(57)【要約】  本発明は、一次アプタマアプタマー及び二次アプタマーを捕捉及び／又は検出するためのアプタマーベースのアッセイ、並びにそのような一次アプタマアプタマー及び二次アプタマーを含む組成物に関する。そこでは、分析物は、抗体に対して限られた相互に非競合的エピトープを提供する、すなわち、一次抗体及び二次抗体又は一次アプタマー及び二次アプタマーを使用する非競合サンドイッチアッセイにおいて測定する能力が限定された小分子を含む。
2019519773.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
興味対象の分析物の存在及び／又は量についてサンプルを試験するためのアッセイであって、前記サンプルの少なくとも一部を
（１）前記分析物に結合するコア配列を含む一次アプタマー、及び
（２）前記一次アプタマーの少なくとも一部に相補的である抗アプタマー、
の有効量と接触させることを含み、
前記一次アプタマー及び／又は抗アプタマーが、前記一次アプタマー及び抗アプタマーが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出する検出可能な部分（単数又は複数）を含み；且つ、
前記分析物に結合した一次アプタマーは、その抗アプタマーに結合しない、
アッセイ。
【請求項２】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３】
前記抗アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項１又は２に記載のアッセイ。
【請求項４】
前記抗アプタマーが前記一次アプタマーの少なくとも８５％に相補的である、請求項１，２又は３に記載のアッセイ。
【請求項５】
前記抗アプタマーが前記一次アプタマーの少なくとも９５％に相補的である、請求項４に記載のアッセイ。
【請求項６】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、及びエピネフリンからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項７】
サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、一次アプタマー、及び前記一次アプタマーの少なくとも一部に相補的である抗アプタマー、の有効量と接触させるステップであって、前記一次アプタマー及び／又は抗アプタマーは、ターゲット分析物が存在しなかった場合、前記一次アプタマーと抗アプタマーとの間の二本鎖形成を可能にする条件下で、分析物に結合した一次アプタマーの量の検出及び／又は測定することを可能にする部分を含む、ステップと；
（ｉｉ）抗アプタマーに結合していない一次アプタマーの量を検出し、且つ、場合によっては定量化するステップと；
を含む方法。
【請求項８】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも８５％に相補的である、請求項７，８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも９５％に相補的である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項７〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）蛍光標識を含む一次アプタマー、及び
（ｂ）分析物が存在しなかった場合、一次アプタマーと抗アプタマーとの間の二本鎖形成が生じることを可能にする条件下で、一次アプタマーと抗アプタマーとが二本鎖で一緒に結合されている場合、前記蛍光標識の蛍光を消光させる部分を含む抗アプタマー、
の有効量と接触させるステップと；
（ｉｉ）蛍光の量を検出し、且つ、場合によっては定量化するステップと；
を含む方法。
【請求項１４】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも８５％に相補的である、請求項１３，１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも９５％に相補的である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項１３〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
興味対象の分析物に結合する一次アプタマーと、前記一次アプタマーの少なくとも一部に相補的である抗アプタマーとを含むキット。
【請求項２０】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
前記抗アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項１９又は２０に記載のキット。
【請求項２２】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも８５％に相補的である、請求項１９，２０又は２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記抗アプタマーが、前記一次アプタマーの少なくとも９５％に相補的である、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項１９〜２３のいずれかに記載のキット。
【請求項２５】
サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）前記分析物に結合するコア配列と、センサーオリゴヌクレオチドに相補的な部分とを含む一次アプタマー、
（ｂ）センサーオリゴヌクレオチド、及び場合によって
（ｃ）ｃｏｍｐオリゴヌクレオチド、
の有効量と接触させるステップであって、そのうちの１つ以上は、前記一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドが互いに結合しているかどうか、又は一次アプタマーが分析物に結合しているかどうかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）に結合しているステップ、
を含む方法。
【請求項２６】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記センサーオリゴヌクレオチドがクエンチャー部分を含む、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項２５、２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
興味対象の分析物に結合する一次アプタマーと、前記一次アプタマーの一部に相補的であるセンサーオリゴヌクレオチドとを含むキット。
【請求項３０】
ｃｏｍｐオリゴヌクレオチドをさらに含む、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項２９又は３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記センサーオリゴヌクレオチドがクエンチャー部分を含む、請求項２９，３０又は３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項２９〜３２のいずれかに記載のキット。
【請求項３４】
サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）前記分析物に結合するコア配列と、一次アプタマーが分析物に結合している場合、二次「サンドイッチ」アプタマーに結合する部分とを含む一次アプタマー、及び
（ｂ）二次「サンドイッチ」アプタマーであって、そのうちの１つ以上は、前記一次アプタマー及び二次「サンドイッチ」アプタマーが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）に結合している、二次「サンドイッチ」アプタマー、
の有効量と接触させるステップ、
を含む方法。
【請求項３５】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記二次「サンドイッチ」アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項３４，３５又は３６に記載の方法。
【請求項３８】
興味対象の分析物に結合する一次アプタマーと、分析物に結合した一次アプタマーに結合する二次「サンドイッチ」アプタマーとを含むキット。
【請求項３９】
前記一次アプタマーが蛍光標識を含む、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
前記二次「サンドイッチ」アプタマーがクエンチャー部分を含む、請求項３８又は３９に記載のキット。
【請求項４１】
前記分析物が、グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウム、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン、及びバソプレッシンからなる群から選択される、請求項３８〜４０のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権主張
この特許出願は、いずれも２０１６年６月３日に出願された米国仮出願第６２／３４５，６４１号及び第６２／３４５，６９７号並びに２０１６年６月６日に出願された米国仮出願第６２／３４６，３７４号に対する優先権を主張し、これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
助成金に関する情報
アメリカ国立衛生研究所から授与された認可番号ＲＧＭ１０４９６０及びアメリカ国立科学財団から授与されたＣＣＦ１５１８７１５を受けて、本発明は、政府支援によってなされたものである。政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列リストを含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１７年７月１２日に作成されたこのＡＳＣＩＩコピーは、０７００５０−５９５３＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは８９，３６３バイトである。
【０００４】
１．序説
本発明は、限られた相互に非競合的なエピトープを抗体に提供する、及びしたがって従来の抗体サンドイッチ型アッセイを用いて検出又は測定することは困難である小分子を包含する分析物を、捕捉及び／又は検出するアプタマーベースのアッセイに関するものである。
【背景技術】
【０００５】
２．発明の背景
非競合サンドイッチアッセイは、分析物を捕捉し、次いで検出するために２つの異なる結合要素を利用する（１−５）。例えば、サンドイッチアッセイフォーマットの典型的な例は、プレート上の酵素結合免疫吸着剤アッセイ（ＥＬＩＳＡ）であり、そこでは、標的分析物（例えば、タンパク質）に向けられた１つの抗体（捕捉抗体）を固体支持体（例えばプレート）に結合させ、前記分析物を結合させ、及び次いで検出可能な部分を有する第２の抗体（「検出抗体」）が導入され、それは捕捉された分析物上の異なる部位に結合する。過剰の試薬の存在下では、典型的には、別の結合部位が分析物上に存在するため、これらのアッセイは、競合アッセイよりも高感度であり得、シグナルが増加するにつれてリガンドを検出し、低ノイズを有することができる。サンドイッチ原理はまた、非特異的相互作用を最小にするより厳しい洗浄プロトコルを可能にする。標的分析物と相互作用する２つ以上の結合要素の原理（すなわち、「サンドイッチ」）は、ラテラルフローアッセイ又はラテックス−ビーズ凝集アッセイのようなＥＬＩＳＡ以外の他のアッセイでも使用される。
【０００６】
サンドイッチ法は、小さすぎて一度に２つの抗体に結合することができないか（例えば、ステロイド又はカテコールアミン、又はバソプレッシンなどの均一な(even)いくつかの小さなペプチド）、又は非免疫原性である（例えば、フェニルアラニン又はグルコース）小さな検体では問題になる。小分子に対する抗体が利用可能である場合、いくつかの特異な(idiosyncratic)アプローチ（６−９）は小分子に対してＥＬＩＳＡ様アッセイを生成した。
【０００７】
アプタマーは、小分子に結合することができるオリゴヌクレオチドベースの受容体である（９−１５）。アプタマーは従来のサンドイッチアッセイにおいて以前から使用されてきたが、従来のサンドイッチアッセイは分析物中の１より多い結合部位の利用可能性に依存する。したがって、複数のエピトープの欠如に起因する問題を克服する小分子を検出するための手段が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
３．発明の概要
本発明は、抗体ベースのアッセイに適していない可能性のある分析物を捕捉して検出するためのアプタマーベースのアッセイに関する。３つの異なる例示的なアッセイ、並びにコア配列及び操作配列を含む様々なアプタマーが提供され、ここで、前記操作配列は、使用されるアッセイに依存して変化し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
実施形態の第1セットは、興味対象の分析物の存在及び／又は量について試験されるサンプルが、
（１）前記分析物に結合するコア配列を含む一次アプタマー、及び
（２）前記一次アプタマーの少なくとも一部に相補的である「抗アプタマー」、
の有効量と接触させる、「抗アプタマーアッセイ」であって、
前記一次アプタマー及び／又は抗アプタマーが、前記一次アプタマー及び抗アプタマーが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出する検出可能な部分（単数又は複数）を含み；且つ、
前記分析物に結合した一次アプタマーは、抗アプタマーに結合しない、
「抗アプタマーアッセイ」を提供する。前記分析物は、一次アプタマーと結合することについて抗アプタマーと競合し、それにより、結合した（又は結合が解けている(unbound)）抗アプタマーの量は、存在する分析物の量と相関する。
【００１０】
実施形態の第２セットは、興味対象の分析物の存在及び／又は量について試験されるサンプルが、
（１）前記分析物に結合するコア配列と、構造スイッチングする「センサーオリゴヌクレオチド」に相補的である少なくとも１部分とを含む一次アプタマー；
（２）場合によってはｃｏｍｐオリゴヌクレオチド(ｃｏｍｐは相補的を意味する)に相補的な部分をさらに含む、場合によっては固体支持体に結合されたセンサーオリゴヌクレオチド；
の有効量と接触させる「擬似サンドイッチアッセイ」であって、
前記一次アプタマー及び／又はセンサーオリゴヌクレオチド及び／又はｃｏｍｐオリゴヌクレオチドは、前記一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）を含み、且つ、
前記一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドは、前記一次アプタマーが分析物に結合したときに、検出可能に解離する部分的に二重らせんを形成するか、又は形成しない、
「擬似サンドイッチアッセイ」を提供する。例えば、試験サンプルは、一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチド及びｃｏｍｐオリゴヌクレオチドからなる複合体の有効量に添加することができる。前記複合体から放出される一次アプタマーの量は、前記試験サンプル中の分析物の量と相関する（そして前記ｃｏｍｐ及びセンサーオリゴヌクレオチドは、少なくとも部分的に二本鎖構造を形成する）。更なる一例として、限定するものではないが、前記複合体は、前記試験サンプルが塗布された固体支持体に連結されてよく、次に放出された前記一次アプタマーを検出することができる。より具体的な非限定的な例として、前記センサーオリゴヌクレオチドを固体支持体に連結し、且つ、一次アプタマーと複合体化させ、次いで得られた複合体を試験サンプル、及び検出された、例えば前記支持体から洗い流すされた、放出された一次アプタマーの量と接触させることができる。
【００１１】
実施形態の第３のセットは、興味対象の分析物の存在及び／又は量について試験されるサンプルが、
（１）前記分析物に結合するコア配列を含む一次アプタマー、並びにそれが分析物に結合した場合に二次アプタマーに結合する少なくとも一部分と、
（ｉｉ）三元複合体（いわゆる「サンドイッチ」）を形成するため、前記一次アプタマーが分析物に結合している限り、一次アプタマーに結合するサンドイッチアプタマー（本明細書では「二次アプタマー」とも呼ばれる）と、
の有効量と接触させる「サンドイッチアッセイ」であって、
前記一次アプタマー及び／又はサンドイッチアプタマーは、前記一次アプタマー及びサンドイッチオリゴヌクレオチドが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）を含む、
「サンドイッチアッセイ」を提供する。例えば、試験サンプルは、一次アプタマー及びサンドイッチアプタマーの有効量に添加することができ、及び次いで一次アプタマー／サンドイッチアプタマー複合体の量、又は結合が解けた(unbound)一次アプタマー若しくはサンドイッチアプタマーの量、を検出することができる。
【００１２】
本明細書ではまた、コンセンサスコア配列、コア配列、及び興味対象の一次アプタマーに結合することができる一次アプタマーも提供される。グルコース、ヒドロコルチゾン、フェニルアラニン、デヒドロイソアンドロステロン、デオキシコルチゾン、テストステロン、アルドステロン、ドーパミン、スフィンゴシン−１−リン酸、セロトニン、メラトニン、チロシン、トブラマイシン、アミカシン、メチレンブルー、アンモニウムイオン、ボロン酸、エピネフリン、クレアチニン及びバソプレッシンを包含する。
【００１３】
さらに、関連する抗アプタマー、センサー、ｃｏｍｐ及びサンドイッチアプタマー／オリゴヌクレオチドが提供される。
【００１４】
さらなる実施形態は、前述の一次アプタマー及び／又はオリゴヌクレオチドを含むキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
図面の簡単な説明
【図１Ａ−Ｇ】一次アプタマー（短い形態）及び対応する標的分析物の構造を表す。（Ａ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２の部分配列(subsequence)）及びそのターゲット分析物、デオキシコルチコステロン２１グルコシド（「ＤＯＧ」）；（Ｂ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３）及びそのターゲット分析物、アルドステロン（「ＡＬＤＳ」）；（Ｃ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の部分配列）及びそのターゲット分析物、コルチゾン（「ＣＳ」）；（Ｄ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３の部分配列）及びそのターゲット分析物、テストステロン（「ＴＥＳ」）；（Ｅ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）及びそのターゲット分析物、Ｐｈｅ−ＣｐＲｈ；（Ｆ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）及びそのターゲット分析物、Ｌ−フェニルアラニン；（Ｇ）一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の部分配列）及びそのターゲット分析物、グルコース。
【図２Ａ−Ｃ】「抗アプタマーアッセイ」の設計原理を表す。（Ａ）蛍光標識（例えばＦ＝フルオレセイン）で標識された一次アプタマー（別名「アプタマー」）及びクエンチャー（例えば、Ｄ＝ダブシル(dabcyl)クエンチャー）で標識されたその「補体(complement)」オリゴヌクレオチド（別名「抗アプタマー」）の有効量は、ハイブリダイズして二本鎖(duplex)を形成することができる。前記アプタマー上の前記標識の蛍光は、二本鎖形成時に消光される。（Ｂ）ターゲット分析物の存在下で、一次アプタマーは、その補体抗アプタマーの代わりに分析物に結合し、且つ、その標識の蛍光は消光されない。（Ｃ）は、非加熱サンプル中のターゲット分析物ＤＯＧの濃度が増加するにつれて蛍光の増加を示すが、加熱サンプル中には示されない（加熱が分析物／アプタマー結合を妨害するため）。
【図３Ａ−Ｌ】「短い形態(short-form)」の一次アプタマーを用いる種々のターゲット分析物に対する抗アプタマーアッセイの結果の例。（Ａ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（「ＤＯＧ」）のための一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２）及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）は、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０により概略的に示される）。ＤＯＧの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｂ）  （Ａ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１比は、０〜１００μＭのＤＯＧ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。（Ｃ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたアルドステロン（「ＡＬＤＳ」）の一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３）及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマーは、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１により概略的に示される）。ＡＬＤＳの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｄ）  （Ｃ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１比は、０〜１００μＭのＡＬＤＳ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。（Ｅ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたコルチゾール（「ＣＳ」）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４）のための一次アプタマー及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマーは、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２により概略的に示される）。ＣＳの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｆ）  （Ｅ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１０比は、０〜１２５μＭのＣＳ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。（Ｇ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたテストステロン（「ＴＥＳ」）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５）のための一次アプタマー及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマーは、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３により概略的に示される）。ＴＥＳの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｈ）  （Ｇ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１比は、０〜１００μＭのＣＳ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。（Ｉ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたＰｈｅ−ＣｐＲｈ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）のための一次アプタマー及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマーは、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４により概略的に示される）。ＤＯＳの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｊ）  （Ｉ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１比は、０〜１００μＭのＰｈｅ−Ｃ��Ｒｈ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。（Ｋ）蛍光標識（例えば、Ｆ＝フルオレセイン）に連結されたフェニルアラニン（「Ｐｈｅ」）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）のための一次アプタマー及びクエンチャー（例えばＤ＝ダブシルクエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマーは、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５により概略的に示される）。Ｐｈｅの存在下では二本鎖形成が少なくなり、且つ、蛍光シグナルが増加する。（Ｌ）  （Ｋ）の一次アプタマー及び抗アプタマーの１：１比は、０〜２ｍＭのＰｈｅ濃度の増加と組み合わされる。グラフは、経時的な蛍光を示す。これらの結果は、前記アプタマー及び抗アプタマー鎖のハイブリダイゼーションに対するターゲット分析物−濃度依存的効果を実証する。
【図４Ａ】図４Ａ−Ｃは、アプタマー／抗アプタマー（短い形態）がプレートベースのアッセイフォーマットをもたらすことを示す。シグナルは、ＴＭＢとＨＲＰタグされた抗アプタマー相補体(complement)との間の反応に由来する。（Ａ）  ＤＯＧ：  １μＭ  ＤＯＧ−アプタマー及びＤＯＧターゲットの溶液に３０分間曝露された抗アプタマーコートプレート。
【図４Ｂ】（Ｂ）  グルコース：  ０．２μＭの抗アプタマーに１０分間曝露され、次いで、ストレプトアビジンコートプレート上に「プルダウンされた」、２μＭグルコースアプタマー及びグルコースターゲットの溶液。
【図４Ｃ】（Ｃ）  フェニルアラニン：  ０．２μＭの抗アプタマーに５分間曝露され、次いで、ストレプトアビジンコートプレート上に「プルダウンされた」、１μＭ  Ｐｈｅアプタマー及びフェニルアラニンターゲットの溶液。
【図５Ａ】図５Ａ−Ｆは、「長い形態(long-form)」の一次アプタマーを用いた様々なターゲット分析物に対する抗アプタマーアッセイの結果の例を示す。（Ａ）  蛍光標識（例えば、ＦＡＭ＝フルオレセイン）に連結されたデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（「ＤＯＧ」）のための一次アプタマーの長い形態（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２及び１２を含むＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）、及びクエンチャー（例えば、ＱＦＢｋＡ１３クエンチャー）で標識されたその補体抗アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）は、ハイブリダイズして二重鎖を形成することができる（Ｂ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８）。
【図５Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８を示す。
【図５Ｃ】（Ｃ）  種々の濃度のターゲットの存在下でアプタマーと抗アプタマーとを混合した後の経時的な蛍光シグナル。これらの結果は、前記アプタマー及びアンチアプタマー鎖のハイブリダイゼーションに対するターゲット濃度依存的効果を実証する。
【図５Ｄ】（Ｄ）  蛍光標識（例えば、ＦＡＭ＝フルオレセイン）に連結された、アルドステロン（ＡＬＤＳ）のための一次アプタマーの長い形態（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３を含むＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）及びその補体抗アプタマー（例えば、ＱＦＢｋＡ１３（「Ｉｏｗａ  Ｂｌａｃｋ」；  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）クエンチャー）で標識された抗アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）はハイブリダイズして二重鎖（Ｅ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）を形成することができる。
【図５Ｅ】（Ｅ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１を示す。
【図５Ｆ】（Ｆ）  種々の濃度のターゲットの存在下でアプタマーと抗アプタマーとを混合した後の経時的な蛍光シグナル。これらの結果は、前記アプタマー及び抗アプタマー鎖のハイブリダイゼーションに対するターゲット濃度依存的効果を実証する。
【図６Ａ−Ｃ】図６Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイの設計原理を表す。（Ａ）  一次アプタマー（ＡＰ）とそのリガンド（Ｌ）との複合体。（Ｂ）  ＡＰを伸長させ（ＡＰｅｘｔ）、且つ、構造スイッチングセンサーを得るために、相補的オリゴヌクレオチド（ＣＤ）を添加する（ここでは、蛍光シグナル伝達を達成するための設定で示されている。Ｆ＝フルオレセイン及びＤ＝ダブシルクエンチャー）。これは平衡プロセスであり、且つ、ＥＬＩＳＡライクなフォーマットを達成するために表面に付着された場合、システムは、成分を除去することなく洗浄することができない。（Ｃ）  擬似サンドイッチアッセイはこれらの問題を克服し、且つ、平衡反応を安定な二重螺旋構造に変換する。これを達成するために、ＣＤはＣＤｅｘｔに伸長され、及び次いでＣＤｅｘｔｃｏｍｐが異なる平衡を確立するために使用される。ＣＤｅｘｔが表面に結合されている場合（１つの可能な実施形態、他方において、１つのＣＤｅｘｔｃｏｍｐが表面に結合している）、リガンドの結合の際に、ＣＤｅｘｔ及びＣＤｅｘｔｃｏｍｐは、表面上に形成された場合には十分に洗浄することができる、安定な二重螺旋複合体を形成する。
【図７】図７は一次アプタマーの選択を表す。液相選択の図示された概略図において、オリゴヌクレオチドライブラリー（ＮＭ、ここで、ランダム化領域Ｍは、定常領域に隣接する８〜１００ヌクレオチドを有する、すなわちＰＣＲ増幅のためのプライマー、ここでＮはＡ、Ｔ、Ｇ、又はＣのうちいずれか１つであり得る）はビオチン化相補的オリゴヌクレオチド（ＣＢ）を介してアガロース−ストレプトアビジンカラムに結合している。ターゲットへの曝露（青色の形状；赤色の形状は、交差反応の排除により特異性を確実にするカウンターターゲットである、は、ステム（Ｓ）が安定化された受容体の溶出を引き起こし、そしてこれらの配列は増幅される。図は、出現順に、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ３０８、３０９、３０８及び３０９を開示する。
【図８Ａ−Ｃ】図８Ａ−Ｃは、小分子のためのサンドイッチアッセイについての設計原理と二次「サンドイッチ」アプタマーの概念を表す。（Ａ）  ＡＰとそのＬとの複合体。（Ｂ）  二次「サンドイッチ」アプタマー（ＡＳ）は、Ｌと複合体を形成して三元複合体を形成する場合にのみＡ Ｐに結合する。（Ｃ）  ＡＰが表面に結合している場合、ＡＳはＡＰとそのＬとの複合体に結合し、従ってサンドイッチを形成する。
【図９Ａ−Ｂ】図９Ａ−Ｂは、二次「サンドイッチ」アプタマーの選択を表す。（Ａ）  固体(solid-state)選択：  ターゲットアプタマー（Ａｐ）をマトリックス（例えばビーズ）に付着させ、Ｌの存在下でライブラリー（例えば、構造化Ｎ４０、ここで、部分的に自己相補的なプライマーはステムを形成する；代替は非構造化ＮＭである）と共にインキュベートしてＡＰ＊Ｌ複合体に対する親和性を有するアプタマー候補を単離する。これらのオリゴヌクレオチドはＰＣＲ増幅され、一本鎖種が再生され、そして次の選択サイクルにおいて使用される。このプロセスは、収束が達成され、プールクローン化され、そして配列決定されまで繰り返され、ＡＳ候補をもたらす。対抗選択は、Ｌが存在しない場合にＡＰへの結合剤を排除することによって行われる。（Ｂ）  液相におけるプロセスは、相補的オリゴヌクレオチドを介してマトリックスに結合した事前構造化(pre-structured)ライブラリーを使用し、そしてＡＳ候補が選択される。なぜなら、それらのループはＡＰへの結合を介して閉じられおり、且つ、それらは固体表面から放出されるためである。この場合の対抗選択は、リガンドを持たないＡＰとリガンドそれ自体に対するものである。
【図１０Ａ】図１０Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるグルコースに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）。
【図１０Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）。ヘアピンの一番左の鎖は５‘末端である。
【図１０Ｃ】（Ｃ）  用量(dose)／蛍光反応曲線。
【図１１Ａ】図１１Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるフェニルアラニンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）。
【図１１Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１１Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１２Ａ】図１２Ａ−Ｃは、擬似サンドウィッチアッセイに用いられるフェニルアラニンの一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）。
【図１３Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（配列番号８７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１３Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１４Ａ】図１４Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるヒドロコルチゾンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）。
【図１４Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１４Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１５Ａ】図１５Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるヒドロコルチゾンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）。
【図１５Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１５Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１６Ａ】図１６Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるヒドロコルチゾンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）。
【図１６Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１６Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１７Ａ】図１７Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデヒドロイソアンドロステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）。
【図１７Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１７Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１８Ａ】図１８Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデヒドロイソアンドロステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）。
【図１８Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１８Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図１９Ａ】図１９Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデヒドロイソアンドロステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１００）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）。
【図１９Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図１９Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２０Ａ】図２０Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデヒドロイソアンドロステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）。
【図２０Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２０Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２１Ａ】図２１Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデオキシコルチコステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）。
【図２１Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２１Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２２Ａ】図２２Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるテストステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）。
【図２２Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２２Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２３Ａ】図２３Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるテストステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０８）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）。
【図２３Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０８）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２３Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２４Ａ】図２４Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるテストステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１０）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）。
【図２４Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２４Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２５Ａ】図２５Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるテストステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）。
【図２５Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２５Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２６Ａ】図２６Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるテストステロンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）。
【図２６Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２６Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２７Ａ】図２７Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるスフィンゴシン−１−リン酸（ｄ１８：１）に対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）。
【図２７Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２７Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２８Ａ】図２８Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）。
【図２８Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２８Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図２９Ａ】図２９Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２０）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）。
【図２９Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図２９Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３０Ａ】図３０Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）。
【図３０Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３０Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３１Ａ】図３１Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）。
【図３１Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３１Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３２Ａ】図３２Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）。
【図３２Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３２Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３３Ａ】図３３Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２８）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）。
【図３３Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３３Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３４Ａ】図３４Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）。
【図３４Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３４Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３５Ａ】図３５Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）。
【図３５Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３５Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３６Ａ】図３６Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）。
【図３６Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３６Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３７Ａ】図３７Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）。
【図３７Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３７Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３８Ａ】図３８Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）。
【図３８Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３８Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図３９Ａ】図３９Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）。
【図３９Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図３９Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図４０Ａ】図４０Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）。
【図４０Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図４０Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図４１Ａ】図４１Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）。
【図４１Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図４１Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図４２Ａ】図４２Ａ−Ｃは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるドーパミンに対する一次アプタマーを表す。（Ａ）  センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６）に結合した一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３）。
【図４２Ｂ】（Ｂ）  コア／ポケット（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）。ヘアピンの一番左の鎖は５’末端である。
【図４２Ｃ】（Ｃ）  用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線。
【図４３Ａ−Ｂ】図４３Ａ−Ｂは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるデオキシコルチコステロンに対する一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２）を表す。特定の非限定的な実施形態において、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、（室温又は２５℃での水溶液中）約３０ｎＭであるデオキシコルチコステロンに対する結合親和性（解離定数、Ｋｄ）を有する。
【図４４Ａ−Ｂ】図４４Ａ−Ｂは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるコルチゾールに対する一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）を表す。特定の非限定的な実施形態において、コルチゾール結合一次アプタマーは、（室温又は２５℃での水溶液中）約３０ｎＭであるコルチゾールに対する結合親和性（解離定数、Ｋｄ）を有する。
【図４５Ａ−Ｂ】図４５Ａ−Ｂは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるセロトニンに対する一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８）を表す。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、（室温又は２５℃での水溶液中）約２５ｎＭであるセロトニンに対する結合親和性（解離定数、Ｋｄ）を有する。
【図４６Ａ−Ｂ】図４６Ａ−Ｂは、擬似サンドイッチアッセイに使用されるグルコースのための一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９）を表す。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、（室温又は２５℃で水溶液中）約８ｎＭであるグルコースに対する結合親和性（解離定数、Ｋｄ）を有し、且つ、ガラクトースと比較して(versus)グルコースに選択的に結合する。
【図４７Ａ】図４７Ａ〜Ｆは、溶液中及びプレート上で実施されるような擬似サンドイッチアッセイの例を複数表す。（Ａ）  溶液中の擬似サンドイッチの例。擬似サンドイッチアッセイに関係している配列、ＡＰはデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）に対する一次アプタマーである（フルオレセインで標識化表示）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０）。Ｃｅｘｔは伸長された競合物であり（クエンチャー、Ｑで標識された）、一方、Ｃｅｘｔｃｏｍｐは安定な二重らせんを形成する相補的オリゴヌクレオチドである。ＣｅｘｔとＣｅｘｔｃｏｍｐとの間の二重らせんの形成、及び蛍光標識アプタマーの放出を示す用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線（図６Ｂ；この場合Ｃｅｘｔは、クエンチャー、Ｑで標識化され、ＡＰはフルオレセイン、Ｆで標識化された）。
【図４７Ｂ】（Ｂ）  溶液中の擬似サンドイッチの例。擬似サンドイッチアッセイに関係している配列、ＡＰはＬ−フェニルアラニンに対する一次アプタマーである（フルオレセインで標識化表示）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２２；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）。Ｃｅｘｔは伸長された競合物であり（クエンチャー、Ｑで標識された）、一方、Ｃｅｘｔｃｏｍｐは安定な二重らせんを形成する相補的オリゴヌクレオチドである。ＣｅｘｔとＣｅｘｔｃｏｍｐとの間の二重らせんの形成、及び蛍光標識アプタマーの放出を示す用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線（図６Ｂ；この場合Ｃｅｘｔは、クエンチャー、Ｑで標識化され、ＡＰはフルオレセインＦで標識化された）。
【図４７Ｃ】（Ｃ）  溶液中の擬似サンドイッチの例。擬似サンドイッチアッセイに関係している配列、ＡＰはＤ−グルコースに対する一次アプタマーである（フルオレセインで標識化表示）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）。Ｃｅｘｔは伸長された競合物であり（クエンチャー、Ｑで標識された）、一方、Ｃｅｘｔｃｏｍｐは安定な二重らせんを形成する相補的オリゴヌクレオチドである。ＣｅｘｔとＣｅｘｔｃｏｍｐとの間の二重らせんの形成、及び蛍光標識アプタマーの放出を示す用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線（図６Ｂ；この場合Ｃｅｘｔは、クエンチャー、Ｑで標識化され、ＡＰはフルオレセイン、Ｆで標識化された）。
【図４７Ｄ】（Ｄ）  溶液中の擬似サンドイッチの例。擬似サンドイッチアッセイに関係している配列、ＡＰはＬ−チロシンに対する一次アプタマーである（フルオレセインで標識化表示）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）。Ｃｅｘｔは伸長された競合物であり（クエンチャー、Ｑで標識された）、一方、Ｃｅｘｔｃｏｍｐは安定な二重らせんを形成する相補的オリゴヌクレオチドである。ＣｅｘｔとＣｅｘｔｃｏｍｐとの間の二重らせんの形成、及び蛍光標識アプタマーの放出を示す用量（ｄｏｓｅ）／蛍光反応曲線（図６Ｂ；この場合Ｃｅｘｔは、クエンチャー、Ｑで標識化され、ＡＰはフルオレセイン、Ｆで標識化された）。
【図４７Ｅ】（Ｅ）  擬似サンドイッチアッセイプレートの例。プレート上のアッセイで使用された配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）；配列は、図４７Ａにおけるものと同じであるが、但し、サンドイッチはプレート上に形成されるのに適している（サンドイッチを増幅するのに使用される西洋ワサビペルオキシダーゼ−ストレプトアビジンコンジュゲート（ＨＲＰ−ＳＴＶ））。プレートの表面上のリガンド−用量依存的サンドイッチ形成を示す用量−色強度応答。
【図４７Ｆ】（Ｆ）  擬似サンドイッチアッセイプレートの例。プレート上のアッセイで使用された配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２２；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）；配列は、図４７Ｂにおけるものと同じであるが、但し、サンドイッチはプレート上に形成されるのに適している（サンドイッチを増幅するのに使用される西洋ワサビペルオキシダーゼ−ストレプトアビジンコンジュゲート（ＨＲＰ−ＳＴＶ））。プレートの表面上のリガンド−用量依存的サンドイッチ形成を示す用量−色強度応答。
【図４８Ａ】図４８Ａ−Ｅは、二次アプタマーの例及び溶液中及びプレート上のサンドイッチアッセイの例を複数表す。（Ａ）  二次アプタマー及び溶液中のアッセイの例。一次アプタマーと複合体を形成するために使用されたターゲット分子としてのデオキシコルチコステロン。二次アプタマーの選択に用いられる一次アプタマー（ＡＰ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に由来する）。前記構造に結合する二次アプタマー（ＡＳ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）。ターゲットの増加する量に対する用量−蛍光応答曲線は、赤色曲線として示され、一方、青色は、一次アプタマーが排除されるコントロールである。このアッセイの目的のために、二次アプタマーをフルオレセインで標識し、クエンチャーを有するＣｅｘｔをそれに添加した。
【図４８Ｂ】（Ｂ）  二次アプタマー及び溶液中のアッセイの例。一次アプタマーと複合体を形成するために使用されたターゲット分子としてのデオキシコルチコステロン。二次アプタマーの選択に用いられる一次アプタマー（ＡＰ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に由来する）。前記構造に結合する二次アプタマー（ＡＳ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）。ターゲットの増加する量に対する用量−蛍光応答曲線は、赤色曲線として示され、一方、青色は、一次アプタマーが排除されるコントロールである。このアッセイの目的のために、二次アプタマーをフルオレセインで標識し、クエンチャーを有するＣｅｘｔをそれに添加した。
【図４８Ｃ】（Ｃ）  二次アプタマー及び溶液中のアッセイの例。一次アプタマーと複合体を形成するために使用されたターゲット分子としてのセロトニン。二次アプタマーの選択に用いられる一次アプタマー（ＡＰ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５に由来する）。前記構造に結合する二次アプタマー（ＡＳ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）。ターゲットの増加する量に対する用量−蛍光応答曲線は、赤色曲線として示され、一方、青色は、一次アプタマーが排除されるコントロールである。このアッセイの目的のために、二次アプタマーをフルオレセインで標識し、クエンチャーを有するＣｅｘｔをそれに添加した。
【図４８Ｄ】（Ｄ）  プレート上のサンドイッチアッセイの例。一次アプタマーと複合体を形成するために使用されたターゲット分子としてのセロトニン。二次アプタマーの選択に用いられる一次アプタマー（ＡＰ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５に由来する）。前記構造に結合する二次アプタマー（ＡＳ）の推定二次構造（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６に由来する）。リガンドに対する用量−色強度応答曲線；色はＨＲＰ−ＳＴＶ反応により発色する。
【図４９Ａ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｂ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｃ】図４９Ｃは、出現順に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１０〜３１１をそれぞれ開示する。
【図４９Ｄ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｅ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｆ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｇ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｈ】図４９Ｈは、出現順に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１２〜３１３をそれぞれ開示する。
【図４９Ｉ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｊ】図４９Ｈは、出現順に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１４〜３１６をそれぞれ開示する。
【図４９Ｋ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｌ】図４９Ｌは、出現順に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１７〜３１８をそれぞれ開示する。
【図４９Ｍ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｎ】図４９Ｎは、出現順に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１９〜３２１をそれぞれ開示する。
【図４９Ｏ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｐ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図４９Ｑ】図４９Ａ−Ｑは例示的なサンドイッチアッセイを複数表す。
【図５０Ａ】図５０Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すグルコース結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）。
【図５０Ｂ】（Ｂ）  ガラクトース（中間の曲線）又はフルクトース（最低部の曲線）と比較した(versus)グルコース（最上部の曲線）に対する選択的結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８及び図１０Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列を含む一次アプタマーから生じる用量／蛍光応答曲線。
【図５１Ａ】図５１Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すフェニルアラニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）。
【図５１Ｂ】（Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７を含む一次アプタマー及び図１１Ａ−Ｃに類似するセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、フェニルアラニンへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５２Ａ】図５２Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すフェニルアラニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）。
【図５２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７を含む一次アプタマー及び図１２Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、フェニルアラニンへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５３Ａ】図５３Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すフェニルアラニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４）。
【図５３Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４を含む一次アプタマー及び図１３Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、チロシン、グリシン及びトリプトファンと比較したフェニルアラニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５４Ａ】（Ａ）ステム及びループ構造を示すヒドロコルチゾン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８）。
【図５４Ｂ】（Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８を含む一次アプタマー及び図１４Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他のステロイドと比較したヒドロコルチゾン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５５Ａ】図５５Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すヒドロコルチゾン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１）。
【図５５Ｂ】（Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１を含む一次アプタマー及び図１５Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したヒドロコルチゾン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５６Ａ】図５６Ａ−Ｂ。（Ａ）ステム及びループ構造を示すヒドロコルチゾン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２）。
【図５６Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２を含む一次アプタマー及び図１６Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他のステロイドと比較したヒドロコルチゾン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５７Ａ】図５７Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３）。
【図５７Ｂ】（Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３を含む一次アプタマー及び図１８Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したデヒドロイソアンドロステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５８Ａ】図５８Ａ−Ｂ。  （Ａ）ステム及びループ構造を示すデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４）。
【図５８Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４を含む一次アプタマー及び図１９Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したデヒドロイソアンドロステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図５９Ａ】図５９Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステロイド及びループ構造を示すデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５）。
【図５９Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５を含む一次アプタマー及び図２０Ａ−Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したデヒドロイソアンドロステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６０Ａ】図６０Ａ−Ｂ。  （Ａ）  ステム及びループ構造を示すデオキシコルチコステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８）。
【図６０Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８を含む一次アプタマー及び図２１Ａ−Ｃに類似するセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したデオキシコルチコステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６１Ａ】図６１Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すデオキシコルチコステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８９及び１９０）。
【図６１Ｂ】（Ｂ）  選択的結合を示すゲル分析。
【図６２Ａ】図６２Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステロイド及びループ構造を示すテストステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１）。
【図６２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１を含む一次アプタマー及び図２２Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したテストステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６３Ａ】図６３Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すテストステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２）。
【図６３Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２を含む一次アプタマー及び図２６Ａ−Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイドと比較したテストステロン（最上部の曲線）への結合を示す、用量／蛍光応答曲線。
【図６４Ａ】図６４Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すスフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３）。
【図６４Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３を含む一次アプタマー及び図２７Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、スフィンゴシン−１−リン酸への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６５Ａ】図６５Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すドーパミン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６）。
【図６５Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６を含む一次アプタマー及び図３０Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、ノルエピネフリン、セロトニン及び５−ＨＩＡＡと比較した（降順の曲線）ドーパミンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６６Ａ】図６６Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すドーパミン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７）。
【図６６Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７を含む一次アプタマー及び図３１Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、Ｌ−ドーパ、セロトニン及びチロシンと比較した（降順の曲線）ドーパミンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６７Ａ】図６７Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すドーパミン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００）。
【図６７Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００を含む一次アプタマー及び図３２Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、セロトニン及びチロシンと比較した（降順の曲線）ドーパミンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６８Ａ】図６８Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すドーパミン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１）。
【図６８Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１を含む一次アプタマー及び図２９Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、Ｌ−ドーパ、セロトニンと、及び次いでチロシン及びメラトニンを包含する種々の他のものと比較した（降順の曲線）、ドーパミンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図６９Ａ】図６９Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すドーパミン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２）。
【図６９Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２を含む一次アプタマー及び図２８Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、セロトニン、及び次いでチロシンを包含する種々の他のものと比較した（降順の曲線）、ドーパミンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７０Ａ】図７０Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステロイド及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３）。
【図７０Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３を含む一次アプタマー及び図３４Ａ−Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、Ｈ−ＩＡＡ、ノルエピネフリン及びドーパミンと比較した（降順の曲線）、セロトニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７１Ａ】図７１Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４）。
【図７１Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４を含む一次アプタマー及び図３７Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、ドーパミン及び種々の他の化合物と比較した（降順の曲線）、セロトニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７２Ａ】図７２Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５）。
【図７２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５を含む一次アプタマー及び図３３Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、例えば、メラトニン、５−ＨＩＡＡ及びトリプトファンと比較した、セロトニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７３Ａ】図７３Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６）。
【図７３Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６を含む一次アプタマー及び図３５Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、例えば、メラトニン、５−ＨＩＡＡ及びトリプトファンと比較した、セロトニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７４Ａ】図７４Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７）。
【図７４Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７を含む一次アプタマー及び図３６Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他の化合物と比較した、セロトニンへの結合（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７５Ａ】図７５Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８）。
【図７５Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８を含む一次アプタマー及び図３８Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他の化合物と比較した、セロトニンへの結合（最上部の曲線）を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７６Ａ】図７６Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すセロトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９）。
【図７６Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９を含む一次アプタマー及び図３９Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他の化合物と比較したセロトニン（最上部の曲線）への結合を示す投与量／蛍光応答曲線。
【図７７Ａ】図７７Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すメラトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０）。
【図７７Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０を含む一次アプタマー及び図４２Ａ〜Ｃと類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他の化合物と比較したメラトニン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７８Ａ】図７８Ａ−Ｂ。（Ａ）  ステム及びループ構造を示すメラトニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１）。
【図７８Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１を含む一次アプタマー及び図４０Ａ〜Ｃに類似のセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、他の化合物と比較したメラトニン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図７９Ａ】図７９Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアルドステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１４）。
【図７９Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１４を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイド化合物と比較したアルドステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８０Ａ】図８０Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアルドステロン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１５）。
【図８０Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１５を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、他のステロイド化合物と比較したアルドステロン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８１Ａ】図８１Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すトブラマイシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１８）。
【図８１Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１８を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、アミカシン及びカナマイシンと比較したトブラマイシン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８２Ａ】図８２Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すトブラマイシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１）。
【図８２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、アミカシン及びカナマイシンと比較したトブラマイシン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８３Ａ】図８３Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアミカシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２５）。
【図８３Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２５を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較したアミカシン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８４Ａ】図８４Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアミカシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８）。
【図８４Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較したアミカシン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８５Ａ】図８５Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアミカシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０）。
【図８５Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な追加の操作配列から得られ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較したアミカシン（最上部の曲線）への結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８６Ａ】図８６Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１）。
【図８６Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８７Ａ】図８７Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２）。
【図８７Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８８Ａ】図８８Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３３）。
【図８８Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３３を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図８９Ａ】図８９Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３４）。
【図８９Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３４を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９０Ａ】図９０Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５）。
【図９０Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９１Ａ】図９１Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すメチレンブルー結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３６）。
【図９１Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３６を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、メチレンブルーへの結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９２Ａ】図９２Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３９）。
【図９２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３９を含む一次アプタマー及びセンサオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９３Ａ】図９３Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４０）。
【図９３Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４０を含む一次アプタマー及びセンサオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９４Ａ】図９４Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４１）。
【図９４Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４１を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９５Ａ】図９５Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４２）。
【図９５Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４２を含む一次アプタマー及びセンサオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９６Ａ】図９６Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４３）。
【図９６Ｂ】（Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４３を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的なさらなる操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９７Ａ】図９７Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４４）。
【図９７Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４４を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９８Ａ】図９８Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すアンモニウム結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５）。
【図９８Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な追加の操作配列から得られ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較した(versus)アンモニウムに対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図９９Ａ】図９９Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すボロン酸結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４７）。
【図９９Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４７を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、例えばグルコースと複合体化した、ビスボロン酸、と比較した(versus)ボロン酸に対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図１００Ａ】図１００Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すボロン酸結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４８）。
【図１００Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４８を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、ボロン酸対、例えばグルコースと複合体化したビスボロン酸と比較した(versus)ボロン酸に対する選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図１０１Ａ】図１０１Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すエピネフリン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４９）。
【図１０１Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４９を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、エピネフリン、及び降順で、セロトニン、ノルエピネフリン及びドーパミンへの選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図１０２Ａ】図１０２Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すエピネフリン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５０）。
【図１０２Ｂ】（Ｂ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５０を含む一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドに相補的な付加的な操作配列から得られ、エピネフリン、及び降順で、セロトニン、ドーパミン及びノルエピネフリン、への選択的結合を示す用量／蛍光応答曲線。
【図１０３Ａ】図１０３Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すクレアチニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６）。
【図１０３Ｂ】（Ｂ）クレアチニンへの結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６を含む一次アプタマーから得られる用量／蛍光応答曲線。
【図１０４Ａ】図１０４Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すクレアチニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５７）。
【図１０４Ｂ】（Ｂ）  クレアチニンへの結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５７を含む一次アプタマーから得られる用量／蛍光応答曲線。
【図１０５Ａ】図１０５Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すクレアチニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８）。
【図１０５Ｂ】（Ｂ）  クレアチニンへの結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８を含む一次アプタマーから得られる用量／蛍光応答曲線。
【図１０６Ａ】図１０６Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すクレアチニン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９）。
【図１０６Ｂ】（Ｂ）  クレアチニンへの結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９を含む一次アプタマーから得られる用量／蛍光応答曲線。
【図１０７Ａ】図１０７Ａ−Ｂ。ステム及びループ構造を示すバソプレッシン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１）。
【図１０７Ｂ】（Ｂ）  バソプレッシンへの結合を示す、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１を含む一次アプタマーから得られる用量／蛍光応答曲線。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
５．発明の詳細な説明
本発明は、分析物を捕捉して検出するためのアプタマーベースのアッセイに関する。本明細書に記載の一次アプタマー、関連オリゴヌクレオチド及びアッセイ方法に加えて、当該方法論は、他のアプタマー、関連オリゴヌクレオチド、並びにアプタマー又はアプタマー対を用いた類似のアッセイの設計に適用することができ、分子型、利用可能な試薬、及び定量的目標に関する調整を伴う。例えば実際の臨床サンプル中の濃度及び／又は単離された試薬の親和性によって確立され得る。さらに、核酸の様々な混合物を利用するアッセイは、他の核酸要素、例えば鎖置換カスケードを形成するもの、と組み合わせることができる。
【００１７】
開示を明瞭にするためであって、限定するためではなく、本発明のこの詳細な説明は、以下のセクションに分けられる。
５．１．  一次アプタマー；
５．２．  抗アプタマーアッセイ；
５．３．  擬似サンドイッチアッセイ；及び
５．４．  サンドイッチアッセイ。
【００１８】
本明細書中で提供される配列がヌクレオチド「Ｎ」を指す場合、配列中のその位置は、特にそうでないと明記しない限り、任意の天然ヌクレオチド又は非天然ヌクレオチドで充填され得る。
【００１９】
用語「エピトープ」は、ターゲット分析物上の一次アプタマーのための結合部位を指すものとして本明細書中で使用され、又はサンドイッチアッセイの場合、前記ターゲット分析物上の結合部位及び二次アプタマーであり得る。
【００２０】
本発明が末端ＣＴＣＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３７）５’配列を有する配列を提供する特定の実施形態では、本発明はまた、初期ＣＴＣＴＣ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３７）配列を欠いているその配列の代替バージョンを提供する。
【００２１】
本発明がＣＴＣＴＣ  ＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３８）５’末端配列を有する配列を提供する特定の実施形態では、本発明はまた、前記初期ＣＴＣＴＣＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３８）配列を欠いているその配列の代替バージョンを提供する。本発明がＴＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４６）３’末端配列を有する配列を提供する特定の実施形態では、本発明はまた、最終的なＴＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４６）配列を欠いているその配列の代替バージョンを提供する。本発明が、ＣＴＣＴＣ  ＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３８）５’末端配列及びＴＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４６）３’末端配列を有する配列を提供する特定の実施形態では、本発明はまた、これらの両方の配列を欠いている代替バージョンを提供する。
【００２２】
本明細書に記載のアッセイでは、検出可能な標識が使用される。特定の実施形態において、蛍光部分は、結合対の一方のパートナーに含まれ、且つ、クエンチャー部分は、結合対の他方のメンバーに含まれる。前記検出可能な部分（例えば、前記蛍光部分）が前記対のいずれかのメンバー上にあるように、アッセイを設計することができる。蛍光／クエンチャー化合物は当該分野で公知であり、且つ、Ｍａｒｙ  Ｋａｔｈｅｒｉｎｅ  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．  ３３５：Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｐｒｏｂｅｓ：  Ｄｅｓｉｇｎｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ２００６，  Ｄｉｄｅｎｋｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，及びＭａｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３０，  ｅ１２２を参照（両方とも参照により本明細書に組み込まれる）。さらに、互いに近接している場合に検出可能なシグナルの増加をもたらす部分は、本明細書に記載のアッセイにおいて代替標識として使用されてもよく、例えば、蛍光共鳴エネルギー移動（「ＦＲＥＴ」）の結果として；適切な対には、いくつか挙げると、フルオロセイン及びテトラメチルローダミン；ローダミン６Ｇ及びマラカイトグリーン、並びにＦＩＴＣ及びチオセミカルバゾールが含まれるが、これらに限定されない。
【００２３】
５．１．  一次アプタマー
「一次アプタマー(primary  aptamer)」（ＡＰ）は、ターゲット分析物（target
analyte）（リガンド、Ｌ）に結合する。一次アプタマーは、溶液相若しくは固相選択によって単離され得る（そのターゲット分析物への結合として同定され得る）。
【００２４】
一次アプタマー（Ａｐ）及び関連オリゴヌクレオチド（例えば、抗アプタマー、センサーオリゴヌクレオチド、ｃｏｍｐオリゴヌクレオチド、及びサンドイッチオリゴヌクレオチド（「二次アプタマー(secondary  aptamers)」又はＡｓとも言う））は、意図された機能と一致する任意のサイズを有することができる。特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマー又は関連オリゴヌクレオチドは、長さが約２０〜２５０ヌクレオチドの間である。例えば、制限するものではないが、長さは、約２０〜２００ヌクレオチドの間、又は約２０〜１５０ヌクレオチドの間、又は約３０〜２００ヌクレオチドの間、又は約４０〜２００ヌクレオチドの間、又は約５０〜２００ヌクレオチドの間、又は約６０〜２００ヌクレオチドの間、又は約７０〜２００ヌクレオチドの間、又は約８０〜２００ヌクレオチドの間、又は約１００〜２００ヌクレオチの間ド、又は約１５０〜２００ヌクレオチドの間、又は約３０〜１５０ヌクレオチドの間、又は約３０〜１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜５０ヌクレオチドの間、又は約４０〜１００ヌクレオチドの間；又は少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、又は約１００ヌクレオチドまで、又は約２００ヌクレオチドまで（「約」は、プラス若しくはマイナス２０パーセントを意味する）、又は２０〜２５０ヌクレオチドの間、又は２５〜１００ヌクレオチドの間であり得る。特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマー及び／又は関連オリゴヌクレオチドは、ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ(登録商標)であり得るか、又は核酸の非天然エナンチオマーを含有し得る（２２−２５）。
【００２５】
特定の実施形態では、前記ターゲット分析物の結合ポケットとして作用するコア配列を含む一次アプタマーが提供される。特定の実施形態では、特定のコア配列、又はコンセンサスコア配列、を含む一次アプタマーが提供される。一次アプタマーは、以下に記載されるように、特定のアッセイにおいて機能的役割を果たす操作配列(operative  sequence)をさらに含み得る。一次アプタマーはまた、その機能性に実質的に影響を及ぼさない、コア配列又は操作配列以外の追加の配列を場合によって含み得る。興味対象のターゲット分析物に結合するコア配列を含む一次アプタマーは、本明細書に例示されるものを含むがこれに限定されない多様なアッセイにおいて利用され得る。
【００２６】
５．１．１．  一次アプタマーを分離するための方法
アミノ酸、単糖及びオリゴ糖、ステロイド、カテコールアミン、セロトニン、メラトニン、脂質、ホルモン及び／又はペプチドを包含するが、これらに限定されない多様なターゲット分析物に選択的に結合する、一次アプタマーが同定され得る。特定の非限定的な実施形態において、当該方法は、バソプレッシン、アミノグリコシド及び他の抗生物質のためのspiegelmers、免疫抑制剤、抗腫瘍剤、殺虫剤、ホルモンなどに結合する一次アプタマーを産生するために使用され得る。
【００２７】
例えば、且つ、限定ではなく、一次アプタマーの単離はＳＥＬＥＸプロセスを用いて行うことができる。特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、固相選択（従来）若しくはより新しい溶液相選択のいずれかによって単離される（１６−２１）。さらに、特定の非限定的な実施形態において、前記溶液相選択は、小分子に固有の利点、例えばアプタマーのより高い親和性及びスクリーニングの容易さなど、を有する。
【００２８】
特定の非限定的な実施形態では、当該方法は、アガロース−ストレプトアビジンに対するＰＣＲプライマーの１つに相補的なビオチン化鎖（ＣＢ）を結合させるステップと（図７）、プライマーのＣＢへの相補的相互作用を介してライブラリー（例えばＮ８〜Ｎ１００、但しこれに限定されない）からの配列を結合するステップと、を含む。ライブラリー上の２つのプライマー、５’−及び３’−も部分的に相補的である。これらのプライマーの相補領域間のステム形成に有利な方法でターゲットと相互作用する前記ライブラリーのメンバーは、相補体ＣＢを置換することによって前記アガロースから放出され、且つ、潜在的アプタマーの豊富なプールを今度は作り出すＰＣＲ増幅において使用される。
【００２９】
前記溶液相選択では、分子はマトリックスに一切結合することなく使用され、従って、官能基が「無駄になる(wasted)」ことはない。これは、アプタマーとの相互作用を最大化し、高い親和性をもたらす。使用することができる化合物の濃度は、溶解度の限界まで上昇し、（例えば、代謝産物及びグルコースに対する）弱い親和性アプタマーの単離を可能にする。
【００３０】
特定の非限定的な実施形態では、蛍光センサーは、ビオチンをダブシルに置換し、且つ、フルオレセインを前記アプタマーに結合させること（図６、ＣＤ）、アプタマーが結合することを確認すること、それらのＫｄを決定すること（これは競合アッセイであるため、半応答はＫｄ８０からシフトし、ＣＤは過剰に存在する）、及び選択性を確立することにより直接選択することができる。
【００３１】
特定の非限定的な実施形態では、当該方法は、
（１）一次アプタマー（Ａｐ）を、溶液相（図７）若しくは固相選択によって単離するステップ（それらが既に利用可能でない限り）；ワトソン−クリック塩基対形成を最小限に抑えることが望まれる場合、エナンチオマーアプタマー（spiegelmers）の使用（例えば、アプタマーを融合する、又は分析物なしでバックグラウンド相互作用を最小限に抑えること）と；
（２）前記一次アプタマーをその構造スイッチング形態で試験し、且つ、その構造スイッチング形態を修正するステップであって、それは次に擬似サンドイッチアッセイフォーマットに変わる、ステップ（図６Ｃ）と；
（３）ターゲットとのそれらの複合体中に一次アプタマー又はspiegelmersを使用する、溶液相又は固相選択のいずれかによって二次サンドイッチアプタマー（Ａｓ）を単離する（図９Ａ〜Ｂ）ステップと；
（４）ターゲットに対するサンドイッチアッセイを実施する（図８Ａ〜Ｃ）ステップと、及び／又は
（５）もともと単離された前記一次アプタマーの短縮形を調製するステップと；
（６）操作配列を導入することにより、前記場合により短縮された一次アプタマーを修正するステップと；及び／又は
（７）目的のアッセイにおける結合特性を改善するために、その結合ポケット内の１つ以上のヌクレオチドを置換することによって、前記場合により短縮された一次アプタマーを修正するステップと；
を含む。
【００３２】
５．１．２．  グルコース結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、水溶液中で室温又は２５℃で１０−１Ｍ未満の解離定数（親和性１０）でグルコースに結合し、且つ、ガラクトースと比較して（ｖｅｒｓｕｓ）グルコースに選択的に結合する。
【００３３】
特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長により１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体のいずれかとを含み、ここで、前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で水溶液中のグルコースに１０−１Ｍ未満の解離定数（親和性１０）で結合し、ガラクトース又はフルクトースと比較してグルコースに選択的に結合する（例えば、図５０Ｂ参照）。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態において、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はその変異体のいずれかとを含む前記グルコース結合一次アプタマーは、グルコースに対する結合親和性を有する。前記結合親和性は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０パーセント又は少なくとも約７５パーセントである。特定の非限定的な実施形態では、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はそれらの変異体のいずれかと、を含む前記グルコース結合一次アプタマーは、グルコース結合についてはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８を有する一次アプタマーと競合する。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はそれらの変異体のいずれかと、を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はそれらの変異体のいずれかと、を含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列と相補的である。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はそれらの変異体のいずれかと、これらの２つの配列の両側に(on  either  side)（隣接する(flanking)）に少なくとも１つの操作配列と、を含む。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＴＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）と、ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）又はＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）又はそれらの変異体のいずれかと、これらの２つの配列の両側に（隣接する）に少なくとも１つの操作配列と、を含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００３４】
特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、グルコースに結合する配列（例えば、ガラクトースと比較して(versus)グルコースに選択的に結合する）、及び／又は以下の：
４−ＯＲ−グルコースエピトープ（式中、Ｒは水素、アルキル基、別の炭水化物又はタンパク質である）；セロビオース；及び／又はマルトース；
うちの１つ以上を含む２つのステムを含む予測される二次構造を有する。例えば、図５０Ａ−Ｂを参照。
【００３５】
例えば、但し限定するわけではないが、グルコース結合一次アプタマーは、以下：
＞Ｓ−Ｇｌｕ０１：  ＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＧＴＴＧＣＴＣＴＧＴＡＡＣ−−−−−−−−−ＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＧＴＣＧＴＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）；
＞Ｓ−Ｇｌｕ０２：  ＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＧＧＴＡＧＡＧＴＣＧＴＣＧＧＧＣＴＣＴＡＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＴＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）；
＞Ｓ−Ｇｌｕ０３：  ＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＣＧＴＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＴＧＴＣＧＴＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）；
＞Ｓ−Ｇｌｕ０４：  ＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＧＡＣＴＴＡＧＡＧＴＣＧ−−−−−−−−−ＡＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＴＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６３）；及び
＞Ｓ−Ｇｌｕ０５：  ＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＴＧＣＡＡＴＴＣＴＴＧＣＡ−−−−−−−−−ＡＧＴＧＴＴＣＴＴＴＧＴＣＧＴＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）；
からなる群より選択される配列を含み得る。
【００３６】
特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３に示すコア配列を含む（図１０Ｂ）。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に示すコア配列を含むグルコース結合一次アプタマーはグルコースに対する結合親和性、すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に記載のコア配列を含むグルコース結合一次アプタマーは、グルコース結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列と相補的である。特定の非限定的な実施形態では、グルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）の少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、グルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３（図１０Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは、互いに相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００３７】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたグルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、若しくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９のヌクレオチド配列、又は、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる、元の配列に対する、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９８％の相同性を有する、これらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたグルコース結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはグルコースに結合することができ、及びそれらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００３８】
５．１．３  フェニルアラニン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のフェニルアラニンに結合し、且つ、チロシン（又はヒドロキシルフェニルアラニン）又はトリプトファンと比較して(versus)フェニルアラニンと選択的に結合する。
【００３９】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）、又は置換、欠失、挿入又は伸長によって１又は２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のフェニルアラニンに結合し、且つ、チロシン（又はヒドロキシルフェニルアラニン）又はトリプトファンと比較して(versus)フェニルアラニンと選択的に結合する（例えば、図５１Ａ−Ｂを参照）。特定の非限定的な実施形態では、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）又はそれらの変異体を含む前記フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７を有する一次アプタマーの結合親和性の、少なくとも約５０パーセント又は少なくとも約７５パーセントである、フェニルアラニンに対する結合親和性を有する。特定の非限定的な実施形態では、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）又はそれらの変異体を含む前記フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７を有する一次アプタマーと競合する。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）又はその変異体と、これらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列と、を含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＣＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）及びＡＧＣ及びＧＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）又はその変異体と、これらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列と、を含む。ここで、前記操作配列の２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００４０】
例えば、限定されないが、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＧ  ＣＧＴ  ＴＴＣ  ＣＣＡ  ＡＧＡ  ＡＡＧ  ＣＡＡ  ＧＴＡ  ＴＴＧ  ＧＴＴ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）
又は図１１Ｂに記載のコアを含むその一部分（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を含むことができる（図５１Ａ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）を参照）。
【００４１】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニンに対する結合親和性、すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるコア配列を含み、及び少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるコア配列を含み、及び少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列と、を含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５（図１１Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列と、を含む。ここで、前記作動配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００４２】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）、又は置換、欠失、挿入又は伸長によって１又は２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のフェニルアラニンに結合し（図５２Ａ−Ｂを参照）、且つ、チロシン（又はヒドロキシルフェニルアラニン）又はトリプトファンと比較して(versus)フェニルアラニンと選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）、又はその変異体を含み、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）、又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは、相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、但し限定されないが、フェニルアラニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＧ  ＧＴＧ  ＧＧＧ  ＧＴＴ  ＣＴＴ  ＴＴＴ  ＣＡＧ  ＧＧＧ  ＡＧＧ  ＴＡＣ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）
を含むことができる。
【００４３】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ；図５２Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に記載のコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に示すコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７（図１２Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）に少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００４４】
特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０）及びＣＡＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１）又はＣＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）及びＴＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）又は１つ塩基若しくは２つの塩基が置換、欠失、挿入若しくは伸長によって異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のフェニルアラニンに結合し、且つ、及びチロシン（又はヒドロキシル−フェニルアラニン）又はトリプトファンと比較して(versus)フェニルアラニンに選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０）及びＣＡＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１）又はＣＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）及びＴＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０）及びＣＡＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１）又はＣＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）及びＴＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０）及びＣＡＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１）又はＣＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）及びＴＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）又はその変異体、及びこれらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０）及びＣＡＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１）又はＣＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）及びＴＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）又はその変異体、及びこれらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、但し限定されないが、フェニルアラニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＡ  ＧＧＣ  ＴＧＧ  ＡＴＧ  ＣＡＴ  ＴＣＧ  ＣＣＧ  ＧＡＴ  ＧＴＴ  ＣＧＡ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４、図５３Ａ）を含み得る。
【００４５】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ；図５３Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示されるコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示すコア配列を含むフェニルアラニン結合一次アプタマーは、フェニルアラニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示されるコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９（図１３Ｂ）に示されるコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは、相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００４６】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたフェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる、元の配列と少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有する、これらの配列の変異体、を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたフェニルアラニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはフェニルアラニンに結合することができ、そしてそれらの構造スイッチングフォーマットでは（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００４７】
５．１．４．ヒドロコルチゾン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のヒドロコルチゾンに結合し、且つ、コルチコステロン、１１−デオキシコルチコステロン及び／又は（１７α、２１−ジヒドロキシプロゲステロンと選択的に結合し、及び／又は前記一次アプタマーは(that)、Ｃ．１７位置に酸素を有しないステロイドと比較して(versus)、１つの酸素に結合したＣ．１７炭素を有するステロイドと、選択的に結合する。
【００４８】
特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）及びＧＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なる、これらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記１次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のヒドロコルチゾンに結合し、且つ、Ｃ．１７位置に１つの酸素を有しないステロイドと比較して(versus)ヒドロコルチゾンに選択的に結合する（図５４Ｂ参照）。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）及びＧＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）及びＧＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７）、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）及びＧＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７）、又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）に少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）及びＧＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７）、又はその変異体、及びこれらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記操作配列のうち２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、ヒドロコルチゾン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＣＣＧ  ＣＡＴ  ＧＴＴ  ＣＣＡ  ＴＧＧ  ＡＴＡ  ＧＴＣ  ＴＴＧ  ＡＣＴ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、図１４Ａ）
又はそれの短いバージョン（図５４Ａ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８）を含むことができる。
【００４９】
特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ；図５４Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に示すコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾンに対する親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０パーセント又は少なくとも約７５パーセント、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に記載のコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾン結合のためのＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に示すようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１（図１４Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで、前記操作配列のうち２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００５０】
特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＴＡＣＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）及びＧＧＡＴＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なる、これらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のヒドロコルチゾンに結合し、且つ、Ｃ．１７位置に酸素を有しないステロイドと比較して(versus)、ヒドロコルチゾンに選択的に結合する（図５５Ｂを参照）。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＴＡＣＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）及びＧＧＡＴＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＴＡＣＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）及びＧＧＡＴＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作物質をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＴＡＣＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）及びＧＧＡＴＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）、又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、配列ＣＧＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５）及びＴＡＣＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）及びＧＧＡＴＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）又はその変異体、及び少なくともこれらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、ヒドロコルチゾン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＡ  ＧＣＧ  ＴＡＴ  ＧＣＧ  ＣＣＡ  ＧＡＡ  ＧＴＡ  ＴＡＣ  ＧＡＧ  ＧＡＴ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、図１５Ａ）
又はその短いバージョン（図５５Ａ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１）を含むことができる。
【００５１】
特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ；図５５Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に示されるコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に示すコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３（図１５Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００５２】
例えば、限定するものではないが、ヒドロコルチゾン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＣＡＧ  ＡＡＧ  ＴＴＴ  ＡＣＧ  ＡＧＧ  ＡＴＡ  ＴＧＧ  ＴＡＡ  ＣＡＴ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、図１６Ａ）
又はその短いバージョン（図５６Ａ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２）を含むことができる。
【００５３】
特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ；図５６Ａ〜Ｂ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に示されるコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に示されるコア配列を含むヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ヒドロコルチゾン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５（図１６Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００５４】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４（図１Ｃ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２のヌクレオチド配列、又は、例えば、ワトソン−クリック塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は非保存位置の突然変異によって得られる、元の配列に対して少なくとも約８０％、又は少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたヒドロコルチゾン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４（図１Ｃ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはヒドロコルチゾンに結合することができ、及びそれらの構造スイッチングフォーマットでは（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似スタンディングアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００５５】
５．１．５．  デヒドロエピアンドロステロン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のデヒドロイソアンドロステロンに結合し、且つ、デオキシコルチコステロと比較して(versus)デヒドロイソアンドロステロンと選択的に結合する。
【００５６】
特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって。１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で、１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のデヒドロイソアンドロステロンと結合し、且つ、デオキシコルチコステロン及び／又は他のステロイドと比較して(versus)デヒドロイソアンドロステロンに選択的に結合する（図５７Ｂ、５８Ｂ及び５９Ｂ参照）。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ここで、前記動作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００５７】
例えば、限定されるものではないが、デヒドロイソアンドロステロン  −  結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＧＧ  ＴＧＧ  ＣＡＴ  ＡＧＧ  ＧＴＡ  ＧＧＣ  ＴＡＧ  ＧＧＴ  ＣＡＣ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３、図５７Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ；図５７Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に示すコア配列を含むデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に記載のコア配列を含むデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９（図１８Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００５８】
例えば、限定するものではないが、デヒドロイソアンドロステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＧＧＣ  ＴＡＧ  ＧＴＡ  ＧＧＴ  ＴＧＣ  ＡＴＧ  ＣＧＧ  ＣＡＴ  ＡＧＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ＮＯ：１８４、図５８Ａ）含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ；図５８Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に記載のコア配列を含むデヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に示すコア配列を含むデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１（図１９Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００５９】
例えば、限定されるものではないが、デヒドロイソアンドロステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＧＡＣ  ＧＧＴ  ＧＴＧ  ＴＡＧ  ＴＴＧ  ＧＧＴ  ＴＧＴ  ＧＧＣ  ＡＧＧ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）
又は関連配列ＮＯ：１８５、図５９Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ；図５９Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に示されるようなコア配列を含むデヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に記載のコア配列を含むデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、デヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３（図２０Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００６０】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたデヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列との少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたデヒドロイソアンドロステン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはデヒドロイソアンドロステロンに結合することができ、及びそれらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００６１】
５．１．６．  デオキシコルステロン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のデオキシコルチコステロンに結合し、且つ、デヒドロイソアンドロステロンと比較してデオキシコルチコステロンに選択的に結合する。
【００６２】
特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、配列ＡＧＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６）及びＧＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７）又は置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のデオキシコルチコステロンに結合し、且つ、デヒドロイソアンドロステロン及び／又は他のステロイドと比較してデオキシコルチコステロンと選択的に結合する（図６０Ｂ、６１Ｂ参照）。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、配列ＡＧＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６）及びＧＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７）又はその変異体を含み、及び少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、配列ＡＧＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６）及びＧＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、配列ＡＧＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６）及びＧＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７）、又はその変異体を含み、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、配列ＡＧＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６）及びＧＣＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７）、又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００６３】
例えば、限定されないが、デオキシコルチコステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＣ  ＧＧＡ  ＴＴＴ  ＴＣＣ  ＧＡＧ  ＴＧＧ  ＡＡＣ  ＴＡＧ  ＣＴＧ  ＴＧＧ  ＣＧＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）
又は関連配列（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８、図６０Ａ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、図１Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ；図６０Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に記載のコア配列を含むデオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、デオキシコルチコステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に示すコア配列を含むデオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、デオキシコルチコステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、デオキシコルチコステロン結合アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５（図２１Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００６４】
例えば、限定するものではないが、デオキシコルチコステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＧＡ  ＴＴＴ  ＴＣＣ  ＡＧＴ  ＧＣＡ  ＡＣＴ  ＡＧＣ  ＴＧＡ  ＡＡＧ  ＣＧＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６２）を含み得る。
例えば、限定されないが、デオキシコルチコステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＧＧＡ  ＴＴＴ  ＴＣＣ  ＡＧＴ  ＧＴＡ  ＡＣＴ  ＡＧＣ  ＴＡＣ  ＡＧＣ  ＧＧＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６３）を含み得る。
【００６５】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたデオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９０、又は、例えば、ワトソン−クリック塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置の突然変異によって得られる元の配列との少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有する、これらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたデオキシコルチコステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８９、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９０のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、デオキシコルチコステロンに結合することができ、及びその構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００６６】
５．１．７  テストステロン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のテストステロンに結合し、且つ、１１−デオキシコルチコステロンと比較してテストステロンに選択的に結合する。
【００６７】
特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又は、Ｇ残基の付加若しくは欠失を包含する、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含む。ここで前記該一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のテストステロンに結合し、且つ、１１−デオキシコルチコステロンと比較してテストステロンに選択的に結合する（図６２Ｂ及び６３Ｂ参照）。特定の非限定的実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体、並びにこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体、並びにこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００６８】
例えば、限定するものではないが、テストステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＡＴ  ＧＴＣ  ＣＧＧ  ＧＧＴ  ＡＣＧ  ＧＴＧ  ＧＴＴ  ＧＣＡ  ＧＴＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）又は関連配列（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、図１Ｄ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１、図６２Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ；図６２Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に示されるコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に記載のコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７（図２２Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含み、二本鎖を形成することができる。
【００６９】
例えば、限定するものではないが、テストステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＴＧ  ＧＴＣ  ＡＴＴ  ＧＡＧ  ＴＧＧ  ＴＣＴ  ＴＡＧ  ＧＣＡ  ＧＧＴ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ＮＯ：１９２、図６３Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ；図６３Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に示すコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に記載のコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５（図２６Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７０】
特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に記載のコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に示すコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に示すコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロン結合のためのＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。
【００７１】
特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９（図２３Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちのつは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７２】
特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に示すコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に記載のコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に記載のコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２４Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７３】
特定の非限定的な実施形態において、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１（図２５Ｂ）に示すコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に記載のコア配列を含むテストステロン結合一次アプタマーは、テストステロン結合のためにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、テストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３（図２５Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７４】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたテストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２、又は、例えばワトソンークリック塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での変異によって得られる元の配列との少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたテストステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２を含む。前記アプタマーはテストステロンに結合することができ、及びそれらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００７５】
５．１．８  スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ 未満の解離定数で水溶液中のスフィンゴシン−１−リン酸に結合する（図６４Ｂ参照）。
【００７６】
特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列の変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中でスフィンゴシン−１−リン酸に結合する。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列を含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、又はその変異体、並びにこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７７】
例えば、限定するものではないが、スフィンゴシン−１−リン酸結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＧＧＴ  ＧＴＧ  ＧＧＡ  ＧＡＡ  ＡＧＡ  ＡＴＴ  ＴＴＣ  ＡＴＴ  ＧＧＧ  ＧＴＡ  ＧＧＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３、図６４Ａ）を含むことができる。
【００７８】
特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ；図６４Ａ）に記載のコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に記載のコア配列を含むスフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、スフィンゴシン−１−リン酸に対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％、又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に示すコア配列を含むスフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、スフィンゴシン−１−リン酸結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７（図２７Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００７９】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたスフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、若しくは非保存位置の突然変異によって得られる、元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたスフィンゴシン−１−リン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、スフィンゴシン−１−リン酸に結合することができ、及びそれらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００８０】
５．１．９  ドーパミン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合し、且つ、ドーパミンと選択的に結合する。
【００８１】
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４）及びＧＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５）、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４ 未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合し、且つ、セロトニン若しくはノルエピネフリンと比較してドーパミンに選択的に結合する（図６５Ｂ）。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４）及びＧＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４）及びＧＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４）及びＧＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５）、又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＣＧＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４）及びＧＧＴＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５）又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、ドーパミン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＣＡＧ  ＴＴＴ  ＧＡＡ  ＧＧＴ  ＴＣＧ  ＴＴＣ  ＧＣＡ  ＧＧＴ  ＧＴＧ  ＧＡＧ  ＴＧＡ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６、図６５Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ；図６５Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ）に示されるようなコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ）に示すコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３に示されるコア配列（図３０Ｂ）を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列ウィさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３（図３０Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８２】
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって、１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合し、且つ、セロトニン又はチロシンと比較してドーパミンに選択的に結合する（図６６Ｂ）。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）又はその変異体を含み、且つ、さらに少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記作動配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）又はその変異体、並びにこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定ではないが、ドーパミン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＧ  ＣＡＧ  ＣＣＴ  ＧＧＧ  ＧＴＴ  ＧＴＧ  ＧＧＧ  ＧＧＴ  ＡＧＧ  ＧＧＡ  ＧＧＴ  ＣＴＧ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２；図３１Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７、図６６Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ；図６６Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示されるコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミンに対する結合親和性、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示すコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示されたコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８３】
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＣＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８）及びＣＡＣＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合し、且つ、セロトニン、メラトニン又はチロシンと比較してドーパミンに選択的に結合する（図６７Ｂ）。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＣＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８）及びＣＡＣＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９）又はその変異体を含み、さらに少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＣＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８）及びＣＡＣＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＣＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８）及びＣＡＣＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９）、又はその変異体、及びこれら２つの配列の両側に（隣接する）の少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＣＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８）及びＣＡＣＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９）又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定ではないが、ドーパミン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＣＡＣ  ＡＧＡ  ＧＧＣ  ＡＣＡ  ＡＣＴ  ＣＧＣ  ＡＧＧ  ＡＧＣ  ＡＡＡ  ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３；図３２Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００、図６７Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ；図６７Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ）に示されるコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５（図３１Ｂ）に示すコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ）に示すようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７（図３２Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８４】
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又は置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記次アプタマーは室温又は２５℃で、１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合し、且つ、セロトニン、メラトニン又はチロシンと比較してドーパミンに選択的に結合する（図６８Ｂ）。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体と、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体、並びにこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定ではないが、ドーパミン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＧＡ  ＧＧＡ  ＧＴＴ  ＡＧＣ  ＡＴＧ  ＡＣＧ  ＧＣＡ  ＡＣＴ  ＴＴＡ  ＧＴＡ  ＣＴＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０；図２９Ａ）]
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１、図６８Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ；図６８Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に記載のコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に示されるようなコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に示されるコア配列と、コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１（図２９Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列の内の２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８５】
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又は置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のドーパミンに結合するセロトニン、メラトニン又はチロシンと比較してドーパミンに選択的に結合する（図６９Ｂ）。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ、又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態において、ドーパミン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧ又はその変異体、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、ドーパミン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＣＴＴ  ＣＡＧ  ＡＣＧ  ＣＴＣ  ＡＡＣ  ＧＴＴ  ＴＧＧ  ＧＧＡ  ＧＧＣ  ＡＣＧ  ＧＣＡ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９；図２８Ａ）又は
関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２、図６９Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ；図６９Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に記載のコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に示されるコア配列を含むドーパミン結合一次アプタマーは、ドーパミン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に示すようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、ドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９（図２８Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８６】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２のヌクレオチド配列、又は、例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、若しくは非保存位置での突然変異によって得られる、元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。相同性パーセントは、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡ、を使用して決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたドーパミン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、ドーパミンに結合することができ、そしてそれらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００８７】
５．１．１０  セロトニン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ 未満の解離定数で水溶液中のセロトニンに結合し、ドーパミン、メラトニン及び５−ヒドロキシトリプトファンと比較してセロトニンと選択的に結合する。
【００８８】
特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧ、又は、置換、欠失、挿入若しくは置換によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のセロトニンに結合し、ドーパミン、メラトニン又は５−ヒドロキシトリプトファンと比較してセロトニンに選択的に結合する（図７０Ｂ、７１Ｂ、７２Ｂ、７３Ｂ、７４Ｂ、７５Ｂ、７６Ｂ）。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記作動配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧ又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧ及びＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）及びＧＧＧ又はその変異体、及びこれらの３つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは、互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００８９】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＧ  ＧＴＡ  ＧＧＣ  ＡＧＡ  ＴＡＧ  ＧＧＧ  ＡＡＧ  ＣＴＧ  ＡＴＴ  ＣＧＡ  ＴＧＣ  ＧＴＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５；図３４Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３、図７０Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ；図７０Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ちＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも一つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１（図３４Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうつの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９０】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＧ  ＧＴＡ  ＧＧＣ  ＡＡＣ  ＡＧＧ  ＧＧＡ  ＡＧＧ  ＧＡＧ  ＴＴＣ  ＴＧＣ  ＧＴＡ  ＣＧＴ  ＧＧＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８；図３７Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４、図７１Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ；図７１Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に示されるようなコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に示すコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に記載のコア配列、及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７（図３７Ｂ）に記載のコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９１】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＧＧＧ  ＣＡＴ  ＡＴＡ  ＴＡＧ  ＴＣＴ  ＡＧＧ  ＧＴＴ  ＴＧＧ  ＴＧＴ  ＧＧＧ  ＴＡＧ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４；図３３Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５、図７２Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ；図７２Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に示されるようなコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ちＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に示され、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に示されるようなコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９（図３３Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つが互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９２】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＧ  ＧＴＡ  ＧＧＣ  ＡＧＣ  ＡＧＧ  ＧＧＡ  ＡＧＴ  ＡＧＧ  ＣＧＴ  ＧＴＣ  ＣＴＣ  ＧＴＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６；図３５Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６、図７３Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ；図７３Ａ）に記載のコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ちるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態では、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に示され、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に示されるようなコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。制限的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３（図３５Ｂ）に示されるようなコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９３】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＧＴＡ  ＧＧＧ  ＧＡＴ  ＣＣＡ  ＣＡＧ  ＴＧＡ  ＧＧＧ  ＧＴＴ  ＴＧＴ  ＡＴＧ  ＧＧＴ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７；図３６Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７、図７４Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ；図７４Ａ）に示されるコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に示すコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ちＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する津）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５（図３６Ｂ）に示されるコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９４】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＡＧＧ  ＴＧＧ  ＴＧＴ  ＣＴＴ  ＧＧＡ  ＣＡＧ  ＴＧＧ  ＴＡＴ  ＴＣＧ  ＣＡＧ  ＴＴＧ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９；図３８Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８、図７５Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ；図７５Ａ）に示すようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９５】
例えば、限定するものではないが、セロトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＡＧＡ  ＣＧＧ  ＧＧＴ  ＧＣＴ  ＴＡＣ  ＴＴＧ  ＧＴＴ  ＣＡＧ  ＧＧＧ  ＡＧＴ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０；図３９Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９、図７６Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態において、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ；図７６Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ）に記載のコア配列を含むセロトニン結合一次アプタマーは、セロトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１（図３９Ｂ）に示されるようなコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、セロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９（図３８Ｂ）に記載のコア配列及び前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列を含み、ここで前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９６】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたセロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、  ＮＯ：２０５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９、又は、例えばＷａｔｏｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、若しくは非保存位置の突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたセロトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、  ＮＯ：２０５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、セロトニンに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【００９７】
５．１．１１  メラトニン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のメラトニンに結合し、且つ、セロトニン又はトリプトファンと比較してメラトニンと選択的に結合する（図７７Ｂ及び７８Ｂ参照）。
【００９８】
例えば、限定するものではないが、メラトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＣＴＴ  ＧＧＧ  ＧＧＴ  ＧＧＴ  ＧＧＧ  ＴＴＴ  ＧＧＣ  ＴＧＧ  ＴＡＣ  ＴＴＡ  ＧＧＧ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２；図４１Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０、図７７Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態において、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ；図７７Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に示すコア配列を含むメラトニン結合一次アプタマーは、メラトニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に記載のコア配列を含むメラトニン結合一次アプタマーは、メラトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態において、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に示されるコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態において、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に示すコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。限定されない実施形態において、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５（図４１Ｂ）に示すコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【００９９】
例えば、限定ではないが、メラトニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＣＣＡ  ＡＧＧ  ＴＣＧ  ＴＡＡ  ＧＧＴ  ＡＣＧ  ＧＴＣ  ＡＧＴ  ＧＴＡ  ＣＴＣ  ＧＧＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１；図４０Ａ）
又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１、図７８Ａ）を含むことができる。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ；図７８Ａ）に示されるようなコア配列を含む。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に示すコア配列を含むメラトニン結合一次アプタマーは、メラトニンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に記載のコア配列を含むメラトニン結合一次アプタマーは、メラトニン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、メラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３（図４０Ｂ）に示されるようなコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは、互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１００】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたメラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０のヌクレオチド配列、又はＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは非保存位置の突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたメラトニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、メラトニンに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１０１】
５．１．１２  チロシン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に示すコア配列を含むチロシン結合一次アプタマーは、チロシンに対する結合親和性、即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３を有する一次アプタマーの結合親和性の少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％、を有する。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に記載のコア配列を含むチロシン結合一次アプタマーは、チロシン結合についてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３を有する一次アプタマーと競合する。非限定的な実施形態において、前記一次アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間、又は約３０〜７０ヌクレオチドの間、又は約３０〜６０ヌクレオチドの間の長さを有する。特定の非限定的な実施形態において、チロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に示されるようなコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、チロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に記載のコア配列を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、チロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に記載のコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、チロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７（図４２Ｂ）に示すコア配列と、前記コア配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは、互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１０２】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたチロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７のヌクレオチド配列、又は例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたチロシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、チロシンに結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１０３】
５．１．１３  アルドステロン結合プライマリアプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアルドステロンと結合し、且つ、コルチゾン、コルチゾール若しくはデオキシコルチゾンと比較してアルドステロン（図７９Ｂ及び８０Ｂ参照）と選択的に結合するか、又はＣ１８位に結合したメチルを有するステロイドと比較して、１個又は２個の酸素原子に結合したＣ１８を有するステロイドに選択的に結合する。
【０１０４】
特定の非限定的な実施形態では、アルドステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアルドステロンに結合し、且つ、コルチゾン、コルチゾール又はデオキシコルチゾンと比較してアルドステロンと選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、アルドステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、アルドステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、アルドステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３）又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に(on  either  side)（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、アルドステロン結合一次アプタマーは、配列ＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２）及びＡＴＧＴＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３）、又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、前記操作配列のうちの２つは壮途に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１０５】
例えば、アルドステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＡＴＡ  ＧＴＴ  ＧＴＴ  ＣＴＴ  ＡＧＣ  ＧＡＴ  ＧＴＴ  ＣＡＧ  ＣＧＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６４）又は関連配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３、図１Ｂ）を含むことができる。
【０１０６】
例えば、アルドステロン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＴＡＧ  ＧＴＡ  ＧＧＣ  ＣＡＡ  ＣＴＧ  ＧＧＴ  ＡＴＴ  ＴＡＣ  ＴＧＧ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６５）を含み得るが、これに限定されない。
【０１０７】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたアルドステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３のヌクレオチド配列、又は、例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、ＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたアルドステロン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはアルドステロンに結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、アンチアプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）それらは、蛍光の増加によって応答することができる。
【０１０８】
５．１．１４  トブラマイシン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中でトブラマイシンに結合し、且つ、アミカシン又はカナマイシンと比較してトブラマイシン（図８１Ｂ及び８２Ｂ参照）と選択的に結合する。
【０１０９】
特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＴＧＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６）及び／又はＡＡＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１つの塩基若しくは２つの塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで前記一次アプタマーは室温又は２５℃で、１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のトブラマイシンに結合し、且つ、アミカシン又はカナマイシンと比較してトブラマイシンに対して選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＴＧＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６）及び／又はＡＡＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＴＧＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６）及び／又はＡＡＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態において、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＴＧＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６）及び／又はＡＡＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７）又はその変異体と、この配列（単数又は複数）の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＴＧＡＡＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６）及び／又はＡＡＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７）又はその変異体と、この配列（単数又は複数）の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つが互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１１０】
例えば、限定するものではないが、トブラマイシン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＣＣＣ  ＣＧＣ  ＡＡＧ  ＧＧＧ  ＴＧＡ  ＡＡＴ  ＧＡＣ  ＡＧＡ  ＧＴＣ  ＡＡＡ  ＧＴＧ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６６）を含むことができる。
【０１１１】
特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＧＴＡＧＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）及び／又はＴＣＧＧＴＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のトブラマイシンと結合し、且つ、アミカシン又はカナマイシンと比較してトブラマイシンに対して選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＧＴＡＧＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）及び／又はＴＣＧＧＴＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＧＴＡＧＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）及び／又はＴＣＧＧＴＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＧＴＡＧＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）及び／又はＴＣＧＧＴＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）又はその変異体と、この配列（単数又は複数）の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、トブラマイシン結合一次アプタマーは、配列（複数可）  ＧＴＡＧＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）及び／又はＴＣＧＧＴＡＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）、又はその変異体と、この配列（単数又は複数）の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つが互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１１２】
例えば、限定するものではないが、トブラマイシン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＡＧＴ  ＣＧＧ  ＡＡＡ  ＣＧＧ  ＴＧＴ  ＣＴＣ  ＡＧＴ  ＴＣＣ  ＴＣＧ  ＧＴＡ  ＧＡＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６７）を含むことができる。
【０１１３】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたトブラマイシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたトブラマイシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１８又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーはトブラマイシンに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１１４】
５．１．１５  アミカシン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアミカシンに結合し、且つ、トブラマイシン又はカナマイシンと比較してアミカシンと選択的に結合する（図８３Ｂ、８４Ｂ及び８５Ｂを参照）。
【０１１５】
特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＣ及びＧＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）及びＧＴＴＴＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）及びＡＧＴＣＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なる、これらの配列の変異体を含み、ここで前記１次アプタマーが室温又は２５℃で１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアミカシンに結合し、且つ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較してアミカシンと選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＣ及びＧＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）及びＧＴＴＴＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）及びＡＧＴＣＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）又はその変異体を含み、且つ少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＣ及びＧＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）及びＧＴＴＴＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）及びＡＧＴＣＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）、又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＣ及びＧＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）及びＧＴＴＴＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）及びＡＧＴＣＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）又はその変異体と、これらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＣ及びＧＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）及びＧＴＴＴＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）及びＡＧＴＣＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）又はその変異体と、これらの４つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、アミカシン結合性アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＧ  ＣＴＴ  ＧＣＣ  ＣＣＣ  ＴＧＧ  ＣＡＴ  ＧＴＴ  ＴＡＧ  ＡＧＣ  ＡＧＡ  ＧＴＣ  ＴＴＴ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６８）
を含むことができる。
【０１１６】
特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＴＣＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６）及びＡＴＧＴＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアミカシンと結合し、且つ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較してアミカシンと選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＴＣＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６）及びＡＴＧＴＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＴＣＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６）及びＡＴＧＴＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＴＣＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６）及びＡＴＧＴＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７）、又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＴＣＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６）及びＡＴＧＴＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７）、又はその変異体と、及びこれらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、アミカシン結合性アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＴ  ＣＣＧ  ＧＴＴ  ＣＡＴ  ＧＡＣ  ＴＴＣ  ＡＧＴ  ＡＧＴ  ＣＴＡ  ＧＴＧ  ＧＧＧ  ＧＴＣ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６９）
を含むことができる。
【０１１７】
特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＡ及びＣＧＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＡＧＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで、前記一次アプタマーは室温又は２５℃で１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアミカシンに結合し、且つ、トブラマイシン及びカナマイシンと比較してアミカシンと選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＡ及びＣＧＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＡＧＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＡ及びＣＧＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＡＧＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列は、センサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＡ及びＣＧＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＡＧＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９）、又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態において、アミカシン結合一次アプタマーは、配列ＣＡＡ及びＣＧＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＡＧＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９）、又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで、前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。例えば、限定するものではないが、アミカシン結合性アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＡＡＣ  ＣＡＴ  ＴＣＣ  ＡＧＴ  ＧＧＣ  ＧＴＣ  ＴＡＣ  ＧＧＣ  ＴＴＡ  ＧＣＴ  ＴＴＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７０）
を含むことができる。
【０１１８】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたアミカシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって若しくは保存されていない位置で変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたアミカシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、アミカシンに結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）それらは蛍光の増加によって応答する。
【０１１９】
５．１．１６  メチレンブルー結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−６Ｍ未満の解離定数で水溶液中のメチレンブルーに結合し、且つ、メチレンブルーと選択的に結合する（図８６Ｂ、８７Ｂ、８８Ｂ、８９Ｂ、９０Ｂ及び９１Ｂを参照）。
【０１２０】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＧＧＡ  ＴＧＣ  ＴＧＴ  ＴＣＣ  ＡＣＣ  ＧＧＧ  ＧＴＡ  ＣＡＧ  ＧＴＡ  ＧＧＴ  ＣＧＣ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７１）
を含むことができる。
【０１２１】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＣＧ  ＴＡＧ  ＣＧＡ  ＴＡＧ  ＡＡＧ  ＡＧＡ  ＧＣＡ  ＧＧＧ  ＧＧＡ  ＧＡＧ  ＡＣＣ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７２）
を含むことができる。
【０１２２】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＡＡ  ＧＧＡ  ＧＴＴ  ＣＣＧ  ＧＧＧ  ＴＡＣ  ＧＣＧ  ＧＧＴ  ＡＡＧ  ＧＧＡ  ＡＧＧ  ＡＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７３）
を含むことができる。
【０１２３】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＡＣＧ  ＡＧＴ  ＡＴＡ  ＣＧＣ  ＴＴＡ  ＣＧＴ  ＣＡＣ  ＧＴＴ  ＧＡＴ  ＧＣＴ  ＧＴＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７４）
を含むことができる。
【０１２４】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＡＴＴ  ＧＡＴ  ＧＴＡ  ＣＡＡ  ＧＣＴ  ＣＧＡ  ＴＴＣ  ＧＴＡ  ＴＣＣ  ＣＴＴ  ＧＡＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７５）
を含むことができる。
【０１２５】
例えば、限定するものではないが、メチレンブルー結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＴＧ  ＧＧＣ  ＴＣＧ  ＴＧＴ  ＴＣＴ  ＡＴＧ  ＧＡＣ  ＡＡＧ  ＧＧＧ  ＧＡＧ  ＴＧＡ  ＣＣＴ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７６）
を含むことができる。
【０１２６】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたメチレンブルー結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３６のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって若しくは非保存位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０パーセント、若しくは少なくとも約８５パーセント、若しくは少なくとも約９０パーセント、若しくは少なくとも約９５パーセント、若しくは少なくとも約９８パーセントの相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたメチレンブルー結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３６のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、メチレンブルーに結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１２７】
５．１．１７  アンモニウム結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−２Ｍ未満の解離定数で水溶液中のアンモニウムイオンに結合し、且つ、グリシン又はエタノールアミン又はカリウムイオンと比較してアンモニウムに選択的に結合する（図９２Ｂ、図９３Ｂ、図９４Ｂ、図９５Ｂ、図９６Ｂ、図９７Ｂ、及び図９８Ｂを参照）。
【０１２８】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＡＡＧ  ＡＧＧ  ＣＴＣ  ＡＧＴ  ＧＣＴ  ＡＴＣ  ＴＴＡ  ＴＣＴ  ＧＡＧ  ＡＧＧ  ＧＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７７）
を含むことがでる。
【０１２９】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＡＧ  ＴＧＴ  ＣＴＣ  ＣＴＡ  ＡＧＧ  ＣＣＴ  ＴＡＧ  ＴＡＡ  ＧＡＡ  ＧＧＧ  ＴＣＣ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７８）
を含むことができる。
【０１３０】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＡＡ  ＧＡＧ  ＧＣＴ  ＣＧＴ  ＧＡＧ  ＴＴＧ  ＡＴＧ  ＧＧＧ  ＡＧＡ  ＧＧＧ  ＴＣＣ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７９）
を含むことができる。
【０１３１】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＡＡＧ  ＧＧＴ  ＣＣＣ  ＧＴＴ  ＧＡＧ  ＴＴＴ  ＧＣＡ  ＡＴＧ  ＧＴＧ  ＡＧＧ  ＧＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８０）
を含むことができる。
【０１３２】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  ＣＧＡ  ＴＧＧ  ＡＡＧ  ＧＧＧ  ＣＣＣ  ＴＧＧ  ＴＧＧ  ＧＡＧ  ＧＧＴ  ＣＡＡ  ＡＧＧ  ＧＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８１）
を含むことができる。
【０１３３】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＣＡ  ＧＧＴ  ＡＧＡ  ＴＣＴ  ＡＣＡ  ＴＧＡ  ＡＴＡ  ＴＧＡ  ＡＧＧ  ＡＡＴ  ＧＡＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８２）
を含むことができる。
【０１３４】
例えば、限定するものではないが、アンモニウム結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＧＧＡ  ＧＣＣ  ＧＣＣ  ＧＧＧ  ＴＧＧ  ＴＴＡ  ＧＴＧ  ＴＣＴ  ＣＧＣ  ＧＡＧ  ＧＡＡ  ＧＴＣ  ＧＴＣ  ＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８３）
を含むことができる。
【０１３５】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたアンモニウム結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって若しくは非保存位置の突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０パーセント、若しくは少なくとも約８５パーセント、若しくは少なくとも約９０パーセント、若しくは少なくとも約９５パーセント、若しくは少なくとも約９８パーセントの相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたアンモニウム結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、アンモニウムに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１３６】
５．１．１８  ボロン酸結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−２Ｍ未満の解離定数で水溶液中のボロン酸に結合し、且つ、ビスホスホン酸、例えばグルコースとの複合体、と比較して、ボロン酸に選択的に結合する（図９９Ｂ、１００Ｂ）。
【０１３７】
例えば、限定するものではないが、ボロン酸結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＧＧＴ  ＧＧＧ  ＧＣＴ  ＧＣＴ  ＣＡＡ  ＧＴＧ  ＧＡＧ  ＧＴＴ  ＣＣＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８４）
を含むことができる。
【０１３８】
例えば、限定するものではないが、ボロン酸結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＡ  ＧＡＧ  ＧＧＧ  ＣＣＴ  ＣＡＡ  ＡＴＧ  ＴＧＧ  ＧＧＴ  ＧＴＴ  ＧＣＴ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８５）
を含むことができる。
【０１３９】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたボロン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４８のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％  と少なくとも約９０パーセント、若しくは少なくとも約９５パーセント、若しくは少なくとも約９８パーセントの相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態では、単離されたボロン酸結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４７又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４８のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、ボロン酸に結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１４０】
５．１．１９  エピネフリン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−３Ｍ未満の解離定数で水溶液中のエピネフリンに結合し、且つ、セロトニン、ノルエピネフリン又はドーパアミンと比較してエピネフリンに選択的に結合する（図１０１Ｂ、  １０２Ｂ）。
【０１４１】
例えば、限定するものではないが、エピネフリン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＧ  ＧＧＧ  ＴＡＧ  ＧＧＧ  ＴＴＡ  ＧＧＴ  ＧＧＧ  ＡＡＴ  ＧＧＡ  ＧＣＴ  ＧＧＡ  ＣＣＧ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８６）
を含むことができる。
【０１４２】
例えば、限定するものではないが、エピネフリン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧ  ＡＣＣ  ＧＴＴ  ＧＣＣ  ＣＴＧ  ＧＧＧ  ＴＡＧ  ＴＧＣ  ＧＣＧ  ＣＴＴ  ＣＧＴ  ＴＴＡ  ＣＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８７）
を含むことができる。
【０１４３】
特定の非限定的な実施形態では、単離されたエピネフリン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５０のヌクレオチド配列、又は、例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって、若しくは保存されていない位置での突然変異によって得られる元の配列に対して少なくとも約８０パーセント、若しくは少なくとも約８５パーセント、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたエピネフリン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４９又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５０のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、エピネフリンに結合することができ、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１４４】
５．１．２０  クレアチニン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−２Ｍ未満の解離定数で水溶液中のクレアチニンに結合し、且つ、クレアチン又は尿素と比較してクレアチニンに選択的に結合する。
【０１４５】
特定の非限定的な実施形態では、クレアチニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＧＧＣＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４）及びＡＧＧＧＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５）又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で、１０−２Ｍ未満の解離定数で水溶液中のクレアチンに結合し（図１０３Ｂ、１０４Ｂ、１０５Ｂ、１０６Ｂ参照）、且つ、クレアチン又は尿素と比較してクレアチニンに選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、クレアチニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＧＧＣＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４）及びＡＧＧＧＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、クレアチニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＧＧＣＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４）及びＡＧＧＧＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５）又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーオリゴヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、クレアチニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＧＧＣＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４）及びＡＧＧＧＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５）又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、クレアチニン結合一次アプタマーは、配列ＧＧＴＧＧＣＣＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４）及びＡＧＧＧＧＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５）又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは互いに相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１４６】
例えば、限定するものではないが、クレアチニン結合アプタマーは、配列：
ＧＡ  ＣＧＡ  ＣＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＧＡＴＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＣＴＴＡＴ  ＡＴＧＴＧ  ＴＧＡＧＧＧＧＴＧ  ＧＴ  ＣＧＴ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６；図１０３Ａ）
を含むことができる。
【０１４７】
例えば、限定するものではないが、クレアチニン結合アプタマーは、配列：
ＧＡ  ＣＧＡ  Ｃ  ＧＧＴＧＧＣＣＴＡＴＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＡＴＧＡＡ  ＧＡＡＴＡＧＡＡＣＴＡＴＴＡＧＧＧＧＧＴ  ＧＴ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８８）
を含むことができる。
【０１４８】
例えば、限定するものではないが、クレアチニン結合アプタマーは、配列：
ＣＧＡ  Ｃ  ＧＧＴＧＧＣＣＴＡＴＴＡＡＡＴＡＧＣＴＴＴＡＧＴＴ  ＴＡＡＧＡＡＡＡＧＴＡＡＴＡＧＧＧＧＧＴ  ＧＴ  ＣＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８；図１０５Ａ）
を含むことができる。
【０１４９】
例えば、限定するものではないが、クレアチニン結合アプタマーは、配列：
ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  Ｃ  ＧＧＴＧＧＣＣＴＡＴＴＡＡＧＴＡＧＣＴＴＴＡ  ＧＴＴＣＡＡＧＡＡＡＡＧＴＡＡＴＡＧＧＧＧＧＴ  ＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９；図１０６Ａ）
を含むことができる。
【０１５０】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたクレアチニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって若しくは非保存位置での突然変異によって得られる元の配列に対して、少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたクレアチニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、クレアチニンに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１５１】
５．１．２１  バソプレッシン結合一次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のバソプレッシンに結合し、且つ、オキシトシン又はプレッシン酸と比較してバソプレッシンに選択的に結合する。
【０１５２】
特定の非限定的な実施形態では、バソプレッシン結合一次アプタマーは、配列ＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０）及びＣＡＴ、又は、置換、欠失、挿入若しくは伸長によって１塩基若しくは２塩基が異なるこれらの配列のいずれかの変異体を含み、ここで前記一次アプタマーは、室温又は２５℃で１０−４Ｍ未満の解離定数で水溶液中のバソプレッシンに結合し（図１０７Ｂ参照）、且つ、オキシトシン又はプレッシン酸と比較してバソプレッシンに選択的に結合する。特定の非限定的な実施形態では、バソプレッシン結合一次アプタマーは、配列ＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０）及びＣＡＴ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含む。特定の非限定的な実施形態では、バソプレッシン結合一次アプタマーは、配列ＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０）及びＣＡＴ又はその変異体を含み、且つ、少なくとも１つの操作配列をさらに含み、前記操作配列はセンサーヌクレオチドに含まれる配列に相補的である。特定の非限定的な実施形態では、バソプレッシン結合一次アプタマーは、配列ＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０）及びＣＡＴ、又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含む。特定の非限定的な実施形態では、バソプレッシン結合一次アプタマーは、配列ＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０）及びＣＡＴ又はその変異体と、これらの２つの配列の両側に（隣接する）少なくとも１つの操作配列とを含み、ここで前記操作配列のうちの２つは相互に相補的な部分を含有し、二本鎖を形成することができる。
【０１５３】
例えば、限定するものではないが、バソプレッシン結合アプタマーは、配列：
ＧＡ  Ｃ  ＧＴＣＣＡＡＧＴＡＧＴＡＣＧＴＴＴＡＡＴＴＡＧＧ  ＡＴＴＴＣＣＧＡＡＴＴＧＧＣＡＴＧＣ  ＧＴ  Ｃ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１；図１０７Ａ）
を含むことができる。
【０１５４】
特定の非限定的な実施形態において、単離されたバソプレッシン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１のヌクレオチド配列、又は、例えばＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって若しくは非保存位置での突然変異によって得られる元の配列に対して、少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約８５％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９８％の相同性を有するこれらの配列の変異体を含む。パーセント相同性は、標準的なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ、を用いて決定することができる。特定の非限定的な実施形態において、単離されたクレアチニン結合一次アプタマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１のヌクレオチド配列を含む。前記アプタマーは、バソプレッシンに結合することができ、且つ、その構造スイッチングフォーマットにおいて（例えば、抗アプタマーアッセイ、擬似サンドイッチアッセイ、又はサンドイッチアッセイにおいて）、それらは蛍光の増加によって応答することができる。
【０１５５】
５．２  抗アプタマーアッセイ
特定の実施形態では、「抗アプタマーアッセイ」が提供され、そこでは興味対象の分析物の存在及び／又は量について試験されるサンプルが、（１）前記分析物に結合するコア配列を含む一次アプタマー、及び（２）前記一次アプタマーの少なくとも一部と相補的である「抗アプタマー」、の有効量と接触する。ここで、前記一次アプタマー及び／又は抗アプタマーは、前記一次アプタマー及び抗アプタマーが互いに結合しているか又は結合が解けている(unbound)かを検出する検出可能部分（複数可）を含み、且つ、前記分析物に結合した一次アプタマーはその抗アプタマーに結合しない。
【０１５６】
ある種の実施形態は、サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、一次アプタマー、及び前記一次アプタマーの少なくとも一部に相補的である抗アプタマー、の有効量と接触させるステップであって、前記一次アプタマー及び／又は抗アプタマーは、ターゲット分析物が存在しなかった場合、前記一次アプタマーと抗アプタマーとの間の二本鎖形成を可能にする条件下で、分析物に結合した一次アプタマーの量の検出及び／又は測定することを可能にする部分を含む、ステップと；
（ｉｉ）抗アプタマーに結合していない一次アプタマーの量を検出し、且つ、場合によっては定量化するステップと；
を含む方法、を提供する。
【０１５７】
サンプルは、例えば且つ限定ではなく、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、尿サンプル、組織サンプル、脳脊髄液サンプル、喀痰サンプル、糞便サンプル、水サンプル、工業用水サンプルなど、であり得る。
【０１５８】
例示的な例として、且つ、限定するものではなく、サンプル中の興味対象の分析物の存在又は量は、
（ｉ）前記サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）蛍光標識を含む一次アプタマー、及び
（ｂ）分析物が存在しなかった場合、一次アプタマーと抗アプタマーとの間の二本鎖形成が生じることを可能にする条件下で、一次アプタマーと抗アプタマーとが二本鎖で一緒に結合されている場合（例えば、二本鎖分子として）、前記蛍光標識の蛍光を消光させる(quenches)部分を含む、前記一次アプタマーの少なくとも８０％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％又は少なくとも９８％に相補的な抗アプタマー、
の有効量と接触させるステップと；
（ｉｉ）蛍光の量を検出し、且つ、場合によっては定量化するステップと；
によって決定することができる。蛍光の量は、サンプルの不在下又は分析物の既知量の存在下での一次アプタマー及び抗アプタマーのコントロール混合物から生じる蛍光の量とさらに比較することができる（例えば、標準曲線）。この例は、当業者に知られているように変更することができる。例えば、異なる部分が、二重鎖形成を検出するために異なる部分を使用することができ、例えば比色標識、酵素標識、放射性標識など、及び、前記検出可能な標識を、アッセイ設計に応じて前記抗アプタマー上に担持することができる。
【０１５９】
特定の実施形態では、一次アプタマーは、抗アプタマーに相補的であり、二本鎖形成を促進する１つ以上の操作配列を含む。例えば、二本鎖形成に有利なヌクレオチド組成を有する操作配列を使用することができる（別名「トーホールド(toe  hold)」配列）。
【０１６０】
抗アプタマーアッセイ及びそれを使用する方法は、本明細書に記載のものを含むがこれに限定されない、興味対象の分析物に結合する任意の一次アプタマーを利用することができる。
【０１６１】
抗アプタマーは、その対応する一次アプタマーの少なくとも８０％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％又は少なくとも９８％に相補的である配列を有する。
【０１６２】
抗アプタマーアッセイにおける使用のための一次アプタマー又は抗アプタマーは、長さが約３０〜約２００ヌクレオチドの間、又は約３０〜１００ヌクレオチドの間、又は約３０〜８０ヌクレオチドの間であり得る。
【０１６３】
特定の非限定的な実施形態において、前記一次アプタマー及び抗アプタマーは、前記アッセイにおいて、約１：１の比で存在し得る。分析物と一次アプタマーとの間の結合の強さ、及び／又は一次アプタマーと抗アプタマーとの間の結合の強さに依存して、この比を変更して所望の特徴を有する用量反応曲線を生成することが望ましい場合がある（例えば、特定の濃度において分析物を側的／検出することができる）。例示的な例として、且つ、限定するものではなく、一次アプタマーと分析物との間の結合が一次アプタマーと抗アプタマーとの間の親和性に対して非常に強い場合、抗アプタマーの相対量を増加させることが望ましい場合があり、それにより、前記比は１：１より大、である。非限定的な例は約１：１である。
【０１６４】
特定の非限定的な実施形態では、抗アプタマーアッセイを溶液中で行うことができる。デオキシコルチゾン（ｄｅｏｘｙｃｏｒｔｉｓｏｅｎ）（図３Ａ〜Ｂ）を測定するための結果を示す、様々な分析物を検出するための、溶液中の抗アプタマーアッセイの使用の非限定的な例を図３Ａ〜Ｌに示す。デオキシコルチゾン（図３Ａ−Ｂ）；アルドステロン（図３Ｃ〜Ｄ）；コルチゾン（図３Ｅ〜Ｆ）；テストステロン（図３Ｇ−Ｈ）；Ｐｈｅｎ−ＣｐＲｈ（図３Ｉ−Ｊ）、及びフェニルアラニン（図３Ｋ−Ｌ）；を測定した結果を示す。例示として提供される特定の非限定的な例において、４００ｎＭ  ＦＡＭ−アプタマー溶液及び４倍(four-times)濃縮Ｉｏｗａ  Ｂｌａｃｋ抗アプタマー（「補体鎖(complement  strand)」）溶液を、緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＫＣｌ、ｐＨ７．５）において別々に調製した。これらの溶液は、沸騰水中で５分間インキュベートすることによって別々にアニールされ、室温で約３０分間冷却される。そうしている間に、各アプタマーのターゲット溶液の２倍濃縮物を調製する。前記アプタマー及び抗アプタマー溶液の３０分間のインキュベーション期間の後、前記アプタマー溶液の１８．７５μｌを最初に３８４ウェルプレートに添加し、次いで前記ターゲット溶液の３７．５μｌを添加し、次いで抗アプタマー溶液の１８．７５μｌが直ちに添加される。インキュベーションなしで、蛍光測定を開始し、蛍光プレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ  ＩＩマイクロプレートリーダー、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、室温で＞８時間、５分毎に読み取る。アプタマーの最終濃度は１００ｎＭであり、相補鎖の濃度は、７５μＬ反応容量中のＣＳアプタマー（１０００ｎＭ）を除くすべてについて１００ｎＭである。
【０１６５】
特定の非限定的な実施形態では、抗アプタマーアッセイは、一次アプタマー又は抗アプタマーが固相に結合した固相アッセイで行うことができる（例えば、ＥＬＩＳＡ様フォーマット）。様々な分析物を検出するための固相アッセイとしての抗アプタマーアッセイの使用の非限定的な例を、デオキシコルチゾン（図４Ａ）、グルコース（図４Ｂ）及びフェニルアラニン（図４Ｃ）について図４Ａ〜Ｃに示す。
【０１６６】
特定の非限定的な実施形態では、本明細書に記載の抗アプタマーアッセイを実施するためのキットが提供される。例えば、前記キットは、興味対象の分析物及び対応する抗アプタマーに向けられた一次アプタマーを含む。そのようなキットに含まれ得る一次アプタマーの非限定的な例は、本明細書に記載の一次アプタマー、例えばセクション５．１及び図５０Ａ〜Ｂ〜図１０２Ａ〜Ｂに記載される、及び本明細書に記載の対応する抗アプタマーを包含する。前記キットは、場合によって、ターゲット分析物、例えばターゲット分析物を含むコントロール溶液、及び／又は標準曲線をさらに含んでもよい。
【０１６７】
５．３  擬似サンドイッチアッセイ
本出願は、溶液中（図４７Ａ〜Ｄ）及びプレート上（図４７Ｅ〜Ｆ）における擬似サンドイッチアッセイを開示する。特定の非限定的な実施形態では、擬似サンドイッチアッセイは一次アプタマーを用いる。
【０１６８】
特定の実施形態は、「擬似サンドイッチアッセイ」、又はサンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）前記分析物に結合するコア配列と、センサーオリゴヌクレオチドに相補的な部分とを含む一次アプタマー、
（ｂ）センサーオリゴヌクレオチド、及び場合によって
（ｃ）ｃｏｍｐオリゴヌクレオチド、
の有効量と接触させるステップであって、そのうちの１つ以上は、前記一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドが互いに結合しているかどうか、又は一次アプタマーが分析物に結合しているかどうかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）に結合しているステップ、
を含む方法、を提供する。
【０１６９】
特定の非限定的な実施形態では、当該方法は、
（１）一次アプタマー（Ａｐ）を溶液相（図７）又は固相選択により単離するステップ（それらが既に利用可能でない限り）、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対形成を最小化することが望ましい場合、エナンチオマーアプタマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ）の使用（例えば、アプタマーを融合させること、又は分析物なしのバックグラウンド相互作用を最小にすること）、と；
（２）一次アプタマーをその構造スイッチングフォーマットで試験するステップと、その構造スイッチング形態を変性するステップであって、これを次に擬似サンドイッチアッセイフォーマットに変えるステップ（図６Ｃ）と；
（３）ターゲットとのそれらの複合体中の一次アプタマー又はｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒを用いて、溶液相又は固相選択（図９）のいずれかによって二次アプタマー（Ａｓ）を単離するステップと；
（４）ターゲットについてサンドイッチアッセイを実施するステップ（図８）と；
を含む。
【０１７０】
開示された一次アプタマーの例示的なリストは、それらの関連するセンサーオリゴヌクレオチドとともに、それらのセンサー（構造スイッチング）形態で図１０−４６に提供される（１６−２１）。開示された一次アプタマーは、溶液相選択を用いて単離され、サンドイッチアッセイ及び擬似サンドイッチアッセイに限定されることなく、アプタマーベースのアッセイにおいて使用され得る。特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマー（図１０〜４６）は、核酸のＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒ又は非天然エナンチオマーであり得る（２２−２５）。特定の非限定的な実施形態において、一次アプタマーは、「擬似サンドウィッチ」アッセイにおいて使用されるように直接操作することができる（図６、図４７及び図４８参照）。
【０１７１】
「擬似サンドイッチ」アッセイは、分析物結合アプタマー（一次アプタマー又はＡＰ）の、溶液相アッセイ（図６及び図４７Ａ〜Ｄ）において、又は溶液状態アッセイ（プレート、ビーズ又は側方流動装置の構成要素）において（この場合には広範な洗浄が可能である（図６及び図４７Ｅ〜Ｆ））、使用することができる、より安定な部分的に二重らせん状の複合体への可逆的相互作用を変換する。
【０１７２】
一次アプタマーがその分析物に結合されると、放出される安定な二重らせん生成物はまた、固体状態の表面（例えば、プレートウェル又はビーズ又は側方流動パッド）に捕捉され得、そして広範囲の洗浄に供され得る。従って、構造スイッチング原理を用いた他のアプタマーに基づくアッセイにおける高バックグラウンドの多くのソースを除去する。捕獲オリゴヌクレオチドと複合体を形成しているオリゴヌクレオチドは、次に、典型的なサンドイッチＥＬＩＳＡの場合のように、最初に結合した分析物の存在及び量を示す増幅された読み取り値(readout)を生成するために使用され得る。
【０１７３】
例えば、相補的オリゴヌクレオチド（ＣＤ）をアプタマーに伸長させることができる（ＣＤｅｘｔ）。ＣＤはそれ自体が平衡状態にあり、且つ、フルオレセインでアプタマーの消光を達成するために３〜５当量が使用されるのに対して、ＣＤｅｘｔは１当量しか必要とせず、アプタマーに対してほぼ不可逆的に結合する。これは、半応答点を助ける。
【０１７４】
次いで、この動力学的に保護された安定な複合体がＣＤｅｘｔ（ＣＤｅｘｔｃｏｍｐ）に相補的なオリゴヌクレオチドと相互作用することを可能にする「トーホールド」領域を加えることにより、ＣＤｅｘｔをさらに伸長させることができる。溶液中に過剰量のＣＤｅｘｔｃｏｍｐが存在すると、少量のアプタマーが結合ポケットを形成し、Ｌと相互作用することが可能になる。これは平衡の確立を引き起こし、溶液中への二重らせんの放出と共に実質的に増加する二重らせん形成の一定量をもたらす。このプロセスは溶液中の蛍光の増加によりモニターすることができる。
【０１７５】
擬似サンドイッチアッセイ、溶液中：
特定の非限定的な実施形態では、溶液中での擬似サンドイッチアッセイを行うことができる。ここでは、デオキシコルチコステロンによって二重らせん形成が誘発される。特定の非限定的な実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のヌクレオチド配列又は類似体を含む一次アプタマーは、ＣＤｅｘｔと複合体を形成することができ、そしてＣＤｅｘｔｃｏｍｐの存在下で、デオキシコルチコステロン及び類似体の存在下で蛍光の増加を生じ得る。
【０１７６】
特定の非限定的な実施形態では、二重らせん形成がチロシンによって誘発される、溶液中での擬似サンドイッチアッセイを行うことができる。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のヌクレオチド配列又は類似体を含む一次アプタマーは、ＣＤｅｘｔと複合体を形成することができ、ＣＤｅｘｔｃｏｍｐの存在下では、チロシン及び類似体の存在下で蛍光の増加を生じ得る。
【０１７７】
特定の非限定的な実施形態では、グルコースによって二重らせん形成が誘発される、溶液中での擬似サンドイッチアッセイを行うことができる。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のヌクレオチド配列又は類似体を含む一次アプタマーはＣＤｅｘｔと複合体を形成することができ、ＣＤｅｘｔｃｏｍｐの存在下ではグルコース及び類似体の存在下で蛍光の増加を生じ得る。
【０１７８】
特定の非限定的な実施形態では、フェニルアラニンによって二重らせん形成が誘発される、溶液中での擬似サンドイッチアッセイを実施することができる。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のヌクレオチド配列又は類似体を含む一次アプタマーは、ＣＤｅｘｔと複合体を形成することができ、ＣＤｅｘｔｃｏｍｐの存在下では、フェニルアラニン及び類似体の存在下で蛍光の増加を生じ得る。
【０１７９】
特定の非限定的な実施形態では、ＣＤｅｘｔ がプレート上に沈着される(deposited)場合、溶液の残部が除去されたときに二重らせんがプレートに付着したままであり、今度は広範囲に洗浄することができる。この二重らせんは、シグナル発生のために様々な方法で使用することができる。
【０１８０】
プレート上の擬似サンドイッチアッセイ：
特定の非限定的な実施形態において、溶液展開(solution-evolved)アプタマーセンサーは、固体表面フォーマット適用における使用、例えば、ＥＬＩＳＡ型アッセイ、に適合される。具体的には、分析物と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のヌクレオチド配列を含む特異的アプタマー（ＣＤｅｘｔに部分的にハイブリダイズされている）とからなる溶液センサーは、固体表面への固定が可能にするために付着化学(attachment  chemistry)で変性される。
【０１８１】
特定の非限定的な実施形態において、前記付着化学は、ビオチンの使用又はマレイミド官能基とスルフヒドリル官能基との間の共有結合を含む。加えて、競合体オリゴヌクレオチドＣＤｅｘｔ（ＣＤｅｘｔｃｏｍｐ）
（分析物の存在下でＣＤｅｘｔに結合するように最適化されている）に対する相補鎖は、「読み出し」産生分子を捕捉するために使用されるビオチン−タグ、ＨＲＰコンジュゲート、で修飾されている。特定の非限定的な実施形態において、「読み出し」は、視覚化のために、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ＨＲＰのための基質、を用いて行われる。
【０１８２】
特定の非限定的な実施形態において、＋／−分析物に対する表面結合センサーの応答の最適化は、いくつかのパラメーターの調整によって行うことができる：  表面のセンサー量；付着化学、相補的競合オリゴヌクレオチドの濃度；各ステップのバッファ；洗浄ステップ；ＨＲＰ濃度；ＨＲＰ基質。
【０１８３】
特定の実施形態では、一次アプタマーは、センサーオリゴヌクレオチドの少なくとも一部に相補的である少なくとも１つの操作配列を含む。
【０１８４】
一次アプタマー及びセンサーオリゴヌクレオチドの対を示す非限定的な説明例を図１０Ａ〜４２Ａに示す。例えば、限定するものではないが、グルコース結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）は、センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）に相補的な操作配列を含む。フェニルアラニン結合一次アプタマーＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２は、センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）に相補的な操作配列を含む。フェニルアラニン結合一次アプタマーＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３は、センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６）に相補的な操作配列を含む。ヒドロコルチゾン結合一次アプタマー（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）は、センサーオリゴヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０）に相補的な操作配列を含む、等。特定の非限定的な実施形態では、プレート上の擬似サンドイッチアッセイは、デオキシコルチコステロンを検出するために行うことができる。
【０１８５】
サンプルは、例えば、且つ限定ではなく、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、尿サンプル、組織サンプル、脳脊髄液サンプル、喀痰サンプル、糞便サンプル、水サンプル、工業用水サンプルなど、であり得る。
【０１８６】
特定の非限定的な実施形態では、前述のアッセイは、興味対象のいずれの分析物を検出及び／又は定量するのに使用することができる。前述のアッセイは、約１０００ダルトン未満、又は約５００ダルトン未満、又は約２００ダルトン未満の分子量を有する分析物の検出及び／又は定量において既存の方法よりも特に有利であり得る。ステロイド化合物、例えば限定されないが、コルチゾール、アルドステロン、デヒドロイソアンドロステロン、プロゲステロン、テストステロン；グルコース；アミノ酸、例えば限定されないが、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、シトルリン、チロシン、アラニン；医薬化合物、ビタミン、毒素、神経伝達物質（例えば、カテコールアミン、セロトニン）、ペプチド（バソプレッシン、オキシトシン、アンジオテンシン、ナトリウム利尿ペプチド、グルカゴン、インスリン及びその他）、抗生物質及び抗真菌化合物（例えば、アミノグルコシド）、大環状免疫抑制剤、又は脂質若しくは脂質複合体、を包含するがこれらに限定されない。
【０１８７】
特定の非限定的な実施形態では、アッセイは、例えば１０００Ｄを超えるような大きな分子に適用することもできる。
【０１８８】
特定の非限定的な実施形態では、キットは、本明細書に記載されるような擬似サンドイッチアッセイを実施するために提供される。特定の実施形態では、前記キットは、興味対象の分析物と、対応するセンサーオリゴヌクレオチドに向けられた一次アプタマーとを含む。そのようなキットに含まれ得る一次アプタマーの非限定的な例は、本明細書に記載されるような、例えばセクション６．１及び図５０Ａ〜Ｂ〜１０２ＡＢに記載されるような、一次アプタマーと、本明細書に記載のされるような対応するセンサーオリゴヌクレオチドとを包含する。一次アプタマー／センサーオリゴヌクレオチド対の非限定的な例は、図１０Ａ〜４２Ａに示される。前記キットは、本明細書に記載されるような１つ以上のコンオリゴヌクレオチドをさらに含み得る。前記キットは、場合により、ターゲット分析物、例えばターゲット分析物を含むコントロール溶液、及び／又は標準曲線をさらに含んでもよい。
【０１８９】
５．４  サンドイッチアッセイ
「二次アプタマー」（ＡＳ）は、遊離の一次アプタマーよりも選択的に、一次アプタマー（ＡＰ）の複合体（ＡＰ＊Ｌ）をそのターゲット分析物（リガンド、Ｌ）に結合し、三元複合体を形成する（ＡＰ＊Ｌ＊ＡＳ）。前記二次アプタマーは、溶液相又は固相選択によって単離される。開示された二次アプタマーの例示的で非限定的なリストを図４８及び４９に提供する。開示された二次アプタマーは、上記の選択のいずれかによって単離された。
【０１９０】
特定の実施形態では、サンドイッチアッセイが提供される。前記サンドイッチアッセイは、サンプルにおける興味対象の分析物の存在若しくは量を検出又は測定する方法であって、
（ｉ）サンプルの少なくとも一部を、
（ａ）前記分析物に結合するコア配列と、一次アプタマーが分析物に結合している場合、二次「サンドイッチ」アプタマーに結合する部分とを含む一次アプタマー、及び
（ｂ）二次「サンドイッチ」アプタマーであって、そのうちの１つ以上は、前記一次アプタマー及び二次「サンドイッチ」アプタマーが互いに結合しているか、又は結合が解けているかを検出することができる検出可能な部分（単数又は複数）に結合している、二次「サンドイッチ」アプタマー、
の有効量と接触させるステップ、
を含む方法、を含む。
【０１９１】
特定の実施形態では、一次アプタマーは、サンドイッチアプタマー（別名二次アプタマー）に結合する少なくとも１つの操作配列を含む。
【０１９２】
特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマーは、アプタマー（一次）に結合するアプタマー（二次）を含み、ここで、後者がそのリガンド（興味対象の分析物）に結合された場合、前者は後者に優先的に結合する。
【０１９３】
特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマーは、別の配列（一次）に結合する配列（「二次」）を含み、ここで、後者が分子に結合された場合、前者は後者に優先的に結合する。
【０１９４】
特定の非限定的な実施形態では、本発明は、２つのオリゴヌクレオチドを使用する分子についてのアッセイ（蛍光アッセイ及びＥＬＩＳＡ様）を開示し、ここで、後者がその分子に結合された場合、１つのオリゴヌクレオチドは他方に優先的に結合する。
【０１９５】
特定の非限定的な実施形態では、１つのアプタマー（一次）は受容体を形成するのに十分である。
【０１９６】
分子中の第２の結合部位（エピトープ）の利用可能性を有しない「サンドイッチ」アッセイは、三元複合体を形成する（ＡＰ＊Ｌ＊ＡＳ）（図８）二次アプタマー（ＡＳ；別名サンドイッチアプタマー又は二次サンドイッチアプタマー）によって可能にされる。開示されたサンドイッチアッセイにおいて、一次アプタマー及び二次アプタマーは、「サンドイッチ」成分であり、ここでＬはターゲットである。特定の非限定的な実施形態において、サンドイッチアッセイは、溶液中（図４８及び４９）又は固体表面上（図４９）（非限定的な例において、プレート、ビーズ、又はラテラルフローデバイスのいずれの構成要素）で実施することができる。
【０１９７】
特定の非限定的な実施形態では、本明細書に記載のサンドイッチアッセイを実施するためのキットが提供される。例えば、前記キットは、興味対象の分析物に向けられた一次アプタマーと、対応するサンドイッチアプタマー（別名、第２アプタマー）とを含む。このようなキットに含まれ得る一次アプタマーの非限定的な例は、本明細書に記載される、例えばセクション６．１及び図５０Ａ〜Ｂ〜１０２ＡＢに記載されているような、一次アプタマーと、本明細書に記載されるような対応するサンドイッチ／二次アプタマーとを包含する。前記キットは、場合によってターゲット分析物、例えばターゲット分析物を含むコントロール溶液、及び／又は標準曲線、をさらに含むことができる。
【０１９８】
サンプルは、例えば且つ限定ではなく、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、尿サンプル、組織サンプル、脳脊髄液サンプル、喀痰サンプル、糞便サンプル、水サンプル、工業用水サンプルなど、であり得る。
【０１９９】
５．４．１．  二次アプタマーの単離
本出願は、ＳＥＬＥＸプロセスを用いた二次アプタマーの単離を開示する。
【０２００】
特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー（Ａｓ）を選択するための方法を実施することができる。当該方法はまた、いくつかの場合において組み合わせることができ（図９）、固相選択と溶液相選択とを含む。
【０２０１】
固体状態選択
固体状態選択の間、ターゲットアプタマー（Ａｐ）をマトリックス（例えば、ビーズ）に結合させ、ＡＰ＊Ｌ複合体について親和性を有するアプタマー候補を単離するため、ターゲット分析物Ｌの存在下ライブラリー（例えば、これに限定されるものではないが、予め構造化された又は構造化されていないＮ２０−１００）とともにインキュベートする（図９Ａ）。これらのオリゴヌクレオチドはＰＣＲ増幅され、一本鎖種が再生され、及び次いで次の選択サイクルで使用される。収束に到達するまでのプロセスを繰り返し、プールをクローニングし、配列決定し、ＡＳ候補をもたらす。対抗選択は、Ｌの不在下でＡｐへの結合剤の排除によって行われ、複合体への結合を確実にする。
【０２０２】
溶液相選択
溶液相でのプロセスは、相補的オリゴヌクレオチドを介してマトリックスに付着したプライマー間にステムを形成可能にする予め構造化されたライブラリーを使用し、ＡＳ候補が選択される。なぜなら、Ａｐへの結合によってそれらのループが閉じられ、固体表面からそれらが法主されるからである（図９Ｂ）。この場合の対抗選択は、リガンドなしのＡｐ及びリガンド自体に対するものである。
【０２０３】
特定の非限定的な実施形態では、選択において使用される一次アプタマーは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ヌクレオチド、又はｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒから作製することができる。Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒは、バックグラウンドを最小化し、親和性を高め、及び二次アプタマーの特性を改善するのに特に好適である。なぜなら、これらは、天然ＤＮＡによる隣接するＷａｔｓｏｎ  Ｃｒｉｃｋ塩基対形成を強固にしない、Ｌ−デオキシリボース又はリボースを有する鏡像核酸であるためである（２０−２３）。特定の非限定的な実施形態では、このようなＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒは、平面分子又は対称面を有する分子、例えばセロトニン又はドーパミン（図２８−３９に示されたアプタマーを逆転させることができる）又は他の神経伝達物質、について、アプタマーを逆転させることによって得ることができる。
【０２０４】
５．４．２．  グルコース結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
より具体的には、特定の非限定的な実施形態では、グルコースについての上記の方法に従って二次アプタマーを単離することができる。特定の非限定的な実施形態において、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がグルコースとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者が単糖類又はオリゴ糖類である場合）。特定の非限定的な実施形態では、第２アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がグルコースと複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列；とを含む。
【０２０５】
５．４．３．  フェニルアラニン結合一次アプタマに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、上記のフェニルアラニンについての上記方法に従って、二次アプタマーを単離することができる。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がフェニルアラニンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態において、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がアミノ酸又はペプチドとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はそれらの類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がフェニルアラニンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列と；を含む。
【０２０６】
５．４．４．  ヒドロコルチゾン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、ヒドロコルチゾンについての上記方法に従って、二次アプタマーを単離することができる。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がヒドロコルチゾンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がヒドロコルチゾンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２０７】
５．４．５．  デヒドロイソアンドロステロン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、二次アプタマーは、デヒドロイソアンドロステロンについての上記の方法に従って単離され得る。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がデヒドロイソアンドロステロンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がデヒドロイソアンドロステロンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２０８】
５．４．６．デオキシコルチコステロン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、二次アプタマーは、デオキシコルチコステロンについて上記の方法を用いて単離され得る。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４〜３５（図４８）のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む二次アプタマー、並びにワトソンクリック塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は非保存一での突然変異によって得られるそれらの類似体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２（図２１）のヌクレオチド配列を含む一次アプタマーに結合する（後者がデオキシコルチコステロンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がデオキシコルチコステロンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２０９】
５．４．７．  テストステロン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、第２アプタマーは、テストステロンについての上記の方法に従って単離され得る。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がテストステロンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がテストステロンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１０】
５．４．８．  スフィンゴシン−１−リン酸化結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、スフィンゴシン−１−リン酸についての上記の方法に従って二次アプタマーを単離することができる。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がスフィンゴシン−１−リン酸との複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がスフィンゴシン−１−リン酸との複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１１】
５．４．９．ドーパミン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、ドーパミンについての上記の方法に従って、二次アプタマーを単離することができる。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置の突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がドーパミンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がドーパミンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１２】
５．４．１０．  セロトニン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態では、セロトニンについての上記の方法を用いて二次アプタマーを単離した。特定の非限定的な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０（図４８）のヌクレオチド配列のいずれか１つを含む二次アプタマー、及びＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失及び挿入によって又は非保存位置の突然変異によって得られるそれらの類似体のいずれか１つは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８（図３４及び図４８Ｃ及びＤ）のヌクレオチド配列のいずれか１つを含む一次アプタマーに結合する（後者がセロトニンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がセロトニンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１３】
５．４．１１．  チロシン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、二次アプタマーは、チロシンについての上記の方法に従って単離され得る。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がチロシンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がチロシンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１４】
５．４．１２．  Ｌ−チロシン結合一次アプタマーに対する二次アプタマー
特定の非限定的な実施形態において、二次アプタマーは、Ｌ−チロシンについての上記の方法に従って単離することができる。特定の非限定的な実施形態では、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対の置換、欠失、及び挿入によって、又は保存されていない位置での突然変異によって得られる二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がＬ−チロシンとの複合体にある場合）。特定の非限定的な実施形態では、二次アプタマー又はその類似体は、一次アプタマーに結合する（後者がＬ−チロシンとの複合体にある場合）。ここで、前記類似体は、前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列と；前記二次アプタマーのヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列と；を含む。
【０２１５】
特定の非限定的な実施形態において、このプロトコルは、図４９に示されるように、一次アプタマー及びそれらの類似体（spiegelmerを包含する）の全ての非限定的な例に対して、二次アプタマーを単離するため、好適に変性され及び最適化することができる。それはまた、１０００００ダルトン未満又は２０００ダルトン未満又は１０００ダルトン未満又は５００ダルトン未満又は２００ダルトン未満の分子質量を有するいずれの分子について、適用することができ、そして互いに競合しない２つのエピトープを有することはできない。
【０２１６】
５．４．１３  追加のサンドウィッチアッセイの実施形態
特定の非限定的な実施形態では、本出願は、蛍光検出及びＥＬＩＳＡ様フォーマットを伴うサンドイッチアッセイを提供する。
【０２１７】
上述の擬似サンドイッチアッセイでは、真のサンドイッチ相互作用はなく（したがって、「擬似サンドイッチ」）、非競合サンドイッチＥＬＩＳＡと同様のフォーマットを可能にする二重らせんの存在下に、リガンド＊アプタマー相互作用が「翻訳」された。しかし、ある実施形態では、サンドイッチアッセイは、互いに競合することなく、同時に１つの分子に結合する２つのアプタマーを含む。
【０２１８】
本出願の特定の非限定的な実施形態では、アプタマー＊リガンド複合体に対するアプタマー又は二次アプタマーは、リガンドとの複合体が生成された場合に、一次アプタマーに結合する（図８及び図４８）。特定の実施形態では、サンドイッチアッセイは高い感度をもたらす。特定の非限定的な実施形態では、アプタマー＊リガンド複合体に対するアプタマーは、微細に調整された相補性を有する洗練されたスイッチとして作用することができる。それらのうちの１つによってリガンドを感知すると、それらは３成分（３次）複合体に一緒になる（図４９）。
【０２１９】
溶液中のサンドイッチアッセイ
特定の非限定的な実施形態において、デオキシコルチコステロン及びセロトニンについての溶液中にサンドイッチが形成され、そして蛍光読み取り値が測定される（図４８Ａ〜Ｃ）。このアッセイにおいては、一次アプタマーが溶液中にあり、二次アプタマー（これも溶液中にある）は、構造スイッチング蛍光形態で変化し、且つ、クエンチャー標識競合オリゴヌクレオチドの放出を介して、前記一次アプタマーが標的化ステロイドとの複合体にある場合、前記一次アプタマーと相互作用している。
【０２２０】
プレート上のサンドイッチアッセイ
特定の非限定的な実施形態では、プレート上のサンドイッチアッセイをセロトニンについて実施する（図４８Ｄ〜Ｅ）。このアッセイでは、一次アプタマーはプレート上に沈着する一方、二次アプタマーは、前記一次アプタマーがリガンド（この場合、セロトニン）との複合体にある場合、前記一次アプタマーに結合する。
【０２２１】
特定の非限定的な実施形態では、前述のアッセイを、興味対象のいずれの分析物を検出及び／又は定量するのに使用することができ、約１０００ダルトン未満、又は約５００ダルトン未満、又は約２００ダルトン未満の分子量を有する分析物を検出及び／又は定量するにおいて、既存の方法よりも特に有利であり得る。ステロイド化合物、例えばであって、それに限定されない、コルチゾール、アルドステロン、デヒドロエピアンドロステロン、プロゲステロン、テストステロン；グルコース；アミノ酸、例えばであって、それに限定されい、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、シトルリン、チロシン、アラニン；医薬化合物、ビタミン、毒素、      神経伝達物質（例えば、カテコールアミン、セロトニン）、ペプチド（バソプレッシン、オキシトシン、アンジオテンシン、ナトリウム利尿ペプチド、グルカゴン、インスリンなど）、抗生物質及び抗真菌化合物（例えば、アミノグルコシド）、大環状免疫賦活剤、又は脂質若しくは脂質複合体、を包含するがそれらに限定されない。
【０２２２】
特定の非限定的な実施形態では、これらのアッセイは、１０００ダルトンを超える分子量を有するより大きな分子に適用することもできる。
【実施例】
【０２２３】
６．  実施例１  一次アプタマーの単離
本実施例は、一次アプタマー（ＡＰ）を単離するための方法及びそれらの構造の例を提供する。
【０２２４】
一次アプタマーの単離はＳＥＬＥＸ法を用いて行った。液相選択によって一次アプタマーを単離した。この方法は、小分子について固有の利点、例えば高い親和性及びアプタマーのスクリーニングの容易さ、を有するためである（表１）。非限定的な例を図１０−４６に示す。
【０２２５】
当該方法は、アガロース−ストレプトアビジンへのＰＣＲプライマーの１つに相補的なビオチン化ストランド（ＣＢ）を付着させるステップ（図７）と、ライブラリー（例えば、これに限定されないが、Ｎ８−Ｎ１００）からの配列を、プライマーのＣＢに対する相互作用を介して付着させるステップと、に基づいていた。ライブラリー上の２つのプライマー、５’−及び３’−、もまた部分的に相補的であった。これらのプライマーの相補領域間のステム形成に有利な方法でターゲットと相互作用する前記ライブラリーの全てのメンバーは、前記相補的ヌクレオチド（ＣＢ）を置換することによって前記アガロースから放出され、ＰＣＲ増幅において使用された。これにより潜在的なアプタマーの豊富なプールが形成された。
【０２２６】
ビオチンをダブシルで置換し、前記アプタマーにフルオレセインを結合させること（図６、ＣＤ）、アプタマーが結合することを確認すること、それらのＫｄを決定することが（これは競合アッセイであったため、半応答がＫｄ８０から離れてシフトし、そしてＣＤは過剰に存在した）、選択性を確立することにより、蛍光センサーをこの選択から直接得た。
【０２２７】
一次アプタマーを、以下のものについて上記の方法に従って単離した：
１．  Ｄ−グルコース（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）；
２．  Ｌ−フェニルアラニン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２〜４）；
３．  ヒドロコルチゾン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５〜７）；
４．  デヒドロイソアンドロステロン及びデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８〜１２）。
５．  テストステロン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３〜１７）；
６．  スフィンゴシン−１−リン酸（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）；
７．  ドーパミン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９〜２３）；
８．  セロトニン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４〜３０）；
９．  メラトニン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１〜３２）；及び
１０．  Ｌ−チロシン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３）。
【０２２８】
開示された一次アプタマーは、それらのターゲット分析物に結合し、且つ、それらの構造スイッチングフォーマットにおいて、それらは蛍光の増加によってその存在に応答した（図１０−４６及び図４７Ａ−Ｄ）。
【０２２９】
表１  一次アプタマー配列。
【表１】
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【０２３０】
表２には、選択（ＣＢ）又は蛍光検出（ＣＤ）において使用された相補的オリゴヌクレオチド（Ｃ）及び推定されたコアポケット（図１０−４６に示す）によって示されるような、それらの推定された二次構造におけるセロトニンについて単離された一次アプタマーの配列が含まれる。
【０２３１】
表２．  それらの推定された二次構造におけるセロトニンについての一次アプタマー、それらの選択において使用される相補的オリゴヌクレオチド、及びそれらの推定されるコアポケット。
【表２】
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【０２３２】
７．  実施例２  擬似サンドイッチアッセイ
本実施例では、溶液中において及びプレート上での蛍光検出（ＥＬＩＳＡ様のフォーマット）を用いた擬似サンドイッチアッセイが提供される。
【０２３３】
溶液展開アプタマーセンサーは、固体表面フォーマット適用、例えば、ＥＬＩＳＡ型アッセイでの使用に適合させた。分析物と競合オリゴヌクレオチドに部分的にハイブリダイズした一次アプタマーとで構成された溶液センサーは、固体表面への固着を可能にするために結合化学を用いて変性された。使用した表面付着化学は、ビオチン−ストレプトアビジン相互作用であった。加えて、（分析物の存在下で競合オリゴヌクレオチドに結合するように最適化された）競合オリゴヌクレオチドに対する相補鎖は、「検出」分子、例えばストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲート、を捕捉するために使用されたビオチンタグで修飾された。ＨＲＰ基質、ＴＭＢ、を可視化に使用した。
【０２３４】
＋／−分析物に対する表面結合センサーの応答の最適化は、表面上のセンサーの量、付着化学、相補的競合オリゴヌクレオチドの濃度、各ステップにおける緩衝液、洗浄ステップ、ＨＲＰ濃度、及びＨＲＰ基質、を包含するパラメータを調製することにより行われた。
【０２３５】
擬似サンドイッチアッセイのための実験手順、溶液中
溶液緩衝液は、ＳＥＬＥＸ緩衝液、又は、センサーが紛れ込む(work  in)ことが示されたいずれの他の緩衝液の組成を有していた。各サンプルウェルが５０ｎｍアプタマー−ＣＤｅｘｔの二重鎖の最終濃度を含有した（アプタマーに関連して、又は２倍若しくは３倍過剰で、ＣＤｅｘｔの化学量論量で）。分析物の選択された濃度を加え、ＣＤＥＸＴに対する補体を、２μＭの最終濃度まで添加した。最終混合物を２０分間室温でインキュベートし、次いで蛍光シグナルを測定した。
【０２３６】
二重螺旋形成が分析物によって誘発された溶液中の擬似サンドイッチアッセイは、以下について行われた：
１．デオキシコルチコステロン２１―グルコシド（ＤＯＧ）；
２．Ｌ−チロシン；
３．Ｄ−グルコース；及び
４．Ｌ−フェニルアラニン。
【０２３７】
一次アプタマーはＣＤｅｘｔと複合体を形成し、ＣＤｅｘｔｃｏｍｐの存在下では、それらのターゲット分析物の存在下で蛍光の増加を生じた（図４７Ａ〜Ｄ）。
【０２３８】
ＣＤｅｘｔをプレート上に沈着させた場合、溶液の残りが除去されたときに、二重らせんが前記プレートに付着したままであり、それを広範囲に洗浄することができた。
【０２３９】
擬似サンドイッチアッセイのための実験手順、固体状態
ストレプトアビジン被覆プレート上のデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）センサーＥＬＩＳＡを以下のように実施した。：  ＰＢＳ  ｐＨ７．４緩衝溶液中のＤＯＧセンサー１５１．５ピコモル（６．６μＬ×３０μＭ）を、１．４４μＭの最終センサー濃度を得るため、ウェル当たり１００μＬのＰＢＳ緩衝液を含有するストレプトアビジン被覆ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ，結合能５ピコモル）に添加した。混合物を室温で５分間インキュベートした。次いで、溶液をウェルから取り出し、ウェルをＰＢＳ緩衝液で８回完全に洗浄した。次に、１ウェルあたり１００μＬのＴＲＩＳ  ｐＨ７．４緩衝液（２０ｍＭのＴＲＩＳ、１４０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、及び２ｍＭのＭｇＣｌ２から構成される）を、続いて、５０μＭの最終デオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）濃度を得るため、ＤＭＳＯに溶解した２ｍＭ  ＤＯＧを２μＬ添加した。次いで、ビオチンタグを含有する一本鎖補体を添加して（２μＬの１００μＭストック）、１．７９μＭの最終濃度を得た。混合物を室温で２０分間インキュベートした。次いで、溶液を除去し、ウェルをＰＢＳ緩衝液で８回完全に洗浄した。次いで、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳの１００μＬ及び８０００倍に希釈したＨＲＰ−ＳＴＶコンジュゲートをウェルごとに添加し、室温で５分間インキュベートした。溶液を除去し、ウェルをＰＢＳ緩衝液で８回完全に洗浄した。次いで１００μＬのＴＭＢ／Ｈ２Ｏ２基質を各ウェルに添加し、６５２ｎｍでプレートリーダーで反応の進行をモニターした。
【０２４０】
ストレプトアビジン−ＥＬＩＳＡ（ＥＬＩＳＡ）９６ウェルプレートに対するデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）濃度依存性の結果を図４７Ｅに示す。８つのウェルをアプタマーセンサーでコーティングし、様々な濃度のデオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）分析物に曝露し、続いてＨＲＰ酵素で標識し、Ｈ２Ｏ２／ＨＲＰにより青色生成物に酸化されるＴＭＢ基質を添加することによって定量した。各ウェルに結合したＨＲＰ酵素の量に比例するＴＭＢの酸化の時間経過、並びに濃度依存性を測定した（図４７Ｅ）。
【０２４１】
ストレプトアビジン被覆プレート上でのフェニルアラニン（Ｐｈｅ）センサーＥＬＩＳＡを以下のように行った。：  ２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５，１Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭのＫＣｌの緩衝液中で、２０分間のインキュベーションステップを行った以外は、Ｐｈｅセンサーについて上述の手順を行った。使用したＰｈｅ濃度は、水中の２ｍＭストック溶液から０〜２００μＭであった。ストレプトアビジン−ＥＬＩＳＡ  ９６ウェルプレートに対するＰｈｅ濃度依存性の結果を図４７Ｆに示す。
【０２４２】
８．  実施例３  二次アプタマーの単離
本実施例は、二次アプタマー（ＡＳ）を単離するための方法及びそれらの構造を開示する。
【０２４３】
二次アプタマーの単離はＳＥＬＥＸ法を用いて行った。二次アプタマー（Ａｓ）を選択するための２つの方法が行われたが、これらはいくつかの場合に組み合わせることもできる（図９）。
【０２４４】
（１）  固体状態選択。
ターゲットアプタマー（Ａｐ）をマトリックス（例えば、ビーズ）に付着させ、ターゲット分析物Ｌの存在下でライブラリー（例えば、これに限定されるものではないが、事前構造化又は非構造化Ｎ２０−１００）と共にインキュベートして、親和性のＡｐ＊Ｌ複合体について親和性を有するアプタマー候補を単離した（図９Ａ）。これらのオリゴヌクレオチドをＰＣＲ増幅し、一本鎖種を再生し、次の選択サイクルで使用した。収束に到達するまでのプロセスを繰り返し、プールをクローニングし、配列決定した。ＡＳ候補をもたらした。対抗選択は、Ｌの非存在下でＡＰへの結合剤の排除、複合体への結合を確実にすることによって行われた。
【０２４５】
（２）  溶液相選択。
溶液相でのプロセスは、相補的オリゴヌクレオチドを介してマトリックスに付着したプライマー間にステムを形成可能にするための予め構造化されたライブラリーを使用し、ＡＳ候補が選択された。なぜなら、Ａｐへの結合によってそれらループが閉じられ、それらが固体表面から放出されるためである（図９Ｂ）。この場合の対抗選択は、リガンドなしのＡｐ及びリガンド自体に対するものであった。
【０２４６】
二次アプタマーを、以下について上記の方法を用いて単離した：
１．  デオキシコルチコステロン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４〜３５）；
２．セロトニン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６，５９、及び６０）。
【０２４７】
前記二次アプタマーは前記一次アプタマーに結合する（後者がそおれらのターゲット分析物との複合体にある場合）（図４８）。
【０２４８】
表３に前記二次アプタマーのヌクレオチド配列を示す。
表３．  二次アプタマー配列。
【表３】
2019519773.tif 000008
【０２４９】
セロトニンについての二次アプタマーは、以下：
ＣＧＡＣＴＧＧＴＡＧＧＣＡＧＡＴＡＧＧＧＧＡＡＧＣＴＧＡＴＴＣＧＡＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ５８）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５（図４８Ａ〜Ｃ）のヌクレオチド配列に由来した）
を含むセロトニンについての一次アプタマーのヌクレオチド配列に基づいて単離した。セロトニンについて二次アプタマーは、単離され、それらの推定された二次構造（図４８Ａ〜Ｃ）において、以下のヌクレオチド配列：
ＴＣＴＧＴＧＴＣＡＴＧＴＧＧＡＴＴＧＴＧＡＣＴＴＧＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＴＴＴＴＧＣＣＡＡＡＣＡＴＧＣＡＴＡＧＣＣＡＣＡＴＧＡＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）
を含む。
【０２５０】
単離された一次及び二次アプタマーは、実施例４に記載のサンドイッチアッセイを行うのに使用された。以下のヌクレオチド配列：
ＣＡＣＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１）
を含む相補的オリゴヌクレオチドを蛍光検出において使用した。
【０２５１】
９．  実施例４  サンドイッチアッセイ
本実施例では、蛍光検出及びＥＬＩＳＡ様のフォーマットによるサンドイッチアッセイの例が提供される。
【０２５２】
上記の擬似サンドイッチアッセイでは、真のサンドイッチ相互作用はなく（したがって、「擬似サンドイッチ」）、非競合サンドイッチＥＬＩＳＡと同様のフォーマットを可能にする二重らせんの存在下にリガンド＊アプタマー相互作用が「翻訳」された。しかし、真のサンドイッチは、互いに競合することなく、同時に１つの分子に結合する２つのアプタマー（２つの抗体に類似）を必要とする。これは、単純にそれらが２つのエピトープを欠いているという理由で、低分子にとって困難であり得る。
【０２５３】
別のアプローチが図８及び図４８に描かれている。ここで、リガンドとの複合体が生成された場合、アプタマー＊リガンド複合体、又は二次アプタマー、に対するアプタマーは一次アプタマーに結合している。この方法の利点は、それがより良い感度につながり得る真のサンドイッチであるということであった。アプタマー＊リガンド複合体に対するアプタマーは、細かく調整された相補性を有する洗練されたスイッチとして作用した。それらのうちの１つによってリガンドを感知すると、それらは三元（三次）錯体で一緒になった。
【０２５４】
サンドイッチアッセイのための実験手順、溶液中
溶液緩衝液は、ＳＥＬＥＸ緩衝液、又は、センサーが紛れ込む(work  in)ことが示されたいずれの他の緩衝液の組成を有していた。セロトニンの測定に使用した緩衝液は、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２を包含するＰＢＳ緩衝液であった。デオキシコルチコステロン及びテストステロンの測定のために、緩衝液は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２及び５ｍＭのＫＣｌからなっていた（ｐＨ７．５）。
【０２５５】
別々の溶液を並行して調製した：  （１）  ４倍濃縮一次アプタマー（ＡＰ）を緩衝液中で調製し、二次構造を案フォールディングするのに使用するまで沸点まで加熱した水浴中で＞５分間インキュベートし、次いで４倍濃縮した分析物（Ｌ）と混合し、＞３０分間インキュベートした。例えば２０μＬの４倍濃縮ＡＰ（例えば１０μＭ）及び２０μＬの４倍濃縮セロトニン溶液（例えば８００μＭ）。セロトニンの最終濃度は４００μＭであり、複合体ＡＰ−セロトニンの最終濃度は５μＭであった。これは２倍濃度のＡｐ−セロトニン複合体溶液である。  （２）  ２倍濃縮二次アプタマー（ＡＳ）溶液を調製した。ＦＡＭ蛍光コンジュゲート(conjugated)ＡＳ（１００ｎＭ）及びそのダブシル−クエンチャー鎖を混合し、十分なクエンチングのためにダブシル−クエンチャー鎖は３〜５倍過剰であった。この混合物を、沸点まで加熱した水浴中で＞５分間インキュベートした。二次構造のアンフォールディング及びクエンチャー鎖とのハイブリダイゼーションを促進するために使用した。別々に調製した溶液（１）及び（２）の各々を４０μＬずつ混合し、４０分間インキュベートした。次に、前記混合溶液の７５μＬを測定のために採取した。蛍光シグナルを測定した。各サンプルは、最終濃度２．５〜５μＭの一次アプタマー（ＡＰ），５０ｎＭの二次アプタマーＡＳ，１５０ｎＭ〜２５０ｎＭのダブシルクエンチャー鎖、及びプロット上の分析物の指示濃度を含有した。
【０２５６】
サンドイッチアッセイ、固体状態
まず、リガンド（Ｌ）及び一次アプタマー（Ａｐ）溶液を調製した。４００μＬの２×濃縮Ｂｉｏ−ＴＥＧコンジュゲート一次アプタマー（０．６ｐｍｏｌｅ／μＬ）を緩衝液中で調製し、使用するまで＞５分間沸騰水中でインキュベートした。２倍濃縮セロトニン溶液（例えば、バッファー中４００μＭ、５０μＬ）を調製し、次いで５０μＬのリガンド及び５０μＬのＡＰ溶液と混合し、そして＞３０分間インキュベートした。セロトニンの最終濃度は２００μＭであり、複合体ＡＰ−セロトニンの最終濃度は、ウェル当たり３０ｐｍｏｌｅであった。第２に、Ｂｉｏ−ＴＥＧ改変二次アプタマー溶液をバルクで調製し、ウェル当たり１００μＬ（０．５ｐｍｏｌｅ／μＬ）を適用した。この溶液を沸騰するまで加熱した水浴中で＞５分間インキュベートし、使用するまで冷却した。これらの溶液を調製した後、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。ＥＬＩＳＡプレートウェルをＰＢＳ（＋２ｍＭ  ＭｇＣｌ２）緩衝液で２回洗浄し、洗浄と洗浄との間に５分間浸漬した。ＡＳ溶液（１００μＬ）をウェルに加え、室温で約２０分間インキュベートしてビオチンをプレートに結合させた。次いで、溶液を除去し、ウェルを同じ緩衝液で８回、完全に洗浄した。次に、１００μＬの［Ｌ＊ＡＰ］溶液をウェルに添加し、室温で＞３０分間インキュベートした。次いで、溶液を除去し、ウェルを同じ緩衝液で８回、完全に洗浄した。次いで、１％ＢＳＡ及び１００００倍に希釈したＨＲＰ−ＳＴＶコンジュゲートを含有する１００μＬのＰＢＳをウェルごとに添加し、室温で５分間インキュベートした。溶液を除去し、ウェルを同じ緩衝液で１０回、完全に洗浄した。この洗浄の直後に、１００μＬのＴＭＢ／Ｈ２Ｏ２基質を各ウェルに添加し、反応の進行をプレートリーダーで３７０又は６５２ｎｍでモニターした。
【０２５７】
サンドイッチが溶液中で形成されたときの蛍光読み取り（図４８Ａ〜Ｃ）を以下の分析物について実施した：
１．  デオキシコルチコステロン２１−グルコシド（ＤＯＧ）；及び
２．  セロトニン。
【０２５８】
このアッセイでは、一次アプタマーが溶液中にあり、二次アプタマー（これも溶液中にある）は、構造スイッチング蛍光形態でチューニングされ、且つ、クエンチャー標識競合オリゴヌクレオチドの放出を介して、前記一次アプタマーが前記ターゲットステロイドとの複合体にある場合、前記一次アプタマーと相互作用していた（図４８Ａ〜Ｃ）。
【０２５９】
プレート上のサンドイッチアッセイを以下の分析物について実施した：
１．  セロトニン。
このアッセイでは、一次アプタマーがプレート上に沈着した一方、二次アプタマーは、前記一次アプタマーに結合した（それがセロトニンとの複合体にあった場合）（図４８Ｄ〜Ｅ）。
【０２６０】
１０．  実施例５  抗アプタマーアッセイ
４００ｎＭ  ＦＡＭ−アプタマー溶液及び４倍濃縮Ｉｏｗａ  Ｂｌａｃｋ相補鎖溶液を緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＫＣｌ、ｐＨ７．５）中で別々に調製する。これらの溶液は、沸騰水中で５分間インキュベートすることによって別々にアニールされ、そして室温で約３０分間冷却された。その一方、各アプタマーのターゲット溶液の２倍濃縮物を調製した。最終濃度を各プロットに示す。前記アプタマー及び補体鎖溶液の３０分間のインキュベーション期間の後、１８．７５μｌの前記アプタマー溶液を最初に３８４ウェルプレートに添加し、次いで３７．５μｌの前記ターゲット溶液を添加し、及び次いで１８．７５μＬの相補鎖溶液を直ちに添加する。インキュベーションなしで、蛍光測定を開始し、蛍光プレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ  ＩＩマイクロプレートリーダー、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて＞８時間、室温で５分毎に読み取った。アプタマーの最終濃度は１００ｎＭであり、相補鎖の濃度は、７５μＬ反応容量中のＣＳアプタマー（１０００ｎＭ）を除くすべてについて１００ｎＭである。ターゲット／リガンドの最終濃度を各プロットに示す。
【０２６１】
各アプタマー及びその相補鎖を以下に列挙する。結果を図３Ａ〜Ｌに示す。
【０２６２】
（Ａ）ＤＯＧアプタマー／相補体（１００ｎＭ：１００ｎＭ）
−  ＤＯＧＳ．２＿ｓｈｔ  ／  ＤＯＧＳ．２＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：ＣＧＡ  ＣＣＣ  ＧＧＡ  ＴＴＴ  ＴＣＣ  ＧＡＧ  ＴＧＧ  ＡＡＣ  ＴＡＧ  ＣＴＧ  ＴＧＧ  ＣＧＧ  ＴＣＧ  ／  ３６−ＦＡＭ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９２）；  ／５ＩＡＢｋＦＱ／ＣＧＡ  ＣＣＧ  ＣＣＡ  ＣＡＧ  ＣＴＡ  ＧＴＴ  ＣＣＡ  ＣＴＣ  ＧＧＡ  ＡＡＡ  ＴＣＣ  ＧＧＧ  ＴＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９３）
−  ＤＯＧＳ．２＿Ｆｕｌｌ／ＤＯＧＳ．２＿Ｆｕｌｌ＿ａｎｔｉ：  ／５６−ＦＡＭ  ／  ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＣＣ  ＧＧＡ  ＴＴＴ  ＴＣＣ  ＧＡＧ  ＴＧＧ  ＡＡＣ  ＴＡＧ  ＣＴＧ  ＴＧＧ  ＣＧＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  Ｃ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９４）；  ＧＧＧ  ＡＣＧ  ＡＣＣ  ＧＣＣ  ＡＣＡ  ＧＣＴ  ＡＧＴ  ＴＣＣ  ＡＣＴ  ＣＧＧ  ＡＡＡ  ＡＴＧ  ＣＧＧ  ＧＴＣ  ＧＴＣ  ＣＣＧ  ＡＧＡ  Ｇ  ／  ３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９５）
【０２６３】
（Ｂ）ＡＬＤアプタマー／相補体：（１００ｎＭ：１００ｎＭ）
−  ＡＬＤＳ．１＿ｓｈｔ  ／  ＡＬＤＳ．１＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＡＴＡ  ＧＴＴ  ＧＴＴ  ＣＴＴ  ＡＧＣ  ＧＡＴ  ＧＴＴ  ＣＡＧ  ＣＧＴ  ＴＧＴ  ＣＧ  ／  ３６−ＦＡＭ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９６）；  ／５ＩＡＢｋＦＱ  ／  ＣＧＡ  ＣＡＡ  ＣＧＣ  ＴＧＡ  ＡＣＡ  ＴＣＧ  ＣＴＡ  ＡＧＡ  ＡＣＡ  ＡＣＴ  ＡＴＣ  ＴＧＴ  ＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９７）
−  ＡＬＤＳ．１＿Ｆｕｌｌ  ／  ＡＬＤＳ．１＿Ｆｕｌｌ＿ａｎｔｉ：  ／５６−ＦＡＭ  ／  ＣＴＣ  ＴＣＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＡＴＡ  ＧＴＴ  ＧＴＴ  ＣＴＴ  ＡＧＣ  ＧＡＴ  ＧＴＴ  ＣＡＧ  ＣＧＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＣＣＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９８）；  ＧＧＧ  ＡＣＧ  ＡＣＡ  ＡＣＧ  ＣＴＧ  ＡＡＣ  ＡＴＣ  ＧＣＴ  ＡＡＧ  ＡＡＣ  ＡＡＣ  ＴＡＴ  ＣＴＧ  ＴＣＧ  ＴＣＣ  ＣＧＡ  ＧＡＧ  ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９９）
【０２６４】
（Ｃ）ＣＳアプタマー／相補体：（１００ｎＭ：１０００ｎＭ）
ＣＳＳ．１＿ｓｈｔ／  ＣＳＳ．１＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：  ＧＡＣ  ＧＡＣ  ＧＣＣ  ＣＧＣ  ＡＴＧ  ＴＴＣ  ＣＡＴ  ＧＧＡ  ＴＡＧ  ＴＣＴ  ＴＧＡ  ＣＴＡ  ＧＴＣ  ＧＴＣ  ／３６−ＦＡＭ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３００）；  ／５ＩＡＢｋＦＱ／ＧＡＣ  ＧＡＣ  ＴＡＧ  ＴＣＡ  ＡＧＡ  ＣＴＡ  ＴＣＣ  ＡＴＧ  ＧＡＡ  ＣＡＴ  ＧＣＧ  ＧＧＣ  ＧＴＣ  ＧＴＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０１）
【０２６５】
（Ｄ）  ＴＥＳアプタマー／相補体：  ＴＥＳ．１＿ｓｈｔ／  ＴＥＳ．１＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：  ＡＣＧ  ＧＧＡ  ＴＧＴ  ＣＣＧ  ＧＧＧ  ＴＡＣ  ＧＧＴ  ＧＧＴ  ＴＧＣ  ＡＧＴ  ＴＣＧ  Ｔ／３６−ＦＡＭ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０２）；  ／５ＩＡＢｋＦＱ／ＡＣＧ  ＡＡＣ  ＴＧＣ  ＡＡＣ  ＣＡＣ  ＣＧＴ  ＡＣＣ  ＣＣＧ  ＧＡＣ  ＡＴＣ  ＣＣＧ  Ｔ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０３）
【０２６６】
（Ｅ）  Ｐｈｅ−ＣｐＲｈ  アプタマー／相補体：
Ｐｈｅ−ＣｐＲｈ＿ｓｈｔ／  Ｐｈｅ−ＣｐＲｈ＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：  ／５６−ＦＡＭ／ＣＧＡ  ＣＡＣ  ＡＧＣ  ＧＴＧ  ＡＧＣ  ＣＡＡ  ＣＴＡ  ＡＴＴ  ＡＧＴ  ＧＣＧ  ＴＡＴ  ＴＧＴ  ＣＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０４）；  ＣＧＡ  ＣＡＡ  ＴＡＣ  ＧＣＡ  ＣＴＡ  ＡＴＴ  ＡＧＴ  ＴＧＧ  ＣＴＣ  ＡＣＧ  ＣＴＧ  ＴＧＴ  ＣＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０５）
【０２６７】
（Ｆ）  Ｐｈｅ  アプタマー／相補体：
Ｐｈｅ＿  ｓｈｔ／  Ｐｈｅ＿ｓｈｔ＿ａｎｔｉ：  ／  ＧＡＣ  ＣＧＧ  ＴＧＧ  ＧＧＧ  ＴＴＣ  ＴＴＴ  ＴＴＣ  ＡＧＧ  ＧＧＡ  ＧＧＴ  ＡＣＧ  ＧＴＣ  ／３６−ＦＡＭ／（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０６）；  ／５ＩＡＢｋＦＱ／ＧＡＣ  ＣＧＴ  ＡＣＣ  ＴＣＣ  ＣＣＴ  ＧＡＡ  ＡＡＡ  ＧＡＡ  ＣＣＣ  ＣＣＡ  ＣＣＧ  ＧＴＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０７）
【０２６８】
１１．  実施例６  サンドイッチアッセイ
図４９Ｈは、セロトニン（ＳＲＴＮＳ．１）に結合する一次アプタマー（ＡＰ）と、アプタマー（一次）に結合する二次アプタマー（ＳＲＴＮ  ２ｎｄ  Ａｐｔ１）：
ＧＴＧ  ＧＴＴ  ＡＧＴ  ＡＡＣ  ＴＴＧ  ＣＡＣ  ＧＣＣ  ＧＣＣ  ＣＡＡ  ＴＴＧ  ＣＴＡ  ＴＴＣ  ＡＴＧ  ＡＣＡ  ＡＧＣ  ＣＡＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２５１）
とを示す。ここで、後者がそのリガンドに結合された場合、前者は後者に優先的に結合する。点線を有する着色された文字は、２つのアプタマー間の仮想部分ハイブリダイゼーション領域を示す。これらの２つのアプタマーは、ストレプトアビジン被覆プレート上に二次アプタマーを固定化し、溶液中に一次アプタマーを固定化することによってＥＬＩＳＡ様アッセイに適用される。分光光度シグナルは、セロトニン分析物に比例して増加する。シグナルは、ＳＲＴＮＳ．１にコンジュゲートしたビオチンを通して産生され、ストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートを結合し、基質ＴＭＢを触媒する（図４９Ｉ）。シグナルの増加は、セロトニンが漸増濃度で存在するとき、より多くの結合があることを確認する。
【０２６９】
図４９Ｊは、セロトニンに結合する一次アプタマー（金色のボール）と、アプタマー（一次）に結合する二次アプタマー（ＡＳ）（ＳＲＴＮ  ２ｎｄ  Ａｐｔ．２：  ＴＣＴ  ＧＴＧ  ＴＣＡ  ＴＧＴ  ＧＧＡ  ＴＴＧ  ＴＧＡ  ＣＴＴ  ＧＣＣ  ＣＡＣ  ＡＡＣ  ＧＡＴ  ＴＴＴ  ＧＣＣ  ＡＡＡ  ＣＡＴ  ＧＣＡ  ＴＡＧ  ＣＣＡ  ＣＡＴ  ＧＡＣ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２５２）とを表す。ここで、後者がそのリガンドに結合した場合、前者は後者に優先的に結合する。点線を有する着色した文字は、２つのアプタマー間の部分的ハイブリダイゼーション領域を示す。ＳＲＴＮ  ２ｎｄ  Ａｐｔ．２（Ｆコンジュゲートした鎖、「Ｆ」はフルオレセインを示す）は、リガンドと、クエンチャー（Ｄ、ダブシル）を担持した相補オリゴヌクレオチドとの間の競合に基づいたフォーマットにおいて示されている。前記クエンチャー鎖（灰色のＣＤ）は、ターゲット（ＳＲＴＮＳ．１  ＋  セロトニン）結合への二次立体配座の変化を介して、アプタマーの５’末端と最初にハイブリダイズする。このクエンチャーはアプタマー鎖から放出され、そして蛍光シグナルの増加をもたらす。青い線よりも高い赤い線は、相補オリゴヌクレオチドがクエンチャー（ＣＤ）で置き換えられていることを示す。一次アプタマー（ＡＰ）が存在する場合（ＬＯＷＥＲ）（すなわち、すでに存在するリガンドに対する一次アプタマーが添加された場合に結合が生じる）か、又は一次アプタマーが既に存在する場合に溶液に（ＵＰＰＥＲ）セロトニンが添加された場合のいずれか（図４９Ｋ）。
【０２７０】
図４９Ｌは、プレート上のトリミングされた二次アプタマー（ＳＲＴＮ  ２ｎｄ  Ａｐｔ１）と、溶液中の一次アプタマー（ＳＲＴＮＳ．１）とを有し、ストレプトアビジンに対するＨＲＰ−コンジュゲート、ストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲート、を介して増幅すること、及び基質ＴＭＢを触媒することを有する、ＥＬＩＳＡアッセイを示す。赤い線は、セロトニンが存在する場合、より多くの結合が存在することを示す（図４９Ｍ）。特定の非限定的な実施形態では、一次及び二次アプタマーが存在する逆のフォーマットが両方とも可能である。
【０２７１】
図４９Ｎは、ＤＯＧ（ＤＯＧＳ．２）に結合する一次アプタマー（ＡＰ）と、アプタマー（一次）に結合する二次アプタマー（ＡＳ）とを表す。ここで、後者がそのリガンドに結合されている場合、前者は後者に優先的に結合している（ＤＯＧ  ２ｎｄ  Ａｐｔ．１：  ＴＣＴ  ＧＴＧ  ＴＣＡ  ＴＧＴ  ＧＧＣ  ＧＣＣ  ＴＣＧ  ＡＣＣ  ＣＣＡ  ＧＣＣ  ＴＴＧ  ＧＴＡ  ＧＣＴ  ＧＴＴ  ＧＧＣ  ＣＡＣ  ＡＣＡ  ＡＧＡ  ＧＣＡ  ＣＡＴ  ＧＡＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５３））。点線を有する色付き文字は、２つのアプタマー間の部分的ハイブリダイゼーション領域を示す。ＤＯＧ  ２ｎｄ  Ａｐｔ．２（Ｆコンジュゲートされた鎖、「Ｆ」はフルオレセインを示す）は、リガンドと、クエンチャー（Ｄ、ダブシル）を有する相補的オリゴヌクレオチドとの間の競合に基づく形式で示される。クエンチャー鎖（灰色）は、ターゲット（ＤＯＧＳ．２  ＋  ＤＯＧ）結合時の二次立体構造変更により、前記アプタマーの５’末端と最初にハイブリダイズし、このクエンチャーは前記アプタマー鎖から放出される。それは蛍光シグナルを増加させる。（ＴＯＰ）は、我々がＤＯＧを添加すると二次アプタマーが一次アプタマーに結合することを示し（Ｘ軸上のステロイド濃度）、（ＢＯＴＴＯＭ）は、二次アプタマーが一次アプタマーの存在下でのみＤＯＧに結合することを示す（図４９Ｏ）。
【０２７２】
１２．  実施例７  二次アプタマーＥＬＩＳＡのためのプロトコル（サンドイッチアッセイ）
プレート上の二次アプタマー及び溶液中の一次アプタマー方法（図４９Ｐ）。ビオチン化二次アプタマーをストレプトアビジン被覆プレート上、適当な緩衝液中で室温で約３０分間固定し、次いで過剰の結合が解けている(unbound)アプタマーを除去するために緩衝液で洗浄する。一次アプタマー及びそのターゲットを室温で４０分間プレインキュベートし、次いで固定した二次アプタマーに添加し、プレート上で４０分間インキュベートする。次に１００μＬのＰＢＳ（ｗ．１％ＢＳＡ）中に１００００倍に希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰを加え、２０分間インキュベートした後、次いでＰＢＳで十分に洗浄する。次いで、ＴＭＢ基質ミックスを添加し、３７０ｎｍでの吸光度の変化を４５分間記録する。
【０２７３】
プレート上の一次アプタマー及び溶液中の二次アプタマー方法（図４９Ｑ）。ビオチン化された一次アプタマーをストレプトアビジン被覆プレート上に適切な緩衝液中で室温で約３０分間固定し、次いで過剰の未結合アプタマーを除去するために緩衝液で洗浄する。次いで、ターゲット溶液を固定化一次アプタマーに添加し、約４０分間インキュベートする。二次アプタマーをターゲット溶液の最上部のプレートに加え、約４０分間インキュベートし、次いで結合が解けている(unbound)二次アプタマーを除去するために緩衝液で洗浄する。次に１００μＬのＰＢＳ（ｗ．１％ＢＳＡ）中に１００００倍に希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰを加え、２０分間インキュベートした後、ＰＢＳで十分に洗浄する。次いで、ＴＭＢ基質ミックスを添加し、３７０ｎｍでの吸光度の変化を４５分間記録する。
【０２７４】
１３．  参考文献
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３４．  Ｋｅｅｆｅ，  Ａ．  Ｄ．；  Ｐａｉ，  Ｓ．；  Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，  Ａ．  “Ａｐｔａｍｅｒｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  ９：５３７−５５０  （２０１０）．
３５．  Ａｎｓｌｙｎ，  Ｅ．  ’Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ’  Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  ７２（３）：６８７−６９９  （２００７）．
３６．  Ｇｅｎｎａｄｙ  Ｖ．；  Ｏｓｈｏｖｓｋｙ，  Ｄ．；  Ｒｅｉｎｈｏｕｄｔ，  Ｄ．  Ｖ．；Ｖｅｒｂｏｏｍ，  Ｗ．  ’Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｗａｔｅｒ’  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ４６（１４）：  ２３６６−２３９３  （２００７）．
３７．  Ｊｏｎａｔｈａｎ  Ｗ．  Ｓｔｅｅｄ  （Ｅｄｉｔｏｒ−ｉｎ−Ｃｈｉｅｆ），  Ｐｈｉｌｉｐ  Ａ．  Ｇａｌｅ  （Ｅｄｉｔｏｒ−ｉｎ−Ｃｈｉｅｆ）  “Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｆｒｏｍ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ”  Ｗｉｌｅｙ，  ８  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｓｅｔ  （２０１２）．
３８．  Ｓｔｅｅｄ，  Ｊ．  Ｗ．；  Ａｔｗｏｏｄ，  Ｊ．  Ｌ．；  Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗｉｌｌｅｙ，  （２００９）．
３９．  Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，  Ｃ．  Ｊ．  ’Ｃｙｃｌｉｃ  ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｌ  ｓａｌｔｓ’  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  ８９（２６）：７０１７−７０３６  （１９６７）．
４０．  Ｋｙｂａ，  Ｅ．  Ｐ．；  Ｓｉｅｇｅｌ，  Ｍ．  Ｇ．；  Ｓｏｕｓａ，  Ｌ．  Ｒ．；  Ｓｏｇａｈ，  Ｇ．  Ｄ．  Ｙ．；  Ｃｒａｍ，  Ｄ．  Ｊ．  “Ｃｈｉｒａｌ，  ｈｉｎｇｅｄ，  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  ｍｕｌｔｉｈｅｔｅｒｏｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  ９５：２６９１−２６９２  （１９７３）．
４１．  Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，  Ｂ．；  Ｌｅｈｎ，  Ｊ．−Ｍ．；  Ｓａｕｖａｇｅ，  Ｊ．−Ｐ．  “Ｄｉａｚａ−ｐｏｌｙｏｘａ−  ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ  ｅｔ  ｍａｃｒｏｂｉｃｙｃｌｅｓ”  Ｔｅｔ  Ｌｅｔｔ  ２８８５−２８８８  （１９６９）．
４２．  Ｃｏｓｔａ  Ｊ．Ｂ．；  Ａｎｄｒｅｉｅｖ  Ａ．Ｉ．；  Ｄｉｅｃｋｍａｎｎ  Ｔ．  “Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ａｎｄ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｌａｃｈｉｔｅ  ｇｒｅｅｎ  ＲＮＡ  ａｐｔａｍｅｒ”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４；５２（３８）：６５７５−８３  （２０１３）．
４３．  Ｈｅｒｍａｎｎ，  Ｔ．；  Ｐａｔｅｌ，  Ｄ．  Ｊ．  “Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：８２０−８２５  （２０００）．
４４．  Ｘｉａ，  Ｔ．；  Ｙｕａｎ，  Ｊ．；  Ｆａｎｇ，  Ｘ．；  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ａｎ  ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ＤＮＡ  ａｐｔａｍｅｒ：  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｓｔｕｄｙ．  Ｊ  Ｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ  Ｂ  １１７（４８）：  １４９９４−５０００３  （２０１３）．
４５．  Ｖａｔｅｒ，  Ａ．；  Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ，  Ｓ．  “Ｔｏｗａｒｄ  ｔｈｉｒｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｐｔａｍｅｒｓ：  Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．”  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｄｅｖｅｌ  ６：  ２５３−２６１  （２００３）．
４６．  Ｖａｔｅｒ，  Ａ．；  Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ，  Ｓ．  “Ｔｕｒｎｉｎｇ  ｍｉｒｒｏｒ−ｉｍａｇｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｉｎｔｏ  ｄｒｕｇｓ：  ｔｈｅ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ２０（１）：  １４７−１５５  （２０１５）．
４７．  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｋ．  Ｐ．；  Ｌｉｕ，  Ｘ．  Ｎ．；  Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ，  Ｔ．  Ｎ．；  Ｌｉｎ，  Ｈ．  Ｙ．；  Ａｕｓｉｅｌｌｏ，  Ｄ．  Ａ．；  Ｋｉｍ，  Ｐ．  Ｓ．；  Ｂａｒｔｅｌ，  Ｄ．  Ｐ．  “Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｓｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｌ−ＤＮＡ  Ｌｉｇａｎｄ  ｏｆ  Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ．”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９４（２１）：１１２８５−１１２９０  （１９９７）．
４８．  Ｐｕｒｓｃｈｋｅ，  Ｗ．  Ｇ．；  Ｅｕｌｂｅｒｇ，  Ｄ．；  Ｂｕｃｈｎｅｒ，  Ｋ．；  Ｖｏｎｈｏｆｆ，  Ｓ．；  Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ，  Ｓ．  “Ａｎ  Ｌ−ＲＮＡ−ｂａｓｅｄ  ａｑｕａｒｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３：５１７３−５１７８  （２００３）．
４９．  Ｋａｔｏ，  Ｔ．；  Ｙａｎｏ，  Ｋ．；  Ｉｋｅｂｕｋｕｒｏ，  Ｋ．；ａｎｄ  Ｋａｒｕｂｅ，  Ｉ．  “Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ−ｗａｙ  ＤＮＡ  ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：１９６３−１９６８  （２０００）．
５０．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．  Ｎ．；  Ｇｒｅｅｎ，  Ｅ．  Ｇ．；  Ｓｅｍｏｖａ，  Ｓ．；  Ｎｉｋｉｃ，  Ｄ．Ｂ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．Ｗ．  “Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｒｒａｙｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｈｒｅｅ−ｗａｙ  ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２５：６０８５−６０８９  （２００３）．
５１．  Ｙａｎｇ，  Ｋ．−Ａ．；  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｓｔｅｆａｎｏｖｉｃ，  Ｄ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．  Ｎ．  “Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  Ｃｒｏｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  Ｓｅｎｓｏｒｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １３４：１６４２−１６４７  （２０１２）．
５２．  Ｉｓｋａｎｄｅｒ，  Ｋ．  Ｎ．；  Ｏｓｕｃｈｏｗｓｋｉ，  Ｍ．  Ｆ．；  Ｓｔｅａｒｎｓ−Ｋｕｒｏｓａｖａ，  Ｄ．  Ｊ．；  Ｓｔｅｐｉｅｎ，  Ｄ．；  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，  Ｃ．；  Ｒｅｍｉｃｋ，  Ｄ．  Ｇ．  “Ｓｅｐｓｉｓ：  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ，  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ”  Ｐｈｙｓ．  Ｒｅｖ．  ９３（３）：  １２４７−１２８８  （２０１３）．  
５３．  Ｂｅｎｅｄｉｃｔ，  Ｃ．  Ｒ．；  Ｒｏｓｅ，  Ｊ．  Ａ．  “Ａｒｔｅｒｉａｌ  ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ”  Ｃｉｒｃ  Ｓｈｏｃｋ  ３８（３）：  １６５−１７２  （１９９２）．
５４．  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｍ．  Ｆ．；  Ｂｒａｃｋｅｔｔ，  Ｄ．  Ｊ．；  Ｔｏｍｐｋｉｎｓ，  Ｐ，  Ｂｅｎｊａｍｉｎ，  Ｂ．；  Ａｒｃｈｅｒ，  Ｌ．  Ｔ．；  Ｈｉｎｓｈａｗ，  Ｌ．  Ｂ．  “Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ａｎｄ  Ｅ．  ｃｏｌｉ  ｓｈｏｃｋ”  Ａｄｖ  Ｓｈｏｃｋ  Ｒｅｓ  ６：１５−２６  （１９８１）．
５５．  Ｌａｎｄｒｙ  Ｄ．  Ｗ．，  Ｌｅｖｉｎ  Ｈ．  Ｒ．，  Ｇａｌｌａｎｔ  Ｅ．  Ｍ．，  Ａｓｈｔｏｎ  Ｒ．  Ｃ．，  Ｓｅｏ  Ｓ．，  Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ  Ｄ．，  Ｏｚ  Ｍ．  Ｃ．，  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｊ．  Ａ．  “Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｖａｓｏｄｉｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ”  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９５：  １１２２−１１２５  （１９９７）．
５６．  Ｌｉｎ，  Ｉ．  Ｙ．；  Ｍａ，  Ｈ．  Ｐ．；  Ｌｉｎ，  Ａ．  Ｃ．；  Ｃｈｏｎｇ，  Ｃ．  Ｆ．；  Ｌｉｎ，  Ｃ．  Ｍ．；  Ｗａｎｇ，  Ｔ．  “Ｌｏｗ  ｐｌａｓｍａ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ／ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ  ｒａｔｉｏ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ”  Ａｍ  Ｊ  Ｅｍｒｇ  Ｍｅｄ  ２３（６）：  ７１８−７２４  （２００５）．
５７．  Ｓａｍ，  Ｓ．；  Ｃｏｒｂｒｉｄｇｅ，  Ｔ．  Ｃ．；  Ｍｏｋｈｌｅｓｉ，  Ｂ．；  Ｃｏｍｅｌｌａｓ，  Ａ．  Ｐ．；  Ｍｏｌｉｔｃｈ，  Ｍ．  Ｅ．  “Ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ”  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｒｉｎｏｌ  （Ｏｘｆ）  ６０（１）：  ２９−３５  （２００４）．
５８．  Ｂｅｎｄｅｌ，  Ｓ．；  Ｋａｒｌｓｓｏｎ，  Ｓ．；  Ｐｅｔｔｉｌａ，  Ｖ．；  Ｌｏｉｓａ，  Ｐ．；  Ｖａｒｐｕｌａ，  Ｍ．；  Ｒｕｏｋｏｎｅｎ，  Ｅ．；  Ｆｉｎｎｓｅｐｓｉｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  “Ｆｒｅｅｌ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ”  Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｑ  １０６（６）：  １８１３−１８１９  （２００８）．
５９．  Ａｎｎａｎｅ，  Ｄ．；  Ｍａｘｉｍｉ，  Ｖ．；  Ｉｂｒａｈｉｍ，  Ｆ．；  Ａｌｖａｒｅｚ，  Ｊ．  Ｃ．；  Ａｂｅ，  Ｅ．；  Ｂｏｕｄｏｕ，  Ｐ．  “Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ａｄｒｅｎａｌ  Ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ”  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １７４：１３１９−１３２６，  ２００６．  
６０．  Ｍｏａｒｅｓ，  Ｒ．  Ｂ．；  Ｆｒｅｉｄｍａｎ，  Ｇ．；  Ｖｉａｎａ，  Ｍ．  Ｖ．；  Ｔｏｎｉｅｔｔｏ，  Ｔ．；  Ｓａｌｔｚ，  Ｈ．；  Ｃｚｅｐｉｅｌｅｗｓｋｉ，  Ｍ．  Ａ．  “Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ：  ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ．”  Ａｒｑ  Ｂｒａｓ  Ｅｎｄｏｒｃｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂｏｌ  ５７（８）：  ６３６−６４１  （２０１３）．    
６１．  Ｓａｌｇａｄｏ，  Ｄ．  Ｒ．；  Ｒｏｃｃｏ，  Ｊ．  Ｒ．；  Ｓｉｌｖａ，  Ｅ．；  Ｖｉｎｃｅｎｔ，  Ｊ．  Ｌ．  “Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：  ａ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ？”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １４（１）：  １１−２０  （２０１０）．
６２．  Ｚｈａｎｇ，  Ｗ．；  Ｃｈｅｎ，  Ｘ．；  Ｈｕａｎｇ，  Ｌ．；  Ｌｕ，  Ｎ．；  Ｚｈｏｕ，  Ｌ．；  Ｗｕ，  Ｇ．；  Ｃｈｅｎ，  Ｙ．  “Ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ：  Ｌｏｗ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ”  Ｅｘｐｅｒ  Ｔｈｅｒａｐ  Ｍｅｄ  ７（５）：  １３４２−１３４８  （２０１４）．
６３．  Ｓａｔｏ，  Ｙ．；  Ｆｕｊｉｗａｒａ，  Ｈ．；  Ｔａｋａｔｓｕ，  Ｙ．  “Ｃａｒｄｉａｃ  ｔｒｏｐｏｎｉｎ  ａｎｄ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｒａ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｓｓａｙｓ”  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ６０（３）：  １６０−１６７  （２０１２）．
６４．  Ｓｈｅｒｗｏｏｄ，  Ｍ．  Ｗ．；  Ｎｅｗｂｙ，  Ｋ．  “Ｈｉｇｈ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｔｒｏｐｏｎｉｎ  Ａｓｓａｙｓ：  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ，  Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  ａｎｄ  Ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ  Ｕｓｅ”  Ｊ  Ａｍ  Ｈｅａｔｈ  Ａｓｓｏｃ．３：  ｅ０００４０３  （２０１４）．
６５．  Ｃｏｘ，  Ｋ．  Ｌ．；Ｄ  ｅｖａｎａｒａｙａｎ，  Ｖ．；  Ｋｒｉａｕｃｉｕｎａｓ，  Ａ．；  Ｍａｎｅｔｔａ，  Ｊ．’  Ｍｏｎｔｒｏｓｅ，  Ｃ．；  Ｓｉｔｔａｍｐａｌａｍ，  Ｓ．  “Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ”  ｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｉｎｔｅｒｎｅｔ），  ＮＣＢＩ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｂｏｏｋｓｈｅｌｆ；  ｌａｓｔ  ｕｐｄａｔｅｄ：  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２４，  ２０１４．
６６．  Ｇａｎ，  Ｓ．Ｄ．；  Ｐａｔｅｌ，  Ｋ．  Ｒ．  “Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ”  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍ  １３３，  ｅ１２  （２０１３）．
６７．  Ｌｅｑｕｉｎ，  Ｒ．  “Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  （ＥＩＡ）／Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  （ＥＬＩＳＡ）”  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５１（１２）：  ２４１５−２４１８  （２００５）．
６８．  Ｆａｎ，  Ｍ．；  Ｈｅ，  Ｊ．  “Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ｈａｐｔｅｎ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ”  Ｃｈａｐｔｅｒ  ５  ｉｎ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌａｂｅｌｌｅｄ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  ｗｗｗ．ｉｎｔｅｃｈｏｐｅｎ．ｃｏｍ，  ａｃｃｅｓｓｅｄ  ａｔ：  ０６／０１／２０１５．
６９．  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｒ．  “Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ：  Ｔｗｉｎ  Ｇｏａｌｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ａｓｓａｙｓ”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １０（２）：  １３５−１４９  （２０１３）．  
７０．  Ｄｅ  Ｌｅｍｏｓ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｍｏｒｒｏｗ，  Ｄ．  Ａ．；  “Ｂｒａｉｎ  Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ”  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０６：  ２６８６−２８７０  （２００２）．
７１．  Ｏｓｂｏｒｎｅ，  Ｓ．  Ｅ．；  Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，  Ｅ．  Ｄ．  “Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｏｆ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９７  （２）：  ３４９−３７０  （１９９７）．
７２．  Ｖａｎｔ−Ｈｕｌｌ  Ｂ．，  Ｇｏｌｄ  Ｌ，  Ｚｉｃｈｉ  ＤＡ．  “Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ”  Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｈａｐｔｅｒ  ９：  Ｕｎｉｔ  ９．１  （２０００）．
７３．  Ｄｏｎｇ，  Ｊ．−Ｘ．；  Ｘｕ，  Ｃ．；  Ｗａｎｇ，  Ｈ．’  Ｘｉａｏ，  Ｚ．−Ｌ．；  Ｇｅｅ，  Ｓ．  Ｊ．；  Ｌｉ，  Ｚ．−Ｆ．；  Ｗａｎｇ，  Ｆ．；  Ｗｕ，  Ｗ．−Ｊ．；  Ｓｈｅｎ，  Ｙ．−Ｄ．；  Ｙａｎｇ，  Ｊ．−Ｙ．；  Ｓｕｎ，  Ｙ．−Ｍ．；  Ｈａｍｍｏｃｋ，  Ｂ．  Ｄ．  “Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”  Ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ｐｈａｇｅ  ＡｎｔｉＩｍｍｕｎｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｌａｃｈｉｔｅ  Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｌｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅ  Ｇｒｅｅｎ”  Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ６２（３４）：  ８７５２−８７５８  （２０１４）．
７４．  Ｉｈａｒａ，  Ｍ．；  Ｓｕｚｕｋｉ，  Ｔ．；  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｎ．；  Ｇｏｔｏ，  Ｊ．；  Ｕｅｄａ，  Ｈ．  “Ｏｐｅｎ−Ｓａｎｄｗｉｃｈ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  Ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ  １１−Ｄｅｏｘｙｃｏｒｔｉｓｏｌ”  Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ８１（２０）：  ８２９８−８３０４  （２００９）．
７５．  Ｓｈｅｎ，  Ｊ．；  ：Ｌｉ，  Ｙ．；  Ｇｕ，  Ｈ．；  Ｘｉａ，  Ｆ．；  Ｚｕｏ，  Ｘ．  “Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓａｎｄｗｉｃｈ  Ａｓｓａｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，  ａｎｄ  Ｉｏｎｓ”  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  １１４（１５）：  ７６３１−７６７７  （ｐａｇｅ  ７６６２）  （２０１４）．
７６．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．  Ｎ．，  ｄｅ  Ｐｒａｄａ，  Ｐ．，  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．  Ｗ．  “Ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ  ａｐｔａｍｅｒｉｃ  ｓｅｎｓｏｒｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，  １２２：１１５４７−１１５４８  （２０００）．
７７．  Ｃｈａｎｄｒａ，  Ｍ．；  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，  Ｓ．  Ｋ．  ’ＤＮＡ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｃａｎ  Ｂｅ  Ｅｑｕａｌｌｙ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｒｂｏｎ−Ｃａｒｂｏｎ  Ｂｏｎｄ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ’，  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １３０：２９３６−２９３７  （２００８）．
７８．  Ｐｉｎｈｅｉｒｏ，  Ｖ．  Ｂ．；  Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．  “Ｔｏｗａｒｄｓ  ＸＮＡ  ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  ｎｅｗ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｆｒｏｍ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ”  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３２（６）：  ３２１−３２８  （２０１４）．
７９．  Ｓａｎｔｏｒｏ，  Ｓ．  Ｗ．；  Ｊｏｙｃｅ，  Ｇ．  Ｆ．；  Ｓａｋｔｈｉｖｅｌ，  Ｋ．；  Ｇｒａｍａｔｉｋｏｖａ，  Ｓ．；  Ｂａｒｂａｓ，  Ｃ．  Ｆ．  “ＲＮＡ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｂｙ  ａ  ＤＮＡ  ｅｎｚｙｍｅ  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２２：２４３３−２４３９  （２０００）．
８０．  Ｐｅｒｒｉｎ  Ｄ．Ｍ．；  Ｇａｒｅｓｔｉｅｒ，  Ｔ．；  Ｈｅｌｅｎｅ，  Ｃ．  “Ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇａｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ：  ａ  ｍｅｔａｌ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡｓｅＡ  ｍｉｍｉｃ  ｗｉｔｈ  ｔｗｏ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｌｉｋｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２３：１５５６−１５６３  （２００１）．
８１．  Ｋｉｍｏｔｏ，  Ｍ．；  Ｙａｍａｓｈｉｇｅ，  Ｒ．；  Ｍａｔｓｕｎａｇａ，  Ｋ−Ｉ．；  Ｙｏｋｏｙａｍａ，  Ｓ．；  Ｈｉｒａｏ，  Ｉ．  ”Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＤＮＡ  ａｐｔａｍｅｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｐｈａｂｅｔ”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３１，４５３−４５７  （２０１３）．
８２．  Ｉｍａｉｚｕｍｉ，  Ｙ．；  Ｋａｓａｈａｒｅ，  Ｙ．；  Ｆｕｊｉｔａ，  Ｈ．；  Ｋｉｔａｄｕｍｅ，  Ｓ．；  Ｏｚａｋｉ，  Ｈ．；  Ｅｎｄｏｈ，  Ｔ．；  Ｋｕｗｈａｒａ，  Ｍ．；  Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，  Ｎ．  “Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｂａｓｅ−ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＤＮＡ  ａｐｔａｍｅｒｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １３５，  ９４１２−９４１９  （２０１３）．  
８３．  Ｂｒｕｋｎｅｒ，  Ｉ．；  Ｅｌ−Ｒａｍａｈｉ，  Ｒ．；  Ｇｏｒｓｋａ−Ｆｌｉｐｏｔ，  Ｉ．；  Ｋｒａｊｉｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｌａｂｕｄａ，  Ｄ．  “Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｒｏｂｅｓ  ｔｏ  ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｃｌｏｓｅｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３５（９）：  ｅ６６，  （２００７），  ａｎｄ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  ｃｉｔｅｄ  ｔｈｅｒｅｉｎ．
８４．  Ｂｒｕｋｎｅｒ，  Ｉ．；  Ｋｒａｊｉｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｄａｓｃａｌ，  Ａ．；  Ｌａｂｕｄａ，  Ｄ．  “Ａ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＤＮＡ  ｔｙｐｉｎｇ．”  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  ２（１１）：２８０７−１４  （２００７）．
８５．  Ａｙｅｌ，  Ｅ．；  Ｅｓｃｕｄe，  Ｃ．  “Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄ  ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＤＮＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｒｉｐｌｅｘ−ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３８（５）：ｅ３１  （２０１０），  ａｎｄ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  ｃｉｔｅｄ  ｔｈｅｒｅｉｎ．
８６．  Ｄａｒｆｅｕｉｌｌｅ，  Ｆ．；  Ｓ．  Ｒｅｉｇａｄａｓ；  Ｊ．  Ｈａｎｓｅｎ；  Ｈ．  Ｏｒｕｍ；  Ｃ．  Ｄｉ  Ｐｒｉｍｏ；  Ｊ．  Ｔｏｕｌｍｅ  （２００６）．  ’Ａｐｔａｍｅｒｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ａｎ  ＲＮＡ  ｈａｉｒｐｉｎ  ｓｈｏｗ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｔｈａｔ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．’  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５  （３９）：１２０７６−１２０８２．
８７．  Ｄｕｒａｎｄ，  Ｇ．；  Ｌｉｓｉ，  Ｓ．；  Ｒａｖｅｌｅｔ，  Ｃ．；  Ｄａｕｓｓｅ，  Ｅ．；  Ｐｅｙｒｉｎ，  Ｅ．；  Ｔｏｕｌｍｅ，  Ｊ．−Ｊ．  “Ｒｉｂｏｓｗｉｔｃｈｅｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｋｉｓｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｌｉｇａｎｄｓ”  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ５３（２７）：  ６９４２−６９４５  （２０１４）．
８８．  Ｌｕｅｎｓｅ，  Ｃ．  Ｅ．；  Ｍｉｃｈｌｅｗｓｋｉ，  Ｇ．；  Ｈｏｐｐ，  Ｃ．  Ｓ．；  Ｒｅｎｔｍｅｉｓｔｅｒ，  Ａ．；  Ｃａｃｅｒｅｓ，  Ｊ．  Ｆ．；  Ｆａｍｕｌｏｋ，  Ｍ．；  Ｍａｙｅｒ，  Ｇ．  “Ａｎ  ａｐｔａｍｅｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｐｉｃａｌ−ｌｏｏｐ  ｄｏｍａｉｎ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ”  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ４９（２７）：４６７４−４６７７，  （２０１０）．
８９．  Ｂｕｔｃｈｅｒ，  Ｓ．  Ｅ．；  Ｐｙｌｅ，  Ａ．  Ｍ．  “Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  Ｓｔａｂｉｌｉｚｅ  ＲＮＡ  Ｔｅｒｔｉａｒｙ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：  ＲＮＡ  Ｍｏｔｉｆｓ，  Ｐａｔｔｅｒｎｓ，  ａｎｄ  Ｎｅｔｗｏｒｋｓ”  Ａｃｃ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．  ４４（１２）：１３０２−１３１１  （２０１１）．
９０．  Ａｂｒａｈａｍ，  Ｍ．；  Ｄｒｏｒ，  Ｏ．；  Ｎｕｓｓｉｎｏｖ，  Ｒ．；  Ｗｏｌｆｓｏｎ，  Ｈ．  Ｊ．  “Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ”  ＲＮＡ  １４（１１）：２２７４−２２８９  （２００８）．
９１．  Ｂｕｔｃｈｅｒ，  Ｓ．  Ｅ．；  Ｈｅｃｋｍａｎ，  Ｊ．  Ｅ．；  Ｂｕｒｋｅ，  Ｊ．  Ｍ．  ’Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈａｉｒｐｉｎ  ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｄｏｍａｉｎｓ’．  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０  （５０）：  ２９６４８−２９６５１  （１９９５）．
９２．  Ｄｏｈｅｒｔｙ，  ＥＡ；  Ｄｏｕｄｎａ  ＪＡ  ’Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ’．  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  ３０：  ４５７−４７５  （２００１）．  
９３．  Ｒｉｎｋｅｒ，  Ｓ．；  Ｋｅ，  Ｙ．；  Ｌｉｕ，  Ｙ．；  Ｃｈｈａｂｒａ，  Ｒ．；  Ｙａｎ，  Ｈ．  “Ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ＤＮＡ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ｌｉｇａｎｄ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｎａｎｏｔｅｃｈ  ３：４１８−４２２  （２００８）．
９４．  Ｃｏｒｂｅｔｔ，  Ｐ．  Ｔ．；  Ｌｅｃｌａｉｒｅ，  Ｊ．；  Ｖｉａｌ，  Ｌ．；  Ｗｅｓｔ，  Ｋ．  Ｒ．；  Ｗｉｅｔｏｒ，  Ｊ．−Ｌ．；  Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｋ．  Ｍ．；  Ｏｔｔｏ，  Ｓ．  ’Ｄｙｎａｍｉｃ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ’．  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  １０６  （９）：３６５２−３７１１  （２００６）．
９５．  Ｗａｎｇ  Ｙ．；  Ｒａｎｄｏ  Ｒ．Ｒ．  “Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｔｏ  ＲＮＡ”  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２８１−２９０  （１９９５）．
９６．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．Ｎ．；  ｄｅ  Ｐｒａｄａ，  Ｐ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．Ｗ．  “Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｅｎｓｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ａｐｔａｍｅｒ  ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｙ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２２：  ９６７８−９６７９  （２０００）．
９７．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．Ｎ．；  ｄｅ  Ｐｒａｄａ，  Ｐ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．Ｗ．  “Ａｐｔａｍｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｓｅｎｓｏｒ  ｆｏｒ  ｃｏｃａｉｎｅ”，  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２３：  ４９２８−４９２９，  （２００１）．
９８．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．Ｎ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．Ｗ．  “Ａｐｔａｍｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｓｅｎｓｏｒ  ｆｏｒ  ｃｏｃａｉｎｅ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２４：  ９６７８−９６７９  （２００２）．
９９．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．Ｎ．  Ｋｏｌｐａｓｈｃｈｉｋｏｖ，  Ｄ．Ｍ．  ’Ｍｏｄｕｌａｒ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｓｅｎｓｏｒｓ’  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２６：  ９２６６−９２７０，  （２００４）．
１００．  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｓｈｅｎ，  Ａ；  Ｏｌａｈ，  Ｍ．；  Ｓｔｅｆａｎｏｖｉｃ，  Ｄ．；  Ｗｏｒｇａｌｌ，  Ｔ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉc，  Ｍ．Ｎ．  ”  Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｒｒａｙ  ｆｏｒ  ａｌｋａｌｏｉｄｓ”  Ｃｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ．  （Ｃａｍｂ）；（２２）：３１９３−５  （２００９）．
１０１．  Ｇｒｅｅｎ，  Ｅ．Ｇ．；  Ｏｌａｈ，  Ｍ．Ｊ．；  Ａｂｒａｍｏｖａ，  Ｔ．；  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｌ．；  Ｓｔｅｆａｎｏｖｉc，  Ｄ．；  Ｗｏｒｇａｌｌ，  Ｔ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉc，  Ｍ．Ｎ．  “Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ａｒｒａｙｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２８：  １５２７８−１５２８２  （２００６）．
１０２．  Ｓｔｏｌｔｅｎｂｕｒｇ，  Ｒ．；  Ｎｉｋｏｌａｕｓ，  Ｎ．；  Ｓｔｒｅｈｌｉｔｚ，  Ｂ．  “Ｃａｐｔｕｒｅ−ＳＥＬＥＸ：  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  Ａｐｔａｍｅｒｓ  ｆｏｒ  Ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ”  Ｊ  Ａｎａｌ  Ｍｅｔｈ  Ｃｈｅｍ  １５６９７  （２０１２）．
１０３．  Ｒａｊｅｎｄｒａｎ  Ｍ，；  Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，  Ａ．  Ｄ．  “Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ａｐｔａｍｅｒ  ｂｅａｃｏｎｓ  ｔｈａｔ  ｌｉｇｈｔ  ｕｐ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｚｉｎｃ”  Ａｎａｌ  Ｂｉｏａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ３９０：１０６７−７５  （２００８）．
１０４．  Ｎｕｔｉｕ，  Ｒ．；  Ｌｉ，  Ｙ．  “Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｐｔａｍｅｒｓ”  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ４４：  １０６１−１０６５  （２００５）．
１０５．  Ｈｕ，  Ｊ．；  Ｅａｓｌｅｙ，  Ｃ．  Ｊ．；  “Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ａｎｄ  ｒａｐｉｄ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔｓ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｐｔａｍｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｖｉａ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｃｈｉｐ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ”  Ａｎａｌｙｓｔ  １３６：３４６１−３４６８  （２０１１）．
１０６．  Ｎｕｔｉｕ，  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｌｉ，  Ｙ．  “Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｐｔａｍｅｒｓ”  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２５：４７７１−４７７８  （２００３）．
１０７．  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．；  １０７．  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｌｉｎ．  Ｑ  ’Ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，’  Ｂｉｏｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄ  ５：３４１１８−３４１１８７  （２０１１）．
１０８．  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｌｉｎ．  Ｑ  ’Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  Ａｐｔａｍｅｒｉｃ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｓｅｎｓｉｎｇ  ｏｆ  Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，’  Ｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｕａｔｏｒｓ  Ｂ：  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  １５４：  ５９−６６  （２０１１）．  
１０９．  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｌａｎｄｒｙ，  Ｄ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｌｉｎ．  Ｑ  ．  ’Ａｎ  Ａｐｔａｍｅｒｉｃ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，’  Ｊ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｌｅｃｔｒｏｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  Ｓｙｓｔ  １８（６）：  １１９８−１２０７  （２００９）．  
１１０．  Ｈｉｌｔｏｎ，  Ｊ．  Ｐ．；  Ｏｌｓｅｎ，  Ｔ．；  Ｋｉｍ，  Ｊ．；  Ｚｈｕ，  Ｊ．；  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｂａｒｂｕ，  Ｍ．；  Ｐｅｉ，  Ｒ．；  Ｓｔｏｊａｎｏｖｉｃ，  Ｍ．；  Ｌｉｎ，  Ｑ．  “Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒｍａｌｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｏｎ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｈｉｐ”  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，  １９（４）：７９５−８０４  （２０１５）．
１１１．  Ｌｉｎｎｅｔ，  Ｋ．  “Ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｓａｍｐｌｅ  ｓｉｚｅ  ｆｏｒ  ｍｅｔｈｏｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ”  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ４５：８８２−８９４  （１９９９）．
１１２．  Ｍａｇａｒｉ，  Ｒ．  Ｔ．  “Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  Ａｇｒｅｅｍｅｎｔ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｔｗｏ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ  ３８：  １０２１−１０２５  （２０００）．  
１１３．  Ｌｉｎｎｅｔ，  Ｋ．  “Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｏｆ  Ｄｅｍｉｎｇ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｍｉｓｓｐｅｃｉｆｉｅｄ  ａｎａｌｙｔｉｃ  ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｉｏ  ｉｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ”  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ４４：１０２４−１０３１  （１９９８）．
１１４．  Ｄｅｗｉｔｔｅ，  Ｋ．；  Ｆｉｅｒｅｎｓ，  Ｃ．；  Ｓｔｏｃｋｌ，  Ｄ．；  Ｔｈｉｅｎｐｏｒｔ，  Ｌ．  Ｍ．  “Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｌａｎｄ−Ａｌｔｍａｎ  ｐｌｏｔ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｔｈｏｄ−ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ：  ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｐｒａｃｔｉｃｅ”  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ４８：７９９−８０１  （２００２）．
１１５．  Ｙａｎｇ，  Ｌ．；  Ｆｌｉｎｔ  Ｂｅａｌ，  Ｍ．    “Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ｀ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ＨＰＬＣ−ＥＣＤ”  ｉｎ  Ｇｉｏｖａｎｎｉ  Ｍａｎｆｒｅｄｉ  ａｎｄ  Ｈｉｂｉｋｉ  Ｋａｗａｍａｔａ  （ｅｄｓ．），  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，．  ｖｏｌ．  ７９３：  ４０１−４１５，  ２０１１．
１１６．  Ｋｅｎｎｅｄｙ，  Ｂ．；  Ｚｉｅｇｌｅｒ，  Ｍ．  Ｇ．  “Ａ  ｍｏｒｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒａｄｉｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ”  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ４７（２３）：２１４３−５３  （１９９０）．  
１１７．  “ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｎｏｖａ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｄｅｔａｉｌ．ａｓｐ？ｃａｔａｌｏｇ＿ｉｄ＝ＫＡ１８８７”及びその他のベンダー、3/2/2016にアクセスされた。
１１８．  Ｃｌａｒｋ，  Ｊ．  Ｊ．；  Ｓａｎｄｂｅｒｇ，  Ｓ．  Ｇ．；  Ｗａｎａｔ，  Ｍ．  Ｊ．；  Ｇａｎ，  Ｊ．  Ｏ．；  Ｈｏｍｅ，  Ｅ．  Ａ．；  Ｈａｒｔ，  Ａ．  Ｓ．；  Ａｋｅｒｓ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  “Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｉｃｒｏｓｅｎｓｏｒｓ  ｆｏｒ  ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｓｕｂｓｅｃｏｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｅｈａｖｉｎｇ  ａｎｉｍａｌｓ”  Ｎａｔ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７（２）：１２６−１２９  （２０１０）．
１１９．  Ｍａｎｎｉｒｏｎｉ，  Ｃ．；  Ｄｉ  Ｎａｒｄｏ，  Ａ．；  Ｆｒｕｓｃｏｌｏｎｉ，  Ｐ．；  Ｔｏｃｃｈｉｎｉ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｉ，  Ｇ．  Ｐ．  “Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ＲＮＡ  ｌｉｇａｎｄｓ”  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３６（３２）：  ９７２６−９７３４  （１９９７）．
１２０．  Ｓｉｍｐｓｏｎ，  Ｎ．；  Ｍａｆｆｅｉ，  Ａ．；  Ｆｒｅｅｂｙ，  Ｍ．；  Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ，  Ｓ．；  Ｆｒｅｙｂｅｒｇ，  Ｚ．；  Ｊａｖｉｔｃｈ，  Ｊ．；  Ｌｅｉｂｅｌ，  Ｒ．  Ｌ．；  Ｈａｒｒｉｓ，  Ｐ．  Ｅ．  “Ｄｏｐａｍｉｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｉｒｃｕｉｔ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ”  Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  （１０）：１７５７−７２  （２０１２）．
１２１．  Ｈａｕｓｅｒ，  Ｎ．  Ｃ．；  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ｒ．；  Ｊａｃｏｂ，  Ａ．；  Ｒｕｐｐ，  Ｓ．；  Ｈｏｈｅｉｓｅｌ，  Ｊ．  Ｄ．；  Ｍａｔｙｓｉａｋ，  Ｓ．  “Ｕｔｉｌｉｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｅｆｔ  ｈｅｌｉｃａｌ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌ−ＤＮＡ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｚｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｍａｒｋｅｒ  ｔｙｐｅｓ  ｏｎ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ  ｐｌａｔｆｏｒｍ”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３４（１８）：  ５０１−５１１１  （２００６）．
１２２．  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，  Ａ．  Ｊ．；  Ｒｕｓｌｉｎｇ，  Ｄ．  Ａ．；  Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ−Ｈｅａｄ，  Ｖ．  Ｊ．；  Ｆｏｘ，  Ｋ．  Ｒ．  “Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ：  Ａ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，  ａｆｆｉｎｉｔｙ，  ａｎｄ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ＤＮＡ＿ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄｓ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４２（２）：  １２８−１４０  （２００７）．
１２３．  Ｒｅｇｕｌｓｋｉ，  Ｅ．  Ｅ．；  Ｂｒｅａｋｅｒ，  Ｒ．  Ｒ．  “Ｉｎ−Ｌｉｎｅ  Ｐｒｏｂｉｎｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｒｉｂｏｓｗｉｔｃｈｅｓ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４１９：  ５３−７５，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ  （２００８）．
１２４．  Ｆｒａｎｋｓｓｏｎ，  Ｇ．；  Ａｎｇｇａｒｄ，  Ｅ．  “Ｔｈｅ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ，  Ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”  Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍ  Ｔｏｘ  ２８（３）：２０９−２１４  （２００９）．
１２５．  Ａｐｐｅｎｄｉｘ．  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒａｎｇｅｓ．  Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ’ｓ  Ｂａｓｉｃ  ＆  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．  Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．  ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ  （２０１１）．
１２６．  Ｅｌｉａｓ，  Ａ．  Ｎ．；  Ｎｏｓｒａｔｏｌａ，  Ｄ．；  Ｖａｚｉｒｉ，  Ｍ．  Ｄ．；  Ｍａｋｓｙ，  Ｍ．  “Ｐｌａｓｍａ  Ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ，  Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ，  ａｎｄ  Ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  Ｅｎｄ−Ｓｔａｇｅ  Ｒｅｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ”  Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １４５：１０１３０１０１５  （１９８５）．
１２７．  Ｐｌｕｎｋｅｒ，  Ｊ．  Ｊ．；  Ｒｅｅｖｅｓ，  Ｊ．  Ｄ．；  Ｎｇｏ，  Ｌ．；  Ｂｅｌｌｏｗｓ，  Ｗ．，  Ｓｈａｆｅｒ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｒｏａｃｈｅ，  Ｇ．；  Ｈｏｗｓｅ，  Ｊ．；  Ｈｅｒｓｋｏｗｉｔｚ，  Ａ．；  Ｍａｎｇａｎｏ，  Ｄ．  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ  “Ｕｒｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｌａｓｍａ  Ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｏｒｔｉｓｏｌ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ａｆｔｅｒ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ”  Ａｎｅｓｔ  ８６：７８５−７９６  （１９９７）．  
１２８．  Ｚｕｋｅｒ，  Ｍ．  “Ｍｆｏｌｄ  ｗｅｂ  ｓｅｒｖｅｒ  ｆｏｒ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１  （１３），  ３４０６−１５，  （２００３）．
１２９．  Ｚａｄｅｈ，  Ｊ．Ｎ．，  Ｓｔｅｅｎｂｅｒｇ，  Ｃ．  Ｄ．；  Ｂｏｉｓ，  Ｊ．  Ｓ．；  Ｗｏｌｆｅ，  Ｂ．  Ｒ．；  Ｋｈａｎ，  Ａ．  Ｒ．；  Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｄｉｒｋｓ，  Ｒ．  Ｍ．；  Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｎ．  Ａ．  “ＮＵＰＡＣＫ：  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ”  Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｃｈｅｍ  ３２：１７０−１７３  （２０１１）．
１３０．  （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｎｚｏｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ．ｃｏｍ／ＡＤＩ−９００−０１７Ａ／ａｒｇ８−ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ−ｅｌｉｓａ−ｋｉｔ／）及びその他の類似のキット、０３／０３／２０１５にアクセスされた。
１３１．  （ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｕｈｌｍａｎｎｌａｂｓ．ｃｈ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ−ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ／ｓｐｅｃｉａｌ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ−ａｄｈ／）及び類似のキット、０３／０３／２０１５にアクセスされた。
１３２．  Ｚｈａｎｇ，  Ｄ．；  Ｒｉｏｓ，  Ｄ．  Ｒ．；  Ｔａｍ，  Ｖ．  Ｈ．；  Ｃｈｏｗ，  Ｄ．  Ｓ．  “Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｕｒｉｎｅ：  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｒｅｔｅｒｍ  ｎｅｏｎａｔｅｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄ”  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ  ９６：６７−７３  （２０１４）．
１３３．  Ｂａｓｓｉ，  Ｅ．；  Ｐａｒｋ，  Ｍ．；  Ａｚａｖｅｄｏ，  Ｌ．  Ｃ．  Ｐ．  “Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｈｉｇｈ−Ｄｏｓｅ  Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｏｒ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｓｈｏｃｋ”  ｖｏｌｕｍｅ  ２０１３：  ＩＤ  ６５４７０８，  １０  ｐａｇｅｓ  （２０１３）．
１３４．  Ｒａｆｆ，  Ｈ．；  Ｆｉｎｄｌｉｎｇ，  Ｊ．  Ｗ．  “Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：  ＡＣＴＨ，  ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ，  ａｎｄ  ａｔｒｉａｌ  ｎａｔｒｉｕｒｅｔｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ”  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １８（９）：９１５−９２０  （１９９７）．
１３５．  Ｄｉｃｋ，  Ｍ．；  Ｄａｓｔａ，  Ｊ．  Ｆ．；  Ｃｈｏｂａｎ，  Ｐ．  Ｓ．；  Ｓｉｎｈａ，  Ｒ．；  Ｆｌａｎｃｂａｕｍ，  Ｌ．  “Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｕｒｉｎｅ  Ｏｕｔｐｕｔ  ｉｎ  Ｏｌｉｇｕｒｉｃ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｕｎｉｔ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  Ｌｏｗ−Ｄｏｓｅ  Ｄｏｐａｍｉｎｅ”  Ａｎｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  ２８：８３７−８４０  （１９９４）．
１３６．  Ｌｉｃｈｔａｒｏｗｉｃｚ−Ｋｒｙｎｓｋａ，  Ｅ．  Ｊ．；  Ｃｏｌｅ，  Ｔ．  Ｊ．；  Ｃａｍａｃｈｏ−Ｈｕｂｎｅｒ，  Ｃ．；  Ｂｒｉｔｔｏ，  Ｊ．；  Ｌｅｖｉｎ，  Ｍ．；  Ｋｌｅｉｎ，  Ｎ．；  Ａｙｎｓｌｅｙ−Ｇｒｅｅｎ，  Ａ．  “Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  Ｌｅｖｅｌｓ  ａｒｅ  Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄｌｙ  Ｌｏｗ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  Ａｃｔｕｔｅ  Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  Ｍｅｔ  ８９（３）：１４１０−１４１４  （２００４）．
１３７．  Ｍｅｕｒａｎｔ，  Ｇ．  “Ｔｈｅ  Ａｄｒｅｎａｌ  Ｃｏｒｔｅｘ”  ｃｈａｐｔｅｒ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖ．  １０Ａ，    ｐ．  ２４１  （１９９７）．
１３８．  Ｆｏｌａｎ，  Ｍ．  Ｍ．；  Ｓｔｏｎｅ，  Ｒ．  Ａ．；  Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ，  Ａ．  Ｌ．；  Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ，  Ａ．  Ｌ．；  Ｓｔｏｆｆｅｒｌ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｈｅｓｓ，  Ｍ．  Ｍ．；  Ｋｒｏｂｏｔｈ，  Ｐ．  Ｄ．  “Ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉｉｓｏａｎｄｒｅｏｓｔｅｒｏｎｅ，  ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉｉｓｏａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｓｕｌｆａｔｅ，  ａｎｄ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｕｎｉｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ”  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０（５）：９６５−９７０  （２００１）．  
１３９．  Ｖｄ  Ｂｅｒｇｈｅ，  Ｇ．；  ｄ  Ｚｅｇｈｅｒ，  Ｆ．；  Ｗｏｕｔｅｒｓ，  Ｐ．；  Ｓｃｈｅｔｚ，  Ｍ．；  Ｖｅｒｗａｅｓｔ，  Ｃ．；  Ｆｅｒｄｉｎａｎｄｅ，  Ｐ．；  Ｌａｕｗｅｒｓ，  Ｐ．  “Ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔｅ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｉｌｌｎｅｓｓ：  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ”  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  ４３：４５７−４６３  （１９９５）．  
【０２７５】
様々な参考文献が本明細書に引用されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
2019519773.tif 000009
【図１Ｂ】
2019519773.tif 000010
【図１Ｃ】
2019519773.tif 000011
【図１Ｄ】
2019519773.tif 000012
【図１Ｅ】
2019519773.tif 000013
【図１Ｆ】
2019519773.tif 000014
【図１Ｇ】
2019519773.tif 000015
【図２Ａ】
2019519773.tif 000016
【図２Ｂ】
2019519773.tif 000017
【図２Ｃ】
2019519773.tif 000018
【図３Ａ】
2019519773.tif 000019
【図３Ｂ】
2019519773.tif 000020
【図３Ｃ】
2019519773.tif 000021
【図３Ｄ】
2019519773.tif 000022
【図３Ｅ】
2019519773.tif 000023
【図３Ｆ】
2019519773.tif 000024
【図３Ｇ】
2019519773.tif 000025
【図３Ｈ】
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【図３Ｉ】
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【図３Ｊ】
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【図３Ｋ】
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【図３Ｌ】
2019519773.tif 000030
【図４Ａ−Ｂ】
2019519773.tif 000031
【図４Ｃ】
2019519773.tif 000032
【図５Ａ】
2019519773.tif 000033
【図５Ｂ】
2019519773.tif 000034
【図５Ｃ】
2019519773.tif 000035
【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
2019519773.tif 000037
【図５Ｆ】
2019519773.tif 000038
【図６Ａ−Ｃ】
2019519773.tif 000039
【図７】
2019519773.tif 000040
【図８Ａ−Ｃ】
2019519773.tif 000041
【図９Ａ−Ｂ】
2019519773.tif 000042
【図１０Ａ】
2019519773.tif 000043
【図１０Ｂ】
2019519773.tif 000044
【図１０Ｃ】
2019519773.tif 000045
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
2019519773.tif 000048
【図１２Ａ】
2019519773.tif 000049
【図１２Ｂ】
2019519773.tif 000050
【図１２Ｃ】
2019519773.tif 000051
【図１３Ａ】
2019519773.tif 000052
【図１３Ｂ】
2019519773.tif 000053
【図１３Ｃ】
2019519773.tif 000054
【図１４Ａ】
2019519773.tif 000055
【図１４Ｂ】
2019519773.tif 000056
【図１４Ｃ】
2019519773.tif 000057
【図１５Ａ】
2019519773.tif 000058
【図１５Ｂ】
2019519773.tif 000059
【図１５Ｃ】
2019519773.tif 000060
【図１６Ａ】
2019519773.tif 000061
【図１６Ｂ】
2019519773.tif 000062
【図１６Ｃ】
2019519773.tif 000063
【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
2019519773.tif 000068
【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
2019519773.tif 000070
【図１９Ｂ】
2019519773.tif 000071
【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
2019519773.tif 000075
【図２１Ａ】
2019519773.tif 000076
【図２１Ｂ】
2019519773.tif 000077
【図２１Ｃ】
2019519773.tif 000078
【図２２Ａ】
2019519773.tif 000079
【図２２Ｂ】
2019519773.tif 000080
【図２２Ｃ】
2019519773.tif 000081
【図２３Ａ】
2019519773.tif 000082
【図２３Ｂ】
2019519773.tif 000083
【図２３Ｃ】
2019519773.tif 000084
【図２４Ａ】
2019519773.tif 000085
【図２４Ｂ】
2019519773.tif 000086
【図２４Ｃ】
2019519773.tif 000087
【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４０Ｃ】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４７Ｃ】
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【図４７Ｅ】
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【図４７Ｆ】
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【図４８Ａ−１】
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【図４８Ｂ−１】
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【図４８Ｂ−２】
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【図４８Ｃ−１】
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【図４８Ｃ−２】
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【図４８Ｄ】
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【図４８Ｅ】
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【図４９Ａ】
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【図４９Ｇ】
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【図５２Ａ】
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【図５３Ａ】
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【図５６Ａ】
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【図５７Ａ】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５９Ａ】
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【図５９Ｂ】
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【図６０Ａ】
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【図６１Ａ】
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【図６２Ａ】
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【図６２Ｂ】
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【図６３Ａ】
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【図６３Ｂ】
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【図６４Ａ】
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【図６４Ｂ】
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【図６５Ａ】
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【図６６Ａ】
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【図６６Ｂ】
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【図６７Ａ】
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【図６７Ｂ】
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【図６８Ａ】
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【図６８Ｂ】
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【図６９Ａ】
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【図６９Ｂ】
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【図７０Ａ】
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【図７１Ａ】
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【図７１Ｂ】
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【図７２Ａ】
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【図７２Ｂ】
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【図７３Ａ】
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【図７３Ｂ】
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【図７４Ａ】
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【図７４Ｂ】
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【図７５Ａ】
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【図７５Ｂ】
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【図７６Ａ】
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【図７６Ｂ】
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【図７７Ａ】
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【図７７Ｂ】
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【図７８Ａ】
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【図７８Ｂ】
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【図７９Ａ】
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【図７９Ｂ】
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【図８０Ａ】
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【図８１Ａ】
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【図８２Ａ】
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【図８２Ｂ】
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【図８３Ａ】
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【図８３Ｂ】
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【図８４Ａ】
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【図８４Ｂ】
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【図８５Ａ】
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【図８５Ｂ】
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【図８６Ａ】
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【図８６Ｂ】
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【図８７Ａ】
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【図８７Ｂ】
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【図８８Ａ】
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【図８８Ｂ】
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【図８９Ａ】
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【図８９Ｂ】
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【図９０Ａ】
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【図９０Ｂ】
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【図９１Ａ】
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【図９１Ｂ】
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【図９２Ａ】
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【図９２Ｂ】
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【図９３Ａ】
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【図９３Ｂ】
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【図９４Ａ】
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【図９４Ｂ】
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【図９５Ａ】
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【図９５Ｂ】
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【図９６Ａ】
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【図９６Ｂ】
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【図９７Ａ】
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【図９７Ｂ】
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【図９８Ａ】
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【図９８Ｂ】
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【図９９Ａ】
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【図９９Ｂ】
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【図１００Ａ】
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【図１００Ｂ】
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【図１０１Ａ】
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【図１０１Ｂ】
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【図１０２Ａ】
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【図１０２Ｂ】
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【図１０３Ａ】
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【図１０３Ｂ】
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【図１０４Ａ】
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【図１０４Ｂ】
2019519773.tif 000293
【図１０５Ａ】
2019519773.tif 000294
【図１０５Ｂ】
2019519773.tif 000295
【図１０６Ａ】
2019519773.tif 000296
【図１０６Ｂ】
2019519773.tif 000297
【図１０７Ａ】
2019519773.tif 000298
【図１０７Ｂ】
2019519773.tif 000299
【国際調査報告】
2019519773.tif 000300
2019519773.tif 000301