(57)【要約】  本発明には、化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩、前記塩の結晶形及び調製方法、並びにこれらの塩の脳卒中又はてんかんを治療するための薬物の製造における使用が開示されている。2019523306.tif 000023
2019523306.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩。
2019523306.tif 000021
【請求項２】
2019523306.tif 000022
から選択される請求項１に記載の化合物の塩。
【請求項３】
式（I）で示される化合物のＡ結晶形であって、
ただし、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（I）で示される化合物のＡ結晶形。
９.１４±０.２°、１０.４３±０.２°、１１.３８±０.２°、１２.５４±０.２°、１３.８６±０.２°、１９.０４±０.２°、１９.３６±０.２°、２１.００±０.２°。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−１に示されるようなものである、請求項３に記載の式（I）で示される化合物のＡ結晶形。
【請求項５】
式（I）で示される化合物のＢ結晶形であって、
ただし、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（I）で示される化合物のＢ結晶形。
９.１７±０.２°、 １１.７５±０.２°、１２.１６±０.２°、１２.６７±０.２°、１５.１４±０.２°、１７.８１±０.２°、２０.５４±０.２°、２２.３４±０.２°。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−２に示されるようなものである、請求項５に記載の式（I）で示される化合物のＢ結晶形。
【請求項７】
式（II）で示される化合物のＣ結晶形であって、
ただし、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（II）で示される化合物のＣ結晶形。
１４.０４±０.２°、 １６.２８±０.２°、１６.７０±０.２°、１７.７３±０.２°、１８.１８±０.２°、２０.２９±０.２°、２３.４０±０.２°、２５.９５±０.２°。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折スペクトル解析データは、表−３に示されるようなものである、請求項７に記載の式（II）で示される化合物のＣ結晶形。
【請求項９】
式（III）で示される化合物のＤ結晶形であって、
ただし、前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（III）で示される化合物のＤ結晶形。
４.４７±０.２°、９.８０±０.２°、１０.６７±０.２°、１３.０５±０.２°、１６.３０±０.２°、１６.７８±０.２°、１７.６５±０.２°、１７.８２±０.２°。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−４に示されるようなものである、請求項９に記載の式（III）で示される化合物のＤ結晶形。
【請求項１１】
式（IV）で示される化合物のＥ結晶形であって、
ただし、前記Ｅ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（IV）で示される化合物のＥ結晶形。
４.７１±０.２°、１２.３０±０.２°、１６.２６±０.２°、１６.８０±０.２°、１９.８０±０.２°、２３.７０±０.２°、２５.６５±０.２°、２６.２２±０.２°。
【請求項１２】
粉末Ｘ線回折スペクトル解析データは、表−５に示されるようなものである、請求項１１に記載の式（IV）で示される化合物のＥ結晶形。
【請求項１３】
式（IV）で示される化合物のＦ結晶形であって、
ただし、前記Ｆ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（IV）で示される化合物のＦ結晶形。
５.７９±０.２°、９.７５±０.２°、１４.０３±０.２°、１５.６７±０.２°、１７.４６±０.２°、１８.８６±０.２°、２０.４２±０.２°、２０.９９±０.２°。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−６に示されるようなものである、請求項１３に記載の式（IV）で示される化合物のＦ結晶形。
【請求項１５】
式（V）で示される化合物のＧ結晶形であって、
ただし、前記Ｇ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（V）で示される化合物のＧ結晶形。
４.５９±０.２°、 １２.２４±０.２°、１５.９３±０.２°、１６.６６±０.２°、１８.４６±０.２°、１９.７２±０.２°、２２.１０±０.２°、２３.５６±０.２°。
【請求項１６】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−７に示されるようなものである、請求項１５に記載の式（V）で示される化合物のＧ結晶形。
【請求項１７】
式（V）で示される化合物のＨ結晶形であって、
ただし、前記Ｈ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（V）で示される化合物のＨ結晶形。
５.８５±０.２°、 ８.８０±０.２°、９.８７±０.２°、１２.４７±０.２°、１４.０６±０.２°、１７.６２±０.２°、１８.７０±０.２°、２０.５８±０.２°。
【請求項１８】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−８に示されるようなものである、請求項１７に記載の式（V）で示される化合物のＨ結晶形。
【請求項１９】
遊離アルカリを酸に接触させること、洗浄及び乾燥を含む、請求項３〜１８のいずれか1項に記載の結晶形の調製方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の化合物、又は請求項３〜７のいずれか１項に記載の結晶形の脳卒中又はてんかんを治療するための薬物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩、これらの塩の結晶形及び調製方法、並びにこれらが脳卒中またはてんかんの治療薬の製造における使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
世界保健機関ＷＨＯの調査によると、脳卒中は、すでに虚血性疾患に次いで、人類を死亡させる大きな要因となっており、障害や後遺症を起こす主な病的要因でもある。患者自身の肢体障害を軽減して身体機能と労働能力を最大限に回復させ、患者の予後と生活の質を改善して、個人と社会の負担を軽減する必要がある。
【０００３】
式（Ｂ−Ｉ）に示す構造を有するビンポセチンは、キョウチクトウ科ヒメツルニチニチソウから抽出されるインドールアルカロイドであり、脂溶性が高く血液脳関門を透過しやすいため、脳組織で比較的高い濃度で分布して治療効果を発揮する。ハンガリーのＧｅｄｌｅｏｎ  Ｒｉｃｈｔｅｒ社によって開発されて１９７８年に市場に投入されて以来、欧州ではすでに３０年以上使用されている。ビンポセチンは、主に、脳梗塞後遺症、脳出血後遺症、脳動脈硬化症などが引き起こす種々の症状の緩和に用いられ、現在、すでに心・脳血管疾患の常用治療薬として使用されている。近年、加齢性記憶障害の緩和と健常者の精神活動の改善など、その他の生理活性が発見されている。また、思考力や注意力の低下、怒り、視覚と聴覚の異常、情緒不安定などに一定の効果を示している。また、臨床試験データによると、６７％以上のてんかん患者に対して発作の頻度が著しく減らされ又は完全に発病しないという効果が現れる。全身強直・間代性痙攣のてんかんにも顕著な効果がある。
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
中国では、脳卒中の発病率とその後遺障害発生率が極めて高く、すでに医療業界の大きな負担となっている。また、ビンポセチンが、脳卒中と関連疾患の治療において幅広い用いられており、脳卒中の予後改善のための重要な治療手段となっているが、その治療効果の確実性に疑問があり、錠剤でのバイオアベイラビリティが低いという問題がある。
【０００５】
てんかんは、慢性反復性に発作する一時的な脳機能障害の症候群である。それは、罹患率が脳卒中に次いで二番目高く、大脳ニューロンの異常な放電から由来する反複性のてんかん発作を主徴とする代表的な神経系疾患の一つである。我が国のてんかん患者の数が多く、尚且２０歳以下の青少年及び児童がてんかん患者の主体となった。てんかんは、後遺障害の発生率及び死亡率が比較的高いため、既に重視すべき社会問題になった。ビンポセチンは、６７％以上のてんかん患者に異なる程度の治療効果があり、特に全身強直・間代性痙攣のてんかんに対して顕著な効果がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩または硫酸塩を提供する。
2019523306.tif 000004
【０００７】
本発明のいくつかの形態では、上記化合物の塩が以下のものから選ばれる：
2019523306.tif 000005
【０００８】
本発明は、更に、式（I）で示される化合物のＡ結晶形を提供し、ただし、上記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：９.１４±０.２°、１０.４３±０.２°、１１.３８±０.２°、１２.５４±０.２°、１３.８６±０.２°、１９.０４±０.２°、１９.３６±０.２°、２１.００±０.２°。
【０００９】
本発明のいくつかの形態では、上記式（I）で示される化合物のＡ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−１に示されている。
【００１０】
【表１】
2019523306.tif 000006
【００１１】
本発明は、更に、式（I）で示される化合物のＢ結晶形を提供し、ただし、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：９.１７±０.２°、 １１.７５±０.２°、１２.１６±０.２°、１２.６７±０.２°、１５.１４±０.２°、１７.８１±０.２°、２０.５４±０.２°、２２.３４±０.２°。
【００１２】
本発明のいくつかの形態では、前記式（I）で示される化合物のＢ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−２に示されている。
【００１３】
【表２】
2019523306.tif 000007
【００１４】
本発明は、更に、式（II）で示される化合物のＣ結晶形を提供し、ただし、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：１４.０４±０.２°、 １６.２８±０.２°、１６.７０±０.２°、１７.７３±０.２°、１８.１８±０.２°、２０.２９±０.２°、２３.４０±０.２°、２５.９５±０.２°。
【００１５】
本発明のいくつかの形態では、前記式（II）で示される化合物のＣ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−３に示されている。
【００１６】
【表３】
2019523306.tif 000008
【００１７】
本発明は、さらに、式（III）で示される化合物のＤ結晶形を提供し、ただし、前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：４.４７±０.２°、９.８０±０.２°、１０.６７±０.２°、１３.０５±０.２°、１６.３０±０.２°、１６.８０±０.２°、１７.６５±０.２°、１７.８２±０.２°。
【００１８】
本発明のいくつかの形態では、上記式（III）で示される化合物のＤ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−４に示されている。
【００１９】
【表４】
2019523306.tif 000009
【００２０】
本発明は、更に、式（IV）で示される化合物のＥ結晶形を提供し、ただし、前記Ｅ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：４.７１±０.２°、 １２.３０±０.２°、１６.２６±０.２°、１６.７８±０.２°、１９.８０±０.２°、２３.７０±０.２°、２５.６５±０.２°、２６.２２±０.２°。
【００２１】
本発明のいくつかの形態では、上記式（IV）で示される化合物のＥ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−５に示されている。
【００２２】
【表５】
2019523306.tif 000010
【００２３】
本発明は、更に、式（IV）で示される化合物のＦ結晶形を提供し、ただし、前記Ｆ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：５.７９±０.２°、９.７５±０.２°、１４.０３±０.２°、１５.６７±０.２°、１７.４６±０.２°、１８.８６±０.２°、２０.４２±０.２°、２０.９９±０.２°。
【００２４】
本発明のいくつかの形態では、上記（IV）で示される化合物のＦ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−６に示されている。
【００２５】
【表６】
2019523306.tif 000011
【００２６】
本発明は、更に、式（V）で示される化合物のＧ結晶形を提供し、ただし、前記Ｇ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：４.５９±０.２°、１２.２４±０.２°、１５.９３±０.２°、１６.６６±０.２°、１８.４６±０.２°、１９.７２±０.２°、２２.１０±０.２°、２３.５６±０.２°。
【００２７】
本発明のいくつかの形態では、上記式（V）で示される化合物のＧ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−７に示されている。
【００２８】
【表７】
2019523306.tif 000012
【００２９】
本発明は、更に、式（V）で示される化合物のＨ結晶形を提供し、ただし、前記Ｈ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する：５.８５±０.２°、 ８.８０±０.２°、９.８７±０.２°、１２.４７±０.２°、１４.０６±０.２°、１７.６２±０.２°、１８.７０±０.２°、２０.５８±０.２°。
【００３０】
本発明のいくつかの形態では、上記式（V）で示される化合物のＨ結晶形について、その粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データが表−８に示されている。
【００３１】
【表８】
2019523306.tif 000013
【００３２】
本発明は、更に、遊離アルカリを酸と接触させること、洗浄及び乾燥を含む、前記結晶形の調製方法を提供する。
【００３３】
本発明は、更に、有効成分としての治療有効量の前記化合物或いは前記結晶形と、薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物を提供する。
【００３４】
本発明は、更に、前記化合物が脳卒中或いはてんかんを治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【００３５】
本発明は、更に、前記結晶形が脳卒中或いはてんかんを治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【００３６】
本発明は、更に、前記医薬組成物が脳卒中或いはてんかんを治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【発明の効果】
【００３７】
本発明が提供する式（I）で示される化合物のＡ結晶形及びＢ結晶形、式（II）で示される化合物のＣ結晶形、式（III）で示される化合物のＤ結晶形、式（IV）で示される化合物のＥ結晶形及びＦ結晶形、並びに式（V）で示される化合物のＧ結晶形及びＨ結晶形は、安定性がよく、溶解度が高く、吸湿性も良いため、製剤開発上に明るい見込みがある。
【００３８】
本発明の各結晶形の調製方法が簡単であり、厳しい条件及び劇毒溶媒に必要がなく、結晶形の純度が高く、成品率がよいため、工業化生産に有利になる。
【関連の定義と説明】
【００３９】
本明細書に使用された以下の用語及び連語は、別途説明のない限り、以下の意味を有する。特定の用語及び連語については、特に定義されていない場合、不明確又は不明瞭なものではなく、通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が出た場合、それに対応する商品又はその活性成分を指すものとする。
【００４０】
本発明の化合物は、当業者が熟知している様々な合成方法で調製されることができ、下記具体的な実施形態、他の化学的合成方法と組み合わせてなされる実施形態、並びに当業者が熟知している同等の代替的な形態を含み、好適な実施形態は、本発明の実施例を含むがこれに限定されるものではない。
【００４１】
本発明に用いられる溶媒は、市販品である。本発明において、以下の略語が使用される：ａｑ.とは水溶液、ＨＡＴＵとはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、ＥＤＣとはＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩、ｍ−ＣＰＢＡとは３−クロロ過安息香酸、ｅｑとは当量又は等量、ＣＤＩとはカルボニルジイミダゾール、ＤＣＭとはジクロロメタン、ＰＥとは石油エーテル、ＤＩＡＤとはアゾジカルボン酸ジイソプロピル、ＤＭＦとはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯとはジメチルスルホキシド、ＥｔＯＡｃとは酢酸エチル、ＥｔＯＨとはエタノール、ＭｅＯＨとはメタノール、ＣＢｚとはアミン保護基であるベンジルオキシカルボニル基、ＢＯＣとはアミン保護基であるｔ−ブトキシカルボニル基、ＨＯＡｃとは酢酸、ＮａＣＮＢＨ３とはナトリウムシアノボロヒドリド、ｒ.ｔ.とは室温、Ｏ/Ｎとは一晩経過すること、ＴＨＦとはテトラヒドロフラン、Ｂｏｃ２Ｏとはジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル、ＴＦＡとはトリフルオロ酢酸、ＤＩＰＥＡとはジイソプロピルエチルアミン、ＳＯＣｌ２とは塩化チオニル、ＣＳ２とは二硫化炭素、ＴｓＯＨとはｐ−トルエンスルホン酸、ＮＦＳＩとはＮ−フルオロ−Ｎ−（ベンゼンスルホニル）ベンゼンスルホニルアミド、ＮＣＳとは１−クロロピロリジン−２,５−ジオン、ｎ−Ｂｕ４ＮＦとはテトラブチルアンモニウムフルオリド、ｉＰｒＯＨとは２−プロパノール、ｍｐとは融点、ＬＤＡとはリチウムジイソプロピルアミド、ＣＤＣｌ３とは重水素化クロロホルム、ＥＡとは酢酸エチル、ＭｅＯＤとはメタノール−Ｄ４、ＩＰＡとはイソプロピルアルコール、ＰＤＥとはホスホジエステラーゼ、ＡＭＰとはアデノシン一リン酸、ＧＭＰとはグアノシン一リン酸を指す。
【００４２】
本発明に使用された溶媒は市販で手に入れられる。市販化合物の名称はメーカーのカタログに準拠する。
【００４３】
粉末Ｘ線回折法の条件は、下記のようにする。
装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置、ターゲット：Ｃｕ：Ｋ− Ａｌｐｈａ、波長λ＝１.５４１７９Å、管電圧Ｖｏｌｔａｇｅ: ４０ ｋＶ、管電流Ｃｕｒｒｅｎｔ: ４０ ｍＡ、走査範囲：４ 〜４０°、サンプル回転速度：１５ ｒｐｍ、走査速度：１０°/分。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
以下、実施例を用いて本発明をより詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。本明細書には、既に本発明を詳細に説明し、その中にも発明を実施するための形態が開示された。当業者に明らかであるように、本発明の趣旨と範囲を逸脱しない場合に本発明の具体的な実施形態に対して様々な変更及び改善を行うことができる。
参考例１  化合物１の調製
2019523306.tif 000014
【００４５】
（（４１Ｓ,１３ａＳ）−１３ａ−エチル−２,３,４１,５,６,１３ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−インドロ[３,２,１−ｄｅ]ピリド[３,２,１−ｉｊ][１,５]ナフチリジン−１２−カルボン酸（１４ｇ、４３.４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３００ｍｇ、２.１７ ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３１ｍＬ、２１７ ｍｍｏｌ）がＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ ｍＬ）に溶解された溶液に、Ｏ−アザベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボラート（１４.６ｇ、４５.６ ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシアセトアミジン塩酸塩（５.２８ｇ、４７.８ ｍｍｏｌ）をそれぞれ加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。そして、塩水を加えて濾過し、濾液を水で薄め、ジクロロメタンで抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、低沸点溶媒を蒸発で取り除き、残留の粗製品のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を直接にマイクロ波で１６０℃までに加熱し、５０分間で反応させた。粗製品がアルカリ性分取高速液体クロマトグラフィーによって分離され、目的化合物が得られた（白色固体、４.０ｇ、収率２５％）。
【００４６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３,４００ＭＨｚ）δｐｐｍ  ７.４６（ｄ,Ｊ＝６.８Ｈｚ,１Ｈ）、７.１３−７.０６（ｍ,２Ｈ）、６.７３（ｄ,Ｊ＝８.０Ｈｚ,１Ｈ）、６.０８（ｓ,１Ｈ）、４.２３（ｓ,１Ｈ）、 ３.３８−３.３４（ｍ,２Ｈ）、３.２９−３.２８（ｍ,２Ｈ）、２.６５−２.６３（ｍ,２Ｈ）、２.５５−２.５１（ｍ,１Ｈ）、２.５１（ｓ,３Ｈ）、１.９７−１.９２（ｍ,２Ｈ）、１.５９−１.５５（ｍ,２Ｈ）、１.４５−１.４１（ｍ,１Ｈ）、１.１１−１.１０（ｍ,１Ｈ）、１.００（ｔ, J＝７.２Ｈｚ,３Ｈ）。
【００４７】
実施例１  式（I）で示される化合物及びその結晶形の調製
2019523306.tif 000015
【００４８】
[式（Ｉ）で示される化合物の調製]
化合物１（１５.００ｇ、４１.６１ｍｍｏｌ、１.００Ｅｑ.）を５００ｍＬの三つ口フラスコの中に入れて、１５０ｍＬの酢酸エチルと１５ｍＬのジクロロメタンを加えて、反応システムを窒素ガスで３回置換した。そして、反応液に１Ｎ ＨＣｌ/ＥＡ（６０ｍＬ）を滴加し、反応温度２５℃にて３０分間撹拌した後、現れた大量な白色固体を濾過した。濾過ケークを５０ｍＬの酢酸エチルで一回洗浄した後、濾過ケークを乾燥して白色製品（１５.００ ｇ、３７.７９ ｍｍｏｌ、９０.８２％）が得られた。
【００４９】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ３）＝７.５２（ｄｄ,Ｊ＝１.８ Ｈｚ,１Ｈ）、７.２４−７.２２（ｍ,２Ｈ）、６.７８（ｄｄ,Ｊ＝４.０ Ｈｚ,１Ｈ）、６.１４（ｓ,１Ｈ）、４.７８（ｓ,１Ｈ）、３.８３−３.６６（ｍ,２Ｈ）、３.３２−３.０１（ｍ,４Ｈ）、２.５５（ｓ,３Ｈ）、２.３３−２.２５（ｍ,３Ｈ）、１.８１−１.６８（ｍ,１Ｈ）、１.２８−１.２７（ｍ,１Ｈ）、１.１２（ｔ,J＝８.０Ｈｚ,３Ｈ）。
【００５０】
[Ａ結晶形の調製]
約５０ｍｇの式（I）で示される化合物をメタノール（１.５ｍL ）に入れて、懸濁液を４０℃にて３日間撹拌した。残る固体物を離心分離させて（１０ｍｉｎ ａｔ １４,０００ｒｐｍ）、４０℃真空乾燥機の中で一晩乾燥し、Ａ結晶形が得られた。
【００５１】
[Ｂ結晶形の調製]
メタノールの代わりにアセトンを使用すること以外、Ａ結晶形の調製方法を参照してＢ結晶形を調製し、Ｂ結晶形が得られた。
【００５２】
実施例２  式（II）で示される化合物及びそのＣ結晶形の調製
2019523306.tif 000016
【００５３】
化合物１（２.００ｇ、５.５５ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ）とクエン酸（１．１７ｇ、６．１１ｍｍｏｌ、１.１０ｅｑ）を１００ｍＬの三つ口フラスコの中に加えると同時に、３０ｍＬのエタノールを入れて、反応システムを窒素ガスで３回置換した。そして、反応温度を８５〜９５℃までに上げ、内温が４５〜６０℃に達した時に、反応液が清らかになり、内温が６０℃以上に達した時に、混濁が現れた。反応温度８５〜９５℃にて３０分間撹拌し、大量な白色固体が現れた。そして、加熱を停止させて、内温が２０℃〜３０℃までに低下した時に、濾過し、濾過ケークを２００ｍＬのエタノールで一回洗浄した後、乾燥して、Ｃ結晶形の白色製品（２.５０ｇ，４.５６ｍｍｏｌ, ８２.２１％）が得られた。
【００５４】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＭｅＯＤ）  ｐｐｍ７.５０−７.７０（ｍ,１Ｈ）、７.０６−７.３０（ｍ,２Ｈ）、６.６４−６.８４（ｍ,１Ｈ）、６.２１（ｓ,１Ｈ）、３.６９−３.７６（ｍ,２Ｈ）、２.９４−３.１３（ｍ,２Ｈ）、２.８７（ｄｄ,Ｊ＝１５.５６,１.００Ｈｚ, ２Ｈ）、２.７７（ｄ,Ｊ＝１５.３１Ｈｚ,２Ｈ）、２.５２（ｓ,３Ｈ）、１.８９−２.１５（ｍ,３Ｈ）、１.１１（ｔ,J＝７.４０Ｈｚ,３Ｈ）。
【００５５】
実施例３  式（III）で示される化合物及びそのＤ結晶形の調製
2019523306.tif 000017
【００５６】
[式（III）で示される化合物の調製]
化合物１（１.００ｇ、２.７７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ.）を１００ｍＬの三つ口フラスコの中に加えると同時に、１５ｍLのエタノールを入れて、反応システムを窒素ガスで３回置換した。そして、反応液にリン酸（３１９.３６ ｍｇ、２.７７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ.）を滴加し、反応温度を６０℃までに上げ、６０℃にて３０分間撹拌した後、大量な白色固体が現れた。加熱を停止させて、内温が２０〜３０℃までに低下した時に、濾過し、濾過ケークを２０ｍLのエタノールで一回洗浄した後、濾過ケークを乾燥して、白色製品（１.２０ｇ，２.６１ ｍｍｏｌ, ９４.３０％）が得られた。
【００５７】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＭｅＯＤ）＝７.５７（ｄ,Ｊ＝６.８Ｈｚ,１Ｈ）、７.１７（ｔ, J＝６.０Ｈｚ,２Ｈ）、６.７２（ｄ,Ｊ＝７.５Ｈｚ,１Ｈ）、６.２０（ｓ,１Ｈ）、３.７５（ｄ,Ｊ＝６.３Ｈｚ, ２Ｈ）、３.２３（ｄ,Ｊ＝１５.１Ｈｚ,２Ｈ）、３.１４−２.９６（ｍ,２Ｈ）、２.５０（ｓ,３Ｈ）、２.１４−１.９６（ｍ,３Ｈ）、１.８３−１.６４（ｍ，２Ｈ）、１.２８−１.２１（ｍ，１Ｈ）、１.１０（ｔ,J＝７.３Ｈｚ,３Ｈ）。
【００５８】
[Ｄ結晶形の調製]
約３０ｍｇの式（III）で示される化合物をエタノール（０.５ｍＬ）に入れ、４０℃にて３日間撹拌した。残った化合物を離心分離させて（１０ ｍｉｎ ａｔ １４,０００ ｒｐｍ）、４０℃の真空乾燥機の中で一晩乾燥して、Ｄ結晶形の乾燥固体が得られた。
【００５９】
実施例４  式（IV）で示される化合物及びその結晶形の調製
2019523306.tif 000018
【００６０】
[式（IV）で示される化合物の調製]
化合物１（１.００ｇ、２.７７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ.）を１００ｍＬの三つ口フラスコに入れ、１５ｍＬの酢酸エチルと３ｍＬのジクロロメタンを加えて、反応システムを窒素ガスで３回置換した。そして、反応液に１ｍＬ水で希釈された硫酸（２７２.１０ ｍｇ、２.７７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ.）を滴加し、反応温度２５℃にて３０分間撹拌した後、現れた大量な白色固体を濾過した。濾過ケークを１０ｍＬの酢酸エチルで一回洗浄した後、濾過ケークを乾燥して、白色製品（１.１０ ｇ、２.４０ ｍｍｏｌ、８６.６１％）が得られた。
【００６１】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＭｅＯＤ）  ＝７.６５−７.５３（ｍ,１Ｈ）、７.２５−７.１２（ｍ,２Ｈ）、６.７９−６.６８（ｍ,１Ｈ）、６.１９（ｓ,１Ｈ）、５.０２（ｓ,１Ｈ）、３.９０−３.７４（ｍ,２Ｈ）、３.３４（ｄ,Ｊ＝１２.３Ｈｚ,１Ｈ）、３.２６−３.０４（ｍ,３Ｈ）、２.４８（ｓ,３Ｈ）、２.０６−１.８９（ｍ,３Ｈ）、１.８１−１.６７（ｍ,２Ｈ）,１.２９−１.１６（ｍ,１Ｈ）、１.１０（ｔ, J＝７.４Ｈｚ,３Ｈ）。
【００６２】
[Ｅ結晶形の調製]
約３０ｍｇの式（IV）で示される化合物を溶媒ＩＰＡ:Ｈ２Ｏ＝１:９（０.５ ｍＬ）に加え、４０℃にて３日間撹拌した。残留の化合物を離心分離させ（１０ ｍｉｎ ａｔ １４,０００ ｒｐｍ）、４０℃の真空乾燥機の中で一晩乾燥して、Ｅ結晶形の乾燥した固体が得られた。
【００６３】
[Ｆ結晶形の調製]
溶媒ＩＰＡ:Ｈ２Ｏ＝１:９の代わりにエタノールを使用すること以外、Ｅ結晶形の調製方法を参照してＦ結晶形を調製した。
【００６４】
実施例５  式（V）で示される化合物及びその結晶形の調製
2019523306.tif 000019
【００６５】
[式（V）で示される化合物の調製]
化合物１（１.００ｇ、２.７７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ.）を１００ｍＬの三つ口フラスコの中に入れ、１５ｍＬの酢酸エチルと３ｍＬのジクロロメタンを加えて、反応システムを窒素ガスで３回置換した。そして、反応液に１ｍＬ水で希釈された硫酸（１３５.８４ｍｇ、１.３９ｍｍｏｌ、０.５０ｅｑ.）を滴加し、反応温度が２５℃にて３０分間撹拌した後、現れた大量な白色固体を濾過した。濾過ケークを１０ｍＬ酢酸エチルで一回洗浄した後、濾過ケークを乾燥して、白色製品（５００.００ｍｇ、１.０９ｍｍｏｌ、３９.３７％）が得られた。
【００６６】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＭｅＯＤ）  ＝７.５９（ｄｄ,Ｊ＝２.４,４.６Ｈｚ,１Ｈ）、７.２７−７.０８（ｍ,２Ｈ）、６.７３（ｄ,Ｊ＝７.５Ｈｚ,１Ｈ）、６.２９−６.１３（ｍ,１Ｈ）、５.０６（ｄ,Ｊ＝１４.８Ｈｚ,１Ｈ）、３.９３−３.７３（ｍ,２Ｈ）、３.４７−３.３１（ｍ,１Ｈ）、３.２８−３.０２（ｍ,３Ｈ）、２.５３−２.４１（ｍ,３Ｈ）、２.１１−１.８８（ｍ,３Ｈ）、１.７７（ｄ,Ｊ＝４.８Ｈｚ,２Ｈ）、１.２５（ｄ,Ｊ＝１０.３Ｈｚ,１Ｈ）、１.１５−１.０２（ｍ,３Ｈ）。
【００６７】
[Ｇ結晶形の調製]
約３０ｍｇの式（V）で示される化合物を溶媒（０.５ｍＬ）に加え、４０℃にて３日間撹拌した。残留の固体化合物を離心分離させ（１０ ｍｉｎ ａｔ １４,０００ ｒｐｍ）、４０℃の真空乾燥機の中で一晩乾燥し、Ｇ結晶形の乾燥した固体が得られた。
【００６８】
[Ｈ結晶形の調製]
溶媒ＩＰＡ:Ｈ２Ｏ＝１:９の代わりにＥｔＯＡｃを使用すること以外、Ｇ結晶形の調製方法を参照してＨ結晶形を調製した。
【００６９】
実施例１：ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の体外検出
【００７０】
実験原理：
蛍光偏光法によりＡＭＰ/ＧＭＰの生成を検出することで、ＰＤＥ１Ａの酵素活性を測定し、反応原理は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３で標識されたＡＭＰ/ＧＭＰが、ＡＭＰ/ＧＭＰの代わりに抗体と結合することである。
【００７１】
実験試薬：
反応緩衝液：１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、５ｍＭ塩化マグネシウム、０.０１％のＢｒｉｊ３５、１ｍＭ  ＤＴＴ及び１％ＤＭＳＯ
酵素基質：１ＭのｃＡＭＰ又はｃＧＭＰ（Ｃａ２+−カルモジュリンをＰＤＥ１Ａの補因子とする）
検出試薬：Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ （登録商標）ＡＭＰ２/ＧＭＰ２抗体、ＡＭＰ２/ＧＭＰ２  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３マーカー
【００７２】
実験のステップ及び方法：
１．新たに調製した反応緩衝液で、検出対象のヒト由来酵素（ＳｉｇｎａｌＣｈｅｍから購入）及び基質を希釈した。
２．濃度３ｐＭの酵素溶液を、反応プレートのウェルに加えた。
３．Ｅｃｈｏ５５０を用いて、化合物が１００％ＤＭＳＯに溶解された溶液を所望の濃度に応じて、酵素溶液を有するマイクロウェルプレートに加え、室温下で１０分間培養した。
４．基質溶液を、酵素及び化合物溶液を有するマイクロウェルプレートに加えて、反応を開始させた。
５．室温下で、１時間培養し、同時にマイクロウェルプレートを振動させた。
６．検出用混合物（マーカー及び抗体が入った反応停止液）を加えて、酵素反応を停止させ、９０分間培養し、同時にマイクロウェルプレートを振動させた。
７．装置ＥｎＶｉｓｉｏｎ （ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）、Ｃｙ５  ＦＰ  Ｅｘ  ＦＰ  ６２０,Ｅｍ  Ｓ−ｐｏｌ  ６８８/Ｐ−ｐｏｌ  ６８８,ＦＰ  ｍｉｒｒｏｒ  Ｄ６５８ｆｐ/Ｄ６８８で検出し、Ｅｘ/Ｅｍ  ６２０/６８８を用いて蛍光偏光度を測定した。
【００７３】
データ分析：
エクセル表において、ＤＭＳＯをネガティブコントロールとして、ＡＭＰ/ＧＭＰ標準曲線からＦＰ信号に対応する酵素活性を見つけて、生成物の濃度（ｎＭ）に変換した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて分析し、ＩＣ５０を算出した。
【００７４】
実験結果を表９に示す。
【表９】
2019523306.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成31年4月4日(2019.4.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩。
2019523306.tif 000024
【請求項２】
2019523306.tif 000025
から選択される請求項１に記載の化合物１の塩酸塩、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩。
【請求項３】
請求項２に記載の式（I）で示される化合物のＡ結晶形であって、
ただし、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（I）で示される化合物のＡ結晶形。
９.１４±０.２°、１０.４３±０.２°、１１.３８±０.２°、１２.５４±０.２°、１３.８６±０.２°、１９.０４±０.２°、１９.３６±０.２°、２１.００±０.２°。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−１に示されるようなものである、請求項３に記載の式（I）で示される化合物のＡ結晶形。
【請求項５】
請求項２に記載の式（I）で示される化合物のＢ結晶形であって、
ただし、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（I）で示される化合物のＢ結晶形。
９.１７±０.２°、 １１.７５±０.２°、１２.１６±０.２°、１２.６７±０.２°、１５.１４±０.２°、１７.８１±０.２°、２０.５４±０.２°、２２.３４±０.２°。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−２に示されるようなものである、請求項５に記載の式（I）で示される化合物のＢ結晶形。
【請求項７】
請求項２に記載の式（II）で示される化合物のＣ結晶形であって、
ただし、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（II）で示される化合物のＣ結晶形。
１４.０４±０.２°、 １６.２８±０.２°、１６.７０±０.２°、１７.７３±０.２°、１８.１８±０.２°、２０.２９±０.２°、２３.４０±０.２°、２５.９５±０.２°。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折スペクトル解析データは、表−３に示されるようなものである、請求項７に記載の式（II）で示される化合物のＣ結晶形。
【請求項９】
請求項２に記載の式（III）で示される化合物のＤ結晶形であって、
ただし、前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（III）で示される化合物のＤ結晶形。
４.４７±０.２°、９.８０±０.２°、１０.６７±０.２°、１３.０５±０.２°、１６.３０±０.２°、１６.８０±０.２°、１７.６５±０.２°、１７.８２±０.２°。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−４に示されるようなものである、請求項９に記載の式（III）で示される化合物のＤ結晶形。
【請求項１１】
請求項２に記載の式（IV）で示される化合物のＥ結晶形であって、
ただし、前記Ｅ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（IV）で示される化合物のＥ結晶形。
４.７１±０.２°、１２.３０±０.２°、１６.２６±０.２°、１６.７８±０.２°、１９.８０±０.２°、２３.７０±０.２°、２５.６５±０.２°、２６.２２±０.２°。
【請求項１２】
粉末Ｘ線回折スペクトル解析データは、表−５に示されるようなものである、請求項１１に記載の式（IV）で示される化合物のＥ結晶形。
【請求項１３】
請求項２に記載の式（IV）で示される化合物のＦ結晶形であって、
ただし、前記Ｆ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（IV）で示される化合物のＦ結晶形。
５.７９±０.２°、９.７５±０.２°、１４.０３±０.２°、１５.６７±０.２°、１７.４６±０.２°、１８.８６±０.２°、２０.４２±０.２°、２０.９９±０.２°。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−６に示されるようなものである、請求項１３に記載の式（IV）で示される化合物のＦ結晶形。
【請求項１５】
請求項２に記載の式（V）で示される化合物のＧ結晶形であって、
ただし、前記Ｇ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（V）で示される化合物のＧ結晶形。
４.５９±０.２°、 １２.２４±０.２°、１５.９３±０.２°、１６.６６±０.２°、１８.４６±０.２°、１９.７２±０.２°、２２.１０±０.２°、２３.５６±０.２°。
【請求項１６】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−７に示されるようなものである、請求項１５に記載の式（V）で示される化合物のＧ結晶形。
【請求項１７】
請求項２に記載の式（V）で示される化合物のＨ結晶形であって、
ただし、前記Ｈ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは、下記角度２θにて特徴的な回折ピークを有する、式（V）で示される化合物のＨ結晶形。
５.８５±０.２°、 ８.８０±０.２°、９.８７±０.２°、１２.４７±０.２°、１４.０６±０.２°、１７.６２±０.２°、１８.７０±０.２°、２０.５８±０.２°。
【請求項１８】
粉末Ｘ線回折スペクトルの解析データは、表−８に示されるようなものである、請求項１７に記載の式（V）で示される化合物のＨ結晶形。
【請求項１９】
遊離アルカリを酸に接触させること、洗浄及び乾燥を含む、請求項３〜１８のいずれか1項に記載の結晶形の調製方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の化合物、又は請求項３〜７のいずれか１項に記載の結晶形の脳卒中又はてんかんを治療するための薬物の製造における使用。
【国際調査報告】
2019523306.tif 000026
2019523306.tif 000027
2019523306.tif 000028
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