(57)【要約】  本発明は、227Thと223Raを含む混合物からの227Thの精製のための方法を提供し、前記方法は、i）第1の水性緩衝液に溶解した227Thイオンと223Raイオンの混合物を含む第1の溶液を調製するステップ；ii）前記第1の溶液を、強陽イオン交換樹脂などの分離材に添加するステップ；iii）227Thを分離材から溶出させ、それにより227Thを含む第2の溶液を生成するステップ；iv）所望により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐステップ；を含む。本発明は、精製された227Thを錯体形成することを含む放射性医薬品を形成するための方法、医薬製剤および癌などの疾患の治療で用いるその使用ならびにかかる製品を生成するためのキットをさらに提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
227Thと223Raを含む混合物からの227Thの精製のための方法であって、前記方法が、
i）第1の水性緩衝液に溶解した227Thイオンと223Raイオンの混合物を含む第1の溶液を調製するステップと；
ii）前記第1の溶液を分離材に負荷するステップと；
iii）227Thを前記分離材から溶出させ、それにより227Thを含む第2の溶液を生成するステップと；
iv）所望により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐステップと；
を含む、方法。
【請求項２】
以下の随意のステップ：
v）前記第2の溶液の前記227Thの含有量を分析するステップ；
vi）前記第2の溶液から液体を蒸発させるステップ；
vii）前記第2の溶液に含まれる前記227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成するステップ；
viii）前記放射性医薬品を滅菌濾過するステップ
の少なくとも1つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記第1の水性緩衝液が、3〜6.5の間のpHである、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記第1の水性緩衝液が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびその混合物から選択される少なくとも1つの有機酸緩衝液を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第1の水性緩衝液が、少なくとも1つのラジカルスカベンジャーおよび／または少なくとも1つのキレート剤をさらに含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記分離材が強陽イオン交換樹脂、好ましくはシリカ系樹脂である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記分離材が、少なくとも1つのCH2−SO3H部分を含む陽イオン交換樹脂である、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記溶出が、好ましくは重力または遠心力下、あるいは上からのガス圧力および／または下からの真空下での、「乾燥」手段による、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
溶出が、前記重力の少なくとも5000倍の「相対遠心力」（RCF）の遠心力による、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
溶出が、10秒から10分の間の遠心力による、請求項8または請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
さらなる洗浄ステップを含まない、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記分離材を水性洗浄媒体で洗浄することを含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ガンマ検出またはガンマ分光法によって、例えばゲルマニウム半導体検出器の使用などによって、前記第2の溶液の前記227Th含有量を分析するステップをさらに含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
227Thを含む前記第2の溶液に含まれる前記227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成するステップをさらに含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記227Thの一部分が、0.1MBq〜100MBqの間の 227Thである、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記放射性医薬品が、前記227Thの一部分および少なくとも1つの8配位錯化剤から形成される、請求項14または請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
前記8配位錯化剤が、抗体、抗体構築物、抗体フラグメントまたは抗体フラグメントの構築物ならびにナノ粒子およびビスホスホネートから選択される標的化部分に複合化されている、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
前記放射性医薬品および／または標的化部分が、「表面抗原分類」（CD）細胞表面マーカーから選択される少なくとも1つの標的に対して特異性を有する、請求項14から17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記形成するステップが、前記第2の試料に含まれる前記227Thの一部分を、標的化部分に連結された錯化剤を含む標的化複合体とともにインキュベートすることを含み、かかるインキュベーションが50℃よりも低い温度で実行される、請求項14から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記インキュベーションが2時間未満の間実行される、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
前記インキュベーションが第1の水性緩衝液中で実行される、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
1MBqの227Thにつき50KBq未満の223Raを含む227Th。
【請求項２３】
請求項1から21のいずれか一項に記載の方法によって形成されたかまたは形成することのできる、請求項22に記載の227Th。
【請求項２４】
請求項22または23に記載の227Thおよび所望により少なくとも1つの製薬上許容される希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項２５】
227Thと223Raの混合物、第1の水性緩衝液、および強陽イオン交換樹脂を含むキット。
【請求項２６】
次の随意の物品：
少なくとも1つの滅菌フィルタ；
少なくとも1つの耐熱容器；
少なくとも1つの加熱装置；
少なくとも1つの227Th錯化剤；
の少なくとも1つをさらに含む、請求項25に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬用のトリウム−227（227Th）の精製に関する。特に、本発明は、ヒト被験体への医薬品投与に用いる直前のトリウム−227の精製の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特定の細胞を死滅させることは、哺乳動物被験体の多様な疾患の治療の成功に不可欠でありうる。この典型的な例は、肉腫および癌腫などの悪性疾患の治療での死滅である。しかし、特定の細胞種を選択的に排除することも、多くのその他の疾患、特に免疫疾患、過形成性疾患および／またはその他の腫瘍性疾患の治療において重要な役割を果たしうる。
【０００３】
現在、選択的治療の最も一般的な方法は、外科手術、化学療法および外部ビーム照射療法である。しかし、標的化された体内放射性核種治療は、細胞毒性の高い放射線を望ましくない細胞型に送達する可能性をもつ、有望な発展途上の領域である。現在ヒトでの使用が認可されている放射性医薬品の最も一般的な形態は、β放出および／またはγ放出放射性核種を用いる。しかし、より特異的な細胞死滅の可能性のために、α放出放射性核種を治療で使用することへの関心が最近急速に高まってきている。特にα放出核種の1つであるラジウム−223（223Ra）は、特に骨および骨表面に関連する疾患の治療に著しく効果的であることが分かった。さらなるα放射体も活発に研究されていて、特に注目される1つの同位体が、α放射体トリウム−227である。
【０００４】
生理学的環境での典型的なα放射体の放射範囲は、通常100マイクロメートル未満であり、細胞直径のほんの数倍に相当する。このことにより、これらの核は微小転移を含む腫瘍の治療に非常に適したものになる。なぜなら放射されるエネルギーのほとんどが標的細胞を越えないので、周囲の健康な組織への損傷が最小限に抑えられるためである（Feinendegenら、Radiat Res 148：195−201（1997）参照）。対照的に、β粒子の範囲は水中で1mm以上である（Wilbur，Antibody Immunocon Radiopharm 4：85−96（1991）参照）。
【０００５】
α粒子線のエネルギーは、β粒子、γ線およびX線と比較して高く、一般に5〜8MeV、すなわちβ粒子のエネルギーの5〜10倍であり、γ線のエネルギーの20倍以上である。従って、この非常に短い距離での大量のエネルギーの蓄積により、γおよびβ線と比較して非常に高い線エネルギー付与（LET）、高い相対生物学的効力（RBE）および低い酸素効果比（OER）がα線に与えられる（Hall，「Radiobiology for the radiologist」，第5版，Lippincott Williams＆Wilkins，Philadelphia PA，USA，2000参照）。これらの特性は、α放出放射性核種の例外的な細胞毒性を説明し、また、同位体が体内に投与される場合に必要とされる純度のレベルに厳しい要求を課す。汚染物質は体内に保持されて重大な損傷を引き起こす可能性があるので、これは汚染物質がα放射体でもある場合に特にあてはまる。放射化学純度は適度に実現可能な程度に高くあるべきであり、特に汚染物質がα放射体である場合には、標的化されていない放射性核種による汚染は最小減に抑えられるべきである。
【０００６】
227Acからの放射性崩壊系列は、227Thを生じ、その後223Raおよびさらなる放射性同位元素を導く。この系列の最初の3つの同位体を図６に示す（図６を下にも示す）。この表は、元素、227Thおよびそれに先行する同位体と後に続く同位体の分子量（Mw）、崩壊モード（モード）および半減期（年数（y）または日数（d）で表す）を示す。227Thの調製は227Acから始めることができる。227Ac自体はウラン鉱にごく微量に見出され、235Uに起源をもつ天然の崩壊系列の一部である。1トンのウラン鉱は約10分の1グラムのアクチニウムを含む、そのため、227Acは天然に見出されるものであるが、原子炉で226Raの中性子照射によって作られることがより一般的である。
【０００７】
【表１】
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【０００８】
この説明から、20年以上の半減期をもつ227Acが、医薬品用に上記崩壊系列から227Thを調製することに関して、非常に危険な潜在的汚染物質であることが分かる。しかし、たとえ一度227Acが安全なレベルに除去または減少されたとしても、227Thは19日未満の半減期をもつ223Raまで崩壊し続ける。223Raは、アルカリ土類金属であるので、トリウムまたはその他のアクチニドのために設計されたリガンドにはあまり簡単に配位されない。次に、この223Raは、安定した207Pbに至る前に4つのα崩壊と2つのβ崩壊を含む、制御されない可能性のある（非標的化）崩壊系列の始まりを形成する。これらは下の表に説明される：
【０００９】
【表２】
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【００１０】
上の2つの崩壊表から、223Raが227Thのどんな調製物からも完全に除去されることができないことは明白である。それは、227Thは常に崩壊し、223Raを生成しているためである。しかし、25MeVを超える放射エネルギーが、患者に投与された各々の223Ra核の崩壊から放出され、その後に核が安定な同位体に達することは明白である。また、2つの元素の異なる化学的性質に起因して、そのような223Raが、キレート化の系および227Thをその作用部位に輸送するように設計された特異的結合によって結合されず、標的化されないこともありうる。そのため、標的化細胞を死滅させ、治療効果を最大化し、副作用を最小にするために、投与の前に227Th調製物中の223Raのレベルを制御することが重要である。
【００１１】
227Thの223Raからの分離は、放射線学の実験室で素早く簡便に実行することができた。しかし、結果として得られる精製された227Thが投与部位に運ばれなければならないので、これは所望の結果を効果的に達成するものではない。
【００１２】
上記を考えると、実行するために幅広い訓練および経験を必要としない簡単な方法を用いて、治療現場でまたは治療現場の近くで、投与時または投与直前に実行することのできる、汚染物質223Raから227Thを精製する方法を提供することはかなりの利点であると思われる。強無機酸および／または強塩基の使用を回避することができるのであれば、安全および取り扱いの観点から有利であろう。これは、使用する試薬が最終製剤での直接使用に適している場合に特にあてはまる。また、少量を使用して、取り扱いを容易にし、汚染廃棄物の量を減らすことができる場合も有利であると思われる。この方法が、所望によりキットの形態でそのような同時調製に供給することのできる、簡単な試薬の群および装置の項目とともに実行できるのであれば、さらに有利であると思われる。
【００１３】
これまでに公知の227Thの調製は、一般に実験室用であり、かつ／または医薬品の基準に対して純度を試験されたことがなかった。例えば、国際公開第2004／091668号では、227Thは、単一カラムからの陰イオン交換によって調製され、純度の検証を行わずに実験目的で使用された。227Thのほとんどの調製方法において、分離の主目的は、長寿命の227Ac親同位体の除去であった。この方法は、227Acから予め精製した227Th試料中で内部成長した223Raの除去のために、これまで考案または最適化されてこなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第2004／091668号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Feinendegenら、Radiat Res 148：195−201（1997）
【非特許文献２】Wilbur，Antibody Immunocon Radiopharm 4：85−96（1991）
【非特許文献３】Hall，「Radiobiology for the radiologist」，第5版，Lippincott Williams＆Wilkins，Philadelphia PA，USA，2000
【発明の概要】
【００１６】
本発明者らは今回、1回の陽イオン交換精製ステップを用いて227Thの調製物から223Raを除去するために使用することのできる、迅速かつ簡単な精製手順を確立した。このように、この方法でいくつかの望ましい利点を提供する一方で、放射化学純度の非常に高い227Th溶液を製造することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
そのため、第1の態様において、本発明は、227Thと223Raを含む混合物からの227Thの精製のための方法を提供し、前記方法は、
i）第1の水性緩衝液に溶解した227Thイオンと223Raイオンの混合物を含む第1の溶液を調製するステップ；
ii）前記第1の溶液を分離材（例えば強陽イオン交換樹脂）に負荷（load）するステップ；
iii）227Thを分離材から溶出させ、それにより227Thを含む第2の溶液を生成するステップ；
iv）所望により、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材をすすぐステップ；
を含む。
一般に、ステップi）〜iv）は、上記の順序で実行されるが、その他のステップおよびプロセスが記載されるステップ中にまたはステップ間に実行されてもよいことは明らかである。
【００１８】
また、プロセスには、所望により以下のさらなるステップの少なくとも1つも含まれ、各々は、通常上記ステップi）〜iv）の後に実施される：
v）前記第2の溶液の227Th含有量を分析するステップ；
vi）前記第2の溶液から液体を蒸発させるステップ；
vii）前記第2の溶液に含まれる227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成するステップ；
viii）前記放射性医薬品を滅菌する（例えば滅菌濾過する）ステップ。
【００１９】
ステップvii）は、特に好ましくは追加のステップを形成する。
【００２０】
さらなる態様では、本発明は、1MBqの227Thあたり50KBq未満の223Ra、好ましくは1MBqの227Thあたり10KBq未満の223Raを含む、227Thの溶液またはその他の試料を提供する。そのような溶液は、本明細書に記載される方法のいずれかによって所望により形成されるかまたは形成可能であり、好ましくは本明細書に記載される好ましい方法によって形成されるかまたは形成可能である。同様に、本発明の方法は、好ましくは1MBqの227Thあたり50KBq未満の223Ra、好ましくは1MBqの227Thあたり10KBq未満の223Raを含む、227Thの溶液の形成のためのものである。対応する医薬品も提供され、それは無菌であってよく、少なくとも1つの（特に227Thに対する）錯化剤、少なくとも1つの（例えば前記錯化剤と複合化した）標的化剤、および所望により少なくとも1つの製薬上許容される担体または希釈剤を含みうる。
【００２１】
なおさらなる態様では、本発明は、227Thと223Raの混合物、第1の水性緩衝液、および分離材（例えば陽イオン交換樹脂）を含むキット（一般に本発明の方法を実行するためのキット）も提供する。227Thと223Raの混合物は（本発明のその他の態様の第1の溶液と同様に）、さらなる223Ra娘生成物も含む。そのような混合物は、貯蔵および輸送の間の精製されたかまたは部分的に精製された227Thの放射性崩壊の結果でありうる。
【００２２】
発明の詳細な説明
あらゆる種類の医薬品は、非常に高い純度基準まで、かつ、基準（例えば純度および無菌性の基準）を満たしているという非常に高い確信が得られるように、常に製造されなければならない。α放出放射性核種を被験体の身体に投与するには、これらを全て考慮することが必要とされ、高い放射化学純度の必要性がさらに加わる。長寿命の前駆体同位体からの精製は、放射化学純度の1つの重要な局面であるが、これは複合的な方法および取り扱い手順を利用することのできる専門的な放射化学研究室または工場で達成することができる。
【００２３】
しかし、目的の放射性核種がその他の放射性同位元素に崩壊する場合には、さらなるレベルの放射化学的精製が必要となろう。放射性娘同位体の生成は、体内放射性核種治療の毒性の一因であることが大いにあり、用量制限性でありうる。227Thの場合では、娘同位体はラジウム、アルカリ土類金属であるが、親はアクチニド系列の遷移金属である。このことは、これまでトリウムを結合するのに適していたどんなキレート化または錯化も、おそらく娘ラジウムを保持するには化学的に適していないことを意味する。α崩壊は、非常に高速でα粒子を放出した後の運動量の保存の結果として、非常に重要な「反跳」エネルギーを娘核にさらに与える。この反跳は、共有結合または配位相互作用よりも何倍も大きいエネルギーを有し、必然的に娘核を最初の親同位体の周囲環境の外に追いやることになる。
【００２４】
227Th崩壊により体内で生成された223Raおよびその娘の存在は用量制限性である可能性があるので、227Thの許容される治療線量をさらに制限するか、または副作用を悪化させる、（かなりの）さらなる不要な223Raが被験体に投与されないことが重要である。
【００２５】
本発明は、223Raの227Th試料への避けられない内部増加および被験体に送達される223Raを合理的な程度まで最小化したいという要望を考慮して開発された。223Raは、最初に1時間当たりの全放射能の約0.2％の割合で増加するので、この方法は、不要な線量を最小化するために、投与の2、3時間前までに実行されなければならない。同様に、227Thを調製の2〜4時間以内に使用することができるならば、この方法は、好ましくは223Raに関して約99％（例えば95％〜99.9％）の放射化学純度を有する227Thをもたらすはずである。使用前の内部増加はより厳密な精製方法のどんな利益も台無しにするので、より高い純度は、非効率的および／または無意味となりうるが、より低い純度（90％未満または95％未満の放射化学純度とする）は、現実的な投与時間を可能にするとしても223Raの線量（従って毒性）は、当然、さらに制限されうるので望ましくない。
【００２６】
一実施形態では、本発明で用いる227Thと223Raの混合物は、227Thで始まる崩壊系列にない放射性同位元素をあまり含まない。特に、本発明の態様のいずれかで用いる227Thと223Raの混合物は、好ましくは100MBqの227Thあたり20Bq未満の227Ac、好ましくは100MBqの227Thあたり5Bq未満の227Acを含む。
【００２７】
本発明は、体内放射性核種治療での使用に適した純度レベルの227Thの製造方法を提供する。この系のいくつかの好ましい特徴が下に示され、その各々は、別に明示されない限り、技術的に実行可能な任意のその他の特徴と組み合わせて使用されてよい。
【００２８】
本発明の方法および全ての対応する実施形態は、好ましくは患者への投与に適した規模で実行される。この規模は、1回の治療線量の場合であってもよいし、各々が線量を受ける多数の対象に適した規模であってもよい。一般に、この方法は、1〜5時間以内の投与、例えば約1〜10の一般的な線量の223Raなどに適した規模で使用される。単一用量の精製は、好ましい一実施形態を形成する。明らかに、典型的な線量は適用に依存する、しかし、典型的な線量は0.5〜100MBq、好ましくは1〜25MBq、最も好ましくは約1.2〜10MBqでありうることが予想される。プールした投薬量の精製は、可能であれば、20までの、好ましくは10までの、または5までの典型的な線量を用いて実行される。従って精製は200MBqまで、好ましくは100MBqまでで実行され、必要に応じて精製後に個別の線量に分割されてよい。
【００２９】
本発明の方法のステップi）は、227Thおよび223Raを含む溶液（そして一般に223Ra娘同位体も含む−上表に記載の娘同位体を参照）に関する。そのような混合物は、227Thの試料が徐々に崩壊することによって本質的に生じるが、本発明で使用するためには、以下の特徴の1以上を、個別に、または任意の実行可能な組合せで有することも好ましい：
a）227Th放射能が、少なくとも0.5MBq（例えば、0.5MBq〜200MBq）、好ましくは少なくとも0.5MBq、より好ましくは少なくとも1.2MBqでありうる；
b）溶液が、第1の水性緩衝液中で形成されうる；
c）溶液の体積が、50ml以下（例えば、0.5〜10mlまたは0.5〜5ml）、好ましくは10mlまたは5ml以下、より好ましくは3ml以下でありうる。
d）第1の水性緩衝液が、3〜6.5の間のpH、好ましくは3.5〜6の間、特に、3.8〜5.8の間でありうる。
e）第1の水性緩衝液が、0.01〜0.2M、例えば0.03〜0.05Mまたは0.1〜0.2Mの濃度で使用されうる。
f）第1の水性緩衝液が、少なくとも1つの有機酸緩衝液を含みうるか、それから本質的になりうるか、またはそれからなりうる。
g）第1の水性緩衝液が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびその混合物から選択される少なくとも1つの有機酸緩衝液を含みうるか、それから本質的になりうるか、またはそれからなりうる。
h）第1の水性緩衝液が、所望により少なくとも1つのフリーラジカルスカベンジャーおよび／または少なくとも1つのキレート剤（特に非緩衝キレート剤）をさらに含む。それぞれの多くが当技術分野で公知であり、それには、pABA（スカベンジャー）およびEDTA（キレート剤）が挙げられる。
i）第1の水性緩衝液が、所望により塩をはじめとするその他の添加剤、例えばNaClなどをさらに含みうる。
【００３０】
本発明の方法のステップii）は、分離材（例えば、陽イオン交換樹脂）への第1の溶液の負荷に関する。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）分離材が、陽イオン交換樹脂またはヒドロキシアパタイト、好ましくは強陽イオン交換樹脂でありうる。
b）樹脂（例えば強陽イオン交換樹脂）が、シリカ系樹脂でありうる；
c）陽イオン交換樹脂が、1以上の酸性官能基を含みうる；
d）陽イオン交換樹脂が、少なくとも1つの酸性部分と好ましくは少なくとも1つのカルボン酸またはスルホン酸部分、例えばプロピルスルホン酸（PSA）樹脂などのアルキルスルホン酸樹脂を含みうる；
e）樹脂（例えば強陽イオン交換樹脂）が、5〜500μm、好ましくは10〜200μmの平均粒度を有しうる。
f）分離材（例えば、陽イオン交換樹脂）が、カラムの形態で使用されうる。
g）使用する分離材（例えば樹脂）の量（例えばカラム充填時）が、100mg以下、（例えば2〜50mg）、好ましくは10〜50mgでありうる。
h）分離材（例えば樹脂）が、第1の溶液を負荷する前に1以上のボリュームの水性媒体で洗浄することによってプレコンディショニングされうる。通常、緩衝液、より好ましくは第1の水性緩衝液をプレコンディショニングに使用する。
【００３１】
本発明の方法のステップiii）は、227Thを前記分離材（例えば強陽イオン交換樹脂）から溶出し、それにより227Thを含む第2の溶液を生成することに関する。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）溶出が、溶離剤溶液を用いて、または「乾燥（dry）」溶出によって、例えば重力下、遠心力下または上からのガス圧力および／または下からの真空下での溶出によるものでありうる；
b）溶出が溶離剤溶液を用いる場合、これが水性緩衝液、例えば、有機酸緩衝溶液を含む、本明細書に記載されるあらゆる緩衝液などでありうる；
c）溶出が、「乾燥」手段、好ましくは重力または遠心力下、例えば遠心機でのスピニングなどによるものでありうる。
d）遠心力による溶出が、重力の少なくとも1000倍、好ましくは少なくとも2000倍または少なくとも10000倍の「相対遠心力」（RCF）（例えば1000〜50000gのrcf）で10秒から10分の間、好ましくは20秒から5分の間の溶出でありうる；
【００３２】
本発明の方法のステップiv）は、第1の水性洗浄媒体を用いて前記分離材（例えば強陽イオン交換樹脂）をすすぐ随意のステップに関する。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）第1の水性洗浄媒体が、水、例えば蒸留水、脱イオン水または注射水などでありうる、または本明細書に記載されるような有機酸緩衝液などの緩衝液でありうる；
b）第1の水性洗浄媒体が、第1の緩衝液と同じ緩衝液を含みうる；
c）随意の洗浄ステップが省略されうる；
d）随意の洗浄ステップが、本明細書に記載される「乾燥」溶出の後に第1の洗浄媒体を樹脂に添加すること、そしてその後洗浄媒体を、例えば重力または遠心分離などによって「乾燥」溶出することを含みうる；
e）洗浄ステップで溶出した溶液、227Thを含む第2の溶液と合せられることがある。
【００３３】
本発明の方法のステップiv）の後、分離材（例えば樹脂）は、一般に放射性廃棄物として処分される。必要とされる樹脂の量は一般に極めて少ないので（例えば50mg未満）、これは大きな処分問題とならない。しかし、樹脂を再使用するかまたは分析もしくは任意のその他の理由のために223Raを回復することを望む場合、任意の適した媒体を用いて223Raを溶出してもよい。そのような回復に適した媒体としては、緩衝液、例えば本明細書に記載されるもの、および水性無機酸、例えばHClおよびH2SO4が挙げられる。樹脂を再使用する場合、それは再使用の前に一般に数ボリュームの第1の緩衝液で再生される。
【００３４】
本発明の方法は、いくつかの随意のステップを含んでよく、その各々は、技術的に可能な限り独立して存在していてもよいし存在しなくてもよい。
【００３５】
本発明の方法のステップv）は、所望により第2の溶液の227Th含有量を分析することに関する。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）227Thは、ガンマ検出／分光法によって、例えばゲルマニウム半導体検出器（高純度ゲルマニウム検出器−HPGe）を使用することなどによって分析されてよい；
b）227Th含有量は、望ましい医薬品線量と比較され、基準濃度、または投与のために引き出された適切な線量に希釈される。
【００３６】
本発明の方法のステップvi）は、液体を前記第2の溶液から蒸発させる随意のステップに関する。このステップは、最終医薬組成物が少量である場合に望ましいことがある。一般に、第1の水性緩衝液は、（本明細書に記載される）標識化反応に適合し、生理学的に容認できる（すなわち、使用する濃度および量での注射に適している）ように選択される。このように、濃縮ステップvi）は、好ましくは回避される。必要であれば、このステップを含めてよく、その中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）蒸発は、減圧下で実施されうる（例えば1〜500mbar）。
b）蒸発は、高温下で実施されうる（例えば50〜200℃、好ましくは80〜110℃）；
【００３７】
本発明の方法のステップvii）は、ステップi）〜iv）を用いて精製された227Thの少なくとも一部分から少なくとも1つの放射性医薬品を形成する随意のステップに関する。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる。さらに、本明細書において示される放射性医薬品の特徴の全ては、特にその医薬品が本発明の方法によって形成されるかまたは形成可能である場合に、本発明の医薬品の態様の好ましい特徴をなす：
a）前記第2の試料（ステップi）〜iv）によって精製）からの227Th部分が、1MBq〜100MBq、好ましくは1〜10MBqでありうる。
b）放射性医薬品が、少なくとも1つの錯化剤を含みうる。
c）錯化剤が、8配位リガンドを含みうる。
d）錯化剤が、ヒドロキシピリジノン（HOPO）リガンドなどのヒドロキシピリジノン、好ましくは8配位3，2−ヒドロキシピリジノン（3，2−HOPO）を含みうる。
e）放射性医薬品が、標的化部分を含みうる。
f）標的化部分が、抗体、抗体構築物、抗体フラグメント（例えば、FABまたはF（AB）’2フラグメントまたは少なくとも1つの抗原結合領域を含む任意のフラグメント）、あるいはかかるフラグメントの構築物でありうる。
g）標的化部分が、受容体または受容体結合剤（例えば、ホルモン、ビタミン、葉酸または葉酸類似体）ビスホスホネートまたはナノ粒子でありうる。
h）標的化部分が、「表面抗原分類」（CD）細胞表面分子（例えば、CD22、CD33、CD34、CD44、CD45、CD166等）などの少なくとも1つの疾病関連抗原に対して特異性を有しうる。
i）標的化部分が、標的化複合体を形成するために共有結合リンカーによってリガンド部分に連結されうる。
j）形成方法が、前記第2の試料に含まれる227Thの部分を標的化複合体とともにインキュベートすることを含みうる。かかるインキュベーションは、50℃よりも低い温度、好ましくは10〜40℃、例えば20〜30℃などのものでありうる。かかるインキュベーションは、2時間未満、例えば1分から60分など（例えば、1〜15分）、好ましくは15〜45分の期間のものでありうる。
k）注射可能な放射性医薬品を形成するために製薬担体、希釈剤、緩衝液、塩、防腐剤等が添加されうる。
l）前記第2の溶液から錯体形成された227Thが、所望により調製と投与との間の間隔を修正して、ステップv）で得られた放射能測定に基づく基準放射能に希釈されうる。
【００３８】
本発明の様々な態様で形成されるかまたは形成可能である放射性医薬品は、任意の適した疾患、例えば腫瘍性または過形成性疾患（例えば、癌腫、肉腫、黒色腫、リンパ腫、または白血病）の治療で使用されてよい。そのような医薬製剤とそのような医薬製剤の使用の両方、ならびに対応する被験体の治療方法は、本発明のさらなる態様を形成する。そのような被験体は、一般にそれを必要とする被験体、例えば腫瘍性または過形成性疾患（例えば本明細書に記載される疾患）に罹患している被験体などである。本発明は、放射性医薬品をステップi）〜iv）、vii）ならびに所望によりステップv）、vi）および／またはviii）のいずれかによって形成し、前記放射性医薬品を（例えば、静脈注射によるかまたは特定の組織または部位に直接に）被験体に投与することを含む、前記被験体（例えばそれを必要とする被験体）への前記放射性医薬品の投与方法をさらに提供する。
【００３９】
本発明の方法のステップviii）は、溶液または医薬品（特にステップvii）で形成されたもの）を滅菌濾過することを含む、随意のステップである。このステップおよびその中に述べられる実体は、以下の好ましい特徴を個別に、または任意の実行可能な組合せ、所望により本明細書に記載されるその他のステップの特徴のいずれかとの実行可能な組合せで有しうる：
a）濾過が、適した膜、例えば0.22μm（またはそれ以下）の膜によるものでありうる。
b）濾過が、適したシリンジフィルタを通過する、シリンジによるものでありうる。
【００４０】
上記のステップに加えて、本発明の方法および全ての対応する態様は、追加のステップを、例えば医薬品目的の227Thの純度を検証するため、対イオンを交換するため、溶液を濃縮または希釈するため、またはpHおよびイオン強度などの要素を制御するために含んでよい。これらのステップの各々は、従って、本発明の様々な態様の随意であるが好ましい追加のステップを形成する。
【００４１】
本発明の方法は、高収率の227Th生成物を提供することが好ましい。これは、廃棄物または有用な生成物を避けたいという要望のためだけでなく、全ての失われた放射性物質が、安全に処分しなければならない放射性廃棄物を形成するためである。従って、一実施形態では、ステップii）で負荷された227Thの少なくとも50％（例えば、50〜90％または50％〜98％）が、ステップiv）で溶出される。これは、好ましくは少なくとも70％、より好ましくは少なくとも80％、最も好ましくは少なくとも85％の収率となる。
【００４２】
本発明の対応する態様では、227Thおよび所望により少なくとも1つの製薬上許容される希釈剤を含む医薬組成物がさらに提供される。そのような医薬組成物は、所望により本発明の方法により形成されるかまたは形成可能である、本明細書に示される純度の227Thを含むことができる。注射水、pH調整剤、および緩衝液、塩（例えばNaCl）およびその他の適した材料をはじめとする適した担体および希釈剤は、当業者に周知である。
【００４３】
医薬組成物は、本明細書に記載されるような227Thを一般にイオン、例えばTh4＋イオンなどとして含む。かかる組成物は、本発明の227Thの単塩を含むことができるが、より好ましくは、本発明の227Thと少なくとも1つのリガンドの錯体、例えば8配位3，2−ヒドロキシピリジノン（3，2−HOPO）リガンドを含む。適したリガンドは、参照により本明細書に援用される国際公開第2011／098611号に、特にその中に開示される典型的な適したHOPOリガンドを表す式I〜IXに関して開示されている。かかるリガンドは、それら自体で使用されてもよいし、少なくとも1つの標的化部分、例えば抗体などと複合化されていてもよい。抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント（例えば、FABまたはF（AB）’2フラグメントまたは少なくとも1つの抗原結合領域を含む任意のフラグメント）、フラグメント（例えば、一本鎖抗体）の構築物またはその混合物が特に好ましい。このように、本発明の医薬組成物は、3，2−ヒドロキシピリジノン（3，2−HOPO）リガンドの複合体および少なくとも1つの抗体、抗体フラグメントまたは抗体構築物の複合体と錯体形成された、本明細書に開示される製薬純度の227ThのTh4＋イオンを、所望により製薬上許容される担体および／または希釈剤を加えて含んでよい。医薬組成物に関して本明細書に記載される実施形態は、実行可能な対応する方法の実施形態も形成し、逆もまた同じである。
【００４４】
本明細書において、用語「含む」は、さらなる成分が所望により存在していてもよいオープンの意味で記載される（このため「オープン」と「クローズド」の両方の形態を開示する）。その一方、用語「からなる」は、クローズドの意味だけに与えられるので、（効果的な、測定可能な、かつ／または絶対的な程度まで）、示される物質（必要に応じて随意の物質を含む）だけが存在する。相応して、「から本質的になる」と記載される混合物または物質は、どんな追加の成分も基本的な挙動に重要な程度まで影響を及ぼさないように、述べられた成分から本質的になる。かかる混合物は、例えば、5％未満（例えば、0〜5％）のその他の成分、好ましくは1％未満、より好ましくは0.25％未満のその他の成分を含む。同様に、用語が「実質的に」、「およそ」、「約」または「ほぼ」として所与の値に与えられる場合、これは与えられる正確な値を考慮に入れ、特に記載される特性の実体に影響を及ぼさない場合に、小さな変動を独立に考慮に入れる。かかる変動は、例えば±5％（例えば、±0.001％〜5％）、好ましくは±1％、より好ましくは±0.25％でありうる。
【００４５】
本発明を、以下の限定されない例および添付の図面を参照することによってさらに説明する。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】90日にわたる227Thの経時的な崩壊ならびに223Raおよび娘同位体の対応する内部増加を示す図である。
【図２】227Thの223Raを介して安定した207Pbまでの放射性崩壊系列を示す図である。
【図３】227Thを内部成長した223Raから分離し、精製した227Thを抗体／リガンド複合体と錯体形成するために投与直前に実行される精製および標識化ステップを示す図である。
【図４】樹脂15.0mg（a）および樹脂30.0mg（b）の、クエン酸緩衝製剤からの223Raの取込みに及ぼす緩衝液濃度（M）（y軸）およびpH（x軸）の影響を示す図である。
【図５】添加剤なし（a）およびpABAとEDTAを含む（b）酢酸緩衝製剤からの227Thの取込みに及ぼすpH（x軸）および樹脂量（mg）（y軸）の影響を示す図である。
【図６】227Acからの放射性崩壊系列の最初の3つの同位体を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
以下の説明文は、本願の対応する図面に適用される：
【００４８】
図3−崩壊した227Thの精製および標的化されたトリウム複合体（TTC）の調製；マイクロスピンカラムで精製し、その後精製した227Thを複合体（抗体とキレート剤）で標識化することによる、緩衝製剤からの223Raの隔離。
【００４９】
図4−様々なクエン酸緩衝液濃度（M）（ｙ軸）およびpH（ｘ軸）の、（a）15.0mgおよび（b）30.0mgのPSA樹脂の223Raの取込み（％）への影響。
【００５０】
図5−様々なPSA樹脂質量（mg）（ｙ軸）および緩衝液pH（ｘ軸）の、a）添加剤pABA／EDTAを含まないがb）pABA／EDTA添加剤を含む酢酸緩衝液からのPSAへの227Thの取込み（％）への影響。
【００５１】
実施例
材料
酢酸ナトリウム三水和物（≧99.0％）、クエン酸三ナトリウム二水和物、（≧99.0％）、4−アミノ安息香酸ナトリウム塩（pABA、≧99％）、エデト酸二ナトリウム（EDTA、USP試験規格に合致）、および水酸化ナトリウム（98.0〜100.5％）は、シグマ−アルドリッチ（ノルウェー、オスロ）より購入した。金属フリー水（TraceSELECT（商標））はFLUKA（スイス、ブフス）より購入した。塩化ナトリウム（分析用）、塩酸（発煙、37％、分析用）および酢酸（氷、分析用100％無水物）はメルクミリポア（ドイツ、ダルムシュタット）より購入した。クエン酸一水和物（分析用試薬）はVWR（米国、ウエストチェスター）より購入した。シリカに基づくPSA（プロピルスルホン酸）陽イオン交換樹脂は、Macherey Nagel（ドイツ、デューレン）より購入した。NAP5カラムは、GEヘルスケア・バイオサイエンスAB（スウェーデン、ウプサラ）より購入した。マイクロスピンカラムは、サーモサイエンティフィックピアス（製品番号89879（米国ロックフォード）より購入した。
【００５２】
複合体は、自社製品であり、クエン酸ナトリウム緩衝液0.10M pH5.5および0.90％（w／w）塩化ナトリウム中5mg／mlトラスツズマブからなった。この複合体は、トラスツズマブ抗体と結合した自社キレート剤から作製された。ハーセプチン（登録商標）（注入溶液用濃縮物の粉末150.0mg）のトラスツズマブは、Roche Registration Limited（英国、Welwyn Garden City）の商標である。
【００５３】
利用可能な放射能源は、0.05M塩酸および金属フリー水（自社製品）中の崩壊した227Th（トリウム（IV）として）であった。227Thは、223Raの量が（ラジウム（II）として）ほぼ1：1の比の227Thと223Raを構築するまで、およそ1半減期の19日間、崩壊させた。
【００５４】
実施例1−緩衝製剤の調製
ストッククエン酸緩衝液（0.10M pH4.0、0.10M pH5.5、0.05M pH 5.0、および0.07M pH4.8）およびストック酢酸緩衝液（0.10M pH4.0、0.10M pH6.0、0.10M pH5.5、0.07M pH4.8、および0.10M pH5.0）を、金属フリー水中で調製し、必要に応じてさらに希釈した。その後、pABA（2.0mg／ml）およびEDTA（2.0mM）を選択された製剤に添加した。その上、イオン強度を調節するために、選択されたクエン酸緩衝製剤を塩化ナトリウム（0.45または0.90％（w／w））に添加した。
【００５５】
使用する全ての賦形剤は、静脈注射に適した認可製剤についてのFDAの不活性成分リストに含まれる。
【００５６】
メトラー・トレド（ノルウェー、オスロ）製の目盛り付きsevenMulti（商標）pH計を使用してストックおよび最終製剤のpHを周囲温度で測定した。
【００５７】
実施例2  PSA陽イオン交換樹脂を用いるマイクロスピンカラムの調製
1500.00mgのPSAシリカ樹脂を、15.00mlの金属フリー水に懸濁した。懸濁液をボルテックスミキサーで浸透して均質性を確保した後、適当な量をマイクロスピンカラムに移して15.0、22.5、および30.0mgの樹脂量をそれぞれ得た。その後、水を除去するために、エッペンドルフ・サーモミキサー・コンフォート（ドイツ、ハンブルク）によってカラムを10000rcfで1分間回転させた。
【００５８】
カラムを、300μlのそれぞれの緩衝製剤でコンディショニングした。過剰量は、サーモミキサーで10000rcfで1分間のスピニングによって除去し、乾燥したカラムを得た（n＝2、DOE試料と中心点）。
【００５９】
実施例3−精製
600μlのそれぞれの緩衝製剤を、0.05M塩酸中、およそ400kBqの227Thおよび400kBqの223Raと混合した（すなわち、放射能濃度に応じて、塩酸中1−5μlの崩壊227Th）。その後、体積の半分を各カラムに添加した（n＝2）。次に、カラムをサーモミキサーで10000rcfで1分間回転させ、カラムを乾燥した状態にした。溶出液は、カラムの下のエッペンドルフチューブに収集した。
【００６０】
実施例4−放射線測定
実施例3の分離法の後の陽イオン交換カラムと溶出液中の223Raおよび227Thの量を測定した後、カラムと溶出液との間の放射性核種の分布を計算した。Ortec（テネシー州オークリッジ）製の高純度ゲルマニウム（HPGe）−検出器（GEM（15））から得たHPGeスペクトルを使用した。この検出器は、およそ30〜1400keVの範囲のγエネルギーをもつ放射性核種を識別し、数値化する。HPGe検出器で分析した全ての試料は、同じ場所に置いて1分間計数した。標準的な放射能を確保し、放射化学（放射性同位元素）純度を検証するために、放射性医薬品を調製する前に、この方法を用いて溶出液中の放射性同位元素濃度を分析することができた。
【００６１】
実施例5  精製した227Thによるトラスツズマブ複合体の標識化
350μlのそれぞれの緩衝製剤を、0.05M塩酸中、およそ1000kBqの227Thおよび1000kBqの223Raと混合した（すなわち、放射能濃度に応じて、塩酸中1−5μlの崩壊227Th）。体積の半分を各マイクロスピンカラムに添加した（n＝2）。次に、カラムをサーモミキサーで10000rcfで1分間回転させ、カラムの下のエッペンドルフチューブ中の溶出液でカラムを乾燥した状態にした。陽イオン交換カラムと溶出液中の227Thおよび223Raの量を高純度ゲルマニウム（HPGe）−検出器GEM（15）で測定した後、複合体を標識するためにさらに使用するために、溶出液中の227Thの量を計算した。
【００６２】
トラスツズマブ−キレート剤複合体の凍結試料（5.00mg／ml）を周囲温度と平衡化させた。次に、160μlの複合体をエッペンドルフチューブに移し、マイクロスピンカラムから得た選択したクエン酸緩衝製剤中、160μlの溶出液と混合した（およそ500kBqの227Th）。試験した製剤は、0.10Mクエン酸緩衝液pH5.5と、pABA＋EDTAを含有する等価な緩衝製剤であった（n＝2）。次に、サーモミキサーで試料を30分間振盪した（22℃、750rpm、10秒サイクル）。
【００６３】
実施例6−標識化反応の検証
放射性医薬品の放射化学純度（RCP）は、結合形態（TTC）で存在する227Th（この場合）と、その非結合形態の227Th（遊離放射性核種）の間の関係である。RCPは、200μlのそれぞれの標識複合試料（TTC）をNAP5カラムに添加することによって計算し、製造業者によって提供されるカラムの標準的な手順に従って、HPGe検出器スペクトルを用いてNAP5カラム（サイズ排除クロマトグラフィー）および溶出液中の227Th取込みの量を分析した（n＝2）。
【００６４】
Bayer AS社の基準によれば、標識化反応の成功は、TTCについて90％を超える放射化学純度をもたらす（Monoclonal Antibody and Peptide−Targeted Radiotherapy of Cancer，Wiley，2010）。トラスツズマブ複合体の精製した崩壊した227Thによる標識化は、pH5.5の0.10Mクエン酸緩衝液を含有する製剤と、同様にpABA＋EDTAを含有する同等の製剤の両方の必要条件の範囲内である（n＝2（表6））。
【００６５】
実施例7−分離最適化。
実験計画（DOE）は、シリカ／PSAマイクロスピンカラム上の227Thから223Raを分離するための条件を調査し、最適化するように考案した。各緩衝液（クエン酸塩および酢酸塩）について、以下の変数を調査した：
【００６６】
【表３】
2019509327.tif 000005
【００６７】
実施例1〜6に示される分離方法論を用いて、DoE変数の各々を調査した。結果を図4および図5に示す。これらの図はPSA樹脂での放射性同位元素取込みへの様々なパラメータの影響を示す。
【００６８】
最適な分離条件は、以下の通りであることが見出された：
【００６９】
【表４】
2019509327.tif 000006
【図１】
2019509327.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2019509327.tif 000011
【図６】
2019509327.tif 000012
【国際調査報告】
2019509327.tif 000013
2019509327.tif 000014
2019509327.tif 000015