(57)【要約】本発明は、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含む真菌感染症の治療に使用するための組成物に関し、このナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、この組成物は、ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールとを含む。この組成物は、真菌爪感染症または皮膚感染症の局所治療として特に適する。本発明は、このような組成物を生産する方法、およびそれを生産するために使用できる組み合わせにも関する。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含む、真菌感染症の治療に使用するための組成物であって、前記ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、前記組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールと
を含む、組成物。
【請求項２】
前記ポリマーは、直鎖および／または分枝鎖もしくは環状ポリモノグアナイド／ポリグアニジン、ポリビグアナイド、それらのアナログもしくは誘導体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ）を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アルコールはエタノールを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物は水をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は局所用組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約２５〜約２００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５０〜約１５０μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、約５〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量のアルコールを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、約２０％〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量のアルコールを含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アルコールは最大約２３％（ｖ／ｖ）である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記アルコールは最大約２０％（ｖ／ｖ）である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーは、約１５０〜約４５０μｇ／ｍｌの範囲内の量である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリマーは最大約３００μｇ／ｍｌの量である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記水は、約７０％〜約９０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量である、請求項５〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記水は最大約８０％（ｖ／ｖ）の量である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
真菌感染症の治療に使用するための組成物であって、
（ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲内の量で存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、ここで前記ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、前記ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコールと、
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水と
を含む、組成物。
【請求項１９】
（ａ）約０．１％ｗ／ｗのテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）約０．３％ｗ／ｗのポリマーと、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗのアルコールと、
（ｄ）最大約７９．６％ｗ／ｗの水と
を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ポリマーは、直鎖および／または分枝鎖もしくは環状ポリモノグアナイド／ポリグアニジン、ポリビグアナイド、それらのアナログもしくは誘導体を含み、および／または、前記アルコールはエタノールを含む、請求項１８または１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比が約１：３である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ナノ粒子は、異径の二つの種の粒子を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記種は、０．５〜５ｎｍの範囲内の第一種と、５０〜３５０ｎｍの範囲内の第二種とを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記真菌感染症は、真菌爪感染症または皮膚感染症を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記真菌爪感染症または皮膚感染症は、爪真菌症および／もしくは足白癬、または皮膚糸状菌感染症および／もしくはイースト菌感染症を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物は、以下の成分：緩衝剤、賦形剤、結合剤、油類、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤および香料ならびに尿素のうちの一つ以上をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物は、他の成分を実質的に含まない、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物は、クリーム、軟膏、スプレーまたはパウダーの形態である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
真菌感染症の治療に使用するための組成物を生産する方法であって、約１：２〜約１：４の比で、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその塩もしくは誘導体とを、ナノ粒子の形成を可能にするのに適した条件下で混合するステップと、最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールを加えるステップとを含む、方法。
【請求項３０】
前記ポリマーは、直鎖および／または分枝鎖もしくは環状ポリモノグアナイド／ポリグアニジン、ポリビグアナイド、それらのアナログもしくは誘導体を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ）を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記方法は、局所用組成物の生産のためのものである、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約２５〜約２００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５０〜約１５０μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記エタノールは、約５〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量である、請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記エタノールは、約２０％〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アルコールは最大約２３％（ｖ／ｖ）である、請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記アルコールは最大約２０％（ｖ／ｖ）である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記アルコールはエタノールを含む、請求項２９〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ポリマーは、約１５０〜約４５０μｇ／ｍｌの範囲内である、請求項２９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ポリマーは最大約３００μｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記水は、約７０％〜約９０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量である、請求項２９〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記水は最大約８０％（ｖ／ｖ）の量である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、前記ポリマーと約１：３の比で混合される、請求項２９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ナノ粒子は、異径の二つの種の粒子で形成される、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記種は、０．５〜５ｎｍの範囲内の第一種と、５０〜３５０ｎｍの範囲内の第二種とを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記真菌感染症は、真菌爪感染症または皮膚感染症を含む、請求項２９〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記真菌爪感染症または皮膚感染症は、水虫または皮膚糸状菌感染症および／もしくはイースト菌感染症を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記方法は、局所用組成物の生産のためである、請求項２９〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物は、以下の成分：緩衝剤、賦形剤、結合剤、油類、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤および香料ならびに尿素のうちの一つ以上をさらに含む、請求項２９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記組成物は、他の成分を実質的に含まない、請求項２９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記局所用組成物は、後にクリーム、軟膏、スプレーまたは粉末に形成される、請求項２９〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
ａ）テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とナノ粒子を形成できるポリマーと、
ｂ）テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
ｃ）アルコールと
の組み合わせであって、
前記テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約１：２〜１：４の範囲内のポリマーに対する比で提供され、前記アルコールは、最大約３０％（ｖ／ｖ）の量で提供される、
組み合わせ。
【請求項５６】
前記組み合わせは、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物を生産するために、または請求項２９〜５４のいずれか一項に記載の方法において使用される、請求項５５に記載の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリマーとテルビナフィンとから形成されるナノ粒子を含む組成物（およびこのような組成物の生産方法）に関する。このような組成物は、真菌爪感染症および／または皮膚感染症の治療に限定はされないが特に適する。
【背景技術】
【０００２】
真菌感染症はヒトおよび動物においてますます一般的になっているが、このような感染症の治療は、抗真菌組成物の毒性、これらの組成物の低い溶解性、および従来の医薬製剤を用いて到達困難であると判明しうる一部の感染の遠隔位置により依然として困難である。
【０００３】
アンホテリシンＢ、ハマイシン、フィリピン、およびナイスタチン等の広範囲の抗真菌薬が１９６０年代に発見された。しかし毒性のため、ハマイシンおよびナイスタチンのみが局所的に使用され、アンホテリシンＢが全身的に使用される。抗真菌療法における大きな進歩は、アゾール類、特にケトコナゾールの導入であった。現在使用される抗真菌薬の主なクラスは、ポリエン類、アゾールアリルアミン類、リポペプチド類、およびピリミジン類である。しかし、ポリエン類は哺乳類細胞に毒性である。アゾール類は局所的には忍容性が良好であるが、全身的に投与されると副作用があり、アゾール類に対する耐性の報告がいくつか存在している。フルシトシンが、最も一般的に使用されるピリミジンである。フルシトシンは優れた組織浸透性を有するが、フルシトシンに対する耐性が急速に発生し、胃腸管副作用を生じうる。リポペプチド類は低い毒性を呈し、効力を試験するためにいくつかの臨床試験が今も続いている。
【０００４】
真菌類は真核生物であり、標的細胞が破壊されると宿主細胞も損傷しうるため、新たな抗真菌薬の開発が制約される。真菌感染症の増加および抗真菌薬の使用の増加により、真菌類の中に耐性が出現している。真菌病は免疫不全の患者の疾病率および死亡率の増加を引き起こしているため、抗真菌薬耐性は大きな臨床的影響をもつ。
【０００５】
水溶解度の問題による適切な送達の欠如により、新たに開発される薬物の約４０％が失敗すると推定される。薬物の局所送達の場合には、皮膚のバリア特性により、必要な薬物の用量を達成するために浸透促進剤が必要であることが多い。
【０００６】
爪真菌症（より一般的には真菌爪感染症として知られる）は、爪が肥厚し、変色し、変形し、割れる。治療しなければ、爪は肥厚して靴の内側に押し付けられ、圧迫、刺激、痛みを生じうる。特に糖尿病患者、末梢血管疾患を有する者、および免疫不全患者には、さらなる合併症のリスクがある。真菌爪感染症は心理的および社会的問題を引き起こしうる。真菌爪感染症の発生率は年齢とともに増加し、６０代以上では約３０％の有病率であり、ヨーロッパでは有意な発生率であり、アジアではさらに高いレベルである。真菌爪感染症は一つ以上の足指の爪および／または手指の爪を侵すこともあり、治療しないでおくと爪を完全に破壊しうる。
【０００７】
真菌爪感染症のための現在の治療は、６〜１２か月にわたる週１〜２回の局所用爪ラッカー／ペイント（アモロルフィン等）、および／または経口抗真菌薬（テルビナフィンまたはイトラコナゾール等）としてである。経口抗真菌薬は、胃腸管不調等の重度の副作用を有する可能性があり、肝不全を生じる可能性もある。症例の２５〜５０％で再発が一般に報告され、多くの患者が予想される副作用および治療期間の長さにより治療過程に取り組まず、疾患がより急速に進行した場合にようやく治療が始まることが多い。現在の経口または局所治療は、効くのに６〜１２か月かかりうる。経口治療は足指に到達するために全身循環を飽和させなければならず、用量の増加は胃腸管および肝臓の合併症のリスクを高める。局所治療は肥厚した爪に浸透するのに効果がなく、これも多量の投薬が必要である。
【０００８】
水虫（足輪癬、足白癬、またはモカシンフットとしても知られる）は、白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）属の真菌（最も一般的には紅色白癬菌（Ｔ．ｒｕｂｒｕｍ）または毛瘡白癬菌（Ｔ．ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ））により通常引き起こされる皮膚の真菌感染症である。水虫を引き起こす様々な寄生真菌は、爪真菌症および股部白癬等の他の皮膚感染症も引き起こしうる。真菌爪感染症とは異なるが、水虫もコンプライアンスおよび治療期間の問題がある。
【０００９】
真菌性角膜炎は、真菌感染により引き起こされる角膜の炎症である。糸状菌感染症にはナタマイシン眼科用懸濁液剤が使用されることが多いが、カンジダ感染症にはフルコナゾール眼科用溶液剤が推奨される。難治性症例にアンホテリシンＢ点眼薬が使用されるが、これらの点眼薬は人によっては毒性でありうる。
【００１０】
口腔カンジダ症は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種による口腔の粘膜の真菌感染症である。口腔カンジダ症は、免疫不全の患者において特に問題となる可能性があり、うまく治療すること困難であることが多い。
【００１１】
特許文献１は、ナノ粒子を形成できるポリマーと抗真菌剤とを含む真菌感染症の治療のための局所用組成物（およびそのような組成物の生産方法）を開示する。特許文献２は、ポリマーとテルビナフィンとで形成されるナノ粒子を含む抗真菌組成物を開示し、ナノ粒子は、０．５〜５ｎｍの範囲内および／または１５０〜２５０ｎｍの範囲内の粒子を含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２０１５０４４６６９号
【特許文献２】国際公開第２０１７／００６１１２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、現在の抗真菌治療に関連する上述の問題の一つ以上に対処することである。局所抗真菌治療を提供することも本発明の目的である。加えて、爪ならびに／または真皮、粘膜、角膜および／もしくは強膜等のいくつかの身体組織への抗真菌剤のより良好な浸透を可能にする治療を提供することも本発明の目的である。本発明は、爪真菌症および足白癬の両方に対処するための単一の治療として使用することができ、かつ容易に施用できるため高い治療順守をもたらし、低い再発率を有するのが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の第一態様によれば、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含む、真菌感染症の治療に使用するための組成物であって、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、この組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールと
を含む、組成物が提供される。
【００１５】
本発明の代替的な第一態様によれば、薬剤として使用するための組成物であって、この組成物は、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含み、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、この組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールと
を含む、組成物が提供される。
【００１６】
本発明のさらなる代替的な第一態様によれば、真菌感染症の治療のための組成物の使用であって、前記組成物は、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含み、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、この組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールと
を含む、組成物の使用が提供される。
【００１７】
本発明のもう一つのさらなる代替的な第一態様によれば、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とを含む真菌感染症の治療用の薬剤の製造のための組成物の使用であって、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、この組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲内のテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比と、
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールと
を含む、組成物の使用が提供される。
【００１８】
本発明の第二態様によれば、真菌感染症の治療に使用するための組成物であって、
（ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲内の量で存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、但し、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコールと、
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水と
を含む組成物が提供される。
【００１９】
本発明の代替的な第二態様によれば、薬剤として使用するための組成物であって、
ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲内の量で存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、但し、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコールと、
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水と
を含む組成物が提供される。
【００２０】
本発明のさらなる代替的な第二態様によれば、真菌感染症の治療のための組成物の使用であって、前記組成物は、
ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲内の量で存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、但し、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコールと、
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水と
を含む、組成物の使用が提供される。
【００２１】
本発明のもう一つのさらなる代替的な第二態様によれば、
ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲内の量で存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、但し、ナノ粒子は、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とともにおよび／またはその存在下で形成され、ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコールと、
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水と
を含む、真菌感染症の治療用の薬剤の製造のための組成物の使用が提供される。
【００２２】
このような第二態様の組成物は、好ましくは、
（ａ）約０．１％ｗ／ｗで存在するテルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
（ｂ）約０．３％ｗ／ｗで存在するポリマーと、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗで存在するアルコールと、
（ｄ）最大約７９．６％ｗ／ｗで存在する水と
を含みうる。
【００２３】
本発明の第一および第二態様の両方の特徴は、適宜互換可能である構成要素と後述のようなこれらの構成要素の量とを含みうる。
【００２４】
ポリマーが直鎖および／または分枝鎖もしくは環状ポリモノグアナイド／ポリグアニジン、ポリビグアナイド、それらのアナログもしくは誘導体を含むのが好ましい。直鎖および／または分枝鎖もしくは環状ポリモノグアナイド／ポリグアニジン、ポリビグアナイド、それらのアナログもしくは誘導体は、以下の式１ａまたは式１ｂによるものであってもよく、下表ＡおよびＢに例が提供される。
式１ａ
【００２５】
【化１】
2019509281.tif 000003
【００２６】
式１ｂ
【００２７】
【化２】
2019509281.tif 000004
【００２８】
式中、
「ｎ」はポリマーにおける反復単位の数を指し、ｎは２〜１０００、例えば２または５〜１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、または９００まで変動しうる。
Ｇ１およびＧ２は独立して、ビグアナイドまたはグアニジンを含むカチオン基を表し、Ｌ１およびＬ２はグアナイドの窒素原子に直接連結される。したがって、ビグアナイドまたはグアニジン基はポリマー骨格と一体である。ビグアナイドまたはグアニジン基は、式１ａの側鎖部分ではない。
【００２９】
カチオン基の例は、
ビグアナイド
【００３０】
【化３】
2019509281.tif 000005
【００３１】
（ＰＨＭＢなど）
または
グアニジン
【００３２】
【化４】
2019509281.tif 000006
【００３３】
（ＰＨＭＧなど）
である。
【００３４】
本発明において、Ｌ１およびＬ２は、ポリマーのＧ１およびＧ２カチオン基の間の連結基である。Ｌ１およびＬ２は、独立して、Ｃ１‐Ｃ１４０炭素原子を含む脂肪族基、例えばメチレン、エチレン、プロピレン、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９またはＣ１０等のアルキル基；Ｃ１‐Ｃ１０、‐Ｃ２０、‐Ｃ３０、‐Ｃ４０、‐Ｃ５０、‐Ｃ６０、‐Ｃ７０、‐Ｃ８０、‐Ｃ９０、‐Ｃ１００、‐Ｃ１１０、‐Ｃ１２０、‐Ｃ１３０または‐Ｃ１４０、アルキルを表すことができ；またはＬ１およびＬ２は、（独立して）、Ｃ１‐Ｃ１４０（例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０；Ｃ１‐Ｃ１０、‐Ｃ２０、‐Ｃ３０、‐Ｃ４０、‐Ｃ５０、‐Ｃ６０、‐Ｃ７０、‐Ｃ８０、‐Ｃ９０、‐Ｃ１００、‐Ｃ１１０、‐Ｃ１２０、‐Ｃ１３０、または‐Ｃ１４０）、環状脂肪族、複素環式、芳香族、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、オキシアルキレンラジカルであってもよく；またはＬ１およびＬ２は、（独立して）、任意に一つ以上の、好ましくは一つの、酸素、窒素、または硫黄原子、官能基、ならびに飽和または不飽和環状部分が介在するポリアルキレンラジカルであってもよい。適切なＬ１およびＬ２の例は、表Ａに列挙された基である。
【００３５】
Ｌ１、Ｌ２、Ｇ１、およびＧ２は、脂肪族、環状脂肪族、複素環式、アリール、アルカリル、およびオキシアルキレンラジカルを使用して修飾されていてもよい。
【００３６】
ＮおよびＧ３は、末端基であるのが好ましい。通常、本発明で使用するポリマーは、末端アミノ（Ｎ）およびシアノグアニジン（Ｇ３）またはグアニジン（Ｇ３）末端基を有する。そのような末端基は、（例えば１，６‐ジアミノヘキサン、１，６ジ（シアノグアニジノ）ヘキサン、１，６‐ジグアニジノヘキサン、４‐グアニジノ酪酸を用いて）脂肪族、環状脂肪族複素環式、複素環式、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、オキシアルキレンラジカルへの結合により修飾されうる。加えて、末端基は、受容体リガンド、デキストラン、シクロデキストリン、脂肪酸もしくは脂肪酸誘導体、コレステロールもしくはコレステロール誘導体、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ；ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）への結合により修飾されうる。任意に、ポリマーは、ＮおよびＧ３位のグアニジンもしくはビグアナイドもしくはシアノアミンもしくはアミンもしくはシアノグアニジン、または、Ｎ位のシアノアミンおよびＧ３位のシアノグアニジン、または、Ｎ位のグアニジンおよびＧ３位のシアノグアナイド、または、Ｇ３のＬ１アミンおよびＮのシアノグアニジンで終端しうる。Ｇ３はＬ１‐アミンン、Ｌ２‐シアノグアニジンまたはＬ２‐グアニジンでありうる。重合数（ｎ）または合成中のポリマー鎖の破断および副反応に依存して、例として上記のような末端基の不均質混合物が生じうる。したがって、ＮおよびＧ３基は、上記のように不均質混合物として互換され／存在しうる。あるいはＮおよびＧ３は不存在でもよく、本ポリマーは環状であってもよく、その場合にはそれぞれの末端Ｌ１およびＧ２基は直接相互に結合される。
【００３７】
式１ｂにおいて、Ｘは存在してもしなくてもよい。Ｌ３、Ｌ４およびＸは、「Ｌ１またはＬ２」につき上記した通りである。したがって、Ｌ３およびＬ４ならびにＸは、ポリマーのＧ４およびＧ５カチオン基の間の連結基である。Ｌ３およびＬ４ならびにＸは、独立して、Ｃ１‐Ｃ１４０炭素原子を含む脂肪族基、例えばメチレン、エチレン、プロピレン、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９またはＣ１０等のアルキル基；Ｃ１‐Ｃ１０、‐Ｃ２０、‐Ｃ３０、‐Ｃ４０、‐Ｃ５０、‐Ｃ６０、‐Ｃ７０、‐Ｃ８０、‐Ｃ９０、‐Ｃ１００、‐Ｃ１１０、‐Ｃ１２０、‐Ｃ１３０または‐Ｃ１４０、アルキルを表すことができ；またはＬ３およびＬ４ならびにＸは、独立して、Ｃ１‐Ｃ１４０（例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０；Ｃ１‐Ｃ１０、‐Ｃ２０、‐Ｃ３０、‐Ｃ４０、‐Ｃ５０、‐Ｃ６０、‐Ｃ７０、‐Ｃ８０、‐Ｃ９０、‐Ｃ１００、‐Ｃ１１０、‐Ｃ１２０、‐Ｃ１３０、または‐Ｃ１４０）、環状脂肪族、複素環式、芳香族、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、オキシアルキレンラジカルであってもよく、またはＬ３およびＬ４ならびにＸは、独立して、任意に一つ以上の、好ましくは一つの、酸素、窒素、または硫黄原子、官能基、ならびに飽和または不飽和環状部分が介在するポリアルキレンラジカルであってもよい。適切なＬ３およびＬ４ならびにＸの例は、表Ｂに列挙された基である。
【００３８】
「Ｇ４」および「Ｇ５」はカチオン部分であり、同一でも異なってもよい。これらの少なくとも一つはビグアニジン部分またはカルバモイルグアニジンであり、他方は上記の通り（ビグアニジンまたはカルバモイルグアニジン）またはアミンでありうる。疑念の回避のため、式１ｂにおいて、カチオン部分Ｇ４およびＧ５は単一グアニジン基のみを含まない。例えばＧ４およびＧ５は通常、単一グアニジン基を含まない。このような化合物の例は、表Ｂに列挙されるように、ポリアリルビグアナイド、ポリ（アリルビグアニドニオ‐コ‐アリルアミン）、ポリ（アリルカルバモイルグアニジノ‐コ‐アリルアミン）、ポリビニルビグアナイドである。
【００３９】
ポリアリルビグアナイドの例は、以下に示す通りである。
【００４０】
【化５】
2019509281.tif 000007
【００４１】
ポリアリルビグニジンの場合には、Ｌ３およびＬ４は同一であり、Ｇ４およびＧ５は類似し、したがってポリアリルビグアナイドは以下のように単純化されうる。
【００４２】
【化６】
2019509281.tif 000008
【００４３】
ポリ（アリルカルバモイルグアニドニオ‐コ‐アリルアミン）の例は、以下に示す通りである。
【００４４】
【化７】
2019509281.tif 000009
【００４５】
本発明で使用するためのポリマーは、一般にポリマーに結合した対イオンを有する。適切な対イオンには、以下が含まれるがこれらに限定されない：ハロゲン化物（例えば塩化物）、リン酸塩、乳酸塩、ホスホン酸塩、スルホン酸塩、アミノカルボン酸塩、カルボン酸塩、ヒドロキシカルボン酸塩、有機リン酸塩、有機ホスホン酸塩、有機スルホルネート、および有機スフレート。
【００４６】
本発明で使用するためのポリマーは、異なる「ｎ」の数のポリマーの不均質混合物、または、標準の精製方法により精製された特定の「ｎ」の数を含む均質画分のいずれかでありうる。上記のように、ポリマーは環状であってもよく、加えて分岐していてもよい。
【００４７】
好ましい「ｎ」の数は、２〜２５０、２〜１００、２〜８０および２〜５０を含む。
【００４８】
【表１】
2019509281.tif 000010
【００４９】
【表２】
2019509281.tif 000011
【００５０】
【表３】
2019509281.tif 000012
【００５１】
使用されるポリマーは、線状、分枝または樹状分子を含みうる。ポリマーは、線状、分枝または樹状分子の組み合わせを含みうる。ポリマーは、例えば上述のような式１ａまたは式１ｂの分子の一つまたは任意の組み合わせを含みうる。
【００５２】
例えば、ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ；ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）、ポリヘキサメチレンモノグアナイド（ＰＨＭＧ；ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｍｏｎｏｇｕａｎｉｄｅ）、ポリエチレンビグアナイド（ＰＥＢ；ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）、ポリテトラメチレンビグアナイド（ＰＴＭＢ；ｐｏｌｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）またはポリエチレンヘキサメチレンビグアナイド（ＰＥＨＭＢ；ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）の一つ以上を含みうる。いくつかの例が表ＡおよびＢに列挙される。
【００５３】
したがって、ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ）、ポリヘキサメチレンモノグアナイド（ＰＨＭＧ）、ポリエチレンビグアナイド（ＰＥＢ）、ポリテトラメチレンビグアナイド（ＰＴＭＢ）、ポリエチレンヘキサメチレンビグアナイド（ＰＥＨＭＢ）、ポリメチレンビグアナイド（ＰＭＢ；ｐｏｌｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）、ポリ（アリルビグアニドニオ‐コ‐アリルアミン）、ポリ（Ｎ‐ビニルビグアナイド）、ポリアリルビグアナイドの一つ以上の均質または不均質混合物を含みうる。最も好ましいポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ）を含む。
【００５４】
「テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩」という用語は、元々Ｌａｍｉｓｉｌ（登録商標）の商品名で市販されている合成アリルアミン抗真菌薬であるテルビナフィン塩酸塩に関係する薬剤的に活性な物質を意味することを意図する。この用語は、薬剤的に許容可能な形態の無毒性有機または無機、酸または塩基の付加塩等の、テルビナフィン塩酸塩の薬剤的変形物、誘導体、代替塩を含むことも意図する。
【００５５】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５〜約１０００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在しうる。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲内で存在しうるのが好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約２５〜約２００μｇ／ｍｌの範囲内で存在するのがより好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約５０〜約１５０μｇ／ｍｌの範囲内で存在するのがなお好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約１００μｇ／ｍｌで存在するのが最も好ましい。
【００５６】
ポリマーは、約１５〜約３０００μｇ／ｍｌの範囲内の量で存在しうる。ポリマーは、約１５〜約１８００μｇ／ｍｌの範囲内で存在するのが好ましい。ポリマーは、約７５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲内で存在するのがより好ましい。ポリマーは、約１５０〜約４５０μｇ／ｍｌの範囲内で存在するのがなお好ましい。ポリマーは、約３００μｇ／ｍｌで存在するのが最も好ましい。ポリマーは、ＰＨＭＢを含むのが好ましい。
【００５７】
アルコールは、約５％〜約２９％または約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量で存在しうる。アルコールは、約１０％〜約２９％または約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量であるのが好ましい。アルコールは、約２０％〜約２９％または約３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量であるのがより好ましい。アルコールは最大約２５％または２３％（ｖ／ｖ）の量であるのがさらに好ましい。アルコールは最大約２０％（ｖ／ｖ）の量であるのが最も好ましい。
【００５８】
アルコールは、エタノールを含むのが好ましいが、メタノールまたはプロパノール等の他のアルコールを（単独でまたは組み合わせて）含んでもよい。
【００５９】
組成物は、水も含みうる。水は、蒸留水であるのが好ましい。水は、約７０％〜約９５％（ｖ／ｖ）の範囲内の量で存在しうる。水は、約７０％〜約９０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量であるのが好ましい。水は、約７０％〜約８０％（ｖ／ｖ）の範囲内の量であるのがより好ましい。水は、約７７％（ｖ／ｖ）を超える量であるのがさらに好ましい。水は、最大約９０％（ｖ／ｖ）、最大約８０％（ｖ／ｖ）、または約７９．６％（ｖ／ｖ）の量であるのが最も好ましい。
【００６０】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約０．００５％ｗ／ｗ〜約１．０％ｗ／ｗの範囲内の量で存在しうる。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約０．００５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲内で存在しうるのが好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約０．０２５％ｗ／ｗ〜約０．２％ｗ／ｗの範囲内で存在するのがより好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約０．０５％ｗ／ｗ〜約０．１５％ｗ／ｗの範囲内で存在するのがなお好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約０．１％ｗ／ｗで存在するのが最も好ましい。
【００６１】
ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲内の量で存在しうる。ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約１．８％ｗ／ｗの範囲内で存在するのが好ましい。ポリマーは、約０．７５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲内で存在するのがより好ましい。ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約０．４５％ｗ／ｗの範囲内で存在するのがなお好ましい。ポリマーは、約０．３％ｗ／ｗで存在するのが最も好ましい。ポリマーは、ＰＨＭＢを含むのが好ましい。
【００６２】
アルコールは、約５％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲内の量で存在しうる。アルコールは、約１０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲内の量であるのが好ましい。アルコールは、約２０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲内の量であるのがより好ましい。アルコールは、最大約２９％ｗ／ｗの量であるのがさらに好ましく、最大約２５％の量であるのがより好ましく、最大約２３％ｗ／ｗの量であるのがなお好ましく、アルコールは最大約２０％ｗ／ｗの量であるのが最も好ましい。
【００６３】
アルコールは、エタノールを含むのが好ましいが、メタノールまたはプロパノール等の他のアルコールを（単独でまたは組み合わせて）含んでもよい。
【００６４】
組成物は、水も含みうる。水は、蒸留水であるのが好ましい。水は、約７０％ｗ／ｗ〜約９５％ｗ／ｗの範囲内の量で存在しうる。水は、約７０％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗの範囲内の量であるのが好ましい。水は、約７０％ｗ／ｗ〜約８０％ｗ／ｗの範囲内の量であるのがより好ましい。水は、最大約７０％ｗ／ｗの量であるのがさらに好ましく、最大約７７％ｗ／ｗの量であるのがより好ましい。アルコールは、最大約９０％ｗ／ｗ、最大約８０％ｗ／ｗまたは最大７９．６％ｗ／ｗの量であるのが最も好ましい。
【００６５】
組成物は、テルビナフィン、ポリマー、アルコールおよび水のみを含むのが好ましい。つまり、さらなる賦形剤または溶媒は組成物に含まれないということである。
【００６６】
テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比は、約１：３±０．７５でありうる。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比は、約１：３±０．５であるのが好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比は、約１：３±０．２５であるのがより好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比は、約１：３±０．１であるのがなお好ましい。テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩のポリマーに対する比は、約１：３であるのが最も好ましい。
【００６７】
ナノ粒子は、異径の二つの種で形成された粒子を含みうる。これは、０．５〜５ｎｍの範囲内の第一種と、５０〜３５０ｎｍの範囲内の第二種とを含みうる。
【００６８】
第一種の第二種に対する相対量は一般に互いに等しいか、または一方の種が組成物においてより顕著な種であってもよい。
【００６９】
第一種の粒子は、０．５〜３ｎｍの範囲内であるのが好ましい。第一種の粒子は、０．５〜２．５ｎｍの範囲内であるのがより好ましい。第一種の粒子は、０．５〜２ｎｍの範囲内であるのが最も好ましい。第二種の粒子は、７５〜３２５ｎｍの範囲内であるのが好ましい。第二種の粒子は、１００〜３００ｎｍの範囲内であるのがより好ましい。第二種の粒子は、１５０〜２００ｎｍまたは２１５ｎｍの範囲内であるのが最も好ましい。
【００７０】
第一種の粒子の平均サイズは、０．５〜１．５ｎｍの範囲内であるのが好ましい。第一種の粒子の平均サイズは、０．６〜１．４ｎｍの範囲内であるのがより好ましい。第一種の粒子の平均サイズは、０．７〜１．２ｎｍの範囲内であるのがなお好ましい。第一種の粒子の平均サイズは、約０．９ｎｍの領域内であるのが最も好ましい。
【００７１】
第二種の粒子の平均サイズは、５０〜３５０ｎｍの範囲内であるのが好ましい。第二種の粒子の平均サイズは、１００〜３００ｎｍの範囲内であるのがより好ましい。第二種の粒子の平均サイズは、１５０〜２００ｎｍの範囲内であるのがなお好ましい。第二種の粒子の平均サイズは、約１６０〜約１７６ｎｍの領域内であるのが最も好ましい。
【００７２】
第二種の粒子の平均最頻サイズは、１５０〜２２５ｎｍの範囲内であるのが好ましい。第二種の粒子の平均最頻サイズは、１５５〜２２０ｎｍの範囲内であるのがより好ましい。第二種の粒子の平均最頻サイズは、１６０〜２１５ｎｍの範囲内であるのがなお好ましい。第二種の粒子の平均最頻サイズは、約１６４〜約２１１ｎｍの領域内であるのが最も好ましい。
【００７３】
組成物は、局所的に施用される組成物を含みうる。
【００７４】
組成物は、以下の成分：緩衝剤、賦形剤、結合剤、油類、溶媒、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤および香料、または薬剤、特に局所用クリームおよび軟膏に通常見られる任意の追加的成分のうちの一つ以上をさらに含みうることが当業者には明らかであろう。さらに、組成物は、ペーストまたは懸濁物等のいくつかの形態でありうる。組成物は、スプレーデバイスと共に使用するために、またはマイクロニードルアレイ送達システムと合わせて使用するために製剤されうる。マイクロニードルアレイを利用する場合には、マイクロニードルアレイが接着パッチに組み込まれうる。
【００７５】
ある用途では、組成物は、テルビナフィン剤の感染領域への送達を可能にするために、浸透剤をさらに含みうる。例えば、感染が爪の下または爪自体の中にある真菌爪感染症に罹患した個体の爪をナノ粒子が突破することを可能にするために尿素が使用されうる。加えて、溶液中へのテルビナフィン等の組成物の一つ以上の成分の溶解を可能にするために、ある溶媒が利用されうる。
【００７６】
本発明の組成物は、鼻腔内投与されるかまたは吸入により投与されてもよく、乾燥粉末吸入器、または加圧された容器、ポンプ、スプレーもしくは噴霧器からのエアゾールスプレーの提供の形態で、適切な推進剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、例えば１，１，１，２‐テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４Ａもしくは１，１，１，２，３，３，３‐ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ２２７ＥＡ３）等、二酸化炭素または他の適切なガスを用いて、便利に送達されうる。加圧エアゾールの場合には、投薬単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することにより決定されうる。加圧された容器、ポンプ、スプレーまたは噴霧器は、潤滑剤、例えばソルビタントリオレートをさらに含みうる、例えば溶媒としてのエタノールと推進剤との混合物を使用した組成物の溶液または懸濁物を含みうる。吸入器または注入器用の（例えばゼラチンから作られる）カプセルおよびカートリッジは、本発明の組成物とラクトースまたはデンプン等の適切な粉末ベースとの粉末ミックスを含むように製剤されうる。
【００７７】
エアゾールまたは乾燥粉末製剤は、各計量された用量または「パフ」が患者への送達のために少なくとも１μｇの組成物を含むように準備されるのが好ましい。エアゾールによる全一日用量は患者ごとに異なり、単回用量で、またはより一般には一日を通して分割用量で投与されうることが理解されよう。
【００７８】
あるいは、本発明の組成物は坐薬もしくはペッサリの形態で投与されてもよいし、またはローション、溶液、クリーム、軟膏または散粉剤の形態で局所的に施用されてもよい。本発明の組成物は、例えば皮膚パッチの使用により、経皮投与されてもよい。本発明の組成物は、特に眼の疾患を治療するために、眼経路により投与されてもよい。
【００７９】
眼科用途では、本発明の組成物は、ナノ粒子システムを用いて、または等張、ｐＨ調整、滅菌食塩水中の微粒子化懸濁剤として、もしくは好ましくは等張、ｐＨ調整、滅菌食塩水中の溶液剤として、任意にベンジルアルコニウムクロリド等の防腐剤と組み合わせて、製剤されうる。あるいは本発明の組成物は、ワセリン等の軟膏において製剤されうる。
【００８０】
皮膚への局所的施用では、本発明の組成物は、例えば鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水のうちの一つ以上との混合物中に懸濁または溶解された活性化合物を含む適切な軟膏として製剤されうる。あるいは、本発明の組成物は、例えば鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２‐オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水のうちの一つ以上の混合物中に懸濁または溶解された適切なローションまたはクリームとして製剤されうる。
【００８１】
本明細書の以上に記載した組成物は、いくつかの真菌感染症を治療するために使用されうる。しかし、この組成物は、真菌爪感染症、水虫またはその他のタイプの真菌皮膚感染症／皮膚糸状菌感染症（鼠径部の輪癬（いんきんたむし）、身体の輪癬（体部白癬）、頭部の輪癬（しらくも）、その他の「輪癬」型感染症等）を治療するのに特に適する。本発明は、間擦疹、癜風、および鵞口瘡（カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）等であるがこれらに限定されないイースト菌感染症の治療にも適する。真菌感染症は、皮膚糸状菌感染症を含みうる。しかし、本発明は、イースト菌感染症および／またはコロニー形成を治療または調節するためにも使用できる。本明細書の以上に記載した組成物は、真菌感染症の治療または管理用でありうる。治療は、局所治療であってもよい。
【００８２】
さらに、本明細書の以上に記載した組成物は、真菌爪感染症および水虫の治療など、いくつかの真菌性疾患を治療するために使用されうる。
【００８３】
本発明のさらなる態様によれば、真菌爪感染症または皮膚感染症の治療に使用するための組成物を生産する方法であって、約１：２〜約１：４の比で、ナノ粒子を形成できるポリマーとテルビナフィンまたはその塩もしくは誘導体とを、ナノ粒子の形成を可能にするのに適した条件下で混合するステップと、最大約３０％（ｖ／ｖ）のアルコールを加えるステップとを含む方法が提供される。
【００８４】
この方法は、本発明の第一態様に関して記載した組成物を生産するために用いられるのが好ましい。
【００８５】
様々な方法を用いてナノ粒子を形成することができ、ナノ粒子はポリマーとテルビナフィンとの複合体として形成されることが想定される。しかし、ポリマーナノ粒子は独立して形成され、その後一緒にまたは別々に任意の順序でテルビナフィンとともにインキュベートされてもよい。テルビナフィンは、真菌に対する抗真菌剤の効力およびナノ粒子の浸透促進効果を保持するようなやり方でナノ粒子に吸収されるかまたは付着しうる。
【００８６】
本発明のさらなる態様では、
ａ）テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩とナノ粒子を形成できるポリマーと、
ｂ）テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩と、
ｃ）アルコールと
の組み合わせが提供され、テルビナフィンまたはその誘導体もしくは塩は、約１：２〜約１：４の範囲内のポリマーに対する比で提供され、アルコールは、最大約３０％（ｖ／ｖ）の量で提供される。
【００８７】
この組み合わせは、第一および第二態様に関して本明細書の以上に記載した組成物を生産するために、またはさらなる態様に関して本明細書の以上に記載した方法において使用されるのが好ましい。
【００８８】
遠心分離、電気泳動法、クロマトグラフ法またはろ過法等のいくつかの技術を利用して、必要なサイズ範囲内のナノ粒子を選択するために混合物がさらに処理されうる。ナノ粒子のサイズ／直径の測定は、動的光散乱解析を用いて実施されるのが好ましい。
【００８９】
本発明は、組成物を局所用薬剤に製剤するステップをさらに含みうる。
【００９０】
本方法を利用して本明細書の以上に記載した組成物が生産されることも明らかであろう。
【００９１】
本発明のさらに別の態様では、真菌爪感染症の治療に使用するための、本明細書の以上に記載した組成物とマイクロニードルアレイとの組み合わせが提供される。マイクロニードルアレイは、接着パッチに組み込まれうる。マイクロニードルは、２ｍｍ未満の長さでありうる。マイクロニードルは、１．５ｍｍ未満の長さであるのがより好ましい。マイクロニードルは、１ｍｍ未満の長さであるのが最も好ましい。５００μｍ未満のマイクロニードルが皮膚に挿入されるのが好ましい。４００μｍ未満のマイクロニードルが皮膚に挿入されるのがより好ましい。約３００〜２００μｍのマイクロニードルが皮膚に挿入されるのが最も好ましい。マイクロニードルは、組成物を真皮および／または表皮に投与するのが好ましい。
【００９２】
次に本発明の実施形態を、以下の実験および添付の図面を参照して、例示としてのみ説明する。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】図１Ａは、３０％エタノール中に０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンを混合し、室温で少なくとも２４時間インキュベートすることにより形成された粒子のサイズ分布を示したヒストグラムである。粒子サイズ分布は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用して測定した（粒子サイズ範囲＝５０〜８００ｎｍ、粒子数＝０．５×１０８粒子／ｍｌ）。図１Ｂは、３０％エタノール中に０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンを混合し、室温で少なくとも２４時間インキュベートすることにより形成された粒子のビデオフレーム画像である。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用して粒子を可視化した。
【図２】図２Ａは、３０％エタノール中に０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンと０．３ｍｇ／ｍｌのＰＨＭＢとを混合し、室温で少なくとも２４時間インキュベートすることにより形成された粒子のサイズ分布を示したヒストグラムである。粒子サイズ分布は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用して測定した（粒子サイズ範囲＝１００〜３００ｎｍ、最頻サイズ＝１９５ｎｍ、粒子数＝１２×１０８粒子／ｍｌ）。図２Ｂは、３０％エタノール中に０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンと０．３ｍｇ／ｍｌのＰＨＭＢとを混合し、室温で少なくとも２４時間インキュベートすることにより形成された粒子のビデオフレーム画像である。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用して粒子を可視化した。
【図３】Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒで測定した０．３ｍｇ／ｍｌのＰＨＭＢ／０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンのナノ粒子で形成されたナノ粒子の強度によるサイズ分布を示したグラフである。
【図４】図４Ａは、１ｍｌあたりのテルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子の数を時間に対して示したグラフであり、ナノ粒子の安定性を１７０日間評価し、０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度の３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５の溶液を、周囲条件の温度および光の下で透明プラスチックスクリュキャップチューブに保存した。指定の日にサンプルを取り出し、ナノ粒子の総数／ｍｌを分析した。図４Ｂは、テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子の最頻粒子サイズを時間に対して示したグラフであり、ナノ粒子の安定性を１７０日間評価し、０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度の３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５の溶液を、周囲条件の温度および光の下で透明プラスチックスクリュキャップチューブに保存した。指定の日にサンプルを取り出し、ナノ粒子の総数／ｍｌを分析した。
【図５】ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）およびテルビナフィンのみによる爪浸漬実験の結果を示したグラフであり、切り取った健常爪からの３ｍｍのヒト爪のディスクを、相当濃度の活性成分（０．１、１および１０ｍｇ／ｍｌ）のＢＢ０３０５およびテルビナフィンの溶液に懸濁した。洗浄し乾燥した爪を、５Ｍ  ＮａＯＨ中に溶解し、テルビナフィンのレベルを定量的ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより決定した。
【図６】図６Ａは、０．２５ｍｇ／ｍｌのＰＨＭＢ、０．０５ｍｇ／ｍｌのＦＩＴＣ標識ＰＨＭＢ（５スパイクに１つの蛍光標識ＰＨＭＢ）および０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの溶液に３２℃で２４時間浸漬した健常ヒトボランティアから切り取った爪の凍結切片の組織学的サンプルの写真である（スケールバーは約１００μｍ）。図６Ｂは、図６Ａと同様のやり方で浸漬した健常ヒトボランティアから切り取った爪の凍結切片の組織学的サンプルの写真である。爪のセクション全体（左側のスケールバーは約１００μｍ）および爪の中央領域のみ（右側のスケールバーは約２０μｍ）の二つの画像が提示される。爪構造自体の中に少なくとも２０μｍ浸透する染色が爪の縁の周りにはっきりと見られる。
【図７】ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）またはテルビナフィンの溶液で処置した健常ヒト爪サンプルへのテルビナフィンの浸透を示した散布図である。ＢＢ０３０５または０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの溶液で処置した健常ヒト爪からのエタノール洗浄物でのＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより、テルビナフィンの濃度を決定した。個々のサンプルをプロットする。（ダイアモンド形マーカー）全てのテルビナフィンサンプル（ｎ＝４）が検出限界未満であった（＜０．１ｎｇ／ｍｌ）。二つのサンプルセットを、テルビナフィン溶液で処置した爪を通過するテルビナフィンの濃度が０．１ｎｇ／ｍｌ（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ検出の限界）であるものと仮定して、スチューデント独立パラメトリックＴ検定を用いて比較した。この検定のｐ値は０．０４であった。
【図８】ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）またはテルビナフィンの溶液で処置した爪に結合したテルビナフィンのレベルを示した散布図である。ＢＢ０３０５または０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィン溶液で処置した健常ヒト爪からの溶解爪サンプルでのＬＣ‐ＭＳにより、テルビナフィンの濃度を決定した。個々のサンプルをプロットする。二つのサンプルセットを、スチューデント独立パラメトリックＴ検定を用いて比較した。この検定のｐ値は０．０２であった。
【図９】図９Ａは、ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）のヒト爪への複数回投与量の添加からのフランツセルデータの概要を示した散布図であり、複数回の小投与量のＢＢ０３０５で処置した健常ヒト爪からのエタノール洗浄物中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより決定）を調べた。図９Ｂは、ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）のヒト爪への複数回投与量の添加からのフランツセルデータの概要を示した散布図であり、複数回の小投与量のＢＢ０３０５で処置した健常ヒト爪からの溶解爪サンプル中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより決定）を調べた。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｅは、３０℃での４日間のインキュベーション後の、毛瘡白癬菌（Ｔｒｙｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）を含む酵母エキスペプトンデキストロース（ＹＥＰＤ）寒天プレートの写真画像である。各プレートの毛瘡白癬菌叢の中央に１０ｍｍの滅菌ペーパーディスクを置いた。４０μｌの再蒸留水または様々な濃度のテルビナフィン溶液を各ペーパーディスク上にスポットした。使用したテルビナフィン溶液の濃度は、０μｇ／ｍｌ（対照、図７Ａ）、０．０６μｇ／ｍｌ（図７Ｂ）、０．６μｇ／ｍｌ（図７Ｃ）、６．００μｇ／ｍｌ（図７Ｄ）および６０．０μｇ／ｍｌであった。図８は、本発明の組成物を送達するためにマイクロニードルパッチで治療されるべき爪を有する指の平面図である。
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）およびテルビナフィンのサンプルが毛瘡白癬菌に対抗して健常ヒト爪を通過する効力を評価したＹＥＰＤプレートの写真画像である。毛瘡白癬菌叢を、５０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを補充したＹＥＰＤ寒天プレート上に広げた。０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィン（図１１Ａ）またはＢＢ０３０５（図１１Ｂ）のいずれかで健常ヒト爪を７日間処置した後のフランツセル収集チャンバからの水性サンプルを１０ｍｍのペーパーディスク上にスポットした。ディスクを白癬プレートの中央に置き、その後３０℃で５日間インキュベートして真菌を増殖させた。ＢＢ０３０５で処置した爪からのテルビナフィンの抗真菌活性が、ディスクの周りのクリアランスゾーンとして見られる。
【図１２】複数回投与量のＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）で処置した爪からのエタノール洗浄物中のテルビナフィン濃度を示した散布図である。複数回の小投与量のＢＢ０３０５で処置した健常ヒト爪からのエタノール洗浄物中のテルビナフィン濃度（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより決定）は、２０％（ｖ／ｖ）エタノール（左側）または３０％（ｖ／ｖ）エタノール（右側）のいずれかであった。
【図１３】複数回投与量のＢＢ０３０５（テルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子）で処置した爪からの溶解爪中のテルビナフィン濃度を示した散布図である。複数回の小投与量のＢＢ０３０５で処置した健常ヒト爪からの溶解爪中のテルビナフィン濃度（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより決定）は、２０％（ｖ／ｖ）エタノール（左側）または３０％（ｖ／ｖ）エタノール（右側）のいずれかであった。
【図１４】本発明の組成物を送達するためにマイクロニードルパッチで処置されるべき爪を有する指の平面図である。
【図１５】図１４に示される指の断面図である。
【図１６】マイクロニードルパッチの断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
以下の実験の目的は、カチオン性ポリマーのポリヘキサメチレンビグアナイド（ＰＨＭＢ）を用いたナノテクノロジーベースの送達システムを使用して、（特に爪真菌症の治療のための）抗真菌薬の細胞送達が増強されうるか否かを検証することであった。ＰＨＭＢは、ドレッシング、スイミングプールおよびコンタクトレンズ溶液に一般的に使用される、安価で容易に入手可能な消毒剤および防腐剤である。その防腐作用は、生物の細胞膜を破壊し、これにより細胞含有物の漏出を引き起こすことにより働くと考えられる。実験は、適切な投薬量レベルおよび製剤の決定を可能にするために、真菌種に対する様々な濃度および製剤の抗真菌剤の効果も評価した。
【００９５】
テルビナフィンおよびＰＨＭＢによるナノ粒子の形成
最初にテルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子を形成する実験を行った。これらのテルビナフィンおよびＰＨＭＢのナノ粒子は、実験全体を通してＢＢ０３０５と表した。
【００９６】
最初に、３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のテルビナフィン．ＨＣｌとＰＨＭＢの組み合わせを０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌまたは１０ｍｇ／ｍｌに相当する最終テルビナフィン濃度とすることにより、ＢＢ０３０５ナノ粒子を形成した。ナノ粒子の形成を、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）でルーチン的に確認した。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて追加のナノ粒子分析を行った。テルビナフィン．ＨＣｌを３０％（ｖ／ｖ）エタノールに溶解し、０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌまたは１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度とすることにより、対照テルビナフィン溶液を作製した。
【００９７】
３０％エタノール中のテルビナフィンおよびＰＨＭＢによる最初の製剤は、形成されるナノ粒子の数を大きく増加させ、３０％エタノール中のテルビナフィンだけで形成された粒子よりも単分散のナノ粒子の形成をもたらすことが分かった。結果から、ＰＨＭＢを使用して抗真菌剤との単分散ナノ粒子を形成し、このナノ粒子をさらに様々な潜在的真菌感染症を後に治療するための局所用薬剤の調製において使用しうることが示された。
【００９８】
ナノ粒子の分析
ＢＢ０３０５の溶液は、室温で５か月以上安定なナノ粒子の形成が明らかに見られた。
【００９９】
最初の分析では、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０ナノサイザ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して溶液中のナノ粒子を検出した。この分析において、テルビナフィン溶液は検出可能な粒子を含んでいた（図１Ａ）。しかし、溶液１ｍｌあたりの粒子数は比較的低く（３０％（ｖ／ｖ）エタノール中の０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの溶液で０．５×１０８／ｍｌ未満）、粒子サイズは不均質で多分散であった。これらの粒子の存在は、化合物の疎水性の性質、つまり完全に可溶化されず、したがって水溶液中に様々な薬物凝集体を含むことに少なくとも部分的に起因すると考えられた。
【０１００】
対照的に、０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度のＢＢ０３０５の溶液では、（図１Ｂに示すように）直径が１７０〜２１０ｎｍの範囲内の多数（典型的に５〜１０×１０８ナノ粒子／ｍｌ）の単分散粒子が観察された。最初の爪浸漬実験（以下に記載）での使用のために、より高い濃度のＢＢ０３０５（それぞれ１ｍｇ／ｍｌおよび１０ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度）も生産したが、これらには単分散性の喪失が見られ、これはより大きなナノ粒子凝集体の形成を可能にするより高いポリマー濃度に起因すると考えられた（データは図示されない）。
【０１０１】
ＬＭ１０は顕微鏡による粒子の直接可視化を用い、粒子がビデオカメラにより追跡され、溶液中の粒子速度を粒子直径に関連させるアインシュタイン‐ストークス式を用いてサイズが計算される。このビデオキャプチャは、様々な製剤の分析中の質的評価も可能にする。しかしこの機器は、分析に関して直径約２０ｎｍのより低いカットオフ範囲を有する。したがって、動的光散乱を用いて粒子サイズを計算し、０．３ｎｍまでのサイズの粒子を検出できるＺｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）でもＢＢ０３０５のナノ粒子を分析した。この分析は、（図３に示すように）ＬＭ１０によっては検出できなかった直径が０．３〜２ｎｍの範囲内のＢＢ０３０５中の第二ナノ粒子集団を特定した。
【０１０２】
最後に、（図４Ａおよび４Ｂに示すように）３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５の溶液の長期安定性を、１７０日間の期間にわたり溶液中のナノ粒子を測定することにより評価した。分析はＮａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を用いて行ったため、より大きい直径のＢＢ０３０５ナノ粒子集団だけを考慮した。この分析は、溶液中の粒子数の当初のわずかな減少および粒子の最頻サイズのいくらかの変動はあるものの、ＢＢ０３０５ナノ粒子は周囲光条件下で、室温で少なくとも５か月間本質的に安定であることを実証した。
【０１０３】
爪浸漬実験
健常ヒト爪のサンプルを３０℃で、ｄｄＨ２Ｏ中で２時間プレインキュベートした。次に、３ｍｍ生検パンチを用いて、切り取った爪から３ｍｍのディスクを切断した。爪ディスクを１．５ｍｌチューブ内の２５０μｌの試験溶液中に置き、０．５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２の加湿インキュベータ内で、３２℃で２４時間インキュベートした。爪サンプルを取り出し、大量のｄｄＨ２Ｏ中で洗浄して、爪上の全ての薬物溶液を除去した。爪を清潔なティッシュを用いて乾燥した後、秤量した。秤量した爪を２００μｌの５Ｍ  ＮａＯＨに３７℃で１時間溶解した。溶解後、２００μｌのメタノールをサンプルに加えて、サンプル中の全てのテルビナフィンが溶液中に確実にとどまるようにした。溶解爪サンプル溶液中のテルビナフィンの量を、定量的ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ質量分析を用いて分析した。
【０１０４】
定量的質量分析（ＭＳ；ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）を使用して、サンプル中のテルビナフィンを検出および定量した。分析に提出する前に、サンプル識別子を見えなくした。分析は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  ＴＱ‐Ｓ質量分析計と結合したＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｉ‐Ｃｌａｓｓ  ＵＰＬＣクロマトグラフィシステムを用いて、タンデム質量分析（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ）を備えた高速液体クロマトグラフィを使用した。テルビナフィンのレベルを、０．１〜１０ｎｇ／ｍｌのテルビナフィンの標準曲線上の薬物標準に対して定量した。サンプルを適切に希釈して、標準曲線内に収まるようにした。０．１ｎｇ／ｍｌ未満のテルビナフィンのサンプルは、この分析の検出限界を下回った。爪サンプル中のテルビナフィンの濃度を爪の総量に対して正規化し、テルビナフィン（ｎｇ）／爪（ｍｇ）として表した。
【０１０５】
最初の研究は、ヒト爪の３ｍｍのディスクを様々な製剤および試験溶液中でインキュベートする単純な爪「浸漬」実験の使用に焦点を当てた。これらの実験は、テルビナフィンが爪と結合しているか否かしか検出できず、爪の浸透の直接的証拠は得られなかった。しかし、これらの実験は技術的に簡単に行うことができ、比較的高スループットであり、多様な製剤を評価することができた。
【０１０６】
図５に示すように、テルビナフィンの単純な溶液中のテルビナフィンは、ヒト爪サンプルに結合する。爪に結合したテルビナフィンの量は、０．１ｍｇ〜１ｍｇ／ｍｌの間では濃度に依存したが、１０ｍｇ／ｍｌのより高い濃度ではさらなる増強は見られなかった。これは、１ｍｇ／ｍｌを超えると爪ディスクは結合できるテルビナフィンの量の上限に達していることを示すと考えられる。
【０１０７】
図５は、ＢＢ０３０５がヒト爪サンプルと結合することも示す。０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度では、ＢＢ０３０５とテルビナフィン溶液との間に有意差は見られず、いずれも溶解爪サンプル中に同等濃度の薬物を生じた。テルビナフィンについて観察されたように、０．１ｍｇ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ相当のテルビナフィン濃度のＢＢ０３０５の間でも薬物結合の増加があったが、１０ｍｇ／ｍｌではさらなる増加はなかった。ここでも１ｍｇ／ｍｌを超えると、ＢＢ０３０５は２４時間で爪ディスクに浸み通ることができる薬物の量の限界に達していることが示唆される。しかし、テルビナフィンで処置した爪と比較して、ＢＢ０３０５で処置した爪と結合できる薬物の最大量は、はるかに高かった（１．３〜２．５倍）。全ての試験が本質的に同じ表面積を有する３ｍｍの爪ディスクで行われ、サンプル間の重量変動は１０％未満にすぎないため、この増加は利用可能な爪表面または全体的な爪材料の違いによるものではなかった。したがってこれらの実験は、ＢＢ０３０５が、ヒト爪と結合できるテルビナフィンの最大量を増加させることを示唆し、この製剤が組織内への薬物送達を増強していることを示した。
【０１０８】
爪浸漬実験は、ＢＢ０３０５が爪内への薬物送達を増強することを示唆したが、爪内への薬物浸透の増加と爪に対する薬物接着の増加とを区別することはできなかった。したがって、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＢ０３０５製剤を組織学的研究に進め、ナノ粒子の組織内浸透の直接的証拠を得ることを試みることにした。この濃度を選択したのは、この濃度が最も堅実で一貫したナノ粒子製剤をもたらし、前述のようにより高い濃度のＢＢ０３０５はナノ粒子の形成において変動がはるかに大きかったためである。
【０１０９】
組織学的研究
１％（ｗ／ｗ）のＦＩＴＣ結合Ｎａｎｏｃｉｎ（商標）（ＰＨＭＢからなるナノ粒子ベースの送達プラットフォーム、Ｔｅｃｒｅａ  Ｌｔｄ、Ｔｈｅ  Ｌｏｎｄｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，２Ｒｏｙａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＮＷ１  ０ＮＨ，ＵＫから市販）の「スパイク」を含むＢＢ０３０５の製剤を、０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの相当濃度で作製した。標識されたＢＢ０３０５を、上述のように爪浸漬実験に使用した。次いで、洗浄し乾燥した爪を組織学的分析に送った。爪の冷凍した凍結切片に、組織学および蛍光顕微鏡検査を行った。
【０１１０】
ＦＩＴＣ標識ＢＢ０３０５を用いた組織学的研究の例示的画像が、図６Ａおよび６Ｂに示される。爪表面へのＢＢ０３０５の接着と整合して、強い蛍光が爪の縁の周りに観察された。加えて、染色が表面から爪内に浸透しているのも観察された。染色のレベルは様々であったが、（特に図６Ａに示すように）爪構造自体の中深くに蛍光を検出することができた。
【０１１１】
このデータは、ＢＢ０３０５ナノ粒子がヒト爪に浸透していることを強く示唆するが、観察された染色が、遊離ＦＩＴＣ‐Ｎａｎｏｃｉｎ（商標）によるものにすぎない可能性が排除される必要があった。したがって、これらの組織学的実験から進んで、フランツセルを使用し、ヒト爪サンプルを横断した薬物の輸送を直接測定することにした。
【０１１２】
フランツセルの爪浸透研究
切り取った爪を３０℃で一晩水に浸漬し、短時間乾燥させた。直径３ｍｍのパンチを使用して、切り取った爪のディスク生検サンプルをとった。各爪ディスクをフランツセルに加え、セルの上部チャンバを取り付けた。４０μｌの以下の製剤を、上部チャンバに加えた：０．３ｍｇ／ｍｌのＰＨＭＢ＋０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィン、または１０ｍｇ／ｍｌのテルビナフィン。フランツセルの下部収集チャンバに水（約６００μｌ）を充填し、爪の下に泡が形成されるのを防ぐためにサンプルチャンバの底部の穴もｄｄＨ２Ｏを充填した。上部サンプルチャンバを、気泡を導入しないように慎重に収集チャンバに入れた。この時点で、収集チャンバからの余分な液体を排出して、下部チャンバ内の液体の最終体積を５００μｌにした。液体の蒸発を防ぐために、Ｐａｒａｆｉｌｍ（登録商標）を使用して上部チャンバと下部チャンバとの間の結合部を包んだ。
【０１１３】
単回投与（連続曝露）実験では、４０μｌの関連試験サンプル（ＢＢ０３０５またはテルビナフィン対照）を、爪／液体界面に気泡を導入しないように微細ピペットチップを使用して上部サンプルチャンバに加えた。上部チャンバを密閉して蒸発を制限した。複数回投与実験では、爪／液体界面に気泡が導入されないように微細ピペットチップを使用して５μｌのサンプルを上部サンプルチャンバ内の爪の上に直接７日間毎日加えた。サンプルが蒸発できるように、チャンバを開いたままにした。フランツセルを、０．５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２の加湿インキュベータ内で、３２℃でインキュベートした。
【０１１４】
フランツセルのインキュベーション後、サンプルチャンバおよびカラーアセンブリを慎重に取り外し、下部収集チャンバおよびカラーの底部の穴から全ての液体を取った。サンプルチャンバおよびカラーアセンブリを逆さにした後、爪の下側に結合した薬物を除去するために爪の下側を５×２０μｌのエタノールで穏やかに洗浄した。合わせたエタノール洗浄物を分析のために保持した（全量１００μｌ）。この洗浄は、爪を通過したかもしれないテルビナフィンを捕捉することを意図したものである。下部収集チャンバまたは爪の下側のエタノール洗浄物のいずれかに見られるテルビナフィンは、爪を通過した薬物を表した。
【０１１５】
フランツセルからの爪ディスクも、以下のようにしてテルビナフィンの存在を分析した。残った試験サンプルを上部サンプルチャンバから取り出して廃棄し、サンプルチャンバを１００μｌのｄｄＨ２Ｏで５回洗浄し、各洗浄物を廃棄してサンプルチャンバ内に残る残留試験溶液を除去した。次いで、サンプルチャンバおよびカラーを分解し、爪サンプルを取り出した。爪を大量のｄｄＨ２Ｏに浸して洗浄し、清潔なティッシュを用いて乾燥させ、秤量した。秤量した爪をその後２００μｌの５Ｍ  ＮａＯＨに３７℃で１時間溶解した。溶解後、２００μｌのメタノールをサンプルに加えて、サンプル中の全てのテルビナフィンが溶液中に確実にとどまるようにした。
【０１１６】
図７〜９Ｂは、ヒト爪サンプルを横断した薬物輸送のフランツセル分析からのデータをまとめたものである。観察結果がサンプルの間で最も堅実であったことから、溶解爪サンプルおよび爪の下側のエタノール洗浄物からの存在するデータのみが提供される。しかし、ＢＢ０３０５で処置した爪の下部チャンバにおいては常に、時には非常に高いレベル（＞０．６μｇ／ｍｌ）で、テルビナフィンを検出することができた。この分析は、ＢＢ０３０５で処置したサンプルにおける爪を通過したテルビナフィンの量の控えめな見方を表すと考えられる。
【０１１７】
単回投与（恒常的曝露）実験
３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５（０．１ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンに相当）またはテルビナフィン（０．１ｍｇ／ｍｌ）の溶液４０μｌを、健常ヒト爪サンプルを含むフランツセルのサンプルチャンバに加えた。次いで、セルを３２℃で７日間インキュベートした。サンプルは各実験の間中、爪の上面と接触したままであった。７日後、爪の下側からのサンプル（エタノール洗浄物）を収集し、ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより分析した。７日目の爪サンプルを洗浄し、先に記載したように５Ｍ  ＮａＯＨを用いて溶解した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  ＴＱ‐Ｓ質量分析計と結合したＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｉ‐Ｃｌａｓｓ  ＵＰＬＣクロマトグラフィシステムで、タンデム質量分析（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ）を備えた高速液体クロマトグラフィを用いて、収集した全てのサンプルをテルビナフィンの存在につき分析した。テルビナフィンのレベルを薬物標準に対して定量した。これらの分析における検出限界は０．１ｎｇ／ｍｌであった。
【０１１８】
図７および８に示すように、ＢＢ０３０５で処置したサンプルは、健常ヒト爪サンプルへのテルビナフィンの浸透を一貫して示した。早くもインキュベーションの１日目から、収集チャンバ溶液および爪の下側のエタノール洗浄物の両方でテルビナフィンを検出できた。ＢＢ０３０５で７日間処置した爪の下側からのエタノール洗浄物の分析は、ＢＢ０３０５による爪を通した強力な薬物送達を示した（図７に示す）。送達量は、おそらく爪サンプルの自然のばらつきに起因してサンプル間で異なったが、すべての場合において、殺菌用量を達成するために必要とされるよりも大きいと予測された。
【０１１９】
対照的に、テルビナフィン溶液は爪に浸透せず、ＢＢ０３０５（０．１ｍｇ／ｍｌ）と同等の薬物濃度を用いた全ての実験において、爪を通過したテルビナフィンの量は、ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにおいて検出限界未満（＜０．１ｎｇ／ｍｌ）であった（図７に示す通り）。テルビナフィンが０．１ｎｇ／ｍｌの濃度まで浸透したと仮定することにより、統計的試験をデータに適用して、ＢＢ０３０５の結果が単純なテルビナフィン溶液の結果と有意に異なることを実証することができた。単純なテルビナフィンで処置したサンプル中のテルビナフィンの最高可能濃度を仮定したため、この分析で計算された０．０４のｐ値は有意性の過小評価である。
【０１２０】
フランツセルからの溶解した爪サンプル中のテルビナフィンの量も、７日目に決定した（図８に示す通り）。これは、爪自体の中の薬物、すなわち爪に浸透しているが反対側に到達していない薬物と合わせた、（５Ｍ  ＮａＯＨで溶解する前に洗い落とされなかった）爪の上面に接着した薬物の量を表した。爪浸漬実験（図５）と同様に、テルビナフィン単独と比較してＢＢ０３０５で処置した爪に有意に高い量のテルビナフィンが結合しているのが分かった（中央値の差は約２倍、ｐ＝０．０２）。これも、ＢＢ０３０５がテルビナフィンの爪内への（および爪を通っての）送達を増強するとの考えと一致する。
【０１２１】
複数回投与実験
単回投与実験では、試験溶液が、インキュベーションの全期間中、爪の上側表面と常に接触している。これは、薬物が毎日感染爪に施用されてから乾燥させられる患者への施用の現実を必ずしも反映しない。したがって、この状況を再現するべく、５μｌのＢＢ０３０５をフランツセルの爪に毎日加える実験を行った。この少量は、爪ディスクの表面をカバーするのに十分であったが、次の添加の前に蒸発し、患者がＢＢ０３０５を毎日の局所治療として施用するのをより忠実に模倣した。爪の下側のエタノール洗浄物からのサンプルおよび爪自体を収集し、先に記載したようにＬＣ‐ＭＳ／ＭＳによりテルビナフィンの存在を分析した。
【０１２２】
複数回投与実験では、爪自体に結合したかなりの量のテルビナフィンが検出された（図９Ａおよび９Ｂに示す通り）。これは、（図８に示す）ＢＢ０３０５による単回投与（恒常曝露）実験で観察されたレベルとあまり変わらないレベルであり、単回投与実験からのテルビナフィン対照よりもやはり高いレベルであった。爪の下側からのエタノール洗浄物中にも有意な量のテルビナフィンが検出され、この実験でも薬物が爪を通過したことが示された。単回投与（恒常曝露）実験と比較して、爪を通って送達された薬物のレベルは、複数回投与実験でははるかに低かった。これは、ＢＢ０３０５による治療が長いほど、爪を通したテルビナフィンの送達が増えるという考えと一致する。
【０１２３】
毛瘡白癬菌抗真菌アッセイ
先の実験は、ＢＢ０３０５がテルビナフィンを爪を通して送達することをはっきりと示したが、薬物の爪通過が化学修飾を引き起こして効力の喪失をもたらすことがないことを証明しなければならなかった。毛瘡白癬菌叢を用いた抗真菌アッセイを実施した。
【０１２４】
毛瘡白癬菌は、爪真菌症に関連する主要な病原体に関係する実験用真菌種であり（例えば、Ｗａｄｅ  Ｆｏｓｔｅｒら、Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．２００４．５０（５）．ｐｐ７４８‐７５２を参照）、この種に対する効力は、紅色白癬菌（Ｔ．ｒｕｂｕｍ）等の病原性白癬菌種に対する効力に変換されることが期待される（下表１）。
【０１２５】
【表４】
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【０１２６】
毛瘡白癬菌の単一のコロニーをストックプレートから採取し、５ｍｌのＹＥＰＤ（酵母エキス、ペプトン、デキストロース）培地中で、３０℃で４８時間増殖させた。得られた培養物に滅菌スワブを浸し、これを用いて、クロラムフェニコール（５０μｇ／ｍｌ）を補充したＹＥＰＤ寒天プレート上に毛瘡白癬菌の叢を広げた。フランツセルからのサンプルは無菌ではなく、普通のＹＥＰＤプレート上で細菌増殖が見られたため、クロラムフェニコールを含めた。１０ｍｍの滅菌ペーパーディスクを試験溶液に浸漬し、過剰の液体を除去し、ディスクを毛瘡白癬菌叢上に置いた。プレートを逆さにし、３０℃で５日間インキュベートした。
【０１２７】
実施した第一の実験は、ペーパーディスクアッセイにおいて毛瘡白癬菌に対するテルビナフィンのおおよそのＭＩＣ（最小阻害剤濃度）を確立するためのものであった。これを行うために、ｄｄＨ２Ｏ中のテルビナフィン．ＨＣｌの１：１０希釈系列を６０μｇ／ｍｌ〜０．０６μｇ／ｍｌまで生成した。その後１０ｍｍ滅菌ペーパーディスクを様々な希釈物に浸漬し、これらを毛瘡白癬菌叢上に置いた。５日間のインキュベーション後、この種に対して抗真菌活性を有するテルビナフィン濃度のディスクの周りにクリアランスゾーンが観察された（図１０に示す通り）。このアッセイでのテルビナフィンのＭＩＣは０．６μｇ／ｍｌであり、この濃度未満では、明確なクリアランスゾーンは観察されなかった。このアッセイにおけるＭＩＣは、毛瘡白癬菌に対してテルビナフィンで以前に報告されたもの（６ｎｇ／ｍｌ）より１００倍超高いことが注目された（上表１を参照）。報告された数字は、より感度が高いことが知られる液体ＭＩＣアッセイから導出されたことが確かであるため、このペーパーディスクアッセイのほうが薬物効力の試験としてかなり厳密であった。
【０１２８】
このアッセイは、ＢＢ０３０５で処置したサンプルの爪を通過するテルビナフィンがその抗真菌効力をなお保持するか否かの問題に対処するためにも使用した。これを行うために、定量的ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ分析により０．６μｇ／ｍｌ超のテルビナフィンを含むことが示されたフランツセル実験の一つからの水相のサンプルを用いて毛瘡白癬菌叢アッセイを行った（図１１Ａ〜１１Ｂ）。ＭＩＣ実験およびこのサンプルの定量的ＭＳの結果と一致して、ＢＢ０３０５による明確なクリアランスゾーンが見られたが、テルビナフィン対照サンプルでは効果は見られなかった。したがって、ＢＢ０３０５で処置した健常ヒト爪を通過するテルビナフィンはその効力を保持し、依然として毛瘡白癬菌を殺すことができた。
【０１２９】
爪真菌症におけるＢＢ０３０５の潜在的効力
ＢＢ０３０５の目的は、経口テルビナフィンの性能を、全身薬物曝露に関連する安全性の問題がないであろう薬物の局所用製剤に匹敵させることであった。テルビナフィン溶液と比較して、ＢＢ０３０５は、健常ヒト爪を通した薬物送達を有意に増強することが示された。重要な問題は、ＢＢ０３０５の投薬により達成される量が爪真菌症の治療において有効であると予測されるか否かである。この問題に対処するために、フランツセル実験で観察されたテルビナフィンの濃度を、経口テルビナフィンで治療した患者の爪で報告された濃度と比較した（Ｌｅｙｄｅｎ，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９８：３８：Ｓ４２‐７）。
【０１３０】
経口投与後、テルビナフィンは、７日間の治療後の爪で０．１μｇ／ｇの濃度に達し、３週間後に約０．２５μｇ／ｇに上昇し、１８か月後に０．５５μｇ／ｇに上昇する（Ｌｅｙｄｅｎ，１９９８）。これらのレベルは全て、爪真菌症に関連する一連の主要な真菌種のＭＩＣよりも高く（表１）、したがってこれらの患者の真菌爪感染症を治療する際の薬物の効力を説明する。
【０１３１】
ＢＢ０３０５は、溶解した爪でこのレベルを大幅に超えているようであり（図８および９Ａ〜９Ｂ）、７日後の爪で約１ｍｇ／ｇの薬物に相当する中央値濃度を達成する（経口投与よりも１００００倍高い）。しかし、より低いものの、テルビナフィン単独でも溶解した爪に結合した有意なレベルの薬物が見られたが（約０．５ｍｇ／ｇの中央値濃度）、（これらの実験で用いたよりもはるかに高用量の）局所用テルビナフィンによる試験は、爪真菌症の治療において効力を示すことができなかった（Ｅｌｅｗｓｋｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ．２０１３，２７（３），ｐｐ２８７‐２９４）。
【０１３２】
相当量の薬物がテルビナフィン溶液で処置した爪に結合しているのが分かったが、いずれのサンプルでも爪を通過する有意な量のテルビナフィンは測定されなかった（図７）。したがって、これらのサンプルでは薬物の大部分が爪の上側表面に接着するかまたは組織内にさほど遠くまで浸透しないと結論づけた。
【０１３３】
テルビナフィンで処置したサンプルとは対照的に、ＢＢ０３０５で処置した爪の下側にはテルビナフィンが常に検出され、薬物が爪の内部に入って通り抜けたに違いないことが示された。したがって、ＢＢ０３０5で処置したサンプルからの溶解した爪中のテルビナフィンの測定は、上側表面に結合した薬物だけでなく、組織の深さ全体にわたり存在する薬物も表す。
【０１３４】
ＢＢ０３０５で処置した爪では、薬物の非対称分布が確立され、上側（処置）表面で濃度がより大きく、爪の下部の方に最も低い薬物濃度が見られる可能性が非常に高い。このため、サンプル中の薬物の最低濃度であると考えられる爪の下方部分のテルビナフィンの濃度を推定した。これを行うために、爪の下側（エタノール洗浄物中）に見られる薬物のレベルを、そのすぐ上の爪ディスクの爪の中の濃度と等しいと仮定した。フランツセル実験では爪の直径３ｍｍのディスクを使用したが、爪の直径１．５ｍｍの円のみが上部および下部チャンバ内の溶液と接触する（爪の残部はチャンバ自体と密閉を形成する）。これは、爪の下部のエタノール洗浄物中のテルビナフィンが、約１．８ｍｍ２の爪の表面積からのものであることを意味する。爪の下方部分中のおおよその濃度を計算するために、爪のこの部分が０．１ｍｍの深さを有すると仮定した。全体として爪の厚さは約０．５ｍｍであるため、これは爪ディスク全体の約５分の１に相当する。したがって、爪ディスクの下方部分体積は０．１８ｍｍ３であり、０．１８μｌに相当する。爪の下方部分中のテルビナフィンの濃度を計算するために、この体積の爪が、エタノール洗浄物中に見られるテルビナフィンと同量のテルビナフィンを含むものと仮定した。
【０１３５】
複数回投与実験で爪の下側に見られたテルビナフィンの中央値濃度は０．４ｎｇ／ｍｌであり（図９Ａ〜９Ｂ）、サンプル中の全テルビナフィンの０．０４ｎｇに相当する。ここから、爪の最下部のテルビナフィンの濃度はしたがって２２０ｎｇ／ｍｌ（０．０４ｎｇ／０．１８μｌ）であると推定された。最後に、健常ヒト爪の密度は１．３４ｇ／ｍｌであるため（Ｂａｒａｌｄｉら、２０１５，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３２（５），１６２６‐３３）、爪の最下部のテルビナフィンの濃度は、０．１６５μｇ／ｇ（０．２２μｇ／ｍｌ／１．３４ｇ／ｍｌ）にほぼ等しい。
【０１３６】
この計算から、複数回投与実験のＢＢ０３０５は、爪の最下部に経口投与により７日後に到達するテルビナフィンの濃度よりも高い量のテルビナフィンを送達したことが分かる（０．１μｇ／ｇと比較して０．１６５μｇ／ｇ）。この薬物のレベルは、爪真菌症に関連する最も感受性の低い真菌種を死滅させるのに必要なレベル（＞０．０６μｇ／ｍｌ、表１参照）より２〜３倍高い。爪の処置表面に近い部分については、濃度がはるかに高いと予想される。これらの数字は、複数回投与実験からの最も控えめなデータに基づく。単回投与実験の場合、エタノール洗浄物中に見られたテルビナフィンの中央値濃度は１８５ｎｇ／ｍｌであり（図７）、相当する下方部分の予想爪薬物濃度は８μｇ／ｍｌであり、経口投与により達成される、抗真菌効力のために必要とされる濃度を大幅に超える。
【０１３７】
まとめると、ＢＢ０３０５の７日間の局所施用は、単純なテルビナフィン溶液よりもはるかに多くのテルビナフィンの健常ヒト爪との結合を促進する。さらに、ＢＢ０３０５は、テルビナフィンが爪の端から端まで浸透することを可能にし、この薬物の爪内レベルの増加が少なくとも部分的には組織内への薬物浸透の増強によるものであることを示す。ＢＢ０３０５の施用から最も遠位の爪の部分でさえ、同等の経口投与量により生成される濃度を超える薬物の濃度を達成すると予測される。このレベルは、関連真菌種のＭＩＣよりも大きく、したがって爪真菌症の治療において有効である可能性が高い。
【０１３８】
経口テルビナフィンは現在、爪真菌症の治療の「ゴールドスタンダード」であり、最も短い治療時間で最も高い治癒率を有する（３〜６か月の投薬後に８０％超が治癒）。しかし、疾患治療におけるその使用は、その安全性プロフィールおよびテルビナフィンが大きな薬物間相互作用を有することにより制限される。これらの問題の多数が、経口投与（例えば肝毒性、ＣＮＳ作用）およびその後の高い全身薬物曝露に起因することがほぼ確実である。他の局所爪真菌症治療は長期の治療レジメン（最長１８か月の治療）が必要であり、治癒率が低く（２０〜４０％）、疾患再発率が高い（＞５０％）（Ｈａｌｍｙ，Ｋ．Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２００５．５２（３）：１２６‐１２６，Ｓｃｈｅｒら、Ｊ  Ａｍ  Ａｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００７；５６（６）：９３９‐９４４）。テルビナフィンの有効な局所用製剤の生産は、最善と証明された臨床効果を有する薬物を採用し、全身曝露に伴う安全性の問題を取り除くため、爪真菌症の治療に非常に魅力的なアプローチである。これを達成することは困難であることが分かっており、局所用テルビナフィン溶液を用いた多くの過去の試みが、爪真菌症の治療において有意な効力を実証できなかった。
【０１３９】
上述のように、局所施用のためのＢＢ０３０５中に存在するテルビナフィンの量は、現在の経口投与に必要とされる量よりもはるかに低いと考えられる。現在の全身治療は通常、一日２５０ｍｇの経口テルビナフィンを７日間にわたり使用する。少量のＢＢ０３０５を爪サンプルに７日間毎日局所施用した後には（患者の毎日の施用を模倣）、経口投与で報告されるよりも高レベルのテルビナフィンが爪中に達成された。爪に見られた薬物レベルは、爪真菌症に関連する全ての関連真菌種に対して効力を示すために必要とされるであろうレベルよりもはるかに高い（表１）。状況を考えれば、これらの実験から、平均的な爪（１００ｍｍ２）を治療するために必要とされたであろうＢＢ０３０５の用量は、経口治療のテルビナフィン１．７５ｇと比較して、約２００μｇを一週間、すなわち８７５０倍低用量となったであろうと考えられる。
【０１４０】
最後に、健常ヒト爪は、はるかに厳格な薬物浸透試験である。Ｂａｒａｌｄｉらによる最近の発表（Ｂａｒａｌｄｉら、２０１５）は、爪真菌症では爪がより厚いものの、完全性が大きく損なわれていること、つまり水溶液がはるかに浸透しやすい（３〜４倍）ことを示した。したがって、ＢＢ０３０５は病変組織においてはさらに良好な薬物浸透特性を示すであろうと期待される。
【０１４１】
２０％（ｖ／ｖ）エタノール対３０％（ｖ／ｖ）エタノール中ＢＢ０３０５の比較
ＢＢ０３０５を用いた以上の実験は全て、３０％（ｖ／ｖ）エタノールの溶液中で行った。最初の製剤研究は、３０％（ｖ／ｖ）エタノールが最大数のＢＢ０３０５ナノ粒子を生産したことを示したのに対し、１０％（ｖ／ｖ）以下のエタノール溶液中での実験は粒子数のかなりの低下が見られた。３０％（ｖ／ｖ）エタノールは局所真菌感染症の治療用に許容可能な溶液であるが、より低いエタノール含量でも効力が維持されるか否かを調べるために異なる％（ｖ／ｖ）のエタノールを評価した。したがって、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５製剤を検討することにした。
【０１４２】
ＢＢ０３０５の製剤を上述のように、しかし３０％（ｖ／ｖ）エタノールの代わりに２０％（ｖ／ｖ）エタノールを使用して作製した。ＮａｎｏＳｉｇｈｔ  ＬＭ１０での分析では、ＢＢ０３０５の粒子数または粒子分布のいずれにおいても３０％（ｖ／ｖ）エタノールと比較して２０％（ｖ／ｖ）製剤に検出可能な違いは見られなかった。そこで、患者が使用すると考えられるタイプの毎日の局所投与を最も良く模倣し、したがって爪真菌症における薬物治療の効力のモデル化が最も有意義であることから、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５製剤を用いたいくつかの複数回投与フランツセル実験を行った。
【０１４３】
５μｌの２０％（ｖ／ｖ）エタノール中ＢＢ０３０５を毎日添加して１週間処置した爪の下側のエタノール洗浄物中に見られるテルビナフィンの量を、本文に記載されるようにＬＣ‐ＭＳ／ＭＳにより分析した（図１２に示す通り）。これらは、洗浄物中に０．５ｎｇ／ｍｌの平均値の一貫したレベルのテルビナフィンが爪を通過していることを示した。データは、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５で処置した爪のほうが通過するテルビナフィンの量がわずかに高い傾向を示し、２０％（ｖ／ｖ）中のＢＢ０３０５のほうが爪を通して薬物を送達する上で有効であることが示唆された。これと一致して、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５で処置した溶解爪中のテルビナフィンの量は、３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５で処置したものより三倍高かった（図１３に示す通り）。
【０１４４】
総合すると、これらの結果は、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５の製剤を使用することにより、フランツセル複数回投与（毎日添加）実験においてヒト爪の内部へおよび爪を通り抜けてのテルビナフィンの送達がさらに強化されることを実証した。はるかに多量の薬物が爪に結合して見られ、爪を通過するテルビナフィンの量も高い。計算により、このＢＢ０３０５の製剤で処置した爪の下方部分の薬物の中央値は０．２１μｇ／ｇとなることが示され、これは７日目に経口投与後の爪に達成されるものの二倍であり、爪真菌症の関連真菌種を殺滅するのに必要なものをはるかに上回る。この結果は、水溶液中の化合物は５０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液中の化合物と比較して健常爪および病変爪の両方への浸透度のレベルが高いというＢａｒａｌｄｉら（Ｂａｒａｌｄｉら、２０１５）の観察と一致する。
【０１４５】
まとめると、ＢＢ０３０５の溶液中のエタノール濃度を３０％から２０％（ｖ／ｖ）に減少させてもナノ粒子形成に検出可能な影響はないが、興味深いことに、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ０３０５の製剤は、爪真菌症の治療における薬物の毎日の施用を模倣したフランツセル実験において、健常ヒト爪の内部へのテルビナフィン送達特性も爪を通り抜けてのテルビナフィン送達特性も改良されることを示す。
【０１４６】
爪真菌症薬剤の製剤
以上の実験に照らし、以下の製剤が爪真菌症のための局所用薬剤として有効であろうと想定される。
【０１４７】
【表５】
2019509281.tif 000014
【０１４８】
他の製剤も、有効な局所用薬剤を提供しうる。
【０１４９】
【表６】
2019509281.tif 000015
【０１５０】
【表７】
2019509281.tif 000016
【０１５１】
【表８】
2019509281.tif 000017
【０１５２】
【表９】
2019509281.tif 000018
【０１５３】
緩衝剤、賦形剤、結合剤、油類、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤および香料ならびに尿素を含む一般的に使用される医薬成分が以上の製剤Ａ〜Ｅとともに使用されうることは当業者にはもちろん明らかであろう。このような成分は、部分的には水分を置換し、薬剤をクリーム、軟膏またはスプレー等の適切な局所用形態に製剤することを可能にするために使用されうる。
【０１５４】
本発明による製剤は、以下の処方Ｆにしたがって調製し、ＢＢ２６０３と表した。
【０１５５】
【表１０】
2019509281.tif 000019
【０１５６】
処方Ｆの製剤をスプレーボトル内に置いた。次に、爪真菌症（加えて場合によっては足白癬）を患う患者の足指の上に製剤を１〜２週間の期間にわたり定期的に噴霧することにより試験を行った。この治療は成功が判明し、爪真菌症（および足白癬）を患う患者を良好かつ迅速に治療し、後の再発はなかった。
【０１５７】
マイクロニードルパッチ
経皮パッチは、皮膚を通して容易に吸収されうる小分子親油性薬物の投与に昔から使用されている。この非侵襲的送達経路は、多くの薬物のバイオアベイラビリティを劇的に減少させることもある消化器および肝門脈系の両方を迂回して全身循環への薬物の直接吸収を可能にするため、経口送達に適さない多くの薬物の投与に有利である。経皮送達は、患者の不快感、針への不安、執行者の針刺し事故のリスク、および鋭利物廃棄にまつわる問題を大きく減少させることにより、皮下注射に関連する課題の多くも克服する。
【０１５８】
これらの多くの利点にもかかわらず、薬物の経皮送達は、皮膚を通した吸収に適合するクラスの分子に限定される。小分子の塩および治療用タンパク質の送達は、皮膚が吸収促進賦形剤の存在下であってもこれらの分子に対する有効な保護バリアを提供するため、伝統的な経皮送達では通常実行可能ではない。しかし、マイクロニードル技術を用いて、抗真菌剤を含むナノ粒子を表皮、真皮および爪マトリックス（爪上皮で爪と皮膚とが出会う箇所）に直接送達することができる。このようにして本発明の組成物を送達することにより、ナノ粒子が爪マトリックスおよび毛管系に入り、抗真菌ナノ粒子組成物を爪床、硬い爪甲の下、および真菌の中に送達する。このようにして、強力な抗真菌剤を作用部位に直接送達し、これにより治療時間を短縮し、効能を高めうる。
【０１５９】
図１４および１５は指１０の図を示し、（図１６に示される）マイクロニードルパッチが指の点線で示した治療エリア１２内に施用されうる。治療エリア１２は、爪１４の後ろの真皮、さらに爪と皮膚とが出会う爪マトリックス（爪上皮）１６で形成される。爪根１８は、爪の後ろの真皮の下のエリアに位置し、したがって本発明の組成物を送達するためのマイクロニードルパッチを施用することにより効果的に治療されうる。もちろん、マイクロニードルパッチは、指爪に加えて足爪に使用されてもよい。
【０１６０】
図１６は、本発明の組成物を真菌爪感染症を患う個人に施すために使用されうるマイクロニードルパッチの図を示す。マイクロニードルパッチ２０は、接着剤２４が下側に施された可撓性ウェブ材料２２で形成される。複数の突端３０を有する下方に延びるマイクロニードルのアレイ２６が、可撓性ウェブの下側の中央に位置する。突端は、組成物を含むリザーバ２８に接続された導管を有する針として形成されることもできるし、または突端が単に組成物でコーティングされることもできる。代替的構成では、リザーバ２８は、組成物が所定の時間枠にわたりアレイの突端を継続的にコーティングできるように、マイクロニードルアレイの周りに配置された穴を通じて組成物を放出しうる。いくつかのマイクロニードルパッチが現在利用可能であり、本発明の組成物を様々なマイクロニードルパッチとともに使用するために適合しうることは当業者に明らかであろう。
【０１６１】
マイクロニードルは長さを２ｍｍ未満とすることができ、好ましくは約２５０μｍが最小限の患者の不快感で皮膚に挿入され、形成される穴が小さいことから注射後感染のリスク、出血、または皮内投与での不注意によるＩＶ注射のリスクが最小限である。また、マイクロニードルは、これらの小さな突起物では皮膚の穿刺事故はほとんど考えられないため、注射執行者へのリスクを減少させる。
【０１６２】
マイクロニードルパッチは、患者が包装材からパッチを取り出し、手指または足指の適切な部分に所定の期間にわたり施すだけでよい単回治療に使用されうることが想定される。代替例では、マイクロニードルパッチが組成物と組み合わせて販売されてもよく、患者がある量の組成物をマイクロニードルの表面にコーティングし、パッチを規定のやり方で身体に施すようにしてもよい。パッチは、患者または医師がマイクロニードルを治療されるべき手指または足指の正しい位置に適切に揃えるのを助けるために、外部にマークを備えていてもよい。
【０１６３】
以上の実施形態は、特許請求の範囲により提供される保護の範囲を限定することを意図せず、本発明の実施方法の例を説明することを意図したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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