(57)【要約】  本発明は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）および任意選択で少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定することに基づいて、対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法に関する。本発明は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）および任意選択で少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定することに基づいて、心房細動を患っていると疑われる対象において心房細動を診断する方法も意図する。さらに想定されているのは、本発明の方法を行うのに適合された装置である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法であって、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量の決定ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む方法。
【請求項２】
試料が、血液、血清または血漿である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
対象がヒトである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＢＮＰ型ペプチドおよびアンジオポエチン−２の量が決定される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
（１種または複数の）参照量を超える（１種または複数の）バイオマーカーの量が、心房細動の再発のリスクがある対象を示し、かつ／または（１種または複数の）参照量未満の（１種または複数の）バイオマーカーの量が、心房細動の再発のリスクがない対象を示す、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
アンジオポエチン−２およびアンジオポエチン−１の量が決定され、任意選択でアンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比が算出され、算出された前記比が参照比と比較される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
対象において心房細動を診断するための方法であって、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む方法。
【請求項９】
（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１の量が決定される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比が算出され、算出された前記比が参照比と比較される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
比が、アンジオポエチン−１の量に対するアンジオポエチン−２の量の比である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
参照比を超える、Ａｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比が、心房細動を患っている対象を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための方法であって、
（ａ）対象からの第１の試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）対象からの第２の試料中の、ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｃ）第１の試料において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を第２の試料中の（１種または複数の）前記バイオマーカーの量と比較するステップと
を含む方法。
【請求項１５】
療法が、少なくとも１種の抗凝固剤の投与である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１種のさらなるバイオマーカーが、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択される、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の増加が、療法に応答しない対象を示し、または第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の減少が、療法に応答する対象を示す、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１種のさらなるバイオマーカーがＡｎｇ−１である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１９】
対象において心房細動をグレード分類するための方法であって、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む方法。
【請求項２０】
心房細動の再発のリスクを予測するための、対象からの試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用、ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用。
【請求項２１】
心房細動を診断するための、対象からの試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用、ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用。
【請求項２２】
心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための、対象からの第１および第２の試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用、ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）および任意選択で少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定することに基づいて、対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法に関する。本発明は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）および任意選択で少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定することに基づいて、心房細動を患っていると疑われる対象において心房細動を診断する方法も意図する。さらに想定されているのは、本発明の方法を行うのに適合された装置である。
【背景技術】
【０００２】
心房細動（ＡＦ）は、心不整脈の最も一般的な型であり、高齢者集団の中で最も普及した状態のうちの１つである。心房細動は、不規則な心拍を特徴とし、経時的に増加しうる短期間の異常な拍動で始まることが多く、永続的な状態になりうる。米国では概算２７０万〜６１０万人、世界的には約３３００万人が心房細動を有する（Ｃｈｕｇｈ  ＳＳ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１４；１２９：８３７〜４７）。ＡＦを有する患者は、洞調律にある患者と比較して、より高い卒中の割合を有し、鬱血性心不全を発症するより高いリスクがある。
【０００３】
アンジオポエチンは、血管新生に関与する糖タンパク質である。これらは、健常な組織においても発現されるので、既存の血管を安定化すること、および内皮細胞と周囲の血管平滑筋細胞との間の相互作用を変調させることが推測される（Ｗｏｎｇ  ＡＬ，ら  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９７；８１：５６７〜７４）。４つのアンジオポエチンが知られており、アンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）からアンジオポエチン−４（Ａｎｇ−４）である。ヒトアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）は、例えば、Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ  ＰＣら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７（１９９７）５５〜６０およびＣｈｅｕｎｇ，Ａ．Ｈ．，ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４８（１９９８）３８９〜９１）に記載されており、アンジオポエチンファミリーの４つのメンバーのうちの１つである。Ａｎｇ−２は、血管内皮中で選択的に発現されるチロシンキナーゼのファミリーであるＴｉｅのリガンドとして発見された（Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｄ．，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４０７（２０００）２４２〜４８）。
【０００４】
Ａｎｇ−１は、内皮細胞特異的なＴｉｅ２受容体チロシンキナーゼのアゴニストであり、血管新生促進特性を有するのに対して、Ａｎｇ−２は、血管形成を阻害し、Ｔｉｅ−２受容体を通して拮抗的なシグナル伝達作用を有することが見出された（Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ  ＰＣら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９７；２７７：５５〜６０）。
【０００５】
アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）は、内皮の安定性を損なうことが知られており、心不全において上昇していることが示されている（例えば、Ｐｏｓｓら  Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−２  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｄｅｃｏｍｐｅｎｓａｔｅｄ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｌｉｎ  Ｒｅｓ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１５年５月；１０４（５）：３８０〜３８７、またはＬｕｋａｓｚら  Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−２  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３；８（６）：ｅ６６８６１を参照されたい）。
【０００６】
Ａｎｇ−２は、慢性（永続性）心房細動を有する患者において上昇していることが見出されている（Ｆｒｅｅｓｔｏｎｅら、Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｅｓｉｓ？  Ａｎｎ  Ｍｅｄ  ２００５；３７：３６５〜７２またはＣｈｏｕｄｈｕｒｙら、Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ４０  Ｌｉｇａｎｄ  ｔｏ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ，Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎｓ，ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ、ＣＨＥＳＴ  ２００７；１３２：１９１３〜１９１９）のに対して、Ａｎｇ−１は、これらの２つの治験において、心房細動によって影響されることが見出されていない。発作性および持続性から永続性の心房細動に進行するための進行速度およびリスク因子は、臨床的に十分に理解されていない（Ｋｅｒｒ  ＣＲら、Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．２００５；１４９：４８９〜４９６）。
【０００７】
Ｌａｔｉｎｉ（Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１１年２月；２６９（２）：１６０〜７１）には、ＡＦの既往歴を有する患者におけるＮＴｐｒｏＡＮＰ、ｈｓＴｎＴまたはＮＴｐｒｏＢＮＰの検出に基づいて心房細動の再発を予測するための方法が開示されている。
【０００８】
Ｍａｓｓｏｎ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ  ２０１５；２９：５５１）は、ＧＩＳＳＩ  ＡＦバイオマーカーサブ試験の試料における分析された多様な血管作動性バイオマーカーまたは炎症バイオマーカーに対する再発性心房細動の予測のための心臓バイオマーカーの有益な使用を開示している。洞調律にある患者において心エコー検査および循環バイオマーカーのアッセイを通してＡＦの再発のリスクを予測することは、ＡＦが進行中のときに、同じ変数の予想される変化を示すのとは完全に異なりかつそれよりもはるかに難しい課題であると結論づけられる。
【０００９】
Ｍａｓｓｏｎ（Ｈｅａｒｔ  ２０１０；９６：１９０９〜１９１４）には、ＩＬ−６などの炎症マーカーの決定に基づいた心房細動の再発の予測が開示されている。炎症マーカーは、増加するはずであるが、ＡＦの最初の再発のための弱い予測因子となるはずである。
【００１０】
ＷＯ２０１４／０７２５００には、対象からの試料中の、例えば、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、およびＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）からなる群から選択される少なくとも１種のマーカーの量を決定することを含む、対象において最近の発作性心房細動を診断するための手段および方法が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
これまで、アンジオポエチン−２は、永続性心房細動に関連してのみ観察された。しかし、現在洞調律にある患者において心電図および／または循環バイオマーカーのアッセイを通してＡＦの再発のリスクを予測することは、ＡＦが進行中のときに、同じ変数の予想される変化を示すのとは完全に異なりかつそれよりもはるかに難しい課題である（Ｍａｓｓｏｎら  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ（２０１５）２９：５５１）。アンジオポエチン−２は、すでに心房細動および主に発作性ＡＦを有している患者における心房細動の再発の予測にまだ使用されていない。それにもかかわらず、心房細動の再発の予測、予防薬の適切な選択および療法の成功の予測は、未だ対処されていない重要な臨床的に必要なことである。有利なことに、本発明の基礎となる試験において、アンジオポエチン−２が、単独で、またはアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、およびＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーとの組合せで、心房細動の再発の信頼性の高い予測を可能にすることが示されている（実施例を参照されたい）。本発明の発見のおかげで、患者を同定し、リスクに応じて治療することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
したがって、本発明は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む、対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の方法の好ましい実施形態では、該方法は、（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む。
したがって、本発明は、特に、対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を（１種または複数の）参照量と比較するステップと
を含む。
【００１４】
好ましくは、心房細動の再発の予測は、比較ステップ（ｂ）の結果に基づく。したがって、本発明の方法は、ステップ（ｂ）の結果に基づいて対象において心房細動の再発のリスクを予測するさらなるステップ（ｃ）を含んでいてもよい。
【００１５】
本発明に従って言及される方法は、上述のステップから本質的になる方法、またはさらなるステップを含む方法を含む。さらに、本発明の方法は、好ましくは、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法である。さらに、それは、明確に上述されているものに加えてステップを含んでいてもよい。例えば、さらなるステップは、さらなるマーカーの決定と、かつ／または試料の前処理と、もしくは該方法によって得られる結果の評価と関連していてもよい。本発明の方法は、対象のモニタリング、確認、および細分類のためにも使用されうる。該方法は、手動で行われても、または自動操作によって補助されてもよい。好ましくは、ステップ（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）は、自動操作によって、例えば、ステップ（ａ）における決定またはステップ（ｂ）におけるコンピューター実行計算のための好適なロボットおよびセンサー設備によって、全体的または部分的に補助されてもよい。
【００１６】
「心房細動」という用語は、当技術分野においてよく知られている。本明細書中で使用される場合、この用語は、好ましくは、心房の機械的機能の結果的な悪化を伴う非協調的な心房活性化を特徴とする上室性頻脈性不整脈を指す。特に、この用語は、速いかつ不規則な拍動を特徴とする異常な心調律を指す。それは、心臓の上部の２つの部屋に関与する。正常心調律では、洞房結節によって生成されるインパルスは、心臓に広がり、心筋の収縮および血液のポンプ輸送を引き起こす。心房細動では、洞房結節の規則的な電気インパルスが、不規則な心拍をもたらす無秩序な速い電気インパルスによって置き換えられる。心房細動の症状は、心臓の動悸、失神、息切れ、または胸痛である。しかし、ほとんどのエピソードは、症状を有さない。心電図上で心房細動は、房室伝導が完全であるときに、一貫したＰ波が、不規則な、頻繁に速い心室性応答に関連した、振幅、形状、およびタイミングが変化する速い振動または細動波によって置き換えられることを特徴とする。
【００１７】
米国心臓病学会（ＡＣＣ）、米国心臓協会（ＡＨＡ）、および欧州心臓病学会（ＥＳＣ）は、以下の分類系を提唱している（本明細書によって参照によりその全体が組み込まれているＦｕｓｔｅｒ（２００６）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１４（７）：ｅ２５７〜３５４を参照されたく、例えば、その文書中の図３を参照されたい）：初発性ＡＦ、発作性ＡＦ、持続性ＡＦ、および永続性ＡＦ。
【００１８】
ＡＦを有するすべての人々は、最初は、初発性ＡＦと呼ばれるカテゴリーに入る。しかし、対象は、発見されていない以前のエピソードを有していても、または有していなくてもよい。ＡＦが１年を超える間持続した場合、対象は、永続性ＡＦを患っている。特に、洞調律に戻る転換は生じない（または医療介入を用いるのみ）。ＡＦが７日を超えて持続した場合、対象は、持続性ＡＦを患っている。対象は、心房細動を停止させるために薬理学的または電気的な介入のいずれかを必要としうる。したがって、持続性ＡＦは、エピソードで生じるが、この不整脈は、典型的には、自然に（すなわち、医療介入なしで）洞調律に戻る転換はされない。発作性心房細動は、好ましくは、７日以内で持続して自然に（すなわち、医療介入なしで）停止する断続的な心房細動のエピソードを指す。発作性ＡＦのほとんどの症例において、エピソードは、２４時間未満で持続する。したがって、発作性心房細動は自然に停止するのに対して、持続性心房細動は自発的に停止せず、かつ停止のために電気的もしくは薬理学的なカルディオバージョン、またはアブレーション法などの他の方法を必要とする（Ｆｕｓｔｅｒ（２００６）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１４（７）：ｅ２５７〜３５４）。
【００１９】
本発明の好ましい実施形態では、「発作性心房細動」という用語は、４８時間未満で、より好ましくは、２４時間未満で、かつ、最も好ましくは、１２時間未満で、自然に停止するＡＦのエピソードとして定義される。持続性ＡＦおよび発作性ＡＦの両方は、再発性でありうる。
【００２０】
該方法によれば、心房細動の再発のリスクが予測されるものとする。したがって、試験されることになる対象が、本発明の方法を行う前に心房細動を患っている対象であることを理解されたい。したがって、対象は、以前に心房細動のエピソードを経験しているものとする。したがって、対象は、好ましくは、心房細動、特に、持続性または発作性の心房細動を患っている。好ましくは、心房細動を患っている対象は、試験試料を採取する前の６カ月以内前、より好ましくは、１カ月以内前、さらにより好ましくは、１４日以内前、最も好ましくは、７日以内前に１回または複数回の心房細動のエピソードを有した。しかし、対象は、好ましくは、試験されることになる試料が採取される時に心房細動のエピソードを有していない。したがって、対象は、好ましくは、この時に正常洞調律を有する。好ましくは、対象は、対象から試験試料を採取する４８時間以内前に心房細動のエピソードを経験していない。したがって、心房細動の最後のエピソードは、試験試料を採取する少なくとも４８時間前に（医療介入の有無にかかわらず）停止したことが想定される。
【００２１】
好ましくは、本発明の方法に従って試験されることになる対象は、永続性心房細動を患っていない。
好ましい実施形態では、少なくとも何回かの心房細動の以前のエピソードが検出されているものとする。したがって、試験されることになる対象が心房細動の既知の病歴を有することが想定される。
【００２２】
好ましい実施形態では、対象は、発作性心房細動を有する。好ましくは、発作性心房細動を有する前記対象は、試験されることになる試料が採取される６カ月以内前、より好ましくは、１カ月以内前、さらにより好ましくは、１４日以内前、最も好ましくは、７日以内前に１回または複数回の心房細動のエピソードを有した。前記１回または複数回の心房細動のエピソードは、好ましくは、自然に、すなわち、医療介入なしで、停止した。好ましくは、最後のエピソードは、試験されることになる試料が採取される少なくとも４８時間前に自然に停止した。
【００２３】
別の好ましい実施形態では、対象は、持続性心房細動を有する。好ましくは、１回または複数回の以前の心房細動のエピソードは、自然に終了しなかった。したがって、対象は、カルディオバージョン、すなわち、好結果のカルディオバージョンを受けていることが想定される。特に、対象は、試験されることになる試料が採取された１４日以内前に（例えば、試料が採取された７日以内前に）カルディオバージョンを受けていることが想定される。前記カルディオバージョンは、診断された最後の心房細動のエピソードを停止させるために行われてきたものとする。カルディオバージョンは、それによって心不整脈が正常調律に転換される医学的方法である。これは、電気的カルディオバージョンまたは抗不整脈薬を用いたカルディオバージョンによって達成されうる。好ましくは、前記カルディオバージョンは、試験試料を採取する少なくとも４８時間前に行われている。
【００２４】
本発明によれば、対象は、試料が採取されるときに、心房細動のエピソードを経験していないことが意図される。したがって、対象は、試料が採取されるときに、正常洞調律を有するものとする。
【００２５】
本明細書中で言及される場合、「対象」は、好ましくは、哺乳類である。哺乳類は、飼いならされた動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよびヒト以外の霊長類、例えば、サルなど）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）を含むが、これらに限定されない。好ましくは、対象は、ヒト対象である。
【００２６】
本発明の方法によれば、心房細動の再発のリスク、および、したがって、対象が再発心房細動を患うリスク、好ましくは、本発明の方法を行った約３カ月以内後、約６カ月以内後、または約１年以内後（または試料が採取された後により詳細となる）のＡＦの再発のリスクが予測されるものとする。好ましい実施形態では、約１年以内での心房細動の再発のリスクが予測される。
【００２７】
好ましくは、「約」という用語は、本明細書中で使用される場合、特定の値、量、濃度、レベルなどに対して相対的に＋および−２０％の範囲を包含し、例えば、「約１００」の値の表示は、１００＋／−２０％の数値の範囲の値、すなわち、８０から１２０までの範囲に及ぶ値を包含することが意味される。好ましくは、この用語は、特定の値、量、濃度、レベルなどに対して相対的に＋および−１０％の範囲ならびに、より好ましくは、特定の値、量、濃度、レベルなどに対して相対的に＋および−５％の範囲を包含する。最も好ましくは、「約」という用語は、正確な値、量、濃度、レベルなどを指す。
【００２８】
好ましくは、「リスクを予測すること」という用語は、本明細書中で使用される場合、どの対象が心房細動の再発を患うことになるかによって確率を評価することを指す。典型的には、対象が心房細動の再発のリスクがある（したがってリスクが上昇している）かまたはリスクがない（したがってリスクが低下している）かどうかが予測される。したがって、本発明の方法は、心房細動のリスクがある対象とリスクがない対象とを区別することを可能にする。好ましくは、「リスクを予測すること」という用語は、リスクの予測を補助すること、例えば、リスクの予測において医師を補助することなども包含する。
【００２９】
上記のように、ある時間枠の中での心房細動の再発のリスク／確率が予測されるものとする。本発明の好ましい実施形態では、予測枠は、約３カ月、約６カ月、または約１年の間隔である。好ましくは、前記予測枠は、本発明の方法の完了後から計算される。より好ましくは、前記予測枠は、試験されることになる試料が採取された時点から計算される。当業者には理解されるであろうが、リスクの予測は、通常、１００％の対象について正確であることは意図されない。しかし、この用語は、予測が、適切かつ正確な様式で、統計的に有意な一部の対象についてなされうることを必要としてもよい。一部が統計的に有意であるかどうかは、多様なよく知られた統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値決定、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定などを使用して、それ以上やるべきことなく当業者によって決定されうる。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３の中で見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。
【００３０】
好ましい実施形態では、「心房細動の再発のリスクを予測すること」という表現は、本発明の方法によって分析されることになる対象が、心房細動の再発のリスクがある対象の群、または心房細動の再発のリスクがない対象の群のいずれかに割り当てられることを意味する。したがって、対象が心房細動の再発のリスクがあるかまたはリスクがないかどうかが予測される。本明細書中で使用される場合、「心房細動の再発のリスクがある対象」は、好ましくは、（好ましくは、予測枠の中での）心房細動の再発の上昇したリスクを有する。好ましくは、前記リスクは、対象のコホートにおける平均的なリスクと比較して上昇している。本明細書中で使用される場合、「心房細動の再発のリスクがない対象」は、好ましくは、（好ましくは、予測枠の中での）心房細動の再発の低下したリスクを有する。好ましくは、前記リスクは、対象のコホートにおける平均的なリスクと比較して低下している。心房細動の再発のリスクがある対象は、好ましくは、約１年の予測枠の中で、好ましくは、少なくとも２０％、またはより好ましくは、少なくとも３０％のリスクまたは再発を有する。最も好ましくは、対象は、好ましくは、約１年の予測枠の中で、バイオマーカーのベースライン濃度の１ＳＤの上昇について、＞１．１のハザード比を有する。心房細動の再発のリスクがない対象は、好ましくは、１年の予測枠の中で、好ましくは、１２％未満、より好ましくは、１０％未満のＡＦの再発のリスクを有する。代替の実施形態では、前記対象は、好ましくは、約１年の予測枠の中で、バイオマーカーのベースライン濃度の１ＳＤの上昇について、≦１のハザード比を有する。
【００３１】
「試料」という用語は、体液の試料、分離された細胞の試料、または組織もしくは器官からの試料を指す。体液の試料は、よく知られた技術によって得ることができ、かつそれには、血液、血漿、血清、尿、リンパ液、痰、腹水、もしくは他のあらゆる体分泌またはそれらの派生物の試料などが挙げられる。組織または器官の試料は、あらゆる組織または器官から、例えば、生検によって、得られてもよい。分離された細胞は、体液または組織もしくは器官から、遠心分離または細胞選別などの分離技術によって得られてもよい。例えば、細胞、組織、または器官の試料は、バイオマーカーを発現または産生する細胞、組織または器官から得られてもよい。試料は、凍結されていてもよく、新しく、固定（例えば、ホルマリン固定）、遠心分離、および／または包埋（例えば、パラフィン包埋）などがされていてもよい。細胞試料は、当然、試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量を評価する前に、よく知られた多様な採取後の調製および保存技術（例えば、核酸および／またはタンパク質の抽出、固定、保存、凍結、限外濾過、濃縮、脱水、遠心分離など）を行うことができる。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態では、試料は、血液（すなわち、全血）、血清または血漿試料である。血清は、血液が凝固できるようにされた後に得られた全血の液体画分である。血清を得るために、遠心分離によって血餅が除去され、上清が収集される。血漿は、血液の無細胞の液体部分である。血漿試料を得るために、抗凝固剤で処理されたチューブ（例えば、クエン酸塩またはＥＤＴＡで処理されたチューブ）中に全血が収集される。遠心分離によって細胞が試料から除去され、上清（すなわち、血漿試料）が得られる。
【００３３】
バイオマーカーアンジオポエチン−２（略記「Ａｎｇ−２」、ＡＮＧＰＴ２と呼ばれることも多い）は、当技術分野においてよく知られている。これは、Ａｎｇ−１（）およびＴＩＥ２（例えば、Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７（１９９７）５５〜６０を参照されたい）の両方についての天然に存在するアンタゴニストである。このタンパク質は、ＡＮＧ−１の非存在下でＴＥＫ／ＴＩＥ２のチロシンリン酸化を誘導することができる。ＶＥＧＦなどの、血管新生誘導因子の非存在下では、ＡＮＧ２を介した、細胞−マトリックスの接触のゆるみが、結果としての脈管の退縮を伴う内皮細胞アポトーシスを誘導しうる。ＶＥＧＦと協力して、それは、内皮細胞の遊走および増殖を促進しえ、したがって、許容的な血管新生シグナルとしての役目を果たしている。ヒトのアンジオポエチンの配列は、当技術分野においてよく知られている。Ｕｎｉｐｒｏｔには、アンジオポエチン−２の以下の３つのアイソフォームがリストされている：アイソフォーム１（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子：Ｏ１５１２３−１）、アイソフォーム２（識別子：Ｏ１５１２３−２）およびアイソフォーム３（Ｏ１５１２３−３）。好ましい実施形態では、アンジオポエチン−２の総量が決定される。総量は、好ましくは、複合体形成したアンジオポエチン−２および遊離したアンジオポエチン−２の量の合計である。
【００３４】
本発明の方法の好ましい実施形態では、該方法は、対象からの試料中（特に該試料中）のアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定をさらに含む。
【００３５】
前の段落に関するさらなるバイオマーカーは、当技術分野においてよく知られている。
バイオマーカーアンジオポエチン１（Ａｎｇ−１）は、ＡＮＧＰＴ１遺伝子によってコードされるアンジオポエチンである。ヒトＡｎｇ−１の配列は、当技術分野においてよく知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（データベースエントリーＱ１５３８９）を介して評価されうる。
【００３６】
脳性ナトリウム利尿ペプチド型ペプチド（本明細書中で「ＢＮＰ型ペプチド」とも呼ばれる）は、好ましくは、ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、およびＢＮＰからなる群から選択される。ｐｒｅ−ｐｒｏペプチド（ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰの場合には１３４アミノ酸）は、短いシグナルペプチドを含み、これは、酵素的に切り離されてｐｒｏペプチド（ｐｒｏＢＮＰの場合には１０８アミノ酸）を放出する。ｐｒｏペプチドは、さらに切断されてＮ末端ｐｒｏペプチド（ＮＴ−ｐｒｏペプチド、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの場合には７６アミノ酸）および活性ホルモン（ＢＮＰの場合には３２アミノ酸）になる。好ましくは、本発明によるＢＮＰ型ペプチドは、ＢＮＰまたは、特に、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰである。ＢＮＰは、活性ホルモンであり、そのそれぞれの不活性カウンターパートＮＴ−ｐｒｏＢＮＰよりも短い半減期を有する。
【００３７】
ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）は、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、および上皮細胞によって分泌されることが知られている３０ｋＤａのモジュラー糖タンパク質である（Ｏｎｏ，Ｙ．，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ２０２（１９９４）１４９０〜１４９６）。好ましくは、「ＩＧＦＢＰ−７」という用語は、ヒトＩＧＦＢＰ−７を指す。このタンパク質の配列は、当技術分野においてよく知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（Ｑ１６２７０、ＩＢＰ７＿ＨＵＭＡＮ）を介して、またはＧｅｎＢａｎｋ（ＮＰ＿００１２４０７６４．１）を介してアクセス可能である。バイオマーカーＩＧＦＢＰ−７の詳細な定義は、例えば、本明細書によって参照によりその全体が組み込まれている、ＷＯ２００８／０８９９９４において提供されている。ＩＧＦＢＰ−７の２つのアイソフォーム、アイソフォーム１および２が存在し、これらは、選択的スプライシングによって産生される。本発明の一実施形態では、両方のアイソフォームの総量が測定される（配列については、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリー（Ｑ１６２７０−１およびＱ１６２７０−２）を参照されたい）。
【００３８】
バイオマーカー「ＣＫ−ＭＢ」（筋−脳型クレアチンキナーゼ、「クレアチンキナーゼ−ＭＢ」または「ＣＰＫ−ＭＢ」とも呼ばれる）は、当技術分野においてよく知られている。それは、多様な組織および細胞型によって発現される酵素であるクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の３つのアイソザイムのうちの１つである（ＥＣ２．７．３．２）。この酵素は、クレアチンの変換を触媒し、アデノシン三リン酸を使用してホスホクレアチンおよびアデノシン二リン酸を生成する。クレアチンキナーゼは、脳型（Ｂ）または筋型（Ｍ）サブユニットでありうる２つのサブユニットを含む。アイソザイムＣＫ−ＭＢは、脳型および筋型サブユニットを含む。ＣＫ−ＭＢの主な源は、心筋である。しかし、それは、骨格筋においても見出される。
【００３９】
「心臓トロポニン」という用語は、心臓の細胞および、好ましくは、心内膜下細胞において発現されるすべてのトロポニンアイソフォームを指す。これらのアイソフォームは、例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  １９９５、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第７６巻、第４号：６８１〜６８６およびＦｅｒｒｉｅｒｅｓ  １９９８、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４４：４８７〜４９３に記載のように、当技術分野においてよく特徴付けされている。好ましくは、心臓トロポニンとは、トロポニンＴまたはトロポニンＩ、および、より好ましくは、トロポニンＴを指す。この用語は、トロポニンＣを包含しない。ヒトトロポニンＴおよびヒトトロポニンＩのアミノ酸配列は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９５年４月；７６（４）：６８１〜６およびＦｅｒｒｉｅｒｅｓ  １９９８、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４４：４８７〜４９３に開示されている。
【００４０】
本発明は、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーとの組合せでＡｎｇ−２の量を決定することも意図する。一実施形態では、さらなるバイオマーカーは、Ａｎｇ−１である。別の実施形態では、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーは、ＢＮＰ型ペプチドおよび／または心臓トロポニンなどの心臓バイオマーカーである。心臓バイオマーカーのさらなる決定は、本発明の予測または診断の特異度を高めることを可能にする。さらに、Ａｎｇ−１のさらなる決定は、感度を高めるのを補助する。感度は、反対に働きかつ発現されたバイオマーカーの比（例えば、Ａｎｇ−１／Ａｎｇ−２）を形成することによって高まる。
【００４１】
本発明の方法および使用に従って決定されうるバイオマーカーの好ましい組合せは、以下の通りである：
・  Ａｎｇ−２およびＢＮＰ型ペプチド、特に、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、
・  Ａｎｇ−２および心臓トロポニン、特に、ｃＴｎＴ−ｈｓ（高感度トロポニンＴ）、
・  Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１、または
・  Ａｎｇ−２、心臓トロポニン、例えば、ｃＴｎＴなど、ＢＮＰ型ペプチド、特に、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ。
【００４２】
さらに好ましい組合せは、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−１およびＢＮＰ型ペプチド、例えば、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰなどである。したがって、上述の量が決定される。さらに、Ａｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比を算出することおよび算出された比を参照比と比較することが想定される。ＢＮＰ型ペプチドの量は、参照量と比較される。
【００４３】
本発明の方法の好ましい実施形態では、決定されることになるさらなるバイオマーカーは、Ａｎｇ−１である。したがって、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびバイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量の組み合わされた決定が想定される。さらなるステップにおいて、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１の決定された量は、参照量と比較される。代替的に、アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比を算出することが想定される。次のステップにおいて、前記比は、参照比と比較される。
【００４４】
したがって、本発明は、対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法にも関し、前記方法は、
（ａ）対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびバイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量を決定するステップと、
（ｂ）アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比を算出するステップと、
（ｃ）算出された比を参照比と比較するステップと
を含む。
【００４５】
心房細動の再発の予測は、比較ステップ（ｃ）の結果に基づくものとする。したがって、該方法は、ステップ（ｃ）の結果に基づいて対象において心房細動の再発のリスクを予測するさらなるステップ（ｄ）を含んでいてもよい。
【００４６】
本明細書中で言及される場合、「比を算出すること」という用語は、Ａｎｇ−２の量およびＡｎｇ−１の量の比を、前記量を除算することによって、またはＡｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量を関係付ける他のいずれかの比較可能な数学的計算を行うことによって算出することに関する。好ましい実施形態では、比を算出するために、Ａｎｇ−２の量をＡｎｇ−１の量で除算する（したがって、Ａｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比が算出される）。別の好ましい実施形態では、比を算出するために、Ａｎｇ−１の量をＡｎｇ−２の量で除算する（したがって、Ａｎｇ−２の量に対するＡｎｇ−１の量の比が算出される）。
【００４７】
本明細書中で言及される場合、バイオマーカーの量を「決定すること」という用語は、バイオマーカーの定量、例えば、本明細書中の他の場所に記載の適切な検出方法を用いて試料中のバイオマーカーのレベルを測定することを指す。「測定すること」および「決定すること」という用語は、本明細書中で互換可能に使用される。
【００４８】
一実施形態では、バイオマーカーの量は、バイオマーカーに特異的に結合する作用剤と試料を接触させること、それによって作用剤と前記バイオマーカーとの間で複合体を形成すること、形成した複合体の量を検出すること、およびそれによって前記バイオマーカーの量を測定することによって測定される。
【００４９】
本明細書中で言及されるバイオマーカーは、当技術分野において一般的に知られている方法を使用して検出することができる。検出方法は、一般的に、試料中のバイオマーカーの量を定量するための方法（定量方法）を包含する。以下の方法のうちのどれがバイオマーカーの定性的および／または定量的な検出のために好適であるかは当業者に一般的に知られている。試料は、例えば、タンパク質について、市販されている、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、蛍光および発光に基づくイムノアッセイのような、ウエスタンおよびイムノアッセイを使用して、都合良くアッセイすることができる。バイオマーカーを検出するためのさらに好適な方法としては、ペプチドまたはポリペプチドに特異的な物理的または化学的特性、例えば、その正確な分子量またはＮＭＲスペクトルなどを測定することなどが挙げられる。前記方法は、例えば、バイオセンサー、イムノアッセイと対にされた光学装置、バイオチップ、分析装置、例えば、質量分析計、ＮＭＲ分析計、またはクロマトグラフィー装置などを含む。さらに、方法としては、マイクロプレートＥＬＩＳＡに基づく方法、完全に自動化されたまたはロボット的なイムノアッセイ（例えば、Ｅｌｅｃｓｙｓ（商標）分析計上で利用可能である）、ＣＢＡ（酵素的コバルト結合アッセイ、例えば、Ｒｏｃｈｅ−Ｈｉｔａｃｈｉ（商標）分析計上で利用可能である）、およびラテックス凝集反応アッセイ（例えば、Ｒｏｃｈｅ−Ｈｉｔａｃｈｉ（商標）分析計上で利用可能である）などが挙げられる。
【００５０】
本明細書中で言及されるバイオマーカータンパク質の検出のために、こうしたアッセイ形態を使用する広範囲のイムノアッセイ技術が利用可能であり、例えば、米国特許第４，０１６，０４３号、第４，４２４，２７９号、および第４，０１８，６５３号を参照されたい。これらは、従来の競合的結合アッセイにおいてだけでなく、非競合的な型の１部位アッセイおよび２部位アッセイすなわち「サンドイッチ」アッセイの両方を含む。これらのアッセイは、標的バイオマーカーに対する、標識化抗体の直接的な結合も含む。
【００５１】
サンドイッチアッセイは、最も有用なイムノアッセイの１つである。
電気化学発光標識を用いる方法は、よく知られている。こうした方法は、特別な金属錯体の能力を使用して、酸化によって、励起状態を達成し、そこから基底状態に壊変して、電気化学発光を放出する。概説については、Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｍ．Ｍ．、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０４（２００４）３００３〜３０３６を参照されたい。
【００５２】
一実施形態では、バイオマーカーの量を測定するために使用されることになる検出抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は、ルテニウム化またはイリジウム化される。したがって、抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は、ルテニウム標識を含むものとする。一実施形態では、前記ルテニウム標識は、ビピリジン−ルテニウム（ＩＩ）複合体である。あるいは抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は、イリジウム標識を含むものとする。一実施形態では、前記イリジウム標識は、ＷＯ２０１２／１０７４１９に開示されている複合体である。
【００５３】
ポリペプチド（Ａｎｇ−２など）の量の測定は、好ましくは、（ａ）ポリペプチドを、前記ポリペプチドに特異的に結合する作用剤と接触させるステップ、（ｂ）結合しなかった作用剤を（任意選択で）除去するステップ、（ｃ）結合した結合剤、すなわち、ステップ（ａ）において形成された作用剤の複合体の量を測定するステップを含んでいてもよい。好ましい実施形態によれば、接触させる、除去するおよび測定する前記ステップは、分析計ユニットによって行われてもよい。一部の実施形態によれば、前記ステップは、前記システムの単一の分析計ユニットによってまたは操作可能な互いの通信において２つ以上の分析計ユニットによって行われてもよい。例えば、特定の実施形態によれば、本明細書中に開示されている前記システムは、接触させるおよび除去する前記ステップを行うための第１の分析計ユニットと、測定する前記ステップを行う、輸送ユニット（例えば、ロボットアーム）によって前記第１の分析計ユニットに操作可能に連結された第２の分析計ユニットとを含んでいてもよい。
【００５４】
バイオマーカーに特異的に結合する作用剤（本明細書中で「結合剤」とも呼ばれる）は、結合した作用剤の検出および測定を可能する標識に共有結合的または非共有結合的にカップリングされてもよい。標識は、直接的または間接的な方法によって行われてもよい。直接的な標識は、標識を結合剤に直接（共有結合的または非共有結合的に）カップリングすることを含む。間接的な標識は、二次結合剤を一次結合剤に（共有結合的または非共有結合的に）結合することを含む。二次結合剤は、一次結合剤に特異的に結合しなければならない。前記二次結合剤は、好適な標識とカップリングされてもよく、かつ／または二次結合剤に結合している三次結合剤の標的（受容体）であってもよい。好適な二次およびより高次の結合剤としては、抗体、二次抗体、およびよく知られたストレプトアビジン−ビオチンシステム（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）などが挙げられうる。結合剤または基質は、当技術分野において知られている１種または複数のタグで「タグ付け」されていてもよい。こうしたタグは、その後、より後の順番の結合剤の標的であってもよい。好適なタグとしては、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｈｉｓタグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃタグ、インフルエンザＡウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質などが挙げられる。ペプチドまたはポリペプチドの場合には、タグは、Ｎ末端および／またはＣ末端にあることが好ましい。好適な標識は、適切な検出法によって検出可能なあらゆる標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダン（ａｃｒｉｄａｎ）エステル、ルミノール、ルテニウム錯体、イリジウム錯体、酵素的に活性な標識、放射性標識、磁気標識（常磁性および超常磁性の標識を含む、「例えば、磁気ビーズ」）、および蛍光標識などが挙げられる。酵素的に活性な標識としては、例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびそれらの誘導体などが挙げられる。検出のための好適な基質としては、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’−５，５’−テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ−ＢＣＩＰ（４−ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−リン酸塩、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓからの既製のストック溶液として入手可能である）、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＥＣＦ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）などが挙げられる。好適な酵素−基質の組合せは、当技術分野において知られている方法に従って（例えば、感光性フィルムまたは好適なカメラシステムを使用して）測定することができる、有色の反応生成物、蛍光または化学発光を生じる結果となってもよい。酵素反応の測定に関しては、上記の基準が同様に適用される。典型的な蛍光標識としては、蛍光タンパク質（ＧＦＰおよびその誘導体など）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、テキサスレッド、フルオレセイン、およびＡｌｅｘａ色素（例えば、Ａｌｅｘａ  ５６８）などが挙げられる。さらなる蛍光標識は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕ��ａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｏｒｅｇｏｎ）から入手可能である。さらに、蛍光標識としての量子ドットの使用が意図される。放射性標識は、既知のかつ適切なあらゆる方法、例えば、感光性フィルムまたは蛍光体撮像機によって検出することができる。
【００５５】
ポリペプチドの量は、また好ましくは、以下のように測定されてもよい：（ａ）本明細書中の他の場所に記載のようなポリペプチドのための結合剤を含む固体支持体をペプチドまたはポリペプチドを含む試料と接触させることならびに（ｂ）該支持体に結合しているペプチドまたはポリペプチドの量を測定すること。支持体を製造するための材料は、当技術分野においてよく知られており、それには、特に、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンのチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、メンブレン、シート、デュラサイト（ｄｕｒａｃｙｔｅ）、反応トレーのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどが挙げられる。
【００５６】
さらに一態様において、試料は、結合剤と少なくとも１種のマーカーとの間で形成された複合体から、形成された複合体の量の測定前に除去される。したがって、一態様では、結合剤は、固体支持体上に固定化されていてもよい。さらに一態様において、試料は、洗浄溶液を適用することによって、固体支持体上の形成された複合体から除去することができる。
【００５７】
「サンドイッチアッセイ」は、サンドイッチアッセイ技術のいくつかのバリエーションを包含する最も有用なかつ一般的に使用されるアッセイの１つである。簡単に説明すると、典型的なアッセイでは、標識されていない（捕捉）結合剤は、固体基質上に固定化されまたは固定化されてもよく、かつ試験されることになる試料は捕捉結合剤と接触するようにされる。結合剤−バイオマーカー複合体の形成を可能にするのに十分な時間の、好適な期間のインキュベーションの後に、検出可能なシグナルを生成する能力のあるレポーター分子で標識された二次（検出）結合剤は、次いで、添加およびインキュベートされ、結合剤−バイオマーカーで標識された結合剤が別の複合体を形成するのに十分な時間が与えられる。未反応の物質はいずれも洗い流されてもよく、検出結合剤に結合したレポーター分子によって生成されるシグナルの観察によってバイオマーカーの存在が決定される。これらの結果は、可視シグナルの簡単な観察による、定性的なものであってもよく、または既知の量のバイオマーカーを含む対照試料との比較によって定量化されてもよい。
【００５８】
典型的なサンドイッチアッセイのインキュベーションステップは、必要に応じてかつ適切に変更されてもよい。こうしたバリエーションとしては、例えば、同時のインキュベーションなどが挙げられ、そこでは、２種以上の結合剤およびバイオマーカーが共インキュベートされる。例えば、分析されることになる試料および標識された結合剤の両方が、固定化された捕捉結合剤に同時に付加される。分析されることになる試料および標識された結合剤を最初にインキュベートし、その後、固相に結合した抗体または固相に結合する能力のある抗体を添加することも可能である。
【００５９】
特定の結合剤とバイオマーカーとの間で形成された複合体は、試料中に存在するバイオマーカーの量と比例するものとする。適用されることになる結合剤の特異度および／または感度は、特異的に結合する能力のある、試料中に含まれる少なくとも１種のマーカーの比例の程度を定めることが理解されるであろう。測定をどのように行うことができるかについてのさらなる詳細は、本明細書中の他の場所でも見出される。形成された複合体の量は、試料中に実際に存在する量を反映するバイオマーカーの量に変換されるものとする。
【００６０】
「結合剤」、「特異的な結合剤」、「検体特異的な結合剤」、「検出剤」および「バイオマーカーに特異的に結合する作用剤」という用語は、本明細書中で互換可能に使用される。好ましくは、それは、対応するバイオマーカーに特異的に結合する結合部分を含む作用剤に関する。「結合剤」または「作用剤」の例は、核酸プローブ、核酸プライマー、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、アプタマー、抗体、抗体断片、ペプチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）または化学化合物である。好ましい作用剤は、測定されることになるバイオマーカーに特異的に結合する抗体である。本明細書中の「抗体」という用語は、最も広義の意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、およびそれらが望ましい抗原結合活性を示す限り抗体断片（すなわち、それらの抗原結合性フラグメント）を含むがこれらに限定されない多様な抗体構造を包含する。好ましくは、抗体は、ポリクローナル抗体である。より好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００６１】
「特異的な結合」または「特異的に結合する」という用語は、結合している対分子が、他の分子には有意には結合しない条件下で互いに対する結合を示す結合反応を指す。「特異的な結合」または「特異的に結合する」という用語は、バイオマーカーとしてのタンパク質またはペプチドについて言及しているときには、結合剤が、対応するバイオマーカーに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合する結合反応を指す。「特異的な結合」または「特異的に結合する」という用語は、好ましくは、その標的分子に対して少なくとも１０−８Ｍの、またはさらにより好ましくは、少なくとも１０−９Ｍの親和性を指す。「特異的な」または「特異的に」という用語は、試料中に存在する他の分子が、標的分子に特異的な結合剤に有意には結合しないことを表すために使用される。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「量」という用語は、本明細書中で言及されるバイオマーカーの絶対量、前記バイオマーカーの相対量または濃度、ならびにそれと相関するまたはそれから導かれうるあらゆる値またはパラメーターを包含する。こうした値またはパラメーターは、直接的な測定によって前記ペプチドから得られたすべての特異的な物理的または化学的な特性からの強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはＮＭＲスペクトルにおける強度値を含む。さらに、包含されるのは、本明細書中の他の場所に明記されている間接的な測定によって得られるすべての値またはパラメーター、例えば、生物学的な読み出しシステムからペプチドに応答して測定される応答量または特異的に結合したリガンドから得られる強度シグナルである。上述の量またはパラメーターと相関している値は、すべての標準的な数学的演算によって得られてもよいことは理解されるべきである。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「比較すること」という用語は、対象からの試料中のバイオマーカーの量を、本明細書中の他の場所に明記されているバイオマーカーの参照量と比較することを指す。本明細書中で使用される場合、比較することとは、通常、対応するパラメーターまたは値の比較を指すことは理解されるべきであり、例えば、絶対量は絶対参照量と比較されるのに対して、濃度は参照濃度と比較され、または試料中のバイオマーカーから得られる強度シグナルは、参照試料から得られる同種の強度シグナルと比較される。比較は、手動で行われても、またはコンピューターによって補助されてもよい。したがって、比較は、計算装置によって行われてもよい。対象からの試料中の測定または検出されたバイオマーカーの量の値および参照量は、例えば、互いに比較することもでき、かつ前記比較は、比較のためのアルゴリズムを実行するコンピュータープログラムによって自動的に行われてもよい。前記評価を行うコンピュータープログラムは、望ましい評価を好適な出力フォーマットで提供することになる。コンピューターによって補助される比較では、測定された量の値は、コンピュータープログラムによってデータベース内に保存された好適な参照に対応する値と比較されてもよい。コンピュータープログラムは、比較の結果、すなわち、自動的に得られた、好適な出力フォーマットの望ましい評価をさらに評価してもよい。コンピューターによって補助される比較では、測定された量の値は、コンピュータープログラムによってデータベース内に保存された好適な参照に対応する値と比較されてもよい。コンピュータープログラムは、比較の結果、すなわち、自動的に得られた、好適な出力フォーマットの望ましい評価をさらに評価してもよい。
【００６４】
本発明によれば、（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量は、参照と比較されるものとする。参照は、好ましくは、参照量である。本明細書中で使用される場合、「参照量」という用語は、好ましくは、（ｉ）心房細動の再発のリスクがある対象の群または（ｉｉ）心房細動の再発のリスクがない対象の群のいずれかへの対象の割り当てを可能にする量を指す。好適な参照量は、試験試料と共に、すなわち、同時にまたは続いて、分析されることになる参照試料から決定されうる。
【００６５】
参照量は、原則として、標準的な統計の方法を適用することにより、上記に明記されているように、所与のバイオマーカーについての平均値または相加平均値に基づき、対象のコホートについて算出されうる。特に、ある事象、またはそうではないことの診断を目的としている方法などの試験の精度は、その受診者動作特性（ＲＯＣ）によって最も良く説明される（特に、Ｚｗｅｉｇ  １９９３、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３９：５６１〜５７７を参照されたい）。ＲＯＣグラフは、決定閾値を観察データの全範囲にわたって連続的に変化させることから得られる感度と特異度のすべての対のプロットである。診断方法の臨床性能は、その精度、すなわち、対象をある予後または診断に正確に割り当てるその能力に依存する。ＲＯＣプロットは、区別を行うのに好適な全範囲の閾値について感度を１−特異度に対してプロットすることにより、２つの分布間の重複を示す。ｙ軸上は感度、または真陽性画分であり、これは、真陽性試験結果の数と偽陰性試験結果の数の積に対する真陽性試験結果の数の比として定義される。これは、罹患サブグループ単独から計算される。ｘ軸上は偽陽性画分、すなわち、１−特異度であり、これは真陰性結果の数と偽陽性結果の数の積に対する偽陽性結果の数の比として定義される。これは、特異度の指数であり、完全に非罹患サブグループから算出される。真陽性画分と偽陽性画分は２つの異なるサブグループからの試験結果を使用することによって完全に別々に算出されるので、ＲＯＣプロットはそのコホートにおけるその事象の罹患率とは独立している。ＲＯＣプロット上の各点は、特定の決定閾値に対応する感度／１−特異度の対を表す。完全識別を伴う試験（結果の２つの分布に重複がない）は、真陽性画分が１．０、すなわち１００％（完全感度）でありかつ偽陽性画分が０（完全特異度）である上左端を通るＲＯＣプロットを有する。識別を伴わない試験（２つの群についての結果が同一の分布）についての理論的プロットは、下左端から上右端への４５°の対角線である。大部分のプロットは、これらの２つの端の間に入る。ＲＯＣプロットが完全に４５°の対角線の下側にある場合、これは、「陽性」についての基準を「より大きい」から「より小さい」に逆転させることによって容易に対処され、またはその逆もまた同様である。定性的に、プロットが上左端に近づくほど、試験の全体的な精度は高くなる。望ましい信頼区間に依存して、閾値は、感度および特異度それぞれの適切なバランスで、所与の事象についての診断を可能にするＲＯＣ曲線から導くことができる。したがって、本発明の上述の方法のために使用されることになる参照、すなわち、心房細動の再発のリスクがある対象か心房細動の再発のリスクがない対象かを区別することを可能にする閾値は、好ましくは、上記のように前記コホートについてのＲＯＣを確立することおよびそこから閾値量を導くことによって、生成することができる。診断方法に望ましい感度および特異度に依存して、ＲＯＣプロットは、好適な閾値を導くことを可能にする。最適な感度は、心房細動の再発のリスクがある対象を除く（すなわち、除外する）ことが望まれるのに対して、最適な特異度は、心房細動の再発のリスクがあると評価されることになる対象が想定（すなわち、包含）されることが理解されるであろう。一実施形態では、本発明の方法は、対象が心房細動の再発のリスクがあることの予測を可能にする。好ましくは、Ａｎｇ−２の量（任意選択で、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量）が参照量を超える場合、対象は、リスクがある。代替の実施形態では、本発明の方法は、対象が心房細動の再発のリスクがないことの予測を可能にする。好ましくは、Ａｎｇ−２の量（任意選択で、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量）が参照量未満の場合、対象は、リスクがない。
【００６６】
好ましい実施形態では、本明細書中の「参照量」という用語は、予め決定された値を指す。前記予め決定された値は、心房細動の再発のリスクがある対象と心房細動の再発のリスクがない対象とを区別することを可能にするものとする。
【００６７】
好ましくは、参照量を超える、試験対象の試料中のＡｎｇ−２の量は、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆する。また好ましくは、参照量未満の、試料中のＡｎｇ−２の量は、対象が心房細動の再発のリスクがないことを示唆する。
【００６８】
参照量の（すなわち、参照量と本質的に同一のまたは等しい）、試験対象の試料中のＡｎｇ−２の量も、好ましくは、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆する。
好ましい実施形態では、参照量は、心房細動の再発のリスクがあることが知られている対象または一群の対象に由来する。別の好ましい実施形態では、参照量は、心房細動の再発のリスクがないことが知られている対象または一群の対象に由来する。
【００６９】
ｉ）参照量が、心房細動の再発のリスクがないことが知られている対象または一群の対象に由来する場合、参照量と比較して減少した、対象の試料中のバイオマーカーＡｎｇ−２の量は、心房細動の再発のリスクがない対象を示す。
【００７０】
ｉｉ）参照量が、心房細動の再発のリスクがあることが知られている対象または一群の対象に由来する場合、参照量と同じであるまたは参照量と比較して増加した、対象の試料中のバイオマーカーＡｎｇ−２の量は、心房細動の再発のリスクがある対象を示す。
【００７１】
２種以上のバイオマーカーの量（例えば、Ａｎｇ−２の量およびＢＮＰ型ペプチドの量）が決定される場合、それぞれの量はそれぞれの参照量と（例えば、Ａｎｇ−２の量はＡｎｇ−２の参照量と、かつＢＮＰ型ペプチドの量はＢＮＰ型ペプチドの参照量と）比較されることが想定される。
【００７２】
試験されることになる対象が発作性または持続性の心房細動を患っているかどうかに依存して、異なる参照の量または比が心房細動の再発の予測に適用されてもよい。当業者には理解されるであろうが、持続性心房細動を患っている試験対象における予測のための参照量または参照比は、発作性心房細動を患っている試験対象における予測のための参照量または参照比よりも大きくなるであろう。
【００７３】
好ましくは、参照量を超える（または参照量の）、試験対象の試料中のバイオマーカーの量は、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆する。また好ましくは、参照量未満の、試料中のバイオマーカーの量は、対象が心房細動の再発のリスクがないことを示唆する。これは、好ましくは、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンに適用される。したがって、例えば、Ａｎｇ−２およびＢＮＰ型ペプチドの量が決定される場合、参照量と比較して増加した（または参照量以上である）両方のバイオマーカーの量は、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆するのに対して、参照量と比較して減少した両方のバイオマーカーの量は、対象が心房細動の再発のリスクがないことを示唆する。
【００７４】
上記で言及されるバイオマーカーとは対照的に、参照量と比較して減少した量のＡｎｇ−１は、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆するのに対して、参照量と比較して本質的に同量または増加した量のＡｎｇ−１は、対象が心房細動の再発のリスクがないことを示唆する。したがって、（Ａｎｇ−１の参照量と比較して）減少した量のＡｎｇ−１と組み合わされた、（Ａｎｇ−２の参照量と比較して）増加した量のＡｎｇ−２は、対象が心房細動の再発のリスクがあることを示唆するのに対して、（Ａｎｇ−１の参照量と比較して）本質的に同量または増加した量のＡｎｇ−１と組み合わされた、（Ａｎｇ−２の参照量と比較して）減少した量のＡｎｇ−２は、対象が心房細動の再発のリスクがないことを示唆する。
【００７５】
上記のように、本発明は、Ａｎｇ−２の量およびＡｎｇ−１の量の比の（すなわち、Ａｎｇ−２の量およびＡｎｇ−１の量の）計算も包含してもよい。前記比は、参照比と比較されるものとする。好ましくは、参照比は、ＡＦの再発のリスクがある対象とＡＦの再発のリスクがない対象とを区別することを可能にするものとする。
【００７６】
一実施形態では、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比が算出される。したがって、参照比は、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の参照比とする。好ましくは、参照比を超える、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、ＡＦの再発のリスクがある対象を示す。また好ましくは、参照比未満の、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、ＡＦの再発のリスクがない対象を示す。
【００７７】
本発明の方法の一実施形態では、前記方法は、予測の結果に基づいて好適な療法を推奨および／または開始するステップをさらに含む。好ましくは、対象がＡＦの再発のリスクがあることが予測された場合に好適な療法が推奨または開始される。好適な療法は、心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とするいかなる療法であってもよい。好ましくは、前記療法は、少なくとも１種の抗凝固剤の投与、調律制御およびアブレーションからなる群から選択される。前記療法は、当技術分野においてよく知られており、例えば、本明細書によって参照によりその全体が組み込まれているＦｕｓｔｅｒ  Ｖら  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１１；１２３：ｅ２６９〜ｅ３６７において概説されている。
【００７８】
一実施形態では、該療法は、少なくとも１種の抗凝固剤の投与である。少なくとも１種の抗凝固剤の投与は、血液の凝固および関連した卒中を減少させるまたは予防することを目的とするものとする。一実施形態では、少なくとも１種の抗凝固剤は、ヘパリン、クマリン誘導体、例えば、ワルファリンまたはジクマロールなど、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）、抗トロンビンＩＩＩ、第ＩＸａ因子阻害剤、第Ｘａ因子阻害剤、第Ｖａ因子および第ＶＩＩＩａ因子の阻害剤ならびにトロンビン阻害剤からなる群から選択される。
【００７９】
本明細書中で上記に示されている定義は、変更すべき点を変更して、本発明の以下の実施形態に適用される。
本発明は、対象において心房細動を診断するための方法にさらに関し、前記方法は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む。
【００８０】
「試料」、「対象」、「比較」、「量」などの用語は、上記に定義されている。それらの定義が準用される。
本発明の上述の方法の好ましい実施形態では、該方法は、（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む。
【００８１】
したがって、本発明は、特に、対象において心房細動を診断するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を（１種または複数の）参照量と比較するステップと
を含む。
【００８２】
好ましくは、心房細動の診断は、比較ステップ（ｂ）の結果に基づく。したがって、本発明の方法は、ステップ（ｂ）の結果に基づいて対象において心房細動を診断するさらなるステップ（ｃ）を含んでいてもよい。
【００８３】
上述の方法によって試験されることになる対象は、心房細動を患っていると疑われる対象であるとする。好ましくは、前記対象は、７０歳よりも高齢である。好ましくは、ＡＦを患っていると疑われる対象は、ＡＦを診断するための方法を行う前にＡＦの症状を示しているものとする。前記症状は、通常、一過性であり、数秒で生じてもよく、かつすぐに消滅してもよい。心房細動の症状としては、眩暈、失神、息切れおよび、特に、心臓の動悸などが挙げられる。本明細書中の他の場所に記載のように、対象は、試料が採取されるときに、心房細動のエピソードを経験していないことが意図される。したがって、対象は、試料が採取されるときに、正常洞調律を有するものとする。したがって、対象は、洞調律にあるものとする。
【００８４】
好ましくは、「診断すること」という用語は、本明細書中で使用される場合、本発明の方法に従って言及される対象が心房細動（ＡＦ）を患っているか、またはいないかどうかを評価することを意味する。一実施形態では、対象がＡＦを患っていることが診断される。代替の実施形態では、対象がＡＦを患っていないことが診断される。
【００８５】
本発明の方法の一実施形態では、診断されることになる心房細動は、発作性心房細動である。診断されることになる心房細動が発作性心房細動である場合、試験されることになる対象は、持続性ＡＦを患っていないことが想定される。さらに、試験されることになる対象は、永続性ＡＦを患っていないことが想定される。特に、対象は、持続性および永続性ＡＦを患っていることを知っていないものとする。
【００８６】
本発明の方法の他の実施形態では、診断されることになる心房細動は、持続性心房細動である。
当業者には理解されるであろうが、本明細書中に記載の診断は、通常、診断されることになるすべて（すなわち、１００％）の対象について正確であることは意図されない。しかし、この用語は、統計的に有意な一部の対象が正確に診断されうることを必要とする（例えば、コホート研究におけるコホート）。したがって、対象がＡＦを患っているか、またはいないかどうかの実際の診断は、診断の確認などのさらなるステップを含んでいてもよい。したがって、本発明の文脈中の診断は、対象が心房細動を患っているか、またはいないかどうかを医師が評価するのを補助することになる。したがって、本発明の文脈中の「診断すること」という用語は、好ましくは、対象が心房細動を患っているか、またはいないかどうかを医師が評価するのを補助することを包含する。
【００８７】
一部が統計的に有意であるかどうかは、多様なよく知られた統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値決定、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定などを使用して、それ以上やるべきことなく当業者によって決定されうる。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３の中で見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。より好ましくは、母集団のうちの少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の対象は、本発明の方法によって適切に診断されうる。
【００８８】
上述の方法によれば、決定された（１種または複数の）バイオマーカーは、参照と比較されるものとする。参照は、好ましくは、参照量である。上述の方法に関して使用される場合、「参照量」という用語は、好ましくは、（ｉ）心房細動を患っている対象の群または（ｉｉ）心房細動を患っていない群のいずれかへの対象の割り当てを可能にする量を指す。好適な参照量は、試験試料と共に、すなわち、同時にまたは続いて、分析されることになる参照試料から決定されうる。
【００８９】
参照量は、上記のように決定されうる。したがって、本発明の上述の方法のために使用されることになる参照、すなわち、心房細動を患っている対象かＡＦを患っていない対象かを区別することを補助する閾値は、好ましくは、ＲＯＣ曲線を確立することによって、生成されうる。診断方法に望ましい感度および特異度に依存して、ＲＯＣプロットは、好適な閾値を導くことを可能にする。最適な感度は、心房細動の再発のリスクがある対象を除く（すなわち、除外する）ことが望まれるのに対して、最適な特異度は、心房細動を患っていると評価されることになる対象が想定（すなわち、包含）されることが理解されるであろう。一実施形態では、本発明の方法は、心房細動を患っていないという診断を可能にする。好ましくは、Ａｎｇ−２の量（任意選択で、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量）が参照量を超える場合、対象は、ＡＦを患っている。代替の実施形態では、本発明の方法は、対象が心房細動を患っていないことの診断を可能にする。好ましくは、Ａｎｇ−２の量（任意選択で、少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量）が参照量未満の場合、対象は、ＡＦを患っていない。
【００９０】
好ましい実施形態では、本明細書中の「参照量」という用語は、予め決定された値を指す。前記予め決定された値は、心房細動を患っている対象と心房細動を患っていない対象とを区別することを可能にするものとする。
【００９１】
好ましくは、参照量以上の、試験対象の試料中のＡｎｇ−２の（および任意選択で上記のようなさらなるバイオマーカー、特に、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンの）量は、対象がＡＦを患っていることを示唆する。また好ましくは、参照量未満の、試料中のＡｎｇ−２の（および任意選択で上記のようなさらなるマーカー、特に、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンの）量は、対象が心房細動を患っていないことを示唆する。
【００９２】
少なくとも１種のさらなるバイオマーカーがＡｎｇ−１である場合、以下の診断アルゴリズムが適用される。このマーカーは、ＡＦを患っている対象において減少している。したがって、Ａｎｇ−２の量が、このマーカー（すなわち、Ａｎｇ−２）の参照量を超える場合、およびＡｎｇ−１の量が、このマーカーの参照量未満である場合、対象は、好ましくは、ＡＦを患っている。したがって、Ａｎｇ−２の量が、このマーカー（すなわち、Ａｎｇ−２）の参照量以下である場合、およびＡｎｇ−１の量が、このマーカー（すなわち、Ａｎｇ−１）の参照量以上である場合、対象は、好ましくは、ＡＦを患っていない。
【００９３】
好ましいマーカーの組合せは、ＡＦの再発のリスクを予測するための方法に関して本明細書中で上記に開示されている。
上述の方法の好ましい実施形態では、決定されることになるさらなるバイオマーカーは、Ａｎｇ−１である。したがって、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびバイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量の組み合わされた決定が想定される。さらなるステップにおいて、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１の決定された量は、参照量と比較される。代替的に、アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比を算出することが想定される。次のステップにおいて、前記比は、参照比と比較される。この比較ステップに基づき、対象がＡＦを患っているかいないかどうかが診断される。好ましくは、参照比を超える、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、ＡＦを患っている対象を示す。また好ましくは、参照比未満の、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、ＡＦを患っていない対象を示す。
【００９４】
本発明はさらに、心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための方法に関し、前記方法は、
（ａ）対象からの第１の試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）対象からの第２の試料中の、ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｃ）第１の試料において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を前記第２の試料中の（１種または複数の）前記バイオマーカーの量と比較するステップと
を含む。
【００９５】
「試料」、「対象」、「比較」、「量」などの用語は、ＡＦの再発のリスクを予測する方法に関して上記に定義されている。それらの定義が準用される。
本明細書中で使用される場合、「モニタリング」という用語は、好ましくは、本明細書中で言及される療法の効果を評価することに関する。したがって、上述の方法は、ステップｃ）において行われる比較ステップの結果に基づいて療法をモニタリングするさらなるステップを含んでいてもよい。当業者には理解されるであろうが、リスクの予測は、通常、１００％の対象について正確であることは意図されない。しかし、この用語は、予測が、適切かつ正確な様式で、統計的に有意な一部の対象についてなされうることを必要とする。したがって、実際のモニタリングは、確認などのさらなるステップを含んでいてもよい。
【００９６】
一部が統計的に有意であるかどうかは、多様なよく知られた統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値決定、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定などを使用して、それ以上やるべきことなく当業者によって決定されうる。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３の中で見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。
【００９７】
上記で言及される方法は、上述のステップから本質的になる方法、またはさらなるステップを含む方法を含む。さらに、本発明の方法は、好ましくは、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法である。さらに、それは、明確に上述されているものに加えてステップを含んでいてもよい。例えば、さらなるステップは、さらなるマーカーの決定と、または試料の前処理と、または該方法によって得られる結果の評価と関連していてもよい。
【００９８】
好ましくは、本発明の方法を行うことにより、対象が前記療法に応答するか、またはしないかどうかを評価することができる。第１の試料と第２の試料を採取する間に対象の状態が改善される場合、対象は、療法に応答する。第１の試料と第２の試料を採取する間に状態が悪化する場合、好ましくは、対象は、療法に応答しない。
【００９９】
好ましくは、第１の試料は、前記療法の開始前に採取される。より好ましくは、試料は、前記療法の開始の１週間以内前に、特に、２週間以内前に採取される。
本発明の上述の方法は、本明細書中で言及される療法によって生じるバイオマーカーの量の変化の評価を含むので、第１の試料は、前記療法の開始後（しかし、第２の試料が採取される前）に採取されてもよい。
【０１００】
したがって、第２の試料は、第１の試料の後に採取されるものとする。第２の試料は、前記療法の開始後に採取されるものとすることは理解されるべきである。
さらに、第２の試料は、第１の試料の採取後の合理的な期間の後に採取されることが特に意図される。本明細書中で言及されるバイオマーカーの量は、すぐには（例えば、１分または１時間以内には）変化しないことは理解されるべきである。したがって、この文脈における「合理的な」とは、第１の試料と第２の試料を採取する間の間隔であって（１種または複数の）バイオマーカーの調整を可能にする間隔を指す。したがって、第２の試料は、好ましくは、前記第１の試料の少なくとも１カ月後、前記第１の試料の少なくとも３カ月、または、特に、少なくとも６カ月後に採取される。
【０１０１】
以下は、好ましくは、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質）に適用される。
【０１０２】
第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の、好ましくは、増加および、より好ましくは、有意な増加、および、最も好ましくは、統計的に有意な増加は、療法に応答しない対象を示す。さらに、第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較して変化していない、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量は、好ましくは、療法に応答しない対象を示す。また、第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の、好ましくは、減少、より好ましくは、有意な減少、最も好ましくは、統計的に有意な減少は、療法に応答する対象を示す。
【０１０３】
以下は、好ましくは、バイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）に適用される：
好ましくは、第１の試料中のバイオマーカーの量と比較して変化していない（等しい）または増加した、第２の試料中のバイオマーカーＡｎｇ−１の量は、療法に応答する対象を示す。また、第１の試料中のバイオマーカーの量と比較した、第２の試料中のバイオマーカーの量の、好ましくは、減少、より好ましくは、有意な減少、最も好ましくは、統計的に有意な減少は、療法に応答しない対象を示す。
【０１０４】
したがって、Ａｎｇ−１およびＡｎｇ−２が決定される場合、例えば、第１の試料中のバイオマーカーの量と比較した、第２の試料中のＡｎｇ−１の量の減少と組み合わされた、第１の試料中のバイオマーカーの量と比較して変化していないまたは増加した、第２の試料中のバイオマーカーＡｎｇ−２の量は、療法に応答しない対象を示す（その逆もまた同様である）。
【０１０５】
療法が心房細動の再発の対象のリスクを低下させる場合、対象は、療法に応答すると考えられる。療法が心房細動の再発の対象のリスクを低下させない場合、対象は、療法に応答しないと考えられる。
【０１０６】
「有意な」および「統計的に有意な」という用語は、当業者によって知られている。したがって、増加または減少が有意または統計的に有意であるかどうかは、多様なよく知られた統計評価ツールを使用して、それ以上やるべきことなく当業者によって決定されうる。例えば、有意な増加または減少は、少なくとも１０％、特に、少なくとも２０％の増加または減少である。
【０１０７】
好ましいバイオマーカーの組合せは、本明細書中の他の場所に開示されている。
上述の方法の好ましい実施形態では、第１および第２の試料において決定されることになるさらなるバイオマーカーは、Ａｎｇ−１である。したがって、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびバイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量の組み合わされた決定が第１および第２の試料において想定される。好ましい実施形態では、ｉ）第１の試料中のアンジオポエチン−２の量および第１の試料中のアンジオポエチン−１の量の比を算出すること（それによって、第１の比を算出すること）、ならびにｉｉ）第２の試料中のアンジオポエチン−２の量および第２の試料中のアンジオポエチン−１の量の比を算出すること（それによって、第２の比を算出すること）が想定される。次のステップにおいて、前記第１の比（すなわち、第１の試料における比）は、第２の比（すなわち、第２の試料における比）と比較される。この比較ステップに基づき、療法は、モニターされる。好ましくは、第１の試料中のＡｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比と比較して増加した、特に、有意に増加した、第２の試料中のＡｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比は、療法に応答する対象を示す。また好ましくは、第１の試料中のＡｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比と比較して減少した、特に、有意に減少した、第２の試料中のＡｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比は、療法に応答しない対象を示す。
【０１０８】
ＡＦの再発を予測することおよびＡＦを診断することに関して本明細書中で上記に示されている定義は、好ましくは、本発明の以下の実施形態に適用される。
本発明は、対象において心房細動をグレード分類するための方法にさらに関し、前記方法は、対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む。
【０１０９】
本発明の上述の方法の好ましい実施形態では、該方法は、（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む。
【０１１０】
したがって、本発明は、特に、対象において心房細動をグレード分類するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）対象からの試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を（１種または複数の）参照量と比較するステップと
を含む。
【０１１１】
好ましくは、心房細動のグレード分類は、比較ステップ（ｂ）の結果に基づく。したがって、本発明の方法は、ステップ（ｂ）の結果に基づいて対象において心房細動をグレード分類するさらなるステップ（ｃ）を含んでいてもよい。
【０１１２】
上述の方法によって試験されることになる対象は、好ましくは、心房細動を患っている。特に、対象は、好ましくは、心房細動を患っていることが（本発明の上述の方法を行う前に）診断されている。したがって、上述の方法は、対象のさらなる分類を可能にするものとする。
【０１１３】
好ましくは、ＡＦをグレード分類するための方法によって試験されることになる対象は、永続性ＡＦを患っていない。
一実施形態では、試験されることになる対象は、試料が採取されるときに、心房細動のエピソードを経験していない。したがって、対象は、試料が採取されるときに、正常洞調律を有する（したがって、洞調律にある）ものとする。
【０１１４】
別の実施形態では、対象は、試料が採取されるときに、心房細動のエピソードを経験している。この実施形態では、対象は、洞調律にない。
好ましくは、「心房細動をグレード分類すること」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象において心房細動の重症度を評価することを意味する。特に、この用語は、この方法に従って言及される対象が軽症型の心房細動または重症型の心房細動を患っているかどうかを評価することを意味する。したがって、この特許請求されている方法を行うことによって、軽症型のＡＦと重症型のＡＦとを区別することができる。軽症型のＡＦは、好ましくは、発作性ＡＦである。重症型のＡＦは、好ましくは、持続性ＡＦである。
【０１１５】
当業者には理解されるであろうが、本明細書中に記載のグレード分類は、通常、グレード分類されることになるすべて（すなわち、１００％）の対象について正確であることは意図されない。したがって、実際のグレード分類は、グレード分類の確認などのさらなるステップを含んでいてもよい。したがって、本発明の文脈中の「グレード分類すること」という用語は、好ましくは、対象が軽症型または重症型の心房細動を患っているかどうかを医師が評価するのを補助することを包含する。
【０１１６】
上述の方法によれば、決定された（１種または複数の）バイオマーカーは、参照と比較されるものとする。参照は、好ましくは、参照量である。上述の方法に関して使用される場合、「参照量」という用語は、好ましくは、（ｉ）軽症型の心房細動を患っている対象の群または（ｉｉ）重症型のＡＦを患っている対象の群のいずれかへの対象の割り当てを可能にする量を指す。上述の方法において適用される参照は、ＡＦを診断するためまたはＡＦの再発を予測するための方法において適用されることになる参照量とは異なっていてもよいことは理解されるべきである。これは、当業者によって考慮に入れられている。
【０１１７】
参照量は、上記のように決定されうる。したがって、本発明の上述の方法のために使用されることになる参照、すなわち、軽症型の心房細動を患っている対象か重症型のＡＦを患っている対象かを区別することを補助する閾値は、好ましくは、ＲＯＣ曲線を確立することによって、生成されうる。
【０１１８】
好ましい実施形態では、本明細書中の「参照量」という用語は、予め決定された値を指す。前記予め決定された値は、軽症型の心房細動を患っている対象と重症型の心房細動を患っている対象とを区別することを可能にするものとする。
【０１１９】
Ａｎｇ−２の量が、軽症型のＡＦ（発作性ＡＦ）を患っている対象におけるＡｎｇ−２の量と比較して、重症型のＡＦ（持続性ＡＦ）を患っている対象において増加していることが本発明の試験において示されている（図２を参照されたい）。したがって、診断アルゴリズムは、以下の通りである：
好ましくは、参照量以上の、試験対象の試料中のＡｎｇ−２の（および任意選択で上記のようなさらなるバイオマーカー、特に、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンの）量は、対象が重症型のＡＦを患っていることを示唆する。また好ましくは、参照量未満の、試料中のＡｎｇ−２の（および任意選択で上記のようなさらなるマーカー、特に、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンの）量は、対象が軽症型のＡＦを患っていることを示唆する。
【０１２０】
Ａｎｇ−２に加えて決定される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーがＡｎｇ−１である場合、以下の診断アルゴリズムが適用される。Ａｎｇ−１は、重症型のＡＦを患っている対象において（軽症型のＡＦを有する対象と比較して）減少している（例えば、図２を参照されたい）。したがって、Ａｎｇ−２の量が、このマーカー（すなわち、Ａｎｇ−２）の参照量を超える場合、およびＡｎｇ−１の量が、このマーカーの参照量未満である場合、対象は、好ましくは、重症型のＡＦを患っている。したがって、Ａｎｇ−２の量が、このマーカー（すなわち、Ａｎｇ−２）の参照量以下である場合、およびＡｎｇ−１の量が、このマーカー（Ａｎｇ−１）の参照量以上である場合、対象は、好ましくは、軽症型のＡＦを患っている。
【０１２１】
好ましいマーカーの組合せは、ＡＦの再発のリスクを予測するための方法に関して本明細書中で上記に開示されている。
上述の方法の好ましい実施形態では、決定されることになるさらなるバイオマーカーは、Ａｎｇ−１である。したがって、バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびバイオマーカーアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量の組み合わされた決定が想定される。さらなるステップにおいて、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１の決定された量は、参照量と比較される。代替的に、アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比を算出することが想定される。次のステップにおいて、前記比は、参照比と比較される。この比較ステップに基づき、ＡＦがグレード分類される。特に、対象が軽症型のＡＦまたは重症型のＡＦを患っているかどうかが区別される。好ましくは、参照比を超える、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、重症型のＡＦを患っている対象を示す。また好ましくは、参照比未満の、Ａｎｇ−１に対するＡｎｇ−２の比は、軽症型のＡＦを患っている対象を示す。
【０１２２】
さらに、本発明は、心房細動の再発のリスクを予測するための、対象からの試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用に関する。
【０１２３】
さらに、本発明は、心房細動を診断するための、対象からの試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用に関する。
【０１２４】
さらに、本発明は、心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための、対象からの第１および第２の試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用に関する。
【０１２５】
最終的に、本発明は、心房細動をグレード分類するための、対象からの試料中のｉ）バイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用に関する。
【０１２６】
本発明の方法に関して示されている定義および説明は、本発明の使用にも適用される（例えば、本明細書中の他の場所に示されている「試料」、「対象」、「作用剤」などの用語の定義を参照されたい）。
【０１２７】
本明細書中に引用されているすべての参考文献は、それらの全開示内容および本明細書中に詳細に言及されている開示内容について、本明細書によって参照により組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１】末梢性動脈疾患、孤立性ＡＦ、喫煙、心拍数、カルディオバージョンあり／なしでの過去６カ月における２回以上のＡＦのエピソードに合わせて調整されたＧＩＳＳＩ−ＡＦにおける最初のＡＦ再発についてのＣｏｘ多変量モデルを示す図である。データは、バイオマーカーのベースライン濃度の１ＳＤの上昇についてのハザード比（ＨＲ）として示されている。
【図２】ＡＦを患っていない２８名の患者に対するＡＦを患っている患者の２８試料における（上方制御された）Ａｎｇ−２／（下方制御された）Ａｎｇ−１の比を用いたＡＦの診断を示す図である。
【実施例】
【０１２９】
本発明は、以下の実施例によって単に例示されることになる。前記実施例は、一切、本発明の範囲を限定する様式で解釈されないものとする。
実施例１：ＧＩＳＳＩ−ＡＦ治験：
ＧＩＳＳＩ−ＡＦ治験は、過去６カ月に症候性のＥＣＧで実証された心房細動の少なくとも２回以上のエピソードによって、または無作為化の１４日前と４８時間前との間の好結果の電気的もしくは薬理学的なカルディオバージョンによって実証された、心房細動、主に、発作性ＡＦの既知の病歴を有する、洞調律にある１４４２名の患者が登録されていた、二重盲検無作為化プラセボ対照多施設治験であり、それらの患者を１２カ月間追跡した（Ｍａｓｓｏｎら  ２０１５  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ  ２９：５５１）。この治験の原理、設計、および結果は、（識別子ＮＣＴ００３７６２７２を有する）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖの下で以前に詳細がすでに公表されている（参照：Ｄｉｓｅｒｔｏｒｉ  Ｍ，ら、Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．２００６；７：２９〜３８；参照  Ｓｔａｓｚｅｗｓｋｙ  Ｌら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ  ２０１５；２９：５５１〜５６１）。
【０１３０】
すべての患者は、４０歳を超える年齢であってかつ登録前の少なくとも１カ月間に心房細動および根底にあるすべての心血管系疾患の安定的な治療を受けていた。事前に処方されていた、心血管系併存症のためのＡＣＥ阻害剤、ベータ遮断薬およびアミオダロンは、摂取の継続が許可されていた。患者を無作為化し、バルサルタンまたはプラセボを投与した。
【０１３１】
主な治験における主要エンドポイントは、（ａ）心房細動の最初の再発までの時間および（ｂ）１年の観察期間において２回以上の心房細動のエピソードを有する患者の割合に対する、アンジオテンシンＩＩ  １型受容体遮断薬、バルサルタンの効果を評価することであった。
【０１３２】
バイオマーカーサブ試験（Ｎ＝３８２）には、１２カ月の経過観察期間中の再発性心房細動を有する２０３名の対象およびそれを有さない１７９名の対照が含まれていた（Ｍａｓｓｏｎ  Ｓら、Ｈｅａｒｔ．２０１０；９６：１９０９〜１４；Ｌａｔｉｎｉ  Ｒら、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１１；２６９：１６０〜７１）。無作為化時ならびに６および１２カ月の経過観察後に血液試料を採取した。
【０１３３】
実施例２：バイオマーカー測定
バイオマーカーＣＫ−ＭＢ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、トロポニンＴおよびビタミンＤの血漿濃度を、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）からの商品化されたＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）試薬を用いて測定した。バイオマーカーＩＧＦＢＰ７およびＡｎｇ−２は、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）からの原型のＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）試薬を用いて測定した。
【０１３４】
ビオチン化されたＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｂｉおよびルテニウム化されたＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｆ（ａｂ’）２−Ｒｕを使用するＡｎｇ−２アッセイ：
特にヒトの血清または血漿試料中のＡｎｇ２の特異的な測定のための電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）は、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ｃｏｂａｓ分析計ｅ６０１を使用して開発された。Ｅｌｅｃｓｙｓ  Ａｎｇ２イムノアッセイは、サンドイッチ原理を介して機能する電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）である。アッセイに含まれる２種の抗体、すなわち、ビオチン化されたモノクローナル抗体ＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞（ＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｂｉ；捕捉抗体）およびモノクローナル抗Ａｎｇ２抗体ＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞のルテニウム化されたＦ（ａｂ’）２断片（ＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｆ（ａｂ’）２−Ｒｕ；検出抗体）があり、これらは、試料中のＡｎｇ２とサンドイッチイムノアッセイ複合体を形成する。複合体は、次いで、固相ストレプトアビジン被覆マイクロ粒子に結合される。これらは、磁気的に電極表面上に捕捉され、電極への電圧の印加に応じて化学発光放出をもたらし、それが光電子増倍管によって測定される。結果は、６台のキャリブレーターのシリーズによって測定範囲にわたる異なる濃度のＡｎｇ２で決定される機器特異的な較正曲線を介して決定する。試料は、アッセイプロトコール２を適用して、２０μｌの量の試料、７５μｌの量の試薬１（Ｒ１）、７５μｌの量の試薬２（Ｒ２）および３０μｌの量の磁気ビーズをピペットで加えて測定する。Ｒ１は、リン酸反応緩衝液中に１．７５μｇ／ｍｌのＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｂｉを含んでおり、試薬２（Ｒ２）は、同じ反応緩衝液中に１μｇ／ｍｌのＭＡＢ＜Ａｎｇ２＞Ｆ（ａｂ’）２−Ｒｕを含んでいる。
【０１３５】
【表１】
2019526041.tif 000002
【０１３６】
バイオマーカーサブ試験の最初の結果は、以前に公表されており（Ｍａｓｓｏｎ  Ｓら、Ｈｅａｒｔ．２０１０；９６：１９０９〜１４；Ｌａｔｉｎｉ  Ｒら、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１１；２６９：１６０〜７１）、そこでは、心臓バイオマーカーであるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはｃＴｎＴ−ｈｓが、ＡＦのエピソード中に上昇していることおよび独立に最初のＡＦ再発と関連付けられることが見出されている。他のマーカーである心臓マーカー（ＭＲ−ｐｒｏＡＮＰ）、血管作動性ペプチド（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ、ＣＴ−ｐｒｏＥＴ１、コペプチン）および炎症性バイオマーカー（ＣＲＰ−ｈｓ）は、心房細動の再発について予測的ではなかった（Ｌａｔｉｎｉ  Ｒら、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０１１；２６９：１６０〜７１）。
【０１３７】
表２は、ＧＩＳＳＩ  ＡＦ試験の６カ月の経過観察の間のＩＧＦＢＰ−７、Ａｎｇ−２、ＣＫ−ＭＢおよびＶｉｔ  Ｂについての結果を示し、再発性心房細動を有する患者において血液バイオマーカーが上昇しているかどうか、情報を提供している。患者は、ベースラインにおいて洞調律（ＳＲ）にあった。
【０１３８】
【表２】
2019526041.tif 000003
【０１３９】
表３は、１２カ月の経過観察の間のＩＧＦＢＰ−７、Ａｎｇ−２、ＣＫ−ＭＢおよびＶｉｔ  Ｂについての結果を示す。
【０１４０】
【表３】
2019526041.tif 000004
【０１４１】
したがって、これらのマーカーは、心房細動の再発のリスクについての信頼性の高い予測因子である。
実施例３：Ａｎｇ−２：Ａｎｇ−１比を用いたＡＦの診断
ＣＡＢＧまたは弁手術を理由とした開胸手術前に血液を採取してバイオマーカーをアッセイしたｎ＝５６の患者の血漿試料において、ＮＴｐｒｏＢＮＰ、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１のレベルを決定した。異なる型のＡＦ、発作性ＡＦおよび持続性ＡＦまたはＳＲ（対照）の証拠は、同時の心内膜−心外膜高密度興奮伝播マッピング（Ｅｎｄｏ−Ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ  Ｈｉｇｈ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ）を用いて手術中に得られた。ＡＦ、発作性ＡＦまたは持続性ＡＦを有する患者および対照を、性別、年齢および併存症に関してマッチングした。
【０１４２】
心外膜高密度マッピングは、電気的興奮伝播の結果として生じる細動波の異なる伝導パターンによる、洞調律、発作性ＡＦおよび持続性ＡＦのサブグループ間の異なる識別手段である（Ｅｃｋｓｔｅｉｎら、Ｔｒａｎｓｍｕｒａｌ  Ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ  Ｉｓ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｆｒｏｍ  Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  Ｅｎｄｏ−Ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ  Ｈｉｇｈ−Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ．Ｃｉｒｃ  Ａｒｒｈｙｔｈｍ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．（２０１３）６、３３４〜３４１ページ；ｖａｎ  Ｍａｒｉｏｎら、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｔｈｅ  Ｐａｓｔ，ｔｈｅ  Ｐｒｅｓｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｔｈｅ  Ｐａｓｔ，ｔｈｅ  Ｐｒｅｓｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ＪＡＦＩＢ：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ；２０１５年８月／９月、第８巻  第２号、５ページを参照されたい）。
【０１４３】
心外膜高密度マッピングは、例えば、心房細動のエピソードの非存在下でも発作性心房細動の診断を可能にする。したがって、それは、ＡＦを患っていない対象と発作性ＡＦを患っている対象と持続性ＡＦを患っている対象との信頼性の高い区別を可能にする。
【０１４４】
血液試料採取時に
・  場合によって洞調律にある、発作性ＡＦを患っている患者；ｎ＝１３の患者
・  持続性ＡＦ患者は、洞調律になかった；ｎ＝１５の患者
・  対照患者は、洞調律にあった；ｎ＝２８の患者。
【０１４５】
データ評価より、参照値を超えるＡｎｇ−２レベルおよび参照値未満のＡｎｇ−１レベルを有する患者は、心房細動を有すると疑われ、抗凝固療法から恩恵を受けうることが示された。発作性ＡＦの検出についてのＡｎｇ−２のＡＵＣは０．５４であり、持続性ＡＦでは０．７８であることが認められた。発作性ＡＦの検出についてのＡｎｇ−１のＡＵＣは０．６０であり、持続性ＡＦでは０．６３であることが認められた。したがって、本明細書中で分析した患者では、バイオマーカーＡｎｇ−１は、発作性ＡＦの改良された診断を可能にする。
【０１４６】
図２ｂに示しているように、洞調律にある患者から発作性ＡＦ患者、持続性ＡＦ患者まで、循環Ａｎｇ−２レベルの進行性の増加を検出することができた。対照的に、かつ図２ａに示しているように、洞調律にある患者から発作性ＡＦ患者、持続性ＡＦ患者まで、循環Ａｎｇ−１レベルの進行性の低下を検出することができた。したがって、本明細書中で分析される患者において、（上方制御された）Ａｎｇ−２／（下方制御された）Ａｎｇ−１の比は、他のバイオマーカーから独立した改良されたＡＦの診断を可能にする。
【０１４７】
【表４】
2019526041.tif 000005
【０１４８】
表４は、実施例３に記載の５６名の患者におけるバイオマーカーＡｎｇ−１およびＡｎｇ−２単独ならびにＡｎｇ−２／Ａｎｇ−１比の性能をまとめているものである。
表４に示しているように、心房細動を有するすべての対象（ｎ＝２８）の検出について、Ａｎｇ−２／Ａｎｇ−１比のＡＵＣは０．６８０であることが認められ、６０％の特異度における感度は６７．９％、かつｐ値は０．０２であった。２８名の対象対２８名の対照における心房細動の検出について、Ａｎｇ−１についてのそれぞれのＡＵＣは０．６２９であることが認められ、６０％の特異度における感度は６０．７％、ｐ値は０．１であった。
【０１４９】
２８名の対象対２８名の対照における心房細動の検出について、Ａｎｇ−２についてのそれぞれのＡＵＣは０．６５４であることが認められ、６０％の特異度における感度は５７．１％、それぞれのｐ値は０．０４８であった。したがって、結論として、Ａｎｇ−１および／またはＡｎｇ−２の両方は、発作性および／または持続性ＡＦの検出に適していることが認められた。提唱されたＡｎｇ−２：Ａｎｇ−１比のアルゴリズムは、本明細書中で分析したコホートにおける発作性および／または持続性ＡＦの検出において、Ａｎｇ−１またはＡｎｇ−２に対して最も高い性能を示した。６０％の特異度における発作性およびまたは持続性ＡＦの検出についての感度は、Ａｎｇ−２：Ａｎｇ−１比、Ａｎｇ−１およびＡｎｇ−２について、それぞれ６７．９％、６０．７％および５７．１％であることが認められた。
【０１５０】
発作性ＡＦの検出についてのＡｎｇ−２：Ａｎｇ−１比のＡＵＣは０．４５９であることが認められ、６０％の特異度における感度は３０．８％であった。Ａｎｇ−１は、発作性心房細動を有する対象において、６０％の特異度における感度が６１．５％、かつＡＵＣが０．５９６で検出された。Ａｎｇ−２は、本明細書中で分析した発作性ＡＦ患者において、６０％の特異度における感度が４６％、かつＡＵＣが０．５３６で検出された。
【０１５１】
したがって、結論として、Ａｎｇ−１は、分析した患者コホートにおける発作性ＡＦの検出において、Ａｎｇ−２単独に対して有益な性能を示した。６０％の特異度における発作性ＡＦの検出についての感度は、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−２：Ａｎｇ−１比について、それぞれ６１．５％、４６．２％および３０．８％であることが認められた。
【０１５２】
持続性ＡＦの検出についてのＡｎｇ−２：Ａｎｇ−１比のＡＵＣは、本明細書中で分析した患者では、０．８０であることが認められた（６０％の特異度における感度８６．７％、ｐ値０．００１）。Ａｎｇ−１は、持続性心房細動を有する対象において６０％の感度および特異度ならびに０．６５７のＡＵＣで検出された。持続性ＡＦ患者は、Ａｎｇ−２については、０．７５７のＡＵＣと、６０％の特異度における６６．７％の感度とを有することが見出された。
【０１５３】
結論として、バイオマーカーＡｎｇ−１またはＡｎｇ−２の両方は、持続性ＡＦ患者の検出に適していることが認められた。Ａｎｇ−２：Ａｎｇ−１比では、持続性ＡＦの検出において、両方のバイオマーカー、Ａｎｇ−１またはＡｎｇ−２単独のいずれの使用に対しても、向上した性能を達成することができた。６０％の特異度における持続性ＡＦの検出のための感度は、Ａｎｇ−２：Ａｎｇ−１比、Ａｎｇ−２およびＡｎｇ−１について、それぞれ８６．７％、６６．７％および６０．０％であることが認められた。
【０１５４】
本明細書中で分析した患者において、発作性ＡＦの検出についてのＮＴｐｒｏＢＮＰのＡＵＣは０．６４であり、持続性ＡＦでは０．９であることが認められた。
（上方制御された）Ａｎｇ−２／（下方制御された）Ａｎｇ−１の比は、Ａｎｇ−２単独に対して有益な性能を示し、したがって、個別にかつ／またはＮＴｐｒｏＢＮＰとの組合せで、心房細動のエピソードの検出を補助することが結論づけられる。参照値未満のＡｎｇ−１レベルとの組合せで、参照値を超えるＡｎｇ−２レベルを有する患者は、心房細動を有すると疑われ、抗凝固療法から恩恵を受けうる。
【０１５５】
したがって、リスクがある患者における心房細動の診断は、Ａｎｇ−２／Ａｎｇ−１比の単独でまたはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰとの組合せで達成されうる。
【図１】
2019526041.tif 000006
【図２】
2019526041.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月15日(2019.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において心房細動の再発のリスクを予測するための方法であって、対象からの血液、血清または血漿試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量の決定ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量の決定を含む方法。
【請求項２】
対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＢＮＰ型ペプチドまたはアンジオポエチン−２の量が決定される、請求項１および２に記載の方法。
【請求項４】
（１種または複数の）バイオマーカーの決定された量を（１種または複数の）参照量と比較するステップをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
（１種または複数の）参照量を超える（１種または複数の）バイオマーカーの量が、心房細動の再発のリスクがある対象を示し、かつ／または（１種または複数の）参照量未満の（１種または複数の）バイオマーカーの量が、心房細動の再発のリスクがない対象を示す、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アンジオポエチン−２およびアンジオポエチン−１の量が決定され、任意選択でアンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比が算出され、算出された前記比が参照比と比較される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
対象において心房細動を診断するための方法であって、対象からの血液、血清、または血漿試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量およびアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）の量の決定を含み、アンジオポエチン−２の量およびアンジオポエチン−１の量の比が算出され、算出された前記比が参照比と比較される、方法。
【請求項８】
比が、アンジオポエチン−１の量に対するアンジオポエチン−２の量の比である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
参照比を超える、Ａｎｇ−１の量に対するＡｎｇ−２の量の比が、心房細動を患っている対象を示す、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための方法であって、
（ａ）対象からの第１の血液、血清または血漿試料中のバイオマーカーアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）の量ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｂ）対象からの第２の血液、血清または血漿試料中の、ステップ（ａ）において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を決定するステップと、
（ｃ）第１の血液、血清または血漿試料において決定される（１種または複数の）バイオマーカーの量を第２の血液、血清または血漿試料中の（１種または複数の）前記バイオマーカーの量と比較するステップと
を含む方法。
【請求項１１】
療法が、少なくとも１種の抗凝固剤の投与である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１種のさらなるバイオマーカーが、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）および心臓トロポニンから選択される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の増加が、療法に応答しない対象を示し、または第１の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量と比較した、第２の試料中の（１種または複数の）バイオマーカーの量の減少が、療法に応答する対象を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１種のさらなるバイオマーカーがＡｎｇ−１である、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１５】
心房細動の再発のリスクを予測するための、対象からの血液、血清、または血漿試料中のｉ）バイオマーカーとしてのアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用。
【請求項１６】
心房細動の再発のリスクを低下させることを目的とする療法をモニタリングするための、対象からの第１および第２の血液、血清または血漿試料中のｉ）バイオマーカーとしてのアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンからなる群から選択される少なくとも１種のさらなるバイオマーカーの使用ならびに／またはｉｉ）アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）に特異的に結合する作用剤ならびに任意選択でアンジオポエチン−１（Ａｎｇ−１）、ＢＮＰ型ペプチド、ＣＫ−ＭＢ（筋−脳型クレアチンキナーゼ）、ＩＧＦＢＰ−７（インスリン様増殖因子結合タンパク質７）、および心臓トロポニンから選択されるバイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１種のさらなる作用剤の使用。
【国際調査報告】
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