(57)【要約】  ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｇｐ１４０タンパク質、ソルビトール、ポリソルベート２０、及びヒスチジンバッファーを含有する免疫原性組成物が記載される。記載される免疫原性組成物は、長期間の冷蔵温度で安定であり、アジュバントに適合するという点で有利である。また、対象においてＨＩＶに対する免疫応答を誘導する免疫原性組成物を使用する方法が記載される。本免疫原性組成物は、単独で投与することも、１種以上の追加のＨＩＶ抗原又は１種以上の追加のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクターと組み合わせて投与することもできる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫原性組成物であって、前記組成物の総容量に対して：
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質又は少なくとも２種のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の混合物；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質又はＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の前記混合物の濃度が、０．２ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質又はＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の前記混合物の濃度が、１ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
ソルビトールの濃度が５％（ｗ／ｖ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ソルビトールの濃度が１２％（ｗ／ｖ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ポリソルベート２０の濃度が０．０２％（ｗ／ｖ）である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記ヒスチジンバッファーの濃度が１０ｍＭであり、かつ前記ヒスチジンバッファーのｐＨが６．５である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
リン酸アルミニウムアジュバントを、例えば０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬで、例えば０．８５ｍｇ／ｍＬで、又は３．８４ｍｇ／ｍＬでさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
前記ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質との混合物を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
免疫原性組成物であって、前記組成物の総容量に対して、
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ若しくは１ｍｇ／ｍＬの、配列番号１若しくは配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、又は配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質との混合物；
ｂ．５％又は１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．リン酸アルミニウムアジュバント、例えば０．８５ｍｇ／ｍＬ又は３．８４ｍｇ／ｍＬ
を含む免疫原性組成物。
【請求項１３】
免疫原性組成物を調製する方法であって、
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質又は少なくとも２種のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１％〜０．０５％のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を混合して、
それによって、前記免疫原性組成物を得ることを含む、方法。
【請求項１４】
例えば０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウムアジュバントを混合することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
２〜８℃での少なくとも６ヶ月間の貯蔵に対して安定である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む、長期間の貯蔵に安定な免疫原性組成物を調製する方法であって、前記方法が、（ｉ）請求項１〜１２又は１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を提供することと、（ｉｉ）前記組成物を２〜８℃で、少なくとも１週間、例えば少なくとも１ヶ月間、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、例えば１８〜３０ヶ月間保存することと、を含む、方法。
【請求項１７】
ＨＩＶに対する免役応答を誘導するために、対象に、好ましくはヒト対象に投与するための請求項１〜１２又は１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用であって、前記免疫原性組成物が前記投与の前に、２〜８℃で１日〜３６ヶ月の間保存されている、使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
世界中で数百万人もの人々がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に襲われており、抗レトロウイルス治療が広く行き渡った時代でさえも、有効なワクチンによるＨＩＶの予防は非常に高い優先度であり続けている。ＨＩＶ−１は当該ウイルスの中で最も一般的であり、かつ最も病原性のある株であり、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの９０％を超える症例はＨＩＶ−１のグループＭの感染に由来している。グループＭはさらに、クレード又はサブタイプに細分される。有効なワクチンは、理論上、強力な細胞応答、及び様々なクレード由来のＨＩＶ−１株を中和できる広範な中和抗体の両方を誘発できるであろう。
【０００２】
ＨＩＶ−１の高い遺伝的変異性が、ＨＩＶ−１ワクチンの開発を先例のない難題にしている。潜在的なＴ細胞エピトープの適用範囲を改善するため、及び細胞応答を改善するために、ＨＩＶ群の抗原（Ｇａｇ）、ポリメラーゼ（Ｐｏｌ）、及びエンベロープ（Ｅｎｖ）由来の「モザイク」ＨＩＶ−１  Ｇａｇ、Ｐｏｌ及びＥｎｖ抗原が、他の研究者らによって記載され、潜在的なＴ細胞エピトープの最大限の適用範囲を実現するために開発された（例えば、Ｂａｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１０，１６：３１９−３２３）。モザイク抗原は、長さ及びドメイン構造が野生型の天然に存在するＨＩＶ−１抗原に類似している。
【０００３】
モザイク抗原をコードする配列は、例えば、組換えアデノウイルス血清型２６（ｒＡｄ２６）などのベクターにおいてクローン化されており、これらの組換えベクターは、ＨＩＶに対する免疫応答を惹起するワクチンにおいて使用されている（上記のＢａｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ；及び国際公開第２０１０／０５９７３２号パンフレットを参照されたい）。このようなモザイクＨＩＶ抗原を発現するウイルスベクターは、ＨＩＶ感染に対する免疫応答の誘発において有効であることが証明されている。
【０００４】
ＨＩＶに対する免疫応答を誘導するために探索されてきた別の治療戦略は、ｇｐ１４０などワクチンにおける免疫原としての三量体ＨＩＶエンベロープタンパク質の使用である。ＨＩＶの表面上の天然のエンベロープスパイクは三量体である。三量体エンベロープタンパク質の例としては、国際公開第２０１４／０４２９４２号パンフレット及び国際公開第２０１４／１０７７４４号パンフレットに記載されるものなど、クレードＣのｇｐ１４０タンパク質、及びモザイクエンベロープ三量体タンパク質が挙げられる。
【０００５】
クレードＣのｇｐ１４０タンパク質は、例えば、国際公開第２０１０／０４２９４２号パンフレット及びＮｋｏｌｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．２０１０において以前に記載されたが、それらの開示では、いずれの医薬製剤の作用にも焦点を当てていなかった。それらの開示では、いくつかの実験において、タンパク質は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中にあった。モザイクｇｐ１４０は、例えば、国際公開第２０１４／１０７７４４号パンフレット及びＮｋｏｌｏｌａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１４において、以前に記載されたが、それらの開示でもまた、いずれの医薬製剤の作用にも焦点を当てていなかった。それらの開示では、いくつかの実験において、タンパク質は、２５ｍＭトリス（ｐＨ７．５及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中にあった。
【０００６】
ｇｐ１４０などの三量体ＨＩＶエンベロープタンパク質は、強力な免疫応答を誘導することができる。そのようなエンベロープタンパク質はまた、モザイク抗原などの他のＨＩＶ抗原と組み合わせて投与して、ＨＩＶに対する免疫の亢進をもたらすことができる。しかし、ＨＩＶエンベロープタンパク質の三量体としての安定性は、臨床及び商業上の製造のために通常使用される条件下では最適ではない。三量体ＨＩＶエンベロープタンパク質は、化学的にも物理的にも分解されやすい。さらに、バッファーの配合などの多くの様々な要因が、タンパク質の安定性に影響を及ぼす可能性があり、その影響は予想できない場合が多い。例えば、タンパク質製剤中でのＨＥＰＥＳバッファーの使用は、製造プロセス中に周囲光に曝された際に過酸化水素の発生を引き起こすことが示されており、タンパク質の安定性、及び界面活性剤などの製剤中の他の成分に影響を与える可能性がある。例えば、Ｂａｉｃｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）４５（１）３３−４８；Ｌｅｐｅ−Ｚｕｎｉｇａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８７）１０３（１），１４５；及びＺｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（１９８５）２１（５），２８２−２８７を参照されたい。クレードＣのｇｐ１４０又はモザイクｇｐ１４０など、また好ましくは単一バイアル製剤としてリン酸アルミニウムアジュバントを有するｇｐ１４０タンパク質の様々な変形体の安定性に好適であること（ワクチンの送達の直前に混合する調剤法に完全に依存しているのではない）に加えて、大規模後期フェーズ及び商業規模の要求を満たす製剤の製造を可能にするであろうＨＩＶワクチンｇｐ１４０製剤を有することが望ましい。成分のどの組み合わせが、これらの全ての要件を満たす製剤をもたらすことになるかは、一般に予測できない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、当技術分野では、このような三量体エンベロープタンパク質の十分な治療上の可能性を実現するために、臨床及び商業上の製造のために使用される条件下で良好な安定性を有するＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の改善された製剤が必要である。これらの製剤はまた、ＨＩＶ抗原を発現するベクターを含む追加のＨＩＶ抗原、及び／又はアジュバントと共に使用するために適合性を有する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、改善された安定性を有するＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の免疫原性組成物に関する。本発明の免疫原性組成物は、冷蔵条件下で長期間保存することができ、臨床及び商業上の製造における使用にとって、より最適である。本発明の免疫原性組成物はまた、アジュバントを含むことができる。本発明はまた、免疫原性組成物を調製する方法、及びＨＩＶに対する免疫応答を誘導するための本免疫原性組成物の使用方法に関する。
【０００９】
１つの一般的態様では、本発明は、組成物の総容量に対して：
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を含む免疫原性組成物に関する。
【００１０】
好ましくは、本発明の実施形態による免疫原性組成物は、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質などの、安定化三量体ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む。
【００１１】
本発明の特定の実施形態では、免疫原性組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む。
【００１２】
特定の実施形態では、本発明の実施形態による免疫原性組成物は、５％（ｗ／ｖ）〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む。
【００１３】
特定の実施形態では、免疫原性組成物は、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファーを含む。
【００１５】
本発明の実施形態によれば、免疫原性組成物はさらに、リン酸アルミニウムアジュバントなどのアジュバントを含む。こうした実施形態の一部では、リン酸アルミニウムは、０．７〜５．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．８〜４．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．８５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、３．８４ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬの濃度で組成物中に存在し得る。ある種の実施形態では、リン酸アルミニウムは、０．８５ｍｇ／ｍＬの濃度で免疫原性組成物中に存在する。ある種の実施形態では、リン酸アルミニウムは、３．８４ｍｇ／ｍＬの濃度で免疫原性組成物中に存在する。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、組成物の総容量に対して、
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む。
【００１７】
別の一般的態様では、本発明は、
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１％〜０．０５％のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を混合して、
それによって、免疫原性組成物を得ることを含む、免疫原性組成物を調製する方法に関する。
【００１８】
ある種の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバントを含み、少なくとも１ヶ月間、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６ヶ月間、より好ましくは７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間、さらに好ましくは少なくとも１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月間、最も好ましくは少なくとも２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６ヶ月間以上、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、２〜８℃の温度での貯蔵に安定である。ある種の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバントを含み、少なくとも６ヶ月間、例えば６〜１２ヶ月間又は６〜２４ヶ月間、２５℃の温度で安定である。ある種の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバントを含み、少なくとも１週間、例えば１〜１２週間、例えば少なくとも２週間、３週間、４週間、１ヶ月間、例えば１〜２ヶ月間、１〜３ヶ月間、又は３〜６ヶ月間、４０℃の温度で安定である。
【００１９】
また別の一般的態様では、本発明は、治療有効量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法に関する。
【００２０】
特定の実施形態では、ＨＩＶに対する免疫応答を誘導する方法は、それを必要とする対象に、組成物の総容量に対して、
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む、免疫原性組成物を投与することを含む。
【００２１】
本発明のある種の実施形態では、ＨＩＶに対する免疫応答を誘導する方法はさらに、１つ以上の追加のＨＩＶ抗原を含む又はコードする、例えば、配列番号３〜１２のアミノ酸配列を含む又はコードする、治療有効量の第２の免疫原性組成物を対象に投与することを含む。この方法は、１つ以上のベクター、好ましくは、配列番号３〜１２のアミノ酸配列を含むものなど、１つ以上のＨＩＶ抗原をコードするアデノウイルス２６ベクターを投与することを含むことが好ましい。ＨＩＶに対する免疫応答を誘導する方法はまた、配列番号３〜１２のアミノ酸配列を含むものなど、１つ以上のＨＩＶ抗原をコードする１つ以上のＭＶＡベクターを投与することを含むことができる。１つ以上の追加のＨＩＶ抗原はまた、（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する、配列番号１１を含むことができる。一実施形態では、配列番号１１を含む抗原は、配列番号１２を含む。
【００２２】
別の一般的態様では、本発明は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む、長期間の貯蔵に安定な免疫原性組成物を調製する方法に関し、方法は、
（ｉ）以下の構成成分を混合して、免疫原性組成物を作製することであって、組成物の総容量に対してこれらの構成成分を：
（ａ）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
（ｂ）２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
（ｃ）０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；及び
（ｄ）ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファーの量で含み、
（ｅ）水、
（ｆ）リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバントを含む、ことと；
（ｉｉ）組成物を２〜８℃で、少なくとも１ヶ月間、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間保存することと、を含む。
【００２３】
上述の概要及び下記の本発明の詳細な説明は、添付した図面と共に読む場合により良く理解されるであろう。本発明は図面に示される明確な実施形態に限定されないことを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１Ａ】図１：図１Ａ及び図１Ｂは、酢酸バッファー、リン酸バッファー、及びヒスチジンバッファーにより調製されたＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質製剤のＳｏｌｖｏＶＰＥ分析の結果と、ソルビトール及びスクロースで調製されたＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質製剤の動的光散乱（ＤＬＳ）分析の結果を示し；特に：図１Ａは、ＳｏｌｖｏＶＰＥ分析の結果を示す；３５０ｎｍにおける吸光度の変化（濁度）を２８０ｎｍにおける吸光度の変化（濃度）に対してプロットし；データ点は、時間０で分析された試料（Ｔ０）と４０℃で２４時間負荷を与えた後の試料（Ｔ２４）との間の変化を示す；ＳｏｌｖｏＶＰＥ分析は実施例１に記載の通りに実施した；図１Ｂは、ＤＬＳ分析の結果を示す；２０℃の時間０（Ｔ０）から７０℃の時間７日（Ｔ７日）の半径（Ｒｈ）の変化を糖（ソルビトールに対するスクロース）によってプロットする；ＤＬＳ分析は実施例１に記載の通りに実施した。
【図１Ｂ】（上記の通り。）
【図２Ａ】図２：図２Ａ〜２Ｆは、実施例２に記載のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質製剤の高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）分析の結果を示す；ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の六量体、三量体、及び高／低分子量種の相対量を、時間０（Ｔ０）及び４０℃で２４時間（Ｔ２４）負荷を与えた後に分析された試料のＨＰ−ＳＥＣにより測定した；「Ｔｒｉ＋Ｈｅｘ」は、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の三量体種及び六量体種の相対量を指し、「ＬＭＷ」は、低分子量種、例えば、切断産物又は分解産物を指し、特に：図２Ａは、異なるタンパク質濃度（０．２ｍｇ／ｍＬ及び１．０ｍｇ／ｍＬ）でのＴ０におけるＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の六量体種及び三量体種の相対量（％）を示す；図２Ｂは、異なる界面活性剤濃度（０．０２％及び０．１％）でのＴ０におけるＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の六量体種及び三量体種の相対量（％）を示し；示されるデータは、ＰＳ２０含有試料及びＰＳ８０含有試料から収集されたデータの組み合わせである；図２Ｃは、異なるタンパク質濃度（０．２ｍｇ／ｍＬ及び１．０ｍｇ／ｍＬ）でのＴ２４におけるＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の六量体種及び三量体種の相対量（％）を示す；図２Ｄは、異なる界面活性剤濃度（０．０２％及び０．１％）でのＴ２４におけるＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の六量体種及び三量体種の相対量（％）を示し；示されるデータは、ＰＳ２０含有試料及びＰＳ８０含有試料から収集されたデータの組み合わせである；図２Ｅは、Ｔ０試料における界面活性剤のタイプ（ＰＳ２０対ＰＳ８０）に基づくＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の低分子量種の相対量（％）を示す；図２Ｆは、異なる界面活性剤濃度でのＴ２４におけるＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質の低分子量種の相対量（％）を示す；
【図２Ｂ】（上記の通り。）
【図２Ｃ】（上記の通り。）
【図２Ｄ】（上記の通り。）
【図２Ｅ】（上記の通り。）
【図２Ｆ】（上記の通り。）
【図３Ａ】図３：図３Ａ及び図３Ｂは、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質製剤の安定性試験の結果を示す；ＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質製剤を、実施例３に記載の複数回の凍結融解サイクルに晒した；図３Ａは、１回、３回、及び５回の凍結融解サイクル後に２８０ｎｍの吸光度を測定することにより決定したタンパク質濃度を示し；並びに図３Ｂは、１回、３回、及び５回の凍結融解サイクル後に３５０ｎｍの吸光度を測定することにより決定した試験製剤の濁度を示す；
【図３Ｂ】（上記の通り。）
【図４Ａ】図４：図４Ａ〜４Ｃは、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質製剤の安定性試験の結果を示す；ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質製剤を、２５℃及び６０％の相対湿度（ＲＨ）、並びに４０℃及び７５％のＲＨで、リン酸アルミニウムアジュバントの有無の両方で保存し、続いて、実施例４に記載の還元ＳＤＳ分析法を用いて試験した；図４Ａは、リン酸アルミニウムアジュバントを含まずに２５℃及び６０％のＲＨで保存したＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０製剤の相対タンパク質濃度（％）を示す；図４Ｂは、リン酸アルミニウムアジュバントを含まずに４０℃及び７５％のＲＨで保存したＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０製剤の相対タンパク質濃度（％）を示す；図４Ｃは、リン酸アルミニウムアジュバントを含んで２５℃及び６０％のＲＨで保存したＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０製剤の相対タンパク質濃度（％）を示す；図４Ｄは、リン酸アルミニウムアジュバントを含んで４０℃及び７５％のＲＨで保存したＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０製剤の相対タンパク質濃度（％）を示す；
【図４Ｂ】（上記の通り。）
【図４Ｃ】（上記の通り。）
【図４Ｄ】（上記の通り。）
【発明を実施するための形態】
【００２５】
背景技術において、また本明細書全体を通して、様々な刊行物、論文及び特許が引用され、又は記載されており、これらの参考文献はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文献、行為、材料、装置、物品などの議論は、本発明に関する文脈を提供することを目的とする。そのような議論は、これらの内容のいずれか又は全てが、開示されている又は特許請求されているあらゆる発明に関する先行技術の一部を形成することを承認するものではない。
【００２６】
別途定義されていない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。そうでなければ、本明細書で使用する、ある特定の用語は、本明細書で規定されている意味を有する。本明細書に引用されている全ての特許、公開されている特許出願及び公報は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。本明細書で使用する場合、及び添付した特許請求の範囲においては、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が明白に規定していない限り、複数の言及を含むことに留意しなければならない。
【００２７】
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などの任意の数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、数値は、通常、列挙された値の±１０％を含む。例えば、濃度１ｍｇ／ｍＬは、０．９ｍｇ／ｍＬ〜１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は、０．９％（ｗ／ｖ）〜１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用する場合、数値範囲の使用は、全ての可能な部分的範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含み、文脈に明らかに別段の指示がない限り、そのような範囲内の整数及び値の分数を含む。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「対象」は、本発明の実施形態に係る免疫原性組成物が投与されることになる又は投与されたあらゆる動物を意味しており、好ましくは哺乳動物を意味しており、最も好ましくはヒトを意味する。用語「哺乳動物」は本明細書で使用する場合、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例として、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒト等が挙げられるがこれらに限定されず、より好ましくはヒトが挙げられるがこれに限定されない。
【００２９】
本発明は、概して、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質及び任意選択でアジュバントを含む免疫原性組成物、そのような組成物を調製及び保存する方法、並びに対象におけるＨＩＶに対する免疫応答を、単独の免疫原性組成物、又は好ましくは１種以上のベクターにより発現される１種以上の追加のＨＩＶ抗原と組み合わせた免疫原性組成物により、誘導する方法に関する。
【００３０】
ＨＩＶ抗原
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）のファミリーの一部であるレンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）属のメンバーである。２種のＨＩＶがヒトに感染し、それは、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２である。ＨＩＶ−１は、ＨＩＶウイルスの最も一般的な株であり、ＨＩＶ−２と比べて病原性が高いことが知られている。本明細書で使用する場合、用語「ヒト免疫不全ウイルス」及び「ＨＩＶ」は、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２を指すが、これらに限定されない。
【００３１】
ＨＩＶは、高度な遺伝的分岐を有する複数のクレードに分類される。本明細書で使用する場合、用語「ＨＩＶクレード」又は「ＨＩＶサブタイプ」は、遺伝的類似性の度合に従って分類された関連するヒト免疫不全ウイルスを指す。現在、３つのグループのＨＩＶ−１分離株：Ｍ、Ｎ、及びＯが存在している。グループＭ（主系統）は、少なくとも１０種のクレードＡ〜Ｊからなる。グループＯ（分類外系統）は、同様の数のクレードからなり得る。グループＮは、グループＭ又はＯのいずれにも分類されていない新型のＨＩＶ−１分離株である。
【００３２】
本明細書で使用する場合、用語「ＨＩＶ抗原」、「ＨＩＶ抗原性タンパク質」、「ＨＩＶ抗原性ポリペプチド」、及び「ＨＩＶ免疫原」は、免疫応答、例えば、対象におけるＨＩＶに対する体液及び／又は細胞媒介性の応答を誘導することが可能なポリペプチドを指す。ＨＩＶ抗原は、対象におけるＨＩＶに対して、免疫応答を誘導できるか、又は免疫、例えば防御免疫を発生させることができるＨＩＶのタンパク質、その断片若しくはエピトープ、又は複数種のＨＩＶタンパク質若しくはその一部分の組み合わせであり得る。
【００３３】
好ましくは、抗原は、宿主中で防御免疫応答を上昇させることが可能であり、例えば、ウイルス性の疾患若しくは感染に対する免疫応答を誘導することが可能であり、かつ／又は対象中で、ウイルス性の疾患若しくは感染から対象を保護する、ウイルス性の疾患若しくは感染に対する免疫を発生させることが可能である（すなわちワクチン接種）。例えば、抗原は、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子産物、ｐｏｌ遺伝子産物、及びｅｎｖ遺伝子産物などのＨＩＶ由来のタンパク質又はその断片を含み得る。
【００３４】
ＨＩＶ抗原は、任意のＨＩＶ−１若しくはＨＩＶ−２抗原、又はその断片であり得る。ＨＩＶ抗原の例として、構造タンパク質及び必須酵素をコードする、ｇａｇ遺伝子産物、ｐｏｌ遺伝子産物及びｅｎｖ遺伝子産物が挙げられるがこれらに限定されない。ｇａｇ遺伝子産物、ｐｏｌ遺伝子産物及びｅｎｖ遺伝子産物はポリタンパク質として合成され、多様なその他のタンパク質産物へとさらにプロセシングされる。ｇａｇ遺伝子の一次タンパク質産物は、ウイルスの構造タンパク質であるＧａｇポリタンパク質であり、ＭＡタンパク質産物、ＣＡタンパク質産物、ＳＰ１タンパク質産物、ＮＣタンパク質産物、ＳＰ２タンパク質産物及びＰ６タンパク質産物へとさらにプロセシングされる。ｐｏｌ遺伝子はウイルス酵素（Ｐｏｌ、ポリメラーゼ）をコードし、一次タンパク質産物は、ＲＴタンパク質産物、ＲＮａｓｅ  Ｈタンパク質産物、ＩＮタンパク質産物及びＰＲタンパク質産物へとさらにプロセシングされる。ｅｎｖ遺伝子は構造タンパク質をコードし、具体的にはビリオンエンベロープの糖タンパク質をコードする。ｅｎｖ遺伝子の一次タンパク質産物はｇｐ１６０であり、これはｇｐ１２０及びｇｐ４１へとさらにプロセシングされる。
【００３５】
ある種の実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ＨＩＶのＧａｇ抗原、Ｅｎｖ抗原、若しくはＰｏｌ抗原、若しくはそのいずれかの抗原性部分若しくはエピトープ、又はその組み合わせを含み、好ましくは、ＨＩＶ−１のＧａｇ抗原、Ｅｎｖ抗原、若しくはＰｏｌ抗原、若しくはそのいずれかの抗原性部分若しくはエピトープ、又はその組み合わせである。
【００３６】
ＨＩＶ抗原はまた、モザイクＨＩＶ抗原であり得る。本明細書で使用する場合、「モザイク抗原」は、天然配列の断片から構築された組換えタンパク質を指す。モザイク抗原は天然抗原に類似するが、天然配列で見出される潜在的Ｔ細胞エピトープの適用範囲を最大化するように最適化されており、それにより、免疫応答の広さ及び適用範囲が改善される。本発明と共に使用するためのモザイクＨＩＶ抗原は、モザイクＨＩＶ−１  Ｇａｇ抗原、Ｐｏｌ抗原、及び／又はＥｎｖ抗原であることが好ましい。モザイクＨＩＶ  Ｇａｇ抗原、Ｐｏｌ抗原、及び／又はＥｎｖ抗原は、ＨＩＶのＧａｇ、Ｐｏｌ、及び／又はＥｎｖのポリタンパク質配列の１つ以上に由来する複数のエピトープを含むモザイク抗原である。例えば、モザイクＧａｇＰｏｌ抗原は、モザイクＧａｇ配列及びモザイクＰｏｌ配列を含む。
【００３７】
本発明で使用することができるモザイクＨＩＶ  Ｇａｇ抗原、Ｐｏｌ抗原、及び／又はＥｎｖ抗原の例としては、例えば、米国特許出願公開第２０１２００７６８１２号明細書；Ｂａｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１０，１６：３１９−３２３；及びＢａｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １５５：１−９，２０１３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。好ましくは、本発明と共に使用するためのモザイクＨＩＶ  Ｇａｇ抗原、Ｐｏｌ抗原、及び／又はＥｎｖ抗原としては、ｍｏｓ１Ｅｎｖ（配列番号３）、ｍｏｓ２Ｅｎｖ（配列番号４）、ｍｏｓ１Ｐｏｌ（配列番号５）、ｍｏｓ２Ｐｏｌ（配列番号６）、ｍｏｓ１Ｇａｇ（配列番号７）、ｍｏｓ２Ｇａｇ（配列番号８）、並びにその組み合わせ、例えば、ｍｏｓ１ＧａｇＰｏｌ（配列番号９）及びｍｏｓ２ＧａｇＰｏｌ（配列番号１０）が挙げられるが、これらに限定されない。モザイクＨＩＶ抗原の他の例としては、合成ＨＩＶ  Ｅｎｖタンパク質が挙げられ、これは、例えば、配列番号１１、又は（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する配列番号１１を含むものなど、１種以上の天然に存在するＨＩＶ株に対する免疫応答を誘導するか、又は免疫を付与するように最適化された、天然に存在しないＨＩＶエンベロープタンパク質であり、好ましい実施形態では、この抗原は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む配列番号１１を含み、全てがＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１１５９号明細書（Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ＆Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  Ｂ．Ｖ．の名で２０１６年１２月１５日に出願）に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３８】
ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質
本明細書で使用する場合、用語「ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質」は、三量体ｇｐ１６０エンベロープタンパク質、すなわち（ｇｐ１６０）３の切断されていない外部ドメインを指す。本発明の実施形態は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０、好ましくは、ｇｐ４１の膜貫通部分及び細胞質部分を欠くｇｐ４１サブユニットの外部ドメインに結合したｇｐ１４０サブユニットの三量体及び／又は六量体の改善された製剤に関する。ＨＩＶのｅｎｖ遺伝子は、タンパク質分解的に切断されて２つの成熟エンベロープ糖タンパク質であるｇｐ１２０及びｇｐ４１になる、前駆体タンパク質ｇｐ１６０をコードする。まず、ｇｐ１６０は（ｇｐ１６０）３に三量体化し、次に、レトロウイルスのエンベロープ糖タンパク質前駆体において高度に保存された配列で、宿主細胞のプロテアーゼであるフューリンにより媒介される切断反応を介して切断を受けて、２つの非共有結合的に相互作用するタンパク質であるｇｐ１２０及びｇｐ４１になる。続いて、ウイルス侵入が、ｇｐ１２０／ｇｐ４１ヘテロ二量体の三量体によって媒介される。ｇｐ１２０は受容体結合断片であり、このような受容体を有する標的細胞（例えばヘルパーＴ細胞など）上のＣＤ４受容体に結合する。ｇｐ４１は、ｇｐ１２０に非共有結合しており、融合断片であり、ＨＩＶが細胞に侵入する第２のステップをもたらす。ｇｐ４１は、最初はウイルスエンベロープ内に埋め込まれているが、ｇｐ１２０がＣＤ４受容体に結合すると、ｇｐ１２０はその高次構造を変化させてｇｐ４１を露出状態にし、このとき、宿主細胞との融合を促進し得る。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、天然状態の切断型ウイルススパイクのサロゲートとして使用されている。
【００３９】
ｇｐ１４０タンパク質の発現については、いくつかの論文（例えば、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）に記載されており、このタンパク質は現在、様々な変異体（例えば様々なＨＩＶ株に基づく）において、サービス提供会社から注文することもできる。本発明によるｇｐ１４０タンパク質は、ｇｐ１２０ドメインとｇｐ４１外部ドメインが共有結合的に結合されるように切断部位の変異を有することができるか、あるいは、ｇｐ１２０ドメインとｇｐ４１外部ドメインは、非共有結合的に結合することができる（例えば、ＳＯＳＩＰ変異体におけるようなジスルフィド架橋によって）。ｇｐ１４０タンパク質は、種々のワクチン接種実験において使用されてきた（例えば、Ｎｋｏｌｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，２０１４；Ｋｏｖａｃｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｂａｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００４０】
本発明の実施形態によれば、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、ホモ三量体（例えば、３つの同一のポリペプチド単位を含む３量体）、又はヘテロ三量体（例えば、全てが同一とは限らない３つのポリペプチドを含む三量体）であり得る。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質はまた、六量体であり得る。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の三量体種及び六量体種の両方が、ＨＩＶに対する免疫原性を有するか、又は生体内でＨＩＶに対する免疫応答を誘導することができる。好ましくは、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は三量体であり、より好ましくは、ホモ三量体である。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、天然に存在する配列、例えば、クレードＡ、クレードＢ、クレードＣなどの任意のＨＩＶクレードから単離された配列であり得るか、又はモザイクｇｐ１４０タンパク質であり得る。「モザイクｇｐ１４０タンパク質」は、１種以上のＨＩＶクレードの１種以上のｇｐ１４０配列由来の複数のエピトープを含有する。
【００４１】
好ましくは、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質である。「安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質」は、三量体構造の安定性を増大させる三量体化ドメインなどのポリペプチド配列を有し得るか、又は含むように改変され得るｇｐ１４０タンパク質であるか、あるいは、ＳＯＳＩＰ及び／又は他の変異など、三量体構造を安定させる変異（天然のｇｐ１４０の配列と比較して）を含有するように改変されているｇｐ１４０タンパク質であり得る。三量体化ドメインの例としては、Ｔ４−フィブリチンの「フォルドン」三量体化ドメイン、例えば、アミノ酸配列ＧＳＧＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬ（配列番号１３）を有するもの；ＧＣＮ４に由来するコイルドコイル三量体化ドメイン、例えば、アミノ酸配列ＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＶ（配列番号１４）を有するもの；及び三量体タグとしての大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）アスパラギン酸トランスカルバモイラーゼの触媒サブユニットが挙げられるが、これらに限定されない。このような三量体化ドメインは、安定した三量体形成を助けるために使用することができる（ｇｐ１４０タンパク質の安定化三量体については、国際公開第２０１０／０４２９４２号パンフレット、Ｎｋｏｌｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．２０１０、国際公開第２０１４／１０７７４４号パンフレット、及びＮｋｏｌｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．２０１４を参照されたい）。本発明で使用するための安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質はまた、安定性を高めるための切断部位変異、例えば、フューリン切断部位変異及び／又はいわゆるＳＯＳＩＰ変異（例えば、Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，２０１５を参照されたい）を含むことができる。安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質は、例えばクレードＡ、クレードＢ、クレードＣなどの任意のＨＩＶクレードから単離されたｇｐ１４０タンパク質に由来し得る。安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質はまた、安定化モザイクｇｐ１４０タンパク質であり得る。
【００４２】
本発明で使用することができる例示的なＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質としては、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質（配列番号１）、ＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質（配列番号２）、及びその組み合わせが挙げられる。ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質（配列番号１）及びＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質（配列番号２）の両方は、Ｔ４−フィブリチンの「フォルドン」三量体化ドメインを含む安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質である。
【００４３】
免疫原性組成物
第１の態様では、本発明は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物に関する。本発明で使用する場合、「免疫原性組成物」は、その組成物を投与された、又は投与されることになる対象において、免疫応答を誘導することが可能な組成物を指す。免疫原性組成物は、ワクチンとなり得る。「ワクチン」は、対象に対して防御免疫又は防御免疫応答をもたらすことができる組成物、又は対象にワクチン接種するのに使用することができる組成物を指す。本発明の実施形態によれば、本開示の観点から当技術分野で公知の任意のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、本発明の免疫原性組成物に使用することができる。免疫原性組成物は、１種、２種、又は３種のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質など、１種以上のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含み得る。
【００４４】
好ましくは、本発明の免疫原性組成物は、安定化三量体ｇｐ１４０タンパク質を含む。好ましい一実施形態では、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質であり、例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含むものである。好ましい別の実施形態では、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、ＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質であり、例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むものである。
【００４５】
他の実施形態では、免疫原性組成物は、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質とＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質の両方を含み、例えば、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列を含むものである。例えば、免疫原性組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質と配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質との混合物を含み得、例えば、１：１の比で含み得る。
【００４６】
本発明の免疫原性組成物はまた、水、好ましくは、注射用の水を含む。それは、調製される組成物の量に依存して、十分な量（ｑ．ｓ．）が組成物に加えられる。
【００４７】
本発明の実施形態によれば、免疫原性組成物は、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、例えば、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、又は５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む。本発明の特定の実施形態では、免疫原性組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬ又は１ｍｇ／ｍＬの、配列番号１又は配列番号２の配列を含むものなどの、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む。本発明の他の特定の実施形態では、免疫原性組成物は、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの、配列番号１及び配列番号２を含むものなどのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の混合物を含み、例えば、１：１の比で含む。
【００４８】
本発明の免疫原性組成物はさらに、ソルビトール（糖）、ポリソルベート２０（界面活性剤）、及びヒスチジンバッファーを含む。本発明者らは、驚くべきことに、ヒスチジンを含む組成物におけるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性が、他のアミノ酸を含む組成物におけるものと比較して、改善された安定性を有したことを発見した。本発明者らはまた、驚くべきことに、組成物中のポリソルベート２０の含有により、組成物中のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性がさらに改善することを発見した。通常、タンパク質製剤に使用されるバッファーは、酢酸及びソルビトールの配合物を含有するか、又はヒスチジン及びスクロースの配合物を含有する（例えば、Ｕｃｈｉｙａｍａ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（２０１４）１８４４，２０４１−２０５２を参照されたい）。ヒスチジン及びソルビトールは、タンパク質製剤用のバッファーの配合物において一般的には使用されない。発明者らの知識の範囲内では、ポリソルベート２０（界面活性剤）を伴うヒスチジン及びソルビトールの配合物は、市販のタンパク質製剤のいずれにおいても使用されていない。したがって、ヒスチジン及びソルビトールの配合物がＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性を改善することが判明したのは驚くべきことであった。
【００４９】
本発明の実施形態によれば、ソルビトールの濃度は、２％〜１５％（ｗ／ｖ）の範囲、例えば、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、又は１５％（ｗ／ｖ）であり得る。好ましい一実施形態では、ソルビトールの濃度は５％（ｗ／ｖ）である。好ましい別の実施形態では、ソルビトールの濃度は１２％（ｗ／ｖ）である。
【００５０】
本発明の実施形態によれば、ポリソルベート２０の濃度は、０．０１％〜０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲、例えば、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、又は０．０５％（ｗ／ｖ）であり得る。好ましい一実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【００５１】
本発明の実施形態によれば、ヒスチジンバッファーの濃度は、５ｍＭ〜２０ｍＭの範囲、例えば、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、又は２０ｍＭであり、１０ｍＭが好ましい。ヒスチジンバッファーのｐＨは、５．５〜７．０の範囲、例えば、５．５、６．０、６．５、又は７．０であり、６．５が好ましい。好ましい一実施形態では、ヒスチジンバッファーの濃度は１０ｍＭであり、かつヒスチジンバッファーのｐＨは６．５である。本明細書で記載される任意のｐＨ値は、列挙されたｐＨ値の±０．５を含むｐＨ値に関して使用される場合、全ての場合で、用語「約」によって修飾されるものと理解されるべきである。別段の指示がない限り、全てのｐＨ値は、本発明の免疫原性組成物に含まれるヒスチジンバッファー自体のｐＨを指す。
【００５２】
本発明のある種の実施形態では、免疫原性組成物はさらに、アジュバントを含む。用語「アジュバント」及び「免疫刺激剤」は、本明細書では同義的に使用され、免疫系の刺激を引き起こすか、又は免疫応答を増強する１種以上の物質と定義される。例えば、アジュバントは、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び／若しくは本発明の免疫原性組成物が単独で投与される場合、又はさらに１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクターと組み合わされて投与される場合に、それらに対する免疫応答を増強するために使用され得る。本発明と共に使用されるのに好適なアジュバントは、人々において潜在的に安全であり、十分に許容され、かつ有効でなければならず、例えば、ＱＳ−２１、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘ、Ｄｅｔｏｘ−ＰＣ、ＭＰＬ−ＳＥ、ＭｏＧＭ−ＣＳＦ、ＴｉｔｅｒＭａｘ−Ｇ、ＣＲＬ−１００５、ＧＥＲＢＵ、ＴＥＲａｍｉｄｅ、ＰＳＣ９７Ｂ、Ａｄｊｕｍｅｒ、ＰＧ−０２６、ＧＳＫ−Ｉ、ＧｃＭＡＦ、Ｂ−ａｌｅｔｈｉｎｅ、ＭＰＣ−０２６、Ａｄｊｕｖａｘ、ＣｐＧ  ＯＤＮ、Ｂｅｔａｆｅｃｔｉｎ、アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム、及び／又はリン酸アルミニウム；リン酸アルミニウムアジュバントの例は、滅菌されたリン酸アルミニウム湿潤ゲル懸濁液であるＡｄｊｕＰｈｏｓである）、Ａｄｊｕｐｌｅｘ、並びにＭＦ５９である。好ましくは、アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。
【００５３】
本発明の実施形態によれば、リン酸アルミニウムアジュバントは、約０．７〜５．０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、若しくは１ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．８５ｍｇ／ｍＬの固定された濃度、又は例えば、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、３．６、３．７、３．８、３．８５、３．９、３．９５、４．０、４．５、若しくは５．０ｍｇ／ｍＬ、例えば３．８４ｍｇ／ｍＬの固定された濃度で免疫原性組成物に含まれ得る。本発明の１つの目的は、ｇｐ１４０タンパク質免疫原と共に存在するリン酸アルミニウムアジュバントを有する長期間安定な製剤を提供することである。驚くべきことに、ＨＩＶ  ｇｐ１４０、ヒスチジンバッファー、ソルビトール、及びポリソルベート２０を含む本発明の液体製剤は、２〜８℃で少なくとも６ヶ月間安定であると判明した。これらの製剤はまた、２５℃の高温においても少なくとも６ヶ月間安定であることが判明した。加えて、これらの製剤はさらに、還元ＳＤＳ  ＰＡＧＥにより測定した際に、４０℃で少なくとも２週間、１ヶ月間、又は３ヶ月に至るまでの間でさえ安定であることが判明した。
【００５４】
本発明の例示的実施形態では、免疫原性組成物は、組成物の総容量に対して：
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．８５ｍｇ／ｍＬ又は３．８４ｍｇ／ｍＬ）のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む。
【００５５】
本発明の免疫原性組成物を対象への投与に適した任意の成分で製剤化して、投与を容易にすることができ、かつ効能を高めることができ、この投与として、経口（経腸）投与及び非経口注射が挙げられるがこれらに限定されない。これらの非経口注射は、例えば、皮下注射、筋肉注射、又は皮内注射を含み得る。本発明の免疫原性組成物はまた、例えば、経粘膜、直腸、舌下投与、経口又は鼻腔内などの他の投与経路のために製剤化され得る。好ましくは、免疫原性組成物は、筋肉注射のために製剤化される。
【００５６】
本発明の免疫原性組成物は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を、冷蔵温度、例えば２℃〜８℃で、約２年などの長期間、液体形態で安定に保存することができる点で有利である。ある種の実施形態では、免疫原性組成物は、アジュバント、例えばリン酸アルミニウムアジュバントを含む。アジュバントを含有する免疫原性組成物はまた、冷蔵条件下で長期間、液体形態での貯蔵に適合する。本発明の免疫原性組成物はまた、凍結乾燥形態での保存にも適合する。ただし、そのため本発明の組成物は、好ましくは液体製剤であり、これは、好ましい貯蔵温度、すなわち２〜８℃で液体形態であることを意味する。通常、液体製剤又は本発明の組成物は、水性懸濁液であり、これは、全てのタンパク質及び／又はリン酸アルミニウムなどの粒子物質が完全に溶解され得るとは限らないことを意味する。このような場合、使用前に組成物を混和させることが勧められる。リン酸アルミニウムアジュバントを含む本発明の組成物を、水の凝固点より高い温度で保存することが好ましく、最も好ましくは、２〜８℃であり、例えば、例えば、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、又は８℃である。利点としては、資源集約的かつコストのかかる凍結乾燥、及び使用前に付随する再溶解が必要ではなく、リン酸アルミニウムアジュバントのベッドサイドでの混合及び別途の貯蔵が必要ではなく、むしろ、製剤を「すぐに使用できる」ように保存できることである。加えて、冷凍条件ではなく冷蔵条件での貯蔵により、資源が限られた構成、例えば、冷凍能力を使用できない場合において、組成物をより容易に使用することができるようになる。さらに、本発明の組成物の高温（例えば、２５℃、さらには４０℃）での持続的な安定性が認められたことは、例えば、一時的に組成物を温暖な環境でも室温に曝すときなど、偶発的な温度変位が、本発明のワクチン組成物にすぐに害を及ぼさないことを示している。
【００５７】
驚くべきことに、リン酸アルミニウムを含むものなど、本発明の組成物は、２〜８℃の温度で少なくとも１日間、１週間、２週間、１ヶ月間、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６ヶ月間貯蔵して安定である。より好ましくは、これらの組成物は、これらの条件下で、少なくとも７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間、さらに好ましくは少なくとも１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月間、最も好ましくは少なくとも２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６ヶ月間以上、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間安定である。したがって、ある種の実施形態では、本発明は、２〜８℃で少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間保存される場合に安定である、本発明による組成物を提供する。好ましくは、このような組成物は、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間、少なくとも３０ヶ月間、少なくとも３６ヶ月間安定である。ある種の実施形態では、本発明は、免疫原性組成物を２〜８℃で、少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６ヶ月間保存した後に、対象、好ましくはヒト対象にワクチン接種するために本発明の免疫原性組成物を使用することを可能にする。
【００５８】
本発明の目的のために、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含み、かつ所与の温度で、少なくとも１週間、好ましくは少なくとも１ヶ月保存した後に、還元ＳＤＳ  ＰＡＧＥゲルにおける前記ｇｐ１４０タンパク質の分解が２５％超を示さず、好ましくは１０％を超えない免疫原性組成物が、前記温度での長期間の貯蔵に安定な免疫原性組成物であると考えられる。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、本発明によれば、一定の条件下（例えば、２〜８℃）で、特定の時間（例えば、６ヶ月）「安定」であると考えられ、前記特定の時間後のこれらの条件下にある場合、前記ｇｐ１４０タンパク質は、還元ＳＤＳ  ＰＡＧＥゲル上で、（ｔ＝０での最初の測定と比較して）２５％超の分解を示さず、好ましくは２０％未満であり、好ましくは１５％未満であり、好ましくは１０％未満であり、最も好ましくは５％未満の分解である。分解は、所望の分子量のｇｐ１４０の下にある別のバンドとして見られる。ＥＬＩＳＡなどの代替的なアッセイもまた、安定性を測定するのに使用することができ、ある種の実施形態では、上で定義されたように安定である組成物はまた、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて５０％超の分解（ｔ＝０での最初のシグナルと比較した減少量）を示さず、好ましくは２５％未満の分解である。
【００５９】
免疫原性組成物を調製する方法
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物を調製する方法に関する。本発明の実施形態によれば、免疫原性組成物を調製する方法は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、ソルビトール、ポリソルベート２０、及びヒスチジンバッファーを適切な濃度範囲で混合することを含む。当業者は、このような組成物を調製するのに使用される従来技術に精通しているであろう。
【００６０】
例えば、免疫原性組成物は、ヒスチジンバッファー、ソルビトール、及びポリソルベート２０を所望の濃度で混合することによって調製することができる。次に、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を加えられ得る。組成物のｐＨは、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を加える前又は後に調整することができる。別の例示的実施例として、最初にヒスチジン及びソルビトールを含有する緩衝液が調製され得る。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質をバッファー中において所望の濃度で調製し、次に、ヒスチジン及びソルビトールを含有する緩衝液を加え、その後、ポリソルベートを目的の濃度で加える。最後にアジュバントを加えて、最終組成物を得ることができる。本発明はまた、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む、長期間の貯蔵に安定な免疫原性組成物を調製する方法を提供する。ある種の実施形態では、このような方法は：（ｉ）本発明による免疫原性組成物（すなわち、０．０５〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、２〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０１〜０．０５％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー、水、及び好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウムを含む）を提供することと、（ｉｉ）前記組成物を２〜８℃で、少なくとも１ヶ月間、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、例えば１８〜３０ヶ月間保存することと、を含む。ある種の実施形態では、このような方法は：
（ｉ）以下の構成成分を混合して、免疫原性組成物を作製することであって、組成物の総容量に対してこれらの構成成分を：
（ａ）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
（ｂ）２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
（ｃ）０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
（ｄ）ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー、
（ｅ）水（好ましくは注射用水）、
（ｆ）リン酸アルミニウムアジュバント、好ましくは０．７〜４ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバントを含む、
ことと；
（ｉｉ）組成物を２〜８℃で、少なくとも１ヶ月間、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、例えば１８〜３０ヶ月間保存することと、を含む。
【００６１】
免疫応答を誘導する方法
本発明はまた、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において本発明の免疫原性組成物で誘導する方法に関する。免疫応答は、１種以上のＨＩＶクレードに対してであり得る。本明細書に記載される方法はまた、本発明の免疫原性組成物を、好ましくは１種以上のベクター、例えば、アデノウイルスベクター又はＭＶＡベクターから発現される１種以上の追加のＨＩＶ抗原と組み合わせて投与することを含み、免疫応答をプライムし、かつブーストする方法を含む。
【００６２】
１つの一般的態様では、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法は、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む治療有効量の免疫原性組成物を対象に投与することを含む。本明細書に記載される免疫原性組成物のいずれかを、対象におけるＨＩＶに対する免疫応答を誘導する方法において使用することができる。好ましくは、組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質などの安定化三量体ＨＩＶ  ｇｐ１４０、若しくは配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質、又はこれらの混合物を含む。組成物はさらに、リン酸アルミニウムアジュバントなどのアジュバントを含む。本発明の方法で使用するための免疫原性組成物の例示的実施形態は、組成物の総容量に対して、
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．８５ｍｇ／ｍＬ又は３．８４ｍｇ／ｍＬ）のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む。
【００６３】
本発明の実施形態によれば、「免疫応答を誘導する」とは、本明細書に記載の方法及び組成物に関して使用される場合、感染、例えばＨＩＶ感染に対して、予防目的で対象に防御免疫をもたらすこと、及び／又はワクチン接種すること、並びに感染、例えばＨＩＶ感染に対して、治療目的で所望の免疫応答又は作用を、それを必要とする対象において引き起こすことを包含している。好ましくは、本発明の方法は、防御免疫をもたらすことなど、予防のためのものである。免疫応答は、細胞性及び／又は体液性の免疫応答であり得る。
【００６４】
本明細書で使用する場合、用語「防御免疫」又は「防御免疫応答」は、ワクチン接種された対象が、このワクチン接種を行った対象の病原性因子による感染を防除できることを意味する。通常、「防御免疫応答」が発現された対象は、軽度から中等度の臨床症状を発現するにすぎないか、又は症状を全く発現しない。通常、ある特定の因子に対する「防御免疫応答」又は「防御免疫」を有する対象は、前記因子による感染の結果として死亡することはない。
【００６５】
通常、本発明の実施形態による免疫原性組成物の投与は、予防目的を有して、感染又は症状の発現の前にＨＩＶ抗原に対する免疫応答を惹起することになる。他の実施形態では、免疫原性組成物は、曝露後の予防のために投与され得る。本発明の免疫原性組成物はまた、実験目的のためなど、非ヒト哺乳動物に投与され得る。
【００６６】
本明細書で使用する場合、「有効量」又は「免疫学的有効量」は、所望の免疫作用又は免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するのに十分な組成物の量を意味する。一実施形態では、有効量は、免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するのに十分な量を意味する。ある種の実施形態では、有効量は、免疫を、それを必要とする対象において発生させるのに十分な量を意味しており、例えば、ウイルス感染などの疾患に対する保護作用をもたらすのに十分な量を意味する。ある種の実施形態では、有効量は、免疫応答を、それを必要とする対象において増強するのに十分な量を意味する。例えば、プライム−ブーストレジメンなどにおいて、免疫応答を引き起こすことが可能な１種以上の他の構成成分又は免疫原性組成物と組み合わせて使用される場合、有効量は、１種以上の他の構成成分又は免疫原性組成物によって誘導される免疫応答を増強するのに十分な量であり得る。
【００６７】
有効量は、様々な要素、例えば対象の体調、年齢、体重、健康状態など；免疫応答を誘導するのか、又は防御免疫をもたらすのかの具体的な用途；及び免疫が所望される具体的な疾患（例えば、ウイルス感染）に応じて変動し得る。当業者は、有効量を、本開示を考慮して容易に決定することができる。一般的な指針として、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質に関して使用される場合、有効量は、例えば約０．３〜約３０００マイクログラム（μｇ）、例えば１〜１０００μｇ、例えば１０〜５００μｇ、例えば約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００μｇの範囲であり得る。
【００６８】
有効量の免疫原性組成物を、単一種の組成物で投与することができ、又は複数種の組成物（例えば、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種又は１０種の組成物）（例えば錠剤、カプセル剤及び／若しくは注射剤）で投与することができ、複数種の組成物（例えば錠剤、カプセル剤及び／若しくは注射剤）の投与により、対象に、合計で免疫学的有効量が投与される。また、以下でさらに詳細に記載するように、有効量の免疫原性組成物を対象に投与し、続いて別の用量の有効量の免疫原性組成物を同じ対象に、いわゆるプライム−ブーストレジメンにおいて投与することも可能である。
【００６９】
本発明の実施形態によれば、免疫原性組成物を、経口（経腸）投与及び非経口注射を含むがこれらに限定されない、当技術分野において知られている任意の手段によって、対象に投与することができる。非経口注射は、例えば、皮下注射、筋肉注射、又は皮内注射を含み得る。好ましくは、免疫原性組成物は、筋肉注射によって投与される。
【００７０】
本発明の免疫原性組成物を、１種以上の追加のＨＩＶ抗原、又は１種以上の追加のＨＩＶ抗原をコードするアデノウイルスベクターなどの１種以上のベクターと共に投与することも可能である。本明細書で使用する場合、用語「共送達」、「共投与」、「〜と共に投与される」、又は「〜と組み合わせて投与される」は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、又はアデノウイルスベクターなどの複数のウイルス発現ベクターを含む免疫原性組成物などの、２種以上の構成成分の同時投与を指す。「同時投与」は、少なくとも同じ日のうちに２種以上の構成成分を投与することであり得る。２種の構成成分を「共に投与する」とき、それらは、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、８時間、若しくは４時間などの短い時間間隔、又は１時間以内に別個の組成物を連続的に投与され得るか、あるいは同時に単一種の組成物で投与され得る。ｇｐ１４０タンパク質の免疫原性組成物をアデノウイルスベクターなどのベクターによってコードされる１種以上の追加のＨＩＶ抗原と投与する非限定的な例は、国際公開第２０１６／０４９２８７号パンフレットにおいて提供され、当該開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７１】
したがって、本発明のある種の実施形態では、免疫応答を誘導する方法はさらに、１種以上のＨＩＶ抗原又はＨＩＶ抗原をコードする１種以上のベクターを含む有効量の第２の免疫原性組成物を対象に投与することを含む。本開示の観点から、当業者に知られている任意のＨＩＶ抗原、例えば、ＨＩＶのＮｅｆ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｅｎｖ抗原、若しくはＰｏｌ抗原、若しくはそのいずれかの抗原性部分若しくはエピトープ、又はその組み合わせなどを使用することができる。モザイクＨＩＶ抗原もまた使用することができる。例示的なＨＩＶ項としては、配列番号３〜１２、又は（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する、配列番号１１のアミノ酸配列を含むものなど、モザイクＥｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、及び／又はＰｏｌ抗原、並びにその組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。追加のＨＩＶ抗原としては、例えば、単離タンパク質若しくはポリペプチドとして、又はこれらのタンパク質若しくはポリペプチドをコードするベクターとして、対象に投与され得る。
【００７２】
好ましくは、有効量の第２の免疫原性組成物を対象に投与することを含む方法では、第２の免疫原性組成物は、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のベクターを含む。
【００７３】
本開示の観点から、当業者に知られている任意のベクターを使用することができる。好ましくは、ベクターはアデノウイルスベクターであり、より好ましくはアデノウイルス２６ベクターである。組換えアデノウイルスベクターの調製法は、当技術分野で知られている。組換えアデノウイルス２６（ｒＡｄ２６）ベクターの調製法は、例えば、国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレット及びＡｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｖｉｒｏｌ  ８１（９）：４６５４−６３に記載されている。Ａｄ２６のゲノム配列の例は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＥＦ１５３４７４及び国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレットの配列番号１の中に見出される。本発明に有用なベクターの例としては、例えば、国際公開第２０１２／０８２９１８号パンフレットに記載のものが挙げられ、当該開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明の免疫原性組成物と組み合わせて使用することができる他のアデノウイルスベクターとしては、国際公開第２０１６／０４９２８７号パンフレット、及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１１５９号明細書に記載のものが挙げられ、当該開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７４】
本発明の実施形態によれば、アデノウイルスベクターは、１種のＨＩＶ抗原、又は２種以上のＨＩＶ抗原、例えば、２種、３種、若しくは４種以上のＨＩＶ抗原を含み得る。免疫原性組成物は、２種、３種、４種以上のＨＩＶ抗原など、１種以上の異なるＨＩＶ抗原をコードする、１種以上のアデノウイルスベクターを含み得る。また、本発明の実施形態によれば、第２の組成物は、１種のアデノウイルスベクター、又は２種以上のアデノウイルスベクター、例えば、２種、３種、若しくは４種以上のアデノウイルスベクターを含み得る。第２の組成物が２種以上のアデノウイルスベクターを含む場合、アデノウイルスベクターは、同一又は異なるＨＩＶ抗原をコードし得る。
【００７５】
本発明の方法における使用のための１種以上のＨＩＶ抗原をコードするアデノウイルスベクターは、プロモーターに操作可能に連結されている、ＨＩＶ抗原をコードする核酸を含み、これは、核酸がプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、相同プロモーター（すなわち、ベクターと同一の遺伝子源に由来する）、又は異種プロモーター（すなわち、異なるベクター若しくは遺伝子源に由来する）であり得る。好適なプロモーターの例としては、サイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）（ＣＭＶ）プロモーター、及びラウス肉腫ウイルス（Ｒｏｕｓ  Ｓａｒｃｏｍａ  ｖｉｒｕｓ）（ＲＳＶ）プロモーターが挙げられる。好ましくは、プロモーターは、発現カセット内部の核酸の上流に位置する。
【００７６】
一般的な指針として、「有効量」は、アデノウイルスベクターに関して使用される場合、約１０８個のウイルス粒子〜約１０１２個のウイルス粒子の範囲であることができ、例えば、１０８個、１０９個、１０１０個、１０１１個又は１０１２個のウイルス粒子であることができる。アデノウイルス２６ベクターなどのアデノウイルスベクターを含む免疫原性組成物の調製法及び用途は、当業者によく知られている。液体医薬組成物としては、一般に、水、石油、動物油若しくは植物油、鉱油、又は合成油などの液体媒体が挙げられる。生理食塩水溶液、ブドウ糖、若しくは他の糖類溶液、又はエチレングリコール、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコールなどのグリコールもまた、含まれる。
【００７７】
例えば、組換えアデノウイルスベクターは、Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｗｏｒｌｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ（Ｈｏｇａｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｊ  １：４３−８）にも使用される緩衝液：２０ｍＭトリス  ｐＨ８、２５ｍＭ  ＮａＣｌ、及び２．５％グリセロール中に保存することができる。ヒトへの投与に好適な別の有用なアデノウイルス製剤バッファーは、２０ｍＭトリス、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％（ｗ／ｖ）スクロース、及び０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート−８０である。組換えアデノウイルスに好適な別の製剤バッファーは、１０〜２５ｍＭ  クエン酸バッファー  ｐＨ５．９〜６．２、４〜６％（ｗ／ｗ）のヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン（ＨＢＣＤ）、７０〜１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１８〜０．０３５％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−８０、及び任意選択による０．３〜０．４５％（ｗ／ｗ）のエタノールを含む。他のバッファーを用いることができ、貯蔵や精製ベクターの医薬投与に好適な製剤が数例知られている。
【００７８】
１種以上の追加のＨＩＶ抗原又は１種以上の追加のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクターを含む免疫原性組成物の投与は通常、筋肉内投与、皮内投与、又は皮下投与である。ただし、静脈内、直腸、皮膚、経口、経鼻などの他の投与様式もまた、同様に想定される。免疫原性組成物の筋肉内投与は、例えば、アデノウイルスベクターなどの発現ベクター及び／又は抗原性ポリペプチドの懸濁液を注射するための針を使用することにより実現することができる。代替法は、組成物を投与する無針注射デバイスの使用（例えばＢｉｏｊｅｃｔｏｒ（商標）を使用する）、又はワクチンを含有する凍結乾燥粉末である。
【００７９】
一実施形態では、本発明の実施形態によるｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８０】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８１】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８２】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８３】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８４】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８５】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８６】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８７】
一実施形態では、本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、配列番号１１、（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する、配列番号１１のアミノ酸配列、又は配列番号１２のアミノ酸配列を含む、ＨＩＶ抗原をコードする、アデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターと組み合わせて使用される。
【００８８】
１種以上のＨＩＶ抗原をコードするアデノウイルスベクターを投与すると、ＨＩＶ抗原が対象の免疫系に提示されるように、アデノウイルスベクターはコードされたＨＩＶ抗原を発現し、それにより、免疫を発生させるため、又は免疫応答を誘導するために必要な応答を誘導する。本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物を、１種以上のアデノウイルスベクターと共に投与して、免疫応答をプライムすることができ、かつ／又は、１種以上のアデノウイルスベクターの投与の後に免疫応答をブーストすることができる。
【００８９】
したがって、本発明の他の実施形態では、ＨＩＶに対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法は、（ｉ）本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含み、かつ好ましくはさらにアジュバントを含む有効量の免疫原性組成物を対象に投与することと、（ｉｉ）１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクターを含む、有効量の第２の免疫原性組成物を対象に投与することと、を含む。ステップ（ｉ）及びステップ（ｉｉ）はいずれかの順序で行われ、ステップのうち一方はプライム免疫のため、他方はブースト免疫のためのものである。任意選択で、方法はさらに、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上の改変ワクシニアアンカラ（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ）ベクターを投与することを含む。ＭＶＡベクターは、本明細書に記載の任意のＨＩＶ抗原をコードし得る。好ましくは、ＭＶＡベクターは、配列番号３〜１２、又は（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する配列番号１１、からなる群から選択される１種以上のＨＩＶ抗原をコードする。
【００９０】
本発明の実施形態によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物と組み合わせて使用することができるアデノウイルスベクター、ＭＶＡベクター、及びプライム−ブーストレジメンの例としては、国際公開第２０１６／０４９２８７号パンフレットに記載のものが挙げられ、当該開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９１】
例えば、開示される方法の一実施形態では、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクターは、免疫応答をプライムするために使用される。本発明によるＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、プライム免疫のための１種以上のアデノウイルスベクターと共に使用され得る。プライム免疫は１回だけ投与され得るが、任意選択で複数回投与することもでき、例えば、時間０で最初のプライム投与、その後、最初のプライム投与の約４〜１４週後、例えば約１０〜１４週間後にさらにプライム投与する。１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上の追加のアデノウイルスベクター又はＭＶＡベクターを任意選択で伴う、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物は、免疫応答をブーストするために使用することができる。ブースト免疫もまた、１回又は複数回投与することができ、例えば、最初のプライム投与の約２２〜２６週間後に１回目、その後、最初のプライム投与から約４６〜５０週間後にさらにブースト投与する。免疫により誘導される免疫応答が監視される。
【００９２】
他の一般的態様では、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチンの組み合わせに関する。本発明の実施形態によれば、ワクチンの組み合わせは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むものなどの、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；配列番号３〜１２及び（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する配列番号１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原などの、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のアデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクター、並びに、任意選択で、配列番号３〜１２及び（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する配列番号１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＩＶ抗原などの、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする１種以上のＭＶＡベクターを含む免疫原性組成物を含む。
【００９３】
本発明の実施形態によれば、ワクチンの組み合わせは、免疫応答をプライムし、かつブーストすることを含む、ＨＩＶに対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するために本明細書で記載される方法のいずれかにおいて使用することができる。
【００９４】
実施形態
実施形態１は、組成物の総容量に対して：
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を含む免疫原性組成物である。
【００９５】
実施形態２は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０の濃度が０．２ｍｇ／ｍＬである、実施形態１の免疫原性組成物である。
【００９６】
実施形態３は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０の濃度が１ｍｇ／ｍＬである、実施形態１の免疫原性組成物である。
【００９７】
実施形態４は、ソルビトールの濃度が５％（ｗ／ｖ）である、実施形態１〜３のいずれかの免疫原性組成物である。
【００９８】
実施形態５は、ソルビトールの濃度が１２％（ｗ／ｖ）である、実施形態１〜３のいずれかの免疫原性組成物である。
【００９９】
実施形態６は、ポリソルベート２０の濃度が０．０２％（ｗ／ｖ）である、実施形態１〜５のいずれかの免疫原性組成物である。
【０１００】
実施形態７は、ヒスチジンバッファーの濃度が１０ｍＭであり、かつヒスチジンバッファーのｐＨが６．５である、実施形態１〜６のいずれかの免疫原性組成物である。
【０１０１】
実施形態８は、リン酸アルミニウムアジュバントを、例えば、０．７〜１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で、好ましくは０．８５ｍｇ／ｍＬの濃度でさらに含む、実施形態１〜７のいずれかの免疫原性組成物である。
【０１０２】
実施形態９は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜８のいずれかの免疫原性組成物である。
【０１０３】
実施形態１０は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜８のいずれかの免疫原性組成物である。
【０１０４】
実施形態１１は、組成物の総容量に対して：
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．リン酸アルミニウムアジュバント、例えば０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬ、例えば０．８５ｍｇ／ｍＬ又は３．８４ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む免疫原性組成物である。
【０１０５】
実施形態１２は、配列番号１のアミノ酸配列を含む０．２ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１０６】
実施形態１３は、配列番号２のアミノ酸配列を含む０．２ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１０７】
実施形態１４は、配列番号１のアミノ酸配列を含む０．２ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び１２％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１０８】
実施形態１５は、配列番号２のアミノ酸配列を含む０．２ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び１２％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１０９】
実施形態１６は、配列番号１のアミノ酸配列を含む１．０ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１１０】
実施形態１７は、配列番号２のアミノ酸配列を含む１．０ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１１１】
実施形態１８は、配列番号１のアミノ酸配列を含む１．０ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び１２％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１１２】
実施形態１９は、配列番号２のアミノ酸配列を含む１．０ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、及び１２％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む、実施形態１１の免疫原性組成物である。
【０１１３】
実施形態２０は、筋肉注射のために製剤化された、実施形態１〜１９のいずれかに記載の免疫原性組成物である。
【０１１４】
実施形態２１は、
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１〜０．０５％のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を混合して、
それによって、免疫原性組成物を得ることを含む、免疫原性組成物を調製する方法である。
【０１１５】
実施形態２２は、ＨＩＶに対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって、組成物の総容量に対して、
ａ．０．０５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０１〜０．０５％のポリソルベート２０；及び
ｄ．ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー
を含む有効量の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法である。
【０１１６】
実施形態２３は、免疫原性組成物が、組成物の総容量に対して、
ａ．０．２ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質；
ｂ．５％〜１２％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
ｃ．０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ．ｐＨ６．５の１０ｍＭヒスチジンバッファー；及び
ｅ．リン酸アルミニウムアジュバント、例えば０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬ、例えば０．８５ｍｇ／ｍＬ又は３．８４ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸アルミニウムアジュバント
を含む、実施形態２２の方法である。
【０１１７】
実施形態２４は、ＨＩＶに対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の有効量の免疫原性組成物を対象に投与することを含む方法である。
【０１１８】
実施形態２５は、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする有効量の１種以上のアデノウイルスベクター、好ましくはアデノウイルス２６ベクターを対象に投与することをさらに含む、実施形態２２〜２４のいずれか１つの方法である。
【０１１９】
実施形態２６は、１種以上のＨＩＶ抗原をコードする有効量の１種以上のＭＶＡベクターを対象に投与することをさらに含む、実施形態２２〜２５のいずれか１つの方法である。
【０１２０】
実施形態２７は、１種以上のＨＩＶ抗原が、配列番号３〜１２、及び（ｉ）Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）と、（ｉｉ）Ｋ４８０Ｅ（第４８０位がＬｙｓからＧｌｕに）と、（ｉｉｉ）ＥＫ４７９−４８０ＲＲＲＲ（すなわち、第４７９位及び第４８０位のＧｌｕ及びＬｙｓを４つの連続したＡｒｇ残基で置換する）、Ｉ５２９Ｐ（第５２９位がＩｌｅからＰｒｏに）、Ａ４７１Ｃ（第４７１位がＡｌａからＣｙｓに）、及びＴ５７５Ｃ（第５７５位がＴｈｒからＣｙｓに）の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を有する配列番号１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２５又は実施形態２６の方法である。
【０１２１】
実施形態２８は、２〜８℃で少なくとも６ヶ月間安定である、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物である。
【０１２２】
実施形態２９は、２〜８℃で少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間、少なくとも３０ヶ月間、少なくとも３６ヶ月間安定である、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物である。
【０１２３】
実施形態３０は、２〜８℃で６〜７２ヶ月間安定である、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物である。
【０１２４】
実施形態３１は、２５℃で少なくとも６ヶ月間安定である、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物である。
【０１２５】
実施形態３２は、４０℃で少なくとも１週間、好ましくは少なくとも２週間安定である、実施形態１〜２０のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物である。
【０１２６】
実施形態３３は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む免疫原性組成物を保存するための方法であって、その方法は、実施形態１〜２０のいずれか１つ、実施形態２８〜３２のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を提供すること、及び前記組成物を２〜８℃で、少なくとも１日間、例えば少なくとも１週間、例えば少なくとも１ヶ月間、例えば１日〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、例えば１８〜３０ヶ月間保存することを含む。
【０１２７】
実施形態３４は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質を含む、長期間の貯蔵に安定な免疫原性組成物を調製するための方法であって、その方法は、（ｉ）０．０５〜５ｍｇ／ｍＬのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質、２〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０１〜０．０５％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５〜７．０の５〜２０ｍＭヒスチジンバッファー、水、及び好ましくは０．７〜４．０ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウム）を含む免疫原性組成物を提供することと、（ｉｉ）前記組成物を２〜８℃で、少なくとも１週間、例えば少なくとも１ヶ月間、例えば１〜７２ヶ月間、例えば６〜４８ヶ月間、例えば１２〜３６ヶ月間、例えば１８〜３０ヶ月間保存することと、を含む。
【０１２８】
実施形態３５は、ＨＩＶに対する免疫応答を誘導するために対象に、好ましくはヒト対象に投与するための、実施形態１〜２０のいずれか１つ、実施形態２８〜３２のいずれか１つ、又は実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物の使用であって、免疫原性組成物は、前記投与の前に２〜８℃で、少なくとも１日間、例えば少なくとも１週間、例えば少なくとも２週間、例えば少なくとも３週間、例えば少なくとも１ヶ月間、例えば少なくとも２ヶ月間、例えば少なくとも３ヶ月間、例えば少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６ヶ月間保存されている。
【０１２９】
実施形態３６は、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質との混合物を含む、実施形態１〜９のいずれか１つの免疫原性組成物である。
【０１３０】
実施形態３７は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が、混合物中で１：１の比で存在する、実施形態３６の免疫原性組成物である。
【実施例】
【０１３１】
実施例１：ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質のための製剤開発試験
タンパク質製剤に含まれ得る各構成成分、例えばバッファー、糖、ｐＨ値、界面活性剤などには多数の候補がある。例えば、バッファーの様々な候補には、リン酸塩、酢酸塩、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＭＰＯＳなどを含むことができ；アミノ酸の様々な候補には、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アラニンなどを含むことができ；糖の様々な候補には、スクロース、ソルビトール、グリセロール、マンニトール、トレハロースなどを含むことができ；かつ界面活性剤の様々な候補には、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０などを含むことができる。また多くの他の種類の賦形剤もあり、浸透圧調節物質（例えば、グリシン、プロリン、グリセロール、尿素など）、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウムなど）、炭水化物（例えば、ラクトース）、タンパク質及びポリマー（例えば、ＨＳＡ、ゼラチン、ＰＶＰ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧなど）、キレート剤及び抗酸化剤（例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、エタノールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、ｍ−クレゾール、フェノールなど）などのタンパク質製剤にさらに含まれ得る各々について多数の候補がある。例えば、Ｋａｍｅｒｚｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１１）６３，１１１８−１１５９を参照されたい。したがって、理論上、製剤を特定するのに使用され得る構成成分には多くの異なる組み合わせがある。しかし、最も好適な製剤は、製剤中の特定のタンパク質に依存する。
【０１３２】
したがって、発明者らは、タンパク質製剤の予測不可能な技術において複雑な要求を満たすことができた改善された製剤、具体的には、大規模後期フェーズ及び商業規模の要求を満たす製剤の製造を可能にし、リン酸アルミニウムアジュバント及び単一バイアルの製剤として冷蔵温度で保存されるｇｐ１４０タンパク質を含み、かつ現在使用されている製剤において存在する特定の構成成分と共同して不安定性を防止する改善されたＨＩＶ  ｇｐ１４０製剤を見出したことを記述した。製剤は、液体形態での貯蔵用に設計されたが、凍結乾燥形態での保存及び注射前に液体に戻される潜在力を有している。
【０１３３】
製剤のスクリーニング試験は、ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質製剤の安定性において、異なるバッファー（ヒスチジン、リン酸塩、及び酢酸塩）、バッファー強度（１０ｍＭ〜５０ｍＭ）、糖（２％〜１２％  ｗ／ｖのスクロース及びソルビトール）、界面活性剤（０．０２％〜１％  ｗ／ｖのポリソルベート２０及びポリソルベート８０）、並びに４．５〜７．５のｐＨ値を評価するように設計された。パラメータを表１に示すように変更した。
【０１３４】
【表１】
2019523773.tif 000002
【０１３５】
バッファー構成成分を試験されるｐＨ値で加え、続いて糖及び界面活性剤を加えることによって製剤を調製した。必要に応じてｐＨを調整した。次に、クレードＣのｇｐ１４０タンパク質（配列番号１）を加えて、１ｍｇ／ｍＬ又は０．２ｍｇ／ｍＬの濃度にした。
【０１３６】
製剤の安定性を、ＳｏｌｖｏＶＰＥシステムを使用して分析して、濃度及び濁度を評価した。各製剤の試料を、時間０（Ｔ０）、及び続いて４０℃で２４時間負荷を与えた後（Ｔ２４）に分析した。また、製剤の安定性を、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して分析した。
【０１３７】
ＳｏｌｖｏＶＰＥ分析：ＳｏｌｖｏＶＰＥ（Ｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｐｏｒｔ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用して、各製剤の試料のＵＶ吸光度を２８０ｎｍ及び３５０ｎｍで測定することによって、タンパク質濃度を決定した。濁度の変化を、Ｔ０及びＴ２４測定の間の３５０ｎｍの吸光度の相違から決定した。所望の製剤のためには、いかなる濁度の変化もできるだけ小さいことが好ましい。濁度の上昇は、タンパク質が溶液から外れて沈殿し、そのため製剤がより不安定になることを示す。ＳｏｌｖｏＶＰＥ分析の結果を図１に示す。
【０１３８】
ＳｏｌｖｏＶＰＥ分析の結果は、酢酸バッファー製剤が最も高い濁度の上昇（＋０．３３９の平均変化）を有した一方で、リン酸バッファー製剤は中程度の上昇（＋０．１７７の平均変化）を示し、ヒスチジンバッファー製剤はほとんど濁度の変化を示さない（−０．０１０の平均変化）ことを示している。濁度の大きな変化は望ましくないため、濁度データは、ヒスチジンバッファーがＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性を改善するために試験されたものの中で最適なバッファーであることを示す。
【０１３９】
動的光散乱（ＤＬＳ）分析：ＤＬＳを使用して、コロイドの安定性、及び特にタンパク質製剤中においてタンパク質の凝集があるかを評価した。２０℃のＴ０から７０℃のＴ７日における半径（Ｒｈ）の変化を測定した。より詳細には、Ｒｈを２０℃の初期の試料で測定した。次に、試料を７０℃まで加熱して、最終のＲｈを測定する前に７０℃の温度で７日間保持した。初期のＲｈ値と最終のＲｈ値との相違を図１Ｂにプロットした。Ｒｈの大きな変化は、タンパク質の凝集があり、したがって製剤がより望ましいものではないことを示す。
【０１４０】
ＤＬＳ分析の結果は、ソルビトールを含有する製剤が、スクロースを含有する製剤と比較してより小さな変化を有したことを示す。Ｒｈの大きな変化は望ましくないため、ＤＬＳデータは、ソルビトールがＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性を改善するために試験されたものの中で最適な糖であることを示す。
【０１４１】
上に記載の試験結果はまた、糖、糖濃度、界面活性剤、界面活性剤濃度、及びタンパク質濃度が安定性に影響を及ぼしたことを示し、そのため、これらのパラメータを下記実施例２で記載されるようにさらに調査した。
【０１４２】
実施例２：ＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０製剤の安定性における糖濃度、界面活性剤濃度、タンパク質濃度の影響
ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質免疫原性製剤を、１０ｍＭのヒスチジンバッファー、ｐＨ６．０±０．５において、変動する次のパラメータ：糖（ソルビトール及びスクロース）、糖濃度（２％及び１２％  ｗ／ｖ）、ポリソルベート（ＰＳ２０及びＰＳ８０）、ポリソルベート濃度（０．０２％及び０．１％  ｗ／ｖ）、タンパク質濃度（０．２ｍｇ／ｍＬ及び１．０ｍｇ／ｍＬ）で調製した。製剤を、１０ｍＭのヒスチジンバッファー、ｐＨ６．０±０．５を加え、続いて糖及び界面活性剤を加えることによって調製した。必要に応じてｐＨを調整した。ＨＩＶ  ｇｐ１４０クレードＣタンパク質（配列番号１）を加えて、所望の濃度にした。次に、製剤を、後述のように高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）により分析した。
【０１４３】
調製され、試験された製剤を以下の表２に示す。
【０１４４】
【表２】
2019523773.tif 000003
【０１４５】
高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）分析：ＨＰ−ＳＥＣを使用して、製剤試料中の六量体種、三量体種、及び高／低分子量種の量を、２８０ｎｍの吸光度を監視することにより分析した。ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、大部分が三量体として存在する。いくつかのＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質六量体種もまた観測された。三量体種は所望の種であるが、ＨＩＶに対する免疫原性は、三量体種及び六量体種の両方で認められる。製剤中の高分子量（ＨＭＷ）種及び低分子量（ＬＭＷ）種は、望ましくない。特に、ＬＭＷ種の存在は、ｇｐ１４０タンパク質の切断及び／又は分解を示す。ＨＭＷ種は、ｇｐ１４０タンパク質の凝集などの、いくつかの要因によって引き起こされ得る。各製剤の試料を、時間０（Ｔ０）、及び続いて４０℃で２４時間負荷を与えた時点（Ｔ２４）で分析した。１ｍｇ／ｍＬのクレードＣのｇｐ１４０タンパク質を含有する製剤を、ＨＰ−ＳＥＣシステムへの注入の前に２倍希釈し、０．２ｍｇ／ｍＬのクレードＣのｇｐ１４０タンパク質を含有する製剤は注入前に希釈しなかった。
【０１４６】
ＨＰ−ＳＥＣ分析の結果を、以下の表３及び図２Ａ〜２Ｆに示す。結果は、Ｔ０試料及びＴ２４試料の両方の三量体及び六量体の量が、界面活性剤及びＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の濃度に依存することを示す。低い界面活性剤濃度（０．０２％  ｗ／ｖ）を有する製剤は、試料への負荷の前後両方において、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の三量体種＋六量体種のより高い観測値を有し、観測された高／低分子量種はより少なかった（図２Ｂ、２Ｄ及び２Ｆを参照されたい）。高いＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質濃度（１．０ｍｇ／ｍＬ）を有する製剤もまた、試料への負荷の前後両方において（図２Ａ及び２Ｃを参照されたい）、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の三量体種＋六量体種のより高い観測値を有し、観測された高／低分子量種はより少なかった（図２Ｂ及び２Ｄを参照されたい）。  ポリソルベート８０とは対照的に、ポリソルベート２０を含有する製剤もまた、存在する低分子量種の量はより少なかった（図２Ｅを参照されたい）。
【０１４７】
【表３】
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【０１４８】
表３に示されるデータは、ソルビトール及びヒスチジンバッファーの配合が、ヒスチジンバッファー及びスクロースの配合に対して好ましいことを示す。例えば、製剤１、製剤４及び製剤７などのヒスチジンバッファー及びソルビトールを含有する製剤は、ヒスチジンバッファー及びスクロースを含有する製剤で観測されたものと比較して、六量体種及び三量体種の量のＴ０とＴ２４との間の変化が最小であることを示した。この結果は、ヒスチジンバッファー及びソルビトールがタンパク質製剤のための配合において通常使用されず、一方でヒスチジンバッファー及びスクロースが組み合わされて使用される場合が多いため、驚くべき結果である。したがって、最適な製剤が、ヒスチジンバッファー及びスクロースではなく、ヒスチジンバッファー（ｐＨ６．０±０．５）及びソルビトールを含んだことは予想外であった。上記の試験はまた、界面活性剤としてポリソルベート２０（図２Ｅを参照されたい）を０．２％（ｗ／ｖ）の濃度（図２Ｂ、２Ｄ及び２Ｆを参照されたい）を含むことによって、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の安定性がさらに改善した製剤を提供することを示す。
【０１４９】
臨床試験においてｇｐ１４０製剤に対して現在使用されているものと比較した本明細書で特定される製剤の利点は、それらが、大規模製造に容易に利用可能であり、長期間の安定性に悪影響を及ぼす可能性のある既知の問題を被らない現行の適格な公定グレードの賦形剤を使用し、安定な大量の原体及び抗原製剤の貯蔵を可能にすることを含む。さらに、これらの製剤では、冷蔵温度における、単一バイアル製剤としてのアジュバント製剤の貯蔵及び安定が可能になる。これらの製剤は、液体形態での貯蔵に好適であるが、凍結乾燥形態での保存及び注射前に液体に戻される潜在力を有しており、このことはさらなる利点である。
【０１５０】
実施例３：ＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質の安定性試験
ＨＩＶモザイクｇｐ１４０タンパク質（配列番号２）を含有する２つの製剤を、凍結融解及び温度サイクル試験における安定性について調査した。試験された製剤を表４に示す。
【０１５１】
【表４】
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【０１５２】
製剤を、複数回の凍結融解サイクルに晒した。１回の凍結融解サイクルを、−８０℃又は−４０℃で２４時間凍結させ、その後−２℃〜８℃で２４時間融解することによって行った。試料を、凍結融解の１サイクル、３サイクル及び５サイクルの終点において、２８０ｎｍ（濃度）及び３５０ｎｍ（濁度）の吸光度を測定することにより分析した。結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。
【０１５３】
結果は、複数回の凍結融解サイクル後の製剤Ｆ１及びＦ２の両方において３５０ｎｍ及び２８０ｎｍの吸光度は大幅に変化しなかったことを示し、これは、製剤の濃度及び濁度が比較的影響を受けなかったことを示している。このことは、製剤中のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質が凍結融解に対して安定であることを実証している。
【０１５４】
実施例４：ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の長期間の安定性試験
本発明の実施形態によるアジュバントを有する場合及び有しない場合のヒスチジンバッファー中のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質組成物の安定性を、アジュバントを有する場合及び有しない場合のＨＥＰＥＳバッファー中のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質組成物の安定性と比較した。試験された組成物を表５に示す。全ての製剤は、０．２ｍｇ／ｍＬのＨＩＶクレードＣのｇｐ１４０タンパク質（配列番号１）を含有した。
【０１５５】
【表５】
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【０１５６】
組成物を、２℃〜８℃；２５℃で６０％の相対湿度（ＲＨ）；及び４０℃で７５％のＲＨで保存した。調査を継続し、試料を２週間、１、２、３、６、９、１２、１８、２４、３０、及び３６ヶ月間貯蔵後に試験した。
【０１５７】
試料を、３ヶ月間までの貯蔵後に還元ＳＤＳにより試験した。還元条件下では、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを実施したとき、三量体形態及び六量体形態は還元されて、ゲル上の単一バンドとして現れる単量体形態になった。タンパク質の低分子量種へのあらゆる分解により、ゲル状で観測されるタンパク質の単量体形態において変化（減少）がもたらされた。２５℃及び６０％ＲＨ、並びに４０℃及び７５％ＲＨで保存された試料のデータを、図４Ａ〜４Ｄに示す。データは、全ての製剤が２５℃及び６０％ＲＨでの貯蔵下で、リン酸アルミニウムアジュバントの有無の両方において、３ヶ月間まで安定であったことを示す（図４Ａ及び４Ｃ）。しかし、４０℃及び７５％ＲＨで、リン酸アルミニウムアジュバントの有無の両方において、ヒスチジンバッファー及びソルビトールを含有する製剤は、ＨＥＰＥＳ及びスクロースを含有する製剤よりも、より安定であった（図４Ｂ及び４Ｄ）。加えて、２５℃で６ヶ月の貯蔵後、リン酸アルミニウムアジュバントを有しない、１２％ソルビトールを有するヒスチジン製剤化物質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定した際に、ＨＥＰＥＳバッファー製剤と比較して、より高い安定性を示した（最初の測定と比較して％においてより小さい変化；データは示さず）。さらに、ヒスチジンバッファー、ソルビトール、及びリン酸アルミニウムアジュバントで製剤化したｇｐ１４０は、２５℃で少なくとも６ヶ月間安定であることが観測された（データは示さず）。ヒスチジンバッファー及びソルビトールを、より高濃度のリン酸アルミニウムアジュバント（３．８４ｍｇ／ｍＬ）で製剤化した場合も、ＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質は、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定した際に、２５℃で少なくとも６ヶ月間、及び４０℃で少なくとも３ヶ月間安定であることが観測された（２５％未満の減少、データは示さず；一方ＥＬＩＳＡを使用した測定では、４０℃で少なくとも２週間の安定性（５０％未満の減少）を示した、データは示さず）。これらのデータはさらに、ヒスチジンバッファー及びソルビトールを含有するＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質製剤は、安定性が増大し、それにより、高温で単一バイアルにおけるアジュバント製剤として保存できることを示しており、このことは、高温での貯蔵に安定なアジュバントタンパク質を製剤化することが困難であることが多いため、利点である。このことは、アジュバントを有する製剤が、製造又は充填及び仕上げの現場で単一バイアルにおいて保存することができ、かつ分離して貯蔵し、投与の直前に調剤部又はベッドサイドで混合することを必要としないことを意味する。経済的な利益を別にして、このことは、収容能力及び設備が制限され得る多くの場所でも使用されることが意図されるＨＩＶワクチン製品にとっては、特に大きな利点である。また、それは、多数の対象が１つの推進事業においてワクチン接種される現場で、製剤を用いて行われる操作の数を限定することの利点でもある。したがって、本発明の製剤により、最終ワクチンの使用、特に資源に制約のある構成に対して実用的な特性が驚異的に改善される。
【０１５８】
２種のＨＩＶ  ｇｐ１４０タンパク質の組み合わせ、配列番号１を有するもの、及び配列番号２を有するものを混合し（総タンパク質濃度０．２〜１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．２ｍｇ／ｍＬのｇｐ１４０タンパク質の総濃度をもたらす各タンパク質について０．１ｍｇ／ｍＬ）、好ましい製剤、すなわち、２％〜１５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；０．０１〜０．０５％（ｗ／ｖ）、例えば０．０２％のポリソルベート２０；及び５〜２０ｍＭ、例えば１０ｍＭのヒスチジンバッファー、ｐＨ５．５〜７．０、例えばｐＨ６．５、並びに好ましくはリン酸アルミニウム、例えば０．７〜４ｍｇ、例えば０．８５又は３．８４ｍｇ／ｍＬにおいて、上記の方法を用いて試験した。この組成物はまた、上記の本製剤中の個々のタンパク質のように、２〜８℃で少なくとも６ヶ月間安定であると予想される。
【０１５９】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は例示の目的のためのものにすぎないこと、並びに上記の実施形態に対してその広い発明思想から逸脱することなく変更がなされ得ることは理解されよう。したがって、本発明は、開示されている特定の実施形態に限定されるのではなく、添付した特許請求の範囲によって規定される本発明の趣旨及び範囲に含まれる変形例を包含することが意図されていると理解されよう。
【０１６０】
参照文献
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特許文献：
１．国際公開第２０１０／０４２９４２号パンフレット
２．国際公開第２０１４／１０７７４４号パンフレット
３．米国特許出願公開第２０１２００７６８１２号明細書；
４．国際公開第２０１６／０４９２８７号パンフレット
５．国際公開第２０１０／０５９７３２号パンフレット
６．米国特許出願公開第２０１２００７６８１２号明細書
７．国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレット
８．ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１１５９号明細書
【図１Ａ】
2019523773.tif 000007
【図１Ｂ】
2019523773.tif 000008
【図２Ａ】
2019523773.tif 000009
【図２Ｂ】
2019523773.tif 000010
【図２Ｃ】
2019523773.tif 000011
【図２Ｄ】
2019523773.tif 000012
【図２Ｅ】
2019523773.tif 000013
【図２Ｆ】
2019523773.tif 000014
【図３Ａ】
2019523773.tif 000015
【図３Ｂ】
2019523773.tif 000016
【図４Ａ】
2019523773.tif 000017
【図４Ｂ】
2019523773.tif 000018
【図４Ｃ】
2019523773.tif 000019
【図４Ｄ】
2019523773.tif 000020
【配列表】
2019523773000001.app
【国際調査報告】
2019523773.tif 000021
2019523773.tif 000022
2019523773.tif 000023