(57)【要約】  本発明は、対象において腫瘍を処置するための併用療法を提供する。併用療法は、（ｉ）癌幹細胞に対する抗体、および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤の投与を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ｉ)癌幹細胞に対する抗体、および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤を投与することを含む、対象において腫瘍を処置するための併用療法。
【請求項２】
（ｉ）が、抗ＬＧＲ５抗体である、請求項１に記載の併用療法。
【請求項３】
抗ＬＧＲ５抗体が、ヒト化抗体またはヒトモノクローナル抗体である、請求項２に記載の併用療法。
【請求項４】
アミノ酸ＧＹＳＦＴＡＹＷ（配列番号１）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ１を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
アミノ酸ＩＬＰＧＳＤＳＴ（配列番号２）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ２を含む、請求項３または請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
アミノ酸ＡＲＳＧＹＹＧＳＳＱＹ（配列番号３）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
アミノ酸ＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦ（配列番号４）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ１を含む、請求項３〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
アミノ酸ＬＴＳ（配列番号５）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ２を含む、請求項３〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
アミノ酸ＱＱＮＡＥＤＰＲＴ（配列番号６）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項３〜８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号７または８を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項３〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
配列番号９または１０を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
チェックポイント阻害剤が、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、２Ｂ４、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１６０、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子）、ＫＩＲ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体）、ＰＳ（ホスファチジルセリン）、ＯＸ−４０、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＩＳＴＡ、ＶＴＣＮ１、およびこれらの組み合わせから選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の併用療法。
【請求項１３】
免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、またはＣＴＬＡ−４の阻害剤である、請求項１２に記載の併用療法。
【請求項１４】
チェックポイント阻害剤が抗体である、請求項１２または１３に記載の併用療法。
【請求項１５】
抗体が、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の併用療法。
【請求項１６】
癌の標準治療と組み合わせて投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の併用療法。
【請求項１７】
癌の標準治療が、１つの化学療法剤または複数の化学療法剤の組み合わせの投与を含む、請求項１６に記載の併用療法。
【請求項１８】
化学療法剤が、シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、カペシタビン、ロイコボリン、フォリン酸、オキサリプラチン、ゲムシタビン、タンパク質結合パクリタキセル、イリノテカン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１７に記載の併用療法。
【請求項１９】
標準治療が５−フルオロウラシル＋ロイコボリン＋イリノテカンを含む、請求項１７または１９に記載の併用療法。
【請求項２０】
化学療法剤が血管破壊剤である、請求項１７に記載の併用療法。
【請求項２１】
血管破壊剤が式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、もしくはその塩である、請求項２０に記載の併用療法：
【化１】
2019529418.tif 000006
（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｓｅ、ＳｅＯ、ＳｅＯ２、またはＮＲを表し、ここで、Ｒは、Ｈ、Ｏ、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、および場合により置換されたスルホニルから選択され、
Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、各々独立して、Ｈ、カルボキシ、シアノ、ジハロメトキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、ペンタハロエチル、ホスホリルアミノ、ホスホノ、ホスフィニル、スルホ、トリハロエテニル、トリハロメタンチオ、トリハロメトキシ、トリハロメチル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアシルイミノ、場合により置換されたアシルイミノキシ、場合により置換されたアシルオキシ、場合により置換されたアリールアルキル、場合により置換されたアリールアルコキシ、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルケニルオキシ、場合により置換されたアルコキシ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキニルオキシ、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたアミノアシル、場合により置換されたアミノアシルオキシ、場合により置換されたアミノスルホニル、場合により置換されたアミノチオアシル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたアリールオキシ、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたオキシアシルアミノ、場合により置換されたオキシアシルオキシ、場合により置換されたオキシアシルイミノ、場合により置換されたオキシスルフィニルアミノ、場合により置換されたオキシスルホニルアミノ、場合により置換されたオキシチオアシル、場合により置換されたオキシチオアシルオキシ、場合により置換されたスルフィニル、場合により置換されたスルフィニルアミノ、場合により置換されたスルホニル、場合により置換されたスルホニルアミノ、場合により置換されたチオ、場合により置換されたチオアシル、場合により置換されたチオアシルアミノを表すか、またはＲ１ＡおよびＲ１Ｂは、一緒になって、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたシクロアルキル、もしくは場合により置換されたシクロアルケニルを形成し、
Ｒ１Ｃは、Ｃ１‐３アルコキシ、Ｃ１‐３アルキルチオ、Ｃ１‐３アルキルアミノ、またはＣ１‐３ジアルキルアミノを表し、
Ｒ１Ｄは、ヒドロキシまたはアミノを表し、
Ｌは、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｓｅ、ＳｅＯ、ＳｅＯ２、Ｃ＝ＮＺ’、もしくはＮＲ’を表し、ここで、Ｚ’は、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、もしくは場合により置換されたアミノであり、かつ、Ｒ’は、Ｈ、Ｏ、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、もしくは場合により置換されたスルホニルから選択され、
Ｒ２Ａ‐Ｒ２Ｅは、各々独立して、Ｈ、カルボキシ、シアノ、ジハロメトキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、ペンタハロエチル、ホスホリルアミノ、ホスホノ、ホスフィニル、スルホ、トリハロエテニル、トリハロメタンチオ、トリハロメトキシ、トリハロメチル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアシルイミノ、場合により置換されたアシルイミノキシ、場合により置換されたアシルオキシ、場合により置換されたアリールアルキル、場合により置換されたアリールアルコキシ、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルケニルオキシ、場合により置換されたアルコキシ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキニルオキシ、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたアミノアシル、場合により置換されたアミノアシルオキシ、場合により置換されたアミノスルホニル、場合により置換されたアミノチオアシル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたアリールオキシ、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたオキシアシルアミノ、場合により置換されたオキシアシルイミノ、場合により置換されたオキシアシルオキシ、場合により置換されたオキシスルフィニルアミノ、場合により置換されたオキシスルホニルアミノ、場合により置換されたオキシチオアシル、場合により置換されたオキシチオアシルオキシ、場合により置換されたスルフィニル、場合により置換されたスルフィニルアミノ、場合により置換されたスルホニル、場合により置換されたスルホニルアミノ、場合により置換されたチオ、場合により置換されたチオアシル、場合により置換されたチオアシルアミノ、または場合により置換されたチオアシルオキシを表すか、または、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂ、Ｒ２ＢおよびＲ２Ｃ、Ｒ２ＣおよびＲ２Ｄ、ならびにＲ２ＤおよびＲ２Ｅのいずれかが、一緒になって、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたシクロアルキル、もしくは場合により置換されたシクロアルケニルを形成し、ならびに、
Ｑは、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、トリアルキルシリル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアミノアシルアミノ、ＯＲ’’、ＳＲ’’、もしくはＮＲ’’Ｒ’’（ここで、Ｒ’’は、各々独立して、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたアシル、および場合により置換されたオキシアシルを表す）を表すか、または、ＮＲ’’’ＮＲ’’’（ここで、Ｒ’’’は、各々独立して、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたヘテロアリールを表す）を表す）。
【請求項２２】
血管破壊剤が、２−メチル−７−ヒドロキシ−３−（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−６−メトキシベンゾフラン（ＢＮＣ１０５）、または６−メトキシ−２−メチル−３−（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−１−ベンゾフラン−７−イルリン酸二ナトリウム（ＢＮＣ１０５Ｐ）である、請求項２０または２１に記載の併用療法。
【請求項２３】
腫瘍が、膀胱癌腫瘍、乳癌腫瘍、結腸癌腫瘍，消化器癌腫瘍、腎癌腫瘍、肺癌腫瘍、卵巣癌腫瘍、膵癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、近位または遠位胆管癌腫瘍、黒色腫、大腸癌腫瘍、転移性大腸癌腫瘍、転移性膵癌腫瘍、三種陰性乳癌腫瘍および小細胞肺癌腫瘍からなる群から選択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の併用療法。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の併用療法を含む、対象における腫瘍を処置する方法。
【請求項２５】
腫瘍が、膀胱癌腫瘍、乳癌腫瘍、結腸癌腫瘍、消化器癌腫瘍、腎癌腫瘍、肺癌腫瘍、卵巣癌腫瘍、膵癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、近位または遠位胆管癌腫瘍、黒色腫、大腸癌腫瘍、転移性大腸癌腫瘍、転移性膵癌腫瘍、三種陰性乳癌腫瘍および小細胞肺癌腫瘍からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
混合物として成分（ｉ）および（ｉｉ）を含む組成物。
【請求項２７】
腫瘍の処置のための医薬の調製における、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の併用療法の成分（ｉ）および（ｉｉ）の使用。
【請求項２８】
腫瘍が、膀胱癌腫瘍、乳癌腫瘍、結腸癌腫瘍、消化器癌腫瘍、腎癌腫瘍、肺癌腫瘍、卵巣癌腫瘍、膵癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、近位または遠位胆管癌腫瘍、黒色腫、大腸癌腫瘍、転移性大腸癌腫瘍、転移性膵癌腫瘍、三種陰性乳癌腫瘍および小細胞肺癌腫瘍からなる群から選択される、請求項２７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、腫瘍の処置のための併用療法に関する。本併用は、癌幹細胞マーカーに対する抗体およびチェックポイント阻害剤を含む。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
現在、免疫療法の臨床上の利益を、より広範な患者集団に拡大するという非常に強い動きがあり、ここでは、多くの患者が反応しない。チェックポイント阻害剤が治療法として使用される免疫学的アプローチは、分化した腫瘍細胞からなる腫瘍塊に偏っている。
【０００３】
チェックポイント阻害剤は、免疫システムの攻撃に対する癌の主な防御の１つを克服しようとしている。免疫システムＴ細胞は、疾病や感染の兆候について体内を絶えず巡回している。免疫システムＴ細胞が他の細胞と出会うと、その細胞の表面上の特定のタンパク質を探索し、特定のタンパク質は細胞のアイデンティティーの印として働く。特定のタンパク質が、その細胞が正常かつ健康であることを示している場合、Ｔ細胞はその細胞を放置する。特定のタンパク質が、その細胞が感染しているか、または癌性であることを示唆している場合、Ｔ細胞はその細胞に対する攻撃を引き起こす。Ｔ細胞が攻撃を開始すると、免疫システムは一連のさらなる分子を増加させて、攻撃により体内の正常な組織が損傷するのを防ぐ。これらの分子が、免疫チェックポイントとして知られている。
【０００４】
腫瘍細胞はしばしば、細胞の癌性を暴露するタンパク質を身につけている。しかしながら、腫瘍細胞は時に、アイデンティティーの盗用に相当することを犯し、正常な細胞のタンパク質に身を隠している。最近の研究により、癌細胞が、免疫システム攻撃を抑制し回避するために、しばしば免疫チェックポイント分子を利用することが示されている。これらの正常に見えるタンパク質によってだまされたＴ細胞は、腫瘍細胞が攻撃されないようにさせ得る。
【０００５】
チェックポイント阻害剤は、癌細胞上のこれらの正常なタンパク質を遮断するか、またはそれらに反応するＴ細胞上のタンパク質を遮断する。その結果、Ｔ細胞が細胞を癌性であると認識し、免疫システム攻撃を仕掛けるのを妨げていた、目隠しを取り除くことができる。
【０００６】
イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）)、ペムブロリズマブ(キイトルーダ（登録商標）)、およびニボルマブ(オプジーボ（登録商標）)を含む、３つのチェックポイント阻害剤が、米国食品医薬品局から、癌に対する迅速な承認を受けている。これらおよび他の免疫チェックポイント療法は、今日の癌処置における、最も有望な最前線の１つとなっている。
【０００７】
一方、癌幹細胞（ＣＳＣ）は、このより分化した腫瘍塊と比較して、異なる遺伝子および抗原の発現プロファイルを示している。これにより、ＣＳＣはチェックポイント阻害剤の治療効果を回避し、腫瘍を再増殖させることができる。ＬＧＲ５は、いくつかの固形癌において、自己再生可能で、これらの能力を欠く子孫細胞への分化が可能である、ＣＳＣまたは腫瘍開始亜集団の機能的マーカーであることが確認されている。重要な証拠ではまた、これらのＣＳＣが免疫抑制の表現型を有し、抗腫瘍宿主免疫反応を回避することを可能にしていることが示されている［１−８］。これは、ＣＳＣのサブセットがＴ細胞免疫を下方制御する可能性を開く。
【０００８】
チェックポイント阻害剤を回避し、治療に対する全体的な反応性を下方制御することができる、腫瘍内の細胞サブセットの存在は、抗ＬＧＲ５抗体がチェックポイント阻害剤と組み合わされる併用療法に、その能力を存分に発揮させ、より大きな治療効果を与える。
【０００９】
免疫チェックポイント療法とＣＳＣ標的化薬との組み合わせは、それぞれのアプローチの臨床的有用性を改善し得、チェックポイント阻害剤の治療的価値を高めることができ、より多くの「反応者」を生み出す患者集団へと後押しするであろう。
【発明の概要】
【００１０】
本発明者らは、癌幹細胞に対する抗体と免疫療法剤との組み合わせが、抗癌幹細胞抗体単独または免疫療法剤単独のいずれかによる処置と比較した場合に、癌を処置する有効性を増大させることを見出した。
【００１１】
従って、第１の局面において、本発明は、(ｉ)癌幹細胞に対する抗体、および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤を投与することを含む、対象において腫瘍を処置するための併用療法を提供する。
【００１２】
第２の局面において、本発明は、本発明の併用療法を含む、対象において腫瘍を処置する方法を提供する。
【００１３】
第３の局面において、本発明は、混合物として該併用療法の成分（ｉ）および（ｉｉ）を含む組成物を提供する。
【００１４】
第４の局面において、本発明は、腫瘍の処置のための医薬の調製における、該併用療法の成分（ｉ）および（ｉｉ）の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】マウス大腸癌（ＣＲＣ）腫瘍モデルにおける腫瘍増殖抑制
【００１６】
【図２】全Ｔ細胞の腫瘍への動員−全リンパ球に対する％としての、腫瘍性ＣＤ３＋
【００１７】
【図３】細胞傷害性Ｔ細胞の腫瘍への動員−ＣＤ３に対する％としての、腫瘍性ＣＤ８＋
【００１８】
【図４】ＣＤ４＋に対する％としての、腫瘍性Ｔｒｅｇ細胞
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の詳細な説明
本明細書を通して、文脈上別段の要求がない限り、用語「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、またはｃｏｍｐｒｉｓｅｓもしくはｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇなどの変形）は、記載された要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群を含むが、他の要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群をいずれも除外しないことを意味することは、理解されるであろう。
【００２０】
本明細書において、いずれの先行刊行物（もしくはそれから得られる情報）への言及、またはいずれの公知の事項への言及も、その先行刊行物（もしくはそれから得られる情報）または公知の事項が、本明細書に関する努力傾注分野における共通の一般的知識の一部を形成するということの認知、または承認、またはいずれの形態の示唆としても見なされるものではなく、そう見なされるべきでもない。
【００２１】
本明細書で言及された全ての刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００２２】
本明細書で用いられているように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数の局面を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「薬剤（ａｎ  ａｇｅｎｔ）」への言及には、１つの薬剤、ならびに２つ以上の薬剤が含まれる；「分子（ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及には、１つの分子、ならびに２つ以上の分子が含まれる、などである。
【００２３】
第１の局面において、本発明は、(ｉ)癌幹細胞に対する抗体、および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤を投与することを含む、対象において腫瘍を処置するための併用療法を提供する。
【００２４】
第２の局面において、本発明は、本発明の併用療法を含む、対象において腫瘍を処置する方法を提供する。
【００２５】
第３の局面において、本発明は、混合物として該併用療法の成分（ｉ）および（ｉｉ）を含む組成物を提供する。
【００２６】
第４の局面において、本発明は、腫瘍の処置のための医薬の調製における、該併用療法の成分（ｉ）および（ｉｉ）の使用を提供する。
【００２７】
癌幹細胞に対する抗体は、好ましくは抗ＬＧＲ５抗体である。当該抗体の例は、WO2015/153916に詳細に記載されており、該開示は相互参照により本明細書に組み込まれる。
【００２８】
複数の実施形態において上述したように、併用療法は、ＬＲＧ５に特異的に結合するヒト抗体またはヒト化抗体の使用を包含する。いくつかの実施形態において、該抗体はＬＧＲ５に特異的に結合するが、Ｒ−ＳｐｏのＬＧＲ５への結合は阻害しない。他の実施形態は、ＬＧＲ５によるＲ−Ｓｐｏシグナル伝達を阻害することなくＬＧＲ５に結合する抗体を含む。さらに他の実施形態は、ＬＧＲ５に結合するが、ＬＧＲ５によるＲ−Ｓｐｏの結合またはシグナル伝達の両方を阻害しない抗体を含む。別の実施形態は、ＬＧＲ５に結合し、Ｗｎｔ経路によるＬＧＲ５シグナル伝達もまた阻害する抗体である。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、Ｗｎｔ経路によるＬＧＲ５シグナル伝達を阻害し、ＲＳｐｏシグナル伝達とは無関係であり得る。
【００２９】
ＬＧＲ５は、系列追跡（ｌｉｎｅａｇｅ  ｔｒａｃｉｎｇ）研究を通して、腸内の正常な幹細胞および腫瘍始原細胞の非常に特異的なマーカーとして同定された。これまでに、Ｗｎｔ発現の無効化（ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ）後にその発現が抑制される、約１５０個の遺伝子が同定された。これらの「Ｗｎｔ標的遺伝子」の包括的な特徴付けにより、ＬＧＲ５が、陰窩基底部で増殖する１０〜１４個の楔形細胞の集団で選択的に発現されることが見出された。これらの陰窩基底部円柱細胞は、以前から幹細胞集団の候補であると提案されていた。遺伝性ｌａｃＺ−ＬＧＲ５レポーター遺伝子を用いたインビボ系列追跡を用いて、ＬＧＲ５腸管幹細胞が、陰窩基底部から絨毛の先端まで伸びた、ｌａｃＺ＋子孫細胞の連続した帯を生じさせる、成体腸管幹細胞の多能性自己再生集団であることが確認されている。
【００３０】
ＣＳＣ上のＬＧＲ５の特異的発現は、ＣＳＣを選択的かつ効果的に標的とする機会を提供する。ＬＧＲ５は、正常な組織と比較して、ＣＲＣ、膵臓および他のほとんどの固形腫瘍において高度に過剰発現されており、それによってＣＲＣ、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、肺癌、胃癌および肝臓癌において、ＣＳＣを標的とする幅広い治療域を提供する。
【００３１】
ＬＧＲ５自体は、分泌されたＲ−スポンジンリガンドに結合してＬＧＲ５陽性細胞上のＷｎｔシグナルを選択的に増幅および増強する、Ｗｎｔ−Ｆｚｄ−ＬＲＰ受容体複合体の任意の（ｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅ）成分である。ＬＧＲ５がＷｎｔに依存しない方法でシグナル伝達できるという証拠もある。さらに、関連する膜貫通型ＲＩＮＧ型Ｅ３ユビキチンリガーゼＺＮＲＦ３（ｚｉｎｃ  ａｎｄ  ＲＩＮＧ  ｆｉｎｇｅｒ  ３）またはＲＮＦ４３（ＲＩＮＧ  ｆｉｎｇｅｒ  ４３）は、ＬＧＲ５＋幹細胞において特異的に発現され、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体を選択的にユビキチン化することによってＷｎｔシグナルを減少させ、それにより、分解するためにこれらのＷｎｔ受容体を標的とする。Ｒ−スポンジンリガンドはＬＧＲ５と相互作用して、膜貫通型ＺＮＲＦ３またはＲＮＦ４３と三元複合体を形成する。これらの三元複合体の形成は、Ｗｎｔ−Ｆｚｄ−ＬＲＰ複合体からＺＮＲＦ３またはＲＮＦ４３を隔離し、標準的および非標準的Ｗｎｔシグナル伝達を安定化させる。最後に、Ｎｏｒｒｉｎは、未知の関連生物学を有するＬＧＲファミリーのさらなるリガンドとして同定されている。
【００３２】
ＣＲＣにおけるゲートキーピング変異（ｇａｔｅ  ｋｅｅｐｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）遺伝子の欠損であり、Ｗｎｔシグナル伝達の異常な活性化をもたらす（正常に作用すれば、結腸陰窩における幹細胞の自己再生と分化とのバランスを調節する）。腸管幹細胞におけるＷｎｔシグナル伝達の調節不全は、結腸において悪性ＣＲＣの前駆体である腺腫性ポリープの形成をもたらす。誘導性ＡＰＣ遺伝子ノックアウトマウスと、ＬＧＲ５幹細胞が４つの蛍光遺伝子マーカー（ＧＦＰ／ＹＦＰ／ＥＣＦＰ／ＲＦＰ）のうちの１つにより特異的かつ無作為に標識されたマウスとの交配戦略を用いて、ＬＧＲ５幹細胞がこれらのマウス腸腫瘍の起源または根源であることを確認した。ＡＰＣ欠失誘導の４週間後に単色の腫瘍（すなわち、全てＧＦＰまたは全てＲＦＰ）が出現したことから、これらの腫瘍が単一のＬＧＲ５幹細胞に由来することが確認された。さらに、このモデルでは、ＬＧＲ５幹細胞の蛍光遺伝子タグを別の色に切り替えることもできたため、赤色の腫瘍を生成するＲＦＰ＋ＬＧＲ５癌幹細胞を途中でＥＣＦＰ＋ＬＧＲ５癌幹細胞に変換することができ、依然として腫瘍の種を蒔いていたが、全て赤色であったＧＦＰ＋の腫瘍塊に浸潤する青色の腫瘍細胞を生じさせた。この切り替え実験は、ＬＧＲ５  ＣＳＣが腸腫瘍の起源であり、腸腫瘍の増殖を開始し、かつ増殖の種を蒔くことができるというさらなる確証を提供しただけでなく、それらが腫瘍形成を継続的に維持する（すなわち長期の再増殖能力を有する）という確証を提供した。
【００３３】
癌におけるＬＧＲ５の機能的役割は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ノックダウン研究を通じて検証されている。ＣＲＣ腫瘍細胞株のパネルにおけるＬＧＲ５のノックダウンは、インビトロで軟寒天コロニーの増殖を有意に阻害し、また、インビボでＨＣＴ１  １６結腸腫瘍異種移植片の増殖も有意に阻害した。ＬＧＲ５  ＲＮＡｉノックダウンでは、続いて、インビトロで患者由来のＣＲＣ腫瘍細胞に由来するＣＳＣコロニーの増殖も減少させることが示された。最後に、選別されたＬＧＲ５＋患者由来の異種移植ＣＲＣ腫瘍細胞は、対照ＬＧＲ５−細胞と比較して、インビボで腫瘍形成性が高いことがわかった。
【００３４】
ＣＳＣは、外科手術および標準治療の化学療法で治療された多くの癌患者における、腫瘍再発の発生率が高いことの原因であると考えられている。例えば、乳癌患者由来のＣＤ４４＋ＣＳＣは化学療法後に増加することが見出されており、高レベルのＣＳＣは化学療法に対する臨床反応の乏しさと相関していた。同様に、転移性ＣＲＣでは、化学療法後の損傷した肝臓においてＬＧＲ５の発現が上方制御されており、化学療法に反応してＬＧＲ５  ＣＳＣが増加すると、転移性疾病が発症および／または悪化することが示唆された。実際、ＬＧＲ５の発現は、原発ＣＲＣ腫瘍と比較して転移部位において有意に大きいことが見出されている。
【００３５】
抗ＬＧＲ５抗体
本明細書で用いられる場合、用語「抗体」には、合成抗体、モノクローナル抗体、組換えで生産された抗体、細胞内抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、合成抗体、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）（二重特異性ｓｄＦｖを含む）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかの抗体のエピトープ結合フラグメントが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で提供されるいくつかの実施形態の抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはより多重の特異性であってよい。多重特異性抗体は、あるポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、またはあるポリペプチドおよびある異種エピトープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持体材料）の両方に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開公報WO O93/17715; WO 92/08802; W091/00360; WO 92/05793; Tutt, et al., J. Immunol. 147:60−69 (1991); 米国特許番号第4,474,893号;第4,714,681号;第4,925,648号;第5,573,920号; 第5,601,819号; Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547−1553 (1992)を参照されたい。これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で用いられる場合、ＬＧＲ５には、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００３６６７．２の範囲内のヌクレオチドコード配列またはそのフラグメントによってコードされる、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３６５８．１のポリペプチドまたはそのフラグメントを含むヒトＬＧＲ５が含まれるが、これらに限定されない。ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３６５８．１のアミノ酸配列および全事項、ならびにＮＭ＿００３６６７．２のヌクレオチド配列および全事項は、その全体が参照により完全に組み込まれる。本明細書で企図されるＬＧＲ５フラグメントの例には、ＬＧＲ５外部ドメイン、膜貫通ドメイン、または細胞内ドメイン、およびこれらの一部が含まれる。
【００３６】
WO2015/15396は、抗ＬＧＲ５抗体の軽鎖および／または重鎖を産生するハイブリドーマを開示しており、１８Ｇ７Ｈ６Ａ３および１８Ｇ７Ｈ６Ａ１と命名された抗ＬＧＲ５抗体を含む。ヒトの治療のためには、抗ＬＧＲ５抗体は、ヒト化抗体またはヒトモノクローナル抗体であることが好ましい。これらの抗体の特定のバージョンは、WO2015/153916に記載されている１８Ｇ７Ｈ６Ａ１または１８Ｇ７Ｈ６Ａ３である。
【００３７】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＧＹＳＦＴＡＹＷ（配列番号１）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ１を含む。
【００３８】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＩＬＰＧＳＤＳＴ（配列番号２）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ２を含む。
【００３９】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＡＲＳＧＹＹＧＳＳＱＹ（配列番号３）またはその保存的変異体を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００４０】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦ（配列番号４）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ１を含む。
【００４１】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＬＴＳ（配列番号５）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ２を含む。
【００４２】
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸ＱＱＮＡＥＤＰＲＴ（配列番号６）またはその保存的変異体を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【００４３】
特定の実施形態では、抗体は、配列番号７または８を含む重鎖可変ドメインを含む。
【００４４】
特定の実施形態では、抗体は、配列番号９または１０を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００４５】
様々な実施形態では、抗体の糖鎖付加は、改変することができる。例えば、糖鎖欠損抗体を作成することができる（すなわち、抗体が糖鎖付加を欠いている）。糖鎖付加は、例えば、抗体の標的抗原への親和性を増加させるために、変えることができる。これらの糖鎖の改変は、例えば、抗体配列内の１つ以上の糖鎖付加部位を変えることによって達成することができる。例えば、１つ以上のアミノ酸置換を行って、１つ以上の可変領域フレームワークの糖鎖付加部位を除去し、それによってその部位における糖鎖付加を除去することができる。この糖鎖欠損は、抗体の抗原に対する親和性を増加させ得る。本手法は、米国特許番号第5,714,350号および第6,350,861号に、さらに詳細に記載されており、これらはそれぞれが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４６】
複数の実施形態では、抗体は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３６５８．１（配列番号４７）のヒトＬＧＲ５ポリペプチドまたはそのフラグメントに、少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％、または少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するＬＧＲ５ポリペプチドを含むか、またはこれから成るポリペプチドに、特異的に結合する。これらのフラグメントは、例えば、ＬＧＲ５ポリペプチドの、少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、または９００の連続もしくは非連続アミノ酸、または前述の長さのいずれかの間の任意の数の連続もしくは非連続アミノ酸であることができる。
【００４７】
上述のように、本発明の併用療法は、チェックポイント阻害剤の使用を包含する。本明細書で用いられる「チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイントタンパク質の活性を阻害する任意の化合物または薬剤を指す。チェックポイント阻害剤には、免疫チェックポイント分子結合タンパク質、免疫チェックポイント分子に結合する抗体（またはそのフラグメントまたは変異体）、免疫チェックポイント分子の発現を下方制御する核酸、または免疫チェックポイント分子に結合して、免疫チェックポイントタンパク質の機能および／または活性を阻害する他の任意の分子（すなわち、小有機分子、ペプチド模倣体、アプタマーなど）が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００４８】
一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム細胞死１リガンド１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ  １）（ＰＤ−Ｌ１）（Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ２７４としても知られる）、プログラム細胞死１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １）（ＰＤ−１）、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、２Ｂ４、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１６０、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子、ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）、ＫＩＲ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体、ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｃｏｌｌａｇｅｎｅｏｕｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）、ＰＳ（ホスファチジルセリン）、ＯＸ−４０、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＩＳＴＡ、および／またはＶＴＣＮ１の阻害剤から選択される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１の阻害剤である。一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体である。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。例えば、米国特許番号 第7,029,674号; 第6,808,710号; または米国特許出願番号第20050250106号および第20050159351号に開示される、ＰＤ−１生物活性の阻害剤（すなわち、ＰＤ−１のリガンド）を、本明細書で提供される方法において、用いることができる。ＰＤ−１に対する例示的な抗体には、以下が含まれる：ＢｉｏＸｃｅｌｌ由来の抗マウスＰＤ−１抗体クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３−２）；ＢｉｏＸｃｅｌｌ由来の抗マウスＰＤ−１抗体クローンＲＭＰ１−１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）；マウス抗ＰＤ−１抗体クローンＥＨ１２；ＭｅｒｃｋのＭＫ−３４７５抗マウスＰＤ−１抗体（キイトルーダ、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ）；およびＡＮＢ０１１として知られるＡｎａｐｔｙｓＢｉｏの抗ＰＤ−１抗体；抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂのヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体ニボルマブ（オプジーボ（登録商標）、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６）；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＡＭＰ−５１４およびＡＭＰ−２２４；およびＣｕｒｅＴｅｃｈ  Ｌｔｄのピディリズマブ（ＣＴ−０１１）。
【００５０】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。例示的な免疫チェックポイント阻害剤には、抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＲＮＡｉ分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１  ＲＮＡｉ）、アンチセンス分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１アンチセンスＲＮＡ）、ドミナントネガティブタンパク質（例えば、ドミナントネガティブＰＤ−Ｌ１タンパク質）、および低分子阻害剤が含まれる。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体には、クローンＥＨ１２が含まれる。ＰＤ−Ｌ１に対する例示的な抗体には、以下が含まれる：ＧｅｎｅｎｔｅｃｈのＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６）；ＢｉｏＸｃｅｌｌ由来の抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体クローン  １０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒ’ｓ  Ｓｑｕｉｂｂ由来の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９）およびＢＭＳ−９３５５５９；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ；マウス抗ＰＤ−Ｌ１クローン２９Ｅ．２Ａ３；およびＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＭＥＤＩ４７３６。
【００５１】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤である。他の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を低減させる。例示的な免疫チェックポイント阻害剤には、抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ２抗体）、ＲＮＡｉ分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ２  ＲＮＡｉ）、アンチセンス分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ２アンチセンスＲＮＡ）、ドミナントネガティブタンパク質（例えば、ドミナントネガティブＰＤ−Ｌ２タンパク質）、および低分子阻害剤が含まれる。抗体には、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体、およびＩｇ融合タンパク質が含まれる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４の阻害剤である。一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブである。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、抗原提示細胞上に発現されたＣＤ８０（Ｂ７−１）および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）への、ＣＴＬＡ−４の結合を遮断する。ＣＴＬＡ−４に対する例示的な抗体には、以下が含まれる：Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗ＣＴＬＡ−４抗体イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）、ＭＤＸ−０１０、ＢＭＳ−７３４０１６およびＭＤＸ−１０としても知られる）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ由来の抗ＣＴＬＡ４抗体、クローン９Ｈ１０；Ｐｆｉｚｅｒのトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、チシリムマブ）；およびＡｂｃａｍ由来の抗ＣＴＬＡ４抗体クローンＢＮＩ３。
【００５３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、WO 98/42752; 米国特許番号第6,682,736号および第6,207,156号; Hurwitz et al. (1998); Camacho et al. (2004) (antibody CP−675206); Mokyr et al. (1998)（これらは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、WO1996040915に開示されるＣＴＬＡ−４リガンドである。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、ＣＴＬＡ−４発現の核酸阻害剤である。
【００５５】
本明細書に開示されている組成物、剤形、および方法で使用するための任意の好適な免疫チェックポイント阻害剤が企図される。免疫チェックポイント阻害剤の選択は複数の要因に依存し、免疫チェックポイント阻害剤の選択は当業者の技術の範囲内である。例えば、考慮されるべき要因には、免疫チェックポイント阻害剤のさらなる薬物相互作用、および免疫チェックポイント阻害剤が服用され得る期間が含まれる。いくつかの例では、免疫チェックポイント阻害剤は、長期間、例えば慢性的に服用され得る免疫チェックポイント阻害剤である。
【００５６】
免疫チェックポイント阻害剤が抗体である実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、合成抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（二重特異性ｓｃＦｖを含む）、１本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、および上記のいずれかの抗体のエピトープ結合フラグメントであり得る。特に、本発明で用いられる抗体には、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、免疫特異的に免疫チェックポイント分子に結合する免疫チェックポイント分子に対する結合部位を含有する分子が含まれる。本発明で用いられる免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子であることができる。好ましくは、本発明で用いられる抗体はＩｇＧであり、より好ましくはＩｇＧ１である。
【００５７】
一実施形態では、さらに、免疫チェックポイント阻害剤には、例えばＭＥＤＩ―４７３６（WO 2011066389 A1に開示）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（US 8217149 B2に開示）、およびＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（１６．５９８３．８２）を介して入手可能）などのＰＤ−Ｌ１を遮断するヒト化抗体または完全なヒト抗体、並びに、現在研究中の他のＰＤ−Ｌ１阻害剤が含まれ得るが、これらに限定されない。本発明によれば、免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤から選択され、例えば、上述の公知のＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤（イピリムマブ、トレメリムマブ、ランブロリズマブ（ｌａｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−２４４、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、ＭＩＨ１）から選択される。
【００５８】
本発明の併用療法は、一般に、患者に投与される典型的な癌の標準治療の補助として、投与されるであろう。用いられる標準的な化学療法剤の例には、シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、カペシタビン、ロイコボリン、フォリン酸、オキサリプラチン、ゲムシタビン、タンパク質結合パクリタキセルおよびイリノテカンが含まれる。いくつかの例では、標準治療には、大腸癌の処置で用いられる５−フルオロウラシル＋ロイコボリン＋イリノテカンなどの、薬剤の組み合わせの使用が包含されるであろう。
【００５９】
本発明の併用療法はさらに、血管破壊剤（ＶＤＡ）の投与を含んでよい。血管破壊剤に関する情報は、WO 06/084338、WO 07/087684およびWO 08/070908において提供されており、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６０】
血管破壊剤は式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、もしくはその塩であることが好ましい。
【化１】
2019529418.tif 000002
（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｓｅ、ＳｅＯ、ＳｅＯ２、またはＮＲを表し、ここで、Ｒは、Ｈ、Ｏ、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、および場合により置換されたスルホニルから選択され、
Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、各々独立して、Ｈ、カルボキシ、シアノ、ジハロメトキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、ペンタハロエチル、ホスホリルアミノ、ホスホノ、ホスフィニル、スルホ、トリハロエテニル、トリハロメタンチオ、トリハロメトキシ、トリハロメチル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアシルイミノ、場合により置換されたアシルイミノキシ、場合により置換されたアシルオキシ、場合により置換されたアリールアルキル、場合により置換されたアリールアルコキシ、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルケニルオキシ、場合により置換されたアルコキシ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキニルオキシ、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたアミノアシル、場合により置換されたアミノアシルオキシ、場合により置換されたアミノスルホニル、場合により置換されたアミノチオアシル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたアリールオキシ、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたオキシアシルアミノ、場合により置換されたオキシアシルオキシ、場合により置換されたオキシアシルイミノ、場合により置換されたオキシスルフィニルアミノ、場合により置換されたオキシスルホニルアミノ、場合により置換されたオキシチオアシル、場合により置換されたオキシチオアシルオキシ、場合により置換されたスルフィニル、場合により置換されたスルフィニルアミノ、場合により置換されたスルホニル、場合により置換されたスルホニルアミノ、場合により置換されたチオ、場合により置換されたチオアシル、場合により置換されたチオアシルアミノを表すか、またはＲ１ＡおよびＲ１Ｂは、一緒になって、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたシクロアルキル、もしくは場合により置換されたシクロアルケニルを形成し、
Ｒ１Ｃは、Ｃ１‐３アルコキシ、Ｃ１‐３アルキルチオ、Ｃ１‐３アルキルアミノ、またはＣ１‐３ジアルキルアミノを表し、
Ｒ１Ｄは、ヒドロキシまたはアミノを表し、
Ｌは、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｓｅ、ＳｅＯ、ＳｅＯ２、Ｃ＝ＮＺ’、もしくはＮＲ’を表し、ここで、Ｚ’は、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、もしくは場合により置換されたアミノであり、かつ、Ｒ’は、Ｈ、Ｏ、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、もしくは場合により置換されたスルホニルから選択され、
Ｒ２Ａ‐Ｒ２Ｅは、各々独立して、Ｈ、カルボキシ、シアノ、ジハロメトキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、ペンタハロエチル、ホスホリルアミノ、ホスホノ、ホスフィニル、スルホ、トリハロエテニル、トリハロメタンチオ、トリハロメトキシ、トリハロメチル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアシルイミノ、場合により置換されたアシルイミノキシ、場合により置換されたアシルオキシ、場合により置換されたアリールアルキル、場合により置換されたアリールアルコキシ、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルケニルオキシ、場合により置換されたアルコキシ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキニルオキシ、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたアミノアシル、場合により置換されたアミノアシルオキシ、場合により置換されたアミノスルホニル、場合により置換されたアミノチオアシル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたアリールオキシ、場合により置換されたシクロアルケニル、場合により置換されたシクロアルキル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたオキシアシルアミノ、場合により置換されたオキシアシルイミノ、場合により置換されたオキシアシルオキシ、場合により置換されたオキシスルフィニルアミノ、場合により置換されたオキシスルホニルアミノ、場合により置換されたオキシチオアシル、場合により置換されたオキシチオアシルオキシ、場合により置換されたスルフィニル、場合により置換されたスルフィニルアミノ、場合により置換されたスルホニル、場合により置換されたスルホニルアミノ、場合により置換されたチオ、場合により置換されたチオアシル、場合により置換されたチオアシルアミノ、または場合により置換されたチオアシルオキシを表すか、または、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂ、Ｒ２ＢおよびＲ２Ｃ、Ｒ２ＣおよびＲ２Ｄ、ならびにＲ２ＤおよびＲ２Ｅのいずれかが、一緒になって、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたシクロアルキル、もしくは場合により置換されたシクロアルケニルを形成し、ならびに、
Ｑは、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、トリアルキルシリル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアシル、場合により置換されたオキシアシル、場合により置換されたアシルアミノ、場合により置換されたアミノアシルアミノ、ＯＲ’’、ＳＲ’’、もしくはＮＲ’’Ｒ’’（ここで、Ｒ’’は、各々独立して、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアリール、場合により置換されたヘテロアリール、場合により置換されたヘテロシクリル、場合により置換されたアシル、および場合により置換されたオキシアシルを表す）を表すか、または、ＮＲ’’’ＮＲ’’’（ここで、Ｒ’’’は、各々独立して、Ｈ、場合により置換されたアルキル、場合により置換されたアルケニル、場合により置換されたアルキニル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたヘテロアリールを表す）を表す）。
【００６１】
好ましくは、血管破壊剤が、２−メチル−７−ヒドロキシ−３−（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−６−メトキシベンゾフラン（ＢＮＣ１０５）、または６−メトキシ−２−メチル−３−（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−１−ベンゾフラン‐７‐イルリン酸二ナトリウム（ＢＮＣ１０５Ｐ）である。
【００６２】
処置される腫瘍は、広範囲の腫瘍のいずれであってもよいが、特定の実施形態では、併用療法は、膀胱癌腫瘍、乳癌腫瘍、結腸癌腫瘍、消化器癌腫瘍、腎癌腫瘍、肺癌腫瘍、卵巣癌腫瘍、膵癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、近位または遠位胆管癌腫瘍、黒色腫、大腸癌腫瘍、転移性大腸癌腫瘍、転移性膵癌腫瘍、三種陰性乳癌腫瘍および小細胞肺癌腫瘍からなる群から選択される腫瘍を対象とする。
【実施例】
【００６３】
実施例１．抗ＰＤ１と組み合わせた１８Ｇ７（ＢＮＣ１０１マウス同等物）
本発明者らは、同系のＭＣ３８マウス結腸腫瘍モデルにおいて、免疫療法用抗ＰＤ１抗体と組み合わせた１８Ｇ７（WO2015/153916に詳細に記載されている）の有効性を決定するために、研究を行った。１８Ｇ７抗体を、１日目、８日目および１５日目に、１５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、抗ＰＤ−１抗体（クローンＲＭＰ１−１４）を、１日目、４日目、８日目、１２日目および１６日目に、５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＣ３８細胞を皮下接種した。腫瘍が約１００〜１５０ｍｍ３の体積に達した時に、１グループあたり１０匹のマウスのグループに無作為に分けた。
2019529418.tif 000003
【００６４】
本研究の目的は、Ｃ５７ＢＬ／６免疫適格性マウスにおいて、皮下ＭＣ３８マウス結腸腺癌モデルの処置において、単剤としての、または抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた場合の、１８Ｇ７抗体のインビボの治療有効性を、前臨床的に評価することであった。この同系のモデルは抗ＰＤ−１単剤療法に反応して、伝統的な腫瘍増殖抑制研究における補完療法に対して相加／相乗効果が見られることが知られている。しかしながら、癌幹細胞（ＣＳＣ）標的化薬から期待されることは、必ずしも短期間の研究で直接的なＴＧＩ（腫瘍増殖抑制）効果が見られることではなく、処置により標準治療または外科手術後の長期的な利益のために腫瘍および免疫システムがプライミングされ、奏効期間が延長されることであろう。本研究は、これが事実であることを示している。
【００６５】
図１において、腫瘍増殖抑制グラフにより、ＭＣ３８モデルから予測されるように、抗ＰＤ−１が増殖抑制に関してエフェクターであったことが示されている。１８日間にわたる腫瘍増殖抑制のみを見た本実験形式において、１８Ｇ７抗体によるＬＧＲ５阻害からさらなる恩恵は得られなかった。ＭＣ３８細胞はＬＧＲ５を発現することが知られているが、１８Ｇ７抗体のＭＣ３８細胞への結合は直接的な抗増殖効果をもたらさなかった。
【００６６】
ＣＳＣは腫瘍微小環境に対して免疫抑制能力を有し、腫瘍に対する免疫攻撃を弱めることが知られている。理想的には、ＢＮＣ１０１処置によるＬＧＲ５＋ｖｅＣＳＣの減少は、それらの免疫抑制能力を制限し、抗ＰＤ−１の治療活性をより高めることができるであろう。この効果は、この動物モデルの倫理的制限が許容するよりも、現れるのに長い時間がかかる可能性があるか、あるいは、再移植アッセイにおいて証明しなければならない効果である。
【００６７】
これらの制限を考慮すると、腫瘍のフローサイトメトリー解析は、（抗ＰＤ−１が、細胞傷害性Ｔ細胞が腫瘍標的に対して有効であり続けるという想定される作用機構により、この時点で活性を有していたにもかかわらず）１８日という早い時期には効果を発揮する機会を有し得なかった変化を指し示す、集団の変化を有するエフェクター免疫細胞のスナップショットを可能にする。フローサイトメトリーを、終了時（２０日目）に、サンプルに対して実施した。腫瘍を、以下の集団について解析した：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８；ＣＤ４、ＣＤ２５、Ｆｏｘｐ３およびＣＤ１１ｂ、Ｌｙ６Ｇ、Ｌｙ６Ｃ。
【００６８】
全Ｔ細胞（ＣＤ３＋ｖｅ）の腫瘍への動員は、処置間で比較的安定であるが、抗ＰＤ−１処置動物由来の腫瘍ではＴ細胞含量のわずかな有意でない増加が見られ、ＣＤ８細胞（ＣＤ３のサブセット）を維持／増殖させる処置と一致する（図２）。
【００６９】
腫瘍に存在する細胞傷害性Ｔ細胞の有意な増加は抗ＰＤ−１処置動物において明らかであり、そして最も興味深いことに１８Ｇ７の添加によりさらに増加した。抗ＰＤ−１と抗ＰＤ−１＋１８Ｇ７との間の比較は有意ではないが、アイソタイプと比較した有意性のさらなる増加は、免疫抑制性ＣＳＣの減少が細胞傷害性Ｔ細胞のより多くの蓄積を可能にし、さらに「免疫システムのブレーキを解除する」という前提と一致する効果を例示している（図３）。ＣＳＣだけではなく、ＬＧＲ５を発現する腫瘍塊を抗ＬＧＲ５が標的とすることによって引き起こされる他の腫瘍微小環境の要因が、この効果をさらに高める可能性がある。
【００７０】
腫瘍性Ｔｒｅｇ細胞の解析はおそらく、最も有望な結果である。制御性Ｔ細胞（ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦｏｘＰ３＋）または免疫抑制細胞は一般に、免疫システムの局所的活性化を抑制または下方制御し、病的な自己反応性を予防する。癌に関しては、これは細胞傷害性ＣＤ８細胞の誘導および増殖を抑制している、腫瘍による免疫減衰化（ｉｍｍｕｎｅ  ｄａｍｐｅｎｉｎｇ）および免疫回避に変換される。
【００７１】
ＣＳＣとＴｒｅｇ細胞を介した免疫抑制との間の複雑なシグナル伝達経路の関係性は文献に見られ、また、本明細書で潜在的に指摘されている。アイソタイプ対照と比較して、１８Ｇ７処置由来のＴｒｅｇ細胞は減少し（９．４％）、抗ＰＤ−１抗体療法を使用した場合にはＴｒｅｇ細胞は有意に減少するが（３３．９％の減少）、抗ＰＤ−１抗体療法を１８Ｇ７と組み合わせて使用した場合にはＴｒｅｇ細胞はさらにより有意に減少する（５７．３％の減少）（図４）。本結果は、免疫療法の組み合わせの分野における、抗ＬＧＲ５抗体療法の位置づけを理解する上で重要となり得る。
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【００７２】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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