(57)【要約】  本発明は、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を用いて組織における代謝調節型グルタミン酸受容体ｍＧｌｕ２および３をイメージングおよび定量するのに有用である、他のｍＧｌｕ受容体よりも選択的な新規の放射性標識ｍＧｌｕＲ２／３リガンドに関する。本発明は、このような化合物を含む組成物、このような化合物および組成物を調製するためのプロセス、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするためのこのような化合物および組成物の使用、ならびに前記化合物の前駆体も対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍＧｌｕ２および３受容体をイメージングまたは定量することにおける使用のための、式（Ｉ）
【化１】
2019502700.tif 000031
（式中、Ｒ１は、−ＣＨ２Ｆであり、およびＲ２は、−Ｈであるか、またはＲ１は、−Ｈであり、およびＲ２は、−ＣＨ２Ｆであり、少なくとも１つの原子は、放射活性である）に従う化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
式
【化２】
2019502700.tif 000032
を有する、請求項１に記載の使用のための化合物またはその溶媒和物の薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
式
【化３】
2019502700.tif 000033
を有する、請求項１に記載の使用のための化合物またはその溶媒和物の薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
式
【化４】
2019502700.tif 000034
の放射性標識化合物またはその溶媒和物の薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
式
【化５】
2019502700.tif 000035
の放射性標識化合物またはその溶媒和物の薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む滅菌医薬組成物。
【請求項７】
滅菌溶液である、請求項６に記載の滅菌医薬組成物。
【請求項８】
前記ｍＧｌｕ２および３受容体をイメージングまたは定量することにおける使用のための、請求項６または７に記載の滅菌医薬組成物。
【請求項９】
前記イメージングは、他の非放射性標識化合物によるｍＧｌｕ２および３受容体部位占有を決定することを含む、請求項８に記載の使用のための滅菌医薬組成物。
【請求項１０】
組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための造影剤としての使用のための、請求項１〜５の何れか一項に記載の化合物または請求項６もしくは７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
組織、細胞または哺乳動物をイメージングする方法であって、請求項１〜５の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の検出可能な量を組織、細胞または哺乳動物と接触させるかまたはそれに提供することと、前記ｍＧｌｕ２および３受容体と結合する前記標識化合物を検出することとを含む、方法。
【請求項１２】
イメージング技術は、ポジトロン断層撮影である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
【化６】
2019502700.tif 000036
からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項１４】
請求項２に記載の化合物の合成のためのプロセスであって、
（ａ）（ａ−１）塩基および不活性溶媒の存在下で式（Ｐ−１）の化合物をメタンスルホン酸無水物と反応させ、かつ（ａ−２）不活性溶媒中、塩基の存在下において、ステップ（ａ−１）で得られた前記化合物を［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化７】
2019502700.tif 000037
または
（ｂ）不活性溶媒中において塩基の存在下で式（Ｐ−２）の化合物を［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化８】
2019502700.tif 000038
を含む、プロセス。
【請求項１５】
請求項３に記載の化合物の合成のためのプロセスであって、
（ａ）（ａ−１）塩基および不活性溶媒、例えば、トリメチルアミンまたはトリエチルアミンおよびジクロロメタンの存在下で式（Ｐ−３）の化合物をメタンスルホン酸無水物と反応させ、かつ（ａ−２）不活性溶媒中、塩基の存在下において、ステップ（ａ−１）で得られた前記化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化９】
2019502700.tif 000039
または
（ｂ）不活性溶媒中において塩基の存在下で式（Ｐ−４）の化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化１０】
2019502700.tif 000040
を含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を用いて組織における代謝調節型グルタミン酸受容体ｍＧｌｕ２および３をイメージングおよび定量するのに有用である、他のｍＧｌｕ受容体よりも選択的な新規の放射性標識ｍＧｌｕＲ２／３リガンドに関する。本発明は、このような化合物を含む組成物、このような化合物および組成物を調製するためのプロセス、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするためのこのような化合物および組成物の使用、ならびに前記化合物の前駆体も対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ＣＮＳにおけるグルタミン酸作動系は、一部の脳機能において重要な役割を果たす神経伝達物質系の１つである。代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）はＧ−タンパク質共役ファミリーに属し、現在、８つの異なるサブタイプが同定されており、これらは様々な脳領域に分布する（Ｆｅｒｒａｇｕｔｉ＆Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏ，Ｃｅｌｌ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３２６：４８３−５０４，２００６）。ｍＧｌｕＲは、グルタミン酸の結合により、ＣＮＳにおいてシナプス伝達および神経細胞の興奮性の調整に関与する。これは、受容体の細胞内シグナル伝達パートナーへの結合を活性化し、細胞事象につながる（Ｎｉｓｗｅｎｄｅｒ＆Ｃｏｎｎ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ５０：２９５−３２２，２０１０）。
【０００３】
ｍＧｌｕＲは、それらの薬理学的および構造特性に基づいて３つのサブグループ：Ｉ群（ｍＧｌｕＲ１およびｍＧｌｕＲ５）、ＩＩ群（ｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３）、およびＩＩＩ群（ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６、ｍＧｌｕＲ７およびｍＧｌｕＲ８）にさらに分類される。オルソステリックおよびアロステリックの両方で調整するＩＩ群リガンドは、精神障害、気分障害、アルツハイマー病および認知または記憶障害を含め、様々な神経障害の処置において有用である可能性があると考えられる。これは、皮質、海馬および線条体などの脳領域でのそれらの主要な局在と一致する（Ｆｅｒｒａｇｕｔｉ＆Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏ，Ｃｅｌｌ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２６：４８３−５０４，２００６）。特に、アンタゴニストおよび負のアロステリック修飾因子が気分障害および認知または記憶機能不全の処置に対する可能性を保持することが報告されている。これは、これらの臨床症候群に関連するとみなされる一連の実験条件に供される実験動物において試験したＩＩ群受容体アンタゴニストおよび負のアロステリック修飾因子での知見に基づく（Ｇｏｅｌｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６４：３３７−３４６，２０１３）。臨床試験は、例えば、行われている抗うつ薬処置（２０１４年２月１９日に回収した、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  ＮＣＴ０１４５７６７７）に対して不適切な反応を有する大うつ病性障害の患者における補助療法においてｍＧｌｕＲ２／３アンタゴニストＲＯ４９９５８１９（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ．）で進行中である。国際公開第２０１３０６６７３６号パンフレット（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ  Ｃｏｒｐ．）は、ｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭとしてキノリンカルボキサミドおよびキノリンカルボニトリル化合物を記載する。国際公開第２０１３１７４８２２号パンフレット（ドメイン治療薬）は、４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］キナゾリン−５−オンおよび４Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キナゾリン−５−オンおよびそのインビトロｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭ活性を記載する。国際公開第２０１４０６４０２８号パンフレット（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  ＡＧ）は、ｍＧｌｕ２／３の負のアロステリック修飾因子の選択および自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の処置におけるそれらの使用の可能性を開示する。国際公開第２０１４１９５３１１号パンフレット（Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  ＮＶ）は、６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４（５Ｈ）−オン化合物およびｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭとしてのそれらの使用を開示する。
【０００４】
ＩＩ群受容体は、シナプスへのグルタミン酸の放出に対する負のフィードバックループを発揮するシナプス前神経終末に主に局在する（Ｋｅｌｍｅｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３：８０−８６，２００６）。したがって、アンタゴニストまたは負のアロステリック修飾因子によるこれらの受容体の機能的阻害は、グルタミン酸放出に対するブレーキを解除し、その結果、グルタミン酸作動性シグナル伝達が促進される。この効果は、ＩＩ群受容体の阻害剤での前臨床種で観察される抗うつ薬様および認知促進効果の根底をなすと考えられる。さらに、ＩＩ群オルソステリックアンタゴニストでのマウスの処置は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）などの増殖因子によるシグナル伝達を促進することが示されている（Ｋｏｉｋｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３８：４８−５２，２０１３）。ＢＤＮＦおよび他の増殖因子は、介在するシナプス可塑性に決定的に関与することが示されているため、この機序は、これらの化合物の抗うつおよび認知促進特性の両方に寄与すると思われる。したがって、ＩＩ群受容体ファミリーのｍＧｌｕＲの阻害は、うつおよび認知または記憶機能不全を含む神経障害に対する可能性のある治療機序に相当すると考えられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）は、全ての核イメージング技術の最大の空間的および時間的解像度をもたらす非浸潤性イメージング技術であり、組織におけるトレーサー濃度の真の定量を可能にし得るというさらなる長所を有する。これは、検出のために、例えば１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃおよび１８Ｆなどのポジトロン放出核種を使用する。現在、ｍＧｌｕＲのインビボイメージングに対して数種のポジトロン断層撮影放射性トレーサーが報告されている。ＩＩ群ｍＧｌｕ受容体をイメージングするためのポジトロン断層撮影放射性トレーサーの改善をもたらすことが依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2019502700.tif 000002
（式中、Ｒ１は、−ＣＨ２Ｆであり、およびＲ２は、−Ｈであるか、またはＲ１は、−Ｈであり、およびＲ２は、−ＣＨ２Ｆであり、少なくとも１つの原子は、放射活性である）を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物に関する。
【０００７】
特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、化合物１
【化２】
2019502700.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
【０００８】
特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、化合物２
【化３】
2019502700.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
【０００９】
本発明は、化合物１の合成のための前駆体化合物にも関する。したがって、本発明は、式Ｐ−１およびＰ−２
【化４】
2019502700.tif 000005
の化合物ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物にも関する。
【００１０】
本発明は、化合物２の合成のための前駆体化合物にも関する。したがって、本発明は、式Ｐ−３およびＰ−４
【化５】
2019502700.tif 000006
の化合物ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物にも関する。
【００１１】
本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む医薬組成物にも関する。特定の実施形態において、前記医薬組成物は、診断に特に適切であり、したがって診断用医薬組成物と呼ばれ得る。特に、前記医薬組成物は滅菌溶液である。したがって、本発明の例となるものは、本明細書中に記載の式（Ｉ）の化合物を含む滅菌溶液である。
【００１２】
本発明は、造影剤としての式（Ｉ）の化合物の使用にさらに関する。したがって、本発明を例証することは、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための本明細書中に記載のような式（Ｉ）の化合物を使用またはイメージングする方法である。特に、本発明は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための、造影剤としての使用のための本明細書中に記載のような式（Ｉ）の化合物に関する。本発明は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための、造影剤としての使用のための式（Ｉ）の化合物を含む組成物にさらに関する。
【００１３】
本発明は、本明細書中に記載のような式（Ｉ）の標識化合物の検出可能な量を組織、細胞または哺乳動物と接触させるかまたはそれに提供もしくは投与することと、式（Ｉ）の化合物を検出することとを含む、組織、細胞または哺乳動物をイメージングする方法にも関する。
【００１４】
さらに本発明の例となるのは、本明細書中に記載のような式（Ｉ）の化合物を組織、細胞または哺乳動物と接触させるかまたはそれに提供もしくは投与することと、ポジトロン断層撮影イメージング系で組織、細胞または哺乳動物をイメージングすることとを含む、組織、細胞または哺乳動物をイメージングする方法である。さらに、本発明は、本明細書中で記載のような式（Ｉ）に従う化合物の調製のためのプロセスであって、
（ａ）（ａ−１）塩基および不活性溶媒、例えばトリメチルアミンまたはトリエチルアミンおよびジクロロメタンの存在下で式（Ｐ−１）の化合物をメタンスルホン酸無水物と反応させ、かつ（ａ−２）不活性溶媒中、塩基の存在下において、ステップ（ａ−１）で得られた化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化６】
2019502700.tif 000007
または
（ｂ）不活性溶媒中において塩基の存在下で式（Ｐ−２）の化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化７】
2019502700.tif 000008
または
（ｃ）（ｃ−１）塩基および不活性溶媒、例えば、トリメチルアミンまたはトリエチルアミンおよびジクロロメタンの存在下で式（Ｐ−３）の化合物をメタンスルホン酸無水物と反応させ、かつ（ｃ−２）不活性溶媒中、塩基の存在下において、ステップ（ｃ−１）で得られた化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化８】
2019502700.tif 000009
または
（ｄ）不活性溶媒中において塩基の存在下で式（Ｐ−４）の化合物を求核性放射活性フッ素化試薬［１８Ｆ］Ｆ−と反応させるステップ
【化９】
2019502700.tif 000010
を含むプロセスを指す。
【００１５】
ステップ（ａ−２）、（ｂ）、（ｃ−２）および（ｄ）における適切な求核性放射活性フッ素化試薬は、例えば、Ｋ［１８Ｆ］／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２または放射活性フッ素［１８Ｆ］Ｆ−を組み込むテトラアルキルアンモニウム塩である。ステップ（ａ−２）、（ｂ）、（ｃ−２）および（ｄ）における適切な塩基は、例えば、Ｋ２ＣＯ３またはＣｓ２ＣＯ３である。ステップ（ａ−２）、（ｂ）、（ｃ−２）および（ｄ）における適切な溶媒は、例えば、ＤＭＳＯ、ＣＨ３ＣＮまたはＤＭＦであり、任意選択により少量の水の添加を伴う。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１ａ】ＳＤラットの脳領域における［１８Ｆ］−１の体内分布を示す。
【図１ｂ】ＳＤラットの末梢における［１８Ｆ］−１の体内分布を示す。
【図２】ＳＤラットにおける、この図面でｍＧｌｕ２／３ＮＡＭとして示される化合物Ａ（ＮＡＭ化合物、他のｍＧｌｕＲと比較してｍＧｌｕ２／３に対して選択的（３よりも２に対して約２０倍選択的））の処置ありまたはなしでの［１８Ｆ］−１の取り込みに対する時間活性曲線を示す。
【図３ａ】ＳＤラットの脳領域における［１８Ｆ］−２の体内分布を示す。
【図３ｂ】ＳＤラットの末梢における［１８Ｆ］−２の体内分布を示す。
【図４】ＳＤラットにおける、この図面でｍＧｌｕ２／３ＮＡＭとして示される化合物Ａ（ＮＡＭ化合物、他のｍＧｌｕＲと比較してｍＧｌｕ２／３に対して選択的（３よりも２に対して約２０倍選択的））の処置ありまたはなしでの［１８Ｆ］−２の取り込みに対する時間活性曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
図２および４において次の凡例を使用する。
【００１８】
【表１】
2019502700.tif 000011
【００１９】
既に言及されるように、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするために使用され得る。特に、本発明は、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物においてｍＧｌｕＲ２／３受容体をイメージングまたは定量する方法に関する。
【００２０】
細胞および組織は、好ましくはｍＧｌｕＲ２／３受容体が豊富である中枢神経系細胞および組織である。既に言及されるように、ｍＧｌｕＲ２／３受容体は、中枢神経系組織、とりわけ脳を形成し、とりわけ大脳皮質、視床領域、副嗅球、海馬、扁桃体、尾状核被殻および側坐核を形成する中枢神経系組織において豊富である。
【００２１】
本方法がインビボで行われる場合、式（Ｉ）の化合物は、静脈内、例えばシリンジでの注射により、または短いカテーテルなどの末梢静脈内ラインにより投与し得る。
【００２２】
哺乳動物がヒトである場合、式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物を含む滅菌溶液は、特に、腕において何れかの同定可能な静脈に、特に手の甲においてまたは肘の肘正中皮静脈において静脈内投与により投与し得る。
【００２３】
したがって、特定の実施形態において、本発明は、哺乳動物への本明細書中で定義されるような式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物を含む組成物の静脈内投与を含む、哺乳動物において組織または細胞をイメージングし、かつポジトロン断層撮影イメージング系で組織または細胞をイメージングする方法に関する。
【００２４】
したがって、さらなる特定の実施形態において、本発明は、本明細書中で定義されるような式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物を含む滅菌処方物のヒトへの静脈内投与を含む、ヒトにおいて組織または細胞をイメージングするか、またはポジトロン断層撮影イメージング系で組織または細胞をイメージングする方法に関する。
【００２５】
さらなる実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物を含む組成物の哺乳動物への静脈内投与を含む、哺乳動物においてｍＧｌｕＲ２／３受容体をイメージングまたは定量し、かつポジトロン断層撮影イメージング系でイメージングする方法に関する。
【００２６】
別の実施形態において、本発明は、インビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための式（Ｉ）の化合物の使用に関するか、または本発明は、ポジトロン断層撮影を使用してインビトロまたはインビボで組織、細胞または哺乳動物をイメージングすることにおける使用のための式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２７】
本発明は、哺乳動物においてｍＧｌｕ２および３受容体をイメージングまたは定量する方法であって、式（Ｉ）の化合物の検出可能な量を哺乳動物に提供することと、ｍＧｌｕ２および３受容体と結合する式（Ｉ）の化合物を検出することとを含む方法にも関する。本方法は、他の非放射性標識化合物によるｍＧｌｕ２および３受容体占有を決定することも可能にし、したがって、本発明は、他の非放射性標識化合物によるｍＧｌｕ２および３受容体部位占有を決定することにおける使用のための、本明細書中で定義されるような式（Ｉ）の化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【００２８】
さらに、本発明は、対象においてｍＧｌｕ２および３受容体に関連する障害またはそれに対する素因を評価する方法であって、式（Ｉ）の化合物または本発明による医薬組成物の検出可能な量を提供することを含む方法に関し、ここで、この式（Ｉ）の化合物は、脳血管関門を通過し、脳組織においてｍＧｌｕ２および３受容体に選択的に結合し、それにより脳組織への化合物の分布が可能になり、脳組織のイメージングが行われる。
【００２９】
本化合物は、化合物がｍＧｌｕ２および３受容体と結合するようになるのに十分な時間が経過した後、検出可能な量で対象に提供され、標識化合物が非侵襲的に検出される。
【００３０】
定義
本明細書中で使用される場合、「組成物」という用語は、指定量で指定成分を含む生成物および指定量での指定成分の組み合わせの結果として直接的または間接的に得られる何らかの生成物を包含するものとする。
【００３１】
「検出可能な量」という用語は、イメージング機器、特にＰＥＴスキャン機器の検出下限を上回る化合物の濃度を指す。
【００３２】
絶対配置は、Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ系に従って特定される。
【００３３】
本発明による化合物の付加塩も本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００３４】
本発明の化合物の許容可能な塩は、対イオンが薬学的に許容可能であるものである。しかし、薬学的に許容可能ではない酸および塩基の塩も、例えば、薬学的に許容可能な化合物の調製または精製において有用であり得る。全ての塩は、薬学的に許容可能であるか否かにかかわらず、本発明の範囲内に含まれる。薬学的に許容可能な塩は、本発明による化合物が形成可能である治療的に活性のある無毒性酸付加塩形態を含むと定義される。前記塩は、本発明による化合物の塩基形態を適切な酸、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、特に塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸；有機酸、例えば酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸およびパモ酸で処理することによって得られ得る。
【００３５】
逆に、前記塩形態は、適切な塩基での処理により遊離塩基形態に変換され得る。
【００３６】
さらに、本発明の化合物の一部は、水（すなわち水和物）または一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成し得、このような溶媒和物も本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００３７】
「対象」という用語は、本明細書中で使用される場合、処置、観察または実験の目的であるかまたは目的である状態である動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。特に明記しない限り、「対象」は、健康な動物および様々な疾患または障害に罹患している動物の両方を含む。
【００３８】
「哺乳動物」という用語は、特にヒト、マウス、イヌおよびラットを指す。
【００３９】
「細胞」という用語は、ｍＧｌｕ２および／または３受容体を発現するかまたは組み込む細胞を指す。
【００４０】
本発明の化合物の名称は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．ソフトウェア（ＡＣＤ／Ｎａｍｅ製品バージョン１０．０１；ビルド１５４９４、２００６年１２月１日）を使用してＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）により合意された命名規則に従って作成した。
【００４１】
適用
本発明による化合物は、インビトロおよびインビボの両方で組織、細胞または哺乳動物をイメージングするための様々な適用がある。したがって、例えば、これらは、様々な年齢および性別の対象においてｍＧｌｕＲ２／３の様々な分布をマッピングするために使用され得る。さらに、これらにより、様々な疾患または障害に罹患した対象においてｍＧｌｕＲ２／３の判別の目安となる分布を探索することができるようになる。したがって、異常な分布は、対象集団の診断、症例発見、層別化において、および個々の対象において疾患進行を監視することにおいて役立ち得る。放射性リガンドは、他のリガンドによるｍＧｌｕＲ２／３部位占有を決定することにおいてさらに有用性が見出され得る。放射性リガンドは、痕跡量、すなわち例えばＰＥＴイメージングに対して検出可能な量で投与されるため、治療効果は、本発明による放射性リガンドの投与に起因するものではない。
【実施例】
【００４２】
実験パート
全般
本明細書中で使用される場合、「ａｑ．」は水性を意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味し、「ＤＳＣ」は示差走査熱量測定を意味し、「Ｅｔ３Ｎ／ＴＥＡ」はトリエチルアミンを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味し、「ｈ」は時間を意味し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ＬＣＭＳ」は液体クロマトグラフィー／質量分析を意味し、「ｉＰｒＯＨ」はイソプロピルアルコールを意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「［Ｍ＋Ｈ］＋」は化合物の遊離塩基のプロトン化質量を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２」はビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリドを意味し、ＰＰｈ３はトリフェニルホスフィンを意味し、「ＲＰ」は逆相を意味し、「ｒ．ｔ．／ＲＴ」は室温を意味し、「Ｒｔ」は保持時間（分）を意味し、「ｓａｔ．」は飽和を意味し、「ｓｏｌ．」は溶液を意味し、「ＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｅ（登録商標）」は（ジエチルアミノ）ジフルオロスルホニウムテトラフルオロボラートを意味する。
【００４３】
試薬グレード溶媒を使用してシリカゲル６０Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）上で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行った。標準的な技術のもと、シリカゲル、メッシュ２３０〜４００粒径および６０Åポアサイズ（Ｍｅｒｃｋ）上でオープンカラムクロマトグラフィーを行った。破砕状シリカゲル、粒径１５〜４０μｍ（順送使い捨てフラッシュカラム）上において、Ａｒｍｅｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔからのＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステム上でＭｅｒｃｋからの連結式のカートリッジを用いて自動化フラッシュカラムクロマトグラフィーを行った。
【００４４】
本発明の化合物を調製するためのいくつかの方法を次の実施例で例示するが、これは、本発明を説明するものであり、本発明の範囲を限定するものではないものとする。別段の断りがない限り、全ての出発物質は市販の供給業者から得て、さらなる精製を行わずに使用した。
【００４５】
中間体化合物の調製
中間体１（Ｉ−１）
【化１０】
2019502700.tif 000012
ｒ．ｔ．および窒素下でＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の（７Ｓ）−６，７−ジヒドロ−３−ヨード−７−メチル−５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４（５Ｈ）−オン（［１６３９９０１−８８−４］、国際公開第２０１４１９５３１１号パンフレット、０．９７ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ２ＣＯ３（１７１ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をｒｔで２時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＤＣＭ中のＥｔＯＡｃ、０／１００〜３０／７０）によって粗製生成物を精製した。所望の分画を回収し、溶媒を真空下で蒸発させて、ベージュ色の固形物として中間体化合物Ｉ−１（５４９ｍｇ、６９％）を得た。
【００４６】
中間体２（Ｉ−２）
【化１１】
2019502700.tif 000013
密封チューブ中、０℃および窒素下でＸｔａｌｆｌｕｏｒ−Ｅ（登録商標）（０．３３８ｇ；１．４７８ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン三フッ化水素酸塩（０．２４１ｍＬ；１．４７８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１４ｍＬ）中の２−アミノ−５−ブロモ−４−ピリジンメタノール（０．２ｇ；０．９８５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に添加した。混合物を温め、１８時間撹拌した。混合物を０℃において飽和ＮａＨＣＯ３／ブラインで慎重に処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＤＣＭ中酢酸エチル、０／１００〜３０／７０）によって残渣を精製した。所望の分画を回収し、真空濃縮して、ベージュ色の固形物として中間体化合物Ｉ−２（９４．４ｍｇ；４７％）を得た。
【００４７】
中間体３（Ｉ−３）
【化１２】
2019502700.tif 000014
ｒ．ｔ．でＤＭＦ（７．９ｍＬ）中の２−アミノ−５−ブロモ−４−（ヒドロキシメチル）ピリジン（０．７９７ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（０．８９ｇ、５．８９ｍｍｏｌ）の混合物にイミダゾール（０．４１ｇ、５．８９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をｒ．ｔ．で１６時間撹拌した。混合物を０℃において飽和ＮａＨＣＯ３で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で蒸発させた。粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、０／１００〜５０／５０）により精製した。所望の分画を回収し、真空下で蒸発させて、白色固形物としてＩ−３（０．３４ｇ、６７％）を得た。
【００４８】
中間体４（Ｉ−４）
【化１３】
2019502700.tif 000015
ヨウ化銅（Ｉ）（３．２０ｍｇ、０．００１７ｍｍｏｌ）を窒素下でＤＭＦ（１１ｍＬ）中のＩ−１（０．５４ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、Ｉ−３（０．６４ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．７０ｍＬ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（２３．６１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ３（８．８２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）の脱酸素化撹拌混合物に添加した。混合物を７０℃で１８時間撹拌した。混合物をＮＨ４ＯＨ／ブラインで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、０／１００〜１００／０）により精製した。所望の分画を回収し、真空濃縮して、淡褐色の固形物としてＩ−４（０．５３ｇ、５７％）を得た。
【００４９】
中間体５（Ｉ−５）
【化１４】
2019502700.tif 000016
密封チューブにおいて、窒素下でトルエン（１５ｍＬ）中の（７Ｓ）−６，７−ジヒドロ−７−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４（５Ｈ）−オン（［１６３９９０１−７９−３、国際公開第２０１４１９５３１１号パンフレット、２．０５ｇ、１３．５５ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）ベンジルアルコール（２．８８ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．１２ｇ、２２．５９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（５７１．３μＬ、４．５２ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液にヨウ化銅（Ｉ）（８６０．２７ｍｇ、４．５２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１０５℃で１８時間撹拌した。次いで、混合物を水およびＮＨ３３２％で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、４０／６０〜７０／３０）により精製した。所望の分画を回収し、真空濃縮して、白色固形物としてＩ−５（３．２４ｇ、８８％）を得た。
【００５０】
中間体６（Ｉ−６）
【化１５】
2019502700.tif 000017
ＣＨ３ＣＮ（４６ｍＬ）中のＩ−５（３．２１ｇ、９．８７ｍｍｏｌ）および硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（３．７９ｇ、６．９１ｍｍｏｌ）の溶液にヨウ素（１．７５ｇ、６．９１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を７５℃で４５分間撹拌した。次いで、混合物をｒ．ｔ．に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、希釈Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２０／８０〜４０／６０）により精製した。所望の分画を回収し、真空下で蒸発させて、白色泡状物質としてＩ−６（４．１ｇ、９２％）を得た。
【００５１】
Ｐ−１の調製
【化１６】
2019502700.tif 000018
ｒ．ｔ．でＥｔＯＨ（１１１ｍＬ）中のＩ−４（０．５３３ｇ、０／９６ｍｍｏｌ）の溶液にＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中６Ｍ、５．０７ｍＬ、３０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、ｒ．ｍ．を１８時間撹拌した。次いで、混合物を真空下で蒸発させた。残渣をＮＨ４ＯＨで処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、０／１００〜１００／０）により精製した。所望の分画を回収し、真空下で蒸発させた。次いで、生成物をＥｔ２Ｏとともに粉砕し、ろ過し、乾燥させて、ベージュ色の固形物としてＰ−１（０．２３ｇ、５４％）を得た。
【００５２】
Ｐ−２の調製
【化１７】
2019502700.tif 000019
Ｎ２雰囲気下、０℃でＤＣＭ（１２．ｍＬ）中のＰ−１（４５．５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（０．１７ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）の混合物にポリマー支持トリフェニルホスフィン（０．２４ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をｒ．ｔ．で１８時間撹拌し、次いでＤＣＭで処理し、ろ過し、次にポリマー性樹脂をＭｅＯＨおよびＤＣＭで数回洗浄した。ろ液をヘプタンで希釈し、ｒ．ｔ．において真空下で蒸発させて、褐色シロップとしてＰ−２を得て、これをさらに精製せずに使用した。
【００５３】
Ｐ−３の調製
【化１８】
2019502700.tif 000020
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＩ−６（１ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）、５−エチニル−２−ピリジンアミン（５２３．６８ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（９２４．２３μＬ、６．６５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（３１．１１ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ３（１１．６３ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にヨウ化銅（Ｉ）（４．２２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２で５分間パージし、次いでこれを９０℃で５時間撹拌した。残渣を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空濃縮した。粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０／１００〜０５／９５）により精製した。所望の分画を回収し、真空濃縮してＰ−３（９２３ｍｇ、９２％）を得た。
【００５４】
Ｐ−４の調製
【化１９】
2019502700.tif 000021
ＤＣＭ（１６ｍＬ）中のＰ−３（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に三臭化リン（ＤＣＭ中１Ｍ、６７９．６４μＬ、０．６８ｍｍｏｌ）を添加し、黄色の溶液が白色の懸濁液に変化した。反応物をｒ．ｔ．で３０分間撹拌し、白色懸濁液を徐々に溶解させた。その後、反応物をＤＣＭ／ヘプタン（最終的に１／１の比率）で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、ｒ．ｔ．で溶媒を真空下で蒸発させて（Ｎ．Ｂ．生成物は濃縮時にそれ自体反応する）、Ｐ−４（１４３ｍｇ、６３％）を得た。
【００５５】
化合物［１９Ｆ］−１の調製
【化２０】
2019502700.tif 000022
窒素下でＤＭＦ（６．７ｍＬ）中のＩ−１（１４７．０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、Ｉ−２（９４．４ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１９２μＬ、１．３８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（６．４６ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ３（２．４２ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）の脱酸素化撹拌混合物にヨウ化銅（Ｉ）（０．８８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で２日間撹拌した。混合物をＮＨ４ＯＨ／水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、０／１００〜８７／１３）。所望の分画を回収し、真空下で蒸発させて、純粋な化合物がある分画を得た。２−プロパノールを数滴入れたＥｔ２Ｏ中で混合した分画を溶解させ、ＨＣｌ／２−プロパノールで処理することにより、これを塩酸塩に変換した。固形塩をろ過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させ、次いで塩基性ｐＨになるまでこれを水／３２％ＮＨ４ＯＨで処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で蒸発させて、純粋な化合物の別の分画を得た。純粋な化合物が入ったこの２つの分画を合わせ、Ｅｔ２Ｏ／ＤＩＰＥとともに粉砕し、ろ過し、乾燥させて、ベージュ色の固形物として化合物［１９Ｆ］−１（３２．７ｍｇ、１６％）を得た。
【００５６】
化合物［１９Ｆ］−２の調製
【化２１】
2019502700.tif 000023
０℃および窒素下でＤＣＭ（６．２ｍＬ）中の化合物Ｐ−３（４３８ｍｇ、０．９９２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にビス（２−メトキシエチル）アミノ−サルファートリフルオリド（０．９１５ｍＬ、４．９６１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で４５分間撹拌した。次いで、０℃において混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で処理し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を真空濃縮した。粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＤＣＭ中ＥｔＯＡｃ、０／１００〜５０／５０）により精製した。所望の分画を回収し、溶媒を真空濃縮した。Ｅｔ２Ｏとともに残渣を粉砕し、黄色の固形物として不純な分画を得て、ＲＰ  ＨＰＬＣ（固定相：Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ  ５０×１００  ５μｍ、移動相：勾配は水中８０％１０ｍＭ  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ  ｐＨ９溶液、２０％ＣＨ３ＣＮから、水中０％１０ｍＭ  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ  ｐＨ９溶液、１００％ＣＨ３ＣＮの勾配）によって精製し、薄黄色の固形物として化合物［１９Ｆ］−２（５５ｍｇ、１２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７１（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，７．４Ｈｚ，１Ｈ）４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，４．２Ｈｚ，１Ｈ）４．５９（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）４．７４（ｑｕｉｎｄ，Ｊ＝６．７，４．４Ｈｚ，１Ｈ）５．６３（ｄ，Ｊ＝４６．７Ｈｚ，２Ｈ）６．４３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，０．７Ｈｚ，１Ｈ）７．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，０．８Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｓ，１Ｈ）７．７２−７．７６（ｍ，２Ｈ）８．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．２，０．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００５７】
化合物［１８Ｆ］−１および［１８Ｆ］−２の調製
全般
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）から化学物質を入手し、さらなる精製を行わずに使用した。ＩＢＡ  Ｃｙｃｌｏｎｅ  １８／９サイクロトロン（Ｌｏｕｖａｉｎ−ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）によって［１８Ｆ］Ｆ−を作製した。
【００５８】
１ｍＬ・ｍｉｎ−１の流速および２５４ｎｍの波長において、水中のＥｔＯＨ／０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．４（３９／６１  ｖ／ｖ）を使用して、Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ；Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ  ＵＳＡ）上で分取ＨＰＬＣを行った（方法Ａ）。
【００５９】
それらの非放射活性類似体と同時注入した後、上記と同じ分析ＨＰＬＣ法を使用して放射性トレーサーの識別を確認した。
【００６０】
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）からＭｉｌｌｅｘ  ＧＶフィルターを入手した。Ｗｉｚａｒｄ  １４８０自動化ガンマカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）を使用して放射活性をカウントした。
【００６１】
［１８Ｆ］−１および［１８Ｆ］−２の場合、対応するアルコール前駆体Ｐ１およびＰ−３をそれぞれ次のプロトコールに従い、放射合成直前にメシル化した：ＤＣＭ（２ｍＬ）中でＰ−１またはＰ−３（約７．５ｍｇ、１ｅｑ）を溶解させ、次いでトリメチルアミン（２．５μＬ、１．１ｅｑ）を添加し、その後、メタンスルホン酸無水物（３．５ｍｇ、１．１ｅｑ）を添加し、混合物をｒ．ｔ．で６０分間温置した。次いで、ｒ．ｍ．を水（×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空下において３０℃で蒸発乾固させた。その後、また真空下において３０℃でＣＨ３ＣＮ（３×２ｍＬ）を使用して生成物を共沸乾燥させた。ＣＨ３ＣＮの最後の部分の蒸発後、メシル化前駆体は即時使用状態であった。対応する前駆体の純度を調べるために、ＴＬＣ（９５％ＤＣＭおよび５％ＭｅＯＨでシリカプレートを溶出）を使用した。
【００６２】
ＱＭＡ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ  ＵＳＡ）カートリッジ上でプロトン照射した標的含量（９８％１８Ｏ−Ｈ２Ｏ）をパージすることにより、［１８Ｆ］Ｆ−を回収した。次に、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２（２６ｍｇ）およびＫ２ＣＯ３（２．５ｍｇ）を含有するＣＨ３ＣＮ／水（７００μＬの９５／５ｖ／ｖ）を使用して反応バイアルにＱＭＡカートリッジを溶出した。溶液を穏やかなヘリウム気流下で１１０℃において６分間乾燥させ、続いてＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）の添加によって２回行い、それぞれ１１０℃で５分間、ヘリウム下で乾燥させた。標準的な条件の場合、ドライＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）中のメシル前駆体（２ｍｇ）を添加し、１２０℃で１０分間反応させた。ｒ．ｍ．を希釈し、次にＨＰＬＣ法を使用して［１８Ｆ］−１または［１８Ｆ］−２を精製した。次いで、回収した分画を滅菌ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶフィルターに通過させ、１０％ＥｔＯＨの濃度まで生理食塩水でさらに希釈した。
【００６３】
ＴＬＣによると、変換は（およその推定として）５０〜８０％であった。非変換アルコール前駆体の分画は、通常、放射合成のために使用される前駆体混合物および幾分かの副産物中に存在した。このメシル化前駆体混合物から出発した放射性化学物質収率は、標準的な条件下で［１８Ｆ］−１について５〜３５％、［１８Ｆ］−２について２０〜４０％であった。これらの標準的な条件下でブロモ前駆体も試験したが、収率は常に＜３％であった。放射性化学物質純度は常に＞９５％であり、合成終了時の比活性は、［１８Ｆ］−１について１６５±８３ＧＢｑ／μｍｏｌであり、［１８Ｆ］−２について１３８±３７ＧＢｑ／μｍｏｌであった。
【００６４】
分析パート
融点：
値はピーク値であり、この分析方法に一般的に付随する実験的な不確実性を伴い得られる。
【００６５】
ＤＳＣ８２３ｅ（Ａ）：化合物の多くに対して、ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）装置を用いて融点を決定した。１０℃／分の温度勾配を用いて融点を測定した。最高温度は３００℃であった。値はピーク値である。
【００６６】
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置（Ｂ）：化合物の多くに対して、Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置上でオープンキャピラリーチューブ（ｏｐｅｎ  ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｔｕｂｅ）において融点を決定した。１、３、５または１０℃／分の温度勾配で融点を測定した。最高温度は３００℃であった。デジタルディスプレイから融点を読み取った。
【００６７】
ＬＣＭＳ
全般的手順
個々の方法で指定されるように、ＬＣポンプ、ダイオード−アレイ（ＤＡＤ）またはＵＶ検出装置およびカラムを使用して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定を行った。必要に応じて、さらなる検出装置を含めた（以下の方法の表を参照されたい）。
【００６８】
大気圧イオン源とともに構成された質量分析計（ＭＳ）にカラムからの流れを運んだ。これは、化合物の名目のモノアイソトピック分子量（ＭＷ）および／または正確な質量モノアイソトピック分子量の同定を可能にするイオンを得るために調整パラメータ（例えば、スキャン範囲、滞在時間など）を設定するための熟練者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアを用いてデータ捕捉を行った。
【００６９】
化合物は、その実験的な保持時間（Ｒｔ）およびイオンにより説明される。データの表で別に指定されない場合、報告される分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に対応する。化合物が直接イオン化可能でなかった場合、付加物のタイプが指定される（すなわち［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−、［Ｍ＋ＣＨ３ＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンがある分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）の場合、報告される値は、最低の同位体質量に対して得られるものである。全ての結果は、使用される方法に一般的に付随する実験的な不確定度とともに得られた。
【００７０】
本明細書中では以後、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器、「ＭＳＤ」は質量選択検出器、「ＱＴＯＦ」は四重極−飛行時間、「ｒｔ」は室温、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド、「ＣＳＨ」は荷電表面ハイブリッド、「ＵＰＬＣ」は超高速液体クロマトグラフィー、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器である。
【００７１】
【表２】
2019502700.tif 000024
【００７２】
【表３】
2019502700.tif 000025
【００７３】
旋光度
ナトリウムランプを用いてＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ３４１旋光計上で旋光度を測定し、次のとおり報告した：［α］°（λ，ｃｇ／１００ｍＬ、溶媒、Ｔ℃）。
［α］λＴ＝（１００α）／（ｌ×ｃ）：式中、ｌはｄｍの経路長であり、ｃは、温度Ｔ（℃）および波長λ（ｎｍ）での試料に対するｇ／１００ｍＬの濃度である。使用した光の波長が５８９ｎｍ（ナトリウムＤライン）である場合、シンボルＤを代わりに使用し得る。旋光度のサイン（＋または−）が常に与えられるはずである。この等式を使用する場合、濃度および溶媒は、通常、旋光後に括弧で提供される。旋光は、度を使用して報告され、濃度の単位は与えられない（これはｇ／１００ｍＬであると想定される）。
【００７４】
【表４】
2019502700.tif 000026
【００７５】
ＮＭＲ
多くの化合物に対して、溶媒としてクロロホルム−ｄ（重水素化クロロホルム、ＣＤＣｌ３）またはＤＭＳＯ−ｄ６（重水素化ＤＭＳＯ、ジメチル−ｄ６スルホキシド）を使用して、４００ＭＨｚで作動するＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００分光計または５００ＭＨｚで作動するＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  Ｉ分光計上で１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。テトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するパーツパーミリオン（ｐｐｍ）で化学シフト（δ）を報告し、これを内部標準として使用した。
【００７６】
【表５】
2019502700.tif 000027
【００７７】
結合アッセイ
［３Ｈ］−化合物Ａ（ＮＡＭ化合物、他のｍＧｌｕＲと比較してｍＧｌｕ２／３に対して選択的（３よりも２に対して約２０倍選択的））結合の場合、ヒトｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３  ＨＥＫ２９３細胞からの膜およびまたラット皮質膜も使用した。解凍後、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを使用して膜をホモジナイズ処理し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有する氷冷結合緩衝液中で懸濁した。２５ｎＭを使用したヒトｍＧｌｕ３膜を除き、６ｎＭの放射性リガンドを使用して置換研究を行った。ヒトｍＧｌｕ２、ヒトｍＧｌｕ３またはラット皮質のそれぞれ７．５ｍｇ、７５〜１００ｍｇまたは７５μｇ膜タンパク質を含有する０．５ｍＬの体積でアッセイ混合物をＲＴにおいて６０分間温置した。１０ｍＭ化合物Ｂ（ｈｍＧｌｕ２に対してＩＣ５０〜１０ｎＭおよびｈｍＧｌｕ３に対してＩＣ５０〜２００ｎＭであるＮＡＭ）の存在下で非特異的な結合を推定した。０．１％ＰＥＩおよびＢｒａｎｄｅｌｌ  ｈａｒｖｅｓｔｅｒ９６に予め浸漬したＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルターシートを使用して、ろ過を行った。フィルターシートからのフィルターをバイアルに押し込んだ。シンチレーション液の添加後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒからの液体シンチレーション分析器においてフィルター上の放射活性をカウントした。
【００７８】
試験化合物の非存在下で測定した全結合のパーセンテージとして放射性リガンド競合結合データを計算した。Ｌｅｘｉｓソフトウェアを使用して、試験化合物のログ濃度に対する全結合のパーセンテージをプロットする阻害曲線を作成した。非線形回帰分析を使用してシグモイド阻害曲線を分析した。
【００７９】
【表６】
2019502700.tif 000028
【００８０】
体内分布試験
全般
１．３５ｍｍ（半値全幅）の体軸横断解像度のルテチウムオキシオルトシリケート検出器に基づく断層撮影（ｍｉｃｒｏＰＥＴ  ＦＯＣＵＳ−２２０；Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ＵＳＡ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）において動物ＰＥＴイメージングを行った。画素幅が０．４７５ｍｍであり、スライス厚が０．７９６ｍｍである１２８×１２８×９５マトリクスでデータを捕捉した。ＰＥＴイメージング中、ガス麻酔下（１ｌ／分の流速で酸素中２．５％イソフルラン）でラットを維持し、温熱パッドを使用して、それらの体温を３６．５〜３７℃で維持した。Ｐｍｏｄソフトウェア、バージョン３．２（Ｐｍｏｄ，Ｚｕｒｉｃｈ  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用してＰＥＴデータを分析した。
【００８１】
処置まで、１ケージあたり４〜６匹の群で、Ｈａｒｌａｎ（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から得たＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを収容した。２１℃の一定温度および１２時間の明／暗サイクルでこれらを維持し、照明は午前８時に切り替えた。動物には餌（Ｔｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌ  １６％タンパク質げっ歯類試料、Ｈａｒｌａｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）および水を自由に摂取させた。動物実験は、全て動物実験におけるベルギーの法律に則って地方の動物倫理委員会による承認後に行った。
【００８２】
エクスビボ体内分布
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットにおける注射から２、１０、３０および６０分後に［１８Ｆ］−１の体内分布を決定し（ｎ＝３／時点）、一方で［１８Ｆ］−２に対して３０分の時点では行わなかった。尾静脈を介して０．７〜１．１ＭＢｑでラットに静脈内注射し、イソフルラン麻酔下において上記で指定される時点で安楽死させた。全組織を解剖し、重量測定し、ガンマカウンターで放射活性をカウントした。
【００８３】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける注射から２、１０、３０および６０分後に［１８Ｆ］−１の体内分布を決定した（ｎ＝３／時点）。尾静脈を介して０．７〜１．１ＭＢｑをラットに静脈内注射し、イソフルラン麻酔下において上記で指定される時点で安楽死させた。全組織を解剖し、重量測定し、ガンマカウンターで放射活性をカウントした。
【００８４】
［１８Ｆ］−１の体内分布から、肝臓での最大取り込みが示され、全ての末梢臓器でウォッシュアウトが観察され、一方で骨での取り込みは経時的に僅かに上昇した。さらに筋肉での取り込みは低く、時間とともに安定化すると思われる。
【００８５】
［１８Ｆ］−１に対する脳での取り込みは非常に高く、一方で脳橋を除く脳の全ての領域に対して経時的な取り込み増加が示され、その取り込みは長時間にわたりかなり安定である。最大取り込みは皮質で観察され、続いて線条体であり、脳橋で示された脳取り込みは最低であった
【００８６】
【表７】
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【００８７】
［１８Ｆ］−２の体内分布から、肝臓での取り込みが高く、大脳および小脳での脳取り込みが中程度であることが示された。骨を除いて全領域がウォッシュアウトを示し、骨は経時的な取り込み増加を示した。
【００８８】
［１８Ｆ］−２の脳での取り込みから、試験領域でトレーサー濃度の変動性があり、ウォッシュアウトが遅かったことが示された。最大取り込みは皮質で観察され、脳での取り込みが最低であったのは脳橋であった。
【００８９】
【表８】
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【００９０】
ＰＥＴスキャニング
前処理溶液は、全てｐＨが６〜８の範囲である生理食塩水中の２０％β−シクロデキストリン中の１ｍｇ／ｍＬ溶液であり、使用前にＭｉｌｌｅｘ  ＧＶフィルター上でろ過滅菌した。
【００９１】
ベースラインスキャンのために、３６〜４３ＭＢｑの［１８Ｆ］−１を、体重が２２９〜２５１ｇである３匹のＳＤラットの尾静脈に注射し、９０分間のダイナミックＰＥＴスキャン中に同時にスキャンした。化合物Ａ（ＮＡＭ化合物、他のｍＧｌｕＲと比較してｍＧｌｕ２／３に対して選択的（３よりも２に対して約２０倍選択的））を用いた前処理スキャンのために、尾静脈への３８〜３７ＭＢｑ［１８Ｆ］−１の注射の６０分前に同じ動物に対して１０ｍｇ／ｋｇ化合物Ａを皮下注射し、９０分間のダイナミックＰＥＴスキャン中に同時にスキャンした。
【００９２】
［１８Ｆ］−１に対して脳での高い取り込みが観察され、特に前頭皮質および線条体は高い取り込みを示す。取り込みは脳橋で最低であったが、一方で脳橋の取り込みは化合物Ａでの前処理後に同じ範囲であった。他の領域において、化合物Ａでの前処理後に取り込みが減少した。時間活性曲線が注射後の時間の関数として増加し続けたため、ピーク取り込みはおそらく９０分以内に到達しなかった。
【００９３】
ベースラインスキャンに対して、尾静脈において体重が３０１〜３１０ｇである３匹のＳＤラットで３９〜４９ＭＢｑの［１８Ｆ］−２を注射し、９０分間のダイナミックＰＥＴスキャン中に同時にスキャンした。化合物Ａを使用した前処理スキャンのために、尾静脈への４６〜５０ＭＢｑ［１８Ｆ］−２の注射の６０分前に同じ動物に１０ｍｇ／ｋｇ化合物Ａを皮下注射し、９０分間のダイナミックＰＥＴスキャン中に同時にスキャンした。
【００９４】
［１８Ｆ］−２の注射後に得られたμＰＥＴスキャン（図４）から、幾分か矛盾した結果が示された。ピーク取り込みは前処理後により高かったが、一般にはウォッシュアウトが速いことが示され、一方でベースラインスキャンでの脳領域の取り込みは、この早期ピークを示さなかった。さらに、皮質は、経時的に取り込みの増加を示し、これは、トレーサーの脱フッ素化のために放射活性濃度が高く、増加することを示した頭蓋からの部分容積効果のためであり得る。
【００９５】
考察
エクスビボ体内分布の末梢における取り込みから、肝臓での取り込みが最大であること、および腎臓、続いて尿中排泄での取り込みが高いことが示された。骨での取り込み［１８Ｆ］−１は、開始時に低かったが、経時的に僅かに上昇し、これは幾分かの脱フッ素化を暗示する。［１８Ｆ］−２から、経時的な骨での取り込みの実質的な増加が示され、これは、相当な脱フッ素化と、その後の［１８Ｆ］Ｆ−の骨への結合を示唆する。
【００９６】
エクスビボ体内分布から、［１８Ｆ］−２に対する、次に［１８Ｆ］−１に対する脳での高い取り込みが示された。［１８Ｆ］−２から、様々な脳領域からの速いウォッシュアウトが示された。脳橋は、ｍＧｌｕＲ２またはｍＧｌｕＲ３発現の欠如と同様に参照領域であると考えられるが、一方で全ての他の領域においてｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３の両方が存在し、大脳皮質において発現レベルが最大であった（Ｆａｒｉｎｈａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｂ  ＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１５，１７２，２３８３−２３９６）。［１８Ｆ］−２から、皮質での取り込みが最大であり、他の領域と比較して、脳橋からのより速いウォッシュアウトと組み合わせて脳橋での取り込みが低いことが示され、脳での取り込みがｍＧｌｕＲ２／３に対する報告された分布パターンを反映するため、良好なｍＧｌｕＲ２／３特異性が示唆された。［１８Ｆ］−１からまた、皮質での取り込みが高く、脳橋での取り込みが低いことも示されたが、トレーサー濃度は、脳橋を除いて全脳領域に対して経時的に増加し続け、取り込みはかなり安定であると思われる。依然として、取り込みパターンはｍＧｌｕＲ２／３に対する分布パターンと非常によく合致する。取り込み増加は、［１８Ｆ］−１の非常に高い親和性または（偽性）不可逆的結合の何れかを暗示している。
【００９７】
［１８Ｆ］−２の注入後のμＰＥＴスキャンから、ベースラインスキャンと比較して、化合物Ａ前処理後、脳での高い取り込みおよび前頭皮質からのより速いウォッシュアウトが示され、これは、ｍＧｌｕＲ２／３特異的な結合を示唆する。しかし、骨での取り込みが高いことにより、顕著な部分容積効果が引き起こされており、骨からのシグナルの溢流は、特に、頭蓋付近に位置するが、またｍＧｌｕＲ２／３の高い発現も含有する皮質で観察される。
【００９８】
ＰＥＴスキャンにおいて、［１８Ｆ］−１から、時間の関数として前頭皮質および線条体で活性濃度が持続的に上昇し、一方で脳橋での活性が低いままである特有の脳カイネティクスが示された。前頭皮質および海馬での高い取り込みは、化合物Ａでの前処理により阻止され得る。この連続的取り込みパターンは、ｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３の何れかまたは両方に対して［１８Ｆ］−１の親和性が高いためであり得、または（偽性）不可逆的結合のためであり得る。脳領域全体での取り込みが化合物Ａ前処理により脳橋での取り込みとほぼ同じ高さまで低下したため、これらのデータからも良好なｍＧｌｕＲ２／３特異性が示される。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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