(57)【要約】本明細書では、リポソームの調製方法およびその使用が提供される。 ある態様において、プロセス中に熱、有機溶媒、タンパク質、および／または無機塩を使用せずにリポソームを調製する。ある態様において、リポソーム調製物は、１つ以上の活性剤を含有する。ある態様において、リポソーム調製物は、疾患または障害の処置に使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のリポソームの疎水性膜領域と非共有結合的に会合された複数の抗体分子を含む、リポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項２】
共有結合的に共役された抗体分子を持たない、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項３】
脂質と抗体のモル比が約５０以下である、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項４】
前記複数のリポソームが水性媒体中に懸濁されている、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項５】
前記水性媒体中の抗体の濃度が、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項６】
凍結乾燥された、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項７】
前記複数のリポソームが大豆ホスファチジルコリンを含む、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項８】
前記組成物がトレハロースを含む、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項９】
前記複数のリポソームの疎水性膜領域に結合していない抗体分子を本質的に持たない、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項１０】
前記抗体が、トラスツズマブまたはアダリムバブである、請求項１に記載のリポソームカプセル化抗体組成物。
【請求項１１】
（ａ）凍結乾燥または可溶化された抗体、およびリポソームの水性懸濁液を提供することと、
（ｂ）前記抗体をリポソームの水性懸濁液と接触させ、それによって、前記抗体がリポソームの疎水性膜領域と会合するようになること、
を含むリポソームカプセル化抗体組成物を調製する方法。
【請求項１２】
（ｃ）リポソーム結合抗体から非結合抗体を分離すること、
をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ｄ）前記リポソームカプセル化抗体組成物を凍結乾燥すること、
をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ（ｂ）が、さらに均一化、せん断機の使用、ミクロ流動化操作、または前記抗体の添加後の濾過をせずに行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体の少なくとも６０％が、カプセル化される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記リポソームが大豆ホスファチジルコリンを含み、前記抗体が、トラスツズマブまたはアダリムバブである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が洗浄剤または有機溶媒に暴露されず、前記抗体が、浸透圧またはｐＨ勾配を用いて、またはリポソームの水性懸濁液の凍結融解を使用して、リポソームに充填されない、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リポソームの調製方法およびその使用に関する。ある態様において、プロセス中に熱、有機溶媒、タンパク質、および／または無機塩を使用せずにリポソームを調製する。ある態様において、リポソーム調製物は、１つ以上の活性剤を含有する。ある態様において、リポソーム調製物は、疾患または障害の処置に使用される。
【背景技術】
【０００２】
医薬品の生体利用可能性は、薬物の溶解性および安定性に部分的に大きく依存する。ｐＨ調整、洗浄剤のミセル中の薬物の会合、有機溶媒への可溶化、シクロデキストリンまたは他のポリマーとの複合体生成、および薬物をリポソーム二重層にカプセル化することを含むが、これらに限定されない多くの方法が薬物の生体利用可能性を改善するために使用されて来た（Strickley, R.G., Pharmaceutical Research, No. 21, 2004: 201 230）。薬物自体または薬物を可溶化するために使用される賦形剤は、アレルギー反応または溶血などの副作用を有し得る。
【０００３】
エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）などの溶媒、錯化剤（例えばニコチンアミド）、および界面活性剤（例えばオレイン酸ナトリウム）は溶血性であることが知られており、注射液での使用は望ましくない。注射可能な製品に有機溶媒を使用する他の制限は、沈殿、痛み、および注射時の炎症を含む。
【０００４】
リポソームは、同心二重層（ラメラ）によって形成された脂質膜によって囲まれた中心の水性キャビティから構成される微視的な脂質小胞である。リポソームは、（水性の内部に）親水性物質または（脂質膜にある）疎水性物質を取り込むことができる。リポソームは、一連の脂質二重層（「オリゴラメラ小胞（oligolamellar vesicle）」とも呼ばれる）を有する単一脂質二重層または多重層小胞（「ＭＬＶ」）を有する単層小胞（「ＵＭＶ」）であり得る。多重層小胞は、典型的には、直径が０．２μｍ〜１０μｍの範囲である。例えば、ＷＯ９８／００６８８２を参照されたい。抗溶血対策は処方物中で一般的に行われるが、処方物中に十分な量のリポソームを維持することは、リポソームと賦形剤との不適合性、または処方物中のリポソームの不安定性のために実現可能でない可能性がある。さらに、疎水性薬物を含有する凍結乾燥処方物を再構成することはしばしば困難である。さらに、リポソームは、濃縮有機溶媒を含む処方物中では安定ではない。
【０００５】
直径が０．２μｍ未満（例えば、０．０２および０．２μｍの間）の単層小胞は、一般に、小さな単層小胞（「ＳＵＶ」）として知られている。０．４５μｍより大きい（場合によっては１μｍより大きい）直径を有する単層小胞は、一般に、大きな単層小胞（「ＬＵＶ」）として知られている。
【０００６】
リポソームの二重層は、ほとんどの場合、リン脂質を含むが、脂肪酸、脂肪酸塩および／または脂肪族アルコールを含むがこれに限定されない脂質も含み得る。リポソームの特性は、とりわけ、構成成分の性質に依存する。したがって、ある特性を有するリポソームを得る場合、その極性基の電荷および／またはその脂肪酸鎖の長さおよび飽和度を考慮する必要がある。
【０００７】
加えて、リポソームの特性は、例えば、コレステロールおよび他の脂質を膜に取り込み、脂質二重層の数を変化させ、または天然分子（例えば、タンパク質、多糖類、糖脂質、抗体、酵素）または合成分子（例えば、ポリエチルグリコール）を表面に共有結合させるなどの修飾がされ得る。リポソームを得るために、水性媒体中に、場合により他の脂質またはコレステロールとリン脂質の多数の組み合わせが存在する。調製方法および使用される脂質に依存して、異なるサイズ、構造および特性の小胞を得ることが可能である。
【０００８】
リポソームの形成に関して考慮すべきもう一つの重要なパラメータは、脂質二重層の剛性である。二重層の一部を発泡させる水和脂質は、液晶（流体）またはゲル状態のいずれかであり得る。温度が上昇するにつれて、ゲル状態は液晶状態に変換される。これは、各脂質に特異的な転移温度（Ｔｃ）として知られる温度で起こる。Ｔｃは鎖長に正比例し、脂肪酸の不飽和度に反比例し、極性基の性質に依存する。
【０００９】
それにもかかわらず、リポソームなどの脂質小胞の調製における一般的な方法は、脂質が溶解された有機溶媒を蒸発させ、次に任意に緩衝化された水溶液中に分散させることを含む。Ｂａｎｇｈａｍ法として知られている１つの例示的な方法は、もともとBangham et al., J. Hot. Biol., 11:238 252 (1965)に記載されていた。Ｂａｎｇｈａｍ法の変形例は当業者に知られており、そのいくつかを以下に記載する。
【００１０】
薄い脂質層の水和。二重層の構成脂質の有機溶液から出発して、脂質フィルムは、有機溶媒の除去によって調製され、これは蒸発（例えば、ロータリーエバポレーター中の減圧下）または凍結乾燥によって達成することができる。得られた乾燥脂質フィルムは、水溶液を添加し、当該混合物をＴｃを超える温度で撹拌することによって水和される。
【００１１】
逆相蒸発。二重層の構成脂質の有機溶液から出発して、有機溶媒の除去によって脂質フィルムが調製される。系を窒素でパージし、脂質を通常ジエチルエーテルおよび／またはイソプロピルエーテルで構成される第２の有機溶液に再溶解する。水相を再溶解した脂質に添加する。この系を連続窒素下で維持する。第２の有機溶媒を除去することによりゲルが形成される。
【００１２】
溶媒注入。有機溶媒に溶解した脂質は、水溶液中にゆっくり注入される。使用された有機溶媒は、しばしば水溶性溶媒で、その水溶液は温めてもよい。
【００１３】
多層小胞のさらなる調製方法は、Szoka およびPapandjopoulos, Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 2: 467508 (1980), ならびにDoussetおよびDousteBlazy, Les Liposomes, Puisieux and Delattre, Editors, Tecniques et Documentation Lavoisier, Paris, pp. 173 (1985)に見出し得る。
【００１４】
さらに、複数の脂質の取り込みが所望される場合、脂質はリポソーム小胞に均一に分布したままであるべきである。伝統的に、これは、予め有機溶媒に脂質を溶解し、得られた有機溶媒をリポソームの調製に使用することによって達成される。
【００１５】
米国特許番号第４，５０８，７０３号明細書には、少なくとも１種の両親媒性脂質と場合により疎水性または部分疎水性の少なくとも１種の成分の粉末混合物を得る方法、この混合物の成分を少なくとも１種の有機溶媒に溶解し、得られた溶液を不活性ガス中に噴霧することを含む方法が記載されいる。この方法は、水性媒体中に容易に分散することができる脂質混合物の調製を可能にするが、有機溶媒の使用を回避しない。
【００１６】
国際公開第９２／１０１６６号公報には、高いカプセル化能力を有するリポソームを調製する方法が記載されている。該方法は、脂質の混合物の使用を可能にする。しかし、混合物は、有機溶媒中の脂質の事前の溶解およびその後の蒸発によって得られる。さらに、脂質と活性剤の水溶液との接触は、Ｔｃより高い温度で行われる。
【００１７】
さらに、有機溶媒を使用せずにリポソームを製造する場合、ある種の好ましくない特性を有する処方物をもたらす可能性がある、他の操作が一般的に必要であることが報告されている。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２７４１７２号には、有機溶媒を使用せずに少なくとも２つのリン脂質を含有するリポソームを調製する方法が記載されている。しかしながら、無機塩を含有する水溶液から安定なリポソームを得るために、Ｔｃを超える温度を使用していた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
結果として、リポソームを調製するための既存の方法は、有機溶媒、タンパク質、無機塩および／または熱を利用している。それらの毒性および可燃性のために、有機溶媒は、医薬品、化粧品および他の使用のためのリポソームの調製において望ましくない。さらに、有機溶媒およびタンパク質の使用は、製造コスト、安全性、作業衛生および環境の点でネガティブな影響を有する。同様に、リポソームの調製における熱の使用は、製造コスト、安全性および環境の点で望ましくない。リポソームの調製における無機塩の使用は、無機塩の導入がリポソームのサイズを増大させ、および／またはより濁った処方物をもたらすので、望ましくない。Castile et al., International Journal of Pharmaceutics, 1999, vol. 188, issue 1, pp. 8795を参照されたい。こうして、望ましくない薬剤や手順を使用しないリポソーム調製の方法の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本明細書には、リポソーム調製方法が提供される。ある態様において、リポソームは、プロセス中において熱、有機溶媒、タンパク質、および／または無機塩を使用せずに調製される。
【００２０】
一態様において、リポソーム調製方法が提供され、当該方法は、
（ａ）周囲温度で水性媒体中において１以上の脂質を組み合わせること、
（ｂ）水性媒体中において脂質を分散させること、および
（ｃ）もたらされた混合物に１以上の糖類を添加し、それによって、リポソームの溶液を浪費させること、
を含む。
【００２１】
ある態様において、リポソーム調製は、１以上の活性剤を含有する。ある態様において、活性剤は、医薬品である。ある態様において、活性剤は、限定はされないが、ラパコン；トランスフェリン；シクロスポリン；コルヒチン；ならびに単一リポソーム処方物において、ラパコンおよびトランスフェリンの組合せを包含する。
【００２２】
ある態様において、前記１以上の活性剤は、リポソームまたはリポソーム溶液の調製後に、添加される。他の態様において、前記１以上の活性剤は、リポソームの生成中に添加される。
【００２３】
また、本明細書では、疾患または障害の処置におけるリポソーム調製物の使用が提供される。一態様において、リポソーム調製物は、前記疾患または障害に罹患している患者への非経口投与に適している。一態様において、患者はヒトである。
【００２４】
定  義
本明細書に使用されるように、および特定されなければ、「脂質」は、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪族アルコールまたはリン脂質であると理解される。脂質はまた、コレステロールを含むがこれに限定されないステロール；スフィンゴミエリンを含むがこれに限定されないスフィンゴ脂質；がんグリオシド、グロボシドおよびセレブロシドを含むが、これらに限定されないスフィンゴ糖脂質；およびステアリル、オレイルおよびリノレイルアミンを含むが、それらに限定されない界面活性剤アミンを包含するように読み得る。
【００２５】
本明細書中で使用されているように、および他に特定されない限り、「リン脂質」は、そのヒドロキシル基の１つがリン酸でエステル化され、他の２つのヒドロキシル基が等価であるか、互いに異なり得、飽和または不飽和であり得る、長鎖脂肪酸でエステル化される、グリセロールの両親媒性誘導体であると理解される。中性リン脂質は、一般に、他のリン酸ヒドロキシルが極性基（通常はヒドロキシルまたはアミノ）で置換されたアルコールによってエステル化され、正味電荷がゼロであるものである。電荷を有するリン脂質は、一般に、他のリン酸ヒドロキシルが極性基で置換されたアルコールによってエステル化され、正味電荷が正または負であるものである。
【００２６】
リン脂質の例には、限定はされないが、ホスファチジン酸（「ＰＡ」）、ホスファチジルコリン（「ＰＣ」）、ホスファチジルグリセロール（「ＰＧ」）、ホスファチジルエタノールアミン  ホスファチジルイノシトール（Ｐｒ）、およびホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンゴミエリン（脳スフィンゴミエリンを含む）、レシチン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド、ジアラキドイルホスファチジルコリン（「ＤＡＰＣ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルコリン（「ＤＤＰＣ」）、ジエライドイルホスファチジルコリン（「ＤＥＰＣ」）ジラウロイルホスファチジルコリン（「ＤＬＰＣ」）、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、ジオレオイルホスファチジルコリン（「ＤＯＰＣ」）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（「ＤＰＰＣ」）、ジステアロイルホスファチジルコリン（「ＤＳＰＣ」）、１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン（「ＰＯＰＣ」）、ジアラキドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＡＰＧ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルグリセロール（「ＤＤＰＧ」）、ジエライドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＥＰＧ」）、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＬＰＧ」）、ジリノレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（「ＤＯＰＧ」）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（「ＤＰＰＧ」）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＳＰＧ」）、１−パリミトイル−２−オレオイルホスファチジルグリセロール （「ＰＯＰＧ」）、ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＡＰＥ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルエタノールアミン（「ＤＤＰＥ」）、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＥＰＥ」）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＬＰＥ」）、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＭＰＥ」）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＰＰＥ」）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＯＰＥ」）、ジアラキドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＡＰＩ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルイノシトール（「ＤＤＰＩ」）、ジエライドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＥＰＩ」）、ジラウロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＬＰＩ」）、ジリノレオイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（「ＤＭＰＩ」）、ジオルコイルホスファチジルイノシトール（「ＤＯＰＩ」）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（「ＤＰＰＩ」）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＳＰＩ」）、１−パルミトイル−２−オレオイ−ルホスファチジルイノシトール（「ＰＯＰＩ」）、ジアラキドイルホスファチジルセリン（「ＤＡＰＳ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルセリン（「ＤＤＰＳ」）、ジエライドイルホスファチジルセリン （「ＤＥＰＳ」）、ジラウロイルホスファチジルセリン（「ＤＬＰＳ」）、ジリノレオイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン（「ＤＭＰＳ」）、ジオレオイルホスファチジルセリン（「ＤＯＰＳ」）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（「ＤＰＰＳ」）、ジステアロイルホスファチジルセリン（「ＤＳＰＳ」）、１−パルミトイル−２−オールコイルホスファチジルセリン（「ＰＯＰＳ」）、ジアラキドイルスフィンゴミエリン、ジデカノイルスフィンゴミエリン、ジエライドイルスフィンゴミエリン、ジラウロイルスフィンゴミエリン、ジリノレオイルスフィンゴミエリン、ジミリストイルスフィンゴミエリン、スフィンゴミエリン、ジオレオイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、および１−パルミトイル−２オレオイル−スフィンゴミエリンを含む。
【００２７】
本明細書中で使用されるように、特に限定しない限り、「カプセル化（encapsulate）」または「カプセル化（encapsulation）」は、活性剤をリポソームまたはリポソーム小胞に取り込むプロセスであると理解される。カプセル化された活性剤は、水性の内部に留まるか、または膜と会合することができる。
【００２８】
本明細書中で使用されるように、および他に特定しない限り、化合物の溶解度に関して使用される場合、用語「増大する（enhance）」または「増大する（enhancing）」は、本明細書で提供される方法が、水中で同じ化合物の溶解度と比べて、化合物の増大する溶解度をもたらすことを意味する。具体的には、用語「増大する（enhance）」または「増大する（enhancing）」は、本明細書で提供される方法が使用される場合、化合物の溶解度が、参照溶媒中の同じ化合物の溶解度の約２０％以上、約４０％以上、約６０％以上、約８０％以上、約１００％以上、または約２００％以上増加することを意味する。いくつかの態様においては、参照溶媒は水である。
【００２９】
本明細書中で使用されるように、および他に特定しない限り、用語「疎水性化合物」は、水溶性がほとんどまたは全くない化合物を意味する。いくつかの態様においては、疎水性化合物は、約２０重量パーセント未満、約１５重量パーセント未満、約１０重量パーセント未満、約５重量パーセント未満、約１重量パーセント未満、約０．１重量パーセント未満、または約０．０１重量パーセント未満の固有水溶性（すなわち、非イオン形態の水溶性）を有する。他の態様において、疎水性化合物は、約１０ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬまたは約０．１ｍｇ／ｍＬ未満の固有水溶性を有する。
【００３０】
本明細書で使用されているように、または他に特定しない限り、用語「水性媒体（aqueous medium）」または「水性媒体（aqueous media）」は、水、食塩水、糖溶液、輸液、緩衝液および任意の他の容易に入手可能な水系媒体などの水系媒体を包含する。さらに、水性媒体は、１種以上の水溶性有機溶媒を含有してもよい。非経口溶液の場合、水性媒体は好ましくは無菌であり、活性剤の担体としての使用に適している。水性媒体の例には、注射用水、生理食塩水、リンゲル液、Ｄ５Ｗ、またはデキストロースおよび他の電解質などの水混和性物質の他の溶液を包含するが、これらに限定されない。
【００３１】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「脂肪酸」は、その構造が１以上の炭素原子を有する炭化水素鎖に結合されたカルボキシル基である化合物を意味する。炭化水素鎖は、飽和または不飽和（すなわち、アルキル、アルケニル、またはアルキニル炭化水素鎖）であってもよい。また、炭化水素鎖は、直鎖または分枝状であってもよい。さらにいくつかの態様において、炭化水素鎖の水素は置換されてもよい。
【００３２】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「脂肪族アルコール」は、その構造が１以上の炭素原子を有する炭化水素鎖に結合されたアルコール基である化合物を意味する。炭化水素鎖は、飽和または不飽和（すなわち、アルキル、アルケニル、またはアルキニル炭化水素鎖）であってもよい。また、炭化水素鎖は、直鎖または分枝状であってもよい。さらにいくつかの態様において、炭化水素鎖の水素は置換されてもよい。
【００３３】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「脂肪酸塩」は、脂肪酸と無機／有機塩基との反応から形成された化合物を意味する。加えて、当該用語は脂肪族アルコールと無機／有機酸との間の反応から形成された化合物を包含する。かかる酸の例は、限定はされないが、硫酸、リン酸を包含する。脂肪酸塩の炭化水素鎖は、飽和または不飽和（すなわち、アルキル、アルケニル、またはアルキニル炭化水素鎖）であってもよい。加えて、該炭化水素鎖は、直鎖または分枝状であってもよい。さらにいくつかの態様において、炭化水素鎖の水素は置換されてもよい。
【００３４】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「置換」は、限定はされないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アロイル、ハロ、ハロアルキル（例えば、トリフロロメチル）、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、ハロアルコキシ（例えば、トリフロロメトキシ）、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルコキシ、ヘテロシクロオキシ、オキソ、アルカノイル、アリール、置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール（例えば、インドリル、イミダゾリル、フリル、チエニル、チアゾリル、ピロリジル、ピリジル、ピリミジル、および同様のもの）、アリールアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリール、ヘテロシクロ、アリールオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアミノ、モノ−およびジ−置換アミノ、アルカノイルアミノ、アロイルアミノ、アラルカノイルアミノ、置換アルカノイルアミノ、置換アリールアミノ、置換アラルカノイルアミノ、カルバミル（例えば、−ＣＯＮＨ２）、置換カルバミル（例えば、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−アリールアルキル、または前記窒素に２個の置換基がある例）、カルボニル、アルコキシカルボニル、カルボキシ、シアノ、エステル、エーテル、グアニジノ、ニトロ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、スルホンアミド（例えば、−ＳＯ２ＮＨ２）、置換スルホンアミド、チオール、アルキルチオ、アリールアルキルチオ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、アルキルチオノ、アリールチオノ、アリールアルキルチオノを包含する１以上の置換基によって置換された基を意味する。
【００３５】
本明細書で使用されるように、そして他に特定されない限り、用語「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、最も好ましくは１〜４個の炭素原子を有する飽和直鎖または分枝非環式炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルを包含し、飽和分枝アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２．５−ジメチルヘキシル、２，２，−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルペンチル、３．３−ジメチルヘキシル、４，４，−ジメチルヘキシル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、２−メチル−４−エチルペンチル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２−メチル−４−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、３，３，−ジエチルヘキシル、２，２，−ジエチルヘキシル、３，３−ジエチルヘキシルなどを包含する。アルキル基は非置換または置換され得る。非置換アルキル基は、以下で述べるアルケニル基、アルキニル基を包含する。
【００３６】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「アルケニル」は、直鎖または分枝の２〜２０個の炭素原子、好ましくは２〜１０個の炭素原子、最も好ましくは２〜６個の炭素原子を有する非環式炭化水素を意味し、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を包含する。代表的な直鎖および分枝（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルは、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、１−ヘプテニル、２−ヘプテニル、３−ヘプテニル、１−オクテニル、２−オクテニル、３−オクテニル、１−ノネニル、２−ノネニル、３−ノネニル、１−デセニル、２−デセニル、３−デセニルなどを包含する。アルケニル基の二重結合は、別の不飽和基に非共役または共役され得る。アルケニル基は、非置換または置換され得る。
【００３７】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「アルキニル」は、直鎖または分枝の２〜２０個の炭素原子、好ましくは２〜１０個の炭素原子、最も好ましくは２〜６個の炭素原子を有する非環式炭化水素を意味し、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を包含する。代表的な直鎖および分枝（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニルは、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、５−ヘキシニル、１−ヘプチニル、２−ヘプチニル、６−ヘプチニル、１−オクチニル、２−オクチニル、７−オクチニル、１−ノニニル、２−ノニニル、８−ノニニル、１−デシニル、２−デシニル、９−デシニルなどを包含する。アルキニル基の三重結合は、別の不飽和基に非共役または共役され得る。アルキニル基は、非置換または置換され得る。
【００３８】
本明細書で使用されているように、および他に特定しない限り、用語「薬学的に許容し得る塩」は、無機酸および塩基、および有機酸および塩基を包含する薬学的に許容し得る非毒性酸および塩基から調製される塩を言う。本明細書に提供される組成物のための適切な薬学的に許容し得る塩基添加塩は、限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛から作られた金属塩、またはリジン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから作られた有機塩を包含する。
【００３９】
適切な非毒性の酸には、限定されないが、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロン酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロニン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸、およびｐ−トルエンスルホン酸などの無機酸および有機酸が包含される。特定の非毒性の酸には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、およびメタンスルホン酸が包含される。したがって、特定の塩の例には、塩酸塩およびイネシレート塩を包含する。他のものは当技術分野において周知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton Pa. (1990) or Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th cd., Mack Publishing, Easton Pa. (1995)を参照されたい。
【００４０】
本明細書で使用されているように、用語「水和物」は、本明細書に提供された化合物、またはその塩であって、さらに非共有分子間力によって結合された水の化学量論的または非化学量論的量を含むものを意味する。
【００４１】
本明細書で使用されているように、「包接化合物（クラスレート；clathrate）」とは、その中に補足されたゲスト分子（例えば、溶媒または水）を有する空間（例えば、溝）を含有する結晶格子の形態における本明細書で提供される化合物、またはその塩を意味する。
【００４２】
本明細書で使用されているように、そして他に示さない限り、用語「プロドラッグ」は、生物学的条件下（インビトロまたはインビボ）で加水分解、酸化、またはそうでなければ反応して活性化合物を提供し得る化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例には、限定されないが、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバメート、生加水分解性カーボネート、生加水分解性ウレイド、および生加水分解性リン酸塩類似物などの生加水分解性部分を包含する化合物の誘導体および代謝産物を包含する。好ましくは、カルボキシ官能基を有する化合物のプロドラッグは、カルボン酸の低級アルキルエステルである。その分子に存在するカルボン酸部分のいずれかをエステル化してカルボキシレートエステルを生成する。プロドラッグは、典型的にはBurger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley)、およびDesign and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh)に記載されたものなどのよく知られた方法を使用して調製され得る。
【００４３】
本明細書で使用されているように、そして他に特定しない限り、処方物と関連して使用される場合の「安定な」という用語は、本明細書で提供される方法を使用して調製される場合の処方物の活性剤が特定の時間可溶化されたままであり、著しく分解したり、または凝集したり、さもなければ（例えば、ＨＰＬＣによって測定されるように）修飾されるようにならないことを意味する。
【００４４】
本明細書で使用されているように、そして他に特定されない限り、「Ｔｃ未満の温度」は最も低いＴｃを有する脂質のＴｃより低い温度であると理解され、そして「Ｔｃより高い温度」は最も高いＴｃを有する脂質のＴｃよりも高い温度であると理解される。
【００４５】
本明細書で使用されているように、そして他に特定されない限り、医薬組成物と関連して使用されるとき、用語「有害成分」は、限定されるものではないが、溶血、過敏性反応、末梢神経障害、および／または組成物の活性成分の生物学的利用能の低下などの、臨床的副作用を引き起こす可能性がある医薬組成物に、通常使用される成分を意味する。有害成分の例としては、これらに限定されないが、エタノール、メタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、酢酸メチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（「ＭＴＢＥ」）、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、ジオキサン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ジグライム、１，２−ジメトキシエタン、１−ブタノール、２−ブタノール、２−ブタノン、ベンゼン、トルエン、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、ヘキサメチルホスホルアミド（「ＨＭＰＡ」）、Ｎ−メチルピロリドン、グリセリン、ニトロメタン、トリエチルアミン、キシレン、ＣＲＥＭＯＰＩＩＯＲ（登録商標）ＥＬ、およびポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）などの有機溶媒を含む毒性溶媒；共洗剤または界面活性剤、例えばポリソルベート（例えばＴｗｅｅｎ）またはビタミンＥ；ひまし油またはトウモロコシ油などの油；ＨＳＡなどのタンパク質；またはその他の潜在的な汚染源となる生物学的薬剤を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
図１Ａは、リポソーム無添加のアダリムバブ（ＨＵＭＩＲＡ）抗体のサイズ排除ＨＰＬＣの対照溶出プロファイルを示す。
図１Ｂは、リポソームカプセル化トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）抗体のサイズ排除ＨＰＬＣの溶出プロファイルを示す。
図１Ｃは、リポソームカプセル化アダリムバブ（ＨＵＭＩＲＡ）抗体のサイズ排除ＨＰＬＣの溶出プロファイルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
発明の詳細な説明
本明細書に提供されるのは、リポソームの調製方法であって、該方法は、以下を含む：
（ａ）周囲温度で水性媒体中において１以上の脂質を組み合わせること、
（ｂ）水性媒体中において脂質を分散させること、および
（ｃ）もたらされた混合物に１以上の糖類を添加し、それによって、リポソームの懸濁液を生成すること。
【００４８】
別の態様において、ステップ（ｂ）において、該方法はさらに水性媒体中で脂質の均一化を含む。
【００４９】
いくつかの態様では、さらに、１以上の活性剤をリポソーム溶液に添加するステップ（ｄ）を含む。一態様において、活性剤は、疎水性薬物である。一態様において、活性剤は固体として添加される。別の態様において、活性剤は有機溶媒中で添加される。別の態様において、活性剤は、１以上の脂肪酸塩、脂肪酸および／またはリン脂質をさらに含む有機溶媒中で添加される。
【００５０】
別の態様において、活性剤は、リポソームの形成中に添加される。
ある態様において、得られたリポソームは約１μｍ未満の直径である。
一態様において、得られたリポソームは、約５００ｎｍ未満の直径である。
一態様において、得られたリポソームは、約１００ｎｍ未満の直径である。
【００５１】
一態様において、脂質の少なくとも１つは、リン脂質またはリン脂質の混合物である。リン脂質の例は、限定されないが、ホスファチジン酸（「ＰＡ」）、ホスファチジルコリン（「ＰＣ」）、ホスファチジルグリセロール（「ＰＧ」）、ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＥ」）、ホスファチジルイノシトール（「ＰＩ」）、およびホスファチジルセリン（「ＰＳ」）、スフィンゴミエリン（脳スフィンゴミエリンを含む）、レシチン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド、ジアラキドイルホスファチジルコリン（「ＤＡＰＣ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルコリン（ＤＤＰＣ）、ジエライドイルホスファチジルコリン（「ＤＥＰＣ」）、ジラウロイルホスファチジルコリン（「ＤＬＰＣ」）、ジリノールコイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、ジオレオイルホスファチジルコリン（「ＤＯＰＣ」）ジパルミトイルホスファチジル（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（「ＤＳＰＣ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルコリン（「ＰＯＰＣ」）、ジアラキドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＡＰＧ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルグリセロール（「ＤＤＰＧ」）、ジエライドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＥＰＧ」）、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＬＰＧ」）、ジリノーレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（「ＤＯＰＧ」）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（「ＤＰＰＧ」）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＳＰＧ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルグリセロール（「ＰＯＰＧ」）、ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＡＰＥ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルエタノールアミン（「ＤＤＰＥ」）、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＥＰＥ」）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＬＰＥ」）、ジリノーレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＭＰＥ」）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＰＰＥ」）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＯＰＥ」）、ジアラキドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＡＰＩ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルイノシトール（「ＤＤＰＩ」）、ジエライドイルホスファチジルイノシトール（ＤＥＰＴ）、ジラウロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＬＰＩ」）ジリノーレオイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（「ＤＭＰＩ」）、ジオレオイルホスファチジルイノシトール（「ＤＯＰＩ」）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（「ＤＰＰＩ」）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＳＰＩ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルイノシトール（「ＰＯＰＩ」）、ジアラキジルホスファチジルセリン（「ＤＡＰＳ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルセリン（「ＤＤＰＳ」）、ジエライドイルホスファチジルセリン（「ＤＥＰＳ」）、ジラウロイルホスファチジルセリン（「ＤＬＰＳ」）、ジリノーレオイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン（「ＤＭＰＳ」）、ジオレオイルホスファチジルセリン（「ＤＯＰＳ」）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（「ＤＰＰＳ」）、ジステアロイルホスファチジルセリン（「ＤＳＰＳ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルセリン（「ＰＯＰＳ」）、ジアラキドイルスフィンゴミエリン、ジデカノイルスフィンゴミエリン、ジエライドイルスフィンゴミエリン、ジラウロイルスフィンゴミエリン、ジリノーレオイルスフィンゴミエリン、ジミリストイルスフィンゴミエリン、スフィンゴミエリン、ジオレオイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、および１−パルミトイル−２−オレオイルスフィンゴミエリンを包含する。
【００５２】
本明細書に提供されるリン脂質は、キラルまたはアキラルであってもよい。本明細書に提供されるキラルのリン脂質は、ＤまたはＬリン脂質、例えば、Ｌ−ａ−ホスファチジルコリン、またはＩ，３−ホスファチジルコリンであり得る。
一態様において、Ｌ−ａ−ホスファチジルコリンは、本明細書に提供される方法に使用される。
【００５３】
別の態様において、本明細書に提供されるのは、リポソームの調製方法であって、該方法は、以下を含む：
（ａ）周囲温度で水性媒体中においてオレイン酸ナトリウムとホスファチジルコリンを組み合わせること、
（ｂ）水性媒体中においてオレイン酸ナトリウムとＬ−ａ−ホスファチジルコリンを分散させること、および
（ｃ）もたらされた混合物に１以上の糖類を添加し、それによって、リポソームの懸濁液を形成すること。
【００５４】
一態様において、水性媒体は、１以上の活性剤、またはそれらの薬学的に許容し得る塩、水和物、包接化合物もしくはそのプロドラッグを含有する。活性剤の例としては、限定されないが、ラパコン（１３−ラパコン）、タキサン（タキソール、７−エピタキソール、７−アセチルタキソール、１０−デスアセチルタキソール、１０−デスアセチル−７−エピタキソール、７−キシロシルタキソール、１０−デスアセチル−７−シロシルタキソール、７−グルタリルタキソール、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルタキソール、７−Ｌ−アラニルタキソール、タキソテール、およびそれらの混合物）、パクリタキセル、コルヒチン、トランスフェリン、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、ケトプロフェン、プロポフォール、アセチルサリチル酸、アセトアミノフェン、アムホテリシン、ジゴキシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ビタキシン、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ４、フマギリン類似物、（例えば、ＴＮＰ４７０）ＣＭ１０１、ＩＦＮ−ｕ、インターロイキン１０、インターロイキン１２、血小板因子４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、アンジオスタチン、エンドスタチン、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、サリドマイド、プロラクチン、リノマイド、アンジオポエチン−１、塩基性線維芽細胞増殖因子、血管内皮増殖因子）ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、エトポシド、エトポシドホスフェート、およびテニポシド）、シタラビン、アクチノマイシン、エトポシド、ブレオマイシン、ゲンタマイシン、シクロホスファミド、メトトレキセート、ストレプトゾトシン、シトシン、１３Ｄ−アラビノフラノシド−５’−トリフォスフェート、シトクロームＣ、シスプラチン、Ｎ−ホスホノ−アセチル−Ｌ−アスパラギン酸、５−フルオロオロト酸、アシクロビル、ジドブジン、インターフェロン、アミノグリコシド、セファロスポリン、テトラサイクリン、プロプラノロール、チモロール、ラベトロール、クロニジン、ヒドララジン、イミプラミン、アミトリプチリン、ドキセピン、フェニロイン、ジフェンヒドラミン、クロロフェニリミン、プロメタジン、プロスタグランジン、メトトレキサート、プロゲステロン、テストステロン、エストラジオール、エストロゲン、エピルビシン、ベクロメタゾンおよびエステル、ビタミンＥ、コルチゾン、デキサメタゾンおよびエステル、ベタメタゾンバレレート、ビフェニルジメチルジカルボン酸、カルシトニン、カンプトテシン、カプトプリル、セファゾリン、クロロキニン、クロロチアゾール、凝固因子ＶＩＩＩおよびＩＸ、ｄ−アルファ−トコフェロール、デキサメタゾン、ジクロフェナク、エトポシド、フェルデン、フルビプロフェン、５−フルオロウラシル、フルオキセチン、フシジン酸、ゲンタマイシン、グリブリド、グラニセトロン、成長ホルモン、インドメタシン、インスリン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、メトトレキセート、メトロニダゾール、ミノキシジル、マイトマイシン、ナフシリン、ナプロキセン、オンダンセトロン、オキシフェンブタゾン、パラゾシン、フィゾスチグミン、ピロキシカム、プレドニゾロン、プリマキン、キニーネ、ラミプリル、タキソタン、テノキシカム、テラゾシン、トリアムシノロン、ウロキナーゼ、オピオイド鎮痛剤（例えば、アルフェンタニル、アニレリジン、コジエン、ジアモルヒネ、フェンタニル、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、モペリジン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、プロポキシフェン、スフェンタニル、ペンタゾシンおよびナルブフィン）、非ステロイド系抗炎症薬（例えばアスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、メフェナム酸およびフェニルブタゾン）、アンギオテンシン変換酵素（「ＡＣＥ」）阻害剤（例、カプトプリルポリエン）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、抗生物質（例えばイミダゾールおよびトリアゾール抗生物質）、葉酸、アントラサイクリン抗生物質、アンチセンスＲＮＡ、トリカテカム、微生物リボソーム不活性化毒素（例えばゲロニン、アブリン、リシンＡ鎖、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、ヤマゴボウ抗ウイルスペプチド）、ピペコリン酸誘導体（例、タクロリムス）、植物アルカロイド、染料、放射性同位体標識化合物、放射線不透過性化合物、放射線増感剤（例えば、５−クロロ−２ '−デオキシウリジン、５−ブロモ−２'−デオキシウリジンおよび５−ヨード−２ '−デオキシウリジン）、蛍光化合物、散瞳薬、気管支拡張薬、局所麻酔薬（例えば、ジブカインおよびクロルプロマジン）、抗真菌剤（例えば、ミコナゾール、テルコナゾール、エコナゾール、イソコナゾール、ブタコナゾール、クロトリマゾール、イトラコナゾール、ナイスタチン、ナフチフィンおよびアンホテリシンＢ）、抗寄生虫剤、ホルモン、ホルモン拮抗薬、免疫調節薬、神経伝達物質拮抗薬、抗糖尿病薬、抗緑内障薬、ビタミン、麻薬、および造影剤を包含する。活性剤の追加の開示は、Gilman et al., Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGrawHill, New York, 2001; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow, M. D. et al. (eds.), 17th Ed., Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, Rahway, N.J., 1999; Cecil Textbook of Medicine, 20th Ed., Bennett and Plum (eds.), W.B. Saunders, Philadelphia, 1996を参照されたい。
【００５５】
一態様において、活性剤は、疎水性化合物、または水に難溶の化合物である。
別の態様において、活性剤は非疎水性化合物である。
一態様において、活性剤は、ペプチド、たんぱく質、核酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、炭化水素、またはそれらの類似物などの水溶性膜不透過性薬剤である。
【００５６】
一態様において、水性媒体は活性剤を含有しない。
別の態様において、もたられた溶液は１０重量％のトレハロースを含有する。
別の態様において、活性剤は、ラパコンまたは薬学的に許容し得る塩、水和物、包接化合物、またはそれらのプロドラッグである。
【００５７】
別の態様において、活性剤は、トランスフェリンまたは薬学的に許容し得る塩、水和物、包接化合物、またはそれらのプロドラッグである。
別の態様において、活性剤は、シクロスポリンまたは薬学的に許容し得る塩、水和物、包接化合物、またはそれらのプロドラッグである。
別の態様において、活性剤は、トランスフェリンおよびラパコンまたは薬学的に許容し得る塩、水和物、包接化合物、またはそれらのプロドラッグである。
【００５８】
本明細書で提供される方法において使用され得る糖類の例は、スクロース、グルコース、フルクトース、ラクトース、マルトース、マンノース、ガラクトースおよびトレハロースを包含するが、これらに限定されない。
一態様において、糖類はトレハロースである。
一態様において、リポソーム調製物は、１つまたは複数の疾患または障害を患っている患者への非経口投与に適している。
一態様において、患者はヒトである。
【００５９】
ある態様において、活性剤の添加順序は、活性剤の溶解度を高める。リポソームに疎水性薬物を取り込む従来の方法は、リポソームの調製前に脂質に薬物を添加することによる。例えば、Immordino, M.L. et al., Journal of Controlled Release, 2003, 91: 417 429を参照されたい。従来法によって、薬物の取込みは僅か０．３〜０．７ｍｇ／ｍｌである。
【００６０】
本明細書で提供されるのは、リポソームの形成後の活性剤の添加が活性剤の溶解度を高めるリポソームの調製方法である。一態様において、リポソーム中の活性剤の溶解度は、従来の方法と比較して少なくとも約２倍、５倍または１０倍増加する。一態様において、リポソーム中の活性剤の溶解度は、約５ｍｇ／ｍＬに増加する。
【００６１】
活性剤が疎水性薬物であるある態様において、活性剤は固体としてまたは有機溶媒中で予め作製されたリポソームに添加される。一態様において、予め作製されたリポソームは、活性剤の溶解度を高めるために１以上の脂肪酸塩、脂肪酸および／またはリン脂質を含む。
【００６２】
一態様において、活性剤の添加の順序は、リポソームへの活性剤の取込みのより大きな効率をもたらす。ある態様において、リポソームへの取込み効率は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％である。ある態様において、取込み効率は、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％である。
【００６３】
特定の理論または機構に限定されないが、予め作製されたリポソームへの活性剤の取込みの増加（例えば、約５ｍｇ／ｍＬの濃度への）は、リポソームの表面積の増加に起因し得る。
以下を含む方法によって調製されたリポソーム組成物もまた本明細書に提供される：
（ａ）周囲温度で水性媒体中において１以上の脂質を組み合わせること、
（ｂ）水性媒体中において脂質を分散させること、 および
（ｃ）得られた混合物に１つ以上の糖類を添加し、それによってリポソームの溶液を形成すること。
【００６４】
別の態様において、以下を含む方法によって調製されたリポソーム組成物が本明細書に提供される：
（ａ）周囲温度で水性媒体中において１以上の脂質を組み合わせること、
（ｂ）水性媒体中において脂質を分散させること、
（ｃ）得られた混合物に１つ以上の糖類を添加し、それによってリポソームの溶液を形成すること、および
（ｄ）活性剤をリポソームの溶液に添加すること。
【００６５】
一態様において、活性剤は疎水性薬物である。
一態様において、活性剤は固体として添加される。
一態様において、活性剤は有機溶媒中に添加される。
一態様において、有機溶媒中の活性剤は、１以上の脂肪酸塩、脂肪酸およびリン脂質をさらに含む。
【００６６】
ある態様において、本明細書で提供される方法は、リポソームおよび１以上の活性剤を含む安定な溶液、組成物または処方物をもたらす。これらの態様において、活性剤は指定された時間の間可溶化されたままであり、著しく分解、凝集または（例えばＨＰＬＣによって測定されるように）他の方法で変性されることはない。
【００６７】
いくつかの態様において、活性剤の約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が上昇する温度（例えば、約３５℃またはそれを超える温度）にて許容し得る希釈剤と希釈後１週間後に可溶化されたままである。
【００６８】
いくつかの態様において、活性剤の約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が室温にて許容し得る希釈剤と希釈後１週間後に可溶化されたままである。
【００６９】
いくつかの態様において、活性剤の約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が低下する温度（例えば、約１０℃またはそれより低い温度）にて許容し得る希釈剤と希釈後１週間後に可溶化されたままである。
【００７０】
ある態様において、本明細書で提供される方法は、水性媒体中の同じ活性剤の溶解度と比較して、活性剤の溶解度の増加をもたらす。具体的には、本明細書に提供される方法が使用される場合、活性剤の溶解度は、参照溶媒中の同じ活性剤の溶解度の約２０パーセント以上、約４０パーセント以上、約６０パーセント以上、約８０パーセント以上、約１００パーセント以上、または約２００パーセント増加する。いくつかの態様において、参照溶媒は水である。
【００７１】
本明細書で提供されるリポソーム組成物を使用して疾患または障害を処置する方法も本明細書で提供される。いくつかの態様において、疾患または障害は、腫瘍性障害、増殖性障害、中枢神経系障害、自己免疫障害、および炎症性疾患または障害を含むが、これらに限定されない。他の態様において、本方法は細菌、ウイルスまたは真菌感染症の処置に関する。
【００７２】
本明細書で提供される方法によって処置することができる増殖性障害（例えばがん）には、限定されないが、新生物、腫瘍（悪性および良性）および転移、あるいは制御されない細胞増殖を特徴とする任意の疾患または障害を包含する。がんは原発性がんまたは転移性がんであり得る。本発明の方法に従って予防、管理、処置または改善することができるがんの具体例には、それだけに限らないが、頭、首、目、口、のど、食道、胸部、骨、肺、結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、ならびに脳のがんを包含する。
【００７３】
追加のがんとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病）、急性骨髄性白血病（例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病性白血病および骨髄異形成症候群）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病、非ホジキン病）、多発性骨髄腫（例えば、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌型骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞性白血病、孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫）、ワルデンストロームマクログロブリン血症、意義不明のモノクローナル性ガンマグロブリン血症、良性モノクローナルガンマグロブリン血症、重鎖病、骨および結合組織肉腫（例えば、骨肉腫、オステオ肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫、骨の繊維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部組織肉腫、血管肉腫（ヘマンジオ肉腫）、繊維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、乏突起神経膠腫、神経膠腫、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、ピンコサイトーマ、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫）、乳がん（例えば、腺癌、小葉（小細胞）癌、管内癌、髄様乳がん、粘液性乳がん、管状乳がん、乳頭状乳がん、パジェット病、炎症性乳がん）、副腎がん（例えば、褐色細胞腫および副腎皮質癌）、甲状腺がん（例えば、甲状腺乳頭がんまたは濾胞性がん、甲状腺髄様がんおよび未分化甲状腺がん）、膵臓がん（例えば、インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、脂肪腫、ソマトスタチン分泌腫瘍、およびカルチノイドまたは膵島細胞腫瘍）、下垂体がん（例えば、クッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、末端肥大症、糖尿病性尿崩症）、眼がん（例えば、虹彩メラノーマ、脈絡膜メラノーマ、毛様体メラノーマなどの眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、膣がん（例えば、扁平上皮がん、腺がん、および黒色腫）、外陰がん（例えば、扁平上皮癌、黒色腫、腺癌、基底細胞癌、肉腫、およびパジェット病）、子宮頸がん（例えば、扁平上皮癌、腺癌）、子宮がん（例えば、子宮内膜癌および子宮肉腫）、卵巣がん（例えば、卵巣上皮癌、境界腫瘍、胚細胞腫瘍、および間質腫瘍）、食道がん（例：扁平上皮がん、腺がん、腺様嚢胞癌、粘表皮癌、線扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、形質細胞腫、疣状癌、および燕麦（小細胞）癌）、胃がん（例えば、腺癌、真菌性（ポリープ状）、潰瘍性、表在性、びまん性、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、および カルシノ肉腫）、結腸がん、直腸がん、肝がん（例えば、肝細胞癌および肝芽細胞腫、腺癌などの胆嚢癌）、胆管癌（例えば、乳頭状、結節、びまん性）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、扁平上皮癌（類表皮癌）、腺癌、大細胞癌および小細胞肺がん）、精巣がん（例えば、胚性腫瘍、セミノーマ、未分化型、古典型（典型的）、精細胞性、非セミノーマ、胚性癌、奇形腫癌、絨毛癌（卵黄嚢腫瘍）、限定されないが、腺癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫などの前立腺がん、陰茎がん、口腔がん（例えば、扁平上皮癌）、基底がん、唾液腺がん（例えば、腺癌、粘表皮癌��腺様嚢胞癌）、咽頭癌がん（例えば、扁平上皮がん、および疣状）、皮膚がん（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌および黒色腫、表在性黒色腫、結節性黒色腫、レンズマメ悪性黒色腫、先端レンズマメ黒色腫）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん、腺癌、過腎腫、線維肉腫、移行上皮がん（腎盂および／または尿管））、ウィルムス腫瘍、膀胱がん（例えば、移行上皮癌、扁平上皮癌、腺癌、癌肉腫）、粘液肉腫、骨原性肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌および乳頭腺癌、濾胞性リンパ腫、ｐ５３突然変異を伴う癌、乳房、前立腺および卵巣のホルモン依存性腫瘍、家族性腺腫性ポリープ症などの前癌病変、および骨髄異形成症候群。
【００７４】
本明細書に提供される方法によって処置され得る他の特定の疾患および障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アレルギー性障害、炎症、喘息、関節炎、脳炎、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、炎症性骨溶解、慢性または急性閉塞性肺疾患、慢性または急性肺炎症性疾患、炎症性腸疾患、クローン病、痛風、ベーチェット病、Henoch Schonlein紫斑病（「ＦＩＳＰ」）、敗血症性ショック、敗血症、髄膜炎、大腸炎、再灌流による炎症、乾癬、肺線維症を含む線維症、パーキンソン病、運動緩慢、筋肉の硬直、パーキンソン震え、パーキンソン病、運動凍結、うつ病；長期記憶障害、ルビンシュタインテイビ症候群（ＲＴＳ）、認知症、睡眠障害、不眠症、体位不安定性、低運動障害、多動障害、シヌクレイン障害、多系統性萎縮症、線条体黒質変性、オリーブ橋小脳萎縮、シャイドラガー症候群、パーキンソン病的特徴を伴う運動ニューロン疾患、レビー小体型認知症、タウ病理障害、進行性超硬直性麻痺、皮質基底核変性、前頭側頭型認知症；アミロイド病理学的障害、軽度認知障害、アルツハイマー病、パーキンソニズムを伴うアルツハイマー病、ウィルソン病、Hallervorden Spatz病、Chediak Hagashi病、ＳＣＡ ３脊髄小脳性運動失調症、Ｘ連鎖ジストニアパーキンソニズム、ハンチントン病、プリオン病、舞踏病、バリズム、ジストニア振戦、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）、ＣＮＳ外傷、ミオクローヌス、および望ましくない免疫反応に関連する疾患または障害（例えば、臓器移植に関連する臓器拒絶反応）。
【００７５】
本明細書に提供される方法によって処置されるウイルス性感染症には、限定されないが、以下が包含される：ヒト免疫不全ウイルス（「ＨＩＶ」）、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、インフルエンザウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ヒトパピローマウイルス（「ＨＰＶ」）、アデノウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デング熱、黄熱病、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、ＧＢウイルスＡ、ＧＢウイルスＢ、ＧＢウイルスＣ、ウシウイルス性下痢ウイルス（「ＢＶＤＶ」）、古典的ブタ熱ウイルス（すなわち、ブタコレラウイルス）、国境病ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘、はしか、狂犬病ウイルス、アルボウイルス、サイトメガロウイルス、おたふく風邪ウイルス、ポリオウイルス、コクサッキーＢウイルス、エプスタインバーウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルスＢ１９、コロナウイルス。
ＳＡＲＳコロナウイルス、アストロウイルス、ノロウイルス、ロタウイルス、およびアデノウイルス。
【００７６】
本明細書で提供される方法によって処置することができる真菌感染症には、限定されないが、アスペルギルス症、ブラストミセス症、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、真菌性副鼻腔炎、ヒストプラスマ症、過敏性肺炎、ムコール症、パラコクシジオイデス症、スポロトリコーシス、およびバレー熱が包含される。
【００７７】
本明細書で提供される方法によって処置されることができる細菌感染症には、限定されないが、ブルセラ症、コレラ、ハンセン病、レプトスピラ症、シゲラ症、塹壕熱、野兎病、Ｑ熱、ウィットモア病、エルシニア症、ヨー、ビブリオ・ブルニフィカス感染症、ストレプトコッカス感染症、ブドウ球菌感染症および大腸菌感染症が包含される。
【００７８】
本発明はまた、抗体または他の治療用タンパク質をカプセル化するリポソームを含む組成物、およびそのようなリポソームカプセル化型抗体またはリポソームカプセル化型治療用タンパク質を作製する方法を企図する。本発明者らは、免疫グロブリンおよび他の治療用タンパク質が、リポソームの脂質二重層の疎水性コアに対する親和性をそれらに提供する疎水性領域またはポケットを含有することを見出した。驚くべきことに、凍結乾燥された抗体または他のタンパク質が予め形成されたリポソームの水性媒体中の懸濁液にさらされる場合、抗体および他の治療用タンパク質は自発的にリポソームに取り込まれ得る。そのような取り込みは、洗剤、界面活性剤、および有機溶媒の使用を必要とせず、そして好ましくは完全に避け、そして均質化、ミクロ流動化、濾過、または脂質二重層を破壊する他の機構も必要としない。そのような取り込みはまた、リポソームへの取り込みの前または後に、免疫グロブリンまたは他の治療用タンパク質のいかなる共有結合またはさらに非共有結合の修飾も必要とせず、好ましくは回避する。免疫グロブリンまたは他の治療用タンパク質は、疎水性相互作用および／またはファンデルワールス相互作用などの非共有結合によって脂質アルキル鎖と好ましくは会合し、誘導体化脂質およびストレプトアビジンおよびビオチンなどのような高親和性適合結合対を含有する誘導体化タンパク質の使用を含まない。得られる抗体またはタンパク質含有脂質小胞は、１００以下、８０以下、６０以下、５０以下、４０以下、さらには３０以下の脂質（例えば、リン脂質）対タンパク質のモル比を有することができる。タンパク質または抗体の取り込み（すなわちカプセル化）の収率は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％である。カプセル化された抗体またはタンパク質は、脂質二重層の疎水性部分内に部分的または全体的に埋め込まれており、小胞内腔に実質的に閉じ込められたり、脂質分子に共有結合されたり、ストレプトアビジンまたはビオチンなどの親和性の高い適合された結合分子に共有結合されない。カプセル化方法は生物学的機能を保持しながら穏やかであり、そしてリポソームカプセル化抗体またはタンパク質は凍結乾燥され得、そして例えば患者への投与など使用前に、あとで再構成され得る。
【実施例】
【００７９】
実施例１：薬物を有さないリポソームの調製：６％Ｌ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）リポソーム
６ｇのＬ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）を、マグネチックスターラーを用いて２００ｒｐｍで１０分間、周囲温度で１００ｍＬの水中に分散させた。分散したリポソーム（多層）を１５，０００ｐｓｉでミクロ流体ホモジナイザー（Microfluidic homogenizer）に通した。３サイクルの通過により、直径１００ｎｍ未満のリポソームが得られた。次いでトレハロースをリポソームに最終濃度１０％（ｗ／ｗ）まで添加した。得られた安定な等張性リポソームを液体として使用するかまたは凍結乾燥した。
【００８０】
実施例２：ラパコンでカプセル化されたリポソームの調製
２００ｍｇのラパコンおよび６ｇのＬ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）を周囲温度でマグネチックスターラーを使用して２００ｒｐｍで１０分間、１００ｍｌの水中に分散させた。分散したリポソーム（多層）を１５，０００ｐｓｉでミクロ流体ホモジナイザーに通した。３サイクルの通過により、直径１００ｎｍ未満の２ｍｇ／ｍＬラパコンでカプセル化されたリポソームが得られた。次いでトレハロースをリポソームに最終濃度１０％（ｗ／ｗ）まで添加した。得られたラパコンでカプセル化された安定な等張性リポソームを液体として使用するかまたは凍結乾燥した。
【００８１】
実施例３：シクロスポリンでカプセル化し、ミクロ乳化したリポソームの調製
５ｍＬのＭｙｇｌｉｏｌ中の５００ｍｇのシクロスポリンおよび６ｇのＬ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）を、周囲温度で１０分間、２００ｒｐｍでマグネチックスターラーを使用して１００ｍＬの水中に分散させた。分散したリポソーム（多層）をミクロ流体ホモジナイザーに１５，０００ｐｓｉで通過させた。３サイクルの通過により、直径１００ｎｍ未満の５ｍｇ／ｍＬシクロスポリンでカプセル化されたリポソームが得られた。次いでトレハロースをリポソームに最終濃度１０％（ｗ／ｗ）まで添加した。シクロスポリンでカプセル化およびミクロ乳化された、得られた安定な等張性リポソーム処方物は、液体として使用するかまたは凍結乾燥した。
【００８２】
実施例４：トランスフェリンでカプセル化したリポソームの調製
２００ｍｇのトランスフェリンおよび６ｇのＬ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）を、周囲温度でマグネチックスターラーを用いて２００ｒｐｍで１０分間、１００ｍＬの水中に分散させた。分散したリポソーム（多層）を１５，０００ｐｓｉでミクロ流体ホモジナイザーに通した。３サイクルの通過により、直径１００ｎｍ未満の５ｍｇ／ｍＬのトランスフェリンでカプセル化されたリポソームが得られた。次いでトレハロースをリポソームに最終濃度１０％（ｗ／ｗ）まで添加した。得られたトランスフェリンでカプセル化された安定な等張性リポソーム処方物は、液体として使用されるかまたは凍結乾燥された。
【００８３】
実施例５：コルヒチンでカプセル化されたリポソームの調製
６ｍｇのオレイン酸ナトリウム、１０ｇのトレハロースおよび６ｇのＬ−ａ−ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ）を、周囲温度でマグネチックスターラーを用いて２００ｒｐｍで１０分間、１００ｍＬの水中に分散させた。分散したリポソーム（多層）をミクロ流体ホモジナイザーに１５，０００ｐｓｉで１０回通過させた。アセトンに溶解した１００μＬのコルヒチンを１ｍＬの予め製造したリポソームに添加し、凍結乾燥した。薬物でカプセル化された、得られた安定な等張性の凍結乾燥されたリポソームは、凍結乾燥後に有機溶媒を本質的に含まない。凍結乾燥後、産物は１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬまたは４ｍｇ／ｍＬの水溶液（例えば注射用水）として再構成することができる。
【００８４】
実施例６：抗体のリポソーム中のカプセル化
抗体を含む多くの治療用タンパク質は、疎水性部分を有する。一態様において、抗体は、丁度他の疎水性タンパク質または疎水性薬物と同様に、抗体を予め形成されたリポソームに添加することによってリポソームによってカプセル化することができる。驚くべきことに、リポソーム膜は、リポソームの二重層のアルキル鎖部分に抗体の疎水性部分をカプセル化できることが見出された。これは、抗体を含むタンパク質が、チオール−マレイミド反応またはペプチド反応を介するなどの化学修飾によって脂質に共役される従来の方法とは対照的である。本発明では、治療用タンパク質の化学修飾は不要であり、タンパク質はその天然の構造を維持している。
【００８５】
ハーセプチン（HERCEPTIN）は、ＨＥＲ２を過剰発現し、リンパ節転移陽性またはリンパ節転移陰性（ＥＲ／ＰＲ陰性または１つの高リスクの特徴を有する）の乳がんの補助処置のために必要である。ハーセプチンは、静脈内投与用の無菌の白色〜淡黄色の防腐剤不含の凍結乾燥粉末として提供される。ハーセプチンの各マルチ使用バイアルは４４０ｍｇのトラスツズマブ、４００ｍｇのα，α−１，１−トレハロース二水和物、９．９ｍｇのＬ−ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ−ヒスチジン、および１．８ｍｇのポリソルベート２０，ＵＳＰを含有する。
【００８６】
注射用の水２０ｍＬでのハーセプチンのバイアルの再構成は、約６．０のｐＨで２１ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する溶液を生じた。１．７５ｍｇのトラスツズマブを含有する溶液のアリコートを３ｍＬのバイアル中で凍結乾燥し、そして２００μＬの６％ダイズホスファチジルコリン（ＳＰＣ）リポソーム（ミクロ流動化操作を使用して調製）を凍結乾燥抗体に添加することによって８．７５ｍｇ／ｍＬの抗体最終濃度にて再構成した（抗体の添加後に穏やかに混合しただけでミクロ流動化操作は実施しなかった）。移動相として１００ｍＭ硫酸ナトリウムおよび１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６．０を用いて、１０μＬのサンプルをＴｏｓｏｈ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬゲル濾過カラムに注入することにより、その試料をサイズ排除ＨＰＬＣにより分析した。リポソームを含まないＨＵＭＩＲＡ試料を対照として使用した（図１Ａ参照）。データは、５．６ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブが、空隙容量でのその溶出に基づいてリポソーム中にカプセル化されたことを示した（図１Ｂ）。
【００８７】
リポソーム化したハーセプチンの組成物は表１に示される。
【表１】
2019526619.tif 000002
【００８８】
フミラ（HUMIRA）は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、およびプラーク乾癬の処置に必要とされる腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）遮断薬である。フミラは皮下投与のためのアダリムマブの無菌、防腐剤不含の溶液として供給される。薬物製品は、使い捨てのプレフィルドペン（HUMIRA Pen）、または使い捨ての１ｍＬプレフィルドガラスシリンジとして供給される。フミラの溶液は無色透明で、ｐＨは約５．２である。各注射器は、アダリムマブ４０ｍｇ、塩化ナトリウム４．９３ｍｇ、一塩基性リン酸ナトリウム二水和物０．６９ｍｇ、二塩基性クエン酸ナトリウム二水和物１．２２ｍｇ、クエン酸ナトリウム０．２４ｍｇ、クエン酸一水和物１．０４ｍｇ、マンニトール９．６ｍｇ、０．８ｍｇのポリソルベート８０、および注射用水、ＵＳＰを含有する０．８ｍＬの薬物製品を送達する。ｐＨを調整するために必要に応じて水酸化ナトリウムを添加する。
【００８９】
１．７５ｍｇのアダリムマブを含有するアリコートを３ｍＬバイアル中で凍結乾燥し、そして次に最終濃度８．７５ｍｇ／ｍＬ抗体を有する２００μＬを有する６％ＳＰＣリポソームで再構成した。移動相として１００ｍＭ硫酸ナトリウムおよび１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６．０を使用して、Ｔｏｓｏｈ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬゲル濾過カラムを使用して１０μＬの試料を注入することにより、試料をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。フミラ試料をリポソームなしの対照として使用した。驚くべきことに、データは、空隙容量での溶出に基づいて、５．６ｍｇ／ｍＬのハーセプチンがリポソーム中にカプセル化されていたことを示した（図１Ｃ）。これらのデータは、ハーセプチンの疎水性ポケットが、二層のホスファチジルコリンのアルキル基の間に化学修飾なしに収容されていることを示唆している。
【００９０】
リポソームのフミラの組成物が、以下の表２に示される。
【表２】
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抗体の同様の取り込みは、抗体の液体（すなわち、水溶化で、凍結乾燥されない）調製物をリポソームの水性懸濁液に添加することによって得られた。
【００９１】
本明細書中に引用された全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物、特許または特許出願がその全体として全ての目的のために組み入れられるように具体的におよび個別に示されるかのように同じ程度まで、全ての目的のためにその全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【国際調査報告】
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