(57)【要約】  本発明は、以下の式(I)による構造を有することを特徴とする化合物、又はその製薬上許容される塩に関する。本発明の化合物は、HIVの治療又は予防に有用である。    【化１】2019502728.tif 000076【選択図】  なし
2019502728.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I：
【化１】
2019502728.tif 000075
(式中、
R1は、H又はC1-4アルキルであり；
L1は、結合、C1-8アルキレン、又はC0-3アルキレンC(O)C0-3アルキレンであり；
R2は、N(R3)R4、又は-OR3であり、各R3及びR4は、独立して、H、C1-3アルキル、C1-3アルキレン-C3-6シクロアルキル、C1-3アルキレン-C5-7ヘテロ環、C1-3アルキレンN(C1-3アルキル)2、C1-3アルキレンC5-7アリール、C(O)C5-7アリール、C(O)C1-4アルキル、C1-3アルキレンC5-7ヘテロアリールであり、各R3及びR4は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；又は
R2がN(R3)R4である場合、R3及びR4は共に結合し、それらが結合しているNと一緒になって4〜7員のヘテロ環を形成してもよく、前記ヘテロ環は、N、S、及びOから選択される1個の他のヘテロ原子を含んでいてもよく、前記S原子は2個以下のオキソ基で置換されていてもよく、前記ヘテロ環は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；
Vは、C4-8シクロアルキレン、C4-8シクロアルケニレン、C5-8アリール、又は5〜8員のヘテロアリール環であり、Vは、ハロゲン及びC1-3アルキル（該アルキルは、1個又は2個のハロゲンで置換されていてもよい）から独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；及び
Aは、-CO2C1-3アルキル又はCO2Hである)
で表される化合物、又はその製薬上許容される塩。
【請求項２】
R1がHである、請求項１に記載の化合物又は塩。
【請求項３】
L1が、C1-4アルキレン、C(O)、又はC(O)C1-4アルキレンである、請求項１又は２に記載の化合物又は塩。
【請求項４】
R2が、N(R3)(R4)である、請求項１〜３のいずれか1項に記載の化合物又は塩。
【請求項５】
R3及びR4が、独立して、C1-3アルキレンN(C1-3アルキル)2、又はC1-3アルキレンフェニルであり、各R3及びR4は、ハロゲン又はSO2C1-3アルキルから独立して選択される1個の置換基で置換されていてもよく；又はR3及びR4は、共に結合し、それらが結合しているNと一緒になって6員のヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環は1個のS原子を含んでいてもよく、前記S原子は2個のオキソ基で置換されていてもよく；各R3及びR4は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよい、請求項１〜４のいずれか1項に記載の化合物又は塩。
【請求項６】
Vが、ハロゲン又はC1-3アルキル（該アルキルは1個又は2個のハロゲンで置換されていてもよい）で場合により置換されているフェニレン又はシクロヘキセニレンである、請求項１〜５のいずれか1項に記載の化合物又は塩。
【請求項７】
Aが、-CO2Hである、請求項１〜６のいずれか1項に記載の化合物又は塩。
【請求項８】
塩が、塩基塩である、請求項１〜７のいずれか1項に記載の塩。
【請求項９】
塩が、リジン塩である、請求項８に記載の塩。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか1項に記載の化合物又は塩を含む医薬組成物。
【請求項１１】
ヒトにおけるHIV感染を治療する方法であって、請求項１０に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
HIV感染を発症するリスクを有する対象におけるHIV感染を予防する方法であって、請求項１０に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１３】
ヒトにおけるHIV感染の治療において使用するための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれか1項に定義される化合物又は塩の使用。
【請求項１４】
療法において使用するための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれか1項に定義される化合物又は塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連発明の相互参照
本出願は、2016年1月20日に出願された米国仮特許出願第62/28089号の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、化合物、医薬組成物、並びに(i) HIVに感染した対象でのHIV複製を阻害するための、又は(ii) HIVに感染した対象を治療するためのそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
1型ヒト免疫不全ウイルス(HIV-1)は、後天性免疫不全症候群(AIDS)の罹患を引き起こす。HIVの症例数は増加を続けており、現在世界中で2500万人を超える個体がこのウイルスに罹患している。現在、抗レトロウイルス薬を用いるウイルス複製の長期抑制がHIV-1感染治療の唯一の選択肢である。実際、米国食品医薬品局は、6種類の異なる阻害剤分類にわたり25種類の薬物を承認しており、それらは患者の生存率及び生活の質を大幅に高めることが示されている。しかしながら、望ましくない薬物-薬物相互作用；薬物-食品相互作用；療法の不遵守；及び酵素標的の突然変異による薬物耐性を原因として、別の療法が依然として必要とされている。
【０００４】
現在、ほとんどすべてのHIV陽性患者が、高活性抗レトロウイルス療法(「HAART」)と称される抗レトロウイルス薬組み合わせの治療レジメンを用いて治療される。しかしながら、薬物耐性HIV-1変異体の急速な出現を回避するために、患者に対して異なる薬物の組み合わせを毎日頻繁に投与しなければならないことから、HAART療法は多くの場合複雑である。HAARTは患者生存率に正の影響を与えるにもかかわらず、薬物耐性は依然として生じ得る。多剤耐性HIV-1分離株の出現は深刻な臨床的帰結を有し、サルベージ療法として知られる新たな薬物レジメンを用いて抑制しなければならない。
【０００５】
現行のガイドラインは、サルベージ療法が少なくとも2種類、好ましくは3種類の十分に活性の高い薬物を含むことを推奨している。典型的には、第一選択療法は、ウイルス酵素である逆転写酵素及びプロテアーゼを標的とする3〜4種類の薬物を組み合わせる。サルベージ療法の1つの選択肢は、耐性分離株に対する活性を維持する同じ作用機序クラスから選択される薬物の様々な組み合わせを投与することである。しかしながら、耐性変異は、同じクラスの異なる薬物に対する広範な交差耐性を頻繁に与えるため、このアプローチに対する選択肢は、多くの場合限られている。融合阻害剤、侵入阻害剤及びインテグラーゼ阻害剤の開発により、近年、代替的な療法戦略が利用できるようになった。しかしながら、3つの新たな薬物クラスすべてに対する耐性が研究室及び患者の両方で既に報告されている。したがって、抗レトロウイルス薬によるHIV-1感染患者の治療の成功を持続させるには、新たな標的及び作用機序を有する新規な改良された薬物の開発を継続する必要がある。
【０００６】
現在、抗レトロウイルス薬によるウイルス複製の長期抑制が、HIV-1感染を治療するための唯一の選択肢である。現在までのところ、多くの承認薬が、患者の生存率を大幅に高めることが示されている。しかしながら、薬物耐性HIV-1変異体の急速な出現を回避するために異なる薬物の組み合わせを患者に投与しなければならないことから、高活性抗レトロウイルス療法(HAART)として知られる治療レジメンは複雑である場合が多い。HAARTは患者の生存率に正の影響を与えるにもかかわらず、薬物耐性は依然として生じ得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
4つのタンパク質ドメインであるマトリックス(MA)、カプシド(CA)、ヌクレオカプシド(NC)及びp6、並びに2つのスペーサーペプチドSP1及びSP2から構成されるHIV Gagポリタンパク質前駆体(Pr55Gag)は、新たな治療標的である。Gagポリタンパク質の切断は、感染性ウイルス粒子産生の進行において中心的な役割を果たすが、今日までのところ、この機序に対する抗レトロウイルス薬は承認されていない。
【０００８】
ほとんどの細胞型では、原形質膜でアセンブリが起こり、GagのMAドメインが膜結合を媒介する。アセンブリは細胞からの未成熟粒子の出芽によって完了する。粒子放出と同時に、ウイルス的にコードされたPRがGagを切断し、4つの成熟タンパク質ドメインであるMA、CA、NC及びp6、並びに2つのスペーサーペプチドSP1及びSP2を生じさせる。Gag-PolもPRによって切断されて、ウイルス酵素PR、RT及びINを放出する。Gagタンパク質分解プロセシングにより、成熟(マチュレーション)として知られる粒子内の形態的再配列が誘導される。成熟によって、未成熟のドーナツ型粒子が、NCとの複合体としてのウイルスRNAゲノムを囲むCAシェル並びにウイルス酵素であるRT及びINから構成される凝縮した円錐形コアを含む成熟ビリオンに変換される。成熟は新たな細胞に感染するためのウイルスを作製し、粒子の感染性には絶対的に必要である。
【０００９】
ベビリマット(PA-457)は、Gagのプロセシングにおける最終段階である、感染性ウイルス粒子の形成に必要とされるカプシドへのカプシド-SP1(p25)の変換を阻害する成熟阻害剤である。ベビリマットは、ART耐性及び野生型HIVに対する活性を有し、全クラスから選択される抗レトロウイルス薬との相乗効果が示されている。ベビリマットは、≧20μg/mLのトラフ濃度に達し且つQ369、V370又はT371における主要なベースラインGag多型のいずれも有さない患者において、平均1.3 log10/mLだけHIVウイルス量を低下させた。しかしながら、Q369、V370又はT371にGag多型を有するベビリマットユーザーは、これらの部位にGag多型を有さない患者より有意に低いウイルス量低下を示した。
【００１０】
成熟阻害剤の他の例は、国際公開第2011/100308号、PCT特許出願第PCT/US2012/024288号、中国PCT出願第PCT/CN2011/001302号、同第PCT/CN2011/001303号、同第PCT/CN2011/002105号、同第PCT/CN2011/002159号、国際公開第2013/090664号、同第2013/123019号、同第2013/043778号、同第2014/123889号、同第2011/153315号、同第2011/153319号、同第2012/106188号、同第2012/106190号、同第2013/169578号、同第2014/13081号に見出すことができる。先行技術における成熟阻害剤は、長期耐久性試験におけるロバストな効力に必要とされる臨床的に重要なタンパク質に適合する抗ウイルス活性などの全体的な効力と共に広範囲の臨床的に重要なgag配列に対する効力が極めて重要である、多型範囲の領域におけるオープンギャップを残したままである。現在までのところ、これらの特性の最適なバランスを達成した成熟阻害剤はない。
【００１１】
したがって、HIV感染の予防及び/又は治療のための上記特性のバランスに効果的な代替的化合物を発見することが当技術分野における進歩であるだろう。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
簡潔に言えば、一態様において、本発明は、式I：
【００１３】
【化１】
2019502728.tif 000003
(式中、
R1は、H又はC1-4アルキルであり；
L1は、結合、C1-8アルキレン、又はC0-3アルキレンC(O)C0-3アルキレンであり；
R2は、N(R3)R4、又は-OR3であり、各R3及びR4は、独立して、H、C1-3アルキル、C1-3アルキレン-C3-6シクロアルキル、C1-3アルキレン-C5-7ヘテロ環、C1-3アルキレンN(C1-3アルキル)2、C1-3アルキレンC5-7アリール、C(O)C5-7アリール、C(O)C1-4アルキル、C1-3アルキレンC5-7ヘテロアリールであり、各R3及びR4は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；又は
R2がN(R3)R4である場合、R3及びR4は共に結合し、それらが結合しているNと一緒になって4〜7員のヘテロ環を形成してもよく、前記ヘテロ環は、N、S、及びOから選択される1個の他のヘテロ原子を含んでいてもよく、前記S原子は2個以下のオキソ基で置換されていてもよく、前記ヘテロ環は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；
Vは、C4-8シクロアルキレン、C4-8シクロアルケニレン、C5-8アリール、又は5〜8員のヘテロアリール環であり、Vは、ハロゲン及びC1-3アルキル（該アルキルは、1個又は2個のハロゲンで置換されていてもよい）から独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよく；及び
Aは、-CO2C1-3アルキル又はCO2Hである)
で表される化合物、又はその製薬上許容される塩を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物又は塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、(i) HIVに感染した対象におけるHIV複製を阻害する方法、(ii) HIVに感染した対象を治療する方法、又は(iii) HIV感染のリスクを有する対象におけるHIV感染を予防する方法を提供する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、療法において、また特にヒト用医薬において使用するための、本発明の化合物又は塩を提供する。
【００１７】
別の態様において、本発明は、(i) HIVに感染した対象におけるHIV複製を阻害するため、(ii) HIVに感染した対象を治療するため、又は(iii) HIV感染のリスクを有する対象におけるHIV感染を予防するための医薬の製造のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００１８】
代表的な実施形態の詳細な説明
好ましくは、R1はHである。
【００１９】
好ましくは、L1は、C1-4アルキレン、C(O)、又はC(O)C1-3アルキレンである。
【００２０】
好ましくは、R2は、N(R3)(R4)である。
【００２１】
好ましくは、R3及びR4は、独立して、C1-3アルキレンN(C1-3アルキル)2、又はC1-3アルキレンフェニルであり、各R3及びR4は、ハロゲン又はSO2C1-3アルキルから独立して選択される1個の置換基で置換されていてもよく；又はR3及びR4は、共に結合し、それらが結合しているNと一緒になって6員のヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環は1個のS原子を含んでいてもよく、前記S原子は2個のオキソ基で置換されていてもよく；各R3及びR4は、ハロゲン、C1-4アルキル、SO2C1-3アルキルから独立して選択される1個又は2個の置換基で置換されていてもよい)。
【００２２】
好ましくは、Vは、ハロゲン又はC1-3アルキルで場合により置換されているフェニレン又はシクロヘキセニレンであり、前記アルキルは、1個又は2個のハロゲンで置換されていてもよい。
【００２３】
好ましくは、Aは-CO2Hである。
【００２４】
好ましくは、本発明の方法において、対象はヒトである。
【００２５】
製薬上許容される塩は、当技術分野で周知の様々な有機及び無機の対イオンから誘導することが可能であり、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びテトラアルキルアンモニウムなどが挙げられ、分子が塩基性官能基を含有する場合は、有機酸又は無機酸の塩(例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、リジン、及びシュウ酸塩)などが挙げられる。好適な塩としては、例えば、P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth(編), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use；2002に記載されている塩が挙げられる。
【００２６】
本発明は、薬理学的増強剤(pharmacological enhancer)として有用な1つ以上の薬剤と組み合わせて、またHIVの予防又は治療のためのさらなる化合物と組み合わせて又は組み合わせずに使用することができる。このような薬理学的増強剤(又は薬物動態学的ブースター(pharmakinetic booster))の例としては、限定するものではないが、リトナビル及びコビシスタット(以前はGS-9350)などが挙げられる。
【実施例】
【００２７】
以下の実施例は、上記の本発明を作製及び使用する方法を、さらに十分に説明する役割を果たす。これらの実施例は、決して本発明の真の範囲を制限するものではなく、むしろ例示の目的で示されることが理解される。以下の実施例及び上記の合成スキームにおいて、下記の略号は右記の意味を有する。略号が定義されていない場合、その略号は一般に認められている意味を有する。
【００２８】
【表１】
2019502728.tif 000004
2019502728.tif 000005
【００２９】
機器の説明
1H NMRスペクトルは、Bruker Ascend 400分光計で記録した。化学シフトは、百万分率(ppm、δ単位)で表わされる。結合定数はヘルツ(Hz)単位で表わされる。分裂パターンは、見かけの多重度を示しており、s(シングレット(一重線))、d(ダブレット(二重線))、t(トリプレット(三重線))、q(カルテット(四重線))、quint(クインテット(五重線))、m(マルチプレット(多重線))、br(ブロード(広幅))と表わされる。
【００３０】
分析用低分解能質量スペクトル(MS)は、グラジエント溶出法により、Waters BEH C18、2.1×50mm、1.7μmを用いる、SQ Detectorを備えたWaters ACQUITY UPLCで記録した:
溶媒A:0.1％ギ酸(FA)(水中)；
溶媒B:0.1％FA(アセトニトリル中)；
30％Bで0.5分間の後、30％〜100％Bで2.5分間。
【００３１】
スキーム及び実験手順
以下のスキーム及び手順は、本発明の化合物を調製することができる方法を説明する。言及される特定の溶媒及び反応条件も例示であって、限定することを意図するものではない。記載されていない化合物は、市販されているか、又は入手可能な出発材料を用いて当業者によって容易に調製される。本明細書中に開示される実施例は、単に例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定することを意図しない。すべての実施例は、本明細書中に開示されるアッセイを用いて、21μM〜1nMのLHIV IC50値を示した。
【００３２】
実施例の幾つかについては、C28第2級アルコールの立体化学は、存在する場合、その絶対配置について明確には確認されなかった。特に明記しない限り、本明細書中に例示される化合物は、光学的に純粋な立体異性体として単離され、図示されるような立体配置に最初に割り当てられた。これらのうちの一部は、その単一のC28位における、図示されるのとは逆の立体化学として挙げらる可能性がある。これは決して、本発明の範囲、又は式Iの化合物の有用性を限定することを意味するものではない。本明細書中に含まれるさらなる実施例は、当業者に周知の分光学的方法(例えば、限定するものではないが、1D及び2D NMR法、振動円二色性、及びX線結晶学など)によって、図示される立体配置を有すると決定された。これらの実施例及び両方のジアステレオマーを作製する方法は、C28位におけるR及びS配置の両方の純粋な立体異性体が、容易に得られ、分離され、さらに特性決定されることを明確に例証する役割を果たすべきであり、任意の残りの規定されない実施例は、当業者に周知の同様の方法により、容易に確認することができた。
【００３３】
【化２】
2019502728.tif 000006
【００３４】
ステップA：中間体1：(3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-ヒドロキシ-3a-(ヒドロキシメチル)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-オクタデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-2-オン
【００３５】
【化３】
2019502728.tif 000007
【００３６】
中間体1A、WO2013/090664(40g、74mmol)及びKOH(16.6g、296mmol)のEtOH(200mL)及びトルエン(200mL)中混合物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を6N HClで中和し、減圧で濃縮して揮発性物質を除去した。残渣をDCMとH2Oとの間で分配し、層を分離させた。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して中間体1を得て(27.4g、81％収率)、これをさらなる精製をせずに次のステップで直接用いた。LC/MS：m/z計算値456.4、実測値457.5(M+1)+。
【００３７】
ステップB：中間体2：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2,9-ジオキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-オクタデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-3a-カルバルデヒド
【００３８】
【化４】
2019502728.tif 000008
【００３９】
中間体1(1g、2.2mmol)及びPCC(940mg、4.4mmol)のDCM(20mL)中混合物を、室温で一晩撹拌した。得られた混合物をDCMで希釈し、セライトのパッドを通してろ過した。濾液を減圧下で濃縮して生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30％EtOAc)により精製し、中間体2が白色固体として得られた(398mg、40％収率)。LC/MS：m/z計算値452.3、実測値453.5(M+1)+。
【００４０】
ステップC：中間体3：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2,9-ジオキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-オクタデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-3a-カルボン酸
【００４１】
【化５】
2019502728.tif 000009
【００４２】
中間体2(3g、6.6mmol)、NaH2PO4(4.8g、40mmol)、NaClO2(3.6g、40mmol)のt-BuOH(20mL)、H2O(30mL)、及びTHF(25mL)中混合物を、イソブチン(15mL)で処理した。室温で2時間撹拌した後、得られた混合物をH2Oで希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を、飽和Na2S2O3及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜50％EtOAc)により精製し、中間体3が白色固体として得られた(2.3g、74％収率)。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 10.37(br, 1H), 3.27 - 3.15(m, 1H), 2.79(dd, J = 12.7, 3.0 Hz, 1H), 2.66 - 2.41(m, 4H), 2.22(d, J = 18.7 Hz, 1H), 2.09 - 1.86(m, 4H), 1.65 - 1.21(m, 18H), 1.11 - 0.96(m, 14H)。LC/MS：m/z計算値468.3、実測値469.4(M+1)+。
【００４３】
ステップD：中間体4：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,10,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-2,9(3H)-ジオン
【００４４】
【化６】
2019502728.tif 000010
【００４５】
中間体3(600mg、1.28mmol)及びTEA(0.21mL、1.53mmol)のトルエン(6mL)中溶液に、DPPA(422mg、1.53mmol)を加えた。反応を室温で30分間撹拌し、その後減圧下で濃縮した。残渣をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗アシルアジド中間体を得て、これをトルエン(10mL)に溶解し、80℃で30分間加熱してイソシアネート(isocyante)を得た。得られた混合物を濃縮し、残渣をDCM(5mL)中濃HCl(5mL)で処理した。混合物を室温で一晩撹拌し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをEtOH中で粉砕し、ろ過後に中間体4が白色固体として得られた(278mg、49％収率)。LC/MS：m/z計算値439.4、実測値440.3(M+1)+。
【００４６】
ステップE：中間体5：tert-ブチル((3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2,9-ジオキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-オクタデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-3a-イル)カルバメート
【００４７】
【化７】
2019502728.tif 000011
【００４８】
中間体4(2g、4.5mmol)のジオキサン(20mL)及び1N NaOH(9mL)中溶液に、Boc2O(1.7g、7.7mmol)を加えた。反応を室温で一晩撹拌し、次いで1N HClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜50％EtOAc/PE)により精製し、中間体5が白色固体として得られた(1.9g、77％収率)。LC/MS：m/z計算値539.4、実測値540.4(M+1)+。
【００４９】
ステップF：中間体6：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イルトリフルオロメタンスルホネート
【００５０】
【化８】
2019502728.tif 000012
【００５１】
-78℃にて、中間体5(1.6g、3.0mmol)の無水THF(16mL)中溶液に、K-HMDS(1M、13.5mL、13.5mmol)をN2雰囲気下で滴下添加した。反応を-78℃で2時間撹拌し、次いでPhNTf2(1.3g、3.7mmol)の無水THF(8mL)中溶液を滴下添加した。反応を-78℃でさらに2時間撹拌し、ゆっくりと室温に温めた。得られた混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜15％EtOAc)により精製し、中間体6が白色固体として得られた(1.5g、75％収率)。LC/MS：m/z計算値671.4、実測値672.3(M+1)+。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 5.59(dd, J = 6.7, 1.9 Hz, 1H), 4.60(s, 1H), 3.12(dt, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 2.90(d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.66(d, J = 18.6 Hz, 1H), 2.37 - 2.20(m, 3H), 2.06 - 1.80(m, 5H), 1.58 - 1.40(m, 17H), 1.29 - 1.13(m, 14H), 1.05 - 0.91(m, 8H)。
【００５２】
中間体8の合成。
【００５３】
【化９】
2019502728.tif 000013
【００５４】
ステップA：中間体7：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレート
【００５５】
【化１０】
2019502728.tif 000014
【００５６】
中間体6(50mg、0.07mmol)、エチル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(22mg、0.08mmol)、テトラキス(5mg、0.0037mmol)及びNa2CO3(24mg、0.22mmol)のジオキサン(2mL)及びH2O(0.5mL)中混合物を、N2で3回パージした。混合物を85℃で4時間加熱し、得られた混合物を、セライトのパッドを通してろ過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0-15％EtOAc/PE)により精製し、中間体7が白色固体として得られた(45mg、89％収率)。LC/MS：m/z計算値675.5、実測値676.4(M+1)+。
【００５７】
ステップB：中間体8：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレートトリフルオロ酢酸塩
【００５８】
【化１１】
2019502728.tif 000015
【００５９】
中間体7(70mg、0.10mmol)のTFA(2mL)及びDCM(2mL)中溶液を室温で2.5時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し、中間体8を白色固体として得て(定量的収率)、これを精製せずに次のステップで使用した。LC/MS：m/z計算値575.4、実測値576.4(M+1)+。
【００６０】
実施例1(化合物10)：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3a-((2-(4-(メチルスルホニル)ピペリジン-1-イル)エチル)アミノ)-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００６１】
【化１２】
2019502728.tif 000016
【００６２】
ステップA：中間体9：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3a-((2-(4-(メチルスルホニル)ピペリジン-1-イル)エチル)アミノ)-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレート
【００６３】
【化１３】
2019502728.tif 000017
【００６４】
中間体8(35mg、0.06mmol)、1-(2-クロロエチル)-4-(メチルスルホニル)ピペリジン(55mg、0.12mmol)及びK3PO4(64mg、0.3mmol)の無水MeCN(1.0mL)中混合物を100℃に加熱し、N2雰囲気下で一晩撹拌した。得られた混合物をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜5％MeOH/DCM)により精製し、中間体9が黄色油状物として得られた(16mg、35％収率)。LC/MS：m/z計算値764.5、実測値765.5(M+1)+。
【００６５】
ステップB：化合物10(実施例1：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3a-((2-(4-(メチルスルホニル)ピペリジン-1-イル)エチル)アミノ)-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００６６】
【化１４】
2019502728.tif 000018
【００６７】
中間体9(16mg、0.02mmol)のジオキサン(1mL)及び1N NaOH(0.1mL)中混合物を、75℃で一晩撹拌した。反応を冷却し、次いでEtOAcで希釈し、1N HClでpH=3〜4に酸性化した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを逆相クロマトグラフィー(5〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、化合物10が得られた(4.4mg、30％収率)。LC/MS：m/z計算値736.5、実測値737.4(M+1)+。1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 8.23(s, 1H), 5.50 - 5.16(m, J = 91.8, 40.0 Hz, 2H), 3.23 - 2.76(m, 8H), 2.50 - 0.71(m, 57H)。
【００６８】
実施例2(化合物12)：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００６９】
【化１５】
2019502728.tif 000019
【００７０】
ステップA：中間体11：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレート
【００７１】
【化１６】
2019502728.tif 000020
【００７２】
中間体8(35mg、0.06mmol)、4-(2-クロロエチル)チオモルホリン1,1-ジオキシド(18mg、0.1mmol)及びK3PO4(64mg、0.3mmol)の無水MeCN(2.0mL)中混合物を100℃に加熱し、N2雰囲気下で一晩撹拌した。得られた混合物をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜5％MeOH/DCM)により精製し、中間体11が黄色油状物として得られた(8mg、18％収率)。LC/MS：m/z計算値736.5、実測値737.5(M+1)+。
【００７３】
ステップB：化合物12：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００７４】
【化１７】
2019502728.tif 000021
【００７５】
中間体11(8mg、0.01mmol)のジオキサン(1mL)及び1N NaOH(0.05mL)中混合物を、75℃で一晩撹拌した。反応を室温に冷却し、EtOAcで希釈し、次いで1N HClでpH=3〜4に酸性化した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを逆相クロマトグラフィー(5〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、化合物12が白色粉末として得られた(5mg、65％収率)。LC/MS：m/z計算値708.5、実測値709.3(M+1)+。1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 8.33(s, 1H), 5.55 - 5.13(m, J = 91.5, 40.0 Hz, 2H), 3.18 - 3.00(m, J = 16.2 Hz, 6H), 2.99 - 2.83(m, 4H), 2.50 - 0.71(m, 51H)。
【００７６】
中間体15の合成。
【００７７】
【化１８】
2019502728.tif 000022
【００７８】
ステップA：中間体13：tert-ブチル(2-(ジメチルアミノ)エチル)カルバメート
【００７９】
【化１９】
2019502728.tif 000023
【００８０】
N1,N1-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(2g、23mmol)のDCM(30mL)中溶液を、Boc2O(5.9g、27mmol)で処理した。室温で1時間撹拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜10％MeOH/DCM)により精製し、中間体13が無色油状物として得られた(4.2g、98％収率)。LC/MS：m/z計算値188.2、実測値189.2(M+1)+。
【００８１】
ステップB：中間体14：tert-ブチル4-クロロベンジル(2-(ジメチルアミノ)エチル)カルバメート
【００８２】
【化２０】
2019502728.tif 000024
【００８３】
0℃にて、中間体13(1g、5.3mmol)のDMF(20mL)中溶液に、NaH(60％、255mg、6.4mmol)を加えた。得られた混合物を室温で1時間撹拌し、次いで1-(ブロモメチル)-4-クロロベンゼン(1.4g、6.9mmol)で処理した。室温で30分間撹拌した後、反応混合物を飽和NH4Clでクエンチし、EtOAcで抽出した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して中間体14を得て、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。LC/MS：m/z計算値312.2、実測値313.2(M+1)+。
【００８４】
ステップC：中間体15：N1-(4-クロロベンジル)-N2,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン二塩酸塩
【００８５】
【化２１】
2019502728.tif 000025
【００８６】
中間体14を、ジオキサン(10mL)中4N HClで処理した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これをエーテルで粉砕し、ろ過して中間体15が白色固体として得られた(600mg、2段階にわたる収率40％、2HCl塩)。1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 11.10(s, 1H), 10.05(s, 2H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.51(d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.20(s, 2H), 3.56 - 3.39(m, 4H), 2.83(s, 6H)。LC/MS：m/z計算値212.1、実測値213.2(M+1)+。
【００８７】
実施例3(化合物18)：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００８８】
【化２２】
2019502728.tif 000026
【００８９】
ステップA：中間体16：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-クロロエチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレート
【００９０】
【化２３】
2019502728.tif 000027
【００９１】
中間体8(860mg、1.5mmol)及びK3PO4(1.9g、9.0mmol)の1-ブロモ-2-クロロエタン(8mL)及び無水MeCN(1mL)中懸濁液を、N2雰囲気下で100℃にて一晩撹拌した。反応を室温に冷却し、DCMとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜50％EtOAc/PE)により精製し、中間体16が白色固体として得られた(200mg、21％収率)。LC/MS：m/z計算値637.4、実測値638.8(M+1)+。
【００９２】
ステップB：中間体17：エチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボキシレート
【００９３】
【化２４】
2019502728.tif 000028
【００９４】
中間体16(200mg、0.31mmol)、中間体15(167mg、0.78mmol)及びK3PO4(532mg、2.5mmol)の無水MeCN(4mL)中懸濁液を、N2雰囲気下で100℃にて一晩撹拌した。反応を室温に冷却し、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜10％MeOH/DCM)により精製し、中間体17が白色固体として得られた(83mg、32％収率)。LC/MS：m/z計算値813.6、実測値814.9(M+1)+。
【００９５】
ステップC：化合物18：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)シクロヘキサ-3-エネカルボン酸
【００９６】
【化２５】
2019502728.tif 000029
【００９７】
中間体17(80mg、0.1mmol)のジオキサン(1mL)及び1N NaOH(1mL)中混合物を、75℃で一晩撹拌した。反応を室温に冷却し、EtOAcで希釈し、次いで1N HClでpH=3〜4に酸性化した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを逆相クロマトグラフィー(60〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、化合物18が白色粉末として得られた(18mg、23％収率)。LC/MS：m/z計算値785.5、実測値786.9(M+1)+。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.30 - 7.19(m, 4H), 5.37(s, 1H), 5.21(d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.67 - 3.52(m, J = 7.3 Hz, 2H), 3.42 - 3.39(m, 1H), 3.20 - 3.10(m, 1H), 2.95(d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.61 - 0.91(m, 59H)。
【００９８】
中間体20の合成。
【００９９】
【化２６】
2019502728.tif 000030
【０１００】
ステップA：中間体19：メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１０１】
【化２７】
2019502728.tif 000031
【０１０２】
中間体6(1.5g、2.2mmol)、(4-(メトキシカウボニル)フェニル)ボロン酸(603mg、3.3mmol)、テトラキス(516mg、0.44mmol)及びNa2CO3(710mg、6.7mmol)のジオキサン(10mL)及びH2O(2.5mL)中混合物を、N2で3回パージした。反応を85℃で一晩撹拌し、室温に冷却し、セライトのパッドを通してろ過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜40％EtOAc/PE)により精製し、中間体19が白色固体として得られた(700mg、48％収率)。LC/MS：m/z計算値657.4、実測値658.8(M+1)+。
【０１０３】
ステップB：中間体20：メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート塩酸塩
【０１０４】
【化２８】
2019502728.tif 000032
【０１０５】
中間体19(700mg、1.1mmol)の4N HCl/ジオキサン(7mL)及びDCM(7mL)中混合物を、室温で一晩撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し、中間体20が白色固体として得られ(873mg、定量的収率)、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。LC/MS：m/z計算値557.4、実測値558.7(M+1)+。
【０１０６】
実施例4(化合物21)：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸塩酸塩塩
【０１０７】
【化２９】
2019502728.tif 000033
【０１０８】
表題化合物の化合物21を、中間体20を用いて実施例3と同様の方法で作成した。粗生成物を逆相クロマトグラフィー(50〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、その後数滴のジオキサン中HClで処理し、化合物21が白色粉末として得られた(32mg、36％収率)。LC/MS：m/z計算値781.5、実測値782.7(M+1)+。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.94(d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.32 - 7.13(m, J = 24.7, 16.6, 8.3 Hz, 6H), 5.32(d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.61(q, J = 13.7 Hz, 2H), 3.27 - 3.07(m, 10H), 3.01 - 2.57(m, 7H), 2.47 - 0.94(m, 38H)。
【０１０９】
実施例5(化合物22)：4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸塩酸塩
【０１１０】
【化３０】
2019502728.tif 000034
【０１１１】
表題化合物の化合物22を、中間体20を用いて実施例2と同様の方法で作成した。粗生成物を逆相クロマトグラフィー(50〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、その後数滴のジオキサン中HClで処理し、化合物22が白色粉末として得られた(31mg、45％収率)。LC/MS：m/z計算値704.4、実測値705.2(M+1)+。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.96(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.21(d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.32(d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.47 - 3.15(m, 10H), 2.69 - 0.90(m, 43H)。
【０１１２】
中間体24の合成。
【０１１３】
【化３１】
2019502728.tif 000035
【０１１４】
ステップA：中間体23：tert-ブチル2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)アセテート
【０１１５】
【化３２】
2019502728.tif 000036
【０１１６】
チオモルホリン1,1-ジオキシド(500mg、3.7mmol)、tert-ブチル2-ブロモアセテート(1.1g、5.5mmol)、K3PO4(2.5g、1.07mmol)の無水MeCN(5mL)中混合物を、N2雰囲気下で85℃にて一晩撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜50％EtOAc/PE)により精製し、中間体23が無色油状物として得られた(485mg、53％収率)。LC/MS：m/z計算値249.1、実測値250.4(M+1)+。
【０１１７】
ステップB：中間体24：2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)酢酸塩酸塩塩
【０１１８】
【化３３】
2019502728.tif 000037
【０１１９】
中間体23(485mg、1.9mmol)の4N HCl/ジオキサン(5mL)及びDCM(5mL)中混合物を、室温で一晩撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮して中間体24を白色固体として得て(432mg、定量的収率)、これをさらに精製することなく使用した。LC/MS：m/z計算値193.0、実測値194.0(M+1)+。
【０１２０】
実施例6(化合物26)：4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸塩酸塩塩
【０１２１】
【化３４】
2019502728.tif 000038
【０１２２】
ステップA：中間体25：メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１２３】
【化３５】
2019502728.tif 000039
【０１２４】
中間体20(100mg、0.18mmol)、中間体24、HBTU(104mg、0.27mg)及びDIPEA(0.23mL、1.25mmol)のDCM(2mL)中混合物を、室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、DCMとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(0〜10％MeOH/DCM)により精製し、中間体25が白色固体として得られた(70mg、53％収率)。LC/MS：m/z計算値732.4、実測値733.5(M+1)+。
【０１２５】
ステップB：化合物26：4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸塩酸塩塩
【０１２６】
【化３６】
2019502728.tif 000040
【０１２７】
表題化合物の化合物26を、中間体25(100mg、0.14mmol)を用いて、実施例1のステップBと同様の方法で作成した。粗残渣を逆相クロマトグラフィー(50〜100％MeCN/H2O+0.1％FA)により精製し、数滴のジオキサン中HClで処理し、化合物26が白色粉末として得られた(37mg、38％収率)。LC/MS：m/z計算値718.4、実測値719.2(M+1)+。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.96(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.21(d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.33(d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.40(m, 8H), 3.19(dt, J = 13.9, 6.9 Hz, 1H), 2.90 - 2.79(m, 1H), 2.66(d, J = 18.4 Hz, 1H), 2.34 - 0.89(m, 40H)。
【０１２８】
実施例7(化合物29)
【０１２９】
【化３７】
2019502728.tif 000041
【０１３０】
ステップA：中間体27：メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-イソシアナト-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１３１】
【化３８】
2019502728.tif 000042
【０１３２】
0℃にて、メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a, 5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(120mg、0.215mmol)及びDIPEA(0.095mL、0.538mmol)のTHF(1.2mL)中溶液に、トリホスゲン(127mg、0.43mmol)を加えた。室温で1時間撹拌した後、得られた混合物をH2Oでクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜10％EtOAc)により精製し、表題化合物が白色固体として得られた(91mg、72％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 584.3。
【０１３３】
ステップB：中間体28：メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(3-(4-クロロベンジル)-3-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ウレイド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１３４】
【化３９】
2019502728.tif 000043
【０１３５】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-イソシアナト-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(91mg、0.156mmol)、N1-(4-クロロベンジル)-N2,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(133mg、0.468mmol)及びDIPEA(0.21mL、1.25mmol)のTHF(1mL)中溶液を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が白色固体として得られた(70mg、57％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 796.5/798.5。
【０１３６】
ステップC：化合物29：4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(3-(4-クロロベンジル)-3-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ウレイド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸
【０１３７】
【化４０】
2019502728.tif 000044
【０１３８】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(3-(4-クロロベンジル)-3-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ウレイド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(70mg、0.088mmol)の1N NaOH(0.88mL)及びジオキサン(1mL)中混合物を、75℃で1.5時間撹拌した。得られた混合物を、1N HClでpH3〜4に酸性化し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをHPLC(C18、H2O中50〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製し、凍結乾燥後に、表題化合物が白色粉末として得られた(LCMSにより回収された画分に数滴のジオキサン中HClを加えてHCl塩を得た)(38mg、53％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 782.4/784.4。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.95(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.37(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.20(t, J = 8.9 Hz, 4H), 5.32(d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.60(dd, J = 59.7, 17.4 Hz, 2H), 4.05 - 3.91(m, 1H), 3.68(dd, J = 14.1, 7.0 Hz, 1H), 3.60 - 3.48(m, 1H), 3.42 - 3.34(m, 2H), 3.29 - 3.11(m, 3H), 2.95 - 2.59(m, 8H), 2.40 - 0.52(m, 35H)。
【０１３９】
実施例8(化合物33)
【０１４０】
【化４１】
2019502728.tif 000045
【０１４１】
ステップA：中間体30：エチルN-(4-クロロベンジル)-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)グリシネート
【０１４２】
【化４２】
2019502728.tif 000046
【０１４３】
N1-(4-クロロベンジル)-N2,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(800mg、3.76mmol)、エチル2-オキソアセテート(50％トルエン溶液、422mg、4.14mmol)及びNaBH3CN(331mg、5.27mmol)のDCE(8mL)中混合物を、室温で4時間撹拌した。得られた混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、DCM/i-PrOH(85:15)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色油状物として得て(200mg、18％収率)、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 299.3/301.4。
【０１４４】
ステップB：中間体31：N-(4-クロロベンジル)-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)グリシン
【０１４５】
【化４３】
2019502728.tif 000047
【０１４６】
エチルN-(4-クロロベンジル)-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)グリシネート(200mg、0.67mmol)の10N NaOH(0.67mL、6.7mmol)及びジオキサン(1mL)中混合物を、120℃で一晩撹拌した。得られた混合物を1N HClで中和し、減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、H2O中0〜100％MeOHと0.3％ギ酸)により精製し、表題化合物が無色油状物として得られた(65mg、36％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 271.2/273.1。
【０１４７】
ステップC：中間体32：メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１４８】
【化４４】
2019502728.tif 000048
【０１４９】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a- ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(60mg、0.108mmol)、N-(4-クロロベンジル)-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)グリシン(116mg、0.43mmol)、HBTU(61mg、0.16mmol)及びDIPEA(76.3mg、0.592mmol)のDCM(1mL)中混合物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、DCMとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が白色固体として得られた(60mg、69％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 810.5/812.5。
【０１５０】
ステップC：化合物33：4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸
【０１５１】
【化４５】
2019502728.tif 000049
【０１５２】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,11aS)-3a-(2-((4-クロロベンジル)(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミノ)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(60mg、0.074mmol)の2.5N LiOH(1mL)及びジオキサン(1mL)中混合物を、75℃で2.5時間撹拌した。得られた混合物を、1N HClでpH3〜4に酸性化し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをHPLC(C18、H2O中50〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製し、凍結乾燥後に、表題化合物が白色粉末として得られた(LCMSにより回収された画分に数滴のジオキサン中HClを加えてHCl塩を得た)(8.2mg、14％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 796.5/798.4。1H NMR(400 MHz、CDCl3と数滴のMeOD) δ 7.95(d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.60(d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.41(d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.21(d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.32(d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.30(s, 2H), 4.15 - 3.27(m, 8H), 3.18(dt, J = 14.1, 7.2 Hz, 1H), 2.84(s, 6H), 2.63 - 2.32(m, 6H), 2.18 - 0.95(m, 32H)。
【０１５３】
実施例9(化合物37)
【０１５４】
【化４６】
2019502728.tif 000050
【０１５５】
ステップA：中間体34：4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド
【０１５６】
【化４７】
2019502728.tif 000051
【０１５７】
0℃にて、4-クロロ安息香酸(1g、6.4mmol)のDCM(20mL)中溶液に、塩化オキサリル(10mL)及びDMF(1滴)を加えた。室温まで温めて30分間撹拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮して粗塩化アシルを得て、これをDCM(10mL)で希釈し、N1,N1-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(0.62g、7.0mmol)及びTEA(0.97g、9.6mmol)のDCM中予冷溶液に導入した。室温で2時間撹拌した後、得られた混合物を飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをISCO(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、4-クロロベンジルクロリドが黄色油状物として得られた(1.3g、90％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 227.3/229.3。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.73(d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.39(d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.83(s, 1H), 3.50(dd, J= 11.3, 5.4 Hz, 2H), 2.59 - 2.47(m, 2H), 2.27(s, 6H)。
【０１５８】
ステップB：中間体35：2-(4-c]クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)酢酸
【０１５９】
【化４８】
2019502728.tif 000052
【０１６０】
0℃にて、4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド(1.3g、5.75mmol)のTHF(20mL)中溶液に、NaH(277mg、6.9mmol)を加えた。得られた混合物を室温まで温めて30分間撹拌し、その後tert-ブチル2-ブロモアセテート(1.24g、6.3mmol)を加えた。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを逆相クロマトグラフィー(C18、H2O中0〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製し、tert-ブチル2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセテートが得られ、これをDCM(10mL)に溶解させ、TFA(5mL)で処理して、2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)酢酸を淡黄色固体として得た(280mg、17％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 285.0/287.0。1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 7.49(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39(d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.83 - 3.73(m, 2H), 3.67(s, 2H), 3.25 - 3.11(m, J = 6.7, 3.7 Hz, 2H), 2.71(s, 6H)(酸プロトンは観察されなかった)。
【０１６１】
ステップC：中間体36：メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-(2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート
【０１６２】
【化４９】
2019502728.tif 000053
【０１６３】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(80mg、0.14mmol)、2-(4-c]クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)酢酸(100mg、0.35mmol)、HBTU(250mg、0.65mmol)及びDIPEA(270mg、2.1mmol)のDCM(5mL)及びDMF(2mL)中混合物を、40℃で一晩撹拌した。得られた混合物を飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをISCO(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-(2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエートが淡黄色固体として得られた(40mg、34％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 824.2/826.4。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.94(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.69(s, 1H), 7.51 - 7.33(m, 4H), 7.21(d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.38 - 5.23(m, 3H), 4.20 - 3.95(m, J = 15.6 Hz, 2H), 3.91(s, 3H), 3.71 - 3.57(m, 1H), 3.56 - 3.36(m, 1H), 3.23 - 3.03(m, 2H), 2.63 - 1.00(m, 45H)。
【０１６４】
ステップD：化合物37：4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-(2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸
【０１６５】
【化５０】
2019502728.tif 000054
【０１６６】
メチル4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-(2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)ベンゾエート(40mg、0.05mmol)の2.5N LiOH(0.4mL)及びジオキサン(2mL)中混合物を、60℃で2時間撹拌した。得られた混合物を、1N HClでpH6〜7に酸性化し、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを逆相クロマトグラフィー(C18、H2O中0〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製し、4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-(2-(4-クロロ-N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ベンズアミド)アセトアミド)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)安息香酸が白色粉末として得られた(20mg、51％収率)。数滴のジオキサン中4N HClを、HPLCにより回収された画分に加え、対応するHCl塩を得た。LC-MS(ESI)：m/z(M/M+2) = 810.5/812.4。1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 7.93(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.47(dd, J = 26.7, 8.2 Hz, 4H), 7.24(d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.34(d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.21 - 3.87(m, 4H), 3.44 - 3.34(m, 2H), 3.28 - 3.20(m, 1H), 2.99(d, J = 9.1 Hz, 6H), 2.80 - 2.44(m, 3H), 2.38 - 2.15(m, 3H), 2.04 - 0.96(m, 34H)。
【０１６７】
実施例10(化合物51)
【０１６８】
【化５１】
2019502728.tif 000055
【０１６９】
ステップA：エチル1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート
【０１７０】
【化５２】
2019502728.tif 000056
【０１７１】
エチル4-オキソシクロヘキサン-1-カルボキシレート(62g、0.36mol)、エタン-1,2-ジオール(22.3mL、0.4mol)及びp-TsOH(0.7g、3.6mmol)のトルエン中混合物を、ディーン・スターク・ウォーター・トラップ(Dean-Stark water trap)及び凝縮器(condenser)で24時間加熱還流した。室温に冷却した後、得られた混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO3水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜20％EtOAc)により精製し、表題化合物が無色油状物として得られた(70g、91％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 215.05。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 4.13(q, J= 7.1 Hz, 2H), 3.94(s, 4H), 2.38 - 2.28(m, 1H), 1.99 - 1.89(m, 2H), 1.86 - 1.70(m, 4H), 1.63 - 1.50(m, 2H), 1.25(t, J= 7.1 Hz, 3H)。
【０１７２】
ステップB：エチル8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート
【０１７３】
【化５３】
2019502728.tif 000057
【０１７４】
-78℃にて、エチル1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート(70g、326mmol)の無水THF(700mL)中溶液に、LDA(THF中2M、196mL、391mmol)を、N2雰囲気下で内部温度を-60℃未満に維持しながら加えた。混合物を-78℃で30分間撹拌し、その後パラホルムアルデヒド(14.8g、490mmol)を1回で加えた。室温で一晩撹拌した後、得られた混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜40％EtOAc)により精製し、表題化合物が無色油状物として得られた(54g、68％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 245.23。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 4.20(q, J= 7.1 Hz, 2H), 3.94(t, J = 2.7 Hz, 4H), 3.64(d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.19 - 2.11(m, J = 9.5, 3.8 Hz, 2H), 2.04(t, J = 6.4 Hz, 1H), 1.69 - 1.52(m, 6H), 1.28(t, J= 7.1 Hz, 3H)。
【０１７５】
ステップC：8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボン酸
【０１７６】
【化５４】
2019502728.tif 000058
【０１７７】
エチル8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート(54g、221mmol)のTHF(320mL)及びMeOH(105mL)中溶液に、LiOH(3N水溶液、147mL、441mmol)を加えた。60℃で一晩撹拌した後、得られた混合物を、ジオキサン中4N HClでpH3〜4に酸性化し、減圧下で濃縮し、LiClと混合した表題化合物を得て(定量的収率)、これを精製することなく次のステップで直接使用した。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 217.30。LC-MS(ESI)：m/z(M-1) = 215.01。1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 3.90(s, 4H), 3.48(s, 2H), 2.09 - 2.00(m, 2H), 1.80 - 1.70(m, 2H), 1.65 - 1.55(m, 2H), 1.53 - 1.43(m, 2H)。
【０１７８】
ステップD：ベンジル8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート
【０１７９】
【化５５】
2019502728.tif 000059
【０１８０】
8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボン酸(36g、前のステップから得られた粗生成物)、臭化ベンジル(19.7mL、166mmol)及びK2CO3(34.5g、250mmol)のDMF(250mL)中混合物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物をろ過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30％EtOAc)により精製し、表題化合物が無色油状物として得られた(33g、2段階にわたる収率65％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 307.51。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.42 - 7.28(m, 5H), 5.18(s, 2H), 4.03 - 3.83(m, 4H), 3.66(d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.20 - 2.14(m, 2H), 1.90(t, J = 6.5 Hz, 1H), 1.69 - 1.58(m, 6H)。
【０１８１】
ステップE：ベンジル8-((((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)メチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート
【０１８２】
【化５６】
2019502728.tif 000060
【０１８３】
-10℃にて、ベンジル8-(ヒドロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート(33g、108mmol)及びピリジン(15.8mL、145mmol)の無水DCM(500mL)中溶液に、Tf2O(24.5mL、145mmol)をN2雰囲気下で滴下添加した。0℃で2時間撹拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮し、残渣をDCMとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30％EtOAc)により精製し、表題化合物が黄色油状物として得られた(40g、85％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 439.10。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.41 - 7.29(m, 5H), 5.18(s, 2H), 4.51(s, 2H), 3.97 - 3.87(m, 4H), 2.28 - 2.16(m, 2H), 1.72 - 1.61(m, 6H)。
【０１８４】
ステップF：ベンジル8-(フルオロメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート
【０１８５】
【化５７】
2019502728.tif 000061
【０１８６】
ベンジル8-((((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)メチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート(40g、91mmol)の無水THF(300mL)中溶液に、TBAF(THF中1M、137mL、137mmol)を滴下添加した。室温で30分間撹拌した後、得られた混合物をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30％EtOAc)により精製し、表題化合物が淡黄色油状物として得られた(25g、89％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 309.10。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.41 - 7.29(m, 5H), 5.18(s, 2H), 4.42(d, J= 47.2 Hz, 2H), 3.98 - 3.87(m, 4H), 2.26 - 2.15(m, 2H), 1.70 - 1.58(m, 6H)。
【０１８７】
ステップG：ベンジル1-(フルオロメチル)-4-オキソシクロヘキサン-1-カルボキシレート
【０１８８】
【化５８】
2019502728.tif 000062
【０１８９】
ベンジル8-(フルオロメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4.5]デカン-8-カルボキシレート(25g、81mmol)のHCl(1.5N水溶液、216mL、324mmol)及びアセトン(250mL)中混合物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し、残渣をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30％EtOAc)により精製し、表題化合物が淡黄色油状物として得られた(20g、93％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 265.24。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.41 - 7.31(m, 5H), 5.25(s, 2H), 4.50(d, J= 47.0 Hz, 2H), 2.50 - 2.30(m, 6H), 1.84 - 1.73(m, 2H)。
【０１９０】
ステップH：ベンジル1-(フルオロメチル)-4-(((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート
【０１９１】
【化５９】
2019502728.tif 000063
【０１９２】
-78℃にて、ベンジル1-(フルオロメチル)-4-オキソシクロヘキサン-1-カルボキシレート(20g、76mmol)及び1,1,1-トリフルオロ-N-(ピリジン-2-イル)-N-((トリフルオロメチル)スルホニル)メタンスルホンアミド(35g、98mmol)の無水THF(200mL)中溶液に、K-HMDS(THF中1M、113mL、113mmol)をN2雰囲気下で滴下添加した。室温で一晩撹拌した後、得られた混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜10％EtOAc)により精製し、表題化合物が黄色油状物として得られた(24g、86％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 397.01。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.44 - 7.27(m, 5H), 5.75(t, J = 4.0 Hz, 1H), 5.24 - 5.11(m, 2H), 4.62 - 4.37(m, 2H), 2.83 - 2.70(m, 1H), 2.45 - 2.15(m, 4H), 1.98 - 1.85(m, 1H)。
【０１９３】
ステップI：ベンジル1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート
【０１９４】
【化６０】
2019502728.tif 000064
【０１９５】
ベンジル1-(フルオロメチル)-4-(((トリフルオロメチル)スルホニル)オキシ)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(24g、61mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(17g、68mmol)、Pd(dppf)Cl2(5.3g、6.5mmol)及びKOAc(19g、195mmol)のジオキサン中(200mL)中混合物を、80℃にてN2雰囲気下で一晩撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通してろ過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜15％EtOAc)により精製し、表題化合物が無色油状物として得られた(18g、79％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 375.40。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 7.41 - 7.26(m, 5H), 6.51(s, 1H), 5.16(s, 2H), 4.63 - 4.37(m, 2H), 2.70 - 2.58(m, 1H), 2.23 - 2.10(m, 3H), 1.95 - 1.75(m, 2H), 1.25(s, 12H)。
【０１９６】
ステップJ：ベンジル(R)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート及びベンジル(S)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート
【０１９７】
【化６１】
2019502728.tif 000065
【０１９８】
ベンジル1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(9.4g、25mmol)を、以下の条件(カラム：Regis(S,S)-whelk-O1；カラムサイズ：0.46cm 内径(I.D.) × 25cm 長さ(L)；注入：5μl；移動相：CO2/[ヘキサン:IPA=4:1,(v/v)] = 80/20；流速：2.0ml/分；波長：UV 220nm；温度：35℃)を用いるキラルクロマトグラフィーにより分離し、ベンジル(R)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(第2溶出、ピークB、2.8g、7.5mmol)及びベンジル(S)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5- テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(第1溶出、ピークA、2.9g、7.7mmol)を得た。異性体は、示される絶対立体化学に仮に割り当てられた。これらの割り当てを用いて以下に記載される化合物は、この仮の割り当てによって決定される。
【０１９９】
【化６２】
2019502728.tif 000066
【０２００】
ステップA：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3,3a,4,5,5a,6,7,7a,8,10,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-2,9(5bH)-ジオン
【０２０１】
【化６３】
2019502728.tif 000067
【０２０２】
(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-アミノ-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3,3a,4,5,5a,6,7,7a,8,10,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-2,9(5bH)-ジオン(400mg、0.9mmol)、4-(2-クロロエチル)チオモルホリン1,1-ジオキシド(198mg、1.0mmol)、K3PO4(579mg、2.7mmol)及びKI(226mg、1.4mmol)のMeCN(4mL)中混合物を、100℃にてN2雰囲気下で一晩撹拌した。得られた混合物を、EtOAcで希釈してろ過した。濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が淡黄色固体として得られた(300mg、56％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 601.39。1H NMR(400 MHz、CDCl3) δ 3.17 - 3.12(m, 1H), 3.11 - 2.81(m, J = 17.4 Hz, 12H), 2.69 - 2.59(m, 2H), 2.58 - 2.38(m, 4H), 2.37 - 2.24(m, 2H), 2.13 - 1.85(m, 6H), 1.54 - 1.37(m, 8H), 1.27 - 1.16(m, 9H), 1.11 - 0.92(m, 12H)。
【０２０３】
ステップB：(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イルトリフルオロメタンスルホネート
【０２０４】
【化６４】
2019502728.tif 000068
【０２０５】
-78℃にて、(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-3,3a,4,5,5a,6,7,7a,8,10,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-2,9(5bH)-ジオン(300mg、0.5mmol)及び1,1,1-トリフルオロ-N-フェニル-N-((トリフルオロメチル)スルホニル)メタンスルホンアミド(267mg、0.75mmol)の無水THF(5mL)中溶液に、K-HMDS(THF中1M、1mL、1mmol)をN2雰囲気下で滴下添加した。室温で一晩撹拌した後、得られた混合物を飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が淡黄色固体として得られた(130mg、36％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 733.26。
【０２０６】
ステップC：ベンジル(R)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート
【０２０７】
【化６５】
2019502728.tif 000069
【０２０８】
(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イルトリフルオロメタンスルホネート(60mg、0.08mmol)、ベンジル(R)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(37mg、0.1mmol)、Pd(PPh3)4(20mg、0.018mmol)及びNa2CO3(28mg、0.27mmol)のジオキサン(1.5mL)及びH2O(0.5mL)中混合物を、80℃にてN2雰囲気下で3時間撹拌した。得られた混合物をDCMとH2Oとの間で分配し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が淡黄色固体として得られた(40mg、60％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 831.52。
【０２０９】
ステップD：(R)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボン酸
【０２１０】
【化６６】
2019502728.tif 000070
【０２１１】
ベンジル(R)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(40mg、0.048mmol)の1N NaOH(0.5mL)、MeOH(0.1mL)及びジオキサン(0.5mL)中混合物を、80℃にて2時間撹拌した。得られた混合物を、1N HClでpH3〜4に酸性化し、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをHPLC(C18、H2O中0〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製した。数滴のジオキサン中4N HClを、HPLCにより回収された画分に加え、表題化合物がHCl塩として得られた(8mg、22％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 741.40。1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 5.35(s, 1H), 5.23(d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.54(dd, J = 18.8, 8.8 Hz, 1H), 4.42(dd, J = 18.6, 8.8 Hz, 1H), 3.30 - 3.21(m, 8H), 3.13 - 1.34(m, 30H), 1.30 - 0.91(m, 21H)。
【０２１２】
実施例11(化合物53)
【０２１３】
【化６７】
2019502728.tif 000071
【０２１４】
ステップA：ベンジル(S)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート
【０２１５】
【化６８】
2019502728.tif 000072
【０２１６】
(3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イルトリフルオロメタンスルホネート(60mg、0.08mmol)、ベンジル(S)-1-(フルオロメチル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(37mg、0.1mmol)、Pd(PPh3)4(20mg、0.018mmol)及びNa2CO3(28mg、0.27mmol)のジオキサン(1.5mL)及びH2O(0.5mL)中混合物を、80℃にてN2雰囲気下で2時間撹拌した。得られた混合物をDCMとH2Oとの間で分配し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10％MeOH)により精製し、表題化合物が淡黄色固体として得られた(45mg、68％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 831.53。
【０２１７】
ステップB：(S)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボン酸
【０２１８】
【化６９】
2019502728.tif 000073
【０２１９】
ベンジル(S)-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aS)-3a-((2-(1,1-ジオキシドチオモルホリノ)エチル)アミノ)-1-イソプロピル-5a,5b,8,8,11a-ペンタメチル-2-オキソ-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a-ヘキサデカヒドロ-2H-シクロペンタ[a]クリセン-9-イル)-1-(フルオロメチル)シクロヘキサ-3-エン-1-カルボキシレート(45mg、0.054mmol)の1N NaOH(0.5mL)、MeOH(0.1mL)及びジオキサン(0.5mL)中混合物を、80℃にて2時間撹拌した。得られた混合物を、1N HClでpH3〜4に酸性化し、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをHPLC(C18、H2O中0〜100％MeCNと0.1％ギ酸)により精製した。数滴のジオキサン中4N HClを、HPLCにより回収された画分に加え、表題化合物がHCl塩として得られた(13mg、32％収率)。LC-MS(ESI)：m/z(M+1) = 741.52。1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 5.34(s, 1H), 5.23(d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.55(dd, J = 18.5, 8.8 Hz, 1H), 4.43(dd, J = 18.4, 8.8 Hz, 1H), 3.30 - 3.14(m, 8H), 3.07 - 1.41(m, 30H), 1.31 - 1.17(m, 9H), 1.15 - 0.81(m, 12H)。
【０２２０】
MT4細胞抗ウイルスアッセイ
実験手順:
抗ウイルスHIV活性及び化合物誘導性細胞傷害性を、ヒトT細胞リンパ球指向性ウイルス形質転換細胞株MT4中でヨウ化プロピジウムベースの手順を用いて、並行して測定した。試験化合物のアリコートを、96穴プレート(Costar 3598)中の培地(RPMI 1640、10％ウシ胎仔血清(FCS)及びゲンタマイシン)に、Cetus Pro/Petteを用いて連続希釈した。指数関数的に増殖しているMT4細胞を回収し、Jouan遠心分離装置(モデルCR 4 12)中、1000rpmで10分間遠心分離した。細胞ペレットを、新鮮な培地(RPMI 1640、20％FCS、20％IL-2及びゲンタマイシン)中で、5×105細胞/mLの密度に再懸濁した。細胞アリコートを、100×TCID50のウイルス感染多重度を得るように希釈されたHIV-1(IIIB株)の添加により感染させた。同様の細胞アリコートを培地で希釈して、モック感染対照を提供した。細胞感染を、加湿5％CO2雰囲気を有する組織培養インキュベータ中、37℃で1時間進行させた。1時間のインキュベーション後、ウイルス/細胞懸濁液を新鮮な培地で6倍に希釈し、125μLの細胞懸濁液を、予め希釈された化合物を含むプレートの各ウェルに添加した。次いで、プレートを、加湿5％CO2を有する組織培養インキュベータ中に5日間置いた。インキュベーション期間の終わりに、細胞数(したがってHIV誘導性細胞変性)を、(A)ヨウ化プロピジウム染色又は(B)MTSテトラゾリウム染色法により評価した。
【０２２１】
ヨウ化プロピジウムの読み取りのため、27μLの5％Nonidet-40を、インキュベーションプレートの各ウェルに添加した。Costarマルチチップピペッターを用いて十分に混合した後、60μLの混合物をフィルターボトム96穴プレートに移した。このプレートを自動アッセイ装置(Screen Machine、Idexx Laboratories社)中で分析した。使用した対照及び標準は、3'-アジド-3'-デオキシチミジンであり、アッセイ毎に0.01〜1μMの濃度範囲にわたって試験した。3'-アジド-3'-デオキシチミジンのIC50値の予想範囲は、0.04〜0.12μMである。このアッセイは、各ウェルのDNA含量を推定するためにヨウ化プロピジウム色素を用いる。
【０２２２】
MTS読み取りのため、20μLのCellTiter 96 AQ One溶液試薬(Promega #G3582)を各ウェルに添加した。MTS試薬の添加後75分で、Tecan Sunrise 96穴プレートリーダーを用いて492nMで吸光度を読み取った。
【０２２３】
分析:
試験化合物の抗ウイルス作用は、EC50(すなわち、HIV誘導性細胞変性作用の50％の低下をもたらす阻害濃度)として報告される。この作用は、未感染のMT4細胞対照と比較して、HIV感染MT4細胞の細胞増殖の50％を回復させるのに必要とされる試験化合物の量により測定される。IC50を、RoboSage、Automated Curve Fitting Program、バージョン5.00、1995年7月10日により算出した。
【０２２４】
各アッセイプレートについて、未感染の細胞又は化合物を含まない感染細胞を含有するウェルの結果(相対蛍光単位、rfU、又はOD値)を、それぞれ平均した。化合物誘導性細胞傷害性の測定のため、様々な化合物濃度及び未感染の細胞を含有するウェルからの結果を、化合物処理していない未感染の細胞の平均と比較した。細胞残存率(％)は、以下の式:
細胞残存率(％)=(化合物で処理された未感染細胞、rfU、又はOD値/未処理の未感染細胞)×100
により決定される。
【０２２５】
79％以下の細胞残存率(％)のレベルは、その濃度の化合物についての直接的な化合物誘導性細胞傷害性の有意なレベルを示している。この状態が生じる場合、この濃度の化合物で処理された感染ウェルからの結果は、EC50の算出に含まれない。
【０２２６】
化合物の抗ウイルス活性の測定のため、様々な化合物濃度及び感染細胞を含むウェルからの結果を、化合物処理していない未感染細胞及び感染細胞の平均と比較する。ウイルス阻害率(％)は、以下の式:
ウイルス阻害率(％)=(1-((未処理の未感染細胞の平均-処理された感染細胞)/(未処理の未感染細胞の平均-未処理の感染細胞の平均)))×100
により決定される。
【０２２７】
以下の表は、上記の実施例の化合物についてのEC50値をまとめる。
【０２２８】
【表２】
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【国際調査報告】
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