(57)【要約】本開示は、がんの治療のための核酸（例えば、ｍＲＮＡ）併用療法の使用に関する。本開示は、組成物、ならびにそれらの調製、製造及び治療上の使用の方法を提供し、それらの組成物は、少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を組み合わせて含み、少なくとも２つのポリヌクレオチドは、（ｉ）免疫応答プライマー（例えば、ＩＬ２３）をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナル（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体）をコードするポリヌクレオチド及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される。本明細書に開示されている治療方法は、例えば、がんの治療のために、例えば腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行うために本明細書に開示されている併用療法を投与することを含む。いくつかの態様において、本明細書に開示されている併用療法は、腫瘍内に投与される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、少なくとも２つのポリヌクレオチド及び任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを前記対象に投与することを含み、前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｉｖ）これらの組み合わせ
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項２】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、少なくとも１つのポリヌクレオチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドを前記対象に投与することを含み、前記少なくとも１つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）これらの組み合わせ
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項３】
前記免疫応答プライマーポリペプチドには、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドには、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を阻害する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ−２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードする、
（ｂ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｃ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、
（ｄ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｅ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｆ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｇ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｈ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｉ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、
（ｊ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、
（ｋ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｌ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｍ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｎ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、
（ｏ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードする、
（ｐ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｑ）第１のポリヌクレオチドがＣＤ８０ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｒ）第１のポリヌクレオチドがＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｓ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、ＩＬ１２をコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｔ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｕ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｖ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｗ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｘ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｙ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｚ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、あるいは
（ａａ）第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含む
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも２つのポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド及び免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、
（ｉｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、または
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを更に含む（ｉ）もしくは（ｉｉ）である
請求項１及び３〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、
（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチド、
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド、
（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチド、
（ｖｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド、
（ｖｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチド、
（ｖｉｉｉ）ＩＬ１５ポリペプチド、
（ｉｘ）抗ＣＴＬＡ−４抗体、及び
（ｘ）これらの組み合わせ
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項９】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドと組み合わせて第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリペプチドが、
（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチド、
（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチド、
（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチド、
（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド、
（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチド、
（ｖｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド、
（ｖｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチド、
（ｖｉｉｉ）ＩＬ１５ポリペプチド、及び
（ｉｘ）これらの組み合わせ
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項１０】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項１１】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＩＬ１２ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項１２】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項１４】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＩＬ２３ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項１５】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項１７】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＯＸ４０Ｌポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項１８】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＣＤ８０ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項２０】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＣＤ８０ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項２１】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項２３】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＴＬＲ４ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項２４】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項２６】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＩＬ１８ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項２７】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＩＬ１５ポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項２９】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＩＬ１５ポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項３０】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記第１のポリヌクレオチドがＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードし、前記第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ
からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、前記方法。
【請求項３２】
腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、前記第１のポリペプチドにはＩＬ３６ガンマポリペプチドが含まれる、前記方法。
【請求項３３】
免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする、第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、抗体または前記抗体をコードするポリヌクレオチドである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ１に特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、及びこれらの組み合わせである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、トレメリムマブまたはイピリムマブである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記少なくとも１つまたは２つのポリヌクレオチドが、５μｇの用量の各ポリヌクレオチドがマウスに投与される場合、前記マウスにおいてＭＣ３８（Ｃ）から誘導された腫瘍のサイズを低減する、またはＭＣ３８（Ｃ）から誘導された腫瘍の成長を阻害する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記少なくとも１つまたは２つのポリヌクレオチドが、５μｇの用量の各ポリヌクレオチドがマウスに投与される場合、前記マウスにおいてＭＣ３８（Ｍ）から誘導された腫瘍のサイズを低減する、またはＭＣ３８（Ｍ）から誘導された腫瘍の成長を阻害する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
併用療法における１つ以上のポリヌクレオチドが、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドが、セクションＸ（「化学的修飾」）に列挙されたうちのいずれか及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドが、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記ヌクレオシドが、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記化学的に修飾されたヌクレオシドが、ウリジン、アデニン、シトシン、グアニン及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記ウリジンヌクレオシドが、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記アデノシンヌクレオシドが、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記シチジンヌクレオシドが、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドにおける前記グアノンヌクレオシドが、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｍｉＲＮＡ結合部位が、ｍｉＲ−１２２結合部位である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ｍｉＲＮＡ結合部位が、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ｍｉＲＮＡ結合部位が、ａａｃｇｃｃａｕｕａ  ｕｃａｃａｃｕａａａ  ｕａ（配列番号１２１２）に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、ここで前記ｍｉＲＮＡ結合部位がｍｉＲ−１２２に結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記ｍｉＲＮＡ結合部位が、ｕｇｇａｇｕｇｕｇａ  ｃａａｕｇｇｕｇｕｕ  ｕｇ（配列番号１２１４）に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、ここで前記ｍｉＲＮＡ結合部位がｍｉＲ−１２２に結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリヌクレオチドが、異なるｍｉＲＮＡ結合部位または同じｍｉＲＮＡ結合部位を含む、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
1つ以上の前記ポリヌクレオチドが、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記５’ＵＴＲが、表２０に列挙されている配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項４１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記３’ＵＴＲが、表４Ａまたは４Ｂに列挙されている配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記ｍｉＲＮＡ結合部位が、前記３’ＵＴＲの範囲内に挿入される、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、前記ｍｉＲＮＡ結合部位に融合したスペーサー配列を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記スペーサー配列が、少なくとも約１０個のヌクレオチド、少なくとも約２０個のヌクレオチド、少なくとも約３０個のヌクレオチド、少なくとも約４０個のヌクレオチド、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約６０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、少なくとも約８０個のヌクレオチド、少なくとも約９０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
1つ以上の前記ポリヌクレオチドが、５’末端キャップ構造を含む、請求項４１〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記５’末端キャップが、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジドグアノシン、Ｃａｐ２、Ｃａｐ４、５’メチルＧキャップ、またはこれらの類似体である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
1つ以上の前記ポリヌクレオチドが、３’ポリ−Ａ尾部を含む、請求項４１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含む、請求項４１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、コドン最適化される、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）される、請求項１〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドがキメラである、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが環状である、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
１つ以上の前記ポリヌクレオチドが送達剤とともに製剤化される、請求項１〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記送達剤には、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣物、ナノチューブ、またはコンジュゲートが含まれる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記送達剤が脂質ナノ粒子である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記脂質ナノ粒子が、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、アミノアルコール脂質、ＫＬ２２及びこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記送達剤には、式（Ｉ）：
【化６８】
2019519516.tif 000429
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれ、式中、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され、またはＲ２及びＲ３が、これらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４が、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑが、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎが、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
各Ｒ５が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ６が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ７が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から選択され、
各Ｒが、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ’が、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ”が、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｒ*が、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｙが、独立してＣ３〜６炭素環であり、
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２及び１３から選択され、
ただし、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５であるとき、−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２であるとき、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではない
請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
前記化合物が式（ＩＡ）：
【化６９】
2019519516.tif 000430
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌが、１、２、３、４及び５から選択され、
ｍが、５、６、７、８及び９から選択され、
Ｍ１が、結合またはＭ’であり、
Ｒ４が、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎが、１、２、３、４、または５であり、Ｑが、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される
請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項７７】
ｍが５、７または９である、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記化合物が式（ＩＩ）：
【化７０】
2019519516.tif 000431
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌが、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｍ１が、結合またはＭ’であり、
Ｒ４が、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎが、２、３、または４であり、Ｑが、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される
請求項７６または７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記化合物が、化合物１〜化合物１４７、ならびにその塩及び立体異性体から選択される、請求項７４〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記化合物が、式（ＩＩａ）：
【化７１】
2019519516.tif 000432
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項８１】
前記化合物が、式（ＩＩｂ）：
【化７２】
2019519516.tif 000433
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項８２】
前記化合物が、式（ＩＩｃ）または（ＩＩｅ）：
【化７３】
2019519516.tif 000434
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項８３】
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、ここでＱ、Ｒ及びｎが、上記の請求項７８または７９に定義されたとおりである、請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項８４】
前記化合物が、式（ＩＩｄ）：
【化７４】
2019519516.tif 000435
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、
式中、Ｒ２及びＲ３が、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎが、２、３及び４から選択され、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍが、上記の請求項７７または７８に定義されたとおりである、請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項８５】
Ｒ２がＣ８アルキルである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｒ３が、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８７】
ｍが５、７または９である、請求項８４〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
各Ｒ５がＨである、請求項８４〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
各Ｒ６がＨである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記送達剤にはリン脂質が更に含まれる、請求項７０〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
前記リン脂質が、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６：０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン及びこれらの混合物からなる群から選択される
請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記リン脂質が、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１６：０  ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１８：０  ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜０２：０  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１４：０  ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：２  ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１４：０  ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１６：０  ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：１  ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１４：０  ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１６：０  ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１８：０  ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：１  ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される
請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記送達剤には構造脂質が更に含まれる、請求項７０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記送達剤にはＰＥＧ脂質が更に含まれる、請求項７０〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記送達剤には、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択されるイオン性脂質が更に含まれる
請求項７０〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
前記送達剤には四級アミン化合物が更に含まれる、請求項７０〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
前記四級アミン化合物が、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＥＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される
請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
（ｉ）１つ以上の請求項１〜７３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド及び医薬として許容され得る担体、または（ｉｉ）１つ以上の、請求項７０〜９９のいずれか１項に記載の送達剤において製剤化された請求項１〜１６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項１０１】
前記送達剤には脂質ナノ粒子が含まれる、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０２】
前記送達剤には、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣物、ナノチューブ、またはコンジュゲートが含まれる、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０３】
前記送達剤には、請求項７０〜１００のいずれか１項に記載の脂質組成物が含まれる、請求項１０１または１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
腫瘍サイズの縮小もしくは減少、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行うときに使用する、請求項１００〜１０３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０５】
ポリヌクレオチドまたは組成物がｉｎ  ｖｉｖｏ送達のために製剤化される、請求項１〜９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０６】
前記ポリヌクレオチドまたは組成物が、筋肉内、皮下、腫瘍内、または皮内送達のために製剤化される、請求項１０５に記載の方法または組成物。
【請求項１０７】
前記ポリヌクレオチドまたは組成物が、皮下に、静脈内に、筋肉内に、関節内に、滑液嚢内に、胸骨内に、くも膜下腔内に、肝臓内に、病変内に、頭蓋内に、脳室内に、経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、頬側に、膣に、または埋込み型リザーバーを介して投与される、請求項１〜９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０８】
前記投与が、がんを治療する、請求項１〜９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０９】
前記がんが、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、咽頭及び下咽頭癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底及び扁平細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、がん治療により生じる二次がん、ならびにそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ポリヌクレオチドまたは組成物が、ポンプ、パッチ、薬物リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、ジェット式注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、クライオプローブ、カニューレ、マイクロカニューレを備える装置、または熱、ＲＦエネルギー、電流を利用する装置、あるいはそれらのいずれかの組み合わせによって送達される、請求項１〜９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１１】
有効量が、約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約１，０００ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記対象がヒトである、請求項１〜１９９のいずれか１項に記載の方法、または請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１３】
請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物及び請求項１〜９９または１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法による使用の使用説明書を含む、キット。
【請求項１１４】
ＩＬ１２ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、インターロイキン１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ１２Ｂ）ポリペプチド及びインターロイキン１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ１２Ａ）ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１１５】
前記ＩＬ１２Ｂポリペプチドが、リンカーにより前記ＩＬ１２Ａポリペプチドに作動可能に連結している、請求項１１４に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１１６】
ＩＬ１２ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１１４または１１５に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１１７】
前記シグナルペプチドがＩＬ１２Ｂシグナルペプチドである、請求項１１６に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１１８】
ＩＬ１８ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、成熟ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１１９】
ＩＬ１８ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１１８に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２０】
前記シグナルペプチドが異種性シグナルペプチドである、請求項１１９に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２１】
前記異種性シグナルペプチドが、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）シグナルペプチドまたはインターロイキン１２（ＩＬ１２）シグナルペプチドである、請求項１２０に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２２】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ＣＤ８０細胞外ドメインをコードするＯＲＦを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１２３】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、Ｆｃ部分をコードする核酸を含む、請求項１２２に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２４】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１２２または１２３に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２５】
前記シグナルペプチドが内在性ＣＤ８０シグナルペプチドである、請求項１２４に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２６】
ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ＴＬＲ４の細胞内ドメイン及び膜貫通領域を含む構成的に活性なＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１２７】
ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１２６に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２８】
前記シグナルペプチドが、異種性シグナルペプチドであり、前記異種性シグナルペプチドが、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ１）シグナルペプチドである、請求項１２７に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１２９】
ＩＬ１５ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ＩＬ１５ポリペプチド及びＩＬ１５Ｒ細胞外ドメインポリペプチドをコードするＯＲＦを含む少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１３０】
前記ＩＬ１５ポリペプチドが、リンカーにより前記ＩＬ１５Ｒ細胞外ドメインポリペプチドに作動可能に連結している、請求項１２９に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３１】
前記ＩＬ１５ポリペプチドがＦｃドメインを更に含む、請求項１２９または１３０に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３２】
ＩＬ１５ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１２９〜１３１のいずれか１項に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３３】
前記シグナルペプチドが異種性シグナルペプチドである、請求項１３２に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３４】
前記異種性シグナルペプチドがｔＰＡシグナルペプチドである、請求項１３３に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３５】
ＩＬ２３ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１３６】
前記ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチドが、リンカーにより前記ＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドに作動可能に連結している、請求項１３５に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３７】
ＩＬ２３ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードする核酸を含む、請求項１３５または１３６に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３８】
前記シグナルペプチドが、ＩＬ１２ｐ４０シグナルペプチドまたはＩＬ２３ｐ１９シグナルペプチドである、請求項１３７に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１３９】
ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、請求項１〜９９もしくは１０５〜１１２のいずれか１項に記載の方法、請求項１００〜１０４のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１３に記載のキット。
【請求項１４０】
成熟ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドＯＲＦが、シグナルペプチドをコードする核酸を更に含む、請求項１３９に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１４１】
前記シグナルペプチドが異種性シグナルペプチドである、請求項１４０に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１４２】
前記異種性シグナルペプチドがｈＩｇＫＶ４シグナルペプチドである、請求項１４１に記載の方法、組成物、またはキット。
【請求項１４３】
少なくとも２つのｍＲＮＡ及び医薬として許容され得る担体を含み、前記ｍＲＮＡが、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡ、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡ、及び
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡ
から選択される、医薬組成物。
【請求項１４４】
前記組成物が、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む、請求項１４３に記載の医薬組成物。
【請求項１４５】
前記組成物が、免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームをそれぞれ有する２個のｍＲＮＡを含む、請求項１４３に記載の医薬組成物。
【請求項１４６】
前記組成物が、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む、請求項１４３に記載の医薬組成物。
【請求項１４７】
前記組成物が、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む、請求項１４３に記載の医薬組成物。
【請求項１４８】
前記免疫応答プライマーポリペプチドには、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１４３〜１４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４９】
前記免疫応答共刺激シグナルポリペプチドには、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項１４３〜１４８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５０】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドが、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を阻害する、請求項１４３〜１４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５１】
（ａ）
（ｉ）５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）と、
（ｉｉ）少なくとも１つの免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、またはこれらの組み合わせをコードし、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの停止コドンと、
（ｉｖ）マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位と、
（ｖ）３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）と、
（ｖｉ）ポリ−Ａ尾部と
を含むｍＲＮＡ、及び
（ｂ）脂質ナノ粒子担体
を含む、請求項１４３〜１５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５２】
（ａ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードする、
（ｂ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｃ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、
（ｄ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｅ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｆ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｇ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｈ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｉ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、
（ｊ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、
（ｋ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｌ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｍ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、
（ｎ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、
（ｏ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードする、
（ｐ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードする、
（ｑ）第１のｍＲＮＡがＣＤ８０ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｒ）第１のｍＲＮＡがＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡが抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、
（ｓ）第１のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２をコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、
（ｔ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、
（ｕ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、
（ｖ）第１のポリヌクレオチドがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、
（ｗ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のｍＲＮＡを含み、
（ｘ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡと抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与とを含み、
（ｙ）第１のｍＲＮＡがＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含み、
（ｚ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含み、あるいは
（ａａ）第１のｍＲＮＡがＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡがＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含む
請求項１４３に記載の医薬組成物。
【請求項１５３】
前記組成物が、２、３、４、５、６個、またはそれ以上のｍＲＮＡを含み、各ｍＲＮＡが少なくとも１つのＯＲＦを含む、請求項１５２に記載の医薬組成物。
【請求項１５４】
前記ｍＲＮＡが、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む、請求項１５３に記載の医薬組成物。
【請求項１５５】
各ｍＲＮＡが同じ脂質ナノ粒子担体において製剤化される、請求項１５３または１５４に記載の医薬組成物。
【請求項１５６】
各ｍＲＮＡが異なる脂質ナノ粒子担体において製剤化される、請求項１５３〜１５５に記載の医薬組成物。
【請求項１５７】
前記脂質ナノ粒子担体が、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、アミノアルコール脂質、ＫＬ２２及びこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を含む、請求項１５５に記載の医薬組成物。
【請求項１５８】
前記脂質ナノ粒子担体が、式（Ｉ）：
【化７５】
2019519516.tif 000436
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｒ１が、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され、またはＲ２及びＲ３が、これらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４が、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑが、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎが、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
各Ｒ５が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ６が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ７が、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から選択され、
各Ｒが、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ’が、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ”が、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｒ*が、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｙが、独立してＣ３〜６炭素環であり、
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２及び１３から選択され、
ただし、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５であるとき、−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２であるとき、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではない
請求項１５５に記載の医薬組成物。
【請求項１５９】
前記化合物が、式（ＩＡ）：
【化７６】
2019519516.tif 000437
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌが、１、２、３、４及び５から選択され、
ｍが、５、６、７、８及び９から選択され、
Ｍ１が、結合またはＭ’であり、
Ｒ４が、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎが、１、２、３、４、または５であり、Ｑが、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される
請求項１５８に記載の医薬組成物。
【請求項１６０】
ｍが５、７または９である、請求項１５８〜１５９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６１】
前記化合物が、式（ＩＩ）：
【化７７】
2019519516.tif 000438
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
ｌが、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｍ１が、結合またはＭ’であり、
Ｒ４が、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎが、２、３、または４であり、Ｑが、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’が、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される
請求項１５８〜１６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６２】
前記化合物が、化合物１〜化合物１４７、ならびにその塩及び立体異性体から選択される、請求項１５８〜１６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６３】
前記化合物が、式（ＩＩａ）：
【化７８】
2019519516.tif 000439
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、１５８または１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６４】
前記化合物が、式（ＩＩｂ）：
【化７９】
2019519516.tif 000440
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、請求項１５８または１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６５】
前記化合物が、式（ＩＩｃ）または（ＩＩｅ）：
【化８０】
2019519516.tif 000441
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である、請求項１５８または１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６６】
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、ここでＱ、Ｒ及びｎが、上記の請求項１５８または１５９に定義されたとおりである、請求項１６２〜１６５に記載の医薬組成物。
【請求項１６７】
前記化合物が、式（ＩＩｄ）：
【化８１】
2019519516.tif 000442
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、
式中、Ｒ２及びＲ３が、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎが、２、３及び４から選択され、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍが、請求項１５８または１５９に定義されたとおりである、請求項１５８または１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６８】
Ｒ２がＣ８アルキルである、請求項１６７に記載の医薬組成物。
【請求項１６９】
Ｒ３が、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである、請求項１６７または１６８に記載の医薬組成物。
【請求項１７０】
ｍが５、７または９である、請求項１６７〜１６９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７１】
各Ｒ５がＨである、請求項１６７〜１７０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７２】
各Ｒ６がＨである、請求項１７１に記載の医薬組成物。
【請求項１７３】
前記脂質ナノ粒子担体がリン脂質を更に含む、請求項１５８〜１７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７４】
前記リン脂質が、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６：０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン及びこれらの混合物からなる群から選択される
請求項１７３に記載の医薬組成物。
【請求項１７５】
前記リン脂質が、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１６：０  ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１８：０  ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜０２：０  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１４：０  ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：２  ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１４：０  ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１６：０  ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：１  ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１４：０  ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１６：０  ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１８：０  ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：１  ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される
請求項１７３に記載の医薬組成物。
【請求項１７６】
前記脂質ナノ粒子担体が構造脂質を更に含む、請求項１５８〜１７５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７７】
前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１７６に記載の医薬組成物。
【請求項１７８】
前記脂質ナノ粒子担体がＰＥＧ脂質を更に含む、請求項１５８〜１７７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７９】
前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１７８に記載の医薬組成物。
【請求項１８０】
前記脂質ナノ粒子担体が、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択されるイオン性脂質を更に含む
請求項１５８〜１７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８１】
前記脂質ナノ粒子担体が、四級アミン化合物を更に含む、請求項１５８〜１８０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８２】
前記四級アミン化合物が、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＥＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される
請求項１８１に記載の医薬組成物。
【請求項１８３】
前記ポリヌクレオチド、組成物、または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することが、前記組成物または医薬組成物における１つのポリヌクレオチドのみを投与することからなる単剤療法より、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、または少なくとも５倍良好に腫瘍のサイズを低減する、または腫瘍の成長を阻害する、請求項１〜１８２のいずれか１項に記載の方法、組成物、医薬組成物、またはキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年５月１８日出願の米国特許仮出願第６２／３３８，４９６号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，４８３号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，５０１号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，５０５号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，５０６号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，４６７号、２０１６年５月１８日出願の同第６２／３３８，５０７号、２０１６年５月１９日出願の同第６２／３３８，５３０号及び２０１６年１０月４日出願の同第６２／４０４，１７３号の優先権の利益を主張し、これらは、それぞれその全体が参考により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出された配列表の参照
本出願と共に出願されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：３５２９＿１２０ＰＣ０２＿ＳＴ２５＿ＳＱＬＳＴ．ｔｘｔ、サイズ：１，６５３，４５２バイト及び作成日：２０１７年５月１８日）の電子提出配列表の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
がんは、身体内の制御されない細胞分裂及び増殖によって特徴づけられる疾患である。米国では、全ての女性のほぼ三分の一及び全ての男性のほぼ半分が、その生涯にがんを経験している。がん細胞の生物学（発癌、細胞周期の抑圧、ＤＮＡ修復及び血管新生）、治療（免疫治療、ホルモン操作、酵素阻害）、がんの種類の診断及び決定（例えば、乳癌、前立腺癌及び子宮頸癌の分子マーカー）を含む疾患のあらゆる態様において、ポリペプチドが関与している。現在使用されている化学療法及び放射線療法などの標準的な治療によってもたらされた望ましくない結果を有する宿主では、疾患関連ペプチド及びこれらの機能を操作する遺伝子治療が、疾患の診断、治療及び管理に対するより標的化された手法を提供する。しかし、遺伝子治療は、ゲノム内への遺伝子のランダム配置による組み込みに起因する望ましくない免疫応答及び安全性の懸念を含む、多数の課題を提起している。
【０００４】
がんの様々な治療方法が開発中である。例えば、樹状細胞（ＤＣ）ワクチンは、可能性のある抗がん療法として研究されてきた。しかし、ＤＣワクチンは、対象からＤＣを単離する、細胞を腫瘍抗原提示のために刺激するようにＤＣをｅｘ  ｖｉｖｏ操作する及び次に操作されたＤＣを対象に戻すために投与する複数のステップを必要とする。更に、ＤＣワクチンの全体的な臨床応答率は低いこと及びがん退縮を誘導するＤＣワクチンの能力は低いことが、報告されている。例えば、Ｋａｌｋｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ：ｗｈａｔ  ｗｅ  ｈａｖｅ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｗｅ  ｎｅｅｄ，”Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌ．５（３）：３７９−３９０（２００９）を参照すること。
【０００５】
免疫腫瘍学的方法の分野における重要な目標は、応答率を改善すること及び有害な副作用を増加することなく免疫治療に応答する腫瘍指標の数を増加することである。これらの目標を達成する一つの手法は、腫瘍指向性免疫治療を使用すること、すなわち、免疫系の最も関連する部分への免疫活性化に焦点を合わせることである。このことは、抗腫瘍効能を改善し得る、ならびに免疫関連の有害事象を低減し得る。腫瘍指向性免疫活性化は、腫瘍または腫瘍区域内に免疫調節因子を直接局所注射することによって達成できる。療法は、標的指向化チェックポイント阻害剤に焦点を合わせており、共刺激受容体は、局在化免疫活性化を介して、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を生成することができる。
【０００６】
近年、療法目的の免疫チェックポイント阻害剤の導入が、がん治療に革命を起こしている。チェックポイント阻害剤と、他の共刺激または阻害分子との組み合わせを特徴とする療法が、関心対象である。
【０００７】
Ｔ細胞制御、すなわち活性化または阻害は、共刺激性または共阻害性シグナルを介して媒介される。この相互作用は、リガンド／受容体相互作用を介して発揮される。Ｔ細胞は、無数のＯＸ４０などの活性化受容体及びプログラム細胞死受容体１（ＰＤ−１）または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）などの阻害性受容体（すなわち、免疫チェックポイント）の両方を持っている（Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｎａｔｕｒｅ．；４８０：４８０−４８９）。この免疫チェックポイントの活性化は、Ｔ細胞の非活性化をもたらし、腫瘍細胞によるこれらの経路の乗っ取りが、免疫回避を成功することに寄与している。
【０００８】
プログラム細胞死受容体１／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１）とＰＤ−Ｌ２との相互作用を標的にする、ペンブロリズマブまたはニボルマブなどの免疫チェックポイント阻害剤は、最近、様々な悪性腫瘍の治療に承認されており、現在、メラノーマ、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含むがんの臨床試験において調査中である。これらの試験から得たデータは、これらの患者集団における好ましい安全性及び毒性プロファイルを伴って、有意な活性を示している。
【０００９】
例えば、チェックポイント阻害剤は、メラノーマの治療のために臨床試験において試験されている。特に、第ＩＩＩ相臨床試験は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１免疫チェックポイントを標的にするイピリムマブ及びペンブロリズマブなどの療法は、それぞれ、患者の３年生存率を上昇させ、メラノーマでは約７０％まで上昇させ、全体的な生存率（＞５年間）を約３０％まで上昇させたことが明らかになっている。
【００１０】
同様に、チェックポイント阻害剤は、頭頸部癌の治療のために臨床試験において試験されている。前臨床試験において、４５〜８０％のＨＮＳＣＣ腫瘍は、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を発現することが示されている（Ｚａｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．５０：６２７−６３２）。現在、ＨＮＳＣＣにおける単剤療法としての、または組み合わせレジメンによる免疫チェックポイント阻害剤の有効性及び安全性を評価する、数十の臨床試験が存在している。例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１及びＣＴＬＡ−４阻害剤による臨床試験が、ＨＮＳＣＣにおいて試されている。ＰＤ−１抗体のペンブロリズマブは、転移性／再発性（Ｒ／Ｍ）ＨＮＳＣＣ患者において有効であり得るというデータが、第１ｂ相Ｋｅｙｎｏｔｅ−０１２第Ｉ／ＩＩ相試験において生成された（Ｃｈｅｎｇ．ＡＳＣＯ  ２０１５、口頭発表）。より最近では、無作為化ＣｈｅｃｋＭａｔｅ−１４１第ＩＩＩ相臨床試験からのデータが発表されている（Ｇｉｌｌｉｓｏｎ．ＡＡＣＲ  ２０１６、口頭発表）。この研究は、プラチナ製剤不応性Ｒ／Ｍ  ＨＮＳＣＣ患者に２週間毎に与えられたモノクローナルＰＤ−１抗体のニボルマブの有効性を調査した。この研究は、研究のニボルマブ群の優位性に起因して、早期に停止された。
大部分の利用可能な、または開発中の免疫療法は抗体に依存しており、これらは製造するのが厄介であり、外来性のタンパク質であることが、抗薬物抗体中和抗体（ＡＤＡ  ｎＡｂ）の発生を頻繁にもたらしている。例えば、Ｋｒｉｓｈｎａ  ＆  Ｎａｄｌｅｒ  （２０１６）“Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ−Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−ｄｒｕｇ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ”Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７：２１；Ｓｃｈｅｌｌｅｋｗｎ（２０１０）“Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ｄｉｓｃｏｖ．Ｍｅｄ，９：５６０−４を参照すること。したがって、がんの治療に有効な免疫療法の必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｋａｌｋｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ：ｗｈａｔ  ｗｅ  ｈａｖｅ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｗｅ  ｎｅｅｄ，”Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌ．５（３）：３７９−３９０（２００９）
【非特許文献２】Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｎａｔｕｒｅ．；４８０：４８０−４８９
【非特許文献３】Ｚａｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．５０：６２７−６３２
【非特許文献４】Ｋｒｉｓｈｎａ  ＆  Ｎａｄｌｅｒ  （２０１６）“Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ−Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−ｄｒｕｇ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ”Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７：２１
【非特許文献５】Ｓｃｈｅｌｌｅｋｗｎ（２０１０）“Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ｄｉｓｃｏｖ．Ｍｅｄ，９：５６０−４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、少なくとも２つのポリヌクレオチド及び任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、少なくとも２つのポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される方法を提供する。
【００１３】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、少なくとも１つのポリヌクレオチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、少なくとも１つのポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び（ｉｉｉ）これらの組み合わせからなる群から選択される方法も提供される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドには、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはこれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドには、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはこれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を阻害する。
【００１５】
上記に開示された方法のいくつかの実施形態において、（ａ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ−２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードする、（ｂ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｃ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、（ｄ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｅ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｆ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｇ）第１のポリヌクレオチドは、ＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｈ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｉ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、（ｊ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、（ｋ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｌ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｍ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｎ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、（ｏ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードする、（ｐ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｑ）第１のポリヌクレオチドはＣＤ８０ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｒ）第１のポリヌクレオチドはＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｓ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ１２をコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｔ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｕ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｖ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｗ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｘ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｙ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、（ｚ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含み、あるいは（ａａ）第１のポリヌクレオチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドの投与及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のポリヌクレオチドの投与を含む。
【００１６】
上記に開示された方法のいくつかの実施形態において、少なくとも２つのポリヌクレオチドは、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド及び免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、（ｉｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド、または（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを更に含む（ｉ）もしくは（ｉｉ）である。
【００１７】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチドを対象に投与することを含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドが、（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチド、（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチド、（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチド、（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド、（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチド、（ｖｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド、（ｖｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチド、（ｖｉｉｉ）ＩＬ１５ポリペプチド、（ｉｘ）抗ＣＴＬＡ−４抗体及び（ｘ）これらの組み合わせからなる群から選択される方法も提供される。
【００１８】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドと組み合わせて第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを対象に投与することを含み、第１のポリペプチドが、（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチド、（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチド、（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチド、（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド、（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチド、（ｖｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド、（ｖｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチド、（ｖｉｉｉ）ＩＬ１５ポリペプチド及び（ｉｘ）これらの組み合わせからなる群から選択される方法も提供される。
【００１９】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００２０】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＩＬ１２ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの態様において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００２１】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００２２】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＩＬ２３ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００２３】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００２４】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＯＸ４０Ｌポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００２５】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＣＤ８０ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００２６】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＣＤ８０ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００２７】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００２８】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＴＬＲ４ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００２９】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００３０】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＩＬ１８ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００３１】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ１５ポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００３２】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＩＬ１５ポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００３３】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含む少なくとも２つのポリヌクレオチド、ならびに任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを対象に投与することを含み、第１のポリヌクレオチドが、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドが、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードする方法も提供される。
【００３４】
また、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であって、（ａ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド及び（ｂ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドである第２のポリペプチドを投与することを含み、第１のポリペプチドにはＩＬ３６ガンマポリペプチドが含まれる方法も提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドからなる群から選択される第３のポリペプチドをコードする第３のポリヌクレオチドを投与することを更に含む。
【００３５】
上記に開示された方法のいくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、抗体または抗体をコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ１に特異的に結合する抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片及びこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブである。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【００３６】
上記に開示された方法のいくつかの実施形態において、少なくとも１つ、または２つのポリヌクレオチドは、５μｇの用量の各ポリヌクレオチドがマウスに投与される場合、マウスにおいてＭＣ３８（Ｃ）から誘導された腫瘍のサイズを低減する、またはＭＣ３８（Ｃ）から誘導された腫瘍の成長を阻害する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つ、または２つのポリヌクレオチドは、５μｇの用量の各ポリヌクレオチドがマウスに投与される場合、マウスにおいてＭＣ３８（Ｍ）から誘導された腫瘍のサイズを低減する、またはＭＣ３８（Ｍ）から誘導された腫瘍の成長を阻害する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、併用療法における１つ以上のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、セクションＸ（「化学的修飾」）に列挙されたうちのいずれか及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおけるヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている。
【００３８】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおける化学的に修飾されたヌクレオシドは、ウリジン、アデニン、シトシン、グアニン及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおけるウリジンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおけるアデノシンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている。
【００３９】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおけるシチジンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドにおけるグアノシンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％化学的に修飾されている。
【００４０】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２結合部位である。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ａａｃｇｃｃａｕｕａ  ｕｃａｃａｃｕａａａ  ｕａ（配列番号１２１２）に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、ここでｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｕｇｇａｇｕｇｕｇａ  ｃａａｕｇｇｕｇｕｕ  ｕｇ（配列番号１２１４）に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、ここでｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、異なるｍｉＲＮＡ結合部位または同じｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、表２０に列挙されている配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、表４Ａまたは４Ｂに列挙されている配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの範囲内に挿入される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位に融合したスペーサー配列を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、スペーサー配列は、少なくとも約１０個のヌクレオチド、少なくとも約２０個のヌクレオチド、少なくとも約３０個のヌクレオチド、少なくとも約４０個のヌクレオチド、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約６０個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、少なくとも約８０個のヌクレオチド、少なくとも約９０個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、５’末端キャップ構造を含む。いくつかの実施形態において、５’末端キャップは、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジドグアノシン、Ｃａｐ２、Ｃａｐ４、５’メチルＧキャップ、またはこれらの類似体である。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、３’ポリ−Ａ尾部を含む。いくつか実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のｍＲＮＡ結合部位を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、コドン最適化される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、キメラである。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、環状である。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、送達剤によって製剤化される。いくつかの実施形態において、送達剤には、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣物、ナノチューブ、またはコンジュゲートが含まれる。いくつかの実施形態において、送達剤は脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、アミノアルコール脂質、ＫＬ２２及びこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を含む。
【００４５】
上記に開示された方法のいくつかの実施形態において、送達剤には、式（Ｉ）：
【化１】
2019519516.tif 000002
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれ、式中、Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され、またはＲ２及びＲ３は、これらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２及び−（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、ならびに各ｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、各Ｒ５は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ６は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から選択され、各Ｒは、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ’は、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ”は、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、各Ｒ＊は、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群から独立して選択され、各Ｙは、独立してＣ３〜６炭素環であり、各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から独立して選択され、ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２及び１３から選択され、ただしＲ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５であるとき、−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２であるとき、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではないことが条件である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＡ）：
【化２】
2019519516.tif 000003
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、１、２、３、４、または５であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ）：
【化３】
2019519516.tif 000004
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、化合物は、化合物１〜化合物１４７、ならびにその塩及び立体異性体から選択される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩａ）：
【化４】
2019519516.tif 000005
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｂ）：
【化５】
2019519516.tif 000006
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｃ）または（ＩＩｅ）：
【化６】
2019519516.tif 000007
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００５２】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、ここでＱ、Ｒ及びｎは、上記に定義されたとおりである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｄ）：
【化７】
2019519516.tif 000008
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３及び４から選択され、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍは、上記に定義されたとおりである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである。いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。いくつかの実施形態において、各Ｒ５はＨである。いくつかの実施形態において、各Ｒ６はＨである。
【００５５】
いくつかの実施形態において、送達剤にはリン脂質が更に含まれる。いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６：０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１６：０  ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１８：０  ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜０２：０  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１４：０  ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：２  ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１４：０  ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１６：０  ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：１  ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１４：０  ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１６：０  ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１８：０  ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：１  ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【００５７】
いくつかの実施形態において、送達剤には構造脂質が更に含まれる。いくつかの実施形態において、構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００５８】
いくつかの実施形態において、送達剤にはＰＥＧ脂質が更に含まれる。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００５９】
いくつかの実施形態において、送達剤には、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択されるイオン性脂質が更に含まれる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、送達剤には、第四級アミン化合物が更に含まれる。いくつかの実施形態において、第四級アミン化合物は、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＥＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【００６１】
本開示は、（ｉ）１つ以上の上記に開示されたポリヌクレオチド及び医薬として許容され得る担体、または（ｉｉ）上記に開示された送達剤によって製剤化された１つ以上の上記に開示されたポリヌクレオチドを含む組成物も提供する。いくつかの実施形態において、開示されている組成物は、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣物、ナノチューブ、またはコンジュゲートから選択される送達剤を含む。いくつかの実施形態において、送達剤には、上記に開示された脂質組成物が含まれる。
【００６２】
本明細書に開示されている組成物は、必要性のある対象において、腫瘍のサイズを低減もしくは減少すること、または腫瘍成長を阻害することに使用され得る。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されているポリヌクレオチドまたは組成物は、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドまたは組成物は、筋肉内、皮下、腫瘍内、または皮内送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドまたは組成物は、皮下に、静脈内に、筋肉内に、関節内に、滑液嚢内に、胸骨内に、くも膜下腔内に、肝臓内に、病変内に、頭蓋内に、脳室内に、経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、頬側に、膣に、または埋込み型リザーバーを介して投与される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、例えば上記に開示された方法による、上記に開示された組成物の投与は、がんを治療する。いくつかの実施形態において、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、咽頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、咽頭及び下咽頭癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底及び扁平細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、がん治療により生じる二次がん、ならびにそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドまたは組成物は、ポンプ、パッチ、薬物リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、ジェット式注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、クライオプローブ、カニューレ、マイクロカニューレを含む装置、または熱、ＲＦエネルギー、電流を利用する装置、あるいはそれらのいずれかの組み合わせによって送達される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている組成物の有効量は、約０．１０ｍｇ／ｋｇ〜約１，０００ｍｇ／ｋｇである。
【００６７】
いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【００６８】
本開示は、上記に開示された任意の組成物及び上記開示された方法による使用説明書を含むキットも提供する。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、インターロイキン１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ１２Ｂ）ポリペプチド及びインターロイキン１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ１２Ａ）ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂポリペプチドは、リンカーによりＩＬ１２Ａポリペプチドに作動可能に連結している。いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩＬ１２Ｂシグナルペプチドである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、成熟ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、異種性シグナルペプチドは、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）シグナルペプチドまたはインターロイキン１２（ＩＬ１２）シグナルペプチドである。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ８０細胞外ドメインをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、Ｆｃ部分をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、内在性ＣＤ８０シグナルペプチドである。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４の細胞内ドメイン及び膜貫通領域を含む構成的に活性なＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドであり、異種性シグナルペプチドは、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ１）シグナルペプチドである。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＩＬ１５ポリペプチド及びＩＬ１５Ｒ細胞外ドメインポリペプチドをコードするＯＲＦを含む、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリペプチドは、リンカーによりＩＬ１５Ｒ細胞外ドメインポリペプチドに作動可能に連結している。いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリペプチドは、Ｆｃドメインを更に含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、異種性シグナルペプチドは、ｔＰＡシグナルペプチドである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチドは、リンカーによりＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドに作動可能に連結している。いくつかの実施形態において、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩＬ１２ｐ４０シグナルペプチドまたはＩＬ２３ｐ１９シグナルペプチドである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、成熟ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのＯＲＦは、シグナルペプチドをコードする核酸を更に含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、異種性シグナルペプチドは、ｈＩｇＫＶ４シグナルペプチドである。
【００７６】
本開示は、少なくとも２個のｍＲＮＡ及び医薬として許容され得る担体を含む医薬組成物も提供し、ｍＲＮＡは、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡ、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡ及び（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１個以上のｍＲＮＡから選択される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームをそれぞれ有する２個のｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉ）チェックポイント阻害剤シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡ及び（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含む。
【００７７】
いくつかの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドには、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはこれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドには、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはこれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を阻害する。
【００７８】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、（ｉｉ）少なくとも１つの免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、またはこれらの組み合わせをコードし、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｉｉｉ）少なくとも１つの停止コドン、（ｉｖ）マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、（ｖ）３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）、（ｖｉ）ポリ−Ａ尾部を含む（ａ）ｍＲＮＡと、（ｂ）脂質ナノ粒子担体とを含む。
【００７９】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、（ａ）第１のｍＲＮＡはＩＬ−２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードする、（ｂ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｃ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、（ｄ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｅ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｆ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｇ）第１のｍＲＮＡは、ＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｈ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｉ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする、（ｊ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、（ｋ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｌ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｍ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする、（ｎ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、（ｏ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードする、（ｐ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードする、（ｑ）第１のｍＲＮＡはＣＤ８０ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｒ）第１のｍＲＮＡはＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする、（ｓ）第１のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡは、ＩＬ１２をコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、（ｔ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＴＬＲ４ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、（ｕ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ２３ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡを含み、（ｖ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のｍＲＮＡの投与を含み、（ｗ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第３のｍＲＮＡを含み、（ｘ）第１のｍＲＮＡはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡと、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のｍＲＮＡの投与とを含み、（ｙ）第１のポリヌクレオチドはＩＬ２３ポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１２ポリペプチドをコードし、更に、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含み、（ｚ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡ及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含み、あるいは（ａａ）第１のｍＲＮＡはＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードし、第２のｍＲＮＡはＩＬ１８ポリペプチドをコードし、更に、ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡの及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をコードする第４のｍＲＮＡを含む。
【００８０】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、組成物は、２、３、４、５、６個、またはそれ以上のｍＲＮＡを含み、各ｍＲＮＡは、少なくとも１つのＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、各ｍＲＮＡは、同じ脂質ナノ粒子担体によって製剤化される。いくつかの実施形態において、各ｍＲＮＡは、異なる脂質ナノ粒子担体によって製剤化される。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、アミノアルコール脂質、ＫＬ２２及びこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を含む。
【００８１】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、式（Ｉ）：
【化８】
2019519516.tif 000009
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、Ｒ１は、Ｃ５〜２０アルキル、Ｃ５〜２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル、Ｃ２〜１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され、またはＲ２及びＲ３は、これらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、Ｒ４は、Ｃ３〜６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２及び非置換Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２及び−（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、ならびに各ｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、各Ｒ５は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ６は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ７は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から選択され、各Ｒは、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニル及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ’は、Ｃ１〜１８アルキル、Ｃ２〜１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”及びＨからなる群から独立して選択され、各Ｒ”は、Ｃ３〜１４アルキル及びＣ３〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、各Ｒ＊は、Ｃ１〜１２アルキル及びＣ２〜１２アルケニルからなる群から独立して選択され、各Ｙは、独立してＣ３〜６炭素環であり、各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から独立して選択され、ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２及び１３から選択され、ただしＲ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５であるとき、−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２であるとき、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではないことが条件である。
【００８２】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＡ）：
【化９】
2019519516.tif 000010
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、１、２、３、４、または５であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。
【００８３】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ）：
【化１０】
2019519516.tif 000011
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、非置換Ｃ１〜３アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜１４アルキル及びＣ２〜１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【００８４】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、化合物１〜化合物１４７、ならびにその塩及び立体異性体から選択される。
【００８５】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩａ）：
【化１１】
2019519516.tif 000012
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００８６】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｂ）：
【化１２】
2019519516.tif 000013
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００８７】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｃ）または（ＩＩｅ）：
【化１３】
2019519516.tif 000014
のもの、またはその塩もしくは立体異性体である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、ここでＱ、Ｒ及びｎは、上記に定義されたとおりである。
【００８９】
本明細書に開示された医薬組成物のいくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩｄ）：
【化１４】
2019519516.tif 000015
のもの、またはその塩もしくは立体異性体であり、
式中、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５〜１４アルキル及びＣ５〜１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３及び４から選択され、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍは、上記に定義されたとおりである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ８アルキルである。Ｒ３は、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである。いくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。いくつかの実施形態において、各Ｒ５はＨである。いくつかの実施形態において、各Ｒ６はＨである。
【００９１】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、リン脂質を更に含む。いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジドコサヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６：０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００９２】
いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１６：０  ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１８：０  ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜０２：０  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１４：０  ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：２  ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１４：０  ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１６：０  ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：１  ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１４：０  ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１６：０  ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１８：０  ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：１  ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【００９３】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、構造脂質を更に含む。いくつかの実施形態において、構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００９４】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、ＰＥＧ脂質を更に含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００９５】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択されるイオン性脂質を更に含む。
【００９６】
本明細書に開示されている医薬組成物のいくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子担体は、第四級アミン化合物を更に含む。いくつかの実施形態において、第四級アミン化合物は、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＥＰＣ）及び
それらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【００９７】
上記に開示された組成物、医薬組成物、またはキットのいくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、組成物、または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することは、組成物または医薬組成物における１つのポリヌクレオチドをのみを投与することからなる単剤療法より、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、または少なくとも５倍良好に腫瘍のサイズを低減する、または腫瘍の成長を阻害する。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】ｍＲＮＡコードされた９Ｄ９抗体を発現するＨｅＬａ細胞において、活性ＣＴＬＡ−４結合（ｍＣＴＬＡ−４結合）に対する総ＩｇＧ（ｍＩｇＧ）を示す。９Ｄ９抗体は、ＨＣ−２Ａａ：ＬＣ（９Ｄ９  ＩｇＧ２ａ抗体）及びＨＣ−２Ｂ：ＬＣ（９Ｄ９  ＩｇＧ２ｂ抗体）である。
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、未治療動物（図２Ａ）と比較した、３、６及び９日目に投与された５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４タンパク質（図２Ｂ）または０．５ｍｇ／ｋｇのＮＳＴ  ＦＩＸ（図２Ｃ）の３用量によるＣＴ２６癌腫モデルにおける陽性／陰性有効性対照データを示す。ＮＳＴ  ＦＩＸは、陰性対照ｍＲＮＡ（非翻訳（「非開始」）第ＩＸ因子をコードするｍＲＮＡ）である。
【図３−１】図３Ａ〜３Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ｂ）抗体をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図３Ａ及び図３Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｃ及び図３Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｅ及び図３Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図３−２】図３Ａ〜３Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ｂ）抗体をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図３Ａ及び図３Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｃ及び図３Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｅ及び図３Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図３−３】図３Ａ〜３Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ｂ）抗体をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図３Ａ及び図３Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｃ及び図３Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図３Ｅ及び図３Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図４−１】図４Ａ〜４Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ａ）をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図４Ａ及び図４Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４ｃ及び図４Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４Ｅ及び図４Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図４−２】図４Ａ〜４Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ａ）をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図４Ａ及び図４Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４ｃ及び図４Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４Ｅ及び図４Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図４−３】図４Ａ〜４Ｆは、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９  ２ａ）をコードするｍＲＮＡの１、２、または３用量による治療を示す。図４Ａ及び図４Ｂは、それぞれ、３日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４ｃ及び図４Ｄは、それぞれ、３日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。図４Ｅ及び図４Ｆは、それぞれ、３日目、６日目及び９日目に投与された対照試料ＮＳＴ  ＦＩＸ及び９Ｄ９  ２ａ抗ＣＴＬＡ−４抗体に対応するデータを示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、未治療対照（図５Ａ）と比較したＣＴ２６癌腫モデル（図５Ｂ）における９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体タンパク質の効能を示す。９Ｄ９  ２ｂ抗ＣＴＬＡ−４抗体は、腫瘍移植後の３、６及び９日目に投与された。
【図６】５ｍｇ／ｋｇ用量の投与後の抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９抗体の血清レベル（２４時間（左側のバー）、４８時間（中間のバー）及び７２時間（右側のバー）の時点で観察された）、または９Ｄ９  ２ｂ抗体をコードするｍＲＮＡ、９Ｄ９  ２ａ抗体をコードするｍＲＮＡ、もしくは対照（ＮＳＴ  ＦＩＸもしくはＤＰＢＳ）の０．５ｍｇ／ｋｇの投与後の血清レベル（それぞれ、左から右へ、２４時間、４８時間、７２時間及び７日の時点で観察された）を示す。
【図７】図７Ａ及び７Ｂは、未治療動物（図７Ａ）及びＮＳＴ  ＦＩＸ／ＬＮＰで治療された対照動物（図７Ｂ）の個別の腫瘍成長曲線を示す。陰性対照ＮＳＴ  ＦＩＸをコードするｍＲＮＡを、腫瘍移植後の３日目、６日目及び９日目に０．５ｍｇ  ＲＮＡ／ｋｇで投与した。
【図８】腫瘍移植後の３日目、６日目及び９日目に投与された、５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９抗体タンパク質の３用量により治療された動物の個別の腫瘍成長曲線を示す。
【図９】抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９  ２ｂ抗体を発現するように設計されたｍＲＮＡの３用量によって治療された動物の個別の腫瘍成長曲線を示す。０．５ｍｇのｍＲＮＡ／ｋｇの用量を腫瘍移植後の３日目、６日目及び９日目に投与した。
【図１０】抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９  ２ａ抗体を発現するように設計されたｍＲＮＡの３用量によって治療された動物の個別の腫瘍成長曲線を示す。０．５ｍｇのｍＲＮＡ／ｋｇの用量を腫瘍移植後の３日目、６日目及び９日目に投与した。
【図１１】図１１Ａ及び１１Ｂは、ＮＳＴ  ＦＩＸ  ｍＲＮＡ対照により治療された動物（図１１Ａ）及び抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９  ２ｂを発現するように設計されたｍＲＮＡにより治療された動物（図１１Ｂ）の個別の腫瘍成長曲線を示す。ｍＲＮＡを腫瘍移植後の３日目及び９日目に０．５ｍｇＲＮＡで投与した。
【図１２】図１２Ａ及び１２Ｂは、ＮＳＴ  ＦＩＸ  ｍＲＮＡ対照により治療された動物（図１２Ａ）及び抗ＣＴＬＡ−４  ９Ｄ９  ２ａを発現するように設計されたｍＲＮＡにより治療された動物（図１２Ｂ）の個別の腫瘍成長曲線を示す。ｍＲＮＡを腫瘍移植後の３日目に０．５ｍｇＲＮＡで投与した。
【図１３】ＣＴＬＡ−４抗体をコードするｍＲＮＡによる治療の生存利益を示す。
【図１４】キメラＣＤ８０Ｆｃポリペプチドの構造のダイアグラムである。このようなキメラポリペプチドは二量体であり、各モノマーは、ＣＤ８０の細胞外ドメイン、ならびにＦｃドメイン（それ自体、２つのＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域を含む）を含む。ＣＤ８９Ｆｃ二量体は、Ｆｃのヒンジ領域内のジスルフィド結合によって一緒に保持されている。
【図１５】結腸癌マウスモデルの治療におけるＣＤ８０Ｆｃ（「Ｂ７．１−Ｆｃ」）の有効性を示すグラフである。結腸の２６個の細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの腹部に確立し、経時的な平均腫瘍体積を一連のＣＤ８０Ｆｃ濃度による反復治療の後に測定した。
【図１６】ＣＤ８０Ｆｃコンストラクトをコードするマウス及びヒト修飾ｍＲＮＡの発現レベルを示す。
【図１７】発現されたＣＤ８０ＦｃコンストラクトがＣＴＬＡ−４に結合する能力を試験した結果を示す。
【図１８】ジャーカット細胞のＣＤ８０Ｆｃ媒介共刺激後のＩＬ−２の分泌を示すグラフである。ジャーカット細胞をＰＨＡ処置して、一次Ｔ細胞受容体活性化シグナルをもたらし、この細胞をＣＤ８０Ｆｃポリペプチドで処置した。各キメラポリペプチドを、６２．５ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ及び１０００ｎｇ／ｍＬを含む一連の濃度で投与した。
【図１９】図１９Ａ、図１９Ｂ及び図１９Ｃは、Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、キメラＣＤ８０Ｆｃポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏの効能のグラフを含む。Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１２）の皮下に確立し、続いて１２．５μｇの修飾ｍＲＮＡ用量を７日毎で６回投与した。マウスには、キメラＣＤ８０Ｆｃをコードする修飾ｍＲＮＡ（図１９Ｂ及び１９Ｃ）または対照ｍＲＮＡ（図１９Ａ）を投与した。グラフは、移植後の１８日目から出発した、各腫瘍の経時的な増殖の個別のプロットを表している。
【図２０】完全長野生型（「ｗｔ」）ＴＬＲ４及びｃａＴＬＲ４の構造を示す。完全長ｗｔＴＬＲ４は、アミノ末端（「Ｎ」）にシグナルペプチド（「ｓｐ」）、細胞外ロイシンリッチリピートドメイン（「ＬＲＲ」）、膜貫通ドメイン（「ＴＭ」）及びカルボキシ末端（「Ｃ」）に細胞内ｔｏｌｌ／インターロイキン−１受容体様ドメイン（「ＴＩＲ」）を含む。ｃａＴＬＲ４は、野生型シグナルペプチド及びＬＲＲを欠き、代わりにヒトリソソーム膜タンパク質１（ｈＬＡＭＰ１）またはマウスイムノグロブリンカッパ可変（「ｍＩｇｋ」）シグナルペプチドを含む。ｃａＴＬＲ４の残りの構造は、ｗｔＴＬＲ４と同じである。
【図２１】ＱＣによる無細胞翻訳におけるｃａＴＬＲ４  ｍＲＮＡの発現を示す。レーン「１」は、２０及び２５キロダルトン（「ｋＤａ」）のサイズを示すＲＮＡラダーである。レーン２は、ｍＲＮＡが無細胞翻訳系に含まれないとき、バンドの不在を示す陰性対照応である。レーン３は、マイクロＲＮＡ（「ｍｉＲ」）標的部位を有さないｍＲＮＡから発現されたヒトｃａＴＬＲ４（「ＨＳ  ｃａＴＬＲ４  ｍｉＲｌｅｓｓ」）を示す。レーン４は、ｍｉＲ１２２標的部位を含むｍＲＮＡから発現されたヒトｃａＴＬＲ４（「Ｈｓ  ｃａＴＬＲ４  ｍｉＲ１２２」）を示す。レーン５は、ｍｉＲ１２２標的部位を含むｍＲＮＡから発現されたマウスｃａＴＬＲ４（Ｍｍ  ｃａＴＬＲ４  ｍｉＲ１２２」）を示す。
【図２２】Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに感染した後、またはリポ多糖（「ＬＰＳ」）に曝露した後、対照ｍＲＮＡ、Ｈｓ  ｃａＴＬＲ４  ｍＲｌｅｓｓ、Ｈｓ  ｃａＴＬＲ４  ｍｉＲ１２２、またはＭｍ  ｃａＴＬＲ４  ｍｉＲ１２２をＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ（商標）ＮＦ−κＢ細胞にトランスフェクトした６及び１８時間後の、アルカリホスファターゼの活性を示すグラフである。
【図２３】図２３Ａ及び図２３Ｂは、マウスＡ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞の皮下移植、ならびに移植の１８、２５及び３２日後における１２．５μｇのＮＳＴ  ＦＩＸ（図２３Ａ）または１２．５μｇの、マウスｃａＴＬＲ４をコードし、ｍｉＲ１２２標的部位を含むｍＲＮＡ（「マウスｃａＴＬＲ４＿ｍｉＲ１２２」、図２３Ｂ）のいずれかの腫瘍内用量の後の、１２匹の個別のマウス（「ｎ＝１２」）における腫瘍体積（ｍｍ３）を示すグラフである。
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｃは、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞の皮下移植及び移植後における３μｇのＮＳＴ２００１（図２４Ａ）、０．５μｇのインターロイキン−１２（「ＩＬ１２」）＋２．５μｇのＮＳＴ  ＦＩＸ（図２４Ｂ）、または０．５μｇのＩＬ１２＋２．５μｇの、ｃａＴＬＡ４をコードするｍＲＮＡ（図２４Ｃ）のいずれかの腫瘍内投与後の、１２匹の個別のマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ３）を示すグラフである。
【図２５】ポリヌクレオチド（ｍＲＮＡ）をコードするＯＸ４０Ｌの例を示す。ｍＲＮＡは、５’キャップ、５’ＵＴＲ、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦ（ｍＲＮＡ）、３’ＵＴＲ、ｍｉＲ１２２結合部位及びポリ−Ａ尾部から構成され得る。
【図２６】ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＢ１６Ｆ１０細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示す。左側のピークは、対照（偽処置された、または陰性対照ｍＲＮＡ（多数の停止コドンを含む同じｍＲＮＡの非翻訳型）により処置された）を表す。右側の４つのピークは、６．３ｎｇ、１２．５ｎｇ、２５ｎｇ、または５０ｎｇのＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡの投与によるＯＸ４０Ｌの発現を表す。
【図２７−１】（図２７Ａ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＨｅＬａ細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示し、処置は、マイトマイシンＣの不在下であった。（図２７Ｂ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＭＣ−３８細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示し、処置は、マイトマイシンＣの不在下であった。図２７Ａ及び２７Ｂのピーク１は、偽処置細胞の表面発現を示す。ピーク２〜６は、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドによる処置後の１、２、３、５及び７日目（それぞれ）における表面発現を示す。（図２７Ｃ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＨｅＬａ細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示し、処置は、マイトマイシンＣの存在下であった。（図２７Ｄ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＭＣ−３８細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示し、処置は、マイトマイシンＣの存在下であった。図２７Ｃ及び２７Ｄのピーク１は、偽処置細胞の表面発現を示す。ピーク２〜６は、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドによる処置後の１、２、３、５及び７日目（それぞれ）における表面発現を示す。（図２７Ｅ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドで処置された後のＨｅＬａ細胞の表面におけるＯＸ４０Ｌの発現を示す。ピーク１は、偽処置細胞の表面発現を示す。ピーク２〜６は、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドによる処置後の１、２、３、４及び５日目（それぞれ）における表面発現を示す。
【図２７−２】（図２７Ｆ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドによるＨｅＬａ細胞の処置後の、細胞溶解物及び細胞培養上清におけるマウスＯＸ４０Ｌタンパク質の定量化を示す。（図２７Ｇ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドによるＨｅＬａ細胞の処置後の、細胞溶解物及び細胞培養上清におけるヒトＯＸ４０Ｌタンパク質の定量化を示す。図２７Ｆ及び２７Ｇのｙ軸は、ウェル毎のタンパク質の量をナノグラム（ｎｇ）で示す。
【図２８−１】図２８Ａ〜２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡにより処置された細胞の表面に発現されたＯＸ４０Ｌの共刺激性生物学的活性を示す。図２８Ａは、Ｔ細胞活性化アッセイの略図を示す。ＯＸ４０発現Ｂ１６Ｆ１０細胞またはＨｅＬａ細胞を、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗マウスＣＤ３抗体（Ｂ１６Ｆ１０細胞）またはＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子（ＨｅＬａ細胞）と共に同時培養した。ＩＬ−２産生を、Ｔ細胞活性化の相関としてＥＬＩＳＡを使用して測定した。図２８Ｂは、マウスＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。図２８Ｃは、ヒトＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。ｙ軸は、ｍＩＬ−２発現をｎｇ／ｍｌで示す。図２８Ｄは図２８Ｃのデータを示し、概略図は、ＯＸ４０Ｌ発現細胞をナイーブのＴ細胞活性化アッセイに加えることを示している。図２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ発現ＨｅＬａ細胞の存在または不在下及び抗ヒトＣＤ３抗体の存在または不在下で培養された予備刺激Ｔ細胞を使用する、Ｔ細胞活性化アッセイを示す。
【図２８−２】図２８Ａ〜２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡにより処置された細胞の表面に発現されたＯＸ４０Ｌの共刺激性生物学的活性を示す。図２８Ａは、Ｔ細胞活性化アッセイの略図を示す。ＯＸ４０発現Ｂ１６Ｆ１０細胞またはＨｅＬａ細胞を、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗マウスＣＤ３抗体（Ｂ１６Ｆ１０細胞）またはＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子（ＨｅＬａ細胞）と共に同時培養した。ＩＬ−２産生を、Ｔ細胞活性化の相関としてＥＬＩＳＡを使用して測定した。図２８Ｂは、マウスＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。図２８Ｃは、ヒトＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。ｙ軸は、ｍＩＬ−２発現をｎｇ／ｍｌで示す。図２８Ｄは図２８Ｃのデータを示し、概略図は、ＯＸ４０Ｌ発現細胞をナイーブのＴ細胞活性化アッセイに加えることを示している。図２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ発現ＨｅＬａ細胞の存在または不在下及び抗ヒトＣＤ３抗体の存在または不在下で培養された予備刺激Ｔ細胞を使用する、Ｔ細胞活性化アッセイを示す。
【図２８−３】図２８Ａ〜２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡにより処置された細胞の表面に発現されたＯＸ４０Ｌの共刺激性生物学的活性を示す。図２８Ａは、Ｔ細胞活性化アッセイの略図を示す。ＯＸ４０発現Ｂ１６Ｆ１０細胞またはＨｅＬａ細胞を、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗マウスＣＤ３抗体（Ｂ１６Ｆ１０細胞）またはＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子（ＨｅＬａ細胞）と共に同時培養した。ＩＬ−２産生を、Ｔ細胞活性化の相関としてＥＬＩＳＡを使用して測定した。図２８Ｂは、マウスＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。図２８Ｃは、ヒトＩＬ−２により測定したＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。ｙ軸は、ｍＩＬ−２発現をｎｇ／ｍｌで示す。図２８Ｄは図２８Ｃのデータを示し、概略図は、ＯＸ４０Ｌ発現細胞をナイーブのＴ細胞活性化アッセイに加えることを示している。図２８Ｅは、ＯＸ４０Ｌ発現ＨｅＬａ細胞の存在または不在下及び抗ヒトＣＤ３抗体の存在または不在下で培養された予備刺激Ｔ細胞を使用する、Ｔ細胞活性化アッセイを示す。
【図２９】ルシフェラーゼポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドにより処置された動物の肝臓組織と比較した、腫瘍組織におけるルシフェラーゼフラックスレベルを示す。代表的な符号は以下のとおりである。中空逆三角形、中空星形、中空菱形、中黒菱形及び中空円形は、５０μｇ、２５μｇ、１２．５μｇ、６．２５μｇ及び３．１２５μｇのｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（それぞれ）の投与後の腫瘍組織におけるルシフェラーゼフラックスを示す。中黒逆三角形、中黒星形、中空正方形、中黒正方形及び中空三角形は、５０μｇ、２５μｇ、１２．５μｇ、６．２５μｇ及び３．１２５μｇのｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（それぞれ）の投与後の肝臓組織におけるルシフェラーゼフラックスを示す。中黒円形及び中黒三角形は、ＰＢＳ対照の投与後の腫瘍組織（中黒円形）及び肝臓組織（中黒三角形）におけるルシフェラーゼフラックスを示す。
【図３０】ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドにより治療された動物のメラノーマ腫瘍組織に存在する、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの量を示す。左側パネルは治療の８時間後を示し、右側パネルは治療の２４時間後を示す。
【図３１−１】（図３１Ａ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドにより治療した、ＮＳＴ−ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ（非翻訳ＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡ）を含むポリヌクレオチドにより治療した、または治療しなかった動物における、結腸腺癌腫瘍組織に存在するＯＸ４０Ｌポリペプチドの量を示す。ＯＸ４０Ｌ発現を３時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間及び１６８時間目に測定した。（図３１Ｂ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの増加用量を投与した後の、腫瘍組織に存在するＯＸ４０Ｌポリペプチド（上側）及びｍＲＮＡ（下側）の量を示す。
【図３１−２】（図３１Ｃ）同じポリヌクレオチドを投与した後の、肝臓組織に存在するＯＸ４０Ｌポリペプチド（上側）及びｍＲＮＡ（下側）の量を示す。（図３１Ｄ）同じポリヌクレオチドを投与した後の、脾臓組織に存在するＯＸ４０Ｌポリペプチド（上側）及びｍＲＮＡ（下側）の量を示す。
【図３２−１】図３２Ａ〜３２Ｃは、結腸腺癌モデルにおける、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの投与のｉｎ  ｖｉｖｏの効能（４２日目に測定した）を示す。図３２Ａは、対照ｍＲＮＡ（ＮＴ  ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２対照）により治療された動物の腫瘍成長を示す。図３２Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２）を含むポリヌクレオチドにより治療された動物の腫瘍成長を示す。図３２Ｃは、全ての治療群（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２、ＮＳＴ＿ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２及びＰＢＳ）のカプラン・マイヤー生存曲線を示す。
【図３２−２】図３２Ａ〜３２Ｃは、結腸腺癌モデルにおける、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの投与のｉｎ  ｖｉｖｏの効能（４２日目に測定した）を示す。図３２Ａは、対照ｍＲＮＡ（ＮＴ  ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２対照）により治療された動物の腫瘍成長を示す。図３２Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２）を含むポリヌクレオチドにより治療された動物の腫瘍成長を示す。図３２Ｃは、全ての治療群（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２、ＮＳＴ＿ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２及びＰＢＳ）のカプラン・マイヤー生存曲線を示す。
【図３３】図３３Ａ〜３３Ｃは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドにより治療された動物における、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍のＯＸ４０Ｌ発現を示す。図３３Ａは、ＥＬＩＳＡで測定した、腫瘍組織において１グラム毎のナノグラムで定量化されたＯＸ４０Ｌ発現を示す。図３３Ｂは、フローサイトメトリーで測定した、腫瘍細胞の細胞表面におけるＯＸ４０Ｌ発現を示す。図３３Ｃは、フローサイトメトリーで測定した、腫瘍細胞の細胞表面におけるＯＸ４０Ｌ発現を示す。
【図３４】図３４Ａ及び３４Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドにより治療された動物における、腫瘍微小環境へのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の浸潤を示す。図３４Ａは、腫瘍微小環境に存在する生ＮＫ細胞の平均率を示す。左側のバーは、ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍＲＮＡの投与後に増加したＮＫ細胞の百分率を示す。右側のバーは、ＮＳＴ  ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍＲＮＡの投与後に増加したＮＫ細胞の百分率を示す。図３４Ｂは、同じ研究における個別の動物データを示す。
【図３５−１】図３５Ａ〜３５Ｄは、Ｂ細胞リンパ腫腫瘍モデルにおける、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの投与のｉｎ  ｖｉｖｏの効能を示す。図３５Ａは、対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ−ＦＩＸ対照）により治療された動物の腫瘍成長を示す。図３５Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２）を含むポリヌクレオチドにより治療された動物の腫瘍成長を示す。図３５Ｃは、３５日目に測定した各群の平均腫瘍体積を示す。図３５Ｄは、各治療群のカプラン・マイヤー生存曲線を示す。正方形は、ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２の投与後の腫瘍体積を示す。三角形は、ＮＳＴ−ＦＩＸ（対照）の投与後の腫瘍体積を示す。
【図３５−２】図３５Ａ〜３５Ｄは、Ｂ細胞リンパ腫腫瘍モデルにおける、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの投与のｉｎ  ｖｉｖｏの効能を示す。図３５Ａは、対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ−ＦＩＸ対照）により治療された動物の腫瘍成長を示す。図３５Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２）を含むポリヌクレオチドにより治療された動物の腫瘍成長を示す。図３５Ｃは、３５日目に測定した各群の平均腫瘍体積を示す。図３５Ｄは、各治療群のカプラン・マイヤー生存曲線を示す。正方形は、ＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２の投与後の腫瘍体積を示す。三角形は、ＮＳＴ−ＦＩＸ（対照）の投与後の腫瘍体積を示す。
【図３６】図３６Ａ及び３６Ｂは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドを投与した後の、ｉｎ  ｖｉｖｏ免疫応答を示す。マウスに、ＭＣ−３８結腸腺癌細胞を接種した。腫瘍が触知可能なサイズに達すると、マウスに、ＯＸ４０ＬポリペプチドコードするｍＲＮＡ（ＯＸ４０Ｌ＿１２２、三角形）、対照ナンセンスｍＲＮＡ（ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ＿１２２、逆三角形）、またはＰＢＳ（正方形）を含むポリヌクレオチドを投与した。ポリペプチド投与の６０日後、マウスに第２のＭＣ−３８腫瘍細胞接種を再負荷した。図３６Ａは、６０日目までの第１期の個別の動物の腫瘍を示す。図３６Ｂは、再負荷した２３日後に腫瘍成長を表した動物の数を示す。
【図３７】ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの第１の用量及び／または第２の用量の後の様々な時点での、Ａ２０腫瘍におけるＯＸ４０Ｌ発現を示す。発現は、ポリヌクレオチドの第１の用量の投与の２４時間、７２時間、７日及び１４日後、ならびにポリヌクレオチドの第２の用量の投与の２４時間、７２時間及び７日後に示されている。
【図３８】図３８Ａ〜３８Ｃは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリペプチドの投与後の腫瘍微小環境に存在する異なる種類の細胞を示す。図３８Ａは、がん細胞、免疫細胞、非癌／非免疫細胞及び骨髄系統の細胞であるＯＸ４０Ｌ発現細胞の、Ａ２０腫瘍における百分率を示す。図３８Ｂは、腫瘍細胞、免疫細胞及び骨髄系統の細胞であるＯＸ４０Ｌ発現細胞の、ＭＣ３８腫瘍における百分率を示す。図３８Ｃは、ポリヌクレオチドの投与後のＯＸ４０Ｌ発現細胞である骨髄細胞の、腫瘍微小環境内の百分率を示す。
【図３９−１】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリペプチドの投与後にＡ２０腫瘍の腫瘍微小環境に浸潤する、異なる種類の免疫細胞を示す。図３９Ａは、ＤＸ５マーカーにより検出された、治療の２４時間後の腫瘍浸潤物におけるＮＫ細胞の百分率を示す。図３９Ｂは、ＣＤ４マーカーにより検出された、治療の１４日後の腫瘍浸潤物におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率を示す。図３９Ｃは、ＣＤ８マーカーにより検出された、治療の１４日後の腫瘍浸潤物におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。図３９Ｄは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの第１及び第２の用量の２４及び７２時間後の、ＭＣ３８腫瘍の腫瘍浸潤におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。
【図３９−２】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリペプチドの投与後にＡ２０腫瘍の腫瘍微小環境に浸潤する、異なる種類の免疫細胞を示す。図３９Ａは、ＤＸ５マーカーにより検出された、治療の２４時間後の腫瘍浸潤物におけるＮＫ細胞の百分率を示す。図３９Ｂは、ＣＤ４マーカーにより検出された、治療の１４日後の腫瘍浸潤物におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率を示す。図３９Ｃは、ＣＤ８マーカーにより検出された、治療の１４日後の腫瘍浸潤物におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。図３９Ｄは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドの第１及び第２の用量の２４及び７２時間後の、ＭＣ３８腫瘍の腫瘍浸潤におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。
【図４０】図４０Ａ及び４０Ｂは、Ａ２０腫瘍における、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド投与のｉｎ  ｖｉｖｏの効能を示す。図４０Ａは、経時的な腫瘍体積（ｍｍ３で測定した）を示す。治療は、以下のように示されている。ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２（中黒円形）、対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）（中空正方形）、ＰＢＳ（中空三角形）及び未治療（中空円形）。図４０Ｂは、同じ動物のカプラン・マイヤー生存曲線を示す。
【図４１】図４１Ａ及び４１Ｂは、トランスフェクションの６時間、２４時間及び４８時間後の、一次ヒト肝細胞、ヒト肝癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）及びヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）におけるＯＸ４０Ｌタンパク質の発現を示す。図４１Ａは、ウェル毎にナノグラムで測定された、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現を示す。図４１Ｂは、ウェル毎にナノグラムで測定された、マウスＯＸ４０Ｌポリペプチドの発現を示す。
【図４２】図４２Ａ〜４２Ｅは、腫瘍内または静脈内に送達されたｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示す。図４２Ａは、ＰＢＳにより静脈内で治療された動物（矢印は注射した日を示す）における腫瘍成長を示す。図４２Ｂは、対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ」）により静脈内で治療された動物（矢印は注射した日を示す）における腫瘍成長を示す。図４２Ｃは、ｍＯＸ４０Ｌ＿ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（「ＯＸ４０Ｌ−ｍｉＲ１２２」）により静脈内で治療された動物（矢印は注射した日を示す）における腫瘍成長を示す。
【図４３】ＰＢＳ、陰性対照ｍＲＮＡ（「ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ」）、またはｍＯＸ４０Ｌ−ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（「ＯＸ４０Ｌ」）により静脈内で治療された動物の生存曲線を示す。用量の日付は矢印によって示されている。
【図４４】ＰＢＳ（中黒円形）、陰性対照ｍＲＮＡ（中黒正方形）及びＯＸ４０Ｌ−ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（中空円形）により静脈内で治療された動物の経時的な体重の変化率を示す。
【図４５】ＩＬ１２をコードする野生型ｍＲＮＡに対する、異なる配列最適化ＩＬ１２  ｍＲＮＡのタンパク質発現の増加を示す表である。
【図４６】群１（ＰＢＳ）、２（ＩＬ１２タンパク質）、７及び８（対照ＮＳＴ−ＦＩＸ、それぞれ０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０５ｍｇ／ｋｇ）と比較した、０．１ｍｇ／ｋｇ（群４）及び０．０５ｍｇ／ｋｇ（群５）（逆三角形を伴う線により示されている）の用量での、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡの単回静脈内（ＩＶ）用量の堅牢な有効性を描写するグラフである。
【図４７】（図４７Ａ）対応するＩＬ１２組み換えタンパク質と比較した、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡの投与後に観察された、Ｌ１２血漿レベルの高いＡＵＣ及びＣｍａｘを描写するグラフである。（図４７Ｂ）ＩＬ１２組み換えタンパク質と比較した、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）により投与されたＩＬ１２  ｍＲＮＡの投与後に観察された、ＩＦＮγ血漿レベルの高いＡＵＣ及びＣｍａｘを描写するグラフである。（図４７Ｃ）およそ０．０５ｍｐｋでのＩＬ１２組み換えタンパク質による治療と比較した、０．１ｍｐｋ及び０．０５ｍｐｋで脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）により投与されたＩＬ１２  ｍＲＮＡの治療後に観察された、ＩＬ１２及びＩＦＮγ血漿レベルの高いＡＵＣレベルを描写する表である。括弧内の数値は、タンパク質に対するｍＲＮＡのｘ倍の増加を示す。
【図４８−１】図４８Ａ〜４８Ｆは、０．１ｍｇ／ｋｇ（群４）（図４８Ｆ）及び０．０５ｍｇ／ｋｇ（群５）（図４８Ｅ）の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ、ＰＢＳ（群１）（図４８Ａ）、ＩＬ１２タンパク質（群２）（図４８Ｄ）、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０５ｍｇ／ｋｇの対照ＮＳＴ−ＦＩＸ（それぞれ群７及び８）（ぞれぞれ、図４８Ｃ及び図４８Ｂ）の用量の、単回静脈内（ＩＶ）用量での投与後に見られた、平均腫瘍体積及び完全応答（ＣＲ）の数を描写するグラフである。完全応答（ＣＲ）は、図４８Ｅ及び図４８Ｆにのみ示されている。図４８Ｅは、８回のＣＲのうち６回が群５（０．０５ｍｇ／ｋｇの用量での脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ）において見られたことを示している。図４８Ｆは、９回のＣＲのうち５回が群４（０．１ｍｇ／ｋｇの用量での脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ）において見られたことを示している。ＩＬ１２  ｍＲＮＡ群を除いて、他の全ての群ではＣＲが何も観察されなかった。
【図４８−２】図４８Ａ〜４８Ｆは、０．１ｍｇ／ｋｇ（群４）（図４８Ｆ）及び０．０５ｍｇ／ｋｇ（群５）（図４８Ｅ）の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ、ＰＢＳ（群１）（図４８Ａ）、ＩＬ１２タンパク質（群２）（図４８Ｄ）、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０５ｍｇ／ｋｇの対照ＮＳＴ−ＦＩＸ（それぞれ群７及び８）（ぞれぞれ、図４８Ｃ及び図４８Ｂ）の用量の、単回静脈内（ＩＶ）用量での投与後に見られた、平均腫瘍体積及び完全応答（ＣＲ）の数を描写するグラフである。完全応答（ＣＲ）は、図４８Ｅ及び図４８Ｆにのみ示されている。図４８Ｅは、８回のＣＲのうち６回が群５（０．０５ｍｇ／ｋｇの用量での脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ）において見られたことを示している。図４８Ｆは、９回のＣＲのうち５回が群４（０．１ｍｇ／ｋｇの用量での脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ）において見られたことを示している。ＩＬ１２  ｍＲＮＡ群を除いて、他の全ての群ではＣＲが何も観察されなかった。
【図４９】１μｇ（約０．０５ｍｇ／ｋｇ）（群２）のＩＬ１２タンパク質、０．１ｍｇ／ｋｇ（群７）もしくは０．０５ｍｇ／ｋｇ（群８）のＮＳＴ−ＦＩＸ、またはＰＢＳ（群１）の単回静脈内（ＩＶ）用量と比較した、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量（群５）及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量（群４）の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡの単回ＩＶ用量の、腫瘍移植後の４７日目の生存利益を描写するグラフである。
【図５０】ＩＬ１２  ｍＲＮＡの全身（静脈内）投与と比べた局所（腫瘍内）投与の耐容性の利点を描写する表である。０．２ｍｇ／ｋｇでＩＬ１２  ｍＲＮＡが静脈内投与された１２匹のマウスのうちの３匹と比較して、０．２ｍｇ／ｋｇ（４μｇ固定）でＩＬ１２  ｍＲＮＡが腫瘍内投与された１０匹のマウスのうちの９匹が２０日目に生存していた。静脈内投与は、腫瘍内投与より約１８倍高いＩＬ１２の血漿レベル（ｎｇ／ｍｌ）を用量の２４時間後に示した（１５９２ｎｇ／ｍｌ対８９ｎｇ／ｍｌ）。
【図５１】図５１Ａ及び５１Ｂは、腺癌（ＭＣ３８）腫瘍を保有するマウスに投与された、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ（４μｇ）の単回腫瘍内用量のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示すグラフである。図５１Ａは、移植後の１０目から開始して２４日目までの平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。群１（円形）は、４μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡ  ＬＮＰが移植後１０日目に投与されたマウス（ｎ＝７）を表し、群２（正方形）は、４μｇの、非翻訳第ＩＸ因子（ＮＳＴ−ＦＩＸ  ＬＮＰ）をコードする対照ｍＲＮＡが投与されたマウス（ｎ＝７）を表し、群３（三角形）は、ＰＢが投与された別の対照群のマウス（ｎ＝７）を表す。図５１Ｂは、移植後の１０目から開始して４７日目までの、マウスの各群における個別の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。完全応答（ＣＲ）は、４μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡ  ＬＮＰ（円形）が投与された７匹の動物のうちの３匹（４４％）に達成された。
【図５２】図５２Ａ及び５２Ｂは、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を保有するマウスに投与された、ＭＣ３系脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によるＩＬ１２  ｍＲＮＡ（５μｇ）の腫瘍内用量のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示すグラフである。図５２Ａは、５μｇの非翻訳対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）が投与されたマウス（ｎ＝１２）の個別の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図５２Ｂは、５μｇのＩＬ１２（ｍｉＲｌｅｓｓ）ｍＲＮＡが投与されたマウス（ｎ＝１２）の個別の腫瘍体積を示す。完全応答（ＣＲ）は、ＩＬ１２  ｍＲＮＡを受けた１２匹の動物のうちの５匹に達成された。
【図５３】図５３Ａ及び５３Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫腫瘍モデル（Ａ２０）において、ｍｉＲｌｅｓｓ  ＩＬ１２  ｍＲＮＡ（図５３Ｂ）に匹敵する、ｍｉＲ１２２結合部位を含有するＩＬ１２  ｍＲＮＡ（５μｇ）（図５３Ａ）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示すグラフである。両方のＩＬ１２  ｍＲＮＡ（ｍｉＲ１２２結合部位を有するもの及び有さないもの（すなわち、ｍｉＲｌｅｓｓ））を、ＭＣ３系脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）によって製剤化した。ＩＬ−１２  ｍＲＮＡを、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を保有するマウスに投与した。完全応答（ＣＲ）は、ＩＬ１２  ｍｉＲｌｅｓｓ群（図５３Ａ）の１２匹のマウスのうちの５匹において及びＩＬ１２  ｍｉＲ１２２群（図５３Ｂ）の１２匹のマウスのうちの６匹において達成された。
【図５４】図５４Ａ及び５４Ｂは、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を保有するマウスに投与された、ＭＣ３系脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）による０．５μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡの単回用量のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示すグラフである。完全応答（ＣＲ）は、ＩＬ１２  ｍｉＲｌｅｓｓ（０．５μｇ）群（図５４Ａ）の１２匹のマウスのうちの４匹において及びＩＬ１２  ｍｉＲ１２２（０．５μｇ）群（図５４Ｂ）の１２匹のマウスのうちの３匹において達成された。
【図５５】図５５Ａ及び５５Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫腫瘍モデル（Ａ２０）の腫瘍を保有するマウスに、ＭＣ３系脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）による０．５μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡの多回用量を投与することによって、Ａ２０において増強されたｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能を示すグラフである。完全応答（ＣＲ）は、０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２の単回用量が投与された（図５５Ａ）１２匹のマウスのうちの３匹において及び０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２の７日毎６回の毎週投与で投与された（図５５Ｂ）１２匹のマウスのうちの５匹において達成された。
【図５６】図５６Ａ及び５６Ｂは、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を保有するマウスに投与された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）による０．５μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡ（すなわち、化合物１８）の毎週腫瘍内用量のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能が、ＭＣ３系ＬＮＰによる０．５μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効能に類似していることを示すグラフである。図５６Ａは、ＭＣ３系ＬＮＰによる０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が７日毎６回投与された１２匹のマウスの個別の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。完全応答（ＣＲ）は、１２匹の動物のうちの５匹において達成された。図５６Ｂは、化合物１８系ＬＮＰによる０．５μｇのＩＬ１２  ｍＲＮＡが７日毎６回投与された１２匹のマウスの個別の腫瘍体積を示す。完全応答（ＣＲ）は、同様に、１２匹の動物のうちの５匹において達成された。
【図５７】図５７Ａ及び５７Ｂは、ＭＣ３系脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）による０．５μｇの非翻訳陰性対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）（図５７Ａ）及び化合物１８系ＬＮＰによる０．５μｇの非翻訳陰性対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）（図５７Ｂ）の毎週投与（７日毎６回）が投与された、Ａ２０腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。
【図５８】図５８Ａ及び５８Ｂは、示された用量のＩＬ１２  ｍＲＮＡが、Ａ２０腫瘍を保有するマウスに腫瘍内投与された６時間及び２４時間後の、血漿（図５８Ａ）及び腫瘍（図５８Ｂ）におけるＩＬ１２の用量依存性レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）５μｇのＮＳＴ、（ｖ）０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘ）５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図５９】図５９Ａ〜５９Ｃは、ＭＣ３系ＬＮＰによるＩＬ１２  ｍＲＮＡと比較した、化合物１８系ＬＮＰによる示された用量のＩＬ１２  ｍＲＮＡの投与後に上昇したＩＬ１２の血漿及び腫瘍内レベルを示すグラフである。図５９Ａは、６時間及び２４時間での血漿ＩＬ１２レベルを示し、図５９Ｂは、６時間及び２４時間での腫瘍ＩＬ１２レベルを示す。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｖ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｖｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｖｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｖｉｉｉ）５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。図５９Ｃは、ＭＣ３製剤化組成物と比較した、化合物１８製剤化組成物によるＩＬ１２の倍増を示す。
【図６０】図６０Ａ及び６０Ｂは、ＩＬ１２  ｍＲＮＡがＡ２０腫瘍を保有するマウスに投与された後の、血漿（図６０Ａ）及び腫瘍（図６０Ｂ）における６時間及び２４時間でのＩＦＮγの増加レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＮＳＴ、（ｖ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉｉ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘｉｖ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図６１】図６１Ａ及び６１Ｂは、ＩＬ１２  ｍＲＮＡがＡ２０腫瘍を保有するマウスに投与された後の、血漿（図６１Ａ）及び腫瘍（図６１Ｂ）における６時間及び２４時間でのＩＰ１０の増加レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＮＳＴ、（ｖ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉｉ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘｉｖ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図６２】図６２Ａ及び６２Ｂは、ＩＬ１２  ｍＲＮＡが投与された後の、血漿（図６２Ａ）及び腫瘍（図６２Ｂ）における６時間及び２４時間でのＩＬ６の減少レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＮＳＴ、（ｖ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉｉ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘｉｖ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図６３】図６３Ａ及び６３Ｂは、ＩＬ１２  ｍＲＮＡが投与された後の、血漿（図６３Ａ）及び腫瘍（図６３Ｂ）における６時間及び２４時間でのＧ−ＣＳＦの減少レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＮＳＴ、（ｖ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉｉ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘｉｖ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図６４】図６４Ａ及び６４Ｂは、ＩＬ１２  ｍＲＮＡが投与された後の、血漿（図６４Ａ）及び腫瘍（図６４Ｂ）における６時間及び２４時間でのＧＯＲαの減少レベルを示すグラフである。左から右へ、マウスには、（ｉ）ＰＢＳ、（ｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＮＳＴ、（ｉｉｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＮＳＴ、（ｉｖ）ＭＣ３による５μｇのＮＳＴ、（ｖ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２、（ｖｉｉｉ）ＭＣ３による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｉｘ）ＭＣ３による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘ）ＭＣ３による５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２、（ｘｉ）化合物１８による０．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉ）化合物１８による２．５μｇのＮＳＴ、（ｘｉｉｉ）化合物１８による０．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２及び（ｘｉｖ）化合物１８による２．５μｇのＩＬ１２  ｍｉＲ１２２が与えられた。
【図６５】図６５Ａ及び６５Ｂは、陰性対照ｍＲＮＡ（図６５Ａ）と比較した、ＩＬ１２＿ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（図６５Ｂ）による治療後の、Ａ２０腫瘍で誘導された疾患後の３５日目までの個別の腫瘍体積を示すグラフである。
【図６６】図６６Ａ及び６６Ｂは、陰性対照ｍＲＮＡ（図６６Ａ）と比較した、ＩＬ１２＿ｍｉＲ１２２  ｍＲＮＡ（図６６Ｂ）による治療後の、Ａ２０腫瘍で誘導された疾患後の３５日目までのマウスの個別の体重測定値を示すグラフである。
【図６７】マウスにおけるルシフェラーゼ可視化（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ−ｅｎａｂｌｅｄ）ＭＣ３８結腸癌細胞株により誘導された疾患後の２２日目の腫瘍負荷の代替物として、生物発光（ＢＬ）を描写するグラフである。左から右へ、マウスには、治療なし、２μｇのｍＩＬ１２＿ｍｉＲｌｅｓｓ、２μｇのｍＩＬ１２＿ｍｉＲ１２２、２μｇのＮＳＴ＿ＯＸ４０Ｌ＿１２２、４μｇの  ｍＩＬ１２＿ｍｉＲｌｅｓｓ、４μｇのｍＩＬ１２＿ｍｉＲ１２２、４μｇのＮＳＴ＿ＯＸ４０Ｌ＿１２２及び１μｇのｒｍ  ＩＬ１２が投与された。
【図６８】ＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌ陰性対照と比較した、ＩＬ１２  ｍＲＮＡを有するＬＮＰにより治療されたマウスの生存率を示すカプラン・マイヤー曲線である。グラフは、Ａ２０腫瘍が移植された後の６０日目までの生存を示している。
【図６９】（図６９Ａ）Ｆｃ−ＩＬ１５Ｒ−ＩＬ１５融合コンストラクトの図表示を示す。コンストラクトは、（ｉ）シグナルペプチド、（ｉｉ）Ｆｃ領域及び（ｉｉｉ）ＩＬ１５の５’末端にリンカーによって３’末端が結合しているＩＬ１５Ｒから構成される。（図６９Ｂ）別の作用剤を伴う、または伴わない、野生型ＩＬ１５をコードする修飾ｍＲＮＡ（ｈＯｐｔＩＬ１５）の投与後の体重変化を示す。他の作用剤には、野生型ＩＬ１５ＲａまたはＩＬ１５ＲａＥＣＤ（マウスもしくはヒト）のいずれかをコードする修飾ｍＲＮＡ、組み換えＩＬ１５タンパク質、あるいはＮＳＴ−ＯＸ４０Ｌが含まれる。体重の変化を投与の２週間後まで、様々な時点で測定した。
【図７０】別の作用剤を伴う、または伴わない、野生型ＩＬ１５をコードする修飾ｍＲＮＡ（ｈＯｐｔＩＬ１５）の単回ＩＶ投与後の、血漿において測定されたＩＬ１５タンパク質のレベルを示す。
【図７１】野生型ＩＬ１５Ｒａをコードする修飾ｍＲＮＡを伴う、野生型ＩＬ１５をコードする修飾ｍＲＮＡ（ｈＯｐｔＩＬ１５）の単回ＩＶ共投与の後の脾臓の重量を示す。
【図７２】野生型ＩＬ１５Ｒａをコードする修飾ｍＲＮＡを伴う、野生型ＩＬ１５をコードする修飾ｍＲＮＡ（ｈＯｐｔＩＬ１５）の単回ＩＶ共投与の後の脾臓細胞計数を示す。脾臓細胞をＣＤ８ａ＋  Ｔ細胞、ＮＫ  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞及びＢ細胞に更に分類した。
【図７３】本明細書に使用されるＩＬ１８ポリペプチドのダイアグラムである。ＩＬ１８ＷＴポリペプチドは、野生型ＩＬ１８ポリペプチド（配列番号５６４）を表す。垂直線は、カスパーゼ−１が３５アミノ酸シグナルペプチドを除去する切断部位を表す。ｔＰＡ−ＩＬ１８ポリペプチドは、Ｎ末端に組織プラスミノーゲン活性化因子シグナルペプチドを有する野生型ＩＬ１８成熟ペプチド（配列番号５７２）である。ＩＬ２ｓｐ−ＩＬ１８ペプチドは、Ｎ末端にＩＬ１２シグナルペプチドを有する野生型ＩＬ１８成熟ペプチド（配列番号５７４）である。
【図７４】図７４Ａは、ＨｅＬａ細胞におけるヒトＩＬ１８（ｈＩＬ１８）及びマウスＩＬ１８（ｍＩＬ１８）の両方の発現を示すプロットである。ＩＬ１８ポリペプチドの検出を下記の実施例に記載されているように実施した。偽は、対照ｍＲＮＡがトランスフェクトされた細胞を表す。野生型ＩＬ１８（ＩＬ１８ＷＴ）をコードするｍＲＮＡ、組織プラスミノーゲン活性化因子シグナルペプチドを有するＩＬ１８（ｔＰＡ−ＩＬ１８）及びＩＬ１２シグナルペプチドを有するＩＬ１８（ＩＬ２ｓｐ−ＩＬ１８）を、示されたようにトランスフェクトした。ＨｅＬａ細胞溶解物中のＩＬ１８ポリペプチドの存在は、ポリペプチドが細胞から分泌されなかったことを示し、一方、上清におけるＩＬ１８ポリペプチドの存在は、ポリペプチドが分泌されたことを示している。    図７４Ｂは、ＩＬ１２の存在下でＣＴＬＬ２に接触したときの、ｍＩＬ２ｓｐ−ｍＩＬ１８及びｍＩＬ１８ポリペプチドの両方の生物活性を示すプロットである。生物活性は、実施例に記載されているように、ＣＴＬＬ２細胞の上清に存在するＩＦＮ−γの量を決定することによって測定した。
【図７５】図７５Ａ及び図７５Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、ＩＬ２３修飾ｍＲＮＡ及びＩＬ１８修飾ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏの効能のグラフを示す。Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に確立し、続いて１２．５ｕｇのｍＲＮＡ用量を腫瘍移植後の１８、２５及び３２日目に投与した。マウスには、ＩＬ２３  ｍＲＮＡ（図７５Ａ）またはＩＬ２３  ｍＲＮＡとＩＬ１８  ｍＲＮＡの混合物（図７５Ｂ）のいずれかを投与した。グラフは、移植後の１８日目から出発した、各腫瘍の経時的な増殖の個別のプロットを表している。
【図７６】ＧＳリンカーにより３’末端がＩＬ２３Ａポリペプチドの５’末端に結合しているＩＬ１２Ｂポリペプチドを含む、一本鎖ＩＬ１２Ｂリンカー（Ｇ６Ｓ）−ＩＬ２３Ａ融合タンパク質の概略図を示す。
【図７７】図７７Ａ及び図７７Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫モデルにおけるｍＩＬ２３コードされたｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏの効能のグラフを提供する。Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に確立し、続いて１２．５ｕｇのｍＲＮＡ用量を腫瘍移植後の１８、２５及び３２日目に投与した。マウスには、ＩＬ２３  ｍＲＮＡ（図７７Ｂ）または対照ｍＲＮＡ、すなわち、ＮＳＴ  ＦＩＸ（図７７Ａ）のいずれかを投与した。グラフは、移植後の１８日目から出発した、各腫瘍の経時的な増殖の個別のプロットを表している。
【図７８】図７８Ａ及び図７８Ｂは、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉ．３６：６６−６８（２００４）によって描かれているように、メラノーマのマウスモデルにおけるインターロイキンの有効性を示すグラフを提供する。Ｂ１６メラノーマ細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの皮下に確立し、続いて、ＩＬ１２（ｐｃＤＮＡ−ＩＬ１２）、ＩＬ１８（ｐｃＤＮＡ−ｍｐｒｏＩＬ１８／マウス）、ＩＬ２３（ｐｃＤＮＡ−ＩＬ２３）、またはＧＦＰ対照（ｐｈＧＦＰ−１０５−Ｃ１）を発現するように設計されたプラスミドベクターを投与した。図７８Ａは、各群の平均腫瘍体積を表す。最終のカプラン・マイヤー生存曲線が作成され、図７８Ｂに示されている。
【図７９】図７９Ａ及び図７９Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、ＩＬ２３をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ１８をコードするｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏの効能のグラフを提供する。Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に確立し、続いて１２．５ｕｇのｍＲＮＡ用量を腫瘍移植後の１８、２５及び３２日目に投与した。マウスには、ＩＬ２３  ｍＲＮＡの単独（図７９Ａ）またはＩＬ２３  ｍＲＮＡとＩＬ１８  ｍＲＮＡの混合物（図７９Ｂ）のいずれかを投与した。グラフは、移植後の１８日目から出発した、各腫瘍の経時的な増殖の個別のプロットを表している。
【図８０】図８０Ａ〜１０３Ａは、ＲＮＡ組成物の計量を表し、例えば、（Ｕ）の計量、（Ｇ）の計量、（Ｃ）の計量、（Ｇ／Ｃ）の計量及びコドン位置１、２、３でのＧ／Ｃの組成のバイアスを表す。「Ｕ含有量（％）」と標識されている縦列は、％ＵＴＬのパラメーターに対応する。「Ｕ含有量対ＷＴ（％）」と標識されている縦列は、％ＵＷＴに対応する。「Ｕ含有量対理論的最小（％）」と標識されている縦列は、％ＵＴＭに対応する。「Ｇ含有量（％）」と標識されている縦列は、ＧＴＬ％に対応する。「Ｇ含有量対ＷＴ（％）」と標識されている縦列は、％ＧＷＴに対応する。「Ｇ含有量対理論的最大（％）」と標識されている縦列は、％ＧＴＭＸに対応する。「Ｃ含有量（％）」と標識されている縦列は、％ＣＴＬに対応する。「Ｃ含有量対ＷＴ（％）」と標識されている縦列は、％ＣＷＴに対応する。「Ｃ含有量対理論的最大（％）」と標識されている縦列は、％ＣＴＭＸに対応する。「Ｇ／Ｃ含有量（％）」と標識されている縦列は、％Ｇ／ＣＴＬに対応する。「Ｇ／Ｃ含有量対ＷＴ（％）」と標識されている縦列は、％Ｇ／ＣＷＴに対応する。「Ｇ／Ｃ含有量対理論的最大（％）」と標識されている縦列は、％Ｇ／ＣＴＭＸに対応する。各表の統計的記載（最大、最小、平均、中央値及び標準偏差）は、配列最適化されたポリヌクレオチドの母集団に対応する。    例えば、図８０Ａでは、「タンパク質」の見出し下の第１の横列は、分析されたコンストラクト（「Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−ＶＬ」）を示し、続いて、タンパク質コンストラクトのアミノ酸の長さ（「１０７」）、コード化核酸の理論的最小Ｕ含有量（％）（「１１．２１％」）、コード化核酸の理論的最小Ｕ（絶対）含有量（「３６」）及びコドンをコードするフェニルアラニンの数（「５」）を示す。「核酸」の見出し下の第１の横列には、ここでもコンストラクトの名称、その核酸塩基の長さ及び組成的記載が含まれる。残りの横列は、特定のコンストラクトをコードする２５の配列最適化されたポリヌクレオチドの母集団の異なる組成パラメーター（最大、最小、平均、中央値及び標準偏差）の分布を提供する。同じ構造が図８０Ａ〜１０３Ａの残りの組成表において使用されている。核酸塩基組成値の代わりに、縦列が、ポリヌクレオチド（「ＧＣ」）における総ＧＣ含有量、ならびにポリヌクレオチドにおける各コドンの第１位、第２位及び第３位でのＧＣ含有量に対応することを除いて、同じ構成が図８８Ａなどのコドンバイアス表に適用される。    図８０Ａは、トレメリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８０Ｂは、トレメリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８０Ｃは、トレメリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８０Ｄは、トレメリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８１】図８１Ａは、トレメリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８１Ｂは、トレメリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８１Ｃは、トレメリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８１Ｄは、トレメリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８２】図８２Ａは、イピリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８２Ｂは、イピリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８２Ｃは、イピリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８２Ｄは、イピリムマブの軽鎖のＶＬドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８３】図８３Ａは、イピリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８３Ｂは、イピリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８３Ｃは、イピリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する２５配列最適化ポリヌクレオチに対応するシトシン（Ｃ）計量ド示す。図８３Ｄは、イピリムマブの重鎖のＶＨドメイン及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８４】図８４Ａは、トレメリムマブ及びイピリムマブコンストラクトに使用される軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）、ならびにそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８４Ｂは、トレメリムマブ及びイピリムマブに使用される軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）、ならびにそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８４Ｃは、トレメリムマブ及びイピリムマブに使用される軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）、ならびにそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８４Ｄは、トレメリムマブ及びイピリムマブに使用される軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）、ならびにそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８５】図８５Ａは、トレメリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ２重鎖の定常領域（ＣＨ）及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８５Ｂは、トレメリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ２重鎖の定常領域（ＣＨ）及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８５Ｃは、トレメリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ２重鎖の定常領域（ＣＨ）及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８５Ｄは、トレメリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ２重鎖の定常領域（ＣＨ）及びそのドメインに対応する２５の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８６】図８６Ａは、トレメリムマブ及びイピリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ１重鎖の定常領域（ＣＨ）、ならびにそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８６Ｂは、トレメリムマブ及びイピリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ１重鎖の定常領域（ＣＨ）、ならびにそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８６Ｃは、トレメリムマブ及びイピリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ１重鎖の定常領域（ＣＨ）、ならびにそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８６Ｄは、トレメリムマブ及びイピリムマブコンストラクトに使用されるＩｇＧ１重鎖の定常領域（ＣＨ）、ならびにそのドメインに対応する５０の配列最適化されたポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８７−１】図８７Ａ及び８７Ｂは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ａ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｂ）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８７Ｃ及び８７Ｄは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｃ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｄ）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８７Ｅ及び８７Ｆは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｅ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｆ）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８７Ｇ及び８７Ｈは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｇ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｈ）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８７−２】図８７Ａ及び８７Ｂは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ａ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｂ）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８７Ｃ及び８７Ｄは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｃ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｄ）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８７Ｅ及び８７Ｆは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｅ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｆ）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８７Ｇ及び８７Ｈは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８７Ｇ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８７Ｈ）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図８８】図８８Ａ及び８８Ｂは、野生型ＣＤ８０及び２５配列最適化ＣＤ８０ポリヌクレオチド（図８８Ａ）、ならびに野生型Ｆｃ領域及び２５配列最適化Ｆｃ領域ポリヌクレオチド（図８８Ｂ）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図８９】図８９Ａは、野生型ｃａＴＬＲ４及び２５配列最適化ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図８９Ｂは、野生型ｃａＴＬＲ４及び２５配列最適化ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図８９Ｃは、野生型ｃａＴＬＲ４及び２５配列最適化ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図８９Ｄは、野生型ｃａＴＬＲ４及び２５配列最適化ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図９０】図９０は、野生型ｃａＴＬＲ４（ＴＬＲ４ｃａ−ＷＴの横列）及び２５配列最適化ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチド（全体の横列）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図９１】図９１Ａは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９１Bは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９１Ｃは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９１Ｄは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ/Ｃ）計量を示す。
【図９２】図９２Ａは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９２Ｂは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９２Ｃは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９２Ｄは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。
【図９３】図９３Ａは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９３Ｂは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９３Ｃは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９３Ｄは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ/Ｃ）計量を示す。
【図９４】図９４Ａは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９４Ｂは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９４Ｃは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９４Ｄは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。「Ｇ／Ｃ含有量（％）」と標識されている縦列は、％Ｇ／ＣＴＬに対応する。
【図９５】図９５Ａは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿００１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。図９５Ｂは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。図９５Ｃは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０−１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２０）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。図９５Ｄは、野生型ＩＬ１２Ａ及び２０配列最適化ＩＬ１２Ａポリヌクレオチド（ｈＩＬ１２ＡＢ＿０２１〜ｈＩＬ１２ＡＢ＿０４０）に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図９６】図９６Ａは、ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６及び５０配列最適化ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６ポリヌクレオチド（ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ０１〜ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ５０）における野生型ＩＬ１５に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９６Ｂは、ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６及び５０配列最適化ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６ポリヌクレオチド（ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ０１〜ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ５０）における野生型ＩＬ１５に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９６Ｃは、ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６及び５０配列最適化ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６ポリヌクレオチド（ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ０１〜ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ５０）における野生型ＩＬ１５に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９６Ｄは、ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６及び５０配列最適化ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６ポリヌクレオチド（ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ０１〜ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ５０）における野生型ＩＬ１５に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図９６Ｅは、ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６及び５０配列最適化ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６ポリヌクレオチド（ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ０１〜ＩＬ１５ｏｐｔ−ｔＰａ６−ＣＯ５０）における野生型ＩＬ１５に対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図９７】図９７Ａは、２５配列最適化ＩＬ１５＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５配列最適化ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメインに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９７Ｂは、２５配列最適化ＩＬ１５＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５配列最適化ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメインに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９７Ｃは、２５配列最適化ＩＬ１５＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５配列最適化ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメインに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９７Ｄは、２５配列最適化ＩＬ１５＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５配列最適化ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメインに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図９７Ｅは、２５配列最適化ＩＬ１５＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５配列最適化ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメインに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図９８】図９８Ａは、ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２及び２５配列最適化ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２ポリヌクレオチド（ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ０１〜ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５Ｒａに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図９８Ｂは、ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２及び２５配列最適化ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２ポリヌクレオチド（ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ０１〜ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５Ｒａに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９８Ｃは、ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２及び２５配列最適化ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２ポリヌクレオチド（ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ０１〜ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５Ｒａに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９８Ｄは、ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２及び２５配列最適化ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２ポリヌクレオチド（ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ０１〜ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５Ｒａに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図９８Ｅは、ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２及び２５配列最適化ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２ポリヌクレオチド（ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ０１〜ＩＬ１５Ｒａ＿ＷＴ＿ｍｉＲ１２２−ＣＯ２５）における野生型ＩＬ１５Ｒａに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図９９】図９９Ａは、２５  ＩＬ１５−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５  ＩＬ１５−Ｆｃ−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５に対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。野生型ＩＬ１５Ｒα及び２０配列最適化ＩＬ１５Ｒαポリヌクレオチド（ｈＩＬ１５ＲαＢ＿０２１〜ｈＩＬ１５ＲαＢ＿０４０）。図９９Ｂは、２５  ＩＬ１５−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５  ＩＬ１５−Ｆｃ−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５に対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図９９Ｃは、２５  ＩＬ１５−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５  ＩＬ１５−Ｆｃ−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５に対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図９９Ｄは、２５  ＩＬ１５−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５  ＩＬ１５−Ｆｃ−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５に対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図９９Ｅは、２５  ＩＬ１５−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５−ＲＬＩ−ＣＯ２５）及び２５  ＩＬ１５−Ｆｃ−ＲＬＩ配列最適化（ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ０１〜ＩＬ１５＿Ｆｃ＿ＲＬＩ−ＣＯ２５）ポリヌクレオチドにおける野生型ＩＬ１５のＳｕｓｈｉドメインに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１００】図１００Ａは、Ｎ末端に組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）シグナルペプチドを有する野生型ＩＬ１８成熟ペプチド（ｔＰＡＮＩＬ１８ｗｔ）及びｔＰＡシグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図１００Ｂは、ｔＰＡＮＩＬ１８ｗｔ及びｔＰＡシグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図１００Ｃは、ｔＰＡＮＩＬ１８ｗｔ及びｔＰＡシグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図１００Ｄは、ｔＰＡＮＩＬ１８ｗｔ及びｔＰＡシグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図１００Ｅは、ｔＰＡＮＩＬ１８ｗｔ及びｔＰＡシグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１０１】図１０１Ａは、Ｎ末端にインターロイキン−２シグナルペプチド（ＩＬ２ｓｐ）を有する野生型ＩＬ１８成熟ペプチド（ＩＬ２ｓｐＩＬ１８ｗｔ）及びＩＬ２シグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図１０１Ｂは、ＩＬ２ｓｐＩＬ１８ｗｔ及びＩＬ２シグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図１０１Ｃは、ＩＬ２ｓｐＩＬ１８ｗｔ及びＩＬ２シグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図１０１Ｄは、ＩＬ２ｓｐＩＬ１８ｗｔ及びＩＬ２シグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図１０１Ｅは、ＩＬ２ｓｐＩＬ１８ｗｔ及びＩＬ２シグナルペプチドを有する２５の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１０２】図１０２Ａは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２５配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図１０２Ｂは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２５配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図１０２Ｃは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２５配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図１０２Ｄは、ＩＬ１２の野生型アイソフォーム１及び２５配列最適化ＩＬ１２ポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図１０２Ｅは、野生型ＩＬ１２Ｂ及び２５配列最適化ＩＬ１２Ｂポリヌクレオチドに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１０３】図１０３Ａは、野生型ＩＬ２３Ａ及び２５配列最適化ＩＬ２３Ａポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図１０３Ｂは、野生型ＩＬ２３Ａ及び２５配列最適化ＩＬ２３Ａポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図１０３Ｃは、野生型ＩＬ２３Ａ及び２５配列最適化ＩＬ２３Ａポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図１０３Ｄは、野生型ＩＬ２３Ａ及び２５配列最適化ＩＬ２３Ａポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図１０３Ｅは、野生型ＩＬ２３Ａ及び２５配列最適化ＩＬ２３Ａポリヌクレオチドに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１０４】図１０４Ａは、野生型ＯＸ４０Ｌ及び２５の配列最適化されたＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドに対応するウラシル（Ｕ）計量を示す。図１０４Ｂは、野生型ＯＸ４０Ｌ及び２５の配列最適化されたＯＸ４０Lポリヌクレオチドに対応するグアニン（Ｇ）計量を示す。図１０４Ｃは、野生型ＯＸ４０Ｌ及び２５の配列最適化されたＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドに対応するシトシン（Ｃ）計量を示す。図１０４Ｄは、野生型ＯＸ４０Ｌ及び２５の配列最適化されたＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドに対応するグアニン＋シトシン（Ｇ／Ｃ）計量を示す。図１０４Ｅは、野生型ＯＸ４０Ｌ及び２５の配列最適化されたＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドに対応する、コドン位置１、２、３におけるＧ／Ｃの組成バイアスの比較を示す。
【図１０５】図１０５Ａ〜１０５Ｄは、ＣＤ８０（ｗｔＣＤ８０）のタンパク質配列（図１０５Ａ、配列番号４７１）、ドメイン特徴の表（図１０５Ｂ）及び核酸配列（図１０５Ｃ、配列番号４７２）を示す。ｗｔＣＤ８０のアイソフォーム２は、Ｓｅｒ残基による配列番号４７１のアミノ酸２３４〜２６６の置換を有し、ｗｔＣＤ８０のアイソフォーム３は、配列番号４７１のアミノ酸１４１〜２６６を欠いている。
【図１０６】図１０６Ａ及び１０６Ｂは、ＣＤ８０−Ｆｃ融合コンストラクトを示す。図１０６Ａは、ＣＤ８０−Ｆｃ融合コンストラクトのタンパク質配列（配列番号４７３）を示す。シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８０シグナルペプチド）は斜体であり、ＣＤ８０の細胞外（ＥＣ）ドメインには下線が引かれており、Ｆｃ領域は太字である。図１０６Ｂは、ＣＤ８０−Ｆｃ融合タンパク質をコードする、対応する野生型ヌクレオチド配列（配列番号４７４）を示す。
【図１０７】図１０７Ａ〜１０７Ｃは、野生型ＴＬＲ４（ｗｔＴＬＲ４）のアイソフォーム１のタンパク質配列（図１０７Ａ、配列番号５２３）、ドメイン特徴の表（図１０７Ｂ）及び核酸配列（図１０７Ｃ、配列番号５２４）を示す。ｗｔＴＬＲ４のアイソフォーム２は、配列番号５２３のアミノ酸１〜４０を欠いており、ｗｔＴＬＲ４のアイソフォーム３は、配列番号５２３のアミノ酸１〜２００を欠いている。
【図１０８】図１０８Ａ及び１０８Ｂは、構成的に活性なＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４）コンストラクトを示す。図１０８Ａは、タンパク質配列（配列番号５２５）を示す。シグナルペプチド（例えば、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ１）シグナルペプチド）は斜体であり、細胞外ドメインには下線が引かれており、膜貫通ドメインは太字であり、細胞質ドメインには点線の下線が引かれている。図１０８Ｂは、ＬＡＭＰ１のシグナルペプチド及びｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードする、対応する野生型ヌクレオチド配列（配列番号５２６）を示す。
【図１０９】（図１０９Ａ）上から下に、（１）野生型ＩＬ１２Ｂアミノ酸配列（配列番号１０３５）、（２）ｗｔＩＬ１２Ｂをコードする野生型核酸（配列番号１０３６）、（３）野生型ＩＬ１２Ａアミノ酸配列（配列番号１０３７）、（４）ｗｔＩＬ１２Ａをコードする野生型核酸（配列番号１０３８）、（５）野生型ＩＬ１２Ｂシグナルペプチドアミノ酸配列（配列番号１０３９）及び（６）ｗｔＩＬ１２Ｂシグナルペプチドをコードする野生型核酸（配列番号１０４０）を示す。（図１０９Ｂ）配列番号におけるアミノ酸の番号付け、配列番号におけるヌクレオチドの番号付け、５’ＵＴＲ、ＩＬ１２Ｂシグナルペプチド、成熟ＩＬ１２Ａ及びＩＬ１２Ｂペプチド、ならびにリンカーに関する表を示す。
【図１１０−１】図１１０Ａは、野生型ＩＬ１５Ｒａアミノ酸配列（配列番号８０８）を示し、図１１０Ｂは、野生型ＩＬ１５Ｒａをコードする野生型核酸（配列番号８０９）を示し、図１１０Ｃは、野生型ＩＬ１５アミノ酸配列（配列番号８１０）を示し、図１１０Ｄは、野生型ＩＬ１５をコードする野生型核酸（配列番号８１１）を示す。野生型ＩＬ１５Ｒａ（図１１０Ａ）及びＩＬ１５（図１１０Ｃ）のシグナルペプチドは、斜体である。野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメイン及び野生型ＩＬ１５のプロペプチドには、図１１０Ａ（二重下線）及び図１１０Ｃ（太線）においてそれぞれ下線が引かれている。図１１０Ｅは、野生型ＩＬ１５−ｔＰＡアミノ酸配列（配列番号８１２）を示す。図１１０Ｅにおいて、シグナルペプチドは斜体であり、成熟ＩＬ１５は、点線の下線によって表されている。図１１０Ｆは、野生型Ｆｃ−ＩＬ１５Ｒ−ＩＬ１５融合コンストラクトのアミノ酸配列（配列番号８１３）を示す。シグナルペプチドは斜体であり、Ｆｃ領域には網掛けが施されており、ＩＬ１５Ｒポリペプチドには二重の下線が引かれており、リンカーは太字であり、ＩＬ１５ポリペプチドには一本線の下線が引かれている。
【図１１０−２】図１１０Ａは、野生型ＩＬ１５Ｒａアミノ酸配列（配列番号８０８）を示し、図１１０Ｂは、野生型ＩＬ１５Ｒａをコードする野生型核酸（配列番号８０９）を示し、図１１０Ｃは、野生型ＩＬ１５アミノ酸配列（配列番号８１０）を示し、図１１０Ｄは、野生型ＩＬ１５をコードする野生型核酸（配列番号８１１）を示す。野生型ＩＬ１５Ｒａ（図１１０Ａ）及びＩＬ１５（図１１０Ｃ）のシグナルペプチドは、斜体である。野生型ＩＬ１５ＲａのＳｕｓｈｉドメイン及び野生型ＩＬ１５のプロペプチドには、図１１０Ａ（二重下線）及び図１１０Ｃ（太線）においてそれぞれ下線が引かれている。図１１０Ｅは、野生型ＩＬ１５−ｔＰＡアミノ酸配列（配列番号８１２）を示す。図１１０Ｅにおいて、シグナルペプチドは斜体であり、成熟ＩＬ１５は、点線の下線によって表されている。図１１０Ｆは、野生型Ｆｃ−ＩＬ１５Ｒ−ＩＬ１５融合コンストラクトのアミノ酸配列（配列番号８１３）を示す。シグナルペプチドは斜体であり、Ｆｃ領域には網掛けが施されており、ＩＬ１５Ｒポリペプチドには二重の下線が引かれており、リンカーは太字であり、ＩＬ１５ポリペプチドには一本線の下線が引かれている。
【図１１１】図１１１Ａ〜１１１Ｃは、ＩＬ１８（ｗｔＩＬ１８）のアイソフォーム１の野生型ＩＬ１８タンパク質配列（図１１１Ａ、配列番号５６４）、ドメイン特徴の表（図１１１Ｂ）及び野生型ＩＬ１８核酸配列（図１１１Ｃ、配列番号５６５）、（図１１１Ｄ）を示す。
【図１１２】図１１２Ａ〜１１２Ｃは、ｗｔＩＬ１８のアイソフォーム２の野生型ＩＬ１８タンパク質配列（図１１２Ａ、配列番号５６６）、ドメイン特徴の表（図１１２Ｂ）及び野生型ＩＬ１８核酸配列（図１１２Ｃ、配列番号５６７）、を示す。ｗｔＩＬ１８のアイソフォーム２は、配列番号５６４のアミノ酸２７〜３０を欠いている。
【図１１３】図１１３Ａは、ｔＰＡ−ＩＬ１８のアミノ酸配列（配列番号５７２）を示す。シグナルペプチドには下線が引かれており、成熟タンパク質配列は太字である。図１１３Ｂは、ｔＰＡ−ＩＬ１８のヌクレオチド配列（配列番号５７３）を示す。図１１３Ｃは、ＩＬ２−ＩＬ１８のアミノ酸配列（配列番号５７４）を示す。図１１３Ｄは、ＩＬ２−ＩＬ１８のヌクレオチド配列（配列番号５７５）を示す。
【図１１４】図１１４Ａは、ＩｇＬＣ−ＩＬ１８のアミノ酸配列（配列番号５７６）を示す。図１１４Ｂは、ＩＬ−１ｒａ−ＩＬ１８のアミノ酸配列（配列番号５７７）を示す。図１１４Ｃは、ＩＬ１８二重変異体のアミノ酸配列を示し、Ｄ７１Ｓ及びＤ７１Ｎにアミノ酸置換を含む（配列番号５７８）。
【図１１５】図１１５Ａは、野生型ＩＬ１２Ｂアミノ酸配列（配列番号９７９）を示し、図１１５Ｂは、ＩＬ１２Ｂポリペプチドをコードする野生型核酸（配列番号９８０）を示し、図１１５Ｃは、野生型ＩＬ２３Ａアミノ酸配列（配列番号９８１）を示し、図１１５Ｄは、ＩＬ２３Ａポリペプチドをコードする野生型核酸（配列番号９８２）を示す。ＩＬ１２Ｂ及びＩＬ２３Ａポリペプチドの両方のシグナルペプチドには、下線が引かれている。
【図１１６】図１１６Ａは、ＩＬ１２Ｂ−リンカー（Ｇ６Ｓ）−ＩＬ２３Ａ融合タンパク質のアミノ酸配列（配列番号９８３）を提供する。図１１６Ｂは、一本鎖ＩＬ１２Ｂ−リンカー（Ｇ６Ｓ）−ＩＬ２３Ａ融合タンパク質の様々なドメインの特徴を確認する表を提供する。図１１６Ｃは、一本鎖ＩＬ１２Ｂ−リンカー（Ｇ６Ｓ）−ＩＬ２３Ａ融合タンパク質をコードする核酸配列（配列番号９８４）を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
がんを治療するための特に面白いアプローチは、がん免疫治療として公知の、免疫応答を刺激する物質を用いた疾患の予防または治療を包含する。当該技術分野において免疫腫瘍学的方法とも呼ばれるがん免疫治療は、腫瘍ではなく宿主免疫系を標的とする療法を導入することによって、がんの治療に革命を起こし始めた。これらの療法は、独特な薬理学的応答性を有し、したがって、異なるタイプのがんを治癒させ得る療法を表す。肺、腎臓、膀胱及び皮膚のがんは、とりわけ、生存または腫瘍応答の点で免疫腫瘍学的方法を用いた治療から実質的な効能を得、黒色腫は潜在的に、最も多大なる恩恵を示す。がん免疫治療はしばしば、チェックポイント阻害剤抗体として公知の面白い新たなクラスの生物製剤を用いたチェックポイント阻害剤治療を特徴とする。
【０１００】
本開示は、がんの治療のための組成物及び方法、特に、がん免疫治療の組み合わせ及びがん免疫治療の方法を提供する。特に、本開示は、腫瘍に対して免疫応答を促進または増強することができる少なくとも２つのポリペプチドをコードするｍＲＮＡを特徴とする組み合わせ的アプローチを使用する、がん治療のための組成物及び方法に関する。理論に束縛されることなく、抗がん免疫応答を刺激することは、例えばＴ細胞またはナチュラルキラー細胞の刺激にとって重要である第１のタンパク質（例えば、ＩＬ１２またはＩＬ２３）をコードするオープンリーディングフレームを含む、例えば第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を投与することによって可能であると考えられる。そのようなプライミング化合物は、例えば、第２の刺激シグナル（すなわち、共刺激シグナル）を提供し、したがってプライマーによって誘発される免疫応答を増幅する第２のタンパク質（例えば、ＯＸＬ）をコードするオープンリーディングフレームを含む、第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与され得る。組み合わせは、第３の成分、例えば、免疫系におけるチェックポイント（例えば、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１）を遮断または阻害する第３のタンパク質（例えば、抗ＣＴＬＡ−４）をコードするオープンリーディングフレームを含む、第３のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含むことができる。チェックポイントの阻害は、免疫応答を更に増幅させる。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている免疫療法の組成物及び方法は、免疫応答を増強すること、及び／または抗がんメモリーを誘発もしくは増強することができる。本開示の好ましい態様は、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチド（例えば、ＩＬ１２またはＩＬ２３ポリペプチド）をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチド（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチド）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチド（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）による治療を特徴とする。
【０１０２】
例示的な態様は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入された上記に記載された組み合わせ、またはｍＲＮＡ（すなわち、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、またはこれらの組み合わせをコードするｍＲＮＡ）による治療を特徴とする。いくつかの例示的な態様において、これらのＬＮＰはカチオン性脂質系ＬＮＰであり、例えば、腫瘍内に投与され得る。
【０１０３】
したがって、本開示は、例えば、組成物、そのような組成物を含む医薬製剤及び本明細書に開示されている組成物または製剤を必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法（例えば、腫瘍サイズの縮小もしくは減少または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法）に向けられている。特に、本開示は、例えば免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、またはそれらの組み合わせをコードするｍＲＮＡの組み合わせの有効量を必要とする対象に投与することを含む、がん（例えば、腫瘍）の治療方法を提供する。いくつかの特定の実施形態において、本明細書に開示されている療法におけるｍＲＮＡは、下記に開示されている式（Ｉ）のイオン性アミノ脂質を含むＬＮＰ、例えば、化合物１８、２５、２６、または４８に封入されている。
【０１０４】
本明細書に提供する見出しは、本開示の種々の態様または態様の制限とはならず、全体として明細書に対する参照によって定義することができる。したがって、直後に定義されてる用語は、その全体が明細書に対する参照によってより完全に定義される。本開示を詳細に説明する前に、本開示が、具体的な組成物またはプロセスステップが変わり得るので、これらに限定されるものではないことは理解されるべきである。
【０１０５】
Ｉ．定義
本開示を一層速やかに理解することができるようにするために、特定の用語をまず定義する。本出願にて使用する場合、本明細書にて別様に明示的に提供される場合を除いて、後述の用語はそれぞれ、以下で説明する意味を有するものとする。本出願を通して、追加の定義が説明される。
【０１０６】
本開示は、群の１つの要素が所与の生成物またはプロセスに厳密に存在する、用いられる、または別様において、所与の生成物またはプロセスに関する実施形態を含む。本開示は、群の２つ以上または全ての要素が所与の生成物またはプロセスに存在する、用いられる、または別様において、所与の生成物またはプロセスに関する実施形態を含む。
【０１０７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈で明確に別様が規定されない限り、複数への言及を含む。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つ以上の」及び「少なくとも１つの」は、本明細書で同じ意味で用いることができる。ある特定の態様において、用語「ａ」または「ａｎ」は「１つの」を意味する。他の態様において、用語「ａ」または「ａｎ」は、「２つ以上の」または「複数の」を含む。
【０１０８】
更に、「及び／または」は、本明細書で使用する場合、２つの具体的な特徴または成分のそれぞれの、他方の特徴または成分を含む、または含まない、具体的な開示として解釈される。したがって、本明細書における「Ａ及び／またはＢ」などの、語句で用いられる場合の用語「及び／または」は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（のみ）、及び「Ｂ」（のみ）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で用いられる場合の用語「及び／または」は、以下の態様のそれぞれを包含することを意図している：Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（のみ）、Ｂ（のみ）、ならびに、Ｃ（のみ）。
【０１０９】
別段定めがない限り、本明細書で使用する全ての技術及び科学用語は、本開示が関係する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；及び、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは当業者に、本開示で用いられる多くの用語の、一般的辞書を提供している。
【０１１０】
言語「含む」を伴って態様が本明細書に記載される場合は全て、「からなる」及び／または「から本質的になる」の用語で記載される、別の類似の態様もまた提供される。
【０１１１】
単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）が許容する形態で表される。数字の範囲は、その範囲を規定する数字を含む。値の範囲が列挙される場合、間に存在するそれぞれの整数値、ならびに、その範囲の列挙した上限と下限との間にあるそれぞれの部分もまた、そのような値の間にある各部分範囲とともに、具体的に開示されていることとが理解されなければならない。任意の範囲の上限及び下限は、その範囲とは独立して含まれる、または独立して除外されることができ、その範囲のいずれかが含まれる、いずれもが含まれない、または両方が含まれる各範囲もまた、本開示の範囲内に含まれる。値が明示的に列挙される場合、列挙した値とほぼ同じ数量または量である値もまた、本開示の範囲内であることと理解されなければならない。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素のそれぞれの部分組み合わせもまた具体的に開示され、本開示の範囲である。逆に、異なる要素または複数の要素群が個別に開示される場合、それらの組み合わせもまた開示される。発明の任意の要素が、複数の代替物を有するものとして開示される場合、各代替物が単一で除外される、または他の代替物との任意の組み合わせで除外される、本発明の実施例もまた本明細書に開示され、発明の２つ以上の要素がこのような除外を有することができ、このような除外を有する要素の全ての組み合わせが本明細書に開示される。
【０１１２】
ヌクレオチドは、一般に是認されている１文字コードで表される。別途記載のない限り、核酸は左から右に、５’から３’方向に記述される。ヌクレオチドは本明細書で、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会により推奨される、一般に知られている１文字の記号により表される。したがって、Ａはアデニンを表し、Ｃはシトシンを表し、Ｇはグアニンを表し、Ｔはチミンを表し、Ｕはウラシルを表す。
【０１１３】
アミノ酸は本明細書で、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会により推奨される、一般に知られている３文字の記号、または１文字の記号のいずれかにより表される。別途記載のない限り、アミノ酸配列はアミノ基からカルボキシ基の方向に、左から右に記述される。
【０１１４】
約：明細書及び特許請求の範囲を通して、数値と組み合わせて用いられる用語「約」は、当業者に周知であり許容される、正確性の隔たりを表す。一般に、正確性のこのような隔たりは±１０％である。
【０１１５】
範囲が与えられる場合、端点は含まれる。更に、特に断りのない限り、またはさもなければ、文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、文脈上別途明記しない限り、本発明の異なる実施形態にて述べられる範囲内の任意の具体的な値または部分範囲を、その範囲の下限の単位の１０分の１までとることができる。
【０１１６】
組み合わせにおいて投与された：本明細書で使用する場合、用語「組み合わせにおいて投与された」または「併用投与」は、２つ以上の作用剤（例えばｍＲＮＡ）が同時に、または、これらが患者に、各作用剤の効果の重なりが存在するような間隔で、対象に投与されることを意味する。いくつかの実施形態において、作用剤は互いに、約６０、３０、１５、１０、５、または１分以内に投与される。いくつかの実施形態において、作用剤の投与は、組み合わせ（例えば、相乗）効果がもたらされるように、共に十分に近い間隔となる。いくつかの実施形態において、併用投与は、同時である（即ち、全てのｍＲＮＡが１つの製剤の一部として投与される、もしくは異なる製剤中の異なるｍＲＮＡが同時に投与される）、または連続的である（例えば、いくつかの製剤中のいくつかのｍＲＮＡが連続して投与される）ことができる。
【０１１７】
アミノ酸置換：用語「アミノ酸置換」とは、親配列（例えば、コンセンサス配列）に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置換することを指す。アミノ酸は親配列中で、例えば、化学ペプチド合成により、または当該技術分野において既知である組換法により、置換することができる。したがって、「位置Ｘにおける置換」への言及は、位置Ｘに存在するアミノ酸を代替のアミノ酸残基で置換することを指す。いくつかの態様において、置換パターンは図式ＡｎＹに従い記載することができ、ここで、Ａは位置ｎに自然に、または元々存在するアミノ酸に対応する１文字のコードであり、Ｙは置換アミノ酸残基である。他の態様において、置換パターンは図式Ａｎ（ＹＺ）に従い記載することができ、ここで、Ａは位置Ｘに自然に、または元々存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する１文字のコードであり、Ｙ及びＺは、代替の置換アミノ酸残基である。
【０１１８】
本開示との関係においては、置換（アミノ酸置換と呼ばれる場合もある）は、核酸レベルで行われる、即ち、アミノ酸残基を代替のアミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを、第２のアミノ酸をコードするコドンで置き換えることにより実施される。
【０１１９】
動物：本明細書で使用する場合、用語「動物」とは、動物界における任意のメンバーを意味する。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の成長段階におけるヒトを意味する。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の成長段階における非ヒト動物を意味する。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物としては、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び虫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物はトランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、またはクローンである。
【０１２０】
およそ：本明細書で使用する場合、１つ以上の目的値に適用される用語「およそ」とは、記述された参照値に類似する値を意味する。ある特定の実施形態において、用語「およそ」とは、特に明記しない限り、または別様において、文脈から明らかでない場合（このような数が可能な値の１００％を超過する場合を除く）、記述された参照値のいずれかの方向（その値を超える、または未満）の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下に含まれる値の範囲を意味する。
【０１２１】
と関係する：疾患に関して本明細書で使用する場合、用語「と関係する」とは、問題の症状、測定値、特徴、または状態が、その疾患の診断、発症、存在、または進行と関連していることを意味する。関連は、疾患に作因的に関係してもよいが、必ずしもそうである必要はない。例えば、がん患者の生活の質の低下を引き起こす症状、続発症、または任意の効果は、がんに関係していると考えられており、本開示のいくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドを、必要とする対象に投与することにより治療する、寛解させる、または予防することができる。
【０１２２】
２つ以上の部位に関して用いる場合、用語「と会合した」「コンジュゲートした」「結合した」「付着した」及び「繋がれた」とは、２つ以上の部位に関して用いる場合、部位が、直接、または結合剤として機能する１つ以上の追加の部位を介してのいずれかで、互いに物理的に会合または接続し、十分安定した構造であって、その構造が用いられる条件、例えば生理学的条件下において、その部位が物理的に会合したままとなる構造を形成することを意味する。「会合」は、直接の共有化学結合による厳密なものである必要はない。「会合した」要素が物理的に会合したままとなる十分に安定した、イオンもしくは水素結合、またはハイブリダイゼーションをベースにした接続性もまた、示すことができる。
【０１２３】
二官能性：本明細書で使用する場合、用語「二官能性」とは、少なくとも２つの機能が可能なまたはそれを維持する任意の物質、分子、または部位を意味する。機能は、同一の結果または異なる結果に影響を及ぼし得る。その機能を生み出す構造は、同一であっても異なっていてもよい。例えば、本開示の二官能性改変ＲＮＡは、ＲＮＡの半減期を延ばすことができるＦｃ（第２の機能）をコードする配列に結合した、治療的に活性であろう、ＣＤ８０ポリペプチド（第１の機能）をコードする配列を含むことができる。この例では、二官能性改変ＲＮＡを必要とする対象にそれを送達することにより、疾患または病態を寛解させ得るまたは治療し得るペプチドまたはタンパク質分子が産生されるだけでなく、対象に存在するｍＲＮＡによりコードされる活性分子の集団が、より長い時間維持される。他の態様において、二官能性改変ｍＲＮＡは、例えば、治療的に活性であろうＩＬ１５ポリペプチド（第１の機能）をコードし、第１のポリペプチドに融合したか、または第１のポリペプチドと同時発現したかのいずれかのＩＬ１５Ｒアルファなどの第２のポリペプチド（第２の機能）もまたコードするｍＲＮＡを含むキメラ分子であることができる。
【０１２４】
生体適合性：本明細書で使用する場合、用語「生体適合性」とは、免疫系により傷害、毒性、または拒絶の危険性をほぼ、または全くもたらさず、生細胞、組織、臓器、または系と適合性があることを意味する。
【０１２５】
生分解性：本明細書で使用する場合、用語「生分解性」とは、生存するものの活動により、破壊されて無毒生成物となることができることを意味する。
【０１２６】
生物学的に活性な：本明細書で使用する場合、語句「生物学的に活性な」とは、生物学的系及び／または生命体内で活性を有する、任意の物質の特徴を意味する。例えば、生命体に投与する際に、その生命体に生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。特定の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの一部が生物学的に活性である、または、生物学的に関係すると考えられる活性を模倣する場合であっても、生物学的に活性であると考えることができる。
【０１２７】
キメラ：本明細書で使用する場合、「キメラ」とは、２つ以上の一致しない、または不均質な部分または領域を有する存在である。例えば、キメラ分子は、ＩＬ１２Ｂポリペプチド、ＩＬ２３Ａポリペプチド、またはＩＬ１２Ｂ及びＩＬ２３Ａポリペプチドの両方を含む第１部分、ならびに、第２の治療用タンパク質（例えば、固有の酵素活性、抗原結合部位、または、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチドの血漿半減期を延ばすことができる部位、例えば抗体のＦｃ領域を有するタンパク質）を含む第２部分（例えば、第１部分に遺伝子的に融合している）を含むことができる。
【０１２８】
コドン置換：コドン最適化の文脈における「コドン置換」または「コドンの置き換え」とは、候補ヌクレオチド配列（例えば、抗体またはその断片の重鎖または軽鎖をコードするｍＲＮＡ）に存在するコドンを、別のコドンで置き換えることを意味する。コドンは候補核酸配列内で、例えば、化学ペプチド合成により、または当該技術分野において既知である組換法により、置換することができる。したがって、核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）内のある特定の位置における、または核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）のある特定の領域もしくはサブ配列内における、「置換」または「置き換え」への言及は、そのような位置または領域におけるコドンを、代替のコドンで置換することを意味する。
【０１２９】
候補核酸配列は、置換表マップに従い、コドンの全てまたは一部を置き換えることにより、コドン最適化することができる。本明細書で使用する場合、用語「候補核酸配列」及び「候補ヌクレオチド配列」とは、コドン最適化により、例えば、その翻訳効果を改善することができるヌクレオチド配列（例えば、抗体またはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列）を意味する。いくつかの態様において、候補ヌクレオチド配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与後の翻訳効果を改善するために、最適化される。
【０１３０】
本明細書で使用する場合、用語「コード領域」及び「コードする領域」、ならびにこれらの文法的変型は、発現時にポリペプチドまたはタンパク質が得られる、ポリヌクレオチドのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を指す。
【０１３１】
併用療法：本明細書で使用する場合、用語「併用療法」、及び「組み合わせにおいて投与された療法」または「併用投与」などの変型は、２つ以上の作用剤が同時に、または、これらが患者に、各作用剤の効果の重なりが存在するような間隔で、対象に投与されることを意味する。いくつかの実施形態において、作用剤は互いに、約６０、３０、１５、１０、５、または１分以内に投与される。いくつかの実施形態において、作用剤の投与は、組み合わせ（例えば、相乗）効果がもたらされるように、共に十分に近い間隔となる。
【０１３２】
化合物：本明細書で使用する場合、用語「化合物」とは、記述される構造の全ての立体異性体及びアイソトープを含むことを意味する。本明細書で使用する場合、用語「立体異性体」とは、化合物の任意の幾何異性体（例えば、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体）、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示は、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオ的に純粋）、ならびに、鏡像異性及び立体異性混合物（例えばラセミ化合物）を含む、本明細書に記載される化合物のあらゆる全ての立体異性体を包含する。化合物の鏡像異性及び立体異性混合物、ならびにこれらを成分である光学異性体または立体異性体に分割する方法は、周知である。「アイソトープ」とは、同じ原子数を有しながら、原子核内の異なる数の中性子により、異なる質量数を有する原子を意味する。例えば、水素のアイソトープとしては三重水素及び重水素が挙げられる。更に、本開示の化合物、塩、または複合体を、決まった手順により、溶媒または水分子と組み合わせて調製し、溶媒和物及び水和物を形成することができる。
【０１３３】
保存的アミノ酸置換：「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似する側鎖を有するアミノ酸残基の仲間は当該技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、またはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、またはグルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、またはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン）が挙げられる。したがって、ポリペプチドのアミノ酸が、同じ側鎖の仲間の別のアミノ酸で置き換えられる場合、アミノ酸置換は保存的であると考えられる。別の態様において、アミノ酸のストリングが、側鎖仲間のメンバーの順序及び／または組成が異なる、構造的に類似するストリングにより保存的に置き換えられることができる。
【０１３４】
非保存的アミノ酸置換：非保存的アミノ酸置換としては、（ｉ）正電荷を有する側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓ）を、負電荷を有する残基（例えば、Ｇｌｕ、またはＡｓｐ）で（により）置換された、（ｉｉ）親水性残基（例えば、Ｓｅｒ、またはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）で（により）置換された、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが任意の他の残基で（により）置換された、あるいは（ｉｖ）嵩高い疎水性のまたは芳香族側鎖（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、またはＴｒｐ）を有する残基が、より小さな側鎖を有する残基（例えば、Ａｌａ、またはＳｅｒ）、あるいは側鎖を有しない残基（例えば、Ｇｌｙ）で（により）置換されたものが挙げられる。
【０１３５】
他のアミノ酸置換基は、当業者により速やかに識別されることができる。例えば、アミノ酸のアラニンに関しては、置換はＤ−アラニン、グリシン、ベータ−アラニン、Ｌ−システイン、及びＤ−システインのいずれか１つから行うことができる。リジンに関しては、置換は、Ｄ−リジン、アルギニン、Ｄ−アルギニン、ホモアルギニン、メチオニン、Ｄ−メチオニン、オルニチン、またはＤ−オルニチンのいずれか１つであることができる。一般的に、単離されたポリペプチドの性質の変化を誘発することが予測可能な、機能上重要な領域における置換は、（ｉ）極性残基、例えば、セリンまたはスレオニンが疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、またはアラニンで（により）置換されている、（ｉｉ）システイン残基が任意の他の残基で（により）置換されている、（ｉｉｉ）正電荷を有する側鎖を有する残基、例えば、リジン、アルギニン、またはヒスチジンが、負電荷を有する側鎖を有する残基、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸で（により）置換されている、あるいは、（ｉｖ）嵩高い側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンが、このような側鎖を有しない残基、例えばグリシンで（により）置換されているものである。前述の非保存的置換の１つが、タンパク質の機能的性質を変化させることができる可能性は、タンパク質の機能上重要な領域に対する置換位置ともまた相関しており、いくつかの非保存的置換はそれ故、生物学的性質への影響をほぼ有しない、または全く有しない可能性がある。
【０１３６】
保存された：本明細書で使用する場合、用語「保存された」とは、それぞれ、比較される２つ以上の配列の同じ位置において変更されないものである、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基を意味する。相対的に保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸とは、配列の別の場所で現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連性が強い配列内で保存されているものである。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに１００％同一である場合、「完全に保存された」と言うことができる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「非常に保存された」と言うことができる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「非常に保存された」と言うことができる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存された」と言うことができる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存された」と言うことができる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの長さ全体に適用することができる、あるいは、それらの一部、領域、または特徴に適用することができる。
【０１３８】
接触させること：本明細書で使用する場合、用語「接触させること」とは、２つ以上の要素間で物理的接続を確立することを意味する。例えば、哺乳動物細胞をナノ粒子組成物と接触させることは、哺乳動物細胞とナノ粒子を、物理的な接続を共有するようにさせることを意味する。細胞を、外部の存在とｉｎ  ｖｉｖｏ及びｅｘ  ｖｉｖｏの両方で接触させる方法は、生物学分野で周知である。例えば、ナノ粒子組成物と、哺乳類内に配置された哺乳動物細胞とを接触させることは、様々な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下）により行うことができ、様々な量のナノ粒子組成物を伴うことができる。更に、２つ以上の哺乳動物細胞をナノ粒子組成物により接触させることができる。
【０１３９】
徐放性：本明細書で使用する場合、用語「徐放性」とは、特定の放出パターンに順応させ治療的結果をもたらす、医薬組成物または化合物の放出プロファイルを意味する。
【０１４０】
共有結合性誘導体：ポリペプチドに言及する場合の用語「共有結合性誘導体」には、天然または出発タンパク質を、有機タンパク様もしくは非タンパク様誘導体化剤、及び／または翻訳後修飾により修飾することを含む。共有結合修飾は従来的に、タンパク質の標的とされるアミノ酸残基を、選択した側鎖もしくは末端残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることにより、または、選択した組み換え宿主細胞にて機能する翻訳後修飾のメカニズムを利用することにより導入される。得られる共有結合性誘導体は、生物活性、免疫学的検定、または、組み換え糖タンパク質の免疫親和性精製のための抗タンパク質抗体の調製に重要な、残基の識別のためのプログラムで有用である。このような修飾は当該技術分野の範囲内であり、過度な実験をすることなく実施される。
【０１４１】
環状または環化：本明細書で使用する場合、用語「環状」とは、連続した環が存在することを意味する。環状分子は環状である必要はなく、結合して未開裂のサブユニット鎖を形成するのみである。本開示の操作されたＲＮＡまたはｍＲＮＡなどの環状分子は、１つの単位または多量体であることができる、あるいは、複雑または高次構造の、１つ以上の構成要素を含むことができる。
【０１４２】
細胞障害性：本明細書で使用する場合、「細胞障害性」とは、細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞））、バクテリア、ウイルス、菌類、原生動物、寄生原虫、プリオン、またはこれらの組み合わせを殺傷すること、または有害、毒性、もしくは致死効果を引き起こすことを意味する。
【０１４３】
送達すること：本明細書で使用する場合、用語「送達すること」とは、物質を目的地に提供することを意味する。例えば、ポリヌクレオチドを対象に送達することには、ポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物を対象に（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路により）投与することを伴うことができる。ナノ粒子組成物を哺乳類または哺乳動物細胞に投与することには、１つ以上の細胞をナノ粒子組成物と接触させることを伴うことができる。
【０１４４】
送達剤：本明細書で使用する場合、「送達剤」とは、少なくとも部分的には、ポリヌクレオチドの標的とされる細胞への、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏ送達を容易にする任意の物質を意味する。
【０１４５】
脱安定化した：本明細書で使用する場合、用語「脱安定な」「脱安定化させる」または「脱安定化領域」とは、領域または分子であって、開始時の野生型または天然形態の同じ領域または分子よりも安定していない領域または分子を意味する。
【０１４６】
検出可能な標識：本明細書で使用する場合、「検出可能な標識」とは、Ｘ線撮影、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光などを含む当該技術分野において既知である方法により速やかに検出される別の物質と結合した、組み込まれた、または会合した１つ以上のマーカー、シグナル、または部位を意味する。検出可能な標識としては、放射性同位体、フルオロフォア、発色団、酵素、色素、金属イオン、リガンド（ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、及びハプテンなど）、量子ドットなどが挙げられる。検出可能な標識は本明細書にて開示したポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の任意の位置に存在することができ、使用して、例えば、組織の分布、代謝、生物学的安定性、排泄などを測定することができる。
【０１４７】
ジアステレオマー：本明細書で使用する場合、用語「ジアステレオマー」とは、互いの鏡像ではなく、かつ互いに重なり合うことができない立体異性体を意味する。
【０１４８】
消化する：本明細書で使用する場合、用語「消化する」とは、破壊してより小さな片または成分にすることを意味する。ポリペプチドまたはタンパク質に言及する場合、消化により、ペプチドの産生がもたらされる。
【０１４９】
遠位の：本明細書で使用する場合、用語「遠位の」とは、中心から離れて位置している、または、目的の点もしくは領域から離れて位置していることを意味する。
【０１５０】
ドメイン：本明細書で使用する場合、ポリペプチドに言及する場合、用語「ドメイン」とは、１つ以上の識別可能な構造的または機能的特徴または性質（例えば、タンパク質−タンパク質相互作用のための部位として機能する結合能）を有する、ポリペプチドのモチーフを意味する。本明細書で使用する場合、用語「ドメイン」は、ポリペプチドドメインをコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ配列）もまた包含する。
【０１５１】
投与計画：本明細書で使用する場合、「投与計画」または「投与計画」は、投与スケジュール、または、医師が決定した治療、予防、もしくは一時緩和ケアの計画である。
【０１５２】
有効量：本明細書で使用する場合、作用剤の「有効量」、という用語は、有益または所望の結果、例えば臨床的結果をもたらすのに十分な量であり、それ故、「有効量」は、この用語が適用される文脈によって左右される。例えば、腫瘍を治療する作用剤を投与するという文脈において、有効量の作用剤は、例えば、作用剤を投与することなく得られる応答と比較して、腫瘍サイズを縮小もしくは減少させる、または腫瘍成長を阻害するのに十分な量である。用語「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）」、「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」、または「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）」と同じ意味で用いることができる。
【０１５３】
鏡像異性体：本明細書で使用する場合、用語「鏡像異性体」とは、少なくとも８０％（即ち、少なくとも９０％の１つの鏡像異性体、及び最大１０％の別の鏡像異性体）、少なくとも９０％、または少なくとも９８％の光学純度または鏡像異性体過剰率（当該技術分野において標準的な方法で測定される）を有する、本開示の化合物の、それぞれ個別の光学活性形態を意味する。
【０１５４】
封入する：本明細書で使用する場合、用語「封入する」とは、同封、包囲、または包むことを意味する。
【０１５５】
封入効率：本明細書で使用する場合、「封入効率」とは、ナノ粒子組成物の調製に使用するポリヌクレオチドの最初の総量と比較した、ナノ粒子組成物の一部となるポリヌクレオチドの量を意味する。例えば、組成物に最初に提供される、合計１００ｍｇのポリヌクレオチドのうち、９７ｍｇのポリヌクレオチドがナノ粒子組成物に封入される場合、封入効率は９７％として示すことができる。本明細書で使用する場合、「封入」とは、完全な、実質的な、または部分的な閉込め、囲い込み、取り囲み、または包み込みを指すことができる。
【０１５６】
コードされたタンパク質切断シグナル：本明細書で使用する場合、「コードされたタンパク質切断シグナル」とは、タンパク質切断シグナルをコードするヌクレオチド配列を意味する。
【０１５７】
操作された：本明細書で使用する場合、開始時点、野生型、または天然分子とは異なる、構造的または化学的特徴または性質を有するように設計される場合、本開示の実施形態は「操作され」ている。
【０１５８】
送達の亢進：本明細書で使用する場合、用語「送達の亢進」とは、対照ナノ粒子により、ポリヌクレオチドが標的目的組織（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）に送達される量と比較して、ナノ粒子により、ポリヌクレオチドが標的目的組織（例えば、哺乳類の肝臓）に一層送達されること（例えば、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍）を意味する。特定の組織への、ナノ粒子の送達量は、組織内で産生されるタンパク質の量をその組織の重量と比較すること、組織内のポリヌクレオチドの量をその組織の重量と比較すること、組織内で産生されるタンパク質の量をその組織内の全タンパク質の量と比較すること、または、組織内のポリヌクレオチドの量をその組織内の全ポリヌクレオチドの量と比較することにより測定することができる。ナノ粒子の標的組織への送達の亢進は、治療中の対象で測定する必要はなく、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代理生物で測定することができることが理解されよう。
【０１５９】
エキソソーム：本明細書で使用する場合、「エキソソーム」は、哺乳類細胞により分泌された小胞、またはＲＮＡ分解に関係する複合体である。
【０１６０】
発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」とは、以下の事象の１つ以上を意味する：（１）（例えば、転写による）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの作製、（２）（例えば、スプライシング、エディティング、５’キャッピング、及び／または３’末端プロセシングによる）ＲＮＡ転写産物のプロセシング、（３）ＲＮＡの、ポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。用語「タンパク質発現」（及び、「発現したタンパク質」などの関連用語）とは具体的に、ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳を意味する。
【０１６１】
ｅｘ  ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合、用語「ｅｘ  ｖｉｖｏ」とは、生命体（例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはこれらの細胞もしくは組織）の外側で発生する事象を意味する。ｅｘ  ｖｉｖｏ事象は、自然（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ）環境から最小限に変更された環境で生じることができる。
【０１６２】
特徴：本明細書で使用する場合、「特徴」とは、性能、性質、または固有の要素を意味する。ポリペプチドに言及する場合、「特徴」は、固有のアミノ酸配列を基準にした、分子の成分として定義される。本開示のポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドの特徴としては、表面での発現、局所の構造形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端、またはそれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【０１６３】
製剤：本明細書で使用する場合、「製剤」は、少なくともポリヌクレオチド、ならびに、担体、賦形剤、及び送達剤の１つ以上を含む。
【０１６４】
断片：本明細書で使用する場合、「断片」とは、部分を意味する。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された完全長タンパク質を消化することにより得られるポリペプチドを含むことができる。いくつかの実施形態において、断片は、Ｎ末端、及び／またはＣ末端、及び／または内部のサブ配列が欠失されている、完全長タンパク質のサブ配列（例えば、ＩＬ２３のサブユニットの１つ）である。本開示のいくつかの好ましい態様において、本開示のタンパク質の断片は機能的断片である。
【０１６５】
機能的：本明細書で使用する場合、「機能的」生物学的分子とは、特性決定される性質及び／または活性を示す形態の、生物学的分子である。したがって、本開示のポリヌクレオチドの「機能的断片」は、例えば、インターロイキン断片などの、機能的ポリペプチドを発現可能なポリヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、生物学的分子、例えば、インターロイキンの「機能的断片」とは、野生型分子、例えば野生型インターロイキンの断片（即ち、インターロイキンの天然に存在する形態の断片）、またはそのバリアントもしくはバリアントを意味し、断片は、対応する完全長タンパク質の生物活性の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％を保持する。
【０１６６】
ヘルパー脂質：本明細書で使用する場合、用語「ヘルパー脂質」とは、（脂質層、例えば、脂質二分子膜内に挿入するための）脂質部位、及び（脂質層の表面にて生理的溶液と相互作用させるための）極性部位を含む化合物または分子を意味する。通常、ヘルパー脂質はリン脂質である。ヘルパー脂質の機能は、アミノ脂質を「補助」して、二分子膜の膜融合性を増加させること、及び／または、例えば、細胞に送達される核酸のエンドソーム・エスケープを促進を補助することである。ヘルパー脂質はまた、ＬＮＰの表面に対する、鍵となる構造成分であるとも考えられている。
【０１６７】
相同性：本明細書で使用する場合、用語「相同性」とは、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体の関係性を意味する。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一であるまたは類似する場合、互いに「相同」であると見なされる。用語「相同」とは必然に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を意味する。本開示に従うと、コードするポリペプチドが、少なくとも約２０個のアミノ酸の少なくとも１つのストレッチに関して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または更に９９％である場合、２つのポリヌクレオチド配列は相同であると見なされる。いくつかの実施形態において、相同なポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５個の、独自に明記されるアミノ酸のストレッチをコードする能力を特徴とする。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列に関して、相同性は、少なくとも４〜５個の、独自に明記されるアミノ酸のストレッチをコードする能力により測定される。本開示に従うと、２つのタンパク質配列は、タンパク質が、少なくとも約２０個のアミノ酸の少なくとも１つのストレッチに関して、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である場合、相同であると見なされる。
【０１６８】
同一性：本明細書で使用する場合、用語「同一性」とは、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間での、全体のモノマー保存を意味する。２つのポリヌクレオチド配列の同一性百分率の計算は、例えば、最適な比較目的のために、２つの配列をアラインすることにより実施することができる（例えば、最適アラインメントのために、第１及び第２の核酸配列の１つまたは両方にギャップを導入することができ、同一でない配列を、比較目的のために無視することができる）。ある特定の実施形態において、比較目的のためにアラインされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次に、対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチドを比較する。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じヌクレオチドにより占められている場合、分子はその位置において同一である。２つの配列間の同一性百分率は、配列により共有される同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適アラインメントに導入される必要のある、ギャップの数と各ギャップの長さとを考慮に入れる。配列の比較、及び２つの配列間の同一性百分率の測定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。ＤＮＡとＲＮＡとを比較する際、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）は同等と見なすことができる。
【０１６９】
好適なソフトウェアプログラムは、様々な供給元から、そして、タンパク質及びヌクレオチド配列の両方のアラインメントのために入手することができる。配列同一性百分率を測定するための１つの好適なプログラムは、米国政府の国立生物工学情報センターＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列を比較するために使用されるが、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ）からもまた入手可能な、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。
【０１７０】
配列アラインメントは、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどの当該技術分野において既知である方法を使用して実施することができる。別途記載のない限り、本出願で開示する同一性百分率の値は、欧州バイオインフォマティクス研究所（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍａｆｆｔ／）で利用可能なＭＡＦＦＴ（高速フーリエ交換を使用する複数アラインメント）バージョン７の、デフォルトパラメータを用いた実装を使用して入手される。
【０１７１】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列とアラインする、単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内にある異なる領域はそれぞれ、独自の配列同一性百分率を有することができる。配列同一性百分率の値は、小数第２位で四捨五入することに注意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は四捨五入して８０．１になり、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は四捨五入して８０．２になる。長さの値は常に整数であることにもまた注意されたい。
【０１７２】
ある特定の態様において、第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の、第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性百分率（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによりアラインされる）第１の配列及び第２の配列のアラインメントにおける同一一致としてスコアリングされるアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性百分率は、第２の配列の第１の配列に対する同一性百分率よりも高くなる。
【０１７３】
当業者は、配列同一性百分率を計算するための配列アラインメントの生成は、一次配列データにより排他的にもたらされる二次配列−配列比較に限定されないことを理解するであろう。更に、配列アラインメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異位置）、または系統データなどの不均一なソースからのデータと組み合わせることにより生成可能であると理解されよう。不均一なデータを組み込んで複数の配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能、あるいは、例えばＥＢＩから入手可能なＴ−Ｃｏｆｆｅｅである。更に、配列同一性百分率を計算するために使用する最終アラインメントを、自動で、または手動で整理することができることが理解されよう。
【０１７４】
免疫応答：用語「免疫応答」とは、例えば、侵入する病原体、病原体に感染した細胞または組織、がん性細胞、あるいは、自己免疫または病理学的炎症の場合、通常のヒト細胞または組織を選択的に損傷する、破壊する、または人体から取り除くことになる、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、及び上記細胞または肝臓により産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を意味する。
【０１７５】
炎症性応答：「炎症性応答」とは、特異的、及び非特異的防御系が関与する免疫応答を意味する。特異的防御系反応は、抗原に対する、特異的な免疫系反応である。特異的防御系反応の例としては、抗体応答が挙げられる。非特異的防御系反応は、免疫記憶を通常できない白血球、例えばマクロファージ、好酸球、及び好中球により仲介される炎症性応答である。いくつかの態様において、免疫応答としては、炎症性サイトカインレベルの増加をもたらす、炎症性サイトカインの分泌が挙げられる。
【０１７６】
炎症性サイトカイン：用語「炎症性サイトカイン」とは、炎症性応答が増加したサイトカインを意味する。炎症性サイトカインの例としては、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＣＸＣＬ１（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１、ＧＲＯαとしても知られている）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０）、または顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。用語「炎症性サイトカイン」は、当該技術分野において既知である、炎症性応答と関係する他のサイトカイン、例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１２（ＩＬ１２）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）などもまた含む。
【０１７７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用する場合、用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」とは、生命体（例えば、動物、植物、または微生物）内ではなく、人工環境、例えば、試験管または反応槽内、細胞培養中、ペトリ皿で生じる事象を意味する。
【０１７８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」とは、生命体（例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはこれらの細胞もしくは組織）内で生じる事象を意味する。
【０１７９】
挿入バリアント及び欠失バリアント：ポリペプチドに言及する場合、「挿入バリアント」とは、天然または開始配列の特定の位置におけるアミノ酸に直接隣接して挿入される、１個以上のアミノ酸を有するバリアントである。アミノ酸に「直接隣接した」とは、アミノ酸のアルファ−カルボキシまたはアルファ−アミノ官能基のいずれかに結合していることを意味する。ポリペプチドに言及する場合、「欠失バリアント」とは、天然または開始アミノ酸配列の１個以上のアミノ酸が除去されているバリアントである。通常、欠失バリアントでは、分子の特定領域において１個以上のアミノ酸が欠失されている。
【０１８０】
インタクト：本明細書で使用する場合、ポリペプチドの文脈において、用語「インタクト」とは、野生型タンパク質に対応するアミノ酸を保持していること、例えば、野生型アミノ酸が変異していない、または置換されていないことを意味する。逆に、核酸の文脈において、用語「インタクト」とは、野生型核酸に対応する核酸塩基を保持していること、例えば、野生型核酸塩基が変異していない、または置換されていないことを意味する。
【０１８１】
イオン性アミノ脂質：用語「イオン性アミノ脂質」は、１、２、３またはそれ以上の数の脂肪酸、または脂肪族アルキル鎖、及び、ｐＨ滴定可能なアミノ先端基（例えば、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ先端基）を有する脂質を含む。イオン性アミノ脂質は通常、アミノ先端基のｐＫａより低いｐＨにてプロトン化されており（即ち正に荷電しており）、実質的に、ｐＫａより高いｐＨにおいては荷電していない。このようなイオン性アミノ脂質としては、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ（ＭＣ３）、及び（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８２】
単離された：本明細書で使用する場合、用語「単離された」とは、（天然形態であるか、実験設定であるかにかかわらず）会合した成分の少なくともいくつかから分離している、物質または構成要素を意味する。単離物質（例えば、ヌクレオチド配列またはタンパク質配列）は、会合している物質に対して、様々なレベルの純度を有することができる。単離物質及び／または要素は、最初に会合していた他の成分と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上分離することができる。いくつかの実施形態において、単離した作用剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％を超えて、または約９９％を超えて純粋である。本明細書で使用する場合、他の成分を実質的に含まない場合、物質は「純粋」である。
【０１８３】
用語「実質的に単離された」とは、化合物が、形成または検出された環境から実質的に分離されていることを意味する。部分分離としては、例えば、本開示の化合物中で濃縮された組成物を挙げることができる。実質的分離は、本開示の化合物、またはその塩を少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％含有する組成物を含むことができる。
【０１８４】
「単離された」、本明細書にて開示したポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、細胞、または任意の組成物は、自然では発見されない形態のポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、細胞、または組成物である。単離ポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、または組成物としては、自然に見出される形態ではない程度にまで精製されているものが挙げられる。いくつかの態様において、単離されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチド、または組成物は実質的に純粋である。
【０１８５】
異性体：本明細書で使用する場合、用語「異性体」とは、本開示の任意の化合物の、任意の互変異性体、立体異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示の化合物は１つ以上のキラル中心及び／または二重結合を有することができ、それ故、立体異性体、例えば二重結合異性体（即ち幾何Ｅ／Ｚ異性体）、またはジアステレオマー（例えば、鏡像異性体（即ち（＋）もしくは（−））、もしくはｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体）として存在することが認識される。本開示に従うと、本明細書で記述した化学構造、及びそれ故、本開示の化合物は、対応する全ての立体異性体、即ち、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオ的に純粋）、ならびに鏡像異性及び立体異性混合物（例えばラセミ化合物）の両方を包含する。本開示の化合物の、鏡像異性及び立体異性混合物は通常、周知の方法、例えばキラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩錯体としての化合物の結晶化、または、化合物のキラル溶媒中での結晶化により、成分である鏡像異性体または立体異性体に分割することができる。鏡像異性体及び立体異性体は、周知の非対称合成法により、立体異性的または鏡像異性的に純粋な中間体、試薬、及び触媒からもまた入手することができる。
【０１８６】
リンカー：本明細書で使用する場合、「リンカー」とは、原子群、例えば、１０〜１，０００個の原子を意味し、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子または基で構成することができるが、これらに限定されない。リンカーは、第１の末端における、核酸塩基または糖部位の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチド、及び、第２の末端におけるペイロード（例えば、検出可能薬または治療剤）に結合することができる。リンカーは、核酸配列への組み込みに干渉しない程度に十分な長さを有することができる。リンカーは、本明細書に記載されるように、任意の有用な目的のため、例えば、（例えば、２つ以上のキメラポリヌクレオチド分子もしくはＩＶＴポリヌクレオチドの結合により）ポリヌクレオチド多量体、またはポリヌクレオチドコンジュゲートを形成するため、及び、ペイロードを投与するために使用することができる。リンカーに組み込み可能な化学基の例としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリルが挙げられるが、これらに限定されず、これらはそれぞれ、本明細書に記載するように、任意選択で置換することができる。リンカーの例としては、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレンまたはプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマー、ならびにこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、リンカー内で切断可能な部位、例えばジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）、またはアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）が挙げられるが、これらに限定されず、これらは還元剤または光分解を用いて切断することができる。選択的に切断可能な結合の非限定的な例としては、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、または他の還元剤、及び／または光分解により切断可能なアミド結合、ならびに、例えば酸性または塩基性加水分解により切断可能なエステル結合が挙げられる。
【０１８７】
投与法：本明細書で使用する場合、「投与法」としては、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与、または組成物を対象に送達する他の方法を挙げてもよい。投与法は、体の特定の領域または系への送達を目標にする（例えば、特異的に送達する）ように選択することができる。
【０１８８】
修飾された：本明細書で使用する場合、「修飾された」とは、本開示の分子の状態または構造の変化を意味する。分子は、化学的方法、構造的方法、及び機能的方法を含む多くの方法で修飾することができる。いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡ分子は、例えば、天然リボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関係するため、非天然ヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入により修飾される。キャップ構造などの、非標準ヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるものの、「修飾された」とは考えられない。
【０１８９】
ナノ粒子組成物：本明細書で使用する場合、「ナノ粒子組成物」とは、１つ以上の脂質を含む組成物である。ナノ粒子組成物は通常、およそマイクロメートル以下のサイズを有し、脂質二分子膜を含むことができる。ナノ粒子組成物は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム（例えば、脂質小胞）、及びリポプレックスを包含する。例えば、ナノ粒子組成物は、５００ｎｍ以下の直径を有する脂質二分子膜を有するリポソームであってよい。
【０１９０】
天然に存在する：本明細書で使用する場合、「天然に存在する」とは、人工的補助無しに自然に存在することを意味する。
【０１９１】
非ヒト脊椎動物：本明細書で使用する場合、「非ヒト脊椎動物」としては、野生種及び家畜種を含む、ヒトを除く全ての脊椎動物が挙げられる。非ヒト脊椎動物の例としては、哺乳類、例えばアルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、及びヤクが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９２】
核酸配列：用語「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」は同じ意味で用いられ、連続した核酸配列を指す。配列は一本鎖、または二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）のいずれかであることができる。
【０１９３】
用語「核酸」は、最も広い意味において、ヌクレオチドのポリマーを含む、任意の化合物及び／または物質を含む。これらポリマーは多くの場合、ポリヌクレオチドと呼ばれる。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ、β−Ｄ−リボ構造を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ構造を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能基化された２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能基化された２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、またはこれらのハイブリッドもしくは組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９４】
語句「をコードするヌクレオチド配列」とは、ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡ分子）コード配列を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳類の細胞内での発現を指令することができるプロモーターまたはポリアデニル化シグナルを含む、制御因子に作動可能に連結した、開始シグナル及び終止シグナルを更に含むことができる。コード配列は、シグナルペプチドをコードする配列を更に含むことができる。
【０１９５】
オフターゲット：本明細書で使用する場合、「オフターゲット」とは、任意の１つ以上の標的、遺伝子、または細胞転写物における、任意の意図しない影響を意味する。
【０１９６】
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」とは、所与のリーディングフレーム内に停止コドンを含有しない配列を意味する。
【０１９７】
作動可能に連結した：本明細書で使用する場合、語句「作動可能に連結した」とは、２つ以上の分子、コンストラクト、転写物、要素、または部位などの間における機能的接続を意味する。
【０１９８】
最適化配列：用語「最適化配列」とは、配列の最適化プロセスによる生成物を意味する。
【０１９９】
任意選択で置換された：本明細書において、「任意選択で置換されたＸ」（例えば、任意選択で置換されたアルキル）の形態の語句は、「Ｘであって、Ｘは任意選択で置換されている」（例えば、「アルキルであって、前記アルキルは任意選択で置換されている」）に等しいことを意図している。特徴「Ｘ」（例えば、アルキル）それ自体が任意のものであることを意味することを意図しているわけではない。
【０２００】
部分：本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドの「部分」または「領域」は、ポリヌクレオチドの全体の長さ未満である、ポリヌクレオチドの任意の部分と定義される。
【０２０１】
患者：本明細書で使用する場合、「患者」とは、治療を求めている可能性がある、もしくは治療を必要とし得る、治療を必要としている、治療を受けている、治療を受けるであろう対象、または、特定の疾患または病態に関して訓練を受けた専門家によりケアを受けている対象を意味する。
【０２０２】
医薬として許容され得る：語句「医薬として許容され得る」は、本明細書において、医学的良識の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わず、ヒト及び動物の組織と接触して用いるのに好適であり、妥当なベネフィット・リスク比にふさわしい、化合物、材料、組成物、及び／または投薬形態を指すために用いられる。
【０２０３】
医薬として許容され得る賦形剤：本明細書で使用する場合、語句「医薬として許容され得る賦形剤」とは、本明細書に記載する化合物以外の、患者には実質的に無毒かつ非炎症性の性質を有する、任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解することが可能なビヒクル）を意味する。賦形剤としては、例えば、抗接着剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング材、圧縮助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤またはコーティング、香味料、香料、滑剤（流動向上剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水を挙げることができる。例示的賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、クエン酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウムデンプン、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０４】
医薬として許容され得る塩：本開示は、本明細書に記載する化合物の医薬として許容され得る塩もまた含む。本明細書で使用する場合、「医薬として許容され得る塩」とは、親化合物が、既存の酸または塩基部位をその塩形態に転換すること（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させること）により修飾されている、開示した化合物の誘導体を意味する。医薬として許容され得る塩の例としては、塩基性残基のミネラルまたは有機酸塩（例えばアミン）、酸性残基のアルカリまたは有機塩（例えばカルボン酸）などが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な酸付加塩としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。例示的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに、無毒性アンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがこれらに限定されない）が挙げられる。本開示の医薬として許容され得る塩としては、例えば、無毒性無機または有機酸から形成される、親化合物の従来の無毒性塩が挙げられる。本開示の医薬として許容され得る塩は、従来の化学的方法により、塩基性部位または酸性部位を含有する親化合物から合成することができる。一般的に、このような塩は、これら化合物の遊離酸または塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中、またはこの２つの混合物中（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水媒体を使用する）で、化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることにより調製することができる。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８、及び、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１−１９（１９７７）に見出され、これらそれぞれの全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０５】
医薬として許容され得る溶媒和物：本明細書で使用する場合、用語「医薬として許容され得る溶媒和物」とは、好適な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている、本開示の化合物を意味する。好適な溶媒は、投与量において生理学的に許容範囲内である。例えば、有機溶媒、水、またはこれらの混合物を含む溶液の結晶化、再結晶、または沈殿により、溶媒和物を調製することができる。好適な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、モノ、ジ、及びトリ水和物）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−ピロリドン、安息香酸ベンジルなどである。水が溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と呼ばれる。
【０２０６】
薬物動態：本明細書で使用する場合、「薬物動態」とは、生体に投与される物質の命運の決定に関係するため、分子または化合物の任意の１つ以上の性質を意味する。薬物動態は、吸収、分配、代謝、及び排泄の程度及び速度を含むいくつかの領域に分けられる。これは一般にＡＤＭＥとして呼ばれ、（Ａ）吸収（Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）は、物質が血液循環に入るプロセスであり、（Ｄ）分配（Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）は、体の流体及び組織全体にわたる、物質の分散または伝搬であり、（Ｍ）代謝（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）（または、生体形質変換）は、親化合物の娘代謝物への不可逆的転換であり、（Ｅ）排泄（Ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ）（または放出）とは、物質の体からの放出を意味する。珍しい場合では、薬剤によっては、体内組織に不可逆的に蓄積するものもある。
【０２０７】
物理化学的：本明細書で使用する場合、「物理化学的」とは、身体的及び／または化学的性質を意味する、またはこれらに関係する。
【０２０８】
ポリヌクレオチド：本明細書で使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」とは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、これらの類似体、またはこれらの混合物を含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを意味する。本用語は、分子の一次構造を意味する。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。これには、例えばアルキル化により、及び／またはキャッピングにより修飾した形態の、ならびに、未修飾の形態のポリヌクレオチドもまた含む。より具体的には、用語「ポリヌクレオチド」としては、ポリデオキシリボヌクレオチド（２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有する）、ポリリボヌクレオチド（Ｄ−リボースを含有する）（ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍＲＮＡを含む）（スプライシングされているかされていないかにかかわらない）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ−グリコシドまたはＣ−グリコシドである、任意の他の種類のポリヌクレオチド、ならびに、非ヌクレオチド主鎖を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）、及びポリモルホリノポリマー、ならびに、ポリマーが、ＤＮＡ及びＲＮＡに見出されるもののような、塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする構造の核酸塩基を含有する場合、他の合成配列特異的核酸ポリマーが挙げられる。特定の態様において、ポリヌクレオチドはｍＲＮＡを含む。他の態様において、ｍＲＮＡは合成ｍＲＮＡである。いくつかの態様において、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１個の非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様において、ある特定の分類の全ての核酸塩基が非天然核酸塩基で置換されている（例えば、本明細書にて開示したポリヌクレオチドの全てのウリジンを、非天然核酸塩基、例えば、５−メトキシウリジンで置換することができる）。いくつかの態様において、ポリヌクレオチド（例えば、合成ＲＮＡまたは合成ＤＮＡ）は、天然の核酸塩基のみ、即ち、合成ＤＮＡの場合はＡ、Ｃ、Ｔ、及びＵ、または、合成ＲＮＡの場合、Ａ、Ｃ、Ｔ、及びＵを含む。
【０２０９】
当業者は、本明細書にて開示したコドンマップにおけるＴ塩基はＤＮＡに存在するが、Ｔ塩基は対応するＲＮＡにおいては、Ｕ塩基により置換されることを理解するであろう。例えば、ＤＮＡ形態の、本明細書にて開示したコドン−ヌクレオチド配列、例えば、ベクターまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳（ＩＶＴ）テンプレートは、対応する転写ｍＲＮＡにおいては、Ｔ塩基がＵ塩基に転写される。これに関して、コドン最適化ＤＮＡ配列（Ｔを含む）、及びそれらの対応するＲＮＡ配列（Ｕを含む）は共に、本開示のコドン最適化ヌクレオチド配列と考えられる。当業者は、１つ以上の塩基を非天然塩基で置き換えることにより、等価なコドンマップを生成することができることもまた理解するであろう。したがって、例えば、ＴＴＣコドン（ＤＮＡマップ）はＵＵＣコドン（ＲＮＡマップ）に対応し、これは転じて、ΨΨＣコドン（Ｕがシュードウリジンで置き換えられているＲＮＡマップ）に対応する。
【０２１０】
標準的なＡ−Ｔ及びＧ−Ｃ塩基対が、それぞれ、チミジンのＮ３−Ｈ及びＣ４−オキシ間、ならびに、アデノシンのＮ１及びＣ６−ＮＨ２間、ならびに、それぞれ、シチジンのＣ２−オキシ、Ｎ３及びＣ４−ＮＨ２間、ならびに、グアノシンのＣ２−ＮＨ２、Ｎ’−Ｈ、及びＣ６−オキシ間における水素結合の形成を可能にする条件下にて、形成される。したがって例えば、グアノシン（２−アミノ−６−オキシ−９−β−Ｄ−リボフラノシル−プリン）を修飾して、イソグアノシン（２−オキシ−６−アミノ−９−β−Ｄ−リボフラノシル−プリン）を形成することができる。このような修飾は、もはやシトシンと標準的な塩基対を効果的に形成しない、ヌクレオシド塩基をもたらす。しかし、シトシン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−２−オキシ−４−アミノ−ピリミジン）を修飾してイソシトシン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−２−アミノ−４−オキシ−ピリミジン−）を形成することにより、グアノシンと効果的に塩基対を形成しないが、イソグアノシンと塩基対を形成する修飾ヌクレオチド（米国特許第５，６８１，７０２号（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．））が得られる。イソシトシンはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）から入手可能であり、イソシチジンは、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２：１０４８９−１０４９６及びその中で引用される参照文献に記載の通りの方法により調製することができ、２’−デオキシ−５−メチル−イソシチジンは、Ｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：４４６１−４４６７及びその中で引用される参照文献に記載の通りの方法により調製することができ、イソグアニンヌクレオチドは、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３（上述）、及びＭａｎｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５９３−５６０１に記載の通りの方法を用いて、または、米国特許第５，７８０，６１０号（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．）に記載の方法により調製することができる。他の非天然塩基対は、２，６−ジアミノピリミジン及びその補体（１−メチルピラゾロ−［４，３］ピリミジン−５，７−（４Ｈ，６Ｈ）−ジオン）の合成に関しては、Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４３：３３−３７に記載の方法により合成することができる。独自の塩基対を形成する、他のこのような修飾ヌクレオチド単位は、Ｌｅａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：３６７５−３６８３及びＳｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（上述）に記載されているものなどが知られている。
【０２１１】
核酸配列：用語「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド」は同じ意味で用いられ、連続した核酸配列を指す。配列は一本鎖、または二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）のいずれかであることができる。
【０２１２】
語句「をコードするヌクレオチド配列」及びその変型は、本明細書において記述する、ポリペプチドまたはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡ分子）コード配列を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳類の細胞内での発現を指令することができるプロモーターまたはポリアデニル化シグナルを含む、制御因子に作動可能に連結した、開始シグナル及び終止シグナルを更に含むことができる。コード配列は、シグナルペプチドをコードする配列を更に含むことができる。
【０２１３】
ポリペプチド：用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書では同じ意味で用いられ、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、修飾アミノ酸を含むことができる。この用語は、自然に修飾されている、または介在（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化）により修飾されているアミノ酸ポリマー、または、標識成分とのコンジュゲーションなどの、任意の他の操作もしくは修飾もまた包含する。この定義には、例えば、１つ以上のアミノ酸の類似体（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ−アセチルフェニルアラニン、Ｄ−アミノ酸、及びクレアチンを含む）ならびに、当該技術分野において既知である他の修飾を含有するポリペプチドもまた含まれる。
【０２１４】
本明細書で使用する場合、この用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを意味する。ポリペプチドは、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、相同分子腫、パラログ、断片、ならびに前述の、他の等価物、バリアント、及び類似体を含む。ポリペプチドは１つのポリペプチドであることができる、または、二量体、三量体、もしくは四量体などの、複数の分子の複合体であることができる。これらは、一本鎖または複数鎖ポリペプチドもまた含むことができる。最も一般的なジスルフィド結合は、複数鎖ポリペプチドに見出される。用語「ポリペプチド」は、１個以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学類似体である、アミノ酸ポリマーにもまた適用することができる。いくつかの実施形態において、「ペプチド」は５０アミノ酸長以下、例えば約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であることができる。
【０２１５】
ポリペプチドバリアント：本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチドバリアント」とは、天然配列または参照配列とはアミノ酸配列が異なる分子を意味する。アミノ酸配列バリアントは、天然配列または参照配列と比較して、アミノ酸配列内のある特定の位置において、置換、欠失、及び／または挿入を有することができる。通常、バリアントは、天然配列または参照配列に対して、少なくとも約５０％の同一性、少なくとも約６０％の同一性、少なくとも約７０％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、少なくとも約９５％の同一性、少なくとも約９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、バリアントは、天然配列または参照配列に対して、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％同一である。
【０２１６】
単位薬剤当たりのポリペプチド（ＰＵＤ）：本明細書で使用する場合、ＰＵＤまたは単位薬剤当たりの生成物は、通常は、体液内での指標により除される、ｐｍｏｌ／ｍＬ、ｍｍｏｌ／ｍＬなどの濃度で定義される、体液または組織内で測定される、生成物（ポリペプチドなど）の合計日用量（通常１ｍｇ、ｐｇ、ｋｇなど）の、細分化した部分として定義される。
【０２１７】
予防すること：本明細書で使用する場合、用語「予防すること」とは、感染、疾患、障害、及び／または病態の開始を部分的にまたは完全に遅らせること、特定の感染、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状、特徴、または臨床症状の開始を部分的にまたは完全に遅らせること、特定の感染、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の開始を部分的にまたは完全に遅らせること、感染、特定の疾患、障害、及び／または病態の進行を部分的にまたは完全に遅らせること、及び／または、感染、疾患、障害、及び／または病態と関連する病状の発症のリスクを低下させることを意味する。
【０２１８】
プロドラッグ：本開示は、本明細書に記載する化合物のプロドラッグもまた含む。本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」とは、任意の物質、分子、または要素であって、化学的または物理的改変の際に、その物質、分子、または要素を治療薬として作用させる形態のものを指す。プロドラッグは何らかの方法で共有結合することができる、または金属イオン封鎖されることができ、哺乳類対象への投与前、投与中、または投与後に放出する、または活性薬剤部位に転換される。プロドラッグは、日常的な操作により、またはｉｎ  ｖｉｖｏで修飾を親化合物に切断するように、化合物中に存在する官能基を修飾することにより調製することができる。プロドラッグとしては、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、またはカルボキシル基が、哺乳類対象に投与される際に切断され、それぞれ遊離ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、またはカルボキシル基を形成する任意の基に結合されている化合物が挙げられる。プロドラッグの調製及び使用は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、及びＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７で論じられており、これら両方はそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１９】
増殖する：本明細書で使用する場合、用語「増殖する」とは、急激に成長、拡大、または増加すること、あるいは急激に成長、拡大、または増加を引き起こすことを意味する。「増殖性」とは、増殖能を有することを意味する。「抗増殖性」とは、増殖の性質とは反対の、または増殖の性質に適合しない性質を有することを意味する。
【０２２０】
予防的：本明細書で使用する場合、「予防的」とは、疾患の拡大を予防するために使用する、治療作用または作用過程を意味する。
【０２２１】
予防：本明細書で使用する場合、「予防」とは、健康を維持し、疾患の拡大を予防する手段を意味する。「免疫予防」とは、能動免疫または受動免疫を生み出して、疾患の拡大を予防する手段を意味する。
【０２２２】
タンパク質切断部位：本明細書で使用する場合、「タンパク質切断部位」とは、アミノ酸鎖の制御された切断を、化学的、酵素的、または光化学的手段により達成可能な部位を意味する。
【０２２３】
タンパク質切断シグナル：本明細書で使用する場合、「タンパク質切断シグナル」とは、切断のためにポリペプチドに印を付ける、またはポリペプチドを標識する少なくとも１つのアミノ酸を意味する。
【０２２４】
目的タンパク質：本明細書で使用する場合、用語「目的タンパク質」または「所望のタンパク質」としては、本明細書において提供されるタンパク質、ならびにその断片、変異体、バリアント、及び変化が挙げられる。
【０２２５】
近位の：本明細書で使用する場合、用語「近位の」とは、中心または目的のある点もしくは領域により近く位置していることを意味する。
【０２２６】
シュードウリジン：本明細書で使用する場合、シュードウリジンとは、ヌクレオシドであるウリジンのＣ−グリコシド異性体を意味する。「シュードウリジン類似体」とは、シュードウリジンの任意の修飾、バリアント、アイソフォーム、または誘導体である。例えば、シュードウリジン類似体としては、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、１−メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３Ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３Ψ）、及び２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（Ψｍ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２７】
精製した：本明細書で使用する場合、「精製する」、「精製した」、「精製」とは、実質的に純粋にすることまたは不必要な成分、材料の汚れ、混合物または不完全さを除去することを意味する。
【０２２８】
参照核酸配列：用語「参照核酸配列」または「参照核酸」または「参照ヌクレオチド配列」または「参照配列」とは、配列最適化することができる開始核酸配列（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ配列）を意味する。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、野生型核酸配列、その断片またはバリアントである。いくつかの実施形態において、参照核酸配列は、以前に配列最適化されている核酸配列である。
【０２２９】
反復トランスフェクション：本明細書で使用する場合、用語「反復トランスフェクション」とは、同じ細胞培養液を複数回、ポリヌクレオチドでトランスフェクトすることを意味する。細胞培養液は、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、少なくとも１６回、少なくとも１７回、少なくとも１８回、少なくとも１９回、少なくとも２０回、少なくとも２５回、少なくとも３０回、少なくとも３５回、少なくとも４０回、少なくとも４５回、少なくとも５０回、またはそれ以上トランスフェクトすることができる。
【０２３０】
塩：いくつかの態様において、本明細書にて開示した、腫瘍内送達用医薬組成物は、いくつかの脂質成分の塩を含む。用語「塩」は、任意のアニオン性及びカチオン性錯体を含む。アニオンの非限定的な例としては、無機及び有機アニオン、例えば、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、シュウ酸イオン（例えば、ヘミシュウ酸イオン）、リン酸イオン、ホスホン酸イオン、リン酸水素イオン、リン酸二水素イオン、酸化物イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン、窒化物イオン、亜硫酸水素イオン、硫化物イオン、亜硫酸イオン、重硫酸イオン、硫酸イオン、チオ硫酸イオン、硫酸水素イオン、ホウ酸イオン、ギ酸イオン、酢酸イオン、安息香酸イオン、クエン酸イオン、酒石酸イオン、乳酸イオン、アクリル酸イオン、ポリアクリル酸イオン、フマル酸イオン、マレイン酸イオン、イタコン酸イオン、グリコール酸イオン、グルコン酸イオン、リンゴ酸イオン、マンデル酸イオン、チグリン酸イオン、アスコルビン酸イオン、サリチル酸イオン、ポリメタクリル酸イオン、過塩素酸イオン、塩素酸イオン、亜塩素酸イオン、次亜塩素酸イオン、臭素酸イオン、次亜臭素酸イオン、ヨウ素酸イオン、アルキルスルホン酸イオン、アリールスルホン酸イオン、ヒ酸イオン、亜ヒ酸イオン、クロム酸イオン、二クロム酸イオン、シアン化物イオン、シアン酸イオン、チオシアン酸イオン、水酸化物イオン、過酸化物イオン、過マンガン酸イオン、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０２３１】
試料：本明細書で使用する場合、用語「試料」または「生体試料」とは、組織、細胞、または成分の一部（例えば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、羊水臍帯血、尿、膣液、及び精液を含むがこれらに限定されない体液）の部分集合を意味する。試料は、生命体全体、または、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、外皮部分、呼吸器、腸、及び泌尿生殖路、涙、唾液、母乳、血液細胞、腫瘍、臓器を含むがこれらに限定されないその組織、細胞、もしくは成分の一部の部分集合、または、それらの分画もしくは一部から調製したホモジェネート、溶解物、または抽出物を更に含むことができる。試料とは、細胞成分（例えばタンパク質または核酸分子）を含有し得る、栄養ブイヨンまたはゲルなどの培地を更に意味する。
【０２３２】
配列の最適化：用語「配列の最適化」とは、参照核酸配列内の核酸塩基を代替の核酸塩基で置き換えることにより、改善された性質、例えば、タンパク質発現の改善または免疫原性の低下を備えた核酸配列を得る１つのプロセス、または一連のプロセスを意味する。
【０２３３】
一般に、配列の最適化の目標は、参照ヌクレオチド配列によりコードされるのと同じポリペプチド配列をコードする、同様のヌクレオチド配列を産生することである。したがって、参照ヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドに対して、最適化されたヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドには、（コドン最適化の結果としての）アミノ酸置換は存在しない。
【０２３４】
シグナル配列：本明細書で使用する場合、語句「シグナル配列」、「シグナルペプチド」、及び「トランジットペプチド」は同じ意味で用いられ、タンパク質をある特定の細胞器官、細胞区画、または細胞外搬出物に輸送または局在化させることができる配列を指す。この用語は、シグナル配列ポリペプチド、及びシグナル配列をコードする核酸配列の両方を包含する。したがって、核酸の文脈において、シグナル配列への言及は、実際には、シグナル配列ポリペプチドをコードする核酸配列を意味する。
【０２３５】
シグナル伝達経路：「シグナル伝達経路」とは、細胞のある部分から細胞の別の部分への、シグナル伝達の際に役割を果たす様々なシグナル伝達分子間の、生化学的関連性を意味する。本明細書で使用する場合、語句「細胞表面受容体」には、例えば、あるシグナルを受信することが可能であり、そのようなシグナルを、細胞の原形質膜を介して伝達可能な分子、及び分子複合体を含む。
【０２３６】
類似性：本明細書で使用する場合、用語「類似性」とは、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間での、全体の関連性を意味する。互いのポリマー分子の類似性パーセントの計算は、類似性パーセントの計算では、当該技術分野において理解される保存的置換を考慮に入れることを除いて、同一性百分率の計算と同じ方法で実施することができる。
【０２３７】
特異的送達：本明細書で使用する場合、用語「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的な送達」とは、ナノ粒子により、オフターゲット組織（例えば、哺乳類の脾臓）と比較して、標的目的組織（例えば、哺乳類の肝臓）に、より多くの（例えば、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍）ポリヌクレオチドを送達することを意味する。特定の組織への、ナノ粒子の送達量は、組織内で産生されるタンパク質の量をその組織の重量と比較すること、組織内のポリヌクレオチドの量をその組織の重量と比較すること、組織内で産生されるタンパク質の量をその組織内の全タンパク質の量と比較すること、または、組織内のポリヌクレオチドの量をその組織内の全ポリヌクレオチドの量と比較することにより測定することができる。例えば、腎血管性の標的化に関して、ポリヌクレオチドの全身投与後に肝臓または脾臓に送達されるポリヌクレオチドと比較して、組織１ｇ当たり、１．５、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍多いポリヌクレオチドが腎臓に送達される場合、ポリヌクレオチドは、肝臓及び脾臓と比較して、哺乳類の腎臓に特異的に提供される。ナノ粒子を標的組織に特異的に送達する能力は、治療中の対象で測定する必要はなく、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代理生物で測定することができることが理解されよう。
【０２３８】
安定した：本明細書で使用する場合、「安定した」とは、反応混合物からの、有用な純度への単離に生残するのに十分に堅強であり、場合によっては、有効な治療剤への製剤化が可能である化合物を意味する。
【０２３９】
安定化した：本明細書で使用する場合、用語「安定させる」、「安定化した」、「安定化領域」とは、安定させること、または安定することを意味する。
【０２４０】
立体異性体：本明細書で使用する場合、用語「立体異性体」とは、化合物が有し得る、全ての可能な異なる異性体形態、及び構造形態（例えば、本明細書に記載される任意の式の化合物）、特に、基本的な分子構造の、全ての可能な立体化学異性体形態及び構造異性体形態、全てのジアステレオマー、鏡像異性体、及び／または配座異性体を意味する。本開示のいくつかの化合物は、異なる互変異性形態で存在することができ、後者のものは全て、本開示の範囲に含まれる。
【０２４１】
対象：「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳類」とは、診断、予後、または治療が所望される任意の対象、特に哺乳類対象を意味する。哺乳類対象としては、ヒト、家庭用動物、家畜、動物園用動物、スポーツ用動物、ペット動物（例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、雌ウシ）、霊長類（例えば、類人猿、サル、オランウータン、及びチンパンジー）、イヌ科動物（例えば、イヌ及びオオカミ）、ネコ科動物（例えば、ネコ、ライオン、及びトラ）、ウマ科動物（例えば、ウマ、ロバ、及びシマウマ）、クマ、食用動物（例えば、ウシ、ブタ、及びヒツジ）、有蹄動物（例えば、シカ及びキリン）、齧歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、及びモルモット）などが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、哺乳類はヒト対象である。他の実施形態において、対象はヒト患者である。特定の実施形態において、対象は、がん治療を必要とするヒト患者である。
【０２４２】
実質的に：本明細書で使用する場合、用語「実質的に」とは、目的の特徴または性質を完全またはほぼ完全に示す、定性的な状態を意味する。生物学分野における当業者は、生物学現象及び化学現象は、たとえあったとしても、完結する、及び／または完結に向かう、あるいは絶対的な結果を達成または回避することは滅多にないことを理解するであろう。それ故、本明細書で使用する用語「実質的に」とは、多くの生物学現象及び化学現象において特有の、完全性を潜在的に欠いていることを表現する。
【０２４３】
実質的に等しい：投与間の時間差に関係して本明細書で使用する場合、この用語は、±２％を意味する。
【０２４４】
実質的に同時の：複数の投与に関係して本明細書で使用する場合、この用語は２秒以内を意味する。
【０２４５】
に罹患している：疾患、障害、及び／または病態「に罹患している」個体は、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状を診断されている、または示している。
【０２４６】
に感染しやすい：疾患、障害、及び／または病態「に感染しやすい」個体は、疾患、障害、及び／または病態の症状を診断されていない、及び／または示し得ないものの、疾患またはその症状が発症する傾向を有する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または病態（例えば、がん）に感染しやすい個体は、以下の１つ以上を特徴とすることができる：（１）疾患、障害、及び／または病態の発症に関係する遺伝的変異、（２）疾患、障害、及び／または病態の発症に関係する遺伝的多型、（３）疾患、障害、及び／または病態に関係する、タンパク質及び／または核酸の発現及び／または活性の増加及び／または低下、（４）疾患、障害、及び／または病態の発症に関係する習慣及び／またはライフスタイル、（５）疾患、障害、及び／または病態の家族歴、ならびに（６）疾患、障害、及び／または病態の発症に関係する、微生物への曝露及び／または感染。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または病態に感染しやすい個体では、疾患、障害、及び／または病態を発症する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または病態に感染しやすい個体では、疾患、障害、及び／または病態を発症しない。
【０２４７】
持続放出：本明細書で使用する場合、用語「持続放出」とは、特定の時間にわたって放出速度に合致する、医薬組成物または化合物の放出プロファイルを意味する。
【０２４８】
合成の：用語「合成の」とは、人の手により作製、調製、及び／または製造されたことを意味する。本開示のポリヌクレオチドまたは他の分子の合成は、化学合成または酵素合成であることができる。
【０２４９】
標的とされる細胞：本明細書で使用する場合、「標的とされる細胞」とは、任意の１つ以上の目的細胞を意味する。細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕで見出され得る、または生命体の組織もしくは臓器で見出され得る。生命体は動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒト、そして最も好ましくは患者であることができる。
【０２５０】
標的組織：本明細書で使用する場合、「標的組織」とは、ポリヌクレオチドを送達することにより、所望の生物学的及び／または薬理学的効果をもたらす、任意の１つ以上の目的組織タイプを意味する。標的目的組織の例としては、特定の組織、臓器、及びこれらの系または群が挙げられる。特定の適用において、標的組織は、腎臓、肺、脾臓、血管内皮（例えば、冠状動脈内もしくは大腿内）、または腫瘍組織（例えば、腫瘍内注射による）であってよい。「オフターゲット組織」とは、コードされたタンパク質の発現が所望の生物学的及び／または薬理学的効果をもたらさない、任意の１つ以上の組織タイプを意味する。特定の適用において、オフターゲット組織は肝臓及び脾臓を含むことができる。
【０２５１】
標的化配列：本明細書で使用する場合、語句「標的化配列」とは、タンパク質またはポリペプチドの輸送または局在化を指令することができる配列を意味する。
【０２５２】
末端：本明細書で使用する場合、ポリペプチドに言及する場合、用語「末端（「ｔｅｒｍｉｎｉ」または「ｔｅｒｍｉｎｕｓ」）」とは、ペプチドまたはポリペプチドの端を意味する。このような端は、ペプチドまたはポリペプチドの最初または最後の部位だけに限定されず、末端領域における追加のアミノ酸も含むことができる。本開示のポリペプチド系分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸で終端している）、及びＣ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸で終端している）の両方を有することを特徴とすることができる。本開示のタンパク質は場合によっては、ジスルフィド結合により、または非共有力によりもたらされる複数のポリペプチド鎖から作製される（多量体、オリゴマー）。これらの種類のタンパク質は、複数のＮ末端及びＣ末端を有する。あるいは、ポリペプチドの末端は、場合に応じて、有機コンジュゲートなどの非ポリペプチド系部位から開始する、またはこのような部位で終端するように、修飾することができる。
【０２５３】
治療剤：用語「治療剤」とは、対象に投与される際に、治療、診断、及び／または予防的効果を有し、及び／または、所望の生物学的効果及び／または薬理学的効果を誘発する作用剤（例えば、ｍＲＮＡ）を意味する。例えば、いくつかの実施形態において、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、もしくはＩＬ３６ポリペプチド、またはこれらの組み合わせをコードするｍＲＮＡは、治療剤であることができる。
【０２５４】
治療有効量：本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」とは、感染、疾患、障害、及び／または病態に罹患している、または感染しやすい対象に投与されると、その感染、疾患、障害、及び／または病態の治療、症状の改善、診断、予防、及び／または開始の遅延を行うのに十分な、送達される作用剤（例えば、核酸、薬剤、治療剤、診断剤、予防剤など）の量を意味する。
【０２５５】
治療有効結果：本明細書で使用する場合、用語「治療有効結果」とは、感染、疾患、障害、及び／または病態に罹患している、または感染しやすい対象において、その感染、疾患、障害、及び／または病態の治療、症状の改善、診断、予防、及び／または開始の遅延を行うのに十分な結果を意味する。
【０２５６】
合計日用量：本明細書で使用する場合、「合計日用量」とは、２４時間の期間に投与または処方される量である。合計日用量は、単一の単位用量または分割用量で投与することができる。
【０２５７】
転写因子：本明細書で使用する場合、用語「転写因子」とは、例えば、転写の活性化または抑制により、ＤＮＡのＲＮＡへの転写を制御するＤＮＡ結合タンパク質を意味する。いくつかの転写因子は単独で転写の制御をもたらすが、他の転写因子は、他のタンパク質と共同して作用する。いくつかの転写因子は、ある特定の条件下において、転写の活性化及び抑制の両方を行うことができる。一般に、転写因子は、標的遺伝子の調節領域内における特定のコンセンサス配列と非常に類似した、特定の標的配列（複数可）に結合する。転写因子は、標的遺伝子のみ、または他の分子との複合体中の転写を制御することができる。
【０２５８】
転写：本明細書で使用する場合、用語「転写」とは、外来性核酸を細胞に導入する方法を意味する。転写方法としては、化学的方法、物理処理、及び陽イオン性脂質または混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５９】
トランスフェクション：本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」とは、ポリヌクレオチドの細胞内への導入であって、ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチドが発現する（例えば、ｍＲＮＡ）、またはポリペプチドが細胞機能を制御する（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、細胞内への導入を意味する。本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」とは、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）のポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳、及び／またはポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾を意味する。
【０２６０】
治療すること、治療、療法：本明細書で使用する場合、用語「治療すること」または「治療」または「療法」とは、超増殖性の疾患（例えば、がん）の１つ以上の徴候または特徴を、部分的または完全に緩和する、寛解させる、改善する、治癒する、発症を遅延させる、進行を阻害する、重症度を低下させる、及び／または発生を低下させることを指す。例えば、がんを「治療すること」とは、腫瘍の生残、増殖、及び／または拡大の阻害を指すことができる。治療は、疾患、障害、及び／または病態の徴候を示していない対象、及び／または、疾患、障害、及び／または病態の初期徴候のみを示している対象に、その疾患、障害、及び／または病態と関係する病状の発症リスクを低下させる目的で、投与することができる。
【０２６１】
未修飾の：本明細書で使用する場合、「未修飾の」とは、何らかの形で変化する前の、任意の物質、化合物または分子を意味する。未修飾のとは、野生型または天然形態の生体分子を指すことができるが、必ずしもこれらを指すわけではない。分子はひと続きの修飾を受けることができ、これにより、それぞれの修飾分子は、後続の修飾のための「未修飾の」出発分子として機能することができる。
【０２６２】
ウラシル：ウラシルは、ＲＮＡの核酸内における４種類の核酸塩基の１つであり、文字Ｕで表すことができる。ウラシルは、β−Ｎ１−グリコシド結合を介して、リボース環、またはより具体的には、リボフラノースに結合して、ヌクレオシドであるウリジンを得ることができる。ヌクレオシドであるウリジンもまた、一般には、その核酸塩基の１文字コードに従って略すことができる（即ち、Ｕ）。したがって、本開示の文脈において、ポリヌクレオチド配列のモノマーがＵである場合、そのようなＵは「ウラシル」または「ウリジン」と交換可能に呼ばれる。
【０２６３】
ウリジン含有量：用語「ウリジン含有量」または「ウラシル含有量」は交換可能であり、ある特定の核酸配列内に存在するウラシルまたはウリジンの量を意味する。ウリジン含有量またはウラシル含有量は、絶対値（配列中におけるウリジンもしくはウラシルの総数）、または相対値（核酸配列中における核酸塩基の総数に対する、ウリジンもしくはウラシルの百分率）として表現することができる。
【０２６４】
ウリジン修飾した配列：用語「ウリジン修飾した配列」とは、候補核酸配列のウリジン含有量及び／またはウリジンパターンに対して、異なる全体または局所ウリジン含有量（多い、または少ないウリジン含有量）を有する、あるいは、異なるウリジンパターン（例えば、勾配分布またはクラスター化）を有する、配列最適化されている核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）を意味する。本開示の文脈において、用語「ウリジン修飾した配列」及び「ウラシル修飾した配列」は、等価であり交換可能であると見なされる。
【０２６５】
「高ウリジンコドン」は、２個または３個のウリジンを含むコドンとして定義され、「低ウリジンコドン」は、１個のウリジンを含むコドンとして定義され、「ウリジン非含有コドン」は、ウリジンが一切ないコドンである。いくつかの実施形態において、ウリジン修飾した配列は、高ウリジンコドンの低ウリジンコドンでの置換、高ウリジンコドンのウリジン非含有コドンでの置換、低ウリジンコドンの高ウリジンコドンでの置換、低ウリジンコドンのウリジン非含有コドンでの置換、ウリジン非含有コドンの低ウリジンコドンでの置換、ウリジン非含有コドンの高ウリジンコドンでの置換、及びこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、高ウリジンコドンを別の高ウリジンコドンで置き換えることができる。いくつかの実施形態において、低ウリジンコドンを別の低ウリジンコドンで置き換えることができる。いくつかの実施形態において、ウリジン非含有コドンを別のウリジン非含有コドンで置き換えることができる。ウリジン修飾した配列は、ウリジンが豊富な配列、またはウリジンが希少な配列であることができる。
【０２６６】
ウリジンが豊富な：本明細書で使用する場合、用語「ウリジンが豊富な」及びその文法的変型は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に対する、配列最適化されている核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）におけるウリジン含有量（絶対値で、またはパーセント値として表される）の増加を意味する。ウリジン富化は、候補核酸配列内のコドンを、より少ないウリジン核酸塩基を含有する同義のコドンで置換することにより実行することができる。ウリジン富化は、全体的（即ち、候補核酸配列の全体の長さに対して）、または局所的（即ち、候補核酸配列のサブ配列もしくは領域に対して）であることができる。
【０２６７】
ウリジンが希少な：本明細書で使用する場合、用語「ウリジンが希少な」及びその文法的変型は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に対する、配列最適化されている核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）におけるウリジン含有量（絶対値で、またはパーセント値として表される）の低下を意味する。ウリジン希少化は、候補核酸配列内のコドンを、より少ないウリジン核酸塩基を含有する同義のコドンで置換することにより実行することができる。ウリジン希少化は、全体的（即ち、候補核酸配列の全体の長さに対して）、または局所的（即ち、候補核酸配列のサブ配列もしくは領域に対して）であることができる。
【０２６８】
バリアント：本開示で用いる用語「バリアント」とは、自然バリアント（例えば、多型、アイソフォームなど）、及び天然または出発配列（例えば、野生型配列）中の少なくとも１個のアミノ酸残基が除去されており、同じ位置のその場所に異なるアミノ酸が挿入されている、人工バリアントの両方を意味する。これらのバリアントは、「置換バリアント」と記述することができる。置換は１つであることができ、ここでは分子内の１個のアミノ酸のみが置換されており、または、置換は複数であることができ、ここでは、同じ分子内の２個以上のアミノ酸が置換されている。アミノ酸が挿入または欠失されている場合、得られるバリアントはそれぞれ、「挿入バリアント」または「欠失バリアント」である。
【０２６９】
抗体：用語「抗体」または「免疫グロブリン」は、本明細書では同じ意味で用いられ、抗体全体、及びその任意の抗原結合部分、または一本鎖を含む。典型的な抗体は、ジスルフィド結合により相互接続した、少なくとも２個の重（Ｈ）鎖及び２個の軽（Ｌ）鎖を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨまたはＶＨと略される）、及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は３個のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬまたはＶＬと略される）、及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、比較的保存されている、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれる領域とともに散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超過変性領域に更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、３個のＣＤＲ、及び４個のＦＷで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、次の順番：ＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、及びＦＷ４にて配置される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）、及び従来の補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合を仲介することができる。
【０２７０】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内における少なくとも１個の抗原認識部位を通して、標的（例えば、ＣＴＬＡ−４）を認識してそれに特異的に結合する、任意の免疫グロブリン分子を包含する。用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、少なくとも２つのインタクトな抗体から生成した二重特異性抗体などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、及び、抗体が所望の生物活性を示す限り、抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。
【０２７１】
抗体は、５種類の主な免疫グロブリンの種類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはこれらのサブクラス（アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであることができ、これは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づく。異なる種類の免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造、及び３次元構造を有する。
【０２７２】
用語「抗体」は、他の分子に融合した抗体の免疫グロブリンドメイン（例えば、ＶＨ、ＣＬ、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３ドメイン）を含む分子、即ち融合タンパク質もまた包含する。いくつかの態様において、このような融合タンパク質は、抗原結合部位（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。抗原結合部位を含む融合タンパク質の抗体部位を使用して、治療剤（例えば、細胞毒素）を、抗原結合部位の特異性により決定される、所望の細胞または組織位置に向けることができる。
【０２７３】
治療用抗体：用語「治療用抗体」は広い意味で用いられ、患者内で標的細胞を枯渇させるよう機能する、任意の抗体またはその機能的断片を包含する。このような標的細胞としては、例えば、腫瘍細胞が挙げられる。治療用抗体は、例えば、特に抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）による、細胞障害性効果または細胞溶解を仲介することができる。本開示に従った治療用抗体を、がん細胞によって過剰発現している表面のエピトープに向けることができる。
【０２７４】
遮断抗体：いくつかの態様において、治療用抗体は遮断抗体である。用語「遮断抗体」または「アンタゴニスト抗体」とは、結合する抗原の生物活性を阻害する、または低下させる抗体を指す。ある特定の態様において、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的に、または完全に阻害する。いくつかの態様において、生物活性は少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または更に１００％低下する。
【０２７５】
その抗原結合部分：本明細書で使用する場合、用語「抗原結合部分」とは、本明細書にて開示した抗体に関して使用する場合、抗体により特異的に結合される抗原に特異的に結合可能な抗体の一部を指すことを意図している。用語「抗原結合部分」は、遮断または標的化抗体、例えばｓｃＦｖとして機能する抗体に由来するコンストラクトもまた意味する。結合部が依然として、その抗原に特異的に結合できるか否かは、当該技術分野において既知である結合アッセイ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）を使用して測定することができる。
【０２７６】
可変領域：抗体の「可変領域」とは、単独または組み合わせのいずれかの、抗体軽鎖の可変領域、または抗体重鎖の可変領域を意味する。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、３個のＣＤＲ領域により結合した４個のＦＷ領域で構成される。各鎖のＣＤＲは、ＦＷ領域により密に接近して共に維持され、他の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲの位置を測定するための技術がいくつか存在する。可変ドメイン内の残基（軽鎖のおよそ残基１〜１０７、及び重鎖の残基１〜１１３）に関する場合、Ｋａｂａｔナンバリングシステムが通常使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。
【０２７７】
本開示で提示される抗体構造成分、即ち、ＶＨまたはＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ＶＨ及びＶＬドメイン、ならびに、定常領域ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の境界は、当業者に既知の方法に従い識別することができる。例えば、抗体内の構造成分の境界は、ＵＲＬ：ｔｏｏｌｓ．ｉｍｍｕｎｅｅｐｉｔｏｐｅ．ｏｒｇ／ｐａｒａｔｏｍｅ／にて入手可能なＰａｒａｔｏｍｅツールを使用して、配列データのみから識別することができる。Ｋｕｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＰＬｏＳ  Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．８：２；Ｋｕｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４０（Ｗｅｂ  Ｓｅｒｖｅｒ  ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５２１−４を参照のこと。
【０２７８】
エピトープ：本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」とは、本明細書にて開示した抗体またはその抗原結合部分への結合を可能にする、抗原タンパク質決定基を意味する。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の、化学活性表面群で構成され、通常、特異的な３次元構造特性、及び特異的荷電特性を有する。エピトープを認識する抗体または結合分子の部分は、パラトープと呼ばれる。タンパク質抗原のエピトープは、その構造、及びパラトープとの相互作用に基づいて、２つのカテゴリー、即ち立体構造エピトープ及び直鎖状エピトープに分けられる。立体構造エピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続なセクションで構成される。これらのエピトープは、抗原の３Ｄ表面の特徴、及び形状または三次構造に基づいて、パラトープと相互作用する。対照的に、直鎖状エピトープは、その一次構造に基づいてパラトープと相互作用する。直鎖状エピトープは、抗原のアミノ酸の連続配列により形成される。
【０２７９】
ＩＩ．がん治療のためのｍＲＮＡ併用療法
本開示は、がんへの免疫応答を刺激するポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）によって疾患の予防または治療を伴うがんを治療する新規の手法、すなわち、がん免疫治療を提供する。
【０２８０】
特に、本開示は、たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）を含む、がん（たとえば、腫瘍）の治療のための組成物を提供し、そこで少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらの組み合わせ、
からなる群から選択される。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、組成物内のポリヌクレオチドは、単一製剤である。
【０２８２】
また本開示は、本明細書に開示される組成物を使用するがん治療のための方法を提供する。その結果、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、対象へ少なくとも２つのポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び任意選択でチェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含み、そこで少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチド、及び
（ｉｖ）それらの組み合わせ、
からなる群から選択される。
【０２８３】
また本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、対象へ少なくとも１つのポリヌクレオチド、及びチェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含み、そこで少なくとも１つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
からなる群から選択される。
【０２８４】
本開示全体を通して使用されるような、用語「併用療法」は、ポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）の併用を指し、そこで各ポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、これらは、単一製剤または複数製剤の部分として、それを必要とする対象へ一斉に、併行して、または連続して投与されることが可能である。たとえば、併用療法は、（ｉ）第１のポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３などの免疫応答プライマーポリペプチド）をコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチド（たとえば、ＯＸ４０Ｌなどの免疫応答共刺激シグナルポリペプチド）をコードする第２のＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）を含むことが可能である。または、たとえば、併用療法は、（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２のＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び（ｉｉｉ）第３のポリペプチドをコードする第３のＯＲＦを含む第３のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）を含むことが可能である。用語「併用療法」がポリヌクレオチドの物理的な併用に制限されず、単一製剤または複数製剤の部分として、それを必要とする対象へ一斉に、併行して、または連続してこれらのポリヌクレオチドの両方の別々の投与をも包含することが理解される。
【０２８５】
本明細書に使用されるように、用語「ダブレット」は、２成分（ポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはそれらの組み合わせ）、すなわち、
（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド、及び第２のポリペプチドをコードする第２のＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド、または
（ｉｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド、及び第２のポリペプチド、
を含む併用療法を指す。
【０２８６】
本明細書に使用されるような、用語「トリプレット」は、３成分（ポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはそれらの組み合わせ）、すなわち、
（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド、第２のポリペプチドをコードする第２のＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリペプチドをコードする第３のＯＲＦを含む第３のポリヌクレオチド、または
（ｉｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド、第２のポリペプチドをコードする第２のＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド、及び第３のポリペプチド、または
（ｉｉｉ）第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド、第２のポリペプチド、及び第３のポリペプチド、
を含む併用療法を指す。
【０２８７】
したがって、上記の例に示されるように、用語、併用療法は、併用療法における成分のうちの少なくとも１つがポリヌクレオチド、及び特に、ｍＲＮＡであることを条件とする、免疫応答プライマー（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）、免疫応答共刺激シグナル（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）、及びチェックポイント阻害剤（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）のうちのいずれかの併用を包含する。たとえば、いくつかの特定の実施形態において、免疫応答プライマー、免疫応答共刺激シグナル、及びチェックポイント阻害剤、たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、または抗ＰＤ−Ｌ１などは、ポリペプチドとして、またはこれらのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしてのいずれか一方として投与されることが可能である。
【０２８８】
本明細書に使用されるような、用語「免疫応答プライマー」は、抗原提示及び／または認識を強化する分子を指す。いくつかの実施形態において、免疫応答プライマーは、ＩＬ１２またはＩＬ２３である。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態において、免疫応答プライマーは、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはそれらの組み合わせである。本開示の併用療法、すなわち、免疫応答プライマー、免疫応答共刺激シグナル、チェックポイント阻害剤、及びそれらの組み合わせを併用するこれらの治療は、当該技術分野において既知である他の免疫応答プライマー（ポリペプチドとして、またはこれらのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしてのいずれか一方として）を組み込むことも可能である。
【０２８９】
本明細書に使用されるように、用語「免疫応答共刺激シグナル」は、Ｔ／ＮＫ細胞動員、増殖、活性化、生存、またはそれらの組み合わせを促進する免疫刺激分子を指す。いくつかの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルは、Ｔ細胞増殖、機能、及びメモリー形成（たとえば、ＯＸ４０Ｌ）を向上させる。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態において、免疫応答共刺激シグナルは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはそれらの組み合わせである。本開示の併用療法、すなわち、免疫応答プライマー、免疫応答共刺激シグナル、チェックポイント阻害剤、及びそれらの組み合わせを併用するこれらの治療は、ポリペプチドとして、またはこれらのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしてのいずれか一方として、当該技術分野において既知である他の免疫応答共刺激シグナルを組み込むことも可能である。
【０２９０】
本明細書に使用されるような、用語「チェックポイント阻害剤」は、がん細胞により免疫細胞が「遮断される」のを阻止する分子を指す。本明細書に使用されるように、用語、チェックポイント阻害剤は、ポリペプチド（たとえば、抗体）、またはこれらのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）を指し、これらは、細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、プログラム細胞死１受容体（ＰＤ−１）、またはＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、及びそれらの組み合わせなどの、阻害性チェックポイント分子を中和する、または阻害する。したがって、いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、抗体、またはこの抗体をコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブである。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。本開示の併用療法、すなわち、免疫応答プライマー、免疫応答共刺激シグナル、チェックポイント阻害剤、及びそれらの組み合わせを併用するこれらの治療は、ポリペプチドとして、またはこれらのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしてのいずれか一方として、当該技術分野において既知である他のチェックポイント阻害剤を組み込むことも可能である。
【０２９１】
これらの例は、限定されず、本明細書に開示される併用療法が免疫システムにおける複数の介入点において介入すること、たとえば、
（ａ）免疫応答プライマーを投与することにより免疫応答を刺激すること、及び／または
（ｂ）免疫応答プライマー（複数可）の投与によりトリガーされる、もしくは免疫応答プライマー（複数可）の投与により向上する免疫応答を追加免疫すること、または免疫応答共刺激シグナルを投与することにより既存の免疫応答を追加免疫すること、及び／または
（ｃ）１つ以上のチェックポイント阻害剤を投与する（たとえば、抗ＣＴＬＡ−４抗体及び／または抗ＰＤ−１抗体の同時投与により、１つ以上の介入点において）ことによって、阻害性チェックポイント分子により免疫応答の阻害を除去すること、または阻害性チェックポイント分子により免疫応答の阻害を阻止すること、
によりがんへの免疫応答を微調整することが可能であることを単に表す。
【０２９２】
本明細書に開示される方法の特定の実施形態において、併用療法で投与される少なくとも２つのポリヌクレオチドは、
（ｉ）第１の免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び第２の免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、
（ｉｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、または
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、もしくはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをさらに含む（ｉ）もしくは（ｉｉ）、
である。
【０２９３】
また本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードする少なくとも２つのポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）を対象へ投与することを含み、そこで（１）第１のポリペプチドは、ＩＬ１２ポリペプチド、ＩＬ２３ポリペプチド、ＩＬ３６ガンマポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド（たとえば、ＣＤ８０−Ｆｃ）、ＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、ｃａＴＬＲ４）、ＩＬ１８ポリペプチド、ＩＬ１５ポリペプチド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、（２）第２のポリペプチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドである。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を含み、この方法は、対象へ、（ｉ）第１のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）、及び（ｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含み、そこで第１のポリペプチドは、（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチド、（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチド、（ｉｉｉ）ＩＬ３６ガンマポリペプチド、（ｉｖ）ＯＸ４０Ｌポリペプチド、（ｖ）ＣＤ８０ポリペプチド（たとえば、ＣＤ８０−Ｆｃ）、（ｖｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、ｃａＴＬＲ４）、（ｖｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチド、（ｖｉｉｉ）ＩＬ１５ポリペプチド、（ｉｘ）抗ＣＴＬＡ−４抗体、及び（ｘ）それらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせである。
【０２９５】
本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＩＬ１２ポリヌクレオチド」）は、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、もしくはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦ、または同一のものをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。他の実施形態において、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせを含むチェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、抗ＰＤ−１抗体と併用してＩＬ１２ポリヌクレオチド、たとえば、ｍＲＮＡを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、たとえば、ｍＲＮＡ、及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、たとえば、ｍＲＮＡ、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、たとえば、ｍＲＮＡ、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（「ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド」）を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、及びチェックポイント阻害剤ポリペプチド、たとえば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせを投与することを含む。
【０２９６】
また本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＩＬ１５ポリヌクレオチド」）は、ＩＬ１５ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。他の実施形態において、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を含み、この方法は、少なくとも１つのポリヌクレオチド、及びチェックポイント阻害剤を投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチドは、ＩＬ１５ポリヌクレオチドを含み、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０２９７】
また本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＩＬ１８ポリヌクレオチド」）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ１２ポリペプチド、ＩＬ２３ポリペプチド、ＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、ｃａＴＬＲ４）、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、抗ＣＴＬＡ−４抗体、及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。他の実施形態において、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせを含むチェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド及びＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドを投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、及びＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（「ＩＬ２３ポリヌクレオチド」）を投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、及びＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（「ＴＬＲ４ポリヌクレオチド」）を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド及びＩＬ１２ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、及びＩＬ２３ポリヌクレオチドを併用して投与することを含む。さらに他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、抗ＣＴＬＡ−４抗体または同一のものをコードするポリヌクレオチド、抗ＰＤ１抗体、及び／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をいずれかの併用において投与することを含む。
【０２９８】
また、提供されるのは、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であり、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＩＬ２３ポリヌクレオチド」）は、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ１２ポリペプチド、ＩＬ１８ポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。他の実施形態において、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはそれらのいずれかの組み合わせを含むチェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド及びＯＸ４０Ｌポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド及びＩＬ１２ポリヌクレオチドを投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド及び抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリペプチド、ＩＬ１８ポリペプチド、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体を併用して投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリペプチド、ＩＬ１８ポリペプチド、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体をいずれかの組み合わせにおいて投与することを含む。
【０２９９】
また、提供されるのは、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であり、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＩＬ３６ガンマポリヌクレオチド」）は、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【０３００】
また本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＴＬＲ４ポリヌクレオチド」）は、ＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、ｃａＴＬＲ４）をコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【０３０１】
また、提供されるのは、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であり、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＣＤ８０ポリヌクレオチド」）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリヌクレオチドは、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードするＯＲＦを含む。
【０３０２】
また、提供されるのは、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であり、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド」）は、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド及びＩＬ１８ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド及びＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、及びＩＬ２３ポリヌクレオチドを併用して投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド及びＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチド、及びＩＬ１８ポリヌクレオチドを併用して投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド及びＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体または同一のものをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体または同一のものをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。特定の実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＩＬ１２ポリヌクレオチド、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、及び抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体または同一のものをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。
【０３０３】
また提供されるのは、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法であり、この方法は、少なくとも２つのポリヌクレオチドを投与することを含み、そこで第１のポリヌクレオチド（「抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド」）は、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードするＯＲＦを含み、第２のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド及びＩＬ１８ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド及びＩＬ１２ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド及びＩＬ２３ポリヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド及びＴＬＲ４ポリヌクレオチドを投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリヌクレオチド、ＩＬ２３ポリヌクレオチド、ＯＸ４０Ｌポリヌクレオチド、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組み合わせを投与することを含む。
【０３０４】
いくつかの特定の実施形態において、ＩＬ１２ポリヌクレオチドは、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み、そこでＩＬ１２ポリペプチドは、インターロイキン１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ１２Ｂ）ポリペプチド及びインターロイキン１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ１２Ａ）ポリペプチドを含む。ＩＬ１２ＢポリペプチドをリンカーによってＩＬ１２Ａポリペプチドへ作動可能に連結することが可能である。いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチド、たとえば、ＩＬ１２Ｂシグナルペプチドをコードする核酸をさらに含むことが可能である。加えて、いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドの配列は、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＩＬ１２Ｂ］−［Ｌ］−［ＩＬ１２Ａ］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＩＬ１２Ｂ］は、成熟ＩＬ１２Ｂに対応するポリペプチドであり、［Ｌ］は、ペプチドリンカー、及び［ＩＬ１２Ａ］は、成熟ＩＬ１２Ａに対応するポリペプチドである。他の実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドの配列は、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＩＬ１２Ａ］−［Ｌ］−［ＩＬ１２Ｂ］
【０３０５】
いくつかの特定の実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、そこでＩＬ１８ポリペプチドは、構造［ＳＰ］−［ＩＬ１８］を有し、そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＩＬ１８］は、成熟ＩＬ１８に対応するポリペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、天然ＩＬ１８シグナルペプチドである。他の実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチド、たとえば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）シグナルペプチドまたはインターロイキン１２（ＩＬ１２）シグナルペプチドである。
【０３０６】
いくつかの特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０細胞外ドメインをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、Ｆｃ部分をコードする核酸配列を含み、これは、ＣＤ８０細胞外ドメインをコードする核酸に作動可能に連結される。その結果、いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド内のＯＲＦは、ＣＤ８０Ｆｃ融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチド、たとえば、ＣＤ８０Ｆｃ融合タンパク質は、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＣＤ８０］−［Ｆｃ］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＣＤ８０］は、ＣＤ８０の細胞外ドメインまたはその機能的部分であり、［Ｆｃ］は、Ｆｃ部分である。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、内在性ＣＤ８０シグナルペプチドである。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４の細胞内ドメイン及び膜貫通領域を含む構成的に活性なＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４）ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲポリヌクレオチド内のＯＲＦによりコードされるＴＬＲ４ポリペプチドは、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＴＬＲ４］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＴＬＲ４］は、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドであり、そこで異種性シグナルペプチドは、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ１）シグナルペプチドである。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリヌクレオチドは、リンカーによりＩＬ１５Ｒポリペプチドに融合されるＩＬ１５ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１５Ｒポリペプチドは、ＩＬ１５Ｒαの細胞外ドメインからなる、または本質的にこの細胞外ドメインからなる。いくつかの実施形態において、ＩＬ１５−ＩＬ１５Ｒ融合ポリペプチドは、Ｆｃドメインをさらに含む。その結果、いくつかの実施形態において、ＩＬ１５ポリヌクレオチド内のＯＲＦによりコードされるＩＬ１５ポリペプチドは、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［Ｆｃ］−［ＩＬ１５Ｒ］−［Ｌ］−［ＩＬ１５］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＩＬ１５］は、成熟ＩＬ１５配列であり、［Ｌ］は、ポリペプチドリンカーであり、［ＩＬ１５Ｒ］は、ＩＬ１５Ｒαの細胞外であり、［Ｆｃ］は、Ｆｃ部分である。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチド、たとえば、ｔＰＡシグナルペプチドである。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ２３ポリヌクレオチドは、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、そこでＩＬ２３ポリペプチドは、ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチド及びＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ｐ４０ポリペプチドは、リンカーを介してＩＬ２３ｐ１９ポリペプチドへ融合される。いくつかの実施形態において、ＩＬ２３ポリペプチドは、シグナルペプチドをさらに含む。その結果、いくつかの実施形態において、ＩＬ２３ポリヌクレオチド内のＯＲＦによりコードされるＩＬ２３ポリペプチドは、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＩＬ１２ｐ４０］−［Ｌ］−［ＩＬ２３ｐ１９］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＩＬ１２ｐ４０］は、ＩＬ２３のＩＬ１２ｐ４０サブユニットであり、［Ｌ］は、ポリペプチドリンカーであり、［ＩＬ２３ｐ１９］は、ＩＬ２３のＩＬ２３ｐ１９サブユニットである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩＬ１２ｐ４０シグナルペプチドである。他の実施形態において、たとえば、ＩＬ２３サブユニットのオーダーをＩＬ２３コンストラクト内に輸送するときに、シグナルペプチドは、ＩＬ２３ｐ１９シグナルペプチドである。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ３６ガンマポリヌクレオチドは、ＩＬ３６ガンマポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ３６ガンマポリペプチドは、シグナルペプチドをコードする核酸をさらに含む。その結果、いくつかの実施形態において、ＩＬ３６ガンマポリヌクレオチド内のＯＲＦによりコードされるＩＬ３６ガンマポリペプチドは、以下の構造を有する。
［ＳＰ］−［ＩＬ３６ガンマ］
そこで［ＳＰ］は、シグナルペプチドであり、［ＩＬ３６ガンマ］は、ＩＬ３６ガンマ、たとえば、成熟ＩＬ３６ガンマである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチド、たとえば、ｈＩｇＫＶ４シグナルペプチドである。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合部分をコードし、この抗体またはその抗原結合部分は、
（ｉ）配列番号９、２８もしくは３９の重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１、２９もしくは４１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体もしくはその抗原結合部分、または
（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ、及び配列番号１８５のＶＬを含む抗体もしくはその抗原結合部分、
と同一のＣＴＬＡ−４エピトープに特異的に結合する。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合部分をコードし、この抗体またはその抗原結合部分は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、
（ｉ）配列番号９、２８もしくは３９のＶＨ、及び配列番号１１、２９もしくは４１のＶＬを含む抗体もしくはその抗原結合部分、または
（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ、及び配列番号１８５のＶＬを含む抗体もしくはその抗原結合部分、
によりＣＴＬＡ−４結合を競合的に阻害する。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、
（ｉ）配列番号９、２８もしくは３９のＶＨ、及び配列番号１１、２９もしくは４１のＶＬを含むＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、または
（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ、及び配列番号１８５のＶＬを含むＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、
をコードする、１つ以上のｍＲＮＡ（たとえば、２つ、３つまたはそれ以上のｍＲＮＡ）を含む。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ＶＨ及びＶＬを含み、そこでＶＬは、
（ｉ）配列番号１７、３３もしくは４７、または配列番号１８９と同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一である、ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１８、３４もしくは４８、または配列番号１９０と同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一である、ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列、及び
（ｉｉｉ）配列番号１９、３５もしくは４９、または配列番号１９１に同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一であるＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列、
からなる群から選択され、
そこでＶＨは、
（ｉｖ）配列番号１４、３０もしくは４４、または配列番号１８６と同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一であるＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列、
（ｖ）配列番号１５、３１もしくは４５、または配列番号１８７と同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一であるＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列、及び
（ｖｉ）配列番号１６、３２もしくは４６、または配列番号１８８と同一である、または４、３、２または１個のアミノ酸置換を除きそれと同一であるＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列、
からなる群から選択される。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチドのうちの１つ以上は、配列最適化されている。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチドのうちの１つ以上は、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。
【０３１６】
ある特定の実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（たとえば、ＯＲＦ）を含むポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、１つ以上の抗がん剤と併用して使用されることが可能である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、１つ以上の標準治療を含むことが可能である。ある特定の実施形態において、１つ以上の抗がん剤は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡである。他の実施形態において、１つ以上の抗がん剤は、腫瘍抗原、または腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡではない。他の実施形態において、１つ以上の抗がん剤は、タンパク質、たとえば、抗体である。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、１つ以上の抗がん剤は、米国食品医薬品局により認可される。他の実施形態において、１つ以上の抗がん剤は、米国食品医薬品局により事前に認可される。
【０３１８】
別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、抗ＰＤ−１アンタゴニストによって治療されている。別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、ＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体によって治療されている。別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体治療によって治療されている。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体治療は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０３１９】
別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体によって治療されている。別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体治療によって治療されている。他の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体治療は、デュルバルマブ、アベルマブ、ＭＥＤＩ４７３、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストによって治療されている。別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、ＣＴＬＡ−４に結合するモノクローナル抗体によって先に治療されている。別の実施形態において、対象は、本明細書に開示される併用療法の投与の前に、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体によって治療されている。他の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体治療は、イピリムマブまたはトレメリムマブを含む。
【０３２１】
したがって、本開示に言及されるようなｍＲＮＡの投与は、本明細書に開示される、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチド（たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、またはそれらの組み合わせ）をコードするｍＲＮＡを含む樹状細胞の形態ではない。むしろ、本開示における投与は、本明細書に開示される、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、もしくはそれらの組み合わせ（たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、またはそれらの組み合わせ）をコードする少なくとも１つのｍＲＮＡ、または本明細書に開示される、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、チェックポイント阻害剤ポリペプチド、もしくはそれらの組み合わせ（たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、またはそれらの組み合わせ）をコードする少なくとも１つのｍＲＮＡを含む組成物の対象への（たとえば、対象内の腫瘍への）直接投与である。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、特異的にＣＴＬＡ−４に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と組み合わせにおいて投与される。１つの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、トレメリムマブである。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、イピリムマブである。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物は、単一製剤または別々の製剤内で、（ｉ）ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド、及び（ｉｉ）ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０３２３】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と組み合わせにおいて投与される。
【０３２４】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と組み合わせにおいて投与される。
【０３２５】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と組み合わせにおいて投与される。
【０３２６】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３２７】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３２８】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３２９】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド、及びＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３０】
他の実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、たとえば、ｃａＴＬＲ４（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３３９】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１受容体に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−Ｌ１受容体に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４１】
１つの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内でＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４２】
別の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４３】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４４】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４５】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせにおいて投与される。
【０３４６】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４７】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３４８】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦ‘を含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３４９】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５０】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５１】
他の実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３５８】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３６２】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、（ｉ）ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ、との組み合わせにおいて投与される。
【０３６３】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、（ｉ）ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ、との組み合わせにおいて投与される。
【０３６４】
いくつかの実施形態において、ＯＸ４０Ｌポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、（ｉ）ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉｉ）ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｖ）それらのいずれかの組み合わせ、との組み合わせにおいて投与される。
【０３６５】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドまたはＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３６６】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ２３をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３６７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦ‘を含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与されることが可能である。
【０３６８】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３６９】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７０】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７１】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７２】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドもしくはＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、（ｉ）単一製剤内でＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）単一製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＩＬ２３タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、または（ｉｉｉ）単一製剤もしくは別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と、ＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との両方、との組み合わせにおいて投与される。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３７８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドもしくはＩＬ２３ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド、またはそれらのいずれかの組み合わせ、との組み合わせにおいて投与される。
【０３７９】
他の実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）と、またはＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８０】
他の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａタンパク質（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及び別の抗がん剤との組み合わせにおいて投与される。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ２３タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及び抗がん剤との組み合わせにおいて投与される。
【０３８２】
他の実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８３】
他の実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドとの組み合わせにおいて投与される。
【０３８４】
他の実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２タンパク質もしくはＩＬ１８タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３８５】
他の実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２タンパク質またはＩＬ１８タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）の両方との組み合わせにおいて投与される。
【０３９０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＴＬＲ４（たとえば、ｃａＴＬＲ４）ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３９２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３ＡポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）もしくはＩＬ１８タンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）またはＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、たとえば、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体と併せて投与され、たとえば、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０３９５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、たとえば、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、たとえば、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と併せて投与され、たとえば、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体は、イピリムマブもしくはトレメリムマブ、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチド、たとえば、ＣＤ８０ＦｃをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３９７】
１つの実施形態において、ＩＬ１２をコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０３９８】
１つの実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、または同一のものをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせにおいて投与される。
【０３９９】
別の実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、または同一のものをコードするポリヌクレオチドとの組み合わせにおいて投与される。
【０４００】
さらに別の実施形態において、ＩＬ１２ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、及びＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分（または同一のものをコードするポリヌクレオチド）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１２をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０４】
他の実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０５】
他の実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２Ｂポリペプチド、ＩＬ１２Ａポリペプチド、またはＩＬ１２Ｂポリペプチド及びＩＬ１２Ａポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０６】
他の実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３ＡポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０７】
他の実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４０８】
他の実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２Ｂポリペプチド、ＩＬ１２ＡポリペプチドもしくはＩＬ１２Ｂポリペプチド及びＩＬ１２Ａポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３ＡポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４１１】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２Ｂポリペプチド、ＩＬ１２Ａポリペプチド、またはＩＬ１２Ｂポリペプチド及びＩＬ１２Ａポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４１２】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３ＡポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４１３】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）との組み合わせにおいて投与される。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＯＸ４０Ｌタンパク質をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２Ｂポリペプチド、ＩＬ１２ＡポリペプチドもしくはＩＬ１２Ｂポリペプチド及びＩＬ１２Ａポリペプチドの両方をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ＩＬ１２Ｂ及び／またはＩＬ２３Ａポリペプチド（たとえば、ＩＬ２３）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（たとえば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント）をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、またはそれらのいずれかの組み合わせとの組み合わせにおいて投与される。
【０４１５】
別の実施形態において、ＩＬ１２をコードするＯＲＦを含む第１のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）、及びＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするＯＲＦを含む第２のポリヌクレオチド（たとえば、ＲＮＡ、たとえば、ｍＲＮＡ）は、単一製剤または別々の製剤内で、ＣＴＬＡ−４へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、ＰＤ−１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分、またはＰＤ−Ｌ１受容体へ特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合部分との組み合わせにおいて投与される。
【０４１６】
１つの実施形態において、本開示に有用な抗ＰＤ−１抗体（またはその抗原結合部分）は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（「ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）」、ランブロリズマブ、及びＭＫ−３４７５とも称される）は、ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１（プログラム死１またはプログラム細胞死１）を対象とするヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペンブロリズマブは、たとえば、米国特許第８，９００，５８７号に記載される。ペンブロリズマブは、再発または不応性メラノーマ及び進行ＮＳＣＬＣの治療についてＦＤＡにより認可されている。
【０４１７】
別の実施形態において、本開示に有用な抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブ（「ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）」とも称され、以前には５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、またはＯＮＯ−４５３８と称された）は、完全ヒト型ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害抗体であり、この抗体は、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に阻止することにより、抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方調節を遮断する（米国特許第８，００８，４４９号、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２（９）：８４６−５６）。ニボルマブは、腎細胞癌（腎腺癌、またはグラヴィッツ腫瘍）、メラノーマ、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含むさまざまな進行固形腫瘍における活性を示している（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２ａ；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；ＷＯ２０１３／１７３２２３）。
【０４１８】
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＥＤＩ０６８０（以前にはＡＭＰ−５１４）であり、このＭＥＤＩ０６８０は、ＰＤ−１受容体に対するモノクローナル抗体である。ＭＥＤＩ０６８０は、たとえば、米国特許第８，６０９，０８９Ｂ２号に記載される。
【０４１９】
ある特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＢＧＢ−Ａ３１７であり、このＢＧＢ−Ａ３１７は、ヒト化モノクローナル抗体である。ＢＧＢ−Ａ３１７は、米国公開第２０１５／００７９１０９号に記載される。
【０４２０】
ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４であり、このＡＭＰ−２２４は、Ｂ７−ＤＣ  Ｆｃ融合タンパク質である。ＡＭＰ−２２４は、米国公開第２０１３／００１７１９９号に記載される。
【０４２１】
例示的な臨床上の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、米国特許第６，９８４，７２０号に記載されるような、ヒトｍＡｂ  １０Ｄ１（現在イピリムマブと称され、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）として販売されている）である。本発明の方法に有用な別の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６とも称される）である。トレメリムマブは、ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体である。トレメリムマブは、ＷＯ／２０１２／１２２４４４、米国公開第２０１２／２６３６７７号、またはＷＯ公開第２００７／１１３６４８Ａ２号に記載される。
【０４２２】
上記に開示されるように、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を使用して、がんを予防する、及び／または治療することが可能である、すなわち、それは、予防的用途、及び治療的用途を有することが可能である。その結果、本開示は、腫瘍サイズの縮小、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を前記対象へ投与することを含む。
【０４２３】
また本開示は、メモリーＴ細胞応答の誘導を必要とする対象において、それを行う方法を含み、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与する、たとえば、腫瘍内に投与する。１つの実施形態において、対象内のイムノカイン生成における増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、イムノカイン生成における増加は、対照（たとえば、ＰＢＳで治療される）より、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約６倍高い。ある特定の実施形態において、併用療法の腫瘍内投与は、他の投与経路と比較して抗腫瘍効果（たとえば、メモリーＴ細胞応答）の効能を高めることが可能である。
【０４２４】
また本開示は、Ｔ細胞増殖の誘導を必要とする対象において、それを行う方法を含み、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与する、たとえば、腫瘍内に投与することを含む。ある特定の実施形態において、併用療法の腫瘍内投与は、他の投与経路と比較して抗腫瘍効果（たとえば、Ｔ細胞増殖）の効能を高めることが可能である。１つの実施形態において、対象内のＴ細胞増殖は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、対象内のＴ細胞増殖は、対象内の、腫瘍のサイズを縮小させる、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を阻害する。Ｔ細胞増殖は、細胞計数、生死判別染色、光学密度アッセイ、またはフローサイトメトリーなどの技術によるＴ細胞活性化（たとえば、ＣＤ６９、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ２５、ＣＤ７１、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１５４、及びＣＤ１３４）と関連する細胞表面マーカーの検出などの当該技術分野における用途を使用して測定されることが可能である。
【０４２５】
また本開示は、Ｔ細胞の活性化を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を対象へ投与する、たとえば、腫瘍内に投与することを含む。１つの態様において、対象内のＴ細胞の活性化は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の態様において、対象内で活性化されたＴ細胞は、対象内の、腫瘍のサイズを縮小させる、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を阻害する。Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞増殖を測定すること、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）もしくは酵素結合ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔアッセイ（ＥＬＩＳＰＯＴ）によるサイトカイン生成を測定すること、またはフローサイトメトリーなどの技術によるＴ細胞活性化（たとえば、ＣＤ６９、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ２５、ＣＤ７１、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１５４、及びＣＤ１３４）と関連する細胞表面マーカーの検出などの、当該技術分野における用途を使用して測定されることが可能である。ある特定の実施形態において、併用療法の腫瘍内投与は、他の投与経路と比較して抗腫瘍効果（たとえば、Ｔ細胞活性化）の効能を高めることが可能である。
【０４２６】
ある特定の実施形態において、本発明の方法または組成物によって活性化されたＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌセレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態において、本発明の方法または組成物により活性化されたＴ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本発明の方法または組成物により活性化されるＴ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示により活性化されるＴ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０４２７】
他の実施形態において、本開示は、腫瘍内のＴ細胞浸潤の誘導を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を対象へ投与することを含む。１つの実施形態において、対象の腫瘍内のＴ細胞浸潤は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、対象の腫瘍内のＴ細胞浸潤は、対象内の、腫瘍のサイズを縮小させる、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を阻害する。腫瘍内のＴ細胞浸潤は、細胞マーカーについての組織切片化及び染色、腫瘍部位における局所的なサイトカイン生成の測定、またはフローサイトメトリーなどの技術によるＴ細胞表面マーカーの検出などの、当該技術分野における用途を使用して測定されることが可能である。
【０４２８】
いくつかの実施形態において、本発明の方法または組成物により浸潤するＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌセレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態において、本発明の方法または組成物により浸潤するＴ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本発明の方法または組成物により浸潤するＴ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示により浸潤するＴ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０４２９】
他の実施形態において、本開示は、メモリーＴ細胞応答の誘導を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を対象へ投与することを含む。１つの実施形態において、対象内のメモリーＴ細胞応答は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、対象内のメモリーＴ細胞応答は、対象内の、腫瘍のサイズを縮小させる、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を阻害する。メモリーＴ細胞応答は、メモリーＴ細胞と関連するＴ細胞マーカーを測定すること、記憶免疫応答に関連する局所的なサイトカイン生成を測定すること、またはフローサイトメトリーなどの技術によりメモリーＴ細胞表面マーカーを検出することなどの、当該技術分野における用途を使用して測定されることが可能である。
【０４３０】
いくつかの実施形態において、本発明の方法または組成物により誘導されるメモリーＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ６２＋（Ｌセレクチン＋）細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ４０Ｌ＋細胞、ＣＤ１３７＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ２６＋細胞、ＣＤ２７＋細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１５４＋細胞、ＣＤ１３４＋細胞、ＣＸＣＲ３＋細胞、ＣＣＲ４＋細胞、ＣＣＲ６＋細胞、ＣＣＲ７＋細胞、ＣＸＣＲ５＋細胞、Ｃｒｔｈ２＋細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはそれらのいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態において、本発明の方法または組成物によるメモリーＴ細胞は、Ｔｈ１細胞である。他の実施形態において、本発明の方法または組成物によるメモリーＴ細胞は、Ｔｈ２細胞である。他の実施形態において、本開示によるメモリーＴ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞である。
【０４３１】
本開示は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数の増加を必要とする対象において、それを行う方法をさらに提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を対象へ投与することを含む。１つの実施形態において、対象内のＮＫ細胞数における増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の態様において、対象内のＮＫ細胞数における増加は、対象内の、腫瘍のサイズを縮小させる、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を阻害する。対象内のＮＫ細胞数における増加は、ＮＫ細胞表面マーカー（たとえば、ＣＤ３３５／ＮＫｐ４６；ＣＤ３３６／ＮＫｐ４４；ＣＤ３３７／ＮＰｐ３０）、または細胞内ＮＫ細胞マーカー（たとえば、パーフォリン；グランザイム；グラニュライシン）の検出などの、当該技術分野における用途を使用して測定されることが可能である。
【０４３２】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与されない対象内のＮＫ細胞数と比較して、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与は、対象内のＮＫ細胞の総数を増加させる。
【０４３３】
他の実施形態において、併用療法のポリヌクレオチド成分（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上によって形質導入される樹状細胞を投与される対象と比較して、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与は、対象内のＮＫ細胞の総数を増加させる。
【０４３４】
他の実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与は、この併用療法を投与されない対象のＮＫ細胞数と比較して、腫瘍微小環境内の対象中のＮＫ細胞数を増加させる。
【０４３５】
他の実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与は、この併用療法のポリヌクレオチド成分（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上によって形質導入される樹状細胞を投与される対象のＮＫ細胞数と比較して、腫瘍微小環境内の対象中のＮＫ細胞数を増加させる。
【０４３６】
他の実施形態において、腫瘍微小環境内のＮＫ細胞の濃度は、対象内のＮＫ細胞の総数が同一のままでありながら増加する。
【０４３７】
ある特定の実施形態において、ＮＫ細胞数は、対照（たとえば、生理的食塩水または対照ｍＲＮＡ）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍増加する。特定の実施形態において、ＮＫ細胞数は、対照（たとえば、生理的食塩水または対照ｍＲＮＡ）と比較して、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与後に少なくとも約２倍増加する。
【０４３８】
本開示は、免疫サイトカイン（たとえば、インターロイキン２）生成の増加を必要とする対象において、それを行う方法をさらに提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を対象へ投与することを含む。１つの実施形態において、対象内のイムノカイン生成における増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、イムノカイン生成における増加は、対照（たとえば、ＰＢＳで治療される）より、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約６倍高い。
【０４３９】
本開示は、ＩＬ−２の増加を必要とする対象において、それを行う方法をさらに提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与し、ＩＬ−２の増加を必要とする対象において、それを行うことを含む。
【０４４０】
１つの実施形態において、対象内のＩＬ−２の増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。別の実施形態において、併用療法の投与によるＩＬ−２発現における増加は、対照（たとえば、ＰＢＳで治療される）より、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約６倍高い。ＩＬ−２発現は、ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴアッセイなどの、いずれかの利用可能な技術を使用して測定されることが可能である。
【０４４１】
また本開示は、ＩＬ−４の増加を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与し、ＩＬ−４の増加を必要とする対象において、それを行うことを含む。
【０４４２】
いくつかの実施形態において、対象内のＩＬ−４の増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。１つの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によるＩＬ−４発現における増加は、対照（たとえば、ＰＢＳで治療される）より、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約６倍高い。ＩＬ−４発現は、ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴアッセイなどの、いずれかの利用可能な技術を使用して測定されることが可能である。
【０４４３】
また本開示は、ＩＬ−２１の増加を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与し、ＩＬ−２１の増加を必要とする対象において、それを行うことを含む。１つの態様において、対象内のＩＬ−２１の増加は、対象内の抗腫瘍免疫応答を対象とする。
【０４４４】
ある特定の実施形態において、本開示は、腫瘍に対する、適応免疫応答、先天性免疫応答、または適応免疫応答及び先天性免疫応答の両方を誘導することを含む方法を含み、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与することを含む。
【０４４５】
ある特定の実施形態において、本開示は、腫瘍を含む対象内のＩＦＮγ発現を増加させる方法をも対象とし、この方法は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）を投与することを含む。
【０４４６】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、腫瘍のサイズは、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療する前の腫瘍の元のサイズに関して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約１００％縮小されることが可能である。
【０４４７】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、腫瘍の成長は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療する前の腫瘍の元の成長速度に関して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約１００％阻害されることが可能である。
【０４４８】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、生存率は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療されていない対象集団の生存率に関して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約１００％増加することが可能である。
【０４４９】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療される対象における生存率は、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療されていない対象集団の生存率より、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍または少なくとも１０倍高いことが可能である。
【０４５０】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療されている治療の必要な対象集団における生存率は、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％であることが可能である。
【０４５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療されている治療の必要な対象集団における応答率（たとえば、部分応答または完全応答）は、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％であることが可能である。
【０４５２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療されている治療の必要な対象集団における完全応答率または完全寛解率は、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％であることが可能である。
【０４５３】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）が１回、２回、３回、またはそれ以上、約０．５ｍｇ  ｍＲＮＡ／ｋｇである用量で投与されるときに、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）によって治療された対象についての完全寛解率は、約１００％である。
【０４５４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与後に腫瘍成長の阻害は、完全寛解（すなわち、完全応答）、奏効または部分応答における改善（たとえば、生存期間における増加、腫瘍サイズなど）、腫瘍負荷の低下、またはそれらの組み合わせをもたらすことが可能である。
【０４５５】
１つの実施形態において、本明細書に開示される併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）の投与は、完全寛解をもたらす。
【０４５６】
いくつかの実施形態において、併用療法（たとえば、少なくとも２つのポリヌクレオチド、そこで各ポリヌクレオチドは免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）におけるポリヌクレオチドのうちの１つ以上は、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法における、すべてのポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）は、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。
【０４５７】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドは、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上におけるヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％、化学的に改変される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上において化学的に修飾されたヌクレオシドは、ウリジン、アデニン、シトシン、グアニン、及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【０４５８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上におけるウリジンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％、化学的に改変される。
【０４５９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上におけるアデノシンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％、化学的に改変される。
【０４６０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上におけるシチジンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％、化学的に改変される。
【０４６１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上におけるグアノシンヌクレオシドは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％、化学的に改変される。
【０４６２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２結合部位、たとえば、ｍｉＲ−１２２−３ｐ及び／またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ａａｃｇｃｃａｕｕａｕｃａｃａｃｕａａａｕａ（配列番号１２１２）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、そこでｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２へ結合する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｕｇｇａｇｕｇｕｇａｃａａｕｇｇｕｇｕｕｕｇ（配列番号１２１４）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、そこでｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２へ結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）は、異なるｍｉＲＮＡ結合部位、または同一のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０４６３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、表２０に列挙される配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む。
【０４６４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、表２１または表２２に列挙される配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲ内に挿入される。
【０４６５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、ｍｉＲＮＡ結合部位に融合されるスペーサー配列を含む。いくつかの実施形態において、スペーサー配列は、少なくとも約１０個のヌクレオチド、少なくとも約１５個のヌクレオチド、少なくとも約２０個のヌクレオチド、少なくとも約２５個のヌクレオチド、少なくとも約３０個のヌクレオチド、少なくとも約３５個のヌクレオチド、少なくとも約４０個のヌクレオチド、少なくとも約４５個のヌクレオチド、少なくとも約５０個のヌクレオチド、少なくとも約５５個のヌクレオチド、少なくとも約６０個のヌクレオチド、少なくとも約６５個のヌクレオチド、少なくとも約７０個のヌクレオチド、少なくとも約７５個のヌクレオチド、少なくとも約８０個のヌクレオチド、少なくとも約８５個のヌクレオチド、少なくとも約９０個のヌクレオチド、少なくとも約９５個のヌクレオチド、または少なくとも約１００個のヌクレオチドを含む。
【０４６６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、５’末端キャップ構造を含む。いくつかの実施形態において、５’末端キャップは、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、２−アジドグアノシン、Ｃａｐ２、Ｃａｐ４、５’メチルＧキャップ、またはそれらの類似体である。
【０４６７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、３’ポリ−Ａ尾部を含む。
【０４６８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０４６９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、コドン最適化される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、キメラである。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、環状である。
【０４７０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法におけるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上は、送達剤とともに製剤化される。いくつかの実施形態において、送達剤は、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣物、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む。いくつかの実施形態において、送達剤は、脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、アミノアルコール脂質、ＫＬ２２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を含む。
【０４７１】
いくつかの実施形態において、送達剤は、式（Ｉ）
【化１５】
2019519516.tif 000016
を有する化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含み、そこで
Ｒ１は、Ｃ５−２０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”、またはＲ２及びＲ３からなる群から独立して選択され、またはＲ２及びＲ３は、これらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、そこでＱは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され、
各Ｒ５は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、
各Ｒ”は、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｒ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
各Ｙは、独立したＣ３−６炭素環であり、
各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ただし、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４もしくは５であるときに−Ｎ（Ｒ）２ではない、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２であるときに５員環、６員環、もしくは７員環ヘテロシクロアルキルではない。
【０４７２】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＡ）
【化１６】
2019519516.tif 000017
またはその塩もしくは立体異性体であり、そこで
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでｎは、１、２、３、４、または５であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０４７３】
式（Ｉ）または式（ＩＡ）のいくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。
【０４７４】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＩ）
【化１７】
2019519516.tif 000018
またはその塩もしくは立体異性体であり、そこで
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ４は、非置換Ｃ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここでｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０４７５】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、化合物１から化合物１４７、ならびにその塩及び立体異性体から選択される。
【０４７６】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＩａ）、
【化１８】
2019519516.tif 000019
またはその塩もしくは立体異性体のものである。
【０４７７】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＩｂ）、
【化１９】
2019519516.tif 000020
またはその塩もしくは立体異性体のものである。
【０４７８】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＩｃ）もしくは（ＩＩｅ）、
【化２０】
2019519516.tif 000021
またはその塩もしくは立体異性体のものである。
【０４７９】
式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）または式（ＩＩｅ）のいくつかの実施形態において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択され、そこでＱ、Ｒ及びｎは、上記に定義されたとおりである。
【０４８０】
いくつかの実施形態において、送達剤内の化合物は、式（ＩＩｄ）、
【化２１】
2019519516.tif 000022
またはその塩もしくは立体異性体のものであり、そこで
Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３、及び４から選択され、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ５、Ｒ６及びｍは、請求項７９または８０に定義されたとおりである。
【０４８１】
式（ＩＩｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。式（ＩＩｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、またはＣ９アルキルである。式（ＩＩｄ）のいくつかの実施形態において、ｍは、５、７、または９である。式（ＩＩｄ）のいくつかの実施形態において、各Ｒ５は、Ｈである。式（ＩＩｄ）のいくつかの実施形態において、各Ｒ６は、Ｈである。
【０４８２】
いくつかの実施形態において、送達剤は、リン脂質をさらに含む。いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６：０ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及び
それらの混合物、
からなる群から選択される。
【０４８３】
いくつかの実施形態において、リン脂質は、
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１６：０  ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜１８：０  ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜０２：０ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１４：０  ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：０  ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：１  ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜１８：２  ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１６：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１４：０  ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１６：０  ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：１  ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜１８：２  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２０：４  ＰＣ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０〜２２：６  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１４：０  ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１６：０  ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：１〜１８：０  ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：１  ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−パルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１６：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：１  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜１８：２  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２０：４  ＰＥ）、
１−ステアロイル−２−ドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１８：０〜２２：６  ＰＥ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、及び
それらのいずれかの組み合わせ、
からなる群から選択される。
【０４８４】
いくつかの実施形態において、送達剤は、構造脂質をさらに含む。いくつかの実施形態において、構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンぺステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ−トコフェロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
【０４８５】
いくつかの実施形態において、送達剤は、ＰＥＧ脂質をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
【０４８６】
いくつかの実施形態において、送達剤は、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９、
１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））、
からなる群から選択されるイオン性脂質をさらに含む。
【０４８７】
いくつかの実施形態において、送達剤は、四級アミン化合物をさらに含む。いくつかの実施形態において、四級アミン化合物は、
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、
１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、
Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、
Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、
Ｎ−（１，２−ジオレオイルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬｅＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＳＴＡＰ）、
１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＰＴＡＰ）、
１，２−ジリノレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＴＡＰ）、
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＭＴＡＰ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳｅＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭｅＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯｅＰＣ）、
１，２−ジ−（９Ｚ−テトラデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１４：１  ＥＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（１６：０−１８：１  ＥＰＣ）、及び
それらのいずれかの組み合わせ、
からなる群から選択される。
【０４８８】
本開示は、（ｉ）本明細書に開示されるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上、及び医薬として許容され得る担体、または（ｉｉ）上記に開示される送達剤のうちの１つにおいて製剤化される本明細書に開示されるポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１つ以上、を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物は、腫瘍サイズの縮小もしくは減少、または腫瘍成長の阻害を必要とする対象において、それを行うときに使用する組成物である。
【０４８９】
本開示は、少なくとも２個のｍＲＮＡであって、
（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む１つ以上のｍＲＮＡ、
（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む１つ以上のｍＲＮＡ、及び
（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む１つ以上のｍＲＮＡ、ならびに
から選択される、ｍＲＮＡ、及び
医薬として許容され得る担体を含む医薬組成物を提供する。
【０４９０】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、免疫応答プライマーポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームをそれぞれ含む２個のｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡ、（ｉｉ）免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡを含む。
【０４９１】
本明細書に開示される医薬組成物のいくつかの実施形態において、免疫応答プライマーポリペプチドは、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ２３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ３６ガンマ）、インターロイキン１８（ＩＬ１８）、またはそれらの組み合わせを含む。本明細書に開示される医薬組成物のいくつかの実施形態において、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、分化クラスター８０（ＣＤ８０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、またはそれらの組み合わせを含む。本明細書に開示される医薬組成物のいくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死−リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、または細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を阻害する。
【０４９２】
いくつかの特定の実施形態において、医薬組成物は、
（ａ）（ｉ）５’キャップを含む５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、
（ｉｉ）本明細書に開示される少なくとも１つのポリペプチド（たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、または抗ＰＤ−Ｌ１）をコードし、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含むオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの停止コドン、
（ｉｖ）マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、
（ｖ）３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）、
（ｖｉ）ポリ−Ａ尾部、
を含むｍＲＮＡ、及び
（ｂ）脂質ナノ粒子担体、
を含む。
【０４９３】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、２、３、４、５、６またはそれ以上のｍＲＮＡを含み、そこで各ｍＲＮＡは、本明細書に開示される少なくとも１つのポリペプチド（たとえば、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ３６ガンマ、ＴＬＲ４、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、または抗ＰＤ−Ｌ１）をコードする少なくとも１つのＯＲＦを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物におけるｍＲＮＡは、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、糖、主鎖、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物における各ｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子担体内で製剤化される。いくつかの実施形態において、医薬組成物における各ｍＲＮＡは、異なる脂質ナノ粒子担体内で製剤化される。
【０４９４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法に使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）は、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、このようなｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、たとえば、筋肉内の、皮下の、腫瘍内の、または皮内の送達であることが可能である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物は、皮下に、静脈内に、筋肉内に、関節内に、滑液嚢内に、胸骨内に、くも膜下腔内に、肝臓内に、病変内に、頭蓋内に、脳室内に、経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、頬側に、膣に、または埋込み型リザーバーを介して投与される。
【０４９５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法において使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）は、がんを治療するために、それを必要とする対象に投与されることが可能である。いくつかの実施形態において、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、咽頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、咽頭及び下咽頭癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底及び扁平細胞皮膚癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、がん治療により生じる二次がん、ならびにそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
【０４９６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法において使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）は、ポンプ、パッチ、薬物リザーバー、ショートニードル装置、シングルニードル装置、マルチプルニードル装置、マイクロニードル装置、ジェット式注射装置、バリスティックパウダー／粒子送達装置、カテーテル、ルーメン、クライオプローブ、カニューレ、マイクロカニューレを備える装置、または熱、ＲＦエネルギー、電流を利用する装置、あるいはそれらのいずれかの組み合わせにより送達されることが可能である。
【０４９７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法において使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）の有効量は、約０．１０ｍｇ／ｋｇから約１，０００ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法において使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）は、ヒト対象に投与される。
【０４９８】
いくつかの実施形態において、そこで本明細書に開示される組成物（たとえば、本明細書に開示される併用療法において使用されるポリヌクレオチド、またはこれらのポリヌクレオチドを含む医薬組成物）の投与は、組成物のポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）のうちの１個のみの投与からなる単剤療法より、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、または少なくとも５倍より良く、腫瘍のサイズを縮小させる、または腫瘍の成長を阻害する。
【０４９９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法の有効性は、併用する各ポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）の５μｇの用量をマウスに投与するときにマウス内の、ＭＣ３８（Ｃ）に由来する腫瘍のサイズ（たとえば、腫瘍体積（ｍｍ３））における縮小、またはＭＣ３８（Ｃ）に由来する腫瘍の成長の阻害を測定することにより決定されることが可能である。
【０５００】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法の有効性は、各ポリヌクレオチド（たとえば、ｍＲＮＡ）の５μｇの用量をマウスに投与するときにマウス内の、ＭＣ３８（Ｍ）に由来する腫瘍のサイズ（たとえば、腫瘍体積（ｍｍ３））における縮小、またはＭＣ３８（Ｍ）に由来する腫瘍の成長の阻害を測定することにより決定されることが可能である。
【０５０１】
いくつかの実施形態において、生存率または体重などの、有効性の追加基準を使用することが可能である。腫瘍サイズにおける縮小、腫瘍の成長の阻害、生存率の向上、体重における増加は、腫瘍治療における有効性を示す。
【０５０２】
また本開示は、本明細書に開示される組成物、及び本明細書に開示される方法（たとえば、治療方法）に従い使用する使用説明書のいずれかを含むキットを提供する。
【０５０３】
ＩＩＩ．例示の併用療法成分
本開示のいくつかの態様では、本明細書に開示される併用療法（例えば、少なくとも２個のポリヌクレオチドであって、各々のポリヌクレオチドは、免疫応答プライマーポリペプチド、免疫応答共刺激シグナルポリペプチド、またはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む）は、以下に記載される成分のうちの１つ以上を含み得る。以下のセクションで詳述される成分は、限定されるものではなく、（ｉ）当該技術分野において既知である他の免疫応答プライマーポリペプチド（例えば、ＩＬ３６）をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉ）当該技術分野において既知である他の免疫応答共刺激シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）当該技術分野において既知である他のチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または（ｉｖ）それらの組み合わせを使用して、本明細書に開示される併用療法を調製し、方法、例えば、本開示に提供される治療方法を実施することができる。
【０５０４】
Ａ．細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、１つ以上の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、すなわち、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のＯＲＦを含むポリヌクレオチドを含む。
【０５０５】
ＣＴＬＡ−４は、免疫調節分子のＣＤ２８−Ｂ７免疫グロブリンスーパーファミリーの一員である。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞の表面上で発現され、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達の下流のＴ細胞活性化を抑制することができる。（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｃｅｌｌ  ７１：１０６５−１０６８（１９９２）、Ｋｒｕｍｍｅｌ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：４５９−４６５（１９９５））。ＣＴＬＡ−４は、より高い親和性及び結合力で抗原提示細胞（ＡＰＣ）と結合することによって、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上でＢ７リガンドであるＣＤ８０、及びＣＤ８６についてＴ細胞共刺激ＣＤ２８に打ち勝つとも考えられている（Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７４：５６１−５６９（１９９１））。ＣＴＬＡ−４の生理学的役割は、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）を抑制するだけでなく、免疫抑制性調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の機能も増加させる（Ｗｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２：２７１−５（２００８））。
【０５０６】
ヒトＣＴＬＡ−４（配列番号１）の標準配列、アイソフォーム１は、２２３アミノ酸長である。アイソフォーム１は、位置１〜３５でシグナルペプチドを含む。成熟形態は、残基３６〜２２３（配列番号３）を含み、そのうち残基３６〜１６１は、細胞外ドメイン（配列番号２）であり、残基１６２〜１８２は、膜貫通ヘリックスであり、残基１８３〜２２３は、細胞内ドメインである。４つのさらなるアイソフォームが文献に記載されている。
【０５０７】
アイソフォーム２（配列番号４）は、ｓｓ−ＣＴＬＡ−４としても知られ、５６アミノ酸長であり、残基３８〜残基２０４の領域が欠如している。アイソフォーム３（配列番号５）は、５８アミノ酸長であり、残基３８〜残基２０４の領域も欠如している。加えて、アイソフォーム３は、残基２０５〜２２３の代替配列を有する。アイソフォーム４（配列番号６）は、７９アミノ酸長であり、残基５９〜残基２０４の領域が欠如しており、残基２０５〜残基２２３の代替配列を有し、Ｃ５８Ｓ点突然変異を含む。アイソフォーム５（配列番号７）は、１７４アミノ酸長であり、残基１７５〜残基２２３の配列が欠如しており、残基１５３〜残基１７４の代替配列を含む。
【０５０８】
抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードするポリヌクレオチド：本開示は、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドを提供する。本明細書で使用する場合、「抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書に開示される併用療法で使用することができる、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチド（例えば、１つ以上のｍＲＮＡ）を指す。
【０５０９】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、表１に記載されるタンパク質配列またはＣＴＬＡ−４に特異的に結合するその部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む。
【０５１０】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、表１に記載されるＤＮＡ配列の完全配列またはサブ配列に対応する１つ以上のｍＲＮＡを含み、前記サブ配列は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合するポリペプチドをコードする。
【表１−１】
2019519516.tif 000023
【表１−２】
2019519516.tif 000024
【表１−３】
2019519516.tif 000025
【表１−４】
2019519516.tif 000026
【表１−５】
2019519516.tif 000027
【表１−６】
2019519516.tif 000028
【０５１１】
表１に提供される抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド配列に加えて、本明細書に開示される方法は、米国特許第ＵＳ８０１７１１４号及び同第ＵＳ６９８４７２０号、国際公開第ＷＯ２００００３７５０４号及び同第ＷＯ２００７１１３６４８号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４０１０５９１４号（ヒト化抗ＣＴＬＡ−４）、米国特許第ＵＳ８６９７８４５号（標的可溶性ＣＴＬＡ−４）、米国特許第号ＵＳ７０３４１２１、米国特許第ＵＳ８８８３９８４号及び同第ＵＳ７８２４６７９号、米国特許第ＵＳ６６８２７３６号、または国際公開第ＷＯ２０１４２０９８０４号（二重特異性抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１）に開示される抗ＣＴＬＡ−４抗体及びその抗原結合部分のいずれかの配列を用いて実施することができ、これらの全ては、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５１２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ＣＴＬＡ−４、例えば、哺乳類ＣＴＬＡ−４ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態において、哺乳類ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、ヒトＣＴＬＡ−４ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号２〜７に記載されるアミノ酸配列を含む。
【０５１３】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするｍＲＮＡは、表１に記載されるアミノ酸配列または表１に記載されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列によってコードされるタンパク質は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合することができる。
【０５１４】
他の実施形態では、本開示に有用なＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、１つ以上の保存的置換を有する、表１に記載されるアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＣＴＬＡ−４への抗体またはその抗原結合部分の結合に影響を与えない、すなわち、抗体またはその抗原結合部分は、置換後にＣＴＬＡ−４に結合する。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は、少なくとも１個の非保存的置換を含む。
【０５１５】
他の実施形態では、本開示に有用なＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列（すなわち、ｍＲＮＡ）は、表１に記載される核酸配列またはそのサブ配列に少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含む。
【０５１６】
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、本開示に有用なＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするコドン最適化配列、例えば、表１からの核酸配列またはそのサブ配列に対応する、または表１からの抗ＣＴＬＡ−４ポリペプチド配列をコードする核酸配列に対応するコドン最適化核酸配列、またはそれらの組み合わせ（例えば、表１に開示されるＣＤＲの組み合わせをコードするいくつかの抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドサブ配列を含むコドン最適化配列）を含む。
【０５１７】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、（ｉ）配列番号９、２８、または３９の重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１、２９、または４１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合部分、または（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬを含む抗体または抗原結合部分と同じＣＴＬＡ−４エピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５１８】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、（ｉ）配列番号９、２８、または３９のＶＨ、及び配列番号１１、２９、または４１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合部分、または（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬを含む抗体またはその抗原結合部分によるＣＴＬＡ−４結合を競合的に阻害する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５１９】
（ｉ）配列番号９、２８、または３９のＶＨ、及び配列番号１１、２９、または４１のＶＬを含むＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、または（ｉｉ）配列番号１８３のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬを含む抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５２０】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供し、抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１７、３３、または４７、または配列番号１８９に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲｌ）アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１８、３４、または４８、または配列番号１９０に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＬ相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１９、３５、または４９、または配列番号１９１に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＬ相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号１４、３０、または４４、または配列番号１８６に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲｌ）アミノ酸配列、（ｖ）配列番号１５、３１、または４５、または配列番号１８７に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列、（ｖｉ）配列番号１６、３２、または４６、または配列番号１８８に同一であるかまたはそれに対して４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列、（ｖｉｉ）それらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、置換は、保存的置換である。他の態様では、置換は、非保存的置換である。
【０５２１】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、（ｉ）配列番号１７、１８、及び１９；配列番号３３、３４、及び３５；配列番号４７、４８、及び４９；または配列番号１８９、１９０、及び１９１にそれぞれ同一であるかまたはそれに対して１つ以上のＶＬ−ＣＤＲにおける４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いてそれぞれ同一であるＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、及びＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＶＬ、（ｉｉ）配列番号１４、１５、及び１６；配列番号３０、３１、及び３２；配列番号４４、４５、及び４６；または配列番号１８６、１８７、及び１８８にそれぞれ同一であるかまたはそれに対して１つ以上のＶＨ−ＣＤＲにおける４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いてそれぞれ同一であるＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、及びＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＶＨ、または（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。いくつかの態様では、置換は、保存的置換である。他の態様では、置換は、非保存的置換である。
【０５２２】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、１４、１５、及び１６；または配列番号３３、３４、３５、３０、３１、及び３２；または配列番号４７、４８、３９、４４、４５、及び４６；または配列番号１８９、１９０、１９１、１８６、１８７、及び１８８にそれぞれ同一であるかまたはそれに対して１つ以上のＣＤＲにおける４、３、２、または１個のアミノ酸置換を除いてそれぞれ同一であるＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、ＶＬ−ＣＤＲ３、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、及びＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ及びＶＨを含む抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。いくつかの態様では、置換は、保存的置換である。他の実施形態では、置換は、非保存的置換である。
【０５２３】
ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＶＬ及びＶＨを含み、ＶＬは、配列番号１１、配列番号２９、配列番号４１、または配列番号１８５に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５２４】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＶＬ及びＶＨを含み、ＶＨは、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４４、または配列番号１８６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合部分をコードし、ポリヌクレオチド中の少なくとも１個のヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドである、１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５２５】
ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＶＬ及びＶＨを含み、
（ｉ）ＶＬは、配列番号１１、配列番号２９、または配列番号４１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及びＶＨは、配列番号９、配列番号２８、または配列番号３９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１８５に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１８３に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５２６】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＶＬ及びＶＨを含み、
（ｉ）ＶＬは、配列番号１１、配列番号２９、または配列番号４１のアミノ酸配列からなるまたはそれから本質的になり、ＶＨは、配列番号９、配列番号２８、または配列番号３９のアミノ酸配列からなるまたはそれから本質的になるか、または
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１８５のアミノ酸配列からなるまたはそれから本質的になり、ＶＨは、配列番号１８３のアミノ酸配列からなるまたはそれから本質的になる
抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上のｍＲＮＡ）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５２７】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする少なくとも１個のｍＲＮＡはさらに、重鎖定常領域またはその断片をコードする。いくつかの実施形態において、重鎖定常領域またはその断片は、ＩｇＧ定常領域である。いくつかの実施形態において、重鎖ＩｇＧ定常領域は、ＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、及びＩｇＧ４定常領域から選択される。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。
【０５２８】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする少なくとも１個のｍＲＮＡはさらに、軽鎖定常領域またはその断片をコードする。いくつかの実施形態において、軽鎖定常領域は、カッパ定常領域及びラムダ定常領域からなる群から選択される。
【０５２９】
本開示は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣは、配列番号２０または配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、ＬＣは、配列番号２２または配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、２、３、４個以上）を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドも提供する。
【０５３０】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、完全抗体、抗体バリアント、抗体断片、またはそれらの組み合わせである。他の実施形態では、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、抗体断片を含む、それからなる、またはそれから本質的になり、抗体断片は、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、またはｓｃ（Ｆｖ）２である。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、イントラボディ、バイシストロン性抗体、疑似バイシストロン性抗体、単一ドメイン抗体、または二重特異性抗体である。いくつかの態様では、ＣＴＬＡ−４は、ヒトＣＴＬＡ−４である。
【０５３１】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に対する抗体またはその抗原結合部分の結合は、（ｉ）腫瘍のサイズを減少する、（ｉｉ）腫瘍の成長を阻害する、（ｉｉｉ）対象における腫瘍細胞増殖を減少する、（ｉｖ）生存率を増加する、または（ｖ）それらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、腫瘍は、メラノーマ腫瘍、肺癌腫瘍、膀胱癌腫瘍、大腸癌腫瘍、及び前立腺癌腫瘍からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、メラノーマ腫瘍であり、メラノーマ腫瘍は、転移性メラノーマ腫瘍である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、肺癌腫瘍であり、肺癌腫瘍は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍または小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）腫瘍である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、前立腺癌腫瘍であり、前立腺癌腫瘍は、転移性ホルモン不応性前立腺癌腫瘍である。いくつかの実施形態において、対象は、ヒトである。
【０５３２】
いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０、配列番号２４、配列番号２２、または配列番号２６に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列、そのサブ配列、またはそれらの組み合わせによってコードされる。いくつかの実施形態において、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６のうちの少なくとも１つ、または（ｉ）１、２、または３個のＶＨ−ＣＤＲ、（ｉｉ）１、２、または３個のＶＬ−ＣＤＲ、（ｉｉｉ）ＶＨ、（ｉｖ）ＶＬ、（ｖ）ＨＣ、（ｖｉ）ＬＣ、（ｖｉｉ）その断片；または（ｉｘ）それらの組み合わせをコードするそのサブ配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列であり、前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１個のＣＴＬＡ−４分子に結合する。
【０５３３】
１つの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＶＨをコードするＯＲＦ、及び／またはＶＬをコードするＯＲＦをコードし、
ＶＨをコードするＯＲＦは、
（ｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１４またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２２に対する少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１５、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２０、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２３、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２５に対する少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１６、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１７、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１９に対する少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｖ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ３、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ４、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ６、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２１に対する少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ７、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ９、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１３、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ２４に対する少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するか、または
（ｖｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ５、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ８、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１０、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１１、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１２、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ１−ＣＯ１８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｖｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１１に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｖｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２１またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２３に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｖｉｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ３、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ４、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ７、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１５、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１６に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｉｘ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ５、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ９、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１４に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｘ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ６、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１０、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１３、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１７、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１８に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｘｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ８、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１２、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ１９に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｘｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２０、Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２２、またはＴｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２４に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、または
（ｘｉｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＩｇＧ２−ＣＯ２５に対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、
及び／または
ＶＬをコードするＯＲＦは、
（ｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１６に対して少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ３、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ７、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１０、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１２、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１３、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１９、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２４、またはＴｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２５に対して少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｉｉｉ）Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ５、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２０、またはＴｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２２に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、
（ｉｖ）Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ４、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ５、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ９、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１１、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１４、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１５、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１７、Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２１、またはＴｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２３に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、または
（ｖ）Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ８またはＴｒｅｍｅ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１８に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、ＶＨ及びＶＬは、抗原、例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を形成する。
【０５３４】
別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＶＨをコードするＯＲＦ及びＶＬをコードするＯＲＦを含み、
ＶＨをコードするＯＲＦは、
（ｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ５、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１１、またはＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２３に対して少なくとも８４％、に対する少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ４、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ７、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１０、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１４、またはＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２０に対する少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ３、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ７８、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１２、またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１７に対する少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｖ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１８、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１９、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２２、またはＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２４に対する少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ９、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１６、またはＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２５に対する少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１３、またはＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一、（ｖｉｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ６に対する少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、または
（ｖｉｉｉ）ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１５に対する少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有し、及び／または
ＶＬをコードするＯＲＦは、
（ｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ３に対して少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ９またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２２に対する少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｉｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ７またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１８に対する少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｉｖ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ６、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１０、またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２５に対して少なくとも８４％、に対する少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ４、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１３、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１４、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１５、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１６、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２３、またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２４に対する少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ５、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ８、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１１、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１２、ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１９、またはＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２１に対する少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、
（ｖｉｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ２０に対する少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性、または
（ｖｉｉｉ）ＩＰＩ−ＬＣ−Ｖａｒ−ＣＯ１７に対する少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０５３５】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、配列最適化されている。ある特定の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、当該技術分野において既知である技術によって最適化される。
【０５３６】
他の実施形態では、本明細書に開示される配列最適化されている抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド配列は、対応する野生型ヌクレオチド酸配列及び他の公知の配列最適化されているヌクレオチド配列とは異なっており、例えば、これらの配列最適化されている核酸は、独自の組成上の特徴を有する。図８０Ａ〜８８Ｂを参照されたい。
【０５３７】
いくつかの実施形態において、配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、例えば、トレメリムマブまたはイピリムマブ、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする）中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）は、参照野生型ヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）に対して改変される（例えば、減少される）。そのような配列は、ウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列と呼ばれる。ヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量の百分率（％）は、配列中のウラシルまたはチミンの数をヌクレオチドの総数で割って、１００を乗じることによって決定することができる。いくつかの実施形態において、配列最適化されているヌクレオチド配列は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも低いウラシルまたはチミン含有量を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも多く、有益な効果、例えば、参照野生型配列と比較した場合に発現の増加、及び／またはトール様受容体（ＴＬＲ）応答の減少をなお維持している。
【０５３８】
野生型トレメリムマブＶＨのウラシルまたはチミン含有量は、約１７％である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１７％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、または６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１％、２％、または３％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０５３９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１４％〜１８％、１４％〜１９％、１４％〜２０％、１３％〜１８％、１３％〜１９％、１３％〜２０％、１２％〜１８％、１２％〜１９％、１２％〜２０％、１４％〜１６％、または１５％〜１６％である。
【０５４０】
本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０５４１】
「野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するウラシルまたはチミン含有量」という語句は、配列最適化されている核酸中のウラシルまたはチミンの数を対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミンの総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＷＴまたは％ＴＷＴと本明細書で略される。
【０５４２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【０５４３】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、８５％〜１１０％、８０％〜１１０％、７５％〜１１０％、８５％〜１０５％、８０％〜９５％、７０％〜８５％、６５％〜９０％、６５％〜９５％、または７０％〜９０％である。
【０５４４】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約８０〜約９５％である。
【０５４５】
ウラシルまたはチミン理論的最小値に対するウラシルまたはチミン含有量は、配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミンの数を、仮説ヌクレオチド配列（仮説配列中の全コドンが、可能な限り低いウラシルまたはチミン含有量を有する同義のコドンと置換される）中のウラシルまたはチミンの総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＴＭまたは％ＴＴＭと本明細書で略される。
【０５４６】
ＤＮＡの場合、チミンがウラシルの代わりに存在し、Ｕが現れる場所でＴに置換することが認識される。従って、ＲＮＡに対する、例えば、％ＵＴＭ、％ＵＷＴ、または％ＵＴＬ、に関する全ての本開示は、ＤＮＡに対する％ＴＴＭ、％ＴＷＴ；または％ＴＴＬにも同様に適用可能である。
【０５４７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０５４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、または１３０％より高い。
【０５４９】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２０％〜１５０％、１２１％〜１５５％、１２０％〜１６０％、１１９％〜１６５％、１１８％〜１７０％、１１７％〜１５５％、１１６％〜１６０％、または１１０％〜１６０％である。
【０５５０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１１８〜約１５１％である。
【０５５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０５５２】
フェニルアラニンは、ＵＵＣまたはＵＵＵによってコードすることができる。従って、ＵＵＵによってコードされるフェニルアラニンがＵＵＣによって置換される場合でも、同義のコドンは、ウラシルペア（ＵＵ）をなお含有する。従って、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。例えば、ポリペプチド、例えば、野生型トレメリムマブＶＨが、例えば、３個のフェニルアラニンを有する場合、ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列、例えば、野生型トレメリムマブＶＨが含み得るウラシルペア（ＵＵ）の絶対最小数は、３である。
【０５５３】
野生型トレメリムマブＶＨは、４個のウラシルペア（ＵＵ）、及び１ウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０５５４】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブＶＨの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０５５５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、１〜３個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０５５６】
「野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）に対するウラシルペア（ＵＵ）」という語句は、配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数を、対応する野生型ヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＵｗｔと本明細書で略される。
【０５５７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、２７５％未満、２５０％未満、２００％未満、１５０％未満、１４０％未満、１３０％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、または５０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０５５８】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、５０％〜２７５％の％ＵＵｗｔを有する。
【０５５９】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０５６０】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブＶＨをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、または約７１％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６０〜約８０％、約６５〜約７５％、約６１〜約７８％、または約６１〜約７７％である。
【０５６１】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも約５２％、少なくとも約５３％、少なくとも約５４％、少なくとも約５５％、少なくとも約５６％、少なくとも約５７％、少なくとも約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、または約６６％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０〜約８０％、約６２〜約８０％、約６３〜約７９％、または約６８〜約７６％である。
【０５６２】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８１％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５％〜約９９％、約９０〜約９７％、または約９１〜約９６％である。
【０５６３】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、または少なくとも１０６％である。
【０５６４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、トレメリムマブＶＨをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０５６５】
野生型トレメリムマブＶＬのウラシルまたはチミン含有量は、約２４％である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２４％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、または１４％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、８％、９％、または１０％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０５６６】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１４％〜１８％、１４％〜１９％、１４％〜２０％、１３％〜１８％、１３％〜１９％、１３％〜２０％、１２％〜１８％、１２％〜１９％、１２％〜２０％、１４％〜１６％、または１５％〜１６％である。
【０５６７】
本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０５６８】
「野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するウラシルまたはチミン含有量」という語句は、配列最適化されている核酸中のウラシルまたはチミンの数を、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミンの総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＷＴまたは％ＴＷＴと本明細書で略される。
【０５６９】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５０％より高い、５２％より高い、５４％より高い、５６％より高い、５８％より高い、６０％より高い、６２％より高い、または６４％より高い。
【０５７０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５０％〜８０％、５５％〜８０％、６０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜７０％、６０％〜８５％、６０％〜９０％、６０％〜９５％、または７０％〜９０％である。
【０５７１】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約５５〜約７５％である。
【０５７２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、２１５％より低い、２１０％より低い、２０５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３５％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０５７３】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、または１３０％より高い。
【０５７４】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２０％〜１７０％、１２１％〜１６５％、１２０％〜１６０％、１１９％〜１６５％、１１８％〜１７０％、１１７％〜１５５％、１１６％〜１６０％、または１１０％〜１６０％である。
【０５７５】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１２７〜約１６３％である。
【０５７６】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０５７７】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。野生型トレメリムマブＶＬは、５個のフェニルアラニンを有するため、ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列、例えば、野生型トレメリムマブＶＬが含み得るウラシルペア（ＵＵ）の絶対最小数は、それぞれ、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１である。
【０５７８】
野生型トレメリムマブＶＬは、７個のウラシルペア（ＵＵ）、及び４個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０５７９】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブＶＬの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０５８０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、または４個の少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、１〜３個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０５８１】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、１５０％未満、１４５％未満、１４０％未満、１３５％未満、１３０％未満、１２５％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、または５０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０５８２】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、１２％〜１４５％の％ＵＵｗｔを有する。
【０５８３】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０５８４】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブＶＬをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、または約７１％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６０〜約８０％、約６５〜約７５％、約６１〜約７８％、または約６０〜約７０％である。
【０５８５】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、少なくとも７０％、少なくとも７２％、少なくとも約７４％、少なくとも約７６％、または少なくとも約７８％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０〜約８０％、約６２〜約８０％、約６３〜約７９％、または約６８〜約７６％である。
【０５８６】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）Ｇ／Ｃ含有量に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５〜約９９％、約９０〜約９７％、または約９１〜約９６％である。
【０５８７】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも１００％、少なくとも１０５％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、または少なくとも１５５％である。
【０５８８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、トレメリムマブＶＬをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０５８９】
野生型トレメリムマブＶＨのウラシルまたはチミン含有量は、約１７％である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１７％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、または６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１％、２％、または３％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０５９０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１２％〜２１％、１２％〜２０％、１２％〜１９％、１３％〜１８％、１３％〜１７％、１３％〜１９％、１４％〜２１％、１４％〜２０％、及び１４％〜１９％である。
【０５９１】
本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０５９２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、９５％より高い、１００％より高い、または１０５％より高い。
【０５９３】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、９０％〜１２５％、８５％〜１２５％、８０％〜１２５％、９０％〜１２０％、８５％〜１１０％、７５％〜１００％、７０％〜１０５％、７０％〜１１０％、または７５％〜１０５％である。
【０５９４】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約８６〜約１１０％である。
【０５９５】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５３％より低い、１５２％より低い、１５１％より低い、１５０％より低い、１４９％より低い、１４８％より低い、１４７％より低い、１４６％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、または１２０％より低い。
【０５９６】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、１３１％より高い、１３２％より高い、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い、１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、１４３％より高い、１４４％より高い、１４５％より高い、１４６％より高い、１４７％より高い、１４８％より高い、１４９％より高い、または１５０％より高い。
【０５９７】
いくつかの実施形態において、本開示のｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２０％〜１５０％、１２１％〜１５５％、１２０％〜１６０％、１１９％〜１６５％、１１８％〜１７０％、１１７％〜１５５％、１１６％〜１６０％、または１１０％〜１６０％である。
【０５９８】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１１９〜約１５２％である。
【０５９９】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０６００】
野生型トレメリムマブＶＨは、４個のウラシルペア（ＵＵ）、及び１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０６０１】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する多くのウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブＶＨの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０６０２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、１〜３個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０６０３】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、２７５％未満、２５０％未満、２００％未満、１５０％未満、１４０％未満、１３０％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、または５０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０６０４】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、５０％〜２７５％の％ＵＵｗｔを有する。
【０６０５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＨをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含む抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０６０６】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブＶＨをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、６０％より高い、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、または少なくとも７１％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８０％、約６５％〜約７８％、または約６７〜約７６％である。
【０６０７】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、または少なくとも６６％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０〜約８５％、約６２〜約８３％、約６３〜約８１％、または約６６〜約８０％である。
【０６０８】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＨをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５〜約９９％、約８７〜約９７％、または約８９〜約９６％である。
【０６０９】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、または少なくとも１０６％である。
【０６１０】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、トレメリムマブＶＨをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０６１１】
野生型トレメリムマブＶＬのウラシルまたはチミン含有量は、約２５％である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２５％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、または６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１％、２％、または３％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０６１２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１２％〜２１％、１２％〜２０％、１２％〜１９％、１３％〜２１％、１３％〜２０％、１３％〜１９％、１４％〜２１％、１４％〜２０％、及び１４％〜１９％である。
【０６１３】
本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０６１４】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５８％より高い、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【０６１５】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６５％〜９０％、６０％〜９０％、５５％〜９０％、６５％〜８５％、６０％〜７５％、５０％〜６５％、４５％〜７０％、４５％〜７５％、または５０％〜７０％である。
【０６１６】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約５８〜約７６％である。
【０６１７】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０６１８】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、、１３１％より高い、１３２％より高い、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い、１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、１４３％より高い、１４４％より高い、１４５％より高い、１４６％より高い、１４７％より高い、１４８％より高い、１４９％より高い、１５０％より高い、１５１％より高い、１５２％より高い、１５３％より高い、１５４％より高い、１５５％より高い、１５６％より高い、１５７％より高い、１５８％より高い、１５９％より高い、または１６０％より高い。
【０６１９】
いくつかの実施形態において、本開示のｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２５％〜１６５％、１２７％〜１７０％、１２５％〜１７５％、１２４％〜１８０％、１２３％〜１８５％、１２２％〜１７０％、１２１％〜１７５％、または１１５％〜１７５％である。
【０６２０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１２７〜約１６４％である。
【０６２１】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０６２２】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。
【０６２３】
野生型トレメリムマブＶＬは、７個のウラシルペア（ＵＵ）、及び４個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０６２４】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブＶＬの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０６２５】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、１〜３個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０６２６】
「野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）に対するウラシルペア（ＵＵ）」という語句は、配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数を、対応する野生型ヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＵｗｔと本明細書で略される。
【０６２７】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、２７５％未満、２５０％未満、２００％未満、１５０％未満、１４０％未満、１３０％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、または５０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０６２８】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、１２％〜１４３％の％ＵＵｗｔを有する。
【０６２９】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＶＬをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０６３０】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブＶＬをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、または少なくとも７１％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約５０〜約８０％、約５５〜約７５％、約５７〜約７３％、または約６０〜約７１％である。
【０６３１】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、または少なくとも７３％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６５〜約９０％、約７０〜約８５％、約７２％〜約８３％、または約７３〜約８２％である。
【０６３２】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＶＬをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０％〜約１００％、約８５％〜約９９％、約８７〜約９８％、または約８９〜約９７％である。
【０６３３】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、少なくとも１０６％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２１％、少なくとも１２２％、少なくとも１２３％、または少なくとも１２４％である。
【０６３４】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、トレメリムマブＶＬをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０６３５】
野生型トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬのウラシルまたはチミン含有量は、約１８．３８％である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１８．３８％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、または９％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、または１０％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０６３６】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１０％〜１８％、１０．５％〜１７．５％、１１％〜１７％、１１．５％〜１７％、１２％〜１７％、１２．５％〜１７％、または１３％〜１７％である。
【０６３７】
本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０６３８】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【０６３９】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６１％〜１０３％、６１％〜１０２％、６２％〜１０１％、６３％〜１００％、６４％〜９９％、６５％〜９８％、６６％〜９７％、６７％〜９６％、６８％〜９５％、６９％〜９４％、７０％〜８３％、または７１％〜９３％である。
【０６４０】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約７０〜約９４％である。
【０６４１】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０６４２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、１３１％より高い、約１３２％、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い、１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、１４３％より高い、１４４％より高い、１４５％より高い、１４６％より高い、１４７％より高い、１４８％より高い、１４９％より高い、１５０％より高い、１５１％より高い、１５２％より高い、１５３％より高い、１５４％より高い、１５５％より高い、１５６％より高い、１５７％より高い、１５８％より高い、１５９％より高い、１６０％より高い、１６１％より高い、１６２％より高い、１６３％より高い、１６４％より高い、１６５％より高い、１６６％より高い、１６７％より高い、１６８％より高い、１６９％より高い、１７０％より高い、または１７１％より高い。
【０６４３】
いくつかの実施形態において、本開示のｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１４５％〜１４７％、１４４％〜１４８％、１４３％〜１４９％、１４２％〜１５０％、１４１％〜１５１％、１４０％〜１５２％、１３９％〜１５３％、または１３８％〜１５４％である。
【０６４４】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１３１〜約１７２％である。
【０６４５】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０６４６】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。例えば、野生型トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬは、４個のフェニルアラニンを有する。従って、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列を含み得るウラシルペア（ＵＵ）の絶対最小数は、４である。
【０６４７】
野生型トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬは、６個のウラシルペア（ＵＵ）、及び０個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、ウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を有さない。
【０６４８】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０６４９】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、または５個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、１〜６個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０６５０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、２７５％未満、２５０％未満、２００％未満、１５０％未満、１４０％未満、１３０％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、または１０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０６５１】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、１１％〜１０５％の％ＵＵｗｔを有する。
【０６５２】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、中のウラシルの少なくとも９５％は、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするウラシル修飾した配列は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０６５３】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６５〜約８５％、約６６〜約８４％、約６７〜約８３％、約６８〜約８２％、または約６８〜約８２％である。
【０６５４】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０〜約１００％、約６１〜約９９％、約６２〜約９８％、約６３〜約９７％、または約６４％〜約９６％である。
【０６５５】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約９０〜約１３０％、約９１〜約１２９％、または約９２〜約１２８％、または約９２〜約１２７％である。
【０６５６】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、または少なくとも１０６％である。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、トレメリムマブ−ＩＰＩ  ＣＬをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＵＳＴ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０６５７】
野生型トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨのウラシルまたはチミン含有量は、約１６．０５％である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６．０５％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６％未満、１５％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、または９％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、または１０％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０６５８】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１０％〜１６％、１０．５％〜１６％、１１％〜１６％、１１．５％〜１６％、１２％〜１６％、１２．５％〜１６％、１３％〜１６％、１３．５％〜１６％、または１４％〜１６％である。
【０６５９】
本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０６６０】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、９５％より高い、または１００％より高い。
【０６６１】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、７９％〜１１２％、８０％〜１１１％、８１％〜１１０％、８２％〜１０９％、８３％〜１０８％、８４％〜１０７％、８５％〜１０６％、８６％〜１０５％、８７％〜１０４％、８８％〜１０３％、または８９％〜１０２％である。
【０６６２】
特定の実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約８５〜約１０５％である。
【０６６３】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、または１３０％より低い。
【０６６４】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、１３１％より高い、約１３２％、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い、１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、１４３％より高い、１４４％より高い、１４５％より高い、１４６％より高い、１４７％より高い、１４８％より高い、１４９％より高い、または１５０％より高い。
【０６６５】
いくつかの実施形態において、本開示のｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１３８％〜１４０％、１３７％〜１４１％、１３６％〜１４２％、１３５％〜１４３％、１３４％〜１４４％、１３３％〜１４５％、１３２％〜１４６％、１３１％〜１４７％、約１３０〜１４８％、約１２９〜１４９％、約１２８〜１５０％、または約１２７〜１５１％である。
【０６６６】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１３１〜約１５０％である。
【０６６７】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０６６８】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。例えば、野生型トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨは、１３個のフェニルアラニンを有する。従って、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列を含み得るウラシルペア（ＵＵ）の絶対最小数は、１３である。
【０６６９】
野生型トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨは、１５個のウラシルペア（ＵＵ）を含み、ウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、６、５、４、３、２、または１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を有する。
【０６７０】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨの場合には４個のウラシルペアを有する。
【０６７１】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６または７個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、８〜１４個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０６７２】
いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、２７５％未満、２５０％未満、２００％未満、１５０％未満、１４０％未満、１３０％未満、１２０％未満、１１０％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、または４０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０６７３】
いくつかの実施形態において、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、５０％〜１００％の％ＵＵｗｔを有する。
【０６７４】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のトレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０６７５】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約１００〜約１１８％、約１０１〜約１１７％、約１０２〜約１１６％、約１０３〜約１１６％、約１０４％〜約１１６％、または約１０５〜約１１６％である。
【０６７６】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６５〜約８０％、約６６〜約７９％、約６７％〜約７８％、約６８％〜約７７％、または約６９％〜約６％である。
【０６７７】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約９０〜約１００％、約９１〜約９９％、約９２〜約９８％、約９２〜約９７％、または約９２〜約９６％である。いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、または少なくとも１０６％である。
【０６７８】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、トレメリムマブＩｇＧ２  ＣＨをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０６７９】
（本明細書に開示されるトレメリムマブ及びイピリムマブ抗体重鎖で使用されるＩｇＧ１定常領域（本開示では「本開示のＩｇＧ１定常領域」と呼ばれる）のウラシルまたはチミン含有量は、約１６％である。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１２％未満、または１１％未満である。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０６８０】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１４％〜１８％、１４％〜１９％、１４％〜２０％、１３％〜１８％、１３％〜１９％、１３％〜２０％、１２％〜１８％、１２％〜１９％、１２％〜２０％、１４％〜１６％、または１５％〜１６％である。
【０６８１】
本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【０６８２】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【０６８３】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、７５％〜１０５％、８０％〜１１０％、７５％〜１１０％、８０％〜１０５％、８０％〜１００％、７０％〜１００％、６５％〜１００％、６５％〜１１０％、または７０％〜１１０％である。
【０６８４】
特定の実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約８０〜約１００％である。
【０６８５】
ＤＮＡの場合、チミンがウラシルの代わりに存在し、Ｕが現れる場所でＴに置換することが認識される。従って、ＲＮＡに対する、例えば、％ＵＴＭ、％ＵＷＴ、または％ＵＴＬ、に関する全ての本開示は、ＤＮＡに対する％ＴＴＭ、％ＴＷＴ、または％ＴＴＬにも同様に適用可能である。
【０６８６】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０６８７】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、１３１％より高い、１３２％より高い、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い、１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、１４３％より高い、１４４％より高い、１４５％より高い、１４６％より高い、１４７％より高い、１４８％より高い、１４９％より高い、または１５０％より高い。
【０６８８】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１２７〜約１４８％である。
【０６８９】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０６９０】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。例えば、本開示のＩｇＧ１定常領域は、１０個のフェニルアラニンを有する。従って、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列を含み得るウラシルペア（ＵＵ）の絶対最小数は、１０である。
【０６９１】
本開示の野生型ＩｇＧ１定常領域は、１２個のウラシルペア（ＵＵ）を含み、ウラシルトリプレット（ＵＵＵ）またはクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を含まない。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、４、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０６９２】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する多くのウラシルペア（ＵＵ）、例えば、本開示のＩｇＧ１定常領域の場合には１０個のウラシルペアを有する。
【０６９３】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、６〜１６個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０６９４】
「野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）に対するウラシルペア（ＵＵ）」という語句は、配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数を、対応する野生型ヌクレオチド配列中のウラシルペア（ＵＵ）の総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＵｗｔと本明細書で略される。
【０６９５】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、１３４％未満、１３０％未満、１２５％未満、１２０％未満、１１５％未満、１１０％未満、１０５％未満、１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、または５０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０６９６】
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、４０％〜１４０％の％ＵＵｗｔを有する。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、５０％〜１３４％の％ＵＵｗｔを有する。
【０６９７】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示される本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０６９８】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する本開示のＩｇＧ１定常領域をコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６０〜約８５％、約６５〜約８０％、約６７〜約７８％、または約６８〜約７７％である。
【０６９９】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０〜約８５％、約６５〜約８０％、約６７〜約７９％、または約６９〜約７６％である。
【０７００】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８１％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０％〜約１００％、約８５％〜約９９％、約９０〜約９８％、または約９２〜約９７％である。
【０７０１】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１０１％、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、少なくとも１０６％、少なくとも１０７％、少なくとも１０９％、または少なくとも１１０％である。
【０７０２】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、本開示のＩｇＧ１定常領域をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０７０３】
配列最適化された抗ＣＴＬＡ−４抗体：本開示は、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする配列最適化ｍＲＮＡ配列も提供する。これらの配列最適化ｍＲＮＡを含む組成物を、それを必要とする対象に投与して、治療用抗体をｉｎ  ｖｉｖｏ発現及びアセンブリし易くすることができる。本明細書に開示される配列最適化されているヌクレオチド配列の各々は、当該技術分野において既知である治療用抗体をコードする野生型ヌクレオチド配列ではない。
【０７０４】
本開示は、抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする配列最適化ｍＲＮＡ配列を含むポリヌクレオチドを提供し、これを使用して、例えば、宿主生物（例えば、特定の組織または細胞）にてｉｎ  ｖｉｖｏで抗体を発現することができる。本開示に提示される配列最適化ｍＲＮＡ配列は、それを必要とする対象にｉｎ  ｖｉｖｏ投与後、発現有効性に関する特性の改善を提示することができる。そのような特性としては、核酸安定性（例えば、ｍＲＮＡ安定性）の改善、標的組織中の翻訳有効性の増加、発現された切断型タンパク質の数の減少、発現タンパク質のフォールディングの改善または発現タンパク質のミスフォールディングの防止、発現産物の毒性の低下、発現産物によって引き起こされる細胞死の減少、タンパク質凝集の増加または減少などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０７０５】
本明細書に開示される配列最適化されているヌクレオチド配列は、当該技術分野における問題のうちの１つ以上を回避する構造的及び／または化学的特徴、例えば、構造的及び機能的完全性を保持し、発現の閾値を克服し、発現率、半減期、及び／またはタンパク質濃度を改善し、タンパク質局在化を最適化し、免疫応答及び／または分解経路などの有害な生物応答を回避する一方、核酸ベースの治療薬の製剤化及び送達の最適化に有用である特徴を有する、ヒト対象における発現に最適化されている。
【０７０６】
本開示の抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードする配列最適化されたポリヌクレオチドを表２に示す。これらのコドン最適化ポリヌクレオチドを、例えば、表１に開示される配列の代替または補完として使用して、本出願の他の箇所に開示される方法を実施することができる。
【表２−１】
2019519516.tif 000029
【表２−２】
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【表２−３】
2019519516.tif 000031
【０７０７】
トレメリムマブ及びイピリムマブをコードする配列最適化されている抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドを表３に示す。これらの配列最適化されている抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドを、例えば、表１及び２に開示される配列の代替または補完として使用して、本出願の他の箇所に開示される方法を実施することができる。
【０７０８】
表３は、トレメリムマブ（Ｔｒｅｍｅ−ＬＣ）及びイピリムマブ（ＩＰＩ−ＬＣ）の軽鎖、並びにトレメリムマブ（ＩｇＧ１形態及びＩｇＧ２の２形態）及びイピリムマブ（ＩｇＧ１形態のみ）の重鎖のタンパク質配列を提示する。
【０７０９】
定常領域、可変領域、及びシグナルペプチドに対応するタンパク質サブ配列を提供する。また、表３に含まれるのは、トレメリムマブ及びイピリムマブの重鎖及び軽鎖の各々に対応する配列最適化されている抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド配列である。当業者であれば、重鎖または軽鎖におけるドメインの各々１つに対応する配列最適化されたポリヌクレオチドにおける領域を容易に決定することができる。
【０７１０】
コドン最適化重鎖及び軽鎖配列の異なるドメインをコードする領域の組成分析を図８０Ａ〜８６Ｄに提示する。ＶＨ領域は、トレメリムマブの重鎖のＩｇＧ１及びＩｇＧ２形態に共通している。また、ＬＣの定常領域は、トレメリムマブ及びイピリムマブの軽鎖に共通している。
【０７１１】
本明細書及び特許請求の範囲に提供される配列比較データは、表３の配列及びサブ配列を指す。表３のコドン最適化配列に対応するサブ配列を定義するのに使用するスキームは、以下のスキームである：
［抗体配列］−［鎖］−［ドメイン］−［コドン最適化配列］
【０７１２】
従って、ＩＰＩ−ＨＣ−Ｖａｒ−ＣＯ９は、コドン最適化配列０９（ＣＯ０９）由来のイピリムマブ、重鎖、可変領域に対応する配列である。
【表３−１】
2019519516.tif 000032
【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表３−５】
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【表３−６】
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【表３−７】
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【表３−８】
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【表３−９】
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【表３−１０】
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【表３−１１】
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【表３−１２】
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【表３−１３】
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【表３−１４】
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【表３−１５】
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【表３−１６】
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【表３−１７】
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【表３−１８】
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【表３−１９】
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【表３−２０】
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【表３−２１】
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【表３−２２】
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【表３−２３】
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【表３−２４】
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【表３−２５】
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【表３−２６】
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【表３−２７】
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【表３−２８】
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【表３−２９】
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【表３−３０】
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【表３−３１】
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【表３−３２】
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【表３−３３】
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【表３−３４】
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【表３−３５】
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【表３−３６】
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【表３−３７】
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【表３−３８】
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【表３−３９】
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【表３−４０】
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【表３−４１】
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【表３−４２】
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【表３−４３】
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【表３−４４】
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【表３−４５】
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【表３−４６】
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【表３−４７】
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【表３−４８】
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【表３−４９】
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【表３−５０】
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【表３−５１】
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【表３−５２】
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【表３−５３】
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【表３−５４】
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【表３−５５】
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【表３−５６】
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【表３−５７】
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【表３−５８】
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【表３−５９】
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【表３−６０】
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【表３−６１】
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【表３−６２】
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【表３−６３】
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【表３−６４】
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【表３−６５】
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【表３−６６】
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【表３−６７】
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【表３−６８】
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【０７１３】
ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド：ある特定の実施形態において、本開示の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド（例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡ）は、
（ｉ）以下に提供される５’キャップを含む、以下に開示される５’ＵＴＲ配列のうちの１つなどの５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードするＯＲＦ、例えば、表１、表２または表３に開示されるＯＲＦ、または上記の表１または表２に提供されるタンパク質配列のいずれかをコードするポリヌクレオチド配列、またはそれらの組み合わせ、
（ｉｉｉ）停止コドン、
（ｉｖ）以下に開示される３’ＵＴＲ配列のうちの１つなどの３’ＵＴＲ、及び
（ｖ）以下に提供されるポリ−Ａ尾部
を含む。
【０７１４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲＮＡ１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０７１５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチド（例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド）は、表１の抗体重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）のいずれかに対して、または
（ｉ）１、２、または３個のＶＨ−ＣＤＲ、
（ｉｉ）１、２、または３個のＶＬ−ＣＤＲ、
（ｉｉｉ）ＶＨ、
（ｉｖ）ＶＬ、
（ｖ）ＨＣ、
（ｖｉ）ＬＣ、
（ｖｉｉ）その断片、または、
（ｖｉｉｉ）それらの組み合わせ
を含む、それからなる、またはそれから本質的になるそれらのサブ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるポリペプチド配列をコードする。
【０７１６】
Ｂ．分化クラスター８０（ＣＤ８０）
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、１つ以上のＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、すなわち、ＣＤ８０ポリペプチドをコードする１つ以上のＯＲＦを含むポリヌクレオチド（例えば、ＣＤ８０Ｆｃ融合タンパク質）を含む。
【０７１７】
分化クラスター８０（ＣＤ８０）は、Ｂ７−１としても知られ、ほとんどの抗原提示細胞上に存在する細胞表面タンパク質であり、Ｔリンパ球活性化に必須の共刺激シグナルに関与している。ＣＤ８０は、Ｔ細胞の表面上の２つの受容体、すなわち分化クラスター２８（ＣＤ２８）、及び細胞障害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）に結合する。ＣＤ８０は、ＣＤ２８（共刺激応答を提供するＴ細胞発現受容体）またはＣＴＬＡ−４（阻害応答を提供するＴ細胞発現受容体）のいずれかとの相互作用を介して、重要な共刺激または阻害入力をＴ細胞にもたらす。
【０７１８】
ＣＤ８０のＣＤ２８への結合は、Ｔ細胞活性化及び生存を促進する一方、ＣＤ８０のＣＴＬＡ−４への結合は、Ｔ細胞活性化を負に調節するように作用する。Ｔ細胞活性を調節する重要な役割のため、ＣＤ８０タンパク質は、腫瘍学において薬物標的と考えられている。例えば、Ｂｒｚｏｓｔｅｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（２４）（２０１６）を参照されたい。例えば、研究者らは、ＣＤ８０の細胞外ドメインとＩｇＧＦｃを組み合わせる融合タンパク質を含む治療薬を投与することの抗腫瘍効果について研究している。Ｌｉｕ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１（２３）：８４９２−８５０２（２００５）を参照されたい。
【０７１９】
ＣＤ８０は、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員であり、二量体として発現される。ＣＤ８０の構造は、細胞外ドメイン（２０８残基）、単一膜貫通ドメイン（２１残基）、及び細胞内ドメイン（２５残基）を含む。ＣＤ８０の少なくとも３つのアイソフォーム、アイソフォーム１、２、及び３が存在する。
【０７２０】
野生型ヒトＣＤ８０標準ｍＲＮＡ配列のコード配列（ＣＤＳ）は、受託番号ＮＭ＿００５１９１．３下で、ＮＣＢＩ参照配列データベース（ＲｅｆＳｅｑ）で記述されている（「ホモサピエンスＣＤ８０分子（ＣＤ８０）、ｍＲＮＡ」）。野生型ＣＤ８０標準タンパク質配列、アイソフォーム１は、は、受託番号ＮＰ＿００５１８２．１（「Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０前駆体［ホモサピエンス］」）下で、ＲｅｆＳｅｑデータベースで記述されている。ＣＤ８０アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ３３６８１−２）は、完全長ＣＤ８０アイソフォーム１のアミノ酸残基２３４〜２６６の代わりに単一のＳｅｒ残基の置換を含み、ＣＤ８０の可溶性アイソフォームが得られる。ＣＤ８０アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ３３６８１−３）は、アミノ酸１４１〜２６６のＡ１４０Ｇ置換及び欠失を含み、ＣＤ８０の可溶性アイソフォームが得られる。ＲｅｆＳｅｑ配列中の参照タンパク質配列をコードする特定の核酸配列は、それぞれのＲｅｆＳｅｑデータベースエントリーに示される、コード配列（ＣＤＳ）であることに留意されたい。ＣＤ８０アイソフォーム１の前駆体形態は、２８８アミノ酸長である一方、その成熟形態（そのシグナルペプチドの除去によって処置される）は、２５４アミノ酸長である。表４を参照されたい。
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【０７２１】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードする核酸配列を含むＣＤ８０ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、免疫応答共刺激シグナルポリペプチドとして機能する。ＣＤ８０ポリペプチドは、完全配列ＣＤ８０、成熟ＣＤ８０（すなわち、シグナルペプチドを有さない）、ＣＤ８０活性を有するその断片、またはその融合タンパク質であり得る。
【０７２２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣ）、またはＣＤ８０活性を有するその断片を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、バリアントである、すなわち、対応する野生型ＣＤ８０配列に対して置換、及び挿入及び／または付加、欠失及び／または共有結合修飾を含むペプチドまたはポリペプチドである。
【０７２３】
本明細書で使用する場合、「ＣＤ８０ポリペプチド」という用語は、ＣＤ８０活性を有するポリペプチド、例えば、ＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ−４と相互作用し、免疫応答、例えば、ＣＤ２８の結合におけるＴ細胞の活性化、またはＣＴＬＡ−４の結合におけるＴ細胞活性化の減衰を誘発することができるポリペプチドを指す。本明細書で使用する場合、「ＣＤ８０ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチドを指す。
【０７２４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、野生型ＣＤ８０の切断型バリアントである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ８０であり、ＣＤ８０は、シグナル伝達ペプチドを含まない。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ８０活性を有するＥＣドメインまたはその部分を含む。他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ８０活性を有するＥＣドメインまたはその部分、及び全てまたは一部の膜貫通ドメインを含む。他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＥＣドメイン、及び全てまたは一部の細胞質ドメインを含む。
【０７２５】
ある特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１（配列番号４７１）のアミノ酸３５〜２３０、３５〜２３１、３５〜２３２、３５〜２３３、３５〜２３４、３５〜２３５、３５〜２３６、３５〜２３７、３５〜２３８、３５〜２３９、３５〜２４０、３５〜２４１、または３５〜２４２を含む。他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１（配列番号４７１）のアミノ酸３５〜２４３、３５〜２４４、３５〜２４５、３５〜２４６、３５〜２４７、３５〜２４８、３５〜２４９、３５〜２５０を含む。１つの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１（配列番号４７１）のアミノ酸３５〜２４１を含む。別の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１（配列番号４７１）のアミノ酸３５〜２４２を含む。特定の１つの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７３（ＣＤ８０Ｆｃコンストラクト）のアミノ酸３５〜２４１を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ８０活性を有するＥＣドメインまたはその部分、ＴＭドメイン、及びＣＰドメインを含む、またはそれからなる、またはそれから本質的になる。
【０７２６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドのＴＭドメインの１つ以上のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態において、ＴＭドメインの１つ以上のアミノ酸は、Ｄ、ＤＫ、ＤＫＴ、ＤＫＴＨ（配列番号４７５）、ＤＫＴＨＴ（配列番号４７６）、ＤＫＴＨＴＣ（配列番号４７７）、またはＤＫＴＨＴＣＰ（配列番号４７８）を含む、それからなる、またはそれから本質的になる。
【０７２７】
他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドのＣＰドメインの１つ以上のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態において、ＣＰドメインの１つ以上のアミノ酸は、Ｆ、ＦＡ、ＦＡＰ、ＦＡＰＲ（配列番号４７９）、ＦＡＰＲＣ（配列番号４８０）、ＦＡＰＲＣＲ（配列番号４８１）、ＦＡＰＲＣＲＥ（配列番号４８２）、ＦＡＰＲＣＲＥＲ（配列番号４８３）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲ（配列番号４８４）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲ（配列番号４８５）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮ（配列番号４８６）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥ（配列番号４８７）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲ（配列番号４８８）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬ（配列番号４８９）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲ（配列番号４９０）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＥＲＬＲＲ（配列番号４９１）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥ（配列番号４９２）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳ（配列番号４９３）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶ（配列番号４９４）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲ（配列番号４９５）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰ（配列番号４９６）、またはＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰＶ（配列番号４９７）を含む、それからなる、またはそれから本質的になる。別の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドのＣＰドメインの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸からなるまたはそれから本質的になるＣＰ断片を含む。
【０７２８】
いくつかの実施形態において、配列タグまたはアミノ酸を、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）によってコードされる配列に付加して、例えば、局在化することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０Ｆｃ）のカルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域に位置するアミノ酸残基は、任意選択で欠失して、断片を提供することができる。
【０７２９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０配列の置換バリアントをコードし、これは、１、２、３、または３個以上の置換を含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０置換バリアントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。他の実施形態では、ＣＤ８０バリアントは、挿入バリアントである。他の実施形態では、ＣＤ８０バリアントは、欠失バリアントである。
【０７３０】
本開示で提示されるある特定の組成物及び方法は、ＣＤ８０のタンパク質またはポリヌクレオチド配列を指す。当業者であれば、そのような開示が当該技術分野において既知であるＣＤ８０の任意の他のアイソフォームにも同様に適用可能であることが分かるであろう。
【０７３１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７３（すなわち、本明細書に開示されるＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチド）のアミノ酸３５〜２４１に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０７３２】
他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドまたはそのアイソフォームのＣＰドメイン、完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドのＴＭドメイン、及び完全長または成熟ＣＤ８０ポリペプチドのＥＣドメインまたはＣＤ８０活性を有するその部分を含み、ＣＰドメインは、配列番号４７１のアミノ酸２６４〜２８８に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＴＭドメインは、配列番号４７１のアミノ酸２４３〜２６３に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、及び／またはＥＣドメインまたはその部分は、配列番号４７３のアミノ酸３５〜２４１（すなわち、本明細書に開示されるＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチド）またはその対応する部分に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【０７３３】
ある特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、シグナルペプチドに融合することができる。１つの実施形態において、シグナルペプチドは、天然に存在するＣＤ８０シグナルペプチドである。別の実施形態では、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号４７３アミノ酸１〜３４に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７３４】
他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、１つ以上の異種ポリペプチドに融合される融合タンパク質であり得る。１つの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドは、１つ以上のＦｃ領域に融合される。
【０７３５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、ＣＤ８０ポリペプチドのいずれか、例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０Ｆｃポリペプチド、例えば、本明細書に開示される配列最適化されたポリヌクレオチドによってコードされるＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチドを含む。
【０７３６】
結晶化可能断片（Ｆｃ）領域を含むＣＤ８０融合体：いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法で使用されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、結晶化可能断片領域（Ｆｃ）に遺伝的に融合されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む（例えば、表４の配列番号４７３及び４７４を参照されたい）。結晶化可能断片（Ｆｃ）領域は、細胞の表面上でＦｃ受容体と相互作用し、免疫応答を活性化する免疫グロブリンポリペプチドの部分である。Ｆｃ領域は、他のＦｃ領域とさらに相互作用して、ジスルフィド結合を介したホモ二量体を形成することができる。操作されたＦｃ領域は、マイクロアレイ技術におけるＦｃ融合餌として、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期延長、免疫組織化学、フローサイトメトリー、結合アッセイを含むがこれらに限定されない種々の目的のために異種ポリペプチドに融合して、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶解性及び／または安定性を増すことができる。
【０７３７】
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ」という用語は、Ｆｃ活性を有するポリペプチド、例えば、Ｆｃ受容体と相互作用することができるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧＦｃ領域、例えば、ＩｇＧ１Ｆｃ、ＩｇＧ２Ｆｃ、ＩｇＧ３Ｆｃ、またはＩｇＧ４Ｆｃ、またはＦｃ活性を有するそれらの断片である。
【０７３８】
特定の１つの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１Ｆｃ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＣ８２５２７．１；「免疫グロブリンガンマ−１重鎖定常領域、部分［ホモサピエンス］」）の野生型アミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０７３９】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号４７３のアミノ酸２４２〜４６８に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域またはその断片は、対応する野生型Ｆｃ配列に対して置換、及び挿入及び／または付加、欠失及び／または共有結合修飾を含むバリアント、ペプチド、またはポリペプチドである。
【０７４０】
いくつかの実施形態において、配列タグまたはアミノ酸を、ポリヌクレオチド（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）によってコードされる配列に付加して、例えば、局在化することができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのカルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域に位置するアミノ酸残基は、任意選択で欠失して、断片を提供することができる。
【０７４１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ配列の置換バリアントをコードし、これは、１、２、３、または３個以上の置換を含み得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃ置換バリアントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。他の実施形態では、Ｆｃバリアントは、挿入バリアントである。他の実施形態では、Ｆｃバリアントは、欠失バリアントである。
【０７４２】
本開示で提示されるある特定の組成物及び方法は、Ｆｃのタンパク質またはポリヌクレオチド配列を指す。当業者であれば、そのような開示が当該技術分野において既知である任意の他のＦｃ領域、例えば、他の免疫グロブリンタンパク質からのＦｃ領域、またはＦｃもしくはＦｃ融合タンパク質に望ましい特性を付与するための特定の突然変異、例えば、血漿半減期を延長するための突然変異を含むＦｃ領域にも同様に適用可能であることが分かるであろう。
【０７４３】
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＣＤ８０活性を有するその部分に融合される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法で使用されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される配列最適化されたポリヌクレオチドによってコードされる任意のＣＤ８０ＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【０７４４】
ＣＤ８０ポリヌクレオチド及びオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：本明細書に開示されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、１つ以上のＣＤ８０ポリペプチド、１つ以上のＦｃ領域、及び／または１つ以上のＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む任意のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０７４５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、
（ｉ）シグナルペプチドを有する、または有さない、ＣＤ８０のＥＣドメインを含むＣＤ８０ポリペプチド、
（ｉｉ）シグナルペプチドを有する、または有さない、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１（配列番号４７１）のアミノ酸３５〜２３０、３５〜２３１、３５〜２３２、３５〜２３３、３５〜２３４、３５〜２３５、３５〜２３６、３５〜２３７、３５〜２３８、３５〜２３９、３５〜２４０、３５〜２４１、または３５〜２４２を含む、それから本質的になる、またはそれからなるＥＣ断片を含むＣＤ８０ポリペプチド、
（ｉｉｉ）ＣＤ８０のＥＣドメイン、及びＤ、ＤＫ、ＤＫＴ、ＤＫＴＨ（配列番号４７５）、ＤＫＴＨＴ（配列番号４７６）、ＤＫＴＨＴＣ（配列番号４７７）、またはＤＫＴＨＴＣＰ（配列番号４７８）を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＴＭドメインの１つ以上のアミノ酸を含むＣＤ８０、
（ｉｖ）ＣＤ８０のＥＣドメイン、及びＦ、ＦＡ、ＦＡＰ、ＦＡＰＲ（配列番号４７９）、ＦＡＰＲＣ（配列番号４８０）、ＦＡＰＲＣＲ（配列番号４８１）、ＦＡＰＲＣＲＥ（配列番号４８２）、ＦＡＰＲＣＲＥＲ（配列番号４８３）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲ（配列番号４８４）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲ（配列番号４８５）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮ（配列番号４８６）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥ（配列番号４８７）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲ（配列番号４８８）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬ（配列番号４８９）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲ（配列番号４９０）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲ（配列番号４９１）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥ（配列番号４９２）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳ（配列番号４９３）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶ（配列番号４９４）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲ（配列番号４９５）、ＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰ（配列番号４９６）、またはＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰＶ（配列番号４９７）を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＰドメインの１つ以上のアミノ酸を含むＣＤ８０、及び
（ｖ）（ｉ）ＣＤ８０ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）Ｆｃ領域を含む融合タンパク質
から選択されるＣＤ８０ポリペプチドをコードする。
【０７４６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、
（ｉ）シグナルペプチドを有する、または有さない、（例えば、野生型ＣＤ８０アイソフォーム１、２、または３と同じかまたは本質的に同じ長さを有する）ＣＤ８０ポリペプチド、
（ｉｉ）本明細書に記載されるＣＤ８０アイソフォームのいずれかのＣＤ８０機能的断片（例えば、野生型アイソフォーム１、２、または３のうちの１つよりも短いが、ＣＤ８０活性をなお維持している切断型（例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのＣＤ８０バリアント（例えば、１つ以上のアミノ酸が置換されている完全長、成熟、または切断型ＣＤ８０アイソフォーム１、２、または３タンパク質、例えば、参照アイソフォームに対してポリペプチドのＣＤ８０活性の全てまたはほとんどを維持するバリアント）、または
（ｉｖ）（ｉ）シグナルペプチドを有する、または有さない、ＣＤ８０ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）異種タンパク質、例えば、Ｆｃ領域を含むＣＤ８０融合タンパク質
もコードすることができる。
【０７４７】
他の実施形態では、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、
（ｉ）（例えば、野生型Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１Ｆｃと同じかまたは本質的に同じ長さを有する）野生型Ｆｃ領域、
（ｉｉ）当該技術分野において既知であるＦｃ領域のＦｃ機能的断片（例えば、切断型（例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのＦｃバリアント（例えば、１つ以上のアミノ酸が置換されている完全長、成熟、または切断型Ｆｃ領域、例えば、参照Ｆｃに対してポリペプチドのＦｃ活性の全てまたはほとんどを維持するバリアント）、または
（ｉｖ）（ｉ）Ｆｃ領域、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）異種タンパク質、例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドを含むＦｃ融合タンパク質
もコードすることができる。
【０７４８】
ある特定の実施形態において、コードされたＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドは、哺乳類ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ８０ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントである。
【０７４９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、これらの細胞に導入する場合の細胞中のＣＤ８０またはＦｃ、タンパク質発現レベル及び／または検出可能なＣＤ８０、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドの活性レベルを、ＣＤ８０ポリヌクレオチドの投与前の細胞中のＣＤ８０タンパク質発現レベル及び／または検出可能なＣＤ８０活性レベルと比較して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加させる。
【０７５０】
ＣＤ８０タンパク質発現レベル及び／またはＣＤ８０活性は、当該技術分野において既知である方法に従って測定することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドを細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入する。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドを細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで導入する。
【０７５１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コドン最適化核酸配列を含み、コドン最適化核酸配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、野生型ＣＤ８０配列由来である。例えば、ＣＤ８０をコードする配列最適化ＯＲＦを含むＣＤ８０ポリヌクレオチドの場合、対応する野生型配列は、天然ＣＤ８０、アイソフォーム１である。
【０７５２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０活性を変化させない突然変異を有する、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。そのような変異体ＣＤ８０ポリペプチドは、機能中立と呼ぶことができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、１つ以上の機能中立点突然変異を含む変異体ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【０７５３】
いくつかの実施形態において、変異体ＣＤ８０ポリペプチドは、対応する野生型ＣＤ８０よりも高いＣＤ８０活性を有する。いくつかの実施形態において、変異体ＣＤ８０ポリペプチドは、対応する野生型ＣＤ８０の活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＣＤ８０活性を有する。
【０７５４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、対応する完全長または成熟ＣＤ８０よりも高いＣＤ８０活性を有するＣＤ８０断片をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。従って、いくつかの実施形態において、ＣＤ８０断片、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドは、対応する完全長または成熟ＣＤ８０のＣＤ８０活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＣＤ８０活性を有する。
【０７５５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、配列番号４７３のアミノ酸３５〜２４１に記載されるアミノ酸配列よりも少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、または２５％短い。
【０７５６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７３のアミノ酸３５〜２４１に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０７５７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７４のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０７５８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４７４のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０７５９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４７４に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０７６０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７６９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７７９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９のヌクレオチド１０３〜７２３に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８４】
他の実施形態では、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、Ｆｃ領域は、ｏｆ配列番号４７３のアミノ酸２４２〜４６８に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０７８５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、Ｆｃ領域は、配列番号４７４のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０７８６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４７４のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０７８７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４７４に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０７８８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７８９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８または５０８に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１、５１３、及び５１５に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０７９９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８００】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０５、５０９、５１０、５１２、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９、５０３、５０６、５０７、及び５１７からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８０９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８１０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８１１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４または５１９に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。表５を参照されたい。
【０８１２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、約６００〜約１００，０００ヌクレオチド（例えば、６００〜６５０、６００〜６７５、６００〜７００、６００〜７２５、６００〜７５０、６００〜７７５、６００〜８００、６００〜９００、６００〜１０００、６００〜１１００、６００〜１２００、６００〜１３００、６００〜１４００、６００〜１５００、７００〜８００、７００〜９００、７００〜１０００、７００〜１１００、７００〜１２００、７００〜１３００、７００〜１４００、７００〜１５００、７５３〜８００、７５３〜９００、７５３〜１０００、７５３〜１２００、７５３〜１４００、７５３〜１６００、７５３〜１８００、７５３〜２０００、７５３〜３０００、７５３〜５０００、７５３〜７０００、７５３〜１０，０００、７５３〜２５，０００、７５３〜５０，０００、７５３〜７０，０００、または７５３〜１００，０００）を含む。
【０８１３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）の長さは、少なくとも３００長のヌクレオチド（例えば、少なくとも約３００、４００、５００、６００、７００、７５０、７５３、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、４０００、４１００、４２００、４３００、４４００、４５００、４６００、４７００、４８００、４９００、５０００、５１００、５２００、５３００、５４００、５５００、５６００、５７００、５８００、５９００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００または最大で１００，０００（それを含む）ヌクレオチド）である。
【０８１４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、非コードである少なくとも１個の核酸配列、例えば、ｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。
【０８１５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、一本鎖または二本鎖である。
【０８１６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であるか、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、少なくとも１個のＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、翻訳されて、コードされたＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで産生することができる。
【０８１７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、野生型配列、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０８１８】
ＣＤ８０シグナル配列：本明細書に開示される併用療法で使用されるＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コードされたポリペプチドの治療上の関連部位への輸送を容易にする追加特性をコードするヌクレオチド配列を含み得る。タンパク質輸送を助ける１つのかかる特徴は、シグナル配列、または標的化配列である。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、本明細書に記載されるＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結したシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。
【０８１９】
いくつかの実施形態において、そのようなシグナル配列またはシグナルペプチドは、任意選択で、それぞれ、コード領域またはＣＤ８０ポリペプチドの５’（またはＮ末端）に組み込まれる、それぞれ、約９〜２００ヌクレオチド（３〜７０アミノ酸）長のポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。これらの配列の付加は、１つ以上の標的経路を介して、コードされたＣＤ８０ポリペプチドの所望の部位、例えば、小胞体またはミトコンドリアへの輸送をもたらす。いくつかのシグナルペプチドは、タンパク質が所望の部位に輸送された後、例えば、シグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。
【０８２０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、シグナルペプチドをコードする５’核酸配列をさらに含む。
【０８２１】
１つの実施形態において、シグナルペプチドは、天然に存在するＣＤ８０シグナルペプチド、例えば、野生型ＣＤ８０のアミノ酸１〜３４に対応するシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号４７３のアミノ酸１〜３４に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８２２】
ＣＤ８０融合タンパク質：いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的ポリペプチドをコードする２個以上の核酸配列（例えば、ＯＲＦ）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメイン、その機能的断片、またはそのバリアントを含むＣＤ８０ポリペプチドをコードする単一のＯＲＦを含む。しかしながら、いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、２個以上のＯＲＦ、例えば、ＣＤ８０ポリペプチド（第１の目的ポリペプチド）、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする第１のＯＲＦ、及び第２の目的ポリペプチドを発現する第２のＯＲＦを含み得る。
【０８２３】
いくつかの実施形態において、２個以上の目的ポリペプチドは、遺伝的に融合することができる、すなわち、２個以上のポリペプチドは、同じＯＲＦによってコードすることができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、２個以上の目的ポリペプチド間のリンカー（例えば、Ｇ４Ｓペプチドリンカーまたは当該技術分野において既知である別のリンカー）をコードする核酸配列を含み得る。
【０８２４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド｛例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、２、３、４個以上のＯＲＦを含み得、各々は、目的ポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド｛例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードする第１の核酸配列（例えば、第１のＯＲＦ）、及び第２の目的ポリペプチドをコードする第２の核酸配列（例えば、第２のＯＲＦ）を含み得る。
【０８２５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド｛例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードする第１の核酸配列（例えば、第１のＯＲＦ）、及びＦｃ領域をコードする第２の核酸配列（例えば、第２のＯＲＦ）を含み得る。
【０８２６】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列：いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチド、例えば、Ｆｃ領域に融合したＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０Ｆｃをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されている。
【０８２７】
ＣＤ８０Ｆｃをコードする例示の配列最適化されたポリヌクレオチド配列を表５に示す。いくつかの実施形態において、表５の配列最適化ＣＤ８０Ｆｃポリヌクレオチド、その断片、及びそのバリアントを使用して、本明細書に開示される方法を実施する。
【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【表５−８】
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【表５−９】
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【表５−１０】
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【表５−１１】
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【表５−１２】
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【表５−１３】
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【表５−１４】
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【表５−１５】
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【表５−１６】
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【０８２８】
本明細書に開示されるＣＤ８０配列最適化されたポリヌクレオチド配列は、対応するＣＤ８０野生型ポリヌクレオチド配列及び他の公知の配列最適化されたポリヌクレオチド配列とは異なっており、例えば、これらの配列最適化されている核酸は、独自の組成上の特徴を有する。図８７Ａ〜８８Ｂを参照されたい。
【０８２９】
いくつかの実施形態において、配列最適化されているＣＤ８０ポリヌクレオチド配列（例えば、ＣＤ８０ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする）中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）は、参照野生型ポリヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）に対して改変される（例えば、減少される）。そのような配列は、ウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列と呼ばれる。ＣＤ８０ポリヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量の百分率（％）は、配列中のウラシルまたはチミンの数をヌクレオチドの総数で割って、１００を乗じることによって決定することができる。いくつかの実施形態において、配列最適化されているＣＤ８０ポリヌクレオチド配列は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも低いウラシルまたはチミン含有量を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される配列最適化されているＣＤ８０ポリヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも多く、有益な効果、例えば、参照野生型配列と比較した場合に発現及び／またはＣＤ８０応答の増加をなお維持している。
【０８３０】
野生型ＣＤ８０のウラシルまたはチミン含有量は、約２６．６０％である。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２５．６０％未満である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、または１６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１５％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０８３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１５％〜２５％、１５％〜２４％、１６％〜２５％、１６％〜２４％、１７％〜２４％、１７％〜２３％、１７％〜２２％、１５％〜２２％、１５％〜２１％、１５％〜２０％、１５％〜１９％、１５％〜１８％、または１５％〜１７％である。
【０８３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１３％〜２０％、１３％〜１９％、１３％〜１８％、１４％〜１９％、１４％〜１８％、１４％〜１７％、１４％〜１６％、１５％〜１８％、１５％〜１９％、１５％〜１７％、または１６％〜１７％である。
【０８３３】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約１５〜約１８％、例えば、１６％〜１８％である。
【０８３４】
野生型Ｆｃのウラシルまたはチミン含有量は、約１５．５７％である。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１５％未満である。いくつかの実施形態において、開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、１５％未満または１４％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１３％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【０８３５】
いくつかの実施形態において、開示されるＦｃ領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１３％〜１６％、１３％〜１５％、１３％〜１４％、または１４％〜１５％である。
【０８３６】
いくつかの実施形態において、開示されるＦｃ領域をコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１１％〜１８％、１１％〜１７％、１１％〜１６％、１１％〜１５％、１２％〜１８％、１２％〜１７％、１２％〜１６％、１２％〜１５％、１３％〜１６％、１３％〜１７％、１３％〜１８％、１３％〜１５％、または１４％〜１５％である。
【０８３７】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約１３〜約１６％、例えば、１３％〜１５％である。
【０８３８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５０％より高い、５５％より高い、６０％より高い、または６５％より高い。
【０８３９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、４９％〜７９％、５０％〜７８％、５１％〜７７％、５２％〜７６％、５３％〜７５％、５４％〜７４％、５５％〜７３％、５６％〜７２％、５７％〜７１％、５８％〜７０％、または５９％〜６９％である。
【０８４０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５７％〜７１％、５７％〜７０％、５８％〜７０％、５９％〜７０％、５９％〜６９％、６０％〜７０％、または６１％〜７０％である。
【０８４１】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約５９〜約６９％、例えば、６０％〜６９％である。
【０８４２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５０％より高い、５５％より高い、６０％より高い、または６５％より高い、７０％以上、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【０８４３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、７５％〜１００％、７６％〜１００％、７７％〜１００％、７８％〜１００％、７９％〜１００％、８０％〜１００％、８１％〜１００％、８２％〜１００％、８３％〜１００％、８４％〜１００％、または８５％〜１００％である。
【０８４４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、８３％〜１００％、８４％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、または８７％〜１００％である。
【０８４５】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約８５〜約１００％、例えば、８６％〜１００％である。
【０８４６】
ＤＮＡの場合、チミンがウラシルの代わりに存在し、Ｕが現れる場所でＴに置換することが認識される。従って、ＲＮＡに対する、例えば、％ＵＴＭ、％ＵＷＴ、または％ＵＴＬ、に関する全ての本開示は、ＤＮＡに対する％ＴＴＭ、％ＴＷＴ、または％ＴＴＬにも同様に適用可能である。
【０８４７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするまたは本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【０８４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするまたは本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、１３０％より高い、１３１％より高い、１３２％より高い、１３３％より高い、１３４％より高い、１３５％より高い、１３６％より高い、１３７％より高い１３８％より高い、１３９％より高い、１４０％より高い、１４１％より高い、１４２％より高い、または１４３％より高い。
【０８４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２２％〜１２４％、１２１％〜１２５％、１２０％〜１２６％、１１９％〜１２７％、１１８％〜１２８％、１１７％〜１２９％、１１６％〜１３０％、１１５％〜１３１％、１１４％〜１３２％、１１３％〜１３３％、１１２％〜１３４％、１１１％〜１３５％、１１０％〜１３６％、１０９％〜１３７％、または１０８％〜１３８％である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１１９〜約１３９％、例えば、１２０％〜１３８％である。
【０８５０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１３５％〜１３７％、１３４％〜１３８％、１３３％〜１３９％、１３２％〜１４０％、１３１％〜１４１％、１３０％〜１４２％、１２９％〜１４３％、１２８％〜１４４％、１２７％〜１４５％、１２６％〜１４６％、１２５％〜１４７％、１２４％〜１４８％、１２３％〜１４９％、１２２％〜１５０％、または１２１％〜１５１％である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１２２〜約１４４％、例えば、１２３％〜１４３％である。
【０８５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたは本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【０８５２】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。野生型ＣＤ８０は、２３個のウラシルペア（ＵＵ）、及び８個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、８、７、６、５、４、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【０８５３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたは本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する数のウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型ＣＤ８０の場合には１１個のウラシルペアを有する。
【０８５４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたは本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、５〜１４個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。他の実施形態では、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、４〜１１個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【０８５５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４０％未満、または３５％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【０８５６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、９９％〜３８％の％ＵＵｗｔを有する。特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列、例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドは、３３％〜９４％の％ＵＵｗｔを有する。
【０８５７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、または７０％未満の％ＵＵｗｔを有する。他の実施形態では、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、１００％超、１１０％超、１２０％超、１３０％超、１４０％超、１５０％超、１６０％超、１７０％超、または１８０％超の％ＵＵｗｔを有する。
【０８５８】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、１９０％〜６５％の％ＵＵｗｔを有する。特定の実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列、例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドは、６６％〜１８４％の％ＵＵｗｔを有する。
【０８５９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。
【０８６０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０個のウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０個のウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【０８６１】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約６５〜約８０％、約６６〜約７９％、約６７〜約７８％、約６８〜約７７％、または約６８〜約７６％である。
【０８６２】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、本明細書に開示されるＦｃポリペプチドをコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約７０〜約８５％、約７１〜約８４％、約７２〜約８３％、約７３〜約８２％、または約７４〜約８２％である。
【０８６３】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６５〜約８５％、約６６〜約８４％、約６７〜約８３％、約６８〜約８２％、約６９〜約８１％、約７０％〜約８０％、または約７０〜約７９％である。
【０８６４】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６２％〜約８０％、約６３％〜約７９％、約６４〜約７８％、約６５％〜約７７％、約６６％〜約７６％、または約６７〜約７６％である。
【０８６５】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５〜約９９％、約８６〜約９７％、約８７〜約９６％、約８８〜約９５％、約８９〜約９５％、または約９０〜約９５％である。
【０８６６】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５〜約９９％、約８６〜約９７％、約８７〜約９６％、約８８〜約９６％、約８９〜約９６％、約９０〜約９６％、約９１％〜約９６％、または約９２〜約９６％である。
【０８６７】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、少なくとも１０６％、少なくとも１０７％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、または少なくとも１３０％である。
【０８６８】
いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中の第３コドン位置における平均Ｇ／Ｃ含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の第３コドン位置における平均Ｇ／Ｃ含有量よりも少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、または少なくとも４９％高い。
【０８６９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０８７０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリヌクレオチドは、Ｆｃポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【０８７１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７３のアミノ酸３５〜２４１に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８７２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号４７３に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８７３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号４７４のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８７４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号４７４に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８７５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８〜５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８７６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８〜５２２からなる群から選択される配列に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８７７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８７８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８７９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１１に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１３、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８８２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１３、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８８３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１３、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して８９％〜１００％、９０％〜１００％、８９％〜９５％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１３、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６〜５０８、５１０、５１２、５１４、５１５、５１７、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８８６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６〜５０８、５１０、５１２、５１４、５１５、５１７、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８８７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０２、５１４、５１６、５１８、及び５１５からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６〜５０８、５１０、５１２、５１４、５１５、５１７、５１８、及び５２２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８８９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１６または５１９のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８９０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１６または５１９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８９１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１６または５１９のヌクレオチド１０３〜７２３  ３０〜２５１に対して９１％〜１００％、９５％〜１００％、または９１％〜９５％の配列同一性を有する。
【０８９２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５１６または５１９に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。
【０８９３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４、５０５、及び５０９からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８９４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４、５０５、及び５０９からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０８９５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４、５０５、及び５０９からなる群から選択される配列のヌクレオチド１０３〜７２３に対して９２％〜１００％、９２％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８９６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０４、５０５、及び５０９からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０８９７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃ領域ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４７３のアミノ酸２４２〜４６８に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８９８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４７３に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０８９９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号４７４のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０９００】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号４７４に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０９０１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５２２のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９０２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５２２に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９０３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０７のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９０４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０７に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９０５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０７のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して８９％〜１００％、９０％〜１００％、８９％〜９５％、８９％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９０６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０７に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９０７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６、５０８、５１１、５１６、及び５１８からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９０８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６、５０８、５１１、５１６、及び５１８からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９０９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６、５０８、５１１、５１６、及び５１８からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０６、５０８、５１１、５１６、及び５１８からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０３、５０４、５０９、５１０、５１３、及び５１９からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９１２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０３、５０４、５０９、５１０、５１３、及び５１９からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９１３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０３、５０４、５０９、５１０、５１３、及び５１９からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０３、５０４、５０９、５１０、５１３、及び５１９からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８、５００、５０５、５１４、５１５、５１７、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９１６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８、５００、５０５、５１４、５１５、５１７、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９１７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８、５００、５０５、５１４、５１５、５１７、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９２％〜１００％、９２％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９８、５００、５０５、５１４、５１５、５１７、５２０、及び５２１からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９１９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９または５０２のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９２０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９または５０２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９２１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９または５０２のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９３％〜１００％、９３％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９２２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号４９９または５０２に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９２３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０５、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９２４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０５、及び５２２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９２５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｆｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０５、及び５２２からなる群から選択される配列のヌクレオチド７２４〜１４０４に対して９４％〜１００％、９４％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９２６】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＤ８０Ｆｃ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５０１、５０５、及び５２２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９２７】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードする修飾ヌクレオチド配列：いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦを含むウラシル修飾した配列であり、ｍＲＮＡは、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。
【０９２８】
ある特定の実施形態において、５−メトキシウラシル塩基が、ポリヌクレオチド中のようにリボース糖に連結する場合、得られる修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドは、５−メトキシウリジンと呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド中のウラシルの少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または約１００％は、５−メトキシウラシルである。１つの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。別の実施形態では、ＣＤ８０ポリヌクレオチド中のウラシルの１００％は、５−メトキシウラシルである。
【０９２９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチド中のウラシルが、少なくとも９５％の５−メトキシウラシルである場合、全体的なウラシル含有量は、ｍＲＮＡが免疫応答をほとんどまたは全く誘導することなく適当なタンパク質発現レベルをもたらすように調整することができる。
【０９３０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０  ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小値のウラシル含有量の約１０５％〜約１４５％、約１０５％〜約１４０％、約１１０％〜約１４０％、約１１０％〜約１４５％、約１１５％〜約１３５％、約１０５％〜約１３５％、約１１０％〜約１３５％、約１１５％〜約１４５％、または約１１５％〜約１４０％（％ＵＴＭ）である。他の実施形態では、ＣＤ８０  ＯＲＦのウラシル含有量は、約１１７〜約１３４％または１１８％〜１３２％の％ＵＴＭである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦのウラシル含有量は、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、または約１５０％の％ＵＴＭである。この文脈において、「ウラシル」という用語は、５−メトキシウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
【０９３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％未満である。いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約１５〜約２５％である。他の実施形態では、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約１８〜約２１％である。１つの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、オープンリーディングフレーム中の総核酸塩基含有量の約２１％未満である。この文脈においても、「ウラシル」という用語は、５−メトキシウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
【０９３２】
さらなる実施形態において、５−メトキシウラシル及び調整ウラシル含有量を有する、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、またはグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量（絶対的または相対的）が増加している。いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のＣ、Ｇ、またはＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）の全体的な増加は、野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。
【０９３３】
いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量は、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列の理論的最大値のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量の約１００％未満、約９０％未満、約８５％未満、または約８０％未満（％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、または％Ｇ／ＣＴＭＸ）である。他の実施形態では、ＯＲＦ中のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量は、約７０％〜約８０％、約７１〜約７９％、約７１〜約７８％、約７１〜約７７％、または約９０〜約９５％の％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、または％Ｇ／ＣＴＭＸである。
【０９３４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＧ及び／またはＣ含有量（絶対的または相対的）の増加は、低いＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量を有する同義のコドンを、より高いＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量を有する同義のコドンに置き換えることによって行うことができる。他の実施形態では、Ｇ及び／またはＣ含有量（絶対的または相対的）の増加は、Ｕで終わるコドンを、ＧまたはＣで終わる同義のコドンに置き換えることによって行う。
【０９３５】
さらなる実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、５−メトキシウラシルを含み、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列よりも少ないウラシルペア（ＵＵ）及び／またはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）及び／またはウラシルクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を含む調整ウラシル含有量を有する。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットを含まない。
【０９３６】
いくつかの実施形態において、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットは、ある特定の閾値を下回って減少する、例えば、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の発生を超えない。特定の実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１未満の非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットを含む。別の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットを含まない。
【０９３７】
さらなる実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、５−メトキシウラシルを含み、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列よりも少ないウラシルに富むクラスターを含む調整ウラシル含有量を有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列中で対応するウラシルに富むクラスターよりも長さが短いウラシルに富むクラスターを含む。
【０９３８】
さらなる実施形態において、代替の低頻度コドンが、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチドの配列の最適化において採用される。５−メトキシウラシルを含むｍＲＮＡの、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦ中のコドンの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％は、代替コドンと置換され、各代替コドンは、同義のコドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりも低いコドン頻度を有する。
【０９３９】
ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、上述のように、調整ウラシル含有量も有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中の少なくとも１個のコドンは、同義のコドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりも低いコドン頻度を有する代替コドンと置換される。
【０９４０】
いくつかの実施形態において、５−メトキシウラシルを含むｍＲＮＡの、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦの調整ウラシル含有量は、哺乳類細胞に投与する場合、対応する野生型ｍＲＮＡ由来のＣＤ８０の発現レベルよりも高いＣＤ８０の発現レベルを示す。他の実施形態では、ＣＤ８０の発現レベルは、哺乳類細胞に投与する場合、少なくとも９５％の５−メトキシウラシルを含み、かつ、理論的最小値の約１６０％、約１７０％、約１８０％、約１９０％、または約２００％のウラシル含有量を有する対応するｍＲＮＡに対して増加する。
【０９４１】
さらに他の実施形態では、ＣＤ８０の発現レベルは、哺乳類細胞に投与する場合、対応するｍＲＮＡに対して増加し、ウラシルの少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％は、１−メチルシュードウラシルまたはシュードウラシルである。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、マウス細胞、ラット細胞、またはウサギ細胞である。他の実施形態では、哺乳類細胞は、サル細胞またはヒト細胞である。いくつかの実施形態において、ヒト細胞は、ＨｅＬａ細胞、ＢＪ線維芽細胞、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０は、ｍＲＮＡを哺乳類細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで投与する場合に発現される。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、マウス、ウサギ、ラット、サル、またはヒトに投与される。１つの実施形態において、マウスは、ヌルマウスである。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、または約０．１５ｍｇ／ｋｇの量でマウスに投与される。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、静脈内または筋肉内に投与される。他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドは、ｍＲＮＡを哺乳類細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで投与する場合に発現される。いくつかの実施形態において、発現は、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約１５００倍、または少なくとも約３０００倍増加する。他の実施形態では、発現は、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％増加する。
【０９４２】
いくつかの実施形態において、５−メトキシウラシルを含むｍＲＮＡの、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするＯＲＦの調整ウラシル含有量は、安定性の増加を示す。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、同じ条件下で対応する野生型ｍＲＮＡの安定性に対して、細胞中の安定性の増加を示す。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、安定性の増加、例えば、ヌクレアーゼに対する耐性、熱安定性、及び／または二次構造の安定性の増加を示す。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡによって示される安定性の増加は、（例えば、血漿、細胞、または組織試料中の）ｍＲＮＡの半減期を決定し、及び／またはｍＲＮＡによるタンパク質発現の曲線下面積（ＡＵＣ）を経時的に（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで）決定することによって測定される。ｍＲＮＡは、半減期及び／またはＡＵＣが同じ条件下で対応する野生型ｍＲＮＡの半減期及び／またはＡＵＣよりも大きい場合に安定性が増加していると識別される。
【０９４３】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ８０  ｍＲＮＡは、同じ条件下で対応する野生型ｍＲＮＡによって誘発される免疫応答に対して検出可能に低い（例えば、先天性または後天性）免疫応答を誘発する。他の実施形態では、本開示のＣＤ８０  ｍＲＮＡは、同じ条件下でＣＤ８０ポリペプチドをコードするが、５−メトキシウラシルを含まないｍＲＮＡによって誘発される免疫応答に対して、または同じ条件下でＣＤ８０ポリペプチドをコードし、５−メトキシウラシルを含むが、調整ウラシル含有量を有さないｍＲＮＡによって誘発される免疫応答に対して、（例えば、先天性または後天性）免疫応答を誘発する。先天性免疫応答は、炎症性サイトカイン発現の増加、細胞内ＰＲＲ（ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５など）の活性化、細胞死、及び／またはタンパク質翻訳の終結または減少によって明らかにすることができる。いくつかの実施形態において、先天性免疫応答の減少は、１型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−Ｋ、ＩＦＮ−δ、ＩＦＮ−ε、ＩＦＮ−τ、ＩＦＮ−ω、及びＩＦＮ−ζ）の発現または活性レベル、またはトール様受容体（例えば、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８）などのインターフェロン調節遺伝子の発現、及び／または本開示のｍＲＮＡの細胞への１回以上の投与後の細胞死の減少によって測定することができる。
【０９４４】
いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡに応答した哺乳類細胞による１型インターフェロンの発現は、対応する野生型ｍＲＮＡ、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするが、５−メトキシウラシルを含まないｍＲＮＡ、またはＣＤ８０ポリペプチドをコードし、かつ、５−メトキシウラシルを含むが、調整ウラシル含有量を有さないｍＲＮＡに対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、または９９．９％よりも多く減少する。いくつかの実施形態において、インターフェロンは、ＩＦＮ−βである。いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡの哺乳類細胞への投与によって引き起こされる細胞死の頻度は、対応する野生型ｍＲＮＡ、ＣＤ８０ポリペプチドをコードするが、５−メトキシウラシルを含まないｍＲＮＡ、またはＣＤ８０ポリペプチドをコードし、かつ、５−メトキシウラシルを含むが、調整ウラシル含有量を有さないｍＲＮＡで観察される細胞死の頻度よりも、１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９５％超低い。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、ＢＪ線維芽細胞である。他の実施形態では、哺乳類細胞は、脾細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、マウスまたはラットのものである。他の実施形態では、哺乳類細胞は、ヒトのものである。１つの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、ｍＲＮＡを導入する哺乳類細胞の先天性免疫応答を実質的に誘発しない。
【０９４５】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるように、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦを含むｍＲＮＡであり、ｍＲＮＡ中のウラシルは、少なくとも約９５％の５−メトキシウラシルであり、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小値のウラシル含有量の約１１５〜約１３５％であり、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約２１％未満である。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦは、対応する野生型ＯＲＦと比較して、Ｇ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）を少なくとも約４０％増加するようにさらに修飾される。
【０９４６】
さらに他の実施形態では、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするＯＲＦは、２０個未満の非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中の少なくとも１個のコドンは、同義のコドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりも低いコドン頻度を有する代替コドンでさらに置換される。いくつかの実施形態において、ＯＲＦを含むｍＲＮＡによってコードされるＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドの発現（ｍＲＮＡ中のウラシルは、少なくとも約９５％の５−メトキシウラシルであり、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小値のウラシル含有量の約１１５〜約１３５％である）は、対応する野生型ｍＲＮＡからのＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドの発現と比較して、少なくとも約１０倍増加する。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、オープンＯＲＦを含み、ｍＲＮＡ中のウラシルは、少なくとも約９５％の５−メトキシウラシルであり、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小値のウラシル含有量の約１１５〜約１３５％であり、ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡを導入する哺乳類細胞の先天性免疫応答を実質的に誘発しない。
【０９４７】
ＣＤ８０ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド：ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチド、例えば、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするｍＲＮＡヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、５’末端から３’末端で、以下を含む：
（ｉ）以下に提供される５’キャップを含む、以下に提供される配列などの５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）ＣＤ８０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０をコードする配列最適化されている核酸配列）、
（ｉｉｉ）少なくとも１個の停止コドン、
（ｉｖ）以下に提供される配列などの３’ＵＴＲ、及び
（ｖ）以下に提供されるポリ−Ａ尾部。
【０９４８】
ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチド、例えば、Ｆｃ領域ポリペプチドまたはその機能的部分をコードするｍＲＮＡヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、５’末端から３’末端で以下を含む：
（ｉ）以下に提供される５’キャップを含む、以下に提供される配列などの５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）Ｆｃ領域ポリペプチドまたはその機能的部分をコードするオープンリーディングフレーム、
（ｉｉｉ）少なくとも１個の停止コドン、
（ｉｖ）以下に提供される配列などの３’ＵＴＲ、及び
（ｖ）以下に提供されるポリ−Ａ尾部。
【０９４９】
ある特定の実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチド、例えば、ＣＤ８０ポリペプチド、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインまたはその機能的部分を含むＣＤ８０ポリペプチドをコードするｍＲＮＡヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、５’末端から３’末端で以下を含む：
（ｉ）以下に提供される５’キャップを含む、以下に提供される配列などの５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）Ｆｃ領域ポリペプチドまたはその機能的部分に融合されるＣＤ８０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（例えば、本明細書に開示されるＣＤ８０をコードする配列最適化されている核酸配列）、
（ｉｉｉ）少なくとも１個の停止コドン、
（ｉｖ）以下に提供される配列などの３’ＵＴＲ、及び
（ｖ）以下に提供されるポリ−Ａ尾部。
【０９５０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲＮＡ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【０９５１】
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０のタンパク質配列またはその機能的断片、例えば、ＣＤ８０のＥＣドメインに対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０９５２】
使用のためのＣＤ８０組成物及び製剤：本開示のある特定の態様は、上で開示されるＣＤ８０ポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物または製剤に関する。いくつかの実施形態において、組成物または製剤は、
（ｉ）ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチド（例えば、その野生型配列、機能的断片、またはバリアント）をコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＣＤ８０ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）、ＣＤ８０ポリヌクレオチドは、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含み（例えば、ウラシルの少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％は、５−メトキシウラシルである）、及びＣＤ８０ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位）をさらに含む）、及び
（ｉｉ）式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）を含む送達剤
を含む。
【０９５３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８０ポリペプチドまたはＦｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するＯＲＦのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）は、約１００〜約１５０％である。
【０９５４】
いくつかの実施形態において、上記のＣＤ８０ポリヌクレオチド、組成物または製剤を使用して、がんを治療する。
【０９５５】
Ｃ．トール様受容体４（ＴＬＲ４）
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、１つ以上のＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、すなわち、ＴＬＲ４ポリペプチド（例えば、ｃａＴＬＲ４、すなわち、構成的に活性なＴＬＲ４ポリペプチド）をコードする１つ以上のＯＲＦを含むポリヌクレオチドを含む。
【０９５６】
トール様受容体（ＴＬＲ）は、病原体関連または内在性損傷関連の分子パターンを有するリガンドを認識する受容体のファミリーである。例えば、Ｍｅｈｍｅｔｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１７：１３０（２０１５），ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３０５８−０１５−０６４０−ｘ、Ｏｂｌａｋ，Ａ．ａｎｄ  Ｊｅｒａｌａ，Ｒ．，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１，ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／６０９５７９、及びＶａｕｒｅ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｉｕ、Ｙ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：１−１５（２０１４）を参照されたい。ＴＬＲは、進化的に保存され、リガンドの認識と関連する細胞外ロイシンリッチリピートドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達と関連する細胞内トール／インターロイキン−１受容体様ドメインを有する。Ｖａｕｒｅ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｙを参照されたい。
【０９５７】
ＴＬＲ４は、ヒトで発見された最初のＴＬＲであり、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、及び微生物感染と関連する他の細菌性及びウイルス性リガンド、並びに組織の損傷と関連する内因性リガンドを認識することが示されている。Ｖａｕｒｅ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｙを参照されたい。ＴＬＲ４発現細胞は、主として骨髄起源であり、ＴＬＲ４は、リガンド認識に必要な他のタンパク質と細胞表面上で複合体を形成する。同上。リガンドの結合は、ＴＩＲドメイン相互作用を介してＴＬＲ４ホモ二量体化を誘発し、細胞内シグナル伝達を活性化する。同上。ＬＰＳによるＴＬＲ４活性化は、例えば、炎症性サイトカイン及びケモカインの合成、並びに樹状細胞成熟及び抗原提示をもたらす。Ｏｂｌａｋ，Ａ．ａｎｄ  Ｊｅｒａｌａ，Ｒを参照されたい。また、ＴＬＲ４は、適応免疫応答の発生と関連する、抗体クラススイッチ、親和性成熟、及びメモリー細胞の形成を刺激する。同上。
【０９５８】
ＴＬＲ４と関連する先天性及び適応免疫応答は、微生物感染に対する自然の防御に必要なだけでなく、悪性新生物の制御にも関与する。Ｏｂｌａｋ，Ａ．ａｎｄ  Ｊｅｒａｌａ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，ＣｅｌｌＭｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１５０〜１５９（２０１４）を参照されたい。例えば、ＴＬＲ４によって刺激される樹状細胞は、次いで、ＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ球及びＣＤ４＋Ｔｈ１免疫の活性化などのＴ細胞応答を刺激することができ、これは、抗腫瘍免疫応答に必須である。Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌを参照されたい。しかしながら、ＴＬＲ４活性化と関連する前炎症性応答は、がん発生及び進行とも関連している。Ｏｂｌａｋ，Ａ．ａｎｄ  Ｊｅｒａｌａ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｍｅｈｍｅｔｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌを参照されたい。従って、ＴＬＲ４活性化に基づく治療介入は困難であり、がんを治療するための改善されたＴＲＬ４療法及び治療薬が当該技術分野で必要とされている。
【０９５９】
トール様受容体４（ＴＬＲ４）は、ＣＤ２８４としても知られ、病原体認識、及び先天性免疫系の活性化に役割を果たす。ＴＬＲ４のリガンドは、種々のタンパク質、細菌（例えば、リポポリ多糖（ＬＰＳ）、多くのグラム陰性及びいくつかのグラム陽性菌の成分）及びウイルスによって発現されるポリ多糖、並びに低密度リポタンパク質、ベータディフェンシン、及び熱ショックタンパク質などの種々の内在性タンパク質を含む。リガンド結合は、ＴＩＲドメイン相互作用を介してＴＬＲ４ホモ二量体化を誘発し、細胞内シグナル伝達を活性化する。また、ＴＬＲ４は、適応免疫応答の発生と関連する、抗体クラススイッチ、親和性成熟、及びメモリー細胞の形成を刺激する。
【０９６０】
９５ｋＤａ  ＴＬＲ４の構造は、細胞外ドメイン（６０８残基）、単一膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメイン（１８７残基）を含む。ＴＬＲ４には少なくとも３つの転写バリアント、すなわち転写バリアント１、３、及び４が存在する。野生型ＴＬＲ４標準ｍＲＮＡ配列のコード配列（ＣＤＳ）、バリアント１は、受託番号ＮＭ＿１３８５５４．４下で、ＮＣＢＩ参照配列データベース（ＲｅｆＳｅｑ）で記述されている（「ホモサピエンストール様受容体４（ＴＬＲ４）、転写バリアント１、ｍＲＮＡ」）。野生型ＴＬＲ４標準タンパク質配列、アイソフォームＡは、受託番号ＮＰ＿６１２５６４．１下で、ＲｅｆＳｅｑデータベースで記述されている（「トール様受容体４アイソフォームＡ前駆体［ホモサピエンス］」）。ＴＬＲ４転写バリアント３（ＮＭ＿００３２６６．３）は、アイソフォーム１と比較して、追加の内部エクソンを含み、下流ＡＵＧと、アイソフォームＡの４０Ｎ末端アミノ酸が欠けているポリペプチド（アイソフォームＣ）からの翻訳開始をもたらす。ＴＬＲ４転写バリアント４（ＮＭ＿１３８５５７．２）は、バリアント１に存在する内部エクソンが欠けている。バリアント３と同様、バリアント４の翻訳開始は、バリアント１と比較して、下流ＡＵＧで起こり、アイソフォームＡの２００Ｎ末端アミノ酸が欠けているポリペプチド（アイソフォームＤ）をもたらす。Ｒｅｆ  Ｓｅｑ配列中の参照タンパク質配列をコードする特定の核酸配列は、それぞれのＲｅｆＳｅｑデータベースエントリーに示すコード配列（ＣＤＳ）であることに留意されたい。
【０９６１】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、ＴＬＲ４ポリペプチドまたはその融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチドは、構成的に活性な（ｃａ）ＴＬＲ４バリアントである。いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、対応する野生型ＴＬＲ４配列に対して置換、及び挿入及び／または付加、欠失及び／または共有結合修飾を含む、バリアント、ペプチド、またはポリペプチドである。
【０９６２】
本明細書で使用する場合、「ｃａＴＬＲ４」という用語は、構成的に活性なＴＬＲ４の任意のバリアント、例えば当該技術分野において既知である任意のそのようなバリアント、例えば、ＴＬＲ４  Ｄ２２９Ｇ及びＴ３９９Ｉ  ＳＮＰ（Ｈｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ９（１１）：ｅ１１１４６０（２０１４）を参照されたい）、並びに、例えば、Ｐａｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｊｅｒａｌａ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６（２６）：２３３３４−４４（２０１１）、Ｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１（４）：１９７６−８３（２０１３）、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ３３：３６９−７７（２０１４）；及びＰａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２）：２２０−２９（２０１５）によって開示されるバリアントを指す。いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４は、細胞質（細胞内）（ＣＰ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、及び野生型ＴＬＲ４の細胞外（ＥＣ）ドメインの部分を含む、野生型ＴＬＲ４の切断型バリアントであり、ｃａＴＬＲ４は、野生型ＴＬＲ４の完全ＥＣドメインを含まない。
【０９６３】
いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、ＣＰドメイン及びＴＭドメインを含むが、ＬＲＲ１、ＬＲＲ２、ＬＲＲ３、ＬＲＲ４、ＬＲＲ５、ＬＲＲ６、ＬＲＲ７、ＬＲＲ８、ＬＲＲ９、ＬＲＲ１０、ＬＲＲ１１、ＬＲＲ１２、ＬＲＲ１３、ＬＲＲ１４、ＬＲＲ１５、ＬＲＲ１６、ＬＲＲ１７、またはＬＲＲ１８を含む、１つ以上のロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメインを含まない。１つの実施形態において、ｃａＴＬＲ４は、ＣＰドメイン及びＴＭドメインを含むが、いかなるＬＲＲドメインも含まない。ある特定の実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、野生型ＴＬＲ４アイソフォーム１（配列番号５２３）のアミノ酸６１８〜８３９を含む。特定の１つの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む。表６を参照されたい。ある特定の実施形態において、ｃａＴＬＲ４は、ＣＰドメイン、ＴＭドメイン、及びＥＣ断片を含む、またはそれからなる、またはそれから本質的になる。
【表６−１】
2019519516.tif 000119
【表６−２】
2019519516.tif 000120
【表６−３】
2019519516.tif 000121
【表６−４】
2019519516.tif 000122
【０９６４】
いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、完全長ＴＬＲ４ポリペプチドの細胞外（ＥＣ）ドメインの１つ以上のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態において、ＥＣドメインの１つ以上のアミノ酸は、Ｍ、ＭＰ、ＭＰＶ、ＭＰＶ、ＭＰＶＬ（配列番号５２７）、ＭＰＶＬＳ（配列番号５２８）、ＭＰＶＬＳＬ（配列番号５２９）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３０）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３１）、ＭＰＶＬＳＬＮＩ（配列番号５３２）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴ（配列番号５３３）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣ（配列番号５３４）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱ（配列番号５３５）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭ（配列番号５３６）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＮ（配列番号５３７）、またはＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＮＫ（配列番号５３８）を含む、それからなる、またはそれから本質的になる。
【０９６５】
別の実施形態では、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、完全長ＴＬＲ４ポリペプチドのＥＣドメインの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸からなるまたはそれから本質的になるＥＣ断片を含む。ある特定の実施形態において、ＥＣ断片は、ＬＲＲ領域ではない。
【０９６６】
いくつかの実施形態において、配列タグまたはアミノ酸を、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）によってコードされるＴＬＲ４配列に付加して、例えば、局在化することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチドのカルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域に位置するアミノ酸残基を、任意選択で欠失して、断片を提供することができる。
【０９６７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４配列の置換バリアントをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、この置換バリアントは、１、２、３個、または３個超の置換を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４置換バリアントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。他の実施形態では、ＴＬＲ４バリアントは、挿入バリアントである。他の実施形態では、ＴＬＲ４バリアントは、欠失バリアントである。
【０９６８】
本開示で提示されるある特定の組成物及び方法は、ｃａＴＬＲ４のタンパク質またはポリヌクレオチド配列を指す。当業者であれば、そのような開示が当該技術分野において既知であるｃａＴＬＲ４の任意の他のアイソフォームにも同様に適用可能であることが分かるであろう。
【０９６９】
いくつかの実施形態において、ｃａＴＲＬ４ポリペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０９７０】
他の実施形態では、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、完全長ＴＬＲ４ポリペプチドのＣＰドメイン、完全長ＴＬＲ４ポリペプチドのＴＭドメイン、及び完全長ＴＬＲ４ポリペプチドのＥＣドメインを含み、ＣＰドメインは、配列番号５２３のアミノ酸６５３〜８３９に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＴＭドメインは、配列番号５２３のアミノ酸６３２〜６５２に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、及び／またはＥＣ断片は、Ｍ、ＭＰ、ＭＰＶ、ＭＰＶ、ＭＰＶＬ（配列番号５２７）、ＭＰＶＬＳ（配列番号５２８）、ＭＰＶＬＳＬ（配列番号５２９）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３０）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３１）、ＭＰＶＬＳＬＮＩ（配列番号５３２）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴ（配列番号５３３）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣ（配列番号５３４）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱ（配列番号５３５）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭ（配列番号５３６）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＮ（配列番号５３７）、またはＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＮＫ（配列番号５３８）からなるまたはそれから本質的になるアミノ酸配列を有する。
【０９７１】
ある特定の実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、シグナルペプチドに融合することができる。１つの実施形態において、シグナルペプチドは、天然に存在するＴＬＲ４シグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、異種ペプチド、例えば、ＴＬＲ４以外のタンパク質由来のペプチドを含む。１つの実施形態において、シグナルペプチドは、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）タンパク質のシグナルペプチドである。別の実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチド、例えば、ヒトＩｇＫシグナルペプチドまたはネズミＩｇＫシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸１〜２９に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０９７２】
他の実施形態では、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドは、１つ以上の異種ポリペプチドに融合される融合タンパク質であり得る。
【０９７３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、任意のＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、本明細書に開示される配列最適化されているＴＬＲ４ポリヌクレオチドによってコードされるｃａＴＬＲ４ポリペプチド、または本明細書に開示される配列最適化されたポリヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含む。
【０９７４】
ＴＬＲ４ポリヌクレオチド及びオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：本明細書に開示される併用療法は、本明細書に開示される任意のＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含み得る。ある特定の実施形態において、本開示は、１つ以上のＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４ポリヌクレオチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法に含まれるＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、
（ｉ）１つ以上のＬＲＲ領域を有さないＣＰドメイン、ＴＭドメイン、及びＥＣドメインを含むｃａＴＬＲ４ポリペプチド、
（ｉｉ）Ｍ、ＭＰ、ＭＰＶ、ＭＰＶ、ＭＰＶＬ（配列番号５２７）、ＭＰＶＬＳ（配列番号５２８）、ＭＰＶＬＳＬ（配列番号５２９）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３０）、ＭＰＶＬＳＬＮ（配列番号５３１）、ＭＰＶＬＳＬＮＩ（配列番号５３２）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴ（配列番号５３３）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣ（配列番号５３４）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱ（配列番号５３５）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭ（配列番号５３６）、ＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＮ（配列番号５３７）、またはＭＰＶＬＳＬＮＩＴＣＱＭＫ（配列番号５３８）を含む、それから本質的になる、またはそれからなるＣＰドメイン、ＴＭドメイン、及びＥＣ断片を含むｃａＴＬＲ４ポリペプチド、及び
（ｉｉｉ）（ｉ）ｃａＴＬＲ４ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）異種タンパク質を含む融合タンパク質
から選択されるＴＬＲ４ポリペプチドをコードすることができる
【０９７５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法に含まれるＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、
（ｉ）（例えば、野生型ＴＬＲ４アイソフォーム１、２、または３と同じかまたは本質的に同じ長さを有する）完全長または成熟ＴＬＲ４ポリペプチド、
（ｉｉ）本明細書に記載されるＴＬＲ４アイソフォームのいずれかの機能的断片（例えば、野生型アイソフォーム１、２、または３のうちの１つよりも短いが、ＴＬＲ４活性をなお維持している切断型（例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つ以上のアミノ酸が置換されている完全長、成熟、または切断型のＴＬＲ４アイソフォーム１、２、または３タンパク質、例えば、参照アイソフォームに対してポリペプチドのＴＬＲ４活性の全てまたはほとんどを維持するバリアント）、または
（ｉｖ）（ｉ）完全長または成熟ＴＬＲ４ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）異種タンパク質を含む融合タンパク質
もコードすることができる。
【０９７６】
ある特定の実施形態において、コードされたＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４は、哺乳類ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ヒトＴＬＲ４ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントである。
【０９７７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、これらの細胞に導入する場合の細胞中のＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４のタンパク質発現レベル及び／または検出可能なＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４の活性レベルを、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドの投与前の細胞中のＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４のタンパク質発現レベル及び／または検出可能なＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４の活性レベルと比較して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加させる。
【０９７８】
ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４のタンパク質発現レベル、及び／またはＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４の活性は、当該技術分野において既知である方法に従って測定することができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで導入する。
【０９７９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コドン最適化核酸配列を含み、コドン最適化核酸配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、野生型ＴＬＲ４配列由来である。例えば、ＴＬＲ４をコードする配列最適化ＯＲＦを含む本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリヌクレオチドの場合、対応する野生型配列は、天然ＴＬＲ４である。
【０９８０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４活性を変化させない突然変異を有する、ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。そのような変異体ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４は、ポリペプチド機能中立と呼ぶことができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、１つ以上の機能中立点突然変異を含む変異体ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【０９８１】
いくつかの実施形態において、変異体ＴＬＲ４ポリペプチドは、対応する野生型ＴＬＲ４よりも高いＴＬＲ４活性を有する。いくつかの実施形態において、変異体ＴＬＲ４ポリペプチドは、対応する野生型ＴＬＲ４の活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＴＬＲ４活性を有する。
【０９８２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４断片、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、対応する成熟ＴＬＲ４よりも高いＴＬＲ４活性を有する。従って、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４断片、例えば、ｃａＴＬＲ４は、対応する成熟ＴＬＲ４のＴＬＲ４活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＴＬＲ４活性を有する。
【０９８３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号５２５のアミノ酸３０〜２５１に記載されるアミノ酸配列よりも少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、または２５％短いＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。
【０９８４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＴＬＲ４ポリペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０９８５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＴＬＲ４ポリペプチドは、配列番号５２５に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０９８６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４１のヌクレオチド８８〜７５３に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９８７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４１に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９８８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９８９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９９０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９のヌクレオチド８８〜７５３に対して８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９９１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９９２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９９３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９９４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９９５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、または５５６に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９９６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９９７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０９９８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【０９９９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０００】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１００１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１００２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。
【１００３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。
【１００４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１００５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１００６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列のヌクレオチド８８〜７５３に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１００７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１００８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０のヌクレオチド８８〜７５３に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１００９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０１０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０のヌクレオチド８８〜７５３に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０１１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０１２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、約６００〜約１００，０００ヌクレオチド（例えば、６００〜６５０、６００〜６７５、６００〜７００、６００〜７２５、６００〜７５０、６００〜７７５、６００〜８００、６００〜９００、６００〜１０００、６００〜１１００、６００〜１２００、６００〜１３００、６００〜１４００、６００〜１５００、７００〜８００、７００〜９００、７００〜１０００、７００〜１１００、７００〜１２００、７００〜１３００、７００〜１４００、７００〜１５００、７５３〜８００、７５３〜９００、７５３〜１０００、７５３〜１２００、７５３〜１４００、７５３〜１６００、７５３〜１８００、７５３〜２０００、７５３〜３０００、７５３〜５０００、７５３〜７０００、７５３〜１０，０００、７５３〜２５，０００、７５３〜５０，０００、７５３〜７０，０００、または７５３〜１００，０００）を含む。
【１０１３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）の長さは、少なくとも３００長のヌクレオチド（例えば、少なくとも約３００、４００、５００、６００、７００、７５０、７５３、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、４０００、４１００、４２００、４３００、４４００、４５００、４６００、４７００、４８００、４９００、５０００、５１００、５２００、５３００、５４００、５５００、５６００、５７００、５８００、５９００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００またはそれら以上、または最大で１００，０００までを含むヌクレオチド）である。
【１０１４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、非コードである少なくとも１個の核酸配列、例えば、ｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。
【１０１５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、一本鎖または二本鎖である。
【１０１６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であるか、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ｍＲＮＡは、少なくとも１個のＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、翻訳されて、コードされたＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｖｉｖｏで産生することができる。
【１０１７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４（例えば、その野生型配列、機能的断片、またはバリアント）をコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【１０１８】
ＴＬＲ４ポリヌクレオチドシグナル配列：ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コードされたポリペプチドの治療上の関連部位への輸送を容易にする追加特性をコードするヌクレオチド配列も含み得る。タンパク質輸送を助ける１つのかかる特徴は、シグナル配列、または標的化配列である。これらのシグナル配列によってコードされるペプチドは、標的ペプチド、輸送ペプチド、及びシグナルペプチドを含む、種々の名称で知られる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、本明細書に記載されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結したシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。
【１０１９】
いくつかの実施形態において、シグナル配列またはシグナルペプチドは、任意選択で、それぞれ、コード領域またはポリペプチドの５’（またはＮ末端）に組み込まれる、それぞれ、約９〜２００ヌクレオチド（３〜７０アミノ酸）長のポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。これらの配列の付加は、１つ以上の標的経路を介して、コードされたポリペプチドの所望の部位、例えば、小胞体またはミトコンドリアへの輸送をもたらす。いくつかのシグナルペプチドは、タンパク質が所望の部位に輸送された後、例えば、シグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。
【１０２０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、シグナルペプチドをコードする５’核酸配列をさらに含む。１つの実施形態において、シグナルペプチドは、天然に存在するＴＬＲ４シグナルペプチド、例えば、野生型ＴＬＲ４のアミノ酸１〜２３に対応するシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、異種性シグナルペプチドである。１つの実施形態において、シグナルペプチドは、リソソーム膜糖タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）タンパク質のシグナルペプチドである。別の実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチド、例えば、ヒトＩｇＫシグナルペプチドまたはネズミＩｇＫシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸１〜２９に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【１０２１】
ＴＬＲ４融合タンパク質：いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的ポリペプチドをコードする２個以上の核酸配列（例えば、ＯＲＦ）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする単一のＯＲＦを含む。しかしながら、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、２個以上のＯＲＦ、例えば、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４（第１の目的ポリペプチド）、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする第１のＯＲＦ、及び第２の目的ポリペプチドを発現する第２のＯＲＦを含み得る。いくつかの実施形態において、２個以上の目的ポリペプチドは、遺伝的に融合することができる、すなわち、２個以上のポリペプチドは、同じＯＲＦによってコードすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、２個以上の目的ポリペプチド間のリンカー（例えば、Ｇ４Ｓペプチドリンカーまたは当該技術分野において既知である別のリンカー）をコードする核酸配列を含み得る。
【１０２２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、２、３、４個、またはそれ以上のＯＲＦを含み得、各々は、目的ポリペプチドを発現する。
【１０２３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする第１の核酸配列（例えば、第１のＯＲＦ）、及び第２の目的ポリペプチドをコードする第２の核酸配列（例えば、第２のＯＲＦ）を含み得る。
【１０２４】
配列最適化されているＴＬＲ４ポリヌクレオチド：いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする配列最適化されているヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されている。
【１０２５】
ｃａＴＬＲ４をコードする例示の配列最適化されているヌクレオチド配列を表７に示す。いくつかの実施形態において、表７の配列最適化ｃａＴＬＲ４配列、断片、及びそのバリアントを使用して、本明細書に開示される方法を実施する。
【表７−１】
2019519516.tif 000123
【表７−２】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−７】
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【表７−８】
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【表７−９】
2019519516.tif 000131
【１０２６】
本明細書に開示される配列最適化されているＴＬＲ４ポリヌクレオチド配列は、対応する野生型ＴＬＲ４ヌクレオチド酸配列及び他の公知の配列最適化されているヌクレオチド配列とは異なっており、例えば、これらの配列最適化されている核酸は、独自の組成上の特徴を有する。図８９Ａ〜９０を参照されたい。
【１０２７】
いくつかの実施形態において、配列最適化されているＴＬＲ４ポリヌクレオチド配列（例えば、ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４、ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする）中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）は、参照野生型ヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）に対して改変される（例えば、減少される）。そのような配列は、ウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列と呼ばれる。ヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量の百分率（％）は、配列中のウラシルまたはチミンの数をヌクレオチドの総数で割って、１００を乗じることによって決定することができる。
【１０２８】
いくつかの実施形態において、配列最適化されているＴＬＲ４ポリヌクレオチド配列は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも低いウラシルまたはチミン含有量を有する。いくつかの実施形態において、配列最適化されているヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも多く、有益な効果、例えば、参照野生型配列と比較した場合に発現の増加、及び／またはＴＬＲ応答の減少をなお維持している。
【１０２９】
野生型ｃａＴＬＲ４のウラシルまたはチミン含有量は、約２６％である。いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２５％未満である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、または１６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１８％、１７％、または１６％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【１０３０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１６％〜２５％、１６％〜２４％、１７％〜２４％、１７％〜２３％、１８％〜２３％、１８％〜２２％、１９％〜２２％、１９％〜２１％、１９％〜２１％、１９％〜２０％、または１９％〜２０％である。
【１０３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１７％〜２３％、１７％〜２２％、１６％〜２３％、１６％〜２２％、１６％〜２１％、１７％〜２１％、１８％〜２１％、１８％〜２０％、１８％〜１９％、または１９％〜２０％である。
【１０３２】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約１８〜約２１％または１９％〜２０％である。
【１０３３】
本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【１０３４】
「野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するウラシルまたはチミン含有量」という語句は、配列最適化されている核酸中のウラシルまたはチミンの数を、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミンの総数で割って、１００を乗じることによって決定されるパラメーターを指す。このパラメーターは、％ＵＷＴまたは％ＴＷＴと本明細書で略される。
【１０３５】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、５０％より高い、５５％より高い、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、または９５％より高い。
【１０３６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６０％〜８８％、６１％〜８７％、６２％〜８６％、６３％〜８５％、６４％〜８４％、６５％〜８３％、６６％〜８２％、６７％〜８１％、６８％〜８０％、６９％〜７９％、または７０％〜７８％である。
【１０３７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、６８％〜７９％、６８％〜８０％、６８％〜８１％、６８％〜７７％、６９％〜７７％、６９％〜７８％、６９％〜７９％、６９％〜８０％、６９％〜８１％、７０％〜７６％、７０％〜７７％、７０％〜７８％、または７０％〜７９％である。
【１０３８】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％ＴＷＴは、約７０〜約７８％、例えば、７０％〜７７％である。
【１０３９】
ＤＮＡの場合、チミンがウラシルの代わりに存在し、Ｕが現れる場所でＴに置換することが認識される。従って、ＲＮＡに対する、例えば、％ＵＴＭ、％ＵＷＴ、または％ＵＴＬ、に関する全ての本開示は、ＤＮＡに対する％ＴＴＭ、％ＴＷＴ、または％ＴＴＬにも同様に適用可能である。
【１０４０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、３００％より低い、２９５％より低い、２９０％より低い、２８５％より低い、２８０％より低い、２７５％より低い、２７０％より低い、２６５％より低い、２６０％より低い、２５５％より低い、２５０％より低い、２４５％より低い、２４０％より低い、２３５％より低い、２３０％より低い、２２５％より低い、２２０％より低い、２１５％より低い、２００％より低い、１９５％より低い、１９０％より低い、１８５％より低い、１８０％より低い、１７５％より低い、１７０％より低い、１６５％より低い、１６０％より低い、１５５％より低い、１５０％より低い、１４５％より低い、１４０％より低い、１３９％より低い、１３８％より低い、１３７％より低い、１３６％より低い、１３５％より低い、１３４％より低い、１３３％より低い、１３２％より低い、１３１％より低い、１３０％より低い、１２９％より低い、１２８％より低い、１２７％より低い、１２６％より低い、１２５％より低い、１２４％より低い、１２３％より低い、１２２％より低い、１２１％より低い、１２０％より低い、１１９％より低い、１１８％より低い、１１７％より低い、１１６％より低い、または１１５％より低い。
【１０４１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１００％より高い、１０１％より高い、１０２％より高い、１０３％より高い、１０４％より高い、１０５％より高い、１０６％より高い、１０７％より高い、１０８％より高い、１０９％より高い、１１０％より高い、１１１％より高い、１１２％より高い、１１３％より高い、１１４％より高い、１１５％より高い、１１６％より高い、１１７％より高い、１１８％より高い、１１９％より高い、１２０％より高い、１２１％より高い、１２２％より高い、１２３％より高い、１２４％より高い、１２５％より高い、または１２６％より高い、１２７％より高い、１２８％より高い、１２９％より高い、または１３０％より高い。
【１０４２】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、１２２％〜１２４％、１２１％〜１２５％、１２０％〜１２６％、１１９％〜１２７％、１１８％〜１２８％、１１７％〜１２９％、１１６％〜１３０％、１１５％〜１３１％、１１４％〜１３２％、１１３％〜１３３％、１１２％〜１３４％、１１１％〜１３５％、または１１０％〜１３６％である。
【１０４３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列の％ＵＴＭは、約１１５〜約１２９％、例えば、１１６％〜１２８％である。
【１０４４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、対応する野生型核酸配列に対して連続したウラシルの数が減少している。例えば、２個の連続したロイシンは、４個のウラシルクラスターを含む配列ＣＵＵＵＵＧによってコードすることができる。そのようなサブ配列は、例えば、ウラシルクラスターを除去するＣＵＧＣＵＣと置換することができる。
【１０４５】
上述のように、配列中のフェニルアラニンの数は、コードされたポリペプチド中のフェニルアラニンの数を変更せずに排除することができないウラシルペア（ＵＵ）の最小数を確立する。
【１０４６】
野生型ｃａＴＬＲ４は、２３個のウラシルペア（ＵＵ）、及び８個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列に対してウラシルトリプレット（ＵＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、８、７、６、５、４、３、２、１個のウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含むかまたはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）を含まない。
【１０４７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数に対してウラシルペア（ＵＵ）の数が減少している。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中の可能な最小数ウラシルペア（ＵＵ）に対応する多くのウラシルペア（ＵＵ）、例えば、野生型ｃａＴＬＲ４の場合には１１個のウラシルペアを有する。
【１０４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、野生型核酸配列中のウラシルペア（ＵＵ）の数よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３個少ないウラシルペア（ＵＵ）を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列は、１０〜２２個のウラシルペア（ＵＵ）を有する。
【１０４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、または２０％未満の％ＵＵｗｔを有する。
【１０５０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、９９％〜３８％の％ＵＵｗｔを有する。特定の実施形態において、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、４３％〜９６％の％ＵＵｗｔを有する。
【１０５１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列は、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列中の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするウラシル修飾した配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５−メトキシウラシルである。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ１４２またはｍｉＲ１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、ウラシル修飾した配列を含むポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【１０５２】
いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸと略される、「ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のグアニン含有量に対する、ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする配列最適化ＯＲＦのグアニン含有量」は、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＧＴＭＸは、約７０〜約８０％、約７１〜約７９％、約７１％〜約７８％、または約７１〜約７７％である。
【１０５３】
いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸと略される、「ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列の理論的最大値のシトシン含有量に対するＯＲＦのシトシン含有量」は、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態において、％ＣＴＭＸは、約６０％〜約８０％、約６２〜約８０％、約６３〜約７９％、または約６８〜約７６％である。
【１０５４】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＴＭＸと略される、「ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列中の理論的最大値のグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）に対するＯＲＦのＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも約８１％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０〜約１００％、約８５〜約９９％、約９０〜約９７％、または約９１〜約９６％である。
【１０５５】
いくつかの実施形態において、％Ｇ／ＣＷＴと略される、「対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量に対するＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量」は、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、少なくとも１０６％、少なくとも１０７％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、または少なくとも１２０％である。
【１０５６】
いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中の第３コドン位置における平均Ｇ／Ｃ含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の第３コドン位置における平均Ｇ／Ｃ含有量よりも少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、または少なくとも３０％高い。
【１０５７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されており、％ＵＴＬ、％ＵＷＴ、％ＵＴＭ、％ＧＴＬ、％ＧＷＴ、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＬ、％ＣｗＴ、％ＣＴＭＸ、％Ｇ／ＣＴＬ、％Ｇ／ＣＷＴ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの各々は、単独またはそれらの組み合わせで、（ｉ）パラメーターの最大値（ＭＡＸ）＋約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最大値から（ｉｉ）パラメーターの最小値（ＭＩＮ）−０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０標準偏差（ＳＴＤ  ＤＥＶ）に対応する最小値の範囲である。
【１０５８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＴＬＲ４ポリペプチドは、配列番号５２５のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１０５９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ＴＬＲ４ポリペプチドは、配列番号５２５に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１０６０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４１のアミノ酸３０〜２５１に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０６１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４１に対して６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０６２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０６３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０６４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９のアミノ酸３０〜２５１に対して８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０６５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５３９または５４９に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０６６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０６７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０６８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０６９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５５２、５５４、及び５５６に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０７０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０７１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０７２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０７３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４２、５４３、５５５、５５７、５５９、及び５６３からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０７４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０７５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２  からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０７６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。
【１０７７】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４６、５５０、５５１、５５３、５６１、及び５６２からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する。
【１０７８】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０７９】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０８０】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８からなる群から選択される配列のアミノ酸３０〜２５１に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０８１】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４０、５４４、５４７、５４８、及び５５８  からなる群から選択される配列に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０８２】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０のアミノ酸３０〜２５１に対して少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０８３】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【１０８４】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０のアミノ酸３０〜２５１に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０８５】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５４５または５６０に対して８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する。
【１０８６】
ＴＬＲ４ポリペプチドをコードする修飾ヌクレオチド配列：いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするＯＲＦを含むウラシル修飾した配列であり、ｍＲＮＡは、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。
【１０８７】
ある特定の実施形態において、５−メトキシウラシル塩基が、ポリヌクレオチド中と同様にリボース糖に連結する場合、得られる修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドは、５−メトキシウリジンと呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド中のウラシルは、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または約１００％の５−メトキシウラシルである。１つの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド中のウラシルは、少なくとも９５％の５−メトキシウラシルである。別の実施形態では、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド中のウラシルは、１００％の５−メトキシウラシルである。
【１０８８】
実施形態では、ＴＬＲ４ポリヌクレオチド中のウラシルが、少なくとも９５％の５−メトキシウラシルである場合、全体的なウラシル含有量は、ｍＲＮＡが免疫応答をほとんどまたは全く誘導することなく適当なタンパク質発現レベルをもたらすように調整することができる。いくつかの実施形態において、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小値のウラシル含有量の約１０５％〜約１４５％、約１０５％〜約１４０％、約１１０％〜約１４０％、約１１０％〜約１４５％、約１１５％〜約１３５％、約１０５％〜約１３５％、約１１０％〜約１３５％、約１１５％〜約１４５％、または約１１５％〜約１４０％（％ＵＴＭ）である。他の実施形態では、ＯＲＦのウラシル含有量は、約１１７〜約１３４％または１１８％〜１３２％の％ＵＴＭである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするＯＲＦのウラシル含有量は、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、または約１５０％の％ＵＴＭである。この文脈において、「ウラシル」という用語は、５−メトキシウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
【１０８９】
いくつかの実施形態において、本開示のＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％未満である。いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約１５〜約２５％である。他の実施形態では、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約１８〜約２１％である。１つの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、オープンリーディングフレーム中の総核酸塩基含有量の約２１％未満である。この文脈において、「ウラシル」という用語は、５−メトキシウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
【１０９０】
さらなる実施形態において、５−メトキシウラシル及び調整ウラシル含有量を有する、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、またはグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量（絶対的または相対的）が増加している。いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のＣ、Ｇ、またはＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）の全体的な増加は、野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量（絶対的または相対的）に対して少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。
【１０９１】
いくつかの実施形態において、ＯＲＦ中のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量は、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする対応する野生型ヌクレオチド配列の理論的最大値のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量の約１００％未満、約９０％未満、約８５％未満、または約８０％未満（％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、または％Ｇ／ＣＴＭＸ）である。
【１０９２】
他の実施形態では、ＯＲＦ中のＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量は、約７０％〜約８０％、約７１〜約７９％、約７１〜約７８％、約７１〜約７７％、または約９０〜約９５％の％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、または％Ｇ／ＣＴＭＸである。
【１０９３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＧ及び／またはＣ含有量（絶対的または相対的）の増加は、低いＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量を有する同義のコドンを、より高いＧ、Ｃ、またはＧ／Ｃ含有量を有する同義のコドンに置き換えることによって行うことができる。他の実施形態では、Ｇ及び／またはＣ含有量（絶対的または相対的）の増加は、Ｕで終わるコドンを、ＧまたはＣで終わる同義のコドンに置き換えることによって行う。
【１０９４】
さらなる実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、５−メトキシウラシルを含み、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする対応する野生型ヌクレオチド配列よりも少ないウラシルペア（ＵＵ）及び／またはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）及び／またはウラシルクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を含む調整ウラシル含有量を有する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットを含まない。いくつかの実施形態において、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットは、ある特定の閾値を下回って減少する、例えば、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の発生を超えない。特定の実施形態において、本開示のＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１未満の非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットを含まない。
【１０９５】
ＴＬＲ４ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチド：ある特定の実施形態において、本開示のＴＬＲ４ポリヌクレオチド、例えば、ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするｍＲＮＡヌクレオチド配列を含むＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、５’末端から３’末端で以下を含む：
（ｉ）以下に提供される５’キャップを含む、以下に提供される配列などの５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）ＴＬＲ４ポリペプチド、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードするオープンリーディングフレーム（例えば、本明細書に開示される、ＴＬＲ４、例えば、ｃａＴＬＲ４をコードする配列最適化されている核酸配列）、
（ｉｉｉ）少なくとも１個の停止コドン、
（ｉｖ）以下に提供される配列などの３’ＵＴＲ、及び
（ｖ）以下に提供されるポリ−Ａ尾部。
【１０９６】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲＮＡ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
【１０９７】
いくつかの実施形態において、本開示のＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ｃａＴＬＲ４のタンパク質配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＴＬＲ４ポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１０９８】
ＴＬＲ４ポリヌクレオチドを含む、使用のための組成物及び製剤：本開示のある特定の態様は、上で開示されるＴＬＲ４ポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物または製剤に関する。
【１０９９】
いくつかの実施形態において、組成物または製剤は、
（ｉ）ｃａＴＬＲ４ポリペプチド（例えば、その野生型配列、機能的断片、またはバリアント）をコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＴＬＲ４ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）（ＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含み（例えば、ウラシルの少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％は、５−メトキシウラシルである）、及びＴＬＲ４ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位）をさらに含む）、及び
（ｉｉ）式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物（例えば、化合物１８、２５、２６または４８）を含む送達剤
を含む。
【１１００】
いくつかの実施形態において、ｃａＴＬＲ４ポリペプチドをコードするＴＬＲ４ヌクレオチド配列の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するＯＲＦのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）は、約１００〜約１５０％である。
【１１０１】
いくつかの実施形態において、上記のＴＬＲ４ポリヌクレオチド、組成物、または製剤を使用して、がんを治療する。
【１１０２】
Ｄ．インターロイキン１８（ＩＬ１８）
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される併用療法は、１つ以上のＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。本明細書で使用する場合、「ＩＬポリヌクレオチド」という用語は、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を指す。
【１１０３】
インターロイキン−１８（「ＩＬ１８」）は、インターフェロンガンマ誘導因子としても知られ、免疫応答及び炎症の主要な調節因子である。ＩＬ１８は、樹状細胞及びマクロファージを含むいくつかの細胞型で構成的に発現される。ＩＬ１８は、ＩＬ１８受容体に結合することによって作動し、ＩＬ１２と一緒に、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びある種類のＴ細胞を刺激することによって細胞性免疫を誘発し、マクロファージ及び他の免疫細胞を活性化するのに重要な役割を果たすサイトカインインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）を産生する。Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４：ａｒｔｉｃｌｅ  ２８９（２０１３）。
【１１０４】
ＩＬ１８は、強い炎症反応を誘発することも分かっており、その発現は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、１型糖尿病、クローン病、乾癬、及び移植片対宿主病と関連している。同上。しかしながら、加齢黄斑変性及びいくつかのがんモデルなどのいくつかの疾患モデルでは、ＩＬ１８の発現は、原因よりもむしろ防御であることが分かっている。Ｄｏｙｌｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ６（２３０）：２３０ｒａ４４（２０１４）。
【１１０５】
ＩＬ１８がＮＫ細胞を活性化する能力は、免疫系によりがん細胞を標的とする方法として研究されてきた。Ｆａｂｂｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．９７：６６５−６７５（２０１５）。しかしながら、ＩＬ１８が進行胃がんにおける腫瘍進行を支持し得ることが、ある研究により示唆されている。実際、ＩＬ１８は、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼの活性化を介して、ＩＬ１８Ｒ発現胃がん細胞中の血管新生促成因子、ロンボスポンジン−１の産生を刺激する。Ｋｉｍ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３４４，１２８４−１２８９。別の研究では、ＶＥＧＦは、胃がん細胞中のＩＬ１８産生及び処理を刺激し、ＩＬ１８は、次に、テンシン下方調節及びアクチン重合を介して細胞遊走を促進する。Ｋｉｍ，Ｋ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６，１４６８−１４７６。
【１１０６】
また、ＩＬ１８がＫｉｔ−ＮＫ細胞のサブセットをＫｉｔ＋ＮＫ細胞に変換し、マウスモデル中でＰＤ−Ｌ１を過剰発現し、免疫アブレーション機能を媒介することが、他の研究により示されている。実際、腫瘍中のＩＬ１８のサイレンシングまたはＩＬ１８ＢＰによるその遮断により、ＮＫ細胞依存性免疫監視機構が回復する。Ｔｅｒｍｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７２，２７５７−２７６７。従って、プロ腫瘍効果を有さずに抗腫瘍効能を有する改善されたＩＬ１８産物を同定することが必要とされている。
【１１０７】
野生型ＩＬ１８遺伝子は、１９２アミノ酸プレタンパク質をコードする。プレタンパク質は、カスパーゼ−１によって切断され、３５アミノ酸シグナルペプチドを除去し、１５７アミノ酸長の成熟タンパク質を残す。Ｇｒａｃｉｅ，Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．７３：２１３−２２４（２００３）。ホモサピエンスインターロイキン−１８アイソフォーム１前駆体ｍＲＮＡ配列に対してＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１５６２．３、及び対応するＩＬ１８アイソフォーム１プレタンパク質に対してＮＰ＿００１５５３．１も参照されたい。カスパーゼ−１による切断後、成熟ＩＬ１８は、それが形成された細胞から分泌される。１つの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、成熟ＩＬ１８ポリペプチドをコードする。
【１１０８】
ＩＬ１８シグナル伝達は、ＮＫ細胞及びある種類のＴ細胞上に存在するヘテロ二量体受容体を介して生じる。ＩＬ１８は、ＩＬ１８受容体アルファ鎖（ＩＬ１８Ｒα）に低親和性で最初に結合し、その後、ＩＬ１８受容体ベータ鎖（ＩＬ１８Ｒβ）を動員して、高親和性の複合体を形成する。Ｇｒａｃｉｅ，Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．７３：２１３−２２４（２００３）。このヘテロ三量体複合体は、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、及びＴＲＡＦ−６を動員するトールインターロイキン−１受容体（ＴＩＲ）と相互作用し、ΙκΒの分解、ＮＦκＢの活性化、及び炎症誘発性遺伝子のその後の活性化を引き起こす。Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４：ａｒｔｉｃｌｅ  ２８９（２０１３）。従って、ポリヌクレオチドによってコードされるＩＬ１８ポリペプチドは、ＩＬ１８受容体アルファ鎖に結合することができる、及び／またはＩＬ１８Ｒα鎖及びＩＬ１８Ｒβ鎖とヘテロ二量体を形成することができる。
【１１０９】
野生型ＩＬ１８  ｍＲＮＡ配列、アイソフォーム１のコード配列（ＣＤＳ）は、受託番号ＮＭ＿００１５６２．３下で、ＮＣＢＩ参照配列データベース（ＲｅｆＳｅｑ）で記述されている（「ホモサピエンスインターロイキン１８（ＩＬ１８）、転写バリアント１、ｍＲＮＡ」）。１つの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、野生型ＩＬ１８ポリペプチド、アイソフォーム１をコードする。野生型ＩＬ１８タンパク質配列、アイソフォーム１は、受託番号ＮＰ  ００１５５３．１下で、ＲｅｆＳｅｑデータベースで記述されている（「インターロイキン−１８アイソフォーム１前駆体［ホモサピエンス］」）。
【１１１０】
本明細書で使用する場合、「ＩＬ１８ポリペプチド」は、成熟ＩＬ１８ポリペプチド、または１つ以上のＩＬ１８機能を有するそのバリアント、変異体、もしくは誘導体を指す。１つの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドは、成熟ＩＬ１８ポリペプチドに対して異種であるシグナルペプチドを含み得る。別の実施形態では、ＩＬ１８ポリペプチドは、成熟ＩＬ１８ポリペプチド内で天然に存在するシグナルペプチドを含む。ＩＬ１８アイソフォーム２は、アイソフォーム１と比較して、インフレーム・コーディング・エクソンを欠いている。アイソフォーム２は、アイソフォーム１と比較して、より短く、タンパク質分解活性化に耐性を有することができる。野生型ＩＬ１８アイソフォーム２  ｍＲＮＡは、受託番号ＮＭ＿００１２４３２１１．１下で、ＲｅｆＳｅｑデータベースで記述されており（「ホモサピエンスインターロイキン１８（ＩＬ１８）、転写バリアント２、ｍＲＮＡ」）、野生型ＩＬ１８アイソフォーム２タンパク質は、受託番号ＮＰ＿００１２３０１４０．１下で、ＲｅｆＳｅｑデータベースで記述されている（「インターロイキン−１８アイソフォーム２［ホモサピエンス］」）。アイソフォーム１は、１９３アミノ酸長であり、アイソフォーム２は、１８９アミノ酸長である。
【１１１１】
いくつかの実施形態において、配列タグまたはアミノ酸を、本開示のポリヌクレオチド（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）によってコードされる配列に付加して、例えば、局在化することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリペプチドのカルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域に位置するアミノ酸残基は、任意選択で欠失して、断片を提供することができる。
【１１１２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８アイソフォーム１または２配列の置換バリアントをコードし、これは、１、２、３、または３個超の置換を含み得る。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８置換バリアントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。他の実施形態では、ＩＬ１８バリアントは、挿入バリアントである。他の実施形態では、そのバリアントは、欠失バリアントである。
【１１１３】
本開示で提示されるある特定の組成物及び方法は、ＩＬ１８をコードするＯＲＦを含むポリヌクレオチド配列、またはＩＬ１８タンパク質もしくはポリペプチドを指す。当業者であれば、当該技術分野において既知であるＩＬ１８のヒトＩＬ１８、アイソフォーム１、並びに任意の他のアイソフォームにも同様に適用可能であることが分かるであろう。
【１１１４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドは、配列番号５６４または配列番号５６６のアミノ酸３７〜１９３に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１１１５】
本明細書に開示されるＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コードされたポリペプチドの治療上の関連部位への輸送を容易にする追加特性をコードするヌクレオチド配列も含み得る。タンパク質輸送を助ける１つのかかる特徴は、シグナル配列、または標的化配列である。これらのシグナル配列によってコードされるペプチドは、標的ペプチド、輸送ペプチド、及びシグナルペプチドを含む、種々の名称で知られる。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、本明細書に記載されるＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結したシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。
【１１１６】
いくつかの実施形態において、「シグナル配列」または「シグナルペプチド」は、任意選択で、それぞれ、コード領域またはＩＬ１８ポリペプチドの５’（またはＮ末端）に組み込まれる、それぞれ、約９〜２００ヌクレオチド（３〜７０アミノ酸）長のポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。これらの配列の付加は、１つ以上の標的経路を介して、コードされたＩＬ１８ポリペプチドの所望の部位、例えば、小胞体またはミトコンドリアへの輸送をもたらす。いくつかのシグナルペプチドは、タンパク質が所望の部位に輸送された後、例えば、シグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。
【１１１７】
当該技術分野において既知である任意の異種性シグナル配列を本開示で使用することができる。１つの実施形態において、本開示に有用なシグナルペプチドは、天然に存在するＩＬ１８シグナルペプチドである。
【１１１８】
別の実施形態では、本開示に有用なシグナルペプチドは、ヒトＩＬ２タンパク質のシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号５６８）に対して少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１１１９】
別の実施形態では、本開示に有用なシグナルペプチドは、ヒトラムダシグナルペプチドであるシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＭＡＷＴＶＬＬＬＧＬＬＳＨＣＴＧＳＶＴＳ（配列番号５６９）に対して少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１１２０】
別の実施形態では、本開示に有用なシグナルペプチドは、ヒトＩＬ１ｒａシグナルペプチドであるシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＭＥＩＣＲＧＬＲＳＨＬＩＴＬＬＬＦＬＦＨＳＥＴＩＣ（配列番号５７０）に対して少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【１１２１】
別の実施形態では、本開示に有用なシグナルペプチドは、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）のシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドは、ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰＳＱＥＩＨＡＲＦＲＲＧＡＲ（配列番号５７１）に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【１１２２】
ある特定の実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸置換、突然変異、欠失、または挿入を含む。１つの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドは、カスパーゼ酵素によって切断される１つ以上のアミノ酸置換または突然変異を含む。別の実施形態では、ＩＬ１８ポリペプチドは、カスパーゼ切断部位に１つ以上のアミノ酸置換または突然変異を含む。他の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換または突然変異は、配列番号５６４（完全長野生型ＩＬ１８、アイソフォーム１）に対応するアミノ酸７１、配列番号５６４（完全長野生型ＩＬ１８、アイソフォーム１）に対応するアミノ酸７６、または配列番号５６４に対応するアミノ酸７１及び７６である。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換または突然変異は、Ｄ７１Ｓ、Ｄ７６Ｎ、またはＤ７１Ｓ及びＤ７６Ｎの両方である。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８は、シグナルペプチドを有さない配列番号５７８（ＩＬ１８二重変異体）を含む。
【１１２３】
他の実施形態では、ＩＬ１８ポリペプチドは、１つ以上の異種ポリペプチドに融合される融合タンパク質であり得る。
【１１２４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される任意のＩＬ１８ポリペプチド、例えば、本明細書に開示される配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド、または本明細書に開示される配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチドを含むヌクレオチド配列によってコードされるＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含み得る。
【１１２５】
ＩＬ１８ポリヌクレオチド及びオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：本明細書に開示される併用療法で使用されるＩＬ１８ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される任意のＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含む。ある特定の実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上のＩＬ１８ポリペプチド、例えば、ＩＬ１８ポリヌクレオチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。
【１１２６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、
（ｉ）シグナルペプチドを有する、または有さない（例えば、野生型ＩＬ１８アイソフォーム１または２と同じかまたは本質的に同じ長さを有する）成熟ＩＬ１８ポリペプチド、
（ｉｉ）本明細書に記載されるＩＬ１８アイソフォームのいずれかの機能的断片（例えば、野生型アイソフォーム１または２のうちの１つよりも短いが、ＩＬ１８活性をなお維持している切断型（例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つ以上のアミノ酸が置換されている完全長、成熟、または切断型ＩＬ１８アイソフォーム１または２タンパク質、例えば、Ｄ７１Ｓ、Ｄ７６Ｎ、またはＤ７１Ｓ及びＤ７６Ｎの両方、または参照アイソフォームに対してポリペプチドのＩＬ１８活性の全てまたはほとんどを維持するバリアント）、
（ｉｖ）シグナルペプチド、例えば、ｔＰＡシグナルペプチド、ＩＬ２シグナルペプチド、ヒト免疫グロブリンラムダ鎖（ｈＩｇＬＣ）シグナルペプチド、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ｈＩＬ−１ｒａ）シグナルペプチド、またはそれらの任意の組み合わせに融合される（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれか１つのＩＬ１８ポリペプチド、
（ｖ）（ｉ）成熟ＩＬ１８ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアント、及び（ｉｉ）異種タンパク質を含む融合タンパク質
をコードすることができる。
【１１２７】
ある特定の実施形態において、コードされたＩＬ１８ポリペプチドは、哺乳類ＩＬ１８ポリペプチド、例えば、ヒトＩＬ１８ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントである。
【１１２８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、細胞中のＩＬ１８タンパク質発現レベル及び／または検出可能なＩＬ１８活性レベルを、これらの細胞に導入する場合、ＩＬ１８ポリヌクレオチドの投与前の細胞中のＩＬ１８タンパク質発現レベル及び／または検出可能なＩＬ１８活性レベルと比較して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加させる。ＩＬ１８タンパク質発現レベル及び／またはＩＬ１８活性は、当該技術分野において既知である方法に従って測定することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドを細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入する。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドを細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで導入する。
【１１２９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、コドン最適化核酸配列を含み、コドン最適化核酸配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、野生型ＩＬ１８配列由来である。例えば、ＩＬ１８をコードする配列最適化ＯＲＦを含むＩＬ１８ポリヌクレオチドの場合、対応する野生型配列は、天然ＩＬ１８である。
【１１３０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８活性を変化させない突然変異を有する、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。そのような変異体ＩＬ１８ポリペプチドは、機能中立と呼ぶことができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、１つ以上の機能中立点突然変異を含む変異体ＩＬ１８ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む。
【１１３１】
いくつかの実施形態において、変異体ＩＬ１８ポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ１８よりも高いＩＬ１８活性を有する。いくつかの実施形態において、変異体ＩＬ１８ポリペプチドは、対応する野生型ＩＬ１８の活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＩＬ１８活性を有する。
【１１３２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、対応する完全長ＩＬ１８よりも高いＩＬ１８活性を有するＩＬ１８断片をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む。従って、いくつかの実施形態において、ＩＬ１８断片は、対応する完全長ＩＬ１８のＩＬ１８活性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％高いＩＬ１８活性を有する。
【１１３３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８のアミノ酸３０〜２５１に記載されるアミノ酸配列よりも少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、または２５％短いＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含む（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３４】
他の実施形態では、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８６％〜１００％、９０％〜１００％、８６％〜９５％、８６％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８７％〜１００％、９０％〜１００％、８７％〜９５％、８７％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８８％〜１００％、９０％〜１００％、８８％〜９５％、８８％〜９０％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１３９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して８９％〜１００％、９５％〜１００％、または８９％〜９５％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１４０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して９０％〜１００％、９０％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１４１】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号５６４、５６６、５７２、５７４、５７６、５７７、または５７８に対して９１％〜１００％、９１％〜９５％、または９５％〜１００％の配列同一性を有する（シグナルペプチドを有して、また有さず）。
【１１４２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、約５００〜約１００，０００ヌクレオチド（例えば、５００〜６５０、５００〜６７５、５００〜７００、５００〜７２５、５００〜７５０、５００〜７７５、５００〜８００、５００〜９００、５００〜１０００、５００〜１１００、５００〜１２００、５００〜１３００、５００〜１４００、５００〜１５００、５６７〜８００、５６７〜９００、５６７〜１０００、５６７〜１１００、５６７〜１２００、５６７〜１３００、５６７〜１４００、５６７〜１５００、５７９〜８００、５７９〜９００、５７９〜１０００、５７９〜１２００、５７９〜１４００、５７９〜１６００、５７９〜１８００、５７９〜２０００、５７９〜３０００、５７９〜５０００、５７９〜７０００、５７９〜１０，０００、５７９〜２５，０００、５７９〜５０，０００、５７９〜７０，０００、または５７９〜１００，０００）を含む。
【１１４３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）の長さは、少なくとも３００長のヌクレオチド（例えば、少なくとも約３００、４００、５００、５６７、５７９、６００、７００、７５０、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、４０００、４１００、４２００、４３００、４４００、４５００、４６００、４７００、４８００、４９００、５０００、５１００、５２００、５３００、５４００、５５００、５６００、５７００、５８００、５９００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００または最大で１００，０００（それを含む）ヌクレオチド）である。
【１１４４】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、非コードである少なくとも１個の核酸配列、例えば、ｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。
【１１４５】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、一本鎖または二本鎖である。
【１１４６】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含むＩＬ１８ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であるか、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、少なくとも１個のＩＬ１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、翻訳されて、コードされたＩＬ１８ポリペプチドをｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｖｉｖｏで産生することができる。
【１１４７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチド（例えば、その野生型配列、機能的断片、またはバリアント）をコードする配列最適化されているヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）を含み、ポリヌクレオチドは、少なくとも１個の化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１２２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、送達剤、例えば、式（Ｉ）、例えば、化合物１〜１４７のいずれかを有する化合物で製剤化される。
【１１４８】
ＩＬ１８融合タンパク質：いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的ポリペプチドをコードする２個以上の核酸配列（例えば、ＯＲＦ）を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリヌクレオチドは、ＩＬ１８ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする単一のＯＲＦを含む。しかしながら、いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリヌクレオチドは、２個以上のＯＲＦ、例えば、ＩＬ１８ポリペプチド（第１の目的ポリペプチド）、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする第１のＯＲＦ、及び第２の目的ポリペプチドを発現する第２のＯＲＦを含み得る。いくつかの実施形態において、２個以上の目的ポリペプチドは、遺伝的に融合することができる、すなわち、２個以上のポリペプチドは、同じＯＲＦによってコードすることができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチドは、２個以上の目的ポリペプチド間のリンカー（例えば、Ｇ４Ｓペプチドリンカーまたは当該技術分野において既知である別のリンカー）をコードする核酸配列を含み得る。
【１１４９】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、２、３、４個以上のＯＲＦを含み得、各々は、目的ポリペプチドを発現する。
【１１５０】
いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードする第１の核酸配列（例えば、第１のＯＲＦ）、及び第２の目的ポリペプチドをコードする第２の核酸配列（例えば、第２のＯＲＦ）を含み得る。
【１１５１】
ＩＬ１８ポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列：いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、本明細書に開示されるＩＬ１８ポリペプチドをコードする配列最適化されているヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、ＯＲＦは、配列最適化されている。
【１１５２】
ＩＬ１８をコードする例示の配列最適化されているヌクレオチド配列を表８に示す。いくつかの実施形態において、配列最適化ＩＬ１８、表８の配列、断片、及びそのバリアントを使用して、本明細書に開示される方法を実施する。
【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
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【表８−１０】
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【表８−１１】
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【表８−１２】
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【表８−１３】
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【表８−１４】
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【表８−１５】
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【表８−１６】
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【表８−１７】
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【表８−１８】
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【表８−１９】
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【表８−２０】
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【表８−２１】
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【表８−２２】
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【表８−２３】
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【表８−２４】
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【表８−２５】
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【表８−２６】
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【表８−２７】
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【表８−２８】
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【表８−２９】
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【表８−３０】
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【表８−３１】
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【表８−３２】
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【表８−３３】
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【表８−３４】
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【表８−３５】
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【表８−３６】
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【表８−３７】
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【表８−３８】
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【表８−３９】
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【表８−４０】
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【表８−４１】
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【表８−４２】
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【表８−４３】
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【表８−４４】
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【表８−４５】
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【表８−４６】
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【表８−４７】
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【表８−４８】
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【表８−４９】
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【表８−５０】
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【表８−５１】
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【表８−５２】
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【表８−５３】
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【表８−５４】
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【表８−５５】
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【表８−５６】
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【表８−５７】
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【表８−５８】
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【表８−５９】
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【表８−６０】
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【表８−６１】
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【表８−６２】
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【１１５３】
本明細書に開示される配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド配列は、対応する野生型ＩＬ１８ポリヌクレオチド配列及び他の公知の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド配列とは異なっており、例えば、これらの配列最適化されている核酸は、独自の組成上の特徴を有する。図１００Ａ〜１０１Ｅを参照されたい。
【１１５４】
いくつかの実施形態において、配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド配列（例えば、ＩＬ１８ポリペプチド、その機能的断片、またはそのバリアントをコードする）中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率（％）は、参照野生型ポリヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン核酸塩基の百分率に対して改変される（例えば、減少される）。そのような配列は、ウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列と呼ばれる。いくつかの実施形態において、配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド配列は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも低いウラシルまたはチミン含有量を有する。いくつかの実施形態において、本開示の配列最適化されているＩＬ１８ポリヌクレオチド配列中のウラシルまたはチミン含有量は、参照野生型配列中のウラシルまたはチミン含有量よりも多く、有益な効果、例えば、参照野生型配列と比較した場合にインターフェロン−γの発現の増加をなお維持している。
【１１５５】
シグナルペプチドを有さない野生型ＩＬ１８ポリペプチド（例えば、配列番号５６４）のウラシルまたはチミン含有量は、約２８％である。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、野生型ＩＬ１８のウラシルまたはチミジン含有量未満、例えば、２８％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、２８％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、または１６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１８％、１７％、または１６％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２５％未満、または約２０％未満である。
【１１５６】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１２％〜２５％、１２％〜２４％、１３％〜２４％、１３％〜２３％、１４％〜２３％、１４％〜２２％、１５％〜２２％、１５％〜２１％、１６％〜２１％、１６％〜２０％、または１７％〜２０％である。
【１１５７】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１５％〜２２％、１５％〜２１％、１６％〜２１％、１６％〜２０％、または１７％〜２０％である。
【１１５８】
特定の実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約１７〜約２０％である。
【１１５９】
ＩＬ２ｓｐ  ＩＬ１８ｗｔ（例えば、配列番号５７５）のウラシルまたはチミン含有量は、約３０％である。いくつかの実施形態において、ＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、３０％未満である。いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量は、３０％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、または１６％未満である。いくつかの実施形態において、ウラシルまたはチミン含有量は、１８％、１７％、または１６％を下回らない。本明細書に開示される配列のウラシルまたはチミン含有量、すなわち、その総ウラシルまたはチミン含有量は、％ＵＴＬまたは％ＴＴＬと本明細書で略される。
【１１６０】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１２％〜２５％、１２％〜２４％、１３％〜２４％、１３％〜２３％、１４％〜２３％、１４％〜２２％、１５％〜２２％、１５％〜２１％、１６％〜２１％、１６％〜２０％、または１７％〜２０％である。
【１１６１】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、１５％〜２２％、１６％〜２１％、１５％〜２０％、１６％〜２０％、１５％〜２１％、１６％〜２１％、１７％〜２１％、または１７％〜２０％である。
【１１６２】
特定の実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列のウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＬまたは％ＴＴＬ）は、約１７〜約２０％である。
【１１６３】
本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列は、対応する野生型核酸配列中のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＷＴまたは％ＴＷＴ）に従って、または野生型タンパク質配列をコードする核酸の理論的最小値のウラシルまたはチミン含有量に対するそのウラシルまたはチミン含有量（％ＵＴＭまたは％ＴＴＭ）に従って記載することもできる。
【１１６４】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＬ１８ポリペプチドをコードするウラシル修飾した配列またはチミン修飾した配列の％ＵＷＴまたは％Ｔ