(57)【要約】  より高い割合またはより大きい絶対数のいずれかの、表現型の上で同定されたナイーブ、幹細胞メモリー、セントラルメモリーＴ細胞、養子ＮＫ細胞、およびタイプＩ  ＮＫＴ細胞を産生する化合物が同定される。改善された有効性を有する養子細胞療法のＴ、ＮＫ、およびＮＫＴ細胞を含む免疫細胞を調節するための組成物および方法が提供される。【選択図】図１
2019502722.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞の集団、ならびに表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物であって、前記１つまたは複数の薬剤が、前記免疫細胞の調節を介して免疫細胞の治療可能性を改善する、組成物。
【請求項２】
前記１つまたは複数の薬剤が、前記免疫細胞を前記１つまたは複数の薬剤で調節する際に、
（ａ）細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率を改善し；
（ｂ）細胞増殖、細胞毒性、持続性、サイトカイン応答および分泌、および／もしくは細胞リコールを改善し；ならびに／または
（ｃ）所望される免疫細胞亜集団の数もしくは割合を増大する
請求項１の組成物。
【請求項３】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項１の組成物。
【請求項４】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項３の組成物。
【請求項５】
増大した数または割合を有する免疫細胞の前記所望される亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）タイプＩ  ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）ＣＤ５７＋ＮＫ細胞
を含む、請求項２の組成物。
【請求項６】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項５の組成物。
【請求項７】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項６の組成物。
【請求項８】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項１の組成物。
【請求項９】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離される、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティ
を含む、請求項８または９の組成物。
【請求項１１】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項１２】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項１１の組成物。
【請求項１３】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項１１の組成物。
【請求項１４】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項１１の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、ＧＳＫ３阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびラパマイシンの１つまたは複数を含む、請求項１の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、ＧＳＫ３阻害剤を含む、請求項１５の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤もしくは放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つまたは複数の添加剤をさらに含む、請求項１または１５の組成物。
【請求項１８】
前記添加剤が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つを含む、請求項１７の組成物。
【請求項１９】
前記添加剤が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数を含む、請求項１７の組成物。
【請求項２０】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む、請求項２の組成物。
【請求項２１】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項５の組成物。
【請求項２２】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項１０、１４、２０または２１の組成物。
【請求項２３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項２２の組成物。
【請求項２４】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項２１の組成物。
【請求項２５】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項２１または２４の組成物。
【請求項２６】
（ａ）ＮＫ細胞の集団、およびＧＳＫ３阻害剤；
（ｂ）ＮＫ細胞の集団、ＧＳＫ３阻害剤、およびＩＬ１５；または
（ｃ）ＮＫ細胞の集団、ＧＳＫ３阻害剤、ＩＬ１５、およびＳＴＩＮＧアゴニスト
を含む、請求項１の組成物。
【請求項２７】
表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物であって、前記１つまたは複数の薬剤が、前記免疫細胞の調節を介して、その免疫細胞の治療可能性を改善する、組成物。
【請求項２８】
前記薬剤が、
（ａ）細胞拡大、維持および／もしくは分化を調節する、
（ｂ）細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、リコール、および／もしくは持続性を改善する；
（ｃ）細胞生存率を改善する；ならびに／または
（ｄ）前記免疫細胞の１つもしくは複数の所望される細胞亜集団の割合を増大する
請求項２７の組成物。
【請求項２９】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項２７または２８の組成物。
【請求項３０】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項２９の組成物。
【請求項３１】
増大した割合を有する前記１つまたは複数の所望される細胞亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）タイプＩ  ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）ＣＤ５７＋ＮＫ細胞
を含む、請求項２８の組成物。
【請求項３２】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項３１の組成物。
【請求項３３】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項３２の組成物。
【請求項３４】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項２７の組成物。
【請求項３５】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象から単離される、
請求項２７の組成物。
【請求項３６】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項３４または３５の組成物。
【請求項３７】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項３８】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項３７の組成物。
【請求項３９】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項３７の組成物。
【請求項４０】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項３７の組成物。
【請求項４１】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む、請求項２８の組成物。
【請求項４２】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項２８の組成物。
【請求項４３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項３６、４０、４１または４２のいずれか１項の組成物。
【請求項４４】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項４３の組成物。
【請求項４５】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項４２の組成物。
【請求項４６】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項４２または４５の組成物。
【請求項４７】
前記組成物が、ＧＳＫ３阻害剤を含む、請求項２７の組成物。
【請求項４８】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つを含む、請求項２７の組成物。
【請求項４９】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項２７の組成物。
【請求項５０】
前記誘導体および類似体が、表１の前記薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグを含む、請求項２７の組成物。
【請求項５１】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項２７の組成物。
【請求項５２】
ＧＳＫ３阻害剤、ＩＬ１５、およびＳＴＩＮＧアゴニストを含む、請求項２７の組成物。
【請求項５３】
単離された免疫細胞を、表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物と接触させることから得られる調節された免疫細胞を含む組成物であって、前記調節された免疫細胞が、調節されていない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する免疫細胞の少なくとも亜集団を含む、組成物。
【請求項５４】
前記調節された免疫細胞が、
（ａ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；
（ｂ）改善された細胞増殖、細胞毒性、持続性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、および／またはリコール；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数または割合の、免疫細胞の１つもしくは複数の所望される亜集団
を含む、請求項５３の組成物。
【請求項５５】
前記単離された免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項５３の組成物。
【請求項５６】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項５５の組成物。
【請求項５７】
増大した数もしくは割合を有する免疫細胞の前記１つまたは複数の所望される亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）タイプＩ  ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）ＣＤ５７＋ＮＫ細胞
を含む、請求項５４の組成物。
【請求項５８】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項５７の組成物。
【請求項５９】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項５８の組成物。
【請求項６０】
前記単離された免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から得られる、請求項５３の組成物。
【請求項６１】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から得られる、請求項５３の組成物。
【請求項６２】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項６０または６１の組成物。
【請求項６３】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項６４】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項６３の組成物。
【請求項６５】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項６３の組成物。
【請求項６６】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／もしくは核酸置換を含み；ならびに／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項６３の組成物。
【請求項６７】
前記単離された免疫細胞が、ＮＫ細胞を含み、前記集団が、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物で調節されている、請求項５３の組成物。
【請求項６８】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項５３の組成物。
【請求項６９】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシンおよびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項５３の組成物。
【請求項７０】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む、請求項５４の組成物。
【請求項７１】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項５４の組成物。
【請求項７２】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項６２、６６、７０または７１のいずれか１項の組成物。
【請求項７３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項７２の組成物。
【請求項７４】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項７１の組成物。
【請求項７５】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項７１または７４の組成物。
【請求項７６】
調節されたＮＫ細胞を含み、前記調節されたＮＫ細胞が、調節されていないＮＫ細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する、請求項５４の組成物。
【請求項７７】
免疫細胞を、表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む、十分量の組成物と、調節されていない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節された免疫細胞の集団を得るのに十分な時間、接触させることを含む、免疫細胞を調節する方法。
【請求項７８】
前記調節された免疫細胞が、表１の前記１つまたは複数の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数もしくは割合の、免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団
を有する細胞を含む、請求項７７の方法。
【請求項７９】
前記１つまたは複数の所望される亜集団を前記調節された免疫細胞から単離することをさらに含む、請求項７８の方法。
【請求項８０】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む、請求項７７の方法。
【請求項８１】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項８０の方法。
【請求項８２】
免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）タイプＩ  ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）ＣＤ５７＋ＮＫ細胞
を含む、請求項７８の方法。
【請求項８３】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項８２の方法。
【請求項８４】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項８３の方法。
【請求項８５】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項７７の方法。
【請求項８６】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離される、請求項７７の方法。
【請求項８７】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項８５または８６の方法。
【請求項８８】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項８９】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項８８の方法。
【請求項９０】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項８８の方法。
【請求項９１】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項８８の方法。
【請求項９２】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む、請求項７８の方法。
【請求項９３】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項７８の方法。
【請求項９４】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項８７、または９１〜９３のいずれか１項の方法。
【請求項９５】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項９４の方法。
【請求項９６】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項９３の方法。
【請求項９７】
前記ＣＤ５７＋  ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項９３または９６の方法。
【請求項９８】
前記組成物が、ＧＳＫ３阻害剤を含む、請求項７７の方法。
【請求項９９】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項７７の方法。
【請求項１００】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項７７の方法。
【請求項１０１】
前記誘導体および類似体が、表１の前記薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグを含む、請求項７７の方法。
【請求項１０２】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項７７の方法。
【請求項１０３】
前記十分な時間が、１６時間以上である、請求項７７の方法。
【請求項１０４】
前記調節が、フィーダーフリーである、請求項７７の方法。
【請求項１０５】
ＮＫ細胞を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節されたＮＫ細胞の集団を得るのに十分な時間、接触させることを含む、請求項７７の方法。
【請求項１０６】
免疫細胞を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節されていない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節された免疫細胞の集団を得るのに十分な時間、接触させることを含む、免疫細胞を調節する方法。
【請求項１０７】
前記調節された免疫細胞が、
前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させていない免疫細胞と比較し、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数もしくは割合の、免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団
を有する、請求項１０６の方法。
【請求項１０８】
前記１つまたは複数の所望される亜集団を前記調節された免疫細胞から単離することをさらに含む、請求項１０７の方法。
【請求項１０９】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む、請求項１０６の方法。
【請求項１１０】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項１０９の方法。
【請求項１１１】
免疫細胞の前記１つまたは複数の所望される亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）タイプＩ  ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）ＣＤ５７＋ＮＫ細胞
を含む、請求項１０７の方法。
【請求項１１２】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項１１１の方法。
【請求項１１３】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項１１２の方法。
【請求項１１４】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項１０６の方法。
【請求項１１５】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離される、請求項１０６の方法。
【請求項１１６】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項１１４または１１５の方法。
【請求項１１７】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項１１８】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項１１７の方法。
【請求項１１９】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項１１７の方法。
【請求項１２０】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項１１７の方法。
【請求項１２１】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む、請求項１０７の方法。
【請求項１２２】
免疫細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１０７の方法。
【請求項１２３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項１１６、または１２０〜１２２のいずれか１項の方法。
【請求項１２４】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項１２３の方法。
【請求項１２５】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項１２２の方法。
【請求項１２６】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項１２２または１２５の方法。
【請求項１２７】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項１０６の方法。
【請求項１２８】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項１０６の方法。
【請求項１２９】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項１０６の方法。
【請求項１３０】
前記ＧＳＫ３阻害剤が、ＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１０６の方法。
【請求項１３１】
前記十分な時間が、１６時間以上である、請求項１０６の方法。
【請求項１３２】
前記免疫細胞が、フィーダーフリーな環境にある、請求項１０６の方法。
【請求項１３３】
ＮＫ細胞を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節されていないＮＫ細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節されたＮＫ細胞を得るのに十分な時間、接触させることを含む、ＮＫ細胞を調節する方法。
【請求項１３４】
前記調節されたＮＫ細胞が、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させていないＮＫ細胞と比較し、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数または割合の、ＮＫ細胞の１つまたは複数の所望される亜集団
を有する、請求項１３３の方法。
【請求項１３５】
前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項１３３の方法。
【請求項１３６】
前記１つまたは複数の所望される亜集団を、前記調節されたＮＫ細胞から単離することをさらに含む、請求項１３４の方法。
【請求項１３７】
ＮＫ細胞の前記１つまたは複数の所望される亜集団が、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１３４の方法。
【請求項１３８】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項１３７の方法。
【請求項１３９】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項１３８の方法。
【請求項１４０】
前記ＮＫ細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項１３３の方法。
【請求項１４１】
前記ＮＫ細胞が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離される、請求項１３３の方法。
【請求項１４２】
前記単離されたＮＫ細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項１４０または１４１の方法。
【請求項１４３】
前記ＮＫ細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項１４４】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項１４３の方法。
【請求項１４５】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、またはＮＫ前駆細胞である、請求項１４３の方法。
【請求項１４６】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む
請求項１４３の方法。
【請求項１４７】
調節されたＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＮＫ細胞を含む、請求項１３４の方法。
【請求項１４８】
調節されたＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１３４の方法。
【請求項１４９】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項１４２、または１４６〜１４８のいずれか１項の方法。
【請求項１５０】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項１４９の方法。
【請求項１５１】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項１４８の方法。
【請求項１５２】
前記ＣＤ５７＋  ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項１４８または１５１の方法。
【請求項１５３】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項１３３の方法。
【請求項１５４】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項１３３の方法。
【請求項１５５】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項１３３の方法。
【請求項１５６】
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１３３の方法。
【請求項１５７】
前記十分な時間が１６時間以上である、請求項１３３の方法。
【請求項１５８】
前記免疫細胞が、フィーダーフリー環境にある、請求項１３３の方法。
【請求項１５９】
ＮＫ細胞を含む免疫細胞の集団を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、前記集団においてＮＫ細胞を選択的に拡大させるのに十分な時間接触させることを含む、免疫細胞の集団においてＮＫ細胞を拡大させる方法。
【請求項１６０】
接触に先立ち、前記ＮＫ細胞が、（ｉ）ＣＤ５７−ＮＫ細胞；または（ｉｉ）ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む、請求項１５９の方法。
【請求項１６１】
拡大後に得られた前記ＮＫ細胞が、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数もしくは割合の、ＮＫ細胞１つまたは複数の所望される亜集団
を有する、請求項１５９の方法。
【請求項１６２】
前記拡大されたＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１５９の方法。
【請求項１６３】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項１６２の方法。
【請求項１６４】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む、請求項１６３の方法。
【請求項１６５】
（ｉ）免疫細胞の集団を、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離することであって、
ここで、単離された免疫細胞の前記集団が、末梢血単核細胞を含む、単離することと、
ならびに／あるいは
（ｉｉ）  ＣＤ３およびＣＤ１９細胞を末梢血単核細胞の前記集団から枯渇させることと、をさらに含み、
ここで、（ｉｉ）の前記枯渇させる工程の後の前記免疫細胞が、末梢血単核細胞を含む、
請求項１５９の方法。
【請求項１６６】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、
請求項１６５の方法。
【請求項１６７】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項１６８】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項１６７の方法。
【請求項１６９】
前記前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、またはＮＫ前駆細胞である、請求項１６７の方法。
【請求項１７０】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、
請求項１６７の方法。
【請求項１７１】
調節されたＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＮＫ細胞を含む、請求項１６１の方法。
【請求項１７２】
調節されたＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１６１の方法。
【請求項１７３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項１６６、または１７０〜１７２のいずれか１項の方法。
【請求項１７４】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項１７３の方法。
【請求項１７５】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項１７２の方法。
【請求項１７６】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項１７２または１７５の方法。
【請求項１７７】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項１５９の方法。
【請求項１７８】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項１５９の方法。
【請求項１７９】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項１５９の方法。
【請求項１８０】
前記ＧＳＫ３阻害剤が、ＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１５９の方法。
【請求項１８１】
前記十分な時間が１６時間以上である、請求項１５９の方法。
【請求項１８２】
前記免疫細胞が、フィーダーフリー環境にある、請求項１５９の方法。
【請求項１８３】
前記方法が、ＮＫ細胞の拡大を少なくとも２倍増大する、請求項１５９の方法。
【請求項１８４】
前記改善されたサイトカイン応答が、増大した産生の、ＩＦＮγおよび／もしくはＴＮＦαを含む１つまたは複数のサイトカインを含む、請求項１６１の方法。
【請求項１８５】
養子ＮＫ細胞を含む細胞の集団を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節された養子ＮＫ細胞を得るのに十分な時間、接触させることを含む、養子ＮＫ細胞を調節する方法。
【請求項１８６】
前記養子ＮＫ細胞が、ＣＤ５７−ＮＫ細胞を含む、請求項１８５の方法。
【請求項１８７】
前記調節された養子ＮＫ細胞が、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させていない養子ＮＫ細胞と比較し、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数または割合の、ＮＫ細胞の１つまたは複数の所望される亜集団；
を有する、請求項１８５の方法。
【請求項１８８】
前記調節された養子ＮＫ細胞が、増大したＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１８５の方法。
【請求項１８９】
前記調節された養子ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項１８８の方法。
【請求項１９０】
養子ＮＫ細胞を含む細胞の前記集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる、請求項１８５の方法。
【請求項１９１】
養子ＮＫ細胞を含む細胞の前記集団が、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から単離される、請求項１８５の方法。
【請求項１９２】
養子ＮＫ細胞を含む細胞の前記集団が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、
請求項１９０または１９１の方法。
【請求項１９３】
養子ＮＫ細胞を含む細胞の前記集団が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；および／あるいは
（ｂ）造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する
請求項１の組成物。
【請求項１９４】
前記幹細胞が、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項１９３の方法。
【請求項１９５】
前記前駆細胞が、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項１９３の方法。
【請求項１９６】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、
請求項１９３の方法。
【請求項１９７】
ＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、請求項１８７の方法。
【請求項１９８】
ＮＫ細胞の前記所望される亜集団が、増大した数または割合の少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するをＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項１８７の方法。
【請求項１９９】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項１９２、または１９６〜１９８のいずれか１項の方法。
【請求項２００】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項１９９の方法。
【請求項２０１】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項１９８の方法。
【請求項２０２】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項１９８または２０１の方法。
【請求項２０３】
免疫細胞を、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させるのに先立ち、前記免疫細胞の集団を、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象
から得ることをさらに含み、免疫細胞の前記集団が、末梢血単核細胞を含む、請求項１８５の方法。
【請求項２０４】
前記免疫細胞を、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させるのに先立ち、ＣＤ３および／またはＣＤ１９細胞を、免疫細胞の前記得られた集団から枯渇させることをさらに含む、請求項２０３の方法。
【請求項２０５】
前記細胞を、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させる前記工程前または工程中に、細胞の前記集団を活性化させることをさらに含む、請求項１８５の方法。
【請求項２０６】
前記方法が、前記集団において養子ＮＫ細胞を少なくとも２倍拡大する、請求項１８５の方法。
【請求項２０７】
ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む、請求項１８５の方法。
【請求項２０８】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項１８５の方法。
【請求項２０９】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項１８５の方法。
【請求項２１０】
前記十分な時間が、１６時間以上である、請求項１８５の方法。
【請求項２１１】
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１８５の方法。
【請求項２１２】
前記養子ＮＫ細胞が、フィーダーフリーな環境にある、請求項１８５の方法。
【請求項２１３】
前記改善されたサイトカイン応答が、増大した産生の、ＩＦＮγおよび／もしくはＴＮＦαを含む１つまたは複数のサイトカインを含む、請求項１８７の方法。
【請求項２１４】
（ｉ）免疫細胞の集団を、
（ａ）健常対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性である対象；
から得ること、
（ｉｉ）ＣＤ３およびＣＤ１９細胞を、免疫細胞の前記集団から枯渇させること、ならびに
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）からもたらされた免疫細胞の前記集団を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節されていないＮＫ細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節されたＮＫ細胞の集団を得るのに十分な時間、接触させること、を含む、ＮＫ細胞の集団を調節する方法であって、
ＣＤ３およびＣＤ１９細胞を枯渇させるのに先立ち、免疫細胞の前記集団が、ＧＳＫ３阻害剤の不存在下でサイトカインと共に培養されない、方法。
【請求項２１５】
前記調節されたＮＫ細胞が、前記ＧＳＫ３阻害剤を含む前記組成物と接触させていないＮＫ細胞と比較し、
（ａ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは持続性；
（ｂ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは
（ｃ）増大した数または割合の、免疫細胞の１つもしくは複数の所望される亜集団
を有する、請求項２１４の方法。
【請求項２１６】
前記１つまたは複数の所望される亜集団を、前記調節されたＮＫ細胞から単離することをさらに含む、請求項２１５の方法。
【請求項２１７】
前記調節されたＮＫ細胞が、増大した数または割合のＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む、請求項２１４の方法。
【請求項２１８】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、養子ＮＫ細胞を含む、請求項２１７の方法。
【請求項２１９】
前記養子ＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む、請求項２１８の方法。
【請求項２２０】
免疫細胞の集団を得ることが、前記免疫細胞を、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離することを含む、請求項２１４の方法。
【請求項２２１】
得られた細胞の前記集団が、
（ａ）ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか；または
（ｂ）少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む、
請求項１９０または２２０の方法。
【請求項２２２】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む、請求項２２１の方法。
【請求項２２３】
前記遺伝子的に修飾されたモダリティが、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む、請求項２２２の方法。
【請求項２２４】
前記ＣＤ５７＋ＮＫ細胞が、ｈｎＣＤ１６の発現を含む、請求項２１７の方法。
【請求項２２５】
前記組成物が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つを更に含む、請求項２１４の方法。
【請求項２２６】
前記組成物が、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む、請求項２１４の方法。
【請求項２２７】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項２１４の方法。
【請求項２２８】
前記ＧＳＫ３阻害剤が、ＣＨＩＲ９９０２１である、請求項２１４の方法。
【請求項２２９】
前記十分な時間が、１６時間以上である、請求項２１４の方法。
【請求項２３０】
前記免疫細胞が、フィーダーフリー環境にある、請求項２１４の方法。
【請求項２３１】
請求項７７〜２３０のいずれか１項に記載の細胞療法のためのＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む調節された免疫細胞を含む治療組成物を製造する方法。
【請求項２３２】
請求項７７〜１３２のいずれか１項により製造される調節された免疫細胞の集団。
【請求項２３３】
請求項１３３〜１５８および２１４〜２３０のいずれか１項により製造される調節されたＮＫ細胞の集団。
【請求項２３４】
請求項１８５〜２１３のいずれか１項により製造される調節された養子ＮＫ細胞の集団。
【請求項２３５】
請求項１５９〜１８４のいずれか１項により製造される選択的に拡大されたＮＫ細胞を含む、調節された免疫細胞の集団。
【請求項２３６】
調節されていないＮＫ細胞と比較し、ＣＤ１０７ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６、ＫＩＲ、ＣＤ２、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６の１つまたは複数において増大した発現を有する調節されたＮＫ細胞の集団であって、その前記発現が、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上増大される、集団。
【請求項２３７】
請求項２３２〜２３６のいずれか１項に記載の調節された細胞、および治療上許容される培地を含む、治療組成物。
【請求項２３８】
ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つまたは複数の追加の添加剤をさらに含む、請求項２３７の治療組成物。
【請求項２３９】
治療上十分量の請求項２３７または２３８の治療組成物を、養子細胞療法を必要とする対象に投与することにより、対象を処置する方法であって、前記細胞療法が、自家または同種であり；前記対象が、自己免疫異常、血液系腫瘍、固形腫瘍、癌、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、もしくはＢＫポリオーマウイルスと関連する感染症を有する、方法。
【請求項２４０】
治療上十分量の請求項２３７の治療組成物を、抗体、化学療法剤、または放射性処置と組み合わせて投与することにより、対象を処置する方法であって、前記抗体、化学療法剤、または放射性処置が、前記医薬組成物の投与に先立ち、最中、または後である、方法。
【請求項２４１】
請求項７７〜２３０の方法に記載の細胞療法のための治療組成物の製造のための混合物の使用であって、前記混合物が、
（ａ）免疫細胞の単離された集団、および
（ｂ）ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物
を含み、
前記ＧＳＫ３阻害剤が、（ａ）の前記細胞を調節する能力がある、使用。
【請求項２４２】
免疫細胞の前記単離された集団が、ＮＫ細胞を含む、請求項２４１の使用。
【請求項２４３】
調節される際、免疫細胞の前記単離された集団が、調節されていないＮＫ細胞を含む免疫細胞の単離された集団と比較して、
（ａ）少なくともＣＤ５７における増大した遺伝子発現；
（ｂ）増大したＣＤ５７＋細胞亜集団；
（ｃ）ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む増大した養子ＮＫ細胞亜集団；（ｄ）改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは持続性；ならびに／または（ｅ）改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率；
の少なくとも１つを有するＮＫ細胞を含む、請求項２４２の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年１月２０日に出願された米国仮出願第６２／２８１，０６４号、および２０１６年５月１３日に出願された米国仮出願第６２／３３６，３３９号の優先権を主張し、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、養子細胞免疫療法の分野と広く関係する。より具体的には、本開示は、養子細胞療法に適した免疫細胞を調節するための小分子の使用と関係する。
【背景技術】
【０００３】
養子免疫療法は、癌、腫瘍、または感染症を有する患者への免疫細胞の投与を含み、これにより、投与された免疫細胞が、患者に治療効果をもたらす。一般的に言うと、免疫療法に適した免疫細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞、および造血幹細胞または造血前駆細胞を含むが、これらに限定されない。患者において完全かつ永続的な疾患応答を仲介することは、これらの細胞ベースの免疫療法の中心となる目標である。
【０００４】
ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ−Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）および腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）を含むが、これらに限定されない、養子Ｔ細胞療法の有効性の背景にある生物学的機序の我々の理解の進歩は、導入されたＴ細胞と関連するある種の特性の重要性を明確に示し、宿主、および癌の処置の成功のため克服されることを必要とする腫瘍細胞により引き起こされる阻害バリアの複雑さを明らかにした。Ｔ細胞因子の中で、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合活性、増殖および生存能力、腫瘍部位への遊走、ならびに腫瘍内でエフェクター機能を持続する能力は、相関研究において、悪性細胞の根絶の引き金を引くための重大な決定要因であることが示された。しかしながら、別の階層の複雑さに加えて、これらの望ましい特性のいくつかは認識されたが、これらの特性をもたらす経路またはプレーヤーはまだ不明確であり、それが、人の、介入する能力、ならびにそれらの治療上の使用のため所望される量および質を有する細胞を得る能力を制限する。
【０００５】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を例として使用すると、療法は、ＣＡＲ−Ｔ能力および持続性、腫瘍への遊走、免疫抑制腫瘍微小環境、腫瘍不均一性、および患者の安全性を含む複数の課題を克服しなければならない。これらの課題を克服するために、複数のアプローチが適用されている。例えば、特異的Ｔ細胞サブセットを、治療上の使用のため選択し、ＣＡＲのさらなる操作を使用して、腫瘍ターゲティング、ＣＡＲ能力、および的中した／腫瘍を離れた安全性の問題が改善されてもよい。しかしながら、ＣＡＲ−Ｔ持続性および遊走を含む、ＣＡＲ−Ｔ治療能力の改善は、解消されるべきままである。Ｔ細胞療法の生体内有効性は、プロセスまたは原料に入れるＴ細胞の開始集団と、利用される生体外拡大および活性化方法の両方に依存性である製造プロセスにより、強く影響され得ることが示されている。投与されたＴ細胞の分化状態は、生体内持続性および抗腫瘍活性に有意に影響し得ることが示されている。Ｔヘルパー（ＣＤ４＋Ｔ細胞）ならびに細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、具体的には、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌマーカーの発現により特徴付けられる、ナイーブ（Ｔｎ）、幹細胞メモリー（Ｔｓｃｍ）ならびにセントラルメモリー（Ｔｃｍ）Ｔ細胞は、マウスモデルにおいて（Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）、と非ヒト霊長類モデルにおいて（Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００８）の両方で優れた抗腫瘍活性を仲介する。
【０００６】
製造プロセス中に、治療細胞（または細胞集団）は、典型的には活性化され、拡大される。このプロセスは、一般的に、細胞の分化をもたらし、より分化した状態にある細胞の割合の増大につながり、Ｔ細胞の場合、より分化した細胞は、エフェクターメモリーまたはエフェクターＴ細胞として表現型の上で特徴付けられる。患者に注入されると、これらのより分化した細胞は、より少なく分化した状態にある細胞と比較して、より低い増殖する能力、およびより低い、長期間生存するかまたは持続する集団として持続する能力を有する。したがって、所望される免疫細胞サブセットを維持し、拡大するのに有用な組成物および方法だけでなく、拡大中に細胞分化を低減し、細胞をより少なく分化した細胞に脱分化させ、これにより、様々な養子免疫療法の有効性を改善するために、より高い増殖し、持続する能力を有し、持続する所望される免疫細胞サブセットを得ることも、当該技術分野において、急ぎ必要である。
【０００７】
同様の有効性の問題は、ＮＫ細胞ベースの療法において同じく存在する。ナチュラルキラー細胞は、比較的短期間生存するとして特徴付けられ、刺激への二次的曝露に応答して最小の変化を提示し、すなわち、制限された標的メモリー応答を提示する固有の免疫細胞として伝統的に分類された。しかしながら、近年の研究が、自己寛容および持続するＮＫ細胞活性を含む重要な役割を果たす活性化するＮＫ細胞受容体と阻害性ＮＫ細胞受容体の両方についての情報を明らかにした。データは、周辺環境に容易に順応し、同じ抗原への二次的曝露に応答するための基本である抗原特異的免疫記憶を編成する、ＮＫ細胞の能力を示した。現在養子ＮＫ細胞またはメモリーＮＫ細胞と呼ばれる、ＮＫ細胞の亜集団が、幾つかのグループにより同定された。これらの細胞は、より長期間生存すること、および初回曝露後に刺激への増強された応答を有することを含む、ＣＤ８＋Ｔ細胞に類似する多くの機能的特徴を有する。これらの特性は、基準のＮＫ細胞と比較して、より有効な細胞療法ストラテジーをもたらし得る。生体内での永続的な抗原特異的認識を仲介する養子／メモリーＮＫ細胞の拡大および維持は、ＮＫ細胞ベースの養子免疫療法の改善の鍵となるだろう。
【０００８】
さらに、ＴおよびＮＫ細胞の様に、改善された細胞療法を生じるための調節の標的とされ得る、自然免疫系と養子免疫系の両方において役割を果たすＣＤ１ｄ拘束性Ｔ細胞の一種である、より有効なＮＫＴ細胞を単離するための改善が成され得ることが考えられる。
【０００９】
患者に入れられる細胞の最終的な状態、または具体的には、細胞サブタイプは、製造プロセスにより大部分において規定され得るので、そのプロセスの重要性を誇張し過ぎることはない。細胞培養および拡大中に、所望される分化状態、ならびに／もしくは養子免疫細胞特徴を有する細胞亜集団を優先的に維持または拡大することは、細胞ベースの療法の有効性を増強するのに極めて有益であり得る。したがって、所望されるＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞サブセットを量と質の両方で増強することができる製造アプローチは、それらの治療有効性の有意な強化をもたらし得る。
【００１０】
当該技術分野において、改善された治療有効性を有する免疫細胞サブセットが実質的に必要である。しかしながら、治療免疫細胞のある種の望ましい特性が公知である一方、これらの特性を達成するのに関与する経路および／またはプレーヤーは、多くが未知である。本発明の方法および組成物は、免疫細胞療法の分野において、これらの要求に対処し、他の関連する利点をもたらす。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、免疫細胞の１つもしくは複数の集団または亜集団を、養子免疫療法のそれらの治療可能性を改善するために調節するための組成物および方法を提供する。例えば、より良好な免疫療法結果をもたらすことが予想される以下の性質：遊走、ホーミング、細胞毒性、維持、拡大、持続性、寿命延長、所望される状態の分化の少なくとも１つにおける改善を提示する細胞の亜集団の数もしくは割合を増大させることにより、治療免疫細胞の増殖、持続性、細胞毒性、および／または細胞リコール／メモリーを改善するための単独あるいは組み合わせのいずれかで、１つあるいは複数の化合物を提供することが、本発明の目的である。
【００１２】
本発明の１つの態様は、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物を提供し、組成物は、表１において挙げられる化合物：ドルソモルフィン；ヘプテリジン酸；１−ピロリジンカルボジチオ酸、アンモニウム塩；２−デオキシグルコース（２−ＤＧ）；ＧＳＫ３阻害剤；Ｒｈｏキナーゼ阻害剤；ＭＥＫ阻害剤；ＰＤＫ１アゴニスト；ＴＧＦβ阻害剤；６−メルカプトプリン；ＡＣ−９３２５３ヨウ化物；チラトリコール；ＰＩ−１０３；フルベストラント；タプシガルジン；ＳＵ４３１２；テルミサルタン；サイクロスポリンＡ；１，３，５−トリス（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−１Ｈ−ピラゾール；ＢＡＹ６１−３６０６；プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム；ラパマイシン；ＨＳ１７３；ＬＹ２９４００２；ピクチリシブ；５−アザシチジン；フルダラビン；ロスコビチン、（Ｓ）−異性体；ＰＡＣ−１、８−キノリノール、５，７−ジクロロ−；ニトロフラントイン；８−キノリノール、５−クロロ−７−ヨード−；２−ナフタセンカルボキサミド，７−クロロ−４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒ；ニフロキサジド；トスフロキサシン塩酸塩；セルトラリン；ジエチレントリアミンペンタ酢酸、ペンタナトリウム；塩化エドロホニウム；ＢＩＸ０１２９４；テルフェナジン；およびｄｍＰＧＥ２からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む。表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤は、当該１つもしくは複数の薬剤を使用した免疫細胞の調節を介して、免疫細胞あるいはその１つまたは複数の亜集団の治療可能性を改善する。幾つかの実施形態において、免疫細胞の調節は生体外でである。
【００１３】
幾つかの実施形態において、表１において挙げられる化合物の１つまたは複数は、細胞拡大、維持、および／または分化を調節し、これにより、免疫細胞、またはその１つもしくは複数の亜集団の増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、細胞リコール、ならびに／あるいは持続性を改善する。
【００１４】
１つの実施形態において、表１において挙げられる化合物の１つまたは複数は、生体外と生体内の両方で、免疫細胞、またはその１つもしくは複数の亜集団の細胞生存率を改善する。
【００１５】
１つの実施形態において、表１において挙げられる化合物の１つまたは複数は、免疫細胞の１つまたは複数の所望される細胞亜集団の割合を増大する。
【００１６】
幾つかの実施形態において、本発明は、Ｔ、ＮＫおよびＮＫＴ細胞を含むが、これらに限定されない、免疫細胞の集団もしくは亜集団の治療効果を改善するための１つまたは複数の選択された薬剤を本明細書において提供する。幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、処置の対象となる免疫細胞はＴ細胞を含み、したがって、１つまたは複数の所望される細胞亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／またはセントラルメモリーＴ細胞を含む増大した割合を有する。幾つかの実施形態において、薬剤を使用した処理の対象となる免疫細胞は、ＮＫＴ細胞を含み、したがって、１つまたは複数の所望される細胞亜集団は、タイプＩ  ＮＫＴ細胞を含む増大した割合を有する。幾つかの他の実施形態において、薬剤を使用した処理の対象となる免疫細胞は、ＮＫ細胞を含み、ここで、１つまたは複数の所望される細胞亜集団は、養子ＮＫ細胞を含む増大した割合を有する。
【００１７】
幾つかの実施形態において、組成物は、表１において挙げられる、化合物、またはその誘導体、類似体もしくは医薬的に許容される塩からなる群から選択される１つあるいは複数の薬物を含む。化合物、またはその誘導体、類似体もしくは医薬的に許容される塩は、表１の化合物のエステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグをさらに含む。
【００１８】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群Ｉから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群ＩＩ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【００１９】
群Ｉは、ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、１−ピロリジンカルボジチオ酸、および２−ＤＧを含む。理論に制限されるものではないが、群Ｉの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、細胞代謝および栄養素センシングに影響を及ぼす。
【００２０】
群ＩＩは、ＧＳＫ３阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、６−メルカプトプリン、ＡＣ−９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ−１０３、フルベストラント、タプシガルジン、ＳＵ４３１２、Ｕ０１２６、テルミサルタン、サイクロスポリンＡ、１，３，５−トリス（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−１Ｈ−ピラゾール、ＢＡＹ６１−３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ラパマイシン、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、およびピクチリシブを含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＩの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、様々な機能的経路におけるシグナル伝達に影響を及ぼす。
【００２１】
群ＩＩＩは、５−アザシチジン、フルダラビン、ロスコビチン、およびＰＡＣ−１を含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＩＩの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、細胞増殖およびアポトーシスに影響を及ぼす。
【００２２】
群ＩＶは、５，７−ジクロロ−８−キノリノール、２−ナフタセンカルボキサミド，７−クロロ−４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒ、ニフロキサジド、およびトスフロキサシン塩酸塩を含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＶの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、感染過程に関連する細胞特性に影響を及ぼし得る。
【００２３】
群Ｖは、セルトラリン、ジエチレントリアミンペンタ酢酸、塩化エドロホニウム、ＢＩＸ０１２９４、テルフェナジン、およびｄｍＰＧＥ２を含む。理論に制限されるものではないが、群Ｖの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、拡大、維持、分化、脱分化、生存率、増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性に関連する他の細胞特性に一般的に影響を及ぼす。
【００２４】
幾つかの他の実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【００２５】
なお他の実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＶ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【００２６】
さらに他の実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【００２７】
なお幾つかの他の実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群Ｖから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／もしくは群ＩＶから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【００２８】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２−ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤と、表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の追加薬剤の組み合わせを含む。幾つかの特定の実施形態において、組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２−ＤＧからなる群から選択される２つまたはそれ以上の薬剤の相乗的組み合わせを含む。
【００２９】
幾つかの実施形態において、表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む。
【００３０】
本発明の別の態様は、免疫細胞の集団または亜集団、ならびに表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物を提供する。幾つかの実施形態において、免疫細胞を１つまたは複数の薬剤と接触させて、かかる処理をしない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の免疫細胞の治療可能性が改善される。幾つかの実施形態において、免疫細胞を１つまたは複数の薬剤と接触させて、同じ処理をしない免疫細胞と比較し、細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率が改善される。さらに幾つかの他の実施形態において、免疫細胞を１つまたは複数の薬剤と接触させて、同じ処理をしない免疫細胞と比較し、細胞増殖、細胞毒性、持続性、および／またはリコールが改善される。
【００３１】
幾つかの実施形態において、１つまたは複数の薬剤と接触させた免疫細胞は、同じ処理をしない免疫細胞と比較し、増大した数または割合の、免疫細胞の所望される亜集団を有する。幾つかの実施形態において、免疫細胞は、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む。１つの実施形態において、組成物はＴ細胞の集団を含み、したがって、薬剤と接触させた後の免疫細胞の所望される亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／またはセントラルメモリーＴ細胞を含む。幾つかの実施形態において、組成物はＮＫＴ細胞の集団を含み、したがって、薬剤と接触させた後の免疫細胞の所望される亜集団は、タイプＩ  ＮＫＴ細胞を含む。さらに幾つかの他の実施形態において、免疫細胞は、ＮＫ細胞の集団を含む。幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞またはＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む。したがって、薬剤と接触させた後の免疫細胞の所望される亜集団は、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞を含む。他の実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む。
【００３２】
幾つかの実施形態において、組成物の免疫細胞の集団または亜集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる。対象は、健常であってもよく、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有していてもよいか、または遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与されていてもよい。幾つかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清陽性であってもよい。幾つかの他の実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【００３３】
さらに別の実施形態において、免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか、あるいは造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する。幾つかの特定の実施形態において、組成物の免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。１つの実施形態において、ＣＤ１６は、ｈｎＣＤ１６（高親和性の切断不可能なＣＤ１６）である。
【００３４】
なお幾つかの他の実施形態において、組成物の免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化する。１つの実施形態において、幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。１つの実施形態において、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。幾つかの実施形態において、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、または少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。１つの特定の実施形態において、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６をコードする外来核酸を含む。幾つかの他の実施形態において、組成物の免疫細胞は、造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する。幾つかの実施形態において、調節後の免疫細胞の所望される細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む。１つの実施形態において、免疫細胞の所望される細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む。１つの特定の実施形態において、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ｈｎＣＤ１６の発現を含む。さらに別の実施形態において、ｈｎＣＤ１６の発現を含むＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞である。別の実施形態において、ｈｎＣＤ１６の発現を含むＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む。
【００３５】
幾つかの実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびラパマイシンの１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤を含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞、および表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター；抗体、もしくは抗体フラグメント；および化学療法剤、放射性部分、もしくは免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つまたは複数の追加の添加剤をさらに含む。これらの実施形態の幾つかにおいて、抗体、または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態において、抗体、または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。幾つかの実施形態において、追加の添加剤は含む。化学療法剤は、細胞毒性抗腫瘍薬、すなわち、腫瘍細胞を優先的に殺傷するか、もしくは迅速に増殖する細胞の細胞サイクルを妨害する化学薬剤、または癌幹細胞を根絶することが見出されている化学薬剤、および腫瘍細胞の成長を妨げるかまたは低減するために治療上使用される化学薬剤を指す。化学療法剤はまた、ときに、抗腫瘍または細胞毒性薬もしくは薬剤としても言及され、当該技術分野において周知である。
【００３６】
１つの特定の実施形態において、組成物は、免疫細胞の集団または亜集団と、ＧＳＫ３阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびｍＴＯＲ阻害剤の１つまたは複数の混合物を含み、ここで、免疫細胞はＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン、およびその類似体または誘導体から選択される。幾つかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン、ならびにシロリムス、シロリムス誘導体、テムシロリムス、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン（エベロリムス）、４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−テトラゾール−ラパマイシン、および他のＯ−アルキル化もしくはＯ−メチル化ラパマイシン誘導体を含む、その類似体または誘導体から選択される。１つの実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤を含む。別の実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびラパマイシンを含む。さらに別の実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤を含む。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、１つまたはそれ以上のＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストをさらに含む。幾つかの実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、もしくはキサンテノン、またはその類似体もしくは誘導体を含む。幾つかの実施形態において、ＣＤＮは、合成であるか、または原核生物の細胞もしくは哺乳類細胞に由来してもよい。幾つかの他の実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＡＭＰ、ｃ−ジ−ＧＭＰ、ｃ−ジ−ＡＭＰ、ｃ−ジ−ＩＭＰ、ｃ−ジ−ＵＭＰ、ｃＡＭＰ−ＧＭＰ、Ｒ，Ｒジチオ−修飾ＣＤＡ化合物（ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡおよびＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡ）、ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ｃＧＡＭＰ、ＤＭＸＡＡ（５，６−ジメチルキサンテノン−４−酢酸）、ならびにその類似体および誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの分子を含む。
【００３７】
本発明の１つの態様は、表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物であって、１つまたは複数の薬剤が、免疫細胞の調節を介してその免疫細胞の治療可能性を改善する、組成物を提供する。当該組成物の幾つかの実施形態において、薬剤は、細胞拡大、維持および／もしくは分化を調節する能力；細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、リコール、ならびに／もしくは持続性を改善する能力；細胞生存率を改善する能力；ならびに／または免疫細胞の１つもしくは複数の所望される細胞亜集団の割合を増大する能力がある。幾つかの実施形態において、誘導体および類似体は、表１の薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグを含む。
【００３８】
幾つかの実施形態において、当該薬剤による調節に適した免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞、および／またはＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、調節された免疫細胞は、増大した割合を有する１つまたは複数の所望される細胞亜集団を含み、亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メ｀モリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；タイプＩ  ＮＫＴ細胞；またはＣＤ５７＋ＮＫ細胞であってもよい。幾つかの実施形態において、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、当該養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つとして特徴付けられる。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋として特徴付けられる。
【００３９】
幾つかの実施形態において、当該薬剤による調節に適した免疫細胞は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる。１つの実施形態において、免疫細胞は、健常対象；自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；またはＣＭＶ血清陽性である対象から単離される。幾つかの他の実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【００４０】
幾つかの他の実施形態において、当該薬剤による調節に適した免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか、あるいは造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する。幾つかの実施形態において、当該幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。他の実施形態において、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。
【００４１】
幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫ、ＮＫＴ細胞を含む様々な免疫細胞に分化させるための幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、または少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。したがって、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞からもたらされる調節された免疫細胞の所望される亜集団はまた、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。１つの特定の実施形態において、免疫細胞の所望される細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、１つまたは複数の誘導されたもしくは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体を含む。１つの特定の実施形態において、免疫細胞調節から得られた所望される亜集団において含まれるＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ｈｎＣＤ１６の発現を含む。別の実施形態において、ｈｎＣＤ１６を発現するＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む。
【００４２】
幾つかの実施形態において、免疫細胞は、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物により調節される。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、１つまたは複数のＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストをさらに含む。したがって、幾つかの実施形態において、組成物は、ＮＫ細胞の集団、およびＧＳＫ３阻害剤を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＮＫ細胞の集団、ＧＳＫ３阻害剤、およびＩＬ１５を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＮＫ細胞の集団、ＧＳＫ３阻害剤、ＩＬ１５、およびＳＴＩＮＧアゴニストを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞は、モジュレーター、ならびにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒を含む組成物により調節される。
【００４３】
本発明のなお別の態様は、表１において挙げられる１つもしくは複数の薬剤、またはその誘導体もしくは類似体を含む組成物と接触させたか、あるいは調節された免疫細胞の単離された集団を含む組成物を提供する。幾つかの実施形態において、提供される組成物は、Ｔ、ＮＫおよびＮＫＴ細胞を含むが、これらに限定されない、免疫細胞の処理された単離された集団または亜集団を有する治療組成物である。治療組成物は、調節薬剤を実質的に含まない緩衝液で洗浄することができる。
【００４４】
幾つかの実施形態において、調節された細胞集団は、調節されていない細胞集団と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する免疫細胞を含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、１つまたは複数の薬剤による処理をしない免疫細胞と比較し、改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率を有する。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、１つまたは複数の薬剤による処理をしない免疫細胞と比較し、改善された細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、細胞リコール、ならびに持続性を有する。幾つかの他の実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、同じ処理をしない免疫細胞と比較し、増大した数もしくは割合の、免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団を有する。
【００４５】
幾つかの実施形態において、表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤で処理された免疫細胞の単離された集団は、Ｔ細胞を含み、したがって、免疫細胞の得られた１つまたは複数の所望される亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／またはセントラルメモリーＴ細胞を含む。幾つかの実施形態において、１つまたは複数の薬剤で処理された免疫細胞の単離された集団は、ＮＫＴ細胞を含み、したがって、免疫細胞の得られた１つまたは複数の所望される亜集団は、タイプＩ  ＮＫＴ細胞を含む。さらに幾つかの他の実施形態において、１つまたは複数の薬剤で処理された免疫細胞の単離された集団は、ＮＫ細胞を含み、したがって、免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団は、養子ＮＫ細胞を含む。
【００４６】
提供される組成物の幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染症の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離されてもよい。対象は、健常であってもよく、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有していてもよいか、または遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与されていてもよい。幾つかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清陽性であってもよい。幾つかの他の実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【００４７】
提供される組成物の幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から分化してもよい。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、薬剤での処理に先立ち、または処理中に、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から分化してもよい。幾つかの実施形態において、幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。幾つかの実施形態において、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。幾つかのさらなる実施形態において、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、前駆細胞、調節のためもたらされた免疫細胞、または調節された、もたらされた免疫細胞は、ゲノム的に操作され、例えば、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。１つの特定の実施形態において、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６をコードする外来核酸を含む。
【００４８】
提供される組成物の幾つかの他の実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換してもよい。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、薬剤による処理に先立ち、もしくは処理中に、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換してもよい。
【００４９】
本発明の別の態様は、免疫細胞を、表１において挙げられる化合物、ならびにその誘導体および類似体からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む、十分量の組成物と、調節されていない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節された免疫細胞の集団を得るのに十分な時間、接触させることを含む、免疫細胞を調節する方法を提供する。幾つかの実施形態において、誘導体および類似体は、表１の薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグを含む。
【００５０】
当該方法の幾つかの実施形態において、調節された免疫細胞は、表１の１つまたは複数の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性；改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率；ならびに／あるいは増大した数もしくは割合の、免疫細胞の１つまたは複数の所望される亜集団を有する細胞を含む。当該方法の幾つかの実施形態において、方法は、１つまたは複数の所望される亜集団を調節された免疫細胞から単離することをさらに含む。１つの実施形態において、調節のための免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。別の実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞、またはＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む。当該方法を使用した免疫細胞調節後、１つの実施形態において、調節された免疫細胞における１つまたは複数の所望される亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；タイプＩ  ＮＫＴ細胞；またはＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含み得る。１つの実施形態において、調節後に得られたＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つにより特徴付けられる。
【００５１】
当該一般的な方法の幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる。幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、健常対象；自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象；遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象；またはＣＭＶ血清陽性である対象から単離される。幾つかの他の実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、ゲノム的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、ゲノム的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【００５２】
幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化する。幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する。幾つかの実施形態において、当該幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。幾つかの実施形態において、当該前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。さらに幾つかの他の実施形態において、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、および／または少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。したがって、それからもたらされた調節された免疫細胞の所望される細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有する免疫細胞を含む。１つの実施形態において、免疫細胞の所望される亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。
【００５３】
幾つかの実施形態において、当該遺伝子的に修飾されたモダリティは、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、１つまたは複数の欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、あるいはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子を含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、１つもしくは複数の誘導されたまたは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体を含む。１つの実施形態において、調節された免疫細胞の所望される亜集団において含まれるＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ｈｎＣＤ１６の発現を含む。別の実施形態において、ｈｎＣＤ１６を発現するＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む。
【００５４】
免疫細胞を調節する当該方法の幾つかの実施形態において、組成物は、ＧＳＫ３阻害剤をモジュレーターとして含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、１つまたは複数のＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストをさらに含む。幾つかの実施形態において、モジュレーターを含む組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む。
【００５５】
免疫細胞を調節する方法の幾つかの実施形態において、当該「十分な時間」または「十分な長さの時間」は、１６時間以上、１４時間以上、１２時間以上、１０時間以上、８時間以上、６時間以上、４時間以上、２時間以上、または間の任意の長さの時間以上である。したがって、当該十分な長さの時間は、例えば、１５時間以上、１３時間以上、１１時間以上、９時間以上、７時間以上、５時間以上、３時間以上、または１時間以上である。方法の幾つかの他の実施形態において、当該十分な長さの時間は、２４時間以上、３６時間以上、４８時間以上、６０時間以上、７２時間以上、または間の任意の長さの時間以上である。したがって、当該十分な長さの時間は、例えば、３０時間以上、４２時間以上、５４時間以上、６６時間以上、７８時間以上、９０時間以上である。
【００５６】
当該方法の幾つかの実施形態において、免疫細胞は、調節中および／または後、フィーダーフリーな環境にある。フィーダーフリーな条件は、フィーダー細胞フリー、およびフィーダー馴化培地フリーを含む。当該方法の幾つかの実施形態において、免疫細胞は、調節中、フィーダー細胞と共培養される。
【００５７】
本発明の別の態様は、免疫細胞を、ＧＳＫ３阻害剤を含む、十分量の組成物と、調節されていない免疫細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節された免疫細胞の集団を得るのに十分な時間接触させることを含む、免疫細胞を調節する方法を提供する。
【００５８】
本発明のさらなる態様は、ＮＫ細胞を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節されていないＮＫ細胞と比較し、養子細胞療法の改善された治療可能性を有する調節されたＮＫ細胞の集団を得るのに十分な時間接触させることを含む、ＮＫ細胞を調節する方法を提供する。当該一般的な方法の幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、改善された増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性を有する。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、改善された細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率を有する。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させていないＮＫ細胞と比較し、増大した数または割合の、ＮＫ細胞の１つまたは複数の所望される亜集団を有する。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞の改善された特性は、試験管内でである。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞の改善された特性は、生体内でである。幾つかの実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む。
【００５９】
ＮＫ細胞をＧＳＫ３阻害剤で調節する方法の１つの実施形態において、方法は、１つまたは複数の所望される亜集団を調節されたＮＫ細胞から単離することをさらに含む。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞の１つまたは複数の所望される亜集団は、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ならびにＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを含む。
【００６０】
ＮＫ細胞を調節する当該方法の幾つかの実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離されるか、またはそれに含まれる。１つの実施形態において、ＮＫ細胞は、健常対象から単離される。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症または固形腫瘍を有している対象から単離される。１つの実施形態において、ＮＫ細胞は、遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与された対象から単離され；さらに別の実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ＣＭＶ血清陽性である対象から単離される。幾つかの他の実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【００６１】
幾つかの他の実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、または核酸置換を含む。１つの実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。別の実施形態において、調節のためのＮＫ細胞は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか、あるいは造血系または非造血系の非多能性細胞から試験管内で分化転換する。幾つかの実施形態において、上記当該幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。幾つかの実施形態において、当該前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、またはＮＫ前駆細胞である。幾つかの特定の実施形態において、上記当該幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、または核酸置換を含む。１つの実施形態において、上記当該幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む当該幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞を使用して、ＮＫ細胞を含む分化した免疫細胞がもたらされてもよい。
【００６２】
１つの実施形態において、調節され、もたらされたＮＫ細胞の所望される亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＮＫ細胞を含む。１つの実施形態において、調節されたＮＫ細胞の所望される亜集団は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを有するＣＤ５７＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、ならびに／もしくは生存を促進するタンパク質の少なくとも１つを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；ならびに（ｉｉ）誘導されたまたは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む。１つの特定の実施形態において、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ｈｎＣＤ１６の発現を含む。別の実施形態において、ｈｎＣＤ１６を発現するＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つをさらに含む。
【００６３】
方法の幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つをさらに含む。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、１つまたは複数のＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストをさらに含む。方法の幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む。
【００６４】
幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１である。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤調節に十分な時間は、１６時間以上である。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、少なくとも２倍増大した拡大を有する。幾つかの他の実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、ＩＦＮγおよび／もしくはＴＮＦαを含む１つまたは複数の増大した産生を有する。さらに幾つかの他の実施形態において、増大した数もしくは割合を有するＮＫ細胞の１つまたは複数の亜集団は、養子ＮＫ細胞；ＣＤ５７を発現するＮＫ細胞；またはＣＤ５７およびＮＫＧ２Ｃを発現する細胞を含む。１つの実施形態において、この方法は、フィーダーフリーな環境において実行される。当該方法の幾つかの実施形態において、免疫細胞は、調節中、フィーダー細胞と共培養される。
【００６５】
集団をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させて、集団において選択的に拡大されたＮＫ細胞を得ることを含む、免疫細胞の集団を培養する方法も提供される。方法は、免疫細胞をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させるのに先立ち、免疫細胞の集団を対象から得ること、ここで、免疫細胞は、末梢血単核細胞を含む、ならびにＣＤ３およびＣＤ１９細胞を、末梢血単核細胞の集団から枯渇させることをさらに含む。
幾つかの実施形態において、対象は、健常であり、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有する対象であるか、またはＣＭＶ血清陽性である対象であるか、または遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与されていてもよい。幾つかの実施形態において、拡大されたＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触されていないＮＫ細胞と比較したとき、改善された細胞毒性、ならびにサイトカイン応答および分泌を有し；改善された増殖、細胞リコール、および／または持続性を有し；改善された細胞拡大、および／または維持を有し；成熟に関して増大したサブタイプ偏向を有し；細胞集団において増大した数もしくは割合の１つまたは複数の亜集団を有し；ならびに／あるいは養子／メモリー細胞様状態を維持する。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、少なくとも２倍増大した拡大を有する。幾つかの他の実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、ＩＦＮγおよび／もしくはＴＮＦαを含む１つまたは複数のサイトカインの増大した産生を有する。さらに幾つかの他の実施形態において、増大した数もしくは割合を有するＮＫ細胞の１つまたは複数の亜集団は、養子ＮＫ細胞；ＣＤ５７を発現するＮＫ細胞；またはＣＤ５７およびＮＫＧ２Ｃを発現する細胞を含む。１つの実施形態において、この方法は、フィーダーフリーな環境において実行される。幾つかの実施形態において、フィーダー細胞と共培養することを含む方法が実行される。幾つかの他の実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、１つまたは複数のＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＭＥＫ阻害剤、およびラパマイシンをさらに含む。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９９０２１である。
【００６６】
免疫細胞の集団を含む組成物、およびＧＳＫ３阻害剤を含む組成物がさらに提供され、ここで、集団は、集団をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物で調節する際に、養子細胞療法の免疫細胞の改善された治療可能性を有する免疫細胞を含む。
【００６７】
出願のさらに別の態様は、養子ＮＫ細胞を含む免疫細胞の集団を、ＧＳＫ３阻害剤を含む十分量の組成物と、調節された養子ＮＫ細胞の集団を得るのに十分な時間接触させることを含む、養子ＮＫ細胞を調節する方法を提供する。当該方法は、免疫細胞の集団を対象から得ること、ならびに免疫細胞をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させるのに先立ち、ＣＤ３および／またはＣＤ１９細胞を免疫細胞の得られた集団から枯渇させることをさらに含んでもよい。幾つかの実施形態において、方法は、免疫細胞をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させる工程の前または中に、免疫細胞の集団を活性化することをさらに含む。幾つかの実施形態において、調節された養子ＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させていない養子ＮＫ細胞と比較し、改善された細胞毒性、ならびにサイトカイン応答および分泌；改善された増殖、細胞リコール、および／もしくは持続性；ならびに／または改善された細胞拡大、および／もしくは維持を有する。幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団において含まれる調節された養子ＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させた後、少なくとも２倍増大した拡大を有する。１つの実施形態において、この方法は、フィーダーフリーな環境において実行される。１つの実施形態において、この方法は、フィーダー細胞と共に実行される。幾つかの他の実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数をさらに含む。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９９０２１である。調節されていないＮＫ細胞と比較し、１つまたは複数のＣＤ１０７ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６、ＫＩＲ、ＣＤ２、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６における増大した発現を有する調節されたＮＫ細胞の集団であって、その発現が、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上増大される、集団も提供される。
【００６８】
本発明のさらなる態様は、細胞療法のための調節された免疫細胞を含む治療組成物を作製する上記免疫細胞調節方法の使用を提供する。幾つかの実施形態において、調節された免疫細胞は、Ｔ、ＮＫ／またはＮＫＴ細胞を含む。幾つかの実施形態において、調節されたＮＫ細胞は、養子ＮＫ細胞を含む。本発明の追加の態様は、本明細書において提供される方法により作製される選択的に拡大されたＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞の集団を提供する。
【００６９】
本発明のまだ別の態様は、本明細書において開示される方法および組成物を使用して得られる調節された細胞、ならびに治療上許容される培地を含む治療組成物を提供する。治療組成物の幾つかの実施形態において、組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つまたは複数の追加の添加剤をさらに含む。
【００７０】
治療上十分量の上記当該治療組成物を養子細胞療法を必要とする対象に投与することにより、対象を処置する方法がさらに提供される。幾つかの実施形態において、細胞療法は自家性である。幾つかの他の実施形態において、細胞療法は同種である。幾つかの実施形態において、療法を必要とする対象は、自己免疫異常、血液系腫瘍、固形腫瘍、癌、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、もしくはＢＫポリオーマウイルスと関連する感染症を有する。幾つかの実施形態において、調節された免疫細胞を使用した対象を処置する方法は、抗体、化学療法処置、または放射性処置と組み合わせて当該治療組成物を投与することにより、実行され、ここで、抗体、化学療法処置、または放射性処置は、治療組成物の投与に先立ち、投与中、または投与後である。
【００７１】
本発明のまだ別の態様は、本明細書において提供される方法による細胞療法のための治療組成物の製造のための混合物の使用を提供し、製造のための混合物は、免疫細胞の単離された集団、およびＧＳＫ３阻害剤を含む免疫細胞調節のための組成物を含む。
【００７２】
この使用の様々な目的および利点は、説明および例示の目的で、本発明のある種の実施形態を説明する添付の図面と併せて以下の説明から明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、（Ａ）生存ＣＤ８＋細胞集団および（Ｂ）生存ＣＤ４＋細胞集団における、ＣＣＲ７とＣＤ６２Ｌの両方を共発現する細胞のパーセンテージ、ならびにナイーブ、幹細胞メモリー、またはセントラルメモリーＴ細胞の絶対数の相対的測定のｚ値のグラフ表現である。
【００７４】
【図２】図２は、複数日間の培養プロセスが、ＰＢＭＣ由来のＮＫ細胞を選択的に拡大し、Ｔ細胞を拡大しないことを示すグラフ表現である。枯渇前（左）および枯渇後（中央）、ならびにＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍＬ）プラス５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１（右）と７日間の培養後の、アフェレーシス産物由来のＣＤ５６＋およびＣＤ３＋細胞のパーセンテージが示された。
【００７５】
【図３】図３は、複数日間のＧＳＫ３ｉ培養プロセスが、現行のプロセスと比べ、トータルのＮＫ細胞の純度、数、および養子ＮＫ細胞の数を増大することを示すグラフ表現である。
【００７６】
【図４】図４は、ＧＳＫ阻害が、養子（ＮＫＧ２Ｃ＋／ＣＤ５７＋）およびトータルのＣＤ５７＋サブセットに関して集団を偏向させる、ＮＫ細胞拡大を効率的に増加させる７日間の培養において鍵となる試薬であることを示すグラフ表現である。Ａ．細胞数における増加倍数。Ｂ．細胞のパーセンテージ。
【００７７】
【図５】図５は、ＧＳＫ３阻害が、未成熟ＮＫ細胞の成熟をもたらすことを示すグラフ表現である。Ａ．７日間のＧＳＫ３ｉ培養期間後のゲーティング方法および細胞四分割。Ｂ．それぞれの細胞四分割における細胞増殖および細胞表面マーカー発現。
【００７８】
【図６ＡＢ】図６は、ＧＳＫ３阻害が、細胞傷害活性を増強することを示すグラフ表現である。Ａ．Ｋ５６２細胞特異的殺傷。Ｂ．ラージ細胞特異的殺傷。Ｃ．およびＤ．ＧＳＫ３阻害剤と共に培養されたＮＫ細胞は、ＳＫＯＶ−３細胞の殺傷動態を増大した。Ｅ．ＧＳＫ阻害が、Ｈｅｒ２  ＡＤＣＣとさらに協同したＳＫＯＶ３の養子ＮＫの増強された殺傷を拡大した。Ｆ．およびＧ．７日間のＧＳＫ３阻害剤処理が、Ａ５４９細胞のＡＤＣＣにより仲介される殺傷を増強する。
【図６ＣＤ】同上。
【図６Ｅ】同上。
【図６Ｆ】同上。
【図６Ｇ】同上。
【００７９】
【図７】図７は、ＧＳＫ３阻害が、ＮＫ細胞サイトカイン応答を増強することを示すグラフ表現である。Ａ．ＩＦＮγ。Ｂ．ＴＮＦα。
【００８０】
【図８】図８は、ＧＳＫ３阻害および組み合わせＧＳＫ３ｉ／ＭＥＫｉ／ラパマイシンが、Ｋ５６２フィーダー細胞の存在下で、ＮＫ増殖を増強し、ＮＫサブタイプ偏向を増加させることを示すグラフ表現である。Ａ．ＮＫ細胞の総数。Ｂ．ＣＤ５７＋ＮＫ細胞の総数。Ｃ．ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞の総数。
【００８１】
【図９】図９は、ＧＳＫ３ｉと共に７日間試験管内で培養されたＮＫ細胞が、導入された後、小分子の存在なしで、少なくとも１週間、生体内でそれらの表現型の変化を維持することを示すグラフ表現である。Ａ．ＣＤ５７＋細胞の集団パーセンテージ。Ｂ．ＮＫ細胞サブセットの集団パーセンテージ。
【００８２】
【図１０】図１０は、ＧＳＫ３阻害剤と培養されたＮＫ細胞の生体内での腫瘍クリアランス能を示すグラフ表現である。
【００８３】
【図１１】図１１は、ＧＳＫ３阻害剤処理が、短期間でＣＤ５６＋ＣＤ５７＋細胞のより高い出現頻度につながらないことを示す。Ａ．ＧＳＫ３阻害剤とおよびなしでの１６時間培養物におけるＣＤ５７＋ＮＫ分画。Ｂ．ＧＳＫ３阻害剤とおよびなしでの０〜７日間の培養物におけるＣＤ５７＋ＮＫ分画。
【００８４】
【図１２Ａ】図１２は、複数日間ＧＳＫ３阻害剤で処理されたＮＫ細胞が、ＳＫＯＶ−３細胞に対して生体内で高度に有効であることを示す。Ａ．ハーセプチンのみ、ハーセプチンで一晩初回刺激したＮＫ細胞、ハーセプチンと共に７日間ビヒクルで処理されたＮＫ細胞、またはハーセプチンと共に７日間ＧＳＫ３阻害剤で処理されたＮＫ細胞を使用した、ＮＫ細胞ＡＤＣＣ殺傷アッセイ。Ｂ．異なる処理下の細胞を使用したＡＤＣＣ殺傷効果の比較。
【図１２Ｂ】同上。
【００８５】
【図１３】図１３は、初代ＡＭＬ芽細胞に対する、複数日間ＧＳＫ３阻害剤で処理されたＮＫ細胞対一晩初回刺激したＮＫ細胞の細胞毒性を示す：Ａ．ＡＭＬドナー１；Ｂ．ＡＭＬドナー２；Ｃ．ＡＭＬドナー３。
【００８６】
【図１４】図１４は、Ｋ５６２腫瘍細胞がＰＢＭＣと混合される二重標的細胞毒性アッセイにおける、同種ＰＢＭＣではないが悪性細胞に対するＧＳＫ３ｉで調節されたＮＫ細胞の細胞毒性を示す：Ａ．ＰＢＭＣドナー１；Ｂ．ＰＢＭＣドナー２；Ｃ．ＰＢＭＣドナー３；Ｄ．ＰＢＭＣドナー４。
【００８７】
【図１５】図１５は、ＳＴＩＮＧアゴニストＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡが、（Ａ）総ＣＤ５７＋ＮＫ数、および（Ｂ）ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ表現型に対する制限された効果を有することを示す。
【００８８】
【図１６】図１６は、ＧＳＫ３ｉと組み合わせたＳＴＩＮＧアゴニストの添加が、ＩＬ−１２＋ＩＬ−１８またはＫ５６２細胞を使用した４時間刺激についてＡ．ＩＦＮγ；およびＢ．ＴＮＦαのＮＫ細胞産生を増強することを示す。ＧＳＫ３ｉと組み合わせたＳＴＩＮＧアゴニストはまた、刺激後にＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の出現頻度を増大する（Ｃ）。
【００８９】
【図１７】図１７は、ＳＴＩＮＧアゴニストの添加が、Ａ．Ｋ５６２、Ｂ．Ｎａｌｍ６、およびＣ．ＫＧ−１を標的細胞として使用した直接殺傷アッセイにおいてＧＳＫ３阻害剤で処理されたＮＫの細胞毒性を増強したことを示す。
【００９０】
【図１８Ａ】図１８は、ＳＴＩＮＧアゴニストが、ＧＳＫ３阻害剤と協同して、標的細胞の殺傷を増強することを示す。ＧＳＫ３阻害剤とＳＴＩＮＧアゴニストの組み合わせは、抗Ｈｅｒ２抗体を用いたＡＤＣＣアッセイにおいて、Ａ．Ａ５４９およびＢ．ＳＫＯＶ−３標的細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性を増強する。
【図１８Ｂ】同上。
【００９１】
【図１９】図１９は、ＧＳＫ３阻害剤とＳＴＩＮＧアゴニストの組み合わせが、ＮＫ細胞上のＮＫｐ３０発現を増強することを示す。発明を実施するための形態
【００９２】
本発明は、養子免疫療法の改善された治療可能性を得るために免疫細胞集団または亜集団を調節するための組成物および方法を提供する。本発明はまた、改善された治療可能性を有する調節された免疫細胞を使用する方法を提供する。一般に、改善された治療可能性を有する免疫細胞は、以下の：改善された増殖、持続性、細胞毒性、および／または細胞リコール／メモリーの少なくとも１つを提示する。本発明は、免疫細胞の性質に対する改善を介して免疫細胞の治療可能性を改善する方法を提供し、例えば、以下の性質：同じ細胞の遊走、ホーミング、細胞毒性、維持、拡大、持続性、寿命、分化、および／もしくは脱分化の少なくとも１つにおいて改善を提示する細胞の亜集団の数または割合における増大が、より良好な免疫療法の結果をもたらすことが予想されるだろう。
【００９３】
定義
【００９４】
本明細書において特に定義されない限り、本出願と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するだろう。さらに、文脈が特に必要としない限り、単数の用語は複数を含むだろうし、複数の用語は単数を含むだろう。
【００９５】
本発明は、本明細書において記載される特定の方法論、プロトコール、および試薬などに制限されず、したがって、変動してもよいことは、理解されなければならない。本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態を記載することのみの目的であり、請求項により単に定義される本発明の範囲を制限することは意図されない。
【００９６】
本明細書において使用される、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、冠詞の文法上の対象の１つまたは、１つより多くを指す。例示の目的で、Ｔ細胞は、１つのＴ細胞、または１つより多くのＴ細胞を意味する。
【００９７】
本明細書において使用される、用語「Ｔリンパ球」および「Ｔ細胞」は、互換的に使用され、胸腺において成熟を完了し、身体における特異的な外来抗原の同定、ならびに他の免疫細胞の活性化および不活性化を含む免疫系における様々な役割を有する主要なタイプの白血球を指す。Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞のような任意のＴ細胞、例えば、初代Ｔ細胞、または培養されたＴ細胞株、例えば、ジャーカット、ＳｕｐＴ１など由来のＴ細胞、または哺乳類から得られたＴ細胞のような任意のＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ３＋細胞であり得る。Ｔ細胞は、任意のタイプのＴ細胞であり得、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血白血球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）などを含むが、これらに限定されない、任意の発生ステージのものであり得る。追加のタイプのヘルパーＴ細胞は、Ｔｈ３、Ｔｈ１７、Ｔｈ９、またはＴｆｈ細胞のような細胞を含む。追加のタイプのメモリーＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）のような細胞を含む。Ｔ細胞はまた、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するよう修飾されたＴ細胞のような、遺伝子的に操作されたＴ細胞を指すことができる。Ｔ細胞はまた、幹細胞または前駆細胞から分化することができる。
【００９８】
本明細書において使用される、用語「ナイーブＴ細胞」またはＴｎは、活性化された、またはメモリーＴ細胞と異なり、末梢内でそれらの同族抗原と遭遇していない、成熟Ｔ細胞を指す。ナイーブＴ細胞は、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）の表面発現；活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ４４またはＣＤ６９の不在；およびメモリーＣＤ４５ＲＯアイソフォームの不在により一般に特徴付けられる。それらはまた、サブユニットＩＬ−７受容体−α、ＣＤ１２７、および共通のγ鎖、ＣＤ１３２からなる、機能的ＩＬ−７受容体を発現する。ナイーブ状態において、Ｔ細胞は、恒常的生存機序のため共通のガンマ鎖サイトカインＩＬ−７およびＩＬ−１５を必要とする、静止状態であり、分裂していないと考えられている。
【００９９】
本明細書において使用される、用語「セントラルメモリーＴ細胞」またはＴｃｍは、エフェクターメモリーＴ細胞、もしくはＴｅｍと比較し、より低い発現またはアポトーシス促進性シグナル伝達遺伝子、例えば、Ｂｉｄ、Ｂｎｉｐ３およびＢａｄを有し、遺伝子がＣＤ６２Ｌ、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ７を含む、二次リンパ器官への輸送と関連する、より高発現の遺伝子を有するＴ細胞の亜群あるいは亜集団を指す。
【０１００】
本明細書において使用される、用語「幹メモリーＴ細胞」、または「幹細胞メモリーＴ細胞」、またはＴｓｃｍは、自己再生し、Ｔｃｍ、ＴｅｍおよびＴｅｆｆ（エフェクターＴ細胞）を生み出す能力があり、ＣＤ２７、ならびに長期免疫を仲介するのに重要な特性であるＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌのようなリンパ球系ホーミング分子を発現するＴ細胞の亜群または亜集団を指す。
【０１０１】
本明細書において使用される、用語「ＮＫ細胞」または「ナチュラルキラー細胞」は、ＣＤ５６またはＣＤ１６の発現、およびＴ細胞受容体（ＣＤ３）の不在により定義される末梢血リンパ球のサブセットを指す。本明細書において使用される、用語「養子ＮＫ細胞」および「メモリーＮＫ細胞」は、互換可能であり、表現型の上でＣＤ３−かつＣＤ５６＋であり、ＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つを有するＮＫ細胞のサブセットを指す。幾つかの実施形態において、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の単離された亜集団は、ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の発現を含む。幾つかの他の実施形態において、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の単離された亜集団は、ＣＤ５７、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＣＲリガンド、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４６、活性化するおよび阻害性ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ、ならびに／またはＤＮＡＭ−１の発現を含む。ＣＤ５６＋は、弱い発現または完全な発現であり得る。
【０１０２】
本明細書において使用される、用語「ＮＫＴ細胞」または「ナチュラルキラーＴ細胞」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する、ＣＤ１ｄ拘束Ｔ細胞を指す。従来の主要組織適合性（ＭＨＣ）分子により提示されるペプチド抗原を検出する従来のＴ細胞と異なり、ＮＫＴ細胞は、ＣＤ１ｄ、非古典的ＭＨＣ分子により提示される脂質抗原を認識する。２つのタイプのＮＫＴ細胞が、現在認められている。インバリアントまたはタイプＩ  ＮＫＴ細胞は、非常に制限されたＴＣＲレパートリー、β鎖の制限されたスペクトル（ヒトにおいてＶβ１１）と関連する古典的α−鎖（ヒトにおいてＶα２４−Ｊα１８）を発現する。非古典的または非インバリアントなタイプＩＩ  ＮＫＴ細胞と呼ばれる、ＮＫＴ細胞の第２の集団は、より不均一なＴＣＲαβ使用を提示する。タイプＩ  ＮＫＴ細胞は、現在、免疫療法に適していると考えられている。養子またはインバリアントな（タイプＩ）ＮＫＴ細胞は、以下のマーカー、ＴＣＲ  Ｖａ２４−Ｊａ１８、Ｖｂ１１、ＣＤ１ｄ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ａＧａｌＣｅｒ、ＣＤ１６１およびＣＤ５６の少なくとも１つまたは複数の発現で同定することができる。
【０１０３】
本明細書において使用される、用語「単離された」などは、その本来の環境から分けられた細胞、または細胞の集団を指し、すなわち、単離された細胞の環境は、「単離されていない」参照細胞が存在する環境において見られる少なくとも１つの成分を実質的に含まない。用語は、その天然の環境、例えば、組織、生検において見られる幾つかまたは全ての成分から取り出された細胞を含む。用語はまた、細胞が天然に存在しない環境、例えば、培養液、細胞懸濁液において見られる、少なくとも１つ、幾つか、または全ての成分から取り出された細胞を含む。それ故、単離された細胞は、天然で見られるか、または天然に存在しない環境において成長するか、保存されるか、もしくは存在する、他の物質、細胞あるいは細胞集団を含む、少なくとも１つの成分から部分的あるいは完全に分けられる。単離された細胞の具体的な例は、部分的に純粋な細胞、実質的に純粋な細胞、および天然に存在しない培地において培養された細胞を含む。単離された細胞は、所望される細胞、またはその集団を環境内の他の物質または細胞から分けることから、あるいは環境から１つもしくは複数の他の細胞集団または亜集団を取り出すことから、得られてもよい。本明細書において使用される、用語「精製する」などは、純度を増大させることを指す。例えば、純度は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％まで増大され得る。
【０１０４】
本明細書において使用される、用語「集団」は、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に関して使用されるとき、それぞれ、２つもしくはそれ以上のＴ、ＮＫ、またはＮＫＴ細胞を含む細胞の群を指す。Ｔ細胞を例として使用すると、Ｔ細胞の単離された、または濃縮された集団は、唯一１つのタイプのＴ細胞を含み得るか、または２つもしくはそれ以上のタイプのＴ細胞の混合物を含み得る。Ｔ細胞の単離された集団は、１つのタイプのＴ細胞の均一な集団、または２つもしくはそれ以上のタイプのＴ細胞の不均一な集団であり得る。Ｔ細胞の単離された集団はまた、Ｔ細胞、および少なくともＴ細胞以外の細胞、例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞などを有する不均一な集団であり得る。不均一な集団は、０．０１％〜約１００％のＴ細胞を有し得る。したがって、Ｔ細胞の単離された集団は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％のＴ細胞を有し得る。Ｔ細胞の単離された集団は、本明細書において開示されるものを含むが、これらに限定されない、１つもしくは複数、または全ての異なるタイプのＴ細胞を含み得る。１つより多くのタイプのＴ細胞を含むＴ細胞の単離された集団において、それぞれのタイプのＴ細胞の割合は、０．０１％〜９９．９９％の範囲にあり得る。単離された集団はまた、Ｔ細胞のクローナルな集団であり得、ここで、集団の全てのＴ細胞は、単一のＴ細胞のクローンである。
【０１０５】
Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞の単離された集団は、ヒト末梢血または臍帯血のような天然供給源から得られてもよい。細胞を組織または細胞混合物から分離して様々な細胞タイプを分ける様々な方法が、当該技術分野において開発された。幾つかの場合において、これらの操作は、細胞の比較的均一な集団をもたらす。Ｔ細胞は、本明細書において記載されるソーティングもしくはセレクションプロセスにより、または当該技術分野において公知の他の方法により単離することができる。単離された集団におけるＴ細胞の割合は、天然の供給源におけるＴ細胞の割合より、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％高くなり得る。単離された集団のＴ細胞は、一般的なＴ細胞、または１つもしくは複数の特異的なタイプのＴ細胞であり得る。
【０１０６】
本明細書において使用される、用語「亜集団」は、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に関して使用されるとき、天然で見られる、決して全てではないタイプのＴ、ＮＫ、もしくはＮＫＴ細胞をそれぞれ含むＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞の集団を指す。
【０１０７】
本明細書において使用される、用語「多能性」は、身体または体細胞（すなわち、胚本体）の全ての系列を形成する細胞の能力を指す。例えば、胚性幹細胞は、３種の胚葉、外胚葉、中胚葉、および内胚葉のそれぞれから細胞を形成することができる、多能性幹細胞の一種である。多能性は、完全な生物を生じることができない不完全または部分的に多能性の細胞（例えば、エピブラスト幹細胞もしくはＥｐｉＳＣ）から、完全な生物を生じることができるより原始的な、より多能性の細胞（例えば、胚性幹細胞）までの範囲にある一連の発生能力である。
【０１０８】
本明細書において使用される、用語「誘導多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」は、全３種の胚もしくは胚葉：中胚葉、内胚葉、および外胚葉の組織に分化する能力がある細胞に誘導されたか、または変化させた（すなわち、リプログラミングされた）、分化した成熟細胞から生み出された幹細胞を指す。
【０１０９】
本明細書において使用される、用語「胚性幹細胞」は、胚胎盤の内部細胞塊の天然に存在する多能性幹細胞を指す。胚性幹細胞は、多能性であり、３種の原始胚葉：外胚葉、内胚葉および中胚葉の全ての派生物への発生中に生じる。それらは、胚体外膜または胎盤には関与せず、全能性ではない。
【０１１０】
本明細書において使用される、用語「前駆細胞」は、より高い発生ポテンシャル、すなわち、それが分化により生じ得る細胞と比べ、より原始的である（例えば、発生経路または進行に沿った初期の段階にある）細胞の表現型を有する細胞を指す。しばしば、前駆細胞は、有意または非常に高い増殖ポテンシャルを有する。前駆細胞は、より低い発生ポテンシャルを有する複数の別々の細胞、すなわち、分化した細胞タイプ、または発生経路、および細胞が発生し、分化する環境に依存し、単一の分化した細胞タイプを生じることができる。
【０１１１】
本明細書において使用される、用語「リプログラミング」または「脱分化」または「細胞能力を増大すること」または「発生能力を増大すること」は、細胞の能力を増大させる方法、または細胞をより少なく分化した状態に脱分化させる方法を指す。例えば、増大した細胞能力を有する細胞は、リプログラミングされていない状態にある同じ細胞と比較して、より発生的柔軟性を有する（すなわち、より多くの細胞タイプに分化することができる）。言い換えると、リプログラミングされた細胞は、リプログラミングされていない状態にある同じ細胞より少なく分化した状態にあるものである。
【０１１２】
本明細書において使用される、用語「分化」は、特化されていない（「確約されていない」）またはより少なく特化された細胞が、例えば、血液細胞または筋細胞のような、特化された細胞の特性を取得するプロセスである。分化したまたは分化を誘導された細胞は、細胞の系列内のより特化された（「確約された」）位置を得たものである。用語「確約された」は、分化のプロセスに適用されるとき、分化の経路において、通常の状況下で、それらが、特定の細胞タイプまたは細胞タイプのサブセットに継続して分化するであろうポイント、および通常の状況下で、異なる細胞タイプに分化することができないか、またはより少なく分化した細胞タイプに戻ることができないポイントに進んだ細胞を指す。
【０１１３】
本明細書において使用される、用語「コードする」は、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡのような、ポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特具体的な配列の、所定の配列のヌクレオチド（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または所定の配列のアミノ酸およびそれから生じる生物学的特性のいずれかを有する、生物学的プロセスにおいて他のポリマーならびに高分子の合成の鋳型として機能を果たす、固有の特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が、細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を産生するなら、タンパク質をコードする。ｍＲＮＡ配列と同一であり、配列表において通常提供されるもののヌクレオチド配列であるコード鎖と、遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される非コード鎖の両方が、その遺伝子もしくはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードするとして言及され得る。
【０１１４】
本明細書において使用される、用語「外来」は、言及される分子または言及される活性が、宿主細胞に導入されることを意味することが意図される。分子は、例えば、宿主染色体への組込みにより、またはプラスミドのような非染色体遺伝子物質としてのような、コード核酸の宿主遺伝子物質への導入により、導入することができる。それ故、コード核酸の発現に関して使用される用語は、発現可能な形態のコード核酸の細胞への導入を指す。用語「内在性」は、宿主細胞に存在する言及された分子または活性を指す。同様に、用語は、コード核酸の発現に関して使用されるとき、細胞内に含まれ、外来で導入されないコード核酸の発現を指す。
【０１１５】
本明細書において使用される、用語「ポリヌクレオチド」は、任意の長さのヌクレオチドの重合形態、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれか、またはその類似体を指す。ポリヌクレオチドの配列は、４種のヌクレオチド塩基：アデニン（Ａ）；シトシン（Ｃ）；グアニン（Ｇ）；チミン（Ｔ）；およびポリヌクレオチドがＲＮＡであるとき、チミンの代わりにウラシル（Ｕ）からなる。ポリヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子フラグメント（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴもしくはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマーを含み得る。ポリヌクレオチドはまた、２本鎖分子と１本鎖分子の両方を指す。
【０１１６】
本明細書において使用される、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、互換的に使用され、ペプチド結合により共有結合したアミノ酸残基を有する分子を指す。ポリペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、ポリペプチドのアミノ酸の最大数に制限は設けられない。本明細書において使用される、用語は、ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーなどとして当該技術分野において一般にまた言及される短鎖と、ポリペプチドまたはタンパク質として当該技術分野において一般的に言及されるより長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」は、数ある中でも、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドのバリアント、修飾されたポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然のポリペプチド、組換えポリペプチド、合成ポリペプチド、またはその組み合わせを含む。
【０１１７】
本明細書において使用される、用語「生体外で」は、生物、好ましくは、天然の状態の最小の変化を有する生物の外側の人工的な環境内の生きている組織内もしくは組織上で行われる実験または測定のような、生物の外側で生じる活動を指す。「生体外での」手法は、生物から採取され、実験装置において、通常無菌条件下で、典型的には数時間もしくは最大約２４時間だが、状況に依存して、最大２〜２８日間を含む間、培養された生きている細胞または組織を含み得る。かかる組織または細胞はまた、収集され、凍結され、生体外での処理のため後に融解され得る。生きている細胞もしくは組織を使用した数日より長く続く組織培養実験または手法は、典型的には、「試験管内」であるとみなされるが、ある種の実施形態において、この用語は、生体外と互換的に使用することができる。一方で、細胞生着、細胞ホーミング、細胞の自己再生、および細胞の拡大のような「生体内」活動は、生物の内部で生じる。
【０１１８】
本明細書において使用される、用語「試験管内」は、試験管内、培養皿内、または生きている生物の外側のどこかで行われるか、または生じる活動を指す。
【０１１９】
本明細書において使用される、用語「薬剤」、「調節薬剤」、および「モジュレーター」は、本明細書において互換的に使用され、免疫細胞を含む細胞の遺伝子発現特性もしくは生物学的特性を修飾する能力がある化合物または分子を指す。薬剤は、単一の化合物もしくは分子、または１つより多くの化合物もしくは分子の組み合わせであり得る。
【０１２０】
本明細書において使用される、用語「接触する」、「処理する」、または「調節する」は、免疫細胞に関して使用されるとき、本明細書において互換的に使用され、免疫細胞を本明細書において開示される薬剤の１つまたは複数と共に培養すること、インキュベーションすること、または曝露することを指す。
【０１２１】
本明細書において使用される、「接触されていない」または「処理されていない」細胞は、対照薬剤以外の薬剤で処理されていない、例えば、培養されていない、接触されていない、またはインキュベーションされていない細胞である。ＤＭＳＯのような対照薬剤と接触させた、または別のビヒクルと接触させた細胞は、接触させていない細胞の例である。
【０１２２】
本明細書において使用される、「フィーダー細胞」または「フィーダー」は、フィーダー細胞が、もう一つの細胞タイプのサポートのための刺激、成長因子および栄養をもたらすので、もう一つのタイプの細胞が成長することができる環境をもたらすために、もう一つのタイプの細胞と共培養される片方のタイプの細胞を記載する用語である。フィーダー細胞は、場合により、それらがサポートする細胞と異なる種由来である。例えば、幹細胞を含む、ある種のタイプのヒト細胞は、マウス胚線維芽細胞、または不死化マウス胚線維芽細胞の初代培養物により、サポートされ得る。別の例では、末梢血由来細胞または形質転換された白血病細胞が、ナチュラルキラー細胞の拡大および成熟をサポートする。フィーダー細胞は、典型的には、他の細胞と共培養されるとき、それらがサポートする細胞をそれらが成長させ過ぎるのを防ぐために照射またはマイトマイシンのような抗有糸分裂剤での処理により不活化され得る。フィーダー細胞は、内皮細胞、ストロマ細胞（例えば、上皮細胞または線維芽細胞）、および白血病細胞を含み得る。前述のものに限定されることなく、１つの具体的なフィーダー細胞タイプは、ヒト皮膚線維芽細胞のような、ヒトフィーダーであり得る。別のフィーダー細胞タイプは、マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）であり得る。一般に、様々なフィーダー細胞を部分的に使用して、多能性を維持し、ある種の系列への分化を指示し、増殖能力を増強し、エフェクター細胞のような、固有の細胞タイプへの成熟を促進することができる。
【０１２３】
本明細書において使用される、「フィーダーフリー」（ＦＦ）な環境は、フィーダーもしくはストロマ細胞を本質的に含まず、および／またはフィーダー細胞の培養により事前に馴化させていない培養条件、細胞培養あるいは培地のような環境を指す。「予め条件付けられた」培地は、フィーダー細胞が、培地内で少なくとも１日間のような期間培養された後に回収された培地を指す。事前に馴化させた培地は、培地において培養されたフィーダー細胞により分泌された成長因子およびサイトカインを含む、多くのメディエーター物質を含有する。幾つかの実施形態において、フィーダーフリーな環境は、フィーダーまたはストロマ細胞の両方を含まず、またフィーダー細胞の培養により事前に馴化させていない。
【０１２４】
本明細書において使用される、用語「類似体」は、それが、親化学物質と同じ化学骨格および機能を保持するなら、１つの単一エレメントもしくは基、または１つより多くの基（例えば、２、３、もしくは４つの基）で構造上異なる、構造および機能において別の化学物質に類似する化学分子を指す。かかる修飾は、当業者にとって日常的なことであり、例えば、酸のエステルもしくはアミド、アルコールもしくはチオールについてのベンジル基のような保護基、およびアミンについてのｔｅｒｔ−ブトキシルカルボニル基のような、追加または置換された化学物質部分を含む。アルキル置換（例えば、メチル、ジメチル、エチルなど）のようなアルキル側鎖に対する修飾、側鎖の飽和または不飽和のレベルに対する修飾、ならびに置換されたフェニルおよびフェノキシのような修飾された基の付加もまた、含まれる。類似体はまた、ビオチンまたはアビジン部分のような抱合体、西洋ワサビペルオキシダーゼなどのような酵素を含み得、放射標識された部分、生物発光部分、化学発光部分、または蛍光部分を含む。また、部分を、本明細書において記載される薬剤に加えて、他の望ましい特性の中でも、生体内もしくは生体外で半減期を増大すること、またはそれらの細胞侵入特性を増大することのような、それらの薬物動態特性を変更することができる。医薬の多数の望ましい性質（例えば、溶解性、バイオアベイラビリティ、製造など）を増強することが知られているプロドラッグも含まれる。
【０１２５】
本明細書において使用される、用語「増大」は、ビヒクルもしくは対照分子／組成物のいずれかにより引き起こされる応答と比較して、細胞においてより大きな生理的応答（すなわち、下流の効果）を生み出すか、または引き起こす薬剤の能力を指し、例えば、インターロイキン４またはインターロイキン１０の産生は、Ｔ細胞の単離された集団により増大される。増大は、ある種の細胞シグナル伝達経路を介したシグナル伝達経路の増加の結果としての遺伝子発現における増大であり得る。「増大した」量は、典型的には、統計上有意な量であり、ビヒクル（薬剤の不在）もしくは対照組成物により生み出される応答と比較して、１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上の倍数（例えば、５００、１０００倍）（１の間かつ１より上の全ての整数および小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である増大を含み得る。
【０１２６】
本明細書において使用される、用語「低下」は、ビヒクルもしくは対照分子／組成物のいずれかにより引き起こされる応答と比較して、細胞においてより小さい生理的応答（すなわち、下流の効果）を生み出すか、または引き起こす薬剤の能力を指す。低下は、遺伝子発現における低下、細胞シグナル伝達における低下、または細胞増殖における低下であり得る。「低下した」量は、典型的には、「統計上有意な」量であり、ビヒクル（薬剤の不在）もしくは対照組成物により生み出される応答の、１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上の倍数（例えば、５００、１０００倍）（１の間かつ１より上の全ての整数および小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である低下を含み得る。
【０１２７】
本明細書において使用される、用語「相乗効果」または「相乗的」は、２つもしくはそれ以上の実体が一緒に働くことが、組み合わせにおける２つまたはそれ以上の実体が、それぞれ他の効果を弱めるか、または中和するとき使用される「拮抗的」と比較して、および組み合わせにおける２つまたはそれ以上の実体が、それらの個々の効果の合計とほぼ等しい効果を生じるとき使用される「相加的」と比較して、それらの個々の効果の合計より大きな効果を生じるような、増強された効果についての２つまたはそれ以上の実体の組み合わせを指す。
【０１２８】
本明細書において使用される、用語「実質的に含まない」は、細胞集団または培地のような組成物を記載するために使用されるとき、特定の物質の９５％フリー、９６％フリー、９７％フリー、９８％フリー、９９％フリー、または従来の手段により測定され、検出可能でない特定の物質のような、任意の供給源の特定の物質を含まない組成物を指す。組成物の特定の物質または成分の不在に言及する場合、同様の意味が、用語「の不在」に適用され得る。
【０１２９】
本明細書において使用される、用語「約」または「およそ」は、参照の量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さもしくは長さに対して１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％と同じくらいで変動する、量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さあるいは長さを指す。量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さまたは長さの範囲は、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、もしくは±１％のおよそ参照の量、レベル、値、数、出現頻度、パーセンテージ、寸法、大きさ、量、重さまたは長さであり得る。
【０１３０】
本明細書において使用される、用語「対象」は、哺乳類を指す。対象は、ヒト、またはイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、もしくはその遺伝子導入種のような非ヒトであり得る。
【０１３１】
本明細書において使用される、用語「処置する」などは、対象に関して使用されるとき、疾患の症状の改善または除去を達成することを含むが、これらに制限されることなく、所望される薬理的および／または生理的効果を得ることを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全または部分的に妨げるという観点で、予防的であり得、ならびに／あるいは症状の改善または除去を達成するか、あるいは疾患および／もしくは疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒をもたらすという観点で治療的であり得る。用語「処置」は、哺乳類における、特に、ヒトにおける疾患の任意の処置を含み、（ａ）疾患の素因があり得るが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患が生じるのを妨げること；（ｂ）疾患を阻害すること、またはその発症を止めること；（ｃ）疾患を軽減すること、または疾患の退縮を引き起こすこと、または疾患の症状を完全もしくは部分的に除去すること；および（ｄ）造血系を元に戻すことのような、個体を前疾患状態に回復させることを含む。
【０１３２】
本明細書において使用される、「遺伝子修飾」は、（１）再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされるもの、または（２）細胞のゲノムにおける挿入、欠失もしくは置換を介したゲノム操作を介して得られるものを含む、遺伝子編集を指す。本明細書において使用される、遺伝子修飾はまた、ドナー、疾患、もしくは処置応答に特異的である、供給源特異的免疫細胞の１つまたは複数の保持可能な治療特質を含む。
【０１３３】
本明細書において使用される、用語「遺伝子インプリント」は、供給源細胞における優先的な治療特質に関与する遺伝子またはエピジェネティック情報を指す。具体的に選択されたドナー、疾患または処置状況から得られる供給源細胞の態様において、優先的な治療特性に関与する遺伝子インプリントは、同定されるかもしくはされない基本的な分子現象に関わりない、保存可能な表現型、すなわち、優先的な治療特性を明らかにする任意の状況特異的遺伝子またはエピジェネティック修飾を含んでもよい。ドナー、疾患、または処理応答に特異的な供給源細胞は、ｉＰＳＣおよびもたらされた造血系細胞において保持可能である遺伝子インプリントを含んでもよく、遺伝子インプリントは、例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞またはインバリアントなナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞由来の事前に決められた単一特異的ＴＣＲ；例えば、選択されたドナーにおいて高親和性ＣＤ１６受容体をコードする点変異についてホモ接合性である、トラッキング可能かつ望ましい遺伝子多型；ならびに事前に決定されたＨＬＡ要求、すなわち、増大した集団を伴って表現型を提示する、選択されたＨＬＡ一致ドナー細胞を含むが、これらに限定されない。本明細書において使用される、優先的な治療特性は、もたらされた細胞の改善された生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、生存、ならびに細胞毒性を含む。優先的な治療特性はまた、抗原ターゲティング受容体発現；ＨＬＡ提示またはその欠如；腫瘍微小環境に対する抵抗性；バイスタンダー免疫細胞の導入および免疫調節；腫瘍を離れた効果の低減を伴った改善された的中した特異性；化学療法のような処置に対する抵抗性に関するものであってもよい。
【０１３４】
本明細書において使用される、用語「セーフティスイッチタンパク質」は、細胞療法の可能性のある毒性またはそうでなければ副作用を妨げるよう設計された操作されたタンパク質を指す。ある場合において、セーフティスイッチタンパク質発現は、セーフティスイッチタンパク質をコードする遺伝子をそのゲノムに持続的に取り込んだ移植された操作された細胞についての安全性の関心に対処するよう条件付きで調節される。この条件付き制御は、可変であり得、小分子により仲介される翻訳後活性化ならびに組織特異的および／または一時的な転写制御を介した調節を含んでもよい。セーフティスイッチは、アポトーシスの誘導、タンパク質合成の阻害、ＤＮＡ複製、成長停止、転写および転写後遺伝子制御、ならびに／または抗体により仲介される枯渇を仲介することができる。ある場合において、セーフティスイッチタンパク質は、活性化されたとき、治療細胞のアポトーシスおよび／または細胞死の引き金を引く、外来分子、例えば、プロドラッグにより活性化される。セーフティスイッチタンパク質の例は、カスパーゼ９（またはカスパーゼ３もしくは７）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、Ｂ−細胞ＣＤ２０、修飾されたＥＧＦＲ、およびその任意の組み合わせのような、自殺遺伝子を含むが、これらに限定されない。このストラテジーにおいて、有害現象の場合に投与されるプロドラッグは、自殺遺伝子産生により活性化され、導入された細胞を殺傷する。
【０１３５】
本明細書において使用される、「治療上十分量」は、その意味において、所望される治療効果をもたらすことが言及されている特定の治療および／もしくは医薬組成物の非毒性だが、十分量ならびに／または有効量を含む。要求される正確な量は、患者の一般的な健康状態、患者の年齢、ならびに状態のステージおよび重症度のような要因に依存して、対象から対象で変動するだろう。特定の実施形態において、治療上十分量は、処置されている対象の疾患または状態と関連する少なくとも１つの症状を向上させる、低減する、および／もしくは改善するのに十分ならびに／または有効である。
【０１３６】
Ｉ．細胞ベースの養子免疫療法の有効性を改善するための薬剤
本発明は、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための１つまたは複数の薬剤を十分量で含む組成物を提供する。改善された治療可能性を有する免疫細胞は、改善された増殖、持続性、細胞毒性、および／または細胞リコール／メモリーを提示する。免疫細胞は、特異的に改善された生体内増殖、生体内持続性、生体内細胞毒性、および／または生体内細胞リコール／メモリーを有してもよい。免疫細胞を改善するために、治療可能性は、Ｔ細胞集団におけるより良好な性質の免疫細胞を一般的に必要とし、例えば、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、ならびに／またはセントラルメモリーＴ細胞の、その維持、拡大、分化、および／もしくは脱分化を介した数あるいは割合の増大は、改善された生体内養子治療可能性についての、Ｔ細胞のより良好な性質の指標である。ＮＫ細胞集団において、例えば、その維持、サブタイプ偏向、拡大、分化、および／もしくは脱分化を介した養子ＮＫ細胞の数または割合の増大は、改善された生体内養子治療可能性についての、ＮＫ細胞のより良好な性質の指標である。ＮＫＴ細胞集団に関して、例えば、その維持、サブタイプスイッチング、拡大、分化、および／もしくは脱分化を介したタイプＩ  ＮＫＴ細胞の数または割合の増大は、改善された生体内養子治療可能性についての、ＮＫＴ細胞のより良好な性質の指標である。
【０１３７】
養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞は、表１において含まれる１つまたは複数の薬剤と接触させられるか、それで処理されるか、または調節される。薬剤での処理は、細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率を調節することによる、ならびに／または増殖、細胞毒性、持続性、および／もしくは細胞リコール／メモリー、そしてこれにより、処理された細胞の治療可能を増大させることによる、を含む、細胞、あるいは細胞の亜集団の生物学的特性を修飾することができる。例えば、処理は、試験管内と生体内の両方で治療免疫細胞の生存率を改善することができる。さらに、処理は、処理された細胞集団の異なる亜集団の割合を変化させることができる。例えば、１つの実施形態において、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／またはセントラルメモリーＴ細胞の数ならびに割合は、表１から選択される１つまたは複数の薬剤を使用した処理の際、単離されたＴ細胞集団において増大する。別の実施形態において、表１から選択される１つまたは複数の薬剤を使用したＮＫ細胞集団の処理の際、養子ＮＫ細胞の数およびパーセンテージは、集団において増大される。
【０１３８】
【表１−１】
2019502722.tif 000003
【０１３９】
【表１−２】
2019502722.tif 000004
【０１４０】
理論により制限されるものではないが、表１の薬剤は、細胞代謝、栄養素センシング、増殖、アポトーシス、シグナル伝達、感染過程に関与する特性、および／もしくは他の態様の細胞機能の制御を介して細胞拡大、代謝、ならびに／または細胞分化を調節することにより、養子療法の免疫細胞の治療可能性を改善する。当業者により理解される通り、本発明の範囲はまた、表１において挙げられた薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体もしくはプロドラッグを含むが、これらに限定されない、類似体または誘導体を含む。例えば、表１の薬剤ｄｍＰＧＥ２（１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ２）の類似体および誘導体の説明としての例は、ＰＧＥ２、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ｐ−（ｐ−アセタミドベンザミド）フェニルエステル、１１−デオキシ−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレン−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレンＰＧＥ２、９−ケトフルプロステノール、５−トランスＰＧＥ２、１７−フェニル−オメガ−トリノルＰＧＥ２、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６−フェニルテトラノルＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、１５（Ｒ）−１５−メチルＰＧＥ２、８−イソ−１５−ケトＰＧＥ２、８−イソＰＧＥ２イソプロピルエステル、８−イソ−１６−シクロヘキシル−テトラノルＰＧＥ２、２０−ヒドロキシＰＧＥ２、２０−エチルＰＧＥ２、１１−デオキシＰＧＥｉ、ノクロプロスト、スルプロストン、ブタプロスト、１５−ケトＰＧＥ２、および１９（Ｒ）ヒドロキシＰＧＥ２を含むが、これらに限定されない。９位においてハロゲンで置換されているＰＧＥ２（例えば、国際公開第２００１／１２５９６号を参照、その開示は参照により全体が本明細書に取り込まれる）、ならびに米国公開第２００６／０２４７２１４号（その開示は参照により全体が本明細書に取り込まれる）において記載されるもののような２−デカルボキシ−２−ホスフィニコプロスタグランジン誘導体に類似する構造を有するＰＧ類似体または誘導体もまた含まれる。
【０１４１】
ＧＳＫ３（グリコーゲン合成酵素キナーゼ３）阻害剤は、ＧＳＫ３を標的にするｓｉＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、アンチセンス核酸、および他のポリヌクレオチドのドミナントネガティブバリアントに結合する抗体を含み得る。本明細書において考慮される組成物における使用に適したＧＳＫ３阻害剤（ＧＳＫ３ｉ）は、ケンパウロン、ｌ−アザケンパウロン、ＣＨＩＲ９９０２１、ＣＨＩＲ９８０１４、ＡＲ−Ａ０１４４１８、ＣＴ９９０２１、ＣＴ２００２６、ＳＢ２１６７６３、ＡＲ−Ａ０１４４１８、リチウム、ＴＤＺＤ−８、ＢＩＯ、ＢＩＯ−アセトキシム、（５−メチル−ｌＨ−ピラゾール−３−イル）−（２−フェニルキナゾリン−４−イル）アミン、ピリドカルバゾール−シクロペナジエニルルテニウム錯体、ＴＤＺＤ−８  ４−ベンジル−２−メチル−ｌ，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン、２−チオ（３−ヨードベンジル）−５−（ｌ−ピリジル）−［ｌ，３，４］−オキサジアゾール、ＯＴＤＺＴ、アルファ−４−ジブロモアセトフェノン、ＡＲ−ＡＯ１４４−１８，３−（ｌ−（３−ヒドロキシプロピル）−ｌＨ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−４−ピラジン−２−イル−ピロール−２，５−ジオン；ＴＷＳ１１９、Ｌ８０３Ｈ−ＫＥＡＰＰＡＰＰＱＳｐＰ−ＮＨ２またはそのミリストイル化形態；２−クロロ−ｌ−（４，５−ジブロモ−チオフェン−２−イル）−エタノン；ＧＦ１０９２０３Ｘ；ＲＯ３１８２２０；ＴＤＺＤ−８；ＴＩＢＰＯ；およびＯＴＤＺＴを含むが、これらに限定されない。１つの実施形態において、ＧＳＫ−３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＴＷＳ１１９である。別の実施形態において、ＧＳＫ−３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１である。まだ別の実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＢＩＯである。
０１４０
ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤は、Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の一部であるＭＥＫまたはＥＲＫセリン／スレオニンキナーゼいずれかの阻害剤を指す。本明細書において考慮される組成物における使用に適したＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤は、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ９８０５９、ＵＯ１２６、ＳＬ３２７、ＡＲＲＹ−１６２、ＰＤ１８４１６１、ＰＤ１８４３５２、スニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、アキシチニブ、ＧＳＫｌ  １２０２１２、ＡＲＲＹ−４３８１６２、ＲＯ５１２６７６６、ＸＬ５１８、ＡＺＤ８３３０、ＲＤＥＡｌ  １９、ＡＺＤ６２４４、ＦＲ１８０２０４、ＰＴＫ７８７、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−ｅ−５−カルボン酸（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−アミド；６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルｍ−  エチル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、１−［６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダ−ゾール−５−イル］−２−ヒドロキシ−エタノン、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−ｅ−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１、１−ジメチル−エトキシ）−アミド、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−（テトラヒドロ−フラン−２−イルｍ−エチル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、６−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−  ｅ−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、６−（２，４−ジクロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−ｅ−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−１、５−ジメチル−６−  −オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド；本明細書において以下でＭＥＫ阻害剤２として言及される；および４−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−１，５−ジメチル−６−−  オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−カルボキサミド、またはその医薬的に許容される塩を含むが、これらに限定されない。さらなる説明としてのＭＥＫ／ＥＲＫ阻害剤は、国際公開第９９／０１４２６号、第０２／０６２１３号、第０３／０７７９１４号、第０５／０５１３０１号および第２００７／０４４０８４号において開示されるそれらの化合物を含む。１つの実施形態において、ＭＥＫ阻害剤は、ＰＤ０３２５９０１である。別の実施形態において、ＭＥＫ阻害剤は、Ｕ０１２６である。
０１４１
ＲＯＣＫ（Ｒｈｏ関連キナーゼ）阻害剤は、Ｒｈｏ−ＧＴＰａｓｅ／ＲＯＣＫ経路の阻害剤を指す。経路は、ＲＯＣＫのさらに下流である（Ｒｈｏ−ＲＯＣＫ−ミオシンＩＩが経路／系を形成する）、下流タンパク質ミオシンＩＩを含む。したがって、人は、本明細書において記載される効果を達成するためのＲｈｏ  ＧＴＰａｓｅ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、もしくはミオシンＩＩ阻害剤のいずれかまたは全てを使用することができる。本明細書において考慮される組成物における使用に適したＲＯＣＫ阻害剤は、チアゾビビン、Ｙ２７６３２、ファスジル、ＡＲ１２２−８６、Ｙ２７６３２  Ｈ−１１５２、Ｙ−３０１４１、Ｗｆ−５３６、ＨＡ−１０７７、ヒドロキシル−ＨＡ−１０７７、ＧＳＫ２６９９６２Ａ、ＳＢ−７７２０７７−Ｂ、Ｎ−（４−ピリジル）−Ｎ’−（２，４，６−トリクロロフェニル）ウレア、３−（４−ピリジル）−１Ｈ−インドール、（Ｒ）−（＋）−トランス−Ｎ−（４−ピリジル）−４−（１−アミノエチル）−シクロヘキサンカルボキサミド、および米国特許第８，０４４，２０１号（参照により全体が本明細書に取り込まれる）において開示されるＲＯＣＫ阻害剤を含むが、これらに限定されない。１つの実施形態において、ＲＯＣＫ阻害剤は、チアゾビビン、Ｙ２７６３２、またはピリンテグリンである。１つの実施形態において、ＲＯＣＫ阻害剤は、チアゾビビンである。
【０１４２】
アクチビン受容体様キナーゼ５（ＡＬＫ５）は、ＴＧＦβｓに対する細胞応答を仲介する主なＴＧＦβ受容体である。リガンド結合の際、恒常的に活性なＴβＲＩＩキナーゼが、ＡＬＫ５をリン酸化し、消化管において、下流のシグナル伝達カスケードを活性化する。ＴＧＦβ受容体／ＡＬＫ５阻害剤は、ＴＧＦβ／ＡＬＫ５受容体に対する抗体、ＴＧＦβ／ＡＬＫ５受容体のドミナントネガティブバリアント、およびｓｉＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、アンチセンス核酸、ならびにＴＧＦβ／ＡＬＫ５受容体の発現を抑制する他のポリヌクレオチドを含み得る。本明細書において考慮される組成物における使用に適したＴＧＦβ受容体／ＡＬＫ５阻害剤は、ＳＢ４３１５４２；Ａ−８３−０１（３−（６−メチル−２−ピリジニル）−Ｎ−フェニル−４−（４−キノリニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボチオアミド；２−（３−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１，５−ナフチリジン、Ｗｎｔ３ａ／ＢＩＯ、ＧＷ７８８３８８（−｛４−［３−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−イル｝−Ｎ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ベンズアミド）、ＳＭ１６、ＩＮ−１１３０（３−（（５−（６−メチルピリジン−２−イル）−４−（キノキサリン−６−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンズアミド）、ＧＷ６６０４（２−フェニル−４−（３−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン）、ＳＢ−５０５１２４（２−（５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−６−メチルピリジンヒドロクロリド）；ＳＵ５４１６；２−（５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−６−メチルピリジンヒドロクロリド（ＳＢ−５０５１２４）；レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍｂ）（ＣＡＴ−１５２）；メテリムマブ（ＣＡＴ−１９２）；ＧＣ−１００８；ＩＤ１１；ＡＰ−１２００９；ＡＰ−１１０１４；ＬＹ５５０４１０；ＬＹ５８０２７６；ＬＹ３６４９４７；ＬＹ２１０９７６１；ＳＤ−２０８；ＳＭ１６；ＮＰＣ−３０３４５；Ｋｉ２６８９４；ＳＢ−２０３５８０；ＳＤ−０９３；グリベック；３，５，７，２’，４’−ペンタヒドロキシフラボン（モリン）；アクチビン−Ｍ１０８Ａ；Ｐ１４４；溶解性ＴＢＲ２−Ｆｃ；およびピリミジン誘導体（例えば、参照により本明細書に取り込まれる、Ｓｔｉｅｆｌ等の国際公開第２００８／００６５８３号において挙げられるもの）を含むが、これらに限定されない。さらに、「ＡＬＫ５阻害剤」は、非特異的なキナーゼ阻害剤を包含することは意図されていないが、「ＡＬＫ５阻害剤」は、例えば、ＳＢ−４３１５４２（例えば、Ｉｎｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６２（１）：６５−７４（２００２）を参照）のような、ＡＬＫ５に加えてＡＬＫ４および／またはＡＬＫ７を阻害する阻害剤を包含することは理解されるべきである。ＴＧＦβ／アクチビン経路の阻害は、ＡＬＫ５を阻害する同様の効果を有するであろうことはさらに確信される。したがって、ＴＧＦβ／アクチビン経路の任意の��害剤（例えば、上流もしくは下流）は、本明細書におけるそれぞれの段落において記載されるＡＬＫ５阻害剤と組み合わせて、または代わりに使用することができる。典型的なＴＧＦβ／アクチビン経路阻害剤は、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＳＭＡＤ２／３リン酸化の阻害剤、ＳＭＡＤ２／３とＳＭＡＤ４の相互作用の阻害剤、およびＳＭＡＤ６およびＳＭＡＤ７の活性化因子／アゴニストを含むが、これらに限定されない。さらに、本明細書において記載される分類は、単に、組織的な目的のために過ぎず、当業者は、化合物が経路内の１つまたは複数のポイントに影響することができ、これにより、化合物が定義された分類の１つより多くにおいて機能し得ることを知っているだろう。１つの実施形態において、ＴＧＦβ受容体阻害剤は、ＳＢ４３１５４２を含む。
【０１４３】
ＰＤＫ１または３’−ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１は、ＡＫＴ／ＰＫＢおよびＰＫＣ、Ｓ６Ｋ、ＳＧＫを含む多くの他のＡＧＣキナーゼの活性化と関連する優れたキナーゼである。ＰＤＫ１の重要な役割は、幾つかの成長因子およびインスリンシグナル伝達を含むホルモンにより活性化されるシグナル伝達経路におけるものである。典型的なＰＤＫｌアゴニストは、スフィンゴシンを含む（Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７５：１８１０８−１８１１３，２０００）。ＰＤＫｌの典型的なアロステリック活性化因子は、ＰＳ４８（（Ｚ）−５−（４−クロロフェニル）−３−フェニルペンタ−２−エン酸）、ＰＳ０８（（Ｚ）−５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−３−フェニルペンタ−２−エン酸）、１−（２−（３−（４−クロロフェニル）−３−オキソ−ｌ−フェニルプロピルチオ）酢酸；化合物１２Ｚ（２−（３−（４−クロロフェニル）−３−オキソ−ｌ−フェニルプロピルチオ）酢酸、（Ｚ）−５−（ナフタレン（Ｎａｐｔｈａｌｅｎ）−２−イル）−３−フェニルペンタ−２−エン酸）、および化合物１３Ｚ（（Ｚ）−５−（ｌＨ−インドール−３−イル）−３−フェニルペンタ−２−エン酸）のような３，５−ジフェニルペンタ−２−エン酸を含む。１つの実施形態において、ＰＤＫ１アゴニストは、ＰＳ４８を含む。
【０１４４】
ラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳類標的は、ラパマイシンの哺乳類標的の活性をブロックする。ｍＴＯＲは、細胞成長および血管新生を刺激する成長因子を制御する、タンパク質キナーゼである。本発明の組成物および方法に適したｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン、ならびにシロリムス、シロリムス誘導体、テムシロリムス、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン（エベロリムス）、４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピル−ラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチル−ラパマイシン、４０−Ｏ−テトラゾール−ラパマイシン、ならびに他のＯ−アルキル化またはＯ−メチル化ラパマイシン誘導体を含むその類似体および誘導体を含むが、これらに限定されない。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。１つの実施形態において、免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、表１から選択される薬剤の少なくとも２つ、３つ、４つ、５つもしくは６つ、または任意の数の組み合わせを含む。
【０１４６】
１つの実施形態において、表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物は、有機溶媒をさらに含む。ある種の実施形態において、有機溶媒は、酢酸メチルを実質的に含まない。ある種の実施形態において、有機溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノール、およびその組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態において、有機溶媒はＤＭＳＯである。幾つかの実施形態において、有機溶媒はエタノールである。幾つかの他の実施形態において、有機溶媒は、ＤＭＳＯとエタノールの混合物である。
【０１４７】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群Ｉ：ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、１−ピロリジンカルボジチオ酸、および２−ＤＧから選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に制限されるものではないが、群Ｉの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、細胞代謝および栄養素センシングに影響を及ぼし得る。
【０１４８】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩ：ＧＳＫ３阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、６−メルカプトプリン、ＡＣ−９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ−１０３、フルベストラント、タプシガルジン、ＳＵ４３１２、Ｕ０１２６、テルミサルタン、サイクロスポリンＡ、１，３，５−トリス（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−１Ｈ−ピラゾール、ＢＡＹ６１−３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、およびピクチリシブから選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＩの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、様々な機能的経路におけるシグナル伝達に影響を及ぼし得る。
【０１４９】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩＩ：５−アザシチジン、フルダラビン、ロスコビチン、およびＰＡＣ−１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＩＩの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、細胞増殖およびアポトーシスに影響を及ぼし得る。
【０１５０】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＶ：５，７−ジクロロ−８−キノリノール、２−ナフタセンカルボキサミド，７−クロロ−４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒ、ニフロキサジド、およびトスフロキサシン塩酸塩から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に制限されるものではないが、群ＩＶの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、感染過程に関連する細胞特性に影響を及ぼし得る。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群Ｖ：セルトラリン、ジエチレントリアミンペンタ酢酸、塩化エドロホニウム、ＢＩＸ０１２９４、テルフェナジン、およびｄｍＰＧＥ２から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に制限されるものではないが、群Ｖの薬剤は、他の可能性のある役割の中でも、拡大、維持、分化、脱分化、生存率、増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性に関連する他の細胞特性に一般的に影響を及ぼし得る。
【０１５２】
さらに幾つかの他の実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群Ｉから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群ＩＩ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０１５３】
幾つかの他の実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０１５４】
さらに幾つかの他の実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０１５５】
さらに幾つかの他の実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／もしくは群Ｖから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０１５６】
さらに幾つかの他の実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／もしくは群ＩＶから選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の治療可能性を改善するための組成物は、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびｍＴＯＲ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。
【０１５８】
幾つかの実施形態において、組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の薬剤の組み合わせであって、薬剤が組み合わせにおいて相加効果を有する、組み合わせを含む。定義される、「相加的」は、組み合わせにおける２つまたはそれ以上の薬剤が、個々の効果の合計とほぼ等しい効果を生み出すときを指す。幾つかの実施形態において、組み合わせにおける１つまたは複数の薬剤は、同じ群：群Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶに由来する。幾つかの実施形態において、組み合わせにおける１つまたは複数の薬剤は、異なる群に由来する。
【０１５９】
幾つかの実施形態において、組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の薬剤の相乗的な組み合わせを含む。定義される、「相乗効果」は、それらの個々の効果の合計より高い効果を生み出すように２つもしくはそれ以上の薬剤が一緒に働くことのような、増強された効果である。１つの実施形態において、相乗的な組み合わせを含む組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２−ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。１つの実施形態において、組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２−ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに表１において挙げられる化合物から選択される１つまたは複数の追加薬剤を含む組み合わせを含む。１つの実施形態において、ＴＷＳ１１９を含む組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の追加薬剤をさらに含む。１つの実施形態において、ＨＳ１７３を含む組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の追加薬剤をさらに含む。１つの実施形態において、ＬＹ２９４００２を含む組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の追加薬剤をさらに含む。１つの実施形態において、ピクチリシブを含む組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の追加薬剤をさらに含む。１つの実施形態において、２−ＤＧを含む組成物は、表１から選択される２つまたはそれ以上の追加薬剤をさらに含む。
【０１６０】
幾つかの実施形態において、表１において挙げられる化合物からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤を含む組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、抗体およびその抗体フラグメント、ならびに／または化学療法剤もしくは放射性部分からなる群から選択されるさらなる追加の添加剤の１つをさらに含む。幾つかの実施形態において、追加の添加剤は、抗体、または抗体フラグメントを含む。これらの実施形態の幾つかにおいて、抗体、または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態において、抗体、または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、サイトカインおよび成長因子は、以下のサイトカインまたは成長因子：上皮成長因子（ＥＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、インスリン様成長因子２（ＩＧＦ−２）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）トランスフェリン、様々なインターロイキン（例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１８）、様々なコロニー刺激因子（例えば、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、様々なインターフェロン（例えば、ＩＦＮ−γ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびエリスロポエチン（Ｅｐｏ）の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態において、サイトカインは、少なくともインターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、またはその任意の組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、組成物の成長因子は、線維芽細胞増殖因子を含む。これらのサイトカインは、市販で、例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネアポリス、ミネアポリス）から得られてもよく、天然または組換えのいずれかであってもよい。特定の実施形態において、成長因子およびサイトカインは、本明細書において考慮される濃度にて加えられてもよい。ある種の実施形態において、成長因子およびサイトカインは、実験的に決定される、または確立されたサイトカインの技術分野により導かれる濃度にて加えられてもよい。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、組成物のマイトジェンは、コンカナバリンＡを含む。幾つかの他の実施形態において、フィーダー細胞は、遺伝子的に修飾される。幾つかの実施形態において、フィーダー細胞は、以下：単核血液細胞、胸腺上皮性細網細胞、内皮細胞、線維芽細胞、白血病細胞Ｋ５６２、ラージ細胞、またはフィーダー細胞成分もしくはその置換因子の１つあるいは複数を含む。
【０１６３】
幾つかの実施形態において、１つまたは複数のスモールＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびアンチセンス核酸を含む。幾つかの他の実施形態において、スモールＲＮＡは、以下：ｍｉＲ−３６２−５ｐ、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−５９８の１つまたは複数を含む。
【０１６４】
幾つかの実施形態において、対象となる１つまたは複数のポリ核酸を含むベクターは、組み込みまたは非組み込みである。幾つかの実施形態において、対象となる１つまたは複数のポリ核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター、プラスミドベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、エピソームベクターなどの骨格をさらに含む。幾つかの実施形態において、動物細胞における発現のためのプラスミドベクターは、例えば、ｐＡｌ−１１、ｐＸＴｌ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどを含む。幾つかの実施形態において、ベクターにおいて含まれる１つまたは複数のポリ核酸は、１つまたは複数のタンパク質もしくはポリペプチドをコードする。幾つかの実施形態において、１つまたは複数のポリ核酸は、デルタ様１（ＤＬＬ１）、デルタ様３（ＤＬＬ３）、デルタ様４（ＤＬＬ４）、Ｊａｇｇｅｄ１（Ｊａｇ１）、またはＪａｇｇｅｄ２をコードする。幾つかの実施形態において、１つまたは複数のポリ核酸は、Ｊａｇｇｅｄ１をコードする。
ＩＩ．養子細胞療法のための免疫細胞
【０１６５】
本発明は、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤と接触させた免疫細胞の単離された集団または亜集団を含む組成物を提供する。１つの実施形態において、免疫細胞の単離された集団または亜集団は、表１から選択される１つまたは複数の薬剤と免疫細胞の治療可能性を改善するのに十分な量で接触された。幾つかの実施形態において、処理された免疫細胞は、細胞ベースの養子療法において使用される。本発明は、免疫細胞の集団または亜集団、および表１において挙げられる薬剤から選択される１つまたは複数の薬剤をさらに提供し、ここで、表１において挙げられる薬剤から選択される１つもしくは複数の薬剤を使用した免疫細胞の集団または亜集団の処理が、養子療法の免疫細胞の治療可能性を改善する。処理は、細胞増殖、細胞毒性、および持続性を改善する、ならびに／または細胞療法の再発率を低減する免疫細胞の生物学的な特性を修飾することができる。
【０１６６】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団は、Ｔ細胞を含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団は、ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団は、ＮＫＴ細胞を含む。
【０１６７】
幾つかの実施形態において、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤と接触させたＴ細胞の集団または亜集団は、同じ処理をしていないＴ細胞と比較し、増大した数もしくは割合のナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、および／またはセントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、ならびに／あるいは改善された細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性を含む。幾つかの実施形態において、Ｔｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数は、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤での同じ処理をしていない細胞集団におけるＴｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％増大されるか、あるいは少なくとも５、１０、１５、あるいは２０倍増大される。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、表１から選択される１つまたは複数の薬剤と接触させたＮＫ細胞の集団または亜集団は、同じ処理をしていないＮＫ細胞と比較し、増大した数もしくは割合の養子（もしくはメモリー）ＮＫ細胞、ならびに／または改善された細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／もしくは持続性を含む。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞の数は、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤での同じ処理をしていない細胞集団における養子ＮＫ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％増大されるか、あるいは少なくとも５、１０、１５、または２０倍増大される。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、および／もしくはラパマイシンと接触させたＮＫ細胞の集団または亜集団は、増大した数または割合の養子ＮＫ細胞を含む。１つの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ３−およびＣＤ５６＋、ならびにＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つにより特徴付けられる。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも２つである。例えば、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋かつＮＫＧ２Ｃ＋であり得る。幾つかの実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも３つである。例えば、養子ＮＫ細胞は、ＳＹＫ−、ＦｃεＲγ−、かつＥＡＴ−２−であることができる。１つの実施形態において、ＧＳＫ−３β阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。１つの実施形態において、ＧＳＫ−３β阻害剤は、ＴＷＳ１１９である。別の実施形態において、ＧＳＫ−３β阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１である。まだ別の実施形態において、ＧＳＫ−３β阻害剤は、ＢＩＯである。
【０１６９】
幾つかの他の実施形態において、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤と接触させたＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤での処理をしていないＮＫＴ細胞の単離された集団または亜集団と比較し、タイプＩ  ＮＫＴ細胞の増大した数あるいはタイプＩＩに対するタイプＩ  ＮＫＴ細胞の増大した割合、ならびに／あるいは改善された細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性を含む。幾つかの実施形態において、タイプＩ  ＮＫＴ細胞の数は、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤での同じ処理をしていない細胞集団におけるタイプＩ  ＮＫＴ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％増大されるか、あるいは少なくとも５、１０、１５、または２０倍増大される。
【０１７０】
幾つかの実施形態において、増大した数もしくは割合のナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、養子ＮＫ細胞、および／またはタイプＩ  ＮＫＴ細胞は、これらの細胞タイプの改善された維持および拡大、ならびに／またはより成熟な細胞サブタイプから所望される分化状態にある細胞サブタイプまでの増大した細胞脱分化／リプログラミングに起因するものである。
【０１７１】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団を、表１において含まれる薬剤の１つまたは複数と接触させた後、集団におけるナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）の数は、処理されていない免疫細胞集団と比較し、増大され、ここで、Ｔｎ、ＴｓｃｍおよびＴｃｍは、ＣＣＲ７および／またはＣＤ６２Ｌの共発現により特徴付けられる。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団を表１において含まれる薬剤の１つまたは複数と接触させた後、集団における養子ＮＫ細胞の数は、処理されていない免疫細胞集団と比較し、増大され、ここで、タイプＩ  養子ＮＫ細胞は、ＣＤ３−、ＣＤ５６＋、ＣＤ１６＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、およびＣＤ５７＋により特徴付けられる。幾つかの他の実施形態において、養子ＮＫ細胞は、ＣＤ３−、ＣＤ５６＋、ならびにＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つ、２つまたは３つにより特徴付けられる。
【０１７３】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団を表１において含まれる薬剤の１つまたは複数と接触させた後、集団におけるタイプＩ  養子ＮＫT細胞の数は、処理されていない免疫細胞集団と比較し、増大され、ここで、養子ＮＫT細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ５６＋、ＴＣＲ  Ｖα２４＋、およびＴＣＲ  Ｖβ１１＋により特徴付けられる。
【０１７４】
幾つかの実施形態において、本明細書において開示される薬剤による処理のためのＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ヒトまたは非ヒト哺乳類から単離することができる。かかる非ヒト哺乳類の例は、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびその遺伝子導入種を含むが、これらに限定されない。
【０１７５】
Ｔ細胞の集団または亜集団は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、および感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、ならびに腫瘍を含むが、これらに限定されない、多数の供給源から得られるか、または単離され得る。骨髄は、大腿骨、腸骨稜、臀部、肋骨、および他の骨から得ることができる。加えて、ジャーカット、ＳｕｐＴ１、および他のもののような、当該技術分野において入手可能なＴ細胞株をまた使用することができる。
【０１７６】
ＮＫ細胞の集団または亜集団は、末梢血、臍帯血、および腫瘍を含むが、これらに限定されない、多数の供給源から得られるか、または濃縮することができる。
【０１７７】
完全に成熟なＮＫＴ細胞は、骨髄、リンパ節組織および臍帯血、胸腺組織に潜在的にみられる成熟ＮＫＴ細胞のより小さな集団を含む末梢血から得られるか、または濃縮することができる。
【０１７８】
本発明のある種の実施形態において、Ｔ、ＮＫ、ＮＫＴ細胞の単離された、もしくは濃縮された集団または亜集団は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離のような、任意の数の当業者に公知の技術を使用して、血液ユニットから得ることができる。１つの実施形態において、個体の循環血液由来のＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞は、アフェレーシスにより得られる。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む、細胞を含有する。１つの実施形態において、アフェレーシスにより集められた細胞を洗浄して、血漿分画を取り除き、細胞を、続くプロセッシング工程のため適当な緩衝液または培地に置くことができる。本発明の１つの実施形態において、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代わりの実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、または全部ではないが多くの２価カチオンを欠き得る。当業者は容易に理解するであろうが、洗浄工程は、製造元の指示に従い、半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによるような、当業者に公知の方法により、達成され得る。洗浄後、細胞は、例えば、Ｃａフリー、ＭｇフリーなＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または他の食塩水溶液を含むかもしくは含まない緩衝液のような様々な生体適合性緩衝液に再懸濁することができる。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が取り除かれ、細胞は培地に直接再懸濁される。
【０１７９】
別の実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、赤血球を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離により、もしくは向流遠心水簸により、単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離されるか、または濃縮される。
【０１８０】
１つの実施形態において、Ｔ細胞の特異的な亜集団は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、および／もしくはＣＤ１２２抗体のようなポジティブまたはネガティブセレクションにより、さらに単離されるか、あるいは濃縮され得る。例えば、１つの実施形態において、Ｔ細胞の単離された、もしくは濃縮された集団または亜集団は、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔのような、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）抱合ビーズと、所望されるＴ細胞のポジティブセレクションに十分な期間インキュベーションすることにより、拡大され、活性化される。１つの実施形態において、期間は、約３０分間である。さらなる実施形態において、期間は、３０分間から７２時間またはそれより長いおよびその間の全ての整数値までの範囲にある。さらなる実施形態において、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態において、期間は、１０〜７２時間である。１つの好ましい実施形態において、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からＴ細胞を単離するため、２４時間のような、より長いインキュベーション時間の使用は、細胞収量を増大することができる。より長いインキュベーション時間を使用して、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍組織から、または免疫不全状態の個体から単離する際のような、他の細胞タイプと比較して、Ｔ細胞があまり存在しないいずれかの状況においてＴ細胞を単離することができる。さらに、より長いインキュベーション時間を使用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞の補足の効率を増大することができる。したがって、時間を単に短縮するか、もしくは延長することにより、Ｔ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させ、および／あるいはＴ細胞に対するビーズの割合（本明細書においてさらに記載される）を増やすか、もしくは減らすことにより、Ｔ細胞の特異的な集団または亜集団は、培養開始時に、またはプロセスの間の他の時間ポイントにてそれについて、またはそれに対してさらに選択され得る。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／もしくは抗ＣＤ２８抗体の割合を増やすこと、または減らすことにより、Ｔ細胞の特異的な集団あるいは亜集団は、培養開始時に、または他の所望される時間ポイントにてそれについて、またはそれに対して優先的に選択され得る。当業者は、複数ラウンドのセレクションがまた、本発明の状況において使用され得ることを認識するだろう。ある種の実施形態において、セレクション手法を行うこと、ならびに活性化および拡大プロセスにおいて「選択されない」細胞を使用することが望ましくあり得る。「選択されていない」細胞はまた、さらなるラウンドのセレクションの対象にすることができる。
【０１８１】
ネガティブセレクションによる、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞の集団または亜集団の単離あるいは濃縮は、ネガティブセレクションされた細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせで達成され得る。１つの方法は、ネガティブセレクションされた細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブ磁気免疫結合または蛍光活性化細胞ソーティングを介した細胞ソーティングおよび／またはセレクションである。例えば、ネガティブセレクションにより、ＣＤ３＋細胞について濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、およびＨＬＡ−ＤＲに対する抗体を含む。ある種の実施形態において、典型的には、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞について濃縮するか、またはポジティブセレクションすることが望ましくあり得る。あるいは、ある種の実施形態において、Ｔ制御性細胞は、抗ＣＤ２５抱合ビーズまたはセレクションの他の同様の方法により、枯渇される。幾つかの実施形態において、免疫療法のため所望されるＴ細胞亜集団は、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌにより、Ｔ細胞を含む調節された免疫細胞から濃縮されるか、または選択される。あるいは、対象となる細胞は、サイズ、密度、粒度、変形能、抵抗性または容量の差異を含む物理的パラメーターに従い、選択されてもよい。
【０１８２】
１つの実施形態において、養子ＮＫ細胞の集団または亜集団は、ＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞内で、それらの表現型の上でのＣＤ３−およびＣＤ５６＋について、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、およびＣＤ５７の陽性発現を含むような、識別子を使用して、セレクションすることにより、濃縮される。さらに、養子亜集団のネガティブセレクションは、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＣＤ５７の発現の欠如、加えて、以下の：低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの１つまたは複数の発現の欠如に基づき得る。
【０１８３】
１つの実施形態において、ＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ＮＫ細胞の集団内で、インバリアントなＴＣＲα鎖を表現型の上で発現するもの、具体的には、以下のマーカー：ＣＤ３＋、ＣＤ５６＋、ＴＣＲ  Ｖα２４＋、および／またはＴＣＲ  Ｖβ１１＋の組み合わせについてセレクションすることにより、濃縮される。あるいは、ＮＫＴ細胞は、インバリアントなＴＣＲα鎖の発現と合わせた表現型の組み合わせに基づき選択することができる。
【０１８４】
対象由来の血液試料またはアフェレーシス産物は、本明細書において記載される免疫細胞が単離されるときに先立つ期間にて、集めることができる。したがって、調節されるべき細胞の供給源は、必須の任意の時間ポイントにて集められ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞のような所望される細胞が、単離され、本明細書において記載されるもののような、かかる細胞療法から恩恵を受ける、任意の数の疾患または状態のための細胞ベースの免疫療法において後に使用するため、凍結され得る。１つの実施形態において、血液試料またはアフェレーシス産物は、一般的な健常対象から集められる。ある種の実施形態において、血液またはアフェレーシス産物は、疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない一般的な健常対象から集められ、対象となる細胞が、単離され、後の使用のため凍結される。他の実施形態において、血液試料またはアフェレーシス産物は、遺伝子的に修飾された免疫細胞（遺伝子的に操作された、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）を既に投与された対象から集められる。ある種の実施形態において、Ｔ、ＮＫ、ＮＫＴまたは他の免疫細胞は、拡大され、凍結され、そして後に処理され、使用され得る。ある種の実施形態において、試料は、本明細書において記載される特定の疾患の診断の直後だが、任意の処置に先立ち、患者から集められる。幾つかの実施形態において、細胞は、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）血清陽性を提示する対象から単離される。さらなる実施形態において、細胞は、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス薬、化学療法、放射線、サイクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６のような免疫抑制薬、抗体、またはＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、サイクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、および照射のような他の免疫除去剤のような薬剤での処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティに先立ち、対象由来の血液またはアフェレーシス産物から単離される。さらなる実施形態において、細胞は、患者から単離され、フルダラビンのような化学療法薬、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨのような抗体のいずれかを使用した骨髄または幹細胞移植、Ｔ細胞除去療法と併せた（例えば、前、同時、または後）後の使用のため、凍結される。別の実施形態において、細胞は、処置に先立ち単離され、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えば、リツキサンのようなＢ細胞除去療法後の処置の後の使用のため凍結され得る。
【０１８５】
幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、または核酸置換を含む。修飾された免疫細胞は、サイトカイン導入遺伝子、発現抑制された阻害性受容体を発現するか；または活性化受容体、もしくは免疫細胞を再ターゲティングするためのＣＡＲを過剰発現してもよい。幾つかの実施形態において、対象、もしくはドナーから調節のため単離されるか、または対象／ドナーの末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、腫瘍から単離されるか、もしくはそこに含まれる免疫細胞の集団は、遺伝子的に修飾されていてもよい。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。
【０１８６】
ゲノム的に操作された免疫細胞は、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、および／もしくは生存を促進するタンパク質の１つまたは複数を含む、遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；（ｉｉ）誘導されたまたは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、あるいは二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体の１つあるいは複数を含む。幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞は、外来核酸を含む。幾つかの実施形態において、外来核酸は、細胞の直接ゲノム編集を介して免疫細胞に導入される。幾つかの他の実施形態において、外来核酸は、分化を通じて免疫細胞を生じる、ゲノム的に操作された造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、またはｉＰＳＣから同じものを保持することを介して免疫細胞に導入される。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞についての外来核酸は、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、三重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、多特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、または複数の免疫細胞タイプと適合する普遍的エンゲイジャーをコードすることができる。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞についての外来核酸は、ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＣＤ１６もしくはそのバリアント、ＮＹ−ＥＳＯ、二重特異性キラー細胞エンゲイジャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲイジャー（ＴｒｉＫＥ）、多特異性キラー細胞エンゲイジャー、または複数の免疫細胞タイプと適合する普遍的エンゲイジャーをコードすることができる。幾つかの実施形態において、ＮＫＴ細胞についての外来核酸は、変更されたＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。幾つかの実施形態において、外来核酸はＣＡＲ１９をコードする。幾つかの実施形態において、ＣＤ１６バリアントは、高親和性ＣＤ１６（ＨＡＣＤ１６）、切断不可能なＣＤ１６、および高親和性切断不可能なＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を含む。したがって、ＧＳＫ３ｉを使用して免疫細胞を調節するための方法および組成物を考慮して、本発明の幾つかの態様は、ＧＳＫ３ｉにより調節された遺伝子的に操作されたＴ、ＮＫ、またはＮＫＴ細胞を提供する。本発明の１つの態様は、ｈｎＣＤ１６を含む、ＧＳＫ３ｉにより調節されたＮＫ細胞を提供する。本発明の別の態様は、修飾されたＨＬＡクラスＩおよび／またはＩＩを有する、ＧＳＫ３ｉにより調節された免疫細胞を提供する。幾つかの実施形態において、修飾されたＨＬＡクラスＩおよび／またはＩＩを有する、ＧＳＫ３ｉにより調節された免疫細胞は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ−Ｅ／Ｇ、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ４７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＲＦＫＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、およびＲＦＸＡＰの少なくとも１つの無発現または低発現を含む。
【０１８７】
幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞の集団または亜集団は、幹細胞または前駆細胞から試験管内で分化する。幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞の単離された集団または亜集団は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞（ＨＳＣ）、または前駆細胞から分化することができる。前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞、またはＮＫＴ細胞前駆細胞であり得る。幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および胚性幹細胞（ＥＳＣ）のような多能性幹細胞であり得る。ｉＰＳＣは、天然に存在しないリプログラミングされた多能性細胞である。対象の細胞が、多能性状態にリプログラミングされると、次に、細胞は、Ｔ、ＮＫ、もしくはＮＫＴ細胞のような所望される細胞タイプまたはサブタイプにプログラムされるか、あるいは分化し得る。幾つかの実施形態において、ｉＰＳＣは、発症の様々なステージ由来の細胞が、中胚葉幹細胞から完全に分化したＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞の範囲に渡る造血表現型を想定して誘導され得る、複数のステージの分化プラットフォームにより、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に分化し得る（例えば、米国特許出願第６２／１０７，５１７号および第６２／２５１，０１６号を参照、その開示は、全体が本明細書に取り込まれる）。
【０１８８】
幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のためのｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、または核酸置換を含む。幾つかの実施形態において、ゲノム的に操作されるｉＰＳＣ、ＨＳＣまたは造血前駆細胞は、セーフティスイッチタンパク質、ターゲティングモダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、医薬的に有効なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；あるいはｉＰＳＣ、ＨＳＣ、前駆細胞、もしくはそれらのもたらされた細胞の生着、輸送、ホーミング、バイアビリティー、自己再生、持続性、免疫応答制御および調節、および／または生存を促進するタンパク質の１つあるいは複数を含む、遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの他の実施形態において、遺伝子的に修飾されたモダリティは、（ｉ）欠失もしくは低減した発現のＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域中の任意の遺伝子；（ｉｉ）誘導されたまたは増大した発現のＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、二重もしくは多特異性または普遍的エンゲイジャーとのカップリングのための表面トリガー受容体、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、あるいはＣＡＲ（キメラ抗原受容体）の１つあるいは複数を含む。幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のためのｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、修飾されたＨＬＡクラスＩおよび／またはＩＩを含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＨＬＡクラスＩおよび／もしくはＩＩを有するＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞分化のためのｉＰＳＣ、ＨＳＣ、あるいは前駆細胞は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ−Ｅ／Ｇ、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ４７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＲＦＫＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、およびＲＦＸＡＰの少なくとも１つの無発現または低発現を含む。幾つかの実施形態において、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のためのｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、外来核酸を有する。幾つかの実施形態において、外来核酸は、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、三重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、多特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、ＣＤ１６もしくはそのバリアント、ＮＹ−ＥＳＯ、二重特異性キラー細胞エンゲイジャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲイジャー（ＴｒｉＫＥ）、多特異性キラー細胞エンゲイジャー、または複数の免疫細胞タイプと適合する普遍的エンゲイジャーをコードすることができる。幾つかの実施形態において、外来核酸は、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のためｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞においてｈｎＣＤ１６をコードする。幾つかの実施形態において、外来核酸は、Ｔ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のためｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞においてＣＡＲ１９をコードする。
【０１８９】
幾つかの実施形態において、免疫細胞の集団または亜集団は、Ｔ、ＮＫ、もしくはＮＫＴ前駆細胞、またはＴ、ＮＫ、もしくはＮＫＴ細胞のような完全に分化した特異的なタイプの免疫細胞であり得る、非造血運命の非多能性細胞から造血系細胞に、または第一の造血細胞タイプの非多能性細胞から異なる造血細胞タイプに試験管内で分化転換する（例えば、米国特許第９，３７６，６６４号および米国特許出願第１５／０７２，７６９号を参照、その開示は、全体が本明細書に取り込まれる）。幾つかの実施形態において、非造血運命の非多能性細胞は、皮膚線維芽細胞、脂肪組織由来の細胞およびヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）のような体細胞である。分化転換に有用な体細胞は、不死化体細胞であってもよい。
【０１９０】
様々なストラテジーを追及して、細胞において多能性を誘導するか、または能力を増大させる（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｙａｍａｎａｋａ，Ｓ．，Ｃｅｌｌ  １２６，６６３−６７６（２００６）；Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １３１，８６１−８７２（２００７）；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１８，１９１７−１９２０（２００７）；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４，３８１−３８４（２００９）；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４，４７２−４７６（２００９）；Ｙａｍａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｓａｈａ，Ｋ．，Ｊａｅｎｉｓｃｈ，Ｒ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ５，５８４−５９５（２００９））、ならびにリプログラミングの効率を改善する（Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ２，５２５−５２８（２００８ａ）；Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ３，５６８−５７４（２００８ｂ）；Ｈｕａｎｇｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２６，７９５−７９７（２００８ａ）；Ｈｕａｎｇｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２６，１２６９−１２７５（２００８ｂ）；Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌｏｓ  Ｂｉｏ  ６，ｅ２５３．Ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．Ｐｂｉｏ．００６０２５３（２００８）；Ｌｙｓｓｉｏｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０６，８９１２−８９１７（２００９）；Ｉｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ５，４９１−５０３（２００９）；Ｍａｈｅｒａｌｉ，Ｎ．，Ｈｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒ，Ｋ．，Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  １９，１７１８−１７２３（２００９ｂ）；Ｅｓｔｅｂａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ６，７１−７９（２０１０）；およびＦｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４，３０１−３１２（２００９））、その開示は、参照により全体が本明細書に取り込まれる。
ＩＩＩ．養子療法のため免疫細胞を調節する方法
【０１９１】
本発明は、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法を提供し、方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含む。
【０１９２】
１つの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、接触された免疫細胞は、表１の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、増大した細胞拡大、増大した数もしくは割合の１つまたは複数の所望される細胞亜集団、ならびに／あるいは改善された増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性を有する。
【０１９３】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、細胞の１つまたは複数の所望される亜集団の維持および拡大は、表１の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、改善される。
【０１９４】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、分化の所望される状態にリプログラミングされた集団における免疫細胞の数または割合は、表１の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、増大される。
【０１９５】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と、表１の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、細胞拡大を増大させる、１つもしくは複数の所望される免疫細胞亜集団の数または割合を増大させる、ならびに／あるいは免疫細胞の増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性を改善するのに十分な量で、接触させることを含む。１つの実施形態において、免疫細胞処置のための薬剤は、約０．１ｎＭ〜約５０μＭである。１つの実施形態において、免疫細胞処置のための薬剤は、約０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μΜ、５μΜ、１０μΜ、２０μΜ、もしくは２５μΜ、または間の任意の濃度である。１つの実施形態において、免疫細胞処置のための薬剤は、約０．１ｎＭ〜約５ｎＭであり、約１ｎＭ〜約１００ｎＭであり、約５０ｎＭ〜約２５０ｎＭであり、約１００ｎＭ〜約５００ｎＭであり、約２５０ｎＭ〜約１μΜであり、約５００ｎＭ〜約５μΜであり、約３μΜ〜約１０μΜであり、約５μΜ〜約１５μΜであり、約１２μΜ〜約２０μΜであるか、または約１８μΜ〜約２５μΜである。
【０１９６】
幾つかの実施形態において、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と、表１の薬剤と接触させていない免疫細胞と比較し、細胞拡大を増大させる、１つもしくは複数の所望される免疫細胞亜集団の数または割合を増大させる、ならびに／あるいは免疫細胞の増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／または持続性を改善するのに十分な時間、接触させることを含む。１つの実施形態において、免疫細胞は、表１の１つまたは複数の薬剤と、少なくとも３０分間、１時間、２時間、５時間、１２時間、１６時間、１８時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、３０日間、または間の任意の長さの期間、接触される。１つの実施形態において、免疫細胞は、表１の１つまたは複数の薬剤と、約０．５時間〜約２時間、約１時間〜約１２時間、約１０時間〜約２日間、約１日〜約３日間、約２日〜約５日間、約３日〜約６日間、約５日〜約８日間、約７日〜約１４日間、約１２日〜約２２日間、約１４日〜約２５日間、約２０日〜約３０日間、接触される。幾つかの実施形態において、免疫細胞は、表１の１つまたは複数の薬剤と、１６時間以上、１４時間以上、１２時間以上、１０時間以上、８時間以上、６時間以上、４時間以上、２時間以上、または間の任意の長さの時間、接触される。したがって、当該十分な長さの時間は、例えば、１５時間以上、１３時間以上、１１時間以上、９時間以上、７時間以上、５時間以上、３時間以上、または１時間以上である。方法の幾つかの他の実施形態において、当該十分な長さの時間は、２４時間以上、３６時間以上、４８時間以上、６０時間以上、７２時間以上、または間の任意の長さの時間以上である。したがって、当該十分な長さの時間は、例えば、３０時間以上、４２時間以上、５４時間以上、６６時間以上、７８時間以上、９０時間以上である。
【０１９７】
免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含む、養子細胞ベースの療法に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、接触後、１つもしくは複数の所望される亜集団を免疫細胞から濃縮するか、または単離することをさらに含み、ここで、１つまたは複数の所望される亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、養子ＮＫ細胞、およびタイプＩ  ＮＫＴ細胞からなる群から選択される。養子ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋の表現型、またはＣＤ５７＋のさらに成熟した集団を有し得る。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤、ならびにＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ１８およびＩＬ２１を含む刺激性サイトカインの少なくとも１つ、またはＭＥＫ阻害剤、ラパマイシン、およびＳＴＩＮＧアゴニストの１つまたは複数を含む、十分量の組成物が、処理／調節のため使用されいてもよい。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、およびその抗体もしくはフラグメントからなる群から選択される１つまたは複数の追加の添加剤をさらに含んでもよい。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１である。幾つかの実施形態において、追加の添加剤は、抗体、または抗体フラグメントを含む。これらの実施形態の幾つかにおいて、抗体、または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態において、抗体、または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
【０１９８】
処理されるべき、または調節されるべき免疫細胞の集団は、対象、もしくはドナーから単離されるか、あるいは対象／ドナーの末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、腫瘍から単離されるか、またはそこに含まれ得る。対象は、健常であってもよいか、または自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有していてもよい。幾つかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清陽性であるか、または遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与されていてもよい。幾つかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清陽性であってもよい。幾つかの他の実施形態において、調節のため単離された免疫細胞は、遺伝子的に修飾される（遺伝子的に操作されるか、または再編成、変異、遺伝子インプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から天然にもたらされる）。幾つかの実施形態において、調節のため単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝子的に修飾されたモダリティを含む。幾つかの実施形態において、免疫細胞の単離された集団は、ゲノム的に操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。幾つかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアントをコードする外来核酸を含む。したがって、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、開示される本組成物および方法を使用した生体外での調節のため単離される。幾つかの実施形態において、調節後、対象から単離された、遺伝子的に修飾された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与されてもよい。
【０１９９】
あるいは、調節のための免疫細胞の集団は、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、または前駆細胞から試験管内で分化するか；あるいは造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換してもよい。幾つかの実施形態において、調節のための免疫細胞をもたらす、幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞、前駆細胞、または非多能性細胞は、ゲノム操作され、挿入、欠失、および／または核酸置換を含み、したがって、調節のためもたらされた免疫細胞は、供給源細胞においてゲノム操作することにより導入された同じ遺伝子モダリティを含む。
【０２００】
ＧＳＫ３阻害剤を使用したＮＫ細胞の集団を調節する方法において、ＮＫ細胞の集団は、ＧＳＫ３阻害剤を含む、十分量の組成物と、養子細胞療法のＮＫ細胞の治療可能性を改善するのに十分な時間培養される。調節のためのＮＫ細胞の集団を得るために、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が、対象から単離されてもよい。ＰＢＭＣは、リンパ球（Ｔ細胞、およそ３０％〜７０％；Ｂ細胞、およそ１０％〜２０％；ＮＫ細胞、およそ５％〜２０％）および単球からなる。対象は、健常であってもよく、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症もしくは固形腫瘍を有していてもよいか、またはＣＭＶ血清陽性であってもよいか、または遺伝子的に修飾された免疫細胞を既に投与されていてもよい。
【０２０１】
方法の幾つかの実施形態において、単離されたＰＢＭＣは、例えば、ＣＤ３およびＣＤ１９抗体、または当該技術分野において公知の他のソーティング方法を使用して、Ｔ細胞およびＢ細胞を枯渇させてもよい。幾つかの実施形態において、単離されたＰＢＭＣは、延長された培養もしくは拡大を有しなくても、または最小の事前枯渇培養もしくは拡大を有してもよい。「延長された培養もしくは拡大を有しなくても、または最小の事前枯渇培養もしくは拡大」により、それは、ＰＢＭＣの事前枯渇培養が、４８時間未満、３６時間未満、２４時間未満、１２時間未満、８時間未満、６時間未満、または２時間未満であることを意味する。幾つかの実施形態において、ＰＢＭＣの事前枯渇培養は、２時間以下、４時間以下、６時間以下、８時間以下、１０時間以下、１２時間以下、２４時間以下、４８時間以下である。１つの実施形態において、ＰＢＭＣの事前枯渇培養は、一晩以下である。幾つかの実施形態において、ＰＢＭＣは、枯渇に先立ち全く培養されない。「事前枯渇培養」により、それは、本明細書において開示される小分子なしではあるが、ＰＢＭＣを、Ｔ細胞およびＢ細胞の枯渇に先立ち、サイトカイン、フィーダー細胞と培養し、抗体、組換え活性性リガンド、および／もしくは自家白血球をブロッキングするか、または活性化して、ＰＢＭＣを維持するか、あるいは拡大することを意味する。典型的なサイトカイン培養条件下で、ＴおよびＢ細胞は、ＮＫ細胞、特に、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含むが、これに限定されない、幾つかのＮＫ細胞サブセットのような、他の亜集団より迅速に拡大し得る。これは、ＴおよびＢ細胞が、これらの培養条件下でより容易に成長し得るか、より速い成長速度を有し得るか、開始細胞集団においてより大きなパーセンテージを有し得るためであり、および／または条件が、これらのＮＫ細胞サブセットが成長および拡大するのに適していないためであり得る。それ故、これらのＮＫ細胞サブセットを過剰成長させるので、拡大された事前枯渇培養は、培養された細胞集団におけるより小さなパーセンテージのＮＫ細胞サブセットをもたらし得る。ＣＤ５７＋細胞および養子ＮＫ細胞は、従来のサイトカイン培養下でＴおよびＢ細胞からの成長圧力／競合なしでさえ、他のＮＫ亜集団より少ない増殖性であることが示された。したがって、ＴおよびＢ細胞枯渇と共に、なしで開始するための約０．１％、約１％、約５％未満、もしくは約１０％未満のＣＤ５７＋または養子ＮＫ細胞を有するＰＢＭＣの培養は、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫサブセットを、ＰＢＭＣ集団から減少させるか、または排除させするだろう。
【０２０２】
したがって、本発明の１つの態様は、ＰＢＭＣを含む試料をＧＳＫ３ｉと複数日間培養して、ＰＢＭＣ試料においてＮＫサブセットを選択的に拡大することを提供する。幾つかの実施形態において、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞およびＢ細胞を枯渇させた。幾つかの実施形態において、ＰＢＭＣは、ＧＳＫ３阻害剤との培養に先立ち、事前枯渇培養を経験していない。他の実施形態において、事前枯渇培養は、最小であり、２４時間未満、１６時間未満、８時間未満もしくは２時間未満、または間の任意の長さの時間である。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下での複数日の培養は、フィーダーフリーな条件下である。１つの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下での複数日間の培養は、フィーダー細胞と共にである。
【０２０３】
本開示によると、１つの実施形態において、細胞集団は、延長された事前枯渇培養を経験しておらず、Ｔ細胞およびＢ細胞の枯渇後、当該細胞集団は、ＣＤ５７−、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋、ＣＤ５７＋および／またはＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞を含む。幾つかの実施形態において、枯渇後だが、事前枯渇培養をしない、集団におけるＮＫ細胞のパーセンテージは、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、または約３０％である。幾つかの実施形態において、枯渇後だが、事前枯渇培養をしない、集団におけるＮＫ細胞のパーセンテージは、多くても約１０％、多くても約２０％、多くても約３０％、多くても約４０％、多くても約４０％、多くても約５０％、多くても約６０％、または多くても約７０％である。幾つかの実施形態において、枯渇後だが、事前枯渇培養をしない、集団におけるＣＤ５７＋ＮＫ細胞またはＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋細胞のパーセンテージは、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、およびその間の任意のパーセンテージである。
【０２０４】
ＴおよびＢ細胞を枯渇させ、「一晩刺激された」ＮＫ細胞として言及される、最小の事前枯渇培養を経験したか、または経験していないＰＢＭＣから単離された、上記ＮＫ細胞集団は、次に、ＮＫ細胞およびその亜集団の表現型および機能性を調節するために十分な時間、本明細書において提供される小分子の存在下での調節の対象にされる。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞を成熟に偏向させることを含む。１つの実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞をＣＤ５７＋ＮＫ細胞に偏向させて、ＮＫ細胞成熟をもたらすことを含む。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞をＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞に偏向させることを含む。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞の細胞毒性を増大させること、および／またはサイトカイン応答を改善すること含む。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＣＤ５７−ＮＫ細胞をＣＤ５７＋ＮＫ細胞に偏向させて、ＮＫ細胞成熟をもたらすこと、細胞毒性を増大させること、およびサイトカイン応答を改善することを含む。幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＣＤ１０７ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６、ＫＩＲ、ＣＤ２、および天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）の１つまたは複数の細胞発現を増大することを含む。ＮＣＲは、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６を含む。幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＮＫｐ３０発現を増大させることを含む。幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＣＤ１０７ａを増大させることを含む。したがって、本発明はまた、調節されていないＮＫ細胞と比較し、ＣＤ１０７ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６、ＫＩＲ、ＣＤ２、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６の１つまたは複数における増大した発現を有する調節されたＮＫ細胞の集団を提供し、ここで、その発現は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上、増大される。さらに幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞もしくはその亜集団の増殖、サイトカイン放出、細胞リコール、および／または持続性を改善することを含む。さらに幾つかの他の実施形態において、ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞もしくはその亜集団の細胞拡大、維持、分化、脱分化、および／または生存率を改善することを含む。
【０２０５】
ＮＫ細胞の表現型および／または機能性を調節するのに十分な時間は、例えば、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間、２１日間、２８日間、または間の任意の長さの時間を含み得る。幾つかの実施形態において、本発明の方法において得られるＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間、２１日間、２８日間、または間の任意の長さの時間、調節される。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞を調節するために十分な時間は、１２時間以上、１６時間以上、２４時間以上、４８時間以上、３日間以上、４日間以上、５日間以上、６日間以上、または７日間以上である。幾つかの実施形態において、本発明の方法において得られるＮＫ細胞は、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で、２４時間以上、４８時間以上、３日間以上、４日間以上、５日間以上、６日間以上、または７日間以上、調節される。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞を調節するのに十分な時間は、１〜２８日間、１〜２１日間、１〜１４日間、１〜７日間、２〜１２日間、３〜１１日間、４〜１０日間、５〜９日間、６〜８日間、７〜１４日間、１４〜２１日間、２１〜２８日間、またはそれに含まれる任意の範囲である。幾つかの実施形態において、本発明の方法において得られるＮＫ細胞は、ＧＳＫ３ｉの存在下で、１〜２８日間、１〜２１日間、１〜１４日間、１〜７日間、２〜１２日間、３〜１１日間、４〜１０日間、５〜９日間、６〜８日間、７〜１４日間、１４〜２１日間、２１〜２８日間、またはそれに含まれる任意の範囲の間、調節される。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞を調節するのに十分な時間は、約３日、約５日、約７日、または約９日である。幾つかの実施形態において、本発明の方法において得られるＮＫ細胞は、ＧＳＫ３ｉの存在下で、約３日間、５日間、約７日間、または約９日間、調節される。
【０２０６】
幾つかの実施形態において、十分な時間の免疫細胞の調節は、３０μＭ未満、２５μＭ未満、２０μＭ未満、１５μＭ未満、１０μＭ未満、または１μＭ未満にある小分子の存在下でである。幾つかの実施形態において、十分な時間免疫細胞を調節する際に使用される小分子は、２５μＭ未満、２０μＭ未満、１５μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、または１μＭ未満である。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で十分な時間調節されたＮＫ細胞の集団は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、数またはパーセンテージにおいて増大されたＮＫ細胞拡大を有する。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で調節されたＮＫ細胞の集団は、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、または少なくとも約９９％のＮＫ細胞純度を有する。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で調節されたＮＫ細胞の集団は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、数においてまたはパーセンテージにおいて増大したＣＤ５７＋ＮＫ細胞拡大を有する。幾つかの実施形態において、調節後の集団におけるＣＤ５７＋ＮＫ細胞またはＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋細胞のパーセンテージは、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％または８０％、およびその間の任意のパーセンテージである。幾つかの実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で調節されたＮＫ細胞の集団は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、数においてまたはパーセンテージにおいて増大したＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞拡大を有する。
【０２０７】
本明細書において開示されるプロセスの後、ＧＳＫ３阻害剤を使用してＮＫ細胞の集団を調節する方法は、増大した数または割合の、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞、およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞のようなＮＫ亜集団を有する細胞療法のための調節されたＮＫ細胞；改善された細胞拡大、維持および成熟；改善された増殖、細胞リコール、および／または持続性につながるＮＫ細胞サブセットの増強された養子／メモリー様状態；ならびに改善された細胞毒性ならびにサイトカイン応答および分泌をもたらす。したがって、本発明の異なる態様は、事前枯渇培養をしないで枯渇させたＰＢＭＣ試料を、調節のため、十分量のＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と、細胞療法の改善された可能性を有する調節された細胞を得るのに十分な時間、接触させることを含む、ＮＫ細胞およびその亜集団を選択的に拡大する方法；養子ＮＫ細胞を拡大し、調節する方法；ＮＫ細胞拡大、維持または成熟を改善する方法；ＮＫ細胞の養子／メモリー様状態を増強する方法；細胞増殖、細胞リコール、および細胞持続性を含むが、これらに限定されない、ＮＫ細胞の治療可能性を改善する方法；ＮＫ細胞の細胞毒性を改善する方法；ならびにＮＫ細胞サイトカイン分泌および応答を増大させる方法をさらに提供する。
【０２０８】
別の実施形態において、上記方法は、ＰＢＭＣの試料を対象から得ること；例えば、ＣＤ３およびＣＤ１９を含む抗体を使用して、試料の事前枯渇培養をしないでＰＢＭＣ試料を枯渇させること；ならびに枯渇させたＰＢＭＣ試料を、十分量のＧＳＫ３ｉを含む組成物と、細胞療法の改善された可能性を有する調節された細胞を得るのに十分な時間接触させることを含む。
【０２０９】
さらに別の実施形態において、上記方法は、ＰＢＭＣの試料を対象から得ること；ＣＤ３およびＣＤ１９または他の非ＮＫ特異的なマーカーを含む抗体を使用して、事前枯渇培養をしないで、ＰＢＭＣ試料を枯渇させること；枯渇させたＰＢＭＣ試料を、調節のため、十分量のＧＳＫ３ｉを含む組成物と、調節された細胞を得るのに十分な時間、接触させること；ならびにＣＤ５７＋ＮＫ細胞を調節された細胞から単離することを含む。
【０２１０】
上記方法の幾つかの実施形態において、方法は、ＮＫ細胞をＧＳＫ３阻害剤を含む組成物と接触させる工程の前または工程中に、ＮＫ細胞の集団を活性化することをさらに含んでもよい。
【０２１１】
上記方法の幾つかの実施形態において、十分量のＧＳＫ３ｉを含む組成物と十分な時間接触させることは、フィーダーフリーな条件、すなわち、フィーダー細胞またはその成分を含まず、かつフィーダー細胞馴化培地を含まない条件において行われてもよい。
【０２１２】
上記方法の幾つかの実施形態において、十分量のＧＳＫ３ｉを含む組成物を十分な時間接触させることは、フィーダー細胞の存在下で行われてもよい。幾つかの実施形態において、フィーダー細胞は、外来表面タンパク質を発現させるためのゲノム編集により、修飾される。
ＩＶ．処理された免疫細胞、免疫細胞集団または亜集団の治療上の使用
【０２１３】
本発明は、細胞ベースの養子療法において使用されるとき、免疫細胞の治療可能性を改善するのに十分な量で、表１から選択される１つもしくは複数の薬剤と接触させた免疫細胞の単離された集団または亜集団を含む組成物を提供する。１つの実施形態において、処理された免疫細胞の単離された集団または亜集団は、増大した数もしくは割合のナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、および／またはセントラルメモリーＴ細胞を含む。１つの実施形態において、接触された免疫細胞の単離された集団または亜集団は、増大した数または割合のタイプＩ  ＮＫＴ細胞を含む。別の実施形態において、接触された免疫細胞の単離された集団または亜集団は、増大した数または割合の養子ＮＫ細胞を含む。腫瘍細胞を標的にするか、またはＮＫ細胞の細胞毒性活性調節する他の薬剤と一緒にＮＫ細胞療法製品を使用する併用治療が、本明細書において考慮される。組成物の幾つかの実施形態において、組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（２本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、対象となる１つもしくは複数のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つまたは複数の追加の添加剤をさらに含む。
【０２１４】
本発明はまた、表１において挙げられる化合物、および追加の治療薬剤を含む１つまたは複数の薬剤で調節された免疫細胞を含む併用治療の組成物ならびに方法を提供する。幾つかの実施形態において、追加の治療薬剤は、抗体、または抗体フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体、ヒト化モノクローナル抗体、キメラ抗体であってもよい。幾つかの実施形態において、抗体、または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態において、抗体、または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。幾つかの実施形態において、腫瘍またはウイルス特異的抗原は、調節されたＮＫ細胞を活性化して、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を使用し、標的細胞を溶解する。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、標的細胞プラスＮＫ細胞および他の細胞タイプ上の動員ＣＤ１６に結合し、これにより、生体内と試験管内の両方でＡＤＣＣによる腫瘍細胞の殺傷をもたらす。ｍＡｂはまた、ＮＫ細胞阻害をブロッキングすることにより、ＡＤＣＣを増強し、ＮＫ細胞を刺激することができる。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞により仲介されるＡＤＣＣは、調節されたＮＫ細胞により、発現されたＣＤ１６および遺伝子的に操作されたそのバリアントを介してである。Ｃｄ１６の遺伝子的に操作されたバリアントは、切断不可能なＣＤ１６、高親和性ＣＤ１６（ｈａＣＤ１６）、および高親和性切断不可能なＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を含むが、これらに限定されない。したがって、本発明の上記態様は、抗体併用癌治療においてＡＤＣＣを果たす能力があるＧＳＫ３ｉにより調節されたＮＫ細胞を提供する。幾つかの実施形態において、本明細書において提供される抗癌ＮＫ細胞での併用処置に適した抗体は、抗ＣＤ２０（リツキシマブ、ベルツズマブ、オファツムマブ、ウブリツキシマブ、オカラツズマブ、オビヌツズマブ）、抗Ｈｅｒ２（トラスツズマブ）、抗ＣＤ５２（アレムツズマブ）、抗ＥＧＦＲ（セルツキシマブ）、および抗ＣＤ３８（ダラツムマブ）、ならびにそれらのヒト化およびＦｃ修飾されたバリアントを含むが、これらに限定されない。加えて、ＮＫ細胞上のＣＤ１６を認識する別のＦａｂ領域と組み合わせた、抗ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＣＤ３３抗原のような腫瘍細胞抗原を標的にする抗体のＦａｂ領域を融合する、二重ならびに三重特異性抗体の設計は、ＮＫ細胞の刺激、その後の腫瘍殺傷につながる。
【０２１５】
幾つかの実施形態において、追加の治療薬剤は、１つもしくは複数の化学療法剤または放射性部分を含む。化学療法剤は、細胞毒性抗腫瘍薬、すなわち、腫瘍細胞を優先的に殺傷するか、もしくは迅速に増殖する細胞の細胞サイクルを妨害する化学薬剤、または癌幹細胞を根絶することが見出されている化学薬剤、および腫瘍細胞の成長を妨げるかまたは低減するために治療上使用される化学薬剤を指す。化学療法剤はまた、抗腫瘍または細胞毒性薬もしくは薬剤としてもときに言及され、当該技術分野において周知である。
【０２１６】
幾つかの実施形態において、化学療法剤は、アントラサイクリン、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗物質、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有薬剤、インターフェロン、およびインターロイキンを含む。典型的な化学療法剤は、アルキル化剤（シクロホスファミド、メクロレタミン、メファリン（ｍｅｐｈａｌｉｎ）、クロラムブチル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン）、代謝拮抗物質（メトトレキサート、フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン）、エピポドフィロトキシン（エトポシド、エトポシドオルトキノン、およびテニポシド）、抗生物質（ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ビスアンスレン、アクチノマイシンＤ、プリカマイシン、ピューロマイシン、およびグラミシジンＤ）、パクリタキセル、コルヒチン、サイトカラシンＢ、エメチン、メイタンシン、ならびにアムサクリンを含むが、これらに限定されない。追加の薬剤は、アミノグルテチミド、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、アレムツザマブ、アルトレタミン、アナストロゾール、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、セツキシマブ、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、ダカルバジン、デニロイキンジフチトクス、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドロモスタノロン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エキセメスタン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロンアルファ（２ａ、２ｂ）、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミソール、メクロレタミン、メゲストロール、メルファリン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポリフェプロザン、ポルフィマー、プロカルバジン、キナクリン、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、トペテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビノレルビン、およびゾレドロネートを含む。他の適当な薬剤は、化学療法剤または放射線療法剤として承認されるもの、および当該技術分野において公知のものを含む、ヒト使用を承認されたものである。かかる薬剤は、共に時々アップデートされる、多数の標準的な医師および腫瘍学者の参考文献（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．，１９９５）のいずれかを通じて、または国立がん研究所のウェブサイト（ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ｄｒｕｇｌｉｓｔｆｒａｒｎｅ．ｈｔｍ）を通じて参照することができる。
【０２１７】
サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドのような免疫調節薬（ＩＭｉＤ）は、ＮＫ細胞とＴ細胞の両方を刺激する。本明細書において提供される通り、ＩＭｉＤは、癌処置のため調節された治療免疫細胞と共に使用されててもよい。
【０２１８】
様々な疾患は、本発明の細胞を養子細胞療法に適した対象に導入することにより、改善され得る。疾患の例は、円形脱毛症、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎筋炎、糖尿病（１型）、幾つかの形態の若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーヴス病、ギランバレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、幾つかの形態の心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、幾つかの形態の甲状腺炎、幾つかの形態のぶどう膜炎、白斑、多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ウェゲナーの）を含むが、これらに限定されない様々な自己免疫異常；急性および慢性白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫および骨髄異形成症候群を含むが、これらに限定されない造血器腫瘍；脳、前立腺、乳房、肺、結腸、子宮、皮膚、肝臓、骨、膵臓、卵巣、精巣、膀胱、腎臓、頭部、頸部、胃、子宮頸部、直腸、咽頭、または食道の腫瘍を含むが、これらに限定されない固形腫瘍；およびＨＩＶ−（ヒト免疫不全ウイルス）、ＲＳＶ−（呼吸器多核体ウイルス）、ＥＢＶ−（エプスタイン・バーウイルス）、ＣＭＶ−（サイトメガロウイルス）、アデノウイルス−およびＢＫポリオーマウイルス−関連異常を含むが、これらに限定されない感染症を含む。
実施例
【０２１９】
以下の実施例は、説明の目的だが、制限の目的ではなく、与えられる。
【０２２０】
実施例１-方法および材料
試験管内細胞培養。フレッシュｌｅｕｋｏｐａｋ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、アラメダ、カリフォルニア州）を健常ドナーから得て、それから、ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（ステムセルテクノロジーズ、バンクーバー、カナダ）を使用して、Ｔ細胞をネガティブセレクションした。新たに単離したＴ細胞を等分し、凍結保存した。新たに単離したＴ細胞を等分し、凍結保存した。スクリーニングを開始した日に、Ｔ細胞を解凍し、５％ヒトＡＢ血清、ＩＬ−２、ペニシリン／ストレプトマイシン、およびさらに上清を含むＸ−Ｖｉｖｏ  １５に注いだ。細胞を、平底３８４ウェルプレートに、５×１０５細胞／ｍｌにて、ビーズ対細胞比３：１の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ｄｙｎａｂｅａｄ（サーモフィッシャー、ウォルサム、マサチューセッツ州）と共に分注した。各プレートのカラム３からカラム２２までの各ウェルに、終濃度１０μＭにて、個々の化合物を加えた。陽性および陰性対照をさらなるウェルに加えた。細胞を、約６日間、３７℃にて、５％ＣＯ２でインキュベーションした。
【０２２１】
フローサイトメトリー。培養６日目に、細胞を、固定可能なバイアビリティーマーカーならびにフルオロフォア抱合抗体：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、およびＣＤ１２２（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス、サンノゼ、カリフォルニア州；およびＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）で染色した。取得の直前に、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｂｅａｄ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ、レークフォレスト、イリノイ州）を加えた。ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス）にて、データ取得を行い、Ｔｒｅｅｓｔａｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＦｌｏｗＪｏ、アシュランド、オレゴン州）およびＳｐｏｔｆｉｒｅ（Ｔｉｂｃｏ、ボストン、マサチューセッツ州）を使用して、データを解析した。
【０２２２】
ＮＫ細胞単離。健常成人ドナー血液を、市販の供給源から、またはＳｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ラホヤ、カリフォルニア州のＧＣＲＣ  ｃｏｒｅ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ＧＥヘルスケア：ライフサイエンス）を使用した密度勾配遠心分離により単離し、次に、製造元の指示に従い、ＣＤ１９  Ｍｉｃｒｏｂｅａｄ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、番号１３０−０５０−３０１）およびＣＤ３  Ｍｉｃｒｏｂｅａｄ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、番号１３０−０５０−１０１）を使用して２４〜３６時間以内ＰＢＭＣを培養することなく、ＢおよびＴ細胞を枯渇させた。
【０２２３】
ＮＫ細胞培養：ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ（０．５〜１×１０Ｅ６／ｍＬ）を、Ｂ０培地（ＤＭＥＭの２：１混合物、（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌ−Ｇｒｏ、番号１０−０１７−ＣＶ）、ならびに１０％ヒトＡＢ血清（Ｖａｌｌｅｙ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、番号ＨＰ１０２２）、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３０−００２−ＣＩ）、２０μＭ２−メルカプトエタノール（シグマ、Ｍ３１４８）、５０μＭエタノールアミン（シグマ、Ｅ０１３５）、１０μｇ／ｍＬアスコルビン酸（シグマ、Ａ４５４４）、および１．６ｎｇ／ｍＬセレン酸ナトリウム（シグマ、Ｓ５２６１）を含むＨａｍ’ｓ  Ｆ１２（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌ−Ｇｒｏ、番号１０−０８０−Ｃ）において培養した。細胞を、１０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−１５（ライフテクノロジーズ、ＰＨＣ９１５４）を含有する培地において、ＧＳＫ３阻害剤ＣＨＩＲ９９０２１（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、番号１６７７−５）、ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤ＢＩＸ０１２９４（Ｔｏｃｒｉ、３３６４）、ＴＧＦ−β１受容体阻害剤ＳＢ−４３１５４２（ＢｉｏＶｉｓｏｎ、１６７４−５）、もしくはヒトインターフェロンアルファ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ、１１２００−１）と共に、またはなしで、７〜８日間（最大４週間）培養した。培養後、トリパンブルーを使用して、またはＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ）により、細胞をカウントし、フローサイトメトリーおよび機能的アッセイのため使用した。ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ上で、フローサイトメトリーを行い、結果を、ＦｌｏｗＪｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅにより解析した。フローサイトメトリーのため、以下の表面マーカー：ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ５７およびＮＫＧ２Ｃに対する市販の抗体（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、またはＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。指した場所で、Ｋ５６２フィーダー細胞を使用した。指した場所で、他のモジュレーターおよび培養試薬を加えた。
【０２２４】
ＮＫ細胞ソーティング：ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣを、１０μＭ  ｅ４５０ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｙｅ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で標識し、ＦＩＴＣ抱合抗ＣＤ５７、ＰＥ抱合抗ＮＫＧ２Ｃ、ＡＰＣ抱合抗ＣＤ５６、ならびにＰｅｒｃｐ−Ｃｙ５．５抱合抗ＣＤ３抗体（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス、およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で染色した。ＣＤ５７およびＮＫＧ２Ｃの発現；ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ−、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋、およびＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ−により、ＣＤ３−ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の４つの集団をソーティングした。ソーティングしたＮＫ細胞集団を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１５およびＣＨＩＲ９９０２１またはビヒクル対照を含むＢ０培地において、ＮＫ：単球の比２：１にて培養した。染色されたが、ソーティングしていない細胞を、対照として並行して培養した。
【０２２５】
ＮＫ細胞の細胞毒性アッセイ：既に公開された方法（Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００７  Ａｕｇ  ３１；３２５（１−２）：５１-６６）に基づくフローサイトメトリーベースの方法を使用して、細胞毒性を決定した。ＮＫ細胞を、ｅ４５０−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｙｅ標識した標的と共に４時間共培養した。ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ（商標）Ｃａｓｐａｓｅ−３／７  Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ライフテクノロジーズ）を使用して、標的細胞の間で細胞死についてアッセイし、試料を、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒにて読み取った。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ  Ｚｏｏｍ装置を使用して、ＳＫＯＶ−３標的の殺傷を定量した。ＮｕｃＬｉｇｈｔ−Ｒｅｄ  ＢａｃＭａｍ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、ＳＫＯＶ−３細胞を一過性に形質導入し、２時間の間隔で画像を取得しながら、指したＮＫ細胞集団と共に７４時間共培養した。ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ（商標）Ｃａｓｐａｓｅ−３／７  Ｇｒｅｅｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ使用して、カスパーゼ３／７活性をモニターし、アポトーシスを経験した標的細胞を示した。標的細胞数を、単独で培養したＳＫＯＶ−３細胞に対して正規化し、アポトーシスを経験した標的を、カスパーゼ３／７活性に基づき定量した。
【０２２６】
ＮＫ細胞の細胞内サイトカイン染色：ＣＤ３／ＣＤ９を枯渇させたＰＢＭＣを、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１５および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１またはビヒクル対照と共に７日間培養した。培養７日目に、細胞を洗浄し、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８（それぞれ、１０ｎｇ／ｍｌおよび５０ｎｇ／ｍｌ）（ライフテクノロジーズ）と共に、または比１：１にてＫ５６２細胞と共に別々に培養した。Ｇｏｌｇｉｓｔｏｐ（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス）を培地に含めて、サイトカインの細胞内検出を促した。４時間の培養期間後、細胞を、細胞表面抗原について染色し、ＩＦＮ−ガンマおよびＴＮＦ−アルファに対する抗体（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス）での細胞内染色に先立ち、固定した。製造元の指示に従い、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（商標）Ｋｉｔを使用して、染色を行った。
【０２２７】
ＮＫ細胞調節化合物のスクリーニング：ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣを、フィーダー細胞と共に、またはなしで、７日間、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１５および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１と共に培養した。様々な小分子および／またはサイトカインを、複数回に分けて０日目に加えて、増殖および表現型に対するそれらの効果を評価した。培養物を、７日の期間中ずっと、培地の酸性化または細胞の過成長についてモニターした。培培養後、細胞を回収し、フローサイトメトリーによる表現型解析のため染色した。増殖およびマーカー発現における変化について、データを解析した。ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ上で、フローサイトメトリーを行い、結果を、ＦｌｏｗＪｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅにより解析した。フローサイトメトリーのため、以下の表面マーカー：ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ５７およびＮＫＧ２Ｃに対する市販の抗体（ベクトン・デッキンソンバイオサイエンス、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、またはＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。
【０２２８】
調節したＮＫ細胞を使用した生体内腫瘍排除：２×１０５ルシフェラーゼ発現ＳＫＯＶ−３細胞の腹腔内移植の１日前に、ＮＳＧマウスに３００ラド照射した。卵巣癌細胞の移植の５日後、マウスを無処置のままか、ハーセプチンのみで処置か、またはハーセプチン、ＩＬ−１５、ならびにＩＬ−１５およびＣＨＩＲ９９０２１と７日間培養したＮＫ細胞で処置した。ルシフェラーゼ発現ＳＫＯＶ−３細胞を、２１日目にＩＶＩＳ画像化システムを使用して画像化した。
【０２２９】
実施例２-免疫細胞調節のための薬剤
データを解析して、より高い割合もしくはより大きい絶対数のいずれかの、表現型の上で同定したナイーブ、幹細胞メモリー、またはセントラルメモリーＴ細胞を生じた化合物を同定した。これらの細胞を、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌの発現により特徴付ける。それ故、これらの同定マーカーの両方を共発現する細胞を評価した。生ＣＤ４＋集団および生ＣＤ８＋集団内で、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞のパーセントを決定した。所望されるＴ細胞サブセットの指標として、Ｔ細胞上でのＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７のいずれかの発現を、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、および可能性のある他の養子Ｔ細胞療法の好ましい機能的特徴を有すると記載した。ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、ＧＳＫ３阻害剤、６−メルカプトプリン、ＡＣ−９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ−１０３、５−アザシチジン、５，７−ジクロロ−８−キノリノール、ニトロフラントイン、５−クロロ−７−ヨード−８−キノリノール、またはジエチレントリアミンペンタ酢酸の処理の下で、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞の数または割合は、生存ＣＤ４＋集団と生存ＣＤ８＋集団の両方において増大した（表２）。フルベストラント、タプシガルジン、ＳＵ４３１２、フルダラビン、２−ナフタセンカルボキサミド、７−クロロ−４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒ、ニフロキサジド、塩化エドロホニウムの処理の下で、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞の数または割合は、少なくとも生存ＣＤ８＋集団において増大した（表２）。１−ピロリジンカルボジチオ酸、アンモニウム塩、Ｕ０１２６、テルミサルタン、サイクロスポリンＡ、１，３，５−トリス（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−１Ｈ−ピラゾール、ＢＡＹ６１−３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ラパマイシン、ロスコビチン、ＰＡＣ−１、トスフロキサシン塩酸塩、ＢＩＸ０１２９４、およびテルフェナジンの処理の下で、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞の数または割合は、少なくとも生存ＣＤ８＋集団において増大した（表２）。
【０２３０】
加えて、ＧＳＫ３（グリコーゲン合成酵素キナーゼ３）阻害剤は、ＣＤ３−ＣＤ１９−ＣＤ５６＋ＮＫ細胞を保存することを示し、ＣＤ５７＋およびＮＫＧ２Ｃ＋発現を含むが、これらに限定されない、観察に基づき、細胞成熟およびサブタイプ偏向に影響することにより、養子ＮＫ細胞亜集団を増大した。
【０２３１】
各試料中のビーズのカウントの絶対数に相関するこれらのゲートのそれぞれにおける現象の数を計算し、ＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋集団内でのナイーブ、幹細胞メモリー、またはセントラルメモリーＴ細胞の絶対数の相対的測定を定義する。各３８４ウェルプレート内の第２の化合物試料に相関するｚ値を、これらの４種の値：１）ＣＤ４＋におけるパーセントＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋、２）ＣＤ８＋におけるパーセントＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋、３）ＣＤ４＋におけるＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋の絶対相対数、および４）ＣＤ８＋におけるＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋の絶対相対数のそれぞれについて計算した（図１Ａおよび１Ｂ）。各試料内の全ての細胞のパーセントバイアビリティー、および各試料内の細胞の相対絶対数について、Ｚスコアを計算した。「Ｚスコア」は、スコアの群における平均とのスコアの関連の統計的測定値である。Ｚ値０は、スコアが、平均と同じであることを意味する。Ｚスコアはまた、それが、平均より上かもしくは下であるかどうかを、かつどれだけ多くの標準偏差かにより示す、正または負であり得る。
【０２３２】
Ｔ細胞増殖またはバイアビリティーに対する有害な影響を有する化合物の排除は、最も恐らくＴ細胞製造方法に適している化合物に対する成果に焦点を当てたものである。以下の基準：−１より大きい「パーセントバイアビリティー」Ｚ−スコア、−１より大きい細胞のＺ−スコアの「相対絶対数」、および＋２より大きい４つの値の１つのＺ−スコアにより、第一のヒット化合物を選択した。ずっと高いＺ−スコアを有し、かつ４つの第一の値の１つより多くについて上記基準を満たすという点で、３４種の化合物（表２）を選択した。さらに５種の化合物をまた、Ｔ細胞を調節するそれらの能力の点で含める（表３）。
【０２３３】
【表２−１】
2019502722.tif 000005
【０２３４】
【表２−２】
2019502722.tif 000006
【０２３５】
【表２−３】
2019502722.tif 000007
【０２３６】
【表３】
2019502722.tif 000008
【０２３７】
実施例３-選択した化合物の試験管内トリアージ実験
試験管内実験を行い、Ｔ細胞機能に対して決定的な影響を有する化合物曝露およびトリアージ化合物の方法を最適化する。第一の試験が、既に観察したナイーブ、幹細胞メモリー、およびセントラルメモリーＴ細胞に対する影響が、さらなるドナーにおいて繰り返されるかどうかを評価しながら、個々の化合物の最適な用量を決定する。Ｔ細胞に対する可能性のある決定的な機能的影響を有する化合物をトリアージするために、増殖能力、Ｔｈ１およびＴｈ１７に二極化させる能力、凍結保存／解凍サイクルを通じた生存、伝達効率、ならびにＣＡＲにより伝達されたＴ細胞の殺腫瘍活性についての試験管内評価を行う。Ｔ細胞機能に対して有意な負の影響を伴わないで、拡大中にナイーブ、幹細胞メモリー、もしくはセントラルメモリーＴ細胞の割合または数を再生可能な方法で改善する化合物を、組み合わせで試験し、相加または相乗効果について評価する。これらの評価を通じて、有力候補または組み合わせを、生体内での追加試験に優先させる。
【０２３８】
実施例４-選択した化合物を使用した養子細胞療法の生体内モデル
生体内スクリーニングおよび追跡試験管内トリアージ実験の結果を説明するために、選択した化合物の有力候補を、養子細胞療法の生体内モデルに適用する。具体的には、生着、殺腫瘍活性、２次的な殺腫瘍応答、遊走、細胞持続性、および移植片対宿主疾患に関して、養子細胞療法に対する小分子調節の影響を調べる。臨床において有効な応答と相関することが見い出された永続的養子細胞療法の特徴である他の読み取り情報もまた、調べる。
【０２３９】
これらの実験を、ヒト細胞を、ヒト腫瘍を生じる免疫不全ＮＳＧマウスに養子性に移植するヒト化システムにおいて、または免疫コンピテント動物が、同系腫瘍を生じ、同系細胞療法で処置される代替マウスモデルにおいてのいずれかで、行う。
【０２４０】
代替またはヒト化モデルシステムのいずれかにおいて、マウスに対象となるルシフェラーゼ標識リンパ腫または他の腫瘍を注入する。その後すぐに、本発明において開示されるビヒクルまたは調節化合物によって前処理された養子細胞療法を行う。細胞療法と腫瘍の両方の用量を、化合物処理の正または有害な効果を観察するウインドウを可能にするように最適化する。動物の重さ、血漿サイトカイン濃度、腫瘍の量、および末梢血、二次リンパ器官および腫瘍塊における養子細胞療法；全身腫瘍組織量、腫瘍転移、および細胞療法の表現型を、実験の持続のためモニターする。
【０２４１】
生体内での１つまたは多数の腫瘍関連パラメーターを向上させることができる化合物は、有効な腫瘍クリアランスに必要な細胞療法の用量を低下させること、末梢血において養子細胞療法の持続性を増大させること、腫瘍部位への遊走を増強させること、および／または高腫瘍用量での負荷に対する増大した生存を含むが、これらに限定されない予想される効果を有する。
【０２４２】
実施例５-ＧＳＫ３阻害剤を使用したＮＫ細胞およびその亜集団の選択的拡大
本発明の１つの態様は、養子細胞療法のためＮＫ細胞を培養し、拡大し、および／または調節する方法ならびにシステムを提供することである。幾つかの実施形態において、ＮＫ細胞を培養し、拡大し、および／または調節する方法およびシステムは、フィーダー細胞、またはフィーダー細胞馴化培地を使用しない。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健常成人ドナーから単離した。単離したアフェレーシス産物（０日、事前枯渇；図２Ａ）は、事前枯渇培養をしていない抗ＣＤ１９およびＣＤ３抗体を使用して枯渇させたＴおよびＢ細胞であった（０日目、枯渇後；図２Ｂ）。次に、枯渇後細胞集団を、フィーダーフリーな条件において、組換えヒトＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍＬ）および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１、ＧＳＫ３阻害剤の存在下で約３〜７日間培養した。示す通り、ＩＬ−１５およびＧＳＫ３阻害剤との培養は、培養７日目において約２０％（図２Ｂ）から約９９％（図２Ｃ）までのＮＫ細胞（ＣＤ５６＋ＣＤ３−）拡大を選択的かつ有意にもたらすように思われる。対照的に、枯渇後集団（約１％；図２Ｂ）における残りのＴ細胞（ＣＤ５６−ＣＤ３＋）は拡大されず、これにより、集団において低減したパーセンテージをもたらす（０．２５％まで；図２Ｃ）。  
【０２４３】
枯渇および一晩培養後（０日目、枯渇後；ＩＬ１５のみと一晩培養；「初回刺激」としても言及する）、細胞集団は、およそ１０〜４０％（ドナー変異性に起因する）ＮＫ細胞を含有する。サイトカインおよびＧＳＫ３阻害剤との７日間の培養後のＮＫ細胞の選択的かつ有意な拡大は、約８０％から約９９％より高い高度に改善されたＮＫ細胞純度をもたらし（図３Ａ）、これは、平均約８倍のＮＫ細胞数の増大を表し（図３Ｂ）、約１８倍のより大きな増大を有する幾つかの試料も伴った。ドナーのバリエーションおよびプロセスのバリエーションは、変異性に寄与し得ることに注意されたい。
【０２４４】
一晩初回刺激した細胞集団におけるＮＫ細胞亜集団、および７日目のＧＳＫ３ｉと培養した細胞集団におけるＮＫ細胞亜集団をさらに解析し、比較した。これらの解析は、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋およびＣＤ５７＋ＮＫサブセットの細胞数が、ＧＳＫ３阻害剤と培養後、平均約５〜６倍増大したことを説明する（図３Ｃおよび３Ｄ）。典型的には、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫサブセットは、ドナー由来細胞において比較的小数で存在する。さらに、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫサブセットは、サイトカインのみの下で培養したとき（ＧＳＫ３ｉなしで７日間の培養；図４Ａ）、十分に維持されず、これは、ＮＫ集団における低減したパーセンテージのＣＤ５７＋ＮＫ細胞によりさらに表された（図４Ｂ）。比較では、ＧＳＫ３阻害剤と培養したとき、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞数は、ＧＳＫ３ｉなしで培養したときのその細胞数と比較し、平均７〜８倍で有意に増大した（図４Ａ）。さらに、ＧＳＫ３ｉとの７日間の培養はまた、ＧＳＫ３ｉなしでの７日間の培養と比較し、トータルのＮＫ集団において増大したパーセンテージのＣＤ５７＋細胞をもたらした（図４Ｂ）。本明細書におけるデータは、ＮＫ細胞集団の伝統的な培養プロセス（すなわち、ＧＳＫ３阻害剤を含まないサイトカインを使用する）は、特に、ＮＫ細胞が、Ｔおよび／またはＢ細胞枯渇をしないドナー由来ＰＢＭＣ集団において含まれるとき、ＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫサブセットを集団から減少させるか、または除去さえするであろうことを示した。
【０２４５】
実施例６-ＧＳＫ３阻害はＮＫ細胞の成熟をもたらす
ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣを、ｅ４５０  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｙｅで標識し、ＣＤ５６＋ＣＤ３−ＮＫ細胞をバルクでソーティングするか、またはＣＤ５７の発現およびＮＫＧ２Ｃ発現に基づき４つの集団にソーティングした（図５Ａ）。トータルの分画化していないＮＫ細胞を、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ−（Ｑ１）、ＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋（Ｑ２）、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ＋（Ｑ３）、ＣＤ５７−ＮＫＧ２Ｃ−（Ｑ４）ソーティングしたＮＫ細胞と並行して、比１：１のＮＫ細胞：単球の自家ＣＤ１４＋単球と共に、（１）サイトカイン（１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ１５）および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１、または（２）ビヒクル対照（例えば、ＤＭＳＯのみ）を含むサイトカインのみのいずれかで培養した（図５Ｂ）。７日間の培養期間後、各ソーティングした集団の培養物を、フローサイトメトリーのため染色し、増殖および細胞表面マーカー発現について解析した。ＧＳＫ３阻害剤との７日間の培養後、トータルのＮＫ細胞においてＣＤ５７発現の有意な増大が存在したことが示された（図５Ｂ、ソーティングしていないより下のパネル）。各細胞四分割を解析するとき、増大したＣＤ５７発現は、ＣＤ５７＋細胞の増殖の観察した増強により、単に占められないことが明らかであった（図５Ｂ、Ｑ１およびＱ２）。ＧＳＫ３阻害剤との培養前にＣＤ５７−であった、Ｑ３およびＱ４のソーティングした細胞におけるＣＤ５７の上方制御された発現は、成熟を経験し、増大したＣＤ５７レベルに大きく関与することがさらに見出された（図５Ｂ、Ｑ３およびＱ４）。それ故、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＤ５７−細胞におけるＣＤ５７発現の上方制御により示されるＮＫ細胞成熟をもたらし、また、ＧＳＫ３ｉで調節した集団における有意に増大したパーセンテージのＣＤ５７＋およびＣＤ５７＋ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞に関与すると結論付けた。
【０２４６】
同じＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ試料は、ＧＳＫ３阻害剤での短期間、例えば、１６時間の期間の処理を経験したとき、ＧＳＫ３阻害剤は、培養物においてＣＤ５７＋細胞のより高い出現頻度を生じず（図１１Ａ）、それは、ビヒクル処理と適合することをさらに観察した。ＧＳＫ３ｉと共にまたはなしでの培養物におけるＣＤ５７＋ＮＫ細胞分画の定量を、図１１Ｂにおいてさらに示し、ここで、ＧＳＫ３ｉは、ＮＫ細胞集団をＧＳＫ３ｉで１６時間より長い十分な時間処理したとき、より高い出現頻度のＣＤ５７＋分画を伴い調節されたＮＫ細胞集団の創出をもたらすことを示した。
【０２４７】
ＣＤ５７の高度に安定な発現は、おそらく、ＮＫ細胞成熟における後期ステージである。ＣＤ５７−細胞と比較して、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞は、ＩＬ−２およびＩＬ−１５に応答して潜在的にあまり増殖せず、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８に応答してほとんどＩＦＮ−γを産生しないと考えられている。それ故、ＧＳＫ３阻害剤を含む組成物を使用した十分な長さの時間のＮＫ細胞の調節が、ＣＤ５７＋に対してＣＤ５７−偏向をもたらし、一方、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞の数と割合の両方が、調節後改善し、それは、以下でさらに記載する、ＮＫ細胞傷害活性およびサイトカイン応答の増強を伴うことを見出したことは驚くべきことである。
【０２４８】
実施例７-ＧＳＫ３阻害はＮＫ細胞傷害活性およびサイトカイン応答を増強する
ドナーから直接単離したＮＫ細胞の細胞毒性を増強するＧＳＫ３阻害の能力を、試験管内殺傷アッセイを使用して評価した。Ｃ３／Ｃ１９を枯渇させたＰＢＭＣ集団を、１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５のみ（初回刺激）、または１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１の７日間の併用培養で一晩処理した。殺傷アッセイの標的細胞は、Ｋ５６２細胞、ＣＤ２０＋ラージ細胞、ＨＥＲ２＋ＳＫＯＶ３細胞およびＨＥＲ２＋Ａ５４９細胞を含むものであった。各アッセイに適用したＥ：Ｔ（エフェクター：ターゲット）比は、０．１、０．５、１、５〜１０の範囲であった。標的細胞を、異なる処理をしたＮＫ細胞と共に４時間インキュベーションした後、特異的殺傷（標的細胞溶解）のそれぞれのパーセンテージを計算した。Ｋ５６２殺傷アッセイにおいて、ＩＬ１５のみで処理したＮＫ細胞についてのＥ：Ｔ５０（標的細胞溶解の５０％が存在するときのＥ：Ｔ比）は約１０であり、一方、ＧＳＫ３ｉおよびＩＬ１５で処理したＮＫ細胞についてのＥ：Ｔ５０は、約１まで低減し、それは、大いに改善された細胞毒性活性を表している（図６Ａ）。ラージ細胞は、ＮＫにより仲介される細胞毒性の傾向があまりない。図６Ｂは、ラージ細胞が、ＮＫ細胞をＩＬ１５でＧＳＫ３ｉの存在下で７日間処理した後、１００とほぼ同じ高さのＥ：Ｔ５０で、一晩ＩＬ−１５で処理したＮＫ細胞に対してまだ相当抵抗性である一方、Ｅ：Ｔ５０は、しかしながら、１〜２に劇的に低減し、これは、抵抗性の細胞を殺傷しさえする増大するＮＫ細胞の細胞毒性におけるＩＬ１５とＧＳＫ３阻害剤の組み合わせの有意な効果を示している。
【０２４９】
同様の様式で、ＳＫＯＶ３細胞を、ＩＬ１５との一晩の培養、ＩＬ１５との７日間の培養、ならびにＩＬ１５およびＧＳＫ３ｉとの７日間の培養からもたらされたＮＫ細胞で処理した。データは、ＳＫＯＶ３細胞の除去（図６Ｃ）、およびカスパーゼ３／７現象（アポトーシス）の最初の最大ピーク（図６Ｄ）により示される細胞殺傷に基づき、ＧＳＫ３ｉで処理したＮＫ細胞が、ＳＫＯＶ３細胞の殺傷において、殺傷率と殺傷効率の両方に関して最も有効であることを示す。
【０２５０】
抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）はまた、ＨＥＲ２抗体（ハーセプチン）を使用して、ＳＫＯＶ３の殺傷を仲介したとき、ＩＬ１５との一晩の培養、およびＩＬ１５との７日間の培養からもたらされたＮＫを使用したＡＤＣＣ殺傷と比較し、ＩＬ１５およびＧＳＫ３ｉと７日間培養したＮＫ細胞で増強されることを示した（図６Ｅ）。さらなる証明のため、ＡＤＣＣにより仲介される殺傷を試験するために、ハーセプチン抗体により標的化され得る、高発現のＨＥＲ２抗原を有するＡ５４９細胞株（小細胞肺癌株）を、ＮＫ細胞殺傷の試験に適用した。ＧＳＫ３ｉと７日間培養したＮＫ細胞による、同様に増強されたＡＤＣＣにより仲介される細胞殺傷を、Ａ５４９細胞殺傷の殺傷率（図６Ｆ）と効率（図６Ｇ）の両方において観察した。併せて、データは、ＩＬ１５＋ＧＳＫ３ｉにおいて複数日間のＮＫ培養を調節することにより、養子およびＣＤ５７＋成熟細胞が、維持され、拡大され、これが、ＮＫ細胞の細胞毒性効果における有意な増大をもたらすことを示す。
【０２５１】
ＮＫ細胞サイトカイン応答に対するＧＳＫ３阻害剤の効果も解析した。ドナーから直接得たＰＢＭＣを、ＣＤ３／ＣＤ９枯渇後、７日間、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１５および５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１と、またはＩＬ１５のみと培養した。７日目に、細胞を洗浄し、刺激のため、ＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１８（５０ｎｇ／ｍｌ）と、または比１：１のＫ５６２細胞と共に別々に培養した。４時間の培養期間後、細胞を、細胞表面抗原について染色し、それぞれ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαに対する抗体での細胞内染色に先立ち、固定した。図７は、ＧＳＫ３ｉおよびＩＬ１５で処理したＮＫ細胞におけるＩＦＮγならびにＴＮＦα産生が、初回刺激（枯渇させ、ＩＬ１５と一晩培養）または７日間ＩＬ１５のみ処理した試料と比較し、ＩＬ１２＋ＩＬ１８とＫ５６２刺激の下の両方で増強されたことを示す。ＧＳＫ３ｉおよびＩＬ１５で処理したＮＫ細胞における増強されたサイトカイン産生は、対照ＮＫ細胞（ＩＬ１５と一晩）、およびＩＬ１５と７日間培養したＮＫ細胞と比較し、図７Ａ（ＩＦＮγ）および７Ｂ（ＴＮＦα）において示される有意なパーセンテージ増大により示される。さらに、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８に対する応答は、典型的には、未成熟ＮＫ細胞と関連するので、上で観察した増強されたＩＦＮγおよびＴＮＦα応答は、本明細書において開示する組成物および方法が、ドナーから直接得たＣＤ３／１９を枯渇させたＰＢＭＣにおいて成熟ＮＫ（細胞毒性）と未成熟ＮＫ（サイトカイン応答性）の両方と関連する増強された機能につながることを支持する。
【０２５２】
実施例８-ＧＳＫ３阻害剤は修飾されたＫ５６２フィーダー細胞の存在下でＮＫ増殖およびサブタイプ偏向に効果をもたらす
本明細書において開示するプロセスを使用した、ＮＫ細胞のＫ５６２フィーダー細胞との共培養、すなわち、０日目にＰＢＭＣを枯渇させ、次に、ＮＫ細胞をＧＳＫ３ｉの存在下で複数日間培養することにより、フィーダーフリーの培養より増強された機能性を伴った、選択的ＮＫ細胞サブセットの拡大における有意な増大を可能にすることを観察した。未修飾および修飾されたＫ５６２細胞（例えば、ある種のタンパク質の導入遺伝子により仲介される表面発現を有する）を試験し、事前枯渇培養、続いて複数日間のＧＳＫ３ｉ培養をしないで、ドナー試料の即時枯渇による選択的ＮＫ増殖およびサブタイプ偏向において同様の結果を示した。
【０２５３】
ＣＤ３／１９を枯渇させたＰＢＭＣを、７日間、修飾されたＫ５６２フィーダー細胞と共に、ＤＭＳＯ（ビヒクル）、０．１μＭ  ＧＳＫ３ｉ  ＣＨＩＲ９９０２１単独（Ｃ）、または０．１μＭ  ＧＳＫ３ｉ  ＣＨＩＲ９９０２１、４０ｎＭ  ＭＥＫｉ  ＰＤ０３２５９０１、および１ｎＭラパマイシンの組み合わせ（ＣＰＲ）の存在下で培養した。図８Ａは、小分子（ＣまたはＣＰＲ）の添加が、ＩＬ２１および４１ＢＢＬを発現するよう修飾されたＫ５６２株と共にのみの培養と比較して、活性化されたＮＫ細胞の増殖を全体的に増大したことを示した。比較では、ＣＤ５７＋ＮＫ細胞の数における増大は、ＧＳＫ３ｉによって最大であり、一方、ＣＰＲは、ビヒクル対照より少ない数のＣＤ５７＋ＮＫ細胞をもたらした（図８Ｂ）。しかしながら、ＮＫＧ２Ｃ＋ＮＫ細胞の数は、ＮＫ細胞を修飾されたＫ５６２フィーダー細胞と共に培養したとき、ＣＰＲを使用した処置で増大した（図８Ｃ）。
【０２５４】
データは、フィーダー細胞の存在、小分子の固有の組み合わせを、ここで開示するプロセスに従い適用するとき、ＣＤ５７＋集団における増大により示される、成熟状態への偏向、またはＮＫＧ２Ｃ＋集団における増大により示される養子状態への偏向を含む、拡大するＮＫ集団の様々な特性を増加させることができることを示す。
【０２５５】
実施例９-生体内での調節したＮＫ細胞表現型の維持
一晩ＩＬ１５と共に培養したＮＫ細胞、７日間ＩＬ１５およびビヒクルと共に培養したＮＫ細胞、ならびに７日間ＩＬ１５およびＧＳＫ３ｉと共に培養したＮＫ細胞を、それぞれ、ＮＳＧマウスに移植した。７日後、マウスの末梢血由来のＮＫ細胞を、表現型について解析した（１群当たりｎ＝３）。マウスはＩＬ−１５のみを受け取り、ＧＳＫ３ｉを受け取っていなかった。ＧＳＫ３ｉと７日間試験管内で培養したＮＫ細胞が、移植後、小分子の存在なしで少なくとも１週間、生体内でそれらの表現型の変化を維持することが示された。ＣＤ５７は高いままであり、それは、細胞をＧＳＫ３ｉなしで培養したときのケースではない、ＮＫ細胞の成熟度を表す（図９Ａおよび９Ｂ）。さらに、抗体依存性殺傷能力についてのマーカーであるＣＤ１６、およびＮＫＧ２Ｃ＋／ＣＤ５７＋が、生体内で維持された（図９Ｂ）。
【０２５６】
さらに、本明細書において提供するプロセスを使用して、ＧＳＫ３ｉと培養したＮＫ細胞の生体内腫瘍クリアランス能力も試験した。ルシフェラーゼ発現ＳＫＯＶ−３細胞の腹腔内移植の１日前に、ＮＳＧマウスに３００ラド照射した。卵巣癌細胞移植の５日後に、マウスを無処置のままにするか、ハーセプチンのみで処置するか、またはハーセプチン、ＩＬ−１５、ならびにＩＬ−１５およびＣＨＩＲ９９０２１と７日間培養したＮＫ細胞で処置するかのいずれであった。ＩＶＩＳ画像化システムを使用して、移植の２１日後（または処置の１６日後）に、ルシフェラーゼ発現ＳＫＯＶ−３細胞を画像化した。図１０は、ＧＳＫ３ｉで処理したＮＫ細胞の添加が、ハーセプチン抗体処置の腫瘍抑制効果を増強することを示し、これは、ＧＳＫ３ｉで処理したＮＫ細胞が、抗体依存性細胞傷害活性を生体内で仲介する能力があることを示唆する。これらのデータは、ＩＬ−１５およびＧＳＫ３ｉとの複数日の培養の効果は、長続きし、小分子、ＣＨＩＲ９９０２１の中止後少なくとも１週間、ＮＫ細胞上でインプリントされたままであることを示唆する。
【０２５７】
次に、本明細書において提供するプロセスを使用した、ＧＳＫ３ｉと培養したＮＫ細胞の生体内腫瘍クリアランス能力を、一晩初回刺激をしたＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ、ならびに７日間ＩＬ−１５およびＤＭＳＯと培養した、ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣと比較した。ルシフェラーゼを発現するＳＫＯＶ−３細胞を、ＮＳＧマウスに腹腔内注入した。５日間後、マウスを、ハーセプチン抗体１００μｇ、ならびに一晩初回刺激したＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させた細胞、７日間ＩＬ−１５およびＤＭＳＯ（ビヒクル）と培養したＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ、または７日間ＩＬ−１５およびＧＳＫ３ｉと培養したＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ（ＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞）のいずれか由来の２．５×１０６細胞で処置した。ＩＶＩＳ画像化システムを使用して、ルシフェラーゼ活性を測定することにより、ルシフェラーゼ発現ＳＫＯＶ−３細胞を定量した。図１２Ａは、ＩＬ−１５およびＧＳＫ３ｉと複数日間培養したＮＫ細胞が、ＳＫＯＶ−３細胞に対して生体内で高度かつ一貫して有効であることを示した。図１２Ｂは、異なった処理をしたＮＫ細胞による生体内ＳＫＯＶ−３  ＡＤＣＣ殺傷効果の定量的比較を示し、それは、図１２Ａ下の観察をさらに確認した。
【０２５８】
初代ＡＭＬ芽細胞に対する、一晩初回刺激したＮＫ細胞対、複数日間ＩＬ−１５およびＧＳＫ３ｉと培養したＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣ（ＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞）の細胞毒性も比較した。複数の患者由来の初代ＡＭＬ芽細胞のパーセント特異的殺傷を、フローサイトメトリーベースの細胞毒性アッセイにより測定した。図１３は、ＩＬ−１５およびＧＳＫ３ｉと複数日間培養したＮＫ細胞が、ＡＭＬ芽細胞に対して高度かつ一貫して有効であることを示した。
【０２５９】
二重標的細胞毒性アッセイにおいて、同種ＰＢＭＣに対するＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞の細胞毒性を、Ｋ５６２腫瘍細胞との比較で評価した。ＰＢＭＣ＋Ｋ５６２＋一晩初回刺激したＮＫ細胞、またはＰＢＭＣ＋Ｋ５６２＋ＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞におけるパーセント特異的殺傷を測定した。１人の健常ＰＢＭＣ標的ドナー当たり４人（図１４Ａ〜Ｃ）または３人（図１４Ｄ）のＮＫ細胞ドナーの平均±ＳＥＭを表すデータは、悪性細胞に対して区別し、それらの細胞を正常細胞の中で選択的に標的化するＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞の能力を示している。
【０２６０】
実施例１０-ＳＴＩＮＧアゴニストはＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞サイトカイン産生および細胞毒性を増強する
ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激物質）複合体は、腫瘍細胞の存在の検出、および身体の自然免疫系による攻撃的な抗腫瘍応答の促進において重要な役割を果たす。ＳＴＩＮＧ複合体は、直接的な細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）と、異なる分子機序を介したタイプＩインターフェロンシグナル伝達におけるアダプタータンパク質の両方として働く。ＳＴＩＮＧは、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、骨髄細胞および単球を含む、末梢リンパ組織中の造血細胞において発現する。細胞質ＤＮＡの検出は、ＳＴＩＮＧ経路活性化につながる一連の相互作用を開始する。経路の活性化は、インターフェロンβおよびインターフェロンαの産生の引き金を引く。ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＳＴＩＮＧ経路を活性化する。ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＳＴＩＮＧに結合し、活性化するＳＴＩＮＧリガンドを含む。公知のＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）およびキサンテノン、ならびにその類似体および誘導体を含む。ＣＤＮは、合成であるか、または原核生物の細胞もしくは哺乳類細胞に由来してもよい。典型的なＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＡＭＰ、ｃ−ジ−ＧＭＰ、ｃ−ジ−ＡＭＰ、ｃ−ジ−ＩＭＰ、ｃ−ジ−ＵＭＰ、ｃＡＭＰ−ＧＭＰ、Ｒ，Ｒジチオ−修飾ＣＤＡ化合物（ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡおよびＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡ）、ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２ｃＧＡＭＰ、ＤＭＸＡＡ（５，６−ジメチルキサンテノン−４−酢酸）を含むが、これらに限定されない。さらなるＣＤＮ類似体、誘導体、および細菌ＣＤＮ産物が、ＳＴＩＮＧリガンドと同定され続けるだろう。
【０２６１】
ＣＤ３／ＣＤ１９を枯渇させたＰＢＭＣを、７日間、１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ１５および（１）ＤＭＳＯ（ビヒクル）；（２）５μＭ  ＧＳＫ３ｉ（ＣＨＩＲ９９０２１）；（３）１μＭ  ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡ）；または（４）５μＭ  ＧＳＫ３ｉ＋１μＭＳＴＩＮＧアゴニストの存在下で培養した。７日目に、ＮＫ細胞機能および表現型を、細胞内サイトカイン染色、細胞毒性アッセイ、およびフローサイトメトリーにより評価した。ＳＴＩＮＧアゴニストＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡは、養子ＮＫ表現型およびトータルのＮＫ数に対する効果を制限することが示された。図１５は、ＩＬ−１５＋ＧＳＫ３ｉ培養の間若干増大しながら、ＳＴＩＮＧアゴニストのＧＳＫ３ｉ＋ＩＬ−１５  ＮＫ細胞培養物への添加が、ＣＤ５７＋分画の継続した維持をもたらすことを示した。しかしながら、図１６において示す通り、ＧＳＫ３ｉと組み合わせたＳＴＩＮＧアゴニストの添加は、ＩＬ−１２＋ＩＬ−１８で、または等しい数のＫ５６２細胞のいずれかで４時間の刺激について、ＩＦＮγ（図１６Ａ）およびＴＮＦα（図１６Ｂ）のＮＫ細胞産生を増強する。Ｋ５６２細胞とのインキュベーション後のＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の出現頻度は、ＩＬ−１５＋ＧＳＫ３ｉのみと培養した細胞と比較して、７日間ＩＬ−１５＋ＧＳＫ３ｉ＋ＳＴＩＮＧアゴニストと培養した細胞について増大した（図１６Ｃ）。増大した細胞表面ＣＤ１０７ａ発現は、ＧＳＫ３ｉと比較し、ＳＴＩＮＧアゴニストの存在下でＮＫ細胞の増強した脱顆粒および細胞毒性の可能性と関連する。
【０２６２】
試験管内殺傷アッセイを使用して、ＧＳＫ３ｉで複数日調節したＮＫ細胞の細胞毒性を増強するＳＴＩＮＧアゴニストの能力を評価した。ＣＤ３／Ｃ１９を枯渇させたＰＢＭＣ集団を、１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５のみで一晩（初回刺激）、１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５のみとの７日間の培養、１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５と５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１の組み合わせとの７日間の培養、または１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５、５μＭ  ＣＨＩＲ９９０２１と１μＭ  ＳＴＩＮＧアゴニストの組み合わせと７日間の培養で処理した。殺傷アッセイの標的細胞は、Ｋ５６２細胞、Ｎａｌｍ６細胞、およびＫＧ−１細胞を含むものであった。各アッセイに適用したＥ：Ｔ（エフェクター：ターゲット）比は、０．１、０．３、１、３〜１０の範囲であった。標的細胞を、異なる処理をしたＮＫ細胞と４時間インキュベーションした後、特異的殺傷（標的細胞溶解）のそれぞれのパーセンテージを計算し、図１７において示した。全てのアッセイにおいて、ＳＴＩＮＧアゴニストの添加が、ＧＳＫ３ｉで調節したＮＫ細胞の細胞毒性を、異なる程度までだが、増強した。
【０２６３】
抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）はまた、ＧＳＫ３ｉとの７日間の培養由来のＮＫを使用したＡＤＣＣ殺傷と比較し、ハーセプチンを使用して、ＳＫＯＶ３またはＡ５４９の殺傷を仲介したときのＳＴＩＮＧアンタゴニストおよびＧＳＫ３ｉと７日間培養したＮＫ細胞で増強されることが示された。比３：１で、ＮＫ細胞を標的に加えた。図１８は、複数日の培養におけるＧＳＫ３ｉとＳＴＩＮＧアゴニストの組み合わせが、抗Ｈｅｒ２抗体を用いたＡＤＣＣアッセイにおいて、Ａ５４９（図１８Ａ）およびＳＫＯＶ−３（図１８Ｂ）標的細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性を増強することを示した。図１８Ｂはまた、ＳＴＩＮＧアゴニストとＧＳＫ３ｉの組み合わせが、単独で使用したいずれかのモジュレーターよりＮＫ細胞の細胞毒性の増強においてより有効であることを示す。
【０２６４】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、抗体に依存した方法で、腫瘍およびウイルスに感染した細胞を認識し、破壊する。ＮＫ細胞の制御は、ＮＫ細胞表面上の受容体を活性化し、阻害することにより、仲介される。受容体を活性化する１つの重要なファミリーは、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６を含む、天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）である。ＮＣＲは、癌細胞上のそれらの特異的なリガンドの認識による腫瘍ターゲティングを開始する。図１９において示す通り、ＧＳＫ３ｉとＳＴＩＮＧアゴニストの組み合わせは、ＳＴＩＮＧアゴニストまたはＧＳＫ３ｉ単独により調節したＮＫ細胞と比較し、調節したＮＫ細胞上でのＮＫｐ３０発現を相乗的に増強し、他の機序の中でも、増強したＮＫ細胞機能に関与し得る。
【０２６５】
当業者は、本明細書において記載される方法、組成物、および製品が、典型的な実施形態の代表であり、本発明の範囲に対する制限として意図されないことを容易に理解するだろう。様々な置換および修飾が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書において開示される本開示に成され得ることは、当業者に容易に明らかであるだろう。
【０２６６】
本明細書において述べられたすべての特許および刊行物は、本開示が関係する当業者のレベルの指標である。全ての特許および刊行物は、それぞれの個々の刊行物が、参照により組み込まれる具体的かつ個別に示されたかのように、同じ程度まで本明細書において参照により取り込まれる。
【０２６７】
本明細書において説明として適切に記載される本開示は、本明細書において具体的に開示されていない任意の構成要件または複数の構成要件、限定または複数の限定の不在下で、実施され得る。したがって、例えば、本明細書における各場合において、用語「含むこと」、「本質的にからなる」、および「からなる」は、他の２つの用語のいずれかで置き換えられ得る。利用されきた用語および表現は、説明の用語として使用され、制限の用語として使用されず、示され、記載される特性、またはその一部の任意の均等物を除外するというかかる用語および表現の使用において、制限は存在しないが、様々な修飾が、請求される本開示の範囲内で可能であることが、認められる。したがって、本開示は、好ましい実施形態により具体的に開示されているが、本明細書において開示される概念の場合による特性、修飾、およびバリエーションが、当業者により再分類され得ること、ならびにかかる修飾およびバリエーションが、添付の請求の範囲により定義される本発明の範囲内であるとみなされることは、理解されるべきである。
【図１】
2019502722.tif 000009
【図２】
2019502722.tif 000010
【図３】
2019502722.tif 000011
【図４】
2019502722.tif 000012
【図５】
2019502722.tif 000013
【図６ＡＢ】
2019502722.tif 000014
【図６ＣＤ】
2019502722.tif 000015
【図６Ｅ】
2019502722.tif 000016
【図６Ｆ】
2019502722.tif 000017
【図６Ｇ】
2019502722.tif 000018
【図７】
2019502722.tif 000019
【図８】
2019502722.tif 000020
【図９】
2019502722.tif 000021
【図１０】
2019502722.tif 000022
【図１１】
2019502722.tif 000023
【図１２Ａ】
2019502722.tif 000024
【図１２Ｂ】
2019502722.tif 000025
【図１３】
2019502722.tif 000026
【図１４】
2019502722.tif 000027
【図１５】
2019502722.tif 000028
【図１６】
2019502722.tif 000029
【図１７】
2019502722.tif 000030
【図１８Ａ】
2019502722.tif 000031
【図１８Ｂ】
2019502722.tif 000032
【図１９】
2019502722.tif 000033
【国際調査報告】
2019502722.tif 000034
2019502722.tif 000035
2019502722.tif 000036
2019502722.tif 000037