(57)【要約】本開示の実施態様は、ヒトパピローマウイルス感染およびそれに関連する疾患の免疫療法のための方法および組成物に関する。具体的な実施態様において、方法は、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８の１種またはそれより多くの抗原を標的化する免疫細胞の生産に関し、ＩＬ−７およびＩＬ−１５を採用するが、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２を採用しない刺激工程を用いた方法を含む。他の具体的な実施態様は、特定の細胞、例えば共刺激細胞および特定の抗原提示細胞の存在下で刺激を利用する。【選択図】図１Ａ、Ｂ
2019529417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞を刺激するための方法であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【請求項２】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含み、
該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【請求項３】
前記Ｔ細胞が、先行のＴ細胞の刺激から、任意選択でＰＢＭＣの集団中から得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記先行のＴ細胞の刺激が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞の刺激の前に、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原提示細胞が、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｔ細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団中に存在するか、またはそれから得られるかもしくは単離される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記集団中の前記ＰＢＭＣが、非接着性のＰＢＭＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を刺激するための方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【請求項１０】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【請求項１１】
前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；および
（ｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含む、上記方法。
【請求項１４】
工程（ｉｉ）の前に、（ｉ）から得られたＴ細胞が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、再刺激されてもよい、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）またはＢ−ブラスト（ＢＢ）である、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および
（ｉｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程
を含む、上記方法。
【請求項１９】
（ｉ）および（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ｉｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞またはそれらの組合せである、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＰＶが、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ペプチドが、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＰＶ関連疾患が、がんであり、前記ペプチドが、Ｅ６およびＥ７の一方または両方に対応する配列を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ペプチドが、
ａ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質、ならびに／または
ｂ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１６のＥ７タンパク質
に対応する配列を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記１種またはそれより多くのペプチドが、少なくとも、または最大で、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸長さを有するペプチドを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記１種またはそれより多くのペプチドが、１５個のアミノ酸長さを有するのペプチドを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
１種またはそれより多くのペプチドが、ライブラリーを形成し、該ライブラリー中のペプチドが、配列において、他のペプチドと１１個のアミノ酸がオーバーラップする、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶに曝露されたことがあるかまたはＨＰＶ関連疾患を有する個体に提供される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＰＶ関連疾患が、新生物を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８またはその両方に曝露されたことがあるか、またはＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有する個体に提供される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患が、新生物を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記新生物が、がんである、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記がんが、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、喉頭乳頭腫症、喉頭がん、頭頸部がん、またはそれらの部位のいずれかの異形成である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記個体が、追加のがん治療をこれまでに受けていた、受けている、または受けると予想される、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記追加のがん治療が、外科手術、放射線、ホルモン療法、化学療法、免疫療法、またはそれらの組合せである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記個体が、ＨＰＶ関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記個体が、ＨＰＶ１６関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記個体が、ＨＰＶ１８関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
養子細胞免疫療法の方法で使用するためのＴ細胞であって、該Ｔ細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物であり、該養子細胞免疫療法の方法は、該Ｔ細胞を該対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項４１】
Ｔ細胞を対象に投与することを含む、養子細胞免疫療法の方法に使用するための医薬品の製造におけるＴ細胞の使用であって、該Ｔ細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物である、上記使用。
【請求項４２】
医薬組成物、医薬またはワクチンを調製する方法であって、請求項１〜３９のいずれか一項に従って、末梢血液またはＴ細胞を刺激すること、または治療的Ｔ細胞を生産すること、および得られた細胞賦形剤を、医薬的に許容される担体、アジュバント、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府によって支援された調査または開発に関する陳述
[0001]本発明は、国立癌研究所（National Cancer Institute）によって付与されたＰ５０ＣＡ０９７００７およびＰＯ１ＣＡ９４２３７に基づく政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
技術分野
[0002]本発明の開示は、少なくとも免疫学、細胞生物学、分子生物学、およびがんの医薬などの医薬の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
[0003]ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）は、皮膚または粘膜のケラチノサイトで増殖性感染を確立するＤＮＡウイルスである。１７０種を超えるＨＰＶがあり、そのＨＰＶ型の一部は発癌性であり、例えば子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、陰茎上皮内腫瘍（ＰＩＮ）、および／または肛門上皮内腫瘍（ＡＩＮ）などの生殖器の腫瘍形成に発展する可能性がある高リスクの性感染型などが挙げられる。ＨＰＶによって誘発されるがんは、ウイルス配列が宿主細胞の細胞ＤＮＡに統合される場合に発生する。ＨＰＶ「初期」遺伝子の一部、例えばＥ６およびＥ７は、腫瘍増殖と悪性転換を促進する腫瘍遺伝子として作用する。
【０００４】
[0004]Ramosら（J Immunother 2013;36:66〜76）は、末梢血単核細胞を刺激してＨＰＶ１６のＥ６およびＥ７に特異的なＴ細胞を生成するための方法を記載している。簡単に言えば、この方法は、サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２およびＩＬ−１５の組合せ含有または非含有のＣＴＬ培地中で細胞を培養する、樹状細胞での末梢血単核細胞の刺激、共培養物にＩＬ−２を補充する第２の刺激、およびＩＬ−１５の存在下におけるペプミックス（pepmix）が取り込まれたアクセサリー抗原提示細胞（例えば、Ｂ−ブラスト（B-blast））での週１回の刺激を含む。この参考文献は、検出可能なＴ細胞応答のために、サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２およびＩＬ−１５の組合せが、患者サンプル由来のＨＰＶ特異的Ｔ細胞の増殖に必要であることを教示している。
【発明の概要】
【０００５】
[0005]本発明の開示は、ＨＰＶ関連疾患、少なくとも例えばＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８に関連する疾患を処置するという当業界における長年の必要性を軽減することを提供する。
【０００６】
簡潔な概要
[0006]本発明の開示は、特定の標的を免疫原性的に認識するように改変された免疫系細胞に関する方法および組成物に向けられる。一部の実施態様において、本発明の開示は、個体において免疫応答を惹起する生物学的部分を標的化する免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ、細胞傷害性Ｔ細胞とも称される）など）の開発に関する。具体的な実施態様において、本発明の開示は、ＨＰＶ疾患関連抗原などのＨＰＶ抗原を標的化する細胞傷害性Ｔ細胞の開発に関する。一部のケースにおいて、細胞傷害性Ｔ細胞の混合物が生産され、この混合物は、１種より多くのＨＰＶ抗原を標的化し、例えば、一部のケースにおいて１種より多くのＨＰＶ型の１種より多くの抗原を標的化する。
【０００７】
[0007]本開示の実施態様は、個体に療法を提供するための方法および組成物に関する。「ＨＰＶ関連疾患」は、ＨＰＶ感染によって引き起こされるかまたは悪化する疾患、ＨＰＶ感染がリスク因子である疾患および／またはＨＰＶ感染が、疾患の発病、発達、進行または重症度と正の関連を有する疾患であり得る。ＨＰＶ関連疾患は、本発明の方法および組成物が治療作用（例えば、疾患の発達／進行の抑制、疾患の発病の遅延／予防、疾患の症状の重症度の低減、疾患の症状の回復、および／または生存率の増加）をもたらす疾患であり得る。当業者にとって、本発明の方法および組成物の治療の有用性は、ＨＰＶ感染細胞数の低減によって利益を得ると予想される本質的に全ての疾患／状態に及ぶことは明らかである。具体的な実施態様において、本開示は、ＨＰＶ関連、例えば、ＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連の医学的状態（がんなど）を標的化することができ、そのための療法である、養子細胞免疫療法のための方法および組成物に関する。
【０００８】
[0008]ある特定の形態において、本発明の開示は、ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８由来の抗原を標的化する複数のＴ細胞の開発に関する。本発明の開示は、ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８抗原に対する特異性を有するＴ細胞株を生成するための方法への重要な非自明的な改善を提供する。
【０００９】
[0009]本開示の一部の実施態様において、個体は、本開示の方法および／または組成物が必要な個体である。ある特定の実施態様において、個体は、ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に曝露されたことがあるか（その存在は、個体がわかっていてもよいし、またはそうでなくてもよい）、または個体は、ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に曝露された疑いがある、もしくはそれらに曝露されるリスクがある。ある特定の実施態様において、個体は、ＨＰＶ関連疾患、例えばＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患、例えばがんなどを有する、またはそれらを有する疑いがある、またはそれらを有するリスクがある。
【００１０】
[0010]本方法の一部の具体的な実施態様において、特定のＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８抗原は、特定の抗原の一部または全てにわたる１つまたはそれより多くのペプチドの形態で抗原提示細胞（ＡＰＣ）に提示される。抗原性ペプチドは、ペプミックスとも称されるペプチド混合物のライブラリーの形態で抗原提示細胞に提供することができる。本開示の特定の形態において、ＡＰＣへの曝露のための様々なペプミックスのプールがある。抗原を発現するＡＰＣは、特定のＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞の刺激が生じる特定の条件下で末梢血Ｔ細胞に曝露されてもよい。
【００１１】
[0011]本発明の開示の一部の形態および実施態様は、ＨＰＶ特異的Ｔ細胞の生成および／または拡大培養に関する。
[0012]第１の形態において、本発明の開示は、末梢血液細胞、好ましくは末梢血Ｔ細胞を刺激するための方法であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、少なくとも一部のケースにおいてＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法を提供する。所与のサイトカインの「存在下」で刺激／培養が実行される本明細書で開示される様々な形態によれば、関連サイトカイン（例えば組換えおよび／または外因性サイトカイン）が、刺激／培養に添加されてもよい。所与のサイトカインの「非存在下」で刺激／培養が実行される場合、関連サイトカイン（例えば組換えおよび／または外因性サイトカイン）が、刺激／培養に添加されなかったと予想される。
【００１２】
[0013]一部の実施態様において、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、インターロイキンＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下で、少なくとも一部のケースにおいて、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法が提供される。
【００１３】
[0014]一部の実施態様において、刺激される末梢血Ｔ細胞は、先行の末梢血液細胞の刺激から得られる。先行の刺激は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、少なくとも一部のケースにおいてＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含んでいてもよい。
【００１４】
[0015]したがって、末梢血Ｔ細胞を刺激する前に、本方法は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、少なくとも一部のケースにおいてＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含んでいてもよい。
【００１５】
[0016]一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、ＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質；ＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質；またはＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質およびＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質の両方の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む。一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、タンパク質Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む。一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２ペプチドを包含するペプチドのライブラリーであってもよい。
【００１６】
[0017]一部の実施態様において、本方法は、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞などの免疫細胞を生産することができる。一部の実施態様において、本方法は、ＨＰＶまたは少なくとも１つのＨＰＶ抗原に特異的な末梢血Ｔ細胞中に存在するＴ細胞の集団を拡大培養することができる。本開示の方法によって生産できるＴ細胞以外の免疫細胞としては、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞が挙げられる。
【００１７】
[0018]一部の実施態様において、抗原提示細胞は、例えば、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）、またはＰＢＭＣである。
[0019]一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、少なくともＩＬ−２の非存在下で行われる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、少なくともＩＬ−４の非存在下で行われる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、少なくともＩＬ−６の非存在下で行われる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、少なくともＩＬ−１２の非存在下で行われる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、少なくともＩＬ−２１の非存在下で行われる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における末梢血Ｔ細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下で行われる。
【００１８】
[0020]一部の特定の実施態様において、本発明の第１の形態の方法における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下で行われる。
[0021]一部の実施態様において、末梢血Ｔ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団中に存在していてもよいし、またはそれから得られるかまたは単離される。集団中のＰＢＭＣは、非接着性のＰＢＭＣであってもよい。抗原提示細胞は、例えば、活性化Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣであってもよい。
【００１９】
[0022]第２の形態において、本発明の開示は、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を刺激するための方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択で共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法を提供する。
【００２０】
[0023]一部の実施態様において、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、インターロイキンＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下で、任意選択で共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、１つまたはそれより多くのＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法提供される。
【００２１】
[0024]一部の実施態様において、抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである。特定の実施態様において、抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞である。
【００２２】
[0025]一部の実施態様において、共刺激細胞は、ＣＤ８０＋細胞、ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ８３＋細胞、４−１ＢＢＬ＋細胞、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つまたはそれより多くの細胞型である。共刺激細胞は、ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋／ＣＤ８３＋／４−１ＢＢＬ＋細胞であってもよい。
【００２３】
[0026]一部の実施態様において、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞の刺激は、第１の刺激工程ではない。刺激される細胞であるＴ細胞は、例えば本発明の開示の第１の形態の方法を使用する先行の刺激の生成物であってもよい。
【００２４】
[0027]一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、ＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質；ＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質；またはＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質およびＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む。一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、タンパク質Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む。一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２ペプチドなどのペプチドのライブラリーであってもよい。
【００２５】
[0028]一部の実施態様において、本方法は、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を生産することができる。一部の実施態様において、本方法は、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞の集団を拡大培養することができる。
【００２６】
[0029]特定の実施態様において、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞の刺激は、ＩＬ−７、ＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の１つまたはそれより多くのタイプの存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含む。
【００２７】
[0030]一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−４の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−６の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−７の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−１２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−２１の非存在下でなされる。一部の実施態様において、本発明の第１の形態の方法におけるＴ細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
【００２８】
[0031]本発明の開示の第１および第２の形態に係る方法は、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産すること方法であり得る。細胞の刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産することができる。
【００２９】
[0032]第３の形態において、第１および第２の形態の方法を組み合わせて、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法を提供することができ、ここで上記方法は、
末梢血液細胞、好ましくは末梢血Ｔ細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択で共刺激細胞の１つまたはそれより多くのタイプの存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含む。
【００３０】
[0033]一部の実施態様において、工程（ｉｉ）の前に、（ｉ）から得られたＴ細胞が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、再刺激されてもよい。このような再刺激は、必要に応じて１、２、３、４、５ラウンドまたはそれより多く行ってもよい。
【００３１】
[0034]一部の実施態様において、（ｉ）で使用される抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである。一部の実施態様において、（ｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである。一部の実施態様において、（ｉ）で使用される抗原提示細胞は、（ｉｉ）で使用される抗原提示細胞と異なるが、これらは、特定のケースにおいて同じであってもよい。特定の実施態様において、（ｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞である。
【００３２】
[0035]一部の実施態様において、共刺激細胞は、ＣＤ８０＋細胞、ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ８３＋細胞、４−１ＢＢＬ＋細胞、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つまたはそれより多くの細胞型である。共刺激細胞は、ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋／ＣＤ８３＋／４−１ＢＢＬ＋細胞であってもよい。
【００３３】
[0036]一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−４の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−６の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−１２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−２１の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
【００３４】
[0037]一部の好ましい実施態様において、工程（ｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
[0038]一部の実施態様において工程（ｉｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
【００３５】
[0039]したがって、一部の実施態様において、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および
（ｉｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択で共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程
を含む、上記方法が提供される。
【００３６】
[0040]一部の実施態様において、（ｉ）および（ｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである。一部の実施態様において、（ｉｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである。一部の実施態様において、（ｉｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、（ｉ）および／または（ｉｉ）で使用される抗原提示細胞と異なる。好ましい実施態様において、（ｉｉｉ）で使用される抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞である。
【００３７】
[0041]好ましい実施態様において、（ｉｉｉ）における刺激は、共刺激細胞の存在下でなされる。一部の実施態様において、共刺激細胞は、ＣＤ８０＋細胞、ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ８３＋細胞、４−１ＢＢＬ＋細胞、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つまたはそれより多くの細胞型である。共刺激細胞は、ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋／ＣＤ８３＋／４−１ＢＢＬ＋細胞であってもよい。
【００３８】
[0042]一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−４の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−６の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−１２の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−２１の非存在下でなされる。一部の実施態様において、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
【００３９】
[0043]一部の実施態様において、工程（ｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。一部の他の実施態様において、工程（ｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の存在下でなされる。
【００４０】
[0044]一部の特定の実施態様において、工程（ｉｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。一部の特定の実施態様において、工程（ｉｉｉ）における細胞の刺激は、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下でなされる。
【００４１】
[0045]一部の特定の実施態様において、本発明の開示の方法は、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に特異的なＴ細胞を生産するための方法である。一部の特定の実施態様において、本発明の方法は、ＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患に特異的なＴ細胞を生産するための方法である。
【００４２】
[0046]一部の実施態様において、末梢血Ｔ細胞は、ＨＰＶ；ＨＰＶ１６もしくはＨＰＶ１８；またはＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の両方の感染がわかっているかまたはその疑いがある個体から得てもよい。
【００４３】
[0047]一部の実施態様において、抗原提示細胞は、ＨＰＶ；ＨＰＶ１６もしくはＨＰＶ１８；またはＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の両方の感染がわかっているかまたはその疑いがある個体から得てもよい。
【００４４】
[0048]一部の実施態様において、本方法は、ペプチドのライブラリーにこれまでに曝露された活性化Ｂ細胞に本方法によって生産されたＴ細胞を晒すことなく行ってもよい。
[0049]一部の実施態様において、抗原提示細胞は、得られた治療的Ｔ細胞での処置が意図されている個体にとって、自己または同種であってもよい。
【００４５】
[0050]一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、ＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質；ＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質；またはＨＰＶ１６の１つもしくはそれより多くのタンパク質およびＨＰＶ１８の１つもしくはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む。一部の実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、またはＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８由来の、タンパク質Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む。
【００４６】
[0051]本発明の開示の実施態様において、ペプチドは、ＨＰＶタンパク質Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含んでいてもよい。一部の実施態様において、ペプチドは、例えばＨＰＶに感染した細胞における、プロウイルスの組み込み後に発現される１つまたはそれより多くのＨＰＶタンパク質（例えばＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６および／またはＥ７）に対応する配列を含んでいてもよい。一部の実施態様において、ペプチドは、１つまたはそれより多くの形質転換ＨＰＶタンパク質（例えばＥ６、および／またはＥ７）に対応する配列を含んでいてもよい。ペプチドは、前記ＨＰＶタンパク質中に存在する隣接したアミノ酸配列に対応していてもよい。ペプチドは、少なくとも、または最大で、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸長さ、または１５個のアミノ酸長さを有していてもよい。ペプチドを収集したものは、ライブラリーを形成してもよいし、該ライブラリー中のペプチドは、配列において、他のペプチドとあらゆる好適な量で、例えば３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個のアミノ酸がオーバーラップしていてもい。ペプチドは、ａ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質、ならびに／またはｂ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１６のＥ７タンパク質に対応する配列を含んでいてもよい。
【００４７】
[0052]本発明の開示の実施態様において、ＨＰＶは、ＨＰＶ１６もしくはＨＰＶ１８、またはその両方であってもよい。ＨＰＶ関連疾患の処置に関する実施態様において、疾患は、がんであってもよく、ペプチドは、Ｅ６およびＥ７の一方または両方に対応する配列を含んでいてもよい。ＨＰＶ関連疾患が前がん性の病変である場合、ペプチドは、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２のうち１種、一部、または全てに対応する配列を含んでいてもよい。
【００４８】
[0053]本発明の開示の方法によって生産されたＴ細胞は、単離および／または精製されていてもよく、例えば他の細胞から単離／精製されていてもよい。
[0054]一部の実施態様において、本発明の開示の方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶに曝露されたことがあるかまたはＨＰＶ関連疾患を有する個体に提供される。関連する形態において、本発明の開示の方法によって生産されたＴ細胞は、ＨＰＶ関連疾患の処置で使用するために提供される。別の関連する形態において、本発明の開示の方法によって生産されたＴ細胞の使用は、ＨＰＶ関連疾患の処置に使用するための医薬品の製造で使用するために提供される。
【００４９】
[0055]本発明の一形態において、養子細胞免疫療法の方法で使用するためのＴ細胞であって、該Ｔ細胞は、本明細書に記載される末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物であり、養子細胞免疫療法の方法は、該Ｔ細胞を該対象に投与することを含む、上記Ｔ細胞が提供される。
【００５０】
[0056]本発明の一形態において、Ｔ細胞を対象に投与することを含む、養子細胞免疫療法の方法に使用するための医薬品の製造におけるＴ細胞の使用であって、該Ｔ細胞は、本明細書に記載される末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物である、上記使用が提供される。
【００５１】
[0057]本発明の一形態において、医薬組成物、医薬またはワクチンを調製する方法であって、本明細書に記載される方法に従って、末梢血液またはＴ細胞を刺激すること、または本明細書に記載される方法に従って、治療的Ｔ細胞を生産すること、および得られた細胞を医薬的に許容される担体、アジュバント、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、上記方法が提供される。
【００５２】
[0058]処置しようとする疾患は、新生物であってもよい。新生物は、がんであってもよい。がんは、ＨＰＶ陽性がん、例えばＨＰＶ１６陽性がんおよび／またはＨＰＶ１８陽性がんであってもよい。
【００５３】
[0059]処置しようとする個体は、ヒトであってもよい。個体は、患者であってもよい。個体は、ＨＰＶ、例えばＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、またはＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の両方に曝露されたことがあるか、またはＨＰＶ、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有する。ＨＰＶ−、ＨＰＶ１６−および／またはＨＰＶ１８関連疾患は、新生物であってもよい。新生物は、がんであってもよい。
【００５４】
[0060]がんは、あらゆる種類のがんであってもよい。一部の実施態様において、がんは、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、または口腔咽頭がんである。一部の実施態様において、がんは、ＨＰＶ関連がんであってもよい。「ＨＰＶ関連がん」は、ＨＰＶ感染によって引き起こされるかまたは悪化するがん、ＨＰＶ感染がリスク因子であるがん、および／またはＰＶ感染が、発病、発達、進行、重症度または転移と正の関連を有するがんであり得る。ＨＰＶ関連がんは、本発明の方法および組成物が治療作用（例えば、がんの発達／進行の抑制、がんの発病の遅延／予防、転移の低減／遅延／予防、がんの症状の重症度の低減、がん細胞数の低減、腫瘍サイズの低減、および／または生存率の増加）をもたらすがんであり得る。一部の実施態様において、がんは、ＨＰＶ関連の癌腫、ＨＰＶ陽性口腔咽頭の癌腫、ＨＰＶ陽性子宮頸癌、ＨＰＶ陽性肛門癌、ＨＰＶ陽性外陰の癌腫、上咽頭癌、ＨＰＶ陽性陰茎癌、あらゆる部位のＨＰＶ陽性の異形成、または喉頭乳頭腫症である。
【００５５】
[0061]個体または対象は、追加のがん治療をこれまでに受けていてもよいし、現在受けていてもよいし、または受ける予定があってもよい。追加のがん治療は、外科手術、放射線、ホルモン療法、化学療法、免疫療法、またはそれらの組合せであってもよい。
【００５６】
[0062]個体または対象は、ＨＰＶ関連がんまたはＨＰＶ陽性がんを有すると決定されてもよい。個体は、ＨＰＶ１６関連がんまたはＨＰＶ１６陽性がんを有すると決定されてもよい。個体は、ＨＰＶ１８関連がんまたはＨＰＶ１８陽性がんを有すると決定されてもよい。個体または対象は、あらゆる動物またはヒトであってもよい。個体または対象は、好ましくは哺乳類であり、より好ましくはヒトである。個体または対象は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。個体または対象は、雄（男性）または雌（女性）であってもよい。個体または対象は、患者であってもよい。
【００５７】
[0063]細胞刺激の工程を含む本発明の開示に係る方法は、インビトロまたはエクスビボで実行することができる。用語「インビトロ」は、実験室条件で、または培養中に、生物学的な材料、物質、細胞および／または組織を用いた研究を包含することが意図される。「エクスビボ」は、生物の外側に、例えばヒトまたは動物の体の外側に存在するかまたは配置されるものを指し、ここで外側とは、組織（例えば臓器全体）または生物から採取した細胞などであり得る。
【００５８】
[0064]一実施態様において、末梢血液細胞を刺激するための方法であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法がある。末梢血Ｔ細胞は、先行の末梢血液細胞の刺激から得てもよく、例えばここで、先行の末梢血液細胞の刺激は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む。具体的なケースにおいて、末梢血Ｔ細胞を刺激する前に、本方法は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含む。
【００５９】
[0065]一実施態様において、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法がある。末梢血Ｔ細胞は、先行の末梢血液細胞の刺激から得てもよく、例えばここで、先行の末梢血液細胞の刺激は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む工程を含む。具体的なケースにおいて、末梢血Ｔ細胞を刺激する前に、本方法は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含む。
【００６０】
[0066]本開示に包含される方法の実施態様において、抗原提示細胞は、活性化Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである。末梢血Ｔ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団中に存在していてもよいし、またはそれから得られるかまたは単離され、少なくとも一部のケースにおいて、集団中のＰＢＭＣは、非接着性のＰＢＭＣであってもよい。共刺激細胞は、採用される場合、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せであってもよい。
【００６１】
[0067]特定の実施態様において、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を刺激するための方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法がある。
【００６２】
[0068]特定の実施態様において、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法がある。
【００６３】
[0069]一実施態様において、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；および（ｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法がある。具体的な実施態様において、工程（ｉｉ）の前に、（ｉ）から得られたＴ細胞が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、再刺激されてもよい。
【００６４】
[0070]一実施態様において、ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および（ｉｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程を含む上記方法が提供される。
【００６５】
[0071]本開示のあらゆる方法において、ＨＰＶは、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８であってもよい。本開示のあらゆる方法において、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含むペプチドを利用することができる。ペプチドは、ａ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質、ならびに／またはｂ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１６のＥ７タンパク質に対応する配列を含んでいてもよい。一部のケースにおいて、本明細書に記載される細胞の有効量が提供される個体は、ＨＰＶ関連疾患、例えばがんを有し、ペプチドは、Ｅ６およびＥ７の一方または両方に対応する配列を含む。具体的な形態において、１種またはそれより多くのペプチドは、少なくとも、または最大で、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸長さを有するペプチドを含み、特に、１種またはそれより多くのペプチドは、１５個のアミノ酸長さを有するペプチドを含む。具体的な実施態様において、１種またはそれより多くのペプチドは、ライブラリーを形成し、該ライブラリー中のペプチドは、配列において、他のペプチドと１１個のアミノ酸がオーバーラップする。
【００６６】
[0072]特定の実施態様において、本方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量は、ＨＰＶに曝露されたことがあるかまたはＨＰＶ関連疾患を有する個体に提供される。具体的な実施態様において、ＨＰＶ関連疾患は、新生物を含む。
【００６７】
[0073]本開示の方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量は、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８またはその両方に曝露されたことがある、または新生物、例えばがんなどのＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有する個体に提供することができる。
【００６８】
[0074]特定の実施態様において、がんは、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、喉頭乳頭腫症、喉頭がん、頭頸部がん、またはそれらの部位のいずれかの異形成である。
【００６９】
[0075]一部のケースにおいて、本開示の細胞を受けたおよび／または受けると予想される個体はまた、追加のがん治療、例えば外科手術、放射線、ホルモン療法、化学療法、免疫療法、またはそれらの組合せも、受けていた、現在受けている、または受けると予想される。
【００７０】
[0076]特定の形態において、本開示の細胞を受けたおよび／または受けると予想される個体は、ＨＰＶ関連がん、例えばＨＰＶ１６関連がんまたはＨＰＶ１８関連がんを有すると決定される。
【００７１】
[0077]以下の番号付けされた段落は、本明細書で開示される本発明の技術的特徴の広範な組合せの記述を含有する。
１．末梢血液細胞を刺激するための方法であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【００７２】
２．ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含み、
該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【００７３】
３．前記末梢血Ｔ細胞が、先行の末梢血液細胞の刺激から得られる、段落１または２に記載の方法。
４．前記先行の末梢血液細胞の刺激が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む、段落３に記載の方法。
【００７４】
５．前記末梢血Ｔ細胞を刺激する前に、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含む、段落１または２に記載の方法。
【００７５】
６．抗原提示細胞が、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、段落１〜７のいずれか一項に記載の方法。
７．前記末梢血Ｔ細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団中に存在するか、またはそれから得られるかもしくは単離される、段落１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【００７６】
８．集団中のＰＢＭＣが、非接着性のＰＢＭＣである、段落７に記載の方法。
９．ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を刺激するための方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【００７７】
１０．ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【００７８】
１１．前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、段落９または１０に記載の方法。
１２．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、段落９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【００７９】
１３．ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；および
（ｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含む、上記方法。
【００８０】
１４．工程（ｉｉ）の前に、（ｉ）から得られたＴ細胞が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、再刺激されてもよい、段落１３に記載の方法。
【００８１】
１５．（ｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである、段落１３または１４に記載の方法。
１６．（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）またはＢ−ブラスト（ＢＢ）である、段落１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【００８２】
１７．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、段落１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【００８３】
１８．ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および
（ｉｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程
を含む、上記方法。
【００８４】
１９．（ｉ）および（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、段落１８に記載の方法。
２０．（ｉｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、段落１８または１９に記載の方法。
【００８５】
２１．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞またはそれらの組合せである、段落１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【００８６】
２２．前記ＨＰＶが、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８である、段落１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
２３．前記ペプチドが、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む、段落１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【００８７】
２４．前記ＨＰＶ関連疾患が、がんであり、前記ペプチドが、Ｅ６およびＥ７の一方または両方に対応する配列を含む、段落１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
２５．前記ペプチドが、
ａ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質、ならびに／または
ｂ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１６のＥ７タンパク質
に対応する配列を含む、段落１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【００８８】
２６．前記１種またはそれより多くのペプチドが、少なくとも、または最大で、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸長さを有するペプチドを含む、段落１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【００８９】
２７．前記１種またはそれより多くのペプチドが、１５個のアミノ酸長さを有するのペプチドを含む、段落１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
２８．１種またはそれより多くのペプチドが、ライブラリーを形成し、該ライブラリー中のペプチドが、配列において、他のペプチドと１１個のアミノ酸がオーバーラップする、段落１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【００９０】
２９．前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶに曝露されたことがあるかまたはＨＰＶ関連疾患を有する個体に提供される、段落１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【００９１】
３０．前記ＨＰＶ関連疾患が、新生物を含む、段落２９に記載の方法。
３１．前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８またはその両方に曝露されたことがあるか、またはＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有する個体に提供される、段落１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【００９２】
３２．前記ＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患が、新生物を含む、段落３１に記載の方法。
３３．前記新生物が、がんである、段落３１または３２に記載の方法。
【００９３】
３４．前記がんが、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、喉頭乳頭腫症、喉頭がん、頭頸部がん、またはそれらの部位のいずれかの異形成である、段落３３に記載の方法。
【００９４】
３５．前記個体が、追加のがん治療をこれまでに受けていた、受けている、または受けると予想される、段落３３または３４に記載の方法。
３６．前記追加のがん治療が、外科手術、放射線、ホルモン療法、化学療法、免疫療法、またはそれらの組合せである、段落３５に記載の方法。
【００９５】
３７．前記個体が、ＨＰＶ関連がんを有すると決定される、段落３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
３８．前記個体が、ＨＰＶ１６関連がんを有すると決定される、段落３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【００９６】
３９．前記個体が、ＨＰＶ１８関連がんを有すると決定される、段落３３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
４０．養子細胞免疫療法の方法で使用するためのＴ細胞であって、該Ｔ細胞は、段落１〜３９のいずれか一項に記載の、末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物であり、該養子細胞免疫療法の方法は、該Ｔ細胞を該対象に投与することを含む、上記Ｔ細胞。
【００９７】
４１．Ｔ細胞を対象に投与することを含む、養子細胞免疫療法の方法に使用するための医薬品の製造におけるＴ細胞の使用であって、該Ｔ細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物である、上記使用。
【００９８】
４２．医薬組成物、医薬またはワクチンを調製する方法であって、請求項１〜３９のいずれか一項に従って、末梢血液またはＴ細胞を刺激すること、または治療的Ｔ細胞を生産すること、および得られた細胞賦形剤を、医薬的に許容される担体、アジュバント、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、上記方法。
【００９９】
４３．対象におけるがんを処置する方法であって、
（１）対象からＴ細胞を単離すること；
（２）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む方法によって、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に特異的なＴ細胞の集団を生成または拡大培養すること；および
（３）生成または拡大培養したＴ細胞の集団を対象に投与すること
を含む、上記方法。
【０１００】
４４．（２）で刺激された前記Ｔ細胞が、先行の末梢血液細胞またはＴ細胞の刺激から得られる、段落４３に記載の方法。
４５．前記Ｔ細胞の刺激の前に、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、末梢血液細胞またはＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む、段落４３に記載の方法。
【０１０１】
４６．（２）の後および（３）の前に、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（２）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む、段落４３に記載の方法。
【０１０２】
４７．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、段落４６に記載の方法。
４８．（２）の後および（３）の前に、
（ｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、（２）から得られたＴ細胞を再刺激する工程、および
（ｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉ）の後に得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含む、段落４３に記載の方法。
【０１０３】
４９．前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、段落４３に記載の方法。
５０．（１）において、前記Ｔ細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団から単離される、段落４３に記載の方法。
【０１０４】
５１．前記がんが、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、喉頭乳頭腫症、喉頭がん、頭頸部がん、またはそれらの部位のいずれかの異形成である、段落４３に記載の方法。
【０１０５】
５２．前記がんが、ＨＰＶ陽性である、段落４３に記載の方法。
５３．前記対象が、ＨＰＶ関連がんを有すると決定される、段落４３に記載の方法。
５４．対象におけるがんを処置する方法であって、
（１）対象からＴ細胞を単離する工程；
（２）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に特異的なＴ細胞の集団を生成または拡大培養する工程であって、
（ｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、該Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および
（ｉｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程
を含む方法によってなされる、工程；
（３）生成または拡大培養したＴ細胞の集団を対象に投与する工程
を含む、上記方法。
【０１０６】
５５．（ｉ）におけるＴ細胞の刺激が、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下でなされる、段落５４に記載の方法。
５６．（ｉ）および（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、段落５４に記載の方法。
【０１０７】
５７．（ｉｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、段落５４に記載の方法。
【０１０８】
５８．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞またはそれらの組合せである、段落５４に記載の方法。
５９．対象におけるがんを処置する方法であって、
（１）対象からＴ細胞を単離すること；
（２）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む方法によって、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に特異的なＴ細胞の集団を生成または拡大培養すること；および
（３）生成または拡大培養したＴ細胞の集団を対象に投与すること
を含む、上記方法。
【０１０９】
６０．前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、段落５９に記載の方法。
６１．前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、段落５９に記載の方法。
【０１１０】
[0078]前述のものは、以下に記載される発明の詳細な説明をよりよく理解できるように、本発明の特色および技術的な利点をかなり概略的に概説した。本発明の特許請求の範囲の主題を形成する本発明の追加の特色および利点を以下に説明する。開示された概念および具体的な実施態様は、本発明の同じ目的を行うために改変したりまたは他の構造を設計したりするための基礎として容易に利用できることが、当業者には理解されるものとする。またこのような等価な構造は、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の本質および範囲から逸脱しないことも、当業者には理解されているものとする。本発明の特色と考えられる新規の特徴は、その構成と操作方法の両方に関して、さらなる目的および利点と共に、添付の図面と共に検討することで以下の説明からよりよく理解されるものとする。しかしながら、図面のそれぞれは、単に例示と説明の目的のために提供されたものであり、本発明の限定を定義するものとして意図されていないことが明示的に理解されると予想される。
【０１１１】
[0079]本発明は、記載された形態および好ましい特徴の組合せを包含し、ただしこのような組合せが明らかに不可能であるかまたは明示的に回避される場合を除く。
[0080]本明細書で使用される章の見出しは、単に系統化する目的のためであり、記載された主題を制限すると解釈されないものとする。
【０１１２】
[0081]ここで本発明の形態および実施態様を添付の図面を参照しながら実施例によって例示する。さらなる形態および実施態様は、当業者には明らかであると予想される。ここで述べられた全ての文書は参照により本明細書に組み入れられる。
【０１１３】
[0082]後続の特許請求の範囲を含む本明細書全体にわたり、文脈上別の意味で解釈すべき場合を除き、言葉「含む（comprise）」、および「含む（comprises）」および「含むこと」などの変化形は、述べられた整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を含むが、他のあらゆる整数もしくは工程または整数もしくは工程の群も排除されないことを示すと理解されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１Ａ】[0083]図１Ａは、ＨＰＶ１６特異的なＴ細胞の生産のための特定の条件を利用する技術分野における方法を実証する。図１Ａは、ペプミックスなし（Ｎｅｇ）、ＨＰＶ１６のＥ６ペプミックス（ＨＰＶ１６のＥ６）またはＨＰＶ１６のＥ７ペプミックス（ＨＰＶ１６のＥ７）を取り込んだ自己ＤＣを有する３人のＨＰＶ関連がん患者（ＯＣＶ、ＨＮＤおよびＨＮＣとして識別）からのＰＢＭＣの刺激に対するスポット形成コロニー（ＳＦＣ）の生産を示す棒グラフである。患者ＯＣＶの場合、左から右に示された３本のバーは、Ｎｅｇ、ＨＰＶ１６のＥ６およびＨＰＶ１６のＥ７である。患者ＨＮＤおよびＨＮＣの場合、左から右に示された２本のバーは、ＨＰＶ１６のＥ６およびＨＰＶ１６のＥ７である。
【図１Ｂ】[0084]図１Ｂは、特定の新規の条件下で、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下におけるＴ細胞の刺激による、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８に特異的なＴ細胞の混合物の生産を利用する本開示の方法を実証する。図１Ｂは、３人のＨＰＶ関連がん患者（ＯＣＶ、ＰＣＶおよびＨＮＤと識別）からのＰＢＭＣの刺激に対するスポット形成コロニー（ＳＦＣ）の生産を示す棒グラフである。患者ＯＣＶの場合、左から右に示された５本のバーは、ペプミックスなし（Ｎｅｇ）、ＨＰＶ１６のＥ６ペプミックス（ＨＰＶ１６のＥ６）、ＨＰＶ１６のＥ７ペプミックス（ＨＰＶ１６のＥ７）、ＨＰＶ１８のＥ６ペプミックス（ＨＰＶ１８のＥ６）、およびＨＰＶ１８のＥ７ペプミックス（ＨＰＶ１８のＥ７）である。患者ＰＣＤの場合、左から右に示された２本のバーは、ＨＰＶ１６のＥ６およびＨＰＶ１６のＥ７である。患者ＨＮＤの場合、左から右に示された４本のバーは、ＨＰＶ１６のＥ６、ＨＰＶ１６のＥ７、ＨＰＶ１８のＥ６およびＨＰＶ１８のＥ７である。
【図２】[0085]図２は、注入後のタイムポイントの患者番号１におけるＴＧＦ−ベータ（ＤＮＲＩＩ）のためのドミナントネガティブ受容体で形質導入された、注入されたＨＰＶで刺激されたＴ細胞のインビボでの拡大培養および持続性を示すチャートである。
【図３】[0086]図３は、注入後のタイムポイントの患者番号２におけるＴＧＦ−ベータ（ＤＮＲＩＩ）のためのドミナントネガティブ受容体が形質導入された、注入されたＨＰＶで刺激されたＴ細胞のインビボにおける拡大培養および持続性を示すチャートである。
【図４】[0087]図４は、患者番号２のＰＥＴスキャン（左および中心）および身体検査の写真（右）を示す。上の列：前処置。下の列：本発明に従って生産されたＨＰＶで刺激されたＴ細胞での処置の６週間後。
【発明を実施するための形態】
【０１１５】
[0088]本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施態様に限定されることは意図されない。
[0089]長年にわたる特許法の慣例に従って、言葉「１つの（a）」および「１つの（an）」は、特許請求の範囲を含め本明細書で含むという言葉と共に使用される場合、「１つまたはそれより多くの」を意味する。本発明の一部の実施態様は、本発明の１つまたはそれより多くの要素、方法の工程、および／または方法からなるか、またはそれらから本質的になっていてもよい。本明細書に記載されるあらゆる方法または組成物は、本明細書に記載される他のあらゆる方法または組成物に関して実行できることが予期される。
【０１１６】
[0090]本発明の開示は、ＨＰＶ特異的Ｔ細胞、例えばＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８特異的なＴ細胞が必要な個体のための、例えばＨＰＶ感染およびＨＰＶ関連の医学的状態を処置するための、治療的Ｔ細胞の生産および使用に関する。特定の実施態様において、本方法および組成物は、間接的または直接的にＨＰＶ感染に関する新生物を処置するのに有用であり、このような新生物は、良性でもよいし、または悪性でもよい。１３から１８種のＨＰＶ株が、高い腫瘍形成性のリスクを付与すると特徴付けられており、これらの株のうち１２種が、ＨＰＶの種７（ＨＰＶ−１８、−３９、−４５、−５９、−６８）および種９（ＨＰＶ−１６、−３１、−３３、−３５、−５２、−５８、−６７）に属する。ＨＰＶの６型および１１型は、喉頭乳頭腫症を引き起こす。
【０１１７】
Ｉ．[0091]ＨＰＶ抗原およびペプミックスの生成
[0092]本開示の方法は、Ｔ細胞にペプチドの混合物を提供する抗原提示細胞を利用する。このような「取り込まれた」ＡＰＣは、末梢血Ｔ細胞の刺激のために末梢血Ｔ細胞への曝露の前に生成され、取り込まれたＡＰＣの生成は、末梢血Ｔ細胞のための刺激工程を実行する個人または組織によって実行されてもよいし、またはそうでなくてもよい。したがって、一部の実施態様において、ペプチドのライブラリーの有効量は、最終的に治療的ＣＴＬを生成する方法の一部としてＡＰＣに提供される。本開示の方法において、刺激工程の前に、ＡＰＣは、十分な量のペプチドライブラリーに曝露される。特定のケースにおいて、ライブラリーは、同じ抗原の一部または全てに及ぶペプチドの混合物（「ペプミックス」）を含むが、一部のケースにおいて、ライブラリーは、１種またはそれより多くの抗原の一部または全てに及ぶペプミックスを含み、１種またはそれより多くの抗原は、同じＨＰＶ由来であってもよいし、またはそうでなくてもよい。特定の実施態様において、ＡＰＣのためのペプチドは非天然であり、それらは、化学的に合成されてもよいし、もしくはそうでなくてもよく、または組換え手段によって生産されてもよい。
【０１１８】
[0093]１種またはそれより多くのＨＰＶ抗原由来のペプチドの混合物のライブラリーを利用することにおいて、様々なペプチドは、所与のタンパク質のあらゆる部分に由来するものであってもよいが、特定のケースにおいて、ペプチドは、集合的にタンパク質の大多数または全ての長さに及び、ここでペプチドの配列は、特異的な抗原の望ましい領域全体の網羅を容易にするために、少なくとも部分的にオーバーラップする。一部のケースにおいて、ペプチドは、ペプチドが対応するそれぞれの抗原の１種またはそれより多くの公知のエピトープまたはドメインの長さに及ぶ。特定の領域は、例えばＮ末端ドメイン、Ｃ末端ドメイン、細胞外ドメイン、または細胞内ドメインなどの領域を含む領域の長さに及ぶペプチドによって網羅されていてもよい。
【０１１９】
[0094]ペプチドの元となる抗原は、ＨＰＶに関する抗原であってもよく、これらはあらゆる種類のものであってもよいが、具体的な実施態様において、このような抗原は、細胞傷害性Ｔ細胞を、がんなどのＨＰＶ感染に関連する新生物に方向付けることができるようなものである。特定の実施態様において、ペプチドは、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８などの少なくとも１つのＨＰＶ型の１種またはそれより多くの抗原の少なくとも一部由来であるか、またはそれらに対応する配列を有する。例えば、後期子宮頸がんにおいて、ＨＰＶウイルスは、腫瘍細胞のゲノムに統合され、Ｅ６およびＥ７を除いてその他の遺伝子の全てを失うことから、一部のケースにおいて、これらの抗原が標的化される。がんの早期ステージを例えばウイルス統合の前に処置する実施態様において、例えばＥ５およびＬ１およびＬ２などのＥ６およびＥ７以外の抗原由来のペプチドを利用することができる。しかしながら、高いリスクのＨＰＶ型の２種の一次腫瘍性タンパク質がＥ６およびＥ７であることを考えれば、具体的な実施態様において、ペプチドの配列は、特定には、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８以外のあらゆるＨＰＶ由来のＥ６および／またはＥ７から得られる。抗原Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２のいずれか由来のペプチドが、本開示の方法において利用することができる。
【０１２０】
[0095]一部のケースにおいて、ペプミックスライブラリーは、単一タイプのＨＰＶウイルス由来の１種またはそれより多くの抗原に対応するペプチドを包含し、これらのペプチドは、問題の抗原全体にわたる配列を網羅するものであってもよいし、またはそうでなくてもよい。他のケースにおいて、ペプミックスライブラリーは、１種より多くのＨＰＶウイルス由来の１種またはそれより多くの抗原に対応するペプチドを包含し、これらのペプチドは、問題の抗原全体にわたる配列を網羅するものであってもよいし、またはそうでなくてもよいは。ペプミックスは、１つまたはそれより多くの特定の抗原の１つまたはそれより多くの特定の領域に対応するペプチド、または１つまたはそれより多くの特定の抗原の全体に対応するペプチドが濃縮されていてもよいし、またはそうでなくてもよい。
【０１２１】
[0096]本開示で利用されるペプミックスは、市販のペプチドライブラリー由来であってもよいし、または例えば合成的に生成されてもよい。利用可能なライブラリーの例としては、ＪＰＴテクノロジー（JPT Technologies）（スプリングフィールド、バージニア州）またはミルテニーバイオテク（Miltenyi Biotec）（オーバーン、カリフォルニア州）からのものが挙げられる。当業者であれば、例えばＨＰＶ１６のＥ６、ＨＰＶ１６のＥ７、ＨＰＶ１８のＥ６、およびＨＰＶ１８のＥ７の公知の配列に基づいて、それらの例示的なそれぞれの配列に対応するペプチドの生成を可能にする十分な情報を有すると予想される。ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質の配列の例は、国立バイオテクノロジー情報センター（National Center for Biotechnology Information）のＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）データベースにおいて、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＡＩＱ８２７７６．１ＧＩ：６８８０１０７０３で入手可能である。ＨＰＶ１６のＥ７タンパク質の配列の例は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＡＩＱ８２８１４．１ＧＩ：６８８０１０７８９である。ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質の配列の例は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＡＧＵ９０４２３．１ＧＩ：５３７８０１９７５である。ＨＰＶ１８のＥ７タンパク質の配列の例は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＡＧＵ９０４２４．１ＧＩ：５３７８０１９７６である。
【０１２２】
[0097]特定の実施態様において、ライブラリーは、それらそれぞれの抗原に対応する特定の長さを有するペプチドで構成されるが、一部のケースにおいて、ライブラリーは、２種またはそれより多くの異なる長さを有するペプチドの混合物で構成される。ペプチドは、特定の長さを有していてもよく、それらは、特定の量の配列においてオーバーラップしていてもよいが、一部のライブラリーにおいてオーバーラップの長さにばらつきがあってもよい。特定の実施態様において、ペプチドは、例えば、少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５個またはそれより多くのアミノ酸長さを有する。特定の実施態様において、例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、または３４個のアミノ酸長さのペプチド間にオーバーラップが存在する。具体的な実施態様において、ペプチドは、１５個のアミノ酸長さを有し、互いに１１個のアミノ酸がオーバーラップする。異なるペプチドの混合物は、あらゆる比率の異なるペプチドを包含していてもよいが、一部の実施態様において、特定のペプチドのそれぞれは、混合物中で、別の特定のペプチドと実質的に同じ数で存在する。ペプチドの配列における抗原の網羅は、ランダムであり、抗原の所与の領域にわたり実質的に均質であってもよいが、一部の実施態様において、ライブラリーは、１種またはそれより多くの特定のペプチド、例えばエピトープまたはそれらの一部をコードすることがわかっている１種またはそれより多くのペプチドなどが濃縮されていてもよい。
【０１２３】
[0098]特定の実施態様において、特定の抗原タンパク質のためのペプミックスは、例えば、８〜１０個のアミノ酸長さを有するあらゆる可能なＨＬＡクラスＩエピトープを含む。具体的な実施態様において、特定のペプチドのための全てのクラスＩＩエピトープを網羅するために、より長いペプチドが利用される。特定の形態において、ペプチドは、最大３０個のアミノ酸長さを有し、２５個のアミノ酸のオーバーラップを含む。
【０１２４】
ＩＩ．[0099]治療的Ｔ細胞を生産および使用する方法
Ａ．治療的Ｔ細胞の生産
[0100]特定の形態において、本発明の開示は、少なくとも１種のＨＰＶウイルス由来の１種またはそれより多くの抗原を標的化する免疫細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞の開発に関する。
【０１２５】
[0101]本明細書で開示される方法は、免疫細胞の刺激および／または拡大培養を含んでいてもよい。本方法は、末梢血液細胞、例えば末梢血単核細胞の刺激および／または拡大培養を含んでいてもよい。本方法は、免疫細胞（例えばＰＢＭＣ）の集団中からの免疫細胞集団（例えばＴ細胞の集団）の拡大培養を含んでいてもよい。例えば、Ｔ細胞の集団は、ＰＢＭＣの集団中のＴ細胞の刺激によって、ＰＢＭＣの集団中から拡大培養されてもよい。したがって、本明細書で開示される方法の実施態様において、Ｔ細胞の刺激および／または拡大培養は、ＰＢＭＣの集団の刺激を含んでいてもよい。一部の実施態様において、Ｔ細胞の集団は、腫瘍浸潤リンパ球の集団中のＴ細胞の刺激によって腫瘍浸潤リンパ球の集団中から拡大培養されてもよい。したがって、本明細書で開示される方法の実施態様において、Ｔ細胞の刺激および／または拡大培養は、腫瘍浸潤リンパ球の集団の刺激を含んでいてもよい。一部の実施態様において、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の集団（例えばヘテロジニアスな特異性を有するＴ細胞の集団）中から拡大培養されてもよく、このような集団は、血液サンプル、ＰＢＭＣの集団、または腫瘍浸潤リンパ球の集団から得られたものであってもよい。刺激／拡大培養は、ＨＰＶ特異的な免疫細胞（例えばＨＰＶ特異的なＴ細胞、例えばＨＰＶ特異的なＣＴＬ）の数の増加をもたらすこともでき、および／または刺激／拡大培養の最後に、細胞集団におけるこのような細胞の比率の増加をもたらすこともできる。本方法は、Ｔ細胞の刺激および／または拡大培養を含んでいてもよい。細胞は、処置しようとする患者から得たものでもよいし（すなわち、自己細胞）、または別の個体から得たものでもよい（すなわち、同種細胞）。特定の実施態様において、本方法は、単離された免疫細胞の刺激および／または拡大培養を含む。すなわち、具体的な方法は、実質的に赤血球などの非免疫細胞を含有しない細胞の集団で実行してもよい。一部のケースにおいて、免疫細胞は、単離されたＰＢＭＣ、または単離されたＴ細胞である。細胞は、血液のサンプル、例えば患者または個体から得られた血液のサンプルから得たものでもよい。細胞は、組織サンプルまたは生検から得たものでもよい。細胞は、腫瘍（例えば腫瘍浸潤リンパ球）から得たものでもよい。本明細書で開示される特定の方法は、患者から得られたサンプルからＰＢＭＣおよび／またはＴ細胞を得る工程を含む。方法の特定の実施態様は、患者または個体からの血液または細胞のサンプルを得る工程を含まないが、その代わりにすでに取得済みのサンプルまたは細胞に実行される。本方法は、サンプルを処理すること、例えば、サンプル中の免疫細胞、例えばＰＢＭＣおよび／またはＴ細胞を濃縮することを含んでいてもよい。このような方法は、サンプル中の赤血球、血小板、血清および／または血漿を除去すること、またはそれらの量を実質的に低減することを含んでいてもよい。これは、赤血球などの他の細胞を実質的に含有しない免疫細胞の集団をもたらすことができる。本明細書で開示される方法は、単離された免疫細胞、または他の細胞に加えて免疫細胞を含有するサンプルに実行することができる。
【０１２６】
[0102]Ｔ細胞を生産する方法において、末梢血Ｔ細胞は、初期において、少なくとも１種のＨＰＶ抗原の一部または全てに及ぶ１種またはそれより多くのペプチドに曝露されたことがあるＡＰＣで刺激されてもよい。抗原性ペプチドを、ペプチド混合物のライブラリー中のＡＰＣに提供してもよいし、ペプミックスの複数ライブラリーを、同じＡＰＣの収集物に提供してもよい。一部の実施態様において、収集物は、免疫優性および亜優性の抗原の両方を包含する。
【０１２７】
[0103]本開示の実施態様において、治療的Ｔ細胞を生成して、ＨＰＶ感染を有するか、またはＨＰＶ感染に間接的または直接的に起因するＨＰＶ関連の医学的状態を有するリスクがある個体に提供することができる。治療的Ｔ細胞を生産する方法において、特定の条件下で、末梢血Ｔ細胞は、例えば、Ｅ６および／またはＥ７などのＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８抗原の一部または全てを包含する１種またはそれより多くの抗原の一部または全てに及ぶペプチドのライブラリーと共に取り込まれるＡＰＣと混合される。具体的な実施態様において、刺激する工程に関して、Ｔ細胞は、ＰＢＭＣの集団中に存在する。
【０１２８】
[0104]一部の実施態様において、特定の工程で使用されるＡＰＣは、樹状細胞（ＤＣ）であり得る。ＤＣを生成するための方法は当業界において周知である。例えば、Ramosら、上記を参照されたい。単球をＣＤ１４選択によりＰＢＭＣから単離し、８００Ｕ／ｍｌの顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）および１０００Ｕ／ｍｌのインターロイキン４（ＩＬ−４）を含むＤＣ培地および２ｍＭアラニル−グルタミン中で５日間培養してもよい。３日目に、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を補充してもよい。５日目に、１０ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、１００ｎｇ／ｍｌのインターロイキン６（ＩＬ−６）、１０ｎｇ／ｍｌのプロスタグランジンＥ２、８００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦおよび１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４を含むＤＣ培地中でＤＣを成熟させる。ＤＣ成熟は、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６およびＨＬＡ−ＤＲのアップレギュレーションを検出するフローサイトメトリーによって査定することができる。
【０１２９】
[0105]一部の実施態様において、特定の工程で使用されるＡＰＣは、活性化Ｔ細胞である。活性化Ｔ細胞は、静脈切開により得られた血液から単離された自己ＰＢＭＣの一部を使用して生成したポリクローナルＴ細胞（Ｔ−ＡＰＣ）であってもよい。細胞は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた細胞培養プレート中で培養することによって活性化されてもよい。次いで細胞を培養して、ＩＬ−２の存在下で２週間拡大培養する。拡大培養されたＴ−ＡＰＣは、後の使用のために低温保存することができる。刺激のためのＴ−ＡＰＣ使用の２〜３日前に（例えば、刺激の３サイクル目の間、任意選択でそれに続く刺激の間に）、低温保存した細胞を融解させ、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた細胞培養プレート中で再刺激する。刺激の日に、Ｔ−ＡＰＣ細胞を回収し、ＨＰＶのＥ６／Ｅ７ペプチドでパルスし、続いて１：１の比率でＨＰＶで刺激されたＴ細胞の継続中の培養に添加する。
【０１３０】
[0106]一部の実施態様において、特定の工程および／または方法で使用されるＡＰＣは、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）であってもよい。Ｂ−ブラストは、例えば、患者の自己ＰＢＭＣから生成したものでもよい。ＰＢＭＣ中のＢリンパ球は、放射線照射された同種ＣＤ４０Ｌを発現するＭＲＣ５上皮細胞株と共培養することによって活性化され、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４および１マイクログラム／ｍｌのシクロスポリンＡを含有する培地中で拡大培養される。
【０１３１】
[0107]一部の実施態様において、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の一方または両方由来の少なくとも１種の抗原を標的化するＴ細胞を生成する方法があり、これは、一般的に、複数のＰＢＭＣを、１種またはそれより多くの特定のＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８ウイルス抗原に対応するペプチドのライブラリーからのペプチドを取り込んだ複数のＡＰＣと接触させることによって行われる。具体的な実施態様において、２つの細胞集団の曝露は、Ｔ細胞の拡大培養を可能にする。特定の実施態様において、刺激工程は、１種またはそれより多くの特定のサイトカインの存在下で行われ、このようなサイトカインは、哺乳類（例えばマウス、ヒト）のサイトカインであってもよいし、またはヒトサイトカインであってもよい。特定の実施態様において、１種またはそれより多くのサイトカインは、ＩＬ−７およびＩＬ−１５であるが、代替の実施態様において、サイトカインは、ＩＬ−１５、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＬ−４、およびそれらの組合せからなる群から選択される。具体的な実施態様において、本方法の１つまたはそれより多くの工程は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、および／またはＩＬ−２１の存在下で行われないが、代替として、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、および／またはＩＬ−２１が利用されてもよい。サイトカインの存在との言及は、外部から添加されたサイトカインの存在のことであり、すなわち細胞培養物中に存在するかまたは細胞培養物によって分泌されたあらゆるサイトカインは排除される。一部の実施態様において、ペプチドはさらに、配列においてＨＰＶ抗原の一部または全てに及ぶようにオーバーラップするペプチドと定義される。例えば、特定の形態において、ペプチドは、少なくとも１０個のアミノ酸、特定には１１個オーバーラップしており、一部の実施態様において、ペプチドは、少なくとも１２個またはそれより多くのアミノ酸の長さ、特定には１５個のアミノ酸長さを有する。
【０１３２】
[0108]細胞培養に入れるための所与のサイトカインの適切な量または濃度の選択は、当業者または当業界の能力の範囲内である。一例として、以下に、特定のインターロイキンの列挙および使用可能な適切な濃度の例を示す。
【０１３３】
[0109]インターロイキン６（ＩＬ−６）：５０〜１５０ｎｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ、６０ｎｇ／ｍｌ、７０ｎｇ／ｍｌ、８０ｎｇ／ｍｌ、９０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１１０ｎｇ／ｍｌ、１２０ｎｇ／ｍｌ、１３０ｎｇ／ｍｌ、１４０ｎｇ／ｍｌまたは１５０ｎｇ／ｍｌのうち１種。
【０１３４】
[0110]インターロイキン７（ＩＬ−７）：５〜１５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌまたは１５ｎｇ／ｍｌのうち１種。
【０１３５】
[0111]インターロイキン１２（ＩＬ−１２）：５〜１５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌまたは１５ｎｇ／ｍｌのうち１種。
【０１３６】
[0112]インターロイキン１５（ＩＬ−１５）：５〜１５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌまたは１５ｎｇ／ｍｌのうち１種。
【０１３７】
[0113]以下の表１に、本開示の方法の特定の実施態様の例を示す。
【０１３８】
【表１】
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【０１３９】
[0115]したがって、特定の実施態様において、Ｔ細胞の集団（ここで集団は、実質的に全てのＴ細胞を含んでいてもよいし、またはＴ細胞の集団は、細胞の別の集団中、例えばＰＢＭＣ中である）は、ＡＰＣの集団に曝露されて、少なくとも：ａ）ＨＰＶ１６のＥ６および／またはＥ７の標的化における有効性、および／またはＨＰＶ１８のＥ６および／またはＥ７の標的化における有効性；ｂ）ポリクローナル性；ｃ）ＴＨ１バイアス；またはｄ）それらの組合せなどの特定の特徴を有するＴ細胞株を生成する。生成したＴ細胞株は、ＨＰＶの種７（ＨＰＶ−１８、−３９、−４５、−５９、−６８）および種９（ＨＰＶ−１６、−３１、−３３、−３５、−５２、−５８、−６７）、ならびに６型および１１型の標的化において有効になるように生産することができ、これは、以下の抗原：Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、および／またはＬ２のいずれか１種またはそれより多くに向けられたペプミックスの結果であってもよい。
【０１４０】
[0116]一部のケースにおいて、Ｔ細胞は、１回より多く刺激され、異なる刺激工程で細胞の集団を同じ条件に曝露してもよいし、または曝露しなくてもよい。具体的な実施態様において、第１の刺激は、第２の刺激および／または第３の刺激などのそれに続く刺激とは異なる条件を有する。具体的な実施態様において、本方法の第１の刺激工程は、ペプミックスが取り込まれたＤＣまたはペプミックスが取り込まれたＰＢＭＣであるＡＰＣを利用し、さらに、ＩＬ−７およびＩＬ−１５を利用する。この刺激工程は、任意選択で、１回またはそれより多く繰り返してもよい。
【０１４１】
[0117]本方法の特定の実施態様において、最初の末梢血Ｔ細胞（またはＰＢＭＣ）のペプミックスまたはＡＰＣへの曝露から８日目から１０日目の間、ＰＢＭＣの再刺激を、８日目、９日目、または１０日目に行ってもよく、ただしそれ以降は行わず、次いでそれに続く再刺激を、１５日目、１６日目、または１７日目に行ってもよい。
【０１４２】
[0118]第１の刺激工程（任意選択の第１の刺激工程の反復を含む）に続く刺激工程において、第１の刺激後に結果得られたＴ細胞（これは、ヘテロジニアスな細胞の集団中であってもよい）は、ペプミックスが取り込まれたＤＣもしくはペプミックスが取り込まれたＰＢＭＣおよび／または自己活性化Ｔ細胞に曝露される。第１および第２の刺激工程に続く刺激において、第２またはその後の刺激後に得られたＴ細胞（これは、ヘテロジニアスな細胞の集団中に存在していてもよい）は、ペプミックス−自己活性化Ｔ細胞に曝露される。あらゆる刺激工程で利用可能な共刺激細胞としては、少なくともＣＤ８６、４−１ＢＢ、ＣＤ８３、ＣＤ４０、ＯＸ４０、および／またはＣＤ８０を発現する細胞が挙げられる。具体的なケースにおいて、共刺激細胞は、Ｋ５６２細胞であってもよい。
【０１４３】
[0119]一部の実施態様において、本方法の工程の間、培養中の細胞は、改変される。具体的な実施態様において、細胞は、特定の目的または機能に関して細胞を有効にまたはより有効にする、例えば特定の標的を標的化することに関して有効にまたはより有効にする遺伝子産物を発現するポリヌクレオチドを内包するように改変されるか、および／またはＴ細胞が媒介する細胞傷害性に関する機能が強化されるか、および／または例えば腫瘍抗原特異的な細胞性免疫に抵抗を示すように改変される。
【０１４４】
[0120]一部の実施態様において、細胞は、Ｔ細胞が、望ましい標的細胞、例えば特定の抗原を発現するものを効果的にまたはより効果的に標的化できるようにする特定の非天然受容体を発現するように改変される。細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、αβＴ細胞受容体などを発現するように改変されてもよい。細胞は、本方法の間の具体的なタイムポイントで、発現ベクター（ウイルスベクター（例えばレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなど）であってもよいし、または非ウイルスベクターであってもよい）を発現するように改変されてもよく、例えばベクターは、例えば培養の２日目から５日目の間に導入される。一部の実施態様において、細胞は、各刺激後の約３日以内に発現ベクターに曝露されるが、このようなケースにおいて、改変は、それほど長期間の能力を持たないより分化したＴ細胞（これは特定の環境において望ましい）で行われる。
【０１４５】
[0121]具体的な実施態様において、細胞は、がん抗原、例えば、ＥｐｈＡ２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、グリピカン−３、５Ｔ４、８Ｈ９、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＡ９、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、カッパ軽鎖、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥｒｂＢ３／４、ＦＡＰ、ＦＡＲ、ＦＢＰ、胎児ＡｃｈＲ、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＫＤＲ、ラムダ、ルイス−Ｙ、ＭＣＳＰ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＣ１、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、Ｓｐ１７、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、ＶＥＧＲＲ２、癌胎児性抗原、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＶＥＧＦ受容体、および／または腫瘍の細胞外マトリックス中に存在する他の例示的な抗原、例えば、フィブロネクチンの腫瘍胎児性バリアント、テネイシン、または腫瘍の壊死領域、および他の腫瘍関連抗原、または例えば腫瘍のゲノム分析および／または差次的発現研究により同定されるアクショナブルな突然変異を標的化するＣＡＲを発現するように改変される。
【０１４６】
[0122]一部の実施態様において、細胞は、例えばトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）が媒介する腫瘍抗原特異的な細胞性免疫に抵抗を示すように改変される。例えば、細胞は、ＴＧＦ−ベータ（ＤＮＲＩＩ）のためのドミナントネガティブ受容体、例えば、Fosterら（参照により本明細書に組み入れられるAntitumor activity of EBV-specific T lymphocytes transduced with a dominant negative TGF-beta receptor. J Immunother. 2008；31：500〜505）に記載されたようなものを発現するように改変されてもよい。これは、免疫原性血球凝着素タグの除去によって改変されたドミナントネガティブ型ＴＧＦ−βタイプＩＩ受容体（ＤＮＲＩＩ）をコードするレトロウイルス発現ベクターで細胞をトランスフェクトすることを含んでいてもよい。このような改変されたＴ細胞は、ＴＧＦ−βを分泌する腫瘍の存在下で、抗腫瘍活性の強化（Fosterら、上記）などの未改変のＴ細胞を超える機能的な利点を有することが示された。
【０１４７】
[0123]本発明に係る方法は、従来技術の方法と比較して、ウイルス特異的なＴ細胞の集団の拡大培養速度を改善することができる。Ｔ細胞集団の拡大培養速度は、当業者周知の方法によって分析することができる。方法は、１つまたはそれより多くのタイムポイントにおけるＴ細胞の数を測定することを包含する。例えば、Ｔ細胞の数を、本発明に係る方法を実行した後に決定し、本方法の開始時におけるＴ細胞の数と比較することができる。次いでＴ細胞の数における拡大培養の倍率を計算することができる。
【０１４８】
[0124]拡大培養の速度は、所定時間にわたってＴ細胞による細胞分裂を分析することによっても決定することができる。所与のＴ細胞の集団の細胞分裂は、例えば、インビトロにおける３Ｈ−チミジンの取込みの分析によって、または例えば参照により全体が本明細書に組み入れられるFulcherおよびWong、Immunol Cell Biol（1999）77（6）：559〜564に記載されたようなＣＦＳＥ希釈アッセイによって分析することができる。
【０１４９】
[0125]本発明に係る方法によって達成される拡大培養の速度における改善は、本発明に係る方法を実行し、その方法におけるＴ細胞の拡大培養を、例えばRamosら（J Immunother 2013；36：66〜76）の方法のような匹敵する対照方法と比較することによって決定することができる。
【０１５０】
[0126]一部の実施態様において、本発明に係る方法におけるＴ細胞の集団の拡大培養の速度は、匹敵する対照方法における拡大培養の速度の、少なくとも１．００１倍、１．００２倍、１．００３倍、１．００４倍、１．００５倍、１．００６倍、１．００７倍、１．００８倍、１．００９倍、１．０１倍、１．０２倍、１．０３倍、１．０４倍、１．０５倍、１．０６倍、１．０７倍、１．０８倍、１．０９倍、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、または２倍のうち１つである。
【０１５１】
[0127]拡大培養の速度は、ウイルス特異的なＴ細胞集団、または全Ｔ細胞集団の拡大培養の速度であってもよい。
[0128]本発明の方法に従って生成／拡大培養したウイルス特異的なＴ細胞は、少なくとも、従来技術の方法に従って生成／拡大培養したウイルス特異的なＴ細胞と同じ機能特性を保持していてもよい。すなわち、拡大培養の速度の加速は、拡大培養されたＴ細胞の機能特性に負の影響を与えない。
【０１５２】
[0129]例えば、本方法によってウイルス特異的なＴ細胞の集団が生成／拡大培養される実施態様において、Ｔ細胞は、従来技術の方法に従って拡大培養されたウイルス特異的なＴ細胞のような、ウイルスに感染した、またはウイルスのペプチドを含む／発現する細胞に対して類似の細胞傷害性を示す。
【０１５３】
[0130]拡大培養されたＴ細胞の細胞傷害性は、例えば、異なるエフェクター（すなわちＴ細胞）と標的（すなわちＡＰＣ）との比率で、Ｔ細胞が特異的なウイルスのペプチドを提示するＡＰＣと共に、拡大培養されたＴ細胞集団を培養すること、およびＡＰＣの特異的な溶解を測定することによって分析することができる。例えば、ＨＰＶ特異的なＣＴＬ集団の細胞傷害性は、異なるエフェクターと標的との比率で、ＨＰＶによって形質転換されたＬＣＬ細胞の特異的な溶解を測定することによって分析することができる。
【０１５４】
Ｂ．治療的Ｔ細胞の使用
[0131]特定の実施態様において、本開示の方法によって生産された細胞は、ウイルス感染によって引き起こされるものなどの医学的状態を処置するために、または医学的状態の症状が検出できないかまたは証明されていないウイルス感染を標的化するために、それを必要とする個体に提供される。本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、疾患または病的状態の症状または病理に対するあらゆる有益なまたは望ましい作用を包含し、さらに、たとえ最低限であっても、処置されている疾患または状態、例えばがんの１種またはそれより多くの測定可能なマーカーの低減も包含し得る。処置は、任意選択で疾患または状態の症状の低減もしくは改善のいずれか、または疾患または状態の進行の遅延を含んでいてもよい。「処置」は、必ずしも疾患もしくは状態またはそれらの関連する症状の完全な根絶または治癒を示さない。
【０１５５】
[0132]本開示に包含される方法において、治療的Ｔ細胞は、単一のＨＰＶではないウイルスによって直接的または間接的に引き起こされるウイルス関連の疾患を処置するのに利用されるか、またはそれ以外の理由で、単一のＨＰＶではないウイルスに関して血清陽性である個体に提供される。他のケースにおいて、治療的Ｔ細胞は、１種より多くのウイルスによって直接的または間接的に引き起こされるウイルス関連の疾患を処置するのに利用されるか、またはそれ以外の理由で、１種より多くのウイルスに関して血清陽性である個体に提供される。治療的Ｔ細胞の収集物において、各Ｔ細胞およびその後代は、１つのウイルス由来の１つの抗原中の唯一のペプチドへの特異性を有し、治療的Ｔ細胞の収集物の生産のとき、集合的に、多重特異性を有し、例えば各ウイルス抗原中の複数のエピトープへの多重特異性を有するＴ細胞クローンの集団を拡大培養する。
【０１５６】
[0133]少なくとも一部の本開示の方法において、それによって生成したＣＴＬの治療有効量は、個体に、例えば、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有することがわかっているか、またはそれを有する疑いがあるか、またはＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に感染しやすい個体に投与される。具体的な実施態様において、細胞は、注射によって、例えば静脈内、筋肉内、皮内、皮下、腹膜内注射などによって投与される。一部の実施態様において、ＣＴＬはさらに、ポリクローナルＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＴＬと定義される。ＰＢＭＣは、個体にとって同種であってもよいし、または個体にとって自己であってもよい。
【０１５７】
[0134]特定のケースにおいて、新生物は、本開示の細胞で処置され、新生物は、良性であってもよいし、悪性であってもよい、またはがんに至る可能性がある前がん病変であってもよい。したがって、個体は、前がん病変のステージで、および／または病変が悪性になった後に、本開示の方法によって生産された細胞で処置されてもよい。個体は、早期がんを有することもあれば、または後期がんを有することもあり、当業者であれば、細胞を生産する方法は、例えば早期がんと後期がんに関連する抗原由来のＡＰＣに関するペプチドを利用することによって、このようながんの異なるステージに合わせることができることを認識している。具体的な実施態様において、がんは、原発性、転移性、再発性、難治性などであり得る。
【０１５８】
[0135]特定のケースにおいて、がんに至る可能性がある前がん病変、例えば、子宮頸、陰門、膣、陰茎、喉頭、中咽頭、肛門、および他の上気道消化管領域の前がん病変などが、本開示の方法によって生産された細胞で処置される。したがって、個体は、前がん病変のステージで、および／または病変が悪性になった後に、本開示の方法によって生産された細胞で処置されてもよい。本開示の方法によって生産された細胞で処置可能なＨＰＶ関連の医学的状態としては、少なくとも生殖器領域の異形成、子宮頸部上皮内腫瘍、外陰上皮内腫瘍、陰茎上皮内腫瘍、肛門上皮内腫瘍、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、生殖器のがん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、口腔パピローマおよび他の上気道消化管の病変が挙げられる。
【０１５９】
[0136]一部のケースにおいて、細胞の投与の前に、がんに関連する血清型を決定することができるが、一部のケースにおいて、血清型は決定されない。具体的な実施態様において、ＨＰＶ１６特異的なまたはＨＰＶ１８特異的な細胞は、それぞれＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８陽性である腫瘍に関する活性を有するが、一部のケースにおいて、異なるＨＰＶ血清型との交差反応性がある。交差反応する能力は、わかっていてもよいし、またはそうでなくてもよく、特定のケースにおいて、例えば、ＨＰＶ１６感染またはＨＰＶ１６関連の医学的状態を有する個体は、ＨＰＶ１８特異的なＴ細胞が投与され、逆もまた同様である。このようなケースにおいて、個体は、個体がその血清型を有するかどうかが不明な血清型に特異的な細胞で処置されてもよく、それでもなお細胞は、交差反応性のために治療上有効である。
【０１６０】
[0137]本方法の刺激工程のＡＰＣが、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ペプミックスを一緒に取り込んでいるケースにおいて、このようなＡＰＣを介して拡大培養されたＴ細胞投与の転帰は、個体が問題のウイルスに曝露されたことがあるかどうかによって決定される。例えば、個体がＨＰＶ１８に感染しているがＨＰＶ１６には感染していない場合、ＨＰＶ１８特異的なＴ細胞のみが応答すると予想され、これはなぜなら、感染によって最初にＨＰＶ１８に対するＴ細胞の応答が刺激されるためである。これらのＴ細胞は、例えば、個体中で拡大培養し、次いでメモリーＴ細胞になり、これまで活性化されたことがないＨＰＶ１６に特異的なＴ細胞より多くの数で存在することになる。
【０１６１】
[0138]処置される個体は、がんを有することがわかっていてもよいし、がんを有する疑いがあってもよいし、またはがんを有するリスク（例えば個人または家族の病歴；性的に活発であること、例えば性的に乱れていることなど；および／または遺伝学的素因、例えば１種またはそれより多くの特異的なマーカーを有すること）があってもよい。処置される個体は、ＨＰＶウイルスの存在があってもよいが、ＨＰＶ関連の医学的状態のいずれの有害な症状もまだ現れていない。個体は、良性または悪性新生物を有していてもよい。個体は、早期または後期がんを有していてもよいし、当業者であれば、細胞を生産する方法は、例えば早期がんと後期がんに関連する抗原由来のＡＰＣに関するペプチドを利用することによって、このようながんの異なるステージに合わせることができることを認識している。具体的な実施態様において、ＨＰＶ関連疾患は、口腔または生殖器の領域の悪性がんである。具体的な実施態様において、がんは、原発性、転移性、再発性、難治性などであり得る。個体は、あらゆる種類の性行為またはあらゆる種類の密接な肉体的接触の結果として、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に感染している可能性がある。
【０１６２】
[0139]あらゆるステージのＨＰＶ感染を、本開示に包含される細胞で処置することができる。本開示の方法で処置されている確立されたＨＰＶ関連がんを有する個体は、上皮内癌（ステージ０）、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶ（これらは、ＭＲＩ、ＣＴスキャン、ＰＥＴスキャンなどによって決定することができる）を含む。加えて、前がん病変（異形成）を有する個体も処置することができる。
【０１６３】
[0140]一部の実施態様において、本開示の方法によって生産された細胞の１回またはそれより多くの投与が、それを必要とする個体に提供される。異なる投与間の時間の長さは、あらゆる好適な持続時間であってもよく、例えば、約１〜７日、１〜４週間、１〜１２ヶ月、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、またはそれより長い年数であってもよい。一部のケースにおいて、約１年以内の複数回の注入を採用することができる。細胞の１回より多くの投与が個体に提供されるケースにおいて、その細胞を標的化する抗原は、初期の投与で利用された細胞で標的化されたのと同じ抗原であってもよいし、またはそうでなくてもよい。例えば、第１の細胞の投与において、細胞は、ＨＰＶ１８のＥ６を標的化するものであってもよいし、それに対して別の細胞の投与において、細胞は、ＨＰＶ１８のＥ７を標的化するものであってもよく、または逆もまた同様である。例えば、難治性になるがんにおいて、追加の投与が必要な場合がある。１種またはそれより多くの他のタイプのがん処置と共に、追加の刺激を採用することができる。
【０１６４】
[0141]一部のケースにおいて、個体は、任意選択で、当業界におけるあらゆる好適な手段によってＨＰＶ感染を有することが決定される。ＨＰＶは細胞培養で培養できないため、ＨＰＶ感染診断方法、例えばＰＣＲ、サザンブロットハイブリダイゼーション、および／またはインサイチュハイブリダイゼーションを利用するＤＮＡ試験を利用してもよく、これらの方法は、例えば、コルポスコピー；酢酸試験；生検；身体検査；および／またはパプ塗抹標本と共に使用してもよいし、またはそうでなくてもよい。
【０１６５】
[0142]具体的な実施態様において、男性個体は、その個体に感染しているＨＰＶを標的化するために本開示の方法によって生産された細胞の有効量が提供され、このようなケースにおいて、その個体はその後、別の個体、例えば女性個体に性行為を介して感染させる機会が低減される。男性個体は、本開示の方法の細胞への曝露の前にＨＰＶ感染が決定されてもよいし、またはそうでなくてもよい。一部のケースにおいて、個体が腫瘍形成性のＨＰＶに感染していることが示される場合、リスクをなくすためにその個体を細胞で処置することに価値があると予想される。細胞が有効な場合、そのような個体も、ウイルスをその個体のパートナーに伝染させる機会が低減されると予想される。
【０１６６】
[0143]具体的な実施態様において、個体は、免疫不全状態である（例えばこれは、免疫系を用いて感染症またはがんと闘う能力が低下しているかまたは全体的に欠けている個体と定義することもできる）。具体的な実施態様において、免疫不全個体は、幹細胞移植（造血幹細胞移植を含む）を受けたことがあるか、臓器移植を受けたことがあるか、および／または例えば化学療法または放射線などの１種またはそれより多くのがん処置を受けたことがある。一部のケースにおいて、個体は、後天性または遺伝性免疫不全障害を有する。一部の実施態様において、自身の疾患および／またはその処置によって免疫不全状態の個体は、本開示の方法および／または組成物が提供される。
【０１６７】
[0144]薬物療法の方法は、ヒト対象における悪性腫瘍を改善する、処置する、または予防する方法によるがんの処置を含んでいてもよく、ここで本方法の工程は、がん細胞を根絶することにおいて、免疫系を助けたり、またはブーストしたりする。このような方法は、がん細胞を破壊するために能動免疫応答を引き起こす（または受動免疫応答を達成する）本発明に従って細胞を投与することを包含していてもよい。処置の方法は、任意選択で、化学療法、放射線、または外科手術などのがんを処置するための従来の療法と組み合わせた、生物学的なアジュバント（例えば、インターロイキン、サイトカイン、カルメット−ゲラン菌、モノホスホリル脂質Ａなど）の共投与を包含していてもよい。処置方法は、免疫系を活性化してがん細胞の増殖を予防するまたはがん細胞を破壊することにより機能するワクチンとして、本発明に係る組成物を投与することを含んでいてもよい。また薬物療法の方法は、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を使用するものなどの、インビボの、エクスビボの、および養子免疫療法を含んでいてもよい。
【０１６８】
ＩＩＩ．[0145]医薬組成物
[0146]本開示によれば、用語「医薬組成物」は、個体に投与するための組成物に関する。特定の実施態様において、医薬組成物は、非経口、経皮、腔内、動脈内、髄腔内もしくは静脈内投与のための、またはがんなどの新生物への直接注射のための治療的な免疫細胞を含む組成物を含む。特定には、医薬組成物が、注入または注射を介して個体に投与されることが想定される。好適な組成物の投与は、様々な方法によって実行することができ、例えば、静脈内、皮下、腹膜内、筋肉内、局所または皮内投与によって実行することができる。
【０１６９】
[0147]本発明の開示の医薬組成物は、医薬的に許容される担体をさらに含んでいてもよい。好適な製剤用担体の例は当業界において周知であり、そのようなものとしては、リン酸緩衝塩類溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液などが挙げられる。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化することができる。これらの医薬組成物は、好適な用量で対象に投与することができる。
【０１７０】
[0148]投薬レジメンは、主治医や臨床的な要因によって決定されることになる。医療分野では周知のように、任意の一人の患者のための投薬は、例えば、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与の時間および経路、全身の健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物などの多くの要因によって決まる。投与のための特定の投薬量は、体表面積１ｍ２当たり、細胞２×１０７個〜細胞１×１０１０個の範囲であってもよい。進行は、定期的な評価によってモニターすることができる。
【０１７１】
[0149]本開示の組成物は、局所投与されてもよいし、または全身投与されてもよい。好ましい実施態様において、医薬組成物は、皮下投与され、さらにより好ましい実施態様において静脈内投与される。非経口投与のための製剤としては、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、水、アルコール性／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液、例えば塩類溶液および緩衝化媒体などが挙げられる。非経口用の媒体としては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発性油が挙げられる。静脈内用の媒体としては、流動性および栄養補充液、電解質補充液（例えばリンゲルデキストロースをベースとしたもの）、などが挙げられる。また保存剤および他の添加剤が存在していてもよく、そのようなものとしては、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどが挙げられる。加えて、本発明の開示の医薬組成物は、タンパク質様の担体、例えば、血清アルブミンまたは免疫グロブリンを含んでいてもよく、好ましくはこれらはヒト由来である。本開示の医薬組成物はさらに、本開示に記載される細胞に加えて、意図される医薬組成物の使用に応じて、生物活性薬剤を含み得ることが想定される。
【０１７２】
ＩＶ．[0150]併用療法
[0151]ＨＰＶ抗原に対して生成したＣＴＬに関する本開示の特定の実施態様において、臨床的な態様のための本発明の開示の方法は、過剰増殖性の疾患の処置において有効な他の薬剤、例えば抗がん剤と組み合わされる。「抗がん」剤は、例えば、がん細胞を死滅させること、がん細胞でアポトーシスを誘導すること、がん細胞の増殖速度を低減すること、転移の発生率または数を低減すること、腫瘍サイズを低減すること、腫瘍増殖を抑制すること、腫瘍またはがん細胞への血液供給を低減すること、がん細胞または腫瘍に対する免疫応答を促進すること、がんを予防するかまたはその進行を抑制すること、またはがんを有する対象の寿命を延ばすことによって、対象におけるがんに負の影響を与えることが可能である。より一般的には、これらの他の組成物は、細胞を死滅させるまたは細胞の増殖を阻害するのに有効な組み合わされた量で提供することができる。これは、がん細胞を両方の薬剤を包含する単一の組成物または医薬製剤と接触させることによって、またはがん細胞を、一方の組成物が発現コンストラクトを包含し、他方が第２の薬剤を包含する２つの別個の組成物または製剤と同時に接触させることによって達成してもよい。他のケースにおいて、細胞および第２の組成物の投与は、別々であってもよいし、別個の投与経路および／または担体を有していてもよい。
【０１７３】
[0152]腫瘍細胞の化学療法および放射線療法剤への耐性は、臨床腫瘍学における主要な問題の代表である。現在のがん研究の１つの目標は、化学療法および／または放射線療法を追加の療法と組み合わせることによって、それらの療法の効能を改善する方法を発見することである。本発明の開示の状況において、細胞療法は、同様に例えば化学療法、放射線療法、および／または免疫療法の介入と共に、使用できることが予期される。
【０１７４】
[0153]代替として、本発明の療法は、数分から数週間、数ヶ月、または数年にわたる範囲のインターバルを介して、他の薬剤での処置の前に行ってもよいし、またはその後に行ってもよい。他の薬剤および本発明が別々に個体に適用される実施態様において、一般的に、薬剤および本発明の療法が細胞に有利に組み合わされた作用をなお発揮できるように、それぞれの送達時間の間でそれほど長い期間が経過しないようにする。このような例において、細胞を、互いの約１２〜２４時間以内、より好ましくは互いの約６〜１２時間以内に両方の様式と接触させてもよいことが予期される。一部の状況において、処置期間を顕著に延長することが望ましい場合があるが、その場合、それぞれの投与の間に、数日（２、３、４、５、６または７日）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８週）が経過する。
【０１７５】
[0154]処置サイクルは必要に応じて繰り返されることが予測される。また、本発明の細胞療法と組み合わせて、様々な標準的な療法、加えて外科的介入が適用できることも予期される。
【０１７６】
[0155]本開示の方法により生産された細胞と共に使用できるＨＰＶ関連がん処置の例（一例として）としては、少なくとも、以下：１）外科手術（腫瘍切除、頸部切開、円錐切除、子宮摘出など）；２）薬物療法、例えば、アバスチン（Avastin）（登録商標）（ベバシズマブ）；ブレノキサン（Blenoxane）（ブレオマイシン）；ハイカムチン（Hycamtin）（登録商標）（塩酸トポテカン）；またはそれらの組合せなど；３）放射線療法；４）本開示以外の免疫療法；５）ホルモン療法；または６）それらの組合せが挙げられる。
【０１７７】
Ｖ．[0156]本開示のキット
[0157]本明細書に記載される組成物のいずれかは、キット中に含まれていてもよい。非限定的な例において、ペプミックスのライブラリーがキット中に含まれていてもよい、あらゆるタイプの細胞がキット中に提供されていてもよいし、および／またはペプミックスおよび／または細胞の操作のための試薬がキット中に提供されていてもよい。サイトカインまたはそれを生産する手段（例えばそれをコードするベクター）が、キット中に包含されていてもよい。細胞培養試薬および／または装置が包含されていてもよい。構成要素は、好適なコンテナー手段中に提供される。
【０１７８】
[0158]一実施態様において、キットは、好ましくは注入による対象への投与のために、より好ましくは自己養子細胞免疫療法の方法における注入による投与のために製剤化された（例えば好適な担体、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントと混合することによって）本発明の方法により得られた所定量のＴ細胞を含むコンテナーを含んでいてもよい。キットは、予め決定された温度で、例えば約４℃未満、約−２℃未満、または約−５０℃未満で維持することができる。キットは、キットの貯蔵および／もしくは輸送、ならびに／またはＴ細胞の投与に関する説明書をさらに含んでいてもよい。
【０１７９】
[0159]キットは、好適には等分した本発明の組成物を含んでいてもよい。キットの構成要素は、水性媒体中か、または凍結乾燥形態のいずれかでパッケージ化されてもよい。キットのコンテナー手段としては、一般的に、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または好ましくは好適に等分された構成要素を入れることができる他のコンテナー手段が挙げられる。キット中に１つより多くの構成要素がある場合、キットはまた、一般的に、追加の構成要素を別々に入れることができる第２、第３または他の追加のコンテナーも含有すると予想される。しかしながら、構成要素の様々な組合せがバイアル中に含まれていてもよい。本発明のキットはまた、典型的には、市販するために厳重に密封した状態で構成要素を入れるための手段も包含すると予想される。このようなコンテナーとしては、望ましいバイアルを保持する射出または吹込成形されたプラスチックコンテナーを挙げることができる。
【０１８０】
[0160]しかしながら、キットの構成要素は、乾燥粉末として提供されてもよい。試薬および／または構成要素が乾燥粉末として提供される場合、粉末は、好適な溶媒の添加によって再溶解することができる。溶媒も別のコンテナー手段に提供される場合があることが想定される。
【０１８１】
[0161]一部のケースにおいて、ＨＰＶ感染を検出するための試薬および／またはデバイスが、キット中に包含されていてもよい。その例としては、スワブ、へら、細胞採取用ブラシ、スライド、カバースライド、細胞学的サンプルの収集容器などが挙げられる。ベバシズマブ；ブレオマイシン；塩酸トポテカン；またはそれらの組合せなどのＨＰＶ感染またはがんのための追加の薬物が、キット中に包含されていてもよい。
【０１８２】
実施例
[0162]以下の実施例は、本発明の好ましい実施態様をより詳細に例示するために提示される。しかしながらこれらは、本発明の広範な範囲を制限するものとして決して解釈されないものとする。
【実施例１】
【０１８３】
治療的Ｔ細胞の生産
[0163]本開示の一部の実施態様において、致命的になる可能性がある１種またはそれより多くのヒトパピローマウイルス由来の様々な抗原に一貫して特異的なポリクローナル（例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋）ＣＴＬを包含するＴ細胞の単一の調製物を迅速に生成することができるメカニズムがある。本開示は、臨床的な実行に容易に適用可能であり、「既製の」ＨＰＶ抗ウイルス剤として使用することができる。本方法および組成物は、臨床的な実行に容易に適用可能であり、個体のための安全かつ有効なＨＰＶ抗ウイルス剤として有用である。
【０１８４】
[0164]具体的な実施態様において、末梢血Ｔ細胞を、特異的なアクセサリーサイトカインの存在または非存在下で、Ｅ６／Ｅ７にかかるペプミックス［１１個のアミノ酸（ａａ）がオーバーラップする１５ｍｅｒのペプチドライブラリー］を取り込んだ単球由来の樹状細胞で刺激した。得られたＴ細胞株をさらに、ペプミックスが取り込まれた活性化Ｂ細胞ブラストと共に拡大培養した。１６人中８人の子宮頸がん患者および５２人中３３人の口腔咽頭がん患者からのＥ６特異的／Ｅ７特異的なＴ細胞をうまく再活性化し、拡大培養した（１２００倍より多く）。
【０１８５】
[0165]本方法の具体的な実施態様において、サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、およびＩＬ−１５の存在は、本方法において有用である。生産されたＴ細胞株は、ポリクローナル性の複数のＴ細胞サブセットの提示（メモリー区画など）とＴＨ１バイアスの望ましい特徴を有し、Ｅ６／Ｅ７標的を欠いている。本開示は、ＨＰＶ１６関連がんを有する患者由来のＨＰＶ１６のＥ６／Ｅ７に向けられたＴ細胞株をロバストに生成できることを示してきた。この技術は拡張性があり、優良製造規範に準拠していることから、これらの細胞株は、ＨＰＶ１６がんを有する患者の養子細胞免疫療法に有用であり、ＨＰＶ１８がんにも適用することができる。
【０１８６】
[0166]ＨＰＶ１６に関するＴ細胞を生産するための公知の方法は、３人のＨＰＶ関連がん患者の結果を示す図１Ａ（ＨＰＶ１６−ペプミックスのみを取り込んだＤＣによるＰＢＭＣの刺激後に得られた細胞株で達成されたγＩＦＮ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）で実証される。第３の個体に加えて、図１Ｂにおいて、図１Ａでも結果が実証されている患者のうち２人の結果を示す。図１Ｂは、ＨＰＶ１６−ペプミックスおよびＨＰＶ１８−ペプミックスを取り込んだＤＣによるＰＢＭＣの刺激の後に得られた細胞株のγＩＦＮ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す。ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８抗原の両方に対する反応性を検出することができる（全ての患者が両方の血清型に対して反応性を有するとは限らない）。
【０１８７】
[0167]本方法の詳細に戻ると、特定のケースにおいて、ＤＣは、ＨＰＶ１６−Ｅ６／Ｅ７およびＨＰＶ１８−Ｅ６／Ｅ７ペプミックスライブラリーを取り込んでいる。このようなケースにおいて、細胞株は、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８のＥ６およびＥ７抗原の両方（例えば、ＨＰＶ１６抗原のみではなく）を認識することができる。少なくとも特定のケースにおいて、Ｔ細胞の拡大培養は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ただしＩＬ−２の非存在下で行われる。本方法の条件におけるＩＬ−７およびＩＬ−１５は、刺激および拡大培養の工程それぞれに存在していてもよいし、またはそうでなくてもよい。一部の実施態様において、ＤＣでの最初の生成／拡大培養後のＨＰＶ特異的Ｔ細胞の拡大培養は、ＩＬ−１５の存在下でペプミックスを取り込んだ自己Ｂ−ブラストの非存在下で行われるが、その代わりに、共刺激細胞（ＣＤ８０／ＣＤ８６／ＣＤ８３／４−１ＢＢＬ）、ならびにＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ペプミックスを取り込んだ自己ポリクローナル活性化Ｔ細胞を利用する。これらの条件を採用すれば、より迅速な速度で、公知の方法によって達成される速度の少なくとも１０倍でＴ細胞の拡大培養が行われ、３ラウンドの刺激の後に、特異性を損なうことなくうまく実証された。
【０１８８】
[0168]表２に、３人のＨＰＶ関連がん患者で公知の方法を使用した細胞拡大培養倍率の要約を提供する。
【０１８９】
【表２】
2019529417.tif 000004
【０１９０】
[0169]表３に、３人のＨＰＶ関連がん患者を用いた本開示の新規の方法を使用した細胞拡大培養倍率の要約を示す。３ラウンドの刺激の後における拡大培養倍率は、公知の方法を使用した場合より平均しておよそ５０倍高い。特異性は、維持される（番号１で例示される）。
【０１９１】
【表３】
2019529417.tif 000005
【実施例２】
【０１９２】
ＨＰＶ  Ｔ細胞拡大培養のためのプロトコール
[0170]まず、ＨＰＶで刺激されたＴ細胞（ＨＰＶＳＴ）を、１０〜２０：１のＰＢＭＣ：ＤＣの比率でＨＰＶのＥ６／Ｅ７ペプチドをパルスした自己樹状細胞（ＤＣ）によって活性化し、ＩＬ−６（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−７（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を含有する培養培地中で８日間培養する（例えば、Ramosら（J Immunother 2013；36：66〜76）によって記載された第１の刺激工程に従って）。
【０１９３】
[0171]９日目の第２の刺激工程を、５〜１０：１のＰＢＭＣ：ＤＣの比率でペプチドをパルスしたＤＣを使用して、ＩＬ−７（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１５（１００ｎｇ／ｍｌ）を含有する培地中で行う。
【０１９４】
[0172]次いで、それに続く週１回の刺激／拡大培養工程を行って、等しい数の放射線照射された同種Ｋ５６２−ｃｓ共刺激細胞の存在下で、ＩＬ−７（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１５（１００ｎｇ／ｍｌ）を含有する培地中で、１：１の比率のＨＰＶのＥ６／Ｅ７ペプチドをパルスした自己Ｔ−ＡＰＣを使用して望ましい数のＨＰＶＳＴを得る。ポリクローナルＴ細胞（Ｔ−ＡＰＣ）は、静脈切開により得られた血液から単離された自己ＰＢＭＣの一部を使用して生成される。細胞は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた細胞培養プレート中で培養することによって活性化される。次いで細胞を培養して、ＩＬ−２の存在下で２週間拡大培養する。拡大培養されたＴ−ＡＰＣは、後の使用のために低温保存することができる。ＨＰＶＳＴ再刺激のためのＴ−ＡＰＣ使用の２〜３日前に（ＨＰＶＳＴでの再刺激の３サイクル目およびそれ以降に）、低温保存した細胞を融解させ、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた細胞培養プレート中で再刺激する。ＨＰＶＳＴでの再刺激の日に、Ｔ−ＡＰＣ細胞を回収し、ＨＰＶのＥ６／Ｅ７ペプチドでパルスし、続いて１：１の比率でＨＰＶＳＴの継続中の培養に添加する。
【実施例３】
【０１９５】
ヒト患者における注入されたＨＰＶＳＴのインビボでの拡大培養および持続性
[0173]実施例２から得られたＨＰＶＳＴを、ＴＧＦ−ベータ（ＤＮＲＩＩ）のためのドミナントネガティブ受容体で形質導入した［Fosterら、Antitumor activity of EBV-specific T lymphocytes transduced with a dominant negative TGF-beta receptor．J Immunother．2008；31：500-505を参照］。
【０１９６】
[0174]２人のヒト患者にＨＰＶＳＴを投与し、インビボにおける拡大培養および持続性に関して試験した。患者番号１は、広範囲に転移した口腔咽頭がんを有しており、前の療法が中止されていた。患者番号２は、頸部に転移した口腔咽頭がんを有しており、ニボルマブの併用処置を受けていたが、これまでにニボルマブ単独に対する応答はなかった。
【０１９７】
[0175]注入されたＨＰＶＳＴのインビボにおける拡大培養および持続性を、患者由来の末梢血液から単離されたＰＢＭＣで実行されたＤＮＲＩＩ遺伝子のｑＰＣＲによって評価した。図２および３におけるデータポイントは、ＨＰＶＳＴ注入後の重要な注入後のインターバルを表す。
【０１９８】
[0176]患者番号１において、進行性膨張を観察した（図２）。患者番号２において、ＨＰＶＳＴの再注入と一致して６週間のピークで拡大培養が制限されたにもかかわらず（図３）、患者は、部分的な臨床応答を示した。ＨＰＶＳＴ注入から６週間後、患者番号２は、ＰＥＴスキャンおよび身体検査によって測定したところ、前処置のベースラインと比較して疾患負荷の減少を示した（図４）。
【０１９９】
[0177]本発明およびその利点を詳細に説明したが、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の本質および範囲から逸脱することなく、様々な変化、置き換えおよび変更をここでなすことができることが理解されるものとする。さらに、本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施態様に限定されることは意図されない。当業者であれば本発明の開示から容易に理解するものと予想されるが、対応する本明細書に記載の実施態様と実質的に同じ機能を実行するかまたは実質的に同じ結果を達成する、現時点で存在するまたは後に開発されることとなるプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法、または工程を本発明に従って利用することができる。したがって、添付の特許請求の範囲は、それらの範囲内に、このようなプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法、または工程を包含することが意図される。
【図１Ａ】
2019529417.tif 000006
【図１Ｂ】
2019529417.tif 000007
【図２】
2019529417.tif 000008
【図３】
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【図４】
2019529417.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成30年5月17日(2018.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞を刺激するための方法であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【請求項２】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含み、
該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【請求項３】
前記Ｔ細胞が、先行のＴ細胞の刺激から、任意選択でＰＢＭＣの集団中から得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記先行のＴ細胞の刺激が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞の刺激の前に、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激して、末梢血Ｔ細胞を生産する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原提示細胞が、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｔ細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団中に存在するか、またはそれから得られるかもしくは単離される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記集団中の前記ＰＢＭＣが、非接着性のＰＢＭＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を刺激するための方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下、および共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、上記方法。
【請求項１０】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の１つまたはそれより多くの存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下、および共刺激細胞の存在下で、ＨＰＶまたはＨＰＶ抗原に特異的なＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程を含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、該刺激は、ＨＰＶ関連疾患にとって治療的なＴ細胞を生産する、上記方法。
【請求項１１】
前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ−ブラスト、またはＰＢＭＣである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；および
（ｉｉ）ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下、および共刺激細胞の存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程
を含む、上記方法。
【請求項１４】
工程（ｉｉ）の前に、（ｉ）から得られたＴ細胞が、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の存在下で、ただし共刺激細胞の非存在下で、再刺激されてもよい、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ−ブラスト（ＢＢ）またはＰＢＭＣである、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）またはＢ−ブラスト（ＢＢ）である、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞、またはそれらの組合せである、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＨＰＶ関連疾患のための治療的Ｔ細胞を生産する方法であって、
（ｉ）末梢血液細胞を刺激する工程であって、インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、任意選択でＩＬ−６および／またはＩＬ−１２の非存在下で、末梢血Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することを含み、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含む、工程；
（ｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下で、ＩＬ−６およびＩＬ−１２の非存在下で、（ｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程；および
（ｉｉｉ）インターロイキン（ＩＬ）−７およびＩＬ−１５の存在下、共刺激細胞の存在下で、（ｉｉ）から得られたＴ細胞を抗原提示細胞で刺激する工程であって、該抗原提示細胞は、これまでに１種またはそれより多くのペプチドに曝露されており、該ペプチドは、ＨＰＶの１つまたはそれより多くのタンパク質の配列の少なくとも一部に対応する配列を含み、（ｉｉｉ）は、任意選択で１回またはそれより多くの回数繰り返される、工程
を含む、上記方法。
【請求項１９】
（ｉ）および（ｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ｉｉｉ）で使用される前記抗原提示細胞が、活性化Ｔ細胞、ＤＣ、ＢＢ、またはＰＢＭＣである、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記共刺激細胞が、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８３＋、４−１ＢＢＬ＋、ＣＤ４０＋細胞、ＯＸ４０＋細胞またはそれらの組合せである、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＰＶが、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ペプチドが、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２の１つまたはそれより多くに対応する配列を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＰＶ関連疾患が、がんであり、前記ペプチドが、Ｅ６およびＥ７の一方または両方に対応する配列を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ペプチドが、
ａ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質、ならびに／または
ｂ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質および／もしくはＨＰＶ１６のＥ７タンパク質
に対応する配列を含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記１種またはそれより多くのペプチドが、少なくとも、または最大で、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸長さを有するペプチドを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記１種またはそれより多くのペプチドが、１５個のアミノ酸長さを有するペプチドを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
１種またはそれより多くのペプチドが、ライブラリーを形成し、該ライブラリー中のペプチドが、配列において、他のペプチドと１１個のアミノ酸がオーバーラップする、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶに曝露されたことがあるかまたはＨＰＶ関連疾患を有する個体に提供される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＰＶ関連疾患が、新生物を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記方法によって生産されたＴ細胞の治療有効量が、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８またはその両方に曝露されたことがあるか、またはＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患を有する個体に提供される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＨＰＶ１６関連および／またはＨＰＶ１８関連疾患が、新生物を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記新生物が、がんである、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記がんが、子宮頸がん、肛門がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、口腔咽頭がん、上咽頭癌、喉頭乳頭腫症、喉頭がん、頭頸部がん、またはそれらの部位のいずれかの異形成である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記個体が、追加のがん治療をこれまでに受けていた、受けている、または受けると予想される、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記追加のがん治療が、外科手術、放射線、ホルモン療法、化学療法、免疫療法、またはそれらの組合せである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記個体が、ＨＰＶ関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記個体が、ＨＰＶ１６関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記個体が、ＨＰＶ１８関連がんを有すると決定される、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
養子細胞免疫療法の方法で使用するためのＴ細胞であって、該Ｔ細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物であり、該養子細胞免疫療法の方法は、該Ｔ細胞を該対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項４１】
Ｔ細胞を対象に投与することを含む、養子細胞免疫療法の方法に使用するための医薬品の製造におけるＴ細胞の使用であって、該Ｔ細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の末梢血液またはＴ細胞を刺激するための方法または治療的Ｔ細胞を生産する方法により得られるか、それにより入手できるか、またはその生成物である、上記使用。
【請求項４２】
医薬組成物、医薬またはワクチンを調製する方法であって、請求項１〜３９のいずれか一項に従って、末梢血液またはＴ細胞を刺激すること、または治療的Ｔ細胞を生産すること、および得られた細胞賦形剤を、医薬的に許容される担体、アジュバント、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、上記方法。
【国際調査報告】
2019529417.tif 000011
2019529417.tif 000012
2019529417.tif 000013