(57)【要約】  本発明は、一側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む皮膚美白用組成物に関するものであり、本発明の一側面により、新しい美白用物質を消費者に提供することができ、且つ皮膚美白関連産業の発展を図ることができる。【選択図】図３ｂ
2019529352.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む皮膚美白用組成物。
【請求項２】
前記サイトカラシンＤは、カビ由来のものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項３】
前記カビは、チゴスポリウム・マソニ（Ｚｙｇｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍａｎｓｏｎｉｉ）である、請求項２に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項４】
前記サイトカラシンＤは、メラニンの生成又は沈着を抑制するものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項５】
前記サイトカラシンＤは、チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）又はＴＲＰ１（Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）の発現を減少させるものである、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項６】
前記サイトカラシンＤは、しみ、そばかす、黒色点、母斑、黒色腫、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着からなる群より選ばれる一つ以上を予防、改善又は治療する、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項７】
当該組成物中のサイトカラシンＤ、その異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．０００１質量％〜２０質量％の範囲である、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項８】
前記サイトカラシンＤ、その異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である、請求項１に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項９】
当該組成物が薬学組成物である、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の皮膚美白用組成物。
【請求項１０】
当該組成物が化粧料組成物である、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の皮膚美白用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、サイトカラシンＤを含む皮膚美白用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）は、黒い色素とタンパク質との複合体形態を持つフェノール類の生体高分子物質であって、リンゴ、じゃがいも、バナナの切断された表面が空気中に露出したときに発生する褐変又は動物の外皮毛、皮膚、毛髪、眼部などで観察される。メラニンが過剰生成して皮膚に沈着すると、しみやそばかすなどができるため皮膚美白などと直結し、メラニンによって皮膚老化も促進され、皮膚癌を誘発することもある。
【０００３】
紫外線、炎症、ホルモンなどによってメラニン細胞刺激ホルモン（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＭＳＨ）が分泌され、該ＭＳＨは受容体と反応してメラニン形成細胞内においてｃＡＭＰを向上させてメラニンを合成し、合成されたメラニンは、メラニン形成細胞の外部へ分泌され、紫外線などから皮膚を保護する役割をするようになる。メラニンの合成は、主にα−ＭＳＨによって調節され、メラニンの合成に関与するタンパク質としては、ＭＩＴＦ、ＴＹＲ、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２などが知られている。
【０００４】
一方、サイトカラシンＤは、サイトカラシンと知られたマイコトキシンの一種と知られており、皮膚美白とサイトカラシンＤとの関連性については未だ知られたところがない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００９／０６９６６８号
【特許文献２】国際公開第２００９／０６９６６８号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】WINDER, A. J. et al., Induction of Tryrosinase in Human Melanoma Cells by L-tyrosine Phosphate and Cytochalasin D, Experimental Cell Research, 1992, vol. 199, no. 2, pages 248-254
【非特許文献２】HUANG, F.-Y. et al., Cytochalasin D, a Tropical Fungal Metabolite, Inhibits CT26 Tumor Growth and Angiogenesis., Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 2012, vol. 5, no. 3, pages 169-174
【非特許文献３】HUANG, F.-Y. et al., The Antitumour Activities Idduced by Pegylated Liposomal Cytochalasin D in Murine Models., European Journal of Cancer, 2012, vol. 48, no. 14, pages 2260-2269
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む皮膚美白用組成物を提供して、皮膚美白関連分野の発展を図ることをその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、一側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む皮膚美白用組成物に関するものである。
【０００９】
本発明は、他の側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を個体に投与することを含む皮膚美白方法を提供する。
【００１０】
本発明は、他の側面において、皮膚美白用途に用いるための有効成分としてサイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を提供する。また、皮膚美白のための有効成分としてサイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の非治療的化粧用途を提供する。
【００１１】
本発明は、また他の側面において、皮膚美白用組成物の製造に用いるためのサイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の用途を提供する。
【００１２】
本発明の他の側面において、メラニンの生成又は沈着を抑制する組成物に関するものでもある。
【００１３】
また、本発明の他の側面において、前記組成物は薬学組成物又は化粧料組成物であってよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、一側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む新しい皮膚美白用組成物を発掘及び提供することで、皮膚美白に関する新しい分野の開拓及び市場の拡張に寄与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１ａ】α−ＭＳＨ及びサイトカラシンＤの処理がメラニンの生成量に及ぼす影響を確認した図である。
【図１ｂ】α−ＭＳＨ及びサイトカラシンＤの処理がチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）、及びＴＲＰ１（Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）タンパク質の発現に及ぼす影響をウエスタンブロットで示した図である。
【図２ａ】Ｂ１６Ｆ１黒色腫細胞株においてα−ＭＳＨ及びサイトカラシンＤの処理がメラニンの生成量に及ぼす影響を確認した図である。
【図２ｂ】Ｂ１６Ｆ１黒色腫細胞株においてα−ＭＳＨ及びサイトカラシンＤの処理がチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）、及びＴＲＰ１タンパク質の発現に及ぼす影響を確認した図である。
【図３ａ】ＮＥＨＭｓにおいてサイトカラシンＤの処理によってメラニンの合成が減少することを示した図である。
【図３ｂ】皮膚モデルにサイトカラシンＤを処理した後に明るさの変化を確認した図である。
【図３ｃ】皮膚モデルにサイトカラシンＤを処理した後に色度計で明るさの変化を評価した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本明細書について詳しく説明する。
【００１７】
本明細書において「皮膚」とは、動物の体表を覆う組織を意味し、顔又はボディーなどの体表を覆う組織だけではなく、頭皮や毛髪を含む最広義の概念である。
【００１８】
本明細書において「サイトカラシンＤ」は、Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ又はＣｙｔｏ  Ｄと表されることがある。
【００１９】
本明細書において「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋なエナンチオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋な立体異性体又はそれらの混合物、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）だけでなく、立体異性体、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（すなわち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００２０】
本明細書において「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、エナンチオマー、立体異性体、又はジアステレオマーと関連して用いた場合、エナンチオマー、立体異性体、又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、好ましくは約９５％以上、より好ましくは約９７％以上、又は約９８％以上、さらに好ましくは約９９％以上、最も好ましくは約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００２１】
本明細書において「許容可能」とは、通常的又は医薬学的服用量（ｄｏｓａｇｅ）で利用する際に相当な毒性を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに使用することができるという政府またはこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は食品基準（Ｆｏｏｄ  ｃｏｄｅ）、健康機能食品基準、又は一般的な薬局方に列挙され、又はその他一般的な文献に記載されたものと認定されることを意味する。
【００２２】
本明細書において「許容可能な塩」とは、通常的に又は医薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸から形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１-カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換されるときに形成される塩を含んでよい。
【００２３】
本明細書において「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは、水が結合している化合物を意味し、水と混合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００２４】
本明細書において「溶媒和物」とは、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００２５】
本発明は、一側面において、サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ）、その光学又は立体異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む皮膚美白用組成物を提供する。
【００２６】
一具現例として、前記サイトカラシンＤは、アクチン重合抑制剤（ａｃｔｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）であってよく、Ｃ３０Ｈ３７ＮＯ６のアルカロイドであってもよく、下記の化学式で示されるものであってよい。
【００２７】
【化１】
2019529352.tif 000003
【００２８】
他の具現例として、前記サイトカラシンＤは、カビ由来のものであってよい。又は、前記サイトカラシンＤは、合成により得たものであってもよい。
【００２９】
他の具現例として、前記カビは、チゴスポリウム・マソニ（Ｚｙｇｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍａｎｓｏｎｉｉ）であってよい。
【００３０】
他の具現例として、前記サイトカラシンＤは、メラニンの生成又は沈着を抑制するものであってよい。
【００３１】
本発明の他の側面によると、前記サイトカラシンＤは、チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）又はＴＲＰ１（Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）の発現を減少させるものであってよい。前記サイトカラシンＤの処理後にチロシナーゼ又はＴＲＰ１の発現がサイトカラシンＤの処理前よりも少なくなるため、これを通じて前記サイトカラシンＤを皮膚美白用組成物の有効成分として用い得ることが分かる。また、サイトカラシンＤを処理した場合、チロシナーゼ又はＴＲＰ１が発現された細胞数を減少させたりもし、これを通じてサイトカラシンＤを皮膚美白用組成物の有効成分として用い得ることが分かる。
【００３２】
メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）は動物の外皮毛、皮膚、頭部、眼部などから観察され、メラニンが過剰産生されると、皮膚に沈着してしみ、そばかすなどを形成したり、皮膚老化も促進し、皮膚癌も誘発したりすることがある。前記メラニン過多生成による疾患又は症状は、しみ、そばかす、老人性しみ、細かいほこり、表皮メラニン細胞性病変（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎ）、カフェオレ斑（Ｃａｆｅ'ｓ  ａｕ  ｌａｉｔ  ｍａｃｕｌｅｓ）、母斑、ベッカー母斑（Ｂｅｃｋｅｒ'ｓ  Ｎｅｖｕｓ）、扁平母斑（Ｎｅｖｕｓ  Ｓｐｉｌｕｓ）、黒子（Ｌｅｎｔｉｇｉｎｅｓ）、黒色点、真皮メラニン細胞性病変（Ｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、蒙古斑（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ  ｓｐｏｔ）、太田母斑（Ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｏｔａ）、遅発性両側性太田母斑様色素斑（Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｏｔａ−ｌｉｋｅ  ｍａｃｕｌｅｓ）、伊藤母斑（Ｎｅｖｕｓ  ｏｆ  Ｉｔｏ）、青色母斑（Ｂｌｕｅ  ｎｅｖｕｓ）、メラニン形成細胞性母斑（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、境界性母斑（Ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｎｅｖｕｓ）、複合性母斑（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｎｅｖｕｓ）、真皮内母斑（Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ  ｎｅｖｕｓ）、暈状母斑（Ｈａｌｏ  ｎｅｖｕｓ）、先天性メラニン細胞性母斑（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｎｅｖｏｃｙｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、スピッツ母斑（Ｓｐｉｔｚ  ｎｅｖｕｓ）、異形成母斑（Ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｎｅｖｕｓ）、黒色腫（Ｍｅｌａｎｏｍａ）、悪性黒字型黒色腫（Ｌｅｎｔｉｇｏ  ｍａｌｉｇｎａ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、表在拡大型黒色腫（Ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｓｐｒｅａｄｉｎｇ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、末端性黒子性黒色腫（Ａｃｒａｌ  ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｕｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、結節型黒色腫（Ｎｏｄｕｌａｒ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、色素性基底細胞癌（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、色素性皮膚線維腫（ｄｅｒｍａｔｏｆｉｂｒｏｍａｓ）、色素性類皮嚢胞（ｄｅｒｍｏｉｄ  ｃｙｓｔ）、色素性ケロイド（ｋｅｌｏｉｄ）、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着及び色素性角化棘細胞腫（ｋｅｒａｔｏａｃａｎｔｈｏｍａｓ）からなる群より選ばれる１以上であってよい。
【００３３】
本発明の一側面において、前記サイトカラシンＤは、しみ、そばかす、黒色点、母斑、黒色腫、紫外線による色素沈着、薬物による色素沈着、炎症後色素沈着、及び皮膚炎から発生する色素沈着からなる群より選ばれる一つ以上を予防、改善又は治療するものであってよい。
【００３４】
本発明者らは、サイトカラシンＤを用いて細胞及び皮膚モデルにおいてメラニンの形成及び沈着を抑制させる可能性があることを確認し、これを通じて、サイトカラシンＤを皮膚美白用物質として用い得ることを見出した。このようなサイトカラシンＤの効能を用いてメラニンに係る前記疾患や症状に対して予防、改善、及び治療などを図ることもできる。
【００３５】
本発明のまた他の側面によると、前記組成物中のサイトカラシンＤ、その異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、前記組成物の総質量に対し、０．０００１質量％〜２０質量％の範囲であってよい。一具現例において、前記含量は、前記組成物の総質量に対し、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．３質量％以上、０．５質量％以上、０．８質量％以上、１質量％以上、３質量％以上、５質量％以上、８質量％以上、１０質量％以上、１２質量％以上、１５質量％以上、又は１８質量％以上であってよい。また、前記含量は、前記組成物の総質量に対し、２０質量％以下、１８質量％以下、１５質量％以下、１２質量％以下、１０質量％以下、８質量％以下、５質量％以下、３質量％以下、１質量％以下、０．８質量％以下、０．５質量％以下、０．３質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、又は０．０００５質量％以下であってよい。
【００３６】
本発明のまた他の側面によると、前記サイトカラシンＤ、その異性体、その許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってよい。一具現例において、前記投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以上、０．８ｍｇ／ｋｇ／日以上、１ｍｇ／ｋｇ／日以上、２ｍｇ／ｋｇ／日以上、３ｍｇ／ｋｇ／日以上、５ｍｇ／ｋｇ／日以上、８ｍｇ／ｋｇ／日以上、１０ｍｇ／ｋｇ／日以上、１２ｍｇ／ｋｇ／日以上、１５ｍｇ／ｋｇ／日以上、又は１８ｍｇ／ｋｇ／日以上であってよい。また、前記投与量は、２０ｍｇ／ｋｇ／日以下、１８ｍｇ／ｋｇ／日以下、１５ｍｇ／ｋｇ／日以下、１２ｍｇ／ｋｇ／日以下、１０ｍｇ／ｋｇ／日以下、８ｍｇ／ｋｇ／日以下、５ｍｇ／ｋｇ／日以下、３ｍｇ／ｋｇ／日以下、２ｍｇ／ｋｇ／日以下、１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．８ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日以下、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日以下、又は０．０００５ｍｇ／ｋｇ／日以下であってよい。
【００３７】
本発明の一側面によると、前記組成物が薬学組成物である皮膚美白用組成物であってよい。
【００３８】
前記薬学組成物は、保存剤、防腐剤、安定化剤、水和剤又は乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び／又は緩衝剤などの薬剤学的補助剤、並びにその他治療的に有用な物質をさらに含有していてよく、通常的な方法に従い多様な経口投与剤又は非経口投与剤の形態で剤形化していてよい。
【００３９】
前記経口投与剤は、例えば、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤などがあり、これらの剤形は、有効成分の他、界面活性剤、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム又はカルシウム塩、並びにポリエチレングリコール）を含有していてよい。錠剤は、さらに、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリジンといった結合剤を含有していてよく、場合によって、澱粉、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤などの薬剤学的添加剤を含有していてよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化又はコーティング方法によって製造されていてよい。
【００４０】
また、前記非経口投与の形態としては、経皮投与型剤形であってよく、例えば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチなどの剤形であってよいが、これらに制限されるものではない。
【００４１】
前記薬学組成物は非経口、直腸、局所、経皮、皮下などに投与されてよい。
【００４２】
前記有効成分の投与量の決定は、通常の技術者の水準内にあり、薬物の１日投与量は、投与しようとする対象の進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などの多様な要因に応じて異なり得る。
【００４３】
前記薬学組成物は皮膚外用剤であってよく、前記皮膚外用剤は、外皮に塗布されるものであればいずれも含み得る組成物の総称であって、多様な剤形の医薬品又は医薬外品がこれに含まれ得る。
【００４４】
本発明のまた他の側面によると、前記組成物が化粧料組成物である皮膚美白用組成物であってよい。
【００４５】
前記化粧料組成物には、機能性添加物及び一般的な化粧料組成物に含まれる成分がさらに含まれていてよい。前記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスからなる群より選ばれた成分を含んでいてよい。その他含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００４６】
前記化粧料組成物は、その剤形が特に限定されず、目的とするところに応じて適宜選択すればよい。例えば、スキンローション、スキンソフナー、スキントナー、アストリンゼント、ローション、ミルクローション、モイスチャーローション、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、ファウンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、石鹸、クレンジングフォーム、クレンジングローション、クレンジングクリーム、ボディーローション、及びボディークレンザーからなる群より選ばれたいずれか一つ以上の剤形で製造されていてよいが、これらに制限されるものではない。
【００４７】
本発明の一側面に係る剤形がペースト、クリーム、又はゲルの場合は、担体成分として、動物繊維、植物繊維、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などが用いられていてよい。
【００４８】
本発明の一側面に係る剤形がパウダー又はスプレーの場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、又はポリアミドパウダーが用いられていてよく、特にスプレーである場合は、さらに、クロロフルオロハイドロカーボン、プロパン／ブタン、又はジメチルエーテルのような推進剤を含んでいてよい。
【００４９】
本発明の一側面に係る剤形が溶液又は乳濁液である場合は、担体成分として、溶媒、溶媒和剤、又は乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、又はソルビタンの脂肪酸エステルがある。
【００５０】
本発明の一側面に係る剤形が懸濁液である場合は、担体成分として、水、エタノール、又はプロピレングリコールのような液状希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、又はトラガカントなどが用いられていてよい。
【００５１】
本発明の一側面に係る剤形が界面活性剤含有クレンジングである場合は、担体成分として、脂肪族アルコールスルフェート、脂肪族アルコールエーテルスルフェート、スルホサクシネートモノエステル、イセチオン酸、イミダゾリウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルスルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。
【００５２】
本発明の他の側面によると、前記組成物が食品又は健康食品組成物である皮膚美白用組成物であってよい。
【００５３】
前記食品又は健康食品組成物は、液状又は固体状態の剤形であってよく、例えば、各種の食品類、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤、健康機能食品類、健康補助食品類などがあり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、又は飲料の形態で用いられていてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分の他、当該分野において通常的に用いられる成分を剤形又は使用目的に応じて当業者が困難なく適宜選定して配合していてもよく、他の原料と同時に適用した場合に相乗効果が奏されることがある。
【００５４】
本明細書に開示された有効成分の他に含有し得る液体成分には特に制限点がなく、通常の飲料と同様に種々の香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含んでいてよい。前記天然炭水化物の例としては、ブドウ糖、果糖などの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類及びデキストリン、シクロデキストリンなどの通常的な糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールがある。前記香味剤としては、天然香味剤(ソーマチン、ステビア抽出物(例えば、レバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど))及び合成香味剤(サッカリン、アスパルテームなど)を有利に用いていてよい。前記天然炭水化物の割合は、本明細書に開示された組成物１００ｍｌ当たり一般的に約１〜２０ｇ、一側面において、約５〜１２ｇであってよい。
【００５５】
前記食品組成物は、一側面において、多様な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクト酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含んでいてよい。他の側面において、天然果物ジュース及び野菜飲料の製造のための果肉を含んでいてよい。これらの成分は、独立的に又は組み合わせて用いていてよい。前記添加剤の割合は種々であってよいが、本明細書に開示された組成物１００質量部当たり０．００１〜約２０質量部の範囲で選択されるのが一般的である。
【００５６】
以下、実施例、実験例を通じて、本発明の一側面の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、下記の例は本発明に関する理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がそれらによって制限されるものではない。
【００５７】
［実施例１］
細胞及び皮膚モデルの準備
正常ヒト表皮メラニン形成細胞（Ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ、ＮＨＥＭｓ、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を入手し、Ｃ５７ＢＬ／６  Ｊ（ｂｌａｃｋ、ａ／ａ）マウス由来のメラニン形成細胞であるメラン−Ａ（Ｍｅｌａｎ−Ａ）細胞株をＤｏｒｏｔｈｙ  Ｃ. Ｂｅｎｎｅｔｔ博士（Ｓｔ. Ｇｅｏｒｇｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ、Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ）から入手した。Ｂ１６Ｆ１マウス黒色腫（ｍｅｌａｎｏｍａ）細胞株はＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から入手した。
【００５８】
正常ヒト表皮メラニン形成細胞は、Ｍ−２５４培地でヒトメラニン形成細胞増殖サプリメント（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ、ＨＭＧＳ）（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｉｎｃ.、Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ、ＵＫ）下で維持させた。Ｍｅｌａｎ−Ａ細胞はＲＰＭＩ  １６４０培地で１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン、及び０．２μＭ  ホルボール１２−ミリスタート１３−アセタート（ｐｈｏｒｂｏｌ  １２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−ａｃｅｔａｔｅ）下で維持させた。Ｂ１６Ｆ１マウス黒色腫細胞株は１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清及び１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭで培養した。
【００５９】
三次元ヒト皮膚代替材（Ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ(商標)、ＭＥＬ−３１２−Ｂ、ＭａｔＴｅｋ社、Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）は入手した後、ＫＧＦ（Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ｂ−ＦＧＦ（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、及びα−ＭＳＨ（ａｌｐｈａ−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ）に最適化したＥＰＩ−１００−ＮＭＭ−１１３培地で製造者の指示に従って維持した。
【００６０】
前記皮膚モデルの明るさの変化（ΔＬ）指数は、色度計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＣＲ−３００、Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ社、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）で測定されたＬ指数（Ｌ  ｖａｌｕｅ、ｌｉｇｈｔｎｅｓｓ  ｉｎｄｅｘ）から計算し、ΔＬ＝１３日目又は２０日目のＬ（処置皮膚）−Ｌ（対照群皮膚）で計算した。ΔＬ指数の増加は、皮膚において化合物誘導による色素の過少沈着を示す（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ., ２０１３）。
【００６１】
試薬
サイトカラシンＤ、α−ＭＳＨ、アルブチン（ａｒｂｕｔｉｎ）、及びコウジ酸（ｋｏｊｉｃ  ａｃｉｄ）はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ. Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から入手した。
【００６２】
メラニンアッセイ
細胞をトリプシン／ＥＤＴＡで処理後、１０００ｘｇで５分間遠心分離し、ＰＢＳで２回洗浄した。チューブ内の最終細胞ペレットを写真に撮り、細胞ペレットは１Ｎ  ＮａＯＨに溶解させた。均質化させた細胞抽出物を９６−ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに移載し、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを利用して吸光度４０５ｎｍにおける相対的メラニン量を測定した。
【００６３】
ウエスタンブロット分析
すべての溶解物は２×Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファー（２×Ｌａｅｍｍｌｉ  ｓａｍｐｌｅ  ｂｕｆｆｅｒ、６２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、２５％［ｖ／ｖ］ｇｌｙｃｅｒｏｌ、２％［ｗ／ｖ］ＳＤＳ、５％［ｖ／ｖ］β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ、及び０．０１％［ｗ／ｖ］ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ  ｂｌｕｅ）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ社、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて準備した。すべての細胞タンパク質はＢｒａｄｆｏｒｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて測定した。その後、前記試料はＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦメンブレイン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に移転した。ＴＢＳＴ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．０５％［ｖ／ｖ］Ｔｗｅｅｎ(登録商標)２０）中の４％（ｗ／ｖ）スキムミルク（ｓｋｉｍ  ｍｉｌｋ）でブロッキングした後、メンブレインを特定の１次抗体とともにオーバーナイト（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）培養させた。
【００６４】
抗アクチン抗体（ａｎｔｉ−ａｃｔｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＭＡＢ１５０１、１：１０,０００）はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ社（Ｔｅｍｅｃｕｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）から入手し、抗αＰＥＰ７（チロシナーゼ）抗体（ａｎｔｉ−αＰＥＰ７（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）ａｎｔｉｂｏｄｙ、１：１０００）と抗αＰＥＰ１（ＴＲＰ１）抗体（ａｎｔｉ−αＰＥＰ１（ＴＲＰ１）ａｎｔｉｂｏｄｙ、１：１０００）は、Ｖ. Ｊ. Ｈｅａｒｉｎｇ（ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）から入手した。タンパク質の検出のために、前記メンブレインはＨＲＰ−コンジュゲーティッド２次抗体を用いて培養し、シグナルはＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ(登録商標)  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  ＨＲＰ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ社、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）を利用して測定した。
【００６５】
統計分析
各データは少なくとも３回の独立した実験を施して得たものとし、平均±ＳＥ（標準誤差）で表した。結果の統計的評価は一元分散分析（１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いて行った（*：ｐ＜０．０５、**：ｐ＜０．０１）。
【００６６】
［実験例１］サイトカラシンＤによるメラニンの生成調節
サイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄ、Ｃｙｔｏ  Ｄ）は、カビ又は糸状菌であるチゴスポリウム・マソニ（Ｚｙｇｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍａｎｓｏｎｉｉ）で産生するアルカロイド（ａｌｋａｌｏｉｄ）であって、下記の化学式１で示される（Ｃ３０Ｈ３７ＮＯ６）。
【００６７】
【化２】
2019529352.tif 000004
【００６８】
α−ＭＳＨ（１μＭ）で２４時間事前処理したメラン−ａ細胞にサイトカラシンＤ（０．２５及び０．５μＭ）で処理後の細胞のメラニンの含量を測定し、メラニンの生成酵素であるチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）及びＴＲＰ１タンパク質の発現水準をウエスタンブロットで確認した。その結果、α−ＭＳＨを処理した場合、メラニンの合成が増加してチロシナーゼ及びＴＲＰ１の発現水準が増加したが、サイトカラシンＤを処理した場合は、そのようなα−ＭＳＨによるメラニンの合成が顕著に減少し（図１ａ）、チロシナーゼ及びＴＲＰ１の発現も顕著に減少した（図１ｂ）。
【００６９】
このような現象がＢ１６Ｆ１マウス黒色腫（ｍｅｌａｎｏｍａ）細胞株でも現われるかを確認した。具体的に、Ｂ１６Ｆ１細胞に対しα−ＭＳＨ（１μＭ）で前処理し、次いで、サイトカラシンＤ（０．２５μＭ、０．５μＭ）の処理を施してから４８時間後に細胞メラニン量を測定した（図２ａ）。また、チロシナーゼ、及びＴＲＰ１をウエスタンブロットで分析した（図２ｂ）。
【００７０】
その結果、Ｂ１６Ｆ１細胞株でもサイトカラシンＤの処理によってメラニンの含量が減少し、且つチロシナーゼとＴＲＰ１の発現を抑制させることが分かった（図２ａ〜図２ｂ）。
【００７１】
総合すると、サイトカラシンＤは、チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）及びＴＲＰ１タンパク質の水準を減少させ、それによりメラニン形成及び沈着が抑制されることを確認した。すなわち、サイトカラシンＤを用いて美白用、特に皮膚美白用組成物に用いることができることを究明した。
【００７２】
［実験例２］正常ヒト表皮メラニン形成細胞（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ、ＮＨＥＭｓ）及び人工皮膚実験
ＮＨＥＭｓと三次元ヒト皮膚代替材（正常ヒト表皮角質細胞及びＮＨＥＭｓを含む組換え表皮モデル）を用いてメラニンの生成の調節を実験した。
【００７３】
具体的に、ＮＨＥＭｓにサイトカラシンＤ（０．５μＭ及び１μＭ）の処理を施してから４８時間後に細胞メラニンの含量を確認した。
【００７４】
その結果、ＮＨＥＭｓでもサイトカラシンＤの処理によってメラニンの合成減少が誘導されることを確認した（図３ａ）。
【００７５】
また、サイトカラシンＤ（０．５μＭ）、コウジ酸（ｋｏｊｉｃ  ａｃｉｄ、ＫＡ、５ｍＭ）を、３日に一回ずつ三次元ヒト皮膚代替材に３日に一回ずつ１３日間及び２０日間投与して色素沈着に及ぼす影響を評価した。色素沈着は色度計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）で評価し、図３ｃ中、ΔＬは対照群と物質処理群間の明るさの差を計算した値である。
【００７６】
その結果、サイトカラシンＤによって皮膚色素沈着が減少した（図３ｂ及び図３ｃ）。これにより、サイトカラシンＤがメラニン形成を抑制して色素沈着を抑制することを確認した。
【００７７】
以下、本発明の一側面に係る組成物の剤形例について説明するが、他の様々な剤形への応用も可能であり、且つ、これらは本発明を限定するためのものではない、単に具体的に説明するためのものである。
【００７８】
［剤形例１］軟質カプセル剤
サイトカラシンＤ  ２０ｍｇ、Ｌ−カルニチン８０〜１４０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、植物性硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇ及びレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法に従い１カプセルに充填して軟質カプセル剤を製造した。
【００７９】
［剤形例２］錠剤
サイトカラシンＤ  ２０ｍｇ、ガラクトオリゴ糖  ２００ｍｇ、乳糖６０ｍｇ及び麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥機を利用して顆粒した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ  ｅｓｔｅｒ）６ｍｇを添加して、打錠機で打錠して錠剤を製造した。
【００８０】
［剤形例３］顆粒剤
サイトカラシンＤ  ２０ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を使用して顆粒に成形した後、包に充填して顆粒剤を製造した。
【００８１】
［剤形例４］ドリンク剤
サイトカラシンＤ  ２０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて各瓶に２００ｍｌずつ充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【００８２】
［剤形例５］注射剤
サイトカラシンＤ  ５０ｍｇ、適量の注射用滅菌蒸留水、適量のｐＨ調節剤を用いて通常の方法に従い注射剤を製造した。
【００８３】
［剤形例６］柔軟化粧水（スキンローション）
サイトカラシンＤ  ３．０質量％、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩１．００質量％、水溶性コラーゲン（１％水溶液）１．００質量％、クエン酸ナトリウム０．１０質量％、クエン酸０．０５質量％、甘草エキス０．２０質量％、１,３−ブチレングリコール３．００質量％、残量として精製水を用いて柔軟化粧水（スキンローション）を製造した。
【００８４】
［剤形例７］クリーム
サイトカラシンＤ  ３．００質量％、ポリエチレングリコールモノステアレート２．００質量％、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５．００質量％、プロピレングリコール４．００質量％、スクアレン６．００質量％、トリ２−エチルヘキサングリセリル６．００質量％、スフィンゴ糖脂質１．００質量％、１,３−ブチレングリコール７．００質量％、蜜蝋５．００質量％、残量として精製水を用いてクリーム状製剤を製造した。
【００８５】
［剤形例８］パック
サイトカラシンＤ  ３．００質量％、ポリビニルアルコール１３．００質量％、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩１．００質量％、ラウロイルヒドロキシプロリン１．００質量％、水溶性コラーゲン（１％水溶液）２．００質量％、１,３−ブチレングリコール３．００質量％、エタノール５．００質量％、残量として精製水を用いてパックを製造した。
【００８６】
［剤形例９］健康食品
下記の表に記載された組成にて通常の方法に従い健康食品を製造した。
【００８７】
【表１】
2019529352.tif 000005
【００８８】
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法に従い前記成分を混合した後、通常の方法に従い健康食品の組成物の製造に用いてもよい。
【００８９】
［剤形例１０］健康飲料
【００９０】
【表２】
2019529352.tif 000006
【００９１】
前記表２のように総体積９００ｍｌになるように残量の精製水を添加して通常の健康飲料の製造方法に従い前記成分を混合してから約１時間８５℃で撹拌加熱し、これにより調製された溶液をろ過して得られたろ液を滅菌された２リットルの容器に入れて密封滅菌した後に冷蔵保管して健康飲料を製造した。
【００９２】
以上、本発明内容の特定の部分を詳しく記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこのような具体的な記述は単に好適な実施態様であるに過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されるものではないことは明白であろう。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項とそれらの等価物によって定義されるといえよう。
【図１ａ】
2019529352.tif 000007
【図１ｂ】
2019529352.tif 000008
【図２ａ】
2019529352.tif 000009
【図２ｂ】
2019529352.tif 000010
【図３ａ】
2019529352.tif 000011
【図３ｂ】
2019529352.tif 000012
【図３ｃ】
2019529352.tif 000013
【国際調査報告】
2019529352.tif 000014
2019529352.tif 000015
2019529352.tif 000016
2019529352.tif 000017