(57)【要約】  本発明は、植物抽出物を含む局所用組成物に関する。特に、本発明は、親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物、好ましくは５００ｎｍ未満のサイズを有し、および少なくとも１種の局所的に許容される賦形剤を含む局所用組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
５００ｎｍよりも小さいサイズを有する、親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物および、少なくとも１つの局所的に許容される賦形剤を含む、水性組成物（ｗａｔｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を含む、局所用組成物。
【請求項２】
前記ニオソーム（１０）が、４００ｎｍ未満、好ましくは３００ｎｍ未満、そして、より好ましくは２００ｎｍ未満の直径を有する、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項３】
前記ニオソーム（１０）が、１０ｎｍより大きい、好ましくは２０ｎｍより大きい、そして、より好ましくは４０ｎｍより大きい直径を有する、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項４】
前記ニオソーム（１０）が、水性コンパートメント（ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）（３０）を画定する（ｄｅｌｉｍｉｔｓ）、モノラメラ構造（ｍｏｎｏ  ｌａｍｅｌｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）（２５）を含む、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項５】
前記モノラメラ構造（ｍｏｎｏ  ｌａｍｅｌｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）（２５）が、両親媒性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）分子（２０）の二重層によって形成されている、請求項４に記載の局所用組成物。
【請求項６】
前記両親媒性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）分子（２０）が、飽和もしくはモノ不飽和の直鎖脂肪酸、またはこれらの混合物でエステル化された、直鎖状または分枝状ポリグリセリンからなる群から選択される、非イオン性界面活性剤である、請求項５に記載の局所用組成物、
【請求項７】
前記ニオソーム（１０）が、グリセリンおよび水溶性（ｈｙｄｒｏｓｏｌｕｂｌｅ）天然抗酸化剤からなる群から選択される安定化剤および防腐剤を含む、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項８】
前記植物抽出物が、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）、レッドクローバー（ｒｅｄ  ｃｌｏｖｅｒ）、イチョウ（ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）、およびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の植物抽出物からなる群から選択された、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項９】
前記局所用組成物が、皮膚および粘膜への適用のための、化粧品組成物および医療用デバイスからなる群から選択される、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項１０】
前記局所用組成物が、前記局所用組成物の総重量に対して、１重量％〜５重量％の量で、前記水性組成物を含む、請求項１に記載の局所用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれかに１項に記載の、５００ｎｍ未満のサイズを有する、親水性小胞（ニオソーム）内に埋め込まれた植物抽出物を含む、水性組成物。
【請求項１２】
前記水性組成物の総重量に対して、前記量を重量％で表記した場合、前記組成物が、３０重量％〜４０重量％の量の水、３５重量％〜５０重量％の量の非イオン性界面活性剤、１０重量％〜２０重量％の量のグリセリン、２重量％〜５重量％の量の植物抽出物、および、１重量％〜６重量％の量の水溶性天然抗酸化剤を含む、請求項１１に記載の親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物を含む、水性組成物。
【請求項１３】
手で振盪する方法（ｈａｎｄ  ｓｈａｋｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）または超音波法の手段を用いて、請求項１０に記載の水性組成物を調製するプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、植物抽出物を含む局所用組成物に関する。特に、本発明は、好ましくは５００ｎｍより小さいサイズを有する親水性小胞（ニオソーム）中に、埋め込まれた植物抽出物、および少なくとも１つの局所的に許容される賦形剤を含む局所用組成物に関する。
【０００２】
従来技術
植物抽出物は、新鮮なまたは乾燥した植物部分（葉、花、根など）から、好ましい溶媒（水、アルコール、アセトンなど）で抽出することによって、調製された、液体組成物（液体抽出物）、固体組成物（乾燥抽出物）または中間コンシステンシー（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）の組成物（軟質抽出物（ｓｏｆｔ  ｅｘｔｒａｃｔｓ））である。
乾燥植物抽出物は、粉末調製物の形態であり、そして、溶媒の完全な蒸発によって得られる。乾燥抽出物は、通常、乾燥残渣が９５重量％以上である。
植物抽出物は、それらの治療特性のために使用されている、薬局方で使用のために広く知られている。
【０００３】
これらの中で、例として、
ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）のもののようなアントシアニン抽出物、
レッドクローバーのもののようなイソフラボン抽出物、
オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）のもののようなリグナン抽出物、
イチョウ（ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）およびセンテラ・アジアティカ（ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）  のようなテルペン抽出物、
スィート・クローバー（ｓｗｅｅｔ  ｃｌｏｖｅｒ）、レモンバーム（ｌｅｍｏｎ  ｂａｌｍ）、パッションフラワー（ｐａｓｓｉｏｎ  ｆｌｏｗｅｒ）および  ガラナ（ｇｕａｒａｎａ）のようなアルカロイドおよびポリフェノール抽出物、ならびに、バイオフラボノイド（ルチンやケルセチン、またそのグリコシドの形で（ｒｕｔｉｎ  ａｎｄ  ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，  ａｌｓｏ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ  ｆｏｒｍ））の抽出物、
を挙げることができる。
【０００４】
オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）の抽出物は、そのリグナンの高い含有量のため、酸化的ストレスに関連する炎症性疾患、心血管疾患の予防、および、特に、更年期女性における、エストロゲンの欠乏に関連した症状を予防または緩和（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）するために、用途を見出す。
【０００５】
ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の乾燥果実は、収斂性（ａｓｔｒｉｎｇｅｎｔ）を有し、そして、下痢止め剤として使用することができる。果物中に存在する物質のいくつかは、血液循環、微小循環の機能、および眼に、また糖尿病などの変性疾患（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）の存在下でも、有用であることが示されてきた。
特に、網膜の毛細血管に対するアントシアニンの効果は、それらは、毛細血管の壁を保護し、そして、微小循環、そして、血管の問題および血管内皮の基礎栄養（ｔｒｏｐｈｉｓｍ）に有益な作用を及ぼすことができるので、強調される。
【０００６】
イチョウの葉から得られた乾燥抽出物は、脳障害および末梢循環の障害に関連する治療において、およそ前世紀中頃から、医学に使用されてきた。
イチョウの抽出物は、神経変性疾患の治療に潜在的に使用され、特に、アルツハイマー病および老年性認知症（ｓｅｎｉｌｅ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）に関連する機能障害に有益な効果を有する。
さらに、心血管障害（特に、血小板接着の減少）において、神経感覚系（ｎｅｕｒｏｓｅｎｓｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）（特に網膜の保護において）のレベルで、そして、より一般的には、心臓および末梢内皮血管拡張（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｖａｓｏｄｉｌａｔｉｏｎ）において、有用であることが見出されている。
【０００７】
レッドクローバー乾燥抽出物は、基本的に、閉経（ｍｅｎｏｐａｕｓｅ）および閉経後（ｐｏｓｔ−ｍｅｎｏｐａｕｓｅ）に関連する症状及び危険因子の予防および／または治療に使用される。
これは、ホルモン補充療法（ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ）によって引き起こされる副作用を伴わずに、エストロゲンの構造および挙動を模倣する、イソフラボンの含有量が高いためである。
【０００８】
植物抽出物、特に、乾燥抽出物は、それらは、通常、水に不溶であり、通常、白色である化粧マトリックスに対してむしろ不適当な色であり、製造および貯蔵のための手順の間のｐＨに対する感受性および／またはその変化、ならびに、クリーム、ローション、ゲルまたは他の局所用製剤中に通常存在する高い割合の水に対する、それらの不安定性または配合禁忌（ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）のため、皮膚上および粘膜上の適用のための局所用製剤、特に、化粧品、および／または医療デバイスには、ほとんど適していないことが知られている。
【０００９】
発明の概要
本出願人は、皮膚上および粘膜上への適用のために、局所用組成物、特に、化粧品および／または医療デバイスに、植物抽出物を組み込むことについて関心がある。
したがって、出願人は、前述の欠点および不利益を克服する植物抽出物を含む局所用組成物を製造する問題に直面している。
特に、本出願人は、経時的に安定であり、そして、分離および／または沈殿および／または、その成分の変化の現象を引き起こさない、水性エマルジョンの形態の植物抽出物を含む局所用組成物を製造する問題に直面している。
【００１０】
同時に、出本願人は、美しい外観および着色を有し、そして、調製中および経時的な色の変化を受けない、植物抽出物を含む局所用組成物を製造する問題に直面している。
特に、出願人は、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）、レッドクローバー、イチョウ、およびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の、濃縮され、そして、高力価の植物抽出物を、局所用組成物中に組込む問題に直面した。
本出願人は、驚くべきことに、植物抽出物を、好ましくは５００ｎｍより小さいサイズを有する、親水性小胞（ニオソーム）に埋め込むことができることを見出し、安定で無色の水性の溶液／分散液を得た。
出願人はまた、驚くことに、植物抽出物のニオソームを含む水性の溶液／分散液が、長時間安定で、そして、特定の変色を起こさない水性局所用組成物、特に、水、ミセル水、エマルジョン、ローション、バーム、クリームおよびゲルを調製するために使用できることを見出した。
【００１１】
さらに、本出願人は、驚くべきことに、植物抽出物のニオソームを組み込むことにより得られた局所用組成物が、皮膚に適用された場合に、予想外の水和性、抗老化性およびしわ防止性を有し、さらに、粘膜、特に膣粘膜に適用された場合に、栄養のある（ｔｒｏｐｈｉｃ）そして水和性（ｈｙｄｒａｔｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）を示すことを見出した。
【００１２】
本出願人は、親水性小胞（ニオソーム）中に包埋された植物抽出物の水性組成物が、グリセリン中に組み込まれたベースの植物抽出物のそれと比較して、驚くほどより高い、有効成分の皮膚貫通吸収活性を示したことを観察した。
本出願人は、予期しないことに、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）の植物抽出物のニオソームを組み込むことによって得られる局所用組成物が、炎症性または刺激性現象（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｏｒ  ｉｒｒｉｔａｎｔ  ｐｈｅｎｏｍｅｎａ）に敏感な皮膚に対して、驚くべき抗刺激性および鎮静作用を有することを見出した。
さらに、出願人は、レッドクローバーの植物抽出物のニオソームを組み込むことによって得られる局所用組成物は、老化の典型的な顔の肌色の異常変色（ｄｙｓｃｈｒｏｍｉａ）および均一性の喪失を阻止または減少させるのに驚くほど効果的であったことを観察した。
本出願人はまた、イチョウの植物抽出物のニオソームを組み込むことによって得られた局所用組成物が、末梢循環を刺激するのに驚くほど有効であることも観察した。
最後に、本出願人は、ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の植物抽出物のニオソームを組み込むことによって得られた局所用組成物が、皮膚のコンパートメント（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）の微小循環に伴う発赤（ｒｅｄｎｅｓｓ）および浮腫（ｏｅｄｅｍａ）を低減するのに驚くほど効果的であることを観察した。
結果として、本発明の第１の態様は、５００ｎｍより小さいサイズを有する、親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物の水性組成物および少なくとも局所的に許容される賦形剤を含む局所用組成物に関する。
【００１３】
本発明の第２の態様は、親水性小胞（ニオソーム）に包埋された植物抽出物を含む、水性組成物、特に水性の分散液または溶液に関し、前記植物抽出物は、好ましくは、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）、レッドクローバー、イチョウおよびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）からなる群から選択される。
より詳細には、本発明は、親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物を含む、水性組成物に関し、前記親水性小胞は、直鎖または分枝鎖ポリグリセリンと、飽和またはモノ不飽和直鎖脂肪酸とのエステルを含む。
【００１４】
本発明の第３の態様は、手で振盪する方法（ｈａｎｄ  ｓｈａｋｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）または超音波の技術の使用を含む、植物抽出物を含有する親水性小胞（ニオソーム）を含む水性組成物の調製方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】指針のためにのみ提供され、そして、それゆえ、制限するものではない、添付の図面を参照して、本発明は、以下に提示される、以下の詳細な説明においてよりよく説明される。ここで、図１は、ニオソーム（１０）の断面を概略的に示し、そして、界面活性剤分子（２０）の配向の表示を提供する。ここで、ドットは、親水性末端（４０）を表し、そして、線は、疎水性末端（５０）を表し、水性コンパートメント（ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）（３０）を包囲する二重層モノラメラ構造（２５）を形成する。
【００１６】
発明の詳細な説明
第１の態様において、本発明は、５００ｎｍよりも低い直径を有する実質的に、球形の親水性小胞（ニオソーム）に埋め込まれた植物抽出物の水性組成物、および、少なくとも局所的に許容される賦形剤を含む局所用組成物に関する。
本明細書において使用される表現「局所的に許容される」は、皮膚および／または粘膜に適用される場合、有害な副作用（刺激、毒性など）がないと認識される物質を定義することを意図する。
有利なことに、本発明で使用されるニオソームは、４００ｎｍ未満の直径、より好ましくは、３００ｎｍ未満の直径、そして、さらにより好ましくは２００ｎｍ未満である。
好ましくは、本発明で使用されるニオソームは、１０ｎｍより大きい直径、より好ましくは２０ｎｍより大きく、そして、さらにより好ましくは４０ｎｍより大きい直径を有する。
有利には、本発明で使用されるニオソームは、５０ｎｍ〜１８０ｎｍ、好ましくは７０ｎｍ〜１５０ｎｍの直径を有する。
好ましくは、本発明において使用される植物抽出物は、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）、レッドクローバー、イチョウおよびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の植物抽出物からなる群から選択される。
【００１７】
図１を参照すると、本発明の目的に使用されるニオソーム（１０）は、水性コンパートメント（３０）を取り囲む両親媒性分子（２０）の二重層によって形成される、非イオン性親水性小胞である。
特に、本発明の目的に使用されるニオソームを形成するために使用される両親媒性分子は、非イオン性界面活性剤である。
図１に示すように、疎水性末端（５０）が、ラメラの内部で互いに向き合って二重層（２０）を形成する一方、非イオン性界面活性剤の親水性末端（４０）は、ラメラの外側に向くように位置されるように、界面活性剤分子は、二重層モノラメラ構造（２５）に自己組織化する傾向がある。
植物抽出物は、非イオン性親水性小胞（１０）を形成する両親媒性分子（２０）の二重層によって画定される水性コンパートメント（３０）に包埋される。
このようにして、植物抽出物は、水性媒体、特に本発明の水性組成物中の分散液／溶液中で、輸送され、維持され得る。
【００１８】
本発明の目的に使用されるニオソームを製造するために特に好ましい界面活性剤は、直鎖または分枝鎖ポリグリセリンと、飽和またはモノ不飽和直鎖脂肪酸（ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ  ｌｉｎｅａｒ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ）、またはそれらの混合物とのエステルからなる。
【００１９】
直鎖状または分枝状のポリグリセリンの有用な例は、以下の一般式（Ｉ）および（ＩＩ）で表される。
（Ｉ）Ｈ−（ＯＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２）ｎ−ＯＨ
（ＩＩ）Ｈ−（ＯＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ））ｎ−ＯＨ
ここで、ｎは２〜１０の整数である。
一般式（Ｉ）および（ＩＩ）で表される、ポリグリセリンの好ましい例は、トリグリセリン、テトラグリセリン、ヘキサグリセリン、オクタグリセリン、およびデカグリセリンである。
本発明に適した直鎖状または分枝鎖状のポリグリセリンは、市販されている。
市販品の例は、
Ｓｐｉｇａ  Ｎｏｒｄ  ＳｐＡ社により、商品名
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−３、
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−４、
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−６および
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−１０、および
Ｓｏｌｖａｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．による商品名
Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ−３およびＰｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ−４で販売されているポリグリセリンである。
【００２０】
飽和直鎖脂肪酸の有用な例は、酪酸、吉草酸（バレリアン酸）、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、モンタン酸、メリシン酸、およびラッセル酸（ｌａｃｅｒｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの４〜３２個の炭素原子を有するモノカルボン酸を含む。
好ましい飽和直鎖脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸およびベヘン酸のような１２〜２２個の炭素原子を有するモノカルボン酸を含む。
モノ不飽和直鎖脂肪酸の有用な例は、１４〜２４個の炭素原子を有するモノカルボン酸、例えばミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、ガドレイン酸およびエルカ酸（ｅｒｕｃｉｃ  ａｃｉｄ）を含む。
脂肪酸の混合物の有用な例は、種子または果実を圧縮または抽出することによって得られる植物油によって代表される。例えば、オリーブ油、ピーナッツ油、ヤシ油、パーム油および菜種油（ｃｏｌｚａ  ｏｉｌ）である。多価不飽和酸の含有量が低減するため、オリーブ油およびヤシ油、特にオリーブ油が好ましい。
本発明に有用な、直鎖または分枝鎖のポリグリセリンと、飽和またはモノ不飽和直鎖脂肪酸とのエステルは、以下の一般式によって表すことができる：
【数１】
2019510029.tif 000002
ｎは０〜８の整数であり、そして、
残基Ｘは、水素原子またはアシル基Ｒ−ＣＯ−を表し、
ここで、Ｒは、３〜３１個の炭素原子、好ましくは１１〜２１個の炭素原子を含む、飽和またはモノ不飽和アルキル鎖である。そして、前記残基Ｘの少なくとも１個かつ３個を超えない、好ましくは１個または２個は、前記アシル基Ｒ−ＣＯ−を示す。
本発明に有用な、直鎖または分枝鎖ポリグリセリンと、飽和またはモノ不飽和直鎖脂肪酸またはそれらの混合物とのエステルは市販されている。
市販製品の例は、たとえば、
Ｓｏａｖｉｒｏｌ  ＯＶ６（オリーブ油  ポリグリセリル−６  エステル）、
Ｓｏａｖｉｒｏｌ  ＯＶ４（オリーブ油  ポリグリセリル−４  エステル）などの、Ｓｏａｖｉｒｏｌという商品名で、Ｎａｔｕｒａｌｉｓ  ｓ．ｒ．ｌ社によって製造され、販売されているポリグリセリン  エステル、
および、たとえば、
Ｎｉｋｋｏｌ  Ｈｅｘａｇｌｙｎ  １−Ｌ（ポリグリセリル−６  ラウレート）および
Ｎｉｋｋｏｌ  Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５（ポリグリセリル−６  ポリリシノール酸エステル）などのＮｉｋｋｏｌ  Ｈｅｘａｇｌｙｎの商品名で、Ｎｉｋｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ株式会社によって製造され、販売されているポリグリセリン  エステルである。
【００２１】
本発明の目的のために使用されるニオソームの製造において、好ましくは、さらなる成分は、たとえば、グリセリンのようなニオソームの水性溶液／分散液を安定化および保存のために適しているもの、および、アスコルビン酸およびその誘導体、イソフラボン類、マグノロール（ｍａｇｎｏｌｏｌ）、テトラヒドロマグノロール、ホノキオール（ｈｏｎｏｋｉｏｌ）、およびオボバトール（ｏｂｏｖａｔｏｌ）などの水溶性の天然の抗酸化剤に適したものが使用できる。
特に、本発明の局所用組成物を製造するために使用される植物抽出物は、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）、レッドクローバー、イチョウ、およびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）の植物抽出物である。
７−ヒドロキシマタイレシノール（７−Ｈｙｄｒｏｘｙｍａｔａｉｒｅｓｉｎｏｌ）（ＨＭＲ）は、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）（オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ））の抽出物中で遥かに最も豊富である、リグナンの単一成分であり、総リグナンの約６０重量％の濃度に達する。
オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）では、濃い根の中のリグナンの濃度は２〜３％である。豊富なリグナンは、枝の心材（５〜１０％）および枝（ｂｒａｎｃｈｉｎｇｓ（ツイスト（ｔｗｉｓｔ））、特に、節（ｋｎｏｔｓ）において存在し、そこでは、リグナンの量が１０％を超えることがある。これらの濃度は、リグナンに富んだ物質であることが知られている、粉砕された亜麻仁の粉末（ｇｒｏｕｎｄ  ｌｉｎｓｅｅｄ  ｐｏｗｄｅｒ）の約１００倍である。
本発明における使用のためのＨＭＲは、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）（オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ））の木材を圧縮することにより、大きな寸法の断片のフラクション（ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ）（枝（ｂｒａｎｃｈｅｓ）、小枝（ｔｗｉｓｔｓ）、および節（ｋｎｏｔｓ）を含む）から単離することができる。
オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ）（ＴＥＰ、ＨＭＲおよび異性体を含む）の全抽出物、および、精製されたＨＭＲである、ＨＭＲＬｉｇｎａｎＴＭ（主にＨＭＲを含む）は、Ｌｉｎｎｅａ  ＳＡ、Ｒｉａｚｚｉｎｏ、スイスから市販されている。
【００２２】
ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）（セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ  Ｌ．））は、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）の低木植物である。
欧州薬局方で与えられているように、乾燥フルーツから得られたビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）抽出物は、２５％のアントシアニジンに相当する３６％のアントシアノシド、および他の成分（フラボノイド、カテキン、ポリフェノール、糖、ペクチン、タンニン、ビタミンＡ、Ｃ、および少量のビタミンＢ）を含む。
【００２３】
イチョウは、銀杏科（Ｇｉｎｋｇｏａｃｅａｅ）の唯一の生存種である植物である。イチョウの抽出物は、様々な植物の部分から得られるが、医学目的で使用される抽出物は主に葉から得られる。
欧州薬局方に記載されているように、イチョウの葉から得られた乾燥抽出物は、
（１）ケルセチン、カンフェロール（ｃａｍｐｈｅｒｏｌ）およびイソラムネチン（ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ）のグリコシド誘導体を含む群から選択されるフラボノイドの２２重量％〜２７重量％；
（２）ギンコライド（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅｓ）Ａ、ＢおよびＣの、２．８重量％〜３．４重量％；
（３）２．６重量％〜３．２重量％のビオバリド（ｂｉｏｂａｌｉｄｅｓ）；および
（４）５ｐｐｍ以下のギンコール酸（ｇｉｎｋｇｏｌｉｃ  ａｃｉｄｓ）、
を含む。
【００２４】
レッドクローバー（ムラサキツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ））は、多年生の草本植物で、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）に属する。レッドクローバー抽出物は、植物の枝の端部で成長する葉および／または赤い花から得られる。
レッドクローバー抽出液は、イソフラボン類、リグナン類、クメストロール（ｃｏｕｍｅｓｔｒｏｌ）の３種類の有効成分を含む。
有効成分の主要な量は、天然の唯一の例である、アグリコン形態の（ａｇｌｙｃｏｎｉｃ  ｆｏｒｍ）イソフラボンによって表され、そして、ビオカニンＡ（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ  Ａ）およびホルモノネチン（ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）によってほぼ完全に表され、他方、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）およびダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）はより少量存在する。
代わりに、リグナンおよびクメストロールは非常に少量で存在し、そして、レッドクローバーの活性へのそれらの寄与はほとんど重要ではない。
特に、本発明に使用される抽出物は、全イソフラボンの３６〜４４％の力価（ｔｉｔｒｅ）を有するレッドクローバー抽出物であり、ビオカニンＡ（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ  Ａ）、ホルモノネチン（ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）およびダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）の合計として表される。
本発明のニオソームを含む水性組成物は、当該技術分野において知られている技術、たとえば、手で振盪する方法（ｈａｎｄ  ｓｈａｋｉｎｇ）または超音波技術によって、調製することができる。
手で振盪する方法（ｈａｎｄ  ｓｈａｋｉｎｇ）は、
・丸底ガラスフラスコ中で実施される、揮発性有機溶媒（たとえば、エチルエーテル、クロロホルムまたはメタノール）に、成分を溶解させる第１工程、
・丸底フラスコの壁に付着した成分の薄い層を残す、室温での（２０〜２５℃）、ロータリーエバポレーター中で行われる、蒸発の第２工程、そして、
・最後に、０℃〜６０℃の温度で、穏やかに撹拌しながら、植物抽出物を含む水相で再水和する第３工程
を含む。
【００２５】
超音波技術は、界面活性剤を含む有機層および植物抽出物を含む水性層を混合して得た分散液を、０℃から６０℃の間の温度で、超音波処理することを含む。
ニオソームを含む組成物を調製するための、これらおよび他の方法は、文献、たとえば、Ｍａｄｈａｖらによる論文「ニオソーム：新規薬物送達システム」（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、  ＩＪＲＰＣ  ２０１１年、１（３）、４９８−５１１頁）に記載されている。
得られたニオソームの分散液／溶液は、ニオソームの分散液／溶液の総重量に対して、３０重量％〜４０重量％の量の水を含む。ポリグリセリンのエステルが主要部分を占め、ニオソームの分散液／溶液の総重量に対して３５重量％〜５０重量％である。
グリセリンは、ニオソームの分散液／溶液の総重量に対して、１０重量％〜２０重量％の量で存在する。
植物抽出物は、ニオソームの分散液／溶液の総重量に対して、２重量％及び５重量％の、より限定された量で含まれる。
酸化防止剤は、ニオソームの分散液／溶液の総重量に対して、１重量％〜６重量％のマイナーな割合を表す。
本発明の局所用組成物は、液体または半固体であってもよい。
特に、本発明の局所用組成物は、皮膚上及び粘膜上に適用するための、化粧品組成物および／または医療デバイスからなる。
本発明の局所用組成物は、好ましくは、液体または半固体の組成物を含み、ここで、水性のニオソーム組成物は、局所用組成物の総重量に対して、１重量％〜５重量％の量で分散されている。
本発明の液体組成物は、広い粘度変化を有する、溶液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ローション、フォーム、ミルク、オイル、発泡製品または懸濁液を含む。
液体組成物は、たとえば、水溶液、水性アルコール溶液、油性溶液、油相を水相に（油中水）またはその逆の、水相を油相に（水中油）分散させることによって得られるエマルジョン、および、固体粒子からなる分散相を、ある粘度の水性または油性液体で一般に表される分散媒中に分散させることによって得られる懸濁液を含む。
本発明の半固体組成物は、クリーム、ゲル、バーム、軟膏、ペースト、クリームゲル、スティックおよびワックスを含む。
さらに、本発明の局所使用のための組成物は、たとえば、乳化剤、水和剤、溶媒、エモリエント、安定剤、粘度調節剤、保存剤、滑沢剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ）、金属イオン封鎖剤またはキレート剤（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｒ  ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、充填剤（ｆｉｌｌｅｒｓ）、粉末（ｐｏｗｄｅｒｓ）、芳香剤（ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ）、香料（ｐｅｒｆｕｍｅｓ）、吸収剤（ａｂｓｏｒｂｅｎｔｓ）、染料および乳白剤（ｄｙｅｓ  ａｎｄ  ｏｐａｃｉｆｉｅｒｓ）、抗酸化剤、ビタミン、スクリーン物質（ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）、ＵＶフィルター、エッセンシャルオイル（ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌｓ）、ケラチン活性物質、およびアミノ酸などの化粧品および／または医療デバイスを調製するのに有用な、当業者に知られている、局所に許容可能な種々の添加剤またはベヒクルを含むことができる。
好ましい溶媒添加剤は、たとえば、水、アルコール、ケトン（アセトンおよびメチルイソブチルケトンなど）、グリコール（エチレングリコール、プロピレングリコールおよびブチレングリコールなど）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−４０、ＰＥＧ−５０、ＰＥＧ−６０など）、酢酸アルキル（酢酸アミル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチルなど）、パラフィンおよびイソパラフィン、シクロアルキル（シクロヘキサンなど）、グリセリン、天然および合成油、天然および合成トリグリセリドを含む。
好ましくは、本発明の局所用組成物は水性組成物である。
水性組成物において、水は組成物の主成分を表し、組成物の総重量に対して、９９重量％までの量にさえ到達する。
水性組成物は、組成物の全重量に対して、好ましくは、２５重量％〜９５重量％、好ましくは５０重量％〜９０重量％の水量を含む。
本発明の水性組成物は、組成物の全重量に対して、好ましくは、約０．１重量％〜約６０重量％、より好ましくは１重量％〜４０重量％、そして、さらにより好ましくは、５〜３５重量％の非水性溶媒の総量を含むことができる。
適切な乳化添加剤の例は、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性界面活性剤、またはそれらの組み合わせである。
本発明において有用な乳化剤の例は、ソルビタン、エトキシル化長鎖アルコール、アルキルポリグリコシド、石鹸、アルキル硫酸塩（例えば、セチルステアリル硫酸ナトリウム）、モノアルキルおよびジアルキルホスフェート、アルキルスルホネート、硬化ヒマシ油、アシルイセチオネート（ｉｓｅｔｈｉｏｎａｔｅｓ）、スクロースエステル（ｓｕｃｒｏｓｅ  ｅｓｔｅｒｓ）、ベタイン、レシチン、第四級アンモニウム塩、アルキルオレエート、グリセリド（例えば、カプリロカプロイル  ポリオキシグリセリド（ｃａｐｒｙｌｏｃａｐｒｏｙｌ  ｐｏｌｙｏｘｙｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）（カプリロカプロイル  マクロゴールグリセリド（ｃａｐｒｙｌｏｃａｐｒｏｙｌ  ｍａｃｒｏｇｏｌｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）））およびオリーブ油からの乳化剤である。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．１重量％〜約６０重量％、より好ましくは０．５重量％〜２５重量％、そして、さらにより好ましくは０．５重量％〜１０重量％の乳化剤の総量を含む。
【００２６】
本発明に有用な、典型的な粘度調整添加剤は、たとえば、キサンタンガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボポール、カラギーナン、ポロキサマーおよびアカシアガムである。
有利には、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．１重量％〜約２５重量％、より好ましくは０．５重量％〜１０重量％、そして、さらにより好ましくは０．５重量％〜５重量％の粘度調整剤の総量を含む。
本発明に有用な、水和作用を有する添加剤の例は、たとえば、尿素、アラントイン、ヒアルロン酸およびその誘導体、グリセリン、アミノ酸、アセチル  モノエタノールアミド、ブトキシプロパノール、ブチルグリコール、低分子量のポリエチレングリコール（たとえば、ＰＥＧ−４０、ＰＥＧ−５０、ＰＥＧ−６０）、アロエ、マロー（ｍａｌｌｏｗ）、トレハロースおよびソルビトールである。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．０５重量％〜約２５重量％、より好ましくは０．５重量％〜１０重量％、さらにより好ましくは０．１重量％〜５重量％の水和剤の全量を含む。
【００２７】
本発明に有用な、好ましいエモリエントの例は、たとえば、ラノリン、アーモンド油、オリーブ油、硬化ヒマシ油、微晶質ワックス、ポリジメチルシロキサン（ジメチコン）、ポリメチルフェニルシロキサン、グリコールおよびシリコーンのポリマー、鉱物油、パラフィン、オゾケライト（ｏｚｏｋｅｒｉｔｅ）、セレシン（ｃｅｒｅｓｉｎ）、トリグリセリドエステル、モノグリセリドアセチルエステル、エトキシル化グリセリド、脂肪酸のアルキルエステル、脂肪酸、長鎖アルコール、ステロール、蜜蝋、多価アルコール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｉｃ  ａｌｃｏｈｏｌｓ）、ポリエステルおよび脂肪酸アミドを含む。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．１重量％〜約２５重量％、より好ましくは０．５重量％〜１０重量％、そして、さらにより好ましくは０．５重量％〜５重量％のエモリエント（ｅｍｏｌｌｉｅｎｔｓ）の総量を含む。
本発明において有用な、適切な防腐剤の例としては、たとえば、エタノール、フェノキシエタノールおよびベンジルアルコールのようなアルコール、メチルおよびプロピルパラヒドロキシ安息香酸、ヒドロキシアニソール  ブチレート（ＢＨＡ）、ソルベート（ｓｏｒｂａｔｅｓ）、尿素誘導体、および、イソチアゾリノンを含む。
本発明の局所用組成物に使用可能な染料の他の例は、２００９年１１月３０日付の規制（ＥＣ）第１２２３／２００９附属書Ｖに見出すことができる。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．０１重量％〜約２．００重量％、より好ましくは、０．０５重量％〜１．００重量％、そして、さらにより好ましくは０．１重量％〜０．５重量％の保存剤の総量を含む。
本発明に有用な金属イオン封鎖剤（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ）またはキレート添加剤の例は、ＥＤＴＡ、ＨＥＤＴＡ、アルキル  オキザレート、リチウムまたはカリウム  オキザレート、ピロリン酸ナトリウムまたはカリウムである。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の総重量に対して、約０．０１重量％〜約２０重量％、より好ましくは０．０５重量％〜１０重量％、そして、さらにより好ましくは０．１重量％〜５重量％の金属イオン封鎖剤（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ）またはキレート化添加剤の全量を含む。
本発明に有用な、好適な安定剤の例は、長鎖アルコール（セチルアルコール、ステアリルアルコールなど）およびそれらの混合物、高分子量のポリエチレングリコール（たとえば、ＰＥＧ−９０００およびＰＥＧ１４０００）およびポリビニルピロリドン（たとえばポビドン）である。
本発明の組成物は、組成物の総重量に対して、好ましくは、約０．１重量％〜約２５重量％、より好ましくは０．５重量％〜１５重量％、さらにより好ましくは、１重量％〜１０重量％の安定剤の総量を含む。
【００２８】
本発明に有用な、粉末形態の好適な添加剤の例は、ジメチコン／ビニルジメチコン  クロスポリマー（ＤＣ９５０６、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ社）、シクロメチコンとジメチコン  クロスポリマーの混合物（ＤＣ９０４０、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ社）、シリカで処理したジメチコンとビニルジメチコンのクロスポリマー（ｃｒｏｓｓｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｏｆ  ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ａｎｄ  ｖｉｎｙｌ  ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｉｌｉｃａ）（ＤＣ９７０１、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ社）、シクロメチコンとジメチコン／ビニルジメチコンのクロスポリマーの混合物（ＳＦＥ  ８３９、ＧＥ  Ｂａｙｅｒ  Ｓｉｌｉｃｏｎｅｓ社）のようなエラストメリックシリコン（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ  ｓｉｌｉｃｏｎｅｓ）である。
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の総重量に対して、約０．１重量％〜約５重量％、より好ましくは、０．２重量％〜１重量％の粉末状の添加剤の総量を含む。
本発明において有用な、乳白剤の例は、酸化亜鉛または酸化アルミニウム、二酸化チタンまたは二酸化亜鉛、アルミナ、マイカ、脂肪酸とアルミニウムとの塩、および石膏である。
本発明において好ましく用いられる染料の例としては、皮膚を染色せず、残留物を残さない、容易に洗浄可能な水溶性染料であり、たとえば、
アシッド  ブルー  ３  ＣＩ  ４２０５１、
アシッド  ブルー  ９  ＣＩ  ４２０９０、
アシッド  ブルー  ７４  ＣＩ  ７３０１５、
ピグメント  ブルー  １５  ＣＩ  ７４１６０、
アシッド  イェロウ  ３  ＣＩ  ４７００５、
フード  イェロウ  ３  ＣＩ  １５９８５、
アシッド  イェロウ  ２３  ＣＩ  １９１４０、
アシッド  イェロウ  ７３  ＣＩ  ４５３５０、
アシッド  レッド  １４  ＣＩ  １４７２０、
アシッド  レッド  １８  ＣＩ  １６２５５、
アシッド  レッド  ２７  ＣＩ  １６１８５、
アシッド  レッド  ５１  ＣＩ  ４５４３０、
アシッド  グリーン  １  ＣＩ  １００２０、
アシッド  グリーン  ２５  ＣＩ  ６１５７０、およびそれらの混合物が挙げられる。
本発明の局所用組成物に使用可能な染料の他の例は、２００９年１１月３０日付の規制（ＥＣ）第１２２３／２００９号の附属書ＩＶに見出すことができる。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の総重量に対して、約０．０１重量％〜約１５重量％、より好ましくは、０．０５重量％〜５重量％の乳白剤および染料の合計量を含む。
好ましくは、本発明の組成物は、紫外線の作用に対して、皮膚を保護することができるＵＶフィルターを含むことができる。
ＵＶフィルターの例は、例えば、
２−エチルヘキシル  ２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート（ＰＡＲＳＯＬ  ３４０）および
エチル  ２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレートなどのアクリル酸エステル、
カンファー  ４−メチルベンジリデン（ＰＡＲＳＯＬ  ５０００）および
カンファー  ３−ベンジリデンなどのカンファー誘導体、
オクチル  メトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ  ＭＣＸ）、エトキシエチル  メトキシシンナメート、ジエタノールアミン  メトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ  Ｈｙｄｒｏ）などのシシンナメート類、
エチルヘキシル  トリアゾン（ＵＶＩＮＵＬ  Ｔ−１５０）、ジエチルヘキシル  ブタミドトリアゾン（ＵＶＡＳＯＲＢ  ＨＥＢ）などのトリアゾン誘導体、
４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン（ＰＡＲＳＯＬ  １７８９）、
ジメトキシジベンゾイルメタンなどのジベンゾイルメタン誘導体、
２，２’−メチレン−ビス（６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノール（ＴＩＮＯＳＯＲＢ  Ｍ）などのベンゾトリアゾール誘導体、ビス−エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン（ＴＩＮＯＳＯＲＢ  Ｓ）などのトリアジン誘導体である。
本発明の局所用組成物に使用可能なＵＶフィルターの他の例は、２００９年１１月３０日付の規制（ＥＣ）第１２２３／２００９号の附属書ＩＶに見出すことができる。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の全重量に対して、約０．１重量％〜約２０重量％、より好ましくは、０．５重量％〜１５重量％で、ＵＶフィルターの総量を含む。
【００２９】
以下の実施例は、本発明の少なくとも１つの実施形態を説明するが、本明細書に添付の特許請求の範囲に規定される保護の程度を決して限定するものではない。
【００３０】
実施例
【００３１】
実施例１−ニオソーム
以下の表１に示す組成を有する、親水性小胞（ニオソーム）中に包埋された植物抽出物の多数の製剤を調製した。
得られた組成物は、均一、透明粘性ゲルの外観を有した。組成物の総重量に対する重量％が、各成分について与えられる。
【００３２】
【表１】
2019510029.tif 000003
【００３３】
ＨＭＲｌｉｇｎａｎを含む、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ）の抽出物を、エタノールで熱抽出した樹木の節（ｋｎｏｔｓ）から得た。
次いで、抽出された画分を、３成分系の溶媒（エタノール、酢酸エチルおよび水）中で、沈殿が得られるまで、酢酸カリウムと共結晶化させた。次いで、沈殿物を濾過し、そして乾燥させて、粉末形態の化合物を得た。
その活性物質の薬理学的組成物の再現性は、ヨーロッパのオウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ）植物の特別な選択、制御された条件下での木材の収集、および標準化された抽出および精製プロセスによって得られる。
【００３４】
レッドクローバー抽出物を、葉から得、エタノール水溶液で熱抽出した。抽出された画分を、次いで、水で希釈し、そして、液体／液体抽出によって精製した。
次いで、精製された液体を濃縮してエタノールを除去し、そして、最後にさらに濃縮し、濾過し、そして、乾燥させて、粉末形態の最終抽出物を得た。
その活性物質の薬理学的組成物の再現性は、制御された条件で生育されたレッドクローバー（ヨーロッパで栽培された）の植物の特別な栽培、および標準的な抽出および精製プロセスによって得られる。
イチョウ（Ｇｉｎｇｋｏ  ｂｉｌｏｂａ）の抽出物を葉から得て、エタノール水溶液で熱抽出した。
次いで、抽出された画分を減圧下で濃縮して、抽出溶媒を除去し、そして、樹脂ベースのカラムでの濾過および固体／液体抽出によって精製した。
次いで、有機溶媒を水と交換し、そして、最後に水相を濃縮し、そして、乾燥させて、粉末形態の最終抽出物を得た。
その活性物質の薬理学的組成物の再現性は、制御された条件で栽培されたイチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）植物（ヨーロッパおよび北アメリカで栽培された）の特別な栽培、および、標準的な抽出および精製プロセスを用いて得られる。
ビルベリー抽出物を、果実から得、エタノールで抽出した。
次いで、抽出された画分を、減圧下、濃縮して抽出溶媒を除去し、そして、樹脂カラムで濾過して精製して、糖成分を除去した。次いで、有機溶媒を水と交換し、そして、水相を最後に噴霧乾燥技術によって凍結乾燥させて、粉末形態の抽出物を得た。
その活性物質の薬理学的組成物の再現性は、ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）植物（ヨーロッパで収穫されたもの）を選択し、その果実を、制御された条件下に収穫し、そして、標準化された抽出および精製プロセスによって得られる。
【００３５】
実施例２−エマルジョン
一連のエマルジョンは、上記実施例１に記載したようにして得られた、親水性小胞に包埋された植物抽出物の製剤を含んで調製された。
エマルジョンの組成を、以下の表２に示す。
【００３６】
【表２】
2019510029.tif 000004
【００３７】
本発明の各代表的なエマルジョンおよび比較エマルジョンのサンプルを、下記の有効性の試験に供した。
【００３８】
実施例３ａ−短期水和試験
マルチパラメーターユニット（Ｍｕｌｔｉ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｕｎｉｔ）（Ｃｏｒｔｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡｐＳ−Ｈａｄｓｕｎｄ  デンマーク）が付属する、Ｄｅｒｍａｌａｂ  Ｃｏｍｂｏを、Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  Ｐｉｎ  Ｐｒｏｂｅと使用して測定した水和指数（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）として、短時間（１時間）の水和および保護効力を、評価した。それは、角質層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）と装置のプローブのセンサーとの間のコンダクタンス（ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）を、マイクロジーメンス（ｍｉｃｒｏｓｉｅｍｅｎｓ）（μＳ）で測定することにより、皮膚の水和を評価できるようにしたものである。
測定は、機器自体によって予め決定される時間の間、一定の圧力を加えるように注意しながら、できるだけ平坦な顔の皮膚の領域で行われた。
センサーは、毎回、清潔に保った。
水和指数（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）は、約２０℃の温度および、約４０〜６０％の環境湿度の条件で測定した。
サンプルは、その使用の特徴に従って適用された。その有効性は、１時間続く短期間の試験で評価した。
検査に使用される領域は、６ｃｍ２の面積を有する正方形の切り抜きが施された（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａ  ｓｑｕａｒｅ  ｃｕｔ−ｏｕｔ  ｗａｓ  ｍａｄｅ）、外科用テープで予め区切られた、額の皮膚の領域である。このような接着テープは、試験中、その場所に維持された。
機器評価は（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ）、製品の適用後、時間ｔ０（ベースライン値）、および、５分（ｔ５）、１５分（ｔ１５）、３０分（ｔ３０）、および６０分（ｔ６０）に行った。
試験の前に、各ボランティアは、実験の前の少なくとも３時間の間、顔を洗わないように依頼された。
試験の前に、被験者は、クリニックに、３０分間留まり、試験が行われる空調室の温度および湿度に皮膚を順応させた。
この時間の終わりに、水和のベースライン値の測定を行った。
試験は、男女（男性６名、女性６名）の被験者１２名について（２６歳から５３歳、平均３７．４歳）行った。
選択された被験者は、皮膚病理または他の性質の病理を有しておらず、いずれの薬物治療もされておらず、そして、局所使用のための製品に対して、不忍容性（ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を宣言していなかった。
全ての被験者は治療の全過程を完了した。
試験は、最初に比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）と、オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）（Ｅｍｕ−ＨＭＲ）およびレッドクローバー（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）の抽出物を含むエマルジョンで行った。
結果を、以下の表３に纏める。表３は、試験されたエマルジョンおよびプラセボについての種々の観察時間で測定した１２人の被験者の水和指数（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）の平均値を示す。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００３９】
【表３】
2019510029.tif 000005
【００４０】
２ヶ月後、同じ比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）およびイチョウの抽出物（Ｅｍｕ−ＧＩＮ）およびビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）（Ｅｍｕ−ＭＲＴ）の抽出物を用いて調製されたエマルジョンを使用して、試験を繰り返した。
結果を、以下の表４に纏めた。これは、試験エマルジョンおよびプラセボについての様々の観察時間で測定した１２人の被験者の水和指数（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）の平均値を示す。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００４１】
【表４】
2019510029.tif 000006
【００４２】
実施例３ｂ−長期水和試験
実施例３ｂに記載された方法を繰り返して、同じ被験者に、６ｃｍ２の面積を有する正方形の切り抜きが施された（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａ  ｓｑｕａｒｅ  ｃｕｔ−ｏｕｔ  ｗａｓ  ｍａｄｅ）、外科用テープで予め区切られた、額の皮膚の２つの異なる領域に、朝、起床時および就寝時に、毎日２回、試験製品とプラセボを適用するように求めた。
機器を用いた評価は、時間ｔ０（ベースライン値）、および７日目（ｔ７）、１４日目（ｔ１４）および２８日目（ｔ２８）に行った。
結果を、以下の表５に纏めた。これは、試験エマルジョンおよびプラセボについてのベースライン値に対する、様々な観察時間で測定した１２人の被験者の水和指数（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）の変化率の平均値を示す。
すべてのデータは、−対のデータのためのスチューデントｔ−検定を用いて分析した。
【００４３】
【表５】
2019510029.tif 000007
【００４４】
実施例４−ＴＥＷＬ長期水和試験（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ）
経皮水分損失（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｗａｔｅｒ  ｌｏｓｓ）（Ｔｒａｎｓ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｏｓｓ、ＴＥＷＬ）を測定することにより、長期（２８日間）の水和および保護効果を評価した。
ＴＥＷＬ、すなわち、真皮および表皮から角質層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）を通って、外部環境に移動する水の量は、皮膚バリアの完全性の敏感な指標である。
ＴＥＷＬは年齢とともに増加するので、これはまた、化粧品の抗老化効果の評価をするための基準パラメータとしても採用される。
評価のために、「ニルソン蒸気圧力勾配」オープンチャンバー法（“Ｎｉｌｓｓｏｎ  ｖａｐｏｕｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ”  ｏｐｅｎ−ｃｈａｍｂｅｒ  ｍｅｔｈｏｄ）による、ＴＥＷＬを測定する、ＳｋｉｎＬａｂコンボ器具（Ｃｏｒｔｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡｐＳ−Ｈａｄｓｕｎｄ  デンマーク）を、“Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ”（経表皮水分損失（ＴＥＷＬ）測定のガイドライン）のガイドラインに従って、使用した。
サンプルは、その使用特性に従って適用された。その有効性は、４週間継続する長期試験で評価された。
検査に使用される領域は、６ｃｍ２の面積を有する正方形の切り抜きが施された（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａ  ｓｑｕａｒｅ  ｃｕｔ−ｏｕｔ  ｗａｓ  ｍａｄｅ）、外科用テープで予め区切られた、内側右前腕の皮膚の領域である。このような接着テープは、試験中、その場所に維持された。
機器による評価は、製品の適用後、ｔ０（ベースライン値）、および、７日目（ｔ７ｄ）、１４日目（ｔ１４ｄ）、および２８日目（ｔ２８ｄ）に行った。
試験の前に、各ボランティアは、実験に先立つ少なくとも３時間の間、試験に関与する前腕の領域を洗浄しないように依頼された。
試験の前に、被験者は、クリニックに、３０分間留まり、試験が行われる空調室の温度および湿度に皮膚を順応させた。
この時間の終わりに、ＴＥＷＬの測定が行われた。 
この試験は、平均年齢３７．４歳の２６歳から５３歳までの、男女１２人の被験者（男性６名、女性６名）で行われた。選択された被験者は、皮膚病理または他の性質の病理を有しておらず、いずれの薬物治療もなされておらず、そして、局所使用のための製品に対して不忍容性（ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を宣言していなかった。
全ての被験者は治療の全過程を完了した。
以下の表６に結果を纏める。試験エマルジョンおよびプラセボのベースライン値に対する、種々の観察時間で測定した１２人の被験者のＴＥＷＬの変化率の平均値を示す、
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００４５】
【表６】
2019510029.tif 000008
【００４６】
実施例５−長期弾性試験
皮膚の弾力性（ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の長期的な改善に対する有効性（２８日）を、皮膚測定プローブを備えた、ＳｋｉｎＬａｂ  Ｃｏｍｂｏ装置を用いて評価した。
弾力性（ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の測定は、２つの別々の段階に基づく：
・皮膚の表面に適用される吸引相、および、
・放出相。  
測定プローブは、皮膚の襞（ｆｏｌｄｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｋｉｎ）に、より良好に接着するために、粘着テープを備えた真空チャンバーからなる。
吸引および放出段階の間、機器は、どのように皮膚が、持ち上がり（ｒｉｓｅｓ）、そして、次いで元に戻る（ｒｅｔｒａｃｔｓ）かについて記録し、皮膚の弾力性（ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）を表す（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ）３つの物理的パラメータを測定した。すなわち、
（ｉ）ヤング率（Ｅ）、
（ｉｉ）皮膚収縮時間Ｒ（完全に拡張された状態から、測定開始の状態に、皮膚が元に戻るのに必要な時間）、および
（ｉｉｉ）皮膚の吸引（ｓｕｃｔｉｏｎ）／上昇（ｅｌｅｖａｔｉｏｎ）の相に関するデータを、解放（ｒｅｌｅａｓｅ）／収縮（ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）の相に関するデータとを、一緒に組み合わせた、皮膚粘弾性（ＶＥ）。
サンプルは、その使用特性に従って適用された。その有効性は、４週間継続する長期試験で評価した。
検査に使用される領域は、６ｃｍ２の面積を有する正方形の切り抜きが施された（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａ  ｓｑｕａｒｅ  ｃｕｔ−ｏｕｔ  ｗａｓ  ｍａｄｅ）、外科用テープで予め区切られた、内側右前腕の皮膚の領域である。このような接着テープは、試験中、その場所に維持された。
機器評価は、ｔ０（ベースライン値）、および、製品の適用後、７日目（ｔ７ｄ）、１４日目（ｔ１４ｄ）、および２８日目（ｔ２８ｄ）に行った。
試験の前に、各ボランティアは、実験に先立つ少なくとも３時間、試験に関与する前腕の領域を洗浄しないように依頼された。
試験の前に、被験者は、クリニックに、３０分間留まり、試験が行われる空調室の温度および湿度に皮膚を順応させた。
この時間の終わりに、ヤング率（Ｅ）、皮膚収縮時間（Ｒ）および皮膚粘弾性（ＶＥ）を測定された。
この試験は、平均年齢３７．４歳の２６歳から５３歳までの、男女１２人の被験者（男性６名、女性６名）で行った。選択された被験者は、皮膚病理または他の性質の病理を有しておらず、いずれの薬物治療もなされておらず、そして、局所使用のための製品に対して不忍容性（ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を宣言していなかった。
全ての被験者は治療の全過程を完了した。
以下の表７−９に、結果を纏めた。試験エマルジョンおよびプラセボについてのベースライン値に対する、様々な観察時間で測定された１２人の被験者のＥ、ＲおよびＶＥにおける変化率の平均値を示す。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００４７】
【表７】
2019510029.tif 000009
【００４８】
【表８】
2019510029.tif 000010
【００４９】
【表９】
2019510029.tif 000011
【００５０】
実施例６−アンチエイジング効果の長期試験
皮膚の厚さ及び皮膚密度（５６日）の長期的増加を齎す、試験製品の有効性を、高周波数超音波プローブ（２０メガヘルツ）を備えたＳｋｉｎＬａｂ  コンボ装置を用いて評価した。
高周波数超音波プローブ（２０メガヘルツ）を使用して得られた、高解像度画像の解析は、皮膚内で発生した生理学的及び病理学的プロセスのｉｎ  ｖｉｖｏ調査を許容した。
この方法論は、高周波数の音パルスが、皮膚内を伝搬する（ｐｒｏｐａｇａｔｅｄ）ときに得られる音響応答の測定に基づく。
すべての実際的な目的のために、これが皮膚の様々な構造に衝突するとき（ｉｍｐｉｎｇｅｓ）、パルスの一部は反射され、そして、一部はさらに伝達される。
反射された信号は、超音波トランスデューサー（ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）によって収集され、そして、処理後、音波が衝突する皮膚の上の断面の画像に変換される。
そのような画像は、色のスケール（ｃｏｌｏｕｒ  ｓｃａｌｅ）において反射された音響信号の強度の関数として、異なる程度の光強度（ｌｕｍｉｎｏｕｓ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を有し、暗い色は、低反射（すなわち、皮膚構造間の密度において、変化がないか、または小さな変化）の皮膚の領域を表し、そして、明るい色（緑色から、黄色および赤色を介して、白色）は、構造密度の著しい変化のために、高強度の反射された信号を生成することができる領域を表す。
皮膚老化プロセス中に発生する細胞外マトリックスにおける変化は、皮膚の厚み、皮膚密度およびエコー輝度（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）における変化の観点で定量化することができる。
後者は、白色−黄−赤−緑−青−黒の異なる色のピクセル（ｐｉｘｅｌｓ）として決定される。
健康な皮膚の画像では、表皮のエコー輝度（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）は、白い帯として現れ、そして、逆に、真皮は、赤色／黄色から緑色の範囲の着色されたピクセルで、不均一に着色されたように見え、そして、皮下組織は黒く見える。
サンプルは、その使用特性に従って適用された。その有効性は、８週間継続する長期試験で評価された。
検査に使用される領域は、６ｃｍ２の面積を有する正方形の切り抜きが施された（ｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａ  ｓｑｕａｒｅ  ｃｕｔ−ｏｕｔ  ｗａｓ  ｍａｄｅ）、外科用テープで予め区切られた、内側右前腕の皮膚の領域である。このような接着テープは、試験中、その場所に維持された。
機器による評価は、時間ｔ０（ベースライン値）、および、製品の適用後、２８日目（ｔ２８）および５６日目（ｔ５６）に実施した。
試験の前に、各ボランティアは、実験に先立つ少なくとも３時間、試験に関与する前腕の領域を洗浄しないように依頼された。
試験の前に、被験者は、クリニックに、３０分間留まり、試験が行われる空調室の温度および湿度に皮膚を順応させた。
超音波検査（Ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｙ）の測定は、この時間の終わりに行われた。
この試験は、平均年齢３７．４歳の、２６歳から５３歳の歳の男女１２人の被験者（男性６名、女性６名）で行った。選択された被験者は、皮膚病理または他の性質の病理を有しておらず、いずれの薬物治療もされておらず、そして、局所使用のための製品に対して不忍容性を宣言していなかった。全ての被験者は治療の全過程を完了した。
試験エマルジョンおよびプラセボについて、種々の観察時間で測定した１２人の被験者の皮膚厚さ（ｍｍ）および真皮密度（ピクセル強度）の平均値を示す、以下の表１０および１１に結果をまとめた。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００５１】
【表１０】
2019510029.tif 000012
【００５２】
【表１１】
2019510029.tif 000013
【００５３】
実施例７−抗菌剤耐性試験（チャレンジ試験）
試験は、
適切な微生物の規定された接種材料（ｉｎｏｃｕｌｕｍ）を用いた調製に「挑戦（ｃｈａｌｌｅｎｇｉｎｇ）」し、
規定の温度で植えた調製物を放置し、そして、
特定の時間間隔で容器からサンプルを取り出し、そして、
採取したサンプル中に存在する生物の数を数える、
ことからなる。
この試験は、イタリア薬局方−第IX版で与えられた推奨に従って、以下の微生物株の細菌培養を用いて行った。
緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）             ＡＴＣＣ  ９０２７
大腸菌                                       ＡＴＣＣ  ８７３９
黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）      ＡＴＣＣ  ６５３８
カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）   ＡＴＣＣ  １０２３１
アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）  ＡＴＣＣ  １６４０４
実施例１に記載したように調製された植物抽出物を含有する、各ニオソーム製剤は、１０５及び１０６の間の細菌の数、および１０４及び１０５の間の真菌またはカビ（moulds）の数を含む接種材料を有する種々の微生物と共に、培地に植え付けた。
植えた製品は、遮光して、室温（２０〜２５℃）で保存した。
存在する微生物の数を決定するために、時間ｔ０（ベースライン値）および２日目（ｔ２）、７日目（ｔ７）、１４日目（ｔ１４）および２８日目（ｔ２８）に製品のサンプルを摂取した。
結果を、下記表１２〜１６に纏めた。種々の観察時間における、各製品および各微生物について、対数で表された、見出された値を与える。
【００５４】
【表１２】
2019510029.tif 000014
【００５５】
【表１３】
2019510029.tif 000015
【００５６】
【表１４】
2019510029.tif 000016
【００５７】
【表１５】
2019510029.tif 000017
【００５８】
【表１６】
2019510029.tif 000018
【００５９】
得られた結果に基づいて、検討したすべてのニオソーム製剤は、ＣＴＰＡ（化粧品、トイレタリーおよびパフューム協会）およびＣＴＦＡ（化粧品、トイレタリーおよびフレグランス協会）によって定められた、許容基準に従って、すべての微生物に対する阻害活性を示し、チャレンジ試験に合格した。
接種から７日以内に、細菌の９９．９％、および、接種されたカビまたは真菌の９０％に相当する量の減少、および、その後のさらなる減少を示した。
【００６０】
実施例８−オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）の植物抽出物のニオソームの鎮静作用の試験
オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）（Ｎｉｏ−ＨＭＲ）抽出物で調製し、エマルジョン（Ｅｍｕ−ＨＭＲ）として製剤された、ニオソームの、皮膚感作の減少の測定における有効性は、比色分析プローブ（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｐｒｏｂｅ）を備えた、ＳｋｉｎＬａｂ  Ｃｏｍｂｏ装置（Ｃｏｒｔｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、デンマーク）を使用して、測定された。
【００６１】
ＳｋｉｎＬａｂ比色プローブは、「紅斑」機能（“Ｅｒｙｔｈｅｍａ”  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）のため、皮膚中のヘモグロビン含有量を、特異的に測定することができ、したがって、紅斑指数（ｅｒｙｔｈｅｍａ  ｉｎｄｅｘ）（ＥＩ）の値の正確な定量を提供する。この値が高いほど、刺激の程度が大きい。
紅斑反応を誘発する目的のために、前腕の皮膚の内側領域を、フィンチャンバー（Ｆｉｎｎ  ｃｈａｍｂｅｒｓ）（２０マイクロリットルの体積を有する小さなアルミニウムのセル）の補助で閉塞して、約１２時間、５％のラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）を含有する溶液で前処理された。
この処置の終わりに、小さなアルミニウムセルを含む閉塞性のプラスターが除去された。
１２時間後に、刺激された皮膚の領域に、２．０ｍｇ／ｃｍ２に等しい量のサンプルを適用した。
試験は、製品Ｅｍｕ−ＣＯＭをコントロールとして行い、０．１％のヒドロコルチゾン−１７−ブチレートに基づく市販の抗炎症クリームをポジティブコントロール（Ｃ＋）、そして、蒸留水をネガティブコントロール（Ｃ−）として、製品Ｅｍｕ−ＨＭＲを用いて行った。
各被験者について、各製品は、以前に感作された前腕の異なる領域に適用された。
この試験は、平均年齢３７．４歳の、２６歳から５３歳の間の歳の男女１２人の被験者（男性６名、女性６名）で行った。選択された被験者は、皮膚病理または他の性質の病理を有しておらず、いずれの薬物治療もされておらず、そして、局所使用のための製品に対して不忍容性を宣言していなかった。全ての被験者は、治療の全過程を完了した。
試験中、被験者は、
（ｉ）治療に関係する領域に製品および／または洗剤を適用しないこと、
（ｉｉ）プラスターを濡らさないこと、
（ｉｉｉ）スポーツ活動に従事しないこと、および
（ｉｖ）ＵＶＡおよびＵＶＢ放射線への暴露を避けること、
と指示された。
機器による評価は、時点ｔ０（ベースライン値）、および、製品の適用後、３０分（ｔ３０）、６０分（ｔ６０）および１２０分（ｔ１２０）で実施した。
結果を、下記表１７に纏めた。試験製品、プラセボ、およびポジテイブおよびネガティブコントロールで処置した区域における様々な観察時間で測定した１２人の被験体の紅斑指数（ＥＩ）の平均値を示す。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００６２】
【表１７】
2019510029.tif 000019
【００６３】
実施例９−皮膚吸収試験（透過試験）
この試験は、合成膜モデルを用いた、上記のニオソーム製剤との様々な接触時間後、局所使用のためのニオソーム製剤に含まれる有効成分の拡散の動力学を評価し、そのモデルに互換性がある限り、インビボでの使用条件をシミュレートすることからなる。
種々の処理時間に、必要に応じて放出され、表皮障壁を横切ることができる、ニオソーム製剤の有効成分は、フランツ細胞（Ｆｒａｎｚ  ｃｅｌｌ）の受容部において探索され、そして、ＨＰＬＣ−ＤＡＤによって定量化される。
膜貫通拡散を評価するための試験は、ＵＳＰ１７２４（２０１５）ＳｅｍｉＳｏｌｉｄＤｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓに記載された方法に従って、Ｆｒａｎｚセルモデルを用いて、およびＳｔｒａｔ−Ｍ（登録商標）膜（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して行った。
Ｓｔｒａｔ−Ｍ（登録商標）膜は、ヒト表皮における種々のタイプの化合物および製剤の拡散をシミュレートする、膜貫通拡散試験に使用される合成膜である。
この試験は、以下の活性物質について行われた。
＊レッドクローバー抽出物を有する、ニオソーム製剤に含まれるバイオカインＡ（ＣＡＳ番号：４９１−８０−５）およびホルモノネチン［ＣＡＳ番号：４８５−７２−３］、
＊オウシュウトウヒ（Ｎｏｒｗａｙ  ｓｐｒｕｃｅ）抽出物を有する、ニオソーム製剤に含まれる、７−ＨＭＲ（７−ヒドロキシマタイレシノール（７−ｈｙｄｒｏｘｙｍａｔａｉｒｅｓｉｎｏｌ））、
＊イチョウのニオソーム製剤に含まれる、ケルセチン、および、
＊ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）のニオソーム製剤中に含まれるアントシアニン。
実施例１に記載したように調製された植物抽出物を含有する各ニオソーム製剤は、高密度液体（ｄｅｎｓｅ  ｌｉｑｕｉｄｓ）用のＰ１００  Ｇｉｌｓｏｎ特殊容積式ピペット（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｐｉｐｅｔｔｅ）の手段を用いて、膜（１ｇ／ｃｍ２）に適用された。
適用前と適用後に、分析天秤を使用して、Ｆｒａｎｚセルを計量することにより、サンプルを正確に測定することができた。
ニオソーム製剤は、そのまま、Ｓｔｒａｔ−Ｍ（登録商標）膜上に適用された。
そのような抽出物を、グリセリン中３％で懸濁させ、そして、次いで、Ｓｔｒａｔ−Ｍ（登録商標）膜上に適用した。このようにして、サンプル中の活性成分間の比較を適切に実施した。
ネガティブコントロールは、リン酸緩衝液で処理された膜によって表される。
サンプルおよびコントロールを、３２℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、そして、それらを、３および／または６および／または２４および／または４８時間暴露した。
各サンプルを三重に試験した。
種々の暴露時間で、シリンジを用いて、受容液の一部をサンプルとして採取した。
このようにして集めたサンプルを、直ちに＋４℃の冷蔵庫に入れ、そして、次いで、定量的クロマトグラフィー分析のために採取した。曝露の終わりに、表皮バリアの完全性をフルオレセインで評価した。
結果を、下記の表１８〜２０に纏めた。様々な観察時間における各製品について見出された値を示す。
【００６４】
【表１８】
2019510029.tif 000020
【００６５】
ＳＴＲＡＴ  Ｍ（登録商標）膜においてインビトロで分析された、製品の中（ＲＣＬ３％グリセリンおよびＮｉｏ−ＲＣＬ）のビオカニン  Ａおよびホルモノネチンの膜貫通拡散は、両方の製品の両活性成分について、時刻Ｔ１で、分析検出可能限界（＜０．５０μｇ／ｃｍ２）より低い拡散を示した。
対照的に、時間Ｔ２において、２つの活性成分の膜貫通拡散は、両製品について検出可能であるが、ニオソーム製剤（Ｎｉｏ−ＲＣＬ）内で拡散された量は、グリセリン（ＲＣＬ３％グリセリン）に懸濁したレッドクローバー抽出物のサンプルからの拡散量に対して、活性成分の両方について有意に大きい。
【００６６】
【表１９】
2019510029.tif 000021
【００６７】
ＳＴＲＡＴ  Ｍ（登録商標）膜において、インビトロで分析された、製品の中（ＨＭＲｌｉｇｎａｎ２％グリセリンおよびＮｉｏ−ＨＭＲ）の７−ヒドロキシマタイレシノール（７−ＨＭＲ）の膜貫通拡散は、時刻Ｔ１において既に、２つの製品の非常に異なる挙動を示した。
３時間後、グリセリン（ＨＭＲｌｉｇｎａｎ  ２％  グリセリン）に懸濁したＨＭＲｌｉｇｎａｎの抽出物のサンプルは、分析可能な検出限界（＜０．２５μｇ／ｃｍ２）未満の拡散を示した一方、ニオソーム製剤（Ｎｉｏ−ＨＭＲ）の拡散は、検出可能な閾値の十分に上であり、２３．５μｇ／ｃｍ２として定量可能であった。
時間Ｔ２において、２つの有効成分の膜貫通拡散（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）が、両方の製品について検出可能である。しかし、かなり低いままである（０．６６μｇ／ｃｍ２）、サンプルのＨＭＲｌｉｇｎａｎ  ２％  グリセリンから拡散した量比べて、ニオソーム製剤（Ｎｉｏ−ＨＭＲ）中に拡散した量は、有意に大きい。
【００６８】
【表２０】
2019510029.tif 000022
【００６９】
ＳＴＲＡＴ  Ｍ（登録商標）膜に対して、インビトロで分析された、製品ＧＩＮ３％グリセリンの中のケルセチンの膜貫通拡散は、２４時間まで、分析検出限界（＜０．４０μｇ／ｃｍ２；時間Ｔ１、Ｔ２およびＴ３）よりも低い拡散を示した。そして、４８時間後（時間Ｔ４）にのみ検出可能であり、７．１μｇ／ｃｍ２として定量可能である。
好ましくは、ニオソーム製剤（Ｎｉｏ−ＧＩＮ）は、６時間（時間Ｔ１およびＴ２）までしか、分析検出限界（＜０．４０μｇ／ｃｍ２）未満の拡散を示し、一方、２４時間（Ｔ３）以降は、検出可能であり、４．９μｇ／ｃｍ２と定量可能であり、そして、４８時間後（時間Ｔ４）は、１２．４μｇ／ｃｍ２と定量可能であった。
時間Ｔ４において、２つの活性成分の膜貫通拡散は、両方の製品について検出可能であるが、有利には、グリセリン（ＧＩＮ２％グリセリン）に懸濁したイチョウ抽出物のサンプルからの拡散量に対して、ニオソーム製剤（Ｎｉｏ−ＧＩＮ）における拡散量は著しく大きい。
実質的に同様の結果が、ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）抽出物（Ｎｉｏ−ＭＲＴ）を含むニオソーム組成物について得られた。
【００７０】
実施例１０−毒性試験
実施例１に記載したようにして調製した、ニオソーム製剤の使用の安全性は、皮膚および粘膜のレベルで、刺激力（ｉｒｒｉｔａｎｔ  ｐｏｗｅｒ）を評価するためのインビトロアッセイによって、一般に、および、特に、の両方で、眼のコンパートメント（ｏｃｕｌａｒ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）において、ＭＴＴアッセイ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を用いて測定して、細胞傷害性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を決定することによって検証した。
このアッセイは、ミトコンドリアの酵素、コハク酸デヒドロゲナーゼの活性を測定する。この酵素は、生存細胞中でのみ活性であり、そして、ＭＴＴ（黄色）と反応して、青色で着色された塩を形成し、生細胞の数に比例するその光学密度（ＯＤｎ）は、波長５７０ｎｍで分光光度的（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃａｌｌｙ）に定量される、
再構成ヒト表皮のモデルおよび再構成ヒト角膜上皮のモデルにおいて試験を行った。
再構成ヒト表皮の使用に基づく、インビトロのプロトコルが、ＥＶＣＡＭ（ｈｔｔｐ：／／ｅｃｖａｍ．ｊｒｃ．ｅｃ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ）によって検証され（ｖａｌｉｄａｔｅｄ）、そして、ＯＥＣＤ／ＯＣＳＥ４３９ガイドラインにおいて、動物の使用の代替モデルとして受け入れられ、そして、以下に説明される。
培養培地（ＥＰＩ−１００−ＮＭＭ）中でのインキュベーション後、組織を、２５ｍｇのニオソーム製剤で処理した。
ポジティブコントロール（ＰＣ）は、組織を、５％のＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）溶液３０μＬで処理して調製し、そして、ネガティブコントロール（ＣＮ）は、ＤＰＢＳ（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ、  Ｅｕｒｏｃｌｏｎｅ）の３０μＬで組織を処理して調製した。
処理後、組織を、６０分間インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ２）、リン酸緩衝液で洗浄し、そして、清浄な培養培地で２４時間（３７℃、５％ＣＯ２）、再びインキュベートした後、再び新鮮な培養培地に移し、そして、さらに１８時間（３７℃、５％ＣＯ２）インキュベートした。
次に、組織を、ＭＴＴのＤＰＢＳ溶液１ｍｇ／ｍＬに移し、そして、３時間（３７℃、５％ＣＯ２）、インキュベートし、次いで、イソプロパノールに移し、そして、暗所、室温で、２時間インキュベートした。
このプロセスの終わりに、分光学的定量法の読み取りを、マイクロプレート・スペクトロフォトメーター（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）  μＱＵＡＮＴ  ＢＩＯ  ＴＥＫ−ＵＳを用いて、波長λ＝５７０ｎｍで行った。
処理したサンプルおよびコントロールについて得られた光学密度の値を、イソプロパノール単独について得られた値に対して正規化した。
結果を以下の表２１に纏め、各ニオソーム製剤で処置した組織および関連するポジティブおよびネガティブコントロールについて得られた、ＯＤｎ（ｎ＝６、２つのアリコート、３つの組織サンプル）および細胞活性（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｉｔａｌｉｔｙ）率の平均値を示す。
細胞活性の程度は、以下の式から計算した：
％細胞活性率＝［試験化合物のＯＤｎ（５７０ｎｍ）／ネガティブコントロールのＯＤｎ（５７０ｎｍ）］×１００
化合物は、細胞活性が５０％以下であれば、刺激性（Ｒ３８）に分類されなければならないが、５０％を超えると非刺激性として分類することができる。
【００７１】
【表２１】
2019510029.tif 000023
【００７２】
再構成されたヒト表皮における、インビトロ刺激性（ｉｒｒｉｔａｎｔ  ｐｏｗｅｒ）評価試験で得られた結果から、本発明のニオソーム製剤はすべて、非刺激性（細胞活性（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｉｔａｌｉｔｙ）率＞５０％以上）として分類できることを、結論付けることができる。
再構築されたヒト角膜上皮のモデルの使用に基づく、インビトロのプロトコルは、ＥＶＣＡＭ（ｈｔｔｐ：／／ｅｃｖａｍ．ｊｒｃ．ｅｃ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ）によって検証され、そして、ＯＥＣＤ  ＴＧ４９２ガイドラインによって、動物使用の代替モデルとして受け入れられ、そして、以下に記載される。
組織は、ＤＭＥＭ（ダルベッコの改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ）；ＯＣＬ−２００−ＡＳＹ）に基づく培養培地中でインキュベーション後、２０μＬのＤＰＢＳで処理し、そして、３０分間（３７℃、５％ＣＯ２）、インキュベートした。次に、５０μＬのニオソーム製剤を添加した。ポジティブコントロール（ＰＣ）は、５０μＬの酢酸メチルを組織に添加することによって調製し、そして、ネガティブコントロール（ＣＮ）は、５０μＬの滅菌脱イオン水を添加することによって調製した。
処理後、組織を３０分間インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ２）、ＤＰＢＳで洗浄し、そして、清浄な培養培地で１２分間（３７℃、５％ＣＯ２）再びインキュベートした後、次いで、新しい温かい培養培地に移し、そして、さらに２時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。
次に、組織を、ＭＴＴのＤＰＢＳ溶液１ｍｇ／ｍＬに移し、そして、３時間、インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ２）、次いで、イソプロパノールに移し、そして、２〜８℃の温度で、振とうすることなく、暗所で一晩インキュベートした。
このプロセスの最後に、マイクロプレート分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）  μＱＵＡＮＴ  ＢＩＯ  ＴＥＫ−ＵＳを使用して、波長λ＝５７０ｎｍで分光光度法（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ）の読み取りを行った。処理されたサンプルおよびコントロールについて得られた光学密度の値を、イソプロパノール単独について得られた値に対して正規化した。
結果を、以下の表２２に纏めた。各ニオソーム製剤で処置した組織および、ポジティブおよびネガティブコントロールについて得られた、ＯＤｎ（ｎ＝１２、４つのアリコート、３つの組織サンプル）および、細胞活性率（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｉｔａｌｉｔｙ）の平均値を示す。
眼刺激性試験の場合、化合物は、細胞活性率（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｉｔａｌｉｔｙ）が６０％以下であれば、刺激性（Ｒ３８）に分類されなければならないが、６０％を超えると刺激性でないと分類することができる。
【００７３】
【表２２】
2019510029.tif 000024
【００７４】
再構築されたヒト角膜上皮のモデルにおける、インビトロでの刺激力の評価のための試験で得られた結果から、本発明のニオソーム製剤はすべて、非刺激性（細胞活性率＞６０％）として分類することができる、と結論付けられる。
【００７５】
実施例１１−皮膚のしみ（ｂｌｏｔｃｈｅｓ）に対する長期の効果試験。
皮膚斑（ｓｋｉｎ  ｂｌｏｔｃｈｅｓ）の数の減少および顔の皮膚の平滑性の向上の測定における、レッドクローバー抽出物（Ｎｉｏ−ＲＣＬ）で調製され、エマルジョン（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）として製剤化されたニオソームの有効性は、ＶＩＳＩＡ  ＩＩ装置（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて評価された。
ＶＩＳＩＡ  ＩＩ（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）は、顔の皮膚の形態変化（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ）を研究するために、特別に最適化された画像分析装置である。
高解像度の写真スキャンにより、ＶＩＳＩＡ  ＩＩは、また、特殊なＵＶフィルター、偏光および蛍光の助けを借りて、分析を行っている被験者の顔の皮膚の状態に関する詳細な形態学的情報を、得ることができる。
ＶＩＳＩＡは、マルチスペクトル画像分析装置により、得られた写真情報を処理することができ、
（ｉ）皮膚の色素沈着、
（ｉｉ）サイズ、および
（ｉｉｉ）細孔の数、
（ｉｖ）細菌活性（細菌についての試験）によるポルフィリン（ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ）の存在、
（ｖ）光誘起された皮膚の斑点、
（ｖｉ）皮膚の赤み、
（ｖｉｉ）しわの数および
（ｖｉｉｉ）しわの強度、
のような、皮膚の健康および見た目に関する８つの特徴に関する、定性的および定量的データを提供する。
サンプルは、その使用特性に従って適用された。その有効性は、４週間継続する長期試験で評価した。
レッドクローバー（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）のニオソームのエマルジョンを使用する、試験のために使用される領域は、顔の左半分である。右半分は、比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）で処理された。
機器評価は、製品の適用後、Ｔ０（ベースライン値）、および、７日目（Ｔ７）および２８日目（Ｔ２８）に行った。
試験の前に、各ボランティアは、実験の前少なくとも３時間の間、顔の装飾品を適用せず、そして、顔を洗わないように指示された。
ＶＩＳＩＡのカメラのアライメント（Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）と「白色」のバランシング（ｂａｌａｎｃｉｎｇ）は、各測定セッションの前に実行された。
試験は、平均年齢３６．７歳の、２２〜５６歳の間の歳の男女（男性６名、女性９名）の１５人の被験者に対して行われた。選択した被験者は、皮膚病理または他のなんらかの性質の病理を有しておらず、そして、いずれも薬物治療を受けておらず、ＩＩ型−ＩＶ表現型を示した（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ）。全ての被験者は治療の全過程を完了した。
結果は、以下の表２３〜２５に纏めた。
試験中のエマルジョン（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）および比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）について、種々の観察時間で測定された、１５人の被験者における、ベースライン値（Ｔ０）に対する、
スコア−スポット（しみの定性的評価）、
しみの数、および、
皮膚のきめ細やかさ（ｓｃｏｒｅ−ｔｅｘｔｕｒｅ）（皮膚の滑らかさ）
の変化率の平均値を示す、
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００７６】
【表２３】
2019510029.tif 000025
【００７７】
【表２４】
2019510029.tif 000026
【００７８】
【表２５】
2019510029.tif 000027
【００７９】
Ｎｉｏ−ＲＣＬを含有するエマルジョンは、比較エマルジョンに対して、顔の肌の滑らかさおよび顔の一般的な顔のきめ細やかさを改善する上で、有意に効果的であることが示された。
Ｅｍｕ−ＲＣＬによる治療は、また、偏光による分析で示されているように、肝斑（ｍｅｌａｓｍａ）および老化そばかす（ｆｒｅｃｋｌｅｓ）の減少と関係しない、むしろ、炎症後の色素異常症（ｄｙｓｃｈｒｏｍｉａ）、および血色素増加（ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉａ）の改善に関係するしみの数の減少をもたらすように見える。
【００８０】
実施例１２−長期的な抗しわ効果の試験
レッドクローバー抽出物（Ｎｉｏ−ＲＣＬ）で調製され、エマルジョン（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）として製剤化された、ニオソームの、顔のしわの数、および目の下のしわの程度の軽減を生じさせる有効性を、実施例１１に記載したＶＩＳＩＡ  ＩＩ装置（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて評価した。
その有効性は、４週間継続する長期試験で評価された。
試験のために使用される領域は、顔の左半分である（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）。顔の右半分は、比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）で処理した。
機器評価は、製品の適用後、Ｔ０（ベースライン値）、および、７日目（Ｔ７）、１４日目（Ｔ１４）、２１日目（Ｔ２１）および２８日目（Ｔ２８）に行った。
試験の前に、各ボランティアは、実験の前、少なくとも３時間の間、顔の装飾品を適用せず、そして、顔を洗わないように指示された。
ＶＩＳＩＡのカメラのアライメントと「白色」のバランシング（ｂａｌａｎｃｉｎｇ）は、各測定セッションの前に実行された。
試験は、平均年齢３６．７歳の２６〜５６歳の間の歳の男女（男性６名、女性９名）１５人の被験者に対して行われた。選択された被験者は、皮膚病理または他のなんらかの性質の病理を有しておらず、そして、いずれの薬物治療を受けておらず、そして、ＩＩ型−ＩＶ表現型を示した（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ）。全ての被験者は治療の全過程を完了した。
結果は、以下の表２６および２７に纏めた。
試験中のエマルジョンおよび比較エマルジョンについて、種々の観察時間で測定した１５人の被験者における、（ベースライン値（ｔ０）に対する、変化パーセントの平均値しわのスコア（ｓｃｏｒｅ−ｗｒｉｎｋｌｅｓ）（しわの定性的評価）、および、しわの数を示す。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
【００８１】
【表２６】
2019510029.tif 000028
【００８２】
【表２７】
2019510029.tif 000029
【００８３】
皮膚の軽減の分析の結果は、比較エマルジョンで処置した被験者に対して、Ｅｍｕ−ＲＣＬで処置した被験者におけるＶＩＳＩＡの測定グリッドに存在する、しわの数および総容量の両方において、有意な減少を示した。
特に、しわの総容量において、５９％の減少が観察され、そして、しわの数において、２２％の減少が観察された。
【００８４】
実施例１３−微小循環および抗脱毛効果に対する活性の試験
脱毛症の軽減および／または停止における、イチョウ抽出液（Ｎｉｏ−ＧＩＮ）を調製し、エマルジョンとして製剤化されたニオソーム（Ｅｍｕ−ＧＩＮ）の有効性は、実施例１０に記載のように、ＭＴＴアッセイ、（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を用いて測定された、活性および平均活性（ａｖｅｒａｇｅ  ｖｉｔａｌｉｔｙ）を研究することによって評価された。
二重盲検試験は、１８および６５歳の間の歳の、等級２および３（ハミルトン−ノーウッド  スケール（Ｈａｍｉｌｔｏｎ−Ｎｏｒｗｏｏｄ  Ｓｃａｌｅ）に従って）の休止期脱毛症（ｔｅｌｏｇｅｎ  ｅｆｆｌｕｖｉｕｍ）によって影響を受けた男女４０人の被験者で行った。
有効性は、３ヶ月続く長期試験で評価した。
試験に使用される領域は、試験の製品（Ｅｍｕ−ＧＩＮ）で処理された、頭蓋（ｃｒａｎｉｕｍ）の左半分である。右半分は、比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）で処理した。
評価は、製品の適用後、Ｔ０（ベースライン値）、および、３０日目（Ｔ３０）、６０日目（Ｔ６０）、および９０日目（Ｔ９０）の時点で行った。
研究は次の段階に分けられた：
１．客観的な臨床評価；
２．細胞生物学の技術を用いて達成されたトリコグラフィック（ｔｒｉｃｈｏｇｒａｐｈｉｃ）分析：
ＬＥＤマイクロカメラを用いた、前縦領域（ｆｒｏｎｔｏ−ｖｅｒｔｉｃａｌ  ａｒｅａ）の微小トリコグラフィック（ｍｉｃｒｏｔｒｉｃｈｏｇｒａｐｈｉｃ）画像、および、ＭＴＴアッセイの手段による平均活性の評価を用いた、各被験者から採取した毛髪の生物学的活性のその後の評価；
３．治療の有効性および製品の好感度の百分率を調べるのに適した質問を用いたアンケートによって行う、研究の参加者による主観的評価。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
Ｎｉｏ−ＧＩＮを含有するエマルジョンは、比較エマルジョンと比較して、毛髪の客観的および主観的評価を改善する点で、有意に有効であることが判明した。
さらに、トリコグラフィック（ｔｒｉｃｈｏｇｒａｐｈｉｃ）分析は、集められた毛髪における細胞の活力の改善を示した。
【００８５】
実施例１４−目の下のくま（ｄａｒｋ  ｒｉｎｇｓ）、および腫れ（ｂａｇｓ）に対する長期の効果試験
エマルジョン（Ｅｍｕ−ＭＲＴ）として製剤化された、ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）抽出液（Ｎｉｏ−ＭＲＴ）を用いて調製されたニオソームの、充血除去（ｄｅｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ）および皮下の腫れの容量の減少、ならびに、くまのマスキングおよび低減における有効性は、客観的および機器による臨床評価によって評価された。
Ｖｉｓｉｏ−３Ｄ  ＤｅｒｍａＴＯＰ  Ｂｌｕｅ技術（Ｅｏｔｅｃｈ、ＳＡ）により、皮下の腫れの減少を分析した。これは、ＯｐｔｏＣＡＴソフトウェアと組み合されて、結果の取得、視覚化および分析に使用される、異なる分析時間での、同じ皮膚領域の正確な測定を可能にする。
このプログラムは、８０×７５ｍｍの領域における、軽減（ｒｅｌｉｅｆｓ）の体積およびそれらの変化を定量化し、表在的な組織形態変化（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｈｉｓｔｏ−ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ）に関連するパラメータについて、データを提供することができる。
くまの減少を、Ｃｈｒｏｍａ  Ｍｅｔｅｒ  ＣＲ−２００（ミノルタ）を使用し、および反射Ｌ＊ａ＊ｂ（ＣＩＥＬａｂという名称でも知られている）のコンポーネントを利用した、反射吸光光度分析方法（ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）により、定量化した。
ＣＩＥＬａｂは、圧縮された非線形色空間ＣＩＥ  ＸＹＺの座標（ｔｈｅ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄ  ｎｏｎ−ｌｉｎｅａｒ  ｃｏｌｏｕｒ  ｓｐａｃｅ  ＣＩＥ  ＸＹＺ）に基づく色対立空間（ｃｏｌｏｕｒ−ｏｐｐｏｎｅｎｔ  ｓｐａｃｅ）であり、色は、３つの値によって識別される：
輝度Ｌは、百分率（黒色は０、白色は１００）で表され、そして、
色対立寸法（ｃｏｌｏｕｒ−ｏｐｐｏｎｅｎｔ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ）ａおよびｂ、
緑色から赤色、および青色から黄色のそれぞれが、−１２０から＋１２０の値を有する色範囲。
この一重盲検試験は、皮下の腫れおよび／または、くまを示した、２５歳から６５歳の２０名の被験者に対して行われた。
ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）抽出液（Ｅｍｕ−ＭＲＴ）のニオソームを含むエマルジョンを、１日２回、朝および夕方に適用した。その有効性は、３０日間続く長期試験で評価された。
試験に使用した領域は、顔の左眼周囲領域であり、ビルベリー（ｂｉｌｂｅｒｒｙ）抽出液のニオソームのエマルジョン（Ｅｍｕ−ＭＲＴ）で処理された。右は、比較エマルジョン（Ｅｍｕ−ＣＯＭ）で処理された。
評価は、製品の適用後、Ｔ０（ベースライン値）および１５日目（Ｔ１５）および３０日目（Ｔ３０）に行った。
研究は次の段階に分けられた：
１．くまおよび皮下腫れの減少の効果の客観的な臨床評価；
２．皮下腫れの減少の機器的評価；
３．くまの減少の機器的評価。
全てのデータを、反復測定、その後のＴｕｋｅｙ検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ）のために、分散分析（一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））に供した。
Ｎｉｏ−ＭＲＴを含むエマルジョンは、比較エマルジョンに対し、皮下腫れの容積の充血除去（ｄｅｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ）および減少において、および、くまのマスキングおよび低減において、有意に有効であることが判明した。
【００８６】
実施例１５−粘膜の乾燥に対する効果試験
膣粘膜の乾燥状態の低減の提供において、エマルジョンとして製剤されたレッドクローバー抽出液を用いて調製したニオソーム（Ｅｍｕ−ＲＣＬ）の有効性を、４０人の被験者についての観察臨床試験（ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ）において評価し、そして、９０日間（Ｔ９０）持続する長期間で評価した。
膣粘膜状態の改善の指標と考えられるパラメータは：
−視覚的アナログスケール（ｖｉｓｕａｌ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｓｃａｌｅ）（ＶＡＳ−スケールは、０の痛みがないから、１０＝最大痛みであり、０．５に等しい中間値を有する）を用いて評価された、外陰膣の（Ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌ）灼熱感および乾燥。
−マリノフスケール（０＝痛みなし、１＝不快感を伴う痛み、性交渉頻度を妨げない痛み；２＝性交頻度の妨害を伴う疼痛；３＝痛みが性交を妨げる）によって評価される、性交疼痛。（Ｍａｒｉｎｏｆｆ  ＳＣ、Ｔｕｒｎｅｒ  ＭＬＣ、外陰部前庭炎症候群（Ｖｕｌｖａｒ  ｖｅｓｔｉｂｕｌｉｔｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｃｌｉｎ  １９９２年；１０：４３５−４４）。
有効性の分析は、治療を開始した全母集団に対して（ＩＴＴ分析−治療意図）で行った。
患者の一般的な特徴および試験に入る際の臨床的な症候は、平均値、中央値および分散の相対的測定値またはパーセンテージを用いて記載した。
これらの特性は、必要に応じて、ｔ検定またはχ二乗検定を用いて比較した。
試験パラメーターの頻度を比較し、そして、統計的有意性について、両側χ二乗検定（ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ  ｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅｄ  ｔｅｓｔ）を用いて検定し、そして、０．０５に等しい有意水準を考慮した。
疼痛スケール（ＶＡＳ）および性交疼痛（ｄｙｓｐａｒｅｕｎｉａ）の結果を、以下の表２８に示す。
【００８７】
【表２８】
2019510029.tif 000030
【００８８】
Ｎｉｏ−ＲＣＬを含有するエマルジョンは、膣の乾燥の症候学（ｓｙｍｐｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ）を改善するのに有意に有効であることが判明した。
【図１】
2019510029.tif 000031
【国際調査報告】
2019510029.tif 000032
2019510029.tif 000033
2019510029.tif 000034
2019510029.tif 000035