(57)【要約】  本開示は、金属過剰障害、特に鉄過剰状態および鉄関連状態に関する治療として金属キレート剤の安全かつ有効な投与レジメンを提供する。
2019527733.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の腎臓、胃腸、肝臓、血液、聴覚、視覚および／もしくは皮膚の毒性を低減する方法であって、複数回用量の金属キレート剤を前記対象に経口投与することを含み、各用量が、前回の投与の２４時間後よりも後、および／または１週間に５回以下で投与される、方法。
【請求項２】
対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の腎臓、視覚、聴覚、神経、呼吸器および／もしくは筋骨格の毒性を低減する方法であって、５回未満の週用量の金属キレート剤を前記対象に静脈内または皮下投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記金属キレート剤が週に５回、月に１５〜２５回、または月に２０〜２５回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記金属キレート剤が（ａ）週に４回、（ｂ）週に３回、（ｃ）月に１２〜１８回、（ｄ）月に１５〜２５回投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記金属キレート剤が３６〜７２時間ごとに投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記金属キレート剤が少なくとも１週間、少なくとも１カ月、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月、少なくとも１年間の期間投与されるか、または無期限に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）標準日用量より多い用量が各投与時に投与され、任意選択で、投与される総週用量が標準総週用量に等しいか、もしくは前記標準総週用量より少なく、任意選択で、投与される前記総週用量が前記標準総週用量の０．７５〜０．９倍であり；
（ｂ）前記標準日用量が各投与時に投与され、かつ／もしくは投与される前記総週用量が前記標準総週用量に等しく；または
（ｃ）投与される前記総週用量が前記標準総週用量より多く、任意選択で、投与される前記総週用量が前記標準総週用量の１．２５〜２倍である、
請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記金属が鉄であり、任意選択で、前記金属キレート剤が鉄キレート剤である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記金属キレート剤がＳＰ−４２０化合物である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記金属キレート剤がＳＰ−４２０化合物であり、任意選択で、
（ａ）前記ＳＰ−４２０化合物が１８〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与され；
（ｂ）前記ＳＰ−４２０化合物が５４〜４００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与され；
（ｃ）前記ＳＰ−４２０化合物がＳＰ−４２０（（Ｓ）−４，５−ジヒドロ−２−［２−ヒドロキシ−４−（３，６−ジオキサヘプチルオキシ）フェニル］−４−メチル−４−チアゾールカルボン酸）もしくはその薬学的に許容される塩であり；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組合せである、
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記金属キレート剤がＳＰ−４２０化合物ではない、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記金属キレート剤がデフェリプロンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、前記対象に投与される前記デフェリプロンの用量が１日２回３７．５〜４９．５ｍｇ／ｋｇまたは１日１回６６〜９９ｍｇ／ｋｇである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記金属キレート剤がデフェロキサミンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、前記対象に投与される前記デフェロキサミンの用量が、（ａ）２０〜５０ｍｇ／ｋｇであり、週５〜７日４〜６時間にわたる低速皮下注入として投与される、または（ｂ）４０〜１００ｍｇ／ｋｇであり、週２〜３日８〜１２時間にわたる低速皮下注入もしくは静脈内注入として投与される、または（ｃ）１０００〜２０００ｍｇであり、隔日注射もしくは週３日の注射として投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記金属キレート剤がデフェラシロクスまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、前記対象に投与される前記デフェラシロクスの用量が、４０〜８０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回もしくは週３日経口投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記金属キレート剤がデフェリトリンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、前記対象に投与される前記デフェリトリンの用量が、２０〜１６０ｍｇ／ｋｇであり隔日１回もしくは週３日経口投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記金属キレート剤がＳＰＤ６０２（ＦＢＳ０７０１）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、前記対象に投与される前記ＳＰＤ６０２の用量が、２０〜１２０ｍｇ／ｋｇであり隔日１回もしくは週３日経口投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記金属誘発性疾患が鉄過剰である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記金属誘発性疾患がランタニドまたはアクチニド過剰であり、任意選択で、前記金属キレート剤がジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記金属が鉛または水銀であり、任意選択で、前記金属誘発性疾患が鉛または水銀中毒であり、任意選択で、前記金属キレート剤がエデト酸カルシウム二ナトリウムまたはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の血液、胃腸、肝臓および／もしくは筋骨格の毒性を低減する方法であって、前記方法が１回または２回の日用量の前記金属キレート剤を前記対象に経口投与することを含み、前記金属キレート剤がデフェリプロンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物であり、任意選択で、
（ａ）前記方法が２回の日用量の前記金属キレート剤を投与することを含み；
（ｂ）前記日用量が６〜１２時間間隔で投与され；または、
（ｃ）前記金属キレート剤が週に１４回投与される、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願への相互参照
本出願は、２０１６年８月５日出願の米国仮出願第６２／３７１，２７４号明細書および２０１６年８月５日出願の同第６２／３７１，２８０号明細書の優先権を主張し、それらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
２．背景
鉄および他の金属は、健康にとって必須の栄養素である。金属は、金属酵素として知られている酵素の補因子を形成し、他の金属含有タンパク質、例えばシトクロム、ヘモグロビンおよびミオグロビンの必須成分である。これらの金属含有タンパク質の多くは、通常の細胞機能にとって重要である。金属欠乏は、通常、不十分な消化管吸収（例えばセリアック病におけるカルシウム）によるか、または胃腸、腎臓もしくは皮膚を侵す疾患による喪失（例えば、下痢状態もしくは利尿剤使用のある腎臓におけるマグネシウム）によるものであり、特徴的な徴候および病状の十分に定義された臨床的症候群を有する。また金属蓄積障害も、過剰量の金属が身体の組織内に蓄積し、通常、過剰吸収を続発する場合（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシスにおける鉄）、または分泌機序を障害する場合（例えば、ウィルソン病における銅）に起こり、同様に、特徴的な徴候および病状の十分に定義された臨床的症候群を引き起こす。
【０００３】
鉄は、他の金属にとって良い例である。鉄は自然界に豊富にあるが食事から吸収するのは難しい。食事からの鉄の不十分な吸収または出血による喪失（例えば月経）は、欠乏に結びつく可能性がある。米国の約１１％の人が鉄欠乏であり、１〜２％の欠乏が貧血を引き起こすほど重篤である。鉄過剰はそれほど一般的ではなく、遺伝性ヘモクロマトーシスでのような異常に亢進された鉄吸収により、または異常赤血球（ＲＢＣ）産生による貧血に付随して最も頻繁に起こる。貧血は、鉄吸収の重要な調節因子である肝臓ヘプシジンの抑制をもたらす。血中ヘプシジンの減少によって腸細胞フェロポーチン（鉄輸送体）の発現が増加し、腸の腸細胞による鉄吸収が過剰となる。鉄過剰は、貧血の治療として輸血を必要とする患者の亜集団をひどく悪化させる。濃縮ＲＢＣの平均ユニットは２００〜２５０ｍｇの鉄を含有する。これを視野に入れると、平均的な人の身体は３グラムの鉄を含有する。鉄の排出機序はないので、鉄過剰がＲＢＣ輸血で速やかに起こる。ＲＢＣ産生におけるこれらの障害としては、サラセミア、鎌状赤血球症、ダイアモンド−ブラックファン貧血、先天性鉄芽球性貧血、先天性赤血球形成異常性貧血、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および再生不良性貧血が挙げられる。
【０００４】
鉄は、通常、タンパク質トランスフェリンに結合して体内で輸送される。細胞上のトランスフェリン受容体は、トランスフェリン−鉄複合体に結合して内在化させ、鉄を細胞内で遊離し、トランスフェリンを放出する。鉄と複合体化されている循環トランスフェリンの割合、トランスフェリン飽和度は、身体の鉄の状態の指標として臨床的に使用されている。通常のトランスフェリン飽和度は、約２０〜５０％の範囲である。これより下回る値は鉄欠乏を示唆し、上回る値は鉄過量または過剰を示唆する。細胞内部では、鉄はフェリチンとして知られているタンパク質で包まれた球体に貯蔵されている。フェリチンは細胞から漏出する可能性があり、体内の鉄状態の指標として使用されている。正常範囲は２０〜２００ｎｇ／ｍＬであり、トランスフェリン飽和度と同様に、この範囲よりも下回る値および上回る値は、鉄欠乏または鉄過量を示唆している。鉄は、通常、トランスフェリンに結合している、またはフェリチンに貯蔵されている。循環系でトランスフェリンに結合されていない鉄である非トランスフェリン結合鉄（ＮＴＢＩ）は、低分子量物質、例えばクエン酸などに結合している。いくつかのＮＴＢＩは活性酸素種を触媒する（すなわち生成する）ことが可能であり、「触媒鉄」と呼ばれる。活性酸素種は、時には「フリーラジカル」と呼ばれ、脂質、タンパク質、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）および細胞内小器官を損傷し、細胞傷害、アポトーシス、壊死、および炎症をもたらす。鉄過剰の徴候および病状としては、疲労、関節痛、インポテンス、骨粗鬆症、糖尿病、心不全および肝硬変が挙げられる。
【０００５】
鉄をキレート化し、体内からそれを除去するのに有効な薬剤が出現する以前は、輸血関連の鉄過剰の重篤な形態であるβ−サラセミアの患者は、人生の２０年という早期に心不全で死亡した。１９７０年代初期に鉄キレート剤が導入された後、進歩的な寿命の拡大があった。しかしなお、英国（ＵＫ）サラセミア登録簿のデータによれば、β−サラセミア患者の約５０％が、主として心疾患により３５歳前に死亡すると報告されている。生存率の重要な予測因子は身体の鉄負荷である。ある１つの研究において、血清フェリチン（身体の鉄含有量のマーカー）を２５００ｎｇ／ｍＬ未満に維持した患者は、心疾患のない生存率は１５年で９１％であるのに対し、フェリチンが２５００ｎｇ／ｍＬを超えている患者では２０％であった。
【０００６】
鉄キレート剤は、鉄と複合体を形成し、鉄の排出を促進する小分子である。それらは循環系および細胞内でＮＴＢＩを結合し得る。治療を開始する前に、体内の鉄負荷は、肝臓の鉄含有量（ＬＩＣ）および心臓の鉄含有量を測定することによって決定される。ＬＩＣは、磁気共鳴画像またはＭＲＩによって測定される。また心臓の鉄もＭＲＩによって決定され、Ｔ２＊スコアとして報告される。スコアが低いほど、心臓の鉄分含有量が多いことを示す。鉄キレート化の目標は、鉄の過剰の程度に依存する。重度の鉄過剰患者（ＬＩＣ＞７またはＴ２＊＜１０）においては、目標は体内鉄バランスがマイナスの状態を作り出すようにすることである。許容可能な鉄過剰（ＬＩＣ  ３〜７およびＴ２＊＞１０）の患者においては、目標は、鉄投与（食事および輸血由来）とキレート剤由来の鉄排出とのバランスを作り出すようにすることである。
【０００７】
３種の鉄キレート剤化合物、デフェロキサミン（例えばＤｅｓｆｅｒａｌ（登録商標））、デフェリプロン（例えばＦｅｒｒｉｐｒｏｘ（登録商標））、およびデフェラシロクス（例えば、Ｅｘｊａｄｅ（登録商標）、Ｊａｄｅｎｕ（登録商標））が米国および他国において使用が承認されている。３種すべてのキレート剤は様々な程度で効果があるが、用量関連の、および鉄状態関連の深刻な毒性副作用を伴っている。ＬＩＣ＜３をもたらす過剰な鉄キレート化は極めて危険であることが明らかになっており、ある場合には死に至る。
【０００８】
最初に承認された鉄キレート剤のデフェロキサミンは、鉄過剰の治療および平均余命の実質的な拡大における主要な成功であった。デフェロキサミンは、輸血依存性貧血による急性鉄中毒症および慢性鉄過剰の治療に対して米国で適応されている。あいにく、デフェロキサミンは経口バイオアベイラビリティが不十分で、半減期が短く、１日に８〜１０時間、週に５〜７日の連続非経口投与（静脈内［ＩＶ］または皮下［ＳＣ］）を必要とする。副作用としては、局所炎症性反応およびアレルギー反応、全身性アレルギー反応、視覚障害および聴覚障害、血清クレアチニンの増加、腎不全、腎尿細管障害、成長遅滞、ならびに呼吸困難が挙げられる。服薬遵守違反は重大な問題であり、効果が最適以下となる。デフェロキサミンを使用する患者の半数が早発性心臓死に関連した鉄過剰レベルを有し得る。生存率は服薬遵守と密接に関係している。１つの研究においては、３０歳時の生存率は服薬遵守患者では６０％であったが、服薬不履行患者ではわずかに１０％であった。
【０００９】
デフェロキサミン治療の負担となる性質、および生存率と服薬遵守の強い関連性は、代替治療法の探索の動機をもたらした。デフェリプロンは最初に承認された経口活性鉄キレート剤であり、現在のキレート療法が不適切である場合にサラセミア症候群患者の治療に適応されている。デフェリプロンは鉄キレート剤効率が低く、排出半減期が短い（ｔ１／２＝１．９時間）ため、結果的に７５〜９９ｍｇ／ｋｇ／日の用量を３回の日用量に分割して投与しなければならない。副作用としては、悪心、嘔吐および腹痛、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の増加、関節痛、好中球減少症、ならびに致命的な可能性のある感染症を回避する頻繁なモニタリングが必要とされる無顆粒球症が挙げられる。さらに、デフェリプロンは、非臨床試験において胎児死亡および奇形が続発する妊娠カテゴリーＤである。３種の利用可能なキレート剤のうち、デフェリプロンは心臓鉄をキレート化するのに最も有効であり得るが、肝臓鉄の除去にはほとんど有効ではない。おそらく、この安全性および有効性プロファイルの結果として、デフェリプロンは使用の最も少ない鉄キレート剤であり、主としてデフェロキサミンに対する補助剤として使用される。
【００１０】
デフェラシロクスは最近開発された経口鉄キレート剤であり、１日１回の投与が可能な効力および薬物動態プロファイルを有する。デフェラシロクスは、デフェロキサミンよりも劣っていないことが、ＬＩＣが上昇した患者の亜集団において明らかとなった。デフェラシロクスの承認によって鉄過剰の治療において大きな進歩が示され、現在、２歳以上の患者における輸血による慢性的鉄過剰の治療に適応されている。添付文書に、デフェラシロクスが臓器不全および消化管出血を含めた腎臓障害および肝臓障害を引き起こし得るという警告が含まれている。ある場合には、これらの反応は死に至る。結果として、腎機能および肝機能の頻繁な試験を行う厳密なモニタリングが治療中必要である。デフェラシロクスは、クレアチニンクリアランス＜４０ｍＬ／ｍｉｎ、または血清クレアチニン＞正常値の上限の２倍、不十分なパフォーマンス状態高リスクＭＤＳ、進行悪性腫瘍、または血小板数が非常に低い患者に対しては禁忌である。患者の約３分の１は、３３％以上の血清クレアチニンの持続性増加を経験し、これにより用量の低減、中断または中止が必要となり得る。腹痛、下痢、悪心、嘔吐、発疹は、服薬不履行または過少量投与をもたらし得る頻繁に起こる副作用である。デフェラシロクスは、水、オレンジジュースまたはリンゴジュースに完全に分散させ、バイオアベイラビリティに対する食物の影響を避けるために食事の３０分前に服用しなければならない、ウェハ様錠剤として入手できる。最近、剤形を分散させる必要なくデフェラシロクス用量を経口投与することができるＪａｄｅｎｕ錠剤が承認された。ＪａｄｅｎｕとＥｘｊａｄｅは同一有効成分を含有するので、副作用プロファイルは類似している。これらの制限にもかかわらず、デフェラシロクスは米国において最も広く使用される鉄キレート剤になった。
【００１１】
３種の承認された鉄キレート剤の制限を考慮すると、安全かつ有効な鉄キレート剤に対する未解決の重要な医学的ニーズがある。理想的な鉄キレート剤は、経口投与による高鉄キレート化効率、鉄過剰によって悪影響のあるすべての器官（例えば肝臓、心臓、膵臓、および腎臓）への高浸透性、ならびに、特に腎臓、肝臓および胃腸系統に対する最小限毒性を有する。これは、臨床開発に向けて開発されてきた製品のこれまでの失敗によって明らかであるように、達成することは簡単ではなかった。ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ８−ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ８−二酢酸）の開発は、十分な経口バイオアベイラビリティが得られないため、フェーズ１の後に中止された。良好な経口バイオアベイラビリティを有する鉄キレート剤であるデフェリトリン（４，５−ジヒドロ−２−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−４−メチルチアゾール−４（Ｓ）−カルボン酸）は、腎臓損傷が証明されたフェーズ２試験の後に中止された。以前はＦＢＳ０７０１であった、ＳＰＤ６０２（（Ｓ）−２−（２−ヒドロキシ−３−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸）は、フェーズ２試験を終えたが、β−サラセミアの患者におけるＬＩＣを有意に低下させることはできなかった。ＳＰ−４２０（（Ｓ）−４，５−ジヒドロ−２−［２−ヒドロキシ−４−（３，６−ジオキサヘプチルオキシ）フェニル］−４−メチル−４−チアゾールカルボン酸）は、フェーズ１〜２試験を終えたが、用量を増大した際の腎臓毒性により早期に終了した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、金属誘発性疾患に関する改善されたキレート剤療法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
３．概要
本開示は、例えば、本明細書に記載の金属誘発性疾患のうちの１つを有する対象における金属誘発性疾患を治療する方法に関する。本開示はさらに、金属誘発性疾患の治療に使用される金属キレート剤に関連する毒性を低減することに関する。一態様では、本開示は、鉄誘発性疾患の治療におけるＳＰ−４２０（（Ｓ）−４，５−ジヒドロ−２−［２−ヒドロキシ−４−（３，６−ジオキサヘプチルオキシ）フェニル］−４−メチル−４−チアゾールカルボン酸）ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物および水和物（まとめて「ＳＰ−４２０化合物」）に関連する毒性を低減することに関する。
【００１４】
有効なキレート化と毒性の間には強い関連性があるように思われる。ＨＢＥＤは生物にとって利用可能ではなく、ＳＰＤ６０２は有効ではなく、いずれの薬物にも明らかな毒性は示されなかった。ほとんどの小分子薬物について、用量が増大するにつれて曝露、有効性および副作用が増加することは驚くことではない。副作用は、薬物の作用機序、他の受容体もしくは経路に対するオフターゲット効果、またはアレルギー反応などの特異体質効果に機構的に関連している可能性がある。鉄キレート剤の場合、副作用が機構的であるようである。鉄キレート剤は細胞から鉄を除去するが、これは意図した効果であり、その理由は、鉄過剰が細胞にとって、特に心臓、肝臓および膵臓において有害なためである。しかし、鉄キレート剤は、多くの場合、毒性の標的器官である腎臓および腸などの他の器官の細胞からも鉄を除去する。これらの器官の細胞は、これらの細胞が呼吸などの正常な細胞プロセスにおいて利用され得る（キレート化されていない）細胞内鉄を必要とするので、機能障害になり得る。鉄含有タンパク質はミトコンドリア内に豊富であり、細胞機能および生存が豊富なエネルギー供給に依存することから、影響される可能性が最もありそうな細胞は、最も代謝的に活性な細胞である。これにより、特に高用量で、または鉄貯蔵が枯渇した場合に、なぜ副作用が鉄キレート剤で重篤または致命的になり得るかを説明することができる。クラスとして、鉄キレート剤が低い治療指数を有するが、代替物が存在しない場合、キレート剤は輸血に関連した鉄過剰に対して広く処方されている。
【００１５】
本開示は、キレート剤、例えば認可された鉄キレート剤およびＳＰ−４２０化合物などの用量または投薬レジメンを変更することによって、有効性を副作用から切り離すことができるという洞察に基づいている。理論に縛られることなく、本発明者らは、身体全体から、または意図した標的器官から金属を除去するという目標を損なうことなく、感受性組織からの金属（例えば鉄）除去が最小限となるように投薬の頻度を変更することができることを確信する。具体的には、総キレート剤用量または全身金属クリアランスを必ずしもまたは有意に減少させることなく曝露の期間または頻度を低減することにより、曝露の低減が細胞をキレート化の影響から回復させるので、感受性器官（例えば腎臓、腸）の細胞が毒性副作用から保護されることが期待される。「休止（off）」キレート剤期間（または細胞回復期間）を提供することで、これらの細胞が重要な代謝機能、例えば呼吸およびエネルギー生産などを維持することができる。本明細書に記載されている投与レジメンは、金属キレート剤投与の期間および／または頻度の低減によって感受性器官の細胞が回復され得るという前提に基づいているので、本レジメンは、簡潔に「細胞回復投与レジメン」または「細胞回復レジメン」と呼ばれる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１−１】毎日（図１Ａ）ＳＰ−４２０を投与した実施例２のラットに関する代表的なＫＩＭ−１データを示す図である。
【図１−２】隔日（図１Ｂ）ＳＰ−４２０を投与した実施例２のラットに関する代表的なＫＩＭ−１データを示す図である。
【図２】２６００ｍｇ／ｋｇのＳＰ−４２０の累積用量を投与した後の実施例２のラットに関するＫＩＭ−１試験紙（KIM-1 strips）を示す図である。
【図３】１６２．５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−４２０を１６日間毎日投与した実施例２のラットに関する投与期間終了時（左側）および投与５日後（右側）のＫＩＭ−１試験紙を示す図である。
【図４】２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で毎日ＳＰ−４２０を投与したラットの２４時間尿サンプルを示す図である。
【図５】実施例２のラットに関する平均ＫＩＭ−１データを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
５．詳細な説明
５．１  金属誘発性疾患
金属イオンは、生物系の適切な機能に重要である。イオンは、ほんの数例を挙げれば、例えばＦｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃａ２＋およびＣｏ３＋などは、３分の１以上の公知の酵素および他の機能性タンパク質、例えばＲＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡ転写因子、チトクロームＰ４５０、ヘモグロビン、ミオグロビン、およびビタミンＢ１２などの補酵素の活性部位において確認することができる。そこで、これらの金属は酸化反応および還元反応を促進し、電荷分布を安定化または保護し、反応の基質を配向する働きをする。
【００１８】
しかし、身体では金属を吸収し排出する能力に限界があり、過剰は毒性をもたらす可能性がある。本開示の基礎となる原理は、過剰の金属が健康状態の原因物質であるあらゆる状態に適用することができる。
【００１９】
一例として、β−重症型サラセミアなどのこうした状態において必要で慢性的に輸血された赤血球に由来したか、またはＨＦＥなどの遺伝子の変異によって引き起こされる遺伝性ヘモクロマトーシスなどの食事由来の鉄の吸収増加による過剰の鉄は、ＨＯ・およびＨＯＯ・などの活性酸素種の鉄による生成を介して有毒になり得る。Ｆｅ２＋の存在下で、Ｈ２Ｏ２は、非常に反応性の高い種であるヒドロキシル基（ＨＯ・）に還元され、このプロセスはフェントン反応として知られている。ヒドロキシル基は様々な細胞成分と非常に速やかに反応し、ＤＮＡおよび膜を損傷し、発がん物質を生成する遊離基および基が介在する連鎖プロセスを開始する可能性がある。臨床結果は、有効な治療がないと、全身の鉄が次第に肝臓、心臓、膵臓、および他の箇所に沈着しながら増大することである。また鉄の蓄積は、（ｉ）肝硬変症に進行し得る肝臓疾患、（ｉｉ）膵臓β細胞分泌の鉄誘発性減少および肝臓インスリン抵抗性の増大の両方に関連する糖尿病、ならびに（ｉｉｉ）依然として、輸血性鉄過剰に関連したβ−重症型サラセミアおよび他の貧血における主要な死因の心臓病も起こし得る。
【００２０】
別の例として、相対的過剰鉄は、心血管疾患（例えば心臓病）の危険性の増加と関連している。血清フェリチンレベルと、炎症性バイオマーカー、例えばＣ−反応性タンパク質およびインターロイキン−１との間には強い相関があり、死亡を免れないのは末梢動脈疾患を有する患者の亜集団である。そのリスクを緩和するために瀉血および鉄キレート化が使用されてきた。鉄キレート剤を用いる治療は、鉄貯蔵を減少させ、血清フェリチンを減少させ、心臓病および脳卒中の発生を減らす可能性があると考えられる。
【００２１】
別の例として、内因性機能がほとんどないか全くないイオンは、体内に入り損傷をもたらし得る。Ｈｇ２＋などの重金属イオンは、金属結合タンパク質中のＺｎ２＋などのイオンに置き換わり、それらを不活性化し得る。その結果、患者の死亡またはその患者の子供の先天的欠損症が起こる可能性がある深刻な急性毒性または慢性毒性がもたらされる。さらに意義深いことには、ランタニドおよびアクチニド系列の放射性同位体は、口、空気または皮膚の接触によって、それらに曝露された個体に重篤な病気をもたらし得る。そのような曝露は、核爆弾または核廃棄物から構成されている「汚染爆弾」の爆発だけでなく、原子力発電施設の破壊からも引き起こされる可能性がある。
【００２２】
前述の金属誘発性疾患のいずれか、ならびに実施形態４６および８９から１０５において特定されている状態は、本明細書に開示されている細胞回復投与レジメンから利益を得ることができる。したがって、本開示は、第５．３節に記載されているレジメンを使用するか、または第５．４節に特定されているアッセイを使用して特定されるそのような金属誘発性疾患を治療する方法を包含する。
【００２３】
５．２  金属キレート剤
本開示の細胞回復投与レジメンは、金属キレート剤、例えばＳＰ−４２０化合物に関する。本明細書で使用される場合、「ＳＰ−４２０化合物」は、ＳＰ−４２０（（Ｓ）−４，５−ジヒドロ−２−［２−ヒドロキシ−４−（３，６−ジオキサヘプチルオキシ）フェニル］−４−メチル−４−チアゾールカルボン酸）ならびにそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物および水和物を意味する。
【００２４】
生体内の金属イオンのキレート化および脱離に関する様々な薬剤が臨床使用されており、また他のものも開示されているが、どちらも毒性のため臨床試験されていないか、臨床試験で進展はなかった。第５．３節に記載されている、または第５．４節で特定されているアッセイを使用して特定された細胞回復レジメンから得られる任意の金属キレート剤に基づいた治療は、毒性の低減に有益であり得る。
【００２５】
レジメンが適用される例示の金属キレート剤としては、限定するものではないが、第２節および第３節において、実施形態４８、７０、７３、７６、７９、８６、および１０６で特定されたもの、ならびにその内容は参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公報の国際公開第２００６／１０７６２６号パンフレットに記載の式（Ｉ）〜（ＩＸ）によって包含されているそれらの化合物が挙げられる。
【００２６】
本開示のいくつかの金属キレート剤、例えば前の段落で記載されているものは、薬学的に許容される塩の形態で投与することができる。薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム）塩が挙げられる。さらに、薬学的に許容される塩としては、アミン塩が挙げられる。好ましくは、薬学的に許容される塩は、金属非含有（例えば、鉄非含有）の塩である。本明細書で使用される場合、「金属非含有塩」は、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩を包含しない。
【００２７】
５．３  投与レジメン
本開示の細胞回復投与レジメンは、毒性を最小限にしながら効果を維持することにより、金属キレート剤療法の治療指数を増加させる正味の効果を有すると思われる。
【００２８】
本レジメンは、一般に、金属イオンを効果的にキレート化するのに十分な高い濃度でキレート剤が身体細胞中に存在しない期間を可能にするように投与間の期間（投与間隔）を拡大することによって投与頻度を減少させる。これによって、細胞は機能性金属含有タンパク質を正常な細胞機能を有するのに十分な量で有することができる。しかし、キレート剤の用量および頻度は、キレート療法の治療目的に応じて、金属バランス状態を作り出すかまたは金属バランスを無効にするのに十分である。
【００２９】
療法に対して現在承認されているキレート剤の場合、いくつかの実施形態では、投与間隔は約３０％〜３００％拡大される（１日１回投与の２４時間間隔を約４時間〜７２時間まで拡大させる）。例えば、デフェラシロクスなどのキレート剤は、典型的には、朝食前の空腹時に、または軽い低脂肪の朝食と共に１日１回投与される。したがって、投与間隔は約２４時間である。あるシナリオでは、第２回の投与は翌日の正午の食事時に行われ、間隔を約２８時間に延長する。第３回の投与は、翌日の夕食時などに行われる。別のシナリオでは、第２回の投与は翌日の夕食時に行われ、間隔は約３２時間に延長される。第３目のシナリオでは、第２回の投与は２日後の朝の食事時に行われ、間隔は約４８時間に延長される。投与間隔の延長による予測される利点は、鉄のキレート化により悪影響を受ける細胞が、効果的なキレート剤を含まない期間中に回復するのに必要な時間が得られることである。いくつかのキレート剤が存在してもよいが、細胞機能に干渉しないように十分に低い濃度である。デフェラシロクスの場合、腎臓損傷および胃腸損傷が実質的に少なくなると予測される。より一般的には、任意のキレート剤で観察される用量関連毒性は、変更した投与レジメンで低減または排除されると予測される。
【００３０】
特定の態様では、新規のレジメンで投与される用量は、投与頻度の減少を埋め合わせるために増加される。したがって、各投与時に投与されるキレート剤の用量は、意図した量の金属クリアランスが新規のレジメンで維持されるように増加される。用量は、元の用量の１０％〜３００％を加えることにより増加させることができる。例示として、２０ｍｇ／ｋｇ用量のデフェラシロクスは、各投与時に２２〜６０ｍｇ／ｋｇの範囲に増加される。本開示に記載されているすべての範囲は包括的である（例えば、２２〜６０ｍｇ／ｋｇの範囲は２２ｍｇ／ｋｇの用量および６０ｍｇ／ｋｇの用量を包含する）。
【００３１】
いくつかの実施形態において、総週用量または総月用量（１週間または１カ月に投与される全用量の合計）が維持される。例えば、デフェラシロクスが最初に毎日２０ｍｇ／ｋｇで投与され、投与間隔が隔日投与に変更された場合、投与される用量は隔日投与される４０ｍｇ／ｋｇに増加される。
【００３２】
本明細書に記載の投与レジメンにおいて、整数が先行する場合の語句「週用量」とは、１週間に投与される用量の数を意味する。例えば、「５回未満の週用量」を含む投与レジメンは、対象に１週間に５回未満（例えば、１週間に１、２、３、または４回）の用量の金属キレート剤を投与する投与レジメンを包含する。同様に、整数が先行する場合の語句「日用量」は、１日に投与される用量の数を意味する。例えば、「１回または２回の日用量」を含む投与レジメンは、対象に１日に１回または１日に２回の用量の金属キレート剤を投与する投与レジメンを包含する。特定の用量の金属キレート剤が提供される場合、文脈上特段の要求がない限り、用量は単回用量で投与される金属キレート剤の量を意味する。前述の週用量、日用量および特定の用量は、少なくとも１週間、少なくとも１カ月、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月、少なくとも１年の期間、または無期限に（例えば、対象の残りの人生の間）投与することができる。文脈上特段の要求がない限り、投与期間は、単回投与の期間よりもむしろ、金属キレート剤の最初の投与と最後の投与との間の期間を意味する。
【００３３】
投与レジメンを変更して、利便性、コンプライアンス、およびアドヒアランスをさらに強化することができる。例えば、隔日投与は、例えば週末の中断を入れて、週３日の投与に変更することができる。週末が土曜日および日曜日である地域においては、そのような投与スケジュールは月曜日、水曜日、および金曜日にキレート剤を投与することからなり得る。これは、患者が忘れずに用量を服用し、それによって推奨されるレジメンを遵守することを覚えている能力を高めると思われる。また、実施例２に示したように、投与からの短い中断はキレート剤の毒性を最小限にすることが期待される。
【００３４】
金属キレート化効率（金属でキレート化された身体から排出される投与薬物の割合）は、動物、ヒト臨床試験対象もしくは患者における金属バランス試験で決定され得るか、または例えば、動物において組織の原子吸光分析の使用により、もしくはヒトにおいてＭＲＩにより組織金属含有量を測定することによって決定され得る。
【００３５】
キレート剤由来の副作用は予測可能であるかスクリーニング試験に基づいて予想することが可能であるので、腹痛などの副作用をモニターするか、腎臓損傷もしくは機能不全を証明する尿または血液を検査する間、投与間隔の間を経時的に調整することができる。
【００３６】
確立した用量のない金属キレート剤については、投与スケジュールは、本明細書に記載されている原理を使用して、例えば第５．４節に記載されているアッセイを使用して確立することができる。
【００３７】
特定の実施形態では、金属キレート剤は、実施形態１から１０６で明記されているレジメンのいずれかに従って、または第５．４節に記載されている方法により投与される。
【００３８】
本開示の細胞回復レジメンにおいて使用されるキレート剤は、好ましくは、即時放出性経口製剤中にあるが、また遅延放出性経口剤形または非経口調製物中にあってもよい。本開示の細胞回復レジメンは、ヒト（成人および子供の両方を含む）ならびに非ヒト動物に投与するために使用することができる。
【００３９】
５．４  投与レジメンを最適化するためのアッセイ
様々な細胞および動物モデルを使用して、金属キレート剤の最適投与間隔を評価することができる。これらのモデルは感受性器官の細胞に対する金属キレート剤の毒性作用を調べて用量毒性および用量間の細胞回復時間を決定する。
【００４０】
細胞培養において試験される細胞型は、ヒトにおいて悪影響を受ける細胞型、例えば肝細胞または顆粒球前駆細胞などを検討するように選択することができる。
【００４１】
腎臓毒性に対する金属キレート剤の効果を評価するため、初代腎近位尿細管細胞または不死化近位尿細管細胞株を、規定の培養培地を使用する組織培養で（ｉｎ  ｖｉｔｒｏで）増殖させることができる。これらの細胞の代謝状態（例えばＭＴＴＰアッセイ）、増殖（例えば細胞数）、および生存率（例えばトリパンブルー排除）を定量するためのアッセイが存在する。金属（例えば鉄）キレート剤を、腎臓のｉｎ  ｖｉｖｏ曝露をモデル化するために規定した期間、培地に添加することができる。例えば、ヒト患者において定常状態でデフェラシロクスを毎日経口投与した後、ピーク血清濃度は投与後約２時間で達成され、平均排出半減期は約１２時間である。デフェラシロクスはアルブミンに強固に結合されるので、アルブミンを培地に添加する。これをモデル化するため、培養中の細胞を、培地中の高ピーク血清濃度に２時間曝露することができる。培養培地は、１４時間の終わり（２時間の初期高濃度＋１２時間の低下濃度）に最終濃度が初期濃度の約半分になるように、低濃度のデフェラシロクスを含有する新しい培地と２時間ごとに交換することができる。デフェラシロクス濃度におけるこの２時間ごとの低下は２４時間の終わりまで継続され、デフェラシロクスが１日１回慢性的に投与されている患者で観察されるトラフ濃度とほぼ同等の濃度が生じる。この投与スキームは、数日間、例えば４日間繰り返され得る。細胞が代謝機能を回復することができるキレート剤のない期間を組み入れた細胞回復レジメンを使用して毒性を低減することができることを確認するため、金属キレート剤の標準投与に基づく曝露スケジュールを使用して観察される細胞毒性を、その後、細胞回復投与スケジュールに基づいた曝露スケジュールを使用して観察される毒性と比較する。例えばデフェラシロクスの場合、上述の細胞アッセイは、例えば、同じ日数の間、細胞を隔日で２倍の濃度のデフェラシロクスに曝露して同一総用量を達成することを含む、低減投与スケジュールを使用して実施することができる。
【００４２】
他のキレート剤の場合、アッセイは、そのキレート剤の典型的な薬物動態プロファイルを、細胞回復用のキレート剤のない期間を組み入れた変更プロファイルと比較するように設計されている。デフェリプロンは、例えば、１日３回、典型的には起床した朝に１回、昼に１回、夜に１回投与される。したがって、典型的なレジメンは、投与を約５時間離し、１時間後にピーク血清濃度が達成され、半減期は２時間である。これは、１時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの初期デフェリプロン高濃度、続いて２時間の５０％の濃度低下、その後２時間の５０％のさらなる低下によって模倣することができる。このサイクルがさらに２回繰り返され、患者における１日３回の投与が模倣される。細胞が代謝機能を回復することができるキレート剤のない期間を組み入れた細胞回復レジメンを使用して毒性を低減することができることを確認するため、次いで、金属キレート剤の標準投与に基づく曝露スケジュールを使用して観察される細胞毒性を、細胞回復投与スケジュールと比較する。デフェリプロンの場合、標準的な投与スケジュールに基づく曝露スケジュールを使用した毒性は、１０時間離された高濃度の２分割用量で投与された同一総用量をもたらすか、または２４時間離された単一用量をもたらす曝露スケジュールと比較する。
【００４３】
腎近位尿細管細胞および他の細胞、例えば肝細胞はまた、マイクロフルイディック腎臓モデル（「腎臓オンチップ」）または肝モデル（「肝臓オンチップ」）において培養され、様々な投与レジメンの薬物動態学のものを模倣する方法でキレート剤に曝露され得る。一実施形態では、金属キレート剤の毒性および細胞回復期間を評価するために使用される「腎臓オンチップ」モデルは、ＫｉｍおよびＴａｋａｙａｍａによって記載されているものである（Kim et al., 2015, Biofabrication. Volume 8, Number 1 015021, dx.doi.org/10.1088/1758-5090/8/1/015021）。より単純な細胞培養モデルと同様に、代謝状態および生存率は、標準の投与レジメン（例えば、デフェラシロクスの毎日投与、またはデフェリプロンについては１日３回投与）と比較して、細胞回復投与レジメン（例えば、デフェラシロクスの隔日投与、またはデフェリプロンについては１日２回もしくは１日１回投与）に応じて評価することができる。
【００４４】
投与レジメンの頻度はまた、動物において試験することもできる。例えば、同一総用量のキレート剤（例えば３０ｍｇ／ｋｇ／日）を１日３回１０ｍｇ／ｋｇとして動物の一群に投与することができ、一方、別の群の動物は１日２回１５ｍｇ／ｋｇを投与することができ、また第３群の動物は１日１回３０ｍｇ／ｋｇを投与することができる。アッセイの延長において、別の群の動物には隔日１回６０ｍｇ／ｋｇを投与することができ、またさらに別の群の動物には３日に１回９０ｍｇ／ｋｇを投与することができる。これらの動物は、明白な毒性および器官機能不全の証拠（例えば血清クレアチニンの上昇もしくは尿検査の異常もしくは肝臓酵素の上昇）、または組織における変化（例えば腎近位尿細管細胞の空胞化もしくは肝細胞における脂肪蓄積）についてモニターする。
【００４５】
これらのアッセイから得た情報を使用して、標準のキレート剤投与レジメンをキレート剤療法からの細胞回復期間を組み入れた変更レジメンと比較するために、ヒト臨床試験の用量選択を導くことができる。また変更レジメンは単独でも試験され、例えば標準レジメンを用いた試験から、過去の対照データと比較することができる。
【実施例】
【００４６】
６．実施例
[実施例１]
６．１  実施例１：ＳＰ−４２０の毎日投与と隔日投与の比較
この試験は、腎臓損傷分子−１（ＫＩＭ−１）のレベルおよび尿中のグルコースの存在（糖尿）を評価することによって、ＳＰ−４２０（ナトリウム塩として投与）の１日投与と隔日投与の毒性を比較するために実施した。ＫＩＭ−１は、げっ歯動物モデルおよびヒトの両方における腎臓損傷の感受性および特異的な尿バイオマーカーである（例えば、Sabbisetti et al., 2014, J Am Soc Nephrol. 25(10):2177-2186を参照されたい）。ＫＩＭ−１は、正常ラットの腎臓においては極微に発現されるが、腎臓損傷では顕著に発現される（例えば、Vaidya et al., 2010, Nat Biotechnol. 28(5): 478-485を参照されたい）。腎糸球体によって濾過されたグルコースは、通常、腎近位尿細管細胞によって完全に再吸収されるため、尿中にグルコースが検出されることは極めて異常である。糖尿は、極めて多量のグルコースが糸球体で濾過され、吸収の機序を破壊する状態である。糖尿は、一般的に、高血糖症に続発する真性糖尿病において、または腎臓ファンコーニ症候群のように、腎近位尿細管細胞が機能不全になる場合にのみ検出される。腎臓ファンコーニ症候群は、鉄キレート剤治療によって引き起こされることが報告されている。グルコースおよび他の濾過物質（例えば、アミノ酸、リン、尿酸）の吸収はエネルギー依存性が高く、腎近位尿細管細胞鉄のキレート化は、ミトコンドリアのエネルギー生産の低下をもたらし、吸収能力の低下を伴って細胞機能不全を引き起こす。
【００４７】
６．１．１．  方法
オスのスプラーグドーリー（Sprague-Dawley）ラット（１群あたりｎ＝５）に、１日１回（ＳＩＤ）１６２．５ｍｇ／ｋｇの用量で、または隔日の（ＥＯＤ）３２５ｍｇ／ｋｇの用量で、胃管強制により経口的にＳＰ−４２０を投与した。各ラット群は、ＳＰ−４２０の２６００ｍｇ／ｋｇの累積用量を受けた。尿は、代謝ケージＥＯＤから、投与の間、最後の投与の５日または６日後、さらに最後の投与の１１日または１２日後に回収し、そのＫＩＭ−１含有量について評価し、１０−パラメーター尿ディップスティック分析に供した。ＳＰ−４２０  ＥＯＤを投与した動物からの尿を、薬物を投与した直後２４時間に回収した。
【００４８】
６．１．２．  結果
ＳＩＤ治療ラットおよびＥＯＤ治療ラットはすべて、薬物への曝露で生存した。しかし、１６２．５ｍｇ／ｋｇ  ＳＩＤ群の１匹のラットは、継続的な体重減少および状態の悪化により、薬物投与の３日後に安楽死させた。尿ＫＩＭ−１レベルは両群において上昇したが、その上昇は薬物ＥＯＤを投与した動物においてはそれほど有意ではなかった。ＫＩＭ−１レベルにおける変化は、薬物投与の５日後または６日後までに概ねベースラインレベルに戻った。糖尿がＳＰ−４２０  ＳＩＤを投与したラットのうち４／５で観察されたが、ＳＰ−４２０  ＥＯＤが投与されたラットでは観察されなかった。
【００４９】
この試験からは、隔日のＳＰ−４２０投与が毎日投与に比べて毒性を低減することが明らかである。
【００５０】
[実施例２]
６．２  実施例２：実施例１の反復試験
実施例１において、「回復」ＫＩＭ−１レベルは、最後の投与の５日後または６日後まで測定されなかった。ＫＩＭ−１レベルがこの期間中に顕著に低下したことは明らかであったが、実施例１の試験は、パラメーターがどれほど速やかにベースラインレベルに戻ったかを示すようには設計されてはいなかった。さらに、実施例１においては、尿を、薬物投与直後の２４時間にキレート剤ＥＯＤを投与したラットから回収したが、ＳＰ−４２０の次の投与に至るまでの２４〜４８時間に生じた尿についてはデータを収集しなかった。この「休止」日の間に何が起こったのかを決定し、尿ＫＩＭ−１レベルが投与間で低下するか否かを決定するため、実施例１の試験を多少変更して繰り返した。
【００５１】
６．２．１．方法
１０匹のオスのスプラーグドーリーラットを無作為に５匹の２つの群に分け、実施例１と同様に投与した。ラットを代謝ケージＥＯＤに収容した実施例１とは異なり、この反復試験での動物は、投与レジメンの過程を通して、またその後６日間、代謝ケージに個別に収容し、回復期間中、尿を回収した。尿を、試験の過程を通して２４時間間隔で回収し、そのＫＩＭ−１含有量について評価した。薬物ＥＯＤを投与されているラットについて、ＫＩＭ−１データを薬物投与直後の０〜２４時間、ならびに「休止」の日（薬物投与後２４〜４８時間）の両方から得た。ラットの体重は、毎日１回測定した。体重の変化は、動物のベースライン体重対薬物の最後の投与が行われた日のそれらの体重から計算した。
【００５２】
６．２．２．結果
すべてのラットは、試験薬への曝露で生存した。１６２．５ｍｇ／ｋｇ  ＳＩＤ群からの１匹のラットは、体重減少および全体的な状態の悪化により、最後の投与の４日後に安楽死させた。
【００５３】
各群のラットに関する代表的なＫＩＭ−１データを図１Ａ〜１Ｂに示す。図１Ａ〜１Ｂは、ＳＰ−４２０が両群の動物においてＫＩＭ−１レベルの上昇を誘導したことを示すが、その値はベースライン付近まで急速に戻った。ＳＰ−４２０  ＥＯＤを投与したラットにおけるＫＩＭ−１レベルの上昇は、ＳＰ−４２０  ＳＩＤを投与した動物においてはそれほど有意ではなかった。これは、図２に示したＫＩＭ−１試験紙に描かれている。番号１〜５の試験紙は、１６２．５ｍｇ／ｋｇ／日でＳＰ−４２０  ＳＩＤが投与されたラットからのものであり、一方、番号６〜１０の試験紙は、３２５ｍｇ／ｋｇ  ＥＯＤでＳＰ−４２０が投与されたラットからのものである。線「Ｃ」は内部標準であり、一方、線「Ｔ」は試験動物に関する結果を示す。試験紙３〜５の線「Ｔ」は非常にはっきりしているが、試験紙７を除く試験紙６〜１０のいずれにおいてもごくわずかなＫＩＭ−１が観察された。ＫＩＭ−１レベルは、図３に示したように、最後の投与から投与後５日まで低下した。図３は、投与期間の終了時（左側）および投与後５日（右側）のＳＰ−４２０  ＳＩＤ投与されたラットからのＫＩＭ−１試験紙を示す。薬物投与後５日目にごくわずかなＫＩＭ−１が試験紙＃４または＃５に観察された。試験紙＃３に対応するラットは、投与後５日目のサンプルを得る前に安楽死させた。
【００５４】
試験の条件下において、ＫＩＭ−１レベルは、（代表的な図１Ｂに示したように）「休止」日にＥＯＤ治療したラットでは低下しなかった。またこれはＳＰ−４２０  ＳＩＤで治療したラットの回復データにおいても観察され、ＫＩＭ−１レベルは、投与の最終日に確認されたものと薬物投与２４時間後の尿中のＫＩＭ−１の量との間で実質的な変化はなかった。しかし、ＥＯＤ動物における用量間の、またはＳＩＤげっ歯動物における薬物中止２４時間以内のＫＩＭ−１低下がないことは驚くことではない。これらの試験におけるラットは、一般に、１日あたり１０〜１５ｍｌ未満の尿を排出する。こうした少量の尿が生成されることから、かなりのＫＩＭ−１、グルコースなどが、ある日から次の日にかけて持ち越されていることが十分に考えられる。例えば、図４に示した写真は、２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量のＳＰ−４２０でＳＩＤ治療したラットの２４時間尿サンプルを示す。その日に生成された尿量はわずかに１４．６ｍＬであった。チューブの下半分は正常に見える尿が含まれていたが、上半分は明らかな血液の層が含まれていた。この単一の２４時間サンプル中に観察された正常な尿と血液を含む尿との「層化作用（layering effect）」に基づくと、ある２４時間回収期間の終了時に存在するＫＩＭ−１またはグルコースの一部が翌日の尿検体にも排出され続けることが予測されることは不適当ではない。
【００５５】
各群の全ラットについての平均ＫＩＭ−１データを図５に示す。図５は、ＳＰ−４２０が両群の動物における平均ＫＩＭ−１レベルの上昇を誘導したことを示しているが、この平均値はベースライン付近まで急速に戻った。ＳＰ−４２０  ＥＯＤが投与されたラットにおける平均ＫＩＭ−１レベルの上昇は、ＳＰ−４２０  ＳＩＤが投与された動物においてはそれほど有意ではなかった。
【００５６】
糖尿は、ＳＰ−４２０  ＳＩＤが投与された３／５のラットで観察された。回復期間中、糖尿は、薬物投与１日後のラット３匹のすべてで、薬物投与２日後のラットの１／３で観察され続け、最終投与３日後までには罹患ラットはなかった。糖尿は、３２５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−４２０  ＥＯＤが投与されたラットのいずれにも観察されなかった。
【００５７】
６．２．３．要約
実施例２は、隔日のＳＰ−４２０投与が１日１回よりも毒性を低減することを示す。これは、尿ＫＩＭ−１排出の点、ならびに試験動物の尿中のグルコースの有／無の点の両方から反映される。薬物投与２〜６日後の尿中ＫＩＭ−１レベルの急速な低下は、週末休止のある週３日の投与スケジュールで、例えば月曜、水曜、金曜服薬スケジュールで患者にキレート剤を投与するという考えを強く支持する。月曜日、水曜日および金曜日の投与スケジュールの場合、週末の休止は、必要に応じて、月曜日に投与が再開される前に腎臓を回復させる時間を調整することができる。
【００５８】
[実施例３]
６．２．４．実施例３：異なる用量のＳＰ−４２０の毎日投与と隔日投与の比較
実施例１および２に記載したものと同様の試験を、ＳＰ−４２０の２５０ｍｇ／ｋｇ  ＥＯＤ、２５０ｍｇ／ｋｇ  ＳＩＤ、５００ｍｇ／ｋｇ  ＥＯＤ、２００ｍｇ／ｋｇ  ＳＩＤおよび４００ｍｇ／ｋｇ  ＥＯＤを用いて実施した。試験の結果は、実施例１および２に記載した試験の結果と共に以下の表１に要約している。表１に示したように、糖尿およびＫＩＭ−１レベルは、同じ累積用量に関するＳＩＤレジメンと比較して、ＥＯＤ投与レジメンについては一貫して低かった。まとめると、データは、隔日または週３回（例えば月曜日、水曜日、金曜日）の投与スケジュールで患者にＳＰ−４２０を投与するという考えを支持するものである。
【００５９】
【表１】
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【００６０】
７．特定の実施形態、参考文献の引用
様々な特定の実施形態を図示し説明してきたが、様々な変更を本開示（複数可）の趣旨および範囲から逸脱することなく行うことができることは理解されよう。本開示は、以下に記載の番号付与した実施形態によって例示される。
【００６１】
１．対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の腎臓、胃腸、肝臓、血液、聴覚、視覚および／もしくは皮膚の毒性を低減する方法であって、複数回用量の金属キレート剤を前記対象に経口投与することを含み、各用量が、前回の投与の２４時間後よりも後、および／または１週間に５回以下で投与される、方法。
２．対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の腎臓、視覚、聴覚、神経、呼吸器および／もしくは筋骨格の毒性を低減する方法であって、５回未満の週用量の金属キレート剤を前記対象に静脈内または皮下投与することを含む、
方法。
３．前記金属キレート剤が週に５回投与される、実施形態１に記載の方法。
４．前記金属キレート剤が週に４回投与される、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
５．前記金属キレート剤が週に３回投与される、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
６．前記金属キレート剤が月に１５〜２５回投与される、実施形態１に記載の方法。
７．前記金属キレート剤が月に２０〜２５回投与される、実施形態１に記載の方法。
８．前記金属キレート剤が月に１２〜１８回投与される、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
９．前記金属キレート剤が月に１５〜２０回投与される、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
１０．前記金属キレート剤が２８〜７２時間ごとに投与される、実施形態１から９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記金属キレート剤が２８時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１２．前記金属キレート剤が３２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１３．前記金属キレート剤が３６時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１４．前記金属キレート剤が４２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１５．前記金属キレート剤が４８時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１６．前記金属キレート剤が２日ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１７．前記金属キレート剤が６０時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１８．前記金属キレート剤が７２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
１９．前記金属キレート剤が３日ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２０．前記金属キレート剤が２８〜３６時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２１．前記金属キレート剤が３２〜４８時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２２．前記金属キレート剤が３６〜４８時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２３．前記金属キレート剤が３２〜６０時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２４．前記金属キレート剤が３６〜６０時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２５．前記金属キレート剤が４８〜６０時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２６．前記金属キレート剤が３２〜７２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２７．前記金属キレート剤が３６〜７２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２８．前記金属キレート剤が４８〜７２時間ごとに投与される、実施形態１０に記載の方法。
２９．対象における（ａ）金属誘発性疾患を治療し、かつ／または（ｂ）金属キレート剤の血液、胃腸、肝臓および／もしくは筋骨格の毒性を低減する方法であって、前記方法が１回または２回の日用量の前記金属キレート剤を前記対象に経口投与することを含み、前記金属キレート剤がデフェリプロンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物である、方法。
３０．２回の日用量の前記金属キレート剤を投与することを含む、実施形態２９に記載の方法。
３１．前記日用量が６、９、または１２時間間隔で投与される、実施形態２９に記載の方法。
３２．前記金属キレート剤が週に１４回投与される、実施形態２９に記載の方法。
３３．前記金属キレート剤が少なくとも１週間の期間投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．前記金属キレート剤が少なくとも１カ月の期間投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記金属キレート剤が少なくとも３カ月の期間投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３６．前記金属キレート剤が少なくとも６カ月の期間投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３７．前記金属キレート剤が少なくとも１年間の期間投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記金属キレート剤が無期限に投与される、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の方法。
３９．標準日用量より多い用量が各投与時に投与される、実施態様１から３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．投与される総週用量が標準総週用量に等しい、実施形態１から３９のいずれか１つに記載の方法。
４１．投与される前記総週用量が前記標準総週用量より少ない、実施形態１から３９のいずれか１つに記載の方法。
４２．投与される前記総週用量が前記標準総週用量の０．７５〜０．９倍である、実施形態４１に記載の方法。
４３．前記標準日用量が各投与時に投与される、および／または投与される前記総週用量が前記標準総週用量に等しい、実施形態１から３８のいずれか１つに記載の方法。
４４．投与される前記総週用量が前記標準総週用量より多い、実施形態１から３９のいずれか１つに記載の方法。
４５．投与される前記総週用量が前記標準総週用量の１．２５〜２倍である、実施形態４４に記載の方法。
４６．前記金属が鉄である、実施形態１から４５のいずれか１つに記載の方法。
４７．前記金属キレート剤が鉄キレート剤である、実施形態４６に記載の方法。
４８．前記金属キレート剤がＳＰ−４２０化合物以外のものである、実施形態１から４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．実施形態２９から３２または３９から４５のいずれか１つに直接的にまたは間接的に依存する場合を除き、前記鉄キレート剤がＳＰ−４２０化合物である、実施形態４７に記載の方法。
５０．前記ＳＰ−４２０化合物が１８〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５１．前記ＳＰ−４２０化合物が１８〜３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５２．前記ＳＰ−４２０化合物が２４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５３．前記ＳＰ−４２０化合物が４０〜６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５４．前記ＳＰ−４２０化合物が６０〜８４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５５．前記ＳＰ−４２０化合物が７２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５６．前記ＳＰ−４２０化合物が５００ｍｇから１０ｇの間の範囲の用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５７．前記ＳＰ−４２０化合物が１ｇ〜５ｇの範囲の用量で投与される、実施形態４９に記載の方法。
５８．前記ＳＰ−４２０化合物が５４〜４００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与される、実施形態４９から５７のいずれか１つに記載の方法。
５９．前記ＳＰ−４２０化合物が５４〜１００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与される、実施形態５８に記載の方法。
６０．前記ＳＰ−４２０化合物が１００〜２００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与される、実施形態５８に記載の方法。
６１．前記ＳＰ−４２０化合物が２００〜３００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与される、実施形態５８に記載の方法。
６２．前記ＳＰ−４２０化合物が３００〜４００ｍｇ／ｋｇの総週用量で投与される、実施形態５８に記載の方法。
６３．前記ＳＰ−４２０化合物が１．５ｇから３０ｇの間の範囲の総週用量で投与される、実施形態４９から５７のいずれか１つに記載の方法。
６４．前記ＳＰ−４２０化合物が３ｇから３０ｇの間の範囲の総週用量で投与される、実施形態６３に記載の方法。
６５．前記ＳＰ−４２０化合物が５ｇから２０ｇの間の範囲の総週用量で投与される、実施形態６３に記載の方法。
６６．前記ＳＰ−４２０化合物がＳＰ−４２０（（Ｓ）−４，５−ジヒドロ−２−［２−ヒドロキシ−４−（３，６−ジオキサヘプチルオキシ）フェニル］−４−メチル−４−チアゾールカルボン酸）である、請求項４９から６５のいずれか１つに記載の方法。
６７．前記ＳＰ−４２０化合物がＳＰ−４２０の薬学的に許容される塩である、実施形態４９から６５のいずれか１つに記載の方法。
６８．前記ＳＰ−４２０化合物がＳＰ−４２０の薬学的に許容される溶媒和物である、実施形態４９から６５のいずれか１つの方法。
６９．前記ＳＰ−４２０化合物がＳＰ−４２０の薬学的に許容される水和物である、実施形態４９から６５のいずれか１つに記載の方法。
７０．前記鉄キレート剤がデフェリプロンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物である、実施形態４７に記載の方法。
７１．前記デフェリプロンの標準用量が経口投与による１日３回２５〜３３ｍｇ／ｋｇである、実施形態７０の方法。
７２．前記対象に投与される前記デフェリプロンの用量が１日２回３７．５〜４９．５ｍｇ／ｋｇまたは１日１回６６〜９９ｍｇ／ｋｇである、実施形態７０に記載の方法。
７３．実施形態２９から３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記鉄キレート剤がデフェロキサミンまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物である、実施形態４７に記載の方法。
７４．前記デフェロキサミンの標準用量が、２０〜５０ｍｇ／ｋｇであり、週５〜７日８〜１２時間にわたる低速皮下注入もしくは静脈内注入として投与される、または５００〜１０００ｍｇであり毎日の注射として投与される、実施形態７３に記載の方法。
７５．前記対象に投与される前記デロキサミンの用量が、２０〜５０ｍｇ／ｋｇであり週５〜７日４〜６時間にわたる低速皮下注入として投与される、または４０〜１００ｍｇ／ｋｇであり、週２〜３日８〜１２時間にわたる低速皮下注入もしくは静脈内注入として投与される、または１０００〜２０００ｍｇであり、隔日注射として投与される、実施形態７３に記載の方法。
７６．実施形態２９〜３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記鉄キレート剤がデフェラシロクス、その薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物である、実施形態４７に記載の方法。
７７．前記デフェラシロクスの標準用量が２０〜４０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回経口投与される、実施形態７６に記載の方法。
７８．前記対象に投与される前記デフェラシロクスの用量が、４０〜８０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回経口投与される、実施形態７６に記載の方法。
７９．実施形態２９から３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記鉄キレート剤がデフェリトリン、その薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物である、実施形態４７に記載の方法。
８０．前記デフェリトリンの標準用量が１０〜８０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８１．前記デフェリトリンの標準用量が１０〜６０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８２．前記デフェリトリンの標準用量が１０〜４０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８３．前記対象に投与される前記デフェリトリンの用量が、２０〜１６０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８４．前記対象に投与される前記デフェリトリンの用量が、２０〜１２０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８５．前記対象に投与される前記デフェリトリンの用量が、２０〜８０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回経口投与される、実施形態７９に記載の方法。
８６．実施形態２９から３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記鉄キレート剤がＳＰＤ６０２（ＦＢＳ０７０１）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物である、実施形態４７に記載の方法。
８７．前記ＳＰＤ６０２の標準用量が１０〜６０ｍｇ／ｋｇであり、１日１回経口投与される、実施形態８６に記載の方法。
８８．前記対象に投与される前記ＳＰＤ６０２の用量が、２０〜１２０ｍｇ／ｋｇであり、隔日１回経口投与される、実施形態８６に記載の方法。
８９．前記金属誘発性疾患が鉄過剰である、実施形態４６から８８のいずれか１つに記載の方法。
９０．前記金属誘発性疾患が体内の鉄の不均等分布または再分布の結果である、実施形態８９に記載の方法。
９１．前記金属誘発性疾患が無トランスフェリン血症、無セルロプラスミン血症またはフリードライヒ運動失調症（Fredreich's ataxia）である、実施形態８９に記載の方法。
９２．前記金属誘発性疾患が輸血鉄過剰の結果である、実施形態８９に記載の方法。
９３．前記金属誘発性疾患がβ−サラセミアである、実施形態８９に記載の方法。
９４．前記金属誘発性疾患が重症型β−サラセミアである、実施形態９３に記載の方法。
９５．前記金属誘発性疾患が中間型β−サラセミアである、実施形態９３に記載の方法。
９６．前記金属誘発性疾患が鎌状赤血球貧血、ダイアモンド−ブラックファン貧血、鉄芽球性貧血、慢性溶血性貧血、治療離脱白血病（off-therapy leukemia）、骨髄移植または骨髄異形成症候群である、実施形態８９に記載の方法。
９７．前記金属誘発性疾患が食事由来鉄の過剰吸収をもたらす遺伝性疾患である、実施形態８９に記載の方法。
９８．前記金属誘発性疾患が遺伝性ヘモクロマトーシスまたは晩発性皮膚ポルフィリン症である、実施形態９７に記載の方法。
９９．前記金属誘発性疾患が過剰な食事由来鉄の吸収をもたらす後天性疾患である、実施形態８９に記載の方法。
１００．前記金属誘発性疾患が肝臓疾患である、実施形態９９に記載の方法。
１０１．前記肝臓疾患が肝炎である、実施形態１００に記載の方法。
１０２．実施形態３３から４５が実施形態２９から３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記金属誘発性疾患がランタニドまたはアクチニド過剰である、実施形態１から２８および３３から４５のいずれか１つに記載の方法。
１０３．前記金属キレート剤がジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）である、実施形態１０２に記載の方法。
１０４．実施形態３３から４５が実施形態２９から３３のいずれか１つに直接的または間接的に依存する場合を除き、前記金属が鉛または水銀である、実施形態１から２８および３３から４５のいずれか１つの方法。
１０５．前記金属誘発性疾患が鉛または水銀中毒である、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．前記金属キレート剤がエデト酸カルシウム二ナトリウムまたはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である、実施形態１０５に記載の方法。
【００６２】
本明細書に引用されているすべての刊行物、特許、特許出願および他の文書は、あたかもそれぞれの個別の刊行物、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的で参照により組み込まれることが個別に示されたのと同程度に、あらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に組み込まれている１つまたは複数の参考文献の教示と本開示との間に矛盾がある場合には、本明細書の教示が意図される。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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