(57)【要約】ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩を、その少なくとも一つの追加の抗癌化学療法剤または免疫療法剤とを含む、新規併用療法が記載されている。関連するキット、医薬組成物および生産方法も記載されている。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする被験体に、ニトロキソリン、類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および免疫療法剤の有効量を投与することを含む癌の治療方法であって、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩および免疫療法剤の組合せが、相乗効果を齎す、治療方法。
【請求項２】
免疫療法剤が、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片である、請求項１の方法であって、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の有効量が、静脈投与で、１〜４週間毎に、１ミリグラム／キログラム〜２０ミリグラム／キログラムである方法。
【請求項３】
免疫療法剤が、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片である、請求項１の方法であって、好適には、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の有効量が、静脈投与で、１〜４週間毎に、４ミリグラム／キログラム〜４０ミリグラム／キログラムである方法。
【請求項４】
免疫療法剤が、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片である、請求項１の方法であって、好適には、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の有効量が、静脈投与で、１〜４週間毎に、０．６ミリグラム／キログラム〜６ミリグラム／キログラムである方法。
【請求項５】
免疫療法剤が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ-Ｇｕｅｒｉｎ  （ＢＣＧ）治療剤である、請求項１の方法であって、好適には、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、ＢＣＧ療法剤の有効量が、膀胱内投与で、１〜４週間毎に、０．５ｘ１０８〜５０ｘ１０８でのコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）である方法。
【請求項６】
癌が膀胱癌である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
癌が前立腺癌である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
それを必要とする被験体に、ニトロキソリン、類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化学療法剤の有効量を投与することを含む、癌の治療方法であって、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩および化学療法剤の組合せが、相乗効果を齎す、治療方法。
【請求項９】
癌が膀胱癌であり、そして、化学療法剤が膀胱内に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
癌が肝臓癌または前立腺癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセルまたはカバジタキセルである、請求項８〜１０のいずれか1項に記載の方法であって、好ましくは、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、パクリタキセル、ドセタキセルまたはカバジタキセルが、膀胱内で、膀胱点滴液中０．５ミリグラム／ミリリットル〜１０ミリグラム／ミリリットルの濃度で、投与される方法。
【請求項１２】
化学療法剤が、マイトマイシンＣである、請求項８〜１０のいずれか1項に記載の方法であって、好ましくは、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、マイトマイシンＣが、膀胱内で、膀胱点滴液０．１ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルの濃度で、投与される方法。
【請求項１３】
化学療法剤が、エピルビシンまたはピラルビシンである、請求項８〜１０のいずれか1項に記載の方法であって、好ましくは、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、エピルビシンまたはピラルビシンが、膀胱内に、膀胱点滴液中０．１ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルの濃度で投与する方法。
【請求項１４】
化学療法剤が、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンまたはネダプラチンである、請求項８〜１０のいずれか1項に記載の方法であって、好ましくは、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムであり、そして、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンまたはネダプラチンが、膀胱内に、膀胱点滴液で、０．１ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルの濃度で、投与される方法。
【請求項１５】
それを必要とする被験体の癌を治療するため、ニトロキソリン、類似体、またはその薬学的に許容される塩の有効量、免疫療法剤または化学療法剤の有効量、および１種以上の薬学的に許容される担体、および、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量と、免疫治療剤または化学療法剤の有効量の組合せを用いることのインストラクションを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１６年３月３１日に出願された、米国仮特許出願第６２／３１５，７７４号に対する優先権を主張するものであり、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、癌の治療のための併用療法に関し、特に、ニトロキソリン、または、その類似体またはその薬学的に許容される塩の、少なくとも一つの追加の抗癌化学療法剤または免疫療法剤とその併用療法に関し、併用療法は、相乗的な抗癌効果を示す。
【０００３】
発明の背景
癌の治療のための併用療法は、いずれかの抗癌治療に対する癌発症の機会の可能性を最小限に抑え、そして、より低い用量の個々の抗癌治療の使用を可能にし、毒性を低下させる。薬物−薬物相互作用の性質に応じて、２つの活性成分の併用は、相乗効果、相加効果または拮抗効果をもたらすことができる。
【０００４】
ニトロキソリン（ＮＩＴ）は、尿路感染症の治療のために、長い間、商業的に市販されている抗菌剤である。
ニトロキソリンは、血管新生の阻害（４）および癌の増殖および浸潤の阻害（５，６）においてもまた、活性であることが最近発見された。
オキシキノリン、クリオキノールおよびヨードキノールのような、ＮＩＴおよびその類似体は、感染症の治療において共通の臨床用途を共有する。
ＮＩＴ類似体はまた、抗癌細胞傷害性を有することも報告されている（７）。
しかしながら、本発明者の知識によれば、これらの薬物は、いずれも、他の抗癌剤と組み合わせて調査されておらず、そして、ＮＩＴまたはその類似体は、他の癌療法剤のいずれかとの薬物−薬物相互作用は報告されていない。
【０００５】
ここに、増強された抗がん作用または毒性の軽減を有する、癌を治療するための新規な併用療法のための技術の必要性が存在する。
【０００６】
発明の概要
本発明は、ニトロキソリン、その類似体またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つのさらなる抗癌化学療法剤または免疫療法剤を含む、新規な併用療法を提供することにより、これらのニーズを満たす。
本併用療法は、癌細胞増殖の阻害に対して相乗効果を示す。
【０００７】
１つの一般的な態様において、本発明は、ニトロキソリン、その類似体、またはその薬学的に許容される塩を、化学療法剤と組み合わせて、それを必要とする被験体に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
化学療法剤は、好ましくは、微小管解体阻害剤、ＤＮＡを架橋する薬剤、および白金化合物からなる群から選択される。
【０００８】
別の一般的な態様において、本発明は、ニトロキソリン、その類似体、またはその薬学的に許容される塩を、免疫療法剤と組み合わせて、それを必要とする被験体に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
免疫療法剤は、好ましくは、有効な免疫応答を刺激し、そして、免疫抑制を阻害することができる薬剤である。
より好ましくは、免疫療法剤は、制御性Ｔ細胞または骨髄由来サプレッサー細胞の阻害剤または調節剤である。
【０００９】
本発明の他の態様、特徴および利点は、本発明の詳細な説明およびその好ましい実施形態および添付の特許請求の範囲を含めた、以下の開示から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
上記の概要および以下の本発明の詳細な説明は、添付の図面と併せて読めば、よりよく理解されるであろう。
本発明を例示する目的のために、現在好ましい実施形態が、図面に示されている。しかしながら、本発明は、示されている正確な構成および手段に限定されないことを理解されたい。図面には：
【図１】図１は、ニトロキソリン（ＮＩＴ）の構造およびその類似体の例を示す。
【図２】図２は、ＮＩＴおよびカルボプラチンの組み合わせによる、ヒト膀胱癌細胞株５６３７の増殖の阻害のコンビネーション・インデックス（ＣＩ）プロットを示す。
【図３】図３は、ＮＩＴおよびパクリタキセルの組み合わせによる、ヒト膀胱癌細胞株５６３７の増殖の阻害のＣＩプロットを示す。
【図４】図４は、ＮＩＴおよびカルボプラチンの組み合わせによる、ヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖の阻害のＣＩプロットを示す。
【図５】図５は、ＮＩＴとパクリタキセルとの組み合わせによる、ヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖の阻害のＣＩプロットを示す。
【図６】図６は、ＮＩＴとマイトマイシンＣとの組み合わせによる、ヒト膀胱癌細胞株５６３７の増殖の阻害のＣＩプロットを示す。
【図７】図７は、ＮＩＴおよびエピルビシンの組み合わせによる、ヒト膀胱癌細胞株５６３７の増殖阻害のＣＩプロットを示す。
【図８】図８は、ＮＩＴおよびピラルビシンの組み合わせによる、ヒト膀胱癌細胞株５６３７の増殖阻害のＣＩプロットを示す。
【図９】図９は、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウスＭＢＴ−２−Ｌｕｃ膀胱癌モデルにおける、経口による、ＮＩＴおよびマイトマイシンＣの組み合わせによる腫瘍増殖の阻害を示す。
【図１０】図１０は、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウスＭＢＴ−２−Ｌｕｃ膀胱癌モデルにおける、経口のＮＩＴと膀胱内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ）ＢＣＧとの組み合わせによる腫瘍増殖の阻害を示す。
【図１１】図１１は、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウスＭＢＴ−２−Ｌｕｃ膀胱癌モデルにおける、経口のＮＩＴおよび抗ＰＤ−１抗体の組み合わせによる、腫瘍増殖の阻害を示す。そして
【図１２】図１２は、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウスＲＭ−９−Ｌｕｃ前立腺癌モデルにおける、経口のＮＩＴおよび抗ＰＤ−１抗体の組み合わせによる、腫瘍増殖の阻害を示す。
【００１１】
発明の詳細な説明
様々な刊行物、記事および特許は、背景および本明細書を通して、引用または記載されている。これらの参考文献のそれぞれは、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、行為、材料、装置、記事等の議論は、本発明の文脈を提供することを目的とするものである。
そのような議論は、これらの事項のいずれかまたはすべてが、開示または請求された発明に関する先行技術の一部を形成することを認めるものではない。
【００１２】
定義
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味を有する。そうでなければ、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書で設定された意味を有する。本明細書で引用した全ての特許、公開特許出願および刊行物は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されている単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上、他を明確に指示しない限り、複数形を含むことに留意されたい。
【００１３】
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度または濃度範囲などの任意の数値は、すべての場合において、「約」という用語によって修飾されるものとして理解されるべきである。従って、数値は、典型的に、列挙された値の±１０％を含む。たとえば、１ミリグラム／ミリリットルの濃度は、０．９ミリグラム／ミリリットル〜１．１ミリグラム／ミリリットルを含む。
同様に、１％〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は、０．９％（ｗ／ｖ）〜１１％（ｗ／ｖ）を含む。
本明細書で使用される場合、文脈が、明確にそうでないことを示さない限り、数値範囲の使用は、可能なすべての部分範囲、その範囲内の整数およびその数値の端数を含むその範囲内のすべての個々の数値を明らかに含む。
【００１４】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は全て、被験体において必ず認識できるわけではないが、被験体において認識し得る癌に関連する、少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善または逆転（ｒｅｖｅｒｓａｌ）を指すことを意図する。
「治療する」、「治療する」および「治療」という用語はまた、後退（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を引き起こし、進行を妨げること、または少なくとも癌の進行を遅くすることを指すこともできる。
特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」および「治療」は、癌に関連する１つまたは複数の症状の緩和、発症または発症の予防、またはその持続期間の短縮を指す。
特定の実施形態において、「治療する」、「治療する」および「治療」は、癌の再発の予防を指す。
特定の実施形態において、「治療する」、「治療する」および「治療」は、癌を有する被験体の生存の増加を指す。
特定の実施形態において、「治療する」、「治療する」および「治療」は、被験体における癌の排除を指す。
【００１５】
本明細書で使用される場合、用語「被験体」は、動物、好ましくは、哺乳動物を指す。特定の実施形態によれば、被験体は、非霊長類（たとえば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモットまたはマウス）または霊長類（たとえば、サル、チンパンジー、またはヒト）を含む、哺乳動物である。特定の実施形態では、被験体はヒトである。
【００１６】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」または「治療有効量」は、被験体において、所望の生物学的または医学的応答を誘発する有効成分または成分の量を指す。
特定の実施形態では、有効量は、別の有効成分または化合物との相乗効果を達成するのに有効な有効成分または化合物の量である。本明細書中で使用される場合、「相乗効果」は、癌の治療における、２つの個々の活性成分または化合物の相加効果よりも大きい効果を指す。治療上有効な量は、記載された目的に関連して、経験的にかつ日常的に決定することができる。
【００１７】
たとえば、最適な用量範囲を同定するのを助けるために、インビトロアッセイを任意に用いることができる。特定の有効用量の選択は、治療または予防すべき疾患、関与する症状、患者の体重、患者の免疫状態および当業者によって知られている他の要因を含む、幾つかの因子の考慮に基づいて、当業者により（たとえば、臨床試験を介して）決定できる。
製剤に使用される正確な用量は、投与経路および疾患の重篤度にも依存し、そして、医師の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。有効量は、インビトロまたは動物モデル試験系から誘導された用量反応曲線から外挿することができる。
たとえば、薬物の組み合わせは、ロエベの相加モデルに基づく数学的アルゴリズムを用いて評価することができる。このモデルでは、コンビネーション・インデックス（ＣＩ）値が計算される。ＣＩ＜１、ＣＩ＝１およびＣＩ＞１は、それぞれ、相乗的、相加的および拮抗的相互作用をそれぞれ示す。
【００１８】
本明細書で使用する「薬学的に許容される塩」という用語は、安全かつ有効な、ニトロキソリンまたはその１つの類似体の塩の形態を指す。
薬学的に許容される塩の制限のない例は、塩化水素酸塩、臭酸水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、琥珀酸塩、アスコルビン酸塩、オキザル酸塩、硝酸塩、梨塩塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、サリチル酸塩、クエン酸水素塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩を含む。
好ましくは、ニトロキソリンの薬学的に許容される塩は、たとえば、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１４／３０５３２に記載されているような、ニトロキソリンの塩基付加塩であり、ここに開示されている全部が、参照により、本明細書に組込まれる。
【００１９】
本明細書で使用する「化学療法剤」という用語は、抗癌剤である任意の化学物質を指す。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、用語「免疫学的薬剤」または「免疫学的調節剤」は、免疫応答を刺激しおよび／または免疫抑制を阻害することができる任意の薬剤をいう。
【００２１】
本明細書中で使用される場合、２つ以上の療法剤の被験体への投与の文脈において、「組み合わせて」という用語は、１つ以上の療法の使用を指す。「組み合わせて」という用語の使用は、療法剤が被験体に投与される順序を制限しない。たとえば、第１の療法剤（たとえば、明細書に記載されている、有効量のニトロキソリンまたは類似体または薬学的に許容される塩）は、事前に（たとえば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間前に）、付随して、または、その後（たとえば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間後）、第２の療法剤（たとえば、有効量の免疫療法剤または有効量の化学療法剤）を、患者へ投与することができる。
【００２２】
本明細書中で使用される場合、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、油脂、脂質、脂質含有小胞、マイクロスフェア、リポソームカプセル化、または、医薬製剤において使用するために、技術分野で周知の他の基剤を指す。
担体、賦形剤または希釈剤の特性は、特定の適用のための投与経路に依存することが理解されるであろう。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、本発明の組成物の有効性または本発明による組成物の生物学的活性を妨害しない非毒性物質を指す。
特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、ニトロキソリン−ベースの医薬組成物における使用に適した任意の薬学的に許容される担体を本発明に使用することができる。担体の非限定的な例としては、生理食塩水および水が挙げられる。
【００２３】
ニトロキソリン（ＮＩＴ）およびその類似体
図１に示すように、オキシキノリン、クリオキノールおよびヨードキノールなどのＮＩＴおよびその類似体は、感染症の治療において共通の臨床用途を共有する。
ＮＩＴは広いスペクトラムの抗生物質であり、そして、１９６０年代から、尿路感染症の治療薬として販売されている。
細菌の増殖を阻害するその作用機序は未知のままである。
ＮＩＴが、尿路病原性大腸菌が、ＮＩＴのサブＭＩＣで、尿路上皮細胞および尿カテーテルに付着することを阻害することが見出され、そして、ＮＩＴが、二価イオンのマグネシウム２＋およびマンガン２＋をキレート化することによって、細菌の外膜の崩壊を促進すると考えられている（１）。
オキシキノリン（オキシン）は、軽度の静真菌性、静菌性、駆虫性、およびアメーバ活性を有する消毒剤である。オキシンは、マンガン２＋およびマグネシウム２＋の酵素を本質的に奪うことによって、酵素に直接接触することなく、単離された大腸菌ＲＮＡポリメラーゼを阻害することができる（２）。
オキシンはまた、金属キレート剤としてもまた、診断目的のためのラジオ−インジウム用の担体としても使用される。
クリオキノールは、長期にわたり、局所的抗感染性、腸の抗アメーバ性および膣トリコモナシドとして使用されてきた。クリオキノールの経口製剤は、亜急性骨髄−視神経症を引き起こすことが示されており、従って、世界中で禁止されている。クリオキノールは、おそらく、Ｃｕ２＋とＺｎ２＋のキレーターとして作用するその能力に起因して、動物モデルにおけるアルツハイマー病の認知低下を停止させることが判明した（３）。
ヨードキノールは、腸の消毒剤として、特に、抗アメーバ剤として、広く使用されている、別のハロゲン化８−キノリノールである。それはまた、他の感染のために局所的に使用され、そして、ＣＮＳおよび眼の損傷を引き起こす可能性がある。その作用メカニズムは未知のままである。
【００２４】
ＮＩＴおよびその類似体は、抗癌活性を有することが示されている。ＮＩＴは、ＭｅｔＡＰ２阻害剤であり、そして、それ故、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）の増殖を阻害することにより癌の血管新生を阻止することができることが示された（４）。
ＮＩＴはまた、前立腺癌細胞のアポトーシスを誘導することができることも示され（５）、そして、癌細胞に対するその細胞傷害性は、Ｃｕ２＋と組み合わせて投与された場合により顕著であった（６）。
クリオキノール（Ｃｌｉｏｑｕｉｎｏｌ）、オキシン（ｏｘｉｎｅ）およびイオドキノール（ｉｏｄｏｑｕｉｎｏｌ）などのＮＩＴ類似体もまた、抗癌細胞毒性を有することが報告されている（７）。
【００２５】
化学療法剤
がんは、他の特徴の中でも、浸潤および転移などの悪性の行動と結びついている、細胞の制御不能な増殖であり、それは、遺伝的感受性と環境因子との間の相互作用によって引き起こされる。
これらの要因は、細胞の増殖速度を制御する遺伝子である、癌遺伝子、および、癌を予防する助けとなる遺伝子である、癌抑制遺伝子に、遺伝的変異の蓄積をもたらし、癌細胞に制御不能な増殖のような悪性の特徴をもたらす。化学療法剤は、化学物質、特に１つ以上の抗癌剤を使用する、癌治療の１つのカテゴリーである。広い意味で、ほとんどの化学療法剤は、有糸分裂（細胞分裂）を損なうことによって作用し、速く分裂する細胞を効果的に標的とする。
これらの薬物は、細胞を損傷させるため、細胞傷害性と呼ばれている。抗癌剤は、ＤＮＡの損傷および細胞分裂に関与する細胞機構の阻害を含む、様々な機作によって、有糸分裂を防止する。これらの薬物が癌細胞を殺す理由の一つの理論は、それらがアポトーシスとして知られている、プログラムされた形態の細胞死を誘導することである。
癌治療のための臨床使用には、多くのタイプの細胞傷害性化学療法剤があり、そして、それらは化学的構造特性に従って、異なるクラスに分類される。たとえば、下記の表１および、www. en.wikipedia.org/wiki/List_of_antineoplastic_agentsを参照されたい。
【００２６】
【表１−１】
2019510825.tif 000003
【表１−２】
2019510825.tif 000004
【００２７】
従来の化学療法剤は細胞傷害性であり、そして、それらは急速に分裂する細胞を殺すことによって作用し、これは、ほとんどの癌細胞の基本的特性の１つである。急速に分裂する細胞のこの標的化は、化学療法剤もまた、骨髄、消化管および毛包の細胞などの、正常な状況下で急速に分裂する細胞にも害を及ぼし、骨髄抑制（血液細胞の産生の減少、したがってまた、免疫抑制）、粘膜炎（消化管の内層の炎症）、および脱毛（脱毛）を含む、化学療法剤の最も一般的な副作用をもたらすことを意味する。
併用療法は、多数の異なる薬物で同時に患者を治療することを含む。
薬剤はそのメカニズムおよび副作用が異なるので、併用療法は、いずれか１つの薬剤に耐性が生じる機会を最小限に抑え、したがって、耐性癌または毒性を低下させるためにより低用量で治療するために使用することができる。しかしながら、薬物−薬物相互作用の予測不可能な性質のため、既知の治療法の組み合わせはまた、有効性の低下または副作用の増加をもたらす可能性がある。
【００２８】
癌免疫療法
癌免疫療法は、腫瘍を拒絶して、そして、破壊する免疫系を刺激する。
癌は、腫瘍の微小環境を操作し、そして、免疫抑制を推進することにより、
ホストの免疫を逃れることができ、そのため、有効な抗腫瘍免疫応答を取り込むために必要な成分は、癌患者に存在するが、ホストは通常、腫瘍進行を阻止することができないことを発見した（８）。
この直感でわかるものではない（ｃｏｕｎｔｅｒｉｎｔｕｉｔｉｖｅ）シナリオを説明するために、過去に、腫瘍の「免疫脱出」に主に焦点を当て、そして、腫瘍が、ホストによって生成された腫瘍特異的免疫応答を回避する能力を発達させるか、または、一緒になってホストの抗癌免疫作用を働かせないことを示唆する、多数の分子および細胞のメカニズムが提案されている。このプロセスは、「腫瘍誘発性免疫抑制」と呼ばれ、近年認識されており、そして、鋭意研究中である。腫瘍は、免疫系の全ての成分を妨害し、抗腫瘍免疫応答の全ての段階に影響を及ぼすことができるようである。
【００２９】
腫瘍が、前悪性から転移性の表現型に進行する際に、腫瘍細胞で起こる分子変化は、すべての腫瘍の主要な特徴として現在認識されている遺伝的不安定性の結果である。遺伝的変化は、腫瘍形成の初期段階で検出可能であり、腫瘍が進行するにつれてより顕著になり、転移細胞において最大であり、そして、腫瘍細胞の抗原エピトーププロフィールの腫瘍異種性および変化に関与する。
免疫系が、免疫介入に敏感であるそれらの悪性細胞を排除し、そして、免疫耐性変異体の選択と生存を可能にすることによる、「免疫編集（ｉｍｍｕｎｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ）」を経由して、これらの抗原性の変化を駆動するかもしれないことが示唆されている。
免疫編集（ｉｍｍｕｎｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ）の最終結果は、腫瘍が宿主免疫系から逃れることである。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および骨髄球由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、免疫逃避（ｉｍｍｕｎｅ  ｅｓｃａｐｅ）を実施するために腫瘍によって使用される２つのタイプの細胞である。Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣまたは阻害因子の有害作用からの免疫細胞の保護、そして、したがって、そのエフェクター機能の増強は、癌患者の有効な抗腫瘍免疫を回復させることができる。
【００３０】
ＣＤ４＋ＣＤ２５highＦＯＸＰ３＋のＴｒｅｇ細胞は、ヒト腫瘍および癌患者の末梢循環に蓄積する。これら細胞が腫瘍に移動するか、その場で増殖するかどうかは不明である。
腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）が自己抗原であるので、Ｔｒｅｇ細胞の蓄積は、免疫寛容の実施に対する応答である可能性がある。
Ｔｒｅｇ細胞は、
ＩＬ−１０およびＴＧＦ−β１産生、
免疫抑制性アデノシンへのＡＴＰの酵素分解、または
Ｆａｓ／ＦａｓＬおよびグランザイム／パーフォリン経路の関与を含む、
様々なメカニズムによるエフェクターＴ細胞の免疫活性の下方制御に寄与する。
腫瘍は、Ｔｒｅｇによって媒介される免疫抑制効果の恩恵を受ける。
【００３１】
骨髄由来の未成熟骨髄性細胞ＭＤＳＣ（ＣＤ３４＋ＣＤ３３＋ＣＤ１３＋ＣＤ１５−）は、末梢循環および、ほぼすべての癌患者の腫瘍において高頻度で存在する。それらは、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−１０、ＶＥＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−６、ＰＧＥ２などの腫瘍由来の可溶性因子によって補充される。それらは、
アルギナーゼ−１の産生、
Ｌ−アルギニン代謝に関与する酵素、ならびに
誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）の活性化を含む、いくつかの機序を介して、Ｔ細胞応答を抑制することによって腫瘍増殖を促進する。
それらはまた、Ｔ細胞分化に必須のアミノ酸である、トリプトファンの異化に関与するインドールアミン−２，２−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の腫瘍の生成を制御する。
【００３２】
初期段階（非侵襲性）膀胱癌のための、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）免疫療法は、弱毒化した生菌の膀胱内への注入を利用し、そして、再発を、最大で２／３に予防するのに有効である。ＢＣＧに対する免疫応答は、以下のように要約することができる（９）：
ＢＣＧによる尿路上皮および膀胱腫瘍細胞の感染は、抗原提示分子の発現を増加させるＢＣＧの内部移行をもたらす。
これは、ＩＬ−８）およびＩＬ−１７と共に、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＬ−２、腫瘍壊死因子、ＩＬ−１２、およびＩＦＮ−γ）およびＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０）などのサイトカインの放出を介して免疫応答を誘導する。
この複雑な免疫カスケードは、細胞傷害性Ｔリンパ球、ナチュラルキラー細胞、好中球およびマクロファージによって媒介される、抗腫瘍活性を誘導する。
同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウス膀胱腫瘍モデルにおける、ＢＣＧの別の研究では、低用量療法と比べ、高用量ＢＣＧ療法に続いて、ＭＤＳＣの集団は、有意に下方調整された。
同じ研究では、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇも同じ変化を示した。
ＢＣＧ処理後、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇの集団は血液中で減少した。免疫抑制因子に対するこれらの阻害効果は、ＢＣＧ療法の強い抗腫瘍治療効果を説明することができる（１０）。
【００３３】
共刺激分子および共阻害分子の両方であり得る、免疫チェックポイント調節因子（Ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ）は、免疫系を調節する。これらのチェックポイントの信号の間のバランスは、リンパ球の活性化を調節し、そして、その結果、免疫応答を調節する。腫瘍は、これらのチェックポイントレギュレーターを使用して、免疫系から自分自身を守ることができる。免疫チェックポイント治療は、特に、腫瘍浸潤Ｔ細胞の数を増加させることによって、被験体におけるＴ細胞の増殖、移動、持続性、および／または細胞障害活性を増強することができる（１１）。
最も特徴づけられた免疫チェックポイント受容体は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（また、ＣＤ１５２としても知られているＣＴＬＡ−４）、プログラムされた細胞死タンパク質１（また、ＣＤ２７９としても知られるＰＤ−１）および、インドールアミン  ２，３−ジオキシゲナーゼ−（ＩＤＯ）であり、そして、これらの分子を標的とする薬剤は、複数の固形または血液癌の治療のために承認されているか、臨床試験において、または広範に試験されている。
【００３４】
阻害性受容体である、ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞活性化の初期段階を、ダウンレギュレートを介した免疫応答の準備をすることに（ｐｒｉｍｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）に従事するグローバル免疫チェックポイントレギュレータである。ＣＴＬＡ−４は、臨床的に検証された最初のチェックポイント経路の標的であった。ＣＴＬＡ−４はＴ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８と相同であり、そして、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８よりも、著しく高い親和力および親和力で、ＣＤ８０およびＣＤ８６に結合し、ＣＴＬＡ−４が、そのリガンドに対して、ＣＤ２８を打ち負かすことを可能にし、Ｔ細胞活性化の有効な阻害をもたらす（１２）。
拮抗性抗体を用いることによる、ＣＴＬＡ−４活性の遮断は、この機作を妨害し、そして、したがって、Ｔ細胞の活性を保存する。
現在、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗ＣＴＬＡ−４  モノクローナル抗体である、イピィリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）は、転移性メラノーマ患者について、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の承認を受けている。
さらに、アストラゼネカの抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）は、悪性中皮腫の患者の治療のために、ＦＤＡによってオーファンドラッグ指定を受けた。
【００３５】
ＰＤ−１は、活性化ＴおよびＢ細胞上に発現する、他の阻害性受容体であり、それは、免疫応答を減衰させる機能を有する（１３）。ＰＤ−１は、免疫チェックポイントレギュレーター（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）として機能し、そして、そのリガンドである、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ２７４）またはＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）の１つと結合すると、ＰＤ−１は、Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン産生を阻害する。
癌の微小環境における、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の過剰発現は、腫瘍内の免疫応答の阻害をもたらす（１４）。抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体による、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用の阻害は、Ｔ細胞の不活性化を阻害し、したがって、抗腫瘍応答を増強し、腫瘍増殖を遅延させ、そして、腫瘍拒絶を促進し得る（１５）。
２つの抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である、ブリストル・マイヤーズ・スクイブのニボルマブ、およびメルクのペンブロリズマブは、転移性黒色腫および非小細胞肺癌患者について、米国のＦＤＡの承認を受けた。最近、ＦＤＡは、転移性腎細胞癌患者の治療としてニボルマブを承認した。
２０１６年に、ロシュの抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である、アテゾリズマブは、転移性尿路上皮癌および非小細胞肺癌の治療薬としてＦＤＡの承認を受けた。
アストラゼネカのドュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）およびファイザーのアベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）のような他の抗ＰＤ−Ｌ１  モノクローナル抗体は、後期臨床試験中である。
【００３６】
インドールアミン  ２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、トリプトファンの酸化的開裂を触媒する酵素である（１６）。ＩＤＯは、抗原依存的活性化を受けるＴ細胞が、細胞増殖および生存のために、トリプトファンを必要とするので、免疫系を抑制するのに役割を果たす（１７）。ＩＤＯは、ほとんどの腫瘍および／または腫瘍流入リンパ節において過剰発現しており、そして、腫瘍が免疫系からの攻撃を回避するのを助ける重要な役割を果たす。ＩＤＯ阻害剤は、トリプトファンの枯渇を減少させ、そして、最終的に、腫瘍に対する免疫応答の増強を促進することを助けるＩＤＯ酵素をブロックする（１８）。現在、単独療法および併用癌療法の両方について、ＩＤＯ阻害剤を評価するための多数の臨床試験が進行中である。
【００３７】
ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、およびＩＤＯに加えて、他の免疫チェックポイントはまた、
Ｔ細胞膜タンパク質−３（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−３）（ＴＩＭ−３）、
ＬＡＧ３、
Ｉｇおよび免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）ドメイン（ＴＩＧＩＴ）を有するＴ細胞免疫受容体（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｔｉｆ  （ＩＴＩＭ）  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ））、
ＢＴＬＡ、
誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  （ＩＣＯＳ））、
キラー阻害受容体（ＫＩＲ）（ｋｉｌｌｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）および
Ｔ細胞活性化の、Ｖドメイン  Ｉｇ含有抑制因子（Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）（ＶＩＳＴＡ）、
を含む、悪性腫瘍の発生および発症にも関与する。
ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４およびＩＤＯと同様に、これらの免疫チェックポイントは、リンパ球活性を阻害し、および／またはリンパ球アネルギー（ａｎｅｒｇｙ）を誘導し、そして、したがって、癌免疫療法の理想的な標的である。これらの免疫チェックポイントのブロッキング抗体は、動物モデルにおいて特異的な抗腫瘍活性を示し、そして、いくつかは臨床試験において試験されている。
【００３８】
これらの免疫チェックポイントに対する抗体を、ブロックすることにより、動物モデルにおいて特異的な抗腫瘍活性を示し、そして、いくつかは臨床試験において試験されている。
【００３９】
治療方法
いくつかの態様において、本発明は、有効量のニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩、および、多くの種類の癌を治療するための化学療法剤または免疫療法剤のいずれかを含む、少なくとも１つの第２の薬剤の有効量による、併用療法の方法を含む。
本発明は、ニトロキソリン、または類似体または薬学的に許容される塩の有効量と、有効量の免疫療法剤または化学療法剤を組み合わせて、抗癌効果の有意な増強、好ましくは相乗的である、を生じる方法を提供する。
【００４０】
癌は、任意の癌である。いくつかの実施形態では、癌は、
メラノーマ、
子宮頸癌、
乳癌、
卵巣癌、
前立腺癌、
精巣癌、
尿路上皮癌、
膀胱癌、
非小細胞肺癌、
小細胞肺癌、
肉腫、
結腸直腸腺癌、
胃腸間質腫瘍白血病、
胃食道癌、
結腸直腸癌、
膵臓癌、
腎臓癌、
肝細胞癌、
悪性中皮腫、
白血病、
リンパ腫、
骨髄異形成症候群、
多発性骨髄腫、
転移性細胞癌、
神経芽腫、
形質細胞新生物、
ウィルムス腫瘍、
グリア芽細胞腫、
網膜芽細胞腫、または
肝細胞癌である。
特定の実施形態では、癌は、
膀胱癌、
前立腺癌、
腎臓癌、
尿路上皮癌、
精巣癌、
非小細胞肺癌、
乳癌、または
肝細胞癌である。
より特定の実施形態では、癌は、膀胱癌、前立腺癌、腎臓癌または尿路上皮癌である。
より特定の実施形態において、癌は、膀胱癌または前立腺癌である。
【００４１】
第２の薬剤は、ニトロキソリン、または類似体または薬学的に許容される塩の、抗癌効果を増強する、任意の化学療法剤とすることができる。
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、微小管解体阻害剤、ＤＮＡを架橋する薬剤、ＤＮＡ塩基対にインターカレートする薬剤、または白金化合物である。
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセルまたはカバジタキセルのような、タキサンなどの微小管分解阻害剤、または、タンパク質または抗体と、混合またはコンジュゲートされたタキサンである。
いくつかの実施形態において、第２の薬剤は、たとえば、マイトマイシンＣなどのＤＮＡの架橋剤である。
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンまたはバルルビシンなどのアントラサイクリンなどのＤＮＡ塩基対にインターカレートする薬剤である。
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、たとえば、カルボプラチン、シスプラチン、ネダプラチンまたはオキサリプラチンのような白金化合物である。
特定の実施形態では、第二の薬剤は、パクリタキセル、マイトマイシンＣ、エピルビシン、ピラルビシン、シスプラチンおよびカルボプラチンからなる群から選択される。
【００４２】
第２の薬剤はまた、ニトロキソリン、または類似体または薬学的に許容される塩の抗癌効果を増強させる、任意の免疫療法剤であってもよい。
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、有効な免疫応答を刺激し、および／または、免疫抑制を阻害することができる免疫学的薬剤である。
いくつかの実施形態において、第２の阻害剤は、制御性Ｔ細胞およびＭＤＳＣなどの免疫抑制因子を調節、特に、阻害、および、下方調節する薬剤であり、
プログラムされた細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）／プログラムされた細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）経路の任意の阻害剤または抗体を含む。
いくつかの実施形態では、第２の阻害剤は、免疫細胞活性を調節することができる、任意の、有効な阻害剤／抗体であり、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＩＬ−１７ａ、ＣＤ２５、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、またはトリプトファン  ２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ２）をターゲットするものを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、第２の阻害剤は、ＢＣＧである。特定の実施形態では、第２の薬剤は、ＰＤ−１またはその抗原結合断片に対する抗体である。
他の特定の実施形態では、第２の薬剤は、ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合断片に対する抗体である。
他の特定の実施形態では、第２の薬剤は、ＣＴＬＡ−４またはその抗原結合断片に対する抗体である。
他の特定の実施形態では、第２の薬剤はＢＣＧ療法、好ましくは弱毒化ＢＣＧ療法であり、より好ましくはマイコバクテリア細胞壁断片、そして、最も好ましくは、マイコバクテリア・フレー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）由来の生物学的に活性な核酸を有するマイコバクテリアの細胞壁断片である。
【００４３】
化合物または薬剤の投与量は選択される。たとえば、選択された特定の投与方法に応じて、必要とされる用量、流体容積、粘度などに基づいて、好ましくは、相乗効果を達成するために、選択される。
いくつかの実施形態では、好ましくは経口で、約１００ミリグラム／日、２００ミリグラム／日、３００ミリグラム／日、４００ミリグラム／日、５００ミリグラム／日、６００ミリグラム／日、７００ミリグラム／日、８００ミリグラム／日、９００ミリグラム／日、１０００ミリグラム／日、１１００ミリグラム／日、１２００ミリグラム／日、１３００ミリグラム／日、１４００ミリグラム／日、１５００ミリグラム／日および１６００ミリグラム／日のような、約１００ミリグラム／日〜約１６００ミリグラム／日、の投与量で、ニトロキソリンまたはその類似体または、その薬学的に許容される塩は、投与される。
好ましくは、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩で投与され、好ましくは経口で、約６００ミリグラム／日〜約１６００ミリグラム／日の投与量で投与される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、抗ＰＤ−１抗体または、その抗原結合断片であり、好適には、たとえば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ミリグラム／キログラムのような、約０１ミリグラム／キログラム〜約２０ミリグラム／キログラムの、の投与量で投与され、好ましくは、静脈内または筋肉内注射で、２、３または４週間毎に、一回、投与される。
より好ましくは、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が投与され、好ましくは、静脈内または筋肉内注射により、総投与量は、約３週間で、約２ミリグラム／キログラム〜約１５ミリグラム／キログラムが投与され、および、その治療は、随意に、１回以上反復される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片であり、好ましくは、たとえば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０ミリグラム／キログラムのような、約１ミリグラム／キログラム〜約４０ミリグラム／キログラムの投与量の投与であり、好ましくは、静脈内または筋肉内注射によって、２、３または４週間毎に１回投与される。
より好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または、その抗原結合断片は、投与され、好ましくは、静脈内または筋肉内注射によって、約１０ミリグラム／キログラム〜約３０ミリグラム／キログラムの総投与量で、４週間の期間で投与され、そして、治療は任意に１回以上繰り返される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体または、その抗原結合断片であり、好ましくは、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５または６ミリグラム／キログラムのような、約０．１〜約６ミリグラム／キログラム〜６ミリグラム／キログラムで投与される。好ましくは、静脈内または筋肉内注射によって、３、４、または５週間毎に１回、投与される。
より好ましくは、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片が投与され、好ましくは、静脈内または筋肉内注射により、約１ミリグラム／キログラム〜約４ミリグラム／キログラムの合計投与量で、約４週間の期間で投与され、そして、治療は任意に、１回以上繰り返される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＢＣＧの治療であり、好ましくは、約０．５Ｘ、１Ｘ、２Ｘ、４Ｘ、６Ｘ、８Ｘ、１０Ｘ、１２Ｘ、１４Ｘ、１６Ｘ、１８Ｘ、２０Ｘ、２２Ｘ、２４Ｘ、２６Ｘ、２８Ｘ、３０Ｘ、３２Ｘ、３４Ｘ、３６Ｘ、３８Ｘ、４０Ｘ、４２Ｘ、４４Ｘ、４６Ｘ、４８Ｘまたは５０Ｘ１０８ＣＦＵのような、約０．５Ｘ１０８〜約５０Ｘ１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）で投与され、好ましくは膀胱内に、１、２、３、４、または５週間ごとに１回、投与される。
より好ましくは、ＢＣＧ治療が投与され、好ましくは、膀胱内に、約１Ｘ１０８〜約８Ｘ１０８ＣＦＵの投与量で、週１回、投与される。処置は、必要に応じて、１回以上、繰り返される。
【００４８】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、化学療法剤が投与され、好ましくは膀胱内に、約０．１ミリグラム／ミリリットル以上の濃度で、水または生理食塩水において、その薬剤の飽和溶解度で投与される。
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、マイトマイシンＣ、アントラサイクリン（たとえば、エピルビシン、ピラルビシン、等）、白金ベースの抗腫瘍剤（たとえば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン）のようなＤＮＡ架橋またはインターカレート剤であり、約０．１ミリグラム／ミリリットル〜約５ミリグラム／ミリリットルの濃度（約０．１、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５または５ミリグラム／ミリリットルのような）で、投与され、好ましくは、膀胱内に、膀胱点滴液で、１、２、３、４または５週間毎に１回、投与される。
より好ましくは、化学療法剤は、好ましくは、膀胱内に、週に１回、膀胱点滴液中に、約０．５ミリグラム／ミリリットル〜２ミリグラム／ミリリットルの濃度で投与され、そして治療は、随意的に、１回以上反復される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、そのタンパク質または抗体などとのコンジュゲートのような、チューブリンを標的とするタキサン系薬剤であり、約０．５ミリグラム／ミリリットル〜約１０ミリグラム／ミリリットルのタキサン薬物の濃度で（約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ミリグラム／ミリリットルのような）、投与され、好ましくは、膀胱内に、膀胱点滴液で、１、２、３、４、または５週間毎に１回、投与される。
より好ましくは、タキサン系薬物が投与され、好ましくは、膀胱内に、週に一度、約１ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルの濃度で、膀胱点滴液で、投与され、そして、治療は、任意に１回以上繰り返される。
【００５０】
化合物または薬剤は、任意の許容される経路によって投与することができる。
いくつかの実施形態では、化合物は、以下にして投与される。
経口で、
アジポサリー内（ｉｎｔｒａａｄｉｐｏｓａｌｌｙ）、
動脈内（ｉｎｔｒａａｒｔｅｒｉａｌｌｙ）、
関節内（ｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ）、
頭蓋内（ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｌｙ）、
皮内（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌｌｙ）、
病巣内（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌｌｙ）、
筋肉内（ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｌｙ、
鼻腔内（ｉｎｔｒａｎａｓａｌｌｙ）、
眼内（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒａｌｌｙ）、
心膜内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｃａｒｄｉａｌｌｙ）、
腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ）、
胸膜内（ｉｎｔｒａｐｌｅｕｒａｌｌｙ）、
前立腺内（ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃａｌｙ）、
結腸内（ｉｎｔｒａｒｅｃｔａｌｌｙ）、
髄腔内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、
気管内（ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙ）、
癌内（ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌｌｙ）、
臍下内（ｉｎｔｒａｕｍｂｉｌｉｃａｌｌｙ）、
膣内（ｉｎｔｒａｖａｇｉｎａｌｌｙ）、
静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ）、
膀胱内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌｌｙ）、
硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌｌｙ）、
リポソームで（ｌｉｐｏｓｏｍａｌｌｙ）、
局所で（ｌｏｃａｌｌｙ）、
粘膜によって（ｍｕｃｏｓａｌｌｙ）、
経口で（ｏｒａｌｌｙ）、
非経口で（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）、
直腸で（ｒｅｃｔａｌｌｙ）、
結膜下に（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ）、
皮下に（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、
舌下で（ｓｕｂｌｉｎｇｕａｌｌｙ）、
局所で（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、
舌下を通って（ｔｒａｎｓｂｕｃｃａｌｌｙ）、
経皮的に（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、
膣に（ｖａｇｉｎａｌｌｙ）、
クリームで、
脂質の組成物で（ｌｉｐｉｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）、
カテーテルを介して（ｖｉａ  ａ  ｃａｔｈｅｔｅｒ）、
洗浄を介して（ｖｉａ  ａ  ｌａｖａｇｅ）、
連続注入を介して（ｖｉａ  ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、
注入を介して（ｖｉａ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、
吸入を介して（ｖｉａ  ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）、
注射で（ｖｉａ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、
局所送達によって（ｖｉａ  ｌｏｃａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、
局所の潅流を介して（ｖｉａ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）、
標的細胞を直接浴びせる（ｂａｔｈｉｎｇ  ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ）、または、
上記の任意の組み合わせ。
いくつかの実施形態では、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学上許容される塩は、経口または注射によって投与され、好ましくは、経口投与される。
いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、注射によって投与される抗体である。
いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、膀胱内または注射によって投与されるＢＣＧ療法であり、そして、好ましくは、膀胱内に投与される。
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、膀胱内または注射によって投与され、好ましくは、膀胱内投与される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、化合物または薬剤は、１日１回投与される。
他の実施形態では、化合物または薬剤は１日２回投与される。
他の実施形態では、化合物は、１日に複数回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、７日に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、または１年に１回投与される。ニトロキソリンまたはその類似体、またはその薬学的に許容される塩の投与レジメは、免疫療法剤または化学療法剤の投与レジメとは異なることができる。
【００５２】
化合物または薬剤は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、６ヶ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間、１５年間、投与することができる。
【００５３】
本発明の方法は、追加の癌治療法と組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態では、追加の癌療法は、手術、放射線療法、化学療法、毒素療法、免疫療法、凍結療法または遺伝子治療を含む。
いくつかの実施形態において、癌は、化学療法抵抗性、免疫療法抵抗性または放射線耐性の癌である。
【００５４】
本発明の実施形態によれば、本発明の併用治療は、治療の個々のコンポーネントと同時、連続または別個投与によって達成することができる。
本発明における治療方法は、任意の動物モデルまたは臨床において、有効量のニトロキソリンまたは類似体もしくは、その薬学的に許容される塩と有効量の免疫療法剤または有効量の化学療法剤との組み合わせとして適用することができる。
【００５５】
組成物／キット
本発明の態様はまた、ニトロキソリンまたはその類似体、またはその薬学的に許容される塩の有効量、免疫療法剤または化学療法剤の有効量、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物またはキット、ならびに、ニトロキソリンまたはその類似体、またはその薬学的に許容される塩、少なくとも１つの追加の抗癌免疫療法剤もしくは化学療法剤、および薬学的に許容される担体を、本開示を考慮して当業者に公知の方法を使用して、組み合わせることによる医薬組成物またはキットの製造方法に関連する。
【００５６】
本発明の実施形態によれば、キットは、有効量のニトロキソリン、もしくは類似体またはその薬学的に許容される塩、および有効量の免疫療法剤を有する、１つのまたは複数を含む医薬組成物を含む。
本発明の他の実施形態によれば、キットは、有効量のニトロキソリン、または類似体もしくはその薬学的に許容される塩、および有効量の化学療法剤を有する１つまたは複数の医薬組成物を含む。
ニトロキソリン、または類似体または、その薬学的に許容される塩の有効量、および免疫療法剤のまたは化学療法剤の有効量は、一つの医薬組成物に存在させることができる。
それらは、別個の医薬組成物中に存在することもできる。
キットはさらに、有効量のニトロキソリンまたは類似体もしくはその薬学的に許容される塩と、癌を治療するための免疫療法剤または化学療法剤の有効量との組み合わせの使用に関する説明書を含む。
【００５７】
本発明の実施形態に係る組成物またはキットは、本開示に鑑みて、当技術分野で公知の方法を用いて調製することができる。
【００５８】
特定の実施形態によれば、有効量は、以下の効果の１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の相乗効果を達成するのに有効な、各活性成分または化合物の量を指す。
（ｉ）治療される癌またはそれに関連する症状の重篤度を低減または緩和する；
（ｉｉ）治療される癌またはそれに付随する症状の持続時間を短縮する；
（ｉｉｉ）治療される癌またはそれに関連する症状の進行の予防；
（ｉｖ）治療されるべき癌またはそれに関連する症状の退行を引き起こす；
（ｖ）治療される癌またはそれに関連する症状の発症または発症の予防；
（ｖｉ）治療される癌またはそれに関連する症状の再発の予防；
（ｖｉｉ）処置される癌またはそれに付随する症状を有する被験体の入院の減少；
（ｖｉｉｉ）治療される癌またはそれに関連する症状を有する被験体の入院期間の短縮；
（ｉｘ）治療される癌またはそれに関連する症状を有する被験体の生存を増加；
（ｘｉ）被験体において、治療される癌またはそれに関連する症状を阻害または軽減すること；および／または
（ｘｉｉ）別の療法の予防的または治療的効果を増強または改善すること。
【００５９】
実施形態
実施形態１は、ニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および免疫療法剤の有効量を、それを必要とする被験体に投与することを含む、癌を治療する方法である。ここで、好ましくは、免疫療法剤は、制御性Ｔ細胞または骨髄由来のサプレッサー細胞の阻害剤またはモジュレーターであり、ならびにニトロキソリンまたは類似体またはその薬学的に許容される塩と免疫療法剤との組み合わせは、相乗効果をもたらす。
【００６０】
実施形態２は、免疫療法剤が、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路の阻害剤であるか、ＣＴＬＡ−４経路の阻害剤、好ましくは、免疫療法剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはそれらの抗原結合断片、より好ましくは、抗体またはその断片は、静脈内または筋肉内注射によって投与される、実施形態１の方法である。
【００６１】
実施形態３は、実施形態１の方法であって、前記免疫療法剤が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ-Ｇｕｅｒｉｎ  （ＢＣＧ）治療、好ましくは弱毒化ＢＣＧ療法、より好ましくは、マイコバクテリア細胞壁断片、そして、最も好ましくは、マイコバクテリウムフレイから由来する、生物学的活性を有する核酸を有するマイコバクテリア細胞壁断片であり、より好ましくは、ＢＣＧ療法剤が膀胱内に投与される。
【００６２】
実施形態４は、実施形態３に記載の方法であって、ここで、ニトロキソリン、類似体またはその薬学的に許容される塩が、ＢＣＧ治療剤の膀胱内点滴注入の２４時間以内に投与されない治療である。
【００６３】
実施形態５は、実施形態の形態１〜４のいずれかに記載の方法であって、ここで、癌は、黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、胃腸間質腫瘍白血病、胃食道癌、結腸直腸癌、膵臓癌、腎臓癌、肝細胞癌、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、転移性細胞癌、神経芽腫、形質細胞新生物、ウィルムス腫瘍、グリア芽細胞腫、網膜芽細胞腫、および肝細胞癌である。
【００６４】
実施形態６は、癌が、膀胱癌である、実施形態５の方法である。
【００６５】
実施形態７は、癌が前立腺癌である、実施形態５に記載の方法である。
【００６６】
実施形態８は、前記実施形態１乃至７のいずれかに記載の方法であって、ニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量は、経口または静脈内または筋肉内注射によって投与される。
【００６７】
実施形態９は、癌、好ましくは膀胱癌、肝臓癌、または前立腺癌の治療方法であって、ニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および、化学療法剤の有効量を、それを必要とする被験体に投与することを含み、および、ニトロキソリンまたは類似体またはその薬学的に許容される塩および化学療法剤前記の組み合わせは、相乗効果をもたらす方法である。
【００６８】
実施形態１０は、実施形態９の方法であって、ここで、前記化学療法剤が、チューブリンを標的とする、タキサン系薬剤、好ましくは、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルである。または、化学療法剤が、ＤＮＡ架橋またはインターカレート剤、好ましくは、マイトマイシンＣ、アントラサイクリン（好ましくは、エピルビシン、ピラルビシン）、または白金ベースの抗腫瘍剤（好ましくは、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンまたはネダプラチン）である。
【００６９】
実施形態１１は、実施形態９または１０の方法であって、ここで、前記化学療法剤が、膀胱内投与で、週に１回、または２、３、４、または５週間に１回投与される。
【００７０】
実施形態１２は、実施形態１〜１１のいずれかに記載の方法であって、ニトロキソリン類似体は、オキシキノリン、クリオキノールおよびヨードキノールからなる群から選択される。
【００７１】
実施形態１３は、実施形態１〜１２のいずれかに記載の方法であって、ニトロキソリンまたは類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量が、１日当たり、１００ミリグラム〜１６００ミリグラムの経口投与、好ましくは、一日あたり、６００ミリグラム〜１６００ミリグラムの経口投与である。
【００７２】
実施形態１４は、癌、好ましくは、膀胱癌または前立腺癌を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、ニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の有効量を投与することを含む。ここで、ニトロキソリンまたは類似体またはその薬学的に許容される塩は、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは、１日当たり、６００〜１６００ミリグラム、および抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片を、静脈内または筋肉内注射に、０．１ミリグラム／キログラム〜２０ミリグラム／キログラムを、１〜４週に１回、好適には、２ミリグラム／キログラム〜１５ミリグラム／キログラムを、合計して３週の期間内に投与して、そして、ニトロキソリンまたは類似体または、その薬学的に許容される塩、および、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が相乗効果を齎す。
【００７３】
実施形態１５は、癌、好ましくは、膀胱癌または前立腺癌、を治療する方法であって、ニトロキソリン、または類似体または、その薬学的に許容される塩の有効量と、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片の有効量を、それを必要とする被験者に投与することを含み、ここで、ニトロキソリンまたはその類似体または、その薬学的に許容される塩は、１日当たり、経口投与で、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは、１日当たり、６００ミリグラム〜１６００ミリグラム、投与され、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片は、静脈内または筋肉内注射で、２〜４週間に一回、１ミリグラム／キログラム〜４０ミリグラム／キログラム、好ましくは、総量１０ミリグラム／キログラム〜３０ミリグラム／キログラムを、４週間の期間で、およびニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩と抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片との組み合わせが、相乗効果をもたらす。
【００７４】
実施形態１６は、癌、好ましくは、膀胱癌または前立腺癌の治療方法であり、ニトロキソリン、または類似体または薬学的に許容される塩の有効量と、ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の有効量とを、それを必要とする被験体に投与することを含む。ここで、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩は、経口投与で、１日当たり、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは、１日当たり、６００ミリグラム〜１６００ミリグラム、および抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片が、静脈内または筋肉内注射で、０．１ミリグラム／キログラム〜約６ミリグラム／キログラムを、３〜５週間に１回、好ましくは、１ミリグラム／キログラム〜４ミリグラム／キログラムの総量を、４週間の期間、投与される。そして、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩と、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片との組み合わせが、相乗効果を齎す。
【００７５】
実施形態１７は、癌、好ましくは膀胱癌または前立腺癌の治療方法であって、ニトロキソリン、または類似体または薬学的に許容される塩の有効量と、ＢＣＧ療法の有効量を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容されるその塩を、経口で、１日当たり、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは、１日当たり、６００ミリグラム〜１６００ミリグラム、およびＢＣＧ療法を、膀胱内に、０．５Ｘ１０８〜５０Ｘ１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）の用量で、１〜５週間に１回、好ましくは、１Ｘ１０８〜８ｘ１０８のＣＦＵが、１週間に１回、投与され、そして、ニトロキソリン、またはその類似体またはその薬学的に許容される塩と、ＢＣＧ療法との組合せが、相乗効果を齎す。
【００７６】
実施形態１８は、癌、好ましくは、膀胱癌、肝臓癌または前立腺癌の治療方法であって、それを必要とする被験体に、ニトロキソリン、または類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量と、有効量の化学療法剤を投与することを含み、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩を、経口で、１日当たり、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは６００ミリグラム〜１６００ミリグラムが投与され、有効量の化学療法剤が、膀胱内または、静脈内または筋肉内注射によって投与され、そして、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩と化学療法剤との組み合わせが相乗効果を齎す。
【００７７】
実施形態１９は、実施形態１８に記載の方法であって、化学療法剤が、マイトマイシンＣ、エピルビシン、ピラルビシン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンおよびネダプラチンからなる群から選択される、ＤＮＡ架橋またはインターカレート剤であって、そして、化学療法薬剤が、膀胱内に、１〜５週間に１回、膀胱点滴注入液中に、０．１ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットル、好ましくは０．５ミリグラム／ミリリットル〜２ミリグラム／ミリリットルの濃度で、投与される。
【００７８】
実施形態２０は、実施形態１８に記載の方法であって、化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセルおよびカバジタキセルから成る群から選択されるタキサン薬物であり、そして、化学療法剤は、膀胱点滴液に、０．５〜１０ミリグラム／ミリリットルであり、好ましくは１〜５ミリグラム／ミリリットルの濃度で、膀胱内に投与される。
【００７９】
実施形態２１は、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法であり、ニトロキソリンまたはその薬学的に許容される塩が、それを必要とする被験体に、経口または注射で投与される。
【００８０】
実施形態２２は、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法であって、オキシキノリン、クリオキノールおよびヨードキノール、またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される、ニトロキソリン類似体が、経口または注射により、それを必要とする被験体に投与される。
【００８１】
実施形態２３は、ニトロキソリンまたはその類似体、またはその薬学的に許容される塩の有効量、免疫療法剤または化学療法剤の有効量、および、一のまたはそれ以上の薬学的に許容される担体を含む、キットであり、ここで、ニトロキソリンもしくはその類似体またはその薬学的に許容される塩の有効量、および、有効量の免疫治療剤または化学療法剤が、同じ医薬組成物または別々の医薬組成物中に存在する。
【００８２】
実施形態２４は、実施形態の２３のキットであり、前記キットは、ニトロキソリンまたはその類似体、またはその薬学的に許容される塩が、投与単位当たり、１００ミリグラム〜１６００ミリグラム、好ましくは６００ミリグラム〜１６００ミリグラムを含む含有する医薬組成物を含む。
【００８３】
実施形態２５は、実施形態２３または２４のキットであって、そのキットは、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片；抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片；抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片；およびＢＣＧ療法からなる群から選択される、免疫療法剤を含む、医薬組成物を含有する。
【００８４】
実施形態２６は、実施形態２３または２４のキットであって、ここで、キットは、マイトマイシンＣ、エピルビシン、ピラルビシン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、パクリタキセル、ドセタキセルおよびカバジタキセルからなる群より選択される、化学療法剤を含む、医薬組成物を含む。
【００８５】
実施形態２７は、実施形態２３〜２６のいずれかに記載のキットであって、ここで、キットは、ニトロキソリン、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を含む。
【００８６】
実施形態２８は、実施形態２３〜２６のいずれかに記載のキットであって、ここで、キットは、オキシキノリン、クリオキノールおよびヨードキノールからなる群から選択されるニトロキソリン類似体、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を含む。
【００８７】
実施形態２９は、実施形態２３〜２８のいずれかに記載のキットを製造する方法であって、キットの中の、ニトロキソリン、その類似体、またはその薬学的に許容される塩、免疫療法剤または化学療法剤、および一つ以上の薬学的に許容される担体を組み合わせることを含む。
【００８８】
実施形態３０は、実施形態２３〜２８のいずれか１つに記載のキットを製造する方法であって、以下を含む：
ニトロキソリン、その類似体、またはその薬学的に許容される塩の有効量を含む、第１の医薬組成物を得る工程、
有効量の免疫療法剤または化学療法剤を含む、第２の医薬組成物を得る工程、そして、
キットの中の第１及び第２医薬組成物を組み合わせる工程。
【００８９】
実施形態３１は、実施形態２３〜２８のいずれかに記載のキットを、癌の治療のための医薬の製造における使用であり、そして、ニトロキソリンまたはその類似体またはその薬学的に許容される塩と、免疫療法剤または化学療法剤の併用は、相乗効果をもたらす。
【００９０】
実施形態３２は、実施形態３１の使用であり、前記癌が、メラノーマ、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、胃腸間質腫瘍白血病、胃食道癌、結腸直腸癌、膵臓癌、腎臓癌、肝細胞癌、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、転移性細胞癌、神経芽腫、形質細胞新生物、ウィルムス腫瘍、グリア芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または肝細胞癌である。
【００９１】
実施形態３３は、実施形態３２の使用であり、前記癌が膀胱癌である。
【００９２】
実施形態３４は、実施形態３２の使用であり、癌が前立腺癌である。
【００９３】
実施形態３５は、実施形態３２の使用であり、癌が肝臓癌である。
【００９４】
実施例
本発明の以下の実施例は、本発明の性質をさらに説明するためのものである。以下の実施例は本発明を限定するものではなく、そして、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって決定されるべきであることを理解すべきである。
【００９５】
実施例１：
ＮＩＴおよび１つ以上の化学療法剤との組み合わせによる腫瘍増殖の相乗的阻害
２つのヒト癌細胞株の増殖阻害において、カルボプラチン、パクリタキセル、マイトマイシンＣ、エピルビシンおよびピラルビシンを含む一群の化学療法剤のグループで、ＮＩＴを試験した。表２および３に示すように、ＮＩＴは、ヒト膀胱癌細胞株５６３７およびヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖を阻害した。
【００９６】
【表２】
2019510825.tif 000005
【００９７】
【表３】
2019510825.tif 000006
【００９８】
表４および５に示されているように、カルボプラチンは、ヒト膀胱癌細胞株５６３７およびヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖を阻害した。
【００９９】
【表４】
2019510825.tif 000007
【０１００】
【表５】
2019510825.tif 000008
【０１０１】
表６および７に示されるように、パクリタキセルは、ヒト膀胱癌細胞株５６３７およびヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖を阻害した。
【０１０２】
【表６】
2019510825.tif 000009
【０１０３】
【表７】
2019510825.tif 000010
【０１０４】
これらの化合物の細胞増殖の阻害のＩＣ５０値を、表８にまとめた。
【０１０５】
【表８】
2019510825.tif 000011
【０１０６】
マイトマイシンＣ、エピルビシンおよびピラルビシンを、膀胱癌細胞株５６３７の増殖の阻害について同様に試験した。そして、それらのＩＣ２５、ＩＣ５０およびＩＣ７５値を表９にまとめた。
【０１０７】
【表９】
2019510825.tif 000012
【０１０８】
ＮＩＴと化学療法の組み合わせの研究は、ＮＩＴを個々の化学療法と、５〜７濃度レベルで混合し、中濃度レベルをそれらのＩＣ５０値に近いものにすることによって行った。Ｔｉｎｇ−ＣｈａｏＣｈｏｕの方法（１９）に従って、相乗効果、相加効果および拮抗作用を含む組み合わせ効果を推定するために、組合せ指数（ＣＩ）を計算し、プロットした。
表１０および１１に示すように、ＮＩＴは、それぞれ、カルボプラチンおよびパクリタキセルと組み合わせて、ヒト膀胱癌５６３７の増殖を阻害し、そして、それぞれ、研究のＣＩ値を計算し、図２および３にプロットした。
【０１０９】
【表１０】
2019510825.tif 000013
【０１１０】
【表１１】
2019510825.tif 000014
【０１１１】
表１２および１３に示すように、ＮＩＴは、ヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の成長をそれぞれ、カルボプラチンおよびパクリタキセルと組合せて、研究のＣＩ値は、それぞれ、図４および図５にプロットした。
【０１１２】
【表１２】
2019510825.tif 000015
【０１１３】
【表１３】
2019510825.tif 000016
【０１１４】
同様に、ＮＩＴは、マイトマイシンＣ、エピルビシンおよびピラルビシンと併用で、膀胱癌細胞株５６３７の成長を阻害した。そして、それらの組合せ阻害の結果とＣＩプロットを、表１４〜１７および図６〜８に示した。
【０１１５】
【表１４】
2019510825.tif 000017
【０１１６】
【表１５】
2019510825.tif 000018
【０１１７】
【表１６】
2019510825.tif 000019
【０１１８】
【表１７】
2019510825.tif 000020
【０１１９】
Chou（１９）によれば、０．９以下のＣＩ値は、２つの薬物の相乗的な組み合わせを表し、そして、０．１〜０．３、０．３〜０．７、０．７〜０．８５、および０．８５〜０．９は、強い相乗作用、相乗作用、中程度の相乗作用およびわずかな相乗作用を、それぞれ、示す。
したがって、図２および４のＣＩプロットは、ＮＩＴおよびカルボプラチンが、相乗的、または強く相乗的、に分類されるように、膀胱癌細胞株５６３７および肝臓癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖を阻害するという結論を支持する。
図３のＣＩプロットは、ＮＩＴとパクリタキセルとの組み合わせが、膀胱癌細胞株５６３７の増殖阻害について、わずかな相乗効果を示したことを示し、そして、図５は、この組み合わせによる、肝臓癌細胞株ＨｅｐＧ２の増殖阻害は、薬剤濃度Ｆａ（吸収率）が０．３よりも低い場合、部分的に相乗的である。
表  １５および図６に示されるように、薬剤のＩＣ５０値より低い濃度でのこの部分的相乗作用はまた、膀胱癌細胞株５６３７の阻害についてのＮＩＴおよびマイトマイシンＣの組み合わせについても見出された。
表１６および１７ならびに図７および８は、ＮＩＴと、エピルビシンまたはピラルビシンとの組み合わせは、膀胱癌細胞株５６３７の増殖の阻害について、いくつかの濃度で部分的に相乗的であることを示した。
【０１２０】
マイトマイシンＣ（ＭＭＣ）との組み合わせで、ＮＩＴによって示される、相乗的な癌増殖阻害を、さらに、マウスの膀胱癌の同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）で評価した。図９は、経口投与されたＮＩＴおよび、膀胱内投与されたＭＭＣの、組み合わせた効果を、ＭＢＴ−２−ｌｕｃ同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウス膀胱癌モデル（ｍｏｕｓｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌ）における腫瘍発生の阻害について示す。
腫瘍体積は、指示された治療後、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００システムで分析した。
図９Ａは、各処置群の典型的なＩＶＩＳ画像を示す。各マウスの腫瘍体積は、１秒あたりの総光子の、関心領域の分析（ｒｅｇｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）によって決定された。
各群、６匹のマウスで分析した。
図９Ｂに示すように、１５ミリグラム／キログラムを、１日２回、経口で、ＮＩＴを、１ミリグラム／ミリリットルのマイトマイシンＣ（ＮＩＴ＋ＭＭＣ）を、７日に１回、膀胱内投与と組み合わせて、投与した群の平均腫瘍体積は、ＮＩＴ単独またはＭＭＣ単独治療群のそれとは有意に相違し（それぞれ、ｐ＜０．０００１およびｐ＝０．０００１）、ＭＭＣとＮＩＴの併用治療により、腫瘍増殖阻害の著しい増強を示した。
各処理についてのマウス生存を評価するために、カプラン−マイヤー解析（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ）も行い、図９Ｃにまとめた。一貫して、ＮＩＴとＭＭＣ群の生存状態は、対照群および単剤治療群とは対照的に、有意に改善した。
【０１２１】
腫瘍増殖阻害の結果と生存割合、ならびに相加性のブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）の計算は、表１８に要約されている。
【０１２２】
【表１８】
2019510825.tif 000021
【０１２３】
経口で、１５ミリグラム／キログラムの用量で（１日２回）投与されたＮＩＴは、腫瘍増殖を、０．３３の割合で、阻害した。そして実験終了時（４５日）の生存マウスの割合は０．３３であった。
膀胱内投与でＭＭＣ処理された、生存マウスの腫瘍抑制率と生存割合は、それぞれ、０．５６と０．５７であった。
経口ＮＩＴを、ＭＭＣと投与した場合、観察された腫瘍抑制率および生存マウスの割合は、有意に増加し、それぞれ、０．７１と１に、有意に増加し、ＮＩＴおよびＭＭＣの組み合わせによる腫瘍阻害の相乗効果を示す、予測されるブリス相加値（Ｂｌｉｓｓ  Ａｄｄｉｔｉｖｅ  Ｖａｌｕｅｓ）よりも大きかった。
【０１２４】
ＮＩＴは、化学療法剤の異なるクラスとの相乗作用において、異なる程度を有するという発見は、種々の固形および血液腫瘍の組合せ治療に使用することができる。
【０１２５】
実施例２：
免疫療法剤とＮＩＴの組み合わせによる、腫瘍増殖の相乗的阻害
ＮＩＴは、マウス膀胱および前立腺癌の同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）モデルの腫瘍増殖阻害のためのＢＣＧおよび抗ＰＤ−１抗体を含む免疫療法剤の群を用いて試験した。
【０１２６】
図１０は、ＭＢＴ−２−ｌｕｃ同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウス膀胱癌モデルにおける、腫瘍発生の阻害に対する経口投与されたＮＩＴと膀胱内注入されたＢＣＧとの組み合わせた効果を示す。示された処置の後に、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００システムにより腫瘍体積を分析し、そして、示された処置の各処置群についての典型的なＩＶＩＳ画像を図１０Ａに示す。
各マウスの腫瘍体積は、１秒あたりの総光子について、関心のある領域解析（ｒｅｇｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）により決定した。各群において８匹のマウスを分析した。図１０Ｂに示されるように、経口投与での３０ミリグラム／キログラムのＮＩＴは、連続でも、また４８時間の休薬を伴っていても、いずれも、腫瘍増殖を阻害し、膀胱内投与されたＢＣＧによって引き起こされるものと比較して、わずかに高い、または類似の活性であった。
経口ＮＩＴ（連続して、または４８時間の休薬で）と共に、ＢＣＧを投与された場合、ＮＩＴ単独またはＢＣＧ治療単独と比較して、阻害率は有意に増加した（全ての比較について、ｐ＜０．０００１）。
カプラン・マイヤー分析もまた、各治療についてのマウスの生存を評価するために行われ、そして、図１０Ｃに纏めた。
ＢＣＧと組み合わせて、経口ＮＩＴで投与（連続的に、または４８時間の休薬）された群の生存状態は、単一の薬物治療群と比較して、有意に改善された。
【０１２７】
腫瘍増殖阻害および生存割合についての、相加のブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）計算の結果を、表１９（連続ＮＩＴ）および表２０（４８時間の休薬を有するＮＩＴ）に纏めた。
【０１２８】
【表１９】
2019510825.tif 000022
【０１２９】
【表２０】
2019510825.tif 000023
【０１３０】
経口ＮＩＴが、連続的または４８時間の中断で、膀胱内ＢＣＧと組み合わせて投与された場合、単味のＮＩＴおよびＢＣＧ治療のそれと比較して、観察された腫瘍阻害率および生存の割合が有意に増加した。ＮＩＨをＢＣＧと組み合わせた場合、実際の腫瘍抑制率と生存比率は、それらの期待された、ブリス相加値よりも非常に高く、ＮＩＴとＢＣＧの組合せによる、腫瘍抑制における強固な相乗効果を示唆した。
【０１３１】
抗ＰＤ−１と組み合わせた、ＮＩＴの相乗的な腫瘍抑制効果を評価するために、組み合わせを、マウス膀胱および前立腺癌の同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）異種移植片モデルで、腫瘍増殖阻害について試験した。
【０１３２】
図１１は、ＭＢＴ−２−ｌｕｃ同所性（orthotopic）マウス膀胱癌モデルにおける腫瘍増殖の阻害に対する腹腔内投与の抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた経口投与ＮＩＴの効果を示す。
各示された処理群についての典型的なＩＶＩＳ画像を、図１１Ａに示す。
各マウスの腫瘍体積は、１秒あたりの総光子の関心領域分析によって決定された。各群、５匹のマウスを分析した。
図１１Ｂに示すように、１０ミリグラム／キログラムの腹腔内抗ＰＤ−１は、腫瘍増殖を８０％の割合で、強力に阻害した。他方、経口投与で、１５ミリグラム／キログラムを投与したＮＩＴは、３１％の阻害割合を示した。経口ＮＩＴが、抗ＰＤ−１と組み合わせられた場合、単味のＮＩＴまたは抗ＰＤ−１処置と比較して、阻害割合は、有意に増強された（それぞれ、ｐ＜０．０００１およびｐ＝０．０３９）。カプラン−マイヤー分析もまた行い、図１１Ｃに纏めた。
ＮＩＴ＋抗ＰＤ−１群、または単味の抗ＰＤ−１群の生存状態は、単味のＮＩＴ群よりも有意に高かった。
【０１３３】
腫瘍成長阻害に対する相加性のブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）計算の結果を、表２１に纏めた。ＮＩＴを、抗ＰＤ−１と組み合わせて投与した場合、その実際に観察された腫瘍阻害率は、予想されるブリス相加値より大きく、腫瘍阻害の相乗作用を示唆した。
【０１３４】
【表２１】
2019510825.tif 000024
【０１３５】
図１２は、ＲＭ−９−ｌｕｃ同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）マウス前立腺癌モデルにおける腫瘍増殖の阻害に対する、腹腔内投与の抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた経口投与ＮＩＴの効果を示す。各示された処置群についての典型的なＩＶＩＳ画像を図１２Ａに示す。
各マウスの腫瘍体積は、１秒あたりの総光子の関心領域（ｒｅｇｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｔｅｒｅｓｔ）分析によって決定された。各群について、８匹のマウスを分析した。図１２Ｂに示すように、１０ミリグラム／キログラムの腹腔内投与の抗ＰＤ−１は、堅牢な腫瘍増殖抑止を示した（７６％）。他方、経口で、１５ミリグラム／キログラムのＮＩＴの投与は、腫瘍抑制率５２％を示した。ＮＩＴが、抗ＰＤ−１と組み合わせた場合、腫瘍阻害率が、９６％まで大幅に向上した（ｐ値は、それぞれ、単味のＮＩＴおよび抗ＰＤ−１処理と比較して、０．０１７と０．０２７であった）。
図１２Ｃは、各群から採取した腫瘍の画像を示す。
各マウスの腫瘍重量は測定され、そして、図１２Ｄにまとめた。腫瘍重量データの分析から、ＮＩＴおよび抗ＰＤ−１の組み合わせは、単味のＮＩＴおよび抗にＰＤ−１治療（それぞれ、３７％および５６％）と比較して、それぞれ、０．０００６と０．０１１１のｐ値を有する、腫瘍阻止の顕著な増強（７４％）を齎すことが明らかになった
【０１３６】
腫瘍の体積および重量について、相加のブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）の計算の結果を、表２２に纏めた。
ＮＩＴを、抗ＰＤ−１と組み合わせて投与したとき、その実際の観察された腫瘍の体積と重量の阻害率は、それぞれ、０．９６と０．７４であって、予想されたブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）値（それぞれ、０．８９および０．７２）より大きく、腫瘍の阻害において、相乗効果を示唆した。
【０１３７】
【表２２】
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【０１３８】
ＮＩＴは、異なる免疫療法剤と、程度が異なる相乗作用の有するという、発見は、種々の固形および血液腫瘍の組合せ治療に使用することができる。
【０１３９】
実施例３
実験手順
３．１研究材料
化合物：ＮＩＴ、カルボプラチン、パクリタキセル、エピルビシンおよびピラルビシンを供給者から購入し、そして、ＤＭＳＯに溶解し、ストック溶液にして、そして、−２０℃で貯蔵した。
使用前に、ストック溶液を異なる濃度の作業溶液に希釈した。作業溶液中のＤＭＳＯ濃度は１％未満であった。全ての癌細胞株は、ベンダーから購入した。
【０１４０】
細胞株および試薬：マウス膀胱癌細胞株ＭＢＴ−２およびＲＭ−９は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、米国）によって提供された。すべての細胞を、１０％ウシ胎仔血清で補充された、ＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持された。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で培養され、日常的に、ＢＣＧを含有する、１００ｃｍ２のフラスコ中、トリプシンーＥＤＴＡ処理によって継代培養され（８１ミリグラム；コンノート亜株（Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ  ｓｕｂｓｔｒａｉｎ）、ＩｍｍｕＣｙｓｔ、日本化薬株式会社、東京、日本）、および、インビボ試験のために、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）。
【０１４１】
ルシフェラーゼを安定して発現する、ＭＢＴ−２およびＲＭ−９細胞（ＭＢＴ−２−ＬｕｃおよびＲＭ−９−Ｌｕｃ；シグマ  アルドリッチ  ジャパン合同会社から得られたルシフェラーゼＬ４８９９）は、ＭＢＴ−２およびＲＭ−９細胞を、ＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）−３Ｔ３トランスフェクションキット（Ｍｉｒｕｓ  Ｂｉｏ  ＬＬＣ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、米国）を用いて、ｐＧＬ３−Ｌｕｃプラスミドでトランスフェクトすることによって生成された）。５００マイクログラム／ミリリットルのＧ４１８を用いて、２週間選択することにより、ルシフェラーゼを安定に発現する細胞を得た。
Ｇ４１８選択の後、ＭＢＴ−２−ＬｕｃおよびＲＭ−９−Ｌｕｃからの増殖培地をルシフェラーゼ活性について試験して、ルシフェラーゼの細胞培地への発現および分泌を確認した。
【０１４２】
ラット抗マウスＰＤ−１モノクローナル抗体（ＲＭＰ１−１４；ＩｇＧ２ａ）は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（ウエストレバノン、ＮＨ、米国）から購入した。
【０１４３】
動物：８週令の雌Ｃ３Ｈ／ＨｅＮおよびＣ５７／ＢＬ６のマウスは、ベンダーから入手した。マウスは、食物と水を自由に摂取させ、特定の病原体のない環境の動物施設で維持した。
【０１４４】
３．２
インビトロアッセイ
ＭＴＴアッセイを、試験法として使用した。
適切な量の細胞（２Ｘ１０３／１００μＬ）を、９６ウェルのプレートに播種し、そして、ＣＯ２インキュベータ中で、３７℃で、細胞接着および適応のために、一夜、インキュベートした。
癌細胞もまた、別の９６ウェルプレート（プレートＴ０）に、１２ウェル／細胞株で播種し、時間ゼロ（Ｔ０）でＯＤ値を測定した。
一晩の順応後、プレートＴ０に、ウェル当たり、２０μＬのＭＴＴ試薬（最終濃度０．５ミリグラム／ミリリットル）を添加し、そして、３７℃で、４時間インキュベートした。
上清培地をピペットで取り出し、そして、ウェル当たり、約１５０μＬのＤＭＳＯを添加した。
試験波長として５５０ｎｍおよび基準波長として６３０ｎｍを使用して、時間ゼロ（Ｔ０）でのＯＤ値を得るために、プレートをプレートリーダーで読み取った。
一晩の適応後、試験化合物およびビヒクルをプレートに加えて、細胞を処理した。
試験化合物を、３倍のウェル中において、６つの濃度で試験した。プレートを３７℃で、ＣＯ２インキュベーターで、４８時間インキュベートした。より長いインキュベーション時間を使用することができる。
１ウェルあたり、２０μＬのＭＴＴ試薬を添加し、そして、３７℃で、４時間インキュベートした。その上清培地をピペットで取り出し、そして、ウェル当たり、約１５０μＬのＤＭＳＯを添加した。
試験波長として約５５０ｎＭおよび参照波長として約６３０ｎＭを使用して、プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００）上でプレートを読み取った。
細胞生存度（％）は、２つの方法で計算した：
【０１４５】
％生存率＝［（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）］Ｘ１００％
【０１４６】
％生存率＝［（Ｔ−Ｃ０）／（Ｃ−Ｃ０）］Ｘ１００％
【０１４７】
Ｔ：様々な時間での、治療の平均吸光度
【０１４８】
Ｃ：様々な時間での、ネガティブコントロールの平均吸光度；
【０１４９】
Ｂ：様々な時間での、ブランク・ウェル（培養培地のみ）の平均吸光度。
【０１５０】
Ｃ０：０時での、ネガティブコントロールの平均吸光度。
【０１５１】
結果は、平均±ＳＤとして表される。ＩＣ５０は、ＸＬｆｉｔソフトウェアにより算出した。各化合物についての試験は、独立して、もう１回繰り返した。
【０１５２】
３．３
マウス膀胱および前立腺癌モデルにおける、インビボ効果
同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）膀胱癌腫瘍を確立するために、マウスを、ケタミン／キシラジン溶液、０．１ミリリットル／１０ｇ体重（Ｋ１１３；シグマーアルドリッチ  ジャパン合同会社、東京、日本）を、腹腔内に（ｉｐ）投与することにより麻酔した。
次いで、２４ゲージのテフロン（登録商標）静脈内カテーテルを、不活性潤滑剤を使用し、尿道を通して膀胱または前立腺に挿入した。腫瘍の埋め込みのための膀胱を準備するために、短時間の酸暴露と、その後のアルカリ中和した。８μｌの１ＭＯＩ硝酸銀の膀胱内滴下によって、膀胱壁上の化学的病変が促進した。これにより、適切かつ制御された拡散性膀胱壁病変が形成された。
１５秒後、ＰＢＳの経尿道注入により、内容物を洗い流した。
最初のカテーテルを取り出し、そして、ＭＢＴ−２−Ｌｕｃ細胞（０．１ミリリットルＰＢＳと混合した５ｘ１０４の細胞）の膀胱内滴下のために、尿道に、新しい２４−ゲージのカテーテルを挿入し、ステッチで、１．５時間保持した。
１０日ごとに、生物発光技術（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００  システム；Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ、米国）を用いて、ルシフェリンの腹腔内投与後に腫瘍イメージングを行った。
【０１５３】
ＮＩＴおよびＢＣＧの組合せについて、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）膀胱癌腫瘍を有するマウスを、無作為に、６つの群に分けた：対照群（ＰＢＳ）、ＢＣＧ群、ＮＩＴ（連続投与）群、ＮＩＴ（毎週のＢＣＧの点滴注入の前後２４時間の休薬を除いて連続投与）群、ＮＩＴ（連続的な投与）とＢＣＧの組み合わせ、およびＮＩＴ（４８時間の休薬）とＢＣＧの組み合わせ。
薬物投与の詳細な説明を表２３に示す。
ルシフェラーゼ発現によって決定された腫瘍造影結果によれば、ＢＣＧ（１Ｘ１０５ＣＦＵ／１００μＬ）は、１週間に１回、３週間、膀胱内投与した。
ＮＩＴは、継続的に、または４８時間休薬して投与した。
【０１５４】
【表２３】
2019510825.tif 000026
【０１５５】
ＮＩＴとＭＭＣの組み合わせについて、同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）膀胱癌腫瘍を有するマウスを、無作為に、４つの群に分けた：コントロール（ＰＢＳ）、ＮＩＴ、ＭＭＣ、およびＮＩＴとＭＭＣの組み合わせ。薬物用量の詳細な説明は、表２４に示す。
【０１５６】
【表２４】
2019510825.tif 000027
【０１５７】
ＮＩＴおよび抗ＰＤ−１の組み合わせについて、同所性（orthotopic）膀胱癌腫瘍を有するマウスを、無作為に、４つの群に分けた：コントロール（ＰＢＳ）、ＮＩＴ、抗ＰＤ−１、およびＮＩＴと抗ＰＤ−１の組み合わせ。薬物の用量の詳細な説明を表２５に示した。
【０１５８】
【表２５】
2019510825.tif 000028
【０１５９】
同所性（ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ）前立腺癌腫瘍を確立するために、Ｃ５７／ＢＬ６マウスの、腹腔内に、ケタミン／キシラジン溶液０．１ミリリットル／１０グラム体重、の用量（Ｋ１１３；シグマ−アルドリッチ  ジャパン合同会社、東京、日本）で麻酔した。低腹部横切開（ｌｏｗ  ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ  ｉｎｃｉｓｉｏｎ）を行い、そして、前立腺の両側の背側葉（ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｄｏｒｓａｌ  ｌｏｂｅｓ）を露出させた。
ＲＭ−９−Ｌｕｃ細胞のトリプシン処理に続いて、ハンクス平衡塩溶液１０μｌ中の５．０Ｘ１０３個の細胞を、新しい２４−ゲージのカテーテルを用いて、前立腺の右背葉部（ｄｏｒｓａｌ  ｌｏｂｅ）に直接、注射した。
注入された前立腺背葉内の明確に識別可能な小胞（ｂｌｅｂ）は、技術的に満足のいく注射のサインと考えた。腹部の創傷をステンレス鋼クリップ（Ａｕｔｏｃｌｉｐ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏ．、Ｓｐａｒｋｓ、ＭＤ）で閉じた。
ＲＭ−９−Ｌｕｃ細胞注射の一週間後、腫瘍径が５ｍｍに達した時、同所性前立腺癌腫瘍を有するマウスを、無作為に、４群に分けた：コントロール（ＰＢＳ）、ＮＩＴ、抗ＰＤ−１、およびＮＩＴと抗ＰＤ−１との組み合わせ。
薬物投与の詳細な説明を表２６に示す。
【０１６０】
【表２６】
2019510825.tif 000029
【０１６１】
マウスは、ルシフェリンの腹腔内注射を受け、そして、腫瘍におけるルシフェラーゼ発現は、Ｘｅｎｏｇｅｎ社ＩＶＩＳ２００システムによって測定した。安楽死のために、そして動物の安楽死のためのガイドライン（Ｅｄｉｔｉｏｎ、２０１３）に従って、マウスをＣＯ２を用いて死亡させた。
【０１６２】
３．４統計分析
【０１６３】
すべての定量的アッセイからのデータを、平均±標準偏差として表し、そして、一元配置分散分析（ａ  ｏｎｅ−ｗａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ）（ＡＮＯＶＡ）と独立サンプルｔ検定（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ−ｓａｍｐｌｅｓ  ｔ  ｔｅｓｔ）を使用して、統計的に分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いて統計的計算を行った。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であるとみなした。
【０１６４】
相加性は、フラクショナルプロダクト法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｃｏｎｃｅｐｔ）またはブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）を用いて決定した。
ＥＸＹ＝ＥＸ＋ＥＹ−（ＥＸＥＹ）、
ここで、ＥＸＹは、２つの化合物ＸおよびＹの相加効果であり、
２つの化合物の個々の効果である、ＥｘおよびＥｙの結果によって計算される。
相乗は、実際に観察された腫瘍阻害値が、ブリス独立基準（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｍｏｄｅｌ）によって決定された、予想される腫瘍阻害値よりも大きい場合に確立された（２０）。
【０１６５】
参考文献
1. Pelletier C, Prognon P, Bourlioux P 「ニトロキソリンの大腸菌株に対する作用機序における二価陽イオンとｐＨの役割」（Roles of divalent cations and pH in mechanism of action of nitroxoline against Escherichia coli strains.） Antimicrob Agents Chemother. 1995;39(3):707-13.
2. Fraser RS, Creanor J. 「８−ヒドロキシキノリンおよび抗生物質ｌｏｍｏｆｕｎｇｉｎによるリボ核酸合成の阻害機構」（The mechanism of inhibition of ribonucleic acid synthesis by 8-hydroxyquinoline and the antibiotic lomofungin） Biochem J. 1975;147(3):401-10.
3. Adlard PA at al. 「８−ヒドロキシキノリン類似体を用いた、アルツハイマー病トランスジェニックマウスにおける認知の迅速な回復は、間質性Ａ−βの低下に関連する」（Rapid restoration of cognition in Alzheimer's transgenic mice with 8-hydroxy quinoline analogs is associated with decreased interstitial A-beta.） Neuron. 2008;59(1):43-55.
4. Shim JS, et al. 「ニトロキソリンが血管新生およびヒト膀胱癌の増殖に及ぼす影響」（Effect of nitroxoline on angiogenesis and growth of human bladder cancer.） J Natl Cancer Inst. 2010;102(24):1855-73.
5. Chang WL et al. 「ヒト前立腺癌に対する潜在的な抗がん剤としてニトロキソリンの再利用：ＡＭＰＫ／ｍＴＯＲのシグナル伝達経路とＣｈｋ２活性化の相互作用における重要な役割」（Repurposing of nitroxoline as a potential anticancer agent against human prostate cancer: a crucial role on AMPK/mTOR signaling pathway and the interplay with Chk2 activation.） Oncotarget. 2015; 6(37):39806-20.
6. Jiang H. et al.「ニトロキソリン（８−ヒドロキシ−５−ニトロキノリン）は、クリオキノール（５−クロロ−７−ヨード−８−キノリン）よりも強力な抗癌剤である。」（Nitroxoline (8-hydroxy-5-nitroquinoline) is more a potent anti-cancer agent than clioquinol (5-chloro-7-iodo-8-quinoline)） Cancer Letters 2011; 312:11-17.
7. Ding WQ, Liu B, Vaught JL, Yamauchi H, and Lind SE. 「抗生物質クリオキノールの抗癌活性」（Anticancer activity of the antibiotic clioquinol）. Cancer Res 2005; 65:3389-95.
8. Whiteside TL, 「阻害剤の阻害：癌免疫抑制を標的とする薬剤の評価」（Inhibiting the Inhibitors: Evaluating Agents Targeting Cancer Immuno-suppression.） Expert OpinBiolTher. 2010; 10(7): 1019-1035.
9. Fuge O, Vasdev N, Allchorne P, Green JS, 「膀胱癌に対する免疫療法」（Immunotherapy for bladder cancer.） Res Rep Urol. 2015; 7:65-79.
10. Huang P, Ma C, Xu P, Guo K, Xu A, Liu C, 「膀胱癌の同所性（orthotopic）モデルにおける腫瘍免疫逃避に対する膀胱内細菌ＢａｃｉｌｌｕｓＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕeｒｉｎ療法の効果」（Efficacy of intravesical Bacillus Calmette-Guerin therapy against tumor immune escape in an orthotopic model of bladder cancer.） ExpTher Med. 2015;9(1):162-166.
11. Pardoll DM. 「癌免疫療法における免疫チェックポイントの遮断」（The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.）Nat Rev Cancer. 2012; 12(4): 252-64.
12. Krummel MF, Allison JP. 「ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４は、刺激に対するＴ細胞の応答に反対の効果を有する」（CD28 and CTLA-4 have opposing effects on the response of T cells to stimulation.） J Exp Med. 1995; 182(2):459-65.
13. Hamid O, Robert C, Daud A, Hodi FS, Hwu WJ, Kefford R. et al. 「メラノーマにおけるｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（抗ＰＤ−１）による安全性および腫瘍応答」（Safety and tumor responses with lambrolizumab (anti-PD-1) in melanoma. N Engl J Med. 2013;369(2):134-44.
14. Freeman GJ, Long AJ, Iwai Y et al. 「新規なＢ７ファミリーメンバーによるＰＤ−１免疫阻害性受容体の関与は、リンパ球活性化の負の調節を導く」（Engagement of the PD-1 immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation.）J Exp Med. 2000; 192:1027-1034.
15. Hawkes EA, Grigg A, Chong G. 「リンパ腫における、プログラムした細胞死−１の阻害」（Programmed cell death-1 inhibition in lymphoma.）Lancet Oncol. 2015;16(5):e234-45.
16. Liu X, Shin N, Koblish HK,et al. 「ＩＤＯ１の選択的阻害は、抗腫瘍免疫のメディエーターを効果的に調節する」（Selective inhibition of IDO1 effectively regulates mediators of antitumor immunity.） Blood. 2010;115:3520-3530.
17. Opitz CA, Litzenburger UM, Opitz U, et al. 「インドール−２、３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）阻害剤１−メチル−Ｄ−トリプトファンは、ヒト癌細胞においてＩＤＯ１をアップレギュレートする」（The indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO) inhibitor 1-methyl-D-tryptophan upregulates IDO1 in human cancer cells.） PloS One. 2011; 6:e19823.
18. Muller AJ, Prendergast GC. 「化学療法と免疫療法を結びつける：なぜＩＤＯと言うのですか」（Marrying immunotherapy with chemotherapy: why say IDO?）Cancer Res. 2005; 65:8065-8068.
19. Ting-Chao Chou, 「理論的根拠、実験計画、および薬物の組合せ研究における相乗作用および拮抗作用のコンピュータシミュレーション」（Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies.） Pharmacol Rev2006; 58:621-681.
20. Yan H, Zhang B, Li S, Zhao Q. 「ＴＮＦ−α誘発ＮＦκＢ経路における薬剤併用効果の解析とその応用に関する正式なモデル」（A formal model for analyzing drug combination effects and its application in TNF-alpha-induced NFkappaB pathway.）BMC Syst Biol. 2010;4:50.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2019510825.tif 000038
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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