(57)【要約】  本発明は、溶解特性に優れたヒアルロン酸マイクロ構造体に関するものである。より詳細には、本発明は、架橋ヒアルロン酸を含み、皮膚に透過時溶解特性に優れた生分解性マイクロ構造体に関するものである。本発明のマイクロ構造体を皮膚内に透過させる場合には、皮膚内溶解特性に優れているだけではなく、架橋されたヒアルロン酸の含有量の比率によって、皮膚内溶解速度を容易に調節することができ、マイクロ構造体に搭載された有用成分を皮膚内に安定的に伝達しながらも、搭載された有用成分の放出速度を容易に調節できるので、薬理学的な活性物質または皮膚改善用物質の経皮型伝達体として有用に使うことができる。【選択図】図１
2019523680.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
主成分として、ｉ）架橋されたヒアルロン酸（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）またはｉｉ）架橋されたヒアルロン酸と非架橋ヒアルロン酸（ｎｏｎ−ｃｒｏｓｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）の混合物を含む皮膚透過用のマイクロ構造体であって、
上記ヒアルロン酸の全体重量を基準に、上記架橋されたヒアルロン酸の含有量は、５〜１００％（ｗ／ｗ）であり、上記非架橋ヒアルロン酸の含有量は、０〜９５％（ｗ／ｗ）であることを特徴とするマイクロ構造体。
【請求項２】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が６０％以下であり、皮膚透過３０分後に溶解率が７５％以下であり、皮膚透過６０分後に溶解率が８５％以下であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項３】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に、１５〜３０％である場合には、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が５０〜６０％であり、皮膚透過３０分後に溶解率が６５〜７５％であり、皮膚透過６０分後に溶解率が７０〜８５％であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項４】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に、３０〜３５％である場合には、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が４５〜５５％であり、皮膚透過３０分後に溶解率が５８〜６８％であり、皮膚透過６０分後に溶解率が６５〜７５％であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項５】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に、３５〜５０％である場合には、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が４０〜５５％であり、皮膚透過３０分後に溶解率が５１〜６１％であり、皮膚透過６０分後に溶解率が５５〜６５％であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項６】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に、５０〜７０％である場合には、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が３５〜４５％であり、皮膚透過３０分後に溶解率が４４〜５４％であり、皮膚透過６０分後に溶解率が４８〜５８％であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項７】
上記マイクロ構造体を３ｋｇ重の力で皮膚に透過させると、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に、７０〜９０％である場合には、マイクロ構造体の長さを基準に、皮膚透過１０分後に溶解率が３０〜４５％であり、皮膚透過３０分後に溶解率が４１〜５１％であり、皮膚透過６０分後に溶解率が４５〜５６％であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項８】
上記ヒアルロン酸の濃度は、上記ｉ）の架橋されたヒアルロン酸、または上記ｉｉ）のヒアルロン酸混合物を構成する水または水性溶媒に対して、１−１０％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項９】
上記ヒアルロン酸は、分子量が１００〜５０００ｋＤａであることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項１０】
上記架橋されたヒアルロン酸は、１〜５０％の架橋度を有することを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項１１】
上記マイクロ構造体の弾性係数（ヤング率、Ｙｏｕｎｇ’ｓ  ｍｏｄｕｌｕｓ）は、０．４〜０．７Ｎ／１００μｍであることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項１２】
上記マイクロ構造体は、皮膚透過時にマイクロ構造体の高さの８０％以上が透過されることを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項１３】
上記マイクロ構造体は、生体適合性高分子または粘着剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のマイクロ構造体。
【請求項１４】
上記生体適合性高分子は、カルボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ：ＣＭＣ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ペクチン、カラギーナン、コンドロイチン（硫酸）、デキストラン（硫酸）、キトサン、ポリリジン（ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、コラーゲン、ゼラチン、カルボキシメチルキチン（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｉｔｉｎ）、フィブリン、アガロース、プルランポリラクチド、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、プルランポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリエーテルエステル（ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｅｓｔｅｒ）、ポリカプロラクトン（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、ポリエステルアミド（ｐｏｌｙｅｓｔｅｒａｍｉｄｅ）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリウレタン、ポリアクリレート、エチレン−酢酸ビニル共重合体、アクリル置換セルロースアセテート、非−生分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン（ｃｈｌｏｒｏｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ  ｐｏｌｙｏｌｅｆｉｎｓ）、ポリエチレンオキサイド、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリメタクリレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、シクロデキストリン、これらの高分子を形成する単量体の共重合体、及びセルロースで構成された群から選択された１以上の高分子であることを特徴とする請求項１３に記載のマイクロ構造体。
【請求項１５】
上記粘着剤は、シリコーン、ポリウレタン、物理的な接着剤（ゲッコー）、ポリアクリル、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、エチレン酢酸ビニル、及びポリイソブチレンで構成された群から選択された１以上の粘着剤であることを特徴とする請求項１３に記載のマイクロ構造体。
【請求項１６】
上記マイクロ構造体は、薬理学的活性成分または美容成分をさらに含むことを特徴とする請求項１から１５のいずれかに記載のマイクロ構造体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本特許出願は、２０１６年６月１６日に大韓民国特許庁に提出された大韓民国特許出願第１０−２０１６−００７４９８５号に対して優先権を主張し、上記特許出願の開示事項は、本明細書に参照として挿入される。
【０００２】
本発明は、溶解特性に優れたヒアルロン酸マイクロ構造体に関するものである。より詳細には、本発明は、架橋ヒアルロン酸を含み、皮膚透過時の溶解特性に優れた生分解性マイクロ構造体に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
薬物伝達システム（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＤＤＳ）は、薬理的活性物質を、様々な物理化学的な技術を利用して、薬物の吸収及び放出を制御することにより、薬物の副作用を減らし、効能を極大化させることができるように、細胞、組織、臓器や器官などの標的部位へ伝達する一連の技術を意味する。薬物伝達システムは、一般的な経口摂取以外に、肺へ薬物を伝達する吸入投与、薬物を局所的に適用することができる経皮透過型の薬物伝達システムなどがあり、薬理活性物質の化学的な性質と生体内での使用目的などにより、患者の順応度を高めながらも、効率的で安全に薬物を投与するための研究が継続的に行われてきた。このうち注射療法の場合、正確な量の薬物を急速に全身循環血流に到達させることができるという長所があるが、投与方法が複雑で、患者によって痛みを伴うことがあり、半減期が短くて、頻繁に注射投与をしなければならないという短所がある。経皮薬物伝達システムは、注射投与方式に比べて、ユーザーの利便性が向上されて肝や胃から薬物が代謝されないため、薬効がすぐに発揮され、半減期が短い薬物の持続的な伝達が可能であり、副作用発生時にも投与の中止が容易だという長所があるが、薬物の放出速度の正確な制御が難しく、高分子量の薬物の場合、皮膚透過が難しくて、低分子量の薬物にのみ適用することができるという短所がある。従って、このような注射療法と経皮薬物伝達システムの短所を改善するために、注射器の針よりもはるかに小さく、痛みが少ないマイクロ構造体（マイクロニードル）を利用して、皮膚に微細な穴を開け薬物を伝達する方法に関する研究が盛んに行われた。マイクロ構造体は、皮膚を介して伝達することができる薬物のレベルを低分子量、高分子量薬物だけでなく、粒子までも飛躍的に増加させることができ、最近、皮用薬物伝達体に関連する用途として脚光を浴びており、血液採取、バイオセンサーや皮膚美容など様々な分野で様々な用途に開発されているのが実情である。
【０００４】
従来のマイクロニードルの製造方法では、特許文献１（米国特許第６３３４８５６号）の「ＭＩＣＲＯＮＥＥＤＬＥ  ＤＥＶＩＣＥＳ  ＡＮＤＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＭＡＮＵＦＡＣＴＵＲＥ  ＡＮＤ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ」と特許文献２（大韓民国特許第１０−０７９３６１５号）の「生分解性ソリッドマイクロニードル及びその製造方法」がある。上記特許は、硬化性ポリマーを用いて作製されたマイクロモールドに生分解性粘性物質を注入して乾燥した後、次のモールドから分離して、マイクロニードルを製造したり（成形技法）、生分解性ソリッドマイクロニードルを形成するための生分解性粘性物質をコーティングして柱にパターニングされたフレームでコーティングされた生分解性粘性物質をドローイングしながら乾燥させた後、ドローイングされた生分解性粘性物質を切断するステップを介してマイクロニードルを製造（ドローイン技法）する方法を開示している。しかし、このような従来の製造方法によって製造された生分解性ポリマーマイクロ構造体は、比較的に低い機械的な強度により、皮膚透過時に曲がったり、つぶれたりする問題点があり、特に、高弾性を有する高分子誘導体を原料として利用する場合の成形技法またはドローイン技法を利用して、マイクロ構造体を製造する際、希望する構造体の形状が均質に生成されない限界があり、皮膚透過に必要なマイクロ構造体の機械的強度を満足させにくい短所があった。また、これらは、皮膚に穴を開けるだけであり、薬物を提供するための媒介体としては使用されることができなくて、薬物の適用のための別途の薬物伝達システムを必要とする。
【０００５】
本明細書の全体にわたって多数の論文及び特許文献が参照され、その引用が表示されている。引用された論文や特許文献の開示内容は、その全体として本明細書に参照として挿入されて、本発明が属する技術分野のレベル及び本発明の内容がより明確に説明される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６３３４８５６号
【特許文献２】大韓民国特許第１０−０７９３６１５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、上述した従来の薬物伝達システムおよびマイクロ構造体の技術らの問題点を解決しようと例の研究に努力した。その結果、本発明者らは、皮膚の構成成分であるヒアルロン酸の誘導体である、架橋されたヒアルロン酸で形成されたハイドロゲルをマイクロ構造体の主成分として利用する場合には、皮膚内の溶解特性に優れているだけではなく、架橋されたヒアルロン酸の含有量の比率によって、皮膚内の溶解速度を容易に調節することができ、マイクロ構造体に搭載された有用成分を皮膚内に安定的に伝達しながらも、搭載された有用成分の放出速度を容易に調節することができることを確認することにより、本発明を完成した。
【０００８】
従って、本発明の目的は、架橋されたヒアルロン酸（ｃｒｏｓｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）を含み、皮膚透過時の溶解特性に優れたマイクロ構造体（ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を提供することにある。
【０００９】
本発明の他の目的および利点は、下記の発明の詳細な説明、請求範囲及び図面によってより明確になる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一態様によれば、本発明は、主成分として、ｉ）架橋されたヒアルロン酸（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）またはｉｉ）架橋されたヒアルロン酸と非架橋ヒアルロン酸（ｎｏｎ−ｃｒｏｓｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）の混合物を含む皮膚透過用のマイクロ構造体であって、
上記ヒアルロン酸の全体重量を基準に、上記架橋されたヒアルロン酸の含有量は、５〜１００％（ｗ／ｗ）であり、上記非架橋ヒアルロン酸の含有量は、０〜９５％（ｗ／ｗ）であることを特徴とするマイクロ構造体を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の特徴と利点を要約すると次の通りである：
（ａ）本発明は、ｉ）架橋されたヒアルロン酸、またはｉｉ）架橋されたヒアルロン酸と非架橋ヒアルロン酸の混合物を含んでおり、皮膚透過時に皮膚内で溶解されることを特徴とするマイクロ構造体を提供する。
（ｂ）本発明のマイクロ構造体を皮膚内へ透過させる場合には、皮膚内の溶解特性に優れており、架橋されたヒアルロン酸の含有量の比率によって、皮膚内の溶解速度を容易に調節することができる。また、マイクロ構造体に搭載された有用成分を皮膚内へ安定的に伝達しながらも、搭載された有用成分の放出速度を容易に調節できるので、薬理学的な活性物質または皮膚改善用の物質の経皮型伝達体として有用に使うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、架橋ヒアルロン酸の混合比による、本発明のマイクロ構造体の溶解時間を示した図である。
【図２ａ】図２ａは、本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、３０分、１２０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した図である。
【図２ｂ】図２ｂは、皮膚透過後に残っているマイクロ構造体の体積変化を基準とした溶解速度を示すグラフである。
【図３ａ】図３ａは、本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０分、２０分、３０分）によって、残っているマイクロ構造体の体積を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した図である。
【図３ｂ】図３ｂは、皮膚透過後に残っているマイクロ構造体の体積変化を基準とした溶解速度を示すグラフである。
【図４ａ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図４ｂ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図４ｃ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図４ｄ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図４ｅ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図４ｆ】図４ａ〜図４ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を含んでいる混合比別のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（透過前、１０秒、１０分、３０分、６０分）によって、残っているマイクロ構造体の長さを走査電子顕微鏡で観察した図である。
【図５ａ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図５ｂ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図５ｃ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図５ｄ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図５ｅ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図５ｆ】図５ａ〜図５ｆは、架橋結合されたヒアルロン酸を０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で含んでいる混合比別のマイクロ構造体を力変位装置（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認したグラフである。
【図６】図６は、架橋結合されたヒアルロン酸を含む混合比別のマイクロ構造体を、力変位装置を利用して、特定範囲の力を加えたとき、構造体の弾性係数（ヤング率、Ｙｏｕｎｇ’ｓ  ｍｏｄｕｌｕｓ、Ｎ／１００μｍ）を測定確認したグラフである。
【図７ａ】図７ａ〜図７ｃは、蛍光物質（ｃａｌｃｅｉｎ）を搭載した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【図７ｂ】図７ａ〜図７ｃは、蛍光物質（ｃａｌｃｅｉｎ）を搭載した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【図７ｃ】図７ａ〜図７ｃは、蛍光物質（ｃａｌｃｅｉｎ）を搭載した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【図８ａ】図８ａ〜図８ｃは、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を結合したヒアルロン酸で製造した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【図８ｂ】図８ａ〜図８ｃは、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を結合したヒアルロン酸で製造した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【図８ｃ】図８ａ〜図８ｃは、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を結合したヒアルロン酸で製造した本発明のマイクロ構造体を豚の皮膚に透過させた後、透過時間（１分、３０分、１２０分）による拡散様相を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書の用語、「ヒアルロン酸」は、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸の二糖単位が繰り返された接続構造を有する生分解性高分子であり、ヒアルロン酸だけでなく、ヒアルロン酸塩（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム）およびこれらの混合物を全て含む意味で使用される。
【００１４】
本明細書の用語、「ハイドロゲル」は、十分な量の水分を保持している親水性高分子の３次元的な構造を意味する。本発明の目的上、ハイドロゲルは架橋されたヒアルロン酸の特性により形成されたハイドロゲルである。
【００１５】
本発明は、様々な形態のマイクロ構造体を提供することができ、例えば、マイクロニードル、マイクロブレード、マイクロナイフ、マイクロファイバー、マイクロスパイク、マイクロプローブ、マイクロバーブ（ｍｉｃｒｏｂａｒｂ）、マイクロアレイまたはマイクロ電極を提供することができる。本発明の一実施例によると、本発明のマイクロ構造体は、マイクロニードルである。
【００１６】
本発明の一実施例によると、本発明のマイクロ構造体（マイクロニードル）の長さは８０μｍから１５００μｍである。
【００１７】
本明細書の用語「透過」は、マイクロ構造体を皮膚に適用する場合、マイクロ構造体の突出部が皮膚の表皮層を突き抜けて入ることを意味し、好ましくは真皮層まで到達することを意味する。
【００１８】
本発明の一実施例によれば、本発明のマイクロ構造体は、架橋ヒアルロン酸の含有量の比率によってアガロースゲルで相異なる溶解特性を示す。
【００１９】
具体的には、マイクロ構造体に含まれる全体のヒアルロン酸（非架橋ヒアルロン酸と架橋ヒアルロン酸）の重量に対して架橋ヒアルロン酸が０％、１０％、２０％、４０％、８０％、１００％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるように精製水に添加し、これを完全に溶解させてヒアルロン酸ハイドロゲル高分子を製造した後、０．１％のメチレンブルーを混合し、ＰＤＭＳモールドに供給、注入および乾燥させて、本発明のマイクロ構造体を製造した。上記マイクロ構造体を３％（ｗ／ｖ）の濃度のアガロースゲルに対して垂直方向に付けて透過される様相を観察した結果、架橋ヒアルロン酸が０％の場合、５〜１０秒でマイクロ構造体が溶解され、１０％の場合１０〜１５秒、２０％の場合３５〜４５秒、４０％の場合５０〜６０秒、８０％の場合７０〜８０秒、１００％の場合１００〜１２０秒で完全に溶解が行われ、架橋ヒアルロン酸の混合比率が高くなるほどアガロースゲルで溶解速度が徐々に低くなり、混合比が低くなるほどアガロースゲルでの溶解速度が徐々に高くなることを確認した。
【００２０】
また、本発明の一実施例によると、本発明のマイクロ構造体は皮膚内に透過時、皮膚内で特定の溶解特性を有する。
【００２１】
具体的には、本発明の実施例によると、本発明の上記マイクロ構造体を３ｋｇ重（ｋｇｆ）の力で皮膚に透過させると、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの６０％以下が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの７５％以下が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの８５％以下が溶解される。
【００２２】
また、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に１５〜３０％である場合には、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの５０〜６０％が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの６５〜７５％が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの７０〜８５％が溶解される。
【００２３】
また、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に３０〜３５％である場合には、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの４５〜５５％が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの５８〜６８％が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの６５〜７５％が溶解される。
【００２４】
また、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に３５〜５０％である場合には、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの４０〜５５％が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの５１〜６１％が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの５５〜６５％が溶解される。
【００２５】
また、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に５０〜７０％である場合には、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの３５〜４５％が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの４４〜５４％が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの４８〜５８％が溶解される。
【００２６】
また、上記架橋ヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量を基準に７０〜９０％である場合には、皮膚透過１０分後に、マイクロ構造体の長さの３０〜４５％が溶解され、皮膚透過３０分後に、マイクロ構造体の長さの４１〜５１％が溶解され、皮膚透過６０分後に、マイクロ構造体の長さの４５〜５６％が溶解される。
【００２７】
上記説示した架橋ヒアルロン酸の濃度（含有量）別の皮膚透過時間による溶解率は、架橋ヒアルロン酸の濃度を調節することによって、マイクロ構造体の溶解速度を調節することができることを説明するために例示したものだけであり、本発明の範囲が必ず上記範囲に限定されるものではない。
【００２８】
一方、上記実施例で使用された豚の皮膚組織は、本マイクロ構造体と関連した学界と産業界から人体の皮膚組織と構造及び代謝特性などの機能において、最も類似性の高い材料として認められて、人体の皮膚組織の代用としてよく使用され、特に薬物の経皮投与拡散実験で人体の皮膚での拡散特性と同様な程度の類似性を示すので（Ｋｏｎｇ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｓｋｉｎ  ａｓ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｉｍａｇｉｎｇ．」，  Ａｎａｌｙｓｔ．  ２０１１  Ｊｕｎ  ７；１３６（１１）：２３５９〜６６．）、豚の皮膚組織で実施した結果であるが、人体の皮膚組織での溶解特性と類似な結果が表示されることを予測することができる。
【００２９】
本発明のマイクロ構造体に主成分として含まれるヒアルロン酸の濃度は、上記本発明の一態様に係る上記ｉ）の架橋されたヒアルロン酸、または上記ｉｉ）のヒアルロン酸混合物を構成する水または水性溶媒に対して１〜１０％（ｗ／ｖ）であり、上記ヒアルロン酸の全体重量を基準に、上記架橋ヒアルロン酸の含有量は、５〜１００％（ｗ／ｗ）であり、上記非架橋ヒアルロン酸の含有量は、０〜９５％（ｗ／ｗ）である。
【００３０】
上記水は、特に制限されるものではないが、皮膚に直接透過されて化粧料を適用したり、薬物を伝達する薬物伝達体の用途としての使用のために精製水または滅菌水であることが好ましい。
【００３１】
上記水性溶媒は、水と混合されて使用されることができる親水性溶媒を総称するもので、特に制限されるものではないが、皮膚に直接透過される用途を考慮してリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス緩衝液などの生体内に投与されても構わない生理食塩水であることが望ましい。
【００３２】
本発明のマイクロ構造体に主成分として含まれるヒアルロン酸の分子量は、１００〜５０００ｋＤａであることができ、具体的には、２００〜４００ｋＤａであることができるが、これらに制限されるものではない。
【００３３】
また、本発明の一実施例によると、本発明の架橋されたヒアルロン酸は、１〜５０％の架橋度を有する。具体的には、具体的には、１〜４０％、２〜４０％、５〜４０％、７〜４０％、１０〜４０％、１５〜４０％、１８〜４０％、２０〜４０％、２２〜４０％、２５〜４０％、２８〜４０％、３０〜４０％、１〜３５％、２〜３５％、５〜３５％、７〜３５％、１０〜３５％、１５〜３５％、１８〜３５％、２０〜３５％、２２〜３５％、２５〜３５％、２８〜３５％、１〜３０％、２〜３０％、５〜３０％、７〜３０％、１０〜３０％、１５〜３０％、１８〜３０％、２０〜３０％、２２〜３０％、２５〜３０％、２８〜３０％、１〜２５％、２〜２５％、５〜２５％、７〜２５％、１０〜２５％、１５〜２５％、１８〜２５％、２０〜２５％、２２〜２５％、１〜２０％、２〜２０％、５〜２０％、７〜２０％、１０〜２０％、１５〜２０％、１８〜２０％、１〜１５％、２〜１５％、５〜１５％、７〜１５％、１０〜１５％、１〜１０％、２〜１０％、５〜１０％、７〜１０％、１〜５％、２〜５％、１〜３％または２〜３％の架橋度を有する。
【００３４】
本発明のマイクロ構造体は、「生体適合性高分子」または「粘着剤」をさらに含むことができる。
【００３５】
上記生体適合性高分子は、マイクロ構造体の分野で通常的に利用される全ての生体適合性高分子を含む。具体的には、カルボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ：ＣＭＣ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ペクチン、カラギーナン、コンドロイチン（硫酸）、デキストラン（硫酸）、キトサン、ポリリジン（ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、コラーゲン、ゼラチン、カルボキシメチルキチン（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｉｔｉｎ）、フィブリン、アガロース、プルランポリラクチド、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、プルランポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリエーテルエステル（ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｅｓｔｅｒ）、ポリカプロラクトン（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、ポリエステルアミド（ｐｏｌｙｅｓｔｅｒａｍｉｄｅ）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリウレタン、ポリアクリレート、エチレン−酢酸ビニル共重合体、アクリル置換セルロースアセテート、非−生分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン（ｃｈｌｏｒｏｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ  ｐｏｌｙｏｌｅｆｉｎｓ）、ポリエチレンオキサイド、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリメタクリレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、シクロデキストリンおよびこれらの高分子を形成する単量体らの共重合体とセルロースで構成された群から選択された１以上の高分子である。
【００３６】
また、上記粘着剤は、マイクロ構造体の分野で通常的に利用される全ての粘着剤を含む。具体的には、シリコン、ポリウレタン、物理的な接着剤（ゲッコー）、ポリアクリル、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、エチレン酢酸ビニルおよびポリイソブチレンで構成された群から選択された１以上の粘着剤である。
【００３７】
本発明のマイクロ構造体は、ヒアルロン酸をはじめとする、上記様々な生体適合性高分子または粘着剤を水または水性溶媒に溶解させてＰＤＭＳ（ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｚａｎｅ）モールドに供給、注入および乾燥させて製造される。本発明の一実施例によれば、上記ＰＤＭＳに供給される生体適合性高分子または粘着剤は、水または水性溶媒に１〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度で含まれるが、これに制限されるものではない。
【００３８】
ヒアルロン酸を主成分とするマイクロ構造体は、当業界の全てのマイクロモールドの製造技法を用いて製造することができる。
【００３９】
また、本発明のマイクロ構造体は、薬理学的な活性物質または皮膚改善用の物質を含むことができる。具体的には、例えば、抗炎症剤、鎮痛剤、抗関節炎剤、鎮痙剤、抗うつ剤、抗精神病薬、精神安定剤、抗不安薬、麻薬拮抗薬、抗パーキンソン病薬、コリン作動性アゴニスト、抗がん剤、血管新生阻害剤、免疫抑制剤、抗ウイルス剤、抗生剤、食欲抑制剤、鎮痛剤、抗コリン剤、抗ヒスタミン剤、片頭痛治療剤、ホルモン剤、冠状血管、脳血管または末梢血管拡張薬、避妊薬、抗血栓薬、利尿剤、降圧薬、心血管疾患治療薬、美容成分（例えば、シワ改善剤、皮膚老化抑制剤および皮膚美白剤）などを含むが、これに制限されるものではない。
【００４０】
本発明のマイクロ構造体は、上記のような薬理学的な活性物質を搭載することができ、皮膚内に透過時、搭載した薬理学的な活性物質を効果的に放出及び拡散させることができ、これを構成する架橋ヒアルロン酸、非架橋ヒアルロン酸の比率によって上記した薬理学的な活性物質の放出と拡散速度を制御することができる。具体的には、本発明の一実施例を挙げて説明すると、マイクロ構造体の製造時に蛍光物質であるカルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ）を架橋ヒアルロン酸ハイドロゲル高分子に５％（ｗ／ｖ）で含有されるように混合し、製造したマイクロ構造体を豚の皮膚にそれぞれ１分、３０分、１２０分の間、垂直に透過した結果、皮膚透過１分〜３０分後、マイクロ構造体が急速に溶解されると、カルセインの蛍光シグナルが急速に放出、拡散及び維持され、皮膚透過１２０分後にもカルセインの蛍光シグナルが強く観察された。
【００４１】
本発明のマイクロ構造体は、主成分であるヒアルロン酸に薬理活性物質を化学的に結合して製造することができ、皮膚透過時に優れた溶解特性を示し、薬理活性物質を効果的に伝達することができる。本発明の他の実施例を挙げて説明すると、蛍光物質（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）が結合されたヒアルロン酸（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）で本発明のマイクロ構造体を製造し、製造したマイクロ構造体を皮膚に透過した結果、ニードルの端から溶解が始まり、皮膚透過直後から非架橋ヒアルロン酸が溶解し始め、皮膚透過後の約３０分まで、非常に速い速度で溶解が行われた。さらに、架橋ヒアルロン酸の遅い溶解速度によって、皮膚透過１２０分後に蛍光シグナルがマイクロ構造体の形状を維持しながら、１２０分以上維持されることを確認することができた。
【００４２】
また、本発明の一実施例によると、本発明のマイクロ構造体は、皮膚透過に適した弾性程度を有する。より具体的には、本発明のマイクロ構造体は、０．４〜０．７Ｎ／１００μｍの弾性係数（ヤング率、Ｙｏｕｎｇ’ｓ  ｍｏｄｕｌｕｓ）を有することを特徴とする。
【００４３】
上記ヤング率（Ｙｏｕｎｇ’ｓ  ｍｏｄｕｌｕｓ）は、物体から起こる変形と圧力との関係を示す弾性係数であり、１次元の例で説明するとヤング率をＥとするとき、応力（ｓｔｒｅｓｓ）＝Ｅ×変形度（ｓｔｒａｉｎ）で表現される。上記ヤング率は、物体本来の性質として、ヤング率は物体に与えられた圧力を知っているとき、その物体の変形の程度を予測するのに使われ、その逆も使われる。
【００４４】
本発明の実施例４〜６で豚の皮膚に対して行った皮膚透過の実験結果によれば、上記弾性係数（ヤング率）の範囲は、豚の皮膚を透過するのに十分な機械的強度を有する範囲に該当する。
【００４５】
本発明のマイクロ構造体は、皮膚透過時にマイクロ構造体の高さの８０％以上が透過されて高い機械的強度を有し、上記実施例によれば、上記機械的強度は、８０〜１００（透過率、％）である。
【００４６】
上記で説明したように、本発明のマイクロ構造体は、皮膚透過時に溶解特性が非常に優れており、架橋されたヒアルロン酸の含有量（混合）比を調節することにより、溶解速度の調節が容易である。また、マイクロ構造体の製造時に薬理活性物質を混合したり、薬理活性物質が化学的に結合されたヒアルロン酸を利用するなどの方式で薬理活性物質の搭載が容易で、マイクロ構造体を皮膚内に透過時、搭載された薬理活性物質の放出及び拡散が効果的に行われて有用成分を皮膚内へ安定的に伝達することができ、架橋ヒアルロン酸の含有量を調節することにより、ヒアルロン酸の溶解速度と有用成分の放出拡散速度を容易に調節することができる。従って、本発明のマイクロ構造体は、薬理学的な活性物質または皮膚改善用物質の経皮型伝達体として有用に使うことができる。
【００４７】
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、ただ本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨に基づいて、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されていないということは、当業界で通常の知識を有する者にとって自明である。
【実施例】
【００４８】
本明細書の全体にわたり、特定物質の濃度を示すために使用される％は、特に言及がない場合は、固体／固体は（重量／重量）％、固体／液体は（重量／体積）％、そして液体／液体は（体積／体積）％である。
【００４９】
（実施例１）：架橋結合されたヒアルロン酸を含むマイクロ構造体のアガロースゲル透過時の溶解速度実験
実施例１−１：架橋結合されたヒアルロン酸を含むマイクロ構造体の製造
シリコンウエハーにフォトリソグラフィ（ｐｈｏｔｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙ）とエッチング（ｅｃｈｉｎｇ）製作技法を利用して、正または負のマスターモールド（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｏｒ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｏｌｄ）を製造した後、上記マスターモールドから硬化性シリコン（ＰＤＭＳ，  ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｚａｎｅ）を利用して、最終負モールド（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｌｄ）を製造した。
【００５０】
生体適合性高分子である平均分子量３６０ｋＤａ（分子量範囲２４０〜４９０ｋＤａ）のヒアルロン酸（Ｂｌｏｏｍａｇｅ  Ｆｒｅｄａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、中国）をアルカリ水（０．２５Ｎ  ＮａＯＨ）に完全に溶解させた後、架橋を達成するために架橋剤（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としてブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ，１，４−Ｂｕｔａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）を添加して架橋結合されたヒアルロン酸（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）を製造した。製造した架橋ヒアルロン酸が全体ヒアルロン酸（非架橋ヒアルロン酸と架橋ヒアルロン酸）の重量に対して、０％、１０％、２０％、４０％、８０％、１００％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるように精製水に添加し、完全に溶解させて架橋／非架橋ヒアルロン酸ハイドロゲル高分子（ポリマー）を製造した。例えば説明すると、精製水１００ｍｌに架橋ヒアルロン酸０．５ｇ、非架橋ヒアルロン酸４．５ｇを溶解させると、架橋ヒアルロン酸が全体ヒアルロン酸の重量に対して、１０％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるヒアルロン酸ハイドロゲル高分子を製造することができる。このように製造されたヒアルロン酸ハイドロゲル高分子をＰＤＭＳマイクロモールドに供給し、注入および乾燥させた後、モールドを除去して、本発明のマイクロ構造体を製造した。
【００５１】
実施例１−２：架橋結合されたヒアルロン酸を含むマイクロ構造体のアガロースゲル透過時の溶解速度実験
マイクロ構造体のアガロースゲル透過時の溶解速度を調べるために、実施例１−１で製造した全体のヒアルロン酸の重量に対して、架橋ヒアルロン酸の重量を０〜１００％（ｗ／ｗ）の重量比で製造した架橋／非架橋ヒアルロン酸ハイドロゲルに同一の体積の０．１％メチレンブルー（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｌｕｅ）を混合し、ＰＤＭＳマイクロモールドに供給、注入および乾燥させた後、モールドを除去して、青色を帯びたヒアルロン酸マイクロ構造体を製造した。
【００５２】
次に、アガロース粉末（ａｇａｒｏｓｅ  ｐｏｗｄｅｒ）０．７５ｇを蒸留水２５ｍｌに入れて加熱して溶解した後、冷やして３％（ｗ／ｖ）の濃度のアガロースゲルを作った後、適切なサイズ（約０．８ｃｍ×１ｃｍ）に切って準備した。
【００５３】
上記で製造したメチレンブルーを含むマイクロ構造体を０．１〜０．１５ｃｍの幅に切り、マイクロ構造体をアガロースゲルに対して垂直方向に付けてマイクロ構造体がアガロースゲルに透過されることができるようにし、マイクロ構造体が含有する架橋結合されたヒアルロン酸の比率別にアガロースゲルに溶解される現象を、顕微鏡（Ｓｕｎｎｙ  ＳＺＭＮ、４０倍以上）を利用して２分間観察した。
【００５４】
結果は、図１に示した。
【００５５】
図１に示すように、架橋ヒアルロン酸の混合比が高いほど、マイクロ構造体が溶解される時間が長くなり、架橋ヒアルロン酸の混合比が低いほど、マイクロ構造体が溶解される時間が短くなることが分かった。従って、架橋されたヒアルロン酸の混合比を変更することにより、本発明のマイクロ構造体の溶解速度を調節することができることを確認した。
【００５６】
（実施例２）：架橋結合されたヒアルロン酸５０％（ｗ／ｗ）を含むマイクロ構造体の豚の皮膚透過時の溶解速度実験
本発明のマイクロ構造体の皮膚透過時の溶解特性を調べるために、架橋ヒアルロン酸と非架橋ヒアルロン酸が同一の重量比で含まれるようにすることを除いては、実施例１と同様の方法で、本発明のマイクロ構造体を製造した。製造したマイクロ構造体を豚の皮膚に一定の力で一定時間、透過（挿入）させた後、透過前後の構造体の変形の程度を確認して溶解速度を比較した。
【００５７】
実施例２−１．マイクロ構造体の長さを基準にした溶解速度
上記で製造したマイクロ構造体を０．７ｃｍ×０．７ｃｍに切った後、豚の皮膚に対して垂直方向に５ｋｇ重の力で１０秒〜１２０分の間、力を加えて透過させた。光学顕微鏡（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）でマイクロ構造体の透過部位を観察し、皮膚透過前後のマイクロ構造体の変形の程度を、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ，  ＪＥＯＬ  ＪＳＭ−７５００Ｆ）を用いて、それぞれの長さと体積の面で透過前、透過１０秒後、透過１０分後、透過２０分後、透過３０分後、透過６０分後および透過１２０分後に確認することにより、透過時の溶解速度を測定した。
【００５８】
本発明のマイクロ構造体の豚の皮膚透過後に残っている構造体の長さの変化による溶解速度実験の結果は、下記表１と図２ａ及び図３ａに示した。
【００５９】
【表１】
2019523680.tif 000003
【００６０】
表１及び図２ａ、図３ａに示すように、豚の皮膚に透過１０秒後に構造体の全長の３５％が溶解され、透過１０分後には５２％、透過２０分後には７０％、透過３０分後は７６％、透過６０分後には７８％が、透過１２０分後には、８２％が溶解されることを確認した。
【００６１】
実施例２−２．マイクロ構造体の体積を基準にした溶解速度
本発明のマイクロ構造体の豚の皮膚に透過後に残っている構造体の体積変化による溶解速度を測定し、実験結果を下記表２と図２ｂ及び図３ｂに示した。
【００６２】
【表２】
2019523680.tif 000004
【００６３】
表２と図２ｂ及び図３ｂに示すように、透過後１０分後には１５％、２０分後には３０％、３０分後には、総体積の４５〜４８％が溶解されて継続的に速い速度で溶解されながら、透過１２０分後には、総体積の５６％が溶解されて、徐々にゆっくりと溶解されることを確認した。
【００６４】
従って、本発明の架橋されたヒアルロン酸を含むマイクロ構造体は、人体の皮膚に適用される場合、非架橋ヒアルロン酸の初期溶解速度が非常に速く、透過３０分までは迅速な効果を提供し、透過３０分以後には架橋結合されたヒアルロン酸がゆっくりと溶解して継続的に皮膚に一定の効果を提供することができるので、皮膚に適用する用途として有用に使えることが分かる。
【００６５】
（実施例３）：架橋結合されたヒアルロン酸を含む混合比別のマイクロ構造体の豚の皮膚透過時の溶解速度の比較実験
本発明のマイクロ構造体の皮膚透過時の溶解特性を調べるために、実施例１と同様の方法で架橋ヒアルロン酸が全体ヒアルロン酸（非架橋ヒアルロン酸と架橋ヒアルロン酸）の重量に対して、０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるように精製水に添加し、完全に溶解させて架橋／非架橋ヒアルロン酸ハイドロゲル高分子を製造した。
【００６６】
上記高分子を用いて製造したマイクロ構造体を０．７ｃｍ×０．７ｃｍに切った後、豚の皮膚に対して垂直方向に３ｋｇ重の力で１０秒〜６０分間、力を加えて透過させた。光学顕微鏡でマイクロ構造体の透過部位と皮膚透過前のマイクロ構造体を観察し、変形の程度を、走査電子顕微鏡を用いて、それぞれの長さの面で透過前、透過１０秒後、透過１０分後、透過３０分後、透過６０分後に確認することにより、透過時の溶解速度を測定した。
【００６７】
本発明のマイクロ構造体の豚の皮膚に透過した後に残っている構造体の長さの変化による溶解速度実験の結果は、下記表３及び図４に示した。
【００６８】
【表３】
2019523680.tif 000005
【００６９】
表３及び図４ａ〜図４ｆに示すように、架橋されたヒアルロン酸の混合比が増加するほど、皮膚透過時の溶解速度が遅くなり、豚の皮膚に透過３０分後に架橋されたヒアルロン酸の混合比によって０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％で、それぞれの構造体の全長の７２％、６７％、６３％、５６％、４９％、４６％が溶解されることを確認した。
【００７０】
従って、本発明の架橋されたヒアルロン酸を含むマイクロ構造体は、人の皮膚に適用される場合、架橋結合されたヒアルロン酸の混合比を調節することにより、皮膚内の溶解時間を調節することができるので、皮膚の保湿とシワ改善効果などの皮膚の美容に有用な効果を示す時間を調節することができ、皮膚美容機能成分、薬物などの有効成分をマイクロ構造体に含む場合、有効成分の皮膚放出速度を適切に調節する用途（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）として有用に使えることが分かる。
【００７１】
（実施例４）：架橋結合されたヒアルロン酸を含む混合比別のマイクロ構造体の機械的強度の比較実験（ｆｏｒｃｅ−ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ測定）
本発明のマイクロ構造体の皮膚透過時の機械的な強度特性を調べるために、力変位装置（Ｚｗｉｃｋ／Ｒｏｅｌｌ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、特定範囲の力を加えたとき、構造体の変形様相を確認した。
【００７２】
実施例１と同様の方法で架橋ヒアルロン酸が全体ヒアルロン酸（非架橋ヒアルロン酸と架橋ヒアルロン酸）の重量に対して、０％、２０％、３３％、４０％、６０％、８０％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるように精製水に添加し、完全に溶解させて架橋／非架橋ヒアルロン酸ハイドロゲル高分子を製造した。
【００７３】
上記高分子で製造したマイクロ構造体を利用して、２×２の構造体（合計４つの構造体）の試料を準備した。力変位装置に混合比別のマイクロ構造体試料を装着して０〜１０Ｎの範囲で力を加えた後、構造体チップ（ｔｉｐ）部分から１００μｍ〜２００μｍの構造体が変形される区間を観察して比較した。また、混合比別の構造体の弾性係数（ヤング率、Ｙｏｕｎｇ’ｓ  ｍｏｄｕｌｕｓ、Ｎ／１００μｍ）を測定して比較した。
【００７４】
図５に示すように、架橋されたヒアルロン酸の混合比が変化するほど力変位（Ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）パターンに微細な変化を確認することができた。架橋されたヒアルロン酸の混合比によって０％、２０％、３３％、４０％の場合、チップから０．３Ｎ〜０．５Ｎから０．９Ｎ〜１．３Ｎの力の範囲で構造体の変形が現れ、６０％、８０％の混合比の場合、それぞれ０．１Ｎ〜０．２Ｎから０．６Ｎ〜０．７Ｎの力の範囲で構造体の変形が現れることを確認した。
【００７５】
【表４】
2019523680.tif 000006
【００７６】
図６〜表４に示すように、混合比別の構造体の弾性係数には大きな差はなく、架橋されたヒアルロン酸の混合比によって０％、２０％、３３％、４０％の範囲では、それぞれ０．３５、０．５、０．５３、０．６６に、６０％、８０％の混合比では、それぞれ０．４３、０．４４になった。
【００７７】
上記の結果から、本発明のマイクロ構造体は、架橋されたヒアルロン酸含有量の全ての範囲で、皮膚透過に十分な強度と弾性力を有することを確認することができた。従って、本発明のマイクロ構造体内の架橋されたヒアルロン酸含有量を調節すると、マイクロ構造体の強度に影響も与えることなく、マイクロ構造体の溶解速度とマイクロ構造内に含まれた有効成分の放出速度を容易に調節することができることが分かる。
【００７８】
（実施例５）：本発明のマイクロ構造体に蛍光物質（ｃａｌｃｅｉｎ）搭載後の皮膚透過時の拡散パターンと拡散速度の実験
本発明のマイクロ構造体の薬物伝達体としての利用の可能性を調べるために、本発明のマイクロ構造体に蛍光物質を搭載（ｌｏａｄｉｎｇ）した後、豚の皮膚に透過時の透過深さなどの拡散パターンと拡散速度を確認した。
【００７９】
まず、架橋結合されたヒアルロン酸がヒアルロン酸の全体重量に対して、３５％（ｗ／ｗ）の比率で含まれている架橋ヒアルロン酸高分子に蛍光物質であるカルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ、シグマアルドリッチ）が５％（ｗ／ｖ）で含有されるように混合した後に、モールドに供給、注入、乾燥してカルセインが搭載された２６５μｍの高さのマイクロ構造体（マイクロニードル）を製造した。マイクロ構造体のサンプルは、０．７ｃｍ×０．７ｃｍに切った後に使用し、豚の皮膚に５ｋｇ重の力で１分、３０分、１２０分の間、垂直に力を加えて透過させた。豚の皮膚に残っている蛍光物質をコンフォーカル顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｎｉｋｏｎ、ＥＣＬＩＰＳＥＴＥ２０００−Ｅ）を用いて観察して透過深さと時間による拡散様相を観察した。
【００８０】
結果は、図７ａ〜図７ｃに示した。
【００８１】
図７ａ〜図７ｃに示すように、皮膚透過１分後にニードルの全長（２６５μｍ）の８０％以上の深さで皮膚透過が行われ、ニードルの端（ｔｉｐ）部分から溶解が開始され、搭載薬物であるカルセインの拡散が起こることを確認した。カルセインの蛍光シグナルは、透過３０分後にも殆ど維持されている様相を見せた。これらの結果は、カルセインを搭載した非架橋ヒアルロン酸が急速に溶解されながら、カルセインを放出（ｆａｓｔ−ｒｅｌｅａｓｅ）するためであると考えられる。また、皮膚透過１２０分後にもカルセインの蛍光シグナルが強く観察され、本発明のマイクロ構造体が、皮膚透過後、ゆっくりと持続的にカルセインを放出することができ、これらの徐放性薬物放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）の効果は、カルセインを搭載した架橋ヒアルロン酸がゆっくりと溶解されながら、カルセインを放出させられるためであると考えられ、本実施例と上記実施例２の結果に鑑みて４〜６時間まで維持されると予想された。従って、本発明のマイクロ構造体は、薬物を搭載して皮膚に放出させる形態の薬物伝達体として有用に使用することができ、製造されるマイクロ構造体の架橋ヒアルロン酸の混合比を高めることにより徐放性（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）に放出される薬物の量を増加させることができ、非架橋ヒアルロン酸の混合比を高めることにより速放性（ｆａｓｔ−ｒｅｌｅａｓｅ）で放出される薬物の量を増加させることができるなどの放出速度の調節が容易であることが分かる。
【００８２】
（実施例６）：蛍光物質が結合されたヒアルロン酸（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）で製造された本発明のマイクロ構造体の皮膚透過時の時間による溶解パターンと溶解速度実験
本発明のマイクロ構造体の皮膚透過時の皮膚内溶解パターンと溶解速度を調べるために、蛍光物質が結合されたヒアルロン酸で製造された本発明のマイクロ構造体の豚の皮膚に透過時の溶解パターンと溶解速度を確認した。
【００８３】
生体適合性高分子としては、平均分子量３６０ｋＤａ（分子量範囲２４０〜４９０ｋＤａ）のヒアルロン酸を用いた。このとき、蛍光物質が結合されたヒアルロン酸（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−ｌａｂｅｌｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、平均分子量８００ｋＤａ、シグマアルドリッチ）を５％（ｗ／ｗ）の比率で添加して架橋剤としてＢＤＤＥを用いて、蛍光物質が結合された架橋ヒアルロン酸（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−ｔａｇｇｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）を製造した。次に、架橋ヒアルロン酸が全体ヒアルロン酸（非架橋ヒアルロン酸と架橋ヒアルロン酸）の重量に対して、３０％（ｗ／ｗ）の混合比で含まれるように精製水に添加し、完全に溶解させて架橋ヒアルロン酸ハイドロゲル高分子を製造した。ＰＤＭＳマイクロモールドに上記高分子を供給して注入及び乾燥させた後、モールドを除去して２６５μｍの高さのマイクロ構造体（マイクロニードル）を製造した。
【００８４】
マイクロ構造体のサンプルは、０．７ｃｍ×０．７ｃｍに切った後に使用し、豚の皮膚に５ｋｇ重の力で１分、３０分、１２０分の間、垂直に力を加えて透過させた。豚の皮膚に残っている蛍光物質をコンフォーカル顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｎｉｋｏｎ、ＥＣＬＩＰＳＥＴＥ２０００−Ｅ）を用いて観察して透過深さなどの溶解パターンと溶解速度を確認した。
【００８５】
結果は、図８ａ〜図８ｃに示した。
【００８６】
図８ａ〜図８ｃに示すように、皮膚透過１分後にニードルの全長（２６５μｍ）の８０％以上の深さで皮膚透過が行われ、ニードルの端（ｔｉｐ）部分から溶解が開始されることを確認した。蛍光物質が結合された架橋ヒアルロン酸の場合には、皮膚透過直後から非常に速く溶解される非架橋ヒアルロン酸とは異なって、透過３０分以降から１２０分まで非常に遅い速度で溶解拡散され、蛍光シグナルがマイクロニードルの形状を維持しながら、１２０分以上維持されることが確認され、本実施例と上記実施例２の結果に鑑みて４〜６時間まで維持されると予想された。従って、本発明のマイクロ構造体は、皮膚透過時に溶解特性に非常に優れており、架橋ヒアルロン酸の混合比を上げたり下げたりすることにより、ゆっくり長い時間溶解されるようにしたり、すぐに短い時間の間に溶解されることができるように溶解速度の調節が容易であることが分かる。
【００８７】
以上で、本発明の特定部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にとって、これらの具体的な技術は、単に好ましい実施例だけであり、これに本発明の範囲が制限されるものではない点は明らかである。従って、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とその等価物によって定義されると言える。
【図１】
2019523680.tif 000007
【図２ａ】
2019523680.tif 000008
【図２ｂ】
2019523680.tif 000009
【図３ａ】
2019523680.tif 000010
【図３ｂ】
2019523680.tif 000011
【図４ａ】
2019523680.tif 000012
【図４ｂ】
2019523680.tif 000013
【図４ｃ】
2019523680.tif 000014
【図４ｄ】
2019523680.tif 000015
【図４ｅ】
2019523680.tif 000016
【図４ｆ】
2019523680.tif 000017
【図５ａ】
2019523680.tif 000018
【図５ｂ】
2019523680.tif 000019
【図５ｃ】
2019523680.tif 000020
【図５ｄ】
2019523680.tif 000021
【図５ｅ】
2019523680.tif 000022
【図５ｆ】
2019523680.tif 000023
【図６】
2019523680.tif 000024
【図７ａ】
2019523680.tif 000025
【図７ｂ】
2019523680.tif 000026
【図７ｃ】
2019523680.tif 000027
【図８ａ】
2019523680.tif 000028
【図８ｂ】
2019523680.tif 000029
【図８ｃ】
2019523680.tif 000030
【国際調査報告】
2019523680.tif 000031
2019523680.tif 000032
2019523680.tif 000033
2019523680.tif 000034