(57)【要約】  本発明は、ａ）被検体の生体液または当該生体液由来のサンプルのラマンスペクトルにおける、約１２５６ｃｍ−１のラマンバンドの強度値を決定する工程と、ｂ）工程ａ）で得られた強度値を基準値と比較する工程とを含み、当該基準値に対する当該ラマンバンド強度の値の増加は、被検体がアルツハイマー病に罹患していることを示す、被検体のアルツハイマー病を診断する振動分光法に関する。本発明は、血漿サンプル分析のための装置、コンピュータプログラム、データ媒体、およびアルツハイマー病を治療するのに適した療法にさらに関する。
2019526809.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）被検体の生体液または前記生体液由来のサンプルのラマンスペクトルにおける、約１２５６ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度値を決定する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた前記強度値を基準値と比較する工程とを含んでなり、
前記基準値に対する前記ラマンバンド強度の値の増加が、前記被検体がアルツハイマー病に罹患していることを示すものとする、
被検体のアルツハイマー病を診断するための振動分光法。
【請求項２】
前記ラマンスペクトルが、近赤外レーザ励起線を用いて記録される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生体液が血漿である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記生体液由来のサンプルが脱水血漿である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記脱水血漿が、ＣａＦ２もしくはＺｎＳｅ結晶または金属担体に前記血漿サンプルを広げ、蒸発乾固することによって調製されるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記血漿サンプルの量が６〜１００μＬであり、および／または、前記蒸発乾固が１０〜２５℃の温度で行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルが血漿画分であり、分析される量が１０μＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記基準値が、対照患者における約１２５６ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度値である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記強度値が、ラマン曲線下の総面積に関してスペクトル値を正規化した後に得られるものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ａ）血漿サンプルを受容する容器と、
ｂ）少なくとも１つのラマン分光計と、
ｃ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の診断方法を実施する手段を備えたコンピュータシステムと
を備える、血漿サンプル分析のための装置。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の診断方法を実行するのに適したコードを含む、コンピュータプログラム。
【請求項１２】
請求項１１に記載のコンピュータプログラムを含む、データ媒体。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の診断方法により被検体が選択される、被検体のアルツハイマー病の治療に用いるためのアルツハイマー病の治療に適した療法。
【請求項１４】
前記療法が、コリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、抗β−アミロイド免疫療法、γセクレターゼ阻害剤、抗タウ療法、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１３に記載の療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に振動分光法に基づいてアルツハイマー病を診断する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧州には、アルツハイマー病患者が３，０００万人以上おり、診断されていない人は７００万人を超えている。
【０００３】
現在、アルツハイマー病（ＡＤ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）は、患者および近親者双方との面談を含む一連の神経心理学的検査によって診断される。このプロセスには、主観的な推論が関わり、臨床医の側にかなりの専門知識を必要とする。しかし、これらの検査は決定的なものではなく、それは、さまざまな種類の認知症の症状が誤診されやすく、通常の老化プロセスと混同される可能性もあるためである。
【０００４】
したがって、これらの検査は、診断検査によって補完されるべきである。今日、ＡＤを診断する主な２つの方法があるが、それらは費用がかかり、侵襲的で、かつ複数の副作用を有する。陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ：Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）では、放射性マーカを注射した後に患者の脳をスキャンするが、これは重度のアレルギー反応を引き起こす可能性がある。もう一方の方法では、髄液を分析するが、これは患者が腰椎穿刺を行うことを必要とする。比較的費用のかかるこの方法は、重度の頭痛、脚のしびれの一時的な疼痛、感染および脊柱管への出血を引き起こし得る。
【０００５】
髄液中のβ−アミロイドの検出に基づくいくつかの診断方法がある。上記のように、このアプローチでは、患者が腰椎穿刺を受ける必要があり、これは多くの副作用を有する。他の検査では血液サンプルを分析するが、その有効性は８０歳を超える患者では試験されておらず、小グループの患者からしかデータが得られていない。
【０００６】
ＡＢ試験（Ａｒａｃｌｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）およびＩＮＮＯ−ＢＩＡ  Ａβ（Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）等の他の血液検査が現在開発中である。これらの検査は、アルツハイマー病の脳に蓄積し、損傷を引き起こす特定のタンパク質、βアミロイドの血漿中濃度を測定することによってＡＤを診断しようと試みる。しかし、いくつかの結果は、血漿中のその濃度が脳内の濃度を反映していないことが示されている。
【０００７】
ラマン分光法が、脳組織切片におけるスペクトルを測定することによってＡＤの診断に応用され、これは、ＡＤ患者の脳組織の切片がアミロイドβペプチドの沈着、コレステロールおよび過リン酸化タウの増加を示すという観察をもたらした（Ａｒｃｈｅｒら  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｐｔｉｃｓ（ＥＣＢＯ），Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００７；Ｃｈｅｎら、Ａｐｐｌ．Ｏｐｔｉｃｓ  ４８，４７４３−４７４８（２００９））。しかし、この研究は特異度および感度の値を提供せず、さらに、組織サンプルの使用を必要とし、組織サンプルは末梢血ほど入手しやすくない。さらに、脳組織に生じる変化は、末梢血においても必ずしも起こるとは限らない。
【０００８】
したがって、ＡＤを診断する方法、とりわけ良好な精度を示す非侵襲的で安価な方法が、当該技術分野において求められている。
【発明の概要】
【０００９】
第一の態様において、本発明は、
ａ）被検体の生体液または当該生体液由来のサンプルのラマンスペクトルにおける、約１２５６ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度値を決定する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた強度値を基準値と比較する工程と 
を含んでなり、
前記基準値に対する前記ラマンバンド強度の値の増加が、被検体がアルツハイマー病に罹患していることを示すものとする、被検体のアルツハイマー病を診断する振動分光法に関する。
【００１０】
第二の態様において、本発明は、
ａ）血漿サンプルを受容する容器と、
ｂ）少なくとも１つのラマン分光計と、
ｃ）本発明による診断方法を実施する手段を備えたコンピュータシステムと
を備える、血漿サンプル分析のための装置に関する。
【００１１】
第三の態様において、本発明は、本発明による診断方法を実行するのに適したコードを含む、コンピュータプログラムに関する。
【００１２】
第四の態様において、本発明は、本発明によるコンピュータプログラムを含む、データ媒体に関する。
【００１３】
第五の態様において、本発明は、被検体のアルツハイマー病の治療に用いるためのアルツハイマー病の治療に適した療法に関し、本発明の方法により当該被検体が選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】約１２５６ｃｍ−１のバンドが現れるラマンスペクトル領域を示す図である。
【図２】ＡＤ患者と健康な患者との間の、約１２５６ｃｍ−１のバンドの強度の差を示す図である。
【図３】１２５６ｃｍ−１に現れるバンドの強度に基づくアルツハイマー病の診断に関連するＲＯＣ曲線。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の発明者らは、約１２５６ｃｍ−１のラマンバンドの強度の値が、アルツハイマー病患者を高い確率で分類可能な分光パラメータであることを見出した（実施例１参照）。
【００１６】
アルツハイマー病を診断する方法
第一の態様において、本発明は、
ａ）被検体の生体液または当該生体液由来のサンプルのラマンスペクトルにおける、約１２５６ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度値を決定する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた強度値を基準値と比較する工程と
を含んでなり、
前記基準値に対する前記ラマンバンド強度の値の増加が、被検体がアルツハイマー病に罹患していることを示すものとする、被検体のアルツハイマー病を診断する振動分光法に関する。
【００１７】
本明細書において「診断する」とは、被検体の可能な疾患を決定および／または特定しようとするプロセス、すなわち、診断手順、およびこのプロセスによって到達される所見、すなわち診断所見の両方を指す。そのため、これは、個体の状態を別の異なるカテゴリに分類する際に、なされるべき治療および予後に関する医学的判断を可能にする試みとみなすこともできる。当業者には理解されるように、アルツハイマー病の診断は、診断または評価される被検体の１００％にとって正しいとは限らないが、そうであることが好ましい。しかしながら、この用語は、被検体の統計学的に有意な部分がアルツハイマー病に罹患していると特定できることを必要とする。被検体が統計学的に有意であるか否かは、信頼区間の決定、ｐ値決定、スチューデントｔ検定、マン−ホイットニー検定等のさまざまな周知の統計学的評価ツールを用いて当業者がさらに熟考することなく判定することができる。詳細は、Ｄｏｗｄｙ  ａｎｄ  Ｗｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３に記載されている。好ましい信頼区間は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である。ｐ値は、好ましくは、０．０５、０．０１、０．００５、またはそれ以下である。
【００１８】
本明細書において「アルツハイマー病」または「ＡＤ」または「アルツハイマー」という用語は、臨床的には、進行性記憶障害、混乱、行動障害、自分自身をケアできないこと、漸進的な肉体の衰え、そして最終的には死に到る、老人斑、神経原線維のもつれ、および進行性ニューロン脱落を特徴とする特定の退行性脳疾患に関連する痴呆を指す。典型的には、ＡＤに罹患している患者は、ＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）基準：臨床認知症評価法（ＣＤＲ）＝１；ミニメンタルステート試験（ＭＭＳＥ）＝１６〜２４点、および側頭葉内側萎縮度（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩにより決定）＞３点（Ｓｃｈｅｌｔｅｎｓスケール）を用いて特定される。
【００１９】
本明細書において、「ＡＤ」の用語は、これに限定されないが、１９８４年のＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡアルツハイマー診断基準によって定義される以下の段階（ＭｃＫｈａｎｎら，１９８４，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３４：９３９−４４）を含む、疾患の全段階を含むことが意図される。
・確定ＡＤ：患者は、ほぼ確実なＡＤの基準を満たし、剖検または生検を介してＡＤの組織病理学的証拠を有する。
・プロバブルまたは前駆期ＡＤ：臨床および神経心理学的検査によって認知症が確定されている。さらに、認知障害は、進行性であり、かつ認知の２つ以上の領域で存在していなければならない。障害の発症が４０〜９０歳の間であり、最終的に、認知症候群を引き起こし得る他の疾患が不在でなくてはならない。
・ポッシブルまたは非前駆期ＡＤ：非定型発症、症候または進行を伴い、公知の病因のない認知症候群があるが、認知症を引き起こし得るいかなる併存症もその原因にはなっていないと考えられる。
【００２０】
さらに、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎは、２０１１年に診断基準を改定し、ＮＩＡ−ＡＡのアルツハイマー病基準（Ａｌｂｅｒｔら，２０１１，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｅｍｅｎｔ  ７：２７０−９；Ｊａｃｋら，２０１１，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  ７：２５７−６２；ＭｃＫｈａｎｎら，２０１１，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  ７：２６３−９；Ｓｐｅｒｌｉｎｇら，２０１１，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  ７：２８０−９２）にした。「ＡＤ」の用語は、これらの基準によって定義される段階も含むことを意図している。
【００２１】
本明細書において「振動分光法」は、分子レベルでの振動に基づく分子特性の分析に関する。特に、ラマンは、５０〜４，０００ｃｍ−１の範囲で有効な散乱／分散技術であり、入射光のシフト（ラマンシフト）を伴う。
【００２２】
「被検体」または「個体」または「動物」または「患者」という用語は、任意の被検体、特に哺乳動物被検体を含む。哺乳類被検体としては、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ、ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）、および動物園またはペット動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、蓄牛、乳牛等が挙げられる。好ましい実施形態において、被検体はヒトである。
【００２３】
第一の工程において、本発明の診断方法は、被検体の生体液または当該生体液由来のサンプルのラマンスペクトルにおける、約１２５６ｃｍ−１の周波数でのラマンバンドの強度値を決定することを含む。
【００２４】
本発明の範囲において、表現「ラマンスペクトル」は、６００〜３１００ｃｍ−１の間に含まれるスペクトル領域を含む波数の集合を指すが、スペクトル領域は、前述の当該ペクトル領域を含むならば、より広いものであってもよい。
【００２５】
本明細書において「生体液」の用語は、生体の身体由来の任意の体液または液体を指す。本発明の診断方法での使用に適したサンプルとしては、血液、血清、血漿、ＣＳＦ、唾液、歯肉溝滲出液、尿、精漿、涙液および乳頭液からなる群から選択される任意の体液が挙げられる。
【００２６】
本発明によれば、被検体からサンプルを採取してから、そのラマンスペクトルが決定される。
【００２７】
好ましい実施形態において、生体液サンプルは血漿である。別の好ましい実施形態において、生体液サンプルは血清である。
【００２８】
本発明において、「血漿」とは血液の液体成分を指し、血液の全体積の６０％に相当し、赤血球および白血球を含まない。血漿分画は、得るのが簡単なため、血小板分画より好ましく、その上、血小板凝集または破裂現象に起因して血小板を得ることの困難性がよく知られているという事実もある。
【００２９】
本発明は、実質的に血小板を含まない血漿で行うことができる。あるいは、別の態様において、多血小板血漿サンプルが好ましい。本発明で使用されるように、「多血小板血漿」とは、血小板が豊富な血漿を指し、一般に３００〜３５０，０００血小板／μＬ超を含む。多血小板血漿を得るために、現況技術で知られている種々の方法を使用することができる。種々の方法は、抗凝固剤を含んだ試験管に血液を採取すること、その血液を、血液が密度に応じてその基本成分へと分離するようにさまざまなプロトコルに従ってさまざまな遠心分離条件に供すること、多血小板血漿に対応する画分を選択することからなる。
【００３０】
本発明によれば、分析される血漿画分は、例えば、遠心濾過分画等の標準的な血液分画プロセスのいずれかによって既に得られているヒト血液サンプル（好ましくはヒト末梢血）から予め得ることができる。
【００３１】
好ましい実施形態において、本発明の診断方法は、被検体の生体液または当該生体液由来のサンプルのラマンスペクトルを記録することを含む工程から始まる。より好ましい実施形態において、生体液サンプルは、ラマンスペクトル記録の前に処理される。さらにより好ましい実施形態において、処理は脱水によって行われる。好ましい実施形態において、脱水は蒸発によって行われる。別の実施形態において、脱水は乾燥するまで行われる。
【００３２】
本明細書で使用される「生体液由来のサンプル」は、生体液の処理から得られる任意のサンプルに関する。好ましい実施形態において、生体液由来のサンプルは脱水生体液である。
【００３３】
本明細書で使用される「脱水生体液」は、水分の除去を示す生体液のサンプルに関する。好ましい実施形態において、水の除去が完了する。
【００３４】
別の好ましい実施形態において、脱水生体液は脱水血漿である。
【００３５】
別の好ましい実施形態において、サンプルは結晶化される。
【００３６】
好ましい実施形態において、脱水血漿は、ＣａＦ２もしくはＺｎＳｅ結晶または金属担体上に６〜１００μＬの量の血漿画分を広げ、１０〜２５℃、好ましくは１５〜２５℃の温度でそれを完全に蒸発乾固することを含むプロセスに従って調製される。
【００３７】
当業者であれば、サンプルの量は、例えばＣａＦ２もしくはＺｎＳｅ結晶または金属担体等の担体の種類に依存することを理解する。好ましい実施形態において、血漿画分の量は、６〜１４μＬまたは１０〜１００μＬである。より好ましい実施形態において、量は、１０〜２０μＬ、２０〜３０μＬ、３０〜４０μＬ、４０〜５０μＬ、５０〜６０μＬ、６０〜７０μＬ、７０〜８０μＬ、８０〜９０μＬ、または９０〜１００μＬである。さらにより好ましい実施形態において、血漿画分の量は１０μＬである。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、結晶または金属担体の表面は０．５〜２ｃｍ２、好ましくは１ｃｍ２である。
【００３９】
別の好ましい実施形態において、ＣａＦ２結晶が使用される。
【００４０】
本明細書において「ＣａＦ２結晶」は、３００°Ｋで３２２ｃｍ−１の一次ラマン線を有する立方晶系結晶に関する。これは、遠紫外から中赤外域での高い透過率、低屈折率、高い耐化学薬品性および高いレーザ損傷閾値を示す。
【００４１】
本明細書において「ＺｎＳｅ結晶」は、その極端に低いバルク損失、熱衝撃への高い耐性、および実質的にあらゆる環境での安定性故に、多くの光学用途において非常に有効で、容易に機械加工される、化学的に不活性で非吸湿性、かつ高純度の生成物に関する。
【００４２】
別の好ましい実施形態において、金属担体が使用され、好ましくは金属はＡｇ、ＡｕおよびＣｕである。表面の調製は、電気化学的粗面化、ナノ構造化基材の金属コーティング、または金属ナノ粒子の堆積によって行うことができる。
【００４３】
当該画分の量の蒸発乾固は、本発明の目的のためにサンプルの変化を観察することなく、１０〜２５℃の温度で行うことができる。より速いサンプル蒸発の目的のために、蒸発は好ましくは１５〜２５℃（両方の限界値を含む）で実施される。
【００４４】
一般的に、非限定的な方法で、非分画ヒト血液サンプルが最初に使用される場合、本発明のラマン分光分析に適した血液画分サンプル（好ましくは血漿サンプル）は、
ａ．通常使用される既知の遠心濾過血液分画プロセスのいずれかを用いて、先に入手したヒト末梢血サンプルから当該血液画分（好ましくは血漿画分）を得る工程と、
ｂ．ＣａＦ２もしくはＺｎＳｅ結晶または金属担体の０．５〜２ｃｍ２、好ましくは１ｃｍ２角の表面に血漿画分を広げる工程と、
ｃ．約１０μＬの先の画分の量を完全に蒸発乾固させて、１μｇの当該画分の乾燥固体残渣を得、当該画分量の蒸発は比較的低温、具体的には１０〜２５℃、より好ましくは１５〜２５℃で行われる（両方の限界値を含む）、工程と
を含むプロセスに従って、分光データを取得する前に調製することができる。
【００４５】
本明細書において「スペクトル値」という用語は、スペクトルから得ることができ、いくつかのスペクトルを比較するために使用することができる任意の測定可能なパラメータを指す。本発明では、スペクトル値は強度値である。
【００４６】
「強度値」という用語は、所与の波数におけるピークの強度を指す。
【００４７】
本発明の範囲内で、「ｃｍ−１で表される周波数値付近のバンド」とは、ｖｉ±１ｃｍ−１により決定される周波数範囲においてその強度が得られるラマン振動スペクトルにおけるバンドを指し、Ｘは少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０ｃｍ−１、またはそれ以上の可変周波数値である。好ましい実施形態において、Ｘは２の値を有する。したがって、１２５６ｃｍ−１の周波数値付近のバンドは、１２５４〜１２５８ｃｍ−１の範囲で得られる最大バンドを指す。本明細書では、当該用語は、「ｃｍ−１で表される周波数値に近いバンド」と呼ぶこともできる。バンド周波数における±Ｘｃｍ−１の増加は、周波数測定精度が異なるさまざまな分光計において測定され得る同じバンドの周波数範囲の振れ幅を定義するために示される。したがって、本明細書に現れる周波数値ｖｉは、使用される分光計に応じて当該周波数値に対して±Ｘｃｍ−１変動し得ることが理解されなければならない。
【００４８】
したがって、「ｃｍ−１で表される周波数値ｖｉ付近で得られるラマン強度」という用語は、ｖｉ±Ｘｃｍ−１により決定される周波数範囲に現れるバンドの最大で得られるラマンスペクトルの強度値を指すと理解される。Ｘが２の値を有する場合、１２５６ｃｍ−１の周波数値付近で得られるラマン強度は、１２５４ｃｍ−１〜１２５８ｃｍ−１の周波数範囲で得られる最大の強度値に対応する。別の実施形態において、約１２５６ｃｍ−１の周波数は、１２５２ｃｍ−１〜１２５８ｃｍ−１の周波数範囲と考えられる。
【００４９】
スペクトル値を得るために、本発明による方法は、スペクトルの正規化およびデコンボリューションを試みる。
【００５０】
当業者であれば、本発明の方法によれば、好ましい実施形態において、強度値を決定するために、ラマンスペクトルのベースラインを補正し、その全領域に関してスペクトルを正規化することを試みることが好ましいと理解するであろう。
【００５１】
本明細書において「正規化」という用語は、測定値間の系統的差異の排除を指す。ラマンスペクトル測定における系統的誤差の最も重要な原因の１つは、全強度変動から生じる。正規化は、強度値の差が、アッセイされるサンプルの量の差に起因するか、または使用されるサンプルの品質のばらつきに起因することを避け、ラマン測定における系統的変動の望ましくない原因をなくすため等に有用であり得る。
【００５２】
当業者であれば、本発明の方法がラマンスペクトルの正規化を企図することを理解するであろう。正規化は、ＡＤ患者とＡＤに罹患していない患者との間で変化しない任意のバンドを用いて行うことができる。好ましい実施形態において、対象となるピークのスペクトル値を完全なスペクトルの値で除することによって正規化を行うことができる。好ましくは、完全なスペクトル領域は、６００〜３１００ｃｍ−１の波長に含まれる。
【００５３】
強度値を得るために、上記の正規化値のいずれかが使用されることが理解されるであろう。基準値は、好ましくは、同じ正規化値を用いて正規化される。例えば、基準値が、対照患者（すなわち、ＡＤに罹患していない患者）における約１２５６ｃｍ−１の周波数のラマンバンドの強度である場合、対照スペクトルのバンドの強度は、試験中のサンプルのバンドの強度と同じように正規化して得られる必要がある。この場合、バンドの強度が増加するか否かを判断するために工程ｃ）で使用される基準値は、正規化された基準値である。好ましい実施形態において、基準値は、１２５２〜１２５８ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度である。別の好ましい実施形態において、基準値は、１２５４〜１２５８ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度である。
【００５４】
好ましい実施形態において、強度値は、ラマン曲線下の総面積に関してスペクトル値を正規化した後に決定される。
【００５５】
本明細書において「領域」という用語は、ピークを横切るベースラインを描き、ピークに囲まれた面積を測定することによって計算することができるスペクトルのピークによって画定される領域を指す。ベースラインは、通常、スペクトルのピーク前後の点に基づいて描かれる。一実施形態において、正規化に使用される領域は、６００〜３１００ｃｍ−１に含まれるスペクトル領域の面積である。
【００５６】
本発明において「デコンボリューション」という用語は、スペクトルがその構成要素に分解され、そうでなければマスクされたままの信号の識別を可能にする方法を指す。
【００５７】
本発明に記載の方法でより良好な結果を得るためには、問題のサンプルのラマンスペクトルを少なくとも部分的にマスクする、血液サンプルに含まれる生物学的物質によってスペクトル中に生成される蛍光信号を除去することが好都合である。使用されるマイクロ分光計を最適化することにより、可視スペクトルにおけるレーザ線を用いたラマン励起で生成されるラマンスペクトルの蛍光を最小限に抑えることができるが、蛍光抑制は１００％にはできない。したがって、例えば、１０６４ｎｍネオジム−ＹＡＧレーザ線のような、近赤外励起によるレーザ線を使用することによってスペクトルを得ることが好都合である。
【００５８】
好ましい実施形態において、ラマンスペクトルは、近赤外レーザ励起線７５０〜１４００ｎｍを使用して記録される。
【００５９】
本発明の方法の第二の工程は、工程ａ）で得られたラマンスペクトル値を対応する基準スペクトル値と比較することを含む。
【００６０】
本明細書において、基準スペクトル値は、サンプルから得られた値／データの基準として使用される実験室値に関する。基準値（または基準レベル）は、絶対値、相対値、上限および／もしくは下限を有する値、一連の値、平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）または対照もしくは基準値を参照して表現される値であってよい。基準値は、個々のサンプルから得られた値、例えば、試験サンプルから得られるが、前の時点で得られた値等に基づくことができる。基準値は、サンプル個体群で得られるかまたは試験されるサンプルを含むもしくは含まないサンプルプールで得られる値等の多数のサンプルに基づくことができる。さらにより好ましい実施形態において、基準サンプルがサンプルプールから得られるとき、サンプルは、試験中の被検体から得られたサンプルと同じ種類のサンプルである。すなわち、試験中の被検体のラマンスペクトルが血漿から得られた場合、基準値は、血漿サンプルのプールから得られたラマンスペクトルから得られる。
【００６１】
好ましい実施形態において、基準スペクトル値は、対照患者、より詳細には、アルツハイマー病に罹患していない被検体、より好ましくは健康な被検体から得られたサンプルのスペクトル値である。さらにより好ましい実施形態において、上述の対照患者から得られた基準サンプルが、試験中の被検体から得られたサンプルと同じ種類のサンプルである。すなわち、試験中の被検体のラマンスペクトルが血漿から得られた場合、基準値は、対照被検体の血漿サンプルから得られたラマンスペクトルから得られる。別の実施形態において、基準スペクトル値は、試験中の患者から得られるが、前の時点で、特に患者が疾患のいかなる症状も示さなかった時点で得られたサンプルのスペクトル値である。さらにより好ましい実施形態において、上述の前の時点で患者から得られた基準サンプルが、試験中の被検体から得られたサンプルと同じ種類のサンプルである。すなわち、試験中の被検体のラマンスペクトルが血漿から得られた場合、基準値は、前の時点の同じ被検体の血漿サンプルから得られたラマンスペクトルから得られる。
【００６２】
本発明の方法によれば、当該ラマンバンド強度の値の増加は、被検体がアルツハイマー病に罹患していることを示す。
【００６３】
ラマンバンド強度の値は、「増加した」とみなされ、対応する基準スペクトル値と比較した約１２５６ｃｍ−１のバンドのラマンバンド強度の値は、少なくとも１．５％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、またはそれ以上である。
【００６４】
血漿サンプル分析のための装置
別の態様において、本発明は、
ａ）血漿サンプルを受容する容器と、
ｂ）少なくとも１つのラマン分光計と、
ｃ）本発明による診断方法を実施する手段を備えたコンピュータシステムと
を備える血漿サンプル分析のための装置に関する。
【００６５】
ラマン分光計を形成する装置は、現況技術では、基本的にレーザおよびＣＣＤ（電荷結合素子）として知られている。機器は、１つの光源のみによって、または光学ヘッドに光を導く励起光ファイバに接続された２つ以上の交換可能な単色光源（例えば、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、Ａｒレーザおよびレーザダイオード）によって形成することができ、後者は、サンプル上に集光できる。同じ光学ヘッドを通って、収集光ファイバによって収集される、サンプルによって散乱した光は、空間的およびスペクトル的にこの光を分離するモノクロメータに導かれる。ＣＣＤは、モノクロメータによって回折された信号を検出し、散乱光光子をデジタル電気信号に変換し、スペクトルはコンピュータに転送される。
【００６６】
あるいは、分散型分光計の場合、光は、コリメート光学系を通して回折格子に導かれ、回折格子は、ＣＣＤにスペクトルを投影するために光を分散させる。
【００６７】
本発明の装置のコンピュータシステムの目的は、とりわけ、散乱ラマン信号の取得と、数学的処理を含むそれに続く分析とを制御することである。コンピュータシステムは、とりわけ、ＣＣＤのパラメータ、レーザビームの集束システムおよびその出力の制御も行う。コンピュータシステムはさらに、スペクトルのある程度の操作、例えば、とりわけ、ベースラインの補正、いくつかのスペクトルの比較、領域およびフーリエ変換の計算、分析されるサンプルのスペクトル値の基準スペクトル値との比較、アルツハイマー病に関連する血液サンプルとアルツハイマー病に関連する血液サンプルとの区別を可能にする値の多変量解析比較をさらに可能にすることができる。
【００６８】
別の特定の実施形態において、本発明の装置は、顕微鏡をさらに備える。別の好ましい実施形態において、本発明の装置は、光をウェブカメラおよびラマンヘッドの両方に向けることを可能にするビームスプリッタを有するビデオ顕微鏡をさらに備える。レーザを集束させ、ラマン光を平行にするために、顕微鏡の対物レンズが使用される。
【００６９】
本発明の診断方法の文脈において詳細に記載される用語ならびにその定義および詳細は、本発明のこの態様に等しく適用される。
【００７０】
コンピュータプログラムおよびデータ媒体
別の態様において、本発明は、本発明による診断方法を実行するのに適したコードを含むコンピュータプログラムに関する。
【００７１】
別の態様において、本発明は、本発明によるコンピュータプログラムを含むデータ媒体に関する。
【００７２】
別の態様において、本発明は、本発明による診断方法を実施する手段を備えたコンピュータシステムに関する。コンピュータシステムは、
（ａ）（ｉ）患者のサンプルに関するラマンスペクトルデータを受信すること、および（ｉｉ）患者を健康な被検体またはアルツハイマー病患者として、被検体のサンプルから得られたスペクトルと基準被検体のスペクトルとの同一性に基づいて割り当てることを含む方法を実施するコンピュータシステムの動作を制御するのに適した少なくとも１つのコンピュータプログラムを含む少なくとも１つのメモリと、
（ｂ）コンピュータプログラムを実行する少なくとも１つのプロセッサ
を備えることができる。
【００７３】
本発明の別の態様は、本発明の方法による工程を実行するコンピュータシステムを制御するためのコンピュータプログラムに関する。
【００７４】
コンピュータシステムは、特定の目的を有する１つまたは複数の汎用プロセッサ、ならびに揮発性および不揮発性のメモリデバイスを含む関連するメモリを含むことができる。
【００７５】
本発明のいくつかの実施形態において有用な機械で読み取り可能な物理記録媒体としては、任意の機械で読み取り可能な物理記録媒体、例えば、固体記憶装置（例えば、フラッシュメモリ）、機械で読み取り可能な磁気記録媒体および光学記録媒体、および他の持続性記録技術を用いたメモリを挙げることができる。いくつかの実施形態において、機械で読み取り可能な媒体は、コンピュータがコンピュータプログラムおよびデータにアクセス可能な任意の有形の媒体であってもよい。機械で読み取り可能な媒体としては、情報、例えば、機械で読み取り可能な命令、プログラムモジュール、プログラム、データ、データ構造およびデータベース情報を保存することができる任意の方法または技術で実施される書き換え可能または書き換え不能の有形の揮発性および不揮発性の媒体を挙げることができる。本発明のいくつかの実施形態において、機械で読み取り可能な媒体としては、限定されないが、ＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）、ＲＯＭ（リードオンリーメモリ）、ＥＰＲＯＭ（書き換え可能なプログラマブルリードオンリーメモリ）、ＥＥＰＲＯＭ（電気的に書き換え可能なプログラマブルリードオンリーメモリ）、フラッシュメモリまたは他のメモリ技術、ＣＤ−ＲＯＭ（コンパクトディスクリードオンリーメモリ）、ＤＶＤ（デジタルバーサタイルディスク）または他の光学記録媒体、磁気カセット、磁気テープ、磁気ディスク記憶装置または他の磁気記憶媒体、他の種類の揮発性および不揮発性のメモリ、ならびに上述の任意の適した組み合わせを含め、情報を保存するために使用することができ、機械で読み取り可能な任意の他の有形の媒体を挙げることができる。
【００７６】
本発明は、自律型コンピュータで、またはネットワークコンピュータシステムの一部として実行することができる。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態において、基準として使用するラマンスペクトルを使用し、電気的に、またはデジタルで記録し、登録し、検索することができる。
【００７８】
本発明のこの態様および他のすべての態様の実施形態において、システムは、基準データを決定モジュールにおいて決定されたスペクトルと比較する操作比較のために利用可能な種々のソフトウエアフォーマットおよびプログラムを使用することができる「比較モジュール」において、データを比較することができる。別の実施形態において、比較モジュールは、１つまたは複数の入力の配列の情報と、もう１つの基準データパターンとを比較するためにパターン認識技術を用いるように構成される。比較モジュールは、パターンを比較するために既存の市販または使い捨てのソフトウエアを使用するように構成でき、行われる特定のデータ比較のために最適化することができる。
【００７９】
いくつかの実施形態において、比較モジュールは、予め定義した基準によって、またはユーザが定義した基準によって、機械で読み取り可能な形態で処理可能な機械で読み取り可能な比較結果を提供し、表示モジュールを用いてユーザによって要求されるように保存し、アクセスすることができる比較結果に部分的に基づく内容を含む報告を提供する。いくつかの実施形態において、表示モジュールは、ユーザのための比較結果に部分的に基づく内容を表示することができ、この内容は、対象患者のサンプルから得られるスペクトルと、健康な被検体のスペクトルとを比較した結果の指標となる報告である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、表示モジュールは、エンドユーザのための比較結果に部分的に基づく報告または内容を表示することができ、この内容は、患者のスペクトルと基準スペクトルとを比較した結果の指標となる報告である。本発明のこの態様および他のすべての態様の実施形態において、比較モジュール、または本発明の任意の他のモジュールは、関係データベース管理システム、ワールドワイドウェブアプリケーション、ワールドワイドウェブサーバが動くオペレーションシステム（例えば、ＵＮＩＸ、Ｗｉｎｄｏｗｓ）を含んでいてもよい。ワールドワイドウェブアプリケーションは、データベース言語命令［例えば、標準クエリ言語（ＳＱＬ）命令］を作成するために必要な実行可能なコードを含んでいてもよい。
【００８１】
コンピュータの命令は、ソフトウエア、ファームウエアまたはハードウエアで実行されてもよく、情報処理システムのモジュールによって行われる任意の種類のプログラム化工程を含んでいてもよい。コンピュータシステムを、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）またはワイドエリアネットワーク（ＷＡＮ）に接続してもよい。
【００８２】
本発明のこの態様および他のすべての態様のいくつかの実施形態において、比較モジュールは、予め定義された基準またはユーザが定義した基準によって機械で読み取り可能な様式で処理可能な機械で読み取り可能なデータを与え、表示モジュールを用いてユーザによって要求されるように保存し、アクセスすることができる検索内容を提供する。
【００８３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、コンピュータ化システムは、表示モジュール、例えば、コンピュータモニタ、タッチスクリーンまたはビデオ表示システムを含むか、またはこれらに操作可能に接続してもよい。表示モジュールは、ユーザインタフェースの一部として、ユーザの指示をシステムユーザに提示することができ、ユーザがシステムの入力を見ることができ、このシステムは、ユーザに結果を示すことができる。コンピュータ化システムは、所望により、システムによって出力される情報の印刷複写物を製造するための印刷デバイスを含んでいてもよく、または印刷デバイスに操作可能に接続していてもよい。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態において、ワールドワイドウェブブラウザを使用し、ユーザが情報を入力するためにシステムと対話し、要求を作成し、検索した内容を示すことができるためのユーザインタフェースを提供できる。さらに、システムの種々の機能モジュールは、ユーザインタフェースを提供するためにウェブブラウザを用いるように構成できる。ウェブブラウザを用いることによって、ユーザは、データソース（例えば、データベース）からデータを検索するための要求を作成することができ、比較モジュールと対話し、比較およびパターンマッチングを行うことができる。ユーザは、システムと対話し、システムが本発明の方法を行うためにグラフィカルユーザインタフェースで従来から使用されるユーザインタフェース要素（例えば、ボタン、ドロップダウンメニュー、ディスプレイスメントライン等）を示し、クリックすることができる。ユーザウェブブラウザを用いて作成された要求は、ネットワークからウェブアプリケーションに送信され、作成したスペクトル、検索された内容に関連する関連情報を提供するために使用可能な１つ以上のデータベースに問い合わせを行うための要求を処理し、フォーマット化し、この情報を処理し、結果を作成することができる。
【００８５】
本発明の診断方法の文脈において詳細に記載される用語ならびにその定義および詳細は、本発明のこの態様に等しく適用される。
【００８６】
個別療法
別の態様において、本発明は、被検体のアルツハイマー病の治療に用いるためのアルツハイマー病の治療に適した療法に関し、本発明の方法により当該被検体が選択または診断される。
【００８７】
あるいは、本発明は、アルツハイマー病の治療に適した化合物を、当該化合物が必要な被検体に投与することを含む、被検体のアルツハイマー病を治療する方法に関し、本発明の方法により当該被検体が選択される。
【００８８】
あるいは、本発明は、アルツハイマー病の治療に適した化合物が必要な被検体の治療用薬剤の調製のための、当該化合物の使用に関し、本発明の方法により当該被検体が選択される。
【００８９】
本明細書において、「アルツハイマー病を治療するのに適した療法」という用語は、「アルツハイマー病を治療するのに適した化合物」とれてもよい。
【００９０】
「アルツハイマー病を治療するのに適した療法（化合物）」は、アルツハイマー病を治療することができる任意の薬物および治療、すなわち、ＡＤの症状を減らし、改善させ、またはなくすための治療を含む。
【００９１】
好ましい実施形態において、アルツハイマー病を治療するのに適した療法は、コリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、抗β−アミロイド免疫療法、γセクレターゼ阻害剤、および抗タウ療法からなる群から選択される。
【００９２】
「コリンエステラーゼ阻害剤」は、コリンエステラーゼまたはアンチコリンエステラーゼを阻害し、放出したアセチルコリンの破壊を防ぎ、それによって、その濃度を増加させ、神経伝達物質の効果を持続させる化学化合物を指す。２種のコリンエステラーゼは、アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣＨＥ）およびブチリルコリンエステラーゼ（ＢＣＨＥ）である。ヒトのコリンエステラーゼの全配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースの寄託番号Ｐ０６２７６を有する（２０１６年１月２０日）。
【００９３】
好ましい実施形態において、本発明により使用される化合物は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。
【００９４】
前臨床試験およびヒトにおけるいくつかの試験から、コリンエステラーゼの阻害が、ＡＤの発病に関与する基本的なプロセスに影響を与えるという証拠が存在する。例えば、アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）の阻害は、ＡＣｈＥアイソフォームの発現に影響を与え、ニコチン受容体の発現を増やすことができ、両方とも、ＡＤ患者の認知の向上と相関関係がある。ＡＣｈＥ阻害が、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の処理に影響を与え、Ａβ産生の妨害、Ａβ  １−４０およびＡβ  １−４２のレベルの変化、およびこのアミロイド前駆体タンパク質の可溶性形態の生成を含む機構によって、Ａβによって誘発される毒性を弱めることも示されている。したがって、非限定的な説明によって、軽度から中程度のＡＤの治療に適した療法は、とりわけ、コリンエステラーゼ阻害剤、例えば、Ｃｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、Ａｒｉｃｅｐｔ（ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスチグミン）、またはＲａｚａｄｉｎｅ（登録商標）（ガランタミン）である。中程度から重度のＡＤは、ＮＭＤＡアンタゴニスト受容体として作用するＮａｍｅｎｄａ（登録商標）（メマンチン）を用いて治療することができる。ＮＭＤＡアンタゴニストは、コリンエステラーゼ阻害剤とは異なる働きをするため、この両方の種類の薬剤を組み合わせて処方することができる。これらの薬剤は、ＡＤの症状が悪化するのを遅らせるか、または防ぐのに役立ち得る。本発明の療法としては、とりわけ、音楽療法、理学療法、精神運動性の教育、作業療法または動物を用いた療法がさらに挙げられる。
【００９５】
アルツハイマー病を治療するための３種類のコリンエステラーゼ阻害剤は、現在、世界的に販売されており、具体的には、ドネペジル、ガランタミンおよびリバスチグミンである。ドネペジル（１−ベンジル−４−［（５，６−ジメトキシ−１−インダノン）−２−イル］−メチル−ピペリジン）は、可逆性アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）阻害剤である。ガランタミン（［４ａＳ−（４ａα，６β，８ａＲ＊）］−４ａ，５，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−３−メトキシ−１１−メチル−６Ｈ−ベンゾフロ［３ａ，３，２−ｅｆ］ベンザアゼピン−６−オール）は、スノードロップ（Ｇａｌａｎｔｈｕｓ  ｎｉｖａｌｉｓ）から単離されたアルカロイドである。ガランタミンは、非常に選択的で、可逆性で、競争型のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。リバスチグミン（（Ｓ）−Ｎ−エチル−３−［１−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチル−フェニル−カルバメート）は、可逆性の非競争型のアセチルコリンエステラーゼおよびブチリルコリンエステラーゼ阻害剤である。
【００９６】
他のコリンエステラーゼ阻害剤、具体的には、塩酸タクリン、（Ｃｌ−９７０、ＴＨＡ．ＨＣｌ）、フペルジンＡ、アコチアミド、ジメボリン、ＤＥＢＩＯ  ９９０２、ＩＮ  １０１、酒石酸フェンセリン、Ｒ−フェンセリン、塩酸スタコフィリン（Ｓ−９９７７、Ｓ−９９７７−２）、ＮＰ−６１、ビスノルシムセリン、ＣＯＬ−２０４、ＳＰＨ  １３７１、ＳＰＨ  １３７３、ＳＰＨ  １３７５、ＳＰ  ０４、ＣＭ  ２４３３、メトリホナート、７−メトキシタクリン（７  ＭＥＯＴＡ）、Ｐ  １１１４９、アリスガシン、ＦＲ  １５２５５８、ＨＵＰ  １３、イソバニフペルジンＡ（ＩＶＨＡ）、ＭＨＰ  １３３、ＮＰ  ７５５７、Ｐ  １０３５８、Ｐ  １１０１２、サリチル酸フィゾスチグミン、マレイン酸ベルナクリン（ＨＰ−０２９、Ｐ８３−６０２９Ａ）、酒石酸エパスチグミン（Ｌ−６９３４８７）、イピダクリン、ザナペジル、ガンスチグミン、マレイン酸イコペジル（ＣＰ−１１８９５４、ＣＰ−１１８９５４−１１）、ＫＷ  ５０９２、キロスチグミン（ＨＰ−２９０、ＮＸＸ−０６６）、ＳＭ  １０８８８、Ｔ  ８２、ＴＡＫ  ８０２、ジフロシロンＭＤＬ−７３７４５）、ＢＧＣ  ２０１２５９、ＣＨＦ  ２０６０、Ｃｌ  １００２、Ｅ  ２０３０、ＥＲ  １２７５２８、ＥＴ  １４２、Ｆ  ３７９６、フプリンＸ、ＭＦ  ２４７、ＭＦ  ２６８酒石酸水素塩、ＭＦ  ８６１５、Ｐ  ２６、ＰＤ  １４２０１２、ＲＯ  ４６５９３４、ＳＳ  ２０、チアトルセリン、酒石酸トルセリン、ＵＲ  １８２７（ＡＤＩＳ  Ｒ＆Ｄ  Ｉｎｓｉｇｈｔ、２５／０２／２０１０）のための臨床治験および／または前臨床治験も行われ、上述のものを本発明のＡＤを治療するために使用することができる。
【００９７】
コリンエステラーゼを阻害するためのさらなる化合物、例えば、エドロホニウム、デメカリウム、アンベノニウム、ネオスチグミンブロミド、デヒドロエボジアミンクロリド、エセロリン、インペラトリン、スコポレチン（ＳＣＴ）、フペルジンＡ（Ｈｕｐ  Ａ）、酒石酸ヘプチルスチグミン（ＭＦ−２０１）、マレイン酸スロナクリン（ＨＰ−１２８）、ＵＣＢ−１  １０５６、ベルベリンヨージド、ノルピリドスチグミン、キロスチグミン（ＨＰ−２９０、ＮＸＸ−０６６）、ＴＨＢ−０１３、ＰＤ−１４２６７６、酒石酸テレスチグミン（ＣＨＦ−２０６０）、チアシムセリン、ＭＦ−８６１５、ＭＦ−２６８酒石酸水素塩、塩酸アンセクリン（ＫＡ−６７２．ＨＣｌ）、塩酸エンサクリン、マレイン酸イコペジル（ＣＰ−１１８９５４）、サリチル酸エゼリン、サリチル酸フィゾスチグミン、ＪＷＳ−ＵＳＣ−７５ＩＸ、Ｐ１１４６７、Ｐ−１０３５８、ビス（７）−タクリン、ＨＭＲ−２４２０、ＣＰ−１２６９９８、ＴＶ−３２７９、ＭＳＦ、ＴＨＡ−Ｃ８、スベルゴルグ酸、スベロゴージン（ｓｕｂｅｒｏｇｏｒｇｉｎ）、ＳＰＨ−１２８６、フペルジンＢ（Ｈｕｐ  Ｂ）、ピリドスチグミンブロミド（Ｒｏ−１−５１３０）、フプリンＹ、コロナリジン、ＲＳ−１２３３、コボフェノールＡ、ビス（１２）−フペリン、ＲＳ−１２５９、ＩＴＨ−４０１２、ＴＫ−１９、Ｔ−８１、ＴＨ−１７１、ＴＨ−１８５、ジスチグミンブロミド（ＢＣ−５１）、（−）−９−デヒドロガランタミニウムブロミド、メモキン、スコポレチン７−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＮＳＣ−４０４５６０）、スコポリン（ＳＣＮ）、スコポロシド、ＢＷ−２８４ｃ５１、ウィタフェリンＡ（ＮＳＣ−１０１０８８）、ウィタフェリン（ＮＳＣ−２７３７５７）、（＋）−コリノリン、コリノリン、（Ｓ）−（−）−オキシポイセダニン、オキシポイセダニン、（−）−ボアカンギン、カルボメトキシイボガイン、ボアカンギン、ジェクトール、フロロフコフロエコール（ＰＦＦ）、フロロフコフロエコールＡ、（−）−３−０−アセチルスペクタリン塩酸塩およびラフィアサポニン（ｒｈａｐｈｉａｓａｐｏｎｉｎ）１、またはこれらの塩、遊離塩基、ラセミ体またはエナンチオマーが記載されており、本発明に従ってＡＤを治療するために使用することができる。
【００９８】
本発明において、「ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト」は、一次侵害受容線維（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｆｆｅｒｅｎｔ  ｆｉｂｅｒ）の多シナプス性放電によって作られる反応を阻害する化学化合物を指す。アンタゴニストの中でも、メマンチン（３，５−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン−１−アミンまたは３，５−ジメチルアダマンタン−１−アミン）が顕著である。
【００９９】
他のＮＭＤＡアンタゴニストは、ニモジピン（３−（２−メトキシエチル）５−プロパン−２−イル  ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート）、ジゾシルピン、ＡＰ−５（２−アミノ−５−ホスホノペンタン酸）、ＡＰ−７（２−アミノ−７−ホスホノヘプタン酸）、ＣＨＦ  ３３８１（ｎ−（２−インダニル）−グリシンアミド塩酸塩］）およびイフェンプロジル（４−［２−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）−１−ヒドロキシプロピル］フェノール）であり、本発明に従ってＡＤを治療するために使用することができる。
【０１００】
本発明において、「抗β−アミロイド免疫療法」は、β−アミロイド蓄積によって引き起こされる損傷を遅らせるか、または止めるための免疫系を用いた療法を指す。当該免疫療法は、抗β−アミロイド抗体の投与を含む。本発明の治療に有用な抗β−アミロイド抗体としては、アミロイド斑を直接的に破壊するもの（ミクログリアは、免疫化によって刺激され、既に以前に生成していたアミロイド斑を貪食する）、アミロイドを捕捉するもの（末梢血内での抗原抗体複合体の生成によって、脳から出たアミロイドを捕捉し、沈着を防ぐ）、または凝集を阻害するもの（抗原抗体複合体の生成によって、アミロイドが老人斑で凝集するのを防ぐ）が挙げられる。あるいは、抗β−アミロイド免疫療法は、１種類または数種類のβ−アミロイドペプチド（例えば、Ａβ（１−５）、Ａβ（１−６）、Ａβ（１−１２）、Ａβ（１３−２８）、Ａβ（２５−３５）、Ａβ（３５−４２）、Ａβ（３３−４２）およびＡβ（３３−４０））を含む免疫原性組成物の使用を含む（Ａβ（Ｘ−Ｙ）という表現は、Ｙ位のアミノ酸に対してＸ位のアミノ酸からなるβ−アミロイドペプチドから誘導されるペプチドを指す）。β−アミロイドペプチドを、接合体（例えば、ＫＬＨまたはアルブミンに対して接合した）形態、またはアジュバント（例えば、Ｆｒｅｕｎｄの完全アジュバント、Ｆｒｅｕｎｄの不完全アジュバント、ＱＳ２１、水酸化アルミニウムゲル、ＭＦ５９、リン酸カルシウム、リポシン、サポニン、スクアレン、Ｌ１２１、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ中のモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、ポリソルベート８０、コレラ毒素（ＣＴ）、ＬＴＫおよびＬＴＫ６３）を含む組成物の形態で投与してもよい。例示的実施例として、本発明で有用なワクチンは、ヒトβ−アミロイドタンパク質の人工複製物であるβＡ４２からなるＡＮ−１９７２ワクチンであり、注射すると、免疫系を刺激し、病気のげっ歯類の脳から異常な沈着物が除去される。これにより、老人斑に付着する抗体の生成を刺激し、免疫系の細胞成分（ミクログリア、アストロサイト）によって後に消化される。
【０１０１】
あるいは、γセクレターゼ阻害剤を使用することが可能であり、γセクレターゼは、βアミロイド合成に関与する酵素である。
【０１０２】
本明細書において化合物に使用する「γセクレターゼ阻害剤」は、βアミロイド合成に関与する酵素であるγセクレターゼを阻害する。本発明に有用なγセクレターゼ阻害剤は、とりわけ、ＬＹ−４５０１３９（ＣＡＳ番号４２５３８６−６０−３）であり、Ｓｅｍａｇａｃｅｓｔａｔ、ＤＡＰＴ（ＣＡＳ番号２０８２５５−８０−５）、ＣＴＳ−２１１６６またはＭＫ  ８９３１とも呼ばれる。
【０１０３】
「抗タウ療法」は、細胞外斑に対して抗アミロイドβ免疫療法と類似している。このような療法としては、タウキナーゼの阻害、微小管安定性を向上させるためのホスファターゼ活性の増強、タウの過剰リン酸化の変化または阻止、タウ凝集および線維形成の減少または阻害が挙げられる。好ましい実施形態において、化合物は抗タウ抗体、例えば、Ｙａｎａｍａｎｄｒａ  Ｋ．ら，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌｕｍｅ  ２，Ｉｓｓｕｅ  ３，ｐａｇｅｓ  ２７８−２８８，Ｍａｒｃｈ  ２０１５に開示されたものである。
【０１０４】
本発明の診断方法の文脈において詳細に記載される用語ならびにその定義および詳細は、本発明のこの態様に等しく適用される。
【実施例】
【０１０５】
本発明は、本発明の範囲の非限定的な説明によって与えられる以下の実施例に基づき、以下に説明する。
【０１０６】
実施例１
サンプル調製
血漿サンプルは、血漿をＣａＦ２の１ｃｍ２角の表面に広げた後、ラマン分光法によって分析した。わずか２分後にサンプルは乾燥し、分析の準備がなされた。
【０１０７】
ラマン分光法
ラマン分光法は、７８５ｎｍのレーザを照射されるＢＷＳ４６５−７８５Ｓラマン分光計を用いて行った。検出は、２０４８画素の線形ＣＣＤおよびラマンプローブヘッドを用いて行った。スペクトル分解能は９１２ｎｍで４．５ｃｍ−１であり、分光計はＢＡＣ  １５１Ｂビデオ顕微鏡に光ファイバで接続されている。ＣＦＩ  ＬＵ  Ｐｌａｎ  ＦＬＵＯＲ  ＥＰＩ  １００Ｘ  Ｎｉｋｏｎ対物レンズを使用し、直径２６μｍのレーザスポットを可能にした。サンプルへの出力は、血漿が熱損傷しないように制御された。スペクトルは、ＮＩＳＴ  ＳＲＭ２２４１標準を用いて較正した。
【０１０８】
結果
ヨーロッパ各地の１４の異なる施設が関与する進行中の多施設共同研究では、２５０人の患者サンプルで詳細なラマン試験が実施された。分析から得られたラマンスペクトルを用いて、本発明者らは、対象となるスペクトル領域内のすべてのスペクトル特徴を得るために、スペクトルの正規化およびデコンボリューションを行った（図１）。
【０１０９】
分光パラメータに基づく患者の分類は重要であることが判明している。図２は、ＡＤと健康な患者との間の約１２５６ｃｍ−１のバンドの強度の差を示す。
【０１１０】
高い確率でアルツハイマー病患者の分類を可能にする分光パラメータは、約１２５６ｃｍ−１の周波数におけるラマンバンドの強度値である（図３）。
【図１】
2019526809.tif 000003
【図２】
2019526809.tif 000004
【図３】
2019526809.tif 000005
【国際調査報告】
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2019526809.tif 000008
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