(57)【要約】  患者の肥満及び糖尿病を予防及び治療する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。
2019510014.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重を減らす方法であって、
ＨＸ２ＱＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＸ２０Ｘ２１ＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８ＧＸ３０
（ここで、Ｘ２は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄ又はＥであり、Ｘ１６は、Ｓ又はＧであり、Ｘ１７は、Ｅ、Ｒ、Ｑ、又はＫであり、Ｘ１８は、Ｒ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ２０は、Ｒ、Ｋ、又はＱであり、Ｘ２１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ２３は、Ｖ又はＩであり、Ｘ２４は、Ａ又はＱであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａ又はＫであり、Ｘ３０は、Ｇ又はＲである）（配列番号４）
のアミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
体脂肪を減らす方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項３】
肥満を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項４】
過剰体重に起因する、若しくは過剰体重を特徴とする疾患若しくは病状を治療又は予防する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項５】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項６】
脂質酸化を増大する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７】
食物摂取を抑制する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項８】
血漿グルコースを低下させる方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項９】
前記被検者が、糖尿病を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記糖尿病が、２型糖尿病である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
２型糖尿病を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチドをヒトに投与するステップを含む方法。
【請求項１２】
２型糖尿病を有するヒト被検者の血糖コントロールを改善する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド１００〜６００μｇを、前記被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
前記投与によって体重が減少する、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与によって肥満が治療される、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記投与によって体脂肪が減少する、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ１８は、Ｓであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、あるいはＸ２８は、Ａである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ペプチドが、配列番号１９を含むか、それから本質的に構成されるか、又はそれから構成される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記投与が、３〜１０日間にわたり初期用量を、その後、より高い第２用量を投与するステップを含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与が、３〜７日間にわたり初期用量を投与するステップを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記初期用量が、１００μｇのペプチドである、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２用量を少なくとも４日間投与する、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第２用量が、１５０〜２００μｇの前記ペプチドである、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記第２用量が、１５０μｇの前記ペプチド又は２００μｇの前記ペプチドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記投与が、さらに、第２用量の後に第３用量を投与するステップを含み、前記第３用量は、前記第２用量よりも高い、請求項１８〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記初期用量を３〜１０日間投与し、前記第２用量を３〜１０日間投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記初期用量を３〜７日間投与し、前記第２用量を３〜７日間投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続４日間投与し、前記第３用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続７日間投与し、前記第３用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記第３用量が、２００〜４００μｇの前記ペプチドである、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第３用量が、２００μｇの前記ペプチド、３００μｇの前記ペプチド、又は４００μｇの前記ペプチドである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
１００μｇの前記ペプチドを投与する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
１５０μｇの前記ペプチドを投与する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
２００μｇの前記ペプチドを投与する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
２５０μｇの前記ペプチドを投与する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ペプチドを毎日投与する、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ペプチドを１日１回投与する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ペプチドを、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間投与する請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ペプチドを注射により投与する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記投与が皮下である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記投与によって、混合食試験後に濃度−時間曲線下のグルコース面積の少なくとも２０％減少がもたらされる、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記投与によって、少なくとも１．０ｋｇ、少なくとも１．３ｋｇ、又は約１．３〜約２．０ｋｇの減量がもたらされる、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記脂肪が、肝臓脂肪である、請求項２、９、１０、及び１５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記投与によって、肝臓脂肪の約三分の一の減少がもたらされる、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記投与によって、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）レベルが低下する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記投与によって、フルクトサミンレベルが低下する、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ペプチドが、固相合成法による合成によって製造される、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記固相合成法が、フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド化学を使用する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
Ｘ３０の前記カルボキシル基が、非修飾Ｇ又はＲである、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
Ｘ３０の前記カルボキシル基が、アミド化される、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ペプチドが、リシン残基のＮ（ε）基上にパルミトイル部分を含む、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記パルミトイル基が、リンカーを介して前記リシンに連結される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記リンカーが、γグルタミン酸塩である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ペプチドが、リシン残基のＮ（ε）基上にステアロイル又はステアリン酸塩部分を含む、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記リシン残基が、Ｘ１０である、請求項５１〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ペプチドが、ｃＡＭＰアッセイ１による１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のＥＣ５０で、ヒトグルカゴン受容体に結合する、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ペプチドが、ｃＡＭＰアッセイ１による１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＧＬＰ−１受容体に結合する、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ペプチドが、ＧＬＰ−１活性のアゴニスト、グルカゴン活性のアゴニスト、又はＧＬＰ−１とグルカゴン活性の両方のアゴニストである、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ペプチドが、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方に結合し、前記グルカゴン受容体よりも、前記ＧＬＰ−１受容体で、天然リガンドと比較して少なくとも約２倍、５倍、又は１０倍大きい活性を呈示する、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ペプチドが、異種部分をさらに含む、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記異種部分が、タンパク質、ペプチド、タンパク質ドメイン、リンカー、有機ポリマー、無機ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ビオチン、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡ  ＦｃＲｎ結合部分、抗体、抗体のドメイン、抗体断片、単鎖抗体、ドメイン抗体、アルブミン結合ドメイン、酵素、リガンド、受容体、結合ペプチド、非ＦｎＩＩＩスカフォールド、エピトープタグ、組換えポリペプチドポリマー、サイトカイン、脂質、又は列挙した部分の２つ以上の組み合わせである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記被検者が、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記被検者が、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記被検者が、少なくとも４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記被検者が、過剰体重である、請求項５〜１２及び１６〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記被検者が、肥満である、請求項５〜１２及び１６〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ペプチドの半減期が、約１０〜約１２時間である、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記投与が、食餌及び運動を補助するものである、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
体重を減らす方法であって、
ＨＸ２ＱＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＸ２０Ｘ２１ＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８ＧＸ３０
（ここで、Ｘ２は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄ又はＥであり、Ｘ１６は、Ｓ又はＧであり、Ｘ１７は、Ｅ、Ｒ、Ｑ、又はＫであり、Ｘ１８は、Ｒ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ２０は、Ｒ、Ｋ、又はＱであり、Ｘ２１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ２３は、Ｖ又はＩであり、Ｘ２４は、Ａ又はＱであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａ又はＫであり、Ｘ３０は、Ｇ又はＲである）（配列番号４）
のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７０】
体脂肪を減らす方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７１】
肥満を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７２】
過剰体重に起因する、又は過剰体重を特徴とする疾患若しくは病状を治療又は予防する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７３】
体重を管理する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７４】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７５】
脂質酸化を増大する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７６】
食物摂取を抑制する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７７】
血漿グルコースを低下させる方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７８】
血糖コントロールを改善する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項７９】
血糖コントロールを達成する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項８０】
体重を減らし、且つ血糖をコントロールする方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項８１】
前記被検者が、糖尿病を有する、請求項６９〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記糖尿病が、２型糖尿病である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
２型糖尿病を治療する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチドをヒトに投与するステップを含む方法。
【請求項８４】
２型糖尿病を有するヒト被検者の血糖コントロールを改善する方法であって、配列番号４の前記アミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇを、前記被検者に投与するステップを含む方法。
【請求項８５】
前記投与によって体重が減少する、請求項８３又は８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記投与によって肥満が治療される、請求項８３〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与によって体脂肪が減少する、請求項７７〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ１８は、Ｓであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、あるいはＸ２８は、Ａである、請求項６９〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
前記ペプチドが、配列番号１９を含むか、それから本質的に構成されるか、又はそれから構成される、請求項６９〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
前記投与が、３〜１０日間にわたり初期用量を、その後、より高い第２用量を投与するステップを含む、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
前記初期用量を３〜７日間にわたり投与する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記初期用量が、１００μｇのペプチドである、請求項９０又は９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記第２用量を少なくとも４日間投与する、請求項９０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項９０〜９３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
前記第２用量が、１５０〜２００μｇの前記ペプチドである、請求項９０〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記第２用量が、１５０μｇの前記ペプチド又は２００μｇの前記ペプチドである、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記投与が、さらに、前記第２用量の後に第３用量を投与するステップを含み、前記第３用量が、前記第２用量よりも高い、請求項９０〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
前記初期用量を３〜１０日間投与し、前記第２用量を３〜１０日間投与する、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記初期用量を３〜７日間投与し、前記第２用量を３〜７日間投与する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続４日間投与し、前記第３用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記初期用量を連続４日間投与し、前記第２用量を少なくとも連続７日間投与し、前記第３用量を少なくとも連続４日間投与する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記第３用量が、２００〜４００μｇの前記ペプチドである、請求項９７〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記第３用量が、２００μｇの前記ペプチド、３００μｇの前記ペプチド、又は４００μｇの前記ペプチドである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
１００μｇの初期用量を４日間投与し、１５０μｇの第２用量を４日間投与し、２００μｇの第３用量を毎日投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
１００μｇの初期用量を５日間投与し、１５０μｇの第２用量を５日間投与し、２００μｇの第３用量を５日間投与し、３００μｇの第４用量を毎日投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
１００μｇの初期用量を５日間投与し、２００μｇの第２用量を５日間投与し、３００μｇの第３用量を毎日投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
５０μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０８】
１００μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
１５０μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
２００μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
２５０μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１２】
３００μｇの前記ペプチドを投与する、請求項６９〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記ペプチドを毎日投与する、請求項６９〜１１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ペプチドを１日１回投与する、請求項６９〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ペプチドを、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間投与する請求項６９〜１１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ペプチドを注射により投与する、請求項６９〜１１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記投与が皮下である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記投与によって、混合食試験後に濃度−時間曲線下のグルコース面積の少なくとも２０％減少がもたらされる、請求項６９〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１９】
グルコースが減少する、請求項６９〜７６、８１〜８３、及び８５〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記グルコースが、空腹時血糖である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記グルコースが、混合食試験からの食後血糖である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記投与によって、少なくとも１．０ｋｇ、少なくとも１．３ｋｇ、又は約１．３〜約２．０ｋｇの減量がもたらされる、請求項６９〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記被検者の体重が、少なくとも３．５ｋｇ又は少なくとも５ｋｇ減少する、請求項６９〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記被検者の体重が、約２〜約３０ｋｇ減少する、請求項６９〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記被検者の体重が、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％減少する、請求項６９〜１２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２６】
前記被検者の体重が、約２％〜約２０％、約２％〜約２５％、又は約２％〜約３０％減少する、請求項６９〜１２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２７】
前記脂肪が、肝臓脂肪である、請求項７０、８１、８２、及び８５〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記被検者の肝臓脂肪が、少なくとも２０％減少する、請求項６９〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記被検者の肝臓脂肪が、約２０％〜約４０％減少する、請求項６９〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記投与によって、肝臓脂肪の約三分の一の減少がもたらされる、請求項６９〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記被検者の肝体積が減少する、請求項６９〜１３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記被検者のＨｂＡ１ｃレベルが低下する、請求項６９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記被検者のＨｂＡ１ｃレベルが、少なくとも０．６％低下する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記被検者のＨｂＡ１ｃレベルが、少なくとも０．９％低下する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３５】
前記被検者のＨｂＡ１ｃレベルが、約０．５％〜約１．５％、約０．５％〜約２％、又は約０．５％〜約３％低下する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３６】
前記被検者のＨｂＡ１ｃレベルが、６．３％以下まで低下する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３７】
前記投与によって、フルクトサミンレベルが低下する、請求項６９〜１３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記被検者の食欲が抑制される、請求項６９〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４０】
前記被検者のエネルギー消費が増加する、請求項６９〜１３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記疾患の進行が停止する、請求項６９〜１４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記疾患の進行が逆転する、請求項６９〜１４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ペプチドが、固相合成法による合成によって製造される、請求項６９〜１４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記固相合成法が、フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド化学を使用する、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
Ｘ３０の前記カルボキシル基が、非修飾Ｇ又はＲである、請求項６９〜１４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４６】
Ｘ３０の前記カルボキシル基が、アミド化される、請求項６９〜１４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ペプチドが、リシン残基のＮ（ε）基上にパルミトイル部分を含む、請求項６９〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記パルミトイル基が、リンカーを介して前記リシンに連結される、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記リンカーが、γグルタミン酸塩である、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ペプチドが、リシン残基のＮ（ε）基上にステアロイル又はステアリン酸塩部分を含む、請求項６９〜８８又は９０〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記リシン残基が、Ｘ１０である、請求項１４７〜１５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ペプチドが、ｃＡＭＰアッセイ１による１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のＥＣ５０で、ヒトグルカゴン受容体に結合する、請求項６９〜１５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５３】
前記ペプチドが、ｃＡＭＰアッセイ１による１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＧＬＰ−１受容体に結合する、請求項６９〜１５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５４】
前記ペプチドが、ＧＬＰ−１活性のアゴニスト、グルカゴン活性のアゴニスト、又はＧＬＰ−１とグルカゴン活性の両方のアゴニストである、請求項６９〜１５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５５】
前記ペプチドが、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方に結合し、前記グルカゴン受容体よりも、前記ＧＬＰ−１受容体で、天然リガンドと比較して少なくとも約２倍、５倍、又は１０倍大きい活性を呈示する、請求項６９〜１５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ペプチドが、異種部分をさらに含む、請求項６９〜１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
前記異種部分が、タンパク質、ペプチド、タンパク質ドメイン、リンカー、有機ポリマー、無機ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ビオチン、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡ  ＦｃＲｎ結合部分、抗体、抗体のドメイン、抗体断片、単鎖抗体、ドメイン抗体、アルブミン結合ドメイン、酵素、リガンド、受容体、結合ペプチド、非ＦｎＩＩＩスカフォールド、エピトープタグ、組換えポリペプチドポリマー、サイトカイン、脂質、又は列挙した部分の２つ以上の組み合わせである、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記被検者が、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する、請求項６９〜１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
前記被検者が、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する、請求項６９〜１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
前記被検者が、少なくとも４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する、請求項６９〜１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記被検者が、過剰体重である、請求項７４〜７９、８１〜８４、及び８８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記被検者が、肥満である、請求項７４〜７９、８１〜８４、及び８８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６３】
前記被検者が、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患の病歴又はこれらの組み合わせを有する、請求項６９、７０、７２〜８５、及び８７〜１６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記被検者が、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血糖、高血圧、脂質異常症、閉塞性睡眠時無呼吸、又はこれらの組み合わせを有する、請求項６９、７０、７２〜８５、及び８７〜１６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記被検者が、インスリン療法を受けている、請求項１〜１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
投与される前記インスリンの量が低減される、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
インスリン療法が停止される、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６８】
前記被検者が、インスリン、メトホルミン、スルホニル尿素、ナトリウム−グルコース共輸送体−２（ｓｇｌｔ−２）阻害剤、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤、グルタゾン、αグルコシダーゼ阻害剤、又はこれらの組み合わせを受けている、請求項６９〜１６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
前記ペプチドの半減期が、約１０〜約１２時間である、請求項６９〜１６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７０】
前記投与が、食餌及び運動を補助するものである、請求項６９〜１６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７１】
前記ペプチドが、配列番号１９を含み、且つ
前記ペプチドが、１００μｇの初期用量で４日間投与され、１５０μｇの第２用量で４日間投与された後、２００μｇの用量で毎日投与される、請求項１〜１７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記ペプチドが、配列番号１９を含み、且つ
前記ペプチドが、１００μｇの初期用量で５日間投与され、２００μｇの第２用量で５日間投与された後、３００μｇの用量で毎日投与される、請求項１〜１７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７３】
前記ペプチドが、配列番号１９を含み、且つ
前記ペプチドが、１００μｇの初期用量で５日間投与され、１５０μｇの第２用量で５日間投与され、２００μｇの第２用量で５日間投与された後、３００μｇの用量で毎日投与される、請求項１〜１７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７４】
前記被検者が、２型糖尿病を有する、請求項１７１〜１７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７５】
前記被検者が、肥満である、請求項１７１〜１７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７６】
前記被検者が、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患の病歴又はこれらの組み合わせを有する、請求項１７１〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７７】
前記被検者が、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血糖、高血圧、脂質異常症、閉塞性睡眠時無呼吸、又はこれらの組み合わせを有する、請求項１７１〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年３月１０日に提出された米国仮特許出願第６２／３０６，１２１号明細書の利益を主張するものである。尚、この文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子データにて提出した配列表の参照
本出願と一緒に提出したＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：Ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：１４，３３３バイト；及び作成日：２０１７年３月６日）で電子データにて提出したリストの内容は、その全体を参照により本明細書に組み込むものとする。
【背景技術】
【０００３】
肥満は、世界規模で主要な、増大しつづける健康問題である。それは、心血管疾患、腎臓病、高血圧、発作、不妊、呼吸不全、及び２型糖尿病などの生命を脅かす多くの疾患に関連している。
【０００４】
グルコン及びグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）は、１５８アミノ酸前駆体ポリペプチドであるプレプログルカゴンに由来し、これは、様々な組織でプロセシングされて、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）及びオキシントモジュリン（ＯＸＭ）など、いくつかの異なるプログルカゴン由来のペプチドを形成するが、これらは、グルコースホメオスタシス、インスリン分泌、胃内容排出、及び腸成長、並びに食物摂取などの多様な生理学的機能に関与する。グルカゴンは、プログルカゴンのアミノ酸３３〜６１（プレプログルカゴンの５３〜８１）に対応する２９アミノ酸ペプチドであるのに対し、ＧＬＰ−１は、プログルカゴンのアミノ酸７２〜１０８（プレプログルカゴンの９２〜１２８）に対応する３７アミノ酸ペプチドとして生成される。ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド又はＧＬＰ−１（７〜３７）酸は、ＧＬＰ−１の生物学的に活性の形態であり、ＧＬＰ−１受容体で実質的に同等の活性を示す。
【０００５】
膵臓によりグルカゴンが生成され、グルカゴン受容体（「ｇｌｕｃＲ」）と相互作用する。グルカゴンは、肝臓内で作用して、糖新生とグリコーゲン分解によって血糖を高める。血糖が下がり始めると、グルカゴンは、グリコーゲンを分解し、グルコースを放出するように肝臓にシグナルを送り、血糖値を通常のレベルへと上昇させる。
【０００６】
ＧＬＰ−１は、グルカゴンと比較して異なる生物学的活性を有する。これは、消化管内Ｌ細胞（ｇｕｔ  Ｌ  ｃｅｌｌｓ）から分泌されて、ＧＬＰ−１受容体に結合する。その活性には、インスリン合成及び分泌の刺激、グルカゴン分泌の阻害、及び食物摂取の阻害が含まれる。
【０００７】
グルカゴン及びＧＬＰ−１のいずれも、それぞれの受容体でアゴニストとして作用し、減量に有効であることがわかっている。特定のＧＬＰ−１類似体は、販売されているか、又は肥満の治療のために開発中であり、例えば、Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ（Ｎｏｖｏ  ＮｏｒｄｉｓｋからのＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標）及びＥｘｅｎａｔｉｄｅ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ／ＡｍｙｌｉｎからのＢｙｅｔｔａ（登録商標））などがある。グルカゴン／ＧＬＰ−１アゴニストペプチドは、（特許文献１）にも開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１４／０９１３１６号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
一部の療法は、血糖のコントロールのために利用可能であるが、これまでのところ実質的な減量を達成するものは皆無であり、これは、患者にとって大きなアンメットニーズのままである。５０％の患者が、血糖コントロールのための経口単剤療法（通常、メトホルミンを用いる）から、１０年以内にインスリン療法の開始へと進行し、多くの場合、インスリン療法を開始する前に複数の経口併用療法を採用する。インスリンの使用は、体重増加を悪化させ、インスリンの開始から１年目で６ｋｇもの増加となり得る。この体重増加は、インスリン抵抗性の増大を招く恐れがあり、これは、高血圧、脂質異常症、及び主要有害心血管事象のリスク増大に関連する。インスリン抵抗性の低減に関して、有意な減量（＞５％）が、インスリン抵抗性を低減するための最適な介入であるが、これは、現時点で、集中的な食餌及びライフスタイル介入並びに／又は肥満手術によってしか確実に達成することができない。糖尿病及び肥満症を治療する上で治療有効的であるが、有害な作用は回避する投薬計画を用いて、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドをヒトに投与する方法が依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを投与するステップを含む、患者の肥満及び糖尿病並びに関連する病状を予防及び治療する方法が本明細書に記載される。
【００１１】
一例では、体重を減らす方法は、ＨＸ２ＱＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＸ２０Ｘ２１ＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８ＧＸ３０
（ここで、Ｘ２は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄ又はＥであり、Ｘ１６は、Ｓ又はＧであり、Ｘ１７は、Ｅ、Ｒ、Ｑ、又はＫであり、Ｘ１８は、Ｒ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ２０は、Ｒ、Ｋ、又はＱであり、Ｘ２１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ２３は、Ｖ又はＩであり、Ｘ２４は、Ａ又はＱであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａ又はＫであり、Ｘ３０は、Ｇ又はＲである）（配列番号４）のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１２】
一例では、体脂肪を減らす方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１３】
一例では、肥満を治療する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１４】
一例では、過剰体重に起因する、又は過剰体重を特徴とする疾患若しくは病状を治療又は予防する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１５】
一例では、体重を管理する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１６】
一例では、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１７】
一例では、脂質酸化を増大する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１８】
一例では、食物摂取を抑制する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００１９】
一例では、血漿グルコースを低下させる方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００２０】
一例では、血糖コントロールを改善する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００２１】
一例では、血糖コントロールを達成する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドを５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００２２】
一例では、体重を減らし、且つ血糖をコントロールする方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、治療を必要とするヒト被検者に投与するステップを含む。
【００２３】
一例では、被検者は、糖尿病を有する。一例では、糖尿病は、２型糖尿病である。
【００２４】
一例では、２型糖尿病を治療する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドをヒトに投与するステップを含む。
【００２５】
一例では、２型糖尿病を有するヒト被検者の血糖コントロールを改善する方法は、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇを、被検者に投与するステップを含む。
【００２６】
一例では、投与によって体重が減少する。一例では、投与によって肥満が治療される。一例では、投与によって体脂肪が減少する。
【００２７】
一例では、Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ１８は、Ｓであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、あるいはＸ２８は、Ａである。
【００２８】
一例では、Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ１８は、Ｓであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、且つＸ２８は、Ａである。
【００２９】
一例では、ペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的に構成されるか、又はそれから構成される。
【００３０】
一例では、投与は、３〜１０日間にわたり初期用量を、その後、より高い第２用量を投与するステップを含む。
【００３１】
一例では、初期用量は、３〜７日間投与する。一例では、初期用量は、１００μｇのペプチドである。一例では、第２用量を少なくとも４日間投与する。一例では、初期用量を連続４日間投与し、第２用量を少なくとも連続４日間投与する。一例では、第２用量は、１５０〜２００μｇのペプチドである。一例では、第２用量は、１５０μｇのペプチド又は２００μｇのペプチドである。
【００３２】
一例では、投与は、さらに、第２用量の後に第３用量を投与するステップを含み、第３用量は、第２用量よりも高い。一例では、初期用量を３〜１０日間投与し、第２用量を３〜１０日間投与する。一例では、初期用量を３〜７日間投与し、第２用量を３〜７日間投与する。一例では、初期用量を連続４日間投与し、第２用量を少なくとも連続４日間投与し、第３用量を少なくとも連続４日間投与する。一例では、初期用量を連続４日間投与し、第２用量を連続７日間投与し、第３用量を少なくとも連続４日間投与する。一例では、第３用量は、２００〜４００μｇのペプチドである。一例では、第３用量は、２００μｇのペプチド、３００μｇのペプチド、又は４００μｇのペプチドである。
【００３３】
一例では、１００μｇの初期用量を４日間投与し、１５０μｇの第２用量を４日間投与し、２００μｇの第３用量を毎日投与する。一例では、１００μｇの初期用量を５日間投与し、１５０μｇの第２用量を５日間投与し、２００μｇの第３用量を５日間投与し、３００μｇの第４用量を毎日投与する。一例では、１００μｇの初期用量を５日間投与し、２００μｇの第２用量を５日間投与し、３００μｇの第３用量を毎日投与する。
【００３４】
一例では、５０μｇのペプチドを投与する。一例では、１００μｇのペプチドを投与する。一例では、１５０μｇのペプチドを投与する。一例では、２００μｇのペプチドを投与する。一例では、２５０μｇのペプチドを投与する。一例では、３００μｇのペプチドを投与する。一例では、４００μｇのペプチドを投与する。
【００３５】
一例では、ペプチドは、毎日投与する。一例では、ペプチドは、１日１回投与する。
【００３６】
一例では、ペプチドは、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間投与する。
【００３７】
一例では、ペプチドは、注射により投与する。一例では、投与は皮下である。
【００３８】
一例では、投与によって、混合食試験後に濃度−時間曲線下のグルコース面積の少なくとも２０％減少がもたらされる。
【００３９】
一例では、グルコースが減少する。一例では、グルコースは、空腹時血漿グルコースである。一例では、グルコースは、混合食試験からの食後血糖である。
【００４０】
一例では、投与によって、少なくとも１．０ｋｇ、少なくとも１．３ｋｇ、又は約１．３〜約２．０ｋｇの減量がもたらされる。一例では、被検者の体重は、少なくとも３．５ｋｇ又は少なくとも５ｋｇ減少する。一例では、被検者の体重は、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％減少する。一例では、被検者の体重は、約２％〜約２０％、約２％〜約２５％、又は約２％〜約３０％減少する。
【００４１】
一例では、脂肪は、肝臓脂肪である。一例では、被検者の肝臓脂肪は、少なくとも２０％減少する。一例では、被検者の肝臓脂肪は、約２０％〜約４０％減少する。一例では、投与によって、肝臓脂肪の約三分の一の減少がもたらされる。一例では、被検者の肝体積が減少する。
【００４２】
一例では、投与によって、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）レベルが低下する。一例では、被検者のＨｂＡ１ｃレベルは、少なくとも０．６％低下する。一例では、被検者のＨｂＡ１ｃレベルは、少なくとも０．９％低下する。一例では、被検者のＨｂＡ１ｃレベルは、約０．５％〜約１．５％、約０．５％〜約２％、又は約０．５％〜約３％低下する。一例では、被検者のＨｂＡ１ｃレベルは、６．３％以下まで低下する。
【００４３】
一例では、投与によって、フルクトサミンレベルが減少する。
【００４４】
一例では、被検者の食欲が抑制される。
【００４５】
一例では、被検者のエネルギー消費が増加する。
【００４６】
一例では、疾患の進行が停止する。一例では、疾患の進行が逆転する。
【００４７】
一例では、ペプチドは、固相合成法による合成によって製造される。一例では、固相合成法は、フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド化学を使用する。
【００４８】
一例では、ペプチドのＸ３０のカルボキシル基は、非修飾Ｇ又はＲである。一例では、ペプチドのＸ３０のカルボニル基は、アミド化される。
【００４９】
一例では、ペプチドは、リシン残基のＮ（ε）基上にパルミトイル部分を含む。一例では、パルミトイル基は、リンカーを介してリシンに連結される。一例では、リンカーは、γグルタミン酸塩である。一例では、ペプチドは、リシン残基のＮ（ε）基上にステアロイル又はステアリン酸塩部分を含む。一例では、リシン残基は、Ｘ１０である。
【００５０】
一例では、ペプチドは、ｃＡＭＰアッセイ１におけるＥＣ５０が、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のヒトグルカゴン受容体に結合する。
【００５１】
一例では、ペプチドは、ｃＡＭＰアッセイ１におけるＥＣ５０が、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のヒトＧＬＰ−１受容体に結合する。
【００５２】
一例では、ペプチドは、ＧＬＰ−１活性のアゴニスト、グルカゴン活性のアゴニスト、又はＧＬＰ−１とグルカゴン活性の両方のアゴニストである。
【００５３】
一例では、ペプチドは、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方に結合し、ペプチドは、グルカゴン受容体より、ＧＬＰ−１受容体で、天然リガンドと比較して少なくとも約２倍、５倍、又は１０倍大きい活性を呈示する。
【００５４】
一例では、ペプチドは、異種部分をさらに含む。一例では、この異種部分は、タンパク質、ペプチド、タンパク質ドメイン、リンカー、有機ポリマー、無機ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ビオチン、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡ  ＦｃＲｎ結合部分、抗体、抗体のドメイン、抗体断片、単鎖抗体、ドメイン抗体、アルブミン結合ドメイン、酵素、リガンド、受容体、結合ペプチド、非ＦｎＩＩＩスカフォールド、エピトープタグ、組換えポリペプチドポリマー、サイトカイン、脂質、又は列挙した部分の２つ以上の組み合わせである。
【００５５】
一例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する。一例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。一例では、被検者は、少なくとも４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。
【００５６】
一例では、被検者は、過剰体重である。一例では、被検者は、肥満である。一例では、被検者は、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患の病歴又はこれらの組み合わせを有する。一例では、被検者は、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血糖、高血圧、脂質異常症、閉塞性睡眠時無呼吸、又はこれらの組み合わせを有する。
【００５７】
一例では、被検者は、インスリン療法を受けている。一例では、投与されるインスリンの量が低減される。一例では、インスリン療法が停止される。
【００５８】
一例では、被検者は、インスリン、メトホルミン、スルホニル尿素、ナトリウム−グルコース共輸送体−２（ｓｇｌｔ−２）阻害剤、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤、グルタゾン、αグルコシダーゼ阻害剤、又はこれらの組み合わせを受けている。
【００５９】
一例では、ペプチドの半減期は、約１０〜約１２時間である。
【００６０】
一例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。
【００６１】
一例では、ペプチドは配列番号１９を含み、ペプチドは、１００μｇの初期用量で４日間投与され、１５０μｇの第２用量で４日間投与された後、２００μｇの用量で毎日投与される。
【００６２】
一例では、ペプチドは配列番号１９を含み、ペプチドは、１００μｇの初期用量で５日間投与され、２００μｇの第２用量で５日間投与された後、３００μｇの用量で毎日投与される。
【００６３】
一例では、ペプチドは配列番号１９を含み、ペプチドは、１００μｇの初期用量で５日間投与され、１５０μｇの第２用量で５日間投与され、２００μｇの第２用量で５日間投与された後、３００μｇの用量で毎日投与される。
【００６４】
一例では、被検者は、２型糖尿病を有する。一例では、被検者は、肥満である。一例では、被検者は、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患の病歴又はこれらの組み合わせを有する。一例では、被検者は、（ｉ）過剰体重であり、且つ（ｉｉ）高血糖、高血圧、脂質異常症、閉塞性睡眠時無呼吸、又はこれらの組み合わせを有する。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、３つの異なる用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ７３０の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。各群での出発体重は、それぞれ、ビヒクル：４７．４±３．７ｇ、Ｇ７３０  １０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４４．５±２．２ｇ、Ｇ７３０  ２０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４５．９±３．６ｇ、及びＧ７３０  ５０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４６．１±２．４ｇであった。
【図２】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、３つの異なる用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ７９７の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。各群での出発体重は、それぞれ、ビヒクル：４７．４±３．７ｇ、Ｇ７９７  ５ｎｍｏｌ／ｋｇ：４７．５±１．２ｇ、Ｇ７９７  ２０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４７．４±２．２ｇ、及びＧ７９７  ５０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４７．２±１．８ｇであった。
【図３】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、２０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ８１２の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。各群での出発体重は、それぞれ、ビヒクル：４７．４±３．７ｇ、及びＧ８１２  ２０ｎｍｏｌ／ｋｇ：４９．２±３．４ｇであった。
【図４】図１、２、及び３に示す３種のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドについて体重変化の結果を比較するグラフである。
【図５】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、２つの異なる用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ７９６の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。
【図６】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、２つの異なる用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ８６５の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。
【図７】ビヒクル処置、及びリラグルチドによる処置と比較して、２つの異なる用量のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドＧ９３３の投与後のＤＩＯマウスの０日目からの体重の平均変化率（％）を示す。
【図８】図５、６、及び７に示す３種のグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドについて体重変化の結果を比較するグラフである。
【図９】計画された、及び実際のＧ９３３単一用量漸増試験のフローチャートを表示する。
【図１０】Ｇ９３３単一用量漸増試験の被検者素因を表示する。
【図１１】Ｇ９３３単一用量漸増試験における被検者の中央血糖値を示す。
【図１２】Ｇ９３３単一用量漸増試験における被検者の中央インスリン値を示す。
【図１３】Ｇ９３３単一用量漸増試験におけるコホート１〜４のフローチャートを表示する。ＭＥＤＩ０３８２は、配列番号１９の配列を有する３０アミノ酸直鎖ペプチドを指す。
【図１４】７日目にプラセボ又は１００μｇのＧ９３３で処置した被検者（コホート１）、１１日目にプラセボ又は１５０μｇのＧ９３３で処置した被検者（コホート２）、及び１５日目にプラセボ又は２００μｇのＧ９３３で処置した被検者（コホート３）における平均混合食試験血糖値を示す。
【図１５】７日目にプラセボ又はＧ９３３で処置した被検者（コホート１）、９日目にプラセボ又はＧ９３３で処置した被検者（コホート３）、及び１５日目にプラセボ又はＧ９３３で処置した被検者（コホート３）におけるベースライン空腹時血糖値の変化を示す。
【図１６】コホート１及び３の両方で試験期間にわたるベースライン体重からの体重変化、並びにコホート１及び３における７日目及び１５日目の体重変化をそれぞれ示す。
【図１７】反復投与後のＭＥＤＩ０３８２の血漿中濃度を示す。
【図１８】Ｇ９３３で処置した患者の血糖値によって測定される血糖コントロールの改善を示す。点線は、ベースライン（１日目）で観察された血糖値を表し、実線は、４１日目で観察された血糖値を表す。
【図１９】Ｇ９３３で処置した患者のＨｂＡ１ｃによって測定される血糖コントロールの改善を示す。
【図２０】Ｇ９３３で処置した患者の絶対重量の減少を示す。（この図では、Ｇ９３３は、「ＭＥＤＩ」又は「０３８２」と称され；「Ｐｌａｃ」は、プラセボを指す。）
【図２１】Ｇ９３３で処置した患者の減量率（％）を示す。（この図では、「ＭＥＤＩ」は、「ＭＥＤＩ０３８２」を指す。）
【図２２】Ｇ９３３で処置した患者の肝臓脂肪減少の評価を示す。個々の被検者からの代表的な画像が提供される。
【図２３】Ｇ９３３で処置した患者に起こった吐気及び嘔吐を示す。
【図２４】Ｇ９３３複数用量漸増試験におけるコホート５及び６のフローチャートを表示する。
【図２５】プラセボと比較して、Ｇ９３３で処置したコホート５患者の血糖値により測定される血糖コントロールの改善を示す。点線は、ベースライン（１日目）で観察された血糖値を表し、実線は、１７日目で観察された血糖値を表す。（この図では、Ｇ９３３は、「ＭＥＤＩ」と称される。）
【図２６】プラセボと比較して、Ｇ９３３で処置したコホート６患者の血糖値により測定される血糖コントロールの改善を示す。点線は、ベースライン（１日目）で観察された血糖値を表し、実線は、１７日目で観察された血糖値を表す。（この図では、Ｇ９３３は、「ＭＥＤＩ」と称される。）
【図２７】全コホートにおけるベースライングルコースＡＵＣからの変化率（％）を示す。
【図２８】コホート５及び６における空腹時血糖値の改善を示す。（この図では、Ｇ９３３は、「ＭＥＤＩ」と称される。）
【図２９】コホート５及び６におけるベースラインからの体重変化を示す。（この図では、Ｇ９３３は、「ＭＥＤＩ」と称される。）
【図３０】全コホートにおける減量及び血糖の変化を示す。
【図３１】１６日目及び２２日目のコホート５並びに１１日目及び１７日目のコホート６におけるＧ９３３の血漿中濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
定義
本開示全体を通して、用語「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」実体は、１つ又は複数の該実体を指し；例えば、「１つのポリヌクレオチド」は、１つ又は複数のポリヌクレオチドを示すと理解される。従って、用語「１つの（ａ）」（又は「１つの（ａｎ）」及び「少なくとも１つの」は、本明細書において置換え可能に用いることができる。
【００６７】
さらに、本明細書で用いる「及び／又は」は、２つの明示された特徴又は構成要素の各々を他のものと一緒に又はなしで、具体的に開示するものとして理解すべきである。従って、本明細書において、「Ａ及び／又はＢ」のようなフレーズに用いられる用語「及び／又は」は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、並びに「Ｂ」（単独）を包含することが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」のようなフレーズに用いられる用語「及び／又は」は、以下の側面：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）を包含することが意図される。
【００６８】
本明細書において、態様が、「含む」という表現と共に記載されている場合はいずれも、「から構成される」及び／又は「から本質的に構成される」の用語で記載される別の類似の態様も提供されることは理解されたい。特定のアミノ酸配列を「含む」ペプチドは、当該アミノ酸配列を含むペプチドを指し、ここで、ペプチドは、別のアミノ酸又は当該アミノ酸配列に対する他の修飾を含んでもよいし、含まなくてもよい。特定のアミノ酸配列から「構成される」ペプチドは、当該アミノ酸配列のみを含み、別のアミノ酸又は当該アミノ酸配列に対する他の修飾を含まないペプチドを指す。特定のアミノ酸配列から「構成される」アミノ酸配列を「含む」ペプチドは、当該アミノ酸配列を含み、別のアミノ酸を含まないが；ペプチドは、アミノ酸配列（例えば、アシル部分又はパルミトイル部分）に対する他の修飾を含み得る。
【００６９】
別に定義されない限り、本明細書で用いる技術及び科学用語は全て、本開示が関連する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，第２版，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，改訂版，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示に用いられる用語の多くの一般的辞書を当業者に提供する。
【００７０】
単位、接頭語、及び記号は、それぞれが国際単位系（ＳＩ）により容認される形態で表示する。数値の範囲は、範囲を定める数値を含む。別に指示のない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で、左から右に記載する。本明細書に記載する見出しは、開示の様々な態様の限定ではなく、これらは、参照により全体を本明細書に組み込むことができる。従って、すぐ下に定義する用語は、本明細書の全体を参照することにより、より十全に定義される。
【００７１】
本明細書で用いる場合、用語「ポリペプチド」は、単数の「ポリペプチド」、さらには複数の「ポリペプチド」を包含することが意図され、２つ以上のアミノ酸の任意の１つ又は複数の鎖を含む。従って、本明細書で用いる場合、１つの「ペプチド」、１つの「ペプチドサブユニット」、１つの「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、「アミノ酸配列」、又は２つ以上のアミノ酸の任意の１つ又は複数の鎖を指すのに用いられるいずれか他の用語は、たとえこれら用語の各々が、より特有の意味を有し得るとしても、「ポリペプチド」の定義に含まれる。用語「ポリペプチド」は、これらの用語のいずれかに代わり、またはそのいずれかと置換え可能に用いることができる。この用語はさらに、翻訳後又は合成後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、又は非天然アミノ酸による修飾を受けたポリペプチドも含む。
【００７２】
さらに具体的には、本明細書で用いる場合、用語「ペプチド」は、完全長ペプチド及び断片、その変異体若しくは誘導体、例えば、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、長さ２９、３０、若しくは３１アミノ酸）を包含する。本明細書に開示する「ペプチド」例えば、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、例えば、半減期を延長するために、Ｆｃドメイン又はアルブミンドメインなどの別の成分を含む融合ポリペプチドの一部であってよい。本明細書に記載するペプチドは、いくつかの異なる方法で誘導体化することもできる。
【００７３】
用語「単離された」は、ペプチド又は核酸が、一般に、本開示に従ってなるであろう状態を指す。単離されたペプチド及び単離された核酸は、それらが天然で結合されている物質、例えば、それらの自然環境、又は調製がｉｎ  ｖｉｔｒｏ若しくはｉｎ  ｖｉｖｏで実施される組換えＤＮＡ技術によるものである場合には、それらが調製される環境（例えば、細胞培養物）においてそれらと一緒に見いだされる他のペプチド若しくは核酸を含まないか、又は実質的に含まないであろう。ペプチド及び核酸は、希釈剤又は補助剤と一緒に製剤化することができ、さらに、実用的な目的のために単離することもでき、例えば、ペプチドは、免疫アッセイに使用するためのマイクロタイタープレートに塗布するために使用される場合、通常、ゼラチン若しくは他の担体と混合され、あるいは、診断又は治療法に使用される場合、薬学的に許容される担体若しくは希釈剤と一緒に混合され得る。
【００７４】
「組換え」ペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって生成されるペプチドを指す。宿主細胞に発現される、組換えにより生成されたペプチドは、任意の好適な技術により分離、分割、又は部分的若しくは実質的に精製されたネイティブ又は組換えポリペプチドであることから、本開示の目的のために単離されたとみなされる。
【００７５】
用語「断片」、「類似体」、「誘導体」、又は「変異体」は、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを指す場合、少なくとも一部の要望される活性、例えば、グルカゴン及び／又はＧＬＰ−１受容体への結合を保持する任意のペプチドを含む。本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの断片は、発現、精製、及び又は被験者への投与の際に、望ましい特性を呈示するタンパク質分解断片、欠失断片を含む。
【００７６】
本明細書で用いる場合、用語「変異体」は、アミノ酸置換、欠失、挿入、及び／又は修飾によって、記載したペプチドとは異なるペプチドを指す。当分野では公知の突然変異誘導技術を用いて、変異体を作製することができる。変異体はさらに、あるいは、これに代わり、他の修飾を含むことができ、例えば、半減期、可溶性、若しくは安定性を増大するために、ペプチドを異種アミノ酸配列若しくは他の部分に結合又はカップリング、例えば、融合させることができる。本明細書に記載のペプチドに結合又はカップリングさせる部分の例として、限定するものではないが、アルブミン、免疫グロブリンＦｃ領域、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などが挙げられる。ペプチドはまた、ペプチド（例：６−Ｈｉｓ）の合成、精製若しくは同定を容易にするために、又は固体支持体とのポリペプチドの結合を増強するために、リンカー又は他の配列に結合させるか、又はカップリングして作製することもできる。
【００７７】
本明細書で用いる場合、用語「配列同一性」は、２つ以上のポリヌクレオチド配列同士、又は２つ以上のポリペプチド配列同士の関係を指す。１つの配列のある位置が、比較配列の対応位置と同じ核酸塩基又はアミノ酸によって占められているとき、配列は、その位置で「同一」であると言う。「配列同一性」の割合（％）は、両配列において同一の核酸塩基又はアミノ酸が存在する位置の数を決定して、「同一」位置の数を得ることにより計算する。次に、「同一」位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割ってから、１００を掛けることにより、「配列同一性」の割合（％）を取得する。「配列同一性」の割合（％）は、２つの最適にアラインメントした配列を、比較ウィンドウにわたって比較することにより決定する。比較のために配列を最適にアラインメントする目的で、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の部分は、ギャップと呼ばれる付加又は欠失を含んでもよいが、参照配列は、不変のまま維持する。最適なアラインメントは、ギャップがあっても、参照及び比較配列間で、考えられる最大の「同一」位置を生み出すアラインメントである。２つの配列同士の「配列同一性」の割合（％）は、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（２００４年９月１日現在）から入手可能なプログラム「ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」のバージョンを用いて決定することができ、このプログラムは、プログラムＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列の比較用）とＢＬＡＳＴＰ（ポリペプチド配列の比較用）を含み、これらのプログラムは、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１２）：５８７３−５８７７，１９９３）のアルゴリズムに基づく。「ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を使用する場合、２００４年９月１日現在デフォルトパラメータであるパラメータを語長（３）、オープンギャップペナルティ（１１）、伸長ギャップペナルティ（１）、ギャップドロップオフ（５０）、期待値（１０）について用いることができ、また、限定はしないが、マトリクスオプションなどの任意の他の必要なパラメータを用いてもよい。
【００７８】
用語「組成物」又は「医薬組成物」は、治療を必要とする被検者、例えば、肥満を治療中のヒト被検者への投与のための、例えば、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と一緒に、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを含有する組成物を指す。
【００７９】
用語「薬学的に許容される」は、正しい医学的判断の範囲内で、過剰な毒性又は他の合併症なしに、妥当な利益／リスク比で、ヒト及び動物の組織との接触に好適な組成物を指す。
【００８０】
「有効な量」は、単一用量又はシリーズの一部としてのいずれかで、被検者に投与した場合、治療、例えば、肥満の治療に有効な、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの量である。ある量は、例えば、その投与により、減量又は体重維持（例えば、増量の予防）、体脂肪の減少、低血糖の予防若しくは調節、高血糖の予防若しくは調節、インスリン合成の促進、又は食物摂取の抑制のうち１つ又は複数が達成されるとき、有効である。この量は、治療を受ける全ての被検者について一定量であってもよいし、又は治療しようとする被検者の体重、健康状態、及び体調、要望される減量又は体重維持の程度、ペプチドの製剤化、医学的状況、並びに他の関連因子に応じて変動し得る。
【００８１】
用語「被検者」は、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを用いた治療を必要とする任意の被検者、特に哺乳動物の被検者を意味する。哺乳動物の被検者として、限定はしないが、ヒト、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、クマ、乳牛、類人猿、サル、オランウータン、及びチンパンジーなどが挙げられる。一実施形態では、被検者は、ヒト被検者である。
【００８２】
本明細書で用いる場合、「それを必要とする被検者」は、治療することが望ましい個体、例えば、体重若しくは体脂肪減少、体重若しくは体脂肪維持を促進すること又は、指定された期間にわたって増量を予防若しくは最小限にすることが望ましい肥満の被検者又は肥満になりやすい被検者を指す。
【００８３】
用語「治療する（こと）」又は「治療」又は「治療すること」は、診断された病状又は障害を治癒する、及び／又は進行を停止させる治療処置を指す。「予防する（こと）」などの用語は、標的とする病状又は障害を予防する、及び／又はその発生を緩和する予防又は防止処置を指す。従って、治療を必要とする者は、疾患又は病状をすでに有する者を含む。予防を必要とする者は、疾患又は病状に罹患しやすい者並びに疾患又は病状を予防しようとする者を含む。例えば、過剰体重に起因する、若しくは過剰体重を特徴とする疾患又は病状を有する「患者を治療する（こと）」というフレーズは、被検者が、それによる不快さ及び／又は機能の変化を被ることがなくなる程度まで疾患又は病状の重症度を低減することを指す。過剰体重に起因する、若しくは過剰体重を特徴とする疾患又は病状を「予防する（こと）」というフレーズは、疾患若しくは病状の可能性を低減する、及び／又は疾患若しくは病状の発生を低減すること（例えば、非治療患者と比較して発生の相対的減少）を指す。
【００８４】
「重症度を低減する（こと）」のような用語は、診断された病状又は障害の症状を緩和する、又は軽減する治療処置を指す。例えば、過剰体重に起因する、若しくは過剰体重を特徴とする疾患又は病状の「重症度を低減する（こと）」というフレーズは、疾患若しくは病状の重症度を低減すること（例えば、非治療患者と比較して体重の減少、又は血糖コントロールの向上）を指す。
【００８５】
本明細書で用いる場合、「ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド」は、グルカゴン受容体において、ネイティブグルカゴンと比べ、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超える活性を呈示し、かつ、アッセイ１の条件下で、ＧＬＰ−１受容体において、ネイティブＧＬＰ−１と比べ、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超える活性を呈示するキメラペプチドである。
【００８６】
本明細書で用いる場合、用語「ネイティブグルカゴン」は、配列番号１の配列を含む、天然に存在するグルカゴン、例えば、ヒトグルカゴンを指す。用語「ネイティブＧＬＰ−１」は、天然に存在するＧＬＰ−１、例えば、ヒトＧＬＰ−１を指し、例えば、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド（配列番号２）、ＧＬＰ−１（７〜３７）酸（配列番号３）又はこれら２つの化合物の混合物を包含する総称である。本明細書で用いる場合、「グルカゴン」又は「ＧＬＰ−１」は、それ以上の呼称がない場合、ネイティブヒトグルカゴン又はネイティブＧＬＰ−１をそれぞれ意味するものとする。他に指示のない限り、「グルカゴン」は、ヒトグルカゴンを指し、また、「ＧＬＰ−１」は、ヒト「ＧＬＰ−１」を指す。
【００８７】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド
本明細書には、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方に結合するペプチドが記載される。例示的なペプチドは、国際公開第２０１４／０９１３１６号パンフレットに記載されており、これは、その全体を参照により本明細書に組み込む。特定の実施形態では、ペプチドは、ＭＥＤＩ０３８２、すなわち、残基１０にγグルタミン酸リンカー及びパルミトイル基誘導化を含有する配列番号１９の配列を含む３０アミノ酸直鎖ペプチドである。特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、グルカゴン及びＧＬＰ−１活性のコアゴニストである。このようなペプチドは、本明細書において、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドと呼ぶ。本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、減量を促進し、増量を予防するか、又は望ましい体重を維持する上で好都合な比でＧＬＰ−１及びグルカゴン活性を有し、かつ最適化された可溶性、製剤化性、及び安定性を備える。特定の実施形態では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ヒトＧＬＰ−１及びヒトグルカゴン受容体において活性であり、特定の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体において天然リガンドと比較した相対活性は、グルカゴン受容体でのものより、少なくとも約１倍、２倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、又は２５倍高い。
【００８８】
特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、グルカゴン及びＧＬＰ−１受容体において望ましい力価を有し、減量を促進する上で望ましい相対力価を有する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ｃＡＭＰアッセイ１（実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、ＧＬＰ−１受容体において、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、４．４％ヒト血清アルブミン中のｃＡＭＰアッセイ（アッセイ２、実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、ＧＬＰ−１受容体において、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ｃＡＭＰアッセイ１（実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、グルカゴン受容体において、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、４．４％ヒト血清アルブミン中のｃＡＭＰアッセイ（アッセイ２、実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、グルカゴン受容体において、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。特定の実施形態では、本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、アッセイ２で用いる場合、ネイティブリガンドと比較して、約０．０１〜０．５０の範囲、例えば、約０．０２〜０．３０、例えば、約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１���、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２８、又は０．３０の相対ＧＬＰ１−Ｒ／ｇｌｕｃＲ力価比を有する。
【００８９】
特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ｃＡＭＰアッセイ１（実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（胃抑制ペプチド）（ＧＩＰＲ：ｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｐｅｐｔｉｄｅ）で、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、４．４％ヒト血清アルブミン中のｃＡＭＰアッセイ（アッセイ２、実施例２を参照）でのＥＣ５０により示されるように、ＧＩＰＲで、１０，０００ｐＭ未満、５０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、４ｐＭ未満、３ｐＭ未満、又は２ｐＭ未満のｉｎ  ｖｉｔｒｏ力価を呈示する。
【００９０】
特定の実施形態では、本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、許容可能な可溶性、製剤化しやすさ、血漿安定性、及び改善された薬物動力学特性の１つ又は複数の基準を有する。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、広範なｐＨ範囲にわたって標準バッファー中に可溶性である。
【００９１】
特定の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、一般的バッファー溶液中に、最大０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、又はそれを超える濃度で、バッファー系に、例えば、０．２５〜１５０ｍＭのイオン強度の範囲で可溶性であり、限定はしないが、リン酸バッファー、Ｔｒｉｓバッファー、グルタミン酸バッファー、酢酸バッファー、コハク酸バッファー、又はヒスチジンバッファーが挙げられる。例示的バッファーとしては、１００ｍＭグルタミン酸ｐＨ４．５バッファー、１００ｍＭ酢酸ｐＨ５バッファー、１００ｍＭコハク酸ｐＨ５バッファー、１００ｍＭリン酸ｐＨ６バッファー、１００ｍＭヒスチジンｐＨ６バッファー、１００ｍＭリン酸ｐＨ６．５バッファー、１００ｍＭリン酸ｐＨ７．０バッファー、１００ｍＭヒスチジンｐＨ７．０バッファー、１００ｍＭリン酸ｐＨ７．５バッファー、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５バッファー、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０バッファーが挙げられる。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、例えば、ｐＨ４．０〜ｐＨ８．０のｐＨ範囲にわたって、例えば、ｐＨ４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、又は８．５で、０．８ｍｇ／ｍｌの標準的バッファーに可溶性である。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ｐＨ４．５〜８．０、５．０〜８．０、５．５〜８．０、６．０〜８．０、６．５〜８．０、７．０〜８．０、４．５〜８．５、５．５〜８．５、５．５〜８．５、６．０〜８．５、６．５〜８．５、又は７．０〜８．５の標準的バッファーに可溶性である。
【００９２】
特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、標準的医薬製剤中に製剤化可能である。例示的製剤として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  マンニトール、最終製剤ｐＨ＝７．２；０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ  アルギニン／プロリン、最終製剤ｐＨ＝８．０；又はリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８）／１．８５％Ｗ／Ｖプロピレングリコール、最終製剤ｐＨ＝７．０。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、最大０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、又はそれを超える濃度で、上記又は他の製剤に可溶性である。
【００９３】
特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、血清又は血漿中のプロテアーゼに対して許容可能に安定している。グルカゴン又はＧＬＰ−１の一般的分解産物としては、＋１産物（酸）及びＤＰＰ  ＩＶ−分解産物がある。＋１質量を有する産物は、グルタミンのアミド基又はＣ末端での脱アミド化から生じ得る。分解産物は、血漿中のプロテアーゼＤＰＰ  ＩＶの作用から生じ得る。特定の実施形態では、開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、３７℃の血漿中２４時間後、最大３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％のレベルで血漿中に安定したままである。
【００９４】
本明細書において、アミノ酸配列：
ＨＸ２ＱＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＸ２０Ｘ２１ＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８ＧＸ３０；
（ここで、Ｘ２は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄ又はＥであり、Ｘ１６は、Ｓ又はＧであり、Ｘ１７は、Ｅ、Ｒ、Ｑ、又はＫであり、Ｘ１８は、Ｒ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ２０は、Ｒ、Ｋ、又はＱであり、Ｘ２１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ２３はＶ又はＩであり、Ｘ２４は、Ａ又はＱであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａ又はＫであり、Ｘ３０は、Ｇ又はＲである）（配列番号４）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチド（配列番号４）が提供され、ここで、Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ１８は、Ｓであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、且つ／又はＸ２８は、Ａである。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチド（配列番号４）が提供され、ここで、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅであり、Ｘ１７は、Ｅであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２７は、Ｅであり、且つ／又はＸ２８は、Ａである。
【００９５】
特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、Ｘ１７は、Ｅ、Ｒ、Ｑ、又はＫであり、Ｘ１８は、Ｒ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（配列番号５）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ１７がＥで、且つＸ１８がＲであるとき、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｙ又はＫであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ１３は、Ｋ又はＹであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、あるいは、Ｘ１７がＲで、且つＸ１８がＳであるとき、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（それぞれ、配列番号６及び配列番号７）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ１７がＥで、且つＸ１８がＲであるとき、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｙであり、Ｘ１２は、Ｋであり、Ｘ１３は、Ｋであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、あるいは、Ｘ１７がＲで、且つＸ１８がＳであるとき、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｖであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（それぞれ、配列番号８及び配列番号９）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ１７がＥで、且つＸ１８がＲであるとき、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｋ、Ｅ、Ｒ、若しくはＳであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、また、Ｘ１７がＲで、且つＸ１８がＳであるとき、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｅであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（それぞれ、配列番号１０及び配列番号１１）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ１７がＥで、且つＸ１８がＲであるとき、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｅであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、あるいは、Ｘ１７がＲで、且つＸ１８がＳであるとき、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｅであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（それぞれ、配列番号１２及び配列番号１３）。特定の実施形態では、上に示す単離されたペプチドが提供され、ここで、Ｘ１７がＥで、且つＸ１８がＲであるとき、Ｘ２は、Ｓであり、Ｘ１０は、Ｋであり、Ｘ１２は、Ｒであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１５は、Ｄであり、Ｘ１６は、Ｓであり、あるいは、Ｘ１７がＲで、且つＸ１８がＳであるとき、Ｘ２０は、Ｒであり、Ｘ２１は、Ｄであり、Ｘ２３は、Ｖであり、Ｘ２４は、Ａであり、Ｘ２７は、Ｅであり、Ｘ２８は、Ａであり、Ｘ３０は、Ｇである（それぞれ、配列番号１４及び配列番号１５）。
【００９６】
本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカンアゴニストペプチドとしては、限定されないが、Ｇ７３０（配列番号１６）、Ｇ７９７（配列番号１７）、Ｇ８４９（配列番号１８）、Ｇ９３３（配列番号１９）、Ｇ８６５（配列番号２０）、Ｇ７９６（配列番号２１）、Ｇ８１２（配列番号２２）及びＧ３８０（配列番号２３）がある。これらのＧＬＰ−１／グルカンアゴニストペプチドを表１に列記する：
【００９７】
【表１】
2019510014.tif 000003
【００９８】
特定の実施形態では、単離されたペプチドは、Ｇ９３３（配列番号１９）である。
【００９９】
ペプチドＧ７９７及びＧ９３３はいずれも、１２位にグルタミン酸残基を有し、実施例２に示すように、グルカゴン及びＧＬＰ−１受容体の両方で頑健な活性を維持する。対応する残基は、エクセンディン−４及びグルカゴンではリシンであり、ＧＬＰ−１においてはセリンである。この残基は、受容体と接触すると考えられていないが、正から負への電荷の変化が、隣接する環境を改変し得る。さらに、Ｇ７９７、Ｇ８４９及びＧ９３３は、２７位にグルタミン酸残基を有する。残基２７はエクセンディン−４ではリシンであり、ＧＬＰ−１（バリン）及びグルカゴン（メチオニン）では非荷電疎水性残基である。エキセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）のリシンは、残基Ｇｌｕ１２７及びＧｌｕ２４におけるＧＬＰ１受容体との静電気的相互作用をもたらす（Ｃ．Ｒ．Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８５  ７２３−７３０（２０１０）；Ｓ．Ｒｕｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３  １１３４０−１１３４７（２００８））。２７位の電荷が負に変化すると、ＧＬＰ１Ｒ力価の損失を予想し得るのに対し、この変化は、Ｇ７９７、Ｇ８４９、及びＧ９３３におけるＧＬＰ１Ｒ活性と適合性である。
【０１００】
ＭＥＤＩ０３８２は、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）及びグルカゴン受容体の合成ペプチド二重アゴニストである。ＭＥＤＩ０３８２は、Ｇ９３３（配列番号１９）であり、これは、残基１０にγグルタミン酸リンカー及びパルミトイル基誘導化を含む。
【０１０１】
ＭＥＤＩ０３８２は、化学的に合成される。樹脂上でのペプチド鎖伸長は、Ｆｍｏｃ−アミノ酸のカップリングのために製造者が供給するプロトコルを用いて、固相ペプチド合成装置により実施する。グルタミン残基２０及び２４は、脱アミノ化に対して感受性ではないアミノ酸で置換され、アルギニン残基１７は、タンパク質分解に対する感受性を低減するためにグルタミン酸塩で置換される。
【０１０２】
ＭＥＤＩ０３８２の配列を以下に示す：
【０１０３】
Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−セリル−Ｌ−グルタミニルグリシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−アスパルチル−（Ｎ６−［Ｎ−（１−オキソヘキサデシル）−Ｌ−γ−グルタミル］）Ｌ−リシル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−アラニルグリシルグリシン
【化１】
2019510014.tif 000004
【０１０４】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの製造方法
本開示は、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの製造方法を提供する。本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、任意の好適な方法により製造することができる。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、当業者には周知の方法、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４）により記載される固相合成法により、化学的に合成される。例えば、標準的試薬（例えば、実施例１で説明するような）を用いる自動合成装置により、固相ペプチド合成を達成することができる。
【０１０５】
あるいは、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、当業者には周知である好都合なベクター／宿主細胞の組み合わせを用いて、組換えにより生産することもできる。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを組換えにより生産するための様々な方法が入手可能である。一般に、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を適切な発現ビヒクル、例えば、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要なエレメントを含有するベクターに挿入する。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドをコードする核酸を適正なリーディングフレーム内のベクターに挿入する。次に、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを発現する好適な宿主細胞に、発現ベクターをトランスフェクトする。好適な宿主細胞として、限定はしないが、細菌、酵母、又は哺乳動物細胞がある。市販の様々な宿主発現ベクター系を用いて、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを発現させ得る。
【０１０６】
修飾、コンジュゲート、融合、及び誘導体化
特定の実施形態では、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、アミノ酸修飾により安定化される。特定の実施形態では、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基をアミド化する。特定の実施形態では、Ｃ末端アミノ酸は、アミド化グリシン、例えば、Ｇ７３０、Ｇ７９７、Ｇ８４９、Ｇ８６５、Ｇ７９６、Ｇ８１２及びＧ３８０である。特定の実施形態では、例えば、Ｇ９３３、すなわち、Ｃ末端グリシンは、非修飾酸である。特定の実施形態では、１又は複数個のアミノ酸残基がアシル化されているＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドが提供される。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、１又は複数個のリシン残基を含有し、ここで、パルミトイル部分は、Ｎ（ε）基と結合している。特定の実施形態では、リンカーは、リシンとパルミトイル基との間に組み込まれる。このリンカーはγグルタミン酸基、又は限定されないが、βアラニン及びアミノヘキサン酸などの別のリンカーであってもよい。コレステロール又はミリストイル基の付加といった異なるアシル化方法を用いてもよい。特定の実施形態では、１３位（例えば、Ｇ７３０）にパルミトイル部分を付加する。特定の実施形態では、パルミトイル部分は、１０位（例えば、Ｇ７９７、Ｇ８４９、Ｇ９３３、Ｇ８６５、Ｇ７９６、及びＧ８１２）に付加される。特定の実施形態では、パルミトイル部分は、１７位（例えば、Ｇ３８０）に付加される。
【０１０７】
本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド、例えば、Ｇ７３０、Ｇ７９７、Ｇ８４９、及びＧ９３３は、実施例１に記載するように、血清アルブミンとの結合によりその半減期を延長し、これによって、腎クリアランスの傾向を低減するために、パルミトイル化することができる。
【０１０８】
上記に代わり、又はこれに加えて、例えば、半減期を延長するために、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを異種部分と結合することができる。異種部分は、タンパク質、ペプチド、タンパク質ドメイン、リンカー、有機ポリマー、無機ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ビオチン、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡ  ＦｃＲｎ結合部位、抗体、抗体のドメイン、抗体断片、単鎖抗体、ドメイン抗体、アルブミン結合ドメイン、酵素、リガンド、受容体、結合ペプチド、非ＦｎＩＩＩスカフォールド、エピトープタグ、組換えポリペプチドポリマー、サイトカイン、又はこれらの部分の２つ以上の組み合わせであってよい。
【０１０９】
例えば、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを異種ポリペプチドと融合させることができる。組換え遺伝子融合及び発現又は化学結合のいずれかによって、本ペプチドをタンパク質と融合させることができる。融合するパートナーとして好適なタンパク質として、限定はしないが、ヒト血清アルブミン、抗体、及び抗体のＦｃ部分との融合を含む抗体断片がある。ＧＬＰ−１は、力価を保持しながら、これらのタンパク質と融合されている（Ｌ．Ｂａｇｇｉｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５３  ２４９２−２５００（２００４）；Ｐ．Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  １３  ４２６−４３３（２０１１）；Ｐ．Ｐａｕｌｉｋ  ｅｔ  ａｌアメリカ糖尿病学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）２０１２，Ｐｏｓｔｅｒ  １９４６）。伸長された組換えペプチド配列は、ペプチドに高分子量を付与することも記載されている（Ｖ．Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２７  １１８６−１１９０（２００９）；ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（欧州特許出願公開第２１７３８９０号明細書））。特定の実施形態では、Ｃ末端での融合パートナー、例えば、アルブミン又はＦｃ部分と一緒に、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを融合タンパク質のＮ末端部分として組み込む。本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、ヒト血清アルブミンに対する親和性を有する「Ａｌｂｕｄａｂｓ」などのペプチド又はタンパク質ドメインに融合することもできる（Ｍ．Ｓ．Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７  ３５０３５−３５０４３（２００２）；Ａ．Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ２３  ２７１−２７８（２０１０））。本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを異種ポリペプチド、例えば、アルブミン又はＦｃ領域と融合させる方法は、当業者には周知である。
【０１１０】
さらに安定化させるか、又は半減期を延長するために、他の異種部分をＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドと結合することもできる。化学的融合の場合、特定の実施形態は、遊離Ｎ末端の維持を特徴とするが、誘導体化のための別の地点を作製することもできる。さらに別の方法は、高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの大きな化学物部分（ｌａｒｇｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｉｅｔｙ）とペプチドを誘導体化するものである。「ペグ化ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド」は、これに共有結合したＰＥＧ鎖を有する。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの誘導体化、例えば、ペグ化を、パルミトイル化したリシン、あるいは、置換された、又は誘導体化を可能にするような伸長により組み込まれたシステインなどの残基において実施することができる。前述のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドフォーマットは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏで、相対力価と、ＧＬＰ−１及びグルカゴン受容体活性化の間の均衡とに関して特徴付けることができる。
【０１１１】
一般的用語「ポリエチレングリコール鎖」又は「ＰＥＧ鎖」は、エチレンオキシドの縮合ポリマーと水の混合物を指し、これは、一般式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ（ｎは、３、４、５、６、７、８、９、又はそれを超える整数である）で表される分岐又は直鎖状である。ＰＥＧ鎖は、約５００〜約４０，０００ダルトンの範囲から選択される平均総分子量を有するエチレングリコールのポリマーを含む。ＰＥＧ鎖の平均分子量は、数値により示され、例えば、ＰＥＧ−５，０００は、約５，０００の総平均分子量を有するポリエチレングリコール鎖を指す。
【０１１２】
ＰＥＧ化は、当分野では公知のＰＥＧ化反応のいずれかにより実施することができる。例えば、Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，３：４−１０，１９９２及び欧州特許出願公開第０  １５４  ３１６号明細書及び同第０  ４０１  ３８４号明細書を参照されたい。ＰＥＧ化は、反応性ポリエチレングリコール分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を用いて実施することができる。
【０１１３】
ＰＥＧ化ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを調製する方法は、一般に、（ａ）分子が、１又は複数個のＰＥＧ基に結合する条件下で、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドをポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧの反応性エステル若しくはアルデヒド誘導体）と反応させるステップと、（ｂ）反応産物を取得するステップを含む。
【０１１４】
医薬組成物
さらには、代謝疾患、例えば、肥満の治療のために製剤化される、有効量の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを含有する組成物、例えば、医薬組成物が提供される。
【０１１５】
本開示の組成物は、公知の方法に従い製剤化することができる。好適な調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１９版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）に記載されており、この文献は、参照によりその全体を本明細書に組み込むものとする。組成物は、限定はしないが、水溶液、エマルジョン、ゲル、懸濁液、凍結乾燥形態、又は当分野で知られる任意の他の形態などの様々な形態であってよい。さらに、組成物は、例えば、希釈剤、結合剤、安定剤、及び防腐剤などの薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。製剤化されたら、本発明の組成物を被検者に直接投与することができる。
【０１１６】
本発明の組成物と一緒に用いることができる担体は、当分野では公知であり、限定はしないが、例えば、チログロブリン、ヒト血清アルブミンのようなアルブミン、破傷風トキソイド、及びポリＬ−リシン、ポリＬ−グルタミン酸のようなポリアミノ酸、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質などが挙げられる。様々な水性担体を用いることができ、例えば、水、緩衝水、０．８％食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸などがある。従来の公知の滅菌技術で組成物を滅菌することもできるし、又は濾過滅菌することもできる。得られた組成物をそのまま、又は凍結乾燥して、使用のためにパッケージングすることができ、凍結乾燥した調製物は、投与前に滅菌液と合わせる。組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要な、ｐＨ調節及び緩衝剤、張性調節剤、湿潤剤などの薬学的に許容される補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどを含有してもよい。
【０１１７】
治療方法
有効な血糖コントロールによる実質的な非外科的減量は、依然として２型糖尿病患者の重要なアンメットニーズである。本明細書に記載する治療方法は、このニーズを満たすことができる。
【０１１８】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、グルカゴンの作用、例えば、食物摂取の抑制又は血糖値の調節と、ＧＬＰ−１の作用、例えば、胃運動性の抑制、又はインスリン放出の促進を組み合わせることができる。従って、これらは、過剰な脂肪組織の排除を加速し、持続可能な減量を誘導すると共に、血糖コントロールを改善することができる。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）はまた、高コレステロール、及び高ＬＤＬ−コレステロール又は異常なＨＤＬ／ＬＤＬ比などの心血管リスク因子を低減するように作用することもできる。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、さらに、トリグリセリドを低減するように作用することもできる。
【０１１９】
本開示は、肥満又は肥満関連疾患若しくは障害を治療する方法を提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。さらに、肥満又は肥満関連疾患若しくは障害の治療のための５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）が提供される。肥満又は肥満関連疾患若しくは障害の治療のための薬剤の製造における、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の使用も提供される。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。
【０１２０】
本開示は、減量方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の実施形態では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。
【０１２１】
本開示は、体脂肪を減らす方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。特定の事例では、脂肪は、肝臓脂肪である。肝臓脂肪の減少によって、インスリン感受性の増大及び／又は肝機能の改善を達成することができる。特定の事例では、被検者の肝臓脂肪は、少なくとも２０％減少する。特定の事例では、被検者の肝臓脂肪は、約２０％〜約４０％減少する。特定の事例では、投与によって、肝臓脂肪の約三分の一の減少が達成される。特定の事例では、被検者の肝体積は縮小する。特定の事例では、投与によって、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）レベルが（例えば、少なくとも０．６％、少なくとも０．９％、約０．５％〜約１．５％、約０．５％〜約２％、約０．５％〜約３％、又は６．３％以上）低下する。
【０１２２】
本開示は、さらに、体重を管理する方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。
【０１２３】
本開示は、さらに、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。投与によって、体重を減らす、又は肥満を治療することもできる。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。
【０１２４】
本明細書に記載するように、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、増量の予防、脂肪（例えば、肝臓脂肪）増加の予防、減量の促進、脂肪（例えば、肝臓脂肪）減少の促進、過剰体重の低減、脂肪（例えば、肝臓脂肪）の低減、又は病的肥満を含む肥満の治療（例えば、食欲、給餌、食物摂取、カロリー摂取、及び／又はエネルギー消費の管理により）のために投与することができる。エネルギー消費の増加は、例えば、肝臓中の脂肪酸及び／又はグルコースの酸化増大によって達成され得る。本開示は、さらに、過剰体重又は過剰体脂肪に起因する、若しくはそれらを特徴とする疾患又は病状を治療又は予防する方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。特定の実施形態では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、他の肥満関連代謝障害の治療のために使用することもできる。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。他の肥満関連（過剰体重関連）障害の例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：インスリン抵抗性、耐糖能障害、糖尿病前期、空腹時血糖値上昇、２型糖尿病、高血圧、脂質異常症（又はこれら代謝リスク因子の組み合わせ）、グルカゴン産生腫瘍、心血管疾患、例えば、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｉｓ）、動脈硬化、冠動脈性心疾患、又は抹消動脈疾患、発作、呼吸不全、又は腎疾患。
【０１２５】
本開示は、さらに、２型糖尿病を治療する方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。投与によって、体重を減らす、又は肥満を治療することもできる。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。
【０１２６】
本開示は、さらに、血糖コントロールを改善する、又は血糖コントロールを達成する方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。投与によって、体重を減らす、又は肥満を治療することもできる。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。血糖コントロールの改善は、混合食試験を用いて評価することができる。特定の事例では、血糖コントロールの改善によって、混合食試験後の濃度−時間曲線下グルコース面積（ＡＵＣ）の少なくとも１０％減少（例えば、処置前のＡＵＣと比較して）がもたらされる。特定の事例では、血糖コントロールの改善によって、混合食試験後のＡＵＣの少なくとも１５％減少（例えば、処置前のＡＵＣと比較して）がもたらされる。特定の事例では、血糖コントロールの改善によって、混合食試験後のグルコースＡＵＣの少なくとも２０％減少（例えば、処置前のＡＵＣと比較して）がもたらされる。特定の事例では、血糖コントロールの改善によって、混合食試験後のグルコースＡＵＣの少なくとも２５％減少（例えば、処置前のＡＵＣと比較して）がもたらされる。特定の事例では、血糖コントロールの改善によって、混合食試験後のグルコースＡＵＣの少なくとも３０％減少（例えば、処置前のＡＵＣと比較して）がもたらされる。血糖コントロールの改善は、ヘモグロビンＡ１ｃ及びフルクトサミンに基づいて評価することもできる。
【０１２７】
本開示は、さらに、減量及び血糖コントロールの方法も提供し、この方法は、治療を必要とする被検者に、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）を投与するステップを含む。５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回又は分割用量で投与することができる。さらに、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇの本明細書に開示するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、投与は、食餌及び運動を補助するものである。投与によって、体重を減らす、又は肥満を治療することもできる。特定の事例では、被検者は、２型糖尿病を有する。特定の事例では、被検者は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の事例では、被検者は過剰体重である。特定の事例では、被検者は肥満である。特定の事例では、投与によって、少なくとも１．０ｋｇ、少なくとも１．３ｋｇ、又は少なくとも２．０ｋｇの減量が達成される。特定の事例では、被検者の体重は、少なくとも３．５ｋｇ又は少なくとも５ｋｇ減少する。特定の事例では、被検者の体重は、約２〜約３０ｋｇ減少する。特定の事例では、被検者の体重は、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％減少する。特定の事例では、被検者の体重は、約２％〜約２０％、約２％〜約２５％、又は約２％〜約３０％減少する。
【０１２８】
特定の事例では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の投与によって、少なくとも１ｋｇの減量が達成される。特定の事例では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の投与によって、少なくとも１．３ｋｇの減量が達成される。特定の事例では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの投与によって、少なくとも１．５ｋｇの減量が達成される。特定の事例では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の投与によって、４週間にわたる１日１回の反復投与後に、１〜３ｋｇの減量がもたらされる。特定の事例では、本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の投与によって、４週間にわたる１日１回の反復投与後に、１．３〜２ｋｇの減量がもたらされる。
【０１２９】
本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入又は局部であってよい。本明細書で用いる場合、用語「非経口」は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋内、皮下、直腸、又は膣内投与を含む。投与のための別の形態例として、注射液、特に、静脈内又は動脈内注射又は滴注用の溶液がある。本明細書に記載するＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単回用量又は複数回用量として投与することができる。特定の実施形態では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを、皮下注射により投与する。
【０１３０】
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入又は負荷ボーラス用量（ｌｏａｄｉｎｇ  ｂｏｌｕｓ  ｄｏｓｅ）に続く維持用量であってよい。これらの組成物は、特定の一定又は変動間隔、例えば、１日１回、又は「必要に応じた」基準に基づき、投与することができる。また、要望される最適応答（例えば、治療又は予防応答）をもたらすように、投与レジメンを調節することもできる。
【０１３１】
特定の事例では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、１日１回投与することができる。特定の事例では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、注射（例えば、皮下投与）により１日１回投与することができる。特定の事例では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間の期間にわたって、注射（例えば、皮下投与）により１日１回投与することができる。特定の事例では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、単一用量又は分割用量で投与することができる。特定の事例では、５０〜６００μｇ又は１００〜６００μｇ（例えば、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、又は６００μｇ）の本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、漸増用量（例えば、１００μｇの初期用量、１５０又は２００μｇの第２用量、並びに任意選択で、２００、３００若しくは４００μｇの第３用量といった用量漸増法、例えば、その際、初期用量及び／若しくは第２用量は、３〜１０日間又は３〜７日間投与する）で投与することができる。特定の事例では、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、初期用量として１００μｇを４日間、第２用量として１５０μｇを４日間投与し、第３用量として２００μｇを毎日投与することができる。特定の事例では、本明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、初期用量として１００μｇを５日間、第２用量として１５０μｇを５日間、第３用量として２００μｇを５日間投与し、第４用量として３００μｇを毎日投与することができる。特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ���１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）は、初期用量として１００μｇを５日間、第２用量として２００μｇを５日間投与し、第３用量として３００μｇを毎日投与することができる。
【０１３２】
特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の半減期は、約７〜約１３時間である。特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の半減期は、約９〜約１３時間である。特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の半減期は、約７〜約１２時間である。特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の半減期は、約１０〜約１２時間である。特定の事例では、明細書に記載のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド（例えば、ＭＥＤＩ０３８２）の半減期は、約８〜約１１時間である。
【０１３３】
キット
また別の実施形態では、本開示は、ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを含むキットを提供し、これは、本明細書に記載の方法を実施するために用いることができる。特定の実施形態では、キットは、１つ又は複数の容器に入った、本明細書に開示のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを含む。当業者であれば、当分野では公知の確立されたキットフォーマットの１つに、開示されるＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを容易に組み込むことができることを容易に認識されよう。
【実施例】
【０１３４】
実施例１：ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの合成、修飾、及び特性決定
略語のリスト：
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル
ｔｅｒｔ−Ｂｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
Ｍｔｔ：４−メチルトリチル
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：トリフェニルメチル、トリチル
【０１３５】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを以下のように合成した：  ＮｏｖａＳｙｎ  ＴＧＲ又は予めロードしたＦｍｏｃ−Ｗａｎｇ樹脂（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）上でのペプチド鎖の伸長を、ＰＲＥＬＵＤＥ（商標）固相ペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ，ＵＳＡ）を用いて実施した。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）でのアミノ酸のヒドロキシベンゾトリアゾールエステルのカップリングのために製造者供給のプロトコルを適用した。アミノポリエチレングリコールのアミノ基及びアミノ酸のαアミノ基の半永久的保護のために、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基を使用し、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシンについてはｔｅｒｔ−ブチル（ｔｅｒｔ−Ｂｕ）で、アルギニンについては２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）で、また、ヒスチジンについてはトリチル（Ｔｒｔ）で、側鎖を保護した。１位のヒスチジンのＮ末端アミノ基をｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル基（Ｂｏｃ）で保護した。続いて側鎖の化学修飾が必要であれば、Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）をペプチド鎖に組み込んだ。
【０１３６】
ペプチド鎖伸長が終了したら、２％ＴＦＡ及び５％ＴＩＳを含有するＤＣＭ（１０×７ｍｌ、各０．５分）で、ペプチド樹脂を洗浄することにより、Ｍｔｔ基を除去した。脂質部分とＬｙｓの側鎖のカップリングを、ＨＯＢｔの存在下で、カップリング試薬としてＤＩＣを用い、ＰＲＥＬＵＤＥ（商標）ペプチド合成装置で実施した。
【０１３７】
ＴＦＡ：ＴＩＳ：水（９５：２．５：２．５）の混合物を用いて、樹脂からペプチドを切断した。室温で２時間後、ペプチジル樹脂を濾過し、ＴＦＡで洗浄した後、合わせた濾液を真空で乾燥まで蒸発させた。残留物をエーテルと一緒に粉砕し、形成された沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄した後、乾燥させた。粗ペプチドを水中の５％酢酸に溶解させ、Ｖａｒｉａｎ  ９２０−ＬＣシステムに取り付けたＰｏｌａｒｉｓ  ３  Ｃ８−Ａカラム上の逆相高速液体クロマトグラフィーにより分析した。１５分間にわたる１０〜９０％バッファーＢの標準勾配システムを分析に用いた。バッファーＡは、水中０．１％ＴＦＡであり、バッファーＢは、アセトニトリル中０．１％ＴＦＡであった。ＨＰＬＣプロフィールを２１０ｎｍで記録した。半分取Ｃ１８  ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｗａｔｅｒｓカラムを用いたＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒシステムで分取を実施した。３０分間にわたる、３０〜７０％バッファーＢの勾配で、水及びアセトニトリルの前述した溶媒系を分離に用いた。クロマトグラフィーにより均質な産物（＞９７％純度）をエレクトロスプレー質量分析により分析した（ＭａｓｓＬｙｎｘ，Ｗａｔｅｒｓ）。
【０１３８】
実施例２：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
グルカゴン及びＧＬＰ−１受容体媒介ｃＡＭＰ生成
細胞ｃＡＭＰ活性アッセイにおけるペプチドの生物学的活性（アッセイ１）：
実施例１の方法により合成したＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの生物学的活性を、生物学的活性、例えば、１つ又は複数の細胞受容体応答の刺激について、下記の方法により試験した。ヒト、マウス、ラット、又はイヌＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）又はグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（胃抑制ポリペプチド）受容体（ＧＩＰＲ）を発現する安定な細胞株を、標準的方法によりＨＥＫ２９３又はＣＨＯ細胞において産生させた。これら各種受容体のペプチド活性化により、ｃＡＭＰセカンドメッセンジャーの下流生産が起こるが、これは、機能活性アッセイで測定することができる。
【０１３９】
「アッセイ培地」を使用して、ｃＡＭＰアッセイを実施した：
アッセイ培地：０．５ｍＭ  ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ＃Ｉ７０１８）を含有する、ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ＃４１９６６）中の１０％ＦＢＳ。
低タンパク質結合３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ＃７８１２８０）を用いて、アッセイ培地で作製した試験サンプルの１１回の１：５連続希釈を実施した。サンプル希釈物は全て、２回反復して作製した。
【０１４０】
目的の受容体を発現する細胞の凍結クライオバイアル（ｃｒｙｏ−ｖｉａｌ）を水浴中で急速に解凍し、予熱したアッセイ培地に移した後、２４０×ｇで５分旋回させた。最適化濃度（例えば、１×１０５細胞／ｍｌのｈＧＣＧＲ細胞、０．５×１０５細胞／ｍｌのｈＧＬＰ−１Ｒ及びｈＧＩＰｒ細胞）で、細胞をアッセイ培地に再懸濁させた。
【０１４１】
希釈プレートから、５μＬレプリカを黒色浅型ウェル（ｓｈａｌｌｏｗ−ｗｅｌｌ）Ｕ底３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３６７６）にスタンプした。これに、５μＬ細胞懸濁液を添加して、プレートを室温で３０分インキュベートした。
【０１４２】
市販のｃＡＭＰダイナミック２ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、Ｃａｔ♯６２ＡＭ４ＰＥＪ）を用いて、ｃＡＭＰレベルを測定した後、製造業者の推奨事項に従い、２つのステッププロトコルを実施した。手短には、抗ｃＡＭＰクリプテート（ドナー発蛍光団）及びｃＡＭＰ−ｄ２（アクセプター発蛍光団）を、キットに備えられたコンジュゲート及び溶解バッファーで各々１／２０希釈することにより、個別に作製した。５μＬの抗ｃＡＭＰクリプテートをアッセイプレートの全てのウェルに添加し、５μＬのｃＡＭＰ−ｄ２を、非特異的結合（ＮＳＢ）ウェル以外の全てのウェルに添加し、これらにコンジュゲート及び溶解バッファーを添加した。プレートを室温で１時間インキュベートした後、励起波長３２０ｎｍ及び発光波長６２０ｎｍ及び６６５ｎｍを用いて、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。
【０１４３】
合成ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの配列、並びに「アッセイ培地」中で実施するｃＡＭＰアッセイにおいて決定されたそれらのＥＣ５０値を表２に示す。表２に示すペプチドは全て、Ｃ末端アミドを伴って合成された。別のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドは、Ｃ末端アミノ酸を伴って合成され、「アッセイ培地」中で実施するｃＡＭＰアッセイで決定されたＥＣ５０値を表３に示す。「アッセイ培地」中で実施する、更なるＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドのＥＣ５０を表４に示す。表４に示すペプチドは全て、「酸」と表示されていない限り、Ｃ末端アミドを有し、酸と表示されている場合には、それらはＣ末端酸を有する。
【０１４４】
【表２】
2019510014.tif 000005
【０１４５】
【表３】
2019510014.tif 000006
【０１４６】
【表４】
2019510014.tif 000007
【０１４７】
【表５】
2019510014.tif 000008
【０１４８】
【表６】
2019510014.tif 000009
【０１４９】
【表７】
2019510014.tif 000010
【０１５０】
【表８】
2019510014.tif 000011
【０１５１】
様々な血漿中濃度の血清アルブミンの存在下でのグルカゴン及びＧＬＰ−１受容体媒介ｃＡＭＰ生成アッセイ（アッセイ２）。
以下のように、ｃＡＭＰ生成を誘導するペプチドのアゴニスト力価決定を、それぞれ４．４、３．２及び３．２％のヒト、ラット若しくはマウス血清アルブミンの存在下、ヒト、ラット若しくはマウスグルカゴン受容体（ＧｌｕｃＲ若しくはＧＣＧＲと略される）又はＧＬＰ−１受容体を発現するＣＨＯ細胞において測定した。
【０１５２】
ヒト、マウス若しくはラットＧｌｕｃＲ又はＧＬＰ−１受容体の安定な組換え発現を有するＣＨＯ細胞をＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ及びゲネチシン（１００μｇ／ｍｌ）中で培養した。凍結保存細胞ストックを２×１０７／バイアルで、１×細胞凍結培地−ＤＭＳＯ血清不含有（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）中で調製し、−８０℃で保存した。細胞を３７℃で急速解凍してから、ヒト、ラット、及びマウス血清アルブミンについてそれぞれ４．４、３．２及び３．２％で血清アルブミンを含有するアッセイバッファー（ＤＭＥＭ）で希釈した。ペプチドをＤＭＳＯで順次希釈した後、表示の最終濃度で血清アルブミンを含有するＤＭＥＭで１００倍希釈した。次に、希釈したペプチドを３８４黒色シャローウェルマイクロタイターアッセイプレートに移した。細胞をアッセイプレートに添加し、室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、アッセイを停止し、ＣｉｓＢｉｏ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓから入手可能なＨＴＲＦ（登録商標）ｄｙｎａｍｉｃ  ｄ２  ｃＡＭＰアッセイキットを用い、製造者のガイドラインに従ってｃＡＭＰレベルを測定した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）蛍光プレートリーダでプレートを読み取った。ヒト及びラット血清アルブミンは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、マウス血清アルブミンは、Ｅｑｕｉｔｅｃｈ  Ｂｉｏ  Ｌｔｄから購入した。
【０１５３】
製造者のガイドラインに記載されている通り、データを％ΔＦに変換し、４−パラメータロジスティックフィットにより分析して、ＥＣ５０値を決定した。選択したペプチドのアッセイ２ＥＣ５０値を表５に示す。決定されたアッセイ２ＥＣ５０値は、組換え細胞株中のＧＬＰ−１で試験したペプチド及びグルカゴン受容体の固有力価と、血清アルブミンに対するペプチドのアフィニティ（遊離ペプチドの量を決定する）の両方に依存的であった。血清アルブミンとの結合は、得られたＥＣ５０値を高める。アルブミンの様々な血漿中濃度での遊離ペプチドの割合及び０％ＨＳＡでのＥＣ５０は、ＨＳＡ濃度によるｃＡＭＰ生成の変動に基づいて計算することができる。例えば、Ｇ７３０及びＧ９３３は、４．４％ＨＳＡの遊離ペプチドについては、０．８５％及び０．２９％、並びに０％ＨＳＡのＧＬＰ１ＲでのＥＣ５０については、７ｐＭ及び６ｐＭの値をそれぞれ付与した。Ｇ７９７及びＧ８４９は、４．４％ＨＳＡの遊離ペプチドについては、０．８２％及び０．４８％、並びに０％ＨＳＡのＧＬＰ１ＲでのＥＣ５０については、７ｐＭ及び２ｐＭの値をそれぞれ付与した。異なるペプチド間で、及び異なる条件下で、ＧＬＰ１Ｒ及びＧｌｕｃＲでの活性の均衡を比較するため、下記の計算を用いてこれらを相関させることができ、その際、ＥＣ５０を天然のリガンドのＥＣ５０と関連付ける。
【０１５４】
【表９】
2019510014.tif 000012
【０１５５】
血漿中ペプチドの安定性試験。ペプチドＧ７３０、Ｇ７９７、Ｇ８４９及びＧ９３３の血漿中安定性を以下のように決定した。
【０１５６】
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｌｏｗ  Ｂｉｎｄ  Ｔｕｂｅ内に固体ペプチドを計量して導入し、ＤＭＳＯ中に溶解させることにより、約２００μｍｏｌ／Ｌのペプチドのストック溶液を調製した。１０μＬのストック溶液をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｌｏｗ  Ｂｉｎｄ  Ｔｕｂｅ内の９９０μＬの血漿に添加して、初期濃度約２μｍｏｌ／Ｌの血漿中ペプチドを得た。ヒト、ラット及びマウスからの凍結ブランク血漿を解凍し、温度３７℃に加熱した後、ストック溶液を添加した。スパイクした血漿サンプルを穏やかに混合し、実験の開始前に、約５分間平衡させた。血漿サンプルをＧａｌａｘｙＲ  ＣＯ２インキュベータ内で３７℃にて４８時間インキュベートした。０、１、２、６．５、１７、２４及び４８時間時点でサンプリング（３０μＬ）を実施した。サンプルは、分析まで−７０℃で保存した。
【０１５７】
血漿サンプルを次のようにしてアッセイした。３０μＬの血漿サンプルは、９６ウェルローバインドプレート（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  
ＬｏＢｉｎｄ）内の１８０ｍｌの低温エタノールで沈殿させたタンパク質であった。混合及び遠心分離後、１００μＬの上清を新しいプレートに移し、１μＬを分析カラム上に注射した。
【０１５８】
ポジティブエレクトロスプレーイオン化と共に、中高分解能質量分析計（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰｅｎＴＯＦ）に接続したμＬＣ−システム（ＬＣ  Ｅｘｉｇｅｎｔ  μＬＣ）を用いて分析を実施した。分析カラムは、２．７μｍの粒径を有する、５ｃｍ、１ｍｍ  Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ（注文品）Ｃ１８−カラムであった。流量：低速逆相勾配を用いて、０．１ｍｌ／分。移動相は、アセトニトリル及び０．１％ギ酸を含む水であった。
【０１５９】
得られたデータを、次の分解産物：＋１産物（酸）及びＤＰＰ  ＩＶ−切断産物についてマニュアルで評価した。＋１質量（ｍａｓｓ）を有する産物は、グルタミンのアミド基又はＣ末端での脱アミドから生じ得る。血漿中のプロテアーゼＤＰＰ  ＩＶの作用から、切断産物が生じる。ペプチドの分解及びペプチド産物の形成のいずれも、初期ペプチド濃度のパーセンテージで記録した。ピークを積分し、残留ペプチド（％）を計算した：（ピーク面積／ピーク面積０Ｈ）＊１００。２４時間時点のデータを表６に示す。Ｇ７９７及びＧ９３３の場合、脱アミド及びＤＰＰ  ＩＶ切断のレベルは低かった。
【０１６０】
【表１０】
2019510014.tif 000013
【０１６１】
可溶性
ペプチドの可溶性を、以下のように、４．５〜８．０のｐＨ範囲内の様々なバッファー種において評価した。ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドの乾燥粉末を室温の様々なバッファー中で再構成した。ＮａｎｏＤｒｏｐ  ２０００分光光度計を用いて、２８０ｎｍで吸光度を測定し、下記の等式を用いて、ペプチド濃度を計算した：
ｃ＝（Ａ２８０＊Ｍｗ）／ε
式中、ｃは、濃度、εは、消散係数、Ｍｗは、分子量であり、
Ａ２８０は、２８０ｎｍでの吸光度であり、
ε＝（１×Ｔｒｐ＝５５６０）＋（１×Ｔｙｒ＝１２００）
【０１６２】
結果を表７に示す。ペプチドの各々は、ｐＨ範囲（６．５〜８．５）にわたって、０．８ｍｇ／で可溶性であった。Ｇ７３０は、４．５〜８．０のｐＨ範囲で可溶性であり、Ｇ７９７は、６．〜８．０のｐＨ範囲で可溶性であり、Ｇ９３３は、６〜８．０のｐＨ範囲で可溶性であった。Ｇ９３３の可溶性は、いくつかの異なるバッファー系で試験し、これらも表７に示す。Ｇ９３３は、少なくとも次のバッファー系において１ｍｇ／ｍｌで可溶性であった：ヒスチジン（ｐＨ６及び７；イオン強度：０．２５〜１００ｍＭ）、リン酸ナトリウム（ｐＨ６〜７．５；イオン強度：０．２５〜１００ｍＭ）、及びトリス／ヒドロキシメチルアミノメタン（ｐＨ７〜９；イオン強度：０．２５〜１００ｍＭ）。
【０１６３】
【表１１】
2019510014.tif 000014
【０１６４】
製剤化。ペプチド可溶性を下記の３つの異なる等張製剤で評価した：
１．デフォルト製剤（ＤＦ）＝０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  マンニトール。最終製剤ｐＨ＝７．２
２．バックアップ製剤１（ＢＦ１）＝０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ  アルギニン／プロリン。最終製剤ｐＨ＝８．０
３．バックアップ製剤２（ＢＦ２）＝リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８）／１．８５％Ｗ／Ｖプロピレングリコール。最終製剤ｐＨ＝７．０
【０１６５】
可溶性を上に詳述したように測定し、結果を表８に示す。Ｇ７３０、Ｇ７９７及びＧ９３３は、ＤＦ中に少なくとも５ｍｇ／ｍｌまで可溶性であり、ＤＦ中のＧ８４９の最大可溶性は、３．７ｍｇ／ｍｌであり、Ｇ７９７は、ＢＦ１中に少なくとも１０ｍｇ／ｍｌまで可溶性であり、Ｇ９３３は、ＢＦ２中に少なくとも１０ｍｇ／ｍｌまで可溶性であった。
【０１６６】
【表１２】
2019510014.tif 000015
【０１６７】
１ヵ月以内に、逆相超性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ  ＵＰＬＣ）により純度を測定することによってＤＦの安定性を評価した。保存条件は、５℃、２５℃、４０℃及び−８０℃であった。結果を表９及び１０に示す。
【０１６８】
【表１３】
2019510014.tif 000016
【０１６９】
【表１４】
2019510014.tif 000017
【０１７０】
実施例３：ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
Ｇ７３０、Ｇ７９７、及びＧ８１２（試験Ａ）。選択した本明細書に開示のＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドを以下のように食餌性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルで試験した。９〜１１週齢の雌Ｃ５７／Ｂｌ６ＪＨｓｄＯｌａ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＫ）に対してＤ１２４９２（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）及びチョコレート菓子のｄｅｌｉｃａｔｏ  ｂａｌｌ（Ｄｅｌｉｃａｔａ  Ｂａｋｖｅｒｋ，Ｓｗｅｄｅｎ）の高脂肪食餌を開始し、これを動物施設への移送までの１６週間、３週間の順応期間及び薬剤処置の間、維持したが、食餌の２つの成分のカロリー含量を表１１に示す。マウスを９群（ｎ＝５〜６）に分け、２９週齢で処置を開始した。治療群及び投与を表１２に示す。
【０１７１】
【表１５】
2019510014.tif 000018
【０１７２】
【表１６】
2019510014.tif 000019
【０１７３】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドＧ７３０、Ｇ７９７、及びＧ８１２、並びにリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）をビヒクルである１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ／１５０ｍＭマンニトール、ｐＨ７．４中に製剤化した。治療薬は、動物を高脂肪食餌で維持しながら、１４日間１日２回皮下投与した。投与期間全体を通して、動物の体重を毎日モニターした。１４日目に、血漿グルコース及びインスリンの測定のために、４時間の絶食時間後、意識のあるマウスから血液サンプルを取得した。次に、イソフルランを用いてマウスを麻酔した後、眼の裏の毛細血管床から末梢血液を採取した。次のパラメータを測定した：トリグリセリド、総コレステロール、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）、β−ヒドロキシ酪酸及び線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の血液化学測定値（以下の表１４及び１５）。
【０１７４】
リラグルチド及びビヒクルと比較して、体重に対するリラグルチド並びにＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドＧ７３０、Ｇ７９７、及びＧ８１２による処置の効果を図１〜４に示す。Ｇ７３０又はＧ７９７のいずれかで処置された動物は、１４日間の投与期間にわたって用量依存的且つ連続的な減量を示した。５０ｎｍｏｌ／ｋｇで、Ｇ７３０及びＧ７９７で処置された動物は、ビヒクルで処置した動物と比較して、１４日目に約２４％の体重変化を経験した。
【０１７５】
Ｇ７３０又はＧ７９７で処置されたマウスは、第１４日にグルコースの用量依存的減少を示した（表１３）。また、これらの２つの処置によって、特により高い用量で、インスリンレベルの低下も観察された（表１３）。インスリン感受性指数である恒常性モデル評価（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＨＯＭＡ）は、２０ｎｍｏｌ／ｋｇのＧ７３０と、２０及び５０ｎｍｏｌ／ｋｇのＧ７９７で、有意に改善した。ＨＯＭＡは、血漿インスリンと血糖値の和を用いて、β−細胞機能及びインスリン抵抗性を評価するモデル化方法である（表１４）。総血漿コレステロールは、リラグルチド、全用量のＧ７３０及びＧ７９７のいずれによっても低下したが、血漿非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）レベル並びに血漿及び肝性トリグリセリド（ＴＧ）に顕著な変化はなかった。β−ヒドロキシ酪酸（ＢｅＨｙ）は、減量と一致して、増加レベルへの傾向を有した。線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）は、概して、二重ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチド処置により増加した。
【０１７６】
【表１７】
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【０１７７】
【表１８】
2019510014.tif 000021
【０１７８】
Ｇ８６５、Ｇ９３３、及びＧ７９６（試験Ｂ）。ＧＬＰ−１／グルカゴンペプチドのさらに別のセットを、上と同じプロトコルを使用するが、表１５に示す処置群及び用量を用いて、食餌性肥満モデルで試験した。
【０１７９】
【表１９】
2019510014.tif 000022
【０１８０】
ＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドＧ８６５、Ｇ９３３、及びＧ７９６、並びにリラグルチドを、ビヒクルである１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ／１５０ｍＭマンニトール、ｐＨ７．４で製剤化した。治療薬は、動物を高脂肪食餌で維持しながら、１４日間１日２回皮下投与した。投与期間全体を通して、動物の体重を毎日モニターした。１４日目に、血漿グルコース及びインスリンの測定のために、４時間の絶食時間後、意識のあるマウスから血液サンプルを取得した。次に、イソフルランを用いてマウスを麻酔して、眼の裏の毛細血管床から末梢血液を採取した。次のパラメータを測定した：トリグリセリド、総コレステロール、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）、β−ヒドロキシ酪酸及び線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の血液化学測定値（以下の表１６及び１７）。
【０１８１】
リラグルチド及びビヒクルと比較して、体重に対するリラグルチド並びにＧＬＰ−１／グルカゴンアゴニストペプチドＧ９３３、Ｇ８６５、及びＧ７９６による処置の効果を図５〜８に示す。Ｇ９３３、Ｇ８６５、又はＧ７９６のいずれかで処置された動物は、１４日間の投与期間にわたって用量依存的且つ連続的な減量を示した。
【０１８２】
治療後１４日目の血糖値、インスリンレベル及びＨＯＭＡを、表１６に示す。治療後１４日目の総血漿コレステロールレベル、血漿非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）レベル、血漿及び肝性トリグリセリド（ＴＧ）レベル、β−ヒドロキシ酪酸（ＢｅＨｙ）レベル、及び線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）レベルを表１７に示す。
【０１８３】
【表２０】
2019510014.tif 000023
【０１８４】
【表２１】
2019510014.tif 000024
【０１８５】
実施例４：単一用量漸増試験
（Ａ）被検者
合計３６２人の被検者が、ドイツにおいて試験に参加することに同意した。被検者は、以下の選択及び除外基準についてスクリーニングされた。
【０１８６】
選択基準：
・健常なボランティア、スクリーニングの時点で年齢１８〜４５歳；
・ボディマスインデックス≧２２且つ≦３０ｋｇ／ｍ２、及び体重≧７０ｋｇ；並びに
・複数回の挿管に適した静脈アクセス
【０１８７】
除外基準：
・Ｇ９３３の評価又は被検者の安全性若しくは試験結果の解釈を妨げ得るあらゆる状態。具体的な例として以下を含む：（ａ）急性若しくは慢性膵炎の病歴、又はスクリーニング時の正常値上限（ＵＬＮ）を超える膵アミラーゼ若しくはリパーゼ、（ｂ）治療を必要とする胃不全麻痺の病歴、（ｃ）安全性及び耐容性データの解釈に影響を及ぼす可能性がある、上部胃腸管に影響する手術の病歴、（ｄ）胆嚢摘出により処置されていない急性胆嚢炎のエピソードを招いた胆石症、又は既知胆道疾患の病歴、（ｅ）多発性内分泌腺腫症２型（ＭＥＮ−２）、甲状腺Ｃ細胞肥厚を示唆する血清カルシトニン（カルシトニンレベル＞５０ｎｇ／Ｌ）の病歴若しくは家族歴、又はスクリーニング時の甲状腺髄様癌、（ｆ）臨床的に有意な心調律異常の病歴、例えば、永続性若しくは発作性心房細動／心房粗動、発作性上室性頻拍症、発作性室性頻拍症、埋込み型ペースメーカデバイス若しくは心臓除細動器／除細動器の存在、（ｇ）治療済み若しくは症候性心不全の病歴、並びに（ｈ）過去の心筋梗塞又は脳血管障害（例えば、発作）の病歴；
・胃腸、腎、若しくは肝疾患（ジルベール症候群を除く）又は薬剤の吸収、分布、代謝、若しくは排泄を妨げることがわかっているその他のいずれかの状態の病歴又は存在；
・非黒色腫皮膚癌を除く癌の病歴；
・１日目の投与前４週間以内のあらゆる臨床的に重要な病、医学的／外科的処置、若しくは外傷；
・スクリーニング時のＢ型肝炎表面抗原陽性又はＣ型肝炎ウイルス抗体血清学；
・スクリーニング時のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）テスト陽性、又は病歴若しくは被検者の口頭報告によって決定される抗レトロウイルス薬剤の使用；
・スクリーニング時の正常範囲外の血清カリウム又はカルシウム；
・スクリーニング時にＵＬＮを超える血清クレアチニン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、又は総ビリルビン；
・治験担当医師により判断される、臨床化学、血液学、若しくは検尿結果における他のいかなる臨床的に重要な異常も、本試験から排除とすべきである。
・次の医療製品のいずれかの使用：（ａ）ＧＬＰ−１受容体アゴニストの同時若しくは以前の使用、（ｂ）スクリーニング前の２８日以内に全身性コルチコステロイドの現在若しくは以前の使用、又は（ｃ）体重のコントロールのために許可されたいずれかの医療製品若しくは植物性生薬の使用又は１日目〜７日目の１週間前から食欲が抑制されている（ｐｒｏｈｉｂｉｔｅｄ）；
・以下：（ａ）収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ若しくは≧１４０ｍｍＨｇ、（ｂ）拡張期血圧＜５０ｍｍＨｇ若しくは≧９０ｍｍＨｇ、又は（ｃ）心拍数＜５０若しくは＞９０拍／分のいずれかとして定義される、仰臥位安静１０分後の異常なバイタルサイン；
・律動、伝導（例えば、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、洞不全症候群）、又は１２誘導ＥＣＧの形態学におけるいずれかの臨床的に重要な異常、あるいは、治験担当医師の意見で、心拍数について補正されたＱＴ間隔（ＱＴｃ）の変化の解釈の妨げとなり得るＥＣＧにおけるあらゆる異常、例えば、異常Ｔ波形態、又は左心室肥大など；
・フリデリシア（Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａ）式を用いた延長ＱＴ（ＱＴｃＦ）＞４５０ミリ秒、又は１２誘導ＥＣＧに基づく短縮ＱＴｃＦ＜３４０ミリ秒、又はＱＴ延長症候群の家族歴；
・＜１２０ミリ秒までのＰＲ（ＲＱ）間隔又は延長＞２００ミリ秒（１度房質ブロック）；
・間欠性２度ブロック（睡眠中のウェンケバッハ（Ｗｅｎｃｋｅｂａｃｈ）ブロックは除外しない）若しくは３度ブロック、又は房室解離；
・５０〜１１０ミリ秒の範囲外のＱＲＳ間隔；
・過去３年以内の薬物乱用の既知又は疑われる病歴
・過去３年以内のアルコール乱用又はアルコールの過剰摂取の病歴；
・現在の喫煙者（＞０タバコ／日）；被検者はまた、スクリーニング時に試験するコチニンについて陽性の場合にも除外される；
・スクリーニング若しくは試験施設への入院時の乱用薬物についてのスクリーンで陽性か、又は治験薬の投与前の試験施設入院時のアルコール呼気テストで陽性。慢性不安又は睡眠障害のためにベンゾジアゼピンを使用する被検者は、試験への参加が許可される場合もある。
・重度のアレルギー／過敏症の病歴又は進行中の臨床的に重要なアレルギー／過敏症
・スクリーニング前２ヵ月以内の全血若しくは赤血球の献血、又はあらゆる血液喪失＞５００ｍＬ
・別の新規化学実体（市販のために承認されていない化合物として定義される）の摂取、又は本試験における治験薬の投与の少なくとも３０日若しくは５半減期（どちらか長い方）以内に薬剤治療を含むいずれか他の臨床試験への参加。除外期間は、最終投与、又は最後の来院から治験薬の３０日若しくは５半減期後（どちらか長い方）に開始するものとする。同意し、スクリーニングを受けたが、本試験又は以前の試験にランダム化されていない被検者は、除外されない；あるいは
・公的若しくは司法命令により、被検者が、施設に送致されるような精神疾患。
【０１８８】
スクリーニングの後、３１３人の被検者が、選択／除外基準を満たさないと決定された。残る４８人の被検者をランダム化し、Ｇ９３３を投与した。４８人の処置患者のデモグラフィックスを以下の表に示す。
【０１８９】
【表２２】
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【０１９０】
【表２３】
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【０１９１】
（Ｂ）試験デザイン
第１相、ランダム化、盲検式、単一用量漸増試験を実施した。提案される試験のフローチャートを図９に示す。コホート当たり８人の被検者を計画した。各コホートにおいて、被検者を３：１でＧ９３３（ＭＥＤＩ０３８２）又はプラセボにランダム化した。
【０１９２】
ＧＰＬ−１及びグルカゴンモジュレータに関する臨床文献データを用いて実施したＰＫ／ＰＤモデル化に基づき、臨床的に有効なＧ９３３の用量は、３００〜２０００μｇ／日の範囲であることが予測された。従って、５、１０、３０、１００、３００、６００、１２００、及び２０００μｇＧ９３３の増加用量を選択した。用量漸増に進む前に、各コホートについての安全性データを評価した。安全性をさらに高めるために、提案された用量範囲の下限で倍増加を最大にし、最後の用量増加が２倍未満になるように段階的に減少させた。この試験で提案される最大用量レベルは、２０００μｇであった。サルのＡＵＣデータに基づいて提案される２０００μｇの最大ヒト用量の安全裕度は、０．８であった。
【０１９３】
被検者は、試験の間、１用量のＧ９３３を投与された。全被検者について、ランダム化前の２８日以内（−２９日目〜−２日日目）にスクリーニング来院を実施した。被検者は、治験薬を受ける前日の晩（−１日目）に施設に入院し、翌朝の投薬前に、資格基準の反復評価、４時間にわたる心電図遠隔モニタリングの実施、身体能力レベルの標準化が実施できるようにした。最小８時間にわたり一晩絶食した後、１日目に、ベースライン安全評価及び血液サンプルを採取してから、単一皮下（ＳＣ）用量のＧ９３３又はプラセボいずれかを被検者に投与した。被検者は、１日目及び２日目を通して、定時評価及び安全性モニタリング（連続的遠隔測定及び断続的なデジタル心電図［ＥＣＧ］による心臓モニタリングを含む）のために試験施設に滞在し、退院まで収容された。被検者は、安全性評価が実施され、血液サンプルが採取されてから３日目の朝に施設から退院した。被検者は、４日目、７日目、及び２８日目に、外来患者として施設に再来院した。
【０１９４】
スクリーニングの後、各被検者の試験期間は、約２９日であり、これには、入院患者評価期間と外来患者の追跡調査期間が含まれた。
【０１９５】
薬力学的評価のために、１日目に、グルコース及びインスリンレベルの測定のために血液サンプルを各食事（朝食、昼食、及び夕食）前、並びに各食事の開始から１及び２時間（±１５分）後に採取した。１日目の各食事の開始を記録し、各食事は、３０分以内に消費するようにした。
【０１９６】
免疫学的評価のために、１日目、投与から約１週間後、投与から約１か月後に抗薬物抗体（ＡＤＡ）のサンプリングを行った。
【０１９７】
薬物動態（ＰＫ）評価の場合、サンプリング時間は、投与前、並びに投与から１、２、４、６、８、１０、１２、１６、２４、３６、４８、及び７２時間後（投与から最初の２時間については±１５分、４８時間までの残りの時点については±３０分）であった。１日目には、各食事（朝食、昼食、及び夕食）前、並びに各食事の開始から１及び２時間（±１５分）後にＰＫサンプルも採取するようにした。
【０１９８】
（Ｃ）結果
用量漸増は、プロトコルに従って計画した通り、５〜３００μｇまで実施したが、有意な嘔吐の事象により立証されるように、３００μｇは認容されなかったため、最終コホートについては用量を１５０μｇまで漸減した。実際の試験のフローチャートを図９に付与し、被検者の素因を図１０に示す。
【０１９９】
５μｇのＧ９３３については、３人の被検者のみが少なくとも１つの血漿中定量可能なレベルを示したことから、ＰＫパラメータを得ることができなかった。５及び１０μｇのＧ９３３群の全被検者において、２〜４．５時間から１６〜２４時間までＧ９３３の血漿中濃度が測定可能であった。Ｇ９３３の血漿中濃度は、１００及び３００μｇのＧ９３３群の全被検者において、４８時間まで測定可能であった。いずれの被検者も、投与から７２時間後のＧ９３３の血漿中濃度は定量下限に満たなかった。
【０２００】
全Ｇ９３３用量について平均濃度−時間プロフィールが、ピーク後に明らかな単一指数関数的降下を示し、ピークから投与後４８時間までに濃度の非常に急速な減少が起こった。
【０２０１】
単一用量血漿Ｇ９３３ＰＫパラメータ推定値を被検者及び処置別に列記し、表１９に処置別にまとめる。
【０２０２】
【表２４】
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【０２０３】
Ｇ９３３は、用量５〜１５０μｇのＧ９３３の単回投与後最大濃度までの平均時間（ｔｍａｘ）７．０〜９．０時間で、最高用量３００μｇでは４．５時間の平均ｔｍａｘで吸収された。
【０２０４】
７２時間のサンプリング期間にわたる視覚検査に基づく少なくとも３つのデータポイントを用いて、Ｇ９３３の見掛け排出半減期（ｔ１／２）を決定した。５μｇ用量群の被検者においてＴ１／２は、血漿中濃度が低すぎたため、評価することができなかった。％ＡＵＣｅｘが２０％を超えた他の用量群でも、ｔ１／２及び結果としてＡＵＣ０−∞は記録されなかった。幾何平均ｔ１／２値は、約１０〜１２時間であった。
【０２０５】
変動係数（ＣＶ）により表される最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）及びＡＵＣ０−∞の被検者間変動は、いずれのパラメータについても中度（３〜３７％）であった。
【０２０６】
ベースライン時又はベースライン後にＡＤＡ陽性の被検者はいなかった。
【０２０７】
試験期間を通して、血圧、脈拍、食物摂取、及び有害事象をモニターしたが、それを表２０にまとめる。
【０２０８】
全ての治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、グレード１（軽度）又はグレード２（中度）の重症度であった。それらを以下の表２１にまとめる。
【０２０９】
【表２５】
2019510014.tif 000028
【０２１０】
【表２６】
2019510014.tif 000029
【０２１１】
【表２７】
2019510014.tif 000030
【０２１２】
全体として、Ｇ９３３は、高用量では、嘔吐や脈拍数及び血圧の上昇が観察されたものの、良好な耐容性を示した。事前に指定された探索的エンドポイントは、プラセボと比較して、全ての用量のＧＰ９３３で処置した被検者における１日食物摂取総量の低減を示唆している。
【０２１３】
投与後２．５〜１４時間の間隔で、食事時間頃の個別の血糖及びインスリン測定値並びに中央血漿グルコース及びインスリン血漿レベルをそれぞれ図１１及び１２に示す。グルコース低減効果は、全ての用量のＧ９３３で処置した被検者の血漿血糖値に認められた。この作用は、最初の食事時間頃に明瞭である。同様に、インスリン血漿レベルも、最初の食事時間と合致して、特に１００μｇ以上の用量で、用量応答を示した。
【０２１４】
最も頻繁なＴＥＡＥ（発生率＞被検者の１０％）は、嘔吐、吐気、めまい、及び頭痛であった。嘔吐のＴＥＡＥは、最も高いＧ９３３用量（１００、１５０、及び３００μｇ）にだけ起こった。嘔吐を経験した１０人の被検者について計４０回の嘔吐エピソードがあった。３０回のエピソードは、３００μｇ用量で５人の被検者から、９回のエピソードは、１５０μｇ用量で４人の被検者から、また１回のエピソードは、１００μｇ用量で１人の被検者からであった。
【０２１５】
１日に、又は食事の調節にもかかわらず連続２日にわたり３件以上の嘔吐エピソードとして定義される有意な嘔吐は、１５０μｇのＧ９３３群中６人の被検者のうち２人（３３．３％）及び３００μｇのＧ９３３群中６人の被検者のうち５人（８３．３％）について報告された。３００μｇ用量で観察された有意な嘔吐の事象のために、Ｇ９３３の用量は、最終コホートについて１５０μｇまで漸減させた。
【０２１６】
１５０μｇまでの用量で、Ｇ９３３の耐容性は、吐気、嘔吐、頻脈及び血圧に関して許容可能であった。Ｇ９３３の３００μｇの用量では、収縮期血圧及び脈拍数の有意な上昇があったため、許容できないレベルの嘔吐が見られた。様々な市販のＧＬＰ−１アゴニスト全体で、特に、吐気及び嘔吐を有する健常なボランティアにおいて、単一用量の後に有意な脈拍数上昇が認められた。Ｇ９３３の胃腸管作用（嘔吐）が、心血管作用を一切起こすことなく、１５０μｇの単一用量で見られたことを考慮すれば、治療域が存在し、Ｇ９３３は、心血管リスクプロフィールにマイナスの影響を与えることなく、血糖コントロールを改善し、且つ減量を促進すると予想される用量で、２型糖尿病を有する被検者に安全に投与することができる。Ｇ９３３は、この単一用量健常ボランティア試験における安全性及び耐容性を満たした。
【０２１７】
実施例５：複数用量漸増試験パートＩ
（Ａ）被検者
約７５人の比較的良好にコントロールされた２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）を有する過剰体重又は肥満の被検者が、本試験への参加のために登録している。登録被検者は、以下の選択及び除外基準を満たす。
【０２１８】
選択基準：
・スクリーニングの時点で年齢１８〜６５歳の男性又は女性；
・ボディマスインデックス２７〜４０ｋｇ／ｍ２（両端の値を含む）；
・Ｔ２ＤＭの診断及びメトホルミン単剤療法で管理される血糖コントロール、ここで、スクリーニング前の３ヵ月間に有意な用量変化（減少若しくは増加≧５００ｍｇ／日）が起こっておらず：（ａ）スクリーニングヘモグロビンＡ１Ｃ（糖化ヘモグロビン；ＨｂＡ１ｃ）値は、６．５％〜８．５％、又は任意選択で７．０％〜８．５％の標的範囲内にあるべきであり；（ｂ）メトホルミン単剤療法に加えてジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ  ＩＶ）阻害剤を処方された被検者は、スクリーニング前４週間のＤＰＰ  ＩＶ阻害剤ウォッシュアウト期間の後に、本試験に参加する資格を有する場合があり；（ｃ）メトホルミン単剤療法に加えてスルホニル尿素の許可用量の５０％未満を処方された被検者は、４週間のスルホニル尿素ウォッシュアウト期間の後に、本試験に参加する資格を有する場合があり；並びに（ｄ）メトホルミン単剤療法に加えてナトリウム−グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤を処方された被検者は、４週間のＳＧＬＴ２阻害剤ウォッシュアウト期間の後、本試験に参加する資格を有する場合がある；
・複数回の挿管に適した静脈アクセス
・コホート４被検者は、スクリーニング前の少なくとも４週間にわたって≧１０ｍｇ１日用量のスタチンを服用しなければならない；並びに
・コホート４被検者は、スクリーニング期間中プラセボの初期自己注射後、毎日皮下（ＳＣ）注射を自己投与する意思があるか、自己投与することができなければならない。
【０２１９】
除外基準：
・治験薬の評価又は被検者の安全性若しくは試験結果の解釈を妨げ得るあらゆる状態。具体的な例として、以下のものがある：（ａ）急性若しくは慢性膵炎の病歴、又はスクリーニング時の実験基準範囲の正常値上限（ＵＬＮ）の２倍を超える膵アミラーゼ若しくはリパーゼ、（ｂ）治療を必要とする胃不全麻痺の病歴、（ｃ）安全性及び耐容性データの解釈に影響を及ぼす可能性がある、上部ＧＩ管に影響する手術の病歴、（ｄ）胆嚢摘出により処置されていない急性胆嚢炎のエピソードを招いた胆石症、又は既知胆道疾患の病歴、並びに（ｅ）スクリーニング時の甲状腺Ｃ細胞肥厚を示唆する血清カルシトニン（カルシトニンレベル＞５０ｎｇ／Ｌ）、甲状腺髄様癌、又は多発性内分泌腺腫症の病歴若しくは家族歴；
・ＧＩ、腎、若しくは肝疾患（ジルベール症候群を除く）、又は薬剤の吸収、分布、代謝、若しくは排泄を妨げることがわかっているその他のいずれかの状態の病歴若しくは存在；
・癌の病歴（任意選択で、過去１０年以内）、但し、非黒色腫皮膚癌を除く；
・糖尿病性足部潰瘍の病歴又は存在；
・１日目投与前４週間以内のあらゆる臨床的に重要な病（既知糖尿病を有する被検者についてはＴ２ＤＭを除く）、医学的／外科的処置、又は外傷；
・インスリン減少症又は血糖コントロール不良（例えば、重度の渇き、夜間頻尿、多尿症、多渇症、若しくは減量）；
・空腹時血糖≧２００ｍｇ／ｄＬ（１１．１１ｍｍｏｌ／Ｌ）；
・スクリーニング時のＢ型肝炎表面抗原又はＣ型肝炎ウイルス抗体血清学的検査陽性；
・スクリーニング時のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）テスト陽性、又は病歴若しくは被検者の口頭報告によって決定される、抗レトロウイルス薬剤を服用する被験者；
・スクリーニング時のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）≧２．５×ＵＬＮ；
・スクリーニング時のアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）≧２．５×ＵＬＮ；
・スクリーニング時の総ビリルビン≧２×ＵＬＮ；
・スクリーニング時に正常範囲の下限を下回るヘモグロビン；
・スクリーニング時の好中球＜１．５×１０９／Ｌ；
・スクリーニング時に正常範囲を超える甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル；
・糸球体濾過量（ＧＦＲ）≦６０ｍｌ／分／１．７３ｍ２として定義される腎機能障害（ＧＦＲは、Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅに従って推定される）；
・持続性（被検者の担当医師による過去２回以上の記録として定義される）顕性アルブミン尿（＞３００ｍｇ／Ｌ）；
・重度の晩期糖尿病性合併症（うっ血性心不全若しくは末梢動脈疾患の症状を伴う大血管症、神経障害、胃不全麻痺、網膜症、腎症の症状を伴う細小血管症）；
・スクリーニング期間中の心伝導障害（例えば、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、洞不全症候群）；
・以下：（ａ）＜６０歳の場合、収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ若しくは≧１４０ｍｍＨｇ、≧６０歳の場合、収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ若しくは≧１５０ｍｍＨｇ、（ｂ）拡張期血圧＜５０ｍｍＨｇ若しくは≧９０ｍｍＨｇ、又は（ｃ）ＨＲ＜４５若しくは＞８５拍／分のいずれかにより定義される、仰臥位安静１０分後の異常なバイタルサイン；
・安静時ＥＣＧの律動、伝導若しくは形態のあらゆる臨床的に重要な異常、並びに、異常ＳＴ−Ｔ波形態学、又は左心室肥大をはじめとする、ＱＴｃ間隔変化の解釈の妨げとなり得る１２誘導ＥＣＧにおけるあらゆる異常；
・延長ＱＴｃＦ＞４５０ミリ秒（両性について）若しくは短縮ＱＴｃＦ＜３４０ミリ秒、又はＱＴ延長症候群の家族歴；
・ＰＲ（ＰＱ）間隔短縮＜１２０ミリ秒（ＰＲ＞１２０ミリ秒であるが、心室粗動のエビデンスがなければ、ＰＲ＞１１０ミリ秒も許容される）；
・ＰＲ（ＰＱ）間隔延長（＞２４０ミリ秒）、間欠性２度若しくは３度ＡＶブロック、又はＡＶ解離；
・持続性又は間欠性脚ブロックをはじめとする、ＱＲＳ持続時間＞１２０ミリ秒；
・埋込み型心臓除細動器若しくは長期ペースメーカ、並びに症状性心室及び／若しくは心房性頻拍；
・Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ＳｏｃｉｅｔｙクラスＩＩより高度に分類される不安定狭心症若しくは安定狭心症、又は心筋梗塞若しくは発作；
・心不全を原因とする入院又は心不全の診断の病歴；
・過去３年以内の薬物乱用の既知又は疑われる病歴；
・過去３年以内のアルコール乱用又はアルコールの過剰摂取の病歴；
・スクリーニング若しくは試験施設への入院時の乱用薬物のスクリーンで陽性か、又は治験薬の投与前の試験施設入院時のアルコールについてのスクリーンで陽性。慢性不安又は睡眠障害のためにベンゾジアゼピンを使用する被検者は、試験への参加が許可される場合もある；
・重度のアレルギー／過敏症の病歴又は進行中の臨床的に重要なアレルギー／過敏症；
・スクリーニング前の２ヵ月間の全血若しくは赤血球の献血、又はあらゆる血液喪失＞５００ｍＬ；
・別の新しい化学実体（市販のために承認されていない化合物として定義される）の摂取、又は本試験における治験薬の最初の投与前の少なくとも３０日若しくは５半減期（どちらか長い方）以内に薬剤治療を含むいずれか他の臨床試験への参加。除外の期間は、最終投与、又は最後の来院から治験薬の３０日若しくは５半減期後（どちらか長い方）に開始するものとする。同意し、スクリーニングを受けたが、本試験に又は以前の第１相試験にランダム化されていない被検者は、除外されない； 
・あらゆる種類の別の試験への同時参加；
・次の医療製品のいずれかの使用：（ａ）ＧＬＰ−１アゴニストの同時若しくは以前の使用、（ｂ）スクリーニング前２８日以内の全身性コルチコステロイドの使用、（ｃ）ＱＴｃ間隔を延長することがわかっている化合物の使用、又は（ｄ）１日目投与前１週間以内の、体重若しくは食欲のコントロールのために許可されたいずれかの植物性生薬若しくは医療製品の使用；
・公的若しくは司法命令により、被検者が、施設に送致されるような精神疾患；
・乳酸アシドーシス又はケトアシドーシスの病歴
【０２２０】
（Ｂ）試験デザイン
第１／２相、ランダム化、二重盲検式、複数用量漸増試験を２つのパート（Ａ及びＢ）で実施した。試験のフローチャートを図１３に示す。パートＡでは、メトホルミン療法を維持するＴ２ＤＭ被検者において、約１２日の期間にわたりＧ９３３（ＭＥＤＩ０３８２）の用量漸増レジメン、並びに用量漸増後の最大有効用量を確立し、これを長期投与期間（パートＢ）にわたり使用して、体重及び血糖コントロールに対するＧ９３３の効果を立証する。
【０２２１】
パートＡは、３つのコホートから成る。コホート１は、７日間にわたって毎日投与される安定用量（例えば、１００μｇ）の治験薬（９人の被検者；Ｇ９３３が６人、プラセボが３人）から構成される。コホート２は、４日間の初期用量（例えば、１００μｇ）の治験薬、及び７日間の漸増ステップ（漸増用量１；例えば、１５０μｇ）（９人の被検者；Ｇ９３３が６人、プラセボが３人）から構成され、コホート３は、４日間の初期用量（例えば、１００μｇ）の治験薬、４日間の漸増ステップ（漸増用量１；例えば、１５０μｇ）、及び７日間の第２漸増ステップ（漸増用量２；例えば、２００μｇ）（９人の被検者；Ｇ９３３が６人、プラセボが３人）で投与される。
【０２２２】
パートＢは、１コホートから成る。このコホート（コホート４）の被検者は、４日間の初期用量（例えば、１００μｇ）の治験薬、４日間の漸増ステップ（漸増用量１；例えば、１５０μｇ）、４日間の第２漸増ステップ（漸増用量２；例えば、２００μｇ）、これに続いて、在宅で２８日間の漸増用量２（例えば、２００μｇ）（４８人の被検者；Ｇ９３３が２４人、プラセボが２４人）から構成される。
【０２２３】
初期用量は、１００μｇである。漸増用量１及び２は３００μｇ以下である。各被検者の試験期間は、コホートにより異なり、入院患者複数用量漸増（ＭＡＤ）又は漸増評価期間（２日目に開始し、コホート１は、８日目、コホート２は、１２日目、コホート３は、１６日目、及びコホート４は、１３日目に終了）と、外来患者追跡調査期間とから構成される。さらに、コホート４についてのみ、第２入院患者漸増ステップ後で、来院の終了前に、２８日間の在宅での治験薬自己投与（毎週の来院を含む）が含まれる。
【０２２４】
被検者は、治験薬を受ける前に２晩入院し、翌朝の投薬前に、資格基準の反復評価及びベースライン混合食試験（ＭＭＴ）を実施し、身体能力のレベルを標準化する。最小８時間にわたる一晩絶食後の１日目に、安全性、効力、薬物動態（ＰＫ）、薬物力学（ＰＤ）、及び抗薬物抗体（ＡＤＡ）実験室テストのためにベースライン血液サンプルを採取する。さらに、１２誘導ＥＣＧを記録し、単一ＳＣ用量のＧ９３３又はプラセボいずれかを被検者に投与した。
【０２２５】
被検者は、１日中及び処置期間を通して、ＥＣＧ、遠隔測定、バイタルサインのモニタリング、及び潜在的反応についての注射部位の評価をはじめとする、観察及び安全性テストのために施設に滞在する。加えて、コホート４の場合、携帯型２４時間血圧モニタリング（ＡＢＰＭ）を実施する。
【０２２６】
１日目と、全コホートについて達成された最も高い用量レベルの最終日に混合食試験（ＭＭＴ）処置を実施する。追加時点は、漸増用量１の第１日（コホート２）、漸増用量２の第１日（コホート３）、漸増入院期間からの退院日（漸増用量２の第５日；コホート４）、及び２８日の在宅自己投与期間中の毎週の来院（コホート４）を含む。ＭＭＴのために、被検者は、５分以内に標準食（Ｅｎｓｕｒｅ  Ｐｌｕｓ（登録商標））を消費し、標準食の消費直前及び２４０分後に、グルコース及びグルコース代謝に関するパラメータの測定のために、定時の連続血液サンプルを採取する。入院期間中、朝食の１５分前及び２時間後、正午、並びに夕食、及び就寝前に、指先の血糖サンプルを収集する。
【０２２７】
コホート４被検者は、最終日エンドポイントを収集するために、在宅自己投与期間の終わりに一晩滞在するために再入院する。
【０２２８】
第１用量の前、入院投与期間中（及びコホート４の外来期間中）、施設からの退院時、並びに７日及び１４日追跡調査来院時を含む（しかし、これらに限定されない）複数の時点で、体重を測定する。
【０２２９】
Ｇ９３３の薬物動態サンプルを、投与前及び投与後、並びにＧ９３３の最後の投与から４８時間後まで、コホートによって様々な時点で取得する。メトホルミン濃度のためのサンプルは、Ｇ９３３の投与前に採取する。抗薬物抗体サンプルは、投与前と、最後の投与から最大２８時間後までの様々な時点で取得する。
【０２３０】
被検者は、本試験で最後の用量を投与された翌日、施設から退院する。治験薬の最後の投与から約２８日後に最終安全性評価のために追跡調査来院を実施する。
【０２３１】
（Ｃ）効力評価
プラセボと比較して、Ｇ９３３の複数用量後の血糖コントロール及び体重に対する影響を評価するために、コホート４におけるＭＭＴグルコースＡＵＣ（ＭＭＴ後最大２４０分）の変化率及びベースライン（−１日目）から処置終了までの体重の変化を、共分散の分析を用いて、ベースライン測定値及び処置群について調節することにより、Ｇ９３３群とプラセボ群の間で比較する。処置終了時の測定値がない場合には、入手可能な最後の測定値で代用する。比較は、０．１の両側有意水準で実施する。プラセボ群と比較してＧ９３３処置群における体重減少（例えば、４週間の１日１回反復投与で１．３〜２．０ｋｇ）は、例えば、１００〜３００μｇの用量のＧ９３３が、減量に有効であることを立証するものである。
【０２３２】
コホート４において、ヘモグロビンＡ１ｃ（糖化ヘモグロビンＨＡ１ｃ）及びフルクトサミンのベースライン（−２日目）からの変化、並びにＭＭＴ後２４時間のグルコースＡＵＣのベースライン（−１日目）からの変化率を体重の評価と同様に分析した。２４時間グルコースＡＵＣ分析は、ＭＭＴ前／後のグルコース代謝パネルからのグルコース測定値、並びに血清化学血糖値及びＰＤグルコースサンプルを含み、ここで、これらの結果は、特異な時点からのものである。プラセボ群と比較してＧ９３３処置群における血糖コントロールの増大（例えば、混合食試験（ＭＭＴ）後の濃度−時間曲線下グルコース面積（ＡＵＣ）の少なくとも２０％の減少並びに／又はヘモグロビンＡ１ｃ及びフルクトサミンにより測定される通り）は、例えば、１００〜３００μｇの用量のＧ９３３が、血糖コントロールに有効であることを立証するものである。
【０２３３】
（Ｄ）結果
（ｉ）パートＡ：コホート１〜３
Ｇ９３３は、最大１５日にわたって、１日１回（ＱＤ）最大２００μｇの用量で首尾よく投与された。
【０２３４】
Ｇ９３３によって正常レベルに対して有意なグルコース低減が、空腹時血漿グルコース及び混合食試験からの食後血糖の両方で観察された。混合食試験では、コホート１〜３の全てにおいて、曲線下グルコース面積（ＡＵＣ）が＞４０％減少した（図１４）。コホート１（７日目）及びコホート３（９及び１５日目）におけるベースライン空腹時血糖値の変化を図１５に示す。
【０２３５】
最大２ｋｇの実質的な減量への用量依存的傾向が認められた。結果を図１６に示すが、これは、Ｇ９３３が、２型糖尿病を有する過剰体重／肥満患者の体重を実質的に低減したことを立証するものである。コホート３では、２ｋｇ超の差が観察された。
【０２３６】
Ｇ９３３は、用量漸増により、２００μｇまで良好な耐容性を示した。反復投与後の薬物動態を図１７に示す。ＰＫは線形であり、予測可能であった。半減期は、約１１時間であった。複数回の１日投与後にはわずかな蓄積があるか、又は全くないかであり、４日目から７日目まで定常状態が達成された。試験した用量範囲内での最大血漿中濃度は、４．２１ｎｇ／ｍＬ及び１８．９０ｎｇ／ｍＬであった。平均１日曝露は、２．８９ｎｇ／ｍＬ〜１２．４５ｎｇ／ｍＬの範囲であった。
【０２３７】
ただ１つのサンプルが、ベースライン後、抗Ｇ９３３抗体に対して陽性であることが確認された。
【０２３８】
有害事象は、管理可能であり、ＧＬＰ−１モノアゴニストについて予想されるものと一致していた。
【０２３９】
報告された大部分の吐気及び嘔吐の事象は、処置の開始時、すなわち、１００μｇ用量レベルで起こった。嘔吐は、Ｇ９３３を受けた患者の２６％（ｎ＝５）に起こり、プラセボでは起こらなかった。コホート１では、嘔吐事象は報告されなかった。コホート２では、２人の活性患者において３回の嘔吐事象が報告された。いずれの症例も、１００μｇを投与する１日目に起き、またいずれの症例も、介入なしで解消された。コホート３では、３人の活性患者において１３回の嘔吐事象が報告された。２人の被検者は、１日目に嘔吐し、これらの症例は介入なしで解消された。１人の被検者は、１日目と５日目に６回嘔吐した。３日目に静脈内食塩水を投与し、この被検者は、５日目に試験を中止した。
【０２４０】
４人（４４．４％）のプラセボ患者及び７人（３６．８％）のＧ９３３処置患者において、心臓に有害事象が報告された。その頻度は、全ての活性コホートで、用量と共に増加しないことがわかった。約１０ｂｐｍの脈拍数増加が、Ｇ９３３による処置後の各コホートにおいて観察された。収縮期血圧及び拡張期血圧に有意な変化は見られなかったが、Ｇ９３３又はプラセボにずれかを受けた全てのコホートに血圧降下の傾向が認められた。
【０２４１】
４人（４４．４％）のプラセボ患者及び１３人（６８．４％）のＧ９３３処置患者において胃腸（ＧＩ）有害事象が報告された。ＧＩ有害事象は、コホート１、２、及び３のそれぞれ３、４、及び６人の患者に及ぼされた。最も主要なＧＩ有害事象は吐気であり、これは、６人（３１．６％）のＧ９３３処置患者に報告された。
【０２４２】
コホート３の６人（８５．７％）のＧ９３３処置患者に食欲減退が報告された。
【０２４３】
１件の重篤な有害事象（ＳＡＥ）：マイコプラズマ肺炎が報告された。
【０２４４】
要約すると、Ｇ９３３は、良好な耐容性を示し、有意な食後血糖の減少をもたらし、臨床的に有意な用量依存的減量を示した。
【０２４５】
（ｉｉ）パートＢ：コホート４
Ｇ９３３は、４１日の投与期間にわたって、血糖及び減量を有効に低下させた。ベースライン（１日目）から４１日目までの曲線下グルコース面積（ＡＵＣ）の平均減少を図１８に示す。この時間の経過で、Ｇ９３３は、３８．５％の減少（９０％Ｃ．Ｉ．−４７．１、−２９．０）をもたらしたのに対し、プラセボは、１６．１％の減少（９０％Ｃ．Ｉ．−２４．９、−８．０）しかもたらさなかった（ｐ値：０．００１）。Ｇ９３３は、ＨｂＡ１ｃにより測定されるように、血糖コントロールも改善した（図１９を参照）。４１日の処置の後、ＨｂＡ１ｃは、７．２％のベースライン平均から４２日目の６．３％の平均へと、０．９２パーセント減少した。これに対し、プラセボは、７．３％のベースライン平均から６．７％の平均へと、ＨｂＡ１ｃを０．５８パーセント低減したに過ぎなかった。
【０２４６】
体重に対するＧ９３３の効果を図２０及び２１に示す。図２０は、Ｇ９３３による４１日の処置の後、患者が、約３．８３ｋｇ減量したのに対し、プラセボを受けた患者は、約１．７１ｋｇしか減量しなかったことを示す（Ｇ９３３とプラセボの差２．１２ｋｇ；ｐ＜０．００１）。さらに、Ｇ９３３で処置した４４％の患者が、少なくとも５ｋｇ減量したのに対し、プラセボを受けた患者で、少なくとも５ｋｇ減量したのは、わずか８％であった。図２１は、Ｇ９３３による４１日の処置の後、患者が、その体重の約４．１８％を減量したのに対し、プラセボを受けた患者は、その体重の約１．７１％しか減量しなかったことを示す（Ｇ９３３とプラセボの差２．４７％；ｐ＜０．００１）。加えて、Ｇ９３３で処置した患者の８４％が、その体重の少なくとも２％を減量したのに対し、プラセボを受けた患者で、その体重の少なくとも２％減量したのは、４２％に過ぎなかった。
【０２４７】
Ｇ９３３による処置は、肝臓脂肪の減少も達成した。（図２２を参照）。プラセボに対するＧ９３３によるベースライン（９５％ＣＩ）からの肝臓脂肪の平均相対減少率は、２０．５％（７．２、３３．９）であった（ｐ＝０．００４）。Ｇ９３３で処置した患者には、プラセボと比較して、肝体積の有意な減少も観察された（０．１４Ｌ（−０．２４、−０．０３）、ｐ＝０．０１）。
【０２４８】
全体として、Ｇ９３３及びプラセボで処置した患者において有害作用は均衡を保った。有害作用を以下の表にまとめる。死亡は起こらなかった。
【０２４９】
【表２８】
2019510014.tif 000031
【０２５０】
計１７人の患者が、吐気を報告した：プラセボを受けた４人（１５．４％）と、Ｇ９３３で処置した１３人（５２．０％）。計８人の患者が、嘔吐した：プラセボを受けた０人と、Ｇ９３３で処置した８人（３２．０％）。吐気及び嘔吐は、早期の投与ほど頻度が高かった。（図２３を参照）。
【０２５１】
心臓及び血流力学パラメータに有害な変化は観察されなかった。収縮期又は拡張期血圧の上昇も観察されなかった。１３日目に１２．８拍／分（ｂｐｍ）の脈拍数の増加が見られたが、４１日目までに６．９ｂｐｍに下降した。
【０２５２】
全体として、Ｇ９３３は、４１日期間の血糖低下及び減量の両方に関して有効であった。混合食試験に基づくグルコース代謝は正常化し、これは、ＨｂＡ１ｃの有意な減少を伴った。意外なことに、リラグルチド（３ｍｇ）による処置について予想されたものよりも、高い減量の推定値が観測された。
【０２５３】
Ｇ９３３は、最大４１日まで、１００μｇから２００μｇまでの漸増用量に対して良好な耐容性を示し、２００μｇによる処置から１週間以内の定常状態達成と、複数回投与後の最小蓄積が確認された。２００μｇ用量レベルで観察された最大血漿中濃度は、１．９８ｎｇ／ｍＬ〜３４．３０ｎｇ／ｍＬであった。
【０２５４】
実施例６：複数用量漸増試験パートＩＩ
（Ａ）被検者
約３２人の比較的良好にコントロールされた２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）を有する過剰体重又は肥満の被検者が、本試験への参加のために登録している。登録被検者は、下記の例外を除いて、実施例５に記載した選択及び除外基準を満たす者である。
【０２５５】
選択基準：
・コホート５及び６の被検者は、スクリーニング期間中プラセボ（又は通常の食塩水）の初期自己注射後、毎日皮下（ＳＣ）注射を自己投与する意思があり、且つ自己投与することができなければならない。
【０２５６】
除外基準：
・以下：（ａ）収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ若しくは≧１４０ｍｍＨｇ；（ｂ）拡張期血圧＜５０ｍｍＨｇ若しくは≧９０ｍｍＨｇ；又は（ｃ）心拍数＜４５若しくは＞８５拍／分のいずれかにより定義される、仰臥位安静１０分後の異常なバイタルサイン；
・Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ＳｏｃｉｅｔｙクラスＩＩより高度に分類される不安定狭心症若しくは安定狭心症、又は心筋梗塞若しくは発作のいずれかの以前の病歴、又は過去１２ヵ月以内の一過性脳虚血発作の病歴。
【０２５７】
（Ｂ）試験デザイン
ランダム化、二重盲検式、複数用量漸増試験を実施した。本試験のフローチャートを図２４に示す。この試験は、２つのコホート：コホート５及びコホート６から成る。コホート５は、１６人の被検者（活性１２、プラセボ４）から成り、５日間にわたる１００μｇのＧ９３３（ＭＥＤＩ０３８２）投与の開始後、１５０μｇを５日間、２００μｇを５日間、そして３００μｇを７日間投与する。コホート６は、更なる１６人の被検者（活性１２、プラセボ４）から成り、５日間にわたる１００μｇのＧ９３３投与の開始後、２００μｇを５日間、そして３００μｇを７日間投与する。コホート５及びコホート６は、計約３２人の被検者を有し、並行して試験を実施する。
【０２５８】
試験は、コホート５及び６の両方について、３日目に開始する入院患者漸増評価期間と、外来患者追跡調査期間から構成される。最初の４日と、３００μｇを投与する最後の日は入院する。
【０２５９】
コホート１〜４について実施例５に記載したように、被検者は診療施設に入院する。しかし、彼らは、３日目に終了する初期入院期間を有し、その後、Ｇ９３３の在宅自己投与期間を行うが、３００μｇ用量の開始まで、用量漸増ステップ毎に診療施設に来院する。被検者は、３００μｇ用量の開始のための第２の入院期間を有し、これは第４日で終了し、その後、この用量での在宅自己投与が続く。
【０２６０】
１日目と、達成される最も高い用量レベルの最後の日に、混合食試験（ＭＭＴ）処置を実施する。追加時点は、３００μｇ用量を開始する前（コホート５は１６日目で、コホート６は１１日目）と、投与の終了時（コホート５は２２日目で、コホート６は１７日目）を含む。ＭＭＴは、実施例５に記載の通りに実施する。
【０２６１】
第１用量の前、入院投与期間中、外来患者期間中、施設からの退院時、７日〜１４日の追跡調査来院時、並びに来院の２８日終了時を含む（しかし、これらに限定されない）複数の時点で、体重を測定する。
【０２６２】
Ｇ９３３の薬物動態サンプルを、投与前及び投与後、並びにＧ９３３の最後の投与から４８時間後まで、コホートによって様々な時点で取得する。メトホルミン濃度のためのサンプルは、Ｇ９３３の投与前に採取する。抗薬物抗体サンプルは、投与前と、最後の投与から最大２８日後までの様々な時点で取得する。
【０２６３】
被検者は、本試験で最終用量を投与された後、施設から退院する。治験薬の最後の投与から約２８日後に最終安全性評価のために追跡調査来院を実施する。
【０２６４】
（Ｃ）結果
Ｇ９３３は、コホート５及び６において、グルコースを有効に低下させた。コホート５及び６で観察されたグルコースＡＵＣレベルをそれぞれ図２５及び２６に示す。コホート５では、Ｇ９３３による処置は、４１．７％のグルコースＡＵＣ減少（９０％Ｃ．Ｉ．−４９．９、−３３．５）をもたらしたのに対し、プラセボによる処置は、８．０％のグルコース低減（９０％Ｃ．Ｉ．−１９．６、３．６）しかもたらさなかった（ｐ＜０．００１）。コホート６において、Ｇ９３３による処置は、３５．８％のグルコースＡＵＣ減少（９０％Ｃ．Ｉ．−４３．３、−２８．３）をもたらしたのに対し、プラセボによる処置は、−６．９％のグルコース低減（９０％Ｃ．Ｉ．−２０．２、６．３）しかもたらさなかった（ｐ＝０．００２）。グルコースＡＵＣに対する効果は、以前のコホートと同等であり、すなわち、約４０％の減少を標準化した。全コホートにおけるベースライングルコースＡＵＣからの変化率（％）を図２７に示す。図２８に示すように、Ｇ９３３は、コホート５及び６の空腹時血糖値も有効に低下させた。
【０２６５】
Ｇ９３３は、減量においても有効であった。図２９に示すように、２２日の処置後、コホート５においてＧ９３３で処置した患者は、約３．０９ｋｇ減量したのに対し、プラセボで処置した患者は、約０．９８ｋｇしか減量しなかった（２．１１ｋｇの差）。同様に、１７日の処置後では、コホート６においてＧ９３３で処置した患者は、約２．２３ｋｇ減量したのに対し、プラセボで処置した患者は、約０．３５ｋｇしか減量しなかった（１．８８ｋｇの差）。コホート５（２．１１ｋｇ）及び６（１．８８ｋｇ）のいずれも、２２日及び１７日後に、コホート４での４１日の投与中に観察されたものと同等の減量を示した。
【０２６６】
体重及び血糖値の変化を図３０に一緒にプロットし、以下の表２２にまとめる。
【０２６７】
【表２９】
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【０２６８】
Ｇ９３３は、コホート５及び６において、良好な耐容性を示し、有害事象プロフィールは、リラグルチドなどの他の市販のＧＬＰ−１類似体と一致した。いずれのコホートにも死亡又は重篤な有害事象は観察されなかった。
【０２６９】
いずれの漸増スケジュールも、最大３００μｇ用量のＧ９３３が、吐気及び嘔吐に関して良好な耐容性であることを立証している。コホート５では、計４人の患者が、８回の吐気のエピソードを報告した：プラセボを受けた患者１人（２０％）及びＧ９３３を受けた患者３人（２７．３％）。計３人の患者が、８回の嘔吐エピソードを報告した：プラセボを受けた患者はおらず（０％）、Ｇ９３３を受けた患者３人（２７．３％）。コホート６では、計５人の患者が、６回の吐気のエピソードを報告した：プラセボを受けた患者はおらず（０％）、Ｇ９３３を受けた患者５人（４１．７％）。１人の患者が、２回嘔吐した：プラセボを受けた患者はおらず（０％）、Ｇ９３３を受けた患者１人（８．３％）。被検者が、最初の用量から４８時間後に外来患者になると、より低い割合の吐気（８／２４＝３３％）及び嘔吐（４／２４＝１６％）が観察された。
【０２７０】
携帯型血圧測定は、Ｇ９３３処置患者において、収縮期血圧／拡張期血圧（ＳＢＰ／ＤＢＰ）にベースラインからの上昇は示さず、下降への潜在的傾向を示した。コホート５では、２２日のＧ９３３の投与後、心拍数がベースラインから約７．６拍／分（ＢＰＭ）増加し、これは、以前、並びに他のＧＬＰ−１類似体及びコホート４で観察されたものと一致した。コホート６では、１７日のＧ９３３の投与後、心拍数がベースラインから約５．９拍／分（ＢＰＭ）増加した。
【０２７１】
両方の漸増計画により得られた３００μｇの最高用量で７日後のＧ９３３の血漿中濃度を図３１に示す。プロフィールは、特に定常状態に達すると、重複するが、これは、この用量レベルでの曝露が、採用した漸増計画とは独立であることを示唆している。３００μｇ用量で観察された最大血漿中濃度は、７．９ｎｇ／ｍＬ〜３０．９ｎｇ／ｍＬの範囲であった。
【０２７２】
複数用量漸増試験結果のまとめ（パートＩ及びＩＩ）
全体として、１００〜３００μｇの用量範囲で、Ｇ９３３は、約８〜１１時間の半減期を有する線形ＰＫ、毎日の反復投与後のわずかな蓄積、並びに試験した全４用量レベルで４日目〜７日目の定常状態達成を示した。これらの結果により、単一用量試験（実施例４）からの結果が確認された。３００μｇの最高用量で７日後に到達した血漿中濃度は、採用した漸増計画とは独立であった。Ｃｍａｘの被検者間変動は、より小さなコホートでは約２０〜３０％、より大きなコホート４では４０〜５０％であった。試験した用量試験範囲内で、且つ採用した漸増計画を用いた最大血漿中濃度は、１．９８ｎｇ／ｍＬ〜３４．３ｎｇ／ｍＬの範囲であり、平均１日血漿中濃度は、０．８７ｎｇ／ｍＬ〜１６．３ｎｇ／ｍＬの範囲であった。
【０２７３】
安全性及び耐容性プロフィールは、他のＧＬＰ−１模倣物と同等であり、重要なことには、Ｇ９３３は、減量及び血糖コントロールの両方をもたらした。
【０２７４】
本開示は、本開示の個別の態様の単一の例示として意図される記載の具体的実施形態、並びに本開示の範囲内で機能的に均等であるあらゆる組成物又は方法によって範囲を限定されるわけではない。実際に、本明細書において図示及び記載するもの以外に、本開示の様々な改変形態が、以上の説明及び添付の図面から、当業者には明らかになるであろう。こうした改変形態は、添付する特許請求の範囲に含まれるものとする。
【０２７５】
本明細書で述べた全ての刊行物及び特許出願は、あたかも各刊行物又は特許出願が、具体的かつ個別に参照により組み込まれると示されているのと同じ範囲まで、参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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