(57)【要約】多様な実施形態では、本発明は、ムチン分泌型のがん、例として、卵巣がんまたは膵臓がんについてのバイオマーカーとしての、ＭＬＰを検出するための抗ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）モノクローナル抗体、組成物および方法を提供する。これまでのところ、卵巣の悪性腫瘍の早期検出は、これまでまだ解決されていない要求である。現在使用されている腫瘍関連のバイオマーカーには、例えば、比較的非特異的な腫瘍マーカーであるＣＡ−１２５があるが、これらはいずれも、卵巣の悪性腫瘍を早期に検出することができない。本発明はこの課題を取り扱う。
2019526227.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
以下：
（ｉ）前記抗体が、モノクローナル抗体であること、
（ｉｉ）前記抗体が、組換え、ヒト化またはキメラ抗体であること、
（ｉｉｉ）前記抗体が、完全ヒト抗体であること、
（ｉｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおけるように、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能であること、または
（ｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合すること
のうち、少なくとも１つが適用される、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｖｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識する、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
以下：
（ｉ）配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含むこと、および／または
（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含むこと
のうち、少なくとも１つが適用される、請求項１から３のいずれかに記載の抗体。
【請求項５】
検出可能な部分で標識されており、かつ／または治療剤にカップリングされている、請求項１から４のいずれかに記載の抗体。
【請求項６】
基材上に固定化されている、請求項１から５のいずれかに記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域
を含み、
前記重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記単離抗体が、ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する、請求項１に記載のヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
以下：
（ｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ２配列が、配列番号２０、１４、１６または１８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含むこと、
（ｉｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ１配列が、配列番号１３または配列番号１７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｉｉ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ２配列が、配列番号２２または配列番号２６に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｖ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ１配列が、配列番号２８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２５に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｖ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号１３を含むこと、
（ｖｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２０を含み、任意選択で、配列番号２０に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有すること、
（ｖｉｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号１５を含むこと、
（ｖｉｉｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２８を含み、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有し、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＳを含有すること、
（ｖｉｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２２を含むこと、
（ｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６を含むこと、
（ｘｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２３を含むこと、
（ｘｉｉ）前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｉｉ）前記抗体が、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｖ）前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｖ）前記抗体が、配列番号７を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号７と少なくとも９０％同一の配列を有するそのバリアントを含むこと、
（ｘｖｉ）前記抗体が、配列番号８を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号８と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと、または
（ｘｖｉｉ）前記抗体が、配列番号９を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと
のうち、少なくとも１つが適用される、請求項１に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、全抗体、単鎖抗体、ＳｃＦｖ、およびヒンジ領域を欠く一価の抗体からなる群から選択される、請求項１から８のいずれかに記載の単離抗体。
【請求項１０】
請求項７から９のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体またはその断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子を含む発現カセット。
【請求項１２】
請求項１０または請求項１１に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子のうちの少なくとも１つを含む細胞。
【請求項１３】
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローン１１として指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＢとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＣとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体
からなる群から選択される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
【請求項１４】
抗ＭＬＰ抗体を産生するハイブリドーマ細胞系であって、
（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、
（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、および
（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系
からなる群から選択される細胞系。
【請求項１５】
（ｉ）配列番号１または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、および
（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ＭＬＰポリペプチド。
【請求項１６】
単離抗ＭＬＰ抗体を生成する方法であって、請求項１２または１４に記載の細胞を、前記抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下で培養するステップと、前記抗ＭＬＰ抗体を単離するステップとを含む方法。
【請求項１７】
被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を決定することによって、上皮性がんを検出または診断する方法であって、
（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、
（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、前記結合の存在が、前記試料中のＭＬＰの前記存在または量を示す、ステップと
を含み、
前記抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合する、方法。
【請求項１８】
前記抗ＭＬＰ抗体が、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の前記存在または量を検出することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの前記量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、前記対照試料（または参照標準）と比較する場合の、被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍または少なくとも１０倍の）増加が、前記被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮性がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示す、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記生物学的試料が、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｖｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、表１に記載する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域ならびにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
卵巣がんおよび／または膵臓がんのバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加の抗体を用いるイムノアッセイを実施するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記被検対象から得られた生物学的試料からの前記アッセイの結果を、１つまたは複数の時点で比較して、治療レジメンの効能を評価するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ＭＬＰ抗体が、基材上に固定化されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡアッセイである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
被検対象中のムチンを分泌するがんの存在を検出または診断する方法であって、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している前記抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、前記対象中のＭＬＰの前記存在または量の検出が、ムチンを分泌するがんの存在を示す、方法。
【請求項３０】
前記ムチンを分泌するがんが、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、および上皮性皮膚がんからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗ＭＬＰ抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含む、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される、請求項２９から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｖｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している対象を治療する方法であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している個体に投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされている、方法。
【請求項３７】
前記治療剤が、化学療法剤である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｖ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｖｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を含む組成物。
【請求項４１】
請求項１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、イムノアッセイにおける使用のための基材。
【請求項４２】
（ａ）少なくとも１つの容器、および（ｂ）請求項１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、卵巣がんおよび膵臓がんを検出する際に使用するためのモノクローナル抗体およびそのような抗体を含む組成物に関する。
【０００２】
配列表に関する陳述
本出願に添付された配列表は、複写用紙の代わりにテキストフォーマットで提供され、本明細書によってこの配列表は、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名前は、ＡＢ．１．０２０８．ＰＣＴ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔｉｎｇ．２０１７０５２５＿ＳＴ２５である。テキストファイルは、２５ＫＢであり、２０１７年５月２５日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して本明細書の提出と共に提出されたものである。
【背景技術】
【０００３】
背景
女性がん患者の間では、卵巣がんの発生率が高く、これには、高い死亡率が伴う（Ｍｏｄｕｇｎｏら、Ａｍ  Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ、１９１巻：７３３〜７４０頁、２００４年）。卵巣がんは、乳房、腸、肺および子宮のがんに続く、女性における５番目に最も一般的ながんである。卵巣がんは、後期に達するまで無症状であることからサイレントキラーと呼ばれている（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２巻：２２１５頁、２００９年）。最初の症状は非局所性の軽度の疼痛であることから、卵巣がんの早期診断は困難であるが、卵巣の悪性腫瘍の症状が、後期にはより明らかになり、そうした症状には、食欲喪失および体重減少、閉経後の膣出血を伴う背部および骨盤における強度の疼痛、頻尿、便秘または下痢および腹部膨満が含まれる（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１３年）。
これまでのところ、卵巣の悪性腫瘍の早期検出は、これまでまだ解決されていない要求である。現在使用されている腫瘍関連のバイオマーカーには、例えば、比較的非特異的な腫瘍マーカーであるＣＡ−１２５があるが、これらはいずれも、卵巣の悪性腫瘍を早期に検出することができない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍｏｄｕｇｎｏら、Ａｍ  Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ、１９１巻：７３３〜７４０頁、２００４年
【非特許文献２】Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２巻：２２１５頁、２００９年
【非特許文献３】Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１３年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
要旨
したがって、卵巣の悪性腫瘍を早期に発見するためには、早期診断のための非侵襲性の臨床検査を開発する差し迫った必要性があり、早期には、治療が有効であり、治療すれば、予後は、より後期の卵巣がんよりもさらに良好である。
【０００６】
要旨
この要旨は、下記の詳細な説明でさらに記載する概念選択を簡潔な形で提供する。この要旨は、特許請求される主題の主要な特色を特定する意図もないし、また特許請求される主題の範囲の決定の支援として使用する意図もない。
【０００７】
一態様では、本発明は、ヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態では、前記抗体は、ヒト化、キメラまたは完全ヒト抗体である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて、グリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、１０ｎＭ未満、例として、１ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合する。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローン１１、（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローンＢ、および（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローンＣからなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識する。
【０００８】
一実施形態では、前記抗体は、配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含む。一実施形態では、前記抗体は、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含む。一実施形態では、前記抗体は、検出可能な部分で標識されている。一実施形態では、前記抗体は、治療剤にカップリングされている。一実施形態では、前記抗体は、基材上に固定化されている。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）のＣ末端領域に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【００１０】
別の態様では、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を決定することによって、上皮性がんを検出または診断する方法を提供する。方法は、（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップとを含み、結合の検出は、試料中のＭＬＰの存在または量を示し、抗体またはその断片は、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープ、例として、配列番号５または配列番号６中のエピトープに結合する。一部の実施形態では、前記抗ＭＬＰ抗体は、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）は、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含む。一部の実施形態では、方法は、ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、対照試料または参照標準と比較する場合の、被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな増加は、被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮性がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示す。一部の実施形態では、生物学的試料は、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される。
【００１５】
別の態様では、本発明は、被検対象中のムチン分泌型のがん、例として、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、上皮性皮膚がんおよび／またはその他のムチン分泌型のがんからなる群から選択される、ムチンを分泌するがんを、ＭＬＰの存在または量を決定することによって検出または診断する方法であって、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープ、例として、配列番号５または配列番号６中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、対象中のＭＬＰの存在または量の検出が、被検対象中の、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、上皮性皮膚がんおよび／またはその他のムチン分泌型のがんの存在を示す、方法を提供する。一実施形態では、抗ＭＬＰ抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）は、検出可能な部分の存在または量を検出することを含む。一実施形態では、方法は、画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される。
【００１６】
別の態様では、本発明は、ムチン分泌型のがん、例として、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、上皮性皮膚がんおよび／またはその他のムチン分泌型のがんからなる群から選択される、ムチンを分泌するがんに罹患している対象を治療する方法であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープ、例として、配列番号５または配列番号６中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片をムチン分泌型のがんに罹患している個体に投与するステップを含み、抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされている、方法を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、（ａ）少なくとも１つの容器、および（ｂ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープ、例として、配列番号５または配列番号６中のエピトープに結合する抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を検出するキットを提供する。
【００１８】
本発明の抗ＭＬＰ抗体、組成物およびキットを使用して、本発明の方法を実行することができる。
【００１９】
本発明の前述の態様および多数の付随する有利点は、次の詳細な記載を参照し、添付の図と合わせて解釈することによってよりよく理解され、さらに容易に認識される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、全長ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）（配列番号１）のアミノ酸配列をＣ末端領域（アミノ酸２７９〜４３１）（配列番号４）に下線を付けて示す。
【００２１】
【図２】図２は、ヒトＭＬＰのＣ末端領域の残基２７９〜４３１に融合されたＮ末端ヒスチジンタグを含む組換え融合タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列を、Ｎ末端ベクター由来配列に下線を付けて示す。
【００２２】
【図３Ａ】図３Ａは、実施例１に記載のとおり、種々の濃度の組換えＭＬＰ（ｒＭＬＰ）Ｃ末端タンパク質に対して検査した、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢを用いて実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果をグラフで例示する。
【００２３】
【図３Ｂ】図３Ｂは、実施例１に記載のとおり、種々の濃度の組換えＭＬＰ（ｒＭＬＰ）Ｃ末端タンパク質に対して検査した、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を用いて実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果をグラフで例示する。
【００２４】
【図４】図４は、実施例１に記載のとおり、組換えＭＬＰ（ｒＭＬＰ）Ｃ末端タンパク質に対して検査した、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を用いて実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果をグラフで例示する。
【００２５】
【図５】図５は、実施例２に記載のとおり、Ｐａｎｃ１細胞系上清（列Ａ）、ｒＭＡＳＰ−３ポリペプチド（列Ｂ）およびｍＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列Ｃ）に対して抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１を用いて実行されたドットブロットアッセイの結果を示す。
【００２６】
【図６】図６は、実施例２に記載のとおり、グリコシル化全長ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）を含有する卵巣がん細胞系Ａ２７８０に由来する濃縮上清に対して抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、１１およびＢを用いて実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果をグラフで例示する。
【００２７】
【図７】図７は、実施例２に記載のとおり、卵巣がん細胞系Ａ２７８０上清（列Ａ）、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質（列Ｂ）およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列Ｃ）に対して抗ＭＬＰ抗体クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１を用いて実行されたドットブロットアッセイの結果を示す。
【００２８】
【図８】図８は、実施例２に記載のとおり、上パネルが、抗ＭＬＰクローンＣがＡ２７８０中のｇＭＬＰ（列１）およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列３）を特異的に認識するが、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質（列２）をしないことを実証しているウエスタンブロットの結果を示し、中パネルが、抗ＭＬＰクローンＢがＡ２７８０中のｇＭＬＰ（列１）およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列３）を特異的に認識するが、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質（列２）をしないことを実証しているウエスタンブロットの結果を示し、下パネルが、抗ＭＬＰクローン１１がＡ２７８０中のｇＭＬＰ（列１）およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列３）を特異的に認識するが、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質（列２）をしないことを実証するウエスタンブロットの結果を示す。
【００２９】
【図９】図９は、実施例２に記載のとおり、グリコシル化全長ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）を含有する卵巣がん細胞系Ａ２７８０に由来する濃縮上清に対して抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、５、１１およびＢを用いて実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果をグラフで例示する。
【００３０】
【図１０Ａ】図１０Ａは、実施例３に記載のとおり、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１（配列番号７）、Ｂ（配列番号８）および２（Ｃ）（配列番号９）の重鎖可変領域間のアミノ酸配列の配列比較を示す。
【００３１】
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、実施例３に記載のとおり、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１（配列番号１０）、Ｂ（配列番号１１）および２（Ｃ）（配列番号１２）の軽鎖可変領域間のアミノ酸配列の配列比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
配列表の説明
抗原
配列番号１：全長ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）、４３１アミノ酸長のアミノ酸配列
配列番号２：Ｎ末端ヒスチジンタグおよびヒトＭＬＰのＣ末端領域の残基２７９〜４３１に対応するポリペプチド領域を含む融合タンパク質をコードするＤＮＡ
配列番号３：ヒトＭＬＰのＣ末端領域の残基２７９〜４３１に融合されたＮ末端ヒスチジン検出タグを含む融合タンパク質（配列番号２によってコードされる）のアミノ酸配列
配列番号４：ヒトＭＬＰのＣ末端領域（アミノ酸２７９〜４３１）のアミノ酸配列
配列番号５：ＳＳＧＨＲＴＥＫＲＫＲＱＱＰＱＲＲＰＡＡＧＴＧＱＲＲＧＳＥＥＭＥＥＥＧ（ヒトＭＬＰのアミノ酸残基３９７〜４３１）
配列番号６：ＥＫＲＫＲＱＱＰＱＲＲＰＡＡＧＴＧＱＲＲＧＳＥＥＭＥＥＥＧ（ヒトＭＬＰのアミノ酸残基４０３〜４３１）
【００３３】
モノクローナル抗体ＶＨ鎖
配列番号７：ｍＡｂクローン１１：ＶＨアミノ酸配列
配列番号８：ｍＡｂクローンＢ：ＶＨアミノ酸配列
配列番号９：ｍＡｂクローンＣ：ＶＨアミノ酸配列
【００３４】
モノクローナル抗体ＶＬ鎖
配列番号１０：ｍＡｂクローン１１：ＶＬアミノ酸配列
配列番号１１：ｍＡｂクローンＢ：ＶＬアミノ酸配列
配列番号１２：ｍＡｂクローンＣ：ＶＬアミノ酸配列
【００３５】
モノクローナル抗体重鎖ＣＤＲ
配列番号１３：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｈ１
配列番号１４：クローン１１に由来するＣＤＲ−Ｈ２
配列番号１５：クローン１１に由来するＣＤＲ−Ｈ３
配列番号３５：クローンＢに由来するＣＤＲ−Ｈ３
配列番号１６：クローンＢに由来するＣＤＲ−Ｈ２
配列番号１７：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｈ１
配列番号１８：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｈ２
配列番号１９：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｈ３
配列番号２０：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｈ２コンセンサス
配列番号３６：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｈ３コンセンサス
【００３６】
モノクローナル抗体軽鎖ＣＤＲ
配列番号２１：クローン１１に由来するＣＤＲ−Ｌ１
配列番号２２：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｌ２
配列番号２３：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｌ３
配列番号２４：クローンＢに由来するＣＤＲ−Ｌ１
配列番号２５：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｌ１
配列番号２６：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｌ２
配列番号２７：クローンＣに由来するＣＤＲ−Ｌ３
配列番号２８：クローン１１およびクローンＢに由来するＣＤＲ−Ｌ１コンセンサス
【００３７】
ＶＨをコードするＤＮＡ
配列番号２９：クローン１１に由来するＶＨをコードするＤＮＡ
配列番号３０：クローンＢに由来するＶＨをコードするＤＮＡ
配列番号３１：クローンＣに由来するＶＨをコードするＤＮＡ
【００３８】
ＶＬをコードするＤＮＡ
配列番号３２：クローン１１に由来するＶＬをコードするＤＮＡ
配列番号３３：クローンＢに由来するＶＬをコードするＤＮＡ
配列番号３４：クローンＣに由来するＶＬをコードするＤＮＡ
【００３９】
実施例１〜３に記載するように、ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）の配列番号４に記載するＣ末端領域に特異的に結合し、患者の血清試料中の卵巣がん、膵臓がんおよびその他のムチンを分泌する悪性新生物の早期検出に有用である高親和性モノクローナル抗体を同定するに至った。したがって、本発明は、ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）のＣ末端領域に特異的に結合するモノクローナル抗体、ならびにムチン分泌型のがん、例として、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、上皮性皮膚がんおよび／またはその他のムチン分泌型のがんからなる群から選択される、ムチンを分泌するがんを検出する方法における、これらの抗体の使用を対象にする。
【００４０】
Ｉ．定義
本明細書においては、特段に定義しない限り、本明細書で使用するすべての用語は、本発明の当業者が理解すると予想される意味と同じ意味を有する。本発明を記載するために本明細書および特許請求の範囲で使用する用語を明確にするために、以下の定義を提供する。
【００４１】
用語「抗体」および「免疫グロブリン」は、本明細書では交換可能に使用される。これらの用語は、当業者により十分に理解されており、１つまたは複数のポリペプチドからなる、抗原に特異的に結合するタンパク質を指す。抗体の１つの形態は、抗体の基本的な構造単位を構成する。この形態は、四量体であり、抗体鎖の同一の対２つからなり、各対が、１つの軽鎖および１つの重鎖を有する。各対において、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とが一緒になって、抗原への結合に関与し、定常領域は、抗体のエフェクター機能に関与する。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、配列番号１に記載するヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）、あるいはその部分、例として、ＭＬＰのＣ末端領域（例えば、アミノ酸残基２７９〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基２７９〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域、またはアミノ酸残基３９７〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基３９７〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号５に記載するＣ末端領域、またはアミノ酸残基４０３〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基４０３〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号６に記載するＣ末端領域）に特異的に結合する抗体およびそれらの抗体断片を包含し、抗体およびそれらの抗体断片は、抗体を産生する任意の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、およびヒトを含めた、霊長類）から誘導されるか、あるいはハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現またはトランスジェニック動物（または抗体もしくは抗体断片を産生するその他の方法）から得られる。抗体の供給源または抗体が作製される様式（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物、ペプチド合成等による様式）の点から、用語「抗体」を限定する意図はない。例示的な抗体として、ポリクローナル、モノクローナルおよび組換え抗体；多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）；ヒト化抗体；完全ヒト抗体、マウス抗体；キメラ、マウス−ヒト、マウス−霊長類、霊長類−ヒトのモノクローナル抗体；ならびに抗イディオタイプ抗体が挙げられ、それらの抗体は、それらの任意のインタクトな分子または断片であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体のみならず、また、それらの断片（例として、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの合成バリアント、天然に存在するバリアント、融合タンパク質であって、必要な特異性を示す抗原結合性断片を有する、抗体の部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要な特異性を示す抗原結合性部位または断片（エピトープ認識部位）を含む、免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された配置も包含する。
【００４３】
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合性断片」は、免疫グロブリンの重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有するポリペプチド断片を指し、ＣＤＲは、ヒトＭＬＰ（配列番号１）、あるいはその部分、例として、ＭＬＰのＣ末端領域（例えば、アミノ酸残基２７９〜４３１のアミノ酸を含むかまたはアミノ酸残基２７９〜４３１のアミノ酸からなる、配列番号４に記載する領域、またはアミノ酸残基３９７〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基３９７〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号５に記載するＣ末端領域、またはアミノ酸残基４０３〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基４０３〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号６に記載するＣ末端領域）に特異的に結合する。この点に関して、本明細書に記載する抗体の抗原結合性断片は、ＭＬＰに結合する抗体に由来する本明細書に記載するＶＨおよびＶＬ配列のＣＤＲのうち、１、２、３、４、５、または６つすべてを含むことができる。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「抗ＭＬＰモノクローナル抗体」は、均質な抗体集団を指し、ここで、モノクローナル抗体は、ＭＬＰ上のエピトープ、例として、ＭＬＰのＣ末端領域中のエピトープ（例えば、アミノ酸残基２７９〜４３１のアミノ酸を含むかまたはアミノ酸残基２７９〜４３１のアミノ酸からなる、配列番号４に記載する領域、またはアミノ酸残基３９７〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基３９７〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号５に記載するＣ末端領域、またはアミノ酸残基４０３〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基４０３〜４３１からなる、ＭＬＰの配列番号６に記載するＣ末端領域）の選択的結合に関与するアミノ酸から構成されている。抗ＭＬＰモノクローナル抗体は、ＭＬＰ標的抗原に極めて特異的である。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体のみならず、また、それらの断片（例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらのバリアント、抗原結合性部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要な特異性を示す抗原結合性断片（エピトープ認識部位）およびエピトープに結合する能力を含む、免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された配置も包含する。
【００４５】
本明細書で使用する場合、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られているという、抗体の性質を示し、この用語には、抗体の供給源または抗体が作製される様式（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物等による様式）の点から、抗体を限定する意図はない。この用語は、免疫グロブリン全体、および「抗体」の定義において上記で記載した断片等を含む。モノクローナル抗体は、細胞系を連続的に培養することによって、抗体分子を産生する任意の技法、例として、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁、１９７５年が記載しているハイブリドーマ法を使用して得ることができ、または組換えＤＮＡ法により作製することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。また、モノクローナル抗体は、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁、１９９１年、およびＭａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁、１９９１年に記載されている技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。そのような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤを含めた、免疫グロブリンの任意のクラス、およびそれらの任意のサブクラスの抗体であり得る。
【００４６】
認識されている免疫グロブリンポリペプチドは、カッパおよびラムダ軽鎖、ならびにアルファ、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー重鎖、またはその他の種における同等物を含む。（約２５ｋＤａまたは約２１４個のアミノ酸の）完全長免疫グロブリン「軽鎖」は、ＮＨ２末端において約１１０個のアミノ酸の可変領域を、ＣＯＯＨ末端においてカッパまたはラムダ定常領域を含む。同様に、（約５０ｋＤａまたは約４４６個のアミノ酸の）完全長免疫グロブリン「重鎖」も、（約１１６個のアミノ酸の）可変領域、および上記の重鎖定常領域のうちの１つ、例えば、（約３３０個のアミノ酸の）ガンマを含む。
【００４７】
基本的な４鎖抗体単位は、同一の軽（Ｌ）鎖２つおよび同一の重（Ｈ）鎖２つから構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドを併せもつ、５つの基本的なヘテロ四量体単位からなり、したがって、１０個の抗原結合性部位を含有する。分泌型ＩｇＡ抗体は重合して、Ｊ鎖を併せもつ、２〜５つの基本的な４鎖単位を含む多価の集合体を形成することができる。各Ｌ鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結し、一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに依存して１つまたは複数のジスルフィド結合により相互に連結する。また、それぞれのＨ鎖およびＬ鎖が、規則的に間隔を置く鎖内ジスルフィド架橋も有する。ＶＨとＶＬとが一緒になって対形を成して、単一の抗原結合性部位を形成する。
【００４８】
各Ｈ鎖が、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて、α鎖およびγ鎖それぞれの場合には、３つの定常ドメイン（ＣＨ）を有し、μアイソタイプおよびεアイソタイプの場合には、４つのＣＨドメイン（ＣＨ）を有する。
【００４９】
各Ｌ鎖が、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いて、その他方の末端において、定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨと整列し、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列する。任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖を、それらの定常ドメイン（ＣＬ）のアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つに帰属させることができる。
【００５０】
免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に依存して、異なるクラスまたはアイソタイプに帰属させることができる。５つのクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、それぞれ、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と称される重鎖を有する。γクラスおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能の軽微な差に基づいて、サブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を発現する。
【００５１】
異なるクラスの抗体の構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ、Ａｂｂａ  Ｉ．ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編）；ＡｐｐｌｅｔｏｎおよびＬａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃｏｎｎ．、１９９４年、７１頁および６章を参照されたい。
【００５２】
用語「可変」は、抗体の間で、Ｖドメインの特定のセグメントが、配列の点で広範に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原についての特異性を定義する。しかし、可変性は、可変ドメインの１１０個のアミノ酸の範囲にわたって均一には分布しない。むしろ、Ｖ領域は、それぞれ９〜１２アミノ酸長である、「超可変領域」と呼ばれる極度に可変性のより短い領域により分離される、１５〜３０個のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチからなる。ネイティブの重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つの超可変領域により接続される、大部分がベータシートの配置をとる４つのＦＲを含み、超可変領域は、ループを形成して、ｎ−シート構造に接続し、場合によっては、ｎ−シート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域は一緒になって密接に近接して、ＦＲにより保持され、他方の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合性部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ（１９９１年）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接には関与しないが、多様なエフェクター機能を示し、例として、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に加わる。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」は、抗原結合に関与する、抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ（１９９１年）の記載に従うＫａｂａｔの番号付けシステムに従って番号付けを行う場合の軽鎖可変ドメイン中の約２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）の残基付近ならびに重鎖可変ドメイン中の約３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６６（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）の残基付近）からのアミノ酸残基を含み；かつ／または「超可変ループ」（すなわち、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）の記載に従うＣｈｏｔｈｉａの番号付けシステムに従って番号付けを行う場合の軽鎖可変ドメイン中の２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）の残基ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５２〜５６（Ｈ２）および９５〜１０１（Ｈ３）の残基）からのアミノ酸残基を含み；かつ／または「超可変ループ」／ＣＤＲ（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｊ．Ｐ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７巻：２０９〜２１２頁；Ｒｕｉｚ，Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８巻：２１９〜２２１頁（２０００年）の記載に従うＩＭＧＴの番号付けシステムに従って番号付けを行う場合のＶＬ中の２７〜３８（Ｌ１）、５６〜６５（Ｌ２）および１０５〜１２０（Ｌ３）の残基ならびにＶＨ中の２７〜３８（Ｈ１）、５６〜６５（Ｈ２）および１０５〜１２０（Ｈ３）の残基）からのアミノ酸残基を含む。
【００５４】
本明細書で使用する場合、用語「抗体断片」は、完全長抗ＭＬＰ抗体から誘導されるかまたは完全長抗ＭＬＰ抗体に関連する部分を指し、一般に、その抗原結合性領域または可変領域を含む。抗体断片の例示的な例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子、抗体断片から形成される二特異性および多重特異性抗体が挙げられる。
【００５５】
二重特異性抗体を使用しようとする場合、これらは、従来の二重特異性抗体であってもよく、従来の二重特異性抗体は、多様な方法で製造すること（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．およびＷｉｎｔｅｒ  Ｇ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、４巻、４４６〜４４９頁（１９９３年））、例えば、化学的にまたはハイブリッドのハイブリドーマから調製することができ、または二重特異性抗体は、上記で言及した二重特異性抗体の断片のうちのいずれかであってもよい。
【００５６】
本明細書で使用する場合、「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖として存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、リンカーにより、ｓｃＦｖが抗原結合に所望される構造を形成することが可能になる。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。「Ｆｖ」は、抗原を認識し、抗原に結合する完全な部位を含有する最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなり、これらのドメインは、強固に非共有結合性につながっている。これら２つのドメインのフォールディングから、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ、３つのループ）が発し、これらのループは、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含む半分のＦｖ）であっても、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有するが、親和性は、結合部位全体よりも低い。
【００５７】
本明細書で使用する場合、用語「特異的結合性」は、種々の分析対象の均質な混合物中に存在する特定の分析対象に優先的に結合する抗体の能力を指す。ある特定の実施形態では、特異的結合性の相互作用は、試料中の望ましい分析対象と望ましくない分析対象とを区別し、一部の実施形態では、約１０〜１００倍またはそれを超える倍数を上回る（例えば、約１０００または１０，０００倍を上回る）。ある特定の実施形態では、捕捉剤と分析対象との間の親和性は、それらが捕捉剤／分析対象の複合体中で特異的に結合する場合、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満、または約２５ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＫＤ（解離定数）を特徴とする。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「バリアント」の抗ＭＬＰ抗体は、アミノ酸配列が、「親」抗体または参照抗体のアミノ酸配列とは、親抗体の配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基の付加、欠失および／または置換によって異なる分子を指す。一実施形態では、バリアントの抗ＭＬＰ抗体は、重鎖可変領域のＣＤＲ領域内における組合せの合計が１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換および／または軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を除いて、親の可変ドメインと同一である可変領域を含有する分子を指す。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、保存的改変配列である。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「親抗体」は、バリアントの調製のために使用されるアミノ酸配列によってコードされる抗体を指す。好ましくは、親抗体は、ヒトフレームワーク領域を有し、存在する場合には、ヒト抗体定常領域を有する。例えば、親抗体は、ヒト化または完全ヒト抗体であり得る。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「単離抗体」は、同定され、その天然の環境の構成要素から分離および／または回収されている抗体を指す。その天然の環境の汚染成分は、抗体の診断または治療への使用を妨げると予想される物質であり、酵素、ホルモン、およびその他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含むことができる。好ましい実施形態では、抗体を、（１）ローリー法により決定する場合、抗体の９５重量％超まで、最も好ましくは、９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用により、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー、または好ましくは、銀染色を使用する、還元性または非還元性条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質になるまで精製する。単離抗体は、組換え細胞内部のｉｎ  ｓｉｔｕでの抗体を含み、その理由は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないからである。しかし通常は、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製する。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」は、モノクローナル抗体が特異的に結合する、抗原の部分を指す。エピトープ決定因子は、通常、化学的に活性な一連の表面分子、例として、アミノ酸または糖側鎖からなり、通常、特異的な三次元構造の特徴および特異的な電荷の特徴を示す。より具体的には、用語「ＭＬＰエピトープ」および「Ｃ末端ＭＬＰエピトープ」は、本明細書で使用する場合、当技術分野で周知の任意の方法、例えば、イムノアッセイにより決定する場合に、抗体が免疫特異的に結合する、対応するポリペプチドの部分（配列番号１および／または配列番号４および／または配列番号５および／または配列番号６）を指す。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。そのようなエピトープは、本来直鎖状であってもよく、または不連続エピトープであってもよい。したがって、本明細書で使用する場合、用語「立体構造エピトープ」は、切れ目のない一連のアミノ酸以外の、抗原のアミノ酸間の空間関係により形成される不連続エピトープを指す。
【００６２】
本明細書で使用する場合、「哺乳動物対象」として、非限定的に、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、およびげっ歯類が挙げられる。
【００６３】
本明細書で使用する場合、「治療剤」は、抗悪性腫瘍剤、抗炎症剤、サイトカイン、抗感染剤、酵素の活性化剤もしくは阻害剤、アロステリック改変剤、抗生物質、または患者において、投与されて、所望の治療効果を誘発するその他の薬剤として作用する現時点で公知であるかもしくは後に開発される化合物、分子または原子を指し、こうした治療剤は、抗体部分、すなわち、抗体または抗体の断片もしくは部分断片と、別途、同時または順次に投与されるか、あるいは抗体部分にコンジュゲートされて投与され、病態に陥っている対象の治療に有用である。治療剤はまた、毒素、化学療法剤または放射性同位体である場合もあり、ここで、治療剤部分は、がん細胞を死滅させるための部分であることを意図する。
【００６４】
本明細書で使用する場合、「検出可能な標識」は、イムノコンジュゲートの文脈では、その存在を検出可能にする特性を示す部分、例えば、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的および／またはその他の物理的手段により検出可能な部分である、イムノコンジュゲートの部分を指す。検出可能な部分は、本発明の抗ＭＬＰ抗体およびそれらの抗原結合性断片に直接的および／または間接的にカップリングさせることができる。例えば、イムノコンジュゲートは、放射性同位元素を用いてかまたはイムノアッセイにおける検出を可能にする酵素活性で標識された抗ＭＬＰ抗体を含むことができる。
【００６５】
本明細書で使用する場合、アミノ酸残基を、以下に従って略す：アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ；Ｖ）。
【００６６】
最も広い意味において、天然に存在するアミノ酸を、それぞれのアミノ酸の側鎖の化学的特徴に基づいて、群に分けることができる。「疎水性」アミノ酸により、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ、ＣｙｓまたはＰｒｏのいずれかを意味する。「親水性」アミノ酸により、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓのいずれかを意味する。この一連のアミノ酸を、以下に従ってさらにサブクラスに分けることもできる。「無電荷親水性」アミノ酸により、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎまたはＧｌｎのいずれかを意味する。「酸性」アミノ酸により、ＧｌｕまたはＡｓｐのいずれかを意味する。「塩基性」アミノ酸により、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓのいずれかを意味する。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「保存的アミノ酸置換」は、以下の群のそれぞれに属するアミノ酸の間での置換により説明される：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン、（３）セリンおよびスレオニン、（４）アスパラギン酸およびグルタミン酸、（５）グルタミンおよびアスパラギン、ならびに（６）リシン、アルギニンおよびヒスチジン。
【００６８】
本明細書で使用する場合、「単離核酸分子」は、生物のゲノムＤＮＡ中に組み入れられていない核酸分子（例えば、ポリヌクレオチド）である。例えば、細胞のゲノムＤＮＡから分離されている、増殖因子をコードするＤＮＡ分子は、単離ＤＮＡ分子である。単離核酸分子の別の例が、化学的に合成された核酸分子であり、これは、生物のゲノム中に組み入れられていない。特定の種から単離されている核酸分子は、当該の種に由来する染色体の完全なＤＮＡ分子よりも小さい。
【００６９】
本明細書で使用する場合、「核酸分子構築物」は、ヒトの介入により、自然界においては存在しない取合せで、組み合わせ、並置された、核酸のセグメントを含有するように改変されている、一本鎖または二本鎖のいずれかの核酸分子である。
【００７０】
本明細書で使用する場合、「発現ベクター」は、宿主細胞中で発現させる遺伝子をコードする核酸分子である。典型的には、発現ベクターは、転写プロモーター、遺伝子、および転写ターミネーターを含む。遺伝子の発現は、通常、プロモーターの制御下に置かれ、そのような遺伝子は、プロモーター「に作動可能に連結されている」といわれる。調節エレメントが、コアプロモーターの活性を調整する場合には、同様に、調節エレメントおよびコアプロモーターも作動可能に連結されている。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「およそ」または「約」は一般に、数に言及する場合、その数のいずれかの方向（それよりも大きいまたはそれよりも小さい）の５％の範囲に収まる数を含むと、別段の記載がないかまたはそうでないことが文脈から明らかでない限り（ただし、そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）理解される。範囲を記述する場合、終点は、範囲内に、別段の記載がない限りまたはそうでないことが文脈から明らかでない限り含まれる。
【００７２】
本明細書で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、複数形の態様を、そうでないことが文脈から明らかに指示されない限り含む。したがって、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」という場合、単一の細胞、および２つまたはそれよりも多い細胞を含み、「薬剤（ａｎ  ａｇｅｎｔ）」という場合、１つの薬剤、および２つまたはそれよりも多い薬剤を含み、「抗体（ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という場合、複数のそのような抗体を含み、「あるフレームワーク領域」という場合、１つまたは複数のフレームワーク領域および当業者に公知のそれらの同等物への言及を含むこと等となる。
【００７３】
別段の明確な記載がない限り、本明細書中の各実施形態は、あらゆる他の実施形態に準用される。
【００７４】
標準的な技法を使用して、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）を行うことができる。酵素反応および精製技法は、製造元の規格に従って、または当技術分野で一般に行われるように、または本明細書の記載に従って行うことができる。これらおよび関連の技法および手順は一般に、当技術分野で周知の従来法に従ったり、本明細書全体を通して引用し、論じる多様な一般的な参考文献およびより詳細な参考文献の記載に従ったりして実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１年、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．Ｉｎｃ．、およびＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＹ、ＮＹ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ、Ａｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ、Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ、Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ、Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ編、２００１年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ＮＹ、ＮＹ）；またはその他の適切な現在のプロトコールについての刊行物、およびその他の同類の参考文献を参照されたい。特段の定義の提供がない限り、本明細書に記載する分子生物学、分析化学、合成有機化学ならびに医薬および薬学における化学に関連して利用する命名法や、それらの実験室の手順および技法は、当技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。標準的な技法を使用して、組換え技術、分子生物学的、微生物学的、化学的合成、化学的分析、医薬の調製、製剤化および送達、ならびに患者の治療を行うことができる。
【００７５】
本明細書で論じる任意の実施形態を、本発明の任意の方法、キット、試薬または組成物に関して実行することができ、逆もまた同様であることが企図される。さらに、本発明の組成物を使用して、本発明の方法を行うこともできる。
【００７６】
ＩＩ．概説
本明細書の実施例１〜３に記載するように、本発明は、モノクローナル抗ＭＬＰ抗体を提供し、これらの抗体は、（配列番号１に記載する）ヒト完全長ムチン様タンパク質「ＭＬＰ」に高い親和性で結合し、ヒト対象に由来する血清試料中の卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、上皮性皮膚がんおよび／またはその他のムチン分泌型のがんの存在を検出するためのバイオマーカーとして使用することが可能である。特定の実施形態では、本発明は、ヒトＭＬＰの（配列番号４に記載する）Ｃ末端領域中のエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＰのＣ末端領域であって、配列番号１のアミノ酸残基３９７〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基３９７〜４３１からなる（配列番号５に記載する）Ｃ末端領域中のエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＰのＣ末端領域であって、配列番号１のアミノ酸残基４０３〜４３１を含むかまたはアミノ酸残基４０３〜４３１からなる（配列番号６に記載する）Ｃ末端領域中のエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。
【００７７】
本明細書の記載によれば、主題の抗体は、組換えＭＬＰに結合し、また、「ｇＭＬＰ」と呼ぶ、天然に存在するグリコシル化形態のＭＬＰにも結合し、ｇＭＬＰは、卵巣がん細胞、膵臓がん細胞等の上皮性がん細胞、および例えば、その他の腺癌細胞により分泌される。したがって、主題の抗体は、対象から得られた生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するための診断方法、またはｉｎ  ｖｉｖｏで対象においてＭＬＰの存在を検出するための診断方法（例えば、画像診断）において、対象中の上皮性がん細胞（例えば、卵巣がん細胞または膵臓がん細胞）の存在または非存在についてのバイオマーカーとして使用することができる。
ＩＩＩ．ＭＬＰ抗原
【００７８】
本明細書の実施例１に記載するように、本発明者らは、図１に示す、配列番号１に記載するＭＬＰの完全長配列（またＭＵＣ−Ｂとも呼ぶ）をコードする、第７染色体上の単一のエクソン遺伝子を同定するに至り、この完全長配列は、４３１個のアミノ酸残基の長さを有し、（配列番号４に記載する）新規のＣ末端領域を含有する。本明細書の実施例１〜３にさらに記載するように、発明者らは、ＭＬＰのＣ末端領域を抗原として使用して、本明細書に記載する診断および療法における方法において使用するのに適切な抗ＭＬＰ抗体も生成するに至った。
【００７９】
したがって、一態様では、本発明は、配列番号１に記載するアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントを含むか、あるいは配列番号１に記載するアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントからなる単離ポリペプチドを提供する。
【００８０】
一実施形態では、本発明は、配列番号４に記載するアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントを含むか、あるいは配列番号４に記載するアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントからなる単離ポリペプチドを提供する。
【００８１】
一実施形態では、本発明は、配列番号３に記載するアミノ酸配列または配列番号３に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントを含むか、あるいは配列番号３に記載するアミノ酸配列または配列番号３に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントからなる単離ポリペプチドを提供する。
【００８２】
一実施形態では、本発明は、配列番号５に記載するアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントを含むか、あるいは配列番号５に記載するアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントからなる単離ポリペプチドを提供する。
【００８３】
一実施形態では、本発明は、配列番号６に記載するアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントを含むか、あるいは配列番号６に記載するアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントからなる単離ポリペプチドを提供する。
【００８４】
一実施形態では、本発明は、配列番号１に記載するポリペプチドのアミノ酸配列をコードする、または配列番号１に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントをコードする単離核酸分子を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号４に記載するポリペプチドのアミノ酸配列をコードする、または配列番号４に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントをコードする単離核酸分子を提供する。一実施形態では、単離核酸配列は、配列番号２を含むかまたは配列番号２からなる。一実施形態では、本発明は、配列番号５に記載するポリペプチドのアミノ酸配列をコードする、または配列番号５に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントをコードする単離核酸分子を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号６に記載するポリペプチドのアミノ酸配列をコードする、または配列番号６に対して少なくとも９０％、例として、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するそのバリアントをコードする単離核酸分子を提供する。
【００８５】
一実施形態では、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のうちの少なくとも１つをコードする発現ベクターを提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号２を含む発現ベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６のうちの少なくとも１つをコードする核酸を含む細胞を提供する。
ＩＶ．抗ＭＬＰモノクローナル抗体
【００８６】
本明細書の実施例１および２に記載するように、発明者らは、ＭＬＰのＣ末端領域（配列番号４）を抗原として使用して、本明細書に記載する診断および療法における方法において使用するのに適切な抗ＭＬＰ抗体を生成するに至った。実施例３に記載するように、いくつかの代表的な抗ＭＬＰモノクローナル抗体の可変軽鎖断片および可変重鎖断片を、クローニングし、配列決定するに至った。図１０Ａは、ＭＬＰのＣ末端領域に対して高い結合親和性を示すことが同定された３つの抗ＭＬＰクローンの可変重鎖領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。図１０Ｂは、ＭＬＰのＣ末端領域に対して高い結合親和性を示すことが同定された３つの抗ＭＬＰクローンの可変軽鎖領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。
【００８７】
上記で論じたＭＬＰ特異的モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を整列させ、それらの抗体のどの位置においてどのアミノ酸が存在するかを決定することによって、ＭＬＰ特異的抗体の置換可能な位置、およびそれらの位置へ置換することができるアミノ酸の選択が明らかになる。例示的な一実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を整列させ、例示的な抗体の各位置におけるアミノ酸の同一性を決定する。（ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖の各位置において存在するアミノ酸を示す）表２および３ならびに図１０Ａおよび１０Ｂに示すように、いくつかの置換可能な位置、およびそれらの位置へ置換することができるアミノ酸残基は、容易に同定される。
【表１】
2019526227.tif 000003
【００８８】
ある特定の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、表１に記載する重鎖可変ドメイン配列のうちのいずれかのドメインと実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である重鎖可変ドメインを有する。
【００８９】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号７に記載するクローン１１（ＶＨ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である重鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号７を含むかまたは配列番号７からなる重鎖可変ドメインを有する。
【００９０】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号８に記載するクローンＢ（ＶＨ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である重鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号８を含むかまたは配列番号８からなる重鎖可変ドメインを有する。
【００９１】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号９に記載するクローンＣ（ＶＨ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である重鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号９を含むかまたは配列番号９からなる重鎖可変ドメインを有する。
【００９２】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、表１に記載する軽鎖可変ドメイン配列のうちのいずれかのドメインと実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である軽鎖可変ドメインを有する。
【００９３】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号１０に記載するクローン１１（ＶＬ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である軽鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号１０を含むかまたは配列番号１０からなる軽鎖を有する。
【００９４】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号１１に記載するクローンＢ（ＶＬ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である軽鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル阻害抗体は、配列番号１１を含むかまたは配列番号１１からなる軽鎖を有する。
【００９５】
一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号１２に記載するクローンＣ（ＶＬ）と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）である軽鎖可変ドメインを有する。一部の実施形態では、主題のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、配列番号１２を含むかまたは配列番号１２からなる軽鎖を有する。
【００９６】
一部の実施形態では、本発明のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、表１に記載するような、重鎖または軽鎖をコードするヌクレオチド配列に高い厳密度の条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列（例えば、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３または配列番号３４）がコードする重鎖または軽鎖を含有する。高い厳密度の条件は、０．１×ＳＳＣ（１５ｍＭの生理食塩水／０．１５ｍＭのクエン酸ナトリウム）中での５０℃またはそれより高い温度におけるインキュベーションを含む。
【００９７】
一部の実施形態では、本発明のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域を有し、ＣＤＲは、下記の表２Ａ〜Ｇおよび表３に記載する重鎖可変配列のうちのいずれかのＣＤＲのアミノ酸配列と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるか、あるいは下記の表２Ａ〜Ｇおよび表３に記載する重鎖可変配列のうちのいずれかのＣＤＲのアミノ酸配列と比較する場合、同一の配列を含むかまたは同一の配列からなる。
【００９８】
一部の実施形態では、本発明のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体は、１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域を有し、ＣＤＲは、下記の表４Ａ〜Ｆおよび表５に記載する軽鎖可変配列のうちのいずれかのＣＤＲのアミノ酸配列と実質的に同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９６％同一、または少なくとも約９７％同一、または少なくとも約９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるか、あるいは下記の表４Ａ〜Ｆおよび表５に記載する軽鎖可変配列のうちのいずれかのＣＤＲのアミノ酸配列と比較する場合、同一の配列を含むかまたは同一の配列からなる。
【００９９】
ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体の重鎖可変領域
【表２Ａ】
2019526227.tif 000004
【表２Ｂ】
2019526227.tif 000005
【表２Ｃ】
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【表２Ｄ】
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【表２Ｅ】
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【表２Ｆ】
2019526227.tif 000009
【表２Ｇ】
2019526227.tif 000010
【０１００】
上記の表１および表２Ａ〜Ｇに列挙したモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）配列を、下記に示す。
【０１０１】
ＫａｂａｔのＣＤＲ（３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６６（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３））は、太字で示され、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ（２６〜３２（Ｈ１）、５２〜５６（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３））は、下線で示される。
【化１】
2019526227.tif 000011
【化２】
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【表３】
2019526227.tif 000013
【０１０２】
ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体の軽鎖可変領域
【表４Ａ】
2019526227.tif 000014
【表４Ｂ】
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【表４Ｃ】
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【表４Ｄ】
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【表４Ｅ】
2019526227.tif 000018
【表４Ｆ】
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【０１０３】
上記の表１および表４Ａ〜Ｆに列挙したＭＬＰ特異的モノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を、下記に示す。
【０１０４】
ＫａｂａｔのＣＤＲ（２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３））は、太字で示され、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ（２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３））は、下線で示される。これらの領域は、Ｋａｂａｔのシステムにより番号付けを行っても、Ｃｈｏｔｈｉａのシステムにより番号付けを行っても同じである。
【化３】
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【表５】
2019526227.tif 000021
【０１０５】
上記によれば、一態様では、本発明は、配列番号５または配列番号６中のエピトープなどのヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて、グリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、１０ｎＭ未満、例として、１ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合する。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有するＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローン１１、（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有するＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローンＢ、および（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有するＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗体ＭＬＰクローンＣからなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識する。
【０１０６】
一実施形態では、前記抗体は、配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一）である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含む。一実施形態では、前記抗体は、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一）である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含む。
【０１０７】
別の態様では、本発明は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する、単離されたＭＬＰ特異的モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、単離された抗体はヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域（すなわち、配列番号１のアミノ酸２７９〜４３１）中のエピトープ、例として、ヒトＭＬＰの配列番号５に記載するＣ末端領域（すなわち、配列番号１のアミノ酸３９７〜４３１）中のエピトープ、または例として、ヒトＭＬＰの配列番号６に記載するＣ末端領域（すなわち、配列番号１のアミノ酸４０３〜４３１）中のエピトープに特異的に結合する。
【０１０８】
一実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１４、１６または１８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む。一実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号１３または１７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号２２または配列番号２６に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２１、２４、２５または２８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む。
【０１０９】
一実施形態では、重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号２０を含む。一実施形態では、配列番号２０に記載するアミノ酸配列は、９位においてＴ（Ｔｈｒ）またはＰ（Ｐｒｏ）を含有する。一実施形態では、配列番号２０に記載するアミノ酸配列は、１０位においてＳ（Ｓｅｒ）またはＴ（Ｔｈｒ）を含有する。一実施形態では、重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３は、（表３に示すように）配列番号１５を含む。一実施形態では、重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３は、（表３に示すように）配列番号３５を含む。一実施形態では、重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３は、（表３に示すように）配列番号３６を含む。
【０１１０】
一実施形態では、軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１は、（表５に示すように）配列番号２８を含む。一実施形態では、配列番号２８に記載するアミノ酸は、９位においてＴ（Ｔｈｒ）を含有する。一実施形態では、配列番号２８に記載するアミノ酸配列は、９位においてＳ（Ｓｅｒ）を含有する。
【０１１１】
一実施形態では、軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２は、（表５に示すように）配列番号２２を含む。
【０１１２】
一実施形態では、軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ３は、（表５に示すように）配列番号２３を含む。
【０１１３】
一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、１０ｎＭまたはより低いＫＤでＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。一実施形態では、それらの保存的改変配列は、重鎖可変領域のＣＤＲ領域内における組合せの合計が１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換および／または軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を除いて、列挙した可変ドメインと同一である可変領域を含有する分子を含むかまたはそうした分子からなる。
【０１１４】
別の態様では、本発明は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで、抗体は、Ｉ）ａ）Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、ｉ）配列番号７、配列番号８または配列番号９の３１〜３５からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ１、およびｉｉ）配列番号７、配列番号８または配列番号９の５０〜６６からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ２、およびｉｉｉ）配列番号７、配列番号８または配列番号９の９５〜１０２からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびにｂ）Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、ｉ）配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の２４〜３４からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ１、およびｉｉ）配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の５０〜５６からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ２、およびｉｉｉ）配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の８９〜９７からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含むか、またはＩＩ）それらのバリアントであって、前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換および前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を除いて、このこと以外は、前記可変ドメインと同一であるバリアントを含み、ここで、抗体またはそのバリアントは、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記重鎖可変領域の２８、３７、５７、５８、６８、７２、８２Ａまたは１０２位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記軽鎖可変領域の２７Ｅ、８０または１００位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記抗体の重鎖可変領域は、配列番号７を含む。一実施形態では、前記抗体の重鎖可変領域は、配列番号８を含むか、または配列番号８からなる。一実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号９を含むか、または配列番号９からなる。一実施形態では、前記抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１０を含むか、または配列番号１０からなる。一実施形態では、前記抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１１を含むか、または配列番号１１からなる。一実施形態では、前記抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１２を含むか、または配列番号１２からなる。
【０１１５】
別の態様では、本発明は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する単離モノクローナル抗体を提供し、ここで、抗体は、Ｉ）ａ）Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、ｉ）配列番号の３１〜３５からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ１、およびｉｉ）配列番号７の５０〜６６からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ２、およびｉｉｉ）配列番号７の９５〜１０２からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびにｂ）ｉ）配列番号１０の２４〜３４からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ１、およびｉｉ）配列番号１０の５０〜５６からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ２、およびｉｉｉ）配列番号１０の８９〜９７からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含むか、またはＩＩ）それらのバリアントであって、前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換および前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を除いて、このこと以外は、前記可変ドメインと同一であるバリアントを含み、ここで、抗体またはそのバリアントは、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記重鎖可変領域の２８、３７、５７、５８、６８、７２、８２Ａまたは１０２位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記軽鎖可変領域の２７Ｅ、８０または１００位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記抗体の重鎖は、配列番号７、または配列番号７に対する少なくとも８０％の同一性（例えば、配列番号７に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性）を含むそのバリアントを含む。一実施形態では、前記抗体の重鎖は、配列番号１０、または配列番号１０に対する少なくとも８０％の同一性（例えば、配列番号１０に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性）を含むそのバリアントを含む。一実施形態では、前記抗体は、１０ｎＭまたはより低いＫＤでＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。
【０１１６】
別の態様では、本発明は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する単離モノクローナル抗体を提供し、ここで、抗体は、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、Ｉ）ａ）ｉ）配列番号８の３１〜３５からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ１、およびｉｉ）配列番号８の５０〜６６からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ２、およびｉｉｉ）配列番号８の９５〜１０２からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびにｂ）ｉ）配列番号１１の２４〜３４からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ１、およびｉｉ）配列番号１１の５０〜５６からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ２、およびｉｉｉ）配列番号１１の８９〜９７からのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含むか、またはＩＩ）それらのバリアントであって、前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換および前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を除いて、このこと以外は、前記可変ドメインと同一であるバリアントを含み、ここで、抗体またはそのバリアントは、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記重鎖可変領域の２８、３７、５７、５８、６８、７２、８２Ａまたは１０２位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記軽鎖可変領域の２７Ｅ、８０または１００位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。
【０１１７】
一実施形態では、前記抗体の重鎖は、配列番号８、または配列番号８に対する少なくとも８０％の同一性（例えば、配列番号８に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性）を含むそのバリアントを含む。一実施形態では、前記抗体の重鎖は、配列番号１１、または配列番号１１に対する少なくとも８０％の同一性（例えば、配列番号１１に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性）を含むそのバリアントを含む。一実施形態では、前記抗体は、１０ｎＭまたはより低いＫＤでＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する。
【０１１８】
一実施形態では、前記抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０１１９】
一実施形態では、前記抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０１２０】
一実施形態では、前記抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０１２１】
本明細書に開示する本発明の任意の態様の一実施形態では、前記抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２およびＦ（ａｂ’）２からなる群から選択される抗体断片である。一実施形態では、前記抗体は、単鎖分子である。一実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ２分子である。一実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ１分子である。一実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ４分子である。一実施形態では、前記抗体は、ヒト化、キメラまたは完全ヒト抗体である。
【０１２２】
一部の実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号７に記載する重鎖可変領域および配列番号１０に記載する軽鎖可変領域を含む参照抗体、例として、参照抗体クローン１１、または（ｉｉ）配列番号８に記載する重鎖可変領域および配列番号１１に記載する軽鎖可変領域を含む参照抗体、例として、参照抗体クローンＢ、または（ｉｉｉ）配列番号９に記載する重鎖可変領域および配列番号１２に記載する軽鎖可変領域を含む参照抗体、例として、参照抗体クローンＣのうちの少なくとも１つにより認識されるエピトープの少なくとも一部を特異的に認識する（表１を参照されたい）。
【０１２３】
上記によれば、本出願のある特定の好ましい実施形態に従う抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載する任意の抗体と、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）への結合について競合する抗体またはその抗原結合性断片であり得る。一部の実施形態では、主題の抗体は、（ｉ）抗原に特異的に結合し、（ｉｉ）本明細書に開示するＶＨおよび／またはＶＬドメインを含むか、または本明細書に開示するＣＤＲ−Ｈ３またはこれらのうちのいずれかのバリアントを含む。結合メンバー間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、かつ／または特定のレポーター分子を１つの結合メンバーにタグ付けすることによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで容易にアッセイすることができ、レポーター分子は、タグが付いてないその他の結合メンバーの存在下で検出することができ、同じエピトープまたはオーバーラップするエピトープに結合する、特異的に結合しているメンバーの同定が可能になる。したがって、ここで、特異的抗体またはその抗原結合性断片を提供し、こうした特異的抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に結合する本明細書に記載する抗体、例として、表１に記載するクローン１１、クローンＢまたはクローンＣのうちのいずれか１つと、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）への結合について競合する、抗体の抗原結合性部位を含む。
抗ＭＬＰ抗体の結合親和性
【０１２４】
本発明の抗ＭＬＰ抗体は、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に、約１００ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満、または約２５ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満もしくはそれと等しい、または０．１ｎＭ未満もしくはそれと等しいＫＤ（解離定数）で結合する。抗ＭＬＰ抗体の結合親和性は、本明細書の実施例１〜３に記載するように、当技術分野で公知の適切な結合アッセイ、例として、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定することができる。
バリアントの抗ＭＬＰ抗体
【０１２５】
上記に記載したモノクローナル抗体を改変して、ヒトＭＬＰに特異的に結合するバリアントの抗体を提供することができる。バリアントの抗体は、上記に記載したモノクローナル抗体の少なくとも１つのアミノ酸に関する置換、付加または欠失により作製することができる。一般に、これらのバリアントの抗体は、上記に記載した抗体の一般的な特徴を有し、少なくとも、上記に記載した抗体のＣＤＲを、またはある特定の実施形態では、上記に記載した抗体のＣＤＲに非常に類似するＣＤＲを含有する。
【０１２６】
好ましい実施形態では、バリアントは、親抗体の１つまたは複数の超可変領域中の１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。例えば、バリアントは、親抗体の１つまたは複数のＣＤＲ領域中に、少なくとも１つ、例えば、約１つ〜約１０個、例として、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、または少なくとも１０個の置換、好ましくは、約２つ〜約６つの置換を含むことができる。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記重鎖可変領域の２８、３７、５７、５８、６８、７２、８２Ａまたは１０２位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。一実施形態では、前記バリアントは、Ｋａｂａｔに従って番号付けを行うと、前記軽鎖可変領域の２７Ｅ、８０または１００位からなる群から選択される１つまたは複数の位置において、アミノ酸置換を含む。
【０１２７】
一部の実施形態では、バリアントの抗体は、前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５または６つのアミノ酸置換および／または前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ領域内における組合せの合計が最大１、２、３、４、５または６つのアミノ酸置換を除いて、このこと以外は、表１に記載する主題の抗体の可変ドメインと同一であるアミノ酸配列を有し、ここで、抗体またはそのバリアントは、ヒトＭＬＰ（配列番号１または配列番号４）に特異的に結合する。
【０１２８】
通常、バリアントは、親抗体の重鎖または軽鎖の可変ドメイン配列に関して、少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に比した同一性または相同性は、本明細書では、配列を整列させ、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を得るために、ギャップを導入した後に、親抗体の残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義する。（例えば、シグナルペプチド配列、リンカー配列、またはタグ、例として、ＨＩＳタグ、等の）抗体配列のＮ末端、Ｃ末端または内部における伸長、欠失または挿入はいずれも、配列の同一性または相同性に影響を及ぼすと解釈してはならない。バリアントは、ヒトＭＬＰ（配列番号１、または配列番号４もしくは配列番号５もしくは配列番号６）に結合する能力を保持し、好ましくは、親抗体の特性よりも優れている特性を有する。例えば、バリアントは、ＭＬＰ（配列番号１、または配列番号４もしくは配列番号５もしくは配列番号６）への結合について、より強力な結合親和性を有し得る。
【０１２９】
そのような特性を分析するためには、バリアントのＦａｂ形態を親抗体のＦａｂ形態と、またはバリアントの完全長形態を親抗体の完全長形態と比較することができる。本明細書において特に興味深いバリアントの抗体は、親抗体と比較する場合に、結合親和性の少なくとも約１０倍、好ましくは、少なくとも約２０倍、最も好ましくは、少なくとも約５０倍の増強を示す抗体である。
【０１３０】
本発明の抗体を、望ましい特性を増強するように改変することができ、例として、抗体の血清半減期を制御することが望ましい場合がある。一般に、完全な抗体分子は、非常に長い血清残留性を有し、一方、（＜６０〜８０ｋＤａの）断片は、腎臓を介して非常に迅速に濾過される。したがって、抗体の長期の作用が望ましい場合には、抗体は、好ましくは、完全な完全長ＩｇＧ抗体（例として、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４）であり、一方、抗体のより短い作用が望ましい場合には、抗体断片が好ましい場合がある。
抗ＭＬＰモノクローナル抗体（クローン１１、ＢおよびＣ）を産生するハイブリドーマ
【０１３１】
Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙの条項に従って、２０１４年１０月３０日に、「ハイブリドーマＭＬＰクローン１１」と称されるハイブリドーマ細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）に寄託した。ＡＴＣＣにより、ハイブリドーマＭＬＰクローン１１に、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９が与えられた。この細胞系は、マウス脾臓細胞から誘導したマウスハイブリドーマ細胞系であり、「αＭＬＰクローン１１」と本明細書では呼ぶモノクローナル抗体を分泌する。
【０１３２】
Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙの条項に従って、２０１４年１０月３０日に、「ハイブリドーマＭＬＰクローンＢ」と称されるハイブリドーマ細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）に寄託した。ＡＴＣＣにより、ハイブリドーマＭＬＰクローンＢに、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００が与えられた。この細胞系は、マウス脾臓細胞から誘導したマウスハイブリドーマ細胞系であり、「αＭＬＰクローンＢ」と本明細書では呼ぶモノクローナル抗体を分泌する。
【０１３３】
Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙの条項に従って、２０１４年１０月３０日に、「ハイブリドーマＭＬＰクローンＣ」と称されるハイブリドーマ細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）に寄託した。ＡＴＣＣにより、ハイブリドーマＭＬＰクローンＣに、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１が与えられた。この細胞系は、マウス脾臓細胞から誘導したマウスハイブリドーマ細胞系であり、「αＭＬＰクローンＣ」と本明細書では呼ぶモノクローナル抗体を分泌する。
【０１３４】
したがって、一実施形態では、本発明は、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９、ＰＴＡ−１２１７００およびＰＴＡ−１２１７０１で寄託したハイブリドーマ細胞系の群から選択されるハイブリドーマ細胞系により産生される単離抗ＭＬＰモノクローナル抗体を提供する。
【０１３５】
別の実施形態では、本発明は、αＭＬＰクローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、αＭＬＰクローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、およびαＭＬＰクローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系からなる群から選択されるハイブリドーマ細胞系を提供する。
単鎖抗ＭＬＰ抗体
【０１３６】
本発明の一実施形態では、抗ＭＬＰ抗体は、単鎖抗体であり、適切なポリペプチドリンカーにより連結されている軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含有する、遺伝学的に融合させた単鎖分子として遺伝子工学的に作製された分子と定義される。そのような単鎖抗体はまた、「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片とも呼ぶ。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、リンカーにより、ｓｃＦｖが抗原結合に所望される構造を形成することが可能になる。ＭＬＰに結合するｓｃＦｖ抗体は、可変軽鎖領域を、可変重鎖領域のアミノ末端側または可変重鎖領域のカルボキシル末端側のいずれかに方向付けることができる。
ヒト化抗ＭＬＰ抗体
【０１３７】
抗ＭＬＰ抗体を、それらの能力を変化させることなく改変して、本明細書に記載する目的で使用することができる。最初の事項として、本明細書に記載する抗体は、組換えＣ末端ＭＬＰ（配列番号４）を用いて免疫化したマウスを起源とすることに注目されたい。したがって、抗体は、マウス抗体中でフレームワーク領域中に通常見出されるアミノ酸残基を含有する、フレームワーク領域（相補性決定領域または「ＣＤＲ」以外の領域）を有し、ヒト患者に投与する場合には、免疫原性を示す恐れがある。ヒトにおいて使用する場合に、マウス抗体の免疫原性を低下させるためには、マウスの抗体中の特定の位置において見出される残基を、ヒト抗体中の同じ位置においてより典型的に見出される残基で置き換えることによって、フレームワーク領域を遺伝子工学的に作製することが、当技術分野では一般的である。これらの形で遺伝子工学的に作製された抗体を、「ヒト化抗体」と呼び、これらの抗体は典型的には、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好ましく、その理由は、ヒト化抗体は、副作用を誘発するリスクがより低く、典型的には、血行中により長く留まることができるからである。抗体をヒト化する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第６，１８０，３７７号、第６，４０７，２１３号、第５，６９３，７６２号、第５，５８５，０８９号および第５，５３０，１０１号に詳細に記載されている。
【０１３８】
さらに、可変領域のＣＤＲが、抗体の特異性を決定するので、表２Ａ〜Ｇ、表３、表４Ａ〜Ｆおよび表５に記載するＣＤＲをグラフトするかまたは遺伝子工学的に作製し、最適な抗体を得て、ＭＬＰへの結合についての特異性を当該の抗体に付与することができる。例えば、クローン１１、ＢおよびＣに由来するＣＤＲを、ヒト抗体の公知の三次元構造のフレームワーク上にグラフトして（例えば、ＷＯ９８／４５３２２；Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２頁（１９８６年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４頁（１９８８年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３頁（１９８８年）、ならびにＷｉｎｔｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４９巻：２９３頁（１９９１年）を参照されたい）、ヒトに投与する場合、免疫原性応答が低下しているかまたは免疫原性応答を示さない抗ＭＬＰ抗体を生成することができる。
抗ＭＬＰ抗体を産生するための方法
【０１３９】
別の態様では、本発明は、特異的に、完全長ヒトＭＬＰポリペプチド（配列番号１）内、例として、ヒトＭＬＰのＣ末端部分（配列番号４）内のエピトープ、例として、ヒトＭＬＰの配列番号５に記載するＣ末端領域（すなわち、配列番号１のアミノ酸３９７〜４３１）中のエピトープ、または例として、ヒトＭＬＰの配列番号６に記載するＣ末端領域（すなわち、配列番号１のアミノ酸４０３〜４３１）中のエピトープを認識し、それに結合する抗体を産生する方法を提供し、前記方法は、配列番号１またはその部分を含むかまたは配列番号１またはその部分からなるポリペプチド、例として、配列番号４を含むかまたは配列番号４からなるポリペプチド、または例として、配列番号５を含むかまたは配列番号５からなるポリペプチド、または例として、配列番号６を含むかまたは配列番号６からなるポリペプチドを哺乳動物に投与するステップと、ヒトＭＬＰを認識する抗体を選択するステップとを含む。
【０１４０】
多くの実施形態では、主題のモノクローナル抗体をコードする核酸を、宿主細胞内に直接導入し、細胞を、コードされる抗体の発現を誘発するのに十分な条件下でインキュベートする。
【０１４１】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の抗ＭＬＰ抗体またはその断片、例として、表１に記載する抗体またはその断片をコードする核酸分子を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４からなる群から選択される核酸配列を含む核酸分子を提供する。
【０１４２】
一部の実施形態では、本発明は、本発明のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体をコードする核酸分子を含む細胞を提供する。
【０１４３】
一部の実施形態では、本発明は、本発明のＭＬＰ特異的モノクローナル抗体をコードする核酸分子を含む発現カセットを提供する。
【０１４４】
一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体を産生する方法であって、本発明のＭＬＰ特異的抗体をコードする核酸分子を含む細胞を培養するステップを含む方法を提供する。
【０１４５】
一実施形態では、ヒトＭＬＰのＣ末端部分内のエピトープを特異的に認識する抗体を産生する方法は、αＭＬＰクローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、αＭＬＰクローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、およびαＭＬＰクローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系からなる群から選択されるハイブリドーマ細胞系を培養するステップを含む。
【０１４６】
ある特定の関連の実施形態によれば、本明細書の記載に従って１つまたは複数の構築物を含む組換え宿主細胞；任意の抗ＭＬＰ抗体、そのＣＤＲ、ＶＨまたはＶＬドメインまたは抗原結合性断片をコードする核酸；およびコードされる産物を産生する方法であって、産物を、それをコードする核酸から発現させるステップを含む方法を提供する。好都合には、発現は、核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって行うことができる。抗体またはその抗原結合性断片は、発現による産生に続いて、任意の適切な技法を使用して単離および／または精製し、次いで、所望するように使用することができる。
【０１４７】
例えば、発現カセットの発現に適切な任意の細胞、例えば、酵母、昆虫、植物等の細胞を、宿主細胞として使用することができる。多くの実施形態では、抗体を通常産生しない哺乳動物宿主細胞系を使用し、それらの例を、以下に示す：サル腎臓細胞（ＣＯＳ細胞）、ＳＶ４０により形質転換されているサル腎臓ＣＶＩ細胞（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ：ＣＲＬ  １６５  １）；ヒト胚性腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．、３６巻：５９頁（１９７７年））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、７７巻：４２１６頁（１９８０年））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．、２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年）；サル腎臓細胞（ＣＶＩ、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ：ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ  ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ、３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年））；ＮＩＨ／３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１６５８）；およびマウスＬ細胞（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−１）。当業者には、追加の細胞系も明らかになるであろう。多種多様な細胞系が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．、２０１１０−２２０９から入手可能である。
【０１４８】
核酸を細胞内に導入する方法は、当技術分野で周知である。適切な方法として、エレクトロポレーション、粒子銃技術、リン酸カルシウム沈殿、直接的なマイクロインジェクション等が挙げられる。方法の選択は一般に、形質転換される細胞の型、および形質転換が行われる状況（すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）に依存する。これらの方法についての一般的な考察を、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９５年に見出すことができる。一部の実施形態では、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ媒介遺伝子移入およびカルシウム媒介遺伝子移入の技術を使用する。
【０１４９】
主題の核酸を細胞内に導入したら、典型的には、細胞を、通例３７℃で、時には選択下で、抗体の発現を可能にするのに適切な時間にわたってインキュベートする。大部分の実施形態では、抗体は典型的には、細胞が成長しつつある培地の上清内に分泌させる。
【０１５０】
哺乳動物宿主細胞においては、ウイルスに基づくいくつかの発現システムを利用して、主題の抗体を発現させることができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合には、目的の抗体コード配列を、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよびトリパータイトリーダー配列にライゲーションすることができる。次いで、このキメラ遺伝子を、アデノウイルスゲノム中に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの組換えにより挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）中への挿入により、感染宿主中で生存可能であり、抗体分子を発現させることが可能である組換えウイルスが得られるであろう。（例えば、ＬｏｇａｎおよびＳｈｅｎｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、８１巻：３５５〜３５９頁（１９８４年）を参照されたい）。適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等を含めることによって、発現の効率を増強することができる（Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５３巻：５１〜５４４頁（１９８７年）を参照されたい）。
【０１５１】
組換え抗体を長期に高収率で産生するために、安定な発現を使用することができる。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞系を、遺伝子工学的に作製することができる。ウイルスの複製開始点を含有する発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞を、免疫グロブリン発現カセットおよび選択マーカーを用いて形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入に続いて、遺伝子工学的に作製した細胞は、強化した培地中で１〜２日間成長させることができ、次いで、選択培地に切り換える。組換えプラスミド中の選択マーカーにより、選択に対する抵抗性が付与され、細胞が、プラスミドを染色体内に安定に組み入れ、成長して、増殖巣を形成することが可能になり、続いて、増殖巣のクローニングおよび拡大増殖を行って、細胞系を得ることができる。そのような遺伝子工学的に作製された細胞系は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物のスクリーニングおよび評価において特に有用である場合がある。
【０１５２】
本発明の抗体分子が産生されたら、抗体分子は、免疫グロブリン分子の精製のための、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィー、親和性カラムクロマトグラフィー、特に、プロテインＡに対する特異的抗原の親和性によるもの、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー（ｓｉｚｉｎｇ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ））、遠心分離、溶解性の差、またはタンパク質を精製するための任意のその他の標準的な技法により精製することができる。多くの実施形態では、抗体を、細胞から培養培地内に分泌させ、培養培地から収集する。例えば、シグナルペプチドをコードする核酸配列を、抗体または断片のコード領域に隣接させて含めることができる。そのようなシグナルペプチドは、主題の抗体の産生を促進するために、主題の抗体について本明細書に記載するアミノ酸配列の５’末端に隣接させて組み込むことができる。
【０１５３】
検出可能な部分で標識された抗ＭＬＰ抗体  
別の態様では、本発明は、検出可能な部分（すなわち、検出および／または定量化を可能にする部分）で標識された抗ＭＬＰ抗体を提供し、これらの抗体を使用して、診断に適用することができる。本明細書で使用する場合、「検出可能な部分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的および／またはその他の物理的手段により検出可能な部分である。検出可能な部分は、当技術分野で周知の方法を使用して、本発明の抗体およびそれらの抗原結合性断片に、直接的に、かつ／または（例えば、化学的なまたは組換えの手段による共有結合性の連結を介して）間接的にカップリングさせることができる。これらの標識された抗ＭＬＰ抗体は、例えば、ｉｎ−ｖｉｔｒｏでのアッセイにおいて、生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するため、またはｉｎ  ｖｉｖｏでのアッセイ（例えば、画像診断）において、生存体内のＭＬＰを発現している細胞の存在を検出するために使用することができる。
【０１５４】
多数の標識が利用可能であり、これらは一般に、以下のカテゴリーにグループ分けすることができる：
（ａ）放射性同位体、例として、３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈおよび１３１Ｉ。抗ＭＬＰ抗体は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１巻および２巻、Ｇｕｔｉｇｅｎら編、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ．（１９９１年）に記載されている技法を使用して、放射性同位体で標識することができ、放射活性は、シンチレーションを計数することを使用して測定することができる。放射性同位体は、抗体に、直接的に、または中間の官能基を使用することによって間接的に結合させることができる。有用な中間の官能基には、キレート化剤、例として、エチレンジアミン四酢酸およびジエチレントリアミン五酢酸が含まれる。例えば、Ｓｈｉｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、４６巻：１１０１頁（１９９０年）、および米国特許第５，０５７，３１３号を参照されたい。主題の抗ＭＬＰ抗体および抗体断片はまた、ｉｎ  ｖｉｖｏでの診断の目的で、常磁性イオンおよび多様な放射線学的造影剤で標識することもできる。磁気共鳴画像法に特に有用である造影剤は、ガドリニウム、マンガン、ジスプロシウム、ランタンまたは鉄イオンを含む。追加の薬剤は、クロム、銅、コバルト、ニッケル、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウムまたはネオジムを含む。主題の抗ＭＬＰ抗体およびそれらの断片はまた、超音波造影剤／増強剤にもコンジュゲートさせることができる。例えば、１つの超音波造影剤は、リポソームである。
【０１５５】
（ｂ）蛍光標識、例として、希土類キレート（ユーロピウムキレート）、またはフルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリトリンおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄが利用可能である。蛍光標識は、例えば、上記のＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙに開示されている技法を使用して、抗体にコンジュゲートさせることができる。蛍光は、蛍光光度計を使用して定量化することができる。
【０１５６】
（ｃ）多様な酵素−基質標識が利用可能である。酵素は一般に、発色基質の化学変化を触媒し、この変化を、多様な技法を使用して測定することができる。例えば、酵素は、基質における色の変化を触媒することができ、これを、分光光学的に測定することができる。代わって、酵素は、基質の蛍光または化学発光を変える場合もある。蛍光の変化を定量化するための技法については、上記に記載した。化学発光基質は、化学反応により電子的に励起され、次いで、光を放射することができ、この光を（例えば、化学発光計を使用して）測定することができ、またはこの光から、エネルギーを蛍光アクセプターに供与させることができる。酵素標識の例として、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタルアジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ、例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、アルカリホスファターゼ、Ｏ−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼおよびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環オキシダーゼ（例として、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等が挙げられる。酵素を抗体にコンジュゲートするための技法は、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ（ＬａｎｇｏｎｅおよびＨ．Ｖａｎ  Ｖｕｎａｋｉｓ編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、７３巻：１４７〜１６６頁（１９８１年）に記載されている。
【０１５７】
酵素−基質の組合せの例として、例えば、
（ｉ）西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）と、基質としての過酸化水素（この場合、過酸化水素は、色素前駆体（例えば、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）または３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ））を酸化する）、
（ｉｉ）アルカリホスファターゼ（ＡＰ）と、発色基質としてのｐａｒａ−ニトロフェニルリン酸、および
（ｉｉｉ）β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）と、発色基質（例えば、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）または蛍光発光基質の４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ
が挙げられる。
【０１５８】
多数のその他の酵素−基質の組合せが、当業者に利用可能である。
【０１５９】
一部の実施形態では、標識を、抗ＭＬＰ抗体と間接的にコンジュゲートさせる。当業者であれば、これを行うための多様な技法を理解するであろう。例えば、抗ＭＬＰ抗体を、ビオチンとコンジュゲートさせることができ、上記で言及した３つの広範なカテゴリーの標識のうちのいずれかを、アビジンとコンジュゲートさせることができ、また、逆もまた同様である。ビオチンは、アビジンに選択的に結合し、したがって、この間接的な様式で、標識を、抗体とコンジュゲートさせることができる。代わって、標識と抗体との間接的なコンジュゲーションを行うために、抗ＭＬＰ抗体を、小型のハプテン（例えば、ジゴキシン）とコンジュゲートさせ、上記で言及した種々の型の標識のうちの１つを、抗ハプテン抗体（例えば、抗ジゴキシン抗体）とコンジュゲートさせる。こうして、標識と抗体との間接的なコンジュゲーションを行うことができる。
【０１６０】
別の実施形態では、抗ＭＬＰ抗体は、標識されておらず（すなわち、裸である）、その存在を、抗ＭＬＰ抗体に結合する、標識された抗体を使用して検出することができる。
治療剤にカップリングされている抗ＭＬＰ抗体
【０１６１】
別の態様では、本発明は、治療剤にカップリングされている抗ＭＬＰ抗体を提供し、これらの抗体をｉｎ  ｖｉｖｏで使用して、ＭＬＰを発現している細胞に、治療剤分子を標的化することができる。例えば、抗ＭＬＰ抗体および治療剤部分を含むイムノコンジュゲートを使用して、ＭＬＰ抗原を担持するがん細胞の成長および増殖を阻害することができる。本明細書で使用する場合、用語「治療剤」は、抗体部分、すなわち、抗体または抗体の断片または部分断片と、別途、同時または順次に投与されるか、あるいは抗体部分にコンジュゲートされて投与され、例えば、上皮性がん等の病態に陥っている対象の治療に有用である化合物、分子または原子である。治療剤の例として、抗体、抗体断片、細胞傷害剤、薬物、毒素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、抗血管新生剤、ホウ素化合物、光活性剤または光活性色素、放射性同位体；ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、ゲムシタビン、エピポドフィロトキシン、タキサン等の化学療法薬；抗代謝剤、アルキル化剤、抗生物質、ＳＮ−３８、ＣＯＸ−２阻害剤、抗有糸分裂剤；抗血管新生性およびアポトーシス性の薬剤、特に、ドキソルビシン、メトトレキセート、タキソール、ＣＰＴ−１１、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｎ）；プロテアソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ）阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ならびに抗がん剤のこれらおよびその他のクラスに属するその他の治療剤が挙げられる。その他の有用ながん化学療法薬には、ナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、ＣＯＸ−２阻害剤、抗代謝剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、白金配位錯体、ｍＴＯＲ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、カンプトテシンおよびホルモンが含まれる。適切な化学療法剤が、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９９５年）、およびＧＯＯＤＭＡＮ  ＡＮＤ  ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ、第７版（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９８５年）、ならびにこれらの刊行物の改訂版に記載されている。実験薬等のその他の適切な化学療法剤は、当業者に公知である。
【０１６２】
本明細書に開示する抗ＭＬＰ抗体、抗体断片および融合タンパク質はいずれも、１つまたは複数の治療剤と、当技術分野で公知の多様な技法を使用してコンジュゲートさせることができる。１つまたは複数の治療剤または診断剤（例えば、検出可能な部分）を、例えば、抗体のＦｃ領域中の炭水化物部分に薬剤をコンジュゲートさせることによって、抗体、抗体断片または融合タンパク質それぞれにつなぐことができる。Ｆｃ領域が存在しない（例えば、特定の抗体断片を用いる）場合には、炭水化物部分を、抗体または抗体断片のいずれかの、軽鎖可変領域内に導入することが可能であり、これに、治療剤または診断剤をつなぐことができる。例えば、Ｌｅｕｎｇら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４巻：５９１９頁（１９９５年）；Ｈａｎｓｅｎら、米国特許第５，４４３，９５３号（１９９５年）、Ｌｅｕｎｇら、米国特許第６，２５４，８６８号を参照されたい；それぞれの特許の実施例のセクションが、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６３】
ペプチドを、抗体の炭水化物部分を介して、抗体の構成要素にコンジュゲートするための方法は、当業者に周知である。例えば、Ｓｈｉｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、４１巻：８３２頁（１９８８年）；Ｓｈｉｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、４６巻：１１０１頁（１９９０年）；および実施例のセクションが参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｈら、米国特許第５，０５７，３１３号を参照されたい。一般的な方法は、酸化されている炭水化物部分を有する、抗体の構成要素を、少なくとも１つの遊離アミン官能基を有し、複数の治療剤、例として、ペプチドまたは薬物が充填されている担体ポリマーと反応させるステップを含む。この反応により、最初のシッフ塩基（イミン）連結が得られ、これを、二級アミンへの還元により安定化させて、最終的なコンジュゲートを形成することができる。
【０１６４】
別の例として、治療剤または診断剤を、ジスルフィド結合の形成を介して、還元されている、抗体の構成要素のヒンジ領域につなぐことができる。代替の例として、ヘテロ二官能性クロスリンカー、例として、Ｎ−サクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロプリオネート（ＳＰＤＰ）を使用しても、そのような薬剤を抗体の構成要素につなぐことができる。Ｙｕら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、５６巻：２４４頁（１９９４年）。そのようなコンジュゲーションのための一般的な技法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９１年）；Ｕｐｅｓｌａｃｉｓら、「Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｉｒｃｈら（編）、１８７〜２３０頁（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９９５年）；Ｐｒｉｃｅ、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｒｉｔｔｅｒら（編）、６０〜８４頁（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９５年）を参照されたい。
【０１６５】
Ｖ．抗ＭＬＰ抗体を使用して上皮がん（例えば、卵巣がんおよび／または膵臓がん）を検出する方法
本明細書に記載のとおり本発明者らは、初期上皮がん（例えば、卵巣がんおよび／または膵臓がん）を検出するための診断アッセイにおける使用のために好適である抗ＭＬＰ抗体を生成した。卵巣がん腫瘍型、リスク因子、診断および分類の簡潔な概要を下に示す。
【０１６６】
１．卵巣がん腫瘍型、リスク因子、診断および分類の概要
卵巣腫瘍型
卵巣腫瘍は、良性腫瘍と悪性腫瘍とに分けられる。良性腫瘍は、異常な細胞増殖であり、局所に留まり、身体の他の器官に伝播しない。通常症状は無い。しかし第２の種類の腫瘍はがん性（悪性）であり、身体の他の部分に転移できる。卵巣腫瘍は、それらの細胞の由来によって、下の表６に示すとおり上皮腫瘍、間質腫瘍および生殖細胞腫瘍に組織病理学的に分類される。
【表６】
2019526227.tif 000022
【０１６７】
表６．さまざまな型の卵巣腫瘍の発生率および発症年齢群。胃、結腸および乳房等の身体の他所への二次転移による転移性腫瘍１％（卵巣に腫瘍を有する）（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年）。
【０１６８】
上皮腫瘍は、すべての卵巣腫瘍の９０％を占める（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年；Ｎｇｕｙｅｎら、Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ、９巻：１７１〜１８７頁、２０１３年）。大部分の上皮腫瘍は良性腫瘍、例えば漿液性腺腫およびブレンナー腫瘍である。悪性上皮腫瘍は、それらが後期に診断されることから、症例のおよそ９０％の患者への現実の脅威である。これらの腫瘍の発生率は閉経後に高い（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年；Ｎｇｕｙｅｎら、Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ、９巻：１７１〜１８７頁、２０１３年。一部の上皮卵巣腫瘍は、遅い増殖および低い伝播率を有する腫瘍であり、低悪性度（ＬＭＰ腫瘍）と考えられる。これらのＬＭＰ腫瘍は、この型の腫瘍が顕微鏡下で明確には見られないことから境界型上皮卵巣がんとしても公知である（Ａｌｔｃｈｅｋら、  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第２版、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００３年）。
【０１６９】
生殖細胞は、卵子の産生に関与する卵巣に位置付けられている。生殖細胞腫瘍は、胚細胞から生じ、すべての卵巣腫瘍の約３％を占める（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年）。それらは大部分が悪性ではなく良性である。これらの腫瘍の発生率は、若年の女性においてより高い。例として成熟奇形腫および内胚葉洞腫瘍が挙げられる（Ａｌｔｃｈｅｋら、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第２版、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００３年）。
【０１７０】
間質細胞腫瘍は、卵巣を合わせて保持している結合組織に由来し、これらの細胞もプロゲステロンおよびエストロゲン等のホルモンを産生する機能を有する（Ａｌｔｃｈｅｋら、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第２版、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００３年）。これらの腫瘍はすべての卵巣腫瘍の６％を占める（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年）。これらは、若年および閉経後の両方の年齢群を冒し、顆粒膜卵胞膜腫瘍（ｇｒａｎｕｌｏｓｅ  ｔｈｅｃａ  ｔｕｍｏｒ）および顆粒膜細胞腫瘍（ｇｒａｎｕｌｏｓｅ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒｓ）を含む（Ａｌｔｅｃｈｅｋら、２００３年）。
卵巣がんについてのリスク因子
【０１７１】
卵巣がんについてのリスク因子として、子宮内膜症（Ｍｏｄｕｇｎｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  １９１巻：７３３〜７４０頁、２００４年）、卵巣嚢胞（Ａｌｔｅｃｋら、２００３年）、年齢（閉経後、６５歳またはそれを超える年齢の女性についてリスクの増加を伴う（Ｙａｎｃｉｋら、Ｃａｎｃｅｒ  ７１巻：５１７〜５２３頁、１９９３年；Ｇｕｐｐｙら、２００５年）、喫煙（Ｊｏｒｄａｎら、Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １０３巻：１１２２〜１１２９頁、２００６年）および肥満（ＭｃＬｅｍｏｒｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｕｒｓｉｎｇ  ３２巻：２８１頁、２００９年）が挙げられる。同様に、乳がん１型（ＢＲＣＡ１）での染色体１７ｑに位置する変異および／または乳がん２型（ＢＲＣＡ２）での染色体１３ｑに位置する変異は、乳がんおよび卵巣がんについての高リスク因子と考えられる（Ｎｇｕｙｅｎら、Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ、９巻：１７１〜１８７頁、２０１３年）。
卵巣がんの診断および分類
【０１７２】
卵巣がんの早期診断は、卵巣がんの最初の症状が非局在性の軽度の痛みであることから困難である。卵巣悪性腫瘍の症状は、後期で明確になり、食欲不振および体重減少、背中および骨盤の痛み、閉経後の膣出血、頻尿、便秘または下痢ならびに腹部の膨満が挙げられる（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｈｏｗ  ｉｓ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ、ｈｔｔｐ：ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｃａｎｃｅｒ／ｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ／ｄｅｔａｉｌｅｄｇｕｉｄｅ／ｏｖａｒｉａｎ−ｃａｎｃｅｒ−ｄｉａｇｎｏｓｉｓ、２０１３年４月２２日にアクセス）。
【０１７３】
卵巣がんは、骨盤の身体診察、医用画像（すなわち、超音波、コンピューター断層撮影（ＣＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）ならびに後期卵巣がんと関連がある種々のバイオマーカー（すなわち、ＣＡ−１２５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を測定するための血液検査によって決定される腫瘍の存在に基づいて診断される。例えばＯｖＰｌｅｘ（商標）は、原発卵巣腫瘍を除去するための手術を既に受けた症候性の女性において卵巣がんの検出のための上に列挙したマーカーの組合せを使用する商業的に入手できるＥＬＩＳＡキットである。ＯｖＰｌｅｘ（商標）は、炎症マーカーＩＬ−６、ＩＬ−８および肝臓急性期マーカーＳＡＡおよびＣＲＰが検出可能レベルに上昇するために強い刺激を必要とすることから、卵巣がんのための早期検出キットではない（２０１３年４月２２日にアクセスされた、Ｈｅａｌｔｈｌｉｎｘ，  Ｏ．、Ｗｈａｔ  ｉｓ  ｔｈｅ  ＯｖＰｌｅｘＴＭ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ、ｈｔｔｐ：ｈｅａｌｔｈｌｉｎｘ．ｃｏｍ．ａｕ／ｏｖｐｌｅｘ−ｔｍを参照されたい）。
卵巣がんの早期検出のために研究されたＭＬＰ以外のバイオマーカー
【０１７４】
多数の研究が、卵巣悪性腫瘍の早期検出のためのバイオマーカーを同定するために実行されている（Ｃｏｓｔａら、Ｃｌｉｎｉｃｓ  ６４巻：６４１〜６４４頁、２００９年）。表７は、卵巣がんの早期検出のために研究された数個のバイオマーカーの状況を要約している。ムチンバイオマーカーＣＡ−１２５とは対照的に、ＭＬＰ発現は、正常組織および良性腫瘍では非存在である。
【表７】
2019526227.tif 000023
分類
【０１７５】
卵巣がんには４つのステージがある。ステージＩは卵巣内に限定されているがんを含む。一方または両方の卵巣に生じる場合がある。卵巣がんは、がんが骨盤への進展または転移を伴う一方または両方の卵巣を巻き込んで増殖している場合にステージＩＩを与えられる。第３および第４ステージでは骨盤を超える疾患の進展があり、ステージＩＩＩの場合は腹腔内からリンパ節、またはステージＩＶの場合では腹腔を超える遠隔転移を含む（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年；Ｇｕｐｐｙら、Ｃｌｉｎｉａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １７巻：３３９〜４１１頁、２００５年）。
【０１７６】
卵巣がんが早期（ステージＩ）で診断されると、５年生存率は６０％から９０％の範囲であり、一方ステージＩＩで診断されると５年生存率は３７％から６６％の範囲に減少する。ステージＩＩＩで診断された卵巣がん患者は、５％から５０％の範囲の５年生存率を有し、ステージＩＶで診断された者は０％〜１７％の間の５年生存率を有する（Ｓｔｉｍｐｆｌら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １４５巻：１３３〜１４１頁、１９９９年）。
治療
【０１７７】
卵巣がんの標準治療は、卵巣の外科的除去に続く、典型的にはプラチナベース薬物およびパクリタキセルの併用である化学療法である（Ｃｏｈｅｎら、Ｊｏｕｒ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、９１巻（３号）：３５７〜３６８頁、２０１３年を参照されたい）。放射線療法は、がん細胞および転移が外科的除去の際に見逃された症例において使用される（Ｓｏｒｎｓｕｋｏｌｒａｔら、Ｃｈｏｔｍａｉｈｅｔ  Ｔｈａｎｇｐｈａｅｔ  ９５巻：１１４１〜１１４８頁、２０１２年）。診断時の腫瘍容積も、無進行期間および生存期間の延長に関して原発腫瘍および二次腫瘍の両方に対する手術の有効性を判定することにおける重要な予後因子である（Ｗｅｉｄｎｅｒら、Ｍｏｄｅｒｎ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２、Ｓａｕｎｄｅｒｓ／Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２００９年）。
【０１７８】
２．上皮がん（例えば、卵巣がんまたは膵臓がん）の存在に対するバイオマーカーとしてのＭＬＰ抗原の存在のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
一態様では本発明の抗ＭＬＰ抗体は、ＭＬＰ抗原の存在について被検対象から得られた生物学的試料をスクリーニングするためのｉｎ  ｖｉｔｒｏイムノアッセイにおいて使用され、ＭＬＰの存在または健常対象由来の対照または参照標準と比較したＭＬＰの量の増加は、対象が上皮がん（例えば、卵巣がんまたは膵臓がん）を有するまたは上皮がん（例えば、卵巣がんまたは膵臓がん）を発症するリスクが増加していることを示す。被検対象は、明らかに健常な対象、または上皮がんを発症するリスクがある対象または、早期の上皮がんを有すると疑われる対象、または卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がん等の上皮がんおよび／または他のムチン分泌型のがんを罹患している対象であってよい。そのようなｉｎ  ｖｉｔｒｏイムノアッセイでは、抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、ネイキッドであってよく、または本明細書に記載される検出可能な部分で標識されていてよく、液相中でまたは下に記載される基材に結合されて利用されてよい。宿主免疫応答を考慮しないことから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの目的のためにマウス、キメラ、ヒト化またはヒト等の任意の種類の抗体は利用されてよい。
【０１７９】
本開示の抗体は、競合的結合アッセイ、直接または間接サンドイッチアッセイおよび免疫沈降アッセイ等の任意の公知の診断用イムノアッセイ法において使用することができる（例えば、Ｚｏｌａ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１４７〜１５８頁（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ．  Ｉｎｃ．、１９８７年）を参照されたい。
【０１８０】
競合的結合アッセイは、限られた量の抗体との結合について被検試料分析物と競合する標識標準物の能力に依存する。被検試料中のＭＬＰの量は、抗体に結合する標準物の量と反比例する。結合する標準物の量の決定を促進するために、一般に抗体は競合前または後は不溶性であり、そのため抗体に結合している標準物および分析物は、未結合のままである標準物および分析物から好都合に分離され得る。
【０１８１】
サンドイッチアッセイは、２つの抗体の使用を含み、検出されるタンパク質（例えば、ＭＬＰ）の異なる免疫原性部分またはエピトープにそれぞれ結合できる。サンドイッチアッセイでは、被検試料分析物は、固体支持体に固定化された第１の抗体（例えば抗ＭＬＰ抗体）によって結合され、その後二次抗体が分析物に結合し、それにより不溶性の三部の複合体を形成する。二次抗体は、それ自体が検出可能な部分（直接サンドイッチアッセイ）で標識されてよく、または検出可能な部分で標識された抗免疫グロブリン抗体を使用して測定されてよい（間接サンドイッチアッセイ）。例えばサンドイッチアッセイの１つの好ましい種類は、検出可能な部分が酵素であるＥＬＩＳＡアッセイである。
【０１８２】
免疫組織化学のために組織試料は、新鮮もしくは冷凍であってよく、またはパラフィンに包埋され、例えばホルマリン等の保存剤を用いて固定されてよい。
【０１８３】
一実施形態では本発明の抗ＭＬＰ抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して生物学的試料中のＭＬＰ抗原の存在を検出するために使用される（例えば、Ｇｏｌｄら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２４巻：２５２〜５８頁、２００６年を参照されたい）。
【０１８４】
直接競合的ＥＬＩＳＡでは、純粋なまたは半純粋な抗原調製物は、検査される体液または細胞抽出物において不溶性である基材に結合され、多量の検出可能に標識された可溶性抗体が基材結合抗原と標識抗体との間に形成されたバイナリー複合体の検出および／または定量を可能にするように加えられる。
【０１８５】
対照的に「２部位ＥＬＩＳＡ」または「サンドイッチアッセイ」としても公知である「二重決定因子（ｄｏｕｂｌｅ−ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」ＥＬＩＳＡは、少量の抗原を必要とし、アッセイは抗原の大規模な精製を必要としない。したがって二重決定因子ＥＬＩＳＡは、臨床試料中の抗原の検出のための直接競合的ＥＬＩＳＡに好ましい。例えば、生検検体中のｃ−ｍｙｃオンコプロテインの定量のための二重決定因子ＥＬＩＳＡの使用を参照されたい。Ｆｉｅｌｄら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４巻：１４６３頁（１９８９年）；Ｓｐａｎｄｉｄｏｓら、ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ９巻：８２１頁（１９８９年）。二重決定因子ＥＬＩＳＡでは、多量の未標識モノクローナル抗体または抗体断片（「捕捉抗体」）が基材（例えば固体支持体）に結合され、被検試料は捕捉抗体と接触するようにされ、多量の検出可能に標識された可溶性抗体（または抗体断片）が捕捉抗体、抗原と標識抗体との間で形成された三元複合体の検出および／または定量を可能にするように加えられる。一実施形態では基材（例えば、固体支持体）に結合された捕捉抗体は、ＭＬＰのＣ末端部分のエピトープに結合する本明細書に開示の抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片である。二重決定因子ＥＬＩＳＡを実施するための方法は、当業者により周知である。例えば、Ｆｉｅｌｄら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４巻：１４６３頁（１９８９年）；Ｓｐａｎｄｉｄｏｓら、ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ９巻：８２１頁（１９８９年）およびＭｏｏｒｅら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０巻：２７３〜２８１頁（Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．  １９９２年）を参照されたい。
【０１８６】
二重決定因子ＥＬＩＳＡでは、可溶性抗体または抗体断片は、捕捉抗体によって認識されるエピトープとは異なるＭＬＰエピトープに結合しなければならない。二重決定因子ＥＬＩＳＡは、ＭＬＰ抗原が体液（例えば血液、血漿または血清）または生検試料等の被検生物学的試料中に存在するかどうかを確認するために実施されてよい。代替的にアッセイは、体液の臨床試料中に存在するＭＬＰ抗原の量を定量するために実施されてよい。定量的アッセイは、精製されたＭＬＰ抗原の希釈物を含むことによって実施することができる。
【０１８７】
別の実施形態では本発明の抗ＭＬＰ抗体は、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）を使用して被検物質（例えば対象から得られた生物学的試料）中のＭＬＰ抗原の存在を検出するために使用される。例えばＲＩＡの一形態では、被検生物学的試料は放射標識ＭＬＰ抗原の存在下で抗ＭＬＰ抗体と混合される。本方法では被検物質の濃度は、抗ＭＬＰ抗体に結合した標識ＭＬＰ抗原の量と反比例し、遊離、標識ＭＬＰ抗原の量と直接関連する。他の好適なスクリーニング方法は当業者に容易に明らかになる。
【０１８８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏイムノアッセイは、少なくとも１つの抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片が基材（例えば、固相担体）に結合して実施されてよい。例えば、抗ＭＬＰモノクローナル抗体またはその断片は、モノクローナル抗体をポリマーコートビーズ、プレート、チューブまたはセラミックもしくは金属チップ等の不溶性基材に連結するためにアミノデキストラン等のポリマーに結合されてよい。一実施形態では基材は、ＥＬＩＳＡ方法（例えばマルチウェルマイクロタイタープレート）における使用のために好適である。したがって試料中のＭＬＰのレベルの決定は、ＥＬＩＳＡベースアッセイ、化学的または酵素的タンパク質決定法等の商業的に入手できる方法によって決定できる。
【０１８９】
一実施形態では本開示の方法は、患者から単離された試料中のＭＬＰのレベルを決定するために固体デバイスを使用する。固体デバイスは、少なくとも１つの抗ＭＬＰ抗体が活性化表面の別個の領域に固定化された活性化表面を有する基材を含む。好ましくは、固体デバイスは、患者から単離された試料中の目的のバイオマーカーのレベルが、試料中の目的のさらなるバイオマーカーのレベルと同時に決定され得る多分析物アッセイを実施できる。本実施形態では固体デバイスは、基材に共有結合された望ましい抗体をそれぞれ保持している多様な別個の反応部位を有し、反応部位間の基材の表面は標的バイオマーカーに関して不活性である。したがって固体の多分析物デバイスは、非特異的結合をほとんどまたは全く示さない場合がある。例えば本開示の方法における使用のために好適な固体デバイスは、Ｂｉｏｃｈｉｐ  Ａｒｒａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｓｙｓｔｅｍ（ＢＡＴ）（Ｒａｎｄｏｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄから入手可能）である。
【０１９０】
他の好適なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、当業者に容易に明らかになる。検出可能に標識された抗ＭＬＰ抗体およびＭＬＰ抗原の具体的な濃度、インキュベーションの温度および時間、ならびに他のアッセイ条件は、試料中のＭＬＰ抗原の濃度、試料の性質等を含む種々の因子に応じて変更されてよい。抗ＭＬＰ抗体の試料の結合活性は、周知の方法により決定されてよい。当業者は、日常的な実験を使用することによってそれぞれの決定のための有効かつ最適なアッセイ条件を決定できる。
【０１９１】
別の実施形態では主題の抗体およびその抗原結合性断片は、組織学的検体（例えば生検試料）から調製された組織セクション中のＭＬＰ抗原の存在を検出するために使用されてよい。そのようなｉｎ  ｓｉｔｕ検出は、ＭＬＰ抗原の存在を判定するため、および検討する組織中のＭＬＰ抗原の分布を判定するために使用されてよい。ｉｎ  ｓｉｔｕ検出は、検出可能に標識された抗ＭＬＰ抗体を組織セクションに適用することによって達成され得る。ｉｎ  ｓｉｔｕ検出の一般的技術は、当業者に周知である。例えば、Ｐｏｎｄｅｒ、「Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｋｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  １１３〜３８頁  Ｍｏｎｋ  （編）  （ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９８７年）を参照されたい。
【０１９２】
主題の抗ＭＬＰ抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書に記載される任意の適切な検出可能な部分で標識されてよい。好適な検出可能な部分の例として、放射性同位元素、酵素、蛍光標識、色素、色素原、化学発光標識、生物発光標識および常磁性標識が挙げられる。上に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｓｉｔｕ検出方法は、生物学的試料（例えば血清試料）中のＭＬＰ抗原の検出、または卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がん等の上皮がんおよび／または他のムチン分泌型のがんの存在等の病理学的状態の診断またはステージ分類を補助するために使用されてよい。例えばそのような方法は、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがん等のＭＬＰ抗原を発現する腫瘍を検出するために使用されてよい。
【０１９３】
前述により一態様では本発明は、被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を検出する方法であって、（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、前記結合の存在が、前記試料中のＭＬＰの前記存在を示す、ステップとを含み、前記抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合する、方法を提供する。一実施形態では前記抗ＭＬＰ抗体は、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）は、前記検出可能な部分の前記存在を検出することを含む。
【０１９４】
一実施形態では方法は、ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの前記量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、前記対照試料（または参照標準）と比較する場合の、前記被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍、またはそれより大きな）増加が、前記被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示す。
【０１９５】
イムノアッセイの詳細は、使用される具体的な形式で変更されるが、生物学的試料中のＭＬＰを検出する方法は、生物学的試料をＭＬＰに特異的に結合する抗体に接触させることを含む。抗体は、免疫学的に反応性の条件下で生物学的試料中のＭＬＰに結合でき、結合抗体の存在は直接的または間接的に検出される。ＭＬＰ特異的抗体も、例えばＥＬＩＳＡの捕捉抗体として、または捕捉抗体によって捕捉されたＭＬＰに結合する二次抗体として使用されてよい。当技術分野において公知であるとおり、典型的には次に二次抗体の存在が検出される。
【０１９６】
生物学的試料は、哺乳動物対象から得られた生物学的組織または体液の任意の試料であってよい。生物学的試料の例として、これだけに限らないが、生検に由来する組織、痰、羊水、腹水、血液または血清が挙げられる。一実施形態では生物学的試料は、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される。
【０１９７】
方法の一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は：（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託した細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１；（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢ；および（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するまたはＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である。
【０１９８】
方法の一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である。
【０１９９】
一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０２００】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、表１に記載される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域、さらにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体である。
【０２０１】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したαＭＬＰクローン１１分泌ハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体である。一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したαＭＬＰクローンＢ分泌ハイブリドーマ細胞系により産生される、モノクローナル抗体である。一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したαＭＬＰクローンＣ分泌ハイブリドーマ細胞系により産生される、モノクローナル抗体である。
【０２０２】
一実施形態では方法は、表７に示すバイオマーカー（例えば、ＣＡ−１２５、ＨＥ４、メソテリン、カリクレイン、オステオポンチンおよびＢ７−Ｈ４）等の卵巣がんおよび／または膵臓がんバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加的抗体を用いるイムノアッセイを実施することをさらに含む。すべてのステージの卵巣がんに対する追加的バイオマーカーとして：ＣＲＰ、ＥＧＦ−Ｒ、ＣＡ−１９−９、Ａｐｏ−Ａ１、Ａｐｏ−ＣＩＩＩ、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、ＭＩＰ−１ａ、テネイシンＣ、ミオグロビン、ｖＷＦ、ハプトグロビン、ＩＬ−１０、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、プロラクチン、ＡＣＥ、ＡＳＰ、レジスチンおよび癌胎児性抗原（ＣＥＡ）が挙げられる。
【０２０３】
一実施形態では被検対象は、明らかに健常である。
【０２０４】
一実施形態では被検対象は、卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する。
【０２０５】
一実施形態では被検対象は、卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している。例えば、ヒト女性対象における卵巣がんと関連がある症状として次の１つまたは複数が挙げられる：骨盤腔内腫瘍、腹水、腹部膨満、腹圧、腫脹または腹部膨満感、骨盤痛または不快感、悪心、便秘、ガス、消化障害、下痢、頻尿または急な排尿の必要性を伴う排尿の問題、食欲不振または早い満腹感；腹囲の増加または衣類の窮屈さ、エネルギーの持続的な欠如、理由不明の体重増加または減少、膣からの異常出血および腰痛。
【０２０６】
一実施形態では被検対象は、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんを罹患していることが分かっており、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている。一実施形態では１つより多い試料が、具体的な被検対象から１時点より多い時期に得られている。一実施形態では方法は、治療レジメンの有効性を評価するために１つまたは複数の時点でのアッセイの結果を比較することをさらに含む。当業者によって理解されるとおり、治療に先行しておよびその後再度、または任意選択で治療の際の進行ステージで、対象から採取された検体のＭＬＰの相対的発現レベルは、治療の有効性を評価するために決定されてよく、経時的なＭＬＰのレベルの低下は治療有効性を示す。
【０２０７】
３．生存対象におけるＭＬＰ抗原の存在を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ
別の態様では本発明の抗ＭＬＰ抗体は、明らかに健常な対象、または上皮がんを発症するリスクがある対象、または早期上皮がんを有することが疑われる対象、または卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がん等の上皮がんおよび／または他のムチン分泌型のがんを罹患している対象等の生存対象におけるＭＬＰ発現細胞の存在を検出するために使用される。放射標識されたモノクローナル抗体を用いるｉｎ  ｖｉｖｏ診断用画像化の種々の方法は、当技術分野において周知である。診断用画像化のために、主題の抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｖｏでの使用のために好適な検出可能な部分で標識され（例えば、ガンマ発光放射性同位元素）患者に導入される。例えば免疫シンチグラフィーの技術では、抗ＭＬＰ抗体はガンマ発光放射性同位元素で標識され、患者に導入され、ガンマカメラがガンマ発光放射性同位元素の位置および分布を検出するために使用される。例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  （編）、Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９８８年）；Ｃｈａｓｅ、「Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ」  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏら  （編）、６２４〜６５２頁（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９９０年）；およびＢｒｏｗｎ、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｐｅｚｚｕｔｏら  （編）  （Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ  １９９３年）を参照されたい。患者に送達される放射線用量は、最短半減期、身体での最少貯留ならびに検出および正確な測定を可能にする同位体の最少量の最良の組合せのための同位体の選択を通じて可能な限り低いレベルに維持される。
【０２０８】
好ましい実施形態では、ヒト対象におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの使用のための抗ＭＬＰ抗体は、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を低減するためにヒト化またはヒト抗体である。ヒト化またはヒト抗ＭＬＰモノクローナル抗体は、本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ診断および治療方法における使用のために好適である。
【０２０９】
前述のとおり、一態様では本発明は、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している前記抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、前記対象中のＭＬＰの前記存在の検出が、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんの存在を示す、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんを検出するまたは診断する方法を提供する。一実施形態では抗ＭＬＰ抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用のために好適な検出可能な部分で標識される。一実施形態では方法は、画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される。
【０２１０】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は：（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託した細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１；（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢ；および（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するまたはＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である。
【０２１１】
一実施形態では、抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含むＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を有するものクローナル抗体である。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０２１２】
一実施形態では被検対象は、明らかに健常である。
【０２１３】
一実施形態では被検対象は、卵巣がんもしくは膵臓がんまたは他のムチン分泌悪性新生物の家族歴を有する。
【０２１４】
一実施形態では被検対象は、卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している。例えばヒト女性対象における卵巣がんと関連がある症状として次の１つまたは複数が挙げられる：骨盤腔内腫瘍、腹水、腹部膨満、腹圧、腫脹また腹部膨満感、骨盤痛または不快感、悪心、便秘、ガス、消化障害、下痢、頻尿または急な排尿の必要性を伴う排尿の問題、食欲不振または早い満腹感；腹囲の増加または衣類の窮屈さ、エネルギーの持続的な欠如、理由不明の体重増加または減少、膣からの異常出血および腰痛。
【０２１５】
一実施形態では被検対象は、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんからなる群から選択されるムチンを分泌するがん型を罹患していることが分かっており、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんに対する治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている。一実施形態では、１つより多い試料が、具体的な被検対象から１時点より多い時期に得られる。一実施形態では方法は、治療レジメンの有効性を評価するために１つまたは複数の時点でのアッセイの結果を比較することをさらに含む。当業者によって理解されるとおり、治療に先行しておよびその後再度、または任意選択で治療の際の進行ステージで、対象から採取された検体のＭＬＰの相対的発現レベルは、治療の有効性を評価するために決定されてよく、経時的なＭＬＰのレベルの低下は治療有効性を示す。
【０２１６】
ＶＩ．治療剤にカップリングしておよび／または治療剤と併用して抗ＭＬＰ抗体を使用する治療方法
別の態様では治療方法は、本明細書に開示される主題の抗ＭＬＰ抗体等の抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を卵巣がんもしくは膵臓がん等の上皮がんまたは他のムチン分泌悪性新生物を罹患している対象に投与することを含んで、悪性腫瘍を治療するために提供される。
【０２１７】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数の他の治療剤と共に対象に投与される。一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載される治療剤にカップリングされている。好ましい実施形態では抗ＭＬＰ抗体およびその断片はヒト化または完全にヒトである。
【０２１８】
１つより多い治療剤が使用される実施形態では、治療剤は同じ治療剤の複数の複製物または他に異なる治療剤の組合せを含んでよい。
【０２１９】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、上皮がん細胞標的治療剤を生成するように治療剤にカップリングされている。多種多様な治療用試薬、例えば薬物、毒素、オリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）、免疫調節薬、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素阻害剤、放射性核種、血管新生阻害剤、アポトーシス促進剤等が、同時にまたは連続的に投与されてもよいし、または本発明の抗体に有利にコンジュゲートされていてもよい。本明細書に列挙される治療剤は、抗体、断片または融合タンパク質にコンジュゲートされるまたは、上に記載されるネイキッド抗体との個別投与のために有用である薬剤である。
【０２２０】
前述により一態様では本発明は、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんを罹患している個体に、配列番号４として記載されるＭＬＰのＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頸がん、胆管がん、食道がん、上皮皮膚がんおよび／または他のムチン分泌型のがんからなる群から選択されるムチン分泌がんを罹患している対象を治療する方法であって、抗体またはその断片が治療剤にカップリングされている、方法を提供する。一実施形態では治療剤は化学治療剤である。一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は：（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託した細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１；（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢ；および（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生される、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するまたはＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である。
【０２２１】
一実施形態では抗ＭＬＰ抗体またはその断片は、配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２４または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である。
【０２２２】
一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５または配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。一実施形態では、前記抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む。
【０２２３】
薬学的に好適な賦形剤
追加的な薬学的方法は、治療適用における抗ＭＬＰ抗体の作用の持続期間を調節するために使用されてよい。放出制御（Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｒｅｌｅａｓｅ）調製物は、抗体、抗体断片または融合タンパク質と複合体化するまたはそれらを吸着するポリマーの使用を通じて調製することができる。例えば生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアセテート）のマトリクスおよびステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリ酸無水物共重合体のマトリクスを含む。Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１４４６頁（１９９２年）。そのようなマトリクスからの抗体、抗体断片または融合タンパク質の放出速度は、抗体、抗体断片または融合タンパク質の分子量、マトリクス内の抗体の量および分散した粒子のサイズに依存する。Ｓａｌｔｚｍａｎら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｊ．  ５５巻：１６３頁（１９８９年）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、上記。他の固体投与形態はＡｎｓｅｌら、ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＤＯＳＡＧＥ  ＦＯＲＭＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ、第５版（Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０年）およびＧｅｎｎａｒｏ  （編）、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１８版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０年）ならびにこれらの改訂版に記載されている。
【０２２４】
主題の抗ＭＬＰ抗体またはその断片を含む組成物は、１つまたは複数の薬学的に好適な賦形剤、１つまたは複数の追加的成分またはこれらのいくつかの組合せを含んでよい。抗体は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法により製剤化されてよく、それによりイムノコンジュゲートまたはネイキッド抗体は薬学的に好適な賦形剤との混合物に組み合わされる。滅菌リン酸緩衝生理食塩水は、薬学的に好適な賦形剤の一例である。他の好適な賦形剤は、当業者周知である。例えばＡｎｓｅｌら、ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＤＯＳＡＧＥ  ＦＯＲＭＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ、第５版（Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０年）およびＧｅｎｎａｒｏ  （編）、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１８版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０年）ならびにこれらの改訂版を参照されたい。
【０２２５】
イムノコンジュゲートまたはネイキッド抗体は、例えばボーラス注射または持続点滴を介する静脈内投与のために製剤化されてよい。注射用製剤は、保存剤を添加されて単位投与形態で、例えばアンプルでまたは複数用量容器中にあってよい。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、溶液または乳剤等の形態であってよく、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤等の製剤化剤を含有してよい。代替的に活性成分は、使用前の好適なビヒクル、例えば滅菌発熱物質不含有水を用いる構成のための粉剤形態であってよい。
【０２２６】
イムノコンジュゲート、ネイキッド抗体またはその断片は、哺乳動物皮下に、または他の非経口経路によって投与されてもよい。好ましい実施形態では抗体またはその断片は、１用量あたりタンパク質２０から２０００ミリグラムの投薬量で投与される。さらに投与は、持続点滴によって、または単回または複数回のボーラスによってでよい。一般に、ヒトに投与されるイムノコンジュゲートまたはネイキッド抗体の投薬量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の医学的状態および既往歴などの要因に応じて変更される。典型的には、単回静脈内または点滴として約１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの範囲でイムノコンジュゲートまたはネイキッド抗体の投薬量をレシピエントに提供することは望ましいが、さらに低いまたは高い投薬量も状況に応じて投与されてよい。本投薬は、必要に応じて繰り返されてよい、例えば４から１０週間について１週間に１回、好ましくは８週間について１週間に１回、より好ましくは４週間について１週間に１回。それは、数ヵ月間にわたり隔週等の低頻度であってよく、または１週間に２回もしくは３回等、さらに高頻度であってもよい。投薬は、用量およびスケジュールの適切な調整を伴って種々の非経口経路を通じて与えられてよい。
【０２２７】
ＶＩＩ．抗ＭＬＰ抗体を含む組成物およびキット
組成物
別の態様では本発明は、治療剤および薬学的に許容される担体にカップリングされたＭＬＰ特異的モノクローナル抗体またはその断片の治療有効量を含む、卵巣がんまたは膵臓がんを治療するための組成物を提供する。一般に、任意の他の選択された治療剤にカップリングされたおよび／またはそれと組み合わされた本発明のＭＬＰ特異的抗体組成物は、薬学的に許容される担体に好適に含有される。担体は、無毒性、生体適合性であり、ＭＬＰ特異的抗体（およびそれと組み合わされる任意の他の治療剤）の生物学的活性に有害に影響しないように選択される。ポリペプチドに関する例示的な薬学的に許容される担体は、Ｙａｍａｄａへの米国特許第５，２１１，６５７号に記載されている。ＭＬＰ特異的抗体は、経口、非経口または外科的投与を可能にする、錠剤、カプセル、粉剤、顆粒剤、軟膏、溶液、デポジトリー（ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ）、吸入剤および注射剤等の固体、半固体、ゲル、液体またはガス状形態中の調製物に製剤化されてよい。本発明は、医用デバイス等をコーティングすることによる組成物の局所投与も検討する。
【０２２８】
別の態様では本発明は、固定化された（または他に沈着された）抗ＭＬＰモノクローナル抗体を含む固体支持体（例えば、ガラス、プラスチックもしくは金属製のプレートもしくはスライド、ポリマーコートビーズ、チューブまたはセラミックもしくは金属チップ等の不溶性基材）等の基材を提供する。一部の実施形態では抗体は、別個の位置（例えば、マルチウェルプレートのウェル中、またはバイオチップ上のアレイに沈着される）に固定化（または沈着）される。一部の実施形態では抗ＭＬＰ抗体を含む基材は、哺乳動物対象から得られた生物学的試料中のＭＬＰを検出するためのキットの一部であってよい。
キット
【０２２９】
別の態様では本発明は、キット（すなわち、所定の量でパッケージ化された試薬の組合せ）を生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するための説明書と共に提供する。例示的なキットは、本明細書に記載される少なくとも１つもしくは複数の抗ＭＬＰモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含有してよい。抗ＭＬＰ抗体が酵素等の検出可能な部分で標識される場合、キットは酵素によって必要とされる基質および補助因子（例えば、検出可能なクロモフォアまたはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。付加的に、他の添加剤、例えば安定化剤、緩衝液（例えば、ブロッキング緩衝液または溶解緩衝液）が含まれていてもよい。種々の試薬の相対的な量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中濃度を与えるように幅広く変化する場合がある。具体的には試薬は、溶解により適切な濃度の試薬溶液をもたらす賦形剤を含んで、乾燥粉剤として、通常凍結乾燥されて提供されてよい。
【０２３０】
付加的にキットは、本発明の抗体の使用の手段を開示する指導用資料も含んでよい（例えば、卵巣がんまたは膵臓がんに対するバイオマーカーとしてのＭＬＰの検出のため）。キットは、キットが設計された具体的な適用を促進するための追加的構成成分も含んでよい。例えばキットは、標識を検出するための手段（例えば、酵素標識のための酵素基質、蛍光標識を検出するフィルターセット、ヒツジ抗マウスＨＲＰ等の適切な二次標識等）を追加的に含有してよい。キットは、当技術分野において周知のとおり、具体的なイムノアッセイの実施のために日常的に使用されている緩衝液および他の試薬を追加的に含んでよい。
【０２３１】
次の実施例は、本発明を実行するために検討された最良の様式を単に例示し、本発明を限定すると解釈されるべきでない。
【実施例】
【０２３２】
（実施例１）
本実施例は、グリコシル化ムチン様タンパク質（ｇＭＬＰ）が卵巣がんのバイオマーカーであることを実証し、ヒトＭＬＰタンパク質の新規Ｃ末端領域を含む組換え融合タンパク質の組換え発現およびタンパク質産生ならびにヒトＭＬＰのＣ末端領域に特異的に結合するモノクローナル抗体の生成を記載している。
背景／原理：
【０２３３】
高分子量糖タンパク質であるムチンは、粘液、上皮細胞表面を覆うゲル状の主な構造構成要素である。ムチンファミリーは、多数のＯ結合型オリゴ糖鎖および少数のＮグリカン鎖とコンジュゲートしたタンパク質骨格を含有する糖タンパク質からなる（Ａｎｄｒｉａｎｉｆａｈａｎａｎａら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ、１７６５巻：１８９〜２２２頁、２００６年）。ムチンファミリーは、高度にグリコシル化されており、これらの糖タンパク質の分子量は、典型的にはおよそ２００ｋＤａから＞１０００ｋＤａである。糖タンパク質は、３個のドメイン：Ｎ末端ドメイン、Ｃ末端ドメインおよびタンデムリピートを有する中央部を含有する。Ｏ−グリコシド結合Ｎ末端は反復性タンデムリピート構造のヒドロキシル側鎖に結合する。そのようなタンデムリピートは、高頻度で豊富な量のセリン（Ｓｅｒ）、プロリン（Ｐｒｏ）およびスレオニン（Ｔｈｒ）アミノ酸残基を含有する（Ｋｉｍら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １３巻：６９３〜７０７頁、１９９６年）。
【０２３４】
全部で２０個のファミリーメンバーを含むムチンファミリーは、２つのクラス、すなわち（ｉ）分泌ムチン（ゲル形成およびゲル非形成）ならびに（ｉｉ）膜結合ムチンに分類される。
【０２３５】
分泌ムチンゲル形成タンパク質は、杯細胞（表面上皮）および粘膜細胞（粘膜下腺）によって発現され、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６およびＭＵＣ１９が挙げられる（Ｃｈａｕｈａｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２巻：２１２〜２１５頁、２００９年；Ｃｈｅｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３０巻：１５５〜１６５頁、２００４年）。分泌ムチンゲル非形成タンパク質としてＭＵＣ７、ＭＵＣ８およびＭＵＣ９が挙げられ、ＭＵＣ８およびＭＵＣ９の両方はＭＵＣ７より高度なタンデムリピートである。ＭＵＣ７は唾液分泌物中に見出された（Ａｎｄｒｉａｎｉｆａｈａｎａｎａら、２００６年、上記）。
【０２３６】
膜結合ムチンとして、ＭＵＣ１、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、ＭＵＣ１２、ＭＵＣＩ１３、ＭＵＣ１５、ＭＵＣ１６、ＭＵＣＩ１７およびＭＵＣＩ２０が挙げられる（Ａｎｄｒｉａｎｉｆａｈａｎａｎａら、２００６年、上記）。膜結合ムチンは、正常細胞において発現されるが、がん状態、嚢胞性線維症および喘息で過発現される（Ｂａｆｎａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２９巻：２８９３〜２９０４頁、２０１０年）。正常（非がん性細胞）でのムチンの機能として、細胞保護（生物学的薬剤に対する細胞の保護）、上皮管腔表面の潤滑、細胞接着および各細胞間の相互作用（Ｂｒｏｃｋｈａｕｓｅｎら、ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ７巻：５９９〜６０４頁、２００６年）が挙げられる。しかし、がん細胞中のムチンはレベルが増大しグリコシル化が変化していることが示されている。がん細胞は、ムチンを細胞表面に過発現し、細胞接着および転移に影響を与える場合がある（Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４６巻：２４５〜２５２頁、１９９８年）。がん細胞中のムチンが、例えばシアリル−Ｔｎ抗原切断オリゴ糖側鎖およびＴｎ抗原の合成から生じるグリコシル化の変化を有し、コアオリゴ糖の蓄積を生じることも決定されている（Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ８７巻：４４１〜４４６頁、１９９５年を参照されたい）。ムチン抗原の多数の変化が新生物の上皮組織中ならびに、例えば、膵臓がん、乳がん、卵巣がんおよび結腸がんを有する患者の血清中で記載されており、これらの抗原（例えば、ＤＦ３、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＳＰａｎ−１およびＤｕＰａｎ２）は、診断用マーカーとして使用されている（Ｈｏ．  Ｓ．Ｂ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３巻：６４１〜６５１頁、１９９３年）。卵巣では上皮悪性腫瘍は、卵巣がんの早期検出のための腫瘍マーカーとして使用できるオリゴ糖の過剰発現を生じる（Ｇｉｕｎｔｏｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８巻：５５４６〜５５５０頁、１９９８年）。
【０２３７】
ＷＯ９８／４８０１４に記載されるとおり、「ＭＵＣ−Ｂ１」とも称される新規ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）をヒトムチンファミリーの以前は認識されなかったメンバーとして同定した。ＭＬＰが、Ｏ結合型オリゴ糖を用いて高度にグリコシル化されたタンパク質骨格からなる糖タンパク質であることを決定した。高度のグリコシル化は、天然糖タンパク質の分子量の大部分を占めている。ＭＬＰ特異的ＤＮＡプローブを使用するｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは、ＭＬＰ遺伝子が染色体７に位置していることを示した。ＷＯ９８／４８０１４にさらに記載されているとおり、ＭＬＰをコードする２つの異なる部分的ｃＤＮＡ転写物を単離し、クローニング時に両方のクローンが２つの可能なＯＲＦを５末端（ＯＲＦ１およびＯＲＦ２）に含有し、非常に類似しているペプチドを複数のタンデムリピートモチーフを含んでコードしていることを決定した。両方の推定ペプチドをＥ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、抗体を生成するための抗原として使用した。ＯＲＦ１およびＯＲＦ２によってコードされるペプチドに対して産生された抗体を使用する免疫組織学的分析によって、グリコシル化ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）は、卵巣腫瘍および膵臓腫瘍細胞等の上皮がんのかなりの割合によって排他的に発現かつ放出され、悪性腫瘍の徴候を有さない正常卵巣組織または卵巣嚢胞には存在しないことを判定した。ＭＬＰが腎臓によって特異的に濾過されず、それにより腫瘍が、血液中のＭＬＰについて検査することによって容易に検出され得ることも判定した。
【０２３８】
本発明者らは、ＷＯ９８／４８０１４において公開された予測タンパク質の配列が、恐らく高度に反復した配列の中央セクションのためにゲノム配列決定の際のコンティグ構築に伴う困難のために不正確であることを判定した。本発明者らは、ゲノム由来配列決定を実施し、配列番号１として記載されている、ムチン様タンパク質（ＭＬＰ）（ＭＵＣ−Ｂとも称される）の正確な全長配列をコードする染色体７に単一のエクソン遺伝子を同定し、それは長さ４３１残基を有し、ＷＯ９８／４８０１４に以前は記載されなかった新規Ｃ末端領域（配列番号５および配列番号６を含んで配列番号４と記載されている）を含有している。ＭＬＰをコードするｃＤＮＡ配列の正確で完全な知識は、本明細書に記載されるＭＬＰ特異的モノクローナル抗体を生成するための抗原としての使用のためのタンパク質（例えば、配列番号４、配列番号５または配列番号６を含むまたはそれからなるポリペプチド）のＣ末端領域に対応する組換えポリペプチドの発現を可能にする。ＭＬＰの新規Ｃ末端領域を、この配列の高度の免疫原性、ＭＬＰに対する非常に高度の特異性（本明細書に記載のとおり）およびこの領域とデータベース中の任意の他のペプチド配列との間の低い類似性から抗ＭＬＰモノクローナル抗体を生成するための抗原としての使用のために選択した。ＭＬＰタンパク質は、重度にグリコシル化されているが、ＭＬＰの最Ｃ末端２９アミノ酸領域（配列番号６として記載）は、２つの予測グリコシル化部位（ＮｅｔＯＧｌｙｃ予測プログラムによって決定されたとおり）だけを含有していることをさらに記載する。したがって、このＣ末端領域に対して産生された抗ＭＬＰ抗体は、これらのＣ末端ＭＬＰ特定抗原部位のペプチドエピトープがグリコシル化によって不明瞭にならないことから、ＭＬＰ陽性真核細胞から分泌される高度にグリコシル化されたＭＬＰ糖タンパク質のタンパク質骨格に結合できる。
【０２３９】
本実施例に記載のとおり、Ｃ末端領域（配列番号４、全長ＭＬＰのアミノ酸２７９〜４３１に対応する、図１において下線付き領域として示されている）をＭＬＰ  Ｃ末端特異的モノクローナル抗体を生成するための抗原としての使用のためにＮ末端ヒスチジンタグを含む融合タンパク質として発現させた。
【０２４０】
方法
１．ｒＭＬＰ  Ｃ末端ポリペプチド抗原の発現
図２に示す、ＨＩＳタグに融合されたＣ末端領域（ヒトＭＬＰのアミノ酸２７９〜４３１、配列番号１として記載）を含む融合タンパク質をコードする核酸配列（配列番号２）をＥ．ｃｏｌｉでの組換え（ｒＭＬＰ）Ｃ末端融合タンパク質の発現のためにｐＲＳＥＴＢ発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。
【０２４１】
ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質の精製をＨＩＳ  ＧｒａｖｉＴｒａｐニッケルカラムを使用して実行した。結合した組換えｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質をＰＢＳ緩衝液２０ｍｌを用いて洗浄し、次に２００ｍＭイミダゾールを用いて溶出する前に１０ｍＭイミダゾールを用いて再度洗浄した。画分をカラムから回収し、１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。精製ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質を含有する画分をプールし、精製ｒＭＬＰタンパク質（０．５３ｍｇ／ｍｌ）を得るように濃縮した。ポリヒスチジンタグ特異的抗体を使用するウエスタンブロット分析は、精製ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質が予測分子量２８ｋＤａに移動したことを示した（データは示されていない）。
【０２４２】
２．ヒトＭＬＰのＣ末端領域に特異的に結合するモノクローナル抗体の生成
マウスを精製ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質を用いて免疫化し、次に同じタンパク質を用いて追加免疫した。高力価の抗体を有するマウスを屠殺し、各マウスからの脾臓細胞を標準的手順に従って骨髄腫細胞に融合し、ハイブリドーマ細胞のクローン由来の上清を酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用してスクリーニングした。８個の候補マウスハイブリドーマを分析のために選択した（クローン１、４、５、６、７、１１、クローンＢおよびクローンＣと名付けた）。
【０２４３】
ハイブリドーマを１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）、２００ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）５ｍＬおよび１００Ｕ／ｍＬペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）５ｍＬを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で増殖させた。ハイブリドーマを培養し、マウスＩｇＧ抗体を上清から、ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する能力を有するプロテインＧセファロースカラムクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して精製した。次に精製モノクローナル抗体を１２％ＳＤＳ  ＰＡＧＥによって還元条件下で分析し、クーマシーブルーを用いて染色し、２５ｋＤａおよび５０ｋＤａに予測された軽鎖および重鎖Ｉｇバンドを示した（データは示されていない）。
【０２４４】
３．ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質に対する候補抗ＭＬＰモノクローナル抗体のＥＬＩＳＡアッセイにおける検査
マイクロタイターＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）を、コーティング緩衝液（１５ｍＭ炭酸ナトリウム無水Ｎａ２ＣＯ３および炭酸水素ナトリウムＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）を使用して１０．０μｇ／ｍｌの組換えＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質を用いてコーティングした。プレートを一晩、４℃でインキュベートした。翌日、残存タンパク質結合部位をＴＢＳ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中の１％ウシ血清アルブミン（ａｌｂｕｍｅｎ）（ＢＳＡ）２５０μＬをプレートの各ウェルに加えることによってブロックし、室温で、２時間インキュベートした。次にプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝液を用いて３回洗浄した。ＴＢＳ緩衝液中のモノクローナル抗体の系列希釈物（クローン１、４、５、６、７、Ｃ、１１およびＢ）を１：１００希釈から開始する２連でプレートに加え、２時間、室温でインキュベートした。次にウェルを３回洗浄した。アルカリホスファターゼにコンジュゲートしたヤギ抗マウス抗体（１：５０００希釈）１００μＬを次に各ウェルに加え、２時間、室温でインキュベートした。プレートを３回洗浄し；次に基質溶液（ｆａｓｔ  ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔａｂｌｅｔ  ｓｅｔｓ、Ｓｉｇｍａ）を加え、２０から３０分間、室温でインキュベートした。吸光度をＢｉｏｒａｄ  ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートリーダーモデル６０８を使用して４０５ｎｍで測定した。
【０２４５】
結果：
検査したｍＡｂクローン８個の内３個（クローン１１、ＢおよびＣ）は、組換えＭＬＰ−Ｃ末端タンパク質に対するＥＬＩＳＡアッセイにおいて陽性であり、クローンＣを用いたシグナルは、クローン１１およびＢを用いて見られたシグナルより非常に弱かったが、５個のｍＡｂクローンはＥＬＩＳＡアッセイにおいて陰性であった（データは示されていない）。ｍＡｂクローンＢおよび１１は、およそ１μｇ／ｍｌの力価でＭＬＰに対して良好な結合を示した。
【０２４６】
ＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質に対するクローン１１およびＢの特異性を確認するために、それらを無関係な対照タンパク質に対するＥＬＩＳＡアッセイにおいても検査し（プレートを１０．０μｇ／ｍｌの組換えＭＡＳＰ−３を用いてコーティングした）、すべて陰性であることが見出された（データは示されていない）。
【０２４７】
４．ＥＬＩＳＡアッセイによる、抗ＭＬＰクローン１１およびＢによるｒＭＬＰの検出
マイクロタイターＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）を、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１およびクローンＢを用いて、コーティング緩衝液（１５ｍＭ炭酸ナトリウム無水Ｎａ２ＣＯ３および炭酸水素ナトリウムＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）を使用する、１μｇ／ｍＬから開始した０．０５μｇ／ｍＬまでの濃度の系列希釈でコーティングした。プレートを一晩、４℃でインキュベートした。翌日、残存タンパク質結合部位をＴＢＳ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）２５０μＬをプレートの各ウェルに加ることによってブロックし、室温で、２時間インキュベートした。次にプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝液を用いて３回洗浄した。濃度範囲０．０１μｇ／ｍＬから５μｇ／ｍＬの組換えＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質の系列希釈物を２連でプレートに加え、２時間、室温でインキュベートした。次にウェルを３回洗浄した。アルカリホスファターゼにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ＭＬＰ抗体（１：５０００希釈）１００μＬを次に各ウェルに加え、２時間、室温でインキュベートした。プレートを３回洗浄し；次に基質溶液（ｆａｓｔ  ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔａｂｌｅｔ  ｓｅｔｓ、Ｓｉｇｍａ）を加え、２０から３０分間、室温でインキュベートした。吸光度をＢｉｏｒａｄ  ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートリーダーモデル６０８を使用して４０５ｎｍで測定した。陰性対照としてプレートを、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢまたはクローン１１を用いてコーティングし、ＭＬＰ抗原の代わりにＴＢＳ緩衝液だけをｍＡｂコートプレートに加えてポリクローナルヤギ抗ＭＬＰ抗体を用いて発色させた。
【０２４８】
結果：
図３Ａは、ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローンＢによるｒＭＬＰの検出をグラフで例示する。図３Ａに示すとおり、このアッセイの感度は非常に高く、０．０１μｇ／ｍＬの濃度に至るｒＭＬＰ抗原の検出を示している。図３Ａにさらに示すとおり、一次抗体ｍＡｂクローンＢの０．０１６２５μｇ／ｍＬに至る希釈は、最大に近いシグナルを生じるように見える。
【０２４９】
図３Ｂは、ＥＬＩＳＡアッセイによる、抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローン１１によるｒＭＬＰの検出をグラフで例示する。図３Ｂに示すとおり、このアッセイの感度は非常に高く、０．０１μｇ／ｍＬの濃度に至るｒＭＬＰ抗原の検出を示している。図３Ｂにさらに示すとおり、一次抗体ｍＡｂクローン１１の０．０１６２５μｇ／ｍＬに至る希釈は、最大に近いシグナルを生じるように見える。
【０２５０】
５．ＭＬＰを検出するためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイの開発
マイクロタイターＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）を、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を１ウェルあたり０．１μｇで用いてコーティング緩衝液（１５ｍＭ炭酸ナトリウム無水Ｎａ２ＣＯ３および炭酸水素ナトリウムＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）を使用してコーティングした。プレートを一晩、４℃でインキュベートした。翌日、残存タンパク質結合部位をＴＢＳ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）２５０μＬをプレートの各ウェルに加えることによってブロックし、室温で、２時間インキュベートした。次にプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝液を用いて３回洗浄した。濃度範囲０．０００１μｇ／ｍＬから１μｇ／ｍＬの組換えＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質の系列希釈物を２連でプレートに加え、２時間、室温でインキュベートした。次にウェルを３回洗浄した。アルカリホスファターゼにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ＭＬＰ抗体（０．５μｇ／ｍＬ）を次に各ウェルに加え、２時間、室温でインキュベートした。プレートを３回洗浄し；次に基質溶液（ｆａｓｔ  ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔａｂｌｅｔ  ｓｅｔｓ、Ｓｉｇｍａ）を加え、２０から３０分間、室温でインキュベートした。吸光度をＢｉｏｒａｄ  ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートリーダーモデル６０８を使用して４０５ｎｍで測定した。陰性対照として、コーティング抗体ｍＡｂクローン１１を省き、ウェルをｒＭＬＰおよびポリクローナルＭＬＰ検出抗体の添加に先行してコーティング緩衝液を用いてインキュベートした。
【０２５１】
結果：
図４は、ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローン１１を用いたｒＭＬＰの検出をグラフで例示する。図４に示すとおり、このサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイの感度は非常に高く、１０ｎｇ／ｍＬ  ｒＭＬＰ未満の濃度に至る直線性を示している。
【０２５２】
（実施例２）
本実施例は、上皮がん細胞バイオマーカーとしての使用のための抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、１１およびＢの分析を記載する。
【０２５３】
バックグラウンド／原理：
Ｐａｎｃ−１は、ヒト膵臓癌、上皮様細胞系であり、腫瘍原性研究のための非内分泌性膵臓がんのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルとして使用される（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１４６９）。細胞系Ａ２７８０は、ヒト卵巣癌がん細胞系である（Ｌｏｕｉｅ  Ｋ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４５巻（５号）：２１１０〜５頁、１９８５年；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｔ．Ｃ．ら、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １１巻（３号）：２８５〜２９８頁、１９８４年）。
【０２５４】
次の実験を、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、１１およびＢが、Ｐａｎｃ−１およびＡ２７８０細胞系から分泌されるグリコシル化ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）を検出できるかどうかを判定するために実行した。
【０２５５】
方法：
１．Ｐａｎｃ−１（ヒト膵臓がん細胞系）から分泌されるｇＭＬＰへの結合に関する抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローンＣ、１１およびＢの分析：
３種の抗ＭＬＰ  ｍＡｂ（クローンＣ、１１およびＢ）を、ＡＴＣＣから得たヒト膵臓細胞系（Ｐａｎｃ１）から得られた上清中に存在するｇＭＬＰへの結合について次のとおりドットブロットおよびＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて検査した。
【０２５６】
Ａ．ドットブロット分析
実施例１に記載のとおり生成した３種の抗ＭＬＰ  ｍＡｂ（クローンＣ、１１およびＢ）を、ＡＴＣＣから得たヒト膵臓がん細胞系（Ｐａｎｃ−１）に対して検査した。精製抗ＭＬＰ特異的ｍＡｂ（クローンＣ、１１およびＢ）のドットブロット分析を、ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質および、膵臓がん細胞系Ｐａｎｃ−１の上清中に存在するグリコシル化全長ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）を用いて実行した。
【０２５７】
４μｌのタンパク質（ｒＭＬＰ、Ｐａｎｃ１上清由来のｇＭＬＰまたはｒＭＡＳＰ−３）をニトロセルロース膜に滴下し、室温で乾燥させた。次にニトロセルロース膜をＰＢＳ中の５％スキムミルクを用いて４５から６０分間、室温で穏やかに振とうしながらブロックした。次に抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローンＣ、１１およびＢ（ＰＢＳ中５％スキムミルク、容積１０ｍＬの１ｍｇ／ｍｌプロテインＧセファロース濃縮抗体保存液の最終濃度ｍＡｂ  １：１０００希釈）をニトロセルロース膜に加え、室温で、１時間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に膜をＰＢＳおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を用いて３回洗浄した。１：６０００に希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした抗マウス抗体を加え、室温で、１時間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に膜を３回洗浄し、抗体結合をＥＣＬキットによって検出した。
【０２５８】
ドットブロット分析の結果：
図５は、Ｐａｎｃ１細胞系上清（列Ａ）、ｒＭＡＳＰ−３ポリペプチド（列Ｂ）およびｍＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列Ｃ）に対して抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１を用いて実行したドットブロットアッセイの結果を示している。図５に示すとおり、３種すべてのｍＡｂ（クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１）は、Ｐａｎｃ−１細胞系の上清に存在するＭＬＰ（ｇＭＬＰ）の天然産生グリコシル化形態（列Ａ）、およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質対照（列Ｃ）に結合することが見出されたが、陰性対照ｒＭＡＳＰ−３ポリペプチド（列Ｂ）には結合しなかった。
【０２５９】
Ｂ．卵巣がん細胞系Ａ２７８９に由来するｇＭＬＰを用いてコーティングしたプレートを使用するＥＬＩＳＡアッセイ
３種の抗ＭＬＰ  ｍＡｂ（クローン１１、ＢおよびＣ）を卵巣がん細胞系Ａ２７８９から得られた濃縮上清由来の１．０μｇ／ｍｌのグリコシル化ＭＬＰを用いてコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを用いて次のとおり検査した。
【０２６０】
マイクロタイターＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）を、卵巣がん細胞系Ａ２７８９から得た濃縮上清由来の１．０μｇ／ｍｌのグリコシル化ＭＬＰ（ｇＭＬＰ）を用いてコーティング緩衝液（１５ｍＭ炭酸ナトリウム無水Ｎａ２ＣＯ３および炭酸水素ナトリウムＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）を使用してコーティングした。プレートを一晩、４℃でインキュベートした。翌日、残存タンパク質結合部位をＴＢＳ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）２５０μＬをプレートの各ウェルに加えることによってブロックし、室温で、２時間インキュベートした。次にプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝液を用いて３回洗浄した。ＴＢＳ緩衝液中で１：１００希釈から開始するｍＡｂ（クローン１１、ＢおよびＣ）の系列希釈物を２連でプレートに加え、２時間、室温でインキュベートした。次にウェルを３回洗浄した。アルカリホスファターゼにコンジュゲートしたヤギ抗マウス抗体（１：５０００希釈）１００μＬを次に各ウェルに加え、２時間、室温でインキュベートした。プレートを３回洗浄し；次に基質溶液（ｆａｓｔ  ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔａｂｌｅｔ  ｓｅｔｓ、Ｓｉｇｍａ）を加え、２０から３０分間、室温でインキュベートした。吸光度をＢｉｏｒａｄ  ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートリーダーモデル６０８を使用して４０５ｎｍで測定した。
卵巣がん細胞系Ａ２７８９由来のｇＭＬＰを用いてコーティングしたプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイの結果
【０２６１】
図６に示すとおり、クローン１１およびＢは、ｇＭＬＰへの顕著な結合を示したが、このアッセイ形式ではクローンＣは、陰性対照ｒＭＡＳＰ−３タンパク質への結合よりｇＭＬＰへの結合がわずかに高いだけであった。
【０２６２】
２．ヒト卵巣がん細胞系Ａ２７８０から分泌されるｇＭＬＰへの結合に関する抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローンＣ、１１およびＢの分析
【０２６３】
３種の抗ＭＬＰ  ｍＡｂ（クローンＣ、５、１１およびＢ）をＡＴＣＣから得たヒト卵巣がん細胞系（Ａ２７８０）から得た上清中に存在するｇＭＬＰへの結合について次のとおりドットプロット、ウエスタンブロットおよびＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて検査した。
【０２６４】
Ａ．ドットブロット分析
ドットブロットアッセイを卵巣がん細胞系Ａ２７８０の上清を使用して上に記載のとおり実行した。４μｌのタンパク質（ｒＭＬＰ、Ａ２７８０上清由来のｇＭＬＰまたはｒＭＡＳＰ−３）をニトロセルロース膜に滴下し、室温で乾燥させた。次にニトロセルロース膜をＰＢＳ中の５％スキムミルクを用いて４５から６０分間、室温で穏やかに振とうしながらブロックした。次に抗ＭＬＰ  ｍＡｂクローンＣ、１１およびＢ（ＰＢＳ中５％スキムミルク、容積１０ｍＬの１ｍｇ／ｍｌプロテインＧセファロース濃縮抗体保存液の最終濃度ｍＡｂ  １：１０００希釈）をニトロセルロース膜に加え、室温で、１時間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に膜をＰＢＳおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を用いて３回洗浄した。１：６０００に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした抗マウス抗体を加え、室温で、１時間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に膜を３回洗浄し、抗体結合をＥＣＬキットによって検出した。
【０２６５】
ドットブロット分析の結果：
図７は、卵巣がん細胞系Ａ２７８０上清（列Ａ）、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質（列Ｂ）およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列Ｃ）に対して抗ＭＬＰ抗体クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１を用いて実行したドットブロットアッセイの結果を示している。
【０２６６】
図７に示されるとおり、クローンＣ、クローンＢおよびクローン１１は、それぞれＡ２７８０細胞系の上清中に存在するＭＬＰ（ｇＭＬＰ）の天然産生グリコシル化形態（列Ａ）、およびｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質対照（列Ｃ）に結合することが見出されたが、陰性対照組換えＭＡＳＰ−３ポリペプチド（列Ｂ）には結合しなかった。
【０２６７】
Ｂ．ウエスタンブロット分析
図８に示されるとおり、ドットブロット結果をＡ２７８０細胞系に由来する濃縮上清を使用するウエスタンブロットによって確認し、特徴的な１８０ｋＤａ  ｇＭＬＰバンド（列１）および２８ｋＤａ  ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質（列３）がクローンＣ（上パネル）、クローンＢ（中パネル）およびクローン１１（下パネル）を用いて検出され、陰性対照タンパク質ｒＭＡＳＰ−３（列２）は３種のＭＬＰ特異的ｍＡｂによって検出されなかった。
【０２６８】
Ｃ．Ａ２７８０細胞に由来するｇＭＬＰを用いてコーティングされたプレートを使用するＥＬＩＳＡアッセイ
３種の抗ＭＬＰ  ｍＡｂ（クローンＣ、５、１１およびＢ）を、上に記載される方法を使用して、痕跡量のグリコシル化天然ＭＬＰを含有するＡ２７８０細胞から得た１μｇ／ｍｌの濃縮上清を用いてコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを用いて検査した。
Ａ２７８０細胞由来のｇＭＬＰを用いてコーティングしたプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイの結果
【０２６９】
図９に示すとおり、クローン１１およびＢは、Ａ２７８０細胞に由来するｇＭＬＰに顕著な結合を示したが、本アッセイフォーマットではクローンＣは、陰性対照ｒＭＡＳＰ−３タンパク質への結合よりもｇＭＬＰへの結合がわずかに高いだけあった。図９における陰性対照は、ｒＭＡＳＰ−３タンパク質に対するクローン１１である。
【表９】
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【０２７０】
概要：
これらの結果は、ウエスタンブロットおよびドットブロットによって決定されるとおり、ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体クローン１１、ＢおよびＣが、ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質に特異的に結合し、膵臓がん細胞系および卵巣がん細胞系から分泌されるｇＭＬＰを検出することができることを実証している。さらに本実施例は、ＭＬＰ特異的モノクローナル抗体クローン１１およびＢが、ｒＭＬＰ  Ｃ末端タンパク質および卵巣がん細胞系から分泌されるｇＭＬＰの両方をＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて検出できることを実証している。
【０２７１】
これらのＭＬＰ特異的ｍＡｂは、治療が有効であり、予後が後期の卵巣がんよりもはるかに優れている早期で卵巣悪性腫瘍を発見するための緊急に必要とされている非侵襲性早期診断法である、高感度検出ＥＬＩＳＡにおいて、例えば初期卵巣がんのバイオマーカーとして卵巣がん患者の血清中のＭＬＰレベルを測定するためのキットの形式において使用することができる。
【０２７２】
（実施例３）
本実施例は、ハイブリドーマクローン１１、ＢおよびＣによって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ領域をコードするＤＮＡのクローニングおよび配列決定を記載する。
【０２７３】
方法：ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９、ＰＴＡ−１２１７００およびＰＴＡ−１２１７０１で２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したαＭＬＰクローン１１、αＭＬＰクローンＢおよびαＭＬＰクローンＣとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体を分泌する細胞系のハイブリドーマ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）、２００ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）５ｍＬおよび１００Ｕ／ｍＬペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）５ｍＬを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でそれぞれ培養した。ＤＮＡをハイブリドーマ細胞系から精製し、可変領域をＰＣＲ増幅し、クローン＃Ｃ、１１およびＢの配列分析を標準的方法を使用して実行した。
【０２７４】
結果：
重鎖可変領域（ＶＨ）配列
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローン１１のＶＨ領域のアミノ酸配列を、配列番号７として記載する。
【０２７５】
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローンＢのＶＨ領域のアミノ酸配列を、配列番号８として記載する。
【０２７６】
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローンＣのＶＨ領域のアミノ酸配列を、配列番号９として記載する。
【０２７７】
図１０Ａは、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１（配列番号７）、Ｂ（配列番号８）およびＣ（配列番号９）の重鎖可変領域の間のアミノ酸配列の配列比較を示す。
【０２７８】
軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローン１１のＶＬ領域のアミノ酸配列を、配列番号１０として記載する。
【０２７９】
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローンＢのＶＬ領域のアミノ酸配列を、配列番号１１として記載する。
【０２８０】
ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１として２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系によって産生される抗ＭＬＰモノクローナル抗体αＭＬＰクローンＣのＶＬ領域のアミノ酸配列を、配列番号１２として記載する。
【０２８１】
図１０Ｂは、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１（配列番号１０）、Ｂ（配列番号１１）および２（Ｃ）（配列番号１２）の軽鎖可変領域の間のアミノ酸配列の配列比較を示す。
【０２８２】
クローン１１とクローンＢとの間の高度な配列同一性は、両方のクローンが同じ親ハイブリドーマ細胞に由来し、同一のＭＬＰエピトープに結合することを示唆している。
【０２８３】
多様な実施形態によれば、本開示は、以下を提供する：
１．ヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片。
【０２８４】
２．モノクローナル抗体である、第１項に記載の抗体。
【０２８５】
３．組換え、ヒト化またはキメラ抗体である、第２項に記載の抗体。
【０２８６】
４．完全ヒト抗体である、第２項に記載の抗体。
【０２８７】
５．前記抗体またはその抗原結合性断片が、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である、第１項に記載の抗体。
【０２８８】
６．前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて、グリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能である、第５項に記載の抗体。
【０２８９】
７．前記抗体またはその抗原結合性断片が、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合する、第１項に記載の抗体。
【０２９０】
８．前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識する、第１項に記載の抗体。
【０２９１】
９．配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含む、第１項に記載の抗体。
【０２９２】
１０．配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含む、第１項に記載の抗体。
【０２９３】
１１．検出可能な部分で標識されている、第１項から第８項のいずれかに記載の抗体。
【０２９４】
１２．治療剤にカップリングされている、第１項に記載の抗体。
【０２９５】
１３．基材上に固定化されている、第１項に記載の抗体。
【０２９６】
１４．ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、単離抗体が、ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【０２９７】
１５．重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ２配列が、配列番号２０、１４、１６または１８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む、第１４項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０２９８】
１６．重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ１配列が、配列番号１３または配列番号１７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む、第１５項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０２９９】
１７．軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ２配列が、配列番号２２または配列番号２６に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む、第１６項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０３００】
１８．軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ１配列が、配列番号２８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２５に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含む、第１７項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０３０１】
１９．重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号１３を含む、第１６項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０３０２】
２０．重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２０を含む、第１５項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０３０３】
２１．重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号１５を含む、第１４項に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
【０３０４】
２２．配列番号２０に記載するアミノ酸配列が、９位においてＴを含有する、第２０項に記載の単離抗体。
【０３０５】
２３．軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２８を含む、第１８項に記載の単離抗体。
【０３０６】
２４．配列番号２８に記載するアミノ酸配列が、９位においてＴを含有する、第２３項に記載の単離抗体。
【０３０７】
２５．配列番号２８に記載するアミノ酸配列が、９位においてＳを含有する、第２３項に記載の単離抗体。
【０３０８】
２６．軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２２を含む、第１８項に記載の単離抗体。
【０３０９】
２７．軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６を含む、第１８項に記載の単離抗体。
【０３１０】
２８．軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２３を含む、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１１】
２９．抗体またはその抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片および全抗体からなる群から選択される、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１２】
３０．抗体またはその抗原結合性断片が、単鎖抗体、ＳｃＦｖ、およびヒンジ領域を欠く一価の抗体からなる群から選択される、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１３】
３１．１０ｎＭまたはより低いＫＤでヒトＭＬＰに結合する、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１４】
３２．上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ＭＬＰに結合する、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１５】
３３．ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおいて、ヒトＭＬＰに結合する、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１６】
３４．検出可能な部分で標識されている、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１７】
３５．治療剤にカップリングされている、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１８】
３６．基材上に固定化されている、第１４項に記載の単離抗体。
【０３１９】
３７．ヒト化または完全ヒトである、第１４項に記載の単離抗体。
【０３２０】
３８．前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む、第１４項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【０３２１】
３９．前記抗体が、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む、第１４項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【０３２２】
４０．前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含む、第１４項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
【０３２３】
４１．配列番号７を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号７と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含む、第１４項に記載の単離抗体。
【０３２４】
４２．配列番号８を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号８と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含む、第１４項に記載の単離抗体。
【０３２５】
４３．配列番号９を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含む、第１４項に記載の単離抗体。
【０３２６】
４４．第１４項から第４３項のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体またはその断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
【０３２７】
４５．抗ＭＬＰ抗体をコードする第４４項に記載の本発明の核酸分子を含む発現カセット。
【０３２８】
４６．抗ＭＬＰ抗体をコードする第４４項または第４５項に記載の本発明の核酸分子のうちの少なくとも１つを含む細胞。
【０３２９】
４７．２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローン１１として指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
【０３３０】
４８．２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＢとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
【０３３１】
４９．２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＣとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
【０３３２】
５０．抗ＭＬＰ抗体を産生するハイブリドーマ細胞系であって、
（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、
（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、および
（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系
からなる群から選択される細胞系。
【０３３３】
５１．配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチド。
【０３３４】
５２．配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチド。
【０３３５】
５３．配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチド。
【０３３６】
５４．配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含む単離ポリペプチド。
【０３３７】
５５．単離抗ＭＬＰ抗体を生成する方法であって、第４６項または第５０抗に記載の細胞を、前記抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下で培養するステップと、前記抗ＭＬＰ抗体を単離するステップとを含む方法。
【０３３８】
５６．被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を決定することによって、上皮性がんを検出または診断する方法であって、
（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、
（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、前記結合の存在が、前記試料中のＭＬＰの前記存在または量を示す、ステップと
を含み、
前記抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合する、方法。
【０３３９】
５７．前記抗ＭＬＰ抗体が、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の前記存在または量を検出することを含む、第５６項に記載の方法。
【０３４０】
５８．ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの前記量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、前記対照試料（または参照標準）と比較する場合の、被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍または少なくとも１０倍の）増加が、前記被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮性がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示す、第５６項または第５７項に記載の方法。
【０３４１】
５９．前記生物学的試料が、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される、第５６項に記載の方法。
【０３４２】
６０．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第５６項に記載の方法。
【０３４３】
６１．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第５６項に記載の方法。
【０３４４】
６２．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、表１に記載する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域ならびにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体である、第５６項に記載の方法。
【０３４５】
６３．卵巣がんおよび／または膵臓がんのバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加の抗体を用いるイムノアッセイを実施するステップをさらに含む、第５６項に記載の方法。
【０３４６】
６４．前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、第５６項に記載の方法。
【０３４７】
６５．前記被検対象から得られた生物学的試料からの前記アッセイの結果を、１つまたは複数の時点で比較して、治療レジメンの効能を評価するステップをさらに含む、第５６項に記載の方法。
【０３４８】
６６．前記抗ＭＬＰ抗体が、基材上に固定化されている、第５６項に記載の方法。
【０３４９】
６７．前記イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡアッセイである、第５６項に記載の方法。
【０３５０】
６８．被検対象中の卵巣がんまたは膵臓がんを検出または診断する方法であって、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、対象中のＭＬＰの存在または量の検出が、卵巣がんまたは膵臓がんの存在を示す、方法。
【０３５１】
６９．前記抗ＭＬＰ抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含む、第６８項に記載の方法。
【０３５２】
７０．画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される、第６８項または第６９項に記載の方法。
【０３５３】
７１．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第６８項に記載の方法。
【０３５４】
７２．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第６８項に記載の方法。
【０３５５】
７３．前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、第６８項に記載の方法。
【０３５６】
７４．卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している対象を治療する方法であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している個体に投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされている、方法。
【０３５７】
７５．前記治療剤が、化学療法剤である、第７４項に記載の方法。
【０３５８】
７６．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第７４項に記載の方法。
【０３５９】
７７．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第７４項に記載の方法。
【０３６０】
７８．被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を決定することによって、ムチン分泌型のがんを検出または診断する方法であって、
（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、
（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、前記結合の存在が、試料中のＭＬＰの存在または量を示す、ステップと
を含み、
抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合する、方法。
【０３６１】
７９．前記抗ＭＬＰ抗体が、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含む、第７８項に記載の方法。
【０３６２】
８０．ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、対照試料（または参照標準）と比較する場合の、被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍または少なくとも１０倍の）増加が、被検対象における、ムチン分泌型のがんの存在を、またはムチン分泌型のがんを発症するリスクの増加を示す、第７８項または第７９項に記載の方法。
【０３６３】
８１．生物学的試料が、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される、第７８項に記載の方法。
【０３６４】
８２．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第７８項に記載の方法。
【０３６５】
８３．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第７８項に記載の方法。
【０３６６】
８４．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、表１に記載する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域ならびにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体である、第７８項に記載の方法。
【０３６７】
８５．ムチンを分泌するがんの型が、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、および上皮性皮膚がんからなる群から選択される、第７８項に記載の方法。
【０３６８】
８６．ムチンを分泌するがんの型が、卵巣がんまたは膵臓がんである、第７８項に記載の方法。
【０３６９】
８７．卵巣がんおよび／または膵臓がんのバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加の抗体を用いるイムノアッセイを実施するステップをさらに含む、第８６項に記載の方法。
【０３７０】
８８．被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）がんに罹患していることが分かっており、がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、第７８項に記載の方法。
【０３７１】
８９．被検対象から得られた生物学的試料からのアッセイの結果を、１つまたは複数の時点で比較して、治療レジメンの効能を評価するステップをさらに含む、第７８項に記載の方法。
【０３７２】
９０．抗ＭＬＰ抗体が、基材上に固定化されている、第７８項に記載の方法。
【０３７３】
９１．イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡアッセイである、第７８項に記載の方法。
【０３７４】
９２．被検対象中のムチンを分泌するがんの存在を検出または診断する方法であって、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、対象中のＭＬＰの存在または量の検出が、ムチンを分泌するがんの存在を示す、方法。
【０３７５】
９３．抗ＭＬＰ抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、検出可能な部分の存在または量を検出することを含む、第９２項に記載の方法。
【０３７６】
９４．画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される、第９２項または第９３項に記載の方法。
【０３７７】
９５．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第９２項に記載の方法。
【０３７８】
９６．前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第９２項に記載の方法。
【０３７９】
９７．被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）がんに罹患していることが分かっており、がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、第９２項に記載の方法。
【０３８０】
９８．ムチン分泌型のがんに罹患している対象を治療する方法であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片をムチン分泌型のがんに罹患している個体に投与するステップを含み、抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされている、方法
を提供する。
【０３８１】
９９．治療剤が、化学療法剤である、第９８項に記載の方法。
【０３８２】
１００．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、第９８項に記載の方法。
【０３８３】
１０１．抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、第９８項に記載の方法。
【０３８４】
１０２．ムチンを分泌するがんの型が、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、および上皮性皮膚がんからなる群から選択される、第９８項に記載の方法。
【０３８５】
１０３．第１項から第４３項のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を含む組成物。
【０３８６】
１０４．第１項から第４３項のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、イムノアッセイにおける使用のための基材。
【０３８７】
１０５．（ａ）少なくとも１つの容器、および（ｂ）第１項から第４３項のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するためのキット。
【０３８８】
本発明の好ましい実施形態を示し、説明してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、それらの実施形態において、多様な変化形態を作製することができることが理解されるであろう。
【図１】
2019526227.tif 000025
【図２】
2019526227.tif 000026
【図３Ａ】
2019526227.tif 000027
【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2019526227.tif 000031
【図７】
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【図８】
2019526227.tif 000033
【図９】
2019526227.tif 000034
【図１０Ａ】
2019526227.tif 000035
【図１０Ｂ】
2019526227.tif 000036
【配列表】
2019526227000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月18日(2019.2.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、任意選択で以下：
（ｉ）前記抗体が、モノクローナル抗体であること、
（ｉｉ）前記抗体が、組換え、ヒト化またはキメラ抗体であること、
（ｉｉｉ）前記抗体が、完全ヒト抗体であること、
（ｉｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおけるように、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能であること、
（ｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合すること、
（ｖｉ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（Ａ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（Ｂ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（Ｃ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識すること、または
（ｖｉｉ）以下：
（Ａ）前記抗体が配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含むこと、および／もしくは
（Ｂ）前記抗体が配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含むこと
のうち、少なくとも１つが適用されること、または
（ｖｉｉｉ）前記抗体が出可能な部分で標識されており、かつ／または治療剤にカップリングされていること、
（ｉｘ）前記抗体が、基材上に固定化されていること、または
（ｘ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、全抗体、単鎖抗体、ＳｃＦｖ、およびヒンジ領域を欠く一価の抗体からなる群から選択されること
のうち、少なくとも１つが適用される、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
請求項１に記載のヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、
前記重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記単離抗体が、ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合し、任意選択で以下：
（ｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ２配列が、配列番号２０、１４、１６または１８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含むこと、
（ｉｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ１配列が、配列番号１３または配列番号１７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｉｉ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ２配列が、配列番号２２または配列番号２６に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｖ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ１配列が、配列番号２８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２５に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｖ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号１３を含むこと、
（ｖｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２０を含み、任意選択で、配列番号２０に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有すること、
（ｖｉｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号１５を含むこと、
（ｖｉｉｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２８を含み、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有し、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＳを含有すること、
（ｖｉｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２２を含むこと、
（ｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６を含むこと、
（ｘｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２３を含むこと、
（ｘｉｉ）前記抗体が、（Ａ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（Ｂ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｉｉ）前記抗体が、（Ａ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５）を含む重鎖可変領域、ならびに（Ｂ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｖ）前記抗体が、（Ａ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（Ｂ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｖ）前記抗体が、配列番号７を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号７と少なくとも９０％同一の配列を有するそのバリアントを含むこと、
（ｘｖｉ）前記抗体が、配列番号８を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号８と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと、または
（ｘｖｉｉ）前記抗体が、配列番号９を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと
のうち、少なくとも１つが適用される、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
請求項１または２に記載の抗ＭＬＰ抗体またはその断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
【請求項４】
請求項３に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子を含む発現カセット。
【請求項５】
請求項３に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子または請求項４に記載の発現カセットのうちの少なくとも１つを含む細胞。
【請求項６】
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローン１１として指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＢとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＣとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体
からなる群から選択される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
【請求項７】
抗ＭＬＰ抗体を産生するハイブリドーマ細胞系であって、
（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、
（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、および
（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系
からなる群から選択される細胞系。
【請求項８】
（ｉ）配列番号１または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、および
（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ＭＬＰポリペプチド。
【請求項９】
単離抗ＭＬＰ抗体を生成する方法であって、請求項５または７に記載の細胞を、前記抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下で培養するステップと、前記抗ＭＬＰ抗体を単離するステップとを含む方法。
【請求項１０】
被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を上皮性がんの指標とする方法であって、
（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、前記被検対象に由来する前記生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、
（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、結合の存在が、前記試料中のＭＬＰの存在または量を示す、ステップと
を含み、
前記抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合し、任意選択で以下：
（ｉ）前記抗ＭＬＰ抗体が、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含むこと、
（ｉｉ）前記方法がステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、前記対照試料（または参照標準）と比較する場合の、前記被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍または少なくとも１０倍の）増加が、前記被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮性がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示すこと、
（ｉｉｉ）前記生物学的試料が、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択されること、
（ｉｖ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（Ａ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（Ｂ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（Ｃ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体であること、または
（ｖ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体であること、
（ｖｉ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、表１に記載する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域ならびにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体であること、
（ｖｉｉ）前記方法が卵巣がんおよび／または膵臓がんのバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加の抗体を用いるイムノアッセイを実施するステップをさらに含むこと、
（ｖｉｉｉ）前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けていること、
（ｉｘ）前記方法が、治療レジメンの効能を評価するために、前記被検対象から得られた生物学的試料からの前記アッセイの結果を１つまたは複数の時点で比較するステップをさらに含むこと、
（ｘ）前記抗ＭＬＰ抗体が、基材上に固定化されていること、または
（ｘｉ）前記イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡアッセイであること
のうち、少なくとも１つが適用される、方法。
【請求項１１】
被検対象中のムチンを分泌するがんの存在を検出または診断する方法において使用するための、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物であって、前記方法は（ａ）前記組成物を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している前記抗体またはその抗原結合性断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、前記対象中のＭＬＰの前記存在または量の検出が、ムチンを分泌するがんの存在を示し、任意選択で前記方法が以下：
（ｉ）前記ムチンを分泌するがんが、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、および上皮性皮膚がんからなる群から選択されること
（ｉｉ）前記抗ＭＬＰ抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含むこと、
（ｉｉｉ）前記方法が、画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用されること
（ｉｖ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（Ａ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（Ｂ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（Ｃ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体であること、
（ｖ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体であること、または
（ｖｉ）前記被検対象が、（Ａ）明らかに健常である、（Ｂ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（Ｃ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（Ｄ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けていること
のうち、少なくとも１つを含む、組成物。
【請求項１２】
卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している対象を治療するための組成物であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされており、以下：
（ｉ）前記治療剤が、化学療法剤であること、
（ｉｉ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（Ａ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（Ｂ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（Ｃ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体であること、または
（ｉｉｉ）前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体であること
のうち、少なくとも１つが適用される、組成物。
【請求項１３】
請求項１、２および６のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を含む組成物。
【請求項１４】
請求項１、２および６のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、イムノアッセイにおける使用のための基材。
【請求項１５】
（ａ）少なくとも１つの容器、および（ｂ）請求項１、２および６のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するためのキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８８】
本発明の好ましい実施形態を示し、説明してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、それらの実施形態において、多様な変化形態を作製することができることが理解されるであろう。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトムチン様タンパク質の配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
以下：
（ｉ）前記抗体が、モノクローナル抗体であること、
（ｉｉ）前記抗体が、組換え、ヒト化またはキメラ抗体であること、
（ｉｉｉ）前記抗体が、完全ヒト抗体であること、
（ｉｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＥＬＩＳＡアッセイフォーマットにおけるように、上皮性がん細胞系から分泌されるグリコシル化ヒトＭＬＰに結合することが可能であること、または
（ｖ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＭＬＰに結合すること
のうち、少なくとも１つが適用される、項目１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される１つまたは複数の参照抗体により認識されるエピトープの少なくとも一部を認識する、項目１または２に記載の抗体。
（項目４）
以下：
（ｉ）配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、重鎖の可変領域を含むこと、および／または
（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むかまたはそうした配列からなる、軽鎖の可変領域を含むこと
のうち、少なくとも１つが適用される、項目１から３のいずれかに記載の抗体。
（項目５）
検出可能な部分で標識されており、かつ／または治療剤にカップリングされている、項目１から４のいずれかに記載の抗体。
（項目６）
基材上に固定化されている、項目１から５のいずれかに記載の抗体。
（項目７）
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、
前記重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列が、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含み、前記単離抗体が、ヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する、項目１に記載のヒトムチン様タンパク質（ＭＬＰ）に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目８）
以下：
（ｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ２配列が、配列番号２０、１４、１６または１８に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含むこと、
（ｉｉ）重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ１配列が、配列番号１３または配列番号１７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｉｉ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ２配列が、配列番号２２または配列番号２６に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｉｖ）軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ１配列が、配列番号２８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２５に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変を含むこと、
（ｖ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号１３を含むこと、
（ｖｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２０を含み、任意選択で、配列番号２０に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有すること、
（ｖｉｉ）重鎖可変領域のＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号１５を含むこと、
（ｖｉｉｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２８を含み、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＴを含有し、任意選択で、配列番号２８に記載する前記アミノ酸配列が、９位においてＳを含有すること、
（ｖｉｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２２を含むこと、
（ｘ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６を含むこと、
（ｘｉ）軽鎖可変領域のＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２３を含むこと、
（ｘｉｉ）前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５、配列番号３５または配列番号３６）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２１）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｉｉ）前記抗体が、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１６）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１５）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２２）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２３）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｉｖ）前記抗体が、（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２７）を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的改変を含むこと、
（ｘｖ）前記抗体が、配列番号７を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号７と少なくとも９０％同一の配列を有するそのバリアントを含むこと、
（ｘｖｉ）前記抗体が、配列番号８を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号８と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと、または
（ｘｖｉｉ）前記抗体が、配列番号９を含む重鎖可変ドメインまたは配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を有するそのバリアントを含むこと
のうち、少なくとも１つが適用される、項目１に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
（項目９）
前記抗体またはその抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、全抗体、単鎖抗体、ＳｃＦｖ、およびヒンジ領域を欠く一価の抗体からなる群から選択される、項目１から８のいずれかに記載の単離抗体。
（項目１０）
項目７から９のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体またはその断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
（項目１１）
項目１０に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子を含む発現カセット。
（項目１２）
項目１０または項目１１に記載の本発明の抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子のうちの少なくとも１つを含む細胞。
（項目１３）
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローン１１として指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＢとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有するハイブリドーマ細胞系により産生される、クローンＣとして指定される抗ＭＬＰモノクローナル抗体
からなる群から選択される抗ＭＬＰモノクローナル抗体。
（項目１４）
抗ＭＬＰ抗体を産生するハイブリドーマ細胞系であって、
（ｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローン１１を分泌するハイブリドーマ細胞系、
（ｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＢを分泌するハイブリドーマ細胞系、および
（ｉｉｉ）ＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１を有する、抗ＭＬＰモノクローナル抗体クローンＣを分泌するハイブリドーマ細胞系
からなる群から選択される細胞系。
（項目１５）
（ｉ）配列番号１または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド、および
（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するそのバリアントを含むポリペプチド
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ＭＬＰポリペプチド。
（項目１６）
単離抗ＭＬＰ抗体を生成する方法であって、項目１２または１４に記載の細胞を、前記抗ＭＬＰ抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下で培養するステップと、前記抗ＭＬＰ抗体を単離するステップとを含む方法。
（項目１７）
被検対象に由来する生物学的試料中のＭＬＰの存在または量を決定することによって、上皮性がんを検出または診断する方法であって、
（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノアッセイにおいて、被検対象に由来する生物学的試料を抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、
（ｂ）前記抗体の結合の存在または非存在を検出するステップであって、前記結合の存在が、前記試料中のＭＬＰの前記存在または量を示す、ステップと
を含み、
前記抗体またはその断片が、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合する、方法。
（項目１８）
前記抗ＭＬＰ抗体が、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の前記存在または量を検出することを含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
ステップ（ｂ）に従って検出したＭＬＰの前記量を、参照標準または健常対象に由来する対照試料と比較するステップをさらに含み、前記対照試料（または参照標準）と比較する場合の、被検試料中のＭＬＰのレベルの少なくとも２倍またはそれより大きな（例えば、少なくとも５倍または少なくとも１０倍の）増加が、前記被検対象における、卵巣がんまたは膵臓がん等の上皮性がんの存在またはそれらを発症するリスクの増加を示す、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２０）
前記生物学的試料が、血液、血清、血漿および組織からなる群から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目２１）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、項目１７に記載の方法。
（項目２２）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、項目１７に記載の方法。
（項目２３）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、表１に記載する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域ならびにそれらの保存的改変配列を含むモノクローナル抗体である、項目１７に記載の方法。
（項目２４）
卵巣がんおよび／または膵臓がんのバイオマーカーに結合する１つまたは複数の追加の抗体を用いるイムノアッセイを実施するステップをさらに含む、項目１７に記載の方法。
（項目２５）
前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、項目１７に記載の方法。
（項目２６）
前記被検対象から得られた生物学的試料からの前記アッセイの結果を、１つまたは複数の時点で比較して、治療レジメンの効能を評価するステップをさらに含む、項目１７に記載の方法。
（項目２７）
前記抗ＭＬＰ抗体が、基材上に固定化されている、項目１７に記載の方法。
（項目２８）
前記イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡアッセイである、項目１７に記載の方法。
（項目２９）
被検対象中のムチンを分泌するがんの存在を検出または診断する方法であって、（ａ）ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を生存被検対象に投与するステップと、（ｂ）ＭＬＰに結合している前記抗体またはその断片の存在もしくは非存在または量を検出するステップとを含み、前記対象中のＭＬＰの前記存在または量の検出が、ムチンを分泌するがんの存在を示す、方法。
（項目３０）
前記ムチンを分泌するがんが、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、乳がん、虫垂がん、肺がん、腎臓がん、子宮頚がん、胆道がん、食道がん、および上皮性皮膚がんからなる群から選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記抗ＭＬＰ抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に適切な、検出可能な部分で標識されており、ステップ（ｂ）が、前記検出可能な部分の存在または量を検出することを含む、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
画像化手順、手術中の手順、内視鏡的手順または血管内の手順において使用される、項目２９から３１のいずれかに記載の方法。
（項目３３）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、項目２９に記載の方法。
（項目３４）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、項目２９に記載の方法。
（項目３５）
前記被検対象が、（ｉ）明らかに健常である、（ｉｉ）卵巣がんまたは膵臓がんの家族歴を有する、（ｉｉｉ）卵巣がんと関連がある１つまたは複数の症状を経験している、または（ｉｖ）卵巣がんまたは膵臓がんに罹患していることが分かっており、卵巣がんまたは膵臓がんのための治療を受けたことがあるかまたは現時点で受けている、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している対象を治療する方法であって、ＭＬＰの配列番号４に記載するＣ末端領域中のエピトープに結合するヒト化もしくは完全ヒト抗ＭＬＰ抗体またはその抗原結合性断片を卵巣がんまたは膵臓がんに罹患している個体に投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、治療剤にカップリングされている、方法。
（項目３７）
前記治療剤が、化学療法剤である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、
（ｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１６９９でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローン１１、
（ｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７００でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＢ、および
（ｉｉｉ）２０１４年１０月３０日にＡＴＣＣ指定番号ＰＴＡ−１２１７０１でＡＴＣＣに寄託したハイブリドーマ細胞系により産生されるモノクローナル抗ＭＬＰ抗体クローンＣ
からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合するかまたは前記参照抗体とＭＬＰへの結合について競合するモノクローナル抗体である、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記抗ＭＬＰ抗体またはその断片が、配列番号１５、配列番号３５、配列番号３６または配列番号１９に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ−Ｈ３配列を有し、配列番号２３または配列番号２７に記載するアミノ酸配列およびそれらの保存的改変配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ−Ｌ３配列を有するモノクローナル抗体である、項目３６に記載の方法。
（項目４０）
項目１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を含む組成物。
（項目４１）
項目１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、イムノアッセイにおける使用のための基材。
（項目４２）
（ａ）少なくとも１つの容器、および（ｂ）項目１から１３のいずれかに記載の抗ＭＬＰ抗体を少なくとも１つ含む、生物学的試料中のＭＬＰの存在を検出するためのキット。
【国際調査報告】
2019526227.tif 000037
2019526227.tif 000038
2019526227.tif 000039
2019526227.tif 000040
2019526227.tif 000041