(57)【要約】  本明細書では、α５含有ＧＡＢＡＡ受容体アゴニストおよび医薬組成物ならびにそれらを用いた神経変性および神経精神障害における認知および気分症状の処置方法が提供される。【選択図】図１
2019509340.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
【化１】
2019509340.tif 000048
（式中、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【化２】
2019509340.tif 000049
からなる群から選択され；
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、−Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、シクロアルキルから独立して選択されるか、または一緒にシクロアルキル環を形成してもよい）
のいずれか１つに従う化合物であって、
ただし、前記化合物は、
【化３】
2019509340.tif 000050
でない化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式（Ｖ）または（ＶＩ）：
【化４】
2019509340.tif 000051
（式中、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【化５】
2019509340.tif 000052
からなる群から選択され；
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１３は、−Ｈ、−ＣＤ３、Ｃ１〜６アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択される）
のいずれか１つに従う化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
ＸがＮである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＣＦである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＢｒである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が−Ｃ≡ＣＨである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が−ＣＨ３である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３が−ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１３が−ＣＨ３である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１３が−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１３が−ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１がＢｒである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１が−Ｃ≡ＣＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が−ＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が−ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１３が−ＣＨ３である、請求項２〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１３が−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項２〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１３が−ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項２〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
【化６】
2019509340.tif 000053
【化７】
2019509340.tif 000054
【化８】
2019509340.tif 000055
【化９】
2019509340.tif 000056
【化１０】
2019509340.tif 000057
【化１１】
2019509340.tif 000058
【化１２】
2019509340.tif 000059
【化１３】
2019509340.tif 000060
からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
式：
【化１４】
2019509340.tif 000061
（式中、
ＸはＣＨ、ＣＦ、ＣＣｌまたはＮであり；
Ｒ４はＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ５はＨまたはＣＨ３である）
のいずれか１つに従う化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
【化１５】
2019509340.tif 000062
からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１または請求項２に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知および／または気分症状の処置方法。
【請求項２６】
【化１６】
2019509340.tif 000063
から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知症状の処置方法。
【請求項２７】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２８】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の化合物または請求項２４に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知および／または気分症状の処置方法。
【請求項２９】
前記認知および／または気分症状がうつ病および神経障害に起因する、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記神経障害が神経精神障害または神経変性障害である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記神経精神障害が、大うつ病、双極性うつ病、または統合失調症である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記神経変性障害がアルツハイマー病である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
式（ＩＶ）：
【化１７】
2019509340.tif 000064
（式中、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【化１８】
2019509340.tif 000065
からなる群から選択され；ならびに
Ｒ１３は、−Ｈ、−ＣＤ３、Ｃ１〜６アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択される）
に従う化合物であって、
ただし、前記化合物は、
【化１９】
2019509340.tif 000066
でない化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
関連出願の相互参照
[０００１]  本出願は、２０１６年３月１８日に出願された米国特許出願第６２／３１０，４０９号明細書の利益を主張し、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府が支援する研究または開発に関する声明
[０００２]  本開示は、ＮＩＨ認可番号Ｒ０１  ＭＨ０９６４６３の下、米国政府の支援によりなされたものである。米国政府は、本開示に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
[０００３]  世界保健機関によると、大うつ病障害（ＭＤＤ）は障害の主な原因であり、世界中で３億５０００万人に影響を及ぼしている。これは、低感情、無快感、不安、反芻、食欲変化、睡眠障害、および認知障害を含む症状を伴う複雑な障害である。その早期発症および慢性的性質は、教育の喪失および失業につき深刻な影響を及ぼす。これは、年間および生涯の有病率がそれぞれ５．３％および１３．２％であり、再発率が高く、有病率は女性においてより高く、遺伝率が３７％であると推定されている。ＭＤＤは、発展途上国および先進国、ならびに女性および男性の両方において、障害による損失年数の主な原因である。うつ病の負担は増加している。重篤で慢性の疾病である抗療性うつ病は、常時、統合失調症および双極性障害の症例を合わせたものよりも大きい割合である、人口の１〜３％の推定有病率を有する。罹患した個人、その家族および社会における許容できない負担にもかかわらず、製薬会社は大部分において新しい抗うつ薬の開発を中止してきた。認知障害は、不安、無快感、睡眠障害および他の欠陥とともに発生する併存症状の一部である。認知機能障害は、注意欠陥、視覚および聴覚処理、短期および作業記憶、運動機能、学習および記憶過程における欠陥を指す。うつ病における認知障害の重要性について圧倒的な合意が得られているにもかかわらず、うつ病における認知障害の完全なプロファイルに関する結論はない。認知障害はＭＤＤにおける主要な機能障害であり得、他のいくつかの中核症状が認知機能障害のメディエータとして作用し得る。現在の抗うつ薬は全て、５０年以上前に偶然発見されたアプローチおよび作用機序から導かれている。これらの薬物は、主にモノアミン（セロトニンおよびノルエピネフリン）系で作用する。治療効果を得るには数週間かかることが多く、対象は、応答不良、低い寛解率（約５０％）および相当の副作用を経験する。さらに、利用可能な抗うつ薬は認知障害を処置するために設計されておらず、いくつかの場合において（いくつかのベンゾジアゼピンなど）、疾病のいくつかの側面（不安、無快感）における正効果は、認知に影響する負の副作用によって相殺される。さらに、臨床研究により、気分症状からの寛解の期間であってもなお認知障害が検出されることが実証されてきた。したがって、認知機能障害ならびに感情的および動機的症状を救済できる可能性のある抗うつ薬を開発することは、ＭＤＤの将来の処置において重要であると考えられる。
【０００４】
[０００４]  新しい抗うつ薬の開発への障壁は、疾患の機構および疾病の主要な病理から得られる標的についての知識の不足に始まり、複数存在する。したがって、合理的な薬物設計に向けた努力、または個人化した処置のための生物学的診断マーカーおよび治療マーカーを開発するための努力は現在ほとんど行われていない。
【発明の概要】
【０００５】
[０００５]  一実施形態において、本開示は、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
【０００６】
【化１】
2019509340.tif 000003
【０００７】
のいずれか１つに従う化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
[０００６]  別の実施形態において、本開示は、式（Ｖ）または（ＶＩ）：
【０００８】
【化２】
2019509340.tif 000004
【０００９】
のいずれか１つに従う化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
[０００７]  一実施形態において、本開示は、本開示による化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
[０００８]  一実施形態において、本開示は、本開示による化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知症状および／または気分症状を処置する方法を提供する。
【００１１】
[０００９]  本開示の他の態様は、詳細な説明および添付の図面を考慮することによって明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本開示の方法において有用な様々な化合物を示す。
【図２】本開示の方法において有用な様々な化合物を示す。
【図３】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−ＩＩ−７３の効果を示す。慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）のパラダイムを使用して、若齢（２〜３ヶ月齢）の動物に作業記憶不足を誘発した。試験の３０分前に、動物にＧＬ−ＩＩ−７３（０、１、５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。試験動物数：対照−溶媒：２８、ＣＲＳ−溶媒：３０、ＣＲＳ−１ｍｇ／ｋｇ：５、ＣＲＳ−５ｍｇ／ｋｇ：１７、ＣＲＳ−１０ｍｇ／ｋｇ：１５およびＣＲＳ−２０ｍｇ／ｋｇ：５。ＡＮＯＶＡにより、処置の全体的効果に対する統計的有意性を明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて検出された。「対照−溶媒」群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１／「ＣＲＳ−溶媒」群と比較して＄＄ｐ＜０．０１および＄＄＄ｐ＜０．００１）。
【図４】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−ＩＩ−７５の効果を示す。試験の３０分前に、ＣＲＳを受けたマウスにＧＬ−ＩＩ−７５（０、１、５、１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）：ｎ＝（４〜１１）／群。ＡＮＯＶＡにより、１、５および１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−７５を投与された動物群における、ストレスの全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対するＣＲＳ誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「対照−溶媒」群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１および「ＣＲＳ−溶媒」群と比較して＄＄ｐ＜０．０１）。
【図５】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−Ｉ−５４の効果を示す。試験の３０分前に、ＣＲＳを受けたマウスにＧＬ−Ｉ−５４（０、１、５、１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）：ｎ＝（６〜９）／群。ＡＮＯＶＡにより、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−Ｉ−５４を投与された動物群における、ストレスの全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対するＣＲＳ誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「対照−溶媒」群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１および「ＣＲＳ−溶媒」群と比較して＄ｐ＜０．０５）。
【図６】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−ＩＩ−３３の効果を示す。ＣＲＳを受けたマウスにＧＬ−ＩＩ−３３を注射した（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、試験３０分前）。試験動物数（ｎ）：ｎ＝（４〜５）／群。ＡＮＯＶＡにより、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−３３を投与された動物群における、ストレスの全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対するＣＲＳ誘発性障害の逆転傾向が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「対照−溶媒」群と比較して＊ｐ＜０．０５）。
【図７】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−Ｉ−６５の効果を示す。ＣＲＳを受けたマウスにＧＬ−ＩＩ−６５を注射した（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、試験３０分前）。試験動物数（ｎ）：ｎ＝（９〜１１）／群。ＡＮＯＶＡにより、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−Ｉ−６５を投与された動物群における、ストレスの全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対するＣＲＳ誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「対照−溶媒」群と比較して＊ｐ＜０．０５、および「ＣＲＳ−溶媒」群と比較して＄ｐ＜０．０５）。
【図８】マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するラセミ混合物（ＧＬ−ＩＩ−７３／ＧＬ−Ｉ−５４）の効果を示す。ＣＲＳを受けたマウスにラセミ混合物溶液（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、各エナンチオマー５ｍｇ／ｋｇ、試験３０分前）または溶媒を注射した。試験動物数（ｎ）：ｎ＝（４〜５）／群。ＡＮＯＶＡにより、ラセミ混合物を投与された動物群における、ストレスの全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対するＣＲＳ誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「対照−溶媒」群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１／「ＣＲＳ−溶媒」群と比較して＄＄＄ｐ＜０．００１）。
【図９】高齢マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−ＩＩ−７３の効果を示す。試験の３０分前に、１８ヶ月齢の対象マウスにＧＬ−ＩＩ−７３（５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）または溶媒を注射した。試験動物数（ｎ）：ｎ＝６／群。ＡＮＯＶＡにより、５ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−７３を投与された動物における、月齢の全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対する月齢誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「若齢−溶媒」群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１および「高齢−溶媒」群と比較して＄ｐ＜０．０５）。
【図１０】高齢マウスにおける作業記憶を評価するＹ迷路空間交替タスクにおける交替率％に対するＧＬ−ＩＩ−７５の効果を示す。試験の３０分前に、１８ヶ月齢の対象マウスにＧＬ−ＩＩ−７５（５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）または溶媒を注射した。試験動物数（ｎ）：ｎ＝６／群。ＡＮＯＶＡにより、５ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−７５を投与された動物における、月齢の全体的効果に対する統計的有意性、および作業記憶に対する月齢誘発性障害の有意な逆転が明らかとなった。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「若齢−溶媒」群と比較して＊＊ｐ＜０．０１および「高齢−溶媒」群と比較して＄＄ｐ＜０．０１）。
【図１１Ａ】水迷路における習得試験中の（ａ）プラットフォームに対する潜時、（ｂ）合計距離、（ｃ）周囲リング内の距離（％）および（ｄ）経路効率、に対するジアゼパム２ｍｇ／ｋｇならびにＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １、２および１０ｍｇ／ｋｇの効果を示す。溶媒（ＳＯＬ）群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１；２ｍｇ／ｋｇジアゼパム（ＤＺＰ  ２）群と比較して＋ｐ＜０．０５、＋＋＋ｐ＜０．００１；１ｍｇ／ｋｇ（ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １）群と比較して、＃ｐ＜０．０５、＃＃＃ｐ＜０．００１。処置群当たりの動物は６〜７であった。ＳＯＬ＝溶媒、ＤＺＰ  ２＝２ｍｇ／ｋｇジアゼパム、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １＝１ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  ２．５＝２．５ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １０＝１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２。
【図１１Ｂ】同上。
【図１１Ｃ】同上。
【図１１Ｄ】同上。
【図１２Ａ】水迷路における探索試験中の（ａ）標的区域内の距離（メートル）および（ｂ）周囲リング内の距離（％）に対する２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムならびに１、２、および１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２の効果を示す。溶媒（ＳＯＬ）群と比較して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１；２ｍｇ／ｋｇジアゼパム（ＤＺＰ  ２）群と比較して＋ｐ＜０．０５、＋＋ｐ＜０．０１；１ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２（ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １）群と比較して、＃ｐ＜０．０５。処置群当たりの動物は６〜７であった。ＳＯＬ＝溶媒、ＤＺＰ  ２＝２ｍｇ／ｋｇジアゼパム、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １＝１ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  ２．５＝２．５ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １０＝１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２。
【図１２Ｂ】同上。
【図１３】社会的新規性識別手順における、識別指数（ａ）およびＰ２の熟知および新規若齢ラットを探索する時間（ｂ）に対する、１．５ｍｇ／ｋｇのジアゼパム（ＤＺＰ１．５）ならびに１、２．５および１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２の効果を示す。識別指数につきゼロからの有意差は、＃（１試料ｔ検定、＃＃ｐ＜０．０１）で示される。熟知対新規探索時間につき、＊ｐ＜０．０５（対応試料ｔ検定）。データは平均±ＳＥＭとして表される。処置群当たりの動物数は８であった。ＳＯＬ＝溶媒、ＤＺＰ  １．５＝１．５ｍｇ／ｋｇジアゼパム、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １＝１ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  ２．５＝２．５ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １０＝１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２。
【図１４】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＧＬ−ＩＩ−７３の効果を示す。腹腔内投与した０、１、５または１０ｍｇ／ｋｇでのＧＬ−ＩＩ−７３の用量応答（試験の２４、２０、１時間前）。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、６および１５／群。ＡＮＯＶＡおよび事後分析により、溶媒群と比較して１０ｍｇ／ｋｇで有意な抗うつ薬様効力が明らかとなった。溶媒群と比較した場合、＊ｐ＜０．０５。
【図１５】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＧＬ−ＩＩ−７４の効果を示す。腹腔内投与した０、１、５または１０ｍｇ／ｋｇでのＧＬ−ＩＩ−７４の用量応答（試験の２４、２０、１時間前）。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、８および１５／群。ＡＮＯＶＡおよび事後分析により、溶媒群と比較して５および１０ｍｇ／ｋｇで有意な抗うつ薬様効力が明らかとなった。溶媒群と比較した場合、＊ｐ＜０．０５。
【図１６】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＧＬ−ＩＩ−７５の効果を示す。腹腔内投与した０、１、５または１０ｍｇ／ｋｇでのＧＬ−ＩＩ−７５の用量応答（試験の２４、２０、１時間前）。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、８および１６／群。ＡＮＯＶＡおよび事後分析により、溶媒群と比較して５および１０ｍｇ／ｋｇで有意な抗うつ薬様効力が明らかとなった。溶媒群と比較した場合、＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１７】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＭＰ−ＩＩＩ−０２２の効果を示す。腹腔内投与したＭＰ−ＩＩＩ−０２２  １０ｍｇ／ｋｇ（試験の２４、２０、１時間前）は、溶媒群と比較して有意な抗うつ薬様作用を誘発した。溶媒群と比較した場合、＊ｐ＜０．０５。試験動物数（ｎ）、ｎ＝８／群。
【図１８】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＧＬ−Ｉ−５４の効果を示す。腹腔内投与した５ｍｇ／ｋｇのＧＬ−Ｉ−５４（試験の２４、２０、１時間前）は、溶媒群と比較して有意な抗うつ薬様作用を誘発した。溶媒群と比較した場合、＊＊＊ｐ＜０．００１。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１０および９／群。
【図１９】ＦＳＴにおいて不動での消費時間に対するＧＬ−ＩＩ−５４の効果を示す。腹腔内投与した１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−５４（試験の２４、２０、１時間前）は、溶媒群と比較して有意な抗うつ薬様作用を誘発した。溶媒群と比較した場合、＊ｐ＜０．０５。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１０および９／群。
【図２０】自発運動に対するＧＬ−ＩＩ−７３の効果を示す。データは移動距離のメートル（３０分セッション）で表される。試験の６０分前に、動物に腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、８、６／群。ＡＮＯＶＡは、処置の全体的効果に対する統計的有意性を明らかにした。事後分析では、ＧＬ−ＩＩ−７３は１ｍｇ／ｋｇで自発運動に影響を与えなかったが、５および１０ｍｇ／ｋｇで移動距離の有意な増加を誘発した。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「溶媒」群と比較して＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図２１】自発運動に対するＧＬ−ＩＩ−７４の効果を示す。データは移動距離のメートル（３０分セッション）で表される。試験の６０分前に、動物に腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、８、６／群。ＡＮＯＶＡは、処置の全体的効果に対する統計的有意性を明らかにした。事後分析では、ＧＬ−ＩＩ−７４は１または５ｍｇ／ｋｇで自発運動に影響を与えなかったが、１０ｍｇ／ｋｇで移動距離の有意な増加を誘発した。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「溶媒」群と比較して＊＊ｐ＜０．０１）。
【図２２】自発運動に対するＧＬ−ＩＩ−７５の効果を示す。データは移動距離のメートル（３０分セッション）で表される。試験の６０分前に、動物に腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６、８、８、８／群。ＡＮＯＶＡは、処置の全体的効果に対する統計的有意性を明らかにした。事後分析では、ＧＬ−ＩＩ−７５は５ｍｇ／ｋｇで自発運動に影響を与えなかったが、１および１０ｍｇ／ｋｇで移動距離の有意な増加を誘発した。群間の差異は、ＰＬＳＤ事後検定を用いて試験された（「溶媒」群と比較して＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図２３】自発運動に対するＭＰ−ＩＩＩ−０２２の効果を示す。データは移動距離のメートル（３０分セッション）で表される。試験の６０分前に、動物に腹腔内注射した。試験動物数（ｎ）、それぞれｎ＝１６および８／群。統計学的分析により、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２が自発運動に対して影響を及ぼさないことが明らかとなった。
【図２４Ａ】ラットにおける６０分間の記録中の自発運動に対するＧＬ−Ｉ−５４、ＧＬ−Ｉ−６５、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４、ＧＬ−ＩＩＩ−２３、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、およびＲＶ−ＩＩ−０４（全て１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与）の効果を示す図である（ａ）。全てのデータは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される。ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４、ＧＬ−ＩＩＩ−２３およびＳＯＬ（ｎ＝６）を除き、処置群当たりの動物数は５であった。＊＊Ｐ＜０．０１および＊＊＊Ｐ＜０．００１対ＳＯＬ群。他の差異は示されず、一般に、ＲＶ−ＩＩ−０４で処置した動物は、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３を除き、他の全ての群と比較して鎮静された。
【図２４Ｂ】（ｂ）グラフは、５分間隔で分割されたデータを表す。
【図２５】感覚運動協調に対する化合物の効果を示す。雌スイスウェブスターマウスを、化合物暴露後、１０、３０、および６０分で、３分間、１５ｒｐｍのロータロッドで試験した。マウス（Ｎ＝１０）は、試験化合物（４０ｍｇ／ｋｇ）、ジアゼパム（５ｍｇ／ｋｇ）または溶媒の経口経管栄養による単回経口注射を受けた。落下が３分より前に発生した場合、その時刻を記録した。データは、平均±ＳＥＭ（Ｎ  ＝  １０）として表す。溶媒処置マウスと比較して、＊＊ｐ＜．０１または＊＊＊ｐ＜０．００１の有意性。本明細書に提示される全ての化合物は、経口溶媒に溶解することができた。
【図２６】α１、２、３、４または５ＧＡＢＡ受容体サブタイプを発現するプラスミドでトランスフェクトしたヒト胚性腎細胞株ＨＥＫ−２９３Ｔ中の、ＧＬ−ＩＩ−７３、７４、７５、７６存在下でのＧＡＢＡに対する応答％を示す。
【図２７−１】異なる投与量および投与経路を有する１２の新規αＰＡＭ化合物の、マウスおよびラットにおける薬物動態パラメータを示す。
【図２７−２】図２７続き。
【図２７−３】図２７続き。
【図２７−４】図２７続き。
【図２７−５】図２７続き。
【図２７−６】図２７続き。
【図２７−７】図２７続き。
【図２７−８】図２７続き。
【図２７−９】図２７続き。
【図２７−１０】図２７続き。
【図２７−１１】図２７続き。
【図２７−１２】図２７続き。
【図２７−１３】図２７続き。
【図２８Ａ】マウス血漿および脳における１０ｍｇ／ｋｇ用量の腹腔内（ＩＰ）投与後（ａ）およびラット血漿および脳における３ｍｇ／ｋｇ用量の静脈内（ＩＶ）および経口（ＰＯ）投与後（ｂ）の、ＧＬ−ＩＩ−７３の濃度−時間プロファイルを示す。１時点あたりｎ＝３。
【図２８Ｂ】同上。
【図２９Ａ】マウス血漿および脳における１０ｍｇ／ｋｇ用量の腹腔内（ＩＰ）投与後（ａ）およびラット血漿および脳における３ｍｇ／ｋｇ用量の静脈内（ＩＶ）投与後（ｂ）の、ＧＬ−ＩＩ−７４の濃度−時間プロファイルを示す。１時点あたりｎ＝３。
【図２９Ｂ】同上。
【図３０】マウス血漿および脳における１０ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−ＩＩ−７５の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３１Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＲＶ−ＩＩ−０４の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３１Ｂ】同上。
【図３１Ｃ】同上。
【図３１Ｄ】同上。
【図３２Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−ＩＩ−３１の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３２Ｂ】同上。
【図３２Ｃ】同上。
【図３２Ｄ】同上。
【図３３Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３３Ｂ】同上。
【図３３Ｃ】同上。
【図３３Ｄ】同上。
【図３４Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−Ｉ−５４の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３４Ｂ】同上。
【図３４Ｃ】同上。
【図３４Ｄ】同上。
【図３５Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−ＩＩＩ−２３の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３５Ｂ】同上。
【図３５Ｃ】同上。
【図３５Ｄ】同上。
【図３６Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−ＩＩ−３３の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３６Ｂ】同上。
【図３６Ｃ】同上。
【図３６Ｄ】同上。
【図３７Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−ＩＩ−５４の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３７Ｂ】同上。
【図３７Ｃ】同上。
【図３７Ｄ】同上。
【図３８Ａ】マウス血漿（ａ）および脳（ｂ）、ならびにラット血漿（ｃ）および脳（ｄ）における３ｍｇ／ｋｇ用量（１時点あたりｎ＝３）の静脈内（ＩＶ）、経口（ＰＯ）または腹腔内（ＩＰ）投与後の、ＧＬ−Ｉ−６５の濃度−時間プロファイルを示す。
【図３８Ｂ】同上。
【図３８Ｃ】同上。
【図３８Ｄ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
[００４８]  本開示の任意の実施形態が詳細に説明される前に、本開示は、その適用において、以下の説明に記載され、または以下の図面に示される構成の詳細および構成要素の配置に限定されないことを理解されたい。本開示は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実施し、または実行することが可能である。
【００１４】
[００４９]  医学的介入および生活条件の改善により、平均的な人間の寿命は劇的に増加した。結果として、認知症を含む神経変性疾患に罹患している人の数が増えている。２０１５年には全世界で４６８０万人が認知症を有しており、この数字は２０年ごとに２倍になることが予測され、２０３０年には７４７０万人、２０５０年には１億１３５０万人に達する。認知症を有する人の大部分はアルツハイマー病（ＡＤ）に罹患している。ＡＤは、人生の認知的、感情的および行動的側面に影響を及ぼす致命的な疾患である。認知症状には、人の意思決定能力、単純なタスクを行う能力、または会話を理解する能力に及ぼす負の影響が含まれる。抗コリン薬はＡＤの認知欠陥に使用されるが、成功は非常に限定的である。ＡＤにおける気分症状には、無感情、興味喪失、低感情、不安および離脱が含まれる。ＡＤは、ＡＤの個人的、社会的および経済的負担を増大させており、すなわち、２０１３年には６０４０億ドルであり、２０５０年には２兆ドルを超えると予測されており、これは前駆（軽度の認知障害）および高リスク因子（老化およびうつ病）状態の負担を考慮していない。この負担は、ＡＤの古典的な神経病理（すなわち、アミロイド斑および濃縮体）を標的とした最近の臨床試験の失敗によって悪化している。
【００１５】
[００５０]  脳障害の生物学的基礎を解明する最近の進歩により、疾患の古典的な分類的診断をまたいだ細胞および分子病態の重要な共有および連続が示されている。したがって、本明細書に記載され、α５含有ＧＡＢＡ−Ａ受容体でアゴニスト活性またはポジティブアロステリック活性を有する化合物が標的とする、ＧＡＢＡ関連病理は、神経精神障害（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性障害（例えば、ＡＤ）に至る脳障害にわたって報告されてきた。したがって、新規治療戦略は、神経精神障害（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性障害（例えば、ＡＤ）に至る障害にわたる、特定の障害および症状の側面（例えば、認知、気分）に指向され得る。
【００１６】
[００５１]  脳障害の分子および細胞病理は、ヒト死後脳における不偏ゲノムアプローチを用いて調査されてきた。遺伝的および環境的マウスモデルは、ヒト脳で同定された病理とげっ歯類の気分および認知調節機構との間の因果関係を調査するために使用されてきた。これらの原因病理学的モジュール内で標的が同定され、これらの標的の価値を新規治療戦略として支持するための予備的前臨床試験が行われてきた。これにより、認知改善抗うつ／抗不安処置の新規標的として、ＧＡＢＡ系およびＧＡＢＡＡ受容体含有α５サブユニットが導かれた。
【００１７】
[００５２]  より具体的には、収束した証拠から、うつ病における阻害性ＧＡＢＡ系の役割が長い間示唆されてきた。最近の証拠から、これらの変化に対する特定の細胞起源が示唆されている（Ｇｕｉｌｌｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１２，１７，１１３０−１１４２；Ｔｒｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１２，１６９，１１９４−１２０２）。これらの知見は、ＧＡＢＡ関連の生化学、細胞および脳領域の知見をうつ病の心理学的概念および症状の側面と関連づけるモデルに統合されてきた（Ｎｏｒｔｈｏｆｆ＆Ｓｉｂｉｌｌｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１４，１９，９６６−９７７）。このモデルでは、錐体細胞の樹状突起への興奮性入力を調節するソマトスタチン陽性（ＳＳＴ＋）ＧＡＢＡニューロンの欠陥は、局所細胞回路による変化した情報処理に変換され、主要な脳領域（前頭葉および帯状皮質）および神経回路網（標準モードおよび実行回路網）の変化した活性を生じる。次に、これらの統合された生物学的欠陥は、うつ病の２つの中心的特徴である、無快感（喜びを経験することの欠如）および増大した負の自己焦点化（反芻、自殺傾向）として表面化する。
【００１８】
[００５３]  ＳＳＴ＋ＧＡＢＡと錐体ニューロンとの間の細胞特異的結合の分子成分の検査に基づき、ＧＡＢＡＡ受容体のα５サブユニットは、うつ病の分子病理を改善し、認知向上および抗うつ薬様活性を発揮する論理的標的であることが提唱される。ＧＡＢＡＡ受容体の異なるαサブユニットは、細胞区画にわたるこれらの受容体の局在化を決定する。α５含有ＧＡＢＡＡ受容体は、ＳＳＴ＋ＧＡＢＡニューロン末端とは反対側の錐体細胞の樹状突起上に位置する。したがって、これはＳＳＴ＋ＧＡＢＡニューロンの機能を媒介する。ＧＡＢＡＡ受容体αサブユニットは、ベンゾジアゼピン様化合物の主な標的である。これらの化合物は、鎮静、抗不安および抗けいれん効果を有する。この広範な活性は、いくつかのαサブユニットの非特異的標的化に起因する。この全αサブユニット活性は、鎮静、耐性および認知の副作用により、治療可能性を相当制限している。様々なＧＡＢＡＡＲαサブユニットの最近の解剖学的、遺伝的および機能的性質決定により、特定のサブユニットの選択的標的化が神経精神障害の新規治療機会を明らかにするという期待が高まっている。
【００１９】
[００５４]  ここに、うつ病の主要な分子病理から得られる新規な認知向上および抗うつのモダリティが提案される。主要な標的は阻害性ＧＡＢＡＡ受容体α５サブユニットであり、薬理学的効果はポジティブアロステリックモジュレーション（α５−ＰＡＭ）であり、治療適応は、潜在的に認知および反芻の中核症状に焦点を合わせた、気分および認知欠陥を共有するうつ病および他の障害である。この標的を選択する理論的根拠は、（１）うつ病におけるＧＡＢＡＡ−α５含有シナプスにおける機能低下を示唆するヒト死後脳試料を用いた知見、（２）うつ病におけるＧＡＢＡ機能の変化を示唆する多くの研究、および（３）α５−ＰＡＭ（Ｐｉａｎｔｏｄｏｓｉｅｔ  ａｌ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１６，７，４４６；含まれる図および結果も参照）および認知向上効果（含まれる図および結果を参照）の抗うつ効果を示す前臨床げっ歯類研究に基づく。最近の知見では、α５含有ＧＡＢＡ−Ａ受容体の機能を低下させることが抗うつ活性を発揮し得ることも示唆されることに留意されたい（Ｆｉｓｃｈｅｌｌｅｔ  ａｌ，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１５，４０，２４９９−２５０９）。これは、α５−ＧＡＢＡ−Ａ受容体機能のための推定逆Ｕ字形効果を示唆しており、高機能および低機能の両方が治療可能性を有し得る。しかしながら、α５含有ＧＡＢＡ−Ａ受容体の機能を低下させることは、脳障害において観察される主要病理（すなわち、ＳＳＴ細胞機能の低下）を悪化させることが特に予測され、したがって、長期的有害作用の高いリスクと関係がある可能性がある。
【００２０】
[００５５]  ＡＤ、統合失調症、双極性うつ病、および大うつ病を含む神経障害におけるソマトスタチン（ＳＳＴ）陽性阻害性ＧＡＢＡニューロンの発現および機能の低下につき、強い根拠が存在する（ＬｉｎおよびＳｉｂｉｌｌｅ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１３，４，１１０）。ＳＳＴ陽性ＧＡＢＡニューロンは、脳の主要な興奮性細胞であるグルタミン酸作動性錐体ニューロンの樹状区画を阻害することを特徴とする阻害性ニューロンのサブタイプである。ＳＳＴニューロンを介したシグナル伝達は、情報および神経処理を調節し、認知および気分の調節に特異的に関与している。ＳＳＴ陽性ニューロンの主な機能は、神経伝達物質ＧＡＢＡおよびα５サブユニットを含有するＧＡＢＡＡ受容体の特異的サブタイプによって媒介される。α５含有ＧＡＢＡＡ受容体は、錐体細胞の樹状突起上に局在し、ＳＳＴ陽性ニューロンによって標的化される細胞区画である。したがって、神経障害にわたって観察されるＳＳＴ陽性細胞の欠陥は、α５含有ＧＡＢＡＡ受容体を介したシグナル伝達の減少を生じると考えられる。したがって、α５含有ＧＡＢＡＡ受容体シグナル伝達の増加は、脳障害にわたって、特にＡＤおよびＭＤＤにおいて、認知および気分症状の治療上の価値を有し得る。
【００２１】
定義
[００５６]  特定の官能基および化学用語の定義については、以下でより詳細に説明する。本開示の目的のために、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ版，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，第７５版，内部カバーに従って化学元素を同定し、特定の官能基はそこに記載されるように一般的に定義される。さらに、有機化学の一般的原理、ならびに特定の官能部分および反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載され、これらの全内容は、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【００２２】
[００５７]  「アシル」という用語は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル、アリールカルボニルまたはヘテロアリールカルボニル置換基を指し、そのいずれもさらに（例えば、１個以上の置換基で）置換されていてもよい。
【００２３】
[００５８]  「アルキル」という用語は、示された数の炭素原子を含有する直鎖または分枝炭化水素鎖を指す。例えば、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルは、アルキル基が１〜１２個（１個および１２個を含む）の炭素原子を有することができ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは、アルキル基が１〜４個（１個および４個を含む）の炭素原子を有することができることを示す。アルキル基は任意選択により置換されていてもよい。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００２４】
[００５９]  「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する直鎖または分枝炭化水素鎖を指す。アルケニル基の例には、アリル、プロペニル、２−ブテニル、３−ヘキセニルおよび３−オクテニル基が含まれるが、これらに限定されない。二重結合炭素の１つは、任意選択によりアルケニル置換基の結合点であってもよい。アルケニル基は、任意選択により置換されていてもよい。
【００２５】
[００６０]  「アルキニル」という用語は、１つ以上の三重結合を有する直鎖または分枝炭化水素鎖を指す。アルキニル基の例には、エチニル、プロパルギルおよび３−ヘキシニルが含まれるが、これらに限定されない。三重結合炭素の１つは、任意選択によりアルキニル置換基の結合点であってもよい。アルキニル基は、任意選択により置換されていてもよい。
【００２６】
[００６１]  「アリール」という用語は、置換可能な任意の環原子が（例えば、１個以上の置換基で）置換されていてもよい芳香族単環式、二環式または三環式炭化水素環系を指す。アリール部分の例には、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが含まれるが、これらに限定されない。
【００２７】
[００６２]  「アリールアルキル」という用語は、アルキル水素原子がアリール基で置き換えられたアルキル部分を指す。アリールアルキルは、１を超える水素原子がアリール基で置き換えられた基を含む。アリールアルキル基の例には、ベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、９−フルオレニル、ベンズヒドリルおよびトリチル基が含まれる。
【００２８】
[００６３]  本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、３〜１２個の炭素（例えば、３、４、５、６または７個の炭素原子）を有する非芳香族、飽和または部分不飽和の環状、二環式、三環式または多環式炭化水素基を指す。任意の環原子は（例えば、１個以上の置換基で）置換されていてもよい。シクロアルキル基は縮合環を含有し得る。縮合環は、１つ以上の共通の炭素原子を共有する環である。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、メチルシクロヘキシル、アダマンチル、ノルボルニルおよびノルボルネニルが含まれるが、これらに限定されない。
【００２９】
[００６４]  本明細書で使用される「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素のいずれかのラジカルを指す。
[００６５]  本明細書で使用される「ハロアルキル」という用語は、１つ以上の水素原子がハロゲンで置き換えられたアルキルを指し、全ての水素がハロゲンで置換されたアルキル部分（例えば、ＣＦ３などのペルフルオロアルキル）を含む。
【００３０】
[００６６]  本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、単環式の場合は１〜３個のヘテロ原子を有し、二環式の場合は１〜６個のヘテロ原子を有し、三環式の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員単環式、８〜１２員二環式、または１１〜１４員三環式の環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＰおよびＳｉから独立して選択される（例えば、単環式、二環式、または三環式の場合、炭素原子、およびＯ、Ｎ、Ｓ、ＰおよびＳｉから独立して選択される、それぞれ１〜３、１〜６または１〜９個のヘテロ原子）。任意の環原子は（例えば、１個以上の置換基で）置換されていてもよい。ヘテロアリール基は、１つ以上の共通原子を共有する環である縮合環を含み得る。ヘテロアリール基の例には、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、フラン、チアゾール、イソチアゾール、チオフェン、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インドリジン、インダゾール、ベンズイミダゾール、フタラジン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、フェナジン、ナフチリジンおよびプリンのラジカルが含まれるが、これらに限定されない。
【００３１】
[００６７]  本明細書で使用される「ヘテロシクリル」という用語は、単環式の場合は１〜３個のヘテロ原子を有し、二環式の場合は１〜６個のヘテロ原子を有し、三環式の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、非芳香族の飽和または部分的不飽和３〜１０員単環式、８〜１２員二環式、または１１〜１４員三環式の環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＳｉおよびＰから選択される（例えば、単環式、二環式、または三環式の場合、炭素原子、ならびにそれぞれ１〜３、１〜６または１〜９個のＯ、Ｎ、Ｓ、ＳｉおよびＰであるヘテロ原子）。任意の環原子は（例えば、１個以上の置換基で）置換されていてもよい。ヘテロシクリル基は、１つ以上の共通原子を共有する環である縮合環を含み得る。ヘテロシクリル基の例には、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ピロリン、ピリミジン、ピロリジン、インドリン、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピラン、チアントレン、ピラン、ベンゾピラン、キサンテン、フェノキサチイン、フェノチアジン、フラザン、ラクトン、アゼチジノンおよびピロリジノンなどのラクタム、スルタム、スルトンなどのラジカルが含まれるが、これらに限定されない。
【００３２】
[００６８]  「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨラジカルを指す。「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキルラジカルを指す。「アリールオキシ」という用語は、−Ｏ−アリールラジカルを指す。「ハロアルコキシ」という用語は、−Ｏ−ハロアルキルラジカルを指す。
【００３３】
[００６９]  「置換基」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アリールアルキルまたはヘテロアリール基上で、その基の任意の原子において「置換された」基を指す。適切な置換基には、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、カルボキシ、シアノ、エステル、ハロ、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、オキソ（例えばＣ＝Ｏ）、ホスホネート、スルフィニル、スルホニル、スルホネート、スルホンアミノ、スルホンアミド、チオアミド、チオール、チオキソ（例えばＣ＝Ｓ）、およびウレイドが含まれるが、限定されない。実施形態において、基上の置換基は、独立して、前述の置換基のいずれか１つ、または任意の組み合わせである。実施形態において、置換基はそれ自体、上記の置換基のいずれか１つで置換されていてもよい。
【００３４】
[００７０]  上記の置換基は、本明細書では省略してもよく、例えば、略語Ｍｅ、ＥｔおよびＰｈはそれぞれメチル、エチルおよびフェニルを示す。有機化学者によって使用される略語のより包括的なリストはＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの各号の第１刷に現れており、このリストは、典型的には、「Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｌｉｓｔ  ｏｆ  Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓ」と題した表に示されている。前記リストに含有される略語、および当業者である有機化学者によって使用される全ての略語は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００３５】
[００７１]  化合物について、基および置換基は、選択および置換により安定な化合物（例えば転位、環化、脱離などによる変換を自発的に起こさない）が得られるよう、原子および置換基の許容される原子価に従って選択することができる。
【００３６】
[００７２]  置換基は、左から右に書かれたそれらの従来の化学式によって特定される場合、構造を右から左へ書くことで生じる置換基を任意選択により包含し、例えば、−ＣＨ２Ｏ−は任意選択により−ＯＣＨ２−も表す。
【００３７】
[００７３]  当技術分野で使用される慣習に従って、群（group）：
【００３８】
【化３】
2019509340.tif 000005
【００３９】
は、部分または置換基の、コアまたは骨格構造への付着点である結合を表すために、本明細書の構造式で使用される。
[００７４]  障害を処置する状況において、本明細書で使用される「有効量」という用語は、細胞の処置、または対象における障害の症状の治癒、軽減、緩和または改善において、対象への単回または複数回投与につき有効な化合物または化合物を含む組成物の量を指す。化合物または組成物の有効量は、用途に応じて変化し得る。障害を処置する状況において、有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する化合物の能力などの因子に依存し得る。一例において、化合物の有効量は、細胞（例えば、細胞の培養物）または化合物で処置されていない対象などの対照と比較して、所定のパラメータにおいて統計的に有意な変化を生じる量である。
【００４０】
[００７５]  本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ウシなどの哺乳動物を指す。
[００７６]  本明細書に列挙された任意の数値（例えば、範囲）は、下限値から上限値までの全ての値を含むこと、すなわち列挙された最低値と最高値との間の全ての可能な数値の組み合わせは、本出願に明示的に記載されているものと考えられるべきことを、特に理解されたい。例えば、濃度範囲が１％〜５０％と記載されている場合、２％〜４０％、１０％〜３０％、または１％〜３％などの値が本明細書中に明示的に列挙されることが意図される。これらは、具体的に意図されているものの例にすぎない。
【００４１】
化合物
[００７７]  新規化合物が本明細書に提供される。化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体α５サブユニットのモジュレーターを含み得る。化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体α５サブユニットのポジティブアロステリックモジュレーターを含み得る。
【００４２】
[００７８]  化合物は、以下の式（Ｉ）のものであってもよい：
【００４３】
【化４】
2019509340.tif 000006
【００４４】
またはその塩であって、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル（ｂｉｃｙｃｌｅ）［１．１．１］ペンタン
【００４５】
【化５】
2019509340.tif 000007
【００４６】
からなる群から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、シクロアルキルから独立して選択されるか、または一緒にシクロアルキル環を形成してもよい。
【００４７】
[００７９]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。
【００４８】
[００８０]  化合物は、以下の式（ＩＩ）のものであってもよい：
【００４９】
【化６】
2019509340.tif 000008
【００５０】
またはその塩であって、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【００５１】
【化７】
2019509340.tif 000009
【００５２】
からなる群から選択され；
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、シクロアルキルから独立して選択されるか、または一緒にシクロアルキル環を形成してもよい。
【００５３】
[００８１]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＦである。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＦ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＣｌ３である。
【００５４】
[００８２]  化合物は、以下の式（ＩＩＩ）のものであってもよい：
【００５５】
【化８】
2019509340.tif 000010
【００５６】
またはその塩であって、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【００５７】
【化９】
2019509340.tif 000011
【００５８】
からなる群から選択され；
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、シクロアルキルから独立して選択されるか、または一緒にシクロアルキル環を形成してもよい。
【００５９】
[００８３]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＦである。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＦ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＣｌ３である。
【００６０】
[００８４]  化合物は、以下の式（ＩＶ）：
【００６１】
【化１０】
2019509340.tif 000012
【００６２】
（式中、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【００６３】
【化１１】
2019509340.tif 000013
【００６４】
からなる群から選択され；
Ｒ１３は、−Ｈ、−ＣＤ３、Ｃ１〜６アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択される）
のものであっても、その薬学的に許容される塩であってもよい。
【００６５】
[００８５]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。いくつかの実施形態において、Ｒ１３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００６６】
[００８６]  いくつかの実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は、
【００６７】
【化１２】
2019509340.tif 000014
【００６８】
でない。
[００８８]  化合物は、以下の式（Ｖ）のものであってもよい：
【００６９】
【化１３】
2019509340.tif 000015
【００７０】
またはその塩であって、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【００７１】
【化１４】
2019509340.tif 000016
【００７２】
からなる群から選択され、
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１３は、−Ｈ、−ＣＤ３、Ｃ１〜６アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択される。
【００７３】
[００８９]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＦである。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＦ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＣｌ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００７４】
[００９０]  化合物は、以下の式（ＶＩ）のものであってもよい：
【００７５】
【化１５】
2019509340.tif 000017
【００７６】
またはその塩であって、
Ｘは、Ｎ、Ｃ−Ｈ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−Ｂｒ、Ｃ−ＩおよびＣ−ＮＯ２からなる群から選択され；
Ｒ１は、−Ｂｒ、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−シクロプロピルおよびビシクル［１．１．１］ペンタン
【００７７】
【化１６】
2019509340.tif 000018
【００７８】
からなる群から選択され；
Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＤ３、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＣｌ３からなる群から選択され；
Ｒ１３は、−Ｈ、−ＣＤ３、Ｃ１〜６アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択される。
【００７９】
[００９１]  いくつかの実施形態において、ＸはＮである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＨである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＦである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＣｌである。いくつかの実施形態において、ＸはＣＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡Ｃ−Ｓｉ（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−シクロプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ビシクル［１．１．１］ペンタンである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＦである。いくつかの実施形態において、Ｒ３はＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＦ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−ＣＣｌ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１３は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００８０】
[００９２]  いくつかの実施形態において、式（ＩＶ）〜（ＶＩ）について、Ｒ１３はＣ１〜６アルキルでなく、特にエチルでない。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）〜（ＩＩＩＩ）について、化合物は、
【００８１】
【化１７】
2019509340.tif 000019
【００８２】
の１つ以上でない。
[００９３]  いくつかの実施形態において、化合物は、以下から選択されてもよい：
【００８３】
【化１８】
2019509340.tif 000020
【００８４】
【化１９】
2019509340.tif 000021
【００８５】
【化２０】
2019509340.tif 000022
【００８６】
【化２１】
2019509340.tif 000023
【００８７】
【化２２】
2019509340.tif 000024
【００８８】
【化２３】
2019509340.tif 000025
【００８９】
【化２４】
2019509340.tif 000026
【００９０】
【化２５】
2019509340.tif 000027
【００９１】
[００９４]  化合物は以下をさらに含んでもよく、
ＸはＣＨ、ＣＦ、ＣＣｌまたはＮであり；
Ｒ４はＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ５はＨまたはＣＨ３である：
【００９２】
【化２６】
2019509340.tif 000028
【００９３】
[００９５]  化合物は以下をさらに含んでもよい：
【００９４】
【化２７】
2019509340.tif 000029
【００９５】
[００９６]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物について、基および置換基は、選択および置換により安定な化合物（例えば転位、環化、脱離などによる変換を自発的に起こさない）が得られるよう、原子および置換基の許容される原子価に従って選択することができる。
【００９６】
[００９７]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下でのみ異なる化合物を含む。例えば、化合物は、重水素またはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ−または１４Ｃ−富化炭素による炭素の置換を除いて、本発明の構造を有し得る。
【００９７】
[００９８]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物は、塩の形態、例えば薬学的に許容される塩であり得る。「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物に見られる特定の置換基に応じて、比較的非毒性の酸または塩基で調製される活性化合物の塩を含む。本開示の化合物の適切な薬学的に許容される塩には、例えば、本開示による化合物の溶液を、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することによって形成され得る酸付加塩が含まれる。さらに、本開示の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な薬学的に許容される塩には、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムまたはマグネシウム塩；および適切な有機リガンドと形成される塩、例えば、第四アンモニウム塩が含まれ得る。
【００９８】
[００９９]  化合物の中性形態は、塩を塩基または酸と接触させ、親化合物を従来の方法で単離することによって再生してもよい。化合物の親形態は、極性溶媒への溶解性などの特定の物理的性質において種々の塩形態とは異なるが、その他の点では、塩は本開示の目的について化合物の親形態と同等である。
【００９９】
[００１００]  塩形態に加えて、本開示はまた、プロドラッグ形態である式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）の化合物を提供し得る。化合物のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を起こして化合物を提供する化合物である。プロドラッグは、エクスビボ環境において化学的または生化学的方法によって本開示の化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬と共に経皮吸収パッチリザーバー内に留置した場合、本開示の化合物にゆっくりと変換することができる。
【０１００】
[００１０１]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物は、例えば、本明細書に記載の立体異性体の鏡像異性的に富化された異性体であり得る。本明細書で使用されるエナンチオマーは、分子構造が互いに鏡像関係を有する一対の化合物のいずれかを指す。例えば、化合物は、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の鏡像体過剰率を有していてもよい。
【０１０１】
[００１０２]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の調製物は、選択された立体中心に対応する選択された立体化学（例えば、ＲまたはＳ）を有する化合物の異性体につき富化されていてもよい。例えば、化合物は、選択された立体中心の選択された立体化学を有する化合物に対応する、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の純度を有していてもよい。化合物は、例えば、選択された立体中心において選択された立体化学（例えば、ＲまたはＳ）を有する構造または複数の構造が富化された、本明細書に開示された化合物の調製物を含み得る。
【０１０２】
[００１０３]  いくつかの実施形態において、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の調製物は、化合物のジアステレオマーである異性体（対象異性体）につき富化されていてもよい。本明細書で使用するジアステレオマーは、同じ化合物の別の立体異性体の鏡像ではない、２つ以上のキラル中心を有する化合物の立体異性体を指す。例えば、化合物は、選択されたジアステレオマーを有する化合物に対応する、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の純度を有していてもよい。
【０１０３】
[００１０４]  化合物中の所定の立体中心における立体配置につき特別の指示がなされていない場合、立体配置のいずれか１つまたは立体配置の混合物が意図される。
[００１０５]  化合物は、立体特異的合成または分割により、ラセミ形態で、または個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして調製することができる。化合物は、例えば、光学活性塩基との塩形成による立体異性体対の形成、次いで分別結晶化および遊離酸の再生、などの標準的な技術によって、それらの成分エナンチオマーまたはジアステレオマーに分割することができる。化合物は、立体異性体エステルまたはアミドの形成、次いでクロマトグラフィー分離およびキラル補助剤の除去によっても分割することができる。あるいは、キラルＨＰＬＣカラムを用いて化合物を分割することができる。エナンチオマーはまた、リパーゼ酵素を用いた対応するエステルのラセミ体の速度論的分割から得ることができる。
【０１０４】
[００１０６]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物は、選択的生物学的特性を高めるために適切な官能基を付加することによって修飾することもできる。そのような修飾は、当技術分野において公知であり、所定の生物学的系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増加させ、経口利用可能性を高め、注射による投与を可能にする溶解性を高め、代謝を変化させ、および／または排泄率を変化させるものを含む。これらの修飾の例には、ポリエチレングリコールによるエステル化、ピボラートまたは脂肪酸置換基を用いた誘導体化、カルバメートへの変換、芳香環のヒドロキシル化、および芳香環におけるヘテロ原子置換が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０５】
化合物の合成
[００１０７]  式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物は、市販の出発物質から合成することができる。例示的な合成を以下の実施例に示す。
【０１０６】
[００１０８]  本明細書における式の化合物を合成する他の方法は、当業者にとって明らかであろう。化合物の合成に有用な合成化学変換および保護基法（保護および脱保護）は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ  （１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ（１９９５）およびそれ以降の刊行物に記載されているものなどを含む。
【０１０７】
化合物の評価
[００１０９]  化合物は、エクスビボおよびインビボの方法を含む多くの方法を用いて分析することができる。
【０１０８】
[００１１０]  例えば、化合物のＧＡＢＡＡサブユニット選択性は、競合的結合アッセイを用いて評価することができる。このようなアッセイは以前に記載されている（Ｃｈｏｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９２，４２，６２７−３３；Ｓａｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１０，３４，３７６−３８６）。このアッセイは、［３Ｈ］フルニトラゼパムなどのＧＡＢＡＡ受容体に結合することが知られている放射性標識化合物の使用を含む。膜タンパク質は、回収して放射性標識化合物とインキュベートすることができ、非特異的結合は、放射性標識化合物の別の非標識化合物（例えば、ジアゼパム）への結合を比較することによって評価することができる。結合した放射能は、液体シンチレーション計数によって定量することができる。膜タンパク質濃度は、市販のアッセイキット（例えば、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を用いて決定することができる。
【０１０９】
[００１１１]  化合物はまた、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ）卵母細胞またはトランスフェクトされた細胞株における電気生理学的アッセイにおいて評価され得る。化合物は、ＧＡＢＡの添加前に予め適用することができ、その後ＧＡＢＡをピーク応答が観察されるまで化合物と同時適用することができる。適用の間に、脱感作からの完全な回復を確実にするために、卵母細胞またはトランスフェクト細胞株を洗浄してもよい。ＧＡＢＡ応答規模の電流測定（Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９７，５２，７１４−７２４）のため、卵母細胞またはトランスフェクト細胞に微小電極を刺入し、電圧クランプを用いて記録を行うことができる。
【０１１０】
[００１１２]  本明細書に記載の化合物は、ＧＡＢＡＡ／α５および／またはＧＡＢＡＡ／α２、ＧＡＢＡＡ／α３またはＧＡＢＡＡ／α２／３受容体でアゴニスト効力の増加による抗うつ、抗不安または認知向上活性を示すＧＡＢＡ受容体リガンドであってもよい。化合物は、ＧＡＢＡＡ／α１受容体に対して、ＧＡＢＡＡ／α５受容体につき少なくとも２倍、好適には少なくとも５倍、有利には少なくとも１０倍の選択的効力を有し得る。しかしながら、ＧＡＢＡＡ／α５受容体に対するそのアゴニスト効力に関して選択的でない化合物も、本開示の範囲内に包含される。このような化合物は、望ましくは、ＧＡＢＡＡ／α１受容体での効力の低下による鎮静−催眠／筋弛緩／失調活性の低下を伴う、認知向上および／または抗うつ活性を実証することによって機能的選択性を示すであろう。
【０１１１】
[００１１３]  アゴニストまたは部分アゴニストまたはポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）として作用するＧＡＢＡＡ受容体のリガンドであるＧＡＢＡ作動性受容体サブタイプ選択的化合物は、以下、「ＧＡＢＡＡ受容体アゴニスト」または「ＧＡＢＡＡ受容体部分アゴニスト」または「アゴニスト」または「部分アゴニスト」または「ＰＡＭ」と称する。特に、これらは、ＧＡＢＡＡ受容体のベンゾジアゼピン（ＢＺ）結合部位のリガンドであり、したがってＢＺ部位アゴニスト、部分アゴニストまたはＰＡＭとして作用する化合物である。このようなリガンドには、ＧＡＢＡ部位またはＧＡＢＡＡ受容体のベンゾジアゼピン部位以外の調節部位に作用する化合物も含まれる。
ＧＡＢＡ作動性受容体サブタイプ選択的化合物は、ＧＡＢＡＡ／α１受容体と比較して、ＧＡＢＡＡ／α５受容体を選択的または優先的に活性化することによって、アゴニスト、部分アゴニストまたはＰＡＭとして作用する。選択的または優先的治療剤は、ＧＡＢＡＡ／α５、ＧＡＢＡＡ／α２またはＧＡＢＡＡ／α３受容体と比較して、ＧＡＢＡＡ／α１受容体に対する結合親和性または効力がより低い。あるいは、薬剤は、ＧＡＢＡＡ／α５、ＧＡＢＡＡ／α１、ＧＡＢＡＡ／α２およびＧＡＢＡＡ／α３受容体と同等の親和性で結合するが、ＧＡＢＡＡ／α１受容体と比較してＧＡＢＡＡ／α５受容体活性化の優位な効力を発揮する。あるいは、選択的薬剤は、ＧＡＢＡＡ／α５に対して、ＧＡＢＡＡ／α２およびＧＡＢＡＡ／α３受容体へのより大きいまたはより小さい結合親和性を有していてもよい。Ｂｚ／ＧＡＢＡアゴニストは、それぞれのＧＡＢＡＡ受容体のベンゾジアゼピン部位で作用するが、その受容体相互作用におけるこの薬物結合ドメインに限定されない。
【０１１２】
[００１１４]  ＧＡＢＡ受容体サブタイプ特異的化合物の薬物動態学的特性は、腹腔内、食道および静脈内投与後の血漿および脳における化合物含量を測定（Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１６，７，４４６）して評価される。マウスおよびラットは、異なる用量で異なる化合物を投与される。連続した脳および血漿濃度が異なる時間に得られ、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて各試料中の各化合物の濃度を測定する。このアッセイを使用して、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ０−１２、ＡＵＣ０−∞、Ｔ１／２およびβを、各組織における各化合物、両方の種の各投与経路について測定する。最適な薬物動態学的特性を有する化合物は、治療的介入の可能性につき考慮される。
【０１１３】
[００１１５]  ＧＡＢＡ受容体サブタイプ特異的化合物の代謝有効性は、ヒトおよびマウス肝ミクロソームアッセイを用いて化合物の分解速度を測定することによって評価される。肝ミクロソームを各化合物とともにインキュベートし、半減期、固有クリアランスおよび代謝速度を測定する。治療介入の可能性のために最適な代謝パラメータを有する化合物が考慮される。
【０１１４】
[００１１６]  細胞毒性および生存率は、インビトロ条件で評価することができる。ヒト細胞（それぞれ肝臓および腎臓由来のＨＥＰＧ２および／またはＨＥＫ２９３細胞株）を化合物とともにインキュベートし、化合物の毒性を決定するために細胞生存性アッセイを行う。１００μＭよりも優れたＬＤ５０を有する化合物は、細胞生存性に対して毒性効果を有しないと考えられる。
【０１１５】
[００１１７]  化合物を評価するための他の方法は、当業者に知られている。認知機能を改善する可能性を評価するために、げっ歯類および他の哺乳動物において、注意、視覚および聴覚処理、運動機能、短期および作業記憶、複数の認知次元の学習および記憶処理（手続、陳述、空間／参照記憶など）についての試験を含むがこれらに限定されない、多数の行動試験が存在する。
【０１１６】
[００１１８]  陳述的および手続的認知機能は、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路、放射状迷路、バーンズホールボードなどを含む様々な迷路を用いて評価することができる（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｅｈａｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９３，１０７，６１８−６２６；ＶｏｒｈｅｅｓおよびＷｉｌｌｉａｍｓ，ＩＬＡＲ  Ｊ，２０１４，５５，３１０−３３２；Ｓｃｈｗａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ＆Ｂｉｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｒｅｖｉｅｗ，２０１０，３４，５８４−５９１）。これらのパラダイムは、学習および記憶能力を試験し、動物の学習および記憶能力を改善して課題を解決するための環境を参照することで、化合物の有効性を特定するために使用される。動物は、タスクを学び、検索／探索試験中に情報をリコールするように訓練される。化合物の潜在的な認知向上特性を試験するための分野における方法には、試験の学習および／またはリコール段階中の化合物の投与が含まれる。成功までの潜時および／または学習および／またはリコール段階中のタスクにおけるエラー数を減少させる化合物は、潜在的な認知向上作用を有すると考えられる。
【０１１７】
[００１１９]  認知機能を測定する他の試験には、熟知したおよび新規な物／対象との間の識別タスクが含まれる。これらの試験には、新規物体認識試験、場所認識試験、社会的新規性識別、３室試験などのバリエーションが含まれるが、これらに限定されない（Ｍｏｒｉｃｉｅｔ  ａｌ，Ｂｅｈａｖ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，２９２，２４１−２５１；Ｍｉｌｌａｎ  およびＢａｌｅｓ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ＆Ｂｉｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０１３，３７，２１６６−２１８０）。これらの試験の概念は、動物がその環境において熟知した要素と新規な要素とを識別する能力を評価することである。新規要素と相互作用する時間を増加させる化合物は、認知向上特性を有すると考えられる。
【０１１８】
[００１２０]  短期および作業記憶機能は、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路、Ｙ迷路またはＴ迷路装置またはバリエーションを使用した異なるタスクを用いて評価することもできる（Ｌａｌｏｎｄｅ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ＆Ｂｉｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，２６，９１−１０４）。簡潔には、これらの試験は、習得直後の情報をリコールするために、動物が情報を短時間保持する能力に基づいている。作業記憶の効率的な処理には、新しい関連情報の習得を可能にするために、無関係な情報を「消去」する必要がある。例えば、短期作業記憶は、新しい環境を探索する動物の本来の傾向を利用することによって評価することができ、装置の２つの異なるアームへ行く選択肢を繰り返し与えた場合に、自発的に交替する傾向に依存し得る。複数の試験後、干渉の負荷のためにエラー数が増加する可能性がある。干渉の負荷は、試験間の遅延の変化によって調整することができ、試験間隔が長くなると、エラー数の増加で指標付けされる干渉の負荷が増加する。ストレスパラダイム、正常老化または神経精神もしくは神経変性障害の他のモデルを用いて、これらの試験における認知能力を低下させることができる。これは、エラー数の増加（すなわち、水迷路タスクにおけるエラーの増加、または交替タスクにおけるチャンスレベル５０％前後の能力）によって特徴付けられる。これらの欠陥を逆転させる化合物は、認知向上作用を有すると考えられる。
【０１１９】
[００１２１]  化合物の潜在的抗うつ性を評価するために、げっ歯類および他の哺乳動物において、不安、行動絶望、無力感または無快感のような行動応答に対する試験を含むがこれらに限定されない、情動性を評価するための多数の試験が存在する。
【０１２０】
[００１２２]  当分野における標準的な方法では、強制泳行試験および尾懸垂試験（Ｃａｓｔａｇｎｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１１，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８）は、げっ歯類の抗うつ作用をスクリーニングするために主に使用されるが、ストレスに対する応答における絶望の行動基準としても用いられる。簡潔には、げっ歯類は潜在的な抗うつ薬化合物を試験するために急性または亜慢性的に注射される。げっ歯類は逃げられない状況に置かれ（水槽内または尾でぶら下がっている）、不動時間の計数は絶望状態への諦めの指数として計測される。これらの試験において不動を減少させた化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。
【０１２１】
[００１２３]  抗うつ作用を評価する他の方法には、学習した無力感試験または恐怖の調整などの嫌悪刺激に対する行動応答性が含まれる（ＣｒｙａｎおよびＭｏｍｂｅｒｅａｕ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２００４，９，３２６；ＰｈｉｌｌｉｐｓおよびＬｅＤｏｕｘ，Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，１０６，２７４−２８５）。両方の試験は、動物が有害条件刺激および非条件刺激に対処する能力に依存している。足のショックが動物に加えられ、生じた行動応答が化合物の潜在的な抗うつ特性の指数として使用される。学習した無力感試験における足のショックを避けるための数および／または潜時、ならびに恐怖調整パラダイムでのすくみに費やされる時間を減少させる化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。
【０１２２】
[００１２４]  化合物の潜在的な抗うつ活性はまた、変化した情動性を示す動物モデルにおいて観察される無快感のような行動を逆転させる、それらの特性について評価することができる。例えば、新規性誘発性食欲不振、ショ糖嗜好性または摂取、またはクッキー試験を、げっ歯類における無快感を評価するのに用いることができる。無快感は、好ましい味の溶液または食物を含むがこれに限定されない、快感経験の探求が減少することを特徴とする（Ｗｉｌｌｎｅｒ，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，５２，９０−１１０；Ｎｏｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５）。快感的経験の探求を増加させる化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。
【０１２３】
[００１２５]  化合物を評価するための他の方法は、当業者に知られている。不安症状は合併症であることが多く、うつ病またはＡＤにおいて観察される気分スペクトルから分離することが困難である。例えば、化合物の抗不安作用の評価は、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９（２０１０）６１２−６１８に記載されるように、オペラントベースの対立手順を用いて客観的かつ定量的に達成することができる。簡潔には、積極的に強化された行動は、軽度の電気ショックなどの有害刺激の応答付随投与によって、これらの処置において抑制され得る。化合物が抗不安効果を有する場合、それは応答付随的な衝撃の送達によって、通常抑制される応答速度を増加させる。対立手順の強みは、ヒトにおいて期待される治療効果に関する予測有効性である。
【０１２４】
[００１２６]  抗不安活性および自発運動活性の可能性は、ホームケージのような装置で評価することができる。高レベルの不安を有する動物は、探索行動を制限し、より多くの時間をシェルター内で隠れて費やす傾向がある。照明課題の適用について同じ設定を使用することができる。不安な動物は、照明課題の終了後でも、照射区域を避け続けている（Ｐｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００９，１７８，３２３−３２６）。これらのタイプの試験で探索を増加させ、この回避行動を制限する化合物は、潜在的な抗うつ／抗不安作用を有すると考えられる。
【０１２５】
[００１２７]  抗酸化活性は、Ｃｒａｗｌｅｙによって開発された方法によって明／暗箱試験において評価することもできる（Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｂｉｏｂｅｈａｖ  Ｒｅｖ  １９８５，９，３７−４４）。明／暗箱は、抗不安活性のための単純な非侵襲的試験である。暗箱に入る潜時を増加させ、および／または点灯した箱で費やす時間を増加させる化合物は、抗不安作用を有すると考えられる。
【０１２６】
[００１２８]  潜在的な抗不安作用は、高架式十字迷路およびオープンフィールド試験で測定することができる（ＢａｉｌｅｙおよびＣｒａｗｌｅｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）。どちらの試験でも、動物が自然に探索する傾向と、曝露された環境における捕食者の脅威に対する先天的な恐怖との間に対立が生じる。げっ歯類は明るい光条件下で迷路／フィールドの中心に置かれる。エントリー数および曝露された領域（オープンアーム／活動領域中心）において費やされた時間が記録される。探索行動を減少させることなくこれらのパラメータを増加させる化合物は、抗不安作用を有すると考えられる。
【０１２７】
[００１２９]  化合物の抗不安特性を評価するための他の方法は、食品または甘味溶液に対する動因と新規な環境に置かれる恐怖との間の対立に依存する試験を用いることができる。これらの試験では、新規性抑制摂食またはクッキー試験における接近および摂食までの潜時、ならびに新規性誘発性食欲不振におけるコンデンスミルクを飲むまでの潜時が評価基準である（Ｎｏｌｌｅｔｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５）。これらのパラメータを減少させる化合物は、潜在的な抗不安特性を有すると考えられる。
【０１２８】
[００１３０]  ガラス玉覆い隠しアッセイ（Ｄｅａｃｏｎ，Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００６，１，１２２；Ｋｉｎｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｅｈａｖ  ２０１１，９８，２１）は別の抗不安試験である。マウスまたはラットは、ガラス玉を覆い隠すために掘ることができる敷材の上に、ガラス玉とともに置かれる。次いで、げっ歯類は、時間が計られ、覆い隠されたガラス玉の数が数えられる。対照と比較したガラス玉覆い隠しの減少は、抗不安効果と考えられる。
【０１２９】
[００１３１]  障害に関連する認知、抑うつ、不安および他の行動側面は、正常ベースライン条件下で、または条件または症状のげっ歯類モデルを用いて評価することができる。そのようなモデルの例には、予測不能な慢性軽度ストレス、慢性拘束ストレスおよび社会的敗北パラダイムが含まれる。例えば、数週間にわたる予測不能な軽度のストレス要因の延長プロトコルを用いて、げっ歯類において「認知障害」および「抑うつ様」状態を誘発することができる。軽度のストレス要因は、予測できない環境を提供するために、典型的であるが排他的でなく、無作為に適用される。軽度のストレス要因には、照明周期の変化、ケージ内の敷材の変化、ケージの変更、捕食者の匂い、騒音または明るい照明への曝露、社会的ストレス要因、攻撃的なマウスへの曝露などがある。これらのパラダイムに曝露されたげっ歯類は、典型的には、変化した認知機能ならびにうつおよび不安関連行動の増加を示し、本明細書に記載のものが含まれるがこれらに限定されない様々な行動試験によって評価することができる。これらの試験において欠陥を逆転させる化合物は、治療適応とみなし得る。
【０１３０】
[００１３２]  これらの障害に関連する認知、うつ、不安、および他の行動側面は、障害に関連する行動または生理学的変化を引き起こす細胞性または分子性病理を誘発するために遺伝子工学が使用されているげっ歯類モデルにおいて評価することができる。例えば、化学的遺伝子学的アプローチを用いたＳＳＴ  ＧＡＢＡニューロンの急性阻害は、行動情動性の上昇を誘発し（ＳｏｕｍｉｅｒおよびＳｉｂｉｌｌｅ，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１４，３９：９，２２５２−６２）、さらに、情動性を低下させる化合物は治療適応とみなすことができる。
【０１３１】
[００１３３]  神経変性障害に関連する認知機能の欠陥はまた、増加したβ−アミロイドプラークおよび／または神経原線維濃縮体などのヒト脳において観察される病理を誘発するために遺伝子操作を用いて開発された複数のげっ歯類モデルにおいて評価することができる。例えば、ＡＤのＴｇＣＲＮＤ８マウスモデルは、突然変異ヒトｂＡＰＰ導入遺伝子ＴｇＣＲＮＤ８マウスを発現し、脳におけるアミロイドベータプラークおよび神経原線維濃縮体の両方のレベルの増加をともなう３ヶ月齢での空間学習欠陥を示す（Ｊａｎｕｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０８：９７９−９８２）。データは、これらのモデルにおいて認知症状を逆転または改善する化合物が正常または疾患関連の認知または病理状態の喪失に有効であろうことを示唆している。
【０１３２】
[００１３４]  統合失調症を処置する可能性の評価のため、化合物は、Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１１，３６：１９０３−１９１１に記載されるようなマウスモデルを用いて試験してもよい。統合失調症のこのマウスモデルは、ＤＮＡメチル化剤、メチルアゾオキシメタノールアセテート（ＭＡＭ）の、妊娠１７日目の妊娠した雌への投与によって誘発される発達障害から生じる。ＭＡＭで処置された子孫は、統合失調症のヒト患者で観察されるものと一致する構造および行動異常を示す。α５ＧＡＢＡＡ受容体（α５ＧＡＢＡＡＲ）のアンタゴニスト作用または遺伝子欠損は、驚きに対するプレパルス阻害および潜在阻害の障害を含む、統合失調症に見られる行動異常のいくつかに似た行動につながる。ＭＡＭモデルは、ＧＡＢＡＡＲのα５サブユニットに選択的なベンゾジアゼピンポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）化合物の有効性を示すために使用することができる。Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．では、脳における強直性ドーパミン伝達の病理学的増加が逆転し、ＭＡＭラットで観察された精神刺激薬に対する行動感受性が低下した。データは、そのような化合物がドーパミン媒介性精神病を緩和するのに有効であり得ることを示唆している。
【０１３３】
[００１３５]  世界的な自発運動の基準は、試験化合物の潜在的な鎮静効果を評価するためにも使用することができる。マウスをホームケージ様活動領域に入れ、移動距離を３０〜６０分間モニターする（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，１３６，５５５−５６９）。移動距離の大幅な減少を誘発する化合物は、鎮静または望ましくない副作用を有すると考えられる。
【０１３４】
[００１３６]  空間および運動協調の基準は、化合物の鎮静−催眠／筋弛緩／失調活性を評価するために評価することもできる。感覚運動ロータロッド試験は、典型的にはこれらの評価に使用される（Ｖｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，４８２，２１５−２２２）。この試験は、試験化合物の注射の１０分後、３０分後および６０分後に実施する。マウスまたはラットを回転ロッド（ロータロッド）上で、１５ｒｐｍで最大３分間試験し、落下時間を記録する。３分間の試験期間前の落下は、化合物によって誘発された任意の自発運動協調障害の指標となるであろう。
【０１３５】
[００１３７]  このような化合物は、望ましくは、ＧＡＢＡＡ／α１受容体での効力の低下による鎮静−催眠／筋弛緩／失調活性の低下を伴う、認知向上および／または抗うつ活性を実証することによって機能的選択性を示すであろう。
【０１３６】
[００１３８]  ＧＡＢＡ−Ａ受容体を活性化する化合物およびＧＡＢＡＡ受容体サブユニットに選択的な化合物は、それらの一般的な神経活動の抑制のため、抗てんかん活性を示すことが多い。したがって、化合物の抗てんかん特性は、米国特許出願公開第２０１１／０２６１７１１号明細書に記載のように、いくつかの標準的なラットおよびマウスてんかんモデルにおいて発作を抑制する能力について試験することができる。化合物の抗けいれん活性をジアゼパムと比較することができる。抗けいれん剤スクリーニングに組み込まれた標準モデルには、最大電気ショック試験（ＭＥＳ）、皮下メトラゾール試験（ｓｃＭｅｔ）、および毒性評価（ＴＯＸ）が含まれる。各状態のデータは、所定の時点および用量で試験動物数に対する保護または毒性（自発運動の喪失）動物数のいずれかの比として表すことができる。
【０１３７】
[００１３９]  ＭＥＳは全身性強直間代発作のモデルであり、脳内の全ての神経回路が最大限に活性であるときの発作の広がりを防止する化合物の能力の指標を提供する。これらの発作は再現性が高く、電気生理学的にヒト発作と一致する。ＭＥＳ痙攣に基づく全ての試験では、麻酔薬（０．５％テトラカインＨＣＬ）を含有する電解液で満たされた角膜電極により６０Ｈｚの交流電流（マウスで５０ｍＡ、ラットで１５０）が送達される。試験１については、０．０１ｍＬ／ｇの容量の腹腔内注射によって投与された３０、１００および３００ｍｇ／ｋｇの試験化合物の用量に続いて、様々な間隔でマウスを試験する。試験２では、０．０４ｍＬ／ｇの容量での３０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）の用量の後にラットを試験する。試験３は、再び０．０４ｍｌ／ｇの容量で、腹腔内注射によって投与される、異なる用量を使用した。動物は、発作の後肢強直伸筋成分の消滅時に、ＭＥＳ誘発性発作から「保護された」とみなされる（Ｓｗｉｎｙａｒｄ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ内，Ｌｅｖｙ，Ｒ．Ｈ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；ｐｐ８５−１０２；Ｗｈｉｔｅ，Ｈ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｔａｌ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ．１９９５ａ，１６，７３−７；Ｗｈｉｔｅ，Ｈ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ内，Ｌｅｖｙ，Ｒ．Ｈ．Ｍ．，Ｍｅｌｄｒｕｍ，Ｂ．Ｓ．，Ｅｄｓ．；Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ９９−１１０，１９９５ｂ）。
【０１３８】
[００１４０]  けいれん薬メトラゾールの皮下注射は、実験動物において間代発作を生じる。ｓｃＭｅｔ試験は、試験化合物が動物の発作閾値を上昇させ、それによって間代発作を示すのを防ぐ能力を検出する。動物は、様々な用量の試験化合物で前処理することができる（５０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）の用量が試験２  ｓｃＭｅｔの標準であるが、ＭＥＳ試験と同様の方法で）。先に決定された試験化合物のＴＰＥにおいて、９７％の動物にけいれんを誘発するメトラゾールの用量（ＣＤ９７：８５ｍｇ／ｋｇマウス）を、頚部正中線における皮膚の緩いひだに注射した。動物は、ストレスを最小限に抑えるために隔離ケージに入れて（Ｓｗｉｎｙａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９６１，１３２，９７−０．１０２）、発作の有無について次の３０分間観察してもよい。前肢および／または後肢、顎または感覚毛の約３〜５秒の間代痙攣の発症を終点とする。この基準を満たさない動物は保護されているとみなされる。
【０１３９】
[００１４１]  化合物の抗けいれん活性をさらに特徴付けるために、海馬キンドリングスクリーニングを行うことができる。このスクリーニングは、複雑な部分発作の処置のための物質潜在的有用性の同定のための伝統的なＭＥＳおよびｓｃＭｅｔ試験に対する有用な補助物である。
【０１４０】
[００１４２]  ベンゾジアゼピンは、特定の処置パラダイムにおいて非常に有効な薬物であり得る。てんかん重積症などの緊急事態および他の急性病状には日常的に利用されている。しかし、慢性けいれん疾患におけるそれらの使用は、鎮静および高用量での呼吸抑制、低血圧および他の作用などの副作用のために制限されている。さらに、このクラスの薬物の慢性投与は、抗けいれん効果に対する耐性をもたらし得ることが長い間主張されてきた。これは、慢性抗けいれん状態の第一処置としての有用性を制限している。減少した副作用プロファイルおよび長期の処置期間にわたる効力を有する強力なＢＤＺの発見は、非常に望ましいことであろう。
【０１４１】
組成および投与経路
[００１４３]  別の態様において、本開示は、薬学的に許容される担体と共に、本開示の１つ以上の化合物を含む医薬組成物を提供する。このような組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下または直腸投与のための、または吸入または吹送による投与のための、錠剤、丸剤、カプセル、散剤、顆粒、滅菌非経口溶液または懸濁液、計量エアロゾルまたは液体スプレー、滴剤、アンプル、自動注入装置または坐剤などの単位剤形であってもよい。また、化合物を、適切な量の薬物を連続的に送達するように設計された経皮吸収パッチに組み込み得ることも考えられる。錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を、医薬担体、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムなどの慣用の錠剤化成分、および他の医薬希釈剤、例えば、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩の均質な混合物を含有する固体の予備製剤組成物を形成するための水と混合する。これらの予備製剤組成物が均質であるという場合、有効成分が組成物全体に均一に分散され、組成物が錠剤、丸剤およびカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に細分され得ることを意味する。次いで、この固体の予備製剤組成物は、本開示の活性成分０．１〜約５００ｍｇを含有する上記タイプの単位剤形に細分される。典型的な単位剤形は、１〜１００ｍｇ、例えば、１、２、５、１０、２５、５０、または１００ｍｇの活性成分を含有する。新規組成物の錠剤または丸剤は、長期作用という利点を与える剤形を提供するために、コーティングまたは他の方法で配合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部剤形および外部剤形を含むことができ、後者は前者の外被の形態である。２つの成分は、胃内の崩壊に抵抗し、内部成分が十二指腸へ無傷で通過するか、または放出の遅延を可能にする腸溶層によって分離することができる。そのような腸溶層またはコーティングには、種々の材料を使用することができ、そのような材料には、多数のポリマー酸およびシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料とのポリマー酸との混合物が含まれる。
【０１４２】
[００１４４]  本開示の組成物が経口的または注射による投与のために組み込まれ得る液体形態には、水溶液、適切に香味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、および綿実油、ゴマ油、ヤシ油またはピーナッツ油などの食用油を用いた香味付けされたエマルジョン、ならびにエリキシル剤および同様の医薬溶媒が含まれる。水性懸濁液に適した分散剤または懸濁剤には、トラガカント、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどの合成および天然ガムが含まれる。
【０１４３】
[００１４５]  適切な投与量レベルは、約０．０１〜２５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０５〜５ｍｇ／ｋｇ／日である。化合物は、１日当たり１〜４回のレジメンで、または連続的に、例えば、経皮パッチの使用を介して、投与してもよい。
【０１４４】
[００１４６]  鼻、頬、直腸または特に経口投与などの経腸投与、および静脈内、筋肉内、皮下、頸動脈、硬膜外または髄腔内投与などの非経口投与用の医薬組成物が適している。医薬組成物は、約１％〜約９５％の活性成分、または約２０％〜約９０％の活性成分を含む。
【０１４５】
[００１４７]  冠動脈内、脳血管内、または末梢血管注射／注入を含む非経口投与のためには、サブユニット選択的ＧＡＢＡＡ受容体アゴニストの溶液、また、懸濁液または分散液、特に等張水溶液、分散液または懸濁液の使用が好ましく、例えば、使用直前に調製することができる。医薬組成物は、滅菌されていてもよく、および／または賦形剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、増粘剤、浸透圧を調節するための塩および／または緩衝剤を含むことができ、公知の方法、例えば、慣用の溶解および凍結乾燥法によって調製される。
【０１４６】
[００１４８]  経口医薬製剤の場合、適切な担体は、特に糖類、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース調製物および／またはリン酸カルシウムなどのフィラー、ならびにデンプン、セルロース誘導体および／またはポリビニルピロリドンなどの結合剤、および／または所望により、崩壊剤、流動調節剤および潤滑剤、例えばステアリン酸またはその塩および／またはポリエチレングリコールである。錠剤コアには、適切な、任意選択により腸溶性の、コーティングを施すことができる。染料または顔料は、例えば、識別目的のために、または活性成分の異なる用量を示すために、錠剤または錠剤コーティングに添加されてもよい。経口投与のための医薬組成物はまた、ゼラチンからなる硬質カプセル、およびゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤からなる軟質密封カプセルを含む。カプセルは、活性成分を顆粒の形態で、または油などの適切な液体賦形剤に溶解または懸濁させて、含有してもよい。
【０１４７】
[００１４９]  例えば経皮パッチを使用した、経皮適用も考慮され、これは長期間、例えば１〜２０日間にわたる投与を可能にする。
処置方法
[００１５０]  本明細書には、障害または病状を処置する方法がさらに提供される。さらに、神経障害における認知および気分改善の方法が提供される。
【０１４８】
[００１５１]  障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）、認知症、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脳血管疾患、感覚消失、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、大うつ病および持続性抑うつ障害および双極性うつ病などのうつ病、統合失調症、アルコール依存症、中毒、不安障害、てんかん、神経性疼痛、自閉症スペクトル障害、またはそれらの組み合わせである。
【０１４９】
[００１５２]  不安障害は、全般性不安障害、恐怖障害およびパニック障害に分類され、それぞれ独自の特徴および症状があり、異なる処置が必要である。不安障害の特定の例には、全般性不安障害、パニック障害、広場恐怖症などの恐怖症、社会不安障害、強迫神経障害、心的外傷後ストレス障害、分離不安および小児期不安障害が含まれる。
【０１５０】
[００１５３]  発作タイプ、発症の典型的な年齢、ＥＥＧ所見、処置、および予後のそれぞれ独自の組み合わせを示す、多くの異なるてんかん症候群が存在する。例示的なてんかん症候群には、例えば、小児期の良性後頭部脳葉てんかん、小児期の良性後頭部てんかん（ＢＯＥＣ）、常染色体優性夜間前頭葉てんかん（ＡＤＮＦＬＥ）、原発性読書てんかん、小児欠神てんかん（ＣＥＡ）、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、症候性局在関連性てんかん、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）、前頭葉てんかん、ラスムッセン脳炎、ウェスト症候群、ドレベット症候群、進行性ミオクローヌスてんかん、およびレノックス−ガストー症候群（ＬＧＳ）のが含まれる。遺伝的、先天性および発達性の病状は、より若い患者の間では、てんかんに関連することが多い。腫瘍は４０歳以上の患者の原因となる可能性がある。頭部外傷および中枢神経系感染は、あらゆる年齢でてんかんを引き起こし得る。
【０１５１】
[００１５４]  統合失調症は、思考過程の崩壊および不良な感情応答性によって特徴付けられる精神障害である。統合失調症の特定のタイプには、妄想型、無秩序型、緊張型、未分化型、残存型、統合失調症後うつ病および単純統合失調症が含まれる。
【０１５２】
[００１５５]  自閉症スペクトル障害は、社会的コミュニケーションにおける持続性欠陥および様々な状況における相互作用を特徴とする、神経発達中に発現される表現型の範囲を包含する。
【０１５３】
[００１５６]  処置は、神経精神障害（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性障害（例えば、ＡＤ）に至る障害にわたる症状の側面にも指向され得、その根底にある脳病理の側面の見地と一貫している。
【０１５４】
[００１５７]  本方法は、本明細書に記載の化合物または組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み得る。
[００１５８]  以下の非限定的な実施例は、いくつかの態様および実施形態を純粋に例示することを意図し、本開示に従って実施された特定の実験を示すものである。
【実施例】
【０１５５】
実施例１：ＭＰ−ＩＩＩ−０２２およびＭＰ−ＩＩＩ−０２３の合成
スキーム１．ＳＨ−０５３−２’Ｆ−（Ｒ／Ｓ）−ＣＨ３の合成。
【０１５６】
【化２８】
2019509340.tif 000030
【０１５７】
スキーム２．ＭＰ−ＩＩＩ−０２２の合成。
【０１５８】
【化２９】
2019509340.tif 000031
【０１５９】
スキーム３．ＭＰ−ＩＩＩ−０２３の合成。
【０１６０】
【化３０】
2019509340.tif 000032
【０１６１】
（Ｓ）−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−Ｎ，４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＭＰ−ＩＩＩ−０２３（９）
[００１５９]  エチルエステルＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｓ−ＣＨ３（２）（２．０ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、これを０℃でセプタムを備えた密封容器に添加し、メチルアミン（２０ｍＬ；３３質量％ＥｔＯＨ溶液）を添加した。容器をスクリューキャップで密封し、６０℃で１２時間攪拌した。次いで、溶液を室温に冷却し、メチルアミン、ＤＣＭおよびエタノールを減圧下で除去した。得られた残留物を洗浄カラム（シリカゲル、ＥｔＯＡｃおよび１％ＭｅＯＨ）で精製して、純粋なアミド９を白色粉末として得た（１．７ｇ、４．５６ｍｍｏｌ、８８．６％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８４（ｓ，１Ｈ），７．８０−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｓ，１Ｈ），２．９６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２２Ｈ１７ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３７３．１４５９，実測値  ３７３．１４５３．
実施例２：ＧＬ−ＩＩ−３１の合成。
スキーム４．ＧＬ−ＩＩ−３１の合成。
【０１６２】
【化３１】
2019509340.tif 000033
【０１６３】
（Ｒ）−８−エチニル−Ｎ，４−ジメチル−６−（ピリジン−２−イル）−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＧＬ−ＩＩ−３１（１１）
[００１６０]  エチルエステルＧＬ−ＩＩ−１９−２’Ｎ−Ｒ−ＣＨ３（１０）（１．７ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、これを０℃でセプタムを備えた密封容器に添加し、メチルアミン（２５ｍＬ；３３質量％ＥｔＯＨ溶液）を添加した。容器をスクリューキャップで密封し、６０℃で１８時間攪拌した。次いで、溶液を室温に冷却し、メチルアミン、ＤＣＭおよびエタノールを減圧下で除去した。粗製物に５ｍＬのＤＣＭを添加し、混合物を３５℃で５分間攪拌し、次いで純粋な生成物を濾別した。濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、７：３  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）によりさらに精製して、純粋なアミド１１のさらなる部分を白色粉末として得た（１．２ｇ、３．３７ｍｍｏｌ、７２％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．５７（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８４−７．６８（ｍ，３Ｈ），７．５２−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．９１（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），２．９７（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，３Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ  １６５．４７，１６３．８７，１５７．４１，１４８．３０，１３８．７４，１３７．３４，１３５．８１，１３５．５７，１３５．２５，１３５．１７，１３４．２６，１３１．０６，１２７．８４，１２４．８４，１２４．２２，１２２．４３，１２１．１０，８１．４３，７９．６６，２５．５６，１４．４５；Ｃ２１Ｈ１７Ｎ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３５６．１５０６，実測値  ３５６．１５０４．
実施例３．ＲＶ−ＩＩ−０４の合成。
スキーム５．ＲＶ−ＩＩ−０４の合成。
【０１６４】
【化３２】
2019509340.tif 000034
【０１６５】
[００１６１]  エチルエステル１２（２．０ｇ、４．６７ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、これを０℃でセプタムを備えた密封容器に添加し、メチルアミン（２０ｍＬ；３３質量％ＥｔＯＨ溶液）を添加した。容器をスクリューキャップで密封し、６０℃で１５時間攪拌した。次いで、溶液を室温に冷却し、メチルアミン、ＤＣＭおよびエタノールを減圧下で除去した。得られた残留物を洗浄カラム（シリカゲル、７：３  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋なアミド１３を黄色粉末として得た（１．３５ｇ、３．２６ｍｍｏｌ、７０％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８５（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｔｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０  −７．４３（ｍ，３Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．１３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．９９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，３Ｈ）；ＨＰＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１３．１５（Ｍ＋Ｈ）＋．
実施例４．ＭＰ−ＩＩ−０６５の合成
スキーム６．ＭＰ−ＩＩ−０６５の合成。
【０１６６】
【化３３】
2019509340.tif 000035
【０１６７】
８−エチニル−６−（ピリジン−２−イル）−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＭＰ−ＩＩ−０６５（１５）
[００１６２]  エチルエステル１４（１ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）および塩化カルシウム（３１１ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）を、攪拌棒を備えた密封可能な容器の内部に入れた。メタノール（無水、２０ｍＬ）を加え、セプタムを設置して容器を密封した。別のフラスコ中で、アンモニア（ｇ）を約１０分間、飽和するまでメタノール（無水、２０ｍＬ）中にバブリングさせた。アンモニア−メタノール溶液を１４を含有する容器に添加し、容器をスクリューキャップで密封した。混合した反応物を加熱し、８５℃で１８時間攪拌した。反応物を冷却させ、メタノールを減圧下で除去した。残った固体を酢酸エチルに溶解し、濾過して塩化カルシウムを除去した。濾液を食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。残った残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１％メタノールおよび１％トリメチルアミンを含むＥｔＯＡｃ）を用いて精製して、純粋な１５を白色固体として得た（６６１ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ、７２％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．５７（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｓ，２Ｈ），７．８１−７．７３（ｍ，１Ｈ），７．６１−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．３２（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），５．３８（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｓ，１Ｈ），３．１７（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １６７．３８，１６４．７１，１５６．５９，１４８．５９，１３６．８７，１３６．５２，１３６．３２，１３５．５３，１３５．１４，１３３．２９，１３１．０１，１２７．１４，１２４．７２，１２４．０４，１２２．７６，１２１．０７，８１．７７，７９．３５，４４．８０；ＨＰＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２８．１２（Ｍ＋Ｈ）＋．
実施例５．カルボキサミドへの一般的な合成経路。
スキーム７．カルボキサミドへの一般的な合成経路。
【０１６８】
【化３４】
2019509340.tif 000036
【０１６９】
実施例６．アミドへの一般的な合成経路。
スキーム８．アミドへの一般的な合成経路。
【０１７０】
【化３５】
2019509340.tif 000037
【０１７１】
（Ｒ）−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボン酸ＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｒ−ＣＨ３−酸（１６）
[００１６３]  エチルエステルＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｒ−ＣＨ３（１）（２０．０ｇ、５１．６ｍｍｏｌ）を５００ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、その後、固体ＮａＯＨ（１６．６ｇ、４１３ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。この反応混合物を０．５時間、５５℃に加熱し、ＥｔＯＨを減圧下で除去した。残りの水溶液を０℃で１０分間攪拌し、次いでｐＨが５（ｐＨ紙）になるまでＨＣｌ水溶液（１Ｍ）を溶液に滴下した。形成された淡白色の沈殿物が溶液中に１０分間放置され、次いで濾過によって回収され、冷水で洗浄し、水層を室温で１０時間静置して、さらなる酸を得た。合わせた固形物を８０℃の真空オーブンで７時間乾燥させて、純粋な酸１６を白色粉末として得た（１８．４ｇ、５１．２ｍｍｏｌ、９９．２％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．４２（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｓ，１Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−  ｄ６）：δ  １６４．７６，１６２．８１，１５８．１９，１４０．５７，１３６．５７，１３５．５４，１３４．７４，１３３．１８，１３２．６５，１３１．８８，１２９．８８，１２９．３５，１２５．１７，１２３．９８，１２１．０９，１１６．５３，１１６．２５，８３．４２，８２．０１，４９．７９，１５．０８；Ｃ２１Ｈ１４ＦＮ３Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３６０．１１４３，実測値  ３６０．１１４０．
他のアミドの一般的手順
[００１６４]  酸（ＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｒ−ＣＨ３−酸１６またはそのエナンチオマー２１）（２ｇ、５．５６ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（５５．６ｍｍｏｌ）および無水ＤＣＭ５０ｍＬの混合物を、アルゴン下、オーブン乾燥した丸底フラスコに入れた。この懸濁液をアルゴン下、６０℃で２時間還流させた。ＴＬＣ（シリカゲル）により出発物質の不在を確認した。有機溶媒および過剰の塩化チオニルを減圧下で蒸発させ、これを無水ＤＣＭで５回繰り返した。得られた黄色の残留物を無水ＤＣＭに溶解し、アルゴン下で１０分間、０℃に冷却した。次いで、適切なアミン（１１．１２ｍｍｏｌ）、続いてＥｔ３Ｎ（５．５６ｍｍｏｌ）を０℃で反応混合物に添加し、次いで混合物を室温まで温め、約７時間攪拌した。反応の完了後、溶媒を減圧下で除去した。残留物を氷冷水で処理し、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで精製して、対応する純粋なアミドを得た。
【０１７２】
実施例７．ＧＬ−ＩＩ−７３の合成。
（Ｒ）−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ，４−トリメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサムＧＬ−ＩＩ−７３（１７）
[００１６５]  １７を、求核剤として無水ジメチルアミンを用いる一般的な手順に従って、１６から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃおよび１％ＭｅＯＨ）で精製して、純粋なジメチルアミド１７を淡黄色粉末として得た（１．５ｇ、３．９ｍｍｏｌ、７０％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．９４（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．４２（ｍ，３Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｓ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），１．９３  （ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２３Ｈ１９ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３８７．１６１６，実測値  ３８７．１６２６．
実施例８．ＧＬ−ＩＩ−７４の合成
（Ｒ）−Ｎ−エチル−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＧＬ−ＩＩ−７４（１８）
[００１６６]  １８を、求核剤として無水エチルアミンを用いる一般的な手順に従って、１６から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、６：４  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋なエチルアミド１８を白色粉末として得た（１．６ｇ、４．３ｍｍｏｌ、７８％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．８２（ｓ，１Ｈ），７．６９  −７．６０（ｍ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４９−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），１．２７−１．２０（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １６２．８１，１６２．５１，１５８．４７，１３８．８１，１３４．９６，１３４．７１，１３３．９０，１３３．３７，１３１．８４，１３１．３７，１２９．７８，１２４．４６，１２４．４２，１２２．０４，１２１．３８，１１６．２０，１１５．９２，８１．５５，７９．５２，４９．８９，３３．７０，１５．０２；Ｃ２３Ｈ１９ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３８７．１６１６，実測値  ３８７．１６１８．
実施例９．ＧＬ−ＩＩ−７５の合成
（Ｒ）−Ｎ−シクロプロピル−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＧＬ−ＩＩ−７５（１９）
[００１６７]  １９を、求核剤として無水シクロプロピルアミンを用いる一般的な手順に従って、１６から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５：５  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋なシクロプロピルアミド１９を白色粉末として得た（１．８ｇ、４．５ｍｍｏｌ、８２％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．８０（ｓ，１Ｈ），７．６８  −７．６１（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｓ，１Ｈ），２．８６−２．８０（ｍ，１Ｈ），１．２７（ｄ，  Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８３−０．７９（ｍ，２Ｈ），０．６３−０．５７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １６４．０２，１６２．８２，１５８．４７，１３８．９１，１３４．９７，１３４．６５，１３３．８９，１３３．３７，１３１．８６，１３１．５８，１３１．３６，１２９．７８，１２４．４７，１２２．０４，１２１．４２，１１６．２０，１１５．９２，８１．５３，７９．５５，４９．８８，２２．１０，１４．９９，６．５４，６．５０；Ｃ２４Ｈ１９ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３９９．１６１６，実測値  ３９９．１６２１．
実施例１０．ＧＬ−ＩＩ−７６の合成。
（Ｒ）−（８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−イル）（ピロリジン−１−イル）メタノンＧＬ−ＩＩ−７６（２０）
[００１６８]  ２０を、求核剤として無水ピロリジンを用いる一般的な手順に従って、１６から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、６：４  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋な生成物２０を白色粉末として得た（１．８ｇ、４．４ｍｍｏｌ、８０％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．９０（ｓ，１Ｈ），７．７０−７．５９（ｍ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７４−３．４１（ｍ，４Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），１．９６−１．８８（ｍ，４Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２５Ｈ２１ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ４１３．１７７２，実測値  ４１３．１７７２．
実施例１１．ＧＬ−Ｉ−５４の合成
スキーム９．ＧＬ−Ｉ−５４の合成。
【０１７３】
【化３６】
2019509340.tif 000038
【０１７４】
（Ｓ）−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボン酸ＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｓ−ＣＨ３−酸（２１）
[００１６９]  エチルエステルＳＨ−０５３−２’Ｆ−Ｓ−ＣＨ３（２）（５．０ｇ、１２．９１ｍｍｏｌ）を２００ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、その後、固体ＮａＯＨ（４．１ｇ、１０３．２５ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。この反応混合物を０．５時間、５５℃に加熱し、ＥｔＯＨを減圧下で除去した。残りの水溶液を０℃で１０分間攪拌し、次いでｐＨが５（ｐＨ紙）になるまでＨＣｌ水溶液（１Ｍ）を溶液に滴下した。形成された淡白色の沈殿物が溶液中に１０分間放置され、次いで濾過によって回収され、冷水で洗浄し、水層を室温で１０時間静置して、さらなる酸を得た。合わせた固体を８０℃の真空オーブンで７時間乾燥させて、純粋な酸２１を白色粉末として得た（４．６ｇ、１２．７ｍｍｏｌ、９９％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．３５（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５６−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．１８（ｍ，２Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｓ，１Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−  ｄ６）：δ  １６４．８８，１６２．９０，１５８．２８，１４０．７９，１３６．７８，１３５．６５，１３４．８３，１３３．２２，１３２．４３，１３１．７７，１２９．８２，１２９．４５，１２５．２１，１２３．９７，１２１．１２，１１６．６４，１１６．２５，８３．４３，８２．１１，４９．６５，１５．１１；Ｃ２１Ｈ１４ＦＮ３Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３６０．１１４３，実測値  ３６０．１１４８．
（Ｓ）−８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ，４−トリメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボキサミドＧＬ−Ｉ−５４（２２）
[００１７０]  ２２を、求核剤として無水ジメチルアミンを用いる一般的な手順に従って、２１から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃおよび１％ＭｅＯＨ）で精製して、純粋なジメチルアミド２２を淡黄色粉末として得た（１．４ｇ、３．８ｍｍｏｌ、６８％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．９３（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５６−７．４２（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｓ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ），１．９４  （ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２３Ｈ１９ＦＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３８７．１６１６，実測値  ３８７．１６２４．
実施例１２．オキサジアゾールへの一般的な合成経路。
スキーム１０．オキサジアゾールへの一般的な合成経路。
【０１７５】
【化３７】
2019509340.tif 000039
【０１７６】
オキサジアゾールの一般的手順
[００１７１]  エチルエステル（２または１０または２３）をアルゴン下、室温で無水ＴＨＦに溶解した。３Åモレキュラーシーブを含有する別のフラスコ中、オキシムをアルゴン下で無水ＴＨＦに溶解し、水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液）で処理した。得られた混合物を１５分間攪拌し、その時点でエチルエステルを含有する溶液を添加した。得られた反応混合物を室温で２時間、またはＴＬＣ（シリカゲル）で示されるように出発物質が消費されるまで攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。次いで、水を加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合わせ、食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。得られた固体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製して、純粋な対応するオキサジアゾールを得た。
【０１７７】
実施例１３．ＧＬ−Ｉ−６５の合成
（Ｓ）−５−（８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４−メチル−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−イル）−３−メチル−１，２，４−オキサジアゾールＧＬ−Ｉ−６５（２４）
[００１７２]  １００ｍＬの無水ＴＨＦ中のオキシム（６２７ｍｇ、８．４６ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液）（２５４ｍｇ、６．３４ｍｍｏｌ）を用いた一般的手順に従って、２４を２（１．６４ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５：５  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋な生成物２４を白色粉末として得た（１．２４ｇ、３．１２ｍｍｏｌ、７４％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．０２（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．６０（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｓ，１Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２３Ｈ１６ＦＮ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３９８．１４１２，実測値  ３９８．１４１９．
実施例１４．ＧＬ−ＩＩ−３３の合成
（Ｒ）−５−（８−エチニル−４−メチル−６−（ピリジン−２−イル）−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−イル）−３−メチル−１，２，４−オキサジアゾールＧＬ−ＩＩ−３３（２５）
[００１７３]  １００ｍＬの無水ＴＨＦ中のオキシム（８００ｍｇ、１０．８ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液）（３２４ｍｇ、８．１ｍｍｏｌ）を用いた一般的手順に従って、２５を１０（２ｇ、５．４ｍｍｏｌ）から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）で精製して、純粋な生成物２５を白色粉末として得た（１．５８ｇ、４．１５ｍｍｏｌ、７７％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．５９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０４−８．０２（ｍ，２Ｈ），７．８５−７．７４（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｓ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １７０．８１，１６７．４２，１６５．３５，１５７．４５，１４８．６０，１３９．２８，１３６．９０，１３６．４５，１３６．０１，１３５．７７，１３５．５４，１３５．１９，１２７．９５，１２４．６８，１２４．０３，１２２．３７，１２１．２１，８１．６１，７９．６１，４９．９７，１４．６７，１１．６６；Ｃ２２Ｈ１６Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３８１．１４５８，実測値  ３８１．１４６１．
実施例１５．ＧＬ−ＩＩＩ−２３の合成
５−（８−エチニル−６−（２−フルオロフェニル）−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−イル）−３−メチル−１，２，４−オキサジアゾールＧＬ−ＩＩＩ−２３（２６）
[００１７４]  １００ｍＬの無水ＴＨＦ中のオキシム（１．２ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液）（４８２ｍｇ、１２．０４ｍｍｏｌ）を用いた一般的手順に従って、２６を２３（３．０ｇ、８．０３ｍｍｏｌ）から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、７：３  ＥｔＯＡｃおよびヘキサン）で精製して、純粋な生成物２６を白色粉末として得た（１．６ｇ、４．１７ｍｍｏｌ、５２％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４９（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），６．１９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．１９（ｓ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）；Ｃ２２Ｈ１４ＦＮ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ３８４．１２５５，実測値  ３８４．１２７３．
実施例１６．ＧＬ−ＩＩ＿５４の合成
スキーム１１．ＧＬ−ＩＩ−５４の合成。
【０１７８】
【化３８】
2019509340.tif 000040
【０１７９】
（Ｒ）−５−（８−ブロモ−４−メチル−６−（ピリジン−２−イル）−４Ｈ−ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−イル）−３−メチル−１，２，４−オキサジアゾールＧＬ−ＩＩ−５４（２８）
[００１７５]  １００ｍＬの無水ＴＨＦ中のオキシム（１．３ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液）（２８２ｍｇ、７．１ｍｍｏｌ）を用いた一般的手順に従って、２８を２７（２．０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）から調製した。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃおよび１％ＭｅＯＨ）で精製して、純粋な生成物２８を白色粉末として得た（１．７ｇ、３．９ｍｍｏｌ、８５％）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．５９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．８５−７．７７（ｍ，２Ｈ），７．５３−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４９（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２０Ｈ１５ＢｒＮ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＨＲＭＳ（ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ）計算値  ４３５．０５６４，実測値  ４３５．０５５７．
実施例１７．Ｙ迷路交替タスク
[００１７６]  若齢動物および慢性ストレス処置：Ｃ５７／Ｂｌ６マウス、雄および雌を８週齢でＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから注文し、１週間、正常な飼育条件（午前７時に始まる１２時間点灯サイクル／水および餌は自由摂取）に保った。この週の間に、動物は、実験者への不安のような反応を減少させるために、単一収容され、ハンドリングされた。作業記憶の欠陥を誘発するために、マウスに慢性拘束ストレスプロトコル（ＣＲＳ）を施した。マウスを、日中サイクルの間、１日２回、５０ｍｌファルコン（登録商標）チューブに１時間入れた。ストレスの発生の時間は、予測可能性を避けるために毎日無作為化された。ＣＲＳは試験日には適用されなかった。Ｙ迷路試験は、最後のストレス要因後、最低１５時間で発生した。
【０１８０】
[００１７７]  若齢対高齢動物試験：Ｃ５７／Ｂｌ６雄マウスは、１０ヶ月齢でＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから注文し、１８ヶ月齢に達するまで、正常な飼育条件（午前７時に始まる１２時間点灯サイクル／水および餌は自由摂取）に保った。８週齢のより若い動物のコホートを実験の対照として使用した。試験前に、動物は、実験者への不安のような反応を減少させるために、ハンドリングされた。通常の老化誘発性作業記憶の欠陥は、下記のＹ迷路試験を用いて評価した。
【０１８１】
[００１７８]  プロトコル：マウスを、連続した２日間、１０分間の自由探索セッション（１セッション／１日）により、最初にＹ迷路装置および遠位キューに慣れさせた。翌日、動物は、３０秒の試験間隔（ＩＴＩ）で分けられた７回の連続した試験からなるトレーニングセッションを行った。この訓練期間中、マウスを実験手順（扉の開閉およびゴールアームへの閉じ込め）に熟知させた。各試験について、マウスは３０秒のＩＴＩの間、スタートボックス内にとどまった。その後、扉が開けられ、マウスは２つのゴールアームのうちの１つに自由に入ることができた。選択されたアームは閉じられ、選択が記録された。選択されたアーム内での３０秒の閉じ込め期間の後、マウスを取り出し、最初の試験と同じ２回目の試験のためにマウスをスタートボックスに戻し、この手順を一連の試験にわたって繰り返した。
【０１８２】
[００１７９]  ＩＴＩが９０秒に延長されたことを除いて、トレーニングセッションで使用されたのと同じ一般的手順が２４時間後に実行された。この実験につき、試験開始３０分前に、動物は溶媒またはαＰＡＭを腹腔内に急性的に注射された。記憶欠陥を、一連の試験を経た交替への動機づけの結果的進行性喪失から分離して考えるために、一連の試験に、７回目の試験からより短いＩＴＩ（５秒）で分けられた８回目の試験を加えた。８回目の試験で交替しなかった動物は全て除外した。平均交代率を計算し、パーセンテージ（動物によってなされた交替数／可能な交替総数×１００）±ＳＥＭで表した。タスク全体の交替率は、作業記憶能力の指数（５０％のランダム交替率）とみなされる。群間の差異を明らかにするため、データにｆａｃｔｏｒｉａｌ  ＡＮＯＶＡを適用した。ＡＮＯＶＡが群効果につき有意であった場合（ｐ＜０．０５）、Ｓｃｈｅｆｆｅ事後分析を実施して、どの群が互いに異なるかを同定した。
【０１８３】
[００１８０]  薬物の調製および投与：全ての薬物を、８５％Ｈ２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％Ｔｗｅｅｎ８０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む溶媒溶液で希釈した。作用溶液を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に合わせて調整して腹腔内投与した。使用した用量は、１、５、１０または２０ｍｇ／ｋｇであった。全てのＹ迷路実験につき、試験開始３０分前に、動物は溶媒またはαＰＡＭを腹腔内に急性的に注射された。
【０１８４】
[００１８１]  ＧＬ−ＩＩ−７３による処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ（図３）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（５，９４）＝１７．５；ｐ＜０．０００１）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、ＣＲＳがこの試験において作業記憶の有意な減少を誘発したことを示した。対照−溶媒群と比較した場合、＊＊＊ｐ＜０．００１。この効果は、ＧＬ−ＩＩ−７３の投与（試験３０分前）によって逆転された。本発明者らの結果は、ＧＬ−ＩＩ−７３がＣＲＳ−溶媒群と比較して、５ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）ならびに１０および２０ｍｇ／ｋｇ（ｐｓ＜０．００１）で認知向上効果を有することを示している。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１８５】
[００１８２]  ＧＬ−ＩＩ−７５による処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図４）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（４，３０）＝６．３；ｐ＝０．０００８）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、この記憶タスクにおけるＣＲＳ誘発性欠陥が、試験３０分前にＧＬ−ＩＩ−７５を投与することによって、逆転できることが明らかとなった。ＧＬ−ＩＩ−７５は、１、５および１０ｍｇ／ｋｇで有意な認知向上効果を有する（対照−溶媒群と比較してｐ＜０．０５）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１８６】
[００１８３]  ＧＬ−Ｉ−５４による処置後のＹ迷路交替タスクのデータ結果：分析（図５）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（４，２９）＝６．６；ｐ＝０．０００６）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、ＣＲＳ−溶媒動物（ｐ＜０．００１）および１ｍｇ／ｋｇのＧＬ−Ｉ−５４を投与したＣＲＳ動物（ｐ＜０．００１）における能力の低下が明らかとなった。１０ｍｇ／ｋｇで注射されたＧＬ−Ｉ−５４は、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後検定によって明らかにされた有意な認知効果を有した（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１８７】
[００１８４]  ＧＬ−ＩＩ−３３による処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図６）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝４．２；ｐ＝０．０４３９）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、ＣＲＳ−溶媒動物における低下した能力（ｐ＜０．０５）、および対照−溶媒群と比較して有意でないＧＬ−ＩＩ−３３  １０ｍｇ／ｋｇ後の交替率の増加が明らかとなった。ＧＬ−ＩＩ−３３マウス群はＣＲＳ−溶媒マウス群と統計的に異ならなかったが、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後検定を使用した場合に傾向が検出された（ｐ＝０．０６）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１８８】
[００１８５]  ＧＬ−Ｉ−６５による処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図７）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，２８）＝５．３８；ｐ＝０．０１０５）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、ＣＲＳ−溶媒動物における低下した能力（ｐ＜０．０５）、および対照−溶媒群と比較して有意でなく、ＣＲＳ−溶媒群と比較して統計的に有意である（ｐ＜０．０５）ＧＬ−Ｉ−６５  １０ｍｇｋｇ後の交替率の増加が明らかとなった。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１８９】
[００１８６]  ＧＬ−ＩＩ−７３およびＧＬ−Ｉ−５４のラセミ混合物で処理した後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図８）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１０）＝１６．８２；ｐ＝０．０００６）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、ＣＲＳ−溶媒動物における有意に低下した能力が明らかとなった（ｐ＜０．００１）。ラセミ混合物（ＧＬ−ＩＩ−７３／ＧＬ−Ｉ−５４）の投与は、ＣＲＳによって誘発される認知障害の逆転を誘発した（ｐ＜０．００１）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこれらの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１９０】
[００１８７]  ＧＬ−ＩＩ−７３による処置後の高齢動物におけるＹ迷路交代課題の結果：データ分析（図９）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１２）＝１３．７９；ｐ＝０．０００８）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、５ｍｇ／ｋｇで、老齢動物におけるＧＬ−ＩＩ−７３の投与が、有意な認知向上効果を有することが明らかとなった（高齢−溶媒群と比較してｐ＜０．０５）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１９１】
[００１８８]  ＧＬ−ＩＩ−７５による処置後の高齢動物におけるＹ迷路交代課題の結果：データ分析（図１０）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１０）＝１１．５７；ｐ＝０．００２５）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析から、５ｍｇ／ｋｇで、老齢動物におけるＧＬ−ＩＩ−７５の投与が、有意な認知向上効果を有することが明らかとなった（高齢−溶媒群と比較してｐ＜０．０１）。これらの結果は、認知欠陥を逆転させるこの化合物の潜在的な効能を示唆している。
【０１９２】
【表１】
2019509340.tif 000041
【０１９３】
実施例１８．他の認知試験におけるαＰＡＭの影響
[００１８９]  Ｍｏｒｒｉｓ水迷路アッセイの手順：ラットの認知能力に影響するＭＰ−ＩＩＩ−０２２の可能性を、２つの十分に検証された行動モデルで評価した。最初に、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路実験を、２２±１℃の水で３０ｃｍの高さに充填した直径２ｍの円形プール中で行った。エスケーププラットフォーム（１５ｃｍ×１０ｃｍ）を水面の２ｃｍ下に沈めた。全ての実験詳細は、Ｓａｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９，１２，１１７９−１１９３）に記載されていた。連続した５日間の各々において、ラットには１つの水泳ブロックが与えられ、これは４回の試験からなった。各試験について、ラットを４つの擬似無作為に決定された開始位置の１つの水中に置いた。ラットがエスケーププラットフォームを見つけて登ると、１５秒間プラットフォームに留まることが許された。ラットは、１２０秒以内にその位置を見つけられなかった場合、実験者によってプラットフォームに導かれた。習得段階の間、処置は、水泳ブロックの前に１日１回適用された。６日目に、ラットにプラットフォームなしで無処置プローブ試験（６０秒）を行った。探索試験は、新規の最も遠い場所から始まった。習得試験中に追跡するための選択された従属変数は：エスケープ潜時（秒）、総移動距離（ｍ）、経路効率（実際の経路長に対する可能な最短経路長の比）、周囲輪内の水泳距離（％）および平均速度（ｍ／ｓ）であった。プローブ試験で選択されたパラメータは、標的区域における水泳距離および周囲輪内の水泳距離％であった。本発明者らは、対照薬物として１、２．５および１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２および２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムの効果を試験した。ＭＰ−ＩＩＩ−０２２の用量は、Ｓｔａｍｅｎｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１６，７９１，４３３−４４３）に示されている完全な薬物動態学的および電気生理学的データの分析に従って、それぞれα５ＧＡＢＡＡＲの軽度、中等度および強度のポジティブモジュレーションを誘発するように選択した。Ｍｏｒｒｉｓ水迷路の習得日からのデータを各ラットで平均化（総データ／１日当たりの試験総数）し、日を反復基準とした反復測定を用いた二元ＡＮＯＶＡ（因子：処置および日）で分析した。有意な相互作用の場合、別個の一元配置ＡＮＯＶＡを実施して、日因子の個々のレベル内での処置の影響を評価した。プローブ試験からのデータは、一元ＡＮＯＶＡを用いて評価した。
【０１９４】
[００１９０]  社会的新規性識別（ＳＮＤ）アッセイの手順：ＳＮＤ試験は、成体ラットの社会調査時間を、熟知したおよび新規の若齢ラットと比較する。試験は、成体対象に対する２つの連続した若齢ラット提示期間：期間１（Ｐ１）および期間２（Ｐ２）からなった。Ｐ１の開始時に、１匹の若齢ラットを成体のホームケージに入れ、若齢ラットを調査するのに成体が費やした時間（肛門生殖器を嗅ぐ、舐める、近くで追いかけるおよび触る）を手動で５分間記録した。Ｐ２の間、同じ若齢ラットと２番目の新規若齢ラットを成体と一緒にケージに入れ、各若齢ラットを調査するのに成体が費やした時間を独立して３分間測定した。試験した各成体に、異なる若齢ラットの対を提示した。手動採点は盲検式で行われた。Ｐ１とＰ２との間に３０分の遅延があり、ＳＮＤは低くなると予想されたため、ＳＮＤは、パラメトリック操作を適用することによって、対照ラットにおいて意図的に障害された。このようにして誘発されたＳＮＤの障害に対するＭＰ−ＩＩＩ−０２２（１、２．５または１０ｍｇ／ｋｇ）の影響を調査した。Ｐ１の２０分前に、溶媒、１．５ｍｇ／ｋｇジアゼパムならびに１、２．５および１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２のうちの１つを投与した５群のラットが存在した。Ｐ２中、熟知した（Ｔｆ）および新規の（Ｔｎ）の若齢ラットを調査する時間量を手動で採点し、識別指数（Ｔｎ−Ｔｆ／Ｔｎ＋Ｔｆ）を計算した。Ｐ１およびＰ２の合計探索時間も手動で記録した。
【０１９５】
[００１９１]  Ｍｏｒｒｉｓ水迷路アッセイの結果：水迷路試験の５日間の習得段階の結果を図１１に示す。表２に要約されるように、測定された全てのパラメータについて、処置因子および日因子の有意な効果が観察された。本発明者らの結果から、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２は、α５ＧＡＢＡＡＲ（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｓｔａｍｅｎｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６による）につき選択性の最高用量では、陽性コントロールとして用いられたジアゼパム２ｍｇ／ｋｇにより誘発されたものと区別できない空間学習不能が誘発された。これは、ベンゾジアゼピンに特有の水迷路障害がα５ＧＡＢＡＡＲのポジティブモジュレーションのみによって達成可能であることを直接的に示す最初の結果である。影響された受容体は海馬に位置する可能性が最も高く、水迷路は海馬依存性の認知タスクとして一般に見られることを念頭に置いている。平均速度に対する二元反復測定ＡＮＯＶＡは、処置因子に関して統計学的に有意ではなかった（Ｆ（４，２７）＝１．１１２、ｐ＝０．３１７）ため、習得セッション中の任意の感覚運動障害を除外することができる。特に、事後検定から、１ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２で処置した群は、２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムおよび１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２群と、全てのパラメータにつき異なることが明らかとなった。１ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２を投与された動物は、エスケープ潜時がより短く、距離がより短く、周囲リング内の水泳距離がより短く、経路効率がより高かった。さらに、ＤａｙＩＩの一元ＡＮＯＶＡ後の事後分析から、１ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２で処置したラットが、対照および他の全ての処置群と比較してより高い経路効率を有することが明らかとなり（ＤａｙＩＩ、図５ｄ）、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２の最低用量に関するわずかなレベルの選択的調節が、ラットにより早くタスクを習得させる傾向を有することを示唆している。表２．ラットのＭＷＭにおける挙動に対する２ｍｇ／ｋｇ  ＤＺＰおよび１、２．５および１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２投与の効果。プラットフォームへの潜時（秒）、合計距離（ｍ）、周囲輪における水泳距離（％）および経路効率に対する二元反復測定ＡＮＯＶＡおよび全体的な事後結果。ＳＯＬ＝溶媒；ＤＺＰ＝ジアゼパム；ＭＰ＝ＭＰ−ＩＩＩ−０２２；ｎｓ＝有意でない。
【０１９６】
【表２】
2019509340.tif 000042
【０１９７】
[００１９２]  探索試験の結果に適用された一元ＡＮＯＶＡから、分析された両方のパラメータ：標的領域における水泳距離（Ｆ（４，２７）＝６．２６、ｐ＝０．００１、図１２ａ）、および周囲リングにおける水泳距離パーセント（Ｆ（４，２７）＝６．８４、ｐ＜０．００１；図１２ｂ）、に対する有意な処置効果が明らかとなった。高用量のＭＰ−ＩＩＩ−０２２は、空間学習および記憶においてジアゼパムの認知破壊効果と似ているが、１ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２は、空間学習と記憶処理において有意な改善を誘発し、α５モジュレーションが、認知向上効果を有し得ることを確認する。
【０１９８】
[００１９３]  社会的新規性識別アッセイの結果：社会的新規性識別手順におけるラットの行動に対する１．５ｍｇ／ｋｇジアゼパムならびに１、２．５および１０ｍｇ／ｋｇ  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２の効果を図１３に示す。識別指標の１試料ｔ検定は、１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２群（ｔ（７）＝２．４４６；ｐ＝０．０２３、図２５ａ）についてのみ、ゼロ（すなわち、チャンスレベル）との有意な差異を明らかにした。同様に、対応ｔ検定は、熟知したおよび新規の若齢ラットをＰ２で探索するのに費やした時間の有意性を明らかにし、１０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０２２群のみが、新しいラットを探索するのに有意により長い時間を費やしたことを示している（ｔ（７）＝−２．９２１、ｐ＝０．０２２、図２５ｂ）。探索時間に関する同じ統計分析は、２．５ｍｇ／ｋｇジアゼパムで処置したラットにおける統計的傾向を明らかにした（ｔ（７）＝−２．０７６、ｐ＝０．０７７）。α５ＧＡＢＡＡＲの選択的強化による社会的新規性識別の促進という知見は新規であり、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２が認知向上効果を有することを示唆している。全体として、２つのアッセイの結果は、α５ＧＡＢＡＡＲの強力な選択的強化（Ｓｔａｍｅｎｉｃ  ｅｔ  ａｌ，２０１６で評価された低濃度のＧＡＢＡによって誘発されるレベルの３倍）が、社会的認知における促進作用、ならびに強化された空間学習および記憶を誘発し得ることを示唆している。
【０１９９】
実施例１９．強制水泳試験
[００１９４]  強制水泳試験アッセイ（ＦＳＴ）の手順
[００１９５]  動物：Ｃ５７Ｂｌ／６雄マウスを８週齢でＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから注文し、１週間、正常な飼育条件（午前７時に始まる１２時間点灯サイクル／水および餌は自由摂取）下で集団収容（マウス４〜５匹／ケージ）した。この週の間、動物を実験者に慣れさせ、行動試験中の不安のような反応を減少させるために、動物をハンドリングした。
[００１９６]  薬物の調製および投与：全ての薬物を、８５％Ｈ２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％Ｔｗｅｅｎ８０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む溶媒溶液で希釈した。作用溶液を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に合わせて調整して腹腔内投与した。使用した用量は、１、５または１０ｍｇ／ｋｇであった。全てのＦＳＴ実験につき、動物は溶媒またはαＰＡＭを腹腔内注射された。
[００１９７]  プロトコル：マウスを強制水泳試験（ＦＳＴ）（抗うつ薬の効力の評価に使用される絶望様行動の基準）で試験した。潜在的な抗うつ薬化合物を試験するために、当分野における標準的な方法に従って３回（試験の２４、２０および１時間前）、動物に亜慢性的に注射した。
【０２００】
[００１９８]  最後の注射から１時間後、マウスを水で満たされた（２５ｃｍ、２５〜２６℃）逃げられない透明なタンクに入れた。ここで、マウスは底に触れることができず、タンクから飛び出すことができない。動物を６分間記録し、タンク内での不動時間の手動計数を、マウス処置歴を知らない実験者が２〜６分間測定した。不動は、浮いたままでいるための最小限の動きの量として定義される。ＦＳＴにおいて不動を減少させた化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。
【０２０１】
[００１９９]  ＧＬ−ＩＩ−７３による処置後の強制水泳試験の結果：データ（図１４）は、群間の差異に対する傾向を示した（ＡＮＯＶＡ  Ｆ（３，３４）＝８．１８９；ｐ＝０．０６１４）。さらに、事後分析から、ＧＬ−ＩＩ−７３  １０ｍｇ／ｋｇが溶媒群＊ｐ＜０．０５と比較して不動を有意に減少させることが確認された。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０２】
[００２００]  ＧＬ−ＩＩ−７４による処置後の強制水泳試験の結果：データ（図１５）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ  Ｆ（３，４３）＝７．１２２；ｐ＜０．００１）。さらに、事後分析から、５および１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−７４が溶媒群＊ｐ＜０．０５と比較して不動を有意に減少させることが確認された。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０３】
[００２０１]  ＧＬ−ＩＩ−７５による処置後の強制水泳試験の結果：データ（図１６）は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ  Ｆ（３，４４）＝６．４２７  ｐ＜０．０１）。さらに、事後分析から、５および１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ−ＩＩ−７５が溶媒群＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１と比較して不動を有意に減少させることが確認された。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０４】
[００２０２]  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２による処置後の強制水泳試験の結果：Ｔ検定分析は、溶媒（ｔ検定、＊ｐ＜０．０５）と比較したＭＰ−ＩＩＩ−０２２（１０ｍｇ／ｋｇ）の不動時間における有意な減少を明らかにした。（図１７）。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０５】
[００２０３]  ＧＬ−Ｉ−５４による処置後の強制水泳試験の結果：Ｔ検定分析は、溶媒（ｔ検定、＊＊＊ｐ＜０．００１）と比較したＧＬ−Ｉ−５４（５ｍｇ／ｋｇ）の不動時間における有意な減少を明らかにした。（図１８）。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０６】
[００２０４]  ＧＬ−ＩＩ−５４による処置後の強制水泳試験の結果：Ｔ検定分析は、溶媒（ｔ検定、＊ｐ＜０．０５）と比較したＧＬ−ＩＩ−５４（１０ｍｇ／ｋｇ）の不動時間における有意な減少を明らかにした。（図１９）。これらの結果は、この化合物の抗うつ剤としての潜在的な効能を示唆している。
【０２０７】
【表３】
2019509340.tif 000043
【０２０８】
実施例２０：自発運動
[００２０５]  ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７５およびＭＰ−ＩＩＩ−０２２のホームケージ自発運動の変化を定量して、暗い照明条件下での動物の動きを評価し、異なる化合物の潜在的な鎮静作用を検出した。マウスは、ホームケージ（２８．２×１７．１ｃｍ）に類似した、清潔なケージ内に入れられ、上からのビデオ記録を可能にするため敷材および蓋は入れなかった。タッキングを行い、ＡＮＹ−Ｍａｚｅ（商標）追跡ソフトウェア（バージョン４９９ｚ）を用いて移動距離（３０分間のセッション）を分析して、ホームケージ環境における自発運動を評価した。動物は試験の１時間前に化合物または溶媒溶液の単回投与を受けた。
【０２０９】
[００２０６]  薬物の調製および投与：全ての薬物を、８５％Ｈ２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％Ｔｗｅｅｎ８０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む溶媒溶液で希釈した。作用溶液を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に合わせて調整して腹腔内投与した。使用した用量は、１、５または１０ｍｇ／ｋｇであった。全ての自発運動実験につき、試験開始１時間前に、動物は溶媒またはαＰＡＭを腹腔内に急性的に注射された。
【０２１０】
[００２０７]  ＧＬ−ＩＩ−７３による処置後の自発運動の結果：データ分析は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（３，３６）＝３．８、ｐ＝０．０１６）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ分析は、溶媒群と比較して、１ｍｇ／ｋｇでのＧＬ−ＩＩ−７３の有意な効果および５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ（それぞれｐ＜０．０５およびｐ＜０．００１）での自発運動の有意な増加を示さなかった。（図２０）。これらの結果は、化合物の鎮静効果を示唆していない。
【０２１１】
[００２０８]  ＧＬ−ＩＩ−７４による処置後の自発運動の結果：データ分析は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（３，３４）＝３．１８；ｐ＝０．０３８１）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析は、溶媒群と比較して、低用量（１または５ｍｇ／ｋｇ）でのＧＬ−ＩＩ−７４の有意な効果および１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）での有意な増加を示さなかった。（図２１）これらの結果は、化合物の鎮静効果を示唆していない。
【０２１２】
[００２０９]  ＧＬ−ＩＩ−７５による処置後の自発運動の結果：データ分析は、群間で有意差を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（３，３６）＝７．０３８；ｐ＝０．０００８）。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ事後分析は、溶媒群と比較して、５ｍｇ／ｋｇでのＧＬ−ＩＩ−７５の有意な効果および１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ（それぞれｐ＜０．０５およびｐ＜０．００１）での自発運動の有意な増加を示さなかった。（図２２）。これらの結果は、化合物の鎮静効果を示唆していない。
【０２１３】
[００２１０]  ＭＰ−ＩＩＩ−０２２による処置後の自発運動の結果：データ解析は、ＭＰ−ＩＩＩ−０２２と溶媒群との間で有意差を示さなかった（ｐ＝０．５２）。（図２３）。これらの結果は、化合物の鎮静効果を示唆していない。ラットにおいて、さらなるリガンドによって誘発された自発運動の変化を評価するための手順。全てが１０ｍｇ／ｋｇで投与された、ＲＶ−ＩＩ−０４、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、ＧＬ−Ｉ−５４、ＧＬ−ＩＩＩ−２３、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４およびＧＬ−Ｉ−６５の自発運動に対する影響を、体重３５０〜４００ｇの実験的に未処置の成体雄Ｗｉｓｔａｒラット（ｎ＝４８）において評価した。試験は、暗赤色光（２０ルクス）下で４つの白色および不透明なプレキシグラスチャンバ（４０×２５×３５ｃｍ）からなる装置内で行った。装置の上に取り付けられたデジタルカメラは動物の活動を記録し、これはＡＮＹ−ｍａｚｅ  Ｖｉｄｅｏ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｃｏ、Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ、ＩＬ、ＵＳＡ）を使用して追跡および分析された。配位子を、８５％蒸留水、１４％プロピレングリコールおよび１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む溶媒（ＳＯＬ）中で超音波処理を用いて溶解／懸濁させた。各リガンドの１０ｍｇ／ｋｇ用量またはＳＯＬを１０ｍｌ／ｋｇの容量で腹腔内投与し、単一のラットを直ちにチャンバーの中心に置いた。活動は合計６０分間追跡された。各試験の後に、希釈したエタノールでチャンバーを清掃した。ＳｉｇｍａＰｌｏｔ１１ソフトウェア（Ｓｙｓｔａｔ、ＵＳＡ）で統計分析（一元ＡＮＯＶＡおよび適用可能な場合、事後ＳＮＫ検定）を実施した。さらなるリガンドで処理した後の自発運動評価の結果：ラットが６０分間の記録中に移動した全距離を図２４ａに示し、５分間容器で移動した距離を図２４ｂに示す。ＡＮＯＶＡは、６０分間に移動した全距離の有意差を示した（Ｆ（８，４０）＝４．７１、Ｐ＜０．００１）。事後検定によれば、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、特にＲＶ−ＩＩ−０４は、著明な鎮静を誘導した。５分間隔の二元反復測定ＡＮＯＶＡは、全ての因子の有意な効果を示した（処置：Ｆ（８，４４０）＝４．７１、Ｐ＜０．００１、時間：Ｆ（１１，４４０）＝４５．８８、Ｐ＜０．００１；相互作用：Ｆ（８８，４４０）＝１．９６、Ｐ＜０．００１）。ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、特にＲＶ−ＩＩ−０４は、記録のほぼ全期間において、鎮静を誘導することが示された。
【０２１４】
実施例２１：自発運動協調
[００２１１]  手順：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＷＩＬ、ＭＡからの、雌スイスウェブスターマウス（１０週齢）を実験に使用した。動物は、湿度、温度、および制御された１２時間の明暗サイクルの標準的条件下で、特定の病原体のない条件下で収容され、食物および水は自由に摂取した。感覚運動ロータロッド試験は、注射の１０、３０または６０分後に行った。マウスを１５ｒｐｍで最大３分間、ロータロッド上で試験され、落下時間が記録された。３分間の試験期間前の落下により、化合物によって誘発された自発運動協調障害を評価する。
【０２１５】
[００２１２]  薬物の調製および投与：マウス（Ｎ＝１０／群）は、試験化合物（４０ｍｇ／ｋｇ）、ジアゼパム（５ｍｇ／ｋｇ）または溶媒（２％ポリエチレングリコール、２．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液）の経口経管栄養による単回投与を受けた。
【０２１６】
[００２１３]  自発運動協調評価の結果：ジアゼパム陽性対照（５ｍｇ／ｋｇ）を含む大部分の化合物は、１０分、続いて３０分と６０分で感覚運動の安定性を示した。最も重度の運動障害を引き起こした化合物は、ＲＶ−ＩＩ−０４、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、およびＧＬ−Ｉ−５４であった。これらの結果は、これらの３つの化合物の鎮静効果を示唆している。感覚運動障害を示さないこの一連の化合物は、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４、ＧＬ−Ｉ−６５、ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４およびＧＬ−ＩＩ−７６である。（図２５）。これらの結果は、これらの化合物の鎮静作用を示唆していない。
【０２１７】
実施例２２：電気生理学
[００２１４]  手順：哺乳動物細胞のトランスフェクトおよび電気生理学的記録。哺乳類の発現ベクター中のＧＡＢＡＡ受容体サブタイプに関する完全長ｃＤＮＡ（Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＤｒ．Ｄａｖｉｄ  Ｗｅｉｓｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸによって十分に提供されている）をヒト胚性腎細胞株ＨＥＫ−２９３Ｔ（ＧｅｎＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ）（Ｃｈｅｓｔｎｕｔ  ｅｔ  ａｌ，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１９３，１７−２７）にトランスフェクトした。全てのサブタイプはヒトクローンであるα２を除いてラットクローンであった。細胞を、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％ウシ胎仔血清、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン中で維持した。
【０２１８】
[００２１５]  ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞を、リン酸カルシウム沈殿を用いて一過的にトランスフェクトした。ＧＡＢＡＡ受容体サブタイプｃＤＮＡをコードするプラスミドを各２μｇの１：１：１比（α：β：γ）で細胞に添加した。３１  陽性トランスフェクトした細胞の同定のために、ｓＦｖ表面抗体をコードするｃＤＮＡを含有するプラスミドｐＨｏｏｋ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ  ＮＹ）もまた、細胞にトランスフェクトした。１１  ３％ＣＯ２で４〜６時間インキュベートした後、細胞をＢＢＳ緩衝液中１５％グリセロール溶液（５０ｍＭ  ＢＥＳ（Ｎ、Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、２８０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４）で３０秒間処置した。ｐＨｏｏｋ発現の選択手順は１８〜５２時間後に行った。細胞を継代し、ｐＨｏｏｋ抗体（約６×１０５ビーズ）の抗原で被覆した磁性ビーズ３〜５μＬと３０〜６０分間混合した。１１  ビーズ被覆細胞を、磁気スタンドを用いて単離した。選択された細胞を補充ＤＭＥＭに再懸濁し、ポリＬ−リジンおよびコラーゲンで処理したガラスカバーガラス上に播種し、翌日の記録に使用した。
【０２１９】
[００２１６]  細胞を全細胞記録形態で−５０ｍＶでパッチクランプした。浴溶液は、ｐＨ＝７．４、浸透圧は２９５〜３０５ｍＯｓｍに調整された、１４２ＮａＣｌ、８．１ＫＣｌ、６ＭｇＣｌ２、１ＣａＣｌ２、および１０ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）からなる（単位はｍＭ）。記録電極を、ｐＨ＝７．４、浸透圧は２９５〜３０５ｍＯｓｍに調整された、１５３ＫＣｌ、１ＭｇＣｌ２、５Ｋ−ＥＧＴＡ（エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテルＮ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラアセテート）および１０ＨＥＰＥＳの溶液（単位はｍＭ）で充填した。ＧＡＢＡは、水中で、新しく作製され、または凍結したストックから、浴溶液に希釈した。化合物をＤＭＳＯに溶解し、０．０１％の細胞に適用した最も高いＤＭＳＯレベルで浴溶液に希釈した。パッチピペットを２ステージプラー（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ，Ｊａｐａｎ）上でホウケイ酸ガラス（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）から５〜１０ＭΩの抵抗まで引き上げた。ＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ＋化合物を含有する溶液を、コンピューター駆動のステッパーモーター（ＳＦ−７７Ｂ，Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，＜５０ｍｓの先端交換時間）によって制御される３バレルの溶液送達装置を使用して、細胞に５秒間適用した。チャンバーを通る外部溶液の連続的流れが存在した。電流は、Ａｘｏｎ２００Ｂ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）パッチクランプ増幅器で記録した。
【０２２０】
[００２１７]  全細胞電流を、Ｃｌａｍｐｆｉｔ（ｐＣｌａｍｐ９  ｓｕｉｔｅ，Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）およびＰｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）プログラムを用いて分析した。濃度−応答データは、４パラメータロジスティック方程式（電流＝［最小電流＋（最大電流−最小電流）］／１＋（１０（ｌｏｇＥＣ５０−ｌｏｇ［モジュレーター］）ｎ）で適合させた。ここで、ｎはＨｉｌｌ数を表す。各細胞につきＧＡＢＡ単独に対する応答のパーセンテージとして表される電流の正規化されたデータに対し、全ての適合が行われた。
【０２２１】
[００２１８]  電気生理学的アッセイの結果：１μＭ濃度でのＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７５およびＧＬ−ＩＩ−７６への曝露は、α５サブユニットでトランスフェクトした細胞におけるＧＡＢＡに対する応答％の増加を誘発した。ＧＬ−ＩＩ−７３、７４および７５は最大の応答を示し（図２６）、これらの化合物がα５サブユニットに対して高い親和性を有することを示唆している。
【０２２２】
実施例２３：マウスおよびラットにおけるα−ＰＡＭ化合物の薬物動態。
[００２１９]  手順：２．５ｍｇ／ｋｇ用量の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後のラット血漿および脳におけるＭＰ−ＩＩＩ−０２２の濃度−時間プロファイルは、計算された薬物動態学的パラメータならびに広範囲の用量（１、２．５、１０、１５および２０ｍｇ／ｋｇ）での腹腔内投与後の血漿および脳濃度とともに、Ｓｔａｍｅｎｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１６，７９１，４３３−４４３）において既に示されている。このデータは、Ｗｉｓｔａｒラットにおいて、やや短い末端消失半減期を有するが（血漿および脳につき、それぞれ３５分および７０分のｔ１／２）、単回投与後のＭＰ−ＩＩＩ−０２２に対する優れた全身および脳曝露を示した。
【０２２３】
[００２２０]  他の１２種類の合成化合物の薬物動態学的特性：ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７５、ＧＬ−ＩＩ−７６、ＲＶ−ＩＩ−０４、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、ＧＬ−Ｉ−５４、ＧＬ−ＩＩＩ−２３、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４およびＧＬ−Ｉ−６５を、成体雄Ｗｉｓｔａｒラット（Ｍｉｌｉｔａｒｙ  Ｆａｒｍ、Ｂｅｌｇｒａｄｅ、Ｓｅｒｂｉａ）およびＣ５７／ＢＬ６マウス（Ｍｉｌｉｔａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ、Ｓｅｒｂｉａ）で試験した。ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７５およびＧＬ−ＩＩ−７６の動態的挙動は、４つのリガンド全てのカセット投薬（Ｗｈｉｔｅ  ａｎｄ  Ｍａｎｉｔｐｉｓｉｔｋｕｌ，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．Ｄｉｓｐ．２００１，２９，９５７−６６；Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ  ２０１３，５，１６９１−７０１）または経口経管栄養もしくは腹腔内投与によって、マウスおよびラットの両方において、１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのいずれかで注射し、投与後２０分または２時間のいずれかで屠殺して、最初に評価された。用量、経路、時間および種（各時点当たり３匹）の各２つを用いたこのようなパイロット研究により、血漿、肝臓および脳組織中のリガンド濃度を測定し、相互作用する可能性を評価することができた。両方の用量での化合物の推定相対比は、リガンドが相互作用を受けにくいことを示唆し、これは、単一処置として適用されるＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４およびＧＬ−ＩＩ−７５のさらなる試験によって確認された。ＧＬ−ＩＩ−７６は、その脳濃度がＣＮＳ活性薬物としての推定使用に対して最適以下であったため、それ以上の薬物動態試験を受けなかった。単なる一例として、１０ｍｇ／ｋｇで投与した腹腔内注射の２０分後に屠殺したマウスにおけるＧＬ−ＩＩ−７６の血漿、肝臓および脳濃度の測定値は、それぞれ６０４．８７±１９８．００ｎｇ／ｍｌ、４３６０．２５±１５６８，０１ｎｇ／ｇおよび２０４．４５±１００．８５ｎｇ／ｇであった。このパイロット実験からの他のデータは提示されていない。
【０２２４】
[００２２１]  したがって、第２の一連の実験では、３ｍｇ／ｋｇの用量のＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４およびＧＬ−ＩＩ−７５は、ラットにおいて経口経管栄養または静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、また、１０ｍｇ／ｋｇでマウスにおいて腹腔内投与によって、単独で投与され、得られた血漿または脳の濃度−時間曲線を図２８〜３０に示す。図３１〜３４に示す第３の一連の実験では、リガンドＲＶ−ＩＩ−０４、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３およびＧＬ−Ｉ−５４は、マウスおよびラットの両方において、３ｍｇ／ｋｇで各３つの経路（経口経管栄養、静脈内および腹腔内注射）を介したカセットとして投与された。第４の一連の実験は、先の実験に類似しており、図３５〜３８に示すように、マウスおよびラットにおけるＧＬ−ＩＩＩ−２３、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４およびＧＬ−Ｉ−６５の薬物動態学的プロファイルを評価した。全ての値は、血漿（ｎｇ／ｍＬ）または脳（ｎｇ／ｇ）における総濃度を表す。
【０２２５】
[００２２２]  第２〜第４の一連の実験においてラットまたはマウスを５つの動物群に分けた。各群は３匹の動物を含み、所定の時間間隔（５、２０、６０、１８０または２４０、および７２０分）に対応していた。化合物の剤形は、８５％蒸留水、１４％プロピレングリコールおよび１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む溶媒中で超音波処理を用いて希釈することによって調製した。ケタミンおよびキシラジン混合物の９０ｍｇ／ｋｇ＋１６ｍｇ／ｋｇ（１０％Ｋｅｔａｍｉｄｏｒ，Ｒｉｃｈｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａ  Ａｇ，Ａｕｓｔｒｉａ、およびＸｙｌａｓｅｄ，２０ｍｇ／ｍｌ，Ｂｉｏｖｅｔａ，Ａ．Ｓ．，Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）での腹腔内投与で麻酔したラットの心臓穿刺により、血液試料をヘパリン化注射器に採取し、８００ｒｃｆで１０分間遠心分離して血漿を得た。動物を断頭し、脳を秤量し、５ｍｌ（ラット）または１．２５ｍｌ（マウス）のメタノールでホモジナイズし、６０００ｒｃｆで２０分間遠心分離した。血漿および脳組織ホモジネートの上清中のリガンドの濃度を決定するために、Ｏａｓｉｓ  ＨＬＢカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて固相抽出によってこれらの試料から抽出した。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ａｃｃｅｓｓ  ＭＡＸ三連四重極質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に接続され、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源を備えた、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｃｃｅｌａ  ６００  ＵＰＬＣシステムを用いた超高速液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によるベンゾジアゼピン結合部位に対するリガンドの試料調製および決定で用いられる手順は、文献に詳細が記載されている（例えば、Ｏｂｒａｄｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２０１４，１５５４，３６−４８）。
【０２２６】
[００２２３]  非区画薬物動態分析は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌソフトウェア用ＰＫ関数（Ｊｏｅｌ  Ｕｓａｎｓｋｙ、Ａｔｕｌ  Ｄｅｓａｉ、およびＤｉａｎｅ  Ｔａｎｇ−Ｌｉｕｗｅｒｅによる）を用いて行い、市販の統計ソフトＳｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ１１（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）でグラフを作成した。脳−血漿分配係数は以下のように計算した：ＫＰ＝ＡＵＣ０−∞、脳／ＡＵＣ０−∞、血漿、ここでＡＵＣ０−∞は、濃度対時間曲線下の０から無限大までの面積を表す。経口バイオアベイラビリティ（Ｆ）は、式：
【０２２７】
【数１】
2019509340.tif 000044
【０２２８】
（式中、ＤＩＶおよびＤＰＯは静脈内および経口投与を表し、ＡＵＣＩＶおよびＡＵＣＰＯはそれぞれ化合物の静脈内および経口投与後のＡＵＣ０−∞である）を用いて計算した。
【０２２９】
[００２２４]  新規リガンドについて得られたマウスおよびラットにおける薬物動態パラメータの結果：ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７５、ＲＶ−ＩＩ−０４、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、ＧＬ−Ｉ−５４、ＧＬ−ＩＩＩ−２３、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−５４およびＧＬ−Ｉ−６５は、図２７に示されている。各濃度−時間プロファイル（図２８〜３８）を並行して考慮すると、血漿中のＡＵＣおよびＣｍａｘ値によって証明されるように、全身曝露における試験リガンドの可能性は投与経路に関係なく、一般的にきわめて高いと結論付けることができる。さらに、インビボ研究のために非常に重要である、１１のリガンドは全て、ＧＩ−ＩＩ−７６を除いて脳浸透性でもある。マウスにおける腹腔内投与後に計算されたＫｐ値は、小数点第２位までに四捨五入され、ＧＬ−ＩＩ−７３につき０．３０、ＧＬ−ＩＩ−７４につき１．０６、ＧＬ−ＩＩ−７５につき０．８０、ＲＶ−ＩＩ−０４につき１．１５、ＧＬ−ＩＩ−３１につき０．３３、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３につき１．１５、ＧＬ−Ｉ−５４につき０．１９、ＧＬ−ＩＩＩ−２３につき２．３７、ＧＬ−ＩＩ−３３につき１．４６、ＧＬ−ＩＩ−５４につき１．１７、ＧＬ−Ｉ−６５につき１．２９である。一般的に言えば、このパラメータの値が１に近いかまたはそれより大きいことは、リガンドの優れた脳標的化を示唆している。インビボで得られた濃度とインビトロで使用された濃度との比較を容易にするために、質量濃度の他にモル濃度での動態結果を表すことが例示的である。３ｍｇ／ｋｇでの腹腔内投与の後、リガンドＧＬ−ＩＩ−３１、ＧＬ−ＩＩ−３３およびＧＬ−Ｉ−６５は中〜高サブミクロン濃度に達し、リガンドＧＬ−Ｉ−５４およびＧＬ−ＩＩ−５４は高サブミクロン〜低マイクロモル値に達し、リガンドＲＶ−ＩＩ−０４、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３およびＧＬ−ＩＩＩ−２３は、マウス脳組織においてマイクロモル濃度に達した。１０ｍｇ／ｋｇ用量の後、ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４およびＧＬ−ＩＩ−７５は、脳濃度がマイクロモル範囲であった。同様に、ラット脳組織においても中〜高サブミクロンまたはマイクロモル値が測定された。
【０２３０】
実施例２４：ヒトおよびマウスの肝ミクロソーム−方法
[００２２５]  ヒト肝ミクロソームおよびマウス肝ミクロソームは、ＢＤ  Ｇｅｎｔｅｓｔから得た。
【０２３１】
[００２２６]  手順：各評価は、一度に３つ、異なる２日で実施された６つの独立したアッセイを含んでいた
１．  溶液の調製：
ａ．ＤＭＳＯ中の１ｍＭ試験化合物。
ｂ．内部標準（ＩＳＴＤ）としてのアセトニトリル中の５μＭベラパミル（氷上保存）。
【０２３２】
２．  ７時点について十分である、ミクロソームアッセイ混合物（ＭＡＭ）の総容量３９０μＬにつき、以下を組み合わせる
ａ．１８．２ｍΩの水２８２μＬ。
ｂ．８０μＬの０．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）
ｃ．２０μＬのＮＡＤＰＨ  Ａ。（コーニングライフサイエンス、カタログ番号４５１２２０）
ｄ．４μＬのＮＡＤＰＨ  Ｂ．（コーニングライフサイエンス、カタログ番号４５１２００）
ｅ．４μＬの試験化合物。
【０２３３】
３．  ５分間ＭＡＭを超音波処理し、一方、氷上でミクロソーム（２０ｍｇ／ｍＬ）（ＢＤ  Ｇｅｎｔｅｓｔ、カタログ番号４５２１５６）を解凍する。
４．  １００μＬの氷冷ＩＳＴＤを７つの別々の１．５ｍＬ円錐バイアルに分注し、０、１０、２０、４０、６０、９０および１２０分間の時点につきそれらを標識する。
【０２３４】
５．  タイマーを配置する。ミクロソーム（最終濃度０．５ｍｇ／ｍＬ）は、ゼロ時点以外の全ての時点に加えなければならない。
６．  ゼロ時点として標識された円錐バイアルに５０μＬのＭＡＭ溶液を加える。残りのＭＡＭ溶液をインキュベーター（３７℃）に５分間留置し、ミクロソーム（８．８μＬ）を添加して反応を開始し、時間を記録する。
【０２３５】
７．  各時間間隔の終わりに、５０μＬを除去し、円錐バイアル中でＩＳＴＤに１００μＬを加え、１０秒間超音波処理し、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心沈殿させる。
８．  １００μＬの上清を取り、Ｓｐｉｎ−Ｘ  ＨＰＬＣフィルターチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、カタログ番号８１６９）に移し、１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、この溶液から５μＬを取って、２ｍＬガラスオートサンプラーバイアル（Ｍｉｃｒｏｓｏｌｖ、カタログ番号９５０２５−ＷＣＶ）中、４９５μＬのＬＣＭＳグレードのメタノール（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＣＡＳ番号６７−５６−１）で希釈する。
【０２３６】
９．  試料をＬＣＭＳ−８０４０で分析する。（島津）
[００２２７]  計算：ピーク面積から、以下を計算する
【０２３７】
【数２】
2019509340.tif 000045
【０２３８】
（Ｔ＝０、１０、２０、３０、４０、５０、６０および１２０分）
[００２２８]  化合物を、１０μＭ濃度のヒトおよびマウス肝ミクロソームにおける代謝安定性について試験する。２時間の終わりの化合物の半減期および残存％を以下の表に示す。
【０２３９】
【表４】
2019509340.tif 000046
【０２４０】
[００２２９]  ヒトまたはマウス肝ミクロソーム（それぞれＨＬＭおよびＭＬＭ）における薬物動態。半減期は分で表し、１または２時間後の化合物の残存量は％で表す。
[００２３０]  代謝アッセイの結果：ヒト肝ミクロソームでは、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３、ＧＬ−ＩＩ−３３、ＧＬ−ＩＩ−７３、ＧＬ−ＩＩ−７４およびＧＬ−ＩＩ−７５が調査された化合物の中で最も安定である。各化合物の９０％超が、それぞれ１時間または２時間後に残存していた。ＭＰ−ＩＩＩ−０２２とＭＰ−ＩＩＩ−０２３の比較から、Ｓ−エナンチオマー（ＭＰ−ＩＩＩ−０２３）はＲ−エナンチオマーＭＰ−ＩＩＩ−０２２よりも安定であることが示された。Ｓ−エナンチオマーＧＬ−Ｉ−５４よりも安定であったＧＬ−ＩＩ−７３（Ｒ−エナンチオマー）について、反対の関係が観察された。他の全ての化合物は、ＧＬ−Ｉ−５４を除いて、ＨＬＭの存在下で安定であり、１時間または２時間後に７０％を超えて残存していた。
【０２４１】
[００２３１]  マウス肝ミクロソームでは、ＧＬ−ＩＩ−３１、ＧＬ−ＩＩＩ−２３およびＧＬ−ＩＩ−５４が最も安定な化合物であり、２時間後に９０％を超えて残存していた。エナンチオマーの安定性に関して、ＧＬ−ＩＩ−７３は、マウス肝ミクロソームにおいてＧＬ−Ｉ−５４よりも安定であり（８１．６％対１５．０％）、ＭＰ−ＩＩＩ−０２３はＭＰ−ＩＩＩ−０２２よりも安定であった（８４．６％対７６．６％）。他の全ての化合物は、ＧＬ−ＩＩ−７４、ＧＬ−ＩＩ−７６およびＧＬ−Ｉ−５４を除いて、ＨＬＭの存在下で安定であり、１時間または２時間後に７０％を超えて残存していた。
【０２４２】
[００２３２]  ヒトおよびマウス肝ミクロソームの両方において、全てのオキサジアゾールは安定であり、２時間後に８０％を超えて残存していた。２時間後、ヒト肝ミクロソームの存在下でＧＬ−ＩＩ−３３の９５．３％が残存していた。マウス肝ミクロソームの存在下では、２時間後にＧＬ−ＩＩＩ−２３およびＧＬ−ＩＩ−５４の９０％超が残存していた。中等度から高度の安定性を有する化合物は、治療適応と考えられる。
【０２４３】
実施例２５：細胞毒性アッセイ
[００２３３]  細胞株の培養および手順：ヒト肝臓肝細胞癌（ＨＥＰＧ２）およびヒト胚性腎２９３（ＨＥＫ２９３）細胞株を購入し（ＡＴＣＣ）、７５ｃｍ２のフラスコ（ＣｅｌｌＳｔａｒ）で培養した。細胞は、非必須アミノ酸（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３０２３８．０１）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３０２２３７．０１）、５×１０６単位のペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＶ３００１０）ならびに１０％の熱不活性化ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、＃１００８２１４７）を添加した、ＤＭＥＭ／高グルコース（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３０２４３０１）培地で培養された。０．０５％トリプシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３０２３６０１）を用いて細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、滅菌白色光学底３８４ウェルプレート（ＮＵＮＣ、＃１４２７６２）に分注した。３時間後、小分子溶液を、１００ｎＬピンツール（Ｖ＆Ｐ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を備えたＴｅｃａｎ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ＥＶＯ液体ハンドリングシステムで移した。対照（Ｅ）−１０−（ブロモトリフェニルホスホラニル）デシル４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）−４−オキソブタ−２−エノアート（ＤＭＳＯ中４００μＭ、陽性対照）およびＤＭＳＯ（陰性対照）。細胞を４８時間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）を添加し、発光ベースの細胞生存性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を行った。全ての発光読み取りは、Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００プレートリーダーで行った。このアッセイは、３回の独立した操作で、４連で実施した。データを対照に対して正規化し、非線形回帰（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）によって分析した。
【０２４４】
【表５】
2019509340.tif 000047
【０２４５】
[００２３４]  細胞毒性アッセイの結果は、試験化合物が様々な高濃度でそれぞれの細胞株に対して毒性でないことを実証する。
実施例２６：オキサジアゾールの薬力学的評価
[００２３５]  ＭＰ−ＩＩＩ−０８０およびＭＰ−ＩＩＩ−０８５の抗不安様作用をガラス玉覆い隠しアッセイを用いてマウスで評価した。１０ｍｇ／ｋｇでは、オキサジアゾールＭＰ−ＩＩＩ−０８０は溶媒と比較してガラス玉覆い隠しを有意に減少させた。３０ｍｇ／ｋｇでは、ＭＰ−ＩＩＩ−０８５およびＭＰ−ＩＩＩ−０８０はガラス玉覆い隠しを有意に減少させた。しかしながら、３０ｍｇ／ｋｇのＭＰ−ＩＩＩ−０８０で処置したマウスは、鎮静の兆候が弱かった。これらの化合物の抗不安対運動副作用の潜在性を評価するために、回転ロッド（ロータロッド）上のマウスを用いた運動感覚研究をガラス玉覆い隠しについて研究したのと同じマウスで行った。雄、ＮＩＨスイスウェブスターマウス（ｎ＝１０）に、試験の３０分前に溶媒または試験化合物（１０または３０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを腹腔内注射した。
【０２４６】
[００２３６]  本開示の様々な特徴および利点は、添付の特許請求の範囲に記載される。
【図１】
2019509340.tif 000067
【図２】
2019509340.tif 000068
【図３】
2019509340.tif 000069
【図４】
2019509340.tif 000070
【図５】
2019509340.tif 000071
【図６】
2019509340.tif 000072
【図７】
2019509340.tif 000073
【図８】
2019509340.tif 000074
【図９】
2019509340.tif 000075
【図１０】
2019509340.tif 000076
【図１１Ａ】
2019509340.tif 000077
【図１１Ｂ】
2019509340.tif 000078
【図１１Ｃ】
2019509340.tif 000079
【図１１Ｄ】
2019509340.tif 000080
【図１２Ａ】
2019509340.tif 000081
【図１２Ｂ】
2019509340.tif 000082
【図１３】
2019509340.tif 000083
【図１４】
2019509340.tif 000084
【図１５】
2019509340.tif 000085
【図１６】
2019509340.tif 000086
【図１７】
2019509340.tif 000087
【図１８】
2019509340.tif 000088
【図１９】
2019509340.tif 000089
【図２０】
2019509340.tif 000090
【図２１】
2019509340.tif 000091
【図２２】
2019509340.tif 000092
【図２３】
2019509340.tif 000093
【図２４Ａ】
2019509340.tif 000094
【図２４Ｂ】
2019509340.tif 000095
【図２５】
2019509340.tif 000096
【図２６】
2019509340.tif 000097
【図２７−１】
2019509340.tif 000098
【図２７−２】
2019509340.tif 000099
【図２７−３】
2019509340.tif 000100
【図２７−４】
2019509340.tif 000101
【図２７−５】
2019509340.tif 000102
【図２７−６】
2019509340.tif 000103
【図２７−７】
2019509340.tif 000104
【図２７−８】
2019509340.tif 000105
【図２７−９】
2019509340.tif 000106
【図２７−１０】
2019509340.tif 000107
【図２７−１１】
2019509340.tif 000108
【図２７−１２】
2019509340.tif 000109
【図２７−１３】
2019509340.tif 000110
【図２８Ａ】
2019509340.tif 000111
【図２８Ｂ】
2019509340.tif 000112
【図２９Ａ】
2019509340.tif 000113
【図２９Ｂ】
2019509340.tif 000114
【図３０】
2019509340.tif 000115
【図３１Ａ】
2019509340.tif 000116
【図３１Ｂ】
2019509340.tif 000117
【図３１Ｃ】
2019509340.tif 000118
【図３１Ｄ】
2019509340.tif 000119
【図３２Ａ】
2019509340.tif 000120
【図３２Ｂ】
2019509340.tif 000121
【図３２Ｃ】
2019509340.tif 000122
【図３２Ｄ】
2019509340.tif 000123
【図３３Ａ】
2019509340.tif 000124
【図３３Ｂ】
2019509340.tif 000125
【図３３Ｃ】
2019509340.tif 000126
【図３３Ｄ】
2019509340.tif 000127
【図３４Ａ】
2019509340.tif 000128
【図３４Ｂ】
2019509340.tif 000129
【図３４Ｃ】
2019509340.tif 000130
【図３４Ｄ】
2019509340.tif 000131
【図３５Ａ】
2019509340.tif 000132
【図３５Ｂ】
2019509340.tif 000133
【図３５Ｃ】
2019509340.tif 000134
【図３５Ｄ】
2019509340.tif 000135
【図３６Ａ】
2019509340.tif 000136
【図３６Ｂ】
2019509340.tif 000137
【図３６Ｃ】
2019509340.tif 000138
【図３６Ｄ】
2019509340.tif 000139
【図３７Ａ】
2019509340.tif 000140
【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３７Ｄ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【国際調査報告】
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