(57)【要約】  本発明は、一般式Ｉのキラルなカルボン酸、それらの塩及び酸誘導体を製造するため、一般式ＩＩのラセミ体カルボン酸エステルを酵素的に加水分解する、及び、場合により引き続きエステル化叉はアシル化する新規な酵素的方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式Ｉのキラルなカルボン酸、カルボキシレート塩及びカルボン酸誘導体の製造方法であって、
【化１】
2019509052.tif 000020
ここで、式中
Ｒ＝Ｈ又はメチル基
Ｚ＝ＯＨ、ＯＭ、ＯＲ’又はＰ（Ｏ）（ＯＹ）２基であり、ここで
Ｍ＝金属イオン、プロトン化アンモニア又はアミン
Ｒ’＝Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｒ、ｉ−Ｐｒ、Ｂｕ、及び
Ｙ＝Ｍｅ叉はＥｔ、であり、
下記一般式ＩＩ
【化２】
2019509052.tif 000021
のラセミ体カルボン酸エステル、
ここで、Ｚ＝ＯＲ’であり、かつＲ’の意味は上記で定義した通りである、を、酵素的に加水分解し、
所望により、一般式Ｉ、ここで、ＺはＯＲ’基を表す、の化合物を製造するために、得られた一般式Ｉの化合物、ここで、ＺはＯＨ基を表す、をエステル化し、
所望により、一般式Ｉ、ここで、ＺはＰ（Ｏ）（ＯＹ）２基を表す、の化合物を製造するために、得られたエステルをアシル化し、
更に、所望により、得られた一般式Ｉの化合物を、その塩に変換するか、又はその塩から遊離することを特徴とする上記方法。
【請求項２】
酵素的加水分解を加水分解酵素で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
加水分解酵素がリパーゼ酵素として、カンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）シュードモナス・フルオレッセンス、カンジダ・アンタークティカＡ、カンジダ・アンタークティカＢ、ブルクホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）、リゾプス・アルリツス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）、リゾムコール・ミエヘイ、（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュードモナス・セパシア・リパーゼ、又はブタ膵臓リパーゼ、子牛膵臓リパーゼ等のリパーゼ酵素を適用する請求項２に記載の方法。
【請求項４】
リパーゼ酵素として、カンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）酵素を適用する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
加水分解を溶媒の存在下で実施する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
溶媒として、エーテル類、炭化水素系溶媒及び芳香族系溶媒、例えば、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ｎ−ヘキサン、トルエンなどを適用する請求項５に記載の方法。
【請求項７】
溶媒としてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを適用する請求項６に記載の方法。
【請求項８】
酵素の量及び活性に依拠して、反応時間が２〜４８時間である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
反応を２０〜４０℃で実施する請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は下記一般式（Ｉ）
【化１】
2019509052.tif 000002
式中、
Ｒ＝Ｈ又はメチル基
Ｚ＝ＯＨ，ＯＭ，ＯＲ’又はＰ（Ｏ）（ＯＹ）２基、ここで、
Ｍ  ＝金属イオン、プロトン化アンモニア又はアミン、
Ｒ’＝Ｍｅ，Ｅｔ，Ｐｒ，ｉ−Ｐｒ，Ｂｕ，及び
Ｙ  ＝Ｍｅ又はＥｔである、
の三重結合を含有する光学活性なカルボン酸、塩、エステル、リン酸塩を製造する方法である。
【０００２】
このプロセスの間、ラセミ体カルボン酸エステルは、酵素加水分解によって光学活性カルボン酸に変換される。この光学活性カルボン酸から、光学活性エステルを製造する。次いで、光学活性エステルを光学活性リン酸塩に変換する。光学活性リン酸塩は、光学活性変性プロスタグランジン、プロスタサイクリン及びカルバサイクリン（（例えば、ベラプロスト、イロプロスト、３−オキサ−イロプロスト、イカプロスト（Ｉｃａｐｒｏｓｔ）、シカプロスト、イソシカプロスト（Ｉｓｏｃｉｃａｐｒｏｓｔ））ジフルオロ−プロスタサイクリンの側鎖の構築に利用し得る。
【０００３】
光学活性カルボン酸はまた、ＣｒｕｅｎｔａｒｅｎＡの合成におけるビルディングブロックとして使用することができ、マクロライドは抗真菌及び細胞増殖抑制効果を発現する。
【０００４】
現在の技術水準によれば、本発明に係る光学活性カルボン酸及びカルボン酸誘導体は、以下の例で実証する様に、高価な及び／又は毒性のある試薬を要する冗長なキラル合成によって製造している。
【０００５】
１.  キラルアミンとの塩形成を経由するラセミ酸から（Ｈ．Ｗａｋｉｔａ、Ｈ．Ｙｏｓｈｉｗａｒａ、Ｙ．  Ｋｉｔａｎｏ、Ｈ．Ｔｉｓｈｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ、２０００、１１（１４）、２９８１−２９８９、ＪＰ２００１０３１６２５）。
【０００６】
【化２】
2019509052.tif 000003
【０００７】
日本の研究者らは２−メチル−４−ヘキシン酸を解決した。
公知の方法の欠点は、コスト高なキラルアミンの使用と立体選択性の低さである。Ｎ−ベンジルアミン誘導体を適用すると、その収率（５０％ラセミ生成物についての計算）は１８．４及び２９．８％であり、エナンチオマー過剰もまた非常に低く、２０．８及び１３．６％であった。
９９．９％エナンチオマー純度を示す（Ｒ）−配置の酸は、キニーネで形成した塩を１０回、再結晶した後に得られた。
９９．６％エナンチオマー純度を示す（Ｓ）−配置の酸は、シンコニジンで形成した塩を９回、再結晶した後に得られた。
【０００８】
２．キラルアミンを有するジアステレオマーアミドの形成によるラセミ酸から。（Ｗ．Ｓｋｕｂａｌｌａ、Ｅ．Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇｅｒ、Ｃ．Ｓ．Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒ、Ｈ．Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ、Ｊ．Ｍｅｄ.Ｃｈｅｍ.、１９８６，２９，３１５−３１７）。
【０００９】
２−メチル−４−ヘプチン酸を三塩化リンで処理して酸塩化物に変換し、酸塩化物からジアステレオマーアミドを（−）−フェニルグリシノールで製造し、ジアステレオマーをクロマトグラフィー法で分離し、酸性ジオキサン中で加水分解した。光学活性の酸の絶対配置は、三重結合を飽和した後に得られたメチルヘプタン酸を絶対配置が既知の２−メチル−アルカン酸と比較することにより、決定した。
【００１０】
【化３】
2019509052.tif 000004
【００１１】
ジアゾメタンで処理した光学活性酸はメチルエステルを与え、次いでジエチルメチルホスホネートで光学活性ホスホネートに変換した。
この方法の欠点は、環境に有害な三塩化リンの使用である。
【００１２】
３．米国特許出願公開ＵＳ２０１４／０２７５５２６６Ａ１においても、２−メチル−４−ヘプチン酸エナンチオマーの製造のためにフェニルグリシノールエナンチオマーを使用していた。
【００１３】
４．三重結合形成を経由するキラルな２−メチル−カルボン酸の変換（Ｅ．Ｊ．Ｃｏｒｅｙ、Ｃｈ。Ｊ．Ｈｅｌａｌ；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９７、３８（４３）、７５１１−７５１４）。
【００１４】
【化４】
2019509052.tif 000005
【００１５】
この方法によれば、キラル３−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸メチルエステルを２段階で変換し、８７％の収率でヨード誘導体に、これを更に変換して６０％の収率で所望の三重結合含有誘導体、２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステルを与える。
【００１６】
５．キラル鉄錯体の使用による不斉合成（Ｇ．Ｊ．Ｂｏｄｗｅｌｌ、Ｓ．Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ、１９９１，２（１０）、１０７５−１０８２。）
【００１７】
【化５】
2019509052.tif 000006
【００１８】
キラル補助物質を、先ずメチル−基で、次いでペント−２−インイル−基でアルキル化し、補助物質を硝酸セリウムアンモニウムによる酸化で除去した。キラル酸をエチルエステルに変換した。
この方法の欠点は、高価で有毒な鉄錯体を使用する点である。
【００１９】
６．キラルなオキサゾリジン誘導体を用いる不斉合成
三重結合含有キラル酸誘導体を製造するために、キラルオキサゾリジンを最初に適用したのは、Ｊ．Ｗｅｓｔｅｒｍａｎ及び彼の共同研究者である（Ｍ．Ｈａｒｒｅ、Ｊ．Ｔｒａｂａｎｄｔ、Ｊ．Ｗｅｓｔｅｒｍａｎｎ；Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．１９８９、１０８１−１０８３）。
【００２０】
【化６】
2019509052.tif 000007
【００２１】
４−メチル−５−フェニル−オキサゾリジノンをヨード−ブチン誘導体と反応させ、次いでキラル補助基をチタンエチラートで煮沸することによって開裂させた。得られたエチルエステルからホスホネートを製造した。
この方法の欠点は、比較的低い収率（６２％）及び低い光学純度（ｄｅ＝８０％）である。
【００２２】
７．Ｖｅｒｍｅｅｒｅｎ及び彼の共同研究者は、光学活性２−メチル−４−ヘプチン酸エチルエステル（Ｒ＝Ｅｔ）（Ｍ．Ｌｅｒｍ、ＨＪ。Ｇａｉｓ、Ｋ．Ｃｈｅｎｇ、Ｃ．Ｖｅｒｍｅｅｒｅｎ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００３，１２５（３２）、９６５３−９６６７）、及び、光学活性２−メチル−４−ヘキシン酸エチルエステル（Ｒ＝Ｍｅ）を製造した。（ＧＪ  Ｋｒａｍｐ、Ｍ．Ｋｉｍ、ＨＪ。Ｇａｉｓ、Ｃ．Ｖｅｒｍｅｅｒｅｎ；Ｊ  Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００５，１２７（５０）、１７９１０−１７９２０）。その著者らはキラル補助物質としてベンジル置換オキサゾリジンを使用した。
【００２３】
【化７】
2019509052.tif 000008
【００２４】
この方法を使用すると、収率及びエナンチオマー純度が顕著に増加したが、然し、この方法の欠点は、スケールアップの困難性、極端な反応条件及びチタンエチレートの使用が困難な点にある。
【００２５】
上記の方法により、クルエンタレンＡの合成のための２−メチル−４−ヘキシン酸エチルエステルを製造した（Ａ．Ｆｕｒｓｔｎｅｒ、Ｍ．Ｂｉｎｄｌ、Ｌ．Ｊａｎ；Ａｎｇｅｗ。Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７、４６（４８）、９２７５−９２７８；Ｍ．Ｂｉｎｄｌ、Ｌ．Ｊａｎ、Ｊ．Ｈｅｒｍａｎｎ、Ｒ．Ｍｕｌｌｅｒ、Ａ．Ｆｕｒｓｔｎｅｒ、Ｅｕｒ．Ｊ．、２００９，１５（４５）、１２３１０−１２３１９）。
【００２６】
８．国際特許出願ＷＯ２０１２１７４４０７Ａ１においても、光学活性２−メチル−４−ヘキシン酸エチルエステルの製造のためにベンジルオキサゾリジンが適用され、及び、米国特許出願ＵＳ２０１４０２７５２６６Ａ１では、光学活性２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステルの製造のために、同様に、国際特許出願ＷＯ２０１４０１５２４６Ａ１、ＷＯ２０１０４０１５２４７Ａ１、ＷＯ２０１５００９９９１Ａ２には、光学活性２−メチル−４−ヘキシン酸、光学活性２−メチル−４−ヘプチン酸及びそれらのエステルの製造のために適用されている。
【００２７】
９．国際特許出願ＷＯ２０１５１７９４２７Ａ１に開示されているように、プソイドエフェドリンエナンチオマーは又、光学活性２−メチル−４−ヘキシン酸及びその誘導体の製造のためのキラル補助物質としても使用することができる。
【００２８】
本出願の方法によれば、本発明者らは、ラセミ体カルボン酸エステルの酵素加水分解により、キラルなカルボン酸、カルボン酸塩及びカルボン酸誘導体を製造した。
【００２９】
酵素的加水分解は、室温下、略中性のｐＨで穏やかな反応条件下で進行する。反応条件が穏やかであるために、この工程は化学的に敏感なカルボン酸エステルの場合にも適用することが出来、エネルギー要求が低いため、この工程は環境に優しい。
【００３０】
本発明の方法により製造された光学活性ホスホネートは、光学活性修飾プロスタグランジン、プロスタサイクリン及び／又はカルバサイクリン誘導体の合成に利用しても良い。
【００３１】
上記によれば、本発明の主題は、下記一般式Ｉのキラルなカルボン酸、カルボキシレート塩及びカルボン酸誘導体の製造方法であり、
【化８】
2019509052.tif 000009
ここで、式中
Ｒ＝Ｈ又はメチル基
Ｚ＝ＯＨ、ＯＭ、ＯＲ’又はＰ（Ｏ）（ＯＹ）２基であり、ここで
Ｍ＝金属イオン、プロトン化アンモニア又はアミン
Ｒ’＝Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｒ、ｉ−Ｐｒ、Ｂｕ、及び
Ｙ＝Ｍｅ又はＥｔ、であり、
下記一般式ＩＩ
【化９】
2019509052.tif 000010
のラセミ体カルボン酸エステル、
ここで、Ｚ＝ＯＲ’かつＲ’の意味は上記で定義した通りである、を、酵素的に加水分解し、
所望により、一般式Ｉ、ここで、ＺはＯＲ’基を意味する、の化合物を製造するために、得られた一般式Ｉの化合物、ここで、ＺはＯＨ基を表す、をエステル化し、  
所望により、一般式Ｉ、ここで、ＺはＰ（Ｏ）（ＯＹ）2 基を表す、の化合物を製造するために、得られたエステルをアシル化し、更に、
所望により、得られた一般式Ｉの化合物を、その塩に変換するか、又はその塩から遊離するという経路における上記方法である。
【００３２】
加水分解の過程において、溶媒としては、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ｎ−ヘキサン、トルエンなどのエーテル類、炭化水素系及び芳香族溶媒を適用しても良い。本発明の好ましい態様によれば、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが加水分解のための溶媒として適用される。
【００３３】
酵素の量及び活性に依存するが、反応時間は２〜４８時間である。反応温度は２０−４０℃である。
【００３４】
酵素的触媒は、変換するのが高度に立体選択的であるか、又は中間体が鋭敏であるために穏やかな反応条件を必要とする、有機化学のほぼ全分野に存在する。最も広範に使用されている酵素は、安価で商業的に手軽に入手が出来る加水分解酵素であり、その中でもエステラーゼであり、リパーゼの例としては、ＡＺリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）、ＡＫリパーゼ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ＣＡＬ−Ａ（Ｃａｎｄｉｄａ  ＡｎｔａｒｃｔｉｃａＡ）、ＣＡＬ−Ｂ（Ｃａｎｄｉｄａ  ＡｎｔａｒｃｔｉｃａＢ）、ＰＳリパーゼ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）、リゾプスアルルヒズス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）リパーゼ、リゾムコルミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ、シュードモナス  セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、ブタ膵臓リパーゼ（ＰＰＬ）、カンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンスリパーゼ（ＰＦ）、アスペルギルス・ニガーリパーゼ（ＡＮ）、子牛膵リパーゼ（ＰＰＬ）、ｉｍｍｏｂｅａｄ  １５０イモビライザー（ＣＡ）上のカンジダ・アンタークティカリパーゼＢを挙げられる。  （Ｕｗｅ  Ｔｈｅｏ  Ｂｏｒｎｓｃｈｅｕｅｒ、Ｒｏｍａｓ  Ｊｏｓｅｐｈ  Ｋａｚｌａｕｓｋａｓ：Ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｒｅｇｉｏ−ａｎｄ  Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ、２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００５，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、ＩＳＢＮ：９７８−３−５２７−３１０２９−６）。
【００３５】
市販の酵素製造物の中の例えば、以下のような多くのものを適用出来る。
・Ｌ１７５４  シグマ
カンジダ・ルゴサ由来のリパーゼ
タイプＶＩＩ、≧７００単位／ｍｇ固体
同義語：トリアシルグリセロールアシルヒドロラーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ
・カンジダ・ルゴサ由来のＩｍｍｏｂｅａｄ  １５０上に固定化したリパーゼ、
・カンジダ・アンタルクチカ由来のリパーゼ（≧１．０単位／ｍｇ、凍結乾燥、粉末、褐色、０．３単位／ｍｇ）
・リゾムコール・ミエヘイ由来のリパーゼ
≧２０，０００単位／ｇ  
同義語：Ｐａｌａｔａｓｅ（登録商標）２０，０００Ｌ
・６２３０９  シグマ
シュードモナス・セパシア由来のリパーゼ
粉末、明褐色、≧３０単位／ｍｇ
同義語：ＰＳリパーゼ、トリアシルグリセロールアシルヒドロラーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ
・７４３９４１アルドリッチ
リパーゼＡ、カンジダ・アンタークティカ、ＣＬＥＡ
≧１５００単位／ｍＬ以上
同義語：リパーゼＡ、カンジダ・アンタークティカ
・シュードモナスフルオレッセンス由来のリパーゼ
粉末、薄褐色、≧１６０単位／ｍｇ
・ｉｍｍｏｂｅａｄ上に固定化されたリパーゼＢカンジダ・アンタークティカ
【００３６】
リパーゼは、エステル結合を形成又は加水分解し、エステル結合を含む化合物を相互に変換するのに適している、すなわちトランスエステル化に適している。これらは常に触媒として反応に参加する。
【００３７】
本発明の観点から、リパーゼの最も重要な特性は、特にキラル中心がカルボニル炭素に隣接して位置する場合、それらは光学活性カルボン酸誘導体の異性体と非常に異なる速度で反応することである。この特性により、これらは光学活性化合物の分割に使用することができる。
上記の能力を次の図に示す。
【化１０】
2019509052.tif 000011
【００３８】
エステル形成とアシル化は、当業者に知られている方法により実行出来る。
【００３９】
本発明の好ましい実施形態によれば、式（１）及び（１’）のホスホン酸エステルは、それ以前の文献には記載されていない方法により製造することが出来る。
【化１１】
2019509052.tif 000012
【００４０】
この工程の反応段階を下の図に示す。
【化１２】
2019509052.tif 000013
【００４１】
この工程の新規性は、最初に加水分解工程を酵素的に実施することであり、かつ、これによりラセミ体の出発物質は所望の異性体がかなり富化された生成物を与える、すなわち動力学的分割を実施することである。この生成物の光学的純度は、加水分解及びエステル化工程を繰り返すことにより更に増加し得る。カンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）リパーゼを使用すると、最初の加水分解後に、ラセミ体メチル２−メチルヘキサ−４−イノエート（２）は、７０％エナンチオマー純度の酸（３）を与える。エステル化及び加水分解を繰り返した後、エナンチオマー純度は９０〜９５％に上昇し、さらにエステル化及び加水分解した後、（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（３）は９７〜９９％エナンチオマー純度で得られる。
【００４２】
以下に個々の段階における好ましい反応条件を記載する。
加水分解：ラセミ出発物質（２）をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルに溶解する。この溶液に水を、次いでリパーゼ酵素を添加し、その反応混合物を２０〜４０℃で反応が終了するまで撹拌する。酵素の量や活性にも依存するが、反応時間は２〜４８時間である。反応中のｐＨは４〜７の間に維持する。反応終了時に、生成物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出する。生成物溶液を塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、次に蒸発することにより生成物（３）を得る。収率は３８〜５０％である。
【００４３】
出発物質として、メチルエステルの代わりに、エチル、プロピル、イソプロピル及びブチルエステルを適用しても良い。発明者らは、反応には、主にカンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）リパーゼ酵素を適用した。溶媒としては、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルの代わりにｎ−ヘキサン、トルエン及びジイソプロピルエーテルを用いても良い。加水分解を繰り返す過程で、収量が増加し、第２回目の加水分解の収率は７０〜８０％、第３回目の加水分解の収率は８０〜９０％である。
【００４４】
エステル化：エステル化は様々な方法で行うことができるが、ここでは２つの方法を例として記述する。
ａ）酸（３）をメタノールに溶解し、少量の濃塩酸をこれに添加し、その混合物を反応終了まで２０〜３０℃で撹拌する。蒸発により濃縮した後、反応混合物を塩溶液に注ぎ入れ、生成物（４）をトルエン又はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出し、塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発させる。収率：７０〜８０％。
ｂ）酸（３）をジメチルホルムアミドに溶解し、炭酸カリウムの存在下、２５〜３５℃でヨウ化メチルでエステル化する。反応終了時に、生成物（４）をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出する。抽出物を塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させる。収率：９０〜９７％。
【００４５】
アシル化：ブチルリチウムの溶液に、最初にジメチルメチルホスホネート（ＤＭＭＰ）のトルエン溶液を−７５〜（−８５）℃で滴加し、得られた溶液にトルエンに溶解したエステル（４）を−７５−（−８５）℃で滴加する。アシル化反応の終了時に、反応混合物を酸溶液に注ぎ入れ、生成物（１）をトルエン又は酢酸エチルで抽出する。抽出物を塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させる。収率：９０〜９５％。
生成物（１’）は正確に同じ方法で製造する。
【００４６】
生成物の光学純度は、キラルカラムを適用するキラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法によって測定した。
【００４７】
（Ｓ）−ジメトキシホスホリル−３−メチル−ヘプト−５−イン−２−オン
装置：           フォトダイオードアレイ検出器を備えたアイソクラティックＨＰＬＣシステム、電子データ処理システム及び自動サンプル管理システム
カラム：         Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、２５０×４．６ｍｍ、５μｍ
移動相：         ヘキサン：エタノール＝  ９：１
検出波長：       ２９０ｎｍ
流速：           １．０ｍｌ／分
注入量：         １０μｌ
カラム温度：     ２５℃
サンプル温度：   ２５℃
操作時間：       ３０分
サンプル溶解：   溶離液
【００４８】
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸：
カラム：         Ｚｏｒｂａｘ  ＲＸ  ＳＩＬ  ２５０×４．６ｍｍ５μｍ
溶離液：         ヘキサン：イソプロパノール＝８８：１２
流速：           １．０ｍｌ／分
カラム温度：     ３０℃
検出：           ２２０ｎｍ
注入量：         １０μｌ
操作時間：       ２５分
試料溶解：       ＴＢＭＥ
【００４９】
誘導体化溶液の製造：
１．１００ｍｇのＣＤＩ＊をアセトニトリル１ｍｌに溶解する。
２．１５０ｍｇの（Ｒ）−ＦＥａ＊をＡＣＮ１ｍｌに溶解する。
＊ＣＤＩ＝１，１’−カルボニル−ジイミダゾール、（Ｒ）−ＦＥａ＝（Ｒ）−１−フェニルエチルアミン
【００５０】
実施例において本発明の方法の詳細を実証するが、本発明を実施例に限定する訳ではない。
【実施例】
【００５１】
１）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸の製造
【化１３】
2019509052.tif 000014
ラセミ体２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル８４１ｇをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル８．４Ｌに溶解させ、脱塩水（ｄｅｍｉ（ｎｅｒａｌｉｚｅｄ）ｗａｔｅｒ）３０Ｌ及びカンジダ・ルゴサリパーゼ（活性：１２００単位／ｍｇ）１２６ｇを添加した。反応混合物を約２５℃〜３０℃で４５％変換にほぼ達っするまで攪拌し、この間１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を添加してｐＨを約６に調整した。反応終了時に１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を加え、相を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで２回洗浄し、次いで１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を加え、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。合一した水相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥材料を濾別し、生成物を含む濾液を蒸発させた。
収量：３６６．０６ｇ（４８．４％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸、エナンチオマー純度：７０．２％。
【００５２】
２）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステルの製造
【化１４】
2019509052.tif 000015
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（エナンチオマー純度７０．２％）３４７ｇをジメチルホルムアミド２Ｌに溶解し、水を含まない炭酸カリウム５３６ｇ及びヨウ化メチル４５７ｍｌを添加した。エステル化を進行している間、反応混合物を２５〜３５℃で撹拌し、次いで、水及び１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を添加することにより破壊する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出し、合一した有機相を塩飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥材料を濾別し、濾液を蒸発させる。
収量：３６９．９３ｇ（９６．０％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル、エナンチオマー純度：７０．２％。
【００５３】
３）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸の製造  
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル（エナンチオマー純度：７０．２％）３６９．９ｇをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル３．７Ｌに溶解させ、脱塩水１３．２Ｌ及びカンジダ・ルゴサリパーゼ（活性：１２００単位／ｍｇ）５５ｇを添加した。反応混合物を約２５℃〜３０℃で、略８０％変換に達っするまで攪拌し、この間１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を添加してｐＨを約６に調整した。反応終了時に１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を加え、相を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで２回洗浄し、次いで１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を加え、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。合一した水相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥材料を濾別し、生成物を含む濾液を蒸発させた。
収率：２５５．８０ｇ（７６．８％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（エナンチオマー純度：９３．０％）
【００５４】
４）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステルの製造
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（エナンチオマー純度９３．０％）２５２ｇをジメチルホルムアミド１．４７Ｌに溶解し、水を含まない炭酸カリウム３９０ｇ及びヨウ化メチル３３２ｍｌを添加した。エステル化を進行している間、反応混合物を２５〜３５℃で撹拌し、次いで、水及び１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を添加することにより破壊する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出し、合一した有機相を塩飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥材料を濾別し、濾液を蒸発させる。
収量：２７２．２８ｇ（９７．１％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル、エナンチオマー純度：９３．０％。
【００５５】
５） （Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸の製造 
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル（エナンチオマー純度：９３．０％）２７２．３ｇをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル２．７Ｌに溶解させ、脱塩水９．７Ｌ及びカンジダ・ルゴサリパーゼ（活性：１２００単位／ｍｇ）４１ｇを添加した。反応混合物を約２５℃〜３０℃で、略９０％変換に達っするまで攪拌し、この間１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を添加してｐＨを約６に調整した。反応終了時に１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を加え、相を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで２回洗浄し、次いで１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を加え、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。合一した水相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥材料を濾別し、生成物を含む濾液を蒸発させた。
収率：２０９．１６ｇ（８５．４％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（エナンチオマー純度：９７．６％）
【００５６】
６）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステルの製造  
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸（エナンチオマー純度９７．６％）２００ｇをジメチルホルムアミド１．２Ｌに溶解し、水を含まない炭酸カリウム３０９ｇ及びヨウ化メチル２６４ｍｌを添加した。エステル化を進行している間、反応混合物を２５〜３５℃で撹拌し、次いで、水及び１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を添加することにより破壊する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出し、合一した有機相を塩飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥材料を濾別し、濾液を蒸発させる。収量：２００．３２ｇ（９０．２％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル、エナンチオマー純度：９７．６％。
【００５７】
７）（Ｓ）−ジメトキシホスホリル−３−メチル−ヘプト−５−イン−２−オンの製造 
【化１５】
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蒸留トルエン１．３Ｌに窒素雰囲気下、１．６Ｍブチルリチウム溶液６６６ｍｌを加え、混合物を−８０±５℃に冷却する。この温度を保ちながら、蒸留トルエン４９５ｍｌ中のメチルホスホン酸ジメチル１２３ｍｌの溶液を添加する。１５分間攪拌した後、蒸留トルエン４０５ｍｌ中の（Ｓ）−２−メチル−４−ヘキシン酸メチルエステル（エナンチオマー純度９７．６％）８２ｇの溶液を−８０±５℃で添加する。反応混合物をこの温度でさらに３０分間撹拌する。アシル化反応の進行後、混合物を酸溶液に注ぎ入れる。相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合一した有機相を飽和塩溶液で洗浄し、蒸発させる。
粗生成物を、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの勾配混合物を使用する重力クロマトグラフィーにより精製する。
収量：１２７．４５ｇ（９４．０％）（Ｓ）−ジメトキシホスホリル−３−メチル−ヘプト−５−イン−２−オン、エナンチオマー純度：９７．８％。
【００５８】
８）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸の製造 
【化１６】
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ラセミ体２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステル４．２７０ｇをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル４３ｍＬに溶解させ、脱塩水１５２ｍＬ及びカンジダ・ルゴサリパーゼ（活性：１３００単位／ｍｇ）０．５３４ｇを添加した。反応混合物を約２５℃〜３０℃で略４５％変換に達っするまで攪拌し、この間１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を添加してｐＨを約６に調整した。反応終了時に１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を加え、相を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで２回洗浄し、次いで１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を加え、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。合一した水相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥材料を濾別し、生成物を含む濾液を蒸発させた。収率：１．４９９ｇ（３８．６％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸，エナンチオマー純度：６８．６％）
【００５９】
９）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステルの製造 
【化１７】
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（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸（エナンチオマー純度６８．６％）１．４６０ｇをジメチルホルムアミド８ｍＬに溶解し、水を含まない炭酸カリウム２．０３０ｇ及びヨウ化メチル１．７ｍｌを添加した。エステル化を進行している間、反応混合物を２５〜３５℃で撹拌し、次いで、水及び１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を添加することにより破壊する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出し、合一した有機相を飽和塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥材料を濾別し、濾液を蒸発させる。
収量：１．３６６ｇ（８５．１％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステル、エナンチオマー純度：６８．６％。
【００６０】
１０）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸の製造  
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステル（エナンチオマー純度：６８．６％）１．３６６ｇをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル  １４ｍＬに溶解させ、脱塩水（ｄｅｍｉ  ｗａｔｅｒ）４９ｍＬ及びカンジダ・ルゴサリパーゼ（活性：１３００単位／ｍｇ）０．１７１ｇを添加した。反応混合物を約２５℃〜３０℃で略４５％変換に達っするまで攪拌し、この間１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を添加してｐＨを約６に調整した。反応終了時に１Ｍ  ＮａＨＣＯ３溶液を加え、相を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで２回洗浄し、次いで１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を加え、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。合一した水相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥材料を濾別し、生成物を含む濾液を蒸発させた。
収率：０．６４６ｇ（５２．０％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸（エナンチオマー純度：９１．０％）
【００６１】
１１）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステルの製造  
（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸（エナンチオマー純度９１．０％）０．５９２ｇをジメチルホルムアミド３．０ｍＬに溶解し、水を含まない炭酸カリウム０．８２０ｇ及びヨウ化メチル０．７０ｍｌを添加した。エステル化を進行している間、反応混合物を２５〜３５℃で撹拌し、次いで、水及び１Ｍ  ＮａＨＳＯ４溶液を添加することにより破壊する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン混合物で抽出し、合一した有機相を飽和塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥材料を濾別し、濾液を蒸発させる。
収量：０．５６９ｇ（８７．４％）（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステル、エナンチオマー純度：９１．０％。
【００６２】
１２）（Ｓ）− ジメトキシホスホリル−３−メチル−オクト−５−イン−２−オンの製造
【化１８】
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蒸留トルエン１７ｍｌに窒素雰囲気下、１．６Ｍブチルリチウム溶液８．１ｍｌを添加し、その混合物を−８０±５℃に冷却する。この温度を保ちながら、蒸留トルエン３．３ｍｌ中のメチルホスホン酸ジメチル１．５ｍｌの溶液を添加する。１５分間攪拌した後、蒸留トルエン３．０ｍｌ中の（Ｓ）−２−メチル−４−ヘプチン酸メチルエステル（エナンチオマー純度９１．０％）０．５４９ｇの溶液を−８０±５℃で添加する。反応混合物をこの温度でさらに３０分間撹拌する。アシル化反応の進行後、混合物を酸溶液に注ぐ。相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合一した有機相を飽和塩溶液で洗浄し、蒸発させる。
粗生成物を、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの勾配混合物を使用する重力クロマトグラフィーで精製した。
収量：０．７８２ｇ（８９．２％）（Ｓ）−ジメトキシホスホリル−３−メチル−オクト−５−イン−２−オン、エナンチオマー純度：９６．７％。
【国際調査報告】
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