(57)【要約】本発明は、ＳＰＲ７４１以外の治療有効量の抗生物質と組み合わせて、治療有効用量の、ポリミキシン類似体であるＳＰＲ７４１を投与することを含む、ヒトの患者の細菌感染症を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、抗生物質は、レタパムリン、テリスロマイシン又はアズトレオナムである。本発明は、治療有効量の第二抗生物質と同時投与するためのＳＰＲ７４１の有効量として、１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１を１日２回〜４回投与することを確立する。本発明はまた、４０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下、好ましくは５ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下のＳＰＲ７４１を、治療有効量の第二抗生物質と組み合わせて投与することによって細菌感染症を治療する方法及びＳＰＲ７４１と第二抗生物質を含む医薬組成物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量の抗生物質と組み合わせた、１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１を、１日２回〜４回投与することを含む、ヒトの患者の細菌感染症を治療する方法。
【請求項２】
２００ｍｇ〜４００ｍｇのＳＰＲ７４１を、１日３回投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細菌感染症がグラム陰性菌感染症である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記細菌感染症が大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）感染症、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染症、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）感染症又はペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）感染症である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記細菌感染症が大腸菌感染症、肺炎桿菌感染症又はアシネトバクター・バウマニ感染症である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗生物質がアジスロマイシン、クラリスロマイシン、フシジン酸、ムピロチン、レタパムリン、リファンピシン、テリスロマイシン、メロペネム、ムピロチン、アジスロマイシン又はバンコマイシンである、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１、及び担体を含む、医薬剤形。
【請求項８】
２００ｍｇ〜４００ｍｇのＳＰＲ７４１を含む、請求項７に記載の剤形。
【請求項９】
前記剤形が、注射用又は静脈内注入用の製剤である、請求項７又は８に記載の剤形。
【請求項１０】
前記剤形が、経口剤形である、請求項７又は８に記載の剤形。
【請求項１１】
さらに抗生物質を含む、請求項１０に記載の経口剤形。
【請求項１２】
前記抗生物質がアジスロマイシン、クラリスロマイシン、フシジン酸、ムピロチン、レタパムリン、リファンピシン、テリスロマイシン、メロペネム、ムピロチン、アジスロマイシン又はバンコマイシンである、請求項１１に記載の経口剤形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本出願は、２０１６年５月１３日に出願された米国特許出願第６２／３３６，２０８号及び２０１６年６月８日に出願された米国特許出願第６２／３４７，１７４号に対する優先権を主張するものであり、両出願の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
グラム陰性菌は、すべての敗血症性感染症のうちの４０％以上の原因となり、かつ、グラム陰性菌の多くは、複数の抗生物質に対する耐性がある。グラム陰性菌は、外膜の構成成分としてリポ多糖類を保有しており、最終的な標的が位置する細胞内のより深部への多くの抗菌剤の拡散を阻害する。グラム陽性菌に対して有効な多くの抗菌剤は、グラム陰性菌に対して活性がない。
【０００３】
ポリミキシンは、パエニバチルス・ポリミクサ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）及び関連する微生物の菌株によって産生される、密接に関連する抗生物質の一群である。これらのカチオン性薬物は、約１０００の分子量を有する比較的単純なペプチドである。ポリミキシン、例えばポリミキシンＢは、デカペプチド抗生物質であり、すなわち、それらは１０個のアミノアシル残基からなる。それらは殺菌性であり、かつ、グラム陰性菌、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）及び腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の他種、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）などに対して特に有効である。しかしながら、ポリミキシンは、腎毒性および神経毒性を含む重篤な副作用を有する。したがって、これらの薬物は、高い全身毒性のために治療剤としての用途が限られている。
【０００４】
ポリミキシンは、１９５０年代に発見されて以来、これらの細菌によって引き起こされた重篤な感染の治療に広く使用されていたが、より新しく、より忍容性の高い抗生物質が開発された１９７０年代には、毒性のために、ほとんど使用されなくなった。グラム陰性菌の多剤耐性株が近年になって出現したことにより、毒性の低い抗生物質の多くがグラム陰性菌に対する有効性を失っている。ポリミキシンは、これらの新興のグラム陰性菌の多剤耐性株に対してその有効性を維持している。したがって、ポリミキシンは治療用の備蓄が想起されている、その毒性のために最終的な治療法であると考えられている。しかし、それらの全身性（すなわち、非局所性）の使用は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びＡ．バウマニの多剤耐性株並びにカルバペネム耐性の腸内細菌科によって引き起こされる、生命を脅かす感染症の治療に、大きく制限されている。
【０００５】
ＳＰＲ７４１（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＩＤ：５３３２３３８１）はＡｃｅｔｙｌ−Ｔｈｒ−ｄＳｅｒ−ｃｙ［Ｄａｂ−Ｄａｂ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ−Ｄａｂ−Ｔｈｒ］（式中、Ｄａｂはα，γ−ジアミノ−ｎ−ブチリル残基であり、ｃｙは環式である）という構造を有し、また、下記に示す化学構造である。
【化１】
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【０００６】
ＳＰＲ７４１は、ムピロシン、アジスロマイシン、フシジン酸及びバンコマイシンに対する特定の細菌の感受性を増加させることが以前に示されている。ＳＰＲ７４１は、グラム陰性菌の外膜を透過するため、結果として、ＳＰＲ７４１と組み合わせて投与された場合、そうでない場合に排除されるであろう抗生物質に、標的へのアクセスを許可する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、治療有効量の抗生物質と組み合わせた、１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１を、１日２回〜４回投与することを含む、ヒトの患者の細菌感染症を治療する方法を含む。
【０００８】
本発明は、１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１、及び担体を含む、医薬剤形を含む。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ＳＰＲ７４１の有効なヒト用量の決定は、３種のアロメトリックスケーリング分析を用いて行った。予想されるヒトＰＫプロファイル及びＳＰＲ７４１の有効な用量は、潜在的なパートナー抗生物質と一致する。医薬組成物／組み合わせの治療有効量は、細菌感染症に関連する罹患率及び死亡率を減少させる及び／又は治癒をもたらすなどの治療効果を提供するために、被験体に投与する場合に有効な量である。特定の状況において、微生物感染症に罹患している被験体は、感染の症状を示さない可能性がある。したがって、化合物の治療有効量はまた、被験体の血液、血清、他の体液又は組織中の、微生物の検出可能なレベルを有意に低下させるのに十分な量である。本発明はまた、特定の実施形態において、予防的処置及び治療的処置において本発明の化合物を使用することを含む。予防的または防止的処置の文脈において、「治療有効量」は、細菌感染症の発症率又はそれに関連する罹患率及び死亡率を、有意に減少させるのに十分な量である。例えば、被験体が嚢胞性線維症又は人工呼吸器患者のような、細菌感染症の危険性が高まっていることが分かっている場合には、予防的処置を施してもよい。有意な減少とは、スチューデントＴ検定（ｐ＜０．０５）のような、統計的有意性の標準的パラメトリック検定において、統計的に有意である検出可能な負の変化である。
【００１０】
「医薬組成物」は、少なくとも１つの活性剤、例えばＳＰＲ７４１、及び少なくとも１つの他の物質、例えば抗生物質、又は担体を含む組成物である。医薬組成物は、ヒト又は非ヒトの薬物のための米国ＦＤＡのＧＭＰ（ｇｏｏｄ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅ）基準を満たす。本発明の医薬組成物／組み合わせに適用される用語「担体」は、活性化合物と共に提供される希釈剤、添加剤又は賦形剤を指す。
【００１１】
本発明の医薬組成物は、眼、口、鼻、経皮、閉塞あり又はなしの局所、静脈内（ボーラス及び注入の両方）、吸入及び注射（腹腔内、皮下、筋肉内又は非経口）の製剤を含む。組成物は、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒、リポソーム、滅菌眼用溶液、非経口溶液又は懸濁液、計量エアロゾル又は液体スプレー、ドロップ、アンプル、自動注射装置又は坐薬のような投与単位であり得るものであり、眼に、経口的に、鼻腔内に、舌下に、非経口的に、又は直腸に、又は吸入もしくは吹送によって投与し得るものである。
【００１２】
本発明の組成物を含有する剤形は、選択された投与経路による、治療効果を提供するのに必要な、有効量の活性剤を含有する。組成物は、本発明の化合物又はその塩形態を約５０００ｍｇ〜約０．５ｍｇ（好ましくは約１０００ｍｇ〜約０．５ｍｇ）含み、選択された投与様式に適した任意の形態に構成することができる。剤形は、即時放出、又は遅延放出もしくは持続放出を含む制御放出のために調剤され得る。医薬組成物は、ＳＰＲ７４１及び少なくとも１つの直接作用抗生物質（生体内で病原菌を殺すのに有効な化合物）、例えばレタパムリン、テリスロマイシン、アズトレオナムを含む。
【００１３】
ＳＰＲ７４１は、標準的な手順を用いたｈＥＲＧアッセイにおいて、３００μｇ／ｍＬの濃度までｈＥＲＧ媒介性カリウム電流の阻害について評価されている。ＳＰＲ７４１は心肺機能及び一般的な毒性について、サルの心肺安全性薬理試験での死亡率、臨床観察、体重、体温、血圧（収縮期、拡張期及び平均動脈）、心拍数、心電図（ＱＲＳ持続時間並びにＲＲ、ＰＲ及びＱＴ間隔）及び呼吸機能（呼吸数、一回換気量及び分時拍出量）に基づいて評価した。ＳＰＲ７４１はまた、中枢神経系（ＣＮＳ）効果について、サルにおけるＧＬＰ１４日間の反復投与毒性試験の一環として、環境刺激に対する反応、不随意的又は定型的行動、歩行、腕渡り、姿勢、把持、活動レベル、バランス、共役運動、位置及び瞳孔反応に基づいて評価されている。
【００１４】
ｈＥＲＧの研究において、ＳＰＲ７４１の灌流は、３００μｇ／ｍＬまでの濃度での平均ｈＥＲＧ媒介性カリウム電流に意味のある変化をもたらさなかった。ＳＰＲ７４１の効果の欠如のため、ＩＣ５０を計算することができなかった。心肺研究では、ＳＰＲ７４１に関連する、臨床徴候、体重の変化、体温の変化、収縮期、拡張期もしくは平均動脈の血圧に示される変化、心拍数で示される変化、ＲＲ間隔、ＰＲ間隔、補正されていないＱＴ間隔、ＱＲＳ持続時間もしくはＱＴｃに示される変化、又は呼吸数、一回換気量もしくは分時拍出量に示される変化のいずれも認められなかった。ＣＮＳ試験では、いずれの神経学的評価においてもＳＰＲ７４１の変化は認められなかった。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】１００、２００、３００、４００及び８００ｍｇでの、ＳＰＲ７４１の１回の６０分間静脈内注入後の、ヒトにおける模擬濃度対時間プロファイル。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、治療上有効量の抗生物質と組み合わせた、１００ｍｇ〜５００ｍｇのＳＰＲ７４１を、１日２回〜４回投与することを含む、ヒトの患者の細菌感染症を治療する方法を含む。
【００１７】
本発明は、以下の方法を含む。
【００１８】
（１）２００ｍｇ〜４００ｍｇのＳＰＲ７４１を、１日３回投与する。
【００１９】
（２）前記細菌感染症がグラム陰性菌感染症である。
【００２０】
（３）前記細菌感染症が大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）感染症、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染症、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）感染症又はペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）感染症である。
【００２１】
（４）前記細菌感染症がマイコバクテリウム属の、大腸菌感染症、肺炎桿菌感染症又はアシネトバクター・バウマニ感染症である。
【００２２】
（５）前記抗生物質がアジスロマイシン、クラリスロマイシン、フシジン酸、ムピロチン、レタパムリン、リファンピシン、テリスロマイシン、メロペネム、ムピロチン、アジスロマイシン又はバンコマイシンである。
【００２３】
本発明は、１００ｍｇ〜５００ｍｇ又は２００ｍｇ〜４００ｍｇのＳＰＲ７４１、及び担体を含む、医薬剤形を含む。
【００２４】
（６）４０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下、３０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下、２０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下、１０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下又は５ｍｇ／ｋｇ患者体重／日以下のＳＰＲ７４１を、治療有効量の第二抗生物質と組み合わせて投与することを含む、ヒトの患者の細菌感染症を治療する方法。
【００２５】
（７）態様（６）の方法であって、４０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日、３０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日、２０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日、１０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日又は５ｍｇ／ｋｇ患者体重／日のＳＰＲ７４１を、１日２回〜４回、又は１日３回投与する。
【００２６】
（８）態様（６）又は（７）の方法であって、前記細菌感染症がグラム陰性菌感染症である。
【００２７】
（９）態様（６）又は（７）の方法であって、前記細菌感染症が大腸菌感染症、肺炎桿菌感染症、アシネトバクター・バウマニ感染症、緑膿菌感染症、淋菌感染症又はペスト菌感染症である。
【００２８】
（１０）態様（６）から（９）のいずれかの方法であって、前記第二抗生物質がアジスロマイシン、クラリスロマイシン、フシジン酸、ムピロチン、レタパムリン、リファンピシン、テリスロマイシン、メロペネム、ムピロチン、アジスロマイシン又はバンコマイシンである。
【００２９】
（１１）態様（６）から（１０）のいずれかの方法であって、ＳＰＲ７４１が注射、経口又は静脈内に投与される。
【００３０】
特定の実施形態では、本発明は以下の医薬組成物を含む。
【００３１】
（１）前記剤形が、注射用又は静脈内注入用の製剤である。
【００３２】
（２）前記剤形が、経口剤形である。
【００３３】
（３）前記経口剤形が、さらに抗生物質を含む。
【００３４】
（４）前記抗生物質がアジスロマイシン、クラリスロマイシン、フシジン酸、ムピロチン、レタパムリン、リファンピシン、テリスロマイシン、メロペネム、ムピロチン、アジスロマイシン又はバンコマイシンである。
【実施例】
【００３５】
以下の略語を実施例で使用する：
ＡＵＣ        曲線下面積
ＣＬ          クリアランス
Ｃｍａｘ        最高血中濃度
ｈ            時間
ＨＥＤ        ヒト等価用量
ＰＫ          薬物動態
Ｔ１／２        終末相半減期
Ｖｄ          分布容積
Ｗ            体重
ＮＯＡＥＬ    無毒性量
【００３６】
実施例１．アロメトリックスケーリングによるＳＰＲ７４１のヒトＰＫパラメータの予測
ＳＰＲ７４１のヒト薬物動態（ＰＫ）パラメータは、固定及び浮動指数のアロメトリックスケーリング法の双方を用いて仮定した。マウス、ラット及びサル試験からのＳＰＲ７４１のＰＫデータを１−コンパートメントモデルに適合させ、そして同じモデルをヒトシミュレーションに使用した。ＰＫ分析は、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）バージョン６．３（ファーサイト・コーポレーション［マウンテンビュー、カリフォルニア州］）を用いて行った。前臨床試験からＰＫパラメータを導くために、ＳＰＲ７４１の平均血漿濃度を使用した。
動物実験からの、及びヒトシミュレーションのためのＰＫパラメータを導出するために、線形排出ＰＫを仮定した。アロメトリックスケーリングの目的を果たすために、標準種の体重を仮定した。スケーリングのために、マウス、ラット、サル及びヒトの体重をそれぞれ０．０２、０．２５、５及び７０ｋｇと仮定した。雄動物のみからのＰＫデータは、スケーリングに利用可能であった。
【００３７】
１−コンパートメントモデルは、マウス、ラット及びサルのＰＫ試験からの平均ＳＰＲ７４１  ＰＫプロファイルに適合した。ＭｉｘＲａｔｉｏ（加法及び乗法）加重はすべてのＰＫモデリングに適用した。ヒト等価用量（ＨＥＤ）を計算し、かつ、健康な被験体における、１回１時間の静脈内注入投与後のＳＰＲ７４１濃度をシミュレートするために、広範囲の推定値をもたらした、ＳＰＲ７４１についての２組のスケーリングされたヒトＰＫパラメータを使用した。
【００３８】
アロメトリックスケーリングは、以下の式を使用して固定（１）及び浮動（２）指数のスケーリング法の双方を使用して実行した。
【数１】
2019519497.tif 000004
【数２】
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式（１）において、ＣＬはクリアランスであり、Ｗは体重である。指数は、クリアランスパラメータについては０．７５に、分布パラメータの体積については１に固定した。
【００３９】
浮動指数アロメトリック法（２）では、体重に対する（マウス、ラット及びサル由来の）ＰＫパラメータについて線形回帰を行った。勾配ａ及び切片ｂを用いて、クリアランスなどのＰＫパラメータを算出した。計算には標準体重を用い、マウスは０．０２ｋｇ、ラットは０．２５ｋｇ、サルは５ｋｇ、そしてヒトは７０ｋｇとした。
【００４０】
種々のアロメトリックアプローチからのＳＰＲ７４１のヒトクリアランス及び半減期の推定値は、それぞれ５１〜１０３ｍＬ／ｈ／ｋｇ及び２．２〜２．４時間の範囲であった。ＳＰＲ７４１のマウスにおける有効性試験は、２〜６０μｇ＊ｈ／ｍＬの範囲のＡＵＣで薬理学的活性を実証した。スケーリングされたクリアランス及びマウス研究で有効性を実証したＡＵＣを用いて予測される、ＳＰＲ７４１のヒト有効用量は、１日３回投与される、約１００〜４００ｍｇの範囲である。ヒトＰＫシミュレーションは、１００、２００、４００及び８００ｍｇのＳＰＲ７４１の１回の静脈内注入投与後に対してそれぞれ、ＡＵＣが１４〜２８、２８〜５６、５５〜１１２及び１１０〜２２５μｇ＊ｈ／ｍＬの範囲で実施した。固定指数及び浮動指数アロメトリックアプローチを用いて推定した薬物動態パラメータを表１に示す。すべてのモデルで７０ｋｇのヒト重量を使用した。
【００４１】
【表１】
2019519497.tif 000006
【００４２】
実施例２．薬理学的なヒト等価用量（ＨＥＤ）の予測
ＨＥＤは、６０μｇ＊ｈ／ｍＬのＡＵＣ値における、ＳＰＲ７４１及びリファンピンを用いたマウス大腿試験からの有効性データに基づくものであった。薬理学的ＨＥＤは、以下の方程式を使用して計算した。
【数３】
2019519497.tif 000007
用量＝薬理学的ＨＥＤ、Ｃｌ＝アロメトリックスケーリングから得られた推定ヒトクリアランス、ＡＵＣ＝６０μｇ＊ｈ／ｍＬ。
【００４３】
固定及び浮動のアロメトリックスケーリングモデルを用いて得られた、予測されるヒト等価用量を表２に示す。
【００４４】
【表２】
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【００４５】
実施例３．ヒトＰＫシミュレーション
アロメトリックスケーリングから得られた低クリアランス推定値及び高クリアランス推定値を用いて、単回投与のシミュレーションを行った。動物データに適合させるために使用した１−コンパートメントモデルを、１回の静脈内注入投与後のヒトシミュレーションに使用した（表３）。１日目のデータはラットでは利用できなかった。わずか２〜３の測定可能な時点をマウスＰＫデータに用いた。
【００４６】
【表３】
2019519497.tif 000009
【００４７】
非コンパートメント分析を、１００、２００、４００及び８００ｍｇ／ｋｇの用量における、推定ヒトＰＫパラメータを得るためのシミュレーションからの濃縮時間値を用いて行った。表４は、１００、２００、４００及び８００ｍｇ／ｋｇでのＳＰＲ７４１の６０分間の１回の静脈内注入から得られる、ヒトにおける予測される臨床的ＡＵＣ及びＣｍａｘを示す。このデータは、図１にグラフ形式でも示している。
【００４８】
【表４】
2019519497.tif 000010
【００４９】
１００、２００、４００及び８００ｍｇ／ｋｇでのＳＰＲ７４１の単回静脈内注入投与後の、ヒトの模擬ＳＰＲ７４１濃度対時間のデータは、２回のシミュレーションを、表５及び６に示す。時間点は、静脈内注入の開始に対して与えられる。
【００５０】
【表５】
2019519497.tif 000011
【００５１】
【表６】
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【００５２】
実施例７．ＳＰＲＡＧＵＥ−ＤＡＷＬＥＹラットにおける、ＳＰＲ７４１のＧＬＰ１４日反復投与試験
ＳＰＲ７４１を、ラットにおける潜在的毒性について、５、１５及び３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで、１４日間連続して１日２回、１２時間間隔で１時間注入して評価した。試験の生存期間中に評価したパラメータには、毎週の体重、臨床観察、生存、摂餌量、眼科学、臨床病理学、並びに尿及び血漿中の毒性動態を含んでいた。剖検では、肉眼観察を記録し、臓器重量を測定し、かつ、特定の組織を採取した。組織病理学的評価を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した組織切片について行った。
【００５３】
生理食塩水中のＳＰＲ７４１を、５、１５又は３０ｍｇ／ｋｇ／日で、約１２時間間隔で１日２回、漸増用量で最初の３日間投与し、続いて留置カテーテルによる１時間の静脈内注入によって標的用量レベルで１４日間投与した。漸増段階の使用は、ラットにおいて広範囲のポリミキシンによって一般的に見られる急性ヒスタミン及び／又は補体媒介反応のためであった。ＳＰＲ７４１は、１４日間の反復投与後に用量依存的な全身暴露を示した（表７）。
【００５４】
毒物学的評価のために、すべての動物の死亡率及び瀕死について１日２回観察した。臨床試験は毎日実施し、詳細な身体検査は毎週行った。眼科検査は、試験開始前に１回及び試験中に１回実施した。予定された剖検に割り当てられたすべての動物について、（血中尿素窒素及び血清クレアチニンを含む）臨床病理パラメータを分析した。全ての動物について完全な剖検を行い、予定された剖検で選択した器官の重量を測定した。死亡した又は最終的に安楽死させたすべての動物、及び予定された剖検において対照、１５及び１０ｍｇ／ｋｇ／日の群であったすべての動物から、選択した組織を顕微鏡検査した。最初の剖検において低用量の群であったすべての動物から、肉眼的病変及び注入部位を検査した。中用量の群及び対照の群において、２８日間の非投与期間後に回復を評価した。２８日間の非投与（回復）期間の後、すべての動物について完全剖検を行い、予定剖検時に選択された器官の重量を測定した。すべての動物から、選択した組織を顕微鏡検査した。
【００５５】
毒物動態評価のために、第１日目及び第１４日目の第１回目のＢＩＤ投与終了後に、用量投与の終了直後（５分以内）、並びに約３０分後、並びに１、２、４及び１２時間後（第２回目のＢＩＤ投与の直前）に、ＳＰＲ７４１投与ラットから血液サンプルを採取した。これらの試料からの血漿を、有効な生物分析法を用いて、ＳＰＲ７４１について分析した。表８は、血中尿素窒素、クレアチニン及び腎臓尿細管再生について観察された変化を示す。
【００５６】
５ｍｇ／ｋｇの用量レベルは、良好な忍容性を示した。より高い用量レベルは、毒性を示した。
【００５７】
【表７】
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【００５８】
【表８】
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【００５９】
実施例８．サルにおけるＳＰＲ７４１の、ＧＬＰ１４日反復投与毒性試験
ＳＰＲ７４１を、２０、４０、６０及び８０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで、１４日間連続、１日３回（８時間間隔）の１時間の注入によって、サルにおける毒性について評価した。試験の生存段階中に評価したパラメータには、毎週の体重、臨床観察（投与期間中の１４ｘ／日）、摂餌量、神経学的検査、心電図（ＥＣＧ）、眼科学、臨床病理学（血液学、凝固、血清化学、尿検査）並びに尿及び血漿のＴＫを含む。剖検では、肉眼観察を記録し、臓器重量を測定し、かつ、特定の組織を採取した。組織病理学的評価を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した組織切片について行った。
【００６０】
雄及び雌のカニクイザルにおける１日３回の、１時間の注入を１４日間繰り返した後のＳＰＲ７４１のＮＯＡＥＬは、４０ｍｇ／ｋｇ／日であった。摂餌量、心電図、及び眼科学にＳＰＲ７４１に関連する影響はなかった。サルにおけるＳＰＲ７４１の標的毒性臓器は、腎臓である。４０ｍｇ／ｋｇ／日を超える用量レベルのＳＰＲ７４１は、血中尿素窒素及び血清クレアチニンの軽度から中程度の増加によって示される、有害な腎毒性と関連していた。腎機能のバイオマーカーの軽度から中程度の増加は、淡色の腎臓、より高い腎臓重量、並びに尿細管の再生、変性／壊死、円柱及び拡張という腎臓における組織病理学的変化を伴う。腎毒性は、２８日間の回復期間の後は完全に可逆的であった。ＳＰＲ７４１は、８０ｍｇ／ｋｇ／日の試験された最高用量を含むいかなる用量レベルにおいても、神経学的な効果とは関連していなかった。
結論：本試験におけるＳＰＲ７４１の標的毒性臓器は腎臓である。毒性はモニター可能かつ可逆的であるため、第１フェーズ試験への進歩の基準を示す。
【００６１】
実施例９．心臓、肺及び中枢神経系における、ＳＰＲ７４１のＧＬＰ安全性及び薬理学的試験
ＳＰＲ７４１を、標準的な手順を用いたｈＥＲＧアッセイによって、３００μｇ／ｍＬまでの濃度でｈＥＲＧ媒介性カリウム電流の阻害について評価した。簡潔には、ｈＥＲＧカリウムチャネルを安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞を、３００μｇ／ｍＬまでの濃度のＳＰＲ７４１で灌流した。電流は、単一細胞パッチクランプを介して記録した。これらの試験の結果を表１０に要約する。
【００６２】
【表９】
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【００６３】
ＳＰＲ７４１を、心肺効果及び一般的な毒性について、単回の１時間の注入によって投与された５、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの、サルの心肺安全薬理試験における、死亡率、臨床観察、体重、体温、血圧（収縮期、拡張期、及び平均動脈）、心拍数、心電図（ＱＲＳ持続時間、ＲＲ、ＰＲ及びＱＴの間隔）並びに呼吸機能（呼吸数、一回換気量、及び分時拍出量）に基づいて評価した。試験開始前に、試験用のサルを遠隔測定した。２４時間にわたって１分間隔でデータを収集した。データは、最初の３時間にわたって１５分間隔で報告した。心臓血管及び肺の試験の結果を表１１に示す。
【００６４】
【表１０】
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【００６５】
ＳＰＲ７４１の中枢神経系（ＣＮＳ）効果について、２０、４０、６０及び８０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルでの、サルにおけるＧＬＰ１４日反復投与毒性試験の一環として、環境刺激に対する反応、不随意的又は定型的行動、歩行、腕渡り、姿勢、把持、活動レベル、バランス、共役運動、位置及び瞳孔反応に基づいて評価した。神経学的評価は、試験日第９日目又は第１０日目に実施し、予備試験データ（試験日−６又は−７）及び溶媒対照の両方と比較した。全てのＣＮＳ評価は正常であった。
【図１】
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【国際調査報告】
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