(57)【要約】  両性の患者における嚢胞性線維症の治療のための非エストロゲン依存性作用薬としてのタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩の使用が開示される。タモキシフェンは、好ましくは吸入経路によって投与される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
嚢胞性線維症を治療するために、両性の患者において非エストロゲン依存性作用を有する薬剤として使用するためのタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
前記薬剤がクエン酸タモキシフェンである、請求項１に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項３】
前記薬剤が経口経路によって投与される、請求項１または２に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項４】
前記薬剤が錠剤として投与される、請求項１、２または３に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項５】
前記薬剤が吸入経路によって投与される、請求項１に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項６】
前記薬剤が１０〜１００ｍｇの用量で投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項７】
前記薬剤が６０ｍｇまたは７０ｍｇの１日量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、両性の患者における嚢胞性線維症の治療のためのタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩の使用、特に両性の患者における嚢胞性線維症の治療のための非エストロゲン依存性作用を有する薬剤としてのタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
嚢胞性線維症は、種々の器官（肺、膵臓、腸、肝臓、汗腺）に関与する遺伝性疾患である。肺の関与は最も多い死因であり、生存期間中央値は３９年である。
【０００３】
嚢胞性線維症は、細胞膜を介して塩化物イオンを輸送する膜タンパク質をコードする遺伝子（嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンスレギュレータ−ＣＦＴＲ）の変異によって引き起こされる。肺のレベルでは、粘液はより密度が高く、粘液を除去することが難しく、粘液は気管支樹に蓄積して、呼吸機能の進行性で致命的な悪化を決定する再発性肺炎の発症に寄与する。
【０００４】
嚢胞性線維症は、欧州で対象１００００人あたり０．７例の発生率の稀な疾患である。現在までに、異常なＣＦＴＲをコードする約１５００の変異が存在する。最も多いのは、嚢胞性線維症に罹患した対象の約７０％に存在するＦ５０８欠失／Ｆ５０８欠失の変異である。細胞ＩＢ３−１に存在する変異Ｆ５０８欠失／Ｗ１２８２Ｘは、全体的にはるかに少ない頻度である。
【０００５】
遺伝子異常であり、タンパク質ＣＦＴＲの正常な動作を回復できる、遺伝子治療以外の治療法がないとしても、過去数十年間に数多くの有効成分が嚢胞性線維症の治療のために提案されている。数年来、嚢胞性線維症の遺伝子治療に関する研究が進行中であるにもかかわらず、この重要な目標はまだ達成されていない。
【０００６】
嚢胞性線維症の治療のために提案されている他のほとんどの薬理学的な治療は、実際には呼吸器に関する病状など、この病状の特定の形態の治療に適応されており、あるいは、いくつかの症状の緩和または合併症のリスクを軽減のために適応されている。
【０００７】
嚢胞性線維症の治療のために提案されている有効成分の１つはタモキシフェンである。
【０００８】
タモキシフェンは、エストロゲン受容体を選択的に調節することができる非ステロイド分子である。タモキシフェンは、混合アゴニスト／アンタゴニスト活性を有し、タモキシフェンが作用する組織の種類に応じてアゴニストまたはアンタゴニストとして挙動する。例えば、タモキシフェンは、子宮内膜ではアゴニストとして、乳腺ではアンタゴニストとして挙動する。
【０００９】
タモキシフェンは、哺乳動物のエストロゲン感受性腫瘍の治療における抗腫瘍剤として長年治療において使用されている。
【００１０】
妊娠可能な年齢の女性患者の嚢胞性線維症の治療におけるその有効性は、ＣｏａｋｌｅｙらによりＪ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１１８（１２）、２００８、１−１１で示唆されており、２０１１年５月９日に出願人の名義で出願されたイタリア特許出願ＲＭ２０１１Ａ０００２３１の臨床データで証明されている。
【００１１】
国際公開第２００９／１０５２３４号では、タモキシフェンは、ＣＦＴＲ欠損に関連する疾患を治療または改善するための使用が主張されている多くの有効成分において、実験的な裏付けデータなしに一般論として報告されている。
【００１２】
事実、国際公開第２０１２／１３４９６５号は、タモキシフェンのようなＣａＣＣの阻害剤とＮＫＣＣのモジュレーターとの共投与による、平滑筋細胞の収縮性の変化を特徴とする疾患の治療または効果の改善方法に関する。
【００１３】
文献において、嚢胞性線維症に罹患した非女性の患者を治療するためにタモキシフェンを使用する可能性を想定し、または嚢胞性線維症に罹患した患者におけるタモキシフェンの非エストロゲン依存性効果の可能性を示すデータはない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本出願人は、タモキシフェンが、クロライド電流の密度の増加を決定するＣａ依存性クロライドチャネルに直接的なエストロゲン非依存性効果も有し、したがって、両性の患者における嚢胞性線維症の治療に有用であることを見出した。
【００１５】
したがって、本発明の目的は、嚢胞性線維症を治療するために両性の患者において、非エストロゲン依存性作用を有する薬剤としてのタモキシフェンまたはその薬学的に受容可能な塩を使用することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の特に好ましい態様では、タモキシフェンの薬学的に受容可能な塩は、クエン酸タモキシフェンである。
【００１７】
タモキシフェンは、経口全身経路により、特に抗腫瘍療法において既に使用されている錠剤として投与することができる。市販の錠剤は、１０ｍｇまたは２０ｍｇの用量でクエン酸塩としてタモキシフェンを含有する。
【００１８】
シロップ、エリキシル剤、カプセル剤、散剤および顆粒剤、懸濁剤のような経口投与に適した他の医薬品形態を使用することができる。
【００１９】
経口投与とは異なる投与経路もまた、本発明の使用目的のために使用することができる。そのような投与経路は、舌下、鼻腔内または吸入経路であっても良い。
【００２０】
吸入経路が特に好ましい。
【００２１】
吸入経路については、他の非経口投与経路に関しては、タモキシフェンの活性代謝物である、特に４−ヒドロキシタモキシフェン、Ｎ−デスメチル−４−ヒドロキシタモキシフェンおよびＮ−デスメチル−タモキシフェンの１つを投与することも可能である。
【００２２】
投与されるタモキシフェンの用量は、一般に、１回以上の用量で１０〜１００ｍｇである。特に適している用量は、６０または７０ｍｇの１日量である。
【００２３】
上記製剤は、適切な薬学的に受容可能な担体との混合物中にタモキシフェンまたはその塩を含有する。
【００２４】
Ｃａ依存性クロライドチャネルに対するタモキシフェンの直接的なエストロゲン非依存性有効性は、本出願人により、気管支上皮細胞においてインビトロで証明されている。
【００２５】
ＣＦＴＲの他に気管支上皮細胞も、小規模ではあるが、クロライド輸送に寄与する別のやり方を有している（ＬａｚａｒｏｗｓｋｉおよびＢｏｕｃｈｅｒ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００９、９（３）、２６２−７）。このやり方は、気管支樹に存在するＡＴＰによって刺激されるＰ２Ｙ受容体によって媒介され、細胞内遊離カルシウム（Ｃａ２＋）を増加させる（Ｌａｚａｒｏｗｓｋｉら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４、２７９（３５）、３６８５５−６４）。その次に、細胞内カルシウムの増加は、Ｃａ依存性クロライドチャネルを活性化する。
【００２６】
Ｃａ依存性クロライドチャネルは、通常、嚢胞性線維症の患者に存在するが、それらは比較的不活性である（既にＬａｚａｒｏｗｓｋｉおよびＢｏｕｃｈｅｒに引用されている）。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】浴溶液（ｎ＝６）において、５μＭのタモキシフェンの非存在下（対照）または存在下で、ＣＦＢＥ（またはＩＢ３−１）細胞において４０分後に記録された電流の電流密度（ｄ）−電圧（Ｖ）の関係の図である。パラメータを細胞の大きさから独立させるため（したがって、表面から独立して異なる細胞間で比較可能であるように）、記録された電流（ｐＡ）を細胞の能力（細胞表面に正比例する）に対して正規化した。
【図２】浴溶液（ｎ＝６）において、５μＭのタモキシフェンの非存在下（対照）または存在下で、細胞ＩＢ３−１において２４時間後に記録された電流の電流密度（ｄ）−電圧（Ｖ）の関係の図である。
【図３】浴溶液（ｎ＝６）において、５μＭのタモキシフェンまたはタモキシフェン＋ＣＦＴＲｉｎｈの存在下で、細胞ＩＢ３−１において２４時間後に記録された電流の電流密度（ｄ）−電圧（Ｖ）の関係の図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
我々は、ＴＭＸがＣａ依存性クロライドチャネルに対して直接的な作用を有するかどうかを評価するために、インビトロでの実験（ＣＦの治療における薬剤の効果を評価するのに最も信頼性が高く、かつ適切である）を行った。
【００２９】
本発明者らの実験は、Ｆ５０８欠失／Ｆ５０８欠失変異を誘導するホモ接合ＣＦＢＥ細胞およびＩＢ３−Ｉ細胞（Ｆ５０８欠失／Ｗ１２８２Ｘ変異をもたらす気管支上皮嚢胞性線維症細胞の不死化細胞株）で行った。
【００３０】
Ｃａ依存性クロライドチャネルを通るクロライド電流は、穿孔された全細胞構成におけるパッチクランプ技術を用いて測定した。全細胞構成は、電極の下の膜を破壊することによってではなく、膜を通る孔を形成し、細胞質の完全性を維持しながら、電極の溶液と細胞質との間の電気的連続性を保証するイオノフォア（グラミシジン、１０μｇ／ｍｌ）の作用によって得られた。したがって、チャネル活性の維持にとって重要であり得る細胞質成分は、電極に含まれる溶液での細胞質の透析後に除去されない。特に、グラミシジンは、細胞膜を一価カチオン（Ｋ＋およびＮａ＋）に対して透過性にするが、二価カチオン（例えばＣａ２＋およびＭｇ２＋など）およびクロライドなどの陰イオンに対して透過性にしない。したがって、二価カチオンおよびクロライドの細胞内濃度は、細胞質の透析の影響を受けない。
【００３１】
電極の溶液は、１４５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含有し、ｐＨ  ７，２５であった。実験中に、細胞を入れた槽の溶液は、ＮＭＧＣｌ  １５０ｍＭ、ＣａＣｌ２  ２ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １ｍＭ、ＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、グルコース１０ｍＭ、マンニトール３０ｍＭ、ｐＨ  ７．４であった。この浴溶液は、膨潤によって活性化された電流を抑制するために、浴溶液の等モル浸透圧条件においても使用された細胞内に存在した電極溶液に対して高浸透圧（浸透圧３３７ｍＯｓｍの測定値）であった（以前に行われた全細胞実験で認められたとおり）。
【００３２】
細胞（ＦＣＳまたはＩＢ３−１）をタモキシフェン５μＭで４０分間インキュベートした。この期間の後、細胞は実験によって、常にタモキシフェン５μＭの存在下で溶解した。
【００３３】
これらの実験中に測定された電流密度は、対照条件下で観察されたものと比較して有意に増加し、タモキシフェンがＣａ依存性クロライドチャネルに直接作用し、クロライドの輸送を増加させるという仮説を支持している（図１）。
【００３４】
さらに、Ｃａ依存性クロライド電流に対するタモキシフェンの長期的効果の可能性を評価するために、５μＭタモキシフェンで２４時間インキュベートした同じ細胞を用いて実験を行った（図２）。
【００３５】
得られたデータは、タモキシフェンの効果が経時的にほとんど変化しないことを示している（２４時間、図２）。
【００３６】
最後に、タモキシフェンがＣＦＴＲチャネルに及ぼす可能性のある作用を評価するために、２４時間タモキシフェンで処置した細胞でＩ／Ｖを記録した後、タモキシフェンおよびＣＦＴＲ  ｉｎｈ（ＣＦＴＲの特異的阻害剤）を含む溶液（図３）への溶液の置き換えを実施した。
【００３７】
得られたデータは、クロライド電流に対するタモキシフェンの効果がＣＦＴＲの阻害剤の存在下では有意に変化しないことを示し、タモキシフェンがＣＦＴＲチャネルに作用しないことを示している（図３）。
【００３８】
結論として、本発明者らの実験は、ＣＦの原因となる変異を有する細胞において、タモキシフェンがＣａ依存性クロライドチャネルに直接的に作用して、クロライド電流の密度を増加させ、これによりナトリウム取り込みのバランスをとり、細胞でのナトリウムの病的蓄積をさせず、粘性を帯びる粘液分泌物から水の回収を可能にすることを示している。
【００３９】
この作用は、タモキシフェンの抗エストロゲン活性とは完全に独立している（図１）。
【００４０】
さらに、Ｃａ依存性クロライドチャネルにおけるタモキシフェンの活性は、長時間持続し（図２）、ＣＦＴＲチャネル活性を伴わない（図３）。
【００４１】
したがって、タモキシフェンは、女性および男性の両方において、年中毎日、持続的な方法でその活性を遂行することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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