(57)【要約】フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法及びシステムが提供される。ある実施形態による本方法の態様は、フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを含む。主題の方法を実施するためのシステムであって、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むための画像センサ、及び、画像化されたフローストリーム内の中断における外乱を特定することと、画像化されたフローストリームを用いて滴下遅延を計算することとを行うように構成されたプロセッサと有するシステムも提供される。非一時的なコンピュータ可読記憶媒体も記載される。
2019529883.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定する方法であって、
前記フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、
前記画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、
前記特定した外乱に基づいて前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することと
を含む方法。
【請求項２】
前記外乱は前記フローストリームの開扇または前記フローストリームの偏向である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することは、
前記外乱の最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを含み、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記所定の滴等量は１／２滴等量である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、位相マスクを適用することを含む請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記位相マスクは１／３２滴等量増分を含む請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、８／３２滴等量位相マスクを適用することを含む請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することは、
１／２滴等量オフセット位相マスクを適用する一方で前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延と同等の所定の滴を添加して、前記フローストリームの前記滴下遅延を決定することとを含む請求項３または４に記載の方法。
【請求項９】
前記１／２滴等量オフセット位相マスクが適用されたときに、外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に滴等量を添加しないことを含む請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記フローストリームの前記画像を検出フィールドにおいて取り込む請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出フィールドは、フローストリーム中断点から上流でレーザ照射点から下流のフローストリームを含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記フローストリームを光源によって照明する請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記決定した滴下遅延に応じて前記フローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整することをさらに含む請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
フローサイトメータのフローストリームの１つ以上の画像を取り込むように構成された画像センサと、
メモリが動作可能に結合されたプロセッサであって、前記メモリには、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいて前記フローストリームの滴下遅延を計算することとを行う命令が記憶されている、プロセッサと
を含むシステム。
【請求項１５】
フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための命令が記憶された非一時的なコンピュータ可読記憶媒体であって、
前記命令は、
画像センサを用いてフローストリームの画像を取り込むためのアルゴリズムと、
画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定するためのアルゴリズムと、
前記特定した外乱に基づいて前記フローストリームの滴下遅延を計算するためのアルゴリズムとを含む非一時的なコンピュータ可読記憶媒体。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
流体サンプル中の粒子（たとえば、血液サンプルの細胞、または任意の他のタイプの生物学または化学サンプル中の対象粒子）を分析及びソートするために、フローサイトメータが用いられる。フローセル内では、粒子を含むストリームの周りに液体シースが形成されて、フローストリームに略均一な速度を与えている。フローストリームがフローセルを出るときに経由するノズルは、望ましい流体システム及びソートレートにとって適切なノズル直径を有している。フローセルは、ストリーム内の粒子（たとえば、細胞）を流体力学的にフォーカスして、照射源（たとえば、レーザビーム）の中心を通っている。
【０００２】
フローストリーム内の対象粒子が照射源を通過する交差部は、検査点と言われることが多い。対象粒子（たとえば、細胞）が、検査点を通って移動するときに、照射源（たとえば、レーザ）からの光が散乱される。光はまた、蛍光特性を有するセルストリーム内の構成要素（たとえば流体サンプルに添加されて、対象とする特定のセルに付着している蛍光マーカー）を励起することができる。
【０００３】
静電気の方法によってセルをソートするフローサイトメータでは、所望のセルは、帯電された液滴内に含まれている。液滴を帯電させるために、フローセルは帯電要素を含んでいる。セルストリームはフローセルから実質的に下方に垂直方向に出るため、液滴もその形成後にその方向に伝搬する。検査レーザによって標的粒子が検出されたときに、標的粒子を含む液滴に電荷を印加する。滴下遅延値は、標的粒子が検出されたレーザ検査点と連続流ストリームから液滴が中断する点との間の時間距離である。中断点より上方では、フローストリームは連続的で接続しており、それより下方では、フローストリームは離散液滴として分離している。一般的に、滴下遅延は、液滴に電荷を印加する前から標的粒子を検査レーザを用いて検出した後までセルソーターが待機する時間（滴等量における）である。フローサイトメータ構成要素内のフローストリームまたはドリフト内に存在する粒子のサイズに変動性があると、フローストリーム内の滴が対象粒子を含むか否かの予測可能性に影響を与える可能性がある。粒子を含む液滴の不正確な予測（たとえば、間違った液滴に電荷を印加すること）があると定性分析にとって有害であり、不正確なセルソートティング、ソートされたサンプルの汚染、ならびに生体サンプルの量的減少に至る可能性がある。
【発明の概要】
【０００４】
本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法を含む。ある実施形態による方法は、フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを含む。いくつかの実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの開扇である。他の実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの偏向である。実施形態において、方法は、検出フィールドにおいてフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことと、検出フィールドにおいてフローストリーム内の外乱を特定することとを含む。いくつかの実施形態では、検出フィールドは、フローストリーム中断点から上流でレーザ照射点から下流のフローストリームを含む。
【０００５】
また方法は、いくつかの実施形態により、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定することを含む。フローサイトメータの滴下遅延を、ある範囲の滴下遅延に渡って設定してもよく、中断点における外乱を各滴下遅延において視覚化して、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を特定する。いくつかの実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの開扇であり、本方法は、滴下遅延の範囲に渡ってフローサイトメータを設定することと、中断点においてフローストリームの最大の開扇量を形成する滴下遅延を特定することとを含む。他の実施形態では、外乱はフローストリームの偏向（すなわち、軌道のずれ）であり、本方法は、滴下遅延の範囲に渡ってフローサイトメータを設定することと、フローストリームの長手軸からの最大の偏向量を形成する滴下遅延を特定することとを含む。特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定するために、位相マスクを適用してもよく、たとえば１／３２滴等量増分を有する位相マスクである。
【０００６】
本開示のある実施形態により滴下遅延を計算することは、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定することと、特定した外乱の最大振幅を形成する決定した滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを含む。結果としての滴下遅延は、特定のストリーム条件にとって最適化された滴下遅延である。たとえば、滴等量は１／３２滴等量〜１滴等量（たとえば１／２滴等量）の範囲であってもよい。ある状況では、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に滴等量は添加しない。いくつかの実施形態では、所定の滴等量は半分の滴である。他の実施形態では、フローストリームの滴下遅延を計算することは、所定のオフセットを適用しながら、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定することを含む。たとえば、滴下遅延の計算を、１／２滴等量オフセットが適用された後に、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定することによって行ってもよい。
【０００７】
ある実施形態では、主題の方法によって、フローサイトメータのセットアップ中かまたは異なるサンプルの分析の間にユーザ入力または手動調整を行う必要性が減る。いくつかの実施形態では、対象とする方法は、フローサイトメータを部分的または完全に自動化して、フローサイトメータのパラメータ（たとえば滴下遅延の計算）をプロセッサ制御してもよい。ある実施形態では、本方法は、何らの人間の入力も用いずにフローサイトメータの滴下遅延を決定することを含む。たとえば、方法は、較正粒子（たとえば、蛍光ビーズ）がない状態でフローストリームの滴下遅延を決定することを含んでいてもよい。フローサイトメータのパラメータを、決定した滴下遅延に応じて調整してもよい。たとえばフローストリームの電荷を印加するタイミングを変えること、帯電パルスの継続時間、電荷の電圧を調整すること、またはフローストリームの流量を変えることである。
【０００８】
また本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するためのシステムを含む。ある実施形態によるシステムは、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むように構成された画像センサと、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを有するプロセッサとを含み、メモリは、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを行う命令を含む。たとえば、メモリは、中断点におけるフローストリームの開扇または中断点におけるフローストリームの偏向を特定する命令を含んでいてもよい。実施形態において、主題のシステムは、検出フィールドにおいてフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことと、検出フィールドにおいてフローストリーム内の外乱を特定することとを行うように構成されている。ある場合には、検出フィールドは、フローストリーム中断点から上流でレーザ照射点から下流のフローストリームを含む。
【０００９】
また本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための非一時的なコンピュータ可読記憶媒体を含む。ある実施形態による非一時的なコンピュータ可読記憶媒体は、画像センサを用いてフローストリームの画像を取り込むためのアルゴリズム、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定するためのアルゴリズムと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算するためのアルゴリズムと、を有する命令が記憶されている。非一時的なコンピュータ可読記憶媒体はまた、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定するためのアルゴリズムを含んでいてもよい。これらの実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、滴下遅延の範囲に渡ってフローサイトメータを設定するためのアルゴリズムと、特定した外乱のその最大振幅を形成する滴下遅延を決定するためのアルゴリズムとを含む。たとえば、コンピュータ可読記憶媒体は、中断点においてフローストリームの最大開扇量を形成する滴下遅延を決定するアルゴリズム、またはフローストリームの長手軸からの最大の偏向量を形成する滴下遅延を決定するアルゴリズムを含んでいてもよい。
【００１０】
本発明は、以下の詳細な説明を添付図面とともに読んだときに最も良く理解され得る。図面には以下の図が含まれている。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ある実施形態によるフローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するためのフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法及びシステムを含む。ある実施形態による方法は、フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを含む。フローストリームの１つ以上の画像を取り込むための画像センサと、画像化されたフローストリーム内の中断における外乱を特定し、画像化されたフローストリームを用いて滴下遅延を計算するように構成されたプロセッサとを有する主題の方法を実施するためのシステムが提供される。非一時的なコンピュータ可読記憶媒体も記載されている。
【００１３】
本発明をより詳細に説明する前に、当然のことながら、本発明は記載した特定の実施形態には限定されず、したがって変わってもよい。また当然のことながら、本明細書で用いる専門用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することは意図していない。なぜならば、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定されるからである。
【００１４】
ある値の範囲が与えられた場合、当然のことながら、その範囲の上限値と下限値との間に存在する各値（文脈から明らかにそうでないと示される場合を除いて下限値の単位の１０分の１まで）及びその記載範囲における任意の他の記載値または間に存在する値が本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、独立してより小さい範囲に含めてもよく、やはり本発明に包含されるが、記載範囲における任意の具体的に除外された限界の支配を受ける。記載範囲に限界の一方または両方が含まれる場合、含まれるこれらの限界の一方または両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
【００１５】
別に定義がない限り、本明細書で用いる技術及び科学用語はすべて、本発明が属する当業者が広く理解するものと同じ意味を有する。本明細書で説明したものと同様または同等の任意の方法及び材料を、本発明を実施または試験するときに用いることもできるが、典型的な例示的方法及び材料について次に説明する。
【００１６】
本明細書中で引用した刊行物及び特許はすべて、個々の刊行物または特許が参照により取り入れられることを具体的及び別個に示されたかのように、本明細書において参照により取り入れられ、また刊行物を引用する際に伴う方法及び／または材料を開示及び記載するように、本明細書において参照により取り入れられている。任意の刊行物を引用することは、出願日前にそれを開示するためであり、本発明には先行発明によってこのような刊行物に先行する権利がないと認めていることであると解釈すべきではない。さらに、記載した刊行物の日付は、独立に確認する必要があり得る実際の刊行日付と異なっている場合がある。
【００１７】
本明細書で用いる場合、また添付の請求項では、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から明らかにそうでないと示される場合を除いて複数の指示対象を含むことに注意されたい。さらに、任意の随意的な要素を除外するように請求項が作成されている場合があることに注意されたい。したがって、この記載は、「単に（ｓｏｌｅｌｙ）」、「単に（ｏｎｌｙ）」などの排他的な専門用語を請求項要素の説明と共に用いるためのまたは「否定的な（ｎｅｇａｔｉｖｅ）」限定を用いるための先行詞として機能することが意図されている。
【００１８】
本開示を読めば当業者には明らかとなるように、本明細書で記載及び例示する個々の実施形態がそれぞれ有する別個の部品及び特徴は、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のうちのいずれかの特徴から容易に分離してもよいしまたはそれらと組み合わせてもよい。任意の説明した方法を、説明した事象の順序で行うこともできるし、または論理的に可能な任意の他の順序で行うこともできる。
【００１９】
上記に要約したように、本開示によって、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法が提供される。開示の実施形態についてさらに説明するなかで、中断点におけるフローストリーム内の特定した外乱に基づいて滴下遅延を決定するための方法について、最初により詳細に記載する。次に、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むための画像センサと、取り込み画像のうちの１つ以上を用いて滴下遅延を計算するように構成されたプロセッサとを有するシステムについて説明する。非一時的なコンピュータ可読記憶媒体も提供される。
【００２０】
フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法
上記に要約したように、本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための方法を含む。ある実施形態による方法は、フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを含む。実施形態において、主題の方法を完全に自動化して、フローストリームの滴下遅延をユーザ入力するかまたは手動で決定する必要性を減らすかまたは全体的になくしてもよい。ある実施形態では、主題の方法によって、たとえばフローサイトメータのセットアップ中に、または異なるサンプルの分析において、フローサイトメータシステムの滴下遅延を決定するために蛍光粒子（たとえば、ビーズ）を用いることがなくなる。言い換えれば、ある実施形態において滴下遅延を決定することは、人間の介入またはユーザによる手動入力の必要が皆無かそれに近くてもよい。後に詳述するように、方法はまた、何らの人間の介入もなく、決定した滴下遅延を用いてフローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整することを含んでいてもよい。たとえば、フローストリームに電荷を印加するタイミング、電荷を印加するときのパルス幅またはフローストリームの流量を、決定した滴下遅延を用いて調整してもよい。
【００２１】
ある実施形態による方法を実施するとき、フローサイトメータフローストリームの１つ以上の画像を、たとえば検出フィールドにおいて取り込む。「検出フィールド」によって意味するところは、１つ以上の画像センサによって画像化されるフローストリームの領域である。実施形態において、方法は、検出フィールドにおいて、フローストリームの０．００１ｃｍ以上、たとえば０．００５ｃｍ以上、たとえば０．０１ｃｍ以上、たとえば０．０５ｃｍ以上、たとえば０．１ｃｍ以上、たとえば０．５ｃｍ以上、たとえば１ｃｍ以上、たとえば２ｃｍ以上、たとえば５ｃｍ以上、またたとえばフローストリームの１０ｃｍ以上に及ぶ画像を取り込むことを含んでいてもよい。画像化される検出フィールドは変わってもよい。実施形態において、検出フィールドはフローストリームの所定の長さである。いくつかの実施形態では、検出フィールドは、フローストリーム中断点から上流でサンプル検査点（たとえば、レーザ検査点）から下流のフローストリームを含む。後に詳述するように、フローストリーム内の外乱を、画像化されたフローストリームの中で特定する。たとえば中断点におけるフローストリームの開扇または偏向である。いくつかの例では、検出フィールドの境界はフローセルノズルオリフィスを含む。
【００２２】
フローストリームの１つ以上の画像を取り込むとき、検出フィールドを光源によって照明する。いくつかの実施形態では、フローストリームを広帯域光源または狭帯域の光を用いて照明する。好適な広帯域光源プロトコルとしては以下のものを挙げてもよい（しかし、これらに限定されない）。数ある広帯域光源の中で、ハロゲンランプ、重水素アークランプ、キセノンアークランプ、安定されたファイバ結合広帯域光源、連続スペクトルを伴う広帯域ＬＥＤ、超放射発光ダイオード、半導体発光ダイオード、広スペクトルＬＥＤ白色光源、マルチＬＥＤ内蔵白色光源、またはそれらの任意の組み合わせである。好適な狭帯域光源としては以下が挙げられる（しかし、これらに限定されない）。１つ以上の光バンドパスフィルタ、回折格子、モノクロメータ、またはそれらの任意の組み合わせに結合された狭波長ＬＥＤ、レーザーダイオード、または広帯域光源である。ある実施形態では、フローストリームの１つ以上の画像を、赤外線ＬＥＤのアレイを用いて検出フィールドを照明することによって取り込む。
【００２３】
ある実施形態では、光源はストロボ光源であり、フローストリームを周期的な光の点滅を用いて照明する。たとえば、光ストロボの周波数は、０．０１キロヘルツ以上、たとえば０．０５キロヘルツ以上、たとえば０．１キロヘルツ以上、たとえば０．５キロヘルツ以上、たとえば１キロヘルツ以上、たとえば２．５キロヘルツ以上、たとえば５キロヘルツ以上、たとえば１０キロヘルツ以上、たとえば２５キロヘルツ以上、たとえば５０キロヘルツ以上、またたとえば１００キロヘルツ以上であってもよい。ある場合には、ストローブ周波数を液滴駆動周波数と同期させる。他の場合では、ストローブ周波数を画像取り込みと同期させる。
【００２４】
フローストリームの１つ以上の画像を取り込むことは、フローストリームを光源の組み合わせ、たとえば２つ以上の光源、たとえば３つ以上の光源、たとえば４つ以上の光源、またたとえば５つ以上の光源を用いて照明することを含んでいてもよい。２つ以上の光源を用いる場合、フローストリームを、光源を用いて同時にまたは順次に、またはそれらの組み合わせで照明してもよい。たとえば、２つの光源を用いて照明することによってフローストリームの画像を取り込む場合、主題の方法は、両方の光源を用いてフローストリームを同時に照明することを含んでいてもよい。他の実施形態では、フローストリームの画像を取り込むことは、２つの光源を用いて順次に照明することを含んでいてもよい。２つの光源で順次に照明する場合、各光源がフローストリームを照明する時間は独立に、０．００１秒以上、たとえば０．０１秒以上、たとえば０．１秒以上、たとえば１秒以上、たとえば５秒以上、たとえば１０秒以上、たとえば３０秒以上、またたとえば６０秒以上であってもよい。２つ以上の光源を用いて順次に照明することによってフローストリームの画像を取り込む実施形態では、フローストリームを各光源によって照明する継続時間は同じであってもよいしまたは異なっていてもよい。
【００２５】
フローストリームの画像を連続的にまたは別個の間隔で取り込んでもよい。ある場合には、方法は連続的に画像を取り込むことを含んでいてもよい。他の場合では、方法は、画像を離散間隔で取り込むことを含む。たとえばフローストリームの画像を、０．００１ミリ秒ごと、０．０１ミリ秒ごと、０．１ミリ秒ごと、１ミリ秒ごと、１０ミリ秒ごと、１００ミリ秒ごと、またたとえば１０００ミリ秒ごと、または何らかの他の間隔で取り込む。
【００２６】
１つ以上の画像を検出フィールドにおいて取り込んでもよい。たとえば各検出フィールドにおいてフローストリームの２つ以上の画像、たとえば３つ以上の画像、たとえば４つ以上の画像、たとえば５つ以上の画像、たとえば１０個以上の画像、たとえば１５個以上の画像、またたとえば２５個以上の画像である。後に詳述するように、方法は、特定した外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を、異なる滴下遅延の範囲に渡って掃引することによって決定することと、各滴下遅延における外乱の振幅を決定することとを含む。これらの実施形態では、１つ以上の画像を、異なる滴下遅延設定のそれぞれにおいて取り込む。
【００２７】
各検出フィールドにおけるフローストリームの画像は、フローストリームの利用可能な画像が取り込まれる限り、フローストリームから任意の好適な間隔で取り込んでもよい。たとえば、各検出フィールドにおける画像を、フローストリームから０．０１ｍｍ以上、たとえば０．０５ｍｍ以上、たとえば０．１ｍｍ以上、たとえば０．５ｍｍ以上、たとえば１ｍｍ以上、たとえば２．５ｍｍ以上、たとえば５ｍｍ以上、たとえば１０ｍｍ以上、たとえば１５ｍｍ以上、たとえば２５ｍｍ以上、またたとえばフローサイトメータフローストリームから５０ｍｍ以上において取り込んでもよい。また各検出フィールドにおけるフローストリームの画像を、フローストリームから任意の角度で取り込んでもよい。たとえば、各検出フィールドにおける画像を、フローストリームの軸に対して１０°〜９０°、たとえば１５°〜８５°、たとえば２０°〜８０°、たとえば２５°〜７５°、またたとえば３０°〜６０°の範囲の角度で取り込んでもよい。ある実施形態では、各検出フィールドにおける画像を、フローストリームの軸に対して９０°の角度で取り込んでもよい。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本方法は、複数の異なる滴下遅延においてフローサイトメータを設定することと、異なる滴下遅延のそれぞれにおいてフローストリームの１つ以上の画像を取り込むこととを含む。ある場合には、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを、フローサイトメータの滴下遅延を、１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば１／１６滴等量以上、たとえば１／８滴等量以上、たとえば１／４滴等量以上、たとえば１／２滴等量以上、たとえば１滴等量以上、たとえば２滴等量以上、たとえば３滴等量以上、たとえば４滴等量以上の滴等量増分で変えながら行い、またたとえば、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを、フローサイトメータの滴下遅延を５滴等量以上の増分で変えながら行う。
【００２９】
一例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／３２滴等量の増分で変えながらフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、本方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／４滴等量の増分で変えながらフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／２滴等量の増分で変えながらフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例では、本方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１滴等量の増分で変えながらフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例では、本方法は、フローサイトメータの滴下遅延を２滴等量の増分で変えながらフローストリームの１つ以上の画像を取り込むことを含む。
【００３０】
ある実施形態では、本方法は、フローサイトメータの滴下遅延を連続的に変えることと、フローストリームをリアルタイムでモニタすることとを含む。フローサイトメータの滴下遅延を任意の好適なレートで変えてもよい。たとえば、滴下遅延を、１分あたり１／１２８滴等量以上、たとえば１分あたり１／６４滴等量以上、たとえば１分あたり１／３２滴等量以上、たとえば１分あたり１／１６滴等量以上、たとえば１分あたり１／８滴等量以上、たとえば１分あたり１／４滴等量以上、たとえば１分あたり１／２滴等量以上、たとえば１滴等量以上／分、たとえば１分あたり２滴等量以上、たとえば１分あたり３滴等量以上、たとえば１分あたり５滴等量以上、またたとえば１分あたり１０滴等量以上で変える。
【００３１】
上記に要約したように、本方法は、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することを含む。用語「中断点」は、本明細書ではその従来の意味で用いられ、フローストリームが別個の液滴として分離されるフローストリームの位置を指す。言い換えれば、中断点から上流では、フローストリームは連続的で接続された流体ストリームであり、中断点から下流では、フローストリームは互いとの物理的接触がない複数の液滴からなる。中断点におけるフローストリーム内の「外乱」によって意味するところは、フローストリームの１つ以上の特性の望ましくない変化である。たとえば、中断点におけるフローストリームの外乱は、フローストリーム液滴中の標的粒子の存在から生じてもよい。いくつかの実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの流量の変化である。他の実施形態では、外乱は、フローストリームの望ましくない偏向（すなわち、軌道の角度のずれ）である。ある実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの開扇である。用語「開扇」は、本明細書ではその従来の意味で用いられ、中断点におけるフローストリームから発する複数の液滴の軌道の望ましくないずれを指す。言い換えれば、中断点においてフローストリームの開扇があると、液滴がフローストリームの長手軸に対して１つ以上の望ましくない角度で偏向することになる。
【００３２】
中断点におけるフローストリーム内の外乱を、任意の好都合なプロトコルを用いて特定してもよい。いくつかの実施形態では、フローストリーム内の外乱を、画像化されたフローストリームの中で中断点においてフローストリームが開扇していることを視覚化することによって特定する。たとえば、方法は、中断点におけるフローストリームの液滴が、フローストリームの長手軸に対して２つ以上の望ましくない角度、たとえば３つ以上の望ましくない角度、たとえば４つ以上の望ましくない角度、たとえば５つ以上の望ましくない角度、またたとえば１０以上の望ましくない角度で偏向していることを視覚化することを含んでいてもよい。これらの実施形態では、複数の液滴の軌道は、５°以上、たとえば１０°以上、たとえば１５°以上、たとえば２０°以上、たとえば２５°以上、たとえば３０°以上、たとえば３５°以上、たとえば４０°以上、たとえば４５°以上、たとえば６０°以上、たとえば７５°以上、またたとえば８５°以上、外れていてもよい。たとえば、複数の液滴の軌道は、５°〜９０°、たとえば１０°〜８５°、たとえば１５°〜８０°、たとえば２０°〜７５°、たとえば２５°〜７０°、たとえば３０°〜６５°、たとえば３５°〜６０°、またたとえば４０°〜５５°、外れてもよい。
【００３３】
他の実施形態では、フローストリーム内の外乱を、画像化されたフローストリームの中の中断点において望ましくない角度でフローストリームが偏向していることを視覚化することによって特定する。ある場合には、フローストリームは、５°以上、たとえば１０°以上、たとえば１５°以上、たとえば２０°以上、たとえば２５°以上、たとえば３０°以上、たとえば３５°以上、たとえば４０°以上、たとえば４５°以上、たとえば６０°以上、たとえば７５°以上、またたとえば８５°以上、偏向される。たとえば、方法は、フローストリームが中断点において、５°〜９０°範囲の角度、たとえば１０°〜８５°、たとえば１５°〜８０°、たとえば２０°〜７５°、たとえば２５°〜７０°、たとえば３０°〜６５°、たとえば３５°〜６０°、またたとえば４０°〜５５°で偏向されていることを視覚化することによって、フローストリーム内の外乱を特定することを含んでいてもよい。
【００３４】
本開示の実施形態では、フローストリームの滴下遅延を特定した外乱に基づいて計算する。ある実施形態では、滴下遅延の計算を、中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することとによって行う。取り込み画像から、フローストリームが中断点において外乱の最大振幅を示すときを判定することは、たとえばユーザが各取り込み画像を観察することによって手動で実現してもよいし、または取り込み画像のそれぞれを評価するアルゴリズムを有するプロセッサが、外乱の最大振幅（たとえば、フローストリームの最大開扇または最大ストリーム偏向）を決定するように構成されたコンピュータ制御を行ってもよい。中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定するために、フローサイトメータを複数の異なる滴下遅延に渡って変えてもよく、フローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を、異なる滴下遅延のそれぞれにおいて取り込んでもよい。たとえば、中断点における外乱の１つ以上の画像の取り込みを、フローサイトメータの滴下遅延を１／３２滴等量以上、たとえば１／１６滴等量以上、たとえば１／８滴等量以上、たとえば１／４滴等量以上、たとえば１／２滴等量以上、たとえば１滴等量以上、たとえば２滴等量以上、たとえば３滴等量以上、たとえば４滴等量以上の増分で変えながら行ってもよく、またたとえば、フローストリームの１つ以上の画像の取り込みを、フローサイトメータの滴下遅延を５滴等量以上の増分で変えながら行ってもよい。
【００３５】
一例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／１２８滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／６４滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／３２滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／１６滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／１８滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／４滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１／２滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を１滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。さらに別の例では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を２滴等量の増分で変えながらフローストリームの中断点における外乱の１つ以上の画像を取り込むことを含む。
【００３６】
ある実施形態では、方法は、フローサイトメータの滴下遅延を連続的に変えることと、フローストリームの中断点における外乱をリアルタイムで（たとえば、肉眼でまたはリアルタイムカメラで）モニタすることとを含む。これらの実施形態では、フローストリームの中断点における外乱をモニタしながら、フローサイトメータの滴下遅延を、１分あたり１／１２８滴等量以上で、たとえば１分あたり１／６４滴等量以上で、たとえば１分あたり１／３２滴等量以上で、たとえば１分あたり１／１６滴等量以上で、たとえば１分あたり１／８滴等量以上で、たとえば１分あたり１／４滴等量以上で、たとえば１分あたり１／２滴等量以上で、たとえば１滴等量以上／分で、たとえば１分あたり２滴等量以上で、たとえば１分あたり３滴等量以上で、たとえば１分あたり５滴等量以上で、またたとえば１分あたり１０滴等量以上で変えてもよい。
【００３７】
本開示のある実施形態によりフローストリームの滴下遅延を計算することは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する決定した滴下遅延に所定の滴等量を添加することを含む。たとえば、本方法は、１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上を添加することを含んでいてもよい。ある場合には、フローストリームの滴下遅延を計算することは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する決定された滴下遅延に０．０１滴〜５滴の範囲の滴等量を添加することを含む。たとえば０．０５滴〜４．５滴、たとえば０．１滴〜４滴、たとえば０．５滴〜３．５滴、またたとえば１滴〜３滴の範囲の滴等量である。
【００３８】
いくつかの実施形態では、中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することは、位相マスクを適用することを含む。用語「位相マスク」は、本明細書ではその従来の意味で用いられ、フローサイトメータが用いるあるタイプのセルソーティングマスクであって、液滴の端部またはその付近に標的粒子がないフローストリーム内の液滴のソーティングをもたらすセルソーティングマスクを指す。位相マスクは任意の好都合なサイズであってもよい。たとえば１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、またたとえば８／３２滴等量以上の位相マスクである。
【００３９】
ある状況では、フローストリームの滴下遅延を計算することは、オフセット位相マスクを適用して、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加しながら、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することを含む。これらの実施形態では、オフセット位相マスクは、１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上であってもよい。
【００４０】
オフセット位相マスクのサイズに応じて、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に添加する所定の滴等量を変える。たとえば、本方法は、１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上を添加することを含んでいてもよい。ある場合には、フローサイトメータの滴下遅延を計算するために、オフセット位相マスクが適用された滴下遅延に０．０１滴〜５滴の範囲の滴等量を添加する。たとえば０．０５滴〜４．５滴、たとえば０．１滴〜４滴、たとえば０．５滴〜３．５滴、またたとえば１滴〜３滴の範囲の滴等量である。
【００４１】
上記で要約したように、主題の方法はまた、何らの人間の介入も伴うことなく、決定した滴下遅延を用いてフローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整することを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、フローストリームに電荷を印加するタイミングを、決定した滴下遅延に応じて調整してもよい。たとえば、ある場合には、フローストリームに電荷を印加することを０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、遅延させてもよく、またたとえばフローストリームに対する電荷の印加を５００ミリ秒以上、遅延させてもよい。
【００４２】
他の実施形態では、フローストリームに電荷を印加する間のパルス幅を、決定した滴下遅延に応じて調整してもよい。一例では、パルス幅の増加を、たとえば０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、またたとえば５００ミリ秒以上、行ってもよい。別の例では、パルス幅の減少を、たとえば０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、またたとえば５００ミリ秒以上、行ってもよい。
【００４３】
さらに他の実施形態では、フローストリームの流量を、決定した滴下遅延を用いて調整してもよい。ある場合には、決定した滴下遅延に応じてフローストリームの流量を増加させることを、たとえばフローストリームの流量を０．１μＬ／分以上、たとえば０．５μＬ／分以上、たとえば１μＬ／分以上、たとえば５μＬ／分以上、たとえば１０μＬ／分以上、たとえば２５μＬ／分以上、たとえば５０μＬ／分以上、たとえば１００μＬ／分以上、たとえば２５０μＬ／分以上、またたとえば５００μＬ／分以上、増加させることによって行ってもよい。たとえば、フローストリームの流量を、決定した滴下遅延に応じて１％以上、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば１５％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、たとえば７５％以上、増加させてもよく、またたとえばフローストリームの流量を９０％以上、増加させてもよい。他の場合では、決定した滴下遅延に応じてフローストリームの流量を減少させることを、たとえば流量を０．１μＬ／分以上、たとえば０．５μＬ／分以上、たとえば１μＬ／分以上、たとえば５μＬ／分以上、たとえば１０μＬ／分以上、たとえば２５μＬ／分以上、たとえば５０μＬ／分以上、たとえば１００μＬ／分以上、たとえば２５０μＬ／分以上、またたとえば５００μＬ／分以上、減少させることによって行ってもよい。たとえば、フローストリームの流量を、決定した滴下遅延に応じて１％以上、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば１５％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、たとえば７５％以上、減少させてもよく、またたとえばフローストリームの流量を９０％以上、減少させてもよい。
【００４４】
さらに他の実施形態では、液滴の帯電電圧を、決定した滴下遅延に応じて調整してもよい。たとえば、ある場合には、液滴の帯電電圧を、たとえば０．０１Ｖ以上、たとえば０．０５Ｖ以上、たとえば０．１Ｖ以上、たとえば０．５Ｖ以上、たとえば１Ｖ以上、たとえば５Ｖ以上、たとえば１０Ｖ以上、たとえば１５Ｖ以上、たとえば２５Ｖ以上、たとえば５０Ｖ以上、増加させ、またたとえば液滴の帯電電圧を７５Ｖ以上、増加させる。たとえば、液滴の帯電電圧を１％以上、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば１５％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、たとえば７５％以上、増加させてもよく、またたとえば液滴の帯電電圧を９０％以上、増加させてもよい。他の場合では、液滴の帯電電圧を、たとえば０．０１Ｖ以上、たとえば０．０５Ｖ以上、たとえば０．１Ｖ以上、たとえば０．５Ｖ以上、たとえば１Ｖ以上、たとえば５Ｖ以上、たとえば１０Ｖ以上、たとえば１５Ｖ以上、たとえば２５Ｖ以上、たとえば５０Ｖ以上、減少させ、またたとえば液滴の帯電電圧を７５Ｖ以上、減少させる。たとえば、液滴の帯電電圧を、１％以上、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば１５％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、たとえば７５％以上、減少させてもよく、またたとえば液滴の帯電電圧を９０％以上、減少させてもよい。
【００４５】
図１に、ある実施形態によるフローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するためのフロー図を示す。ステップ１において、フローストリームの１つ以上の画像を取り込む。前述したように、フローストリームの画像を検出フィールドにおいて（たとえば、フローストリームの中断点を含む検出フィールドにおいて）取り込んでもよい。ステップ２において、フローストリームの中断点における外乱を特定する。たとえば、外乱はフローストリームの偏向またはフローストリームの開扇であってもよい。滴下遅延を特定した外乱に基づいて計算する。ステップ３Ａでは、中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定する。ステップ３Ｂにおいて、オフセット位相マスクを適用して、中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定する。ステップ４Ａにおいて、ステップ３Ａで決定した滴下遅延に所定の滴等量を添加する。ステップ４Ｂにおいて、ステップ３Ｂで決定した滴下遅延に所定の滴等量を添加する。ステップ５において、フローサイトメータの１つ以上のパラメータを、決定した滴下遅延に応じて調整してもよい。
【００４６】
フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するためのシステム
また本開示の態様は、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するためのシステムを含む。ある実施形態によるシステムは、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むように構成された画像センサと、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを有するプロセッサとを含み、メモリは、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとを行う命令を含む。前述したように、対象とするシステムを完全に自動化して、フローサイトメータの滴下遅延をユーザ入力するかまたは手動で決定する必要性を減らすかまたは全体的になくしてもよい。実施形態において、システムは、蛍光粒子（たとえば、ビーズ）を用いることなく、フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するように構成されている。たとえば、システムを、フローサイトメータのセットアップ中かまたは異なるサンプルの分析の間に滴下遅延を自動的に決定するように構成してもよい。言い換えれば、ある実施形態において滴下遅延を決定することは、人間の介入、ユーザによる手動入力または開始の必要が皆無かそれに近くてもよい。
【００４７】
上記で要約したように、システムは、たとえば１つ以上の検出フィールドにおいてフローサイトメータフローストリームの画像を取り込むように構成された１つ以上の画像センサを含む。前述したように、用語「検出フィールド」は、１つ以上の画像センサによって画像化されるフローストリームの領域を指す。検出フィールドは、検査しているフローストリームの特性に応じて変わってもよい。実施形態において、検出フィールドは、フローストリームの０．００１ｍｍ以上、たとえば０．００５ｍｍ以上、たとえば０．０１ｍｍ以上、たとえば０．０５ｍｍ以上、たとえば０．１ｍｍ以上、たとえば０．５ｍｍ以上、たとえば１ｍｍ以上、たとえば２ｍｍ以上、たとえば５ｍｍ以上、またたとえばフローストリームの１０ｍｍ以上に及んでもよい。実施形態において、検出フィールドはフローストリームの所定の長さである。いくつかの実施形態では、検出フィールドは、フローストリーム中断点から上流でサンプル検査点（たとえば、レーザ検査点）から下流のフローストリームを含む。いくつかの例では、検出フィールドの境界はフローセルノズルオリフィスを含む。
【００４８】
システムは、検出フィールドにおけるフローストリームの画像を取り込むように構成された１つ以上の画像センサを含む。画像センサは、光学画像を取り込んで電子データ信号に変換することができる任意の好適なデバイスであってもよい。たとえば、限定することなく、電荷結合素子、半導体電荷結合素子（ＣＣＤ）、アクティブピクセルセンサ（ＡＰＳ）、相補型金属酸化物半導体（ＣＭＯＳ）画像センサ、またはＮ型金属酸化膜半導体（ＮＭＯＳ）画像センサである。いくつかの実施形態では、画像センサはＣＣＤカメラである。たとえば、カメラは電子増倍ＣＣＤ（ＥＭＣＣＤ）カメラまたは増強ＣＣＤ（ＩＣＣＤ）カメラであってもよい。他の実施形態では、画像センサはＣＭＯＳ型カメラである。
【００４９】
検査している検出フィールドの長さ及びフローサイトメータのサイズに応じて、主題のシステムにおける画像センサの数は、必要に応じて変わってもよい。たとえば、主題のシステムは、１つの画像センサ以上、たとえば２つの画像センサ以上、たとえば３つの画像センサ以上、たとえば４つの画像センサ以上、たとえば５つの画像センサ以上、またたとえば１０個の画像センサ以上を含んでいてもよい。ある実施形態では、システムは１つの画像センサを含む。他の実施形態では、システムは２つの画像センサを含む。システムが２つ以上の画像センサを含む場合、各画像センサを他に対して（Ｘ−Ｙ平面内で参照して）、１０°〜９０°、たとえば１５°〜８５°、たとえば２０°〜８０°、たとえば２５°〜７５°、またたとえば３０°〜６０°の範囲の角度で配向してもよい。ある実施形態では、各画像センサは互いに直交して（Ｘ−Ｙ平面内で参照して）配向されている。たとえば、主題のシステムが２つの画像センサを含む場合、第１の画像センサは、第２の画像センサに対して直交して（Ｘ−Ｙ平面内で参照して）配向されている。
【００５０】
主題のシステムが２つ以上の画像センサを含む場合、各画像センサは同じであってもよいしまたは異なるセンサの組み合わせであってもよい。たとえば、主題のシステムが２つの画像センサを含む場合、いくつかの実施形態では、第１の画像センサはＣＣＤタイプのデバイスであり、第２の画像センサはＣＭＯＳタイプのデバイスである。他の実施形態では、第１及び第２の画像センサは両方ともＣＣＤ型デバイスである。さらに他の実施形態では、第１及び第２の画像センサは両方ともＣＭＯＳ型デバイスである。
【００５１】
いくつかの実施形態では、画像センサは固定されていて、フローサイトメータ内での単一位置を維持している。他の実施形態では、画像センサをフローストリームの経路に沿って動くように構成してもよい。たとえば、画像センサを、フローストリームと並んで上流及び下流に動いて、複数の検出フィールドにおいて画像を取り込むように構成してもよい。たとえば、システムは、フローストリームに沿った２つ以上の異なる検出フィールドにおいて画像を取り込むように適合された画像センサを含んでいてもよい。たとえばフローストリーム中断点から上流でサンプル検査点から下流のフローストリームを含む第１の検出フィールドと、偏向プレートから下流のフローストリームを含む第２の検出フィールド（フローストリームは偏向プレートから上流で電荷を受ける）とである。画像センサがフローストリームに沿って動くように構成されている場合、画像センサをフローストリーム経路に沿って連続的にまたは別個の間隔で動かしてもよい。いくつかの実施形態では、画像センサを連続的に変位させる。他の実施形態では、画像センサを、別個の間隔（たとえば、１ｍｍ以上の増分、たとえば２ｍｍ以上の増分、またたとえば５ｍｍ以上の増分）でフローストリーム経路に沿って変位させてもよい。
【００５２】
画像センサを、振動トランスデューサによって複数の周波数をそれぞれ（前述したように）印加する間に連続的にまたは別個の間隔で画像を取り込むように構成してもよい。ある場合には、対象とする画像センサは画像を連続的に取り込むように構成されている。他の場合では、画像センサは、離散間隔で測定するように、たとえばフローストリームの画像を０．００１ミリ秒ごと、０．０１ミリ秒ごと、０．１ミリ秒ごと、１ミリ秒ごと、１０ミリ秒ごと、１００ミリ秒ごと、またたとえば１０００ミリ秒ごと、または何らかの他の間隔で取り込むように構成されている。
【００５３】
後に詳述するように、画像センサはフローストリームの１つ以上の画像を取り込むように構成されている。たとえば、画像センサを、検出フィールドにおいてフローストリームの２つ以上の画像、たとえば３つ以上の画像、たとえば４つ以上の画像、たとえば５つ以上の画像、たとえば１０個以上の画像、たとえば１５個以上の画像、またたとえば２５個以上の画像を取り込むように構成してもよい。複数の画像を検出フィールドにおいて取り込む場合、プロセッサは、複数の画像を（必要に応じて）組み合わせるためにデジタル画像処理アルゴリズムを含んでいてもよい。
【００５４】
フローストリームレート及び所望の画像分解能に応じて、フルセンサを読み出すときの画像センサの露光時間は１００ｍｓ以下、たとえば７５ｍｓ以下、たとえば５０ｍｓ以下、たとえば２５ｍｓ以下、たとえば１０ｍｓ以下、たとえば５ｍｓ以下、たとえば１ｍｓ以下、たとえば０．１ｍｓ以下、たとえば０．０１ｍｓ以下、たとえば０．００１ｍｓ以下、たとえば０．０００１ｍｓ以下、たとえば０．００００１ｍｓ以下であってもよく、またたとえば露光時間は０．０００００１ｍｓ以下であってもよい。たとえば、フローストリーム中断点から上流でサンプル検査点から下流のフローストリームを含む検出フィールドにおいてフローストリームの画像を取り込む検出フィールドでの画像センサの露光時間は、０．０００１ｍｓ〜１０ｍｓ、たとえば０．００１ｍｓ〜５ｍｓ、たとえば０．０１ｍｓ〜２ｍｓ、またたとえば０．１ｍｓ〜１ｍｓの範囲の露光時間を有していてもよい。
【００５５】
ある実施形態では、主題のシステムにおける画像センサは、１Ｍのアクティブピクセル以上、たとえば１．５Ｍ以上、たとえば、２Ｍ以上、２．５Ｍ以上、または３Ｍ以上を有していてもよい。ある態様では、ピクセルは約０．３μｍの実際の物理的寸法に対応する。検出フィールドに応じて、ある場合には、画像センサのセンサ領域は１５０ｍｍ2 以上、たとえば約１５０ｍｍ2 〜約１７５ｍｍ2 、約１７５ｍｍ2 〜約２００ｍｍ2 、２００ｍｍ2 〜約２２５ｍｍ2 、約２２５ｍｍ2 〜約２５０ｍｍ2 、約２５０ｍｍ2 〜約３００ｍｍ2 、約３００ｍｍ2 〜約４００ｍｍ2 、約４００ｍｍ2 〜約５００ｍｍ2 、約５００ｍｍ2 〜約７５０ｍｍ2 、約７５０ｍｍ2 〜約１０００ｍｍ2 、または約１０００ｍｍ2 以上である。
【００５６】
画像センサは、センサが検出フィールドにおいてフローストリームの画像を取り込むことができる限り、フローサイトメータフローストリームから任意の好適な間隔に位置してよい。たとえば、画像センサは、フローストリームから０．０１ｍｍ以上、たとえば０．０５ｍｍ以上、たとえば０．１ｍｍ以上、たとえば０．５ｍｍ以上、たとえば１ｍｍ以上、たとえば２．５ｍｍ以上、たとえば５ｍｍ以上、たとえば１０ｍｍ以上、たとえば１５ｍｍ以上、たとえば２５ｍｍ以上、またたとえばフローサイトメータフローストリームから５０ｍｍ以上に位置していてもよい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、画像センサはフローストリーム軸に対してある角度で位置する。たとえば、画像センサはフローストリームの軸に対して１０°〜９０°、たとえば１５°〜８５°、たとえば２０°〜８０°、たとえば２５°〜７５°、またたとえば３０°〜６０°の範囲の角度で位置していてもよい。ある実施形態では、画像センサはフローストリームの軸に対して９０°の角度で位置する。
【００５８】
ある場合には、画像センサは光学調整プロトコルも含む。「光学調整」によって意味するところは、画像センサによる検出フィールドの画像の取り込みを必要に応じて変えて、取り込んだ寸法を増加もしくは減少させるかまたは画像の光学分解能を高めてもよいことである。ある場合には、光学調整は、画像センサが取り込んだ検出フィールドのサイズを、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、増加させるように、またたとえば画像センサの検出フィールドを７５％以上、増加させるように構成された拡大プロトコルである。他の場合では、光学調整は、画像センサが取り込んだ検出フィールドのサイズを、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、減少させるように、またたとえば画像センサが取り込んだ検出フィールドのサイズを７５％以上、減少させるように構成された縮小プロトコルである。ある実施形態では、光学調整は、取り込み画像の分解能を、たとえば５％以上、たとえば１０％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、向上させるように、またたとえば取り込み画像の分解能を７５％以上、高めるように構成された強化された分解能プロトコルである。画像センサによって検出フィールドの画像を取り込むことを、任意の好都合な光学調整プロトコルを用いて調整してもよい。たとえば、限定することなく、レンズ、ミラー、フィルタ、及びそれらの組み合わせである。ある実施形態では、画像センサは集束レンズを含む。集束レンズは、たとえば縮小レンズであってもよい。他の実施形態では、集束レンズは拡大レンズである。
【００５９】
本開示の画像センサはまた、１つ以上の波長分離器を含んでいてもよい。用語「波長分離器」は、本明細書ではその従来の意味で用いて、多色光をその成分波長に分離して検出するための光プロトコルを指す。波長分離は、ある実施形態によれば、特定の波長または波長範囲の多色光を選択的に通すかまたは遮ることを含んでいてもよい。光の波長を分離するために、透過光を任意の好都合な波長分離プロトコルに通してもよい。たとえば、数ある波長分離プロトコルの中で、限定することなく、色ガラス、バンドパスフィルタ、干渉フィルタ、ダイクロイックミラー、回折格子、モノクロメータ、及びそれらの組み合わせである。システムは１つ以上の波長分離器を含んでいてもよい。たとえば２つ以上、たとえば３つ以上、たとえば４つ以上、たとえば５つ以上、またたとえば１０個以上の波長分離器である。一例では、画像センサは１つのバンドパスフィルタを含んでいる。別の例では、画像センサは２つ以上のバンドパスフィルタを含んでいる。別の例では、画像センサは２つ以上のバンドパスフィルタと回折格子とを含んでいる。さらに別の例では、画像センサは複数のバンドパスフィルタとモノクロメータとを含んでいる。ある実施形態では、画像センサは、フィルタホイールセットアップ内に構成された複数のバンドパスフィルタと回折格子とを含んでいる。画像センサが２つ以上の波長分離器を含む場合、波長分離器を別個にまたは連続して用いて、多色光を成分波長に分離してもよい。いくつかの実施形態では、波長分離器を連続して並べる。他の実施形態では、波長分離器を別個に並べて、１つ以上の測定を各波長分離器を用いて行う。
【００６０】
いくつかの実施形態では、システムは、１つ以上の光学フィルタ、たとえば１つ以上のバンドパスフィルタを含んでいる。たとえば、ある場合には、対象とする光学フィルタは、バンドパスフィルタの最小帯域幅が２ｎｍ〜１００ｎｍ、たとえば３ｎｍ〜９５ｎｍ、たとえば５ｎｍ〜９５ｎｍ、たとえば１０ｎｍ〜９０ｎｍ、たとえば１２ｎｍ〜８５ｎｍ、たとえば１５ｎｍ〜８０ｎｍの範囲であり、またたとえばバンドパスフィルタの最小帯域幅が２０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲である。他の場合では、光学フィルタはロングパスフィルタであり、たとえば、１６００ｎｍ以下、たとえば１５５０ｎｍ以下、たとえば１５００ｎｍ以下、たとえば１４５０ｎｍ以下、たとえば１４００ｎｍ以下、たとえば１３５０ｎｍ以下、たとえば１３００ｎｍ以下、たとえば１０００ｎｍ以下、たとえば９５０ｎｍ以下、たとえば９００ｎｍ以下、たとえば８５０ｎｍ以下、たとえば８００ｎｍ以下、たとえば７５０ｎｍ以下、たとえば７００ｎｍ以下、たとえば６５０ｎｍ以下、たとえば６００ｎｍ以下、たとえば５５０ｎｍ以下、たとえば５００ｎｍ以下の光の波長を減衰させるロングパスフィルタであり、またたとえば４５０ｎｍ以下の光の波長を減衰させるロングパスフィルタである。さらに他の状況では、光学フィルタショートパスフィルタであり、たとえば、２００ｎｍ以上、たとえば２５０ｎｍ以上、たとえば３００ｎｍ以上、たとえば３５０ｎｍ以上、たとえば４００ｎｍ以上、たとえば４５０ｎｍ以上、たとえば５００ｎｍ以上、たとえば５５０ｎｍ以上の光の波長を減衰させるショートパスフィルタであり、またたとえば６００ｎｍ以上の光の波長を減衰させるショートパスフィルタである。
【００６１】
他の実施形態では、波長分離器は回折格子である。回折格子は透過、分散または反射型回折格子を含んでいてもよい（しかし、これらに限定されない）。回折格子の好適な間隔は、光源、検出フィールド、及び画像センサ、ならびに他の存在する光学調整プロトコル（たとえば、集束レンズ）の構成に応じて変わってもよく、０．０１μｍ〜１０μｍ、たとえば０．０２５μｍ〜７．５μｍ、たとえば０．５μｍ〜５μｍ、たとえば０．７５μｍ〜４μｍ、たとえば１μｍ〜３．５μｍ、またたとえば１．５μｍ〜３．５μｍの範囲である。
【００６２】
いくつかの実施形態では、各画像センサは、検出フィールドにおけるフローストリームを照明するための１つ以上の光源に動作可能に結合されている。いくつかの実施形態では、光源は広帯域光源であり、広範囲の波長を有する光を発する。たとえば、５０ｎｍ以上、たとえば１００ｎｍ以上、たとえば１５０ｎｍ以上、たとえば２００ｎｍ以上、たとえば２５０ｎｍ以上、たとえば３００ｎｍ以上、たとえば３５０ｎｍ以上、たとえば４００ｎｍ以上に及び、またたとえば５００ｎｍ以上に及ぶ。たとえば、１つの好適な広帯域光源は波長が２００ｎｍ〜１５００ｎｍの光を発する。好適な広帯域光源の別の例としては、波長が４００ｎｍ〜１０００ｎｍの光を発する光源が挙げられる。任意の好都合な広帯域光源プロトコルを用いてもよい。たとえば、数ある広帯域光源の中で、ハロゲンランプ、重水素アークランプ、キセノンアークランプ、安定されたファイバ結合広帯域光源、連続スペクトルを伴う広帯域ＬＥＤ、超放射発光ダイオード、半導体発光ダイオード、広スペクトルＬＥＤ白色光源、マルチＬＥＤ内蔵白色光源、またはそれらの任意の組み合わせである。ある実施形態では、画像取り込み中に検出フィールドにおけるフローストリームを照明するための光源としては赤外線ＬＥＤのアレイが挙げられる。
【００６３】
他の実施形態では、光源は、特定の波長または狭い範囲の波長を発する狭帯域光源である。ある場合には、狭帯域光源は狭い波長範囲の光を発し、たとえば、５０ｎｍ以下、たとえば４０ｎｍ以下、たとえば３０ｎｍ以下、たとえば２５ｎｍ以下、たとえば２０ｎｍ以下、たとえば１５ｎｍ以下、たとえば１０ｎｍ以下、たとえば５ｎｍ以下、たとえば２ｎｍ以下であり、またたとえば光源は特定の波長の光（すなわち、単色光）を発する。任意の好都合な狭帯域光源プロトコルを用いてもよい。たとえば、１つ以上の光バンドパスフィルタ、回折格子、モノクロメータまたはそれらの任意の組み合わせに結合された狭波長ＬＥＤ、レーザーダイオード、または広帯域光源である。
【００６４】
上記で要約したように、システムは、画像センサに動作可能に結合された１つ以上のプロセッサを含み、プロセッサは、取り込み画像からデータ信号を生成してフローストリームの滴下遅延を決定するように構成されている。実施形態において、プロセッサは、主題の方法のステップ（前述したように）を行なうための複数の命令を有するメモリを含む。たとえば画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算することとである。ある実施形態では、主題のプロセッサは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、を行うための複数の命令を有するメモリを含む。他の実施形態では、主題のプロセッサはメモリを含み、このメモリは、オフセット位相マスクを適用しながら、フローサイトメータのフローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、を行うため複数の命令を有する。
【００６５】
主題のシステムは、ハードウェア及びソフトウェア構成要素の両方を含んでいてもよい。ハードウェア構成要素は、１つ以上のプラットフォームという形を（たとえば、サーバの形態で）取ることで、機能要素（すなわち、システムの特定のタスク（たとえば、情報の入力及び出力を管理すること、情報を処理することなど）を行なうシステムの要素）を、システムの示された１つ以上のコンピュータプラットフォーム上で及びそれに渡ってソフトウェアアプリケーションを実行することによって行え得るようにしてもよい。プロセッサは、本明細書で説明する異なる実施形態による主題の方法のステップ（たとえば、フローサイトメータフローストリームを光源で照明すること、フローストリームの１つ以上の画像を取り込むこと、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定すること、及び特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算すること）を行なうための命令が記憶されたメモリを含む。
【００６６】
実施形態において、プロセッサは、フローストリームの１つ以上の画像を取得すること及びフローストリームの中断点における外乱を特定することを行うように構成されている。前述したように、中断点におけるフローストリーム内の「外乱」は、フローストリームの１つ以上の特性の任意の望ましくない変化であってもよい。たとえば、中断点におけるフローストリームの外乱は、フローストリーム液滴中の標的粒子の存在から生じてもよい。いくつかの実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの流量の変化である。他の実施形態では、外乱はフローストリームの望ましくない偏向（すなわち、軌道の角度のずれ）である。ある実施形態では、外乱は中断点におけるフローストリームの開扇である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、プロセッサは、画像化されたフローストリームにおいてフローストリームが中断点で開扇していることを視覚化することによってフローストリーム内の外乱を特定するように構成されている。たとえば、プロセッサは、中断点におけるフローストリームの液滴が、フローストリームの長手軸に対して２つ以上の望ましくない角度、たとえば３つ以上の望ましくない角度、たとえば４つ以上の望ましくない角度、たとえば５つ以上の望ましくない角度、またたとえば１０個以上の望ましくない角度で偏向していることを決定する命令を伴うメモリを含んでいてもよい。これらの実施形態では、プロセッサは、５°以上、たとえば１０°以上、たとえば１５°以上、たとえば２０°以上、たとえば２５°以上、たとえば３０°以上、たとえば３５°以上、たとえば４０°以上、たとえば４５°以上、たとえば６０°以上、たとえば７５°以上、またたとえば８５°以上、外れた複数の液滴の軌道を決定するように構成されている。たとえば、プロセッサを、５°〜９０°、たとえば１０°〜８５°、たとえば１５°〜８０°、たとえば２０°〜７５°、たとえば２５°〜７０°、たとえば３０°〜６５°、たとえば３５°〜６０°、またたとえば４０°〜５５°だけ外れた複数の液滴の軌道を決定するように構成してもよい。
【００６８】
他の実施形態では、プロセッサは、画像化されたフローストリームの中で中断点において望ましくない角度でフローストリームが偏向されていることを視覚化することによって、フローストリーム内の外乱を特定するように構成されている。ある場合には、フローストリームは、５°以上、たとえば１０°以上、たとえば１５°以上、たとえば２０°以上、たとえば２５°以上、たとえば３０°以上、たとえば３５°以上、たとえば４０°以上、たとえば４５°以上、たとえば６０°以上、たとえば７５°以上、またたとえば８５°以上、偏向されている。たとえば、プロセッサを、フローストリームが中断点において５°〜９０°、たとえば１０°〜８５°、たとえば１５°〜８０°、たとえば２０°〜７５°、たとえば２５°〜７０°、たとえば３０°〜６５°、たとえば３５°〜６０°、またたとえば４０°〜５５°の範囲の角度で偏向されていることを視覚化することによって、フローストリーム内の外乱を特定するように構成してもよい。
【００６９】
対象とするシステムはまた、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算するように構成されている。いくつかの実施形態では、プロセッサは、中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、によって滴下遅延を計算する命令を有するメモリを含む。ある場合には、プロセッサは、複数の異なる滴下遅延に渡ってフローサイトメータの滴下遅延を変えて、異なる滴下遅延のそれぞれにおいて１つ以上の画像を取り込むように構成されている。たとえば、プロセッサは、中断点における外乱の１つ以上の画像の取り込みを、フローサイトメータの滴下遅延を１／３２滴等量以上、たとえば１／１６滴等量以上、たとえば１／８滴等量以上、たとえば１／４滴等量以上、たとえば１／２滴等量以上、たとえば１滴等量以上、たとえば２滴等量以上、たとえば３滴等量以上、たとえば４滴等量以上、またたとえば５滴等量以上の増分で変えながら行うように構成してもよい。
【００７０】
ある実施形態では、プロセッサは、滴下遅延を連続的に変えることと、フローストリームの中断点における外乱をリアルタイムでモニタすることと、を行うための命令を有するメモリを含む。これらの実施形態では、フローストリームの中断点における外乱をモニタしながら、プロセッサは、フローサイトメータの滴下遅延を１分あたり１／１２８滴等量以上で、たとえば１分あたり１／６４滴等量以上で、たとえば１分あたり１／３２滴等量以上で、たとえば１分あたり１／１６滴等量以上で、たとえば１分あたり１／８滴等量以上で、たとえば１分あたり１／４滴等量以上で、たとえば１分あたり１／２滴等量以上で、たとえば１滴等量以上／分で、たとえば１分あたり２滴等量以上で、たとえば１分あたり３滴等量以上で、たとえば１分あたり５滴等量以上で、またたとえば１分あたり１０滴等量以上で変えるように構成されている。
【００７１】
フローサイトメータの滴下遅延を計算するために、プロセッサは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加する命令を有するメモリを含む。たとえば、プロセッサを、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に１／１２８滴等量以上を添加するように構成してもよい。たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上である。ある場合には、プロセッサは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に、０．０１滴〜５滴の範囲の滴等量を添加する命令を有するメモリを含む。たとえば０．０５滴〜４．５滴、たとえば０．１滴〜４滴、たとえば０．５滴〜３．５滴、またたとえば１滴〜３滴の範囲の滴等量である。
【００７２】
ある実施形態では、プロセッサは、位相マスクを適用しながら、フローサイトメータのフローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延を決定するように構成されている。前述したように、位相マスクは任意の好都合なサイズであってもよく、たとえば１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、またたとえば８／３２滴等量以上の位相マスクである。
【００７３】
対象とするシステムはまた、オフセット位相マスクを適用しながら、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、によって滴下遅延を計算するように構成してもよい。これらの実施形態では、オフセット位相マスクは、１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上、たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上であってもよい。オフセット位相マスクのサイズに応じて、プロセッサは、異なる所定の滴等量を添加するように構成されている。たとえば、メモリは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する、オフセット位相マスクが適用された滴下遅延に１／１２８滴等量以上、たとえば１／６４滴等量以上、たとえば１／３２滴等量以上を添加するための命令を含んでいてもよい。たとえば２／３２滴等量以上、たとえば３／３２滴等量以上、たとえば４／３２滴等量以上、たとえば５／３２滴等量以上、たとえば６／３２滴等量以上、たとえば７／３２滴等量以上、たとえば８／３２滴等量以上、たとえば１０／３２滴等量以上、たとえば１２／３２滴等量以上、たとえば１４／３２滴等量以上、またたとえば１６／３２滴等量（すなわち、１／２滴等量）以上である。ある場合には、メモリは、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する、オフセット位相マスクが適用された滴下遅延に、０．０１滴〜５滴の範囲の滴等量、たとえば０．０５滴〜４．５滴、たとえば０．１滴〜４滴、たとえば０．５滴〜３．５滴、またたとえば１滴〜３滴の範囲の滴等量を添加するための命令を含んでいてもよい。
【００７４】
上記で要約したように、主題のシステムはまた、何らの人間の介入もなく、決定した滴下遅延を用いてフローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整するように構成してもよい。いくつかの実施形態では、対象とするシステムは、決定した滴下遅延に応じてフローストリームに電荷を印加するタイミングを調整するように構成されている。たとえば、主題のシステムは、フローストリームに対する電荷の印加を０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、遅延させるように、またたとえばフローストリームに対する電荷の印加を５００ミリ秒以上、遅延させるように構成してもよい。
【００７５】
他の実施形態では、対象とするシステムは、決定した滴下遅延に応じてフローストリームに電荷を印加しながら、パルス幅を調整するように構成されている。一例では、主題のシステムは、パルス幅を０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、またたとえば５００ミリ秒以上、増加させるように構成されている。別の例では、主題のシステムは、パルス幅を０．００１ミリ秒以上、たとえば０．００５ミリ秒以上、たとえば０．０１ミリ秒以上、たとえば０．０５ミリ秒以上、たとえば０．１ミリ秒以上、たとえば０．５ミリ秒以上、たとえば１ミリ秒以上、たとえば５ミリ秒以上、たとえば１０ミリ秒以上、たとえば１００ミリ秒以上、またたとえば５００ミリ秒以上、減少させるように構成されている。
【００７６】
さらに他の実施形態では、対象とするシステムは、決定した滴下遅延に応じてフローストリームの流量を調整するように構成されている。ある場合には、主題のシステムはフローストリームの流量の増加を、たとえばフローストリームの流量を０．１μＬ／分以上、たとえば０．５μＬ／分以上、たとえば１μＬ／分以上、たとえば５μＬ／分以上、たとえば１０μＬ／分以上、たとえば２５μＬ／分以上、たとえば５０μＬ／分以上、たとえば１００μＬ／分以上、たとえば２５０μＬ／分以上、またたとえば５００μＬ／分以上、増加させることによって行う。他の場合では、主題のシステムはフローストリームの流量の減少を、たとえばフローストリームの流量を０．１μＬ／分以上、たとえば０．５μＬ／分以上、たとえば１μＬ／分以上、たとえば５μＬ／分以上、たとえば１０μＬ／分以上、たとえば２５μＬ／分以上、たとえば５０μＬ／分以上、たとえば１００μＬ／分以上、たとえば２５０μＬ／分以上、またたとえば５００μＬ／分以上、減少させることによって行う。
【００７７】
さらに他の実施形態では、対象とするシステムは、決定した滴下遅延に応じて液滴の帯電電圧を調整するように構成されている。ある場合には、主題のシステムは、液滴の帯電電圧をたとえば０．０１Ｖ以上、たとえば０．０５Ｖ以上、たとえば０．１Ｖ以上、たとえば０．５Ｖ以上、たとえば１Ｖ以上、たとえば５Ｖ以上、たとえば１０Ｖ以上、たとえば１５Ｖ以上、たとえば２５Ｖ以上、たとえば５０Ｖ以上、増加させるように、またたとえば滴の帯電電圧を７５Ｖ以上、増加させるように構成されている。他の場合では、主題のシステムは、液滴の帯電電圧をたとえば０．０１Ｖ以上、たとえば０．０５Ｖ以上、たとえば０．１Ｖ以上、たとえば０．５Ｖ以上、たとえば１Ｖ以上、たとえば５Ｖ以上、たとえば１０Ｖ以上、たとえば１５Ｖ以上、たとえば２５Ｖ以上、たとえば５０Ｖ以上、減少させるように、またたとえば滴の帯電電圧を７５Ｖ以上、減少させるように構成されている。
【００７８】
ある実施形態では、主題のシステムは、フローセルノズルを用いたフローサイトメータシステムと、フローストリーム中でサンプルが発した光を検出するための光学部品サブシステムと、を含む。サンプルを分析するための好適なフローサイトメータシステム及び方法としては、Ｏｒｍｅｒｏｄ（ｅｄ．），Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（１９９７）；Ｊａｒｏｓｚｅｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｎｏ．９１，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９９７）；Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ（１９９５）；Ｖｉｒｇｏ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊａｎ；４９（ｐｔ  １）：１７−２８；Ｌｉｎｄｅｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍ  Ｈｅｍｏｓｔ．２００４  Ｏｃｔ；３０（５）：５０２−１１；Ａｌｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，２０１０  Ｄｅｃ；２２２（４）：３３５−３４４；及びＨｅｒｂｉｇ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．２４（３）：２０３−２５５が挙げられる（しかし、これらに限定されない）。なおこれらの開示内容は本明細書において参照により取り入れられている。ある状況では、対象とするフローサイトメトリーシステムとしては、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＶａｎｔａｇｅ（商標）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳｏｒｔ（商標）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣｏｕｎｔ（商標）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳｃａｎ（商標）、及びＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）システム、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｆｌｕｘ（商標）セルソーター、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｊａｚｚ（商標）セルソーター及びＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ａｒｉａ（商標）セルソーターなどが挙げられる。
【００７９】
ある実施形態では、主題のシステムは、米国特許第３，９６０，４４９号；第４，３４７，９３５号；第４，６６７，８３０号；第４，７０４，８９１号；第４，７７０，９９２号；第５，０３０，００２号；第５，０４０，８９０号；第５，０４７，３２１号；第５，２４５，３１８号；第５，３１７，１６２号；第５，４６４，５８１号；第５，４８３，４６９号；第５，６０２，０３９号；第５，６２０，８４２号；第５，６２７，０４０号；第５，６４３，７９６号；第５，７００，６９２号；第６，３７２，５０６号；第６，８０９，８０４号；第６，８１３，０１７号；第６，８２１，７４０号；第７，１２９，５０５号；第７，２０１，８７５号；第７，５４４，３２６号；第８，１４０，３００号；第８，２３３，１４６号；第８，７５３，５７３号；第８，９７５，５９５号；第９，０９２，０３４号；第９，０９５，４９４号及び第９，０９７，６４０号に記載するフローサイトメータの１つ以上の構成要素を組み込むフローサイトメータシステムである。なおこれらの開示内容は本明細書において参照により取り入れられている。
【００８０】
いくつかの実施形態では、フローサイトメータは、米国特許出願第１４／２６０，１７７号（ＵＳ２０１４／０３２０８６１として公開）；米国仮出願第６２／０９０，２４８号及び米国仮出願第６２／０９１，４２１号に記載するサイトメータからの１つ以上の構成要素を含むフローサイトメータである。なおこれらの開示内容は本明細書において参照により取り入れられている。
【００８１】
フローサイトメータフローストリームの滴下遅延を決定するためのコンピュータ可読記憶媒体
本開示の態様はさらに、主題の方法を実施するための命令を有する非一時的なコンピュータ可読記憶媒体を含む。コンピュータ可読記憶媒体を１つ以上のコンピュータ上で用いて、本明細書で説明する方法を実施するためにシステムの完全自動化または部分自動化を行うようにしてもよい。ある実施形態では、本明細書で説明する方法による命令を、コンピュータ可読記憶媒体上に「プログラミング」の形態でコーディングすることができる。用語「コンピュータ可読記憶媒体」は、本明細書で用いる場合、命令及びデータをコンピュータに与えて実行及び処理させることに関与する任意の非一時的な記憶媒体を指す。好適な非一時的な記憶媒体の例としては、フロッピーディスク、ハードディスク、光ディスク、光磁気ディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＣＤ−Ｒ、磁気テープ、不揮発性メモリカード、ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、ブルーレイディスク、ソリッドステートディスク、及びネットワーク接続ストレージ（ＮＡＳ）（このようなデバイスがコンピュータの内部であろうと外部であろうと）が挙げられる。情報を収容するファイルをコンピュータ可読記憶媒体上に「記憶する」ことができる。「記憶する」は、情報がコンピュータによって後の日付でアクセス可能及び読み出し可能となるように情報を記録することを意味する。本明細書で説明するコンピュータ実装方法を、任意の数のコンピュータプログラミング言語のうちの１つ以上で書くことができるプログラミングを用いて実行することができる。このような言語としては、たとえば、Ｊａｖａ（登録商標）（Ｓｕｎ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ），Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）、及びＣ＋＋（ＡＴ＆Ｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｍｉｎｓｔｅｒ，ＮＪ）、ならびに任意の他の多くが挙げられる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、対象とするコンピュータ可読記憶媒体にはコンピュータプログラムが記憶されている。コンピュータプログラムは、コンピュータ上にロードされると、画像センサを用いてフローストリームの画像を取り込むためのアルゴリズム、画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定するためのアルゴリズム、特定した外乱に基づいてフローストリームの滴下遅延を計算するためのアルゴリズムを有する命令を含む。
【００８３】
コンピュータ可読記憶媒体は、フローストリームの１つ以上の画像、たとえばフローストリームの２つ以上の画像、たとえば３つ以上の画像、たとえば４つ以上の画像、たとえば５つ以上の画像、たとえば１０個以上の画像、たとえば１５個以上の画像、またたとえば２５個以上の画像を取り込むための命令を含んでいてもよい。ある実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、画像の光学分解能を高めるために取り込み画像の光学調整を行うための命令を含む。ある実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、取り込み画像の分解能を、５％以上、たとえば１０％以上、たとえば２５％以上、たとえば５０％以上、高めるための、またたとえば取り込み画像の分解能を７５％以上、高めるための命令を含んでいてもよい。
【００８４】
実施形態において、対象とするコンピュータ可読記憶媒体は、フローストリームの中断点における外乱を特定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、中断点におけるフローストリームの流量の変化を検知するためのアルゴリズムを含む。他の実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、フローストリームの望ましくない偏向（すなわち、軌道の角度のずれ）を特定するためのアルゴリズムを含む。コンピュータ可読記憶媒体は、中断点におけるフローストリームの開扇を特定するためのアルゴリズムを含む。
【００８５】
コンピュータ可読記憶媒体はまた、特定したフローストリームの中断点における外乱に基づいて滴下遅延を計算するためのアルゴリズムを含む。いくつかの実施形態では、対象とするコンピュータ可読記憶媒体は、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、を行うためのアルゴリズムを含む。他の実施形態では、対象とするコンピュータ可読記憶媒体は、オフセット位相マスクを適用しながら、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成するフローサイトメータの滴下遅延を決定することと、フローストリームの中断点において外乱の最大振幅を形成する滴下遅延に所定の滴等量を添加することと、を行うアルゴリズムを含む。
【００８６】
コンピュータ可読記憶媒体を、ディスプレイとオペレータ入力デバイスとを有する１つ以上のコンピュータシステム上で用いてもよい。オペレータ入力デバイスはたとえば、キーボード、マウスなどであってもよい。処理モジュールは、主題の方法のステップを行なうための命令が記憶されたメモリにアクセスするプロセッサを含む。処理モジュールは、オペレーティングシステム、グラフィカルユーザインターフェース（ＧＵＩ）コントローラ、システムメモリ、メモリ記憶デバイス、及び入出力コントローラ、キャッシュメモリ、データバックアップユニット、ならびに他の多くのデバイスを含んでいてもよい。プロセッサは市販のプロセッサであってもよいし、または入手可能であるかまたは入手可能になる他のプロセッサの１つであってもよい。プロセッサはオペレーティングシステムを実行し、オペレーティングシステムインターフェースは、ファームウェア及びハードウェアと良く知られた方法で相互作用し、プロセッサが種々のコンピュータプログラムの機能を調整及び実行することを容易にする。コンピュータプログラムは、種々のプログラミング言語（たとえば、Ｊａｖａ、Ｐｅｒｌ、Ｃ＋＋、他の高レベルまたは低レベル言語、ならびに当該技術分野で知られるようにそれらの組み合わせ）で書いてもよい。オペレーティングシステムは、典型的にプロセッサと協同して、コンピュータの他の構成要素の機能を調整及び実行する。またオペレーティングシステムによって、スケジューリング、入出力制御、ファイル及びデータ管理、メモリ管理、ならびに、通信制御及び関連サービス（すべて、周知の技術による）がもたらされる。
【００８７】
有用性
主題の方法、システム、及びコンピュータ可読記憶媒体は、フローサイトメータの滴下遅延を正確及び便利に決定することが望ましい種々の異なる応用例において用途がある。また本開示は、フローサイトメータの較正及びセットアップを自動化して、生体サンプルからのセルを特徴付けてソートするための速くて信頼性が高いシステムをもたらすところに用途がある。本開示の実施形態は、人間の入力に依存する量及びシステムに対する調整の量を最小限にすることが望ましいところ、たとえば研究及び高スループット実験室試験において用途がある。本開示はまた、フローサイトメータにセルソートティング精度の向上、粒子収集の強化、粒子帯電効率、粒子帯電の精度の向上、及びセルソートティング中の粒子偏向の強化をもたらすことが望ましいところに用途がある。実施形態において、本開示によって、フローサイトメータをセットアップするためにまたはフローサイトメータを用いたサンプル分析の間にユーザ入力または手動調整を行う必要性が減る。ある実施形態では、主題のシステムは、完全に自動化されたプロトコルを提供しているため、フローサイトメータの滴下遅延の計算、ならびに正確な滴下遅延（たとえば、フローストリーム帯電のタイミング）に基づくフローサイトメータのパラメータの調整は、人間の入力を、たとえあったとしても、ほとんど必要としない。
【００８８】
また本開示は、生体サンプルから調製したセルが研究、実験室試験にとって望ましいかまたは治療で用いるために望ましい場合がある応用例で用途がある。いくつかの実施形態では、主題の方法及びデバイスは、標的流体または組織生体サンプルから調製された個々のセルを取得すること（すなわち、単一のセル分解能）を容易にする場合がある。たとえば、主題の方法及びシステムによって、疾患たとえば癌に対する研究または診断用試料として用いるべき流体または組織サンプルからセルを取得することが容易になる。同様に、主題の方法及びシステムによって、治療で用いるべき流体または組織サンプルからセルを取得することが容易になる。本明細書で説明する方法、システム、及びコンピュータ可読記憶媒体によって、従来のフローサイトメトリーシステムと比べて高効率で低コストで生体サンプル（たとえば、臓器、組織、組織片、流体）からセルを分離及び収集することが可能になる。
【００８９】
添付の請求項にもかかわらず、本明細書に記載される開示は、以下の付記によっても定義される。
１．フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定する方法であって、
前記フローストリームの画像を取り込んで、画像化されたフローストリームを取得することと、
前記画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、
前記特定した外乱に基づいて前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することと
を含む方法。
２．前記外乱は前記フローストリームの開扇である付記１に記載の方法。
３．前記外乱は前記フローストリームの偏向である付記１に記載の方法。
４．前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することは、
前記外乱の最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを含み、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える付記１〜３のいずれか一つに記載の方法。
５．前記所定の滴等量は１／２滴等量である付記４に記載の方法。
【００９０】
６．前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、位相マスクを適用することを含む付記４または５に記載の方法。
７．前記位相マスクは１／３２滴等量増分を含む付記６に記載の方法。
８．前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、８／３２滴等量位相マスクを適用することを含む付記７に記載の方法。
９．前記フローストリームの前記滴下遅延を計算することは、
１／２滴等量オフセット位相マスクを適用する一方で前記外乱の最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に所定の滴等量を添加して、前記フローストリームの前記滴下遅延を決定することとを含む付記４または５に記載の方法。
１０．前記１／２滴等量オフセット位相マスクが適用されたときに、外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に滴等量を添加しないことを含む付記９に記載の方法。
【００９１】
１１．前記フローストリームの前記画像を検出フィールドにおいて取り込む付記１〜１０のいずれか一つに記載の方法。
１２．前記検出フィールドは前記フローストリーム中断点から上流で前記レーザ照射点から下流の前記フローストリームを含む付記１１に記載の方法。
１３．前記フローストリームを光源によって照明する付記１〜１２のいずれか一つに記載の方法。
１４．前記光源はレーザである付記１３に記載の方法。
１５．前記光源は発光ダイオードである付記１３に記載の方法。
【００９２】
１６．前記決定した滴下遅延に応じて前記フローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整することをさらに含む付記１〜１５のいずれか一つに記載の方法。
１７．前記フローストリームに電荷を印加することを前記決定した滴下遅延に応じて調整する付記１６に記載の方法。
１８．前記フローストリームに電荷を印加するタイミングを前記決定した滴下遅延に応じて調整する付記１７に記載の方法。
１９．前記フローストリームに電荷を印加する帯電パルス幅を前記決定した滴下遅延に応じて調整する付記１７に記載の方法。
２０．前記帯電パルス幅を前記決定した滴下遅延に応じて減少させる付記１９に記載の方法。
【００９３】
２１．前記帯電パルス幅を前記決定した滴下遅延に応じて増加させる付記１９に記載の方法。
２２．前記フローストリームはビーズを含まない付記１〜２１のいずれか一つに記載の方法。
２３．前記フローストリームは蛍光較正粒子を含まない付記１〜２２のいずれか一つに記載の方法。
２４．フローサイトメータのフローストリームの１つ以上の画像を取り込むように構成された画像センサと、
メモリが動作可能に結合されたプロセッサであって、前記メモリには、前記画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定することと、前記特定した外乱に基づいて前記フローストリームの滴下遅延を計算することとを行う命令が記憶されている、プロセッサと
を含むシステム。
２５．前記メモリには、前記フローストリームの開扇を特定する命令が記憶されている付記２４に記載のシステム。
【００９４】
２６．前記メモリには、前記フローストリームの偏向を特定する命令が記憶されている付記２４に記載のシステム。
２７．前記メモリには、
前記外乱の最大振幅において前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅において前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを行う命令が記憶され、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える付記２４〜２６のいずれか一つに記載のシステム。
２８．前記所定の滴等量は１／２滴等量である付記２７に記載のシステム。
２９．前記メモリには、位相マスクが適用された前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定する命令が記憶されている付記２７または２８に記載のシステム。
３０．前記位相マスクは１／３２滴等量増分を含む付記２９に記載のシステム。
【００９５】
３１．前記メモリには、８／３２滴等量位相マスクが適用された前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定する命令が記憶されている付記２９に記載のシステム。
３２．前記メモリには、
１／２滴等量オフセット位相マスクを適用しながら、前記外乱の最大振幅において前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅において前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを行う命令が記憶され、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える付記２８〜３１のいずれか一つに記載のシステム。
３３．前記メモリには、前記１／２滴等量オフセット位相マスクが適用されたときの外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に滴等量を添加しない命令が記憶されている付記３２に記載のシステム。
３４．前記画像センサは、検出フィールドにおいて前記フローストリームの前記画像を取り込むように構成されている付記２４〜３３のいずれか一つに記載のシステム。
３５．前記検出フィールドは、前記フローストリーム中断点から上流で前記レーザ照射点から下流の前記フローストリームを含む付記３４に記載のシステム。
【００９６】
３６．さらに光源を含む付記２４〜３５のいずれか一つに記載のシステム。
３７．前記光源はレーザである付記３６に記載のシステム。
３８．前記光源は発光ダイオードである付記３６に記載のシステム。
３９．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整する命令を含む付記２４〜３８のいずれか一つに記載のシステム。
４０．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローストリームへの電荷の前記印加を調整する命令を含む付記３９に記載のシステム。
【００９７】
４１．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローストリームに電荷を印加するタイミングを調整する命令を含む付記４０に記載のシステム。
４２．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を調整する命令を含む付記４０に記載のシステム。
４３．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を減少させる命令を含む付記４２に記載のシステム。
４４．前記メモリは、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を増加させる命令を含む付記４２に記載のシステム。
４５．フローサイトメータにおけるフローストリームの滴下遅延を決定するための命令が記憶された非一時的なコンピュータ可読記憶媒体であって、
前記命令は、
画像センサを用いてフローストリームの画像を取り込むためのアルゴリズムと、
画像化されたフローストリーム内の中断点における外乱を特定するためのアルゴリズムと、
前記特定した外乱に基づいて前記フローストリームの滴下遅延を計算するためのアルゴリズムとを含むコンピュータ可読記憶媒体。
【００９８】
４６．前記命令は、前記フローストリームの開扇を特定するためのアルゴリズムを含む付記４５に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
４７．前記命令は、前記フローストリームの偏向を特定するためのアルゴリズムを含む付記４５に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
４８．前記命令は、
前記外乱の最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを行うためのアルゴリズムを含み、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える付記４５〜４７のいずれか一つに記載のコンピュータ可読記憶媒体。
４９．前記所定の滴等量は１／２滴等量である付記４８に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５０．前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、位相マスクを適用することを含む付記４８または４９に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
【００９９】
５１．前記位相マスクは１／３２滴等量増分を含む付記５０に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５２．前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延を決定することは、８／３２滴等量位相マスクを適用することを含む付記５１に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５３．前記滴下遅延を計算するためのアルゴリズムであって、
１／２滴等量オフセット位相マスクを適用する一方で前記外乱の最大振幅における前記滴下遅延を決定することと、
前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に所定の滴等量を添加することとを含む前記アルゴリズムをさらに含み、
前記所定の滴等量を加えた前記外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延は、最適化された滴下遅延を与える、付記４８〜５２のいずれか一つに記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５４．前記命令は、前記１／２滴等量オフセット位相マスクが適用されたときの外乱の前記最大振幅における前記滴下遅延に何らの滴等量も添加しないアルゴリズムを含む付記５３に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５５．前記命令は、検出フィールドにおいて前記フローストリームの前記画像を取り込むためのアルゴリズムを含む付記４５〜５４のいずれか一つに記載のコンピュータ可読記憶媒体。
【０１００】
５６．前記検出フィールドは、前記フローストリーム中断点から上流で前記レーザ照射点から下流のフローストリームを含む付記５５に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５７．前記命令は、光源を用いて前記フローストリームを照明するためのアルゴリズムをさらに含む付記４５〜５６のいずれか一つに記載のコンピュータ可読記憶媒体
５８．前記光源はレーザである付記５７に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
５９．前記光源は発光ダイオードである付記５７に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
６０．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローサイトメータの１つ以上のパラメータを調整するためのアルゴリズムをさらに含む付記４５〜５９のいずれか一つに記載のコンピュータ可読記憶媒体。
【０１０１】
６１．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローストリームへの印加された電荷を調整するためのアルゴリズムを含む付記６０に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
６２．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記フローストリームに対する前記印加電荷のタイミングを調整するためのアルゴリズムを含む付記６１に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
６３．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を調整するためのアルゴリズムを含む付記６１に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
６４．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を増加させるためのアルゴリズムを含む付記６３に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
６５．前記命令は、前記決定した滴下遅延に応じて前記帯電パルス幅を減少させるためのアルゴリズムを含む付記６４に記載のコンピュータ可読記憶媒体。
【０１０２】
前述した発明を、理解を明瞭にするために例示及び実施例としてある程度詳細に説明してきたが、本開示の教示を考慮すれば当業者には容易に明らかであるように、添付の請求項の趣旨または範囲から逸脱することなく発明に対して変形及び変更を行ってもよい。
【０１０３】
したがって、前述は単に本発明の原理を例示しているだけである。当然のことながら、当業者は種々の取り合わせを考案することができる。これらは本明細書では明示的に記載も図示もされていないが、本発明の原理を具体化し、その趣旨及び範囲に含まれる。さらに、本明細書で説明したすべての実施例及び条件付き言語は、このような具体的に説明した実施例及び条件に限定することなく、主として読者が本発明の原理を理解することを助けることを意図している。また、本発明の原理、態様、及び実施形態、ならびにその具体例を説明する本明細書におけるすべての記述は、その構造的及び機能的な等価物の両方を包含することが意図されている。さらに、このような等価物は、現時点で知られている等価物と、将来に開発される等価物（すなわち、構造にかかわらず同じ機能を行なう開発される任意の要素）との両方を含むことが意図されている。したがって、本発明の範囲は、本明細書で図示及び説明した典型的な実施形態に限定されることは意図してはいない。むしろ、本発明の範囲及び趣旨は添付の請求項によって具体化される。
【０１０４】
関連出願の相互参照
米国特許法§１１９（ｅ）に従って、本出願は米国仮特許出願第６２／４０３，５５３号）（２０１６年１０月３日に出願）の出願日に対して優先権を主張する。なおこの出願の開示内容は本明細書において参照により取り入れられている。
【図１】
2019529883.tif 000003
【国際調査報告】
2019529883.tif 000004
2019529883.tif 000005
2019529883.tif 000006