(57)【要約】ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物  本発明は、式Ｉ2019519530.tif 000118（式中、Ｒ１、Ｒ２、リンカー、ＰＥＧ、ｎ及びｏは、本明細書で定義されている通りである）のポリマー性のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物、及びその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、これらの化合物を製造する方法及びがんを治療するため、特に多発性骨髄腫を含む血液悪性腫瘍を治療するために使用する方法を提供する。
2019519530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの構造を有するペグ化されたカルフィルゾミブ化合物
【化１】
2019519530.tif 000105
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであり；
各Ｒ２は、独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
ｏは、０、１、２または３から選択される整数であり；
リンカーは、
【化２】
2019519530.tif 000106
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｎは、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｐは、０、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｑは、１、２、３、４、５、６、７、８または９から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３、４または５から選択される整数である）の構造を有する部分であり；
ＰＥＧは、約５００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）。
【請求項２】
Ｒ１が、Ｃ１−１０アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
各ｏが、０または１であり、Ｒ２が、ＣＨ３またはハロゲンである、請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４】
各ｏが、０または１であり、Ｒ２が、ＣＨ３またはＦである、請求項１、２及び３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
前記リンカーが、
【化３】
2019519530.tif 000107
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、１、２、３、４または５から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３または４から選択される整数である）の構造を有する部分である、請求項１、２、３及び４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記リンカーが、
【化４】
2019519530.tif 000108
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、４であり；
ｒは、２である）である、請求項１、２、３、４及び５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；前記リンカーが、
【化５】
2019519530.tif 000109
である、請求項１、２、３、４、５、６及び７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
式ＩＩの構造
【化６】
2019519530.tif 000110
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
リンカーは、
【化７】
2019519530.tif 000111
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｎは、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｐは、０、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｑは、１、２、３、４、５、６、７、８または９から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３、４または５から選択される整数である）の構造を有する部分であり；
Ｘは、塩化物、重硫酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、アルキル−スルホン酸塩またはアリール−スルホン酸塩から選択される対イオン塩であり；
ＰＥＧは、約２０００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）を有する、請求項１に記載のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、Ｃ１−１０アルキルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が、Ｈ、ＣＨ３またはハロゲンである、請求項９及び１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２が、Ｈ、ＣＨ３またはＦである、請求項９、１０及び１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
前記リンカーが、
【化８】
2019519530.tif 000112
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、１、２、３、４または５から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３または４から選択される整数である）の構造を有する部分である、請求項９、１０、１１及び１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記リンカーが、
【化９】
2019519530.tif 000113
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、４であり；
ｒは、２である）である、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルである、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；
前記リンカーが、
【化１０】
2019519530.tif 000114
である、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
【化１１】
2019519530.tif 000115
2019519530.tif 000116
の構造を有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記ＰＥＧが、約２Ｋ〜約２０Ｋの範囲の重量を有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記ＰＥＧが、２Ｋ、３Ｋ、５Ｋまたは２０Ｋの重量を有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
塩化物アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオン、硝酸アニオン、リン酸アニオン、アルキル−スルホン酸アニオンまたはアリール−スルホン酸アニオンから選択される対アニオンを含む薬学的に許容される塩である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
前記対アニオンが、塩化物アニオンまたはアルキル−スルホン酸アニオンである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項２３】
経口でまたは注入もしくは注射によって投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
多発性骨髄腫を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物または請求項２２〜２３のいずれか１項に記載の組成物の治療的有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項２５】
前記多発性骨髄腫が、再発性、難治性または再発難治性多発性骨髄腫である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記多発性骨髄腫が、新たに診断された多発性骨髄腫である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物を製造するプロセスであって、前記プロセスが、式Ｉの化合物を調製するために、
【化１２】
2019519530.tif 000117
（Ｘ−は、塩化物アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオン、硝酸アニオン、リン酸アニオン、アルキル−スルホン酸アニオンまたはアリール−スルホン酸アニオンからなる群から選択される対イオン塩であり、ＰＥＧは、約２Ｋ〜約２０Ｋの範囲の重量を有する）の工程を含む、前記プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物、その化合物を含む薬学的組成物、多発性骨髄腫などの血液悪性腫瘍、及び固形腫瘍を含むがんを治療するための方法及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは、最も広範な疾患の一つであり、世界的に主要な死亡原因である。米国だけでも、がんは心疾患だけに上回られる第２の主要な死亡原因である。がんは、しばしば、正常細胞プロセスの脱制御または無秩序な細胞増殖を特徴とする。
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、形質細胞に由来する進行性且つ悪性の腫瘍型のがんである。それは、骨髄内での悪性形質細胞の異常な蓄積を特徴とし、全血液癌のおよそ１３％を占める（Ｐａｌｕｍｂｏ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，２０１１）。２０１５年には、約２６，８５０の新たな例がＭＭと診断されると予想され、米国で約１１，２４０人がその疾患が原因で死亡すると予想された（ＡＣＳ，２０１５）。ＭＭの発生率は、米国における一般人口の平均余命の上昇のために着実に増加している（Ｗａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。その疾患は、高齢者集団に最も一般的に影響し、発生年齢の中央値は約６９歳である（Ｈｏｗｌａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；ＡＣＳ，２０１５）。
【０００４】
ＭＭの管理の治療目標は、症候性軽減を提供し、疾患制御を達成し、長期寛解を提供することである（Ｋｕｒｔｉｎ，２０１３）。従来、高用量の化学療法剤（メルファラン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、リポソーマルドキソルビシン、ベンダマムスチン）に続く自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）の組み合わせは、若年で治療未経験の医学的に適合する患者（６５歳未満）を治療するのに利用されてきた（Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。年齢、併発状態及び高齢者評価は、高用量療法（ＨＤＴ）に続くＡＳＣＴに耐える患者の適格性を決定するための主要な基準である（Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＨＤＴ及びＡＳＣＴに適格でない高齢の患者のために、プレドニゾンを加えたメルファランは数十年間標準療法である（Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。過去１０年間に、ＭＭの治療アルゴリズムは、新たな免疫調節剤（サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドなど）及び標的化プロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ及びカルフィルゾミブ）の導入でパラダイム変化を経験した（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｄｍｏｓｚｙｎｓｋａ，２００８；Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０００５】
カルフィルゾミブは、構成的プロテオソーム及び免疫プロテオソームに選択的且つ不可逆的に結合するテトラペプチドエポキシケトンプロテオソーム阻害剤である。より具体的には、エポキシケトン求電子性弾頭は、プロテアソームタンパク質のβ５サブユニットの触媒トレオニン残基に結合する。ＣＦＺは、許容される毒性プロファイルで良好に耐容される。カルフィルゾミブ、多形体、製造方法、製剤、その使用及び他のカルフィルゾミブの特質は、ＵＳ２００５０２４５４３５、ＵＳ２０１４０１０５９２１及びＰＣＴ公開ＷＯ２００６０１７８４２、ＷＯ２００９０４５４９７、ＷＯ２０１４１６９８９７、ＷＯ２０１３１６９２８２、ＷＯ２０１４０１１６９５、ＷＯ２００６０６３１５４、ＷＯ２０１４０１５０１６、及びＷＯ２０１００４８２９８に記載されており、その各々の明細書は本明細書によってその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００６】
カルフィルゾミブは、再発性及び難治性のＭＭを有する患者及び新たに診断されたＭＭを有する患者において励みになる応答率を示してきた。この目的のため、カルフィルゾミブは、単剤療法として、２０１２年７月に再発性及び難治性のＭＭを有する患者における治療のために初めて承認された（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）として）。より最近では、Ｋｙｐｒｏｌｉｓは、１〜３回の治療を受けた再発性及び難治性ＭＭを有する患者の治療のために、レナリドマイド及びデキサメタゾンとの組み合わせ（２０１５年７月）及びデキサメタゾンとの組み合わせ（２０１６年１月）で承認された。カルフィルゾミブの承認された治療レジメンは、短い１０分の期間にわたって、またはより遅くより長い３０分の持続時間にわたってのいずれかで、注入によって患者にそれを投与することである。この注入は、２８日サイクルで３週間連続して１週間当たり２日連続で行うべきである。それ故、この治療スケジュールに従うために、患者は、週に２回連続した日に、カルフィルゾミブが適切且つ安全に投与され得る医師のオフィス、診療所または病院などの認可された薬物投与センターまで車で行くか車で連れていかれる必要がある。これは、不便または非実際的であり得るか、または一部の患者にとっては単に負担であり得、処方されたカルフィルゾミブ治療レジメンの十分且つ完全なクールの遵守の低下または低減、または更に完全な非遵守の可能性を高める。
【０００７】
カルフィルゾミブはヒトにおいて迅速に代謝され、排出される。小さなテトラペプチド化合物であるカルフィルゾミブは、ヒトにおいて約６０分以下のインビボでの短い半減期を示す。カルフィルゾミブのクリアランスの１つの機構は、カルフィルゾミブの比較的短い半減期をもたらす肝血流を介するものである。短い半減期または迅速なクリアランスを有する薬物製品は、一般に、生物学的阻害活性の減少及び短縮をもたらす標的範囲の減少を示す傾向がある。そのような不足を克服するために、生物学的作用部位において、より多くの薬物及び延長された有効性を提供するために、典型的には追加の薬物が投与される。したがって、カルフィルゾミブの投薬の迅速なクリアランス及び週２回の頻度の両方は、有効性、送達及び／または患者のコンプライアンスの改善の可能性の余地を残す。
【０００８】
現在承認されているように（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標））、カルフィルゾミブは、スルファブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥＣＤ）及びクエン酸ナトリウム緩衝液を含む滅菌凍結乾燥製剤である。凍結乾燥物は滅菌水で再構成され、患者に注入または注射される。ＳＢＥＣＤ賦形剤は、主として、カルフィルゾミブのための可溶化添加剤として作用し、カルフィルゾミブと複合体を形成し、それによってカルフィルゾミブの水溶性を改善する。
【０００９】
薬物製品の弱点を解決しようとする試みが、それらの薬物のｐＫ及び／またはＰＤの特性を向上させる試みにおいて、プロドラッグバージョンの生成を含むこれらの薬学的化合物の代替形態の調製を導いてきたことを歴史は明らかにしている。例えば、Ｇｒｅｅｎｗａｌｄらは、アミン含有化合物のプロドラッグを開示している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，４２，３６５７−３６６７）。ＷＯ２００５０６３７７７は、肺炎症の治療のためのベンジルホスフェート及び置換ベンジルホスフェートプロドラッグを開示している。ＷＯ２００９０１５２１６０は、動脈性高血圧の治療のための吸入カルバプロタサイクリン及びプロスタサイクリンプロドラッグを開示している。米国特許公開第２００４０１００２２５号は、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））のアシルオキシメチルプロドラッグを開示している。また、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１１０８４８４６は、リスペリドンのアシルオキシメチルプロドラッグを開示している。これらのプロドラッグの開示は、アルキル−アシルオキシメチル結合プロドラッグを教示している。別の例である米国特許出願公開第ＵＳ２０１４０１０５９２１号は、阻害剤をポリエチレングリコール単位（ＰＥＧ）に結合させるアシルオキシメチルリンカーを有するカルフィルゾミブ及び他のエポキシケトンプロテアソーム阻害剤プロドラッグを記載している。しかしながら、これらのカルフィルゾミブプロドラッグ化合物は、インビボでの代謝の間にキノンメチド副生成物を放出することが判明しており、それは潜在的に毒性であり、安全性のリスクをもたらす可能性がある。この目的のため、現在承認されているカルフィルゾミブ治療の有効性及び／または安全性を維持しつつまたは場合により改善しつつ、活性薬学的成分カルフィルゾミブを患者に送達するためのカルフィルゾミブの代替形態及び／または代替方法を特定することが望ましいであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００５／０２４５４３５号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１４／０１０５９２１号明細書
【特許文献３】国際公開第２００６／０１７８４２号明細書
【特許文献４】国際公開第２００９／０４５４９７号明細書
【特許文献５】国際公開第２０１４／１６９８９７号明細書
【特許文献６】国際公開第２０１３／１６９２８２号明細書
【特許文献７】国際公開第２０１４／０１１６９５号明細書
【特許文献８】国際公開第２００６／０６３１５４号明細書
【特許文献９】国際公開第２０１４／０１５０１６号明細書
【特許文献１０】国際公開第２０１０／０４８２９８号明細書
【特許文献１１】国際公開第２００５／０６３７７７号明細書
【特許文献１２】国際公開第２００９／０１５２１６０号明細書
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００４／０１００２２５号明細書
【特許文献１４】国際公開第２０１１／０８４８４６号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２０１４／０１０５９２１号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｐａｌｕｍｂｏ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，２０１１
【非特許文献２】ＡＣＳ，２０１５
【非特許文献３】Ｗａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３
【非特許文献４】Ｈｏｗｌａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３
【非特許文献５】Ｋｕｒｔｉｎ，２０１３
【非特許文献６】Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１
【非特許文献７】Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４
【非特許文献８】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２
【非特許文献９】Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７
【非特許文献１０】Ｄｍｏｓｚｙｎｓｋａ，２００８
【非特許文献１１】Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３
【非特許文献１２】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，４２，３６５７−３６６７
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、匹敵するまたはより長いカルフィルゾミブ血漿濃度及びプロテアソーム曝露を維持しつつ、患者に治療上の抗がん利益をもたらす、新規なポリマー性カルフィルゾミブ化合物、すなわち、カルフィルゾミブの修飾構造を提供する。この目的のため、これらのポリマー性カルフィルゾミブ化合物は、現在承認されているカルフィルゾミブシクロデキストリンＩＶ製剤のものに匹敵するプロテオソーム阻害活性を提供する。
【００１３】
特に、本発明は、改善された水溶性を有し、多発性骨髄腫を含むがこれに限定されない様々なタイプのがんを治療するのに有用なペグ化されたカルフィルゾミブ化合物を提供する。より詳細には、本明細書で提供されるペグ化された化合物は、好適なバイオアベイラビリティを維持するかまたは示し、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンなどの可溶化賦形剤または薬剤の必要性を低減するかまたは完全に排除する。本発明は更に、ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物を調製する方法、それを含む薬学的組成物、及び多発性骨髄腫などの様々な形態のがんを治療するためのその化合物及び組成物の使用方法を提供する。
【００１４】
本発明の一態様では、本明細書に記載のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、（ｉ）そのようなポリマー部分を含有しない対応する承認されているカルフィルゾミブ製品と比較した場合に向上した溶解性、透過性、薬物動態学的（ｐｋ）及び／または薬力学的（ＰＤ）特性をカルフィルゾミブに与えることができ；且つ（ｉｉ）対象への投与後にインビボで切断または除去され、それによって多発性骨髄腫を含むがこれに限定されない様々ながんを治療するための安全性及び有効性の能力が証明されている遊離カルフィルゾミブを更に提供することができる１つ以上の共有結合したＰＥＧ部分を含む。
【００１５】
本発明によって提供されるペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、現在承認されているカルフィルゾミブ製品と比較した場合に投薬頻度の減少を可能にする放出延長、より低いＣｍａｘ及び、結果として、副作用の減少の可能性を含む潜在的な利益を更に提供する。本発明の化合物の改善された安全性プロファイルはまた、現在承認されている注入投与様式からの、例えば皮下投与などの代替的な投与様式を容易にし得る向上した水溶性から生じ得る。本発明のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物の改変されたｐＫ及び／または生体内分布プロファイルは、多発性骨髄腫及び固形腫瘍を含むがこれらに限定されないがんの治療における改善された有効性をもたらし得る。更に、本発明のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、潜在的に改善された化学的及び温度安定性、より少ない投薬量及び現在承認されているカルフィルゾミブ薬物製品の製造手順の一部である凍結乾燥工程を排除する潜在性を有する製剤オプションを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】（ヒトｐＫを代表する）ヒト血漿中でのいくつかの例示されたペグ化されたカルフィルゾミブの化合物の遊離カルフィルゾミブへの転化の速度によって生成された曲線のグラフである。
【図２】ラット血漿中のカルフィルゾミブの代表的なペグ化された化合物のｐＫを反映するグラフである。
【図３】血液、副腎、心臓及び肝臓組織におけるキモトリプシン様プロテアソーム活性に対するカルフィルゾミブ及び化合物実施例１の影響を示すグラフ図である。
【図４】本発明の実施例１３、２６及び３４についての経時的な平均カルフィルゾミブ血漿濃度のグラフ図である。
【図５】マウス異種移植がんモデルにおける実施例１３対ＣＦＺ−カプチゾール製剤の有効性を示すグラフである。
【図６】図５に示された試験からのマウスの生存のグラフ図である。
【図７】マウス異種移植がんモデルにおける実施例１３対ＣＦＺ−カプチゾール製剤の第２の有効性試験を示すグラフである。
【図８】実施例２３についてのＮＭＲスペクトルの図である。
【図９】カルフィルゾミブについての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１０】化合物実施例５についての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１１】化合物実施例３５についての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１２】化合物実施例３６についての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１３】化合物実施例３７についての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１４】化合物実施例３８についての細胞ＣＴ−Ｌ活性の図である。
【図１５】化合物実施例３５及び３６についてのインビボＣＴ−Ｌ活性の図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明は、新規なペグ化されたカルフィルゾミブ化合物、その化合物を含む薬学的組成物、その化合物を製造する方法、及び多発性骨髄腫、リンパ腫、白血病などの血液悪性腫瘍の治療、及び固形腫瘍などの他のがんの治療を含む、がんの治療のためのその化合物及びその化合物を含む組成物の使用を提供する。具体的には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）結合カルフィルゾミブのポリマー単位は、現在承認されているＩＶ投与されるＫｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）（カルフィルゾミブ）と同等またはそれより改善された様々な薬物動態学的（ｐＫ）及び／または薬力学的（ＰＤ）特性を有する。
【００１８】
カルフィルゾミブは、とりわけ、米国特許第７，４１７，０４２号及び第７，７３７，１１２号に記載されているエポキシケトンプロテアーゼ阻害剤である。本発明に記載されたペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、（ｉ）概して、そのようなＰＥＧ部分を含有しない遊離薬物のカルフィルゾミブと比較して向上した溶解性、透過性、ｐＫ及び／またはＰＤ特性をもたらし；且つ（ｉｉ）インビボで切断され、それによって遊離活性薬物のカルフィルゾミブを放出することができる。本発明によって提供される実施形態では、カルフィルゾミブのＮ−末端「キャップ」（例えば、モルホリノキャップ）が、（例えば、Ｎ−アシルオキシフェニルメチル基の付加によって）第四級塩に転化される。いくつかの実施形態では、第四級塩はＰＥＧ部分を含有する。いくつかの実施形態では、ペグ化された化合物は、ｐＨ変化及び／または限定されないがエステラーゼ、シトクロムＰ４５０、ホスホジエステラーゼ、ホスホアミダーゼ、ホスファターゼ、及びＤＴ−ジアホラーゼなどの酵素、またはそれらの任意の組み合わせによって切断可能である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは線状ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜２個の化合物を複合体化することができる２官能性ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜４個の化合物を複合体化することができる４つのアームのＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜８個の化合物を複合体化することができるヘキサグリセリンコアを有する８つのアームのＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜８個の化合物を複合体化することができるトリペンタエリスリトールコアを有する８つのアームのＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、分岐した２つのアームのＰＥＧである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、分岐した４つのアームのＰＥＧである。また、化合物は、可溶化剤、透過性向上剤、マスキング剤、マクロ分子担体、標的化部分、及び化合物に直接結合するかまたはスペーサー部分を介して間接的に結合する半減期及び疾患特異性を改善するための生物製剤を更に含み得る。
【００１９】
「態様」及び「実施形態」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。
【００２０】
本発明の態様１では、本発明は、式Ｉの構造を有するペグ化されたカルフィルゾミブ化合物
【化１】
2019519530.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであり；
各Ｒ２は、独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
ｏは、０、１、２または３から選択される整数であり；
リンカーは、
【化２】
2019519530.tif 000004
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｎは、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｐは、０、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｑは、１、２、３、４、５、６、７、８または９から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３、４または５から選択される整数である）の構造を有する部分であり；
ＰＥＧは、約５００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）を提供する。
【００２１】
本発明の態様１ａでは、本発明は、式Ｉの構造を有するペグ化されたカルフィルゾミブ化合物
【化３】
2019519530.tif 000005
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであり；
各Ｒ２は、独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
ｏは、０、１、２または３から選択される整数であり；
リンカーは、
【化４】
2019519530.tif 000006
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｐは、０、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３または４から選択される整数である）の構造を有する部分であり；
ＰＥＧは、約５００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）を提供する。
【００２２】
本発明の態様２では、本発明は、式ＩＩの構造を有する態様１のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物
【化５】
2019519530.tif 000007
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
リンカーは、
【化６】
2019519530.tif 000008
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｎは、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｐは、０、１、２、３または４から選択される整数であり；
ｑは、１、２、３、４、５、６、７、８または９から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３、４または５から選択される整数である）の構造を有する部分であり；
Ｘは、塩化物、重硫酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、アルキル−スルホン酸塩またはアリール−スルホン酸塩から選択される対イオン塩であり；
ＰＥＧは、約２０００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）を提供する。
【００２３】
本発明の態様３では、本発明は、Ｒ１がＣ１−１０アルキルである、態様１、１ａ及び２の化合物を提供する。
【００２４】
本発明の態様４では、本発明は、各Ｒ２が、独立して、Ｈ、ＣＨ３またはハロゲンである、態様１、１ａ、２及び３のいずれか１つの化合物を提供する。
【００２５】
本発明の態様５では、本発明は、各Ｒ２が、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣｌまたはＦである、態様１、１ａ、２、３及び４のいずれか１つの化合物を提供する。
【００２６】
本発明の態様５ａでは、本発明は、各Ｒ２が、独立して、Ｈ、ＣＨ３またはＦである、態様１、１ａ、２、３及び４のいずれか１つの化合物を提供する。
【００２７】
本発明の態様６では、本発明は、リンカーが、
【化７】
2019519530.tif 000009
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、１、２、３、４または５から選択される整数であり；
ｒは、０、１、２、３または４から選択される整数である）の構造を有する部分である、態様１、１ａ、２、３、４及び５のいずれか１つの化合物を提供する。
【００２８】
本発明の態様６ａでは、本発明は、リンカーが、
【化８】
2019519530.tif 000010
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）の構造を有する部分である、態様１、１ａ、２、３、４及び５のいずれか１つの化合物を提供する。
【００２９】
本発明の態様７では、本発明は、リンカーが、
【化９】
2019519530.tif 000011
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
ｑは、４であり；
ｒは、２である）である、態様１、１ａ、２、３、４、５及び７のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３０】
本発明の態様７ａでは、本発明は、リンカーが、
【化１０】
2019519530.tif 000012
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）である、態様１、１ａ、２、３、４、５及び７のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３１】
本発明の態様８では、本発明は、Ｒ３がＨである、態様１、１ａ、２、３、４、６、６ａ、７及び７ａのいずれか１つの化合物を提供する。
【００３２】
本発明の態様９では、本発明は、Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルである、態様１〜８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３３】
本発明の態様１０では、本発明は、Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；リンカーが、
【化１１】
2019519530.tif 000013
である、態様１〜９のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３４】
本発明の態様１０ａでは、本発明は、Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；リンカーが、
【化１２】
2019519530.tif 000014
である、態様１〜９のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３５】
態様１、１ａ、２及び態様３〜１０において、「またはその薬学的に許容される塩」という用語は、態様２の式ＩＩに示されるもの、または以下の態様１１〜２４に示されるものなどの第四級窒素カチオン電荷の対イオン塩を含み得ることに留意すべきである。更に、「態様１〜Ｘのいずれか１つ」という用語は、限定されないが、副態様１ａ、５ａ、６ａ、７ａ及び１０ａを含む、本明細書に開示される１〜Ｘの全ての副態様も含むことが意図されることに留意すべきである。
【００３６】
本発明の態様１１では、本発明は、
【化１３】
2019519530.tif 000015
2019519530.tif 000016
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｘ−は、塩化物アニオン及びアルキル−スルホン酸アニオンから選択される対アニオンであり；
ｎは、４であり；
ＰＥＧは、約２０００〜約２０，０００の範囲の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である）の構造を有する、態様１〜１０のいずれか１つによるペグ化されたカルフィルゾミブ化合物を提供する。
【００３７】
本発明の態様１２では、本発明は、化合物が、
【化１４】
2019519530.tif 000017
（式中、Ｘは、ハライド、スルホネートまたはアルキル−スルホネート対イオン塩である）である、態様１〜１１のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３８】
本発明の態様１２ａでは、本発明は、化合物が、
【化１５】
2019519530.tif 000018
（式中、Ｘは、ハライド、スルホネートまたはアルキル−スルホネート対イオン塩である）である、態様１〜１１のいずれか１つの化合物を提供する。
【００３９】
本発明の態様１３では、本発明は、化合物が、
【化１６】
2019519530.tif 000019
（式中、Ｘは、ハライド、スルホネートまたはアルキル−スルホネート対イオン塩である）である、態様１〜１１のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４０】
本発明の態様１４では、本発明は、化合物が、
【化１７】
2019519530.tif 000020
である、態様１〜１１のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４１】
本発明の態様１５では、本発明は、Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；
各Ｒ２が、独立して、ＣＨ３またはハロゲンであり；
リンカーが、
【化１８】
2019519530.tif 000021
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）の構造を有する部分であり；
ＰＥＧが、２０００、３０００、５０００または２０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である、態様１及び２のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４２】
本発明の態様１６では、本発明は、Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり；
各Ｒ２が、独立して、ＣＨ３であり；
リンカーが、
【化１９】
2019519530.tif 000022
（式中、Ｒ３は、Ｈである）の構造を有する部分であり；
ＰＥＧは、約３０００、５０００または２０，０００の分子量を有するポリエチレングリコールポリマー部分である、態様１５の化合物を提供する。
【００４３】
本発明の態様１７では、本発明は、化合物が、以下で表２に記載されている実施例１〜３４において表される個々の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、態様１〜１６のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４４】
本発明の態様１８では、本発明は、化合物が、
【化２０】
2019519530.tif 000023
2019519530.tif 000024
またはその薬学的に許容される塩である、態様１〜１７のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４５】
本発明の態様１９では、本発明は、化合物が、
【化２１】
2019519530.tif 000025
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４６】
本発明の態様１９ａでは、本発明は、化合物が、
【化２２】
2019519530.tif 000026
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４７】
本発明の態様２０では、本発明は、化合物が、
【化２３】
2019519530.tif 000027
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４８】
本発明の態様２１では、本発明は、化合物が、
【化２４】
2019519530.tif 000028
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００４９】
本発明の態様２２では、本発明は、化合物が、
【化２５】
2019519530.tif 000029
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５０】
本発明の態様２３では、本発明は、化合物が、
【化２６】
2019519530.tif 000030
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５１】
本発明の態様２４では、本発明は、化合物が、
【化２７】
2019519530.tif 000031
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５２】
本発明の態様２５では、本発明は、化合物が、
【化２８】
2019519530.tif 000032
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５３】
本発明の態様２６では、本発明は、化合物が、
【化２９】
2019519530.tif 000033
である、態様１〜１８のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５４】
本発明の態様２７では、本発明は、ＰＥＧが、約２Ｋ〜約２０Ｋの範囲の重量を有する、態様１〜１６のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５５】
本発明の態様２８では、本発明は、ＰＥＧが、３Ｋ、５Ｋまたは２０Ｋの重量を有する、態様１〜１６のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５６】
本発明の態様２９では、本発明は、塩化物アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオン、硝酸アニオン、リン酸アニオン、アルキル−スルホン酸アニオンまたはアリール−スルホン酸アニオンから選択される対アニオンを含む薬学的に許容される塩である、態様１〜１６のいずれか１つの化合物を提供する。
【００５７】
本発明の態様３０では、本発明は、対アニオンが塩化物アニオンまたはアルキル−スルホン酸アニオンである、態様２９の化合物を提供する。
【００５８】
本発明の態様３１では、本発明は、対アニオンが塩化物アニオンまたはメタン−スルホン酸アニオンである、態様２９の化合物を提供する。
【００５９】
本発明の態様３２では、本発明は、態様１〜２６のいずれか１つによる化合物及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００６０】
本発明の態様３３では、本発明は、経口でまたは注入または注射によって非経口で投与される態様３２の薬学的組成物を提供する。
【００６１】
本発明の態様３４では、本発明は、態様１〜２６のいずれか１つによる化合物の１種以上を薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤と共に含む態様３２〜３３のいずれか１つによる薬学的組成物を提供する。
【００６２】
本発明の態様３５では、本発明は、態様１〜２８のいずれか１つによる少なくとも２種の化合物を薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤と共に含む態様３２〜３４のいずれか１つによる薬学的組成物を提供する。
【００６３】
本発明の態様３６では、本発明は、多発性骨髄腫を治療する方法であって、それを必要とする患者に、態様１〜３１のいずれか１つの化合物または態様３２〜３５のいずれか１つの薬学的組成物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００６４】
本発明の態様３７では、本発明は、多発性骨髄腫が再発性、難治性または再発難治性多発性骨髄腫である、態様３４の方法を提供する。
【００６５】
本発明の態様３８では、本発明は、多発性骨髄腫が新たに診断された多発性骨髄腫である、態様３６の方法を提供する。
【００６６】
本発明の態様３９では、本発明は、プロセスが、式Ｉの化合物を調製するために、
【化３０】
2019519530.tif 000034
（式中、Ｘ−は、塩化物アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオン、硝酸アニオン、リン酸アニオン、アルキル−スルホン酸アニオンまたはアリール−スルホン酸アニオンからなる群から選択される対イオン塩であり、ＰＥＧは、約２Ｋ〜約２０Ｋの範囲の重量を有する）の工程を含む、態様１〜１６のいずれか１つによる化合物を製造するプロセスを提供する。
【００６７】
本発明の態様４０では、本発明は、プロセスが、式Ｉの化合物を調製するために、
【化３１】
2019519530.tif 000035
（式中、
Ｘ−は、塩化物アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオン、硝酸アニオン、リン酸アニオン、アルキル−スルホン酸アニオンまたはアリール−スルホン酸アニオンの対イオン塩であり；
ＰＥＧは、約２Ｋ〜約２０Ｋの範囲の重量を有し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びｏは、態様１で定義した通りである）の工程を含む、態様１による式Ｉの化合物を製造するプロセスを提供する。
【００６８】
他の態様では、本発明は、式（ＳＭ）ｍ−ＰＥＧを有する化合物、またはその薬学的に許容される塩（式中、各ＳＭは、本明細書において上記及びどこかで定義されている式Ｉまたは式ＩＩの独立して選択される化合物であり、ｎの数の位置で定義された重量のＰＥＧに結合し、ｎは２〜１０である（例えば、態様１４の化合物ではｎ＝４；本明細書の以下の表Ｉも参照されたい）を提供する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、式Ｉ及びＩＩに示されるように、カルフィルゾミブモルホリン環の窒素原子は、ベンジルエステル部分で置換されており、それによって第四級窒素原子を形成し、第四級窒素原子に付随する正電荷は、本明細書においてＸ−によって定義される薬学的に許容されるアニオンによって平衡となる。
【００７０】
本発明のいくつかの態様では、本明細書に記載の化合物自体は、前記対応するエポキシケトンプロテアーゼ阻害剤と比較した場合、より低い治療活性を示し、前記対応するエポキシケトンプロテアーゼ阻害剤と比較した場合、向上した溶解性、透過性、インビボでの薬物動態学的及び／または薬力学的特性を示す。
【００７１】
本発明のいくつかの態様では、ポリマー部分またはペグ部分は、ｐＨ変化及び／または限定されないがエステラーゼ、シトクロムＰ４５０、ホスホジエステラーゼ、ホスホアミダーゼ、ホスファターゼ、及びＤＴ−ジアホラーゼなどの酵素、またはそれらの任意の組み合わせによってカルフィルゾミブ活性成分から切断される。
【００７２】
本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは線状ＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜２個の化合物を複合体化することができる２官能性ＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜４個の化合物を複合体化することができる４つのアームのＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜８個の化合物を複合体化することができるヘキサグリセリンコアを有する８つのアームのＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ当たり１〜８個の化合物を複合体化することができるトリペンタエリスリトールコアを有する８つのアームのＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、分岐した２つのアームのＰＥＧである。本発明のいくつかの態様では、ＰＥＧは、分岐した４つのアームのＰＥＧである。また、化合物は、可溶化剤、透過性向上剤、マスキング剤、マクロ分子担体、標的化部分、及び化合物に直接結合するかまたはスペーサー部分を介して間接的に結合する半減期及び疾患特異性を改善するための生物製剤を更に含み得る。
【００７３】
理論に縛られることを望むものではないが、本発明の化合物は、ペグ化された結合部分が開裂されて遊離カルフィルゾミブ（試験され、規制承認された活性薬学的部分）を全身循環に放出するまで、一時的にプロテアーゼ阻害活性をマスクしてもよく、または部分的にマスクしてもよく、様々な投与経路に関連し得る望まない副作用を低減し得る。この目的のため、本発明のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、カルフィルゾミブのプロドラッグとして作用し得る。あるいは、ペグ化された部分が、カルフィルゾミブテトラペプチド主鎖構造のモルホリン末端の近くに位置するので、本発明の化合物は、ペグ開裂の前に、活性プロテアソーム阻害活性を非常に良好に有し得る。
【００７４】
本発明の化合物の有益な特性はまた、皮下投与を容易にし、例えば、４時間を超えるまで、カルフィルゾミブの半減期を延長し得る。本発明の態様４１では、本発明の化合物のヒト血漿半減期は、０．５時間より長い。本発明の態様４２では、化合物のヒト血漿半減期は、０．５〜５時間である。本発明の態様４３では、化合物のヒト血漿半減期は、５時間より長い。本発明の態様４４では、化合物のヒト血漿半減期は、５〜１００時間である。本発明の態様４５では、化合物のヒト血漿半減期は、１００時間より長い。本発明の態様４６では、化合物のヒト血漿半減期は、１００〜８３６時間である。本発明の態様４７では、化合物のヒト血漿半減期は、２００〜３００時間である。本発明の態様４８では、化合物のヒト血漿半減期は、約２６７時間である。本発明の態様４９では、化合物のヒト血漿半減期は、最大で８３６時間である。カルフィルゾミブの半減期を延長することにより、本発明は、カルフィルゾミブでの治療における患者の利便性及びコンプライアンスだけでなく投薬を潜在的に改善する。
【００７５】
本発明の態様５０では、本発明は、本明細書のどこかに記載のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００７６】
本明細書において後に記載される本発明の他の態様または実施形態では、方法は、がん、自己免疫疾患、移植（ｇｒａｆｔ）または移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）に関連する状態、神経変性疾患、線維化関連状態、虚血関連状態、感染（ウイルス性、寄生虫性または原核生物性）及び骨損失に関連する疾患からなる群から選択される疾患または状態を治療することを特徴とし、その方法は、本明細書のどこかに記載されている化合物の治療的有効量を患者に投与することを含む。また更なる態様では、患者におけるがん（例えば、多発性骨髄腫、例えば、再発性及び／または難治性である多発性骨髄腫）を治療するための方法が本発明によって提供され、それは、本明細書に記載されている化合物の治療的有効量を患者に投与することを含む。
【００７７】
特に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を表す。本開示に使用される方法及び材料は本明細書に記述され、当該技術分野で知られている好適な方法及び材料を使用することもできる。材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定的であることは意図されない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースのエントリ、及び他の参考文献は、本明細書に記載されているかのように、それらの全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が優先する。本開示の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになる。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「態様」という用語は、「実施形態」という用語と同義的に使用される。
【００７９】
定義
以下の定義は、本明細書で使用される用語及び本明細書に記載される本発明の範囲の理解を更に助けるはずである。
【００８０】
「Ｃｘ−ｙアルキル」という用語は、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含有する直鎖アルキル及び分枝鎖アルキル基を含む、置換または非置換の飽和炭化水素基を指す。「ハロアルキル」という用語は、少なくとも１個の水素原子がハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード）、例えば、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、トリフルオロメチル及び２，２，２−トリフルオロエチルによって置き換えられたアルキル基を指す。
【００８１】
「Ｃ２−ｙアルケニル」及び「Ｃ２−ｙアルキニル」という用語は、上記のアルキルと長さ及び可能な置換において類似する置換もしくは非置換の不飽和脂肪族基を指すが、それぞれ、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含有する。いくつかの実施形態では、二価の基アルケニレン及びアルキニレンは、２〜１２個の炭素原子を含む。所定の実施形態では、アルキレン及びアルキニレンは、２〜１０個の炭素原子を含む。所定の実施形態では、アルキレン及びアルキニレンは、２〜６個の炭素原子（例えば、２、３、４、５、または６個の炭素原子）を含む。
【００８２】
「アルコキシル」という用語は、それに結合した酸素を有するアルキル基を指す。代表的なアルコキシル基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが含まれる。「エーテル」は、酸素によって共有結合した２つの炭化水素である。したがって、そのアルキルをエーテルにするアルキルの置換基は、アルコキシであるか、またはそれに類似する。
【００８３】
本明細書で使用される「Ｃ３−ｙシクロアルキル」という用語は、環の各原子が炭素であり、その環がサイズで３〜γ個の炭素原子を含有する完全飽和、置換または非置換の環を指す。例えば、Ｃ３−７シクロアルキルという用語は、サイズで３〜７個の炭素原子をどこかで含有する炭素環式環を意味することが意図される。そのような環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチル環が含まれる。これらの環は、指定されたように更に置換されていてもよい。
【００８４】
「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には無秩序な細胞成長を特徴とする対象における生理的状態を指しまたは記述する。がんの例には、限定されないが、血液悪性腫瘍または血液媒介性癌、例えば多発性骨髄腫及び白血病、ならびに他のがん、例えばがん腫、リンパ腫、肉腫、及び芽腫が含まれる。そのようながんのより具体的な例には、扁平上皮細胞癌、肺癌、膵臓癌、子宮頸癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、及び頭頚部癌が含まれる。本明細書で使用される「がん」という用語は、疾患のいずれか１つの特定の形態に限定されない一方で、本発明の方法は、化学療法剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリンなどを含むがこれらに限定されない抗がん剤での治療に対してある程度耐性となった患者におけるがんに、及びそのような抗がん剤での再発した事後的治療を有するがんに特に有効であると考えられる。
【００８５】
「含む」という用語は、示された構成要素（複数可）を含むが、他の要素を排除しないオープンエンドを意味する。
【００８６】
本明細書で使用される「ｅｇ」または「ｅｇ．」という用語または略語は、「例」を意味することが意図されている。
【００８７】
「阻害剤」という用語は、酵素の活性または酵素、受容体、もしくは他の薬理学的標的のシステムをブロックまたは低減する化合物を表すことを意味する（例えば、ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、Ｂｏｘ−ＬＬＲ−ＡＭＣ及びＺ−ＬＬＥ−ＡＭＣ等の標準的蛍光性ペプチド基質のタンパク質分解切断の阻害、２０Ｓプロテアソームの様々な触媒活性の阻害）。阻害剤は、競合的、不競合的、または非競合的阻害により作用し得る。阻害剤は、可逆的または不可逆的に結合することができ、したがって、この用語は、酵素の自殺基質である化合物を含む。阻害剤は、酵素の活性部位上またはその近くの１つ以上の部位を修飾することができ、または、阻害剤は、酵素上の他の箇所において構造変化をもたらすことができる。用語、阻害剤は、アゴニスト、アンタゴニスト、刺激剤、補因子等の薬理学的または治療的に有用な薬剤の他のクラスを包含するように、科学文献よりも広義に本明細書で使用される。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「薬物耐性」及び「多剤耐性」という用語は、発達した及び／または薬物に耐性のがん細胞を指す。これらには、効力がほとんどまたは全くないか、または薬物の初期用量で示された効力が低下したがん細胞が含まれる。がん細胞は、１つの薬物、またはがん細胞内の異なる生物学的標的で作用するように向けられた異なる化学構造の複数の薬物に対して耐性であり得る。
【００８９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、アルカリ金属塩を形成するため、及び遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するために一般的に使用される塩を包含する。塩の性質は、それが薬学的に許容される限り、重要ではない。化合物の好適な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸から、または有機酸から調製され得る。そのような無機酸の例には、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸及びリン酸が含まれる。有機酸の例には、限定されないが、有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、炭素環式及びスルホン酸のクラスが含まれ、その例は、ギ酸、酢酸、アジピン酸、酪酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、４−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸（パモ酸）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ショウノウ酸、カンファースルホン酸、ジグルコン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ドデシルスルホン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ニコチン酸、２−ナフタレンスルホン酸、シュウ酸、パルモ酸、ペクチン酸、過硫酸、２−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバリン酸、プロピオン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、メシル酸、ウンデカン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β−ヒドロキシ酪酸、サリチル酸、ガラクタル酸及びガラクツロン酸である。
【００９０】
化合物の好適な薬学的に許容される塩基付加塩には、限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から製造された塩などの金属塩、または環状アミン、例えばカフェイン、アルギニン、ジエチルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ヒスチジン、グルカミン、イソプロピルアミン、リシン、モルホリン、Ｎ−エチルモルホリン、ピペラジン、ピペリジン、トリエチルアミン、トリメチルアミンを含む、第１級、第２級、第３級アミン及び置換アミンを含む有機塩基から製造された塩が含まれる。本明細書で企図される塩の全ては、例えば、適切な酸または塩基をその化合物と反応させることによって対応する化合物から従来の手段によって調製され得る。
【００９１】
本明細書で使用される「プロテアソーム」という用語は、免疫及び構成プロテアソームを含むことを意味する。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「難治性」という用語は、複数の療法治癒剤に対する耐性を含む、治療、刺激（療法）または治癒に対して感受的でないか、耐性であるかまたは非応答性であることを指すことが意図される。「難治性」は、本明細書で使用される場合、がんまたは腫瘍を特徴付ける文脈において、１種以上の抗がん剤での治療に対して非応答性であるか、または耐性もしくは減弱した応答を有するがんまたは腫瘍を指すことが意図される。その治療は、典型的には、再発するかもしくは耐性を生じさせるかまたはそのまさに同じ治療に対して不応性となる期間にわたって継続的、持続的及び／または反復的である。
【００９３】
本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒト、ならびにウシ、ウマ、イヌ及びネコなどの動物を含む任意の哺乳動物を指す。それ故、本発明は、ヒトの患者ならびに獣医の対象及び患者において使用され得る。本発明の一実施形態では、本発明の化合物は、ヒトの対象に投与され得る。
【００９４】
「治療的有効」または「治療的有効量」という語句は、所望の投薬レジメンの一部として（患者、例えば、ヒトに）に投与する場合に、治療される障害または状態または美容目的のための臨床的に許容される標準に従って、例えば、任意の医学的治療に適用可能な妥当なベネフィット／リスク比で、症状を緩和し、状態を改善し、または疾患状態の発症を遅らせる本発明の化合物の量を定量化することが意図されている。それ故、それは、多発性骨髄腫もしくは他の血液悪性腫瘍または固形腫瘍であろうとなかろうと、がんを治療することができる本発明の化合物の量である。
【００９５】
本明細書で使用される「治療する」、「治療すること」及び「治療」という用語は、限定されないが、治癒療法、予防療法、及び防止療法を含む療法を指し、一般に、患者の状態を改善または安定させる手法で症状、臨床的兆候、及び状態の内在する病状を覆すこと、低減すること、または阻止することを含む。予防的治療は、一般に、障害の発症を完全に防止すること、または個体における疾患の前臨床的に明らかな段階の発症を遅らせることのいずれかを構成する。「予防的または療法的」治療という用語は、当該技術分野で認識されており、対象組成物のうちの１つ以上の宿主への投与を含む。望ましくない状態（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床兆候前、またはその状態が弱まった後に投与される場合、治療は予防的であるが（すなわち、望ましくない状態を発症することから宿主を保護する）、望ましくない状態の兆候後に投与される場合、治療は療法的である（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を軽減する、改善する、または安定させることが意図される）。
【００９６】
用語「置換」は、分子の１つ以上の非水素原子上の水素を置換する置換基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換された」は、そのような置換が、置換された原子及び置換基の許容される価数に従い、置換が安定な化合物、例えば、例として再配列、環化、脱離等による転換を自発的に生じない安定な化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことが理解される。本明細書において使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。広い態様において、許容可能な置換基は、有機化合物の非環式及び環式、分岐及び非分岐、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基を含む。許容可能な置換基は、適切な有機化合物に対して１つ以上であり、同じかまたは異なり得る。本開示の目的のために、窒素等のヘテロ原子は、水素置換基及び／またはヘテロ原子の原子価を満たす、本明細書に記載の有機化合物の任意の許容可能な置換基を有していてもよい。置換基は、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、もしくはチオホルメート）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含み得る。適切な場合、炭化水素鎖上で置換された部分自体が置換され得ることは、当業者によって理解されるであろう。
【００９７】
ＰＥＧという用語は、本明細書で使用される場合、その一般的に理解される伝統的な意味を有することが意図される。特に、ＰＥＧは、繰り返しのポリ（エチレングリコール）ポリマー単位から構成された部分であり、その正確な数がその分子量を決定する。例えば、本発明で使用されるＰＥＧ部分は、本明細書に記載され、また、例えば、表Ｉに示される式Ａ−Ｉに図示されているような構造のいずれか１つを有し得る。この分子量の単位はダルトンである。それ故、本明細書（明細書、特許請求の範囲及び要約書）で使用されるＰＥＧの分子量に対する言及、例えば、所与のＰＥＧに対する「２Ｋ」、「３Ｋ」、「５Ｋ」及び「２０Ｋ」または「２０００」、「３０００」、「５０００」または「２００００」の言及は、それぞれ、２０００ダルトン（または２キロダルトン）、３０００ダルトン（または３キロダルトン）、５０００ダルトン（または５キロダルトン）、及び２００００ダルトン（または２０キロダルトン）のＰＥＧ重量を意味することが意図される。更に、本明細書で使用される場合、「ＫＤａ」はキロダルトンを意味する。表Ｉにおける式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩに示されるカルフィルゾミブ化合物は、本明細書において本発明によって記載及び定義されているようなリンカーを介して共有結合した異なるＰＥＧ部分を示すことが理解される。表Ｉにおける各式の理解を助けるために、
Ｙ＝
【化３２】
2019519530.tif 000036
（Ｒ１及びＲ２は、式Ｉ及びＩＩにおいて本明細書で定義されている通りである）。対アニオンＸ−は、本明細書で式Ｉ及びＩＩにおいて定義されている通りである。例えば、対アニオンＸ−は、Ｃｌ−、ＨＳＯ４−、ＳＯ４−２、ＮＯ３−、Ｈ２ＰＯ４−、アルキル／アリール−ＳＯ３−、例えばトシレート（トシルスルホン酸）、メシレート（メタンスルホン酸）またはベンジレート（ベンジルスルホン酸）アニオンであり得る。カルフィルゾミブ化合物のＰＥＧ部分は、典型的には、約４００ダルトン〜約５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有する。以下の式Ａ−Ｉに示される化合物のリンカー部分もまた、式Ｉ及びＩＩにおいて本明細書で定義されている通りである。例えば、リンカーは、
【化３３】
2019519530.tif 000037
（式中、Ｒ３は、ＨまたはＭｅである）であり得る。
【００９８】
【表１】
2019519530.tif 000038
2019519530.tif 000039
2019519530.tif 000040
【００９９】
実施形態５１では、ＰＥＧは、１ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１００】
実施形態５２では、ＰＥＧは、約１ｋＤａの分子量を有する。
【０１０１】
実施形態５３では、ＰＥＧは、２ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１０２】
実施形態５４では、ＰＥＧは、約２ｋＤａの分子量を有する。
【０１０３】
実施形態５５では、ＰＥＧは、５ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１０４】
実施形態５６では、ＰＥＧは、約５ｋＤａの分子量を有する。
【０１０５】
実施形態５７では、ＰＥＧは、１０ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１０６】
実施形態５８では、ＰＥＧは、約１０ｋＤａの分子量を有する。
【０１０７】
実施形態５９では、ＰＥＧは、２０ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１０８】
実施形態６０では、ＰＥＧは、約２０ｋＤａの分子量を有する。
【０１０９】
実施形態６１では、ＰＥＧは、３０ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１１０】
実施形態６２では、ＰＥＧは、約３０ｋＤａの分子量を有する。
【０１１１】
実施形態６３では、ＰＥＧは、４０ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１１２】
実施形態６４では、ＰＥＧは、約４０ｋＤａの分子量を有する。
【０１１３】
実施形態６５では、ＰＥＧは、５０ｋＤａより大きい分子量を有する。
【０１１４】
実施形態６６では、エポキシケトンプロテアーゼ阻害剤に対する複合体化の前に、ＰＥＧは、複数の反応性官能基（例えば、アジド基）を有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、エポキシケトンプロテアーゼ阻害剤との複合体化の前に、ＰＥＧは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の反応性官能基（例えば、アジド基）を有する。
【０１１６】
本発明のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、カルフィルゾミブ活性薬学的成分（ＡＰＩ）に複合体化したポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖を有する。この目的のため、本発明は、態様６７において、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、式Ｉまたは式ＩＩのカルフィルゾミブＰＥＧ化合物を提供する。実施形態６８では、ｎは８である。実施形態６９では、ｎは４である。実施形態７０では、ｎは２である。実施形態７１では、ｎは１である。
【０１１７】
本発明の一般的合成及び代表的な例
記載したように、式Ｉ及びＩＩにおけるペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、活性薬学的成分であるカルフィルゾミブの切断可能なポリマーＰＥＧ担体であり（式Ｉ及びＩＩ）、インビボで遊離カルフィルゾミブを放出する。可溶化ポリマー担体である所望のサイズ及び／または重量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は商業的に利用可能であり、例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ及び似たようなポリマー材料の商業的供給業者から購入することができる。ＰＥＧ基は、本明細書に記載されているように、自己犠牲パラ−アルカノイルオキシ置換ベンジルリンカーを介することを含む、様々なリンカー中のモルホリン環上の第四級塩としてカルフィルゾミブに付加され得る。リンカーは潜在的求核性フェノール基を含有し、これは生物学的または化学的誘発機構後に電子供与性になり、次いで電子カスケードを開始して最終的にカルフィルゾミブの放出に至る。可溶化ポリマー担体と第四級塩形成との独特な組み合わせにより、非常に高い水溶性を有する複合体がもたらされる。カルフィルゾミブは、エステラーゼ酵素を介して酵素的に、または水酸化物触媒加水分解によって化学的に複合体から放出される。このＰＥＧコンジュゲート単独／それ自体は、プロテアソーム阻害剤として活性であり、複合体が適切なエステラーゼ酵素またはわずかに塩基性の環境に曝露された場合、より活性な薬学的成分のカルフィルゾミブを速やかに放出することに留意すべきである。置換の速度は、酵素アクセスを制限する立体的に嵩高い基（複数可）、及び／または式Ｉ及びＩＩ中の位置Ｒ２での電子密度調節基（複数可）の導入によって時間範囲にわたって変化させることができる。
【０１１８】
略語：一般的スキーム及び実施例の両方を通して使用される以下の略語は、以下を意味することが意図される：
ＤＣＭ      ジクロロメタン；メチレンジクロライド
ＤＭＦ      ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ    ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
ＭｅＯＨ    メタノール
ｍｐｋ      ミリグラムパーキログラム；ｍｇ／ｋｇ
ＲＴ、ｒｔ    室温
ＮａＣｌ    塩化ナトリウム
ｔＢｕＯＨ    ｔ−ブタノール；ｔ−ブチルアルコール
【０１１９】
本発明の化合物を調製するために使用される出発材料のカルフィルゾミブは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６０１７８４２、ＷＯ２００９０４５４９７、ＷＯ２０１４１６９８９７、ＷＯ２０１３１６９２８２、ＷＯ２０１４０１１６９５、ＷＯ２００６０６３１５４、ＷＯ２０１４０１５０１６、ＷＯ２０１００４８２９８及び米国特許第７，７１４，０４２号及び第７，７３７，１１２号に記載されており、その各々の明細書は本明細書によってその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２０】
スキーム１：ベンジル脱離第四級塩の開裂
【化３４】
2019519530.tif 000041
【０１２１】
フェニルエステルの酵素的及び／または化学的加水分解は、カルボン酸（ＩＩ）及びフェノレート中間体（Ｉ）を提供し、フェノレート中間体（Ｉ）は迅速な１，６脱離を受けて遊離カルフィルゾミブ及びキノンメチドを提供し、キノンメチドは可溶化ＰＥＧポリマーに共有結合したままである。キノンメチドは、反応性マイケル受容体であることが知られており、潜在的な遺伝毒性に関連するリスクを示すと考えられている。本発明では、キノンメチドリンカー副生成物のポリマーへの永久的な結合は、細胞アクセスを妨げ、血清求核剤に対する反応性を低下させることによって毒性を減弱させ得る。インビボでの中間体ＩＩＩの最もあり得る結果は、排泄によって身体から迅速に除去されるベンジルアルコール−ポリマー付加物を形成する水との反応である。
【０１２２】
スキーム２：前述したカルフィルゾミブ−ポリマー複合体の切断
【化３５】
2019519530.tif 000042
【０１２３】
スキーム２は、ＷＯ２０１４０１１６９５に記載されているカルフィルゾミブポリマー化合物のための１つの代謝経路を示している。ここで、上で示したように、カルフィルゾミブ−ポリマー複合体は、エステラーゼ酵素と相互作用するか、または矢印によって示されるように化学的攻撃を受ける。この攻撃は、エステル加水分解の際に（上記で枠に囲まれた）遊離キノンメチドの放出をもたらす。このメチド中間体は更に細胞性求核剤と自由に反応し、場合により毒性をもたらし得る。本発明のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、スキーム１に記載されているように、この潜在的に毒性の副生成物を回避する。
【０１２４】
スキーム３：２工程ＰＥＧポリマー複合体化手順
【化３６】
2019519530.tif 000043
【０１２５】
本発明によって提供されるカルフィルゾミブ−ＰＥＧ化合物は、スキーム３に示されるように、２工程手順で調製される。カルフィルゾミブをまず適切に置換されたパラ−アルカノイルオキシ置換ベンジルハライド（１）と反応させて第四級塩中間体（２）を得る。第四級塩臭化物またはヨウ化物アニオンは、イオン交換樹脂を介して、重硫酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸二水素塩またはアルキル／アリールスルホン酸塩などの薬学的に許容されるアニオンと交換されて、中間体（３）を得ることができる。この中間体には、相補的に官能化されたポリマー試薬（４）との反応に好適な反応性基が好都合に付加されており、所望の生成物５が得られる。多数のＰＥＧ試薬が、分子量、構造、末端基の化学的性質、及び反応性末端基（アーム）の数の範囲で商業的に利用可能である（表１参照）。それらは、本開示に記載されたリンカーの化学的性質と直接適合していてもよく、または既知の方法によるいくつかの更なる化学的操作を必要としてもよい。分岐鎖及び複数アームＰＥＧは、より高い薬物荷重、改善された安定性、及び／またはより低い製剤粘度の潜在性などの線状ＰＥＧに対して利点を提供し得る。
【０１２６】
スキーム４：アジド／アルキンクリックケミストリーを介する２工程ポリマー複合体化
【化３７】
2019519530.tif 000044
【０１２７】
スキーム４は、高い化学的収率、無害な副生成物、大きな熱力学的原動力、及び出発材料の利用可能性のためにポリマー及びポリマーＰＥＧ結合体に特によく適しているヒュスゲン１，３−双極性アジド／アルキン付加環化及びアミノオキシ／アルデヒドオキシム化などの「クリック」ケミストリーを示している。
【０１２８】
ヒュスゲン１，３−双極性アジド／アルキン付加環化は、１，２，３−トリアゾール結合複合体（Ａ４−（１−６））を得るためにＰＥＧ−アジド（−Ｎ３）などのアジド官能化ポリマー担体と反応することができるアルキン基（Ａ１−（１−６））でベンジル基を置換することを必要とする。アルキン部分は、直接結合されていてもよく、アルキルスペーサー（Ａ１−１）を介して結合されていてもよく、エーテル（Ａ１−２、３）、チオエーテル、スルホキシドまたはスルホン（Ａ１−４）結合を介して結合されていてもよく、またはアミド結合（Ａ１−５、６）を介して結合されていてもよい。多くのアジド置換ＰＥＧ試薬は、多種多様なサイズ及び構造で現在商業的に利用可能であるだけでなく、メシル化またはトシル化による活性化に続くアジド塩との反応を介して任意の利用可能なＰＥＧ−アルコールから容易に調製され得る。付加環化反応は、商業的に利用可能な第一銅塩触媒を使用して実施され得るが、銅（ＩＩ）（例えば、硫酸銅（ＩＩ）、メタンスルホン酸銅（ＩＩ））と還元剤（例えば、アスコルビン酸ナトリウム）との混合物を使用してより効率的に進行し、Ｃｕ（Ｉ）をその場で生成する。銅（Ｉ）は、水溶液中及び酸素の存在下で不安定であるため、安定化リガンド、例えばトリス−（ベンジルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＢＴＡ）、トリス（３−ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）、２−［４−（｛ビス［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］エチル硫酸水素塩（ＢＴＴＥＳ）または２−［４−（｛ビス［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミノ｝メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］酢酸（ＢＴＴＡＡ）が任意に添加され得る。反応は、様々な溶媒、及び水と、アルコール、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ｔＢｕＯＨ及びアセトンを含む様々な混和性有機溶媒との混合物中で室温または高温で実行され得る。最終的なＰＥＧ−カルフィルゾミブ生成物（Ａ４−（１−６））は、反応混合物を水またはブラインで希釈し、ＤＣＭなどの有機溶媒で抽出し、所望の純度の生成物が得られるまでイソプロパノールまたはエーテル／イソプロパノール混合物から再沈殿させることによって好都合に後処理され得る。ブライン中の塩化物アニオンなどの後処理手順中のアニオンへの中間体または生成物の曝露は、典型的には最終生成物におけるアニオンの混合物をもたらし、生成物塩均質性を確保するために最終的なアニオン交換樹脂処理が必要であり得る。
【０１２９】
中間体第四級ハライド塩（臭化物またはヨウ化物、（Ａ２−（１−６））は、メタンスルホン酸塩、重硫酸塩または硫酸塩などの銅（Ｉ）触媒で沈殿しないアニオンに転化されて（Ａ３−（１−６））、高い反応収率を達成することができる。また、エポキシドの開裂及びブロモヒドリンまたはヨードヒドリン副生成物の形成可能性を防止するためにハライドアニオンを交換することが望ましい場合がある。
【０１３０】
スキーム４Ａ１−２
【化３８】
2019519530.tif 000045
【０１３１】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（スキーム４における中間体Ａ１−２）の合成
【０１３２】
工程１：４−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中のＮａＯｔＢｕの混合物に、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１０ｇ、７２．５ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を氷浴で冷却し、３−ブロモプロプ−１−イン（８．６２ｇ、７２．５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加しながら撹拌し、内部温度を１５〜２０℃に維持しようと試みた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層を水で洗浄してＤＭＦを除去し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して褐色固体を得た。残渣をＤＣＭ／石油エーテル（３０ｍＬ／５００ｍＬ）から繰り返し結晶化させて化合物１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ，）： δ ９．８７ （ｓ，１Ｈ），７．５４ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．５ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．８２ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ）．
【０１３３】
工程２：４−ホルミル−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（２）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物１（１０．００ｇ、５６．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１１．４８ｇ、１１３．６４ｍｍｏｌ）、続いて塩化アセチル（５．３５ｇ、６８．１８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を２Ｎの飽和ＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物２を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ９．９６ （ｓ，１Ｈ），７．６３ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．５７ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３５ （ｓ，３Ｈ）。
【０１３４】
工程３：４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（３）
ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ／１５ｍＬ）中の化合物２（１２．００ｇ、５５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（３．０６ｇ、８２．５７ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をアセトン（５ｍＬ）によってクエンチし、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ７．１６ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．９８ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．６９ （ｓ，２Ｈ），２．５３ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１３５】
工程４：４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（４）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物３（１１．５０ｇ、５２．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（２０．５０ｇ、７８．４１ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１１．０４ｇ、６２．７３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して、化合物４（７．８２ｇ、５３％の収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ７．１４ （ｍ，１Ｈ），７．０２ （ｍ，２Ｈ），４．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．４８ （ｓ，２Ｈ），２．５５ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１３６】
スキーム５：第四級塩アニオン交換
【化３９】
2019519530.tif 000046
【０１３７】
イオン交換は、スキーム５に示されるように、中間体第四級ハライドと銀塩との反応によって、またはより実際的には、イオン交換樹脂への通過によって達成され得る。中間体または最終生成物中に存在するカルフィルゾミブ第四級塩アニオンは、アニオン交換樹脂を介して重硫酸塩、硫酸塩、リン酸二水素塩、硝酸塩またはアルキル／アリールスルホン酸塩などの異なる強酸アニオンに効率的に転化され得る。ＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６（ＯＨ−型）などのアニオン交換樹脂を所望の酸またはアンモニウム塩で前処理し、次いで第四級ハライド塩を通過させる。酢酸塩、ギ酸塩または乳酸塩などの弱酸アニオンから調製された複合体は、第四級塩の増大した塩基性及びエステルトリガー基との非適合性のために不安定である。
【０１３８】
スキーム６：アミノオキシ／カルボニル化学を介する２工程ポリマー複合体化
【化４０】
2019519530.tif 000047
【０１３９】
代替的に、ベンジル基（Ｂ１−（１−６））は、ＰＥＧ−アミノオキシ（−ＯＮＨ２）などのアミノオキシ官能化ポリマー担体と反応して安定なオキシム結合複合体（Ｂ４−（１−６））を提供することができるカルボニル（アルデヒドまたはケトン）基で置換され得る。カルボニル部分は、直接結合されていてもよく、アルキルスペーサー（Ｂ１−１）を介して結合されていてもよく、エーテル（Ｂ１−２、３）、チオエーテル、スルホキシドまたはスルホン（Ｂ１−４）結合を介して結合されていてもよく、またはアミド結合（Ｂ１−５、６）を介して結合されていてもよい。カルフィルゾミブ及びベンジルハライド（Ｂ１−（１−６））をアセトニトリルなどの好適な有機溶媒中で室温または高温で反応させて、臭化物またはヨウ化物塩として第四級中間体（Ｂ２−（１−６））を提供する。エポキシドの開裂及びブロモヒドリンまたはヨードヒドリン副生成物の形成可能性を防止するためにこのハライドアニオンを交換することが望ましい。アニオン交換は、前述したように（スキーム５）、中間体第四級ハライドと銀塩との反応によって、またはより実際的には、イオン交換樹脂への通過によって達成され得る。カルフィルゾミブ第四級塩中間体（Ｂ３−（１−６））及びＰＥＧ−ＯＮＨ３＋Ｙ−ポリマー試薬を次いでＤＣＭまたは混合水性有機溶媒などの好適な有機物中で室温または高温で反応させる。アニリン、ｐ−フェニレンジアミン、または５−メトキシアントラニル酸などのオキシム化触媒が任意に添加され得るが、通常は必要ではない。カルフィルゾミブ第四級塩中間体（Ｂ３−（１−６））及びＰＥＧ−アミノオキシ試薬アニオン塩は、混合アニオン塩最終生成物の形成及び任意の更なるアニオン操作の必要性を排除するために同一であることに留意されたい。最終的なＰＥＧ−カルフィルゾミブ生成物は、反応溶媒の蒸発及び所望の純度の生成物が得られるまでのイソプロパノールまたはエーテル／イソプロパノール混合物からの残渣の再沈殿によって好都合に後処理され得る。
【０１４０】
スキーム７：ＰＥＧ−アミノオキシ試薬の合成
【化４１】
2019519530.tif 000048
【０１４１】
ＰＥＧ−アミノオキシ試薬は、商業的に利用可能であり得るか、またはスキーム７に図示されるように、メシルまたはトシル活性化ＰＥＧ−アルコール、ＰＥＧ−ハライド（Ａ）またはＰＥＧ−アミン（Ｂ）出発材料から容易に調製され得る。ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護中間体は、塩化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、または硫酸などの強酸で脱保護されて、塩化物、トリフルオロ酢酸塩または硫酸塩としてのＰＥＧ−アミノオキシ試薬を得ることができる。ＰＥＧ−アミノオキシ試薬アニオンは、アニオン交換樹脂を介して異なるアニオンと任意に交換され得る。
【０１４２】
スキーム８：オキシム異性体
【化４２】
2019519530.tif 000049
【０１４３】
スキーム８に図示されるように、オキシムが２つの幾何異性体：ｓｙｎ（Ｚ）−異性体及びａｎｔｉ（Ｅ）−異性体として存在し得ることは当業者によって容易に理解される。本開示における例の多くは、芳香族アルドキシムであり、（Ｅ）−異性体としてのみ存在する。非芳香族アルドキシム及びケトキシムは、通常、完全に分離され、（Ｚ）−異性体及び（Ｅ）−異性体として得ることができる。本発明において記載されているペグ化された非芳香族アルドキシム及びケトキシムは、分離した（Ｚ）及び（Ｅ）−異性体としてまたは（Ｚ）及び（Ｅ）−異性体の混合物として存在し得る。
【０１４４】
スキーム９：第四級塩を形成するための直接ポリマー複合体化
【化４３】
2019519530.tif 000050
【０１４５】
代替的に、本発明に記載のカルフィルゾミブ−ポリマー複合体は、スキーム９に示されるように、カルフィルゾミブと所望のポリマー鎖が予め付加されたパラ−アルカノイルオキシ置換ベンジルハライドとの１工程反応で調製され得る。ポリマー鎖は、多種多様な既知の化学または前述したアルキン／アジドまたはカルボニル／アミノオキシ化学を介して付加され得る。この経路は、ＰＥＧ含有生成物を未反応のペグ化された出発材料から分離することが困難であるため、あまり望ましくない場合がある。
【０１４６】
本発明の代表的な例
以下のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、本発明の代表的な例であり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されることは意図されていない。ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物は、以下の２つの一般的なＰＥＧ結合法（Ａ及びＢ）を使用して調製された。
【０１４７】
ＰＥＧトリアゾール−リンカー法Ａ：
【化４４】
2019519530.tif 000051
【０１４８】
カルフィルゾミブ第四級塩中間体Ａ３−（１−６）（１．５当量）、ＰＥＧ−アジド（１当量）及び（Ｌ）−アスコルビン酸（０．７５当量）をＤＭＦ（５０ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）中で混合して、クリーム色の懸濁液を得た。混合物を５分間激しく撹拌し、水（１０ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）中の硫酸銅（ＩＩ）五水和物（０．３当量）の溶液を迅速に滴下添加した。反応は直ちに暗くなって黄褐色になり、懸濁液は５分以内に透明になった。１時間後、アスコルビン酸の第２の部分（０．７５当量）を添加し、反応混合物を６０分間撹拌した。アスコルビン酸の第３の部分（０．３８当量）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。水（１００ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）及びＮａＣｌ（１５ｇ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）を添加し、混合物をＮａＣｌが溶解するまで撹拌した。生成物をＤＣＭ（３×３５ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）で抽出した。抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、４０℃で真空下で濃縮した。残渣をイソプロパノール（１２５ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）に４０℃で溶解させた。固体が完全に溶解させた後、ジエチルエーテル（９０ｍｌ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）を添加し、溶液を氷浴中で冷却した。得られた固体を濾過し、フィルターケーキを２−プロパノール及びジエチルエーテルでそれぞれ２回洗浄した。フィルターケーキをＤＣＭに溶解させ、真空下で濃縮した。残渣を温かい（４０℃）イソプロパノール（２００ｍＬ／ｍｍｏｌＰＥＧ−アジド）に溶解させ、次いで氷浴中で冷却した。得られた固体を濾過し、フィルターケーキを２−プロパノール及びジエチルエーテルでそれぞれ２回洗浄し、次いで真空下で乾燥させた。
【０１４９】
ＰＥＧオキシム−リンカー法Ｂ
【化４５】
2019519530.tif 000052
【０１５０】
ＤＣＭ（１５ｍＬ／ｍｍｏｌＢ３−（１−６））中のカルフィルゾミブ第四級塩中間体Ｂ３−（１−６）（１当量）、ＰＥＧ−ＯＮＨ３＋ＭｓＯ−（０．８当量）及び５−メトキシアントラニル酸（オキシム化触媒、０．３当量）をＰＥＧ試薬の完全な消費がＨＰＬＣ（ＥＬＳ検出器）によって観察されるまで室温で撹拌した。反応混合物を蒸発乾固し、残渣をイソプロパノール（１５ｍＬ／ｍｍｏｌＢ３−（１−６））に４０℃で溶解させた。透明な溶液を室温に冷却し、エーテル（５ｍＬ／ｍｍｏｌＢ３−（１−６））を添加して結晶化を誘発した。混合物を氷浴中で５〜１０分間冷却し、形成した固体を濾過によって収集した。未反応のカルフィルゾミブ第四級塩中間体Ｂ３−（１−６）の全てがＨＰＬＣによって検出して除去されるまで、イソプロパノール／エーテルからの再結晶化をもう１〜２回繰り返した。最終的な固体を３０℃で真空下で乾燥させた。典型的な収率：６０〜８０％；典型的な反応時間：アルデヒド官能基を含有する中間体の場合１０〜３０分、ケトン官能基を有する中間体の場合２４時間。
【０１５１】
調製されたＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物、ＰＥＧ構造及びＰＥＧリンカー手段の例が表２に列挙されている。表２は更に、ＰＥＧ付加物のサイズ及び重量（ダルトン）ならびにＰＥＧ部分をカルフィルゾミブ骨格に付加するために使用される方法を含む。
【０１５２】
【表２】
2019519530.tif 000053
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【実施例】
【０１５３】
実施例１：４−（４−アセトキシ−３−（（１−（ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
【化４６】
2019519530.tif 000059
【０１５４】
４−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＤＭＳＯ（３００ｍＬ）中のＮａＨの混合物に、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（３０ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、３−ブロモプロプ−１−イン（２５．８７ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を氷水（８００ｍＬ）に注ぎ、得られた溶液をｐＨ＝２に調整した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をＤＣＭ／石油エーテル（３０ｍＬ／５００ｍＬ）から繰り返し結晶化させて、化合物１を得た（３０ｇ、７８％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ ９．８７ （ｓ，１Ｈ），７．５４ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．５ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．８２ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ）。
【０１５５】
４−ホルミル−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（２）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物１（１０．００ｇ、５６．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１１．４８ｇ、１１３．６４ｍｍｏｌ）、続いて塩化アセチル（５．３５ｇ、６８．１８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を２Ｎの飽和ＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物２を得（１２ｇ、９７％の収率）、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ９．９６ （ｓ，１Ｈ），７．６３ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．５７ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３５ （ｓ，３Ｈ）
【０１５６】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（３）
ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ／１５ｍＬ）中の化合物２（１２．００ｇ、５５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（３．０６ｇ、８２．５７ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をアセトン（５ｍＬ）によってクエンチし、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、化合物３を得た（１０．３２ｇ、８５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ ７．１６ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．９８ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．６９ （ｓ，２Ｈ），２．５３ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１５７】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（４）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物３（１１．５０ｇ、５２．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（２０．５０ｇ、７８．４１ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１１．０４ｇ、６２．７３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して、化合物４を得た（７．８２ｇ、５３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ７．１４ （ｍ，１Ｈ），７．０２ （ｍ，２Ｈ），４．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．４８ （ｓ，２Ｈ），２．５５ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１５８】
４−（４−アセトキシ−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中の化合物４（５．８５ｍｇ、２０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（４．９６ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で２日間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：６）によって精製して、所望の化合物５を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（３．２ｇ、５０％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ９．６６ （ｍ，１Ｈ），７．８３ （ｍ，１Ｈ），７．３６ （ｍ，１Ｈ），７．２６−７．１４ （ｍ，１３Ｈ），６．７２ （ｍ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，１Ｈ），４．９０ （ｍ，２Ｈ），４．７７ （ｍ，２Ｈ），４．５３−４．３６ （ｍ，４Ｈ），４．２６ （ｍ，３Ｈ），４．０８ （ｍ，１Ｈ），３．９２ （ｍ，２Ｈ），３．７４ （ｍ，１Ｈ），３．４６ （ｍ，１Ｈ），３．３５ （ｍ，１Ｈ），３．１３ （ｍ，１Ｈ），３．０４ （ｍ，２Ｈ），２．８１ （ｓ，３Ｈ），２．７５ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ），２．３３ （ｍ，３Ｈ），２．２０ （ｍ，１Ｈ），２．１２ （ｍ，１Ｈ），１．７０−１．５３ （ｍ，３Ｈ），１．５０−１．３３ （ｍ，５Ｈ），１．２５ （ｍ，２Ｈ），０．９０−０．８１ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１５９】
実施例１は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物６及びＰＥＧ２０Ｋ（Ｎ３）４から調製した；１Ｈ ＮＭＲ （５００ Ｍｈｚ，緩和時間＝１０秒） ＤＭＳＯ−ｄ６ ＮＭＲ：  δ ９．５０ （ｓ，４Ｈ），８．５０ （ｓ，４Ｈ），８．３９ （ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，４Ｈ），８．２７ （ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，４Ｈ），８．１１ （ｓ，４Ｈ），８．０５ （ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，４Ｈ），７．５８ （ｓ，４Ｈ），７．２６−７．２９ （ｍ，１２Ｈ），７．１２−７．２３ （ｍ，３２Ｈ），７．０３−７．０６ （ｍ，４Ｈ），５．２６ （ｍ，８Ｈ），４．８９−５．００ （ｍ，８Ｈ），４．５２−４．５６ （ｍ，１２Ｈ），４．２８−４．３８ （ｍ，１６Ｈ），４．１７−４．２０ （ｍ，４Ｈ），４．０５ （ｍ，１６Ｈ），３．８１ （ｔ，Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ，８Ｈ），３．６３−３．６６ （ｍ，８Ｈ），３．５０ （ｓ，２０９８Ｈ），３．１０ （ｄ，Ｊ＝ ５ Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−２．９８ （ｍ，１２Ｈ），２．７２−２．７８ （ｍ，４Ｈ），２．５０−２．６５ （ｍ，８Ｈ），２．２４ （ｓ，１２Ｈ），１．９０−１．９８ （ｍ，４Ｈ），１．７８−１．８８ （ｍ，４Ｈ），１．５８−１．６６ （ｍ，８Ｈ），１．３９ （ｓ，１２Ｈ），１．２５−１．３８ （ｍ，１２Ｈ），０．８３６−０．８８２ （ｍ，２４Ｈ），０．７８６−０．８１７ （ｍ，２４Ｈ）；荷重：８７％。
【０１６０】
実施例２：４−（４−アセトキシ−２−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（９）
【化４７】
2019519530.tif 000060
【０１６１】
２−ヒドロキシ−４−（メトキシメトキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の化合物２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（５．０４ｇ、３６．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（６．５２ｇ、５４．３５ｍｍｏｌ）及びクロロ（メトキシ）メタン（３．２１ｇ、３９．８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１５：１）によって精製して、化合物１を得た（３．９６ｇ、６０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ １１．４１ （ｓ，１Ｈ），９．７６ （ｓ，１Ｈ），７．４８ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．７ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．６７ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．４ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．６２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），５．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ，２Ｈ），３．５１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．０ Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１６２】
４−（メトキシメトキシ）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（２）
ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中のＮａＨ（９００ｍｇ、２１．２５２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の化合物１（２．０ｇ、１０．６３ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、次いで３−ブロモプロプ−１−イン（１．９０ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を同じ温度で４時間撹拌し、次いで氷水（１００ｍＬ）に注いだ。得られた溶液をｐＨ＝２〜３に調整し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加した。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機の組み合わせた有機相を乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物２を得た（１．８９ｇ、８０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．３４ （ｓ，１Ｈ），７．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６ （ｍ，２Ｈ），５．２６ （ｓ，２Ｈ），４．８３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．５２ （ｓ，３Ｈ），２．６０ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１６３】
４−ヒドロキシ−２−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（３）
プロパン−２−オール（１００ｍＬ）中の化合物２（５．１ｇ、２３．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＢｒ４（７６０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩還流した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物３を得た（２．４４ｇ、６０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １０．７６ （ｓ，１Ｈ），１０．１１ （ｓ，１Ｈ），７．６０ （ｄ，Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．５９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．５２ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．０ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．７０ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１６４】
４−（ヒドロキシメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェノール（４）
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の化合物３（２．４５ｇ、１３．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（６１８ｍｇ、１６．６９８ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を同じ温度で１時間撹拌し、次いで水（１．５ｍＬ）でクエンチした。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に再溶解させた。得られた溶液を乾燥させ、濃縮して、化合物４を得（１．８０ｇ、７４％の収率）、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ６．９８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．３２ （ｓ，１Ｈ），６．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，２Ｈ），４．３２ （ｓ，２Ｈ），３．５４ （ｍ，１Ｈ）。
【０１６５】
４−（ヒドロキシメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（５）
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の化合物４（１．２０ｇ、６．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．７０ｇ、１６．８５ｍｍｏｌ）、続いて塩化アセチル（６３４ｍｇ、８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５：１）によって精製して、化合物５を得た（３６０ｍｇ、３０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．３８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．０ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），５．０９ （ｍ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．８２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４６ （ｄ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．６０ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．２６ （ｓ，３Ｈ）。
【０１６６】
４−（ブロモメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（６）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物５（３６０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（５１５ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）、続いてＮＢＳ（３１８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、化合物６を得た（１９０ｍｇ、４１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．３６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．７８ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．７３ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．０Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．７７ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．５４ （ｓ，２Ｈ），２．５６ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３１ （ｓ，３Ｈ）。
【０１６７】
４−（４−アセトキシ−２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物６（１９０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（４８０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ＝１：５０）によって精製して、所望の化合物７を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（３４０ｍｇ、７４％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６８ （ｍ，１Ｈ），７．８８ （ｍ，１Ｈ），７．６３ （ｍ，１Ｈ），７．３３〜７．１６ （ｍ，１０Ｈ），６．８９ （ｍ，３Ｈ），６．５０ （ｍ，１Ｈ），５．１６ （ｍ，１Ｈ），５．０５ （ｍ，１Ｈ），４．８７ （ｍ，１Ｈ），４．７５ （ｍ，２Ｈ），４．４７ （ｍ，２Ｈ），４．４５〜４．１２ （ｍ，８Ｈ），４．０２ （ｍ，３Ｈ），３．７２ （ｍ，１Ｈ），３．５４ （ｍ，１Ｈ），３．３８ （ｍ，１Ｈ），３．２０ （ｍ，１Ｈ），３．０６ （ｍ，２Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｍ，２Ｈ），２．６３ （ｍ，２Ｈ），２．４０〜２．０８ （ｍ，５Ｈ），１．６４ （ｍ，２Ｈ），１．４７ （ｓ，３Ｈ），０．８５ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１６８】
実施例２の化合物は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物８及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した
【０１６９】
実施例３：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（２−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（９）
【化４８】
2019519530.tif 000061
【０１７０】
２−ヒドロキシ−４−（メトキシメトキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＴＨＦ中の２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（５．０ｇ、３６．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（６．５２ｇ、５４．３５ｍｍｏｌ）及びクロロ（メトキシ）メタン（３．２１ｇ、３９．８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１５：１）によって精製して、化合物１を得た（３．９６ｇ、６０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １１．４１ （ｓ，１Ｈ），９．７６ （ｓ，１Ｈ），７．４８ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．７ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．６７ （ｄｄ，Ｊ１＝ ２．４ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．６２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），５．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ，２Ｈ），３．５１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．０ Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１７１】
４−（メトキシメトキシ）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（２）
ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中のＮａＨ（９００ｍｇ、２１．２５２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の化合物１（２．０ｇ、１０．６２６ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、次いで３−ブロモプロプ−１−イン（１．９０ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を同じ温度で４時間撹拌し、次いで氷水（１００ｍＬ）に注いだ。得られた溶液をｐＨ＝２〜３に調整し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加した。２つの相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物２を得た（１．８９ｇ、８０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．３４ （ｓ，１Ｈ），７．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６ （ｍ，２Ｈ），５．２６ （ｓ，２Ｈ），４．８３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．５２ （ｓ，３Ｈ），２．６０ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７２】
４−ヒドロキシ−２−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（３）
プロパン−２−オール（１００ｍＬ）中の化合物２（５．１ｇ、２３．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＢｒ４（７６０ｍｇ、２．３１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩還流した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物３を得た（２．４４ｇ、６０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １０．７６ （ｓ，１Ｈ），１０．１１ （ｓ，１Ｈ），７．６０ （ｄ，Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．５９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．５２ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．０ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．７０ （ｑ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７３】
４−（ヒドロキシメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェノール（４）
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の化合物３（２．４５ｇ、１３．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（６１８ｍｇ、１６．６９８ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を同じ温度で１時間撹拌し、次いで水（１．５ｍＬ）によってクエンチした。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に再溶解させた。得られた溶液を乾燥させ、濃縮して、化合物４を得（１．８０ｇ、７４％の収率）、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ６．９８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．３２ （ｓ，１Ｈ），６．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，２Ｈ），４．３２ （ｓ，２Ｈ），３．５４ （ｍ，１Ｈ）。
【０１７４】
４−（ヒドロキシメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルプロピオネート（５）
ＤＣＭ／ＴＨＦ（３０ｍＬ／５ｍＬ）中の化合物４（２．４ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（３．４１ｇ、３３．７５ｍｍｏｌ）及び無水プロピオン酸（１．９３ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物５を得た（８５０ｍｇ、３０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．３８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．８１ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．７４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．４ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．０８ （ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．８０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４６ （ｓ，２Ｈ），３．６０ （ｍ，１Ｈ），２．２０ （ｍ，２Ｈ），１．１６ （ｍ，３Ｈ）。
【０１７５】
４−（ブロモメチル）−３−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルプロピオネート（６）
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の化合物５（８５０ｍｇ、３．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（１．２４ｇ、４．７２ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（７６７．４ｍｇ、４．３６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物６を得た（７８０ｍｇ、７３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．３４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．７８ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．７３ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．４ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．７７ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５４ （ｍ，１Ｈ），２．６０ （ｍ，２Ｈ），２．５６ （ｍ，１Ｈ），１．２７ （ｑ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１７６】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物６（７８０ｍｇ、２．６２６ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（９４５ｍｇ、１．３１３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：３）によって精製して、所望の化合物７を得（７６０ｍｇ、５７％の収率）、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（７４０ｍｇ、９７％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６４ （ｍ，１Ｈ），７．８８ （ｍ，１Ｈ），７．６３ （ｍ，１Ｈ），７．２６ （ｍ，１０Ｈ），６．９２ （ｍ，１Ｈ），６．８９ （ｍ，２Ｈ），６．５０ （ｍ，１Ｈ），５．１６ （ｍ，１Ｈ），５．０５ （ｍ，１Ｈ），４．８７ （ｍ，１Ｈ），４．７８ （ｍ，２Ｈ），４．４７ （ｍ，２Ｈ），４．４５〜４．１２ （ｍ，８Ｈ），３．７２ （ｍ，１Ｈ），３．５４ （ｍ，１Ｈ），３．３８ （ｍ，１Ｈ），３．２０ （ｍ，１Ｈ），３．０６ （ｍ，２Ｈ），２．８４ （ｍ，１Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｍ，２Ｈ），２．６３ （ｍ，３Ｈ），２．４０〜２．０８ （ｍ，５Ｈ），１．６４ （ｍ，２Ｈ），１．４７ （ｓ，３Ｈ），１．２４ （ｍ，３Ｈ），０．８５ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１７７】
ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物実施例３は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物８及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０１７８】
実施例４：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバモイル）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（９）
【化４９】
2019519530.tif 000062
【０１７９】
ｔｅｒｔ−ブチル５−ホルミル−２−ヒドロキシベンゾエート（１）
２−メチルプロパン−２−オール（７０ｍＬ）中の化合物５−ホルミル−２−ヒドロキシ安息香酸（２．０１ｇ、１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（２．３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を還流下で３時間撹拌した。溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５：１）によって精製して、化合物１を得た（１．８ｇ、７５％の収率）。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １１．７６ （ｓ，１Ｈ），９．９１ （ｓ，１Ｈ），８．３３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），８．００ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．８ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．１１ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），１．６８ （ｓ，９Ｈ）。
【０１８０】
ｔｅｒｔ−ブチル５−ホルミル−２−（イソブチリルオキシ）ベンゾエート（２）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物１（１．０１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１．０７ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）及び無水イソ酪酸（１．４２３ｇ、９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を３時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物２を得た（４２０ｍｇ、３６％の収率）。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．０４ （ｓ，１Ｈ），８．３６ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），８．０４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ ２．１ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｍ，１Ｈ），２．９１ （ｍ，１Ｈ），１．５９ （ｓ，９Ｈ），１．３６ （ｄ，Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ，６Ｈ）
【０１８１】
ｔｅｒｔ−ブチル５−（ヒドロキシメチル）−２−（イソブチリルオキシ）ベンゾエート（３）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物２（４００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（５７．３ｍｇ、１．５ｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を１時間撹拌し、次いでアセトン（１ｍＬ）によってクエンチした。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝８：１）によって精製して、化合物３を得た（３００ｍｇ、７５％の収率）。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．８５ （ｍ，１Ｈ），７．５２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．７３ （ｓ，２Ｈ），２．８８ （ｍ，１Ｈ），１．５７ （ｓ，９Ｈ），１．３０ （ｍ，６Ｈ）。
【０１８２】
５−（ヒドロキシメチル）−２−（イソブチリルオキシ）安息香酸（４）
ＴＦＡ／ＤＣＭ（ｖ／ｖ、３ｍＬ／１２ｍＬ）中の化合物３（４００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩撹拌した。混合物を水に注ぎ、水溶液をｐＨ＝３〜４に調整した。２つの相を分離し、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物４を得（２０２ｍｇ、６２％の収率）、これを更に精製することなく次の工程で使用した。
【０１８３】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルカルバモイル）フェニルイソブチレート（５）
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物４（２０２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２１９．３ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（９６９ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）及びプロプ−２−イン−１−アミン（９３．５ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５：１）によって精製して、化合物５を得た（１３０ｍｇ、６０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．８３ （ｍ，１Ｈ），７．５２ （ｍ，１Ｈ），７．１０ （ｍ，１Ｈ），４．６５ （ｓ，２Ｈ），４．２４ （ｍ，２Ｈ），２．８７ （ｍ，１Ｈ），２．３０ （ｍ，１Ｈ），１．２６ （ｍ，６Ｈ）。
【０１８４】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルカルバモイル）フェニルイソブチレート（６）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物５（１３０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（１７０．３ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１０５．６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、溶媒を濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物６を得た（５０ｍｇ、３２％の収率）。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．８８ （ｍ，１Ｈ），７．３７ （ｍ，１Ｈ），７．１１ （ｍ，１Ｈ），４．５１ （ｓ，２Ｈ），４．２３ （ｍ，２Ｈ），２．８７ （ｍ，１Ｈ），２．３１ （ｍ，１Ｈ），１．３７ （ｍ，６Ｈ）。
【０１８５】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルカルバモイル）ベンジル）モルホリン−４−イウムブロマイド（８）
ＭｅＣＮ（４ｍＬ）中の化合物６（３６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（７２０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝５０：１）によって精製して、所望の生成物７を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（１５０ｍｇ、１５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６１ （ｍ，１Ｈ），７．９０ （ｍ，１Ｈ），７．６４ （ｍ，２Ｈ），７．３４−７．１０ （ｍ，１２Ｈ），６．９２ （ｍ，１Ｈ），６．６８ （ｍ，１Ｈ），５．０３ （ｍ，２Ｈ），４．８６ （ｍ，１Ｈ），４．５８−４．３２ （ｍ，４Ｈ），４．２８−４．１０ （ｍ，５Ｈ），３．９６ （ｍ，４Ｈ），３．４７−３．３１ （ｍ，２Ｈ），３．１８ （ｍ，１Ｈ），３．０６−２．８７ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｓ，３Ｈ），２．７６ （ｍ，２Ｈ），２．２６ （ｍ，１Ｈ），２．２３−２．０４ （ｍ，３Ｈ），１．６６−１．５８ （ｍ，２Ｈ），１．４２ （ｍ，４Ｈ），１．３８−１．３０ （ｍ，６Ｈ），１．２７ （ｍ，４Ｈ），０．９０−０．８４ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１８６】
ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物実施例４は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物８及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０１８７】
実施例５：４−（４−アセトキシ−３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
【化５０】
2019519530.tif 000063
【０１８８】
４−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＤＭＳＯ（３００ｍＬ）中のＮａＨの混合物に、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（３０ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、３−ブロモプロプ−１−イン（２５．８７ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を氷水（８００ｍＬ）に注ぎ、得られた溶液をｐＨ＝２に調整した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をＤＣＭ／石油エーテル（３０ｍＬ／５００ｍＬ）から繰り返し結晶化させて、化合物１を得た（３０ｇ、７８％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ，）：δ ９．８７ （ｓ，１Ｈ），７．５４ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．５ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．８２ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ）。
【０１８９】
４−ホルミル−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（２）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物１（１０．００ｇ、５６．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１１．４８ｇ、１１３．６４ｍｍｏｌ）、続いて塩化アセチル（５．３５ｇ、６８．１８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を２Ｎの飽和ＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物２を得（１２ｇ、９７％の収率）、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ９．９６ （ｓ，１Ｈ），７．６３ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．５７ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３５ （ｓ，３Ｈ）。
【０１９０】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（３）
ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ／１５ｍＬ）中の化合物２（１２．００ｇ、５５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（３．０６ｇ、８２．５７ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をアセトン（５ｍＬ）によってクエンチし、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、化合物３を得た（１０．３２ｇ、８５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ７．１６ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．９８ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．６９ （ｓ，２Ｈ），２．５３ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１９１】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（４）
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物３（１１．５０ｇ、５２．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（２０．５０ｇ、７８．４１ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１１．０４ｇ、６２．７３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して、化合物４を得た（７．８２ｇ、５３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ７．１４ （ｍ，１Ｈ），７．０２ （ｍ，２Ｈ），４．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．４８ （ｓ，２Ｈ），２．５５ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０１９２】
４−（４−アセトキシ−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中の化合物４（５．８５ｍｇ、２０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（４．９６ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で２日間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：６）によって精製して、所望の化合物５を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（３．２ｇ、５０％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ ９．６６ （ｍ，１Ｈ），７．８３ （ｍ，１Ｈ），７．３６ （ｍ，１Ｈ），７．２６−７．１４ （ｍ，１３Ｈ），６．７２ （ｍ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，１Ｈ），４．９０ （ｍ，２Ｈ），４．７７ （ｍ，２Ｈ），４．５３−４．３６ （ｍ，４Ｈ），４．２６ （ｍ，３Ｈ），４．０８ （ｍ，１Ｈ），３．９２ （ｍ，２Ｈ），３．７４ （ｍ，１Ｈ），３．４６ （ｍ，１Ｈ），３．３５ （ｍ，１Ｈ），３．１３ （ｍ，１Ｈ），３．０４ （ｍ，２Ｈ），２．８１ （ｓ，３Ｈ），２．７５ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ），２．３３ （ｍ，３Ｈ），２．２０ （ｍ，１Ｈ），２．１２ （ｍ，１Ｈ），１．７０−１．５３ （ｍ，３Ｈ），１．５０−１．３３ （ｍ，５Ｈ），１．２５ （ｍ，２Ｈ），０．９０−０．８１ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１９３】
ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物実施例５は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物６及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０１９４】
実施例６：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化５１】
2019519530.tif 000064
【０１９５】
４−ホルミル−２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）フェニルプロピオネート（１）
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（２．６４ｇ、１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（３ｇ、３０ｍｍｏｌ）及び塩化プロピオニル（１．６７ｇ、１８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物を水（５０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ相を収集し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物１を得た（２．４ｇ、８５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．９７ （ｓ，１Ｈ），７．６４ （ｄ，Ｊ ＝ １．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．５５ （ｄ，Ｊ１ ＝ １．５ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ７．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．６８ （ｑ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ，２Ｈ），２．５８ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），１．３１ （ｔ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１９６】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルプロピオネート（２）
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の化合物１（２．３２ｇ、０．０１ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（５７０ｍｇ、０．０１５ｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５ｍＬ）によってクエンチした。有機相を収集し、水相をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）によって抽出した。有機相を組み合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、化合物２（１．７ｇ、７３％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．１２〜６．９５ （ｍ，３Ｈ），４．６８ （ｍ，２Ｈ），４．６２ （ｍ，２Ｈ），２．６３ （ｍ，２Ｈ），２．５３ （ｍ，１Ｈ），１．２７ （ｍ，３Ｈ）。
【０１９７】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルプロピオネート（３）
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の化合物２（１．７ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（２．２８ｇ、８．７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．１２ｇ、８．７ｍｍｏｌ）を順次添加した。混合物を０℃に冷却し、ＮＢＳ（１．４ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物３を得た（４００ｍｇ、１９％の収率）。
【０１９８】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物３（４００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（４８４．８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩加熱した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の化合物４を得（３８０ｍｇ、４８％の収率）、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（３７０ｍｇ、定量的）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６３ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．３５〜７．０９ （ｍ，１３Ｈ），６．９１ （ｍ，１Ｈ），６．５２ （ｍ，１Ｈ），５．１３ （ｍ，１Ｈ），５．０２〜４．８２ （ｍ，５Ｈ），４．７２ （ｍ，２Ｈ），４．５０〜３．８３ （ｍ，１１Ｈ），３．５２〜３．３１ （ｍ，２Ｈ），３．１８〜２．５８ （ｍ，１１Ｈ），１．６８〜１．１８ （ｍ，９Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０１９９】
ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物実施例６は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物５及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０２００】
実施例７：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化５２】
2019519530.tif 000065
【０２０１】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中の化合物３（０．５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（８６４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で２０時間撹拌した。溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：６）によって精製して、所望の化合物４を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（５００ｍｇ、４４％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６７ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．２７ （ｍ，１６Ｈ），６．８５ （ｍ，１Ｈ），６．４７ （ｍ，１Ｈ），５．１３ （ｍ，１Ｈ），５．０２ （ｍ，１Ｈ），４．８５ （ｍ，１Ｈ），４．７０ （ｍ，２Ｈ），４．４５ （ｍ，２Ｈ），４．３７ （ｍ，２Ｈ），４．２３ （ｍ，４Ｈ），３．９２ （ｍ，２Ｈ），３．８４ （ｍ，１Ｈ），３．４６ （ｍ，１Ｈ），３．３５ （ｍ，１Ｈ），３．１５ （ｍ，１Ｈ），３．０３ （ｍ，１Ｈ），２．９２ （ｍ，１Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｍ，２Ｈ），２．５８ （ｍ，１Ｈ），２．２０ （ｍ，１Ｈ），２．１２ （ｍ，１Ｈ），１．７０ （ｍ，１Ｈ），１．６２ （ｍ，３Ｈ），１．４３ （ｍ，４Ｈ），１．２８ （ｍ，６Ｈ），１．２１ （ｍ，３Ｈ），０．８５ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２０２】
実施例７は、実施例３及び５に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＮ３を反応させた。
【０２０３】
実施例８：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ブチリルオキシ）−３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化５３】
2019519530.tif 000066
【０２０４】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ブチリルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（８ｍＬ）中の化合物３（０．７ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（０．８ｇ、１．１２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００／３）によって精製して、所望の化合物４を得（５００ｍｇ、２３．３％の収率）、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（４６０ｍｇ、９２％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．７３ （ｍ，１Ｈ），７．７６ （ｍ，１Ｈ），７．３３〜７．１０ （ｍ，１３Ｈ），６．９１ （ｍ，１Ｈ），６．５２ （ｍ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，１Ｈ），５．０８〜４．８５ （ｍ，２Ｈ），４．７２ （ｍ，２Ｈ），４．５０〜３．７８ （ｍ，１１Ｈ），３．５２〜３．３１ （ｍ，２Ｈ），３．１８〜２．５８ （ｍ，１１Ｈ），２．１８ （ｍ，２Ｈ），１．６８〜１．２４ （ｍ，１２Ｈ），０．８４ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２０５】
実施例８は、実施例３で記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化イソプロパノイルを使用して、実施例３に示された中間体１に対する結果物（ｃｏｒｒｅｌａｒｙ）を生成する）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＮ３を反応させた。
【０２０６】
実施例９：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ヘキサノイルオキシ）−３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化５４】
2019519530.tif 000067
【０２０７】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ヘキサノイルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（２５ｍＬ）中の化合物３（１．４１ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（１．０ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０〜４５℃で一晩加熱した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製して、所望の化合物４を得、これをイオン交換樹脂での処理によってメシル酸塩に変換した（５７０ｍｇ、４１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．７２ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．３４〜７．１５ （ｍ，１２Ｈ），７．１０ （ｍ，１Ｈ），６．８２ （ｍ，１Ｈ），６．４３ （ｍ，１Ｈ），５．１５ （ｍ，１Ｈ），４．９８ （ｍ，１Ｈ），４．７６ （ｍ，２Ｈ），４．４６ （ｍ，２Ｈ），４．３８ （ｍ，２Ｈ），４．２５ （ｍ，３Ｈ），４．１２ （ｍ，１Ｈ），４．０１ （ｍ，２Ｈ），３．８５ （ｍ，２Ｈ），３．４７ （ｍ，１Ｈ），３．３６ （ｍ，１Ｈ），３．１５ （ｍ，１Ｈ），３．０１ （ｍ，２Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７２ （ｍ，２Ｈ），２．６０ （ｍ，２Ｈ），２．５１ （ｍ，１Ｈ），２．３５〜２．１４ （ｍ，４Ｈ），１．７６ （ｍ，２Ｈ），１．５５ （ｍ，２Ｈ），１．４８ （ｍ，４Ｈ），１．３７ （ｍ，６Ｈ），１．２３ （ｍ，３Ｈ），０．８６ （ｍ，１２ Ｈ）。
【０２０８】
実施例９は、実施例３に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ペンタノイルを使用して実施例３で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＮ３を反応させた。
【０２０９】
実施例１０：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）−４−（オクタノイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化５５】
2019519530.tif 000068
【０２１０】
実施例１０は、実施例３に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ヘプタノイル及びトリメチルアミンを使用して実施例３で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＮ３を反応させた。
【０２１１】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（オクタノイルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（２５ｍＬ）中の化合物３（１．５３ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（１．００ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０〜４５℃で一晩撹拌した。溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：５）によって精製して、所望の化合物４を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（６２０ｍｇ、４４％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６９ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．３４〜７．１５ （ｍ，１２Ｈ），７．１０ （ｍ，１Ｈ），６．８８ （ｍ，１Ｈ），６．５１ （ｍ，１Ｈ），５．１５ （ｍ，１Ｈ），４．９８ （ｍ，１Ｈ），４．８８ （ｍ，１Ｈ），４．７４ （ｍ，２Ｈ），４．４６ （ｍ，２Ｈ），４．３８ （ｍ，２Ｈ），４．２５ （ｍ，４Ｈ），４．０２ （ｍ，２Ｈ），３．８５ （ｍ，１Ｈ），３．４７ （ｍ，１Ｈ），３．３６ （ｍ，１Ｈ），３．１５ （ｍ，１Ｈ），３．０１ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｓ，３Ｈ），２．７２ （ｍ，２Ｈ），２．６０ （ｍ，３Ｈ），２．３５−２．１４ （ｍ，３Ｈ），１．７６ （ｍ，２Ｈ），１．５５ （ｍ，２Ｈ），１．４８−１．２３ （１５Ｈ），０．９２〜０．７８ （１２ Ｈ）。
【０２１２】
実施例１１：４−（４−アセトキシ−３−メチル−５−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化５６】
2019519530.tif 000069
【０２１３】
３，４−ジヒドロキシ−５−メチルベンズアルデヒド（１）
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物４−ヒドロキシ−３−メトキシ−５−メチル−ベンズアルデヒド（２．００ｇ、１２．０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＢｒ３（３．０２ｇ、１２．０４ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を−２０℃で飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）でクエンチした。２つの相を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物１を得た（１．５６ｇ、８５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ９．９４ （ｓ，１Ｈ），９．６９ （ｓ，１Ｈ），９．４７ （ｓ，１Ｈ），７．２１ （ｓ，１Ｈ），７．１５ （ｓ，１Ｈ），２．０２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２１４】
４−ヒドロキシ−３−メチル−５−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（２）
ＤＭＳＯ（３０ｍＬ）中のＮａＨ（４８９．１２ｍｇ、２０．３８ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中の化合物１（１．５５ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、次いで３−ブロモプロプ−１−イン（１．２１ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）を同じ温度で添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、水（１００ｍＬ）でクエンチした。得られた溶液をｐＨ＝４〜５に調整し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせたＥｔＯＡｃ相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物２を得た（１．７ｇ、８８％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ９．８４ （ｓ，１Ｈ），９．７７ （ｓ，１Ｈ），７．４２ （ｍ，２Ｈ），４．９４ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．６５ （ｍ，１Ｈ），２．２２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２１５】
４−ホルミル−２−メチル−６−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（３）
ＤＣＭ中の化合物２（１．６０ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（２．００ｇ、２５．２３ｍｍｏｌ）、続いて塩化アセチル（１．３２ｇ、１６．８２ｍｍｏｌ）を液滴で０℃で添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで水（１００ｍＬ）を添加した。２つの相を分離し、有機相を希ＨＣｌ（１Ｎ、５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物３（２．０ｇ、定量的）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ９．９５ （ｓ，１Ｈ），７．５６ （ｍ，２Ｈ），４．９６ （ｍ，２Ｈ），３．６７ （ｍ，１Ｈ），２．３６ （ｍ，３Ｈ），２．２３ （ｓ，３Ｈ）。
【０２１６】
４−（ヒドロキシメチル）−２−メチル−６−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（４）
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の化合物３（２．００ｇ、８．６１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（３２５．８０ｍｇ、８．６１ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。反応混合物を同じ温度で１時間撹拌し、次いで水（１ｍＬ）でクエンチした。混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、無水ＭｇＳＯ４で直接乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５：１）によって精製して、化合物４（１．５ｇ、７４％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．００ （ｓ，１Ｈ），６．８６ （ｓ，１Ｈ），５．２６ （ｍ，１Ｈ），４．７８ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．４７ （ｍ，２Ｈ），３．６１ （ｍ，１Ｈ），２．３１ （ｓ，３Ｈ），２．１１ （ｓ，３Ｈ）。
【０２１７】
４−（ブロモメチル）−２−メチル−６−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルアセテート（５）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物４（１．５０ｇ、６．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（１．７５ｇ、６．４６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）でクエンチした。２つの相を分離し、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３０：１）によって精製して、化合物５（７５０ｍｇ、３９％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．００ （ｓ，１Ｈ），６．９４ （ｓ，１Ｈ），４．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．４７ （ｓ，２Ｈ），２．５７ （ｍ，１Ｈ），２．３７ （ｓ，３Ｈ），２．１９ （ｓ，３Ｈ）。
【０２１８】
４−（４−アセトキシ−３−メチル−５−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物５（３５１．２５ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（４２８．３５ｍｇ、５９５．００ｕｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０〜４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：１）によって精製して、所望の化合物６を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（２８０ｍｇ、５０％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６８ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．２６ （ｍ，１１Ｈ），７．００ （ｍ，２Ｈ），６．６０ （ｍ，１Ｈ），５．１７ （ｍ，１Ｈ），５．０８ （ｍ，１Ｈ），４．７８ （ｍ，３Ｈ），４．４６ （ｍ，４Ｈ），４．２２ （ｍ，４Ｈ），４．０１ （ｍ，２Ｈ），３．８０ （ｍ，２Ｈ），３．４５ （ｍ，２Ｈ），３．１８ （ｍ，１Ｈ），３．０５ （ｍ，２Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｍ，２Ｈ），２．６０ （ｍ，１Ｈ），２．４３ （ｍ，３Ｈ），２．２０ （ｍ，３Ｈ），１．５８ （ｍ，２Ｈ），１．４６ （ｍ，６Ｈ），１．３２ （ｍ，３Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２１９】
実施例１１は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物７及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０２２０】
実施例１２：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバモイル）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（９）
【化５７】
2019519530.tif 000070
【０２２１】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ピバロイルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルカルバモイル）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物６（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（７２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＭｅＣＮ／Ｅｔ２Ｏ（ｖ／ｖ、１／５）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物７を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（１２０ｍｇ、１１．２％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６３ （ｍ，１Ｈ），７．８２〜７．５５ （ｍ，４Ｈ），７．３３〜７．０８ （ｍ，１１Ｈ），６．８５ （ｍ，１Ｈ），６．６２ （ｍ，１Ｈ），５．１３〜４．８２ （ｍ，２Ｈ），４．５０〜３．９３ （ｍ，１４Ｈ），３．４２〜２．６８ （ｍ，１１Ｈ），２．５〜１．９ （ｍ，６Ｈ），１．６８〜１．１８ （ｍ，１９Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２２２】
実施例１２は、実施例４に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ｔ−ブタノイルを使用して実施例４で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物８及びＰＥＧ５ＫＮ３を反応させた。
【０２２３】
実施例１３：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（１−（ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムホルメート（７）
【化５８】
2019519530.tif 000071
【０２２４】
４−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−イニルオキシ）ベンズアルデヒド（１）
ＤＭＳＯ（３００ｍＬ）中のＮａＨの混合物に、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（３０ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、３−ブロモプロプ−１−イン（２５．８７ｇ、２１７．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで氷水に注いだ。得られた溶液をｐＨ＝２に調整し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をＤＣＭ／石油エーテル（３０ｍＬ／５００ｍＬ）から繰り返し結晶化させて、化合物１を得た（３０ｇ、７８％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ，）：δ ９．８９ （ｓ，１Ｈ），７．５４ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．５ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．８２ （ｍ，２Ｈ），２．６２ （ｍ，１Ｈ）。
【０２２５】
４−ホルミル−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルピバレート（２）
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中の化合物１（３．０ｇ、１７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（３．４５ｇ、３４ｍｍｏｌ）、続いて塩化ピバロイル（２．３４ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、化合物２（２．１０ｇ、４７％の収率）を白色固体として得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ ９．９９ （ｓ，１Ｈ），７．６１ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．５５ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．８ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．７７ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．５８ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），１．４２ （ｓ，９Ｈ）。
【０２２６】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルピバレート（３）
ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００ｍＬ／１０ｍＬ）中の化合物２（１．８ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．３７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をアセトン（３ｍＬ）によってクエンチし、溶媒を濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物３を得た（１．５０ｇ、８３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ ７．１１ （ｍ，１Ｈ），７．００ （ｍ，２Ｈ），４．６８ （ｍ，４Ｈ），２．５３ （ｍ，１Ｈ），１．４１ （ｓ，９Ｈ）。
【０２２７】
４−（ブロモメチル）−２−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニルピバレート（４）
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の化合物３（１．５０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（１．８０ｇ、６．８ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１．１１ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、化合物４（１．３４ｇ、８１％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ ７．１２ （ｄ，Ｊ ＝ １．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．０３ （ｍ，２Ｈ），４．７０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．５１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．９ Ｈｚ，２Ｈ），２．５６ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），１．４０ （ｓ，９Ｈ）。
【０２２８】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（ピバロイルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
ＭｅＣＮ（３０ｍｌ）中の化合物４（２．３８ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（２．６４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：６）によって精製して、所望の化合物５を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（１．２３ｇ、２５％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ ９．８３ （ｍ，１Ｈ），７．９２ （ｍ，１Ｈ），７．５０−７．１１ （ｍ，１３Ｈ），７．０３ （ｍ，１Ｈ），６．６２ （ｍ，１Ｈ），５．２５ （ｍ，１Ｈ），５．１５−４．９０ （ｍ，２Ｈ），４．８８−４．７５ （ｍ，２Ｈ），４．７０−４．２０ （ｍ，７Ｈ），４．２０−３．９０ （ｍ，３Ｈ），３．７０−３．４０ （ｍ，４Ｈ），３．２６ （ｍ，１Ｈ），３．１５ （ｍ，２Ｈ），２．９０ （ｓ，３Ｈ），２．８５ （ｍ，２Ｈ），２．４０−２．１０ （ｍ，２Ｈ），１．８７−１．６３ （ｍ，５Ｈ），１．５５ （ｍ，３Ｈ），１．４１ （ｓ，９Ｈ），１．３８ （ｍ，２Ｈ），０．８９−１．０５ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２２９】
化合物実施例１３は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物６及びＰＥＧ２０Ｋ（Ｎ３）４から調製した。化合物実施例１３はまた、本明細書に例示した様々な図においてＯＰ−５９３８１と指定されている。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，緩和時間＝１０秒，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．４７ （ｓ，４Ｈ），８．４２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ，４Ｈ），８．２９ （ｄ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ，４Ｈ），８．１１ （ｓ，４Ｈ），８．０７ （ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，４Ｈ），７．５３ （ｓ，４Ｈ），７．２６−７．２９ （ｍ，４Ｈ），７．１１−７．１９ （ｍ，３２Ｈ），７．０５−７．０６ （ｍ，４Ｈ），５．２１ （ｓ，８Ｈ），４．９５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ及び３９．０ Ｈｚ，８Ｈ），４．５２−４．５４ （ｍ，１２Ｈ），４．２８−４．３８ （ｍ，１６Ｈ），４．１７−４．２０ （ｍ，４Ｈ），４．０６ （ｍ，２０Ｈ），３．７８ （ｔ，Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ，８Ｈ），３．６１−３．６５ （ｍ，８Ｈ），３．５０ （ｓ，２１３３Ｈ），３．３５−３．３７ （ｍ，８Ｈ），３．１０ （ｄ，Ｊ ＝ ５ Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−２．９８ （ｍ，１２Ｈ），２．７３−２．７８ （ｍ，４Ｈ），２．５０−２．６５ （ｍ，８Ｈ），１．９０−１．９８ （ｍ，４Ｈ），１．７８−１．８８ （ｍ，４Ｈ），１．５１−１．６８ （ｍ，８Ｈ），１．３９ （ｓ，１２Ｈ），１．２５−１．３８ （ｍ，１６Ｈ），１．１８ （ｓ，３６Ｈ），０．８３３−０．８８１ （ｍ，２４Ｈ），０．７８２−０．８１５ （ｍ，２４Ｈ）；荷重：８６％。
【０２３０】
実施例１４：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（（１−ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（１４）
【化５９】
2019519530.tif 000072
【０２３１】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中の化合物３（０．５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（８６４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で２０時間撹拌した。溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：６）によって精製して、所望の化合物４を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（５００ｍｇ、４４％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６７ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，１Ｈ），７．２７ （ｍ，１６Ｈ），６．８５ （ｍ，１Ｈ），６．４７ （ｍ，１Ｈ），５．１３ （ｍ，１Ｈ），５．０２ （ｍ，１Ｈ），４．８５ （ｍ，１Ｈ），４．７０ （ｍ，２Ｈ），４．４５ （ｍ，２Ｈ），４．３７ （ｍ，２Ｈ），４．２３ （ｍ，４Ｈ），３．９２ （ｍ，２Ｈ），３．８４ （ｍ，１Ｈ），３．４６ （ｍ，１Ｈ），３．３５ （ｍ，１Ｈ），３．１５ （ｍ，１Ｈ），３．０３ （ｍ，１Ｈ），２．９２ （ｍ，１Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｍ，２Ｈ），２．５８ （ｍ，１Ｈ），２．２０ （ｍ，１Ｈ），２．１２ （ｍ，１Ｈ），１．７０ （ｍ，１Ｈ），１．６２ （ｍ，３Ｈ），１．４３ （ｍ，４Ｈ），１．２８ （ｍ，６Ｈ），１．２１ （ｍ，３Ｈ），０．８５ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２３２】
実施例１４は、実施例３、５及び７で記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化イソプロパノイルを使用して実施例３で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物５及びＰＥＧ２０ＫＮ３を反応させた。
【０２３３】
実施例１５：４−（４−アセトキシ−３−（２−（２−（２−（（１−ＰＥＧ５Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（９）
【化６０】
2019519530.tif 000073
【０２３４】
２−（２−（２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（１）
ＴＨＦ（３２０ｍＬ）中のＮａＨ（３．４７ｇ、０．０８６ｍｏｌ）の混合物に、２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタノール（２０ｇ、０．１３３ｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、次いで３−ブロモプロプ−１−イン（７．９３ｇ、０．０６６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で２時間維持し、次いで一晩室温に放置した。混合物を水（４ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液を無水ＭｇＳＯ４で直接乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１：１）によって精製して、化合物１を得た（１０．１２ｇ、８０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ４．２１ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．７５−３．６８ （ｍ，１０Ｈ），３．６２ （ｍ，２Ｈ），２．４４ （ｍ，１Ｈ），２．２３ （ｓ，１Ｈ）。
【０２３５】
２−（２−（２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（２）
ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の化合物１（５ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴｓＣｌ（７．６ｇ、３９．８９ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、続いてピリジン（２５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＤＣＭ溶液をＨＣｌ（３Ｎ、５０ｍＬ×４）で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、化合物２（７．８９ｇ、８７％の収率）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．８０ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，２Ｈ），７．３４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，２Ｈ），４．２０ （ｍ，４Ｈ），３．６８ （ｍ，６Ｈ），３．６１ （ｍ，４Ｈ），２．４５ （ｍ，１Ｈ），２．４０ （ｍ，３Ｈ）。
【０２３６】
４−ヒドロキシ−３−（２−（２−（２−（プロプ−２−イニルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ベンズアルデヒド（３）
ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中のＮａＨ（０．８２ｇ、２０．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１．４１ｇ、１０．２３ｍｍｏｌ）の溶液及びＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の化合物２（３．５ｇ、１０．２３ｍｍｏｌ）の溶液を２０℃で順次添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を氷水（５００ｍＬ）に注ぎ、この水溶液を２ＮのＨＣｌによってｐＨ＝２に調整した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出し、組み合わせたＥｔＯＡｃ相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１：１）によって精製して、化合物３（５７９ｍｇ、１８％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．８０ （ｓ，１Ｈ），７．４６ （ｍ，２Ｈ），７．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．２５ （ｍ，４Ｈ），３．８８ （ｍ，２Ｈ），３．７０ （ｍ，８Ｈ），２．４５ （ｍ，１Ｈ）。
【０２３７】
４−ホルミル−２−（２−（２−（２−（プロプ−２−イニルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアセテート（４）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物３（４７９ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（４７１ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）及びＡｃ２Ｏ（２３８ｍｇ、２．３３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、化合物４（４００ｍｇ、７４％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．９４ （ｓ，１Ｈ），７．５２ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．６ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．２３ （ｍ，２Ｈ），４．２０ （ｍ，２Ｈ），３．８６ （ｍ，２Ｈ），３．７２ （ｍ，８Ｈ），２．４３ （ｍ，１Ｈ），２．３４ （ｓ，３Ｈ）。
【０２３８】
４−（ヒドロキシメチル）−２−（２−（２−（２−（プロプ−２−イニルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアセテート（５）
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の化合物４（１．１８ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＨ３／ＴＨＦ溶液（３．４ｍＬ、３．３８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いでＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチした。反応溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１：１）によって精製して、化合物５（７００ｍｇ、５９％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９４ （ｄｄ，Ｊ１ ＝ １．８ Ｈｚ，Ｊ２ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．６８ （ｓ，２Ｈ），４．２２ （ｍ，４Ｈ），３．８５ （ｍ，２Ｈ），３．７４ （ｍ，８Ｈ），２．４６ （ｍ，１Ｈ），２．３３ （ｓ，３Ｈ）。
【０２３９】
４−（ブロモメチル）−２−（２−（２−（２−（プロプ−２−イニルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアセテート（６）
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の化合物５（６８０ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ３（６０７ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）、続いてＮＢＳ（３７４ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物６（４３０ｍｇ、５４％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．０３ （ｓ，１Ｈ），６．９９ （ｍ，２Ｈ），４．４６ （ｓ，２Ｈ），４．２０−４．１６ （ｍ，４Ｈ），３．８３ （ｍ，２Ｈ），３．６８ （ｍ，８Ｈ），２．４３ （ｍ，１Ｈ），２．２９ （ｓ，３Ｈ）。本明細書に記載されたものと類似の方法を使用して化合物６を化合物８に転化させた。
【０２４０】
４−（４−アセトキシ−３−（２−（２−（２−（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物６（４３０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（７４３ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、所望の生成物７（１６０ｍｇ、１４％の収率）を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシル酸塩（１３５ｍｇ、８５％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６８ （ｍ，１Ｈ），７．７３ （ｍ，１Ｈ），７．２９−７．０５ （ｍ，１３Ｈ），６．８２ （ｍ，１Ｈ），６．４０ （ｍ，１Ｈ），５．１５ （ｍ，１Ｈ），５．０８ （ｍ，１Ｈ），５．０２ （ｍ，１Ｈ），４．８２ （ｍ，２Ｈ），４．５１ （ｍ，２Ｈ），４．３８ （ｍ，３Ｈ），４．２０ （ｍ，４Ｈ），４．１５ （ｍ，２Ｈ），４．０３ （ｍ，２Ｈ），３．８４ （ｍ，１Ｈ），３．７６ （ｍ，２Ｈ），３．６５ （ｍ，９Ｈ），３．５０ （ｍ，１Ｈ），３．３８ （ｍ，１Ｈ），３．１８ （ｍ，１Ｈ），３．０２ （ｍ，２Ｈ），２．８６ （ｍ，１Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．６４ （ｍ，２Ｈ），２．４６ （ｍ，１Ｈ），２．３２ （ｍ，３Ｈ），２．３０−２．０５ （ｍ，３Ｈ），１．６０ （ｍ，２Ｈ），１．５２ （ｍ，６Ｈ），１．２４ （ｍ，２Ｈ），０．８４ （１２ Ｈ）。
【０２４１】
実施例１５は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物８及びＰＥＧ５ＫＮ３から調製した。
【０２４２】
実施例１６：４−（４−アセトキシ−３−（１−（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）エチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
【化６１】
2019519530.tif 000074
【０２４３】
２−アセチル−４−メチルフェニルアセテート（１）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の１−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）エタノン（１．５ｇ、０．０１ｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．５ｇ、０．０１５ｍｏｌ）及び塩化アセチル（０．９４ｇ、０．０１２ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を水（２０ｍＬ）でクエンチした。ＤＣＭ相を収集し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物１（０．９ｇ、４７％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６４ （ｍ，１Ｈ），７．３７ （ｍ，１Ｈ），７．０２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．５７ （ｓ，３Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ），２．３７ （ｓ，３Ｈ）。
【０２４４】
２−アセチル−４−（ブロモメチル）フェニルアセテート（２）
ＣＣｌ４（２０ｍＬ）中の化合物１（０．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（５７３ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（４２．６ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を室温に冷却し、濾過した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物２（１６０ｍｇ、２３％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０２ （ｍ，１Ｈ），７．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．８１ （ｓ，２Ｈ），２．５３ （ｓ，３Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２４５】
４−（４−アセトキシ−３−アセチルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（４）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物２（１．０３ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（８８４．７ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩加熱した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：３）によって精製して、所望の化合物３を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２６０ｍｇ、２１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６２ （ｍ，１Ｈ），８．０６ （ｍ，１Ｈ），７．８８〜７．７１ （ｍ，２Ｈ），７．３３〜７．１１ （ｍ，１１Ｈ），６．９５ （ｍ，１Ｈ），６．６６ （ｍ，１Ｈ），５．３３〜４．９１ （ｍ，２Ｈ），４．５５〜３．９０ （ｍ，１１Ｈ），３．５８〜２．９１ （ｍ，４Ｈ），２．８５ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｍ，２Ｈ），２．６１ （ｓ，３Ｈ），２．４０ （ｓ，３Ｈ），２．３１〜１．９４ （ｍ，７Ｈ），１．７２〜１．１８ （ｍ，８Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２４６】
実施例１６は、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物４及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−から調製した。
【０２４７】
実施例１７：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（１−（（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）エチル）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
【化６２】
2019519530.tif 000075
【０２４８】
４−（３−アセチル−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（４）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物２（１．０３ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（７６６ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ（５／１、ｖ／ｖ）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物３を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（３００ｍｇ、３２％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６８ （ｍ，１Ｈ），８．０６ （ｍ，１Ｈ），７．７５ （ｍ，１Ｈ），７．４０−７．１５ （ｍ，１２Ｈ），６．９２ （ｍ，１Ｈ），６．６５ （ｍ，１Ｈ），５．２８−４．９６ （ｍ，２Ｈ），４．５５−４．４２ （ｍ，４Ｈ），４．３８−４．１８ （ｍ，４Ｈ），４．０７−３．９０ （ｍ，３Ｈ），３．６０−３．３０ （ｍ，２Ｈ），３．１７ （ｍ，２Ｈ），３．０４ （ｍ，２Ｈ），２．８５ （ｓ，３Ｈ），２．８０ （ｍ，２Ｈ），２．６３ （ｓ，３Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．２８−２．１２ （ｍ，２Ｈ），２．０４ （ｍ，３Ｈ），１．７６ （ｍ，３Ｈ），１．５０−１．４０ （ｍ，６Ｈ），１．３０−１．１８ （ｍ，４Ｈ），０．９２−０．８４ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２４９】
実施例１７は、実施例１６に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ｔ−ブタノイルを使用して実施例１６で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物４及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２５０】
実施例１８：４−（３−アセトキシ−４−（（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化６３】
2019519530.tif 000076
【０２５１】
２−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド（１）
ホルムアルデヒド（３７％、１７ｍＬ）の水溶液に、２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１０．３ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）及び濃ＨＣｌ（４２ｍＬ）を添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を室温に冷却し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物１（１．９７ｇ、１５％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ ＭＨｚ）： δ １０．６１ （ｓ，１Ｈ），１０．２６ （ｓ，１Ｈ），７．６０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．４６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．９６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，１Ｈ），４．４２ （ｄ，Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ，２Ｈ）。
【０２５２】
５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（２）
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の化合物１（２．０１ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（１．４３ｇ、２１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（２．５７ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）に注いだ。２つの相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、化合物２（３．２ｇ、９１％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．８５ （ｂｒ，ｓ，１Ｈ），９．７８ （ｓ，１Ｈ），７．４１ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３５ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．０，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５９ （ｓ，２Ｈ），０．８２ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２５３】
４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（３）
ＤＣＭ（５００ｍＬ）中の化合物２（２５ｇ、９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１９．０ｇ、１８８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１１．１ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１００：１）によって精製して、化合物３（１９．７ｇ、６８％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ ９．９８ （ｓ，１Ｈ），７．７０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６６ （ｓ，２Ｈ），２．２８ （ｓ，３Ｈ），０．８３ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２５４】
２−ホルミル−４−（ヒドロキシメチル）フェニルアセテート（４）
化合物３（３．６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ／２５ｍＬ／２５ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を３０℃で３時間撹拌した。過剰のＴＨＦを除去し、得られた溶液をｐＨ＝７〜８に調整し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物４（２．０４ｇ、９０％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ １０．０８ （ｓ，１Ｈ），７．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．６７ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５７ （ｓ，２Ｈ），２．３５ （ｓ，３Ｈ）。
【０２５５】
４−（ブロモメチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（５ａ）
ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の化合物４（２．０３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（２．７９ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応を水（２０ｍＬ）の添加によってクエンチし、得られた混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ＝７に調整した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物５ａ（３００ｍｇ、１１％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ １０．１２ （ｓ，１Ｈ），７．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．６８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．５４ （ｓ，２Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２５６】
４−（ヨードメチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（５ｂ）
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の化合物４（５．０ｇ、２７．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＳＯＣｌ２（６．１３ｇ、５１．５５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、対応する塩化ベンジル（２．４ｇ、４４％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）： δ １０．１２ （ｓ，１Ｈ），７．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．６８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６４ （ｓ，２Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２５７】
アセトン（１６０ｍＬ）中の塩化ベンジル（２．４ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＩ（１６．９４ｇ、１１２．９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３０℃で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５０ｍＬ×３）及び水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、化合物５ｂ（２．１ｇ、６１％の収率）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ １０．１０ （ｓ，１Ｈ），７．９０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．６６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．１，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１６ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４９ （ｓ，２Ｈ），２．４１ （ｓ，３Ｈ）。
【０２５８】
４−（４−アセトキシ−３−ホルミルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物５ｂ（３８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（５３２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、所望の化合物（６）を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２８０ｍｇ、３９％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．１５ （ｓ，１Ｈ），９．５３ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．８５ （ｍ，１Ｈ），７．６８ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３７ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．１３ （ｍ，１０Ｈ），６．８４ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．５２ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．２０ （ｍ，２Ｈ），４．９７ （ｍ，１Ｈ），４．５０−３．９６ （ｍ，７Ｈ），３．４６−３．２８ （ｍ，２Ｈ），３．１６ （ｍ，１Ｈ），３．０６−２．９２ （ｍ，３Ｈ），２．８５−２．６１ （ｍ，７Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．１４ （ｍ，２Ｈ），１．６９−１．１７ （ｍ，１１Ｈ），０．８９−０．８３ （ｍ，１２Ｈ）。この反応のために化合物５ａを使用することもできた。
【０２５９】
実施例１８は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物７及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−から調製した。
【０２６０】
実施例１９：４−（４−アセトキシ−３−（（Ｅ）−（（２−（（ＰＥＧ５Ｋ−アミノ）−２−オキソエトキシ）イミノ）メチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化６４】
2019519530.tif 000077
【０２６１】
２−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド（１）
ホルムアルデヒド（３７％、１７ｍＬ）の水溶液に、２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１０．３ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）及び濃ＨＣｌ（４２ｍＬ）を添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を室温に冷却し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物１（１．９７ｇ、１５％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ ＭＨｚ）： δ １０．６１ （ｓ，１Ｈ），１０．２６ （ｓ，１Ｈ），７．６０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．４６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．９６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，１Ｈ），４．４２ （ｄ，Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ，２Ｈ）。
【０２６２】
５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（２）
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の化合物１（２．０１ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（１．４３ｇ、２１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（２．５７ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）に注いだ。２つの相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、化合物２（３．２ｇ、９１％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．８５ （ｂｒ，ｓ，１Ｈ），９．７８ （ｓ，１Ｈ），７．４１ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３５ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．０，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５９ （ｓ，２Ｈ），０．８２ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２６３】
４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（３）
ＤＣＭ（５００ｍＬ）中の化合物２（２５ｇ、９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１９．０ｇ、１８８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１１．１ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１００：１）によって精製して、化合物３（１９．７ｇ、６８％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ ９．９８ （ｓ，１Ｈ），７．７０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６６ （ｓ，２Ｈ），２．２８ （ｓ，３Ｈ），０．８３ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２６４】
２−ホルミル−４−（ヒドロキシメチル）フェニルアセテート（４）
化合物３（３．６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ／２５ｍＬ／２５ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を３０℃で３時間撹拌した。過剰のＴＨＦを除去し、得られた溶液をｐＨ＝７〜８に調整し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物４（２．０４ｇ、９０％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ １０．０８ （ｓ，１Ｈ），７．８５ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．６７ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５７ （ｓ，２Ｈ），２．３５ （ｓ，３Ｈ）。
【０２６５】
４−（ブロモメチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（５ａ）
ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の化合物４（２．０３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（２．７９ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応を水（２０ｍＬ）の添加によってクエンチし、得られた混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ＝７に調整した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物５ａ（３００ｍｇ、１１％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ １０．１２ （ｓ，１Ｈ），７．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．６８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．５４ （ｓ，２Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２６６】
４−（ヨードメチル）−２−ホルミルフェニルアセテート（５ｂ）
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の化合物４（５．０ｇ、２７．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＳＯＣｌ２（６．１３ｇ、５１．５５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、対応する塩化ベンジル（２．４ｇ、４４％の収率）を得た；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）： δ １０．１２ （ｓ，１Ｈ），７．９２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．６８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６４ （ｓ，２Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２６７】
アセトン（１６０ｍＬ）中の塩化ベンジル（２．４ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＩ（１６．９４ｇ、１１２．９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３０℃で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５０ｍＬ×３）及び水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、化合物５ｂ（２．１ｇ、６１％の収率）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ ＭＨｚ）：δ １０．１０ （ｓ，１Ｈ），７．９０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．６６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．１，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１６ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４９ （ｓ，２Ｈ），２．４１ （ｓ，３Ｈ）。
【０２６８】
４−（４−アセトキシ−３−ホルミルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物５ｂ（３８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（５３２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、所望の化合物（６）を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２８０ｍｇ、３９％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．１５ （ｓ，１Ｈ），９．５３ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．８５ （ｍ，１Ｈ），７．６８ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３７ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．１３ （ｍ，１０Ｈ），６．８４ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．５２ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．２０ （ｍ，２Ｈ），４．９７ （ｍ，１Ｈ），４．５０−３．９６ （ｍ，７Ｈ），３．４６−３．２８ （ｍ，２Ｈ），３．１６ （ｍ，１Ｈ），３．０６−２．９２ （ｍ，３Ｈ），２．８５−２．６１ （ｍ，７Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．１４ （ｍ，２Ｈ），１．６９−１．１７ （ｍ，１１Ｈ），０．８９−０．８３ （ｍ，１２Ｈ）。この反応のために化合物５ａを使用することもできた。
【０２６９】
実施例１９は、一般的なペグ化手順Ａに従って、化合物７及びＰＥＧ５ＫＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＮＨ２（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓ，Ｃｈａｐｅｌ  Ｈｉｌｌ，ＮＣ，ＵＳ）から調製した。
【０２７０】
実施例２０：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
【化６５】
2019519530.tif 000078
【０２７１】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−ホルミル−４−（プロピオニルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物４（４００ｍｇ、１．４７６ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（３１８．８ｍｇ、０．４４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をＭｅＣＮ／Ｅｔ２Ｏ（１／５、ｖ／ｖ）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物５を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート（２００ｍｇ、１５％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．１８ （ｓ，１Ｈ），７．６８ （ｂｒ，ｓ，１Ｈ），８．０３ （ｓ，１Ｈ），７．８８ （ｍ，１Ｈ），７．７２ （ｂｒ，１Ｈ），７．３８ （ｍ，１Ｈ），７．３０〜７．１５ （ｍ，１０ Ｈ），６．７４ （ｍ，１Ｈ），６．３７ （ｂｒ，１ Ｈ），５．２５〜５．０１ （ｍ，３Ｈ），４．５０〜３．９０ （ｍ，１２ Ｈ），３．４７〜３．１２ （ｍ，３Ｈ），２．９７ （ｍ，２Ｈ），２．９７〜２．７１ （ｍ，７Ｈ），２．１５ （ｍ，２Ｈ），２．７１〜１．１０ （ｍ，９Ｈ），０．８７ （ｍ，１２ Ｈ）。
【０２７２】
実施例２０は、実施例１６に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化エタノイルを使用して実施例１６で示された中間体１に対する結果物を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物６及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２７３】
実施例２１：４−（３−アセトキシ−４−（（ＰＥＧ２Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化６６】
2019519530.tif 000079
【０２７４】
４−（４−アセトキシ−３−ホルミルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物５ｂ（３８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（５３２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、所望の化合物（６）を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２８０ｍｇ、３９％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．１５ （ｓ，１Ｈ），９．５３ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．８５ （ｍ，１Ｈ），７．６８ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３７ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．１３ （ｍ，１０Ｈ），６．８４ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．５２ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．２０ （ｍ，２Ｈ），４．９７ （ｍ，１Ｈ），４．５０−３．９６ （ｍ，７Ｈ），３．４６−３．２８ （ｍ，２Ｈ），３．１６ （ｍ，１Ｈ），３．０６−２．９２ （ｍ，３Ｈ），２．８５−２．６１ （ｍ，７Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．１４ （ｍ，２Ｈ），１．６９−１．１７ （ｍ，１１Ｈ），０．８９−０．８３ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２７５】
実施例２１は、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物７及びＰＥＧ２ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−から調製した。
【０２７６】
実施例２２：４−（４−アセトキシ−３−（１−（ＰＥＧ２Ｋ−イミノ）エチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
【化６７】
2019519530.tif 000080
【０２７７】
２−アセチル−４−メチルフェニルアセテート（１）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の１−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）エタノン（１．５ｇ、０．０１ｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．５ｇ、０．０１５ｍｏｌ）及び塩化アセチル（０．９４ｇ、０．０１２ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を水（２０ｍＬ）でクエンチした。ＤＣＭ相を収集し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製して、化合物１を得た（０．９ｇ、４７％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６４ （ｍ，１Ｈ），７．３７ （ｍ，１Ｈ），７．０２ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．５７ （ｓ，３Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ），２．３７ （ｓ，３Ｈ）。
【０２７８】
２−アセチル−４−（ブロモメチル）フェニルアセテート（２）
ＣＣｌ４（２０ｍＬ）中の化合物１（０．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（５７３ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（４２．６ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を還流下で一晩加熱した。混合物を室温に冷却し、濾過した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物２を得た（１６０ｍｇ、２３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０２ （ｍ，１Ｈ），７．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．８１ （ｓ，２Ｈ），２．５３ （ｓ，３Ｈ），２．３２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２７９】
４−（４−アセトキシ−３−アセチルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（４）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物２（１．０３ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（８８４．７ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩加熱した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：３）によって精製して、所望の化合物３を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２６０ｍｇ、２１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６２ （ｍ，１Ｈ），８．０６ （ｍ，１Ｈ），７．８８〜７．７１ （ｍ，２Ｈ），７．３３〜７．１１ （ｍ，１１Ｈ），６．９５ （ｍ，１Ｈ），６．６６ （ｍ，１Ｈ），５．３３〜４．９１ （ｍ，２Ｈ），４．５５〜３．９０ （ｍ，１１Ｈ），３．５８〜２．９１ （ｍ，４Ｈ），２．８５ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｍ，２Ｈ），２．６１ （ｓ，３Ｈ），２．４０ （ｓ，３Ｈ），２．３１〜１．９４ （ｍ，７Ｈ），１．７２〜１．１８ （ｍ，８Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２８０】
実施例２２は、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物４及びＰＥＧ２ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−から調製した。
【０２８１】
実施例２３：４−（３−アセトキシ−４−（（ＰＥＧ３Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化６８】
2019519530.tif 000081
【０２８２】
４−（４−アセトキシ−３−ホルミルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物５ｂ（３８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（５３２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、所望の化合物（６）を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２８０ｍｇ、３９％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １０．１５ （ｓ，１Ｈ），９．５３ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．８５ （ｍ，１Ｈ），７．６８ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３７ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．１３ （ｍ，１０Ｈ），６．８４ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．５２ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．２０ （ｍ，２Ｈ），４．９７ （ｍ，１Ｈ），４．５０−３．９６ （ｍ，７Ｈ），３．４６−３．２８ （ｍ，２Ｈ），３．１６ （ｍ，１Ｈ），３．０６−２．９２ （ｍ，３Ｈ），２．８５−２．６１ （ｍ，７Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．１４ （ｍ，２Ｈ），１．６９−１．１７ （ｍ，１１Ｈ），０．８９−０．８３ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２８３】
実施例２３は、実施例１６に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化アセチルを使用して実施例１６で示された結果物の中間体１を生成した）、一般的なペグ化手順Ａに従って化合物７及びＰＥＧ３ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２８４】
実施例２４：４−（４−アセトキシ−３−（１−（ＰＥＧ３Ｋ−イミノ）エチル）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
【化６９】
2019519530.tif 000082
【０２８５】
４−（４−アセトキシ−３−アセチルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（４）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物２（１．０３ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（８８４．７ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で一晩加熱した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１００：３）によって精製して、所望の化合物３を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレートに変換した（２６０ｍｇ、２１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．６２ （ｍ，１Ｈ），８．０６ （ｍ，１Ｈ），７．８８〜７．７１ （ｍ，２Ｈ），７．３３〜７．１１ （ｍ，１１Ｈ），６．９５ （ｍ，１Ｈ），６．６６ （ｍ，１Ｈ），５．３３〜４．９１ （ｍ，２Ｈ），４．５５〜３．９０ （ｍ，１１Ｈ），３．５８〜２．９１ （ｍ，４Ｈ），２．８５ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｍ，２Ｈ），２．６１ （ｓ，３Ｈ），２．４０ （ｓ，３Ｈ），２．３１〜１．９４ （ｍ，７Ｈ），１．７２〜１．１８ （ｍ，８Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２８６】
実施例２４は、実施例２２に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物４及びＰＥＧ３ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２８７】
実施例２５．４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（２−（ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム−イミノ）エトキシ）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート
実施例２５は、実施例１７に記載されたものと類似する方法によって調製したが、ＰＥＧ２０ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を使用し、一般的なペグ化手順Ｂに従いつつ中間体を同様の手法で製造した。
【０２８８】
実施例２６：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化７０】
2019519530.tif 000083
【０２８９】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−ホルミル−４−（イソブチリルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（８ｍＬ）中の化合物３（５５０ｍｇ、１．６５７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（３９３ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣を（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ＝１：５）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物４を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート５（１１５ｍｇ、７．５％の収率）に変換した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．１８ （ｓ，１Ｈ），９．６８ （ｍ，１Ｈ），８．０４ （ｍ，１Ｈ），７．８９ （ｍ，１Ｈ），７．８１ （ｓ，１Ｈ），７．３５ （ｍ，１Ｈ），７．３０ （ｍ，１Ｈ），７．１１−７．２９ （ｍ，９Ｈ），６．７９ （ｓ，１Ｈ），６．４４ （ｍ，１Ｈ），５．１８（ｍ，２Ｈ），４．９９ （ｍ，１Ｈ），４．４１ （ｍ，３Ｈ），４．２０ （ｍ，３Ｈ），３．９９ （ｍ，３Ｈ），３．４０ （ｍ，１Ｈ），３．３０ （ｍ，１Ｈ），３．２０ （ｍ，１Ｈ），２．９５ （ｍ，２Ｈ），２．９２ （ｍ，１Ｈ），２．７９ （ｍ，３Ｈ），２．７５ （ｍ，２Ｈ），２．２１ （ｍ，１Ｈ），２．０９ （ｍ，１Ｈ），１．８３ （ｍ，４Ｈ），１．６２ （ｍ，２Ｈ），１．４９ （ｍ，４Ｈ），１．３８ （ｍ，６Ｈ），１．２４ （ｍ，２Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２９０】
実施例２６は、実施例１６に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化イソプロパノイルを使用して実施例１６で示された結果物の中間体１を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２９１】
実施例２７：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化７１】
2019519530.tif 000084
【０２９２】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−ホルミル−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（８ｍＬ）中の化合物３（５００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（３６０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣を（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ＝１：５）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物４を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート５に変換した（１３０ｍｇ、１２％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．１７ （ｓ，１Ｈ），９．７４ （ｍ，１Ｈ），８．０１ （ｍ，１Ｈ），７．９０ （ｍ，１Ｈ），７．７４ （ｍ，１Ｈ），７．３６−７．１２ （ｍ，１１Ｈ），６．７８ （ｍ，１Ｈ），６．４１ （ｍ，１Ｈ），５．２２ （ｍ，１Ｈ），５．１４ （ｍ，２Ｈ），４．５８−４．３５ （ｍ，３Ｈ），４．２８−４．１０ （ｍ，３Ｈ），４．０８−３．８３ （ｍ，３Ｈ），３．３８ （ｍ，１Ｈ），３．２９ （ｍ，１Ｈ），３．１７ （ｍ，１Ｈ），２．９７ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｓ，３Ｈ），２．７６ （ｍ，２Ｈ），２．３０−２．２０ （ｍ，２Ｈ），１．７０−１．５８ （ｍ，２Ｈ），１．４７ （ｍ，６Ｈ），１．４２ （ｓ，１０Ｈ），１．３０−１．１６ （ｍ，３Ｈ），０．９０−０．８４ （ｍ，１２Ｈ）。
【０２９３】
実施例２７は、実施例１６に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ｔ−ブタノイルを使用して実施例１６で示された結果物の中間体１を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物５及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−を反応させた。
【０２９４】
実施例２８：４−（４−アセトキシ−３−（１−（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）エチル）−５−メチルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
【化７２】
2019519530.tif 000085
【０２９５】
２−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルベンズアルデヒド（１）
２−ヒドロキシ−３−メチルベンズアルデヒド（５．０１ｇ、３６．８４ｍｍｏｌ）及びホルムアルデヒド（３７％、７．０１ｇ、８６．４５ｍｍｏｌ）の混合物に、濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を８０℃で１時間加熱した。水（９０ｍＬ）を添加し、得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を濃縮し、残渣を水（１５０ｍＬ、４０℃）で処理した。固体を濾別し、濾液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物１を得た（２．６０ｇ、４３％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １１．２６ （ｓ，１Ｈ），９．８８ （ｓ，１Ｈ），７．４１ （ｓ，２Ｈ），４．６６ （ｓ，２Ｈ），２．２８ （ｓ，３Ｈ）。
【０２９６】
５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−２−ヒドロキシ−３−メチルベンズアルデヒド（２）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物１（２．６０ｇ、１５．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（２．１３ｇ、３１．３３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＴＢＳＣｌ（３．５４ｇ、２３．５０ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２００：１）によって精製して、化合物２を得た（３．９０ｇ、８８．９％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １０．８５ （ｂｒ，ｓ，１Ｈ），９．９６ （ｓ，１Ｈ），７．４４ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．３３ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．５６ （ｓ，２Ｈ），２．１２ （ｓ，３Ｈ），０．８２ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２９７】
４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−２−ホルミル−６−メチルフェニルアセテート（３）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物２（１．７０ｇ、６．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．２３ｇ、１２．１４ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（７１５ｍｇ、９．１１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、次いで水（１００ｍＬ）に注いだ。２つの相を分離し、有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗化合物３を得（１．９４ｇ、定量的）、これを更に精製することなく次の工程で使用した；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ ９．９０ （ｓ，１Ｈ），７．５２ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．３５ （ｄ，Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．６３ （ｓ，２Ｈ），２．３０ （ｓ，３Ｈ），２．１１ （ｓ，３Ｈ），０．８３ （ｓ，９Ｈ），０．００ （ｓ，６Ｈ）。
【０２９８】
２−ホルミル−４−（ヨードメチル）−６−メチルフェニルアセテート（４）
ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中のＮａＩ（４．６６ｇ、３１．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物３（２．０１ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）及びＳｉＣｌ４（１．０６ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭ（１００ｍＬ）で処理した。得られた混合物を濾過し、濾液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１５：１）によって精製して、化合物４を得た（８０３ｍｇ、４１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １０．００ （ｓ，１Ｈ），７．７０ （ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．４４ （ｓ，２Ｈ），２．４２ （ｓ，３Ｈ），２．２２ （ｓ，３Ｈ）。
【０２９９】
４−（４−アセトキシ−３−アセチル−５−メチルベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の化合物４（８０３ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（３４０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣を（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ＝１：５）から３回再結晶化して、所望のヨウ化物塩５を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート６に変換した（２０２ｍｇ、４７％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １０．０５ （ｓ，１Ｈ），９．５５ （ｍ，１Ｈ），７．８６ （ｍ，１Ｈ），７．７４ （ｍ，２Ｈ），７．１３−７．２９ （ｍ，１０Ｈ），６．８５ （ｍ，１Ｈ），６．５１ （ｍ，１Ｈ），５．２３ （ｍ，１Ｈ），５．０５ （ｍ，２Ｈ），４．４５ （ｍ，５Ｈ），４．２２ （ｍ，５Ｈ），４．００ （ｍ，４Ｈ），３．３０−３．５２ （ｍ，２Ｈ），３．１７ （ｍ，１Ｈ），２．９８ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｓ，４Ｈ），２．７６ （ｍ，２Ｈ），２．４６ （ｓ，３Ｈ），２．２９ （ｓ，３Ｈ），２．０８−２．２５ （ｍ，２Ｈ），１．４８−１．６９ （ｍ，４Ｈ），１．４５ （ｍ，２Ｈ），１．３８ （ｍ，２Ｈ），１．２５ （ｍ，２Ｈ），０．８８ （ｍ，１２Ｈ）。
【０３００】
実施例２８は、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物６及びＰＥＧ５ＫＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−から調製した。
【０３０１】
実施例２９：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム−イミノ）メチル）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート
【化７３】
2019519530.tif 000086
【０３０２】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−ホルミル−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（８ｍＬ）中の化合物３（５００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（３６０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣を（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ＝１：５）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物４を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート５に変換した（１３０ｍｇ、１２％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．１７ （ｓ，１Ｈ），９．７４ （ｍ，１Ｈ），８．０１ （ｍ，１Ｈ），７．９０ （ｍ，１Ｈ），７．７４ （ｍ，１Ｈ），７．３６−７．１２ （ｍ，１１Ｈ），６．７８ （ｍ，１Ｈ），６．４１ （ｍ，１Ｈ），５．２２ （ｍ，１Ｈ），５．１４ （ｍ，２Ｈ），４．５８−４．３５ （ｍ，３Ｈ），４．２８−４．１０ （ｍ，３Ｈ），４．０８−３．８３ （ｍ，３Ｈ），３．３８ （ｍ，１Ｈ），３．２９ （ｍ，１Ｈ），３．１７ （ｍ，１Ｈ），２．９７ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｓ，３Ｈ），２．７６ （ｍ，２Ｈ），２．３０−２．２０ （ｍ，２Ｈ），１．７０−１．５８ （ｍ，２Ｈ），１．４７ （ｍ，６Ｈ），１．４２ （ｓ，１０Ｈ），１．３０−１．１６ （ｍ，３Ｈ），０．９０−０．８４ （ｍ，１２Ｈ）。
【０３０３】
実施例２９は、実施例１８に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ｔ−ブタノイルを使用して実施例１８で示された結果物の中間体１を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物５及びＰＥＧ２０Ｋ−（ＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−）４を反応させた。
【０３０４】
実施例３０：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（ＰＥＧ２０Ｋ−４−アーム−イミノ）メチル）−５−メチル−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（６）
【化７４】
2019519530.tif 000087
【０３０５】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−ホルミル−５−メチル−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（５）
ＭｅＣＮ（８ｍＬ）中の化合物３（９００ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（６２４ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。過剰の溶媒を濃縮し、残渣を（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏ＝１：５）から繰り返し結晶化させて、所望の化合物４を得、これをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート５に変換した（２２２ｍｇ、９．０％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １０．０５ （ｓ，１Ｈ），９．６６ （ｍ，１Ｈ），７．８２ （ｍ，３Ｈ），７．１２−７．３０ （ｍ，１０Ｈ），６．８４ （ｍ，１Ｈ），６．４７ （ｍ，１Ｈ），５．１９ （ｍ，１Ｈ），５．０１ （ｍ，２Ｈ），４．４７ （ｍ，５Ｈ），４．２０ （ｍ，４Ｈ），３．９８ （ｍ，４Ｈ），３．４０ （ｍ，１Ｈ），３．２８ （ｍ，１Ｈ），３．１７ （ｍ，１Ｈ），２．９８ （ｍ，２Ｈ），２．８３ （ｍ，４Ｈ），２．７３ （ｍ，２Ｈ），２．２５ （ｍ，３Ｈ），２．１０ （ｍ，２Ｈ），１．６１ （ｍ，２Ｈ），１．４７ （ｍ，１２Ｈ），１．２６ （ｍ，２Ｈ），０．８７ （ｍ，１２Ｈ）。
【０３０６】
実施例３０は、実施例２８に記載されたものと類似する方法によって調製したが、中間体は同様の手法で製造し（塩化ｔ−ブタノイルを使用して実施例２８で示された結果物の中間体１を生成した）、一般的なペグ化手順Ｂに従って化合物５及びＰＥＧ２０Ｋ（ＯＮＨ３＋．ＭｓＯ−）４を反応させた。
【０３０７】
実施例３１：４−（４−アセトキシ−３−（（４−（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）オキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化７５】
2019519530.tif 000088
【０３０８】
１−（クロロメチル）−４−（ジメトキシメチル）ベンゼン（１）
ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の（４−（ジメトキシメチル）フェニル）メタノール（２００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（３６５．６ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）及びＭｓＣｌ（２０７．６ｍｇ、１．８１３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注いだ。２つの相を分離し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物１を得（２００ｍｇ、９１％）、これを更に精製することなく次の工程で使用した。
【０３０９】
４−（４−（ジメトキシメチル）ベンジルオキシ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（２）
ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の化合物１（２００ｍｇ、０．９９８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（３７．４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。３０分の反応後、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１３７．７ｍｇ、０．９９８ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注ぎ、得られた混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物２（３００ｍｇ、粗製）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。
【０３１０】
２−（４−（ジメトキシメチル）ベンジルオキシ）−４−ホルミルフェニルアセテート（３）
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物２（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（２０２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＡｃＣｌ（１０２ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）に注いだ。２つの相を分離し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物３（２００ｍｇ、粗製）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。
【０３１１】
２−（４−（ジメトキシメチル）ベンジルオキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニルアセテート（４）
ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ／１ｍＬ）中の化合物３（２００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（１９．８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いでアセトン（５ｍＬ）でクエンチした。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（１０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物４（３００ｍｇ、粗製）を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。
【０３１２】
４−（ブロモメチル）−２−（４−ホルミルベンジルオキシ）フェニルアセテート（５）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物４（１．８ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（１．４１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬ）でクエンチした。２つの層を分離し、水相をＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝４：１）によって精製して、化合物５を得た（３２７ｍｇ、１５％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ １０．０１ （ｓ，１Ｈ），７．９６〜７．９４ （ｍ，２Ｈ），７．６２〜７．６０ （ｍ，２Ｈ），７．３１ （ｍ，１Ｈ），７．１３〜 ７．０７ （ｍ，２Ｈ），５．２６ （ｓ，２Ｈ），４．６８ （ｓ，２Ｈ），２．２７ （ｓ，３Ｈ）。
【０３１３】
４−（４−アセトキシ−３−（（４−ホルミルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（６ｍＬ）中の化合物５（３２０ｍｇ、０．８８４ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（２５４ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で４８時間撹拌した。過剰の溶媒を蒸発させ、残渣をＭｅＣＮ／Ｅｔ２Ｏ（１／５、ｖ／ｖ）から繰り返し結晶化させて、所望の生成物６を得、次いでイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート化合物７に変換した（１８０ｍｇ、４７％の収率）。
【０３１４】
ＤＣＭ中の化合物７（５００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、２−アミノ−５−メトキシ安息香酸（２５．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＰＥＧ−Ｏ−ＮＨ２（メシル酸塩、２．１２ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、残渣をｉＰｒＯＨに４０℃で溶解させた。溶液を室温に冷却し、Ｅｔ２Ｏを添加して、結晶化を誘発させた。混合物を氷浴中で１０分間保持し、次いで濾過した。濾過ケーキをｉＰｒＯＨ／Ｅｔ２Ｏ（５／２）から結晶化させて、８を得た（２．１０ｇ、収率８２％）。
【０３１５】
実施例３２：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（４−（イソブチリルオキシ）−３−（（４−（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）オキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化７６】
2019519530.tif 000089
【０３１６】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（４−ホルミルベンジルオキシ）−４−（イソブチリルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（２ｍＬ）中の化合物５（３１０．４ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（２８６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で４８時間撹拌した。過剰の溶媒を蒸発させ、残渣をＭｅＣＮ／Ｅｔ２Ｏ（１／５、ｖ／ｖ）から繰り返し結晶化させて、所望の生成物６を得、次いでイオン交換樹脂での処理によって対応するメシレート化合物７に変換した（２８０ｍｇ、８３％の収率）。
【０３１７】
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の化合物６（２８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、２−アミノ−５−メトキシ安息香酸（１４．０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）及びＰＥＧ−Ｏ−ＮＨ２（メシル酸塩、１．１６ｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）を室温で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、残渣を４０℃でｉ−ＰｒＯＨに溶解させた。溶液を室温に冷却し、Ｅｔ２Ｏを添加して結晶化を誘発させた。混合物を氷浴中で１０分間保持し、形成した固体を濾過によって収集した。全ての７が除去されるまでｉ−ＰｒＯＨ／Ｅｔ２Ｏ（５：２）からの結晶化を２回繰り返して、８を得た（１．０ｇ、７２％の収率）。
【０３１８】
実施例３３：４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（（４−（ＰＥＧ５Ｋ−イミノ）メチル）ベンジル）オキシ）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（８）
【化７７】
2019519530.tif 000090
【０３１９】
４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）−４−（３−（４−ホルミルベンジルオキシ）−４−（ピバロイルオキシ）ベンジル）モルホリン−４−イウムメタンスルホネート（７）
ＭｅＣＮ（３ｍＬ）中の化合物５（実施例３１の化合物５のｔ−ブチルエステル類似体、２３０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）ペンタンアミド（１８４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で４８時間撹拌した。過剰の溶媒を蒸発させ、残渣をＭｅＣＮ／Ｅｔ２Ｏ（１／５、ｖ／ｖ）から繰り返し結晶化させて、所望の生成物６を得、次いでこれをイオン交換樹脂での処理によって対応するメシル酸塩化合物７に変換した（１７０ｍｇ、７１％の収率）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．９９ （ｓ，１Ｈ），９．５９ （ｍ，１Ｈ），７．８７〜７．８５ （ｍ，２Ｈ），７．５７〜７．５５ （ｍ，２Ｈ），７．３２ （ｍ，１Ｈ），７．２６〜７．１３ （ｍ  ，１１Ｈ），７．０３ （ｍ，１Ｈ），６．８９ （ｍ，１Ｈ），６．４４ （ｍ，１Ｈ），５．１８ （ｍ，２Ｈ），５．０５〜５．０３ （ｍ，１Ｈ），４．９２〜４．８８ （ｍ，２Ｈ），４．４６〜４．４２ （ｍ，４Ｈ），４．１８〜４．０３ （ｍ，４Ｈ），３．９４〜３．９０ （ｍ，３Ｈ），３．４０〜３．３２ （ｍ，１Ｈ），３．２７〜３．２０ （ｍ，１Ｈ），３．１３ （ｍ，１Ｈ），３．００〜２．９８ （ｍ，２Ｈ），３．８２〜２．８０ （ｍ，３Ｈ），２．７９ （ｍ，１Ｈ），２．７４〜２．７２ （ｍ，２Ｈ），２．１９ （ｍ，１Ｈ），２．１０〜１．９７ （ｍ，４Ｈ），１．６４〜１．５５ （ｍ，２Ｈ），１．４８〜１．４４ （ｍ，５Ｈ），１．２９ （ｍ，６Ｈ），０．８８〜０．８１ （ｍ，１２Ｈ）。
【０３２０】
ＤＣＭ中の化合物７（１７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、２−アミノ−５−メトキシ安息香酸（２８．２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）及びＰＥＧ−Ｏ−ＮＨ２（メシル酸塩、６１４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３０分間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、残渣を４０℃でｉＰｒＯＨに溶解させた。溶液を室温に冷却し、Ｅｔ２Ｏを添加して結晶化を誘発させた。混合物を氷浴中で１０分間保持し、次いで濾過した。濾過ケーキをｉＰｒＯＨ／Ｅｔ２Ｏ（５／２）から結晶化させて、８を得た（５８０ｍｇ、７７％）。
【０３２１】
本発明の代表的なカルフィルゾミブプロドラッグ実施例３１〜３３は、潜在的に向上した化学的安定性を有するオキシム結合複合体を提供する。これらの実施例では、オキシム結合は、電子供与性ベンジルオキシ基で隔てられ、ＰＥＧ構築物の全体的な安定性を増加させる。
【０３２２】
実施例３４：４−（４−アセトキシ−３−（（１−ＰＥＧ３Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムクロライド
【化７８】
2019519530.tif 000091
【０３２３】
実施例３４は、対イオンとして塩化物アニオンを有する塩化物塩中間体を使用した以外は、実施例５〜１１及び方法Ａで教示したものと類似する方法を使用して調製した。
【０３２４】
実施例３５：４−（４−アセトキシ−３−（（１−ＰＥＧ３Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメシレート
【化７９】
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【０３２５】
実施例３５は、ＰＥＧ３ＫＮ３を使用して実施例５〜１１及び方法Ａで教示したものと類似する方法を使用して調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ｄＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ ９．１９ （ｍ，１Ｈ），８．２４ （ｍ，２Ｈ），８．１２ （ｍ，１Ｈ），７．９０ （ｍ，１Ｈ），７．６２ （ｍ，１Ｈ），７．２２ （ｍ，１３ Ｈ），７．０ （ｍ，１Ｈ），５．２６ （ｍ，２Ｈ），４．８８ （ｍ，２Ｈ），４．５３ （ｍ，３Ｈ），４．３７ （ｂｒ ｓ，４Ｈ），４．０５ （ｍ，５Ｈ），３．８１ （ｍ，２Ｈ），３．６８ （ｍ，４Ｈ），３．５２ （ｂｒ ｓ，３３９Ｈ），３．３０ （ｍ，４Ｈ），３．２４ （ｓ，４Ｈ），２．９４ （ｍ，２Ｈ），２．７５ （ｍ，１Ｈ），２．６３ （ｍ，２Ｈ），２．２４ （ｓ，３Ｈ），１．８７ （ｍ，２Ｈ），１．５９ （ｍ，２Ｈ），１．４０ （ｍ，７Ｈ），０．８４ （ｍ，１２Ｈ）
【０３２６】
実施例３６：４−（４−アセトキシ−３−（（１−ＰＥＧ２Ｋ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメシレート
【化８０】
2019519530.tif 000093
【０３２７】
実施例３６は、ＰＥＧ２ＫＮ３を使用して実施例５〜１１及び方法Ａで教示したものと類似する方法を使用して調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ｄＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ ９．４４ （ｍ，１Ｈ），８．２６ （ｍ，２Ｈ），８．１６ （ｍ，１Ｈ），８．００ （ｍ，１Ｈ），７．６２ （ｍ，１Ｈ），７．２２ （ｍ，１３ Ｈ），５．２６ （ｍ，２Ｈ），５．００ （ｍ，２Ｈ），４．５４ （ｍ，３Ｈ），４．３７ （ｍ，５Ｈ），４．０９ （ｍ，４Ｈ），３．８１ （ｍ，２Ｈ），３．６８ （ｍ，２Ｈ），３．５０ （ｂｒ ｓ，２１８Ｈ），３．３２ （ｍ，２Ｈ），３．２７ （ｓ，１Ｈ），３．２６ （ｓ，４Ｈ），２．９４ （ｍ，２Ｈ），２．７６ （ｍ，１Ｈ），２．６１ （ｍ，２Ｈ），２．２４ （ｓ，３Ｈ），１．９０ （ｍ，２Ｈ），１．６２ （ｍ，２Ｈ），１．４０ （ｍ，７Ｈ），０．８２ （ｍ，１２Ｈ）
【０３２８】
実施例３７：４−（４−アセトキシ−３−（（１−（５−（（２−ＰＥＧ３Ｋ−エチル）アミノ）−５−オキソペンチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメシレート
【化８１】
2019519530.tif 000094
【０３２９】
実施例３７は、５−アジドペンタン酸から誘導されたリンカーを有するＰＥＧ３Ｋを使用して実施例５〜１１及び方法Ａで教示したものと類似する方法を使用して調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ｄＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ ９．２６ （ｍ，１Ｈ），８．２５ （ｍ，２Ｈ），８．１７ （ｍ，１Ｈ），７．９８ （ｄ，１Ｈ），７．８７ （ｍ，１Ｈ），７．６２ （ｍ，１Ｈ），７．２２ （ｍ，１１ Ｈ），７．０２ （ｍ，１Ｈ），４．９９ （ｍ，２Ｈ），４．５６ （ｍ，１Ｈ），４．３７ （ｂｒ ｓ，６Ｈ），４．１１ （ｍ，３Ｈ），３．７１ （ｍ，３Ｈ），３．５２ （ｂｒ ｓ，３０４Ｈ），３．２５ （ｂｒ ｓ，７Ｈ），２．７５ （ｍ，１Ｈ），２．６１ （ｍ，２Ｈ），２．２４ （ｓ，３Ｈ），２．１１ （ｍ，１Ｈ），１．８７ （ｍ，２Ｈ），１．４０ （ｍ，５Ｈ），０．８２ （ｍ，１２Ｈ）
【０３３０】
実施例３８：４−（４−アセトキシ−３−（（１−（５−（（２−ＰＥＧ２Ｋ−エチル）アミノ）−５−オキソペンチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）ベンジル）−４−（（４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−ベンジル−７−イソブチル−１５−メチル−１３−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−カルボニル）−２，５，８，１１−テトラオキソ−４−フェネチル−３，６，９，１２−テトラアザヘキサデシル）モルホリン−４−イウムメシレート
【化８２】
2019519530.tif 000095
【０３３１】
実施例３８は、５−アジドペンタン酸から誘導されたリンカーを有するＰＥＧ２Ｋを使用して実施例５〜１１及び方法Ａで教示したものと類似する方法を使用して調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ｄＭＳＯ−ｄ６，４００ ＭＨｚ）： δ ９．５６ （ｍ，１Ｈ），８．２９ （ｍ，２Ｈ），８．１８ （ｍ，１Ｈ），８．０４ （ｍ，１Ｈ），７．９２ （ｍ，１Ｈ），７．６２ （ｍ，１Ｈ），７．２２ （ｍ，１１ Ｈ），７．０ （ｍ，１Ｈ），５．３８ （ｍ，２Ｈ），４．９９ （ｍ，２Ｈ），４．５６ （ｍ，１Ｈ），４．３７ （ｂｒ ｓ，７Ｈ），４．１９ （ｍ，３Ｈ），４．０２ （ｍ，３Ｈ），３．５２ （ｂｒ ｓ，１７９Ｈ），３．２５ （ｂｒ ｓ，５Ｈ），２．９４ （ｍ，２Ｈ），２．８０ （ｍ，１Ｈ），２．６３ （ｍ，２Ｈ），２．２４ （ｓ，３Ｈ），２．１０ （ｍ，２Ｈ），１．８７ （ｍ，２Ｈ），１．４０ （ｍ，９Ｈ），０．８２ （ｍ，１２Ｈ）
【０３３２】
本発明の例示的な化合物は、そのようながん治療を提供するために好適且つ十分な薬物動態学的及び薬力学的プロファイルを有することにより、多発性骨髄腫を含むがこれに限定されない様々ながんの治療に有効であることが示され得る。以下の例示的な説明及び添付の図は、本発明の選択された代表的な化合物のこれらの薬物動態学的及び薬力学的プロファイルのいくつかを示している。
【０３３３】
実施例３９：ヒト血漿におけるＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物の転化
【０３３４】
ヒト血漿転化プロトコル：
所望の試験化合物の１ミリモル濃度（ｍＭ）ストックをＤＭＳＯ中で調製した。試験化合物の２５μＭストックを、１ｍＭストックから希釈することによってアセトニトリル：水中で調製した（すなわち、２．５μＬの１ｍＭストック溶液を９７．５μＬのアセトニトリル：水（５０：５０）に添加した）。凍結したヒト血漿（５人の男性からプールした、２ＫＥＤＴＡ抗凝固剤）を室温で解凍し、１４００ｘＲＣＦ４℃で１５分間遠心分離した。透明な上清画分のおよそ９０％を別のチューブに移し、アッセイに使用した。時間０分の試料について、血漿を８０℃で熱不活性化した。７２μＬの熱不活性化血漿に、３μＬの２５μＭ作用ストックを添加し、５０μＬの試料を内部標準を含有する２００μＬのアセトニトリルで粉砕した。アッセイのために、１μＭのインキュベーション試料を、２０μＬの２５μＭの作用ストックを４８０μＬの血漿にスパイクすることによって調製した。試料を穏やかに振盪しながら３７℃で振とう水浴中で０．５、１、２、４及び６時間インキュベートした。各時点で、内部標準を含有する２００μＬのアセトニトリルで５０μＬの試料を沈殿させ、４０００ｘＲＦＦ、４℃で２０分間遠心分離した。１５０μＬの上清を１５０μＬの水で希釈し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。５μＭの最高濃度のカルフィルゾミブを有する血漿を使用して８点検量線を生成し、続いて２．５倍希釈した。放出されたカルフィルゾミブの量を較正曲線に対して定量化し、μＭで報告した。
【０３３５】
図１は、ＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物の代表的な例の遊離の非ＰＥＧ複合活性形態のカルフィルゾミブへの転化速度を示している。示されているように、例示された本発明の化合物は、時間０に始まり、図示された例の大部分について、２時間もの長い間、及びいくつかの場合では２時間よりも長い間、意義のある濃度まで徐々に増加するカルフィルゾミブの血漿濃度を提供する。この図は、本発明の例示化合物の半減期が少なくとも２時間であり、ヒト血漿中で潜在的により長いことが予測されることを示している。それ故、図１は、本発明のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物が、活性形態のカルフィルゾミブの血漿中へのゆっくりとした放出を提供し、それによってカルフィルゾミブを、細胞プロテオソーム酵素に対して潜在的により長い継続時間作用させることが可能となり、プロテアソーム活性に対して予想された阻害効果の延長がもたらされる。
【０３３６】
メスＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３）へのＰＥＧ−カルフィルゾミブ複合体の静脈内投与後の平均血漿濃度（μＭ）。示された用量は、ＰＥＧ−カルフィルゾミブ複合体のｍｇ／ｋｇである。
【０３３７】
実施例４０：ＰＥＧ−カルフィルゾミブマウスｐＫ
ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を１０％（ｗ／ｖ）のエタノールを含有する水溶液中の特定用量（用量体積５ｍＬ／ｋｇ）で静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラスとしてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、メス、用量群当たりｎ＝３）に投与した。示された時点で血液試料を収集し、血漿カルフィルゾミブ濃度をＬＣ／ＭＳ−ＭＳによって二重に測定した。対照比較プロファイルは、カルフィルゾミブ標準製剤、すなわち、投与（５ｍｇ／ｋｇ）のために１０％（ｗ／ｖ）のスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン及び１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．５）の水溶液製剤であった。この標準カルフィルゾミブは、多発性骨髄腫の治療のために現在承認されているカルフィルゾミブの製剤を表す。実施例１３、１６及び１８のマウスに投与された異なる用量は、存在する及び投薬されたカルフィルゾミブの量、及び標準カルフィルゾミブ製剤に提供されたカルフィルゾミブの量とおおよそ同じであると計算された量を反映している。
【０３３８】
図２に図示されているように、実施例１８は対照カルフィルゾミブと同様のプロファイルを示した一方で、実施例１３及び１６はそれらのプロファイルの拡張を示した。特に、実施例１６は、対照と同じ期間にわたって、遊離の活性カルフィルゾミブの改善した利用可能性を有していた。しかしながら、実施例１３は、対照のカルフィルゾミブよりもはるかに長い期間にわたってカルフィルゾミブの放出を示し、これは、そのより長い期間にわたって血漿中のカルフィルゾミブの有意により高い濃度をもたらした。実施例１３の血漿濃度は、対照のそれに対して複数対数倍であった。
【０３３９】
実施例４１：ＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物対カルフィルゾミブのプロテアソーム阻害
ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物実施例１を１０％（ｗ／ｖ）のエタノールを含有する水溶液中の特定用量（用量体積５ｍＬ／ｋｇ）で静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラスとしてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、メス、用量群当たりｎ＝３）に投与した。カルフィルゾミブ標準は、投与（５ｍｇ／ｋｇ）のために１０％（ｗ／ｖ）のスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン及び１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．５）の水溶液中で製剤化された。ｉ．ｖ．薬物投与後の選択された時点で、組織試料（副腎、心臓、肝臓及び骨髄）を収集した。全血を心穿刺によってヘパリンナトリウムを含有するチューブに収集した。
【０３４０】
血液：およそ０．４ｍＬの全血をＥＤＴＡマイクロ遠心分離チューブのいずれかを使用して収集する。試料を直ちに氷上に置き、室温（ＲＴ）でマイクロ遠心分離機で最高速度で２分間回転させる。細胞ペレットを湿った氷上で保存する。全血細胞ペレットを１ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、４℃で最高速度で遠心分離する。上清を除去し、ペレットをＰＢＳで２回目の洗浄をする。試料を２倍量の溶解緩衝液（２０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、５ｍＭのＥＤＴＡ）に再懸濁し、次いで凍結し、分析まで−８０℃で保存する。
【０３４１】
副腎、心臓及び肝臓組織：
組織（副腎、心臓、及び肝臓）を、投薬後に指定されたグラフィック時点で収集した。組織を摘出し、ＰＢＳを含有する１５ｍｌのチューブ内に４℃で入れた。ホモジナイズされた組織については、試料をはさみで刻み、約０．１〜０．２ｍｇの部分を２ｍＬのマイクロ遠心分離チューブに入れた。組織部分を凍結し、−８０℃で保存した。
【０３４２】
試料処理：
全ての試料を氷上で解凍した。溶解緩衝液（全血）中の全ての単細胞ペレットを簡潔にボルテックスし、次いでマイクロ遠心分離機で１４，０００ｒｐｍで４℃で１５分間回転させた。上清を１０％グリセロールの最終濃度のための試料プレートにおいて２５μＬの５０％グリセロールに対して１００μＬの比で移した。次いでこれらの試料はアッセイの準備ができていたか、またはそれらは−８０℃で凍結され得る。およそ２倍量の溶解緩衝液及びステンレス鋼ビーズを、解凍した組織部分（副腎、心臓、及び肝臓）に添加した。試料を各サイドで２０ｍＨｚで６０秒間ホモジナイズし、次いでマイクロ遠心分離機で１４，０００ｒｐｍで４℃で１５分間回転させた。上清を１０％グリセロールの最終濃度のための試料プレートにおいて２５μＬの５０％グリセロールに対して１００μＬの比で移した。高い脂肪含有量を有する組織（すなわち、副腎）について頂部脂質層を避けるように注意した。次いでこれらの試料はアッセイの準備ができていたか、またはそれらは−８０℃で凍結され得る。この溶解物／１０％グリセロール段階で凍結した試料をアッセイ前に氷上で解凍すべきである。各試料についてのタンパク質濃度をブラッドフォードアッセイによって測定した。蛍光ペプチドＳｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ（ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ）からの遊離ＡＭＣの放出をモニターすることによってプロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性を定量した。
【０３４３】
図３に示されているように、ＣＴ−Ｌ活性は、マウスにおける血液中ならびに副腎、心臓及び肝臓の組織中で標準カルフィルゾミブと実施例複合体１との間で同等であった。
【０３４４】
実施例４２：平均カルフィルゾミブ血漿濃度−それぞれ静脈内投与された実施例１３、２６及び３４の時間プロファイル。
【０３４５】
ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を５ｍｇ／ｋｇ（容量体積１ｍＬ／ｋｇのカルフィルゾミブと同等）で静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラスとしてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、オス、用量群当たりｎ＝９）に投与した。示された時点（投薬後０．５、１、２、４、６、１２、１６及び２４時間）に各マウスからの血液試料を収集し、内部標準としてＤ１０−ＣＦＺを含有する１２５μＬのアセトニトリルでのタンパク質沈殿によって２５μＬの血漿試料を抽出し、次いで遠心分離した。カルフィルゾミブ濃度を、正のエレクトロスプレーイオン化モードで複数の反応モニタリングを使用してＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって上清中で測定した。アッセイの定量の下限は０．５００ｎｇ／ｍＬであった。
【０３４６】
図４に示されているように、この試験における対照標準カルフィルゾミブ（ＣＦＺ）シクロデキストリン製剤（５ｍｇ／ｍＬ）は、非常に短い期間にわたって血漿濃度の低下をもたらした。３Ｋ−ＰＥＧ  ＣＦＺ（実施例３４）は、ＰＥＧ複合体の初回投与後に最大２０〜約２５時間血漿中に存在する。同様に、５Ｋ−ＰＥＧ  ＣＦＺ（実施例２６）は、図５で測定されているように、約２５時間までの事実上全ての間、より高い濃度で血漿中に存在する。最後に、２０Ｋ−ＰＥＧ（実施例１３）は、３Ｋ及び５Ｋ−ＰＥＧ曲線の両方よりも高い曲線である一方で、それらの間で始まり、このＰＥＧ複合体が、測定された２５時間の過程にわたってカルフィルゾミブを血漿中に放出する一方で、その長期の持続時間の間、有意に高い血漿濃度でカルフィルゾミブを提供する。最後に、図４に示されているように、開始時点で最も高い曲線である３Ｋ−ＰＥＧ及び２０Ｋ−ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の両方の組み合わせを含む製剤は、個々での３Ｋ−ＰＥＧよりも高く且つ長く、また、最も高い分子量の２０Ｋ−ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物単独に匹敵する血漿濃度を示した。
【０３４７】
表４は、代表的なカルフィルゾミブ化合物の例を標準カルフィルゾミブと比較した場合に得られた結果を記載しており、全ての試料は静脈内投薬された。
【０３４８】
【表３】
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【０３４９】
実施例３９〜４１で投薬されたＰＥＧカルフィルゾミブ製剤は、一般に以下のように調製した：所望量のＰＥＧ−ＣＦＺ化合物を分析天秤を使用して滅菌ガラス容器に秤量した。希釈剤の体積は材料の重量に基づいて計算した。１０ｍＭの酢酸塩、ｐＨ５．０、９％スクロースの希釈剤をガラス容器に添加して、ＰＥＧ−ＣＦＺ化合物の濃度が１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬとなる最終容量とした。各ＰＥＧ−ＣＦＺ試料を室温で１時間撹拌して、材料を完全に溶解させた。材料が溶液中に完全に溶解すると、ｐＨを測定するために試料を採取したが、これは４．９〜５．１の所望の範囲にあることが一貫して判明した。それ故、更なるｐＨ調整は行われなかった。試料の浸透圧測定及びエンドトキシン試験を全ての試料について実施し、浸透圧については２９５〜３１２ｍＯｓｍの許容される範囲内であり、エンドトキシンカウントについては＜１．０ＥＵ／ｍＬであることが一貫して判明した。溶解直後に、試料を５ｃｃの滅菌ガラスバイアルに無菌で充填し、栓をしてキャップをした。試料は、本明細書で以下に記載されるように実施例３９〜４１において移して投薬する前に−７０℃で１日〜２．５週間凍結した。
【０３５０】
実施例４３：ＳＣＩＤＢｅｉｇｅマウスにおけるＨＴ−２９ヒト結腸直腸腺癌異種移植モデルにおける実施例１３及びＣＦＺ−カプチゾールの有効性試験（図５）
手順：メスのＢｅｉｇｅ重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス（６０＋予備）をＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｉｖｅｒｍｏｒｅ，ＣＡ）から６〜７週齢のマウスとして購入した。到着後、動物を電子天秤（Ｏｈａｕｓ  ＳＣＯＵＴ（登録商標）ＰＲＯ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）を使用して秤量し、動物が良好な状態にあることを保証するために臨床検査を行い、（投薬前に）ケージ当たり５匹飼育した。動物を、時間当たり少なくとも１０回の室内空気変化を提供するＭｉｃｒｏ−ＶＥＮＴ全換気齧歯動物飼育システム（Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ  Ｃａｇｉｎｇ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ，ＮＪ）におけるＨＥＰＡ濾過環境で維持した。動物室の制御は、２０℃±１℃及び５０％±２０％の温度及び相対湿度をそれぞれ維持するように設定した。飼育室は１２：１２の明暗サイクルにあった。ケージを加熱滅菌し、ＳａｎｉＣｈｉｐ照射済寝具７９９０．ＢＧ（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ；Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）上に動物を寝かせた。水を加熱滅菌し、水ボトルを介して各ケージに自由に供給した。照射済２０１８Ｔｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌの１６％タンパク質齧歯動物飼料（（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ）を各ケージに自由に供給した。
【０３５１】
化合物製剤：実施例１３は、概して上述したように調製した。カルフィルゾミブ比較化合物を（１ｍｇ／ｍＬで）ＣＦＺ−カプチゾールとして調製した。実施例１３の粉末試料を、１０％ＥＴＯＨ／生理食塩水中３０ｍｇ／ｍｌ（第３群）または５０ｍｇ／ｍｌ（第４の用量を始める第３群）または４０ｍｇ／ｍｌ（第４群）に希釈した。ビヒクル及びＣＦＺ−カプチゾールは試験を通して４℃で保存した。試験の間、実施例１３は、懸濁液の質の潜在的な変化について定期的に検査された；いずれも観察されなかった。
【０３５２】
細胞株：ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＣＡ）株であるＮＣＩ−ＨＴ２９（ＨＴ−２９；ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−３８（商標））をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＭＧＩで受領した後、細胞をＲＰＭＩ１６４０及び１０％ウシ胎仔血清中で社内で７代継代培養し、次いで凍結ストックを生成するために使用した。細胞を凍結ストックから回収し、上記のように培養した。増殖後、細胞を遠沈させ、添加剤を有しない無血清培地に５Ｅ０７細胞／ｍＬの濃度で再懸濁し、次いでＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と１：１で組み合わせた。移植の時点で、細胞はＭＧＩ継代７（ＭＧＰ７）に対応していた。
【０３５３】
細胞の移植：計画された病期の日のおよそ３週間前に、マウス当たり２００μＬ（５．０Ｅ０６細胞）の新たに調製したＨＴ２９：マトリゲル混合物を左下脇腹部に皮下（ＳＣ）注射によってマウスに移植した。全ての手順は、ＨＥＰＡ濾過層流フード内で行った。
【０３５４】
試験設計：全ての群の試験設計及び治療を表Ｉに示す（有効性）。腫瘍がマウス当たりおよそ２００ｍｍ３の平均体積に達したとき、確立された腫瘍及び中等度の体重を有する４０匹の動物を無作為化して４つの治療群（ｎ＝１０マウス／群）とした。０日目に開始して、ビヒクル（第１群）を週１回（ｑｗ）の注射によってまたは５ｍｐｋでＣＦＺ−カプチゾール（第２群）または１５０ｍｇ／ｋｇでＯＰ−５９３８１（第３群）を週二回Ｄ１Ｄ２注射（すなわち、各週の隣接する２日）によって動物に投与した。第４の用量から開始して（すなわち、３週間後）、第３群の動物の投薬を２５０ｍｇ／ｋｇに増加させた。第４群には、２００ｍｇ／ｋｇでＯＰ−５９３８１（実施例１３）を週１回（ｑｗ）の注射で投薬した。これらの用量の全てを５ｍＬ／ｋｇの用量体積で静脈内（ＩＶ）注射として投与した。７週目のＩＶ投薬後（すなわち、第１群〜第４群についての４２日目後）に、腫瘍治療有効性は遅くなったかまたは完全に停止したようであった。
【０３５５】
【表４】
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【０３５６】
図５に見られるように、ビヒクル群（第１群）における腫瘍はＩＶ投薬間隔にわたって直線的に増殖し、腫瘍は４９日目までに初期サイズの約２，７５５％まで増大した。０日目〜１５日目の腫瘍サイズは３つの群全てにおいてビヒクル対照に対して変化しなかったが、１９日目までに、２００ｍｐｋの実施例１３及び５ｍｐｋのＣＦＺ−カプチゾールで治療された動物において腫瘍増殖が有意に減弱した。３つの実験群の全てが４０日目まで続く有意性を達成した場合にこの有意な減弱は２９日目まで続いたが、このことは３つの用量が抗腫瘍活性を提供するのに十分であることを証明している。
【０３５７】
実施例４４：実施例４４は、実施例４１の試験から得られたマウス生存データを反映しており、このデータは表６に一覧にされており、図６にグラフで示されている。
【０３５８】
【表５】
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【０３５９】
実施例４１及び４２は、ヒト結腸直腸腺癌細胞のマウス異種移植モデルにおけるカルフィルゾミブの代表化合物実施例１３の有効性を明らかにしている。試験の間、ビヒクル群における腫瘍は直線的に増殖した。化合物実施例１３（２００ｍｐｋ、または１５０から３週間後に２５０ｍｐｋに上昇）またはＣＦＺ−カプチゾール（５ｍｐｋ）による週１回の静脈内投薬は、最初の用量投薬の１９日以内に（ビヒクル対照と比較して）腫瘍増殖の有意な減弱を提供した。また、両方の製剤での静脈内投薬は、体重増加の有意な減弱と関連していた。
【０３６０】
実施例４５：ＳＣＩＤＢｅｉｇｅマウスにおけるＨＴ−２９結腸直腸腺癌異種移植モデルにおける実施例１３及びＣＦＺ−カプチゾールの有効性試験（図７）
手順：メスのＢｅｉｇｅ重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス（６０＋予備）をＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｉｖｅｒｍｏｒｅ，ＣＡ）から６〜７週齢のマウスとして購入した。到着後、動物を電子天秤（Ｏｈａｕｓ  ＳＣＯＵＴ（登録商標）ＰＲＯ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）を使用して秤量し、動物が良好な状態にあることを保証するために臨床検査を行い、（投薬前に）ケージ当たり５匹飼育した。動物を、時間当たり少なくとも１０回の室内空気変化を提供するＭｉｃｒｏ−ＶＥＮＴ全換気齧歯動物飼育システム（Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ  Ｃａｇｉｎｇ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ，ＮＪ）におけるＨＥＰＡ濾過環境で維持した。動物室の制御は、２０℃±１℃及び５０％±２０％の温度及び相対湿度をそれぞれ維持するように設定した。飼育室は１２：１２の明暗サイクルにあった。ケージを加熱滅菌し、ＳａｎｉＣｈｉｐ照射済寝具７９９０．ＢＧ（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ；Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）上に動物を寝かせた。水を加熱滅菌し、水ボトルを介して各ケージに自由に供給した。照射済２０１８Ｔｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌの１６％タンパク質齧歯動物飼料（（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ）を各ケージに自由に供給した。
【０３６１】
化合物製剤：実施例１３は、所望の濃度に本明細書に記載のように製剤化した。カルフィルゾミブは、（１ｍｇ／ｍＬで）ＣＦＺ−カプチゾールとして提供された。実施例１３の粉末試料を１０％ＥＴＯＨ／生理食塩水中で３０ｍｇ／ｍｌ（第３群）または５０ｍｇ／ｍｌ（第４群）に希釈した。ビヒクル及びＣＦＺ−カプチゾールは試験を通して４℃で保存した。試験の間、実施例１３の調製物は、懸濁液の質の潜在的な変化について定期的に検査された；いずれも観察されなかった。
【０３６２】
細胞株：ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＣＡ）株であるＮＣＩ−ＨＴ２９（ＨＴ−２９；ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−３８（商標））をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＭＧＩで受領した後、細胞をＲＰＭＩ１６４０及び１０％ウシ胎仔血清中で社内で７代継代培養し、次いで凍結ストックを生成するために使用した。細胞を凍結ストックから回収し、上記のように培養した。増殖後、細胞を遠沈させ、添加剤を有しない無血清培地に５Ｅ０７細胞／ｍＬの濃度で再懸濁し、次いでＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と１：１で組み合わせた。移植の時点で、細胞はＭＧＩ継代７（ＭＧＰ７）に対応していた。
【０３６３】
細胞の移植：計画された病期の日のおよそ３週間前に、マウス当たり２００μＬ（５．０Ｅ０６細胞）の新たに調製したＨＴ２９：マトリゲル混合物を左下脇腹部に皮下（ＳＣ）注射によってマウスに移植した。全ての手順は、ＨＥＰＡ濾過層流フード内で行った。
【０３６４】
試験設計：全ての群の試験設計及び治療を表Ｉに示す（有効性）。腫瘍がマウス当たりおよそ２００ｍｍ３の平均体積に達したとき、確立された腫瘍及び中等度の体重を有する４０匹の動物を無作為化して４つの治療群（ｎ＝１０マウス／群）とした。０日目に開始して、ビヒクル（第１群）を週１回（ｑｗ）の注射によってまたは５ｍｐｋでＣＦＺ−カプチゾール（第２群）または１５０ｍｇ／ｋｇもしくは２５０ｍｇ／ｋｇで実施例１３（それぞれ、第３群または４）を週二回Ｄ１Ｄ２注射（すなわち、各週の隣接する２日）によって動物に投与した。これらの用量の全てを５ｍＬ／ｋｇの用量体積で静脈内（ＩＶ）注射として投与した。第６週の用量投与（複数可）後（すなわち、３５日目後）に、有効性のためのＩＶ投薬を停止した。
【０３６５】
図７に見られるように、ビヒクル群（第１群）における腫瘍はＩＶ投薬間隔にわたって直線的に増殖し、腫瘍は４１日目までに初期サイズの約２１００％まで増大した。比較すると、腫瘍増殖は実験群の全てにおいて有意に減弱した：４１日目の腫瘍サイズは、第２群、３、及び４についてそれぞれ対照の８３．６％、７９．６％、及び６１．８％であった。この減弱化は、最も早い時点（９または１２日目）で開始して有意性を達成し、２つの用量が抗腫瘍活性を提供するのに十分であることを実証した。ＩＶ投薬の終了後（３５日目後）に腫瘍増殖が再開した。
【０３６６】
【表６】
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【０３６７】
実施例４６：細胞中の例示的な化合物のプロテオソーム阻害（図９〜１４）
細胞株：ＭＯＬＴ−４ヒト急性リンパ性白血病Ｔリンパ芽球を増殖培地（１０％ＦＢＳ及び１×Ｌ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ−１６４０基礎培地）中で少なくとも６回継代培養した。懸濁細胞を１〜２ｅ６細胞／ｍＬ（５０μＬ、約６０，０００細胞／ウェル）の率で９６ウェルプレートに二重に入れた。
【０３６８】
治療：カルフィルゾミブ及びペグ化されたカルフィルゾミブ化合物実施例５、３５、３６、３７、及び３８の調製物をＤＭＳＯに１０ｍＭの濃度で溶解させた。ＤＭＳＯ中で一連の希釈を実施して、７ｌｏｇをカバーする濃度を生成し、次いで各一連の希釈物を増殖培地中で更に４０倍希釈した。次いで、細胞を含有するウェルに希釈液を等量で添加し、更に化合物濃度を２倍希釈した。細胞を３７℃（５％のＣＯ２）で１時間インキュベートし、次いで室温で５分間１５００ｒｐｍで回転させた。培地を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。最後の洗浄後、上清を除去し、細胞ペレットをドライアイス上で凍結させた。
【０３６９】
分析：細胞ペレットを解凍し、次いで氷上で５０μＬの溶解緩衝液（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８）中に再懸濁することによって溶解させた。調製物を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いでＡＭＣ−ＬＬＶＹ蛍光アッセイに直接利用した。測定を２分毎に７０分間行って動力学曲線を生成し、ＩＣ５０値を５〜１５分の傾き（ＲＦＵ／分、初期速度）を使用して計算した。
【０３７０】
図１０に示されているように、代表的な例示的化合物５は、約１６．２５ｎＭの細胞プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）ＩＣ５０阻害効力を示した。比較すると、カルフィルゾミブの対照試料は、約９．２ｎＭのＩＣ５０活性、及び実施例５のものと同様の効力を示した。同様に、化合物例番号３５（図１１）は、約９．０ｎＭの細胞プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）ＩＣ５０阻害効力を示し、化合物例番号３６（図１２）は、約２１．８ｎＭの細胞プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）ＩＣ５０阻害効力を示し、化合物例番号３７（図１３）は、約２２．８ｎＭの細胞プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）ＩＣ５０阻害効力を示し、化合物例番号３８（図１４）は、約２１．８ｎＭの細胞プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）ＩＣ５０阻害効力を示した。本発明のいくつかの代表的な化合物は、ペグ化されたカルフィルゾミブ化合物としてＣＴ−Ｌ阻害活性を示す。
【０３７１】
実施例４７：ＰＥＧ−カルフィルゾミブ複合体対カルフィルゾミブのプロテアソーム阻害
ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物実施例３５及び３６を、１０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）及び９％の投与用スクロース（２０ｍｇ／ｋｇ）を含有する水溶液中の特定用量（用量体積５ｍＬ／ｋｇ）で皮下ボーラスとしてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、メス、用量群当たりｎ＝３）に投与した。薬物投与後の選択された時点で、ヘパリンを含有するチューブを使用して血液試料を収集した。試料を直ちに氷上に置き、室温（ＲＴ）でマイクロ遠心分離機で最高速度で２分間回転させる。細胞ペレットを湿った氷上で保存する。全血細胞ペレットを１ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、４℃で最高速度で遠心分離する。上清を除去し、ペレットをＰＢＳで２回目の洗浄をする。試料を２倍量の溶解緩衝液（２０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、５ｍＭのＥＤＴＡ）に再懸濁し、次いで凍結し、分析まで−８０℃で保存する。
【０３７２】
試料処理：全ての試料を氷上で解凍した。溶解緩衝液（全血）中の全ての単細胞ペレットを簡潔にボルテックスし、次いでマイクロ遠心分離機で１４，０００ｒｐｍで４℃で１５分間回転させた。上清を１０％グリセロールの最終濃度のための試料プレートにおいて２５μＬの５０％グリセロールに対して１００μＬの比で移した。次いでこれらの試料はアッセイの準備ができていたか、またはそれらは−８０℃で凍結され得る。この溶解物／１０％グリセロール段階で凍結した試料をアッセイ前に氷上で解凍すべきである。各試料についてのタンパク質濃度をブラッドフォードアッセイによって測定した。蛍光ペプチドＳｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ（ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ）からの遊離ＡＭＣの放出をモニターすることによってプロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性を定量した。
【０３７３】
図１５は、本発明の代表的な化合物実施例３５及び３６のインビボ薬力学的（ＰＤ）活性を示している。図１５に示されているように、実施例３５及び３６の各々は、マウスにおいて投与後４８時間を超える間、インビボでほぼ完全なＣＴ−Ｌ阻害を示した。９６時間もの期間にわたってさえも、化合物はマウスにおいて約５０％以上のＣＴ−Ｌ阻害活性を示し続けた。
【０３７４】
使用方法
プロテアソーム阻害の生物学的効果は有用であり、望ましい。プロテアソーム阻害は、増殖性疾患、神経毒性／変性疾患、アルツハイマー病、虚血状態、炎症、自己免疫疾患、ＨＩＶ、がん、臓器移植片拒絶反応、敗血ショック、抗原提示阻害、ウイルス遺伝子発現の低下、寄生虫感染、アシドーシスに関連した状態、黄斑変性、肺疾患、筋肉消耗疾患、線維性疾患、骨及び毛髪成長疾患を含むがこれらに限定されない、数多くの疾患の予防及び／または治療として提案されている。そのため、本発明のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を治療的に有効な投薬量で含む薬学的製剤は、患者に薬物を投与し、これらの状態を治療する手段を提供する。
【０３７５】
細胞レベルにおいて、様々なプロテアソーム阻害剤による細胞の処理の際に、ポリユビキチン化タンパク質の蓄積、細胞形態変化、及びアポトーシスが報告されている。プロテアソーム阻害も開示されており、有用な抗腫瘍治療策略として臨床的且つ商業的に証明されている。この目的のため、本発明の化合物及びその化合物を含む組成物は、限定されないが、新たに診断された及び／または再発性及び難治性の多発性骨髄腫を含むがんを治療するのに有用である。
【０３７６】
インビボ及びインビトロモデルの両方において、悪性細胞が一般にプロテアソーム阻害の影響を受けやすいことが示されている。実際に、プロテアソーム阻害は、多発性骨髄腫の治療のための療法戦略としてすでに実証されている。これは、極めて増殖性の悪性細胞の、迅速にタンパク質を除去するためのプロテアソーム系への依存性に一部起因し得る（Ｒｏｌｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（１９９７）７５：５−１７；Ａｄａｍｓ，Ｎａｔｕｒｅ（２００４）４：３４９−３６０）。本明細書では、がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、本明細書で提供または記載された式Ｉ及びＩＩのペグ化されたカルフィルゾミブ化合物、または任意の具体的に例示されたＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【０３７７】
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、血液媒介性癌及び固形腫瘍を含むがこれらに限定されない。がんは、膀胱、血液、骨、脳、乳房、頚部、胸部、結腸、子宮内膜、食道、眼、頭部、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、口、頸、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎、皮膚、胃、精巣、喉、及び子宮のがんを含むがこれらに限定されない、血液、骨、器官、皮膚組織及び血管系の構成要素を苦しめ得る。具体的ながんは、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病、成熟Ｂ細胞新生物（小リンパ球性白血病）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えばワルデンストローム大グロブリン血症）、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、モノクローナル免疫グロブリン沈着疾患、重鎖疾患、結節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫及びバーキットリンパ腫／白血病）、成熟Ｔ細胞及びナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞新生物（Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒球性リンパ球性白血病、進行性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾臓Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫（セザリー症候群）、原発性皮膚退生大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、不特定の末梢Ｔ細胞リンパ腫及び退生大細胞リンパ腫）、ホジキンリンパ腫（結節性硬化症、混合細胞充実性、リンパ球リッチ、リンパ球枯渇または非枯渇型、結節性リンパ球優勢型）、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫（多発性骨髄腫、無痛性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫）、慢性骨髄増殖性疾患、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、免疫不全関連リンパ球増殖性障害、組織球性及び樹状細胞新生物、肥満細胞症、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、悪性巨細胞腫、骨髄腫骨疾患、骨肉腫、乳癌（ホルモン依存型、ホルモン独立型）、婦人科系の癌（頚部、子宮内膜、卵管、妊娠性栄養膜疾患、卵巣、腹腔、子宮、膣及び外陰部）、基底細胞癌腫（ＢＣＣ）、扁平細胞癌腫（ＳＣＣ）、悪性黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫、星状細胞腫、毛様細胞性星状細胞腫、胎生期奇形性神経表皮腫瘍、乏突起膠腫、上衣細胞腫、多形性グリア芽細胞腫、混合膠腫、乏星状細胞腫、髄芽腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞種、胚細胞腫、奇形腫、悪性中皮腫（腹腔内中皮腫、心臓周囲中皮腫、胸膜中皮腫）、胃−腸管−膵臓または胃腸膵臓の神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ−ＮＥＴ）、カルチノイド、膵臓内分泌腺腫瘍（ＰＥＴ）、結腸直腸腺癌、結腸直腸癌腫、進行性神経内分泌腺腫瘍、平滑筋肉腫膠様腺癌、印環細胞腺癌、肝細胞癌腫、胆管癌、肝芽細胞腫、血管腫、肝腺腫、局所結節性過形成（結節性再生性過形成、過誤腫）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（扁平細胞肺癌、腺癌、大細胞肺癌）、小細胞肺癌腫、甲状腺癌、前立腺癌（ホルモン不応性、アンドロゲン非依存性、アンドロゲン依存性、ホルモン非感受性）、及び軟組織肉腫（線維肉腫、悪性線維性ヒスチオサイトーマ、皮膚線維肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫平滑筋肉腫、血管内皮腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍／神経線維肉腫、骨格外骨肉腫）を含むが、これらに限定されない。
【０３７８】
一態様では、本発明は、本明細書において提供されるようなペグ化されたカルフィルゾミブ化合物を提供するか、またはそれを含む薬学的組成物は、患者における多発性骨髄腫を治療するために投与され得る。例えば、多発性骨髄腫には、新たに診断されたまたは再発性及び／または難治性の多発性骨髄腫のいずれかまたは両方が含まれ得る。
【０３７９】
造血及びリンパ系組織の多くの腫瘍は、細胞増殖、または特定の型の細胞の増加を特徴とする。慢性骨髄増殖性疾患（ＣＭＰＤ）は、骨髄細胞系列の１つ以上の骨髄中の増殖を特徴とするクローン性造血幹細胞障害であり、末梢血中の顆粒球、赤血球及び／または血小板の数の増加をもたらす。このように、そのような疾患の治療のためのプロテアソーム阻害剤の使用は魅力的であり、試験されている（Ｃｉｌｌｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ（２００７）９２：１１２４−１２２９）。ＣＭＰＤは、慢性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、真性赤血球増加症、慢性特発性骨髄線維症、本態性血小板血症、及び分類不可能な慢性骨髄増殖性疾患を含み得る。本明細書では、ＣＭＰＤを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、本明細書で開示されるプロテアソーム阻害剤化合物の有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【０３８０】
骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、例えば慢性骨髄単球性白血病、異型慢性骨髄性白血病、若年性骨髄単球性白血病及び分類不可能な異形成脊髄／骨髄増殖性疾患は、骨髄細胞系列の１つ以上の増殖に起因する骨髄の細胞過多を特徴とする。本明細書に記載の組成物でプロテアソームを阻害することは、これらの骨髄異形成／骨髄増殖性疾患の治療を必要とする患者に有効量の組成物を提供することによってそのような治療に役立ち得る。
【０３８１】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、主要な骨髄細胞株の１つ以上における異形成及び非効果的な造血を特徴とする造血幹細胞障害の群を指す。これらの血液悪性腫瘍におけるプロテアソーム阻害剤によるＮＦ−ｋＢの標的化は、アポトーシスを誘発させ、それによって悪性細胞を死滅させる（Ｂｒａｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２００６）１３：７４８−７５８）。更に、本明細書では、ＭＤＳを治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、本明細書で提供される化合物の有効量を投与することを含む、方法が提供される。ＭＤＳとして、不応性貧血、環状鉄芽球を伴う不応性貧血、多系列の形成異常を伴う不応性血球減少症、過剰芽球を伴う不応性貧血、分類できない骨髄異形成症候群及びｄｅｌ（５ｑ）単独の染色体異常を伴う骨髄異形成症候群が挙げられる。
【０３８２】
肥満細胞症は、脂肪細胞の増殖、及び１つ以上の器官系におけるその後の蓄積である。肥満細胞症は、皮膚肥満細胞症、無痛性全身性肥満細胞症（ＩＳＭ）、関連したクローン性血液学的非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）、進行性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、肥満細胞肉腫（ＭＣＳ）及び皮膚外肥満細胞腫を含むが、これらに限定されない。更に、本明細書では、肥満細胞症を治療するための方法であって、肥満細胞症と診断された患者に、本明細書で開示された化合物の有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【０３８３】
追加の実施形態は、腫瘍性タンパク質のプロテアソーム依存的調節に影響を与えるための方法、及びがん増殖を治療または阻害する方法を含み、各方法は、細胞（インビボ、例えば患者内、またはインビトロ）を、本明細書で開示された組成物に曝露することを含む。ＨＰＶ−１６及びＨＰＶ−１８誘導Ｅ６タンパク質は、ＡＴＰ及びユビキチン依存的複合体化、ならびに粗網状赤血球溶血液中のｐ５３の分解を刺激する。劣性がん遺伝子ｐ５３は、突然変異熱不安定性Ｅ１を有する細胞株において、非許容温度で蓄積することが示されている。ｐ５３のレベルの上昇は、アポトーシスをもたらし得る。ユビキチン系により分解されるプロト腫瘍性タンパク質の例は、ｃ−Ｍｏｓ、ｃ−Ｆｏｓ、及びｃ−Ｊｕｎを含む。一実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を患者に投与することを含む、ｐ５３関連アポトーシスを治療するための方法である。
【０３８４】
また、２０Ｓプロテアソームに結合する阻害剤は、骨組織培養における骨形成を刺激することが示されている。更に、そのような阻害剤がマウスに全身投与された場合、所定のプロテアソーム阻害剤は、骨体積及び骨形成速度を７０％超増加させた（Ｇａｒｒｅｔｔ，Ｉ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００３）１１１：１７７１−１７８２）ことから、ユビキチン−プロテアソーム機構が骨芽細胞分化及び骨形成を調節することが示唆されている。したがって、開示された組成物は、骨粗しょう症等の骨損失に関連した疾患の治療及び／または予防において有用であり得る。
【０３８５】
骨組織は、骨細胞を刺激するための能力を有する因子の優れた源である。したがって、ウシ骨組織の抽出物は、骨の構造的完全性の維持を担う構造タンパク質だけでなく、骨細胞の増殖を刺激し得る生物活性骨成長因子を含有する。これらの後者の因子には、最近説明された、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）と呼ばれるタンパク質のファミリーがある。これらの成長因子は全て、他の種類の細胞、及び骨細胞に対する効果を有し、例えば、Ｈａｒｄｙ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓ  Ｇｅｎｅｔ（１９９２）８：５５−６１は、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）が、発達中に毛包内に差次的に発現するという証拠を記載している。Ｈａｒｒｉｓ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ（１９９４）９：８５５−８６３は、骨細胞におけるＢＭＰ−２及び他の物質の発現に対するＴＧＦ−βの効果を記載している。成熟毛包内のＢＭＰ−２発現は、成熟化の間、及び細胞増殖期間後にも生じる（Ｈａｒｄｙ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２，ｓｕｐｒａ）。したがって、本明細書で提供される化合物はまた、毛包成長刺激にも有用となり得る。
【０３８６】
最後に、開示された組成物はまた、プロテアソームを含むＮｔｎヒドロラーゼにより処理されるタンパク質（例えば、酵素、転写因子）のスクリーニングのための診断薬（例えば、診断キット内の、または臨床検査室における使用のための）として有用である。開示された組成物はまた、Ｘ／ＭＢ１サブユニットまたはα鎖に特異的に結合するための、及びそれに関連したタンパク質分解活性を阻害するための研究試薬として有用である。例えば、プロテアソームの他のサブユニットの活性（及びその特異的阻害剤）が決定され得る。
【０３８７】
ほとんどの細胞タンパク質は、成熟または活性化の間にタンパク質分解処理を受ける。本明細書に開示される酵素阻害剤は、細胞性、発達性、または生理学的プロセスまたは産生が特定のＮｔｎ加水分解酵素のタンパク質分解活性によって調節されるかどうかを決定するために使用され得る。１つのそのような方法は、生物、無傷細胞調製物、または細胞抽出物を得ること；本明細書で開示された組成物にその生物、細胞調製物、または細胞抽出物を曝露すること；化合物に曝露された生物、細胞調製物、または細胞抽出物をシグナルに曝露すること、及びプロセスまたは産物をモニターすることを含む。本明細書に開示された化合物の高い選択性は、所与の細胞性、発達上、または生理学的プロセスにおけるＮｔｎ（例えば、２０Ｓプロテアソーム）の迅速且つ正確な排除または関与を可能にする。
【０３８８】
薬学的組成物
本発明は更に、がん患者のための治療を施すための薬学的組成物を提供する。組成物は、本明細書に記載されるように、１種の、いくつかの実施形態では、１種を超える、式ＩまたはＩＩ、及びその副次的な式のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を含む。本発明が提供する薬学的組成物の１つのタイプは、非経口投与される薬学的組成物である。注入、注射または皮下投与に好適な非経口投与可能な組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）もしくは分散液及び／または注入または注射のいずれかのための滅菌溶液もしくは分散液の用時調製のための滅菌粉末が含まれる。注入等による静脈内投与の場合、好適な担体には、注射用滅菌水、クエン酸緩衝液等の滅菌緩衝液、静菌水、及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）が含まれる。全ての場合において、特にヒトの使用、治療及び摂取のための組成物は、無菌でなければならず、シリンジまたは注入バッグに添加するかまたは引き出すことが容易である程度に流動的であるべきである。組成物は、製造及び保存の条件下で安定であるべきであり、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）を含有する溶媒または分散媒、及びその好適な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散の場合には必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、多価アルコール（マンニトール、ソルビトール等）、及び塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。注射用組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、アルミニウムモノステアレート及びゼラチンをその組成物に含めることによってほぼもたらされ得る。
【０３８９】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上で列挙した成分の１つまたは組み合わせと共に、本発明の活性化合物であるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を必要量で適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。概して、分散剤は、塩基性分散媒と、上に列挙されたものからの必要とされる他の成分とを含有する滅菌ビヒクルにカルフィルゾミブを組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好適な調製方法はフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これは、その事前に滅菌濾過された溶液からの任意の追加的な所望の成分を加えたカルフィルゾミブの粉末形態を提供する。
【０３９０】
本明細書に記載の本発明の治療化合物の全身投与は、経粘膜または経皮的手段によることもできる。経粘膜または経皮投与の場合、浸透する障壁に適した浸透剤が製剤中に使用される。そのような浸透剤は、一般に当該技術分野で知られており、例えば、経粘膜投与用には、洗浄剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用を介して達成され得る。経皮投与の場合、本発明の活性化合物は、一般に当該技術分野で知られているように、軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。
【０３９１】
一実施形態では、本発明の治療用ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、制御放出製剤等の身体からの迅速な排出から治療化合物を保護する担体と共に調製される。他の例には、限定されないが、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムが含まれる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。そのような製剤は、標準的な技術を使用して調製され得るか、または、例えば、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に入手することができる。リポソーム懸濁液（細胞抗原に対するモノクローナル抗体で選択された細胞を標的とするリポソームを含む）は、薬学的に許容される担体としても使用され得る。これらは、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように、例えば、当業者に知られている方法に従って調製され得る。
【０３９２】
本発明によって提供される薬学的組成物は、１回で投与されてもよく、またはいくつかのより少ない用量に分割して、時間間隔をおいて投与されてもよい。治療の正確な投薬量及び持続時間は、治療される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを使用して、またはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿によって実験的に決定され得ることが理解される。濃度及び投薬量の値が緩和される状態の重症度によっても異なり得ることに留意されたい。任意の特定の患者に対しても、特定の投薬レジメンは、時間にわたって、個人の必要性と、本組成物を投与するまたはその投与を監督する人の専門的な判断に従って調整すべきであり、且つ本明細書に記載の濃度範囲は例示のみであり、特許請求される組成物の範囲または実施を制限することは意図されないことを更に理解されたい。
【０３９３】
非毒性担体から製造されたバランスを有する０．００５％〜１００％の範囲の本明細書に記載の本発明のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物を含有する剤形または組成物が調製され得る。これらの組成物の調製方法は当業者に知られている。企図される本発明の薬学的組成物は、０．００１％〜１００％、一実施形態では０．１〜９５％、及び別の実施形態では７５〜８５％の本明細書で提供されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を含有し得る。薬学的組成物は、投与のための指示書と共に容器、パック、またはディスペンサーに含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、米国特許第９３０９２８３号に記載されているように製剤化され得る。
【０３９４】
投与
本明細書に記載のように調製された組成物は、当該技術分野でよく知られているように、治療される障害ならびに患者の年齢、状態、及び体重に応じて、様々な形態で投与され得る。例えば、組成物は、経口投与される場合、それらは錠剤、カプセル、顆粒、粉末、またはシロップ剤として製剤化することができる。または非経口投与については、注射（静脈内、筋肉内、または皮下）、点滴注入製剤、または坐薬として製剤化することができる。眼粘膜経路による適用のために、点眼薬または眼軟膏として製剤化することができる。これらの製剤は、本明細書に記載される方法と共に、従来の手段によって調製することができ、所望の場合、活性成分は、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、矯味剤、可溶化剤、懸濁助剤、乳化剤、またはコーティング剤等の任意の従来の添加剤または賦形剤と混合することができる。投薬量は、患者の症状、年齢及び体重、治療または予防対象の障害の性質及び重症度、薬剤の投与経路及び剤形に応じて変化するが、一般的には、成人ヒト患者については０．０１〜２０００ｍｇの化合物の一日用量が推奨され、単回用量または分割用量で投与されてもよい。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせられ得る活性成分の量は、概して治療的効果を生成する化合物の量であろう。本発明の化合物の投薬量に関する更なる情報は、本明細書において以下に提供される。一般に、非経口使用（例えば、静脈内、皮下注射）を意図する組成物は可溶化剤を含む。可溶化剤は置換シクロデキストリンであり得る。
【０３９５】
所与の患者において治療の有効性の点で最も有効な結果をもたらす投与の正確な時間及び／または組成物の量は、特定のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の作用、薬物動態、及びバイオアベイラビリティ、患者の生理学的状態（年齢、性別、疾患の種類及びステージ、一般的身体条件、所与の投与量に対する応答性、及び薬物の種類を含む）、投与経路等に依存する。しかしながら、上記のガイドラインは、治療の微調整、例えば、最適な投与時間及び／または投与量を決定することを基礎として使用することができ、患者をモニタリングすること及び投薬量及び／またはタイミングを調整することから成る日常的な試みしか必要とされない。
【０３９６】
「薬学的に許容される」という語句は、正当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症のないヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に釣り合ったそれらのリガンド、材料、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で用いられる。
【０３９７】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という語句は、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料等の、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。各々の担体は、製剤の他の成分と適合し、且つ患者に有害でないという意味において「許容可能」でなければならない。薬学的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例には、（１）ラクトース、グルコース、及びスクロース等の糖類；（２）トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、及び置換または非置換β−シクロデキストリン等のデンプン；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース等のセルロース、及びその誘導体；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバター及び坐剤ワックス等の賦形剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及び大豆油等の油；（１０）プロピレングリコール等のグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール等のポリオール；（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等のエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；及び（２１）薬学的製剤に用いられる他の非毒性適合性の物質が含まれる。所定の実施形態では、本明細書が提供する薬学的組成物は、非発熱性であり、すなわち患者に投与した場合に顕著な温度上昇を誘導しない。
【０３９８】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物（複数可）の比較的非毒性の無機及び有機酸付加塩または塩基性塩を指す。これらの塩は、化合物（複数可）の最終的な単離及び精製の間にその場で、またはその遊離塩基形態で精製されたＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物を、好適な有機または無機酸と別々に反応させ、このように形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な酸付加塩として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリルスルホン酸塩、及びアミノ酸塩等が挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、１つ以上の酸性官能基を含有してもよく、それ故、薬学的に許容される塩基で薬学的に許容される塩を形成することができる。これらの例における「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物の比較的非毒性の無機及び有機塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、阻害剤（複数可）の最終的な単離及び精製中にその場で、またはその遊離酸形態の化合物を、好適な塩基（薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩等）、アンモニア、または薬学的に許容される有機の第１級、第２級、または第３級アミンと別々に反応させることによって調製することができる。代表的な塩基性塩として、限定されないが、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩等のアルカリまたはアルカリ土類塩、及びアンモニウム塩等が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとして、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、前出を参照のこと）。
【０４００】
湿潤剤、乳化剤、ならびに滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム等、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、及び芳香剤、防腐剤、ならびに酸化防止剤もまた、組成物中に存在し得る。
【０４０１】
薬学的に許容される抗酸化剤の例として、（１）水溶性酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等（２）油溶性酸化防止剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等、及び（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が挙げられる。
【０４０２】
経口投与に好適な製剤は、それぞれ活性成分として規定量の本発明の化合物を含有する、カプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、トローチ剤（フレーバーベース、通常はスクロース及びアカシアまたはトラガカントを使用する）、粉末、顆粒の形態、または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、または水中油型もしくは油中水型液体エマルションとして、またはエリキシルもしくはシロップとして、またはトローチ（ゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアカシア等の不活性マトリックスを使用する）として及び／または洗口剤として等であり得る。組成物はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与してもよい。
【０４０３】
経口投与のための固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、ドラジェ、粉末、顆粒等）において、活性成分（本発明の化合物）は、クエン酸ナトリウムもしくは第二リン酸カルシウム等の１つ以上の薬学的に許容される担体、及び／または以下のいずれかと混合される：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、シクロデキストリン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び／またはアカシア；（３）保湿剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、所定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム：（５）溶液遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物、ならびに界面活性剤、例えば、ポロキサマ及びラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール；（８）吸収剤、例えば、カオリン及びベントナイト粘土；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物；ならびに（１０）着色剤。カプセル、錠剤、及び丸剤の場合、本薬学的組成物はまた、緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコール等のそのような賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤としても使用することができる。
【０４０４】
錠剤は、圧縮または成形によって、任意に１つ以上の補助成分と共に、製造され得る。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、澱粉グリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤を使用して調製され得る。成形錠剤は、好適な機械で、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末阻害剤（複数可）の混合物を成形することによって製造することができる。
【０４０５】
錠剤、及び糖衣錠、カプセル、丸剤、及び顆粒等の他の固体剤形は、腸溶性コーティング及び薬学的製剤分野でよく知られている他のコーティング等のコーティング及びシェルで任意に刻んで印をつけられ得るかまたは調製され得る。それらはまた、例えば、様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、その中の活性成分の徐放または制御放出を提供するように製剤化されて、所望の放出特性、他のポリマーマトリックス、リポソーム、及び／またはミクロスフィアを提供してもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターによって濾過する、または滅菌水、もしくは使用直前にいくつかの他の滅菌注射用媒体に溶解することのできる、滅菌固体組成物の形態で、滅菌剤に組み込むことによって滅菌することができる。これらの組成物は、不透明化剤を含んでいてもよく、消化管の特定の部位に、任意に遅延様式で活性成分（複数可）のみをまたは優先的に放出する組成物であってもよい。使用することができる埋封組成物の例として、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。活性成分は、適宜、１つ以上の前述の賦形剤と共に、マイクロカプセル化形態であってもよい。
【０４０６】
経口投与用の液体剤形として、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分の他に、液体剤形は、当該技術分野で多く使用される不活性希釈剤を含んでいてもよく、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤及びエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ、トウモロコシ、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及び脂肪酸エステルソルビタン等の乳化剤、ならびにその混合物が挙げられる。
【０４０７】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化及び懸濁剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤、及び防腐剤等のアジュバントを含むこともできる。
【０４０８】
活性阻害剤（複数可）の他に、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、及びこれらの混合物のような懸濁剤を含有してもよい。
【０４０９】
直腸または膣投与のための製剤は、坐剤として提供することができ、１つ以上の好適な非刺激性賦形剤または担体と１つ以上の阻害剤（複数可）を混合することによって調製することができ、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐薬ワックスまたはサリチル酸塩を含み、室温では固体であるが、体温では液体であり、したがって、直腸または膣腔内で融解し、活性剤を放出する。
【０４１０】
膣内投与に好適な製剤としてまた、適切であると当該技術分野で知られているような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレー製剤が挙げられる。
【０４１１】
本発明の選択された化合物の局所または経皮投与用の剤形には、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、及び吸入剤が含まれる。化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、及び必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤、または噴射剤と混合することができる。
【０４１２】
軟膏、ペースト、クリーム、及びゲルは、本発明の化合物（複数可）に加えて、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、またはそれらの混合物等の賦形剤を含有していてもよい。粉末及びスプレーは、本発明の化合物（複数可）に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物等の賦形剤を含有することができる。スプレーは、更にクロロフルオロ炭素水素等の通常の噴射剤ならびにブタン及びプロパン等の揮発性非置換炭化水素を含むことができる。
【０４１３】
本発明のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、エアロゾルによって投与され得る。これは、水性エアロゾル、リポソーム製剤、または組成物を含む固体粒子を調製することによって達成される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁液を使用することができる。いくつかの実施形態では、音波噴霧器は、化合物の分解をもたらし得る剪断に薬剤を曝露することを最小限にするため、好ましい。通常、水性エアロゾルは、水溶液または懸濁液を、従来の薬学的に許容される担体及び安定剤と共に製剤化することによって製造される。担体及び安定剤は特定の組成物の要件に応じて変化するが、典型的には、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、プルロニック、ソルビタンエステル、レシチン、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ポリエチレングリコール等の薬学的に許容される共溶媒、血清アルブミンのような無害のタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシン、緩衝剤、塩、塩または糖アルコール等のアミノ酸が挙げられる。エアロゾルは、一般的に等張溶液から調製される。
【０４１４】
経皮パッチは、本発明の化合物の身体への制御送達を提供するという追加の利点を有する。そのような剤形は、適切な媒体に化合物を溶解または分散することによって製造することができる。吸収増強剤もまた、皮膚を横切る化合物（複数可）の流動を増加させるために使用され得る。そのような流動の速度は、速度制御する膜を提供することまたはポリマーマトリックスまたはゲル中に化合物（複数可）を分散させることのいずれかによって制御され得る。
【０４１５】
非経口投与に好適な薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される無菌の水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョン、または滅菌粉末を組み合わせた１つ以上の本発明の化合物を含み、滅菌粉末は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤を、目的の受領者の血液と等張にする溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含有し得る滅菌注射用溶液または分散液に使用直前に再構成することができる。本明細書で提供される薬学的組成物に用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例には、注射用の水、例えば皮下投与によるもの（例えば、注射用の滅菌水）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、緩衝剤（クエン酸塩緩衝液等）、及びそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング材料の使用により、分散液の場合は必要な粒径の維持により、また、表面活性剤の使用により、維持することができる。
【０４１６】
薬学的組成物は、典型的には薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という言葉には、医薬投与に適合性のある緩衝剤、注射用滅菌水、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が含まれる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、得られる溶液のための安定なｐＨを維持するためのクエン酸塩緩衝液等の酸−塩基緩衝系である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、注射用滅菌水である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、クエン酸を含む。
【０４１７】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤等のアジュバントを含有し得る。微生物の活動の防止は、様々な抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等、を含めることによって確保することができる。また、組成物に糖等の張度調整剤を含むことが望ましい場合がある。また、注射可能な薬学的形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅らせる薬剤の含有によってほぼもたらすことができる。いくつかの場合では、薬物の効果を延長するために、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。例えば、非経口的に投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解または懸濁することによって達成される。
【０４１８】
注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中で本発明の化合物（複数可）のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって製造される。ポリマーに対するカルフィルゾミブの比、典型的には重量比、及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、カルフィルゾミブ放出の速度が制御され得る。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射製剤はまた、身体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を閉じ込めることによっても調製される。
【０４１９】
薬剤の調製物は、経口、非経口、局所、または直腸に投与され得る。それらは、当然ながら、各投与経路に好適な形態で投与される。例えば、それらは、錠剤またはカプセルの形態で、注射、吸入、目薬、軟膏、坐剤、注入よって；ローションまたは軟膏によって局所的に；坐剤によって直腸に投与される。いくつかの実施形態では、投与は経口である。
【０４２０】
「非経口投与」及び「非経口的に投与される」という語句は本明細書で使用するとき、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常は注射によるものであり、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内及び胸骨内注射、及び注入が挙げられる。
【０４２１】
「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」及び「末梢的に投与される」という語句は本明細書で使用するとき、例えば皮下投与のように、リガンド、薬物、または他の物質を直接中枢神経に投与しない投与を意味し、その結果、薬物は全身に入り、代謝及び類似のプロセスの対象になる。
【０４２２】
本明細書に記載の本発明のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、経口、例えばスプレーによる経鼻、直腸、膣内、非経口、大槽内、粉末、軟膏または液滴による局所（口腔及び舌下を含む）を含む任意の好適な投与経路によって治療のためにヒト及びその他の動物に投与され得る。
【０４２３】
選択される投与の経路にかかわらず、好適な水和形態で使用され得る本発明の化合物、及び／または本明細書に記載の薬学的組成物は、当業者に知られている従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０４２４】
本明細書で上述したように、本発明によって提供される薬学的組成物中のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の実際の投薬量は、有効であることが臨床的に証明されている、及び／または有効なものとして商業的に承認されている量の活性ＰＥＧ遊離カルフィルゾミブ剤を含むように変更されて、多発性骨髄腫患者を含むがこれに限定されないがん患者に対する所望の治療反応を達成することができる。この目的のため、薬学的に許容される組成物中の本発明のペグ化されたカルフィルゾミブ化合物の特定の量及び／または濃度は、投与される化合物の投薬量、用いられる化合物（複数可）の薬物動態学的特性、及び投与経路を含むいくつかの要因に依存して変化する。一般に、本明細書によって提供される薬学的組成物は、非経口投与の場合、他の物質の中で、約０．１〜２０％ｗ／ｖの本明細書に開示される化合物を含有する水溶液であり得る。ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物活性成分についての典型的な用量範囲は、各日に１〜４回の分割用量で与えられる、１日当たり約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重である。各分割用量は、本発明によって提供される化合物の１種以上を含有する。所望の特定の化合物の投薬量は、患者の血漿中の遊離作用性カルフィルゾミブの治療的有効投薬量を提供するのに十分な量であるべきであり、その有効投薬量は規制承認された適応症のための規制承認された用途に基づく。この有効量は、患者によって変わる場合があり、一般に、患者の全体的健康、及び選択された化合物（複数可）の特定の製剤組成及び投与経路を含むいくつかの要因に依存する。
【０４２５】
カルフィルゾミブは、２０ｍｇ／ｍ２〜５６ｍｇ／ｍ２の範囲の患者血漿濃度を提供するのに十分な量で、２８日サイクルで連続した３週間で毎週最初の連続した２日間で１日１回提供される用量で現在認可されている。それ故、本発明のより高い分子量のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、承認された投薬範囲におおよそ等しい量を薬物動態学的に提供するのに十分な量で投与されるべきである。例えば、本発明の２Ｋ  ＰＥＧ化合物は、およそ２４重量％の遊離カルフィルゾミブである。それ故、１．９ｍ２の平均身体表面を有する平均男性を使用して、２７ｍｇ／ｍ２のおおよそ等しい用量を達成するためには、約２１５ｍｇの２ｋ  ＰＥＧ  ＣＦＺ化合物を投薬しなければならないであろう。同様に、カルフィルゾミブについて現在承認されている製剤の７０ｍｇ／ｍ２の用量と同じ量のカルフィルゾミブを送達するために、約１１００ｍｇの２０Ｋ  ＰＥＧ  ＣＦＺ化合物を投薬し得る。
【０４２６】
本発明の実施形態７１では、治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法が提供され、その方法は、対象に式ＩのＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量を対象に投与してがんを治療することを含む。実施形態７２では、本発明は、がんが多発性骨髄腫である、実施形態７１の方法を提供する。実施形態７３では、本発明は、ＰＥＧカルフィルゾミブの有効投薬量が約１００ｍｇ〜約２０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７２のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７４では、本発明は、その有効投薬量が１日当たり約１５０ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７５では、本発明は、投与されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７４のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７６では、本発明は、投与される２Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７７では、本発明は、投与される３Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約３００ｍｇ〜約２０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７８では、本発明は、投与される５Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約８００ｍｇ〜約３０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態７９では、本発明は、投与される２０Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約８００ｍｇ〜約３０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８０では、本発明は、投与されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約２００ｍｇ〜約１５００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８１では、本発明は、投与されるＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり対象の体重で約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８２では、本発明は、投与される２Ｋ、３Ｋまたは５Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約２００ｍｇ〜約８００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８３では、本発明は、投与される２Ｋまたは３Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８４では、本発明は、投与される５Ｋまたは２０Ｋ  ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物の有効投薬量が１日当たり約４００ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲にある、実施形態７１〜７３のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８５では、本発明は、方法がステロイドの投与を更に含む、実施形態７１〜８４のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８６では、本発明は、ステロイドがデキサメタゾン及びプレドニゾンからなる群から選択される、実施形態８５の方法を提供する。実施形態８���では、本発明は、ステロイドがデキサメタゾンである、実施形態８５〜８６のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８８では、本発明は、ステロイドがプレドニゾンである、実施形態８５〜８６のいずれか１つの方法を提供する。実施形態８９では、本発明は、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群から選択される免疫調節剤の投与を更に含む、実施形態７１〜８８のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９０では、本発明は、免疫調節剤がレナリドマイドまたはポマリドマイドである、実施形態８９の方法を提供する。実施形態９１では、本発明は、免疫調節剤がレナリドマイドである、実施形態８９〜９０のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９２では、本発明は、免疫調節剤がポマリドマイドである、実施形態８９〜９０のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９３では、本発明は、方法がＣＤ−３８阻害剤の投与を更に含む、実施形態７１〜８８のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９４では、本発明は、ＣＤ−３８阻害剤がダラツムマブである、実施形態９３の方法を提供する。実施形態９５では、本発明は、がんが再発性または難治性多発性骨髄腫である、実施形態７１〜９４のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９６では、本発明は、がんが、新たに診断された多発性骨髄腫である、実施形態７１〜９４のいずれか１つの方法を提供する。実施形態９７では、本発明は、がんが、新たに診断された多発性骨髄腫であり、患者が、免許を受けた認可された医師によって決定されて、幹細胞移植適格である、実施形態９６の方法を提供する。実施形態９８では、本発明は、がんが、新たに診断された多発性骨髄腫であり、患者が、免許を受けた認可された医師によって決定されて、幹細胞移植適格ではない、実施形態９６の方法を提供する。実施形態９９では、本発明は、方法が、式ＩのＰＥＧカルフィルゾミブ化合物を含む薬学的組成物を対象に投与することを含む、実施形態７１〜９８のいずれか１つの方法を提供する。実施形態１００では、本発明は、薬学的組成物が経口溶液または非経口溶液である、実施形態９９の方法を提供する。実施形態１０１では、本発明は、薬学的組成物が、投与前に再構成され得るフリーズドライされた調製物である、実施形態９９〜１００のいずれか１つの方法を提供する。実施形態１０２では、本発明は、ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物が、
【化８３】
2019519530.tif 000100
2019519530.tif 000101
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−１０アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、−ＯＣＨ３またはハロゲンであり；
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｘ−は、塩化物アニオン及びアルキル−スルホン酸アニオンから選択される対アニオンであり；
ｎは、４であり；
ＰＥＧは、３０００、５０００または２００００ダルトンの分子量のポリエチレングリコールポリマー部分である）である、実施形態７１〜９８の各１つの方法を提供する。
【０４２７】
実施形態１０３では、本発明は、ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物が、
【化８４】
2019519530.tif 000102
である、実施形態７１〜９８の方法を提供する。
【０４２８】
実施形態１０４では、本発明は、ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物が、
【化８５】
2019519530.tif 000103
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である、実施形態７１〜９８の方法を提供する。
【０４２９】
組み合わせ
本発明のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、唯一の活性医薬剤として投薬または投与され得る一方で、第２の抗がん剤等の１種以上の薬剤と組み合わせても使用され得る。組み合わせとして投与される場合、ＰＥＧカルフィルゾミブ活性成分及び他の薬剤は、同時にまたは異なる時間に連続して投与される別個の組成物として製剤化され得るか、または両方の活性剤が単一の組成物として与えられ得る。
【０４３０】
本発明のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物及び別の抗がん剤の使用を定義する際の「共療法」（または「併用療法」）という語句は、薬物の組み合わせの有益な効果を提供するレジメンにおける順次的な手法での各薬剤の投与を利用することが意図され、また、固定比のこれらの活性薬剤を有する単一投薬製剤、または各活性薬剤についての複数の別個の投薬製剤等の実質的に同時の手法でのこれらの薬剤の共投与を利用することが意図される。それ故、本発明は投与の順序に限定されない。すなわち、ＰＥＧカルフィルゾミブ化合物（複数可）は、他の薬剤の投与の前、同時または後のいずれかで投与され得る。
【０４３１】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上の他のプロテアソーム阻害剤（複数可）と併せて投与される。別のプロテアソーム阻害剤には、例えば、ボルテゾミブ、オプトロゾミブまたはイキサゾミブが含まれ得る。別の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧカルフィルゾミブ化合物は、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドを含む免疫調節化合物と組み合わせて投与される。直前の実施形態からの一実施形態では、ＰＥＧカルフィルゾミブは、レナリドマイド及びポマリドマイドから選択される免疫調節剤と組み合わせて投与される。更なる実施形態では、本発明は、式ＩまたはＩＩのＰＥＧカルフィルゾミブ化合物及び免疫調節剤を含む併用療法を対象に投与することによって対象におけるがんを治療する方法を提供する。更なる実施形態では、がんは多発性骨髄腫である。
【０４３２】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上の他の化学療法剤と併せて投与される。好適な化学療法薬は、天然生成物、例えばビンカアルカロイド（すなわち、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビンオレルビン）、タキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、例えば、ドセタキセル）、エピジポドフィロトキシン（すなわち、エトポシド、テニポシド）、抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）ダウノルビシン、ドキソルビシン及びイダルビシン；例えば、ドキソルビシン）、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン、酵素（全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を枯渇させる、Ｌ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば窒素マスタード（メクロレタミン、イホスファミド、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブシル、例えば、メルファラン）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサアメチルメラミン及びチオテパ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン−デカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗有糸分裂抗代謝剤、例えば葉酸類似体（メトトレキサート）、ピリミジン類似体（フルオロウラシル、フロクスウリジン、及びシタラビン）、プリン類似体及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２−クロロデオキシアデノシン）；アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、エキセメスタン、及びレトロゾール）；白金配位複合体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、アミノグルテチミド；ＤＮＡ結合／細胞毒性薬（例えば、ザリプシス）；ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えば、トリコスタチン、酪酸ナトリウム、アピシダン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド（ＳＡＨＡ（ボリノスタット））、トリコスタチンＡ、デプシデプチド、アピシジン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＣＨＡＰ、酪酸、デプデシン、オキサムフラチン、フェニルブチレート、バルプロ酸、ＭＳ２７５（Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシ−カルボニル）アミノメチル］ベンズアミド）、ＬＡＱ８２４／ＬＢＨ５８９、ＣＩ９９７、ＭＧＣＤ０１０３、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット）；ホルモン（すなわち、エストロゲン）及びホルモン作動薬、例えば黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動薬（ゴセレリン、ロイプロリド及びトリプトレリン）を含み得る。他の化学療法剤には、メクロレタミン、カンプトテシン、イホスファミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、ゲムシタビン、ナベルビン、または前述のものの任意の類似体または誘導改変体が含まれ得る。
【０４３３】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、サイトカインと併せて投与される。サイトカインには、インターフェロン−γ、−α、及び−β、インターロイキン１〜８、１０及び１２、顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＴＮＦ−α及び−β、ならびにＴＧＦ−βが含まれるが、これらに限定されない。
【０４３４】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、ステロイドと併せて投与される。好適なステロイドは、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメタゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフプレドネート、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチル、フルコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコルタール、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、エタボン酸ロテプレドノール、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２５−ジエチルアミノアセテート、プレドニゾロンリン酸ナトリウム、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、並びにそれらの塩及び／または誘導体（例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン及びプレドニゾロン；例えば、デキサメタゾン）を含み得るが、これらに限定されない。所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、デキサメタゾンと併せて投与される。所定の実施形態では、併用療法には、米国ＦＤＡ及びＥＭＡによって承認されたＫＹＰＲＯＬＩＳ（カルフィルゾミブ）ラベルで提供される投薬レジメンが含まれる。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、免疫療法薬と併せて投与される。好適な免疫療法薬は、ＭＤＲ調整剤（ベラパミル、バルスポーダル、ビリコダル、タリクイダル、ラニクイダル）、シクロスポリン、サリドマイド、及びモノクローナル抗体を含み得るが、これらに限定されない。モノクローナル抗体は、裸であっても、または複合体化されてもよく、例えば、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ベバシズマブ、セツキシマブ、エルロチニブ及びトラスツズマブであり得る。
【０４３６】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えば、トリコスタチン、酪酸ナトリウム、アピシダン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド（「ＳＡＨＡ」（ボリノスタット））、トリコスタチンＡ、デプシペプチド、アピシジン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＣＨＡＰ、酪酸、デプデシン、オキサムフラチン、フェニルブチレート、バルプロ酸、ＭＳ２７５（Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシ−カルボニル）アミノメチル］ベンズアミド）、ＬＡＱ８２４／ＬＢＨ５８９、ＣＩ９９４、ＭＧＣＤ０１０３、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット；例えば、ＳＡＨＡ、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット）と併せて投与される。
【０４３７】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上のナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、イホスファミド、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブシル、例えば、メルファラン）と併せて投与される。
【０４３８】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上のＤＮＡ結合／細胞毒性薬（例えば、ザリプシス（Ｚａｌｙｐｓｉｓ））と併せて投与される。
【０４３９】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上のタキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、例えば、ドセタキセル）と併せて投与される。
【０４４０】
所定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−カルフィルゾミブ化合物は、１種以上の抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）ダウノルビシン、ドキソルビシン及びイダルビシン；例えば、ドキソルビシン）と併せて投与される。
【０４４１】
上記は本発明の単なる例示であり、本発明を開示された用途に限定することを意図するものではない。当業者にとって日常的である変形及び変更は、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲及び性質の範囲内にあることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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