(57)【要約】  小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法が提供される。より具体的には、ｈＲＳＶのＦタンパク質に結合し、ＲＳＶ感染を中和するポリペプチドが小児の肺に特定の投与計画で投与される方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法であって、
ＲＳＶ感染を患う小児に、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に（免疫アッセイにより測定された場合）５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを（マイクロ中和アッセイで測定された場合）９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kgの堆積用量での吸入により小児に投与される、
方法。
【請求項２】
小児におけるＲＳＶ感染の処置における使用のための、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドであり、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kgの堆積用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチド。
【請求項３】
堆積用量が、１日０．０２０〜０．０３５mg/kgである、請求項１又は２記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４】
堆積用量が、１日０．０２４mg/kgである、請求項３記載の方法又はポリペプチド。
【請求項５】
吸入用量が、１日０．２０〜０．４０mg/kgである、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項６】
吸入用量が、１日０．２０〜０．３５mg/kgである、請求項５記載の方法又はポリペプチド。
【請求項７】
吸入用量が、１日０．２４mg/kgである、請求項６記載の方法又はポリペプチド。
【請求項８】
名目用量が、１日１．００〜２．００mg/kgである、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項９】
名目用量が、１日１．００〜１．７５mg/kgである、請求項８記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１０】
名目用量が、１日１．２０mg/kgである、請求項９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１１】
ポリペプチドが、２〜５日間連続で毎日投与される、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１２】
ポリペプチドが、３日間連続で毎日投与される、請求項１１記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１３】
ＲＳＶ感染が、ＲＳＶ下気道感染である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１４】
小児の齢が、２４か月未満である、請求項１〜１３のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１５】
小児の齢が、２８日〜５か月未満である、請求項１４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１６】
小児の齢が、２８日〜２４か月未満である、請求項１４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１７】
小児の齢が、１か月〜２４か月未満である、請求項１４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１８】
小児の齢が、３か月〜２４か月未満である、請求項１４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項１９】
小児の齢が、５か月〜２４か月未満である、請求項１４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２０】
小児の齢が、３６か月未満である、請求項１〜１９のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２１】
小児の齢が、１か月〜３６か月未満である、請求項２０記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２２】
小児の齢が、５か月〜３６か月未満である、請求項２０記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２３】
小児が、幼児である、請求項１〜２２のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２４】
小児が、歩き始めの幼児である、請求項１〜２２のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２５】
小児が、ＲＳＶ下気道感染と診断されているが、他の点で健康である、請求項１〜２４のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２６】
小児が、ＲＳＶ下気道感染で入院している、請求項１〜２５のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２７】
抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９〜５０の一方のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、請求項１〜２６のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２８】
抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、請求項２７記載の方法又はポリペプチド。
【請求項２９】
抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：１〜３４のアミノ酸配列のうちの１つから選択される、請求項２７記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３０】
抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：１〜２のアミノ酸配列の一方から選択される、請求項２９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３１】
ポリペプチドが、配列番号：６５〜８５のアミノ酸配列のうちの１つから選択される、請求項２９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３２】
ポリペプチドが、配列番号：７１である、請求項２９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３３】
ポリペプチドが、単剤療法として投与される、請求項１〜３２のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３４】
少なくとも１つの更なる治療剤が投与される、請求項１〜３２のいずれか一項記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３５】
更なる治療剤が、気管支拡張剤である、請求項３４記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３６】
気管支拡張剤が、ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項３５記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３７】
気管支拡張剤が、持続性ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項２９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３８】
気管支拡張剤が、フォルモテロール又はその溶媒和物、サルメテロール又はその塩及びそれらの混合物から選択される、請求項３７記載の方法又はポリペプチド。
【請求項３９】
気管支拡張剤が、短時間作用性ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項３６記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４０】
気管支拡張剤が、サルブタモール、テルブタリン、ピルブテロール、フェノテロール、ツロブテロール、レボサブタモール及びそれらの混合物から選択される、請求項３９記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４１】
サルブタモールが、２００マイクログラムの用量で投与される、請求項４０記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４２】
気管支拡張剤が、抗コリン薬のクラスに属する、請求項３５記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４３】
気管支拡張剤が、チオトロピウム、オキシトロピウム、イプラトロピウムブロミド及びそれらの混合物から選択される、請求項４２記載の方法又はポリペプチド。
【請求項４４】
５０mg/mLのポリペプチド組成物を０．１００〜０．５００mL含み、該ポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる、
例えば、ネブライザ等の吸入装置。
[請求項４４ａ]
５０mg/mLのポリペプチド組成物を０．１００mL、０．１３０mL、０．１５０mL、０．２００mL、０．２５０mL、０．３００mL、０．３５０mL、０．４００mL又は０．５００mL含み、該ポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる、請求項４４記載のネブライザ。
[請求項４４ｂ]
５０mg/mLのポリペプチド組成物を０．０２５〜０．０３５mL/kg、例えば、０．０２５〜０．０３３mL/kg含み、該ポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる、請求項４４〜ｘのいずれか一項記載のネブライザ。
[請求項４４ｃ]
５０mg/mLのポリペプチド組成物を０．０２５mL/kg、０．０２６mL/kg、０．０２７mL/kg、０．０２８mL/kg、０．０２９mL/kg、０．０３０mL/kg、０．０３１mL/kg、０．０３２mL/kg、０．０３３mL/kg、０．０３４mL/kg又は０．０３５mL/kg含み、該ポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる、請求項４４〜ｘのいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項４５】
少なくとも１つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９〜５０の一方のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、請求項４４〜ｘのいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項４６】
少なくとも１つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、請求項４５記載のネブライザ。
【請求項４７】
少なくとも１つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：１〜３４のアミノ酸配列のうちの１つから選択される、請求項４６記載のネブライザ。
【請求項４８】
少なくとも１つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインが、配列番号：１〜２のアミノ酸配列の一方から選択される、請求項４７記載のネブライザ。
【請求項４９】
ポリペプチドが、配列番号：６５〜８５のアミノ酸配列のうちの１つから選択される、請求項４６記載のネブライザ。
【請求項５０】
ポリペプチドが、配列番号：７１である、請求項４９記載のネブライザ。
【請求項５１】
振動型メッシュ式ネブライザである、請求項４４〜５０のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項５２】
空気又は酸素の定流を有する、請求項４４〜５１のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項５３】
小児におけるＲＳＶ感染の処置における使用のための、請求項４４〜５２のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項５４】
ＲＳＶ感染が、ＲＳＶ下気道感染である、請求項５３記載のネブライザ。
【請求項５５】
小児の齢が、２４か月未満である、請求項５３又は５４記載のネブライザ。
【請求項５６】
小児の齢が、２５又は２８日〜５か月未満である、請求項５５記載のネブライザ。
【請求項５７】
小児の齢が、２８日〜２４か月未満である、請求項５５記載のネブライザ。
【請求項５８】
小児の齢が、１か月〜２４か月未満である、請求項５５記載のネブライザ。
【請求項５９】
小児の齢が、３か月〜２４か月未満である、請求項５５記載のネブライザ。
【請求項６０】
小児の齢が、５か月〜２４か月未満である、請求項５５記載のネブライザ。
【請求項６１】
小児の齢が、３６か月未満である、請求項５３〜５７のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６２】
小児の齢が、１か月〜３６か月未満である、請求項６１記載のネブライザ。
【請求項６３】
小児の齢が、５か月〜３６か月未満である、請求項６１記載のネブライザ。
【請求項６４】
小児が、幼児である、請求項５３〜６３のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６５】
小児が、歩き始めの幼児である、請求項５３〜６３のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６６】
小児が、ＲＳＶ下気道感染と診断されているが、他の点で健康である、請求項５３〜６５のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６７】
小児が、ＲＳＶ下気道感染で入院している、請求項５３〜６６のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６８】
ポリペプチドが、単剤療法として投与される、請求項４４〜６７のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項６９】
少なくとも１つの更なる治療剤が投与される、請求項４４〜６７のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項７０】
更なる治療剤が、気管支拡張剤である、請求項６９記載のネブライザ。
【請求項７１】
気管支拡張剤が、ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項７０記載のネブライザ。
【請求項７２】
気管支拡張剤が、持続性ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項７１記載のネブライザ。
【請求項７３】
気管支拡張剤が、フォルモテロール又はその溶媒和物、サルメテロール又はその塩及びそれらの混合物から選択される、請求項７２記載のネブライザ。
【請求項７４】
気管支拡張剤が、短時間作用性ベータ２−模倣物のクラスに属する、請求項７１記載のネブライザ。
【請求項７５】
気管支拡張剤が、サルブタモール、テルブタリン、ピルブテロール、フェノテロール、ツロブテロール、レボサブタモール及びそれらの混合物から選択される、請求項７４記載のネブライザ。
【請求項７６】
サルブタモールが、２００マイクログラムの用量で投与される、請求項７５記載のネブライザ。
【請求項７７】
気管支拡張剤が、抗コリン薬のクラスに属する、請求項７０記載のネブライザ。
【請求項７８】
気管支拡張剤が、チオトロピウム、オキシトロピウム、イプラトロピウムブロミド及びそれらの混合物から選択される、請求項７７記載のネブライザ。
【請求項７９】
（ａ）振動型メッシュを備えるエアロゾル発生器と、
（ｂ）霧化される液体用の貯留部であって、該貯留部が振動型メッシュと流体連通している、貯留部と、
（ｃ）ガス流入開口と、
（ｄ）
−ケース、
−エアロゾル流入開口、
−患者との接触面及び
−０．５〜５mbarの範囲で選択される呼気抵抗を有する、ケース中に一方向呼気弁又は二方向吸気／呼気弁を有する、フェイスマスクと、
（ｅ）ガス流入開口からフェイスマスクのエアロゾル流入開口に伸びる流路であって、該流路が、
−エアロゾル発生器が流路内に少なくとも部分的に挿入される側方開口、
−ガス流入開口とフェイスマスクのエアロゾル流入開口との間における１〜２０mL/分の流量の定流抵抗を有する、流路
とを含む、請求項４４〜７８のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項８０】
流路が、側方開口のすぐ上流の位置において２L/分の流量で少なくとも４m/sの平均ガス速度を達成するサイズ及び形状を有し、及び／又は、側方開口上流の流路は、ガスが１〜２０L/分の流量で流路を通って導入された場合、層流を達成するように形成されている、請求項７９記載のネブライザ。
【請求項８１】
ガス流入開口が、管継手として形成されており、ここで、流路が、好ましくは、ガスを受容するための更なる流入開口を示さない、請求項７９又は８０記載のネブライザ。
【請求項８２】
エアロゾル発生器が、霧化されたエアロゾルを流路内に、流路の長手方向軸に対して約９０°の角度で放出するように方向付けされており、ここで、吸入装置が、好ましくは、エアロゾル発生器の動作を開始及び停止させるためのスイッチを含み、ここで、エアロゾル発生器の動作が、振動型メッシュの連続的な振動を含む、請求項７９〜８１のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項８３】
フェイスマスクが、９０mL以下又は７０mL以下又は約５０mL以下の呼び内容積を有し、又は、呼び内容積が、患者の平均一回呼吸量より小さい、請求項７９〜８２のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項８４】
フェイスマスクが、両方向において３mbar以下の抵抗を有する二方向吸気及び呼気弁を有し、ここで、フェイスマスクの呼び内容積が、約５０mL以下である、請求項７９〜８３のいずれか一項記載のネブライザ。
【請求項８５】
側方開口とフェイスマスクのエアロゾル流入開口との間の流路の内容積が、３０mL以下である、請求項７９〜８４のいずれか一項記載のネブライザ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法を提供する。より具体的には、本発明は、小児への肺投与における使用のための、ＲＳＶを中和する免疫グロブリンシングル可変ドメイン特定の投与計画を提供する。
【０００２】
発明の背景
呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）は、幼児及び非常に幼い小児における重篤な気道感染の再発原因であり、冬季の数か月の間に年間の流行を生じる。ＲＳＶは、典型的には、侵入点：鼻腔及び気道を裏打ちする繊毛上皮細胞において、その一次感染を引き起こす（Black 2003, Respir. Care 48: 209-31; discussion 231-3）。一次感染は、通常、軽度な上気道疾患からより重篤な下気道感染（ＬＲＴＩ）（気管支肺炎及び気管支炎を含む）までの範囲の臨床症候を伴う症候性である（Aliyu, et al. 2010, Bayero Journal of Pure and Applied Sciences 3: 147-155）。同臨床症候は、主に幼児において生じる。
【０００３】
膜貫通糖タンパク質Ｆ及びＧは、ＲＳＶの主な表面抗原である。付着タンパク質（Ｇ）は、細胞レセプターへの結合を媒介し、一方、Ｆタンパク質は、細胞膜との融合を促進し、ホスト細胞内への進入を可能にする（Lopez et al. J Virol. 1998, 72: 6922-8）。Ｇタンパク質の抗原的及び遺伝的変異性に基づいて、２つの血清型のＲＳＶが、複数の亜型を伴って特定されている（Ａ及びＢ）。
【０００４】
Ｇタンパク質とは対照的に、Ｆタンパク質は、ＲＳＶの血清型ＡとＢとの間で高度に保存されている（８９％ アミノ酸同一性）ため、ウイルス侵入阻害剤の開発のための主なターゲットであると考えられる。また、糖タンパク質Ｆは、感染細胞と隣接する未感染細胞との融合を誘引する。このホールマーク特性により、多核細胞形成（上皮細胞合胞体）の外観がもたらされる。同多核細胞形成により、複製されたウイルスリボ核酸（ＲＮＡ）の細胞間伝達が可能となり、ホストの免疫応答に対する更なる保護が付与される（Black 2003）。
【０００５】
特に、ＲＳＶ感染を予防するのに利用可能なワクチンが存在しないため、ＲＳＶ感染は、健康管理インフラに著しい負担を強い、処置の選択肢のための高い医療的ニーズが残っている。
【０００６】
市販されている薬品は、ウイルス糖タンパク質Ｆに対して指向性を有するヒト化モノクローナル抗体（SYNAGIS（登録商標）（パリビズマブ）のみである。同抗体は、重篤なｈＲＳＶ感染を患う非常に高いリスクにある小児に予防的に使用される。SYNAGIS（登録商標）が限定的に使用されるのは、少なくとも一部において、この製品が非常に高価であるためである。ＲＳＶ感染の処置に利用可能な適切な薬物療法が存在しないため、入院した幼児に対する標準治療は、ほとんどが支持的なものである（例えば、流動物／栄養補給の提供、観察及び必要に応じて呼吸支援）。ｈＲＳＶによる感染の予防及び／又は治療のための改善された及び／又はより安価な予防剤及び／又は治療剤についてのニーズが明らかに存在する。
【０００７】
本開示の配列番号：６５〜８５は、ヒト呼吸器多核体ウイルスの融合タンパク質に対して指向性を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインである。配列番号：６５〜８５は、可撓性リンカーによりリコンビナントに連結された、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインからなる。
【０００８】
配列番号：６５〜８５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおいて広く特徴付けられた（例えば、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号を参照のこと。同文献の内容は、その全体が参照により組み入れられる）。抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）のＦタンパク質に特異的かつ強力に結合する。ＨＥｐ２細胞でのｉｎ  ｖｉｔｒｏマイクロ中和試験において、これらの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ウイルスライフサイクルにおける初期イベントを阻害し、細胞外ウイルスがウイルスナイーブ細胞に感染するのを妨げることが示唆された。配列番号：６５〜８５の有効性は、ＲＳＶ感染コットンラット及び仔羊において確認された。
【０００９】
配列番号：６５〜８５は、ＲＳＶを中和し、阻害することが意図されているため、エアロゾル装置による気道への直接送達及び堆積は、好ましく、最も適した投与経路であると考えられる。ネブライザ溶液としての免疫グロブリンシングル可変ドメイン（配列番号：６５〜８５を含む）の製剤化は、ＷＯ第２０１１／０９８５５２号に広く記載されている。
【００１０】
発明の概要
配列番号：７１の吸入の安全性、許容性及び薬物動態（ＰＫ）パラメータが、成人ボランティアでの３回の第Ｉ相臨床試験において更に評価された。これらの研究から、配列番号：７１の吸入及び静脈内（ｉ．ｖ．）注入は、概ね十分許容されることが示された。しかしながら、ＲＳＶにより生じる下気道疾患がこれらの集団において稀に生じるため、成人から小児へ又はより成長した小児からより幼い小児への有効性を外挿するための可能性は存在しない。
【００１１】
特に、高リスク集団、例えば、小児におけるＲＳＶ感染の有効な予防及び／又は治療のためのこの長年解決されていなかった必要性に取り組むために、本発明は、小児集団における生物学的製剤の肺投与のための投与計画を提供する。とりわけ、本発明は、小児、例えば、幼児及び歩き始めの幼児への免疫グロブリンシングル可変ドメインの肺投与のための投与計画を提供する。
【００１２】
上記されたように、ＲＳＶ中和剤について、ＲＳＶにより生じる下気道疾患がこれらの集団において稀に生じるため、成人から小児へ又はより成長した小児からより幼い子供への有効性を外挿するための可能性は存在しない。したがって、用量決定は、モデリングアプローチにのみ基づくことができる。
【００１３】
小児集団についての用量決定は、伝統的に、成人用量から体重、身長又は年齢に関する関数を使用して調整する。特定の治療剤（例えば、PULMOZYME（登録商標）（dornase alfa））は、幼児を含む全ての年齢に対して固定用量として与えられる。これらの通常の用量決定とは異なり、本発明において、モデリングアプローチ（発達中の肺胞空間への薬剤の送達及び堆積並びに同空間からのその吸収を含む）は、成長及び発達プロセス、例えば、臓器成熟、血流の変化、体組成及び除去機構の個体発生も考慮して設計された。
【００１４】
本発明により、予想外に、小児への生物学的製剤の肺投与のための投与計画は、小児及びその発達中の臓器の生理機能の差異により主に決定されることが決定された。とりわけ、本発明者らは、本発明における用量決定が成人の肺における送達、分布及び吸収と比較して成長中の小児の肺における薬剤の肺への送達、分布及び吸収における差異により主に導かれたことを決定した。したがって、ＲＳＶに感染した小児における全身及び局所ＰＫを決定するのに主に重要なパラメータは、肺胞吸収空間における薬剤量であると考えられる。本発明のモデリングアプローチに基づいて、ＲＳＶ活性の臨床的に意義のある低下が得られるターゲット濃度（９μg/ml）が、０．０２４mg/kg 体重の堆積用量を使用して肺胞空間で達成されると推定された。肺胞表面積及びそれと共に肺胞容積が体重に比例するため、肺胞濃度は、体重名目用量については、実質的に年齢依存的ではなかった。
【００１５】
上記設計されたモデル及び観察に基づいて、本発明は、ＲＳＶ中和免疫グロブリンシングル可変ドメインの小児対象への肺投与のための投与計画、抗ウイルス活性が観察される下気道における局所薬剤濃度をもたらす投与計画を提供する。
【００１６】
したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、好ましくは、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg等の堆積用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００１７】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置における使用のための、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドであり、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、好ましくは、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg等の堆積用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。このポリペプチドの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このポリペプチドの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００１８】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、好ましくは、１日０．２０〜０．３５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg等の吸入用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００１９】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置における使用のための、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドであり、ここで、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、好ましくは、１日０．２０〜０．３５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg等の吸入用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。このポリペプチドの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このポリペプチドの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００２０】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、好ましくは、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg等の名目用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００２１】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置における使用のための、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドであり、ここで、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、好ましくは、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg等の名目用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。このポリペプチドの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このポリペプチドの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００２２】
ＲＳＶ感染は、上気道のＲＳＶ感染、下気道のＲＳＶ感染（気管支炎及び気管支肺炎を含む）並びにＲＳＶ感染に関連する疾患及び／又は障害、例えば、ｈＲＳＶに関連する呼吸器疾患、上気道感染、下気道感染、気管支炎（肺における小気道の炎症）、肺炎、呼吸困難、咳、（再発性）喘鳴及び喘息又はＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）（の悪化）を含む。一態様において、ＲＳＶ感染は、ＲＳＶ下気道感染である。したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ下気道感染を患う小児に、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、好ましくは、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg等の堆積用量；１日０．２０〜０．４０mg/kg、好ましくは、１日０．２０〜０．３５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg等の吸入用量；１日１．００〜２．００mg/kg、好ましくは、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg等の名目用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００２３】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなるポリペプチドであり、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、好ましくは、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg等の堆積用量；１日０．２０〜０．４０mg/kg、好ましくは、１日０．２０〜０．３５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg等の吸入用量；１日１．００〜２．００mg/kg、好ましくは、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg等の名目用量での吸入によりＲＳＶ下気道感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。このポリペプチドの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このポリペプチドの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００２４】
一態様において、小児の齢は、５か月未満である。
【００２５】
一態様において、小児の齢は、２４か月未満である。
【００２６】
一態様において、小児の齢は、３６か月未満である。
【００２７】
一態様において、小児の齢は、２８日〜５か月未満である。
【００２８】
一態様において、小児の齢は、２８日〜２４か月未満である。
【００２９】
一態様において、小児の齢は、１か月〜２４か月未満である。
【００３０】
一態様において、小児の齢は、３か月〜２４か月未満である。
【００３１】
一態様において、小児の齢は、５か月〜２４か月未満である。
【００３２】
一態様において、小児の齢は、２８日〜３６か月未満である。
【００３３】
一態様において、小児の齢は、１か月〜３６か月未満である。
【００３４】
一態様において、小児の齢は、３か月〜３６か月未満である。
【００３５】
一態様において、小児の齢は、５か月〜３６か月未満である。
【００３６】
一態様において、小児は、幼児である。
【００３７】
一態様において、小児は、歩き始めの幼児である。
【００３８】
一態様において、小児は、ＲＳＶ下気道感染と診断されているが、他の点で健康である。
【００３９】
一態様において、小児は、ＲＳＶ下気道感染で入院している。
【００４０】
該ポリペプチド（「本発明のポリペプチド」とも呼ばれる）は、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる。一態様において、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合する。一態様において、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和する。好ましい態様では、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和する。このポリペプチドの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このポリペプチドの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４１】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９〜５０の一方のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、好ましくは、配列番号：４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号：４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号：６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、少なくとも１つ（好ましくは２つ、最も好ましくは３つ）の抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを包含する。一態様において、本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号：１〜３４のアミノ酸配列のうちの１つ、好ましくは、配列番号：１〜２のうちの１つから選択される、少なくとも１つ（好ましくは２つ、最も好ましくは３つ）の抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを包含する。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号：６５〜８５のアミノ酸配列のうちの１つから選択され、好ましくは、配列番号：７１である。
【００４２】
一態様において、該ポリペプチドは、２〜５日間連続で毎日、少なくとも、例えば、２日間連続、３日間連続、４日間連続、５日間連続、少なくとも、例えば、３日間連続等で毎日投与される。
【００４３】
本発明のポリペプチドは、単剤治療として、又は、別の治療剤との組み合わせにおいて投与することができる。一態様において、本発明のポリペプチドは、単剤治療として投与される。一態様において、本発明のポリペプチドは、組み合わせ療法として投与される。
【００４４】
したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチドと気管支拡張剤とを吸入により、同時、別々又は連続的に投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg又は１日０．０２４mg/kgの堆積用量での吸入により小児に投与される、方法も提供する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４５】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法における使用のための、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤であり、ここで、該ポリペプチドと気管支拡張剤とは、吸入により同時、別々又は連続的にＲＳＶ感染を患う小児に投与され、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg又は１日０．０２４mg/kgの堆積用量での吸入により小児に投与される、抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４６】
したがって、別の態様では、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチドと気管支拡張剤とを吸入により、同時、別々又は連続的に投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、１日０．２０〜０．３５mg/kg又は１日０．２４mg/kgの吸入用量での吸入により小児に投与される、方法も提供する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４７】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法における使用のための、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤であり、ここで、該ポリペプチドと気管支拡張剤とは、吸入により同時、別々又は連続的にＲＳＶ感染を患う小児に投与され、ここで、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、１日０．２０〜０．３５mg/kg又は１日０．２４mg/kgの吸入用量での吸入により小児に投与される、抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４８】
したがって、別の態様では、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ下気道感染を患う小児に、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチドと気管支拡張剤とを吸入により、同時、別々又は連続的に投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、１日１．００〜１．７５mg/kg又は１日１．２０mg/kgの名目用量での吸入により小児に投与される、方法も提供する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００４９】
また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法における使用のための、ＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤であり、ここで、該ポリペプチドと気管支拡張剤とは、吸入により同時、別々又は連続的にＲＳＶ感染を患う小児に投与され、ここで、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、１日１．００〜１．７５mg/kg又は１日１．２０mg/kgの名目用量での吸入により小児に投与される、抗ＲＳＶポリペプチド及び気管支拡張剤に関する。この方法の特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、この方法の特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【００５０】
気管支拡張剤は、好ましくは、ベータ２−模倣物のクラス又は抗コリン薬のクラスに属する。一態様において、気管支拡張剤は、持続性ベータ２−模倣物、例えば、フォルモテロールもしくはその溶媒和物、サルメテロールもしくはその塩又はそれらの混合物等である。別の態様では、気管支拡張剤は、短時間作用性ベータ２−模倣物、例えば、サルブタモール、テルブタリン、ピルブテロール、フェノテロール、ツロブテロール、レボサブタモール又はそれらの混合物等である。別の態様では、気管支拡張剤は、抗コリン薬、例えば、チオトロピウム、オキシトロピウム、イプラトロピウムブロミド又はそれらの混合物等である。
【００５１】
また、本発明は、本発明のポリペプチドを５０mg/mLの濃度で含む組成物を０．１５０〜０．４００mL又は０．１５０〜０．５００mL含む、例えば、ネブライザ等の吸入装置に関する。一態様において、ネブライザは、振動型メッシュ式ネブライザである。一態様において、ネブライザは、空気又は酸素の定流を有する。また、本発明は、本発明の方法における使用のための、本発明のポリペプチドを５０mg/mLの濃度で含む組成物を０．１５０〜０．４００mL又は０．１５０〜０．５００mL含む、このようなネブライザに関する。本発明の例示的なネブライザは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に５×１０−１０M以下のＫＤで結合し、ｈＲＳＶを９０ng/mL以下のＩＣ９０で中和し、そして、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、同ドメインから本質的になるか、又は、同ドメインからなる、ポリペプチドを含むか、同ポリペプチドから本質的になるか、又は、同ポリペプチドからなる、５０mg/mLの組成物を０．１５０〜０．４００mL又は０．１５０〜０．５００mL含むか、同組成物から本質的になるか、又は、同組成物からなる。このネブライザの特定の態様では、ＫＤは、免疫アッセイにより測定することができる。代替的に又は付加的に、このネブライザの特定の態様では、ＩＣ９０は、マイクロ中和アッセイで測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、本発明に使用されたモデリング戦略の概観を示す模式図である。名目用量：ネブライザに充填される配列番号：７１の量；送達用量：振動型メッシュ式ネブライザにより発生され、吸入用のフェイスマスクにおいて利用可能なエアロゾル粒子中の配列番号：７１の量；吸入用量：上気道において利用可能なエアロゾル粒子中の配列番号：７１の量（すなわち、吸入された用量）；堆積用量：下気道に堆積したエアロゾル粒子中の配列番号：７１の量；全身用量：下気道の肺胞被膜流体を介して吸収され、循環に放出される配列番号：７１の量。
【図２】図２は、本発明の肺投与のためのモデルにおける肺臓器の図形表現である。標準的なPK-SIM（登録商標）モデルと比較したモデル構造の拡張は、肺胞被膜流体（ＡＬＦ区画）を表わす太枠によりマークされている。
【図３】図３は、ＰＢＰＫモデル構築及び拡張ステップを示す模式図である。ＩＰ：肺内；ＩＶ：静脈内；生化学データ：配列番号：７１の特徴決定。
【図４】図４は、静かな鼻吸引についてのＭＰＰＤツールにより算出された、気道の種々の領域に堆積された吸入用量の割合を示すグラフである。年齢別肺モデル；３か月、２１か月、２３か月及び２８か月。
【図５】図５は、正常な呼吸からの結果と比較して、種々の呼吸困難シナリオについてのＭＰＰＤツールにより算出された、肺胞空間に堆積された吸入用量の年齢依存性割合を示すグラフである。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、ラットにおける単回投与（用量５mg/kg）ＩＶ適用後（図６Ａ）の配列番号：７１の実験対シミュレーション血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。記号：実験データ、線：シミュレーション；（図６Ｂ）イヌにおける複数回投与ＩＶ適用（３mg/kg、１０mg/kg及び３０mg/kgの上昇する用量（ascending dose））。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図７】図７は、ラットにおける肺適用（表Ｂ−１：研究１）後の配列番号：７１の実験対シミュレーション血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供する一連のグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図８】図８は、肺胞吸収区画における配列番号：７１のシミュレーション量に対する、ラットにおける肺適用（表Ｂ−１：研究１）後のＢＡＬＦにおける配列番号：７１の実験量の比較を提供する一連のグラフである。記号：実験データ（右肺からの実験ＢＡＬＦデータを肺葉の重量に従って総肺に調整した）；線：シミュレーション。
【図９】図９は、ラットにおける肺適用（表Ｂ−１：研究４）後１日目及び１４日目での、配列番号：７１の実験対シミュレーション血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供する一連のグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図１０】図１０は、１日目及び１４日目での、肺胞吸収区画におけるシミュレーション量に対する、ラットにおける肺適用（表Ｂ−１：研究４）後のＢＡＬＦにおける配列番号：７１の実験量の比較を提供する一連のグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、（図１１Ａ）７０mg；（図１１Ｂ）１４０mg；（図１１Ｃ）２１０mgでの配列番号：７１の肺適用（表Ｂ−１：研究５）後の１名の個体についての実験対シミュレーション血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供する一連のグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図１２】図１２は、ラットから調整されたヒトモデルのシミュレーション結果に対する、ＩＶ投与（表Ｂ−１：研究６）後の配列番号：７１の個々の実験血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供するグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。灰色の線は、ＬＬＯＱを示す。
【図１３】図１３は、ラットから調整されたヒトモデルのシミュレーション結果に対する、ＩＶ投与（表Ｂ−１：研究６）後の尿に排泄された用量の個々の実験累積割合の比較を提供するグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｂは、ラットから調整されたヒトモデルのシミュレーション結果（線）に対する、第ＩＩ相臨床試験（表Ｂ−１：研究６）からの単回投与吸入（図１４Ａ）及び複数回投与吸入（図１４Ｂ）後の配列番号：７１の個々の実験血漿（丸）及びＡＬＦ（正方形）濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。
【図１５】図１５は、改良されたヒトＩＶモデル（流体力学半径：２．４６nm；腎クリアランス：５％のＧＦＲ及び更なる血漿クリアランスプロセス）のシミュレーション結果に対する、ＩＶ投与（表Ｂ−１：研究６）後の配列番号：７１の個々の実験血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供するグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。灰色の線は、ＬＬＯＱを示す。
【図１６】図１６は、改良されたヒトＩＶモデル（流体力学半径：２．４６nm；腎クリアランス：５％のＧＦＲ及び更なる血漿クリアランスプロセス）のシミュレーション結果に対する、ＩＶ投与（表Ｂ−１：研究６）後の尿に排泄された用量の個々の実験累積割合の比較を提供するグラフである。記号：実験データ；線：シミュレーション。
【図１７】図１７Ａ〜１７Ｂは、吸入用の改良されたヒトモデル（流体力学半径：２．４６nm；腎クリアランス：５％のＧＦＲ、更なる血漿クリアランスプロセス；及び肺胞厚みの代替値：０．２μm）のシミュレーション結果（線）に対する、第ＩＩ相臨床試験（表Ｂ−１：研究６）からの単回投与吸入（図１７Ａ）及び複数回投与吸入（図１７Ｂ）後の配列番号：７１の個々の実験血漿（丸）及びＡＬＦ（正方形）濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。
【図１８】図１８Ａ〜１８Ｂは、ＩＶ適用（表Ｂ−１：研究６）後の集団シミュレーションからの結果に対する、配列番号：７１の個々の実験血漿濃度−時間プロファイル（図１８Ａ）及び累積尿排泄（図１８Ｂ）の比較を提供するペアのグラフである。斜線部：集団シミュレーションの５〜９５パーセンタイル；実線：集団シミュレーションの中央値；丸：個々の実験データ。
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｂは、単回投与肺適用についての第ＩＩ相臨床試験（表Ｂ−１：研究６）のための集団シミュレーションからの結果に対する、配列番号：７１の個々の実験血漿（図１９Ａ）及びＡＬＦ（図１９Ｂ）濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。斜線部：集団シミュレーションの５〜９５パーセンタイル；実線：集団シミュレーションの中央値；白丸：個々の実験データ；黒記号（図１９Ａ−血漿プロファイル）：実験データの中央値、５及び９５パーセンタイル（全ての個体（ｎ＝２３）についてのデータが利用可能であった場合のみ示す）。
【図２０】図２０Ａ〜２０Ｂは、複数回投与肺適用についての第ＩＩ相臨床試験（表Ｂ−１：研究６）のための集団シミュレーションからの結果に対する、配列番号：７１の個々の実験血漿（図２０Ａ）及びＡＬＦ（図２０Ｂ）濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。斜線部：集団シミュレーションの５〜９５パーセンタイル；実線：集団シミュレーションの中央値；白丸：個々の実験データ；黒記号（図２０Ａ−血漿プロファイル）：実験データの中央値、５及び９５パーセンタイル（全ての個体（ｎ＝１５）についてのデータが利用可能であった場合のみ示す）。
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｂは、１回目のヒト研究（表Ｂ−１：研究５）についての単回投与吸入（図２１Ａ）及び複数回投与吸入（図２１Ｂ）のための集団シミュレーションからの結果に対する、配列番号：７１の個々の実験血漿濃度−時間プロファイルの比較を提供するペアのグラフである。斜線部：集団シミュレーションの５〜９５パーセンタイル；実線：集団シミュレーションの中央値；白丸：個々の実験データ；黒記号：実験データの中央値、５及び９５パーセンタイル（全ての個体についてのデータが利用可能であった場合のみ示す。単回投与についてｎ＝１８、複数回投与についてｎ＝１２）。
【図２２】図２２Ａ〜２２Ｂは、０〜１週齢の小児群についてのＡＬＦ濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：０−２４−４８−７２−９６ｈ。灰色の線は、ターゲット濃度９μg/mlを示す。図２２Ａ：均等濃度目盛；図２２Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。
【図２３】図２３Ａ〜２３Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についての血漿濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：０−２４−４８ｈ。図２３Ａ：均等濃度目盛；図２３Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についてのＡＬＦ濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：０−２４−４８ｈ。図２４Ａ：均等濃度目盛；図２４Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。ターゲット濃度９μg/mLを破線で示す。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についての血漿濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：０−２４ｈ。図２５Ａ：均等濃度目盛；図２５Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。
【図２６】図２６Ａ〜２６Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についてのＡＬＦ濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：０−２４ｈ。図２６Ａ：均等濃度目盛；図２６Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。ターゲット濃度９μg/mLを破線で示す。
【図２７】図２７Ａ〜２７Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についての血漿濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：単回投与。図２７Ａ：均等濃度目盛；図２７Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。
【図２８】図２８Ａ〜２８Ｂは、プール集団（５〜２４月齢の小児）についてのＡＬＦ濃度−時間曲線を提供するペアのグラフである。投与スキーム：単回投与。図２８Ａ：均等濃度目盛；図２８Ｂ：ｌｏｇ濃度目盛。ターゲット濃度９μg/mLを破線で示す。
【図２９】図２９は、ｈＲＳＶに感染した新生児の仔羊の肺におけるウイルス抗原検出を示すグラフである。感染後６日目に、右前葉、左前葉、左中葉及び左後葉の葉当たりに２つの肺片を採取した。ウイルス抗原を、免疫組織化学により検出し、視野当たりに影響を受けた気管支／細気管支又は肺胞の数をカウントした。結果を、３つの研究における全ての動物についての評価した全ての葉の平均±ＳＥＭとして表現する。
【図３０】図３０Ａ〜３０Ｂは、実施例２に記載された分析結果を示すペアのグラフである。図３０Ａ．ウイルス病変の肺全体の実験  Ｒｔ Ｃｒ：右前葉；Ｒｔ  Ｍｉｄ：右中葉；Ｒｔ  Ｃｄ：右後葉；Ａｃｃ：付属葉；Ｌｔ  Ｃｒ：左前葉；Ｌｔ  Ｍｉｄ：左中葉；Ｌｔ  Ｃｄ：左後葉。結果を、３つの研究からの全ての動物についての用量レベル及び葉当たりの平均±ＳＥＭとして示す。図３０Ｂ．ｈＲＳＶに感染した新生児の仔羊における組織学的肺野陰影スコア。仔羊の肺を、病変についてスコアリングした。陰影スコアは、典型的なｈＲＳＶ病変のスコア全体である。複数の特性が１つのスコア全体にグループ化されていることを意味する。結果を、３つの研究からの全ての動物についての平均±ＳＥＭとして示す。
【図３１】図３１は、臨床集成スコアを示すグラフである。臨床集成スコアを、表Ｂ−４に示された評価基準に基づいて決定した。結果を、３つの研究からの全ての動物についての用量レベル当たりの平均±ＳＥＭとして示す。
【図３２】図３２は、ｈＲＳＶに感染した新生児の仔羊における吸入による３又は５日間連続の毎日投与後の上皮肺被膜流体における配列番号：７１濃度を示すグラフである。ＥＬＦにおける配列番号：７１濃度を、検死後に採取したＢＡＬＦにおいて測定された濃度から尿補正法に基づく希釈についての正規化後に導き出した（値をＲＢＣ補正した）。ＢＡＬＦを最後の投与後２４時間で採取した。結果を、３つの全ての研究についての平均±ＳＥＭとして示す。ハッチ線は、ターゲット濃度を表わす。
【図３３】図３３は、好ましい吸入装置の断側面図を示す。（１００）吸入装置；（１０１）エアロゾル発生器；（１０２）振動型メッシュ；（１０３）貯留部；（１０４）ガス流入開口；（１０５）フェイスマスク；（１０６）ケース；（１０７）エアロゾル流入開口；（１０８）患者との接触面；（１０９）弁（一方向呼気又は二方向吸気／呼気弁）；（１１０）流路；（１１１）側方開口；（１１３）管継手；（１１４）蓋；（１１８）基部ユニット；（１１９）混合チャネルユニット。
【図３４】図３４は、実施例１２に記載された臨床試験の研究設計の概観を示す。略語：ＤＭＣ＝データモニタリング委員会、Ｎ＝対象数。
【図３５】図３５は、実施例１２に記載された臨床試験に使用された処置スケジュール及び研究期間を示す。略語：ＬＲＴＩ：下気道感染、ＰＬＣ＝プラセボ、ＲＳＶ＝呼吸器多核体ウイルス。
【図３６】図３６Ａ〜３６Ｂは、研究集団（パートＡ、Ｂ及びＣ）における経時的なウイルス負荷（投与後１日目、２日目及び３日目；６時間での鼻のスワブ）を示すペアのグラフである。研究集団（非盲検、導入部及び二重盲検、ランダム化処置群）は、配列番号：７１で処置された３０名の対象（ＲＳＶ感染未確認の４名の対象及び結果を有さない１名の対象を除く）と、１５名のプラセボ処置対象（ＲＳＶ感染未確認の１名の対象を除く）とからなる。図３６Ａ：培養による経時的なウイルス負荷；図３６Ｂ：ｑＲＴ−ＰＣＲによる経時的なウイルス負荷。
【図３７】図３７Ａ〜３７Ｂは、ウイルス力価が検出できなくなる時間、すなわち、処置開始から２回連続の鼻スワブにおける最初にウイルス力価が検出できなくなるまでの時間として表現された抗ウイルス効果を示すペアのグラフ（カプラン−マイヤープロット−経時的に検出できなくなる確率）である。研究集団（非盲検、導入部及び二重盲検、ランダム化処置群）は、配列番号：７１で処置された３０名の対象（ＲＳＶ感染未確認の４名の対象及び結果を有さない１名の対象を除く）と、１５名のプラセボ処置対象（ＲＳＶ感染未確認の１名の対象を除く）とからなる。研究集団からは、ベースライン及び最初の投与後時点の両方での検出できない結果を有した対象、すなわち、最初の投与前に既に検出できなかった対象も除外した。図３７Ａ：プラークアッセイにより測定されたウイルスが検出できなくなるまでの時間；図３７Ｂ：ｑＲＴ−ＰＣＲにより測定されたウイルスが検出できなくなるまでの時間。
【図３８】図３８は、配列番号：７１で処置された対象及びプラセボ処置対象についての総合重症度スコアを示す。総合重症度スコアは、Justicia-Grande et al. 2015（Leipzig: 33rd Annual Meeting of the European Society for Paediatric Infectious Diseases）及びCebey-Lopez et al. 2016（PLoS ONE 11(2):e0146599）に記載された７種類の項目：栄養補給不寛容、医療的介在度合い、呼吸困難、呼吸頻度、無呼吸、全身状態及び発熱（表Ｂ−７を参照）に基づいて、呼吸器感染を有する幼児の分類を可能にする、臨床スコアリングシステム（最大２０点）である。研究集団（二重盲検、ランダム化処置群）は、配列番号：７１で処置された２６名の対象（ＲＳＶ感染未確認の４名の対象を除く）と、１５名のプラセボ処置対象（ＲＳＶ感染未確認の１名の対象を除く）とからなる。配列番号：７１とプラセボとを総合重症度スコアについて比較し、ベースラインのスコア及び時間について調節する対数分析に基づく、ｐ値＝０．００９２。
【図３９】図３９は、配列番号：７１とプラセボとを処置の開始時から培養においてウイルスを最初に検出できなくなる（２連続の時点で検出できなくなる）までの時間について比較するためのＣｏｘモデルを示す。
【００５３】
詳細な説明
定義
特に断りない限り、使用される全ての用語は、当業者に明らかであろう当技術分野におけるその通常の意味を有する。例えば、標準的な参考書、例えば、Sambrook et al. 「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」( 2nd.Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)；F. Ausubel et al. eds., 「Current protocols in molecular biology」, Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)；Lewin 「Genes II」, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985)；Old et al. 「Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering」, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981)；Roitt et al. “Immunology” (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001)；Roitt et al. Roitt’s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001)；及びJaneway et al. 「Immunobiology」(6th Ed.), Garland Science Publishing/ Churchill Livingstone, New York (2005)並びに本明細書で引用された一般的な背景技術に参照がなされる。
【００５４】
特に断りない限り、詳細な説明に具体的に記載されていない全ての方法、工程、技術及び操作を、当業者に明らかであろうそれ自体公知の様式で行うことができ、行われてきた。例えば、再度、本明細書で言及された標準的な参考書及び一般的な背景技術並びに本明細書で引用された更なる参考文献に参照がなされ、並びに、例えば、下記レビュー：Presta 2006（Adv. Drug Deliv. Rev. 58 (5-6): 640-56）、Levin and Weiss 2006（Mol. Biosyst. 2(1): 49-57）、Irving et al. 2001（J. Immunol. Methods 248(1-2): 31-45）、Schmitz et al. 2000（Placenta 21 Suppl. A: S106-12）、Gonzales et al. 2005（Tumour Biol. 26(1): 31-43）に参照がなされる。これらのレビューには、タンパク質操作のための技術、例えば、親和性成熟並びにタンパク質、例えば、免疫グロブリンの特異性及び他の所望の特性を改善するための他の技術が記載されている。
【００５５】
核酸配列又はアミノ酸配列は、例えば、それらが得られる反応媒体又は培養培地と比較して、それらが前記供給源又は媒体中で通常会合している少なくとも１つの他の成分、例えば、別の核酸、別のタンパク質／ポリペプチド、別の生体成分もしくは高分子又は少なくとも１つの汚染物質、不純物もしくは少量成分から単離された場合、「本質的に単離されている（単離された形態である）」と考えられる。特に、核酸配列又はアミノ酸配列は、少なくとも２倍、特に少なくとも１０倍、とりわけ少なくとも１００倍及び最大１０００倍以上精製された場合、「本質的に単離されている」と考えられる。「本質的に単離された形態にある」核酸配列又はアミノ酸配列は、適切な技術、例えば、適切なクロマトグラフ技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用して決定された場合、好ましくは本質的に均質である。
【００５６】
ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列が別のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列をそれぞれ「含む」、又は、別のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列「から本質的になる」と言われる場合、これは、後者のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列が最初に言及されたヌクレオチド配列又はアミノ酸配列それぞれに包含されていることを意味してもよいが、より通常には、これは、一般的には、最初に言及された配列が実際にどのように生成され又は得られたのかに関わらず（最初に言及された配列は、例えば、任意の適切な方法により生成され又は得られてもよい）、最初に言及されたヌクレオチド配列又はアミノ酸配列がその配列内に、後者の配列と同じヌクレオチド配列又はアミノ酸配列それぞれを有するヌクレオチド又はアミノ酸残基それぞれのストレッチを含むことを意味してもよい。非限定的な例として、本発明のポリペプチドが免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むと言われる場合、これは、前記免疫グロブリンシングル可変ドメイン配列が本発明のポリペプチドの配列内に包含されていることを意味してもよいが、より通常には、これは、一般的には、前記本発明のポリペプチドがどのように生成され又は得られるのかに関わらず、本発明のポリペプチドがその配列内に、免疫グロブリンシングル可変ドメインの配列を含有することを意味する。また、核酸又はヌクレオチド配列が別のヌクレオチド配列を含むと言われる場合、最初に言及された核酸又はヌクレオチド配列は、好ましくは、発現産物（例えば、ポリペプチド）内に発現された場合、後者のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列が前記発現産物の一部を形成する（すなわち、後者のヌクレオチド配列が最初に言及されたより大きな核酸又はヌクレオチド配列と同じリーディング・フレームにある）ようにである。
【００５７】
「から本質的になる（essentially consist(s) of）」又は「から本質的になる（consist(s) essentially of）」は、本発明の方法に使用された免疫グロブリンシングル可変ドメインが本発明のポリペプチドと正確に同じであるか、又は、免疫グロブリンシングル可変ドメインのアミノ末端、カルボキシ末端又はアミノ末端とカルボキシ末端との両方に加えられた限られた数のアミノ酸残基、例えば、１〜２０個のアミノ酸残基、例えば、１〜１０個のアミノ酸残基、及び好ましくは、１〜６個のアミノ酸残基、例えば、１、２、３、４、５もしくは６個のアミノ酸残基を有する本発明のポリペプチドに対応することを意味する。
【００５８】
加えて、本明細書で使用する場合、（例えば、「免疫グロブリン配列」、「可変ドメイン配列」、「免疫グロブリンシングル可変ドメイン配列」、「ＶＨＨ配列」又は「タンパク質配列」等の用語における）「配列」という用語は、文脈においてより限定された解釈が必要とされない限り、一般的には、関連するアミノ酸配列及びそれをコードする核酸配列又はヌクレオチド配列の両方を含むことを理解されたい。
【００５９】
特定の抗原性決定基、エピトープ、抗原又はタンパク質（又はその少なくとも一部、フラグメントもしくはエピトープ）に（特異的に）結合することができ、これらに親和性を有し、及び／又は、これらに特異性を有する、アミノ酸配列（例えば、免疫グロブリンシングル可変ドメイン、抗体、本発明のポリペプチド又は一般的には、抗原結合タンパク質もしくはポリペプチドもしくはそのフラグメント）は、前記抗原性決定基、エピトープ、抗原又はタンパク質「に対する」又は「に対して指向性を有する」と言われる。
【００６０】
親和性は、分子間相互作用の強度又は安定性を指す。親和性は、一般的には、モル/リットル（又はM）の単位を有する、ＫＤ又は解離定数により与えられる。また、親和性は、会合定数ＫＡとして表わされる。同会合定数は、１／ＫＤに等しく、（モル/リットル）−１（又はM-1）の単位を有する。本明細書において、２つの分子間（例えば、本発明の免疫グロブリンシングル可変ドメイン又はポリペプチドとｈＲＳＶのＦ−タンパク質との間）の相互作用の安定性は、それらの相互作用のＫＤ値について主に表現されるであろう。相関ＫＡ＝１／ＫＤを考慮して、そのＫＤ値により分子間相互作用の強度を特定することは、対応するＫＡ値を算出するのにも使用することができることは、当業者に明らかである。ＫＤ値は、周知の相関ＤＧ＝ＲＴ．Ｉｎ（ＫＤ）（同様に、ＤＧ＝ＲＴ．Ｉｎ（ＫＡ））［式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度であり、Ｉｎは自然対数を指す］による結合の自由エネルギー（ＤＧ）に関する場合、熱力学的な意味においても分子間相互作用の強度を特徴付ける。
【００６１】
意義のある（特異的である）と考えられる生物学的相互作用についてのＫＤは、典型的には、１０−１０M（０．１nM）〜１０−５M（１００００nM）の範囲にある。相互作用が強力なほど、そのＫＤは低くなる。
【００６２】
また、ＫＤは、その会合速度（ｋｏｎと示される）に対する複合体の解離速度定数（ｋｏｆｆと示される）の比としても表現することができる（このため、ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ及びＫＡ＝ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）。ｏｆｆ速度ｋｏｆｆは、ｓ−１の単位を有する（ｓは、秒のＳＩ単位表記である）。ｏｎ速度ｋｏｎは、M-1s-1の単位を有する。ｏｎ速度は、１０２M-1s-1〜約１０７M-1s-1で変動することができ、２つの分子間相互作用についての拡散限界会合速度定数に近づく。ｏｆｆ速度は、相関ｔ１／２＝ｌｎ（２）／ｋｏｆｆにより、所定の分子間相互作用の半減期に関する。ｏｆｆ速度は、１０−６ｓ−１（数日のｔ１／２を有する不可逆性に近い複合体）〜１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）で変動することができる。
【００６３】
抗原結合タンパク質の抗原又は抗原性決定基への特異的な結合は、それ自体公知の任意の適切な様式で決定することができる。同様式は、例えば、スキャッチャード分析及び／又は競合的結合アッセイ、例えば、放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）及びサンドイッチ競合アッセイ及び当技術分野においてそれ自体公知のそれらの種々の変形例並びに本明細書で言及された他の技術を含む。
【００６４】
２つの分子間の分子間相互作用の親和性は、それ自体公知の種々の技術、例えば、周知の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサ技術（例えば、Ober et al. 2001, Intern. Immunology 13: 1551-1559を参照のこと）により測定することができる。同センサ技術では、１つの分子がバイオセンサチップ上に固定され、他の分子が固定された分子上を流動条件下で通過され、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ測定値、及びこのため、ＫＤ（又はＫＡ）値を得る。これは、例えば、周知のBiacore機器（Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden）を使用して行うことができる。Kinetic Exclusion Assay（KinExA）（Drake et al. 2004, Analytical Biochemistry 328: 35-43）は、結合パートナーをラベルすることなく、溶液中の結合イベントを測定し、複合体の解離を反応速度的に排除することに基づいている。
【００６５】
GYROLAB（商標）免疫アッセイシステムは、自動生体分析及び素早いサンプル交換のためのプラットフォームを提供する（Fraley et al. 2013, Bioanalysis 5: 1765-74）。
【００６６】
測定プロセスが、例えば、ある分子のバイオセンサ上のコーティングに関連するアーティファクトにより、意味する分子の本来の結合親和性に何らかの影響を及ぼす場合、実測ＫＤが、見掛けのＫＤに対応してもよいことも当業者に明らかであろう。また、ある分子が他の分子についての２つ以上の認識部位を含有する場合、見掛けのＫＤを測定することができる。このような状況において、実測親和性は、２つの分子による相互作用の結合活性により影響を受ける場合がある。
【００６７】
親和性を評価するのに使用することができる別のアプローチは、Friguet et al. 1985（J. Immunol. Methods 77: 305-19）の２工程ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）法である。この方法により、液相結合平衡測定が確立され、支持体、例えば、プラスチック上の分子のうちの１つの吸着に関する可能性のあるアーティファクトが避けられる。
【００６８】
ただし、ＫＤの正確な測定は、かなりの労力を要し、その結果として多くの場合、見掛けのＫＤ値が、２つの分子の結合強度を評価するのに決定される。全ての測定が一貫した方法（例えば、アッセイ条件を変更せずに）でなされる限り、見掛けのＫＤ測定値は、真のＫＤの近似値として使用することができるため、本明細書において、ＫＤ及び見掛けのＫＤは、等しい重要性又は関連性で処置されるべきであることに留意されたい。
【００６９】
本明細書で使用する場合、「ウイルスの感染性」という用語は、前記ウイルスに曝された場合、実際に前記ウイルスに感染した生きている対象の割合を指す。
【００７０】
本明細書で使用する場合、「ウイルスの中和」は、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ、細胞内又はｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（例えば、更に言及されるもの）を使用して測定された場合、中和化合物をウイルス粒子に結合させることによる、ウイルスの感染性（本明細書で定義されたとおり）の変調及び／又は低下並びに／又は予防及び／もしくは阻害を指す。
【００７１】
「用量」という用語は、対象に投与される本発明のポリペプチドの量を指す。
【００７２】
「充填用量」は、ネブライザに充填された本発明のポリペプチドの総量を指す。充填用量について本発明で使用される単位は、「mg（ミリグラム）」である。
【００７３】
「名目用量」は、ネブライザに充填された本発明のポリペプチドの体重正規化（すなわち、対象の１kg当たりの）量を指す。名目用量について本発明で使用される単位は、「mg/kg（キログラム当たりのミリグラム）」である。名目用量は、充填容積及び治療組成物中の本発明のポリペプチド濃度に基づいて容易に決定することができる。
【００７４】
「充填容積」は、ネブライザに充填された治療組成物の容積を指す。充填容積について本発明で使用される単位は、「mL（ミリリットル）」である。
【００７５】
「名目充填容積」は、ネブライザに充填された治療組成物の体重正規化（すなわち、対象の１kg当たりの）容積を指す。名目充填容積について本発明で使用される単位は、「mL/kg（キログラム当たりのミリリットル）」である。
【００７６】
「送達用量」は、振動型メッシュ式ネブライザにより発生され、吸入用のフェイスマスクにおいて利用可能なエアロゾル粒子中の本発明のポリペプチドの体重正規化（すなわち、対象の１kg当たりの）量を指す。送達用量について本発明で使用される単位は、「mg/kg（キログラム当たりのミリグラム）」である。
【００７７】
「吸入用量」は、上気道で利用可能なエアロゾル粒子中の本発明のポリペプチドの体重正規化（すなわち、対象の１kg当たりの）量（すなわち、吸入された用量）を指す。吸入用量について本発明で使用される単位は、「mg/kg（キログラム当たりのミリグラム）」である。吸入用量は、名目用量からの割合（％）として算出することができ、ネブライザの特徴に依存するであろう。吸入用量は、通常、充填用量の１０％〜２０％以上で変動する。
【００７８】
吸入用量は、例えば、小児の上気道の気道モデルを使用して決定することができる。このようなモデルは、例えば、Sophia anatomical infant nose throat（SAINT）モデル（Janssens et al. 2001, J. Aerosol Med. 14:433-41）である。SAINTモデルは、９か月齢の小児の上気道の解剖学的に正しい投影／表現であり、ステレオリトグラフィ技術を使用して構築され、小児におけるエアロゾル堆積を研究するのに使用される。本発明の方法に適用される投与条件をきっちり模倣させることができる。FOX-Flamingo振動型メッシュ式ネブライザ（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）による投与により、例えば、ネブライザ内に充填された総用量から、約２０％が吸入されると予測されることが示された。
【００７９】
「堆積用量」は、下気道に堆積されたエアロゾル粒子中の本発明のポリペプチドの体重正規化（すなわち、対象の１kg当たりの）量を指す。堆積用量について本発明で使用される単位は、「mg/kg（キログラム当たりのミリグラム）」である。堆積用量は、吸入用量から算出することができ、吸入粒子の特徴及びＲＳＶ感染を患う小児の呼吸パターンにより決まるであろう。ＲＳＶ感染小児における呼吸パターンは、例えば、Amirav et al. 2002（J. Nucl. Med. 43: 487-91）、Amirav et al. 2012（Arch. Dis. Child 97: 497-501）、Chua et al. 1994（Eur. Respir. J. 7: 2185-91）、Fok et al. 1996（Pediatr. Pulmonol. 21: 301-9）、Wildhaber et al. 1999（J. Pediatr. 135: 28-33）、Totapally et al. 2002（Crit. Care 6: 160-5）、Mundt et al. 2012（Pediatr. 2012: 721295）に記載されている。
【００８０】
堆積用量は、モデリングを使用し、肺の形態（年齢別）、粒子特性（サイズ及び密度）及び呼吸パターン（頻度、容積）を考慮して最も良く決定されるべきである。これらのパラメータを考慮したモデルは、例えば、多経路粒子用量決定モデル（ＭＰＰＤ）である。ＭＰＰＤツールは、the NIH Centre for Information Technology（CIT, US）及びthe National Institute of Public Health and the Environment（RIVM, the Netherlands）により開発された年齢別の対称肺モデルであり、気道におけるエアロゾルの堆積を算出するのに使用することができる。種々の小児年齢群及び異なるサイズの粒子についての、頭部、気道内及び肺胞領域における平均局所堆積及び気道年代当たりの平均堆積を説明することができる。全体として、局所堆積は、肺の形態（年齢別）、粒子特性（サイズ及び密度分布）及び呼吸パターン（頻度、容積）により決まる。ＲＳＶ感染小児及び２．６３マイクロメートルの粒子のＭＡＤ（質量中央径）による静かな鼻吸引について、肺胞空間に堆積される割合は、吸入用量の約１０％であると算出された。
【００８１】
「全身用量」は、下気道の肺胞被膜流体を介して吸収され、循環内に放出される本発明のポリペプチドの量を指す。全身用量は、全身循環中の本発明のポリペプチドの濃度を測定することにより容易に決定することができる。
【００８２】
本発明で使用する場合、「全身循環」は、酸素化血液を心臓から全身に運び、脱酸素化血液を心臓に戻す心血管系の一部である。
【００８３】
「投与（dosing）」という用語は、本発明のポリペプチドの投与を指す。特に断りない限り、本発明の文脈において、「投与」という用語は、本発明のポリペプチドの肺投与を指す。
【００８４】
小児は、一般的には、誕生から思春期までの間のヒト対象又は幼年期の発達段階にあるヒト対象である。本発明の文脈において、「小児」は、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児を指す。「幼児」は、ヒトの非常に幼い子供である。この用語は、通常、赤子と同義であると考えられる。「幼児」という用語は、典型的には、齢が１か月〜１２か月の小児に適用される。ヒトの小児が歩行を覚えた場合、「歩き始めの幼児」という用語を、それに代えて使用することができる。「歩き始めの幼児」は、齢が１歳〜３歳の小児である。本発明の文脈において、「歩き始めの幼児」は、齢が１か月〜２４か月未満又は齢が１か月〜３６か月（３歳）未満の小児である。
【００８５】
「小児科」は、幼児及び小児の医療を取り扱う医学部門である。
【００８６】
「気道（Respiratory tract）」は、本発明の目的で、「呼吸器系」、「気道組織」又は「気道（airways）」と同等である。呼吸器系は、２つの区別できるゾーン：導入ゾーン及び呼吸ゾーンを含む。同呼吸ゾーン内に、気道及び血管区画が存在する（例えば、「Pulmonary Drug Delivery」, Edited by Karoline Bechtold-Peters and Henrik Luessen, 2007, ISBN 978-3-87193-322-6 pages 16-28を参照のこと）。導入ゾーンは、鼻、咽頭（pharynx）、咽頭（larynx）、気管、気管支及び細気管支からなる。これらの構造により、肺の内外を移動する空気のための連続的な経路が形成される。呼吸ゾーンは、肺の内側深くに見られ、呼吸器細気管支、肺胞管及び肺胞から構成される。これらの薄壁構造により、吸入された酸素が、二酸化炭素についての交換において、肺の毛細血管内に拡散するのが可能となる。解剖学的に、同じ構造は、多くの場合、上気道と下気道とに分割される。上気道構造は、頭頚部に見られ、鼻、咽頭（pharynx）及び咽頭（larynx）からなる。下気道構造は、胸部又は胸に位置し、気管、気管支及び肺（すなわち、細気管支、肺胞管及び肺胞）を含む。このため、下気道は、気管から肺への気道の一部を指す。
【００８７】
「肺胞（alveolus）」（複数形：「肺胞（alveoli）」）は、中空腔の形状を有する解剖学的構造である。肺実質に見られる肺胞は、呼吸樹の末端であり、同呼吸樹は、肺胞嚢又は肺胞管のいずれかから露出している。同肺胞嚢又は肺胞管も、血液とのガス交換の両部位である。肺胞膜は、ガス交換表面である。二酸化炭素を豊富に含む血液は、身体の残り部分から肺胞血管内に送り込まれ、肺胞血管では、拡散により、その二酸化炭素が放出され、酸素が吸収される。
【００８８】
「肺胞被膜流体（ＡＬＦ）」は、肺胞、小気道及び大気道の粘膜を覆う薄い流体層を形成する。肺胞被膜流体は、肺と外界との間の最初の障壁を構成する。本発明の文脈において、この用語は、より深い肺を指す。
【００８９】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）は、気管支鏡を口又は鼻を通過させて肺に入れ、流体を肺の小さな部分に吹きかけ、ついで、検査用に収集する医療術である。ＢＡＬは、肺胞被膜流体（ＡＬＦ）の成分を採取するのに最も一般的な様式である。
【００９０】
本発明で使用する場合、「吸入による投与」、「肺投与」、「吸入による送達」及び「肺送達」は、本発明のポリペプチドが気道に投与されることを意味する。本発明において、この送達法では、本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドを（ネブライザにより）霧化することにより得られたエアロゾルで存在する。
【００９１】
「吸入装置」は、医薬品を体内に肺を介して送達するのに使用される医療装置である。
【００９２】
本明細書で使用する場合、「エアロゾル」は、気体に分散された微粒子の形態での懸濁液（すなわち、微細な粒子を含有する微細な霧又はスプレー）を指す。本発明で使用する場合、「粒子」という用語は、液体、例えば、液滴を指す。本発明のポリペプチドを肺に送達するための薬学的エアロゾルは、口及び／又は鼻を介して吸入することができる。肺送達において、約５又は６マイクロメートルより小さい粒子の発生は、（すなわち、呼吸細気管支及び肺胞領域において）微細粒子画分（ＦＰＦ）としての堆積を達成するのに必須であると考えられる（O’Callaghan and Barry, 1997, Thorax 52: S31-S44）。エアロゾルにおける粒径は、体積中央径（ＶＭＤ）として表現することができる。「体積中央径」は、エアロゾルの幾何粒子径として定義される。この場合、エアロゾル体積の５０％は、この値より大きく、５０％がこの値より小さい。「質量中央空気力学径（ＭＭＡＤ）」及び「質量中央径（ＭＡＤ又はＭＭＤ）」は、幾何平均（空気力学）径と定義される。この場合、粒子の５０重量％がこの値より小さく、５０％がこの値より大きいであろう。エアロゾル粒子の密度が１g/cm3である場合、ＶＭＤ及びＭＭＡＤ、ＭＡＤ又はＭＭＤは同等である。
【００９３】
本発明で使用する場合、「霧化」という用語は、（本明細書で更に定義されたように）ネブライザによる液体の霧又は微細スプレーへの変換を指す。
【００９４】
「エアロゾル発生器」は、液体製剤、例えば、吸入用の医薬組成物からエアロゾルを発生可能な装置又は装置コンポーネントである。同義的に、「ネブライザ」又は「霧化手段」という用語を利用することができる。
【００９５】
特に断りない限り、「気体」は、吸入に適した任意の気体又は気体の混合物を指す。
【００９６】
「側方」又は「側方に」は、装置又は装置コンポーネントの中央、中心又はセンター軸から離れることを意味する。
【００９７】
対象又は患者の「一回呼吸量」は、過度の努力が適用されない通常な吸気と呼気との間で置き換えられる空気の正常な容積を表わす肺容積である。
【００９８】
本明細書で使用する場合、「対象」及び「患者」という用語は互換的に使用される。本明細書で使用する場合、「対象」及び「患者」という用語はヒトを指す。
【００９９】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容し得る」という表現は、連邦又は州政府の監督官庁により承認されていること、又は、動物、及びとりわけ、ヒトに使用するのに、米国薬局方、欧州薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。この意味で、薬学的に許容し得るは、製剤の他の成分と適合性であるべきであり、対象における許容できない有害作用を引き起こさないべきである。薬学的に許容し得るは、正常な医療判断の範囲内であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答又は他の問題もしくは合併症なしに、合理的な利益／リスク比に釣り合って、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適しているような化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【０１００】
本明細書で使用する場合、「薬学活性量」という用語は、１つ以上の疾患及び／又は障害の重症度及び／又は期間を低下させるのに十分な治療剤（例えば、本発明のポリペプチド）の量を指す。
【０１０１】
本発明のポリペプチド
本発明のポリペプチドは、非天然であることができる。このため、本発明のポリペプチドは、非天然配列を生成するのに、設計され、製造され、合成され、及び／又は、組み換えられてもよい。
【０１０２】
免疫グロブリンシングル可変ドメイン
特に断りない限り、「免疫グロブリン配列」という用語は、本明細書において、重鎖抗体又は従来の４本鎖抗体を指すのに使用されるか否かに関わらず、一般的な用語として、全長抗体、その個々の鎖及びその全ての部分、ドメイン又はフラグメント（抗原結合ドメイン又はフラグメント、例えば、ＶＨＨドメイン又はＶＨ／ＶＬドメインそれぞれを含むが、これらに限定されない）の両方を含むのに使用される。加えて、本明細書で使用する場合、（例えば、「免疫グロブリン配列」、「抗体配列」、「可変ドメイン配列」、「ＶＨＨ配列」又は「タンパク質配列」等の用語において）「配列」という用語は、一般的には、より限定した解釈が文脈により求められない限り、関連するアミノ酸配列とそれをコードする核酸又はヌクレオチド配列との両方を含むと理解されたい。
【０１０３】
「シングル可変ドメイン」と互角的に使用される「免疫グロブリンシングル可変ドメイン」という用語は、抗原結合部位が１つの免疫グロブリンドメイン上に存在し、１つの免疫グロブリンドメインにより形成される分子を定義する。これは、「従来」免疫グロブリン又はそのフラグメントとは別の免疫グロブリンドメインを設定する。ここで、２つの免疫グロブリンドメイン、特に、２つの可変ドメインは、抗原結合部位を形成するように相互作用する。典型的には、従来の免疫グロブリンにおいて、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、抗原結合部位を形成するように相互作用する。この場合には、両ＶＨ及びＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、抗原結合部位に寄与するであろう、すなわち、合計６個のＣＤＲが、抗原結合部位形成に関与するであろう。
【０１０４】
対照的に、免疫グロブリンシングル可変ドメインの結合部位は、１つのＶＨ又はＶＬドメインにより形成される。したがって、免疫グロブリンシングル可変ドメインの抗原結合部位は、３つ以下のＣＤＲにより形成される。
【０１０５】
したがって、「免疫グロブリンシングル可変ドメイン」及び「シングル可変ドメイン」という用語は、抗原結合部位の形成のための少なくとも２つの可変ドメインの相互作用を必要とする従来の免疫グロブリン又はそのフラグメントを含まない。ただし、これらの用語は、抗原結合部位が１つの可変ドメインにより形成されている従来の免疫グロブリンのフラグメントを含むものである。
【０１０６】
一般的には、１つの可変ドメインは、４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的になるアミノ酸配列であろう。このような１つの可変ドメイン及びフラグメントは、最も好ましくは、それらが免疫グロブリンフォールドを含み、又は、適切な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成可能であるようにである。また、１つの可変ドメインは、１つの抗原結合ユニット（すなわち、例えば、別の可変ドメインと相互作用（例えば、ＶＨ／ＶＬ相互作用により、機能性抗原結合ドメインを形成）する必要がある従来の抗体及びｓｃＦｖフラグメントに存在する可変ドメインと同様に、１つの抗原結合ドメインが別の可変ドメインと相互作用して、機能的な抗原結合ユニットを形成する必要がないように、1つの可変ドメインから本質的になる機能的な抗原結合ユニット）を形成可能である限り、例えば、軽鎖可変ドメイン配列（例えば、ＶＬ配列）もしくはその適切なフラグメント；又は重鎖可変ドメイン配列（例えば、ＶＨ配列又はＶＨＨ配列）もしくはその適切なフラグメントを含んでもよい。
【０１０７】
本発明の一実施態様において、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、軽鎖可変ドメイン配列（例えば、ＶＬ配列）又は重鎖可変ドメイン配列（例えば、ＶＨ配列）であり、より具体的には、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、従来の４本鎖抗体から得られた重鎖可変ドメイン配列又は重鎖抗体から得られた重鎖可変ドメイン配列であることができる。
【０１０８】
例えば、シングル可変ドメイン又は免疫グロブリンシングル可変ドメイン（又は免疫グロブリンシングル可変ドメインとして使用するのに適したアミノ酸）は、（シングル）ドメイン抗体（又は（シングル）ドメイン抗体として使用するのに適したアミノ酸）、「ｄＡｂ」又はｄＡｂ（又はｄＡｂとして使用するのに適したアミノ酸）又はナノボディ（本明細書で定義されたとおり、ＶＨＨを含むが、これに限定されない）；他のシングル可変ドメイン又はそれらのいずれか１つの任意の適切なフラグメントでもよい。
【０１０９】
（シングル）ドメイン抗体の一般的な説明について、また、本明細書で引用された従来技術及びＥＰ第０３６８６８４号に参照がなされる。「ｄＡｂ」という用語について、例えば、Ward et al. 1989（Nature 341: 544-546）、Holt et al. 2003（Trends Biotechnol. 21: 484-490）；及び、例えば、ＷＯ第０４／０６８８２０号、同第０６／０３０２２０号、同第０６／００３３８８号、同第０６／０５９１０８号、同第０７／０４９０１７号、同第０７／０８５８１５号並びにDomantis Ltdの他の公開された特許出願に参照がなされる。哺乳類起源でないため、本発明の文脈においてほとんど好ましくないが、シングル可変ドメインは、特定種のサメから得ることができることにも留意されたい（例えば、いわゆる「ＩｇＮＡＲドメイン」、例えば、ＷＯ第０５／１１８６２９号を参照のこと）。
【０１１０】
特に、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、Nanobody（登録商標）（本明細書で
定義されたとおり）又はその適切なフラグメントであることができる［注記：Nanobody（登録商標）、Nanobodies（登録商標）及びNanoclone（登録商標）は、Ablynx N.V.の登録商標である］。Nanobodiesの一般的な説明について、以下の更なる説明及び本明細書で引用された従来技術、例えば、ＷＯ第０８／０２００７９号（第１６頁）に記載された従来技術に参照がなされる。
【０１１１】
ＶＨＨ及びNanobodiesの更なる説明について、Muyldermans 2001によるレビュー文献（Molecular Biotechnology 74: 277-302におけるレビュー）及び一般的な背景技術として言及された特許出願：Vrije Universiteit BrusselのＷＯ第９４／０４６７８号、同第９５／０４０７９号及び同第９６／３４１０３号；UnileverのＷＯ第９４／２５５９１号、同第９９／３７６８１号、同第００／４０９６８号、同第００／４３５０７号、同第００／６５０５７号、同第０１／４０３１０号、同第０１／４４３０１号、ＥＰ第１１３４２３１号及びＷＯ第０２／４８１９３号；Vlaams Instituut voor Biotechnologie（VIB）のＷＯ第９７／４９８０５号、同第０１／２１８１７号、同第０３／０３５６９４号、同第０３／０５４０１６号及び同第０３／０５５５２７号；Algonomics N.V.及びAblynx N.V.のＷＯ第０３／０５０５３１号；National Research Council of CanadaによるＷＯ第０１／９０１９０号；Institute of AntibodiesによるＷＯ第０３／０２５０２０号（＝ＥＰ第１４３３７９３号）；及びAblynx N.V.によるＷＯ第０４／０４１８６７号、同第０４／０４１８６２号、同第０４／０４１８６５号、同第０４／０４１８６３号、同第０４／０６２５５１号、同第０５／０４４８５８号、同第０６／４０１５３号、同第０６／０７９３７２号、同第０６／１２２７８６号、同第０６／１２２７８７号及び同第０６／１２２８２５号並びにAblynx N.V.による公開された更なる特許出願に参照がなされる。また、これらの出願に言及された更なる従来技術、及び特に、国際出願のＷＯ第０６／０４０１５３号の第４１〜４３頁に言及された参考文献のリストにも参照がなされる。同リスト及び参考文献は、参照により本明細書に組み入れられる。これらの参考文献に記載されたように、Nanobodies（特に、ＶＨＨ配列及び部分ヒト化Nanobodies）は、特に、１つ以上のフレームワーク配列における１つ以上の「ホールマーク残基」の存在により特徴付けることができる。Nanobodiesのヒト化及び／又はラクダ化並びに他の改変を含むNanobodies、一部もしくはフラグメント、誘導体もしくは「Nanobody融合物」、多価構築物（リンカー配列の一部の非限定的な例を含む）及びNanobodiesの半減期を長くする種々の改変並びにその調製の更なる説明を、例えば、ＷＯ第０８／１０１９８５号及び同第０８／１４２１６４号に見出すことができる。
【０１１２】
このため、本発明の意味において、「免疫グロブリンシングル可変ドメイン」又は「シングル可変ドメイン」という用語は、非ヒトソース、好ましくは、ラクダ科から得られるポリペプチド、好ましくは、ラクダ重鎖抗体を含む。それらは、先に記載されたようにヒト化することができる。更に、この用語は、非ラクダ科ソース、例えば、マウス又はヒトから得られたポリペプチドを含む。同ポリペプチドは、例えば、Davies and Riechmann 1994（FEBS 339: 285-290）、1995（Biotechonol. 13: 475-479）、1996（Prot. Eng. 9: 531-537）及びRiechmann and Muyldermans 1999（J. Immunol. Methods 231: 25-38）に記載されたように「ラクダ化」される。
【０１１３】
「免疫グロブリンシングル可変ドメイン」という用語は、種々の起源の免疫グロブリン配列を包含する。同配列は、マウス、ラット、ウサギ、ロバ、ヒト及びラクダ科の免疫グロブリン配列を含む。また、免疫グロブリン配列は、完全にヒト、ヒト化又はキメラ免疫グロブリン配列も含む。例えば、免疫グロブリン配列は、ラクダ科免疫グロブリン配列及びヒト化ラクダ科免疫グロブリン配列又はラクダ化免疫グロブリンシングル可変ドメイン、例えば、Ward et al. 1989（例えば、ＷＯ第９４／０４６７８号及びDavies and Riechmann 1994, 1995 and 1996)に記載されたラクダ化ｄＡｂ及びラクダ化ＶＨを含む。
【０１１４】
再度、このような免疫グロブリンシングル可変ドメインは、任意の適切な様式で、任意の適切なソースから得ることができ、例えば、天然のＶＨＨ配列（すなわち、適切なラクダ科の種由来）又は合成もしくは半合成のアミノ酸配列（部分的又は完全に「ヒト化」ＶＨＨ、「ラクダ化」免疫グロブリン配列（及び特に、ラクダ化ＶＨ）を含むが、これらに限定されない）並びに（例えば、合成、ランダム又は天然の免疫グロブリン配列、例えば、ＶＨＨ配列から開始する）親和性成熟、ＣＤＲグラフト化、ベニアリング、異なる免疫グロブリン配列から得られたフラグメントの組み合わせ、オーバーラッププライマーを使用するＰＣＲアセンブリ等の技術並びに当業者に周知の免疫グロブリン配列を操作するための同様の技術；又は前述のいずれかの任意の適切な組み合わせにより得られたNanobodies及び／又はＶＨＨでもよい。
【０１１５】
免疫グロブリンシングル可変ドメインにおけるアミノ酸残基の総数は、１１０〜１２０個の範囲、好ましくは、１１２〜１１５個の範囲、及び最も好ましくは、１１３個であることができる（ただし、本明細書並びにＷＯ第０８／０２００７９号、同第０６／０４０１５３号及び更なる免疫グロブリンシングル可変ドメインに関して本明細書で引用された文献で与えられた免疫グロブリンシングル可変ドメイン配列の例に基づいて、アミノ酸残基の正確な数は、免疫グロブリンシングル可変ドメインに存在する特定のＣＤＲの長さによっても決まるであろうことが明らかであろう）。
【０１１６】
免疫グロブリンシングル可変ドメインのアミノ酸配列及び構造は、４つのフレームワーク領域又は「ＦＲ」から構成される（ただし、それには限定されない）と考えることができる。同フレームワーク領域は、当技術分野及び本明細書において、「フレームワーク領域１」又は「ＦＲ１」；「フレームワーク領域２」又は「ＦＲ２」；「フレームワーク領域３」又は「ＦＲ３」；及び「フレームワーク領域４」又は「ＦＲ４」とそれぞれ呼ばれる。同フレームワーク領域は、３つの相補性決定領域又は「ＣＤＲ」により分断される。同相補性決定領域は、当技術分野において、「相補性決定領域１」又は「ＣＤＲ１」；「相補性決定領域２」又は「ＣＤＲ２」；及び「相補性決定領域３」又は「ＣＤＲ３」とそれぞれ呼ばれる。
【０１１７】
ＷＯ第０８／０２００７９号（参照により本明細書に組み込まれる）の第５８及び５９頁の段落ｑ）に更に記載されたように、免疫グロブリンシングル可変ドメインのアミノ酸残基は、Riechmann and Muyldermans 2000の文献(J. Immunol. Methods 240: 185-195；例えば、この刊行物の図２を参照のこと)におけるラクダ科由来のＶＨＨドメインに適用されたKabat et al.（「Sequence of proteins of immunological interest」, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）により与えられたＶＨドメインについての一般的なナンバリングに従ってナンバリングされる。このナンバリングによれば、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＦＲ１は、１〜３０位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＣＤＲ１は、３１〜３５位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＦＲ２は、３６〜４９位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＣＤＲ２は、５０〜６５位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＦＲ３は、６６〜９４位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＣＤＲ３は、９５〜１０２位におけるアミノ酸残基を含み、免疫グロブリンシングル可変ドメインのＦＲ４は、１０３〜１１３位におけるアミノ酸残基を含む。
【０１１８】
本発明の方法において、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に結合するため、「抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメイン」又は「本発明の抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメイン」とも呼ばれる。とりわけ、抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに（適切に測定され、及び／又は、ＫＤ値（実測又は見掛け）、ＫＡ値（実測又は見掛け）、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度として表現された）親和性で、好ましくは、
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１０００nM〜１nM以下、好ましくは、１００nM〜１nM以下、より好ましくは、１５nM〜１nM又は更に１０nM〜１nM以下の解離定数（ＫＤ）で結合し、及び／又は
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１０４M-1s-1〜約１０７M-1s-1、好ましくは、１０５M-1s-1〜１０７M-1s-1、より好ましくは、約１０６M-1s-1以上のｋｏｎ速度で結合し、及び／又は
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１０−２ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−４ｓ−１（数日のｔ１／２を有する不可逆性に近い複合体を提供）、好ましくは、１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１以下で結合する
ように結合することができる。
【０１１９】
特定の態様では、親和性は、表面プラズモン共鳴、例えば、Biacore又はKinExA（上記を参照のこと）により決定される。
【０１２０】
一態様において、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ｈＲＳＶを中和可能である。分子の中和能を決定するためのアッセイは、例えば、Anderson et al.（1985, J. Clin. Microbiol. 22: 1050-1052；1988, J. Virol. 62: 4232-4238）に記載されたマイクロ中和アッセイ又は、例えば、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号等のこのアッセイの改変例、又は、例えば、Johnson et al.（1997, J. Inf. Dis. 176: 1215-1224）に記載されたプラーク減少アッセイ及びその改変例を含む。例えば、（例えば、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号；第３７５頁、実施例６等に記載された）ｈＲＳＶ  Ｌｏｎｇでのマイクロ中和アッセイにおいて、抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、１００nM〜１０００nM、好ましくは、１００nM〜５００nM以下のＩＣ５０値を有する場合がある。
【０１２１】
好ましい抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列の組み合わせを、表Ａ−１に示す。好ましい態様では、抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号：４６であるＣＤＲ１と、配列番号：４９及び５０から選択されるＣＤＲ２と、配列番号：６１であるＣＤＲ３とを有する。最も好ましくは、ＣＤＲ１は、配列番号：４６であり、ＣＤＲ２は、配列番号：４９であり、ＣＤＲ３は、配列番号：６１である。また、表Ａ−１に、免疫グロブリンシングル可変ドメインに使用するための、ＣＤＲ配列（すなわち、同じ列に示されたＣＤＲ配列）の好ましい組み合わせ及びＣＤＲ配列とフレームワーク配列（すなわち、同じ列に示されたＣＤＲ配列及びフレームワーク配列）との好ましい組み合わせも示す。
【０１２２】
限定されないが、本発明のポリペプチドに使用するのに有利な免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号に記載されている。好ましくは、抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、表Ａ−２における配列番号：１〜３４のいずれか、最も好ましくは、表Ａ−２における配列番号：１〜２のいずれかから選択される。
【０１２３】
本発明のポリペプチド
本発明の方法に使用するための免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に特異的に結合する１つ以上の免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、又は、これから（本質的に）なり、場合により、１つ以上の更なるアミノ酸配列（１つ以上の適切なリンカーを介して場合により全てが連結される）を更に含むことができる、ポリペプチド（本明細書において、「本発明のポリペプチド」と呼ばれる）の一部を形成することができる。また、「免疫グロブリンシングル可変ドメイン」という用語は、このような本発明のポリペプチドも包含することができる。例えば、限定されないが、１つ以上の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、このようなポリペプチドにおける結合ユニットとして使用することができる。同結合ユニットは、本発明の一価、多価又は多重特異性ポリペプチドそれぞれとなるように、結合ユニットとして機能することができる１つ以上の更なるアミノ酸配列を場合により含有することができる（１つ以上のＶＨＨドメインを含有する多価及び多重特異性ポリペプチド並びにそれらの調製について、Conrath et al. 2001（J. Biol. Chem. 276: 7346-7350）及び例えば、ＷＯ第９６／３４１０３号、同第９９／２３２２１号及び同第２０１０／１１５９９８号にも参照がなされる）。
【０１２４】
好ましくは、本発明のポリペプチドは、３つ以上の抗原結合ユニットを含む構築物を、上記概説されたシングル可変ドメインの形態で包含する。例えば、ｈＲＳＶに結合する３つ以上の免疫グロブリンシングル可変ドメイン（本明細書において、「抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメイン」とも呼ばれる）は、三価又は多価構築物を形成するのに連結させることができる。好ましくは、本発明のポリペプチドは、３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインからなる。
【０１２５】
上記されたポリペプチドにおいて、３つ以上の抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインは、互いに直接、及び／又は、１つ以上の適切なリンカーもしくはスペーサを介して連結させることができる。多価ポリペプチドに使用するのに適したスペーサ又はリンカーは、当業者に明らかであろうし、一般的には、アミノ酸配列を連結するのに当技術分野において使用される任意のリンカー又はスペーサであることができる。好ましくは、前記リンカー又はスペーサは、医薬用途を意図したタンパク質又はポリペプチドを構築するのに使用するのに適している。
【０１２６】
一部の特に好ましいスペーサは、抗体フラグメント又は抗体ドメインを連結させるのに当技術分野において使用されるスペーサ及びリンカーを含む。これらは、上記引用された一般的な背景技術に言及されたリンカー、及び例えば、ディアボディ又はＳｃＦｖフラグメントを構築するのに当技術分野において使用されるリンカーを含む（ただし、この観点において、ディアボディ及びＳｃＦｖフラグメントでは、使用されるリンカー配列は、適切なＶＨ及びＶＬドメイン同士が完全な抗原結合部位を形成可能な長さ、可撓性度合い及び他の特性を有するべきであるが、本発明のポリペプチドに使用されるリンカーの長さ又は可撓性には特定の限定は存在しないことに、留意されたい。各免疫グロブリンシングル可変ドメインはそれ自体が完全な抗原結合部位を形成するためである。
【０１２７】
例えば、リンカーは、適切なアミノ酸配列及び特に、１〜５０個、好ましくは、１〜３０個のアミノ酸配列、例えば、１〜２０個又は１〜１０個のアミノ酸残基であることができる。広く使用されるペプチドリンカーは、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ繰返し、例えば、１、２、３、４、５、６回以上の繰返しにおける（Ｇｌｙ）４−Ｓｅｒ、もしくは例えば、（ｇｌｙｘｓｅｒｙ）ｚ型等（例えば、ＷＯ第９９／４２０７７号に記載された（ｇｌｙ４ｓｅｒ）３又は（ｇｌｙ３ｓｅｒ２）３）又はヒンジ様領域、例えば、（例えば、ＷＯ第９４／０４６７８号に記載された）天然の重鎖抗体又は類似する配列のヒンジ領域を含む。一部の他の特に好ましいリンカーは、ポリアラニン（例えば、ＡＡＡ）及び表Ａ−４に言及されたリンカーである。
【０１２８】
他の適切なリンカーは、一般的には、有機化合物又はポリマー、特に、医薬用途のタンパク質に使用するのに適したものを含む。例えば、ポリ（エチレングリコール）部分が、抗体ドメインを連結させるのに使用されてきた。例えば、ＷＯ第０４／０８１０２６号を参照のこと。
【０１２９】
一態様において、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に結合する。とりわけ、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに（適切に測定され、並びに／又は、ＫＤ値（実測又は見掛け）、ＫＡ値（実測又は見掛け）、ｋｏｎ速度及び／もしくはｋｏｆｆ速度として表現された）親和性で、好ましくは、
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１００nM〜０．１nM以下、好ましくは、１０nM〜０．１nM以下、より好ましくは、１nM〜０．１nM以下、例えば、５×１０−１０M（０．５nM）以下等の解離定数（ＫＤ）で結合し、及び／又は
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１０４M-1s-1〜約１０７M-1s-1、好ましくは、１０５M-1s-1〜１０７M-1s-1、より好ましくは、約１０６M-1s-1以上のｋｏｎ速度で結合し、及び／又は
−ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１０−２ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−４ｓ−１（数日のｔ１／２を有する不可逆性に近い複合体を提供）、好ましくは、１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１、より好ましくは、５×１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度で結合するように
結合することができる。
【０１３０】
特定の態様では、親和性は、表面プラズモン共鳴、例えば、Biacore又はKinExA（上記を参照のこと）により決定される。
【０１３１】
一態様において、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶを中和可能である。分子の中和能を決定するためのアッセイは、例えば、Anderson et al.（1985, J. Clin. Microbiol. 22: 1050-1052；1988, J. Virol. 62: 4232-4238）に記載されたマイクロ中和アッセイ又は、例えば、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号等のこのアッセイの改変例、又は、例えば、Johnson et al.（1997, J. Inf. Dis. 176: 1215-1224）に記載されたプラーク減少アッセイ及びその改変例を含む。例えば、（例えば、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号、第３７５頁、実施例６等に記載された）ｈＲＳＶ  Ｌｏｎｇでのマイクロ中和アッセイにおいて、本発明のポリペプチドは、１０pM〜１０００pM、好ましくは、１０pM〜２５０pM、より好ましくは、５０pM〜２００pM以下のＩＣ５０値を有する場合がある。本発明のポリペプチドは、１nM〜１００nM、好ましくは、１nM〜１０nM、より好ましくは、１nM〜５nM以下、例えば、２nM以下又は９０ng/mL以下等のＩＣ９０値を有する場合がある。
【０１３２】
好ましい態様では、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に（適切に測定され、及び／又は、本明細書で記載されたＫＤ値（実測又は見掛け）として表現された）親和性で、好ましくは、ｈＲＳＶのタンパク質Ｆに、１００nM〜０．１nM以下、好ましくは、１０nM〜０．１nM以下、より好ましくは、１nM〜０．１nM以下、例えば、５×１０−１０M（０．５nM）以下等の解離定数（ＫＤ）で結合するように結合し、加えて、本発明のポリペプチドは、１０pM〜１０００pM、好ましくは、１０pM〜２５０pM、より好ましくは、５０pM〜２００pM以下のＩＣ５０値、又は、１nM〜１００nM、好ましくは、１nM〜１０nM、より好ましくは、１nM〜５nM以下、例えば、２nM以下又は９０ng/mL以下のＩＣ９０値で、ｈＲＳＶを中和可能である。一態様において、本発明のポリペプチドは、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質Ｆに、５×１０−１０M（０．５nM）以下の親和性で結合し、９０ng/mL以下のＩＣ９０値でｈＲＳＶを中和する。
【０１３３】
具体的な態様では、本発明の多価（例えば、三価）ポリペプチドは、配列番号：１〜３４（表Ａ−２）のいずれかから選択される、少なくとも３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインを含むか、又は、これらから本質的になることができる。限定されないが、本発明の方法に使用するのに有利なポリペプチドは、ＷＯ第２０１０／１３９８０８号に記載されている。好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号：６５〜８５（表Ａ−２）のいずれかから選択され、好ましくは、配列番号：７１である。
【０１３４】
配列番号：７１は、重鎖のみのラマ抗体から得られた３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインからなる三価ポリペプチドである。３つの抗ｈＲＳＶ免疫グロブリンシングル可変ドメインはそれぞれ、ｈＲＳＶのＦ−タンパク質に結合する。
【０１３５】
本発明のポリペプチドは、下記工程：
ａ）適切なホスト細胞もしくはホスト生物又は別の適切な発現系において、本発明のポリペプチドをコードする核酸もしくはヌクレオチド配列又は遺伝子構築物を発現させる工程と、場合により続けて、
ｂ）このようにして得られた本発明のポリペプチドを単離し及び／又は精製する工程と
を含む方法により製造することができる。
【０１３６】
本発明のポリペプチドを製造するための方法は、下記工程：
ａ）ホスト又はホスト細胞を、前記ホスト又はホスト細胞が少なくとも１つの本発明のポリペプチドを発現し及び／又は製造するような条件下で培養し及び／又は維持する工程と、場合により続けて、
ｂ）このようにして得られた本発明のポリペプチドを単離し及び／又は精製する工程と
を含むことができる。
【０１３７】
本発明の１つの好ましいが非限定的な実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、細菌細胞、特に、大規模な医薬品製造に適した細菌細胞において製造される。
【０１３８】
本発明の別の好ましいが非限定的な実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、酵母細胞、特に、大規模な医薬品製造に適した酵母細胞において製造される。
【０１３９】
本発明の更に別の好ましいが非限定的な実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、哺乳類細胞、特に、ヒト細胞又はヒト細胞系統の細胞、及びとりわけ、大規模な医薬品製造に適したヒト細胞又はヒト細胞系統の細胞において製造される。
【０１４０】
工業規模での製造のために、免疫グロブリンシングル可変ドメイン又は免疫グロブリンシングル可変ドメイン含有タンパク質治療剤の（工業的）製造に好ましい異種性ホストは、大規模発現／製造／発酵、及び特に、大規模医薬品発現／製造／発酵に適した、E. coli、Pichia pastoris、S. cerevisiae株を含む。このような株の適切な例は、当業者にあきらかであろう。このような株及び製造／発現系は、Biovitrum（Uppsala, Sweden）等の企業から入手することもできる。
【０１４１】
代替的に、哺乳類細胞系統、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、大規模発現／製造／発酵、及び特に、大規模医薬品発現／製造／発酵に使用することができる。再度、このような発現／製造系は、上記言及された幾つかの企業から入手することもできる。
【０１４２】
続けて、本発明のポリペプチドは、ホスト細胞／ホスト生物から、及び／又は、前記ホスト細胞又はホスト生物が培養された培地から、それ自体公知のタンパク質単離及び／又は精製技術、例えば、（調製用）クロマトグラフィー及び／又は電気泳動技術、分別沈降（differential precipitation）技術、親和性技術（例えば、本発明のポリペプチドと融合した特異的開裂性アミノ酸配列を使用）及び／又は調製用免疫学的技術（すなわち、単離されるアミノ酸配列に対する抗体を使用）を使用して単離することができる。
【０１４３】
本発明の方法
本発明は、本発明のポリペプチドの小児への肺投与のための方法及び投与計画を提供する。また、これらの方法及び投与計画は、これらの小児におけるＲＳＶ感染の処置（本明細書で定義されたとおり）に使用することができる。
【０１４４】
ＲＳＶ感染は、軽度の上気道疾患及びより重篤な下気道感染（ＬＲＴＩ）を含む。ＲＳＶ下気道感染は、気管支炎及び気管支肺炎を含むことができ、典型的な臨床兆候及び症候、例えば、頻呼吸、喘鳴、咳、湿性ラ音、副筋の使用及び／又は鼻翼呼吸を示す可能性がある。
【０１４５】
また、ＲＳＶ感染は、ＲＳＶ感染に関連する疾患及び／又は障害を含む場合がある。ＲＳＶ感染に関連するこのような疾患及び／又は障害の例は、当業者に明らかであろうし、例えば、下記疾患及び／又は障害：ｈＲＳＶに関連する、呼吸器疾患、上気道感染、下気道感染、気管支炎（肺における小気道の炎症）、肺炎、呼吸困難、咳、（反復性）喘鳴及び喘息又はＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）（の悪化）を含む。
【０１４６】
したがって、本発明は、ｈＲＳＶに関連する、呼吸器疾患、上気道感染、下気道感染、気管支炎（肺における小気道の炎症）、肺炎、呼吸困難、咳、（反復性）喘鳴及び／又は喘息もしくはＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）（の悪化）の処置のための方法及び投与計画も提供する。
【０１４７】
本発明の文脈において、「処置」という用語は、疾患を治療することのみを含むのでなく、一般的には、疾患の進行を遅らせ又は反転させ、疾患に関連する１つ以上の症候の開始を遅らせ、疾患に関連する１つ以上の症候を減少させ及び／又は軽減し、疾患及び／又はそれに関連する任意の症候の重症度及び／又は期間を減少させ、並びに／又は、疾患及び／又はそれに関連する症候の重症度の更なる増大を防止し、疾患により生じる任意の生理学的傷害を防止し、減少させ又は反転させること並びに処置される患者に利益をもたらす一般的に任意の薬理作用も含む。
【０１４８】
本発明の方法は、本発明のポリペプチドの対象の気道、及びより具体的には、下気道への送達を提供する。医薬品の気道への送達及び／又は医薬品の吸入による送達のための方法は、当業者に公知であり、例えば、参考書「Drug Delivery: Principles and Applications」(2005) by Binghe Wang, Teruna Siahaan and Richard Soltero（Eds. Wiley Interscience (John Wiley & Sons)）；「Pharmacology PreTestTMSelf-Assessment and Review」(11th Ed.) by Rosenfeld G.C., Loose-Mitchell D.S.；及び「Pharmacology」(3rd Edition) by Lippincott Williams & Wilkins, New York；Shlafer M. McGraw-Hill Medical Publishing Division, New York；Yang K.Y., Graff L.R., Caughey A.B. Blueprints Pharmacology, Blackwell Publishingに記載されている。本発明の方法において、本発明のポリペプチドは、吸入可能な形態で送達される。とりわけ、吸入可能な形態は、本発明のポリペプチドを（ネブライザにより）霧化することにより得られるエアロゾルである。
【０１４９】
処置される対象は、ヒト、とりわけ、小児である。当業者に明らかなように、処置される対象は、特に、ＲＳＶ感染を患う小児であろう。例えば、対象は、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染を患う小児であることができる。
【０１５０】
一態様において、対象は、齢が５か月未満、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、幼児である。一態様において、対象は、歩き始めの幼児である。
【０１５１】
一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断された小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断された、齢が５か月未満、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断された、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断された幼児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断された、歩き始めの幼児である。
【０１５２】
一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断されたが、他の点で健康である小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断されたが、他の点で健康である、齢が５か月未満、齢が２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断されたが、他の点で健康である、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）を有すると診断されたが、他の点で健康である幼児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）と診断されたが、他の点で健康である、歩き始めの幼児である。
【０１５３】
一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院している小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院している、齢が５か月未満、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院している、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院している幼児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院している、歩き始めの幼児である。
【０１５４】
一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断された小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断された、齢が５か月未満、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断された、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断された幼児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断された、歩き始めの幼児である。
【０１５５】
一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断されたが、他の点で健康である小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断されたが、他の点で健康である、齢が５か月未満、２４か月未満又は３６か月（３歳）未満の小児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断されたが、他の点で健康である、齢が２８日〜５か月未満（例えば、２８日〜４か月等）、齢が２８日〜２４か月未満（例えば、２８日〜２３か月等）、齢が１か月〜２４か月未満（例えば、１か月〜２３か月等）、齢が３か月〜２４か月未満（例えば、３か月〜２３か月等）、齢が５か月〜２４か月未満（例えば、５か月〜２３か月等）、齢が２８日〜３６か月未満（例えば、２８日〜３５か月等）、齢が１か月〜３６か月未満（例えば、１か月〜３５か月等）、齢が３か月〜３６か月未満（例えば、３か月〜３５か月等）又は齢が５か月〜３６か月未満（例えば、５か月〜３５か月等）の小児である。一態様において、対象は、感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同感染と診断されたが、他の点で健康である幼児である。一態様において、対象は、ＲＳＶ感染（例えば、ＲＳＶ下気道感染、例えば、気管支炎又は気管支肺炎）で入院しており、同ＲＳＶ感染と診断されたが、他の点で健康である、歩き始めの幼児である。
【０１５６】
本発明の方法において、本発明のポリペプチド、例えば、配列番号：７１は、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染を患う対象に、処置が生じるように選択された投与計画において吸入により投与される。
【０１５７】
本発明のポリペプチドの活性は、処置中のウイルス負荷の減少を測定することにより評価することができる。ウイルス負荷は、例えば、小児の鼻粘膜中で決定することができる。粘膜を鼻から、鼻吸引器、ゴム弁シリンジ、又は鼻スワブによる鼻吸引により除去することができる。ウイルス負荷は、当技術分野において公知の任意の方法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応又は培養等により決定することができる。
【０１５８】
したがって、本発明の方法において、本発明のポリペプチド、例えば、配列番号：７１は、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染を患う対象に、ウイルス負荷が減少されるように選択された投与計画において吸入により投与される。一態様において、投与後６時間で、平均鼻ウイルス負荷が、ＰＦＵアッセイにより測定された場合、１．０００ｌｏｇ１０PFU/mlまで（例えば、プラセボにおける約０．５ｌｏｇ１０PFU/mlと比較して）低下する。別の態様では、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染を患う対象への吸入による本発明のポリペプチド、例えば、配列番号：７１の投与により、ウイルスが検出できなくなる中央時間（すなわち、処置開始から２回連続の鼻スワブにおいてウイルス力価が最初に検出できなくなる時点までの時間）が５０％減少する。
【０１５９】
本発明のポリペプチドの活性は、血清中の特定の生体マーカー、例えば、ＩＬ−８及びＫＬ−６等を測定することにより評価することもできる。
【０１６０】
インターロイキン８（ＩＬ−８）は、傷害及び感染に対するホスト応答の重要なメディエータである。血清中のＩＬ−８レベルは、当業者に公知の技術を使用するそれ自体公知の任意の方法、例えば、下記市販のアッセイ：ヒトＩＬ−８ELISAキット（Life Technologies; Cat# KHC0081)、ヒトＩＬ−８ELISAキット（Thermo Fisher Scientific Inc.; Cat# EH2IL8, EH2IL82, EH2IL85）又はAlphaLISA IL8 Immunoassay Researchキット（PerkinElmer Inc.; Cat# AL224C, AL224F）等により測定することができる。
【０１６１】
Ｋｅｒｂｓ  ｖｏｎ  Ｌｕｎｇｒｅｎ  ６抗原（ＫＬ−６）は、ＩＩ型肺胞細胞の表面に発現される高分子量糖タンパク質である。ＫＬ−６の血清レベルは、肺胞上皮細胞傷害により特徴付けられる各種の間質性肺疾患において上昇する。血清ＫＬ−６は、ＲＳＶ気管支炎の重症度に関連し、ＲＳＶ気管支炎の重症度についての有用な生体マーカーである可能性があることが示唆された（Kawasaki et al. 2009, J. Med. Virol. 81: 2104-8）。血清中のＫＬ−６レベルは、当業者に公知の技術を使用するそれ自体公知の任意の方法、例えば、下記市販のアッセイ：ＫＬ−６ヒトELISA（BioVendor; Cat# RSCYK243882R）、Ｋｅｒｂｓ  ｖｏｎ  Ｌｕｎｇｒｅｎ  ６免疫アッセイキット（BIOTREND Chemikalien GmbH; Cat# E05k0061）又はＫＬ−６ELISAキット（Biorbyt; Cat# orb153677）等により測定することができる。
【０１６２】
下記評価：心拍数及び末梢毛細血管Ｏ２飽和（ＳｐＯ２）レベル；栄養補給（栄養補給支援の種類、栄養補給の十分さ）、水分補給に対する特定の注意及び栄養補給中の呼吸の快適さ；呼吸速度；喘鳴（呼気／吸気中）；肺聴診中の湿性ラ音／捻髪音；日中の咳；夜間の咳（からの睡眠障害）；（呼吸筋）退縮（鎖骨上、肋間及び肋骨下）；一般外貌（活性、興奮、環境への関心及び応答性）；並びに入院期間は、本発明のポリペプチドの臨床活性を評価するのに行うことができる。
【０１６３】
臨床活性パラメータに基づいて、更なるスコア、例えば、臨床応答、呼吸困難評価機器（ＲＤＡＩ）スコア及び呼吸評価変化スコア（ＲＡＣＳ）を算出することができる。呼吸困難評価機器（ＲＤＡＩ）スコアは、喘鳴及び退縮に基づく１７点スコアである。ＲＤＡＩスコアは、列スコアの合計であり、全体として０〜１７の範囲であり、スコアが高いほど、より重篤な疾患を示す。呼吸評価変化スコア（ＲＡＣＳ）は、ＲＤＡＩスコアの変化の合計であり、呼吸速度の変化についての標準化スコアである。
【０１６４】
総合重症度スコア（ＧＳＳ）は、７種類の項目：栄養補給不寛容、医療的介在度合い、呼吸困難、呼吸頻度、無呼吸、全身状態及び発熱に基づいて、呼吸器感染を有する幼児の分類を可能にする、臨床スコアリングシステム（最大２０点）である。発熱を除いて（スコア０〜２）各スコアは０〜３であり、最大総スコア２０をもたらす。（表Ｂ−７及び表Ｂ−１０に更に示されたように）スコアが高いほど、より高い疾患の重症度を示す。この総合スコアは、幼児におけるＲＳＶ  ＬＲＴＩの重症度を評価するのに関連する全ての種類の臨床パラメータを考慮し、個々の項目より包括的であるというメリットを有する。ＧＳＳ評価について、Justicia-Grande et al. 2015（Leipzig: 33rd Annual Meeting of the European Society for Paediatric Infectious Diseases）及びCebey-Lopez et al. 2016（PLoS ONE 11(2):e0146599）にも参照がなされる。
【０１６５】
一態様において、本発明の方法では、本発明のポリペプチド、例えば、配列番号：７１は、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染を患う対象に、総合重症度スコアが投与後１日で（プラセボ対照対象と比較して）有意に（好ましくは、ｐ＜０．０５、より好ましくは、ｐ＜０．０１）減少するように選択された投与計画において吸入により投与される。
【０１６６】
本発明のポリペプチドは、ウイルスライサイクルにおける初期イベントを阻害し、ウイルス粒子のターゲット細胞への融合を阻害することにより、細胞外ウイルスがウイルスナイーブ細胞に感染するのを妨げる。本発明の方法及び投与計画は、ウイルスライサイクルにおけるこれらの初期イベントを阻害し、ウイルス粒子のターゲット細胞への融合を阻害することにより、細胞外ウイルスがウイルスナイーブ細胞に感染するのを妨げるのに使用される。
【０１６７】
中和アッセイにおいて（例えば、本明細書で更に記載されるＨｅｐ−２細胞培養において）、９０ng/mLのｉｎ  ｖｉｔｒｏ濃度を、本発明のポリペプチドがその最大阻害抗ウイルス作用の９０％（ＩＣ９０）に達する濃度として決定した。続けて、変数を評価する未知性又は困難性を考慮して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて決定されたＩＣ９０に１００を掛けた。（ｉ）Ｈｅｐ−２細胞培養におけるＲＳＶの複製速度がｉｎ  ｖｉｖｏでの状況を完全には反映していない場合があり、（ｉｉ）広い各種の臨床株の感染性及び複製速度が相当変動する場合があり、（ｉｉｉ）多数（ｎ＝６）の臨床ウイルス株が本発明のポリペプチドの阻害活性に対してその感受性を評価されたが、それらは、完全な範囲の臨床株を表わしていない場合があるためである。
【０１６８】
得られた値（９マイクログラム/mL以上）を、下気道においてＲＳＶ感染の臨床的に意義のある低下をもたらすのに必要であろう本発明のポリペプチドのターゲット濃度と考えた。この濃度は、ＲＳＶ感染幼児におけるピークウイルス力価に利用可能な全てのターゲットを完全に満足するのに十分になるように算出され、ＲＳＶ感染新生児仔羊及びコットンラットにおける非臨床試験での有効性を示した局所ターゲット濃度によっても支持される。したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に本発明のポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、９マイクログラム/mL（ここで、この値は、±０．５マイクログラム/mLの範囲を場合により包含すると理解される）以上のターゲット濃度での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための本発明のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、９マイクログラム/mL（ここで、この値は、±０．５マイクログラム/mLの範囲を場合により包含すると理解される）以上のターゲット濃度での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。
【０１６９】
本発明において、小児モデルを、適切な投与計画についてのガイダンスを提供し、本発明のポリペプチドのための局所及び全身ＰＫ指数及びその関連する変異性を予測するために開発した（図１を参照のこと）。主な目的は、成長及び発達プロセス、例えば、臓器成熟、血流の変化、体組成、及び除去機構の個体発生を考慮して、下気道における推定ターゲット濃度（９μg/mL）を上回る濃度値（Ｃｔｒｏｕｇｈ）を確実にすることであった。小児モデルを、最初に非臨床データを使用し、その後に、成人における本発明のポリペプチドの予測及び測定臨床ＰＫパラメータを使用し、その後に、（ｉ）解剖学的及び生理学的パラメータ、（ｉｉ）クリアランスプロセス及び（ｉｉｉ）吸収プロセスを拡張することにより小児に外挿する、多段階拡張により開発した。
【０１７０】
開発された小児モデルは、処置期間全体を通して９５％の個体において、推定ターゲット濃度以上の局所濃度に達し、同濃度を維持するのに必要な用量を推定するのに使用された。この小児モデルによるシミュレーションに基づいて、１回の投与後の下気道に存在するのに必要であろう堆積用量は、体重１kg当たりに０．０２４mg 本発明のポリペプチドであった。したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に本発明のポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、より具体的には、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg（ここで、この値は、±０．００２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の堆積用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための本発明のポリペプチドであり、該ポリペプチドは、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、より具体的には、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg（ここで、この値は、±０．００２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の堆積用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。
【０１７１】
更なるシミュレーションから、ＲＳＶ感染幼児及び歩き始めの幼児に代表的な呼吸パターンにより、下気道における本発明のポリペプチドの吸入量の約１０％（年齢及び粒径に応じて７〜１３％）の堆積がもたらされることが示された。それに対応して、０．２４mg/kgの用量が、１回の投与後に下気道において０．００２４mg/kgの堆積用量を達成するように吸入される必要があるであろう（吸入用量）。したがって、また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に本発明のポリペプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、より具体的には、１日０．２０〜０．３５又は０．２０〜０．４５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg（ここで、この値は、±０．０２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の吸入用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための本発明のポリペプチドであり、該ポリペプチドは、１日０．２０〜０．４０mg/kg、より具体的には、１日０．２０〜０．４５又は０．２０〜０．４５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg（ここで、この値は、±０．０２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の吸入用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。
【０１７２】
エアロゾル堆積についての研究を、the Sophia anatomical infant nose-throat（SAINT）モデル（Janssens et al. 2001, Journal of aerosol medicine : the official journal of the International Society for Aerosols in Medicine 14: 433-41）で行った。同研究において、該ポリペプチドは、振動型メッシュ式ネブライザ、より具体的には、付加空気又はＯ２の２L/分の定流を有する振動型メッシュ式ネブライザ、例えば、FOX-Flamingo振動型メッシュ式ネブライザ（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）等により投与された。この結果により、ネブライザ内に充填された総用量から、約２０％が吸入されると予測されることが示された。したがって、０．２４mg/kgの吸入用量を確実にするためにネブライザに充填される名目用量は、１．２mg/kgであろう。したがって、また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に本発明のポリぺプチドを投与することを含み、ここで、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、より具体的には、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の名目用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための本発明のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、より具体的には、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の名目用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、ポリペプチドに関する。
【０１７３】
一態様において、該ポリペプチドは、２〜５日間連続で毎日、又は、例えば、２日間連続、３日間連続、４日間連続、５日間連続、又は好ましくは、３日間連続で毎日投与される。
【０１７４】
上記投与計画は、本明細書において、「選択投与計画」又は「選択投与」とも呼ばれる。
【０１７５】
好ましい態様では、上記本発明の方法に使用される本発明のポリペプチドは、配列番号：７１である。
【０１７６】
したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に配列番号：７１を投与することを含み、ここで、配列番号：７１は、９マイクログラム/mL（ここで、この値は、±０．５マイクログラム/mLの範囲を場合により包含すると理解される）以上のターゲット濃度での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための配列番号：７１であり、ここで、配列番号：７１は、９マイクログラム/mL（ここで、この値は、±０．５マイクログラム/mLの範囲を場合により包含すると理解される）以上のターゲット濃度での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、配列番号：７１に関する。
【０１７７】
したがって、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に配列番号：７１を投与することを含み、ここで、配列番号：７１は、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、より具体的には、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg（ここで、この値は、±０．００２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の堆積用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための配列番号：７１であり、ここで、配列番号：７１は、１日０．０２０〜０．０４０mg/kg、より具体的には、１日０．０２０〜０．０３５mg/kg、例えば、１日０．０２４mg/kg（ここで、この値は、±０．００２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の堆積用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、配列番号：７１に関する。
【０１７８】
したがって、また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に配列番号：７１を投与することを含み、ここで、配列番号：７１は、１日０．２０〜０．４０mg/kg、より具体的には、１日０．２０〜０．３５又は０．２０〜０．４５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg（ここで、この値は、±０．０２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の吸入用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための配列番号：７１であり、ここで、配列番号：７１は、１日０．２０〜０．４０mg/kg、より具体的には、１日０．２０〜０．３５又は０．２０〜０．４５mg/kg、例えば、１日０．２４mg/kg（ここで、この値は、±０．０２mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の吸入用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、配列番号：７１に関する。
【０１７９】
したがって、また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に配列番号：７１を投与することを含み、ここで、配列番号：７１は、１日１．００〜２．００mg/kg、より具体的には、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の名目用量での吸入により小児に投与される、方法に関する。また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染の処置における使用のための配列番号：７１であり、配列番号：７１は、１日１．００〜２．００mg/kg、より具体的には、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の名目用量での吸入によりＲＳＶ感染を患う小児に投与される、配列番号：７１に関する。
【０１８０】
一態様において、配列番号：７１を有するポリペプチドは、２〜５日間連続で毎日、又は、例えば、２日間連続、３日間連続、４日間連続、５日間連続、又は、例えば、３日間連続等で毎日投与される。
【０１８１】
医薬組成物及び製剤、
本発明は、更に、特定濃度での本発明のポリペプチドと、場合により、それ自体公知のこのような組成物の１つ以上の更なる成分とを含む組成物（本明細書において、「本発明の組成物」又は「本発明の製剤」とも呼ばれる）に関する。一般的には、医薬用途のために、本発明のポリペプチドは、特定濃度での本発明のポリペプチドと、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、希釈剤又は賦形剤及び／又は補助材と、場合により、１つ以上の更なる薬学上有効成分とを含む、製剤又は組成物（「本発明の医薬組成物」又は「本発明の医薬製剤」とも呼ばれる）として配合することができる。
【０１８２】
本発明のポリペプチドは、それ自体公知の任意の適切な様式で配合し、投与することができる。これについては、例えば、標準的な参考書、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences 1990（18th Ed., Mack Publishing Company, USA）、Remington 2005（the Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams and Wilkins）又はthe Handbook of Therapeutic Antibodies (S. Dubel, Ed.), Wiley, Weinheim, 2007（例えば、第２５２〜２５５頁を参照のこと）に参照がなされる。
【０１８３】
本発明のポリペプチド及び／又はそれを含む組成物が吸入により（すなわち、気道に）投与される場合、該製剤は、好ましくは、吸入による投与に適した形態である。この観点において、医薬組成物は、本発明のポリペプチドと、吸入による対象への投与に適した少なくとも１つの担体、希釈剤又は賦形剤と、場合により、１つ以上の更なる有効成分とを含むであろう。
【０１８４】
本明細書で使用する場合、「賦形剤」という用語は、製剤に対して有益な物性、例えば、向上したタンパク質安定性、向上したタンパク質溶解性及び／又は低下した粘度を付与する、薬剤用の希釈剤、媒体、保存剤、バインダー又は安定剤として一般的に使用される不活性な物質を指す。賦形剤の例は、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン）、界面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリソルベート、例えば、Tween20及びTween80、ポロクサマー、例えば、Pluronics及び他の非イオン性界面活性剤、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ））、糖類（例えば、グルコース、スクロース、マルトース及びトレハロース）、ポリオール（例えば、マンニトール及びソルビトール）、脂肪酸及びリン脂質（例えば、アルキルスルホナート及びカプリラート）を含むが、これらに限定されない。賦形剤に関する更なる情報について、Remington's Pharmaceutical Sciences（by Joseph P. Remington, 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA）を参照のこと。同文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１８５】
本明細書で使用する場合、「吸入による投与に適した担体」という表現は、例えば、気道において薬剤（例えば、予防剤又は治療剤）を運び又は輸送するのに関与する、薬学的に許容し得る材料、組成物又は媒体、例えば、液体又は固体充填材、希釈剤、賦形剤又は溶媒を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に対して傷害性でないという意味で、「許容し得る」必要がある。
【０１８６】
本発明の組成物に含まれる担体は、好ましくは、液状担体、例えば、蒸留水、MilliQ（登録商標）水又は注射用水（ＷＦＩ）である。該組成物は、薬学的に許容し得る任意のバッファーにより緩衝させることができる。本発明の組成物に使用するのに好ましいバッファーは、ＰＢＳ，リン酸バッファー、ＴｒｉｓＨＣｌ、ヒスチジンバッファー及びクエン酸バッファー、例えば、ヒスチジン  ｐＨ６．０〜６．５、リン酸バッファー  ｐＨ７．０、ＴｒｉｓＨＣｌ  ｐＨ７．５及びクエン酸バッファー／リン酸バッファー  ｐＨ６．５、特に、リン酸（ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）バッファー  ｐＨ７．０を含む（が、これらに限定されない）。他の薬学的に許容し得る担体も、本願の製剤に使用することができる。薬学的に許容し得る担体として機能させることができる材料の一部の例は、糖類、例えば、ラクトース、グルコース及びスクロース；グリコール、例えば、ポリエチレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；エステル、例えば、エチルオレアート及びエチルラウラート；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；発熱物質を含まない水；等張性生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；及び医薬製剤に利用される他の非毒性で適合性の物質を含む。
【０１８７】
実施例において証明されたように、５０mg/mLの濃度を、本発明のポリペプチドの肺投与に使用した。したがって、これらの濃度付近の値を有する他の濃度（及びこれらの値の外側、すなわち、これらの値より高い又は低い濃度）も使用することができる。例えば、２５、３０、３５、４０、４５、５５、６０、７０、７５mg/mLの濃度を使用することができる。本発明において決定された特定の名目用量（mg/kg）を考慮して、ネブライザに充填される医薬組成物の容積（充填容積）は、医薬組成物中の本発明のポリペプチドの濃度により決まるであろうことが、当業者に明らかであろう。
【０１８８】
本発明の方法において、ＲＳＶ感染性の臨床的に意義のある低下を確実にするためにネブライザに充填される名目用量は、１日１．００〜２．００mg/kg、より具体的には、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１日１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）と決定された。小児の体重に応じて、ネブライザ内に充填されるべき（本発明のポリペプチドの特定濃度、例えば、５０mg/mLにおいて）医薬組成物の容量は異なるであろう。他の吸入製品に則して、本発明のポリペプチドの投与量（及び、特定濃度で本発明のポリペプチドを含む医薬組成物の充填容積）を（狭い）体重分類について標準化することができる（例えば、５０mg/mLの医薬組成物について、表Ｂ−２及び表Ｂ−６を参照のこと）。
【０１８９】
吸入装置−ネブライザ
また、本発明は、本発明のポリペプチドの吸入による送達に適しており、それを含む組成物の使用に適した、医薬装置に関する。したがって、本発明は、選択された用量で本発明のポリペプチドを含むこのような装置に関する。
【０１９０】
種々の吸入システムは、例えば、レビュー（「Pulmonary Drug Delivery」, Bechtold-Peters and Luessen, eds、上記）における第１２９〜１４８頁に記載されている。本発明の方法において、該装置は、本発明のポリペプチドを含む液体（例えば、微細固体粒子の懸濁液又は液滴）用の吸入器である。好ましくは、この装置は、本発明のポリペプチドを含むエアロゾル送達システム又はネブライザである。
【０１９１】
本発明の方法に使用されるエアロゾル送達システムは、本発明の組成物を含む容器と、それに連結されたエアロゾル発生器とを含むことができる。エアロゾル発生器は、本発明の組成物のエアロゾルを発生させるように構築され、配置される。
【０１９２】
好ましい態様では、エアロゾル送達システムは、ネブライザである。ネブライザは、吸入のための薬剤含有液滴の霧を発生させる。本発明に使用する場合、「霧化」は、液体の微細スプレーへの変換を意味する。ネブライザは、医薬品を圧縮空気と混合して、患者がフェイスマスク又はマウスピースから吸い込む微細な霧を発生させる。
【０１９３】
好ましくは、振動型メッシュ式ネブライザが使用される。振動型メッシュ式ネブライザは、受動的及び能動的振動型メッシュ式装置に分けられる（Newman 2005, J. Appl. Ther. Res. 5: 29-33）。受動的振動型メッシュ式装置（例えば、Omron MICROAIR（登録商標）NE-U22ネブライザ）は、最大６０００ミクロンサイズの孔を有する貫通プレートを利用する。トランスデューサホーンに取り付けられた振動型ピエゾ電気結晶は、その前に位置する貫通プレートにおける「受動的な」振動を誘引し、孔を通る液体の押出し及びエアロゾルの発生をもたらす。能動的振動型メッシュ式装置（例えば、AERONEB（登録商標）Proネブライザ）は、最大１０００個のドーム状開口を有するプレートと電流の適用において後退し、伸長する振動素子とからなるエアロゾル発生器を含む「マイクロポンプ」システムを利用することができる。これにより、数マイクロメートルまでのメッシュの上向き及び下向き移動、流体の押出し並びにエアロゾルの発生がもたらされる。振動型メッシュ式ネブライザの他の例は、Akita2 Apixneb（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）、EFLOW（登録商標）（PARI GmbH, Grafelingen, Germany；ＵＳ第５，５８６，５５０号も参照のこと)、AERONEB（登録商標）（Aerogen, Inc., Sunnyvale, California;ＵＳ第５，５８６，５５０号；同第５，９３８，１１７号；同第６，０１４，９７０号；同第６，０８５，７４０号；同第６，２０５，９９９号も参照のこと)又はFOX-Flamingo振動型メッシュ式ネブライザ（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）を含み、全て小児科用途に適合している。小児科用途に適合する好ましいネブライザは、ＷＯ第２０１６／０５５６５６号に記載されている。
【０１９４】
好ましい態様では、連続流ネブライザが使用される。気管支炎の幼児を考えると、付加酸素又は空気の供給が必要である場合があり、送達システムから２L/分の連続的な酸素又は空気の供給を維持することが推奨される。
【０１９５】
したがって、ネブライザは、付加空気又はＯ２流を有無で使用することができる。好ましくは、ネブライザは、付加空気又はＯ２流、例えば、２L/分の付加空気又はＯ２流で使用される。
【０１９６】
したがって、一態様において、ネブライザは、
（ａ）振動型メッシュ（１０２）を備えるエアロゾル発生器（１０１）と、
（ｂ）噴霧される液体用の貯留部（１０３）であって、該貯留部が振動型メッシュと流体連通している、貯留部と、
（ｃ）ガス流入開口（１０４）と、
（ｄ）
−ケース（１０６）、
−エアロゾル流入開口（１０７）、
−患者との接触面（１０８）及び
−０．５〜５mbarの範囲で選択される呼気抵抗を有する、ケース中に一方向呼気弁又は二方向吸気／呼気弁（１０９）を有する、フェイスマスクと、
（ｅ）ガス流入開口からフェイスマスクのエアロゾル流入開口に伸びる流路（１１０）であって、該流路が、
−エアロゾル発生器が流路内に少なくとも部分的に挿入される側方開口（１１１）、
−ガス流入開口とフェイスマスクのエアロゾル流入開口との間における１〜２０mL/分の流量の定流抵抗を有する、流路とを含むことができる（図３３を参照のこと）。
【０１９７】
一態様において、流路は、側方開口のすぐ上流の位置において２L/分の流量で少なくとも４m/sの平均ガス速度を達成するサイズ及び形状を有する。
【０１９８】
一態様において、側方開口の上流の流路は、ガスが１〜２０L/分の流量で流路を通って導入された場合、層流を達成するように形成されている。
【０１９９】
一態様において、ガス流入開口は、管継手として形成されている。
【０２００】
一態様において、流路は、ガスを受容するための更なる流入開口を示さない。
【０２０１】
一態様において、エアロゾル発生器は、霧化されたエアロゾルを流路内に、流路の長手方向軸に対して約９０°の角度で放出するように方向付けされている。
【０２０２】
一態様において、側方開口とフェイスマスクのエアロゾル流入開口との間の流路の内容積は、３０mL以下である。
【０２０３】
一態様において、吸入装置又はネブライザは、エアロゾル発生器の動作を開始及び停止させるためのスイッチを含み、ここで、エアロゾル発生器の動作は、振動型メッシュの連続的な振動を含む。
【０２０４】
１８か月までの幼児は、鼻呼吸を実質的に必要とするため、マウスピースによる制御された吸入は適しておらず、インターフェースには、種々の年齢に適したフェイスマスクの種類及びサイズに関する特別の注意が必要である場合がある。
【０２０５】
吸入装置又はネブライザのフェイスマスクは、マスクを通した患者による呼気を可能にするように構成することができる。これは、多少小さい呼気抵抗を示す弁により達成することができる。
【０２０６】
好ましくは、フェイスマスクの呼び内容積は、約１２０mL以下である。本明細書で使用する場合、呼び内容積は、患者との接触面が平坦面上に配置されている場合、エアロゾル流入開口から患者との接触面までのケースにより囲まれる内容積と理解される。この容積は、患者の顔に対して配置された場合、マスクにより囲まれる容積であるため、患者の顔のサイズ及び形状により決まる、有効内容積又はいわゆるデッドスペースよりわずかに大きい。患者が小学生である場合、呼び内容積は、患者の顔のサイズに応じて、好ましくは、それぞれ約９０mL以下、又は更に、約８０mL以下又は約７０mL以下又は約６０mL以下又は約５０mL以下又は約４０mL以下である。患者が新生児である場合、約４０又は５０mL以下の呼び内容積を有するマスクを選択するのが一般的に好ましい。
【０２０７】
患者の平均一回呼吸量に対してフェイスマスクの呼び内容積を選択するのが更に好ましい。有利に、マスクの呼び内容積は、一回呼吸量より小さい。例えば、患者が約８０mLの正常な呼吸中の平均一回呼吸量を有する小児患者である場合、フェイスマスクの呼び内容積は、これより小さくあるべきである。特に、各容積は、平均一回呼吸量の約１０％〜約８０％の範囲にあることができる。更なる実施態様では、フェイスマスクの呼び内容積は、患者の平均一回呼吸量の約６０％以下、又は更に、約５０％以下である。
【０２０８】
一実施態様において、フェイスマスクは、いずれの方向にも３mbar以下の抵抗を有する二方向吸気及び呼気弁を有することができ、ここで、フェイスマスクの呼び内容積は、約５０mL以下である。この実施態様は、幼い小児患者、例えば、新生児、幼児及び歩き始めの幼児に特に適している。別の実施態様では、フェイスマスクは、１つ以上の吸気弁と１つ以上の呼気弁とを有することができ、ここで、呼気弁は、３mbar以下の抵抗を有し、ここで、マスクの呼び内容積は、約７０mL以下である。この実施態様は、歩き始めの幼児及び小児に特に適している。
【０２０９】
場合により、フェイスマスクは、更なる吸気及び／又は呼気弁を含むことができる。そのような場合、組み合わせられた弁の有効呼気圧は、特定範囲にも、すなわち、約０．５〜５mbarであるべきである。場合により、また、呼気圧は、それぞれ約０．５mbar〜約３mbar、例えば、約１mbar又は約２mbarからも選択することができる。フェイスマスクに設けられる弁は、この呼気抵抗を提供するのに適した任意の構造、例えば、わずかにのみ言及したスリット弁、ダックビル弁又はメンブラン弁を有することができる。例えば、弁は、交差スリット及び重なったメンブラン、例えば、シリコーンメンブランを有する一方向弁であることができる。一方向において、交差スリットからメンブランに向かって、弁が開き、一方、反対方向において、メンブランは、交差上にきっちり押されるため、弁を塞ぐであろう。弁がフェイスマスク内に挿入されるのに応じて、吸気又は呼気弁の両方として機能することができる。
【０２１０】
吸入装置又はネブライザは、１〜５L/分の範囲での一定の流速でガスを供給するガス供給源に連結させることができる。前記ガス供給源により供給されるガスは、酸素、空気、酸素を豊富に含む空気、酸素と窒素との混合物及びヘリウムと酸素との混合物から選択することができる。
【０２１１】
本発明の方法と共に使用するための例示的な吸入装置又はネブライザは、ＷＯ第２０１６／０５５６５５号に記載されている。同文献は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２１２】
吸入装置又はネブライザには、本発明の医薬組成物が充填される。したがって、また、本発明は、本発明のポリペプチドを含む医薬組成物を含有する吸入装置又はネブライザに関する。好ましい態様では、吸入装置又はネブライザは、配列番号：７１を含む医薬組成物を含有する。上記示されたように、本発明のポリペプチドは、ネブライザ中に任意の適切な濃度、例えば、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５mg/mL、好ましくは、５０mg/mLの濃度で存在させることができる。
【０２１３】
本明細書で記載されたように、ＲＳＶの臨床的に意義のある減少を確実にするために、本発明のポリペプチドは、１日１．００〜２．００mg/kg、好ましくは、１日１．００〜１．７５mg/kg、例えば、１．２０mg/kg（ここで、この値は、±０．０６mg/kgの範囲を場合により包含すると理解される）等の名目用量で投与される。小児の体重に応じて、ネブライザ内に充填されるべき（５０mg/mLの本発明のポリペプチドの濃度での）医薬組成物の容積（「充填容積」とも呼ばれる）は、以下のとおりであろう（表Ｂ−２及び表Ｂ−６も参照のこと）。
【０２１４】
【表１】
2019523213.tif 000002
【０２１５】
上記用量は、本明細書において、「選択投与計画」とも呼ばれる。
【０２１６】
したがって、本発明は、５０mg/mLの本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号：７１の組成物を０．１００〜０．４００mL又は０．１００〜０．５００mL（例えば、０．１００mL、０．１３０mL、０．１５０mL、０．２００mL、０．２５０mL、０．３００mL、０．３５０mL、０．４００mL、０．５００mL）含む、吸入装置又はネブライザに関する。より具体的には、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染等の処置における使用のための、５０mg/mLの本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号：７１の組成物を０．１００〜０．４００mL又は０．１００〜０．５００mL（例えば、０．１００mL、０．１３０mL、０．１５０mL、０．２００mL、０．２５０mL、０．３００mL、０．３５０mL、０．４００mL、０．５００mL）含む、吸入装置又はネブライザに関する。
【０２１７】
また、本発明は、５０mg/mLの本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号：７１の組成物を０．０２５〜０．０３５mL/kg、例えば、０．０２５〜０．０３３mL/kg（例えば、０．０２５mL/kg、０．０２６mL/kg、０．０２７mL/kg、０．０２８mL/kg、０．０２９mL/kg、０．０３０mL/kg、０．０３１mL/kg、０．０３２mL/kg）含む、吸入装置又はネブライザに関する。より具体的には、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染等の処置における使用のための、５０mg/mLの本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号：７１の組成物を０．１００〜０．４００mL又は０．１００〜０．５００mL（例えば、０．１００mL、０．１３０mL、０．１５０mL、０．２００mL、０．２５０mL、０．３００mL、０．３５０mL、０．４００mL、０．５００mL）含む、吸入装置又はネブライザに関する。
【０２１８】
一態様において、小児の齢は、５か月未満である。
【０２１９】
一態様において、小児の齢は、２４か月未満である。
【０２２０】
一態様において、小児の齢は、３６か月（３歳）未満である。
【０２２１】
一態様において、小児の齢は、２８日〜５か月未満である。
【０２２２】
一態様において、小児の齢は、２８日〜２４か月未満である。
【０２２３】
一態様において、小児の齢は、１か月〜２４か月未満である。
【０２２４】
一態様において、小児の齢は、３か月〜２４か月未満である。
【０２２５】
一態様において、小児の齢は、５か月〜２４か月未満である。
【０２２６】
一態様において、小児の齢は、２８日〜３６か月（３歳）未満である。
【０２２７】
一態様において、小児の齢は、１か月〜３６か月（３歳）未満である。
【０２２８】
一態様において、小児の齢は、３か月〜３６か月（３歳）未満である。
【０２２９】
一態様において、小児の齢は、５か月〜３６か月（３歳）未満である。
【０２３０】
一態様において、小児は、幼児である。
【０２３１】
一態様において、小児は、歩き始めの幼児である。
【０２３２】
一態様において、小児は、ＲＳＶ下気道感染と診断されているが、他の点で健康である。
【０２３３】
一態様において、小児は、ＲＳＶ下気道感染で入院している。
【０２３４】
更なる治療剤
本発明のポリペプチドは、単剤療法として又は、ＲＳＶ感染の処置に使用されもしくは使用することができ、その結果として、相乗効果が得られても又は得られてなくてもよい、他の薬学上有効な化合物又は原理との組み合わせで投与することができる。このような化合物及び原理並びにそれらを投与するための経路、方法及び医薬製剤又は組成物の例は、臨床医に明らかであろう。
【０２３５】
２つ以上の物質又は原理が組み合わせ処置計画の一部として使用される場合、それらは、同じ投与経路又は異なる投与経路を介して、本質的に同じ時点又は異なる時点で（例えば、本質的に同時、連続的又は交互の計画に従って）投与することができる。当該物質又は原理が、同じ投与経路を介して同時に投与される場合、それらは、当業者に明らかであろうように、異なる医薬製剤もしくは組成物又は組み合わせ医薬製剤もしくは組成物の一部として投与することができる。
【０２３６】
また、２つ以上の活性物質又は原理が組み合わせ処置計画の一部として使用される場合、当該物質又は原理はそれぞれ、当該化合物又は原理がそれ自体で使用される場合で使用されるのと同じ量でかつ同じ計画に従って投与することができ、このような組み合わせ使用により、相乗効果がもたらされてもよいし又はもたらされなくてもよい。ただし、２つ以上の活性物質又は原理の組み合わせ使用が、相乗効果をもたらす場合、投与される１つ以上又は全ての物質又は原理の量を減らすことができる可能性もある一方で、所望の治療活性を達成することもできる。これは、例えば、それらがその通常量で使用された場合に、１つ以上の物質又は原理の使用に関連する任意の望ましくない副作用を避け、制限し、又は減少させるのに有用である可能性がある一方で、所望の薬学的効果又は治療効果を得ることもできる。
【０２３７】
また、本発明は、ｈＲＳＶに結合し、中和する本発明のポリペプチドの肺投与のための方法及び投与計画であって、該ポリペプチドは、少なくとも１つの更なる治療剤との組み合わせで投与される、方法及び投与計画も提供する。
【０２３８】
限定されないが、更なる治療剤は、ＲＳＶ感染、例えば、ＲＳＶ下気道感染で入院中の標準治療から選択することができ、気管支拡張剤、抗生物質（例えば、入院中の二次細菌感染［複合感染］の場合）、エピネフリン、抗コリン薬、解熱剤及び／又は非ステロイド系抗炎症剤を含む（が、これらに限定されない）。
【０２３９】
一態様において、本発明のポリペプチドは、気管支拡張剤との組み合わせで投与される。したがって、また、本発明は、小児におけるＲＳＶ感染の処置のための方法であって、ＲＳＶ感染を患う小児に、本発明のポリペプチドを投与することを含み、該ポリペプチドは、気管支拡張剤との組み合わせでの選択投与計画での吸入により小児に投与される、方法に関する。本発明の方法において、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、気道に（すなわち、吸入により）組み合わせ治療（キットの部品）として投与される。この方法において、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、組み合わせ処置計画の一部として使用される。より具体的には、この組み合わせ療法の両部分は、気道に（すなわち、吸入により）、同時、別々又は連続的に投与される。
【０２４０】
２つの主な分類の気管支拡張剤、すなわち、短時間作用性及び持続性ベータ２−模倣物を含む交感神経作動薬及び抗コリン薬が存在する。短時間作用性模倣物は、サルブタモール、テルブタリン、フェノテロール、ピルブテロール及びツロブテロールを含む（が、これらに限定されない）。それらは、塩基又は許容し得る薬学的塩として使用することができる。持続性ベータ２−模倣物は、フォルモテロール及びサルメテロールを含む（が、これらに限定されない）。それらも、塩基又は許容し得る薬学的塩として使用することができる。抗コリン薬は、イプラトロピウム、オキシトロピウム及びチオトロピウムを含む（が、これらに限定されない）。
【０２４１】
限定されず、本発明の方法に使用するための更なる気管支拡張剤は、Accu Hale、アルブテロール、ビトルテロール、エフェドリン、エピネフリン、イソエタリン、イソプロテレノール、メタプロテレノール、ピルブテロール、ラセピネフリン、リトドリン、テルブタリン、レボサブタモール、レバブテロール、クレンブテロール、アンフェタミン、メタンフェタミン、コカイン、テオフィリン、カフェイン、テオブロミン、ＴＨＣ及びＭＤＰＶを含む。
【０２４２】
作用の非常に長い持続性を有する気管支拡張剤分類の分子は、１日１回のみで投与されるべきであろう（例えば、チオトロピウム）。フォルモテロール及びサルメテロール等の持続性ベータ２模倣物は、通常、１日２回投与される。最後に、１日４〜６回投与すべき、短時間作用性気管支拡張剤、例えば、サルブタモール、テルブタリン、イプラトロピウム又はオキシトロピウムが存在する。このような情報に基づいて、処置計画は、組み合わせ療法の最適な利点を得るために設計することができる。処置計画は、本発明のポリペプチドと気管支拡張剤との同時、別々又は連続的な投与を包含することができる。組み合わせ療法（キットの部品）の投与に最も一般的な装置は、ネブライザ、測量用量吸入器（ＭＤＩ）及びこれらの組み合わせである。
【０２４３】
一態様において、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は同時に投与される。この実施態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、吸入可能な形態で混合された状態で投与される。限定されないが、本発明のポリペプチドと気管支拡張剤との吸入可能な形態は、両方とも、好ましくは、（本発明の）同じ組成物に存在する本発明のポリペプチドと気管支拡張剤とを同時に（例えば、ネブライザにより）霧化することで得られるエアロゾルであることができる。
【０２４４】
別の態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は別々に投与される。この実施態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、別々の吸入可能な形態で投与される。限定されないが、本発明のポリペプチド及び／又は気管支拡張剤の別々の吸入可能な形態は、（本発明の）組成物に別々に存在する、本発明のポリペプチド又は気管支拡張剤を（例えば、ネブライザにより）霧化することで得られるエアロゾルであることができる。代替的に、本発明のポリペプチド及び／又は気管支拡張剤の別々の吸入可能な形態は、本発明のポリペプチドを（例えば、ネブライザにより）霧化することで得られるエアロゾルと、揮発性噴霧剤に溶解又は懸濁された気管支拡張剤を（例えば、測量用量吸入器（ＭＤＩにより）液滴に分散させ、続けて、これらの液滴を急速に蒸発させることで得られる別個のエアロゾルとであることができる。なお、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、２つの異なる（種類の）吸入器により投与され、それぞれの吸入器は、別個の吸入形態を発生させる。限定されないが、下記組み合わせを提案することができる。
−ＭＤＩによる気管支拡張剤の吸入及びネブライザによる本発明のポリペプチドの吸入；
−ネブライザによる気管支拡張剤の吸入及びネブライザによる本発明のポリペプチドの吸入
【０２４５】
別の態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は連続的に投与される。この実施態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、別々かつ連続的に吸入可能な形態において投与される。限定されないが、本発明のポリペプチド及び／又は気管支拡張剤の吸入可能な形態は、（本発明の）組成物に別々に存在する、本発明のポリペプチド又は気管支拡張剤を（例えば、ネブライザにより）霧化することで得られるエアロゾルであることができる。代替的に、本発明のポリペプチド及び／又は気管支拡張剤の別々の吸入可能な形態は、本発明のポリペプチドを（例えば、ネブライザにより）霧化することで得られるエアロゾルと、揮発性噴霧剤に溶解又は懸濁された気管支拡張剤を（例えば、測量用量吸入器（ＭＤＩ）により）液滴に分散させ、続けて、これらの液滴を急速に蒸発させることで得られた別個のエアロゾルとであることができる。組み合わせ療法のこの連続的な投与のために、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、２つの別々で連続的な吸入可能な形態を発生させることができるように、吸入装置に別々に充填される２種類の（別々の）本発明の組成物に存在すべきである。この実施態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、２つの異なる（種類の）吸入器により投与することができる。ただし、2つの異なる吸入器の使用は、幾つかの装置（例えば、ネブライザ等）を必ずしも必要とせず、別々の組成物を連続的に充填することができる。限定されないが、下記組み合わせを提案することができる。
−ＭＤＩによる気管支拡張剤の吸入、続けて、ネブライザによる本発明のポリペプチドの吸入；
−ネブライザによる気管支拡張剤の吸入、続けて、ネブライザ（同じ又は異なることができる）による本発明のポリペプチドの吸入；
−ネブライザによる本発明のポリペプチドの吸入、続けて、ＭＤＩによる気管支拡張剤の吸入；
−ネブライザによる本発明のポリペプチドの吸入、続けて、ネブライザ（同じ又は異なることができる）による気管支拡張剤の吸入
【０２４６】
本発明のポリペプチドと気管支拡張剤との連続的な投与に好ましい間隔は、（上記されたように）使用される本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤により決まるであろうし、５分〜２４時間以上、例えば、５分、１０分、１５分、２０分、３０分、１時間、４時間、６時間、８時間、１２時間等を含むことができる。
【０２４７】
好ましい態様では、気管支拡張剤は、短時間作用性ベータ２アゴニスト、例えば、サルブタモール等である。
【０２４８】
好ましい態様では、気管支拡張剤、例えば、短時間作用性ベータ２アゴニストは、ネブライザによる本発明のポリペプチドの投与前に、ＭＤＩにより投与される。例えば、気管支拡張剤である短時間作用性ベータ２アゴニストは、本発明のポリペプチドの投与前１０〜１５分で投与することができる。例えば、短時間作用性ベータ２アゴニスト、例えば、サルブタモールは、本発明のポリペプチドの投与前１５分で、２００マイクログラム（例えば、１００マイクログラムを２吹き）の用量で小児に投与される。
【０２４９】
別の好ましい態様では、気管支拡張剤は、ネブライザによる本発明のポリペプチドの投与前に、ネブライザにより投与される。この好ましい態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、同じネブライザにより（すなわち、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤はそれぞれ、ネブライザ内に連続的に充填される別々の組成物で存在することができる）又は２つの異なるネブライザにより投与することができる。
【０２５０】
別の好ましい態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、ネブライザにより同時に投与される。この好ましい態様では、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、好ましくは、ネブライザ内に充填された１つの本発明の組成物に存在する。他には、本発明のポリペプチド及び気管支拡張剤は、両方ともネブライザに充填された２つの異なる本発明の組成物に存在する。
【実施例】
【０２５１】
実施例１：小児集団における用量決定のためのモデル開発
疾患を患う小児のための生理学に基づく薬物動態（ＰＢＰＫ）モデルを、前臨床データ並びに予測及び測定臨床データ（表Ｂ−１）を使用する多段階拡張アプローチにおいて開発した（図３、実施例３〜１１）。
【０２５２】
用量選択は、有効性を達成するために、典型的なｉｎ  ｖｉｔｒｏマイクロ中和アッセイから生成された複数のＩＣ９０値に基づいた。マイクロ中和アッセイにおいて決定された場合、少なくとも感受性のプロトタイプＲＳＶ  Ｂ  １８５３７株に対する配列番号：７１の平均ＩＣ９０値は、約９０ng/mLであった（ｎ＝２０）。ＲＳＶ臨床単離感受性における可能性のある差異を考慮するために、このＩＣ９０を１００倍上回る値（９μg/mL）をターゲット濃度とした。
【０２５３】
ターゲット（ＲＳＶ  Ｆタンパク質）はヒトにおいて発現されず、成人から小児に有効性を外挿する可能性は存在しないため、用量決定は、モデリングアプローチにのみ基づくことができる。本アプローチにおいて、小児の解剖学及び生理学、成長及び発達プロセス、例えば、臓器成熟、血流の変化、体組成、及び除去機構の個体発生（呼吸器系の変化を含む）を考慮して、モデルを開発した（図１及び以下の更なる詳細な説明を参照のこと）。
【０２５４】
ＰＢＰＫモデリング（Barrett et al. 2012, Clin. Pharmacol. Ther. 92: 40-9；Khalil and Laer 2011, J. Biomed. Biotechnol. Epub 2011 Jun 1）を小児と成人の薬理学を橋渡しするのに使用した。これを成人についての吸入ＰＢＰＫモデルを確立することにより行った。ついで、同モデルを小児に拡張した。ＰＢＰＫモデルをソフトウェアPK-Sim（登録商標）（Bayer Technology Services, Leverkusen, Germany；www.pk-sim.com、ＰＢＰＫモデル構築についてはバージョン５．１．３、集団シミュレーションについてはバージョン５．２．２及び５．３．２）を使用して構築した。PK-Sim（登録商標）は、実験動物及びヒトにおける薬剤のＰＢＰＫモデリングのための市販ツールである。PK-Sim（登録商標）は、タンパク質治療剤及び高分子のための遺伝的ＰＢＰＫモデルを含む（図２）。PK-Sim（登録商標）に実装された遺伝的ＰＢＰＫモデル構造についての詳細な説明については、Willmann et al.（2007, J. Pharmacokinet. Pharmacodyn. 34: 401-431；2005, 1: 159-168；2003, Biosilico 1: 121-124）を参照のこと。このモデルを、静脈内（ＩＶ）投与のためのＰＢＰＫモデル及び肺投与のためのベースモデルを構築するのに使用した。
【０２５５】
肺胞空間からの吸収を説明するために、肺胞被膜流体（ＡＬＦ）を表わす更なる区画をPK-Sim（登録商標）からエクスポートされた標準的な全身ＰＢＰＫモデルの肺に挿入した（図２）。肺胞被膜流体は、吸入後に肺胞空間に堆積された用量を含有する。異なる種についてのＡＬＦ区画の容積を肺胞表面積及び肺胞被膜流体の厚みについての文献値から算出した（Tschumperlin and Margulies 1999, J. Appl. Physiol., 86: 2026-33；Patton 1996, Advanced Drug Delivery Reviews 19: 3-36；Bastacky et al. 1995, J. Appl. Physiol. 79: 1615-28）。ＡＬＦ区画の容積を吸入された水分の素早い再吸収のためにエアロゾルの吸入後に一定であると仮定した。
【０２５６】
また、肺胞空間を肺組織（間質）に繋ぐ拡散交換経路を当該モデルに挿入した。拡散速度を下記一次元方程式により算出した。
ｄＮ／ｄｔ＝Ｐａｌｖ＊Ａａｌｖ＊（Ｃａｌｆ−Ｃｉｎｔ）
ここで、
Ｎ：薬剤量
Ｐａｌｖ：肺胞透過性（上皮細胞障壁）。パラメータ値をラットにおける吸入後の血漿濃度−時間プロファイルに当て嵌めた。
Ａａｌｖ：文献からの肺胞表面積
Ｃａｌｆ：ＡＬＦにおける薬剤濃度
Ｃｉｎｔ：肺間質における薬剤濃度
【０２５７】
吸入後に、エアロゾル粒子は、気道の種々の領域に堆積される。配列番号：７１の吸入後に下気道に堆積された割合を推定するために、異なる小児齢群についてのエアロゾル堆積をＰＢＰＫモデルである多経路粒子用量決定モデル（ＭＰＰＤ）Ｖ２．１１（２００２〜２００９、詳細な説明は、http://www.ara.com/products/mppd.htmに見出すことができる）に組み込まれた専用ツールを使用して拡張した。ＭＰＰＤモデルは、the National Institute of Public Health and the Environment (RIVM), The Netherlands及びthe Ministry of Housing, Spatial Planning and the Environment, The Netherlandsとの協同において、Applied Research Associates, Inc.及びThe Hamner Institutes for Health Sciences, USAにより開発された。同モデルにより、異なる小児齢群及び異なるサイズの粒子についての頭部、気道内及び肺胞領域における平均局所堆積及び気道発生当たりの平均堆積の説明が可能となる。全体として、局所堆積は、肺の形態（年齢別）、粒子特性（サイズ及び密度分布）及び呼吸パターン（頻度、容積）により決まる。また、ＭＰＰＤツールは、種々のサイズの粒子についての、成人及び小児（齢：３、２１、２３及び２８か月、３、８、９、１４及び１８歳）の気道におけるエアロゾルの堆積を算出する。堆積は、気道又は気道分岐内の拡散、沈降及び衝突により堆積のための論理的に得られる効率を使用して算出される。頭部によるエアロゾルのろ過は、経験上の効率関数を使用して決定される。
【０２５８】
実施例２：新生児仔羊ＲＳＶ感染モデルにおける配列番号：７１  Nanobodyのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
新生児仔羊ＲＳＶ感染モデルを吸入による送達後の配列番号：７１のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性を評価するのに使用した。全体として、３回の独立した有効性研究を行った。簡潔に、２〜５日齢の初乳無摂取仔羊に、PARI LC SPRINT（商標）ネブライザ（PARI Respiratory Equipment, Inc., Lancaster, PA, USA）を使用する霧化によりＲＳＶを０日目に感染させた。３回のウイルス含有媒体又は対照媒体の２mLのアリコートを各動物に、４L/分、１６psi（Philips Respironics Air Compressor, Andover, MA, USA）において、２３分の経過にわたって投与し、各仔羊に約６mLの総吸入をもたらした。同一のウイルス摂取用量を各仔羊に使用した（２０％w/v スクロースを含む媒体中の１．２７×１０７FFU/mLでのｈＲＳＶ  Ｍｅｍｐｈｉｓ３７株）。配列番号：７１処置を注射後１日目（１回の研究において）又は３日目（２回の研究において）のいずれかで開始し、注射後５日目まで毎日繰り返した。振動型メッシュ系AERONEB（登録商標）Soloシステム（Aerogen Ltd, Galway, Ireland）を使用して、霧化による投与を行った。全体として、３つの用量レベルを試験し、１１mg（低用量）、３６mg（中用量）及び１１０mg（高用量）送達配列番号：７１用量に相当した。
【０２５９】
全体的な健康及び呼吸速度、心拍数、体温、血液酸素飽和、体重、喘鳴及び呼出努力について、仔羊を毎日モニタリングし、これらを記録した。呼吸組織及び気管肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を、ウイルス病変、肺ウイルス力価、ウイルス抗原及び肺病理組織学の定量のために、接種後６日目に収集した。全ての評価を表Ｂ−３及びＢ−４に記載されたように行った。
【０２６０】
ＲＳＶ感染媒体処置仔羊において、ウイルスＲＮＡ及び培養性ウイルスの両方が、行われた全ての研究についての６日目における全ての肺葉に一貫して存在した（表Ｂ−５）。加えて、総肺試験から、気管支／肺胞におけるウイルス抗原発現及び組織学的肺野陰影（図２９及び３０）と平行した全ての肺葉の約１２〜４０％に関与する広いウイルス病変が証明された。感染後３〜４日目に、感染の最初の臨床兆候を検出した。同兆候には、上昇した呼吸速度及び呼出努力、喘鳴及び不調を含まれたが、これらの症候は、研究間で変動した。
【０２６１】
配列番号：７１により処置された群において、３種類の用量を仔羊に投与した。各用量レベルにより、処置開始の日に関わらず、ウイルス力価（表Ｂ−５）、ウイルス抗原発現（図２９）、総ウイルス病変及び病理組織学的スコア（図３０）が強力に低下した。更に、臨床症候が異なる方法において表れたが、集成臨床スコアにおけるポジティブな効果が、全ての試験用量について観察された（図３１）。
【０２６２】
組み合わせられた全ての動物からの肺上皮被膜流体における配列番号：７１の平均濃度は、全ての用量について、９μg/mLに近いか、又は、９μg/mLを上回った（図３２）。ＲＳＶ−Ｂプロトタイプ株（１８５３７）を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイから、この９μg/mLを肺におけるターゲット濃度（ＩＣ９０×１００）として定義した。Ｍｅｍｐｈｉｓ３７株ついてのデータから、ＲＳＶ  Ｂ  １８５３７より約６倍感受性であったことを示された。
【０２６３】
まとめると、配列番号：７１の処置は、新生児仔羊に３又は５日間毎日送達された場合、ＲＳＶ感染誘引変化に有益な効果を発揮した。用量依存性は明らかでなかった。このことから、ターゲット組織（ＥＬＦ）において達成された濃度が、全ての用量において、９μg/mLのターゲット濃度であるか又は同ターゲット濃度を上回ったと予期するものであった。このターゲット濃度は、集成臨床スコアにおけるポジティブな効果により証明された（図３１）、仔羊における完全な有効性を伝えた。
【０２６４】
実施例３：ＰＢＰＫモデル評価：ＰＢＰＫ  ＩＶモデル
ＰＢＰＫ  ＩＶモデルを下記情報：ｉ）配列番号：７１の物理化学特性における化合物固有情報、ｉｉ）ラットにおける初期ＰＫ研究（表Ｂ−１；研究１）からのデータ、ｉｉｉ）ラットにおける毒性研究（表Ｂ−１：研究２）からのデータ及びｉｖ）ＩＶ投与後のイヌにおける心血管安全性薬理研究（表Ｂ−１：研究３）からのデータを使用して確立した。この最初のレベルのモデル構築（ＩＶモデル）において、分布及びクリアランスプロセスを考慮した。
【０２６５】
２つのパラメータ、配列番号：７１の流体力学半径及び腎クリアランス（ＣＬ）を、実験血漿濃度プロファイルを当て嵌めることにより推定した（図６Ａ及びＢ）。得られた配列番号：７１の流体力学半径は、３．５nmの予測実験値より小さい２nmであった。２nmの半径は、三価ポリペプチドの一価ユニットの半径に一致する。このため、パラメータ特定後に得られた小さい薬剤半径は、ポリペプチドの可撓性により説明することができる。ラットにおいて、最良の結果を５８％の糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）の腎ＣＬにより得た。
【０２６６】
実施例４：ＰＢＰＫモデル評価：ラットにおける肺送達
吸収プロセスを説明するために、肺送達を第２のレベルのモデル構築にモデリングした。実施例３に記載された２nmの流体力学薬剤半径及び５８％のＧＦＲの腎クリアランスを使用するＩＶ適用のためのモデルを、実施例１に記載された肺区画の追加により肺吸収に拡張した。このパートを、ラットにおいて行われた単回投与（表Ｂ−１：研究１）及び繰返し投与の毒性研究（表Ｂ−１：研究４）からの実験血漿濃度−時間プロファイル及び肺における局所薬剤量に基づいて確立した。
【０２６７】
肺胞透過性及び肺胞吸収空間に堆積された用量割合をラットにおける肺投与後の実験血漿濃度−時間プロファイル（表Ｂ−１：研究１）に一致するように当て嵌めた（図７）。実験データに、４．５８Ｅ−９cm/分の肺胞透過性Ｐａｌｖ及び０．３７％の肺胞空間に堆積された用量割合を得るシミュレーション曲線に十分一致した。
【０２６８】
同じモデルを気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）において実験的に見出された量（図８）に対する、ＡＬＦ吸収区画における配列番号：７１のシミュレーション量を比較するのに使用した。全ての用量について、配列番号：７１の算出量は、実験値と一致した。ここで、シミュレーション半減期は、観察された半減期よりわずかにのみ大きかった。
【０２６９】
繰返し投与研究（表Ｂ−１：研究４）のシミュレーションのために、肺胞透過性について、上記単回投与研究（４．５８Ｅ−９cm/分）についてと同じ値を使用した。１４日間の１日１回での肺適用後の配列番号：７１の血漿濃度曲線のシミュレーションにより、肺胞吸収空間に堆積された用量の割合の調節後に１日目及び１４日目（図９）における実験データとの優れた一致を得た。以前の研究とは対照的に、堆積された用量割合についての異なる値には、合理的な当嵌めを得るために仮定する必要があった（１５mg/kgについて１．８％、５０mg/kgについて０．９３％及び１５０mg/kgについて０．４７％）。より高い用量によるより小さい肺胞堆積の傾向から、種々の用量群についての種々の血漿ＰＫ曲線を説明することができる。
【０２７０】
図９におけるのと同じモデルを使用するＡＬＦ吸収区画におけるシミュレーション量を、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）に実験的に見出された量（図１０）と比較した。シミュレーション曲線は、実験量から強力に（一桁の大きさで）逸脱した。ＢＡＬＦにおける実験量が気道全体からの寄与を含有し、一方で、シミュレーション量は、肺胞吸収空間における量のみを指すため、この不一致は、ＢＡＬＦデータにおける気管／気管支からの寄与により説明することができる。実験とシミュレーションとの間の逸脱は、研究１におけるより非常に大きかった。これは、可能性として異なるＢＡＬＦ採取プロセス（研究４における気道を含む肺全体、研究１における右肺）のために、研究４におけるより大きい薬剤回収により説明することができる。実験ＢＡＬＦデータの蓄積／半減期は、シミュレーションにより十分説明され、血漿における蓄積／半減期に類似した。
【０２７１】
実施例５：ＰＢＰＫモデル評価：健康なヒト成人における肺投与
５．１  最初の臨床試験（表Ｂ−１：研究５）
配列番号：７１の吸入の安全性、許容性及びＰＫを、健康な男性ボランティアでの第Ｉ相試験（表Ｂ−１：研究５）において最初に評価した。第Ｉ相試験には、４４名の対象における１回の上昇する投与パートが含まれた。同投与において、２．１mg〜２１０mgの範囲の６つの用量レベルを試験した。続けて、複数回の投与パートを１６名の健康な男性で開始した。同パートにおいて、対象に、配列番号：７１を１日２回７０mg（１日１４０mg）及び１０５mg（１日２１０mg）用量で５日間受けさせた。
【０２７２】
５．２  モデル評価
ラットにおけるＰＢＰＫモデルを、ヒトPK-Sim（登録商標）データベースからの生理学的パラメータ、例えば、臓器容積、臓器中の血液及びリンパ液を適合させることによりヒトに拡張した。配列番号：７１の流体力学半径及び腎ＣＬをラットにおける以前の全ての算出と同様に、２nm及び５８％のＧＦＲに設定した。肺胞吸収をラットにおけるのと同じメカニズムにより説明した。ＡＬＦの厚み及び肺胞透過性はラットについてと同じであると仮定した。一方、肺胞表面積を１０２．２ｍ２に調整した（Patton 1996, Advanced Drug Delivery Reviews 19: 3-36）。
【０２７３】
ヒトにおけるこの最初の臨床試験（表Ｂ−１：研究５）からのヒト血漿ＰＫデータをモデル及び拡張の論理的根拠を評価するのに使用した。肺胞空間に堆積された割合を実験データに当て嵌める必要があった。ただし、このパラメータの可変性（有効用量における可変性と等しい）により、濃度軸に沿ったシミュレーションプロファイルのシフトのみがもたらされたが、プロファイルの形状は保存された。このため、シミュレーションは、吸収速度により決定された最終半減期を含む濃度プロファイルのための予測特性を有した。
【０２７４】
図１１において、配列番号：７１のシミュレーションされた血漿濃度−時間プロファイルを配列番号：７１の肺投与後の１回の健康なボランティアからの実験データと比較した。最良の当嵌め結果を肺胞空間に堆積された用量の割合についての１５％の値を使用して得た。図１１に、健康なヒトボランティアにおける吸収速度がラットモデルから拡張されたＰＢＰＫモデルにより十分予測され、したがって、ヒトにおいて、肺胞透過性についてと同じ値をラットにおけるのと同様に仮定することができることを示す。
【０２７５】
実施例６：ＰＢＰＫモデル評価：健康なヒト成人におけるＩＶ及び肺投与
６．１  ２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）
別の第Ｉ相試験を健康な成人男性ボランティアへの吸入により投与された配列番号：７１の単回及び繰返し投与のＰＫを評価するために行った。配列番号：７１の単回ｉ．ｖ．投与も、その後のＰＫモデリング及びシミュレーションのための更なる情報を提供するために、この研究に含ませた。４４名の対象をランダム化し、２３名の対象を配列番号：７１の単回投与吸入により処置し、１５名の対象を配列番号：７１の複数回投与吸入により処置し、６名の対象を配列番号：７１のｉ．ｖ．注入により処置した。この研究により、経口吸入又は静脈内投与により投与された場合の、局所（気管支及び肺胞空間）及び／又は全身の配列番号：７１の濃度を調査した。
【０２７６】
６．２  モデル評価
モデルを更に検証し、ＩＶ及び肺投与後の２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）からの尿及び肺胞被膜流体（ＡＬＦ）データにより改良した。
【０２７７】
最初の臨床試験（表Ｂ−１：研究５）を使用して評価した同じヒトモデルを２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）のＩＶ投与後の血漿濃度−時間曲線及び尿排泄データと比較した。
【０２７８】
ラットから拡張されたヒトモデルによるシミュレーションは、投与後最初の１２時間、実験ＩＶデータと十分に一致する。ただし、投与後２４時間の実験データ点は、シミュレーションにより過小評価され、その後の時間点も過小評価されると考えられる（図１２）。
【０２７９】
尿中に実験的に見出された薬剤量（６〜２３％）は、シミュレーション（９１％）より非常に少なかった（図１３）。このため、このモデルの腎クリアランス（５８％のＧＦＲ）は大き過ぎると考えられた。この２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）に利用可能になった尿データを考慮して、このモデルの腎クリアランスを低くする必要があった。血漿濃度時間曲線を更に説明するために、更なるクリアラスプロセスをこのモデルに導入する必要があった。
【０２８０】
最初に開発されたヒトの平均モデルも、２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）からの吸入データにより評価した（図１４）。最初のモデルを何ら変化させることなく使用した（肺胞空間に堆積された用量の１５％の割合を含む）。比較に使用された実験ＡＬＦ中濃度を尿希釈法を使用して補正した（Conte et al.1995, Antimicrob. Agents Chemother. 39: 334-8）。
【０２８１】
吸入後のシミュレーション血漿濃度−時間曲線は、実験データと十分一致した。初期段階において、実験血漿濃度はわずかに過小評価された。また、初期段階において、最初の臨床試験（表Ｂ−１：研究５）からの実験血漿濃度は、２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）からのものよりわずかに低かった。また、シミュレーションＡＬＦ中濃度は、実験データと一致しているが、実験データはわずかに過剰評価された。すなわち、平均モデルは、より高い個体のＡＬＦ中濃度と一致した。
【０２８２】
実施例７：ＰＢＰＫモデル改良
７．１  モデル改良
下記モデル特徴をモデル評価に従って改良した。
【０２８３】
１．流体力学半径を、ＩＶ投与後２４時間より後の時点についての血漿濃度−時間プロファイルをより良好に説明するために適合させた。
【０２８４】
２．腎クリアランスを、尿中の用量の実験的に観察された割合と一致させるために低下させた。約４０kDaのサイズを有するタンパク質について、１０％未満の腎クリアランスが文献において報告されている（Galaske et al. 1979, Kidney Int. 16: 394-403；Maack et al. 1979, Kidney Int. 16: 251-70）。この報告により、腎クリアランスの低下が正当化される。ＩＶ投与後に観察された血漿濃度プロファイルを更に説明するのを可能にするために、全ての血漿区画内での更なる一次クリアランスプロセスをこのモデルに加えた。更なるクリアランスプロセスは、血漿プロテアーゼに関与する場合がある。一次速度定数をＩＶ投与後の血漿濃度プロファイルに当て嵌めた。
【０２８５】
３．吸入モデルのために、肺胞厚みについての代替的な文献値を吸入後のＡＬＦ中濃度をより良好に説明するのに使用した。最初に確立されたモデルにおいて、０．０６８μmの肺胞厚みをPatton 1996によるレビュー（Advanced Drug Delivery Reviews 19: 3-36）において引用されたように使用した。０．２μmの値を改良モデルに使用した。この代替値は、Pattonに同様に引用されていた。同じ値は、ラットについての肺胞厚みの面積荷重平均とは独立して報告された（Dall'Acqua et al. J. Biol. Chem. 281: 23514-24）。０．２μmのより厚い厚みを使用することにより、肺胞容積の増大、及びその結果として、肺胞濃度の低下がもたらされる。肺胞透過性が対応して増大したとしても、吸収速度全体及びこのため、全身濃度は変化しなかった。このため、改良モデルにおいて、下記調整肺胞透過性：４．５８Ｅ−９cm/分×０．２／０．０６８＝１．３５Ｅ−８cm/分を使用した。
【０２８６】
改良モデルにより行われたシミュレーションにより、２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）の実験データと十分一致した平均血漿及び尿濃度−時間プロファイルを得た（図１５及び１６）。当て嵌められた流体力学半径について、２．４６nmの値を得た。腎クリアランスについて、５％の値のＧＦＲを得た。更なる血漿クリアランスについて、０．０１４２分−１の速度定数を得た。
【０２８７】
肺胞厚みについての代替的な文献値を使用して、実験ＡＬＦ中濃度が十分説明された（図１７）。改良モデルによるシミュレーションのために、肺胞空間に堆積された用量の割合は、血漿濃度のより良好な説明を得るために、更にわずかに適合させた（１０．６％）。
【０２８８】
７．２  改良モデルによる集団シミュレーション
改良された成人モデルについての集団シミュレーションを評価するために、集団シミュレーション結果を、２回目の臨床試験（表Ｂ−１：研究６）及び最初の臨床試験（表Ｂ−１：研究５）からのＰＫデータと比較した。European ICRP2002集団の１０００名の男性個体から構成される集団を、2つの研究からの範囲内に均一に分散された人工統計学パラメータを処理して生成した。
【０２８９】
ＩＶ適用後の、配列番号：７１（表Ｂ−１：研究６）の個々の実験血漿濃度−時間プロファイル及び累積尿排泄と、集団シミュレーションから生じるそれらとの比較を図１８に示す。
【０２９０】
集団シミュレーションと、２回目のヒト研究（表Ｂ−１：研究６）からの単回吸入及び複数回吸入後の実験血漿及びＡＬＦ濃度との比較をそれぞれ、図１９及び図２０に示す。
【０２９１】
改良モデルを使用する集団シミュレーションも、最初のヒト研究（表Ｂ−１：研究５）からのデータと比較することにより再評価した（図２１）。
【０２９２】
両研究について、集団シミュレーションは、実験データと十分合理的に一致する。
【０２９３】
実施例８：成人ＰＢＰＫモデルの健康な小児への拡張
続けて、改良成人ＰＢＰＫモデルを、確立されたパラメータ及び文献（Edginton et al. 2006, Clin. Pharmacokinet. 45: 1013-1034；Rhodin et al. 2009, Pediatr. Nephrol. 24: 67-76；Hislop et al. 1986, Early Hum. Dev. 13: 1-11）から利用可能な等式に主に基づいて、（ｉ）解剖学的及び生理学的パラメータ、（ｉｉ）クリアランスプロセス及び（ｉｉｉ）吸収プロセスを調整することにより小児に外挿した。
【０２９４】
肺胞吸収空間に堆積された吸入用量の割合を推定するために、ＭＰＰＤツールを使用した。月齢３か月、２１か月、２３か月及び２８か月がＭＰＰＤツール内で利用可能である。使用された粒径分布を２．６３μmのＭＡＤ（質量中央径）及び１．４６の幾何標準偏差とした。静かな鼻吸引を呼吸パラメータに使用した。他のパラメータについて、ＭＰＰＤデフォルト設定を使用した。肺胞空間における吸入用量の割合を約２０％と算出した（図４）。
【０２９５】
人体測定学的及び生理学的パラメータ（例えば、臓器容積、血流、ＧＦＲ）の標準的な変動性を有する小児PK-Sim（登録商標）集団を使用した。１０００名の個体及び両性別の均一な比を有する８つの齢群それぞれについての仮想コーカサス人集団を、集団薬物動態を推定するのに生成した。齢群は、０〜１週、１〜２週、２〜４週、１〜３か月、３〜６か月、６〜９か月、９〜１２か月、１２〜２４か月、２〜３歳、３〜４歳、４〜５歳及び５〜６歳（早産の小児を除く）とした。
【０２９６】
３つの更なるパラメータ：肺胞透過性、肺胞空間に堆積された用量割合及び更なる血漿クリアランスプロセスを集団シミュレーションにおいて変動させた。３つ全てのパラメータについて、対数正規分布を仮定した。肺胞透過性（幾何平均：１．３５Ｅ−８cm/分）について、１．４の幾何標準偏差を最初のヒト成人臨床試験（表Ｂ−１：研究５）への個々の当嵌めから推定されるように使用した。肺胞空間における用量を肺胞ターゲット濃度に達するように選択した。２の幾何標準偏差を全ての齢群についての肺胞空間における用量割合に使用した。５日間の１日１回の吸入をシミュレーションのための適用スキームとして使用した（吸入時間：各吸入について３分）。複数回の投与スキームの各投与について、肺胞空間における用量割合の値を他の投与についての値から独立して分布から得た。更なる血漿クリアランスについて、１．１の幾何標準偏差を成人集団に使用した（幾何平均：０．０１４２分−１）。
【０２９７】
モデリングの目的によれば、全投与間隔の９５％の個体について、用量を少なくとも９μg/mL（１００＊ＩＣ９０）に達するように選択した。用量に関わらず、ＰＢＰＫモデルにおける全身及び局所ＰＫを決める主に重要なパラメータは、肺胞吸収空間における薬剤量であると考えられる。ＰＢＰＫシミュレーションに基づいて、９μg/mlのターゲット濃度に、全ての齢群についての肺胞空間における０．０２４mg/kg 体重（堆積用量）の量を使用して達した。肺胞表面積及びそれと共に肺胞容積を体重により調整したため、肺胞濃度は、体重正規化用量については、実質的に年齢依存的ではなかった。このため、肺胞吸収空間における０．０２４mg/kg 体重の堆積用量を、ＡＬＦ及び血漿濃度の全てのシミュレーションに使用した（図２２〜２８）。
【０２９８】
実施例９：成人ＰＢＰＫモデルの病気の小児への拡張
ついで、成人ＰＢＰＫモデルを、疾患に関連する可能性のある生理学的差異を考慮するために、病気の小児に拡張した。ＲＳＶ感染小児と健康な小児とを直接比較する文献データが乏しいため、感受性分析をモデル開発プロセス中に適合／当嵌めされる重要なパラメータ（肺胞空間に堆積された割合、クリアランス、肺胞透過性、肺胞空間厚み及び流体力学薬剤半径）について行った。利用可能な非臨床試験結果、利用可能な文献（Kilani et al. 2004, Chest 126:  186-91；Singh et al. 2007, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 293: L436-45；Domachowske and Rosenberg 1999, Clin. Microbiol. Rev. 12: 298-309；Johnson et al. 2007, Mod. Pathol. 20: 108-19）に基づき、かつ、モデルに既に組み込まれたＰＫ指数における変動性の予測を考慮して、ＲＳＶ感染を説明するのに、肺胞空間からのクリアランス及び／又は吸収についての固有の変化を必要としなかった。
【０２９９】
肺胞空間に堆積された割合について、ＲＳＶ感染を反映した呼吸パターンの変化を考慮するＭＰＰＤ算出を、ＲＳＶ感染小児での肺胞空間に堆積された吸入用量の割合を推定するのに使用した。第１のシナリオにおいて、Totapally et al. 2002（Crit. Care 6: 160-5）により観察された１歳未満の小児の呼吸頻度及び一回呼吸量を使用した。第２のシナリオにおいて、気管支炎の影響を模倣するために、Mundt et al. 2012（ISRN Pediatr. 2012 p. 721295）により利用された呼吸頻度及び一回呼吸量における同じ相対的な変化を、各ＭＰＰＤデフォルト値を適合させるのに使用した。呼吸困難パターンについてのＭＰＰＤツールにより予測された肺胞空間に堆積された割合は、特にMundt et al 2012から適合された呼吸パターンを用いるシナリオについて、正常な呼吸についての結果と比較して低かった。
【０３００】
シミュレーションから、ＲＳＶ感染幼児及び歩き始めの幼児（月齢５〜２４か月）に代表的な呼吸パターンが下気道における配列番号：７１の吸入用量の約１０％の堆積をもたらした（齢及び粒径に応じて７〜１３％）ことが示された。それに対応して、０．２４mg/kgの用量が、１回の投与後の下気道における０．０２４mg/kgの堆積用量に達するために吸入される（吸入用量）のに必要であろう
【０３０１】
実施例１０：小児におけるＲＳＶ下気道感染の処置のための用量決定
振動型メッシュ式ネブライザが、免疫グロブリンシングル可変ドメイン、例えば、配列番号：７１（ＷＯ第２０１１／０９８５５２号）の霧化に最も適した技術であると考えられる。更に記載された研究（実施例１２を参照のこと）において、配列番号：７１は、小児用途に適合したFOXネブライザ（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）を使用して投与される（ＷＯ第２０１６／０５５６５５号）。ネブライザは、通常、２L/分の付加空気又はＯ２流により使用され、小児フェイスマスク（２つのサイズ）を備える。
【０３０２】
Sophia anatomical infant nose throat（SAINT）モデル（Janssens et al. 2001）を、上記ネブライザによる配列番号：７１の投与に固有のデータを生成するのに使用した。SAINTモデルは、９か月齢の小児の上気道の解剖学的に正しい投影／表現であり、光造形技術を使用して構築され、小児におけるエアロゾル堆積を研究するのに使用される。臨床環境で使用されるであろう投与条件を、健康及びＲＳＶ感染幼児及び歩き始めの幼児に代表的な呼吸パターンを含めて、厳密に模倣した。結果から、ネブライザ内に充填された総用量から、約２０％が吸入されると予測されたことが示された。したがって、０．２４mg/kgの吸入用量を確実にするためにネブライザに充填される用量は、１．２mg/kgであった（名目用量）。
【０３０３】
他の吸入製品に則して、配列番号：７１の投与量は、（狭い）体重分類（６つの投与群、１又は２kgの増量ステップ、表Ｂ−２及び表Ｂ−６を参照のこと）について標準化される。これは、安全性マージンにより支持され、（０．０１mL）目盛付き１mLシリンジにより、ネブライザ内に適切な量を正確に測定し、充填することの可能性を考慮する。体重分類の適切さも、更なるＰＢＰＫシミュレーションにより確認した。
【０３０４】
装置仕様を考慮して、体重に基づく分類に対応する投与時間は、４５秒（５．０〜６．０kgの対象）〜１２０秒（１４．１〜１６．０kgの対象）で変動させることができる。残量 約７μL（充填容積とは関係なく）が、ネブライザの貯留部に残留し、表Ｂ−２に列記された充填容積に考慮した。
【０３０５】
装置仕様を考慮して、体重に基づく分類に対応する投与時間は、３０秒（３．５〜３．９kgの対象）〜１５０秒（１６．１〜１９．０kgの対象）で変動させることができる。残量 約７μL（充填容積とは関係なく）が、ネブライザの貯留部に残留し、表Ｂ−６に列記された充填容積に考慮した。
【０３０６】
実施例１１：集団シミュレーション
集団シミュレーションを実施例１０に記載された６つの投与群について行い、小児における血漿及びＡＬＦ濃度を推定した（月齢５〜２４か月）。
【０３０７】
シミュレーションを種々の投与スキーム：
・１日１回で３回投与（０、２４、４８時間）；
・１日１回で２回投与（０及び２４時間）；
・１回投与（０時間）
について行った。
【０３０８】
０、２４、４８時間の投与スキームについての血漿及びＡＬＦ濃度時間プロファイルをそれぞれ、図２３及び図２４に与える。最初の吸入後７２時間（３×２４時間）の間、肺胞濃度は、個体の９５％について、１４μg/mlより高かった。これは、６つの投与群における堆積割合及び投与の幾何標準偏差の低下のために、以前のシミュレーション（９μg/ml）におけるより高い（群内の体重範囲のために、肺胞空間における用量は、０．０２４mg/kgよりわずかに高い場合がある）。最後の投与後３４時間においてのみ、５パーセンタイルの濃度が、９μg/mlのターゲット濃度を下回って低下する。
【０３０９】
０〜２４時間の投与スキームについての血漿及びＡＬＦ濃度時間プロファイルをそれぞれ、図２５及び図２６に与える。０〜２４時間の投与スキームの間、総集団の５パーセンタイルについての肺胞濃度が、５７時間後に９μg/mlを下回って低下する。最初の投与後７２時間の間、時間の２０％について、９μg/mlのターゲット濃度を下回る。総集団の中央肺胞濃度は、９１時間後に９μg/mlを下回って低下する。
【０３１０】
１回投与スキームについての血漿及びＡＬＦ濃度時間プロファイルをそれぞれ、図２７及び図２８に与える。１回投与の間、総集団の５パーセンタイルの肺胞濃度が、３１時間後に９μg/mlを下回って低下する。最初の投与後７２時間の間、時間の５７％について、９μg/mlのターゲット濃度を下回る。総集団の中央肺胞濃度は、５９時間後に９μg/mlを下回って低下する。最初の投与後７２時間の間、時間の１８％について、９μg/mlのターゲット濃度を下回る。
【０３１１】
実施例１２：幼児及び歩き始めの幼児におけるＲＳＶ感染の処置
上記されたように、小児における肺胞吸収空間での配列番号：７１の量（０．０２４mg/kg 体重）は、肺胞ターゲット空間において予め定義された配列番号：７１濃度（９μg/ml）に達すると予測された。これらの予測を、複数の研究及び複数の種からの観察データを包含する検証モデルによるＰＢＰＫモデリングアプローチを使用して行った。
【０３１２】
多施設研究を、ＲＳＶ下気道感染で入院しており、同感染と診断された幼児及び歩き始めの幼児に対して、肺に投与された配列番号：７１のこの投与計画の安全性及び許容性を評価するのに行った。加えて、臨床作用、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）における配列番号：７１のこの投与計画の効果及び配列番号：７１の免疫原生を評価した。
【０３１３】
１２．１  研究設計
呼吸器多核体ウイルス下気道感染で入院しており、同感染と診断されたが、他の点で健康な幼児及び歩き始めの幼児（月齢５か月〜２４か月未満、月齢３か月〜２４か月未満、齢２８日〜２４か月未満又は齢２８日〜５か月未満）における多施設研究を、標準治療に加えて、吸入により投与された配列番号：７１の安全性、許容性及び臨床作用を評価するのに行った。欧州及びアジア太平洋地域における合計２１か所の研究施設において、この研究における対象を登録した。
【０３１４】
この研究は、３つのパート：（Ａ）非盲検導入パート、（Ｂ）二重盲検プラセボ対照パート及び（Ｃ）小児対象における二重盲検プラセボ対照拡張コホートからなった。適用可能なヒト用医薬品委員会（ＣＨＭＰ）ガイドラインに則して、独立したデータモニタリング委員会（ＤＭＣ）を、研究データをレビューし、推奨を提供するために割り当てた。
【０３１５】
・パートＡ：研究の非盲検導入パート（グループＩ、Ｎ＝５）：
最初に、５名の対象（月齢５か月〜２４か月未満）をパートＡに含ませ、活性な研究薬剤（配列番号：７１）のみを受けさせた。全ての対象の研究処置期間を完了させた後に、ＤＭＣは全ての利用可能なデータをレビューし、この研究のパートＢの開始及びパートＢにおける月齢３か月〜２４か月未満の対象を含ませることについてのポジティブな推奨を提供した。
【０３１６】
・パートＢ：研究の二重盲検プラセボ対照パート（グループＩＩ、Ｎ＝３０）：
ＤＭＣによるポジティブな推奨後に、３０名の対象（月齢３か月〜２４か月未満）をパートＢに登録し、配列番号：７１又はプラセボのいずれかを受けさせるように、２：１の割合でランダムに割り当てた。対象の半分をリクルートした（１５名の対象の研究薬剤処置期間の終了）後、全ての利用可能な臨床データをＤＭＣによりレビューした。ＤＭＣによるポジティブな推奨に基づいて、パートＢの残り部分における登録についての適格齢範囲を、２８日〜２４か月未満に拡張した。
【０３１７】
・パートＣ：拡張コホート（グループＩＩＩ、Ｎ＝１８）
パートＢにおける全ての対象の研究薬剤処置期間の終了後に、拡張集団及び臨床的に非常に関連するターゲット集団における更なるデータを収集するために、齢２８日〜５か月未満の１８名の更なる対象をパートＣに登録した。パートＣにおける対象を配列番号：７１又はプラセボのいずれかを受けさせるように、２：１の割合でランダムに割り当てた。
【０３１８】
（ＲＳＶ診断検査によりＲＳＶ陽性と診断された）合計５３名の対象をこの研究においてランダム化した（パートＡに５名の対象、パートＢに３０名の対象及びパートＣに１８名の対象）。研究設計の概略を図３４に与える。対象のベースライン特徴を表Ｂ−９に示す。
【０３１９】
臨床試験の３つのパートに、類似する処置計画を使用した（図３５）。各研究施設において、配列番号：７１又は対応するプラセボ（パートＢ及びＣのみ）を、標準治療に加えて、３日間連続で１日１回、FOX-Flamingo振動型メッシュ式ネブライザ（Activaero, now Vectura Group plc, Wiltshire, UK）による吸入により投与した。（体重分類当たりの）ネブライザに充填された適切な容量の概観及び適切な霧化時間を表Ｂ−６に示す。ネブライザを空気又は必要に応じて（対象のＯ２要求に基づいて調査官により判断される）Ｏ２の固定した２L/分流で使用した。
【０３２０】
研究薬剤の投与前約１５分に、短時間作用性β２アゴニストであるサルブタモールの吸入用量を投与した。２回のパフ（２×１００μg）を用量計測吸入器（スペーサを備える）により与えた。
【０３２１】
各対象についての計画研究期間は約１５日とした。配列番号：７１の安全性、許容性及び臨床作用を、研究全体を通して厳密にモニタリングした。ＰＤ（ウイルス負荷）、ＰＫ（配列番号：７１の全身濃度の評価）及び配列番号：７１の可能性のある免疫原性（全身性の既存又は処置発生抗薬剤抗体［ＡＤＡ］の存在）もこの研究において調査した。
【０３２２】
１２．２  主な安全性評価
中でも、安全性を処置発生有害事象（ＴＥＡＥ）、臨床研究室検査結果（臨床化学及び血液学）、健康診断結果（肺聴診を含む）並びに心拍数及び末梢毛細血管Ｏ２飽和（ＳｐＯ２）により評価した。
【０３２３】
配列番号：７１に関連する研究からは重篤な有害事象及び／又は休薬は観察されなかった。最も共通する有害事象は、呼吸器障害及び感染であった。このことから、このターゲット集団における配列番号：７１の安全性及び許容性プロファイルが確認される。
【０３２４】
１２．３  薬物動態
血清中の配列番号：７１の濃度を、局所肺濃度を評価するための代理測定値として評価した。配列番号：７１を投与後３日目（最後の投与後６時間）の血清サンプル中に検出した。このことから、肺における配列番号：７１の暴露が確認された。
【０３２５】
１２．４  薬力学
ウイルス負荷を鼻スワブにより得られたサンプルにおいて、調査ＰＤパラメータとして評価した。
【０３２６】
ウイルス負荷をポリメラーゼ連鎖反応（全てのウイルスＲＮＡ、培養性及び生育不可能ウイルスを測定するｑＲＴ−ＰＣＲ）及び培養（培養性／感染性ウイルスを測定するプラークアッセイ）により測定した。ＲＳＶ診断検査によりＲＳＶ陽性と診断されたが、５名の対象は、研究中のいずれの時点でもプラーク又はｑＲＴ−ＰＣＴアッセイによるＲＳＶ感染についての証拠を示さず、素早い診断ストリップ検査からの偽陽性と推定された。経時的（１、２及び３日目での鼻スワブ；投与後６時間）なウイルス負荷として表現された抗ウイルス作用を図３６に示す。
【０３２７】
最初の配列番号：７１の投与により、平均培養性ウイルス力価は、６時間以内に定量限界を下回って低下したが、プラセボ処置対象の場合には低下しなかった（最初の投与後のベースラインからの平均変化、配列番号７１についての−０．８７９  ｌｏｇ１０PFU/mL対プラセボについての−０．４３４  ｌｏｇ１０PFU/mL）が、ベースライン値は、プラセボ群においてよりも配列番号：７１群においてより低かった。その後の平均培養性ウイルス力価は、配列番号：７１処置対象において定量限界を下回って維持された。一方、プラセボ群における対象について、平均培養性ウイルス力価のみが、２回目の投与後に定量限界を下回って低下した。配列番号：７１による検出不可能なウイルスへの中央時間の５０％減少が存在した（ｐ＝０．０１４）（表Ｂ−８）。
【０３２８】
ＲＳＶ力価を有さない５名の対象を除いたポストｈｏｃ分析から、配列番号：７１処置対象がプラセボ群における対象と比較して、培養性ウイルス力価のより素早い減少を有したことが確認された（最初の投与後のベースラインからの平均変化、配列番号７１についての−１．０００  ｌｏｇ１０PFU/mL対プラセボについての−０．４６３  ｌｏｇ１０PFU/mL）。検出不可能なウイルス力価（ＢＱＬ）への時間、すなわち、処置開始から２回連続の鼻スワブにおける最初の検出不可能なウイルス力価の時間までの時間として表現した抗ウイルス作用を、図３７及び３９に示す。ＢＱＬへの中央時間は、プラセボ群と比較して配列番号：７１群においてより短く、これは、感染性ウイルスに対する配列番号：７１処置の可能性のある有益な効果の証拠を提供する。
【０３２９】
培養性及び生育不可能なウイルスの両方を測定するＲＴ−ｑＰＣＲについて、平均ウイルス力価は、両処置群についての研究の経過にわたって低下したが、群間の明らかな差異はほとんどなく、プラセボ対照処置群と比較して、配列番号：７１処置群におけるウイルス負荷が低下する傾向があった。
【０３３０】
まとめると、配列番号：７１による処置は、ＲＳＶ感染幼児におけるウイルス複製の中程度の影響を有した。
【０３３１】
１２．５  調査免疫原性
配列番号：７１に対する既存の抗体（ｐｒｅ−Ａｂ）又は処置発生抗薬剤抗体（ＡＤＡ）の全身における存在を（血清中で）評価した。外来通院において、処置発生抗薬剤抗体を、ＲＳＶ感染による肺における全体的な免疫活性化と一致して、対象の２３％で検出した。有害事象に対する相関及びＰＫにおける明らかな効果は存在しなかった。
【０３３２】
１２．６  主な臨床活性評価
臨床活性を、中でも、栄養補給、呼吸速度（１分間隔）、Ｏ２飽和、喘鳴（呼気／吸気中）、日中の咳、夜間の咳（による睡眠障害）及び一般外貌（活性、興奮、環境への関心及び応答性）により評価した。研究中に測定された臨床活性パラメータに基づいて、総合重症度スコアを算出した。
【０３３３】
１２．６．１  一般外貌
一般外貌の評価には、活性、興奮、環境への関心及び応答性が含まれる。
【０３３４】
全てのパラメータについて、両処置群における対象は、研究の経過にわたって改善した。ここで、ベースラインと投与２日前との間で既に改善していた。処置群間に明らかな差異は観察されなかった。
【０３３５】
１２．６．２  喘鳴
呼気及び吸気中の喘鳴を記録した。
【０３３６】
呼気（対象のそれぞれ８．８％及び２５．０％）及び吸気（対象のそれぞれ６７．６％及び８１．３％）中に、配列番号：７１群とプラセボ群との間の不均衡がベースラインにおいて存在した。ここで、配列番号：７１群における対象は、おそらく「喘鳴」をほとんど有さなかった。研究の経過にわたって、これは逆転し、１日目以降のほとんどの時点（退院時を含む）で、配列番号：７１群におけるより高い割合の対象は、呼気又は吸気中に喘鳴しなかった。
【０３３７】
配列番号：７１による霧化の結果として、喘鳴により反映された呼吸困難の誘発又は同呼吸困難の増加の兆候は存在しなかった。
【０３３８】
１２．６．３  呼吸速度
呼吸速度を１分間隔で測定した。
【０３３９】
平均呼吸速度は、ベースラインにおいて、配列番号：７１群とプラセボ群で同一であった（１分あたり４８．７回の呼吸）が、パートＡの対象は、ベースラインにおいてより速い呼吸速度を表わした（１分あたり５４．５回の呼吸）。呼吸速度は両処置群における研究の経過にわたって低下したが、この低下は、プラセボ群と比較して、配列番号：７１群においてより早い（すなわち、処置２日目及び３日目まで）と言えた。
【０３４０】
配列番号：７１による霧化の結果として、呼吸速度評価により反映された呼吸困難の誘発又は同呼吸困難の増加の兆候は存在しなかった。
【０３４１】
１２．６．４  酸素飽和
フェイスマスクの配置及びその後の研究薬剤の投与の中及びこれらの後に、末梢毛細血管酸素飽和をパルスオキシメトリにより連続的に測定した。
【０３４２】
１２．６．５  日中の咳
日中の咳を親又は後見人のフィードバックに基づいて、又は、それが可能でなければ、看護師からのフィードバックに基づいて記録した。
【０３４３】
スクリーニングとベースラインとの間のデータ（１日目、投与前２時間）は変動した。重篤な日中の咳の症例は、多くの場合報告されなかった。軽い又は中程度の咳が、種々の時点で処置群において類似する頻度で報告された。１４日目に、両処置群における全ての対象は、日中の咳を有さず、又は、軽い日中の咳を有した。
【０３４４】
配列番号：７１による霧化の結果として、咳の評価により反映された呼吸困難の誘発又は同呼吸困難の増加の兆候は存在しなかった。
【０３４５】
１２．６．６  栄養補給
栄養補給支援の種類及び退院が可能となるのに十分な栄養補給の（時間及び日数）を、（水分補給及び栄養補給中の呼吸の快適さへの特定の注目についての）調査官の意見において評価した。（例えば、看護師のノートに基づいて）栄養補給についての遡及的な評価が可能であった。
【０３４６】
ベースラインにおいて、約４０％の対象が、ほとんどが静脈内に提供された栄養補給支援を受けた（ＡＬＸ−０１７１群における４０．６％の対象及びプラセボ群における３７．５％の対象）。３日目（投与前２時間）に、ベースラインと比較して栄養補給支援の必要性の低下が両処置群において見られた。この低下は、プラセボ群より配列番号：７１群において言えた（配列番号：７１群における２５．７％の対象及びプラセボ群における３１．３％の対象がそれでも栄養補給支援を必要とした）。
【０３４７】
１２．６．７
夜間の咳
夜間の咳による睡眠障害を翌日の朝又は１４日目の通院外来又は退院時に、親もしくは後見人のフィードバックに基づいて、又はそれが可能でなければ、看護師からのフィードバックに基づいて記録した。
【０３４８】
夜間の咳による睡眠障害を有する患者の割合は、スクリーニングの夜（配列番号：７１群における８１．３％の対象及びプラセボ群における８７．５％）から、３日目の前の夜（配列番号：７１群における５１．４％及びプラセボ群における５０．０％）及び退院前の夜（配列番号：７１群における３４．３％及びプラセボ群における３７．５％）に低下した。
【０３４９】
１２．６．８  総合重症度スコア
総合重症度スコア（ＧＳＳ）は、ReSVinet scale［１８］から得られた臨床スコアリングシステムであり、７種類の項目（栄養補給不寛容、医療的介在、呼吸困難、呼吸頻度、無呼吸、全身状態、発熱）に基づく呼吸器感染を有する幼児の客観的な分類を可能にする検証された臨床スコアリングシステムである。総合重症度スコア（ＧＳＳ）は、これらの二次エンドポイントを組み合わせ、７種類の項目：栄養補給不寛容、医療的介在の度合い、呼吸困難、呼吸頻度、無呼吸、全身状態及び発熱に基づく呼吸器感染を有する幼児の客観的な分類を提供する。各項目は、発熱（０〜２のスコア）を除いて、０〜３のスコアであり、最大合計２０のスコアとなる。ここで、（表Ｂ−７及び表Ｂ−１０に記載されたように）スコアが高いほど、より高い疾患の重症度を示す。この総合スコアは、幼児におけるＲＳＶ  ＬＲＴＩの重症度を評価するのに関連する全ての種類の臨床パラメータを考慮し、個々の項目より包括的であるというメリットを有する。ＧＳＳ評価について、Justicia-Grande et al. 2015（Leipzig: 33rd Annual Meeting of the European Society for Paediatric Infectious Diseases）及びCebey-Lopez et al. 2016（PLoS ONE 11(2):e0146599）にも参照がなされる。
【０３５０】
研究の二重盲検コンポーネント（パートＢ及びＣ）に登録された対象を含み、検出可能なＲＳＶを含まない５名の対象を除外する改変安全性集団についての経時的な平均総合重症度スコア（ＧＳＳ）を表Ｂ−１１に提供し、図３８にグラフで表わす。平均（ＳＤ）ベースラインＧＳＳ値は、プラセボ群における７．４（３．２０）と比較して、配列番号：７１群において７．７（２．４２）であった。両処置群において、平均ＧＳＳは、研究の経過にわたって低下した。ここで、改善は、１日目から既に始まって、プラセボ群と比較して、配列番号：７１群においてよりはっきりしていた。このことから、プラセボ処置と比較して、配列番号：７１処置によるより速い回復が示される。実際に、図３８には、投与後１日目に始まる総合重症度スコアにおける群間の分離が示され、このことは、配列番号：７１群における疾患重症度のより素早い改善を示唆している。
【０３５１】
経時的な平均ＧＳＳをモデリングし、配列番号：７１とプラセボ処置とを比較する一方で、ベースラインスコア及び時間を調節する対数分析に基づいて、ｐ＝０．００９２のｐ値が得られた。
【０３５２】
【表２】
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【０３５３】
【表３】
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【０３５４】
【表４】
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【０３５５】
【表５】
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【０３５６】
【表６】
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【０３５７】
【表７】
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【０３５８】
【表８】
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【０３５９】
【表９】
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【０３６０】
【表１０】
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【０３６１】
【表１１】
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【０３６２】
【表１２】
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【０３６３】
【表１３】
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【０３６４】
【表１４】
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【０３６５】
【表１５】
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【０３６６】
【表１６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2019523213.tif 000066
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