(57)【要約】  本発明はがんの治療に関し、特に、有効量の体積調節型陰イオンチャネルのモジュレータ、即ち、ＶＲＡＣモジュレータを投与することによって、がん細胞を抗がん療法に対して感作させる方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん細胞を抗がん治療に対して感作させる方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む、方法。
【請求項２】
抗がん治療の治療効果を増強する方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記ＶＲＡＣモジュレータが前記抗がん治療と共に同時投与される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記抗がん治療がトポイソメラーゼ阻害剤、抗ホルモン剤、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、コルチコステロイド、ターゲッティング抗がん療法、分化剤、および免疫療法からなる群から選択される化学療法剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗がん治療が、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８のようなトポイソメラーゼ阻害剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ａ．前記抗がん治療は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンのようなトポイソメラーゼ阻害剤を含み、
ｂ．前記ＶＲＡＣ阻害剤はＮＳ３７２８であり、および
ｃ．前記がんは結腸直腸癌（例えば、イリノテカン耐性結腸直腸癌）であり、任意に、前記結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗がん治療は、抗エストロゲン、抗プロゲストゲンまたは抗アンドロゲンのような抗ホルモン剤であり、前記がんはステロイドホルモン受容体陽性がんである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ホルモン剤は、フルベストラントまたはタモキシフェンのような抗エストロゲンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ａ．前記抗がん治療は、抗エストロゲン、例えばフルベストラントまたはタモキシフェンを含み、
ｂ．前記ＶＲＡＣ阻害剤はＮＳ３７２８であり、および
ｃ．前記がんは、フルベストラントまたはタモキシフェン耐性がんのようなエストロゲン受容体陽性がんであり、好ましくは、前記エストロゲン受容体陽性がんは乳癌であり、任意に、前記乳癌は転移性乳癌である、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗がん治療は、テモゾロミドのようなアルキル化剤である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗がん治療は、パクリタキセルまたはドセタキセルのような有糸分裂阻害剤である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗がん治療が５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のような代謝拮抗剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療は相乗的である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＶＲＡＣモジュレータの投与は、治療量以下の用量（正常よりも低い）での前記化学療法剤の投与を可能にする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＶＲＡＣモジュレータは前記抗がん治療と同時投与され、それにより前記抗がん治療の効果が増強される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、前記抗がん治療の開始の前および／または同時に、および／または後に投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、前記抗がん治療の開始前に投与される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＶＲＡＣモジュレータの投与は、前記抗がん治療の臨床効果を高める、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、好ましくは３μＭ以下のような、例えば１μＭ以下、０．５μＭ以下のような、例えば０．１μＭ以下、１０ｎＭ以下のような、例えば５ｎＭ以下の５μＭ以下のＩＣ５０を有する、ＶＲＡＣ遮断剤である請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、ＮＳ３７２８、ＮＳ３６２３、ＮＳ３７４９およびタモキシフェンからなる群から選択される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＶＲＡＣモジュレータは一般式Ｉ：
【化１】
2019519506.tif 000008
の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩であって、ここで、
Ｒ２はテトラゾリルを表し、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６は、互いに独立して、水素、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロ、アルキル、アルキルカルボニル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａ−ＣＯ−Ｒｂ、フェニル、またはヘテロアリールを表し、
前記フェニルは任意に、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロ、−ＣＯ−ＮＨＲｃ、−ＣＯ−Ｏ−Ｒｃまたは−ＣＯ−ＮＲ’Ｒ’’で置換され、
ここでのＲｃは水素、アルキル、またはフェニルであり、
Ｒ’およびＲ’’は、互いに独立して、水素もしくはアルキルであり、または、
Ｒ’およびＲ’’は、それらが結合している窒素と一緒になって、５員または７員の複素環を形成し、この環は任意に、環要素として１つの酸素原子、および／または１つの追加の窒素原子、および／または１つの炭素−炭素二重結合、および／または１つの炭素−窒素二重結合を含み、
前記複素環は、任意にアルキルで置換されてよく、
ＲａおよびＲｂは、互いに独立して、水素またはアルキルであり、または
Ｒ１５およびＲ１６、もしくはＲ１４およびＲ１５は、それらが結合しているフェニル環と一緒になってナフチル環またはインダニル環を形成し、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびＲ１３、ならびにＲ１４、Ｒ１５およびＲ１６の残りの１つは上記で定義した通りである、
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、
Ｒ４はハロを表す、
請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、
Ｒ４はトリフルオロメチル、ニトロまたは−ＣＯ−ＮＨＲｃで置換されたフェニルを表し、
ここでのＲｃはフェニルである、
請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物は、
Ｎ−４−ニトロフェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３，５−ジ（トリフルオロメチル）フェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（３−ニトロフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−アニリノカルボニルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−フェニル−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−クロロ−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−アミノ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−アセチルアミノ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−カルバモイル−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−（Ｎ”，Ｎ”−ジメチルカルバモイル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
３’−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４’−［３−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−ウレイド］−ビフェニル−４−カルボン酸；
Ｎ−（インダン−５−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−４−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−アセチル−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−［３−（ピリジン−３−イル）−フェニル］−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−ブロモ−フェニル）−Ｎ’−［４’−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−３−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−ビフェニル−４−イル］尿素；
Ｎ−（３，５−ジクロロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ナフタレン−１−イル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−フルオロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−エチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
またはそれらの医薬的に許容可能な塩である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物は、
Ｎ−４−ニトロフェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３，５−ジ（トリフルオロメチル）フェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（３−ニトロフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−アニリノカルボニルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
またはそれらの医薬的に許容可能な塩である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＶＲＡＣモジュレータがＮＳ３７２８である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、経口投与のための錠剤またはカプセルの形態である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、静脈内投与または連続注入のための液体の形態である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗がん治療は、白金、ルテニウム、金またはチタン系抗がん剤のような金属系抗がん剤を含むものではなく、またはそれからなるものでない、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗がん治療は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンまたはネダプラチンのような白金系抗がん剤による治療を含むものでなく、またはそれからなるものでない、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記がんは化学療法剤のような抗がん治療に対して耐性である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記耐性はデノボ耐性である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記耐性は後天的耐性である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＶＲＡＣモジュレータによる治療は、前記がんを前記抗がん治療に対して再感作させる、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記がんは、肉腫、癌腫およびリンパ腫から選択される固形腫瘍のような固形腫瘍である、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記がんは、結腸直腸癌、乳癌、肺癌（非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、膠芽腫、頭頸部癌、悪性黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞癌、肝癌、膵臓癌、前立腺癌、肛門癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮体癌、卵巣癌、胆嚢癌、肉腫、白血病（骨髄性およびリンパ性）、リンパ腫、骨髄腫からなる群から選択される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記がんは転移性がんである、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記がんは転移性結腸直腸癌のような結腸直腸癌である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記がんは転移性乳癌のような乳癌、である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記がんは膠芽腫である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
がんの治療方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤のような抗がん治療を投与することを含む、方法
【請求項４２】
有効量のＶＲＡＣモジュレータ、化学療法剤および１以上の医薬的に許容可能なアジュバント、賦形剤、担体、緩衝剤および／または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項４３】
有効量のＶＲＡＣモジュレータと、医薬として使用するための有効量の化学療法剤とを含む組成物。
【請求項４４】
有効量のＶＲＡＣモジュレータと、がんの治療に用いるための有効量の化学療法剤とを含む組成物。
【請求項４５】
がん細胞を抗がん治療に対して感作させることにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータ。
【請求項４６】
抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータ。
【請求項４７】
ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤、ならびに任意に使用説明書を含むパーツのキットであって、前記ＶＲＡＣモジュレータおよび前記化学療法剤は、同時、逐次または別々の投与のために製剤化される、キット。
【請求項４８】
がん細胞を抗がん治療に感作させるために、または抗がん治療の治療効果を増強するために使用するための医薬の製造のためのＶＲＡＣモジュレータの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療、特に有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することにより、がん細胞を抗がん治療に対して感作させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは、我々の社会にとって圧倒的な負担であり、２０１４年には約１，４００万人が新たにがんと診断された。多くの新しい治療法／選択肢の導入にも拘わらず、適用される治療に対するデノボ耐性または後天的耐性が、がんに由来する死因の大部分を占めている。
【０００３】
大部分の哺乳動物細胞には、体積調節型陰イオンチャネル（Ｖｏｌｕｍｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ａｎｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌ：ＶＲＡＣ）が存在する。ＶＲＡＣの重要な機能は、細胞体積の調節である。低張溶液中で細胞が膨潤すると、これらのチャネルが活性化され、カリウムイオン（カリウムチャネルを介して）および水と並行して塩素イオンが細胞から流出し、それによって元の細胞体積を回復する。
【０００４】
ＶＲＡＣの活性を遮断できる化合物は、Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６（２００３）において特徴付けされている。例えば、ＮＳ３７２８（Ｅｎｄｏｖｉｏｎ；ＳＣＯ−１０１）は、強力な経口活性ＶＲＡＣ遮断剤である。
【０００５】
ＷＯ９８／４７８７９およびＷＯ００／２４７０７は、ＮＳ３７２８を含むＶＲＡＣモジュレータ、および鎌状赤血球貧血の治療におけるそれらの使用を開示している。
【０００６】
ＷＯ２００４／０１２７３３は、ＮＳ３７２８を含むＶＲＡＣモジュレータ、および抗血管新生療法、特に抗転移治療に応答する疾患の治療におけるそれらの使用を開示している。
【０００７】
以前の研究は、がん細胞がアポトーシスを受ける能力におけるＶＲＡＣの役割を示し、ＮＳ３７２８は、インビトロにおいてシスプラチン媒介性アポトーシスを阻害することが示されている（Ｐｏｕｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０；Ｓｏｅｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１６；Ｐｌａｎｅｌｌｓ＿Ｃａｓｅｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２０１５）。
【０００８】
転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）の化学療法的治療は、一般には、代謝拮抗薬である５−フルオロウラシル（５ＦＵ）と、ＤＮＡ結合剤であるオキサリプラチンとの併用（例えば、ＦＯＬＦＯＸレジメン）、またはトポイソメラーゼＩ阻害剤であるイリノテカンとの併用（例えば、ＦＯＬＦＩＲＩレジメン）の何れかに基づいており、また生物学的治療、例えばＥＧＦＲターゲティング薬物または抗血管新生剤と組み合わせて投与されることも多い。ｍＣＲＣ患者の応答率および生存率を有意に上昇させたこれらの併用レジメンの有効性（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ａｎｄ  Ｋｅｍｅｎｙ，２０１０）にもかかわらず、治療患者の３０〜５０％のみが何れかの併用療法に対して客観的応答を示し、また化学療法的治療にもかかわらず、がんの進行は共通の結果である（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ａｎｄ  Ｋｅｍｅｎｙ、２０１０；Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。更に悪いことに、以前のＦＯＬＦＩＲＩ治療患者に対するｍＣＲＣ・ＦＯＬＦＯＸの第２選択の化学療法に対する客観的奏効率は１０〜２０％に低下し、第３選択の治療に対する客観的応答は殆ど存在しない。従って、デノボ（既存の）または後天性の薬物耐性が、ｍＣＲＣの管理における主要な問題であることは明らかである。原発性ＣＲＣ（この場合、補助化学療法［殆どの場合、ＦＯＬＦＯＸまたはＸＥＬＯＸ］を受けているステージＩＩＩの患者の大部分［３０〜４０％］が化学療法後に疾患の再発を示す）について議論する際にも、同様の結論を導くことができる。
【０００９】
乳癌（ＢＣ）は異種疾患であり、これは様々なタイプの化学療法に対する異種反応パターンに反映される。ＢＣのアジュバント治療において、最も頻繁に使用される薬物は、アントラサイクリン（トポイソメラーゼ２阻害剤）およびタキサンを含む細胞傷害性薬物である。これらの薬物は、シクロホスファミドと併用して投与されることが最も多い。エストロゲン受容体陽性ＢＣ患者の場合、アジュバント治療は、アロマターゼ阻害剤、エストロゲン受容体アンタゴニスト（タモキシフェンおよびフルベストラント）などの抗エストロゲンを含むことが最も多い。しかし、アジュバントまたはネオアジュバントの全身抗がん治療を受けている患者の約１８〜２０％は、疾患の再発を経験するであろう。転移性ＢＣ（ｍＢＣ）患者の全身療法に対する奏功率は、一次治療では６０％以上に亘るが、三次ないし四次の治療に到達した時点では２０〜２５％へと急速に減少する。これらの数字は、毎年何千人もの女性が疾患の進行および死亡に至る、高度のデノボ耐性および後天的耐性の両方を明瞭に示している。
【００１０】
従って、がん、特に薬物耐性がんの治療のための新薬および薬物の組み合わせの同定、特徴付け、ならびに前臨床的および臨床的検証は、未だ満たされていない高度の医学的必要性を構成している。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、がんのための新規な治療レジメンを提供するものであり、化学療法耐性がんの治療に特に適している。本発明の治療レジメンは、体積調節型陰イオンチャネル（ＶＲＡＣ）の活性を調節できる化合物、即ちエンドビオン（ＮＳ３７２８）のようなＶＲＡＣモジュレータでの治療を含むものである。驚くべきことに、ＶＲＡＣモジュレータとの併用治療は、抗がん治療の効果を高めることが示されている。更に、ＶＲＡＣモジュレータとの併用療法は、化学療法耐性がん細胞を、特定の化学療法剤による治療に対して再感作できることが示されている。
【００１２】
第１の態様において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させる方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む方法に関する。ＶＲＡＣモジュレータは、抗がん治療が施される前、最中および／または後に投与されてよい。
【００１３】
第２の態様において、本発明は、抗がん治療の治療効果を増強する方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む方法に関する。ＶＲＡＣモジュレータは、抗がん治療が施される前、最中および／または後に投与されてよい。
【００１４】
第３の態様において、本発明は、がんの治療方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤のような抗がん治療を投与することを含む方法に関する。
【００１５】
第４の態様において、本発明は、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤を含む組成物に関する。
【００１６】
第５の態様において、本発明は、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤を含む組成物であって、医薬として使用するための組成物に関する。
【００１７】
第６の態様において、本発明は、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤を含む組成物であって、がんの治療に用いるための組成物に関する。
【００１８】
第７の態様において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させることにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータに関する。
【００１９】
第８の態様において、本発明は、抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータに関する。
【００２０】
第９の態様において、本発明は、ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤を含むパーツのキットであって、ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤は同時に、逐次的に、または別々に投与されるために処方され、また任意に使用説明書を具備するキットに関する。
【００２１】
第１０の態様において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させるための、または抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するための医薬の製造のためのＶＲＡＣモジュレータの使用に関する。
【００２２】
第１１の態様において、本発明は、患者の治療のためにＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤のような抗がん治療を使用することであって、該患者は以前に、該抗がん剤での治療に対して耐性であると判定されている使用に関する
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】インビボでのＣ９膠芽腫異種移植片の増殖に対するＮＳ３７２８（４０ｍｇ／ｋｇ・ＰＯ）、テモゾラミド（テモダール）（２５ｍｇ／ｋｇ・ＩＰ）およびそれらの組み合わせの毎日投与の効果。
【図２】インビボでの皮下エアサック（ＳＡＳ）モデルにおけるＣ９膠芽腫細胞の増殖に対する、ＮＳ３７２８（４０ｍｇ／ｋｇ）テモゾラミド（テモダール）（５ｍｇ／ｋｇ・ＩＰ）およびそれらの組み合わせの毎日投与の効果。
【図３】インビボにおいて、ビヒクルで処置したマウスと比較された、ＨＴ２９結腸腫瘍異種移植片の増殖に対するＮＳ３７２８（８０ｍｇ／ｋｇ・ＰＯ）、５−フルオロウラシル（３０ｍｇ／ｋｇ・ＩＰ）およびそれらの併用の効果。
【図４】インビボにおいて、ビヒクルで処置したマウスと比較された、ＨＴ２９結腸腫瘍異種移植片の増殖に対するＮＳ３７２８（８０ｍｇ／ｋｇ・ＰＯ）、パクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ・ＩＰ）およびそれらの併用の効果。
【図５】インビトロにおける、ドセタキセル耐性ＭＣＦ７乳癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ドセタキセルおよびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図６】インビトロにおける、ドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ドセタキセルおよびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図７】インビトロにおける、親ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、オキサリパチンおよびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図８】インビトロにおける、親ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図９】インビトロにおける、親ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１０】インビトロにおける、親ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１１】インビトロにおける、ＳＮ−３８耐性ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１２】インビトロにおける、ＳＮ−３８耐性ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１３】インビトロにおける、ＳＮ−３８耐性ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１４】インビトロにおける、オキサリプラチン耐性ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１５】インビトロにおける、オキサリプラチン耐性ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＳＮ−３８およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１６】インビトロにおける、タモキシフェン耐性ＭＣＦ７／ＬＣＣ２乳癌細胞の細胞生存度に対するＮＳ３７２８、タモキシフェンおよびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【図１７】インビトロにおける、ＩＣＩ１８２，７８０耐性ＭＣＦ７／ＬＣＣ９乳癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ＩＣＩ１８２，７８０（フルベストラント／ファスロデックス）およびそれらの併用の効果。エラーバーは標準偏差である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明者らは、驚くべきことに、ＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん療法、例えば化学療法剤を用いたがんの併用治療が、単独療法と比較して有効性を増強し、更には化学療法耐性がん細胞を治療に対して再感作させることを見出し、従って、ＶＲＡＣモジュレータを投与して抗がん治療の治療効果を増強し、および／またはがん細胞を抗がん治療に対して感作させる、がんのための新しい治療レジメンを提案する。
【００２５】
ＶＲＡＣ
大部分の哺乳動物細胞には、体積調節型陰イオンチャネル（ＶＲＡＣ）が存在する。ＶＲＡＣの重要な機能は細胞体積の調節である。低張溶液中で細胞が膨潤すると、これらのチャネルが活性化されて、塩素イオンがカリウムイオン（カリウムチャネルを介して）および水と並行して細胞から流出し、それによって元の細胞体積が回復する。
【００２６】
ＶＲＡＣをコードする遺伝子ファミリーは、２０１４年に二つの独立したグループによって実質的に同時に、ＬＲＲＣ８ファミリーとして同定された（Ｖｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４（６１８４）：６３４−８、およびＱｕｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｃｅｌｌ  １５７（２）：４４７−５８）。ＶＲＡＣはまた、文献中歴史的には、体積感受性有機オスモライト・陰イオンチャネル（ＶＳＯＡＣ）、体積感受性外向き整流器（ＶＳＯＲ）、電圧依存性陰イオンチャネル（ＶＤＡＣ）、ヒト体積感受性外向き整流器（ＨＳＶＯＲ）、体積調節型塩化物チャネル（ＶＲＣＩＣ）およびＩＣｌ，ｓｗｅｌｌとして知られていた。これら表現型の出現は、現在では、異なる細胞型で発現される機能的ＶＲＡＣのＬＲＲＣ８サブユニットにおける異なる組成の結果であると考えられている。
【００２７】
ＶＲＡＣは、ほぼ遍在的に分布した陰イオンチャネルであり、細胞の膨潤および／または細胞内イオン強度の低下によって活性化される。これは、調節体積減少（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｄｅｃｒｅａｓｅ［ＲＶＤ］）の際の陰イオンコンダクタンスの増加を媒介するチャネルである。電気生理学的記録において、ＶＲＡＣは外向き整流を示し、殆どの細胞では、陽性膜電位において顕著な電位依存性不活性化を示す。ＶＲＡＣは高度に陰イオン選択的であり、小さい無機イオンについての独特な選択性序列、即ち、ＳＣＮ−＜Ｉ−＝ＮＯ３−＜Ｂｒ−＜Ｃｌ−＜ＨＣＯ３−＜Ｆ−（アイゼンマンのＩ型ハロゲン化物選択性序列）を有し、また特異的サブユニット組成に依存して、シスプラチンのような多数の負に帯電した、または中性の有機分子の透過をも可能にする広い細孔を有する。
【００２８】
ＶＲＡＣの活性化は、細胞内ＡＴＰの存在に不可避的に依存し、またタンパク質キナーゼが関与する複雑な細胞内シグナル伝達カスケードが、この活性化プロセスを支援する。
【００２９】
ＶＲＡＣ遮断剤
一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータはＶＲＡＣ遮断剤である。「ＶＲＡＣ遮断剤」の用語は、本明細書では「ＶＲＡＣ阻害剤」の用語と互換的に使用される。ＶＲＡＣ遮断剤は、細胞の膨潤または細胞内イオン強度の低下に応答して、塩化物または任意の他の陰イオンまたは中性分子の膜貫通輸送を阻害する化合物である。
【００３０】
ＶＲＡＣ阻害剤として作用する化合物は、チャネルタンパク質に結合し、本明細書に記載のＶＲＡＣ機能を測定する１以上の方法により識別可能な阻害効果を奏する。阻害化合物は、１以上の理論的な作用様式（ＭＯＡ）を介して作用することができ、その主な類別は次の通りである。
１）阻害を得るための方法は、チャネルの膜貫通細孔領域のどこかに結合することによって、開口チャネルを通る電流の流れを直接妨害（遮断）することである。そのような分子は、当技術分野において「阻害剤」と呼ばれることがある。
２）阻害を得るためのもう一つのより異質な方法は、チャネルの自然活性化プロセスを防止または遅延させること、および／またはその天然の不活性化または不活性化プロセスを刺激／促進することによるものである。そのような分子は、全体的に、その開口形態において個々のチャネルタンパク質を見出す可能性を低下させると予想される（開口状態確率Ｐｏの低下）。そのような分子は、それらがどのような微視的プロセスに影響に与えるかに関わらず、「負の開閉モジュレータ」と総称することができる。負の開閉モジュレータは、「負のアロステリックモジュレータ」または「ＮＡＭ」と呼ばれることもある。
【００３１】
特定の化合物についての詳細なＭＯＡの解明は非常に困難な課題であり、高感度機能測定（例えば、本明細書に記載の単一チャネル記録）と高解像度構造情報（例えば、結晶学、配列分析、突然変異分析等）の組合せを必要とする可能性がある。この場合、どのＭＯＡが、本明細書に記載したＶＲＡＣモジュレータにおけるＶＲＡＣ阻害効果の原因であるかは明白には決定されていない。従って、それらは総称してＶＲＡＣ阻害剤と称される。
【００３２】
ＶＲＡＣ阻害剤として作用する所定の物質の潜在能力は、下記のような標準的な実験室的試験法を用いて決定され得る。即ち、
ａ）全細胞または単一チャンネルのパッチクランプ技術、またはその自動化ＨＴＣバージョン、
ｂ）微小電極電気生理学（貫通性の先鋭電極）、
ｃ）流れアッセイ（例えば、放射性同位体および非放射性同位体）、
ｄ）蛍光染料（例えば、膜電位または塩化物濃度指示薬）、
ｅ）細胞体積測定（例えば、光散乱、コールターカウンター測定、または画像分析のような光学的方法）。
【００３３】
ＶＲＡＣ活性を測定するためには、細胞を膨潤させることによって（例えば、低張の細胞外リンゲル溶液に曝露することにより）、または細胞内溶液を高張または低イオン強度にすることによって、チャネルタンパク質を活性化する必要がある（極めて僅かの技術だけ、即ち、以下の１．ａに記載する全細胞パッチクランプがそれを可能にする）。
【００３４】
ＶＲＡＣ活性は、固定膜電位（電圧クランプ）における膨潤活性化膜貫通陰イオン電流の直接測定を可能にする電気生理学的方法によって、最も直接的に記録される。可能性は次の通りである。
【００３５】
手動技術
ａ）手動全細胞パッチクランプ（細胞膜全体からの陰イオン電流の測定）。これは薬物スクリーニングのための最も現実的な構成である。細胞付着構成（細胞膜の小さな断片で発現された比較的少数のイオンチャネルを通る電流の測定）は、文献において幾つかのケースで使用されており、また膜断片がパッチピペットの先端に単離されている（内側から外側、および外側から外側の構成）場合には、切除された構成についても同じことが当てはまる。これらの方法は、生物物理学的研究または特定の化合物の作用様式の解明（低いスループット）に最も関連している。
ｂ）穿孔パッチ記録（本質的には１ａに記載されている全細胞構成と同じ構成であり、膜には孔が確立されていないが、透過性処理剤［典型的にはアンホテリシンＢのような細菌性孔形成ペプチド］を使用することによる細胞内部への低抵抗接続において異なっている）。スループットは全細胞法よりもかなり低いが、記録中に、生理的組成に近い細胞の環境を維持するという利点を有する。（ＶＲＡＣが細胞内ＡＴＰに依存するという点において、この分子は、それが全細胞構成において有するような、ピペット溶液に適用される必要はない）。
ｃ）膜貫通性の「鋭利な」電極を用いた手動の「古典的」電気生理学。典型的な小さい実験室細胞株（ＨＥＫ、ＣＨＯなど）での使用は非常に困難であるため、薬物スクリーニングのためには容易に実施できない。
自動技術
ｄ）様々な形態のＨＴＳ電気生理学、これはＳｏｐｈｉｏｎ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのＱＰａｔｃｈまたはＱＵＢＥ（Ｋｏｒｓｇａａｒｄ，ＭＰ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ，２００９；Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｃ  ｅｔ  ａｌ，Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１６）、またはナニオンシステムズ（Ｎａｎｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍｓ）に記載されている。全ての方法は、チップ上に取り付けられた平坦なガラスまたはシリコン基板を使用して、基本的に全細胞測定（ａ参照）または穿孔パッチ測定（ｂ参照）を行うが、これはパラレル設定での測定および化合物／流体処理の高度の自動化を可能にする。
【００３６】
ＶＲＡＣ活性化のより間接的な効果は、以下により測定することができる：
ａ）問題の細胞（即ち、ＨＥＫ２９３）中のハロゲン化物感受性の蛍光タンパク質またはペプチドの発現（安定的、一時的または誘導性の何れか）。最も多く使用されているのは黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）であり、その発光は培地中のハロゲン化物の種類および濃度に非常に敏感である。これに関連して、ヨウ化物イオンの効果は塩素イオンよりもはるかに顕著であることが利用される。ヨウ化物イオン（ＣｌイオンよりもＶＲＡＣを更に良く透過する）を細胞外溶液に適用することによって、ＶＲＡＣが開くときに、これらを細胞内部へと膜を通過させることが達成される（細胞を出る塩素イオンの反対方向で）。それにより、ＶＲＡＣの活性化は、ＹＦＰからの増大した発光によって報告される。ＶＲＡＣの阻害剤は、この放出を抑制することが期待され（ヨウ素イオン流入が少ない）、従って、この方法は阻害の効力および程度の定量化に使用することができる。
ｂ）ＶＲＡＣを発現する細胞の膨潤の程度は、例えば、コールターカウンター、光散乱技術、顕微鏡技術、またはインピーダンス測定などによって、細胞サイズを直接測定することにより追跡することができる。ＶＲＡＣの阻害は膨潤プロセスに影響を及ぼさないが、ＶＲＡＣ活性化によって引き起こされるＲＶＤ（調節型体積減少）と称する体積回復プロセスを防止または遅延させる。ＹＦＰおよび細胞サイズの両方を測定することにより、ＶＲＡＣ活性化の間接的な「ダウンストリーム」効果にますます依存することになり、これは偽陽性と偽陰性の両方の信号を登録するリスクを有意に増大させることを認識するのが重要である。従って、そのような結果は、通常は電気生理学的測定の使用によって検証される。
ｃ）他の多くの方法をＶＲＡＣの活性化へと結びつけることができるが、これらは更に間接的である。特定の細胞株に対する遊走、増殖、細胞傷害性、アポトーシス試験における効果は全て、インビボがん効果の予測に関してそれ自体重要であるが、ＶＲＡＣのみに依存するものはない。
【００３７】
ＶＲＡＣの発現は、例えば、ｑＰＣＲ、インサイチューハイブリダイゼーションまたは抗体によって測定することができる。
【００３８】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は、ＷＯ９８／４７８７９、および／またはＷＯ００／２４７０７に記載されているようなジフェニル尿素誘導体である。
【００３９】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は、標準的な試験方法によるインビトロ阻害について、１０μＭ未満、例えば１０００ｎＭ未満、例えば１００ｎＭ未満、例えば５０ｎＭ未満、例えば１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す。
【００４０】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は５μＭ以下、例えば３μＭ以下（例えば１μＭ以下）、例えば０．５μＭ以下（例えば０．１μＭ以下）、例えば１０ｎＭ以下（例えば５ｎＭ以下）のＩＣ５０を有する。
【００４１】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は２μＭ以下（例えば１μＭ以下）、例えば０．５μＭ以下（例えば０．１μＭ以下）、例えば１０ｎＭ以下（例えば５ｎＭ以下）のＩＣ５０を有する。好ましい実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は０．５μＭ以下のＩＣ５０を有する。
【００４２】
ＶＲＡＣ遮断剤の一例は、一般式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩である。
【化１】
2019519506.tif 000002
ここで、
Ｒ２はテトラゾリルを表し、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６は、互いに独立して、水素、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロ、アルキル、アルキルカルボニル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａ−ＣＯ−Ｒｂ、フェニル、またはヘテロアリールを表し、
フェニルは任意に、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロ、−ＣＯ−ＮＨＲｃ、−ＣＯ−Ｏ−Ｒｃまたは−ＣＯ−ＮＲ’Ｒ’’で置換され、
ここでのＲｃは水素、アルキル、またはフェニルであり、
Ｒ’およびＲ’’は、互いに独立して、水素もしくはアルキルであるか、または
Ｒ’およびＲ’’は、それらが結合している窒素と一緒になって、５員または７員の複素環を形成し、この環は任意に、環要素として１つの酸素原子、および／または１つの追加の窒素原子、および／または１つの炭素−炭素二重結合、および／または１つの炭素−窒素二重結合を含み、
また、複素環は、任意にアルキルで置換されてよく、
ＲａおよびＲｂは、互いに独立して、水素またはアルキルであり、または
Ｒ１５およびＲ１６、またはＲ１４およびＲ１５は、それらが結合しているフェニル環と一緒になってナフチル環またはインダニル環を形成し、またＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびＲ１３、ならびにＲ１４、Ｒ１５およびＲ１６の残りの１つは上記で定義した通りである。
【００４３】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤は一般式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩である。
【化２】
2019519506.tif 000003
ここで、
Ｒ２はテトラゾリルを表し、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロまたはフェニルを表し、
このフェニルは任意にハロ、トリフルオロメチル、ニトロまたは−ＣＯ−ＮＨＲｃで置換されてもよく、
Ｒｃは水素、アルキルまたはフェニルである。
【００４４】
一般式Ｉの化合物の一実施形態において、Ｒ２はテトラゾリルを表し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素、ハロ、トリフルオロメチルまたはニトロを表す。
【００４５】
一般式Ｉの化合物の一実施形態において、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、またＲ４は臭素のようなハロを表す。
【００４６】
一般式Ｉの化合物の一実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素を表す。
【００４７】
一般式Ｉの化合物の更なる実施形態において、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、またＲ４は−ＮＲａＲｂ、例えばアミノを表す。
【００４８】
一般式Ｉの化合物のなお更なる実施形態において、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、またＲ４は−ＮＲａ−ＣＯ−Ｒｂ、例えばアセチルアミノを表す。
【００４９】
一般式Ｉの化合物の更なる実施形態において、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、Ｒ４はトリフルオロメチル、ニトロまたはＣＯ−ＮＨＲｃで置換されたフェニルを表し、ここでのＲｃはフェニルである。特定の実施形態において、Ｒ４は、トリフルオロメチルで置換されたフェニル、例えば４−トリフルオロメチルフェニルを表す。更なる実施形態において、Ｒ４は、ニトロで置換されたフェニル、例えば３−ニトロフェニルを表す。更なる実施形態において、Ｒ４は、−ＣＯ−ＮＨＲｃで置換されたフェニル、例えばアニリノカルボニルフェニル、特に４−アニリノカルボニルフェニルを表す。
【００５０】
一般式Ｉの化合物の更なる実施形態において、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素を表し、Ｒ４は、−ＣＯ−Ｏ−Ｒｃまたは−ＣＯ−ＮＲ’Ｒ”で置換されたフェニルを表す。特定の実施形態において、Ｒ４は、−ＣＯ−Ｏ−Ｒｃで置換されたフェニルを表し、ここでＲｃは水素である。特定の実施形態において、Ｒ４は、−ＣＯ−ＮＲ’Ｒ”で置換されたフェニル、例えば、４−ジメチルカルバモイルフェニルまたは４−（４−メチル−１−ピペラジン−カルボニル）−フェニルを表す。
【００５１】
なお更なる実施形態において、Ｒ１５はトリフルオロメチルを表す。特定の実施態様において、Ｒ１５はトリフルオロメチルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１６は水素を表す。更なる実施形態において、Ｒ１３はトリフルオロメチルを表す。特定の実施形態において、Ｒ１３およびＲ１５はトリフルオロメチルを表し、Ｒ１２、Ｒ１４およびＲ１６は水素を表す。
【００５２】
更なる実施形態において、Ｒ１６はトリフルオロメチルを表す。特定の実施態様において、Ｒ１６はトリフルオロメチルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は水素を表す。
なお更なる実施形態において、Ｒ１５はハロ、例えばクロロまたはブロモを表す。特定の実施形態において、Ｒ１５はハロ、例えばクロロまたはブロモを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１６は水素を表す。更なる実施形態において、Ｒ１３およびＲ１５は、ハロ、例えばクロロを表し、Ｒ１２、Ｒ１４およびＲ１６は、水素を表す。なお更なる実施形態において、Ｒ１４およびＲ１５は、ハロ、例えばクロロを表し、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１６は、水素を表す。
【００５３】
更なる実施形態において、Ｒ１６は、ハロ、例えばフルオロを表す。特定の実施形態において、Ｒ１６は、ハロ、例えばフルオロを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、水素を表す。
なお更なる実施形態において、Ｒ１６は、アルキル、例えばメチルまたはエチルを表す。特定の実施形態では、Ｒ１６は、アルキル、例えばメチルまたはエチルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、水素を表す。
【００５４】
更なる実施形態において、Ｒ１４はニトロを表す。特定の実施形態において、Ｒ１４はニトロを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５およびＲ１６は水素を表す。
なお更なる実施形態において、Ｒ１４は、アルキルカルボニル、例えばアセチルを表す。特定の実施形態において、Ｒ１４は、アルキルカルボニル、例えばアセチルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５およびＲ１６は、水素を表す。
【００５５】
更なる実施形態において、Ｒ１５はフェニルを表す。更なる実施形態では、Ｒ１４はフェニルを表す。特定の実施形態において、Ｒ１４またはＲ１５の一方はフェニルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６の残りは水素を表す。
なお更なる実施形態において、Ｒ１５はピリジル、例えばピリジン−３−イルを表す。特定の実施形態において、Ｒ１５は、ピリジル、例えばピリジン−３−イルを表し、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１６は、水素を表す。
【００５６】
更なる実施形態において、Ｒ１５およびＲ１６は、それらが結合しているフェニル環と一緒になってナフチル環を形成する。
【００５７】
更なる実施形態において、Ｒ１４およびＲ１５は、それらが結合しているフェニル環と一緒になってインダニル環を形成する。
【００５８】
更なる実施形態において、一般式Ｉの化合物は、下記から選択される。
Ｎ−４−ニトロフェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３，５−ジ（トリフルオロメチル）フェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（３−ニトロフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−アニリノカルボニルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−フェニル−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−クロロ−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−アミノ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−アセチルアミノ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−カルバモイル−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−（Ｎ”，Ｎ”−ジメチルカルバモイル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
３’−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４’−［３−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−ウレイド］−ビフェニル−４−カルボン酸；
Ｎ−（イン−ダン−５−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−４−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−アセチル−フェニル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−［３−（ピリジン−３−イル）−フェニル］−Ｎ’−［２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３−ブロモ−フェニル）−Ｎ’−［４’−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−３−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−ビフェニル−４−イル］尿素；
Ｎ−（３，５−ジクロロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（ナフタレン−１−イル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−トリフルオロメチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−フルオロ−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
Ｎ−（２−エチル−フェニル）−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］尿素；
またはそれらの医薬的に許容可能な塩。
【００５９】
本発明の特定の実施形態において、化合物は、
Ｎ−４−ニトロフェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３，５−ジ（トリフルオロメチル）フェニル−Ｎ’−［４−ブロモ−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（３−ニトロフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−アニリノカルボニルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
Ｎ−３−トリフルオロメチルフェニル−Ｎ’−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１−Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］尿素；
またはその医薬的に許容可能な塩である。
【００６０】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤はＮＳ３７２８：
【化３】
2019519506.tif 000004
またはその医薬的に許容可能な塩である。ＮＳ３７２８は、エンドビオン（Ｅｎｄｏｖｉｏｎ）およびＳＣＯ−１０１としても知られている。ＮＳ３７２８は、０．４０μＭのＩＣ５０を有する強力な経口活性ＶＲＡＣ遮断剤である（Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６，２００３）。
【００６１】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤はＮＳ３６２３：
【化４】
2019519506.tif 000005
またはその医薬的に許容可能な塩である。ＮＳ３６２３は、１．８μＭのＩＣ５０を有するＶＲＡＣ遮断剤である（Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６，２００３）。
【００６２】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤はＮＳ３７４９：
【化５】
2019519506.tif 000006
またはその医薬的に許容可能な塩である。ＮＳ３７４９は、１．４μＭのＩＣ５０を有するＶＲＡＣ遮断剤である（Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６，２００３）。
【００６３】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤はタモキシフェン（ＴＭＸ）：
【化６】
2019519506.tif 000007
またはその医薬的に許容可能な塩である。タモキシフェンは、女性の乳癌を予防し、女性および男性の乳癌を治療するために使用される医薬である。他の種類のがんについても研究されている。タモキシフェンはＶＲＡＣの電圧依存遮断剤であり、ＩＣ５０＝２．２μＭである（Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６，２００３）。
【００６４】
一実施形態において、ＶＲＡＣ遮断剤はタモキシフェンではない。特に、抗がん治療が抗エストロゲン、より具体的にはタモキシフェンである場合、ＶＲＡＣ遮断剤はタモキシフェンではない。
【００６５】
ＶＲＡＣ遮断剤の他の例には、ＤＩＤＳ（ＩＣ５０＝２６μＭ）、およびＮＰＰＢ（ＩＣ５０＝２１μＭ）が含まれる（Ｈｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．１９６，２００３）。
【００６６】
一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータは、ＥＰ２９１９００９に記載されているようにして識別され、その教示は、その全体を本明細書の一部として援用する。
【００６７】
置換基の定義
本開示の文脈において、ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを表す。
【００６８】
本開示の文脈において、アルキル基は、一価で飽和の、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を意味する。炭化水素鎖は、好ましくは１〜６の炭素原子を含み（Ｃ１−６アルキル）、これにはペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、第三級ペンチル、ヘキシルおよびイソヘキシルが含まれる。一実施形態において、アルキルはＣ１−４アルキル基を表し、ブチル、イソブチル、第二級ブチルおよび第三級ブチルが含まれる。本発明の別の実施形態において、アルキルはＣ１−３アルキル基を表し、特に、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルであり得る。
【００６９】
本開示の文脈において、ヘテロアリール基は、その環構造に１以上のヘテロ原子を保持する芳香族の単環、二環または多環の複素環基を意味する。好ましいヘテロ原子には、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）、および硫黄（Ｓ）が含まれる。本発明の好ましい単環式ヘテロアリール基には、５員および６員芳香族の単環式複素環基が含まれ、これにはフラニル、特に２−または３−フラニル；チエニル、特に２または３−チエニル；ピロリル（アゾリル）、特に１、２または３−ピロリル；オキサゾリル、特にオキサゾール−２、４または５−イル；チアゾリル、特にチアゾール−２、４または５−イル；イミダゾリル、特に１、２または４−イミダゾリル；ピラゾリル、特に１、３または４−ピラゾリル；イソオキサゾリル、特にイソオキサゾール−３，４または５−イル；イソチアゾリル、特にイソチアゾール−３，４または５−イル；オキサジアゾリル、特に１，２，３−、１，２，４−、１，２，５−または１，３，４−オキサジアゾール−３、４または５−イルであり；トリアゾリル、特に１，２，３−、１，２，４−、２，１，３−または４，１，２−トリアゾリル；チアジアゾリル、特にチアジアゾール−３、４または５−イル；ピリジニル、特に２、３または４−ピリジニル；ピリダジニル、特に３または４−ピリダジニル；ピリミジニル、特に２、４または５−ピリミジニル；ピラジニル、特に２または３−ピラジニル；およびトリアジニル、特に１，２，３−、１，２，４−または１，３，５−トリアジニルが含まれる。
【００７０】
１つの窒素原子を含む５〜７員の複素環には、例えば、ピロリジン、ピペリジン、ホモピペリジン、ピロリン、テトラヒドロピリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピペラジン、ホモピペラジン、およびモルホリンが含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
医薬的に許容可能な塩
本明細書に記載のＶＲＡＣ遮断剤は、意図された投与に適した任意の形態で提供することができる。適切な形態には、医薬的（すなわち生理学的）に許容される塩、およびプレドラッグまたはプロドラッグ形態が含まれる。
【００７２】
医薬的に許容可能な付加塩の例には、限定されるものではないが、非毒性の無機および有機の酸付加塩、例えば、塩酸由来の塩酸塩、臭化水素酸由来の臭化水素酸塩、硝酸由来の硝酸塩、過塩素酸由来の過塩素酸塩、リン酸由来のリン酸塩、硫酸由来の硫酸塩、蟻酸由来の蟻酸塩、酢酸由来の酢酸塩、アコニット酸由来のアコニタート、アスコルビン酸由来のアスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸由来のベンゼンスルホン酸塩、安息香酸由来の安息香酸塩、桂皮酸由来の桂皮酸塩、クエン酸由来のクエン酸塩、エンボン酸由来のエンボ酸塩、エナント酸由来のエナント酸塩、フマル酸由来のフマル酸塩、グルタミン酸由来のグルタミン酸塩、グリコール酸由来のグリコール酸塩、乳酸由来の乳酸塩、マレイン酸由来のマレイン酸塩、マロン酸由来のマロン酸塩、マンデル酸由来のマンデル酸塩、メタンスルホン酸由来のメタンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸由来のナフタレン−２−スルホン酸塩、フタル酸由来のフタル酸塩、サリチル酸由来のサリチル酸塩、ソルビン酸由来のソルビン酸塩、ステアリン酸由来のステアリン酸塩、コハク酸由来のコハク酸塩、酒石酸由来の酒石酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸由来のｐ−トルエンスルホン酸塩などが含まれる。そのような塩は、当該技術分野において周知の記載された手順によって形成することができる。
【００７３】
医薬的に許容されないとみなされ得る蓚酸などの他の酸は、本発明による使用のための化学化合物およびその医薬的に許容される酸付加塩を得る際の、中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。
【００７４】
本発明の化学化合物の医薬的に許容可能な陽イオン性塩の例には、限定されるものではないが、陰イオン性基を含む本発明の化学化合物のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、アルミニウム塩、リチウム塩、コリン塩、リシン塩、およびアンモニウム塩などが含まれる。そのような陽イオン性塩は、当該技術分野において周知の記載された手順によって形成することができる。本発明の文脈において、Ｎ−含有化合物の「オニウム塩」もまた、医薬的に許容可能な塩（アザ−オニウム塩）として想定されている。好ましいアザオニウム塩には、アルキル−オニウム塩、特にメチル−およびエチル−オニウム塩；シクロアルキル−オニウム塩、特にシクロプロピル−オニウム塩；およびシクロアルキルアルキル−オニウム塩、特にシクロプロピル−メチル−オニウム塩が含まれる。
【００７５】
医薬組成物
一実施形態において、本発明は、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤を含む医薬組成物に関する。
【００７６】
本明細書に開示されるＶＲＡＣ遮断剤および／または化学療法剤は、生の化学化合物の形態で投与してもよいが、任意に、生理学的に許容される塩の形態の活性成分を、１以上のアジュバント、賦形剤、担体、緩衝剤、希釈剤、および／または他の慣用的な医薬補助剤と共に、医薬組成物の中に導入するのが好ましい。
【００７７】
一実施形態において、本発明は、本発明によるＶＲＡＣ遮断剤またはその医薬的に許容可能な塩もしくは誘導体を、１以上の医薬的に許容可能な担体、および任意に当該分野において知られかつ使用されている他の治療的および／または予防的成分と一緒に含む医薬組成物を提供する。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。更なる実施形態において、本発明は、本発明による使用のための２以上の化合物またはプロドラッグ、例えば、本発明による使用のための２つの異なる化合物またはプロドラッグを含む医薬組成物を提供する。
【００７８】
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、気管支、鼻、肺、局所（バッカルおよび舌下を含む）、経皮、膣または非経口（皮膚、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、脳内、眼内の注射または注入）投与、または粉末および液体エアロゾル投与を含む吸入または吹送による投与、または持続放出系による投与に適した形態のものが挙げられる。持続放出系の適切な例には、本発明の化合物を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらマトリックスは成形品、フィルムまたはマイクロカプセルの形態であってよい。
【００７９】
従って、本発明のＶＲＡＣ遮断剤は、従来のアジュバント、担体または希釈剤と共に、医薬組成物およびその単位用量の形態にすることができる。このような形態には、固体、特に錠剤、充填カプセル、粉末およびペレット形態、ならびに液体、特に水性または非水性の溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル剤およびそれらを充填したカプセル（全て経口での使用）、直腸投与用の坐剤、および非経口用の滅菌注射液が含まれる。そのような医薬組成物およびその単位剤形は、追加の活性化合物または成分を伴って、または伴わずに、従来の成分を従来の比率で含むことができ、そのような単位剤形は、用いられるべき意図された１日投与量範囲に見合った任意の適切な有効量の活性成分を含有することができる。
【００８０】
本明細書に開示されるＶＲＡＣ遮断剤は、多種多様な経口および非経口の剤形で投与することができる。
【００８１】
本発明の化学化合物から医薬組成物を調製するために、医薬的に許容可能な担体は、固体または液体の何れかであり得る。固体形態の製剤には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤および分散性顆粒剤が含まれる。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用し得る１以上の物質であることができる。散剤において、担体は微粉固体であり、微粉活性成分と共に混合物中にある。
【００８２】
錠剤において、活性成分は、必要な結合能力を有する担体と共に適切な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。散剤および錠剤は、好ましくは５パーセント、または１０〜約７０パーセントの活性化合物を含有する。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどである。「製剤」の用語は、その中で、担体を伴ってまたは伴わずに活性成分が担体に取り囲まれるカプセルを提供し、従ってそれと一体である、担体としての封入材料を用いた活性化合物の製剤を含むことを意図している。同様に、カシェおよびロゼンジも含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤およびロゼンジ剤は、経口投与に適した固体形態として使用することができる。
【００８３】
坐剤を調製するためには、脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物のような低融点ワックスを最初に融解し、例えば撹拌により、活性成分をその中に均一に分散させる。次いで、融解した均質な混合物を都合のよい大きさの型に注ぎ、冷却させることにより固化させる。
【００８４】
膣内投与に適した組成物は、有効成分に加えて、当技術分野において適切であることが知られている担体を含んだ、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレーとして提供することができる。
【００８５】
液体製剤には、溶液、懸濁液、およびエマルジョン、例えば水または水−プロピレングリコール溶液が含まれる。例えば、非経口注射液製剤は、水性ポリエチレングリコール溶液中の溶液として製剤化することができる。従って、本発明によるＶＲＡＣ遮断剤は、非経口投与（例えば、ボーラス注射または連続注入など）のために製剤化することができ、アンプル、プレフィルドシリンジ、小容量注入または保存剤と加えた多数回用量容器の中の単位投与量形態で提供することができる。当該組成物は、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとり、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化のための薬剤を含み得る。或いは、ＶＲＡＣ遮断剤は、使用する前に適切なビヒクル、例えば滅菌したパイロジェンフリーの水を用いて構成するための、滅菌固体の無菌単離または溶液からの凍結乾燥によって得られる粉末形態であってもよい。
【００８６】
経口使用に適した水性懸濁液は、天然または合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、または他の周知の懸濁化剤のような粘性物質を用いて、微粉活性成分を水中に分散させることにより作製することができる。
【００８７】
また、使用直前に経口投与のための液体形態の製剤に変換するための、固体形態の製剤も含まれる。そのような液体形態には、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが含まれる。活性成分に加えて、そのような製剤は、着色料、香味料、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。
【００８８】
表皮への局所投与のために、ＶＲＡＣ遮断剤は、軟膏、クリームまたはローションとして、または経皮パッチとして処方され得る。軟膏およびクリームは、例えば、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した、水性または油性基剤を用いて製剤化することができる。ローションは、水性または油性の基剤を用いて製剤化することができ、一般に、１以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤または着色剤も含有する。口中での局所投与に適した組成物には、香味基剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性剤を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアカシアのような不活性基剤中に活性成分を含むトローチ；適切な液体担体中に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【００８９】
溶液または懸濁液は、従来の手段、例えば点滴器、ピペットまたはスプレーを用いて、鼻腔に直接適用することができる。組成物は、単回または複数回投与の形態で提供され得る。
【００９０】
気道への投与はエアロゾル製剤によっても達成され得るものであり、ここでは有効成分が、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタンまたはジクロロテトラフルオロエタンのようなクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、二酸化炭素、または他の適切な気体を含む加圧パック中に提供される。エアロゾルは都合のいいようにレシチンなどの界面活性剤を含有してもよい。薬物の用量はメータド弁を備えることにより制御されてもよい。或いは、活性成分は乾燥粉末、例えば、乳糖、デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのデンプン誘導体のような適切な粉末基剤中の化合物の粉末混合物の形態で提供されてもよい。好都合なことに、粉末担体は鼻腔においてゲルを形成する。粉末組成物は、単位用量形態、例えば、ゼラチンのカプセルもしくはカートリッジ、または粉末を吸入器により投与できるブリスターパックで提供されてよい
【００９１】
鼻腔内投与用組成物を含む気道への投与を意図した組成物では、化合物は一般に、例えば５ミクロン以下程度の小さな粒径を有するであろう。そのような粒径は、当技術分野で公知の手段、例えば微粉化によって得ることができる。
【００９２】
所望に応じて、ＶＲＡＣ活性成分の持続放出を与えるように適合された組成物を使用することができる。
【００９３】
医薬製剤は、好ましくは単位用量形態である。そのような形態において、製剤は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位用量剤形は、パッケージ化された製剤であることができ、該パッケージは、パッケージ化された錠剤、カプセルおよびバイアルまたはアンプル中の粉末のような別個の量の製剤を含有する。また、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤またはロゼンジ剤自体であってよく、またはパッケージ化された形態中の何れか適切な数のこれらであってもよい。
【００９４】
経口投与のための錠剤またはカプセル、および静脈内投与および持続注入のための液体が好ましい組成物である。
【００９５】
他の実施形態において、ＶＲＡＣ阻害剤は、局所投与用に製剤化される。
【００９６】
製剤および投与の技術に関する更なる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）の最新版に見出すことができる。
【００９７】
治療的に有効な用量は、症状または状態を改善する活性成分の量を指す。治療的有効性および毒性、例えば、ＥＤ５０およびＬＤ５０は、細胞培養または実験動物における標準的な薬理学的手順によって決定することができる。治療効果と毒性効果との間の用量比は治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。大きな治療指数を示す医薬組成物が好ましい。
【００９８】
勿論、投与される用量は治療される個体の年齢、体重および状態、ならびに投与経路、剤形およびレジメン、および所望の結果に注意深く調整されなければならず、勿論、正確な用量は専門家によって決定される。
【００９９】
ＶＲＡＣモジュールおよび／または抗がん剤の実際の投与量は、治療される疾患の性質および重症度に依存し、医師の裁量の範囲内であり、所望の治療効果を生じる特定の状況への用量の滴定によって変化し得る。
【０１００】
例えば、ＶＲＡＣ遮断剤は、１日に１回または数回投与することができる。例示的な範囲は、１回または２回投与される１０〜２００ｍｇ／日ｐ．ｏ．（経口）、例えば１日２回の２５〜５０ｍｇｐ．ｏ．である。
【０１０１】
本開示に従って治療される被験体は、任意のヒトまたは動物の被験体、好ましくはがんに罹患したヒトであり得る。
【０１０２】
がん
本発明は、がん細胞を抗がん治療に感作させること、または抗がん治療の治療効果を増強することに関する。
【０１０３】
一実施形態において、がんは化学療法剤による治療に対して耐性である。がんが耐性である場合、ＶＲＡＣ遮断剤との併用治療は、問題の化学療法剤に対してがんを再感作させることができる。がんの耐性は、デノボ耐性または後天的耐性の何れかであり得る。一般に、がんは、臨床的に許容される抗がん剤の投与量で治療された患者が抗がん剤に対して予想通りに反応しない場合、即ち、がんが悪化、増殖または蔓延する（進行性疾患）場合には、特定の抗がん療法に対して耐性であると看做される。がんが薬物感受性であるか耐性であるかは、当業者が決定できる。
【０１０４】
一実施形態において、本開示に従って治療されるがんは、肺癌（非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、膠芽腫、頭頸部癌、悪性黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞癌、乳癌、肝癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮体癌、卵巣癌、胆嚢癌、肉腫、白血病（骨髄性およびリンパ性）、リンパ腫、骨髄腫からなる群から選択されてよい。
【０１０５】
一実施形態において、がんは転移性である。
【０１０６】
一実施形態において、がんは結腸直腸癌である。
【０１０７】
一実施形態において、がんは転移性結腸直腸癌である。
【０１０８】
一実施形態において、がんは乳癌である。
【０１０９】
一実施形態において、がんは転移性乳癌である。
【０１１０】
一実施形態において、がんは膠芽腫である。
一実施形態において、がんは固形腫瘍、例えば肉腫、癌腫およびリンパ腫から選択される固形腫瘍である。
【０１１１】
一実施形態において、がんは固形腫瘍ではない。例えば、がんは白血病を含むが、これに限定されない血液悪性腫瘍であり得る。
【０１１２】
一実施形態において、がんは前立腺癌、例えば転移性前立腺癌である。
【０１１３】
一実施形態において、がんはステロイドホルモン受容体陽性がん、例えばエストロゲン受容体陽性がん、プロゲステロン受容体陽性がんまたはアンドロゲン受容体陽性がんである。
【０１１４】
抗がん治療
本開示による抗がん治療は、１以上の化学療法剤による治療および／または放射線療法であることができる。好ましい実施形態において、抗がん治療は、化学療法剤による治療を包含する。
【０１１５】
化学療法薬は、それらが如何に作用するか、それらの化学構造、および他の薬物に対するそれらの関係のような因子に基づいてグループ分けすることができる。幾つかの薬物は２以上の方法で作用し、複数のグループに属し得る。一実施形態において、本発明の抗がん治療は２以上の化学療法剤による治療を包含する。
【０１１６】
一実施形態において、抗がん治療は、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、抗血管新生剤および抗がん性生物剤からなる群から選択される化学療法剤であり、充分に確定された標的を有している。
【０１１７】
一実施形態において、化学療法剤は、細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤である。
【０１１８】
好ましい実施形態において、抗がん治療は化学療法剤であり、ＶＲＡＣモジュレータが化学療法剤と共に同時投与される。
【０１１９】
ＶＲＡＣモジュレータは、抗がん治療の開始前、開始と同時および／または開始後に投与することができる。一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータは抗がん治療の開始前に投与される。一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータは抗がん治療と同時に投与される。
【０１２０】
本明細書で使用される同時投与とは、ＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療の被験体への投与を指し、ここでのＶＲＡＣモジュレータは、抗がん治療の前、同時および／または後に投与されてよい。
【０１２１】
ＶＲＡＣモジュレータの投与は、抗がん治療の効果を増強する。従って、ＶＲＡＣ遮断剤および抗がん治療による治療効果は、相加的または相乗的である。一実施形態において、当該治療の効果は相乗的である。
【０１２２】
一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータの投与は、正常な用量よりも低い用量、即ち、正常には治療的用量未満と考えられる用量での抗がん治療の投与を可能にする。
【０１２３】
一実施形態において、ＶＲＡＣモジュレータの投与は抗がん治療の臨床効果を高める。臨床効果は臨床医によって決定され得る。
【０１２４】
一実施形態において、抗がん治療は、トポイソメラーゼ阻害剤、抗ホルモン剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、ターゲッティング抗がん療法、分化剤、および免疫療法からなる群から選択される化学療法剤である。
【０１２５】
アルキル化剤
一実施形態において、化学療法剤はアルキル化剤である。アルキル化剤は、ＤＮＡ（各細胞の遺伝物質）を直接損傷して、細胞の再生を妨げる。これらの薬物は、細胞周期の全ての段階で働き、膠芽腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫および肉腫、ならびに肺、乳房、および卵巣の癌を含む、多くの異なるがんを治療するために使用される。
【０１２６】
アルキル化剤は、以下を含む異なる分類に分けられる：
・ナイトロジェンマスタード：メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、クロラムブシル、シクロホスファミド（シトキサン［登録商標］）、イホスファミド、メルファラン
・ニトロソ尿素：ストレプトゾシン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン
・アルキルスルホネート：ブスルファン
・トリアジン：ダカルバジン（ＤＴＩＣ）およびテモゾロミド（テモダール［登録商標］）
・エチレンイミン：チオテパおよびアルテレタミン（ヘキサメチルメラミン）
【０１２７】
一実施形態において、アルキル化剤は、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、アルキルスルホネート、トリアジン、エチレンイミンからなる群から選択される。
【０１２８】
一実施形態において、アルキル化剤は、テモゾロミドのようなトリアジンである。
【０１２９】
白金薬剤（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンなど）は、類似の方法で細胞を殺すので、時にはアルキル化剤と一緒に分類される。しかし、本文脈においては、白金薬剤はアルキル化剤とはみなさない。
【０１３０】
一実施形態において、抗がん治療は、白金、ルテニウム、金またはチタン系抗がん剤のような金属系抗がん剤を含まず、またはそれからなるものではない。
【０１３１】
一実施形態において、抗がん治療は、白金系抗がん剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンまたはネダプラチンによる治療を含まないか、またはそれからなるのもではない。
【０１３２】
一実施形態において、アルキル化剤は膠芽腫、特に、アルキル化剤での治療に対して耐性である膠芽腫の治療のために、ＶＲＡＣモジュレータと併用される。
【０１３３】
特定の実施形態において、アルキル化剤は、テアゾロミド（テモダール）などのトリアジンであり、ＶＲＡＣモジュレータはＮＳ３７２８であり、治療されるがんは膠芽腫、特にテモゾロミド耐性の膠芽腫である。
【０１３４】
代謝拮抗剤
一実施形態において、化学療法剤は代謝拮抗剤である。代謝拮抗剤は、ＲＮＡおよびＤＮＡの通常のビルディングブロックを置換することによって、ＤＮＡおよびＲＮＡの成長を妨げる。これらの薬剤は、細胞の染色体がコピーされているＳ期に細胞に損傷を与える。これらは、白血病、乳癌、卵巣癌、および腸管の癌、例えば結腸直腸癌、ならびに他のタイプの癌を治療するために一般に使用される。
【０１３５】
一実施形態において、代謝拮抗剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン（ゼローダ［登録商標］）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ［登録商標］）、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（ジェムザール［登録商標］）、ヒドロキシ尿素、メソトレキセート、ペメトレキセド（アリムタ［登録商標］）からなる群から選択される。
【０１３６】
一実施形態において、代謝拮抗剤は５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）である。
【０１３７】
一実施形態において、代謝拮抗剤は、結腸直腸癌、特に代謝拮抗物質による治療に対して耐性の結腸直腸癌の治療のために、ＶＲＡＣモジュレータと併用される。一実施形態において、結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である。
【０１３８】
特定の実施形態では、結腸直腸癌、特に５−ＦＵ耐性結腸直腸癌の治療のために、５−ＦＵを、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと同時投与する。一実施形態において、結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である。
【０１３９】
抗腫瘍抗生物質
これらの薬物は、がん細胞の内部のＤＮＡを変化させて、それらが成長および増殖しないように働く。
【０１４０】
一実施形態において、化学療法剤は抗腫瘍抗生物質剤である。他の実施形態において、化学療法剤は抗腫瘍抗生物質剤ではない。
【０１４１】
一実施形態において、抗腫瘍抗生物質剤はアントラサイクリンである。アントラサイクリンは、ＤＮＡ複製に関与する酵素を妨害する抗がん抗生物質である。これらの薬物は、細胞周期のすべての段階で機能する。それらは様々ながんについて広く使用されている。アントラサイクリンは、トポイソメラーゼＩＩをも阻害することができる。
【０１４２】
アントラサイクリンの例には、次のものが含まれる。
・ダウノルビシン
・ドキソルビシン（アドリアマイシン［登録商標］）
・エピルビシン
・イダルビシン
【０１４３】
アントラサイクリンではない抗腫瘍抗生物質には、次のものが含まれる。
・アクチノマイシン−Ｄ
・ブレオマイシン
・マイトマイシン−Ｃ
・ミトキサントロン（トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としても作用する）
【０１４４】
トポイソメラーゼ阻害剤
一実施形態において、化学療法剤はトポイソメラーゼ阻害剤であり、トポイソメラーゼＩ阻害剤またはトポイソメラーゼＩＩ阻害剤であり得る。これらの薬物は、Ｓ期にＤＮＡ鎖を分離して、それらがコピーされ得るようにするトポイソメラーゼと称する酵素を妨害する。トポイソメラーゼ阻害剤は、結腸直腸癌、特定の白血病、ならびに肺癌、卵巣癌、胃腸癌および他のがんを治療するために使用される。
【０１４５】
トポイソメラーゼ阻害剤は、それらが作用する酵素の種類に応じて分類される。
【０１４６】
トポイソメラーゼＩ阻害剤には、次のものが含まれる。
・トポテカン
・イリノテカン（ＣＰＴ−１１）。イリノテカンの活性代謝物はＳＮ−３８である。
【０１４７】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤には、次のものが含まれる。
・エトポシド（ＶＰ−１６）
・テニポシド
・ミトキサントロン（抗腫瘍抗生物質としても作用する）
・アントラサイクリン
【０１４８】
一実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、イリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８のようなトポイソメラーゼＩ阻害剤である。
【０１４９】
一実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、アントラサイクリンのようなトポイソメラーゼＩＩ阻害剤である。
【０１５０】
一実施形態では、トポイソメラーゼＩ阻害剤のようなトポイソメラーゼ阻害剤を、結腸直腸癌、特に該トポイソメラーゼ阻害剤による治療に対して耐性である結腸直腸癌の治療のために、ＶＲＡＣモジュレータと併用する。一実施形態において、結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である。
【０１５１】
特定の実施形態では、結腸直腸癌、特にイリノテカン／ＳＮ−３８耐性結腸直腸癌の治療のために、イリノテカン／ＳＮ−３８を、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと同時投与する。一実施形態において、結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である。
【０１５２】
有糸分裂阻害剤
一実施形態において、化学療法剤は有糸分裂阻害剤である。有糸分裂阻害剤は、植物アルカロイド、および天然物由来の他の化合物であることが多い。それらは、細胞周期のＭ期において有糸分裂を停止させることにより機能するが、酵素が細胞再生に必要なタンパク質を作るのを妨げることによって、全ての段階で細胞に損傷を与える可能性がある。
【０１５３】
有糸分裂阻害剤の例には、次のものが含まれる。
・タキサン：パクリタキセル（タキソール［登録商標］）、およびドセタキセル（タキソテール［登録商標］）
・エポチロン：イクサピベロン（イクムプラ［登録商標］）
・ビンカアルカロイド：ビンブラスチン（ベルバン［登録商標］）、ビンクリスチン（オンコビン［登録商標］）、ビノレルビン（ナベルビン［登録商標］）
・エストラムスチン（エムサイト［登録商標］）
【０１５４】
有糸分裂阻害剤は、乳癌、肺癌、骨髄腫、リンパ腫、および白血病を含む多くの異なる種類のがんを治療するために使用される。
【０１５５】
一実施形態において、有糸分裂阻害剤は、パクリタキセルまたはドセタキセルのようなタキサンである。
【０１５６】
一実施形態において、有糸分裂阻害剤は、乳癌、特に有糸分裂阻害剤による治療に対して耐性の乳癌を治療するために、ＶＲＡＣモジュレータと併用される。一実施形態において、この乳癌は転移性乳癌である。
【０１５７】
特定の実施形態において、パクリタキセルまたはドセタキセルのようなタキサンは、乳癌、特にパクリタキセルまたはドセタキセル耐性の乳癌の治療のために、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと同時投与される。一実施形態において、この乳癌は転移性乳癌である。
【０１５８】
コルチコステロイド
一実施形態において、化学療法剤はコルチコステロイドである。しばしば単にステロイドとも呼ばれるこのコルチコステロイドは、多くのタイプのがん、ならびに他の病気の治療に有用な、天然ホルモンおよびホルモン様薬物である。
【０１５９】
これらの薬剤ががん治療の一部として使用される場合、それらは化学療法薬とみなされる。
【０１６０】
コルチコステロイドの例には、次のものが含まれる。
・プレドニゾン
・メチルプレドニゾロン（ソルメドロール［登録商標］）
・デキサメタゾン（デカドロン［登録商標］）。
【０１６１】
ステロイドはまた、化学療法による吐き気や嘔吐を防ぐのを助けるためにも一般的に使用されている。それらは、重篤なアレルギー反応の防止を補助するために、化学療法の前に使用される。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、化学療法剤はコルチコステロイドではない。
【０１６３】
他の化学療法薬
幾つかの化学療法薬は僅かに異なる方法で作用し、他のカテゴリーの何れにもうまく適合しない。例としては、酵素であるＬ−アスパラギナーゼ、プロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（ベルケイド［登録商標］）などの薬剤が含まれる。
【０１６４】
ターゲッティングされる抗がん療法
一実施形態において、化学療法剤は、十分に定義された標的または生物学的経路に作用する抗体に基づく療法のような、ターゲッティングされる抗がん剤である。
【０１６５】
ターゲティングされる療法の例には、次のものが含まれる。
・イマチニブ（グリベック［登録商標］）
・ゲフィチニブ（イレッサ［登録商標］）
・スニチニブ（スーテント［登録商標］）
・ボルテゾミブ（ベルケイド［登録商標］）。
【０１６６】
一実施形態において、ターゲッティングされる抗がん療法は、抗血管新生剤、例えば抗ＶＥＧＦ剤である。例えば、抗血管新生剤は、ヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体、例えば、アバスチン（ベバシズマブ）であり得る。本開示の抗がん療法が抗血管新生剤である場合、この抗血管新生剤はＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣ遮断剤ではない。
【０１６７】
幾つかの実施形態において、化学療法剤はターゲッティングされる抗がん剤ではない。
【０１６８】
分化剤
これらの薬物はがん細胞に作用して、それらを正常細胞に成熟させる。その例には、レチノイド、トレチノイン（ＡＴＲＡまたはアトラリン（Ａｔｒａｌｉｎ）［登録商標］）およびベキサロテン（タルグレチン［登録商標］）、ならびに三酸化ヒ素（Ａｒｓｅｎｏｘ［登録商標］）が含まれる。
【０１６９】
一実施形態において、化学療法剤は分化剤である。幾つかの実施形態において、化学療法剤は分化剤ではない。
【０１７０】
抗ホルモン剤
一実施形態において、化学療法剤は、抗ホルモン療法剤である。このカテゴリーの薬物は、性ホルモンまたはホルモン様薬物であり、女性ホルモンまたは男性ホルモンの作用または産生を変化させる。それらは、通常は体内において天然の性ホルモンに応答して増殖する乳癌、前立腺癌、および子宮内膜（子宮）癌の増殖を遅らせるために使用される。これらのがん治療ホルモンは、標準の化学療法薬と同じ方法では作用しない。それらは、がん細胞が、その成長に必要なホルモンを使用できなくすることによって、または身体がホルモンを作るのを防ぐことによって作用する。
【０１７１】
抗ホルモン療法の例には、次のものが含まれる。
・抗エストロゲン：フルベストラント（フェソロデックス［登録商標］）、タモキシフェン、トレミフェン（フェアストン［登録商標］）、クロミフェン、ラロキシフェン。
・抗プロゲストゲン：ミフェプリストン、ウリプリストールアセテート、アグレプリストン、リロプリストン、オナプリストン
・抗アンドロゲン剤：ビカルタミド（カソデックス［登録商標］）、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ［登録商標］）、およびニルタミド（ニランドロン［登録商標］）
・アロマターゼ阻害剤：アナストロゾール（アリミデックス［登録商標］）、エキセメスタン（アロマシン［登録商標］）、およびレトロゾール（フェマーラ［登録商標））
・プロゲスチン：酢酸メゲストロール（メゲース［登録商標］）
・エストロゲン
・ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストまたは類似体としても知られる：ロイプロリド（リュ―プロン［登録商標］）およびゴセレリン（ゾラデックス［登録商標］）
【０１７２】
一実施形態において、抗がん治療は抗エストロゲン治療を含む。エストロゲン受容体アンタゴニストまたはエストロゲン受容体遮断剤としても知られる抗エストロゲンは、エストラジオールなどのエストロゲンが、体内でのその生物学的作用を媒介するのを防止する薬物の分類である。
【０１７３】
一実施形態では、抗エストロゲンはフルベストラントである。
【０１７４】
一実施形態において、抗エストロゲンはタモキシフェンである。
【０１７５】
一実施形態において、抗がん治療は、抗プロゲストゲン治療を含む。プロゲステロン受容体アンタゴニストまたはプロゲステロン遮断剤としても知られる抗プロゲストゲンまたは抗プロゲスチンは、プロゲステロンのようなプロゲストゲンが、体内で生物学的作用を媒介するのを防止する薬物の分類である。
【０１７６】
抗プロゲストゲンの例には、ミフェプリストン、ウリプリスタルアセテート、アグリプリストン、リリプリストンおよびオナプリストンが含まれる。
【０１７７】
一実施形態において、抗がん治療は抗アンドロゲン治療を含む。アンドロゲン受容体アンタゴニストまたはテストステロン遮断剤としても知られる抗アンドロゲンは、テストステロンおよびジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）のようなアンドロゲンが、体内で生物学的作用を媒介するのを防止する薬物の分類である。
【０１７８】
幾つかの実施形態において、化学療法剤は抗ホルモン剤ではない。
【０１７９】
抗ホルモン療法はステロイドホルモン受容体陽性がんの治療に特に有用であり、例えば抗エストロゲンは、ＥＲ陽性の乳癌または子宮癌の治療に使用される。
【０１８０】
一実施形態において、抗エストロゲンはＥＲ陽性がん、例えばＥＲ陽性乳癌の治療のために、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと共に同時投与される。一実施形態において、この乳癌は転移性乳癌である。
【０１８１】
一実施形態において、抗プロゲストゲンはＰＲ陽性がん、例えばＰＲ陽性乳癌の治療のために、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと共に同時投与される。一実施形態において、この乳癌は転移性乳癌である。
【０１８２】
一実施形態において、抗アンドロゲンは、ＡＲ陽性がん、例えばＡＲ陽性前立腺癌の治療のために、ＮＳ３７２８のようなＶＲＡＣモジュレータと共に同時投与される。一実施形態において、この前立腺癌は転移性前立腺癌である。
【０１８３】
免疫療法
一実施形態において、化学療法剤は免疫療法剤である。免疫療法薬はがんを有する者に与えられて、免疫システムががん細胞を認識および攻撃するのを助ける。
【０１８４】
免疫療法には様々な種類がある。能動免疫療法は、病気と戦うために身体自身の免疫システムを刺激する。受動免疫療法は、その病気を攻撃するために身体に依存しない。それらは身体の外で作製され、がんと戦うために与えられる免疫系の構成要素（例えば抗体）である。
【０１８５】
能動免疫療法の例には、次のものが含まれる。
・モノクローナル抗体療法、例えばリツキシマブ（リツキサン［登録商標］）およびアレムツズマブ（キャンパス［登録商標］）
・非特異的免疫療法およびアジュバント（免疫応答をブーストする他の物質または細胞）、例えば、ＢＣＧ、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、およびインターフェロン−アルファ
・免疫調節薬、例えばサリドマイド、レナリドマイド（レブラミド［登録商標］）
【０１８６】
一実施形態において、化学療法剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えばＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１を阻害できる抗体である。
【０１８７】
がんワクチンは、一種の特異的能動免疫療法である。
【０１８８】
幾つかの実施形態において、化学療法剤は免疫療法剤ではない。
【０１８９】
放射線療法
一実施形態において、抗がん治療は放射線療法である。放射線療法は、一般に、悪性細胞を制御または殺すためのがん治療の一部として、電離放射線を用いた療法である。放射線療法は、多くの種類のがんにおいて、それらが身体の１つの領域に局在する場合に治癒的であり得る。それはまた、原発性悪性腫瘍（例えば、初期ステージの乳癌）を除去する手術後の腫瘍再発を予防するための、補助療法の一部として使用されてよい。放射線療法は化学療法と相乗的であり、感受性がんの化学療法の前、最中、および後に使用されている。放射線療法の線量および治療スケジュールは、治療されるがんのタイプおよびステージに依存して変化し、臨床医によって決定され得る。
【０１９０】
医療用途
一実施形態において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させる方法であって、それを必要とする被験体に対して有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む方法に関する。
【０１９１】
一実施形態において、本発明は、抗がん治療の治療効果を増強する方法であって、それを必要とする被験体に対して有効量のＶＲＡＣモジュレータを投与することを含む方法に関する。
【０１９２】
一実施形態において、本発明は、がんの治療方法であって、それを必要とする被験体に対して、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤などの抗がん治療を投与することを含む方法に関する。
【０１９３】
一実施形態において、本発明は、医薬として使用するための、有効量のＶＲＡＣモジュレータとおよび有効量の化学療法剤を含む組成物に関する。
【０１９４】
一実施形態において、本発明は、がんの治療において使用するための、有効量のＶＲＡＣモジュレータおよび有効量の化学療法剤を含む組成物に関する。
【０１９５】
一実施形態において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させることにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータに関する。
【０１９６】
一実施形態において、本発明は、抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するためのＶＲＡＣモジュレータに関する。
【０１９７】
一実施形態において、本発明は、がん細胞を抗がん治療に対して感作させるための、または抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するための、医薬の製造のためのＶＲＡＣモジュレータの使用に関する。
【０１９８】
一実施形態において、本発明は、ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤、ならびに任意に使用説明書を含むパーツのキットであって、ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤は、同時、逐次または別々の投与のために製剤化されるキットに関する。
【０１９９】
特に興味深い実施形態において、本発明は、被験体におけるがんの治療において使用するための、ＶＲＡＣモジュレータおよび化学療法剤などの抗がん療法に関し、ここでの該がんは、該抗がん療法での治療に対して耐性であると判定されている。ＶＲＡＣモジュレータでの治療は、耐性がん細胞を抗がん療法による治療に対して再感作させる。耐性は、デノボ耐性または後天的耐性であり得る。
【０２００】
ＶＲＡＣモジュレータは抗がん療法の有効性を最大化するので、本明細書に記載のＶＲＡＣモジュレータとの同時治療は、抗がん治療の補助療法と看做すことができる。
【０２０１】
一実施形態において、本明細書に記載のＶＲＡＣモジュレータでの治療は、抗がん治療の前に投与されるときには、ネオアジュバント療法と看做すことができる。
【０２０２】
実施例
実施例１．膠芽腫におけるテモゾロミドおよびＮＳ３７２８
ＮＳ３７２８の単剤療法（４０ｍｇ／ｋｇ／日）またはテモゾロミド（テモダール、２５または５ｍｇ／ｋｇ／日）との併用として与えられたＣ６神経膠腫細胞に対するインビボ抗腫瘍効果を、異種移植法または皮下気嚢モデルの何れかを使用した２つの別個の実験で試験した（ＳＡＳ；Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．，Ｐ．Ｊ．Ｈｊａｒｎａａ，Ｐ．Ｅ．Ｋｒｉｓｔｊａｎｓｅｎ，Ｄ．Ｈａｎｓｅｎ  ＆  Ｌ．Ｂｉｎｄｅｒｕｐ：ラット皮下気嚢モード：誘導血管における抗血管新生の定量的アッセイ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９９，８４，３４−４０参照）。
【０２０３】
第１の研究では、５００万個のＣ６ラット神経膠腫細胞を、Ｆｉｓｈｅｒラットの脇腹に接種した。３日後に腫瘍は直径２〜５ｍｍの大きさに成長し、処置が開始された。Ｃ６細胞は侵襲的増殖挙動を有することが観察され、急速に顕著な固形腫瘍が形成されていた。ＮＳ３７２８（４０ｍｇ／ｋｇ／日）とテモゾロミド（２５ｍｇ／ｋｇ／日）との併用による経口投与は、増殖速度の有意な低下を示したのに対して、ＮＳ３７２８（４０ｍｇ／ｋｇ／日）およびテモゾロミド（２５ｍｇ／ｋｇ／日）は何れも、単独療法として投与した場合には何らの有意な抗腫瘍効果も示さなかった（図１参照）。テモゾロミドで治療された全ての動物において毒性の明確な兆候が観察され、抑制された行動、背中を丸めた外観および体重減少を含んでいた。この研究は、倫理的理由により治療の４日目に終了した。
【０２０４】
第２の研究では、細胞数の半分（１動物あたり２５０万個のＣ６細胞）を接種し、皮下空気嚢（ＳＡＳ）技術を使用することによって、腫瘍増殖を遅延させた。手短に言えば、ラットをＣＯ２／Ｏ２で麻酔し、１０〜１５ｍＬの空気を皮下注射によって背部に導入して、頭部の後方約４〜５ｃｍに位置する気嚢を生じさせた。気嚢の壁は時間と共に徐々に厚くなり、１０〜１４日後には透明な膜の外観を有する細胞の十分なライニングが樹立された。ラットにおいて、Ｃ６神経膠腫細胞を直接膜上に接種した。接種の日に処置を開始し、処置の１０日目に試験を終了した。Ｃ６細胞は低い侵襲的増殖を示し、また単独療法またはテモゾロミド（５ｍｇ／ｋｇ／日）との併用でＮＳ３７２８（４０ｍｇ／ｋｇ／日）を経口投与したところ、腫瘍増殖の有意な阻害を生じた（図２）のに対して、テモゾロミド単独での治療は、腫瘍重量によって測定したときに有意な腫瘍増殖阻害をもたらさなかった。
【０２０５】
ここに示された実験は、テモゾロミドと組み合わせて経口投与されたＮＳ３７２８（デンマークの膠芽腫に対する「第一選択」療法）が、接種部位とは独立してＣ６神経膠腫細胞の増殖を５０〜５５％遅延させることを実証している。何れかの化合物による単独療法と比較して、効果は明らかに相加的または相乗的であった。従って、この結果は、ＮＳ３７２８での治療が、がん細胞を当該治療に対して感作させ、インビボでのテモゾロミドの効果を増強することを示している。
【０２０６】
実施例２．結腸癌における、パクリタキセルまたは５−フルオロウラシル、およびＮＳ３７２８
ヒトＨＴ２９結腸癌細胞株に対するＮＳ３７２８のインビボ抗腫瘍効果を、パクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ）または５−フルオロウラシル（３０ｍｇ／ｋｇ）と併用した単剤療法（８０ｍｇ／ｋｇ）として、二つの独立した実験シリーズでそれぞれ試験した。ＮＳ３７２８は経口（ＰＯ）で与えられ、パクリタキセルおよび５−フルオロウラシルの両方は注射により腹腔内（ＩＰ）投与された。癌細胞をｔ＝０で皮下に接種し（ビヒクル群の１匹の動物は腫瘍を発症せず、５−フルオロウラシル実験から除外した）、処置は４日目に開始し２２日目に終了した。実験は、以下の投薬群（ｎ＝９〜１０／群）を含んでいた。
【０２０７】
１）ビヒクル、
２）ＮＳ３７２８、
３）パクリタキセルまたは５−フルオロウラシル、
４）ＮＳ３７２８＋パクリタキセルまたはＮＳ３７２８＋５−フルオロウラシル。
【０２０８】
投薬は、投与休止により中断される期間中において（４〜８日目、１１〜１５日目、１８〜２２日目）、ＮＳ３７２８および細胞傷害性薬物の両方を毎日投与して行った。結果を図３（５−フルオロウラシル）および図４（パクリタキセル）に示す。両方の実験において、ビヒクル群の腫瘍体積は、５−フルオロウラシル実験における１６６ｍｍ３、パクリタキセル実験における１２２ｍｍ３の最終腫瘍体積まで、超線形に増加した。単独療法として与えられたＮＳ３７２８および細胞傷害性薬物の両方においては、増殖曲線の軽度（有意でない）の減衰が観察された。対照的に、両方の細胞傷害性薬物との併用療法（ＮＳ３７２８および細胞傷害性薬物）では、両方の組み合わせについて、増殖曲線が更に低下し、対照群に対する有意差（ｔ検定）に達した（ＮＳ３７２８＋５−フルオロウラシルについてはＰ＝０．０３、ＮＳ３７２８＋パクリタキセルについてはＰ＝０．００３）。
【０２０９】
結論として、本発明者らは、ヒト異種移植ＨＴ２９腫瘍が、ＮＳ３７２８と５−フルオロウレシルまたはパクリタキセルとの併用療法に対し、これら化学療法剤の一方による単独療法と比較して増大した感受性を示すことを実証した。従って、ＮＳ３７２８はインビボにおいて、５−フルオロウレシルおよびパクリタキセルの効果を増強することができる。
【０２１０】
実施例３．ドセタキセル耐性ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳癌細胞株における、ドセタキセルおよびＮＳ３７２８。
乳癌は異種疾患であり、乳癌の少なくとも６つのサブタイプが、以前にＳｏｅｒｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ（ＰＭＩＤ：１１５５３８１５）によって記載されている。主な違いとして、乳癌は、ホルモン（エストロゲンおよびプロゲステロン）受容体陽性乳癌およびホルモン受容体陰性乳癌に分けることができる。本発明者らの実験では、これら２つの主要なサブタイプが含められた。本発明者らは、Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５（ＰＭＩＤ：２５５９６７０３）に記載されているように、化学療法ドセタキセルに対して耐性であるヒト乳癌細胞株を樹立した。これらの細胞株は、ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１である。
【０２１１】
ＭＣＦ−７：エストロゲンおよびプロゲステロン受容体陽性
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：エストロゲンおよびプロゲステロン受容体陰性、およびＨＥＲ２受容体陰性（いわゆる三重陰性表現型）
【０２１２】
本発明者らは、ドセタキセル耐性乳癌細胞株において、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、またはドセタキセルとの併用の効果を調べた。
【０２１３】
本発明者らは、標準的なＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物）細胞生存アッセイを使用した。細胞を９６ウェルプレートに播種し（１０，０００細胞／ウェル）、２４時間接着させた。続いて、細胞生存率を測定する前に、ＮＳ３７２８、ドセタキセル、またはこれら２種の薬剤の組み合わせを７２時間添加した。全ての値は、未処置細胞（「処置なし」）のパーセンテージで表される。ＮＳ３７２８およびドセタキセルの両方をＤＭＳＯで希釈するので、「ＤＭＳＯ」は溶媒対照を指す。従って、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）対照は、細胞生存率に対する有機溶媒の何らかの潜在的影響を調べるために含められた。各データ点は三重に実施された。
【０２１４】
ＤＭＳＯは、ドセタキセル耐性ＭＣＦ−７乳癌細胞の細胞生存率に影響を与えなかった。６５ｎＭのドセタキセルはドセタキセル耐性ＭＣＦ−７乳癌細胞を耐性にした濃度なので、この濃度が選択された。単独療法として提供された６５ｎＭのドセタキセルおよび４０μＭのＮＳ３７２８は、細胞生存率を低下させなかった。６５ｎＭのドセタキセルおよび４０μＭのＮＳ３７２８の併用は、ドセタキセル耐性ＭＣＦ−７乳癌細胞の細胞生存率に対して併用効果をもたらした。
【０２１５】
ドセタキセル耐性ＭＣＦ−７乳癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ドセタキセルおよびそれらの併用の効果を図５に示す。
【０２１６】
ＤＭＳＯは、ドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の細胞生存率に影響を与えなかった。１５０ｎＭのドセタキセルは細胞を耐性にした濃度なので、この濃度が選択された。１５０ｎＭのドセタキセルは、生存率を未処理対照の約５０％に低下させた。５０μＭのＮＳ３７２８は細胞生存率を低下させなかった。５０μＭのＮＳ３７２８および１５０ｎＭのドセタキセルにおいて、ドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞について、細胞生存率に対する併用効果が観察された。
【０２１７】
ドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８、ドセタキセルおよびそれらの併用の効果を、図６に示す。
【０２１８】
結論
これらの前臨床試験は、ＶＲＡＣ阻害剤であるＮＳ３７２８が、ドセタキセル耐性乳癌細胞株に対するドセタキセルの効果を増強し得ることを実証するものである。よって、データは、ＮＳ３７２８がドセタキセル耐性がん細胞を、ドセタキセルによる処置に対して、再感作できることを示している。
【０２１９】
実施例４．親ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９およびＬｏＶｏヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）細胞株における、オキサリプラチンまたはＳＮ３８とＮＳ３７２８
ＣＲＣ細胞は、染色体不安定性、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）およびＣｐＧ島メチレータ表現型（ＣＩＭＰ）に起因する遺伝的不安定性を示し、これはＫＲＡＳなどのがん原遺伝子の活性化およびＴＰ５３（ｐ５３）などの腫瘍抑制遺伝子の不活性化をもたらす。ある種の遺伝子変化の有無により、ＣＲＣ患者の治療に対する反応が決定される可能性があるため、上述の遺伝子変化の異なる組み合わせをもったＣＲＣ細胞株を研究することが重要である。従って、我々は、ＣＲＣ患者で観察された主要な遺伝子変化を表すために次の３つの細胞株を選択した：
【０２２０】
・ＨＣＴ１１６：原発性腫瘍（Ｄｕｋｅｓ  Ｃ）由来のＭＳＩ、ＫＲＡＳ変異、ＴＰ５３野生型、ＣＩＭＰ＋、ＣＩＮ−
・ＨＴ２９：原発性腫瘍（Ｄｕｋｅｓ  Ｃ）由来のＭＳＳ、ＫＲＡＳ野生型、ＴＰ５３変異、ＣＩＭＰ＋、ＣＩＮ＋
・ＬｏＶｏ：転移（Ｄｕｋｅｓ  Ｃ）由来のＭＳＩ、ＫＲＡＳ変異、ＴＰ５３野生型、ＣＩＭＰ−、ＣＩＮ−
【０２２１】
本発明者らは、親、すなわち薬剤感受性細胞株において、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、またはＯＸＰもしくはＳＮ−３８の何れかとの併用の効果を調べた。本発明者らは、標準的なＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物）細胞生存アッセイを使用した。細胞を９６ウェルプレートに播種し（１０，０００細胞／ウェル）、２４時間接着させた。続いて、細胞生存率を測定する前に、ＮＳ３７２８、ＯＸＰ、ＳＮ−３８またはＮＳ３７２８と、細胞傷害性薬物の１つとの組合せを４８時間添加した。全ての値は、未処置細胞（「処置なし」と称する）のパーセンテージで表される。ＮＳ３７２８および化学療法剤の両方がＤＭＳＯで希釈されるので、「ＤＭＳＯ」は溶媒対照を指す。従って、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）対照は、有機溶媒による細胞生存率への潜在的影響を調べるために含められる。各データ点は三重に実施された。
【０２２２】
親細胞では、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、およびＯＸＰまたはＳＮ−３８の何れかとの併用の効果を試験した。
【０２２３】
親ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＯＸＰ
ＤＭＳＯは、ＨＣＴ１１６親細胞の細胞生存率の僅かな低下を引き起こした。ＮＳ３７２８は未処置細胞の約５０％へと細胞生存率を低下させ、ＯＸＰは用量依存的にＨＣＴ１１６親細胞の細胞生存率を低下させた。４０または５０μＭのＮＳ３７２８および０．１６／０．８／４／２０μＭのオキサリプラチンの併用は、ＨＣＴ１１６親細胞における何れの単独療法よりも細胞生存率を阻害しなかった。
【０２２４】
親ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＯＸＡの併用の効果を図７に示す。
【０２２５】
ＨＴ２９親細胞およびＬｏＶｏ親細胞においては、ＮＳ３７２８およびＯＸＰの細胞生存率に対する如何なる併用阻害効果も観察されなかった（データ示さず）。
【０２２６】
従って、ＯＸＰ感受性結腸直腸癌においては、ＮＳ３７２８およびオキサリプラチンを併用する効果はないようである。
【０２２７】
ＨＣＴ１１６親ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは細胞生存率の僅かな低下を引き起こした。ＮＳ３７２８は、２つの濃度（４０および５０μＭ）において、未処置細胞の約５０％にまで細胞生存率を低下させた。ＳＮ−３８（０．１６μＭ）もまた、未処置細胞の約５０％にまで生存率を低下させた。４０または５０μＭのＮＳ３７２８および０．１６μＭのＳＮ−３８の併用は、細胞生存率に対する併用阻害効果を有し、４０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約３０％にまで細胞生存率を低下させ、また５０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約２３％にまで細胞生存率を低下させた。
【０２２８】
親ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図８に示す。
【０２２９】
ＨＴ２９親ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは、この細胞株における細胞生存率を未処置細胞の約７８％にまで低下させた。ＮＳ３７２８は、４０μＭでは未処置細胞の約９０％にまで、また５０μＭでは未処置細胞の約７７％にまで細胞生存率を低下させた。ＳＮ−３８（０．０３２μＭ）は、未処置細胞の約７７％にまで生存率を低下させた。４０または５０μＭのＮＳ３７２８および０．０３２μＭのＳＮ−３８の併用は、細胞生存率に対する併用阻害効果を生じさせ、４０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約５０％まで細胞生存率を低下させ、また５０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約３８％にまで細胞生存率を低下させた。
【０２３０】
親ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図９に示す。
【０２３１】
ＬｏＶｏ親ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは、この細胞株における細胞生存率を未処置細胞の約７５％にまで低下させた。ＮＳ３７２８は、４０μＭでは未処置細胞の約４５％にまで、また５０μＭでは未処置細胞の約３８％にまで細胞生存率を低下させた。ＳＮ−３８（０．００６４μＭ）は、未処置細胞の約５３％にまで生存率を低下させた。４０または５０μＭのＮＳ３７２８および０．００６４μＭのＳＮ−３８の併用は、細胞生存率に対する併用阻害効果を生じ、４０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約３５％にまで細胞依存率を低下させ、また５０μＭのＮＳ３７２８＋ＳＮ−３８では未処置細胞の約２２％にまで細胞生存率を低下させた。
【０２３２】
親ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対するＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１０に示す。
【０２３３】
結論
これらの前臨床試験は、ＶＲＡＣ阻害剤であるＮＳ３７２８が、１）単独療法として投与された場合にＣＲＣ細胞増殖を阻害し、２）ヒトＣＲＣ細胞に対するある種の化学療法の効果を増強できることを実証している。ＮＳ３７２８とオキサリプラチンとの併用効果は認められなかった。従って、この結果は、ＶＲＡＣ阻害剤による治療が、一定のタイプの化学療法の効果を増強できることを示している。
【０２３４】
実施例５．オキサリプラチン（ＯＸＰ）またはＳＮ−３８耐性のＨＣＴ１１６、ＨＴ２９およびＬｏＶｏヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）細胞株における、オキサリプラチンまたはＳＮ−３８およびＮＳ３７２８。
本発明者らは、Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５（ＰＭＩＤ：２５７５９１６３）に記載されたようにして、化学療法剤のオキサリプラチン（ＯＸＰ）またはＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝産物）に対して耐性のヒトＣＲＣ癌細胞株を樹立した。これら細胞株は、ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９およびＬｏＶｏである。
【０２３５】
本発明者らは、ＯＸＰ耐性およびＳＮ−３８耐性の細胞株において、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、またはＯＸＰもしくはＳＮ−３８の何れかとの併用の効果を試験した。本発明者らは、標準的なＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物）細胞生存アッセイを使用した。細胞を９６ウェルプレート（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、２４時間接着させた。続いて、ＮＳ３７２８、ＯＸＰ、ＳＮ−３８またはこれら薬剤の組合せを４８時間添加してから、細胞生存率を測定した。全ての値は、未処置細胞（「処置なし」）のパーセンテージで表される。ＮＳ３７２８および化学療法剤の両方がＤＭＳＯで希釈されるので、「ＤＭＳＯ」は溶媒対照を指す。従って、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）対照は、有機溶媒による細胞生存率への潜在的影響を調べるために含められる。各データ点は三重に実施された。
【０２３６】
ＯＸＰ耐性細胞において、本発明者らは、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、およびＳＮ−３８またはＯＸＰの何れかとの併用効果を試験した。
【０２３７】
ＳＮ−３８耐性細胞において、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、およびＳＮ−３８またはＯＸＰの何れかとの併用効果を試験した。
【０２３８】
ＳＮ−３８耐性ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびオキサリプラチン
ＳＮ−３８耐性のＨＣＴ１１６、ＨＴ２９およびＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞株において、ＮＳ３７２８またはオキサリプラチンの単独療法と比較したときの、ＮＳ３７２８およびオキサリプラチンを併用する効果は見られなかった（データ示さず）。従って、ＮＳ３７２８は、ＳＮ−３８耐性のオキサリプラチン感受性ＣＲＣ細胞において、オキサリプラチンの治療効果を増強することはできないように思える。
【０２３９】
ＨＣＴ１１６・ＳＮ−３８耐性ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
この細胞株において、ＤＭＳＯは細胞生存率に対して影響を及ぼさなかった。ＮＳ３７２８（３０μＭ）は未処置細胞の約８５％にまで細胞生存率を低下させ、ＳＮ−３８（４μＭ）は細胞生存率に殆ど影響を与えなかった。しかし、４μＭのＳＮ−３８と３０μＭのＮＳ３７２８との併用は、細胞生存率における併用による低下を引き起こし、細胞生存率を約６０％にまで有意に低下させた。
【０２４０】
ＳＮ−３８耐性ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１１に示す。
【０２４１】
ＨＴ２９・ＳＮ−３８耐性ＣＲＣ細胞株−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは細胞生存率に影響を及ぼさなかった。ＮＳ３７２８（３０μＭ）は、未処置細胞の約１２０％まで生存率を増加させた。ＮＳ３７２８（４０μＭ）は細胞生存率に影響を及ぼさず、ＮＳ３７２８（５０μＭ）は未処置細胞の約８５％にまで生存率を低下させた。ＳＮ−３８（０．８μＭ）は未処置細胞の約７８％にまで生存率を低下させた。０．８μＭのＳＮ−３８および３０／４０／５０μＭのＮＳ３７２８の併用は、３つの全てのＮＳ３７２８濃度について、未処置細胞の３０％未満にまで、細胞生存率の有意な併用による低下を引き起こした。
【０２４２】
ＳＮ−３８耐性ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１２に示す。
【０２４３】
ＬｏＶｏ・ＳＮ−３８耐性ＣＲＣ癌細胞−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは、この細胞株における細胞生存率を、未処置細胞の約８０％にまで低下させた。ＮＳ３７２８（３０μＭ）は未処置細胞の約８０％にまで生存率を低下させ、ＮＳ３７２８（４０μＭ）は未処置細胞の約５７％にまで生存率を低下させ、ＮＳ３７２８（５０μＭ）は未処置細胞の約５０％にまで生存率を低下させた。ＳＮ−３８（０．１６μＭ）は、生存率を未処置細胞の約７８％にまで低下させた。０．１６μＭのＳＮ−３８と３０／４０／５０μＭのＮＳ３７２８との併用は、３つの全てのＮＳ３７２８濃度について、未処置細胞の２０％未満にまで、細胞生存率の有意な併用による低下を引き起こした。
【０２４４】
ＳＮ−３８耐性ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１３に示す。
【０２４５】
ＨＴ２９オキサリプラチン耐性ＣＲＣ癌細胞−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは本質的に細胞生存率に変化を生じなかった。ＮＳ３７２８（２０μＭ）は生存率を未処置細胞の約８５％に低下させ、ＳＮ−３８（０．１μＭ）は生存率を未処置細胞の約４３％に低下させた。２０μＭのＮＳ３７２８および０．１μＭのＳＮ−３８の併用は、細胞生存率に併用効果を生じた。
【０２４６】
オキサリプラチン耐性ＨＴ２９・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１４に示す。
【０２４７】
ＬｏＶｏオキサリプラチン耐性ＣＲＣ癌細胞−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
ＤＭＳＯは、生存率を未処置細胞の約８５％にまで低下させた。２０／３０／４０／５０μＭのＮＳ３７２８およびＳＮ−３８（０．００５μＭ）の併用は全て、細胞生存率に対して有意な併用効果を有していた。
【０２４８】
オキサリプラチン耐性ＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞の細胞生存率に対する、ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８の併用効果を図１５示す。
【０２４９】
ＨＴ１１６オキサリプラチン耐性ＣＲＣ癌細胞−ＮＳ３７２８およびＳＮ−３８
オキサリプラチン耐性ＨＣＴ１１６・ＣＲＣ細胞では、ＮＳ３８７２８をＳＮ−３８と併用した場合に、軽度の阻害性併用効果が観察された（データ示さず）。
【０２５０】
オキサリプラチン耐性ＣＲＣ癌細胞−ＮＳ３７２８およびオキサリプラチン
オキサリプラチン耐性のＨＣＴ１１６、ＨＴ２９およびＬｏＶｏ・ＣＲＣ癌細胞株において、ＮＳ３７２８またはオキサリプラチンの単独療法と比較したときに、ＮＳ３７２８およびオキサリプラチンを併用する効果は見られなかった（データ示さず）。従って、ＮＳ３７２８は、オキサリプラチン耐性ＣＲＣ細胞を、オキサリプラチンによる治療に対して再感作させることはできないように思える。
【０２５１】
結論
これらの前臨床試験は、ＶＲＡＣ阻害剤であるＮＳ３７２８が、耐性ＣＲＣ細胞株に対する一定のタイプの化学療法の効果を増強し得ることを実証している。特に興味深いのは、ＮＳ３７２８は、後天的ＳＮ−３８耐性または後天的オキサリプラチン耐性を有する癌細胞におけるＳＮ−３８の効果も増強することである。このデータは、ＮＳ３７２８が、ＳＮ−３８薬剤耐性がん細胞をＳＮ−３８による治療に対して再感作できることを示唆している。
【０２５２】
実施例６．タモキシフェン耐性ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２またはフルベストラントＭＣＦ−７／ＬＣＣ９ヒト乳癌細胞株における、タモキシフェンまたはフルベストラントのＮＳ３７２８との併用。
本発明者らは、Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ  １９９３（ＰＭＩＤ：８３２４７３２）に記載されたようにして、抗エストロゲンであるタモキシフェンに対して耐性であるヒト乳癌細胞株を樹立した。これらの細胞株は、ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２である。本発明者らはまた、Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ １９９７（ＰＭＩＤ：９２７００１７）に記載されたようにして、抗エストロゲンであるフルベストラントに対して耐性であるヒト乳癌細胞株を樹立した。ＭＣＦ−７は、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体陽性細胞株である。
【０２５３】
本発明者らは、ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２またはＭＣＦ−７／ＬＣＣ９薬剤耐性乳癌細胞株において、ＮＳ３７２８の単剤としての効果、またはタモキシフェンもしくはフルベストラントの何れかとの併用効果をそれぞれ試験した。
【０２５４】
本発明者らは、標準的なＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物）細胞生存アッセイを使用した。細胞を９６ウェルプレート（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、２４時間接着させた。続いて、細胞生存率を測定する前に、ＮＳ３７２８、ドセタキセルまたは２種の薬剤の組み合わせを７２時間添加した。全ての値は、未処置細胞（「処置なし」）のパーセンテージで表される。各データポイントは三重に実施された。
【０２５５】
０．１μＭのタモキシフェンが選択されたたが、その理由は、この濃度ではタモキシフェン感受性細胞の増殖がより有意に阻害されたのに対して、ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２細胞に対しては僅かな細胞増殖効果しか引き起こさないことが元の刊行物に示されたからである。４０μＭのＮＳ３７２８は、未処置対照の７０％までの細胞生存率の僅かな低下を引き起こした。０．１μＭのタモキシフェンは、タモキシフェン耐性ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２細胞の細胞生存率に影響を及ぼさなかった。４０μＭのＮＳ３７２８および０．１μＭのタモキシフェンの併用は、ＭＣＦ−７／ＬＣＣ２細胞生存率を、未処置細胞の４０％未満へと強力かつ有意に（Ｐ＜０．０５）低下させた（図１６）。
【０２５６】
１μＭのフルベストラントを選択したのは、これがＭＣＦ−７／ＬＣＣ９細胞株を樹立するための最終濃度として元の刊行物において適用された濃度であり、この濃度はフルベストラント感受性ＭＣＦ−７細胞の増殖を強く阻害するからである（Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，ＰＭＩＤ９２７００１７）。４０μＭのＮＳ３７２８は、未処置対照の６０％にまで細胞生存率の低下を引き起こした。１μＭのフルベストラントは、フルベストラント耐性ＭＣＦ−７／ＬＣＣ９細胞の細胞生存率に影響を及ぼさなかった。４０μＭのＮＳ３７２８および１μＭのフルベストラントの併用は、ＭＣＦ−７／ＬＣＣ９細胞生存率を、未処置細胞の２４％まで強力かつ有意に（Ｐ＜０．０５）低下させた（図１７）。
【０２５７】
結論
これらの前臨床試験は、ＶＲＡＣ阻害剤であるＮＳ３７２８が、これら２つのタイプの抗エストロゲンに対して耐性にされたＭＣＦ−７乳癌細胞に対するこれらのタイプの抗エストロゲン、すなわちタモキシフェンおよびフルベストラントの効果を増強し得ることを実証している。従ってこのデータは、ＮＳ３７２８が、抗エストロゲン耐性乳癌細胞を、抗エストロゲン、特にタモキシフェンおよびフルベストラントでの治療に対して再感作させることが可能であることを示唆している。
【０２５８】
実施例７．ドセタキセル耐性異種移植片腫瘍（乳癌）におけるＮＳ３７２８の再感作効果のインビボ研究
マウス異種移植実験は、一対の感受性およびドセタキセル耐性の三重陰性ヒト乳癌細胞株（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）を用いて実施される。実験に使用したマウスは、ヒト癌細胞の拒絶反応を防ぐために著しく免疫無防備状態である。
【０２５９】
実験の構成は次の３つの段階を含む：
１．「成長」
２．「用量応答性」
３．「薬物治療」
【０２６０】
段階１：感受性（親）およびドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の成長
ドセタキセル感受性およびドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の異種移植片腫瘍増殖の最適な細胞数を決定するために、異なる数の感受性またはドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、２群のマウスに接種する。この実験は、段階２および３におけるその後の用量応答性実験に重要な癌細胞の最適数を決定する。
【０２６１】
段階２：体制表現型、ドセタキセルの用量応答性
異種移植されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における、ドセタキセル感受性および耐性の表現型を確認するために、腫瘍が樹立されたときにドセタキセルでマウスを処置する。感受性またはドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、段階１で決定した細胞数でマウスに接種する。この実験は、インビボ環境で癌細胞がそれぞれ感受性または耐性であることを実証するために重要である。
【０２６２】
段階３：ＮＳ３７２８によるドセタキセル再感作処置
ドセタキセル耐性異種移植片腫瘍におけるＮＳ３７２８とドセキタセルとの併用による再感作効果を測定するために、親細胞およびドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をマウスに接種し、ビヒクル（対照群）、ドセタキセル単独、ＮＳ３７２８単独、またはＮＳ３７２８およびドセタキセルの併用で処置した。
【０２６３】
全てのステップにおいて、腫瘍形成は触診によってモニターされ、キャリパーによって測定される。腫瘍容積が計算され、成長曲線において時間に対してプロットされる。腫瘍が最大サイズ（１２ｍｍ）に近い場合、またはマウスが不快感または病気の徴候を示す場合には、マウスを安楽死させる。
【０２６４】
結論
本発明者らのインビトロ実験（図６）およびパクリタキセルを用いた異種移植実験（図４）に基づいて、本発明者らは、ドセタキセルとＮＳ３７２８の併用が、異種移植ドセタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞におけるドセタキセル感受性を回復し、ＮＳ３７２８単独またはドセタキセル単独の何れかと比較して減少した腫瘍体積に反映されるとの所見を予測する。
【図１】
2019519506.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2019519506.tif 000019
【図１２】
2019519506.tif 000020
【図１３】
2019519506.tif 000021
【図１４】
2019519506.tif 000022
【図１５】
2019519506.tif 000023
【図１６】
2019519506.tif 000024
【図１７】
2019519506.tif 000025
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月1日(2019.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2019519506.tif 000026

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩、およびがんの治療における使用のための抗がん治療であって、前記抗がん治療はトポイソメラーゼＩ阻害剤である、抗がん治療。
【請求項２】
前記トポイソメラーゼＩ阻害剤は、イリノテカン、その活性代謝物ＳＮ−３８またはトポテカンである、請求項１に記載の使用のためのトポイソメラーゼＩ阻害剤。
【請求項３】
前記がんは、イリノテカン耐性結腸直腸癌などの結腸直腸癌であり、任意に、前記結腸直腸癌は転移性結腸直腸癌である、請求項１〜２のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項４】
前記治療は相乗的である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項５】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、前記抗がん治療の開始前および／または同時に、および／または後に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項６】
前記ＶＲＡＣモジュレータの投与は、前記抗がん治療の臨床効果を高める、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項７】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、経口投与のための錠剤またはカプセルの形態である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項８】
前記ＶＲＡＣモジュレータは、静脈内投与または連続注入のための液体の形態である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項９】
前記がんは前記抗がん治療に対して耐性である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１０】
前記耐性はデノボ耐性である、請求項９に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１１】
前記耐性は後天的耐性である、請求項９に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１２】
前記ＶＲＡＣモジュレータによる治療は前記がんを前記抗がん治療に対して再感作させる、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１３】
前記がんは肉腫、癌腫およびリンパ腫から選択される固形腫瘍のような固形腫瘍である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１４】
前記がんは、胃腸癌、結腸直腸癌、乳癌、肺癌（非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、神経膠芽細胞腫、頭頸部癌、悪性黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞癌、肝臓癌、膵臓癌、前立腺癌、肛門癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮体癌、卵巣癌、胆嚢癌、肉腫、白血病（骨髄性およびリンパ性）、リンパ腫、骨髄腫からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１５】
前記がんは転移性がんである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１６】
前記がんは転移性結腸直腸癌のような結腸直腸癌である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１７】
前記がんは転移性乳癌のような乳癌である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１８】
前記がんは神経膠芽細胞腫である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項１９】
前記がんは肺癌である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用のためのＶＲＡＣモジュレータおよび抗がん治療。
【請求項２０】
有効量の式Ｉ
【化２】
2019519506.tif 000027

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩、抗がん治療、および１種以上の医薬的に許容可能なアジュバント、賦形剤、担体、緩衝剤および／または希釈剤を含む医薬組成物であって、前記抗がん治療がトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、医薬組成物。
【請求項２１】
有効量の式Ｉ
【化３】
2019519506.tif 000028

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩、医薬として使用するための有効量の抗がん治療を含む組成物であって、前記抗がん治療がトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、組成物。
【請求項２２】
がん細胞を抗がん治療に対して感作させることにおいて使用するための、式Ｉ
【化４】
2019519506.tif 000029

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩であって、前記抗がん治療はトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、ＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩。
【請求項２３】
抗がん治療の治療効果を増強することにおいて使用するための、式Ｉ
【化５】
2019519506.tif 000030

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩であって、前記抗がん治療はトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、ＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩。
【請求項２４】
式Ｉ
【化６】
2019519506.tif 000031

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩と、抗がん治療と、任意に使用説明書を含むパーツのキットであって、前記ＶＲＡＣモジュレータおよび前記抗がん治療は、同時、逐次または別々の投与のために製剤化され、前記抗がん治療はトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、キット。
【請求項２５】
がん細胞を抗がん治療に対して感作させるために、または抗がん治療の治療効果を増強するために使用するための医薬の製造のための、式Ｉ
【化７】
2019519506.tif 000032

のＶＲＡＣモジュレータまたはその医薬的に許容可能な塩の使用であって、前記抗がん治療がトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはその活性代謝物ＳＮ−３８である、使用。
【国際調査報告】
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