(57)【要約】抗ＣＴＬＡ−４抗体を開示する。こうした抗体を含む組成物、ならびにこうした抗体の使用およびこうした抗体を用いる方法もまた開示する。
2019519208.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、任意に単離されており、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【化１】
2019519208.tif 000015
を有する抗体または抗原結合性断片、あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体である、前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＲＡＴＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号５）である、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６）である、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＱＱＡＮＴＬＰＬＦＴ（配列番号７）である、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＳＮＴＡＡＷＮ（配列番号８）である、請求項１〜４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＳＤＹＧＬＳＶＫＳ（配列番号９）である、請求項１〜５のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項７】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＥＧＳＧＧＴＬＩＹ（配列番号１０）である、請求項１〜６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
以下のＣＤＲ：
【化２】
2019519208.tif 000016
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
以下のＣＤＲ：
【化３】
2019519208.tif 000017
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
ＣＤ２８に結合しない、請求項１〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１１】
ＣＴＬＡ−４に結合し、そしてＣＤ２８に実質的に結合を示さない、抗体または抗原結合性断片。
【請求項１２】
ヒトまたはネズミＣＴＬＡ−４に特異的に結合する、請求項１〜１１のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１３】
ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０、任意にヒトＣＴＬＡ−４およびヒトＣＤ８０、の間の相互作用を阻害する、請求項１〜１２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８６、任意にヒトＣＴＬＡ−４およびヒトＣＤ８６、の間の相互作用を阻害する、請求項１〜１３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１５】
抗体が、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復するのに有効である、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１６】
以下のＣＤＲ：
【化４】
2019519208.tif 000018
を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１７】
軽鎖配列：配列番号１、または２（図１）に少なくとも８５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１８】
以下のＣＤＲ：
【化５】
2019519208.tif 000019
を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号３または４（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１８または請求項１９記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、請求項１５または請求項１６記載の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２１】
ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＡＴＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号５）、ＬＣ−ＣＤＲ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６）、ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＱＡＮＴＬＰＬＦＴ（配列番号７）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＮＴＡＡＷＮ（配列番号８）、ＨＣ−ＣＤＲ２：ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＳＤＹＧＬＳＶＫＳ（配列番号９）、ＨＣ−ＣＤＲ３：ＥＧＳＧＧＴＬＩＹ（配列番号１０）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む、
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２２】
ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、任意に単離され、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号１または２（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号３または４（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、（ｉ）請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＣＴＬＡ−４以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチドを含む、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、任意に単離された、抗体または抗原結合性断片。
【請求項２４】
ＣＴＬＡ−４以外のターゲットタンパク質に結合可能である抗原結合性断片またはポリペプチドが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢ、ＧＩＴＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＫＩＲ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５の１つに結合可能である、請求項２３の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項記載の抗原結合性断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２６】
請求項２５記載のＣＡＲを含む細胞。
【請求項２７】
ＣＴＬＡ−４に結合した、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を含む、任意に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項２８】
請求項１〜２５のいずれか一項の抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲおよび少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項２９】
請求項１〜２５のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲをコードする、単離核酸。
【請求項３０】
請求項２９の核酸を含むベクター。
【請求項３１】
請求項３０のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３２】
請求項１〜２５のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、請求項３１の宿主細胞を培養し、そして抗体、または抗原結合性断片またはポリペプチドまたはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法。
【請求項３３】
療法または医学的治療法において使用するための、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項３４】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項３５】
癌の治療において使用するための、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項３６】
感染性疾患の治療において使用するための、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項３７】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項３８】
癌の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項３９】
感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項４０】
請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法。
【請求項４１】
Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法。
【請求項４２】
癌を患う患者に、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、癌を治療する方法。
【請求項４３】
感染性疾患を患う患者に、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、感染性疾患を治療する方法。
【請求項４４】
ＣＴＬＡ−４を含有するかまたは含有すると推測される試料を、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む方法。
【請求項４５】
被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項４６】
ＣＴＬＡ−４またはＣＤ８６またはＣＤ８０にターゲティングされる剤での治療のため、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項４７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＴＬＡ−４を検出するための、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用。
【請求項４８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、請求項１〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用。
【請求項４９】
Ｔ細胞を、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物と、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法。
【請求項５０】
Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、Ｔ細胞集団を拡大させるように、請求項１〜２６または２８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の存在下で、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、拡大されたＴ細胞を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項５１】
被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、請求項１〜２６、２９または３０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項５２】
被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞内に、請求項２９記載の核酸または請求項３０記載のベクターを導入し、それによって、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項５３】
あらかじめ決定した量の請求項１〜２６、または２８〜３１のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を含む部分のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞消耗は、多くの慢性感染および癌の間に生じるＴ細胞機能不全状態である。該状態は、劣ったＴ細胞エフェクター機能、阻害性受容体発現の持続、および機能するエフェクターまたは記憶Ｔ細胞のものとは異なる転写状態によって定義される。消耗は、感染および腫瘍の最適な制御を妨げる（Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，  ４９２−４９９（２０１１））。
【０００３】
Ｔ細胞消耗は、段階的および進行性のＴ細胞機能喪失によって特徴付けられる。消耗は、慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）感染中によく定義され、そして一般的に、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス感染を含む多くの慢性感染後に、ならびに腫瘍転移中に起こる、抗原持続状態下で発展する。表現型的および機能的欠陥の漸次的変化が現れる可能性があり、消耗は均一に機能しなくなった状態ではなく、そしてこれらの細胞は原型エフェクター、記憶およびまたアネルギー性Ｔ細胞とは異なる。消耗Ｔ細胞は、最も一般的には、高度慢性感染中に出現し、そして抗原刺激のレベルおよび期間は該プロセスの決定的な決定要因である（Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ａｐｒ  ２０１０；  １２９（４）：４７４−４８１）。
【０００４】
循環ヒト腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、細胞傷害性である可能性があり、そしてｉｎ  ｖｉｖｏでサイトカインを産生する可能性があることから、自己および腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞が、ペプチド、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、およびＣｐＧでのワクチン接種などの強力な免疫療法後、または養子移入後に、機能的反応能に到達する可能性もあることが示される。末梢血と対照的に、腫瘍部位に浸潤するＴ細胞は、しばしば機能的に不全であり、異常な低サイトカイン産生および阻害性受容体ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３およびＬＡＧ−３の上方制御を示す。黒色腫組織から単離されたＴ細胞は、短期ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養後にＩＦＮ−γ産生を回復しうるため、機能的不全は可逆性である。しかし、依然として、この機能障害が、さらなる分子経路、おそらくは動物モデルにおいて定義されるようなＴ細胞消耗またはアネルギーと似た経路を伴うかどうかを決定する必要がある（Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０）。
【０００５】
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）はまた、ＣＤ１５２とも称され、ヒトにおいてＣＴＬＡ４遺伝子によってコードされるＩ型膜貫通タンパク質である。本明細書記載のＣＴＬＡ−４の分子特性および生物学的機能は、ＭｃＣｏｙおよびＬｅ  Ｇｒｏｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （１９９９）７７：１−１０、ならびにＧｒｏｓｓｏおよびＫｕｎｋｅｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  （２０１３）１３：５に概説される。
【０００６】
正の共刺激受容体ＣＤ２８の、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のそのリガンド、ＣＤ８０およびＣＤ８６への結合は、Ｔ細胞の活性化を導き、Ｔ細胞増殖およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）の産生を生じる。ＣＴＬＡ−４は、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の細胞表面上で発現され、そしてＴ細胞機能の重要な負の制御因子である。ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８に類似の構造を有し、そしてまた、ＡＰＣ上のＣＤ８０およびＣＤ８６の両方に結合するが、より高いアビディティおよびアフィニティを持つ（Ｃｏｌｌｉｎｓら，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  （２００２）１７：２０１−２１０）。
【０００７】
ＣＴＬＡ−４は、ＧｒｏｓｓｏおよびＫｕｎｋｅｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  （２０１３）  １３：５の表１に要約される、内因性および外因性両方の機構を通じて、免疫活性化を負に制御することが示されてきている。簡潔には、（ｉ）ＡＰＣ上のＣＤ８０およびＣＤ８６を通じた逆シグナル伝達は、Ｔ細胞反応の抑制を生じ、そして／または未処理（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞のＴｒｅｇへの変換を促進し、（ｉｉ）ＣＴＬＡ−３を通じたシグナル伝達は、ＴＧＦ−βなどの制御性サイトカインの産生を刺激し、ＡＰＣによる抗原提示の阻害およびＴ細胞機能の阻害を生じ、（ｉｉｉ）ＣＤ８０／ＣＤ８６へのＣＴＬＡ−４の結合は、ＣＤ２８による結合に関するこれらのリガンドの利用可能性を減少させ、ＡＰＣによるＴ細胞活性化減少を生じ、（ｉｖ）ＣＤ８０／ＣＤ８６へのＣＴＬＡ−４の結合は、そのトランスエンドサイトーシスを引き起こし、ＡＰＣがＴ細胞を活性化する能力を減少させ、（ｖ）ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞シナプスにＰＰ２ＡおよびＰＴＰＮ１１などの阻害性タンパク質を補充して、ＣＤ２８およびＴＣＲを通じたシグナル伝達を阻害し、（ｖｉ）ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ８０／８６を占め、そしてそれによってＣＤ２８による結合を防止する高アフィニティ競合剤として作用し、（ｖｉｉ）ＣＴＬＡ−４の可溶性スプライス変異体は、Ｔ細胞活性化を阻害可能であってもよく、そして（ｖｉｉｉ）ＣＴＬＡ−４は、ＡＰＣによるＴ細胞の活性化に重要なＴ細胞停止シグナルを阻害する。
【０００８】
ＣＴＬＡ−４による負の制御の阻害は、適応免疫反応およびＴ細胞活性化の刺激を促進することが示されてきている。ＣＴＬＡ−４ブロッキング抗体は、癌のマウスモデルにおいて有効であることが示されてきており、そして抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブ（ＷＯ２００１０１４４２４  Ａ１に記載されるＹｅｒｖｏｙ、ＭＤＸ−０１０、１０Ｄ１）およびトレメリムマブ（チシリムマブ；  ＣＰ−６７５，２０６）が、癌における抗腫瘍免疫を促進する戦略として調べられている。ＣＴＬＡ−４の遮断はまた、慢性ウイルス感染などのＴ細胞消耗と関連する障害に関する有望な療法戦略でもある。
【０００９】
イピリムマブは、ネズミＣＴＬＡ−４に結合不能であることが示されてきており（ＷＯ  ２００１／１０１４４２４  Ａ１、表５、８１ページ）、そしてトレメリムマブは、同様に、ネズミＣＴＬＡ−４に結合しないことが示されてきている（Ｈａｎｓｏｎら  Ｐｒｏｃ  Ａｍｅｒ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （２００４）６４：８７７）。Ｈａｎｓｏｎらはまた、トレメリムマブがヒトＣＤ２８への結合を示すことも開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＷＯ２００１０１４４２４  Ａ１
【特許文献２】ＷＯ  ２００１／１０１４４２４  Ａ１
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２、４９２−４９９（２０１１）
【非特許文献２】Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ａｐｒ  ２０１０；  １２９（４）：４７４−４８１
【非特許文献３】Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０
【非特許文献４】ＭｃＣｏｙおよびＬｅ  Ｇｒｏｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （１９９９）７７：１−１０
【非特許文献５】ＧｒｏｓｓｏおよびＫｕｎｋｅｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  （２０１３）１３：５
【非特許文献６】Ｃｏｌｌｉｎｓら，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  （２００２）１７：２０１−２１０
【非特許文献７】Ｈａｎｓｏｎら  Ｐｒｏｃ  Ａｍｅｒ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （２００４）６４：８７７
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、ＣＴＬＡ−４に結合する抗体または抗原結合性断片に関する。重鎖および軽鎖ポリペプチドもまた開示する。抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、単離および／または精製型で提供されてもよく、そして研究、療法および診断において使用するために適した組成物に配合されてもよい。
【００１３】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋  Ｔ細胞において、Ｔ細胞機能を回復するために有効であってもよい。いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示しているＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復するために有効であってもよい。
【００１４】
本発明の１つの側面において、ＣＴＬＡ−４に結合し、そしてＣＤ２８に実質的に結合をまったく示さない、抗体または抗原結合性断片を提供する。
本発明の別の側面において、ＣＴＬＡ−４に結合し、そしてＣＤ２８およびＣＤ８０の間の相互作用、ならびに／あるいはＣＤ２８およびＣＤ８６の間の相互作用を防止または阻害しない、抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１５】
本発明の１つの側面において、抗体または抗原結合性断片を提供し、抗体のアミノ酸配列は、アミノ酸配列ｉ）〜ｉｉｉ）、またはアミノ酸配列ｉｖ）〜ｖｉ）、または好ましくはアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【００１６】
【化１】
2019519208.tif 000003
【００１７】
あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体を含んでもよい。
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＲＡＴＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号５）である。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６）である。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＱＱＡＮＴＬＰＬＦＴ（配列番号７）である。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＮＴＡＡＷＮ（配列番号８）である。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＳＤＹＧＬＳＶＫＳ（配列番号９）である。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＥＧＳＧＧＴＬＩＹ（配列番号１０）である。
【００１８】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００１９】
【化２】
2019519208.tif 000004
【００２０】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２１】
【化３】
2019519208.tif 000005
【００２２】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
抗体は、図１に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、図２に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００２３】
抗体は、配列番号１、５、６、７；または２、５、６、７の１つのアミノ酸配列、あるいは図１に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号１、５、６、７；または２、５、６、７の１つ、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
【００２４】
抗体は、配列番号３、８、９、１０；または４、８、９、１０の１つのアミノ酸配列、あるいは図２に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号３、８、９、１０；または４、８、９、１０の１つ、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでもよい。
【００２５】
抗体は、配列番号１、５、６、７；または２、５、６、７の１つのアミノ酸配列、または図１に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号１、５、６、７；または２、５、６、７の１つ、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域、および配列番号３、８、９、１０；または４、８、９、１０の１つのアミノ酸配列、または図２に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号３、８、９、１０；または４、８、９、１０の１つ、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００２６】
抗体は、任意に、ＣＴＬＡ−４、任意にヒトまたはネズミＣＴＬＡ−４、に結合してもよい。いくつかの態様において、抗体は、ヒトおよびネズミＣＴＬＡ−４の両方に結合可能である。抗体は、任意に、上述のようなアミノ酸配列構成要素を有してもよい。抗体はＩｇＧであってもよい。１つの態様において、ＣＴＬＡ−４に結合した、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片を含む、任意に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００２７】
抗体は、任意に、ヒトＣＴＬＡ−４およびヒトＣＤ８０または８６、あるいはネズミＣＴＬＡ−４およびネズミＣＤ８０または８６、の間の相互作用または機能的関連を阻害するかまたは防止してもよい。ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０または８６の間の相互作用または機能的関連のこうした阻害または防止は、ＣＴＬＡ−４のＣＤ８０またはＣＤ８６が仲介する活性化、ＣＤ８０／ＣＴＬＡ−４シグナル伝達またはＣＤ８６／ＣＴＬＡ−４シグナル伝達を阻害するかまたは防止してもよい。
【００２８】
本発明の１つの側面において、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該軽鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００２９】
【化４】
2019519208.tif 000006
【００３０】
を含む。
本発明の１つの側面において、軽鎖配列：配列番号１または２（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、単離軽鎖可変領域ポリペプチドは、ＣＴＬＡ−４に結合可能である。
【００３１】
本発明の１つの側面において、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該重鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００３２】
【化５】
2019519208.tif 000007
【００３３】
を含む。
本発明の１つの側面において、配列番号３または４（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、単離重鎖可変領域ポリペプチドは、ＣＴＬＡ−４に結合可能である。
【００３４】
本発明の１つの側面において、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＡＴＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号５）、ＬＣ−ＣＤＲ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６）、ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＱＡＮＴＬＰＬＦＴ（配列番号：７）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、そして；
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＮＴＡＡＷＮ（配列番号８）、ＨＣ−ＣＤＲ２：ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＳＤＹＧＬＳＶＫＳ（配列番号９）、ＨＣ−ＣＤＲ３：ＥＧＳＧＧＴＬＩＹ（配列番号１０）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む、
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００３５】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００３６】
本発明の別の側面において、任意に単離され、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号１または２（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号３または４（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００３７】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００３８】
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＬＣＦＲ１：ＬＣ−ＣＤＲ１：ＬＣＦＲ２：ＬＣ−ＣＤＲ２：ＬＣＦＲ３：ＬＣ−ＣＤＲ３：ＬＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間に可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００３９】
本発明の１つの側面において、任意に、本明細書記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該軽鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００４０】
【化６】
2019519208.tif 000008
【００４１】
を含む。
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＨＣＦＲ１：ＨＣ−ＣＤＲ１：ＨＣＦＲ２：ＨＣ−ＣＤＲ２：ＨＣＦＲ３：ＨＣ−ＣＤＲ３：ＨＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間に可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００４２】
本発明の１つの側面において、任意に、本明細書記載の軽鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該重鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００４３】
【化７】
2019519208.tif 000009
【００４４】
を含む。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ヒト定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の１つより選択されるものである。
【００４５】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ネズミ定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ＢおよびＩｇＧ３の１つより選択されるものである。
【００４６】
本発明の別の側面において、ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、任意に単離された、抗体または抗原結合性断片を提供する。二重特異性抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）本明細書に記載するようなＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＣＴＬＡ−４以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。
【００４７】
いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４以外のターゲットタンパク質は、細胞表面受容体、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体、例えば共刺激受容体または阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択されてもよい。いくつかの態様において、阻害性受容体は、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されてもよい。
【００４８】
いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４以外のターゲットタンパク質は、その発現が癌と関連する癌マーカーであってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５より選択されてもよい。
【００４９】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗原結合性断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
別の側面において、本発明は、本明細書に記載するようなＣＡＲを含む細胞を提供する。
【００５０】
本発明の別の側面において、ＣＴＬＡ−４に結合した、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体は、任意に単離されていてもよい。
【００５１】
本発明の別の側面において、組成物、例えば薬学的組成物または薬剤を提供する。組成物は、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を含んでもよい。
【００５２】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、またはＣＡＲをコードする、単離核酸を提供する。核酸は、配列番号１１、１２、１３または１４（図３）の１つの配列、あるいは遺伝暗号の結果として縮重しているコード配列を有してもよく、あるいは少なくとも７０％の同一性、任意に、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの同一性を有するヌクレオチド配列を有してもよい。
【００５３】
本発明の１つの側面において、本明細書記載の核酸を含むベクターを提供する。本発明の別の側面において、ベクターを含む宿主細胞を提供する。例えば、宿主細胞は、真核、または哺乳動物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、またはヒトであってもよいし、あるいは原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）であってもよい。本発明の１つの側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、本明細書に記載するような宿主細胞を培養し、そして抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法を提供する。
【００５４】
本発明の別の側面において、療法または医学的治療法において使用するための、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物の製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用を提供する。
【００５５】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行してもよい。
【００５６】
本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法を提供する。
【００５７】
本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物の製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用を提供する。
【００５８】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を腫瘍細胞に投与する工程を含む、腫瘍細胞を殺す方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行してもよい。腫瘍細胞の殺傷は、例えば抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の結果として、あるいは抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物にコンジュゲート化された薬剤の作用を通じてであってもよい。
【００５９】
本発明の別の側面において、癌を患う患者に、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、癌を治療する方法を提供する。
【００６０】
癌は、ＣＴＬＡ−４を発現するかまたは過剰発現する癌であってもよいし、あるいはＣＴＬＡ−４を発現するかまたは過剰発現する細胞を含んでもよい。
本発明の別の側面において、被験体において、免疫反応を調節する方法であって、被験体における免疫反応が調節されるように、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６１】
本発明の別の側面において、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。いくつかの態様において、被験体において、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の療法的有効量を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６２】
本発明の別の側面において、ＣＴＬＡ−４を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む、方法を提供する。
【００６３】
本発明の別の側面において、被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６４】
本発明のさらなる側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＴＬＡ−４の検出のための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用を提供する。本発明の別の側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用を提供する。
【００６５】
本発明の方法において、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞は、本明細書に記載するような組成物として提供されてもよい。
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【００６６】
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞に、本明細書記載の核酸またはベクターを導入し、それによって、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【００６７】
別の側面において、本発明は、あらかじめ決定した量の本明細書記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を含む部分のキットを提供する。
【００６８】
いくつかの態様において、抗体は、本明細書に記載するようなクローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌであってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
本発明の原理を例示する態様および実験は、ここで、付随する図に言及しながら論じられる。
【図１】抗ＣＴＬＡ−４抗体クローン２Ｃ８および２Ｃ８＿ｇｌの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２】抗ＣＴＬＡ−４抗体クローン２Ｃ８および２Ｃ８＿ｇｌの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図３Ａ】抗ＣＴＬＡ−４抗体クローン２Ｃ８および２Ｃ８＿ｇｌの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図３Ｂ】抗ＣＴＬＡ−４抗体クローン２Ｃ８および２Ｃ８＿ｇｌの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４Ａ】バイオパニング後の抗ヒトＣＴＬＡ−４ヒットの選択を示す棒グラフ。ＦａｂをヒトＣＴＬＡ−４と混合し、そしてＣＤ８０への結合をＥＬＩＳＡによって分析した。矢印は、ＣＤ８０へのＣＴＬＡ−４結合の効率的な遮断剤であることが同定された、クローン２Ｃ８を示す。
【図４Ｂ】バイオパニング後の抗ヒトＣＴＬＡ−４ヒットの選択を示す棒グラフ。ＦａｂをヒトＣＴＬＡ−４と混合し、そしてＣＤ８０への結合をＥＬＩＳＡによって分析した。矢印は、ＣＤ８０へのＣＴＬＡ−４結合の効率的な遮断剤であることが同定された、クローン２Ｃ８を示す。
【図５】ヒトＣＴＬＡ−４への２Ｃ８  Ｆａｂの結合のＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。
【図６】２Ｃ８  Ｆａｂによる、ＣＤ８０へのＣＴＬＡ−４結合の遮断のＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。
【図７】マウスＣＴＬＡ−４への２Ｃ８  ＩｇＧの結合のＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。
【図８】ヒトＣＤ２８への２Ｃ８の結合のＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。
【図９】ヒトＣＴＬＡ−４への２Ｃ８の結合の結合アフィニティのＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。示すのは、どちらも２つ組で行った、２回の独立の実験に関する平均吸光度±ＳＤである。
【図１０】ヒトＣＴＬＡ−４への２Ｃ８の結合のアビディティのＥＬＩＳＡ分析結果を示すグラフ。
【図１１】ＣＤ８０を通じた活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８によるＴ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、上清中のＩＬ−２濃度に対応する吸光度測定の２回の独立の実験における、２つ組に関する平均±ＳＤである。
【図１２】ＣＤ８６を通じた活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８によるＴ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、上清中のＩＬ−２濃度に対応する吸光度測定の２回の独立の実験における、２つ組に関する平均±ＳＤである。
【図１３】結腸癌のＭＣ３８腫瘍増殖マウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏの２Ｃ８の抗腫瘍活性の分析結果を示すグラフ。（Ａ）および（Ｂ）は、２回の独立の実験の結果を示す。
【図１４】カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）／アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ）ＣＴＬＡ−４への２Ｃ８の結合を示すグラフ。
【図１５】マウスＣＴＬＡ−４に関する結合アフィニティを示すグラフ。示すのは、２Ｃ８、２Ｃ８ｇｌおよびＬＡＬＡ突然変異を伴う２Ｃ８のＩｇＧ１型、２Ｃ８のＩｇＧ４型、イピリムマブ（ヒト抗ｈｕＣＴＬＡ−４）およびＩｇＧ１アイソタイプ対照の２つ組に関する平均吸光度±ＳＤである。
【図１６】マウスＣＴＬＡ−４に関する結合アビディティを示すグラフ。示すのは、２Ｃ８、２Ｃ８ｇｌおよびＬＡＬＡ突然変異を伴う２Ｃ８のＩｇＧ１型、２Ｃ８のＩｇＧ４型、イピリムマブ（マウスＣＴＬＡ−４と交差反応しないことが知られている抗ｈｕＣＴＬＡ−４）およびＩｇＧ１アイソタイプ対照の２つ組に関する平均吸光度±ＳＤである。
【図１７】ヒトＣＴＬＡ−４でトランスフェクションされているＨＥＫ−２９３．６Ｅ細胞への２Ｃ８の結合を示すグラフ。示すのは、２つ組に関する平均蛍光強度±ＳＤである。
【図１８】マウスＣＴＬＡ−４でトランスフェクションされているＨＥＫ−２９３．６Ｅ細胞への２Ｃ８の結合を示すグラフ。示すのは、２つ組に関する平均蛍光強度±ＳＤである。
【図１９Ａ】活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８または派生抗体による、Ｔ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、陽性対照としてのイピリムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いた、４回の独立の実験（Ａ〜Ｄ）における２つ組に関する分泌ＩＬ−２の平均±ＳＤである。
【図１９Ｂ】活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８または派生抗体による、Ｔ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、陽性対照としてのイピリムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いた、４回の独立の実験（Ａ〜Ｄ）における２つ組に関する分泌ＩＬ−２の平均±ＳＤである。
【図１９Ｃ】活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８または派生抗体による、Ｔ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、陽性対照としてのイピリムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いた、４回の独立の実験（Ａ〜Ｄ）における２つ組に関する分泌ＩＬ−２の平均±ＳＤである。
【図１９Ｄ】活性化のＣＴＬＡ−４誘導性阻害後の、２Ｃ８または派生抗体による、Ｔ細胞活性の回復を示すグラフ。示すのは、陽性対照としてのイピリムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いた、４回の独立の実験（Ａ〜Ｄ）における２つ組に関する分泌ＩＬ−２の平均±ＳＤである。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
抗体
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＣＴＬＡ−４（抗原）、好ましくはヒトまたはネズミＣＴＬＡ−４に、任意に２〜２０ｎＭの範囲のＫＤで結合する。
【００７１】
本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。
本発明記載の抗体は、以下の特性の少なくとも１つを示しうる：
ａ）（例えばＳＰＲによって決定した際）１μＭまたはそれ未満、好ましくは、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦５００ｐＭの１つのＫＤで、ヒトまたはマウスＣＴＬＡ−４に結合する；
ｂ）（例えばＥＬＩＳＡによって決定した際）ＥＣ５０＝１μＭまたはそれ未満、好ましくは、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦５００ｐＭの１つの結合アフィニティで、ヒトまたはマウスＣＴＬＡ−４に結合する；
ｃ）（例えばＥＬＩＳＡによって決定した際）ＥＣ５０＝５００ｐＭまたはそれ未満、好ましくは、≦４００ｐＭ、≦３００ｐＭ、≦２００ｐＭ、≦１５０ｐＭ、≦１００ｐＭ、≦９０ｐＭ、≦８０ｐＭ、≦７５ｐＭ、≦７０ｐＭ、≦６５ｐＭ、≦６０ｐＭ、≦５５ｐＭ、≦５０ｐＭの１つの結合アビディティで、ヒトまたはマウスＣＴＬＡ−４に結合する；
ｄ）ＣＤ２８（例えばヒトＣＤ２８またはマウスＣＤ２８）に実質的に結合を示さない。
【００７２】
ｅ）ヒトおよびマウスＣＴＬＡ−４に結合し、そしてヒトＣＤ２８に実質的に結合を示さない；
ｆ）ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０、任意にヒトＣＴＬＡ−４およびヒトＣＤ８０、の間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｇ）ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８６、任意にヒトＣＴＬＡ−４およびヒトＣＤ８６、の間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｈ）ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の間の相互作用ならびにＣＴＬＡ−４およびＣＤ８６の間の相互作用、任意にヒトＣＴＬＡ−４、ヒトＣＤ８０およびヒトＣＤ８６の間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｉ）ＣＤ２８およびＣＤ８０、任意にヒトＣＤ２８およびヒトＣＤ８０、の間の相互作用を阻害せずまたは防止しない；
ｊ）ＣＤ２８およびＣＤ８６、任意にヒトＣＤ２８およびヒトＣＤ８６、の間の相互作用を阻害せずまたは防止しない；
ｋ）ＣＤ２８およびＣＤ８０の間の相互作用、ならびにＣＤ２８およびＣＤ８６の間の相互作用、任意にヒトＣＤ２８、ヒトＣＤ８０およびヒトＣＤ８６の間の相互作用を阻害せずまたは防止しない；
ｌ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞の活性化を増加させる；
ｍ）Ｔ細胞再活性化アッセイにおいて、Ｔ細胞によるＩＬ−２産生を増加させる；
ｎ）感染に反応して、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させる；
о）任意にｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍増殖を阻害する。
【００７３】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、免疫細胞、例えばＴ細胞集団の拡大のための方法において有用でありうる。本発明記載の抗体は、望ましい特性を持つ免疫細胞集団の拡大のために有用である。
【００７４】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、免疫制御／免疫抑制表現型を持つ免疫細胞（例えばＴｒｅｇ）よりも、エフェクター表現型を持つ免疫細胞（例えばＣＴＬ）集団を拡大するための方法において、拡大するために有用である。
【００７５】
「抗体」によって、本発明者らは、その断片または誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片も含める。
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体を、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，  Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８２）に開示されるものによって調製してもよい。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８，  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２，  ７９２−７９９）によって論じられる。
【００７６】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ポリクローナル抗体は、本発明の方法において有用である。単一特異的ポリクローナル抗体が好ましい。当該技術分野に周知の方法を用いて、適切なポリクローナル抗体を調製してもよい。
【００７７】
いくつかの態様において、抗体／断片は、完全ヒト抗体／断片である。完全ヒト抗体／断片は、ヒト核酸配列（単数または複数）によってコードされる。完全ヒト抗体／断片は、非ヒトアミノ酸配列を欠く。
【００７８】
いくつかの態様において、抗体／断片は、キメラ抗体／断片であってもよい。キメラ抗体／断片は、異なる抗体／断片由来のアミノ酸配列を含んでもよい。例えば、キメラ抗体／断片は、１つの抗体／抗原結合性断片由来のＣＤＲまたは可変ドメイン配列（単数または複数）、および別の抗体／抗原結合性断片由来の定常領域配列（単数または複数）を含んでもよい。いくつかの態様において、キメラ抗体／断片は、１つの抗体／抗原結合性断片由来のＣＤＲ、ならびに別の抗体／抗原結合性断片の定常領域配列（単数または複数）およびフレームワーク領域配列（単数または複数）を含んでもよい。
【００７９】
いくつかの態様において、キメラ抗体／断片は、本明細書記載の抗ＣＴＬＡ−４クローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌのＣＤＲまたは可変ドメイン配列（単数または複数）、および別の抗体／抗原結合性断片の定常領域配列（単数または複数）を含んでもよい。いくつかの態様において、キメラ抗体／断片は、本明細書記載の抗ＣＴＬＡ−４クローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌのＣＤＲ、ならびに別の抗体／抗原結合性断片の定常領域配列（単数または複数）およびフレームワーク領域配列（単数または複数）を含んでもよい。
【００８０】
いくつかの態様において、キメラ抗体／断片は、１つの種由来の抗体由来のＣＤＲまたは可変ドメイン配列（単数または複数）および別の種由来の抗体由来の定常領域配列（単数または複数）を含んでもよい。いくつかの態様において、キメラ抗体／断片は、１つの種由来の抗体由来のＣＤＲ、ならびに別の種由来の抗体由来の定常領域配列（単数または複数）およびフレームワーク領域配列（単数または複数）を含んでもよい。
【００８１】
いくつかの態様において、本発明にしたがったキメラ抗体／断片は、本明細書記載の抗ＣＴＬＡ−４クローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌ由来のＣＤＲまたは可変ドメイン配列（単数または複数）、および非ヒト種由来の抗体由来の定常領域配列（単数または複数）を含んでもよい。いくつかの態様において、本発明記載のキメラ抗体／断片は、本明細書記載の抗ＣＴＬＡ−４クローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌ由来のＣＤＲ、ならびに非ヒト種由来の抗体由来の定常領域配列（単数または複数）およびフレームワーク領域配列（単数または複数）を含んでもよい。いくつかの態様において、非ヒト種は、例えば非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯類目（ｏｒｄｅｒ  Ｒｏｄｅｎｔｉａ）の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目（ｏｒｄｅｒ  Ｂｏｓ）の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目（ｏｒｄｅｒ  Ｅｑｕｉｄａｅ）の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【００８２】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／断片は、関心対象の種において天然に産生される抗体に対する類似性を増加させるため、修飾（例えば１またはそれより多いアミノ酸置換）を含んでもよい。
【００８３】
ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの、抗体の抗原結合性断片もまた用いて／提供してもよく、遺伝子操作した抗体および抗体断片もまた用いて／提供してもよい。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１−６８５５）。
【００８４】
抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１またはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）；  Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０３８）；  ＶＨおよびＶＬパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，  ２９３−２９９中に見出されるはずである。
【００８５】
「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。
【００８６】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。また、当該技術分野に周知であるようなファージディスプレイ技術を用いて、ＣＴＬＡ−４に結合する合成抗体を作製してもよい。
【００８７】
やはり提供するのは、本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含む、多重特異性抗体および多重特異性抗原結合性断片である。
本明細書において、「多重特異性」は、１より多いエピトープに対する特異性を有することを意味する。いくつかの態様において、多重特異性抗体または多重特異性抗原結合性断片は、例えば２（二重特異性）、３（三重特異性）、４、５、６、７、８、９または１０の異なるエピトープに対して特異的であってもよい。
【００８８】
いくつかの態様において、本発明記載の多重特異性抗体／断片は、１より多いターゲット分子に対する特異性を有してもよい。いくつかの態様において、多重特異性抗体／断片は、例えば２（二重特異性）、３（三重特異性）、４、５、６、７、８、９または１０の異なるターゲット分子に対して特異的であってもよい。
【００８９】
いくつかの態様において、多重特異性抗体および多重特異性抗原結合性断片は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体／断片は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片、および別のターゲットタンパク質、すなわちＣＴＬＡ−４以外のタンパク質に結合可能な例えば１、２、３、４、５、６、７、８、または９の抗原結合性断片（単数または複数）を含む。
【００９０】
本出願はまた、ＣＴＬＡ−４に結合可能であり、そして二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、抗体または抗原結合性断片も提供する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は単離されていてもよい。
【００９１】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片であって、ＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片が本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含むかまたはこれらからなる、前記断片を含む。
【００９２】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片を含む。
【００９３】
別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片は、ＣＴＬＡ−４以外の別のタンパク質に結合可能であってもよい。
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、細胞表面受容体であってもよい。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、免疫細胞、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される細胞表面受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体であってもよい。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は、共刺激受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択されてもよい。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、阻害性受容体は、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されてもよい。
【００９４】
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は癌マーカーであってもよい。すなわち、ターゲットタンパク質は、その発現（例えば上方制御された発現）が癌と関連するタンパク質であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは受容体であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５より選択されてもよい。
【００９５】
いくつかの態様において、ＣＤ２７の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２７抗体クローン０３２３（Ｍｉｌｌｏｐｏｒｅ）またはバルリルマブ（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２８の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＣＤ２８．２、クローンＪＪ３１９（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン２０４．１２、クローンＢ−２３、クローン１０Ｆ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン３７４０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン２０４−１２（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン１５Ｅ８（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｏｐｏｒｅ）、クローン２０４−１２、クローンＹＴＨ９１３．１２（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローンＢ−Ｔ３（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン９Ｈ６Ｅ２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＣ２８／７７（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローンＫＯＬＴ−２（ＡＬＰＣＯ）、クローン１５２−２Ｅ１０（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローンＸＰＨ−５６（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＩＣＯＳの抗原結合性断片は、例えば抗ＩＣＯＳ抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、またはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＩＣＯＳ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４０抗体クローン８２１１１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはＡＳＫＰ１２４０（Ｏｋｉｍｕｒａら，  ＡＭ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２０１４）  １４（６）  １２９０−１２９９）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２２の抗原結合性断片は、抗ＣＤ１２２抗体クローンｍｉｋβ２（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＯＸ４３の抗原結合性断片は、例えばＵＳ  ２０１３０２８０２７５、ＵＳ  ８２８３４５０またはＷＯ２０１３０３８１９１に開示される抗ＯＸ４３抗体、例えばクローン１２Ｈ３またはクローン２０Ｅ５のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＯＸ４３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、４−１ＢＢの抗原結合性断片は、例えば抗４−１ＢＢ抗体ＰＦ−０５０８２５６６（Ｆｉｓｈｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）  ６１：  １７２１−１７３３）、または��レルマブ（ＢＭＳ−６６５５１３；  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；  ＬｉおよびＬｉｕ，  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０１３）；  ５：  ４７−５３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他の４−１ＢＢ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＧＩＴＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＧＩＴＲ抗体ＴＲＸ−５１８（ＴｏｌｅｒｘＲ；  Ｓｃｈａｅｒら，（２０１０）  １１（１２）：  １３７８−１３８６）、またはクローンＡＩＴ  ５１８Ｄ（ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＧＩＴＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ３の抗原結合性断片は、例えばＵＳ  ２０１３００７８２３４、ＷＯ２０１４１６０６２７またはＷＯ２０１１１０９４００に開示される抗Ｂ７−Ｈ３抗体クローンのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ４の抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１３０６７４９２、ＷＯ２００９０７３５３３またはＥＰ２９３４５７５に開示される抗Ｂ７−Ｈ４抗体クローン、例えばクローン２Ｈ９のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＢＴＬＡの抗原結合性断片は、例えば抗ＢＴＬＡ抗体クローン１Ｂ７、クローン２Ｇ８、クローン４Ｃ５（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン４Ｂ８（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、クローンＭＩＨ２６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＵＭＡＢ６１（ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３３０１０４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１Ｂ４（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン４４０２０５、クローン５Ｅ７（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢＴＬＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＬＡＧ−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＬＡＧ−３抗体クローン１７Ｂ４（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン３３３２１０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１４Ｌ６７６（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＢＭＳ−９８６０１６、またはＷＯ２０１５０４２２４６  Ａ１に記載される抗ＬＡＧ−３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＬＡＧ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ａ２ＡＲの抗原結合性断片は、例えば抗Ａ２ＡＲ抗体クローン７Ｆ６（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｋｏｓｈｉｂａら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９９）；  ５５：  ６１４−６２４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡ２ＡＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡの抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１５０９７５３６またはＵＳ２０１４０１０５９１２に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体、例えばクローン１３Ｆ３のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＶＩＳＴＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＴＩＭ−３の���原結合性断片は、例えば抗ＴＩＭ−３抗体クローンＦ３８−２Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン２Ｅ２（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｐｉｒｅｓ  ｄａ  Ｓｉｌｖａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ（２０１４）  ２（５）：  ４１０−４２２）、クローン６Ｂ６Ｅ２、クローン０２４（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）  クローン３４４８０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＥ−１８、クローンＨ−１９１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローン１３Ａ２２４（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＴＩＭ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、例えば抗ＰＤ−１抗体クローンＪ１１６、クローンＭＩＨ４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、クローン１９２１０６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＪ１１０、クローンＪ１０５（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローン１２Ａ７Ｄ７、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローン＃９Ｘ２１（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローン４Ｈ４Ｄ１（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ）、クローンＤ３Ｗ４Ｕ、クローンＤ３Ｏ４Ｓ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、クローンＲＭＰ１−３０、クローンＲＭＰ１−１４（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＥＨ１２．２Ｈ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン１０Ｂ１２２７（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＵＭＡＢ１９８、クローンＵＭＡＢ１９７（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ラムブロリズマブ、あるいはＷＯ  ２０１０／０７７６３４またはＷＯ  ２００６／１２１１６８に記載される他の抗ＰＤ−１抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＰＤ−１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＫＩＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＫＩＲ抗体クローン１−７Ｆ９（Ｒｏｍａｇｎｅら，  Ｂｌｏｏｄ（２００９）  １１４（１３）：  ２６６７−２６７７）、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５；  Ｓｏｌａら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ（２０１３）；  １：Ｐ４０）あるいはＵＳ  ２０１５／０３４４５７６またはＷＯ  ２０１４／０６６５３２に記載される抗ＫＩＲ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＫＩＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−２の抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−２抗体トラスツズマブ（ハーセプチン）、あるいはＷＯ  ２００３／００６５０９またはＷＯ  ２００８／０１９２９０に記載される抗ＨＥＲ−２抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥＲ−２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−３抗体クローンＭＭ−１２１（Ｌｙｕら，  Ｉｎｔ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ（２０１５）  ８（６）：  ６１４３−６１５６）、ＭＥＨＤ７９４５Ａ（Ｓｃｈａｅｆｅｒら，  Ｃａｎｃ��ｒ  Ｃｅｌｌ（２０１１）  ２０（４）：  ４７２−４８６）、ＡＭＧ  ８８８（Ｕ３−１２８７；  Ａｕｒｉｓｉｃｃｈｉｏら，  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１２）  ３（８）：  ７４４−７５８）あるいはＷＯ２００８／１００６２４またはＷＯ  ２０１３０４８８８３に記載される抗ＨＥＲ−３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥＲ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥＧＦＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ；ベクチビックス）、セツキシマブ（エルビタックス）、ニモツズマブ、マタズマブ（ＥＭＤ  ７２００）または抗体クローン０４８−００６（Ｓｏｇａｗａら，  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍ（２０１２）  ３３（７）：  ７１９−７２５）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥＧＦＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥｐＣＡＭの抗原結合性断片は、例えば抗ＥｐＣＡＭ抗体エドレコロマブ、ＩＮＧ−１、３６２２Ｗ４、またはアデカツムマブ（Ｍｕｎｚら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ（２０１０）  １０：４４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥｐＣＡＭ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３０抗体ブレンツキシマブ（ｃＡＣ１０）、クローンＳＧＮ−３０（Ｗａｈｌら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００２  ６２（１３）：３７３６−３７４２）、クローン５Ｆ１１（Ｂｏｒｃｈｍａｎｎら，  Ｂｌｏｏｄ（２００３）  １０２（１）：  ３７３７−３７４２）、あるいはＷＯ  １９９３０２４１３５またはＷＯ  ２００３０５９２８２に記載される抗ＣＤ３０抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３３抗体リンツズマブ（ＳＧＮ−３３）、ゲムツズマブ（ミロターグ）、またはクローンｈＰ６７．７（Ｓｉｅｖｅｒｓら，  Ｂｌｏｏｄ（１９９９）  ９３（１１）：  ３６７８−３６８４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３８の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブ（ダルザレックス）、ＳＡＲ６
５０９８４（Ｍａｒｔｉｎら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０１４）  ３２：５ｓ，（補遺；要約  ８５３２）またはＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）、あるいはＷＯ  ２００６０９９８７５またはＵＳ  ２０１００２８５００４に記載される抗ＣＤ３８抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブまたはＢＭ−ｃａ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄ（２０１３）  ２（２）：  １３０−１４３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２４抗体クローンｅＢｉｏＳＮ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＭＬ５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＷＯ  ２００８０５９４９１に記載される抗ＣＤ２４抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９０抗体クローン５Ｅ１０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１５抗体クローンＣ３Ｄ−１、Ｃａｒｂ−３（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、ＭＭＡ（Ｒｏｃｈｅ）またはＢＹ８７（Ａｂｃａｍ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ５２の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ５２抗体アレムツズマブ、クローンＨＩ１８６、またはクローンＹＴＨ３４．５（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ５２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１２５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１２５抗体オレゴボマブのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１２５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３４抗体クローン５６１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン５８１（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、またはクローン５Ｆ３（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１５−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１５−３抗体クローン２Ｆ１６（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＴＡ９９８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、クローン１Ｄ１（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、またはＭａｂ  ＡＲ２０．５（Ｑｉら，  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ（２００１）  ２０（５−６）：  ３１３−３２４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１５−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１９−９の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１９−９抗体クローン１１６−ＮＳ−１９−９（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、クローンＳＰＭ１１０、またはクローン１２１ＳＬＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１９−９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＥＡの抗原結合性断片は、例えば抗ＣＥＡ抗体ラベツズマブ、Ｃ２−４５（協和発酵キリン株式会社）あるいはＩｍａｋｉｉｒｅら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（２００４）  １０８：  ５６４−５７０またはＷＯ  ２０１１０３４６６０に開示される抗ＣＥＡ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＥＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９９の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９９抗体クローンＣ７Ａ（Ｍｏｒｉｃｏｌｉら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１４）  ４０８：  ３５−４５）またはクローン１２Ｅ７（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１１７の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１１７抗体クローンＣＫ６（Ｌｅｂｒｏｎら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ（２０１４）  １５（９）：  １２０８−１２１８）、またはクローン１０４Ｄ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１１７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３１の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３１抗体クローンＪＣ７０Ａ（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４４抗体ＰＦ−０３４７５９５２（Ｒｕｎｎｅｌｓら，  Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ（２０１０）；  ２７（３）：  １６８−１８０）、ＲＧ７３５６（Ｖｕｇｔｓら，  ＭＡｂｓ（２０１４）  ６（２）：  ５６７−５７５）、クローンＩＭ７、またはクローンＡ３Ｄ８（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１２３抗体ＣＳＬ３６２（Ｎｉｅｖｅｒｇａｌｌら，  Ｂｌｏｏｄ（２０１４）  １２３（８）：１２１８−１２２８）、ＣＳＬ３６０（Ｈｅら，  Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ（２０１５）  ５６（５）：  １４０６−１４１５）  ７３Ｇ（Ｊｉｎら，  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ（２００９）  ５（１）：  ３１−４２）  クローン６Ｈ６（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）またはＷＯ  ２０１４１３０６３５に記載される抗ＣＤ１２３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１３３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１３３抗体クローン６Ｂ３、クローン９Ｇ４、クローンＡＣ１４１（Ｗａｎｇら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（３）：  ２４１−２４９）、クローン６Ｂ６（Ｃｈｅｎら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（４）：  ３０５−３１０、クローンＡＣ１１３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＷＯ  ２０１１１４９４９３に記載される抗ＣＤ１３３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＡＢＣＢ５の抗原結合性断片は、例えば抗ＡＢＣＢ５抗体クローン５Ｈ３Ｃ６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡＢＣＢ５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４５抗体ＹＡＭＬ５６８（Ｇｌａｔｔｉｎｇら，  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ（２００６）  ４７（８）：  １３３５−１３４１）またはクローンＢＲＡ−５５（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４５結合性断片を含んでもよい。
【００９６】
本発明記載の二重特異性抗体の抗原結合性断片または二重特異性抗原結合性断片は、抗原に結合可能なポリペプチドの任意の断片であってもよい。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の抗原結合性領域を一緒に定義する少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３）を含む。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。
【００９７】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ  ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばディアボディ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９の図２を参照されたい。
【００９８】
当業者は、本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を設計し、そして調製することが可能である。
二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ，  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばＦａｂ断片をヒンジ領域ＳＨ基を通じて化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を生成してもよい。
【００９９】
二重特異性抗体を産生するための他の方法には、例えばＤ．  Ｍ．およびＢａｓｔ，  Ｂ．  Ｊ．  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるように、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。
【０１００】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２），  第４０章：  二重特異性抗体の産生：ディアボディおよびタンデムｓｃＦｖ（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または  Ｆｒｅｎｃｈ，  二重特異性抗体作製法，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ２０００；  ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生してもよい。例えば、２つの抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわちＣＴＬＡ−４に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、そして抗原結合性断片間に適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製してもよい。その後、組換え二重特異性抗体を、適切な宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において構築物を発現させる（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで）ことによって産生してもよく、そして次いで、任意に、発現した組換え二重特異性抗体を精製してもよい。
【０１０１】
非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら，  Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；  Ｂａｒｂａｓら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒら  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４（１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。
【０１０２】
本発明記載の抗体は、好ましくはＣＴＬＡ−４に対する特異的結合を示す。ターゲット分子に特異的に結合する抗体は、好ましくは、他のターゲットに結合するよりもより高いアフィニティで、および／またはより長い期間、ターゲットに結合する。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８またはＬＡＧ−３の１またはそれより多くに対してよりも、ＣＴＬＡ−４に対して、より高いアフィニティで結合可能である。
【０１０３】
本発明の態様において、抗体、断片またはポリペプチドは、ＣＤ２８、例えばヒトＣＤ２８に実質的に結合を示さない。先行技術の抗体（例えば抗体クローンＬ３Ｄ１０）は、高濃度でＣＤ２８への結合を示すため（例えば図５を参照されたい）、これはＣＴＬＡ−４への結合が可能な抗体に関する予期せぬ特徴である。好適には、こうした抗体は、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ２８／ＣＤ８６シグナル伝達を阻害／防止することなく、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０またはＣＴＬＡ−４／ＣＤ８６シグナル伝達を阻害／防止可能である。
【０１０４】
「実質的に結合しない」は、本明細書において、陰性対照抗体（例えばＣＤ２８に関連しないターゲットに対して向けられる抗体、またはＣＤ２８に結合しないことが知られる抗体）による結合レベルよりも有意に高くはない結合を指す。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいてまたは所定の濃度で、陰性対照抗体（例えばＣＤ２８に関連しないターゲットに対して向けられる抗体、またはＣＤ２８に結合しないことが知られる抗体）によって示されるＣＤ２８への結合の≦５００％、≦４００％、≦３００％、≦２５０％、≦２００％、≦１５０％、または≦１００％である、ＣＤ２８（例えばヒトＣＤ２８）への結合を示してもよい。
【０１０５】
所定の分子への本発明記載の抗体の結合は、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー、フローサイトメトリーを含む当業者に周知の技術によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって、測定可能である。こうした分析を通じて、所定のターゲットへの結合を測定し、そして定量化してもよい。いくつかの態様において、結合は、所定のアッセイにおいて検出される反応であってもよい。
【０１０６】
１つの態様において、関連しないターゲットへの抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーによって、またはＲＩＡによって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体が、別のターゲット分子に対する抗体のＫＤよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫＤで、ＣＴＬＡ−４に結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、任意に、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。
【０１０７】
本発明記載の抗体は、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１．５ｎＭ、≦１．４ｎＭ、≦１．３ｎＭ、≦１．２５ｎＭ、≦１．２４ｎＭ、≦１．２３ｎＭ、≦１．２２ｎＭ、≦１．２１ｎＭ、≦１．２ｎＭ、≦１．１５ｎＭ、≦１．１ｎＭ  ≦１．０５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦９００ｐＭ、≦８００ｐＭ、≦７００ｐＭ、≦６００ｐＭ、≦５００ｐＭの１つの解離定数（ＫＤ）を有する。ＫＤは約０．１〜約３ｎＭの範囲であてもよい。抗体のそのターゲットに対する結合アフィニティは、しばしば、解離定数（ＫＤ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えばＨｅａｒｔｙら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１２）  ９０７：４１１−４４２を参照されたい）、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（例えばＬａｄら，  （２０１５）  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：  ４９８−５０７を参照されたい）、または抗体のＦａｂ型および抗原分子で行う放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定してもよい。
【０１０８】
本発明記載の抗体は、参照抗ＣＴＬＡ−４抗体による結合のアフィニティよりも高いアフィニティまたはこれと類似のアフィニティで、ＣＴＬＡ−４（例えばヒトＣＴＬＡ−４またはマウスＣＴＬＡ−４）に対する結合を示す。所定のターゲットに対する、本発明記載の抗体および参照抗体の結合の相対アフィニティは、例えば本明細書に記載するようなＥＬＩＳＡによって決定可能である。
【０１０９】
本発明記載の抗体は、抗体クローンＬ３Ｄ１０（例えばＭａｙら，  Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５：１１１４−１１２０に記載される）による結合のアフィニティよりも高いアフィニティまたはこれと類似のアフィニティで、ヒトＣＴＬＡ−４に対する結合を示してもよい。いくつかの態様において、抗体は、マウスＣＴＬＡ−４に対する結合が可能な参照抗体よりも高いアフィニティまたはこれと類似のアフィニティで、マウスＣＴＬＡ−４に対する結合を示してもよい。
【０１１０】
本明細書において、参照抗体に比較して、所定のターゲット分子に関して、「より高いアフィニティ」を示す抗体は、ターゲット分子に対する参照抗体の結合強度に比較した際に、より強い強度で、そのターゲット分子に結合する。所定のターゲット分子に関する抗体のアフィニティを、定量的に決定してもよい。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質に対する参照抗体よりも高いアフィニティを示す抗体は、参照抗体によるそのターゲットの結合に関する値未満のＫＤ値またはＥＣ５０値でターゲット分子に結合してもよい。
【０１１１】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に関する参照抗体のアフィニティの１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い、ＣＴＬＡ−４に関するアフィニティを有してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に関する参照抗体の対応するＫＤ値またはＥＣ５０値の０．９９倍またはそれ未満、０．９５倍またはそれ未満、０．９倍またはそれ未満、０．８５倍またはそれ未満、０．８倍またはそれ未満、０．７５倍またはそれ未満、０．７倍またはそれ未満、０．６５倍またはそれ未満、０．６倍またはそれ未満、０．５５倍またはそれ未満、０．５倍またはそれ未満のＫＤ値またはＥＣ５０値でＣＴＬＡ−４に結合する。
【０１１２】
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＥＣ５０＝５００ｐＭまたはそれ未満、より好ましくは、≦４００ｐＭ、≦３００ｐＭ、≦２００ｐＭ、≦１５０ｐＭ、≦１００ｐＭ、≦９０ｐＭ、≦８０ｐＭ、≦７５ｐＭ、≦７０ｐＭ、≦６５ｐＭ、≦６０ｐＭ、≦５５ｐＭ、≦５０ｐＭの１つの結合アビディティで、ヒトまたはマウスＣＴＬＡ−４に結合する。本明細書において、結合アビディティは、抗体：ターゲット複合体を形成する、抗体のターゲット分子への結合の強度を指す。高アビディティで結合する抗体は、ターゲット分子により強く結合し、そしてしたがって、安定な抗体：ターゲット複合体を形成する。ターゲット分子への抗体の結合アビディティを、例えば、本明細書に記載するようなＥＬＩＳＡによって分析し、そして定量化してもよい。
【０１１３】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の間の相互作用を阻害／防止してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の間の相互作用を阻害／防止してもよく、そしてＣＴＬＡ−４およびＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。
【０１１４】
ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止を、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用と関連する反応の分析によって推測してもよい。本発明記載の抗体のＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の相対阻害／防止を、例えば本明細書に記載するように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定してもよい。
【０１１５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体、例えば抗体クローンＬ３Ｄ１０による、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止より高いかまたはそれと同等の度合いまで、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体による、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止よりも、１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いまで、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。
【０１１６】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＤ２８およびＣＤ８０の間の相互作用を阻害／防止しなくてもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＤ２８およびＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止しなくてもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＤ２８およびＣＤ８０の間の相互作用を阻害／防止しなくてもよく、そしてＣＤ２８およびＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止しなくてもよい。
【０１１７】
ＣＤ２８およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ＣＤ２８およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用と関連した反応を測定することによって、分析してもよい。
【０１１８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体の存在下で、ＣＤ２８およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用に関連する反応は、抗体の非存在下での反応、あるいは陰性対照抗体（すなわち関連しないターゲットに対して向けられる抗体、あるいはＣＤ２８、ＣＤ８０またはＣＤ８６に結合しないことが知られる抗体）の存在下での反応の≧７０％、≧７５％、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９５％、または≧９９％であってもよい。
【０１１９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体、例えば抗体クローンＬ３Ｄ１０による、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止より高いかまたはそれと等しい度合いまで、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体による、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用の阻害／防止の１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いまで、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０またはＣＤ８６の間の相互作用を阻害／防止してもよい。
【０１２０】
本発明記載の抗体は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、Ｔ細胞の活性化を増加させる。Ｔ細胞活性化増加を、所定のアッセイにおける、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞によるＩＬ−２発現／産生、またはＩＦＮγ発現／産生の増加の１またはそれより多くの検出によって推測してもよい。Ｔ細胞増殖は、当業者に周知の方法によって、例えばトリチウム化チミジンの取り込みを測定することによって、またはＣＦＳＥ色素希釈によって、例えばＡｎｔｈｏｎｙら，  ２０１２  Ｃｅｌｌｓ  １：１２７−１４０に記載されるように、評価してもよい。ＩＬ−２および／またはＩＦＮγ発現／産生は、例えば当業者に周知の核酸／抗体に基づく方法、例えばｑＲＴ−ＰＣＲ、ウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴによって、またはレポーターに基づく方法によって、分析してもよい。
【０１２１】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体（例えばＬ３Ｄ１０）と類似の度合いまで、またはより高い度合いまで、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させてもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＣＴＬＡ−４に結合可能な参照抗体に反応したＴ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の増加の１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いまで、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させてもよい。
【０１２２】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、腫瘍増殖または癌進行を阻害可能であってもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、抗癌活性を示してもよい。いくつかの態様において、腫瘍増殖または癌進行の阻害は、ｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。「阻害」は、腫瘍増殖の減少または制御、あるいは癌細胞数の減少または制御であってもよい。腫瘍増殖または癌進行の阻害を、例えば本明細書に記載するような癌の動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価してもよい。
【０１２３】
本発明記載の抗体は、該抗体が結合する抗原の生物学的活性を阻害するかまたは減少させる「アンタゴニスト」抗体であってもよい。ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０および／またはＣＤ８６の間の相互作用のブロッキングは、ＣＴＬＡ−４によって仲介される免疫阻害性シグナル伝達経路を阻害することによって、Ｔ細胞機能の回復を補助する。
【０１２４】
本発明はまた、本発明記載の抗原結合性断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲ構造および操作は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｄｏｔｔｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説される。
【０１２５】
ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域およびシグナル伝達領域に連結された抗原結合性領域を含む。任意のヒンジ領域は、抗原結合性領域および細胞膜アンカー領域間に分離を提供してもよく、そして柔軟性リンカーとして作用してもよい。
【０１２６】
ＣＡＲの抗原結合性領域は、ＣＡＲがターゲティングする抗原に特異的な抗体、またはターゲットに結合可能である他の剤の抗原結合性領域に基いてもよい。例えば、ＣＡＲの抗原結合性ドメインは、ターゲットタンパク質に特異的に結合する抗体の、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列または全長軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列を含んでもよい。ＣＡＲの抗原結合性ドメインは、他のタンパク質：タンパク質相互作用、例えばリガンド：受容体結合に基づいて抗原をターゲティングしてもよく；例えば、ＩＬ−１３に基づく抗原結合性ドメインを用いて、ＩＬ−１３Ｒα２をターゲティングするＣＡＲが開発されてきている（例えば、Ｋａｈｌｏｎら  ２００４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６４（２４）：  ９１６０−９１６６を参照されたい）。
【０１２７】
本発明のＣＡＲは、ＣＴＬＡ−４結合性領域を含む。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、本発明記載の抗体／抗原結合性断片を含むかまたはこれらからなる抗原結合性領域を含む。
【０１２８】
本発明のＣＡＲのＣＴＬＡ−４結合性領域は、任意の適切な形式、例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂ等で提供されてもよい。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲのＣＴＬＡ−４結合性領域は、ＣＴＬＡ−４結合性ｓｃＦｖを含むかまたはこれからなる。
【０１２９】
細胞膜アンカー領域を、ＣＡＲの抗原結合性領域およびシグナル伝達領域の間で提供する。細胞膜アンカー領域は、抗原結合性領域が細胞外空間にあり、そしてシグナル伝達領域が細胞内部にあるように、ＣＡＲを発現している細胞の細胞膜へのＣＡＲのアンカーリングを提供する。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の１つの膜貫通領域アミノ酸配列を含むか、該配列からなるか、または該配列に由来するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる細胞膜アンカー領域を含む。
【０１３０】
本明細書において、参照アミノ酸配列「に由来する」領域は、参照配列に、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１３１】
ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能にする。ＣＡＲシグナル伝達領域は、リン酸化およびＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化のための免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含んでもよい。他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域もまた、ＣＡＲにおいて使用されてきており、例えば、ＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメイン（Ｈａｙｎｅｓら，  ２００１  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１）：１８２−１８７）がある。ＣＤ３−ζの細胞内ドメイン由来のシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、しばしば、第一世代ＣＡＲと称される。
【０１３２】
ＣＡＲのシグナル伝達領域はまた、ターゲットタンパク質への結合に際して、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を促進するため、共刺激分子のシグナル伝達領域由来の共刺激配列も含んでもよい。適切な共刺激分子には、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７が含まれる。さらなる共刺激配列を含むシグナル伝達領域を有するＣＡＲは、しばしば、第二世代ＣＡＲと称される。
【０１３３】
いくつかの場合、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激を提供するよう操作される。例えば、ＣＤ２８共刺激に関連するシグナル伝達は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路を優先的に活性化し、一方、４−１ＢＢ仲介性シグナル伝達は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を通じる。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達領域は、ときに、１より多い共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含有する。多数の共刺激配列を含むシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、しばしば、第三世代ＣＡＲと称される。
【０１３４】
いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７の１またはそれより多くの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、該配列からなるかまたは該配列に由来する、１またはそれより多い共刺激配列を含む。
【０１３５】
任意のヒンジ領域は、抗原結合性ドメインおよび膜貫通ドメイン間の分離を提供してもよく、そして柔軟性リンカーとして作用してもよい。ヒンジ領域は、結合部分が異なる方向を向くことを可能にする、柔軟性ドメインであってもよい。ヒンジ領域は、免疫グロブリンのＩｇＧ１またはＣＨ２ＣＨ３領域に由来してもよい。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、免疫グロブリンのＩｇＧ１またはＣＨ２ＣＨ３領域のヒンジ領域のアミノ酸配列を含むか、該配列からなるか、または該配列に由来するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるヒンジ領域を含む。
【０１３６】
ＣＡＲは、Ｔ細胞強度、特異性および安全性をさらに増進させるため、共刺激性リガンド、キメラ共刺激性受容体またはサイトカインと組み合わされてもよい（本明細書に特に援用される、Ｓａｄｅｌａｉｎら，  キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）設計の基本原理。  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１３  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：  ３８８−３９８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１２−０５４８）。
【０１３７】
本発明記載のＣＡＲを含む細胞もまた提供する。本発明記載のＣＡＲを用いて、Ｔ細胞を生成してもよい。Ｔ細胞へのＣＡＲの操作は、形質導入および拡大のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養中に実行してもよく、例えば養子Ｔ細胞療法のためのＴ細胞の拡大中に起こる。
【０１３８】
いくつかの側面において、抗体は、クローン２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌ、あるいは２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌの変異体である。２Ｃ８および２Ｃ８＿ｇｌは、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１３９】
【化８】
2019519208.tif 000010
【０１４０】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
本発明記載の抗体は、２Ｃ８または２Ｃ８＿ｇｌのＣＤＲ、あるいは配列番号１および３；または２および４の１つを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列のうち１または２または３または４が異なってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列のうち１つまたは２つに、１つまたは２つのアミノ酸置換を有してもよい。
【０１４１】
抗ＣＴＬＡ−４クローンのＶＨおよびＶＬ鎖のアミノ酸配列を図１および２に示す。コードヌクレオチド配列を図３に示す。
軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持してもよい。適切なフレームワーク領域は、当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＆  Ｇ．  Ｌｅ：ｆｒａｎｃ  （２００１）  ”Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【０１４２】
本明細書において、抗体は、配列番号１および３；または２および４のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列の１またはそれより多く、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに高い割合の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ鎖を有してもよい。
【０１４３】
例えば、本発明記載の抗体には、ＣＴＬＡ−４に結合し、そして配列番号１〜４の１つのＶＨまたはＶＬ鎖アミノ酸配列に、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨまたはＶＬ鎖を有する抗体が含まれる。
【０１４４】
本発明記載の抗体は、検出可能に標識されるか、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体を、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識してもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が含まれる。結合部分を検出可能標識で直接標識してもよいし、または間接的に標識してもよい。例えば、結合部分は、それ自体標識されている別の抗体によって検出可能な、非標識抗体であってもよい。あるいは、第二の抗体が該抗体に結合したビオチンを有してもよく、そしてビオチンに対する標識ストレプトアビジンの結合を用いて、第一の抗体を間接的に標識する。
【０１４５】
核酸／ベクター
本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、核酸は、例えば他の核酸または天然存在生物学的材料から精製されるかまたは単離されている。
【０１４６】
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲをコードする核酸を含むベクターも提供する。
本発明記載の核酸および／またはベクターは、細胞、例えば初代ヒト免疫細胞内に導入するために提供されてもよい。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えばガンマレトロウイルスベクター（例えばネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば酵母人工染色体）、例えばどちらも本明細書にその全体が援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ，  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ２０１６  ４，  ９に記載されるようなものが含まれる。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、または単純ヘルペスウイルスベクターであってもよい。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターはｐＥＬＮＳであってもよいし、またはｐＥＬＮＳに由来してもよい。いくつかの態様において、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をコードするベクターであってもよい。
【０１４７】
抗体／断片／ＣＡＲを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲを含むかまたは発現する細胞も提供する。本発明記載の核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞もまた提供する。
【０１４８】
細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、または非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯類目の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【０１４９】
いくつかの態様において、細胞は、ヒト被験体由来であってもよいし、またはヒト被験体から得られていてもよい。
細胞は免疫細胞であってもよい。細胞は、造血起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ  ＣＤ３ε  ＣＤ３ζまたはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαまたはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現してもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
【０１５０】
細胞が本発明記載のＣＡＲを含むＴ細胞である場合、細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞と称されてもよい。
いくつかの態様において、細胞は抗原特異的Ｔ細胞である。本明細書のいくつかの態様において、「抗原特異的」Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的である抗原または前記抗原を発現する細胞に反応してＴ細胞の特定の機能特性を示す細胞である。いくつかの態様において、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞と関連する機能特性である。いくつかの態様において、抗原特異的Ｔ細胞は、以下の特性の１またはそれより多くを示してもよい：例えばＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に対する、細胞傷害性；例えばＴ細胞が特異的である抗原またはＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に反応した、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ−２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュリシン発現、および／またはＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現。いくつかの態様において、Ｔ細胞が特異的である抗原は、ウイルス、例えばエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。
【０１５１】
本発明はまた、本発明記載の核酸またはベクターを含む細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲを発現する細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞に導入する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に適した条件下で、細胞を培養する工程をさらに含む。いくつかの態様において、方法をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行う。
【０１５２】
いくつかの態様において、本発明記載の単離核酸またはベクターの細胞内への導入は、形質導入、例えばレトロウイルス形質導入を含む。したがって、いくつかの態様において、単離核酸またはベクターは、ウイルスベクターに含まれるか、またはベクターはウイルスベクターである。いくつかの態様において、方法は、本発明記載の核酸またはベクターを、エレクトロポレーションによって、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｋｏｈら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  −  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  （２０１３）  ２，  ｅ１１４に記載されるように、導入する工程を含む。
【０１５３】
本発明はまた、本発明記載の細胞を産生するための方法によって得られるかまたは得られうる細胞も提供する。
検出法
本明細書記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞を、ＣＴＬＡ−４に対する抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の結合を伴う方法で用いてもよい。こうした方法は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の結合した複合体の検出を伴ってもよい。こうしたものとして、１つの態様において、ＣＴＬＡ−４を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＣＴＬＡ−４の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【０１５４】
サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む適切な方法形式は、当該技術分野に周知である。該方法は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲもしくは細胞、またはＣＴＬＡ−４、あるいは両方を、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識で標識することを伴ってもよい。ＣＴＬＡ−４発現は、例えば生検によって得られた組織試料の、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定してもよい。
【０１５５】
この種の方法は、ＣＴＬＡ−４またはＣＤ８０またはＣＤ８６の検出およびまたは定量化を必要とする疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、患者試料に対して、または患者試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであってもよい。
【０１５６】
こうした方法は、患者試料に存在するＣＴＬＡ−４の量を決定することを伴ってもよい。該方法は、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程をさらに含んでもよい。他の診断試験を、本明細書に記載するものと組み合わせて用いて、診断または予後診断の正確さを増進するか、あるいは本明細書に記載する試験を用いることによって得られる結果を確認してもよい。
【０１５７】
癌細胞は、ＣＴＬＡ−４の発現を上方制御して、腫瘍微小環境に浸潤するいかなるＴ細胞上の阻害性ＣＴＬＡ−４受容体の活性化も可能にし、そしてそれによってその活性を抑制することによって、免疫抑制環境を生成するために、ＣＴＬＡ−４経路を利用しうる。ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、多くの異なる癌タイプにおいて立証されてきており、そして高いＣＴＬＡ−４発現はまた、劣った臨床転帰に関連付けられてきている。
【０１５８】
患者試料に存在するＣＴＬＡ−４またはＣＤ８０またはＣＤ８６のレベルは、患者が抗ＣＴＬＡ−４抗体での治療に反応しうることを示しうる。試料中の高レベルのＣＴＬＡ−４またはＣＤ８０またはＣＤ８６の存在を用いて、抗ＣＴＬＡ−４抗体での治療のために患者を選択してもよい。したがって、本発明の抗体を用いて、抗ＣＴＬＡ−４療法を用いた治療のための患者を選択してもよい。
【０１５９】
ＣＴＬＡ−４の試料における検出を、患者におけるＴ細胞機能不全障害または癌性状態の診断、癌性状態に対する素因の診断の目的のために、あるいは癌性状態の予後を提供する（予言する）ために、用いてもよい。診断または予後は、存在する（以前診断された）良性または悪性であってもよい癌性状態に関連してよく、推測される癌性状態に関連してもよく、あるいは患者における癌性状態（以前未診断であってもよい）に関してスクリーニングすることに関連してもよい。
【０１６０】
１つの態様において、Ｔ細胞消耗の度合いおよび疾患状態の重症度を示すために、ＣＤ８＋  Ｔ細胞上のＣＴＬＡ−４発現レベルを検出してもよい。
１つの態様において、疾患状態、例えば感染、組織炎症または癌の存在または重症度を示すために、例えば抗原提示細胞または腫瘍細胞上の、ＣＤ８０またはＣＤ８６発現のレベルを検出してもよい。
【０１６１】
任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。
【０１６２】
本発明記載の方法は、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験を含むよう意図される。
【０１６３】
療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチド、ならびにこうした剤を含む組成物を、医学的治療の方法において使用するために提供してもよい。治療を、治療を必要とする疾患または状態を有する被験体に提供してもよい。疾患または状態は、癌に関連するＴ細胞機能不全障害、または癌、または感染と関連するＴ細胞機能障害、または感染を含む、Ｔ細胞機能不全障害の１つであってもよい。
【０１６４】
Ｔ細胞機能不全障害は、正常Ｔ細胞機能が損なわれて、例えば外因性病原体、例えば微生物、細菌およびウイルスによる感染によって生じる、あるいはある型の癌におけるもの（例えば腫瘍関連抗原の型）などのある疾患状態にある宿主によって生成される、病原性抗原に対する被験体の免疫反応の下方制御を引き起こす疾患または状態であってもよい。
【０１６５】
Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを含んでもよい。Ｔ細胞消耗は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞が、増殖できないか、または抗原刺激に反応してＴ細胞エフェクター機能、例えば細胞傷害性およびサイトカイン（例えばＩＦＮγ）分泌を発揮できない状態を含む。消耗Ｔ細胞はまた、ＣＴＬＡ−４の持続発現によって特徴付けられることも可能であり、この場合、ＣＴＬＡ−４：ＣＤ８０またはＣＴＬＡ−４：ＣＤ８６の相互作用のブロッキングはＴ細胞消耗を逆転させ、そして抗原特異的Ｔ細胞反応を回復させることも可能である。
【０１６６】
Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、または感染に対する有効な免疫反応を開始することが出来ない状態として現れうる。感染は、慢性、持続性、不顕性または緩慢であってもよく、そして細菌、ウイルス、真菌または寄生虫感染の結果であってもよい。こうしたものとして、細菌、ウイルスまたは真菌感染を有する患者に、治療を提供してもよい。細菌感染の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）での感染が含まれる。ウイルス感染の例には、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎での感染が含まれる。
【０１６７】
Ｔ細胞機能不全障害は、癌、例えば腫瘍免疫エスケープと関連してもよい。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、そして免疫反応を誘導可能な腫瘍関連抗原を発現する。ＣＴＬＡ−４を通じたＴ細胞活性化の負の制御の阻害は、いくつかの研究において、癌の有望な治療であることが示されてきており、これらは例えば、ＧｒｏｓｓｏおよびＫｕｎｋｅｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１３）１３：５に概説されている。
【０１６８】
Ｔ細胞機能不全障害、例えばＴ細胞消耗の徴候がない場合もまた、癌を治療可能であるが、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞の使用は、被験体がＣＴＬＡ−４シグナル伝達を抑制し、そして限定された障害、回避または腫瘍免疫エスケープの誘導を伴って、有効な免疫反応を開始することを可能にする。こうした治療において、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞は、腫瘍免疫エスケープの発展の防止を伴う、癌の治療を提供しうる。
【０１６９】
ＣＴＬＡ−４を過剰発現する癌もまた、治療可能である。例えば、ＣＴＬＡ−４を過剰発現するこうした腫瘍細胞を、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）による、または抗ＣＴＬＡ−４抗体−薬剤コンジュゲートを用いる、抗ＣＴＬＡ−４抗体での治療によって、直接殺してもよい。
【０１７０】
治療は、Ｔ細胞機能不全障害の防止、例えば感染の防止、あるいは癌の発展または進行の防止を目的としてもよい。こうしたものとして、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチドを用いて、薬学的組成物または薬剤を配合して、そして被験体を疾患状態の発展に対して予防的に治療してもよい。これは、疾患状態の症状の開始前に行ってもよく、そして／または感染または癌発展のリスクがより高いと見なされる被験体に対して行ってもよい。
【０１７１】
治療は、ワクチン、例えばＴ細胞ワクチンとの併用療法を含んでもよく、これは、同時、別個または連続療法を伴ってもよいし、あるいは単一組成物中のワクチンおよび抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの組み合わせ投与であってもよい。この背景において、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、ワクチンに対するアジュバントとして提供してもよい。消耗Ｔ細胞の限定された増殖能は、Ｔ細胞免疫療法の失敗の主な理由とされてきており、そしてＴ細胞消耗をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な剤の組み合わせは、Ｔ細胞免疫療法の有効性を改善するための潜在的な戦略である（Ｂａｒｂｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｖｏｌ  ４３９，  Ｎｏ．９  ｐ６８２−６８７  Ｆｅｂ  ２００６）。
【０１７２】
抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に利益を示すために十分な量である。投与する実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療する疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０１７３】
薬学的に有用な組成物および薬剤の配合
本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチドは、臨床的使用のための薬学的組成物として配合してもよく、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。
【０１７４】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のためにも方法を提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを単離し；そして／または本明細書に記載するような単離抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１またはそれより多い工程を含んでもよい。
【０１７５】
例えば、本発明のさらなる側面は、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む、前記方法に関する。
【０１７６】
感染
感染は、いかなる感染または感染性疾患、例えば細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫感染であってもよい。いくつかの態様において、慢性／持続性感染、例えばこうした感染がＴ細胞機能不全またはＴ細胞消耗に関連する場合の感染を治療することが特に望ましい可能性もある。
【０１７７】
Ｔ細胞消耗が、多くの慢性感染（ウイルス、細菌および寄生虫感染を含む）中に、ならびに癌において（Ｗｈｅｒｒｙ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．  １２，  Ｎｏ．６，  ｐ４９２−４９９，  ２０１１年６月）生じるＴ細胞機能不全状態であることがよく確立されている。
【０１７８】
感染または感染性疾患は、ＣＴＬＡ−４が上方制御されるものであってもよい。
治療可能な細菌感染の例には、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｅｒａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルウィナ属（Ｅｒｗｉｎａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ミコバクテリア（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が含まれる。例えば、細菌感染は、敗血症または結核であってもよい。
【０１７９】
Ｋｉｒｍａｎら，  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ（１９９６）６７（８）：３７８６−３７９２は、マイコバクテリア感染によって誘導される免疫反応を、ＣＴＬＡ−４遮断が増進する能力を記載し、そしてＲｏｗｅら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１２８：ｅ４７１−ｅ４７８は、ＣＴＬＡ−４の遮断による、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）による感染に対するＴ細胞反応の増大を記載する。
【０１８０】
治療可能なウイルス感染の例には、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルスおよびヒトパピローマウイルスが含まれる。
【０１８１】
ＨＩＶ感染中、ＣＴＬＡ−４発現は、ウイルス負荷と正に相関することが示されてきており、そしてＣＴＬＡ−４遮断は、ＨＩＶ特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖、ならびにＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を回復させることが示されてきている（Ｋａｕｆｍａｎｎら  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００７）８：１２４６−１２５２）。ＣＴＬＡ−４の遮断はまた、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０のＨＩＶ特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞による産生を減少させるが、ＨＩＶ特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ産生を増加させる（Ｅｌｒｅｆａｅｉら  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２００９）４（１２）：ｅ８１９４）。
【０１８２】
慢性ウイルス感染、例えばＬＣＭＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、およびＨＩＶによって引き起こされるものは、一般的に、阻害性受容体の発現など、免疫クリアランスを逃れる機構を伴う。Ｓｃｈｕｒｉｃｈら（２０１１）５３（５）：１４９４−１５０３は、慢性ＨＢＶ感染を伴う患者において、ＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＴＬＡ−４発現の上方制御を記載し、そしてこれがウイルス負荷と相関することを記載する。
【０１８３】
治療可能な真菌感染の例には、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種およびヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種による感染が含まれる。真菌感染は真菌敗血症またはヒストプラズマ症であってもよい。真菌感染を仲介する際のＴ細胞消耗の重要性は、例えばＣｈａｎｇら  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  （２０１３）  １７：Ｒ８５、およびＬａｚａｒ−Ｍｏｌｎａｒら  ＰＮＡＳ  （２００８）  １０５（７）：  ２６５８−２６６３によって確立されてきている。
【０１８４】
治療可能な寄生虫感染の例には、プラスモジウム属種（例えば熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ネズミマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、またはプラスモジウム・シャバウディ・シャバウディ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｃｈａｂａｕｄｉ  ｃｈａｂａｕｄｉ））による感染が含まれる。寄生虫感染は、例えばマラリア、リーシュマニア症およびトキソプラズマ症などの疾患であってもよい。
【０１８５】
癌
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であってもよい。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、網（ｏｍｅｎｔｕｍｅ）、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。
【０１８６】
いくつかの態様において、治療されうる癌は、結腸、直腸、上咽頭、子宮頸、中咽頭、胃、肝臓、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、喉、唾液腺、洞、咽頭、喉頭、前立腺、肺、膀胱、皮膚、腎臓、卵巣または中皮からなる群より選択される組織の癌であってもよい。
【０１８７】
治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。
【０１８８】
特定の態様において、治療されうる癌は、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌または黒色腫（例えば進行性黒色腫）であってもよい。
いくつかの態様において、治療されうる癌は、結腸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、上咽頭癌、子宮頸癌、中咽頭癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔癌、喉頭癌、前立腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黒色腫、進行性黒色腫、腎細胞癌、卵巣癌または中皮腫であってもよい。
【０１８９】
養子Ｔ細胞移入療法
本発明の態様において、治療法または予防法は、免疫細胞の養子細胞移入を含んでもよい。養子Ｔ細胞移入療法は、一般的に、典型的には血液試料を抜き取ることによって、白血球を被験体から除去し、そこから白血球を分離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで拡大し、そして同じ被験体または異なる被験体のいずれかに戻すプロセスを指す。治療は、典型的には、被験体において必要とされるＴ細胞集団の活性型の量／濃度を増加させることを目的とする。こうした治療は、Ｔ細胞消耗を経験している被験体において有益でありうる。
【０１９０】
Ｔ細胞消耗機構をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な抗体は、Ｔ細胞活性を増進させ、そしてＴ細胞拡大を促進する手段を提供する。
免疫チェックポイント受容体（例えばＣＴＬＡ−４）に対して向けられる抗体もまた、例えば特定の関心対象のＴ細胞集団の拡大のための、Ｔ細胞拡大法において有用でありうる。例えば、抗体は、（例えば望ましくない特性を有するＴ細胞サブセットよりも）望ましい特性を有するＴ細胞サブセットを優先的に拡大するための、Ｔ細胞拡大法において有用でありうる。
【０１９１】
したがって、本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法を提供する。
【０１９２】
該方法は、任意に、以下の工程：被験体から血液試料を採取する工程；血液試料からＴ細胞を単離する工程；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養中でＴ細胞を培養し（ここで該細胞を抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させてもよい）、Ｔ細胞の拡大集団を収集する工程；Ｔ細胞をアジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する工程；拡大Ｔ細胞を被験体に投与する工程の１またはそれより多くを含んでもよい。
【０１９３】
したがって、本発明のいくつかの側面において、Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、治療が必要な被験体から血液試料を得て、Ｔ細胞集団が拡大されるように、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの存在下で、血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして拡大されたＴ細胞を、治療が必要な被験体に投与する工程を含む、前記治療法を提供する。
【０１９４】
治療が必要な被験体からＴ細胞を得てもよく、そして単離し、そして／または精製してもよい。これらはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞集団であってもよい。Ｔ細胞は、Ｔ細胞消耗を経験している集団に相当してもよく、そして任意にＣＴＬＡ−４の上方制御された発現を有してもよい。
【０１９５】
培養中、Ｔ細胞が望ましい細胞数に拡大することを可能にする条件下で、そしてそれに適した期間、Ｔ細胞を、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させてもよい。適切な期間の後、Ｔ細胞を採取し、任意に濃縮してもよく、そして適切なキャリアー、アジュバントまたは希釈剤と混合し、そして被験体の体内に戻してもよい。被験体は、こうした療法の１またはそれより多い周期を経てもよい。
【０１９６】
Ｔ細胞拡大法は、当該技術分野に周知であり、例えばＫａｌａｍａｓｚら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００４  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；  ２７（５）：４０５−１８；  Ｍｏｎｔｅｓら，  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５  Ｎｏｖ；１４２（２）：２９２−３０２；  ＷｏｅｌｆｌおよびＧｒｅｅｎｂｕｒｇ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９  ｐ９５０−９６６  ２７  Ｍａｒｃｈ  ２０１４；  ＴｒｉｃｋｅｔｔおよびＫｗａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｖｏｌ．  ２７５，  Ｉｓｓｕｅｓ  １−２，  １  Ａｐｒｉｌ  ２００３，  ｐ２５１−２５５；  Ｂｕｔｌｅｒら  ＰＬｏＳＯＮＥ  ７（１）  １２  Ｊａｎ  ２０１２に記載されるものがある。
【０１９７】
例えば、Ｔ細胞拡大の方法は、Ｔ細胞を刺激する工程を含んでもよい。刺激は、例えば抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８での処理による、非特異的刺激を含んでもよい。Ｔ細胞の刺激は、例えば抗原（例えばＭＨＣと複合体を形成した、例えば抗原提示細胞によって発現される）での処理による、特異的刺激を含んでもよい。Ｔ細胞拡大の方法は、Ｔ細胞増殖／拡大を促進するための１またはそれより多い因子の存在下での培養を含んでもよい。例えば、Ｔ細胞拡大の方法は、ＩＬ−２の存在下での培養を含んでもよい。
【０１９８】
本発明において、養子細胞移入（ＡＣＴ）は、被験体内に細胞または細胞集団を導入し、そして／または被験体における細胞または細胞集団の頻度を増加させることを目的として行ってもよい。
【０１９９】
Ｔ細胞の養子移入は、例えば、本明細書にその全体が援用される、ＫａｌｏｓおよびＪｕｎｅ  ２０１３，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９（１）：  ４９−６０において記載される。ＮＫ細胞の養子移入は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｄａｖｉｓら  ２０１５，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  ２１（６）：  ４８６−４９１に記載される。
【０２００】
細胞は、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はウイルス特異的Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶに特異的である。
【０２０１】
本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは提示する方法であって、被験体から得た少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、任意に、修飾した少なくとも１つの細胞を拡大し、そして修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【０２０２】
いくつかの態様において、方法は：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、
（ｃ）任意に、修飾した少なくとも１つの細胞を拡大し、そして；
（ｄ）修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する
工程を含む。
【０２０３】
いくつかの態様において、細胞を単離した被験体は、修飾細胞を投与する被験体である（すなわち養子移入は自己細胞のものである）。いくつかの態様において、細胞を単離した被験体は、修飾した細胞を投与する被験体とは異なる被験体である（すなわち養子移入は同種細胞のものである）。
【０２０４】
本発明記載の修飾した少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法にしたがって修飾してもよい。修飾は、トランスファーされる核酸の永続的または一過性発現のための核酸トランスファーを含んでもよい。
【０２０５】
いくつかの態様において、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、あるいはＣＡＲをコードする核酸またはベクターを含むかまたは発現するようにさらに修飾されてもよい。
任意の適切な遺伝子操作プラットホームを用いて、本発明記載の細胞を修飾してもよい。細胞を修飾するための適切な方法には、例えば、本明細書で上記に援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５に記載されるような遺伝子操作プラットホーム、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションの使用が含まれる。
【０２０６】
いくつかの態様において、方法は、以下の工程の１またはそれより多くを含んでもよい：被験体から血液試料を採取する；血液試料から少なくとも１つの細胞を単離および／または拡大する；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養において、少なくとも１つの細胞を培養する；少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する；修飾した少なくとも１つの細胞を拡大する；修飾した少なくとも１つの細胞を収集する；修飾細胞を、アジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する；修飾細胞を被験体に投与する。
【０２０７】
いくつかの態様において、方法は、細胞を処理して、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターの発現を誘導／増進させる工程をさらに含んでもよい。例えば、核酸／ベクターは、特定の剤での処理に反応した、核酸／ベクターからの、抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲの発現の誘導性上方制御のための制御要素を含んでもよい。いくつかの態様において、処理は、本発明記載の修飾細胞を投与されている被験体への、剤の投与によって、ｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。いくつかの態様において、処理は、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの培養中の細胞への剤の投与によって、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏであってもよい。
【０２０８】
当業者は、本発明記載の細胞の養子移入のための適切な試薬および方法を決定することが可能であり、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｄａｉら，  ２０１６  Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １０８（７）：  ｄｊｖ４３９を参照されたい。
【０２０９】
関連する側面において、本発明は、修飾細胞を調製する方法、細胞内に、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する工程を含む方法を提供する。方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。
【０２１０】
１つの側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾し；そして
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【０２１１】
いくつかの態様において、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸またはベクターを導入するようにさらに修飾されてもよい。
いくつかの態様において、方法は、例えば癌の治療または防止のため、療法的または予防的介入をさらに含む。いくつかの態様において、療法的または予防的介入は、化学療法、免疫療法、放射療法、手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法より選択される。
【０２１２】
同時または連続投与
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。
【０２１３】
本明細書において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチド、および抗感染剤または化学療法剤（療法剤）を同時にまたは連続して投与してもよい。
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドでの治療には、化学療法が付随してもよい。
【０２１４】
同時投与は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドおよび療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）、あるいは互いの直後の、そして任意に同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。
【０２１５】
連続投与は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドあるいは療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様ではこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。
【０２１６】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路およびＣＴＬＡ−４遮断の組み合わせた阻害が、抗腫瘍有効性を提供することが示されてきている。Ｗｏｌｃｈｏｋら，  ＮＥＪＭ（２０１３）；３６９：１２２−１２３を参照されたい。したがって、１つの側面において、本発明は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤との組み合わせ療法において使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを提供する。
【０２１７】
いくつかの態様において、本発明は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤を用いた組み合わせ療法を提供する。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用によって仲介されるシグナル伝達を阻害または防止することが可能な剤である。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遺伝子またはタンパク質発現を下方制御することが可能な剤である。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の結合を阻害または防止することが可能な剤である。いくつかの態様において、剤は抗体である。いくつかの態様において、剤はＰＤ−１への結合が可能な抗体である。いくつかの態様において、剤は、ＰＤ−Ｌ１への結合が可能な抗体である。抗体は、アンタゴニスト抗体、またはブロッキング抗体であってもよい。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤は、当業者に周知であり、そしてこれには、例えば、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８оＡ、ペムブロリズマブ、およびアベルマブが含まれる。本発明にしたがった使用が意図されるＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤には、本明細書にその全体が援用される、ＳｕｎｓｈｉｎｅおよびＴａｕｂｅ  「ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤」，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０１５，  ２３：３２−３８に記載されるものが含まれる。
【０２１８】
抗感染剤
感染治療において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、上述のように、抗感染剤と組み合わせて投与してもよい。抗感染剤は、感染の原因となる微生物またはウイルスに対する作用を有することが知られる剤であってもよい。
【０２１９】
適切な抗感染剤には、抗生物質（例えばペニシリン、セファロスポリン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン）、抗ウイルス剤（例えば逆転写酵素阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ剤およびプロテアーゼ阻害剤）、抗真菌剤（例えばポリエン、イミジアゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、およびエキノキャンディン）、および抗寄生虫剤（例えば抗線虫剤、抗条虫剤、抗吸虫剤、抗アメーバ剤および抗原生動物剤）が含まれる。
【０２２０】
化学療法
化学療法は、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。好ましい態様において、化学療法は、薬剤での治療を指す。薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として配合してもよい。配合物は、１またはそれより多い薬剤（例えば１またはそれより多い活性剤）を、１またはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。
【０２２１】
治療は、１より多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤は、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。
【０２２２】
化学療法は、１またはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療計画（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｇｉｍｅ）にしたがって投与されてもよい。治療計画は、医者または医師によって準備されてもよく、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえてもよい、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、プラン、スキームまたはスケジュールであってもよい。
【０２２３】
治療計画は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１またはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療計画を提供してもよい。
【０２２４】
化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシンＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））；抗癌ワクチン、例えばシプルーセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。
【０２２５】
１つの態様において、化学療法剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＬＡＧ−３、抗４１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲまたは他の抗体である。いくつかの態様において、化学療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤または共刺激分子である。
【０２２６】
さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ  アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラックＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン  シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシトＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシアＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガードＴＭ、エレンスＴＭ、エロキサチンＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨルエトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、フルタミド���フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベックＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェハー、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカインＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、リュースタチンＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックスＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセルＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサルＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロンＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニ���アラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチンインプラントプリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサールＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベシチビックスＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュルＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ヴモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリンＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。
【０２２７】
投与経路
本発明の側面にしたがった抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞、ポリペプチドおよび他の療法剤、薬剤および薬学的組成物を、限定されるわけではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋内、皮下、皮内、腫瘍内および経口を含む、いくつかの経路による投与のために配合してもよい。抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞、ポリペプチドおよび他の療法剤を、液体または固体型で配合してもよい。ヒトまたは動物の体の選択した領域への注射による投与のため、液体配合物を配合してもよい。
【０２２８】
投薬計画（ｄｏｓａｇｅ  ｒｅｇｉｍｅ）
抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの多数回の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。
【０２２９】
多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月の１つであるように選択されてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日ごとに１回投与してもよい（プラスまたはマイナス３、２、または１日）。
【０２３０】
キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定された量の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、薬剤または薬学的組成物の形で、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを提供してもよく、そして明記する疾患または状態を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供されてもよい。抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。
【０２３１】
いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように配合されてもよい。
【０２３２】
被験体
治療しようとする被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０２３３】
タンパク質発現
細胞において本発明記載のポリペプチドを産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ニューヨーク：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に示されるものがある。
【０２３４】
ポリペプチドはヌクレオチド配列から発現されてもよい。ヌクレオチド配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。
【０２３５】
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性遺伝物質をトランスファーするためのビヒクルとして用いられるオリゴヌクレオチド分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、遺伝物質を発現させるための発現ベクターであってもよい。こうしたベクターには、発現しようとする遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれてもよい。ベクターにはまた、終結コドンおよび発現エンハンサーも含まれてもよい。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターからポリペプチドを発現させてもよい。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ウイルスベクターおよび人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。
【０２３６】
本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択されたヌクレオチド配列および制御ヌクレオチド配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列がヌクレオチド配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択されたヌクレオチド配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されてもよい。
【０２３７】
本発明記載のペプチドを産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞を使用しうる。細胞は、原核細胞または真核細胞であってもよい。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用してもよい。
【０２３８】
関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴ってもよい。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供され、バイオリアクター中で実行されてもよい。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集してもよい。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。
【０２３９】
バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１またはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。
【０２４０】
関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチド／タンパク質を分離するための任意の適切な方法を使用してもよい。培養から関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離するため、まず、関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離してもよい。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する上清を生じるであろう。
【０２４１】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド／タンパク質構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。
【０２４２】
異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０２４３】
関心対象のポリペプチド／タンパク質が、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。
【０２４４】
配列同一性
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のための整列を、当業者に知られる多様な方式で達成してもよく、例えば公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２．  Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いてもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、デフォルトパラメータ、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するものを用いる。ＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２のデフォルトパラメータは：タンパク質ギャップ・オープンペナルティ＝１０．０、タンパク質ギャップ伸長ペナルティ＝０．２、タンパク質マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ、タンパク質／ＤＮＡ  ＥＮＤＧＡＰ＝−１、タンパク質／ＤＮＡ  ＧＡＰＤＩＳＴ＝４である。
【０２４５】
本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。
【０２４６】
本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書が本明細書に援用される。
【０２４７】
本明細書全体にわたって、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む」、ならびに変形、例えば「含む」および「含んでいる」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程群も排除しないことが理解されるであろう。
【０２４８】
本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別であると示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されてもよい。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。
【０２４９】
以下の番号付けした段落は、本発明の特定の側面および態様を記載する：
１．  癌を治療する方法であって、癌を患っている患者に、抗体または抗原結合性断片を投与する工程を含み、抗体または抗原結合性断片は、ＣＴＬＡ−４に結合し、そして：
以下のＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域：
【０２５０】
【化９】
2019519208.tif 000011
【０２５１】
および；以下のＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域：
【０２５２】
【化１０】
2019519208.tif 000012
【０２５３】
を含む、前記方法。
２．  抗体または抗原結合性断片が、配列番号３または４のアミノ酸配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、および配列番号１または２のアミノ酸配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む、段落１の方法。
【０２５４】
３．  抗体または抗原結合性断片が、配列番号３または４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１または２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、段落１の方法。
【０２５５】
４．  癌が、結腸、直腸、上咽頭、子宮頸、中咽頭、胃、肝臓、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、喉、唾液腺、洞、咽頭、喉頭、前立腺、肺、膀胱、皮膚、腎臓、卵巣または中皮からなる群より選択される組織の癌であるか、あるいは癌が、結腸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、上咽頭癌、子宮頸癌、中咽頭癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔癌、喉頭癌、前立腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黒色腫、進行性黒色腫、腎細胞癌、卵巣癌および中皮腫からなる群より選択される、段落１の方法。
【０２５６】
５．  抗体または抗原結合性断片の投与が静脈内である、段落１の方法。
６．  抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４より選択されるヒト定常領域を含む、段落１の方法。
【０２５７】
７．  抗原結合性断片が、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ断片である、段落１の方法。
８．  抗原結合性断片が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、段落１の方法。
９．  癌を治療する方法であって、癌を患う患者に抗体または抗原結合性断片を投与する工程を含み、抗体または抗原結合性断片がＣＴＬＡ−４に結合し、そして：
配列番号３または４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および
配列番号１または２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記方法。
【０２５８】
１０．  癌が、結腸、直腸、上咽頭、子宮頸、中咽頭、胃、肝臓、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、喉、唾液腺、洞、咽頭、喉頭、前立腺、肺、膀胱、皮膚、腎臓、卵巣または中皮からなる群より選択される組織の癌であるか、あるいは癌が、結腸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、上咽頭癌、子宮頸癌、中咽頭癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔癌、喉頭癌、前立腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黒色腫、進行性黒色腫、腎細胞癌、卵巣癌および中皮腫からなる群より選択される、段落９の方法。
【０２５９】
１１．  抗体または抗原結合性断片の投与が静脈内である、段落９の方法。
１２．  抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４より選択されるヒト定常領域を含む、段落９の方法。
【０２６０】
１３．  抗原結合性断片がＦａｂ断片またはｓｃＦｖ断片である、段落９の方法。
１４．  抗原結合性断片が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、段落９の方法。
１５．被験体において癌を治療する方法であって：
癌を有する被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を、ＣＴＬＡ−４に結合する抗体または抗原結合性断片の存在下で培養して、Ｔ細胞集団を拡大させ；そして
拡大されたＴ細胞集団を被験体に投与する工程を含み；
ＣＴＬＡ−４に結合する抗体または抗原結合性断片が：
以下のＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域；
【０２６１】
【化１１】
2019519208.tif 000013
【０２６２】
および以下のＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域
【０２６３】
【化１２】
2019519208.tif 000014
【０２６４】
を含む、前記方法。
１６．  抗体または抗原結合性断片が、配列番号３または４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１または２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、段落１５の方法。
【０２６５】
１７．  癌が、結腸、直腸、上咽頭、子宮頸、中咽頭、胃、肝臓、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、喉、唾液腺、洞、咽頭、喉頭、前立腺、肺、膀胱、皮膚、腎臓、卵巣または中皮からなる群より選択される組織の癌であるか、あるいは癌が、結腸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、上咽頭癌、子宮頸癌、中咽頭癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔癌、喉頭癌、前立腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黒色腫、進行性黒色腫、腎細胞癌、卵巣癌および中皮腫からなる群より選択される、段落１５の方法。
【０２６６】
１８．  抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４より選択されるヒト定常領域を含む、段落１５の方法。
１９．  抗原結合性断片がＦａｂ断片またはｓｃＦｖ断片である、段落１５の方法。
【０２６７】
２０．  抗原結合性断片が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、段落１５の方法。
【実施例】
【０２６８】
本発明者らは、以下の実施例において、ヒトおよびマウスＣＴＬＡ−４に結合し、ヒトＣＤ２８に結合せず、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の相互作用を遮断可能であり、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０およびＣＴＬＡ−４／ＣＤ８６シグナル伝達を阻害し、そしてｉｎ  ｖｉｖｏで抗癌活性を示すことが示される、抗ＣＴＬＡ−４抗体の単離および特徴付けを記載する。
【０２６９】
実施例１：抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体クローン２Ｃ８の単離
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を通じて、ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから抗ＣＴＬＡ−４抗体を単離した。ブロッキングＥＬＩＳＡにおいて、ＣＴＬＡ−４のそのリガンドに対する結合を遮断する能力に関して、抗体をスクリーニングした。試験した３８４クローンのうち、クローン２Ｃ８は、ＣＴＬＡ−４結合の劇的な阻害を示す唯一のクローンであった（図４）。
【０２７０】
実施例２：ヒトＣＴＬＡ−４に対する２Ｃ８の結合の分析
ヒトＣＴＬＡ−４に対する２Ｃ８の結合を、ＥＬＩＳＡによって分析した。ヒトＣＴＬＡ−４をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、そして２Ｃ８  Ｆａｂまたは陰性対照Ｆａｂを多様な濃度で添加した。結果を図５に示す。２Ｃ８は、用量依存方式で、ヒトＣＴＬＡ−４に強く結合する能力を示した。
【０２７１】
実施例３：ヒトＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の間の相互作用のブロッキングの分析
２Ｃ８が、ＣＴＬＡ−４のそのリガンド、ＣＤ８０への結合を阻害する能力を、ＥＬＩＳＡによって分析した。簡潔には、ＣＤ８０をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。２Ｃ８、陰性対照ＦａｂまたはＬ３Ｄ１０（商業的マウス抗ヒトＣＴＬＡ−４  ＩｇＧ１）をヒトＣＴＬＡ−４とプレインキュベーションし、そして次いで、ＥＬＩＳＡプレート上に添加した。ＣＤ８０に対するＣＴＬＡ−４の結合をＥＬＩＳＡによって決定した。
【０２７２】
結果を図３に示す。２Ｃ８は、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ８０の間の相互作用をブロッキングすることが示された。
実施例４：２Ｃ８の２Ｃ８＿ｇｌへの操作
抗体クローン２Ｃ８を、ヒトＩｇＧ１として発現させた。２Ｃ８可変ドメインのフレームワーク領域を操作して、生殖系列様免疫グロブリンに復帰させ、そして操作したクローンを２Ｃ８＿ｇｌと名付けた。
【０２７３】
実施例５：種交差反応性の分析
２Ｃ８がマウスＣＴＬＡ−４を認識する能力をＥＬＩＳＡによって分析した。２Ｃ８  ＩｇＧ、２Ｃ８＿ｇｌ  ＩｇＧおよび商業的ラット抗マウスＣＴＬＡ−４  ＩｇＧをＥＬＩＳＡプレート内にコーティングした。マウスＣＴＬＡ−４をビオチン化し、そして次いで、多様な濃度でＥＬＩＳＡプレートに添加した。ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて、マウスＣＴＬＡ−４の抗体への結合を顕色した。
【０２７４】
結果を図７に示す。２Ｃ８は、マウスＣＴＬＡ−４を認識可能であり、そして商業的陽性対照よりもはるかに高い効率を有することが示された。生殖系列復帰操作は抗体２Ｃ８＿ｇｌとしての抗体の結合能に影響を及ぼさず、該抗体は、２Ｃ８と同一の結合プロファイルを示した（図７）。
【０２７５】
実施例６：交差種反応性の分析：カニクイザルおよびアカゲザルＣＴＬＡ−４に対する結合
カニクイザル／アカゲザルＣＴＬＡ−４を用いて類似のＥＬＩＳＡを行った。イピリムマブを陽性対照として用いた。２Ｃ８は、カニクイザル／アカゲザルＣＴＬＡ−４を強く認識した（図１４）。
【０２７６】
実施例７：ＣＤ２８との交差反応性の分析
ＣＴＬＡ−４はＣＤ２８とリガンドを共有する。ＣＤ２８がＣＤ８０およびＣＤ８６への結合に際して、Ｔ細胞に刺激シグナルを伝達する一方、ＣＴＬＡ−４は阻害シグナルを送る。２Ｃ８のＣＤ２８への結合をＥＬＩＳＡによって調べた。ヒトＦｃにコンジュゲート化されたヒトＣＤ２８をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、そして多様な濃度の抗ＣＴＬＡ−４または陰性対照抗体を添加した。
【０２７７】
結果を図８に示す。商業的ラット抗マウスＣＴＬＡ−４  ＩｇＧとは異なり、２Ｃ８は、ＣＤ２８への結合を、高濃度の抗体であってさえ、まったく示さなかった（図５）。特に、２Ｃ８は、Ｌ３Ｄ１０よりもＣＤ２８への低い結合を示した。
【０２７８】
実施例８：ＣＴＬＡ−４に対する２Ｃ８の結合のアフィニティの分析
ＣＴＬＡ−４に対する抗体２Ｃ８の結合アフィニティをＥＬＩＳＡによって測定した。抗体をプレート上にコーティングし、そしてヒトＣＴＬＡ−４を異なる濃度で添加した。用量反応曲線をプロットし（図９を参照されたい）、そして有効濃度５０％（ＥＣ５０）を計算した。このアッセイにおいて、２Ｃ８は、５．０ｎＭの平均ＥＣ５０を示した（２回の独立の実験から）。
【０２７９】
マウスＣＴＬＡ−４に関する結合アフィニティを同様に測定し、そしてマウスＣＴＬＡ−４に関するＥＣ５０を外挿した；２Ｃ８  ＩｇＧ１は、９．６ｎＭのＥＣ５０を示した（２Ｃ８＿ｇｌ  ＩｇＧ１に関しては２３．５ｎＭ、ＬＡＬＡ突然変異を伴う２Ｃ８  ＩｇＧ１に関しては５．１ｎＭ、そして２Ｃ８  ＩｇＧ４に関しては７．０ｎＭ）（図１５）。「ＬＡＬＡ」突然変異は、Ｆｃ領域の２３４および２３４位のロイシン残基のアラニンへの突然変異を指す（すなわちＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）；この突然変異は、ＦｃおよびＦｃ−γＲの間の相互作用を弱め、そしてしたがってＡＤＣＣ活性を防止することが知られる（例えばＨｅｚａｒｅｈら，  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ（２００１）７５（２４）：１２１６１−１２１６８を参照されたい）。
【０２８０】
ヒトＣＴＬＡ−４への２Ｃ８の結合のアフィニティを表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によってもまた測定した。抗体をバイオセンサーチップ上に固定し、ヒトＣＴＬＡ−４を異なる濃度で流し、そして反応を測定した。このアッセイにおいて、２Ｃ８は、９．６ｎＭの結合アフィニティ（ＫＤ）を示した。
【０２８１】
実施例９：ＣＴＬＡ−４に対する２Ｃ８の結合のアビディティの分析
ヒトＣＴＬＡ−４に対する２Ｃ８の結合のアビディティをＥＬＩＳＡによって分析した。簡潔には、ヒトＣＴＬＡ−４をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、そして抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体を多様な濃度でＥＬＩＳＡプレートに添加した。反応曲線をプロットし（図１０を参照されたい）、そしてＥＣ５０を計算した。独立のアッセイにおける２Ｃ８に関する平均ＥＣ５０は６３．６ｐＭであった。
【０２８２】
マウスＣＴＬＡ−４に関するアビディティをＥＬＩＳＡによって同様に測定した（図１６）。マウスタンパク質を用いると、ＥＣ５０は２Ｃ８  ＩｇＧ１に関して４．９ｎＭである（２Ｃ８＿ｇｌ  ＩｇＧ１に関して７７．１ｎＭ；ＬＡＬＡ突然変異を伴う２Ｃ８  ＩｇＧ１に関して８．０ｎＭ；２Ｃ８  ＩｇＧ４に関して２０．９ｎＭ）。
【０２８３】
実施例１０：細胞表面上に発現されるＣＴＬＡ−４に対する結合の分析
ＨＥＫ−２９３．６Ｅ細胞をヒトまたはマウスＣＴＬＡ−４でトランスフェクションした。次いで、過剰発現細胞を２Ｃ８またはアイソタイプ対照の存在下でインキュベーションし、そして細胞に対する抗体の結合をフローサイトメトリーによって測定した。
【０２８４】
２Ｃ８は、これらのアッセイにおいて、細胞表面で発現されたヒトＣＴＬＡ−４（図１７）またはマウスＣＴＬＡ−４（図１８）に効率的に結合可能であった。
実施例１１：抗ＣＴＬＡ−４抗体２Ｃ８のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性の分析
Ｔ細胞再活性化アッセイを行って、抗体の活性を分析した。該アッセイにおいて、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を植物性血球凝集素およびＣＤ８０またはＣＤ８６のいずれかで刺激する。こうした処理の後、細胞はＩＬ−２を分泌する。ＣＴＬＡ−４の添加は、ＩＬ−２の刺激および分泌を阻害する。抗ＣＴＬＡ−４および対照抗体の存在下での細胞活性化、すなわちＩＬ−２分泌のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（図１１）。再活性化アッセイにおいて、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）として市販されているヒト抗ｈｕＣＴＬＡ−４）またはＬ３Ｄ１０（商業的マウス抗ｈｕＣＴＬＡ−４  ＩｇＧ１κ）のいずれかを陽性対照として用いた。
【０２８５】
２Ｃ８は、ＣＤ８０（図１１）またはＣＤ８６（図１２）を通じた刺激およびＣＴＬＡ−４での阻害後、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ−２分泌を用量依存方式で回復させることが可能であった。
【０２８６】
アッセイを数回反復し、そしてこれは、２Ｃ８および派生抗体の、ＣＴＬＡ−４仲介性阻害を抑制する能力を一貫して示した（図１９）。これらのアッセイにおいて、２Ｃ８は、０．５〜１．４ｎＭの間のＥＣ５０を示すイピリムマブと非常によく似て、０．６〜２．０ｎＭの範囲のＥＣ５０を示した。ＬＡＬＡ突然変異は抗体強度に影響を及ぼさず、突然変異を含む２Ｃ８は０．７〜１．２ｎＭの間のＥＣ５０を示した。抗体の生殖系列型は、１つの実験においてより高いＥＣ５０（５．６ｎＭ）および別の実験において同等のＥＣ５０（１．１ｎＭ）を示し、これは有意でない可能性もある。
【０２８７】
実施例１２：抗ＣＴＬＡ−４抗体２Ｃ８のｉｎ  ｖｉｖｏ活性の分析
２Ｃ８の活性をまた、結腸癌ＭＣ３８細胞を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏで、腫瘍増殖のマウスモデルでも試験した。第０日、マウスに２ｘ１０６ＭＣ３８細胞を皮下接種した。第８日に始まり、マウスに５用量（動物あたり２００μｇ）の２Ｃ８  ＩｇＧ１またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を腹腔内注射した。実験全体で腫瘍サイズを測定した。
【０２８８】
２回の独立の実験の結果を図１３Ａおよび１３Ｂに示す。２Ｃ８は腫瘍増殖を調節する際に有効であることが示された。
【図１】
2019519208.tif 000020
【図２】
2019519208.tif 000021
【図３Ａ】
2019519208.tif 000022
【図３Ｂ】
2019519208.tif 000023
【図４Ａ】
2019519208.tif 000024
【図４Ｂ】
2019519208.tif 000025
【図５】
2019519208.tif 000026
【図６】
2019519208.tif 000027
【図７】
2019519208.tif 000028
【図８】
2019519208.tif 000029
【図９】
2019519208.tif 000030
【図１０】
2019519208.tif 000031
【図１１】
2019519208.tif 000032
【図１２】
2019519208.tif 000033
【図１３】
2019519208.tif 000034
【図１４】
2019519208.tif 000035
【図１５】
2019519208.tif 000036
【図１６】
2019519208.tif 000037
【図１７】
2019519208.tif 000038
【図１８】
2019519208.tif 000039
【図１９Ａ】
2019519208.tif 000040
【図１９Ｂ】
2019519208.tif 000041
【図１９Ｃ】
2019519208.tif 000042
【図１９Ｄ】
2019519208.tif 000043
【配列表】
2019519208000001.app
【国際調査報告】
2019519208.tif 000044
2019519208.tif 000045