(57)【要約】  本発明は、化学誘導による細胞を直接リプログラミングする機構、腫瘍細胞のアポトーシスに伴い、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）するを誘導する方法とその小分子組成物、及び当該小分子組成物に基づいて調製された培地と試薬を開示した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学誘導による、腫瘍細胞の様々な程度のアポトーシスに伴い、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング転化又は分化転換する小分子組成物であって、前記組成物は、ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤を含む、又は前記組成物は、ＧＳＫ３β阻害剤とＴＧＦβ阻害剤とからなることを特徴とする小分子組成物。
【請求項２】
前記組成物は、
０．０４６−４．６５重量部、若しくは溶液状態で最終濃度が０．１−１０ｕＭであるＧＳＫ３β阻害剤と、
０．０３８−７．６８重量部、若しくは溶液状態で最終濃度が０．１−２０ｕＭであるＴＧＦβ阻害剤と、を含むことを特徴とする請求項１に記載される組成物。
【請求項３】
前記組成物は、
０．２３２−２．３２５重量部、若しくは溶液状態で最終濃度が０．５−５ｕＭであるＧＳＫ３β阻害剤と、
０．１９２−３．８４重量部、若しくは溶液状態で最終濃度が０．５−１０ｕＭであるＴＧＦβ阻害剤と、を含むことを特徴とする請求項２に記載される組成物。
【請求項４】
前記組成物は
０．０３−６．０重量部、好ましくは０．１５−３重量部、又は溶液状態で最終濃度が０．１−２０ｕＭ、好ましくは０．５−１０ｕＭであるレチノイン酸類化合物をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載される組成物。
【請求項５】
前記組成物は、さらに下記から選択される一つ又は複数の成分：
ＢＭＰ阻害剤：０．０２−４．６５重量部；好ましくは：０．２０３−２．０３重量部；若しくは溶液状態で最終濃度：０．０５−１０ｕＭ；好ましくは０．５−５ｕＭ；
又はＢｒｄＵ：０．１５−３０重量部；好ましくは１．５−１５重量部；若しくは溶液状態で最終濃度：０．５−１００ｕＭ；好ましくは５−５０ｕＭ；
又はＥｄＵ：０．１２５−２５重量部；好ましくは１．２５−１２．５重量部；若しくは溶液状態で最終濃度：０．５−１００ｕＭ；好ましくは５−５０ｕＭ
を含むことを特徴とする請求項１に記載される組成物。
【請求項６】
前記ＧＳＫ３β阻害剤は、ＣＨＩＲ−９９０２１、ＢＩＯ、ＩＭ−１２、ＴＷＳ１１９、１−Ａｚａｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅ、ＣＨＩＲ−９８０１４、Ｔｉｄｅｇｌｕｓｉｂ、ＡＲ−Ａ０１４４１８、ＬＹ２０９０３１４、ＳＢ２１６７６３、ＡＺＤ１０８０などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＧＳＫ３βシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含む；好ましくは、ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１である；
前記ＴＧＦβ阻害剤は、ＳＢ４３１５４２、Ａ８３−０１、ＳＢ５２５３３４、ＬＹ２１０９７６１、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＤ−２０８、ＧＷ７８８３８８、ＳＢ５０５１２４、ＥＷ−７１９７などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＴＧＦβシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含む；好ましくは、ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１である；
前記レチノイン酸類化合物は天然又は人工合成されても良く、レチノイン酸、１３−シスレチノイン酸、９−シスレチノイン酸、イソレチノイン酸などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのレチノイン酸類誘導分化剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含む；好ましくはレチノイン酸である；
前記ＢＭＰ阻害剤は、ＬＤＮ−１９３１８９、Ｋ０２２８８、ＤＭＨ１などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＢＭＰシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含む；好ましくは、ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載される組成物。
【請求項７】
前記組成物は、薬物組成物であって、薬学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含み、
前記担体又は賦形剤は、
水、生理食塩水、リン酸緩衝液または他の水性溶媒；
ＤＭＳＯ、グリセロールおよびエタノールまたは他の有機溶媒；
マイクロスフェア、リポソーム、マイクロエマルションまたは高分子界面活性剤；
コロイドタイプドラッグデリバリーシステム又は高分子ドラッグデリバリーシステム；又は
防腐剤、抗酸化剤、香味剤、芳香剤、可溶化剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、接着剤、充填剤、潤滑剤又は他の薬物賦形剤
を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載される組成物。
【請求項８】
前記組成物から調製できる薬物剤形は、
粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、放出制御製剤およびその他の固形製剤；
注射剤、注入剤、懸濁剤およびその他の液体製剤；
及びガス製剤、または
半固形製剤
を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載される組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一つに記載される組成物が、腫瘍を治療する薬物の研究開発又は調製における応用、又はヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング転換または分化転換することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする培地又は試薬の調製における応用。
【請求項１０】
請求項１−８のいずれか一つに記載される組成物を用いてヒト腫瘍細胞を処理して、それを非腫瘍形成性細胞にリプログラミングすると共に、腫瘍細胞を様々な程度にアポトーシスすることを含むことを特徴とする、腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング転換または分化転換することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする方法。
【請求項１１】
請求項１−８のいずれか一つに記載される組成物、又は当該組成物に基づいて開発し調製される、腫瘍を治療する薬物又は薬物配合；又は当該組成物に基づいて調製される試薬又は培地を含むことを特徴とする、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング転換または分化転換することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスすることに用いられるキット。
【請求項１２】
腫瘍又は腫瘍細胞は、肝臓ガン、肺ガン、胃ガン、結腸直腸ガン、膵臓ガン、乳ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、骨肉腫、リンパ腫、白血病、鼻咽頭ガン、食道ガン、子宮頸ガン、口腔ガン、唾液腺腫瘍、鼻腔と副鼻腔悪性腫瘍、喉頭ガン、耳腫瘍、眼腫瘍、甲状腺腫瘍、縦隔腫瘍、胸壁・胸膜腫瘍、腸腫瘍、胆道腫瘍、膵臓とファーター膨大部腫瘍、腸間膜と後腹膜腫瘍、腎腫瘍、副腎腫瘍、膀胱腫瘍、睾丸腫瘍、陰茎ガン、子宮内膜ガン、卵巣悪性腫瘍、悪性栄養芽腫、外陰ガンと膣ガン、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、軟部組織腫瘍、骨腫瘍、皮膚と付属器腫瘍、悪性黒色素瘤又は神経系腫瘍およびその他の血液系腫瘍和固形腫瘍又はその細胞を含むが、それらに限定されない；好ましくは肝臓ガン又は肝臓ガン細胞であることを特徴とする、請求項１−８のいずれか一つに記載された組成物、請求項９に記載される応用、請求項１０に記載される方法、請求項１１に記載されるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍学、幹細胞リプログラミング、薬学横断分野に属する；更に具体的に、本発明は、小分子組成物で多重標的にヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする方法とかかわる小分子組成物に関する；前記小分子組成物は、薬物担体又は賦形剤の添加により、臨床に腫瘍を治療する薬物又は薬物配方に研究開発・調製させることができる、又は水性溶媒又は有機溶媒、基礎培地又は無血清培地の添加により、試薬又は培地に調製させることができる。
【背景技術】
【０００２】
世界保健機関の報告により、２０１２年において、全世界に１．４１千万新発がん症例があり、ガンで死亡した患者は８２０万である（ＣＡジャーナル《２０１２全世界ガン統計》）；２０１１年中国発ガン人数は３３７万で、死亡人数は２１１万である；毎分に、６．４人がガンに診断され、５人がガンで死亡した；死亡率高い順に並べる結果は、肺ガン、肝臓ガン、胃ガン、食道ガンと結腸直腸ガンである；５年生存率最も低いのは肝臓ガン（１０．１％）、その後は肺ガン（１６．１％）（《２０１５中国腫瘍登録年報》）。したがって、現在、腫瘍の発病率が年々増加している趨勢を呈する。
腫瘍は、様々な分化程度が異なる異常細胞からなり、かつ異質性特徴を有する。現在の放射線療法（Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）、化学療法（Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）、標的療法、生物学的免疫療法、分化を誘導された後に殺滅などの腫瘍治療方法は、いずれも腫瘍細胞の殺滅に焦点を合わせるものであり、臨床実践には、それらの療法は腫瘍異質性を克服できず、かつ治療効果も限界があり、毒性副作用が強い、耐薬性を生じし易い、再発率が高い、５年生存率が低いことを証明した。そして、本分野において、新しい高効率な低毒性抗腫瘍薬物の開発には需要が高まっている、臨床の抗腫瘍治療と患者生存率の向上に新しいルートを提供する。
【０００３】
本発明の革新的な考え方は、腫瘍細胞の殺滅の代わりに、直接それを分化転換して、正常又は非腫瘍形成性細胞に形成したことで、腫瘍異質性を克服できる、かつ高効率な低毒性の新しい治療方法を打ち立てる。
細胞リプログラミング（Ｃｅｌｌ  ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）とは、細胞シグナル経路の調整及びエピジェネティクス（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）修飾の変化によって、細胞を一つのタイプから、他のタイプに転化することである（本発明には、細胞リプログラミングとは、細胞リプログラミングを誘導することである）。細胞リプログラミングは、多能細胞（ｉＰＳＣｓ）のリプログラミングと細胞の直接リプログラミング（分化転換）の誘導を含み、正常細胞のタイプの転化に広く採用された。外部転写因子によって、個別の腫瘍細胞をリプログラミングして、ｉＰＳＣｓになること（その腫瘍形成性も確保）も報告された。本発明は、転写因子を要らずに、化学小分子だけを用いて、腫瘍細胞の直接リプログラミング（分化転換）を誘導・調節して、非腫瘍形成性細胞になると共に、腫瘍細胞をアポトーシスさせる方法であって、従来の文献に開示されないものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的としては、多重標的にヒト腫瘍細胞の直接なリプログラミング（分化転換）を誘導し、非腫瘍形成性細胞になると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする小分子組成物（以下、アポトーシスを伴う腫瘍細胞を分化転換する小分子組成物と略称）とその方法を提供することである；当該小分子組成物に薬物担体又は賦形剤を添加して、腫瘍の臨床治療薬物又は薬物配合を開発・調製してもよい；又は、水性溶媒又は有機溶媒、基礎培地又は無血清培地を添加して、研究用試薬又は培地を調製してもよい。
既に解明された本発明のメカニズムは、主にＧＳＫ３β阻害剤とＴＧＦβ阻害剤との２種類の小分子の組み合わせによって、多重標的に腫瘍細胞のＧＳＫ３β、ＴＧＦβシグナル経路の変化を誘導して、加えてレチノイン酸類又はエピジェネティクスの変化を誘導する化合物の相乗作用により、そして腫瘍細胞のエピジェネティクスの変化を調節して、腫瘍細胞の遺伝子発現プロファイルをリコード（Ｒｅｃｏｄｅ）して、腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換することである；分化転換できない腫瘍細胞は、以上の過程と伴いアポトーシスされた。ある種類腫瘍細胞に対して、ＢＭＰ阻害剤の添加によって、又はＢｒｄＵ或いはＥｄＵの添加によって、ＢＭＰシグナル経路を誘導・調節すると、優れる効果を得られる。注意すべきは、ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤が２種類を含む；同じ機能を有する、又は同じ誘導標的を有する一連の小分子が形成する異なる組み合わせは、いずれも様々な程度に腫瘍細胞の分化転換を誘導でき、かつ様々な程度の腫瘍細胞アポトーシスを伴っている。ＢＭＰ阻害剤とレチノイン酸類化合物の状況も似通っている。したがって、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する、同一のシグナル経路に対して同じ効果する類似の小分子化合物、及びそれが構成する腫瘍細胞を調節して、直接非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導可能な小分子の組み合わせは、いずれも本発明の特許の請求範囲に属する。
【０００５】
「腫瘍形成性」は腫瘍細胞の共通性である；本発明には、異質性が最も強い肝臓ガン細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換することを成功に達成する上に、相次で、膵臓ガン、肺ガン、胃ガン、乳ガン、リンパ腫、神経膠腫などを代表とする様々な腫瘍又は腫瘍細胞を、様々な程度に化学的に誘導して非腫瘍形成性細胞に分化転換して、かつ様々な程度な腫瘍細胞アポトーシスを伴っている。従って、本発明の「小分子組成物によるヒト腫瘍細胞の直接なリプログラミング（分化転換）を誘導し、非腫瘍形成性細胞になると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする方法とかかわる小分子組成物」の対象となるものは、肝臓ガンを代表とする様々な腫瘍又はその細胞であって、すなわち、本発明は、様々な腫瘍細胞を様々な程度に非腫瘍形成性細胞に分化転換でき、かつ様々な程度な腫瘍細胞アポトーシスを伴っている。
【０００６】
本発明の一つは、ヒト腫瘍細胞の直接リプログラミングを化学誘導して、非腫瘍形成性細胞に転化又は分化転換して、かつ様々な程度な腫瘍細胞アポトーシスを伴う小分子組成物（又は配合）を提供して、前記組成物は、ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤を含み、又は前記組成物は、ＧＳＫ３β阻害剤とＴＧＦβ阻害剤とからなる。
【０００７】
好ましい例の一つにおいて、前記組成物は、
０．０４６−４．６５重量部のＧＳＫ３β阻害剤と、
０．０３８−７．６８重量部のＴＧＦβ阻害剤と
を含む。
【０００８】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は溶液状態の組成物にしても良い、
最終濃度０．１−１０ｕＭのＧＳＫ３β阻害剤と、
最終濃度０．１−２０ｕＭのＴＧＦβ阻害剤と、
を含む。
【０００９】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は、
０．２３２−２．３２５重量部のＧＳＫ３β阻害剤と、
０．１９２−３．８４重量部のＴＧＦβ阻害剤と、
を含む。
【００１０】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は溶液状態の組成物にしても良い、
最終濃度０．５−５ｕＭのＧＳＫ３β阻害剤と、
最終濃度０．５−１０ｕＭのＴＧＦβ阻害剤と、
を含む。
【００１１】
好ましい例のもう一つにおいて、組成物の総重量に対して、ＧＳＫ３β阻害剤とＴＧＦβ阻害剤の合計重量が０．０１〜９９．９％を占める；例えば０．１〜５０％（例えば溶液状態で）、又は５０〜９９．９％を占める。更に具体的に、例えば１％、５％、１０％、２０％、３０％などを占める。
【００１２】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／和Ａ８３−０１）の重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００１３】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は、更に
０．０３−６．０重量部、好ましくは０．１５−３重量部のレチノイン酸類化合物を含む。レチノイン酸類化合物の添加によって、アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を促進・増強し、又は適用な腫瘍タイプ又は範囲を拡大できる。
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は溶液状態の組成物にしても良く、レチノイン酸類化合物の最終濃度は０．１−２０ｕＭであって、好ましくは０．５−１０ｕＭである。
【００１４】
好ましい例のもう一つにおいて、組成物の総重量に対して、ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、とレチノイン酸類化合物の合計重量は０．０２〜９９．９％を占める；例えば０．２〜５０％又は５０〜９９．９％を占める。更に具体的に、例えば１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％などを占める。
【００１５】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）とレチノイン酸類化合物（又はレチノイン酸）の重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００１６】
好ましい例のもう一つにおいて、前記所述組成物は、更に以下のグループから選べる一つ又は複数の成分を添加されても良い：
０．０２−４．６５重量部、好ましくは０．２０３−２．０３重量部のＢＭＰ阻害剤（例えばＬＤＮ−１９３１８９）；又は
０．１５−３０重量部、好ましくは１．５−１５重量部のＢｒｄＵ；又は
０．１２５−２５重量部、好ましくは１．２５−１２．５重量部のＥｄＵ。
【００１７】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は、溶液状態の組成物にしても良い、更に以下のグループから選べる一つ又は複数の成分を含む：
最終濃度０．０５−１０ｕＭ、好ましくは０．５−５ｕＭのＢＭＰ阻害剤；
最終濃度０．５−１００ｕＭ、好ましくは５−５０ｕＭのＢｒｄＵ；又は
最終濃度０．５−１００ｕＭ、好ましくは５−５０ｕＭのＥｄＵ。
【００１８】
ＢＭＰ阻害剤（例えばＬＤＮ−１９３１８９）、ＢｒｄＵ又はＥｄＵの添加によって、更にアポトーシスと伴う、一部の悪性腫瘍細胞の分化転換を促進又は増強できる。
【００１９】
好ましい例のもう一つにおいて、組成物の総重量に対して、ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、レチノイン酸類化合物、及び／又はＢＭＰ阻害剤、及び／又はＢｒｄＵ（又は／及びＥｄＵ）の合計重量は０．０２〜９９．９％を占める；例えば０．２〜５０％又は５０〜９９．９％を占める。更に具体的に、例えば１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％などを占める。
【００２０】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＢｒｄＵの重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１５−３０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．５−１５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＥｄＵの重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１２５−２５）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．２５−１２．５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
前記重量部の比の重量単位は、キログラム（ｋｇ）、ミリグラム（ｍｇ）、マイクログラム（ｕｇ）などから選べるいずれか一つの重量単位にしても良い；モル濃度比のモル単位は、モル（Ｍ）、ミリモル（ｍＭ）、マイクロモル（ｕＭ）などから選べるいずれか一つのモル濃度単位にしても良い。
【００２１】
前記組成物を大きな動物と腫瘍病人に適用する際に、専門的変換式で換算した、小動物の使用量に対応する大きな動物と腫瘍病人の有効な使用量（固形若しくは溶液状態の投与量換算も含む）も本発明の特許請求の範囲に属する。
【００２２】
好ましい例のもう一つにおいて、前記ＧＳＫ３β阻害剤は、ＣＨＩＲ−９９０２１、ＢＩＯ、ＩＭ−１２、ＴＷＳ１１９、１−Ａｚａｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅ、ＣＨＩＲ−９８０１４、Ｔｉｄｅｇｌｕｓｉｂ、ＡＲ−Ａ０１４４１８、ＬＹ２０９０３１４、ＳＢ２１６７６３、ＡＺＤ１０８０などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＧＳＫ３βシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない；好ましくは、ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１。
【００２３】
前記ＴＧＦβ阻害剤は、ＳＢ４３１５４２、Ａ８３−０１、ＳＢ５２５３３４、ＬＹ２１０９７６１、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＤ−２０８、ＧＷ７８８３８８、ＳＢ５０５１２４、ＥＷ−７１９７などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＴＧＦβシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない；好ましくは、ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１。
【００２４】
前記レチノイン酸類化合物は天然又は人工合成されても良く、レチノイン酸（全トランスレチノイン酸、ＡＴＲＡ）、１３−シスレチノイン酸、９−シスレチノイン酸、イソレチノイン酸などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのレチノイン酸類誘導分化剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない；好ましくはレチノイン酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＲＡ）。
【００２５】
前記ＢＭＰ阻害剤は、ＬＤＮ−１９３１８９、Ｋ０２２８８、ＤＭＨ１などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのＢＭＰシグナル経路阻害剤若しくは化合物、又はそれらと等効する医薬品、類似物、異性体及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体、又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない；好ましくは、ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９。
【００２６】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物は、薬物組成物であって、薬学的に許容される担体又は賦形剤も含む；その担体又は賦形剤は、水、生理食塩水、リン酸緩衝液または他の水性溶媒；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、グリセロールおよびエタノールまたは他の有機溶媒；マイクロスフェア、リポソーム、マイクロエマルションまたは高分子界面活性剤；コロイドタイプドラッグデリバリーシステム又は高分子ドラッグデリバリーシステム；又は防腐剤、抗酸化剤、香味剤、芳香剤、可溶化剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、接着剤、充填剤、潤滑剤又は他の薬物賦形剤を含むが、それらに限定されない。
【００２７】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物から調製可能な薬物剤形は、固形製剤（粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、放出制御製剤を含むが、それらに限定されない）；液体製剤（注射剤、注入剤、懸濁剤、又は他の液体製剤を含むが、それらに限定されない）；ガス製剤；又は半固形製剤を含むが、それらに限定されない。
【００２８】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物には、水性溶媒又は有機溶媒を添加して、研究用試薬を調和しても良い；基礎培地又は無血清培地を添加して、腫瘍細胞が直接非腫瘍形成性細胞にリプログラミングすることを誘導する培地を調製してもよい、ただし、組成物において、各成分が、５−２０％子牛血清と、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）とを含有する基礎細胞培地、又は様々な細胞因子又は成長因子を含有する無血清培地に存在するが、組成物には、細胞分化基本培地を含まない。
【００２９】
本発明のもう一つは、前記組成物が、腫瘍を治療する薬物（又は薬物配合）の研究開発又は調製における応用、又はヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする培地又は試薬の調製における応用を提供する。
【００３０】
本発明のもう一つは、腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする方法を提供して、前記方法が請求項１−６のいずれか一つの組成物を用いてヒト腫瘍細胞を直接非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導・調節すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスするのを含むことを特徴とする。
【００３１】
好ましい例のもう一つにおいて、アポトーシスに伴い、ヒト腫瘍細胞を分化転換することを誘導する培地又は試薬方法とその試験ステップを提供して、
（１）濃縮液試薬を調和する：請求項１−６のいずれか一つの組成物によって、各成分を有機溶媒又は水性溶媒に溶解して、濃縮液試薬を調和する；好ましくは、前記有機溶媒がジメチルスルホキシドを含む；好ましくは、前記水性溶媒が、水、生理塩水、リン酸塩緩衝液を含む；
（２）培地を得る：ステップ（１）の濃縮液試薬がそれぞれに５−２０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地、又は様々な細胞因子又は成長因子を含む無血清培地に希釈されて（各組分の濃度が、請求項１−６のいずれか一つの組成物に限定される濃度にさせる）、アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する培地を得る；ただし、当該培地の各組分の百分比量は、上下５０％にしても良い；好ましくは上下３０％；より好ましくは上下２０％、例えば１０％、５％；
（３）アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する：腫瘍細胞を、前記ステップ（２）で調和された「アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する培地」に懸濁させ、播種して、処理グループとする；小分子組成物を溶解する処理グループ培地の溶媒（例えばＤＭＳＯ又は他の溶媒）と等量の溶媒を、処理グループが使用する、１０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地（又は含有様々な細胞因子又は成長因子的無血清培地）に添加して、「コントロール培地」（百分数は、ｖ／ｖで）を得る；そして処理グループと相同数の腫瘍細胞を「コントロール培地」に懸濁して、播種して、コントロールグループとする；３７℃で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行う；３−７日毎に一回の継代を行う；
（４）アポトーシスに伴い腫瘍細胞の分化転換を誘導する継代培養：元の培養液を廃棄して、ＰＢＳで一回洗浄して、細胞消化液を加えて、３７℃、１−５分で細胞を消化して、細胞の消化を中止して、遠心して、上澄みを廃棄して、細胞を沈殿した後に再懸濁して、１：１−１：３の比で継代・播種する。試験ステップの（１）と（２）の方法で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行う。使用される消化液は、トリプシン、ＥＤＴＡ、Ａｃｕｔａｓｅ、ＴｒｙｐｌｅＥなどを含む。３−７日毎に一回の継代を行う；
（５）アポトーシスに伴い腫瘍細胞の分化転換を誘導することで正常又は非腫瘍形成性細胞を得る：前記試験ステップ（３）、（４）で、アポトーシスに伴う分化転換で腫瘍細胞を１−４週間に培養や継代・培養して、ＰＢＳで洗浄して、アポトーシス細胞を除去して、分化転換された非腫瘍形成性細胞を得る；
を含む。
【００３２】
本発明のもう一つは、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングすることを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスすることに用いられるキットを提供して、前記キットは、前文に記載されるいずれか一つの組成物；又は当該組成物に基づいて開発・調製される、腫瘍を治療する薬物又は薬物配合；又は当該組成物に基づいて調製される研究用試薬又は培地を含む。
【００３３】
前に述べたように、前記腫瘍又は腫瘍細胞は、肝臓ガン、肺ガン、胃ガン、結腸直腸ガン、膵臓ガン、乳ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、骨肉腫、リンパ腫、白血病、鼻咽頭ガン、食道ガン、子宮頸ガン、口腔ガン、唾液腺腫瘍、鼻腔と副鼻腔悪性腫瘍、喉頭ガン、耳腫瘍、眼腫瘍、甲状腺腫瘍、縦隔腫瘍、胸壁・胸膜腫瘍、腸腫瘍、胆道腫瘍、膵臓とファーター膨大部腫瘍、腸間膜と後腹膜腫瘍、腎腫瘍、副腎腫瘍、膀胱腫瘍、睾丸腫瘍、陰茎ガン、子宮内膜ガン、卵巣悪性腫瘍、悪性栄養芽腫、外陰ガンと膣ガン、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、軟部組織腫瘍、骨腫瘍、皮膚と付属器腫瘍、悪性黒色素瘤又は神経系腫瘍およびその他の血液系腫瘍和固形腫瘍又は其細胞を含むが、それらに限定されない；好ましくは肝臓ガン又は肝臓ガン細胞である。
【００３４】
本文に開示された内容に基づき、当業者にとって、本発明の他の面は自明なことである。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図面１において、小分子（培地６）が、アポトーシスに伴い、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１を非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導することを示した。  Ａ図面において、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、培地６に１０日培養され、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することを誘導され、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；Ｂ図面において、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、培地６に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導されるように、１−１４日の培養におけるアポトーシス統計を示した。図面において、青色柱は、早期（Ｅａｒｌｙ）アポトーシスを表して、赤色柱は、晩期（Ｌａｔｅ）アポトーシスを表す；Ｔ、Ｔ１Ｗ、Ｔ２Ｗは、それぞれに直接処理、１、２週間に処理された肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１のアポトーシス状況を表す。コントロールグループと処理グループとのアポトーシス値は、統計学的な有意差がある（ｐ＜０．０５）。
【図２】図面２において、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、培地４、１に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される。Ａ、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、培地４に８日培養され、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することを誘導され、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；Ｂ、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、培地１に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される。図面において、青色柱は、早期アポトーシスを表して、赤色柱は、晩期アポトーシスを表す；Ｔ、Ｔ１Ｗ、Ｔ３Ｗは、それぞれに直接処理、１、３週間に処理されたアポトーシス検出結果を表す。コントロールグループと処理グループとのアポトーシス値は、統計学的な有意差がある（ｐ＜０．０５）。
【図３】図面３において、５−Ｆｕ耐性肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、培地５、２に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される。Ａ、右図面の処理グループ肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、培地５に、２週間に処理され、分化転換に誘導したあとに、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；Ｂ、肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕ、培地２に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される。図面において、青色柱は、早期アポトーシスを表して、赤色柱は、晩期アポトーシスを表す；Ｔ２、Ｔ３Ｗ、Ｔ４Ｗは、それぞれに２、３、４週間に処理されたアポトーシス検出結果を表す。コントロールグループと処理グループとのアポトーシス値は、統計学的な有意差がある（ｐ＜０．００５）。
【図４】図面４において、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１（培地６）、ＨｅｐＧ２（培地４）、７４０２／５−Ｆｕ（培地５）は、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することに誘導され、かつ正常な肝細胞機能を有する。ＰＡＳ：グリコーゲン染色；オイルレッド：オイルレッド染色、脂肪吸収機能を反映する。
【図５】図面５において、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１（培地１０）、ＨｅｐＧ２（培地１１）、７４０２／５−Ｆｕ（培地１２）は、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することに誘導され、かつ正常な肝細胞の、アルブミン分泌（ＡＬＢ）、尿素生成（Ｕｒｅａ）、ＣＹＰ１Ａ２誘導和ＣＹＰ３Ａ４誘導機能を有する。Ａ、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、培地１０に非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することに誘導され、かつ正常な肝細胞機能を有する；Ｂ、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、培地１１に非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することに誘導され、かつ正常な肝細胞機能を有する；Ｃ、５−Ｆｕ耐性肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、培地１２に非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換することに誘導され、かつ正常な肝細胞機能を有する；Ｔ１Ｗ、Ｔ２Ｗ、Ｔ３Ｗは、それぞれに１、２、３週間に処理されることを表す。Ｒｉｆ：リファンピシン；Ｏｍｅ：オメプラゾール。
【図６】図面６において、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１（培地６）、ＨｅｐＧ２（培地４）と７４０２／５−Ｆｕ（培地５）は、分化転換することに誘導されて得る非腫瘍形成性肝細胞様細胞は、生体内外には、いずれも腫瘍形成性を有しない。Ａ、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１、ＨｅｐＧ２と７４０２／５−Ｆｕは、それぞれに培地６、４、５に分化転換することに誘導されて得る非腫瘍形成性肝細胞様細胞は、生体外の成長にはクローニングを形成しない、生体外には腫瘍形成性を有しない；Ｂ、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は分化転換することに誘導されて得る非腫瘍形成性肝細胞様細胞は、生体内には、腫瘍を生成しない（処理４週間）、生体内の腫瘍形成性を有しない（培地６）。Ｃ、肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは分化転換することに誘導されて得る非腫瘍形成性肝細胞様細胞は、生体内には、腫瘍を生成しない（処理４週間）、生体内の腫瘍形成性を有しない（培地６）；Ｃ図面の上図には、ヌードマウス後ろ足の右側は、処理グループ細胞が腫瘍を形成しない、腫瘍形成性を有しないことを示す；后腿左側のコントロールグループ細胞が腫瘍を形成する；Ｃ図面の下図は、コントロールグループが形成した腫瘍の解剖形状外観を示す。
【図７】図面７において、小分子組み合わせを、生体内の患者肝臓ガン組織のＰＤＸ動物モデル試験に応用する（アポトーシスに伴う分化転換組成物８）。結果は、処理グループの腫瘍組織が壊死して、組織構造は破壊又は喪失された（赤色染色）；コントロールグループの腫瘍組織と細胞構造が変化なし（パープル色染色）（ＰＤＸ−８０８７２）。図面において、４、７、８などの数字がマウスの耳のタグの番号を表す。
【図８】図面８において、正常な人線維芽細胞と肝細胞は、（アポトーシスに伴う分化転換培地８、３に）３週間に処理・培養された後、形態が変化なし、影響されないと示す。
【図９】図面９において、鼻咽頭ガン細胞ＨＮＥと肺ガン細胞Ｈ４６０は、それぞれに培地９、７にアポトーシスに伴い分化転換に誘導される。図９に示すように、鼻咽頭ガン細胞ＨＮＥ（培地９で処理）の処理グループのガン細胞には、分化転換後に、形態は完全に変われ、分化転換されたことを表す；処理グループの肺ガン細胞Ｈ４６０は、（培地９、７に）それぞれに処理され、その中、肺ガン細胞Ｈ４６０は、（培地７に）ほぼ全てアポトーシスに誘導された（図面において、緑色柱は、早期アポトーシスを表して、赤色柱は、晩期アポトーシスを表す；Ｔ１０Ｄ、Ｔ２０Ｄは、それぞれに１０日、２０日に処理されたことを表す）；コントロールグループの肺ガン細胞Ｈ４６０は、ほぼアポトーシスしない。
【図１０】図面１０において、胃ガン細胞ＳＧＣ−７９０１とＭＫＮ２８は、それぞれに分化転換に誘導された（培地１２、１３で２週間処理する）。胃ガン細胞ＳＧＣ−７９０１（培地１２）とＭＫＮ２８（培地１３）は、それぞれに２週間に処理され、処理グループのガン細胞には、分化転換の後に、形態は完全に変われ、分化転換されたことを表す；
【図１１】図面１１において、膵臓ガン細胞ＳＷ１９９０は、分化転換に誘導された（培地１２で２週間処理する）。膵臓ガン細胞ＳＷ１９９０の処理グループのガン細胞には、分化転換の後に、形態は完全に変われ、分化転換されたことを表す；
【図１２】図面１２において、乳ガン細胞ＳＫＢｒ３は、分化転換に誘導された（培地１３で２週間処理する）。乳ガン細胞ＳＫＢｒ３の処理グループのガン細胞には、分化転換の後に、形態は完全に変われ、分化転換されたことを表す；
【図１３】図面１３において、白血病細胞Ｕ９３７、Ｂ細胞リンパ腫ＳＵＤＨＬ−４は、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される（培地１０、１１で１０日処理する）。白血病細胞Ｕ９３７（培地１０）、Ｂ細胞リンパ腫ＳＵＤＨＬ−４（培地１１）の処理グループのガン細胞の大部分は、アポトーシスに誘導され、細胞形態は完全ではない。
【図１４】図面１４において、乳ガン細胞ＳＫＢｒ３と胃ガン細胞ＭＫＮ２８は、分化転換に誘導される（培地１３、１４）。乳ガン細胞ＳＫＢｒ３と胃ガン細胞ＭＫＮ２８は、それぞれに培地１３、１４で２週間処理され、図面１４の右の上図と下図は、処理グループ（Ｔ）のガン細胞には、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した。
【図１５】図面１５において、小分子組み合わせが、大腸ガンＨＣＴ１１６細胞を分化転換したあと、腫瘍形成性を無くすことを誘導した。大腸ガン細胞ＨＣＴ１１６は、培地９で２週間処理され、右図が、大腸ガン細胞ＨＣＴ１１６の処理グループのガン細胞には形態は完全に変われ、かつクローニングを形成しないことを示して、分化転換され、腫瘍形成性を有しないことを示す。
【図１６】図面１６において、小分子組み合わせが、前立腺ガンＰＣ−３細胞を分化転換したあと、腫瘍形成性を無くすことを誘導した。前立腺ガンＰＣ−３細胞は、培地５で２週間処理され、図面１６の右図が、処理グループの膵臓ガンＰＣ−３細胞には、分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、生体外の腫瘍形成性を無くすことを示す。
【図１７】図面１７において、小分子組み合わせが、卵巣ガン細胞ＳＫＯＶ３とＡ２７８０細胞を分化転換したあと、腫瘍形成性を無くすことを誘導した。右側の上図と下図は、それぞれに処理グループの卵巣ガン細胞ＳＫＯＶ３とＡ２７８０には、それぞれに培地７、８で分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くすことを示す。
【図１８】図面１８において、小分子組み合わせが、胃ガン、乳ガン細胞を分化転換したあと、腫瘍形成性を無くした。右側の上図と下図は、それぞれに処理グループの胃ガン細胞ＭＫＮ２８、乳ガン細胞ＳＫｂｒ３には、それぞれに培地１０、１１で２週間処理され、分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くすことを示す。
【図１９】図面１９において、小分子が神経膠腫細胞を分化転換に誘導した後に、形態は完全に変われた。右の上図と下図の処理グループ神経膠腫細胞Ｔ９８Ｇ、Ｕ８７ＭＧは、培地４、５でそれぞれに２週間処理され、それぞれに分化転換に誘導したあとに形態は完全に変われ、分化転換されたことを示す。
【図２０】図面２０において、小分子組み合わせを、生体内の肝臓ガン組織のＰＤＸ動物モデル試験に応用する。左の図面の処理グループの肝臓ガン組織及び細胞は、アポトーシスに伴う分化転換の小分子組成物２１で調和した注射用試薬２１で処理された３週間後に、広域にわたる壊死して、ガン組織構造は、破壊又は喪失された。右の図面の処理グループは、小分子試薬で３週間処理された後に、残留した組織及び細胞が人肝細胞特有のマーカーＨＮＦ４ａを発現して、分化転換の発生を示唆する。
【図２１】図面２１において、小分子組み合わせが、肺ガン細胞を分化転換したあと、生体内外の腫瘍形成性を無くした。Ａは、培地で２週間処理した結果であって、下の図面の処理グループは、肺ガン細胞Ａ５４９、Ｈ１２９９とＨ４６０はそれぞれに培地１４、１３、９で分化転換に誘導された後に、クローニングを形成しなく、生体外の腫瘍形成性をなくしたことを示す；Ｂにおいて、ヌードマウス後ろ足の右側は（青色矢印が指示する）処理グループの分化転換された肺ガン細胞を、ヌードマウス体内に注射した４週間後の状況であり、処理グループが、分化転換された細胞が腫瘍を形成しないことを示して、分化転換に誘導された肺ガン細胞Ａ５４９（培地１４で処理）は、生体内の腫瘍形成性もなくしたことを表す。赤色矢印が指示したのは、未処理肺ガン細胞が形成した腫瘍である。
【図２２】図面２２において、小分子組み合わせが、肺ガン細胞１２９９を分化転換したあと、生体外の腫瘍形成性を無くした。右の図面は、処理グループの肺ガン細胞Ｈ１２９９（培地１５で２週間処理した）は分化転換に誘導されたあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くすことを示す。
【図２３】図面２３において、卵巣ガン細胞Ａ２７８０、ＳＫＯＶ３は、それぞれに分化転換に誘導されたあとに、生体外の腫瘍形成性をなくした。右の上図と下図は、処理グループの卵巣ガン細胞Ａ２７８０（培地１６）、ＳＫＯＶ３（培地１７）は、２週間処理され、分化転換に誘導されたあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くすことを示す。
【図２４】図面２４において、前立腺ガン細胞ＰＣ９は、培地１８で２週間処理され、分化転換に誘導される。右の図の処理グループの前立腺ガン細胞ＰＣ９には、分化転換に誘導されたあとに、細胞形態は完全に変われ、分化転換されたことを示す。
【図２５】図面２５において、胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞は、培地１９、２０でそれぞれに分化転換に誘導された。Ａ図の処理グループは、胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞（培地１９で２週間処理した）を分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、生体外の腫瘍形成性を無くすことを示す。Ｂ図面は、胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞をアポトーシスに誘導した（培地２０で２週間処理）統計結果である。図面において、緑色柱は、早期アポトーシス（Ｅａｒｌｙ）を表して、赤色柱は、晩期アポトーシス（Ｌａｔｅ）を表す；Ｔ１Ｗ、Ｔ２Ｗは、それぞれに１、２週間に処理されたアポトーシス統計を表す；コントロールグループのごく一部は、早、晩期に、自然にアポトーシスした。コントロールグループと処理グループとのアポトーシス値は、統計学的な有意差がある（ｐ＜０．００５）。
【図２６】図面２６において、膵臓ガンＳＷ１９９０細胞は、培地１６で２週間処理され、分化転換に誘導されたあとに、腫瘍形成性をなくして、右の図面の処理グループの膵臓ガンＳＷ１９９０細胞は、分化転換後にクローニングを形成しなく、生体外の腫瘍形成性をなくした。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明人が、徹底的な研究で、小分子組成物を用いてヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導すると共に、腫瘍細胞をアポトーシスする方法とかかわる小分子組成物に関する；前記小分子組成物は、薬物担体又は賦形剤の添加により、臨床に腫瘍を治療する薬物又は薬物配方に開発・調製させることができる、又は水性溶媒又は有機溶媒、基礎培地又は無血清培地の添加により、研究用試薬又は培地に調製させることを明らかにした。当該小分子組成物を用いてヒト腫瘍細胞を直接リプログラミング（分化転換）することを誘導する方法は、まず肝臓ガン細胞に用いられ、肝臓ガン細胞を直接非腫瘍形成性の肝細胞様細胞に分化転換するとともに、様々な程度な肝臓ガン細胞のアポトーシスを伴う；分化転換されて得る肝細胞様細胞が、正常な肝細胞機能を有する；試験テスト範囲に、正常な肝細胞と線維芽細胞を損害しないことを実証した。これに基づき、当該小分子組成物が、更に肺ガン、胃ガン、膵臓ガン、乳ガン、白血病、リンパ腫、神経膠腫などを代表とする様々な腫瘍又は腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換して、かつ様々な程度な腫瘍細胞アポトーシスを伴っている。
【００３７】
基本のメカニズム
化学誘導による細胞の直接リプログラミング（分化転換）とは、遺伝子配列を変化しないままで、細胞シグナル経路及びエピジェネティクスの変化を調節することで、細胞運命を変化させる過程である。
【００３８】
幹細胞科学の発展に伴い、細胞リプログラミングは絶えずに革新して、既に外部から転写因子を導入することでリプログラミングを達成した；今まで、細胞シグナル経路とエピジェネティクスを調節する小分子組み合わせを使用すると、「化学誘導による多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）リプログラミング」（Ｈｏｎｇｋｕｉ  Ｄｅｎｇ等、Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｍｏｕｓｅ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ３４１、６５１−４、  ２０１３）と「化学誘導による細胞の直接リプログラミング」（Ｌｉ  Ｘ、  Ｚｕｏ  Ｘ、  Ｊｉｎｇ  Ｊ、  Ｍａ  Ｙ、  Ｗａｎｇ  Ｊ、  Ｌｉｕ  Ｄ、  Ｚｈｕ  Ｊ、  Ｄｕ  Ｘ、  Ｘｉｏｎｇ  Ｌ、  Ｄｕ  Ｙ、  Ｘｕ  Ｊ、  Ｘｉａｏ  Ｘ、  Ｃｈａｉ  Ｚ、  Ｚｈａｏ、  Ｙ、  Ｄｅｎｇ、  Ｈ．  Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ−Ｄｒｉｖｅｎ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｉｎｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｕｒｏｎｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ．  １７（２）：  １９５−２０３、  ２０１５；Ｈｕ  ＷなどＤｉｒｅｃｔ  Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｉｎｔｏ  Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ．  １７（２）：  ２０４−２１２、  ２０１５）も実現できる；リプログラミングの開始と目的細胞タイプも、分化した細胞を多能性幹細胞にリプログラミングすることから、直接他の分化した細胞にリプログラミングすることに拡大する；乃至、異常細胞（粘液瘤細胞）は外部から導入した転写因子にリプログラミングされて、多能性細胞になたが、その腫瘍形成性を維持できる（  Ｚｈａｎｇ  Ｘ、  Ｃｒｕｚ  ＦＤ、  Ｔｅｒｒｙ  Ｍ、  Ｒｅｍｏｔｔｉ  Ｆ  ａｎｄ  Ｍａｔｕｓｈａｎｓｋｙ  Ｉ．Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｓ  ｖｉａ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ−ｂａｓｅｄ  ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、  ２、  ２２４９-２２６０、  ２０１３）；したがって、小分子のみ使用することで、腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングすることは、可能になる。
【００３９】
【表１】
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【００４０】
細胞のリプログラミングで、複数タイプの正常分化細胞を同一タイプの細胞にリプログラミングする報告された実例（表１）から、開始細胞のタイプは、キーではなく、目的細胞の特有の遺伝子発現プロファイル又は生物学的な行為を構築かつ維持可能、及び開始細胞リプログラミング過程における様々な「能障」を突破可能な誘導因子の組み合わせの選別は、細胞リプログラミングのキーであることが分かられる。
【００４１】
したがって、様々な「能障」を突破でき、目的細胞の特有遺伝子発現プロファイルを構築かつ維持可能な誘導因子又は化合物を見つけられば、異なる胚葉の様々な分化細胞だけではなく、ないし腫瘍細胞も、細胞のリプログラミングで細胞運命の転換を完成することに可能になる。したがって、前記構想に基づき、小分子組み合わせを選別して、腫瘍細胞を対応の非腫瘍形成性細胞（目的細胞）に分化転換することを誘導・調節して、かつ腫瘍細胞の異質性を克服することは、理論的に、実行可能であるものである。
【００４２】
本発明には、まず、異質性最も強い肝臓ガンを突破口とする。正常（非腫瘍形成性）な肝細胞（目的細胞）の特有遺伝子発現プロファイルを構築かつ維持可能、同時に肝臓ガン細胞から正常な肝細胞に分化転換する過程における様々な“能障”を突破できる小分子組み合わせを選別して、様々な程度な肝臓ガン細胞アポトーシスに伴う、小分子で肝臓ガン細胞から非致瘤肝細胞に分化転換することを誘導する方法のプラットフォームを構築する；当該革新方法は、以下のメリットを有する：１、小分子の性質が安定であって、作用の時間、投与量と組み合わせ方式は制御しやすい、作用効果は安定性・信頼性がある；２、分化転換された肝細胞様細胞は、正常な成熟ヒト肝細胞の機能を有することではなく、かつ生体内外には腫瘍形成性を有しない；3、当該方法は、肝臓ガン細胞を有力的に分化転換して、かつ正常肝細胞及び線維芽細胞に対する損害がない；腫瘍細胞の殺滅には殺細胞試薬の協力は不要だから、正常の組織細胞に対する無差別殺滅という副作用を避ける；4、外部遺伝子の導入又は細胞遺伝子構造の変化は不要だから、外部遺伝子導入又は遺伝子変化に引かれる新しい発癌リスクを避けるから、安全性・信頼性がある；5、当該方法は、化学誘導による直接リプログラミングして、誘導多能幹細胞（ｉＰＳＣ）にリプログラミングする必要がない、幹細胞の発癌リスクを避ける。
【００４３】
当該方法は、発病原因及び発病機構が複雑、異質性が強いかつ有効な治療手段を欠く人体肝臓ガンの制御又は有効な治療には重要な意義がある。それだけではなく、一層の研究結果によると、当該小分子組成物は、腫瘍細胞の様々な程度アポトーシスに伴い、鼻咽頭ガン、肺ガン、胃ガン、結腸直腸ガン、膵臓ガン、乳ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、骨肉腫、リンパ腫、白血病およびその他の血液系腫瘍と固形腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導することには、同様又は類似な効果を有する。したがって、前記一連の試験結果が、本発明人は、小分子組み合わせで、分化転換出来ない腫瘍細胞のアポトーシスに伴い、多重標的に腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）することを誘導したことを検証した。この構想と方案は、成功し、効果的である。
【００４４】
薬物組成物とその応用
本発明人が、広い研究を通じ、初めて、様々な程度にＧＳＫ３βとＴＧＦβシグナル経路を同時に抑制することで、腫瘍細胞のアポトーシスに伴い、腫瘍細胞の分化転換を誘導することを開示した。腫瘍細胞の異質性の個体差又は腫瘍細胞株同士の差により、分化転換に誘導された腫瘍細胞と、アポトーシスに誘導された腫瘍細胞の数の割合も変化している；分化転換に偏る場合もあり、アポトーシスに偏る場合もある；同時にＧＳＫ３βとＴＧＦβシグナル経路を抑制するものは、アポトーシスに偏って、分化転換が不徹底である。
【００４５】
ＧＳＫ３βとＴＧＦβシグナル経路を抑制するとともに、レチノイン酸（ＲＡ）系化合物の協調作用を結合すると、腫瘍細胞の様々な程度のアポトーシスに伴い、小分子組成物が腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導することを強められる。更に、ＢＭＰシグナル経路のダウンと結合すると、及び／又はＢｒｄＵ（又は／及びＥｄＵ）と結合すると、さらに、腫瘍細胞のアポトーシスに伴う、ある悪性より強い腫瘍細胞の分化転換を増強又は促進できる。腫瘍の異質性は差があるから、小分子組み合わせによる分化転換とアポトーシスの割合も異なるが、当該小分子組み合わせで、腫瘍細胞のアポトーシスに伴う、腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導する最終効果に影響を及ぼさない。したがって、当該小分子組成物を抗腫瘍治療の新薬物又は薬物配合に開発する潜在力がある；かつ、腫瘍細胞のアポトーシスに伴い、化学誘導による腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングする研究用培地又は試薬に直接調製できる。
【００４６】
理解すべきことは、本発明の実施例中における挙げられた具体的なＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＢＭＰ阻害剤以外の、他のＧＳＫ３βシグナル経路、ＴＧＦβシグナル経路、ＢＭＰシグナル経路を抑制可能な、同じ標的を誘導・調節する、又は同じ機能を有する同種類の阻害剤も同様な技術効果を達成できて、本発明の範囲に含まれるべきである。
【００４７】
同様に、本発明の実施例中における挙げられた具体的なレチノイン酸（ＲＡ）誘導分化剤以外の、他の同じ機能を有する、又は同じ標的を誘導・調節するレチノイン酸類化合物も、同様な技術効果を達成できて、本発明の範囲に含まれるべきである。
本明細書で使用されるように、用語「含む」または「有する」は、「含む」、「基本的に〜からなる」および「からなる」を含む。
【００４８】
本明細書で使用されるように、用語「基本的に〜からなる」とは、組成物において、必要成分又は必要組分を含有すること以外、さらに少量かつ有効成分に影響を及ぼさない次要成分及び／又は不純物を含有してもよいことである。例えば、甘味料を含有することで、味を改善してもよく、抗酸化剤を含有することで、酸化を防止してもよく、その他の本分野に良く用いられる薬物添加剤、担体、賦形剤を含有してもよい。
【００４９】
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」成分は、ヒト及び／又は動物に適用、過度の不良な副反応（例えば毒性、刺激とアレルギー反応）がないもので、すなわち合理な利益／リスク比がある物質である；例えば、本分野に良く用いられる薬物担体又は賦形剤。
【００５０】
本明細書で使用されるように、用語「有効量」とは、人及び／又は動物に、機能できる又は活性を有する、かつ人及び／又は動物に許容される量である。
【００５１】
本明細書で使用されるように、用語「薬学的に許容される担体又は賦形剤」には、担体とは、薬物が人体に進入する方式と生体内の分布を変化し、薬物の釈放速度を制御し、かつ薬物をターゲット器官へ輸送できる体系である；薬物担体自身は、必要な活性成分ではなく、かつ応用された後に、過分の毒性を有しない。適当な担体は、当業者に熟知され、水、塩水、リン酸緩衝液及びその他の水性溶媒；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、グリセリンとエタノール及びその他の有機溶媒；マイクロスフェア、リポソーム、マイクロエマルション、高分子界面活性剤；コロイドタイプドラッグデリバリーシステム、新型高分子ドラッグデリバリーシステム、新型薬物担体及びその他の薬学的な担体を含むが、それらに限定されない；ただし、賦形剤とは、薬物制剤中には、主な薬物以外の追加物であり、補助原料ともいう。例えば、錠剤中における接着剤、充填剤、崩解剤、潤滑剤；漢方薬の丸剤中における酒、酢、薬汁等；半固体調製軟膏、クリームの基質部分；液体制剤中における防腐剤、抗酸化剤、香味剤、芳香剤、溶解補助剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整剤、着色剤などは、賦形剤と呼ばれてもよい。
【００５２】
賦形剤に対する一般的な要望は、安定な性質を有して、主な薬物と相容れないことがない、副作用を生じない、治療効果に影響を及ぼさない、常温で変形、ひび割れ、カビ、虫食いが発生しにくい、人体に無害して、生理的な作用がない、主な薬物と化学又は物理的に反応しない、主な薬物に対する含量の測定に影響を及ぼさないなどである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．、Ｎ．Ｊ．  １９９１）には、薬学的に許容される担体又は賦形剤に関する十分な検討を見つけられる。その担体又は賦形剤は、水、塩水、リン酸緩衝液などの水溶液；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、グリセリンとエタノールとなどの有機溶媒；マイクロスフェア、リポソーム、マイクロエマルション、高分子界面活性剤；コロイドタイプドラッグデリバリーシステム、新型高分子ドラッグデリバリーシステム、新型薬物担体及びその他の薬学的な担体；液体制剤における防腐剤、抗酸化剤、香味剤、芳香剤、可溶化剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、錠剤における接着剤、充填剤、潤滑剤及びその他の薬物賦形剤などを含むが、それらに限定されない。
【００５３】
本明細書で使用されるように、用語「組成物に基づいて調製できる薬物剤形」における薬物剤形とは：治療又は予防の需要に応じて、調製された薬物の応用形式は、薬物剤形と呼ばれる；本発明のいずれの一つの組成物に基づいて調製できる薬物剤形は、粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、放出制御製剤およびその他の固形製剤；注射剤、注入剤、懸濁剤およびその他の液体製剤、及びガス製剤、半固形製剤などの他の製剤を含むが、それらに限定されない。
【００５４】
本明細書で使用されるように、「重量部」又は「重量部数」は、交換可能に使用されてもよく、前記重量部は、一定なマイクログラム、ミリグラム、グラムまたはキログラムで表される重量のいずれ一つであって良い（例えば１ｕｇ、１ｍｇ、１ｇ、２ｇ、５ｇ、又はｋｇなど）。例えば、１重量部の組分ａと９重量部の組分ｂからなる組成物は、１グラムの組分ａ＋９グラムの組分ｂからなる組成物にしても良く、或いは１０グラムの組分ａ＋９０グラムの組分ｂからなる組成物などにしても良い。前記組成物には、ある組分の百分数含量＝（当該組分の重量部数／全ての組分の重量部数の和）×１００％。したがって、１重量部の組分ａと９重量部の組分ｂからなる組成物において、組分ａの含有量は１０％で、組分ｂの含有量は９０％である。
【００５５】
また、溶液状態で、前記「重量部」は、「モル数」に換算されても良い；「重量部の比」は、「モル濃度比」に換算されても良い。前記重量部の比の重量単位は、キログラム（ｋｇ）、ミリグラム（ｍｇ）、マイクログラム（ｕｇ）などから選べるいずれも一つの重量単位にしても良い；モル（濃度）比のモル単位は、モル（Ｍ）、ミリモル（ｍＭ）、マイクロモル（ｕＭ）などから選べるいずれも一つのモル濃度単位にしても良い；
好ましい例の一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／和Ａ８３−０１）は、重量部の比で、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）の範囲にある；又はモル比で、（０．１−１０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００５６】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）とレチノイン酸類化合物（又はレチノイン酸）は、重量部の比で、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）の範囲にある；又はモル比で、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００５７】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＢｒｄＵの重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１５−３０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．５−１５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
【００５８】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＥｄＵは、重量部の比で、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１２５−２５）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．２５−１２．５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比で、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
【００５９】
本発明の好ましい方式として、前記組成物において、含まれる成分とその重量部の比又はモル濃度比は、表２と表３（溶液状態の組成物）に示された。
【００６０】
【表２】
2019502671.tif 000003
【００６１】
【表３】
2019502671.tif 000004
【００６２】
表１と表２の配合の範囲は、参照ガイドとして使用できる。理解すべきことは、薬物組成物の開発・調製に用いられる際に、使用される組成物の有効な用量は、投与したモードと、治療しようとする腫瘍の種類、及び疾病の重症度に応じて変化できる。かつ、生体内に使用される際に、一般的に、「重量／キログラム（体重）」を、投与量の単位として使用する；前記小分子組成物を大きな動物と腫瘍病人に適用する際に、専門的変換式で換算した、小動物の使用量を対応する大きな動物と腫瘍病人の有効な使用量（固形若しくは溶液状態の投与量換算も含む）も本発明の特許請求の範囲に属する。
【００６３】
本発明に使用されるように、前記「ＧＳＫ３β阻害剤」とは、細胞におけるＧＳＫ３βシグナル経路を抑制できる阻害剤の総称であり、ＣＨＩＲ−９９０２１、ＢＩＯ、ＩＭ−１２、ＴＷＳ１１９などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプＧＳＫ３βシグナル経路阻害剤を含むが、それらに限定されない：
ＣＨＩＲ−９９０２１（ＣＴ９９０２１）は、ＧＳＫ−３αとβ阻害剤であり、ＩＣ５０それぞれに１０ｎＭと６．７ｎＭであり、ＣＤＣ２、ＥＲＫ２およびその他のキナーゼに対する抑制性よりも５００倍強いである；
ＣＨＩＲ−９９０２１（ＣＴ９９０２１）ＨＣｌは、ＣＨＩＲ−９９０２１の塩酸塩で、ＧＳＫ−３α／β阻害剤であり、無細胞試験中におけるＩＣ５０は１０ｎＭ／６．７ｎＭであり、ＧＳＫ−３と、それと最も近いホモログＣｄｃ２とＥＲＫ２との区別に用いられる；
ＢＩＯは、特異性のＧＳＫ−３阻害剤であり、無細胞試験中には、ＧＳＫ−３α／βに作用したＩＣ５０は５ｎＭである；
ＩＭ−１２は、選択性のＧＳＫ−３β阻害剤であり、そのＩＣ５０は５３ｎＭであり、Ｗｎｔシグナル経路を増強した；
ＴＷＳ１１９は、ＧＳＫ−３β阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０は３０ｎＭである；
１−Ａｚａｋｅｎｐａｕｌｌｏｎｅは、高い選択性があるＧＳＫ−３β阻害剤であり、ＩＣ５０は１８ｎＭである；
ＣＨＩＲ−９８０１４は、有効的なＧＳＫ−３α／β阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０は０．６５ｎＭ／０．５８ｎＭである；
Ｔｉｄｅｇｌｕｓｉｂは、不可逆的な、非ＡＴＰ競争性のＧＳＫ−３β阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０は６０ｎＭである；
ＡＲ−Ａ０１４４１８は、ＡＴＰ競争性と選択性があるＧＳＫ３β阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０とＫｉは、１０４ｎＭと３８ｎＭである；
ＬＹ２０９０３１４は、有効的なＧＳＫ−３阻害剤であり、ＧＳＫ−３α／βに作用して、ＩＣ５０は１．５ｎＭ／０．９ｎＭである；
ＳＢ２１６７６３は、有効的な、選択性のＧＳＫ−３α／β阻害剤であり、ＩＣ５０は３４．３ｎＭである；
ＡＺＤ１０８０は、経口で生物有効的な、選択性の、脳を透き通られるＧＳＫ３阻害剤であり、ヒトＧＳＫ３αとＧＳＫ３βを抑制して、Ｋｉそれぞれには６．９ｎＭと３１ｎＭであり、ＣＤＫ２、ＣＤＫ５、ＣＤＫ１とＥｒｋ２に対する選択性よりも１４倍以上高いである。
【００６４】
本発明の好ましい方式として、前記ＧＳＫ３β阻害剤はＣＨＩＲ−９９０２１であり、その異名はＣＴ９９０２１である；その分子構造式は、以下の式（Ｉ）に示すように：
【化１】
2019502671.tif 000005
【００６５】
本発明に使用されるように、前記「ＴＧＦβ阻害剤」とは、細胞におけるＴＧＦβシグナル経路を抑制できる阻害剤の総称であり、ＳＢ４３１５４２、Ａ８３−０１、ＳＢ５２５３３４、ＬＹ２１０９７６１、ＲｅｐＳｏｘなどを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプＴＧＦβシグナル経路阻害剤を含むが、それらに限定されない：
ＳＢ−４３１５４２は、有効的な、選択性のＡＬＫ５阻害剤であり、ＩＣ５０は９４ｎＭであり、ｐ３８、ＭＡＰＫおよびその他のキナーゼに対する抑制性よりも１００倍強いである；
Ａ８３−０１は、ＡＬＫ５、ＡＬＫ４とＡＬＫ７の阻害剤であり、ＩＣ５０それぞれには１２、４５と７．５ｎＭである；
ＳＢ５２５３３４は、有効的な、選択性のＴＧＦβ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉ（ＡＬＫ５）阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０は１４．３ｎＭであり、ＡＬＫ４に作用する際に、ＡＬＫ５に作用する効果よりも４倍低い、ＡＬＫ２、３、と６に対する活性がない；
ＬＹ２１０９７６１は、新しい、選択性のＴＧＦ−β  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｉ／ＩＩ  （ＴβＲＩ／ＩＩ）二重阻害剤であり、無細胞試験中には、Ｋｉそれぞれには３８ｎＭと３００ｎＭである；
ＲｅｐＳｏｘは、有効的な、選択性のＴＧＦβＲ−１／ＡＬＫ５阻害剤であり、ＡＴＰとＡＬＫ５の結合及びＡＬＫ５自己リン酸化に作用して、無細胞試験中にはＩＣ５０それぞれには２３ｎＭと４ｎＭである。
ＳＤ−２０８は、選択性のＴＧＦ−βＲＩ（ＡＬＫ５）阻害剤であり、ＩＣ５０は４８ｎＭであり、選択性は、ＴＧＦ−βＲＩＩよりも１００倍以上高いである；
ＧＷ７８８３８８は、有効的な、選択性のＡＬＫ５阻害剤であり、無細胞試験中には、ＩＣ５０は１８ｎＭであり、ＴＧＦ−βＩＩ型受容体とａｃｔｉｖｉｎ  ＩＩ型受体の活性を抑制するが、ＢＭＰ  ＩＩ型受容体を抑制しない；
ＳＢ５０５１２４は、選択性のＴＧＦβＲ阻害剤であり、ＡＬＫ４とＡＬＫ５に作用して、無細胞試験中にはＩＣ５０それぞれには１２９ｎＭと４７ｎＭであり、ＡＬＫ７も抑制するが、ＡＬＫ１、２、３又は６を抑制しない；
ＥＷ−７１９７は、高効率的な、選択性の、経口で生物有効的なＴＧＦ−β  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＡＬＫ４／ＡＬＫ５阻害剤であり、ＩＣ５０それぞれには１３ｎＭと１１ｎＭである。
【００６６】
本発明の好ましい方式として、前記ＴＧＦβ阻害剤はＳＢ  ４３１５４２である（ＳＢ−４３１５４２とも言う）；その分子構造式は、以下の式（ＩＩ）のように示す。
【化２】
2019502671.tif 000006
【００６７】
本発明の好ましい方式として、前記ＴＧＦβ阻害剤はＡ８３−０１であり（Ａ８３０１ともいう）；その分子構造式は、以下の式（ＩＩＩ）のように示す。
【化３】
2019502671.tif 000007
【００６８】
本発明に使用されるように、前記レチノイン酸類（ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）化合物が、レチノイン酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＲＡ）、異名：全トランスレチノイン酸（ａｌｌ  ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＡＴＲＡ）；１３−シスレチノイン酸（１３−ｃｉｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、１３−ＣＲＡ）、９−シスレチノイン酸（９−ｃｉｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、９−ＣＲＡ）  などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプのレチノイン酸類誘導分化剤若しくは化合物、又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない。
【００６９】
レチノイン酸類（ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）化合物は、細胞の増殖、分化と細胞の生理性アポトーシス（  ａｐｏ  ｐｔｏｓｉ  ｓ）を調節する機能を有して、対応のレチノイン酸核受容体（ｒｅｔｉｎｏｉｅ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、  ＲＡＲ）とレチノイン酸Ｘ核受容体（ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｘ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＲＸＲ）蛋白を活性化でき、レチノイン酸応答因子（  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｐｏ  ｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＲＡＲＥ）との特異性結合により、特定の核遺伝子の転写活性を調節して、生物学的な効果を産生する。レチノイン酸類化合物とその異性体誘導体における大量は、同様又は類似の機能を有するから、大切な誘導分化剤若しくは化合物になる。
レチノイン酸類（ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）化合物は、一組のビタミンＡ（レチノール）の酸化代謝産物又は誘導体、及びビタミンＡと類似する構造を有する人工合成物であって、天然と合成の両種類がある。主に、レチノイン酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＲＡ）（異名：ビタミンＡ酸、全トランスレチノイン酸）、１３−シスレチノイン酸（１３−ｃｉｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、１３−ＣＲＡ）、アシトレチンエステル、９−シスレチノイン酸（９−ｃｉｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、９−ＣＲＡ）、ＵＡＢ７、ＵＡＢ８、イソレチノイン酸（Ｉｓｏｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、フェンレチニド（Ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）、アシトレチン（Ａｃｉｔｒｅｔｉｎ）、エトレチネート（Ｅｔｒｅｔｉｎａｔｅ）、タザロテン（Ｔａｚａｒｏｔｅｎｅ）、アダパレン（Ａｄａｐａｌｅｎｅ）、ＴＴＮＰＢ、３−メチル−ＴＴＮ  ＰＢ、ＡＭ８０、ＡＭ５８０、ＣＤ４３７、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ、ＬＧＤ１０６９およびその他の同じ機能を有するレチノイン酸類化合物を含む。その中に、ＲＡ又はＡＴＲＡ、ＴＴＮＰＢ、ＡＭ８０とＡＭ５８０は、ＲＡＲの特異性アゴニストである；ＬＧＤ  １０６９とＳＲ  １１２３７は、ＲＸＲの特異性アゴニストである；９−ＣＲＡと３−甲基−ＴＴＮＰＢがこれらの両種類の受容体タンパクを刺激でき、パンアゴニストに属する。
本発明の好ましい方式として、前記レチノイン酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＲＡ）、異名は全トランスレチノイン酸（ａｌｌ  ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、ＡＴＲＡ）、ビタミンＡ酸、ビタミンＡ酸、ビタミンギ酸、レチン酸、全トランスビタミンＡ酸、ビタミンＡギ酸の分子構造式は、以下の式（ＩＶ）のように示す。
【化４】
2019502671.tif 000008
【００７０】
本発明に使用されるように、前記「ＢＭＰ阻害剤」とは、細胞におけるＢＭＰシグナル経路を抑制できる阻害剤の総称であり、ＬＤＮ−１９３１８９、ＬＤＮ１９３１８９  ＨＣｌ、Ｋ０２２８８、ＤＭＨ１などを代表とする、同じ機能、又は同じ誘導標的を有する同じタイプＢＭＰシグナル経路阻害剤を含むが、それらに限定されない：
ＬＤＮ−１９３１８９は、選択性のＢＭＰシグナル経路阻害剤であり、ＢＭＰ  Ｉ型受容体ＡＬＫ２とＡＬＫ３の転写活性を抑制して、Ｃ２Ｃ１２細胞には、ＩＣ５０それぞれには５ｎＭと３０ｎＭであり、ＢＭＰに作用する際に、ＴＧＦ−βに作用する際の選択性よりも２００倍高いである。Ｃａｓ：１０６２３６８−２４−４；
ＬＤＮ１９３１８９  ＨＣｌは、ＬＤＮ１９３１８９の塩酸塩であり、選択性のＢＭＰシグナル阻害剤であり、ＢＭＰ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＡＬＫ２とＡＬＫ３の転写活性を抑制できて、Ｃ２Ｃ１２細胞には、ＩＣ５０それぞれには５ｎＭと３０ｎＭであり、かつＢＭＰに対する選択性は、ＴＧＦ−βに対する選択性の２００倍である。
【００７１】
Ｋ０２２８８は、高い選択性のＩ型ＢＭＰ受容体阻害剤であり、ＡＬＫ２、ＡＬＫ１とＡＬＫ６に対するＩＣ５０それぞれには１．１、１．８、６．４ｎｍであり、その他のＡＬＫＳ（３、４、５）とＡｃｔＲＩＩａに対して、軽微な抑制作用を有する。
【００７２】
ＤＭＨ１は、選択性のＢＭＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ阻害剤であり、ＡＬＫ２を抑制して、ＩＣ５０は１０７．９ｎＭであり、ＡＭＰＫ、ＡＬＫ５、ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ−２）とＰＤＧＦＲに対する抑制効果がない。
【００７３】
本発明の好ましい方式として、前記ＢＭＰ阻害剤はＬＤＮ−１９３１８９である（ＬＤ−Ｎ１９３１８９とも言う）；その分子構造式は、以下の式（V）のように示す。
【化５】
2019502671.tif 000009
【００７４】
本発明に使用されるように、前記ＢｒｄＵのフルネームは５−ブロモデオキシウリジンであり、異名は５−ブロモ−２’−デオキシウリジン；５−ブロモ−２−デオキシウリジン；５−ブロモ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノース）ウラシル；５−ブロモデオキシウリジンであり；英語名称は、５−Ｂｒｏｍｏ−２”−Ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅである；略称は、ＢｒｄＵ又は５−ＢｒｄＵである。異名は、５−Ｂｒｏｍｏ−２−ｄｅｏｘｙＵｒｉｄｉｎｅ  ；  Ｂｒ−ｄＵ；  ＢＵｄＲ；５−Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ；Ｂｒｄｕである；チミンの誘導体だけではなく、チミジン類似体であり、チミンの代わりにＤＮＡ合成段階（Ｓ期）にわたり活体注射又は細胞培養で加入され、その後、抗Ｂｒｄｕモノクローナル抗体によるＩＣＣ染色して、増殖細胞を示す。一般的に、細胞マーカーとして使用されるが、最新の研究が、それは新しい機能を有することを解明した。
【００７５】
本発明の好ましい方式として、ＢｒｄＵの分子構造式は、以下の式（ＶＩ）のように示す。
【化６】
2019502671.tif 000010
【００７６】
本発明に使用されるように、前記ＥｄＵの名称は、５−エチニル−２’−デオキシウリジンである；異名は、５−エチニル−２−デオキシウリジン；５−エチニル−２’−デオキシウリジン；エチニル−デオキシウリジンである；英語名称は、５−Ｅｔｈｙｎｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅであり、略称はＥｄＵである；異名は、ＥＹｄＵ；Ｕｒｉｄｉｎｅ；５−Ｅｔｈｙｎｙｌ−ｄｕｒｄ；５−Ｅｔｈｙｎｙｌ−２’−ｄＵ；２’ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ；５−ｅｔｈｙｎｙｌ；２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｅｔｈｙｎｙｌｕｒｉｄｉｎｅ；２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｅｔｈｙｎｙｌ−ｕｒｉｄｉｎである；ＥｄＵは、新たらしいチミジン類似体であり、分裂している細胞に加えられる。投与量が高い場合に、細胞毒性がある。ＥｄＵは、蛍光アジ化物の一つに検出され、後者は、クリックケミストリーで前者と共价結合を形成する。よく用いられるブロモデオキシウリジンのようにではなく、ＥｄＵは、熱又は酸の処理がない場合にも、検出できる。一般的に、細胞マーカーとして使用されるが、最新の研究が、それは新らしい機能を有することを解明した。
【００７７】
本発明の好ましい方式として、ＥｄＵの分子構造式は、以下の式（ＶＩＩ）のように示す。
【化７】
2019502671.tif 000011
【００７８】
本発明は、更に前記化合物I、II又はIII、IV、V、VI又はVIIと等効する化合物、医薬品、類似物及び／又はその塩、水和物若しくは前駆体も含む；その自然生成と人工合成の化合物も含む。
【００７９】
前記化合物の類似物は、前記化合物の異性体、ラセミートを含むが、それらに限定されない。化合物は、一つと以上の非対称センターを有する。したがって、これらの化合物は、ラセミート混合物、単独のエナンチオマー、単独のジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、シスまたはトランス異性体として存在してもよい。
【００８０】
前記「塩」は、（１）塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などのような無機酸と形成した塩；（２）酢酸、蓚酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、アルギニンなどのような有機酸と形成した塩を含むが、これらに限定されない。他の塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属（例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウム）と形成した塩などを含む。
【００８１】
「化合物の前駆体」とは、適切な方法によって投与または処理されたあとに、当該化合物の前駆体が、培地、又は動物、又は人体内において、前記いずれ一つの化合物に転換できる化合物の一つであり、又は前記化合物のいずれ一つの化合物が組成する塩又は溶液を指す。
【００８２】
本発明の組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／和Ａ８３−０１）は、重量部の比で、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比で、（０．１−１０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００８３】
当該小分子組成物は、様々な程度な腫瘍細胞アポトーシスを伴い、ヒト腫瘍細胞の直接リプログラミングを化学誘導して、非腫瘍形成性細胞に転化することに用いられるが、当該組成物が、腫瘍細胞のアポトーシスの誘導に偏り、腫瘍細胞を転化する機能はやや弱い；
【００８４】
本発明の好ましい方式として、前記組成物は、更にレチノイン酸類化合物：０．０３−６．０  重量部；好ましくは：０．１５−３．０  重量部；若しくは溶液状態で、モル最終濃度は：０．１−２０ｕＭ；好ましくは０．５−１０  ｕＭを含む；前記成分の添加が、腫瘍細胞の転化又はアポトーシスを促進と増強出来て、かつ適用する腫瘍タイプ又は範囲を拡大した。
【００８５】
前記成分を添加された組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）とレチノイン酸類化合物（又はレチノイン酸）の重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）の範囲にある。
【００８６】
本発明の前記組成物において、更に下記から選択される一つ又は二つの成分を添加してもよい：ＢＭＰ阻害剤  ＬＤＮ−１９３１８９：０．０２−４．６５  重量部；好ましくは：０．２０３−２．０３  重量部。又は溶液状態で最終濃度：０．０５−１０ｕＭ；好ましくは０．５−５ｕＭ；又は／及びＢｒｄＵ、又は／及びＥｄＵ：０．１５−３０  重量部（ＢｒｄＵ）、０．１２５−２５重量部（ＥｄＵ）；好ましくは：１．５−１５  重量部（ＢｒｄＵ）、１．２５−１２．５（ＥｄＵ）；又は溶液状態で最終濃度：０．５−１００ｕＭ（ＢｒｄＵ又はＥｄＵ）；好ましくは５−５０ｕＭ（ＢｒｄＵ又はＥｄＵ）；前記成分の添加で、さらにある極度悪性の腫瘍細胞の分化転換又はアポトーシスを誘導することを促進又は増強できる。
【００８７】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＢｒｄＵの重量部の比は、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１５−３０）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．５−１５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比は、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）の範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
【００８８】
好ましい例のもう一つにおいて、前記組成物において、ＧＳＫ３β阻害剤（例えばＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１）、ＴＧＦβ阻害剤（例えばＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）、レチノイン酸類化合物（例えばレチノイン酸）、ＢＭＰ阻害剤（例えばＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９）とＥｄＵは、重量部の比で、（０．０４６−４．６５）：（０．０３８−７．６８）：（０．０３−６．０）：（０．０２−４．６５）：（０．１２５−２５）の範囲にある；好ましくは、（０．２３２−２．３２５）：（０．１９２−３．８４）：（０．１５−３）：（０．２０３−２．０３）：（１．２５−１２．５）の範囲にある；若しくは溶液状態で、モル比で、（０．１−１０）：（０．１−２０）：（０．１−２０）：（０．０５−１０）：（０．５−１００）範囲にある；好ましくは、（０．５−５）：（０．５−１０）：（０．５−１０）：（０．５−５）：（５−５０）の範囲にある。
【００８９】
本発明の前記組成物の製剤は、限定されなく、哺乳類の使用に適した任意の剤形であってもよい；調製できる製剤は、粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、放出制御製剤およびその他の固形製剤；注射剤、注入剤、懸濁剤およびその他の液体製剤、及びガス製剤、半固形製剤などの他の製剤を含む。好ましくは、前記製剤は、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、徐放剤、錠剤などの固形製剤又は注射剤、注入剤、溶液剤、懸濁液などの液体製剤にしても良い。
【００９０】
本発明の組成物を調製する方法は、調製したい剤形および投与経路に応じて決定され、当業者は、本発明が提供した組み合わせおよび比率を参照した後、従来の薬物組成物の調製方法を使用して、本発明の組成物を調製することができる。
【００９１】
理解すべきことは、特定の実施形態では、発明者がいくつかの組成物形態を挙げられるが、本発明の他の任意の組み合わせが同じ顕著な効果を有する。
【００９２】
本発明人が、はじめて本発明の小分子組成物は、腫瘍を予防、改善又は治療する薬物又は薬物配合を開発・調製することに用いられることを実証した。腫瘍の予防、改善又は治療に用いられる際に、使用する組成物の有効な用量は、投与モードと、治療しようとする腫瘍の種類、及び疾病の重症度に応じて変化できる。特定の状況は、熟練した医師または薬剤師によって判断される範囲内にある被験者の個々の状態に従って決定される。
本発明において、前記腫瘍又は腫瘍細胞は、肝臓ガン、鼻咽頭ガン、肺ガン、胃ガン、結腸直腸ガン、膵臓ガン、乳ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、骨肉腫、リンパ腫、白血病、食道ガン、子宮頸ガン、口腔ガン、唾液腺腫瘍、鼻腔と副鼻腔悪性腫瘍、喉頭ガン、耳腫瘍、眼腫瘍、甲状腺腫瘍、縦隔腫瘍、胸壁・胸膜腫瘍、腸腫瘍、胆道腫瘍、膵臓とファーター膨大部腫瘍、腸間膜と後腹膜腫瘍、腎腫瘍、副腎腫瘍、膀胱腫瘍、睾丸腫瘍、陰茎ガン、子宮内膜ガン、卵巣悪性腫瘍、悪性栄養芽腫、外陰ガンと膣ガン、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、軟部組織腫瘍、骨腫瘍、皮膚と付属器腫瘍、悪性黒色素瘤又は神経系腫瘍およびその他の血液系腫瘍和固形腫瘍又は其細胞を含むが、それらに限定されない。好ましくは肝臓ガン又は肝臓ガン細胞である。
【００９３】
培地と試薬
本発明は、さらに、腫瘍細胞アポトーシスに伴う、小分子組成物に誘導される、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）するための培地（以下、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地とも言う）を提供する。
【００９４】
本発明が提供した組成物の最終濃度配合により、具体的な最終濃度の小分子組成物を選択して、調和する。本発明の好ましい方式として、それぞれに溶質の異なる性質と異なる溶解に応じて、当該具体的な小分子組成物における不同成分を、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）又は他の有機溶媒又は水性溶媒に溶解させ、濃縮液試薬（１:５０−１:１０、０００の範囲）を調合する；その後、当該具体的な小分子組成物の所定の最終濃度に応じて、各小分子有機溶液の濃縮液試薬を希釈して、１０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地（又は様々な細胞因子又は成長因子を含有する無血清培地）に添加して、前記アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地を得る。ただし、当該培地の各組分の百分比量が上下５０％にしても良い；好ましくは上下３０％；より好ましくは上下２０％、例えば１０％、５％；（百分数は、ｖ／ｖで）。
【００９５】
本発明の好ましい方式として、前記基礎細胞培地は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、Ｆ１２、ＩＭＤＭ、ＲＰＭＩ１６４０、Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｂａｓａｌ又はＦｉｓｃｈｅｒｓなどの市販品を含むが、それらに限定されない。
【００９６】
本発明の好ましい方式として、前記「無血清培地」とは、血清を含まず、細胞増殖と生物反応をサポートする複数の栄養成分（例えば成長因子、組織抽出物など）を含む細胞培地である。即ち、血清以外の様々な細胞因子又は成長因子などの添加剤を、基礎細胞培地に添加してなる細胞培地である。
【００９７】
本発明の好ましい方式として、前記様々な細胞因子又は成長因子を含む無血清培地は、ＩＴＳ、Ｎ２、Ｂ２７などの自分調製品又は市販品を含むが、それらに限定されない。
理解すべきことは、当業者は、前記基礎細胞培地又は無血清培地の調製又は購入方式を熟知するから、基礎細胞培地又は無血清培地は、本発明に挙げられたものに限定されない。
【００９８】
本発明の好ましい方式として、前記「アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地」の具体的な調製は、以下のように実施する：
（１）１、ＧＳＫ３β阻害剤（又はＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１）：０．０４６−４．６５重量部；好ましくは：０．２３２−２．３２５重量部；又は溶液状態で最終濃度０．１−１０ｕＭ；好ましい量は：０．５−５ｕＭ；と２、ＴＧＦβ阻害剤（又はＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２又は／及びＡ８３−０１）：０．０３８−７．６８重量部；好ましくは：０．１９２−３．８４重量部；又は溶液状態で最終濃度は０．１−２０ｕＭ；好ましい量：０．５−１０ｕＭを混合して、本発明の腫瘍細胞アポトーシスを伴い、ヒト腫瘍細胞の直接リプログラミングを化学誘導して、非腫瘍形成性細胞に転化することに用いられる小分子組成物を得る。
【００９９】
（２）（１）の組成物に、さらに、レチノイン酸類化合物（又はレチノイン酸）：０．０３−６．０重量部；好ましくは：０．１５−３重量部；若しくは溶液状態で、モル最終濃度は：０．１−２０ｕＭ；好ましくは０．５−１０ｕＭを添加する；前記成分の添加が、腫瘍細胞の転化又はアポトーシスを促進と増強出来て、かつ適用する腫瘍タイプ又は範囲を拡大した。
【０１００】
（３）（２）の組成物に、さらに下記から選択される一つ又は二つの成分を添加してもよい：ＢＭＰ阻害剤  ＬＤＮ−１９３１８９：０．０２−４．６５重量部；好ましくは：０．２０３−２．０３重量部。
【０１０１】
又は溶液状態で最終濃度：０．０５−１０ｕＭ；好ましくは０．５−５ｕＭ；又は／及びＢｒｄＵ、又は／及びＥｄＵ：０．１５−３０重量部（ＢｒｄＵ）、０．１２５−２５（ＥｄＵ）；好ましくは：１．５−１５重量部（ＢｒｄＵ）、１．２５−１２．５（ＥｄＵ）；若しくは溶液状態で（ＢｒｄＵ又はＥｄＵ）：最終濃度：０．５−１００ｕＭ；好ましくは５−５０ｕＭ。前記成分の添加は、さらにある腫瘍細胞の転換又はアポトーシスを誘導することを促進又は増強できる。
【０１０２】
（４）前記小分子組成物を混合して、「アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地」を調製して得る。
【０１０３】
本発明は、更に腫瘍細胞アポトーシスを伴い、ヒト腫瘍細胞の直接リプログラミング（分化転換）を化学誘導して、非腫瘍形成性細胞に転化することに用いられる実験動物注射剤または経口使用試薬を提供する。
【０１０４】
本発明の好ましい方式として、前記いずれか一つ組成物の各小分子組成物を、対応する用量をキログラム体重で計算して、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（１−３０％）又はＴｗｅｅｎ−８０（５％）溶液に溶解させ、試験動物注射又は経口使用試薬を得る；又は当該組成物における異なる組分の対応量の濃縮試薬を取って、それを注射用生理塩水又はリン酸塩溶液（５％ＦＢＳを含有又は含有しない）に添加して、試験動物注射用又は経口試薬を得る。好ましくは、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（１−３０％）に溶解させる。
【０１０５】
培養方法
本発明は、腫瘍細胞アポトーシスに伴う、小分子組成物に誘導される、ヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミング（分化転換）する方法を開示して、前記方法は、以下のステップを含む：
（１）濃縮液試薬を調和する：請求項１−６からいずれか一つの組成物によって、各成分を有機溶媒又は水性溶媒に溶解して、濃縮液試薬を調和する；好ましくは、前記有機溶媒がジメチルスルホキシドを含む；好ましくは、前記水性溶媒が、水、生理塩水、リン酸塩緩衝液を含む；
（２）培地を得る：ステップ（１）の濃縮液試薬がそれぞれに５−２０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地、又は様々な細胞因子又は成長因子を含む無血清培地に希釈されて（各組分の濃度が、請求項１−６からいずれか一つの組成物に限定される濃度にさせる）、アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する培地を得る；
ただし、当該培地の各組分の百分比量が上下５０％にしても良い；好ましくは上下３０％；より好ましくは上下２０％、例えば１０％、５％。
（３）アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する：腫瘍細胞を、前記ステップ（２）で調和された「アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する培地」に懸濁させ、播種して、処理グループとする；
小分子組成物を溶解する処理グループ培地の溶媒（例えばＤＭＳＯ又は他の溶媒）と等量の溶媒を、処理グループが使用する、１０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地（又は含有様々な細胞因子又は成長因子的無血清培地）に添加して、「コントロール培地」（百分数は、ｖ／ｖで）を得る；そして処理グループと相同数の腫瘍細胞を「コントロール培地」に懸濁して、播種して、コントロールグループとする；
３７℃で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行う；３−７日毎に一回の継代を行う。
（４）アポトーシスに伴い腫瘍細胞の分化転換を誘導する継代培養：元の培養液を廃棄して、ＰＢＳで一回洗浄して、細胞消化液を加えて、３７℃、１−５分で細胞を消化して、細胞の消化を中止して、遠心して、上澄みを廃棄して、細胞を沈殿した後に再懸濁して、１：１−１：３の比で継代・播種する。試験ステップの（１）と（２）の方法で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行う。使用される消化液は、トリプシン、ＥＤＴＡ、Ａｃｕｔａｓｅ、ＴｒｙｐｌｅＥなどを含む。３−７日毎に一回の継代を行う。
（５）アポトーシスに伴い腫瘍細胞の分化転換を誘導することで正常（非腫瘍形成性）細胞を得る：前記試験ステップ（３）、（４）で、アポトーシスに伴う分化転換で腫瘍細胞を１−３週間に培養や継代・培養して、ＰＢＳで洗浄して、アポトーシス細胞を除去して、非腫瘍形成性細胞を得る；当該細胞は、他の研究試験に用いられてもよい；細胞アポトーシスの検出：アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換の培養は、前記培養方法に示された試験ステップの通り。培養時間が異なる腫瘍細胞は、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ  （Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ）で染色された後に、フローサイトメトリーで検出され、具体的なステップは、試薬盒の指示を従う。
【０１０６】
分化転換で得られた非腫瘍形成性細胞の機能検出：アポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換の培養は、前記通り、培養時間が異なる非腫瘍形成性細胞で、それらの関連機能を検出する。
【０１０７】
本発明の「アポトーシスを伴う腫瘍細胞を分化転換する小分子組成物」とそれに基づく調製される培地と試薬、及びその試験方法は、腫瘍を治療する薬物を研究開発・調製できて、更に、腫瘍を予防・治療する方法及び機構の研究、前臨床期間の研究、薬理及び毒理の安全性の検出に広く使われている；得られる非腫瘍形成性細胞は、更に機能の検出、腫瘍形成性の多重標的試験、前臨床期間の研究などを行なわれる。当該方法は、腫瘍を予防・治療する研究には新しい分野を開拓するだけではなく、広い応用将来性も有する；かつ幹細胞リプログラミング理論を豊かにして、その応用範囲を開拓する。重大な科学意義と極大な応用価値がある。
【０１０８】
本発明の有益な効果は：
１．真っ先に細胞リプログラミング機構を参考して、目的細胞の特有の遺伝子発現プロファイル又は生物学的な行為を構築かつ維持可能、及び開始細胞リプログラミング過程における様々な「能障」を突破可能な誘導因子の組み合わせを選別すると、腫瘍細胞を直接目的細胞に分化転換できるという革新な構想を提出する。
【０１０９】
２．真っ先に細胞リプログラミング機構及び化学誘導による細胞の直接リプログラミング（分化転換）方法を、腫瘍の治療と研究に応用して、予想の結果を得る。小分子の使用で、ガン細胞のアポトーシスに伴い、肝臓ガン細胞を、機能を有する（生体外）非腫瘍形成性肝細胞に分化転換することを誘導する；類似の構想と方法を他の腫瘍細胞の分化転換に応用すると、同様又は類似効果を得る。
【０１１０】
３．真っ先に化学誘導による肝臓ガン細胞の分化転換方法を生体内の腫瘍分化転換（肝臓ガン組織ＰＤＸ動物模型試験）に応用する。結果として、生体内には、大部の肝臓ガン組織が壊死して、壊死しない組織は、肝臓ガンの組織構造を無くして、その中の細胞が、ＨＮＦ４ａを高く発現して、既に分化転換されたことを示唆する。本発明の小分子組成物は、患者の肝臓ガンの治療には、潜在な治療があることを証明した；  
【０１１１】
４．本発明において、応用された小分子の性質が安定であり、作用の時間、投与量と組み合わせ方式は制御しやすい、作用効果は安定性・信頼性がある；
５．本発明には、外部遺伝子の導入や、細胞遺伝子構造の変化は不要だから、外部遺伝子導入又は遺伝子変化に引かれる新しい発癌リスクを避けるから、安全性・信頼性がある；
【０１１２】
６．真っ先に、多重標的な誘導で腫瘍細胞を正常（非腫瘍形成性）細胞に分化転換して、かつ腫瘍の制御または治療には、殺細胞試薬の協力は不要である。したがって、正常細胞に損害しない（例えば正常ヒト線維芽細胞と肝臓細胞）、正常細胞に対する損害及び毒副作用を避ける；
【０１１３】
７．真っ先に小分子組み合わせの使用で、多能幹細胞（ｉＰＳＣ）にリプログラミングする段階がない、腫瘍細胞を直接非腫瘍形成性細胞をリプログラミングすることを誘導して、幹細胞の生体内発癌リスクを避ける；
【０１１４】
８．本発明の小分子組成物は、アポトーシスに伴う肝臓ガン細胞の分化転換を誘導することに有効だけではなく、さらに研究結果により、アポトーシスに伴う、鼻咽頭ガン、肺ガン、胃ガン、結腸直腸ガン、膵臓ガン、乳ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、骨肉腫、リンパ腫、白血病およびその他の血液系腫瘍と固形腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に分化転換することを誘導することには、同様又は類似効果を有する；
【０１１５】
９．本発明の小分子組成物は、高効率な、低毒性の肝臓ガン及びその他の悪性腫瘍を制御又は治療する新しい新方法、新手段、新薬物を開発してなる潜在力がある；又は、化学誘導による腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングする研究用培地と試薬を調製する。
【０１１６】
１０．本発明の小分子組成物とそのアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する方法は、取り扱やすい、コスト低い、生産・応用しやすいである。
【０１１７】
１１．本発明は、リプログラミング理論を豊かにして、その適用範囲を広げ、腫瘍治療研究の新しい分野を開拓して、臨床腫瘍治療にの新しいアイデア、新しい方法、および新薬物を提供する。
【０１１８】
以下、具体的な実施例を参照して、本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の単なる例示であることが理解されるべく。以下の実施例において詳しい条件を特定しない実験方法について、一般的に、Ｊ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍａｎｕａｌ、Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｅｓｓ、２００２に記載される条件、またはメーカーの推奨条件に従う。
【０１１９】
実施例１  アポトーシスを伴う腫瘍細胞を分化転換する小分子組成物とその培地と試薬の調製
モル濃度又は重量濃度で、以下のように組成物又は培地を調製した：
１、アポトーシスを伴う腫瘍細胞を分化転換する小分子組成物の配合
以下の配合の組成物を用意：  
（１）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度２ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度５ｕＭ。
（２）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物２
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度２ｕＭ。
（３）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物３
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度５ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤Ａ８３−０１：最終濃度２ｕＭ。
（４）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物４
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度４ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤Ａ８３−０１最終濃度３ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度０．５ｕＭ。
（５）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物５
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度５ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度３ｕＭ。
（６）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物６
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：２ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度２ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度５ｕＭ。
（７）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物７
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度１ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度０．５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：最終濃度０．５ｕＭ。
（８）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物８
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度５ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度３ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：０．５ｕＭ。
（９）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物９
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度２ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度１０ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：最終濃度０．５ｕＭ。
（１０）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１０
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：２ｕＭ。
（１１）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１１
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度７．５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：最終濃度０．５ｕＭ。
（１２）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１２
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度５ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度２ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度５ｕＭ。
（１３）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１３
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度４ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤Ａ８３−０１最終濃度３ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度０．５ｕＭ；
ＢｒｄＵ：最終濃度１５ｕＭ。
（１４）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１４
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度５ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度３ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：０．５ｕＭ；
ＥｄＵ：最終濃度３０ｕＭ。
（１５）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１５
ＧＳＫ３β阻害剤ＢＩＯ：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度７．５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：最終濃度０．５ｕＭ。
（１６）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１６
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度５ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＬＹ２１０９７６１：最終濃度２ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度５ｕＭ。
（１７）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１７
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＲｅｐＳｏｘ：最終濃度７．５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：最終濃度０．５ｕＭ。
（１８）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１８
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９８０１４：最終濃度３ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤Ａ８３−０１：最終濃度５ｕＭ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：２ｕＭ。
（１９）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１９
ＧＳＫ３β阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：最終濃度４ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：最終濃度３ｕＭ；
９−シスレチノイン酸：最終濃度０．５ｕＭ。
（２０）  アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物２０
ＧＳＫ３β阻害剤ＴＷＳ１１９：最終濃度４ｕＭ；
ＴＧＦβ阻害剤Ａ８３−０１：最終濃度３ｕＭ；
レチノイン酸（ＲＡ）：最終濃度０．５ｕＭ。
【０１２０】
各具体的な小分子組成物は、前記「培養方法」のステップ（１）の通り、まずＤＭＳＯに溶解させ、濃縮液試薬を調製した。
【０１２１】
２、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地の調製
前記培養方法ステップ（２）で、前記試験ステップ１で調製されたアポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１〜２０の各成分のＤＭＳＯ濃縮液試薬を調製して（選択した基礎培地は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２）、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地１〜２０を得られた（即ち、培地１の最終濃度は、組成物１の化合物と同じ；培地２の最終濃度は、組成物２の化合物と同じ、…、培地２０の最終濃度は、組成物２０の化合物と同じ）。
【０１２２】
３、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する注射又は経口使用試薬の調製
前記試験ステップ１で調製された「アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物８」の各成分を、１％Ｃａｐｔｉｓｏｌに溶解させ、試験動物注射又は経口使用試薬８を得られた。
【０１２３】
ｍｇ／ｋｇ（体重）の計算で、「アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物２１」を調製した：
ＧＳＫ３阻害剤ＣＨＩＲ−９９０２１：１ｍｇ／ｋｇ；
ＴＧＦβ阻害剤ＳＢ４３１５４２：０．５ｍｇ／ｋｇ；
レチノイン酸（ＲＡ）：０．２ｍｇ／ｋｇ；
ＢＭＰ阻害剤ＬＤＮ−１９３１８９：０．２ｍｇ／ｋｇ；
前記各成分を１％  Ｃａｐｔｉｓｏｌに溶解させ、試験動物注射又は経口使用試薬２１を得られた。
【０１２４】
実施例２  肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、培地６に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導される
１、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培養
肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１を、前記調製された培地６に懸濁させ、播種して、処理グループとした。
処理グループと等量のＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を、１０％子牛血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシン混合液（１００ｘ）を含む基礎細胞培地ＤＭＥＭ／Ｆ１２に添加して、ＤＭＳＯ「コントロール培地」（百分数は、ｖ／ｖで）を得られた；そして処理グループと相同数の肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１をＤＭＳＯ「コントロール培地」に懸濁して、播種して、コントロールグループとした；
３７℃で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行った；３−７日毎に一回の継代を行った。
【０１２５】
２、アポトーシスに伴う分化転換の培養における肝臓ガン細胞の継代培養
継代培養ステップ：元の培養液を廃棄して、ＰＢＳで一回洗浄して、細胞消化液を加えて、３７℃、１−５分で細胞を消化して、細胞の消化を中止して、遠心して、上澄みを廃棄して、細胞を沈殿した後に再懸濁して、１：１−１：３の比で継代・播種した。試験ステップの（１）と（２）の方法で培養して、２−４日毎に一回の液交換を行った。使われた消化液は、トリプシン（ＥＤＴＡ、Ａｃｕｔａｓｅ、ＴｒｙｐｌｅＥも使える）などである。３−７日毎に一回の継代を行った。
【０１２６】
３、アポトーシスに伴う分化転換の培養で肝細胞様細胞を得た
肝臓ガン細胞の１−３週間の試験ステップ１、２を経たアポトーシスに伴う分化転換の培養及び継代培養の後に、肝臓ガン細胞には、遠心でアポトーシス細胞を除去した後に、アポトーシスしない肝臓ガン細胞は、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換した；得られた非腫瘍形成性肝細胞様細胞は、他の研究試験に使用されても良い。
【０１２７】
試験結果は、図１を参照。  Ａ図が、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、分化転換に誘導され、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；Ｂ図は、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、アポトーシスに伴い分化転換に誘導された統計結果を示した。処理グループには、様々な処理時間帯にも様々な程度の早期と晩期アポトーシスがあるが、コントロールグループには、早期アポトーシスが殆どない、一部の晩期自然アポトーシスがある。
【０１２８】
実施例３  小分子組み合わせ（培地１、４）で誘導された肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２のアポトーシスに伴う分化転換
培地６の代わりに、それぞれに培地１、４を使用した以外、実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ、及び培養試験ステップを設置した。
【０１２９】
培養処理１−３週間の試験結果は、図２に示された。Ａ図が、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、（培地４で）分化転換に誘導され、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；早、晩期にアポトーシスに誘導された肝臓ガン細胞以外、残る肝臓ガン細胞は、全て分化転換された。Ｂ図は、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、（培地１で）アポトーシスに誘導されたことの統計である；処理グループには、様々な処理時間帯にも様々な程度の早期と晩期アポトーシスがあるが、コントロールグループには、早期アポトーシスが殆どない、ある程度の晩期自然アポトーシスがある。
【０１３０】
実施例４  ５−Ｆｕ耐性肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、それぞれに培地５、２に、アポトーシスに伴い分化転換に誘導された
アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地６の代わりに、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地５又はアポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地２を使用した以外、実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ、及び培養試験ステップを設置した。
【０１３１】
培養処理１−４週間の試験結果は、図３に示された。  Ａ図の右が、肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、（培地５で）肝細胞様細胞に分化転換することが誘導され、形態は完全に変われ、分化転換されたことを示した；Ｂ図は、肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、（培地２で）アポトーシスに伴い分化転換に誘導された統計結果を示した。処理グループには、様々な処理時間帯にも様々な程度の早期と晩期アポトーシスがあるが、コントロールグループには、早期アポトーシスがない、僅かの晩期自然アポトーシスがある。
【０１３２】
実施例５  肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１、ＨｅｐＧ２、７４０２／５−Ｆｕは、それぞれに培地６、４、５の誘導で、正常な肝細胞機能を有する肝細胞様細胞に分化転換した
アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地６、４、５以外、実施例２、３、４と同じように、処理グループとコントロールグループ、及び培養試験ステップを設置した。２週培養処理した処理グループは、遠心でアポトーシス細胞を除去した後に、アポトーシスしない肝臓ガン細胞は、非腫瘍形成性肝細胞様細胞に分化転換した。コントロールグループは、同じ時間に培養を行って、細胞を収集した。
【０１３３】
（１）  肝グリコーゲン染色
Ｓｃｈｉｆｆ方法を使用した。具体的な試験ステップは：１、細胞培養液を廃棄し、ＰＢＳで１回を洗浄し、２、４％のパラホルムアルデヒドで１０分間に固定した後に、ＰＢＳで５分間×３回洗浄し、3、ＰＡＳ−Ｉ液を加えて、１０ｍｉｎに、流水で洗い流し、4、ＰＡＳ−ＩＩ液を加えて、１−２ｍｉｎ、流水で洗い流し、5、顕微鏡で観察、撮影した。
【０１３４】
（２）オイルレッド染色（Ｏｉｌ−ｒｅｄ）
試薬キットで検出する。具体的な実験手順は、試薬キットの指示を従う。試薬キットは、南京建成科技有限公司から、番号：Ｄ０２７であるものを購入した。
試験結果は、図４を参照。肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１（培地６）、ＨｅｐＧ２（培地４）、７４０２／５−Ｆｕ（培地５）は、それぞれに分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、正常な肝細胞機能を有する。ＰＡＳ：グリコーゲン染色；オイルレッド：オイルレッド染色、脂肪吸収機能を反映する。
したがって、前記通り、肝臓ガン細胞を分化転換されて得た肝細胞様細胞は、正常ヒト肝細胞の関連機能を有する。
【０１３５】
実施例６  肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１、ＨｅｐＧ２、７４０２／５−Ｆｕは、それぞれに培地１０、１１、１２の誘導で、肝細胞機能を有する細胞に分化転換した
アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地１０、１１、１２以外、実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ、及び培養試験ステップを設置した。２週培養処理した処理グループは、遠心で、アポトーシス細胞を除去した後に、処理グループとコントロールグループの細胞培養の上澄み液及び細胞を収集した。
【０１３６】
（１）  アルブミンの分泌（ＡＬＢ）、尿素の生成（Ｕｒｅａ）テスト
ＥＬＩＳＡ方法で、試薬キットで、それぞれに処理グループとコントロールグループの培養された細胞におけるアルブミン分泌及び尿素生成機能を調査した。具体的な実験手順は、試薬キットの指示を従う。アルブミン検出試薬キット（米国Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ社／ＤＩＡＧ−２５０、ＢＣＧ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ）、尿素検出試薬キット（米国Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ社／ＤＩＵＲ−５００、Ｕｒｅａ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ）。
【０１３７】
（２）Ｐ４５０酵素（ＣＹＰ３Ａ４とＣＹＰ１Ａ２）活性誘導テスト
（ＣＹＰ３Ａ４を誘導する）リファンピシンと、（ＣＹＰ１Ａ２を誘導する）オメプラゾールで、それぞれに異なるＰ４５０酵素活性を誘導する。異なる濃度のリファンピシン（１ｕＭ、１０ｕＭ、２５ｕＭ）又はオメプラゾール（１ｕＭ、１０ｕＭ、２５ｕＭ）は、それぞれに処理グループとコントロールグループの細胞培養液に添加され、４８時間培養して、その後、細胞ＲＮＡを収集して、ｑＲＴ−ＰＣＲで定量的に異なる処理条件の細胞のＣＹＰ３Ａ４和ＣＹＰ１Ａ２遺伝子発現量を検出した。
【０１３８】
試験結果は、図５を参照。
Ａ、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、（培地１０に）分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、正常な肝細胞機能を有する；
Ａ、肝臓ガン細胞ＨｅｐＧ２は、（培地１１に）分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、正常な肝細胞機能を有する；
Ｃ、５−Ｆｕ耐性肝臓ガン細胞７４０２／５−Ｆｕは、（培地１２に）分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、正常な肝細胞機能を有する；
図面において、青色柱は、早期アポトーシスを表して、赤色柱、晩期アポトーシスを表す；Ｔ１Ｗ、Ｔ２Ｗ、Ｔ３Ｗは、それぞれに１、２、３週間に処理されたことを表す；Ｒｉｆ：リファンピシン；Ｏｍｅ：オメプラゾール。
したがって、分化転換で得られた肝細胞様細胞は、正常ヒト肝細胞の関連機能を有する；分化転換された肝臓ガン細胞は、正常肝細胞のアルブミン分泌（ＡＬＢ）、尿素生成（Ｕｒｅａ）、ＣＹＰ１Ａ２誘導とＣＹＰ３Ａ４誘導機能を得た。
【０１３９】
実施例７  肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１、ＨｅｐＧ２と７４０２／５−Ｆｕは、それぞれに（培地６、４、５で）分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、生体内外には、腫瘍形成性を無くした。
【０１４０】
アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地６、４、５でそれぞれに２週間培養処理する以外、実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ、及び培養試験ステップを設置した；処理グループには、アポトーシス細胞を除去した後、アポトーシスしない肝臓ガン細胞は、肝細胞様細胞に分化転換された；得られた肝細胞様細胞は、生体外には、腫瘍形成性を有しない。
【０１４１】
１、分化転換で得られた肝細胞様細胞の生体外腫瘍形成性試験
方法ステップ：それぞれに、処理グループとコントロールグループの１×１０３個細胞を、６ウェルプレートに播種した、実施例２と同じように２週間培養した；パープルクリスタルで染色して、撮影して、細胞成長とクローニングの形成を観察、計数した。結果は、図６を参照。図Ａ、肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１（培地６で処理）、ＨｅｐＧ２（培地４で処理）と７４０２／５−Ｆｕ（培地５で処理）を分化転換して得た肝細胞様細胞は、生体外の成長には、クローニングを形成しなく、生体外には、腫瘍形成性を有しない。
【０１４２】
２、分化転換で得られた肝細胞様細胞の生体内の皮下担ガン試験
２０日処理された肝臓ガン細胞を分化転換して得た肝細胞様細胞を、消化液で単個細胞に消化して、遠心して、ＰＢＳで洗浄して、細胞を計数して、１×１０６個細胞を取って、５週齢大小のヌードマウス後ろ足の皮下（右側）に注射して、ＤＭＳＯ「コントロール培地」に同じ時間で処理された癌細胞を、コントロールとして同じヌードマウスの後ろ足の皮下（左側）に注射して、４週間で試験を終止して、腫瘍を分離して、撮影した。結果は、図６を参照。図面Ｂ：肝臓ガン細胞ＳＭＭＣ−７７２１は、培地６に分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、生体内には腫瘍を生成しない、腫瘍形成性を無くした。図面Ｃ：培地８に７４０２／５−Ｆｕを分化転換に誘導され、得られた肝細胞様細胞は、生体内には腫瘍を生成しない、腫瘍形成性を無くした；Ｃ図において、上の図には、ヌードマウス右側の処理グループは、腫瘍を形成しない；左側のコントロールグループは、腫瘍を形成した；Ｃ図において、下の図は、コントロールグループで形成した腫瘍の解剖形状外観である。
【０１４３】
実施例８  患者肝臓ガン組織ＰＤＸ動物模型試験（アポトーシスに伴う分化転換する小分子組成物８）
肝臓ガン患者の手術に切除した瘤組織を５週齢のヌードマウス皮下に移植して、腫瘍を形成される（ＰＤＸ模型）。ヌードマウス皮下に形成した腫瘍を分離して、再度に、５週齢のヌードマウス皮下に移植して、腫瘍を形成される。腫瘍が５−１０ｍｍに成長した際に、薬物で処理された。実施例１で調製された、アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する試験動物注射用試薬８を、３回／週間に、腫瘍に注射して、コントロールとして、ＤＭＳＯ生理塩水注射液を腫瘍に注射した。４週間の後に、試験を終止した。腫瘍を分離し、撮影し、腫瘍組織を固定し、ＨＥ染色を行った。
【０１４４】
試験結果は、図７を参照。処理グループの腫瘍組織及び細胞が壊死して、組織構造は壊され又は喪失された；コントロールグループの腫瘍組織と細胞構造は、変化がない。
【０１４５】
実施例９  正常ヒト線維芽細胞と肝臓細胞を、それぞれにアポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地８、３で処理・培養した状況
アポトーシスに伴い腫瘍細胞を分化転換する培地８又は３の順に、それぞれに正常ヒト線維芽細胞と肝臓細胞を培養すること以外、実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び試験培養方法を設置した。
【０１４６】
結果は図８に示すように、コントロールグループと比べて、正常ヒト線維芽細胞と肝臓細胞は、腫瘍細胞に３週間培養された後に、形態を変化しない、影響を及ぼさないと表す。
【０１４７】
実施例１０  鼻咽頭ガン細胞ＨＮＥと肺ガン細胞Ｈ４６０は、培地９、７にアポトーシスに伴い分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。培養処理２週間の試験結果は、図９に示された。
【０１４８】
分化転換された鼻咽頭ガン細胞ＨＮＥ（培地９で処理）の処理グループガン細胞は、形態には完全に変化して、既に分化転換されたことを表す；処理グループの肺ガン細胞Ｈ４６０は、（培地９、７で）それぞれに処理され、ただし、肺ガン細胞Ｈ４６０は、（培地７で）ほとんど全てアポトーシスに誘導された；コントロールグループの肺ガン細胞Ｈ４６０は、ほとんどアポトーシスしない。
【０１４９】
実施例１１  胃ガン細胞ＳＧＣ−７９０１とＭＫＮ２８は、それぞれに（培地１２、１３に）、アポトーシスに伴い分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。
【０１５０】
２週間に培養処理された試験の結果は、図１０に示すように、処理グループの胃ガン細胞ＳＧＣ−７９０１（培地１２）とＭＫＮ２８は、（培地１３）を分化転換した後に、細胞の形態は完全に変化して、分化転換されたことを表す。
【０１５１】
実施例１２、膵臓ガン細胞ＳＷ１９９０は、培地１２に分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。
【０１５２】
膵臓ガン細胞ＳＷ１９９０を（培地１２で）２週間処理した試験の結果は、図面１１に示す；処理グループのガン細胞を分化転換した後に、形態は完全に変化して、分化転換されたことを表す。
【０１５３】
実施例１３  乳ガン細胞ＳＫＢｒ３は、培地１３で分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。（培地１３で）２週間処理した試験の結果は、図１２に示す；処理グループの乳ガン細胞ＳＫＢｒ３を分化転換した後に、形態は完全に変化して、分化転換されたことを表す。
【０１５４】
実施例１４  白血病細胞Ｕ９３７、Ｂ細胞リンパ腫ＳＵＤＨＬ−４は、培地１０、１１でアポトーシスに伴い分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。  ２週間に培養処理された試験の結果は、図１３に示す；処理グループの白血病細胞Ｕ９３７（培地１０で培養）、Ｂ細胞リンパ腫細胞ＳＵＤＨＬ−４（培地１１で培養）は、大量にアポトーシスした。
【０１５５】
実施例１５、乳ガン細胞ＳＫＢｒ３と胃ガン細胞ＭＫＮ２８は、培地１３、１４に分化転換に誘導される。
【０１５６】
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。２週間に培養処理された試験の結果は、図１４に示すように、処理グループの乳ガン細胞ＳＫＢｒ３（培地１３）と胃ガン細胞ＭＫＮ２８（培地１４）を分化転換した後に、細胞の形態は完全に変化して、分化転換されたことを表す。
【０１５７】
実施例１６、大腸ガン細胞ＨＣＴ１１６を、培地９で非腫瘍形成性細胞に分化転換することに誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。２週間に培養処理された試験の結果は、図１５に示す；右の図が、処理グループの大腸ガン細胞ＨＣＴ１１６を（培地９で）分化転換した後に、細胞はクローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くした。
【０１５８】
実施例１７、前立腺ガン細胞ＰＣ−３、卵巣ガン細胞ＳＫＯＶ３とＡ２７８０は、それぞれに培地５、７、８で分化転換に誘導された後に、腫瘍形成性を無くした
実施例７と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。２週間に処理された後に、試験の結果は、図１６、１７に示す。図１６の右図と、図１７の右の上下図は、それぞれに、処理グループの前立腺ガンＰＣ−３（培地５）、卵巣ガン細胞ＳＫＯＶ３（培地７）とＡ２７８０（培地８）を分化転換に誘導した後に、クローニングを形成しない、生体外には腫瘍形成性を無くしたことを表す。  
【０１５９】
実施例１８、胃ガン細胞ＭＫＮ２８、乳ガン細胞ＳＫｂｒ３は、それぞれに培地１０、１１で分化転換に誘導された後に、腫瘍形成性を無くした。
【０１６０】
実施例７と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した；    ２週間に処理された後に、試験の結果は、図１８に示す。図１８の右側の上図と下図は、それぞれに処理グループの胃ガン細胞ＭＫＮ２８（培地１０で処理）、乳ガン細胞ＳＫｂｒ３（培地１１で処理）を分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くしたことを示す。
【０１６１】
実施例１９  神経膠腫細胞Ｔ９８Ｇ、Ｕ８７ＭＧは、培地４、５でアポトーシスに伴い分化転換することを誘導された
実施例１４と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した；    ２週間に培養処理された後に、試験の結果は、図１９に示す。図１９の右の上図と下図の処理グループ神経膠腫細胞Ｔ９８Ｇ（培地４で処理）、Ｕ８７ＭＧ（培地５で処理）は、それぞれに分化転換に誘導したあとに形態は完全に変われ、分化転換されたことを示す。
【０１６２】
実施例２０  患者肝臓ガン組織ＰＤＸ動物模型試験（アポトーシスを伴う腫瘍細胞を分化転換する小分子組成物１５）
アポトーシスに伴う腫瘍細胞を分化転換する組成物１５で調製された注射用試薬１５を使用した以外、実施例８と同じように、試験動物の注射試薬、処理グループとコントロールグループ及び試験ステップ、染色方法を設置した、試験の結果は、図２０に示した。
【０１６３】
図２０の左の図に示された処理グループの肝臓ガン組織及び細胞は、注射用試薬１５で３週間に処理された後に、大面積に壊死して、ガン組織の構造は、壊され又は喪失された。右の図面の処理グループは、小分子試薬で３週間処理された後に、残留した組織及び細胞が人肝細胞特有のマーカーＨＮＦ４ａを発現して、分化転換の発生を示唆する。  
【０１６４】
実施例２１  肺ガン細胞Ａ５４９、Ｈ１２９９とＨ４６０は、それぞれに培地１４、１３、９で分化転換することに誘導された後に、生体内外には、腫瘍形成性を無くした
実施例７と同じように、試験動物の注射試薬、処理グループとコントロールグループ及び試験ステップを設置した、試験の結果は、図２１に示した。
【０１６５】
Ａ図：２週間に培養処理された結果；下の図の処理グループは、肺ガン細胞Ａ５４９（培地１４で処理）、Ｈ１２９９（培地１３で処理）とＨ４６０（培地９で処理）を、それぞれにを分化転換に誘導したあとに、クローニングを形成しない、生体外の腫瘍形成性を無くしたことを示す；Ｂ図：ヌードマウスの右側の後ろ足（青色矢印）は、（培地１４で処理）分化転換された処理グループの肺ガン細胞Ａ５４９をヌードマウス体内に注射して４週間、腫瘍を形成しない、生体内には、腫瘍形成性を無くした。
【０１６６】
実施例２２  肺ガン細胞Ｈ１２９９を、培地１５で非腫瘍形成性細胞に分化転換することに誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。
【０１６７】
２週間に培養処理された試験の結果は、図２２に示す；右の図が、処理グループの肺ガン細胞Ｈ１２９９細胞を（培地１５で）分化転換した後に、細胞はクローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くしたことを示す。
ＧＳＫ３β阻害剤の他の小分子ＢＩＯと、ＴＧＦβ阻害剤及びＢＭＰ阻害剤からなる小分子組み合わせは、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１６８】
実施例２３  卵巣ガン細胞Ａ２７８０、ＳＫＯＶ３を、それぞれに（培地１６、１７で）非腫瘍形成性細胞に分化転換することに誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。
【０１６９】
２週間に培養処理された試験の結果は、図２３に示す；右の上図と下図は、処理グループの卵巣ガン細胞Ａ２７８０（培地１６で処理）、ＳＫＯＶ３（培地１７で処理）は、分化転換に誘導されたあとに、クローニングを形成しない、腫瘍形成性を無くすことを示す。
【０１７０】
ＴＧＦβ阻害剤の他の小分子ＬＹ２１０９７６１又はＲｅｐＳｏｘと、ＧＳＫ３β阻害剤とレチノイン酸類化合物またはＢＭＰ阻害剤からなる小分子組成物は、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１７１】
実施例２４  前立腺ガン細胞ＰＣ９は、（培地１８で）分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。
【０１７２】
（培地１８で）２週間処理した試験の結果は、図２４に示す；右の図の処理グループの前立腺ガン細胞ＰＣ９の形態は完全に変化して、分化転換されたことを表す。
【０１７３】
ＧＳＫ３β阻害剤の他の小分子ＣＨＩＲ−９８０１４と、ＴＧＦβ阻害剤及びＢＭＰ阻害剤からなる小分子組成物は、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１７４】
実施例２５、胃ガン細胞ＳＧＣ−７９０１は、それぞれに培地１９、２０で、アポトーシスに伴い分化転換に誘導された
１、胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞は、培地１９で分化転換に誘導された後に、腫瘍形成性を無くした
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。２週間に処理された後に、試験の結果は、図２５（Ａ図）に示す。Ａ図の処理グループが、分化転換された胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞はクローニングを形成しない、生体外には腫瘍形成性を無くしたことを示す。
【０１７５】
レチノイン酸類化合物の他の小分子９−シスレチノイン酸と、ＧＳＫ３β阻害剤とＴＧＦβ阻害剤とからなる小分子組成物は、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１７６】
２、胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞は、培地１９、２０で、アポトーシスに伴い分化転換に誘導された
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。  
【０１７７】
２週間に培養処理された胃ガンＳＧＣ−７９０１細胞は、アポトーシスに伴う分化転換に誘導された統計結果は、図２５に示された。Ｂ図：処理グループには、様々な処理時間帯にも様々な程度の早期と晩期アポトーシスがあるが、コントロールグループには、僅かの早、晩期自然アポトーシスがある。コントロールグループと処理グループとのアポトーシス値は、統計学的な有意差がある（ｐ＜０．００５）。
【０１７８】
ＧＳＫ３β阻害剤の他の小分子ＴＷＳ１１９と、ＴＧＦβ阻害剤及びレチノイン酸類化合物からなる小分子組成物は、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１７９】
実施例２６、膵臓ガンＳＷ１９９０細胞は、培地１６で分化転換に誘導され、腫瘍形成性を無くした
実施例２と同じように、処理グループとコントロールグループ及び培養試験ステップを設置した。２週間に処理された後に、試験の結果は、図２６に示す。右の図の処理グループの膵臓ガンＳＷ１９９０細胞は、（培地１６で処理）分化転換に誘導された後に、クローニングを形成しない、生体外には、腫瘍形成性を無くした。
【０１８０】
ＴＧＦβ阻害剤の他の小分子ＬＹ２１０９７６１と、ＧＳＫ３β阻害剤及びレチノイン酸類化合物からなる小分子組成物は、同様なアポトーシスに伴う腫瘍細胞の分化転換を誘導する効果があることを証明した。
【０１８１】
本出願に言及されている全ての参考文献は、参照として単独に引用されるように、本出願に引用されて、参照になる。理解すべきことは、本発明の前記開示に基づき、当業者は、本発明を様々な変更または修正を行っても良い、これらの同等の形態も本出願に添付された請求の範囲に規定される範囲内に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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