(57)【要約】  キャリアータンパク質、結合剤及びパクリタキセルを含むナノ粒子複合体で癌を有する患者を処置し、及び任意的に、抗PD-L1抗体で共処置される為の方法、製剤及びキットが本明細書において記載されている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
PD-L1を発現する細胞を含む癌を患っている患者を処置する為の方法であって、該患者を、治療量未満の量の抗PD-L1抗体と、(a)アルブミン、(b)有効量の抗PD-L1結合剤及び(c)パクリタキセルを含むナノ粒子複合体とで処置することを含む、上記方法。
【請求項２】
上記量の抗PD-L1結合剤が、上記癌細胞への方向性誘導を上記ナノ粒子複合体に提供する為に有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記癌細胞は、キャリアータンパク質及びパクリタキセルを含むナノ粒子で複合体化されていない非複合抗PD-L1抗体を含む免疫療法に対して耐性である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記ナノ粒子複合体が追加の化学療法剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
上記抗PD-L1結合剤が抗PD-L1抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記抗PD-L1結合剤が、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、抗PD-L1抗体の治療投与量の約1%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%又は約60%から成る量から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、上記癌細胞上のPD-L1を阻止することなしに、循環するPD-L1を阻止する量である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
上記癌細胞が、肺癌細胞、膀胱癌細胞、腎臓癌細胞、血液癌細胞、乳癌、結腸直腸癌細胞、メラノーマ細胞及び固形癌細胞から成る群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
上記患者に投与されるべき抗PD-L1の上記治療量未満の量が、血液中の循環するPD-L1のレベルを解析することによって又は処置されるべき腫瘍の組織生検において湿潤性T細胞に結合されたPD-L1のパーセントを解析することによって決定される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、アルブミン結合化学療法剤／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の投与の約30分間〜約48時間前に投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
(a)アルブミン、(b)有効量の抗PD-L1結合剤及び(c)パクリタキセル含むナノ粒子複合体の有効性を高める為の方法であって、治療量未満の量の抗PD-L1抗体の投与を必要とする患者に投与してから約24時間後に、上記アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1結合剤のナノ粒子複合体を投与することを含む、上記方法。
【請求項１３】
上記量の抗PD-L1結合剤が、上記癌細胞への方向性誘導を上記ナノ粒子複合体に提供する為に有効である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
上記抗PD-L1結合剤が抗PD-L1抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
上記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、抗PD-L1抗体の治療投与量の約1%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%又は約60%から成る量から選択される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、上記ナノ粒子複合体の標的上のPD-L1を阻止することなしに、循環するPD-L1を阻止する量である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
上記ナノ粒子複合体の上記標的が、肺癌細胞、膀胱癌細胞、腎臓癌細胞、血液癌細胞、乳癌細胞、結腸直腸癌細胞、メラノーマ細胞及び固形癌細胞から成る群から選択される癌細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
上記患者に投与されるべき抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、血液中の循環するPD-L1のレベルを解析することによって又は処置されるべき腫瘍の組織生検において湿潤性T細胞に結合されたPD-L1のパーセントを解析することによって決定される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、アルブミン結合化学療法剤／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の投与の約30分間〜約48時間前に投与される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
PD-L1を発現する癌を患っている患者における治療結果を高める為の方法であって、(i)ナノ粒子複合体を含む組成物で処理されるべきである患者を選択すること、ここで、該複合体は、(a)アルブミン、(b)有効量の抗PD-L1結合剤及び(c)パクリタキセルを含む；そして(ii)治療量未満の量の抗PD-L1抗体を上記患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項２２】
上記量の抗PD-L1結合剤が、上記癌細胞への方向性誘導を上記ナノ粒子複合体に提供する為に有効である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
PD-L1を過剰発現する癌を患っている患者における治療結果を高める為の方法であって、(i)治療量未満の量の抗PD-L1抗体で処置されている患者を選択すること；そして(ii)アルブミン、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含むナノ粒子複合体の有効量を上記患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項２４】
上記ナノ粒子複合体の上記抗体が、上記ナノ粒子複合体上に及び／又は上記ナノ粒子複合体内に取り込まれている、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
抗PD-L1抗体の単位用量製剤であって、治療量の約1%〜約60%の上記抗体を含み且つ単位用量として投与されるように包装されている、上記単位用量製剤。
【請求項２６】
上記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項２５に記載の製剤。
【請求項２７】
上記製剤が、治療量の約5%〜約20%のアテゾリズマブ又はその後発生物製剤を含む、請求項２５又は２６に記載の製剤。
【請求項２８】
(a)アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の所定量、(b)治療量未満の量の抗PD-L1抗体の単位投与量、及び任意的に、(c)取扱説明書を含むキット。
【請求項２９】
上記アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体が凍結乾燥されている、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
PD-L1を発現する細胞を有する癌を患っている患者を処置する為の方法であって、(a)アルブミン、(b)有効量の抗PD-L1抗体及び(c)有効量のパクリタキセルを含むナノ粒子複合体の治療的に有効量を含む組成物を上記患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項３１】
上記量の抗PD-L1結合剤が、上記癌細胞への方向性誘導を上記ナノ粒子複合体に提供する為に有効である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
上記癌細胞が、キャリアー結合化学療法剤を含むナノ粒子で複合体化されていない抗PD-L1抗体での免疫療法に対して耐性である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
上記複合体が追加の化学療法剤を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
上記アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
上記アルブミンが組み換えヒト血清アルブミンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
上記抗PD-L1抗体がヒト化抗体である、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
上記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
上記癌がPD-L1を過剰発現する、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
上記癌が固形癌である、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
上記癌が、メラノーマ、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、メルケル細胞癌、卵巣癌、膀胱癌又は乳癌である、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
上記組成物は、予め凍結乾燥されたナノ粒子複合体を再構成することによって製造された水性製剤であり、該ナノ粒子複合体は、水性バッファー中で再構成される、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
上記ナノ粒子複合体が、滅菌水性バッファー中で再構成される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
上記ナノ粒子組成物が濾過滅菌される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
上記ナノ粒子組成物が、注射によって患者に投与される、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
上記ナノ粒子複合体が約0.1μm〜約0.9μmである、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
上記ナノ粒子複合体が約130nm〜約225nmである、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
上記ナノ粒子複合体が約100〜1000の抗体を含む、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
上記ナノ粒子複合体が約400〜800の抗体を含む、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
上記キャリアータンパク質が組み換えヒト血清アルブミンであり、且つ上記抗体がアテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
PD-L1を発現する癌細胞を含む癌を有する哺乳動物を処置する為の方法であって、該方法は、(a)アルブミン、(b)上記細胞への方向性誘導を上記ナノ粒子複合体に提供するようにする有効量の抗PD-L1抗体、及び(c)パクリタキセルを含むナノ粒子複合体の治療量を含む組成物を哺乳動物に投与することを含み、ここで、上記組成物の上記複合体の少なくとも5パーセントの平均直径が0.1μm〜0.9μmである、上記方法。
【請求項５１】
上記哺乳動物がヒトである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
上記癌は、キャリアータンパク質結合化学療法剤のナノ粒子と複合化していない抗体を含む抗PD-L1抗体免疫療法での免疫療法に対して耐性である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
上記癌が、メラノーマ、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、メルケル細胞癌、卵巣癌、膀胱癌又は乳癌である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
上記組成物がさらに追加の化学療法剤を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
上記追加の化学療法剤がアルキル化剤である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
上記追加の化学療法剤が白金化合物である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
上記追加の化学療法剤がカルボプラチンである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
上記抗PD-L1抗体がヒト化抗体である、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
上記抗PD-L1抗体がキメラ抗体である、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
上記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
上記組成物は、予め凍結乾燥されたナノ粒子複合体を再構成することによって製造された水性製剤であり、該ナノ粒子複合体は、水性バッファー中で再構成される、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
上記ナノ粒子複合体が、滅菌水性バッファー中で再構成される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
上記ナノ粒子組成物が濾過滅菌される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
上記ナノ粒子組成物が、注射によって患者に投与される、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
上記ナノ粒子複合体が約0.1μm〜約0.9μmである、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
上記ナノ粒子複合体が約130nm〜約225nmである、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
上記ナノ粒子複合体が約100〜1000の抗体を含む、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
上記ナノ粒子複合体が約400〜800の抗体を含む、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示書は、キャリアータンパク質、PD-L1に特異的に結合する結合剤及びパクリタキセルを含むナノ粒子複合体を投与することによって癌を処置する為の新規な方法及びキットに関する。該方法はまた、ナノ粒子複合体を投与する前、該投与と同時に又は該投与の後に、抗PD-L1抗体単独でPD-L1を発現する癌細胞を含む癌を患っている患者を前処置することを含む。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞は、免疫監視機構を回避し、そしてそれによって増殖及び／又は転移し続ける為に様々な手段を用いる。例えば、多くの癌細胞型は、プログラム細胞死タンパク質1(PD-1)の腫瘍リガンドであるPD-L1(プログラム細胞死リガンド1；programmed  cell  death  ligand  1)(B7-H1)を発現又は過剰発現する。PD-1は、Tリンパ球上の細胞表面受容体であり且つPD-1はTリンパ球上の細胞表面受容体であり、長期の抗原曝露後の成熟造血細胞、例えばT細胞及びB細胞、NKT細胞並びに単球、において活性化時に発現される(Ishida等，1992年，EMBO  J．11：3887)。腫瘍微小環境におけるPD-1及びPD-L1の発現は、免疫監視機構を回避する為の主要な耐性機構であるように思われる。T細胞上のPD-1に結合するPD-L1は、エフェクター抗腫瘍T細胞活性を抑制し且つ免疫回避を促進すると仮定されている。
【０００３】
癌、例えば肺癌、膀胱癌、腎臓癌、血液癌、乳癌、結腸直腸癌、メラノーマ及び固形癌を含む癌、の処置においてPD-1又はPD-L1のいずれかに結合するモノクロナール抗体を用いる幾つかの臨床試験がある。当技術分野において知られている抗PD-1抗体は例えば、ニボルマブ(BMS-936558／MDX-1106／ONO-4538；Bristol  Myers  Squibb)、PDR001(Novartis)及びペンブロリズマブ(MK-3475)(Merck  Sharp  ＆  Dohme)；当技術分野において知られている抗PD-L1抗体は例えば、BMS-936559／MDX-1105(Bristol  Myers  Squibb)、アテゾリズマブ(MPDL3280A，Genetech／Roche)、MeDI4736(デュルバルマブ；MedImmune／AstraZeneca)、MSB00100718C(アベルマブ；EMD  Serono)を含む(例えば、Philips  and  Atkins  ”Therapeutic  uses  of  anti-PD-1  and  anti-PD-L1  antibodies”  International  Immunology  Vol．27(1)  pp：39-46を参照)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
PD-1:PD-L1経路を標的とする抗体の抗腫瘍活性にも関わらず、これらの治療に対する耐性が益々観察されている(例えば、Lussier等，J．Immunotherapy  of  Cancer，2015年，3:21及びKoyama等，Nature  Communications，2016年：1-9  (ネット上で公開，2016年2月17日)を参照)。従って、癌治療の有効性を改善することが、当技術分野において依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
プログラム細胞死リガンド1(PD-L1)を発現する癌細胞、特に、例えば抗PD-L1抗体での免疫療法に対して耐性となっているPD-L1を発現する癌細胞、を有する癌を患っている患者を処置する為の方法が本明細書において記載されている。該方法は、必要とする対象、例えばPD-L1を発現又は過剰発現する癌細胞を有する哺乳動物、に、治療量のナノ粒子複合体を含む組成物を投与することを含む又はそれから本質的になる。該ナノ粒子複合体は、(a)キャリアータンパク質、(b)上記癌細胞への方向性誘導を該ナノ粒子複合体に提供する為の、PD-L1に結合するPD-L1結合部分を有する有効量の結合剤、及び(c)有効量のパクリタキセルを含む。
【０００６】
一つの実施態様において、該複合体の平均直径は0.1〜0.9μmである。該結合剤は、抗PD-L1抗体、例えばアテゾリズマブ、でありうる。該哺乳動物は、ヒトであることができる。PD-L1を発現する癌細胞は例えば、メラノーマ、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、メルケル細胞癌、卵巣癌、膀胱癌及び進行性固形腫瘍でありうる。
【０００７】
該キャリアータンパク質／パクリタキセル／結合剤のナノ粒子複合体は、アブラキサン(登録商標)／抗PD-L1抗体の複合体であることができる。アブラキサン(登録商標)は、Celgene  Corp．から入手可能であり、且つパクリタキセルをヒトアルブミンと組み合わせたナノ粒子製剤である。該キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗体のナノ粒子複合体、又は該複合体を含む組成物はさらに、アルキル化剤を含むことができる。該アルキル化剤は、白金化合物であることができる。該白金化合物は、カルボプラチンであることができる。該抗PD-L1抗体は、ヒト化抗体であることができる。該抗PD-L1抗体は、キメラ抗体であることができる。該組成物は、注射によって投与されることができる。
【０００８】
一つの実施態様において、該PD-L1を発現する癌細胞は、抗PD-L1抗体での免疫療法に対して耐性である。
【０００９】
本明細書において記載されている方法の一実施態様において、該複合体は、治療的に有効量のパクリタキセルを送達する為に十分な量で投与される。
【００１０】
本明細書に記載された本発明における使用の為に適した抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブ(TECENTRIQ(商標)，Genentech，Inc．A  Member  of  the  Roche  Group)又はその後発生物製剤を含む。幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、BMS-936559／MDX-1105(Bristol  Myers  Squibb)、アテゾリズマブ(MPDL3280A，Genetech／Roche)、MeDI4736(デュルバルマブ；MedImmune／AstraZeneca)又はMSB00100718C(アベルマブ；EMD  Serono)である。
【００１１】
本明細書において記載されている方法の一実施態様において、該癌細胞の標的は固形癌の細胞である。
【００１２】
本明細書において記載されている方法の一実施態様において、該キャリアータンパク質／パクリタキセル／PD-L1結合剤のナノ粒子複合体、例えばアルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体、は、凍結乾燥され、そしてそれを必要とする対象への投与の為に再構成されうる。
【００１３】
本明細書の一実施態様は、PD-L1を発現する腫瘍による化学療法剤の取り込みの持続時間を増加させるための方法を含む。該方法は、キャリアータンパク質、化学療法剤(例えば、パクリタキセル)及びPD-L1結合剤、例えば、PD-L1に特異的に結合する抗体、を含むナノ粒子複合体中に化学療法剤を投与することを含む。ここで、該結合剤は、該腫瘍への方向性誘導を該ナノ粒子複合体に提供する。
【００１４】
本明細書において記載されている通り、アルブミン含有ナノ粒子(例えば、アブラキサン(登録商標)ナノ粒子)と抗体(例えば、抗PD-L1抗体、例えばアテゾリズマブ)とのイン・ビトロ混合は、高分子複合体の形成を結果として生じることができ、その特性(例えば、サイズ、抗体含有量、又は化学療法剤薬物含有量)は、必要に応じてカスタマイズされることができる。ある場合には、そのような高分子複合体は、抗体媒介性標的結合特異性を保持することができ、高められた化学療法剤腫瘍細胞細胞傷害性を保持又は示すことができ、且つアブラキサン(登録商標)ナノ粒子単独の毒性以上の追加の毒性を示すことができない。本明細書においてまた記載されている通り、ヒト(例えば、ヒト癌患者、ここで、該癌はPD-L1を発現または過剰発現する)への投与の前に、アブラキサン(登録商標)を抗PD-L1抗体(例えば、アテゾリズマブ)と接触させることは、アブラキサン(登録商標)／抗PD-L1抗体の複合体を形成しない様式でアブラキサン(登録商標)及び抗PD-L1抗体を別々に投与することを含む処置計画と比較して、複合体として投与される場合に、癌を処置する増加した能力を有する。本明細書において提供される該方法及び材料は、癌患者における無増悪生存率を増加させる為に使用されることができる。無増悪生存率を増加することは、癌患者が長生きすることを許すことができる。従って、本明細書において提供される該方法及び材料は、癌患者における全生存率を増加させる為に使用されることができる。
【００１５】
抗PD-L1抗体及びナノ粒子複合体を患者に投与することによって、癌、好ましくはプログラム細胞死リガンド1(PD-L1)を発現する癌細胞を含む癌、を処置する為の方法であって、該複合体は、キャリアータンパク質、パクリタキセル、及びPD-L1、例えば抗PD-L1抗体、に特異的に結合する結合剤を含む、上記方法が本明細書においてまた記載されている。本明細書において記載されている通り、PD-L1抗体をそのようなナノ粒子複合体と組み合わせて用いて癌、例えばPD-L1を発現する又はPD-L1を過剰発現する癌、を有する対象の処置は、該複合体の治療効果を増加させる。好ましくはそのような抗PD-L1抗体は、そのようなナノ粒子複合体での処置の前に投与される。従って、本明細書において提供される観点は、癌、例えばPD-L1を発現又は過剰発現する癌、を患っている患者を処置する為の方法であって、該患者は治療量未満の量の抗PD-L1抗体と上記キャリアー、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含む治療量のナノ粒子複合体とで処置される、上記方法である。該治療量未満の量の抗PD-L1抗体の投与は、該ナノ粒子複合体の有効性を高めるようなものである。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、治療量未満の量の抗PD-L1抗体の投与は、体内における非腫瘍結合PD-L1に結合することによって該ナノ粒子複合体の治療効果を高めると考えられる。治療量未満の量の抗PD-L1抗体での処置は、腫瘍へのナノ粒子複合体のより大きな標的化を許すこと、所望の効果を達成する為に必要である、患者に投与されるキャリアータンパク質／パクリタキセル／抗体複合体の量を減少させること、又はその両方である。
【００１６】
他の観点において、治療量未満の量の抗PD-L1抗体での患者の前処置の約0.5〜48時間後に該複合体を投与することによって、キャリアータンパク質／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の有効性を高める為の方法が、本明細書において記載されている。好ましくは、そのようなナノ粒子複合体は、上記治療量未満の量の抗PD-L1抗体の約24時間後に投与される。
【００１７】
他の観点において、治療量未満の量の抗PD-L1抗体(例えば、非複合抗PD-L1抗体、例えばキャリアータンパク質／パクリタキセル複合体に結合しない)で患者を処置し、そしてアルブミン、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含むナノ粒子複合体の有効量で患者を共処置することによって、癌、例えばPD-L1を発現又は過剰発現する癌、を患っている患者における治療結果を高める為の方法であって、該複合体はPD-L1に結合することができる、上記方法が本明細書において記載されている。一つの実施態様において、該抗体は、該複合体の表面に配置される。
【００１８】
他の観点において、キャリアータンパク質、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含むナノ粒子複合体での任意のその後の処置の前に、治療量未満の量の抗PD-L1抗体で患者を処置することによって、癌、例えばPD-L1を発現又は過剰発現する癌、を患っている患者において治療結果を高める為の方法であって、該複合体はPD-L1に結合する、上記方法が本明細書において記載されている。一つの実施態様において、該抗体は、該複合体の表面に配置される。
【００１９】
本発明の実施態様において、本明細書において記載された方法は、PD-L1を発現する細胞を含む癌であるが、該癌はキャリアータンパク質結合化学療法剤、例えばアルブミン結合パクリタキセルナノ粒子、例えばアブラキサン(登録商標)、を含むナノ粒子で複合体化されていない抗PD-L1抗体での免疫療法に耐性である癌を有する対象に投与される。
【００２０】
PD-L1を発現することが知られており、従って本明細書において開示された方法での処置の為に適する癌細胞の例は、メラノーマ、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、メルケル細胞癌、卵巣癌、膀胱癌、血液癌、及び他の固形癌（それら癌はPD-L1を発現する）を含むが、これらに限定されない。
【００２１】
一つの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である。アテゾリズマブ(商標名TECENTRIQ(商標))が、PD-L1に対するIgG1アイソタイプの完全ヒト化された、Fc修飾されたモノクロナール抗体である。他の抗PD-L1抗体は、MDX-1105、PD-L1に結合する完全ヒトモノクローナル抗体；アベルマブ(MSB0010718C，Merck  KGaA，Darmstadt，Germany  &  Pfizer)，アイソタイプIgG1の完全ヒトモノクローナルPD-L1抗体；及びデュルバルマブ(MedImmune／AstraZeneca)、Fc最適化抗PD-L1  mAbを含む。
【００２２】
一つの実施態様において、抗PD-L1抗体は上記治療量未満の量が、抗PD-L1抗体の治療投与量の約1%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%又は約60%から成る量から選択される。抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、腫瘍に伴うPD-L1の最小限の阻止で、循環するPD-L1を優先的に阻止すると考えられる。幾つかの実施態様において、患者に投与されるべき抗PD-L1の上記治療量未満の量が、血液中の循環するPD-L1のレベルを解析することによって決定される。
【００２３】
一つの実施態様において、抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の投与の約30分間〜約48時間前に投与される。
【００２４】
他の観点において、抗PD-L1抗体、例えばアテゾリズマブ又はその後発生物製剤の単位用量製剤であって、該製剤は治療量の約1%〜約60%の該抗体を含み、該製剤は、単位用量として投与されるように包装される、上記単位用量製剤が本明細書において提供される。
【００２５】
幾つかの実施態様において、抗PD-L1抗体の該製剤は、治療量の約5%〜約20%のアテゾリズマブ又はその後発生物製剤を含む。例えば局所進行性又は転移性の尿路上皮癌についてのアテゾリズマブの治療量は、処方情報に記載されている。該治療量は、1200mgであり且つ好ましくは治療量未満の量は治療量の5%〜20%の範囲である。そのような好ましい実施態様において、そのような治療量未満の量は、60mg〜240mg、より好ましくは120mg〜160mg、の範囲であろう。
【００２６】
他の観点において、(a)アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の所定量、(b)治療量未満の量の抗PD-L1抗体の単位投与量、及び任意的に、(c)取扱説明書を含むキットが本明細書において提供される。
【００２７】
一つの実施態様において、該キットの該キャリアー結合パクリタキセル(例えば、アルブミン-パクリタキセル、例えばアブラキサン(登録商標))／抗PD-L1抗体の複合体は凍結乾燥されている。該凍結乾燥された複合体は、投与前に水性溶液中で再構成されうる。該水性溶液は滅菌水性溶液であってもよく、又は再構成された水性溶液は例えば0.2又は0.22μmのフィルターを通じて濾過滅菌されていてもよい。
【００２８】
本明細書の実施態様は、キャリアータンパク質、パクリタキセル、化学療法剤及びPD-L1結合剤、例えば抗PD-L1抗体、該腫瘍への方向性誘導を該ナノ粒子複合体に提供するPD-L1結合剤、を含むナノ粒子複合体中に化学療法剤を投与することによって、化学療法剤の腫瘍取り込みの期間を増加させる為の方法を含む。幾つかの実施態様において、該対象は、そのようなナノ粒子複合体の前に又はそれと同時に、治療量未満の量の抗PD-L1抗体を受け取る。
【００２９】
下記の図は、本発明の代表例に過ぎず且つ限定として意図されるものでない。一貫性の為に、アブラキサン(登録商標)及びアテゾリズマブを用いるナノ粒子が、頭文字「AA」を用い、AAの後の数字、例えばAA130、は、これらのナノ粒子の平均粒子サイズ(ナノメートルで、Malvern  Nanosight分析に基づく)を与えることが意味される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図1は、アテゾリズマブとABXとの間の結合親和性を示す。Kdは、1.462x10-9であると決定された。バイオレイヤー・インターフェロメトリー(BLItz：Biolayer  interferometry)(Forte  Bioscience)が、ストレプトアビジン・プローブを用いて行われた。
【図２Ａ】図2Aは、Mastersizer  NS300によって決定された、ABX単独(90nmの平均サイズ)及びABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA；129nmの平均サイズ)の粒子サイズ分布を示す。
【図２Ｂ】図2Bは、図8AからのABX-アテゾリズマブのナノ粒子の写真である。
【図３Ａ】図3A〜図3Eは、PD-L1陽性ヒトメラノーマ細胞株、C8161への結合の為に、ラベル付けされた抗PD-L1抗体と競合するABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA130)のフローサイトメトリーを示す。C8161細胞がアイソタイプ対照抗体(図3A)で前処理され、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。
【図３Ｂ】図3Bは、PD-L1陽性ヒトメラノーマ細胞株、C8161への結合の為に、ラベル付けされた抗PD-L1抗体と競合するABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA130)のフローサイトメトリーを示す。C8161細胞が処理無しの前処理(図3B)、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。
【図３Ｃ】図3Cは、PD-L1陽性ヒトメラノーマ細胞株、C8161への結合の為に、ラベル付けされた抗PD-L1抗体と競合するABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA130)のフローサイトメトリーを示す。C8161細胞がアブラキサン(登録商標)(図3C)で前処理され、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。
【図３Ｄ】図3Dは、PD-L1陽性ヒトメラノーマ細胞株、C8161への結合の為に、ラベル付けされた抗PD-L1抗体と競合するABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA130)のフローサイトメトリーを示す。C8161細胞がアテゾリズマブ(図3D)で前処理され、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。
【図３Ｅ】図3Eは、PD-L1陽性ヒトメラノーマ細胞株、C8161への結合の為に、ラベル付けされた抗PD-L1抗体と競合するABX-アテゾリズマブのナノ粒子(AA130)のフローサイトメトリーを示す。C8161細胞がAA130(図3E)で前処理され、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。
【図４】図4は、C8161細胞に対するABX(実線)及びAA130(破線)の用量依存毒性を示す。
【図５Ａ】図5Aは、2x106のPD-L1陽性C8161メラノーマ腫瘍細胞を注射され、次に、1回、食塩水での100ulのIV尾静脈注射(図5A)によって処置されたマウスにおける腫瘍体積の経時変化を示す。腫瘍成長は週に3回モニターされた。腫瘍サイズは、下記の式で計算された：(長さx幅2)／2。
【図５Ｂ】図5Bは、2x106のPD-L1陽性C8161メラノーマ腫瘍細胞を注射され、次に、1回、アテゾリズマブ単独(18mg／kg；図5B)によって処置されたマウスにおける腫瘍体積の経時変化を示す。腫瘍成長は週に3回モニターされた。腫瘍サイズは、下記の式で計算された：(長さx幅2)／2。
【図５Ｃ】図5Cは、2x106のPD-L1陽性C8161メラノーマ腫瘍細胞を注射され、次に、1回、ABX単独(45mg／kg；図5C)によって処置されたマウスにおける腫瘍体積の経時変化を示す。腫瘍成長は週に3回モニターされた。腫瘍サイズは、下記の式で計算された：(長さx幅2)／2。
【図５Ｄ】図5Dは、2x106のPD-L1陽性C8161メラノーマ腫瘍細胞を注射され、次に、1回、AA130(18mg／kgのアテゾリズマブ及び45mg／kgのABX；図5D)によって処置されたマウスにおける腫瘍体積の経時変化を示す。腫瘍成長は週に3回モニターされた。腫瘍サイズは、下記の式で計算された：(長さx幅2)／2。
【図６】図6は、図11A〜11Dにおいて示された実験からのマウスの生存率を示す。カプラン・マイヤー(Kaplan  Meier)曲線が、グラフ・パッド(Graph  Pad)ソフトウェアを用いて作成された。各群の生存期間中央値は、食塩水、アテゾリズマブ、アブラキサン及びAA130についてそれぞれ、14、13、16及び21.5日であった。AA130と全ての他の群との間の生存率の差は有意であり、p値は食塩水について0.0008、アテゾリズマブについて0.0015及びABXについて0.0113であった。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本明細書を読んだ後に、様々な代替の実施形態及び代替の用途において本発明を如何に実施するかは当業者に明らかになるであろう。
【００３２】
しかしながら、本発明の様々な全ての実施態様は本明細書において記載されていないだろう。本明細書に提示された実施態様は例としてのみ提示され、限定ではないことが理解されるであろう。従って、様々な代替の実施態様のこの詳細な説明は、以下に記載される本発明の範囲又は広さを限定すること解釈されるべきではない。
【００３３】
本発明が開示され且つ記載される前に、以下に記載される観点は特定の組成物、そのような組成物を調製する方法に限定されないこと、又はそれらのそれ自体の使用は勿論変わりうることが理解されるべきである。本明細書において使用される語は特定の態様を説明することのみであること且つ限定することを意図されていないことがまた理解されるべきである。
【００３４】
本発明の詳細な説明は、読者の便宜の為にのみ様々な項に分割されており、且つ任意の項に見られる開示は他の項に見られる項と組み合わせられうる。タイトル又はサブタイトルは、読者の便宜の為に本明細書において使用されうることがあり、それらは本発明の範囲に影響を及ぼすことを意図されるものでない。
【００３５】
定義
【００３６】
他に定義されない限り、本明細書において用いられる技術用語及び科学用語の全ては、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において且つ添付の特許請求の範囲において、以下の意味を有すると定義されるべき幾つかの語を参照するだろう。
【００３７】
本明細書で用いられる語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、且つ本発明を限定することを意図されるものでない。本明細書で用いられる場合に、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数形も含むことを意図されている。
【００３８】
「任意の」又は「任意的に」は、後で説明される事象若しくは状況が起こり得る若しくは起こり得ないこと、及びその記述が事象若しくは状況が起こる場合とそれが起こらない場合を含むことを意味する。
【００３９】
範囲を含む数字表示、例えば、温度、時間、量、濃度などの前に使用される場合に、語「約」は、(+)又は(-)10%、5%、1%、又はそれらの間の任意の部分範囲若しくは部分値で変化しうる近似値を示す。好ましくは、投与量に関して用いられる場合に、語「約」は、投与量が+／-10%変わりうることを意味する。
【００４０】
「含んでいる」は「含む」は、組成物及び方法が列挙された要素を含むが他を除外しないことを意味することを意図されている。組成物及び方法を定義するために使用される場合に、「本質的に〜なる」は、言及された目的の為の組み合わせに対してとって本質的に重要な意味の他の要素を除外することを意味するものとする。従って、本明細書において定義された要素の本質的になる組成物は、特許請求の範囲に記載された発明の基本的且つ新規な1以上の特徴に実質的に影響を及ぼさない他の物質又は工程を排除するものでない。「〜からなる」は、他の成分の微量以上の要素及び実質的な方法の工程を除外することを意味する。これらの遷移語のそれぞれによって定義される実施態様は、本発明の範囲内である。
【００４１】
本明細書において使用される場合に、語「治療量未満」(sub-therapeutic)は、癌を処置する為に慣用的に使用されている抗体の上記量よりも少ない抗体の量を説明するために用いられている。例えば、治療量未満の量は、治療に必要であると製造業者によって定義された量よりも少ない量である。
【００４２】
本明細書において使用される場合に、語「ナノ粒子」又は「ナノ粒子組成物」は、5ミクロン未満である少なくとも1つの寸法を有する粒子を云う。好ましい実施態様において、例えば静脈内投与について、該粒子は1ミクロン未満である。直接投与、例えば腫瘍内への直接投与、について、該粒子はより大きいことができる。もっとより大きな粒子でさえも本発明によって明確に企図される。
【００４３】
粒子の集団において、個々の粒子のサイズは平均的に分布している。それ故に、該集団についての粒子サイズは、平均値によって、及びまたパーセンタイルによって表されることができる。D50は、50%の粒子が落ちるサイズ未満の粒子サイズである。10%の粒子はD10値よりも小さく、且つ90%の粒子はD90よりも小さい。不明な場合は、「平均」サイズはD50と同等である。それ故に、例えば、AA130は、130ナノメートル(nm)の平均サイズを有するナノ粒子を云う。
【００４４】
語「ナノ粒子」はまた、より小さい単位のナノ粒子の離散多量体を含みうる。例えば、320nmの粒子は、単位160nmのナノ粒子の二量体を含む。それ故に、160nmのナノ粒子について、多量体は、国際特許出願PCT／US15／54295号において記載されている通りMastersizer  2000(Malvern  Instruments  Ltd，Wocestershire，英国から入手可能)によって決定される場合に、およそ320nm、480nm、640nm、800nm、960nm、1120nmなどであろう。
【００４５】
本明細書において使用される場合に、語「後発生物製剤」(biosimilar)は、品質、安全性、及び有効性において、革新企業によって販売されている参照製品と同等であると見なされるバイオ医薬品を云う(公衆衛生法(Public  Health  Service  Act)(42  U．S．C．  262(i)のSection  351(i))。
【００４６】
本明細書において使用される場合に、語「キャリアータンパク質」は、抗体及び／又は治療剤を輸送する為の機能を有するタンパク質を云う。本開示書の抗体は、キャリアータンパク質に可逆的に結合することができる。キャリアータンパク質の例は、以下でより詳細に説明される。
【００４７】
本明細書において使用される場合に、語「コア」は、キャリアータンパク質、キャリアータンパク質、及び治療剤若しくは他の剤又は剤の組み合わせからなりうるナノ粒子複合体の中央部又は内側部を云う。幾つかの実施態様において、該抗体は、コアと非共有結合的に結合（複合化）されうる。
【００４８】
本明細書において使用される場合に、癌患者に関連して語「治療結果を高める」などは、癌細胞若しくは固形腫瘍の増殖の減速若しくは減少し、又は癌細胞若しくは全腫瘍量(tumor  burden)の総数における減少を云う。
【００４９】
本明細書において使用される場合に、語「治療剤」は、治療的に有用である剤、例えば、病状、生理学的状態、症状若しくは病因的因子の処置、寛解若しくは減弱の為の剤、又はそれらの評価若しくは診断のための剤を意味する。治療剤は、化学療法剤、例えば分裂抑制剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ステロイド、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、アルキル化剤、酵素、プロテアソーム阻害剤、又はそれらの任意の組み合わせ、でありうる。
【００５０】
本明細書において使用される場合に、語「結合剤」、「〜に特異的な結合剤」又は「〜に特異的に結合する結合剤」は、標的抗原に結合し且つ無関係の化合物に有意に結合しない剤を云う。好ましくは、該結合剤は、10-7M、10-8M若しくは10-9M又はそれ未満の解離定数(Kd)を有する高い特異性で標的抗原に結合する。好ましくは、該解離定数は約10-7M〜約10-14Mである。開示された方法において効果的に用いられることができる結合剤の例は、レクチン、タンパク質及び抗体、例えばモノクロナール抗体、例えばヒト化モノクロナール抗体、キメラ抗体又はポリクロナール抗体、又はそれらの抗原-結合フラグメント、並びにアプタマー、融合タンパク質、及びアルブミン結合モチーフを有する又はアルブミン結合モチーフに融合されるアプタマーを含むがこれらに限定されない。一つの実施態様において、該結合剤は、外因性抗体である。外因性抗体は、哺乳動物免疫系によって、哺乳動物において、例えばヒトにおいて、天然に産生されない抗体である。
【００５１】
本明細書において使用される場合に、語「抗PD-L1結合剤」、「〜に特異的な抗PD-L1結合剤」又は「〜に特異的に結合する抗PD-L1結合剤」は、PD-L1に結合し且つ無関係の化合物に有意に結合しない剤を云う。好ましくは、該PD-L1結合剤は、10-7M、10-8M若しくは10-9M又はそれ未満の解離定数を有する高い特異性でPD-L1に結合する。好ましくは、該解離定数は約10-7M〜約10-14Mである。開示された方法において有効に用いられることができる抗PD-L1結合剤の例は、抗体、例えばモノクロナール抗体、例えばヒト化モノクロナール抗体、キメラ抗体若しくは又はポリクロナール抗体、又はそれらの抗原結合性フラグメント、並びに、アプタマー、融合タンパク質、及びアプタマーを含むが、これらに限定されない。好ましくは、該結合剤は、アルブミン結合モチーフを有する又はそれに融合されている。一つの実施態様において、該抗PD-L1結合剤は外因性抗体である。
【００５２】
本明細書において使用される場合に、語「1つの抗体」又は「複数の抗体」は、は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分(すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子)を云う。該語はまた、2つの免疫グロブリン重鎖及び2つの免疫グロブリン軽鎖からなる抗体、並びに完全長抗体及びその一部を含む様々な形態を云う；例えば、免疫グロブリン分子、モノクロナール抗体、キメラ抗体、CDRグラフト化抗体、ヒト化抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、ジスルフィド結合されたFv、scFv、単一ドメイン抗体(dAb)、二重特異性抗体(diabody)、多重特異的抗体、二重特異的抗体(dual  specific  antibody)、抗イディオタイプ抗体、二重特異性抗体(bispecific  antibody)、それらの機能的に活性なエピトープ-結合フラグメント、二機能性ハイブリッド抗体例えば、Lanzavecchia等，Eur．J．Immunol．17，105  (1987年))、及び単鎖(例えば、Huston等，Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．，85，5879-5883  (1988年)及びBird等，Science  242，423-426  (1988年))など（該文献は参照によって本明細書内に取り込まれる）を参照)、を含む。(一般に、Hood等，Immunology，Benjamin，N．Y．，第2版  (1984年)；Harlow及びLane，Antibodies．A  Laboratory  Manual，Cold  Spring  Harbor  Laboratory  (1988年)；Hunkapiller及びHood，Nature，323，15-16  (1986年)、該文献は参照によって本明細書内に取り込まれる、を参照)。該抗体は、任意の種類(例えば、IgG、IgA、IgM、IgE又はIgD)でありうる。好ましくは、該抗体はIgGである。抗体は、非ヒト(例えば、マウス、ヤギ又は他の任意の動物)、完全ヒト、ヒト化またはキメラでありうる。一つの実施態様において、該抗体は外因性抗体である。外因性抗体は、哺乳動物免疫系によって、哺乳動物において、例えばヒトにおいて、天然に生産されない抗体である。
【００５３】
「Kd」としてまた言及される語「解離定数」は、特定の物質が個々の成分(例えば、タンパク質キャリアー、抗体及び／又は治療剤)に分離する程度を表す量を云う。
【００５４】
本明細書において使用される場合に、語「凍結乾燥された」、「凍結乾燥」などは、乾燥されるべき物質(例えば、ナノ粒子)が最初に凍結され、そして次に、氷又は凍結された溶媒が真空環境における昇華によって除かれる方法を云う。添加剤は、保存時の凍結乾燥された製品の安定性を高めるために、予備凍結乾燥製剤に任意的に含まれる。幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、治療薬として使用する前に、凍結乾燥された成分(キャリアータンパク質、抗体及び任意の治療剤)から形成されることができる。他の実施態様において、該キャリアータンパク質、抗体及び治療剤がナノ粒子複合体に最初に組み合わされて、そして次に凍結乾燥される。該凍結乾燥されたサンプルはさらに、追加の添加剤を含みうる。
【００５５】
語「バッファー」は、凍結乾燥前に許容範囲内に溶液のpHを維持する剤を包含し、及びコハク酸塩(ナトリウム又はカリウム)、ヒスチジン、リン酸塩(ナトリウム又はカリウム)、トリス(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン)、ジエタノールアミン、クエン酸(ナトリウム)などを含みうる。幾つかの実施態様において、本発明のバッファーは、約5.5〜約6.5の範囲のpH、好ましくは約6.0のpH、を有する。この範囲のpHを制御するだろうバッファーの例は、コハク酸塩(例えば、コハク酸ナトリウム)、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩及び他の有機酸バッファーを含む。
【００５６】
語「医薬製剤」は、活性成分が有効になることを許すような形態であり、及び該製剤が投与されるであろう対象にとって毒性であるさらなる成分を含まない製剤を云う。
【００５７】
「薬学的に許容される」添加剤（ビヒクル、添加物）は、使用される有効成分の有効量を提供する為に対象哺乳動物に合理的に投与されることができるものである。
【００５８】
語「再構成時間」は、凍結乾燥された製剤を溶液中に再水和する為に必要とされる時間である。
【００５９】
「安定な」製剤は、その中のタンパク質が貯蔵時にその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を本質的に保持しているものである。
【００６０】
本明細書において使用される場合に、語「エピトープ」は、抗体によって認識される抗原の部分を云う。エピトープは、タンパク質（例えば抗体）又はリガンドとの特異的相互作用を可能にする短いアミノ酸配列又はペプチド（任意的に、グリコシル化されているか又は他の方法で修飾されている）を含むが、これらに限定されない。例えば、エピトープは、抗体の抗原結合部位が付着する分子の一部でありうる。
【００６１】
語「処置する」又は「処置」は、対象、例えばヒト、における疾病又は障害(例えば、癌)の処置を包含し、且つ(i)疾病又は障害を抑制すること、すなわち、その発症を阻止すること；(ii)疾病又は障害を軽減すること、すなわち疾病又は障害を後退させること；(iii)疾病又は障害の進行を遅らせること；及び／又は(iv)疾病又は障害の１以上の症状の進行を抑制、緩和若しくは進行を遅らせることを含む。幾つかの実施態様において、「処置する」又は「処置」は、癌細胞を殺すことを云う。
【００６２】
癌処置に関連して語「殺す」は、その癌細胞又は癌細胞の集団の少なくとも一部の死をもたらすであろう任意の種類の操作を含むことに向けられている。
【００６３】
語「用量」はそれを必要とする患者に与えられる抗体又はナノ粒子複合体の量を云う。主治医は、例えば患者の体重、年齢、健康、癌の病期、循環するPD-L1のレベル、及び他の関連要因に基づく範囲から適切な用量を選択するし、それらの全ては当業者の技術の範囲内である。
【００６４】
語「単位用量」は、所望の結果を提供する為に、患者に与えられる抗体又はナノ粒子複合体の用量を云う。幾つかの例において、該単位用量は、治療量未満の製剤(例えば、10%の治療量)において販売されている。該単位用量は、単位用量又は一連の副用量として投与されうる。所与のFDA承認適応症に対する抗体の為の治療量は処方情報に記載されており、例えば、局所進行性又は転移性の尿路上皮癌を有する患者の処置について承認されているアテゾリズマブの治療量は、疾病の進行又は許容できない毒性があるまで、3週間毎に60分又は30分かけて静脈内注入として1200mg投与され、好ましくは治療量未満の量は5%〜20%の治療量である。そのような好ましい実施態様において、そのような治療量未満の量は、60mg／kg〜240mg／kg、より好ましくは120mg／kg〜180mg／kg、の範囲でありうる。抗体がFDAに承認されていないか又はその適応症に対してまだ承認されていない場合の所与の適応症に対する抗体についての治療量は、他の適応症に対して承認されている治療量に相関する量であり、従ってFDA未承認の適応症についての治療量未満の量は、治療量のパーセントとして容易に計算される（例えば、10%の治療量）。例えば、転移性のメラノーマの処置の為の抗体の治療用量、従って治療量未満の量は、一般に承認されている転移性癌の治療量に相関する。
【００６５】
さらに、本明細書において用いられている幾つかの語は、下記でより具体的に定義されている。
【００６６】
概要
【００６７】
本開示書を読めば当業者には明らかであるように、本開示書は、キャリアータンパク質／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の、治療的に有効量のパクリタキセルを含むナノ粒子複合体で患者を処置することによって、PD-L1を発現する癌細胞を有する患者、特に抗PD-L1抗体免疫療法での処置に耐性であるか又は耐性となっている癌細胞を有する患者、を処置する為の方法に関する。
【００６８】
本開示書はまた、治療量未満の量の抗PD-L1抗体並びに、キャリアータンパク質／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の、治療的に有効量のパクリタキセルを含むナノ粒子複合体で患者を処置することによって、PD-L1を発現する癌細胞を有する患者、特に抗PD-L1抗体免疫療法での処置に耐性であるか又は耐性となっている癌細胞を有する患者、を処置する為の方法に関する。
【００６９】
抗PD-L1抗体
【００７０】
幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である。
【００７１】
アテゾリズマブ(TECENTRIQ(商標)，Roche，米国)が、PD-L1に対するIgG1アイソタイプの完全ヒト化された、Fc修飾されたモノクロナール抗体である。アテゾリズマブは、局所進行性又は転移性の尿路上皮癌(膀胱癌を含む)及び非小細胞肺癌を有する患者の処置に承認されているPD-L1阻止抗体(blocking  antibody)である。
【００７２】
他の抗PD-L1抗体はまた、当技術分野において知られており、例えばBMS-936559／MDX-1105(Bristol  Myers  Squibb)、MeDI4736(デュルバルマブ，MedImmune／AstraZeneca)及びMSB00100718C(アベルマブ，EMD  Serono)である。
【００７３】
幾つかの実施態様において、抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、抗PD-L1抗体の治療投与量の約1%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%又は約60%から成る量から選択される。
【００７４】
幾つかの実施態様において、抗PD-L1抗体の上記治療量未満の量が、腫瘍に伴うPD-L1を阻止することなしに、循環するPD-L1を優先的に阻止する量である。
【００７５】
複合体
【００７６】
キャリアータンパク質／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体を調製する為に適した方法が例えば、2014年10月6日に出願され米国特許仮出願No．62／060,484号；及び2015年8月18日に出願された米国特許仮出願No．62／206,770号；No．62／206,771号；及びNo．62／206,772号、並びに、2015年10月6日に出願されたPCT公開公報WO2016／057554号パンフレット；並びに2013年9月30に出願された国際特許出願WO2014／055415号パンフレットにおいて記載されている。これらの出願のそれぞれの内容は、その全体を参照によって具体的に取り込まれる。下記の実施例1は、そのような複合体を製造する為の詳細なプロトコルの一例を提供する。
【００７７】
本明細書において記載された方法において用いられうるナノ粒子複合体はまた、抗PD-L1抗体以外のPD-L1結合剤を含みうる。そのようなPD-L1結合剤は、PD-L1結合部分及びアルブミン結合モチーフを含み、ここで、該PD-L1結合剤は、キャリアータンパク質結合化学療法剤のナノ粒子、例えばアブラキサン(登録商標)、と複合体を形成し、例えば凍結乾燥及び再構成後にPD-L1に結合する能力を保持するナノ粒子複合体を形成する。例えば、該PD-L1結合剤は、アルブミン結合モチーフなどを有するか又はそれに融合されたPD-L1結合アプタマーでありうる。
【００７８】
幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤である。幾つかの実施態様において、該抗体は、ナノ粒子の表面の全部又は一部上の実質的に単層の抗体である。幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、約100〜1000の抗体又は約400〜約800の抗体を含む。
【００７９】
幾つかの実施態様において、該キャリアータンパク質は、アルブミン、例えばヒト血清アルブミン、である。幾つかの実施態様において、該アルブミンは、組み換えヒト血清アルブミンである。
【００８０】
幾つかの実施態様において、該複合体はさらに、アビラテロン、ベンダムスチン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カバジタキセル、シスプラチン、クロラムブシル、ダサチニブ、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エルロチニブ、エトポシド、エベロリムス、ゲフィチニブ、イダルビシン、イマチニブ、ヒドロキシウレア、イマチニブ、ラパチニブ、リュープロレリン、メルファラン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ネダプラチン、ニロチニブ、オキサリプラチン、パゾパニブ、ペメトレキセド、ピコプラチン、ロミデプシン、サトラプラチン、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、スニチニブ、テニポシド、トリプラチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン及びシクロホスファミドからなる群から選択される少なくとも1つの追加の化学療法剤、例えば化学療法剤、を含む。
【００８１】
幾つかの実施態様において、該キャリアー結合化学療法剤は、アルブミン結パクリタキセル、例えばアブラキサン(登録商標)(Celgene)、である。
【００８２】
一つの実施態様において、該ナノ粒子複合体の抗体は、該ナノ粒子複合体、例えばアルブミン結合パクリタキセルコアの表面、上及び／又はそれの中に組み込まれる。一つの実施態様において、該ナノ粒子複合体の抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)結合パクリタキセルコアの表面に配置されている。一つの実施態様において、該ナノ粒子複合体の抗体は、アルブミン結合パクリタキセルコアと会合されている。一つの実施態様において、該ナノ粒子複合体の抗体は、該ナノ粒子複合体中のキャリアータンパク質、例えばアルブミン、と会合されている（結合されている）。一つの実施態様において、該キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)及びパクリタキセルは、非共有結合を介して会合している（互いに結合している）。
【００８３】
本発明の幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体を含む上記組成物はさらに、追加の化学療法剤を含みうる。該追加の化学療法剤は例えば、アルキル化剤、例えば白金化合物、例えばカルボプラチン、でありうる。
【００８４】
幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体のサイズは、0.09μm〜0.9μm、90nm〜800nmであり、例えば約90nm、100nm、130nm、160nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm又は800nmを含む。幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体のサイズは、約100nm〜約225nmである。他の実施形態において、該ナノ粒子複合体はより大きく、例えば800nm超〜約3.5μmである。幾つかの実施態様において、該粒子は、ナノ粒子複合体の多量体である。幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、新しく作られた、又は凍結乾燥、そして注射に適した水性溶液中への再懸濁の後のいずれかで、約100nm〜約225nmの平均粒子サイズを有する。
【００８５】
理論に縛られることなしに、該結合剤は、疎水性相互作用を介してキャリアータンパク質によって結合されると考えられており、それはその性質上弱い。それでも、個々の成分の活性並びに該ナノ粒子中のそれらの相対的関係は、凍結乾燥及び該組成物の再構成にかかわらず維持される。キャリアータンパク質への結合、例えば該結合剤のキャリアータンパク質への複合体形成は、結合剤上のアルブミン結合モチーフ及び／又はキャリアータンパク質上の抗体結合モチーフを介して生じるとなおさらに考えられる。アルブミン結合モチーフ及び抗体結合モチーフは、2017年8月4日に出願された国際特許出願PCT／US17／45643号に記載されており、その全体が参照によって本明細書内に取り込まれる。幾つかの実施態様において、該結合剤は、非治療的且つ非内因性のヒト抗体、融合タンパク質、例えば標的抗原に結合するペプチドとの抗体Fcドメインの融合体、又はアプタマーである。
【００８６】
処置方法
【００８７】
一つの観点において、PD-L1を発現する癌を有する患者を処置する為の方法であって、癌を処置する為に、治療的に有効量の抗PD-L1／アルブミン／パクリタキセルナノ粒子を患者に投与することを含む、上記方法が提供される。一つの実施態様において、該方法は、PD-L1を発現する癌を有する患者を選択することを含む。一つの実施態様において、該方法は、PD-L1を発現し且つチェックポイント阻害剤免疫療法での処置に耐性である癌を有する患者を選択することを含む。一つの実施態様において、該チェックポイント阻害剤免疫療法は、本明細書において記載されている通り、ナノ粒子複合体の一部でない抗PD-L1抗体を含む。
【００８８】
一つの観点において、必要とする患者を処置する為の方法であって、ここで、治療量未満の量の抗PD-L1抗体の投与がナノ粒子複合体の有効性を高めるように、該患者は、治療量未満の量の抗PD-L1抗体及びアルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の、治療的に有効量のパクリタキセルを含むナノ粒子複合体で処置される、上記方法が提供される。必要とする対象は、癌細胞がPD-L1を発現又は過剰発現する癌に罹患している対象でありうる。該対象はまた、癌細胞がPD-L1を発現又は過剰発現するが、抗PD-L1抗体免疫療法での処置に耐性である癌に罹患されていてもよい。一つの実施態様において、治療量未満の量の抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)結合化学療法剤(「非複合」抗PD-L1抗体)を含むナノ粒子複合体中にない。
【００８９】
一つの実施態様において、該方法は、癌細胞がPD-L1を発現又は過剰発現する癌を有する患者を選択することを含む。一つの実施態様において、該方法は、癌細胞がPD-L1を発現又は過剰発現するが、抗PD-L1抗体免疫療法での処置に耐性である癌を有する患者を選択することを含む。腫瘍がPD-L1を発現する癌細胞を含むかどうかを決定する為の方法、例えばVentana  PD-L1(sp263)アッセイ(Roche)（それは転移性の尿路上皮癌を有する患者に対するPD-L1状態を提供する為の補完的診断薬としてFDAによって承認されたものである）及びPD-L1  IHC  28-8  pharmDxアッセイ(Dako，Agilent  Pathology  Solutions)、が当技術分野において知られている。
【００９０】
本発明の幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、抗PD-L1抗体以外のPD-L1結合剤を含む。本発明の幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、「非複合」抗PD-L1抗体と同じ抗体である抗PD-L1抗体を含む。本発明の幾つかの実施態様において、該ナノ粒子複合体は、「非複合」抗PD-L1抗体とは異なる抗体である抗PD-L1抗体を含む。
【００９１】
該患者は、抗PD-L1抗体及びキャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の治療量未満の量で同時処置されうる。
【００９２】
明確にするために、該抗PD-L1抗体が循環するPD-L1を結合することができるように、「同時処置」は、該キャリアー(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の投与前に、それと同時に又はその直後に、抗PD-L1抗体でのPD-L1を発現する癌の処置を云う。
【００９３】
一つの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、ナノ粒子複合体の投与前に、治療量未満の量において投与される。この実施態様において、抗PD-L1抗体の投与は、該ナノ粒子複合体の投与の約0.5時間〜約48時間前に生じる。
【００９４】
他の実施態様において、該抗PD-L1抗体は、該ナノ粒子複合体の投与の0.5時間前から0.5時間後までに投与される。この実施態様において、そのような投与はそれにもかかわらず抗体による循環するPD-L1の一部の結合を結果として生じるだろうと考えられる。
【００９５】
なお他の実施態様において、該抗体組成物は、ナノ粒子複合体の投与後2時間までに投与されることができる。
【００９６】
好ましい観点において、治療量未満の量の抗PD-L1抗体を有する患者の前処置の約0.5時間〜48時間後に投与することによって、アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の有効性を高める為の方法が提供される。好ましくは、そのようなナノ粒子複合体は、治療量未満の量の抗PD-L1抗体の約24時間に投与される。
【００９７】
他の観点において、PD-L1を発現する癌を患っている患者において治療結果を高める為の方法であって、該患者はアルブミン、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含むナノ粒子で処置されるように選択され、該方法は、如何なるその後のナノ粒子での処置の前に、治療量未満の量の抗PD-L1抗体で患者を処置することを含む、上記方法が提供される。
【００９８】
他の観点において、PD-L1を過剰発現する癌を患っている患者において治療結果を高める為の方法であって、治療量未満の量の抗PD-L1抗体と、アルブミン結合パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を有する有効量のナノ粒子複合体とで患者を同時に処置することを含む上記方法が提供される。
【００９９】
他の観点において、PD-L1を発現する癌を患っている患者において治療結果を高める為の方法であって、該患者は、アルブミン、パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含むナノ粒子複合体で処置されるべきであり、該方法は、ナノ粒子の投与の+／-0.5時間以内に治療量未満の量の抗PD-L1抗体で患者を処置することを含む。
【０１００】
他の観点において、PD-L1を過剰発現する癌を患っている患者において治療結果を高める為の方法であって、該患者は、治療量未満の量の抗PD-L1抗体で処置されており、該方法は、抗体の投与の+／-0.5時間内に、アルブミン結合パクリタキセル及び抗PD-L1抗体を含む有効量のナノ粒子で患者を処置することを含む、上記方法が提供される。
【０１０１】
幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の前に投与される。例えば、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の投与の数分前、数時間前又は数日前に投与されることができる。幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体の投与の約5〜約59分間、約10〜約50分間、約15〜約45分間、約20〜約40分間、約25〜約35分間前に投与される。他の実施形態において、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の投与の約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約12時間、約24時間、約48時間、約72時間又はそれより長い時間前に投与されることができる。他の実施形態において、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の投与の約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約10日、約12日、約15日又はそれよりも長い日前に投与されることができる。考えられる値は、終点を含む列挙された範囲又は複数の値内の任意の値、部分範囲又は範囲を含む。
【０１０２】
幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の投与と同時に、例えば互いに10分以内に同時に投与されることができる。
【０１０３】
他の実施形態において、該抗PD-L1抗体は、アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体の投与の後の例えば2時間以内に引き続き投与されることができる。
【０１０４】
本明細書に記載された組成物及び方法によって処置されることができる癌又は腫瘍は、胆道癌；脳癌、例えば神経膠芽腫及び髄芽細胞腫を含む；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌、胃がん；血液腫瘍、例えば急性リンパ性白血病及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；多発性骨髄腫；エイズ関連白血病及び成人T細胞白血病リンパ腫；上皮内腫瘍、例えばボーエン病及びパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝癌(肝細胞癌)；肺癌；リンパ腫、例えばホジキン病及びリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；口腔癌、例えば扁平上皮癌を含む口腔癌；卵巣癌、例えば上皮細胞、間質細胞、生殖細胞及び間葉細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫、例えば平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫及び骨肉腫を含む肉腫；皮膚癌、例えばメラノーマ、カポジ肉腫、基底細胞癌及び扁平上皮癌を含む皮膚癌；精巣癌、例えば胚種腫瘍(germinal  tumors)（精上皮腫、非精上皮腫［奇形腫、絨毛癌］）、間質性腫瘍及び生殖細胞腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌、例えば甲状腺腺癌及び髄様癌を含む甲状腺癌；並びに、腎臓癌、例えば腺癌及びウィルムス腫瘍を含む腎臓癌を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載された方法での処置に適した癌は、PD-L1を発現又は過剰発現する癌を含むが、これらに限定されない。本明細書に開示された方法で処置されうる癌はまた、抗PD-L1抗体免疫療法での処置に耐性である癌、例えば免疫療法に反応していたが、抗PD-L1抗体免疫療法に耐性を展開した癌を含む癌、を含み、該抗PD-L1抗体は、キャリアータンパク質(例えば、アルブミン)結合化学療法剤(例えば、アブラキサン(登録商標))を含むナノ粒子と複合体を形成しない。
【０１０５】
抗体製剤
【０１０６】
一つの観点において、抗PD-L1抗体は、抗PD-L1抗体の単位用量製剤であり、該製剤は治療量の約1%〜約60%の抗体を含み、ここで、該製剤は、単位用量として投与されるように包装される。本発明の一観点において、抗PD-L1抗体の単位用量製剤は、治療量の約10%の抗体を含む。例えば、治療量の10%の抗PD-L1抗体、例えばアテゾリズマブ、は、60mg〜240mgでありうる。
【０１０７】
抗PD-L1抗体の単位用量製剤は、治療量の約1%〜約60%、約5%〜約50%、約10%〜約40%、約15%〜約30%、約20%〜約25%、の抗PD-L1抗体であることができる。考えられる値は、終点を含む列挙された範囲の任意の範囲内の任意の値、部分範囲又は値を含む。
【０１０８】
幾つかの実施態様において、該抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブ又はその後発生物製剤であり、該製剤は、治療量の約5%〜約20%のアテゾリズマブ又はその後発生物製剤を含む。
【０１０９】
他の観点において、本明細書において提供される抗PD-L1抗体及び少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む製剤が本明細書において提供される。
【０１１０】
一般に、本明細書において提供される単位用量製剤は、許容される投与様式のいずれかによって患者への投与用に製剤化されることができる。様々な製剤及び薬物送達システムが、当技術分野において利用可能である。例えば、Remington's  Pharmaceutical  Sciences，E．W．Martinによって編集(Mack  Publishing  Company，第18版，1990年)を参照。
【０１１１】
一般に、本明細書において提供される単位用量製剤は、下記の経路のいずれか１つによって医薬組成物として投与されるだろう：経口、全身（例えば、経皮、鼻腔内若しくは座薬による）、又は非経口（例えば、筋肉内、静脈内若しくは皮下）投与。
【０１１２】
該単位用量製剤は一般に、抗PD-L1抗体を、任意的に少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤と組み合わせて構成されうる。許容される添加剤は、非毒性であり、投与を助け、且つ特許請求の範囲に記載された化合物の治療効果に悪影響を及ぼさない。そのような添加剤は、任意の固体、液体、半固体、又はエアロゾル組成物の場合には、当業者に一般的に入手可能な気体添加剤でありうる。
【０１１３】
ナノ粒子複合体製剤
【０１１４】
一つの観点において、本明細書において記載されたナノ粒子複合体を含む上記組成物は、全身送達、例えば静脈内投与、用に製剤化される。
【０１１５】
一つの観点において、該ナノ粒子組成物は、腫瘍内への直接注入用に製剤化される。直接注入は、腫瘍部位内への又は腫瘍部位の近傍への注射、腫瘍内への灌流などを含む。該ナノ粒子組成物は全身的に投与されないので、腫瘍内への直接注入用に製剤化されているナノ粒子組成物は、任意の平均粒子サイズを含みうる。理論に縛られることなしに、より大きな粒子(例えば、500nm超、1μm超など)は腫瘍内に固定化される可能性が高く、それによって良好な有益な効果であると考えられているものを提供すると考えられる。
【０１１６】
他の観点において、本明細書で提供される化合物を含む組成物、及び少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤が本明細書において提供される。
【０１１７】
一般に、本明細書において提供される化合物は、許容される投与方法の任意のものによって患者に投与する為に製剤化されることができる。様々な製剤及び薬物送達システムが当技術分野において利用可能である。例えば、Gennaro，A．R．編集  (1995年)  Remington's  Pharmaceutical  Sciences，第18版，Mack  Publishing  Co．を参照。
【０１１８】
一般に、本明細書において提供される化合物は、下記の経路のいずれか１つによって医薬組成物として投与されるだろう：経口、全身(例えば、経皮、鼻腔内若しくは座薬による)、又は非経口(例えば、筋肉内、静脈内若しくは皮下)投与。
【０１１９】
本明細書において記載された製剤は、添加剤を含みうる。固形医薬添加剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどを含む。液体及び半固体の添加剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び、例えば石油、動物、植物又は合成起源、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む様々な油から選択されうる。好ましい液体キャリアー、特に注射溶液の為の液体キャリアー、は、水、食塩水、水性デキストロース及びグリコールを含む。他の適切な医薬添加剤及びそれらの製剤が、E．W．Martinにより編集されたRemington's  Pharmaceutical  Sciences(Mack  Publishing  Company，第18版，1990年)において記載されている。
【０１２０】
本製剤は、所望であれば、単位用量の活性成分を含むパック又はディスペンサー装置において提供されうる。そのようなパック又は装置は例えば、金属又はプラスチックのホイル、例えばブリスターパック、又はガラス、及びゴム栓、例えばバイアル内のゴム栓、を含みうる。該パック又はディスペンサー装置は、投与の為の説明書を添付されうる。適合性の医薬キャリアーにおいて製剤化された本発明の単位用量製剤を含む組成物がまた調製され、適切な容器に入れられ、そして指示された状態の処置用にラベル付けされた。
【０１２１】
キット
【０１２２】
幾つかの観点において、本発明は、(a)ある量のアルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体、(b)単位用量の治療量未満の量の抗PD-L1抗体、及び任意的に、(c)取扱説明書を含むキットに関する。
【０１２３】
幾つかの実施態様において、該キットは、アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の凍結乾燥された複合体を含むことができる。
【０１２４】
幾つかの好ましい実施態様において、該キットの構成要素は、構成要素がそれらの使用順序でアクセスされるように構成されることができる。例えば、いくつかの観点において、該キットは、開封時又はユーザによってアクセスされると、利用可能な第1の要素が、例えば第1のバイアルにおいて、抗PD-L1抗体の治療量未満の量の単位用量であるように構成されることができる。次に、ある量のアルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体のナノ粒子複合体を含むか又はそれを含む第2の容器（例えば、バイアル）にアクセスすることができる。従って、該第2のバイアルが開けられる前に該第1のバイアルが開けられる必要があるように該キットは直感的に構成されることができる。幾つかの実施態様において、例えば、抗体の投与の前に、最初に複合体を投与することが望ましい場合、順序は異なることができることを理解されたい。また、両方が同時に管理されるように構成されることができる。最後に、いずれか又は両方の成分の追加のバイアル又は容器が含まれることができ、且つ任意の所望の順序で開くように構成されることができることが理解されるべきである。例えば、第1のバイアルは抗体であることができ、第2のバイアルは複合体を含むことができ、第3のバイアルは抗体又は複合体などのいずれかを含むことができる。そのように構成されたキットは、使用説明書によって意図されていない順序で成分が投与されるのを防ぐか又は少なくとも防ぐのを助けると考えられる。
【０１２５】
幾つかの観点において、本発明は、アルブミン／パクリタキセル／抗PD-L1抗体の複合体及び治療量未満の量の抗PD-L1抗体の単位用量を投与する為の部品キットに向けられており、該キットは任意的に、読み取り可能な媒体内の投与処置スケジュールをさらに含む。幾つかの実施態様において、該投与スケジュールは、所望の平均血清レベルを達成する為に必要な治療量未満の量の抗PD-L1抗体が提供されることを含む。幾つかの実施態様において、パーツのキットは、担当臨床医に、患者の性別、患者の大きさ(mass)及び臨床医が達成したい血清レベルに基づいて治療量未満の量の抗PD-L1抗体の投与レジメンを選択する能力を提供する投与スケジュールを含む。幾つかの実施態様において、該投与処置は、患者の血液中の循環するPD-L1のレベルに基づく。幾つかの実施態様において、該投与スケジュールはさらに、患者の体重（又は大きさ）および性別に基づいて患者の血液量に対応する情報を提供する。一つの実施態様において、該記憶媒体は、該キット内の単位用量形態に付随する添付のパンフレット又は同様の書面情報を含むことができる。一つの実施態様において、該記憶媒体は、例えばそのような情報のデジタル符号化された機械読み取り可能な表現を格納する為に、電子的、光学的又は他のデータ記憶装置、例えば不揮発性メモリー、を含むことができる。
【０１２６】
本明細書において使用される場合に、語「読み取り可能な媒体」は、例えばヒトによって又は機械によって読み取ることができるデータの表現を云う。人間が読むことができるフォーマットの非限定的な例は、パンフレット、挿入物又は他の書面の形態を含む。機械可読可能な形態の非限定的な例は、機械(例えば、コンピュータ、タブレット及び／又はスマートフォン)によって可読可能な形式において情報を提供(すなわち、格納及び／又は送信)する任意のメカニズムを含む。例えば、機械読み取り可能な媒体は、読み取り専用メモリー(ROM)；ランダムアクセスメモリ(RAM)；磁気ディスク記憶媒体；光記憶媒体；及びフラッシュメモリデバイスを含む。一つの実施態様において、機械読み取り可能な媒体はCD-ROMである。一つの実施態様において、該機械読み取り可能な媒体はUSB装置である。一つの実施態様において、該機械読み取り可能な媒体は、クイック・レスポンス・コード(Quick  Response  Code；QR  Code)又は他のマトリックスバーコードである。
【０１２７】
実施例
【０１２８】
本開示書は、アテゾリズマブ(すなわち、TECENTRIQ(商標))、続いてアルブミン結合パクリタキセル(すなわち、アブラキサン(登録商標))及びアテゾリズマブ(すなわち、TECENTRIQ(商標))からなるナノ粒子の前処理を用いて説明される。
【０１２９】
当業者は、実施例のナノ粒子の製造及び使用、並びにアテゾリズマブの同時処置の投与は例示の目的のためだけであり、且つ本開示はこの例示によって限定されないことを理解するであろう。
【０１３０】
本明細書で使用される任意の略語は、通常の科学的意味を有する。特に記載がない限り、全ての温度は℃である。本明細書において、下記の語は、他に定義されない限り下記の意味を有する。
【０１３１】
【表１】
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【０１３２】
実施例1：アテゾリズマブ-アブラキサン(登録商標)ナノ粒子の製造
【０１３３】
アテゾリズマブ及びアブラキサン(登録商標)(ABX)は、それぞれ4mg／mL及び10mg／mLの濃度で、室温で、30分間、同時インキュベーションされて、ナノ粒子，AA130，を形成した。
【０１３４】
アテゾリズマブ及びABXが相互作用してナノ粒子複合体を形成することができるかどうかを決定する為に、バイオレイヤー干渉法(BLItz：Biolayer  interferometry)(Forte  Bioscience)は、ストレプトアビジン・プローブを用いて実行された。1xPBS中の100μg／mlのビオチン化アテゾリズマブは、ストレプトアビジン・プローブに結合された。該プローブから未結合アテゾリズマブを洗浄した後、該抗体結合プローブが、1XPBS中の100、500、1000μg／mLの濃度でABXに曝露された。PBSに曝露された抗体プローブはバックグラウンドとして使用され、そして該バックグラウンドが差し引かれた。BLItzソフトウェアが、解離定数を計算する為に使用された(図1)。Kdが1.462x10-9であると決定された。
【０１３５】
実施例2：アテゾリズマブ-アブラキサン(登録商標)ナノ粒子のサイズ測定
【０１３６】
Mastersizer  NS300が、ABX単独と比較したアテゾリズマブ結合ABXの粒子サイズを決定する為に用いられた。ナノサイト(Nanosight)は、動的光散乱及びブラウン運動を用いて、粒子サイズを計算する。
【０１３７】
上記された通り、アテゾリズマブ及びABXは共にインキュベーションされて、ナノ粒子，AA130，を形成した。ABXが1：200に希釈され、且つアテゾリズマブ結合ABXが1：800に希釈された；3つの30秒ビデオクリップが、粒子サイズを決定する為に、キャプチャーされ、そして分析された(図2A)。図2Bは、AA130のビデオクリップのうちの1つからの静止画像である。アテゾリズマブ-ABXナノ粒子の平均粒子サイズは約129nmあると決定された；ABX単独の平均サイズは約90nmである。
【０１３８】
実施例3：AA130はPD-L1を結合する
【０１３９】
フローサイトメトリーが行われて、リガンド，PD-L1，へのアテゾリズマブとアテゾリズマブ結合アブラキサンの結合を調べた。PD-L1陽性メラノーマ細胞株，C8161、が、この実験の為に用いられた。AA130が上記に記載された通りに作成され、そして一定分量のナノ粒子が、6000rpmで、10分間回転されて、任意の未結合アテゾリズマブを除去した。C8161細胞がそれぞれ、陰性対照及び陽性対照としてFITCでラベル付けされたアイソタイプ対照及び抗ヒトPD-L1で染色された。該C8161細胞は、ABX及びアテゾリズマブ単独及びAA130ナノ粒子とともに、30分間、インキュベーションされた。インキュベーション後、該細胞は、FITCでラベル付けされた抗ヒトPD-L1で30分間標識付けされ、そしてFACSバッファー(1xPBS+0.5%のBSA及び0.05%のアジ化ナトリウム)で洗われた。洗浄後、細胞が、Guava  8HT上で、フローサイトメーターによって分析され、データ解析がGauvasoftソフトウェア(Millipore)を用いて行われた。
【０１４０】
C8161細胞が、アイソタイプ対照抗体(図3A)、処理なし(図3B)、アブラキサン(登録商標)(図3C)、アテゾリズマブ(図3D)又はAA130(図3E)で前処理され、次に、蛍光的にラベル付けされた抗PD-L1抗体でラベル付けされた。130nm粒子の文脈におけるアテゾリズマブは、そのリガンド，PD-L1，に結合するその能力を保持する。
【０１４１】
実施例4：AA130の細胞毒性
【０１４２】
C8161メラノーマ細胞が、細胞毒性を決定するために、0〜200μg／mLのパクリタキセル濃度で、一晩、ABX及びAA130に曝露された。該細胞はまた、チミジン類似体であるEdUと共にインキュベーションされた。翌日、該細胞が回収され、2%パラホルムアルデヒドで固定され、そして1%サポニンで透過性にされた。透過処理後、該細胞は、細胞増殖のパーセントを決定する為に、FITCでラベル付けされた抗EdU抗体で、30分間、インキュベーションされた。洗浄後、該細胞は、Guava  8HT上で、フローサイトメーターによって分析され、そしてデータ解析がGauvasoftソフトウェア(Millipore)を用いて行われた。増殖指数が処理無しの陽性対照に対する正規化によって計算された。
【０１４３】
図4は、C8161細胞に対するABX(実線)及びAA130(破線)の用量依存毒性を示す。AA130ナノ粒子複合体は、ABX単独と同様の細胞毒性を有する。
【０１４４】
実施例5：AA130ナノ粒子複合体の静脈内製剤の製造
【０１４５】
ヒトでの使用の為に、AA130複合体が、用量適正数(dose  appropriate  number)の4mLのバイアルの25mg／mLのATZの4mLバイアルの25 mg／mLのATZを得て、そして、下記の指示に従って各バイアルを4mg／mLに希釈することによって調製される。ABXの用量適正数の100mgバイアルは、10mg／mLのABXナノ粒子を含む最終濃度に再構成することによって調製される。滅菌した3mLシリンジを用いて、1.6mL(40mg)のアテゾリズマブ(25mg／mL)が引き抜かれ、そして1分間かけて、100mgのABXを含むバイアルのそれぞれの内壁上にゆっくりと注入される。アテゾリズマブ溶液は、凍結乾燥されたケーキ上に直接的に注入されるべきではない。なぜならば、これは泡を結果として生じるからである。次に、滅菌した12mL滅菌シリンジを用いて、8.4mLの0.9%塩化ナトリウム注射(USP)が抜き取られ、そして100mgのABX及び40mgのATZを含む各バイアルの内壁上に、最低1分間で、8.4mLをゆっくり注入される。1.6mLのATZ及び8.4mLの0.9%塩化ナトリウム注射(USP)の添加が完了したら、各バイアルは、如何なるケーキ／粉末の完全な溶解が生じるまで、少なくとも2分間、穏やかに回転され及び／又はゆっくりと反転される。泡の発生は避けられるべきである。この時点で、各バイアルの濃度は、100mg／10mLのABX及び40mg／10mLのATZになるはずである。ABX及びATZを含むバイアルは、60分間、静置されるべきである。1以上のバイアルは、複合体を混合し続ける為に、穏やかに回転され及び／又は10分毎に反転される。60分が経過した後、計算された投与量のABX及びATZが各バイアルから抜き取られ、そして空のバイアフレックスバッグにゆっくりと加えられる。次に、等容量の0.9%塩化ナトリウム注射液(USP)が、5mg／mLのABX及び2mg／mLのATZの最終濃度になるように加えられる。次に、該バッグは、混合する為に、1分間、穏やかに回転され及び／又はゆっくりと反転される。ABX：ATZナノ粒子が、最終希釈後、室温で、4時間まで保存される。
【０１４６】
実施例6：ATZとの共処置は、ABX／ATZ複合体の標的化を改善する
【０１４７】
無胸腺ヌードマウスは、右側腹部に1x106のA375ヒトメラノーマ細胞で注射され、そして次に、PBS、12mg／kgのATZ、30mg／kgのABX、AA130で処置されるか又は1.2mg／kgのATZで前処置され、そして24時間後にAA130で処置される。AA130は、国際特許出願PCT／US15／54295号及び上記の実施例1に記載された通りに調製される。AA130で処置されたマウスのみ(ATZでの前処置の有無に関わらず)が、平均腫瘍体積における減少を示すと考えられる。
【０１４８】
ATZでの前処置は、対照又はATZ単独又はABX単独に比べて腫瘍体積において統計的に有意な減少に関連付けられるだろう。
【０１４９】
腫瘍は、食塩水(PBS)、TECENTRIQ(商標)(ATZ)、アブラキサン(登録商標)(ABX)、AA130、又はAA130の1日前のATZの前処置(ATZ+AA130)のいずれかでの処置後、15日目に測定される。ATZ単独又はAA130コホートに与えられる用量と比較して、10%治療量未満のATZが、AA130の投与の24時間前にATZ+AA130コホートに与えられる。ATZ+AA130コホートは、AA130と比較した場合でさえも、遅延された腫瘍増殖を伴って存在するだろうと考えられる。これらの実験は、ATZ+AA130での前処置が生存率を増加させることを示すだろうと考えられる。
【０１５０】
生存率は40日目に再び評価される。ATZ前処置及びAA130で処置されたマウスの生存期間中央値は、生存期間中央値、又はPBS若しくはATZ単独のいずれかで処置されたマウスの生存期間中央値を超えると考えられる。
【０１５１】
実施例7：AlexaFluor750でラベル付けされたナノ粒子の経時的蛍光
【０１５２】
マウスは、標識付けされたアブラキサン(登録商標)、又は上記実施例１のようにアテゾリズマブ(ATZ)と表面錯体を有するアブラキサン(登録商標)のナノ粒子のいずれかの等量でIV注射される；マウスの1つのAA130群は、1.2mg／kgアテゾリズマブの前処置を受ける。蛍光画像化が、710／760の励起／発光スペクトルで行われる。マウスにおける関心領域(ROI：Regions  of  interest)は、蛍光閾値に基づいて腫瘍蓄積を追跡する為にソフトウェアによって割り当てられる。3つの処置群全てについてのバックグラウンドROI及び腫瘍ROIの単位面積当たりの蛍光は、注射の24、29及び48時間後に決定される。
【０１５３】
24、29及び48時間における腫瘍及びバックグラウンドのROIにおける蛍光（従って、パクリタキセル）の量が決定され、そしてデータは、ATZでの前処置が、AA130単独又はアブラキサン単独と比較してより高いレベルの腫瘍蛍光を結果として生じることを実証するだろうと考えられる。ATZでの前処置及びATZとの表面錯体形成を有するアブラキサン(登録商標)ナノ粒子の使用は、アルブミンを含む化学療法剤の腫瘍取り込みの持続時間を24時間及び48時間の両方で増加させる方法を提供すると考えられる。ATZとの表面錯体化を有するアブラキサン(登録商標)ナノ粒子の使用はまた、48時間でのATZでの前処置の有無にかかわらず、これらのアルブミンを含むナノ粒子の腫瘍取り込みの持続時間を増加させることを提供すると考えられる。
【０１５４】
いかなる理論にも限定されないが、アルブミンナノ粒子の抗体コーティングは、おそらく肝臓若しくは腎臓のクリアランスを減少させることによって及び／又はアルブミンキャリアーのプロテアーゼ分解を減少させることによって安定性を付与する。
【０１５５】
実施例8：AA130ナノ粒子のイン・ビボでの有効性
【０１５６】
無胸腺ヌードマウス(Harlan  Sprague  Dawley)は、2x106のPD-L1陽性C8161メラノーマ腫瘍細胞で注射された。該腫瘍は約600mm3まで成長され、そして食塩水、アテゾリズマブ単独(18mg／kg)、ABX単独(45mg／kg)及びAA130(18mg／kgのアテゾリズマブ及び45mg／kgのABX)で1回、100μlのIV尾静脈注射で処置された(図5A〜5D)。腫瘍増殖が、3回／週モニターされた。腫瘍サイズが下記の式を用いて計算された：(長さx幅2)／2。
【０１５７】
腫瘍増殖曲線(図6)は、食塩水及び個々の薬物単独と比較して、AA130で処置されたマウスにおける鈍化された腫瘍増殖を示す。カプラン・マイヤー(Kaplan  Meier)曲線が、グラフ・パッド(Graph  Pad)ソフトウェアを用いて生成された。各群についての生存期間中央値はそれぞれ、食塩水、アテゾリズマブ、ABX及びAA130について14、13、16及び21.5日であった。AA130と他の全ての群との生存率の差は、食塩水で0.0008、アテゾリズマブで0.0015、及びアブラキサンで0.0113のp値で有意であった。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【国際調査報告】
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