(57)【要約】本発明は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。また、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、セベリパーゼアルファを前記患者に投与することを含み、前記患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に前記患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少を有すると判定された、方法。
【請求項２】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、セベリパーゼアルファを前記患者に投与することを含み、前記患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に前記患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少を有すると判定された、方法。
【請求項３】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、
（ａ）  セベリパーゼアルファを前記患者に投与することと、
（ｂ）  前記患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に前記患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少を有するか否かを判定することと、を含み、
少なくとも１ポイントの減少が肝線維症の軽減を示す、方法。
【請求項４】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、
（ａ）  セベリパーゼアルファを前記患者に投与することと、
（ｂ）  前記患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に前記患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少を有するか否かを判定することと、を含み、
少なくとも１ポイントの減少が治療を示す、方法。
【請求項５】
前記患者が２ポイント以上の減少を有すると判定された、請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記患者が２ポイント以上の減少を有するか否かを判定することを含む、請求項３又は請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１ポイントの減少が２０週目か、又は２０週目までに生じる、請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１ポイントの減少が３０週目か、又は３０週目までに生じる、請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記２ポイント以上の減少が５２週目か、又は５２週目までに生じる、請求項５又は請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｉｓｈａｋ線維症ステージが肝生検により評価される、請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
セベリパーゼアルファが静脈内注入として投与される、請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
セベリパーゼアルファが少なくとも二時間にわたって注入される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
セベリパーゼアルファが前記患者に隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１から請求項１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
セベリパーゼアルファが、
ａ）  １ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して１０ｍＬ；
ｂ）  １１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ；
ｃ）  ２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ；
ｄ）  ５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ；又は
ｅ）  １００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬの総注入容量で投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
セベリパーゼアルファが前記患者に毎週１回、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１から請求項１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
セベリパーゼアルファが、
ａ）  １ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ；
ｂ）  １１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ；
ｃ）  ２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ；
ｄ）  ５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬ；又は
ｅ）  １００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して５００ｍＬの総注入容量で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者がベースラインで肝硬変を有する、請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、コラーゲン、マクロファージ、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、及び／又は肝脂肪含有量の正常レベルへの移行をもたらす、請求項１から請求項１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法により、ベースラインと比較して、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、コラーゲン、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、微小胞脂肪症、マクロファージ、及び／又は全肝脂肪含有量のレベルが減少することになる、請求項１から請求項１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法により、ベースラインと比較して、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が約６０％以上、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）が約４０％以上、及び／又は肝脂肪含有量が約３０％以上減少することになる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
肝脂肪含有量のレベルが磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により評価される、請求項１８から請求項２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者における肝線維症を軽減するためのキットであって、
（ａ）ある用量のセベリパーゼアルファと、
（ｂ）請求項１から請求項２１のいずれか一項に記載の方法でセベリパーゼアルファを使用するための指示書と、を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年９月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／４０２１８３号、２０１６年１１月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４２０２３３号、及び２０１７年２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／４５６５１１号の利益を主張するものであり、これらの出願の内容は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を含んでおり、該配列表はＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されたものであり、かつその全体が参照により本明細書に援用される。このＡＳＣＩＩコピーは２０１７年９月１４日に作成され、ＡＸＪ−２２１ＰＣ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは３，９５８バイトである。
【背景技術】
【０００３】
ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症（ＬＡＬ−Ｄ）は、酵素の欠損のためにライソゾームでコレステリルエステル（ＣＥ）及びトリグリセリド（ＴＡＧ）が分解されないことによって特徴づけられる、稀なライソゾーム病（ＬＳＤ）である。ＬＡＬ欠損症は、多くの組織及び細胞型で基質の蓄積を伴うその他のライソゾーム病に類似している。ＬＡＬ欠損症では、肝臓のＫｕｐｆｆｅｒ細胞、脾臓及び小腸粘膜固有層の組織球を含めた細網内皮系の細胞で、基質の蓄積が最も顕著である。細網内皮細胞は、マクロファージマンノース／Ｎ−アセチルグルコサミン受容体（マクロファージマンノース受容体、ＭＭＲ、又はＣＤ２０６としても知られている）を発現するが、この受容体は、ＧｌｃＮＡｃ又はマンノース末端Ｎ−グリカンを持つタンパク質の結合、細胞取り込み、及びライソゾーム内への移行を媒介し、この重要な細胞型における酵素欠損を是正し得る経路を提供するものである。
【０００４】
ＬＡＬ欠損症は、胃腸、肝臓、及び心血管の合併症を伴って好発し、罹患率及び死亡率が高いとして知られる多系統疾患である。ＬＡＬ欠損症の臨床的な影響は、多数の組織においてライソゾームに大量の脂質物質が蓄積すること、並びに肝コレステロール合成が大幅に増えることを含めてコレステロール及び脂質の恒常性維持機構が重度に攪乱されることに起因するものである。ＬＡＬ欠損症には、ウォルマン病（ＷＤ）及びコレステリルエステル蓄積症（ＣＥＳＤ）という少なくとも二つの表現型がある。
【０００５】
ウォルマン病は、最初にそれを説明した医師にちなんで名称が付けられたものであり、ＬＡＬ欠損症の最も侵攻性の高い症状である。この表現型は、成長阻害、吸収不良、脂肪便、重度の体重減少、リンパ節腫大、脾腫大、肝腫大を含めた、胃腸及び肝臓での発現を特徴とする。ウォルマン病は急速進行性であり、通常は生後一年以内に例外なく死に至る。生後一年以内に重症のＬＡＬ欠損症に起因した成長阻害を示す患者が１２カ月齢よりも長く生存することは極めて稀であることが、症例報告レビューに示されている。この最も侵攻型では、成長阻害が顕著な臨床上の特徴であり、早期死亡率の主な誘因となる。肝肥大及びトランスアミナーゼ上昇により明らかになる肝病変も乳児ではよく見られる。
【０００６】
ウォルマン病の診断は、身体所見及び臨床検査の両方により確定されるものである。乳児は、下痢、持続性嘔吐、摂食困難、発育不全、及び成長障害により生後２カ月以内に入院することになるのが典型的である。身体所見には肝腫大及び脾腫大による腹部膨張などがあり、またレントゲン検査により副腎の石灰沈着が明らかになることも多い。臨床評価では通例、血清トランスアミナーゼレベルが上昇したことや、内因性ＬＡＬ酵素活性がないこと又は極端に低下したことが明らかになる。コレステロール及びトリグリセリドの血中レベルの上昇が一部の患者に見られる。
【０００７】
ＬＡＬ欠損症の患者は、後年、顕著な肝臓及び心血管の病変を現す場合もあり、これをコレステリルエステル蓄積症（ＣＥＳＤ）と称することが多い。ＣＥＳＤでは、著しい肝腫大、肝細胞壊死、トランスアミナーゼの上昇、肝硬変、及び肝線維症により肝臓が重症となる。ＣＥ及びＴＡＧのレベルが増加するため、心血管病変は、高脂血症を特徴とし得る。ＣＥＳＤに罹患している一部の対象において、動脈壁への脂肪沈着物の蓄積（アテローム性動脈硬化症）が報告されている。沈着は、動脈管腔を狭め、血管の閉塞をもたらして、心筋梗塞及び心筋発作を含めた顕著な心血管事象のリスクを増加させる可能性がある。しかしながら、ＬＡＬ欠損症に罹患している全ての対象がアテローム性動脈硬化症を発症するわけではない。例えば、ウォルマン病の患者は、肝臓及び脾臓の肥大、リンパ節腫大、及び小腸による吸収不良を含めた、この疾患に関連する他の症状で苦しめられるが、ＷＤは通常、アテローム性動脈硬化症を特徴とするものではない（Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  （Ｓｃｒｉｖｅｒ，Ｃ．Ｒ．，Ｂｅａｕｄｅｔ，Ａ．Ｌ．，Ｓｌｙ，Ｗ．Ｓ．ａｎｄ  Ｖａｌｌｅ  Ｄ．，ｅｄｓ）７ｔｈ  ｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  ２  ｐ．２５７０  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，１９９５）。同様に、全てのＣＥＳＤ患者がアテローム性動脈硬化症を示すわけではない。Ｄｉ  Ｂｉｓｃｅｇｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １１：７６４−７７２（１９９０），Ａｍｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３６：２４１−２５０（１９９５）を参照のこと。ＣＥＳＤの症状は、合併症が成人期後期に顕在化するまで診断されないまま経過した患者については極めて多様である一方で、それ以外の患者は、幼児期早期に現れる肝機能障害を発症し得る。ＣＥＳＤは、短寿命及び著しい健康障害を伴う。ＣＥＳＤを有する者の平均余命は、随伴する合併症の重症度によって異なる。
多くの場合、ＬＡＬ欠損症の治療法には生涯にわたる治療が必要となる。したがって、患者の生活に質を改善することを目的に、投与頻度を最小限にした有効な治療法が大いに必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  （Ｓｃｒｉｖｅｒ，Ｃ．Ｒ．，Ｂｅａｕｄｅｔ，Ａ．Ｌ．，Ｓｌｙ，Ｗ．Ｓ．ａｎｄ  Ｖａｌｌｅ  Ｄ．，ｅｄｓ）７ｔｈ  ｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  ２  ｐ．２５７０  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，１９９５
【非特許文献２】Ｄｉ  Ｂｉｓｃｅｇｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １１：７６４−７７２（１９９０），Ａｍｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３６：２４１−２５０（１９９５）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ（スコア）において、セベリパーゼアルファの投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。
【００１０】
一実施形態では、ＬＡＬ欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法は、（ａ）セベリパーゼアルファを該患者に投与することと、（ｂ）該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、セベリパーゼアルファの投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有するか否かを判定することと、を含み、少なくとも１ポイントの減少が肝線維症の軽減を示す。
【００１１】
別の実施形態では、ＬＡＬを有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法は、
（ａ）患者由来の肝生検材料を採取し、該生検に基づいてベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージを割り当てることと、（ｂ）該生検に続いてセベリパーゼアルファを該患者に投与することと、（ｃ）該患者から第２の肝生検材料を採取し、セベリパーゼアルファ投与後のＩｓｈａｋ線維症ステージを割り当てることと、（ｄ）該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、前述のベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少を有するか否かを判定することと、を含み、少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）が肝線維症の軽減を示す。
【００１２】
別の実施形態では、本方法は、セベリパーゼアルファ投与前の１以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６のＩｓｈａｋ線維症ステージ）のベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージに基づいて、肝線維症を有するＬＡＬ患者を診断することによって、肝線維症を有する該患者を診断及び治療することを含み、ベースラインと比較して、セベリパーゼアルファの治療後のＩｓｈａｋ線維症ステージにおける少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）が肝線維症の軽減を示す。
【００１３】
また、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、セベリパーゼアルファの投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、（ａ）セベリパーゼアルファを該患者に投与することと、（ｂ）該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、セベリパーゼアルファの投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有するか否かを判定することと、を含み、少なくとも１ポイントの減少が治療を示す。
【００１４】
別の実施形態では、ＬＡＬ欠損症を有するヒト患者を治療する方法は、
（ａ）患者由来の肝生検材料を採取し、該生検に基づいてベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージを割り当てることと、（ｂ）該生検に続いてセベリパーゼアルファを該患者に投与することと、（ｃ）該患者から第２の肝生検材料を採取し、セベリパーゼアルファ投与後の第２のＩｓｈａｋ線維症ステージを割り当てることと、（ｄ）該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、前述のベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、セベリパーゼアルファの投与後に少なくとも１ポイントの減少を有するか否かを判定することと、を含み、少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）が治療を示す。
【００１５】
別の実施形態では、本方法は、セベリパーゼアルファ投与前の１以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６のＩｓｈａｋ線維症ステージ）のベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージに基づいて、肝線維症を有するＬＡＬ患者を診断することによって、該患者を治療することを含み、ベースラインと比較して、セベリパーゼアルファの治療後のＩｓｈａｋ線維症ステージにおける少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）が治療を示す。
【００１６】
本明細書に記載の方法は、１ポイントの減少をもたらす。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ５への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ４への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ２からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ０からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は１ポイント以上の減少である。
【００１７】
別の実施形態では、減少は２ポイントの減少である。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ４への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ２からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は２ポイント以上の減少である。
【００１８】
別の実施形態では、減少は３ポイントの減少である。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は３ポイント以上の減少である。
【００１９】
一実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、２０週目に又は２０週目までに生じる。別の実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、３０週目に又は３０週目までに生じる。別の実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、５２週目に又は５２週目までに生じる。別の実施形態では、２ポイント以上の減少が、５２週目に又は５２週目までに生じる。
【００２０】
Ｉｓｈａｋ線維症ステージは、当該技術分野で公知の任意の適切な技術によって評価することができる。一実施形態では、Ｉｓｈａｋ線維症ステージは肝生検により評価される。一実施形態では、患者はベースラインで肝硬変を有している。
【００２１】
セベリパーゼアルファは、患者に当該技術分野で公知の任意の適切な手段により投与することができる。一実施形態では、セベリパーゼアルファは静脈内注入物として投与される。一実施形態では、セベリパーゼアルファは少なくとも２時間にわたって注入される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。セベリパーゼアルファが患者に隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される特定の実施形態では、セベリパーゼアルファは、（ａ）１ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して１０ｍＬ、（ｂ）１１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ、（ｃ）２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ、（ｄ）５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ、又は（ｅ）１００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬの総注入容量で投与される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に毎週１回、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に毎週１回又は隔週１回、０．３５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される（例えば、小児患者に対して又は耐性の問題のある事象において）。セベリパーゼアルファが患者に毎週１回、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される特定の実施形態では、セベリパーゼアルファは、（ａ）１ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ、（ｂ）１１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ、（ｃ）２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ、（ｄ）５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬ、又は（ｅ）１００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して５００ｍＬの総注入容量で投与される。
【００２２】
別の実施形態では、患者は第２の治療薬を投与される。第２の治療薬としては、例えば、コレステロール降下薬（例えば、スタチン又はエゼチミブ）、抗ヒスタミン薬（例えば、ジフェンヒドラミン）、又は免疫抑制薬が挙げられ得る。
【００２３】
本明細書に記載の方法の有効性は、任意の適切な手段で評価することができる。
【００２４】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＬＤＬ−Ｃレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＬＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＬＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約２６％、２７％、２８％、２９％、又は３０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００２５】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、高比重リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＨＤＬ−Ｃレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％増加することになる（例えば、ＳＡでの治療２０週以上の後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、又は２５％増加することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００２６】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、非高比重リポタンパクコレステロール（ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、又は３０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００２７】
別の実施形態では、本方法により、ベースラインと比較して、（ＡＬＴ）、ＬＤＬ−Ｃ、コラーゲン、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、微小胞脂肪症、マクロファージ、及び／又は全肝脂肪含有量のレベルが減少することになる。
【００２８】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝臓の機能が改善することになる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝臓検査を正常化するのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝臓トランスアミナーゼ（例えば、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び／又は血清アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）など）が正常血清レベルへ移行することになる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＳＴ及び／又はＡＬＴを減少させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＬＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＬＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、又は５７％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００２９】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＳＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＳＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、又は５１％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００３０】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝腫大を最小化するのに十分なものである。  別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、患者の肝臓サイズを減少させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、正常の肝容積への移行（例えば、ベースラインと比較した場合の肝容積の減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝容積がベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、又は２０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝容積がベースラインと比較して少なくとも約１１％、１２％、又は１３％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、３０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００３１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝脂肪含有量（肝脂肪画分）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合の肝脂肪含有量の減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝脂肪画分がベースラインと比較して少なくとも約１０％、１５％、２０％、又は２５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝脂肪画分がベースラインと比較して少なくとも約２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、又は２９％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、３０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００３２】
一実施形態では、肝脂肪含有量のレベルは、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により評価される。
【００３３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、血清フェリチンレベルを減少させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、血清脂質レベル（例えば、コレステリルエステル（ＣＥ）レベル及び／又はトリグリセリド（ＴＧ）レベルなど）を低減させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＴＧの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＴＧレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＴＧレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＴＧレベルがベースラインと比較して少なくとも約１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、又は２５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【００３４】
別の実施形態では、本方法により、ベースラインと比較して、ＡＬＴが約６０％以上、ＬＤＬ−Ｃが約４０％以上、及び／又は肝脂肪含有量が約３０％以上減少することになる。
【００３５】
別の実施形態では、患者は小児患者である。別の実施形態では、ＳＡでの治療を開始する時に、患者は８カ月齢未満である。別の実施形態では、ＳＡは小児患者に毎週又は隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＳＡは小児患者に隔週１回、３ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＳＡは小児患者に毎週又は隔週１回、０．３５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者が４０カ月以上の（例えば、４１カ月、４２カ月、４３カ月、４４カ月、４５カ月、４６カ月、４７カ月、４８カ月、４９カ月、５０カ月、５１カ月、５２カ月、５３カ月、５４カ月、５５カ月、５６カ月、５７カ月、５８カ月、５９カ月、６０カ月、６１カ月、６２カ月、６３カ月、６４カ月、６５カ月、６６カ月、６７カ月、６８カ月、６９カ月、７０カ月、又はそれを超える）平均余命となる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者の体重増加が改善することになる。例えば一実施形態では、小児患者は、ＳＡでの治療後、年齢対体重の成長曲線で４５％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％）以上のパーセンタイルにある。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者における胃腸症状が改善する（例えば、嘔吐及び下痢が軽減される）ことになる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者におけるアルブミンが正常レベルとなる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者において正常な肝臓機能をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてＡＬＴの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＡＬＴレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてＡＳＴの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＡＳＴレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてヘモグロビンの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のヘモグロビンレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてアルブミンの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のアルブミンレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者において正常な発育をもたらす。
【００３６】
また、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者における肝線維症を軽減するためのキットであって、（ａ）ある用量のセベリパーゼアルファと、（ｂ）本明細書に記載の方法のうちのいずれか一つでセベリパーゼアルファを使用するための指示書と、を含むキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は全体の試験計画を示す。
【図２】図２はＡＲＩＳＥにおける肝生検の頻度を示す。
【図３】図３は対応のある肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）を有する対象のベースラインから２０週目までの肝脂肪症の割合の変化を示す。
【図４】図４はベースラインと２０週目での対応のある肝生検データを有する対象の脂肪症割合の中央値の変化を示す。
【図５】図５は二重盲検期（２０週のＳＡ曝露（ｎ＝１６））の間のＳＡ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。
【図６】図６は非盲検期（５２週のＳＡ曝露（ｎ＝１２））の間のＳＡ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。
【図７】図７は二重盲検期（０週のＳＡ曝露（ｎ＝１０））の間のＰＢＯ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。
【図８】図８は非盲検期（３０週のＳＡ曝露（ｎ＝８））においてＰＢＯ群でＳＡを開始した場合のＩｓｈａｋステージの変化を示す。
【図９】図９はＳＡで２０週及び５２週治療した後のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、Ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ、及びＴＧのデータ一覧を示す。
【図１０】図１０は治療群（すなわちＳＡ／ＳＡ及びＰＢＯ／ＳＡ）におけるＡＬＴの平均値の経時的な変化を示す。
【図１１】図１１はＳＡで７６週治療した場合の脂質パラメーターにおけるベースラインからの平均値の変化を示す。
【図１２】図１２は小児ＬＡＬ−ＣＬ０３臨床試験の生存統計を示す。
【図１３】図１３は誕生から死亡までの時間（ＬＡＬ−ＣＬ０３臨床試験）と成長阻害を有する未治療のＬＡＬ−Ｄ乳児（ＬＡＬ−−ＮＨ０１臨床試験）のカプラン・マイヤープロットを示す。
【図１４】図１４は患者Ｄの年齢対体重の成長曲線を示す。
【図１５−１】図１５Ａ〜１５Ｆは患者Ｂ（図１５Ａ）、患者Ｃ（図１５Ｂ）、患者Ｄ（図１５Ｃ）、患者Ｅ（図１５Ｄ）、患者Ｆ（図１５Ｅ）、患者Ｇ（図１５Ｆ）の年齢対体重の成長曲線を示す。
【図１５−２】同上。
【図１５−３】同上。
【図１６−１】図１６Ａ〜１６Ｆは経時的な肝臓と血液のパラメーター（ＡＬＴ（図１６Ａ）、ＡＳＴ（図１６Ｂ）、ヘモグロビン（図１６Ｃ）、フェリチン（図１６Ｄ）、アルブミン（図１６Ｅ）、血小板（図１６Ｆ））を示す。
【図１６−２】同上。
【図１６−３】同上。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。また、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。
【００３９】
定義
便宜上、本明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語を本明細書で明記して、本発明を説明するために使用される種々の用語の意味及び範囲を説明かつ定義する。
【００４０】
本明細書で使用される「ＬＡＬ」とは、「ライソゾーム酸性リパーゼ」を表し、この二つの用語は、本出願全体を通して互換的に使用される。ＬＡＬは、ヒトタンパク質、すなわち、ヒトライソゾーム酸性リパーゼであり得る。「ＳＢＣ−１０２」という用語は、本明細書で使用される場合、組換えヒトライソゾーム酸性リパーゼを表す。ＬＡＬは、文献において、酸コレステリルエステル加水分解酵素、コレステリルエステラーゼ、リパーゼＡ、ＬＩＰＡ、及びステロールエステラーゼとも称されている。
【００４１】
ＬＡＬは、コレステロールエステル及びトリグリセリドからの遊離コレステロール、グリセロール、及び遊離脂肪酸への加水分解に触媒作用を及ぼす。よって、「ＬＡＬ活性」は、例えば、蛍光基質であるオレイン酸４−メチルウンベリフェリル（４ＭＵＯ）の切断により測定することができる。４ＭＵＯの切断は、例えば、放出されたフルオロフォアである４−メチルウンベリフェロン（４ＭＵ）の約３６０ｎｍでの励起、及び４６０ｎｍでの発光により検出され得る。結果は、相対蛍光単位（ＲＦＵ）で記録され得る。例えば、３０分のエンドポイントアッセイで切断された基質の量は、４ＭＵ標準曲線に対して定量化することができ、活性の１単位（Ｕ）は、３７℃で１分当たり１マイクロモルの４ＭＵＯを切断するために必要とされる酵素の量として定義され得る。したがって、ＬＡＬの機能的断片又は機能的変異体は、ＬＡＬ活性（例えばコレステロールエステル及び／又はトリグリセリドを加水分解する能力）を有する断片又は変異体を含む。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「外因性ＬＡＬ」とは、患者が自然に産生しないＬＡＬを表す。例えば、外因性ＬＡＬには、患者に投与される組換えＬＡＬタンパク質と、ある人又は動物から単離され、患者に投与されるＬＡＬタンパク質と、ＬＡＬコードＲＮＡ及び／若しくはＤＮＡの投与の結果として又は内因性ＬＡＬタンパク質の発現を増加させる別の治療の結果として患者に産生される（すなわち、発現する）ＬＡＬタンパク質とが含まれる。一実施形態では、外因性ＬＡＬはセベリパーゼアルファである。
【００４３】
本明細書で使用される場合、セベリパーゼアルファ（ＫＡＮＵＭＡ（登録商標））は、組換えヒトライソゾーム酸性リパーゼ（ｒｈＬＡＬ）である。ライソゾーム酸性リパーゼは、コレステリルエステルからの遊離コレステロール及び脂肪酸への加水分解、並びにトリグリセリドからのグリセロール及び遊離脂肪酸への加水分解に触媒作用を及ぼす、ライソゾーム糖タンパク質酵素である。セベリパーゼアルファは、遺伝子操作されたニワトリによって産卵された卵の卵白で、組換えＤＮＡ技術を用いて産生される。精製されたセベリパーゼアルファは、６Ｎ−結合型グリコシル化部位を含む単量体糖タンパク質であり、分子質量が約５５，０００ダルトンである。セベリパーゼアルファのアミノ酸配列は、ヒトＬＡＬのアミノ酸配列と同一である。セベリパーゼアルファの比活性は、１９５〜３４５ユニット／ｍｇである。１ユニットは、３７℃の所定のアッセイ条件下で、合成基質であるオレイン酸４−メチルウンベリフェリル１マイクロモルの１分当たりの加水分解を触媒する酵素活性の量である。ＫＡＮＵＭＡ（登録商標）は、静脈内注入用の単回使用のバイアルに、無菌で防腐剤の含まれていない、非発熱性の水溶液として供給される。各バイアルは２０ｍｇ／１０ｍＬのセベリパーゼアルファを含有している。溶液の各ｍＬは、セベリパーゼアルファ（２ｍｇ）、クエン酸一水和物（１．５７ｍｇ）、ヒト血清アルブミン（１０ｍｇ）、及びクエン酸三ナトリウム二水和物（１３．７ｍｇ）をｐＨ５．９で含む。
【００４４】
ＬＡＬ欠損症は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）酵素活性の顕著な減少又は損失をもたらす遺伝子欠陥を特徴とする、常染色体劣性のライソゾーム蓄積障害である。ＬＡＬ酵素の主な作用部位はライソゾームであり、そこで酵素は通例、ＬＤＬ−Ｃを含む脂質粒子を分解する。欠損したＬＡＬ酵素の活性により、コレステリルエステル及びトリグリセリドが、肝臓、脾臓、腸、及び血管壁などの複数の器官でライソゾーム内に蓄積し、進行性の合併症が生じることになる。肝臓で脂質が蓄積した結果、肝脂肪含有量が増加し、線維症及び肝硬変肝などの肝臓疾患が進行することになる恐れがある。腸壁での脂質の蓄積によって、吸収不良及び成長阻害が生じることになる。同時に、ライソゾーム脂質の分解が損なわれることに起因する脂質異常症が、ＬＤＬ−Ｃ及びトリグリセリドの上昇と、ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の低下を伴って一般的に見られる。
【００４５】
セベリパーゼアルファは、細胞表面受容体に、そのタンパク質に発現したグリカンを介して結合した後に、ライソゾーム内に移行される。セベリパーゼアルファは、コレステリルエステル及びトリグリセリドからの遊離コレステロール、グリセロール、及び遊離脂肪酸へのライソゾーム加水分解に触媒作用を及ぼす。
【００４６】
「静脈内注射」は、ＩＶプッシュ又はボーラス注射とも医学的に称されることが多く、シリンジがＩＶアクセスデバイスに接続され、薬物が直接的に、通例迅速に、また静脈の過敏症又は急激すぎる作用を引き起こす可能性がある場合には最大１５分まで、注射される投与経路を表す。薬物をＩＶ管の液体流内に注射したならば、薬物を管から患者に確実に到達させる何らかの手段がなければならない。通常これは、液体流を正常に流れるようにし、それによって、薬物を血流の中に送ることにより達成される。一方、第一の注射後、時折「フラッシュ」と呼ばれる第２の流体注射を使用して、薬物を血流の中に入り易くする場合もある。
【００４７】
「静脈内注入」は、薬物が長時間にわたり送達される投与経路を表す。例えば、薬物は、１〜８時間にわたり、患者に送達され得る。また、薬物は、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、又は約８時間にわたり、患者に送達され得る。静脈内注入を行うために、ＩＶ重力滴下又はＩＶポンプを用いることができる。ＩＶ注入は、典型的には、患者が特定の時間にのみ薬物を必要とし、電解質、血中糖類、及び水分損失を回復する液体などの追加の静脈内輸液（例えば、ナトリウム、塩化物、グルコース、又はそのいずれかの組み合わせを含み得る水溶液）を必要としない場合に使用される。
【００４８】
本明細書に使用される「鳥類」という用語は、以下に限定されないが、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、キジ、オウム、フィンチ、タカ、カラス、並びにダチョウ、エミュー、及びヒクイドリを含む走鳥類などの、分類学的分類における鳥綱の生物の任意の種、亜種、又は種族を表す。本用語には、ガルスガルス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ）、又はニワトリ（例えば、ハクショクレグホン（Ｗｈｉｔｅ  Ｌｅｇｈｏｒｎ）、ブラウンレグホン（Ｂｒｏｗｎ  Ｌｅｇｈｏｒｎ）、バードロック（Ｂａｒｒｅｄ−Ｒｏｃｋ）、サセックス（Ｓｕｓｓｅｘ）、ニューハンプシャー（Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）、ロードアイランド（Ｒｈｏｄｅ  Ｉｓｌａｎｄ）、オーストラロープ（Ａｕｓｔｒａｌｏｒｐ）、ミノルカ（Ｍｉｎｏｒｃａ）、アムロックス（Ａｍｒｏｘ）、カルフォルニアグレイ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｇｒａｙ））といった様々な公知の系統、並びにシチメンチョウ、キジ、ウズラ、アヒル、ダチョウ、及び商業的規模で一般的に飼育される他の家禽の系統が含まれる。また、本用語には、胚期及び胎仔期を含む、全ての発育段階の個々の鳥類の生体も含まれる。
【００４９】
「家禽由来」又は「鳥類由来」という用語は、家禽から産生された又は家禽から得られた組成物又は物質を表す。「家禽」とは、以下に限定されないが、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウ、ウズラ、及び走鳥類を含む、家畜として飼育され得る鳥類を表す。例えば、「家禽由来」とは、ニワトリ由来、シチメンチョウ由来、及び／又はウズラ由来を表すことができる。
【００５０】
「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、医療提供者による指示に従って診察若しくは治療を受けている、又は受けた、又は受ける予定の任意の個人を表す。
【００５１】
「治療有効用量」とは、本明細書で使用される場合、意図した治療応答を生じさせるのに必要とされる薬物の用量（例えば、量及び／又は間隔）を表す。治療有効用量とは、かかる用量を受けなかった対応する対象と比較して、疾患、障害、若しくは副作用の、治療、治癒、予防、若しくは回復を改善させるか、又は疾患若しくは障害の発生若しくは進行の速度を減少させる用量を表す。本用語にはまた、その範囲内に、生理学的機能を強化するために有効な用量も含まれる。
【００５２】
「治療する」「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）すること」及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、予防的に、及び／又は症状が生じた後のいずれかに、疾患若しくは症状を緩和する、寛解する、若しくは軽減する、更なる症状を予防する、根本的な症状の原因を軽減若しくは防止する、疾患若しくは状態を阻害する、疾患若しくは状態の発症を阻止する、疾患若しくは状態を和らげる、疾患若しくは状態を退縮させる、疾患若しくは状態によってもたらされた症状を和らげる、又は疾患若しくは状態の症状を阻止する方法を表す。
【００５３】
特定の用量に関して本明細書で使用される場合、「ｋｇ−１」、「１ｋｇ当たり」「／ｋｇ」、及び「１キログラム当たり」とは、哺乳類の「体重１キログラム当たり」を表し、よって、本用語は互換的に使用することができる。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「体表面積（ＢＳＡ）に基づく用量」とは、個々の患者の体表面積（ＢＳＡ）に適合した作用剤の用量を表すものである。ＢＳＡに基づく用量は、ｍｇ／ｋｇ（体重）として与えられ得る。直接測定しないでＢＳＡを得る種々の計算方法が公開されており、最も広範に用いられているのはデュボア（Ｄｕ  Ｂｏｉｓ）の式（Ｄｕ  Ｂｏｉｓ  Ｄ，Ｄｕ  Ｂｏｉｓ  ＥＦ（Ｊｕｎ  １９１６）Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７（６）：８６３−７１；及びＶｅｒｂｒａｅｃｋｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（Ａｐｒ  ２００６）．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ５５（４）：５１５−２４を参照）である。他のＢＳＡの式の例として、Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒの式（Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒ  ＲＤ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，１９８７；３１７：１０９８）、Ｈａｙｃｏｃｋの式（Ｈａｙｃｏｃｋ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  １９７８，９３：６２−６６）、Ｇｅｈａｎ及びＧｅｏｒｇｅの式（Ｇｅｈａｎ  ＥＡ，Ｇｅｏｒｇｅ  ＳＬ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｐ  １９７０，５４：２２５−２３５）、Ｂｏｙｄの式（Ｃｕｒｒｅｎｔ，ＪＤ（１９９８），Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ２（２）；及びＢｏｙｄ，Ｅｄｉｔｈ（１９３５），Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ．Ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃｈｉｌｄ  Ｗｅｌｆａｒｅ，Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ．ｘ．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｆｕｊｉｍｏｔｏの式（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｅｉｓｅｉｇａｋｕ  Ｚａｓｓｈｉ  １９６８；５：４４３−５０）、Ｔａｋａｈｉｒａの式（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｅｉｓｅｉｇａｋｕ  Ｚａｓｓｈｉ  １９６８；５：４４３−５０）、並びにＳｃｈｌｉｃｈの式（Ｓｃｈｌｉｃｈ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｒｎａｈｒｕｎｇｓ  Ｕｍｓｃｈａｕ  ２０１０；５７：１７８−１８３）が挙げられる。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「固定用量」、「一定用量」、及び「一定固定用量」という用語は互換的に用いられ、患者の体重又は体表面積（ＢＳＡ）関係なく患者に投与される用量を表す。したがって、一定用量又は固定用量は、ｍｇ／ｋｇ単位の用量としてではなく、作用剤の絶対量として与えられる。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、単数の「ポリペプチド」と複数の「ポリペプチド」とを包含することが意図され、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）により直鎖状に結合したモノマー（アミノ酸）で構成される分子を表す。「ポリペプチド」という用語は、二つ以上のアミノ酸の任意の鎖を表し、特定の長さの産物を表すものではない。よって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は二つ以上のアミノ酸鎖を表すのに使用される他の任意の用語は、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のいずれかの代わりに、又はそれと互換的に使用することができる。「ポリペプチド」という用語は、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は天然には存在していないアミノ酸による修飾を含めた、ポリペプチドの発現後の修飾産物を表すことも意図される。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来し得るか、又は組換え技術によって産生され得るが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されたものではない。ポリペプチドは、化学合成を含む、任意の手段で生成され得る。
【００５７】
本明細書で使用される場合、二つのアミノ酸配列間又は二つのヌクレオチド配列間のパーセント相同性は、二つの配列間のパーセント同一性に等しい。二つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有される同一位置の数の関数であり（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）、二つの配列の至適アライメントのために導入されるべきギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れている。配列の比較及び二つの配列間のパーセント同一性の算出は、以下の非限定的な例で説明するように、数学的アルゴリズムを用いて遂行され得る。
【００５８】
二つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８））を用いて、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用して算出され得る。更に、二つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）に組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ、Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））のアルゴリズムを用いて、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかと、ギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、及び長加重１、２、３、４、５、又は６とを使用して測定され得る。
【００５９】
「単離された」ポリペプチド、又はその断片、変異体、若しくは誘導体は、自然環境には存在しないポリペプチドを意図するものである。特定のレベルの精製は必要とされない。例えば、単離されたポリペプチドは、その自然環境又は天然環境から取り出され得る。宿主細胞で発現した組換え産生ポリペプチド及びタンパク質は、任意の適切な技術を用いて分離、分画、又は部分的若しくは実質的に精製された天然ポリペプチド又は組換えポリペプチドであるため、本明細書に開示されるように単離されているとみなされる。
【００６０】
本明細書で開示される他のポリペプチドは、前述のポリペプチドの断片、誘導体、類似体、又は変異体、及びそれらの任意の組み合わせである。本明細書に開示されるポリペプチドのいずれかに言及するとき、「断片」、「変異体」、「誘導体」、及び「類似体」という用語は、対応する天然のポリペプチド（例えば、コレステロールエステル及び／又はトリグリセリドを加水分解する能力を保持している、ＬＡＬポリペプチド断片、変異体、誘導体、及び類似体）の活性の少なくとも一部を保持している任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片には、例えば、タンパク質分解断片と欠失断片とが含まれる。ポリペプチドの変異体は、上述の断片と、更にはアミノ酸置換、欠失、又は挿入により変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドとを含む。変異体は、天然に存在していても、天然に存在していなくてもよい。天然に存在していない変異体は、当該技術分野に公知の変異誘発法を使用して産生することができる。変異体ポリペプチドは、保存的若しくは非保存的なアミノ酸置換、欠失、又は付加を含んでいてもよい。誘導体は、天然のポリペプチドには見られない更なる特徴を示すように変更されたポリペプチドである。例としては融合タンパク質が挙げられる。変異体ポリペプチドは、本明細書において、「ポリペプチド類似体」とも称される場合がある。本明細書で使用される場合、対象ポリペプチドの「誘導体」は、官能側基の反応により化学的に誘導された一つ又は複数の残基を含有し得る。２０個の標準アミノ酸のうちの一つ又は複数の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも、「誘導体」として含まれている。例えば、４−ヒドロキシプロリンはプロリンに対して置換することができ、５−ヒドロキシリジンはリジンに対して置換するでき、３−メチルヒスチジンはヒスチジンに対して置換することができ、ホモセリンはセリンに対して置換することができ、及び／又はオルニチンはリジンに対して置換することができる。
【００６１】
「ポリヌクレオチド」という用語は、単一核酸と複数の核酸とを包含するように意図され、単離された核酸分子又は構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）若しくはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を表す。ポリヌクレオチドは、従来のリン酸ジエステル結合又は非従来型の結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含んでいてもよい。「核酸」という用語は、ポリヌクレオチドに含まれる任意の一つ又は複数の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡ断片又はＲＮＡ断片を表す。「単離された」核酸又はポリヌクレオチドは、その天然環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡ、又はＲＮＡを意図するものである。例えば、ベクターに含まれたＬＡＬをコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的において単離されたとみなされる。単離されたポリヌクレオチドの更なる例としては、異種宿主細胞に保持された組換えポリヌクレオチド、又は溶液中の（部分的又は実質的）精製ポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子には、本発明のポリヌクレオチドのインビボ又はインビトロのＲＮＡ転写物が含まれる。本発明の単離されたポリヌクレオチド又は核酸は、合成で産生された同様の分子を更に含む。更に、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、又は転写ターミネーターなどの制御エレメントであり得るか、又はそれらを含み得る。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「コード領域」とは、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸の一部分である。「停止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、又はＴＡＡ）は、アミノ酸に翻訳されないが、コード領域の一部とみなされてもよい一方で、任意の隣接配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどは、コード領域の一部分ではない。本発明の二つ以上のコード領域は、例えば単一ベクター上などの単一ポリヌクレオチド構築物に、又は例えば別個の（異なる）ベクター上のなどの別個のポリヌクレオチド構築物に存在し得る。更に、いずれのベクターも、単一コード領域を含むか、又は二つ以上のコード領域を含んでいてもよい。加えて、本発明のベクター、ポリヌクレオチド、又は核酸は、ＬＡＬポリペプチド又はその断片、変異体、若しくは誘導体をコードする核酸に融合して又は融合せずに、異種コード領域をコードすることができる。異種コード領域は、以下に限定されないが、分泌シグナルペプチド又は異種機能ドメインなどの、固有のエレメント又はモチーフを含む。
【００６３】
種々の転写調節領域は、当業者に公知である。これらは、以下に限定されないが、サイトメガロウイルスからのプロモーター及びエンハンサーセグメント（イントロンＡと併せて即時初期プロモーター）、シミアンウイルス４０（初期プロモーター）、及びレトロウイルス（ラウス肉腫ウイルスなど）といった、脊椎動物細胞で機能する転写調節領域を含む。他の転写調節領域は、アクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモン、及びウサギβ−グロビンなどの脊椎動物遺伝子に由来するもの、並びに真核生物細胞での遺伝子発現を調節することができる他の配列を含む。更なる適切な転写調節領域は、組織特異的プロモーター及びエンハンサー並びにリンホカイン誘発性プロモーター（例えば、インターフェロン又はインターロイキンにより誘発されるプロモーター）を含む。
【００６４】
同様に、種々の翻訳調節エレメントが当業者に公知である。これらは、以下に限定されないが、リボソーム結合部位、翻訳開始及び終止コドン、並びにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に内部リボソーム侵入部位又はＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列とも称される）を含む。
【００６５】
他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の形態のＲＮＡである。
【００６６】
本発明のポリヌクレオチド及び核酸コード領域は、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの分泌を誘導する、分泌ペプチド又はシグナルペプチドをコードする更なるコード領域と関連していてもよい。シグナル仮説によると、哺乳類細胞によって分泌されたタンパク質は、粗面小胞体全体にわたって成長タンパク質鎖の排出が開始されると成熟タンパク質から切断される、シグナルペプチド又は分泌リーダー配列を有する。当業者が認識することには、脊椎動物細胞によって分泌されたポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に融合したシグナルペプチドを有するのが一般的であり、これは完全又は「完全長」のポリペプチドから切断されて、分泌形態又は「成熟」形態のポリペプチドを産生する。特定の実施形態では、天然のシグナルペプチド、例えばヒトＬＡＬのＭＫＭＲＦＬＧＬＶＶＣＬＶＬＷＴＬＨＳＥＧ（配列番号２）シグナルペプチドが使用されるか、又はその配列の機能性誘導体であって、それと作用可能に会合したポリペプチドの分泌を誘導する能力を保持する誘導体が使用される。あるいは、異種のシグナルペプチド（例えば、異種哺乳類又は異種鳥類のシグナルペプチド）又はその機能性誘導体が使用され得る。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）又はマウスβグルクロニダーゼのリーダー配列で置換され得る。
【００６７】
「ベクター」とは、一本鎖、二本鎖、環状、又はスーパーコイルＤＮＡ若しくはＲＮＡから構成されるポリヌクレオチドを意味する。典型的なベクターは、機能的遺伝子発現を可能にするために適切な距離で作用可能に結合された以下のエレメントから構成され得る：複製開始点、プロモーター、エンハンサー、５’ｍＲＮＡリーダー配列、リボソーム結合部位、核酸カセット、終止部位及びポリアデニル化部位、並びに選択可能マーカー配列。これらのエレメントのうちの一つ又は複数は、特定の用途において省くことができる。核酸カセットは、発現されるべき核酸配列を挿入するための制限部位を含んでもよい。機能的ベクターにおいて、核酸カセットは、翻訳開始部位及び終止部位を含む、発現されるべき核酸配列を含有する。任意選択的に、イントロンが構築物に含まれ、例えばコード配列５’’に含まれ得る。ベクターは、適切な制御配列を有するベクターに特定のコード配列が含まれるように構築され、調節配列に対するコード配列の位置及び配向は、コード配列が調節配列又は制御配列の「調節」下で転写されるようにする。この目的を達成するために、特定の対象となるタンパク質をコードする配列を修飾することが望ましい場合がある。例えば、配列を適切な配向を有する調節配列に結合できるように修飾するか、又はリーディングフレームを維持することが必要であり得る場合もある。調節配列及び他の制御配列は、ベクターの中に挿入される前にコード配列に連結され得る。あるいは、コード配列は、発現ベクター内に直接クローン化され得るが、この発現ベクターは、調節配列の制御調節を有するリーディングフレーム内にありかつその制御調節下にある、調節配列及び適切な制御部位を既に含んでいるものである。
【００６８】
本明細書で使用される「発現」という用語は、遺伝子が生化学物質、例えばポリペプチドを産生するプロセスを表す。本プロセスには、以下に限定されないが、遺伝子ノックダウン並びに一時的発現及び安定発現の両方を含めた、細胞内における遺伝子の機能的存在物の任意の発現が含まれる。本プロセスには、以下に限定されないが、遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写、及びかかるｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が含まれる。遺伝子の発現により、「遺伝子産物」が産生する。本明細書で使用される場合、遺伝子産物は、核酸、例えば遺伝子の転写により産生されるメッセンジャーＲＮＡか、又は転写物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載される遺伝子産物は、転写後修飾、例えばポリアデニル化を受けた核酸、又は翻訳後修飾、例えばメチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断などを受けたポリペプチドを更に含む。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」とは、組換えＤＮＡ技法を使用して構築されかつ少なくとも一つの異種遺伝子をコードするベクターを保有する、細胞を表す。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「Ｎ−グリカン」、「オリゴ糖」、「オリゴ糖構造」、「グリコシル化パターン」、「グリコシル化プロファイル」、及び「グリコシル化構造」という用語は、実質的に同じ意味を有し、それぞれ、糖残基から形成され、グリコシル化タンパク質に結合される一つ又は複数の構造を表す。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、本明細書に記載される化合物と、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、及び／又は賦形剤などの他の化学成分との混合物を表す。
【００７２】
Ａ．肝線維症及びＩｓｈａｋ線維症ステージ
本発明は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。また、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者を治療する方法であって、セベリパーゼアルファを該患者に投与することを含み、該患者が、Ｉｓｈａｋ線維症ステージにおいて、投与前に該患者から得たベースラインＩｓｈａｋ線維症ステージと比較して、投与後に少なくとも１ポイントの減少（例えば、１ポイント以上の減少又は２ポイント以上の減少）を有すると判定された、方法を提供する。
【００７３】
一実施形態では、Ｉｓｈａｋ線維症ステージは肝生検により評価される。肝生検は、種々の肝臓疾患を持つ患者の評価における重要な要素である（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４７（２００７）５９８−６０７を参照）。肝生検は、診断を確立することに加えて、疾患の重症度をグレートとステージの両方に関して評価するのにも使用されることが多い。多くの慢性肝臓疾患のステージは、瘢痕の程度に関係し、最終ステージが臨床的合併症を伴う肝硬変となる。具体的には、疾患のステージは、疾患が自然経過でどの程度進行したかを表す尺度であり、最終ステージは患者の死亡又は器官の不全となる。グレードは、基礎疾患プロセス（発症機序により異なる特徴を持つ）の重症度に関係し、疾患が最終ステージまでどの程度速く進行するかを示している。慢性肝臓疾患の多くの形態において、最終ステージは臨床的代償不全を伴う肝硬変である一方、初期のステージは線維症又は肝硬変よりも程度が軽いものである。グレードは、損傷のタイプやパターンにより異なる特徴を有する、基礎肝臓疾患の重症度に関係するとみなされ得る。理想的には、グレードもステージも予後を予測し、治療的介入を誘導すべきものである。
【００７４】
肝線維症を評価するために一般的に使用されるシステムのうちの一つは、Ｉｓｈａｋステージ分類（又はスコア分類）であり、これを以下の表１（例えば、Ｉｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｒ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２２（１９９５）６９６−６９９を参照されたく、この文献は参照により本明細書に明示的に援用される）、及び実施例１の表７（例えば、Ｒ  Ａ  Ｓｔａｎｄｉｓｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ２００６；５５：５６９−５７８を参照されたく、この文献は参照により本明細書に明示的に援用される）に記載している。ステージは、瘢痕形成の種々の程度に関連した構造変化を言い表し、理解し易いものである。ステージは、瘢痕形成の種々の程度に関連した構造変化を言い表し、理解し易いものである。このシステムの利点は、０〜６段階にステージ化するその簡便さであり、ステージは容易に他のタイプのアセスメントステージに変換可能であるが、このことは、Ｇｏｏｄｍａｎにより説明されており（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４７（２００７）５９８−６０７）、この文献は参照により本明細書に明示的に援用される。
【００７５】
表１：Ｉｓｈａｋステージ／スコア
【表１】
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本明細書に記載の方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ（スコア）において少なくとも１ポイントの減少をもたらす。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ５への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ４への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ２からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ０からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は１ポイント以上の減少である。
【００７６】
別の実施形態では、減少は２ポイントの減少である。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ４への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ２からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は２ポイント以上の減少である。
【００７７】
別の実施形態では、減少は３ポイントの減少である。例えば、一実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ６からＩｓｈａｋ線維症ステージ３への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ５からＩｓｈａｋ線維症ステージ２への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ４からＩｓｈａｋ線維症ステージ１への減少をもたらす。別の実施形態では、本方法は、Ｉｓｈａｋ線維症ステージ３からＩｓｈａｋ線維症ステージ０への減少をもたらす。別の実施形態では、減少は３ポイント以上の減少である。
【００７８】
一実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、２０週目に又は２０週目までに生じる。別の実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、３０週目に又は３０週目までに生じる。別の実施形態では、少なくとも１ポイントの減少が、５２週目に又は５２週目までに生じる。別の実施形態では、２ポイント以上の減少が、５２週目に又は５２週目までに生じる。
【００７９】
Ｂ．不十分なＬＡＬ活性を有する患者
本発明を用いて、対象又は患者における広範な状態を治療することができる。ゆえに、本発明に従って外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）により有益に治療をされ得る任意の状態が、本発明の範囲内に含まれる。
【００８０】
本発明を任意の特定の状態又は状態の群の治療に制限することを望まないが、本発明は、患者におけるライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症の治療を含む。本明細書で使用される場合、ＬＡＬ欠損症を有する患者は、不十分なＬＡＬ活性を持つ任意の患者である。患者における不十分なＬＡＬ活性の結果、例えば、低ＲＮＡレベル、低タンパク質レベル、又は低タンパク質活性となり得る。不十分なＬＡＬ活性は、ＬＡＬコード配列、ＬＡＬ制御配列、又は他の遺伝子（例えば、ＬＡＬを制御する遺伝子）における変異に起因し得る。不十分なＬＡＬ活性はまた、環境要因の結果でもあり得る。
【００８１】
本発明の一実施形態は、ライソゾーム酸性リパーゼの欠損に起因するライソゾーム病（ＬＳＤ）、具体的にはウォルマン病（ＷＤ）及びコレステリルエステル蓄積症（ＣＥＳＤ）の治療に着目している。本発明を作用のいかなる特定の理論又は機序に束縛することも望まないが、ＷＤとＣＥＳＤの両方共、ＬＡＬ遺伝子座での変異に起因し得るものであり、数多くの組織においてライソゾームに大量の脂質性物質が蓄積し、コレステロール及び脂質の恒常性維持機構が重度に攪乱され得るが、これは、本発明の方法に従って外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）を投与することにより治療することができる。したがって、一実施形態では、本発明に従って治療されるＬＡＬ欠損症はＷＤである。別の実施形態では、本発明に従って治療されるＬＡＬ欠損症はＣＥＳＤである。一部の実施形態では、ＷＤ又はＣＥＳＤの診断は、遺伝子解析（例えば、ＬＡＬコード配列における機能的変異の同定）に基づく。他の実施形態では、ＷＤ又はＣＥＳＤの診断は臨床所見（例えば、身体診察及び／又は臨床検査）に基づく。
【００８２】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）を用いて、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの種々の状態の合併症を治療することができる。ＮＡＦＬＤは、アルコールの過剰摂取に起因した肝臓疾患と同様の病理組織を有する肝臓の疾患を表すものである。これは、肝臓の肥大を引き起こす大滴性脂肪症を特徴とする。ＮＡＦＬＤはＮＡＳＨに進行する可能性があり、ＮＡＳＨは、ＮＡＦＬＤと同様であるが、その上に線維症及び肝硬変を招き得る肝臓への炎症及び損傷を加えた肝臓疾患を表す。
【００８３】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）を使用して、膵炎、例えば、慢性膵炎及び／又は急性膵炎、並びにアルコール性膵炎などのアルコール性膵損傷状態を治療することができる。
【００８４】
任意の有用な方法により産生される外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）を使用して、アルコール性細胞損傷に起因する疾患を治療することができるが、アルコール性細胞損傷としては、以下に限定されないが、体組織（例えば、以下に限定されないが、肝臓、脾臓、消化管、及び心血管組織）に脂質エステルが蓄積するアルコール性細胞損傷が挙げられる。本発明によると、吸収不良も、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）を投与することにより治療することができる。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）はまた、タンジール病及び家族性低αリポ蛋白血症を有する患者の治療に有用である。タンジール病／家族性低αリポ蛋白血症は、マクロファージにおけるコレステロールエステルの蓄積に関連し、肝脾腫大及び／又はリンパ節腫大及び低ＨＤＬレベルを伴うものであるが、これは外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与により治療することができる。例えば、本発明を作用のいかなる特定の理論又は機序に束縛することも望まないが、ＬＡＬ活性の欠損によりＡＢＣＡ１発現が減少し得るが、それに反して、外因性ＬＡＬをタンジール病／家族性低αリポ蛋白血症を有する患者に投与することによって得られるＬＡＬ活性の増加により、ＡＢＣＡ１発現が増加して、多型の結果として機能的活性が低下したＡＢＣＡ１遺伝子の影響が排されるであろう。
【００８５】
一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約１％、約２％、約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、又は約８０％である。一実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約５０％以下である。一実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約４０％以下である。一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約３０％以下である。一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約３０％以下である。一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約２０％以下である。一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約１０％以下である。一部の実施形態では、治療前の患者のＬＡＬ活性レベルは、ＬＡＬ活性の正常レベルの約５％以下である。一部の実施形態では、患者には治療前に測定可能なＬＡＬ活性が見られない。
【００８６】
一部の実施形態では、ＬＡＬ活性のレベルは、ＬＡＬ欠損症を患うヒト患者から得られた培養線維芽細胞で測定される。一部の実施形態では、ＬＡＬ活性のレベルは、ＬＡＬ欠損症を患うヒト患者のリンパ球（例えば、白血球）で測定される。リンパ球には、以下に限定されないが、末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）が含まれる。測定方法は、例えば、Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  １０１：２５−３２、及びＡｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．＆Ｍｅｔａｂ．，６６：３３３−３４５に記載されており、この両方の文献はその全体が本明細書に援用される。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）で治療されるべきＬＡＬ欠損症患者は、線維芽細胞ＬＡＬ酵素活性が、基質としてトリオレインを用いて測定した場合、約３０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約１０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約５ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約４ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約３ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、又は約１ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満であり得る。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）で治療されるべきＬＡＬ欠損症患者は、白血球ＬＡＬ酵素活性が、基質としてトリオレインを用いて測定した場合、約３０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約１０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約５ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約４ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約３ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、又は約１ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満であり得る。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）で治療されるべきＬＡＬ欠損症患者は、線維芽細胞ＬＡＬ酵素活性が、基質としてオレイン酸コレステリルを用いて測定した場合、約３０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約１０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約５ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約４ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約３ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、又は約１ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満であり得る。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）で治療されるべきＬＡＬ欠損症患者は、白血球ＬＡＬ酵素活性が、基質としてオレイン酸コレステリルを用いて測定した場合、約３０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約１０ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約５ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約４ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約３ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、約２ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満、又は約１ｐｍｏｌ／ｍｇ／分未満であり得る。
【００８７】
Ｃ．外因性ＬＡＬの投与
状態を治療するために、一般的には、投与される外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の量は、受容者の年齢、健康状態、体重、併用療法の種類、治療頻度などの既知の因子によって変化し得る。通常、活性成分の投与量は、体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜５０ｍｇであり得る。一実施形態では、本発明による外因性ＬＡＬの投与量は、体重１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜０．５ｍｇである。一実施形態では、投与量は１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約５．０ｍｇである。一実施形態では、投与量は１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約５．０ｍｇである。一実施形態では、投与量は、１キログラム当たり約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．３０ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．４０ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．５０ｍｇである。一実施形態では、投与量は１キログラム当たり約１ｍｇ〜約５ｍｇである。一実施形態では、投与量は１キログラム当たり約１ｍｇである。一実施形態では、投与量は１キログラム当たり約３ｍｇである。例えば、体重１キログラム当たり０．１ｍｇ、体重１キログラム当たり０．２ｍｇ、体重１キログラム当たり０．３ｍｇ、体重１キログラム当たり０．４ｍｇ、体重１キログラム当たり０．５ｍｇ、体重１キログラム当たり１ｍｇ、体重１キログラム当たり２ｍｇ、体重１キログラム当たり３ｍｇ、体重１キログラム当たり４ｍｇ、又は体重１キログラム当たり５ｍｇが投与され得る。一実施形態では、投与量は体重１キログラム当たり約１ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【００８８】
本発明はまた、本発明の投与スケジュールを用いる場合に、他の投与量を含む。例えば、本発明の投与スケジュールによると、体重１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇが患者に投与される。
【００８９】
一部の実施形態では、約０．５ｍｇ〜約５０ｍｇの外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）が、例えば、ウォルマン病を有する１カ月齢〜２４カ月齢の患者に投与される。一実施形態では、患者は１歳未満である。別の実施形態では、患者は２歳未満である。一部の実施形態では、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、又は約４５ｍｇの外因性ＬＡＬが、ウォルマン病を有する患者に投与される。一部の実施形態では、約０．５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、又は約０．５ｍｇ〜約５ｍｇが、ウォルマン病を有する患者に投与される。一部の実施形態では、約１ｍｇ〜約３０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、又は約１ｍｇ〜約５ｍｇが投与される。
【００９０】
一部の実施形態では、約１ｍｇ〜約３５０ｍｇの外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）が、例えば、ＣＥＳＤと診断された患者に投与される。したがって、一部の実施形態では、約１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、又は３５０ｍｇの外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）が、ＣＥＳＤを有する患者に投与される。一部の実施形態では、約５ｍｇ〜約３５０ｍｇ、約５ｍｇ〜約３００ｍｇ、約５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又は約５ｍｇ〜約２００ｍｇが、ＣＥＳＤを有する患者に投与される。一部の実施形態では、約１０ｍｇ〜約３５０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又は約１０ｍｇ〜約２００ｍｇが、ＣＥＳＤを有する患者に投与される。
【００９１】
一実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。セベリパーゼアルファが患者に隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される特定の実施形態では、セベリパーゼアルファは、（ａ）１ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して１０ｍＬ、（ｂ）１１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ、（ｃ）２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ、（ｄ）５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ、又は（ｅ）１００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬの総注入容量で投与される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に毎週１回、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。セベリパーゼアルファが患者に毎週１回、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される特定の実施形態では、セベリパーゼアルファは、（ａ）１ｋｇ〜１０．９ｋｇの患者に対して２５ｍＬ、（ｂ）１１ｋｇ〜２４．９ｋｇの患者に対して５０ｍＬ、（ｃ）２５ｋｇ〜４９．９ｋｇの患者に対して１００ｍＬ、（ｄ）５０ｋｇ〜９９．９ｋｇの患者に対して２５０ｍＬ、又は（ｅ）１００ｋｇ〜１２０．９ｋｇの患者に対して５００ｍＬの総注入容量で投与される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に毎週１回又は隔週１回、０．３５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される（例えば、小児患者に対して及び／又は耐性の問題のある事象において）。
【００９２】
Ｄ．併用治療
本明細書に開示される治療用タンパク質を、他の治療剤と併用して使用することができる。本発明は、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与によって生じる可能性がある、任意の起こり得るアナフィラキシー反応を最小化又は予防するための前処置手順を提供する。一実施形態では、起こり得るアナフィラキシー反応の前処置のために、抗ヒスタミン薬（例えば、ジフェンヒドラミン）としても知られるＨ−１受容体アンタゴニストを、患者に投与する。一実施形態では、Ｈ−１受容体アンタゴニストは、体重１キログラム当たり約１ｍｇ〜約１０ｍｇの用量で投与される。例えば、抗ヒスタミン薬は、体重１キログラム当たり約５ｍｇの用量で投与され得る。抗ヒスタミン薬の投与は、本発明の外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与前であり得る。一実施形態では、Ｈ−１受容体アンタゴニストは、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与の約１０分〜９０分前、例えば、約３０分〜６０分前に投与される。Ｈ−１受容体アンタゴニストは、血管アクセスポートに接続した歩行システムを用いて投与され得る。一実施形態では、抗ヒスタミン薬は、外因性ＬＡＬの投与の約９０分前に投与される。一実施形態では、抗ヒスタミン薬は、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与の約１０分〜約６０分前に投与される。別の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与の約２０分〜約４０分前に投与される。例えば、抗ヒスタミン薬は、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与の２０分前、２５分前、３０分前、３５分前、又は４０分前に投与され得る。一実施形態では、投与される抗ヒスタミン薬はジフェンヒドラミンである。任意の有用な抗ヒスタミン薬を使用することができる。こうした抗ヒスタミン薬として、以下に限定されないが、クレマスチン、ドキシルアミン、ロラタジン、デスロラタジン、フェキソフェナジン、フェニラミン、セチリジン、エバスチン、プロメタジン、クロルフェニラミン、レボセチリジン、オロパタジン、クエチアピン、メクリジン、ジメンヒドリナート、エンブラミン、ジメチンデン、及びデキスクロルフェニルアミンが挙げられる。
【００９３】
一実施形態では、抗ヒスタミン薬は、体重１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、抗ヒスタミン薬は、体重１キログラム当たり約１ｍｇ〜約５ｍｇの用量で投与される。例えば、用量は、体重１キログラム当たり１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、又は５ｍｇであり得る。抗ヒスタミン薬は、任意の有用な方法で投与され得る。一実施形態では、抗ヒスタミン薬は静脈内に投与される。別の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、薬学的に許容可能なカプセル剤で投与される。
【００９４】
別の実施形態では、静脈内注入に関して、注入剤を漸増プロトコールを用いて投与することによって、アナフィラキシー反応の可能性を低減することができる。この文脈において、漸増プロトコールとは、薬物の注入に対して患者を脱感作させるために、注入している間に、注入する速度を徐々に増加させることを表す。
【００９５】
以下に限定されないが、抗ヒスタミン薬、コルチコステロイド、シロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン、メトトレキサート、ＩＬ−２受容体指向性抗体、Ｔ細胞受容体指向性抗体、ＴＮＦ−α指向性抗体、又は融合タンパク質（例えば、インフリキシマブ、エタネルセプト、又はアダリムマブ）、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（例えばアバタセプト）、抗ＯＸ−４０抗体などの免疫抑制薬が、例えば、アナフィラキシー反応又は有害な免疫応答が予想されるか、又は患者に認められる場合に、外因性ＬＡＬの投与前、投与中、又は投与後に更に投与され得る。
【００９６】
本発明は、一つ又は複数のコレステロール低下剤（例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤）と組み合わせた外因性ＬＡＬ含有組成物の投与に関わる療法も包含する。こうした薬剤の非限定的な例としては、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ（登録商標）及びＴｏｒｖａｓｔ（登録商標））、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｌｔｏｃｏｒ（登録商標）、Ａｌｔｏｐｒｅｖ（登録商標））、ピタバスタチン（Ｌｉｖａｌｏ（登録商標）、Ｐｉｔａｖａ（登録商標））、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標）、Ｓｅｌｅｋｔｉｎｅ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標））、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））、及びシンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｌｉｐｅｘ（登録商標））が挙げられる。
【００９７】
Ｅ．外因性ＬＡＬの作用
本発明は、治療後の疾患関連症状の是正又は正常化をもたらす。外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）に応答する臨床的進行（すなわち、状態の改善）は、任意の有用な方法又は手順によりモニタリングされ得る。
【００９８】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、約２００ｎｇ／ｍＬ〜約１，５００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、約２００ｎｇ／ｍＬ〜約１，０００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、約２００ｎｇ／ｍＬ〜約８００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、約２００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ、約４００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、約６００ｎｇ／ｍＬ、約７００ｎｇ／ｍＬ、約８００ｎｇ／ｍＬ、約９００ｎｇ／ｍＬ、約１，０００ｎｇ／ｍＬ、約１，２５０ｎｇ／ｍＬ、又は約１，５００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、注入中にＣｍａｘに達する。
【００９９】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、４０分未満のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、３０分未満のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、２０分未満のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、１５分未満のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、１０分未満のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、約６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２５分、３０分、３５分、又は４０分のＬＡＬ半減期（ｔ１／２）を達成するのに十分なものである。
【０１００】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、患者におけるＬＡＬ活性を増加させる。ＬＡＬ活性は、例えば、肝臓、脾臓、リンパ節、大動脈、末梢血白血球、及び／又は皮膚線維芽細胞で増加し得る。一部の実施形態では、ＬＡＬ活性は、血液サンプルから単離されたリンパ球の抽出物で測定される。
【０１０１】
外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、ＬＡＬ活性を、ＬＡＬ投与前の活性と比べて、少なくとも約１．５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、又は約２０倍増加することができる。外因性ＬＡＬは、ＬＡＬ活性を、ＬＡＬ投与前の活性と比べて、少なくとも約１０倍、約１１倍、約１２倍、約１３倍、約１４倍、約１５倍、約１６倍、約１７倍、約１８倍、約１９倍、約２０倍増加することができる。ＬＡＬ活性は、例えば、コレステリル［１−１４Ｃ］オレイン酸、トリオレイン（グリセロールトリ［１−１４Ｃ］オレイン酸）、ｐ−ニトロフェニルミリスチン酸、又は４−ＭＵＯ（オレイン酸４−メチルウンベリフェリル）の基質を用いるアッセイを含めた、当該技術分野で公知の方法を用いて評価することができる。
【０１０２】
一実施形態では、本発明の外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与後、器官と組織の容積及び特性評価を利用して、状態の改善を判定する。
【０１０３】
一実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与後、肝臓機能／損傷における臨床的進行を、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、並びに／又はアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、並びに／又はアルブミン、アルカリホスファターゼ、及びビリルビン（直接型ビリルビンと総ビリルビン）といった他のバイオマーカーなどの血中トランスアミナーゼを経時的に定量することによってモニタリングする。  
一実施形態では、臨床的進行を画像技術を用いてモニタリングする。例えば、以下に限定されないが、使用される画像技術は、超音波、ＣＴスキャン、磁気共鳴映像法、及び核磁気共鳴分光法であり得る。
【０１０４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の用量での外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、ヒト患者において成長を回復させ、及び／又は体重を増加させるのに十分なものである。外因性ＬＡＬの投与はまた、若年性ＬＡＬ欠損症を患う乳児又は小児患者において、成長率を増加（すなわち体重を増加）させることもできる。例えば、外因性ＬＡＬの投与は、体重増加率を、投与前に見られる成長率／速度の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、又は約５００％増加させることができる。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの投与は、若年性ＬＡＬ欠損症（例えば、ウォルマン病）を患う、約１カ月齢〜約２４カ月齢の小児患者において正常な成長率を回復させる。この文脈において「正常」とは、医学分野における通常の技術を有する従事者によって判定される、治療されている患者にとっての正常の成長率を意味する。
【０１０５】
一実施形態では、本明細書に記載の方法により、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、コラーゲン、及び／又は肝脂肪含有量が正常レベルへ移行することになる。別の実施形態では、本方法により、ベースラインと比較して、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、コラーゲン、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、微小胞脂肪症、マクロファージ、及び／又は全肝脂肪含有量のレベルが減少することになる。別の実施形態では、本方法により、ベースラインと比較して、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が約６０％以上、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）が約４０％以上、及び／又は肝脂肪含有量が約３０％以上減少することになる。一実施形態では、レベルは、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により評価される。
【０１０６】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＬＤＬ−Ｃレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＬＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＬＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約２６％、２７％、２８％、２９％、又は３０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１０７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、高比重リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＨＤＬ−Ｃレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％増加することになる（例えば、ＳＡでの治療２０週以上の後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、又は２５％増加することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１０８】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、非高比重リポタンパクコレステロール（ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルがベースラインと比較して少なくとも約２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、又は３０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１０９】
別の実施形態では、本方法により、ベースラインと比較して、（ＡＬＴ）、ＬＤＬ−Ｃ、コラーゲン、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、微小胞脂肪症、マクロファージ、及び／又は全肝脂肪含有量のレベルが減少することになる。
【０１１０】
一実施形態では、例えば、ＷＤ及びＣＥＳＤ、又は他のＬＡＬ欠損症に関して、肝腫大が顕著に好転し、肝臓のサイズが正常サイズより約１％〜約６０％大きい範囲内のサイズに戻る。この文脈において「正常」とは、医学分野における通常の技術を有する従事者によって判定される、治療されている患者にとっての正常サイズの肝臓を意味する。一実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝腫大を最小化するのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、患者の肝臓サイズを減少させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、正常の肝容積への移行（例えば、ベースラインと比較した場合の肝容積の減少）をもたらす。一実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約１％〜約５０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約１％〜約４０％大きいサイズまで減少する。一実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約１％〜約３０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約１％〜約２０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約１０％〜約２０％大きいサイズまで減少する。例えば、肝臓は、正常サイズよりも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、又は２０％大きくなり得る。更に別の実施形態では、肝臓サイズは正常よりも約０％〜約１０％大きいサイズまで減少する。例えば、肝臓は、肝臓の正常サイズよりも０％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、又は１０％大きくなり得る。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝容積がベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、又は２０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝容積がベースラインと比較して少なくとも約１１％、１２％、又は１３％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、３０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１１１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、肝脂肪含有量（肝脂肪画分）の正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合の肝脂肪含有量の減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝脂肪画分がベースラインと比較して少なくとも約１０％、１５％、２０％、又は２５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝脂肪画分がベースラインと比較して少なくとも約２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、又は２９％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、３０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１１２】
一実施形態では、肝脂肪含有量のレベルは、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により評価される。
【０１１３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、血清フェリチンレベルを減少させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、血清脂質レベル（例えば、コレステリルエステル（ＣＥ）レベル及び／又はトリグリセリド（ＴＧ）レベルなど）を低減させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＴＧの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＴＧレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＴＧレベルがベースラインと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は３５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＴＧレベルがベースラインと比較して少なくとも約１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、又は２５％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１１４】
外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）での治療は、肝臓機能を改善することもできる。したがって、一部の実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、正常の肝臓機能を回復するのに、及び／又は肝臓テスト結果を正常化させるのに十分なものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、肝臓トランスアミナーゼ（例えば、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び／又は血清アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）など）が正常血清レベルへ移行することになる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＳＴ及び／又はＡＬＴを減少させるのに十分なものである。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを、例えば少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％減少させる、及び／又は少なくとも９０％まで減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約４０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約５０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約６０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約７０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約８０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、肝臓トランスアミナーゼの血清レベルを少なくとも約９０％減少させるのに十分なものである。
【０１１５】
一部の実施形態では、肝臓トランスアミナーゼはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）である。一実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、血清ＡＬＴを低減させるのに十分なものである。例えば、外因性ＬＡＬの投与は、血清ＡＬＴを、例えば少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低減させることができる。血清ＡＬＴレベルは、肝臓損傷の指標を示すことができる。したがって、本発明はまた、外因性ＬＡＬの有効量を投与して血清ＡＬＴを低減させることによって、ＬＡＬ欠損症を患うヒト患者における肝臓損傷を低減させる方法を意図するものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＬＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＬＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、又は５７％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１１６】
一部の実施形態では、肝臓トランスアミナーゼは血清アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）である。一実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、血清ＡＳＴを低減させるのに十分なものである。例えば、外因性ＬＡＬの投与は、血清ＡＳＴを、例えば少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低減させることができる。血清ＡＳＴレベルは、肝臓損傷の指標を示すことができる。したがって、本発明はまた、外因性ＬＡＬの有効量を投与して血清ＡＳＴを低減させることによって、ＬＡＬ欠損症を患う患者における肝臓損傷を低減させる方法を意図するものである。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＳＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週以上後）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により、ＡＳＴレベルがベースラインと比較して少なくとも約４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、又は５１％減少することになる（例えば、ＳＡでの治療の２０週後、５２週後、又は７６週後）。
【０１１７】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）での治療は、血清フェリチンレベルを減少させることができる。よって、一部の実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、血清フェリチンを、前処置レベルと比較した場合に少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも５０％減少させるのに十分なものである。更に別の実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも約６０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも約７０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも約８０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも約９０％減少させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬでの治療は、フェリチンの血清レベルを少なくとも約９５％減少させるのに十分なものである。
【０１１８】
一実施形態では、例えば、ウォルマン病及びＣＥＳＤ、又は他のＬＡＬ欠損症に関して、脾腫大が顕著に好転し、脾臓のサイズが正常サイズより約１％〜約６０％大きい範囲内のサイズに戻る。この文脈において「正常」とは、医学分野における通常の技術を有する従事者によって判定される、試験されている患者にとっての正常サイズの脾臓を意味する。一実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約１％〜約５０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約１％〜約４０％大きいサイズまで減少する。一実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約１％〜約３０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約１％〜約２０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約１０％〜約２０％大きいサイズまで減少する。例えば、脾臓は、正常サイズよりも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、又は２０％大きくなり得る。更に別の実施形態では、脾臓サイズは正常よりも約０％〜約１０％大きいサイズまで減少する。例えば、脾臓は、脾臓の正常サイズよりも０％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、又は１０％大きくなり得る。
【０１１９】
一実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、リンパ節腫大（すなわち腫大したリンパ節）を縮小させるのに十分なものである。したがって、一部の実施形態では、リンパ節は、正常のサイズよりも約１％〜約６０％大きい範囲内の略サイズまで縮小する。この文脈において「正常」とは、医学分野における通常の技術を有する従事者によって判定される、試験されている患者にとっての正常サイズのリンパ節を意味する。一実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約１％〜約５０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約１％〜約４０％大きいサイズまで減少する。一実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約１％〜約３０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約１％〜約２０％大きいサイズまで減少する。別の実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約１０％〜約２０％大きいサイズまで減少する。例えば、リンパ節は、正常サイズよりも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、又は２０％大きくなり得る。更に別の実施形態では、リンパ節サイズは正常よりも約０％〜約１０％大きいサイズまで減少する。例えば、リンパ節は、リンパ節の正常サイズよりも０％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、又は１０％大きくなり得る。
【０１２０】
別の実施形態では、脂質分析を行い、状態の改善をモニタリングする。例えば、脂質分析を行い、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の治療効果を評価することができる。脂質分析は、患者の組織サンプル（例えば、血液サンプル、肝生検サンプル）で、以下に限定されないが、高速液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、質量分析法、又は薄層クロマトグラフィー、又は当業者が好適と考えるこれらの任意の組み合わせといった、任意の有用な方法を用いて行うことができる。一実施形態では、本発明に従って行う脂質分析は、総コレステロール、トリグリセリド、低比重リポタンパク質、高比重リポタンパク質、及び／又はコレステリルエステルのレベルを明らかにするものである。
【０１２１】
一実施形態では、例えば、ウォルマン病及びＣＥＳＤ、又は他のＬＡＬ欠損症に関して、本発明に従って治療された患者の脂質分析は、肝臓、脾臓、腸、リンパ節、及び／又は大動脈において脂質濃度の正常化を示しているが、これは医学分野における通常の技術を有する従事者によって判定され得るものである。
【０１２２】
脂質レベルは、血漿脂質分析又は組織脂質分析を用いて評価され得る。血漿脂質分析においては、血漿が採取され得、総血漿遊離コレステロールレベルを、例えば、ＣＯＤ−ＰＡＰキット（Ｗａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）を用いた総血漿比色アッセイで測定することができ、総血漿トリグリセリドを、例えばトリグリセリド／ＧＢキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ社）で測定することができ、及び／又は総血漿コレステロールを、コレステロール／ＨＰキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ社）で測定することができる。組織脂質分析においては、例えば、肝臓、脾臓、及び／又は小腸のサンプルから脂質を抽出することができる（例えば、Ｆｏｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２２６：４９７−５０５（１９５７）に記載のＦｏｌｃｈ方法を用いる）。総組織コレステロール濃度は、例えばＯ−フタルアルデヒドを用いて測定することができる。
【０１２３】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、養分吸収を増加させるのに十分なものである。一実施形態では、外因性ＬＡＬの投与により、養分吸収が増加するが、これは血清アルファトコフェロール、２５ＯＨビタミンＤ、血清レチノール、ジデヒドロレチノール、又はトランスサイレチンのレベルにより測定される。
【０１２４】
一部の実施形態では、例えば、ＷＤ及びＣＥＳＤ、又は他のＬＡＬ欠損症に関して、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）の投与は、血清ヘモグロビンレベル（Ｈｂ）を増加させるのに十分なものである。一実施形態では、ヘモグロビンレベルは、外因性ＬＡＬの投与前に観察されたレベルと比較して、少なくとも約１０％又は約２０％増加する。
【０１２５】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、副作用を最小化する方法を用いて投与され得る。例えば、外因性ＬＡＬの投与は、外因性ＬＡＬへの免疫応答を最小化することができる。
【０１２６】
別の実施形態では、患者は小児患者である。別の実施形態では、ＳＡでの治療を開始する時に、患者は８カ月齢未満である。別の実施形態では、ＳＡは小児患者に毎週又は隔週１回、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＳＡは小児患者に隔週１回、３ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、セベリパーゼアルファは患者に毎週１回又は隔週１回、０．３５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者が４０カ月以上の（例えば、４１カ月、４２カ月、４３カ月、４４カ月、４５カ月、４６カ月、４７カ月、４８カ月、４９カ月、５０カ月、５１カ月、５２カ月、５３カ月、５４カ月、５５カ月、５６カ月、５７カ月、５８カ月、５９カ月、６０カ月、６１カ月、６２カ月、６３カ月、６４カ月、６５カ月、６６カ月、６７カ月、６８カ月、６９カ月、７０カ月、又はそれを超える）平均余命となる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者の体重増加が改善することになる。例えば一実施形態では、小児患者は、ＳＡでの治療後、年齢対体重の成長曲線で４５％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％）以上のパーセンタイルにある。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者における胃腸症状が改善する（例えば、嘔吐及び下痢が軽減される）ことになる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、小児患者におけるアルブミンが正常レベルとなる。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者において正常な肝臓機能をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてＡＬＴの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＡＬＴレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてＡＳＴの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のＡＳＴレベルの減少）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてヘモグロビンの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のヘモグロビンレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者においてアルブミンの正常レベルへの移行（例えば、ベースラインと比較した場合のアルブミンレベルの増加）をもたらす。別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、小児患者において正常な発育をもたらす。
【０１２７】
Ｆ．ＬＡＬ及び外因性ＬＡＬを含む医薬組成物
本発明は、本明細書に記載のＬＡＬ欠損症関連状態及び上述していないが治療効果を得られる他の状態のいずれかを治療することを包含する。本発明に従って使用される外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）として、任意の有用なタンパク質発現システム、例えば、以下に限定されないが、細胞培養（例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などのバクテリア、哺乳類及び鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、及びシチメンチョウ）などのトランスジェニック動物、並びに植物システム（例えば、アオウキクサ及びタバコ）で産生され得る、組換えＬＡＬが挙げられる。本発明の一態様は、２００６年１０月３日に発行された米国特許第７，５２４，６２６号、２００７年１０月１０日に出願された米国特許出願公開第１１／９７３，８５３号、２００７年１０月２９日に出願された米国特許出願公開第１１／９７８，３６０号、及び２００９年１月７日に出願された米国特許出願公開第１２／３１９，３９６号に従って産生された組換えＬＡＬに関し、これらの特許文献の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明の一態様は、Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．７７：１０６１−１０７４、及びＤｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，４９：１６４６−１６５７に記載の通りに産生された組換えＬＡＬに関し、これらの文献の開示はその全体が参照により本明細書に援用される。有用な一実施形態では、外因性ＬＡＬはトランスジェニック鳥類（例えば、トランスジェニックニワトリ）の卵管で、例えば、２０１１年４月２３日に出願された国際公開第２０１１／１３３９６０号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３３６９９号）に記載の方法に従って産生されており、この特許文献は、その全体が参照により本明細書に明示的に援用される。一部の実施形態では、組換えＬＡＬは鳥類細胞株で産生される。一部の実施形態では、組換えＬＡＬは哺乳類（例えば、ヒト）細胞株で産生される。
【０１２８】
一実施形態では、本発明に従って使用される外因性ライソゾーム酸性リパーゼは、実質的Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）構造及びマンノース末端Ｎ−結合型構造を有するグリカンを含む。外因性ＬＡＬにおけるＧｌｃＮＡｃ及びマンノース末端グリカンは、特異的に認識され、マクロファージ及び線維芽細胞により内部移行され得る。マンノース−６−リン酸（Ｍ６Ｐ）は、タンパク質をＧｌｃＮＡｃ／マンノース受容体への標的とすることができ、この受容体は、外因性ＬＡＬ投与によって治療可能である状態に関与した細胞で発現するものであり、マンノース−６−リン酸は本発明に従って使用される外因性ＬＡＬにも通常含まれる。
【０１２９】
本明細書で考察かつ開示される本発明の外因性ＬＡＬは通例、ヒトＬＡＬである。一実施形態では、外因性ＬＡＬは、Ｇｅｎｂａｎｋ  ＲｅｆＳｅｑ  ＮＭ＿０００２３５．２に定められたアミノ酸配列を有する。一実施形態では、成熟外因性ＬＡＬは、アミノ酸配列：
ＳＧＧＫＬＴＡＶＤＰＥＴＮＭＮＶＳＥＩＩＳＹＷＧＦＰＳＥＥＹＬＶＥＴＥＤＧＹＩＬＣＬＮＲＩＰＨＧＲＫＮＨＳＤＫＧＰＫＰＶＶＦＬＱＨＧＬＬＡＤＳＳＮＷＶＴＮＬＡＮＳＳＬＧＦＩＬＡＤＡＧＦＤＶＷＭＧＮＳＲＧＮＴＷＳＲＫＨＫＴＬＳＶＳＱＤＥＦＷＡＦＳＹＤＥＭＡＫＹＤＬＰＡＳＩＮＦＩＬＮＫＴＧＱＥＱＶＹＹＶＧＨＳＱＧＴＴＩＧＦＩＡＦＳＱＩＰＥＬＡＫＲＩＫＭＦＦＡＬＧＰＶＡＳＶＡＦＣＴＳＰＭＡＫＬＧＲＬＰＤＨＬＩＫＤＬＦＧＤＫＥＦＬＰＱＳＡＦＬＫＷＬＧＴＨＶＣＴＨＶＩＬＫＥＬＣＧＮＬＣＦＬＬＣＧＦＮＥＲＮＬＮＭＳＲＶＤＶＹＴＴＨＳＰＡＧＴＳＶＱＮＭＬＨＷＳＱＡＶＫＦＱＫＦＱＡＦＤＷＧＳＳＡＫＮＹＦＨＹＮＱＳＹＰＰＴＹＮＶＫＤＭＬＶＰＴＡＶＷＳＧＧＨＤＷＬＡＤＶＹＤＶＮＩＬＬＴＱＩＴＮＬＶＦＨＥＳＩＰＥＷＥＨＬＤＦＩＷＧＬＤＡＰＷＲＬＹＮＫＩＩＮＬＭＲＫＹＱ  （配列番号１）を有する。
【０１３０】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１のアミノ酸１〜３７８、配列番号１のアミノ酸３〜３７８、配列番号１のアミノ酸６〜３７８、又は配列番号１のアミノ酸７〜３７８を含む。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１のアミノ酸１〜３７８、配列番号１のアミノ酸３〜３７８、配列番号１のアミノ酸６〜３７８、及び配列番号１のアミノ酸７〜３７８からなる群から選択される少なくとも二つのポリペプチドの混合物を含む。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１のアミノ酸１〜３７８を含むポリペプチド、配列番号１のアミノ酸３〜３７８を含むポリペプチド、及び配列番号１のアミノ酸６〜３７８を含むポリペプチドの混合物を含む。
【０１３１】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１のアミノ酸１〜３７８、配列番号１のアミノ酸３〜３７８、配列番号１のアミノ酸６〜３７８、又は配列番号１のアミノ酸７〜３７８と同一のポリペプチドを含む。他の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１のアミノ酸１〜３７８、配列番号１のアミノ酸３〜３７８、配列番号１のアミノ酸６〜３７８、又は配列番号１のアミノ酸７〜３７８と、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、配列番号１の機能断片であるポリペプチドを含むか、又は配列番号１の機能断片と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である。
【０１３２】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、２０１１年４月２３日に出願された国際公開第２０１１／１３３９６０号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３３６９９号）に記載の組換えＬＡＬタンパク質であり、この特許文献はその全体が、参照により本明細書に明示的に援用される。
【０１３３】
同一ではないアミノ酸位は、保存的アミノ酸置換により異なっていることが多く、そこでは、アミノ酸残基が、同様の化学特性（例えば電荷又は疎水性）を有する他のアミノ酸残基に対して置換しており、したがって、分子の機能特性を変更していないことが認識される。配列が保存的置換の点で異なっている場合、パーセント配列同一性は、置換の保存的性質を補正するために上方に調節され得る。この調節を行うための手段は、当業者に周知である。保存的置換のスコアリングは、例えば、Ｍｅｙｅｒｓ＆Ｍｉｌｌｅｒｓ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８）のアルゴリズムに従って計算され得る。
【０１３４】
「比較ウインドウ」とは、約２５〜約４００位、又は約５０〜２００位、又は約１００〜１５０位などの隣接位のセグメントであって、そのセグメントにわたって、ある配列を、同一数の隣接位の参照配列と、二つの配列を至適にアライメントした後に比較することができる、セグメントを表す。比較のために配列をアライメントさせる方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の至適なアライメントは、例えば、局所相同性アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１））、グローバルアライメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０））、類似性検索方法（Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２（１９９７））、通例デフォルト設定を用いる、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行（例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＢＬＡＳＴ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、ウィスコンシン州マディソン）、又は手動アライメント及び目視検査（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９４を参照）によって行われ得る。例えば、ＢＬＡＳＴタンパク質の検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を使用して実施し、配列番号１のアミノ酸配列又はその断片と８０％超同一であるアミノ酸配列を得ることができる。
【０１３５】
有用なアルゴリズム実行の一例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、プログレッシブペアワイズアライメント法を用いて、関連配列の一群から多重配列アラインメントを生成する。これは、アライメントを作成するのに使用されるクラスタリング関係を示す樹状図をプロットすることもできる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０（１９８７）のプログレッシブアラインメント法の簡易化したものを用いている。使用方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−３（１９８９）に記載されている方法と同様である。多重アライメント手順は、二つの最も類似した配列のペアワイズアライメントから始め、二つのアライメントされた配列のクラスターを作成する。続いて、このクラスターを、次に最も近い配列、又はアライメントされた配列のクラスターにアライメントすることができる。二つの配列クラスターを、二つの個々の配列のペアワイズアライメントを単純伸長することによってアライメントすることができる。繰り返す度に異なる配列及び配列のクラスターを次第に含むようになる一連のこうしたペアワイズアライメントが、最終アライメントを作成する。
【０１３６】
一部の実施形態では、本発明の外因性ＬＡＬポリペプチドには、野生型配列の変異体が含まれる。これらの変異体は、三つのクラスである置換、挿入、又は欠失の変異体のうちの一つ又は複数に分類される。これらの変異体は、天然に存在する対立遺伝子変異体若しくは種間変異体であり得るか、又はタンパク質をコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドの部位特異的変異誘発によって調製され得る。部位特異的変異誘発は、カセット若しくはＰＣＲ変異誘発又は当該技術分野で周知の他の技術を用いて行って、変異体をコードするＤＮＡを作製し、その後、組換え細胞培養においてそのＤＮＡを発現することができる。最大約１００〜１５０アミノ酸残基を有する変異体標的タンパク質断片を、確立された技術を用いたインビトロ合成によって調製することができる。機能的に同様なアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野で周知である（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５−１０９１９（１９９２））。
【０１３７】
アミノ酸置換は通例、単一残基の置換である。挿入は通常、約１〜約２０のアミノ酸程度のものであるが、それよりもかなり長い挿入も許容され得る。欠失は、約１〜約２０の残基の範囲であるが、はるかに長い場合もあり得る。置換、欠失、挿入、又はこれらの任意の組み合わせを用いて、最終的な誘導体に達することができる。
【０１３８】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、少なくとも約１００Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、少なくとも約２００Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、少なくとも約２５０Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、約１００Ｕ／ｍｇ〜約１，０００Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、約１００Ｕ／ｍｇ〜約５００Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、約１００Ｕ／ｍｇ〜約３５０Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、約２００Ｕ／ｍｇ〜約３５０Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、約２５０Ｕ／ｍｇ〜約３５０Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは約２５０Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは約２７５Ｕ／ｍｇの比活性を有する。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは約３００Ｕ／ｍｇの比活性を有する。
【０１３９】
ヒトＬＡＬには、そのアミノ酸配列において、Ｎ−結合型グリコシル化の六つの候補部位があり、それらは配列番号１に記載されているＡｓｎ３６、Ａｓｎ７２、Ａｓｎ１０１、Ａｓｎ１６１、Ａｓｎ２７３、及びＡｓｎ３２１である。一部の実施形態では、Ｎ−結合型グリコシル化部位のうちの少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、又は五つがグリコシル化されている。一部の実施形態では、六つのグリコシル化部位全てがグリコシル化されている。一部の実施形態では、Ａｓｎ３６、Ａｓｎ１０１、Ａｓｎ１６１、Ａｓｎ２７３、及びＡｓｎ３２１がグリコシル化されている。一部の実施形態では、Ａｓｎ３６、Ａｓｎ１０１、Ａｓｎ１６１、Ａｓｎ２７３、及びＡｓｎ３２１がグリコシル化され、Ａｓｎ７２はグリコシル化されていない。一部の実施形態では、Ｎ−グリカン構造は、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、マンノース、及び／又はマンノース−６−リン酸（Ｍ６Ｐ）を有する２分岐、３分岐、及び４分岐構造を含む。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、Ａｓｎ１０１、Ａｓｎ１６１、及びＡｓｎ２７３で、Ｍ６Ｐ−修飾Ｎ−グリカンを含む。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬはＯ−結合型グリカンを含まない。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬはシアル酸を含まない。一部の実施形態では、外因性ＬＡＬは、２０１１年４月２３日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３３６９９号に記載されているグリコシル化パターンを有しており、この特許文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０１４０】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬの分子量は約５５ｋＤである。
【０１４１】
特定の実施形態では、対象は、外因性ＬＡＬをコードする核酸分子で、例えばベクターで治療され得る。ポリペプチドをコードする核酸の用量は、１患者当たり約１０ｎｇ〜１ｇ、１００ｎｇ〜１００ｍｇ、１μｇ〜１０ｍｇ、又は３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲である。感染ウイルスベクターの用量は、１用量当たり１０個〜１００個又はそれを超えるビリオンと様々である。
【０１４２】
本発明で提供される治療用タンパク質である組換えＬＡＬは、そのままの形態で投与することが可能であるが、治療用タンパク質を医薬製剤の一部として投与することが好ましい。
【０１４３】
医薬製剤は、経口用、直腸用、経鼻用、局所用（頬側及び舌下を含む）、膣用、又は非経口用に適した製剤を含む。医薬製剤は、筋肉内投与、皮下投与、及び静脈内投与を含めた注射による投与に適した製剤を含む。医薬製剤はまた、吸入又は吹送による投与用の製剤も含む。製剤は、必要に応じて、個別の投与単位で提供されるのが便利である場合があり、また薬学分野において周知の方法のいずれかにより調製することができる。医薬製剤を生成する方法は通例、治療用タンパク質を液体担体、又は微粉化した固体担体、又はその両方の中に入れる工程と、必要な場合には、続いて産物を所望の製剤に成形する工程とを含む。
【０１４４】
経口投与に適した医薬製剤は、例えば、各々が所定の量の活性成分を含んでいるカプセル剤、カシェ剤、若しくは錠剤などの個別の単位として、粉末若しくは顆粒として、溶液として、懸濁液として、又は乳濁液として提供されるのが便利である場合がある。活性成分は、大形丸剤、練り薬、又はペーストとして提供されることも可能である。経口投与用の錠剤及びカプセル剤は、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、又は湿潤剤などの従来の賦形剤を含有し得る。錠剤は、当該技術分野で周知の方法によりコーティングされ得る。経口液体調製物は、例えば、水性又は油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ剤、又はエリキシル剤の形態であってもよく、使用前に水又は他の適切なビヒクルで構成させるための乾燥産物として提供されてもよい。こうした液体調製物は、懸濁剤、乳化剤、非水系ビヒクル（食用油を含むことができる）又は防腐剤などの従来の添加剤を含有し得る。
【０１４５】
本発明の治療用タンパク質はまた、非経口投与用（例えば、注射、例えばボーラス注入又は持続注入用）に製剤化することができ、アンプル、プレフィルドシリンジ、小容量注入の単位用量の形態で、又は防腐剤を添加した複数回用量の容器で提供され得る。治療用タンパク質は、例えば、皮下注射、筋肉内注射、及び静脈内（ＩＶ）注入又は注射により注入され得る。
【０１４６】
一実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、任意の有用な方法を用いたＩＶ注入により静脈内に投与される。一例では、外因性ＬＡＬは、末梢ラインを介して静脈内注入により投与され得る。別の例では、外因性ＬＡＬは、末梢挿入中心カテーテルを介して静脈内注入により投与され得る。別の例では、外因性ＬＡＬは、静脈血管アクセスポートに接続された歩行注入器により促された静脈内注入により投与され得る。静脈内注入を用いる一実施形態では、薬物は、当該技術分野において熟練した医師によって算定された通り、注入される薬物の量及び患者の前回の注入に関連した応答履歴に応じて、１時間〜８時間の期間にわたって投与される。別の実施形態では、外因性ＬＡＬは、ＩＶ注射により静脈内に投与される。別の実施形態では、外因性ＬＡＬは、腹腔内注射により投与され得る。更に別の実施形態では、外因性ＬＡＬは、治療用タンパク質の薬学的に許容可能なカプセル剤を介して投与される。例えば、カプセル剤は腸溶性のゼラチンカプセルであり得る。
【０１４７】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は注入により投与され、その注入は、例えば３０分〜１０時間の長時間にわたって行われ得る。よって注入は、例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、又は約５時間にわたって行われ得る。また注入は、様々な速度で行われ得る。よって、例えば、注入速度は１時間当たり約１ｍＬ〜１時間当たり約２０ｍＬであり得る。別の実施形態では、注入速度は１時間当たり１２５ｍＬである。一部の実施形態では、注入速度は１時間当たり５ｍＬ〜１０ｍＬである。一実施形態では、注入速度は、１時間当たり１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７ｍＬ、１８ｍＬ、１９ｍＬ、又は２０ｍＬである。一実施形態では、注入速度は０．１ｍｇ／ｋｇ／時〜５ｍｇ／ｋｇ／時である。一実施形態では、注入速度は、約０．１ｍｇ／ｋｇ／時、約０．２ｍｇ／ｋｇ／時、約０．３ｍｇ／ｋｇ／時、約０．５ｍｇ／ｋｇ／時、約１．０ｍｇ／ｋｇ／時、約１．５ｍｇ／ｋｇ／時、約２．０ｍｇ／ｋｇ／時、又は約３ｍｇ／ｋｇ／時である。
【０１４８】
外因性ＬＡＬ（例えば、セベリパーゼアルファ）は、油性又は水性のビヒクル中で懸濁液、溶液、又は乳濁液といった形態をとることができ、懸濁剤、安定剤、及び／又は分散剤などの調合剤を含むことができる。外因性ＬＡＬは、滅菌固体を無菌単離することによって又は溶液を凍結乾燥することによって得られる粉末形態であってもよく、使用前に、それを例えば無菌の発熱物質を含まない水などの適切なビヒクルを用いて構成する。
【０１４９】
表皮への局所投与に関して、外因性ＬＡＬは、軟膏、クリーム、若しくはローションとして、又は経皮パッチとして製剤化され得る。軟膏及びクリームは、例えば、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加することにより、水性基剤又は油性基剤を用いて製剤化され得る。ローションは水性基剤又は油性基剤を用いて製剤化することができ、一般に、一つ又は複数の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、又は着色剤も含有する。
【０１５０】
口内の局所投与に適切な製剤は、風味基剤である、一般的にスクロース及びアカシア又はトラガントに活性成分を含むトローチ剤、ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤に活性成分を含む香錠、並びに適切な液体担体に活性成分を含む洗口剤を含む。
【０１５１】
担体が固体である直腸投与に適した医薬製剤は、単位用量の坐剤となっているのが最も好ましい。適切な担体には、ココアバター及び当該技術分野で通常使用される他の材料が含まれ、坐剤は、便宜上、活性化合物を、軟化又は融解させた担体と混合して、その後冷却し、鋳型で成形することによって形成され得る。
【０１５２】
膣投与に適した製剤は、活性成分に加え、適切であることが当該技術分野において公知である担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡状物、又はスプレーとして供され得る。
【０１５３】
鼻腔内投与において、外因性ＬＡＬは、液体スプレー若しくは分散性粉末として、又は滴剤の形態で使用され得る。
【０１５４】
滴剤は、一つ又は複数の分散剤、可溶化剤、又は懸濁剤を更に含む水性若しくは非水性の基剤を用いて製剤化され得る。液体スプレーは、便宜上、加圧パックから送達される。
【０１５５】
吸入による投与において、本発明による治療用タンパク質は、便宜上、吸入器、ネブライザ、若しくは加圧パック、又は他の簡便なエアロゾルスプレー送達手段から送達され得る。加圧パックは、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の適切なガスなどの適切な噴霧剤を含み得る。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、定量を送達するための弁を備えることによって定められ得る。
【０１５６】
吸入又は吹送による投与において、外因性ＬＡＬは、乾燥粉末組成物、例えば、その化合物とラクトース又はデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物の形態をとることができる。粉末組成物は、例えば、カプセル若しくはカートリッジの単位剤形で、又は、例えば、粉末を吸入器若しくは吹送器を用いて投与することができるゼラチン若しくはブリスターパックで供され得る。所望する場合、活性成分を持続放出するように適合させた上記の製剤が利用され得る。
【０１５７】
本明細書に記載の医薬組成物はまた、抗菌剤又は防腐剤などの他の活性成分を含有していてもよい。
【０１５８】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬを含む医薬組成物は、緩衝液を更に含む。緩衝液の例として、酢酸、リン酸、クエン酸、及びグルタミン酸の緩衝液が挙げられる。また、緩衝液の例として、クエン酸リチウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸カルシウム、乳酸リチウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、乳酸カルシウム、リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム、マレイン酸リチウム、マレイン酸ナトリウム、マレイン酸カリウム、マレイン酸カルシウム、酒石酸リチウム、酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウム、酒石酸カルシウム、コハク酸リチウム、コハク酸ナトリウム、コハク酸カリウム、コハク酸カルシウム、酢酸リチウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸カルシウム、及びそれらの混合物が挙げられる。一部の実施形態では、緩衝液はクエン酸三ナトリウム二水和物である。一部の実施形態では、緩衝液はクエン酸一水和物である。一部の実施形態では、医薬組成物は、クエン酸三ナトリウム二水和物及びクエン酸一水和物を含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、外因性ＬＡＬを含む医薬組成物は、安定剤を更に含む。安定剤の例として、アルブミン、トレハロース、糖類、アミノ酸、ポリオール、シクロデキストリン、塩類（塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、及び塩化カルシウムなど）、凍結乾燥保護剤、及びそれらの混合物が挙げられる。一部の実施形態では、医薬組成物はヒト血清アルブミンを含む。
【０１６０】
本発明は、該当する器官及び組織のライソゾームへの外因性ＬＡＬの取り込みを促す、任意の投与経路を包含する。
【０１６１】
Ｆ．キット及び単位剤形
前述の方法おける使用に適した治療有効量でセベリパーゼアルファを含むキットが更に、本明細書で提供される。キットには、任意で、例えば投与スケジュールを含めた、従事者（例えば、医師、看護師、又は患者）がセベリパーゼアルファを患者に投与できるようにする指示書が含まれる場合もある。キットはまた、シリンジを含む。
【０１６２】
一実施形態では、本発明は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有するヒト患者において肝線維症を軽減するキットであって、（ａ）ある用量のセベリパーゼアルファと、（ｂ）本明細書に記載の方法でセベリパーゼアルファを使用するための指示書と、を含むキットが提供される。
【実施例】
【０１６３】
以下の実施例は、単に例示的なものであり、何ら本開示の範囲を制限するものとして解釈されるべきではないが、これは、数多くの変化形及び等価物が、本開示を読むことにより当業者に明らかになるからである。
【０１６４】
実施例１
ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症を有する小児及び成人における肝線維症のセベリパーゼアルファ５２週後の変化（ＡＲＩＳＥ試験）
Ａ．プロトコール
ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症（ＬＡＬ−Ｄ）は稀な遺伝性進行性疾患であり、線維症、小結節性肝硬変、及び最終的に肝不全を招くことが多い。ＬＡＬ−Ｄの動物モデルにおいて、セベリパーゼアルファ（ＳＡ）は肝臓病変を改善し、肝腫大、肝線維症の消散、及び正常構造の回復をもたらした。
【０１６５】
試験ＬＡＬ−ＣＬ０２（「ＡＲＩＳＥ」（ＮＣＴ０１７５７１８４）としても知られる）は、ライソゾーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症を有する小児及び成人におけるセベリパーゼアルファ（ＳＡ）の安全性及び有効性を評価するように設計された、第ＩＩＩ相の多施設共同、無作為化、プラセボ対照試験である。この試験は、最大６週間のスクリーニング期、２０週間の二重盲検治療期、最大１３０週間の非盲検期（ＳＡが登録されていないか、又は使用可能でない領域で薬物を投与されている対象には更に１０４週まで延長）、及び治験薬の最終投与から少なくとも４週間後の追跡調査から構成されている。全体の試験計画を図１に示す。プラセボ（ＰＢＯ）群の対象は、非盲検期に割り付けられてＳＡを投与された。
【０１６６】
対象は、インフォームドコンセントの時点で４歳以上であり、乾燥血液スポット（ＤＢＳ）で確認されたＬＡＬ酵素活性の欠損を有し、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が、少なくとも１週間空けて得られた２回連続のスクリーニング測定値において、基準値上限（ＵＬＮ）の１．５倍以上であることが必要とされた。
【０１６７】
被験者はＳＡ又はＰＢＯを用いる二重盲検治療に無作為化された。実薬治療に無作為化された対象は、ＳＡを１ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週（ＱＯＷ）で静脈内（ＩＶ）注入され、２０週間の二重盲検治療期にわたって合計で１１回注入された。二重盲検期中には、いかなる用量変更も認めなかった。盲検化された治験薬で有意な臨床的進行のエビデンスを示した対象は、二重盲検治療期を中止し、ＳＡを１ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＷの用量で用いる非盲検治療に移行することが認められた。
【０１６８】
非盲検期（２２週目に開始）の間、全対象はＳＡのＱＯＷでのＩＶ注入を受けた。非盲検期中には、用量変更を認めた。対象が用量漸増基準で規定されたプロトコールに適合した場合には、３ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＷまでの用量増加を認め、忍容性が低い事象の場合には、０．３５ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＷまでの用量減少を認めた。肝生検は、サンプリングの変動性、侵襲的技術のための合併症の可能性、及び主観的なスコアリングなどの制限があるものの、肝臓疾患活性及び線維症の病理組織評価の一般的に認められた標準法となっている。１試験プロトコールにつき、肝生検を、ベースライン、２０週目（二重盲検治療期の完了時）、及び５２週目（非盲検期）で得られるようにした。対象は、１０４週目〜１５２週目の間にいつでも任意の肝生検をすることも可能であった。肝生検は、医学的に禁忌とならない限り、成人対象で得ることが可能であった。肝生検は、適正な同意が得られ、地方条例及びそれぞれの医療機関のＩＲＢ／ＩＥＣにより許可されている場合、小児対象では任意となった。肝生検を、１９人の成人対象（１８歳以上）のうちの１８対象、及び４７人の小児対象のうちの１５対象で得た。少なくともの１回肝生検した３３対象のうちの３０対象は、有効なベースラインデータと、少なくとも１回の有効な投与後肝生検とを有した。
【０１６９】
二重盲検治療期の間に評価時点及び治療割り付けに盲目であった中央検査機関の第三者的病理学者が、全ての生検を、Ｉｓｈａｋステージ、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、及び微小胞脂肪症などの組織学的特徴に関して、半定量的に評価した。コンピュータ支援形態計測を用いて、脂肪症、コラーゲン、線維症、及びマクロファージの割合を定量した。
【０１７０】
Ｂ．肝生検データを有する対象の割り付け及び人口統計
肝生検を、ベースライン、２０週目（二重盲検治療期の完了時）、及び５２週目（非盲検期）で得た。また、任意の肝生検を１０４週目〜１５２週目から得た。図２はＳＡ群及びＰＢＯ群の患者における肝生検の頻度を示す。肝生検は、医学的に禁忌とならない限り１８歳以上の対象で得られ、また任意の基準で、親又は後見人からの同意（及び該当する場合には対象からの承諾）がある場合には１８歳未満の対象で得られた。
【０１７１】
総勢６６対象をＬＡＬ−ＣＬ０２  ＡＲＩＳＥ試験で無作為化した。３６対象をセベリパーゼアルファ（ＳＡ）に無作為化し、３０対象をＰＢＯに無作為化した。
【０１７２】
１９人の成人対象のうち、１対象において生検が医学的に禁忌とされた。４７人の小児対象のうち、１対象において生検が医学的に禁忌とされた。１５人の小児対象について、生検への同意を得た。したがって、３３対象（１８人の成人対象と１５人の小児対象）が少なくとも１回の肝生検を行った。
【０１７３】
肝生検をした３３対象のうちの３０対象が対応のあるデータ（有効なベースライン生検と少なくとも１回の有効な投与後の生検）を有した。残りの３対象が、対応のある分析には含まれなかった。
【０１７４】
治療群の無作為化による割り付けは以下の通りにした：
・  ３３対象が少なくとも１回の肝生検を行った
・  ３２対象がベースラインでの肝生検生検を有した  
・  ３１対象はベースラインでの有効な生検データを有した（２０週目の肝生検が治験薬の２２週目の投与１日後に取られたため、１対象からの肝生検データを分析から除いた）：
ｏ  ＳＡに無作為化された１８対象
ｏ  ＰＢＯに無作為化された１３対象
・  ３０対象が、ベースラインでの有効な生検データと、少なくとも１回の有効な投与後肝生検とを有した（表２を参照）：
ｏ  ＳＡに無作為化された１８対象
ｏ  ＰＢＯに無作為化された１２対象
・  ＳＡ／ＳＡ群に無作為化された対象のうち：
ｏ  １０対象は、ベースライン、２０週目、及び５２週目で生検データを有した
ｏ  ６対象は、ベースライン、及び２０週目でのみ生検データを有した
ｏ  ２対象は、ベースライン、及び５２週目でのみ生検データを有した
・  ＰＢＯ／ＳＡ群に無作為化された対象のうち：
ｏ  ６対象は、ベースライン、２０週目、及び５２週目で生検データを有した
ｏ  ４対象は、ベースライン、及び２０週目でのみ生検データを有した
ｏ  ２対象は、ベースライン、及び５２週目でのみ生検データを有した
期間による割り付けは以下の通りにした：
・  ２６対象は二重盲検期に関して対応のある肝生検データ（ベースライン及び２０週目）を有した：
ｏ  ＳＡ群の１６対象
ｏ  ＰＢＯ群の１０対象
・  ２０対象は、ベースライン及び５２週目で対応のある肝生検データを有した：
ｏ  ＳＡ／ＳＡ群の１２対象
ｏ  ＰＢＯ／ＳＡ群の８対象
表２：ベースライン及び投与後で有効な肝生検データを有する対象
【表２】
2019529479.tif 000003
年齢は、インフォームドコンセントに署名した時のベースラインでの対象の年齢である。プロトコールに規定された１基準当たりの用量漸増（１ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＷ〜３ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＷ）をしたのは９対象であった。肝生検データを有する対象のいずれも、５２週目の前には用量を漸増しなかった。言い換えると、５２週目までの肝生検データを有する全ての対象は、ＰＢＯ及び／又は１ｍｇ／ｋｇのＳＡにのみ曝露されていた。
【０１７５】
肝生検を１５人〜４７人の小児対象で得た。これらの１５人の小児対象のうちの２人は、それぞれ１回の肝生検のみ行い、したがって対応のある肝生検データを有する１３人の小児対象のコホートには含まれていない。
【０１７６】
Ｃ．肝生検評価
以下の評価を肝臓病理組織サンプルを用いて行った：
１．  形態計測による脂肪症の割合（Ｈ＆Ｅ染色）
２．  Ｉｓｈａｋステージ（０〜６にスコア化）（Ｈ＆Ｅ染色）
３．  コラーゲンの割合（シリウスレッド染色）
４．  線維症の割合（ＳＭＡ染色）
５．  マクロファージ（ＣＤ６８染色）
６．  門脈炎症（０〜４にスコア化）（Ｈ＆Ｅ染色）
７．  小葉炎症（０〜４にスコア化）（Ｈ＆Ｅ染色）
８．  大滴性脂肪症（０〜４にスコア化）（Ｈ＆Ｅ染色）
９．  微小胞脂肪症（０〜４にスコア化）（Ｈ＆Ｅ染色）
肝臓組織の評価は、ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色した部分の詳細な評価に主として基づくものである。Ｈ＆Ｅ染色は、組織学的検査において最もよく使用される染色技術である。これは、形態評価に最も重要な技術である。以下に記載する染色法などの更なる染色法を用いて、Ｈ＆Ｅ染色では容易に観察できない特徴を同定した。
【０１７７】
平滑筋アクチン（ＳＭＡ）：肝星細胞により発現されるアクチンのアルファアイソタイプは、その筋線維芽細胞様細胞への活性化を表すものであり、実験的な肝線維形成には直接的に関与し、慢性肝臓疾患におけるヒト線維症には間接的に関与していた。インビボで、アルファ平滑筋アクチンの発現は、線維組織の沈着に先立つ肝星細胞の活性化の信頼できるマーカーであり、これは、肝線維症の最初期ステージを特定し、治療法の有効性をモニタリングするのに有用になり得る。
【０１７８】
ＣＤ６８：ＣＤ６８（分化抗原群６８）は、マクロファージで発現される、肝臓で見られるＫｕｐｆｆｅｒ細胞などのライソゾーム糖タンパク質である。ＣＤ６８の免疫組織化学的検査を用いて、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞及び他のマクロファージを特定する。
【０１７９】
シリウスレッドは、形態計測による線維症の定量測定が必要となる際に、コラーゲンの選択的染色に用いられるポリアゾ染料である。シリウスレッドは、フィブリル形成型（Ｉ型及びＩＩＩ型）を含むほとんどの肝臓コラーゲンに対して親和性を持ち、その結果、線維症の定量評価を信頼性及び再現性が高い方法で行うことができる。
【０１８０】
１．脂肪症の割合（Ｈ＆Ｅ染色）
肝臓病理組織の定量的形態計測に基づく評価を肝脂肪症に対して行った（Ｈ＆Ｅ染色部分で測定）。ベースラインでの肝生検パラメーターを表３にまとめている。
【０１８１】
表３：ベースラインでの肝生検パラメーター
【表３】
2019529479.tif 000004
【０１８２】
肝脂肪症におけるベースラインから２０週目までの変化を表４及び図３に示す。事後分析によると、応答者が、ベースラインから改善したか又はベースラインから変化しなかった対象として定義された（脂肪症においては、改善したか又は変化しない状態は５％未満の増加として定義された）場合、２０週目で、ＳＡ群に無作為化された応答した対象（１５／１６対象、９４％）は、ＰＢＯ群に無作為化された対象（５／１０対象、５０％、ｐ＝０．０１８４）に比べて、有意に多いことがわかった。ＳＡを投与された患者は、ＰＢＯを投与された患者よりも、脂肪症の割合の中央値に改善が見られた（−４２．９％対１２．３％、ｐ＝０．０６１）（図４）。ＳＡを５２週投与されたコホート（ｎ＝１２）において、脂肪症の割合の中央値は、ベースラインから３７％低下した。
【０１８３】
表４：対応のある肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）を有する対象のベースラインから２０週目までの肝脂肪症の変化
【表４】
2019529479.tif 000005
【０１８４】
脂肪症における、ベースラインから２０週目までの個々の対象の形態計測的に算出された値それぞれの割合中央値の変化を分析すると、差分が統計的有意性（ｐ＝０．０６１３）に到達しなかったものの、ＳＡで治療された対象は、ＰＢＯを投与された対象と比較して脂肪症の割合に全体として改善を示す（表５及び図４）という傾向にあった。
【０１８５】
表５：時点毎と治療群（ベースライン及び２０週目）毎の肝脂肪症割合の要約統計量
【表５】
2019529479.tif 000006
【０１８６】
脂肪症の割合の要約統計量は、ＳＡに無作為化された対象（表６）及びＰＢＯに無作為化された対象（表７）のベースライン、２０週目、５２週目について示している。ベースラインでは、Ｈ＆Ｅにより評価された脂肪症の割合の形態計測スコアが、二つの治療群の間で同等であった（ＳＡ群では２９．７％であるのに対して、ＰＢＯでは２８．４％）。
【０１８７】
２０週目では、ＳＡ／ＳＡ対象は、脂肪症の平均割合が１４．８％減少（改善）し、中央値が１３．０５％減少（改善）した。ＳＡ／ＰＢＯ対象は、６．１％減少（改善）し、中央値が３．６％増加（悪化）した。
【０１８８】
５２週目では、ＳＡ／ＳＡ対象は、脂肪症の平均割合が１１．２％減少（改善）し、中央値が１５．４％減少（改善）し、ベースラインからの平均変化割合が１．１％であった。ＳＡ／ＰＢＯ対象は、脂肪症の平均割合が３．１％減少（改善）し、中央値が１０．４％減少（改善）し、ベースラインからの平均変化割合が１５．４％であった。ＳＡで治療した対象における脂肪症の割合がベースラインから改善する傾向は、５２週目まで継続した。これは、ＳＡで５２週間治療した対象（ＳＡに無作為化された対象）と、３０週間治療した対象（ＰＢＯに無作為化された対象）の両方で明らかである。
【０１８９】
表６：時点毎の脂肪症の割合：ＳＡに無作為化された対象のベースライン、２０週目、及び５２週目（Ｈ＆Ｅ染色）
【表６】
2019529479.tif 000007
【０１９０】
表７：時点毎の脂肪症の割合：ＰＢＯに無作為化された対象のベースライン、２０週目、及び５２週目（Ｈ＆Ｅ染色）
【表７】
2019529479.tif 000008
【０１９１】
２．Ｉｓｈａｋステージ（Ｈ＆Ｅ染色）
Ｉｓｈａｋステージのスコアは０〜６の範囲であり、肝生検の病理組織評価に基づいて算出された（表８）。
【０１９２】
文献に記載の他の分類システム（Ｋｎｏｄｅｌｌ組織学的活動指数、Ｂａｔｔｓ−Ｌｕｄｗｉｇステージ、Ｓｃｈｅｕｔｅｒ、及びＭＥＴＡＶＩＲ）は０〜４の範囲のスケールでスコア化される。Ｉｓｈａｋスケールはよりきめ細かくなっており（０〜６の範囲のステージ）、各Ｉｓｈａｋ線維症のステージは前のステージよりも瘢痕が多いことを示している。近年、Ｉｓｈａｋ分類システムが、特に米国で、臨床試験に広く用いられるようになっている。
【０１９３】
Ｉｓｈａｋステージと線維症との間には線形的な関係がないことに留意されたい。例えば、ステージ１からステージ２への線維症の変化（３．０％から３．６％）は、ステージ４からステージ５への変化（１３．７％から２４．３％）よりもはるかに小さくなっている。
【０１９４】
表８：Ｉｓｈａｋステージの説明
【表８】
2019529479.tif 000009
Ｉｓｈａｋスコアにおけるベースラインから２０週目までの変化と、ベースラインから５２週目までの変化を表９（ＳＡに無作為化された対象）と表１０（ＰＢＯに無作為化された対象）に示す。
【０１９５】
ベースラインでは、生検をした３２人の患者が線維症（ステージ１以上）を有していた。４７％が架橋線維症（ステージ３〜４）であったのに対して、３１％が肝硬変（ステージ５〜６）を有している。ベースライン及び試験５２週目の対応のある生検データを有する２０人の患者のうち、８人の患者はベースラインでＩｓｈａｋステージ５又は６であったが、これは初期又は慢性の肝硬変であることを示している。
【０１９６】
図５は二重盲検期（２０週のＳＡ曝露（ｎ＝１６））の間のＳＡ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。図６は非盲検期（５２週のＳＡ曝露（ｎ＝１２））の間のＳＡ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。ＳＡを５２週投与された１２人の患者のコホートにおいて、８人の線維症ステージが減少し（６人で２ポイント減少し、２人で１ポイント減少した）、３人で変化が見られなかった。一人の患者で増加が見られた。
【０１９７】
図７は二重盲検期（０週のＳＡ曝露（ｎ＝１０））の間のＰＢＯ群におけるＩｓｈａｋステージの変化を示す。図８は非盲検期（３０週のＳＡ曝露（ｎ＝８））においてＰＢＯ群でＳＡを開始した場合のＩｓｈａｋステージの変化を示す。ＳＡを３０週投与された８人の患者のコホートにおいて、４人の線維症ステージが１ポイント減少し、３人で変化せず、１人で増加した。
【０１９８】
２０週目には、ＳＡ群及びＰＢＯ群の両方における対象の大多数（２６対象のうち１７対象）で、Ｉｓｈａｋスコアがベースラインから変化しなかった。
【０１９９】
上述したように、５２週目では、６対象でＩｓｈａｋスコアがベースラインから２ポイント以上の減少した（図６を参照）。６対象全てが５２週ＳＡ曝露されていたが、これは長いＳＡ曝露には更に大きな効果があることを明らかにしている。Ｉｓｈａｋステージスコアがベースラインから５２週目まで２ポイント以上減少した６対象のうち５対象が、ベースラインでＩｓｈａｋステージが３であったが、これは線維症が十分に確立する前に治療を開始した場合には、より大きな治療効果があることを示唆している。全体的に、５２週目では、対応のある肝生検データを有する２０対象のうちの１８対象（９０％）のＩｓｈａｋスコアが、改善していたか又は進行していなかった。
【０２００】
Ｉｓｈａｋステージが１ポイント減少した患者の半数以上が、ベースラインで肝硬変を有していた。ステージが２ポイント減少した６人の患者のうち、１人がベースラインで肝硬変を有していた。６人のうち５人がベースラインでステージ３であり、５２週での平均割合の変化が、ＡＬＴでは−６０．５％であり、ＬＤＬ−Ｃでは−４０．３％であり、ＭＲＩで評価した肝脂肪含有量では−３１．６％であった。試験の５２週の間、６２人の患者が１つ以上の有害事象（ＡＥ）を有し、その多くが無関係なものであった。１０人の患者に注入に伴う反応（ＩＡＲ）が見られた。５人の患者に重篤な有害事象（ＡＥ）が見られ、そのうちの一つは治療に関連がある（ＩＡＲ）とみなされた。ＳＡを中止し、患者に短期の脱感作プロトコールを行った後にＳＡを再投与して、薬剤の試験を続けている。いずれの患者もＡＥのために試験を中止しなかった。
【０２０１】
５２週間ＳＡで治療した１２人の患者のうち、８人で線維症ステージが減少し、３人で変化せず、１人で増加した。治療の期間を長くすると、線維症のより大きな軽減を示す傾向にあった。これらの軽減は肝脂肪、ＡＬＴ、及びＬＤＬ−Ｃの低減に付随して起こった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、Ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ及びＴＧのデータを図９に記載している。これらのデータは、ＬＡＬ−Ｄを有する小児及び成人における短期及び長期のＳＡ治療の価値を裏付けるものである。
【０２０２】
表９：ＳＡに無作為化された対象のベースラインから２０週目及び５２週目までのＩｓｈａｋスコアの変化（Ｈ＆Ｅ染色）
【表９】
2019529479.tif 000010
【０２０３】
表１０：ＰＢＯに無作為化された対象のベースラインから２０週目及び５２週目までのＩｓｈａｋスコアの変化（Ｈ＆Ｅ染色）
【表１０】
2019529479.tif 000011
【０２０４】
ベースライン生検をした３１対象全員がベースラインで何らかの線維症を有した（表１１及び表１２）。１０対象のＩｓｈａｋスコアはベースラインで５又は６であったが、これは初期又は慢性の肝硬変であることを示している。ＳＡに無作為化された対象（表９）について、Ｉｓｈａｋスコアは２０週目までに改善し、５２週目まで改善し続けたが（対象の２１％が線維症を有さなかった）、これは治療が長くなると改善がより明らかになることを示唆している。
【０２０５】
表１１：ＳＡに無作為化された対象の時点毎のＩｓｈａｋステージスコア
【表１１】
2019529479.tif 000012
【０２０６】
表１２：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎のＩｓｈａｋステージスコア
【表１２】
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【０２０７】
３．コラーゲン（シリウスレッド染色）
コラーゲンの割合の要約統計量は、ＳＡに無作為化された対象（表１３）及びＰＢＯに無作為化された対象（表１４）のベースライン及び５２週目について示している。ベースラインでは、シリウスレッドにより評価されたコラーゲンの割合の形態計測スコアは、ＳＡ群では平均値が９．２％（中央値が８．１％）であり、ＰＢＯ群では平均値が１６．４％（中央値が１０．８％）であった。
【０２０８】
２０週目では、両方の治療群で、中央値が微増した（ＳＡ対象については３．８５％、ＰＢＯについては３．３５％）。
【０２０９】
５２週目までに、ＳＡ／ＳＡ治療群の対象で、コラーゲンの割合が改善した：ＳＡ／ＳＡ対象に対して平均値がベースラインから３．２％減少（改善）（中央値は２．５％減少）した。ＰＢＯ／ＳＡ治療群の対象は、平均値がベースラインから０．６％増加（悪化）し、中央値が２．７％増加（悪化）した。
【０２１０】
表１３：コラーゲンの割合：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（シリウスレッド染色）
【表１３】
2019529479.tif 000014
【０２１１】
表１４：コラーゲンの割合：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（シリウスレッド染色）
【表１４】
2019529479.tif 000015
【０２１２】
４．線維症（ＳＭＡ染色）
線維症の割合の要約統計量は、ＳＡに無作為化された対象（表１５）及びＰＢＯに無作為化された対象（表１６）のベースライン及び５２週目について示している。ベースラインでは、ＳＭＡ染色により評価された線維症の割合の形態計測スコアは、ＳＡ群では平均値が６．１％（中央値が４．０５％）であり、ＰＢＯ群では平均値が７．９％（中央値が４．００％）であった。
【０２１３】
２０週目では、線維症の割合の評価結果は、ＳＡ群で５．９％（中央値６．０５％）、ＰＢＯ群で７．７％（中央値６．６％）であった。
【０２１４】
５２週目までに、両方の治療群の対象で、線維症の割合が改善した：ＳＡ／ＳＡ対象に対して平均値がベースラインから４．４％減少（改善）（中央値は３．１％減少）し、ＰＢＯ／ＳＡ対象に対して平均値が２．４％減少（中央値は２．９％減少）した。
【０２１５】
表１５：線維症の割合：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（ＳＭＡ染色）
【表１５】
2019529479.tif 000016
【０２１６】
表１６：線維症の割合：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（ＳＭＡ染色）
【表１６】
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【０２１７】
５．マクロファージ（ＣＤ６８免疫染色）
マクロファージの割合の要約統計量は、ＳＡに無作為化された対象（表１７）及びＰＢＯに無作為化された対象（表１８）のベースライン及び５２週目について示している。ベースラインでは、ＣＤ６８＋免疫染色により評価されたＣＤ６８＋細胞の割合の形態計測スコアは、ＳＡ群では平均値が９．１％（中央値が７．４％）であり、ＰＢＯ群では平均値が４．６％（中央値が６．０％）であった。
【０２１８】
２０週目で、ＳＡ群の平均値が６．４％（中央値は４．６％）まで改善した。ＰＢＯ群の平均値は７．１％（中央値は６．２％）であった。
【０２１９】
５２週目で、ＳＡ／ＳＡ群の対象は、マクロファージの割合が継続して改善していた：平均値はベースラインから４．４％減少（改善）（中央値は１．６％減少）した。ＰＢＯ／ＳＡ群の対象は、平均値がベースラインから１．７５％増加（悪化）（中央値は１．８％増加）した。
【０２２０】
表１７：マクロファージの割合：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（ＣＤ６８＋免疫染色）
【表１７】
2019529479.tif 000018
【０２２１】
表１８：マクロファージの割合：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（ＣＤ６８＋免疫染色）
【表１８】
2019529479.tif 000019
６．門脈炎症
門脈炎症は０〜４までスコア化され、スコアは、ＳＡに無作為化された対象については表１９に、ＰＢＯに無作為化された対象については表２０に、時点毎（ベースライン、２０週目、及び５２週目）に提示されている。門脈炎症は、ベースラインにおいてほとんど全ての対象に存在していた（３０対象又は３１対象に対してスコアは１又は２、軽度又は中程度）。２０週目までに、２対象（両人共ＰＢＯ群）でスコアが３（中程度／顕著な門脈炎症）に進行し、ＳＡ対象ではいずれもスコア３に進行しなかった。５２週目までに、対象の大多数が門脈炎症の軽度又は中程度の分類に残った。
【０２２２】
表１９：門脈炎症：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表１９】
2019529479.tif 000020
【０２２３】
表２０：門脈炎症：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２０】
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【０２２４】
７．小葉炎症
小葉炎症を０〜４にスコア化する。スコアは、ＳＡに無作為化された対象については表２１に、ＰＢＯに無作為化された対象については表２２に、時点毎（ベースライン、２０週目、及び５２週目）に提示されている。小葉炎症はベースラインで全ての対象に存在した。ＳＡで治療した後に、小葉炎症が経時的に減少する傾向にあった。５２週目までに、２対象（両人共ＳＡ／ＳＡ群）では小葉炎症がなくなるまで改善した（０スコア）。
【０２２５】
表２１：小葉炎症：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２１】
2019529479.tif 000022
【０２２６】
表２２：小葉炎症：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２２】
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【０２２７】
８．大滴性脂肪症
大滴性脂肪症を０〜４にスコア化する。スコアは、ＳＡに無作為化された対象については表２３に、ＰＢＯに無作為化された対象については表２４に、時点毎（ベースライン、２０週目、及び５２週目）に提示されている。対象の大多数（３１対象のうち２７対象）はベースラインで大滴性脂肪症を有しておらず、これは基礎疾患の報告された病理に基づけば予想された結果であった。５２週目で、対象の大多数（２１対象のうち１５対象）が大滴性脂肪症を有さなかった。
【０２２８】
表２３：大滴性脂肪症：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２３】
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【０２２９】
表２４：大滴性脂肪症：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２４】
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【０２３０】
９．微小胞脂肪症
微小胞脂肪症を０〜４にスコア化する。スコアは、ＳＡに無作為化された対象については表２５に、ＰＢＯに無作為化された対象については表２６に、時点毎（ベースライン、２０週目、及び５２週目）に提示されている。対象の大多数がベースラインで微小胞脂肪症を有していたが（３１対象中３０対象）、これは基礎疾患を伴うことが予想された通りである。更に、大半（３１対象のうちの２７対象）が６６％を超える肝細胞の病変／置換を有していたが、これは疾患の重症度を示し、その根拠をなすものである。５２週までに、２１対象のうちの１２対象のみが６６％を超える肝細胞の病変／置換を有していたが、これは肝細胞における脂肪低減へのＳＡの効果を示している。
【０２３１】
表２５：微小胞脂肪症：ＳＡに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２５】
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【０２３２】
表２６：微小胞脂肪症：ＰＢＯに無作為化された対象の時点毎の肝生検データ（Ｈ＆Ｅ染色）
【表２６】
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【０２３３】
Ｃ．考察及び結論
肝生検は、サンプリングの変動性、侵襲的技術のための合併症の可能性、及び主観的なスコアリングなどの制限があるものの、肝臓疾患活性及び線維症の病理組織評価の一般的に認められた標準法となっている。
【０２３４】
肝生検を、１９人の成人対象（１８歳以上）のうちの１８対象、及び４７人の小児対象のうちの１５対象において得た。少なくともの１回肝生検した３３対象のうちの３０対象は、有効なベースラインデータと、少なくとも１回の有効な投与後肝生検（２０週目及び／又は５２週目）とを有した。対応のある肝生検データを有する対象が少数であるため、サンプリングの変動性が本試験の制限となる。
【０２３５】
二重盲検治療期の間に評価時点及び治療割り付けに盲目であった中央検査機関の第三者的病理学者が、全ての生検を、Ｉｓｈａｋステージ、門脈炎症、小葉炎症、大滴性脂肪症、及び微小胞脂肪症などの組織学的特徴に関して、半定量的に評価した。コンピュータ支援形態計測を用いて、脂肪症、コラーゲン、線維症、及びマクロファージの割合を定量した。
【０２３６】
肝臓病理組織の定量的形態計測に基づく評価を脂肪症の割合に対して行った。ベースラインでは、脂肪症の割合の形態計測スコアが、２つの治療群の間で同等であった（ＳＡ群では２９．７％であるのに対して、ＰＢＯでは２８．４％）。応答者が、ベースラインから改善したか又はベースラインから変化しなかった対象として定義された場合、２０週目で、ＳＡ群に無作為化された応答した対象（１５／１６対象、９４％）は、ＰＢＯ群に無作為化された対象（５／１０対象、５０％、ｐ＝０．０１８４）に比べて、有意に多くなった。脂肪症におけるベースラインから２０週目までの割合中央値の変化を分析すると、差分が統計的有意性（ｐ＝０．０６１）に到達しなかったものの、ＳＡで治療された対象は、ＰＢＯを投与された対象と比較して脂肪症の割合に改善を示すという傾向にあった。ベースライン及び５２週目の対応のある肝生検データを有する対象を考慮すると、ＳＡで治療した対象における脂肪症の割合がベースラインから改善する傾向は、５２週目まで継続した。これは、ＳＡで５２週間治療した対象（ベースラインからの平均値の変化は１１．２％であった）と、３０週間治療した対象（ベースラインからの平均値の変化は３．１％であった）の両方から明らかで、５２週間治療した対象における平均値の改善が明らかに大きくなっており、これは治療の効果と治療期間の関係を示すものである。
【０２３７】
ベースライン生検と少なくとも１つの有効な投与後生検を持つ３１対象全員が、ベースラインで何らかの線維症を有した。ベースラインと５２週目で対応のあるデータを持つ２０対象のうち、１０対象のＩｓｈａｋスコアはベースラインで５又は６であったが、これは初期又は慢性の肝硬変であることを示している。５２週目では、対応のある肝生検データを有する２０対象のうちの１８対象（９０％）のＩｓｈａｋステージスコアが、改善していたか又は進行していなかった。５２週のＳＡでの長期の治療は、肝臓マーカー及び脂質パラメーターの改善に加えて、患者の９２％（１２対象のうちの１１対象）が改善したか又は変わらないＩｓｈａｋ線維症ステージを有し、ベースラインからのＩｓｈａｋステージスコアが、６７％（１２対象のうちの８対象）で少なくとも１ステージ改善し、５０％（１２対象のうちの６対象）で２ポイント減少した。６対象全てが５２週ＳＡ曝露されていたが、これは長いＳＡ曝露には更に大きな効果があることを明らかにしている。Ｉｓｈａｋステージスコアがベースラインから５２週目まで２ポイント以上減少した６対象のうち５対象が、ベースラインでＩｓｈａｋステージが３であったが、これは線維症が十分に確立する前に治療を開始した場合には、より大きな治療効果があることを示唆している。
【０２３８】
コラーゲン、線維症、マクロファージ、門脈炎症、及び小葉炎症の組織学的特徴に関して、全ての対象はベースラインに対して５２週目で改善を示し、５２週間ＳＡで治療した対象（ＳＡに無作為化された対象）はＰＢＯで無作為化された対象（３０週間ＳＡで治療した対象）よりも大きな改善を示した。
【０２３９】
基礎疾患の病理に基づいて予想されるように、対応のある肝生検データを有する少数の対象（５／２０）しかベースラインで何らかの大滴性脂肪症を患っていなかったが、ほとんどの対象（１９／２０）が微小胞脂肪症を患っていた。他の組織学的パラメーターに関しては、微小胞脂肪症はＳＡでの治療で改善し、３０週間よりも５２週間治療した対象でより大きな改善が見られた。
【０２４０】
全体の傾向として、ＳＡで治療した対象における肝臓損傷が、ベースラインと比べて改善したか、又は進行しないことを示している。ＳＡに無作為化された、３つの時点（ベースライン、２０週、５２週）での生検データを有する対象から得た結果は、ＳＡに曝露される時間が増えるとより改善されることを示している。同様に、対象を５２週目で比較すると、５２週間ＳＡで治療された対象（ＳＡに無作為化された対象）が、３０週間治療された対象（ＰＢＯに無作為化された対象）よりも改善されていた。
【０２４１】
実施例２：ＡＲＩＳＥ試験からの更なる中間結果
以下は、進行中のＡＲＩＳＥ試験からの中間データのまとめであり、上述したプロトコールに実質的に従って行われたものであり、実施例１のデータを補足する。この分析の目的は、進行中のＡＲＩＳＥ試験の非盲検相を、７６週のセベリパーゼアルファ（ＳＡ）での治療の間の主要な臨床研究パラメーターに関して評価することであった。
【０２４２】
初めにＳＡ群に無作為化された患者にＳＡを７６週間投与した（試験０週〜７６週）。初めにプラセボ群に無作為化された患者は、続けて非盲検期に入り、ＳＡを７８週間投与された（試験２２週〜１００週）。集計データを７６週のＳＡ治療として示している。
【０２４３】
非盲検延長期において報告されている、最も一般的な治療下で発現した有害事象（発現率１０％以上）を以下表２７に記載している。１ｍｇ／ｋｇで３９５１回の注入及び３ｍｇ／ｋｇで２４８回の注入を行った。大半の有害事象（ＡＥ）の程度は軽度又は中程度であった。いかなる患者も非盲検期にＡＥのために中止することがなかった。非盲検延長期の間に注入に伴う反応（ＩＡＲ）が１３人の患者（２０％）で発生したが、１人を除く全員の程度が軽度又は中程度であった。７人の患者が重篤なＡＥを有した。これらのうち、１人が治療に関連すると思われるＩＡＲであった。その患者はＳＡ治療を８６週間中止し、脱感作プロトコールを行った後に、治療を再開した。抗薬物抗体（ＡＤＡ）を７人の患者（１１％）で検出した。これらの７人のうち、２人の患者が中和抗体を有した。ＡＤＡ陽性を示した患者の安全性プロファイルは、全体の試験集団のプロファイルと一致していた。
【０２４４】
表２７：最も一般的な治療下で発現した有害事象
【表２７】
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図１０に示すように、ＡＬＴレベルの平均値が、ベースラインの９９．６Ｕ／Ｌから、７６週のＳＡ治療により３９．６Ｕ／Ｌに減少した。これは、平均値の変化割合が−５６．１％であることを示している。具体的には、患者の８７％のＡＬＴが、１．５×ＵＬＮ以下となった。７６週では、５１％（３１／６１）がＡＬＴを正常化した。
【０２４５】
更に、血清ＡＳＴレベルの平均値が、ベースラインの７９．８Ｕ／Ｌから、７６週のＳＡ治療により３６．３Ｕ／Ｌに減少し、これは平均値の変化割合が−５０．７％であることを示している。具体的には、患者の９５％のＡＳＴが、１．５×ＵＬＮ以下となった。７６週では、患者の６５％（３７／５７）が、ＳＡ治療によりＡＳＴを正常化した。
【０２４６】
図１１は、ＳＡで７６週治療した場合の脂質パラメーターにおけるベースラインからの平均値の変化を示す。図１１に示すように、ＬＤＬ−Ｃレベルの平均値は、１９９ｍｇ／ｄＬから１４２ｍｇ／ｄＬに改善した。ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベルの平均値は、２３０ｍｇ／ｄＬから１６６ｍｇ／ｄＬに改善した。ＴＧレベルの平均値は、１５５ｍｇ／ｄＬから１２３ｍｇ／ｄＬに改善した。ＨＤＬ−Ｃレベルの平均値は、３３ｍｇ／ｄＬから４０ｍｇ／ｄＬに改善した。
【０２４７】
マルチエコーグラディエントエコー型磁気共鳴映像法を、ベースライン、試験２０週目、試験５２週目（ＳＡ／ＳＡ群では５２週のＳＡ治療に相当し、ＰＢＯ／ＳＡ群では３０週の治療に相当する）で行い、肝脂肪画分及び肝容積を評価した。５２週のＳＡ治療では、８８％の患者（２８／３２）で肝脂肪画分が減少した（減少率の平均値−２１％、ｎ＝３２）。９０％の患者（２８／３１）で、肝容積が減少した（減少率の平均値−１３％、ｎ＝３１）。３０週のＳＡ治療では、８８％の患者（２１／２４）で肝脂肪画分が減少した（減少率の平均値−２８％、ｎ＝２４）。９６％の患者（２５／２６）で、肝容積が減少した（減少率の平均値−１１％、ｎ＝２６）。
【０２４８】
まとめると、７６週のＳＡでの治療により、肝臓損傷、脂質異常、肝容積、及び肝臓脂肪含有量のマーカーで持続的な改善が見られたが、これは長期療法の効果を浮き彫りにしている。更に、７６週にわたる進行中のＳＡでの治療は、ＬＡＬ−Ｄを有する患者に概ね良好な忍容性を示した。具体的には、長期安全性プロファイルが、二重盲検期の間のプロファイルと同様であり、ほとんどの有害事象の程度が軽度から中程度であった。
【０２４９】
実施例３：小児患者における試験からの中間結果
以下は、小児試験をまとめたもので（ＬＡＬ−ＣＬ０３試験、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０１３５８３７０？ｔｅｒｍ＝ＬＡＬ−１＆ｒａｎｋ＝１）、上述のプロトコールに実質的に従って行われたものであり、実施例１及び実施例２のデータを補足する。この分析の目的は、ＳＡが、３歳までの生存と、急速進行性ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症（ＬＡＬ−Ｄ）を有する乳児の肝臓機能とに及ぼす影響を評価することであった。
【０２５０】
この試験では、ＬＡＬ−Ｄを有する小児患者（すなわち３歳までの乳児）に、毎週０．３５ｍｇ／ｋｇの開始用量でＳＡを投与し、１ｍｇ／ｋｇまで漸増させた。更に３．０又は５まで漸増させた。０ｍｇ／ｋｇはプロトコールに規定された基準に従って許容された。主要な選択基準は以下である：（１）予定の第一注入時の年齢が８カ月齢未満、（２）ＬＡＬ−Ｄの臨床確定診断、及び（３）６カ月齢前に発症する成長阻害又は急速進行性疾患の他のエビデンスを示したこと。生存は有効性の最も重要な尺度であるが、体重及び機能発達における改善、血液学的影響、並びに３年にわたる安全性／忍容性も評価した。
【０２５１】
９人の患者を３１カ月にわたり登録した。患者の人口統計を表２８に記載している。９人のうち８人が成長阻害を有した。９人全員に下痢若しくは嘔吐、副腎石灰化、肝腫大、及び／又は脾腫大が見られた。９人全員が特別な規定食（例えば、Ｍｏｎｏｇｅｎ（登録商標））を必要とし、９人のうち３人は脂肪を減らした食事をとり、９人のうち２人は非経口栄養を必要とした。
【０２５２】
表２８：小児患者の人口統計
【表２８】
2019529479.tif 000029
いかなる患者も現在までに試験を中止していない。１０１３回の注入を投与した。一人の患者（患者Ｄ）は２０１６年５月に本試験を完了してから、隔週でＳＡを３ｍｇ／ｋｇ投与され続けている。
【０２５３】
４３件の重篤な有害事象（ＳＡＥ）が９人全ての患者に生じた。この評価の前１年にわたり、無関係な二件のＳＡＥ（二人の別々の患者にクループ及び吸収不良（低アルブミン血症））と、一件の軽度であり治療法のいかなる変更も招いていない注入に伴う反応（ＩＡＲ）とがあった。有害事象（ＡＥ）の大部分（９５％）は軽度／中程度であった。
【０２５４】
５人の患者に、ＳＡＥとして報告された４件の事象も含めた総計５４件のＩＡＲがあった。
【０２５５】
ＩＡＲのうちの４８件を関連している又は関連している可能性があるとした。ＩＡＲのうちの５１件は軽度又は中程度であった（例えば、発熱又は嘔吐）。３件の重症のＩＡＲが同一患者に生じた。全ての応答を正しく管理し、常套的な医療行為で消散させた
抗薬物抗体（ＡＤＡ）陽性結果を、評価した７人の患者のうちの４人から得た。この陽性患者のうちの二人は、ＡＤＡ及び中和抗体に対して、評価した最も最近の時点を含めて一貫して陽性であった。他の二人の患者はＡＤＡ陽性になる頻度が低く、一人のみが中和抗体を有した。全てのＡＤＡ陽性患者は、治療に影響を与えることなく、抗体の有無とばらついた一時的な関連性を有して、ＩＡＲを経験した。
【０２５６】
生存統計を図１２に記載している。５人の患者が、２０１６年８月２８日の時点で３歳を超えて生存した。年齢中央値（範囲）：３年１１カ月（３年６カ月〜５年９カ月）。試験における時間の中央値は３年５カ月である。最も年齢の高い患者には、ＳＡを５年５カ月投与した。四人の死亡はＳＡとは関係がないか、又は関係がない可能性があった。三人の患者は、ＳＡを４回以下投与された後に死亡した（一人は心停止、一人は大量腹腔内出血により死亡）。もう一人の患者は、ＬＡＬ−Ｄにより肝不全で死亡した。一人の患者は本試験を完了したが、未だ治療中である。図１３は、誕生から死亡までの時間（ＬＡＬ−ＣＬ０３試験）と成長阻害を有する未治療のＬＡＬ−Ｄ乳児（ＬＡＬ−−ＮＨ０１臨床試験、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０１３７１８２５？ｔｅｒｍ＝ＬＡＬ−ＣＬ０３＆ｒａｎｋ＝１）のカプラン・マイヤープロットを示すものである。
【０２５７】
図１４には、患者Ｄの年齢対体重の成長曲線を示す。１２カ月齢まで生存している六人の患者（患者Ｂ、患者Ｃ、患者Ｄ、患者Ｅ、患者Ｆ、及び患者Ｇ）の年齢対体重成長曲線を図１５に示す。
【０２５８】
投与状況及び用量漸増スキームを表２９に示す。
【０２５９】
表２９：投与状況及び用量漸増
【表２９】
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【０２６０】
重量、肝臓、及び血液の結果を表３０に示す。経時的な肝臓及び血液のパラメーター（ＡＬＴ、ＡＳＴ、ヘモグロビン、フェリチン、アルブミン、及び血小板）を図１６に示す。重量中央値のパーセンタイルはベースラインで３．１％であり、最新の来院で３７．０％まで増加した。身長中央値のパーセンタイルは１．８％パーセンタイルであり、最新の来院で３０．６％まで増加した。
【０２６１】
表３０：投与状況及び用量漸増
【表３０】
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最終的に、５人の患者が３歳を超えて生存した。自然歴研究における乳児の生存の中央値は３．７カ月であった。全ての生存患者は毎週３．０ｍｇ／ｋｇ以上までの用量漸増を必要とした。体重増加、胃腸症状、肝脾腫大、ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びヘモグロビンにおける改善が経時的に持続していた。患者の大多数が正常発達を示した。ＳＡは良好な忍容性を示した。
【０２６２】
＊  ＊  ＊
上記の明細書の各実施例は本発明を説明するために提供されるものであり、本発明を限定するものではない。実際、本発明の範囲又は趣旨から逸脱することなく、本発明に種々の修正、統合、追加、削除、及び変更がなされ得ることは、当業者に明らかであろう。例えば、一実施形態の一部として図示又は記載された特徴は、別の実施形態で使用されて、更なる実施形態を与えることができる。本発明は、こうした修正、統合、追加、削除、及び変更を網羅することが意図される。
【０２６３】
本明細書に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、及び受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列の両方を含む）は、個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、又は受託番号／データベース配列のそれぞれが、参照により援用されることを具体的かつ個々に示されるのと同じ程度に、あらゆる目的に対し、その全体が参照により本明細書に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１６−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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