(57)【要約】免疫グロブリン、例えば、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１の複合体に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性部分などが本明細書に開示される。本出願は、例えば、ＴＧＦβ１活性を阻害し、がんおよび線維症などのＴＧＦβ１関連障害に罹患している被験体を処置するための、これらの免疫グロブリンの使用方法も提供する。一局面では、上記抗体およびその抗原結合性部分が結合するＴＧＦβ１のエピトープは、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体のうちの２つまたはそれよりも多くの中に存在する場合に、上記抗体による結合に利用可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、前記エピトープは、前記ＴＧＦβ１が以下のタンパク質複合体：
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、
ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、
ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および
ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体
のうちの２つまたはそれよりも多くの中に存在する場合に、前記抗体による結合に利用可能なものであり、
前記抗体は、遊離の成熟ＴＧＦβ１には結合しない、
抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２】
前記ＴＧＦβ１が潜在型ＴＧＦβ１である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３】
前記ＴＧＦβ１がプロＴＧＦβ１である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４】
前記抗体が、ＴＧＦβ２には結合しない、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項５】
ＴＧＦβ３には結合しない、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項６】
ＴＧＦβ１のインテグリンに結合する能力を妨げない、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項７】
配列番号５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項８】
配列番号３のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項９】
配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む重鎖可変領域および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１０】
配列番号１３に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１１】
配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１２】
配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１３】
配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む重鎖可変領域および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６、および１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１４】
配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６、１２および１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１５】
配列番号１５に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１から６、および１２から１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１６】
配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１から６、および１２から１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１７】
ＴＧＦβ１活性化を阻害する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１８】
前記ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、前記ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、前記ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／または前記ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１９】
ＴＧＦβ１の前記エピトープに対する解離定数（ＫＤ）が、少なくとも約１０−８Ｍ；少なくとも約１０−９Ｍ；少なくとも約１０−１０Ｍ；少なくとも約１０−１１Ｍ；少なくとも約１０−１２Ｍ；および少なくとも約１０−１３Ｍからなる群より選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２０】
ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２１】
ヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２２】
ＩｇＧ１様ヒンジが生成され、鎖間ジスルフィド結合の形成が可能になるＳｅｒからＰｒｏへの骨格置換を有する、ヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項２１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２３】
ヒトＩｇラムダ定常ドメインまたはヒトＩｇカッパ定常ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖定常ドメインをさらに含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２４】
２つの重鎖および２つの軽鎖である４つのポリペプチド鎖を有するＩｇＧである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
ヒト化抗体、ダイアボディ、またはキメラ抗体である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
ヒト化抗体である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
ヒト抗体である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
ヒト生殖系列アミノ酸配列を有するフレームワークを含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２９】
Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦａｂ断片、またはｓｃＦｖ断片である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の抗原結合性部分。
【請求項３０】
請求項１から２９までのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性部分と結合について競合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３１】
請求項１から２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分と同じエピトープに結合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３２】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３３】
ＴＧＦβ１活性化を阻害するための方法であって、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３２に記載の医薬組成物に曝露させるステップを含む、方法。
【請求項３４】
前記抗体またはその抗原結合性部分が、前記ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、前記ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、前記ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／または前記ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施される、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
ｉｎ  ｖｉｖｏで実施される、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体または前記ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体が、細胞の外表面に存在する、請求項３３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞が、Ｔ細胞、線維芽細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、抗原提示細胞、またはミクログリアである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体または前記ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体が、細胞外マトリクスに結合している、請求項３３から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞外マトリクスが、フィブリリンを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記細胞外マトリクスが、ＲＧＤモチーフを含むタンパク質を含む、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
被験体におけるＴＧＦβ１活性化を低減するための方法であって、前記被験体に、請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３２に記載の医薬組成物を有効量で投与し、それにより、前記被験体におけるＴＧＦβ１活性化を低減するステップを含む、方法。
【請求項４３】
前記被験体が、線維症、筋ジストロフィー、がん、認知症、および骨髄線維症からなる群より選択される状態を有するかまたは有するリスクがある、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記被験体が、肝線維症、腎線維症、または肺線維症（例えば、特発性肺線維症）を有するかまたは有するリスクがある、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記被験体が、ミオスタチン阻害剤、ＶＥＧＦアゴニスト、ＩＧＦ１アゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ５阻害剤、二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、リシルオキシダーゼ様−２阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ＧＤＦ１１阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせを含む治療をさらに受ける、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗体またはその抗原結合性部分が、制御性Ｔ細胞の抑制活性を低減する、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体またはその抗原結合性部分が、前記被験体における臓器毒性を誘導しない、請求項３３から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記臓器毒性が、心血管毒性、胃腸毒性、免疫毒性、骨毒性、軟骨毒性、生殖系毒性、または腎毒性を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
がんの処置を必要とする被験体におけるがんを処置するための方法であって、前記被験体に、請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３２に記載の医薬組成物を有効量で投与し、それにより、前記被験体におけるがんを処置するステップを含む、方法。
【請求項５０】
前記抗体またはその抗原結合性部分を追加的な薬剤または追加的な治療と組み合わせて投与する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記追加的な薬剤がチェックポイント阻害剤である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記追加的な薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＩＣＯＳＬ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記追加的な治療が、放射線、化学療法剤、またはこれらの組み合わせである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸。
【請求項５５】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３２に記載の医薬組成物、およびその使用についての指示を含む、キット。
【請求項５６】
筋線維傷害を処置するための方法であって、筋線維傷害を有する被験体に、ＴＧＦβ２／３に対してＴＧＦβ１を選択的に阻害する薬剤を、
ｉ）筋線維修復を促進する；
ｉｉ）収縮誘導性損傷から保護する；
ｉｉｉ）筋肉の炎症を低減する；および／または、
ｉｖ）筋肉の線維症を低減する
のに有効な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項５７】
前記量が、前記被験体において許容されないレベルの有害作用を引き起こさない、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記筋線維傷害が、
ｉ）筋ジストロフィーに関連する；または
ｉｉ）急性筋損傷に関連する、
請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記薬剤が、ＴＧＦβ１の活性化を遮断するが、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３の活性化を遮断しない、請求項５６から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記薬剤が、モノクローナル抗体である、請求項５６から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記モノクローナル抗体が、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ２−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ３−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、および／またはＬＴＢＰ４−プロＴＧＦβ１潜在型複合体に結合する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記被験体が、ミオスタチン阻害剤をさらに受ける、請求項５６から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
疾患に関連するＴＧＦβ１の供給源または状況を同定するステップ
をさらに含む、請求項５６から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
ＴＧＦβシグナル伝達を調節する医薬組成物を生成するための方法であって、
ＴＧＦβの少なくとも１つのアイソフォームのシグナル伝達を調節する１つまたは複数の薬剤を提供するステップ；
ＴＧＦβの全てのアイソフォームに対する前記１つまたは複数の薬剤の活性を測定するステップ；
ＴＧＦβの単一のアイソフォームに特異的である薬剤を選択するステップ；
アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に製剤化するステップ
を含む、方法。
【請求項６５】
前記アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターが、ＴＧＦβ１特異的モジュレーターである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＴＧＦβ１特異的モジュレーターが、ＴＧＦβ１の阻害剤である、請求項６５に記載の方法、
【請求項６７】
前記アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターが、抗体またはその断片である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体またはその断片が、ＴＧＦβ１のプロ／潜在型複合体に特異的に結合する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体またはその断片が、前記プロ／潜在型複合体に存在しない遊離の成熟ＴＧＦβ１には結合しない、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記プロ／潜在型複合体が、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３またはＬＴＢＰ４を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
請求項６４に記載の方法によって生成される医薬組成物。
【請求項７２】
ＴＧＦβシグナル伝達に関連する疾患を処置するための方法であって、
それを必要とする被験体に、請求項７１に記載の医薬組成物を、前記疾患を処置するのに有効な量で投与するステップを含み、前記量が、前記疾患を有する患者集団に投与した場合に統計的に有意な臨床的効能および安全性を達成する、
方法。
【請求項７３】
被験体における有害作用の低減に使用するためのＴＧＦβ阻害剤であって、アイソフォーム選択的であるＴＧＦβ阻害剤。
【請求項７４】
前記ＴＧＦβ阻害剤が、ＴＧＦβ１を特異的に阻害する抗体である、請求項７３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１６年３月１１日に出願された米国仮出願第６２／３０７，３５３号、２０１７年１月６日に出願された米国仮出願第６２／４４３，６１５号および２０１７年１月３１日に出願された米国仮出願第６２／４５２，８６６号（これら各々の全体の内容は、その全容が参考として本明細書に明示的に援用される）に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
増殖因子のトランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、これらに限定されないが、細胞増殖の阻害、組織恒常性、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）リモデリング、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、細胞遊走および浸潤、および免疫調節／抑制、ならびに間葉上皮転換を含めた多様な生物学的プロセスを制御するいくつものシグナル伝達カスケードに関与する。ＥＣＭリモデリングとの関連で、ＴＧＦβシグナル伝達により線維芽細胞集団およびＥＣＭ沈着（例えば、コラーゲン）が増加する可能性がある。免疫系では、ＴＧＦβリガンドにより、制御性Ｔ細胞の機能ならびに免疫前駆細胞の増殖および恒常性の維持が調節される。正常な上皮細胞では、ＴＧＦβは、強力な増殖阻害剤および細胞分化のプロモーターである。しかし、腫瘍が発生し進行するにつれ、上皮細胞はＴＧＦβに対する負の増殖応答を失う頻度が高い。この場面では、ＴＧＦβは、血管新生を刺激し、間質の環境を変化させ、局所および全身免疫抑制を誘導することができるので、腫瘍発生のプロモーターになり得る。これらおよび他の理由で、ＴＧＦβはいくつもの臨床的適応症に関する治療標的になっている。現在までいくつものグループにより多くの努力がなされてきたにもかかわらず、ＴＧＦβ治療薬の臨床開発は困難なものである。
【０００３】
ラットおよびイヌを含めた前臨床試験からの観察から、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴＧＦβの阻害に付随するある特定の毒性が明らかになった。さらに、現在までにいくつかのＴＧＦβ阻害剤が開発されてきたが、ＴＧＦβを標的化する大半の臨床的なプログラムは副作用に起因して中止されている。
【０００４】
例えば、Ａｎｄｅｒｔｏｎら（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、３９巻：９１６〜２４頁、２０１１年）により、前臨床動物モデルにおいてＴＧＦβＩ型（ＡＬＫ５）受容体の小分子阻害剤が出血、炎症、変性および弁間質細胞の増殖を特徴とする心臓弁病変を誘導することが報告された。この毒性は、試験した全ての用量で、全ての心臓弁において観察された。Ｆｒａｚｉｅｒら（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、３５巻：２８４〜２９５頁、２００７年）により、ラットにおいて、ＴＧＦβＩ型（ＡＬＫ５）受容体の小分子阻害剤であるＧＷ７８８３８８を投与すると骨端軟骨異形成が誘導されることが報告された。
【０００５】
Ｓｔａｕｂｅｒら（Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、４巻：３号、２０１４年）により、ラットおよびイヌにおいて、ある特定のがん処置に関して調査されているＴＧＦβ受容体Ｉ型キナーゼの阻害剤であるＬＹ２１５７２９９を長期（３か月以上）投与すると心血管系、胃腸系、免疫系、骨／軟骨系、生殖系、および腎臓系が関与する多数の臓器毒性が引き起こされたことが報告された。
【０００６】
ＴＧＦβの全てのヒトアイソフォームを中和することができる「汎」ＴＧＦβ抗体であるフレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）（ＧＣ１００８）は、カニクイザルを用いた試験において、複数回の投与後に、歯肉、膀胱、および鼻甲介上皮の上皮過形成を誘導することが報告されている（Ｌｏｎｎｉｎｇら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２巻：２１７６〜８９頁、２０１１年）。同様に、臨床試験において、当該薬物の複数用量の投与後に種々の皮膚発疹／病変、歯肉出血および疲労が報告されている。フレソリムマブに対する最も注目すべき有害反応は、ヒトがん患者における皮膚の角化棘細胞腫および／または扁平上皮細胞癌の誘導を含む（例えば、Ｌａｃｏｕｔｕｒｅら、２０１５年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、６４巻：４３７〜４６頁；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、２０１３年、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２巻：８号、ｅ２６２１８頁；およびＬｏｎｎｉｎｇら、２０１１年を参照されたい）。臨床試験からの追加的な証拠から、一部の場合ではこの抗体により腫瘍の進行が加速する可能性があることが示唆される（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、２０１３年、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２巻：８号、ｅ２６２１８頁）。
【０００７】
したがって、例えば、がん、線維症および炎症を含めた、ＴＧＦβが関与する疾患および障害を有効かつ安全に処置するために使用することができる、ＴＧＦβシグナル伝達を調節するための新しい方法および組成物が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｌａｃｏｕｔｕｒｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１５年）６４巻：４３７〜４６頁
【非特許文献２】Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１３年）２巻：８号、ｅ２６２１８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示は、ＴＧＦβ作用のサブセットの選択的調節に関する。本発明は、少なくとも一部において、現在までに分かっているＴＧＦβアンタゴニストのアイソフォーム特異性の欠如が、ＴＧＦβ阻害に付随する毒性の原因の基礎をなす可能性があるという概念に基づく。実際に、本開示の発明者らは、現在までに記載されている大半のＴＧＦβ阻害剤が複数のまたは全てのＴＧＦβアイソフォームに対して拮抗することを見出した。さらに、当技術分野で記載されている一般的傾向は、ＴＧＦβの複数のアイソフォームの中和が「最大の治療的効能」を達成するのに必要または有利であると思われるという理由で、ＴＧＦβの複数のアイソフォームに対して拮抗する阻害剤（例えば、抗ＴＧＦβ抗体など）が有利であることである（例えば、Ｂｅｄｉｎｇｅｒら（２０１６年）ＭＡＢＳ、８巻（２号）：３８９〜４０４頁を参照されたい）。
【００１０】
この一般的教示とは反対に、本発明の発明者らは、その代わりに、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて公知のＴＧＦβアンタゴニストを用いて観察される毒性（例えば、有害作用、副作用）を排除することまたは著しく低減することを目的として、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３にも影響を及ぼす阻害とは対照的に、ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害を可能にする薬剤を開発しようと努めた。この新規の手法は、少なくとも一部において、ＴＧＦβ阻害剤の臨床的有用性が、その効能だけでなく、その安全性にも基づくものであり得るという概念に基づく。前例のない特異性の程度を用いて標的を微調整できることにより、臨床の場における効能と安全性／忍容性の両方を達成することができると判断した。
【００１１】
したがって、本発明は、ＴＧＦβシグナル伝達をアイソフォーム特異的に阻害する医薬品により、複数のＴＧＦβアイソフォームに影響を及ぼす薬剤と比較して改善された安全性プロファイルがもたらされ得るという認識を包含する。対照的に、当技術分野におけるいくつもの公知のＴＧＦβアンタゴニストは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて効果的であることが示されている用量で、許容されないレベルの毒性を生じる。そのような例では、毒性を回避するために、より少ない投薬を使用することができるが、その低減した用量ではもはや十分なｉｎ  ｖｉｖｏ効能が生じなくなる可能性がある。特定の理論にも拘束されることを望まないが、そのような毒性は、少なくとも一部において、薬剤のアイソフォーム特異性／選択性の欠如によって生じることが予想される。
【００１２】
したがって、一態様では、本発明は、被験体におけるＴＧＦβ阻害に付随する毒性（例えば、有害作用、望ましくない副作用）を低減するための方法を提供する。本発明によると、本明細書に記載のものなどのＴＧＦβ１特異的阻害剤は、より広範な標的（例えば、ＴＧＦβの１種よりも多くのアイソフォーム）に対する活性を引き出す薬剤と比較して優れた安全性−効能プロファイルを有する。したがって、そのようなＴＧＦβ１特異的阻害剤は、それを必要とする被験体に、有害作用を引き起こすことなく、治療有効用量で投与することが可能である。したがって、そのような手法により、患者において効能および安全性／忍容性の両方を達成することができる投薬量の範囲が広がる。したがって、本発明は、ＴＧＦβ１シグナル伝達に関連する疾患を、被験体にＴＧＦβ１アイソフォームに特異的または高度に選択的であるＴＧＦβ阻害剤を有効量で投与することによって処置するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、そのようなＴＧＦβ１アイソフォーム選択的またはＴＧＦβ１アイソフォーム特異的阻害剤は、小分子薬剤または生物製剤（例えば、抗体）であり得る。任意のそのような阻害剤の、被験体におけるＴＧＦβ阻害に付随する毒性（例えば、有害作用または副作用）を低減するための使用は本発明に包含される。本発明によると、有効量は、ｉ）効能（例えば、治療的に有益な影響）；およびｉｉ）安全性（例えば、有害作用または副作用が許容されるレベルの範囲内であること）の両方を可能にする投薬量の範囲内である。いくつかの実施形態では、有害作用は、心血管毒性、胃腸毒性、免疫毒性、骨／軟骨毒性、生殖毒性、および腎毒性を含み得る。いくつかの実施形態では、心血管毒性は、これらに限定されないが、心臓弁病変、例えば、弁間質細胞の出血、炎症、変性および増殖を含む。いくつかの実施形態では、有害作用は、出血を含み得る。いくつかの実施形態では、有害作用は、皮膚病変または腫瘍を含み得る。いくつかの実施形態では、有害作用は、腫瘍の進行を含み得る。
【００１３】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴＧＦβ１活性化のステップを選択的に阻害し、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３活性化のステップは阻害しないことを特徴とするアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤抗体またはその抗原結合性断片を提供する。そのような抗体またはその断片は、ＴＧＦβ１阻害が有益である被験体に、許容されないまたは耐えられないレベルの有害作用を引き起こすことなく臨床的効能を達成するのに有効な量で投与され得る。したがって、本発明は、ヒト患者におけるＴＧＦβシグナル伝達に関連する疾患または状態を処置するための効能基準および安全性基準の両方が満たされるように特異的に選択されるＴＧＦβ１アイソフォーム特異的阻害剤を教示する。
【００１４】
関連する態様では、本発明は、改善された安全性プロファイル（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ毒性の低減）を有するアイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターの作製方法を提供する。そのような方法では、候補薬剤をアイソフォーム特異性について試験し、選択する必要がある。いくつかの実施形態では、候補薬剤をＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３シグナル伝達ではなくＴＧＦβ１シグナル伝達に対する特異的な活性について選択する。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＴＧＦβ１アイソフォーム特異的阻害剤である。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３ではなくＴＧＦβ１に特異的に結合し、その活性化を遮断する抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、そのような抗体またはその抗原結合性断片は、プロ／潜在型複合体と会合していない遊離の成熟ＴＧＦβ１増殖因子には結合しない。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ＴＧＦβ活性化を状況依存的に調節することによってＴＧＦβシグナル伝達のさらなる微調整を達成するための組成物および関連する方法を提供する。
【００１６】
ＴＧＦβは、いくつもの細胞／組織作用の付与に関与し、そのような作用はそれぞれ、一部において、いわゆる「提示分子」との相互作用によって媒介される。種々の提示分子の発現は細胞型特異的または組織特異的であるので、ＴＧＦβは、その特定の提示分子との相互作用（すなわち、「状況」）に応じて細胞作用を付与することが意図されている。したがって、とりわけ、本開示は、特定の状況（すなわち、ＴＧＦβと提示分子とを含む複合体）で存在するＴＧＦβに選択的に結合するモノクローナル抗体を提供する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下の複合体：ｉ）ＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ；ｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＲＲＣ３３；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ１；および、ｉｖ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ３のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下の複合体：ｉ）ＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ；ｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＲＲＣ３３；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ１；および、ｉｖ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ３のうちの１つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下の複合体：ｉ）ＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ；ｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＲＲＣ３３；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ１；および、ｉｖ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ３のうちの２つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下の複合体：ｉ）ＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ；ｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＲＲＣ３３；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ１；および、ｉｖ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ３のうちの３つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下の複合体：ｉ）ＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ；ｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＲＲＣ３３；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ１；および、ｉｖ）ＴＧＦβ１−ＬＴＢＰ３の全てに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、遊離のＴＧＦβ１である（例えば、提示分子と複合体を形成していない）成熟ＴＧＦβ１には結合しない。
【００１７】
本開示は、ＴＧＦβ１の小潜在型複合体（例えば、「Ｃ４Ｓ」）に結合するモノクローナル抗体を含む。
【００１８】
本開示は、特定の状況にあるＴＧＦβを選択的に標的化し、調節するモノクローナル抗体をさらに提供する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、特定の状況にあるＴＧＦβを阻害するかまたは活性化する。
【００１９】
したがって、本発明は、ＴＧＦβ活性のサブセットを調節する（活性化するかまたは阻害する）ための組成物および方法を提供する。したがって、本発明は、ＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路のサブセットを、他のＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路に影響を及ぼすことなく選択的に調節することができるモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路のサブセットは、ｉ）ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉ）ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉｉ）ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用、およびｉｖ）ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを含む。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下のＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路のうちの１つを、他の３つ経路は調節することなく、特異的に調節する：ｉ）ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉ）ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉｉ）ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用、およびｉｖ）ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下のＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路のうちの２つを、他の２つの経路は調節することなく、特異的に調節する：ｉ）ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉ）ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉｉ）ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用、およびｉｖ）ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下のＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路のうちの３つを、他の１つの経路は調節することなく、特異的に調節する：ｉ）ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉ）ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉｉ）ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用、およびｉｖ）ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、以下のＴＧＦβに媒介されるシグナル伝達経路の全てを特異的に調節する：ｉ）ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉ）ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用、ｉｉｉ）ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用、およびｉｖ）ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用を特異的に調節する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用を特異的に調節する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用を特異的に調節する。いくつかの実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用を特異的に調節する。したがって、本発明は、ＴＧＦβ活性を状況依存的に選択的に標的化するための方法を提供する。
【００２０】
本発明の態様は、ヒト被験体における疾患または障害を処置するための医薬組成物および方法を含む。いくつかの実施形態では、そのような疾患または障害は、免疫制御／制御不全に関連する状態、Ｔ細胞制御／制御不全に関連する状態；線維化特徴に関連する状態（線維症）；および／または腫瘍に関連する状態を含む。
【００２１】
本明細書に記載のＴＧＦβのプロ／潜在型複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片は、すでに放出された遊離の成熟増殖因子を標的化するのとは対照的に、活性化ステップ（すなわち、不活性な潜在型のプレ形態の複合体からの遊離の成熟ＴＧＦβ増殖因子の放出）を調節するものであるので、これらの調節剤の作用様式は、組織内のＴＧＦβ増殖因子の供給源に依存する。したがって、疾患の状況に関与するＴＧＦβの供給源を同定することが、適正な状況にあるＴＧＦβを有効に調節する薬剤の選択に役立つことが意図されている。例えば、ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。ＬＴＢＰ２に媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＬＴＢＰ２−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。ＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＬＴＢＰ３−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。ＬＴＢＰ４に媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、ＬＴＢＰ４−プロＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化する抗体またはその断片を選択することが望ましい。複数の（例えば、２つまたはそれよりも多くの）状況によって媒介されるＴＧＦβ１作用を伴う疾患表現型を処置するためには、対応する複数のＴＧＦβ１提示の状況を標的化することが可能な抗体またはその断片選択することが望ましい。
【００２２】
ある特定の疾患は、単一のＴＧＦβ機能の状況に限定されない、ＴＧＦβシグナル伝達の複数の生物学的役割に関連する。そのような場面では、複数の状況にわたってＴＧＦβ作用を調節することが有益であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＧＦβ１を、状況特異的にではなく、アイソフォーム特異的に標的化し、調節するための方法を提供する。そのような薬剤は、「アイソフォーム特異的、状況許容的」ＴＧＦβ１モジュレーターと称され得る。いくつかの実施形態では、状況許容的ＴＧＦβ１モジュレーターは、複数の状況（例えば、複数の型のプロ／潜在型ＴＧＦβ１複合体）を標的化する。いくつかの実施形態では、状況許容的ＴＧＦβ１モジュレーターは、全ての状況を包含するように、全ての型のプロ／潜在型ＴＧＦβ１複合体（例えば、ＧＡＲＰと会合したもの、ＬＲＲＣ３３と会合したもの、ＬＴＢＰと会合したものなど）を標的化する。
【００２３】
状況許容的ＴＧＦβ１モジュレーターは１つよりも多くの型のプロ／潜在型ＴＧＦβ１複合体（すなわち、異なる提示分子を伴う）を標的化することが可能である一方で、いくつかの実施形態では、そのようなモジュレーターは、１つまたは複数の状況を他の状況よりも好み得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１の活性化を阻害する状況許容的抗体は、そのような抗体が両方の型のプロ／潜在型複合体に結合することができるものであっても、１つの提示分子によって媒介されるＴＧＦβ１活性化を、別の提示分子よりも優先的に阻害する。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＬＴＢＰと会合したＴＧＦβ１、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１、およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に結合し、その活性化を阻害するが、ＬＴＢＰと会合したＴＧＦβ１に対して優先的な阻害活性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＬＴＢＰ１と会合したＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３と会合したＴＧＦβ１、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１、およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に結合し、その活性化を阻害するが、ＬＴＢＰ１−およびＬＴＢＰ−３と会合したＴＧＦβ１に対して優先的な阻害活性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＬＴＢＰ１と会合したＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３と会合したＴＧＦβ１、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１、およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に結合し、その活性化を阻害するが、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に対して優先的な阻害活性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に結合し、その活性化を阻害するが、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１に対して優先的な阻害活性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に結合し、その活性化を阻害するが、ＬＲＲＣ３３と会合したＴＧＦβ１に対して優先的な阻害活性を有するモノクローナル抗体である。
【００２４】
したがって、本発明によると、ＴＧＦβ作用のサブセットを標的化するために、種々の選択性の程度を生じさせることができる。ＴＧＦβのアイソフォーム特異的モジュレーター（ＴＧＦβの単一のアイソフォームを標的化する）は、汎ＴＧＦβモジュレーター（ＴＧＦβの複数のまたは全てのアイソフォームを標的化する）よりも高い選択性をもたらすものである。ＴＧＦβのアイソフォーム特異的、状況許容的モジュレーター（ＴＧＦβの単一のアイソフォームの複数の状況を標的化する）は、アイソフォーム特異的モジュレーターよりも大きな選択性をもたらすものである。ＴＧＦβのアイソフォーム特異的、状況特異的モジュレーター（ＴＧＦβの単一のアイソフォームの単一の状況を標的化する）は、アイソフォーム特異的、状況許容的モジュレーターよりもはるかに高い選択性をもたらすものである。
【００２５】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、まず、疾患に関連するＴＧＦβの供給源および／または状況を同定または確認し、次いで、組織内のＴＧＦβの特定のサブプールを特異的に標的化する薬剤を選択することを含む、ＴＧＦβシグナル伝達に関連する疾患を処置するための方法を含む。このように、そのような手法により、ＴＧＦβの正常な機能は保存しながら、ＴＧＦβの疾患に関連する機能を優先的に調節することができることが意図されている。いくつかの実施形態では、疾患に関連するＴＧＦβの供給源／状況を同定するために、患部組織に存在するＴＧＦβ提示分子（複数可）の発現を評価することができる。一例を挙げると、疾患組織内にＬＴＢＰと会合したＴＧＦβ１潜在型複合体およびＧＡＲＰと会合したＴＧＦβ１複合体の両方が存在する可能性があり、この２つのうちの後者のみが疾患表現型として発現する可能性がある。その筋書きでは、ＬＴＢＰに媒介されるＴＧＦβ１シグナル伝達はインタクトに維持しながら、ＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ１シグナル伝達を阻害することが望ましい。疾患に関連するＴＧＦβ１の供給源／状況の決定は、特定の提示分子（例えば、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰなど）を含むＴＧＦβ１潜在型複合体に特異的に結合する抗体を使用して行うことができる。Ｔ細胞制御／制御不全に関連する状態の処置に関しては、本発明のいくつかの実施形態は、被験体におけるＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用を調節するモノクローナル抗体を有効量で含む組成物の投与を含む。
【００２６】
免疫制御／制御不全に関連する状態の処置に関しては、本発明のいくつかの実施形態は、被験体におけるＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用および／またはＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ作用を調節するモノクローナル抗体を有効量で含む組成物の投与を含む。
【００２７】
線維症に関連する状態の処置に関しては、本発明のいくつかの実施形態は、被験体におけるＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用および／またはＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用を調節するモノクローナル抗体を有効量で含む組成物の投与を含む。
【００２８】
ある特定の型のがんに関連する状態の処置に関しては、本発明のいくつかの実施形態は、被験体におけるＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ作用、ＬＴＢＰ１に媒介されるＴＧＦβ作用および／またはＬＴＢＰ３に媒介されるＴＧＦβ作用を調節するモノクローナル抗体を有効量で含む組成物の投与を含む。
【００２９】
本開示の態様は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分などの免疫グロブリンに関する。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１に存在する場合に、抗体またはその抗原結合性部分による結合に利用可能なＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する。
【００３０】
一態様では、ＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、エピトープが、ＴＧＦβ１が以下のタンパク質複合体：ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体のうちの２つまたはそれよりも多くに存在する場合に、抗体による結合に利用可能なものであり、抗体が遊離の成熟ＴＧＦβ１には結合しない、単離された抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１は、潜在型ＴＧＦβ１である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１は、プロＴＧＦβ１である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ２には結合しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ３には結合しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１のインテグリンに結合する能力を妨げない。
【００３３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号３のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む重鎖可変領域および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む重鎖可変領域および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１活性化を阻害する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、少なくとも約１０−８Ｍ；少なくとも約１０−９Ｍ；少なくとも約１０−１０Ｍ；少なくとも約１０−１１Ｍ；少なくとも約１０−１２Ｍ；および少なくとも約１０−１３Ｍからなる群より選択される、ＴＧＦβ１のエピトープに対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２Ａ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２Ｂ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＡ定常ドメイン、ヒトＩｇＡ１定常ドメイン、ヒトＩｇＡ２定常ドメイン、ヒトＩｇＤ定常ドメイン、またはヒトＩｇＥ定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＩｇＧ１様ヒンジが生成され、鎖間ジスルフィド結合の形成が可能になるＳｅｒからＰｒｏへの骨格置換を有する、ヒトＩｇＧ４定常ドメインの免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ヒトＩｇラムダ定常ドメインまたはヒトＩｇカッパ定常ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖定常ドメインをさらに含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖である４つのポリペプチド鎖を有するＩｇＧである。
【００４５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト生殖系列アミノ酸配列を有するフレームワークを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、抗原結合性部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦａｂ断片、またはｓｃＦｖ断片である。
【００４７】
一態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分との結合について競合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。
【００４８】
別の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分と同じエピトープに結合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、薬物または検出可能な部分とコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、薬物または検出可能な部分とリンカーを介してコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、蛍光剤、発光剤、酵素剤、および放射性薬剤からなる群より選択される。
【００５０】
一態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００５１】
別の態様では、ＴＧＦβ１活性化を阻害するための方法であって、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物に曝露させることを含む方法が本明細書で提供される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、方法をｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施する。いくつかの実施形態では、方法をｉｎ  ｖｉｖｏで実施する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、細胞の外表面に存在する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、線維芽細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、抗原提示細胞、またはミクログリアである。
【００５６】
いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体またはＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体は、細胞外マトリクスに結合している。いくつかの実施形態では、細胞外マトリクスは、フィブリリンを含む。いくつかの実施形態では、細胞外マトリクスは、ＲＧＤモチーフを含むタンパク質を含む。
【００５７】
別の態様では、被験体におけるＴＧＦβ１活性化を低減するための方法であって、被験体に、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物を有効量で投与し、それにより、被験体におけるＴＧＦβ１活性化を低減するステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００５８】
いくつかの実施形態では、被験体は、線維症を有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、筋ジストロフィーを有する。いくつかの実施形態では、被験体は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を有する。いくつかの実施形態では、被験体は、肝線維症、腎線維症、または肺線維症（例えば、特発性肺線維症）を有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、がんを有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、認知症を有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、骨髄線維症を有するかまたはそれが発生するリスクがある。
【００５９】
いくつかの実施形態では、被験体は、追加的な治療をさらに受ける。いくつかの実施形態では、追加的な治療は、ミオスタチン阻害剤、ＶＥＧＦアゴニスト、ＩＧＦ１アゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ５阻害剤、二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、リシルオキシダーゼ様−２阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ＧＤＦ１１阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００６０】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、制御性Ｔ細胞の抑制活性を低減する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、被験体における臓器毒性を誘導しない。いくつかの実施形態では、臓器毒性は、心血管毒性、胃腸毒性、免疫毒性、骨毒性、軟骨毒性、生殖系毒性、または腎毒性を含む。
【００６２】
一態様では、それを必要とする被験体においてがんを処置するための方法であって、被験体に、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物を有効量で投与し、それにより、被験体におけるがんを処置するステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００６３】
別の態様では、それを必要とする被験体において腫瘍増殖を低減する方法であって、被験体に、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物を有効量で投与し、それにより、被験体における腫瘍増殖を低減するステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分を追加的な薬剤または追加的な治療と組み合わせて投与する。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＩＣＯＳＬ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、追加的な治療は、放射線、化学療法薬、またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、追加的な治療は、放射線である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、化学療法剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、タキソールである。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、抗炎症剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、単球／マクロファージ動員および／または組織浸潤のプロセスを阻害するものである。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、肝星細胞活性化の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、ケモカイン受容体アンタゴニスト、例えば、ＣＣＲ２アンタゴニストおよびＣＣＲ５アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、そのようなケモカイン受容体アンタゴニストは、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストなどの二重特異性アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、併用療法として投与される追加的な薬剤は、増殖因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーまたはその制御因子であるまたはそれを含む。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンおよびＧＤＦ１１のモジュレーター（例えば、阻害剤および活性化因子）から選択される。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンシグナル伝達の阻害剤である。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、プロ／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合し、ミオスタチンの活性化を遮断するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、プロ／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合し、ミオスタチンの活性化を遮断するモノクローナル抗体は、遊離の成熟ミオスタチンには結合しない。
【００６５】
さらに別の態様では、それを必要とする被験体において腎障害を処置する方法であって、被験体に、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物を有効量で投与し、それにより、被験体における腎障害を処置するステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００６６】
一態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸が本明細書で提供される。当該核酸を含むベクターも提供される。
【００６７】
別の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸を含む細胞が本明細書で提供される。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸を含むベクターを含む細胞も提供される。
【００６８】
さらに別の態様では、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物、およびその使用についての指示を含むキットが本明細書で提供される。
【００６９】
別の態様では、筋線維傷害を処置するための方法であって、筋線維傷害を有する被験体に、ＴＧＦβ２／３と比較してＴＧＦβ１を選択的に阻害する薬剤を、ｉ）筋線維修復を促進する；ｉｉ）収縮誘導性損傷から保護する；ｉｉｉ）筋肉の炎症を低減する；および／または、ｉｖ）筋肉の線維症を低減するのに有効な量で投与するステップを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、量は、被験体において許容されないレベルの有害作用を引き起こすものではない。
【００７０】
いくつかの実施形態では、筋線維傷害は、ｉ）筋ジストロフィーに関連する；または、ｉｉ）急性筋損傷に関連する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＴＧＦβ１の活性化を遮断するがＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３の活性化を遮断しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ２−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、ＬＴＢＰ３−プロＴＧＦβ１潜在型複合体、および／またはＬＴＢＰ４−プロＴＧＦβ１潜在型複合体に結合する。いくつかの実施形態では、被験体は、ミオスタチン阻害剤をさらに受ける。
【００７１】
いくつかの実施形態では、方法は、疾患に関連するＴＧＦβ１の供給源または状況を同定するステップをさらに含む。
【００７２】
さらに別の態様では、ＴＧＦβシグナル伝達を調節する医薬組成物を生成するための方法であって、ＴＧＦβの少なくとも１つのアイソフォームのシグナル伝達を調節する１つまたは複数の薬剤を提供するステップ；ＴＧＦβの全てのアイソフォームに対する１つまたは複数の薬剤の活性を測定するステップ；ＴＧＦβの単一のアイソフォームに特異的である薬剤を選択するステップ；アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に製剤化するステップを含む方法が本明細書で提供される。この方法によって生成される医薬組成物も提供される。
【００７３】
いくつかの実施形態では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターは、ＴＧＦβ１特異的モジュレーターである。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１特異的モジュレーターは、ＴＧＦβ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβモジュレーターは、抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、ＴＧＦβ１のプロ／潜在型複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、プロ／潜在型複合体に存在しない遊離の成熟ＴＧＦβ１には結合しない。いくつかの実施形態では、プロ／潜在型複合体は、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３またはＬＴＢＰ４を含む。
【００７４】
別の態様では、ＴＧＦβシグナル伝達に関連する疾患を処置するための方法であって、それを必要とする被験体に、本発明で提供される医薬組成物を、疾患を処置するために有効な量で投与するステップであり、当該量が、疾患を有する患者集団に投与した場合に統計的に有意な臨床的効能および安全性を達成するものである、ステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００７５】
さらに別の態様では、被験体における有害作用の低減に使用するためのＴＧＦβ阻害剤であって、アイソフォーム選択的であるＴＧＦβ阻害剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦβ１を特異的に阻害する抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】図１は、組織微小環境において潜在型複合体に結合したＴＧＦβを示す概略図である。
【００７７】
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、微小環境におけるニッチ調節を示す概略図である。図２Ａは、線維性疾患ニッチおよび創傷治癒ニッチにおいてＴＧＦβを提示する潜在型トランスホーミング増殖因子ベータ結合性タンパク質（ＬＴＢＰ）を示す。図２Ｂは、糖タンパク質Ａ反復優性タンパク質（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ  ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＧＡＲＰ）により炎症性ニッチにおけるＴＧＦβ活性化が調節されることを例示する。
【００７８】
【図３】図３は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体およびＬＴＢＰ−ＴＧＦβ１複合体を作製するためのタンパク質発現プラットフォームを例示する。ＨＥＫ２９３に基づく発現系ではＮｉＮＴＡアフィニティー精製およびゲル濾過を使用して数ミリグラム量の精製タンパク質を得る。野生型プロＴＧＦβ１、ＬＴＰＢ１、ｓＧＡＲＰ、およびプロＴＧＦβ１  Ｃ４Ｓの概略図が示されている。
【００７９】
【図４Ａ】図４Ａおよび４Ｂは、ｓＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体の精製を示す。図４Ａは試料のクロマトグラムであり、図４Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。
【図４Ｂ】図４Ａおよび４Ｂは、ｓＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体の精製を示す。図４Ａは試料のクロマトグラムであり、図４Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。
【００８０】
【図５Ａ】図５Ａおよび５Ｂは、ｓＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１  ＬＡＰ複合体の精製を示す。図５Ａは試料のクロマトグラムであり、図５Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。
【図５Ｂ】図５Ａおよび５Ｂは、ｓＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１  ＬＡＰ複合体の精製を示す。図５Ａは試料のクロマトグラムであり、図５Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。
【００８１】
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂは、プロＴＧＦβ１と複合体を形成したＬＴＢＰ１の精製を示す。図６Ａは試料のクロマトグラムであり、図６Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。ＮＲは非還元を表し、Ｒは還元を表す。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂは、プロＴＧＦβ１と複合体を形成したＬＴＢＰ１の精製を示す。図６Ａは試料のクロマトグラムであり、図６Ｂは産物のブロットおよび複合体を例示する概略図を示す。ＮＲは非還元を表し、Ｒは還元を表す。
【００８２】
【図７】図７は、Ａｂ１およびＡｂ２によりＴＧＦβ１活性の活性化が遮断されることを示すグラフである。
【００８３】
【図８】図８は、ヒト細胞におけるＡｂ１の最初の用量反応分析を示す。
【００８４】
【図９】図９は、ヒト細胞におけるＡｂ１によるＴＧＦβ１阻害を例示するＣＡＧＡ１２レポーター細胞アッセイを示す。
【００８５】
【図１０】図１０は、ＧＡＲＰ複合体の阻害により、健康なドナーの血液から単離されたＴ細胞における制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の抑制活性が遮断されることを示すグラフである。
【００８６】
【図１１−１】図１１Ａ〜１１Ｃは、線維芽細胞からのインテグリン媒介性ＴＧＦβ１放出の阻害を示す。図１１Ａおよび１１Ｂは、Ａｂ１（図１１Ａ）またはＡｂ２（図１１Ｂ）のいずれかを漸増濃度で使用した、正常なヒト皮膚線維芽細胞（丸）、正常なヒト肺線維芽細胞（四角）、マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ肺線維芽細胞（逆三角形）、またはマウスＤＢＡ２／Ｊ筋線維芽細胞（丸）のいずれかにおける内在性ＴＧＦβ１の阻害を示すグラフである。図１１Ｃは、共培養アッセイ系の概略図を提示する。
【図１１−２】図１１Ａ〜１１Ｃは、線維芽細胞からのインテグリン媒介性ＴＧＦβ１放出の阻害を示す。図１１Ａおよび１１Ｂは、Ａｂ１（図１１Ａ）またはＡｂ２（図１１Ｂ）のいずれかを漸増濃度で使用した、正常なヒト皮膚線維芽細胞（丸）、正常なヒト肺線維芽細胞（四角）、マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ肺線維芽細胞（逆三角形）、またはマウスＤＢＡ２／Ｊ筋線維芽細胞（丸）のいずれかにおける内在性ＴＧＦβ１の阻害を示すグラフである。図１１Ｃは、共培養アッセイ系の概略図を提示する。
【００８７】
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、Ａｂ１（図１２Ａ）またはＡｂ２（図１２Ｂ）のいずれかのＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１複合体への結合を示す。
【００８８】
【図１３Ａ】図１３Ａおよび１３Ｂは、Ａｂ１（「Ａｂ１」）、Ａｂ２（「Ａｂ２」）、アイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体（「アイソタイプ対照」）、またはビヒクル対照（「ビヒクル」）のいずれかを漸増濃度で使用した、ＳＷ４８０／β６細胞トランスフェクタントにおけるＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体（図１３Ａ）またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体（図１３Ｂ）の阻害を示すグラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ａおよび１３Ｂは、Ａｂ１（「Ａｂ１」）、Ａｂ２（「Ａｂ２」）、アイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体（「アイソタイプ対照」）、またはビヒクル対照（「ビヒクル」）のいずれかを漸増濃度で使用した、ＳＷ４８０／β６細胞トランスフェクタントにおけるＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体（図１３Ａ）またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体（図１３Ｂ）の阻害を示すグラフである。
【００８９】
【図１４】図１４は、恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行い、外科的介入の前にＰＢＳ（対照）、３０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１対照抗体、３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２、もしくは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与したマウス（２番目の棒〜５番目の棒）；またはＰＢＳを投与し、開腹術を行ったマウス（偽対照；最初の棒）由来の腎組織におけるヒドロキシプロリンのレベルを示す棒グラフである。
【００９０】
【図１５−１】図１５Ａ〜１５Ｈは、恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行い、外科的介入の前日、次いで外科手術の１日後および３日後にＰＢＳ（対照）、３０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１対照抗体、３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２、もしくは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与したマウス（各グラフの２番目の棒〜５番目の棒）；またはＰＢＳを投与し、開腹術を行ったマウス（偽対照；各グラフの最初の棒）由来の腎組織における、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子−１（ＰＡＩ−１；図１５Ａ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ；図１５Ｂ）、ＴＧＦβ１（図１５Ｃ）、フィブロネクチン−１（図１５Ｄ）、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ；図１５Ｅ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１；図１５Ｆ）、Ｉ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ１ａ１；図１５Ｇ）、またはＩＩＩ型コラーゲンアルファ１鎖（Ｃｏｌ３ａ１；図１５Ｈ）のいずれかの相対的なｍＲＮＡレベルを示す棒グラフである。このデータは、複数回の実験を代表するものである。
【図１５−２】図１５Ａ〜１５Ｈは、恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行い、外科的介入の前日、次いで外科手術の１日後および３日後にＰＢＳ（対照）、３０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１対照抗体、３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２、もしくは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与したマウス（各グラフの２番目の棒〜５番目の棒）；またはＰＢＳを投与し、開腹術を行ったマウス（偽対照；各グラフの最初の棒）由来の腎組織における、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子−１（ＰＡＩ−１；図１５Ａ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ；図１５Ｂ）、ＴＧＦβ１（図１５Ｃ）、フィブロネクチン−１（図１５Ｄ）、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ；図１５Ｅ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１；図１５Ｆ）、Ｉ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ１ａ１；図１５Ｇ）、またはＩＩＩ型コラーゲンアルファ１鎖（Ｃｏｌ３ａ１；図１５Ｈ）のいずれかの相対的なｍＲＮＡレベルを示す棒グラフである。このデータは、複数回の実験を代表するものである。
【図１５−３】図１５Ａ〜１５Ｈは、恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行い、外科的介入の前日、次いで外科手術の１日後および３日後にＰＢＳ（対照）、３０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１対照抗体、３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２、もしくは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与したマウス（各グラフの２番目の棒〜５番目の棒）；またはＰＢＳを投与し、開腹術を行ったマウス（偽対照；各グラフの最初の棒）由来の腎組織における、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子−１（ＰＡＩ−１；図１５Ａ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ；図１５Ｂ）、ＴＧＦβ１（図１５Ｃ）、フィブロネクチン−１（図１５Ｄ）、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ；図１５Ｅ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１；図１５Ｆ）、Ｉ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ１ａ１；図１５Ｇ）、またはＩＩＩ型コラーゲンアルファ１鎖（Ｃｏｌ３ａ１；図１５Ｈ）のいずれかの相対的なｍＲＮＡレベルを示す棒グラフである。このデータは、複数回の実験を代表するものである。
【００９１】
【図１６】図１６は、ピクロシリウスレッドで染色し、カラースペクトル分割を使用した定量的組織学的分析に供した、マウスから収集された右側腎臓の３つの連続切片の複合皮質コラーゲン体積の割合（ＣＶＦ）を示す。恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行い、外科的介入前にＰＢＳ（「Ｖｅｈ」）、３０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１対照抗体（「ＩｇＧ  Ｃｔｒｌ」）、３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２（「３  Ａｂ２」）、もしくは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２（「３０  Ａｂ２」）を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与したマウス（各グラフの２番目の棒〜５番目の棒）；またはＰＢＳを投与し、開腹術を行ったマウス（「偽」；各グラフの最初の棒）由来のＣＶＦ。
【００９２】
【図１７】図１７は、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせ（群１；対照）；Ａｂ１とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせ（群２）；Ａｂ２とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせ（群３）；マウスＩｇＧ１対照抗体と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ（群４）；Ａｂ１と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ（群５）；Ａｂ２と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ（群６）のいずれかを投与したＭＣ３８マウス結腸癌同系モデルＣ５７／ＢＬ／６マウスのメジアン腫瘍体積を示す。
【００９３】
【図１８】図１８Ａ〜１８Ｃは、例示的なモノクローナル抗体の結合特異性を示す。図１８Ａは、Ａｂ１およびＡｂ２が、ＥＬＩＳＡによって測定したところプロＴＧＦβ１に特異的に結合するが、プロＴＧＦβ２にもプロＴＧＦβ３にも成熟ＴＧＦβ１にも結合しないことを示す。図１８Ｂは、抗体結合特異性を決定するための抗原として使用するために発現させ、精製した、精製ＬＴＢＰ−プロＴＧＦβ１の例を示す。図１８Ｃは、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体（ＥＬＩＳＡによって測定して）の例を示す。
【００９４】
【図１９】図１９は、ビヒクル対照（ＰＢＳ；「対照」）；２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１；３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１；１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体（「汎ＴＧＦβ  Ａｂ」）；または１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを用いて処置したラットの生存曲線を示す。
【００９５】
【図２０】図２０は、ビヒクル対照（ＰＢＳ；「対照」）；２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１；３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１；１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体（「汎ＴＧＦβ  Ａｂ」）；または１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ２のいずれかを用いて処置したラットの体重（平均／標準偏差）を示す。
【００９６】
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｃは、ビヒクル対照（ＰＢＳ；「対照」）、２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１、または３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１（図２１Ａ）；ビヒクル対照（ＰＢＳ；「対照」）、または１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体（「汎ＴＧＦβ  Ａｂ」）；またはビヒクル対照（ＰＢＳ；「対照」）、または１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ２を用いて処置した個々のラットの体重を示す。
【００９７】
【図２２】図２２Ａおよび２２Ｂは、Ａｂ１（図２２Ａ）またはＡｂ２（図２２Ｂ）のいずれかを漸増濃度で使用した、プロＴＧＦβ１および提示分子（すなわち、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３）を発現するようにプラスミドを一過性にトランスフェクトしたＳＷ４８０／β６細胞におけるＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１複合体の阻害を示すグラフである。ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は０．４４５であり、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は１．３２５であった。
【００９８】
【図２３】図２３は、２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１（右上のパネル）；１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体（「汎ＴＧＦβ  Ａｂ」、左下のパネル）；１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ２（右下のパネル）のいずれかを用いて処置したラット、または無処置対照（左上のパネル）の心臓弁に由来するヘマトキシリン・エオシン染色切片の顕微鏡画像を示す。注：右下のパネル（Ａｂ２）は、厚さが不均一なためにより濃く染色された斜めになった切片である。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
哺乳動物では、トランスホーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、少なくとも３３種の遺伝子産物で構成される。これらは、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、アクチビン、増殖分化因子（ＧＤＦ）、ならびにＴＧＦβファミリーの３種のアイソフォーム：ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３を含む。ＴＧＦβは、細胞増殖の阻害、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）リモデリング、および免疫恒常性などの多様なプロセスにおいて重要な役割を果たすと考えられている。Ｔ細胞恒常性に対するＴＧＦβ１の重要性は、ＴＧＦβ１−／−マウスが３〜４週間しか生存せず、強力な免疫活性化に起因する多臓器不全で死亡するという知見によって実証される（Ｋｕｌｋａｒｎｉ，  Ａ．Ｂ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９９３年、９０巻（２号）：７７０〜４頁；Ｓｈｕｌｌ，  Ｍ．Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９２年、３５９巻（６３９７号）：６９３〜９頁）。ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３の役割ははっきりしていない。３種のＴＧＦβアイソフォームは、別個の時間的および空間的発現パターンを有する一方で、同じ受容体、ＴＧＦβＲＩおよびＴＧＦβＲＩＩを通じてシグナル伝達するが、一部の場合、例えばＴＧＦβ２シグナル伝達に関しては、ベータグリカンなどのＩＩＩ型受容体も必要である（Ｆｅｎｇ，  Ｘ．Ｈ．およびＲ．  Ｄｅｒｙｎｃｋ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ、２００５年、２１巻：６５９〜９３頁；Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９９８年、６７巻：７５３〜９１頁）。ＴＧＦβＲＩ／ＩＩのリガンド誘導性オリゴマー形成により、ＳＭＡＤ転写因子のリン酸化が誘発され、その結果、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＡＣＴＡ２、およびＳＥＲＰＩＮＥ１などの標的遺伝子の転写がもたらされる（Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．、Ｊ．  Ｓｅｏａｎｅ、およびＤ．  Ｗｏｔｔｏｎ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ、２００５年、１９巻（２３号）：２７８３〜８１０頁）。ＳＭＡＤに依存しないＴＧＦβシグナル伝達経路も、例えば、Ｍａｒｆａｎマウスのがんまたは大動脈病変において記載されている（Ｄｅｒｙｎｃｋ，  Ｒ．およびＹ．Ｅ．  Ｚｈａｎｇ、Ｎａｔｕｒｅ、２００３年、４２５巻（６９５８号）：５７７〜８４頁；Ｈｏｌｍ，  Ｔ．Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１１年、３３２巻（６０２７号）：３５８〜６１頁）。
【０１００】
ヒトにおけるＴＧＦβ経路の生物学的重要性は遺伝子疾患によって検証されてきた。カムラチ−エンゲルマン病の結果、ＴＧＦＢ１遺伝子の常染色体優性変異に起因して骨異形成が生じ、それにより、構成的なＴＧＦβ１の活性化シグナル伝達が導かれる（Ｊａｎｓｓｅｎｓ，  Ｋ．ら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ、２００６年、４３巻（１号）：１〜１１頁）。ロイス／ディーツ症候群の患者は、大動脈瘤、隔離症、および口蓋垂裂を引き起こす、ＴＧＦβシグナル伝達経路の構成成分の常染色体優性変異を有する（Ｖａｎ  Ｌａｅｒ，  Ｌ．、Ｈ．  Ｄｉｅｔｚ、およびＢ．  Ｌｏｅｙｓ、Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ、２０１４年、８０２巻：９５〜１０５頁）。ＴＧＦβ経路の制御不全は多数の疾患に関係づけられているので、ＴＧＦβ経路を標的化するいくつかの薬物が開発され、患者において試験されてきたが、成功は限られている。
【０１０１】
本開示の発明者らは、ＴＧＦβの３種のアイソフォーム全てが、同じ受容体を通じてシグナル伝達し、当該受容体を発現する細胞において下流のエフェクターを伝達することができるが、各ＴＧＦβアイソフォームはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて別個の生物学的効果を生じ得ると判断した。さらに、本発明者らは、少なくとも一部の場合では、増殖因子−受容体相互作用が誘発される方式により、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるシグナル伝達特異性がさらにもたらされ得ると考察した。この認識を踏まえて、以下に簡単に要約されている通り、現在まで文献に記載されているＴＧＦβ阻害剤は特異性を欠くことに留意する。
【０１０２】
ＴＧＦβの３種のアイソフォーム全てに結合し、それを阻害するヒト化モノクローナル抗体であるフレソリムマブは、巣状分節状糸球体硬化症、悪性黒色腫、腎細胞癌、および全身性硬化症の患者において臨床的に試験されている（Ｒｉｃｅ，  Ｌ．Ｍ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２０１５年、１２５巻（７号）：２７９５〜８０７頁；Ｔｒａｃｈｔｍａｎ，  Ｈ．ら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ、２０１１年、７９巻（１１号）：１２３６〜４３頁；Ｍｏｒｒｉｓ，  Ｊ．Ｃ．ら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ、２０１４年、９巻（３号）：ｅ９０３５３頁）。さらなる会社により、ＴＧＦβアイソフォームに対する選択性の程度が様々な、ＴＧＦβ増殖因子に対するモノクローナル抗体が開発されている。そのような薬剤では、ＴＧＦβ１に加えて他のＴＧＦβファミリーメンバーに対する残留活性によりｉｎ  ｖｉｖｏにおける毒性が引き出される可能性がある。本開示の発明者らの知見の限りでは、成熟増殖因子を標的化することでは単一のアイソフォームに対する完全な特異性は達成されておらず、これは、アイソフォーム間の配列同一性の程度が高いことに起因する。
【０１０３】
ＴＧＦβ経路を標的化するための他の手法は、Ａｃｃｅｌｅｒｏｎからの可溶性ＴＧＦβＲＩＩ−ＦｃリガンドトラップであるＡＣＥ−１３３２（Ｙｕｎｇ，  Ｌ．Ｍ．ら、Ａ  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、２０１６年、１９４巻（９号）：１１４０〜１１５１頁）、またはＬｉｌｌｙのガルニセルチブなどのＡＬＫ５キナーゼの小分子阻害剤を含む。一方でＡＣＥ−１３３２はＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３に同等に高い親和性で結合する（Ｙｕｎｇ，  Ｌ．Ｍ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、２０１６年、１９４巻（９号）：１１４０〜１１５１頁）。ＡＬＫ５阻害剤は、ＴＧＦＲ１を通じてシグナル伝達する全ての増殖因子の活性を遮断する。ＡＬＫ５阻害剤を使用した前臨床試験において実質的な毒性が見出され（Ａｎｄｅｒｔｏｎ，  Ｍ．Ｊ．ら、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、３９巻（６号）：９１６〜２４頁；Ｓｔａｕｂｅｒ，  Ａ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、２０１４年、４巻（３号）：１〜１０頁）、有害作用を低減させながら効能を維持するためには洗練された臨床的投薬スキームが必要である（Ｈｅｒｂｅｒｔｚ，  Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ、２０１５年、９巻：４４７９〜９９頁）。実際、ＴＧＦβシグナル伝達特異性および公知のＴＧＦβ阻害剤で観察される毒性に対する可能性のあるその影響に関する問題が、ＴＧＦβの遮断が試みられている候補薬物の全てではないが大半において生じている。例えば、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３に対してＴＧＦβ１の阻害に起因する毒性がどのくらいであるかに関しては対処されていない。同様に、ＴＧＦβシグナル伝達に拮抗するためのやり方の設計または開発においてＴＧＦβ活性化の方式は考慮されていない。
【０１０４】
ＴＧＦβ１の活性化機構への最近の構造的洞察により、本発明者らがＴＧＦβ阻害のための新規のより特異的な手法をとることが可能になった（Ｓｈｉ，  Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１年、４７４巻（７３５１号）：３４３〜９頁）。他のサイトカインとは異なり、ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーは、活性増殖因子としては分泌されないが、Ｎ末端プロドメインおよびＣ末端増殖因子ドメインからなる二量体プロタンパク質として分泌される。フューリンプロテアーゼによるプロＴＧＦβ１の切断により、ホモ二量体の増殖因子ドメインが潜在型会合ペプチド（ＬＡＰ）とも称されるプロドメインから分離される。しかし、増殖因子とＬＡＰは非共有結合により会合したままになり、その受容体に結合し、シグナル伝達を誘導することができない潜在型複合体が形成される（図１）。翻訳の間、小潜在型複合体（ｓｍａｌｌ  ｌａｔｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＳＬＣ）とも称される潜在型ＴＧＦβ１は、ジスルフィド架橋によって「提示分子」と連結し、大潜在型複合体（ｌａｒｇｅ  ｌａｔｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＬＬＣ）が形成される。これらの分子により、プロＴＧＦβ１が特異的な細胞または組織状況で提示されることが可能になる。潜在型ＴＧＦβ１のＮ末端付近の２つのシステインは提示分子上の適切な位置にあるシステインと連結する。提示分子の同一性は環境および潜在型ＴＧＦβ１を産生する細胞型に依存する。例えば、線維芽細胞は、潜在型ＴＧＦβ結合性タンパク質（ＬＴＢＰ）に係留された潜在型ＴＧＦβ１を分泌し、これは、次に細胞外マトリクス（ＥＣＭ）内のタンパク質（すなわち、フィブロネクチン、フィブリリン−１）と会合し、潜在型ＴＧＦβをＥＣＭに連結させる（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら、Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ、４７巻：４４〜５３頁（２０１５年）（図２Ａ）。活性化された制御性Ｔ細胞の表面上で潜在型ＴＧＦβ１は膜貫通タンパク質ＧＡＲＰと共有結合し（図２Ｂ）、最近、ＧＡＲＰと密接に関連するタンパク質ＬＲＲＣ３３が、単球、マクロファージおよびミクログリアの表面上のＴＧＦβ１のための提示分子として同定された（Ｗａｎｇ，  Ｒ．ら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ、２０１２年、２３巻（６号）：１１２９〜３９頁およびＴ．Ａ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｉｎｔ．  ＢＭＰ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、２０１６年）。
【０１０５】
哺乳動物では、４種の公知のＬＴＢＰ、ＬＴＢＰ１〜４が存在し、それぞれが複数のスプライスバリアントを有する（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｉ．Ｂ．ら、Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ、２０１５年、４７巻：４４〜５３頁）。ＬＴＢＰ２は潜在型ＴＧＦβと会合しない唯一のＬＴＢＰである（Ｓａｈａｒｉｎｅｎ，  Ｊ．およびＪ．  Ｋｅｓｋｉ−Ｏｊａ、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ、２０００年、１１巻（８号）：２６９１〜７０４頁）。ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３と潜在型ＴＧＦβ１の会合は十分に検証されているが、ＴＧＦβ提示におけるＬＴＢＰ４の役割ははっきりしていない。ＬＴＢＰ４と潜在型ＴＧＦβ１の複合体は、ＬＴＢＰ４のＴＧＦβ結合性ドメインにはいくつかの負に荷電した残基が存在しないことに潜在的に起因してはるかに低い効率で形成されると思われる（Ｓａｈａｒｉｎｅｎ，  Ｊ．およびＪ．  Ｋｅｓｋｉ−Ｏｊａ、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ、２０００年、１１巻（８号）：２６９１〜７０４頁；Ｃｈｅｎ，  Ｙ．ら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２００５年、３４５巻（１号）：１７５〜８６頁）。ＬＴＢＰ４Ｓ−／−マウスおよびＬＴＢＰ４のヌル変異を有するアーバン・リフキン・デービス症候群（Ｕｒｂａｎ−Ｒｉｆｋｉｎ−Ｄａｖｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）患者のどちらでも、弾性線維アセンブリの破壊が生じる（Ｕｒｂａｎ，  Ｚ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ、２００９年、８５巻（５号）：５９３〜６０５頁；Ｄａｂｏｖｉｃ，  Ｂ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０１５年、２３０巻（１号）：２２６〜３６頁）。さらに、ＬＴＢＰ４Ｓ−／−マウスは、肺中隔形成および弾性線維形成欠陥（ｅｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｄｅｆｅｃｔ）を有し、潜在型ＴＧＦβ１との複合体を形成することができないＬＴＢＰ４を有するトランスジェニックマウスは、明白な表現型を有さない（Ｄａｂｏｖｉｃ，  Ｂ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０１５年、２３０巻（１号）：２２６〜３６頁）。ＬＴＢＰ４が提示分子として機能することによって潜在型ＴＧＦβ１制御に直接関与するかどうかは不明である；その代わりに、ＬＴＢＰ４は、ＥＣＭにおける弾性原線維の適切な形成に必要であり得、その欠如はＥＣＭにおける欠陥によって潜在型ＴＧＦβ１活性化に間接的に影響を及ぼす。
【０１０６】
いくつもの研究により、ＴＧＦβ１活性化の機構が明らかになった。３種のインテグリン、αＶβ６、αＶβ８、およびαＶβ１が潜在型ＴＧＦβ１の重要な活性化因子であることが実証されている（Ｒｅｅｄ，  Ｎ．Ｉ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１５年、７巻（２８８号）：２８８ｒａ７９；Ｔｒａｖｉｓ，  Ｍ．Ａ．およびＤ．  Ｓｈｅｐｐａｒｄ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１４年、３２巻：５１〜８２頁；Ｍｕｎｇｅｒ，  Ｊ．Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９９年、９６巻（３号）：３１９〜２８頁）。αＶインテグリンは、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ１  ＬＡＰに存在するＲＧＤ配列に高親和性で結合する（Ｄｏｎｇ，  Ｘ．ら、Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２０１４年、２１巻（１２号）：１０９１〜６頁）。インテグリンの結合を妨げるが分泌は妨げないＴＧＦβ１  ＲＧＤ部位における変異を有するトランスジェニックマウスは、ＴＧＦβ１−／−マウスを表現型模写する（Ｙａｎｇ，  Ｚ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００７年、１７６巻（６号）：７８７〜９３頁）。β６インテグリンとβ８インテグリンの両方を欠くマウスは、多臓器炎症および口蓋裂を含めた、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３ノックアウトマウスの必須表現型を全て再現し、これにより、発生および恒常性におけるＴＧＦβ１活性化に関するこれらの２種のインテグリンの本質的な役割が確認される（Ａｌｕｗｉｈａｒｅ，  Ｐ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ、２００９年、１２２巻（Ｐｔ２号）：２２７〜３２頁）。潜在型ＴＧＦβ１のインテグリン依存性活性化の鍵は、提示分子との共有結合による係留である；変異誘発によるＧＡＲＰとＴＧＦβ１  ＬＡＰの間のジスルフィド結合の破壊により、複合体の形成は損なわれないが、αＶβ６によるＴＧＦβ１活性化は完全に消滅する（Ｗａｎｇ，  Ｒ．ら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ、２０１２年、２３巻（６号）：１１２９〜３９頁）。最近の潜在型ＴＧＦβ１の構造により、インテグリンにより活性なＴＧＦβ１が潜在型複合体から放出することがどのように可能になるかが解明される：潜在型ＴＧＦβ１とその提示分子の共有結合性の連結により、潜在型ＴＧＦβ１が、ＬＴＢＰを通じてＥＣＭに、またはＧＡＲＰもしくはＬＲＲＣ３３を通じて細胞骨格に固定される。ＲＧＤ配列へのインテグリンの結合の結果、ＬＡＰの構造に力依存性変化が生じ、それにより、活性なＴＧＦβ１が放出され、近くの受容体に結合することが可能になる（Ｓｈｉ，  Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１年、４７４巻（７３５１号）：３４３〜９頁）。疾患におけるインテグリン依存性ＴＧＦβ１活性化の重要性も十分に検証されている。αＶβ１の小分子阻害剤により、ブレオマイシン誘導性肺線維症および四塩化炭素誘導性肝線維症からの保護がなされ（Ｒｅｅｄ，  Ｎ．Ｉ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１５年、７巻（２８８号）：２８８ｒａ７９）、また、抗体を用いたαＶβ６遮断、またはインテグリンβ６発現の欠如により、ブレオマイシン誘導性肺線維症および放射線誘導性線維症が抑制される（Ｍｕｎｇｅｒ，  Ｊ．Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ、１９９９年、９６巻（３号）：３１９〜２８頁）；Ｈｏｒａｎ，  Ｇ．Ｓ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、２００８年、１７７巻（１号）：５６〜６５頁）。インテグリンに加えて、トロンボスポンジン−１、およびマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、カテプシンＤまたはカリクレインなどのプロテアーゼによる活性化を含めた他のＴＧＦβ１活性化の機構も関係づけられている。しかし、これらの研究の大多数は、精製されたタンパク質を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実施されたものである；ｉｎ  ｖｉｖｏ研究からのこれらの分子の役割に関する証拠は少ない。トロンボスポンジン−１のノックアウトにより、一部の組織においてＴＧＦβ１−／−表現型の一部の側面が再現されるが、ＴＧＦβ依存性であることが公知のブレオマイシン誘導性肺線維症において保護的なものではない（Ｅｚｚｉｅ，  Ｍ．Ｅ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２０１１年、４４巻（４号）：５５６〜６１頁）。さらに、候補プロテアーゼのノックアウトの結果、ＴＧＦβ１表現型は生じなかった（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｊ．Ｊ．、Ｊ．Ｅ．  Ｋｌｅｍｅｎｔｏｗｉｃｚ、およびＭ．Ａ．  Ｔｒａｖｉｓ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ、２０１１年、３６巻（１号）：４７〜５４頁）。これは、冗長性によって、または、これらの機構が発生および恒常性ではなく特定の疾患において重要であることによって説明することができた。
【０１０７】
ＴＧＦβは、線維症、免疫調節およびがんの進行を含めたいくつもの生物学的プロセスに関係づけられている。ＴＧＦβ１は、タンパク質のＴＧＦβスーパーファミリーの最初に同定されたメンバーである。ＴＧＦβ１ならびにアイソフォームであるＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３は、ＴＧＦβスーパーファミリーの他のメンバーと同様に、最初に不活性な前駆プロタンパク質形態（プロＴＧＦβと称される）として発現する。ＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３）はプロタンパク質転換酵素（例えば、フューリン）によってタンパク質分解により切断されて、潜在型形態（潜在型ＴＧＦβと称される）が生じる。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３）のプロタンパク質形態または潜在型形態は、「プロ／潜在型ＴＧＦβタンパク質」と称され得る。ＴＧＦβ１は、例えば、ＧＡＲＰ（ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体を形成するため）、ＬＲＲＣ３３（ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を形成するため）、ＬＴＢＰ１（ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体を形成するため）、および／またはＬＴＢＰ３（ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体を形成するため）を含めた複数の分子との複合体で他の分子に提示され得る。これらの複合体に存在するＴＧＦβ１は、潜在型形態（潜在型ＴＧＦβ１）であっても前駆形態（プロＴＧＦβ１）であってもよい。
【０１０８】
本発明は、免疫グロブリン、例えば、（１）ＧＡＲＰタンパク質との複合体中のＴＧＦβタンパク質（例えば、プロ／潜在型ＴＧＦβ１、プロ／潜在型ＴＧＦβ２、およびプロ／潜在型ＴＧＦβ３）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分、（２）ＬＴＢＰタンパク質（例えば、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３）との複合体中のＴＧＦβタンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分、および／または（３）ＬＲＲＣ３３タンパク質との複合体中のＴＧＦβタンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分に関する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に存在する場合に抗体またはその抗原結合性部分による結合に利用可能であるＴＧＦβ１のエピトープに結合する。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性部分の、ＧＡＲＰタンパク質、ＬＴＢＰタンパク質、および／またはＬＲＲＣ３３タンパク質のいずれかとの複合体中に存在するＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１）に結合する能力は、ＴＧＦβタンパク質を状況非依存的に標的化することを可能にするものであり、治療への適用に特に好適である。
【０１０９】
定義
本開示の理解を容易にするために、最初に特定の用語を定義する。これらの定義は、本開示の残りの部分を踏まえて読まれるべきであり、また、当業者に理解される通りである。別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。詳細な説明の全体を通して追加的な定義が記載されている。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、抗体またはその抗原結合性部分と抗原との相互作用が特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体またはその抗原結合性部分は、タンパク質全般に結合するのではなく、特異的なタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、標的、例えばＴＧＦβ１に、当該抗体の標的に対するＫＤが少なくとも約１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、１０−１３Ｍ、またはそれ未満であれば、特異的に結合する。いくつかの実施形態では、用語「ＴＧＦβ１のエピトープへの特異的結合」、「ＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する」、「ＴＧＦβ１への特異的結合」、または「ＴＧＦβ１に特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、ＴＧＦβ１に結合し、表面プラズモン共鳴によって決定される解離定数（ＫＤ）が１．０×１０−７Ｍまたはそれ未満である抗体またはその抗原結合性部分を指す。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１のヒトオルソログおよび非ヒト（例えば、マウス）オルソログの両方に特異的に結合し得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に対する結合親和性を、Ｏｃｔｅｔアッセイを使用して決定する。いくつかの実施形態では、Ｏｃｔｅｔアッセイは、抗体と抗原の結合を示す１つまたは複数の動態パラメータを決定するアッセイである。いくつかの実施形態では、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して、抗体またはその抗原結合性部分のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に対する結合親和性を決定する。例えば、抗体の結合親和性は、ｆｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＱＫｅ  ｄｉｐおよびバイオレイヤー干渉法を利用する読み出し標識フリーアッセイ系を使用して決定することができる。いくつかの実施形態では、抗原をバイオセンサー（例えば、ストレプトアビジンでコーティングしたバイオセンサー）に固定化し、抗体および複合体（例えば、ビオチン化ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体およびビオチン化ＬＴＢＰ−ＴＧＦβ１複合体）を溶液中に高濃度（５０μｇ／ｍＬ）で存在させて結合相互作用を測定する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に対する結合親和性を、表６に概説されているプロトコールを使用して決定する。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、「ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体」という用語は、トランスホーミング増殖因子−β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型形態と糖タンパク質Ａ反復優性タンパク質（ＧＡＲＰ）とを含むタンパク質複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型形態は「プロ／潜在型ＴＧＦβ１タンパク質」と称され得る。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と１つまたは複数のジスルフィド結合を介して共有結合により連結したＧＡＲＰを含む。他の実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合により連結したＧＡＲＰを含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、天然に存在する複合体、例えば細胞内のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体である。例示的なＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体が図３に示されている。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体」という用語は、トランスホーミング増殖因子−β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型形態と潜在型ＴＧＦ−ベータ結合性タンパク質１（ＬＴＢＰ１）とを含むタンパク質複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と１つまたは複数のジスルフィド結合を介して共有結合により連結したＬＴＢＰ１を含む。他の実施形態では、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合により連結したＬＴＢＰ１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体は、天然に存在する複合体、例えば細胞内のＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体である。例示的なＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体が図３に示されている。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体」という用語は、トランスホーミング増殖因子−β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型形態と潜在型ＴＧＦ−ベータ結合性タンパク質１（ＬＴＢＰ３）とを含むタンパク質複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と１つまたは複数のジスルフィド結合を介して共有結合により連結したＬＴＢＰ３を含む。他の実施形態では、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合により連結したＬＴＢＰ１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体は、天然に存在する複合体、例えば細胞内のＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体である。例示的なＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体が図３に示されている。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体」という用語は、トランスホーミング増殖因子−β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型形態とロイシンリッチリピートを含有するタンパク質３３（ＬＲＲＣ３３；活性酸素種の負の制御因子（Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｏｆ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ）またはＮＲＲＯＳとしても公知）との間の複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と１つまたは複数のジスルフィド結合を介して共有結合により連結したＬＲＲＣ３３を含む。他の実施形態では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、プロ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合により連結したＬＲＲＣ３３を含む。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、天然に存在する複合体、例えば細胞内のＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体である。
【０１１６】
「抗体」という用語は、標的抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指し、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、および二特異性抗体を含む。インタクトな抗体は、一般に、少なくとも２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含むが、ラクダ科の動物において天然に存在する重鎖のみを含む場合がある抗体などのいくつかの例では、より少ない鎖を含む場合がある。抗体は、単一の供給源のみに由来するものであってもよく、「キメラ」、すなわち、抗体の異なる部分が２つの異なる抗体に由来するものであってよい。抗体またはその抗原結合性部分は、ハイブリドーマにおいて、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製され得る。抗体という用語は、本明細書で使用される場合、それぞれモノクローナル抗体、二特異性抗体、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では時には「抗体模倣物」と称される）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書では時には「抗体コンジュゲート」と称される）を含む。いくつかの実施形態では、この用語は、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）も包含する。
【０１１７】
天然に存在する抗体構造単位は、典型的には、四量体を含む。そのような四量体は、それぞれ、典型的には、２つの同一のポリペプチド鎖の対で構成され、各対が１つの全長「軽」鎖（ある特定の実施形態では、約２５ｋＤａ）および１つの全長「重」鎖（ある特定の実施形態では、約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、典型的には、一般には抗原認識に関与する約１００〜１１０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、典型的には、エフェクター機能に関与し得る定常領域を規定する。ヒト抗体軽鎖は、典型的には、カッパ軽鎖とラムダ軽鎖に分類される。重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンに分類され、これにより抗体のアイソタイプが規定される。抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＹ、およびＩｇＥ）およびクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のものであってよい。全長軽鎖および重鎖の中で、可変領域および定常領域は、典型的には、約１２またはそれよりも多くのアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合しており、重鎖はまた、約１０またはそれよりも多くのアミノ酸の「Ｄ」領域を含む（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，  Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい）。典型的には、各軽鎖／重鎖対の可変領域が抗原結合性部位を形成する。
【０１１８】
可変領域は、典型的には、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）に相補性決定領域またはＣＤＲとも称される超可変領域が３つ接合した、同じ一般構造を示す。典型的には、各対の２つの鎖に由来するＣＤＲはフレームワーク領域によって整列され、これにより、特異的なエピトープへの結合が可能になる。典型的には、軽鎖可変領域および重鎖可変領域はどちらも、Ｎ末端からＣ末端まで、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、典型的には、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年および１９９１年））、またはＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ、３４２巻：８７８〜８８３頁の定義に従う。軽鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３と称される場合もあり、重鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３と称される場合もある。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖（複数可）のカルボキシ末端からの少数のアミノ酸欠失を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖のカルボキシ末端の１〜５つのアミノ酸欠失を有する重鎖を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲの最終的な線引きおよび抗体の結合性部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明することおよび／または抗体−リガンド複合体の構造を解明することによって達成される。ある特定の実施形態では、これは、Ｘ線結晶構造解析などの、当業者に公知の様々な技術のいずれかによって達成され得る。いくつかの実施形態では、種々の分析方法を使用してＣＤＲ領域を同定するかまたは見積もることができる。そのような方法の例は、これらに限定されないが、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、およびｃｏｎｔａｃｔ定義を含む。
【０１１９】
結合性タンパク質の「機能的抗原結合性部位」は、標的、抗原、またはリガンドに結合することができる部位である。抗原結合性部位の抗原結合親和性は必ずしも抗原結合性部位が由来する親結合性タンパク質ほど強力ではなくてよいが、抗原に結合する能力は抗原への結合性タンパク質の結合を評価するための公知の種々の方法のいずれか１つを使用して測定可能なものでなければならない。さらに、本明細書の多重特異性結合性タンパク質の抗原結合性部位のそれぞれの抗原結合親和性は定量的に同じである必要はない。
【０１２０】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、典型的には、おおよそで、重鎖のアミノ末端の１２０〜１３０アミノ酸および軽鎖の約１００〜１１０アミノ末端アミノ酸を含む、抗体の軽鎖および／または重鎖の一部を指す。ある特定の実施形態では、異なる抗体の可変領域は、同じ種の抗体の間でさえアミノ酸配列が広範囲にわたって異なる。典型的には、抗体の可変領域により、特定の抗体のその標的に対する特異性が決定される。
【０１２１】
免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖定常ドメインまたは軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖定常ドメインおよび軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列は、当技術分野で公知である。
【０１２２】
用語「競合する」は、同じエピトープについて競合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）に関して使用される場合、試験されている抗原結合性タンパク質により、参照抗原結合性タンパク質の共通の抗原（例えば、ＴＧＦβ１またはその断片）への特異的結合が妨げられるまたは阻害される（例えば、低減する）アッセイによって決定される、抗原結合性タンパク質間の競合を意味する。１つの抗原結合性タンパク質が別の抗原結合性タンパク質と競合するかどうかを決定するために、多数の型の競合結合アッセイ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ；固相直接標識アッセイ、および固相直接標識サンドイッチアッセイを使用することができる。通常、競合する抗原結合性タンパク質が過剰に存在する場合、当該抗原結合性タンパク質により、参照抗原結合性タンパク質の共通の抗原への特異的結合が、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％または７５％またはそれよりも大きく阻害される（例えば、低減する）。いくつかの例では、結合は、少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、または９７％またはそれよりも大きく阻害される。
【０１２３】
用語「抗原」は、抗原結合性タンパク質（例えば、抗体を含む）などの選択的な結合性薬剤が結合することが可能なエピトープ、例えば、分子もしくは分子の一部、または分子もしくは分子の一部の複合体をもたらす分子構造を指す。したがって、選択的な結合性薬剤は、複合体中の２つまたはそれよりも多くの構成成分によって形成される抗原に特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、その抗原に結合することが可能な抗体を産生させるために動物に使用することができるものである。抗原は、異なる抗原結合性タンパク質、例えば、抗体と相互作用することができる１つまたは複数のエピトープを保有し得る。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれに３つのＣＤＲが存在し、これらは、可変領域のそれぞれについてＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される。用語「ＣＤＲセット」は、本明細書で使用される場合、抗原に結合することができる単一の可変領域に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って違うように定義されている。Ｋａｂａｔに記載されているシステム（Ｋａｂａｔら（１９８７年；１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．）では、任意の抗体の可変領域に適用可能な一義的な残基の番号付けシステムが提供されるだけでなく、３つのＣＤＲを画定する正確な残基境界も提供される。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜９１７頁；ならびにＣｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ、３４２巻：８７７〜８８３頁）は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある特定のサブ部分が、アミノ酸配列のレベルでは大きな多様性を有するにもかかわらずほぼ同一のペプチド骨格コンフォメーションをとることを見出した。これらのサブ部分はＬ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と名付けられ、「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ軽鎖領域および重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称することができ、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界がＰａｄｌａｎ（１９９５年）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、９巻：１３３〜１３９頁およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２６２巻（５号）：７３２〜４５頁により記載されている。さらに他のＣＤＲ境界の定義は本明細書のシステムのうちの１つに厳密に従わない場合があるが、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合性に有意な影響を及ぼさないという予測または実験所見を踏まえて短縮または延長され得るとはいえ、それでもなおＫａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。本明細書で使用される方法では、これらのシステムのいずれによって定義されるＣＤＲも利用することができるが、ある特定の実施形態では、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲを使用する。
【０１２５】
用語「結晶」および「結晶化された」は、本明細書で使用される場合、結晶の形態で存在する結合性タンパク質（例えば、抗体）、またはその抗原結合性部分を指す。結晶は、物質の固体の状態の１つの形態であり、非晶質の固体の状態または液晶の状態などの他の形態とは別個である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）、または分子アセンブリ（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な繰り返しの３次元アレイで構成される。これらの３次元アレイは、当技術分野でよく理解されている特定の数学的関係に従って配置されている。結晶中で繰り返される基本単位または構成要素は非対称単位と称される。所与の明確に定義された結晶学的対称性と合致する配置内での非対称単位の繰り返しにより、結晶の「単位格子」がもたらされる。３次元全てでの規則的な並進による単位格子の繰り返しにより結晶がもたらされる。Ｇｉｅｇｅ，  Ｒ．およびＤｕｃｒｕｉｘ，  Ａ．  Ｂａｒｒｅｔｔ、Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、第２版、２０１〜１６頁、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９年）を参照されたい。
【０１２６】
用語「エピトープ」は、結合性薬剤、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意の分子決定基（例えば、ポリペプチド決定基）を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの、分子の化学的に活性な表面群分けを含み、ある特定の実施形態では、特定の３次元構造特性および／または特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、結合性タンパク質が結合する抗原の領域である。したがって、エピトープは、抗原（またはその断片）の、特異的な結合パートナー上の相補部位に結合することが分かっている領域のアミノ酸残基からなる。抗原断片は、１つよりも多くのエピトープを含有し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を認識する場合、抗原に特異的に結合するものである。例えば、抗体は、抗体が交差競合する（一方が、他方の結合または調節作用を妨げる）場合、「同じエピトープに結合する」と言える。さらに、エピトープの構造的な定義（重複、同様、同一）は情報価値があるが、多くの場合、機能的な定義がより関連がある。なぜなら、それらは、構造的（結合）パラメータおよび機能的（調節、競合）パラメータを包含するからである。
【０１２７】
「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、治療的処置、予防的処置、および被験体で障害または他の危険因子が発生するリスクを低減する適用を包含する。処置は、障害の完全な治癒を必要とするものではなく、症状または基礎をなす危険因子を低減する実施形態を包含する。
【０１２８】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、および組織培養物および形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）に関する標準の技術を使用することができる。酵素反応および精製技術は、製造者の仕様書に従って、または当技術分野において一般に達成される通りもしくは本明細書に記載の通り実施され得る。前述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、ならびに本明細書全体を通して引用され考察されている種々の一般的なおよびより具体的な参考文献に記載されている通り実施され得る。例えば、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照されたい。特定の定義が提示されていなければ、本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学、および医学および製薬化学に関連して利用される命名法、ならびに実験室における手順および技術は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬調製、製剤、および送達、および患者の処置に関する標準の技術を使用することができる。
【０１２９】
抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性断片」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ＴＧＦβ１）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗原結合性部分は、これらに限定されないが、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得られる、合成、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合性部分は、例えば、全抗体分子から、タンパク質消化、または抗体可変ドメインおよび任意選択で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子操作技術などの任意の好適な標準の技術を使用して得られ得る。抗原結合性部分の非限定的例は、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）ＳＣＩＥＮＣＥ、２４２巻：４２３〜４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）ＰＲＯＣ．  ＮＡＴ’Ｌ．  ＡＣＡＤ．  ＳＣＩ．  ＵＳＡ、８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照されたい）；（ｖｉ）ｄＡｂ断片（例えば、Ｗａｒｄら（１９８９年）ＮＡＴＵＲＥ、３４１巻：５４４〜５４６頁を参照されたい）；ならびに（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。ダイアボディなどの単鎖抗体の他の形態も包含される。抗体の抗原結合性部分という用語は、他に「ｓｃＦａｂ」として公知の「単鎖Ｆａｂ断片」を含み、これは、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）およびリンカーを含み、前記抗体ドメインと前記リンカーは以下のＮ末端からＣ末端方向での順序：ａ）ＶＨ−ＣＨ１−リンカー−ＶＬ−ＣＬ、ｂ）ＶＬ−ＣＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＨ１、ｃ）ＶＨ−ＣＬ−リンカー−ＶＬ−ＣＨ１またはｄ）ＶＬ−ＣＨ１−リンカー−ＶＨ−ＣＬのうちの１つを有し、また、前記リンカーは、少なくとも３０アミノ酸、好ましくは３２アミノ酸から５０アミノ酸の間のポリペプチドである。
【０１３０】
「単離された抗体」とは、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、他の細胞性材料および／または化学物質を実質的に含まない。
【０１３１】
「親和性成熟した」抗体は、その１つまたは複数のＣＤＲに１つまたは複数の変更を有し、その結果、抗体の抗原に対する親和性がこれらの変更を有さない親抗体と比較して改善された抗体を指す。例示的な親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製される。Ｍａｒｋｓら（１９９２年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁には、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発がＢａｒｂａｓら（１９９４年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９１巻：３８０９〜３８１３頁；Ｓｃｈｉｅｒら（１９９５年）Ｇｅｎｅ、１６９巻：１４７〜１５５頁；Ｙｅｌｔｏｎら、（１９９５年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５巻：１９９４〜２００４頁；Ｊａｃｋｓｏｎら（１９９５年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４巻（７号）：３３１０〜９頁；およびＨａｗｋｉｎｓら（１９９２年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２６巻：８８９〜８９６頁により説明されており、活性を増強させるアミノ酸残基を用いた選択的変異誘発位置、接触または超変異位置における選択的変異が米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【０１３２】
「ＣＤＲがグラフトされた抗体」という用語は、１つの種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１つまたは複数の配列が別の種のＣＤＲ配列で置き換えられた抗体、例えば、マウス重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有し、マウスＣＤＲの１つまたは複数（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置き換えられた抗体などを指す。
【０１３３】
「キメラ抗体」という用語は、１つの種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体、例えば、ヒト定常領域と連結したマウス重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体などを指す。
【０１３４】
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって導入された変異）。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされたマウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来する抗体を含むものではない。
【０１３５】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部分がより「ヒト様」になるように、すなわち、ヒト生殖系列可変配列とより類似するように変更された抗体を指す。ヒト化抗体の１つの型は、ヒトＣＤＲ配列を非ヒトＶＨおよびＶＬ配列に導入して対応する非ヒトＣＤＲ配列を置き換えた、ＣＤＲがグラフトされた抗体である。「ヒト化抗体」はまた、目的の抗原に免疫特異的に結合し、また、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するＦＲ領域および実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有するＣＤＲ領域を含む抗体、またはその改変体、誘導体、類似体もしくは断片である。本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、ＣＤＲに関しては、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものに対応する少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含む。ある実施形態では、ヒト化抗体はまた、典型的には、ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域も含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖のみを含有する。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク」または「フレームワーク配列」という用語は、可変領域からＣＤＲを抜いた残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムによって決定され得るので、フレームワーク配列の意味は対応して異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３および重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３）によっても軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域が各鎖上の４つの小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分けられ、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間に位置付けられ、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に位置付けられ、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置付けられる。特定の小領域がＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として明示されなければ、フレームワーク領域は、他者によって言及される通り、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲの混合を表す。本明細書で使用される場合、１つのＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つの小領域のうちの１つを表し、複数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つの小領域のうちの２つまたはそれよりも多くを表す。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、用語「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」は、特定の免疫グロブリンの発現に関する遺伝子再配列および変異を導く成熟プロセスを受けていない非リンパ系細胞によりコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら（２００２年）Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２巻（３号）：１８３〜２００頁；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら（２００１年）Ａｄｖ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．、４８４巻：１３〜３０頁を参照されたい）。本開示の種々の実施形態によってもたらされる利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子では成熟抗体遺伝子よりも種内の個体の特徴となる必須アミノ酸配列構造が保存される可能性が高く、したがって、その種において治療的に使用された場合に外来供給源に由来するものと認識される可能性がより低いという認識に基づく。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、用語「中和性（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）」は、結合性タンパク質が抗原に特異的に結合した際に抗原の生物学的活性を打ち消すことを指す。ある実施形態では、中和性結合性タンパク質は、抗原／標的、例えば、サイトカイン、キナーゼ、増殖因子、細胞表面タンパク質、可溶性タンパク質、ホスファターゼ、または受容体リガンドに結合し、その生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれよりも大きく低減する。
【０１３９】
用語「結合性タンパク質」は、本明細書で使用される場合、これらに限定されないが、抗体またはその抗原結合性部分、ＤＶＤ−ＩｇＴＭ、ＴＶＤ−Ｉｇ、ＲＡｂ−Ｉｇ、二特異性抗体および二重特異性抗体を含めた、抗原（例えば、ＴＧＦβ１）に特異的に結合する任意のポリペプチドを含む。
【０１４０】
用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、それを含む組成物に関連して使用される場合、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、微量存在し得る、可能性のある天然に存在する変異以外は同一である集団から得られた抗体調製物を指し得る。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原を対象とする。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各ｍＡｂは、抗原上の単一の決定基を対象とする。修飾語「モノクローナル」は、抗体を任意の特定の方法によって作製することを必要とするものとは解釈されない。
【０１４１】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製、発現、創出または単離された全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体（下の節ＩＩ  Ｃにさらに記載されている）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，  Ｈ．Ｒ．（１９９７年）ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．、１５巻：６２〜７０頁；Ａｚｚａｚｙ，  Ｈ．およびＨｉｇｈｓｍｉｔｈ，  Ｗ．Ｅ．（２００２年）Ｃｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３５巻：４２５〜４４５頁；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ，  Ｊ．Ｖ．およびＬａｒｒｉｃｋ，  Ｊ．Ｗ．（２００２年）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２９巻：１２８〜１４５頁；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，  Ｈ．およびＣｈａｍｅｓ，  Ｐ．（２０００年）Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、２１巻：３７１〜３７８頁、参照により本明細書に組み込まれる）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．  Ｄ．ら（１９９２年）Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０巻：６２８７〜６２９５頁；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ，  Ｓ−Ａ．およびＧｒｅｅｎ，  Ｌ．Ｌ．（２００２年）Ｃｕｒ．  Ｏｐｉｎ．  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１３巻：５９３〜５９７頁；Ｌｉｔｔｌｅ，  Ｍ．ら（２０００年）Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、２１巻：３６４〜３７０頁を参照されたい）またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、創出または単離された抗体などを含むものとする。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックの動物を使用する場合にはｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）を受け、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、それに関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるヒト抗体生殖系列レパートリー内では天然に存在しない可能性がある配列である。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」または「ＤＶＤ−ＩｇＴＭ」などは、対になった重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、各対になった重鎖および軽鎖により、２つの抗原結合性部位がもたらされる結合性タンパク質を含む。各結合性部位は、抗原結合性部位当たり抗原結合に関与するＣＤＲを合計で６つ含む。ＤＶＤ−ＩｇＴＭは、典型的には、少なくとも一部においてＣＨ３ドメインの二量体化によって互いと結合した２つのアームを有し、ＤＶＤの各アームは二特異性であり、結合性部位を４つ有する免疫グロブリンがもたらされる。ＤＶＤ−ＩｇＴＭは、それぞれが配列表を含め参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／０２６０６６８号および同第２００９／０３０４６９３号に提示されている。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、「三重可変ドメイン免疫グロブリン」または「ＴＶＤ−Ｉｇ」などは、対になった重鎖ＴＶＤ結合性タンパク質ポリペプチドおよび軽鎖ＴＶＤ結合性タンパク質ポリペプチドを含み、各対になった重鎖および軽鎖により、３つの抗原結合性部位がもたらされる結合性タンパク質である。各結合性部位は、抗原結合性部位当たり抗原結合に関与するＣＤＲを合計で６つ含む。ＴＶＤ結合性タンパク質は、少なくとも一部においてＣＨ３ドメインの二量体化によって互いと結合した２つのアームを有し得、ＴＶＤ結合性タンパク質の各アームは三特異性であり、結合性部位を６つ有する結合性タンパク質がもたらされる。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、「受容体−抗体免疫グロブリン」または「ＲＡｂ−Ｉｇ」などは、一緒になって合計３つの抗原結合性部位を形成する重鎖ＲＡｂポリペプチドおよび軽鎖ＲＡｂポリペプチドを含む結合性タンパク質である。重鎖ＲＡｂポリペプチドおよび軽鎖ＲＡｂポリペプチドのそれぞれに存在する抗体重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインの対合によって合計６つのＣＤＲを有する単一の結合性部位を形成することによって１つの抗原結合性部位が形成され、第１の抗原結合性部位がもたらされる。重鎖ＲＡｂポリペプチドおよび軽鎖ＲＡｂポリペプチドはそれぞれ、第２および第３の「抗原」結合性部位をもたらす、リガンドに独立に結合する受容体配列を含む。ＲＡｂ−Ｉｇは、典型的には、少なくとも一部においてＣＨ３ドメインの二量体化によって互いと結合した２つのアームを有し、ＲＡｂ−Ｉｇの各アームは三特異性であり、結合性部位を６つ有する免疫グロブリンがもたらされる。ＲＡｂ−Ｉｇは、配列表を含めたその内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００２／０１２７２３１号に記載されている。
【０１４５】
用語「二特異性抗体」は、本明細書で使用される場合、および「二特異性半Ｉｇ結合性タンパク質」または「二特異性（半Ｉｇ）結合性タンパク質」と区別して、クアドローマ技術によって（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｃ．およびＣｕｅｌｌｏ，  Ａ．Ｃ．（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻（５９３４号）：５３７〜５４０頁を参照されたい）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的なコンジュゲーションによって（Ｓｔａｅｒｚ，  Ｕ．Ｄ．ら（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ、３１４巻（６０１２号）：６２８〜６３１頁を参照されたい）、またはノブ−イントゥ−ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）もしくはＦｃ領域にＣＨ３−ＣＨ３二量体化を阻害しない変異を導入し（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９０巻（１４号）：６４４４〜６４４８頁を参照されたい）、その結果、１つのみが機能的な二特異性抗体である多数の異なる免疫グロブリン種がもたらされる同様の手法によって作製される全長抗体を指す。分子機能により、二特異性抗体は、その２つの結合性アームのうちの一方（１つのＨＣ／ＬＣの対）上で１つの抗原（またはエピトープ）に結合し、その第２のアーム（異なるＨＣ／ＬＣの対）上で異なる抗原（またはエピトープ）に結合する。この定義によると、二特異性抗体は、（特異性およびＣＤＲ配列の両方において）２つの別個の抗原結合性アームを有し、それが結合する各抗原に対して一価である。
【０１４６】
用語「二重特異性抗体」は、本明細書で使用される場合、および二特異性半Ｉｇ結合性タンパク質または二特異性結合性タンパク質と区別して、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの対）のそれぞれにおいて２つの異なる抗原（またはエピトープ）に結合することができる全長抗体を指す（ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０２７７３号を参照されたい）。したがって、二重特異性結合性タンパク質は、同一の特異性および同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合性アームを有し、それが結合する各抗原に対して二価である。
【０１４７】
用語「汎ＴＧＦβ抗体」は、ＴＧＦβの１種よりも多くのアイソフォーム、例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３のうちの少なくとも２種に結合することができる任意の抗体を指す。いくつかの実施形態では、汎ＴＧＦβ抗体は、３種全てのアイソフォーム、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３に結合する。いくつかの実施形態では、汎ＴＧＦβ抗体は、３種全てのアイソフォーム、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３に結合し、それを中和する。
【０１４８】
用語「Ｋｏｎ」は、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の通り、結合性タンパク質（例えば、抗体）と抗原が会合して、例えば抗体／抗原複合体を形成することについての結合速度定数（ｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）を指すものとする。「Ｋｏｎ」は、本明細書では互換的に使用される用語「結合速度定数（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」または「ｋａ」としても公知である。抗体のその標的抗原に対する結合速度または抗体と抗原の複合体の形成速度を示す値は、方程式：抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇによっても示される。
【０１４９】
用語「Ｋｏｆｆ」は、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の通り、結合性タンパク質（例えば、抗体）の、例えば抗体／抗原複合体からの解離についての解離速度定数（ｏｆｆ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）を指すものとする。「Ｋｏｆｆ」は、本明細書では互換的に使用される用語「解離速度定数（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」または「ｋｄ」としても公知である。抗体のその標的抗原からの解離速度またはＡｂ−Ａｇ複合体の経時的な遊離の抗体と抗原への分離を示す値は、方程式：Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇによって示される。
【０１５０】
本明細書では互換的に使用される用語「平衡解離定数」または「ＫＤ」は、平衡状態での滴定測定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）において得られる値、または解離速度定数（ｋｏｆｆ）を結合速度定数（ｋｏｎ）で割ることによって得られる値を指す。結合速度定数、解離速度定数、および平衡解離定数は、結合性タンパク質、例えば抗体の抗原に対する結合親和性を表すために使用される。結合速度定数および解離速度定数を決定するための方法は当技術分野で周知である。蛍光に基づく技術を使用することにより、高い感度、および平衡状態で生理的緩衝液中の試料を検査する能力がもたらされる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子間相互作用分析）アッセイなどの他の実験手法および計器を使用することができる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ、ａ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な計器）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）アッセイも使用することができる。
【０１５１】
用語「リンカー」は、ペプチド結合によって接合した２つまたはそれよりも多くのアミノ酸残基を含み、１つまたは複数の抗原結合性部分を連結するために使用されるポリペプチドを指すために使用される。そのようなリンカーポリペプチドは当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁；Ｐｏｌｊａｋ，  Ｒ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２巻：１１２１〜１１２３頁を参照されたい）。例示的なリンカーは、これらに限定されないが、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号５５）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号５６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号５７）；ＴＶＡＡＰ（配列番号５８）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号５９）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号６０）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号６１）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号６２）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号６３）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６４）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号６５）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号６６）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号６７）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号６８）；ＡＤＡＡＰ（配列番号６９）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号７０）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号７１）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号７２）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号７３）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号７４）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号７５）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号７６）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７７）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号７８）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号７９）；ＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号８０）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号８１）；およびＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号８２）を含む。
【０１５２】
用語「がん」は、本明細書で使用される場合、典型的には、制御されていない細胞増殖を特徴とする、多細胞性の真核生物における生理的状態を指す。
【０１５３】
「標識」および「検出可能な標識」または「検出可能な部分」は、例えば、抗体および検体などの特異的な結合対のメンバー間の反応を検出可能にするために、抗体または検体などの特異的な結合パートナーに付着させる部分を意味し、そのように標識された特異的な結合パートナー、例えば、抗体または検体は、「検出可能に標識された」と称される。したがって、用語「標識された結合性タンパク質」は、本明細書で使用される場合、結合性タンパク質の同定をもたらす標識が組み入れられたタンパク質を指す。ある実施形態では、標識は、視覚的または機器による手段、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組み入れまたはしるしを付したアビジン（例えば、光学的もしくは比色定量方法によって検出することができる蛍光マーカーもしくは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの付着によって検出可能なシグナルを生じ得る検出可能なマーカーである。ポリペプチドに対する標識の例は、これらに限定されないが、以下を含む：放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、および１５３Ｓｍ）；色素原；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、およびランタニドリン光体）；酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびアルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合性部位、金属結合性ドメイン、およびエピトープタグ）；ならびにガドリニウムキレートなどの磁気薬剤。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表的な例は、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物、および、蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインを含む。他の標識が本明細書に記載されている。この点について、部分自体は検出可能に標識されない場合があるが、さらに別の部分と反応して検出可能になる場合がある。「検出可能に標識した」の使用は、後者の型の検出可能な標識を包含することが意図されている。
【０１５４】
用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書で使用される場合、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ、ａ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用してバイオセンサーマトリクス内のタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイム二特異性相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる説明については、Ｊｏｅｎｓｓｏｎ，  Ｕ．ら（１９９３年）Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．、５１巻：１９〜２６頁；Ｊｏｅｎｓｓｏｎ，  Ｕ．ら（１９９１年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１１巻：６２０〜６２７頁；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，  Ｂ．ら（１９９５年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、８巻：１２５〜１３１頁；およびＪｏｈｎｎｓｏｎ，  Ｂ．ら（１９９１年）Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９８巻：２６８〜２７７頁を参照されたい。
【０１５５】
「プラスミド」または「ベクター」は、宿主細胞への送達または異なる宿主細胞間の移行のために設計された核酸構築物を含む。「発現プラスミド」または「発現ベクター」は、異種核酸断片を細胞内に組み入れ、発現させる能力を有するプラスミドであり得る。発現プラスミドは、追加的なエレメントを含んでよく、例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有してよく、したがって、２つの生物内で維持されることが可能になる。プラスミドに組み入れられる核酸は、発現制御配列によりそのポリヌクレオチド配列の転写および翻訳を制御および調節する場合、発現制御配列に作動可能に連結されてよい。
【０１５６】
「核酸」または「核酸配列」は、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体の単位を組み入れる任意の分子、好ましくはポリマー分子であってよい。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよい。一本鎖核酸は、変性した二本鎖ＤＮＡの一方の核酸鎖であってよい。代替的に、一本鎖核酸は、いかなる二本鎖ＤＮＡにも由来しない一本鎖核酸であってよい。一態様では、核酸はＤＮＡであってよい。別の態様では、核酸はＲＮＡであってよい。好適な核酸分子は、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含めたＤＮＡである。他の好適な核酸分子は、ｍＲＮＡを含めたＲＮＡである。
【０１５７】
動作する実施例中または別段の指示がある場合を除き、本明細書において使用される成分の分量または反応条件を表す全ての数字は、全ての場合に、用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。用語「約」は、百分率に関連して使用される場合、±１％を意味し得る。
【０１５８】
本開示のいくつかの実施形態を本明細書において記載し、説明してきたが、機能を行うための、ならびに／あるいは本明細書において記載される結果および／または１つもしくは複数の利点を得るための、多様な他の手段および／または構造は、当業者によって容易に想起され、そのような変更および／または改変のそれぞれは、本開示の範囲内であると考えられる。より一般的には、本明細書において記載される全てのパラメータ、寸法、材料、および構成は、例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構成は、特定の適用または本開示の教示が使用される適用に依存することを、当業者は容易に理解するであろう。当業者は、単なる日常的実験を使用して、本明細書に記載される開示の特異的実施形態に対する多くの同等物を認識するかまたは確認することができる。したがって、前述の実施形態は、単なる例として紹介され、添付の特許請求の範囲およびその同等物の範囲内で、本開示は具体的に記載および特許請求される以外に実践してもよいと理解すべきである。本開示は、本明細書において記載されるそれぞれの個々の特徴、システム、物品、材料、および／または方法を対象とする。さらに、２つまたはそれよりも多くのそのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法の任意の組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法が相互に矛盾しない限り、本開示の範囲に含まれる。
【０１５９】
不定冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、相反することが明確に示されていなければ、「少なくとも１つの（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」を意味すると理解されるべきである。
【０１６０】
句「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」は、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、そのようにつなげられた要素、すなわち、一部の場合では接続的に存在し、他の場合では離接的に存在する要素の「いずれかまたは両方（ｅｉｔｈｅｒ  ｏｒ  ｂｏｔｈ）」を意味すると理解されるべきである。相反することが明確に示されていなければ、「および／または」節によって具体的に同定された要素以外の他の要素が、具体的に同定された要素に関連するか関連しないかにかかわらず、任意選択で存在し得る。したがって、非限定的例として、「Ａおよび／またはＢ（Ａ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｂ）」への言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのオープンエンドの言葉と併せて使用される場合、一実施形態では、Ａ、Ｂは伴わない（Ａ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ｂ）（任意選択でＢ以外の要素を含む）；別の実施形態では、Ｂ、Ａは伴わない（Ｂ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ａ）（任意選択でＡ以外の要素を含む）；さらに別の実施形態では、ＡとＢの両方（ｂｏｔｈ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ）（任意選択で他の要素を含む）などを指し得る。
【０１６１】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、句「少なくとも１つの（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」は、１つまたは複数の要素の一覧に関しては、要素の一覧中の要素の任意の１つまたは複数から選択された少なくとも１つの要素を意味するが、要素の一覧中に具体的に列挙されているそれぞれおよび全ての要素の少なくとも１つが必ずしも含まれるのではなく、また、要素の一覧中の要素の任意の組み合わせが排除されるものではないと理解されるべきである。この定義は、句「少なくとも１つの（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」が指す要素の一覧中で具体的に同定されている要素以外の要素が、具体的に同定されている要素に関連するか関連しないかにかかわらず、任意選択で存在し得ることも可能にするものである。したがって、非限定的例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｆ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ）」（もしくは、同等に、「ＡまたはＢの少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｆ  Ａ  ｏｒ  Ｂ）」、または、同等に、「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｆ  Ａ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｂ）」）は、一実施形態では、任意選択で１つよりも多くを含め、少なくとも１つのＡ、Ｂは存在しない（および任意選択でＢ以外の要素を含む）；別の実施形態では、任意選択で１つよりも多くを含め、少なくとも１つのＢ、Ａは存在しない（および任意選択でＡ以外の要素を含む）；さらに別の実施形態では、任意選択で１つよりも多くを含め、少なくとも１つのＡ、および任意選択で１つよりも多くを含め、少なくとも１つのＢ（および任意選択で他の要素を含む）などを指し得る。
【０１６２】
特許請求の範囲において請求項の要素を修飾するための、例えば「第１の」、「第２の」、「第３の」などの順序を示す用語の使用は、それだけで１つの請求項の要素の別の請求項の要素に対するいかなる優先順位、先行、もしくは順序を示すものでもなく、方法の行為が実施される時間的順序を示すものでもなく、ただ単に、特許請求の範囲の要素を区別するために、ある特定の名称を有する１つの請求項の要素と同じ名称を有する（順序を示す用語が使用されない場合）別の要素を区別するための標識として使用されるものである。
【０１６３】
本明細書で提供される範囲は、その範囲内の値の全てについて省略したものであることが理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群よりのあらゆる数、数の組み合わせ、または部分範囲、例えば、１０〜２０、１〜１０、３０〜４０などを包含するものと理解される。
【０１６４】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性部分
本発明は、少なくとも一部において、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に存在するＴＧＦβ１に結合する抗体およびその抗原結合性部分の発見に基づく。したがって、本発明のいくつかの態様は、ＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分であって、エピトープが、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に存在する場合に抗体またはその抗原結合性部分による結合に利用可能なものである、抗体またはその抗原結合性部分に関する。いくつかの実施形態では、エピトープは、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、および／またはＬＲＲＣ３３との複合体中にある場合のＴＧＦβ１のコンフォメーションの変化に起因して利用可能になる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分が結合するＴＧＦβ１のエピトープは、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、および／またはＬＲＲＣ３３との複合体中にない場合には利用可能ではない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ２に特異的に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ３に特異的に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１のインテグリンへの結合を妨げない。例えば、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１のインテグリン結合性部位を遮蔽しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１の活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。
【０１６５】
本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合し、ここで、エピトープは、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ２−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に存在する場合に抗体またはその抗原結合性部分による結合に利用可能なものである。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１は、天然に存在する哺乳動物アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１は、天然に存在するヒトアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１は、ヒト、サル、ラットまたはマウスアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ２に特異的に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ３に特異的に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ２にもＴＧＦβ３にも特異的に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２１に記載されているアミノ酸配列を含むＴＧＦβ１に特異的に結合する。ＴＧＦβ２のアミノ酸配列、およびＴＧＦβ３アミノ酸配列は、それぞれ配列番号２２および２３に記載されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、天然に存在しないアミノ酸配列を含むＴＧＦβ１（そうでなければ、本明細書では、天然に存在しないＴＧＦβ１と称される）に特異的に結合する。例えば、天然に存在しないＴＧＦβ１は、天然に存在するＴＧＦβ１アミノ酸配列と比べて、組換えによって生じた１つまたは複数の変異を含み得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、またはＴＧＦβ３アミノ酸配列は、表１に示されている配列番号２４〜３５に記載されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、またはＴＧＦβ３アミノ酸配列は、表２に示されている配列番号３６〜４３に記載されているアミノ酸配列を含む。
【化１】
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【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【０１６６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原性タンパク質複合体（例えば、ＬＴＢＰ−ＴＧＦβ１複合体）は、１つまたは複数のＬＴＢＰタンパク質（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、およびＬＴＢＰ４）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、天然に存在しないタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、組換えタンパク質である。そのような組換えＬＴＢＰ１タンパク質は、ＬＴＢＰ１、その選択的にスプライシングされた改変体および／またはその断片を含み得る。組換えＬＴＢＰ１タンパク質はまた、１つまたは複数の検出可能な標識を含むように改変されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列はプロセシングまたは切断されている）。そのような検出可能な標識としては、これらに限定されないが、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、哺乳動物ＬＴＢＰ１タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットＬＴＢＰ１タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、表２の配列番号４６および４７に記載されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、表３の配列番号５０に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、天然に存在しないタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、組換えタンパク質である。そのような組換えＬＴＢＰ３タンパク質は、ＬＴＢＰ３、その選択的にスプライシングされた改変体および／またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列はプロセシングまたは切断されている）。組換えＬＴＢＰ３タンパク質はまた、１つまたは複数の検出可能な標識を含むように改変されていてもよい。そのような検出可能な標識は、これらに限定されないが、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、哺乳動物ＬＴＢＰ３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットＬＴＢＰ３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、表２の配列番号４４および４５に記載されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、表３の配列番号５１に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、天然に存在しないタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、組換えタンパク質である。そのようなＧＡＲＰは組換え型のものであってよく、本明細書では、組換えＧＡＲＰと称される。いくつかの組換えＧＡＲＰは、野生型ＧＡＲＰと比較して１つまたは複数の改変、短縮および／または変異を含んでよい。組換えＧＡＲＰは、可溶性になるように改変されたものであってよい。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列はプロセシングまたは切断されている）。他の実施形態では、組換えＧＡＲＰは、１つまたは複数の検出可能な標識を含むように改変されたものである。さらなる実施形態では、そのような検出可能な標識は、これらに限定されないが、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ、ｆｌａｇタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを含み得る。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、哺乳動物ＧＡＲＰタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットＧＡＲＰタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、表２の配列番号４８〜４９に記載されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰタンパク質は、表４の配列番号５２および５３に記載されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１に状況依存的に結合しない、例えば、ＴＧＦβ１への結合は、ＴＧＦβ１分子がＧＡＲＰなどの特定の提示分子と複合体を形成している場合にのみ起こる。その代わりに、抗体およびその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１に状況非依存的に結合する。言い換えれば、抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１に、ＴＧＦβ１が任意の提示分子：ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、および／またはＬＲＣＣ３３と結合している場合に結合する。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、天然に存在しないタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、組換えタンパク質である。そのようなＬＲＲＣ３３は組換え型のものであってよく、本明細書では、組換えＬＲＲＣ３３と称される。いくつかの組換えＬＲＲＣ３３タンパク質は、野生型ＬＲＲＣ３３と比較して１つまたは複数の改変、短縮および／または変異を含み得る。組換えＬＲＲＣ３３タンパク質は、可溶性になるように改変されたものであってよい。例えば、いくつかの実施形態では、可溶性ＬＲＲＣ３３タンパク質（ｓＬＲＲＣ３３；例えば、配列番号８４を参照されたい）を発現させるために、ＬＲＲＣ３３の外部ドメインをＣ末端Ｈｉｓタグと共に発現させることができる。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列はプロセシングまたは切断されている）。他の実施形態では、組換えＬＲＲＣ３３タンパク質は、１つまたは複数の検出可能な標識を含むように改変されたものである。さらなる実施形態では、そのような検出可能な標識は、これらに限定されないが、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ、ｆｌａｇタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、哺乳動物ＬＲＲＣ３３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットＬＲＲＣ３３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３タンパク質は、表４の配列番号８３、８４、および８５に記載されているアミノ酸配列を含む。
【表３−１】
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【表３−２】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【０１７０】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に存在する場合に抗体による結合に利用可能なＴＧＦβ１のエピトープに特異的に結合する本発明の抗体またはその抗原結合性部分、ならびに抗体をコードする本開示の核酸分子は、表５に示されているＣＤＲアミノ酸配列の１つまたは複数を含む。
【表５】
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【０１７１】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本発明の抗体は、表５に示されている抗体の任意の１つに関して提供されているＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはこれらの組み合わせを含む任意の抗体またはその抗原結合性部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、表５に示されている抗体の任意の１つのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。本発明は、表５に示されている抗体のいずれか１つに関して提供されているＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３を含む分子をコードする任意の核酸配列も提供する。抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ３ドメインは、抗体の抗原に対する結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし得る。したがって、本開示のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／もしくはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体、またはこれらの抗体もしくはその抗原結合性部分をコードする核酸分子は、表５に示されている抗体の少なくとも重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３を含み得る。
【０１７２】
本発明の態様は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、また、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１および２のいずれか１つに記載されている配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号３および４のいずれか１つに記載されている配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号５および６のいずれか１つに記載されている配列を含む。ＣＤＲＬ１は、配列番号７および８のいずれか１つに記載されている配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＬ２は、配列番号９および１０のいずれか１つに記載されている配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＬ３は、配列番号１１および１２のいずれか１つに記載されている配列を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では（例えば、表５に示されている抗体Ａｂ１に関しては）、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号９に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号３のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む重鎖可変領域および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９１に記載されている核酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされる重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号９２に記載されている核酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされる軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９１に記載されている核酸配列によりコードされる重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号９２に記載されている核酸配列によりコードされる軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では（例えば、表５に示されている抗体Ａｂ２に関しては）、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１０に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む重鎖可変領域および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９３に記載されている核酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされる重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号９４に記載されている核酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされる軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９３に記載されている核酸配列によりコードされる重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号９４に記載されている核酸配列によりコードされる軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施例では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体はいずれも、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、および／またはＣＤＲＬ３と実質的に同様の１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲＨまたはＣＤＲＬ）配列を有する任意の抗体（その抗原結合性部分を含む）を含む。例えば、抗体は、配列番号１〜１２のいずれか１つの対応するＣＤＲ領域と比較して最大５つ、４つ、３つ、２つ、または１つのアミノ酸残基の変動を含有する、表５に示されている１つまたは複数のＣＤＲ配列（配列番号１〜１２）を含み得る。表５に列挙されている抗体（例えば、Ａｂ１およびＡｂ２）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の完全なアミノ酸配列、ならびに抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする核酸配列を以下に提示する。
【化２】
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【化３】
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【化４】
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【０１８３】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１３もしくは１７の重鎖可変ドメインまたは配列番号１４もしくは１８の軽鎖可変ドメインを含む任意の抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１３および１４；ならびに１７および１８の重鎖可変と軽鎖可変の対を含む任意の抗体を含む。
【０１８４】
本開示の態様は、本明細書に記載のもののいずれかと相同な重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列を有する、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、配列番号１３もしくは１７の重鎖可変アミノ酸配列、または配列番号１４もしくは１８の軽鎖可変配列と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。いくつかの実施形態では、相同な重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれの中でも変動しない。例えば、いくつかの実施形態では、配列変動の程度（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）が、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれも除く重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列内に存在し得る。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１５もしくは１９の重鎖または配列番号１６もしくは２０の軽鎖を含む任意の抗体またはその抗原結合性部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１５と１６；または１９と２０の重鎖と軽鎖の対を含む任意の抗体を含む。
【０１８６】
本開示の態様は、本明細書に記載のもののいずれかと相同な重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列を有する、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、配列番号１５もしくは１９の重鎖配列または番号１６もしくは２０の軽鎖配列アミノ酸配列と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である重鎖配列または軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、相同な重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれの中でも変動しない。例えば、いくつかの実施形態では、配列変動の程度（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）が、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれも除く重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列内に存在し得る。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１５もしくは１９の重鎖または配列番号１６もしくは２０の軽鎖を含む任意の抗体またはその抗原結合性部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、配列番号１５と１６；または１９と２０の重鎖と軽鎖の対を含む任意の抗体を含む。
【０１８８】
本開示の態様は、本明細書に記載のもののいずれかと相同な重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列を有する、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、配列番号１５もしくは１９の重鎖配列または配列番号１６もしくは２０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である重鎖配列または軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、相同な重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれの中でも変動しない。例えば、いくつかの実施形態では、配列変動の程度（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）が、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれも除く重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列内に存在し得る。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、２個のアミノ酸配列の「パーセント同一性」はＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：５８７３〜７７頁、１９９３年のとおり改変されたＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７巻：２２６４〜６８頁、１９９０年のアルゴリズムを使用して決定される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜１０頁、１９９０年のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、目的のタンパク質分子に相同性のアミノ酸配列を得るためにＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行され得る。２個の配列間にギャップが存在する場合、ギャップＢＬＡＳＴがＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁、１９９７年に記載のとおり利用され得る。ＢＬＡＳＴおよびギャップＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。
【０１９０】
本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片のいずれにおいても、ＣＤＲまたはフレームワーク配列に、抗体−抗原相互作用に関与する可能性が低い残基の位置に１つまたは複数の保存的変異を導入することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲまたはフレームワーク配列に、結晶構造に基づいて決定される、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体との相互作用に関与する可能性が低い残基の位置（複数可）にそのような保存的変異（複数可）を導入することができる。いくつかの実施形態では、構造的な類似性を共有する別の抗原に関する公知の構造的な情報から、可能性の高い界面（例えば、抗原−抗体相互作用に関与する残基）を推定することができる。
【０１９１】
本明細書において使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対電荷またはサイズの特徴を変更しないアミノ酸置換を指す。改変体は、そのような方法をまとめている参考文献、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｊ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋら編、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９年またはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて見出されるような当業者に公知のポリペプチド配列を変更するための方法に従って調製されてよい。アミノ酸の保存的置換は、次の群：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸の間で行われる置換を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は、抗体に望ましい特性を付与する変異を含む。例えば、天然ＩｇＧ４  ｍＡｂで生じることが公知であるＦａｂアーム交換による起こり得る困難な状況を回避するために、本明細書で提供される抗体は、セリン２２８（ＥＵ番号付け、Ｋａｂａｔ番号付け残基２４１）がプロリンに変換されてＩｇＧ１様（ＣＰＰＣＰ（配列番号５４））ヒンジ配列が生じる安定化「Ａｄａｉｒ」変異を含む場合がある（Ａｎｇａｌら、「Ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ａｂｏｌｉｓｈｅｓ  ｔｈｅ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ  （ＩｇＧ４）  ａｎｔｉｂｏｄｙ」Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０巻、１０５〜１０８頁；１９９３年）。したがって、抗体のいずれかは、安定化「Ａｄａｉｒ」変異またはアミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号５４）を含んでよい。
【０１９３】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、任意選択で抗体定常領域またはその一部を含んでよい。例えばＶＬドメインは、そのＣ末端でＣκまたはＣλなどの軽鎖定常ドメインに付着され得る。同様にＶＨドメインまたはその一部は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭならびに任意のアイソタイプサブクラスのような重鎖の全体または一部に付着され得る。抗体は、好適な定常領域を含み得る（例えばＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第９１〜３２４２号、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）を参照されたい）。したがって、この範囲内の抗体は、任意の好適な定常領域と組み合わされたＶＨおよびＶＬドメイン、またはその抗原結合性部分を含み得る。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、配列番号１３〜２０の抗体のフレームワーク領域を含んでもよく含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、マウス抗体であり、マウスフレームワーク領域配列を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に比較的高い親和性、例えば、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍまたはそれ未満のＫＤで結合し得る。例えば、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に、５ｐＭから５００ｎＭの間、例えば、５０ｐＭから１００ｎＭの間、例えば、５００ｐＭから５０ｎＭの間の親和性で結合し得る。本開示は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体への結合について本明細書に記載の抗体のいずれかと競合し、５０ｎＭまたはそれ未満（例えば、２０ｎＭまたはそれ未満、１０ｎＭまたはそれ未満、５００ｐＭまたはそれ未満、５０ｐＭまたはそれ未満、または５ｐＭまたはそれ未満）の親和性を有する抗体または抗原結合性断片も含む。ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の親和性および結合動態は、これらに限定されないが、バイオセンサー技術（例えば、ＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）を含めた任意の好適な方法を使用して試験され得る。
【０１９６】
ＴＧＦβを阻害する抗体
本発明は、一態様では、機能性抗体を提供する。本明細書で使用される場合、「機能性抗体」とは、その抗原に結合する能力によって１つまたは複数の生物学的活性を付与するものである。機能性抗体は、阻害抗体（または阻害性抗体）および活性化抗体を含み得る。したがって、本開示は、ＴＧＦβシグナル伝達によって媒介される生物学的プロセスを調節する（例えば、阻害するかまたは活性化する）ことができるＴＧＦβ抗体を含む。
【０１９７】
本明細書で使用される場合、「阻害抗体」という用語は、成熟増殖因子の放出を阻害するかまたは増殖因子活性を低減する抗体を指す。阻害抗体は、そのような抗体と会合すると増殖因子の放出または活性を低減する任意のエピトープを標的化する抗体を含む。そのようなエピトープは、抗体が結合すると増殖因子活性の低減を導く、ＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１）、増殖因子または他のエピトープのプロドメイン上に存在し得る。本発明の阻害抗体は、これらに限定されないが、ＴＧＦβ１−阻害抗体を含む。
【０１９８】
本開示の複数の実施形態は、溶液、細胞培養物および／または被験体において、増殖因子シグナル伝達を改変するための、阻害抗体の使用方法を含む。
【０１９９】
ポリペプチド
本開示のいくつかの態様は、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１５、および配列番号１９からなる群より選択される配列を有するポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、可変重鎖ドメインまたは重鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１５、および配列番号１９に記載されているアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。
【０２００】
本開示のいくつかの態様は、配列番号１４、配列番号１８、配列番号１６、および配列番号２０からなる群より選択される配列を有するポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４、配列番号１８、配列番号１６、および配列番号２０に記載されているアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。
【０２０１】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体と競合する抗体
本開示の態様は、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合するかまたは交差競合する抗体に関する。用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用される場合、第１の抗体がエピトープ（例えば、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体のエピトープ）に、第２の抗体の結合と十分に類似した様式で結合し、したがって、第１の抗体とそのエピトープの結合の結果が、第２の抗体の存在下では、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して検出可能に低下することを意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合も同様に第１の抗体の存在下で検出可能に低下する代替案があり得るが、そうである必要はない。すなわち、第１の抗体は第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害するが、その第２の抗体による第１の抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合の阻害は伴わない場合がある。しかし、各抗体が他の抗体のそのエピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、程度が同じであるかより大きいかより小さいかにかかわらず、これらの抗体は、これらのそれぞれのエピトープ（複数可）への結合について互いと「交差競合する」と言える。競合抗体および交差競合抗体のどちらも本開示の範囲内である。そのような競合または交差競合が起こる機構（例えば、立体的な障害、コンフォメーションの変化、または共通のエピトープ、またはその一部への結合）にかかわらず、そのような競合抗体および／または交差競合抗体は本明細書で提供される方法および／または組成物に包含され、有用であり得ることが当業者には理解されよう。
【０２０２】
本開示の態様は、本明細書で提供される特異的抗体またはその抗原結合性部分のいずれかと競合するかまたは交差競合する抗体に関する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、本明細書で提供される抗体のいずれかと同じエピトープまたはその付近に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、エピトープから１５個またはそれ未満のアミノ酸残基以内に結合する場合、エピトープ付近に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性部分のいずれかは、本明細書で提供される抗体のいずれかが結合するエピトープから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸残基以内に結合する。
【０２０３】
別の実施形態では、本明細書で提供される抗原（例えば、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体）のいずれかへの結合について、１０−６Ｍ未満の抗体とタンパク質の間の平衡解離定数ＫＤで競合するかまたは交差競合する抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。他の実施形態では、本明細書で提供される抗原のいずれかへの結合について１０−１１Ｍから１０−６ＭまでにわたるＫＤで競合するかまたは交差競合する抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分と結合について競合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分と同じエピトープに結合する抗ＴＧＦβ１抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。
【０２０４】
本明細書で提供される抗体はいずれも任意の好適な方法を使用して特徴付けられ得る。例えば、１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピトープマッピング」である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９９９年の第１１章に記載されるように、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイを含む、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングし特徴付けるための好適な方法は多く存在する。追加的な例では、エピトープマッピングを使用して抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープは、線形エピトープ、すなわち、アミノ酸の単一のストレッチ中に含有されるエピトープであってもよく、必ずしも単一のストレッチ（一次構造線形配列）中に含有されなくてよいアミノ酸の３次元相互作用によって形成されるコンフォメーショナルエピトープであってもよい。いくつかの実施形態では、エピトープは、ＴＧＦβ１がＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体中にある場合にのみ本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分による結合に利用可能になるＴＧＦβ１エピトープである。様々な長さのペプチド（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸長）を単離または合成し（例えば、組換えによって）、抗体を用いた結合アッセイに使用することができる。別の例では、抗体が結合するエピトープを、標的抗原配列に由来する重複するペプチドを使用し、抗体による結合を決定することによって、系統的スクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子断片発現アッセイによると、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームをランダムにまたは特異的な遺伝子構築によって断片化し、発現した抗原の断片の試験される抗体との反応性を決定する。遺伝子断片を、例えばＰＣＲによって生成し、次いで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて放射性アミノ酸の存在下で転写およびタンパク質への翻訳を行う。次いで、抗体の放射性標識された抗原断片への結合を免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定する。ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上にディスプレイしたランダムなペプチド配列の大きなライブラリー（ファージライブラリー）を使用することによって同定することもできる。代替的に、重複するペプチド断片の定義されたライブラリーを試験抗体との結合について単純な結合アッセイにおいて試験することができる。追加的な例では、抗原結合性ドメインの変異誘発、ドメインスワッピング実験およびアラニンスキャニング変異誘発を実施して、エピトープ結合に要求される、十分な、および／または必要な残基を同定することができる。例えば、ドメインスワッピング実験は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体の種々の断片が、ＴＧＦβタンパク質���ァミリーの別のメンバー（例えば、ＧＤＦ１１）などの密接に関連するが抗原性ににおいて別個のタンパク質に由来する配列で置き換えられた（スワッピングされた）標的抗原の変異体を使用して実施され得る。抗体のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体の変異体への結合を評価することにより、抗体結合に対する特定の抗原断片の重要性を評価することができる。
【０２０５】
代替的に、同じ抗原に結合することが分かっている他の抗体を使用して競合アッセイを実施して、抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定することができる。競合アッセイは当業者には周知である。
【０２０６】
さらに、本明細書で提供される抗体のいずれかとＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体内の１つまたは複数の残基との相互作用は、常套的な技術によって決定され得る。例えば、結晶構造を決定することができ、それに応じて、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体内の残基と抗体内の１つまたは複数の残基の間の距離を決定することができる。そのような距離に基づいて、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体内の特定の残基が抗体内の１つまたは複数の残基と相互作用するかどうかを決定することができる。さらに、競合アッセイおよび標的変異誘発アッセイなどの好適な方法を適用して、候補抗体の優先的な結合を決定することができる。
【０２０７】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に結合する抗体の産生
本開示の抗体またはその抗原結合性断片を得るために、多数の方法を使用することができる。例えば、抗体は、組換えＤＮＡ法を使用して産生され得る。モノクローナル抗体は、公知の方法に従って、ハイブリドーマの生成によっても産生され得る（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９９頁を参照されたい）。次いで、このように形成されたハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（例えば、ＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）分析などの標準の方法を使用してスクリーニングして、指定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する１つまたは複数のハイブリドーマを同定する。指定の抗原の任意の形態、例えば、組換え抗原、天然に存在する形態、任意の改変体またはその断片、ならびにその抗原性ペプチド（例えば、線形エピトープとしてまたはコンフォメーショナルエピトープとして足場内の本明細書に記載のエピトープのいずれか）を免疫原として使用することができる。抗体作製の１つの典型的な方法は、抗体またはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）を発現するタンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージまたはリボソームディスプレイライブラリーのスクリーニングを含む。ファージディスプレイは、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｓｍｉｔｈ（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２８巻：１３１５〜１３１７頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁；Ｍａｒｋｓら、（１９９１年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９に記載されている。
【０２０８】
ディスプレイライブラリーの使用に加えて、指定の抗原（例えば、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体）を使用して非ヒト動物、例えば、げっ歯類、例えば、マウス、ハムスター、またはラットを免疫化することができる。一実施形態では、非ヒト動物はマウスである。
【０２０９】
別の実施形態ではモノクローナル抗体は、非ヒト動物から得られ、次いで好適な組換えＤＮＡ技術を使用して改変される（例えばキメラ）。キメラ抗体を作製するための種々のアプローチは記載されている。例えばＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．８１巻：６８５１頁、１９８５年、Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４巻：４５２頁、１９８５年、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号、Ｂｏｓｓら、米国特許第４，８１６，３９７号、Ｔａｎａｇｕｃｈｉら、欧州特許公開第ＥＰ１７１４９６号、欧州特許公開第０１７３４９４号、英国特許第ＧＢ２１７７０９６Ｂ号を参照されたい。
【０２１０】
追加的な抗体産生技術についてＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８年を参照されたい。本開示は、抗体のいずれかの特定の供給源、産生の方法または他の特別な特徴に必ずしも限定されない。
【０２１１】
本開示のいくつかの態様は、ポリヌクレオチドまたはベクターで形質転換された宿主細胞に関する。宿主細胞は、原核または真核細胞であってよい。宿主細胞に存在するポリヌクレオチドまたはベクターは、宿主細胞のゲノムに組み込まれていてもよく、または染色体外に維持されていてもよい。宿主細胞は、細菌性、昆虫、真菌、植物、動物またはヒト細胞などの任意の原核または真核細胞であってよい。いくつかの実施形態では真菌細胞は、例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のもの、具体的にはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種のものである。用語「原核生物」は、抗体または対応する免疫グロブリン鎖の発現のためにＤＮＡまたはＲＮＡ分子で形質転換またはトランスフェクトされ得る全ての細菌を含む。原核生物の宿主は、例えばＥ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓなどのグラム陰性およびグラム陽性細菌を含んでよい。用語「真核生物」は、酵母、高等植物、昆虫ならびに脊椎動物細胞、例えばＮＳＯおよびＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞を含む。組換え産生手順において用いられる宿主に応じて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体または免疫グロブリン鎖は、グリコシル化されてよい、またはグリコシル化されなくてよい。抗体または対応する免疫グロブリン鎖は、開始メチオニンアミノ酸残基も含んでよい。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主はヌクレオチド配列の高レベル発現に好適な条件下に維持されてよく、所望により、免疫グロブリン軽鎖、重鎖、軽鎖／重鎖二量体もしくはインタクト抗体、抗原結合性断片または他の免疫グロブリン形態の回収および精製が続いてよい；Ｂｅｙｃｈｏｋ、Ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、（１９７９年）を参照されたい。したがって、ポリヌクレオチドまたはベクターは、次に抗体または抗原結合性断片を産生する細胞に導入される。さらに、前述の宿主細胞を含むトランスジェニック動物、好ましくは哺乳動物は、抗体または抗体断片の大規模産生のために使用されてよい。
【０２１３】
形質転換された宿主細胞は、発酵槽で増殖され、最適な細胞増殖を達成するための任意の好適な技術を使用して培養されてよい。発現されると、全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、他の免疫グロブリン形態または抗原結合性断片は、硫酸アンモニウム沈殿法、親和性カラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当技術分野の標準的手順により精製されてよい；Ｓｃｏｐｅｓ、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９８２年）を参照されたい。次いで抗体または抗原結合性断片は、増殖培地、細胞溶解物または細胞膜画分から単離されてよい。例えば微生物で発現された抗体または抗原結合性断片の単離および精製は、例えば調製用クロマトグラフィー分離および、例えば抗体の定常領域に対して指向されたモノクローナルまたはポリクローナル抗体の使用を含むものなどの免疫学的分離などの任意の従来の手段によってであってよい。
【０２１４】
本開示の態様は、モノクローナル抗体の無期限に延長される供給源を提供するハイブリドーマに関する。ハイブリドーマの培養物から直接免疫グロブリンを得るための代替法として、不死化ハイブリドーマ細胞は、続く発現および／または遺伝子操作のための再編成重鎖および軽鎖遺伝子座の供給源として使用されてよい。再編成抗体遺伝子は、ｃＤＮＡを産生するために適切なｍＲＮＡから逆転写されてよい。いくつかの実施形態では重鎖定常領域は、異なるアイソタイプのものと交換されるかまたは全体が除去されてよい。可変領域は、一本鎖Ｆｖ領域をコードするように連結されてよい。複数のＦｖ領域は、１つより多い標的への結合能力を付与するために連結されてよく、またはキメラ重鎖および軽鎖組み合わせが用いられてよい。任意の適切な方法は、抗体可変領域のクローニングおよび組換え抗体の生成のために使用されてよい。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、重鎖および／または軽鎖の可変領域をコードする適切な核酸が得られ、標準的組換え宿主細胞にトランスフェクトされ得る発現ベクターに挿入される。種々のそのような宿主細胞が使用されてよい。いくつかの実施形態では哺乳動物宿主細胞は、効率的なプロセシングおよび産生のために有利である場合がある。この目的のために有用な典型的な哺乳動物細胞株は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞またはＮＳＯ細胞を含む。抗体または抗原結合性断片の産生は、改変組換え宿主を宿主細胞の増殖およびコード配列の発現に適切な培養条件下で培養することによって実行されてよい。抗体または抗原結合性断片は、培養物からそれらを単離することによって回収され得る。発現系は、生じた抗体が培地に分泌されるように、シグナルペプチドを含める形で設計されてよいが；細胞内産生物も可能である。
【０２１６】
本開示は、本明細書に記載の抗体の免疫グロブリン鎖の少なくとも可変領域をコードするポリヌクレオチドも含む。いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドによってコードされる可変領域は、上に記載のハイブリドーマのいずれか１つによって産生された抗体の可変領域のＶＨおよび／またはＶＬの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０２１７】
抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、例えばＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡまたは合成的に産生されたＤＮＡもしくはＲＮＡまたはこれらのポリヌクレオチドのいずれかを単独もしくは組み合わせで含む組換え的に産生されたキメラ核酸分子であってよい。いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドは、ベクターの一部である。そのようなベクターは、好適な宿主細胞においておよび好適な条件下でベクターの選択を可能にするマーカー遺伝子などのさらなる遺伝子を含んでよい。
【０２１８】
いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドは、原核または真核細胞での発現を可能にする発現調節配列に作動可能に連結される。ポリヌクレオチドの発現は、ポリヌクレオチドの翻訳可能なｍＲＮＡへの転写を含む。真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞での発現を確実にする制御エレメントは、当業者に周知である。それらは、転写の開始を促進する制御配列ならびに任意選択で転写の終了および転写物の安定化を促進するポリＡシグナルを含んでよい。追加的制御エレメントは、転写および翻訳エンハンサー、ならびに／または天然で関連するもしくは異種性のプロモーター領域を含んでよい。原核生物の宿主細胞での発現を可能にする可能性のある制御エレメントは例えばＥ．ｃｏｌｉにおけるＰＬ、Ｌａｃ、ＴｒｐまたはＴａｃプロモーターを含み、真核宿主細胞での発現を可能にする制御エレメントの例は、酵母におけるＡＯＸ１もしくはＧＡＬ１プロモーターまたは哺乳動物および他の動物細胞におけるＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーもしくはグロビンイントロンである。
【０２１９】
転写の開始に関与するエレメント以外のそのような制御エレメントはＳＶ４０ポリＡ部位またはｔｋポリＡ部位などのポリヌクレオチドの下流の転写終結シグナルも含み得る。さらに、用いられる発現系に応じて、ポリペプチドを細胞コンパートメントに向かわせるまたはそれを培地に分泌することができるリーダー配列を、ポリヌクレオチドのコード配列に加えてよく、以前に記載されている。リーダー配列（複数可）は、翻訳、開始および終止配列と適切なフェーズ（ｐｈａｓｅ）でアセンブルされ、好ましくは、リーダー配列は翻訳されたタンパク質またはその部分の例えば細胞外培地への分泌を導くことができる。望ましい特徴、例えば発現される組換え産物の安定化または精製の簡略化を与えるＣまたはＮ末端識別ペプチドを含む融合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチド配列を、任意選択で使用してもよい。
【０２２０】
いくつかの実施形態では軽鎖および／または重鎖の少なくとも可変ドメインをコードするポリヌクレオチドは、両方の免疫グロブリン鎖または１つだけの可変ドメインをコードしてよい。同様にポリヌクレオチドは、同じプロモーターの調節下にあってよく、または発現のために別々に調節されてよい。さらにいくつかの態様は、抗体または抗原結合性断片の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを、任意選択で抗体の他の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせで含む、遺伝子工学において従来使用されるベクター、特にプラスミド、コスミド、ウイルスおよびバクテリオファージに関する。
【０２２１】
いくつかの実施形態では発現調節配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトできるベクター中の真核プロモーター系として提供されるが、原核生物の宿主のための調節配列も使用されてよい。レトロウイルス、ワクチニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスまたはウシパピローマウイルスなどのウイルス由来の発現ベクターは、ポリヌクレオチドまたはベクターを標的化された細胞集団（例えば抗体または抗原結合性断片を発現するように細胞を操作するため）に送達するために使用されてよい。種々の適切な方法は、組換えウイルス性ベクターを構築するために使用されてよい。いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドおよびベクターは、標的細胞への送達のためにリポソームに再構成されてよい。ポリヌクレオチド（例えば配列および発現調節配列をコードする免疫グロブリン鎖の重鎖および／または軽鎖可変ドメイン（複数可））を含有するベクターは、細胞宿主の種類に応じて変化する好適な方法によって宿主細胞に移行されてよい。
【０２２２】
修飾
本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体の検出および単離のために、これらに限定されないが、酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料、ポジトロン放出金属、非放射性常磁性金属イオン、および親和性標識を含めた検出可能な標識または検出可能な部分で修飾されてよい。検出可能な物質または部分は、本開示のポリペプチドに直接または好適な技術を使用して中間体（例えばリンカー（例えば、切断可能なリンカー）など）を通じて間接のいずれかでカップリングまたはコンジュゲートされてよい。好適な酵素の非限定的例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含み；  好適な補欠分子族複合体の非限定的例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み；  好適な蛍光材料の非限定的例は、ビオチン、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンを含み；発光材料の例はルミノールを含み；生物発光材料の非限定的例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンを含み；好適な放射性材料の例は、例えば、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、８６Ｒ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、およびスズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）などの放射性金属イオン、例えばアルファ放射体または他の放射性同位元素を含む。検出可能な物質は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体に直接または、好適な技術を使用して中間体（例えばリンカーなど）を通じて間接のいずれかでカップリングまたはコンジュゲートされてよい。検出可能な物質にコンジュゲートされた本明細書で提供される抗体はいずれも、本明細書に記載のものなどの任意の好適な診断アッセイに使用され得る。
【０２２３】
さらに、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は薬物で修飾されてよい。薬物は、本開示のポリペプチドに直接、または好適な技術を使用して中間体（例えばリンカー（例えば切断可能なリンカー）なと）を通じて間接のいずれかでカップリングまたはコンジュゲートされてよい。
【０２２４】
標的化薬剤
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性部分を被験体の特定の部位に標的化して、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ放出を調節するための、１つまたは複数の標的化薬剤の使用を含む。例えば、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体は、典型的には、細胞外マトリクスに局在している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている抗体は、抗体をＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体が存在する部位に局在化させるために、細胞外マトリクス標的化薬剤とコンジュゲートされ得る。そのような実施形態では、抗体の選択的標的化により、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体の選択的調節が導かれる。いくつかの実施形態では、抗体の選択的標的化により、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体の選択的阻害が導かれる（例えば、線維症を処置するため）。いくつかの実施形態では、細胞外マトリクス標的化薬剤は、ヘパリン結合性薬剤、マトリクスメタロプロテイナーゼ結合性薬剤、リシルオキシダーゼ結合性ドメイン、フィブリリン結合性薬剤、ヒアルロン酸結合性薬剤、およびその他を含む。
【０２２５】
同様に、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、典型的には、細胞、例えば活性化されたＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の表面に局在している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている抗体は、抗体をＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体が存在する部位に局在化させるために、免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）結合性薬剤とコンジュゲートされ得る。そのような実施形態では、抗体の選択的標的化により、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体の選択的調節が導かれる。いくつかの実施形態では、抗体の選択的標的化により、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体の選択的阻害（例えば、例えばがんの処置における免疫調節のための、成熟ＴＧＦβ１の放出の選択的阻害）が導かれる。そのような実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞標的化薬剤は、例えば、ＣＣＬ２２およびＣＸＣＬ１２タンパク質またはその断片を含んでよい。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体およびＬＴＢＰ−ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する第１の部分と、標的部位の構成成分、例えば、ＥＣＭの構成成分（例えば、フィブリリン）またはＴｒｅｇ細胞の構成成分（例えば、ＣＴＬＡ−４）に選択的に結合する第２の部分とを有する二特異性抗体を使用することができる。
【０２２７】
医薬組成物
本発明は、さらに、ヒトおよび非ヒト被験体への投与に好適な医薬として使用される医薬組成物を提供する。ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する１つまたは複数の抗体は、医薬組成物を形成するために、例えば緩衝液を含めた、薬学的に許容される担体（賦形剤）と共に製剤化または混和されてよい。そのような製剤は、ＴＧＦβシグナル伝達が関与する疾患または障害の処置に使用され得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβシグナル伝達に関連するそのような疾患または障害は、１つまたは複数の状況を伴う、すなわち、ＴＧＦβが特定の型（複数可）の提示分子と会合している。いくつかの実施形態では、そのような状況は、細胞型特異的かつ／または組織特異的に生じる。いくつかの実施形態では、例えば、そのようなＴＧＦβシグナル伝達の状況依存性作用は、一部においてＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３に媒介される。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、２つまたはそれよりも多くの状況のＴＧＦβに特異的に結合し、したがって、抗体は、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３のうちの２つまたはそれよりも多くから選択される提示分子との複合体中にあるＴＧＦβに結合する。したがって、そのような医薬組成物は、ＴＧＦβ関連適応症（例えば、線維症、免疫障害、および／またはがん）を緩和するために患者に投与され得る。「許容される」とは、担体が組成物の活性成分と適合性であり（および、好ましくは、活性成分を安定化でき）、処置される被験体に有害でないことを意味する。緩衝液を含めた薬学的に許容される賦形剤（担体）の例は当業者には明らかであり、以前に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版（２０００年）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．  Ｅ．  Ｈｏｏｖｅｒ編を参照されたい。一例では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を１つよりも多く含有し、ここで、これらの抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体の異なるエピトープ／残基を認識する。
【０２２９】
本方法において使用される医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を凍結乾燥製剤または水溶液の形態で含むことができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（２０００年）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．  Ｅ．  Ｈｏｏｖｅｒ編）。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸などの緩衝剤；アルコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリドなど；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類およびグルコース、マンノースもしくはデキストランを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎタンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでよい。薬学的に許容される賦形剤はさらに本明細書に記載される。
【０２３０】
いくつかの実施例では、本明細書に記載の医薬組成物は、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８２巻：３６８８頁（１９８５年）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、７７巻：４０３０頁（１９８０年）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されているものなどの任意の好適な方法によって調製することができるＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を含有するリポソームを含む。循環時間が増強されたリポソームが米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物での逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、望ましい直径を有するリポソームを得るための規定のポアサイズのフィルターを通して押し出される。
【０２３１】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体は、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中の、例えばコアセルベーション技術によってまたは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルにも捕捉され得る。例示的技術は、以前に記載されており、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００年）を参照されたい。
【０２３２】
他の例では本明細書に記載の医薬組成物は、徐放性形式で製剤化されてよい。徐放性調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、マトリクスは成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例は、ポリエステル、ハイドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）または、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）などの分解性乳酸グリコール酸共重合体、スクロースアセテートイソブチレートおよびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
【０２３３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば無菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。治療用抗体組成物は、一般に無菌アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針によって貫通できるストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０２３４】
本明細書に記載の医薬組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与または吸入もしくは吹送法による投与のための錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁物または座薬などの単位投与形態であってよい。
【０２３５】
錠剤などの固体組成物を調製するために主要活性成分は、医薬用担体、例えばコーンデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムもしくはガムなどの従来の錠剤化成分、および本開示の化合物の均一な混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成するための他の医薬用希釈剤、例えば水、または無毒性の薬学的に許容されるそれらの塩と混合されてよい。これらの予備製剤組成物を均一と称する場合、活性成分が組成物全体に均質に分散されており、それにより組成物が錠剤、丸剤およびカプセルなどの同等に有効な単位投与形態に容易に分割され得ることを意味する。この固体予備製剤組成物は、次いで本開示の活性成分０．１ｍｇから約５００ｍｇを含有する上に記載の種類の単位投与形態に分割される。新規組成物の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす投与形態を提供するためにコーティングまたは他の方法で配合されてよい。例えば錠剤または丸剤は、内剤（ｉｎｎｅｒ  ｄｏｓａｇｅ）および外剤（ｏｕｔｅｒ  ｄｏｓａｇｅ）構成成分を含んでよく、後者は前者を覆うエンベロープの形態にある。２個の構成成分は、胃での崩壊に抵抗するために役立ち、内部の構成成分が十二指腸へインタクトなまま通過することまたは放出を遅らせることを可能にする腸溶性層（ｅｎｔｅｒｉｃ  ｌａｙｅｒ）によって分離されてよい。種々の材料がそのような腸溶性層またはコーティングのために使用されてよく、そのような材料はいくつかのポリマー酸ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料との混合物を含む。
【０２３６】
好適な表面活性剤は、具体的にはポリオキシエチレンソルビタン（例えばＴｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）および他のソルビタン（例えばＳｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）などの非イオン性剤を含む。表面活性剤を含む組成物は、好都合には０．０５から５％の表面活性剤を含み、０．１から２．５％であってよい。必要に応じて他の成分、例えばマンニトールまたは他の薬学的に許容されるビヒクルが添加されてよいことは理解される。
【０２３７】
好適なエマルジョンは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などの商業的に入手できる脂肪エマルジョンを使用して調製されてよい。活性成分は、予め混合されたエマルジョン組成物に溶解されてよく、または代替的に油（例えばダイズ油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、コーン油もしくはアーモンド油）およびリン脂質（例えば卵リン脂質、ダイズリン脂質もしくはダイズレシチン）と水とを混合して形成されたエマルジョンに溶解されてもよい。他の成分、例えばグリセロールまたはグルコースが、エマルジョンの張度を調整するために加えられてよいことは理解される。好適なエマルジョンは、典型的には２０％まで、例えば５から２０％の油を含有する。
【０２３８】
エマルジョン組成物は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）とまたはその構成成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製されるものであってよい。
【０２３９】
吸入または吹送法のための医薬組成物は、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液および懸濁物ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上に記載の好適な薬学的に許容される賦形剤を含有してよい。いくつかの実施形態では組成物は、局所または全身性効果のために経口または経鼻呼吸経路によって投与される。
【０２４０】
好ましくは無菌の薬学的に許容される溶媒中の組成物は、ガスの使用によって噴霧されてよい。噴霧される溶液は、噴霧デバイスから直接吸われてよい、または噴霧デバイスはフェイスマスク、テントもしくは間欠的陽圧呼吸器に取り付けられてよい。溶液、懸濁物または粉末組成物は、好ましくは経口または経鼻で適切な様式で製剤を送達するデバイスから投与されてよい。
【０２４１】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性部分の使用
いくつかの実施形態では、本開示の抗体、その抗原結合性部分、および組成物は、多種多様な疾患、障害および／または状態を処置するために使用され得る。一部の場合では、そのような疾患、障害および／または状態は、ＴＧＦβ関連適応症であり得る。本明細書で使用される場合、「ＴＧＦβ関連適応症」という用語は、ＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の発現、活性および／または代謝に関連する任意の疾患、障害および／または状態、あるいは１つまたは複数のＴＧＦβファミリーメンバータンパク質の活性および／またはレベルの調節が有益であり得る任意の疾患、障害および／または状態を指す。ＴＧＦβ関連適応症は、これらに限定されないが、線維症、がん（これらに限定されないが、結腸がん、腎がん、乳がん、悪性黒色腫および神経膠芽腫、化学療法後の迅速な造血の促進、骨治癒、創傷治癒、認知症、骨髄線維症、腎疾患、片側尿管閉塞（ＵＵＯ）、歯の脱落および／または変性、内皮増殖症候群、喘息およびアレルギー、胃腸障害、加齢貧血、大動脈瘤、希少適応症（例えば、マルファン症候群およびカムラチ・エンゲルマン病など）、肥満症、糖尿病、関節炎、多発性硬化症、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）パーキンソン病、骨粗鬆症、変形性関節症、骨減少症、メタボリックシンドローム、栄養障害、臓器萎縮、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ならびに食欲不振を含み得る。追加的な適応症は、それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０１２２００７号、米国特許第８，４１５，４５９号または国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１５１４３２号に開示されている任意の適応症を含み得る。
【０２４２】
線維症
いくつかの実施形態では、本開示の抗体および／または組成物は、線維症を変化させるために有用であり得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体および／または組成物は、ＴＧＦβ（例えば、ＴＧＦβ１）のアンタゴニストである。ＴＧＦβ１は、線維化応答の中心的な編成因子（ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｏｒ）として認識されている。多数の前臨床モデルにおいて、ＴＧＦβ１を標的化する抗体により、線維症が減少する。そのような抗体および／または抗体に基づく化合物は、ＬＹ２３８２７７０（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を含む。それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，４９２，４９７号、同第７，１５１，１６９号、同第７，７２３，４８６号および米国特許出願公開第２０１１／０００８３６４号に記載されているものも包含される。
【０２４３】
本開示の抗体および／または組成物を治療的に使用することができる線維化適応症は、これらに限定されないが、肺適応症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、アレルギー性喘息、急性肺損傷、好酸性食道炎、肺動脈高血圧症および化学的気体損傷（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｇａｓ−ｉｎｊｕｒｙ））、腎臓適応症（例えば、糖尿病性糸球体硬化症、巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性腎疾患、腎移植および慢性拒絶反応に関連する線維症、ＩｇＡ腎症、ならびに溶血性尿毒症症候群）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性ウイルス性肝炎、寄生虫血症、先天性代謝異常、アルコール性線維症などの毒素媒介線維症、非アルコール性脂肪性肝炎−肝細胞癌（ＮＡＳＨ−ＨＣＣ）、原発性胆汁性肝硬変、および硬化性胆管炎）、心血管線維症（例えば、心筋症、肥大性心筋症、アテローム性動脈硬化症および再狭窄）、全身性硬化症、皮膚線維症（例えば、全身性硬化症における皮膚線維症、びまん性皮膚全身性硬化症、強皮症、病理学的皮膚瘢痕、ケロイド、術後瘢痕、瘢痕修正術、放射線誘導性瘢痕および慢性創傷）およびがんまたは二次性線維症（例えば、骨髄線維症、頭頸部がん、Ｍ７急性巨核芽球性白血病および粘膜炎）を含む。本開示の化合物および／または組成物を使用して処置することができる線維症に関連する他の疾患、障害または状態は、これらに限定されないが、マルファン症候群、皮膚硬化症候群（ｓｔｉｆｆ  ｓｋｉｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、強皮症、関節リウマチ、骨髄線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、筋ジストロフィー（例えばＤＭＤなど）、デュピュイトラン拘縮、カムラチ・エンゲルマン病、神経瘢痕（ｎｅｕｒａｌ  ｓｃａｒｒｉｎｇ）、認知症、増殖性硝子体網膜症、角膜損傷、緑内障ドレナージ術後の合併症、および多発性硬化症を含む。そのような線維化適応症の多くは、免疫構成成分の関与を示す患部組織（複数可）の炎症も伴う。
【０２４４】
本明細書に記載の抗体は、線維症を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１アイソフォーム特異的薬剤は、線維症を処置するために有効な量で被験体に投与される。そのような抗体の有効量は、被験体における治療的効能および臨床的安全性の両方を達成するために有効な量である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＬＴＢＰを含有する、ＥＣＭと会合したＴＧＦβ１によって媒介されるＴＧＦβ１の活性化を遮断することができる状況特異的抗体である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＣＭに局在するＬＴＢＰに媒介されるＴＧＦβ１および免疫細胞に局在するＧＡＲＰに媒介されるＴＧＦβ１の活性化を遮断することができる状況許容的抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＣＭに局在するＬＴＢＰに媒介されるＴＧＦβ１および単球／マクロファージに局在するＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ１の活性化を遮断することができる状況許容的抗体である。いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３である。いくつかの実施形態では、線維化微小環境において線維化促進性Ｍ２様マクロファージ上のＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１を標的化し、阻害することが有益であり得る。
【０２４５】
線維症を変化させるための本開示の抗体および／または組成物の効能の決定において有用なアッセイは、これらに限定されないが、当技術分野で公知の線維芽細胞を計数するための組織学的アッセイおよび基本的な免疫組織化学分析を含む。
【０２４６】
がん
本開示の抗体および／または組成物を用いて種々のがんを処置することができる。本明細書で使用される場合、用語「がん」は、周囲組織に浸潤し、新しい身体部位に転移する傾向がある未分化細胞の増殖を特徴とする種々の悪性新生物のいずれかを指し、また、そのような悪性新生物の増殖を特徴とする病的状態も指す。がんは、腫瘍または血液悪性疾患であり得、これらに限定されないが、全ての型のリンパ腫／白血病、癌腫および肉腫、例えば、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、子宮頸部（ｃｅｒｖｉｘ）、結腸／直腸、子宮内膜、食道、眼、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）、口、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、精巣、甲状腺および子宮に見られるがんまたは腫瘍などを含む。
【０２４７】
がんにおいて、ＴＧＦβ（例えば、ＴＧＦβ１）は、増殖促進性または増殖阻害性のいずれでもあり得る。例として、膵がんでは、ＳＭＡＤ４野生型腫瘍は、ＴＧＦβに応答して増殖の阻害を受ける可能性があるが、疾患が進行するにつれて、典型的には、構成的に活性化されたＩＩ型受容体が存在する。さらに、ＳＭＡＤ４ヌル膵がんが存在する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体、その抗原結合性部分、および／または組成物は、１つまたは複数の形態のがんにおいて一意的に機能するＴＧＦβシグナル伝達経路の構成成分を選択的に標的化するように設計される。白血球細胞（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）、すなわち白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）の異常な増殖を特徴とする白血病、または血液もしくは骨髄のがんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（第１０染色体と第１１染色体の間の転座［ｔ（１０，１１）］、第８染色体と第２１染色体の間の転座［ｔ（８；２１）］、第１５染色体と第１７染色体の間の転座［ｔ（１５；１７）］、および第１６染色体における逆位［ｉｎｖ（１６）］を伴うＡＭＬ；以前にＡＭＬに変化する骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または骨髄増殖性疾患を有したことのある患者を含む、多系列異形成（ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）を伴うＡＭＬ；ＡＭＬおよび骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、療法関連、このカテゴリーは、以前に化学療法および／または放射線を受け、その後、ＡＭＬまたはＭＤＳが発生したことがある患者を含む；ｄ）上記のカテゴリーに入らないＡＭＬの亜型を含む、他にカテゴリー化されないＡＭＬ；およびｅ）白血病細胞を骨髄系細胞またはリンパ系細胞のいずれかに分類することができない場合、または両方の型の細胞が存在する場合に生じる、系列が不明瞭な急性白血病）；ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含めた４つの主要な分類に分けることができる。
【０２４８】
癌腫の型は、これらに限定されないが、乳頭腫／癌腫、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、奇形腫、腺腫／腺癌、黒色腫、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫、血管腫、骨腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮細胞癌、小細胞細胞腫、大細胞未分化癌、基底細胞癌および副鼻腔未分化癌を含む。
【０２４９】
肉腫の型は、これらに限定されないが、胞状軟部肉腫などの軟部肉腫、血管肉腫、皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、骨外性軟骨肉腫（ｅｘｔｒａｓｋｅｌｅｔａｌ  ｃｈｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ）、骨外性骨肉腫（ｅｘｔｒａｓｋｅｌｅｔａｌ  ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）、線維肉腫、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、およびアスキン腫瘍（Ａｓｋｉｎ’ｓ  ｔｕｍｏｒ）、ユーイング肉腫（未分化神経外胚葉性腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性シュワン細胞腫、骨肉腫、および軟骨肉腫を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体および方法は、これらに限定されないが、結腸がん、腎がん、乳がん、悪性黒色腫および神経膠芽腫を含み得る、１つまたは複数の型のがんまたはがんに関連した状態を処置するために使用され得る（Ｓｃｈｌｉｎｇｅｎｓｉｅｐｅｎら、２００８年；Ｏｕｈｔｉｔら、２０１３年）。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、それを必要とする被験体においてがんを処置するための方法であって、がんが処置されるように、抗体またはその抗原結合性部分を被験体に投与するステップを含む方法において使用され得る。ある特定の実施形態では、がんは、結腸がんである。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、固形腫瘍を処置するための方法において使用され得る。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、一般に高密度であり、治療用分子の透過が難しい、線維形成性腫瘍であり得る。そのような腫瘍のＥＣＭの構成成分を標的化することにより、そのような抗体は、高密度の腫瘍組織を「緩め」て崩壊させ、それにより、治療薬の接近を容易にして、その抗がん効果を発揮する。したがって、任意の公知の抗腫瘍薬などの追加的な治療薬を組み合わせて使用することができる。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、固形腫瘍を有する被験体における固形腫瘍増殖を阻害するかまたは減少させるための方法であって、固形腫瘍増殖が阻害されるかまたは減少されるように抗体またはその抗原結合性部分を被験体に投与するステップを含む方法において使用され得る。ある特定の実施形態では、固形腫瘍は、結腸癌腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんを処置するために有用な抗体またはその抗原結合性部分は、ＴＧＦβ１活性化のアイソフォーム特異的、状況許容的阻害剤である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を標的化する。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体を標的化する。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を標的化する。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を標的化する。
【０２５４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、がんまたは腫瘍を有する被験体に、単独で、または、追加的な薬剤、例えば抗ＰＤ−１抗体（例えば抗ＰＤ−１アンタゴニスト）と組み合わせてのいずれかで投与される。本発明に包含される他の併用療法は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分を放射線、または化学療法剤と共に投与するものである。例示的な追加的な薬剤は、これらに限定されないが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＩＣＯＳＬ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤を含む。
【０２５５】
骨格筋の状態におけるＴＧＦβの役割
骨格筋において、ＴＧＦβは、増殖および分化の阻害、萎縮の誘導、および線維症の発生を含めた種々の役割を果たす。ＴＧＦβにより、サテライト細胞増殖が低減し、分化が妨げられる（ＭｙｏＤおよびミオゲニンの阻害によって）（Ａｌｌｅｎ，  Ｒ．Ｅ．およびＬ．Ｋ．  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、１９８７年、１３３巻（３号）：５６７〜７２頁；Ｂｒｅｎｎａｎ，  Ｔ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９９１年、８８巻（９号）：３８２２〜６頁；Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９８６年、８３巻（２１号）：８２０６〜１０頁；Ｏｌｓｏｎ，  Ｅ．Ｎ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１９８６年、１０３巻（５号）：１７９９〜８０５頁）。これらの初期の論文ではＴＧＦβのアイソフォーム（すなわち、ＴＧＦβ１、２、または３）は特定されていないが、ＴＧＦβ１であると推定される。ＴＧＦβはまた、筋肉線維症にも寄与する；組換えＴＧＦβ１の直接注射により骨格筋線維症が生じ、汎ＴＧＦβ阻害により急性および慢性的に損傷を受けている筋肉における線維症が減少する（Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００４年、１６４巻（３号）：１００７〜１９頁；Ｍｅｎｄｉａｓ，  Ｃ．Ｌ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２０１２年、４５巻（１号）：５５〜９頁；Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁）。ＴＧＦβ１は、骨格筋内の筋線維、マクロファージ、制御性Ｔ細胞、線維芽細胞、および線維細胞によって発現され（Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００４年、１６４巻（３号）：１００７〜１９頁；Ｌｅｍｏｓ，  Ｄ．Ｒ．ら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２０１５年、２１巻（７号）：７８６〜９４頁；Ｖｉｌｌａｌｔａ，  Ｓ．Ａ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１４年、６巻（２５８号）：２５８ｒａ１４２；Ｗａｎｇ，  Ｘ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１６年、１９７巻（１２号）：４７５０〜４７６１頁）、発現は損傷の際におよび疾患で増大する（Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００４年、１６４巻（３号）：１００７〜１９頁；Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁；Ｂｅｒｎａｓｃｏｎｉ，  Ｐ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１９９５年、９６巻（２号）：１１３７〜４４頁；Ｉｓｈｉｔｏｂｉ，  Ｍ．ら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ、２０００年、１１巻（１８号）：４０３３〜５頁）。ｍｄｘ筋肉ではＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３も、ＴＧＦβ１より程度は低いが、上方制御される（ｍＲＮＡレベルで）（Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁；Ｚｈｏｕ，  Ｌ．ら、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ、２００６年、１６巻（１号）：３２〜８頁）。Ｐｅｓｓｉｎａらは、最近、系列追跡実験を使用して、ジストロフィーの筋肉内の多数の起源の細胞がＴＧＦβ依存性の経路を介して線維形成性の運命をたどる（Ｐｅｓｓｉｎａ，  Ｐ．ら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１５年、４巻（６号）：１０４６〜６０頁）。
【０２５６】
ＴＧＦβ１は、ヒト筋ジストロフィーに関係づけられている。デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、ジストロフィンが存在しないことによって引き起こされる、重症、進行性であり、最終的に死に至る疾患である（Ｂｕｓｈｂｙ，  Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ、２０１０年、９巻（１号）：７７〜９３頁）。ジストロフィンの欠乏の結果、収縮誘導性損傷への感受性が増大し、それにより、継続的な筋肉変性が導かれる（Ｐｅｔｒｏｆ，  Ｂ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９９３年、９０巻（８号）：３７１０〜４頁；Ｄｅｌｌｏｒｕｓｓｏ，  Ｃ．ら、Ｊ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｒｅｓ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｔｉｌ、２００１年、２２巻（５号）：４６７〜７５頁；Ｐｒａｔｔ，  Ｓ．Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ、２０１５年、７２巻（１号）：１５３〜６４頁）。修復のラウンドの反復が慢性炎症、線維症、サテライト細胞プールの消耗、最終的な可動性の喪失および死亡に寄与する（Ｂｕｓｈｂｙ，  Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ、２０１０年、９巻（１号）：７７〜９３頁；ＭｃＤｏｎａｌｄ，  Ｃ．Ｍ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２０１３年、４８巻（３号）：３４３〜５６頁）。ＴＧＦβ１の発現はＤＭＤの患者において有意に増大し、これらの患者において観察される線維症の程度と相関する（Ｂｅｒｎａｓｃｏｎｉ，  Ｐ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１９９５年、９６巻（２号）：１１３７〜４４頁；Ｃｈｅｎ，  Ｙ．Ｗ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２００５年、６５巻（６号）：８２６〜３４頁）。過剰なＥＣＭ沈着は筋肉の収縮特性に対して有害な影響を有し、筋線維が血液供給から隔離されるので栄養の利用が制限され得る（Ｋｌｉｎｇｌｅｒ，  Ｗ．ら、Ａｃｔａ  Ｍｙｏｌ、２０１２年、３１巻（３号）：１８４〜９５頁）。最近、追加的なデータにより、ＴＧＦβ１がさらに筋ジストロフィーに関係づけられた。ＬＴＢＰ４の改変体は、マウスおよびヒトにおける疾患の重症度を調節することが見出されている。マウスでは、ＬＴＢＰ４の改変体はジストロフィンまたはγ−サルコグリカンを欠くマウスにおいて保護的である（Ｃｏｌｅｙ，  Ｗ．Ｄ．ら、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ、２０１６年、２５巻（１号）：１３０〜４５頁；Ｈｅｙｄｅｍａｎｎ，  Ａ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００９年、１１９巻（１２号）：３７０３〜１２頁）。ヒトでは、２つのグループが独立に、ＬＴＢＰ４の改変体がＤＭＤにおいて保護的であり、歩行運動の喪失を数年遅延させることを同定した（Ｆｌａｎｉｇａｎ，  Ｋ．Ｍ．ら、Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ、２０１３年、７３巻（４号）：４８１〜８頁；ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｅｎ，  Ｊ．Ｃ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２０１５年、８６巻（１０号）：１０６０〜５頁）。マウスおよびヒトにおいて遺伝学的改変体の性質は異なるが、どちらの種でも、保護的な改変体により、ＴＧＦβシグナル伝達の低下がもたらされる（Ｈｅｙｄｅｍａｎｎ，  Ａ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００９年、１１９巻（１２号）：３７０３〜１２頁）；Ｃｅｃｏ，  Ｅ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１４年、６巻（２５９号）：２５９ｒ��１４４）。骨格筋生物学におけるＴＧＦβ１の機能の多くは、精製された活性増殖因子を動物に注射するかまたは培養物中の細胞に添加する実験から推定されている（Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９８６年、８３巻（２１号）：８２０６〜１０頁；Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００４年、１６４巻（３号）：１００７〜１９頁；Ｍｅｎｄｉａｓ，  Ｃ．Ｌ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２０１２年、４５巻（１号）：５５〜９頁）。ＴＧＦβ１の特定の機能に対する細胞の状況の重要性を考慮すると（例えば、Ｈｉｎｃｋら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．  Ｂｉｏｌ、２０１６年、８巻（１２号）を参照されたい）、これらの実験において観察される影響の一部はｉｎ  ｖｉｖｏにおけるサイトカインの内在的役割（複数可）を反映しない可能性がある。例えば、ヒト皮膚線維芽細胞を組換えＴＧＦβ１、ミオスタチン、またはＧＤＦ１１で処置すると、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるこれらのタンパク質の役割はかなり異なるにもかかわらず、これらの細胞においてほぼ同一の遺伝子発現の変化がもたらされる（Ｔａｎｎｅｒ，  Ｊ．Ｗ．、Ｋｈａｌｉｌ，  Ａ．、Ｈｉｌｌ，  Ｊ．、Ｆｒａｎｔｉ，  Ｍ．、ＭａｃＤｏｎｎｅｌｌ，  Ｓ．Ｍ．、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  １１  Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  Ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ、Ｆｉｂｒｏｓｉｓ：  Ｆｒｏｍ  Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．、２０１６年：Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，  ＣＯ）。
【０２５７】
多数の研究者が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける増殖因子の役割を明らかにするためにＴＧＦβの阻害剤を使用してきた。ｍｄｘマウスを汎ＴＧＦβ中和抗体１Ｄ１１で処置することにより、線維症の低減（組織学およびヒドロキシプロリン含有量による）、筋傷害の低減（血清中クレアチンキナーゼの低減およびより大きな筋線維密度）、ならびに筋肉機能の改善（プレチスモグラフィ、単離されたＥＤＬ筋の力発生、および前肢握力の増大）が明白にもたらされる（Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁；Ａｎｄｒｅｅｔｔａ，  Ｆ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００６年、１７５巻（１〜２号）：７７〜８６頁；Ｇｕｍｕｃｉｏ，  Ｊ．Ｐ．ら、Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ（１９８５年）、２０１３年、１１５巻（４号）：５３９〜４５頁）。さらに、ドミナントネガティブＴＧＦβＩＩ型受容体の筋線維特異的発現により、心臓毒損傷後に、およびδ−サルコグリカン−／−マウスにおいて筋傷害からの保護がなされる（Ａｃｃｏｒｎｅｒｏ，  Ｆ．ら、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ、２０１４年、２３巻（２５号）：６９０３〜１５頁）。骨格筋において豊富であり、ＴＧＦβ活性を阻害するプロテオグリカンデコリンにより、ｍｄｘマウスにおける、および裂創損傷後の筋線維症が減少する（Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ、２００７年、１５巻（９号）：１６１６〜２２頁；Ｇｏｓｓｅｌｉｎ，  Ｌ．Ｅ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２００４年、３０巻（５号）：６４５〜５３頁）。スラミン（抗腫瘍薬剤）およびロサルタン（アンジオテンシン受容体遮断薬）などの、ＴＧＦβ阻害活性を有する他の分子が、損傷、マルファン症候群、および筋ジストロフィーのマウスモデルにおける筋肉病態の改善および線維症の低減において有効であった（Ｓｐｕｒｎｅｙ，  Ｃ．Ｆ．ら、Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ、２０１１年、１６巻（１号）：８７〜９５頁；Ｔａｎｉｇｕｔｉ，  Ａ．Ｐ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２０１１年、４３巻（１号）：８２〜７頁；Ｂｅｄａｉｒ，  Ｈ．Ｓ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｓｐｏｒｔｓ  Ｍｅｄ、２００８年、３６巻（８号）：１５４８〜５４頁；Ｃｏｈｎ，  Ｒ．Ｄ．ら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００７年、１３巻（２号）：２０４〜１０頁）。上記の治療剤は全てＴＧＦβ１またはそのシグナル伝達を阻害するものであるが、いずれもＴＧＦβ１アイソフォームに特異的ではない。例えば、１Ｄ１１は、ＴＧＦβ１、２、および３アイソフォームに結合し、それを阻害する（Ｄａｓｃｈ，  Ｊ．Ｒ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９８９年、１４２巻（５号）：１５３６〜４１頁）。スラミンは、ＴＧＦβ１に加えてＰＤＧＦ、ＦＧＦ、およびＥＧＦを含めた多数の増殖因子のこれらの受容体に結合する能力を阻害する（Ｈｏｓａｎｇ，  Ｍ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９８５年、２９巻（３号）：２６５〜７３頁；Ｏｌｉｖｉｅｒ，  Ｓ．ら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、１９９０年、２６巻（８号）：８６７〜７１頁；Ｓｃｈｅｒ，  Ｈ．Ｉ．およびＷ．Ｄ．  Ｈｅｓｔｏｎ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｓ、１９９２年、５９巻：１３１〜５１頁）。デコリンは、ミオスタチン��性も阻害し、これは、直接結合によるものであり、かつミオスタチン阻害物質であるフォリスタチンの上方制御を通じたものである（Ｍｉｕｒａ，  Ｔ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、２００６年、３４０巻（２号）：６７５〜８０頁；Ｂｒａｎｄａｎ，  Ｅ．、Ｃ．  Ｃａｂｅｌｌｏ−Ｖｅｒｒｕｇｉｏ、およびＣ．  Ｖｉａｌ、Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ、２００８年、２７巻（８号）：７００〜８頁；Ｚｈｕ，  Ｊ．ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００７年、２８２巻（３５号）：２５８５２〜６３頁）。ロサルタンは、ＩＧＦ−１／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を含めたレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系に対するその効果を通じて追加的なシグナル伝達経路に影響を及ぼす（Ｂｕｒｋｓ，  Ｔ．Ｎ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１１年、３巻（８２号）：８２ｒａ３７；Ｓａｂｈａｒｗａｌ，  Ｒ．およびＭ．Ｗ．  Ｃｈａｐｌｅａｕ、Ｅｘｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０１４年、９９巻（４号）：６２７〜３１頁；ＭｃＩｎｔｙｒｅ，  Ｍ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ、１９９７年、７４巻（２号）：１８１〜９４頁）。したがって、これらの療法は全て、これらの治療効果、ならびに毒性の一因となり得る追加的な分子を阻害するものである。
【０２５８】
ＴＧＦβの筋肉恒常性、修復、および再生における仮定される役割を考慮すると、ＴＧＦβ１シグナル伝達を選択的に調節する本明細書に記載のモノクローナル抗体などの薬剤は、慢性／遺伝学的筋ジストロフィーおよび急性筋肉損傷におけるなどの筋線維の傷害を現在までに開発されたより広範に作用するＴＧＦβ阻害剤に伴う毒性を伴わずに処置するのに有効であり得る。
【０２５９】
したがって、本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴＧＦβ作用の全てではなくサブセットを優先的に調節する薬剤を使用して筋線維の傷害を処置するための方法を提供する。そのような薬剤は、ＴＧＦβ１シグナル伝達を選択的に調節することができる（「アイソフォーム特異的調節」）。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、さらに、特定の状況にあるＴＧＦβ１を選択的に調節することができる（「状況特異的調節」）。
【０２６０】
慢性筋疾患における筋線維修復
本発明は、ＤＭＤ患者における筋肉の質および機能を、線維症を限定し、筋肉の形態および機能の標準化に寄与することによって改善するための方法を包含する。ＴＧＦβ１は筋形成も阻害するので、ＴＧＦβ１遮断により、ジストロフィーの筋肉の再生が促進される可能性があり、これにより、さらなる治療的利益が付加される。ＴＧＦβ１阻害剤は、Ｅｘｏｎｄｙｓ  ５１（Ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ）などのジストロフィン上方制御療法と組み合わせて使用され得る。筋ジストロフィーにおけるＴＧＦβ１阻害の潜在的な治療的利益を考慮すると、（１）ＴＧＦβ１の役割（複数可）をＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３の役割（複数可）と区別すること、ならびに（２）ＴＧＦβ１阻害が最も有益になる分子の状況（複数可）を明らかにすることが重要である。上記の通り、汎ＴＧＦβ阻害剤には著しい毒性が付随し、それにより、これらの化合物の臨床使用は限定されている（Ａｎｄｅｒｔｏｎ，  Ｍ．Ｊ．ら、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、３９巻（６号）：９１６〜２４頁；Ｓｔａｕｂｅｒ，  Ａ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、２０１４年、４巻（３号）：１〜１０頁）。ＴＧＦβアイソフォーム（複数可）のいずれによって毒性が引き起こされるかは不明である。記載されている毒性の一部は、免疫系におけるＴＧＦβ１阻害に起因する可能性がある。例えば、１Ｄ１１は、横隔膜における線維症のレベルを有意に低減するが、この処置はまた、筋肉におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増加させ、これは、長期間にわたる処置で有害になり得る、汎ＴＧＦβ阻害の際の炎症反応の増大を示唆するものである（Ａｎｄｒｅｅｔｔａ，  Ｆ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００６年、１７５巻（１〜２巻）：７７〜８６頁）。実際に、筋肉からのＴ細胞の枯渇により、ｍｄｘマウスの筋肉病態が改善し、これにより、Ｔ細胞により媒介される炎症反応がジストロフィーの筋肉に対して有害であることが示唆される（Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｍ．Ｊ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００１年、９８巻（２号）：２３５〜４３頁）。１Ｄ１１投与に際したＴ細胞数の増加は、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞に対するＴＧＦβ１の影響に起因する可能性がある。Ｔｒｅｇはこれらの細胞表面上にＧＡＲＰを介してＴＧＦβ１を提示し、この複合体からのＴＧＦβ１の放出によりＴｒｅｇ抑制活性が増強され、したがって、Ｔ細胞媒介性炎症が限定される（Ｗａｎｇ，  Ｒ．ら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ、２０１２年、２３巻（６号）：１１２９〜３９頁；Ｅｄｗａｒｄｓ，  Ｊ．Ｐ．、Ａ．Ｍ．  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ、およびＥ．Ｍ．  Ｓｈｅｖａｃｈ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１４年、１９３巻（６号）：２８４３〜９頁；Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｋ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００４年、１７２巻（２号）：８３４〜４２頁；Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｋ．、Ａ．  Ｋｉｔａｎｉ、およびＷ．  Ｓｔｒｏｂｅｒ、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、２００１年、１９４巻（５号）：６２９〜４４頁）。実際に、ＰＣ６１抗体を使用してＴｒｅｇを枯渇させるとｍｄｘマウスの横隔膜における炎症および筋傷害が増大し、Ｔｒｅｇの数および活性を強化することにより、筋傷害が低減する（Ｖｉｌｌａｌｔａ，  Ｓ．Ａ．ら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ、２０１４年、６巻（２５８号）：２５８ｒａ１４２）。興味深いことに、追加的な免疫抑制性Ｔ細胞の集団、Ｔｒ１細胞が最近同定された。これらの細胞は、これらの抑制活性に必要な大量のＴＧＦβ３を産生する（Ｇａｇｌｉａｎｉ，  Ｎ．ら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２０１３年、１９巻（６号）：７３９〜４６頁；Ｏｋａｍｕｒａ，  Ｔ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、２００９年、１０６巻（３３号）：１３９７４〜９頁；Ｏｋａｍｕｒａ，  Ｔ．ら、Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ、２０１５年、６巻：６３２９頁）。骨格筋におけるＴｒ１細胞の役割は分かっていないが、１Ｄ１１によるＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方の阻害には、ＴｒｅｇおよびＴｒ１細胞の両方の阻害による付加的な炎症促進効果がある可能性がある。
【０２６１】
ＴＧＦβ１潜在性および活性化に関する上記の構造的洞察から、ＴＧＦβ１の活性化を特異的に標的化する薬物を発見するための新規の手法が可能になる（Ｓｈｉ，  Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１年、４７４巻（７３５１号）：３４３〜９頁）。３種の成熟ＴＧＦβ増殖因子の間で共有される高い程度の配列同一性は、潜在型複合体には共有されず、これにより、プロＴＧＦβ１に非常に特異的な抗体の発見が可能になる。抗体発見のための所有権のある手法を使用して、本発明者らは、プロＴＧＦβ１に特異的に結合する抗体（Ａｂ１およびＡｂ２）を同定した（図１８Ａ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ共培養系を使用して、これらの抗体がＴＧＦβ１のインテグリン媒介性放出を阻害することが実証された。この系では、ヒト皮膚またはマウス骨格筋由来の線維芽細胞が潜在型ＴＧＦβ１の供給源であり、これは、活性なＴＧＦβ１の放出を可能にするαＶβ６を発現する細胞株であり、活性なＴＧＦβ１は、次いで、ＳＭＡＤ２／３応答性ルシフェラーゼレポーターを発現する第３の細胞株を使用して測定される（図１１Ａ〜Ｃ）。これらの抗体の１つ、Ａｂ１は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて試験されており、腎線維症のＵＵＯ（片側尿管閉塞）マウスモデルにおける効能が示されている。このモデルでは、マウス（ｎ＝１０）を９ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１で処置することにより、ＴＧＦβ１応答性遺伝子の上方制御が防止され（図１５）、損傷後の線維症の程度が低減した（ピクロシリウスレッド染色による）（図１６）。ＴＧＦβ１特異的療法は、汎ＴＧＦβ阻害剤と比較して改善された効能および安全性プロファイルを有し得、これは、ＤＭＤ集団において長期にわたって使用される治療薬に関して重大な側面である。ＴＧＦβ１阻害性抗体は、特異的なＴＧＦβ１阻害がＤＭＤまたは他の筋疾患に対する治療薬としての潜在性を有するかどうかを決定するため、および骨格筋再生におけるＴＧＦβ１の役割を明らかにするために使用され得る。
【０２６２】
慢性筋線維損傷  対  急性筋線維損傷および最適な治療薬の選択
急性損傷後の正常であるが再生中の筋肉（例えば、他の点では健康な筋肉または運動ニューロンへの外傷性損傷など）では、傷害を受けた組織を取り除くため、およびサテライト細胞活性化に必要な因子（例えば、サイトカイン）を分泌させるためには、最初に炎症性マクロファージが浸潤することが必要であると考えられている。その後、これらの細胞はＭ２表現型に切り替わって創傷の消散を駆動する。
【０２６３】
対照的に、ＤＭＤを含めた疾患などの慢性の状態では、炎症促進性マクロファージが常に優勢であり、Ｍ２への切り替えは全く（または少なくとも十分に効率的には）起こらず、炎症促進性マクロファージにより炎症および筋傷害が駆動され続ける。ＤＭＤでは、ＮＦｋＢ経路が永久的に活性であり、その結果、構成的な炎症が生じる。したがって、いくつかの実施形態では、慢性炎症を低減させるためにＮＦｋＢ阻害剤をＤＭＤ患者に投与することができる。
【０２６４】
したがって、ＤＭＤなどの慢性の状態では、治療上の焦点は、筋肉再生とは対照的に筋肉修復に当てられ得る。これは、ＤＭＤ筋線維に欠陥があるが、破壊されてはいないこと−ＤＭＤ筋線維が膜の裂傷、カルシウムトランジェントの制御不全、およびマクロファージからのＲＯＳ傷害による傷害を受けているからである。比較すると、健康な筋肉への損傷の場合、治療上の焦点は再生に当てられ得る。例えば、心臓毒モデルでは、筋線維は死滅し、再生させる必要がある。これは、挫滅創などの外傷性損傷後のプロセスをシミュレートするものである。
【０２６５】
証拠から、ＬＲＲＣ３３がＭ２様表現型（アルギナーゼを高レベルで発現し、ｉＮＯＳを発現せず、ＣＤ２０６を高レベルで発現することを特徴とする）を有するチオグリコール酸誘導性腹膜マクロファージにおいて発現することが示唆される。
【０２６６】
ＬＲＲＣ３３が主にＭ２細胞上に発現する場面、およびＴＧＦβ１の提示（「状況」）がこれらの細胞の創傷治癒促進効果に重要である場面では、ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ１を活性化して、修復および／または筋形成を促進することが有益であり得る。他方では、ＬＲＲＣ３３が炎症促進性Ｍ１細胞上にも発現する場面では、特にＤＭＤなどのジストロフィーの場合では炎症により線維症が駆動されることを考慮して、ＬＲＲＣ３３に媒介されるＴＧＦβ１阻害することが有益であり得る。したがって、疾患に関連するＴＧＦβ１の供給源／状況を同定することは、どのレベルの選択性を検討すべきか（例えば、アイソフォーム特異的、状況許容的ＴＧＦβ１モジュレーター、または、状況特異的ＴＧＦβ１モジュレーター；ＴＧＦβ１阻害剤または活性化因子など）を伝える、ＴＧＦβシグナル伝達の適切なモジュレーターの選択における重要なステップであり得る。
【０２６７】
慢性炎症以外のＤＭＤの特質は、過剰かつ進行性の線維症である。進行疾患では、線維症は、実際に個々の筋線維がこれらの血液供給から隔離される可能性があるほどに重症である。線維症はまた、筋肉の収縮特性も変化させる。ヒト患者では、ＴＧＦβ１上方制御の程度と線維症の間に強力な相関があり、また、線維症の程度と負の可動性転帰の間に強力な関連性がある。したがって、いくつかの実施形態では、ＬＴＢＰ−プロＴＧＦβ１阻害剤を、線維症の防止および／または低減のために、疾患におけるＥＣＭと会合したＴＧＦβ１作用を選択的に標的化するためにジストロフィー患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の種々のアイソフォーム選択的薬剤および／または状況選択的薬剤は、線維症を防止し、筋形成を促進するが、免疫系に対しては望ましくない影響を及ぼさないように、ＴＧＦβ１の阻害シグナル伝達を達成するため（例えば、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３を通じて）に使用され得る。
【０２６８】
処置
本明細書に開示されている方法を実施するために、上記の医薬組成物の有効量を、処置を必要とする被験体（例えば、ヒト）に静脈内投与、例えばボーラスとしてまたは一定期間にわたる持続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内、経口、吸入または局所経路によって、などの好適な経路を介して投与することができる。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含めた、液体製剤のための商業的に入手できる噴霧器が投与に有用である。液体製剤は、直接噴霧されてよく、凍結乾燥粉末は再構成後に噴霧され得る。代替的に、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化されてよく、または凍結乾燥され破砕された粉末として吸入されてよい。
【０２６９】
本明細書に記載の方法によって処置される被験体は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物は、これらに限定されないが、家畜、競技動物、愛玩動物、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。処置を必要とするヒト被験体は、上記のものなどのＴＧＦβ関連適応症を有する、そのリスクがある、またはそれを有する疑いがあるヒト患者であり得る。ＴＧＦβ関連適応症を有する被験体は、日常的な医学的検査、例えば、臨床検査、臓器機能検査、ＣＴスキャン、または超音波によって同定することができる。そのような適応症のいずれかを有する疑いがある被験体は、適応症の１つまたは複数の症状を示し得る。適応症のリスクがある被験体は、その適応症に関する危険因子の１つまたは複数を有する被験体であり得る。
【０２７０】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」および「有効用量」は、その意図された目的（複数可）、すなわち、組織または被験体において、許容されるベネフィット／リスク比で所望の生物学的反応または医学的な反応を満たすために十分な、化合物または組成物の任意の量または用量を指す。例えば、本発明のある特定の実施形態では、意図された目的は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴＧＦβ−１活性化を阻害してＴＧＦβ−１阻害に関連する臨床的に意味がある転帰を達成することであり得る。当業者によって認識されるとおり、有効量は、処置される特定の状態、状態の重症度、年齢、身体状態、サイズ、性別および体重を含む個々の患者パラメータ、処置の期間、同時に行われている治療（ある場合）の性質、投与の特定の経路ならびに医療関係者の知識および専門的意見内の同様の要因などに応じて変化する。これらの要因は当業者に周知であり、日常的な実験程度で対処され得る。個々の構成成分またはその組み合わせの最大用量、すなわち正当な医学的判断による最高安全用量が使用されることは一般に好ましい。しかし患者が医学的根拠、心理的理由のためにまたは事実上任意の他の理由のためにより低い用量または許容できる用量を主張できることは、当業者によって理解される。
【０２７１】
半減期などの経験的検討事項は、一般に投薬量の決定に寄与する。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合性である抗体は、抗体の半減期を延長し、かつ宿主の免疫系によって抗体が攻撃されることを防ぐために使用されてよい。投与の頻度は、治療の経過にわたって決定および調整されてよく、一般に、必ずではないが、ＴＧＦβ関連適応症の処置および／または抑制および／または好転（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）および／または遅延に基づく。代替的に、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の持続した継続放出製剤も適切である場合がある。徐放を達成するための種々の製剤およびデバイスは、当業者に明らかであり、本開示の範囲内である。
【０２７２】
一例では、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体についての投薬量は、抗体の１回または複数回の投与を与えられた個体において経験的に決定され得る。個体は、漸増する投薬量のアンタゴニストを与えられる。効能を評価するために、ＴＧＦβ関連適応症の指標が追跡されてよい。例えば、筋線維傷害、筋線維修復、筋肉における炎症レベル、および／または筋肉における線維症レベルを測定するための方法は、当業者に周知である。
【０２７３】
本発明は、ＴＧＦβの活性化ステップをアイソフォーム特異的に調節することができる薬剤が、医薬として使用した場合に改善された安全性プロファイルをもたらすという認識を包含する。したがって、本発明は、ＴＧＦβ１に特異的に結合し、その活性化を阻害するが、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３には結合せず、それにより、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴＧＦβ１シグナル伝達の特異的阻害を付与しながら、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３シグナル伝達が影響を受けることに起因する望ましくない副作用は最小化する、抗体およびその抗原結合性断片を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、被験体に投与された場合に毒性ではない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、被験体に投与された場合に、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２の両方に特異的に結合する抗体と比較して低減した毒性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、被験体に投与された場合に、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方に特異的に結合する抗体と比較して低減した毒性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、被験体に投与された場合に、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３に特異的に結合する抗体と比較して低減した毒性を示す。
【０２７５】
一般に、本明細書に記載の抗体のいずれの投与についても、初回の候補投薬量は約２ｍｇ／ｋｇであってよい。本開示の目的のため、典型的な毎日投薬量は、上述の因子に応じて約０．１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれよりも多くのいずれかの範囲でよい。数日間またはそれよりも長い期間にわたる繰り返し投与のためには、状態に応じて、所望の症状の抑制が起こるまで、あるいはＴＧＦβ関連適応症またはその症状を緩和するために十分な治療レベルが達成されるまで、処置を持続する。例示的な投与レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初回用量、続いて毎週の抗体の約１ｍｇ／ｋｇの維持用量、または続いて１週おきの約１ｍｇ／ｋｇの維持用量の投与を含む。しかし、臨床医が達成したい薬物動態学的減衰のパターンに応じて他の投与レジメンも有用であり得る。例えば、週１〜４回の投与が意図される。いくつかの実施形態では、約３μｇ／ｍｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、および約２ｍｇ／ｋｇなど）の投与が使用されてよい。薬物動態実験により、本明細書に開示されている抗体（例えば、Ａｂ２）の血清中濃度が、前臨床動物モデル（例えば、マウスモデル）への投与後、少なくとも７日間安定したままであることが示されている。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、抗体が投与される被験体（例えば、ヒト被験体）において臨床的に有効な血清中濃度を維持しながら抗体をより少ない頻度で投与することができるので、この投与後の安定性は有利であり得る。いくつかの実施形態では、投与頻度は、毎週、２週ごと、４週ごと、５週ごと、６週ごと、７週ごと、８週ごと９週ごと、もしくは１０週ごとに１回、または毎月、２か月ごと、３か月ごと、またはそれよりも長い期間に１回である。この治療の進行は従来の技術およびアッセイによって容易にモニターすることができる。投与レジメン（用いられる抗体を含む）は時間をわたって変動し得る。
【０２７６】
いくつかの実施形態では正常体重の成人患者について、約０．３から５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。特定の投与レジメン、例えば用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の医療歴および個々の薬剤の特性（薬剤の半減期および他の関連する検討事項など）に依存する。
【０２７７】
本開示の目的のために、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の適切な投薬量は、用いられる特異的抗体（またはその組成物）、適応症の種類および重症度、抗体が予防目的または治療目的で投与されるか、以前の治療、患者の病歴およびアンタゴニストへの応答、ならびに主治医の判断に依存する。いくつかの実施形態では、望ましい結果を達成する投薬量に到達するまで、臨床医は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を投与する。ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の投与は、投与の目的が治療的または予防的であるかにかかわらず、例えばレシピエントの生理学的状態、および熟練した医師に公知である他の要因に応じて連続的または間欠的であってよい。ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の投与は、予め選択した期間にわたって本質的に連続的であっても、または間隔をあけた一連の用量、例えばＴＧＦβ関連適応症が発症する前、その間またはその後のいずれかであってもよい。
【０２７８】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」は、ＴＧＦβ関連適応症、適応症の症状、または適応症に対する素因を有する被験体への、その適応症、その適応症の症状、またはその適応症に対する素因を治癒する（ｃｕｒｅ）、治す（ｈｅａｌ）、緩和する、軽減する、変える、治療する（ｒｅｍｅｄｙ）、好転させる、改善する、または影響を与えることを目的とした、１つまたは複数の活性剤を含む組成物の適用または投与を指す。
【０２７９】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体を用いてＴＧＦβ関連適応症を緩和することは、適応症の発生もしくは進行を遅らせること、または適応症の重症度を低減することを含む。適応症を緩和することは、必ずしも治癒的結果を要求しない。本明細書で使用する場合、ＴＧＦβ関連適応症の発症を「遅らせること」は、適応症の進行を遅らせる（ｄｅｆｅｒ）、妨げる（ｈｉｎｄｅｒ）、遅くする（ｓｌｏｗ）、遅らせる（ｒｅｔａｒｄ）、安定化するおよび／または先に延ばす（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）ことを意味する。この遅らせることは、適応症の病歴および／または処置される個体に応じて様々な時間の長さであってよい。適応症の発症を「遅らせる」もしくは緩和する、または適応症の発病（ｏｎｓｅｔ）を遅らせる方法は、方法を使用しない場合と比較して所与の時間枠において適応症の１つもしくは複数の症状の発症の可能性を低減するおよび／または所与の時間枠において症状の程度を低減する方法である。そのような比較は、統計的に有意な結果をもたらすのに十分な数人の被験体を使用する臨床研究に典型的には基づく。
【０２８０】
ＤＢＡ２／Ｊマウスは、ＬＴＢＰ４アレルに４０ｂｐの欠失を有する。潜在型ＴＧＦｂ１が会合するＥＣＭの制御不全により、Ａｂ１が結合するエピトープが露出し得る。Ａｂ１が結合するエピトープが露出した疾患が存在する可能性があり、これらの疾患は、ＴＧＦｂ１阻害が適応である場合、Ａｂ１のための治療的機会であり得る。
【０２８１】
併用療法
本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＧＦβ阻害が有益である可能性がある被験体を処置するための併用療法として使用される医薬組成物および関連する方法を包含する。これらの実施形態のいずれにおいても、そのような被験体は、少なくとも１つのＴＧＦβ阻害剤、例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含む第１の組成物と、同じまたは重複する疾患または臨床的状態の処置を目的とする少なくとも１つのさらなる治療薬を含む第２の組成物とを併せて含む併用療法を受けることができる。第１の組成物および第２の組成物は、どちらも同じ細胞標的に作用するものであってもよく、別個の細胞標的に作用するものであってもよい。いくつかの実施形態では、第１の組成物および第２の組成物により、疾患または臨床的状態の症状または外観（ａｓｐｅｃｔ）の同じまたは重複するセットを処置または緩和することができる。いくつかの実施形態では、第１の組成物および第２の組成物により、疾患または臨床的状態の症状または外観の別々のセットを処置または緩和することができる。一例を挙げると、第１の組成物によりＴＧＦβシグナル伝達に関連する疾患または状態を処置することができ、第２の組成物により同じ疾患に関連する炎症または線維症を処置することができる、などである。そのような併用療法は、互いと併せて投与することができる。句「と併せて」とは、併用療法に関しては、併用療法を受けている被験体において第１の治療の治療効果が第２の治療の治療効果と一時的におよび／または空間的に重複することを意味する。したがって、併用療法は、同時投与用の単一の製剤として製剤化されてもよく、療法の逐次的投与用の別々の製剤として製剤化されてもよい。
【０２８２】
好ましい実施形態では、併用療法により、疾患の処置において相乗効果が生じる。「相乗的」という用語は、各単独療法を総計した相加効果よりも大きな効果（例えば、より大きな効能）を指す。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物を含む併用療法により、別の療法（例えば、第２の薬剤の単独療法など）によって生じる効能と全体的に同等の効能が生じるが、第２の薬剤の単独療法と比較して、第２の薬剤に付随する望ましくない有害作用がより少なくなるまたは毒性の重症度がより低くなる。いくつかの実施形態では、そのような併用療法により、第２の薬剤の投薬量をより少なくし、しかし全体的な効能を維持することが可能になる。そのような併用療法は、長期間にわたる処置が保証されているおよび／または小児患者を伴う患者集団に特に好適であり得る。
【０２８４】
したがって、本発明は、ＴＧＦβ１タンパク質活性化を低減させるため、および本明細書に記載のＴＧＦβ１シグナル伝達に関連する疾患または状態を処置または防止するための併用療法に使用するための医薬組成物および方法を提供する。したがって、方法または医薬組成物は、第２の治療をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療は、ＴＧＦβ１シグナル伝達に関連する疾患または状態の処置または防止において有用であり得る。第２の治療は、標的化された疾患に関連する少なくとも１つの症状（複数可）を減弱または処置することができる。第１の治療と第２の治療はこれらの生物学的効果を同様の作用機構によってもしくは無関係の作用機構によって発揮し得る、または第１の治療と第２の治療の一方もしくは両方がこれらの生物学的効果を多数の作用機構によって発揮し得る。
【０２８５】
本明細書に記載の医薬組成物は、記載されている実施形態のそれぞれについて第１の治療と第２の治療を同じ薬学的に許容される担体中に、または異なる薬学的に許容される担体中に有してもよいことが理解されるべきである。第１の治療および第２の治療は、記載されている実施形態の範囲内で同時にまたは逐次的に投与され得ることがさらに理解されるべきである。
【０２８６】
本発明の１つまたは複数の抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合性部分は、追加的な治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用され得る。本発明の抗ＴＧＦβ抗体と共に使用され得る追加的な治療剤の例は、これらに限定されないが、ミオスタチン阻害剤、ＶＥＧＦアゴニスト、ＩＧＦ１アゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ５阻害剤、二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、リシルオキシダーゼ様−２阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ＧＤＦ１１阻害剤などを含む。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＩＣＯＳＬ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、追加的な治療は、放射線である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は化学療法剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤はタキソールである。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は抗炎症剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、単球／マクロファージ動員および／または組織浸潤のプロセスを阻害する。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、肝星細胞活性化の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加的な薬剤は、ケモカイン受容体アンタゴニスト、例えば、ＣＣＲ２アンタゴニストおよびＣＣＲ５アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、そのようなケモカイン受容体アンタゴニストは、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストなどの二重特異性アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、併用療法として投与される追加的な薬剤は、増殖因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーまたはその制御因子であるまたはそれを含む。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンおよびＧＤＦ１１のモジュレーター（例えば、阻害剤および活性化因子）から選択される。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンシグナル伝達の阻害剤である。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、プロ／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合し、ミオスタチンの活性化を遮断するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、プロ／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合し、ミオスタチンの活性化を遮断するモノクローナル抗体は、遊離の成熟ミオスタチンには結合しない。
【０２８８】
そのような併用療法では、投与される治療剤をより少ない投薬量で有利に利用し、したがって、種々の単独療法に関連する可能性のある毒性または合併症を回避することができる。
【０２８９】
ＴＧＦβ活性の調節
本開示の方法は、１つまたは複数の生物系において増殖因子活性を調節する方法を含む。そのような方法は、１つまたは複数の生物系を本開示の抗体および／または組成物に接触させることを含み得る。一部の場合では、これらの方法は、生物系における（例えば、細胞ニッチまたは被験体における）遊離の増殖因子のレベルを調節するステップを含む。そのような方法による抗体および／または組成物は、これらに限定されないが、本明細書に記載の組換えタンパク質、タンパク質複合体および／または抗体もしくはその抗原結合性部分を含めた生体分子を含んでよいが、これらに限定されない。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本明細書では「阻害方法」と称される、増殖因子活性の低減または排除に使用され得る。そのような方法のいくつかは、ＴＧＦβ複合体における成熟増殖因子の保持（例えば、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３および／またはＬＲＲＣ３３と複合体を形成したＴＧＦβ１）および／または増殖因子のＴＧＦβ複合体への再会合の促進を含み得る。一部の場合では、阻害方法は、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体の使用を含み得る。いくつかの阻害方法によると、１つまたは複数の阻害抗体が提供される。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体、その抗原結合性部分、および組成物は、ＴＧＦβ１活性化を阻害するために使用され得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ１活性化を阻害するための方法であって、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物に曝露させるステップを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物が、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。いくつかの実施形態では、方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施される。いくつかの実施形態では、方法はｉｎ  ｖｉｖｏで実施される。いくつかの実施形態では、方法はｅｘ  ｖｉｖｏで実施される。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、細胞の外表面に存在する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、線維芽細胞、マクロファージ、単球、またはミクログリアである。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、線維化促進性（Ｍ２様）マクロファージの外表面に存在する。いくつかの実施形態では、線維化促進性（Ｍ２様）マクロファージは線維化微小環境に存在する。いくつかの実施形態では、線維化促進性（Ｍ２様）マクロファージの外表面のＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を標的化することにより、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体を単に標的化することと比較して優れた効果がもたらされる。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、細胞外マトリクスに結合している。いくつかの実施形態では、細胞外マトリクスは、フィブリリンを含む。いくつかの実施形態では、細胞外マトリクスは、ＲＧＤモチーフを含むタンパク質を含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、被験体におけるＴＧＦβ１タンパク質活性化を低減させるための方法であって、本明細書に記載の抗体、その抗原結合性部分、または医薬組成物を被験体に投与し、それにより、被験体におけるＴＧＦβ１タンパク質活性化を低減させることを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、被験体は、線維症を有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、がんを有するかまたは有するリスクがある。いくつかの実施形態では、被験体は、認知症を有するかまたは有するリスクがある。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合性部分により、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の抑制活性が低減する。
【０２９７】
ＴＧＦβ関連適応症に関連する疾患／障害の緩和に使用するためのキット
本開示は、ＴＧＦβ関連適応症に関連する疾患／障害の緩和に使用するためのキットも提供する。そのようなキットは、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分、例えば、本明細書に記載のもののいずれかを含む１つまたは複数の容器を含んでよい。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかによる使用のための指示を含んでよい。含まれる指示は、本明細書に記載の標的疾患を処置する、発病を遅延させるまたは緩和するためのＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分の投与の記載を含み得る。キットは、個体が標的疾患を有するかどうかを同定することに基づいて処置に好適な個体を選択する記載をさらに含み得る。さらに他の実施形態では、指示は、標的疾患のリスクがある個体に抗体またはその抗原結合性部分を投与する記載を含む。
【０２９９】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分の使用に関する指示は、一般に意図される処置のための投薬量、投与スケジュールおよび投与の経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または部分単位用量であってよい。本開示のキット中に供給される指示は、典型的にはラベルまたはパッケージ挿入物（例えばキットに含まれる紙のシート）上の書面での指示であるが、機械で読み出し可能な指示（例えば磁気または光学保存ディスク上に書き込まれた指示）も許容される。
【０３００】
ラベルまたはパッケージ挿入物は組成物がＴＧＦβ関連適応症に関連する疾患または障害を処置する、発病を遅らせるおよび／または緩和するために使用されることを示す。指示は、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するために提供されてよい。
【０３０１】
本開示のキットは、好適なパッケージ中にある。好適なパッケージは、これらに限定されないが、バイアル、ビン、ジャー、可撓性パッケージ（例えばシールされたマイラーまたはプラスチックバッグ）などを含む。吸入器、鼻投与デバイス（例えばアトマイザー）またはミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスとの組み合わせでの使用のためのパッケージも検討される。キットは、無菌アクセスポートを有してよい（例えば容器は皮下注射針によって貫通できるストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。容器も無菌アクセスポートを有してよい（例えば容器は皮下注射針によって貫通できるストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分である。
【０３０２】
任意選択でキットは、緩衝剤および解釈の情報などの追加的構成成分を提供できる。通常キットは、容器および、容器上にまたは容器に付随してラベルまたはパッケージ挿入物（複数可）を含む。いくつかの実施形態では本開示は、上に記載のキットの内容物を含む製造品を提供する。
【０３０３】
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を検出するためのアッセイ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法および組成物は、被験体から得られた試料中のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を検出するための方法に関する。本明細書で使用される場合、「被験体」は、個々の生物、例えば、個々の哺乳動物を指す。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。いくつかの実施形態では、被験体は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、被験体は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、被験体はげっ歯類である。いくつかの実施形態では、被験体はヒツジ、ヤギ、ウシ、家禽、ネコ、またはイヌである。いくつかの実施形態では、被験体は、脊椎動物、両生類、爬虫類、魚類、昆虫、ハエまたは線虫である。いくつかの実施形態では、被験体は実験動物である。いくつかの実施形態では、被験体は遺伝子操作されており、例えば遺伝子操作された非ヒト被験体である。被験体は、いずれの性で任意の発達段階にあってよい。いくつかの実施形態では、被験体は患者または健康なボランティアである。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、被験体から得られた試料中のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体を検出するための方法は、（ａ）抗原が試料中に存在する場合、抗体の抗原への結合に好適な条件下で試料をＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ１−ＴＧＦβ１複合体、ＬＴＢＰ３−ＴＧＦβ１複合体、および／またはＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する抗体と接触させ、それにより結合複合体を形成するステップ、および（ｂ）抗原に結合した抗体のレベルを決定するステップ（例えば結合複合体のレベルを決定するステップ）を含む。
【０３０５】
一実施形態では、係留を提供することによって潜在型ＴＧＦβのインテグリンによる活性化を可能にする、表面上に固定化されたビオチン化潜在型ＴＧＦβ１複合体を利用するスクリーニングアッセイ。他に、非インテグリン活性化因子をその系において試験することもできる。読み出しは、レポーター細胞または他のＴＧＦβ依存性の細胞応答を通じたものであってよい。
【０３０６】
ＴＧＦβ活性化を測定するための細胞に基づくアッセイ
ＴＧＦβの活性化（および、抗体などのＴＧＦβ試験阻害剤によるその阻害）は当技術分野で公知の任意の好適な方法によって測定され得る。例えば、ＴＧＦβのインテグリン媒介性活性化を本明細書により詳細に記載されている「ＣＡＧＡ１２」ルシフェラーゼアッセイなどの細胞に基づくアッセイにおいて利用することができる。そのようなアッセイの例示的な実施形態を例示目的で図１１Ｃに示す。示されている通り、そのようなアッセイ系は、以下の構成成分：ｉ）ＴＧＦβの供給源（組換え、内在性またはトランスフェクトされたもの）；ｉｉ）インテグリンの供給源（組換え、内在性またはトランスフェクトされたもの）；およびｉｉｉ）ＴＧＦβに応答し、シグナルを読み取り可能な出力（例えば、ＣＡＧＡ１２細胞または他のレポーター細胞株におけるルシフェラーゼ活性）に変えることができるＴＧＦβ受容体を発現する細胞などの、ＴＧＦβ活性化に応答するレポーター系を含み得る。いくつかの実施形態では、レポーター細胞株は、ＴＧＦβ応答性プロモーター（例えば、ＰＡＩ−１プロモーター）の制御下にあるレポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子）を含む。いくつかの実施形態では、感度を付与するある特定のプロモーターエレメントをレポーター系に組み入れることができる。いくつかの実施形態では、そのようなプロモーターエレメントはＣＡＧＡ１２エレメントである。アッセイに使用することができるレポーター細胞株は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＡｂｅら（１９９４年）Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２１６巻（２号）：２７６〜８４頁に記載されている。いくつかの実施形態では、上述のアッセイの構成成分のそれぞれは同じ供給源（例えば、同じ細胞）から提供される。いくつかの実施形態では、上述のアッセイの構成成分のうちの２つが同じ供給源から提供され、第３のアッセイの構成成分は異なる供給源から供給される。いくつかの実施形態では、３つのアッセイの構成成分は全て異なる供給源から供給される。例えば、いくつかの実施形態では、インテグリンと潜在型ＴＧＦβ複合体（プロＴＧＦβおよび提示分子）は、同じ供給源（例えば、同じトランスフェクトされた細胞株）からアッセイのために提供される。いくつかの実施形態では、インテグリンとＴＧＦは、別々の供給源（例えば、２つの異なる細胞株、精製されたインテグリンとトランスフェクトされた細胞の組み合わせ）からアッセイのために提供される。細胞がアッセイの構成成分の１つまたは複数の供給源として使用される場合、そのようなアッセイの構成成分は、細胞に対して内在性のもの、細胞において安定に発現するもの、一過性にトランスフェクトされたもの、またはこれらの任意の組み合わせであってよい。本明細書に開示されている抗体Ａｂ１およびＡｂ２を使用したＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１複合体のいずれかの阻害が実証されたＴＧＦβ活性化を測定するための細胞に基づくアッセイの非限定的な例示的な実施形態からの結果をそれぞれ図２２Ａおよび図２２Ｂに示す。この例示的なアッセイでは、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は０．４４５であり、およびＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１��合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は１．３２５であった。
【０３０７】
当業者は、そのようなアッセイを種々の好適な構成に容易に適合させることができる。例えば、ＴＧＦβの種々の供給源を検討することができる。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβの供給源は、ＴＧＦβが発現し、それが沈着する細胞（例えば、初代細胞、繁殖細胞、不死化細胞または細胞株など）である。いくつかの実施形態では、好適な手段を使用したアッセイ系においてＴＧＦβの供給源が精製され、かつ／または組換えＴＧＦβが固定化される。いくつかの実施形態では、アッセイ系において固定化されたＴＧＦβは、アッセイプレート上の細胞外マトリクス（ＥＣＭ）組成物中に、脱細胞化（ｄｅ−ｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を伴ってまたは伴わずに存在し、線維芽細胞起源のＴＧＦβを模倣する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、アッセイに使用される細胞の細胞表面上に存在する。さらに、好適な潜在型ＴＧＦβ複合体を提供するために、選択された提示分子をアッセイ系に含めることができる。当業者は、どの提示分子（複数可）がある特定の細胞または細胞型において存在し得るまたは発現され得るかを容易に決定することができる。そのようなアッセイ系を使用して、試験薬剤（例えば抗体など）の存在下または非存在下でのＴＧＦβ活性化の相対的変化を容易に測定して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける試験薬剤のＴＧＦβ活性化に対する効果を評価することができる。例示的な細胞に基づくアッセイからのデータを下の実施例の節に提示する。
【０３０８】
そのような細胞に基づくアッセイは、試験されるＴＧＦβアイソフォーム、潜在型複合体の型（例えば、提示分子）などに応じて、いくつものやり方で改変または調整され得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβを活性化することができるインテグリンを発現することが分かっている細胞をアッセイにおけるインテグリンの供給源として使用することができる。そのような細胞は、ＳＷ４８０／β６細胞（例えば、クローン１Ｅ７）を含む。いくつかの実施形態では、インテグリン発現細胞に、目的の提示分子（例えばＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３）など）をコードするプラスミドと目的のＴＧＦβアイソフォームのプロ形態（例えばプロＴＧＦβ１など）をコードするプラスミドを同時トランスフェクトすることができる。トランスフェクション後、細胞を、トランスフェクトされた遺伝子の発現が可能になるのに十分な時間にわたって（例えば、約２４時間）インキュベートし、細胞を洗浄し、試験薬剤（例えば、抗体）の段階希釈物と一緒にインキュベートする。次いで、レポーター細胞株（例えば、ＣＡＧＡ１２細胞）をアッセイ系に添加し、その後、適切な時間インキュベートしてＴＧＦβシグナル伝達を可能にする。試験薬剤を添加した後のインキュベーション期間（例えば、約１８〜２０時間）後、シグナル／読み出し（例えば、ルシフェラーゼ活性）を好適な手段を使用して検出する（例えば、ルシフェラーゼを発現するレポーター細胞株に関しては、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することができる）。いくつかの実施形態では、ルシフェラーゼ蛍光は、ＢｉｏＴｅｋ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１）プレートリーダーをオートゲイン設定で使用して検出され得る。
【０３０９】
核酸
いくつかの実施形態では、本開示の抗体、その抗原結合性部分、および／または組成物は、核酸分子によりコードされ得る。そのような核酸分子は、限定することなく、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクター、プラスミドなどを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物および／または組成物をコードする核酸分子を発現するようにプログラミングまたは生成された細胞を含み得る。一部の場合では、本開示の核酸は、コドン最適化された核酸を含む。コドン最適化された核酸を生成する方法は当技術分野で公知であり、これらに限定されないが、それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７８６，４６４号および同第６，１１４，１４８号に記載されているものを含み得る。
【０３１０】
本発明は、いかなる形でも限定されるものではない以下の実施例によってさらに例示される。本出願全体を通して引用されている全ての参考文献、特許および公開特許出願の全内容、ならびに図面は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０３１１】
（実施例１：ＴＧＦβ１の阻害）
ＴＧＦβスーパーファミリーは、活性増殖因子と複合体を形成したプロペプチドを含む（図１）。複合体を安定化する抗体を得て、その結果、より選択的かつ強力な阻害をもたらすための選択戦略を開発した。
【０３１２】
ＨＥＫ２９３に基づく発現系を使用して、ＮｉＮＴＡ親和性およびゲル濾過を実施して数ミリグラム量の精製タンパク質を得て、それを使用して、ＬＴＢＰと複合体を形成したＴＧＦβ１（ＬＴＢＰ−ＴＧＦβ１複合体）およびＧＡＲＰと複合体を形成したＴＧＦβ１（ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体）を生成した（図３）。製造されるタンパク質の多様性により、種交差反応性の試験およびエピトープマッピングが可能になった。ｓＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ複合体（図４Ａおよび４Ｂ）、ｓＧＡＲＰ−ＴＧＦβ  ＬＡＰ複合体（図５）、およびＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体（図６）の精製が示されている。
【０３１３】
候補抗体を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ発光アッセイを使用して試験した（図８）。スクリーニングにおいて、増殖因子の放出を阻害した抗体は、正常な活性化の刺激に直面するとレポーター細胞を「オフ」にした。Ａｂ１およびＡｂ２は、潜在型ＴＧＦβ１複合体の活性化の阻害剤であり（図７）、マウスに対して交差反応性であることが示された。
【０３１４】
ヒトＴＧＦβ１を発現する細胞におけるＡｂ１の最初の用量反応分析曲線によりＴＧＦβ１活性阻害が示された（図８）。より感度の高いＣＡＧＡ１２レポーター細胞株を使用して、Ａｂ１は、同様のヒトプロＴＧＦβ１活性の阻害を示した（図９）。さらに、ＧＡＲＰ複合体の阻害により、健康なドナーの血液から単離されたＴ細胞における分裂しているエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）のパーセントによって測定される制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の抑制活性が遮断されることが示された（図１０）。
【０３１５】
ＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１阻害剤の親和性をヒトＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１細胞に対するＯｃｔｅｔアッセイによって測定し、一方、活性を、ヒトＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１阻害を試験するＣＡＧＡ１２レポーター細胞によって測定した。抗体Ａｂ１およびＡｂ２の本明細書で提供される複合体に対する親和性を測定するために使用したプロトコールを表６に要約する。結果を表７に示す。
【表６−１】
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【表６−２】
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【表７】
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【０３１６】
クローンを、結合選択性（表８）および種交差反応性（表９）についてさらにスクリーニングした。Ａｂ１およびＡｂ２は、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、またはＴＧＦβ３には結合しなかったが、プロＴＧＦβ１複合体には結合し、また、種交差反応性を示した。
【表８】
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【表９】
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【０３１７】
（実施例２：Ａｂ１およびＡｂ２は、複数の種に由来するプロＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する）
Ａｂ１およびＡｂ２が複数の種に由来するプロＴＧＦβ１複合体に特異的に結合することができるかどうかを決定するために、表６に記載されている通りＯｃｔｅｔ結合アッセイを実施した。表１０（以下）に示されている通り、どちらの抗体も（すなわち、Ａｂ１もＡｂ２も）ヒトＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体およびマウスＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体、ヒトＬＴＢＰ３−プロＴＧＦβ１複合体、ならびにヒトＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体に特異的に結合した。しかし、ラットＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１複合体にはＡｂ２のみが特異的に結合した。
【表１０】
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【０３１８】
（実施例３：Ａｂ１およびＡｂ２は、ヒト線維芽細胞およびマウス線維芽細胞において内在性ＴＧＦβ１を阻害する）
Ａｂ１およびＡｂ２が異なる起源の培養された初代線維芽細胞から分泌される内在性ＴＧＦ−β１を阻害することができるかどうかを決定するために、分泌されるＴＧＦ−β１の活性を、ＣＡＧＡ１２合成プロモーターと融合したルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む核酸で安定にトランスフェクトし、Ａｂ１またはＡｂ２のいずれかで処理した線維芽細胞と共培養したミンク肺上皮細胞から生じるルシフェラーゼレベルを測定することによって決定する定量的ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを実施した。図１１Ａおよび１１Ｂに示されている通り、Ａｂ１およびＡｂ２のどちらによっても、正常なヒト皮膚線維芽細胞、マウスＣ５７ＢＬ．６Ｊ肺線維芽細胞、およびＤＢＡ２／Ｊ筋線維芽細胞から分泌される内在性ＴＧＦ−β１が阻害された。各抗体を用いて観察される最大阻害の差異は細胞株特異的であった。
【０３１９】
（実施例４：Ａｂ２はＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１に結合する）
Ａｂ１およびＡｂ２がＬＲＲＣ３３と複合体を形成したプロＴＧＦβ１に結合するかどうかを決定するために、Ｏｃｔｅｔ結合アッセイを実施した。図１２Ａおよび１２Ｂに示されている通り、Ａｂ１およびＡｂ２はどちらもＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１タンパク質複合体に結合することができる。しかし、Ａｂ１は、ＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１タンパク質複合体への結合に関して遅い会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）を示す。Ａｂ１およびＡｂ２のＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１タンパク質複合体への結合を、ＥＬＩＳＡを使用してさらに確認した。
【０３２０】
（実施例５：Ａｂ１およびＡｂ２により、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１のどちらの活性も阻害される）
Ａｂ１およびＡｂ２によりＧＡＲＰ−プロＴＧＦ−β１および／またはＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦ−β１活性が阻害されるかどうかを決定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に基づくアッセイを実施した。このアッセイ系では、β６インテグリンで安定にトランスフェクトされた、操作されたヒト結腸がん細胞株（ＳＷ４８０／β６細胞）を、プロＴＧＦ−β１を発現させるための構築物および提示分子（すなわち、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３）を発現させるための構築物で同時トランスフェクトした。提示分子を発現させるために、キメラＬＲＲＣ３３−ＧＡＲＰ（配列番号８５）またはＧＡＲＰをコードする構築物を使用した。トランスフェクトされた細胞を、構成成分（インテグリンおよびそれぞれの提示分子と複合体を形成したプロＴＧＦβ１）の十分な発現および沈着が可能になるようにインキュベートした。Ａｂ１またはＡｂ２の存在下または非存在下でのＴＧＦβ１の活性化を、下流のシグナルトランスダクション経路とカップリングしたＴＧＦβ受容体を発現するレポーター細胞（ＣＡＧＡ１２細胞）を使用してアッセイして抗体の阻害活性を測定した。図１３Ａおよび１３Ｂに示されている通り、Ａｂ１およびＡｂ２により、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦ−β１およびＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦ−β１がどちらも阻害された。
【０３２１】
追加的な細胞に基づくアッセイを実施して、抗体Ａｂ１およびＡｂ２を使用するＧＡＲＰ−プロＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦβ１複合体のいずれかの阻害を検出した。図２２Ａおよび図２２Ｂに示されている通り、Ａｂ１およびＡｂ２により、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦ−β１およびＬＲＲＣ３３−プロＴＧＦ−β１がどちらも阻害された。このアッセイでは、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は０．４４５であり、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体に対するＡｂ１のＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）は１．３２５であった。
【０３２２】
（実施例６：片側尿管閉塞（ＵＵＯ）マウスモデルにおける腎臓バイオマーカーおよび線維症に対するＡｂ２の効果）
片側尿管閉塞マウスモデルは、末期腎疾患に至る可能性がある一般的な病理学的プロセスである間質性線維症を試験するために広く使用されている（Ｉｓａｋａら（２００８年）Ｃｏｎｔｒｉｂ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．、１５９巻：１０９〜２１頁、およびＣｈｅｖａｌｉｅｒ（１９９９年）Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．、１３巻：６１２〜９頁を参照されたい）。ＵＵＯマウスは、最小の糸球体病変を伴う、腎臓の筋線維芽細胞活性化、尿細管萎縮および間質性線維症を特徴とする（Ｌｉａｎら（２０１１年）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｉｎ．、３２巻：１５１３〜２１頁を参照されたい）。ＴＧＦβ１の発現の増大は、ＵＵＯマウスにおいて観察される表現型において役割を果たすと考えられる。ＵＵＯマウスモデルにおける間質性線維症の症状（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）に対するＡｂ２の効果を評価するために、以下の実験を実施した。
【０３２３】
簡単に述べると、マウス（ｎ＝１０）を４群にした７〜８週齢の雄ＣＤ−１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、Ａｂ２（３ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ；投与体積１０ｍＬ／ｋｇ）、マウスＩｇＧ１対照抗体（３０ｍｇ／ｋｇ；投与体積１０ｍＬ／ｋｇ）、またはビヒクル対照としてＰＢＳのいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した後、外科的介入を行った。処置を、外科手術の１日前（ｄ−１）、外科手術の１日後（ｄ１）、および外科手術の３日後（ｄ３）に施行した。０日目（ｄ０）に、マウスをノーズコーンを用いてイソフルラン麻酔により麻酔し、開腹術を実施し、その後、恒久的右片側性ＵＵＯ手術を行った。追加的な対照群のマウス（ｎ＝８）にＰＢＳを上記の通り投与したが、偽外科手術（すなわち、尿管の閉塞を伴わない）のみを行った。外科手技の完了直後に、全てのマウスが０．００１ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンの皮下注射を１回受けた。マウスを外科手術の５日後に屠殺し、分析のために組織を回収した。回収後、両側の腎臓を氷冷の０．９％ＮａＣｌ中に入れ、脱被包化（ｄｅ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅ）し、秤量した。腎組織のコラーゲン含有量を評価するためのヒドロキシプロリンレベルを評価した。図１４に示されている通り、組織線維症およびコラーゲン沈着のマーカーである腎臓ヒドロキシプロリンレベルは、外科的介入を受けたマウスにおいて偽外科手術を受けたマウスと比較して有意に上昇した。
【０３２４】
各右側腎臓の中央横断切片を１０％中性緩衝ホルマリン中に４８時間にわたって浸漬固定し、次いで、それを組織学的処理および分析のために７０％エタノールに移した。固定された腎臓切片をパラフィン包埋し、切片作製し（より大きく試料採取し、腎臓損傷を表すことを可能にするために、動物の腎臓当たり３つの、２００〜２５０μｍ離して取得した５μｍの連続切片）、ピクロシリウスレッドで染色し、カラースペクトル分割を使用した定量的組織学的分析に供して、皮質コラーゲン体積の割合（ＣＶＦ）を決定した。３つの連続切片それぞれのＣＶＦスコアの平均を決定することによって各動物について１つの複合ＣＶＦスコアを算出した。片側ｔ検定を使用して統計解析を実施した。図１６に示されている通り、ＣＶＦによって決定される腎臓皮質線維症は、ＵＵＯ閉塞腎臓において対照偽処置マウスと比較して増加した。３ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２を受けたマウスでは、ビヒクル対照（ＰＢＳ）またはＩｇＧ対照のいずれかを受けたマウスと比較してＣＶＦのＵＵＯ誘導性増大の有意な減弱が示された。
【０３２５】
回収された腎組織におけるプラスミノーゲン活性化因子阻害因子−１（ＰＡＩ−１）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、ＴＧＦβ１、フィブロネクチン−１、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）、Ｉ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ１ａ１）、およびＩＩＩ型コラーゲンアルファ１鎖（Ｃｏｌ３ａ１）の相対的なｍＲＮＡ発現レベルを決定した（図１５Ａ−１５Ｈ）。ｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ１）ｍＲＮＡレベルを使用して正規化した。さらに、外科的介入の前に３ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡｂ２を受けたマウスでは、ＰＡＩ−１、ＣＴＧＦ、ＴＧＦβ１、フィブロネクチン１、Ｃｏｌ１ａ１、およびＣｏｌ３ａ１のｍＲＮＡレベルが３０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ１対照を受けたマウスと比較して有意に低下した。外科的介入前に３ｍｇ／ｋｇのＡｂ２を受けたマウスでは、α−ＳＭＡのｍＲＮＡレベルが３０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ１対照を受けたマウスと比較して有意に低下した。さらに、外科的介入前に３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ２を受けたマウスでは、ＭＣＰ−１のｍＲＮＡレベルが３０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ１対照を受けたマウスと比較して有意に低下した。
【０３２６】
要約すると、ＵＵＯマウスモデルでは、Ａｂ２で処置したマウスにおいて、ヒドロキシプロリンレベルを例外として、有意な効果が観察された。図１５Ａ〜１５Ｈおよび１６に示されている通り、Ａｂ２による処置により、ＣＶＦのＵＵＯ誘導性増大が有意に減弱し、また、ＰＡＩ−１、ＣＴＧＦ、ＴＧＦβ１、フィブロネクチン１、Ｃｏｌ１ａ１、およびＣｏｌ３ａ１などの公知の線維症マーカーの遺伝子発現が有意に低下した。これらのデータから、ＴＧＦβ１が腎疾患において役割を果たすＴＧＦβの主要な形態であること、ならびに、驚いたことに、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３は病因に関与しない可能性があることが実証される。
【０３２７】
（実施例７：Ａｂ１およびＡｂ２の単独でまたは抗ＰＤ−１抗体との組み合わせでのＭＣ３８マウス結腸癌同系マウスモデルにおける腫瘍の進行に対する効果）
Ａｂ１およびＡｂ２の、単独でまたは抗ＰＤ−１抗体との組み合わせでの、結腸癌腫瘍の進行の低下に対する効果を評価するために、ＭＣ３８マウス結腸癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス同系モデルを使用した。
【０３２８】
腫瘍細胞培養
ＭＣ３８マウス結腸癌細胞を、１０％ウシ胎仔血清、１００単位／ｍＬのペニシリンＧナトリウム、１００μｇ／ｍＬの硫酸ストレプトマイシン、２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシン、および２ｍＭのグルタミンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で増殖させた。細胞培養物を加湿インキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２および９５％空気の雰囲気下、組織培養フラスコ中で維持した。
【０３２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ埋め込みおよび腫瘍増殖
埋め込みに使用するＭＣ３８細胞を対数期増殖中に回収し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。腫瘍埋め込みの日に、各試験マウスの右側腹部に５×１０５個の細胞（細胞懸濁物０．１ｍＬ）を皮下注射し、腫瘍増殖を、平均サイズが８０〜１２０ｍｍ３の標的範囲に近づくのをモニターした。試験の１日目に指定される１１日後に、マウスを算出された腫瘍サイズに応じてそれぞれが個々の腫瘍体積が６３ｍｍ３から１９６ｍｍ３までにわたり、群平均腫瘍体積が９５〜９８ｍｍ３である動物１２匹からなる群に選別した。カリパスを使用して腫瘍を２つの寸法で測定し、式：
【化５】
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（式中、ｗ＝腫瘍の幅およびｌ＝腫瘍の長さ、ｍｍ単位である）を使用して体積を算出した。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３と等しいという仮定を用いて推定され得る。
【０３３０】
処置
簡単に述べると、１日目に、皮下ＭＣ３８腫瘍（６３〜１７２ｍｍ３）を有する８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１２）にＡｂ１、Ａｂ２、マウスＩｇＧ１対照抗体のいずれか（それぞれ投与体積１０ｍＬ／ｋｇ中３０ｍｇ／ｋｇ）を週２回、４週間にわたって腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。対照群の腫瘍が１５０ｍｍ３に達したら（６日目）、マウスにラット抗マウスＰＤ−１抗体（ＲＭＰ１−１４）またはラットＩｇＧ２Ａ対照抗体のいずれかを週に２回、２週間にわたってｉ．ｐ．投与した（各抗体を投与体積１０ｍＬ／ｋｇ中５ｍｇ／ｋｇで）。
【０３３１】
群１は、腫瘍増殖対照としての機能を果たし、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせを受けた。群２は、Ａｂ１とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせを受けた。群３は、Ａｂ２とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせを受けた。群３は、マウスＩｇＧ１対照抗体と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを受けた。群４は、Ａｂ１と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを受けた。群５は、Ａｂ２と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを受けた。群６（ｎ＝１６）は処置せず、試料採取対照群としての機能を果たした。
【０３３２】
エンドポイントおよび腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）分析
週２回、カリパスを使用して腫瘍を測定し、各動物について、腫瘍がエンドポイント体積１，０００ｍｍ３に達した時または試験終了時（６０日目）のいずれか早い時点で安楽死させた。腫瘍体積エンドポイントにより試験を終了したマウスは、腫瘍の進行（ＴＰ）により安楽死させたとして安楽死の日にちと共に記録に残した。各マウスについて、分析のためのエンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）を以下の方程式：
【化６】
2019509737.tif 000026
（式中、ＴＴＥは日数で表され、エンドポイント体積はｍｍ３で表され、ｂは切片であり、ｍは対数変換された腫瘍増殖データセットの線形回帰から得られる線の傾きである）を使用して算出した。データセットは、分析に使用したエンドポイント体積を超えた最初の観察およびこのエンドポイント体積が達成されるすぐ前の３つの連続した観察からなった。算出されるＴＴＥは、通常、腫瘍サイズにより動物を安楽死させた日であるＴＰ日よりも小さい。エンドポイント体積に到達しなかった腫瘍を有するマウスには、試験の最終日と等しいＴＴＥ値を割り当てた（６０日目）。対数変換された算出されたＴＴＥが、エンドポイントに到達するより前の日に先行するかまたは腫瘍体積エンドポイントに到達する日を超える例では、線形補間を実施してＴＴＥを概算した。処置に関連しない（ＮＴＲ）原因で死亡したものに分類されたマウスはＴＴＥ算出（およびさらなる分析の全て）から排除した。ＴＲ（処置に関連する）死亡またはＮＴＲｍ（転移に起因する、処置に関連しない死亡）に分類された動物には死亡日と等しいＴＴＥ値を割り当てた。
【０３３３】
処置の転帰を腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）から評価し、対照群と比較して処置群におけるエンドポイントまでのメジアン時間（ＴＴＥ）の増大と定義した：
日数で表すと：
ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃ、
または対照群のメジアンＴＴＥに対する百分率として表すと：
【化７】
2019509737.tif 000027
（式中、
Ｔ＝処置群についてのメジアンＴＴＥ、および
Ｃ＝指定の対照群についてのメジアンＴＴＥ）。
【０３３４】
ＭＴＶおよび退縮応答についての基準
処置の効能は、最終日に試験に残っている動物の腫瘍体積から決定され得る。ＭＴＶ（ｎ）を、腫瘍がエンドポイント体積に達しなかった残りの動物の数（ｎ）での、試験の最終日におけるメジアン腫瘍体積と定義した。
【０３３５】
処置の効能は、試験中に観察される退縮応答の発生数および大きさからも決定され得る。処置により、動物における腫瘍の部分的退縮（ＰＲ）または完全退縮（ＣＲ）が引き起こされ得る。ＰＲ応答では、腫瘍体積は、試験の過程中の３回の連続した測定に関して、その１日目の体積の５０％またはそれ未満であり、これらの３回の測定のうちの１回または複数回に関して１３．５ｍｍ３と等しいまたはそれよりも大きかった。ＣＲ応答では、腫瘍体積は、試験の過程中の３回の連続した測定に関して１３．５ｍｍ３よりも小さかった。試験終了時にＣＲ応答を有した動物はさらに無腫瘍生存動物（ＴＦＳ）に分類した。動物を退縮応答についてモニターした。
【０３３６】
腫瘍増殖阻害
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）分析では処置マウスと対照マウスのメジアン腫瘍体積（ＭＴＶ）の差異が評価される。この試験に関して、ＴＧＩを決定するためのエンドポイントは、対照マウスの平均腫瘍体積が１５００ｍｍ３に達した日である２９日目であった。ＴＧＩ分析日の動物の数、ｎについてのメジアン腫瘍体積であるＭＴＶ（ｎ）を各群について決定した。パーセント腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）を、指定の対照群のＭＴＶと薬物処置群のＭＴＶの差異を対照群のＭＴＶに対する百分率として表したものと定義した：
【化８】
2019509737.tif 000028
【０３３７】
ＴＧＩ分析のためのデータセットは、ＴＧＩ分析日よりも前に処置に関連する（ＴＲ）または処置に関連しない（ＮＴＲ）原因で死亡したマウス以外の群内全てのマウスを含むものであった。
【０３３８】
本試験では、Ａｂ１およびＡｂ２を単独でおよび抗ＰＤ−１と組み合わせて、ＭＣ３８マウス結腸癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス同系モデルにおいて評価した。Ａｂ２を抗ＰＤ−１と組み合わせて投与したマウスでは、有意な２９日目ＴＧＩがもたらされ（Ｐ＜０．０５、マン・ホイットニーのＵ検定）、ログランク生存分析（Ｐ＜０．０５、ログランク）を使用して、ビヒクルで処置した対照とは統計的に有意に異なる生存利益が生じた（図１７を参照されたい）。Ａｂ１またはＡｂ２とラットＩｇＧ２ａ対照抗体の組み合わせを受けたマウスでは、それぞれＣＲが１例およびＰＲが１例の退縮応答があった。抗ＰＤ−１と組み合わせると、Ａｂ１およびＡｂ２の退縮応答は、それぞれＰＲが１例およびＣＲが１例、ならびにＣＲが４例であった。Ａｂ２と抗ＰＤ−１を組み合わせると、２９日目に有意な短期の効能が生じ、また、このＭＣ３８マウス結腸癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス同系モデルにおける６０日間のＴＧＤ試験において全生存利益が生じた。
【０３３９】
（実施例８：筋ジストロフィーにおけるＴＧＦβ１の役割）
ＴＧＦβは、筋形成の阻害、炎症および筋肉修復の制御、ならびに線維症の促進を含む、骨格筋機能における多数の役割を果たす。ＴＧＦβ阻害には筋ジストロフィーを含めた広範囲の疾患に対する治療としてかなりの関心が寄せられているが、これらの治療では、分子の状況にかかわらず、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３が阻害される。これらの阻害剤の特異性／選択性の欠如により、望ましくない副作用が生じる可能性があり、それにより、効能が不十分な臨床的用量が導かれる。ｍｄｘマウスにおいて汎ＴＧＦβ阻害性分子により筋肉機能が改善され、線維症が低減することが報告されているが、これらの効果がＴＧＦβ１、β２、またはβ３の不活化に起因するものであるかどうかはまだ対処されていない。
【０３４０】
そのために、ＴＧＦβ２およびβ３は残しながら潜在型ＴＧＦβ１のインテグリン媒介性活性化を特異的に遮断する抗体が生成された。ジストロフィーの筋肉における筋肉修復において特異的なＴＧＦβ１の役割を確認するために、Ｄ２．ｍｄｘマウスをプロＴＧＦβ１特異的抗体で処置する。ＴＧＦβ１阻害の、収縮誘導性損傷からの保護に対する機能的効果、ならびに同じ損傷方法からの回復に対する機能的効果を評価する。組織学的評価は、処置が筋傷害、線維症、および炎症に影響を及ぼすかどうかを含む。さらに、筋肉における汎ＴＧＦβ阻害で報告された観察される負の影響（例えば、炎症の増大、筋肉機能の長期欠損）がＴＧＦβ１の阻害に起因するものであるのか、またはＴＧＦβ２／３の阻害に起因するものであるのかを決定するために、可能性のある毒性を評価することができる。特定の分子の状況にあるＴＧＦβ１の阻害がより効果的であり、かつ／または負の影響（有害作用）がより少ないのかどうかを理解するために、このモデルにおけるＬＴＢＰ−プロＴＧＦβ１阻害剤の効能を評価して、免疫細胞に提示されたＴＧＦβ１の役割を細胞外マトリクス（ＥＣＭ）内に存在するＴＧＦβ１の役割からデコンボリュートし、より安全かつ／またはより有効な抗線維化治療が潜在的に導かれるようにすることができる。
【０３４１】
ジストロフィーの筋肉は、収縮誘導性損傷に対して高度に感受性である。損傷後、ｍｄｘマウス由来の筋肉は、ＷＴと比較した力生成の有意な低減およびエバンスブルー色素の取り込みの増加（筋線維に対する物理的損傷／傷害の指標となる）を示す（Ｌｏｖｅｒｉｎｇ，  Ｒ．Ｍ．ら、Ａｒｃｈ  Ｐｈｙｓ  Ｍｅｄ  Ｒｅｈａｂｉｌ、２００７年、８８巻（５号）：６１７〜２５頁）。収縮誘導性損傷の程度を低減するかまたは損傷後の回復を改善する治療剤は、筋ジストロフィー患者に対する有意な臨床的有用性があるものである（Ｂｕｓｈｂｙ，  Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ、２０１０年、９巻（１号）：７７〜９３頁）。Ａｂ１およびＡｂ２を、ｉ）収縮誘導性損傷を防止する能力、ならびにｉｉ）損傷からの回復を促進する能力について評価する。本発明者らの実験では、Ｂ１０バックグラウンドの従来のｍｄｘ系統とは対照的に、Ｄ２．ｍｄｘ系統を使用することができる。ｍｄｘをＤＢＡ２／Ｊバックグラウンドと交配することによって生成されたこれらのマウスは、上記のＬＴＢＰ４の非保護的改変体を有し、したがって、より重症であり、進行性であり、かつ標準のｍｄｘ系統よりもヒト疾患に類似した疾患病態を示す（Ｃｏｌｅｙ，  Ｗ．Ｄ．ら、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ、２０１６年、２５巻（１号）：１３０〜４５頁）。Ｄ２．ｍｄｘマウスを使用するので、ＤＢＡ２／Ｊマウスが野生型対照としての機能を果たし得る。ＤＭＤは主に男性に影響を及ぼすので、試験は、雄マウスに焦点を当てることができる。
【０３４２】
Ａｂ１およびＡｂ２の収縮誘導性損傷を防止する／限定する能力を調査するために、６週齢の雄Ｄ２．ｍｄｘマウス（ｎ＝１０）を、ＩｇＧ対照、Ａｂ１、またはＡｂ２のいずれかを１０ｍｇ／ｋｇ／週で用いて６週間処置する。公開されている、汎ＴＧＦβ阻害剤を使用した研究との比較を可能にするために、第４の群に１Ｄ１１を１０ｍｇ／ｋｇ／週で投与する。全ての抗体がｍＩｇＧ１アイソタイプであり、この用量は、ＵＵＯモデルにおいて有効であることが以前に示されている（図１５および１６）。ＩｇＧ対照が投与されるＷＴ群も包含される。蛍光顕微鏡による筋線維傷害の評価を可能にするために、屠殺の２４時間前にマウスにＰＢＳ中１％のエバンスブルー色素（ＥＢＤ）（体重の１％の体積）を投与する。処置の最後に、マウスをｉｎ  ｖｉｖｏ伸張性収縮プロトコールに供す。腓腹筋の伸張性損傷を、３０５Ｂ筋肉レバーシステム（Ａｕｒｏｒａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、記載の通り行うことができる（Ｋｈａｉｒａｌｌａｈ，  Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ、２０１２年、５巻（２３６号）：ｒａ５６頁）。簡単に述べると、間に１分間の休止を伴う２０回の伸張性収縮を実施し、伸張性フェーズ前のピーク等尺性筋力の低下を筋傷害の指標とみなすことができる。筋力低下の程度およびＥＢＤ陽性線維のパーセントを決定することができる。このプロトコールに供されたＤＢＡ２／Ｊマウスは２０回の伸張性収縮後に最初の筋力の３０〜４０％を失う。対照的に以前に記載されている通り、Ｄ２．ｍｄｘマウスは同じプロトコール後に最初の筋力の８０％を失う（Ｐｒａｔｔ，  Ｓ．Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ、２０１５年、７２巻（１号）：１５３〜６４頁；Ｋｈａｉｒａｌｌａｈ，  Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ、２０１２年、５巻（２３６号）：ｒａ５６頁）。Ａｂ１およびＡｂ２の損傷後の筋力低下を低減する能力を評価することができる。マウスを実験の最後に屠殺し、損傷を受けた腓腹筋および損傷を受けていない腓腹筋の両方を組織学的分析のために採取することができる。両方の筋肉からＥＢＤ取り込みを評価することができる。筋線維横断面積および線維症の程度を測定することができる。横断面積を決定するために、筋肉の中腹部由来の切片をフルオロフォアとコンジュゲートしたコムギ胚芽凝集素で染色して細胞膜を可視化することができる。蛍光顕微鏡を使用して切片をデジタル化し、予測ソフトウェアを使用して細胞境界をたどり、不偏の自動測定によって横断面積を決定することができる。線維症を分析するために、切片をピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）で染色し、スライド当たりのＰＳＲ＋面積をコンピュータで計算することができる。
【０３４３】
Ａｂ１およびＡｂ２の収縮誘導性損傷からの回復を加速する能力を評価する。１２週齢のＤＢＡ２／ＪマウスおよびＤ２．ｍｄｘマウスに上記の同じ伸張性収縮プロトコールを受けさせることができる。損傷後、マウスを処置群（ｎ＝１０）に分類し、ＩｇＧ対照（ＷＴおよびＤ２．ｍｄｘマウスに対して）、１Ｄ１１、Ａｂ１、またはＡｂ２（Ｄ２．ｍｄｘのみ）のいずれかを投与する。抗体を１０ｍｇ／ｋｇ／週で実験の持続時間にわたって投与する。損傷の７日後および１４日後、最大ピーク等尺性筋力、単収縮・強縮比、および力・頻度関係を測定して損傷からの回復に対する処置の効果を評価することができる。Ａｂ１およびＡｂ２は提示分子にかかわらずＴＧＦβ１の放出を阻害するが、ＤＭＤでは、ＴＧＦβ１により駆動されるＴｒｅｇ活性が保存されるので細胞外マトリクスからのＴＧＦβ１（すなわち、ＬＴＢＰにより提示される）の選択的放出がより大きく有益である。この問題に取り組むために、特異的なＬＴＢＰ−プロＴＧＦβ１阻害性抗体を、収縮誘導性損傷を妨げる能力および損傷からの回復を加速する能力の両方について評価することもできる。
【０３４４】
（実施例９：急性損傷後の骨格筋再生におけるＴＧＦβ１の役割）
特に筋損傷後の筋線維再生におけるＴＧＦβ１の役割を調査することができる。ＴＧＦβ１特異的抗体を心臓毒損傷モデルにおいて使用して、特に筋線維再生中のＴＧＦβ１の役割を決定することができる。再生を組織学的に評価することができ、筋肉の強度および質の機能的評価を行うことができる。筋肉再生に対するＴＧＦβ１阻害の潜在的利益を考慮すると、汎ＴＧＦβ阻害で観察される毒性を伴わずに有益な効果を有する療法の利益は大きい。これにより、サテライト細胞機能に対するＴＧＦβ１特異的阻害の効果を調査することが可能になり、サテライト細胞移植試験に関する洞察をもたらすことができる。
【０３４５】
上記の通り、ＴＧＦβは、筋芽細胞の増殖および分化の阻害ならびに萎縮および線維症の促進を含む筋肉生物学に対する多数の影響を及ぼすと思われる（Ａｌｌｅｎ，  Ｒ．Ｅ．およびＬ．Ｋ．  Ｂｏｘｈｏｒｎ、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、１９８７年、１３３巻（３号）：５６７〜７２頁；Ｂｒｅｎｎａｎ，  Ｔ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９９１年、８８巻（９号）：３８２２〜６頁；Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、１９８６年、８３巻（２１号）：８２０６〜１０頁；Ｏｌｓｏｎ，  Ｅ．Ｎ．ら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１９８６年、１０３巻（５号）：１７９９〜８０５頁；Ｌｉ，  Ｙ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２００４年、１６４巻（３号）：１００７〜１９頁；Ｍｅｎｄｉａｓ，  Ｃ．Ｌ．ら、Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ、２０１２年、４５巻（１号）：５５〜９頁；Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁）。しかし、これらの試験では、結果が非生理的になる可能性がある、培養物中の組換えＴＧＦβ１を使用するかマウスに注射した。なぜなら、これは、増殖因子がその分子の状況から除かれるからである。代替的に、研究者はＴＧＦβ１に選択的でないＴＧＦβ阻害剤を使用した。
【０３４６】
ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的影響を評価するために、複数のプロＴＧＦβ１抗体（例えば、Ａｂ１およびＡｂ２）を、ＣＴＸ誘導性損傷後の筋肉再生に影響を及ぼすこれらの能力について調査することができる。これらの抗体は、ＴＧＦβ１活性化の「アイソフォーム特異的」かつ「状況許容的」阻害剤であり、したがって、任意の提示分子からのＴＧＦβ１の放出を特異的に阻害し（ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３とは対照的に）、成熟増殖因子には結合しない（図１８Ａ）。
【０３４７】
雄ＤＢＡ２／Ｊマウス（ｎ＝１０）において右腓腹筋へのＣＴＸ注射によって筋肉再生を誘導することができる。損傷の前日、マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、１Ｄ１１、Ａｂ１、またはＡｂ２を投与することができる。抗体を試験終了まで毎週投与し続ける。損傷の７日後および１４日後に、筋力測定値をｉｎ  ｖｉｖｏで３０５Ｃ筋肉レバーシステム（Ａｕｒｏｒａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、Ａｕｒｏｒａ、ＣＡＮ）を用いて測定することができる。簡単に述べると、足底屈筋群について、麻酔したマウスにおける坐骨神経への経皮電気刺激によって収縮を誘発し、次いで、刺激の周波数を増加させながら一連の刺激を行う（パルス０．２ｍｓ、連続継続時間（ｔｒａｉｎ  ｄｕｒａｔｉｏｎ）５００ｍｓ）：１、１０、２０、４０、６０、８０、１００、１５０Ｈｚ、続いて１Ｈｚで最後の刺激。最大ピーク等尺性筋力、単収縮・強縮比、および力・頻度関係を決定する。筋力測定後、損傷を受けた腓腹筋およびヒラメ筋を採取し、組織学のために調製する。筋線維横断面積および％ＰＳＲ＋面積を上の実施例８に記載されている通り決定することができる。
【０３４８】
Ａｂ１およびＡｂ２を用いた処置により、線維症の低減および筋肉機能の改善がもたらされ得る。しかし、免疫活性化の制御におけるＴＧＦβ１の役割を考慮すると、１Ｄ１１による処置で報告されている通り、抗体を用いると炎症の増大が観察され得る可能性がある（Ａｎｄｒｅｅｔｔａ，  Ｆ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００６年、１７５巻（１〜２号）：７７〜８６頁）。炎症の増大によりＴＧＦβ１阻害の治療効果が限定される可能性がある場合、その後、毒性を限定し得るさらなる特異性の程度がもたらされるように状況特異的抗体を評価することができる。例えば、上記の読み出しおよび方法を使用して、ＴＧＦβ１のＬＴＢＰからの放出を阻害する抗体のみを使用することができる。これらの抗体は、ＴＧＦβ１の、Ｔｒｅｇまたはマクロファージからの放出に影響を及ぼすことなく、ＥＣＭからの放出のみを限定し得る。
【０３４９】
（実施例１０：適切なＴＧＦβ１阻害性薬剤の選択）
健康な筋肉、再生中の筋肉、および疾患にかかっている筋肉におけるプロＴＧＦβ１およびその提示分子の発現解析により、最適な治療手法の選択を補助するための有用な情報がもたらされ得る。筋肉の再生および修復におけるＴＧＦβ１阻害の潜在的利益を考慮すると、異なる条件下（健康、急性損傷、および慢性損傷）での骨格筋におけるプロＴＧＦβ１提示の状況（例えば、ＥＣＭ内または免疫細胞上）の理解が、抗体の治療的有用性を伝えるのに役立ち、最終的に臨床的効能と安全性の両方を達成するために必要な特異性／選択性の程度に関する洞察がもたらされ得る。ＴＧＦβ１提示の性質は、筋肉の健康状態に応じておよび疾患の経過にわたって変動する可能性があり、これは、あらゆるＴＧＦβ１標的化療法に意味を持つ可能性がある。これらの分子の発現プロファイルを理解することにより、潜在的な治療用分子に対する適切な投与時間の選択も補助される。ウエスタンブロット、免疫組織化学、および免疫沈降を使用して、正常な筋肉、急性損傷（心臓毒損傷）を受けた筋肉、および長期にわたって再生中の筋肉（Ｄ２．ｍｄｘマウス）におけるプロＴＧＦβ１およびその提示分子の発現を評価することができる。これらの分子の発現は、特に、上記の異なる条件での重要な細胞型または細胞型のサブセット（例えば、サテライト細胞、マクロファージ、線維形成・脂肪生成前駆体（ｆｉｂｒｏ−ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）など）を調査することができる。
【０３５０】
ｍｄｘマウス由来の筋肉におけるＴＧＦβアイソフォームの発現は調査されているが、以前の研究は、成熟増殖因子の発現に焦点を合わせたものであった（Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、２０１１年、１７８巻（６号）：２６１１〜２１頁；Ｚｈｏｕ，  Ｌ．ら、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ、２００６年、１６巻（１号）：３２〜８頁）。本明細書に記載のＴＧＦβ１抗体の標的特異性を考慮すると、発現パターンを成熟およびプロＴＧＦβ１についてだけでなく、同様に提示分子についても調査することが必須であり、それにより、目的のＴＧＦβ１のプールの供給源および／または状況に関する情報がもたらされるはずである。理想的には、各構成成分についてだけでなく潜在型複合体の発現パターンについて理解することが望ましい。
【０３５１】
抗体を目的の標的に対するウエスタンブロットおよびＩＨＣのためにスクリーニングする。マウスＴＧＦβ１−ＬＡＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、およびＬＴＢＰ４に対する抗体は商業的に入手できる。ＴＧＦβ１−ＬＡＰに対する抗体（クローンＴＷ７−１６Ｂ４）は広範囲にわたって特徴付けられており、フローサイトメトリーおよびウエスタンブロットのどちらにおいても有効である（Ｏｉｄａ，  Ｔ．およびＨ．Ｌ．  Ｗｅｉｎｅｒ、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ、２０１０年、５巻（１１号）：ｅ１５５２３頁）。ＬＴＢＰ１に対する抗体（ＰｒｏｔｅｉｎＴｅｃｈ＃２２０６５−１−ＡＰ）およびＬＴＢＰ３に対する抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＡＢＴ３１６）は、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦβ１またはＬＴＢＰ３−プロＴＧＦβ１をトランスフェクトしたＳＷ４８０細胞を使用して内部で検証されており、これらの標的に特異的であることが示されている。これらの抗体のＩＨＣへの有用性を決定することができる。健康なマウス由来の筋肉およびＤ２．ｍｄｘマウス由来の筋肉を切片作製し、抗体を凍結切片およびＦＦＰＥ切片で試験する。観察されるシグナルが特異的なものであることを確実にするために、１００×過剰の精製された標的タンパク質または複合体（自社製、例えば図１８Ｂ）を用いた条件を含めることによって抗体を検証することができる。
【０３５２】
以前の研究により、所与の潜在型複合体に特異的に結合するが阻害活性は有さない抗体が同定されている。これらの抗体による抗原結合はＥＬＩＳＡによって確認されており（図１８Ｂおよび１８Ｃ）、ＩＨＣにおけるこれらの有用性についても評価することができる（これらのエピトープの三次元構造を考慮すると、これらの抗体はウエスタンブロット試薬として有効である可能性は低い）。バルク組織由来の潜在型ＴＧＦβ１複合体の存在もウエスタンブロットまたは免疫沈降によって評価することができる。潜在型複合体は、ウエスタンブロットにより、還元条件下および非還元条件下で同じ試料で実行することによって同定することができる。還元条件下では、ＴＧＦβ１、ＬＡＰおよび提示分子は分離し、３つの分子を同じブロット上で同定することができるが、二色ウエスタンブロット法を使用する。非還元条件では、ＬＡＰ：提示分子複合体は会合したままであるが、ＴＧＦβ１は放出される；複合体は空の提示分子よりも遅く移動し、ＴＧＦβ１−ＬＡＰと共に移動する（図１８Ｂ）。ＴＧＦβ１と特定の提示分子の直接結合を実証するために、種々の抗体を筋肉由来の潜在型複合体を免疫沈降させるこれらの能力についても評価することができる。
【０３５３】
適切な抗体が同定されたら、健康な筋肉、再生中の筋肉、およびジストロフィーの筋肉における発現を、利用可能な抗体に応じてウエスタンおよび／またはＩＨＣによって評価する。前脛骨筋（ＴＡ）および横隔膜筋を４週齢、８週齢、および１２週齢のＤＢＡ２／ＪマウスおよびＤ２．ｍｄｘマウスから採取することができる。再生中の筋肉については、心臓毒を１２週齢のＤＢＡ２／ＪマウスのＴＡに注射し、損傷の３日後、７日後、および１４日後に筋肉を採取することができる。各条件／時点について少なくとも４匹のマウスからの組織を使用することができる。種々の分子を発現する細胞集団を同定するために共染色実験も行うことができる（例えば：マクロファージについてはＣＤ１１ｂ、ＴｒｅｇについてはＦｏｘＰ３、筋原細胞についてはＭｙｏＤ）。
【０３５４】
（実施例１１：Ａｂ２は、ＡＬＫ５キナーゼ阻害剤ＬＹ２１０９７６１および汎ＴＧＦβ抗体と比較して低減した毒性を示す）
Ａｂ２の毒性を小分子ＴＧＦ−βＩ型受容体（ＡＬＫ５）キナーゼ阻害剤ＬＹ２１０９７６１と、および汎ＴＧＦβ抗体（ｈＩｇＧ４）と比較して評価するために、ラットにおいて毒性試験を実施した。簡単に述べると、雌Ｆ３４４／ＮＨｓｄラットに、３ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）、３０ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）、もしくは１００ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）でのＡｂ２；３ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）、３０ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）、もしくは１００ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）での汎ＴＧＦβ抗体；２００ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）もしくは３００ｍｇ／ｋｇ（１群、ｎ＝５）でのＬＹ２１０９７６１；またはＰＢＳ（ｐＨ７．４）ビヒクル対照（１群、ｎ＝５）のいずれかを投与した。Ａｂ２、汎ＴＧＦβ抗体またはビヒクル対照のいずれかを受ける動物には静脈内に１回投与し（１日目）、ＬＹ２１０９７６１を受けるラットには経口胃管栄養によって１日１回、７日間投与した（７回用量）。動物の体重を投与相の１日目、３日目、および７日目に決定した。動物を８日目に屠殺し、剖検を実施した。
【０３５５】
図１９に示した生存データに示されている通り、Ａｂ２は、他の処置群と比較して低減した毒性を示した。３００ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ５キナーゼ阻害剤ＬＹ２１０９７６１を投与した全ての動物が、試験の３日目、６日目、または７日目に瀕死の状態で屠殺されたまたは死亡しているのが見つかった。２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物のうち２匹が試験の７日目に死亡しているのが見つかった。１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物１匹が試験の６日目に死亡しているのが見つかった。１００ｍｇ／ｋｇまでのＡｂ２を投与した動物は全てが最終的に屠殺するまで生存した。
【０３５６】
さらに、投与相の間の動物の体重をモニターすることによって処置の毒性を評価した。図２０および２１Ａ〜２１Ｃに示されている通り、ＬＹ２１０９７６１を２００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇのいずれかで受けた動物は、試験の過程中、体重の減少を示した。
【０３５７】
動物の臓器重量も死後に評価した。表１１に示されている通り、≧２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物において心臓重量の増加が観察された。≧３０ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物においても心臓重量の増加が観察された。１００ｍｇ／ｋｇまでのＡｂ２を投与した動物では臓器重量に値する影響は観察されなかった。
【表１１】
2019509737.tif 000029
【０３５８】
１００ｍｇ／ｋｇまでのＡｂ２または汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物では肉眼で見える所見は観察されなかったが、２００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１のいずれかを受けた各処置群の動物４匹で異常な形状の胸骨が観察された。３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物１匹で胸腔中の透明な液体（ｆｌｕｉｄ）２．５ｍＬおよび過剰な液体に起因する胸腺の肥大（すなわち、浮腫）が観察され、この動物は試験の３日目に死亡しているのが見つかった。
【０３５９】
表１２に示されている通り、顕微鏡レベルでは、≧２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物は、心臓弁所見（すなわち、弁膜症）を示した。弁膜症は、出血、内皮過形成、混合炎症細胞浸潤、および／または間質過形成に起因して心臓弁が肥厚することを特徴とする（図２３、右上のパネルを参照されたい）。大半の動物は、複数の弁が影響を受けた。さらに、最小〜わずかな混合炎症細胞浸潤、最小の出血、および／またはヘマトキシリン・エオシン染色切片における心房の好塩基性染色の増大をもたらす最小の内皮（心内膜）過形成を含めた心房所見が観察された。心筋所見も観察され、大部分が心臓底部におけるものであり、最小〜わずかな変性／壊死、わずかな出血、および／またはわずかな混合炎症細胞浸潤からなるものであった。３００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物１匹では冠状動脈の炎症を伴うわずかな壊死があった。さらに、２００ｍｇ／ｋｇのＬＹ２１０９７６１を投与した動物２匹では最小の混合炎症細胞浸潤または大動脈根の出血があった。
【表１２】
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【０３６０】
表１３に示されている通り、≧３ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物は、上記の通りＬＹ２１０９７６１を投与した動物に関して記載されているものと同様の心臓弁所見（すなわち、弁膜症）を示した（図２３、左下のパネルも参照されたい）。≧３０ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物は、ＬＹ２１０９７６１を投与した動物に関して記載されているものと同様の心房所見を示した。１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物は、ＬＹ２１０９７６１を投与した動物に関して記載されているものと同様の心筋所見を示し、３０ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物では心筋の出血があった。１００ｍｇ／ｋｇの汎ＴＧＦβ抗体を投与した動物１匹では冠状動脈の出血を伴う中程度の壁内壊死があり、これは、わずかな血管周囲の混合炎症細胞浸潤を伴った。
【表１３】
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【０３６１】
対照的に、１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ２を投与した処置群の動物１匹では、左房室弁の単一の心臓弁リーフレットに最小の混合炎症細胞浸潤があり（図２３、右下のパネルを参照されたい）、これは、発生数が単一であり、また、同時発生的な弁所見がないので、バックグラウンド所見と一致した。したがって、Ａｂ２を用いた処置では、驚いたことに、ＡＬＫ５キナーゼ阻害剤ＬＹ２１０９７６１を用いた処置または汎ＴＧＦβ抗体を用いた処置のいずれと比較しても死亡率の低減および心毒性の低減がもたらされた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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