(57)【要約】  式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有している、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体が提供される。また、アテローム症を予防および治療するための薬物の調製における、それらの使用も提供される。上記のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、（i）細胞毒性が低く、（ii）ａｐｏＥ−／−マウスにおいて、動脈硬化プラークの面積の割合を有意に減少させることができ、（iii）マウスの血清中の、低密度リポタンパク質コレステロールのレベルを効果的に減少させるとともに、高密度リポタンパク質コレステロールのレベルを効果的に増加させることもでき、（iv）ａｐｏＥ−／マウスの動脈において、局所的なＴＮＦ−αのレベルを有意に減少させることができ、（v）良好な抗炎症効果を有している。上記のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を３０μＭの用量で用いると、ＲＡＷ２６４．７細胞由来泡沫細胞の形成を、有意に減少させることができる。さらに、上記のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の製造方法は、操作が容易であり収率が高い。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有している、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体：
【化１】
2019529550.tif 000057
（式Ｉおよび式ＩＩ中、Ｒ１は下記式であり、
【化２】
2019529550.tif 000058
ここで、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ２は、式ＩＩＩに示す構造を有しており、
【化３】
2019529550.tif 000059
式ＩＩＩ中、ｎ＝０、１または２であり、
Ｒ４は、メチルまたはエチルであり、
Ｒ５は、水素原子、置換または未置換のＣ１〜Ｃ５アルキル、置換または未置換のベンジル、およびＣ４〜Ｃ９ヘテロシクロアルキルのうちの１つである）。
【請求項２】
Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロキシアルキル、またはＣ３〜Ｃ５エステルアルキルである、請求項１に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体。
【請求項３】
Ｒ５が、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３である、請求項２に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体。
【請求項４】
Ｒ５が、下記式のいずれかである、請求項１に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体。
【化４】
2019529550.tif 000060
【請求項５】
Ｒ２が、下記式のいずれかである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体。
【化５】
2019529550.tif 000061
【請求項６】
Ｒ１が、下記式のいずれかである、請求項１に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体。
【化６】
2019529550.tif 000062
【請求項７】
以下のステップを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の製造方法：
（１）アルカリ試薬の存在下にて、親化合物を酸無水物と求核置換反応させ、第１中間生成物を得るステップ；
（２）酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（１）の第１中間生成物を酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ；
（３）有機溶媒および還元剤の存在下にて、ステップ（２）の第２中間生成物を、アミノ化合物と還元アミノ化反応させ、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得るステップ；
ここで、ステップ（１）の親化合物は、式ＩＶまたは式Ｖに示す構造を有している。
【化７】
2019529550.tif 000063
【請求項８】
ステップ（２）の酸化反応が下記の特定のステップである、請求項７に記載の製造方法：
（２１）第１酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（１）の第１中間生成物を一次酸化反応させ、第２中間生成物の前駆体を得るステップ；
（２２）第２酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（２１）の第２中間生成物の前駆体を二次酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ。
【請求項９】
ステップ（２１）の上記第１酸化剤が、過酸化水素、次亜塩素酸、次亜塩素酸カルシウム、過酸化アセトンまたはｍ−クロロ過安息香酸であり、
ステップ（２２）の上記第２酸化剤が、過マンガン酸カリウム、二酸化マンガン、過ヨウ素酸またはサレット試薬である、
請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
アテローム症の予防および治療のための薬剤の調製における、請求項１〜６のいずれか１項に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体、または請求項７〜９のいずれか１項に記載の製造方法により得られるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬の技術分野に属する。特に、本発明は、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体、その製造方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
今日、アテローム症は、発生率が高い疾患の一つである。これは、多くの重篤な心血管疾患（冠動脈性心疾患、狭心症、脳血管塞栓症など）に共通する病理学的な原因であり、人間の健康に重大な脅威を与える。現在、アテローム症を治療するための薬物は、主に血中脂質を調節しており、スタチン、フィブラート、ナイアシンなどがある。上述のカテゴリーの薬物は、血中脂質を低下させる良好な効果奏しうる。しかし、アテローム症の発生率は依然として高く、年々増加している。このことは、薬血中脂質を調節する機能のみを有する薬物では、アテローム症の予防および治療の要件を満たし得ないことを示している。研究の示すところによると、炎症性免疫因子がアテローム症の病因において重要な役割を果たしており、アテローム症は血管の慢性炎症性疾患として認識されている。したがって、血中脂質の調節および抗炎症活性の効果を同時に奏する、抗アテローム症薬の開発が重要となっている。
【０００３】
古代から、オタネニンジンは「百草の王」と賞されており、大補元気、復脈固脱、補脾益肺、生津養血、安神益智の効能を有している。ギンセノシドはオタネニンジンの主要な有効成分であり、オタネニンジンの主要な薬理活性を担っている。構造が同定されたギンセノシド単量体は、約４０種類以上存在している。研究によって見出されたことによると、パナキシジオール型ギンセノシドは、アテローム症の予防および治療に確かな効果を有している。さらなる作用機序の研究が示すところによると、パナキシジオール型ギンセノシドの薬理効果には、血中脂質の調節、炎症の軽減、および平滑筋増殖の軽減などが含まれているが、しかし、その活性は低く、ある種の細胞毒性を有しており、実用的な応用価値に欠けている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の目的は、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体、その製造方法および使用を提供することである。つまり、アテローム症を予防および治療するための薬剤の製造に使用できる、活性が比較的高く毒性が比較的低いパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を提供することが意図されている。
【０００５】
本発明は、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有している、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体を提供する。
【０００６】
【化１】
2019529550.tif 000002
【０００７】
式Ｉおよび式ＩＩ中、Ｒ１は下記式であり、
【０００８】
【化２】
2019529550.tif 000003
【０００９】
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ４のアルキルであり、
Ｒ２は、式ＩＩＩに示す構造を有しており、
【００１０】
【化３】
2019529550.tif 000004
【００１１】
式ＩＩＩ中、ｎ＝０、１または２であり、
Ｒ４は、メチルまたはエチルであり、
Ｒ５は、水素原子、置換または未置換のＣ１〜Ｃ５アルキル、置換または未置換のベンジル、およびＣ４〜Ｃ９ヘテロシクロアルキルのうちの１つである。
【００１２】
好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ５エステルアルキルである。
【００１３】
好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３である。
【００１４】
好ましくは、Ｒ５は、下記式のいずれかである。
【００１５】
【化４】
2019529550.tif 000005
【００１６】
好ましくは、Ｒ２は、下記式のいずれかである。
【００１７】
【化５】
2019529550.tif 000006
【００１８】
好ましくは、Ｒ１は、下記式のいずれかである。
【００１９】
【化６】
2019529550.tif 000007
【００２０】
本発明は、上記技術的解決手段に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の製造法を提供する。この製造方法は、以下のステップを含む。
（１）アルカリ試薬の存在下にて、親化合物を酸無水物と求核置換反応させ、第１中間生成物を得るステップ；
（２）酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（１）の第１中間生成物を酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ；
（３）有機溶媒および還元剤の存在下にて、ステップ（２）の第２中間生成物をアミノ化合物と還元アミノ化反応させ、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得るステップ。
【００２１】
ここで、ステップ（１）の親化合物は、式ＩＶまたは式Ｖに示す構造を有している。
【００２２】
【化７】
2019529550.tif 000008
【００２３】
好ましくは、ステップ（２）の酸化反応は、下記の特定のステップである。
（２１）第１酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（１）の第１中間生成物を一次酸化反応させ、第２中間生成物の前駆体を得るステップ；
（２２）第２酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（２１）の第２中間生成物の前駆体を二次酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ。
【００２４】
好ましくは、ステップ（２１）の第１酸化剤は、過酸化水素、次亜塩素酸、次亜塩素酸カルシウム、過酸化アセトンまたはｍ−クロロ過安息香酸である。また、ステップ（２２）の第２酸化剤は、過マンガン酸カリウム、二酸化マンガン、過ヨウ素酸またはサレット試薬である。
【００２５】
本発明は、アテローム症を予防および治療するための薬剤の調製における、（i）上記技術的解決手段に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の使用、または、（ii）上記技術的解決手段に記載の製造方法により得られるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の使用、を提供する。
【００２６】
本発明は、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有している、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体を提供する。本発明により提供されるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、（i）細胞毒性が低く、（ii）ａｐｏＥ−／−マウスにおける動脈硬化プラークの面積割合を有意に減少させ、（iii）マウスの血清中において、低密度リポタンパク質コレステロールのレベルを効果的に低下させ、高密度リポタンパク質コレステロールのレベルを効果的に増加させることができ、（iv）ａｐｏＥ−／−マウスの動脈における局所的なＴＮＦ−αレベルを有意に低下させることができ、（v）良好な抗炎症効果を有するパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、３０μｍｏｌ／Ｌの投与量で、ＲＡＷ２６４．７細胞由来泡沫細胞の形成を、有意に低下させることができる。このことは、本発明において提供されるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体が、アテローム症の予防および治療用薬剤の調製における有効成分として使用されうることを意味している。
【００２７】
さらに、本発明は、操作が容易で高い収率のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の製造方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有している、パナキシジオール型ギンセノシド誘導体を提供する。
【００２９】
【化８】
2019529550.tif 000009
【００３０】
式Ｉおよび式ＩＩ中、Ｒ１は下記式であり、
【００３１】
【化９】
2019529550.tif 000010
【００３２】
Ｒ３はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ２は、式ＩＩＩに示す構造を有しており、
【００３３】
【化１０】
2019529550.tif 000011
【００３４】
式ＩＩＩ中、ｎ＝０、１または２であり、
Ｒ４はメチルまたはエチルであり、
Ｒ５は水素原子、置換または未置換のＣ１〜Ｃ５アルキル、置換または未置換のベンジルおよびＣ４〜Ｃ９ヘテロシクロアルキルのうちの１つである。
【００３５】
本発明において、Ｒ１は、下記式である。
【００３６】
【化１１】
2019529550.tif 000012
【００３７】
式中、Ｒ３はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、好ましくはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたはイソブチルである。したがって、本発明において、Ｒ１は、好ましくは下記式のいずれかである。
【００３８】
【化１２】
2019529550.tif 000013
【００３９】
本発明において、Ｒ２は、式ＩＩＩに示す構造を有している。
【００４０】
【化１３】
2019529550.tif 000014
【００４１】
式ＩＩＩ中、ｎ＝０、１または２であり、
Ｒ４はメチルまたはエチルであり、
Ｒ５は水素原子、置換または未置換のＣ１〜Ｃ５アルキル、置換または未置換のベンジルおよびＣ４〜Ｃ９ヘテロシクロアルキルのうちの１つである。
【００４２】
本発明において、置換または非置換のＣ１〜Ｃ５アルキルは、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ５エステルアルキルである。本発明において、Ｃ１〜Ｃ５アルキルは、好ましくは、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２または−ＣＨ（ＣＨ３）２である。Ｃ１〜Ｃ５ヒドロキシアルキルは、好ましくは、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨである。Ｃ３〜Ｃ５エステルアルキルは、好ましくは、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３である。
【００４３】
本発明において、置換ベンジルは、好ましくはヒドロキシベンジルであり、特に下記式である。
【００４４】
【化１４】
2019529550.tif 000015
【００４５】
本発明において、Ｃ４〜Ｃ９ヘテロシクロアルキルは、好ましくは下記式のいずれかである。
【００４６】
【化１５】
2019529550.tif 000016
【００４７】
したがって、本発明において、Ｒ２は、好ましくは下記式のいずれかである。
【００４８】
【化１６】
2019529550.tif 000017
【００４９】
本発明において、式Ｉに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、好ましくは下記式のいずれかである。
【００５０】
【化１７】
2019529550.tif 000018
【００５１】
本発明において、式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、好ましくは下記式のいずれかである。
【００５２】
【化１８】
2019529550.tif 000019
【００５３】
本発明は、上記技術的解決手段に記載のパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の製造方法を提供する。この製造方法は、以下のステップを含む。
（１）アルカリ試薬の存在下にて、親化合物を酸無水物と求核置換反応させ、第１中間生成物を得るステップ；
（２）酸化剤および有機溶媒の存在下にて、ステップ（１）の第１中間生成物を酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ；
（３）有機溶媒および還元剤の存在下にて、ステップ（２）の第２中間生成物を、アミノ化合物と還元アミノ化反応させ、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得るステップ。
【００５４】
ここで、ステップ（１）の親化合物は、式ＩＶまたは式Ｖに示す構造を有している。
【００５５】
【化１９】
2019529550.tif 000020
【００５６】
本発明においては、アルカリ試薬の存在下にて、式ＩＶまたは式Ｖに示す構造を有している親化合物を酸無水物と求核置換反応させ、第１中間生成物を得る。本発明において、親化合物：酸無水物：アルカリ試薬の質量比は、好ましくは１：（１〜２０）：（１〜２０）であり、より好ましくは、１：（４〜１５）：（４〜１５）であり、最も好ましくは１：（８〜１２）：（８〜１２）である。
【００５７】
本発明において、酸無水物の種類は特に限定されず、Ｒ１の構造を得ることができる当業者に周知の酸無水物を用いることができる。本発明において、酸無水物は、好ましくは、無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、無水イソ酪酸または無水イソ吉草酸である。
【００５８】
本発明において、アルカリ試薬の種類は特に限定されず、当業者に周知の有機アルカリ化合物、無機アルカリ化合物および／またはアルカリ金属を用いることができる。
【００５９】
本発明において、有機アルカリ化合物の種類は特に限定されず、当業者に周知の有機アルカリ化合物を用いることができる。本発明において、有機アルカリ化合物は、好ましくは、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、テトラメチルエチレンジアミン、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウムメトキシド、カリウムエトキシドまたはナトリウムエトキシドである。
【００６０】
本発明において、無機アルカリ化合物の種類は特に限定されず、当業者に周知の無機アルカリ化合物を用いることができる。本発明において、無機アルカリ化合物は、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムまたは水素化ナトリウムである。
【００６１】
本発明において、アルカリ金属の種類は特に限定されず、当業者に周知のアルカリ金属を用いることができる（ナトリウム金属など）。
【００６２】
本発明において、求核置換反応の温度は、好ましくは０〜１００℃であり、より好ましくは２０〜７５℃であり、最も好ましくは３５〜６０℃である。求核置換反応の時間は、好ましくは１〜４８時間であり、より好ましくは５〜３８時間であり、最も好ましくは１５〜２５時間である。本発明においては、攪拌しながら求核置換反応させることが好ましい。本発明において、攪拌速度は、好ましくは８００〜１２００ｒｐｍであり、より好ましくは９００〜１１００ｒｐｍである。本発明において、攪拌の方法は特に限定されず、当業者に周知の攪拌方法を用いることができる。本発明においては、好ましくは、磁気攪拌を行う。
【００６３】
本発明において、好ましくは、求核置換反応の完了後、得られた生成物を後処理して第１中間生成物を得る。本発明において、後処理は、好ましくは以下のステップを含む。
（i）求核置換反応後、減圧下で蒸留を行い、粗生成物を得るステップ；
（ii）粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、第１中間生成物を得るステップ。
【００６４】
本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィに用いられる具体的な操作ステップおよび試薬は特に限定されず、当業者に周知のものを用いることができる。本発明においては、好ましくは、粗生成物を酢酸エチルと混合し、その混合物をシリカゲルとさらに混合してから、カラムクロマトグラフィに供する。本発明において、粗生成物の酢酸エチルに対する質量比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。本発明においては、好ましくは、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンを溶離液として使用する。溶離液中の、酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。
【００６５】
本発明においては、第１中間生成物を得た後、酸化剤および有機溶媒の存在下にて、第１中間生成物を酸化反応させて、第２中間生成物を得る。本発明において、酸化反応は、下記の特定のステップである。
（i）第１酸化剤および有機溶媒の存在下にて、第１中間生成物を一次酸化反応させ、第２中間生成物の前駆体を得るステップ；
（ii）第２酸化剤および有機溶媒の存在下にて、第２中間生成物の前駆体を二次酸化反応させ、第２中間生成物を得るステップ。
【００６６】
本発明においては、第１酸化剤および有機溶剤の存在下にて、第１中間生成物を一次酸化反応させ、第２中間生成物の前駆体を得る。本発明において、第１中間生成物：第１酸化剤：有機溶媒の質量比は、好ましくは１：（０．１〜０．５）：（５〜１０）であり、より好ましくは１：（０．２〜０．４）：（６〜８）である。
【００６７】
本発明において、第１酸化剤は、好ましくは、過酸化水素、次亜塩素酸、次亜塩素酸カルシウム、過酸化アセトンまたはｍ−クロロ過安息香酸である。
【００６８】
本発明において、一次酸化反応を行うのに必要な有機溶媒の種類は特に限定されない。このような溶媒としては、第１中間生成物および第１酸化剤と相溶性である、当業者に周知の極性有機溶媒または非極性有機溶媒を用いることができる（ピリジン、Ｎ−メチルピロリドン、クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、テトラヒドロフラン、または１，４−ジオキサンなど）。
【００６９】
本発明において、一次酸化反応の温度は、好ましくは１０〜８０℃であり、より好ましくは１５〜５５℃であり、最も好ましくは２０〜３５℃である。とりわけ本発明の実施形態においては、一次酸化反応は室温にて行われ、反応系を加熱または冷却しない。本発明において、一次酸化反応の時間は、好ましくは１〜１０時間であり、より好ましくは３〜８時間であり、最も好ましくは４〜６時間である。
【００７０】
本発明において、好ましくは、一次酸化反応の完了後、得られた生成物を後処理して、第２中間生成物の前駆体を得る。本発明において、後処理は、好ましくは以下のステップを含む。
（i）一次酸化反応および撹拌後に得られた物質に水を加え、濾過し、溶媒を除去して、粗生成物を得るステップ；
（ii）粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、第２中間生成物を得るステップ。
【００７１】
本発明において、一次酸化後に得られた物質の水に対する質量比は、好ましくは１：（１〜１００）であり、より好ましくは１：（８〜７０）であり、最も好ましくは１：（２０〜４０）である。本発明において、撹拌速度は、好ましくは８００〜１２００ｒｐｍであり、より好ましくは９００〜１１００ｒｐｍである。撹拌時間は、好ましくは１〜１０時間であり、より好ましくは３〜８時間であり、最も好ましくは４〜６時間である。本発明において、攪拌の方法は特に限定されず、当業者に周知の攪拌方法を用いることができる。本発明においては、好ましくは、磁気攪拌を行う。本発明において、濾過は特に限定されず、当業者に周知の濾過の手段を用いることができる。本発明において、溶媒の除去法は特に限定されず、当業者に周知の溶媒の除去の手段を用いることができる。本発明においては、好ましくは、減圧下での蒸留によって溶媒を除去する。
【００７２】
本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィに用いられる具体的な操作ステップおよび試薬は特に限定されず、当業者に周知のものを用いることができる。本発明においては、好ましくは、粗生成物を酢酸エチルと混合し、その混合物をシリカゲルとさらに混合してから、カラムクロマトグラフィに供する。本発明において、粗生成物の酢酸エチルに対する質量比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。本発明においては、好ましくは、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンを溶離液として使用する。溶離液中の、酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。
【００７３】
本発明においては、第２中間生成物の前駆体を得た後、第２酸化剤および有機溶媒の存在下にて、第２中間生成物の前駆体を二次酸化反応させて、第２中間生成物を得る。本発明において、第２中間生成物の前駆体：第２酸化剤：有機溶媒の質量比は、好ましくは１：（０．１〜０．３）：（５〜１０）であり、より好ましくは１：（０．１５〜０．２５）：（６〜８）である。
【００７４】
本発明において、第２酸化剤は、好ましくは、過マンガン酸カリウム、二酸化マンガン、過ヨウ素酸またはサレット試薬である。
【００７５】
本発明において、二次酸化反応を行うのに必要な有機溶媒の種類は特に限定されない。このような溶媒としては、第２中間生成物の前駆体および第２酸化剤と相溶性である、当業者に周知の極性有機溶媒または非極性有機溶媒を用いることができる（クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、アセトニトリル、テトラヒドロフランまたは１，４−ジオキサンなど）。
【００７６】
本発明において、二次酸化反応の温度は、好ましくは１０〜１００℃であり、より好ましくは１５〜６５℃であり、最も好ましくは２０〜４５℃である。とりわけ本発明の実施形態においては、二次酸化反応は室温にて行われ、反応系を加熱または冷却しない。本発明において、二次酸化反応の時間は、好ましくは１〜１０時間であり、より好ましくは３〜８時間であり、最も好ましくは４〜６時間である。
【００７７】
本発明においては、好ましくは、二次酸化反応の完了後、得られた生成物を後処理して、第２中間生成物を得る。本発明において、後処理は、好ましくは以下のステップを含む。
（i）二次酸化反応後に得られた物質を有機溶媒で抽出し、洗浄し、溶媒を除去して、粗生成物を得るステップ；
（ii）粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、第２中間生成物を得るステップ。
【００７８】
本発明において、二次酸化反応後に得られた物質の抽出剤に対する質量比は、好ましくは１：（１０〜３０）であり、より好ましくは１：（１５〜２５）であり、最も好ましくは１：（１８〜２２）である。本発明において、抽出剤は、好ましくは、酢酸エチル、クロロホルム、ジクロロメタンまたは四塩化炭素である。本発明において、抽出は、好ましくは２〜４回行われる。本発明においては、特に、抽出後に得られる有機相を洗浄する。
【００７９】
本発明において、洗浄は特に限定されず、当業者に周知の洗浄手段を用いることができる。本発明において、好ましくは、抽出後に得られた物質を、アルカリ溶液および塩化ナトリウム溶液で続けて洗浄する。本発明において、抽出後に得られた物質のアルカリ溶液または塩化ナトリウム溶液に対する体積比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。本発明において、アルカリ溶液の種類は特に限定されず、当業者に周知のアルカリ溶液を用いることができる（重炭酸ナトリウム溶液など）。本発明において、アルカリ溶液および塩化ナトリウム溶液の濃度は特に限定されず、当業者に周知である洗浄に適した溶液の濃度とすることができる。本発明の実施形態においては、とりわけ、飽和アルカリ溶液および飽和塩化ナトリウム溶液によって洗浄を行う。本発明においては、好ましくは、抽出後に得られた物質を、アルカリ溶液で３〜５回洗浄した後、塩化ナトリウム溶液で３〜５回洗浄する。本発明において、溶媒の除去方法は特に限定されず、当業者に周知である溶媒の除去手段とすることができる。本発明においては、好ましくは、減圧下にて蒸留する。
【００８０】
本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィに用いられる具体的な操作ステップおよび試薬は特に限定されず、当業者に周知のものを用いることができる。本発明においては、好ましくは、粗生成物を酢酸エチルと混合し、その混合物をシリカゲルとさらに混合してから、カラムクロマトグラフィに供する。本発明において、粗生成物の酢酸エチルに対する質量比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。本発明においては、好ましくは、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンを溶離液として使用する。溶離液中の、酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。
【００８１】
本発明においては、第２中間生成物を得た後、有機溶媒および還元剤の存在下にて、第２中間生成物をアミノ化合物と還元アミノ化反応させて、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得る。本発明において、第２中間生成物と、アミノ化合物と、還元剤および有機溶媒との質量比は、好ましくは１：（１〜１００）：（５〜１０）であり、より好ましくは１：（８〜７０）：（６〜９）であり、より一層好ましくは１：（２０〜５０）：（７〜８）である。
【００８２】
本発明において、アミノ化合物は、好ましくは、Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩、Ｌ−バリンメチルエステル塩酸塩、Ｌ−トレオニンメチルエステル塩酸塩、Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩、Ｌ−グルタミン酸ジメチルエステル塩酸塩、グリシンメチルエステル塩酸塩、β−アラニンエチルエステル塩酸塩、ジエチルアミノマロネート塩酸塩、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩、Ｌ−チロシンメチルエステル、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル塩酸塩またはＬ−トリプトファンメチルエステル塩酸塩である。
【００８３】
本発明において、還元剤は、好ましくは、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセチル水素化ホウ素ナトリウムである。
【００８４】
本発明において、還元アミノ化反応を行うのに必要な有機溶媒の種類は特に限定されない。このような溶媒としては、第２中間生成物、アミノ化合物および還元剤と相溶性である、当業者に周知の極性有機溶媒または非極性有機溶媒を用いることができる（メタノール、酢酸エチル、クロロホルム、ジクロロメタンおよび四塩化炭素など）。
【００８５】
本発明においては、好ましくは、−２〜２℃にて、還元剤と、第２中間生成物、アミノ化合物および有機溶媒とを混合する。本発明において、還元剤と、第２中間生成物、アミノ化合物および有機溶媒とを混合する際の温度の制御方法は特に限定されず、当業者に周知の温度制御方法を用いることができる。本発明の実施形態においては、とりわけ、氷水浴中にて、還元剤と、第２中間生成物、アミノ化合物および有機溶媒とを混合する。本発明においては、好ましくは、撹拌しながら、還元剤と、第２中間生成物、アミノ化合物および有機溶媒とを混合する。本発明において、攪拌速度は、好ましくは８００〜１２００ｒｐｍであり、より好ましくは９００〜１１００ｒｐｍである。本発明において、攪拌方法は特に限定されず、当業者に周知の攪拌方法を用いることができる。本発明においては、好ましくは、磁気攪拌を行う。
【００８６】
本発明において、還元アミノ化反応の温度は、好ましくは−１０〜８０℃であり、より好ましくは０〜５５℃であり、最も好ましくは２０〜３５℃である。とりわけ本発明の実施形態においては、還元アミノ化反応は室温にて行われ、反応系を加熱または冷却しない。本発明において、還元アミノ化反応の時間は、好ましくは１〜４８時間であり、より好ましくは８〜３２時間であり、最も好ましくは１３〜２０時間である。
【００８７】
本発明において、好ましくは、還元アミノ化反応の完了後、得られた生成物を後処理して、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得る。本発明において、後処理は、好ましくは以下のステップを含む。
（i）還元アミノ化後に得られた物質を有機溶媒で抽出し、洗浄し、溶媒を除去して、粗生成物を得るステップ；
（ii）粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得るステップ。
【００８８】
本発明において、還元アミノ化後に得られた物質の抽出剤に対する質量比は、好ましくは１：（１〜５０）であり、より好ましくは１：（８〜４０）であり、最も好ましくは１：（１５〜２５）である。本発明において、抽出剤は、好ましくは、酢酸エチル、クロロホルム、ジクロロメタンまたは四塩化炭素である。本発明において、抽出は、好ましくは２〜４回行われる。本発明においては、とりわけ、抽出後に得られる有機相を洗浄する。
【００８９】
本発明において、洗浄は特に限定されず、当業者に周知の洗浄手段を用いることができる。本発明においては、好ましくは、抽出後に得られた物質を塩化ナトリウム溶液で洗浄する。本発明において、塩化ナトリウム溶液の濃度は特に限定されず、当業者に周知である洗浄に適した濃度の溶液を用いることができる。本発明の実施形態においては、とりわけ、飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄を行う。本発明において、抽出後に得られた物質の塩化ナトリウム溶液に対する体積比は、好ましくは１：（１〜３０）であり、より好ましくは１：（５〜２３）であり、最も好ましくは１：（１０〜１５）である。本発明においては、好ましくは、洗浄を３〜５回行う。本発明において、溶媒の除去方法は特に限定されず、当業者に周知である溶媒の除去手段を用いることができる。本発明においては、好ましくは、減圧下にて蒸留する。
【００９０】
本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィに用いられる具体的な操作ステップおよび試薬は特に限定されず、当業者に周知のものを用いることができる。本発明においては、好ましくは、粗生成物を酢酸エチルと混合し、その混合物をシリカゲルとさらに混合してから、カラムクロマトグラフィに供する。本発明において、粗生成物の酢酸エチルに対する質量比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。本発明においては、好ましくは、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンを溶離液として使用する。溶離液中の、酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比は、好ましくは１：（１〜１０）であり、より好ましくは１：（３〜８）であり、最も好ましくは１：（４〜６）である。
【００９１】
本発明は、アテローム症を予防および治療するための薬剤の調製における、（i）上記技術的解決手段であるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の使用、または、（ii）上記技術的解決手段である製造方法によって得られるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体の使用、を提供する。本発明において、アテローム症を予防および治療するための薬剤は、好ましくは、有効成分および補助成分を含んでいる。本発明において、アテローム症を予防および治療するための薬剤の有効成分は、上述の本発明の技術的解決手段であるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体、または、上記技術的解決手段である製造方法により得られるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体である。本発明において、補助成分の種類は特に限定されず、当業者に周知の補助成分を用いることができる。本発明において、有効成分の補助成分に対する比率は特に限定されず、実際の条件に応じて決定することができる。本発明において、アテローム症を予防および治療するための薬剤の剤型および投与量は特に限定されず、実際の必要に応じて決定することができる。
【００９２】
以下、本発明における技術的解決手段を、本発明の実施例と組み合わせて、明確かつ完全に説明する。記載されている実施例は一部なのであって、本発明の実施例の全てではないことは明白である。本発明の実施例に基づいて、創造的な努力を伴うことなく当業者が得ることができる他の全ての実施例は、本発明の保護の範囲内にある。
【実施例】
【００９３】
〔実施例１〕
式ＩＶに示す構造を有している化合物１ｇ（１６ｍｍｏｌ）を、無水酢酸１０ｍＬおよびピリジン１０ｍＬと混合した。９００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、４０℃にて３時間、求核置換反応させた。得られた系を減圧下で蒸留して、得られた粗生成物を酢酸エチル６ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比率＝１：５）。１．３ｇの化合物１を、白色固体として得た（収率：９０％）。化合物１の構造は、以下の通りである。
【００９４】
【化２０】
2019529550.tif 000021
【００９５】
〔実施例２〕
実施例１において調製した化合物１  １ｇ（１１ｍｍｏｌ）と、ジクロロメタン５ｍＬと、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸０．２ｇ（１１ｍｍｏｌ）とを混合した。室温にて１時間、一次酸化反応させた。一次酸化反応後に得られた物質に水２５ｍＬを加え、１１００ｒｐｍで１時間、磁気攪拌した。白色固体を沈殿させ、濾過して、透明な溶液を得た。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル８ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：８）。０．８７ｇの化合物２を白色固体として得た（収率：９０％）。化合物２の構造は、以下の通りである。
【００９６】
【化２１】
2019529550.tif 000022
【００９７】
〔実施例３〕
実施例２において調製した化合物２  ０．８ｇ（９ｍｍｏｌ）と、テトラヒドロフラン５ｍＬと、過ヨウ素酸０．３２ｇ（１４ｍｍｏｌ）とを混合し、室温にて２時間、二次酸化反応させた。二次酸化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、４０ｍＬであった）。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で、それぞれ４回ずつ続けて洗浄し、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和重炭酸ナトリウム溶液の体積は５０ｍＬであり、洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は６０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル４ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：４）。０．７３ｇの化合物３を白色固体として得た（収率：９２％）。化合物３の構造は、以下の通りである。
【００９８】
【化２２】
2019529550.tif 000023
【００９９】
〔実施例４〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩０．０１３ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合た。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、３０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル６ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：７）。０．０３ｇの目的化合物４を白色固体として得た（収率：５２％）。目的化合物４の構造は、以下の通りである。
【０１００】
【化２３】
2019529550.tif 000024
【０１０１】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ5.90(t,1H), 5.70 (dd, 1H), 5.11(t, 1H), 4.87 (m, 2H), 4.55(m, 1H), 4.41(m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.19 (m, 1H),3.62 (d, 2H), 3.05 (m, 1H),2.55 (m, 2H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１０２】
〔実施例５〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−バリンメチルエステル塩酸塩０．０１２ｇ（０．７ｍｍｏｌ）および酢酸エチル２ｍＬと混合した。氷浴中、８００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて３時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１００ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウムの体積は、５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル１０ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：６）。０．０３ｇの目的化合物５を白色固体として得た（収率：６０％）。目的化合物５の構造は、以下の通りである。
【０１０３】
【化２４】
2019529550.tif 000025
【０１０４】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ6.98(t, 1H), 5.22 (m, 3H), 4.86 (m, 1H), 4.69 (dd,1H), 4.50 (m, 1H), 4.42 (m, 2H), 4.27(m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.67 (m, 1H), 2.58 (m, 2H), 2.33 (m, 1H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H),0.96(s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１０５】
〔実施例６〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−トレオニンメチルエステル塩酸塩０．０１２ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびクロロホルム２ｍＬと混合した。氷浴中、９００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、トリアセチル水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて６時間還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、９０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、１０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル１ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：１）。０．０２ｇの目的化合物６を白色固体として得た（収率：４０％）。目的化合物６の構造は、以下の通りである。
【０１０６】
【化２５】
2019529550.tif 000026
【０１０７】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ5.66 (t, 1H), 5.37 (m, 2H), 5.03 (m, 2H), 4.42 (s,2H), 4.28 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.57 (m, 2H),2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 12.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H), 1.18 (s, 3H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１０８】
〔実施例７〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩０．０１１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて９時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、２０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、９０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル２ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：２）。０．０２ｇの目的化合物７を白色固体として得た（収率：４０％）。目的化合物７の構造は、以下の通りである。
【０１０９】
【化２６】
2019529550.tif 000027
【０１１０】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ6.26(t, 1H), 5.37 (t, 1H), 5.29 (m, 1H), 4.95 (m,2H), 4.45 (m, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.15 (m, 2H),3.77 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.25(t, 1H), 2.57 (m, 2H),2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１１１】
〔実施例８〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−グルタミン酸ジメチルエステル塩酸塩０．０１７ｇ（０．７ｍｍｏｌ）および四塩化炭素２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、３０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、８０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル３ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：３）。０．０３ｇの目的化合物８を白色固体として得た（収率：５５％）。目的化合物８の構造は、以下の通りである。
【０１１２】
【化２７】
2019529550.tif 000028
【０１１３】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ6.68(t, 1H), 5.63 (t, 1H), 5.06 (m, 1H), 4.95 (t,2H), 4.82 (m, 1H), 4.55 (m, 2H), 4.26 (t, 1H),3.99 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.55(t, 1H), 2.57 (m, 2H), 2.35 (m, 2H), 2.28(m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１１４】
〔実施例９〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、グリシンメチルエステル塩酸塩０．００９ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１２００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、４０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウムの体積は、７０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル４ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：４）。０．０３ｇの目的化合物９を白色固体として得た（収率：６０％）。目的化合物９の構造は、以下の通りである。
【０１１５】
【化２８】
2019529550.tif 000029
【０１１６】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ6.66(t,1H), 4.95-4.82 (m, 5H), 4.55(m, 1H), 4.44 (m, 1H), 4.28(t, 1H), 4.01(m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.62 (d, 2H), 2.57 (m, 2H),2.44 (m, 1H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１１７】
〔実施例１０〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、β−アラニンエチルエステル塩酸塩０．０１１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１２００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、５０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウムの体積は、６０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．０３ｇの目的化合物１０を白色固体として得た（収率：６０％）。目的化合物１０の構造は、以下の通りである。
【０１１８】
【化２９】
2019529550.tif 000030
【０１１９】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ5.16 (t, 1H), 4.97 (t, Hz, 1H), 4.89 (dd, 1H), 4.66 (d, 1H), 4.10 - 4.06 (m, 1H), 4.04 (dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 3.60 (ddd, 1H), 2.70 (ddd, 1H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 2.283(m, 1H), 2.14 - 2.08 (m, 2H), 2.062(m, 2H),2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H), 1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H),1.07(m, 3H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１２０】
〔実施例１１〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、エチルアミノマロネート塩酸塩０．０１５ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、４０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウムの体積は、７０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル４ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：４）。０．０３ｇの目的化合物１１を白色固体として得た（収率：５０％）。目的化合物１１の構造は、以下の通りである。
【０１２１】
【化３０】
2019529550.tif 000031
【０１２２】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ5.16 (t, 1H), 4.97 (t, 1H), 4.89 (dd, 8.0 Hz, 1H), 4.78 (ddd, 1H), 4.66 (d, 1H), 4.46 (d, 1H), 4.11 (m, 5.3 Hz, 4H), 4.09 (m, 2H),3.60 (ddd, 1H), 2.77 (ddd, 1H), 2.540(m, 1H),2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (m, 18H),1.82 (dd, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.74 (t,1H), 1.67 (s, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.55(m, 2H),1.49 (m, 2H), 1.39(m, 2H),1.37(m, 1H),1.33 (s, 3H), 1.25 (m, 2H),1.220(m, 1H), 1.07(m, 2H),1.01 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.77 (s, 3H)。
【０１２３】
〔実施例１２〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩０．０１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、３０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、８０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル３ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：３）。０．０３ｇの目的化合物１２を白色固体として得た（収率：５０％）。目的化合物１２の構造は、以下の通りである。
【０１２４】
【化３１】
2019529550.tif 000032
【０１２５】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.31 (t, 1H), 7.11(m, 5H),5.32 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.79 (m,2H), 4.61 (t, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.31(m, 1H), 4.16 (dd, 1H), 4.06(t, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.32 (m, 1H),2.94 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１２６】
〔実施例１３〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−チロシンメチルエステル０．０１４ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、２０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウムの体積は、９０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル２ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：２）。０．０２ｇの目的化合物１３を白色固体として得た（収率：３５％）。目的化合物１３の構造は、以下の通りである。
【０１２７】
【化３２】
2019529550.tif 000033
【０１２８】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.01 (d, 2H), 6.75 (d, 2H), 6.04 (m, 1H), 5.49 (dd, 1H), 5.18 (m, 2H), 4.56 (m, 1H), 4.50 (s, 2H), 4.37 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.63 (m,3H), 3.25 (s, 1H), 2.97 (m, 1H), 2.57 (t, 2H),2.28(m, 1H), 2.06(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H), 1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１２９】
〔実施例１４〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル塩酸塩０．０１７ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、９００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な塩化ナトリウム溶液の体積は、１００ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗製物を１ｍＬの酢酸エチルと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：１）。０．０３ｇの目的化合物１４を白色固体として得た（収率：５１％）。目的化合物１４の構造は、以下の通りである。
【０１３０】
【化３３】
2019529550.tif 000034
【０１３１】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ8.67 (d, 1H), 7.63 (d, 1H),6.02(t, 1H), 5.90 (dd, 1H), 4.99 (m, 1H), 4.75 (t,1H), 4.55 (m, 1H), 4.42 (m, 2H), 4.26 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.48(t, 1H), 3.14 (m, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.55 (m, 2H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１３２】
〔実施例１５〕
実施例３において調製した化合物３  ０．０５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−トリプトファンメチルエステル塩酸塩０．０１５ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、８００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０５ｇ（８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、５０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な塩化ナトリウム溶液の体積は、５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．０２ｇの目的化合物１５を白色固体として得た（収率：３３％）。目的化合物１５の構造は、以下の通りである。
【０１３３】
【化３４】
2019529550.tif 000035
【０１３４】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.26 (dd, 1H), 6.85(ddd, 1H),6.76 (ddd, 1H), 6.67 (ddd, 1H), 6.26(t,1H), 5.15 (t, 1H), 4.92 (m, 1H), 4.55(dd, 1H), 4.44 (m, 1H), 4.28(t, 1H), 4.11(m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.52 (m, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.37 (m, 1H), 2.54 (m, 2H),2.48 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 2.283(m, 1H), 2.062(m, 2H), 2.00 (ddd, 18H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１３５】
〔実施例１６〕
式Ｖに示す構造を有している化合物１ｇ（２１ｍｍｏｌ）を、無水酢酸１０ｍＬおよびピリジン１０ｍＬと混合した。１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、６０℃にて３時間求核置換反応させた。求核置換反応後に得られた物質を減圧下で蒸留して、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンのに対する体積比＝１：５）。１．１ｇの化合物１６を白色固体として得た（収率：９０％）。化合物１６の構造は、以下の通りである。
【０１３６】
【化３５】
2019529550.tif 000036
【０１３７】
〔実施例１７〕
実施例１６において調製した化合物１６  １ｇ（１７ｍｍｏｌ）と、ジクロロメタン５ｍＬと、ｍ−クロロ過安息香酸０．３１ｇ（１１ｍｍｏｌ）とを混合した。室温にて１時間、一次酸化反応させた。一次酸化反応後に得られた物質に水４０ｍＬを加え、１０００ｒｐｍで２時間磁気攪拌した。白色固体を沈殿させ、濾過して、透明な溶液を得た。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．９２ｇの化合物１７を白色固体として得た（収率：９０％）。化合物１７の構造は、以下の通りである。
【０１３８】
【化３６】
2019529550.tif 000037
【０１３９】
〔実施例１８〕
実施例１７において調製した化合物１７  ０．９ｇ（１５ｍｍｏｌ）と、テトラヒドロフラン５ｍＬと、過ヨウ素酸０．８３ｇ（３２ｍｍｏｌ）とを混合した。室温にて２時間、二次酸化反応させた。二次酸化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は４０ｍＬであった）。その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で、それぞれ４回ずつ続けて洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和重炭酸ナトリウム溶液の体積は５０ｍＬであり、洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．７１ｇの化合物１８を白色固体として得た（収率：８５％）。化合物１８の構造は、以下の通りである。
【０１４０】
【化３７】
2019529550.tif 000038
【０１４１】
〔実施例１９〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩０．０１３ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、８００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、１００ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル１０ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：１０）。０．０３ｇの目的化合物１９を白固体として得た（収率：７２％）。目的化合物１９の構造は、以下の通りである。
【０１４２】
【化３８】
2019529550.tif 000039
【０１４３】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１４４】
〔実施例２０〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−バリンメチルエステル塩酸塩０．０１２ｇ（０．７ｍｍｏｌ）および酢酸エチル２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて３時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、２０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、９０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル９ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：９）。０．０３ｇの目的化合物２０を白色固体として得た（収率：７５％）。目的化合物２０の構造は、以下の通りである。
【０１４５】
【化３９】
2019529550.tif 000040
【０１４６】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H),0.96(s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１４７】
〔実施例２１〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−トレオニンメチルエステル塩酸塩０．０１２ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびクロロホルム２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて６時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、３０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、８０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル８ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：８）。０．０４ｇ目的化合物２１を白色固体として得た（収率：５０％）。目的化合物２１の構造は、以下の通りである。
【０１４８】
【化４０】
2019529550.tif 000041
【０１４９】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１５０】
〔実施例２２〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩０．０１１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン２ｍＬと混合した。氷浴中、１２００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて９時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、４０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、７０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル７ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：７）。０．０２８ｇの目的化合物２２を白色固体として得た（収率：７３％）。目的化合物２２の構造は、以下の通りである。
【０１５１】
【化４１】
2019529550.tif 000042
【０１５２】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１５３】
〔実施例２３〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−グルタミン酸ジメチルエステル塩酸塩０．０１７ｇ（０．７ｍｍｏｌ）および四塩化炭素２ｍＬと混合した。氷浴中で、１２００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、５０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、６０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル６ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：６）。０．０２８ｇの目的化合物２３を白色固体として得た（収率：６７％）。目的化合物２３の構造は、以下の通りである。
【０１５４】
【化４２】
2019529550.tif 000043
【０１５５】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１５６】
〔実施例２４〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、グリシンメチルエステル塩酸塩０．００９ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１１００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、６０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．０２６ｇの目的化合物２４を白色固体として得た（収率：７０％）。目的化合物２４の構造は、以下の通りである。
【０１５７】
【化４３】
2019529550.tif 000044
【０１５８】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.65 (s, 3H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H),1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１５９】
〔実施例２５〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、β−アラニンエチルエステル塩酸塩０．０１１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、７０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、４０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル４ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：４）。０．０２５ｇの目的化合物２５を白色固体として得た（収率：６５％）。目的化合物２５の構造は、以下の通りである。
【０１６０】
【化４４】
2019529550.tif 000045
【０１６１】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.92 (t, 2H), 2.93 (t, 2H), 2.56(t, 2H),2.46(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１６２】
〔実施例２６〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、ジエチルアミノマロネート塩酸塩０．０１５ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、９００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、８０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、３０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル３ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：３）。０．０２６ｇの目的化合物２６を白色固体として得た（収率：６０％）。目的化合物２６の構造は、以下の通りである。
【０１６３】
【化４５】
2019529550.tif 000046
【０１６４】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H),1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H), 1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H), 1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H),1.07(m, 3H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１６５】
〔実施例２７〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩０．０１ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、８００ｒｐｍでの磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、９０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、２０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル２ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：２）。０．０２９ｇの目的化合物２７を白色固体として得た（収率：７０％）。目的化合物２７の構造は、以下の通りである。
【０１６６】
【化４６】
2019529550.tif 000047
【０１６７】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.31 (t, 1H), 7.11(m, 5H),δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H),1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１６８】
〔実施例２８〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−チロシンメチルエステル０．０１４ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１００ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、１０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル１：１ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：１）。０．０２４ｇの目的化合物２８を白色固体として得た（収率：５５％）。目的化合物２８の構造は、以下の通りである。
【０１６９】
【化４７】
2019529550.tif 000048
【０１７０】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.01 (d, 2H), 6.75 (d, 2H),δ4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.50(t, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.05 (m, 1H),2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H), 1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１７１】
〔実施例２９〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル塩酸塩０．０１７ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、５０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．０２５ｇの目的化合物２９を白色固体として得た（収率：５０％）。目的化合物２９の構造は、以下の通りである。
【０１７２】
【化４８】
2019529550.tif 000049
【０１７３】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ8.73 (d, 1H), 7.65 (d, 1H),4.95 (m, 1H), 4.25 (t, 1H),3.45 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 2.82(dd, 1H), 2.56(t, 2H),2.00 (ddd, 9H), 1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H), 1.09(m, 1H), 1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H), 0.82(s, 3H)。
【０１７４】
〔実施例３０〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−トリプトファンメチルエステル塩酸塩０．０１５ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気撹拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出した（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、５０ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、５０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル５ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：５）。０．０２ｇの目的化合物３０を白色固体として得た（収率：４５％）。目的化合物３０の構造は、以下の通りである。
【０１７５】
【化４９】
2019529550.tif 000050
【０１７６】
1H NMR (600 MHz, cdcl3)δ7.26 (dd, 1H), 6.85(ddd, 1H),6.76 (ddd, 1H), 6.67 (ddd, 1H),δ4.95 (t, 1H), 4.25 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.56(t, 2H), 2.00 (ddd, 9H),1.92(m, 2H),1.85(m, 2H),1.82(m, 1H), 1.81(m, 1H), 1.74(m,1H), 1.67(m, 3H), 1.65(m, 3H),1.63(m, 3H), 1.53(m, 2H),1.49(m, 2H),1.39(m,1H),1.33(m, 3H), 1.26(m, 1H),1.21(m, 1H),1.20 (m, 2H),1.11(s, 3H),1.09(m, 1H),1.03(m, 1H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85(m, 1H),0.84(s, 3H),0.82(s, 3H)。
【０１７７】
〔実施例３１〕
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の毒性を試験した。具体的なステップは以下の通りである。
【０１７８】
１８６匹のKunmingマウス（１８〜２２ｇ、オス、第三軍医大学実験動物センターから購入）を無作為かつ平均的に３１群に分け、本発明の実施例１〜３０において調製した化合物を与えた（１回あたり５００ｍｇ／ｋｇを胃内投与）。また、生理食塩水対照群（１ｍＬ）も用意した。マウスを１４日間続けて観察した。
【０１７９】
［結果］
各実験群のKunmingマウスは死亡せず、良好な健康状態であり、食物摂取および毛髪色は正常であった。実験群のマウスの体重と、生理食塩水対照群の体重との間に、有意差はなかった。
【０１８０】
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の毒性をさらに検証するために、マウスマクロファージ細胞系ＲＡＷ２６４．７を培養した。本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の濃度を、培地を用いて１０μｍｏｌ／Ｌに調製した。この培地は、溶媒が標準生理食塩水であり、共溶媒がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；最終濃度は０．１％）であった。また、０．１％ＤＭＳＯ生理食塩水対照群を用意した。細胞生存率をＣＣＫ８法により測定した。データは、平均±標準偏差で表した。それぞれの群に対して、SPSS 10.0を用いて一元配置分散分析を行った。ｐ＜０．０５を有意差とした。結果を表１に示す。表１から分かるように、上記の濃度において、化合物１、２および３は有意な細胞毒性を有していたのに対し、他の化合物は有意な細胞毒性を有していなかった。
【０１８１】
【表１】
2019529550.tif 000051
【０１８２】
〔実施例３２〕
高脂質の餌を与えたａｐｏＥ−／−マウスにおいて、動脈全体の面積に対して動脈硬化プラークが形成された面積の割合に対する、本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の効果。それに加えて、低密度リポタンパク質コレステロールおよび高密度リポタンパク質のレベルに対する、本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の効果。具体的なステップは以下の通りである。
【０１８３】
［１．動物］
１６０匹のａｐｏＥ−／−マウス（１０週齢、健康、クリーン・グレード、北京大学実験動物センターから購入、オス、体重：２２〜２５ｇ）を、無菌層流飼育室内で別々のケージに収容し、自由に摂餌させた。マウスに高脂質の餌（標準食＋０．１５％コレステロール＋２１％ラード）を２５週間与えた。室温を２４℃、相対湿度を５０％、照明時間を７：３０〜１９：３０に保った。
【０１８４】
［２．グループ分け、投与方法］
１０週間の飼育後、均等かつ無作為な方法で、動物を体重によって３２群（ｎ＝５）に分けた。投与から１５週後に致死させた。
【０１８５】
標準生理食塩水対照群：標準生理食塩水、胃内投与
陽性対照群：シンバスタチン１０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）、胃内投与
本発明の実施例１〜３０で調製した化合物群（全３０群）：各化合物を３０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）胃内投与。
【０１８６】
［３．試験指標および方法］
（１．動脈硬化プラークの面積および総面積に対する割合の分析）
動物を致死させた後、大動脈の基部から腹部大動脈の末端分岐部まで、大動脈を摘出した。ホルマリンで固定した後、大動脈をスーダンＩＶで染色した。赤く染色された部分は、アテローム症による病変領域であった。全面積に対する病変領域の面積の割合を、Image Pro Plus 5.0ソフトウェアを用いて算出した。
【０１８７】
（２．総コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）および高密度リポ蛋白質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）のレベルの決定）
ROCHE 7060自動生化学分析装置を使用して決定した。
【０１８８】
（３．ＴＮＦ−αレベルの測定）
測定にはMillipore社の液相チップ法を用いた（Mcytomag-70K-3、マウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネル）。
【０１８９】
［４．統計分析方法］
データは、平均±標準偏差で表した。それぞれの群に対して、SPSS 10.0を用いて一元配置分散分析を行った。ｐ＜０．０５を有意差とした。
【０１９０】
［結果］
（i）表２に示されるように、本発明の実施例１〜３０において調製された化合物は全て、ａｐｏＥ−／−マウスにおける動脈硬化プラークの面積の割合を有意に減少させた。これは対照群とは統計的に異なっていた。
【０１９１】
【表２】
2019529550.tif 000052
【０１９２】
（ii）表３に示されるように、本発明の実施例１〜３０において調製された化合物は全て、マウス血清中のＨＤＬ−Ｃのレベルを有意に向上させることができた。また、いくつかの化合物は、マウス血清中のＬＤＬ−Ｃのレベルを有意に低下させることができた。これは対照群とは統計的に異なっていた。
【０１９３】
【表３】
2019529550.tif 000053
【０１９４】
（iii）表４に示されるように、本発明の実施例１〜３０において調製された化合物は、ａｐｏＥ−／−マウスの動脈における局所的なＴＮＦ−αのレベルを有意に減少させることができた。これは対照群とは統計的に異なっており、本発明の実施例１〜３０において調製された化合物が良好な抗炎症効果を有していることを示している。
【０１９５】
【表４】
2019529550.tif 000054
【０１９６】
〔実施例３３〕
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物が、ＲＡＷ２６４．７細胞由来泡沫細胞の形成に及ぼす効果。具体的なステップは以下の通りである。
【０１９７】
［１．細胞培養および泡沫細胞モデルの確立］
ＲＡＷ２６４．７細胞を、高グルコースレベルのＤＭＥＭ培養培地（GIBCO）中で、細胞密度が１×１０６となるまで培養した。この細胞を６ウェルプレート中に播種し、６０ｍｇ／Ｌのｏｘ−ＬＤＬ（酸化修飾低密度リポタンパク質；Peking Union Medical College）を加えた。４８時間インキュベートした後に、泡沫細胞を得た。
【０１９８】
［２．グループ化および指標の検出］
得られた泡沫細胞を６１群に分けた（１群当たり３つのウェルプレートが含まれる）。薬物（１００μＬ／ウェル）を加えて４８時間処理した後、培地を廃棄した。オイルレッドＯ染色を施した後、余分なオイルレッドＯを洗い流した。細胞をイソプロパノールで溶解させて、４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。モデル群のＯＤ値を１００％とし、細胞数で補正した各群のＯＤ値をモデル群と比較して、細胞内脂質含有率を求めた。値が大きいほど、細胞内脂質が多く、泡沫細胞が多く形成されている。
【０１９９】
標準生理食塩水対照群：標準生理食塩水
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の少量投与群：１０μｍｏｌ／Ｌ（溶媒は標準生理食塩水）
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物の多量投与群：３０μｍｏｌ／Ｌ（溶媒は標準生理食塩水）。
【０２００】
［３．統計解析法］
データは、平均±標準偏差で表した。それぞれの群に対して、SPSS 10.0を用いて一元配置分散分析を行った。ｐ＜０．０５を有意差とした。
【０２０１】
［４．結果］
本発明の実施例１〜３０において調製した化合物は全て、３０μｍｏｌ／Ｌの投与量において、泡沫細胞の形成を有意に減少させることができた。また、いくつかの化合物は、１０μｍｏｌ／Ｌの投与量において、泡沫細胞の形成を有意に減少させることができた。
【０２０２】
【表５】
2019529550.tif 000055
2019529550.tif 000056
【０２０３】
上述の実施例から分かるように、本発明によって提供されるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、細胞毒性が低く、ａｐｏＥ−／−マウスにおいて動脈硬化プラークの面積の割合を有意に減少させることができる。また、上記誘導体は、マウスの血清中の低密度リポタンパク質コレステロールのレベルを効果的に減少させ、高密度リポタンパク質コレステロールのレベルを増加させることもできる。さらに、上記誘導体は、ａｐｏＥ−／−マウスの動脈における局所的なＴＮＦ−αのレベルを有意に減少させることができ、良好な抗炎症効果を有している。３０μＭの投与量において、上記パナキシジオール型ギンセノシド誘導体は、ＲＡＷ２６４．７細胞由来泡沫細胞の形成を有意に減少させることができる。これらの事項は、本発明により提供されるパナキシジオール型ギンセノシド誘導体、アテローム症を予防および治療するための薬剤の調製のための有効成分として使用できることを示している。
【０２０４】
上述の実施例は、本発明の好ましい実施形態に過ぎない。当業者は、本発明の原理から逸脱することなく、種々のの改善および修正を行うことができ、これらの改善および修正も、本発明の保護の範囲内とみなされることに留意されたい。
【手続補正書】
【提出日】令和1年5月16日(2019.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
本発明においては、第２中間生成物を得た後、有機溶媒および還元剤の存在下にて、第２中間生成物をアミノ化合物と還元アミノ化反応させて、式Ｉまたは式ＩＩに示す構造を有しているパナキシジオール型ギンセノシド誘導体を得る。本発明において、第２中間生成物と、アミノ化合物と、還元剤との質量比は、好ましくは１：（１〜１００）：（５〜１０）であり、より好ましくは１：（８〜７０）：（６〜９）であり、より一層好ましくは１：（２０〜５０）：（７〜８）である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６８】
〔実施例２８〕
実施例１８において調製した化合物１８  ０．０３３ｇ（０．６ｍｍｏｌ）を、Ｌ−チロシンメチルエステル０．０１４ｇ（０．７ｍｍｏｌ）およびメタノール２ｍＬと混合した。氷浴中、１０００ｒｐｍで磁気攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３３ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間、還元アミノ化反応させた。還元アミノ化反応後に得られた物質を、酢酸エチルで３回抽出（抽出１回あたりに必要な酢酸エチルの体積は、１００ｍＬであった）。その後、飽和塩化ナトリウム溶液で４回洗浄して、透明な溶液を得た（洗浄１回あたりに必要な飽和塩化ナトリウム溶液の体積は、１０ｍＬであった）。透明な溶液を、減圧下で蒸留して溶媒を除去し、得られた粗生成物を酢酸エチル１ｍＬと混合した。その混合物をシリカゲルと混合してから、カラムクロマトグラフィに供した。溶離液として、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物を用いた（酢酸エチルのｎ−ヘキサンに対する体積比＝１：１）。０．０２４ｇの目的化合物２８を白色固体として得た（収率：５５％）。目的化合物２８の構造は、以下の通りである。
【国際調査報告】
2019529550.tif 000064
2019529550.tif 000065
2019529550.tif 000066
2019529550.tif 000067