８．３、１２９．７、１２６．４、１２５．０、１１８．４、１１３．４、８０．５、５８．６、４９．５、４６．６、４３．１、２８．３。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４４９．１７９６［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４４９．１７８１。Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６１．９６；Ｈ，６．１５；Ｎ，１３．１４。実測値：Ｃ，６２．１５；Ｈ，６．１９；Ｎ，１２．９１。
【００９８】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−クロロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（４７）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４０７ｍｇ、収率９８％、融点１１５℃〜１１７℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４３８（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７７（ｓ，１Ｈ）、７．５３〜７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．３９〜７．３５（ｍ，２Ｈ）、７．３２〜７．２６（ｍ，５Ｈ）、５．４７（ｓ，１Ｈ）、４．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０２（ｍ１Ｈ）、３．８９〜３．５７（ｍ１Ｈ）、３．１５〜３．０３（ｍ２Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．９、１５３．５、１３９．４、１３１．６、１２８．４、１２８．２、１２６．９、１２６．４、１２５．５、１２１．２、７９．１、５３．１、４８．７、４６．０、４２．３、２７．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２６ＣｌＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４３８．１５５５［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４３８．１５４２。Ｃ２２Ｈ２６ＣｌＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６３．５３；Ｈ，６．３０；Ｎ，１０．１０。実測値：Ｃ，６３．１７；Ｈ，６．２０；Ｎ，９．７３。
【００９９】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−フェニル−１−［（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（４８）
生成物をシロップとして得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２０２ｍｇ、収率４５％）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４７２（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５〜７．２（ｍ，９Ｈ）、６．５０（ｓ，１Ｈ）、５．１（ｍ，１Ｈ）、４．５〜３．１（ｍ６Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５４．８、１５４．４、１４２．０、１３８．４、１２９．６、１２８．６、１２３．１、１１９．１、１１４．２、８０．４、５８．１、４６．５、４４．１、３９．４、２８．４。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２６Ｆ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４７２．１８１８［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４７２．１８０３。
【０１００】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−フルオロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（４９）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３１５ｍｇ、収率７９％、融点２０２℃〜２０４℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４２２（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６８（ｓ，１Ｈ）、７．５〜７．１（ｍ，９Ｈ）、５．４７（ｓ，１Ｈ）、４．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０５〜３．９７（ｍ１Ｈ）、３．８７〜３．７１（ｍ１Ｈ）、３．１４〜２．９３（ｍ２Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５８．４、１５６．５、１３９．１、１３６．６、１２８．４、１２６．６、１２１．６、１２１．５、１１４．９、１１４．７、７９．１、５３．１、４６．１、２７．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２６ＦＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４２２．１８５０［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４２２．１８３８。Ｃ２２Ｈ２６ＦＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６６．１５；Ｈ，６．５６；Ｎ，１０．５２。実測値：Ｃ，６６．２１；Ｈ，６．４６；Ｎ，１０．２２。
【０１０１】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−シアノフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３９０ｍｇ、収率９６％、融点９４℃〜９６℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４２９（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５〜７．２（ｍ，９Ｈ）、６．５５（ｓ，１Ｈ）、５．１０（ｓ，１Ｈ）、４．５〜３．２（ｍ，６Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５４．４、１４２．７、１３８．３、１３３．１、１２９．７、１２６．２、１１９．１、１１４．５、１０５．８、８０．５、５８．６、４９．５、４４．２、３８．５、２８．３。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ３Ｎａの算出値４２９．１８９７［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４２９．１８９７。Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ３の算出値：Ｃ，６７．９６；Ｈ，６．４５；Ｎ，１３．７８。実測値：Ｃ，６８．０３；Ｈ，６．３７；Ｎ，１３．２７。
【０１０２】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（２−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３８４ｍｇ、収率９０％、融点１３２℃〜１３４℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４４９（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４１（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．７５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７（ｄｔ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８（ｍ，４Ｈ）、７．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｔｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．３９（ｓ，１Ｈ）、４．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．００（ｍ１Ｈ）、３．８８〜３．６７（ｍ１Ｈ）、３．４７〜３．４０（ｍ１Ｈ）、３．２４〜２．９４（ｍ，２Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．５、１４０．６、１３４．４、１３４．１、１２８．４、１２７．０、１２６．６、１２５．５０、１２３．９、１２３．１、７９．１、５３．８、４６．１、４２．４、２７．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４４９．１７９５［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４４９．１７８２。Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６１．９６；Ｈ，６．１５；Ｎ，１３．１４。実測値：Ｃ，６１．９８；Ｈ，５．８８；Ｎ，１２．９７。
【０１０３】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（２−クロロ−５−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５２）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（９：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４７３ｍｇ、収率９８％、融点９６℃〜９８℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５０６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３９（ｓ，１Ｈ）、８．０３〜７．３１（ｍ，８Ｈ）、５．４１（ｓ，１Ｈ）、４．４４〜４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．０５〜３．９９（ｍ１Ｈ）、３．８８〜３．６６（ｍ１Ｈ）、３．５６〜３．４７（ｍ，１Ｈ）、３．３１〜３．２３（ｍ１Ｈ）、１．３３（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．７、１５３．５、１３８．９、１３７．５、１３０．５、１２７．１、１２６．６、１２４．８、１２２．６、１２１．５、７９．１、５４．０、４６．２、２７．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値５０６．１４２９［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値５０６．１４１７。Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５７．０９；Ｈ，５．２１；Ｎ，８．６８。実測値：Ｃ，５７．０４；Ｈ，５．３４；Ｎ，８．４６。
【０１０４】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−クロロ−３−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５３）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４６４ｍｇ、収率９６％、融点１０９℃〜１１１℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５０６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０１（ｓ，１Ｈ）、８．０８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１〜７．３５（ｍ，２Ｈ）、７．３２〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、５．４８（ｓ，１Ｈ）、４．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０２（ｍ１Ｈ）、３．８９〜３．６３（ｍ１Ｈ）、３．４４〜３．３７（ｍ，１Ｈ）、３．１５〜２．９１（ｍ２Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５４．６、１５３．６、１４０．１、１３８．８、１３１．６、１２８．４、１２６．９、１２４．０、１２２．３、１２１．８、１１８．０、７９．１、５４．１、４５．９、２７．９。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値５０６．１４２９［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値５０６．１４１８。Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，５７．０９；Ｈ，５．２１；Ｎ，８．６８。実測値：Ｃ，５６．８５；Ｈ，５．２７；Ｎ，８．４９。
【０１０５】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５４）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３７０ｍｇ、収率９０％、融点９０℃〜９２℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４３４（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４〜７．３（ｍ，９Ｈ）、６．０８（ｓ，１Ｈ）、５．０８（ｍ，１Ｈ）、４．３〜３．４（ｍ６Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５６．０、１５５．７、１３８．９、１３１．７、１２９．４、１２８．５、１２６．５、１２３．７、１２２．２、１１４．１、８０．２、５８．０、５５．５、４９．４、４５．２、３９．４、２８．３。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ４Ｎａの算出値４３４．２０５０［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４３４．２０３７。Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ４の算出値：Ｃ，６７．１３；Ｈ，７．１０；Ｎ，１０．２１。実測値：Ｃ，６７．３２；Ｈ，６．９３；Ｎ，９．９８。
【０１０６】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−［（４−メチルフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５５）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３４８ｍｇ、収率８８％、融点１６２℃〜１６４℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１８（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４〜７．３（ｍ，９Ｈ）、６．１５（ｓ，１Ｈ）、５．０８（ｍ，１Ｈ）、４．４〜３．３（ｍ６Ｈ）、２．２５（ｓ，３Ｈ）、１．３３（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５０．２、１３３．６、１３０．８、１２７．６、１２４．１、１２３．２、１２１．０、１１４．９、７５．０、５２．８、４１．４、３９．０、３４．１、２３．１、１５．５。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４１８．２１０１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１８．２０８８。Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６９．８５；Ｈ，７．３９；Ｎ，１０．６２。実測値：Ｃ，７０．０３；Ｈ，７．５５；Ｎ，１０．４２。
【０１０７】
１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニル−４−ピバロイルピペラジン（５６）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３５２ｍｇ、収率９７％）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４３３（６５％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３１（ｓ，１Ｈ）、８．２２〜７．２３（ｍ，９Ｈ）、５．４２（ｍ，１Ｈ）、１．１０（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７５．４、１５４．２、１５５．３、１４０．１、１３２．５、１２８．６、１２５．６、１２２．２、１２０．５、１１３．８、１１３．５、７９．５、５５．４、４５．４、３８．１、２７．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ４Ｎａの算出値４３３．１８５２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４３３．１８３３。Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ４の算出値：Ｃ，６４．３７；Ｈ，６．３８；Ｎ，１３．６５。実測値：Ｃ，６４．５８；Ｈ，６．１９；Ｎ，１３．５１。
【０１０８】
１−［（４−シアノフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニル−４−ピバロイルピペラジン（５７）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２６１ｍｇ、収率６７％、融点１５１℃〜１５３℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１３（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｓ，１Ｈ）、７．３〜６．８（ｍ，９Ｈ）、５．４２（ｍ，１Ｈ）、４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．９８（ｔｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９８（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．４５（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３８（ｍ，１Ｈ）、３．２９（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、１．０８（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７６．０、１５４．７、１３９．７、１３２．７、１２８．３、１２６．３、１２１．９、１２０．２、１１３．８、１１３．５、７９．０、５５．２、５５．１、４５．４、３８．１、２７．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ２Ｎａの算出値４１３．１９４８［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１３．１９３３。Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ２の算出値：Ｃ，７０．７５；Ｈ，６．７１；Ｎ，１４．３５。実測値：Ｃ，７０．８７；Ｈ，６．４６；Ｎ，１４．６４。
【０１０９】
１−［（４−メトキシフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニル−４−ピバロイルピペラジン（５８）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（２２９ｍｇ、収率５８％、融点６２℃〜６５℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４１８（５５％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｓ，１Ｈ）、７．３〜６．８（ｍ，９Ｈ）、５．４２（ｍ，１Ｈ）、４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．９８（ｔｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９８（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．４５（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３８（ｍ，１Ｈ）、３．２９（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、１．０８（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７６．０、１５４．７、１３９．７、１３２．７、１２８．３、１２６．３、１２１．９、１２０．２、１１３．８、１１３．５、７９．０、５５．２、５５．１、４５．４、３８．１、２７．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値４１８．２１０１［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４１８．２０８８。Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６９．８５；Ｈ，７．３９；Ｎ，１０．６２。実測値：Ｃ，６９．９５；Ｈ，７．５５；Ｎ，１０．３７。
【０１１０】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（５９）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４００ｍｇ、収率８５％、融点１４１℃〜１４３℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４９３（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３９（ｓ，１Ｈ）、８．１６（ｍ，２Ｈ）、７．７６〜７．７１（ｍ，３Ｈ）、７．６７〜７．６４（ｍ，１Ｈ）、７．４６（ｍ，１Ｈ）、７．３９〜７．２０（ｍ，７Ｈ）、５．６２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７６〜３．４２（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５４．３、１５３．９、１４７．９、１４７．２、１４５．７、１４１．５、１４．１、１３８．９、１２８．５、１２７．１、１２６．７、１２６．３、１２５．１、１２４．７、１２３．７、１２２．５、１１８．６、１１１．８、５４．１、４８．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２６Ｈ２２Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４９３．１４８２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４９３．１４７０。Ｃ２６Ｈ２２Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６６．３７；Ｈ，４．７１；Ｎ，１１．９１。実測値：Ｃ，６６．５８；Ｈ，４．９３；Ｎ，１１．７１。
【０１１１】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−クロロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（６０）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４１４ｍｇ、収率９０％、融点１１８℃〜１２０℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４８２（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８２（ｓ，１Ｈ）、７．７６〜７．２６（ｍ，１４Ｈ）、５．５９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．８０〜３．４０（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５８．４、１５３．９、１４７．９、１３９．３、１２８．５、１２８．２、１２７．０、１２６．７、１２６．３、１２５．６、１２３．７、１２２．５、１２１．２、１１１．８、５３．５。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２６Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４８２．１２４２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４８２．１２３７。Ｃ２６Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６７．９０；Ｈ，４．８２；Ｎ，９．１４。実測値：Ｃ，６８．１５；Ｈ，５．０１；Ｎ，８．９３。
【０１１２】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−フェニル−１−［（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］ピペラジン（６１）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４６８ｍｇ、収率９５％、融点１３４℃〜１３６℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５１６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１０（ｓ，１Ｈ）、７．７７〜７．２６（ｍ，１４Ｈ）、５．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７９〜３．４９（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５４．７、１５３．９、１４７．９、１４４．１、１３９．０、１２８．５、１２７．１、１２６．７、１２６．３、１２５．６、１２３．７、１２２．５、１１９．１、１１１．８、５３．９、４８．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２７Ｈ２２Ｆ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値５１６．１５０５［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値５１６．１４９４。Ｃ２７Ｈ２２Ｆ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６５．７２；Ｈ，４．４９；Ｎ，８．５２。実測値：Ｃ，６５．５１；Ｈ，４．１８；Ｎ，８．８２。
【０１１３】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−フルオロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（６２）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３３７ｍｇ、収率７６％、融点１２２℃〜１２４℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４６６（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７４（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．１０（ｍ，１４Ｈ）、５．６１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７８〜３．４８（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５８．４、１５６．６、１５５．１、１５３．９、１４７．９、１３９．２、１３６．６、１２８．５、１２７．０、１２６．６、１２６．３、１２３．７、１２２．５、１２１．６、１１４．９、１１１．７、５３．７、４８．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２６Ｈ２２ＦＮ３Ｏ３Ｎａの算出値４６６．１５３７［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４６６．１５２４。Ｃ２６Ｈ２２ＦＮ３Ｏ３の算出値：Ｃ，７０．４２；Ｈ，５．００；Ｎ，９．４８。実測値：Ｃ，７０．２２；Ｈ，５．３８；Ｎ，９．１９。
【０１１４】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（４−シアノフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（６３）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４３７ｍｇ、収率９７％、融点２１２℃〜２１４℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４７３（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１９（ｓ，１Ｈ）、７．７８〜７．６３（ｍ，６Ｈ）、７．４９〜７．２２（ｍ，８Ｈ）、７．６７〜７．６４（ｍ，１Ｈ）、７．４６（ｍ，１Ｈ）、７．３９−７．２０（ｍ，７Ｈ）、５．６２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７７〜３．４４（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５４．４、１５３．９、１４７．９、１４４．９、１３９．０、１３２．９、１２８．５、１２７．１、１２６．７、１２６．３、１２５．１、１２４．７、１２３．７、１２２．５、１１９．２、１１８．４、１１１．８、１０３．３、５３．８、４０．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２７Ｈ２２Ｎ４Ｏ３Ｎａの算出値４７３．１５８４［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４７３．１５６９。Ｃ２７Ｈ２２Ｎ４Ｏ３の算出値：Ｃ，７１．９９；Ｈ，４．９２；Ｎ，１２．４４。実測値：Ｃ，７１．８８；Ｈ，５．１５；Ｎ，１２．２１。
【０１１５】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２−ニトロフェニル）アミノカルボニル］−２−フェニルピペラジン（６４）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（３４８ｍｇ、収率７４％、融点１４３℃〜１４５℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４９３（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４５（ｓ，１Ｈ）、７．９８（ｄｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．６９〜７．６６（ｍ２Ｈ）、７．５０〜７．２３（ｍ，９Ｈ）、５．２３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．８４〜３．４１（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．３、１５４．４、１５３．９、１４７．９、１３８．６、１３４．４、１３４．２、１２８．５、１２７．２、１２６．７、１２６．３、１２５．１、１２３．７、１２３．１、１２２．５、１１１．７、４８．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２６Ｈ２２Ｎ４Ｏ５Ｎａの算出値４９３．１４８２［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値４９３．１４７０。Ｃ２６Ｈ２２Ｎ４Ｏ５の算出値：Ｃ，６６．３７；Ｈ，４．７１；Ｎ，１１．９１。実測値：Ｃ，６６．２７；Ｈ，４．８３；Ｎ，１１．７３。
【０１１６】
４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−１−［（２−クロロ−５−トリフルオロメチルフェニル）アミノカルボニル］−２フェニルピペラジン（６５）
生成物を固体として得て、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２．５：１）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した（４８６ｍｇ、収率９２％、融点１４０℃〜１４２℃）。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５５０（１００％）［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０７（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０〜７．６６（ｍ，２Ｈ）、７．４９〜７．４４（ｍ，３Ｈ）、７．４０〜７．２９（ｍ，７Ｈ）、５．５３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．８９〜３．４８（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＲＭＮ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．４、１５４．５、１５３．９、１４７．９、１３８．９、１３７．４、１３０．４、１２８．６、１２７．４、１２６．７、１２６．３、１２４．８、１２３．７、１２２．５、１２１．４、１１１．８、４８．７。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ２７Ｈ２１ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３Ｎａの算出値５５０．１１１６［Ｍ＋Ｎａ］＋；実測値５５０．１１０４。Ｃ２７Ｈ２１ＣｌＦ３Ｎ３Ｏ３の算出値：Ｃ，６１．４３；Ｈ，４．０１；Ｎ，７．９６。実測値：Ｃ，６１．００；Ｈ，４．２０；Ｎ，７．７３。
【０１１７】
１．２．生物学的評価
細胞及びウイルス
ヒトＡ５４９、２９３及びＭＲＣ−５の細胞株は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（バージニア州マナッサスのＡＴＣＣ：American Type Culture Collection）に由来した。ヒトβ５遺伝子を含むサイトメガロウイルスプロモーター駆動性発現プラスミドを２９３細胞にトランスフェクトし、ネオマイシン耐性について選択することにより、ヒトβ５インテグリンサブユニットを過剰発現する２９３β５の安定発現細胞株を作製した４０。これらの細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（カリフォルニア州タルザナのOmega Scientific）、ＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、Ｌ−グルタミン４ｍＭ、ペニシリン１００単位／ｍｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、及び非必須アミノ酸０．１ｍＭで補足したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Life Technologies/Thermo Fisher）（完全ＤＭＥＭ）において増殖させた。
【０１１８】
野生型のＨＡｄＶ５及びＨＡｄＶ１６、並びにＨＣＭＶ（ＡＤ１６９）をＡＴＣＣから得た。本発明で使用したＨＡｄＶ５−ＧＦＰ及びＨＡｄＶ１６−ＧＦＰは、Ｅ１／Ｅ３領域に代えてＣＭＶプロモーター駆動性高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）レポーター遺伝子カセットを含む複製欠損ウイルスである４１。ＨＡｄＶウイルスを２９３β５細胞において増殖させ、塩化セシウム密度遠心分離によって細胞溶解物から単離した。ｍｇ／ｍｌ単位のウイルス濃度をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（Bio-Rad Laboratories）で計算し、４×１０１２ｖｐ／ｍｇを使用してウイルス粒子／ｍｌ（ｖｐ／ｍｌ）に変換した。
【０１１９】
１．３．エントリーアッセイ
候補抗ウイルス性化合物５０μＭの存在下で、ＨＡｄＶ５−ＧＦＰ（２０００ｖｐ／細胞）で感染させたヒトＡ５４９上皮細胞（Corningの黒色ウェル壁の透明底９６ウェルプレートにおいて３×１０５細胞／ウェル）を使用して初期の迅速スクリーニングを行った。ウイルスを４℃で４５分間、上記化合物（個別に及び混合して）と予備インキュベートした後、細胞に添加した。ウイルスの２倍段階希釈物を使用して、化合物の不在下で、細胞を感染させることにより標準感染曲線を並行して作成した。全ての反応をトリプリケート（triplicate：三連）で行った。細胞、ウイルス、及び化合物を３７℃及び５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。Ｔｙｐｈｏｏｎ９４１０イメージャー（GE Healthcare Life Sciences）を使用してＨＡｄＶ媒介ＧＦＰ発現によって測定される感染を分析し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔＴＬ（GE Healthcare Life Sciences）により定量した。２０００ｖｐ／細胞、及び５０μＭ〜１．５６μＭの範囲の濃度の化合物を使用する投与量アッセイ（dosage assay）において、抗ウイルス活性を示した化合物を更に試験した。
【０１２０】
１．４．細胞毒性アッセイ
製造業者の使用説明書に従い、ＡｌａｒｍＢｌｕｅ細胞生存率アッセイ（Invitrogen）を使用して化合物の細胞毒性を測定した。活発に分裂しているＡ５４９細胞を化合物と共に４８時間インキュベートした。インキュベーションの後、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ試薬を細胞に添加し（培養培地中の１／１０のａｌａｍａｒＢｌｕｅ試薬）、更に４時間インキュベートした。分子の５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０）をCheng et al.４２に従って計算した。選択指数（ＳＩ）をＩＣ５０に対するＣＣ５０の比として評価し、ここで、ＩＣ５０はＨＡｄＶ感染を５０％阻害する化合物の濃度として定義される。
【０１２１】
１．５．プラークアッセイ
低ＭＯＩ感染に関して、プラークアッセイにおいて活性化合物を更に評価した。２９３β５細胞を各条件についてデュプリケートで６ウェルプレート中、１ウェル当たり４×１０５細胞で蒔いた。細胞が８０％〜９０％の培養密度に達したとき、それらの細胞をＨＡｄＶ５−ＧＦＰ又はＨＡｄＶ１６−ＧＦＰ（０．０６ｖｐ／細胞）で感染させ、３７℃で２時間振蕩した。接種物を除去し、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。その後、１．６％（水／容量）Ｄｉｆｃｏ  Ａｇａｒ  Ｎｏｂｌｅ（メリーランド州スパークスのBecton, Dickinson & Co）と、２×ペニシリン／ストレプトマイシン、２×Ｌ−グルタミン及び１０％ＦＢＳで補足した２×ＥＭＥＭ（BioWhittaker）とが等分の４ｍｌ／ウェルで細胞を注意深く覆った。また、上記混合物は、５μＭ〜１μＭの範囲の濃度で化合物を含んだ。３７℃で７日間のインキュベーションの後、プレートをＴｙｐｈｏｏｎ  ９４１０イメージャー（GE Healthcare Life Sciences）でスキャンし、プラークをＩｍａｇｅＪで定量した４３。
【０１２２】
１．６．リアルタイムＰＣＲによるＤＮＡ定量
ＤＮＡの定量のため、Ａ５４９細胞（２４ウェルプレート中、１５００００細胞／ウェル）を野生型のＨＡｄＶ５又はＨＡｄＶ１６（１００ｖｐ／細胞）で感染させ、完全ＤＭＥＭ中３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーションの後、過剰なウイルスを除去し、５０μＭのいずれかの化合物又は同容量のＤＭＳＯ（陽性対照）を含む５００μｌの完全ＤＭＥＭで培地を置換した。全ての試料をトリプリケートで行った。３７℃で２４時間のインキュベーションの後、製造業者の使用説明書に従って、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州バレンシアのQIAGEN）によって細胞溶解物からＤＮＡを精製した。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ（TaqMan）Ｐｒｉｍｅｒ  Ｄｅｓｉｇｎソフトウェア（GenScript）を用いて、ＨＡｄＶ５ヘキソンの領域に対してＴａｑＭａｎプライマー及びプローブを設計した。オリゴヌクレオチド配列は、ＡｄＦ：５’−ＧＡＣＡＴＧＡＣＴＴＴＴＧＡＧＧＴＧＧＡ−３’；ＡｄＲ：５’−ＧＴＧＧＣＧＴＴＧＣＣＧＧＣＣＧＡＧＡＡ−３’；及びＡｄプローブ：５’−ＴＣＣＡＴＧＧＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＡＡＡ−３’であった。リアルタイムＰＣＲ混合物は、総容量１２．５μｌ中、２μｌの精製されたＤＮＡ、各々濃度２００ｎＭのＡｄＦ及びＡｄＲ、並びに濃度５０ｎＭのＡｄプローブからなり、ＫＡＰＡ  ＰＲＯＢＥ  ＦＡＳＴ  ｑＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（マサチューセッツ州のKAPABiosystems）１２．５μｌと混合した。ＰＣＲサイクリングプロトコルは、９５℃３分間の後、９５℃１０秒間、そして６０℃３０秒間を４０サイクルであった。
【０１２３】
ヒトグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）遺伝子を内部対照として使用した。ＧＡＰＤＨに対するオリゴヌクレオチド配列及び条件は、以前Rivera et al.４４によって報告されたものであった。定量のため、ヘキソン及びＧＡＰＤＨに由来する遺伝子フラグメントをｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Promega）へとクローニングし、既知濃度のテンプレートを使用して各実験に対する標準曲線を並行して作成した。全てのアッセイをＣ１０００  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ装置（BioRad）で行った。
【０１２４】
１．７．核会合ＨＡｄＶゲノム
いくらかの改変を加えて以前に記載されたプロトコル４５を使用し、感染細胞から核を単離した後、ＨＡｄＶゲノムの核送達をリアルタイムＰＣＲで判断した。簡潔には、化合物５０μＭ又は同容量のＤＭＳＯの存在下において、６ウェルプレート中、１×１０６個のＡ５４９細胞を２０００ｖｐ／細胞のＭＯＩでＨＡｄＶ５野生型に感染させた。感染の４５分後、低張バッファー溶液及びＮＰ−４０洗浄剤を使用して細胞質画分及び核画分を分離した。感染後、Ａ５４９細胞をトリプシン処理して収集し、その後、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞ペレットを１×低張バッファー（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＭｇＣｌ２）５００μｌに再懸濁させ、４℃で１５分間インキュベートした。その後、ＮＰ−４０  ２５μｌを添加し、試料をボルテックスした。ホモジェネートを４℃にて８３５×ｇで１０分間遠心分離した。細胞質画分（上清）を除去した後、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州バレンシアのQIAGEN）を使用して、核画分（ペレット）からＤＮＡを単離した。
【０１２５】
１．８．ウイルス収率の減少
ウイルス産生に対する活性化合物の効果をバーストアッセイで評価した。５０μＭの化合物の存在下又は不在下で、Ａ５４９細胞を野生型のＨＡｄＶ５又はＨＡｄＶ１６（ＭＯＩ  １００）で感染させた。４８時間後、細胞を採取し、３回の凍結／解凍に供した。清澄化溶解物の段階希釈物をＡ５４９細胞に対して滴定し、終点希釈法を使用してＴＣＩＤ５０値を計算した４６。
【０１２６】
１．９．定量的ＰＣＲによるＨＣＭＶ感染力アッセイ
本発明者らの化合物に対するＨＣＭＶの感受性を試験するため、ＭＲＣ−５細胞（６ウェルプレートで１．７５×１０５細胞／ウェル）を０．０５ｖｐ／細胞のＭＯＩでＨＣＭＶにより感染させ、５０μＭの化合物で補足した完全ＤＭＥＭ又は同じ容量のＤＭＳＯにおいてトリプリケートでインキュベートした。３７℃で７２時間のインキュベーションの後、製造業者の使用説明書に従いＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州バレンシアのQIAGEN）を用いて細胞溶解物からＤＮＡを精製した。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ（TaqMan）Ｐｒｉｍｅｒ  Ｄｅｓｉｇｎソフトウェア（GenScript）を用いて、ＵＳ２８遺伝子の領域に対してＴａｑＭａｎプライマー及びプローブを設計した。オリゴヌクレオチド配列はＣＭＶ−Ｆ：５’−ＴＣＴＡＣＧＴＧＧＣＴＡＴＧＴＴＴＧＣＣ−３’、ＣＭＶ−Ｒ：５’−ＧＧＣＣＧＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧＴＡＡＡＣＡＡ−３’、及びＣＭＶプローブ：５’−ＣＡＣＧＧＡＧＡＴＴＧＣＡＣＴＣＧＡＴＣＧＣ−３’であった。リアルタイムＰＣＲ混合物は、総容量１２．５μｌ中、１０μｌの精製したＤＮＡ、濃度１００ｎＭのＣＭＶ−Ｆ、濃度３００ｎＭのＣＭＶ−Ｒ、及び濃度５０ｎＭのＣＭＶ−プローブからなり、ＫＡＰＡ  ＰＲＯＢＥ  ＦＡＳＴ  ｑＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（マサチューセッツ州のKAPABiosystems）１２．５μｌと混合した。ＰＣＲサイクリングプロトコルは、９５℃１０分間の後、９５℃３０秒間、そして５８℃６０秒間を４０サイクルであった。ヒトグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を内部対照として使用した。ＧＡＰＤＨに対するオリゴヌクレオチド配列及び条件は、以前Rivera et al.４４によって報告されたものであった。定量のため、ＵＳ２８及びＧＡＰＤＨ由来の遺伝子フラグメントをｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Promega）へとクローニングし、既知濃度のテンプレートを使用して、各実験に対する標準曲線を並行して作成した。全てのアッセイをＣ１０００  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ装置（BioRad）で行った。
【０１２７】
１．１０．統計学的分析
ＧｒａｐｈＰａｄプリズム５一式を用いて統計学的分析を行った。別段の指示がない限り、データをトリプリケート試料の平均±標準偏差（ＳＤ）として提示する。
【０１２８】
実施例２．第１世代化合物
１．化学
第１世代化合物
２−メチルピペラジン５（スキーム１）を、本発明者らが第１世代化合物と呼ぶ新たなクラスの化合物の前駆物質として用いた。２−置換ピペラジンの化学選択的Ｎ−アシル化反応により、より妨害されていない窒素にアシル官能基を導入し、異なるＲ１を有するウレタン及びアミドの誘導体６〜９を合成した。これらの化合物に対する一般的な合成経路をスキーム１に提示する。
【０１２９】
スキーム１．モノアシルメチルピペラジン誘導体６〜９の合成
【化１９】
2019509338.tif 000020
【０１３０】
これらのモノアシル誘導体６〜９から、この位置のどの有機官能基が生物学的活性に決定的であるかを特定するため、他の窒素にあるカルボニル基をアミド基又は尿素／チオ尿素基として組み込んだ（スキーム２）。ここで本発明者らの構造はモデル２〜４とは異なるため、フェニル環上の置換基（Ｒ２）の性質、すなわち電子求引性基又は電子供与性基もまた評価されなければならない。スキーム２に本質的に記載される経路に続いて、適切な塩化アシル又はイソシアネート／イソチオシアネートの反応物を選択することにより、化合物１０〜化合物２６が得られた（表１）。
【０１３１】
スキーム２．新たなメチルピペラジン誘導体の作製に対する合成方法論
【０１３２】
【表１】
2019509338.tif 000021
【０１３３】
２．生物学
第１世代化合物
化合物１０〜化合物２６を、候補分子の存在下でのＨＡｄＶプラーク形成を定量するプラークアッセイにより、それらの抗ＨＡｄＶ活性の可能性についてスクリーニングし、エントリーアッセイによって、細胞へのＨＡｄＶ侵入を遮断する上記候補分子の能力を評価した。
【０１３４】
プラークアッセイのため、（１０μＭの化合物の存在下で）２９３β５細胞をＨＡｄＶ５−ＧＦＰで感染させた（表２）。この世代の化合物から、本発明者らの一次スクリーニングは、同容量のＤＭＳＯで処理した対照と比較してＨＡｄＶ５−ＧＦＰプラーク形成を９０％超阻害した４つの化合物（１２、１３、２２、及び２５）を同定した。
【０１３５】
【表２】
2019509338.tif 000022
【０１３６】
この世代の化合物から、本発明者らの一次スクリーニングは、プラークアッセイにおいてＨＡｄＶ５−ＧＦＰ感染を９０％超阻害した４つの化合物（１２、１３、２２、及び２５）を同定した。エントリーアッセイのため、５０μＭの候補抗ウイルス性化合物の存在下でヒトＡ５４９上皮細胞をＨＡｄＶ５−ＧＦＰで感染させ、４８時間インキュベートした。得られた阻害パーセンテージは著しく高いものではなく、例えば、１２及び２１について０％、１０〜１２、１５〜１７、１９、２０及び２６について２０％未満、わずか数種の化合物のみが中程度から高度（５０％〜７０％）の値の阻害を与えた（１３、１８、２２〜２５）。表３は、エントリーアッセイにおいて見られたデータと並んで、それらのプラークアッセイにおける最も活性な化合物に関する細胞生存率に対する効果の評価を示す。
【０１３７】
【表３】
2019509338.tif 000023
【０１３８】
結果は、この第１世代の分子のうち、最も活性なものは、一般構造Ｂ（表１）に属し、電子求引性基を有する一つの窒素において尿素基又はチオ尿素基、ＮＯ２（Ｒ２、図１）を含み、他の窒素上のアシル基がウレタン又はベンゾフラン−２−イルオン（Ｒ１、図３）である構造上の特徴を持つことを示した。
【０１３９】
細胞毒性活性について、化合物は１００μＭ超の濃度で低い毒性を示した。これにより、化合物１２及び化合物２２は細胞毒性であるため（表３）、チオ尿素官能基は最終的には次世代のため廃棄される。一方、化合物２５の細胞毒性を減少させる必要があった。この世代から、最良の抗ウイルス活性を示した最も安全な化合物は化合物１３であった。
【０１４０】
実施例３．第２世代化合物
１．化学
第２世代化合物
第１世代の阻害剤をスクリーニングしたライブラリによって生成された情報に基づいて、本発明者らは、他の窒素に電子求引性基を持つ尿素基と同様に、最初に官能化された窒素におけるウレタン基又はベンゾフランカルボニル基が、活性に好ましいようであると結論付けた。次の段階として、化合物６及び化合物９と適切なイソシアネートとの反応による同じ効率的で高収率の方法論に従って、フェニル環上のＲ（電子求引性基）の変異、及びＲ１としてｔｅｒｔ−ブトキシル又はベンゾフラン−２−イルを有する化合物２７〜化合物４１を合成した（表４）。
【０１４１】
【表４】
2019509338.tif 000024
【０１４２】
２．生物学
第２世代化合物
それらの可能性のある抗ＨＡｄＶ活性を判断するため、先に記載される同じアッセイに従って、化合物２７〜化合物４１を評価した。
【０１４３】
【表５】
2019509338.tif 000025
【０１４４】
上記基の性質とそのフェニル環での位置の両方の活性に対する効果を調査した。表５に示されるように、この世代から得られた５つの最も活性な化合物（化合物３０、化合物３１、化合物３３、化合物３５、及び化合物３６）は、９１％〜１００％のＨＡｄＶ５−ＧＦＰプラーク形成阻害を提示し、それらはいずれもフェニル環の異なる位置に異なる電子求引性基を有する。
【０１４５】
それらのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル誘導体２７〜３１について、Ｃｌ基、ＣＦ３基、及びオルトＮＯ２基は、化合物１３の活性を改善しなかった（それぞれ、２７、２８及び２９、表５、エントリー１〜エントリー３）。しかしながら、化合物３０及び化合物３１は非常に活性であったものの、非常に毒性でもあった（表５、エントリー４及びエントリー５）。化合物３０及び化合物３１が二置換のフェニル環（Ｃｌ及びＣＦ３）を持つことに注目することは重要である。それらのベンゾフラン−２−カルボニル誘導体について、化合物４１の活性の欠如は、フェニル環上の置換基の存在が必要であることを示す。パラ位で評価された種々の基、Ｃｌ、ＣＦ３、ＣＮ、及びＦ（それぞれ３２、３３、３４、及び３５）のうち、ＣＦ３及びＦにより最良の活性が見られたが、ＣＦ３誘導体３３は幾分細胞毒性を提示した。
【０１４６】
この世代に対して、最良のデータは、非常に活性で高いＣＣ５０（２００μＭ超）を有する化合物３５及び化合物３６（表５、エントリー９及びエントリー１０）によって得られた。２５のアナログを得ようとして、同様の活性を有し、毒性が減少された化合物をもたらしたフェニル環の置換パターンをパラ位（化合物２５）からオルト位（化合物３６）へと変化させることによって、化合物３６を合成した。オルト位にある他の電子求引性基（Ｆ、Ｂｒ）について、活性は検出されなかった（化合物３７及び化合物３８）。
【０１４７】
実施例４．第３世代の化合物
１．化学．第３世代の化合物
第２世代から、より活性な化合物の構造的特徴（電子求引性基を有する尿素官能基によって連結された、Ｒ１としてのｔｅｒｔ−ブトキシル又はベンゾフラン−２−イルとフェニル環）を保存することにより、また本発明者らの一般骨格の構造上の可変性の最終ポイント、すなわちピペラジン環上の置換基（図１）を変化させることにより、更に最適化のラウンドを行って第３世代の阻害剤を得た。この場合、２−フェニルピペラジンを出発材料として用いて、スキーム３に示される一般合成経路を経てモノアシル誘導体４３〜４５を高収率で得た。
【０１４８】
スキーム３．モノアシルフェニルピペラジン誘導体４３〜４５の合成
【化２０】
2019509338.tif 000026
【０１４９】
同様に、４３〜４５と適切なイソシアネートとの反応により、高収率で化合物４６〜化合物６５を得た（表６）。
【０１５０】
【表６】
2019509338.tif 000027
【０１５１】
２．生物学
第３世代化合物
先に作製した全ての化合物と同じ方法で、可能性のある化合物４５〜化合物６５の抗ＨＡｄＶ活性を評価した（表７）。
【０１５２】
【表７】
2019509338.tif 000028
【０１５３】
大まかに言えば、この世代からの化合物は、高い活性を提示した（２０個中２個のみが７０％未満の阻害パーセンテージを与えた）。それらのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル誘導体４６〜５５について、４６のみが細胞毒性がなく、高阻害活性（ＮＯ２基）を示したが、パラ位のＣｌ基、ＣＦ３基、Ｆ基、及びＣＮ基は活性を改善しなかった。Ｃｌ又はＣＦ３（それぞれ４７及び４８、表７、エントリー２及びエントリー３）の存在は、著しい細胞毒性をもたらした。同様に、化合物５１、化合物５２及び化合物５３は高い阻害活性を示したが、著しい細胞毒性も示した（表７、エントリー６及びエントリー７）。化合物５１はオルト位にＮＯ２基を持っていたのに対し、５２、５３は二置換のフェニル環（異なる位置のＣｌ及びＣＦ３）を持っていたことに注目することは重要である。それらの化合物は、それぞれ対応するメチルピペラジン誘導体２９、３０、及び３１のフェニルピペラジン誘導体アナログとなるように設計された。
【０１５４】
フェニルによるメチルの置換は、活性であるが一定の細胞毒性を有する化合物５１（２９は活性ではなかった）を与えた。化合物５２及び化合物５３の場合、所望の目的は、それらの細胞毒性を持たずに３０及び３１と同様の阻害活性を得ることであった。化合物５２は、細胞毒性がより低く、より活性な化合物（５２対３０）を生じたが、化合物５３は顕著な阻害活性を提示するにもかかわらず３１と同じくらいの細胞毒性を生じた。ベンゾフラン−２−イル基が存在する場合、パラ置換フェニル環を持つそれらの化合物は、それらのアナログのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル誘導体よりも活性であった。この事実は、新たな活性化合物５９としてのＮＯ２誘導体のみならず、Ｃｌ及びＣＮの誘導体（６０及び６３）も与えた。ＣＦ３及びＦの誘導体である６１及び６２は、４８及び４９と比較して抗ＨＡｄＶ活性に関して改善された化合物であるが、それらはまだ高い毒性を呈した。オルトＮＯ２誘導体６４は非常に活性で、非細胞毒性であったのに対し、そのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアナログ５１は低い毒性を示した。またさらに、二置換ベンゾフラン−２−イル誘導体６５は、５２のアナログとして作製され、高い阻害活性及び低い細胞毒性を示した。
【０１５５】
最後に、一般骨格が先の世代に関して変更されたという事実により、上に言及される２つとは異なるアシル基、及び尿素官能基を有する３つのフェニルピペラジン誘導体（５６〜５８）を作製し、評価した。フェニル環に位置する置換基は、電子求引性基と電子供与性基の両方であった。それらのいずれも抗ＨＡｄＶ活性を与えなかった。
【０１５６】
プラークアッセイにおけるそれらの抗ウイルス活性、すなわち９６％〜１００％の阻害及びそれらの低い細胞毒性について化合物４６、化合物５９、化合物６０、化合物６３、化合物６４及び化合物６５を選択した。各化合物に対する５０％化合物阻害濃度（ＩＣ５０）、選択指数（ＳＩ）の測定のため、また阻害に関する幾つかの機構的な理解を得るため、これらの活性化合物を更に評価した（表８）。
【０１５７】
【表８】
2019509338.tif 000029
【０１５８】
２−フェニルピペラジン４６及び５９は、高い感染多重度（ＭＯＩ）、すなわち２０００個のウイルス粒子（ｖｐ）／細胞で再現性よく、用量依存的にＨＡｄＶ５感染を阻害した。ウイルスのより低いインプット（０．０６ｖｐ／細胞）を使用する後のスクリーニングでも、これらの化合物は、１０μＭの濃度において９６％〜１００％のプラーク形成の阻害により用量依存的な活性を示した（表８）。一方、化合物６０、化合物６３、化合物６４、及び化合物６５は、プラークアッセイでは高い用量依存的な阻害を保持しながら、エントリーアッセイにおいてより少ない程度にＨＡｄＶ５感染を阻害した（表８）。また、本発明者らは、Ｂ種のＨＡｄＶ（ＨＡｄＶ１６）に対するこれらの２−フェニルピペラジンの抗ウイルス活性を試験し、プラークアッセイにおいてＨＡｄＶ５によってみられたものと同様のレベルの阻害を見出した（表８）。ＨＡｄＶ５及びＨＡｄＶ１６に対するヒット化合物に関するＩＣ５０値を表８に要約する。
【０１５９】
実施例５．ＨＡｄＶ侵入に対する影響
本研究に我々が使用したエントリーアッセイは、２−フェニルピペラジン４６、５９及び６３による処理は、化合物に応じて異なったレベルで顕著にＨＡｄＶ−ＧＦＰ導入遺伝子の発現を阻害したことを示したが、この特定は、本発明者らにそれらの可能性のある阻害機構の示唆を与えなかった。化合物４６及び化合物５９のみがそれらのＣＣ５０濃度を下回る濃度のＩＣ５０に達することができた。これらの分子が侵入経路の幾つかの段階を遮断することができたかどうかを明らかにするため、本発明者らは、核へのＨＡｄＶゲノムの到達性を定量的に測定するためのアッセイを行った。タンパク質ＶＩによって媒介されるエンドソーム脱出の後、部分的に被覆されていないＨＡｄＶカプシドは微小管ネットワークによって核膜に輸送される２５。この時点で、ＨＡｄＶゲノムは核膜孔複合体によってタンパク質ＶＩＩと共に核へと移入される。本発明者らは、これらの２−フェニルピペラジンのいずれかが、同期した感染の後に宿主核に到達するＨＡｄＶゲノム数に反映され得るＨＡｄＶ侵入のいずれかの段階を阻害したかどうかを議論した。図２Ａに示されるように、これらの２−フェニルピペラジンのいずれかで処理された細胞の核から単離されたＨＡｄＶ  ＤＮＡ量対ＤＭＳＯで処理されたもののＤＮＡ量に有意差はなかった。また本発明者らは、核単離の純度に関する対照として、核と細胞質の両方における細胞ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨのＤＮＡコピー数を測定した。本発明者らの結果は、本発明者らが核に到達したＨＡｄＶ  ＤＮＡを特異的に測定していたこと、及び上記化合物がこの後期侵入事象までつながる段階のいずれも変更しなかったことを示した（図２Ｂ）。
【０１６０】
実施例６．ＨＡｄＶ複製に対する影響
次の段階は、感染性ウイルス粒子の産生を測定するウイルスバーストサイズアッセイ（burst size assay）を使用して、２−フェニルピペラジン４６、５９、６０、６３、６４及び６５が有するウイルス複製に対する効果を検討することであった。本発明者らは野生型ウイルスを使用し、抗ＨＡｄＶ分子の存在下及び不在下での感染のＴＣＩＤ５０を計算した。表８に要約されるように、本発明者らの２−フェニルピペラジン誘導体による処理は、ＨＡｄＶ５に関して９．９倍〜２１１．７倍、及びＨＡｄＶ１６に関して２７．４倍〜２６５．５倍のウイルス収率の全体的な減少を伴った。
【０１６１】
さらに本発明者らは、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行って、これらの化合物の存在下でのＨＡｄＶ  ＤＮＡ複製効率を測定した。ＨＡｄＶ５に感染したＡ５４９細胞を３７℃で２４時間インキュベートしてから、洗浄して結合していないビリオンを除去した。この初期の時間点でＤＮＡを抽出して、感染から３２時間後〜３６時間後に起こる次のラウンドの感染に由来する新たに生成されたウイルス粒子の影響を回避した。５０μＭの濃度の化合物４６、化合物５９、化合物６０、化合物６３及び化合物６４の存在は、ＨＡｄＶ５のＤＮＡ複製を５０％超、有意に阻害し、細胞対照遺伝子ＧＡＰＤＨに対しては何らの顕著な効果もなかった（表９）。同じ濃度のＤＭＳＯで処理した対照と比較した場合、化合物６５のみがＨＡｄＶ５のＤＮＡ複製に対して顕著な効果を示さなかった。
【０１６２】
【表９】
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【０１６３】
２−フェニルピペラジン４６、５９、６０、６３、６４、及び６５は、ＨＡｄＶ５及びＨＣＭＶのＤＮＡ複製を阻害する。それらは、定量的ＰＣＲアッセイにおいて感染から２４時間（ＨＣＭＶの場合の７２時間）後の陽性対照と比較して、ＨＡｄＶ５及びＨＣＭＶの新たなＤＮＡコピーの産生を減少させた。結果は、独立した３回の実験によるトリプリケート試料の平均±ＳＤを表す。
【０１６４】
実施例７．ＨＣＭＶ複製に対する影響
本発明者らは、ＨＣＭＶに対するこれらの２−フェニルピペラジン誘導体の広スペクトルの阻害活性の可能性を探索した。驚いたことに、感染から７２時間後のＭＲＣ−５細胞のＨＣＭＶ  ＤＮＡ複製の評価は、本発明者らのヒット化合物で処理したそれらの試料と、同じ容量のＤＭＳＯで処理した対照試料との間で著しい阻害を明らかにした（表９）。ＧＡＰＤＨ遺伝子に対する定量的ＰＣＲを対照として含み、ここでも試料間の差異は示さなかった。これらの結果は、ウイルスＤＮＡ複製に関与する仕組みを含むウイルス感染の阻害に対する機構を示唆する。
【０１６５】
実施例８．抗菌性化合物の新たなファミリーに対する材料及び方法
１．株
使用した株はいずれもコリスチンに耐性：耐性（Ｒ）≧４  感受性（Ｓ）≦２のアシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）株であり、これらの株はいずれもValencia R, Arroyo LA, Conde M, Aldana JM, Torres MJ, Fernandez-Cuenca F, et al. Nosocomial outbreak of infection with pan-drug-resistant Acinetobacter baumannii in a tertiary care university hospital. Infection control and hospital epidemiology. 2009;30(3):257-63に開示されている。使用した具体的な菌株は次の通りである：１、１０、１１、１４、１６、１７、１９、２０、２１Ｒ、２２Ｐ、２４、９９、及び１１３。
【０１６６】
２．スクリーニング法．
９６ウェルプレート中５×１０５ＣＦＵ／ｍｌの濃度のＡ．バウマンニ株の各株において、最終濃度５０μＭの各ピペラジン誘導体を使用することにより、４つのファミリーのピペラジン誘導体の細菌増殖阻害の評価を行った。これらのプレートを３７℃で１８時間インキュベートした。
【０１６７】
３．最小阻止濃度）（ＭＩＣ）
ミュラーヒントンブロスＩＩ（ＭＨＢＩＩ）の細胞培地中における微量希釈
この技術を、スクリーニング研究において阻害活性を提示したそれらのピペラジンにおいて単独で実行した。
【０１６８】
本発明者らは、９６ウェルプレート中、５×１０５ＣＦＵ／ｍｌの濃度のＡ．バウマンニの各株において、各ピペラジン誘導体の濃度を減少させて（５０μＭから０．０５μＭへ）使用した。これらのプレートを３７℃の温度で１８時間インキュベートした。
【０１６９】
実施例９．第１ファミリーの化合物のスクリーニング（μＭ）の結果
試験した化合物を下記表１０に説明する。
【０１７０】
【表１０】
2019509338.tif 000031
【０１７１】
得られた結果を下記表１１に説明する。
【０１７２】
【表１１】
2019509338.tif 000032
【０１７３】
実施例１０．第１ファミリーの化合物のＣＭＩ（μＭ）の結果
得られた結果を下記表１２に説明する。
【０１７４】
【表１２】
2019509338.tif 000033
【０１７５】
実施例１１．第２ファミリーの化合物のスクリーニング（μＭ）の結果
試験した化合物を下記表１３に説明し、ＲはＲ４に対応する。
【０１７６】
【表１３】
2019509338.tif 000034
【０１７７】
得られた結果を下記表１４に説明する。
【０１７８】
【表１４】
2019509338.tif 000035
【０１７９】
実施例１２．第２ファミリーの化合物のＣＭＩ（μＭ）の結果
得られた結果を下記表１５に説明する。
【０１８０】
【表１５】
2019509338.tif 000036
【０１８１】
実施例１３．第３ファミリーの化合物のスクリーニング（μＭ）の結果
試験した化合物を下記表１６に説明する。
【０１８２】
【表１６】
2019509338.tif 000037
【０１８３】
得られた結果を下記表１７に説明する。
【０１８４】
【表１７】
2019509338.tif 000038
【０１８５】
実施例１４．第３ファミリーの化合物のＣＭＩ（μＭ）の結果
得られた結果を下記表１８に説明する。
【０１８６】
【表１８】
2019509338.tif 000039
【０１８７】
実施例１５．第４ファミリーの化合物のスクリーニング（μＭ）の結果
試験した化合物を下記表１９に説明する。
【０１８８】
【表１９】
2019509338.tif 000040
【０１８９】
得られた結果を下記表２０に説明する。
【０１９０】
【表２０】
2019509338.tif 000041
【０１９１】
実施例１６．第４ファミリーの化合物のＣＭＩ（μＭ）の結果
得られた結果を下記表２１に説明する。
【０１９２】
【表２１】
2019509338.tif 000042
【０１９３】
実施例１７．第５ファミリーの化合物のスクリーニング（μＭ）の結果及び更なる結果
試験した化合物を下記表２２に説明する。
【化２１】
2019509338.tif 000043
【０１９４】
【表２２】
2019509338.tif 000044
2019509338.tif 000045
2019509338.tif 000046
【図１】
2019509338.tif 000053
【図２】
2019509338.tif 000054
【図３】
2019509338.tif 000055
【図４】
2019509338.tif 000056
【図５】
2019509338.tif 000057
【国際調査報告】
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