(57)【要約】  本発明は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート（化学名：２’−デオキシ‐２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート）（ＮＵＣ−１０３１）と、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤との組み合わせに関する。この組み合わせは、癌、特に、胆道癌及び膀胱癌の治療に有用である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌治療において、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わせて使用される、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物。
【請求項２】
プラチナ系抗癌剤がシスプラチンである請求項１の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項３】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、ジアステレオ異性的に純粋な形のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートである請求項１又は２の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項４】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、ホスフェートジアステレオ異性体の混合物である請求項１又は２の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項５】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、遊離塩基の形である請求項１〜４のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項６】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが静脈内投与される請求項１〜５のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項７】
癌が、固形腫瘍、例えば、卵巣癌、膀胱癌、及び胆道癌から選ばれるものである請求項１〜６のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項８】
癌が、胆道癌、例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌である請求項７の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項９】
癌が再発性である請求項８の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項１０】
癌が転移性である請求項８の使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項１１】
癌が、プラチナ系抗癌剤に対して不応性、抵抗性又は部分的抵抗性である請求項１〜１０のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項１２】
癌がプラチナ系抗癌剤に対して感受性である請求項１〜９のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項１３】
各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量が、２５０〜１２５０ｍｇ／ｍ２であり、各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤の用量が、１０〜２００ｍｇ／ｍ２である請求項１〜１２のいずれかの使用のためのゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート。
【請求項１４】
癌を治療する方法であって、必要とする対象に、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わせて、治療上有効な量のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物を投与することを含んでなる方法。
【請求項１５】
プラチナ系抗癌剤がシスプラチンである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、ジアステレオ異性的に純粋な形のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートである請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、ホスフェートジアステレオ異性体の混合物である請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１８】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、遊離塩基の形である請求項１４〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートを静脈内投与する請求項１４〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
癌が、固形腫瘍、例えば、卵巣癌、膀胱癌、及び胆道癌から選ばれるものである請求項１４〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
癌が、胆道癌、例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌卵巣癌である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
癌が、再発性である請求項１４〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
癌が、転移性である請求項１４〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
癌がプラチナ系抗癌剤に対して不応性、抵抗性又は部分的抵抗性である請求項１４〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
癌が、プラチナ系抗癌剤に対して感受性である請求項１４〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量が、２５０〜１２５０ｍｇ／ｍ２であり、各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤の用量が、１０〜２００ｍｇ／ｍ２である請求項１４〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
併用投与により、１０時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供する請求項１４〜２６のいずれかにの記載の方法。
【請求項２８】
併用投与により、１８時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供する請求項１４〜２７のいずれかにの記載の方法。
【請求項２９】
シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤とともに、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物を含んでなる医薬製剤。
【請求項３０】
併用される２つの別個の製剤を含んでなるキットであって、前記製剤が、
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第１の製剤；及び
シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第２の製剤
であるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート（化学名：２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート）（ＮＵＣ−１０３１）と、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤との組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＮＵＣ−１０３１
ゲムシタビン（（１）；ジェムザール（登録商標）として販売されている）は、現在、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣癌及び膵臓癌の治療用に認可され、膀胱癌、胆道癌、大腸癌及びリンパ腫を含む各種の他の癌を治療するために広く使用されている効果的なヌクレオシド類似体である。
【０００３】
ゲムシタビン（１）
【化１】
2019509253.tif 000002
【０００４】
ゲムシタビンの臨床有用性は、多数の本来の及び獲得した抵抗性機構によって制限される。細胞レベルでは、抵抗性は、３つのパラメーター：（ｉ）リン酸化部分への活性化に必要なデオキシシチジンキナーゼのダウンレギュレーション；（ｉｉ）ヌクレオシドトランスポーター、特に、癌細胞による取り込みに要求されるｈＥＮＴ１の低下した発現；及び（ｉｉｉ）触媒酵素、特に、ゲムシタビンを分解するシチジンデアミナーゼのアップレギュレーションに依存する。
【０００５】
国際公開第２００５／０１２３２７号には、一連のゲムシタビンのプロドラッグ及び関連するヌクレオシド薬物分子が記載されている。それらの中でも、特に効果的な化合物として、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホフェート（ＮＵＣ−１０３１；（２））が認定されている。これらのプロドラッグは、ゲムシタビンの有用性を制限する多くの本来の及び獲得された抵抗性機構を回避することを示している（「ＲｒｏＴｉｄｅ技術のゲムシタビンへの適用：極めて重要な癌抵抗性機構を克服するための奏功のアプローチは、臨床開発において、新たな薬剤（ＮＵＣ−１０３１）をもたらす」；Ｓｌｕｓａｒｃｚｙｋら；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；２０１４，５７，１５３１−１５４２）。
【０００６】
ＮＵＣ−１０３１（２）は、代表的には、ホスフェート中心においてエピマーである２つのジアステレオ異性体（Ｓ−エピマー（３）及びＲ−エピマー（４））の混合物として調製され、該混合物は分離され、単一のエピマーとして投与される。
【０００７】
ＮＵＣ−１０３１（２）
【化２】
2019509253.tif 000003
【０００８】
Ｓ−エピマー（３）
【化３】
2019509253.tif 000004
【０００９】
Ｒ−エピマー（４）
【化４】
2019509253.tif 000005
【００１０】
ＰｒｏＧｅｍ１は、進行した固形悪性腫瘍の被験者において、２つの並行投与量スケジュールで投与されたＮＵＣ−１０３１の安全性、忍容性、臨床有効性、薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を調査するための、ヒトへの最初の投与（ＦＴＩＨ）、フェーズ１、オープンラベル、２ステージ治験である（ＥｕｄｒａＣＴ番号：２０１１−００５２３２−２６）。被験者は、治験登録時、次の腫瘍を有していた：大腸癌（対象７人）、原発不明癌（３人）、卵巣癌（１２人）、乳癌（４人）、膵臓癌（９人）、胆管癌（７人）、子宮内膜癌（３人）、子宮頸癌（２人）、肺癌（７人）、中皮腫（３人）、食道癌（３人）、卵管癌（１人）、トロホブラスト（１人）、腎臓癌（１人）、胃癌（１人）、肛門癌（１人）、胸腺癌（１人）、及び骨肉腫（１人）。治験では、進行した進行癌の患者（全ての標準的な治療オプションを尽くしており、その多くは、従来のヌクレオシド類似体（ゲムシタビンを含む）治療に対して抵抗性又は不応性であった）において、ＮＵＣ−１０３１の抗腫瘍活性が確認された。特に注目すべきことには、薬物動態データが、単剤としてのＮＵＣ−１０３１は、当モル用量での単剤ゲムシタビンよりも約１０倍高い活性トリホスフェート部分（ｄＦｄＣＴＰ）のピーク細胞内濃度（Ｃｍａｘ）を生ずることを示した。さらに、ｄＦｄＣＴＰへの細胞内経時露出又は曲線下面積は、公表された多くの研究からのゲムシタビンに関する履歴データと比較して、ＮＵＣ−１０３１について、２７倍大きいものであった。最後に、分析では、ＮＵＣ−１０３１は、ゲムシタビンと通常関連する潜在的に有毒性の代謝物２’，２’−ジフルオロ−２’−ジオキシウリジン（ｄＦｄＵ）のレベルの半分未満を放出することが示された。
【００１１】
胆道癌
胆道癌（ＢＴＣｓ）は、高い死亡率（人口１００万人当たり約２３人）を伴い、発症率は大人の悪性腫瘍の０．７％であり、すなわち、イングランド及びウエールズでは、１年当たり約１２００件の新たなケースが登録されている。胆道癌は、出現部位により、下記のようにサブ分類される；
胆嚢癌、
末梢胆管、
膨大部腫瘍、
肝内胆管癌、
肺門（クラッキン）胆管癌。
【００１２】
これらの癌は、５０〜７０歳の患者で多く、胆管癌及び膨大部腫瘍のケースでは男性において、胆嚢癌については女性において発症率が高い。ＢＴＣｓの９０％以上が腺癌であるが、扁平上皮癌、神経内分泌癌、リンパ腫、又は肉腫のような他の組織学的サブタイプを見出すことができる。ＢＴＣに関する主な病原学的ファクターは、胆石、胆管の先天異常、原発性硬化性胆管炎、慢性肝臓疾患、及び遺伝性ポリポーシスシンドロームである。
【００１３】
手術は、長期療養を伴う。しかし、ＢＴＣは侵攻性であるため、多数の患者（＞６５％）は、手術ができず、利用可能な治療は、苦痛を緩和する化学療法のみであるような進行したステージで診断される。進行した（転移性、又は切除不能な局部的に進行した疾患）胆道癌と診断された患者の予後は悪い。ステージＩＩＩ及びＩＶの５年生存率は、それぞれ、１０％及び０％である。にもかかわらず、一次併用化学療法は、単剤療法と比べて、生存率及びクオリティ・オブ・ライフの改善を示している。
【００１４】
ＢＴＣｓの治療のための最も活性な化学療法剤は、ゲムシタビン、フルオロピリミジン、及びプラチナ製剤である。英国ＮＣＲＮ  ＡＢＣ−０２治験は、ＢＴＣ患者の一次治療用の対照レジメンとして、シスプラチン及びゲムシタビンを確立した。シスプラチン／ゲムシタビンの併用療法と、ゲムシタビン単剤療法とを比較する患者４１０人についてのランダム化ステージＩＩＩ治験の結果は、全生存（中央値１１．７月対８．１月；ｐ＜０．００１）及び無増悪生存（中央値８月対５月；ｐ＜０．００１）における優位性を示した。極めて類似した利益の大きさは、同じ治療レジメンを使用する日本のランダム化ステージＩＩ治験（ＢＴ−２２治験）において見られ、この治験では、シスプラチン／ゲムシタビンにより、中央値生存１１．２月が立証されている。そのサイズ及び観察された生存の優位性を提供したＡＢＣ−０２治験の頑強性により、標準治療として、シスプラチン及びゲムシタビンの組み合わせが確立され、それ以来、英国及び世界的に広く採用されている（例えば、米国におけるＮＣＣＮガイドライン）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、癌治療のために併用療法を提供することにある。本発明の具体例の目的は、既存の治療法よりも効果的である治療法を提供することにある。
【００１６】
本発明の特定の具体例は、上記目的のいくつか又はすべてを満足する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明によれば、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わせて癌治療に使用される、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物が提供される。
【００１８】
本発明は、また、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わされたゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物を提供する。この組み合わせは、代表的には、癌治療での使用のためにものである。
【００１９】
本発明は、また、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物と組み合わせて癌治療において使用するための、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤を提供する。
【００２０】
本発明は、また、癌を治療する方法を提供するものであり、該方法は、必要とする患者に、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わせて、治療上有効な量のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物を投与することを含んでなる。
【００２１】
本発明は、また、癌治療用医薬の製造における使用のための、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わされたゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物を提供する。
【００２２】
本発明は、また、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤と組み合わせた癌治療用医薬の製造における使用のための、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物を提供する。
【００２３】
本発明は、また、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物と組み合わせた癌治療用医薬の製造における使用のための、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤を提供する。
【００２４】
本発明は、また、シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤と一緒に、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物を含んでなる医薬製剤を提供する。
【００２５】
前記製剤は、単位用量のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及び単位用量のプラチナ系抗癌剤を含有することができる。単位用量は同一であってもよいが、代表的には相違する。
【００２６】
本発明は、また、一緒に使用される２つの別個の製剤を提供するものであり、製剤は、
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又は薬学上許容されるその塩又は溶媒和物、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第１の製剤；及び
シスプラチン、ピコプラチン、リポプラチン、及びトリプラチンから選ばれるプラチナ系抗癌剤、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第２の製剤
である。
【００２７】
製剤はキットの形でもよい。製剤（すなわち、前記製剤を含んでなるキット）は、代表的には、癌の治療用である。
【００２８】
本発明の治療は、２つの剤（すなわち、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及びプラチナ系抗癌剤）の組み合わせが、各々を単独で投与する場合よりも、組み合わせて投与する場合には、より大きい効力を示すとの事実に基づくものである。本明細書における用語「組み合わせて」又は「一緒に」は、２つの剤の両方が、治療期間中に、同一の患者に投与されることを意味する。投与は、別個の投薬で提供されるとの意味で別個であってもよく、又は同一の投薬であってもよい。投与は、同時に行われてもよく、又は一方の投与の直後に又は２つの剤の投与の間に間隔をおいて行われてもよい。この明細書における用語「単独で」は、このように、間隔後であっても、治療期間中に、１つの活性剤のみが投与され、他の剤が投与されないことを意味する。
【００２９】
本発明による併用療法は、全体の治療期間中に、活性剤の一方の単独での投与と比べて、全体の治療効果を増大させるように、２つの剤の同時投与又は連続投与を含む。この目的に使用される医薬製剤は、個々の、すなわち、別個の製剤であってもよく、又は単一の製剤であってもよい。製剤又は個々の製剤は、液状（希釈されたもの又は希釈されるようになっているもの）であってもよく、又は固体であってもよい。固体型は、好適な溶媒に溶解され得るものとして提供される。固体型は、また、錠剤、カプセル剤、等として濃縮単位用量型であってもよい。
【００３０】
特に、発明者らは、シスプラチンが、特定の癌細胞系、例えば、膀胱癌細胞系ＨＴ１３７６を、ＮＵＣ−１０３１に対して感受性として、強い相乗効果を発揮するとの知見を得た。さらに、発明者らは、インビボにおいて、ＮＵＣ−１０３１とシスプラチンとの組み合わせが、ｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２の増大を導き、当該組み合わせが、胆道癌の治療において有効であることを証明した。
【００３１】
ゲムシタビン及びプラチナ製剤について観察された相乗効果は、ゲムシタビン及びＮＵＣ−１０３１の両方の活性な代謝物ｄＦｄＣＴＰ（ゲムシタビントリホスフェート）のレベルにおける１．５倍の増大によるものであり（ｖａｎ  Ｍｏｏｒｓｅｌら，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９９，８０（７），９８１−９９０）、これは、改善されたデオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）活性の結果として記載されている。ゲムシタビンと組み合わされた場合、ｄＣＫを介するｄＦｄＣＴＰレベルを増加させるために、２つのプラチナ製剤機構が提案されている。第１の細胞機構は、ｄＣＫを阻害することについて知られた、デオキシシチジントリホスフェート（ｄＣＴＰ）合成を担当する酵素であるリボヌクレオシドリダクターゼの阻害を包含する（Ｂａｊｅｔｔａｒａ，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００３，１４，２４２−２４７）。第２の分子機構では、プラチナ惹起ＤＮＡ−ダメージが、ヌクレオチド除去修復プロセスを活性化し、これはデオキシリボヌクレオチド（ｄＮＴＰｓ）を必要とする。次に、ｄＮＴＰｓ合成に関与するいくつかの酵素（ｄＣＫを含む）が増大される（ｖａｎ  Ｍｏｏｒｓｅｌら，１９９９）。ＮＵＣ−１０３１は、モノホスフェートの形で、ヌクレオチド類似体として合成され、ｄＣＫ依存性ｄＦｄＣＴＰ形成をバイパスし、従って、ＮＵＣ−１０３１及びシスプラチンを併用する際に観察される相乗効果は、異なった及び未だ知られていない経路に由来すると思われる。
【００３２】
いくつかの好ましい具体例では、プラチナ系抗癌剤はシスプラチンである。
【００３３】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、ホスフェートジアステレオ異性体の混合物であるか、又は実質的にジアステレオ異性的に純粋である形の（Ｓ）−エピマー又は（Ｒ）−エピマーでもよい。「実質的にジアステレオ異性的に純粋」は、本発明の目的について、約９０％以上のジアステレオ異性純度として定義される。実質的にジアステレオ異性的に純粋な形で存在する場合、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、９５％、９８％、９９％又は９９．５％以上のジアステレオ異性純度を有する。
【００３４】
癌は、固形腫瘍である。癌は、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、大腸癌、肺癌、胆道癌（例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌）、前立腺癌、腎癌、リンパ腫、白血病、子宮頸癌、胸腺癌、原発不明癌、食道癌、中皮腫、副腎癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、精巣癌、頭頚部癌、中枢神経系の癌、及び胚細胞性腫瘍から選ばれる癌である。
【００３５】
特定の好適な具体例では、癌は、膀胱癌、卵巣癌、非微小細胞肺癌、及び胆道癌（例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌）から選ばれてもよい。特定の好適な具体例では、癌は、膀胱癌、卵巣癌、及び胆道癌（例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌）から選ばれてもよい。特定の好適な具体例では、癌は胆道癌である。他の好適な具体例では、癌は膀胱癌である。これらの特別な癌の治療については、プラチナ系抗癌剤がシスプラチンである組み合わせが、特に、好ましい。特定の好適な具体例では、癌は、卵巣癌、非微小細胞肺癌、及び胆道癌（例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌）から選ばれ、プラチナ系抗癌剤はシスプラチンである。特定の好適な具体例では、癌は、卵巣癌及び胆道癌（例えば、胆嚢癌、末梢胆管癌、膨大部癌、肺門胆管癌、肝内胆管癌から選ばれる癌）から選ばれ、プラチナ系抗癌剤はシスプラチンである。このように、癌が胆道癌であり、プラチナ系抗癌剤がシスプラチンであってもよい。同様に、癌が膀胱であり、プラチナ系抗癌剤がシスプラチンであってもよい。
【００３６】
癌は、以前に、化学療法受けていないものでもよい。或いは、癌（例えば、胆道癌又は膀胱癌）は、再発性でもよい。このように、癌は、以前の１以上の化学療法過程（シスプラチン、ゲムシタビン、又はゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートから選ばれる薬剤による治療を含んでいてもよく、又は含んでいなくてもよい）の後に再発したもの又は進行したものでもよい。癌（例えば、胆道癌又は膀胱癌）は、難治性、プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）に対して抵抗性又は部分的抵抗性であってもよい。癌（例えば、胆道癌又は膀胱癌）は、プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）に対して感受性であってもよい。癌（例えば、胆道癌又は膀胱癌）は、転移性のものでもよい。
【００３７】
溶媒和物は、代表的には、水和物である。このように、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、塩又は水和物、又は塩の溶媒和物（例えば、水和物）の形である。ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは塩の形でなくてもよく、及び溶媒和物又は水和物の形でなくてもよい。好ましくは、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは遊離塩基の形である。
【００３８】
併用投与は、１０時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供することができる。併用投与は、１５時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供することができる。併用投与は、１８時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供することができる。併用投与は、２０時間以上のｄＦｄＣＴＰの細胞内ｔ１／２を提供することができる
【００３９】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及びプラチナ系抗癌剤は同時に投与されるか、又は連続して投与される。同時に投与される場合には、単製剤で投与されるか、又は別々の製剤で投与される。連続して投与される場合、同日に投与されるか、又は治療期間中の別個の日に投与される。治療期間中の特定の日に、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及びプラチナ系抗癌剤を同時に投与するか、又は治療期間中の同じ日に又は特定の他の日に、剤のただ１つを投与する。
【００４０】
ＮＵＣ−１０３１製剤
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、非経口的に、例えば、静脈内、皮下、又は筋肉内投与される。好ましくは、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは静脈内投与される。
【００４１】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、水性製剤（任意に、極性の有機溶媒、例えば、ＤＭＡも含んでなる）として投与されてもよい。非経口（例えば、静脈内）投与の場合、製剤は、好ましくは、極性の有機溶媒、例えば、ＤＭＡも含んでなる。
【００４２】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、製剤内に含まれる。製剤は、投与直前、すなわち、投与前４８時間以内（例えば、２４時間、１２時間又は２時間内）に、所定の量により希釈されるものでもよい。
【００４３】
製剤は、１以上の薬学上許容される可溶化剤、例えば、薬学上許容される非イオン性可溶化剤を含むこともできる。可溶化剤は、界面活性剤又は乳化剤とも呼ばれる。実例となる可溶化剤は、ポリエトキシル化脂肪酸及び脂肪酸エステル及びその混合物を含む。好適な可溶化剤は、ポリエトキシル化ヒマシ油（例えば、商品名Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＰで販売されているもの）であるか又は含んでなるか；又はポリエトキシル化ヒドロキシ−ステアリン酸（例えば、商品名Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）又はＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＨＳ１５で販売されているもの）であるか又は含んでなるか；又はポリエトキシル化（例えば、ポリオキシエチレン（２０））ソルビタンモノオレエート（例えば、商品名Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０で販売されているもの）であるか又は含んでなるものである。
【００４４】
特定の好ましい具体例では、製剤は、１以上の薬学上許容される可溶化剤を含んでなる。
【００４５】
製剤は、水性ビヒクルを含むこともできる。製剤は、すぐに投与されるものであり、この場合、代表的には、水性ビヒクルを含んでなる。
【００４６】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、好ましくは、非経口投与用に、例えば、静脈内、皮下又は筋肉内投与用に製剤されるが、本発明の特定の具体例では、経口投与されてもよい。好ましくは、製剤は静脈内投与用である。投与は、中心静脈投与装置（ＣＶＡＤ）を介するか、又は末梢静脈を介する。
【００４７】
投与に好適な製剤におけるゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの総用量は、代表的には、２５０ｍｇ〜３ｇ、例えば、１ｇ〜２ｇ、例えば、約１．５ｇである。
【００４８】
ストック溶液製剤
極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の３０容量％以上を占めることができる。このように、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の５０容量％以上、例えば、６０％以上を占めることができる。極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の９５容量％以下、例えば、９０％以下を占めることができる。製剤は、水性ビヒクル（例えば、食塩水）を含んでなることもできる。水性ビヒクルは、製剤の５０容量％以下、例えば、製剤の３０容量％以下を占めることができる。代表的には、水性ビヒクル（例えば、食塩水）は、製剤の５容量％以上、例えば、１０容量％以上を占めることができる。
【００４９】
製剤溶媒中のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの濃度は５００ｍｇ／ｍｌ以下である。濃度は、１００ｍｇ／ｍｌ以上であってもよい。好ましくは、濃度は、１ｍｌ当たり２００〜３００ｍｇ、２２５〜２７５ｍｇ、例えば、約２５０ｍｇである。
【００５０】
いくつかの好ましい製剤は、
ＤＭＡ３０〜９５容量％；
水性ビヒクル５〜５０容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート１００〜４００ｍｇ（例えば、１００〜３００ｍｇ）／ｍｌ
を含んでなる。
【００５１】
より好ましい製剤は、
ＤＭＡ７０〜９０容量％；
水性ビヒクル（例えば、食塩水）１０〜３０容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート２００〜３００ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。
【００５２】
先の４つのパラグラフに記載の製剤（主要構成成分として、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）が存在する）は、投与前に希釈されることなく投与される（例えば、点滴又は注射による）。これらは、例えば、ＣＶＡＤを介して投与される。ＣＶＡＤを介して投与される際には、これらは、一般的に、希釈されない。
【００５３】
或いは、これらの製剤は、ストック溶液でもよく、該ストック溶液は、末梢静脈を介する投与に好適な製剤を形成するために使用される前に、希釈される。
【００５４】
界面活性剤溶液製剤
極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の１０容量％以上、例えば、２０容量％以上を占めることができる。このように、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の８０容量％以下、例えば、７０％容量以下を占めることができる。極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の５５容量％以下を占めることができる。製剤は、１以上の可溶化剤（例えば、１以上のポリエトキシル化脂肪酸）も含んでなることができる。１以上の可溶化剤は、製剤の７０容量％以下、例えば、製剤の６０容量％以下を占めることができる。代表的には、可溶化剤は、製剤の２０容量％以上、例えば、３５容量％以上を占めることができる。製剤は、水性ビヒクルを、例えば、１〜１５容量％、又は５〜１２容量％の量で存在する。
【００５５】
製剤溶媒中のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの濃度は、１ｍｌ当たり２００ｍｇ以下、例えば、１５０ｍｇ以下、又は１３０ｍｇ以下である。濃度は、４０ｍｇ／ｍｌ以上、例えば、６０ｍｇ／ｍｌであってもよい。好ましくは、濃度は、７０〜１２０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約１００ｍｇ／ｍｌである。
【００５６】
特定の好ましい製剤は、
ＤＭＡ２０〜７０容量％；
可溶化剤２０〜７０容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート５０〜１５０ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。製剤は、水性ビヒクルを、例えば、１〜１５容量％の量で含んでなることもできる。
【００５７】
特定の特に好ましい製剤は、
ＤＭＡ３０〜６０容量％；
第１の可溶化剤１０〜３５容量％；
第２の可溶化剤１０〜３５容量％；
水性ビヒクル２〜１５容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート５０〜１５０ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。第１の可溶化剤は、ポリエトキシル化ヒマシ油（例えば、商品名Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＰで販売されているもの）である。第２の可溶化剤は、ポリエトキシル化ソルビタンモノオレエート（例えば、商品名Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０で販売されているもの）である。
【００５８】
製剤は、
ＤＭＡ３５〜５０容量％；
第１の可溶化剤１５〜３０容量％；
第２の可溶化剤１５〜３０容量％；
水性ビヒクル５〜１２容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート５０〜１５０ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。
【００５９】
先の５つのパラグラフに記載の界面活性剤溶液製剤（主要構成成分として、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）が存在する）は、代表的には、投与前に、水性ビヒクルにて希釈される。これらは、代表的には、投与の準備のために、さらに希釈される前に、上記のストック溶液から調製される。希釈された後、これらは、末梢血管を介して投与される。
【００６０】
これらの製剤は、可溶化剤を全く含有しないストック溶液製剤を、可溶化剤を含有する溶液にて希釈することによって形成される。
【００６１】
点滴溶液製剤
極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、製剤の０．１容量％以上、例えば、０．５容量％以上、又は１容量％以上を占めることができる。このように、ＤＭＡは、製剤の１２容量％以下、例えば、１０％容量以下、又は８容量％以下を占めることができる。製剤は、水性ビヒクル（例えば食塩水又はＷＦＩ）を含んでなることもできる。水性ビヒクルは、製剤の９９．５容量％以下、例えば、９９容量％又は９８容量％以下で存在できる。典型的には、水性ビヒクルは、製剤の８０容量％以上、例えば、９５％容量以上を占める。製剤は、１以上の可溶化剤（例えば、１以上のポリエトキシル化脂肪酸）も含んでなることができる。１以上の可溶化剤は、製剤の１２容量％以下、例えば、製剤の１０容量％以下、又は８容量％以下を占めることができる。典型的には、１以上の可溶化剤は、製剤の０．１容量％以上、例えば、０．５容量％以上、又は１容量％以上を占めることができる。
【００６２】
製剤溶媒中のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの濃度は、１５．０ｍｇ／ｍｌ以下又は１２．０ｍｇ／ｍｌ以下、例えば、１０．０ｍｇ／ｍｌ以下、又は８ｍｇ／ｍｌ以下である。濃度は、１．０ｍｇ／ｍｌ以上、例えば、２．０ｍｇ／ｍｌであってもよい。好ましくは、濃度は、１ｍｌ当たり２．５〜１２ｍｇ、例えば、約３〜４ｍｇ／ｍｌである。
【００６３】
特定の好ましい製剤は、
ＤＭＡ０．１〜１０容量％；
可溶化剤０．１〜１０容量％；
水性ビヒクル８５〜９９容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート２．０〜１２．０ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。
【００６４】
特定の特に好ましい製剤は、
ＤＭＡ１〜８容量％；
第１の可溶化剤０．５〜４容量％；
第２の可溶化剤０．５〜４容量％；
水性ビヒクル８５〜９９容量％；及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート２．０〜１２．０ｍｇ／ｍｌ
を含んでなる。第１の可溶化剤は、ポリエトキシル化ヒマシ油（例えば、商品名Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＰで販売されているもの）である。第２の可溶化剤は、ポリエトキシル化ソルビタンモノオレエート（例えば、商品名Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０で販売されているもの）である。
【００６５】
先の４つのパラグラフに記載の点滴溶液製剤（主要構成成分として、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ＤＭＡ）が存在する）は、代表的には、投与前４８時間までに、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの濃縮溶液を、水性ビヒクルにて希釈することによって調製される。前記濃縮溶液は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの極性の有機溶媒溶液（上記見出し「ストック溶液製剤」参照）か、又はゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの、極性の有機溶媒及び可溶化剤における溶液（上記見出し「界面活性剤溶液製剤」参照）のいずれかである。これらの製剤（主要構成成分として、極性の有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）存在する）は、末梢血管を介して投与される。前記製剤における低濃度の極性の有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、これらは、末梢性投与の際に痛みを生じないことを意味する。
【００６６】
キット
本発明は、癌を治療するためのキットを提供するものであり、該キットは、
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート、又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第１の製剤；及び
プラチナ系抗癌剤、及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第２の製剤
を含んでなる。
【００６７】
特定の特別な具体例では、キットは、
ＤＭＡ３０〜９５容量％、
水性ビヒクル５〜５０容量％、及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート１００〜４００ｍｇ／ｍｌ（例えば、１００〜３００ｍｇ／ｍｌ）
を含んでなる第１の製剤；
プラチナ系抗癌剤及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第２の製剤；及び
ＤＭＡ３０〜９５容量％、
水性ビヒクル５〜５０容量％
を含んでなる第３の製剤
を含んでなる。
【００６８】
第３の製剤は、典型的には、活性剤を含まない。このように、第３の製剤は、典型的には、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートだけでなく、プラチナ系抗癌剤も含まない。第３の製剤は、２つの別個の容器又は単一の容器で提供される。
【００６９】
先の２つのパラグラフにおいて述べたキットは、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、ＣＶＡＤを介して静脈内投与される場合に有用である。ＣＶＡＤは、第１の製剤の投与前に、第３の製剤にてフラッシュされる。これは、活性剤製剤と水性媒体（例えば、食塩水フラッシング溶液）との直接接触を避けることによって、静脈内投与装置、すなわち、ＣＶＡＤ内又は入口において、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの析出の危険を軽減する。ＣＶＡＤは、第１の製剤の投与後に、第３の製剤にてフラッシュされてもよい。これは、さらに、析出を防止する。
【００７０】
特定の特別な具体例では、キットは、
ＤＭＡ３０〜９５容量％、
水性ビヒクル５〜５０容量％、及び
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート１００〜４００ｍｇ／ｍｌ（例えば、１００〜３００ｍｇ／ｍｌ）
を含んでなる第１の製剤；
プラチナ系抗癌剤及び少なくとも１つの薬学上許容される添加剤を含んでなる第２の製剤；及び
ＤＭＡ１０〜５０容量％、
第１の可溶化剤２０〜６０容量％、
第２の可溶化剤２０〜６０容量％
を含んでなる第３の製剤
を含んでなる。
【００７１】
典型的には、第３の製剤は、活性剤を何ら含まない。このように、第３の製剤は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートだけでなく、プラチナ系抗癌剤も含まない。
【００７２】
先の２つのパラグラフにおいて述べたキットは、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートが、末梢静脈を介して静脈内投与される場合に有用である。第１の製剤を、投与前４８時間以内、例えば、２４時間以内に、第３の製剤にて希釈して、第４の製剤を形成する。第４の製剤を、さらに、投与前に、水性ビヒクルにて所望の濃度に希釈して、患者への点滴又は注射によって投与される製剤を形成する。ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの析出に関して安定な末梢性投与用の製剤を形成するためは、代表的には、可溶化剤を含むことが望ましい。しかし、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートは、このような可溶化剤の存在下では、分解を生じ易い。このように、２段階希釈法は、本発明の特定の具体例では、好ましい手段であり、これによって、末梢性投与用のゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの製剤が達成される。
【００７３】
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの投与のための実例となる方法
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの投与のための実例となる方法は、下記のとおりである。
ＤＭＡ及び０．９％食塩水の８０：２０（容量）混合物におけるゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート溶液２５０ｍｇ／ｍｌ溶液を形成する。このストック溶液製剤は、代表的には、長期間の保存及びプロチドの輸送について、十分に安定である。このストック溶液製剤は、ＣＶＡＤ（例えば、Ｈｉｃｋｍａｎライン、ＰＩＣＣライン、留置ポート）を介して、例えば、速度２０ｍｌ／時間で、患者に静脈内投与される。静脈内投与装置は、代表的には、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートを含んでなる製剤の投与前及び後の両方で、ＤＭＡ及び０．９％食塩水の８０：２０（容量）混合物（下記の実施例４において述べる「フラッシング溶液」）にてフラッシュされる。これは、食塩水フラッシュとの接触時、静脈内投与装置におけるゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの潜在的な析出の危険を低減することを助ける。或いは、末梢血管への静脈内投与が、好適な投与方法である場合には、ついで、ストック溶液製剤を、ＤＭＡ：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０：Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＰの２０％：４０％：４０％混合物である希釈溶液にて、１００ｍｇ／ｍｌに希釈する（例えば、８０：２０のＤＭＡ：０．９％食塩水混合物における２５０ｍｇ／ｍｌゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート）溶液６．７ｍｌを、ＤＭＡ：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０：Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＰ希釈溶液１０ｍｌに添加する）。得られた（界面活性剤溶液）製剤は、代表的には、５日間までは安定である。ついで、この界面活性剤溶液を、０．９％食塩水にて、所望の濃度に希釈することによって、点滴溶液製剤を調製する。
【００７４】
実施例に記載するＡＢＣ‐０８治験におけるゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの投与は、この投与法を使用して行われ、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートの（Ｓ）−エピマーが、ＣＶＡＤを介して投与される。
【００７５】
プラチナ系抗癌剤の製剤
プラチナ系抗癌剤は、非経口的、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、又は筋肉内投与される。好ましくは、プラチナ系抗癌剤は静脈内投与される。
【００７６】
プラチナ系抗癌剤は、典型的には、水性溶液、例えば、殺菌した１ｍｇ／ｍｌ水性溶液として投与される。水性溶液は、代表的には、食塩水（例えば、０．９％食塩水）である。水性溶液は、マンニトール（例えば、１０ｍｇ／ｍｌ）を含んでなることができる。
【００７７】
プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）は、５０ｍｇ／ｍｌ未満の用量で投与される場合には、代表的には、１５〜６０分間で、１００〜２５０ｍｌバッグから点滴として投与される。プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）は、５０ｍｇ／ｍｌ以上の用量で投与される場合には、代表的には、１５〜６０分間で、２５０〜５００ｍｌバッグから点滴として投与される。
【００７８】
シスプラチンの投与に関する更なる情報は、例えば、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）に関する米国ＦＤＡの承認ラベルにおいて利用可能である。
【００７９】
用量レジメン
ＮＵＣ−１０３１は、２１日サイクル内で２回投与される。プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）は、２１日サイクル内で２回投与される。好ましい用量レジメンでは、ＮＵＣ−１０３１は、２１日サイクルのｄａｙ１及びｄａｙ８において投与される。プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）は、２１日サイクルのｄａｙ１及びｄａｙ８において投与される。ＮＵＣ−１０３１及びプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）は、２１日サイクルのｄａｙ１及びｄａｙ８において、同時に投与されてもよい。
【００８０】
各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量は、好ましくは、２５０〜１２５０ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量は、３００〜１０００ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量は、４００〜９００ｍｇ／ｍ２、例えば、６００〜８００ｍｇ／ｍ２、又は３００〜７５０ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量は、約７５０ｍｇ／ｍ２である。
【００８１】
各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、１０〜２００ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、２０〜１００ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、２０〜６０ｍｇ／ｍ２である。各投与機会に投与されるプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、３０〜９０ｍｇ／ｍ２である。
【００８２】
各治療サイクルにおいて、ＮＵＣ−１０３１の用量、又はプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量、又は両化合物の用量は、各治療サイクルにおいて、実質的に同一のままである。例えば、複数回の治療サイクルにおいて、投与機会当たり約７５０ｍｇ／ｍ２のＮＵＣ−１０３１用量、及び約５０ｍｇ／ｍ２のシスプラチン用量を使用できる。
【００８３】
或いは、ＮＵＣ−１０３１の用量、又はプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量、又は両化合物の用量は、１回目の治療サイクルから、２回目（又はその後）の治療サイクルに向かって低減されてもよい。例えば、各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量は、１回目の治療サイクルにおける約７５０ｍｇ／ｍ２から、２回目（又はその後）の治療サイクルにおける約６２５ｍｇ／ｍ２に低減される。プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、１回目の治療サイクルにおける約９０ｍｇ／ｍ２から、２回目（又はその後）の治療サイクルにおける約６０ｍｇ／ｍ２、又は約５０ｍｇ／ｍ２に低減される。
【００８４】
好適な治療レジメンは、１回目の治療サイクルから２回目（又はその後）の治療サイクルに向かって、ＮＵＣ−１０３１の用量及びプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量の両方の減量（先のパラグラフにおいて提示しているように）の使用を可能にする。例えば、各投与機会に投与されるＮＵＣ−１０３１の用量を、１回目の治療サイクルにおける約７５０ｍｇ／ｍ２から、２回目（又はその後）の治療サイクルにおける約６２５ｍｇ／ｍ２に低減し、及びプラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量を、１回目の治療サイクルにおける９０ｍｇ／ｍ２から、２回目（又はその後）の治療サイクルにおける約６０ｍｇ／ｍ２、又は約５０ｍｇ／ｍ２に低減できる。
【００８５】
ＮＵＣ−１０３１の用量が、１回目から２回目、又はその後の治療サイクルに向かって低減する（例えば、投与機会当たり約７５０ｍｇ／ｍ２から、投与機会当たり約６２５ｍｇ／ｍ２に低減する）場合、プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、１回目及び２回目又はその後の治療サイクルの間で同一のままであってもよい（例えば、各サイクルにおいて、約５０ｍｇ／ｍ２）。
【００８６】
ＮＵＣ−１０３１の用量が、１回目から２回目、又はその後の治療サイクルまで一定のままである（例えば、投与機会当たり約６２５ｍｇ／ｍ２である）場合、プラチナ系抗癌剤（例えば、シスプラチン）の用量は、１回目及び２回目又はその後の治療サイクルの間で低減される（例えば、１回目の治療サイクルにおける約９０ｍｇ／ｍ２から、２回目（又はその後）の治療サイクルにおける約６０ｍｇ／ｍ２、又は５０ｍｇ／ｍ２に低減されもよい。
【００８７】
上述の用量レジメンは、組合せの各成分の毒性が許容レベルにあり、それにもかかわらず、なお当該組み合わせによる治療効果が観察されるとのバランスを提供することが期待される。
【００８８】
上述の用量レジメンは、患者の改善された生存率を提供するものであってもよい。患者５０％以上において安定した状態を提供するものであってもよい。許容できる副作用レベルで、上記効果の１以上を提供するものであってもよい。用量は、ｄＦｄＣＴＰのＡＵＣが、単剤として投与されるＮＵＣ−１０３１の場合よりも併用の場合により高くなるものであってもよい。用量は、ＡＵＣ：ｄＦｄＣＴＰのＣｍａｘ比が、単剤として投与されるＮＵＣ−１０３１の場合よりも併用の場合に高くなるものであってもよい。
【００８９】
以下に、添付図面を参照して、さらに、本発明の具体例を記載する。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム及びｎ−ヘプタン／ＩＰＡグラディエント溶離剤系を使用するＨＰＬＣによる化合物（３）及び（４）の分離に関するクロマトグラフを示す。
【図２】膀胱癌細胞系ＨＴ１３７６におけるシスプラチン／ＮＵＣ−１０３１に関する曲線移動法を使用することによって示す相乗効果を表す。
【発明を実施するための形態】
【００９１】
「同時」は、実質的同時を意味し、例えば、３０分未満で離れていてもよい。「その後」は、３０分以上離れた投与を意味する。
【００９２】
この明細書を通して、用語「Ｓ−エピマー」又は「Ｓ−ジアステレオ異性体」は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートをいう。同様に、この明細書を通して、用語「Ｒ−エピマー」又は「Ｒ−ジアステレオ異性体」は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェートをいう。
【００９３】
本発明の化合物は、薬学上許容される塩の形で得られ、保存され及び／又は投与される。好適な薬学上許容される塩としては、薬学上許容される無機酸、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸、及び臭化水素酸の塩、又は薬学上許容される有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、ムチン酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸、及び吉草酸の塩が含まれる（ただし、これらに限定されない）。好適な塩基塩は、無毒性塩を形成する塩基から形成される。例としては、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、及び亜鉛の塩が含まれる。酸又は塩基のヘミ塩、例えば、ヘミ硫酸塩、ヘミシュウ酸、及びヘミカルシウム塩も形成される。特定の具体例では、特に、Ｓ−エピマーに適用されるものについては、化合物は、ＨＣｌ塩又はヘミシュウ酸の形である。
【００９４】
本発明の化合物は、単結晶型又は結晶型の混合物として存在し、又は非晶質型であってもよい。このように、医薬用途を目的とする本発明の化合物は、結晶型生成物又は非晶質型生成物として投与される。これらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、又はスプレー乾燥、又は蒸発乾燥のような方法によって、例えば、固体粒、粉体、又はフィルムとして得られる。この目的のために、マイクロ波又は高周波乾燥が使用される。
【００９５】
本発明の上記化合物について、もちろん、投与される用量は、使用する化合物、投与形態、所望される治療及び現在の疾患によって変動する。例えば、本発明の化合物が、非経口投与されるとすると、本発明の化合物の用量は、０．１〜５ｇ／ｍ２、例えば、０．５〜２ｇ／ｍ２の範囲である。本発明の化合物の治療目的の用量サイズは、当然、よく知られた薬剤の原理に従って、病状及び重篤性、動物又はヒトの年齢及び性別、及び投与ルートに応じて変動する。
【００９６】
本発明の化合物の用量レベル、投与頻度、及び治療期間は、製剤及び臨床的適応、患者の年齢及び共存する病状に応じて異なることが予測される。
【００９７】
本発明の化合物、又は薬学上許容されるその塩は、単独で使用されるが、一般に、本発明の化合物、又は薬学上許容されるその塩を、薬学上許容されるアジュバント、希釈剤又はキャリヤーと一緒に含んでなる医薬組成物の形で投与される。好適な医薬製剤の選択及び調製に関する一般的な手続きは、例えば、「医薬品−製剤設計の科学」，Ｍ．Ｅ．Ａｕｌｔｏｎ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，１９８８に記載されている。
【００９８】
本発明の化合物の投与形態に応じて、本発明の化合物を投与するために使用される医薬組成物は、好ましくは、本発明の化合物０．０５〜９９質量％、より好ましくは、本発明の化合物０．０５〜８０質量％、さらに好ましくは、本発明の化合物０．１０〜７０質量％、及びさらに一層好ましくは、本発明の化合物０．１０〜５０質量％を含んでなる（全ての百分率が組成物の総質量基準である）。
【００９９】
経口投与については、本発明の化合物を、アジュバント又はキャリヤー、例えば、乳糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール；デンプン、例えば、ジャガイモデンプン、コーンスターチ又はアミロペクチン；セルロース誘導体；結合剤、例えば、ゼラチン又はポリビニルピロリドン；及び／又は滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ワックス、パラフィン、等と混合され、及びついで打錠される。コーティング錠が望まれる場合には、上記の通りに調製したコアを、濃縮した砂糖溶液（例えば、アラビヤゴム、ゼラチン、タルカム及び二酸化チタンを含有できる）で被覆する。或いは、錠剤を、容易に揮発する有機溶媒に溶解した好適なポリマーで被覆することもできる。
【０１００】
軟質ゼラチンカプセルの調製については、本発明の化合物を、例えば、植物油、又はポリエチレングリコールと混合する。一方、硬質ゼラチンカプセルは、錠剤用の上記添加剤のいずれかを使用して、化合物の粒状物を含有できる。また、本発明の化合物の液体又は半固体製剤を、硬質ゼラチンカプセルに充填してもよい。
【０１０１】
経口投与用の液体調製物は、シロップ又は懸濁液、例えば、本発明の化合物を含有し、残余が砂糖及びエタノール、水、グリセリン及びプロピレングリコールの混合物である溶液の形である。任意に、このような液体調製物は、着色料、香料、甘味料（例えば、サッカリン）、保存料及び／又は増粘剤としてのカルボキシメチルセルロース又は当業者に知られている他の添加剤を含有できる。
【０１０２】
非経口（例えば、静脈内）投与については、化合物を、殺菌した水性又は油性溶液として投与できる。本発明の化合物は非常に親油性である。それ故、水性製剤は、典型的には、薬学上許容される極性の有機溶媒も含有するであろう。
【０１０３】
本発明の化合物の治療目的の用量サイズは、当然、よく知られた薬剤の原理に従って、病状及び重篤性、動物又はヒトの年齢及び性別、及び投与ルートに応じて変動する。
【０１０４】
本発明の化合物の用量レベル、投与頻度、及び治療期間は、当然、製剤及び臨床的適応、患者の年齢及び併存する病状に応じて異なることが予測される。
【０１０５】
本発明は、１以上の原子が、同じ原子番号を有するが、原子質量又は質量数が、天然に通常見出される主な同位体の原子質量又は質量数とは異なる原子によって置換された、いずれも薬学上許容される同位体標識した形の化合物（２）、（３）又は（４）も含む。
【０１０６】
本発明の化合物に含まれる好適な同位体の例としては、水素の同位体、例えば、２Ｈ及び３Ｈ、炭素の同位体、例えば、１１Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃ、塩素の同位体、例えば、３６Ｃｌ、フッ素の同位体、例えば、１８Ｆ、ヨウ素の同位体、例えば、１２３Ｉ及び１２５Ｉ、窒素の同位体、例えば、１３Ｎ及び１５Ｎ、酸素の同位体、例えば、１５Ｏ、１７Ｏ及び１８Ｏ、リンの同位体、例えば、３２Ｐ、及びイオウの同位体、例えば、３５Ｓが含まれる。
【０１０７】
いくつかの同位体標識化合物、例えば、放射性同位体を含むものは、薬剤及び／又は基質の組織分布の研究において有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち、３Ｈ、及び炭素１４、すなわち、１４Ｃは、導入の容易性及び既存の検出手段に鑑み、この目的には特に有用である。
【０１０８】
重水素、すなわち、２Ｈのような、より重質の同位体による置換は、より大きい代謝安定性から生ずるいくつかの治療上の利点、例えば、増大したインビボ半減期又は低減した必要用量を提供し、このため、状況次第では好ましい。
【０１０９】
１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ及び１３Ｎのようなポジトロン放出性同位体による置換は、基質受容体占有を調べるためのポジトロン断層（ＰＥＴ）法では有用である。
【０１１０】
同位体標識化合物は、一般に、当業者に知られた一般的な技術によって又はこれまで使用されてきた非標識試薬の代わりに、好適な同位体標識試薬を使用する公知の方法と類似の方法によって調製される。
【０１１１】
癌治療のための治療方法又は癌治療における使用のための化合物は、ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及びプラチナ系抗癌剤に加えて、一般的な手術又は放射線治療又は化学療法を含む。このような化学療法は、１以上の他の活性剤の投与を含むことができる。
【０１１２】
このように、医薬製剤の各々、又はいずれか１つは、他の活性剤を含んでなることもできる。
【０１１３】
１以上の他の活性剤は、抗腫瘍剤の下記のカテゴリーの１以上である：
（ｉ）抗増殖剤／抗新生物治療剤及びその組み合わせ、例えば、アルキル化剤（例えば、シクロホスファアミド、ナイトロジェンマスタード、ベンダムスチン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾロミド、及びニトロソ尿素）；代謝拮抗剤（例えば、ゲムシタビン、及び葉酸代謝拮抗剤（例えば、フルオロピリミジン（５−フルオロウラシル及びテガフール）、ラルチトレキセド、メトトレキサート、ペメトレキセド、シトシンアラビノシド、及びヒドロキシ尿素）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンカルカトイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン及びビノレルビン）及びタキソイド（例えば、タキソール及びタキソテレ、及びポロキナーゼ阻害剤）；プロテアソーム阻害剤、例えば、カーフィルゾミブ及びボルテゾミブ；インターフェロン療法；及びトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド及びテニポシド）、アムサクリン、トポテカン、ミトキサントロン及びカンプトテシン）；
【０１１４】
（ｉｉ）細胞分裂阻害剤、例えば、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン及びイドキシフェン）、抗アンドロゲン薬（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド及び酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨ拮抗薬又はＬＨＲＨ作動薬（例えば、ゴセレリン、リュープロレリン及びブセレリン）、プロゲストーゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール及びエキセケスタン）及び５α−リダクターゼの阻害剤、例えば、フィナステリド；
【０１１５】
（ｉｉｉ）抗侵襲剤、例えば、ダサチニブ及びボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、及びメタロプロテアーゼ阻害剤、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体機能阻害剤又はヘパラナーゼに対する抗体；
【０１１６】
（ｉｖ）成長因子機能の阻害剤、例えば、このような阻害剤は、成長因子抗体及び成長因子受容体抗体（例えば、抗−ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標名））、抗−ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗−ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ）、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、上皮成長因子ファミリーの阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ及び６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）−キナゾリン−４−アミン（Ｃｌ１０３３）のようなＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、ラパチニブのようなｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤）；肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤；インスリン成長因子ファミリーの阻害剤；細胞アポプトーシスのタンパク質調節剤の修飾因子（例えば、Ｂｃｌ−２阻害剤）；血小板由来成長因子ファミリーの阻害剤、例えば、イマチニブ及び／又はニロチニブ（ＡＭＮ１０７）；セリン／スレオニンキナーゼの阻害剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、チピファルニブ及びロナファルニブ）のようなＲａｓ／Ｒａｆシグナル経路阻害剤）、ＭＥＫ及び／又はＡＫＴキナーゼを介する細胞シグナル経路の阻害剤、ｃ−キット阻害剤、ａｂｌキナーゼ阻害剤，ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＰＩｔ３キナーゼ阻害剤、ＣＳＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ＩＧＦ受容体キナーゼ阻害剤；オーロラキナーゼ阻害剤及びサイクリン依存性キナーゼ阻害剤、例えば、ＣＤＫ２及び／又はＣＤＫ４阻害剤；
【０１１７】
（ｖ）抗血管新生薬、例えば、血管内皮成長因子の影響を阻害するもの（例えば、抗−血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標名））；サリドマイド；レナリドマイド；及び例えば、バンデタニブ、バタラニブ、スニチニブ、アキシチニブ及びパゾパニブのようなＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤；
【０１１８】
（ｖｉ）例えば、異常ｐ５３、異常ＢＲＣＡ１又はＢＲＣＡ２のような異常遺伝子を置き換えるアプローチを含む遺伝子療法アプローチ；
【０１１９】
（ｖｉｉ）例えば、アレムツズマブ、リツキシマブ、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））及びオファツムマブのような抗体療法；インターフェロンαのようなインターフェロン；ＩＬ−２（アルデスロイキン）のようなインターロイキン；；インターロイキン阻害剤、例えば、ＩＲＡＫ４阻害剤；ＨＰＶワクチン（例えば、ガーダシル、サーバリックス、オンコファージ及びＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）のような予防用及び治療用ワクチンを含む癌ワクチン；及びｔｏｌｌ様受容体修飾物質（例えば、ＴＬＲ−７又はＴＬＲ−９作動薬）を含む免疫療法；及び
【０１２０】
（ｖｉｉｉ）細胞毒性薬、例えば、フルダラビン（フルダラ）、クラドリビン、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（商標名））；
【０１２１】
（ｉｘ）コルチコステロイド（グルココルチコイド及びミネラルコルチコイドを含む）のようなステロイド、例えば、アルクロメタゾン、アルクロメタゾンジプロピオン酸エステル、アルドステロン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベクロメタゾンジプロピオン酸エステル、ベタメタゾン、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、ベタメタゾン吉草酸エステル、ブデソニド、クロベタゾン、クロベタゾン酪酸エステル、クロベタゾンプロピオン酸エステル、クロプレドノール、コルチゾン、コルチゾン酢酸エステル、コルチバゾール、デオキシコルトン、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサメタゾンイソニコチン酸エステル、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオロコルチゾン、フルオロコルトロン、フルオロコルトロンカプロン酸エステル、フルオロコルトロンピバル酸エステル、フルオロメトロン、フルプレドニデン、プルプレドニデン酢酸エステル、フルランドレノロン、フルチカゾン、フルチカゾンプロピオン酸エステル、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン酢酸エステル、ヒドロコルチゾン酪酸エステル、ヒドロコルチゾンアセポン酸エステル、ヒドロコルチゾン酪酸エステルプロピオン酸エステル、ヒドロコルチゾン吉草酸エステル、イコメタゾン、イコメタゾンブタン酸エステル酢酸エステル、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、モメタゾン、パラメタゾン、モメタゾンフランカルボン酸エステル１水和物、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、チキソコルトール、チキソコルトールピバル酸エステル、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール及びそれらの各薬学上許容される誘導体（ステロイドの組み合わせ、例えば、このパラグラフに記載した２以上のステロイドの組み合わせを使用できる）；
【０１２２】
（ｘ）標的治療、例えば、ＰＩ３Ｋｄ阻害剤（例えば、アイデラリシブ及びペリホシン、又はＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及びＣＡＴ  Ｔを阻害する化合物）。
【０１２３】
１以上の他の活性剤は、抗生物質でもよい（例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン及びミスラマイシン）。
【０１２４】
この明細書及び特許請求の範囲を通して、用語「含んでなる」及び「含有する」及びその変形は、「含むが、限定されない」を意味するものであり、これらは、他の部分、添加剤、成分、整数又は工程を除外することを意図するものではない（及び除外しない）。この明細書及び特許請求の範囲を通して、単数は、他に要求されない限り、複数も含むものである。特に、不定冠詞を使用する場合、明細書は、他に要求されない限り、単一性とともに、複数性を含むものとして理解されなければならない。
【０１２５】
特殊な態様と合わせて記載する本発明の特徴、整数、特性、化合物、化学部分及び基、具体例又は実施例は、矛盾しない限り、ここに記載する他の態様、具体例又は実施例のいずれにも適用できるものであると理解されなければならない。この明細書（特許請求の範囲、要約及び図面を含む）に開示する特徴の全て、及び／又は同様に開示された方法及びプロセスの工程の全ては、このような特徴及び／又は工程の少なくともいくつかが、相互に排他的である組み合わせを除き、いかようにも組み合わされる。本発明は、上述の具体例の詳細に限定されない。本発明は、この明細書に開示された特徴のいずれかの新規な１つ又は新規な組み合わせに、又は同様に開示されたいずれかの方法又はプロセスの工程のいずれかの新規な１つ又は新規な組み合わせに及ぶものである。
【０１２６】
読者の注目は、この出願に関連するこの明細書と同時に又はこれよりも先に提出された、又はこの明細書と一緒に縦覧に供される全ての論文及び文献に向けられるが、このような全ての論文及び文献の内容は、参照することによって、ここに組み込まれる。
【０１２７】
［実施例１］−ＮＵＣ−１０３１の単一のジアステレオ異性体
下記の条件下におけるＨＰＬＣによって、（Ｒ）及び（Ｓ）異性体を分離できる：
装置：ＤＡＤ検出器を有するＡｇｉｌｅｎｔ１２００（商標名）シリーズ
流速：１．０ｍｌ／分
カラム：ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（商標名）；２５０×４．６ｍｍＩＤ（順相）
温度：室温
粒径：２０μｍ
フィード：ＭｅＯＨに溶解；１０ｇ／ｌ
溶媒：ｎ−ヘプタン／ＩＰＡ  １０→５０％イソプロピルアルコール
クロマトグラムを図１に示す。（Ｓ）−異性体は８．６分で溶離し、（Ｒ）−異性体は１０．３分で溶離した。
【０１２８】
特徴付け及び物質：
分光計Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ５００において、２５℃で、プロトン（１Ｈ）、炭素（１３Ｃ）、リン（３１Ｐ）及びフッ素（１９Ｆ）のＮＭＲスペクトルを記録した。スペクトルを重溶媒ピークに自動計算し、全ての１３ＣＮＭＲ及び３１ＰＮＭＲがプロトンデカップリングされている。最終化合物の純度は、分析カラムとしてＶａｒｉａｎ  ＰｏｌａｒｉｓＣ１８−Ａ（１０μＭ）を使用し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ１００／０〜０／１００、３５分間のグラデーション溶離によるＨＰＬＣ分析によって確認される。Ｖａｒｉａｎ  Ｐｒｏｓｔａｒ（ＬＣ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ‐Ｖａｒｉａｎ  ｐｒｏｓｔａｒ３３５ＬＣ検出器）によって、ＨＰＬＣ分析を行った。
【０１２９】
２’−デオキシ‐２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベンジルオキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート（３）
（ＥＳ＋）ｍ／ｚ、実測値：（Ｍ−Ｎａ＋）６０３．１４
Ｃ２５Ｈ２７Ｆ２Ｎ４Ｏ８ＮａＰ理論値：（Ｍ＋）５８０．４７
３１ＰＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δｐ３．６６
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＨ７．５８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．３８−７．３２（ｍ，７Ｈ，ＡｒＨ），７．２６−７．２０（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），６．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．８４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），５．２０（ＡＢ  ｓｙｓｔｅｍ，ＪＡＢ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ），４．４６−４．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），４．３６−４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），４．２５−４．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），４．０７−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’，ＣＨＣＨ３），１．３８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨＣＨ３）
１９ＦＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＦ−１１８．０（ｄ，Ｊ＝２４１Ｈｚ，Ｆ），−１２０．２４（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝２４１Ｈｚ，Ｆ）
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ１７４．６１（ｄ，３ＪＣ−Ｐ＝５．０Ｈｚ，Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７．６３（Ｃ−ＮＨ２），１５７．７４（Ｃ＝Ｏ  ｂａｓｅ），１５２．１０（ｄ，２ＪＣ−Ｐ＝７．０Ｈｚ，Ｃ−Ａｒ），１４２．４０（ＣＨ−ｂａｓｅ），１３７．２２（Ｃ−Ａｒ），１３０．９０，１２９．６３，１２９．３９，１２９．３２，１２６．３２（ＣＨ−Ａｒ），１２４．５１（ｄ，１ＪＣ−Ｆ＝２５７Ｈｚ，ＣＦ２），１２１．４７，１２１．４３（ＣＨ−Ａｒ），９６．６７（ＣＨ−ｂａｓｅ），８５．９２（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，Ｃ−１’），８０．３１（Ｃ−４’），７１．２７（ａｐｐａｒｅｎｔ  ｔ，２ＪＣ−Ｆ＝２３．７Ｈｚ，Ｃ−３’），６８．０３（ＯＣＨ２Ｐｈ），６５．７３（ｄ，  ２ＪＣ−Ｐ＝５．３０Ｈｚ，Ｃ−５’），５１．６６（ＣＨＣＨ３），２０．４２（ｄ，３ＪＣ−Ｐ＝６．２５Ｈｚ，ＣＨＣＨ３）
逆相ＨＰＬＣ：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  １００／０〜０／１００、３５分間での溶離、ｔＲ＝２２．５３分を有するジアステレオ異性体の１つのピークを示した。
【０１３０】
２’−デオキシ‐２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベンジルオキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート（４）
（ＥＳ＋）ｍ／ｚ、実測値：（Ｍ−Ｎａ＋）６０３．１４
Ｃ２５Ｈ２７Ｆ２Ｎ４Ｏ８ＮａＰ理論値：（Ｍ＋）５８０．４７
３１ＰＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δｐ３．８３
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＨ７．５６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．３８−７．３１（ｍ，７Ｈ，ＡｒＨ），７．２３−７．１９（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），６．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’），５．８８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），５．２０（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ），４．４９−４．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），４．３８−４．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），４．２３−４．１７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），４．０７−４．０１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’，ＣＨＣＨ３），１．３８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨＣＨ３）
１９ＦＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＦ−１１８．３（ｄ，Ｊ＝２４１Ｈｚ，Ｆ），−１２０．３８（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝２４１Ｈｚ，Ｆ）
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ１７４．６５（ｄ，３ＪＣ−Ｐ＝５．０Ｈｚ，Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７．６５（Ｃ−ＮＨ２），１５７．７５（Ｃ＝Ｏ  ｂａｓｅ），１５２．１０（ｄ，２ＪＣ−Ｐ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ），１４２．２８（ＣＨ−ｂａｓｅ），１３７．５０（Ｃ−Ａｒ），１３０．８６，１２９．６３，１２９．４０，１２９．３２，１２６．３１（ＣＨ−Ａｒ），１２４．５０（ｄ，１ＪＣ−Ｆ＝２５７Ｈｚ，ＣＦ２），１２１．４４，１２１．４０（ＣＨ−Ａｒ），９６．６７（ＣＨ−ｂａｓｅ），８５．９０（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，Ｃ−１’），８０．２７（Ｃ−４’），７１．３０（ａｐｐａｒｅｎｔ  ｔ，２ＪＣ−Ｆ＝２３．７Ｈｚ，Ｃ−３’），６８．０２（ＯＣＨ２Ｐｈ），６５．５０（Ｃ−５’），５１．８３（ＣＨＣＨ３），２０．２２（ｄ，３ＪＣ−Ｐ＝７．５Ｈｚ，ＣＨＣＨ３）
逆相ＨＰＬＣ：Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  １００／０〜０／１００、３５分間での溶離、ｔＲ＝２１．８７分を有するジアステレオ異性体の１つのピークを示した。
【０１３１】
［実施例２］−ＮＵＣ−１０３１及びシスプラチン併用のインビボ治験
Ａ２７８０、ＳＫ−ＯＶ−３、ＯＶＣＡＲ−３、ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＮＣＩ−Ｈ２１２２、５６３７、及びＨＴ１３７６を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−１００９９１４１）を補足したＰＲＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−２２４００１０５）において培養した。全ての細胞株を、加湿したインキュベーターにおいて、３７℃、５％ＣＯ２の条件下に維持した。細胞培養培地及びサプリメントを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎがら購入し、組織培養フラスコをＣｏｒｎｉｎｇから購入し、９６ウエルプレート及び３８４ウエルプレートをＧｒｅｉｎｅｒから購入した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ＡｓｓａｙをＰｒｏｍｅｇａから購入し（Ｐｒｏｍｅｇａ−Ｇ７５７３）、細胞カウンターＶｉ−ＣｅｌｌをＢｅｃｋｍａｎから購入し、検出装置ＥｎｖｉｓｉｏｎをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。
【０１３２】
パクリタキセル（対照として使用した）及びシスプラチンをＳＥＬＬＥＣＫから購入した。これらは、使用可能な最高純度であった。化合物の全ては、ＤＭＳＯに溶解し、培地に希釈する際に、溶液の調製及び希釈のために、ＤＭＳＯ、化合物及び培地を、３７℃に加温した。
【０１３３】
細胞毒性アッセイ
８つの細胞株を、一夜で、９６ウエルプレートに付着させ（１００μｌ／ウエル）、３．１６倍希釈、９用量ポイント、三重又はビヒクルコントロールでの薬剤処理のため、ＤＭＳＯ中で、化合物のストック溶液を調製し、ウエルに添加して、指摘した最終薬剤濃度とした。最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％であった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  ＣｅｌｌＶｉａｂｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用することによって、細胞ＡＴＰ濃度を、製造者の指示により、薬剤の添加後７２時間で測定した。
【０１３４】
併用分析
８つの細胞株を、一夜で、３８４ウエルプレートに付着させ（６０ｍｌ／ウエル）、併用治験のため、２つの薬剤の４つの組み合わせを、２度調査し、１つの化合物を固定濃度に維持するとともに、第２の化合物の濃度を増大させて（１０倍希釈、５用量ポイント）、ＤＭＳＯ中で、化合物のストック溶液を調製し、Ｄ３００ｅデジタルディスペンサーによってウエルに添加して、指摘した最終薬剤濃度とした。最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％であった。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  ＣｅｌｌＶｉａｂｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用することによって、細胞ＡＴＰ濃度を、製造者の指示により、薬剤の添加後７２時間で測定した。
このように、治験は２つの段階を含んでなる。
段階１：単剤のＩＣ５０の決定
段階１では、個々の化合物（シスプラチン、ゲムシタビン及びＮＵＣ−１０３１）の関連する細胞株におけるＩＣ５０（５以上の濃度を使用する）を決定する。
【０１３５】
【表１】
2019509253.tif 000006
段階２：併用治療
段階２は、癌細胞の成長に関する化合物の選ばれた組合せの相互作用を決定する。計８つの条件を、適切な細胞株について、テストした。これは、１つの化合物を固定濃度に維持するとともに、第２の化合物の濃度を増大させて、２つの化合物の４つの組み合わせを２度調査したことを意味する。
【０１３６】
【表２】
2019509253.tif 000007
【０１３７】
２．２分析方法
化合物の組み合わせの効果を特徴付けるために、下記の用語を使用する。
「相乗作用」：単剤化合物から予測される効果よりも、組み合わせた化合物について観察される効果が、より大きいこととして定義される。
「付加的」効果：組み合わせた化合物について観察される効果が、単剤化合物の効果の合計から予測される効果と等しいこととして定義される。
「拮抗作用」：単剤化合物の効果から予測されるものよりも、組み合わせた化合物について観察される効果が、有意に、より弱いこととして定義される。
Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法
薬剤併用に関するＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法は、質量作用の法則に由来するＭｅｄｉａｎ  Ｅｆｆｅｃｔ等式に基づくものであり、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの得られる組み合わせ指数（ＣＩ）は、薬剤併用における、付加的効果（ＣＩ＝１）、相乗作用（ＣＩ＜１）についての量的定義を提供する。
Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｐｅｎｄｅｎｃｅモデル
方法は、観察された併用応答（ＹＯ）と、予測された併用応答（ＹＰ）とを比較するものであり、薬剤−薬剤の相互作用からは効果がないとの仮定に基づいて得られたものである。
２つの薬剤Ａ、Ｂ（ともに、腫瘍の成長を阻害する）を仮定する。用量ａの薬剤Ａは、腫瘍の成長Ｙａ％を阻害し、用量ｂの薬剤Ｂは、腫瘍の成長Ｙｂ％を阻害する。仮に、２つの薬剤が、独立して働くとすると、併用の阻害率Ｙａｂ，Ｐは、確率論の完全加法性を使用して、次のように予測される。
Ｙａｂ，Ｐ＝Ｙａ＋Ｙｂ−ＹａＹｂ
曲線移動分析
２つの薬剤は、独立して働き、薬剤Ａを固定濃度に維持し、薬剤Ｂの濃度が変動すると仮定して、固定の薬剤Ａの濃度に基づく併用効果を正規化し、薬剤Ａから得られた用量効果曲線を比較し、併用用量効果曲線の左方向へのシフトは相乗作用に関連し、右方向へのシフトは拮抗作用を表示し、オーバーラップは付加的効果を表示する。
【０１３８】
２．３結果
段階１：単剤による細胞毒性アッセイ
治験の段階１において、段階２における併用に関する最適濃度を知るために、単剤としてのシスプラチン、ＮＵＣ−１０３１及びゲムシタビンの細胞毒性を調査した。
【０１３９】
【表３】
2019509253.tif 000008
データの大要−３つの分析方法の全てからの結果の概要
下記の表４は、併用化合物ＮＵＣ−１０３１及びシスプラチンの効果を特徴付けるために、３つの方法論（Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ、Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｐｅｎｄｅｎｃｅ、及び曲線移動）を使用する分析からの結果を示す。
【０１４０】
【表４】
2019509253.tif 000009
３つの分析方法の間の結果の一致は、癌細胞株ＨＴ１３７６に対して２つの化合物の併用により、相乗作用が観察されたことを表しており、これを表５に概略する。
【０１４１】
【表５】
2019509253.tif 000010
【０１４２】
個々の方法論の結果
Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法を使用して分析したデータ
【表６】
2019509253.tif 000011
曲線移動法を使用して分析したデータ
膀胱癌細胞株ＨＴ１３７６における下記の相乗作用を、図２に示す。
【表７】
2019509253.tif 000012
Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｐｅｎｄｅｎｃｅ法を使用して分析したデータ
【表８】
2019509253.tif 000013
【０１４３】
［実施例３］−更なるＮＵＣ−１０３１及びシスプラチン併用のインビボ治験
細胞培養及び試薬
ＳＫＯＶ３細胞を、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞を、細胞培養フラスコ内で、１０％Ｇｉｂｃｏ（商標名）ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；１０２７０−１０６）及び１％Ｇｉｂｃｏ（商標名）Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；１５１４０１２２）を含むＧｉｂｃｏ（商標名）ＲＭＰＩ  １６４０培地＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標名）−Ｉ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；６１８７０−０１０）（完全培地として知られている）において、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。シスプラチンを、ＴＥＶＡ  ＵＫ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入した（ＰＬ００２８９／１１４）。フルバスタチン及びスルホラファンを、いずれも、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した（それぞれ、カタログ番号３４４０９６及び５７４２１５）。（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１をＮｕＣａｎａ（登録商標）Ｌｔｄ．から購入した。
【０１４４】
薬剤を適用した組織培養
ＳＫＯＶ３細胞を、Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）３５９６  ９６ウエルプレートの中央の６０ウエルに、１ウエル当たり、２００μｌ中の細胞２５０個で蒔き、外側の３６ウエルに、それぞれ、ＰＢＳ２００μｌを充填した。各種の薬剤化合物を添加する前に、細胞を、完全培地において、４８時間、成長させた。単剤として、完全培地において１０の異なる濃度のシスプラチン、（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１、フルバスタチン、及びスルホラファンを、中央の６０ウエルに添加した（ｄａｙ０）。各濃度を、六重で負荷した。細胞を、２４時間、化合物に曝し、化合物を、純粋な完全培地に置き換えた。フルバスタチンによる実験を、２４時間の代わりに４日間、曝すことにより、繰り返した。スルホローダミンＢアッセイ（下記参照）のために薬剤化合物を添加した後、ｄａｙ４において、４℃、６０分間で、２５％ＴＣＡ溶液５０μｌにて、プレートを固定した。
２つの薬剤の併用について、異なった濃度のシスプラチン及びフルバスタチン、及び各種の濃度のフルバスタチンと組み合わせた２つの固定濃度のシスプラチンを、Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）３５９６  ９６ウエルプレートにおいて、中央の６０ウエルに、三重で蒔いた。外側の３６ウエルには、それぞれ、ＰＢＳ２００μｌを充填した（ｄａｙ０）。細胞を、２４時間、薬剤化合物に曝し、ｄａｙ１において、化合物を吸引し、純粋な完全培地に置き換えた。スルホラファンを伴うシスプラチン、及び（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１を伴うシスプラチンを使用して、実験を繰り返し、各濃度を、三重で負荷した。ｄａｙ４において、スルホローダミンＢアッセイ（下記参照）のために、４℃、６０分間で、２５％ＴＣＡ溶液５０μｌにて、プレートを固定した。
【０１４５】
スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）比色アッセイ
ＴＣＡ溶液を添加した後、プレートを、流水下で、１０回洗浄し、オーブンにおいて、５０℃で乾燥させた。ついで、細胞を染料ＳＲＢ５０μにて染色し、ＳＲＢ添加後３０分で、染料を、１％氷酢酸にて４回洗浄除去した。ついで、プレートを、オーブンにおいて、乾燥した。染料ＳＲＢを、ロッカーにおいて、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝溶液１５０μｌに、６０分間、溶解させた。プレートを、Ｂｉｏｈｉｔ  ＢＰ８００  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｂｉｏｈｉｔ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に読み取り、吸光度を５４０ｎｍで測定した。単剤及び併用実験の両方の結果を使用し、Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して、薬剤化合物のＩＣ５０（５０％の阻害を生ずる薬剤の濃度である）を算定した。２つの薬剤の併用から得られた結果について、これらの結果を使用し、ＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏｓｏｆｔ）を使用して、化合物の併用指数（ＣＩ）を算定した。
【０１４６】
結果：
シスプラチン及びスルホラファンのＩＣ５０は、それぞれ、２．４３６μＭ及び７．００２μＭであった。フルバスタチン及びＮＵＣ−１０３１のＩＣ５０は、観察不可能な阻害性のため、算定することができなかった。フルバスタチンを伴うシスプラチンのＣＩ値は０．３５５〜０．５５７の範囲であり、相乗作用を示した。スルホラファンを伴うシスプラチンのＣＩ値は０．８９１〜１．４７４の範囲であり、拮抗作用を示した。ＳＫＯＶ３細胞に関する、０．１〜０．５μＭ及び１〜２μＭのＮＵＣ−１０３１を伴うシスプラチンのＣＩ値は、それぞれ、０．８７１〜０．９５７及び１．０６７〜１．７５６の範囲であった。
【０１４７】
結論
ＳＫＯＶ３細胞に対して、シスプラチンを伴う低濃度のＮＵＣ−１０３１について、相乗的な阻害が認められ、これは、より低い薬剤濃度が、通常、より低い毒性を与えるため、臨床的に、より使用され易いものとする。この結果は、患者において、効力及び安全性を保証するためにテストする前に、さらに、正確な最適併用用量を調査するための基礎として機能することができる。個人における併用の細胞毒性及び副作用を評価することによって個別化された治療は、遺伝子プロファイル及び薬剤応答のため、最適であり、これにより、各患者は、最適用量で薬剤を服用できる。
【０１４８】
［実施例４］−ＡＢＣ−００８臨床治験（シスプラチンと組み合わせたＮＵＣ−１０３１）からのｄＦｄＣＴＰ濃度の薬物動態分析及びＰｒｏＧｅｍ１臨床治験（ＮＵＣ−１０３１単独）からの結果との比較
ＡＢＣ−００８臨床治験における初めの３人の患者から得られたサンプルについて、初期薬物動態分析を行った。
患者の詳細は以下のとおりである：
患者１：７１歳、転移性胆道癌、開始時の用量：（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１  ６２５ｍｇ／ｍ２＋シスプラチン２５ｍｇ／ｍ２
患者２：７８歳、転移性胆道癌、開始時の用量：（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１  ６２５ｍｇ／ｍ２＋シスプラチン２５ｍｇ／ｍ２
患者３：７５歳、転移性胆道癌、開始時の用量：（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１  ６２５ｍｇ／ｍ２＋シスプラチン２５ｍｇ／ｍ２
ＮＵＣ−１０３１及びシスプラチンの両方を、２１日サイクルのｄａｙ１及び８で投与した。
ＮＵＣ−１０３１の最適な１回分用量６２５ｍｇ／ｍ２を、ルアーロックシリンジにおいて調製した。所定の用量は、基準体表面積（ＢＳＡ）計算式を使用して、対象の身長及び体重に基づく。ＮＵＣ−１０３１を収容するシリンジを延長ラインに接続する前に、ポリエチレン延長ラインを、フラッシング溶液１．５ｍｌ以下にて浄化した。
患者の中心静脈投与装置（ＣＶＡＤ）に延長ラインを接続し、シリンジポンプを使用して、速度２０ｍｌ／時間で注入した。注入が完了した後、ＮＵＣ−１０３１シリンジを、延長ラインから取り外し、ついで、延長ラインを、追加容量３ｍｌ以下のフラッシング溶液にてフラッシュした。
【０１４９】
物質及び方法
１．物質
ｄＦｄＣＴＰ対象化合物を、英国Ｂｉｏｒｂｙｔから入手した。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐを英国ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ．から入手した。過塩素酸（ＰＣＡ）、酢酸アンモニウム（ＮＨ４Ａｃ）及びアンモニアを、全て、英国Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。ＬＣ−Ｍｓグレードの水、メタノール、アセトニトリル及びギ酸を、全て、英国Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。
２．方法
Ａ．血液の採取及びＰＢＭＣｓの調製：ヘパリン処理した血液収集管を使用して、血液６ｍｌを採取した。血漿の遠沈及び分離の後、バフィーコートを収集し、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ密度差分離液３ｍｌを収容する新たな試験管に移した。遠心分離後、ＰＢＭＣ層を含有する上方界面を、新たな試験管に移した。リン酸塩緩衝化食塩水（ＰＢＳ）にて洗浄した後、ＰＢＭＣｓを、ＰＢＳ１００μｌに再懸濁化した。ついで、０．８Ｍ  ＰＣＡ１００μｌを添加し、混合物をボルテックス混合し、遠心分離し、続いて、上澄み１００μｌを新たな試験管に移した。ＰＣＡ抽出物を、分析時まで、−８０℃において保存した。
Ｂ．サンプルの抽出（ＰＢＭＣｓ）：ＰＣＡ抽出物を、１Ｍ  ＮＨ４Ａｃ５０μｌを使用して緩衝化し、ついで、１０％アンモニア溶液２０μｌを使用して中和した。最後に、内部基準物８−ＣｈｌｏｒｏＡＴＰの含有物５μｌ及び精製水５μ１を添加した。抽出物をＬＣ−ＭＳバイアルに移し、１０μｌを、ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。
３．クロマト法及びサンプル分析
分析物の１０ｍｇ／ｍｌストック溶液を調製し、使用時まで、アリコートを−８０℃で凍結した。ＢｉｏｂａｓｉｃＡＸ、５μｍ、５０×２．１ｍｍカラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国カリフォルニア州マリエータ）及びＮＨ４Ａｃの１０ｍＭ  ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（３０：７０ｖ／ｖ）溶液（ｐＨ６．０）（Ａ）及びＮＨ４Ａｃの１ｍＭ  ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（３０：７０ｖ／ｖ）の溶液（ｐＨ１０．５）（Ｂ）の混合物からなる移動相を備えた超高速液体クロマトグラフィーシステム（Ａｃｃｅｌａ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を使用して、分析物を分解した。緩衝液Ａ＝０〜０．５分において９５％、１．２５分で９５〜０％、１．７５分間０％に維持、０．１分で０〜９５％、２．９分間９５％で終了、全ての流速５００μｌ／分でなる移動相グラディエントを使用した。
４．質量分析法
エレクトロスプレーイオン源を備えた３連四重極型Ｖａｎｔａｇｅ質量分析システム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）を使用して、目的の溶離化合物を検出した。多重反応モニタリング（ＭＲＭ）において、それぞれ、スプレー電圧３５００及び３０００Ｖにおいて、ポジティブ（＋ｖｅ）及びネガティブ（−ｖｅ）イオンモードで、サンプルを分析した。シースガス及び補助ガスとして、それぞれ、流速５０及び２０任意単位（ａｒｂ．ｕｎｉｔ）で窒素を使用した。コリジョンガスとして、アルゴンを圧力１．５ｍトルで使用した。
結果
初期の結果を表９及び１０に示す。
【０１５０】
【表９】
2019509253.tif 000014
【０１５１】
【表１０】
2019509253.tif 000015
【０１５２】
考察
ＮＵＣ−１０３１血漿ＰＫパラメーターは、ＰｒｏＧｅｍ１（単剤ＮＵＣ−１０３１によるヒトへの最初の投与、フェーズ１治験）と比べて、２．１倍のＡＵＣの増加及び１．９倍のＣｍａｘにおける増加を示した。ＮＵＣ−１０３１血漿ＰＫパラメーターは、単剤ＮＵＣ−１０３１と比べて、３．６倍の半減期の増加を示した。
細胞内ｄＦｄＣＴＰ（活性な抗癌部分）パラメーターは、より長いｔ１／２を有する点を除いて、ＰｒｏＧｅｍ１と非常に類似していた。このより長いｔ１／２は、ＰＫサンプリングの４時間の期間にわたって、細胞内ｄＦｄＣＴＰがより高いレベルに維持されることによるものであろう。シスプラチンを伴うＮＵＣ−１０３１治療後に観察されたｄＦｄＣＴＰレベルにおける相乗作用は、癌の成長を阻止するために及び単剤使用後の再発癌の治療において、より長い期間にわたって、高いｄＦｄＣＴＰレベルが要求される癌の治療のための幅広い臨床上の利用を含む極めて重要な臨床的意義を有する。
ゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート又はその薬学上許容される塩又は溶媒和物とプラチナ系抗癌剤とを併用する治療において観察されるｄＦｄＣＴＰの半減期の増加は、多数の状況での癌の治療において利点を提供することが評価されるであろう。主要な利点は、この半減期の増大を提供する投薬の柔軟性に認められる。例えば、このような医学的用途は、効果的な治療レジメン（活性剤を使用する治療の発生が、現在使用されている治療よりも、頻度が少ない）を可能にする。単なる例とし示せば、本発明の治療は、数日間にわたる複数回の投与を要求するよりもむしろ、１日１回の治療で患者に提供される。適切な治療回数、例えば、このような１日１回の治療は、長期間の投与よりもむしろ、活性剤の比較的迅速な提供のみを必要とする（例えば、点滴による）。一緒に使用されるゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート及びプラチナ系抗癌剤は、患者に１日１回投与される薬として処方される（組み合わせて又は個々に）。この種の１日１回の投与のための薬は、再発した癌の治療にも有用である。
プラチナ系抗癌剤と併用してゲムシタビン−［フェニル（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］ホスフェートを使用する（組み合わせて又は連続して）本発明による治療は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごとの治療機会に使用される。実際、本発明による治療は、相互に、１週、２週、又は３週離れての治療機会に使用される。
【０１５３】
［実施例５］−単剤ゲムシタビン及びゲムシタビン／シスプラチン併用治療における、ＡＢＣ−０８治験において現在までに得られた重要な無増悪生存時点と、ＡＢＣ−０２治験における無増悪生存について確立された中央値時点との対比
ＡＢＣ−０２バックグラウンド：
ＡＢＣ−０２治験は、ゲムシタビン／シスプラチンの併用を、転移性胆道癌の治療において、ゲムシタビン単独と比べて、優れた治療標準として確立した。ゲムシタビン／シスプラチンを受けた患者についての無増悪生存の確立された中央値は８カ月であった。ゲムシタビンを単剤として受けた患者についての無増悪生存の確立された中央値は５カ月であった。（Ｖａｌｌｅ  Ｊ，  Ｗａｓａｎ  Ｈ，  Ｐａｌｍｅｒ  ＤＨら，２０１０）。
ＡＢＣ−０８対照：
ＡＢＣ−０８治験において現在までに得られた無増悪生存時点は、単剤ゲムシタビン及びゲムシタビン／シスプラチン併用療法の両方について確立された中央値を越えた。特別な実例を下記に示す。
患者０２：−ＮＵＣ−１０３１の用量が、３７５ｍｇ／ｍ２に６０％減少され、同時に、シスプラチンが２５％減少された。にもかかわらず、下記に詳述するように、彼女は、一連の腫瘍容積の持続した減少を示し続けた。
この患者は、９カ月の無増悪生存時点を達成し、進行中である。これは、ＡＢＣ−０８治験について、観察された最長の無増悪生存時点であり、今のところ、ＡＢＣ−０２治験によって確立された中央値を越えている。
この同一の患者は、複数の放射線評価において、持続した進行中の腫瘍容積の減少を示している。
３か月の時点でのスキャン：１７％の減少−不変
６か月の時点でのスキャン：２４％の減少−不変
９か月の時点でのスキャン：４１％の減少−部分奏功
患者０５：−５５歳、転移性胆道癌、開始時用量：６２５ｍｇ／ｍ２（Ｓ）−ＮＵＣ−１０３１＋２５ｍｇ／ｍ２シスプラチン
この患者は、５．５カ月の無増悪生存時点を達成し、現在、進行中であり、単剤ゲムシタビンを受けた患者について確立された５カ月の中央値無増悪生存時点を上回っている。
この同一の患者は、最初の放射線評価において、顕著な腫瘍容積の減少を示している。
３か月の時点でのスキャン：５４％の減少−部分奏功
これらの結果は個々の患者からのものであるが、本発明の併用に関する将来有望な臨床結果を表している。
【図１】
2019509253.tif 000016
【図２】
2019509253.tif 000017
【国際調査報告】
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2019509253.tif 000019
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